特表 2024-513453 増強された幹細胞様メモリーＴ細胞操作のための材料及び方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-25

(54)【発明の名称】増強された幹細胞様メモリーＴ細胞操作のための材料及び方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240315BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240315BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240315BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240315BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240315BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240315BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20240315BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240315BHJP

   C12Q 1/06 20060101ALI20240315BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240315BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240315BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240315BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240315BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240315BHJP

   A61P 7/00 20060101ALI20240315BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C12N5/0783 ZNA

C12N15/12

C07K19/00

C12N5/10

C12N15/62 Z

C07K14/725

C07K16/28

C12Q1/06

A61K35/17

A61P35/00

A61P31/00

A61P37/06

A61P35/02

A61P7/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023561607

(86)(22)【出願日】2022-04-07

(85)【翻訳文提出日】2023-12-01

(86)【国際出願番号】 US2022023883

(87)【国際公開番号】W WO2022216963

(87)【国際公開日】2022-10-13

(31)【優先権主張番号】63/172,601

(32)【優先日】2021-04-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/172,605

(32)【優先日】2021-04-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/172,595

(32)【優先日】2021-04-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/172,610

(32)【優先日】2021-04-08

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】509087759

【氏名又は名称】ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】100092783

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 浩

(74)【代理人】

【識別番号】100095360

【弁理士】

【氏名又は名称】片山 英二

(74)【代理人】

【識別番号】100093676

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 純子

(74)【代理人】

【識別番号】100120134

【弁理士】

【氏名又は名称】大森 規雄

(74)【代理人】

【識別番号】100196966

【弁理士】

【氏名又は名称】植田 渉

(72)【発明者】

【氏名】シュクマル，マドフスッドハナン

(72)【発明者】

【氏名】ガネサン，ラジクマール

(72)【発明者】

【氏名】シン，サンジャヤ

(72)【発明者】

【氏名】オラべクス，タマス

【テーマコード（参考）】

4B063

4B065

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QQ02

4B063QQ42

4B063QQ52

4B063QR32

4B063QR35

4B063QS05

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AB04

4B065BA02

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4B065BB40

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4C087AA01

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4C087BB37

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4C087BB65

4C087NA20

4C087ZA51

4C087ZB08

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZB31

4H045AA11

4H045AA20

4H045BA09

4H045BA54

4H045CA40

4H045DA50

4H045DA86

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、幹細胞様メモリーＴ（ＴＳＣＭ）細胞を生成するための方法を提供する。本開示はまた、細胞、医薬組成物、及び癌などの疾患の治療のための養子免疫療法におけるそれらの使用を提供する。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮する方法であって、
ａ）Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間、前記Ｔ細胞集団を、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させる工程と、
ｂ）任意選択的に、前記Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させる工程とを含む、方法。

【請求項2】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５を更に含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２１を更に含む、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

前記１つ以上のサイトカインの各々を、約１～約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で前記Ｔ細胞集団と接触させる、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記１つ以上のサイトカインの各々を、約５～１２ｎｇ／ｍｌの濃度で前記Ｔ細胞集団と接触させる、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記１つ以上のサイトカインの各々を、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で前記Ｔ細胞集団と接触させる、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２を含まない、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記Ｔ細胞集団が、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

工程（ａ）の前に、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋細胞を末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離する工程を更に含む、請求項９に記載の方法。

【請求項11】

前記Ｔ細胞集団が、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記１つ以上のサイトカインが、前記増大工程（ｂ）中に存在する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記Ｔ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させる工程を更に含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記遺伝子改変が、前記ＣＡＲ又は前記操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを前記細胞に導入することによって行われる、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記ＣＡＲ又は前記操作されたＴＣＲをコードする前記ポリヌクレオチドが、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注射、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される、請求項１４に記載の方法。

【請求項16】

前記ＣＡＲ又は前記操作されたＴＣＲが、腫瘍抗原、感染性抗原、又は自己免疫抗原に特異的に結合する、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、及びＰＳＭＡから選択される、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記遺伝子改変が、前記増大工程（ｂ）の前に行われる、請求項１３～１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記１つ以上のサイトカインが、前記遺伝子改変工程中に存在する、請求項１８に記載の方法。

【請求項20】

前記接触工程（ａ）が、１０～２０日間実行される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記接触工程（ａ）が、約１４日間実行される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記接触工程（ａ）及び前記増大工程（ｂ）が、合計１０～２０日間実行される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記接触工程（ａ）及び前記増大工程（ｂ）が、合計１４日間実行される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記接触工程が、約３７℃の温度で実行される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記方法が、
前記接触工程（ａ）の開始時に前記Ｔ細胞集団を活性化する工程を更に含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記活性化工程が、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて約２４時間実行される、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記方法が、
前記活性化工程（ａ）の前に前記Ｔ細胞集団をプライミングする工程を更に含む、請求項２５又は２６に記載の方法。

【請求項28】

前記方法が、
前記増大工程（ｂ）後に、前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、前記増大工程（ｂ）後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である、請求項２８に記載の方法。

【請求項30】

前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｂ）後、約６０％～７０％である、請求項２９に記載の方法。

【請求項31】

遺伝子改変された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成する方法であって、
ａ）単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得する工程と、
ｂ）前記Ｔ細胞集団を活性化する工程と、
ｃ）工程（ｂ）後に存在する前記細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させる工程と、
ｄ）前記遺伝子改変された細胞を増大させる工程とを含み、
工程ｂ）、ｃ）、及びｄ）が、インターロイキン－７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行される、方法。

【請求項32】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５を更に含む、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２１を更に含む、請求項３１又は３２に記載の方法。

【請求項34】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む、請求項３１に記載の方法。

【請求項35】

前記１つ以上のサイトカインの各々を、約１～約１５ｎｇ／ｍｌの濃度で前記Ｔ細胞集団と接触させる、請求項３１～３４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項36】

前記１つ以上のサイトカインの各々を、約５～１２ｎｇ／ｍｌの濃度で前記Ｔ細胞集団と接触させる、請求項３１～３５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項37】

前記１つ以上のサイトカインの各々を、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で前記Ｔ細胞集団と接触させる、請求項３１～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２を含まない、請求項３１～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせが、末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離される、請求項３１～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記Ｔ細胞が、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない、請求項３９に記載の方法。

【請求項41】

前記遺伝子改変が、前記ＣＡＲ又は前記操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することによって行われる、請求項３１～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

前記ＣＡＲ又は前記操作されたＴＣＲをコードする前記ポリヌクレオチドが、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注射、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記ＣＡＲ又は前記操作されたＴＣＲが、腫瘍抗原、感染性抗原、又は自己免疫抗原に特異的に結合する、請求項３１～４２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項44】

前記腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、及びＰＳＭＡから選択される、請求項４３に記載の方法。

【請求項45】

前記増大工程（ｄ）が、少なくとも１０～２０日間実行される、請求項３１～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記増大工程（ｄ）が、少なくとも約１４日間実行される、請求項３１～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記工程（ｂ）、（ｃ）及び（ｄ）が、合計１０～２０日間実行される、請求項３１～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計１４日間実行される、請求項３１～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、約３７℃の温度で実行される、請求項３１～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記活性化工程が、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて約２４時間実行される、請求項３１～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記活性化工程（ｂ）の前に前記Ｔ細胞集団をプライミングする工程を更に含む、請求項３１～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記方法が、
前記増大工程（ｄ）後に、前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む、請求項３１～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、前記増大工程（ｄ）後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である、請求項５２に記載の方法。

【請求項54】

前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｄ）後、約６０％～７０％である、請求項５３に記載の方法。

【請求項55】

請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法によって調製された、濃縮された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含むＴ細胞集団。

【請求項56】

請求項５５に記載のＴ細胞集団と、医薬的に許容される担体又は賦形剤とを含む、医薬組成物。

【請求項57】

必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法であって、治療有効量の請求項５５に記載のＴ細胞集団、又は請求項５６に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項58】

前記Ｔ細胞集団が、前記対象に対して同種異系である、請求項５７に記載の方法。

【請求項59】

前記Ｔ細胞集団が、前記対象に対して自己由来である、請求項５７に記載の方法。

【請求項60】

前記疾患又は障害が、癌、感染症、又は自己免疫疾患である、請求項５７～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

前記癌が、血液悪性腫瘍である、請求項６０に記載の方法。

【請求項62】

前記癌が、固形腫瘍である、請求項６０に記載の方法。

【請求項63】

前記癌が、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿管の癌、肝臓癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、皮膚癌、多発性ミエローマ及び急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄球性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、リンパ種、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫及び原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、Ｔ細胞ＮＨＬ、例えば、前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、結節外ナチュラルキラーＴ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、脳ならびに頭頸部癌、胆管癌、気管支癌、脊索腫、絨毛癌、上皮癌、内皮肉腫、食道癌、ユーイング肉腫Ｈ鎖病、造血癌、免疫細胞アミロイドーシス、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性疾患、原因不明骨髄化生（ＡＭＭ）若しくは骨髄線維症（ＭＦ）、慢性突発性骨髄線維症、骨髄増殖性腫瘍、真性赤血球増加症、直腸腺癌、本態性血小板増加症、慢性好中球性白血病、好酸球増加症候群、若しくは軟部組織肉腫、又はそれらの組み合わせ若しくは転移である、請求項６０に記載の方法。

【請求項64】

前記癌が、ＢＣＭＡ発現癌である、請求項６０に記載の方法。

【請求項65】

前記ＢＣＭＡ発現癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である、請求項６４に記載の方法。

【請求項66】

Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮するためのシステムであって、
ａ）Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間、前記Ｔ細胞集団を、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させるための手段と、
ｂ）任意選択的に、前記Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段とを含む、システム。

【請求項67】

前記Ｔ細胞集団が、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６６に記載のシステム。

【請求項68】

Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋細胞、又はそれらの任意の組合せを末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離するための手段を更に含む、請求項６７に記載のシステム。

【請求項69】

前記Ｔ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させるための手段を更に含む、請求項６６～６８のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項70】

前記Ｔ細胞集団を、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む前記１つ以上のサイトカインと接触させる工程の開始時に、前記Ｔ細胞集団を活性化するための手段を更に含む、請求項６６～６９のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項71】

前記活性化の前に前記Ｔ細胞集団をプライミングするための手段を更に含む、請求項７０に記載のシステム。

【請求項72】

前記増大後の前記Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する手段を更に含む、請求項６６～７１のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項73】

遺伝子改変された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成するためのシステムであって、
ａ）単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得するための手段と、
ｂ）前記Ｔ細胞集団を活性化するための手段と、
ｃ）活性化後に前記細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させるための手段と、
ｄ）遺伝子改変細胞を増大させるための手段とを含み、
単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組合せの集団を取得することと、前記Ｔ細胞集団を活性化することと、前記Ｔ細胞集団を遺伝子改変することとが、インターロイキン－７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行される、システム。

【請求項74】

前記１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－２１を更に含む、請求項６６～７３のいずれか一項に記載のシステム。

【請求項75】

Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮するための組成物であって、
ａ．Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するためのインターロイキン７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインと、
ｂ．ＴＳＣＭ細胞を濃縮するための手段であるＴ細胞集団と、
ｃ．任意選択的に、前記Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段とを含む、組成物。

【請求項76】

Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮するための組成物であって、
ａ．Ｔ細胞集団と、
ｂ．インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと、
（ｉ）前記Ｔ細胞集団を、ＩＬ－７を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させることによってＴ_ＳＣＭ細胞を濃縮するための、
（ｉｉ）前記濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を活性化するための、及び
（ｉｉｉ）任意選択的に、前記Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段と含む、組成物。

