特表 2024-512986 改良された物理化学的特性および薬理学的特性を有する酵素トリガー自己反応性リンカー

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-21

(54)【発明の名称】改良された物理化学的特性および薬理学的特性を有する酵素トリガー自己反応性リンカー

(51)【国際特許分類】

   A61K 47/54 20170101AFI20240313BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240313BHJP

   C07K 5/062 20060101ALI20240313BHJP

   C07K 5/065 20060101ALI20240313BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240313BHJP

   C07K 5/02 20060101ALI20240313BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240313BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240313BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20240313BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240313BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240313BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240313BHJP

   A61K 38/07 20060101ALN20240313BHJP

   A61K 31/4745 20060101ALN20240313BHJP

【ＦＩ】

A61K47/54

C07K16/00 ZNA

C07K5/062

C07K5/065

C07K19/00

C07K5/02

A61K47/68

A61K39/395 L

A61K47/65

A61P35/00

A61P37/02

A61K45/00

A61K38/07

A61K31/4745

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023559766

(86)(22)【出願日】2022-03-30

(85)【翻訳文提出日】2023-11-16

(86)【国際出願番号】 EP2022058402

(87)【国際公開番号】W WO2022207699

(87)【国際公開日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】21305405.9

(32)【優先日】2021-03-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(31)【優先権主張番号】63/167,915

(32)【優先日】2021-03-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】520144853

【氏名又は名称】マブリンク ビオシオンス

(71)【出願人】

【識別番号】505351201

【氏名又は名称】セントレ ナシオナル デ ラ ルシェルシェ シエンティフィーク

(71)【出願人】

【識別番号】511196870

【氏名又は名称】ユニベルシテ クロード ベルナール リヨン プルミエ

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】ヴィリセル，ワラン

(72)【発明者】

【氏名】ジョゼフ，ブノワ

(72)【発明者】

【氏名】フルネ，ギュイ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076CC07

4C076CC27

4C076EE41

4C076EE59

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA17

4C084BA44

4C084CA47

4C084DA35

4C084NA05

4C084ZB07

4C084ZB26

4C085AA16

4C085AA25

4C085AA26

4C085BB01

4C085BB36

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB22

4C086MA03

4C086MA05

4C086NA05

4C086ZB07

4C086ZB26

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA11

4H045BA13

4H045BA41

4H045BA50

4H045CA40

4H045DA75

4H045EA20

4H045FA33

4H045GA21

(57)【要約】

本発明は、酵素トリガー自己反応アーム化合物、そのような化合物を調製するために使用される化学中間体、およびそれらの使用、特にプロドラッグ設計およびコンジュゲーション技術に関する。本発明はまた、そのような酵素トリガー自己反応アームを含むリガンド－薬物－コンジュゲート（ＬＤＣ）に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

以下の式（Ｉ）を有するリガンド－薬物－コンジュゲート化合物（ＬＤＣ）

【化1】

式中、
Ｌは、リガンドである；
Ｘ１は、コネクターユニットである；
Ｚは、任意のスペーサーである；
Ｘ２は、コネクターユニットである；
Ｋは、任意の疎水性マスキング物質であり、好ましくはポリサルコシンおよびポリエチレングリコールから選択される；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙは、Ｔが糖開裂性ユニットの場合はＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットの場合はＮＲ３である；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【請求項2】

Ｌは、ポリペプチド、タンパク質、抗体および抗体フラグメントからなる群から選択されるリガンドであり、好ましくは、Ｌは抗体である、請求項１に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項3】

Ｄは、薬物からなる群から選択され、好ましくは、Ｄは抗癌剤または免疫調節剤である、請求項１または２に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項4】

Ｘ１およびＸ２は、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、任意に置換されたポリエーテル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、６～１０個の環原子を有するアリーレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロアリーレン、Ｃ_２－Ｃ_１０アルケニレン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から独立して選択され、
前記アルキレンおよび前記アルケニレンは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断され、
ならびに、前記アルキレン、前記アリーレン、前記シクロアルキレン、前記ヘテロシクロアルキレン、前記ヘテロアリーレン、および前記アルケニレンは、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換されている：ハロゲン、オキソ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロシクリル、６～１０個の環原子を有するアリール、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－（ＣＯ）－Ｒ’、－Ｏ－（ＣＯ）－Ｒ’、－（ＣＯ）－Ｏ－Ｒ’、－（ＣＯ）－ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’－（ＣＯ）－Ｒ’、および－ＮＲ’’Ｒ’’’；
Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項5】

Ｚは、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、任意に置換されたポリエーテル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、６～１０個の環原子を有するアリーレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロアリーレン、Ｃ_２－Ｃ_１０アルケニレン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から独立して選択され、
前記アルキレンおよび前記アルケニレンは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断され、
ならびに、前記アルキレン、前記アリーレン、前記シクロアルキレン、前記ヘテロシクロアルキレン、前記ヘテロアリーレン、および前記アルケニレンは、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換されている：ハロゲン、オキソ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロシクリル、６～１０個の環原子を有するアリール、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－（ＣＯ）－Ｒ’、－Ｏ－（ＣＯ）－Ｒ’、－（ＣＯ）－Ｏ－Ｒ’、－（ＣＯ）－ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’－（ＣＯ）－Ｒ’、および－ＮＲ’’Ｒ’’’；
Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項6】

Ｋは、ポリサルコシンである、請求項１～５のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項7】

Ｔは、グルクロニドである糖開裂性ユニットである、請求項１～６のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項8】

Ｔはジペプチドであり、好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－ＡｌａおよびＰｈｅ－Ｌｙｓから選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項9】

前記化合物は、式（ＶＩ）の化合物である

【化2】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数であり；および、Ｔはポリペプチド開裂性ユニット、好ましくはジペプチドである、請求項１～６のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項10】

前記化合物は、式（ＶＩＩＩ）の化合物である

【化3】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数であり；および、Ｔは糖開裂性ユニット、好ましくはグルクロニドまたはガラクトシドである、請求項１～６のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項11】

請求項１～１０のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物と、薬学的に許容される担体と、を含む、医薬組成物。

【請求項12】

薬物として使用するための、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＬＤＣ化合物。

【請求項13】

式（ＩＩ）の中間体化合物

【化4】

式中、
Ｘ１’は、リガンドと反応してコネクターユニットを形成することができる基である；
Ｚは、任意のスペーサーである；
Ｘ２は、コネクターユニットである；
Ｋは、任意の疎水性マスキング物質であり、好ましくはポリサルコシンおよびポリエチレングリコールから選択される；
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【請求項14】

Ｋは、ポリサルコシンである、請求項１１に記載の式（ＩＩ）の中間体化合物。

【請求項15】

式（ＩＩＩ）の中間体化合物

【化5】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【請求項16】

式（ＩＶ）の中間体化合物

【化6】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈである；
Ｒ５は、Ｈである；
Ｔは、糖開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｏである；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【請求項17】

式（ＩＶ）の中間体化合物

【化7】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｙ’は、ＮＲ３’である；
Ｔは、ポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

〔技術分野〕
本発明は、酵素トリガー自己反応アームを含む化合物、そのような化合物を調製するために使用される化学中間体、およびそれらの使用、特にプロドラッグ設計およびコンジュゲーション技術に関する。

【0002】

本発明はまた、このような酵素トリガー自己反応アームを含むリガンド－薬物－コンジュゲート（ＬＤＣ）に関する。

【0003】

〔背景〕
リガンド－薬物－コンジュゲート（ＬＤＣ）は、活性化合物を標的組織に特異的に送達する一方で、健常組織は温存するように設計されている。例えば、細胞毒性の抗癌剤を腫瘍細胞に送達することを目的としたＬＤＣの場合には、ＬＤＣの形式を用いることで、毒性プロファイルを改善し、かつ治療の忍容性を向上することができる。

【0004】

ＬＤＣは、少なくとも１つのリガンドユニットを含む。当該リガンドユニットは、通常ポリペプチド、タンパク質または標的化低分子であり、これらは合成リンカーを介して少なくとも１つの治療化合物、診断化合物または標識化合物（以下、薬物またはＤと称する）と共有結合している。この合成リンカーは、リガンドユニット（単数または複数）と、薬物ユニット（単数または複数）とを結合するための１つまたは複数の１価または２価のアームを含み得、これらはスペーサー、コネクターおよび酵素感受性切断可能部分から選択され得る。前記リンカーはまた、ＬＤＣ性能（貯蔵安定性、形質安定性または薬物動態特性など）を向上させることができる任意の部分を直交して担持し得る。コンジュゲートのリガンドユニットが抗体または抗体フラグメントであり、免疫賦活薬、細胞毒性薬または化学療法薬と結合している場合には、抗体－薬物－コンジュゲート（ＡＤＣ）という用語が一般的に使用される。

【0005】

ＬＤＣを設計する場合には、最終的な活性薬物をリガンド標的化ユニットに共有結合させると同時に、細胞内在化後、または疾患組織の微小環境において、選択的な酵素機構による薬物ユニットの最終的な放出を可能にする必要がある。この観点から、いくつかのペプチダーゼ感受性切断可能リンカー化学戦略およびグリコシダーゼ感受性切断可能リンカー化学戦略（自己犠牲化学と関連する）が開発された。これらの開裂性リンカーおよび対応する切断機構はよく知られており、いくつかの出版物に記載されている（例えば、Bargh JG et al., Chem. Soc. Rev., 2019, 48, 4361, Toki et al. J. Org. Chem. 2002, 67, 6, 1866-1872, Scott et al. Bioconjugate Chem. 2006, 17, 3, 831-840）。

【0006】

例えば、ＷＯ２０１１１４５０６８には、４－（１－ヒドロキシブト－３－イン－１－イル）フェノール自己犠牲化学スペーサーに基づくグリコシダーゼ感受性切断可能薬物リンカーの使用が開示されており、これによって、クリックケミストリー性能のための末端アルキンハンドルが付与される（下記式参照）。

【0007】

【化1】

【0008】

ＷＯ２０１７０８９８９５には、２－ヒドロキシ－５－（ヒドロキシメチル）安息香酸自己犠牲化学スペーサー（下記式参照）に基づくグリコシダーゼ感受性切断可能薬物リンカーの使用が記載されている。

【0009】

【化2】

【0010】

しかし、ＬＤＣの物理化学的特性および薬理学的特性を改善するような酵素感受性自己犠牲リンカーを開発することが、常に望まれている。

【0011】

したがって、この文脈において、本開示の目的の１つは、ＬＤＣを調製するために使用できる酵素感受性自己犠牲リンカーを提供することである。

【0012】

本開示のもう１つの目的は、ＬＤＣの物理化学的特性および／または薬理学的特性を改善することができる酵素感受性自己犠牲リンカーである。

【0013】

本開示の別の目的は、ＬＤＣを調製するために使用できる化合物を提供することである。

【0014】

〔まとめ〕
第１の態様において、本開示は、以下の式（Ｉ）を有するリガンド－薬物－コンジュゲート化合物（ＬＤＣ）に関する。

【0015】

【化3】

【0016】

式中、
Ｌは、リガンドである；
Ｘ１は、コネクターユニットである；
Ｚは、任意のスペーサーである；
Ｘ２は、コネクターユニットである；
Ｋは、任意の疎水性マスキング物質であり、好ましくはポリサルコシンおよびポリエチレングリコールから選択される；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙは、Ｔが糖開裂性ユニットの場合はＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットの場合はＮＲ３である；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択さる；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0017】

式（Ｉ）のように、２－アミノ－１－（４－アミノフェニル）エタン－１－オール－ベースの自己犠牲リンカーまたは２－アミノ－１－（４－オキソフェニル）エタン－１－オール－ベースの自己犠牲リンカーを使用すると、驚くべきことに、改善された親水性および改善されたｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態プロファイルを有するＬＤＣが得られることが見出された。この自己犠牲リンカーはまた、式（Ｉ）の化合物の製造、精製および製剤化を容易にし、したがって収率をより高くすることを可能にする。式（Ｉ）の化合物はまた、この特異的なリンカーの存在によって、より低い凝集の可能性を有する。

【0018】

本開示はまた、本開示の化合物、好ましくは式（Ｉ）の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。

【0019】

本開示はまた、本開示の化合物、好ましくは薬物として使用するための式（Ｉ）の化合物に関する。

【0020】

本開示はまた、式（ＩＩ）の中間体化合物に関する：

【0021】

【化4】

【0022】

式中、
Ｘ１’は、リガンドと反応してコネクターユニットを形成することができる基である；
Ｚは、任意のスペーサーである；
Ｘ２は、コネクターユニットである；
Ｋは、任意の疎水性マスキング物質であり、好ましくはポリサルコシンおよびポリエチレングリコールから選択される；
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0023】

本開示はまた、式（ＩＩＩ）の中間体化合物に関する

【0024】

【化5】

【0025】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0026】

本開示はまた、式（ＩＶ）の中間体化合物に関する

【0027】

【化6】

【0028】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
各々のＲ２は、電子吸引基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0029】

〔図面の簡単な説明〕
図１および図２は、実施例３による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。

【0030】

図３および図４は、実施例４によるコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを表す。

【0031】

図５は、実施例５によるコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを表す。

【0032】

図６、図７、図８および図９は、ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態プロファイルおよび実施例６による薬物動態パラメータを表す。

【0033】

図１０は、実施例７による胃癌のマウス異種移植モデルにおける経時的な腫瘍体積を表す。

【0034】

〔詳細な説明〕
〔定義〕
本開示の様々な実施形態が、本明細書に記載されている。各々の実施形態において明記される特徴は、他の明記される特徴と組み合わされて、さらなる実施形態を提供し得ることを認識されたい。

【0035】

本開示は、本開示の化合物、それらの互変異性体、エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体またはそれらの混合物、ならびにそれらの水和物、エステル、溶媒和物または薬学的に許容される塩を包含する。

【0036】

本明細書で示される式のどれもが、重水素標識化合物または^１４Ｃ標識化合物のように、非標識化合物の形態ならびに同位体標識化合物の形態を表すことも意図している。

【0037】

「薬学的に許容される塩」という用語は、本開示の化合物の生物学的な有効性および特性を保持し、典型的には生物学的または他の点で不都合のない塩を指す。多くの場合には、本開示の化合物は、アミノ基および／またはカルボキシル基またはこれらに類似する基の効能によって、酸塩および／または塩基塩を形成することができる。薬学的に許容される酸付加塩は、有機酸および／または無機酸を用いて形成することができる。薬学的に許容される塩基付加塩は、有機塩基および／または無機塩基を用いて形成することができる。このような塩は当業者に公知である。

【0038】

本明細書で使用される場合には、「Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル」という用語は、それ自体または別の置換基の一部として、１～２４個の炭素原子、好ましくは１～２０個の炭素原子、より好ましくは１～１２個または１～６個の炭素原子を有する直鎖アルキル官能基または分枝アルキル官能基を指す。好適なアルキル基は、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉ－ブチル、ｓ－ブチルおよびｔ－ブチル、ペンチルおよびその異性体（例えば、ｎ－ペンチル、ｉｓｏ－ペンチル）、ならびにヘキシルおよびその異性体（例えば、ｎ－ヘキシル、ｉｓｏ－ヘキシル）を含む。

【0039】

アルキレンは、単独で、または例えばアルキレングリコールの一部として使用され、本明細書で定義される２価の飽和アルキル基、直鎖アルキル基または分枝アルキル基を指す。

【0040】

アルケニルおよびアルキニルは、２～２０個の炭素原子、好ましくは２～１２個、より好ましくは２～６個、特に２～４個を有する、少なくとも部分的に不飽和の
直鎖炭化水素基もしくは分枝炭化水素基を指す。アルケニル基は、少なくとも１つのＣ＝Ｃ二重結合を含み；アルキニル基は、少なくとも１つのＣ≡Ｃ三重結合を含む。

【0041】

本明細書で使用される場合には、「Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル」または「炭素環」という用語は、３～８個の炭素原子、好ましくは３～６個の炭素原子を有する飽和環式基または不飽和環式基を指す。シクロアルキルは、単環または共に縮合した複数の環を有することができる。シクロアルキルはスピロ環も含むことができる。好適なシクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。

【0042】

本明細書で使用される場合には、「Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン」または「カルボシクロ」という用語は、本明細書で定義される２価のシクロアルキルを指す。

【0043】

本明細書で使用される場合には、「ハロゲン」という用語は、フルオロ（－Ｆ）基、クロロ（－Ｃｌ）基、ブロモ（－Ｂｒ）基、またはヨード（－Ｉ）基を指す。

【0044】

本明細書で使用される場合には、「Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル」という用語は、本明細書で定義される１つ以上のハロゲン基によって置換されている、本明細書で定義されるＣ_１－Ｃ_６アルキルを指す。好適なＣ_１－Ｃ_６ハロアルキル基は、トリフルオロメチルおよびジクロロメチルを含む。

【0045】

本明細書で使用される場合には、「ヘテロアルキル」という用語は、１～１２個の炭素原子、好ましくは１～１０個、より好ましくは１～６個の炭素原子、およびＯ、Ｎ、ＳｉおよびＳからなる群から選択される１個から３個までのヘテロ原子からなる直鎖炭化水素鎖または分岐炭化水素鎖を指す。ここで、窒素原子および硫黄原子は任意に酸化されていてもよく（例えば：スルホキシドまたはスルホン）、窒素ヘテロ原子は任意に４級化されていてもよい。ヘテロ原子Ｏ、ＮおよびＳは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置またはアルキル基が分子の残りの部分に結合している位置に配置されてもよい。

【0046】

ヘテロアルキレンは、上記で定義される２価のヘテロアルキルを指す。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子は鎖末端のいずれか一方または両方を占めることもできる。