【請求項77】

遺伝子改変された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成するための組成物であって
ａ．Ｔ細胞集団と、
ｂ．インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと、
（ｉ）前記Ｔ細胞集団を、ＩＬ－７を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させることによってＴ_ＳＣＭ細胞を濃縮するための、
（ｉｉ）前記濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を活性化するための、
（ｉｉｉ）前記濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させるための手段と、
（ｉｖ）任意選択的に、前記Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段とを含む、組成物。

【請求項78】

前記Ｔ_ＳＣＭ細胞が、前記Ｔ細胞集団を、前記ＩＬ－７を含む有効量の前記１つ以上のサイトカインと、Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間接触させることによって濃縮されている、請求項７５～７７のいずれか一項に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年４月８日に出願された米国仮出願第６３／１７２，５９５号、２０２１年４月８日に出願された同第６３／１７２，６０１号、２０２１年４月８日に出願された同第６３／１７２，６０５号、及び２０２１年４月８日に出願された同第６３／１７２，６１０号に対する優先権を主張するものであり、これらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

（発明の分野）
本発明は、養子免疫療法において使用するための幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成する方法に関する。本発明はまた、細胞、医薬組成物、及び疾患の治療のための養子免疫療法におけるそれらの使用に関する。

【0003】

（配列表）
本出願は、配列表を含み、この配列表は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年０４月０６日に作成された当該ＡＳＣＩＩコピーの名称は２５３５０５＿０００１３１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは２１，０８２バイトである。

【背景技術】

【0004】

免疫療法は、固形腫瘍及び他の癌を治療する新たな方法を提供する^１，２。モノクローナル抗体、Ｔ細胞再指向化二重特異性抗体、チェックポイント阻害剤、及びごく最近のものであるキメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を含む生物製剤は、腫瘍の治療を大幅に改善している。強力な証拠が示唆するところでは、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）形質導入及びＣＡＲ操作Ｔ細胞などの遺伝子改変Ｔ細胞の養子移入を使用する免疫療法は、転移性癌を有する一部の患者において完全な退縮をもたらすことがある。現在、４つのＣＡＲ－Ｔ療法が食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認されており、より多くが臨床パイプラインに入っている^３。しかしながら、ＣＡＲ－Ｔ細胞ベースの療法による最近の成功は、欠点がないというものではない^４－７。

【発明の概要】

【0005】

ＣＡＲ－Ｔ細胞は、患者の血液を収集し、Ｔ細胞を抽出し、更に、一般に腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を標的とする単鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）で、ＣＡＲを発現させることによって生成される。このプロセスは、患者のＴ細胞を再プログラムして、腫瘍細胞を特異的に標的化し、腫瘍細胞を破壊し、細胞死をもたらす^８。現在の臨床試験は、ＴＣＲ操作及びＣＡＲ－Ｔ細胞増大のための出発集団として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）由来Ｔ細胞サブセット又は非選択バルクＴ細胞集団を利用している。しかし、現在の製造プロセスは、患者に投与される最終細胞産物の一貫性のない可変の細胞組成物の生成をもたらしている。

【0006】

幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞は、ナイーブＴ細胞から直接生成された初期メモリーＴ細胞サブセットの希少集団であり、他の特徴付けられたメモリー及びエフェクタＴ細胞サブセットに対して、異なる表現型、転写、及びエピジェネティック状態を有する。単一のＴ_ＳＣＭ細胞は、自己再生する能力を有し、それによって、セントラルメモリー（Ｔ_ＣＭ）、エフェクタメモリー、及びエフェクタＴ細胞サブセットを含むＴ細胞サブセット全体を再構成する。Ｔ_ＳＣＭ細胞は、健常ドナー及び癌患者の両方において検出されるが、後者においては低頻度であり、他の既知のメモリーＴ細胞サブセットと比較してより少しかない疲弊マーカーを有する遺伝子シグネチャを示す。選別されていないバルクＰＢＭＣ集団から最適化されたＴ_ＳＣＭ又はＴ_ＳＣＭ様細胞を生成するための取り組みは、特に、現在、従来の製造アプローチを適用すると、大部分が無効であることが証明されている。

【0007】

このことを背景に、本出願は、抗腫瘍免疫を増強するために、エフェクタ機能が増強され、疲弊マーカーが減少したＴ_ＳＣＭ ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成する方法を提供する。

【0008】

一態様では、Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮する方法であって、
ａ）Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間、Ｔ細胞集団を、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させる工程と、
ｂ）任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させる工程とを含む、方法が、本明細書で提供される。

【0009】

いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－１５を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２１を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインの各々を、約１～１５ｎｇ／ｍｌ、約２～１４ｎｇ／ｍｌ、約３～１３ｎｇ／ｍｌ、約４～１２ｎｇ／ｍｌ、約５～１２ｎｇ／ｍｌ、約６～１２ｎｇ／ｍｌ、約７～１１ｎｇ／ｍｌ、約８～１２ｎｇ／ｍｌ、約８～１０ｎｇ／ｍｌ、又は約１０ｎｇ／ｍｌの濃度でＴ細胞集団と接触させる。一実施形態では、１つ以上のサイトカインの各々を、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度でＴ細胞集団と接触させる。

【0011】

いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２を含まない。

【0012】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、本方法は、工程（ａ）の前に、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋細胞、又はそれらの任意の組み合わせを末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団が、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない。

【0013】

いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、増大工程（ｂ）中に存在する。

【0014】

いくつかの実施形態では、本方法は、Ｔ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させる工程を更に含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変が、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することによって行われる。いくつかの実施形態では、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注射、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲが、腫瘍抗原、感染性抗原又は自己免疫抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、及びＰＳＭＡから選択される。

【0016】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変が、増大工程（ｂ）の前に行われる。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、遺伝子改変工程中に存在する。

【0017】

様々な実施形態では、接触工程（ａ）が、約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。一実施形態では、接触工程が、約１４日間実行される。

【0018】

様々な実施形態では、接触工程（ａ）及び増大工程（ｂ）が、合計５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、接触工程（ａ）及び増大工程（ｂ）が、合計約１４日間実行される。

【0019】

いくつかの実施形態では、接触工程（ａ）が、約３７度の温度で実行される。

【0020】

様々な実施形態では、本方法は、接触工程（ａ）の開始時にＴ細胞集団を活性化することを更に含む。一実施形態では、活性化工程が、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて約２４時間実行される。

【0021】

様々な実施形態では、本方法は、活性化工程（ａ）の前にＴ細胞集団をプライミングする工程を更に含む。

【0022】

様々な実施形態では、本方法は、増大工程（ｂ）後に、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｂ）の後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である。一実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｂ）後、約６０％～７０％である。

【0023】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞を濃縮するための方法が、インビトロ又はエクスビボで実行される。

【0024】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成する方法であって、
ａ）単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得する工程と、
ｂ）当該Ｔ細胞集団を活性化する工程と、
ｃ）工程（ｂ）後に存在する細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させる工程と、
ｄ）当該遺伝子改変された細胞を増大させる工程とを含み、
工程ｂ）、ｃ）、及びｄ）が、インターロイキン－７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行される、方法が本明細書で提供される。

【0025】

いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－１５を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２１を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む。

【0026】

いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインの各々を、約１～１５ｎｇ／ｍｌ、約２～１４ｎｇ／ｍｌ、約３～１３ｎｇ／ｍｌ、約４～１２ｎｇ／ｍｌ、約５～１２ｎｇ／ｍｌ、約６～１２ｎｇ／ｍｌ、約７～１１ｎｇ／ｍｌ、約８～１２ｎｇ／ｍｌ、約８～１０ｎｇ／ｍｌ、又は約１０ｎｇ／ｍｌの濃度でＴ細胞集団と接触させる。一実施形態では、１つ以上のサイトカインの各々を、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度でＴ細胞集団と接触させる。

【0027】

様々な実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２を含まない。

【0028】

様々な実施形態では、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせが、末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞が、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない。

【0029】

様々な実施形態では、遺伝子改変が、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することによって行われる。いくつかの実施形態では、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注射、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲが、腫瘍抗原、感染性抗原又は自己免疫抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、及びＰＳＭＡから選択される。

【0030】

いくつかの実施形態では、増大工程（ｄ）が、５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、増大工程が、約１４日間実行される。

【0031】

いくつかの実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計で５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計１４日間実行される。

【0032】

様々な実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、約３７℃の温度で実行される。

【0033】

様々な実施形態では、活性化工程が、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて実行される。様々な実施形態では、活性化工程が、約１２～４８時間（例えば、２４時間）実行される。

【0034】

様々な実施形態では、本方法は、活性化工程（ｂ）の前にＴ細胞集団をプライミングする工程を更に含む。

【0035】

様々な実施形態では、本方法は、増大工程（ｄ）後に、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｄ）後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である。一実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｄ）後、約６０％～７０％である。

【0036】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変Ｔ_ＳＣＭ細胞を作製するための方法が、インビトロ又はエクスビボで実行される。

【0037】

別の態様では、濃縮された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含むＴ細胞集団であって、
ａ）Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと、Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間接触させる工程と、
ｂ）任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させる工程とを含む、方法によって調製される、Ｔ細胞集団が本明細書で提供される。

【0038】

別の態様では、濃縮された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含むＴ細胞集団であって、
ａ）Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと、Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間接触させる工程と、
ｂ）任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させる工程とを含む、方法によって取得可能である、Ｔ細胞集団が本明細書で提供される。

【0039】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－２１を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む。

【0040】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは各々、約１～１５ｎｇ／ｍｌ、約２～１４ｎｇ／ｍｌ、約３～１３ｎｇ／ｍｌ、約４～１２ｎｇ／ｍｌ、約５～１２ｎｇ／ｍｌ、約６～１２ｎｇ／ｍｌ、約７～１１ｎｇ／ｍｌ、約８～１２ｎｇ／ｍｌ、約８～１０ｎｇ／ｍｌ、又は約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。一実施形態では、１つ以上のサイトカインは各々、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。

【0041】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２を含まない。

【0042】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋細胞、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋細胞、又はそれらの任意の組み合わせが、末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。いくつかの実施形態では、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４＋細胞、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋細胞、又はそれらの任意の組み合わせは、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない。

【0043】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、増大工程（ｂ）中に存在する。

【0044】

本明細書に記載のＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、調製方法は、Ｔ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することによって行われる。いくつかの実施形態では、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注射、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される。

【0045】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲは、腫瘍抗原、感染性抗原、又は自己免疫抗原に特異的に結合する。

【0046】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１及びＰＳＭＡから選択される。

【0047】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、遺伝子改変が、増大工程（ｂ）の前に行われる。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、遺伝子改変工程中に存在する。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、増大工程（ｂ）中に存在する。

【0048】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、接触工程（ａ）が、約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。一実施形態では、接触工程が、約１４日間実行される。

【0049】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、接触工程（ａ）及び増大工程（ｂ）が、合計で約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。一実施形態では、接触工程（ａ）及び増大工程（ｂ）が、合計１４日間実行される。

【0050】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、接触工程（ａ）が、約３７℃の温度で実行される。

【0051】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、調製方法は、接触工程（ａ）の開始時にＴ細胞集団を活性化する工程を更に含む。一実施形態では、活性化工程が、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて約２４時間実行される。

【0052】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、本方法は、活性化工程（ａ）の前にＴ細胞集団をプライミングする工程を更に含む。

【0053】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、本方法は、増大工程（ｂ）後に、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｂ）後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である。一実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｂ）後、約６０％～７０％である。

【0054】

別の態様では、濃縮された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）を含むＴ細胞集団であって、
ａ）単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得する工程と、
ｂ）当該Ｔ細胞集団を活性化する工程と、
ｃ）工程（ｂ）後に存在する細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させる工程と、
ｄ）当該遺伝子改変された細胞を増大させる工程とを含み、
工程ｂ）、ｃ）、及びｄ）が、インターロイキン－７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行される、方法によって調製された（又は取得可能である）、Ｔ細胞集団が、本明細書で提供される。