【0047】

本明細書で使用される場合には、「Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ」という用語は、－Ｏ－アルキル基を指す。ここで、アルキル基は本明細書で定義されるＣ_１－Ｃ_６アルキルである。好適なＣ_１－Ｃ_６アルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、プロポキシを含む。

【0048】

本明細書で使用される場合には、「Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ」という用語は、本明細書で定義される１つ以上のハロゲン基によって置換されている、本明細書で定義されるＣ_１－Ｃ_６アルコキシ基を指す。好適なハロアルコキシは、トリフルオロメトキシを含む。

【0049】

本明細書で使用される場合には、「６～１０個の環原子を有するアリール」という用語は、６～１０個の環原子を含む、単環もしくは共に縮合した複数の芳香族環を有する多価不飽和芳香族ヒドロカルビル基を指す。ここで、少なくとも１つの環は、芳香族である。芳香族環は、任意に、芳香族環に縮合した１～２個の付加的な環（本明細書で定義される、シクロアルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロアリール）を含んでもよい。好適なアリール基は、フェニル、ナフチルおよびヘテロシクリル（ベンゾピラニル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニルなど）に縮合したフェニル環を含む。

【0050】

アリーレンは、上記で定義される２価のアリール基を指す。

【0051】

本明細書で使用される場合には、「５～１０個の環原子を有するヘテロアリール」という用語は、５～１０個の原子を含む単環、または、５～１０個の原子を含む、共に縮合した複数の芳香族環もしくは共有結合した複数の芳香族環を有する多価不飽和芳香族環系を指す。ここで、少なくとも１つの環は芳香族であり、少なくとも１つの環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子である。窒素ヘテロ原子および硫黄ヘテロ原子は任意に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意に４級化されていてもよい。このような環は、アリール環、シクロアルキル環またはヘテロシクリル環に縮合されていてもよい。このようなヘテロアリールの非限定的な例は以下を含む：フラニル、チオフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、オキサトリアゾリル、チアトリアゾリル、ピリジニル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、オキサジニル、ジオキシニル、チアジニル、トリアジニル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、イソベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、プリニル、ベンゾチアジアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、シノリニル、キナゾリニルおよびキノキサリニル。

【0052】

本明細書で使用される場合には、「３～１０個の環原子を有するヘテロシクリル」、「３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル」または「ヘテロシクリル」という用語は、３～１０個の環原子、好ましくは３～８個の環原子を有する飽和環式基もしくは不飽和環式基を指す。ここで、少なくとも１個の環原子は、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子である。窒素ヘテロ原子および硫黄ヘテロ原子は任意に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意に４級化されていてもよい。ヘテロ環はスピロ環と同様に、縮合環または架橋環を含むことができる。ヘテロ環の例は、テトラヒドロピリジル、ピペリジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペラジニル、１－アゼパニル、イミダゾリニル、１，４－ジオキサニルなどを含むが、これらに限定されない。

【0053】

本明細書で使用される場合には、「ヘテロ環」または「ヘテロシクロアルキレン」という用語は、本明細書で定義される２価の複素環を指す。

【0054】

さらに、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルキレン、アリーレン、ヘテロアルキル、ヘテロアルキレン、Ｃ_３－Ｃ_８炭素環、Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ、Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロ環、Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ、ポリエーテルという用語は、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換された基を指す：－Ｘ、－Ｒ’、－Ｏ^－、－ＯＲ’、＝Ｏ、－ＳＲ’、－Ｓ^－、－ＮＲ’_２、－ＮＲ’_３、＝ＮＲ’、－ＣＸ_３、－ＣＮ、－ＯＣＮ、－ＳＣＮ、－Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、－ＮＣＳ、－ＮＯ、－ＮＯ_２、＝Ｎ_２、－Ｎ_３、－ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’_２、－ＳＯ_３ ^－、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’、－ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＲ’、－Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ’、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）_２、－ＰＯ_３ ^－、－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、－ＣＯ_２Ｒ’、－ＣＯ_２、－Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’_２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’_２、およびＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’_２。ここで、各々のＸは独立して、ハロゲン：－Ｆ、－ＣＩ、－Ｂｒ、または－Ｉであり；および、各々のＲ’は独立して、－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_２０アルキル、－Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または－Ｃ_３－Ｃ_１０ヘテロ環である。

【0055】

アシル基は－ＣＯ－アルキルを指し、ここでアルキルは上記の定義を有する。

【0056】

本明細書で使用される場合には、「ポリエーテル」という用語は、エーテル結合を含むポリマーを指す。ポリエーテル中のエーテル部分の数は、２～１００個、好ましくは２～２５個、特に２～１０個含まれ得る。ポリエーテルの例は、２～１００個、好ましくは２～２５個、特に２～１０個のエーテル部分を有するポリエチレングリコールのようなポリエチレングリコールを含む。

【0057】

「任意に置換されたポリエーテル」という用語は、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換されたポリエーテル、特にポリエチレングリコールを指すことができる：ハロゲン、オキソ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロシクリル、６～１０個の環原子を有するアリール、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－（ＣＯ）－Ｒ’、－Ｏ－（ＣＯ）－Ｒ’、－（ＣＯ）－Ｏ－Ｒ’、－（ＣＯ）－ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’－（ＣＯ）－Ｒ’、および－ＮＲ’’Ｒ’’’；Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される。

【0058】

固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）は、支持体である不溶性ポリマーに固定されたペプチドが、脱保護－洗浄－カップリング－洗浄のサイクルを繰り返しながら、Ｆｍｏｃ－またはＢｏｃ－で保護されたアミノ酸を連続的に添加することによって組み立てられる、公知のプロセスを指す。各々のアミノ酸の添加は、以下のサイクルとして呼ばれる：（ｉ）Ｎα－保護基の切断、（ｉｉ）洗浄工程、（ｉｉｉ）カップリング試薬および非求核塩基を用いたフルオレニルメトキシカルボニル－（Ｆｍｏｃ－）またはｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル－（Ｂｏｃ－）の保護アミノ酸のカップリング、（ｉｖ）洗浄工程。増大する鎖は前記支持体に結合しているので、過剰な試薬および可溶性の副生成物は、簡単なろ過によって除去できる。ヒンダードＦｍｏｃ－またはＢｏｃ－保護Ｎ－メチル化アミノ酸とカップリング反応を繰り返すことは困難であり、多くの場合最適ではなく、粗純度が低く、精製が困難であり、本技術では収率が低いことが予想される。前記支持体の例として、ワング樹脂（Ｗａｎｇ ｒｅｓｉｎ）、リンクアミド樹脂（Ｒｉｎｋ ａｍｉｄｅ ｒｅｓｉｎ）、トリチル－および２－クロロトリチル樹脂（ｔｒｉｔｙｌ－ ａｎｄ ２－ｃｈｌｏｒｏｔｒｉｔｙｌ ｒｅｓｉｎｓ）、ＰＡＭ樹脂、ＰＡＬ樹脂、Ｓｉｅｂｅｒアミド樹脂、ＭＢＨＡ樹脂、ＨＭＰＢ樹脂、ＨＭＢＡ樹脂が市販されており、これらはペプチドが直接的または間接的に結合している。

【0059】

リガンド薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）は、本明細書で定義されるように、リガンドと薬物とを共有結合させ、本明細書に記載されるような任意の方法を含み、本明細書の実施例に例示されるようなコンジュゲートを指す。リガンドが抗体である場合には、本開示の好ましい実施形態である抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を参照することができる。

【0060】

コネクターユニットという用語は、異なる化合物の一部と共に結合する構成要素を指し、例えば、コネクターは、リガンドをスペーサーに、またはスペーサーをアミド機能－ＣＯ－ＮＲ１－に結合することができる。コネクターは、リガンド－薬物－コンジュゲートの構成要素、すなわちリガンド、スペーサー、疎水性マスキング物質および／またはアミド機能－ＣＯ－ＮＲ１－の付着部位を有する足場である。

【0061】

当業者はその知識から、予想されるＬＤＣ化合物に適したコネクターを選択することができる。コネクターの非網羅的なリストは、アミノ酸（例えば、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、セリン、チロシン、システイン、セレノシステイン、グリシン、ホモアラニン；アミノアルコール；アミノアルデヒド；ポリアミンまたはそれらの任意の組み合わせ）を含む。有利には、コネクターユニットＸ１および／またはＸ２は、１つ以上の天然または非天然のアミノ酸である。一実施形態において、コネクターユニットＸ１およびＸ２は、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、任意に置換されたポリエーテル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、６～１０個の環原子を有するアリーレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロアリーレン、Ｃ_２－Ｃ_１０アルケニレン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から独立して選択されてもよく、前記アルキレンおよび前記アルケニレンは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断され、ならびに、前記アルキレン、前記アリーレン、前記シクロアルキレン、前記ヘテロシクロアルキレン、前記ヘテロアリーレン、および前記アルケニレンは、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換されている：ハロゲン、オキソ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロシクリル、６～１０個の環原子を有するアリール、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－（ＣＯ）－Ｒ’、－Ｏ－（ＣＯ）－Ｒ’、－（ＣＯ）－Ｏ－Ｒ’、－（ＣＯ）－ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’－（ＣＯ）－Ｒ’、および－ＮＲ’’Ｒ’’’；Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される。

【0062】

コネクターユニットの例は、任意に置換されたポリエーテル、アミノ酸、ベンジル基、アミン、ケトン、

【0063】

【化7】

【0064】

を含む。

【0065】

特に、コネクターユニットは２価または３価であってもよい。例えば、疎水性マスキング物質Ｋが存在する場合には、Ｘ２は３価のコネクターユニットであってもよい。

【0066】

「アミノ酸」という用語は、天然または非天然のアミノ酸を指す。－ＣＯＮＲ１－基または－ＣＯＮＲ１’－基のＣＯ部分は、Ｘ２が１つ以上のアミノ酸からなる場合には、Ｘ２コネクターユニットの一部とみなすことができる。アミノ酸の非網羅的なリストは、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、セリン、チロシン、システイン、セレノシステイン、グリシンおよびホモアラニンを含む。

【0067】

スペーサーは、リガンド－薬物－コンジュゲートの２つの構成要素を共有結合する２価のアーム（２つのコネクターユニットなど）である。スペーサーＺは存在してもよいし、存在しなくてもよい。

【0068】

スペーサーユニットの非網羅的リストは、以下を含む：アルキレン、ヘテロアルキレン（Ｓｉ、Ｎ、ＯおよびＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子によって中断されたアルキレン）；アルコキシ；ポリエーテル（ポリアルキレングリコールおよび典型的にはポリエチレングリコールなど）；１つ以上の天然または非天然のアミノ酸（グリシン、アラニン、プロリン、バリン、Ｎ－メチルグリシンなど）；Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ；Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ；アリーレン、およびそれらの任意の組み合わせ。例えば、スペーサーは、２価の直鎖アルキレン基、好ましくは（ＣＨ_２）_４である。

【0069】

例えば、スペーサーは、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－、－Ｃ_１－Ｃ_１０ヘテロアルキレン－、－Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ－、－Ｏ－（Ｃ_１ Ｃ_８アルキル）－、－アリーレン－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－アリーレン－、－アリーレン－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－、－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－、－Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－、－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０ヘテロアルキレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）－Ｃ（＝Ｏ）－、－アリーレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－アリーレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－アリーレン－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｃ（＝Ｏ）－、－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｃ（＝Ｏ）－、－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－ＮＨ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０ヘテロアルキレン－ＮＨ－、－Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ－ＮＨ－、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）－ＮＨ－、－アリーレン－ＮＨ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－アリーレン－ＮＨ－、－アリーレン－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－ＮＨ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－ＮＨ－、－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－ＮＨ－、－Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ－ＮＨ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－ＮＨ－、－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－ＮＨ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｓ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０ヘテロアルキレン－Ｓ－、－Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ－Ｓ－、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）－）－Ｓ－、－アリーレン－Ｓ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－アリーレン－Ｓ－、－アリーレン－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｓ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｓ－、－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｓ－、－Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ－Ｓ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｓ－、－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｓ－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｏ－（Ｃ_１－Ｃ_８アルキル）－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－アリーレン－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－アリーレン－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－アリーレン－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－（Ｃ_３－Ｃ_８カルボシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－、および－（Ｃ_３－Ｃ_８ヘテロシクロ）－Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレン－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－からなる群から選択されてもよい。

【0070】

上述の基のいずれかは、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換される：－Ｘ、－Ｒ’、－Ｏ^－、－ＯＲ’、＝Ｏ、－ＳＲ’、－Ｓ^－、－ＮＲ’_２、－ＮＲ’_３ ⁺、＝ＮＲ’、－ＣＸ_３、－ＣＮ、－ＯＣＮ、－ＳＣＮ、－Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、－ＮＣＳ、－ＮＯ、－ＮＯ_２、＝Ｎ_２、－Ｎ_３、－ＮＲ’Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’_２、－ＳＯ_３ ^－、－ＳＯ_３Ｈ、－Ｓ（＝Ｏ）_２Ｒ’、－ＯＳ（＝Ｏ）_２ＯＲ’、－Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ’、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ’、－ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ’）_２、－Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ’）_２、－ＰＯ_３ ^－、－ＰＯ_３Ｈ_２、－Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、－Ｃ（＝Ｓ）Ｒ’、－ＣＯ_２Ｒ’、－ＣＯ_２、－Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ’、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ’_２、Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ’_２、およびＣ（＝ＮＲ’）ＮＲ’_２。ここで、各々のＸは独立して、ハロゲン：－Ｆ、－ＣＩ、－Ｂｒ、または－Ｉであり；および、各々のＲ’は独立して、－Ｈ、－Ｃ_１－Ｃ_２０アルキル、－Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または－Ｃ_３－Ｃ_１０ヘテロ環である。

【0071】

リガンドとは、ＬＤＣ（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）技術で通常採用されるような任意の高分子（ポリペプチド、タンパク質、ペプチド、典型的には抗体）、または低分子（葉酸もしくはアプタマーなど）を指し、バイオコンジュゲート技術を使用して、本研究の合成リンカーまたは薬物リンカーと共有結合させることができる（Greg T. Hermanson, Bioconjugate Techniques, 3rd Edition, 2013, Academic Press参照）。リガンドは伝統的に、その標的化能力のために選択される化合物である。リガンドの非網羅的リストは、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、全長抗体およびその抗原結合フラグメント、インターフェロン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ビタミン、トランスフェリン、またはその他の細胞結合分子もしくは物質を含む。コンジュゲートの調製に用いられるリガンドの主な種類は、抗体である。タンパク質の例は、ヒト血清アルブミンである。

【0072】

本明細書で使用される「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、修飾モノクローナル抗体および修飾ポリクローナル抗体、単特異性抗体、多重特異性抗体（二特異性抗体など）、抗体フラグメントおよび抗体模倣体（Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎ（登録商標）、Ａｆｆｉｍｅｒ（登録商標）、Ｎａｎｏｆｉｔｉｎ（登録商標）、Ｃｅｌｌ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ａｌｐｈａｂｏｄｙ（登録商標）、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒ（登録商標）、Ｆｙｎｏｍｅｒ（登録商標）、ＭｏｎｏｂｏｄｉｅｓまたはｎａｎｏＣＬＡＭＰ（登録商標））を含む。抗体の例は、トラスツズマブである。

【0073】

本明細書で言及される「抗体」という用語は、抗体全体、およびその抗原結合フラグメント（すなわち「抗原結合部分」）またはその一本鎖を含む。

【0074】

天然に存在する「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に結合された少なくとも２本の重鎖（Ｈ）と２本の軽鎖（Ｌ）とを含む糖タンパク質である。各々の重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略記する）と、重鎖定常領域と、を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３の３つのドメインを含む。各々の軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略記する）と、軽鎖定常領域と、を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Lを含む。Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存性の高い領域が散在している超可変性の領域にさらに細分化され得る。各々のＶ_ＨおよびＶ_Ｌは３つのＣＤＲと４つのＦＲを含み、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序で配列されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的な補体系の第一構成要素（Ｃｌｑ）を含む、宿主の組織もしくは因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

【0075】

本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」（または単に「抗原部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の全長または１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメントによって果たされ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合フラグメントの例は、Ｆａｂフラグメント、Ｖ_Ｌドメイン、Ｖ_Ｈドメイン、Ｃ_Ｌドメイン、およびＣＨ１ドメインからなる１価のフラグメント；Ｆ（ａｂ）_２フラグメント、ヒンジ領域でのジスルフィド結合によって結合した２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメント；Ｖ_ＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体の単一アームのＶ_ＬドメインおよびＶ_ＨドメインからなるＦｖフラグメント；Ｖ_ＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., 1989 Nature 341:544-546）；ならびに、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはそのような抗原結合部分を含む任意の融合タンパク質を含む。

【0076】

さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈは、別々の遺伝子によってコードされているが、組換え法を用いて、Ｖ_Ｌ領域およびＶ_Ｈ領域が対になって１価の分子を形成する一本鎖タンパク質として作製されることを可能にする合成リンカーによって、結合させることができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Bird et al., 1988 Science 242:423-426; and Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883参照）。そのような一本鎖抗体が、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることもまた意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている従来の技術を用いて得られ、そのフラグメントはインタクト抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。

【0077】

特定の実施形態において、ＬＤＣのリガンドは、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体である。

【0078】

本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト由来の配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含む場合には、定常領域もそのようなヒト配列（例えば、ヒト生殖細胞系列配列）、またはヒト生殖細胞系列配列の変異体、または（例えば、Ｋｎａｐｐｉｋら（2000. J Mol Biol 296, 57-86）に記載されているような）ヒトフレームワーク配列解析に由来するコンセンサスフレームワーク配列を含む抗体に由来する。

【0079】

ヒト抗体は、ヒト配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発、またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）を含んでいてもよい。しかしながら、本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、他の哺乳動物種（マウスなど）の生殖細胞系列由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図していない。

【0080】

「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方がヒト配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。

【0081】

本明細書で使用される「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によって提供される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（ＩｇＧ１またはＩｇＧ４など））を指す。

【0082】

本明細書において、「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」という表現は、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換的に使用される。

【0083】

活性剤とは、生理活性分子または治療用分子を指す。活性剤の例は、薬物、イメージング剤および蛍光剤を含む。イメージング剤としては、インドシアニングリーンのような蛍光剤が挙げることができる。

【0084】

薬物とは、固有の薬理学的特性または診断学的特性を有するあらゆるタイプの薬物または化合物（例えば、細胞毒性化合物、細胞増殖抑制化合物、免疫調節化合物、免疫抑制化合物、免疫刺激化合物、抗炎症化合物、電離性化合物または抗感染性化合物）を指す。細胞毒性化合物としては、カリキアミシン；ウンシアラマイシン；アウリスタチン（ＭＭＡＥとして知られるモノメチルアウリスタチンＥなど）；ハリコンドリン誘導体（エリブリンなど）、ツブリシンアナログ；メイタンシン；クリプトフィシン；ベンゾジアゼピン二量体（ＰＢＤとして知られるピロロ［２，１－ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピンを含む）；インドリノベンゾジアゼピン偽二量体（ＩＧＮ）；デュオカルマイシン；アントラサイクリン（ドキソルビシンまたはＰＮＵ１５９６８２など）；カンプトテシンアナログ（ＳＮ３８またはエキサテカンとして知られる７－エチル－１０－ヒドロキシ－カンプトテシンなど）；Ｂｃｌ２およびＢｃｌ－ｘｌ阻害剤；タイランスタチン；アマトキシン（α－アマニチンを含む）；キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤；ビノレルビン；サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）阻害剤；分子接着剤分解剤、ブレオマイシン；ダクチノマイシンまたは放射性核種およびその錯化剤（ＤＯＴＡ／^１７７Ｌｕなど）を挙げることができる。抗炎症薬としては、コルチコステロイド（デキサメタゾンまたはフルチカゾンなど）を挙げることができる。抗感染薬としては、抗生物質（リファンピシンまたはバンコマイシンなど）を挙げることができる。薬物は、抗癌剤または免疫調節剤であってもよい。抗癌剤の例は、細胞毒性化合物および細胞増殖抑制化合物、好ましくは細胞毒性化合物である。

【0085】

疎水性マスキング物質とは、化合物の見かけの疎水性を低下させることができる基を指す。疎水性マスキング物質は、ポリサルコシン、ポリエチレングリコール、およびキトオリゴ糖から選択することができる。エチレングリコールまたはサルコシン部分の数は、広い範囲で変化してもよい。例えば、疎水性マスキング物質中のエチレングリコールまたはサルコシン部分の数は、２～５００個、好ましくは５～１００個、特に５～２５個で含まれ得る。一実施形態において、疎水性マスキング物質は、６個から２４個までのサルコシン部分、好ましくは１０個から１２個までのサルコシン部分を含むポリサルコシンである。キトオリゴ糖中のキトサンの数は、２～２０個、例えば２～８個で含まれ得る。

【0086】

電子吸引基とは、通常、共鳴効果または誘導効果によって、隣接原子からそれ自身に向かって電子密度を引き寄せる原子または基を指す。電子吸引基は、ハロゲン、（－ＣＦ_３のような）ハロアルキル、－ＣＮ基、－ＳＯ_３Ｈ基、－ＮＯ_２基、および－Ｃ（Ｏ）Ｒ基を含み、Ｒ＝Ｈ、ＯＨ、またはアルコキシを有する。有利には、電子吸引基は－ＮＯ_２である。一実施形態において、電子吸引基はフェニル環のＹ－Ｔ置換基に対してオルト位にある。

【0087】

本明細書で使用される場合には、「保護基」という用語は、再生された官能基または分子中の他の官能基を攻撃しない容易に入手可能な試薬によって、選択的に除去され得る化学的置換基を指す。好適な保護基は当該技術分野で知られており、開発され続けている。好適な保護基は、例えば、Ｗｕｔｚら（"Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth Edition," Wiley-Interscience, 2007）において見出すことができる。Ｗｕｔｚら（６９６～９２７ページ）に記載されているようなアミノ基を保護するための保護基が、特定の実施形態において使用される。アミノ保護基の代表例は、ｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９－フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、アセチル（Ａｃ）、カルボキシベンジル基（Ｃｂｚ）、ベンジル基（Ｂｎ）、アリル、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基および２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）を含むが、これらに限定されない。

【0088】

コネクターユニットを形成するためにリガンドと反応することができる基とは、リガンドを共有結合させるために反応性であるあらゆる化学部分を指す。特に、それはリガンド上に存在するチオール基と反応し得る。

【0089】

リガンドを共有結合させるために反応性である化学部分の非網羅的リストは、以下を含む：カルボン酸；第一級アミン；第二級アミン；第三級アミン；ヒドロキシル；ハロゲン；活性化エステル（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、パーフルオロエステル、ニトロフェニルエステル、アザベンゾトリアゾールおよびベンゾトリアゾール活性化エステルなど）、アシル尿素；アルキニル；アルケニル；アジド；イソシアネート；イソチオシアネート；アルデヒド；チオール反応性部分（マレイミド、ハロマレイミド、ハロアセチル、ピリジルジスルフィドなど）；チオール；アクリレート；メシレート；トシレート；トリフラート、ヒドロキシルアミン；クロロスルホニル；ボロン酸－Ｂ（ＯＲ’）_２誘導体（ここで、Ｒ’は水素またはアルキル基である）。

【0090】

「開裂性ユニット」は、内部または外部、好ましくは外部の刺激の作用によって、切断され得る化学基を指す。本開示において、開裂性ユニットは、ポリペプチド開裂性ユニットまたは糖開裂性ユニットのいずれかである。開裂性ユニットの切断を誘発する刺激としては、例えば、ｐＨもしくは温度条件、または酵素の存在であり得る。開裂性ユニットの切断は、好ましくは本発明の化合物のフェニルを含むリンカーの自己犠牲、および活性剤Ｄの放出を誘発する。本開示において、「開裂性糖ユニット」は、糖部分、好ましくはグルクロニドまたはガラクトシドを指すことができる。本開示において、「ポリペプチド開裂性ユニット」は、ポリペプチド、好ましくはジペプチドまたはトリペプチドを指すことができる。

【0091】

本明細書で使用される場合には、「１つ以上」という用語は、１～２０、または１～１０、または１～５の数を指すと理解することができる。

【0092】

式（Ｉ）の化合物
本開示は、式（Ｉ）の化合物に関する：

【0093】

【化8】

【0094】

式中、
Ｌは、リガンドである；
Ｘ１は、コネクターユニットである；
Ｚは、任意のスペーサーである；
Ｘ２は、コネクターユニットである；
Ｋは、任意の疎水性マスキング物質であり、好ましくはポリサルコシンおよびポリエチレングリコールから選択される；
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、ポリサルコシン、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引性基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙは、Ｔが糖開裂性ユニットの場合はＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットの場合はＮＲ３である；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0095】

一実施形態によれば、Ｌは、ポリペプチド、タンパク質、抗体およびそれらの抗原結合フラグメントからなる群から選択されるリガンドであり、好ましくは、Ｌは抗体またはその抗原結合フラグメントであり、より好ましくは、Ｌは抗体である。一実施形態によれば、抗体はトラスツズマブである。

【0096】

一実施形態によれば、Ｄは薬物からなる群から選択され、好ましくは、Ｄは抗癌剤または免疫調節剤である。一実施形態によれば、ＤはエキサテカンまたはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）である。

【0097】

一実施形態によれば、Ｘ１およびＸ２は、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、任意に置換されたポリエーテル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、６～１０個の環原子を有するアリーレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロアリーレン、Ｃ_２－Ｃ_１０アルケニレン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から独立して選択され、
前記アルキレンおよび前記アルケニレンは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断され、
ならびに、前記アルキレン、前記アリーレン、前記シクロアルキレン、前記ヘテロシクロアルキレン、前記ヘテロアリーレン、および前記アルケニレンは、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換されている：ハロゲン、オキソ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロシクリル、６～１０個の環原子を有するアリール、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－（ＣＯ）－Ｒ’、－Ｏ－（ＣＯ）－Ｒ’、－（ＣＯ）－Ｏ－Ｒ’、－（ＣＯ）－ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’－（ＣＯ）－Ｒ’、および－ＮＲ’’Ｒ’’’；
Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される。

【0098】

一実施形態によれば、Ｘ１は、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、任意に置換されたポリエーテル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、６～１０個の環原子を有するアリーレン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0099】

一実施形態によれば、Ｘ１は以下の通りである。

【0100】

【化9】

【0101】

一実施形態によれば、Ｘ２は、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、任意に置換されたポリエーテル、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。

【0102】

一実施形態によれば、Ｚは、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、任意に置換されたポリエーテル、Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレン、６～１０個の環原子を有するアリーレン、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキレン、５～１０個の環原子を有するヘテロアリーレン、Ｃ_２－Ｃ_１０アルケニレン、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキレンおよび前記アルケニレンは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断され、
ならびに、前記アルキレン、前記アリーレン、前記シクロアルキレン、前記ヘテロシクロアルキレン、前記ヘテロアリーレン、および前記アルケニレンは、以下から選択される１つ以上の置換基で任意に置換されている：ハロゲン、オキソ、－ＯＨ、－ＮＯ_２、－ＣＮ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロシクリル、６～１０個の環原子を有するアリール、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、Ｃ_１－Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルキル、Ｃ_１－Ｃ_６ハロアルコキシ、－（ＣＯ）－Ｒ’、－Ｏ－（ＣＯ）－Ｒ’、－（ＣＯ）－Ｏ－Ｒ’、－（ＣＯ）－ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’－（ＣＯ）－Ｒ’、および－ＮＲ’’Ｒ’’’；
Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される。

【0103】

一実施形態によれば、Ｚは、１つ以上のアミノ酸（単数または複数）、１つ以上のＮ－置換アミノ酸、およびポリエチレングリコールからなる群から選択される。

【0104】

一実施形態によれば、Ｚは存在せず、Ｘ１およびＸ２は単結合を介して互いに直接結合している。

【0105】

一実施形態によれば、Ｋはポリサルコシンであり、好ましくは単分散ポリサルコシンである。ポリサルコシンは、１から５０までの繰り返しユニットを有することができる。

【0106】

特定の実施形態において、Ｋはポリサルコシンであり、好ましくは以下の式（Ｖ）のポリサルコシンである

【0107】

【化10】

【0108】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数である、
ならびに、Ｒ６はＯＨまたはＮＨ２に相当する。

【0109】

一実施形態によれば、Ｔは、グルクロニドまたはガラクトシドである糖開裂性ユニットである。Ｔをアリール基に連結するグリコシド結合は、薬物の放出をもたらす自己犠牲反応シーケンスを開始するために切断され得るものであってもよい。

【0110】

一実施形態によれば、Ｔはジペプチドであり、好ましくはＶａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－ＡｌａおよびＰｈｅ－Ｌｙｓから選択される。

【0111】

一実施形態によれば、Ｒ１は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択され、好ましくはＨである。

【0112】

一実施形態によれば、Ｒ３は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択され、好ましくはＨである。

【0113】

一実施形態によれば、Ｒ４は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択される。

【0114】

一実施形態によれば、Ｒ５は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルからなる群から選択される。

【0115】

一実施形態によれば、Ｒ４およびＲ５の両方がＨである。

【0116】

一実施形態によれば、ｎは０であり、ＹはＮＲ３であり、Ｔはポリペプチド開裂性ユニットである。別の実施形態によれば、ｎは１であり、Ｒ２は－ＮＯ_２であり、ＹはＯであり、Ｔは糖開裂性ユニットである。

【0117】

好ましい実施形態によれば、Ｌは抗体またはその抗原結合フラグメントである。

【0118】

一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３７、ＣＤ７９ｂ、ＨＥＲ２、およびＰＳＭＡを含む群、またはこれらからなる群から選択される抗原と結合する。

【0119】

一実施形態によれば、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＨＥＲ２／ｎｅｕに結合する。

【0120】

本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物におけるリガンドＬとして好適な抗体のいくつかの例は、トラスツズマブ、ブレンツキシマブ、ロンカツキシマブ、ロソパタマブ、リツキシマブ、ピナツズマブ、ポラツズマブ、およびナラツキシマブを含むが、これらに限定されない。

【0121】

一実施形態によれば、抗体はトラスツズマブである。

【0122】

式（Ｉ）の化合物は、少なくとも１つの不斉炭素を有するので、異なる立体異性体が存在し得る。例えば、式（Ｉ）の化合物は以下に示すように、（Ｒ）形態または（Ｓ）形態で存在し得る：

【0123】

【化11】

【0124】

一実施形態によれば、式（Ｉ）の化合物は（Ｓ）である。

【0125】

特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＶＩ）の化合物である：

【0126】

【化12】

【0127】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数であり；および、Ｔはポリペプチド開裂性ユニット、好ましくはジペプチドである。

【0128】

特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＶＩＩ）の化合物である

【0129】

【化13】

【0130】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数である。

【0131】

特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＶＩＩＩ）の化合物である

【0132】

【化14】

【0133】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数であり；および、Ｔは糖開裂性ユニット、好ましくはグルクロニドまたはガラクトシドである。

【0134】

特定の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＸ）の化合物である

【0135】

【化15】

【0136】

式中、ｋは２～５０、好ましくは４～３０の整数である。

【0137】

本発明による式（Ｉ）の化合物は、実施例の節で開示したプロセスのような、当技術分野で公知の任意の好適なプロセスによって合成することができる。

【0138】

式（Ｉ）の化合物について記載した実施形態は、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）および式（ＩＶ）の化合物にも適用される。

【0139】

式（ＩＩ）の化合物
本開示はまた、式（ＩＩ）の化合物に関する：

【0140】

【化16】

【0141】

式中、
Ｘ１’は、リガンドと反応してコネクターユニットを形成することができる基である；
Ｚは、任意のスペーサーである；
Ｘ２は、コネクターユニットである；
Ｋは、任意の疎水性マスキング物質であり、好ましくはポリサルコシンおよびポリエチレングリコールから選択される；
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引性基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0142】

一実施形態によれば、Ｘ１’はマレイミドである。

【0143】

一実施形態によれば、Ｒ１’はＨである。

【0144】

一実施形態によれば、Ｒ３’はＨである。

【0145】

式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物を合成するために使用することができ、したがって式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物の合成における中間体である。

【0146】

式（ＩＩＩ）の化合物
本開示はまた、式（ＩＩＩ）の化合物に関する

【0147】

【化17】

【0148】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｄは活性剤であり、好ましくは、薬物、イメージング剤および蛍光剤からなる群から選択される；
各々のＲ２は、電子吸引性基からなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0149】

式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物を合成するために使用することができ、したがって式（ＩＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物の合成における中間体である。

【0150】

式（ＩＶ）の化合物
本開示はまた、式（ＩＶ）の化合物に関する

【0151】

【化18】

【0152】

式中、
Ｒ１’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
各々のＲ２は、電子吸引性基およびＣ_１－Ｃ_４アルキルからなる群から独立して選択される；
ｎは、０、１または２である；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ５は、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_６アルキルおよびＣ_２－Ｃ_６アルケニルからなる群から選択され、前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、および－ＮＲ’’－から選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｔは、糖開裂性ユニットまたはポリペプチド開裂性ユニットである；
Ｙ’は、Ｔが糖開裂性ユニットである場合にはＯであり、Ｔがポリペプチド開裂性ユニットである場合にはＮＲ３’である；
Ｒ３’は、アミノ保護基、Ｈ、Ｃ_１－Ｃ_２４アルキル、Ｃ_２－Ｃ_６アルケニル；任意に置換されたポリエーテル、６～１０個の環原子を有するアリール、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、３～１０個の環原子を有するヘテロシクロアルキル、５～１０個の環原子を有するヘテロアリール、およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択され、
前記アルキルおよび前記アルケニルは、１つ以上のヘテロ原子、または、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－ＮＲ’’’－、－ＮＲ’’－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’－およびトリアゾールから選択される１つ以上の化学基によって任意に中断される；
Ｒ’’およびＲ’’’は、ＨおよびＣ_１－Ｃ_６アルキルから独立して選択される；
ならびに、その薬学的に許容される塩である。

【0153】

一実施形態によれば、Ｒ４およびＲ５はＨであり、Ｙ’はＯであり、Ｔは糖開裂性ユニットである。

【0154】

別の実施形態によれば、Ｙ’はＮＲ３’であり、Ｔはポリペプチド開裂性ユニットである。

【0155】

式（ＩＶ）の化合物は、式（ＩＩＩ）の化合物を合成するために使用することができ、したがって式（ＩＶ）の化合物は、式（Ｉ）の化合物の合成における中間体である。

【0156】

〔医薬組成物〕
本開示はまた、本開示の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。特に、本開示は、式（Ｉ）の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。

【0157】

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などを含む。担体は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、非経口投与、脊髄投与または表皮投与（例えば、注射または注入による）に適し得る。一実施形態において、担体は皮下経路または腫瘍内注射に適するべきである。投与経路に応じて、活性化合物は、化合物を不活性化し得る酸および他の自然条件の作用から化合物を保護するための材料で被覆され得る。製剤は、１つ以上の賦形剤、保存剤、可溶化剤、緩衝剤などをさらに含むことができる。

【0158】

医薬組成物の形態、投与経路、投与量およびレジメンは、当然、治療される状態、疾患の重症度、患者の年齢、体重および性別などに依存する。

【0159】

本開示の医薬組成物は、局所投与、経口投与、経鼻投与、眼内投与、静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与などのために製剤化され得る。