【0055】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得する工程が、対象から取得された試料に対して実行される。

【0056】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２１を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む。

【0057】

本明細書に記載されるＴ細胞集団のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは各々、約１～１５ｎｇ／ｍｌ、約２～１４ｎｇ／ｍｌ、約３～１３ｎｇ／ｍｌ、約４～１２ｎｇ／ｍｌ、約５～１２ｎｇ／ｍｌ、約６～１２ｎｇ／ｍｌ、約７～１１ｎｇ／ｍｌ、約８～１２ｎｇ／ｍｌ、約８～１０ｎｇ／ｍｌ、又は約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。一実施形態では、１つ以上のサイトカインは各々、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。

【0058】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２を含まない。

【0059】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせが、末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞が、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない。

【0060】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、遺伝子改変が、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することによって行われる。いくつかの実施形態では、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドが、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注射、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲは、腫瘍抗原、感染性抗原、又は自己免疫抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原が、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、及びＰＳＭＡから選択される。

【0061】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、増大工程（ｄ）が、約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、増大工程が、約１４日間実行される。

【0062】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計で約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計１４日間実行される。

【0063】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）は、約３７℃の温度で実行される。

【0064】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、活性化工程は、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて実行される。様々な実施形態では、活性化工程は、約２４時間実行される。

【0065】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、本方法は、活性化工程（ｂ）の前にＴ細胞集団をプライミングすることを更に含む。

【0066】

本明細書に記載されるＴ細胞集団の様々な実施形態では、本方法は、増大工程（ｄ）後に、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、増大工程（ｄ）後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージは、増大工程（ｄ）後、約６０％～７０％である。

【0067】

別の態様では、本明細書に記載されるＴ細胞集団と、医薬的に許容される担体又は賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書で提供される。

【0068】

別の態様では、必要とする対象における疾患又は障害を治療する方法であって、対象に、治療有効量の、濃縮された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含むＴ細胞集団、又は濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を含む当該Ｔ細胞集団と、医薬的に許容される担体若しくは賦形剤とを含む医薬組成物を投与することを含み、濃縮されたＴ細胞を含む当該Ｔ細胞集団が、
ａ）単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得する工程と、
ｂ）当該Ｔ細胞集団を活性化する工程と、
ｃ）工程（ｂ）後に存在する細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させる工程と、
ｄ）当該遺伝子改変された細胞を増大させる工程とを含み、
工程ｂ）、ｃ）、及びｄ）が、インターロイキン－７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行される、方法によって調製される（又は取得可能である）、方法が、本明細書で提供される。

【0069】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせの集団を取得する工程が、対象から得られた試料に対して実行される。

【0070】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは、ＩＬ－１５を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２１を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を更に含む。

【0071】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインは各々、約１～１５ｎｇ／ｍｌ、約２～１４ｎｇ／ｍｌ、約３～１３ｎｇ／ｍｌ、約４～１２ｎｇ／ｍｌ、約５～１２ｎｇ／ｍｌ、約６～１２ｎｇ／ｍｌ、約７～１１ｎｇ／ｍｌ、約８～１２ｎｇ／ｍｌ、約８～１０ｎｇ／ｍｌ、又は約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。一実施形態では、１つ以上のサイトカインが各々、約１０ｎｇ／ｍｌの濃度で添加される。

【0072】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－２を含まない。

【0073】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせが、末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞が、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない。

【0074】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、遺伝子改変は、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドを細胞に導入することによって行われる。いくつかの実施形態では、当該ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするポリヌクレオチドは、ウイルス形質導入、エレクトロポレーション、直接注入、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はそれらの組み合わせを介して導入される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲが、腫瘍抗原、感染性抗原、又は自己免疫抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈＫ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、及びＰＳＭＡから選択される。

【0075】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、増大工程（ｄ）は、約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、増大工程（ｄ）が、約１４日間実行される。

【0076】

本明細書に記載の治療方法のいくつかの実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計で約５～２０日間、約１０～２０日間、約５～１８日間、約８～１５日間、約１０～１８日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、約１５日間、約１６日間、約１７日間、又は約１８日間実行される。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）が、合計１４日間実行される。

【0077】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、工程（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）は、約３７℃の温度で実行される。

【0078】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、活性化工程は、抗ＣＤ３剤及び／又は抗ＣＤ２８剤を用いて約２４時間実行される。

【0079】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、本方法は、活性化工程（ｂ）の前にＴ細胞集団をプライミングする工程を更に含む。

【0080】

本明細書に記載の治療方法のいくつかの実施形態では、本方法は、増大工程（ｄ）後に、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定する工程を更に含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージは、増大工程（ｄ）後、少なくとも約４０％、５０％、６０％、又は７０％である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージは、増大工程（ｄ）後、約６０％～７０％である。

【0081】

本明細書に記載される治療方法のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、対象に対して同種異系である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、対象に対して自己由来である。

【0082】

本明細書に記載の治療方法のいくつかの実施形態では、疾患又は障害は、癌、感染症、又は自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、癌は、血液悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、癌は、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、肺癌、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌又は胃癌、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、肝癌、乳癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎臓癌又は腎癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、皮膚癌、多発性骨髄腫及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫（ＨＬ）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁Ｂ細胞リンパ腫、縦隔原形質細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫及び原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、Ｔ細胞ＮＨＬ、例えば前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外性ナチュラルキラーＴ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂腺炎様Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、上記の１つ以上の白血病／リンパ腫の混合物、脳ならびに頭頸部癌、胆管癌、気管支癌、脊索腫、絨毛癌、上皮癌、内皮肉腫、食道癌、ユーイング肉腫、Ｈ鎖病、造血癌、免疫性アミロイドーシス、未確定の意義のモノクローナルガンマグロプリン血症、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性障害、特発性骨髄化生（ＡＭＭ）又は骨髄線維症（ＭＦ）、慢性特発性骨髄線維症、骨髄増殖性新生物、真性赤血球増加症、直腸腺癌、本態性血小板増加症、慢性好中球性白血病、好酸球増加症候群、若しくは軟部組織肉腫、又はそれらの組合せ若しくは転移である。

【0083】

いくつかの実施形態では、癌が、ＢＣＭＡ発現癌である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ発現癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）若しくは多発性骨髄腫（ＭＭ）、又はくすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）である。

【0084】

別の態様では、Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（_ＳＣＭ）細胞を濃縮するためのシステムであって、
ａ）Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間、Ｔ細胞集団を、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させるための手段と、
ｂ）任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段とを含む、システムが本明細書で提供される。

【0085】

本明細書に記載されるシステムのいくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団は、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

【0086】

本明細書に記載されるシステムのいくつかの実施形態では、本システムは、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はナイーブＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ナイーブ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離するための手段を更に含む。いくつかの実施形態では、本システムは、Ｔ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させるための手段を更に含む。いくつかの実施形態では、本システムは、Ｔ細胞集団を、インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインと接触させる工程の開始時に、当該Ｔ細胞集団を活性化するための手段を更に含む。いくつかの実施形態では、本システムは、活性化の前にＴ細胞集団をプライミングするための手段を更に含む。いくつかの実施形態では、本システムは、増大後のＴ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージを判定するための手段を更に含む。

【0087】

別の態様では、遺伝子改変された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成するためのシステムであって、以下の要素：
ａ）単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組合せの集団を取得するための手段、
ｂ）当該Ｔ細胞集団を活性化するための手段、
ｃ）活性化後に細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させるための手段、
ｄ）当該遺伝子改変細胞を増大させるための手段、を含み、
単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組合せの集団を取得することと、当該Ｔ細胞集団を活性化することと、当該Ｔ細胞集団を遺伝子改変することとが、インターロイキン－７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行される、システムが本明細書で提供される。

【0088】

本明細書に記載されるシステムの様々な実施形態では、１つ以上のサイトカインが、ＩＬ－１５及び／又はＩＬ－２１を更に含む。

【0089】

別の態様では、Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮するための組成物であって、
ａ．Ｔ細胞集団と、
ｂ．Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するためのインターロイキン７（ＩＬ－７）を含む１つ以上のサイトカインと、
ｃ．任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段とを含む、組成物が本明細書で提供される。

【0090】

別の態様では、Ｔ細胞集団における幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮するための組成物であって、
ａ．Ｔ細胞集団と、
ｂ．インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと、
（ｉ）Ｔ細胞集団を、ＩＬ－７を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させることによってＴ_ＳＣＭ細胞を濃縮するための、
（ｉｉ）当該濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を活性化するための、及び
（ｉｉｉ）任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段と含む、組成物が本明細書で提供される。

【0091】

別の態様では、遺伝子改変された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を生成するための組成物であって、
ａ．Ｔ細胞集団と、
ｂ．インターロイキン７（ＩＬ－７）を含む有効量の１つ以上のサイトカインと、
（ｉ）Ｔ細胞集団を、ＩＬ－７を含む有効量の１つ以上のサイトカインと接触させることによってＴ_ＳＣＭ細胞を濃縮するための、
（ｉｉ）当該濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を活性化するための、
（ｉｉｉ）当該濃縮されたＴ_ＳＣＭ細胞を遺伝子改変して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現させるための、及び
（ｉｖ）任意選択的に、当該Ｔ_ＳＣＭ細胞を増大させるための手段とを含む、組成物が本明細書で提供される。

【0092】

様々な実施形態では、Ｔ_ＳＣＭ細胞は、Ｔ_ＳＣＭ細胞を濃縮するのに十分な期間、ＩＬ－７を含む１つ以上のサイトカインの有効量と接触させることによって濃縮される。

【図面の簡単な説明】

【0093】

【図1A】例示的な第二世代ＣＡＲ－Ｔ細胞設計を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ８Ａに由来するヒンジ及び膜貫通配列並びに４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）及びＣＤ３ζ細胞内ドメインと融合した、目的のＴＡＡ、例えば、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とするｓｃＦｖを含む第二世代ＣＡＲ－Ｔの図である。図１Ｂは、本明細書に記載される例示的な抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物のアミノ酸配列を示す。

【図1B】例示的な第二世代ＣＡＲ－Ｔ細胞設計を示す。図１Ａは、ヒトＣＤ８Ａに由来するヒンジ及び膜貫通配列並びに４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）及びＣＤ３ζ細胞内ドメインと融合した、目的のＴＡＡ、例えば、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とするｓｃＦｖを含む第二世代ＣＡＲ－Ｔの図である。図１Ｂは、本明細書に記載される例示的な抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物のアミノ酸配列を示す。

【図2A】サイトカイン調節が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＴ_ＳＣＭ細胞表現型を増強することを示す。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、示されたサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析のために、細胞をＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞上でゲーティングした。ＣＤ４^＋ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞内のＣＤ６２Ｌ（図２Ａ）、ＣＣＲ７（図２Ｂ）、及びＣＤ２７（図２Ｃ）の発現の頻度レベルを判定した。ここに示すのは、ＣＡＲ－Ｔ細胞形質導入後１４日目の表現型の特徴付けである。

【図2B】サイトカイン調節が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＴ_ＳＣＭ細胞表現型を増強することを示す。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、示されたサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析のために、細胞をＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞上でゲーティングした。ＣＤ４^＋ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞内のＣＤ６２Ｌ（図２Ａ）、ＣＣＲ７（図２Ｂ）、及びＣＤ２７（図２Ｃ）の発現の頻度レベルを判定した。ここに示すのは、ＣＡＲ－Ｔ細胞形質導入後１４日目の表現型の特徴付けである。

【図2C】サイトカイン調節が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＴ_ＳＣＭ細胞表現型を増強することを示す。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、示されたサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析のために、細胞をＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞上でゲーティングした。ＣＤ４^＋ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞内のＣＤ６２Ｌ（図２Ａ）、ＣＣＲ７（図２Ｂ）、及びＣＤ２７（図２Ｃ）の発現の頻度レベルを判定した。ここに示すのは、ＣＡＲ－Ｔ細胞形質導入後１４日目の表現型の特徴付けである。

【図3】Ａ～Ｂは、サイトカイン調節が、ＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＴ_ＳＣＭ細胞表現型を増強することを示す。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、示されたサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞をＣＤ８^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞上でゲーティングした。ＣＤ８^＋ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞内のＣＤ６２Ｌレベル（図３Ａ）、ＣＣＲ７レベル（図３Ｂ）、及びＣＤ２７レベル（図３Ｃ）の発現の頻度レベルを判定した。ここに示すのは、ＣＡＲ－Ｔ細胞形質導入後１４日目の表現型の特徴付けである。

【図4A】サイトカイン調節が、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセットの両方においてＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ_ＳＣＭ細胞表現型を増強することを示す。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、示されたサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞をＣＡＲ^＋Ｔ細胞上でゲーティングした。ＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋の発現の頻度レベル（図４Ａ）。ＣＤ８^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋の発現の頻度レベル（図４Ｂ）。ここに示すのは、ＣＡＲ－Ｔ細胞形質導入後１４日目の表現型の特徴付けである。

【図4B】サイトカイン調節が、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセットの両方においてＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ_ＳＣＭ細胞表現型を増強することを示す。Ｐａｎ－Ｔ細胞を、示されたサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞をＣＡＲ^＋Ｔ細胞上でゲーティングした。ＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋の発現の頻度レベル（図４Ａ）。ＣＤ８^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞サブセットにおけるＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋の発現の頻度レベル（図４Ｂ）。ここに示すのは、ＣＡＲ－Ｔ細胞形質導入後１４日目の表現型の特徴付けである。

【発明を実施するための形態】

【0094】

定義
用語「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、Ｔ細胞は、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球、又は活性化Ｔリンパ球を含む。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）、Ｔヘルパー２（Ｔｈ２）細胞、Ｔヘルパー１７（Ｔｈ１７）、又は調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ＴヘルパーＴ細胞（Ｔｈ；ＣＤ４^＋Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＩＬ、ＣＤ８^＋Ｔ細胞）、ＣＤ４^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞、セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）、エフェクタメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）、末端エフェクタＴ細胞（Ｔ_ｅｆｆ）、又はＴ細胞の任意の他のサブセットであり得る。特定の実施形態での使用に適した例示的なＴ細胞集団としては、幹セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ）が挙げられる。

【0095】

ナイーブＴ細胞は、細胞表面マーカーの次の発現パターンを有することができる：ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＤ９５^－。幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ）は、細胞表面マーカーの次の発現パターンを有することができる：ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ４５ＲＡ^＋、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＤ９５^＋。セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＣＭ）は、細胞表面マーカーの次の発現パターンを有することができる：ＣＣＲ７^＋、ＣＤ６２Ｌ^＋、ＣＤ４５ＲＡ^－、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ９５^＋。エフェクタメモリーＴ細胞（Ｔ_ＥＭ）は、細胞表面マーカーの次の発現パターンを有することができる：ＣＣＲ７^－、ＣＤ６２Ｌ^－、ＣＤ４５ＲＡ^－、ＣＤ４５ＲＯ^＋、ＣＤ９５^＋。末端エフェクタＴ細胞（Ｔ_ｅｆｆ）は、細胞表面マーカーの次の発現パターンを有することができる：ＣＣＲ７^－、ＣＤ６２Ｌ^－、ＣＤ４５ＲＯ^－、ＣＤ９５^＋。例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１７（２０１１）：１２９０－７、及びＦｌｙｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓｌａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３（２０１４）：ｅ２０を参照されたく、全ての目的のためその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0096】

用語「発現する」及び「発現」は、遺伝子又はＤＮＡ配列の情報が生成されることを可能にするか又は生成させること、例えば、対応する遺伝子又はＤＮＡ配列の転写及び／又は翻訳に関与する細胞機能を活性化することによって、ＲＮＡ又はタンパク質を生成することを意味する。ＤＮＡ配列は、細胞内に又は細胞によって発現されて、ＲＮＡ又はタンパク質などの「発現産物」を形成する。発現産物自体、例えば、得られたタンパク質は、細胞によって「発現された」と言うこともできる。発現産物は、細胞内、細胞外、又は膜貫通として特徴付けることができる。

【0097】

用語「ベクター」、「クローニングベクター」、及び「発現ベクター」は、細胞を遺伝子改変し、導入された配列の発現（例えば、転写及び翻訳）を促進するように、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列（例えば、外来遺伝子）を宿主細胞に導入することができるビヒクルを意味する。ベクターとしては、プラスミド、合成ＲＮＡ及びＤＮＡ分子、ファージ、ウイルスなどが挙げられる。特定の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターであり、例えば、ウイルスベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴、アルファウイルス、ヘルペス、レンチウイルス、レトロウイルス、又はワクシニアベクターであるが、これらに限定されない。

【0098】

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」、「特異的に認識する」、又は「に対して特異的に」という用語は、生物学的分子を含む分子の不均一な集団の存在下での標的の存在を決定する、標的と抗原結合タンパク質（ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲなど）との間の結合などの測定可能かつ再現性のある相互作用を指す。

【0099】

用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は本明細書で互換的に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。この用語「タンパク質」は、全ての長さのタンパク質断片を含む天然及び合成のタンパク質、融合タンパク質、並びに糖タンパク質に加えて、全ての他の種類の修飾タンパク質（例えば、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ペグ化、ビオチン化などから得られるタンパク質）を含むがこれに限定されない修飾タンパク質の全ての種類を包含する。

【0100】

用語「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「ポリヌクレオチド」は、別途明記しない限り、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方を包含する。「核酸配列」又は「ヌクレオチド配列」とは、アミノ酸をコードする核酸配列を意味し、この用語はまた、リンカーによってコードされる任意のアミノ酸を含む、クローニングのアーチファクトとして付加された任意のアミノ酸をコードする部分を含む核酸配列を指し得る。

【0101】

状態、障害、若しくは病状の「治療する」又は「治療」という用語は、以下を含む：（１）状態、障害、若しくは病状に罹患している又は罹患しやすい可能性があるが、状態、障害、若しくは病状の臨床的又は臨床前症状をまだ経ていない又は示していない対象において発症する状態、障害、若しくは病状の少なくとも１つの臨床的又は臨床前症状の出現の発生率及び／又は可能性を予防、遅延又は低減すること、又は（２）状態、障害、若しくは病状を阻害すること、すなわち、疾患の発症若しくはその再発、又はその少なくとも１つの臨床的若しくは臨床前症状を停止、低減、若しくは遅延させること、又は（３）疾患を軽減すること、すなわち、状態、障害、若しくは病状、又はその臨床的若しくは臨床前症状の少なくとも１つの退縮を引き起こすこと。治療される対象に対する利益は、統計学的に有意であるか、又は少なくとも患者若しくは医師に知覚可能であるかのいずれかである。

【0102】

用量又は量に適用される「有効な」という用語は、それを必要とする対象への投与時に所望の活性をもたらすのに十分な化合物又は医薬組成物の量を指す。活性成分の組み合わせを投与するとき、その組み合わせの有効量は、個々に投与された場合に有効であろう各成分の量を含んでいる場合もあり、含んでいない場合もあることに留意されたい。正確な必要量は、種、年齢、及び全身状態、治療される病態の重症度、用いられる具体的な薬物、投与の様式などに応じて、対象によって異なる。

【0103】

「医薬的に許容される」という語句は、本明細書に記載の組成物に関連して使用される場合、生理学的に許容可能であり、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されたときに通常は有害反応を生じない分子実体及びそのような組成物の他の成分を指す。好ましくは、用語「医薬的に許容される」とは、哺乳類、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に記載されていることを意味する。

【0104】

用語「患者」、「個体」、「対象」、及び「動物」は、本明細書において互換的に使用され、ヒト、非ヒト霊長類、及び獣医学的動物（例えば、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタなど）並びに実験動物モデルを含むがこれらに限定されない哺乳動物を指す。哺乳動物の例としては、齧歯目の哺乳動物（例えば、マウス及びハムスター）、ウサギ目の哺乳動物（例えば、ウサギ）、ネコ科（ネコ）及びイヌ科（イヌ）を含む食肉目の哺乳動物、ウシ科（ウシ）及びブタ科（ブタ）を含む偶蹄目の哺乳動物、ウマ科（ウマ）を含む奇蹄目の哺乳動物、又は霊長類、セボイド（Ceboids）若しくはシモイド（Simoids）（サル）若しくは類人猿（Anthropoids）（ヒト及び類人猿）の哺乳動物が挙げられる。好ましい一実施形態では、対象はヒトである。

【0105】

用語「担体」は、化合物が一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このような医薬担体は、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体であってよい。水又は水溶液、生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセリン水溶液が、特に注射溶液用の担体として好ましく用いられる。代替的に、担体は、バインダー（圧縮丸剤用）、流動促進剤、封入剤、風味剤、及び着色剤のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない固体剤形担体であってもよい。好適な医薬用担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。

【0106】

文脈が明確に他を指示しない限り、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「方法（a method）」への言及は、本開示を読むと当業者に明らかになるであろう、本明細書に記載の種類の１つ以上の方法及び／又は工程を含む。

【0107】

用語「約」又は「およそ」は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを含む。このような範囲は、所与の値又は範囲の１桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、更により好ましくは１０％以内、更により好ましくは５％以内であり得る。用語「約」又は「およそ」によって包含される許容可能な変動は、研究中の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。

【0108】

本開示全体を通して、本開示の様々の態様が範囲形式にて提示され得る。範囲形式の説明は単に便宜上及び簡潔さのためのものであり、本開示の範囲上の確固とした制限として解釈されるべきではない、と理解すべきである。したがって、範囲の説明は、全ての可能な部分範囲、並びにその範囲内の個々の数値を具体的に開示しているとみなされるべきである。例えば、１～６などの範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６などの具体的に開示される部分範囲、並びにその範囲内の個々の数、例えば、１、２、２．７、３、４、５、５．３、及び６を有するとみなされるべきである。別の例として、９５～９９％の同一性などの範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するものを含み、９６～９９％、９６～９８％、９６～９７％、９７～９９％、９７～９８％、及び９８～９９％の同一性などの部分範囲を含む。これは、範囲の広さにかかわらず適用される。

【0109】

本発明の任意の態様の全ての実施形態は、文脈が明確に他を指示しない限り、組み合わせて使用することができる。

【0110】

本発明の方法
本開示の方法における使用に適した細胞は、全ての細胞及び組織、特に哺乳動物の細胞及び組織に由来するものであってもよい。好適な細胞は、ヒト、類人猿、サル、ブタ、又は齧歯類由来であってもよく、初代細胞であっても培養細胞であってもよい。いくつかの実施形態では、本開示の方法を使用して改変される細胞は、ヒト細胞である。

【0111】

ドナー細胞の単離／濃縮
いくつかの実施形態では、本開示の方法において使用される細胞は、ドナーから取得される。いくつかの実施形態では、細胞は、細胞が投与されるレシピエントに対して同種異系であっても非自己由来（「非自己」）であってもよい。代替の実施形態では、細胞は、細胞が投与されるレシピエントに対して自己由来であってもよい。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物対象から取得される。他の実施形態では、細胞は霊長類対象から取得される。いくつかの実施形態では、細胞はヒト対象から取得される。