【0160】

好ましくは、医薬組成物は、注射可能な製剤として薬学的に許容されるビヒクルを含む。これらは、特に、等張、無菌、生理食塩水（リン酸一ナトリウムもしくは二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウムもしくは塩化マグネシウムなど、またはこれらの塩の混合物）、または乾燥した、特に凍結乾燥した組成物であってよく、場合によっては、滅菌水または生理食塩水を添加することによって注射液の構成を可能にする。

【0161】

投与に使用される用量は、様々なパラメータの関数として、特に使用される投与様式の関数として、関連する病態の関数として、または代替的に所望の治療期間の関数として適合され得る。

【0162】

医薬組成物を調製するために、本開示による化合物の有効量を、薬学的に許容される担体または水性媒体に溶解または分散させてもよい。

【0163】

注射可能な使用に適した医薬形態は、無菌の水溶液または分散液；ゴマ油、ピーナッツ油または水性プロピレングリコールを含む製剤；および無菌の注射用溶液または分散液を即時に調製するための無菌の粉末または凍結乾燥物を含む。いずれの場合においても、製剤は無菌でなければならず、容易に注射できる程度に流動性がなければならない。また、製造および保管の条件下で安定でなければならず、微生物（細菌および真菌など）の汚染作用に対して保存されなければならない。

【0164】

遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性化合物の溶液は、界面活性剤（ヒドロキシプロピルセルロースなど）と適切に混合した水中で調製できる。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物、ならびに油中で調製できる。通常の保管および使用の条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を防ぐために防腐剤を含む。

【0165】

本開示の化合物は、中性または塩の形態で組成物に配合することができる。薬学的に許容される塩は、酸付加塩（遊離アミノ基で形成される）を含み、これは、例えば、無機酸（塩酸もしくはリン酸など）、または有機酸（酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸など）で形成される。遊離カルボキシル基と形成される塩はまた、例えば、無機塩基（ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄など）、および有機塩基（イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなど）に由来し得る。

【0166】

担体はまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、および野菜油、を含む、溶媒または分散液とすることができる。適切な流動性は、例えば、コーティング剤（レシチンなど）の使用、分散液の場合には必要な粒子径の維持、ならびに、界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなど）によってもたらされ得る。多くの場合には、等張剤（例えば、糖類または塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射用組成物の長時間の吸収は、吸収遅延剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）の組成物への使用によってもたらされ得る。

【0167】

無菌注射液は、必要な量の活性化合物を、上に列挙したいくつかの他の成分と共に適切な溶媒中に必要な量で取り込み、必要に応じ、次いでろ過滅菌することによって調製される。一般に、分散液は、基本的な分散媒体と、上に列挙した成分のうち必要な他の成分とを含む無菌ビヒクルに、様々な滅菌された活性成分を組み込むことによって調製される。無菌注射液の調製のための無菌粉末の場合には、好ましい調製方法は、真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、この技術は、活性成分の粉末に加え、あらかじめ無菌ろ過した溶液から所望の追加成分を得る。

【0168】

さらなる調製、または直接注射のための高濃度溶液はまた、溶媒としてＤＭＳＯを使用することで、高濃度の活性剤を小さな腫瘍領域に送達し、極めて迅速な浸透をもたらすことが想定されている。

【0169】

製剤化されると、溶液は剤形に適合した方法で治療上有効な量が投与される。製剤は、前述の注射液のタイプのような種々の剤形で容易に投与されるが、薬物放出カプセルなども採用され得る。

【0170】

水溶液で非経口投与する場合には、例えば、必要であれば溶液を適切に緩衝化し、最初に液体希釈剤を十分な生理食塩水またはグルコースを用いて等張にする。これらの特定の水溶液は、特に、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与に適している。これに関連して、採用できる滅菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に公知であろう。例えば、１投与量を１ｍＬの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍＬの皮下注射液に添加するか、または注入予定部位に注射してもよい（例えば、"Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, pages 1035-1038 and 1570-1580参照）。投与量は、治療を受ける対象の状態によって、必然的に多少変動する。いずれにせよ、投与責任者が個々の対象に適切な用量を決定する。

【0171】

非経口投与（静脈内注射または筋肉内注射など）用に製剤化された化合物に加えて、他の薬学的に許容される形態は、例えば、経口投与用の錠剤または他の固形物；タイムリリースカプセル；および現在使用されている任意の他の形態を含む。

【0172】

特定の実施形態において、抗体を宿主細胞に導入するために、リポソームおよび／またはナノ粒子の使用が企図されている。リポソームおよび／またはナノ粒子の形成および使用は、当業者に公知である。

【0173】

ナノカプセルは、一般に、安定かつ再現性のある方法で化合物を封入することができる。細胞内のポリマーの過負荷による副作用を避けるために、このような超微粒子（約０．１μｍの大きさ）は、一般に、ｉｎ ｖｉｖｏで分解可能なポリマーを使用して設計される。このような要件を満たす生分解性ポリアルキル－シアノアクリレートナノ粒子は、本開示での使用が企図されており、そのような粒子は容易に製造することができる。

【0174】

リポソームは、水性媒体中に分散されたリン脂質から形成され、自発的に多層同心二重層小胞（多層小胞（ＭＬＶ）とも呼ばれる）を形成する。ＭＬＶは一般に、２５ｎｍから４μｍまでの直径を有する。ＭＬＶを超音波処理すると、コアに水溶液を含み、２００～５００Ａの範囲で直径を有する小さな単層小胞（ＳＵＶ）が形成される。リポソームの物理的特性は、ｐＨ、イオン強度、および２価陽イオンの存在に依存する。

【0175】

投与に使用される用量は、様々なパラメータの関数として、特に使用される投与様式の関数として、関連する病態の関数として、または代替的に所望の治療期間の関数として、適合され得る。化合物および化合物を含む組成物の適切な投与量は、患者によって異なり得ることを理解されたい。最適な投与量を決定することは、一般に、本明細書に記載されるあらゆる治療のリスク、または有害な副作用に対する治療上の有益性のレベルのバランスを取ることに関連する。選択される投与量レベルは、特定の化合物の活性、投与経路、投与時間、化合物の排出速度、治療期間、併用される他の薬物、化合物、および／または材料、ならびに患者の年齢、性別、体重、状態、一般的健康状態、および既往歴を含むがこれらに限定されない様々な要因に依存する。化合物の量および投与経路は、最終的には医師の裁量に委ねられるが、一般的には、実質的に有害または有害な副作用を引き起こすことなく所望の効果を達成する、作用部位の局所濃度を達成するための投与量となる。例えば、投与に用いられる用量は、約５０～７０ｋｇの対象に対して本開示の化合物を約０．１～１０００ｍｇとすることができる。

【0176】

〔使用方法〕
本開示の化合物は、実施例において提供されるｉｎ ｖｉｔｒｏ試験およびｉｎ ｖｉｖｏ試験において示されるように、貴重な薬学的特性を示し、したがって治療のために示される。本開示はまた、薬物として使用するための本開示の化合物に関する。特に、本開示は、薬物として使用するための、式（Ｉ）のリガンド－薬物コンジュゲート化合物、より具体的には、Ｌが抗体またはその抗原結合部分である式（１）の抗体－薬物コンジュゲート化合物に関する。

【0177】

特に、本開示の化合物、より具体的には、本開示の式（Ｉ）の抗体－薬物コンジュゲートは、癌、炎症性疾患および／または感染性疾患の予防または治療に有用である。好ましい実施形態において、癌の予防または治療に使用するための式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）のリガンド－薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）であり、ここで、Ｌは抗体またはその抗原結合部分であり、より好ましくは、Ｄは細胞毒性化合物である。

【0178】

本開示はまた、癌を治療するための方法において使用するための本開示の化合物に関する。本明細書で使用される場合には、「癌」という用語は、当該技術分野における一般的な意味を有し、急速に増殖する細胞増殖を特徴とする異常な状態（ｓｔａｔｅ）または状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）を含む。この用語は、病理組織学的タイプまたは浸潤性のステージに関係なく、全てのタイプの癌性増殖または癌原性プロセス、転移組織または悪性に形質転換された細胞、組織または器官を含むことを意味する。癌という用語は、皮膚、肺、乳房、甲状腺、リンパ系、消化管、および泌尿生殖器に影響を及ぼすような様々な器官系の癌、ならびに、ほとんどの結腸癌、腎細胞癌、前立腺癌および／または精巣腫瘍、肺の非小細胞癌、小腸の癌および食道の癌などの癌を含む腺癌を含む。

【0179】

本開示は、癌を治療するための方法に関し、前記方法は、それを必要とする対象、好ましくはヒトに、治療上有効な量の
（ｉ）本開示の化合物、または
（ｉｉ）本明細書に記載の医薬組成物
を投与することを含む。

【0180】

好ましい実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において癌を治療または予防するための方法に関し、前記方法は、治療有効量の式（Ｉ）のリガンド－薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）を投与することを含み、ここで、Ｌは抗体またはその抗原結合部分であり、より好ましくは、Ｄは細胞毒性化合物である。

【0181】

本開示はまた、炎症性疾患を治療するための方法において使用するための本開示の化合物に関する。

【0182】

本明細書において、「炎症性疾患」という用語は、対象において炎症によって引き起こされる、または炎症につながるあらゆる疾患を定義するために使用される。この用語は、（１）炎症性疾患および／またはアレルギー性疾患、（２）自己免疫疾患、（３）移植片拒絶反応、ならびに（４）望ましくない炎症反応が阻害される他の疾患、を含み得るが、これらに限定されない。

【0183】

本開示は、炎症性疾患を治療するための方法に関し、前記方法は、それを必要とする対象、好ましくはヒトに、治療上有効な量の
（ｉ）本開示の化合物、または
（ｉｉ）本明細書に記載の医薬組成物
を投与することを含む。

【0184】

本開示はまた、感染性疾患を治療するための方法において使用するための本開示の化合物に関する。

【0185】

本明細書において、「感染性疾患」という用語は、感染因子（または病原体）による対象への侵入、その増殖、およびこれらの感染因子およびそれらが産生する毒素に対する対象の組織の反応によって引き起こされるあらゆる疾患を定義するために使用される。この用語は、（１）細菌感染、（２）ウイルス感染、（３）真菌感染、および（４）寄生虫感染を含むが、これらに限定されない。

【0186】

本開示は、感染性疾患を治療するための方法に関し、前記方法は、それを必要とする対象、好ましくはヒトに、治療上有効な量の
（ｉ）本開示の化合物、または
（ｉｉ）本明細書に記載の医薬組成物
を投与することを含む。

【0187】

好ましい実施形態において、本開示は、それを必要とする対象において感染症を治療または予防するための方法に関し、前記方法は、治療有効量の式（Ｉ）のリガンド－薬物コンジュゲート（ＬＤＣ）を投与することを含み、ここで、Ｌは、抗体またはその抗原結合部分であり、より好ましくは、Ｄは、抗感染剤（例えば、抗生物質または抗ウイルス剤）である。

【0188】

本明細書で使用される場合には、「治療する」という用語は、当該用語が適用される疾患、障害、もしくは状態、または、当該疾患、障害、もしくは状態の１つ以上の症状もしくは発現の可能性を逆転させること、緩和すること、進行を抑制すること、予防すること、または低減することを含む。予防することは、疾患、障害、状態、またはそのような症状もしくは発現、またはそのような重症度の悪化を起こさないようにすることを指す。したがって、現在開示されている化合物は、疾患、障害または状態の、発生または再発を、予防または低減するために、予防的に投与することができる。

【0189】

本明細書で使用される場合には、化合物の「治療上有効な量」という用語は、対象の生物学的反応または医学的反応を誘発する化合物の量（例えば、症状を改善する、状態を緩和する、疾患の進行を遅らせる、または疾患を予防する化合物の量）を指す。

【0190】

本開示はまた、癌、炎症性疾患および／または感染性疾患の治療のための、好ましくは癌の治療のための医薬の製造について、本開示の化合物、好ましくは式（Ｉ）の化合物の使用に関する。

【0191】

式（ＩＩ）の化合物は、リガンドなしでそのまま使用することができる。例えば、Ｘ１’がマレイミド部分である場合には、式（ＩＩ）の化合物は、血清アルブミンのようなタンパク質とｉｎ ｖｉｖｏで反応することができ、次いでリガンドとなる。したがって、本開示はまた、薬物として使用するための、上述のような式（ＩＩ）の化合物に関する。

【0192】

〔実施例〕
〔材料および一般的な方法〕
全ての溶媒および試薬は、信頼できる市販の供給元（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍ、ＴＣＩ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ、Ｅｎａｍｉｎｅ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ｃａｒｂｏｓｙｎｔｈ、ＷｕＸｉ ＡｐｐＴｅｃ、Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）から入手し、特に断りのない限り、さらに精製することなく使用した。無水溶媒は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。Ｆｍｏｃ－アミノ酸、２－クロロトリチル、ワングおよびリンクアミドポリスチレン１％ＤＶＢ １００－２００メッシュ樹脂（最初のＦｍｏｃ－サルコシンアミノ酸をあらかじめ担持）は、Ｃｈｒｉｓｔｏｆ Ｓｅｎｎ ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓおよびＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、エキサテカンメシレートおよび７－エチル－１０－ヒドロキシカンプトテシン（ＳＮ３８）は、ＤＣＣｈｅｍｉｃａｌｓ、ＭｅｄＣｈｅｍＥｘｐｒｅｓｓ、またはＡｂｚｅｎａから購入した。ヒトアルブミン（ｃａｔ＃Ａ３７８２）は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）ＩＶ）は、Ｒｏｃｈｅから購入した。市販されていないモノクローナル抗体は、ＣＨＯ細胞株、およびＧＴＰ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｔｏｕｌｏｕｓｅ、フランス）によって精製されたｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ／ＳＥＣへの一過性トランスフェクションによって、カスタム生産した。

【0193】

２０μｍのポリエチレンフリット（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を備えた空のＳＰＥプラスチックチューブ内で、オンレジン合成を行った。攪拌には、Ｔｉｔｒａｍａｘ１０１プラットフォームシェーカー（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ）を使用した。特に断りのない限り、全ての化学反応は不活性アルゴン雰囲気下、室温で行った。

【0194】

液体核磁気共鳴スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ Ｆｏｕｒｉｅｒ ３００ＨＤまたはＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ＩＩＩ ＨＤ４００質量分析計で、較正のために残留溶媒ピークを使用して記録した。質量分析は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｌａｕｄｅ Ｂｅｒｎａｒｄ Ｌｙｏｎ １のＵＭＲ５２４６ ＣＮＲＳ研究所のＣｅｎｔｒｅ Ｃｏｍｍｕｎ ｄｅ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｉｅ ｄｅ Ｍａｓｓｅ（ＣＣＳＭ）によって実施した。

【0195】

順相フラッシュクロマトグラフィーは、Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ Ｃｈｒｏｍａｂｏｎｄ（登録商標）フラッシュカートリッジ（４０～６３μｍ）を用いて、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ２００装置で実施した。逆相クロマトグラフィーは、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ Ｃｏｍｂｉｆｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ２００装置で、Ｂｉｏｔａｇｅ（登録商標）Ｓｆａｒ Ｃ１８ Ｄｕｏ １００Ａ ３０μｍカートリッジまたはＩｎｔｅｒｃｈｉｍ ＰｕｒｉＦｌａｓｈ ＲＰ－ＡＱ（３０μｍ）カートリッジを使用して；または、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００分取バイナリーＨＰＬＣシステムを使用して実施した。

【0196】

化学反応および化合物の特性は、それぞれ、プレコートされた４０～６３μｍシリカゲル（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）、ＨＰＬＣ－ＵＶ（Ａｇｉｌｅｎｔ１１００システム）、または、ＵＨＰＬＣ－ＵＶ／ＭＳ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｉｍｐａｃｔ ＩＩ（商標）Ｑ－ＴｏＦ質量分析計を備えたＴｈｅｒｍｏ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ ＵＨＰＬＣシステム、もしくはＢｒｕｋｅｒ ＭｉｃｒＯＴＯＦ－ＱＩＩ質量分析計を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １２６０ ＨＰＬＣシステム）を用いた薄層クロマトグラフィーによって、モニターおよび分析した。

【0197】

ＨＰＬＣ法１：ＤＡＤ検出器装備を装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステム。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムはＡｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ａｑ ４．６×１５０ｍｍ ５μｍ（室温）であった。直線勾配は０％Ｂ～５０％Ｂで３０分間であり、その後５０％Ｂで５分間保持した。流速は１．０ｍＬ／分であった。

【0198】

ＨＰＬＣ法２：ＤＡＤ検出器装備を装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステム。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムはＡｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ３．０×５０ｍｍ ２．７μｍ（室温）であった。直線勾配は５％Ｂ～８０％Ｂで９分間であり、その後８０％Ｂで１分間保持した。流速は０．８ｍＬ／分であった。

【0199】

ＨＰＬＣ法３：ＤＡＤ検出器装備を装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ＨＰＬＣシステム。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムはＡｇｉｌｅｎｔ Ｐｏｒｏｓｈｅｌｌ １２０ ＥＣ－Ｃ１８ ３．０×５０ｍｍ ２．７μｍ（室温）であった。直線勾配は５％Ｂ～８０％Ｂで２０分間であり、その後８０％Ｂで２分間保持した。流速は０．８ｍＬ／分であった。