【0112】

いくつかの実施形態では、本開示の方法において使用される細胞は、リンパ球（例えば、Ｔ細胞）である。リンパ球は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍などであるがこれらに限定されない供給源から取得することができる。リンパ球はまた、幹細胞の分化によって生成され得る。いくつかの実施形態では、リンパ球は、沈降、例えばＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に概ね知られている技術を使用して、対象から採取された血液から取得することができる。

【0113】

対象の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって取得することができる。アフェレーシスデバイスは、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含むリンパ球を含有する。アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、その後の処理のために適切な緩衝液又は培地中に細胞を配置し得る。細胞は、ＰＢＳ、又はカルシウム、マグネシウム、及び他の全てではないとしてもほとんどの二価カチオンを欠く別の好適な溶液で洗浄することができる。洗浄工程は、当業者に公知の方法（例えば、半自動化フロースルー遠心分離機によって、例えば、限定されないが、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞処理装置又はＢａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅを使用して、達成され得る。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性緩衝液、細胞培養培地、又は緩衝液を含むか若しくは含まない他の生理食塩水溶液に再懸濁され得る。

【0114】

Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離することができる。一例として、Ｔ細胞は、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離によって選別することができる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣの単離後、細胞傷害性及びヘルパーＴリンパ球の両方を、活性化、増大、及び／又は遺伝子改変の前又は後のいずれかに、ナイーブ、メモリー、及びエフェクタＴ細胞亜集団に選別することができる。

【0115】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法において使用されるＴ細胞集団は、Ｐａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団が、対象から取得された試料から単離される。

【0116】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるＴ細胞集団は、抑制性の調節性Ｔ細胞を含まない。

【0117】

いくつかの実施形態では、Ｔリンパ球を濃縮することができる。例えば、限定されないが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３４、ＣＤ３６、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ６２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２２、ＣＤ１２３、ＣＤ１２７、ＣＤ２３５ａ、ＣＣＲ７、ＨＬＡ－ＤＲ、又はそれらの組み合わせなどの１つ以上のマーカーを発現する、幹セントラルメモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ）などのＴリンパ球の特定の亜集団を、陽性選択技術又は陰性選択技術のいずれかを使用して濃縮することができる。いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ）は、本明細書に詳述される方法を使用して濃縮される。

【0118】

いくつかの実施形態では、Ｔリンパ球は、臍帯血幹細胞、前駆細胞、骨髄幹細胞、造血幹細胞（ＨＳＣ）、及び人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞から分化させることもできる。

【0119】

遺伝子改変
Ｔ細胞を遺伝子改変して、高親和性Ｔ細胞受容体（操作されたＴＣＲ）又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現させることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含む外因性核酸分子を細胞に導入する工程を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞を遺伝子改変して、１つ以上の操作されたＴＣＲ又はＣＡＲを発現させる。

【0120】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＩＬ－７の存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＩＬ－７及びＩＬ－１５の存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＩＬ－７及びＩＬ－２１の存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の存在下で実行され得る。

【0121】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、ＩＬ－２の非存在下で実行され得る。

【0122】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、Ｔ細胞の増大の前に実行され得る。例えば、ＰＢＭＣから単離されたＰａｎ－Ｔ細胞、ナイーブＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナイーブＣＤ８^＋Ｔ細胞、若しくはナイーブＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞、又はそれらの任意の組み合わせは、遺伝子改変され得る。

【0123】

いくつかの実施形態では、遺伝子改変は、Ｔ細胞の増大後に実行され得る。いくつかの実施形態では、濃縮された幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ）を含むＴ細胞が、遺伝子改変される。

【0124】

本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」は、細胞外標的結合ドメインと、膜貫通ドメインと、リンパ球活性化ドメイン及び任意選択的に少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む細胞質ドメインとを、全て、天然では単一のタンパク質において一緒に見出されない組み合わせで含む細胞表面受容体を指す。これには、特に、細胞外ドメイン及び細胞質ドメインが天然では単一の受容体タンパク質において一緒に見出されない、受容体が含まれる。

【0125】

天然に存在するＴ細胞受容体は、２つのサブユニット（αサブユニット及びβサブユニット）を含み、これらの各々は、各Ｔ細胞のゲノムにおける組換え事象によって産生される固有のタンパク質である。ＴＣＲのライブラリは、特定の標的抗原に対するそれらの選択性についてスクリーニングされ得る。このようにして、標的抗原に対して高いアビディティ及び反応性を有する天然ＴＣＲを選択し、クローニングし、続いて養子免疫療法に使用されるＴ細胞集団に導入することができる。

【0126】

一実施形態では、Ｔ細胞は、標的抗原を発現する腫瘍細胞に対する特異性をＴ細胞に付与するＴＣＲを形成する能力を有するＴＣＲのサブユニットをコードするポリヌクレオチドを導入することによって改変される。特定の実施形態では、サブユニットが、トランスフェクトされたＴ細胞に、標的細胞にホーミングし、免疫学的に関連するサイトカインシグナル伝達に関与する能力を付与するＴＣＲを形成する能力を保持する限り、サブユニットは、天然に存在するサブユニットと比較して、１つ以上のアミノ酸置換、欠失、挿入、又は改変を有する。操作されたＴＣＲはまた、好ましくは、関連する腫瘍関連ペプチドを提示する標的細胞に高いアビディティで結合し、任意選択的に、関連するペプチドを提示する標的細胞の効率的な死滅をインビボで媒介する。

【0127】

ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含む外因性核酸分子は、エピソーム発現され得る。あるいは、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含む外因性核酸分子は、相同組換え修復（ＨＤＲ）を介して（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓなどのゲノム編集ヌクレアーゼを使用することによって）遺伝子座にノックインされ得る。例えば、限定されるものではないが、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含む外因性核酸分子を、ＴＣＲα、ＴＣＲβ、又はＢ２Ｍ遺伝子座にノックインして、内因性遺伝子を置き換え得る。ノックインの場合、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲをコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子は、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）として、又はウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）で提供され得る。いずれの実施形態でも、遺伝子は、細胞中で活性なプロモータに作動可能に連結される（すなわち、転写制御下にある）。

【0128】

ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲは、悪性細胞又は感染細胞の表面で発現される抗原、例えば腫瘍抗原又は感染性抗原に対して指向され得る。

【0129】

本明細書に記載の改変細胞によって標的とされ得る腫瘍抗原の非限定的な例としては、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ＫＬＫ２）、ヘキソキナーゼ２（ｈＫ２）、インターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ－１３Ｒａ２）、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、キナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）、アンドロゲン受容体、アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、カルボニックアンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＣＣＣＴＣ結合因子（ＺＦｉｎｇｅｒ）様（ＢＯＲＩＳ）、ＣＤ１７１、ＣＤ１７９ａ、ＣＤ２４、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ９７、染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、クローディン６（ＣＬＤＮ６）、ＣＳ－１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９又は１９Ａ２４）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１）、サイクリンＢ１、シトクロムＰ４５０１Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、ＥＴＳトランスロケーションバリアント遺伝子６、染色体１２ｐ上に位置（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）、葉酸受容体β、Ｆｏｓ関連抗原１、フコシルＧＭ１、Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）、Ｇタンパク質共役受容体クラスＣ群５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ３、グリコセラミド（ＧｌｏｂｏＨ）、グリピカン－３（ＧＰＣ３）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、グローブＨの六糖部分、高分子量メラノーマ関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ－１１Ｒａ）、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブＡファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ルイス（Ｙ）抗原、リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）、メラノーマ癌精巣抗原１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）、メラノーマ癌精巣抗原２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）、アポトーシス阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）、ムチン１、細胞表面結合型（ＭＵＣ１）、Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ｐ５３ミュータント、対ボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）、対ボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）、パンネキシン３（ＰＡＮＸ３）、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲ－β）、ポリシアル酸、プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、プロテアソーム（Ｐｒｏｓｏｍｅ，Ｍａｃｒｏｐａｉｎ）サブユニット、βタイプ、９（ＬＭＰ２）、ＲａｓホモログＣ（ＲｈｏＣ）、肉腫転座ブレークポイント、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｔ細胞によって認識される扁平上皮癌抗原３（ＳＡＲＴ３）、ステージ特異的胚性抗原４（ＳＳＥＡ－４）、滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、ＴＣＲγ代替読み枠タンパク質（ＢＣＭＡ）、ＴＧＳ５、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＡＬＫ）、Ｔｎ抗原（ＴＡｇ）、腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、ウロプラキン２（ＵＰＫ２）、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫症ウイルス癌遺伝子神経芽細胞腫由来ホモログ（ＣＡＩＸ）、ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、及びＸ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、又はそれらの断片若しくは変異体が挙げられる。

【0130】

本明細書に記載される改変細胞によって標的化され得る更なる抗原としては、炭酸脱水酵素ＥＸ、α－フェトプロテイン、Ａ３、Ａ３３抗体に特異的な抗原、Ｂａ７３３、ＢｒＥ３－抗原、ＣＡ１２５、ＣＤ１、ＣＤ１ａ、ＣＤ３、ＣＤ５、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、Ｆｍｓ関連受容体チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）又はＣＤ１３５、結腸特異的抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＣＥＡ（ＣＥＡＣＡＭ５）、ＣＥＡＣＡＭ６、ＣＳＡｐ、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－Ｉ、ＥＧＰ－２、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ１、ＥｐｈＡ３、ＥｐｈＡ４、ＥｐｈＡ５、ＥｐｈＡ６、ＥｐｈＡ７、ＥｐｈＡ８、ＥｐｈＡ１０、ＥｐｈＢ１、ＥｐｈＢ２、ＥｐｈＢ３、ＥｐｈＢ４、ＥｐｈＢ６、ＦＩｔ－Ｉ、Ｆｌｔ－３、葉酸受容体、ＨＬＡ－ＤＲ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）及びそのサブユニット、低酸素症誘導因子（ＨＩＦ－１）、Ｉａ、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、インスリン増殖因子－１（ＩＧＦ－Ｉ）、ＫＣ４－抗原、ＫＳ－１－抗原、ＫＳ１－４、Ｌｅ－Ｙ、マクロファージ阻害因子（ＭＩＦ）、ＭＡＧＥ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３、ＭＵＣ４、ＮＣＡ６６、ＮＣＡ９５、ＮＣＡ９０、ＰＡＭ－４ｌｌ抗体に特異的な抗原、胎盤増殖因子、ｐ５３、前立腺酸性ホスファターゼ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ，ＲＳ５、Ｓ１００、ＴＡＣ、ＴＡＧ－７２、テネイシン、ＴＲＡＩＬ受容体、Ｔｎ抗原、Ｔｈｏｍｓｏｎ－Ｆｒｉｅｄｅｎｒｅｉｃｈ抗原、腫瘍壊死抗原、ＶＥＧＦ、ＥＤ－Ｂフィブロネクチン、１７－１Ａ－抗原、血管新生マーカー、癌遺伝子マーカー又は癌遺伝子産物が挙げられるが、これらに限定されない。

【0131】

特定の実施形態では、本明細書に記載の改変された細胞によって標的化される腫瘍抗原は、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＤ７９、ＫＬＫ２、ＣＤ１９、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ｈｋ２、ＦＬＴ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＫＲＡＳＧ１２Ｄ、ｐ５３、ＢＲＡＣ１、又はＰＳＭＡである。

【0132】

一実施形態では、ＢＣＭＡに特異的に結合するＣＡＲは、配列番号２のアミノ酸配列、又は配列番号２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有する配列を含む細胞外標的結合ドメインを含む。

【0133】

一実施形態では、ＢＣＭＡに特異的に結合するＣＡＲは、配列番号３のアミノ酸配列、又は配列番号３と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有する配列を含む細胞外標的結合ドメインを含む。

【0134】

一実施形態では、ＢＣＭＡに特異的に結合するＣＡＲは、配列番号１１のアミノ酸配列、又は配列番号１１と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有する配列を含む。

【0135】

一実施形態では、ＢＣＭＡに特異的に結合するＣＡＲは、配列番号１２のアミノ酸配列、又は配列番号１２と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一性を有する配列を含む細胞外標的結合ドメインを含む。

【0136】

感染性抗原は、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、寄生虫抗原、又はプリオン抗原などであり得る。感染性抗原としては、インタクトな微生物（例えば、ウイルス、細菌、真菌）並びにその天然の単離物及び断片又は誘導体、並びに更に、天然の微生物抗原と同一又は類似であり、その微生物（例えば、ウイルス、細菌、真菌）に特異的な免疫応答を誘導する合成又は組換え化合物が挙げられる。化合物は、天然微生物抗原に対する免疫応答（体液性及び／又は細胞性）を誘導する場合、天然微生物抗原に類似している。このような抗原は、当該分野で日常的に使用され、当業者に周知である。

【0137】

感染性抗原は感染性ウイルスであってもよく、又は感染性ウイルスに由来してもよい。ヒトにおいて見出されている感染性ウイルスの非限定的な例としては、アデノウイルス科（ほとんどのアデノウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；ビルナウイルス科；ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス、及びナイロウイルス）；カルシウイルス（例えば、胃腸炎を引き起こす株）；コロノウイルス科（例えば、コロナウイルス）；フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）；フラビウイルス科（例えば、デングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）１型及び２型、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）；イリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）；ノーウォーク及び関連ウイルス、並びにアストロウイルス；オルトミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、はしかウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルス、及びロタウイルス）；レトロウイルス科（例えば、ＨＩＶ－１（ＨＴＬＶ－ＩＩＩ、ＬＡＶ若しくはＨＴＬＶ－ＩＩＩ／ＬＡＶ、又はＨＩＶ－ＩＩＩとも呼ばれる）などのヒト免疫不全症ウイルス）；及び他の分離株、例えばＨＩＶ－ＬＰ）；ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；及び分類されていないウイルス（例えば、海綿状脳症の病原体、デルタ肝炎の病原体、非Ａ非Ｂ型肝炎（すなわち、Ｃ型肝炎）の病原体）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0138】

感染性抗原は、感染性細菌であってもよく、又は感染性細菌に由来してもよい。グラム陰性細菌及びグラム陽性細菌の両方が、脊椎動物において抗原として機能することができる。このようなグラム陽性菌としては、パスツレラ種、ブドウ球菌種、及び連鎖球菌種が挙げられるが、これらに限定されない。穀物陰性細菌としては、大腸菌、シュードモナス菌種、及びサルモネラ菌種が挙げられるが、これらに限定されない。感染性細菌の非限定的な例としては、放線菌（Actinomyces israelli）、炭疽菌（acillus antracis）、バクテロイデス属（Bacteroides sp.）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Borelia burgdorferi）、クラミジア（Chlamydia）、ウェルシュ菌（Clostridium perfringers）、ジフテリア菌（Corynebacterium diphtheriae）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium sp.）、エンテロバクター・アエロゲネス（Enterobacter aerogenes）、腸球菌属（Enterococcus sp.）、豚丹毒菌（Erysipelothrix rhusiopathiae）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Fusobacterium nucleatum）、ヘモフィルスインフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori）、クレブシエラ・ニューモニエ（Klebsiella pneumoniae）、レジオネラ・ニューモフィラ（Legionella pneumophilia）、レプトスピラ（Leptospira）、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）、マイコバクテリウム属（Mycobacteria sps.）（例えば、結核菌（M. tuberculosis）、Ｍ．アビウム（M avium）、マイコバクテリウム・ゴルドナエ（M gordonae）、Ｍ．イントラセルラーエ（M intracellulare）、Ｍカンサシ（M kansaii））淋菌（Neisseria gonorrhoeae）、髄膜炎菌（Neisseria meningitidis）、パスツレラ・ムルトシダ（Pasturella multocida）、病原性カンピロバクター属（pathogenic Campylobacter sp.）、リケッチア（Rickettsia）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Streptobacillus monihformis）、連鎖球菌（嫌気性属）、連鎖球菌（ビリダンス群）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Streptococcus agalactiae）（Ｂ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・ボビス（Streptococcus bovis）、糞便連鎖球菌（Streptococcus faecalis）、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、梅毒トレポネーマ（Treponema pallidium）、及びトレポネーマ・ペルテヌエ（Treponema pertenue）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0139】

感染性抗原は、他の感染性微生物であっても、又はそれに由来してもよい。感染性真菌の非限定的な例としては、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Cryptococcus neoformans）、ヒストプラスマ・カプスラタム（Histoplasma capsulatuin）、コクシジオイデス・イミチス（Coccidioides immitis）、ブラストミセス・デルマティティジス（Blastomyces dernatitidis）、クラミジア・トラコマチス（Chlamydia trachomatis）、及びカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）が挙げられる。他の感染性生物（すなわち原生生物）としては、例えば、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、マラリア原虫（Plasmodium malariae）、卵形マラリア原虫（Plasmodium ovale）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、トキソプラズマ（Toxoplasma）、及び住血吸虫（Shistosoma）などの変形体が挙げられる。他の医学的に関連する微生物は、文献に広範に記載されており、例えば、Ｃ．Ｇ．Ａ．Ｔｈｏｍａｓ，「Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ」，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎ １９８３を参照されたく、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0140】

感染性抗原の他の非限定的な例としては、ＨＩＶ抗原（例えば、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０、ｐ１８、Ｔａｔ、Ｇａｇ、Ｐｏｌ、Ｅｎｖ、Ｎｅｆ）などのウイルス抗原、ヘルペスウイルス由来の糖タンパク質、並びにＢ型肝炎ウイルス由来の表面抗原及びコア抗原；ボレリア属由来のＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ及びＯｓｐＣ抗原などの細菌抗原；カンジダ・アルビカンス由来のＭＰ６５及びプラスモジウム科由来のＣＳタンパク質など真菌及び寄生虫抗原が挙げられる。

【0141】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲは、自己抗原に対して指向され得る。このような抗原の例としては、例えば、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性硬化（ＭＳ）、シェーグレン症候群、類肉腫症、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免疫甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊髄炎、硬皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、乾せん、血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、Ｃｒｏｈｎ病及び潰瘍性結腸炎）などの自己免疫疾患に関連する抗原が挙げられる。

【0142】

更なる実施形態では、本開示の方法はまた、１つ以上の内因性Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を低減又は阻害することを伴い得る。

【0143】

上記の方法の様々な実施形態は、１つ以上のポリヌクレオチド／ポリペプチド剤（例えば、ＣＡＲ又は操作されたＴＣＲ）を細胞に導入することを伴う。本発明に記載されるポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドは、ウイルス性、非ウイルス性遺伝子送達方法、又は物理的方法を介して細胞に導入され得る。本発明の方法で使用するためのポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド送達に適した方法としては、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドを細胞小器官、細胞、組織、又は生物に導入することができる、当業者に公知の任意の方法が挙げられる。ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドの移入は、インビトロ、エクスビボ、又はインビボで行われ得る。

【0144】

様々な実施形態では、ポリペプチド又はポリヌクレオチドは、物理的方法を使用して細胞に導入される。好適な物理的方法としては、限定はされないが、エレクトロポレーション、直接注射（例えば、微量注射）、マグネトフェクション、超音波、弾道若しくは流体力学的方法、又はこれらの組み合わせが挙げられる。

【0145】

エレクトロポレーションは、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド送達のための方法である。例えば、Ｐｏｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，７１６１－７１６５及びＴｕｒ－Ｋａｓｐａ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６，７１６－７１８を参照されたい。両文献とも、全ての目的のためにその全体が本明細書に組み込まれる。エレクトロポレーションは、細胞及びＤＮＡの懸濁液を高電圧放電に曝露することを伴う。いくつかの実施形態では、ペクチン分解酵素などの細胞壁分解酵素を用いて、細胞を、エレクトロポレーションによる遺伝子改変に対して、未処理細胞よりも影響を受けやすくすることができる。例えば、米国特許第５，３８４，２５３号を参照されたい。これは、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0146】

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼが使用される場合、１つ以上のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ及び１つ以上のｇＲＮＡをようにアセンブルして、１つ以上のリボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を形成することができ、これは次いで、エレクトロポレーションによって細胞内に導入され得る。

【0147】

本発明で使用するためのエレクトロポレーションの方法としては、例えば、Ｓａｒｄｅｓａｉ，Ｎ．Ｙ．及びＷｅｉｎｅｒ，Ｄ．Ｂ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ２３：４２１－９（２０１１）及びＦｅｒｒａｒｏ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ７：１２０－１２７（２０１１）が挙げられ、これらは両方とも、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0148】

ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド移入のための別の物理的方法としては、注射が挙げられる。いくつかの実施形態では、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、又はベクターは、１回以上の注射（例えば、針注射）を介して細胞、組織、又は生体に送達され得る。注射の非限定的な方法としては、組成物（例えば、生理食塩水ベースの組成物）の注射が挙げられる。ポリヌクレオチド及び／又はポリヌクレオチドは、直接微量注射によって導入することもできる。注射の非限定的な部位としては、皮下、皮内、筋肉内、結節内（リンパ組織への抗原の直接送達を可能にする）、静脈内、前立腺内、腫瘍内、リンパ内（樹状細胞の直接投与を可能にする）及び腹腔内が挙げられる。適切な注射部位の準備（例えば、適切な針の配置を観察するために注射部位を削ること）が必要であることが理解される。

【0149】

いくつかの実施形態では、本発明に記載されるポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドは、高張性又は低張性によって誘導される飲作用によって細胞に導入される。例えば、細胞は、通常の生理食塩水よりも高いか又は低いかのいずれかの塩濃度を有する緩衝液中に配置され得る。これは、細胞外環境を取り込む細胞における能動的取り込み機構を活性化し得る。様々な化学物質を使用して、このプロセスを増強及び改変することができる。これは特別な機械を必要としない。飲作用が形質導入のために使用され得る例示的な方法は、当該分野で記載されている。例えば、国際公開第２０１７０９３３２６（Ａ１）号を参照されたい。これは、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0150】

様々な実施形態では、本発明に記載されるポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドは、ベクターを介して細胞に導入される。ベクターは、ウイルスベクターであっても非ウイルスベクターであってもよい。

【0151】

いくつかの実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。本発明において使用することができる好適なウイルスベクターとしては、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アルファウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、又はバキュロウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。１つの特定の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。１つの特定の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、細胞は、レトロウイルス形質導入を介して形質導入される。遺伝子のレトロウイルス形質導入を記載する参考文献は、Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔ ａｌ．、米国特許第５，３９９，３４６号；Ｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，３３：１５３（１９８３）；Ｔｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ、米国特許第４，６５０，７６４号；Ｔｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ、米国特許第４，９８０，２８９号；Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１１２０（１９８８）；Ｔｅｍｉｎ ｅｔ ａｌ、米国特許第５，１２４，２６３号；１９９５年３月１６日に公開されたＤｏｕｇｈｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．による国際公開第９５／０７３５８号；及びＫｕｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８２：８４５（１９９３）であり、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0152】

いくつかの実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。本発明の方法において有用な非ウイルスベクターの非限定的な例としては、プラスミド又はトランスポゾンが挙げられる。