【0200】

ＨＰＬＣ法４：Ｔｈｅｒｍｏ ＵｌｔｉＭａｔｅ ３０００ ＵＨＰＬＣシステム＋Ｂｒｕｋｅｒ Ｉｍｐａｃｔ ＩＩ（商標）Ｑ－ＴｏＦ質量分析計。移動相Ａは水＋０．１％ギ酸であり、移動相Ｂはアセトニトリル＋０．１％ギ酸であった。カラムはＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬＲＰ－Ｓ １０００Ａ ２．１×１５０ｍｍ ８μｍ（８０℃）であった。直線勾配は１０％Ｂ～５０％Ｂで２５分間であった。流速は０．４ｍＬ／分であった。ＵＶ検出は２８０ｎｍでモニターした。Ｑ－ＴｏＦ質量分析計を使用し、ｍ／ｚ範囲は５００－３５００（ＥＳＩ^＋）であった。データはＢｒｕｋｅｒ Ｃｏｍｐａｓｓ（登録商標）ソフトウェアに含まれるＭａｘＥｎｔアルゴリズムを使用してデコンボリューションした。

【0201】

ＨＰＬＣ法５（分取法）：ＤＡＤ検出器装備を装備したＴｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ２００バイナリーＭＰＬＣシステム。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。再利用可能なカートリッジはＢｉｏｔａｇｅ（登録商標）Ｓｆａｒ Ｃ１８ Ｄｕｏ １００Ａ ３０μｍ（３０ｇ）であった。直線勾配は１０％Ｂ～５０％Ｂで３５分間であり、その後５０％Ｂで５分間保持した。流速は２５ｍＬ／分であった。

【0202】

ＨＰＬＣ法６（分取法）：デュアルループオートインジェクター、ＤＡＤ検出器、およびフラクションコレクターを装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｂｉｎａｒｙ ＨＰＬＣシステム。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。カラムはＷａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８ ＯＢＤ Ｐｒｅｐ Ｃｏｌｕｍｎ，１００Ａ，５μｍ，１９ｍｍ×２５０ｍｍ（室温）であった。直線勾配は１０％Ｂ～６０％Ｂで４０分間であり、その後６０％Ｂで５分間保持した。流速は２５ｍＬ／分であった。

【0203】

１）本発明の化学化合物の調製
１．１）単分散ポリサルコシン中間体
１．１．１）一般的な方法
リンクアミド樹脂および２－クロロトリチル樹脂ではサブモノマー合成反復手順（特許ＷＯ２０１９０８１４５５に記載済み）を用いて、ワング樹脂では市販のＦｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨジペプトイドビルディングブロック（ＣＡＳ＃２３１３５３４－２０－０）を使用する古典的なＦｍｏｃ／ＳＰＰＳ方法に従って、単分散ポリサルコシンの樹脂上での合成を実現した。なお、ワング樹脂上でのペプトイドサブモノマー合成は失敗したことに留意されたい。全ての場合において、樹脂上での二量体ステージ（ｎ＝２）は、ジケトピペラジン形成のために回避した。全ての合成収率は、製造業者によって指示された初期のＦｍｏｃ－サルコシン添加量に基づいて報告される。特に断りのない限り、全ての反応は室温で行った。リンクアミド、２－クロロトリチルまたはワングポリスチレン１％ＤＶＢ１００－２００メッシュ樹脂に、第１のＦｍｏｃ－サルコシン残基をあらかじめ添加したもの（Ｃｈｒｉｓｔｏｆ Ｓｅｎｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用した（一般的な初期添加量は０．６－１ｍｍｏｌ／ｇ）。

【0204】

１．１．２）ポリサルコシンの伸長
Ｆｍｏｃ－サルコシンをあらかじめ添加したリンクアミド、２－クロロトリチルまたはワング樹脂を、ＤＭＦ中２０％のピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）で室温にて１５分×２回処理した。次いで、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。樹脂に、Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨ（３ｅｑ）、ＨＡＴＵ（２．９ｅｑ）およびＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）のＤＭＦ溶液（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を加えた。反応容器を２時間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。樹脂を、ＤＭＦ中２０％のピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を用いて室温にて１５分×２回処理した。その後、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。

【0205】

リンクアミドまたは２－クロロトリチル樹脂上での合成には、ＷＯ２０１９０８１４５５に記載されているように、古典的なサブモノマー合成手順を使用した。ｎ＝３のポリサルコシンオリゴマーの伸長は、ブロモアセチル化工程とアミン置換工程とを交互に行い、所望の長さが得られるまで行った。ブロモアセチル化工程は、１０ｅｑのブロモ酢酸および１３ｅｑのジイソプロピルカルボジイミドを、ＤＭＦ（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）中で添加することによって行った。混合物を３０分間撹拌し、水切りし、ＤＭＦで洗浄した（４回）。アミン置換工程のために、水溶液中の４０％（ｗｔ）メチルアミンを添加し（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）、容器を３０分間振とうし、水切りし、ＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。

【0206】

ワング樹脂上での合成には、古典的なＦｍｏｃ／ＳＰＰＳ手順を用いた。ｎ＝３のポリサルコシンオリゴマーの伸長は、Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨジペプトイドビルディングブロック（ＣＡＳ＃２３１３５３４－２０－０）の反復カップリングによって行った。樹脂に、Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨ（３ｅｑ）、ＨＡＴＵ（２．９ｅｑ）およびＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）のＤＭＦ溶液を加えた（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で広範囲に洗浄した。次に、樹脂を、ＤＭＦ中２０％のピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を用いて室温で１５分×２回処理した。樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。このカップリング／Ｆｍｏｃ－脱保護サイクルを、所望の長さのポリサルコシンが得られるまで繰り返した。必要であれば、最終的に均等な長さのポリサルコシンを得るために、Ｆｍｏｃ－Ｓａｒ－Ｓａｒ－ＯＨジペプトイドユニットの代わりに市販のＦｍｏｃ－Ｓａｒ－ＯＨアミノ酸を用いて最後のカップリングを行う。

【0207】

１．１．３）ポリサルコシンの最終的な樹脂上の側官能基化、任意のキャッピング、樹脂の切断および精製
所望の樹脂上のポリサルコシン単分散オリゴマー長に達したら、直交化学的官能基化を行う。任意に、Ｆｍｏｃ－アミノ酸（例えば、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－β－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６ジオキサオクタン酸、Ｆｍｏｃ－９－アミノ－４，７－ジオキサノナン酸）による最終的なキャッピングが続く。最終化合物のＮ末端をキャッピングするＦｍｏｃ保護基は、使用する直交官能基化化学に依って、樹脂切断の前または後に除去できる（後述する）。

【0208】

１．１．３．１）２－アジドエタン－１－アミン側官能基化ポリサルコシン
リンク樹脂または２－クロロトリチル樹脂に、ＤＭＦ中１０ｅｑのブロモ酢酸と１３ｅｑのジイソプロピルカルボジイミドとを加える（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）。混合物を３０分間撹拌し、水切りし、ＤＭＦで洗浄した（４回）。３モーラーの２－アジドエタン－１－アミンのＤＭＦ溶液（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を加え、容器を４５分間振とうし、水切りし、ＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。続いて、１時間のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨカップリング（ＤＭＦ中５ｅｑのＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、４．９ｅｑのＨＡＴＵ、１０ｅｑのＤＩＰＥＡ（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ））およびＤＭＦ中２０％のピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）によるＦｍｏｃ－脱保護を、室温で１５分×２回行った。樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。

【0209】

最終ポリサルコシン化合物を樹脂から切断した（リンク樹脂およびワング樹脂は１００％ＴＦＡを３０分×２回、２－クロロトリチル樹脂はＤＣＭ中２０％ＴＦＡを１５分×２回）。樹脂をろ過し、減圧下で揮発性物質を除去して粗製物を得、これをＩｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＲＰ－ＡＱ（３０μｍ）カートリッジで精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。

【0210】

１．１．３．２）β－アラニン側官能基化ポリサルコシン
リンク樹脂または２－クロロトリチル樹脂に、ＤＭＦ中１０ｅｑのブロモ酢酸と１３ｅｑのジイソプロピルカルボジイミドを加える（樹脂１００ｍｇ当たり２ｍＬ）。混合物を３０分間撹拌し、水切りし、ＤＭＦで洗浄した（４回）。３モーラーのアリル３－アミノプロパノエートのＤＭＦ溶液（Schroer et al., J. Org. Chem. 1997, 62, 10, 3220-3229に記載のように合成し、ＴＨＦ中３ｅｑのＮａ_２ＣＯ_３を用いて５０℃で２０分間フリーベースした）を加え（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）、容器を４５分間振とうし、水切りし、ＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。続いて、１時間のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨカップリング（ＤＭＦ中５ｅｑのＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ、４．９ｅｑのＨＡＴＵ、１０ｅｑのＤＩＰＥＡ（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ））を行った。樹脂をＤＭＦ（４回）、ＤＣＭ（４回）で洗浄した。０．２５ｅｑのＰｄ（ＰＰｈ_３）_４および２０ｅｑのフェニルシランを含むＤＣＭ溶液で３０分×２回処理することによって、アロック保護基を除去した（アルゴン気流下で穏やかに撹拌）。その後、樹脂をＤＭＦ（５回）およびＤＣＭ（５回）で洗浄した。任意に、５０ｅｑのＤＩＣおよび６０ｅｑのＮ－ヒドロキシスクシンイミドを含むＤＭＦ溶液（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）で９０分間処理することによって、最終ポリサルコシン化合物のカルボン酸側鎖にＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを導入した。その後、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。

【0211】

最終ポリサルコシン化合物を樹脂から切断した（リンク樹脂およびワング樹脂は１００％ＴＦＡを３０分×２回、２－クロロトリチル樹脂はＤＣＭ中２０％ＴＦＡを１５分×２回）。樹脂をろ過し、減圧下で揮発性物質を除去して粗製物を得、これをＩｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＲＰ－ＡＱ（３０μｍ）カートリッジで精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。

【0212】

１．１．３．３）グルタミン酸側官能基化ポリサルコシン
リンク樹脂、ワング樹脂または２－クロロトリチル樹脂に、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）－ＯＨ（３ｅｑ）、ＨＡＴＵ（２．９ｅｑ）およびＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）のＤＭＦ溶液（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を加えた。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で広範囲に洗浄した。次に、樹脂を、ＤＭＦ中２０％のピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を用いて室温で１５分×２回処理した。樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。続いて、ＤＭＦ中、Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６ジオキサオクタン酸（３ｅｑ）、ＨＡＴＵ（２．９ｅｑ）、ＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を用いて１時間カップリングした。樹脂をＤＭＦ（４回）、ＤＣＭ（４回）で洗浄した。０．２５ｅｑのＰｄ（ＰＰｈ_３）_４および２０ｅｑのフェニルシランを含むＤＣＭ溶液で３０分×２回処理することによって、アロック保護基を除去した（アルゴン気流下で穏やかに撹拌）。その後、樹脂をＤＭＦ（５回）およびＤＣＭ（５回）で洗浄した。任意に、５０ｅｑのＤＩＣおよび６０ｅｑのＮ－ヒドロキシスクシンイミドを含むＤＭＦ溶液（樹脂１００ｍｇ当たり１．５ｍＬ）で９０分間処理することによって、最終ポリサルコシン化合物のカルボン酸側鎖にＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを導入した。その後、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。

【0213】

最終ポリサルコシン化合物を樹脂から切断した（リンク樹脂およびワング樹脂は１００％ＴＦＡを３０分×２回、２－クロロトリチル樹脂はＤＣＭ中の２０％ＴＦＡを１５分×２回）。樹脂をろ過し、減圧下で揮発性物質を除去して粗製物を得、これをＩｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＲＰ－ＡＱ（３０μｍ）カートリッジで精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。

【0214】

１．１．３．４）γ－アジドホモアラニン官能化ポリサルコシン
リンク樹脂、ワング樹脂または２－クロロトリチル樹脂に、Ｆｍｏｃ－γ－アジドホモアラニン（３ｅｑ）、ＨＡＴＵ（２．９ｅｑ）およびＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）のＤＭＦ溶液（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を加えた。反応容器を９０分間撹拌し、樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で広範囲に洗浄した。次に、樹脂を、ＤＭＦ中２０％のピペリジン（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を用いて室温で１５分×２回処理した。樹脂をＤＭＦ（４回）およびＤＣＭ（４回）で洗浄した。続いて、ＤＭＦ中、Ｆｍｏｃ－アミノ－３，６ジオキサオクタン酸（３ｅｑ）、ＨＡＴＵ（２．９ｅｑ）、ＤＩＰＥＡ（６ｅｑ）（樹脂１００ｍｇ当たり１ｍＬ）を用いて１時間カップリングした。樹脂をＤＭＦ（４回）、ＤＣＭ（４回）で洗浄した。

【0215】

最終ポリサルコシン化合物を、樹脂から切断した（リンク樹脂およびワング樹脂は１００％ＴＦＡを３０分×２回、２－クロロトリチル樹脂はＤＣＭ中２０％ＴＦＡを１５分×２回）。樹脂をろ過し、減圧下で揮発性物質を除去して粗製物を得、これをＩｎｔｅｒｃｈｉｍ（登録商標）ＲＰ－ＡＱ（３０μｍ）カートリッジで精製した。移動相Ａは水＋０．１％ＴＦＡであり、移動相Ｂはアセトニトリルであった。

【0216】

１．１．４）最終ポリサルコシン中間体
次の表１は、得られた化合物の一覧である。

【0217】

【表1】

【0218】

１．２）中間体化合物の合成
１．２．１）化合物Ｂ１および化合物Ｂ２の合成

【0219】

【化19】

【0220】

これらの化合物は、特許ＷＯ２０１９９０８１４５５に記載されている手順に従って合成した。これらの化合物は、等モルのジアステレオ異性体混合物である（立体異性中心はアスタリスクによって示される）。

【0221】

１．２．２）化合物Ｂ３および化合物Ｂ４の合成

【0222】

【化20】

【0223】

１．２．２．１）ｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメートの合成
（±）－オクトパミン塩酸塩（１６９０ｍｇ／１１ｍｍｏｌ）を丸底フラスコに量り取り、４ｍＬの蒸留水に懸濁した。フラスコを０℃で冷やし、あらかじめ冷やしておいた６５％硝酸溶液４ｍＬをゆっくりと加えた。反応は０℃で２０分間保持され、ＨＰＬＣによる評価で出発物質の完全なモノニトロ化を示した。フラスコの内容物を２５０ｍＬのあらかじめ冷やした三角フラスコに移し、ｐＨ値が８～９になるまで０℃で飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（約５０ｍＬ）を用いてゆっくりと中和した。次に、ジオキサン３０ｍＬを加え、続いてＢｏｃ_２Ｏ（７２０２ｍｇ／１３．２ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応物を室温にし、一晩撹拌した。その後、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和クエン酸水溶液で３回、飽和ＮａＣｌ水溶液で１回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、真空下で蒸発させて粗製物を得、これをシリカゲル上のクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、７０：３０から２０：８０までの勾配）で精製して、表題化合物（１３２０ｍｇ／４０％）を濃い黄色から褐色の油として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１０．７９（ｓ，１Ｈ）、７．７９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．１Ｈｚ，１Ｈ）、７．０８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ）、６．７４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．５６（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ）、３．０７（ｔｄ，Ｊ＝６．１，１．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．３１（ｓ，９Ｈ）。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２９９．１；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２９９．１。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝５．５分。

【0224】

１．２．２．２）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシエチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートの合成
丸底フラッシュに、Ａｇ_２ＣＯ_３（１５００ｍｇ／５．４ｍｍｏｌ）および１，１，４，７，１０，１０－ヘキサメチルトリエチレンテトラミン（２５１ｍｇ／１．１ｍｍｏｌ）を４ｍＬの無水アセトニトリル中に取り込み、室温で２時間撹拌した。前駆化合物ｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメート（２９２ｍｇ／０．９８ｍｍｏｌ）および１－ブロモ－２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－α－Ｄ－グルクロニドメチルエステル（５８３ｍｇ／１．４６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、溶液混合物を室温で４時間撹拌した。次いで、反応物をセライト上でろ過し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和クエン酸水溶液で３回、飽和ＮａＣｌ水溶液で１回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、真空下で蒸発させて粗製物を得、これをシリカゲル上のクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、７０：３０から３０：７０までの勾配）で精製して、表題化合物（２４４ｍｇ／４８％）を黄色の泡として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．７６（ｄｄ，Ｊ＝３．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝８．７，２．６Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｓ，１Ｈ），５．７１（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６１（ｓ，１Ｈ），５．４６（ｔｄ，Ｊ＝９．５，１．１Ｈｚ，１Ｈ），５．２１－５．０２（ｍ，３Ｈ），４．７５（ｄｄ，Ｊ＝９．９，１．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），３．１７（ｓ，２Ｈ），３．１０（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），２．８１－２．５９（ｍ，６Ｈ），２．０５－１．９６（ｍ，９Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，９Ｈ）。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６３７．２；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６３７．２。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝６．７５分。

【0225】

１．２．２．３）（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートの合成
前駆化合物（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシエチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテート（３３４ｍｇ／０．５４ｍｍｏｌ）および４－ニトロフェニルクロロホルメート（２１９ｍｇ／１．０９ｍｍｏｌ）を、６ｍＬの乾燥ＤＣＭに０℃で溶解した。無水ピリジン（１１２ｍｇ／１．４１ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。反応物を０．４５μｍＰＴＦＥフィルターでろ過し、シリカゲル上のクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、８５：１５から３０：７０までの勾配）で精製して、表題化合物（３８０ｍｇ／９０％）を黄色の泡として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．３９－８．２６（ｍ，２Ｈ），７．９３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｄｄ，Ｊ＝９．２，１．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝７．７，３．７Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｑ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，２Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ，１Ｈ），３．７３－３．５９（ｍ，３Ｈ），３．５９－３．３７（ｍ，２Ｈ），２．０５－１．９６（ｍ，９Ｈ），１．４８－１．３５（ｍ，１Ｈ），１．３２（ｓ，９Ｈ）。ＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝８０２．１５；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝８０２．１５。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝８．５分。