【0153】

また、核酸ワクチンを使用して、ポリヌクレオチドを細胞に移入することができる。このようなワクチンとしては、非ウイルスポリヌクレオチドベクター、「裸の」ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにウイルスベクターが挙げられるが、これらに限定されない。これらのワクチンを用いて細胞を遺伝子改変する方法、及びこれらのワクチンに含まれる遺伝子の発現を最適化するための方法は、当業者に公知である。

【0154】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドは、ナノ粒子、ポリマー、デンドリマー、リポソーム、及びポリエチレンイミン（ＰＥＩ）粒子を使用して細胞に導入され得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチド（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ）は、可溶性タンパク質又はリボ核タンパク質として細胞に導入される。

【0155】

ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド移入の更なる方法としては、リポソーム媒介トランスフェクション（例えば、ポリヌクレオチドを、過剰な水溶液中に懸濁された脂質複合体中に捕捉）が挙げられる。例えば、Ｇｈｏｓｈ ａｎｄ Ｂａｃｈｈａｗａｔ，（１９９１）Ｉｎ：Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｕｓｉｎｇ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｌｉｇａｎｄｓ．ｐｐ．８７－１０４を参照されたい。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ又はＳｕｐｅｒｆｅｃｔと複合体化されたポリヌクレオチド及び／又はポリペプチド；ＤＥＡＥ－デキストラン（例えば、ポリヌクレオチドは、ＤＥＡＥ－デキストラン、続いてポリエチレングリコールを使用して細胞に送達される）も企図される。例えば、Ｇｏｐａｌ，Ｔ．Ｖ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８５ Ｍａｙ；５（５）：１１８８－９０）；リン酸カルシウム（例えば、ポリヌクレオチドは、リン酸カルシウム沈殿を使用して細胞に導入される）を参照されたい。例えば、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，（１９７３）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，５２，４５６－４６７；Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｏｋａｙａｍａ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，７（８）：２７４５－２７５２，１９８７）、及びＲｉｐｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１０：６８９－６９５，１９９０）；超音波処理負荷（直接超音波負荷によるポリヌクレオチドの導入）を参照されたい。例えば、Ｆｅｃｈｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，８４６３：８４６７）；微粒子銃ボンバード（例えば、１つ以上の粒子を少なくとも１つのポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドでコーティングし、推進力によって細胞内に送達することができる）を参照されたい。例えば、米国特許第５，５５０，３１８号；米国特許第５，５３８，８８０号、米国特許第５，６１０，０４２号；及び国際公開第９４／０９６９９号；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ，３２７，７０－７３、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７，９５６８：９５７２；及び受容体媒介性トランスフェクション（例えば、様々な受容体の細胞型特異的分布を使用して標的細胞において生じる受容体媒介性エンドサイトーシスによる巨大分子の選択的取り込み）を参照されたい。例えば、Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２，４４２９－４４３２；Ｗａｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７（９）：３４１０－３４１４，１９９０；Ｐｅｒａｌｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：４０８６－４０９０（１９９４）；Ｍｙｅｒｓ，ＥＰＯ ０２７３０８５；Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．，１２：１５９－１６７，１９９３；Ｎｉｃｏｌａｕ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１４９，１５７－１７６）を参照されたく、本明細書で引用される各参考文献は、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。

【0156】

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼの場合、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ）及びｇＲＮＡは、同じ方法を使用して送達される必要はないことが認識されるべきである。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ）及びｇＲＮＡは、同じ方法を使用して送達される。例えば、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ）及びｇＲＮＡの両方を、エレクトロポレーションを介して、又は同じベクター中で細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ）及びｇＲＮＡは、異なる方法を使用して送達される。例えば、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ）は、エレクトロポレーションを介して細胞に導入され、ｇＲＮＡは、ウイルスベクターで送達される。別の例として、Ｃａｓタンパク質（例えば、Ｃａｓ９、Ｃａｓ１２ａ）及びｇＲＮＡは、別々のベクターで送達される。

【0157】

Ｔ細胞の刺激／活性化
十分な治療用量の細胞組成物に達するために、Ｔ細胞は、１回以上の刺激／活性化に供され得る。細胞は、遺伝子改変工程の前、後、及び／又は最中にエクスビボで活性化及び／又は増大され得る。

【0158】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の刺激／活性化は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１を含む１つ以上のサイトカインの存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の刺激／活性化は、ＩＬ－７の存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の刺激／活性化は、ＩＬ－７及びＩＬ－１５の存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の刺激／活性化は、ＩＬ－７及びＩＬ－２１の存在下で実行され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の刺激／活性化は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１の存在下で実行され得る。

【0159】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の刺激／活性化は、ＩＬ－２の非存在下で実行され得る。

【0160】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上の刺激シグナル又は作用物質（例えば、化合物、小分子、例えば小有機分子、核酸、ポリペプチド、又はそれらの断片、アイソフォーム、変異体、類似体、若しくは誘導体）の存在下で、Ｔ細胞を刺激して活性化する工程を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、１つ以上の刺激シグナル又は作用物質の存在下で、Ｔ細胞を刺激して活性化させ、増殖させる工程を含む。

【0161】

Ｔ細胞は、細胞が活性化マーカーを発現し、サイトカインを産生し、増殖し、及び／又は標的細胞に対して細胞傷害性になる生物学的状態の変化を誘導することによって活性化することができる。これらの変化は全て、一次刺激シグナルによって生じ得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制し、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。

【0162】

Ｔ細胞は、概して、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、及び同第６，８６７，０４１号に記載されているような方法を用いて活性化することができ、これらの特許の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0163】

いくつかの実施形態では、α－βＴ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８刺激を使用して活性化することができる。一例として、α－βＴ細胞は、抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体を使用して刺激され得る。

【0164】

いくつかの実施形態では、γ－δＴ細胞は、ゾレドロネート及び／又はγ－デルタＴＣＲに結合する作用物質（例えば、抗体）によって活性化することができる。また、ＩＬ－２及びＩＬ－１５を使用して、γ－δＴ細胞を増大させることができる。

【0165】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ３ζを活性化する作用物質に結合することによって活性化することができる。

【0166】

他の実施形態では、ＣＤ２結合剤を使用して、一次刺激シグナルをＴ細胞に提供することができる。例えば、限定するものではないが、ＣＤ２剤としては、ＣＤ２リガンド及び抗ＣＤ２抗体、例えば、Ｔｌ１．１又はＴｌ１．２抗体と組み合わせたＴｌ１．３抗体（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭｅｕｅｒ，Ｓ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｃｅｌｌ ３６：８９７－９０６）、及び９－１抗体と組み合わせた９．６抗体（ＴＩ１．１と同じエピトープを認識する）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＹａｎｇ，Ｓ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：１０９７－１１００）が挙げられる。上記抗体のいずれかと同じエピトープに結合する他の抗体も使用することができる。

【0167】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、酢酸ミリスチン酸ホルボール（ＰＭＡ）及びイオノマイシンを投与することによって活性化される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、活性化及びその後の増大を誘導する適切な抗原を投与することによって活性化される。いくつかの実施形態では、ＰＭＡ、イオノマイシン、及び／又は適切な抗原は、ＣＤ３誘導活性化及び／又は増大を伴って投与される。

【0168】

概して、本発明において使用される活性化剤としては、抗体、その断片、及び抗体様機能を有するタンパク質性結合分子が挙げられるが、これらに限定されない。（組換え）抗体断片の例は、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、（Ｆａｂ）２’－断片などの二価抗体断片、ダイアボディ、トリアボディ（Ｉｌｉａｄｅｓ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ（１９９７）４０９，４３７－４４１、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、デカボディ（Ｓｔｏｎｅ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００７）３１８，８８－９４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及び他のドメイン抗体（Ｈｏｌｔ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００３），２１，１１，４８４－４９０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）である。二価抗体断片が、（Ｆａｂ）２’－断片、又は二価単鎖Ｆｖ断片であり得る一方、一価抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、及び単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）からなる群から選択され得る。

【0169】

いくつかの実施形態では、ＣＤ３ζ剤の１つ以上の結合部位は、二量体リポカリンムテイン（すなわち、デュオカリン）などの二価タンパク質性人工結合分子であってもよい。いくつかの実施形態では、受容体結合試薬は、単一の第２の結合部位を有し得る（すなわち、一価）。一価薬剤（一価作用物質）の例としては、一価抗体断片、抗体様結合特性を有するタンパク質性結合分子、又はＭＨＣ分子が挙げられるが、これらに限定されない。一価抗体断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、及び二価一本鎖Ｆｖ断片を含む一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）が挙げられるが、これらに限定されない。

【0170】

ＣＤ３に特異的に結合する薬剤としては、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ３抗体の二価抗体断片、抗ＣＤ３抗体の一価抗体断片、及び抗体様結合特性を有するタンパク質性ＣＤ３結合分子が挙げられるが、これらに限定されない。抗体様結合特性を有するタンパク質性ＣＤ３結合分子は、アプタマー、リポカリンファミリーのポリペプチドに基づくムテイン、グルボディ、アンキリン足場に基づくタンパク質、結晶性足場に基づくタンパク質、アドネクチン、及びアビマーであり得る。これはまた、ビーズに結合することができる。

【0171】

いくつかの実施形態では、活性化剤（例えば、ＣＤ３結合剤）は、約０．１～約１０μｇ／ｍｌの濃度で存在することができる。いくつかの実施形態では、活性化剤（例えば、ＣＤ３結合剤）は、約０．２μｇ／ｍｌ～約９μｇ／ｍｌ、約０．３μｇ／ｍｌ～約８μｇ／ｍｌ、約０．４μｇ／ｍｌ～約７μｇ／ｍｌ、約０．５μｇ／ｍｌ～約６μｇ／ｍｌ、約０．６μｇ／ｍｌ～約５μｇ／ｍｌ、約０．７μｇ／ｍｌ～約４μｇ／ｍｌ、約０．８μｇ／ｍｌ～約３μｇ／ｍｌ、又は約０．９μｇ／ｍｌ～約２μｇ／ｍｌの濃度で存在することができる。いくつかの実施形態では、活性化剤（例えば、ＣＤ３結合剤）は、約０．１μｇ／ｍｌ、約０．２μｇ／ｍｌ、約０．３μｇ／ｍｌ、約０．４μｇ／ｍｌ、約０．５μｇ／ｍｌ、約０．６μｇ／ｍｌ、約０．７μｇ／ｍｌ、約０．８μｇ／ｍｌ、約０．９μｇ／ｍｌ、約１μｇ／ｍｌ、約２μｇ／ｍｌ、約３μｇ／ｍｌ、約４μｇ／ｍｌ、約５μｇ／ｍｌ、約６μｇ／ｍｌ、約７μｇ／ｍｌ、約８μｇ／ｍｌ、約９μｇ／ｍｌ、又は約１０μｇ／ｍｌの濃度で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合剤は、１μｇ／ｍｌの濃度で存在することができる。

【0172】

いくつかの実施形態では、活性化剤は、限定されないが、ビーズなどの固体支持体、培養プレート若しくはウェル中に存在する吸収性ポリマー、又は限定されないが、セファロース若しくはガラスなどの他のマトリックスに付着され、当業者に公知の手段によって、天然細胞株又は組換え細胞株の細胞表面上に（例えば、天然形態又は組換え形態で）発現され得る。