【0226】

１．２．２．４）化合物Ｂ３の合成
１０１ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）の前駆化合物（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテート、９８ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）のＭＭＡＥおよび１８ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、８５：１５（ｖ／ｖ）の無水ＤＭＦ／ピリジン混合物１ｍＬに溶解した。１６．７ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から９５：５までの勾配）で精製して、脱保護工程に直接関与する中間体化合物（白色固体）を１４７ｍｇ（８４％）得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１３５８．７。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝８．８分。

【0227】

この中間体化合物１４４ｍｇ（０．１０６ｍｍｏｌ）を０℃でＭｅＯＨ３ｍＬに溶解した。ＬｉＯＨ一水和物（４４．５ｍｇ／１．０６ｍｍｏｌ）を水（０．４ｍＬ）に溶解し、反応容器に加えた。０℃で３０分間撹拌した後（反応後、ＨＰＬＣ）、混合物を酢酸（８３ｍｇ／１．４ｍｍｏｌ）で中和し、減圧下濃縮した。得られた粗製物をＴＦＡ／ＤＣＭ（３０：７０ｖ／ｖ）溶液を用いて０℃にて再溶解し、室温で１５分間撹拌した。揮発性物質を減圧下で蒸発させ、粗残渣を水／ＡＣＮ（１：１ｖ／ｖ）溶液に取り込み、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、８５ｍｇ（７２％）の化合物Ｂ３を白色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１１８．５８６７；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１１８．５８４２；Ｅｒｒｏｒ＝２．２ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝９．３６分。

【0228】

１．２．２．５）化合物Ｂ４の合成
化合物Ｂ４は、化合物Ｂ３の合成に用いた手順と同じ手順に若干の調整を加えて合成した。（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートとエキサテカンメシレートとのカップリング反応は、室温で一晩行う代わりに４０℃で２時間行った。

【0229】

１２５ｍｇ（８７％）の中間体化合物（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｓ，６Ｓ）－２－（４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－（（（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－６－（メトキシカルボニル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－３，４，５－トリイルトリアセテートは、黄色／緑色の固体で得られた。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１０９８．３。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１４．７分および１４．９分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0230】

グルクロニド部分の脱保護は、純粋なＭｅＯＨの代わりに、ＭｅＯＨ／ＴＨＦ（７５：２５ｖ／ｖ）を用いて行った。Ｂｏｃ－脱保護は、化合物Ｂ３について記載したように実施した。

【0231】

ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製すると、６５ｍｇ（６７％）の化合物Ｂ４が黄色の固体として得られた。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８３６．２。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．３分および７．８分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0232】

１．２．２．６）立体純化合物Ｂ４－ＳおよびＢ４－Ｒの合成

【0233】

【化21】

【0234】

１．２．２．６．１）ｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメートのラセミ混合物のキラル分離
ラセミ体ｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメート（前述のように合成）のキラル分離は、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ２００システム上のＣｈｉｒａｌｆｌａｓｈ（登録商標）ＩＣ ＭＰＬＣカラム３０×１００ｍｍ、２０μｍ（Ｄａｉｃｅｌ ｃａｔ＃８３Ｍ７３）を用いて行った。移動相はＤＣＭ＋０．２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ（アイソクラティック勾配）であった。流速は１２ｍＬ／分であった。サンプル溶媒はＤＣＭ＋０．２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨであった。分離後の２つのエナンチオマーの質量回収率は８０％超であった。

【0235】

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメートの保持時間は１５分であったが、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）－（２－ヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシ－３－ニトロフェニル）エチル）カルバメートの保持時間は２５分であった。

【0236】

絶対配置を決定するために、両方のエナンチオマーのフェノール位置を、無水ＴＨＦ中、１．２モル当量の４－ニトロベンゾイル塩化物および２モル当量のトリエチルアミンを用いてエステル化した。化合物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ、９０：１０から１０：９０までの勾配）で精製して、４－（２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシエチル）－２－ニトロフェニル ４－ニトロ安息香酸を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．５１（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），８．４４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２Ｈ），８．１９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８６－４．７６（ｍ，１Ｈ），３．２４（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝４７０．１。エナンチオマー（あらかじめヘプタン／ジクロロメタンの１：１混合物に溶解し、結晶形成を誘導するために３週間ゆっくりと蒸発させた）の絶対配置は、Ｘ線結晶構造解析によって確認した。ブロック状の結晶をパーフルオロエーテル油中のナイロンループにマウントした。データは、Ｔ＝１５０．００（５）Ｋで動作するＯｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ低温装置を装備したＸｃａｌｉｂｕｒ、Ａｔｌａｓ、Ｇｅｍｉｎｉ超回折計を使用して収集した。データは、ＣｕＫ_α放射線を使用したωスキャンを用いて測定した。構造は、デュアル法を用いたＳｈｅｌＸＴソリューションプログラムを用いて、Ｏｌｅｘ２（O.V. Dolomanov et al., Olex2: A complete structure solution, refinement and analysis program, J. Appl. Cryst., 2009, 42, 339-341）をグラフィカルインターフェースとして使用することによって解明した。このモデルは、ＳｈｅｌＸＬ ２０１８／３（Sheldrick, G.M., Crystal structure refinement with ShelXL, Acta Cryst., 2015, C71, 3-8）で、Ｆ^２について完全行列最小二乗法による最小化を用いて精密化した。

【0237】

１．２．２．６．２）立体純Ｂ４－ＳおよびＢ４－Ｒ化合物の合成
立体純化合物のＢ４－ＳおよびＢ４－Ｒは、反応条件、反応性、または全般的な収率に大きな変化はなく、前節１．２．２で述べたように合成された。

【0238】

ＨＰＬＣ分取法５を用いた最終精製によって、３３ｍｇの化合物Ｂ４－Ｓを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８３６．２。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．３分。

【0239】

ＨＰＬＣ分取法５を用いた最終精製によって、２１ｍｇの化合物Ｂ４－Ｒを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８３６．２。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．８分。

【0240】

１．２．３）化合物Ｂ５および化合物Ｂ６の合成

【0241】

【化22】

【0242】

１．２．３．１）Ａｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＨ（アセチル－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニン）の合成
３０ｍＬのＤＣＭ中のＬ－アラニンベンジルエステル塩酸塩（５４２ｍｇ／２．５ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（２５４ｍｇ／２．５ｍｍｏｌ）、蒸留水（３０ｍＬ）、Ｎ－α－アセチル－Ｌ－バリン（４００ｍｇ／２．５ｍｍｏｌ）、およびＨＯＢｔ（３３９ｍｇ／２．５ｍｍｏｌ）を順次加えた。次いで混合物を０℃に冷却し、ＥＤＣ－ＨＣｌ（５３０ｍｇ／２．７５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を０℃で一晩撹拌した。反応物を２０ｍＬの２Ｍ ＨＣｌで希釈し、層を分離した。有機相を２Ｍ ＨＣｌで２回、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で２回、飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、真空下で蒸発させて、ベンジルアセチル－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニネートを白色固体の中間体として７１４ｍｇ（８９％）得た。

【0243】

この中間体を、１：１（ｖ／ｖ）のＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ１０ｍＬに溶解し、ステンレス鋼製の水素化反応器に移した。最初のアルゴンパージ後、触媒量の５重量％Ｐｄ／Ｃを添加した。その後、反応器をＨ_２で２回パージし、１０ｂａｒのＨ_２圧力下に室温で一晩保持した。０．４５μｍのＰＴＦＥフィルターで反応物をろ過し、真空下で溶媒を除去した後、純粋なアセチル－Ｌ－バリル－Ｌ－アラニンを白色固体として定量的に得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ１２．４５（ｓ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２５－４．１１（ｍ，２Ｈ），１．９４（ｄｔ，Ｊ＝１３．６，６．８Ｈｚ，１Ｈ），１．８５（ｓ，３Ｈ），１．２６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ），０．８５（ｄｄ，Ｊ＝１２．１，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。

【0244】

１．２．３．２）（２Ｓ）－２－アセトアミド－Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（１－ヒドロキシブト－３－イン－１－イル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）－３－メチルブタンアミドの合成
丸底フラッシュに、４２０ｍｇ（２．６０ｍｍｏｌ）の１－（４－アミノフェニル）ブト－３－イン－１－オール（Sharma A. et al., Chem 2018, 4 (10), 2370-2383に記載の手順に従って合成）および６００ｍｇ（２．６０ｍｍｏｌ）の前駆化合物Ａｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＯＨを、２０ｍＬの無水ＴＨＦに懸濁した。次に、５ｍＬの無水ＤＭＦに先に溶解させた６７６ｍｇ（２．７４ｍｍｏｌ）の２－エトキシ－１－エトキシカルボニル－１，２－ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）をフラスコに入れ、濁った反応混合物を室温で一晩撹拌した。その後、揮発性物質を減圧下で蒸発させ、粗残渣を乾固し、シリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から８５：１５までの勾配）で精製して、表題化合物８０９ｍｇ（８３％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．８４（ｓ，１Ｈ），８．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），５．４４（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｑ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｐ，Ｊ＝７．６，７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，６．８Ｈｚ，１Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９６（ｄｔ，Ｊ＝１３．２，６．６Ｈｚ，１Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．８６（ｄｄ，Ｊ＝１０．９，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３７４．２。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝３．９５分。

【0245】

１．２．３．３）１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）ブト－３－イン－１－イル（４－ニトロフェニル）カーボネートの合成
９４ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）の（２Ｓ）－２－アセトアミド－Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（１－ヒドロキシブト－３－イン－１－イル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）－３－メチルブタンアミドおよび１５３ｍｇ（０．５０ｍｍｏｌ）のビス（４－ニトロフェニル）カーボネートを２ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。９８ｍｇ（０．７６ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、粗残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から９０：１０までの勾配）で精製して、表題化合物１１８ｍｇ（８７％）を黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．９９（ｓ，１Ｈ），８．３５－８．２６（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．５８－７．４８（ｍ，２Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．７４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｐ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．０１－２．８４（ｍ，３Ｈ），１．９９－１．９１（ｍ，１Ｈ），１．８８（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１．２，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５３９．１。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝６．４８分。

【0246】

１．２．３．４）化合物Ｂ５の合成
４４ｍｇ（０．０８２ｍｍｏｌ）の前駆化合物１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）ブト－３－イン－１－イル（４－ニトロフェニル）カーボネート、５３ｍｇ（０．０７４）のＭＭＡＥおよび１１．１ｍｇ（０．０８２ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、８５：１５（ｖ／ｖ）の無水ＤＭＦ／ピリジン混合物１ｍＬに溶解した。１０．６ｍｇ（０．０８２ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、ＨＰＬＣ分取法５を用いて直接精製し、化合物Ｂ５を白色固体として４１ｍｇ（５０％）得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１１３９．７。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝７．４０分。

【0247】

１．２．３．５）化合物Ｂ６の合成
化合物Ｂ６は、化合物Ｂ５の合成に用いた手順と同じ手順に若干の調整を加えて合成した。１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）ブト－３－イン－１－イル（４－ニトロフェニル）カーボネートとエキサテカンメシレートとのカップリング反応は、室温で一晩行う代わりに４０℃で３時間行った。減圧下で揮発性物質を除去した後、反応混合物をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から９５：５までの勾配）で精製して、５３．３ｍｇ（７８％）の化合物Ｂ６を黄色／緑色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８３５．３。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝６．５０分および６．６０分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0248】

１．２．４）化合物Ｂ７および化合物Ｂ８の合成

【0249】

【化23】

【0250】

１．２．４．１）ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－アミノフェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートの合成
市販のｔｅｒｔ－ブチル（２－ヒドロキシ－２－（４－ニトロフェニル）エチル）カルバメート（ＣＡＳ＃９３９７５７－２５－２）９１１ｍｇ（３．２３ｍｍｏｌ）を含むＭｅＯＨ溶液を、ステンレス鋼製の水素化反応器に移した。最初のアルゴンパージ後、５重量％の触媒量のＰｄ／Ｃを添加した。その後、反応器をＨ_２で２回パージし、１０ｂａｒのＨ_２の圧力下、室温で５時間、攪拌しながら反応を保持した。反応物を０．４５μｍＰＴＦＥフィルターでろ過し、真空下でＭｅＯＨを除去した後、表題化合物７４９ｍｇ（９２％）を白色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２５３．２。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝２．７３分。

【0251】

１．２．４．２）ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートの合成
１５０ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）の前駆化合物ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－アミノフェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメート、２２２ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨおよび８１ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを、５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。１８１ｍｇ（０．７１ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを加え、反応物を室温で一晩撹拌する。その後、揮発性物質を減圧下で除去し、粗残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ １００：０から９０：１０までの勾配）で精製して、Ｆｍｏｃ－脱保護に直接関与する最初の中間体ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）フェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートを定量的に得た。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝７．７分。

【0252】

ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）プロパンアミド）フェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートを、９：１（ｖ／ｖ）のＤＭＦ／ピペリジン５ｍＬに溶解し、室温で１５分間撹拌した。次いで、揮発性物質を減圧下で除去し、粗残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から８０：２０までの勾配）で精製して、１３０ｍｇ（２工程にわたって６８％）の第２の中間体ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－アミノプロパンアミド）フェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートを白色の泡状固体として得た。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝３．７５分。

【0253】

１３０ｍｇ（０．４０ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－アミノプロパンアミド）フェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートおよび１２４ｍｇ（０．４８ｍｍｏｌ）の市販のＡｃ－Ｖａｌ－ＯＳｕ（ＣＡＳ＃５６１８６－３７－９）を３ｍＬの無水ＤＭＦに溶解し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。その後、揮発性物質を減圧下で除去し、粗残渣を３ｍＬのＤＣＭで粉砕して、表題化合物９５ｍｇ（５１％）を白色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．８２（ｓ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．７３－６．５８（ｍ，１Ｈ），５．２７（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．５８－４．４７（ｍ，１Ｈ），４．４０（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．１５－２．９０（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｓ，４Ｈ），１．３５（ｓ，９Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．９２－０．７３（ｍ，６Ｈ）。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４８７．３。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝４．５０分。

【0254】

１．２．４．３）ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）－２－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）カルバメートの合成
２８６ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）のｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートおよび３７５ｍｇ（１．２３ｍｍｏｌ）のビス（４－ニトロフェニル）カーボネートを、無水ＤＭＦ３ｍＬに溶解した。３１８ｍｇ（２．４６ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加え、反応混合物を室温で３時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で除去し、粗残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から９０：１０までの勾配）で精製して、表題化合物３３６ｍｇ（８７％）を黄色固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ９．９９（ｓ，１Ｈ），８．３６－８．２６（ｍ，２Ｈ），８．２２（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．５６－７．４６（ｍ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．６８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｐ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４９－３．３４（ｍ，２Ｈ），２．０１－１．９０（ｍ，１Ｈ），１．８７（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，９Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．８６（ｄｄ，Ｊ＝１１．１，６．８Ｈｚ，６Ｈ）。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝６５２．２。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝７．１３分。

【0255】

１．２．４．４）化合物Ｂ７の合成
４３．２ｍｇ（０．０６９ｍｍｏｌ）の前駆化合物ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）－２－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）カルバメート、４１ｍｇ（０．０５７）のＭＭＡＥおよび６．７ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、８５：１５（ｖ／ｖ）の無水ＤＭＦ／ピリジン混合物１ｍＬに溶解した。１１．０ｍｇ（０．０８６ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１から９０：１０までの勾配）で精製して、Ｂｏｃ－脱保護工程に直接関与する４７ｍｇ（５５％）の中間体化合物（微黄色固体）を得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１２３０．７。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝７．５５分。

【0256】

得られた固体をＴＦＡ／ＤＣＭ（３０：７０ｖ／ｖ）溶液を用いて０℃にて再溶解し、室温で１５分間撹拌した。揮発性物質を減圧下で蒸発させ、粗残渣を水／ＡＣＮ（１：１ｖ／ｖ）溶液に取り込み、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、化合物Ｂ７を白色固体として１５ｍｇ（３０％）得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１０８．７。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝５．８分および５．９分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0257】

１．２．４．５）化合物Ｂ８の合成
化合物Ｂ８は、化合物Ｂ７の合成に用いた手順と同じ手順に若干の調整を加えて合成した。ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）－２－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）エチル）カルバメートとエキサテカンメシレートとのカップリング反応は、室温で一晩行う代わりに４０℃で３時間行った。

【0258】

中間体化合物１－（４－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アセトアミド－３－メチルブタンアミド）プロパンアミド）フェニル）－２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）エチル（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバメートを褐黄色の固体で得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝９２６．４。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝６．７分および６．８分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0259】

Ｂｏｃ－脱保護は、化合物Ｂ７について述べたように行った。ＨＰＬＣ分取法５を用いた精製によって、４７ｍｇ（７０％）の化合物Ｂ８を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８２６．４。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．３０分および８．７５分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0260】

１．２．４．６）立体純化合物Ｂ８－ＳおよびＢ８－Ｒの合成

【0261】

【化24】

【0262】

１．２．４．６．１）ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－アミノフェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートのラセミ混合物のキラル分離
ラセミ体ｔｅｒｔ－ブチル（２－（４－アミノフェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートのキラル分離は、Ｔｅｌｅｄｙｎｅ Ｉｓｃｏ ＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）Ｒｆ２００システムにＣｈｉｒａｌｆｌａｓｈ（登録商標）ＩＣ ＭＰＬＣカラム３０×１００ｍｍ，２０μｍ（Ｄａｉｃｅｌ ｃａｔ＃８３Ｍ７３）を用いて行った。移動相はＤＣＭ＋０．２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ（アイソクラティック勾配）であった。流速は１２ｍＬ／分であった。サンプル溶媒はＤＣＭ＋０．２％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨであった。分離後の２つのエナンチオマーの質量回収率は７５％以上であった。

【0263】

ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（２－（４－アミノフェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートの保持時間は２１分であったが、ｔｅｒｔ－ブチル（Ｒ）－（２－（４－アミノフェニル）－２－ヒドロキシエチル）カルバメートの保持時間は２９分であった。エナンチオマー（あらかじめヘプタン／エタノールの１：１混合溶媒に溶解し、結晶形成を誘導するために１週間ゆっくりと蒸発させた）の絶対配置をＸ線結晶構造解析で確認した。ブロック状の結晶をパーフルオロエーテル油中のナイロンループにマウントした。データは、Ｔ＝１５０．００（１０）Ｋで動作するＯｘｆｏｒｄ Ｃｒｙｏｓｙｓｔｅｍｓ低温装置を備えたＸｃａｌｉｂｕｒ、Ａｔｌａｓ、Ｇｅｍｉｎｉ超回折計を使用して収集された。データは、ＣｕＫ_α放射線を使用したωスキャンを用いて測定された。構造は、デュアル法を用いたＳｈｅｌＸＴソリューションプログラムを用いて、Ｏｌｅｘ２（O.V. Dolomanov et al., Olex2: A complete structure solution, refinement and analysis program, J. Appl. Cryst., 2009, 42, 339-341）をグラフィカルインターフェースとして使用することによって解明した。このモデルは、ＳｈｅｌＸＬ ２０１８／３（Sheldrick, G.M., Crystal structure refinement with ShelXL, Acta Cryst., 2015, C71, 3-8）を用いて、Ｆ^２について完全行列最小二乗法による最小化を用いて精密化した。

【0264】

１．２．４．６．２）立体純Ｂ８－ＳおよびＢ８－Ｒ化合物の合成
立体純化合物Ｂ８－ＳおよびＢ８－Ｒは、反応条件、反応性、または全般的な収率に大きな変化はなく、前節１．２．４で述べたように合成した。

【0265】

ＨＰＬＣ分取法５を用いた最終精製によって、５４ｍｇの化合物Ｂ８－Ｓを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８２６．４。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．４５分。

【0266】

ＨＰＬＣ分取法５を用いた最終精製によって、４６ｍｇの化合物Ｂ８－Ｒを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝８２６．４。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．９０分。

【0267】

１．２．５）化合物Ｂ９、化合物Ｂ１０および化合物Ｂ１１の合成
１．２．５．１）化合物Ｂ９の合成

【0268】

【化25】

【0269】

２０．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）のＢｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＣＡＳ＃１８８４５７８－００－０，Ｉｒｉｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、２３．１ｍｇ（０．０３２）のＭＭＡＥおよび５ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）のＨＯＢｔを、８５：１５（ｖ／ｖ）の無水ＤＭＦ／ピリジン混合物１ｍＬに溶解した。４．６ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）のＤＩＰＥＡを加えた。反応物を室温で１６時間撹拌し、揮発性物質を減圧下で蒸発させた。粗残渣を２ｍＬのＴＦＡ／ＤＣＭ（３０：７０ｖ／ｖ）溶液で溶解し、室温で１時間撹拌した。揮発性物質を減圧下で蒸発させ、粗残渣を水／ＡＣＮ（１：１ｖ／ｖ）溶液に取り込み、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、１１ｍｇ（２６％）の化合物Ｂ９を白色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０３７．７。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝７．９分。

【0270】

１．２．５．２）化合物Ｂ１０の合成

【0271】

【化26】

【0272】

化合物Ｂ１０は、化合物Ｂ９の合成に用いた手順と同じ手順に若干の調整を加えて合成した。Ｂｏｃ－Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ－ＰＮＰ（ＣＡＳ＃１８８４５７８－００－０）とエキサテカンメシレートとのカップリング反応は、室温で一晩行う代わりに４０℃で３時間行った。

【0273】

Ｂｏｃ－脱保護は、上記の化合物Ｂ９について述べたように行った。ＨＰＬＣ分取法５を用いた精製によって、５２ｍｇ（２工程にわたって９０％）の化合物Ｂ１０を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝７５５．３。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝５．７０分。

【0274】

１．２．５．３）化合物Ｂ１１の合成

【0275】

【化27】

【0276】

化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（２－（３－アミノプロパンアミド）－４－（（５Ｒ，８Ｒ，１１Ｒ，１２Ｓ）－１１－（（Ｒ）－ｓｅｃ－ブチル）－１２－（２－（２－（（１Ｒ，２Ｓ）－３－（（（１Ｒ，２Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル）アミノ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル）ピロリジン－１－イル）－２－オキソエチル）－５．８－ジイソプロピル－４，１０－ジメチル－３，６，９－トリオキソ－２，１３－ジオキサ－４，７，１０－トリアザテトラデシル）フェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸（化合物Ｂ１１）を、Jeffrey SC et al., Bioconjug. Chem., 2006, 17(3), 831-840に記載のように合成した。

【0277】

１．３）薬物リンカーの合成
１．３．１）グルクロニドベースの薬物リンカーの合成
１．３．１．１）化合物ＤＬ１の合成

【0278】

【化28】

【0279】

１００ｍｇ（０．０８１ｍｍｏｌ）の化合物Ａ１（ＮＨＳ－活性化ポリサルコシン中間体）および５１ｍｇ（０．０６１ｍｍｏｌ）の化合物Ｂ４（ＮＨ_２－ペイロード）を、小瓶中の無水ＤＭＦに溶解した（化合物Ｂ４の濃度は０．０８０Ｍ）。４１ｍｇ（０．４０５ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加え、室温で３０分間撹拌して反応させた。ＨＰＬＣで観察される反応の全転化後、ＤＭＦ中８％（ｖ／ｖ）のピペリジン溶液になるように、ピペリジンを反応バイアルに直接添加する。その後、ＨＰＬＣでＦｍｏｃ－脱保護が完全に観察されるまで、反応物を室温で５～１０分間撹拌する。反応物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中１０％のＴＦＡの溶液を用いてゆっくりと中和し、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、７４ｍｇ（出発化合物Ｂ４に基づいて７０％の収率）の中間体化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（４１－アミノ－１－（（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）アミノ）－９－グリシル－１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９－デカメチル－１，６，１１，１４，１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５，３８，４１－トリデカオキソ－２－オキサ－５，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３，３６，３９－ドデカアザヘンテトラコンタン－３－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１７３１．７。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．４０分および７．７０分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0280】

１７．８ｍｇ（０．０１０ｍｍｏｌ）のこの化合物および２．８５ｍｇ（０．０１１ｍｍｏｌ）のマレイミド酢酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルを、無水ＤＭＦ（マレイミド化合物の濃度は０．１Ｍ）に溶解した。１．５６ｍｇ（０．０１５）のトリエチルアミンを加え、ＨＰＬＣで観察される反応物の全転化まで２時間撹拌した。次いで、反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法６を用いて精製し、１３．７ｍｇ（７２％）の化合物ＤＬ１を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９３４．８５５９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９３４．８５４４；Ｅｒｒｏｒ＝１．７ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．７３分および８．０８分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0281】

１．３．１．２）化合物ＤＬ２の合成

【0282】

【化29】

【0283】

４４．５ｍｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）の化合物Ａ２（アジド－ポリサルコシン中間体）および２７．５（０．０３３ｍｍｏｌ）の化合物Ｂ２（アルキン－ペイロード）を、化合物Ｂ２の濃度が０．０６０Ｍになるように、１００ｍＭ ＰＢＳ（ｐＨ＝７．５）とＤＭＳＯとが１：１（ｖ／ｖ）である溶液に溶解した。次いで、０．０８モル当量のＣｕおよび１モル当量のアスコルビン酸ナトリウム（反応混合物中の化合物Ｂ２モル当量に基づく）になるように、新しく調製したＣｕＳＯ_４五水和物およびアスコルビン酸ナトリウム溶液（約２５０ｍｇ／ｍＬ）を反応バイアルに順次加えた。反応をアルゴンでパージし、４０℃で撹拌する。反応はＨＰＬＣでモニターし、２時間以内に完了した。反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中０．１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、４４ｍｇ（出発化合物Ｂ２に基づいて７７％）の中間体化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（２－（１－（３５－アミノ－３－グリシル－６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－デカメチル－５，８，１１，１４、１７，２０，２３，２６，２９，３２，３５－ウンデカオキソ－３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７，３０，３３－ウンデカアザペンタトリアコンチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）－１－（（（（１Ｒ，９Ｒ）－９－エチル－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－４－メチル－１０，１３－ジオキソ－２，３，９，１０，１３，１５－ヘキサヒドロ－１Ｈ，１２Ｈ－ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３’，４’：６，７］インドリジノ［１，２－ｂ］キノリン－１－イル）カルバモイル）オキシ）エチル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１７５５．７。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．５１分および７．８２分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0284】

２６．０ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）のこの化合物および４．１１ｍｇ（０．０１６ｍｍｏｌ）のマレイミド酢酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルを、無水ＤＭＦ（０．１Ｍ濃度のマレイミド化合物）に溶解した。２．２５ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加え、ＨＰＬＣで反応物の全転化が観察されるまで２時間撹拌した。反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法６を用いて精製し、１６．０ｍｇ（５７％）の化合物ＤＬ２を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１８９２．７。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．９５分および８．２０分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0285】

１．３．１．３）化合物ＤＬ３の合成

【0286】

【化30】

【0287】

５．４ｍｇ（０．０２３ｍｍｏｌ）の市販の２－（４－（２，５－ジオキソ－２Ｈ－ピロール－１（５Ｈ）－イル）フェニル）酢酸（ＣＡＳ＃９１５７４－４５－７）および９．０４ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）のＣＯＭＵを、無水ＤＭＦ（マレイミド化合物の濃度０．１Ｍ濃度）に溶解した。４．７５ｍｇ（０．０６７ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加えた。反応物を室温で２分間プレインキュベートし、９．８ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）の化合物Ｂ４（反応バイアル中であらかじめ秤量）上に移した。反応物をＨＰＬＣで反応の全転化が観察されるまで３０分間撹拌した。反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、４．７ｍｇ（４０％）の化合物ＤＬ３を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０４９．２８４７；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０４９．２８７３；Ｅｒｒｏｒ＝－２．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝９．８０分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0288】

１．３．１．４）化合物ＤＬ４の合成

【0289】

【化31】

【0290】

１６．０ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）のＮ－（２－アジドエチル）－２－（４－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）フェニル）アセトアミド（特許ＷＯ２０１９０８１４５５にすでに記載されている手順に従って合成した。－２０℃で保存すると数日しか保存できない、かなり不安定な化合物）および２２．６（０．０２７ｍｍｏｌ）の化合物Ｂ２を、０．０６０Ｍ濃度の化合物Ｂ２となるように、１００ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ＝７．５）とＤＭＳＯとが１：１（ｖ／ｖ）である溶液に溶解した。次に、新たに調製したＣｕＳＯ_４五水和物およびアスコルビン酸ナトリウム溶液（約２５０ｍｇ／ｍＬ）を、０．０８モル当量のＣｕおよび１モル当量のアスコルビン酸ナトリウム（反応混合物中の化合物Ｂ２モル当量に基づく）になるように反応バイアルに順次加えた。反応をアルゴンでパージし、室温で撹拌した。反応はＨＰＬＣでモニターし、１時間以内に完了した。次いで、反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中０．１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法６を用いて精製し、１６ｍｇ（５３％）の化合物ＤＬ４を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１４４．３３３１；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１４４．３３５１；Ｅｒｒｏｒ＝－１．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝９．６１分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0291】

１．３．１．５）化合物ＤＬ５の合成

【0292】

【化32】

【0293】

化合物ＤＬ５は、化合物ＤＬ１に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ４（ＮＨＳ－活性化ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ３（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0294】

１０．８ｍｇ（２工程にわたって４８％）の化合物ＤＬ５を微黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^３＋＝７６５．０４６０；Ｅｘｐ［Ｍ＋３Ｈ］^３＋＝７６５．０４４３；Ｅｒｒｏｒ＝２．２ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝９．１４分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0295】

１．３．１．６）化合物ＤＬ６の合成

【0296】

【化33】

【0297】

化合物ＤＬ６は、化合物ＤＬ２に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ５（アジド－ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ１（アルキン－ペイロード）であった。

【0298】

１６．３ｍｇ（２工程にわたって４１％）の化合物ＤＬ６を微黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝１１５９．１。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝９．３２分および９．４５分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0299】

１．３．１．７）化合物ＤＬ７の合成

【0300】

【化34】

【0301】

化合物ＤＬ７は、化合物ＤＬ３に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、市販の化合物マレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および化合物Ｂ３（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0302】

１５．６ｍｇ（６９％）の化合物ＤＬ７を白色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋２Ｎａ］^２＋＝７０１．３。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１０．９４分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0303】

１．３．１．８）化合物ＤＬ８の合成

【0304】

【化35】

【0305】

１５．０ｍｇ（０．０１３ｍｍｏｌ）の化合物Ｂ１（アルキン－ペイロード）および３．４４ｍｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）の２－アジドエチルアミンを、化合物Ｂ１の濃度が０．０６０Ｍになるように、１００ｍＭのＰＢＳ（ｐＨ＝７．５）とＤＭＳＯとが１：１（ｖ／ｖ）である溶液に溶解した。次に、新しく調製したＣｕＳＯ_４五水和物およびアスコルビン酸ナトリウム溶液（約２５０ｍｇ／ｍＬ）を、０．０８モル当量のＣｕおよび１モル当量のアスコルビン酸ナトリウム（反応混合物中の化合物Ｂ１モル当量に基づく）になるように、反応バイアルに順次加えた。反応をアルゴンでパージし、室温で撹拌する。反応はＨＰＬＣでモニターし、１時間以内に完了した。反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中０．１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、１８．２ｍｇ（出発化合物Ｂ１に基づき１１０％）の中間体化合物（２Ｓ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）－６－（４－（（３Ｓ，４Ｒ，７Ｒ，１０Ｒ）－１５－（１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）－４－（（Ｒ）－ｓｅｃ－ブチル）－３－（２－（２－（（１Ｓ，２Ｓ）－３－（（（１Ｒ，２Ｓ）－１－ヒドロキシ－１－フェニルプロパン－２－イル）アミノ）－１－メトキシ－２－メチル－３－オキソプロピル）ピロリジン－１－イル）－２－オキソエチル）－７，１０－ジイソプロピル－５，１１－ジメチル－６，９、１２－トリオキソ－２，１３－ジオキサ－５，８，１１－トリアザペンタデカン－１４－イル）－２－ニトロフェノキシ）－３，４，５－トリヒドロキシテトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－カルボン酸を白色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２１３．６。ＨＰＬＣ法２の保持時間＝５．５５分および５．６５分（ジアステレオ異性体混合物）。

【0306】

５．７９ｍｇ（０．０２２ｍｍｏｌ）の市販のマレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および９．００ｍｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）のＣＯＭＵを、無水ＤＭＦ（０．１Ｍ濃度のマレイミド化合物）に溶解した。６．１ｍｇ（０．０６０ｍｍｏｌ）のトリエチルアミンを加えた。反応物を室温で２分間プレインキュベートし、１８．２ｍｇ（０．０１２ｍｍｏｌ）の前駆化合物（反応バイアル中であらかじめ秤量）上に移した。反応物をＨＰＬＣで観察する反応物の全転化が観察されるまで３０分間撹拌した。反応混合物を、１：１（ｖ／ｖ）の水／ＡＣＮ中１％のＴＦＡの溶液で希釈し、ＨＰＬＣ分取法５を用いて精製し、化合物ＤＬ８を白色固体として１６．０ｍｇ（７３％）得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝７２６．８６０９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝７２６．８６３１；Ｅｒｒｏｒ＝－３．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１０．４０分および１０．５６分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0307】

１．３．１．９）化合物ＤＬ９の合成

【0308】

【化36】

【0309】

化合物ＤＬ９は、化合物ＤＬ３に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、市販の化合物マレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および化合物Ｂ１１（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0310】

１０．０ｍｇ（４１％）の化合物ＤＬ９を白色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝６８５．３５４９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝６８５．３５５４；Ｅｒｒｏｒ＝－０．８ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１１．３８分。

【0311】

１．３．１．１０）化合物ＤＬ１０の合成

【0312】

【化37】

【0313】

化合物ＤＬ１０は、化合物ＤＬ１に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ６（ＮＨＳ－活性化ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ４（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0314】

５４．１ｍｇ（２工程にわたって４４％）の化合物ＤＬ１０を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９３４．８５５９；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９３４．８５４５；Ｅｒｒｏｒ＝１．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．６８分および８．０１分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0315】

１．２．１．１１）化合物ＤＬ１０－ＳおよびＤＬ１０－Ｒの合成

【0316】

【化38】

【0317】

化合物ＤＬ１０－ＳおよびＤＬ１０－Ｒは、化合物ＤＬ１に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質はそれぞれ、化合物Ｂ４－ＳおよびＢ４－Ｒ（ＮＨ_２－ペイロード）ならびに化合物Ａ６（ＮＨＳ－活性化ポリサルコシン中間体）であった。

【0318】

４．７ｍｇの化合物ＤＬ１０－Ｓを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１８９０．７。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝７．６２分。

【0319】

４．０ｍｇの化合物ＤＬ１０－Ｒを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１８９０．７。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．０６分。

【0320】

１．２．１．１２）化合物ＤＬ１１の合成

【0321】

【化39】

【0322】

化合物ＤＬ１１は、化合物ＤＬ２に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ３（アジド－ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ２（アルキン－ペイロード）であった。

【0323】

１４．３ｍｇ（２工程にわたって４３％）の化合物ＤＬ１１を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９４７．３５３６；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９４７．３５４０；Ｅｒｒｏｒ＝－０．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．１３分および８．３６分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0324】

１．３．２）ジペプチドベースの薬物リンカーの合成
１．３．２．１）化合物ＤＬ１２の合成

【0325】

【化40】

【0326】

化合物ＤＬ１２は、化合物ＤＬ１に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ７（ＮＨＳ－活性化ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ８（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0327】

３４．９ｍｇ（２工程にわたって４６％）の化合物ＤＬ１２を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９８１．４３９４；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９８１．４３９８；Ｅｒｒｏｒ＝－０．４ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．８１分および８．９４分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0328】

１．３．２．２）化合物ＤＬ１２－ＳおよびＤＬ１２－Ｒの合成

【0329】

【化41】

【0330】

化合物ＤＬ１２－ＳおよびＤＬ１２－Ｒは、化合物ＤＬ１に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質はそれぞれ、化合物Ｂ８－ＳおよびＢ８－Ｒ（ＮＨ_２－ペイロード）ならびに化合物Ａ７（ＮＨＳ－活性化ポリサルコシン中間体）であった。

【0331】

１８．１ｍｇの化合物ＤＬ１２－Ｓを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９８１．４。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．７８分。

【0332】

１６．３ｍｇの化合物ＤＬ１２－Ｒを黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９８１．４。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．９６分。

【0333】

１．３．２．３）化合物ＤＬ１３の合成

【0334】

【化42】

【0335】

化合物ＤＬ１３は、化合物ＤＬ２に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ８（アジド－ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ６（アルキン－ペイロード）であった。

【0336】

４．５ｍｇ（２工程にわたって２４％）の化合物ＤＬ１３を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９９３．４４５１；Ｅｘｐ［Ｍ＋２Ｈ］^２＋＝９９３．４４１６；Ｅｒｒｏｒ＝３．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．８８分および９．１１分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0337】

１．３．２．４）化合物ＤＬ１４の合成

【0338】

【化43】

【0339】

化合物ＤＬ１４は、化合物ＤＬ３に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、市販の化合物マレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および化合物Ｂ８（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0340】

７．０ｍｇ（５９％）の化合物ＤＬ１４を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０６５．４３６４；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１０６５．４３７０；Ｅｒｒｏｒ＝－０．５ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１０．２０分および１０．４４分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0341】

１．３．２．５）化合物ＤＬ１５の合成

【0342】

【化44】

【0343】

化合物ＤＬ１５は、化合物ＤＬ８で用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。

【0344】

３．１ｍｇ（２工程にわたって２０％）の化合物ＤＬ１５を黄色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１６０．４８４８；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１１６０．４８５４；Ｅｒｒｏｒ＝－０．６ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝９．９６分および１０．１２分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0345】

１．３．２．６）化合物ＤＬ１６の合成

【0346】

【化45】

【0347】

化合物ＤＬ１６は、化合物ＤＬ３に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、市販の化合物マレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および化合物Ｂ７（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0348】

５．３ｍｇ（４１％）の化合物ＤＬ１６を白色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１３６９．７６１８；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｎａ］^＋＝１３６９．７６２１；Ｅｒｒｏｒ＝－０．３ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１１．３８分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0349】

１．３．２．７）化合物ＤＬ１７の合成

【0350】

【化46】

【0351】

化合物ＤＬ１７は、化合物ＤＬ８に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。

【0352】

８．９ｍｇ（２工程にわたって２４％）の化合物ＤＬ１７を白色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１４４２．８２９４；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１４４２．８２８４；Ｅｒｒｏｒ＝０．７ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１１．８１分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0353】

１．３．２．８）化合物ＤＬ１８の合成

【0354】

【化47】

【0355】

化合物ＤＬ１８は、化合物ＤＬ３に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、市販の化合物マレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および化合物Ｂ１０（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0356】

１４．５ｍｇ（６２％）の化合物ＤＬ１８を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝９９４．４。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１１．６２分。

【0357】

１．３．２．９）化合物ＤＬ１９の合成

【0358】

【化48】

【0359】

化合物ＤＬ１９は、化合物ＤＬ３に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、市販の化合物マレイミド－ＰＥＧ_２－酸（ＣＡＳ＃１３７４６６６－３２－６）および化合物Ｂ９（ＮＨ_２－ペイロード）であった。

【0360】

４．７ｍｇ（３５％）の化合物ＤＬ１９を白色固体として得た。ＨＲＭＳｍ／ｚ（ＥＳＩ^＋）：Ｃａｌｃ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２７６．７４３９；Ｅｘｐ［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１２７６．７４４１；Ｅｒｒｏｒ＝－０．１ｐｐｍ。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝１３．２８分。

【0361】

１．３．２．１０）化合物ＤＬ２０の合成

【0362】

【化49】

【0363】

化合物ＤＬ２０は、化合物ＤＬ２に用いた手順と同じ手順で、上記のように合成した。出発物質は、化合物Ａ３（アジド－ポリサルコシン中間体）および化合物Ｂ６（アルキン－ペイロード）であった。

【0364】

１４．０ｍｇ（２工程にわたって３６％）の化合物ＤＬ２０を黄色固体として得た。ＥＳＩ^＋［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１８８３．８。ＨＰＬＣ法３の保持時間＝８．８２分および９．０７分（等モルジアステレオ異性体混合物）。

【0365】

２）コンジュゲートの調製および特性評価
２．１）抗体－薬物コンジュゲートの調製
抗体の溶液（１０ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ７．４＋１ｍＭのＥＤＴＡ）を、１４モル当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を用いて３７℃で２時間処理した。完全に還元された抗体を、Ａｍｉｃｏｎ３０Ｋ遠心フィルター装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて希釈／遠心を３回繰り返し、リン酸カリウム１００ｍＭ ｐＨ７．４＋１ｍＭのＥＤＴＡを用いて緩衝液交換した。薬物抗体比（ＤＡＲ）が８になるように、１０～１２モル当量の薬物リンカー（１２ｍＭのＤＭＳＯストック溶液から）を抗体に添加した（残留ＤＭＳＯ＜１０％ｖ／ｖ）。溶液を室温で３０分間インキュベートした。コンジュゲートを、Ａｍｉｃｏｎ３０Ｋ遠心フィルター装置を用いて希釈／遠心を４回繰り返すことによって、ＰＢＳ ｐＨ７．４で緩衝液の交換／精製し、無菌ろ過した（０．２０μｍＰＥＳフィルター）。

【0366】

自己加水分解性マレイミド（マレイミド－フェニルおよびマレイミド－グリシン）を組み込んだコンジュゲートを、ＰＢＳ８．０中５ｍｇ／ｍＬで３７℃にて２４時間インキュベートして、スクシンイミジル部分の完全な加水分解を確実にし、Ａｍｉｃｏｎ３０Ｋ遠心フィルター装置を用いてＰＢＳ ｐＨ７．４で緩衝液交換し、滅菌ろ過した（０．２０μｍＰＥＳフィルター）。

【0367】

最終タンパク質濃度は、Ｃｏｌｉｂｒｉ微量分光計装置（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を用いて、２８０ｎｍで、分光光度法で評価した。

【0368】

２．２）コンジュゲートの特性評価
得られたコンジュゲートは、以下の通りに特徴付けられた：
逆相液体クロマトグラフィー質量分光分析（ＲＰＬＣ－ＭＳ）：
変性ＲＰＬＣ－ＱＴｏＦ分析は、上述のＵＨＰＬＣ法４を用いて行った。簡単に説明すると、水／アセトニトリル＋０．１％ギ酸の移動相勾配（０．４ｍＬ／分）を用いて、コンジュゲートをＡｇｉｌｅｎｔ ＰＬＲＰ－Ｓ １０００Ａ ２．１×１５０ｍｍ ８μｍ（８０℃）で溶出し、Ｂｒｕｋｅｒ Ｉｍｐａｃｔ ＩＩ（商標）Ｑ－ＴｏＦ質量分析計を用いて、５００～３５００ｍ／ｚ範囲（ＥＳＩ^＋）をスキャンして検出した。データはＢｒｕｋｅｒ Ｃｏｍｐａｓｓ（登録商標）ソフトウェアに含まれるＭａｘＥｎｔアルゴリズムを用いてデコンボリューションした。

【0369】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）：
ＳＥＣは、Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ＨＰＬＣシステムのエクストラカラム容量１５μＬ以下（内径０．１２ｍｍのピークチューブの短いセクションおよびマイクロボリュームのＵＶフローセルを装備）で行った。カラムはＡｇｉｌｅｎｔ ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏＳＥＣ ３００Ａ ４．６×１５０ｍｍ ２．７μｍ（３０℃で維持）であった。移動相は１００ｍＭリン酸ナトリウムおよび２００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．８）であった。１０％アセトニトリル（ｖ／ｖ）を移動相に加え、固定相との二次的な疎水性相互作用を最小限に抑え、細菌の増殖を防止した。流速は０．３５ｍＬ／分であった。ＵＶ検出は２８０ｎｍでモニターした。

【0370】

疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）：
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）は、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ＨＰＬＣ システムで行った。カラムは、Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫ－ＧＥＬ ＢＵＴＹＬ－ＮＰＲ ４．６×３５ｍｍ ２．５μｍ（２５℃）であった。移動相Ａは、１．５Ｍ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４＋２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ７．０であった。移動相Ｂは、２５ｍＭリン酸カリウムｐＨ７．０＋１５％イソプロパノール（ｖ／ｖ）であった。直線勾配は０％Ｂ～１００％Ｂで１０分間であり、その後１００％Ｂで３分間保持した。流速は０．７５ｍＬ／分であった。ＵＶ検出は２２０ｎｍおよび２８０ｎｍでモニターした。

【0371】

２．３）合成したコンジュゲートの概要
抗体－薬物コンジュゲートは、変性ＲＰＬＣクロマトグラムで、１つのＬＣ－１ｄ（薬物リンカーが１つ結合した軽鎖）と、１つのＨＣ－３ｄ（薬物リンカーが３つ結合した重鎖）との吸光度ピークを示した（ＤＡＲ８コンジュゲート）。重鎖の質量分光分析では、主要なグリコフォームが報告された（トラスツズマブはＧ０Ｆ）。

【0372】

【表2】

【0373】

３）抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）プロファイル
コンジュゲートの見かけの疎水性は、節２に記載の方法に従い、Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫ－ＧＥＬ ＢＵＴＹＬ－ＮＰＲカラムを用いた疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）によって評価した。

【0374】

結果を、本発明のグリコシダーゼベースの薬物リンカー（オクトパミンアーキテクチャ）については図１に、本発明のジペプチダーゼベースの薬物リンカー（２－アミノ－１－（４－アミノフェニル）エタン－１－オールアーキテクチャ）については図２に示す。本発明のコンジュゲートは、既知の対応するアーキテクチャと比較して、系統的により親水性であった（ＨＩＣクロマトグラムにおける保持時間がより短い）。この効果は、グリコシダーゼベースの薬物リンカーおよびジペプチダーゼベースの薬物リンカーで観察される。この効果は、薬物リンカーアーキテクチャの疎水性マスキング物質であるポリサルコシンの有無にかかわらず観察される。この効果は、異なる性質および異なるレベルの固有疎水性を持つ薬物ペイロードで観察される。

【0375】

４）本発明の薬物リンカーに基づくコンジュゲートおよび既知のアーキテクチャの薬物リンカーに基づくコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
いくつかの抗原陽性癌細胞株について、コンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を評価した。細胞を９６ウェルプレートに、細胞株に応じて適切な密度（１００μＬの適切な培地に１０００～１００００細胞／ウェル）でプレーティングし、３７℃で２４時間インキュベートした。あらかじめ培地に溶解した試験化合物の連続希釈液（５０μＬ）を加え、ＭＭＡＥベースのコンジュゲートでは７２時間、エキサテカンベースのコンジュゲートでは１４４時間、３７℃でインキュベートした。ＭＴＴ（５ｍｇ／ｍＬ、２０μＬ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）をウェルに添加し、３７℃で１～２時間インキュベートを続けた。その後、培地を注意深く除去し、ウェルの内容物を酸性化イソプロパノールで均一に溶解した。吸光度値は、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ（商標）スカイマイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用い、波長５７０ｎｍ（基準波長６９０ｎｍ）で測定した。未処理のコントロール細胞と比較したＩＣ_５０濃度値は、阻害用量反応曲線フィッティング（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９）を用いて決定した。

【0376】

結果を、グリコシダーゼ感受性薬物リンカーに基づくコンジュゲートについては図３に、ジペプチダーゼ感受性薬物リンカーに基づくコンジュゲートについては図４に示す。本発明のコンジュゲート（オクトパミンおよび２－アミノ－１－（４－アミノフェニル）エタン－１－オールアーキテクチャ）は、既知の対応するアーキテクチャと比較して、系統的に同様の効力を示した。

【0377】

５）本発明のＤＬ１０薬物リンカー（等モルジアステレオ異性体混合物）、本発明の立体定義ＤＬ１０－Ｓ薬物リンカーおよび本発明の立体定義ＤＬ１０－Ｒ薬物リンカーに基づくコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
コンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性は、上記節４）の実験プロトコールに従って、いくつかの抗原陽性癌細胞株を評価した。

【0378】

結果を図５に示す。立体純度の高い薬物リンカーと同じ薬物リンカーの等モルジアステレオ異性体混合物との間にｉｎ ｖｉｔｒｏでの効力差は観察されなかった。

【0379】

６）３ｍｇ／ｋｇのコンジュゲートを単回静脈内投与したラットの薬物動態プロファイル（全抗体－薬物コンジュゲート濃度の経時的変化）
メスのＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラット（４～６週齢－Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）に、尾静脈からＡＤＣを３ｍｇ／ｋｇ注射した（１群につき３匹、無作為割付け）。様々な時点で眼窩後出血によってクエン酸塩チューブに採血し、血漿に処理し、分析まで－８０℃で保存した。ＡＤＣ濃度は、ヒトＩｇＧ ＥＬＩＳＡキット（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ（商標）Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて、製造業者のプロトコールに従って評価した。定量には対応するモノクローナル抗体の標準曲線を用いた。薬物動態パラメータ（クリアランス、半減期およびＡＵＣ）は、ＰＫ関数を組み込んだＭｉｃｒｏｓｏｆｔ（登録商標）Ｅｘｃｅｌ（登録商標）ソフトウェア（Ｕｓａｎｓｋｙらにより開発されたアドイン、薬物動態および薬物代謝の部門，Ａｌｌｅｒｇａｎ，Ｉｒｖｉｎｅ，米国）を用いた２－コンパートメント解析によって算出した。

【0380】

結果を、グリコシダーゼ感受性薬物リンカーに基づくコンジュゲートについては図６（ＰＫプロファイル）および図７（ＰＫパラメーター）に、ジペプチダーゼ感受性薬物リンカーに基づくコンジュゲートについては図８（ＰＫプロファイル）および図９（ＰＫパラメーター）に示す。本発明のコンジュゲート（オクトパミンおよび２－アミノ－１－（４－アミノフェニル）エタン－１－オールアーキテクチャ）は、既知の対応するアーキテクチャと比較して、改善された薬物動態プロファイルおよび薬物動態パラメータ（改善した曝露、増大した半減期および減少したクリアランス速度）を系統的にもたらした。

【0381】

７）ＮＣＩ－Ｎ８７ ＨＥＲ２＋胃癌異種移植モデルにおいて、ＡＤＣ１１０コンジュゲート（グルクロニド－エキサテカンペイロードを有する本発明のオクトパミンアーキテクチャ）およびＡＤＣ１１２コンジュゲート（グルクロニド－エキサテカンペイロードを有するトリアゾールアーキテクチャ）を、１ｍｇ／ｋｇで１回静脈内投与した際の腫瘍体積（ｍｍ^３）の経時的変化。

【0382】

ＮＣＩ－Ｎ８７胃癌細胞を、雌性ＳＣＩＤマウス（４週齢）に皮下移植した。ＡＤＣは、腫瘍が約１５０ｍｍ^３まで成長した時点で、１ｍｇ／ｋｇの亜臨界用量を１回静脈内投与した（各群６匹、群間の初期腫瘍体積の差を最小にするように割り付けた）。腫瘍体積はキャリパー装置で３～５日ごとに測定し、式（Ｌ×Ｗ^２）／２を用いて算出した。腫瘍体積が１０００ｍｍ^３を超えた時点でマウスを犠牲にした。

【0383】

結果を図１０に示す。本発明のオクトパミンアーキテクチャに基づくコンジュゲートＡＤＣ１１０は、トリアゾールアーキテクチャに基づくコンジュゲートＡＤＣ１１２と比較して、改善されたｉｎ ｖｉｖｏ活性を示した。全ての処置したマウスにおいて有意な体重減少は観察されなかった。

【図面の簡単な説明】

【0384】

【図1】図１は、実施例３による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。

【図2】図２は、実施例３による疎水性相互作用クロマトグラムを表す。

【図3-1】図３は、実施例４によるコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを表す。

【図3-2】図３の続き。

【図3-3】図３の続き。

【図4-1】図４は、実施例４によるコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを表す。

【図4-2】図４の続き。

【図4-3】図４の続き。

【図5】図５は、実施例５によるコンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを表す。

【図6】図６は、ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態プロファイルおよび実施例６による薬物動態パラメータを表す。

【図7】図７は、ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態プロファイルおよび実施例６による薬物動態パラメータを表す。

【図8】図８は、ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態プロファイルおよび実施例６による薬物動態パラメータを表す。

【図9】図９は、ラットにおけるｉｎ ｖｉｖｏ薬物動態プロファイルおよび実施例６による薬物動態パラメータを表す。

【図10】図１０は、実施例７による胃癌のマウス異種移植モデルにおける経時的な腫瘍体積を表す。

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図3-3】

【図4-1】

【図4-2】

【図4-3】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【国際調査報告】