【0173】

Ｔ細胞の増大／増殖
Ｔ細胞を活性化し、形質導入した後、細胞を培養して増殖させることができる。Ｔ細胞は、少なくとも１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、８日間、９日間、１０日間、１１日間、１２日間、１３日間、１４日間、１５日間、１６日間、１７日間、１８日間、１９日間、又は２０日間、少なくとも１週間又は２週間、少なくとも１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、４ヶ月間、５ヶ月間、又は６ヶ月、又はそれ以上の間、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０、又はそれ以上の増大回数で培養され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１～２０日間、１～１８日間、１～１４日間、３～２０日間、３～１８日間、３～１４日間、５～２０日間、５～１８日間、５～１４日間、７～２０日間、７～１８日間、７～１６日間、７～１５日間、７～１４日間、８～２０日間、８～１８日間、８～１６日間、８～１５日間、８～１４日間、８～１３日間、８～１２日間、９～２０日間、９～１８日間、９～１６日間、９～１５日間、９～１４日間、９～１３日間、９～１２日間、１０～２０日間、１０～１８日間、１０～１６日間、１０～１５日間、又は１０～１４日間培養される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、８～１４日間培養される。一実施形態では、Ｔ細胞は、１４日間培養される。

【0174】

本開示によれば、Ｔ細胞をＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／又はＩＬ－２１などのインターロイキンと共に培養することによって、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮することができる。

【0175】

いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞は、ＩＬ－７の存在下でＴ細胞を培養することによって濃縮することができる。いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞は、ＩＬ－７及びＩＬ－１５の存在下でＴ細胞を培養することによって濃縮することができる。いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞は、ＩＬ－７及びＩＬ－２１の存在下でＴ細胞を培養することによって濃縮することができる。いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の存在下でＴ細胞を培養することによって濃縮することができる。いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の存在下でＴ細胞を培養することによって濃縮することができる。

【0176】

いくつかの実施形態では、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を濃縮するために使用されるインターロイキンは、ＩＬ－２を含まない。

【0177】

いくつかの実施形態では、増大のために使用される薬剤（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）は、約１ｎｇ／ｍｌ～約２０ｎｇ／ｍｌで投与される。いくつかの実施形態では、増大のために使用される薬剤（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）は、約２ｎｇ／ｍｌ～約２０ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ～約２０ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ～約１８ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ～約１５ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ～約１２ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ～約２０ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ～約１８ｎｇ／ｍｌ、７ｎｇ／ｍｌ～約１５ｎｇ／ｍｌ、５．５ｎｇ／ｍｌ～約９．５ｎｇ／ｍｌ、約６ｎｇ／ｍｌ～約９ｎｇ／ｍｌ、約６．５ｎｇ／ｍｌ～約１２ｎｇ／ｍｌ、又は約９ｎｇ／ｍｌ～約１２ｎｇ／ｍｌで投与される。いくつかの実施形態では、増大のために使用される薬剤（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１）は、約５ｎｇ／ｍｌ、約６ｎｇ／ｍｌ、約７ｎｇ／ｍｌ、約８ｎｇ／ｍｌ、約９ｎｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ、約１１ｎｇ／ｍｌ、約１２ｎｇ／ｍｌ、約１３ｎｇ／ｍｌ、約１４ｎｇ／ｍｌ又は約１５ｎｇ／ｍｌで投与される。

【0178】

Ｔ細胞の増大のために使用され得る薬剤の他の実例は、ＣＤ８、ＣＤ４５又はＣＤ９０に結合する薬剤、例えば、αＣＤ８、αＣＤ４５又はαＣＤ９０抗体である。Ｔ細胞集団の実例には、抗原特異的Ｔ細胞、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（メモリーＴ細胞の実例はＣＤ６２Ｌ^＋ＣＤ８^＋特異的セントラルメモリーＴ細胞である）又は調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇの実例はＣＤ４^＋ＣＤ２５^＋ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔｒｅｇ細胞である）が含まれる。

【0179】

Ｔリンパ球を増大させるために使用され得る更なる薬剤には、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、及び同第６，８６７，０４１号に記載されるような方法が含まれ、これらの特許の各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0180】

Ｔ細胞培養に適切な条件には、適切な培地（例えば、最小必須培地（ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ培地１６４０、Ｌｏｎｚａ ＲＰＭＩ １６４０、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ、Ｃｌｉｃｋｓ、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、α－ＭＥＭ、Ｆ－１２、ＴｅｘＭＡＣＳ、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、及びＸ－Ｖｉｖｏ ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒに、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、及びビタミンが添加され、無血清であるか、又は適切な量の血清（若しくは血漿）若しくは規定のホルモンセット、及び／又は成長及び増大に十分な量のサイトカインが補充されている）が含まれる。

【0181】

Ｔ細胞増大のための他の添加剤の例としては、界面活性剤、プラスミン、ＨＥＰＥＳなどのｐＨ緩衝剤、並びにＮ－アセチル－システイン及び２－メルカプトエタノールなどの還元剤が挙げられるが、これらに限定されない。抗生物質（例えば、ペニシリン及びストレプトマイシン）は、実験培養物にのみ含まれ、対象に注入される細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、成長を支持するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）及び雰囲気下（例えば、空気＋５％ ＣＯ_２）で維持される。

【0182】

細胞がｉＰＳＣ由来細胞であるいくつかの実施形態では、改変された細胞は、マスター細胞バンクを作製するために個々のクローンについて選択される。

【0183】

いくつかの実施形態では、Ｔ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージが、細胞増大後のＴ細胞集団において判定される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージは、細胞増大後、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％である。一実施形態では、Ｔ細胞集団におけるＴ_ＳＣＭ細胞のパーセンテージは、細胞増大後、約３０％～９０％、４０％～８０％、５０％～６０％、５０％～７０％、５０％～８０％、６０％～７０％、又は６０％～８０％である。

【0184】

本発明の組成物
一実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法に従って調製された幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含む、Ｔ細胞集団を提供する。細胞を遺伝子改変して、１つ以上のＣＡＲ又は操作されたＴＣＲを発現させることができる。

【0185】

別の実施形態では、本開示はまた、幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含むＴ細胞集団と、任意選択的に、医薬的に許容される担体及び／又は賦形剤とを含む、医薬組成物を提供する。医薬担体の例としては、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体が挙げられるが、これらに限定されない。水又は水溶液、生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセリン水溶液が、特に注射溶液用の担体として好ましく用いられる。

【0186】

本明細書に記載の改変された細胞を含む組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液；グルコース、マンノース、スクロース又はデキストラン、マンニトールなどの炭水化物；タンパク質；グリシンなどのポリペプチド又はアミノ酸；抗酸化剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば水酸化アルミニウム）；及び防腐剤を含み得る。

【0187】

本明細書に記載される改変された細胞を含む組成物は、無菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩水、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム、固定油、例えば溶媒又は懸濁媒体として役立ち得る合成モノ又はジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の溶媒；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸などのキレート剤；酢酸塩、クエン酸塩、又はリン酸塩などの緩衝剤；並びに塩化ナトリウム又はデキストロースなどの張度を調整するための薬剤、のうちの１つ以上を含み得る。非経口製剤は、ガラス又はプラスチックで作製されたアンプル、使い捨て注射器、又は多数回投与バイアルに封入することができる。注射用医薬組成物は、好ましくは無菌である。

【0188】

いくつかの実施形態では、組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内又は動脈内）、腹腔内、腫瘍内、脳室内、胸膜内又は筋肉内投与のために製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、投与前に凍結乾燥調製物から再構成される。

【0189】

いくつかの実施形態では、改変された細胞は、それらの投与前に接着又は浸透する物質、例えば、限定されないが、ナノ粒子と混合され得る。

【0190】

治療方法
別の実施形態では、本開示は、必要とする対象における移植の方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載される幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含むＴ細胞集団又は本明細書に記載される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0191】

別の実施形態では、本開示は、必要とする対象における疾患又は障害を治療する方法であって、対象に、有効量の本明細書に記載の幹細胞様メモリーＴ（Ｔ_ＳＣＭ）細胞を含む細胞集団又は本明細書に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。

【0192】

別の実施形態では、本開示は、医療における使用のための、本明細書に記載されるＴ細胞集団、又は医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、疾患又は障害、例えば、これらに限定されないが、癌、自己免疫疾患、又は感染症を治療する際に使用するための、本明細書に記載のＴ細胞集団、又は医薬組成物を提供する。

【0193】

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞集団又は医薬組成物を製造するための方法は、インビトロ又はエクスビボで実行される。

【0194】

いくつかの実施形態では、細胞集団又は医薬組成物中の細胞は、細胞集団又は医薬組成物を投与される対象に対して同種異系である。いくつかの実施形態では、細胞集団又は医薬組成物中の細胞は、細胞集団又は医薬組成物を投与される対象に対して自己由来である。

【0195】

本開示の方法及び／又は組成物を使用して治療することができる疾患又は障害としては、癌、自己免疫疾患、又は感染症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0196】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で治療することができる疾患又は障害は、癌である。用語「癌」及び「癌性」は、典型的には調節されない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的病状を指すか、又は説明する。用語「癌」は、例えば、軟組織腫瘍（例えば、リンパ腫）、並びに血液及び血液形成器官の腫瘍（例えば、白血病）、並びに血流の外側の解剖学的部位で成長する固形腫瘍（例えば、癌腫）を含む。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（例えば、骨肉腫又は横紋筋肉腫）、及び白血病又は悪性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。そのような癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌（例えば、上皮扁平上皮癌）、腺扁平上皮癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、気管支原性癌、ルイス肺癌、肺神経内分泌腫瘍、典型的カルチノイド、非定型カルチノイド、及び大細胞神経内分泌癌を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌又は胃癌（例えば、胃腸癌、消化管間質腫瘍膵臓癌、膵臓腺癌、乳管内乳頭粘液性新生物（ＩＰＭＮ）、膵島細胞腫瘍が挙げられる）、子宮頸癌（限定されないが、子宮頸部腺癌を含む）、卵巣癌（限定されないが、嚢胞腺癌、卵巣胚性癌腫、卵巣腺癌、卵巣明細胞癌、卵巣漿液性嚢胞腺腫を含む）、肝臓癌、膀胱癌、尿路の癌、肝癌、乳癌（限定されないが、乳房の腺癌、乳房の乳頭状癌、乳癌、乳房の髄様癌を含む）、結腸癌（限定されないが、結腸腺癌を含む）、結腸直腸癌（限定されないが、直腸癌、結腸直腸腺癌を含む）、子宮内膜癌（限定されないが、子宮癌、子宮肉腫を含む）、唾液腺癌、腎臓癌又は腎癌（限定されないが、腎芽細胞腫又はウィルムス腫瘍、腎細胞癌を含む）、前立腺癌（限定されないが、前立腺腺癌を含む）、外陰癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、皮膚癌（限定されないが、原発性又は転移性黒色腫、扁平上皮癌、ケラトアカントーマ、基底細胞癌を含む）、多発性骨髄腫（限定されないが、くすぶり型多発性骨髄腫を含む）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）（限定されないが、Ｂ細胞ＡＬＬ、Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（例えば、Ｂ細胞ＡＭＬ、Ｔ細胞ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（例えば、Ｂ細胞ＣＭＬ、Ｔ細胞ＣＭＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ）、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）（限定されないが、Ｂ細胞ＨＬ、Ｔ細胞ＨＬを含む）などのリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ））などのＢ細胞性ＮＨＬ、濾胞性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（限定されないが、腎芽細胞腫又はウィルムス腫瘍、腎細胞癌を含む）、原発性縦隔球性Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、上皮扁平上皮癌）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、有毛細胞白血病（ＩＰＭＮ）、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫及び原発性中枢神経系（ＡＬＬ）リンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病などのＴ細胞ＮＨＬ、末梢Ｔ細胞リンパ腫（ＡＭＬ）（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、気管支原性癌、ルイス肺癌、肺神経内分泌腫瘍、典型的カルチノイド、非定型カルチノイド、及び大細胞神経内分泌癌を含む）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外ナチュラルキラーＴ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂腺様Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、上記のような１つ又は複数の白血病／リンパ腫の混合物、脳（例えば、高悪性度神経膠腫、びまん性橋膠腫、上衣腫、神経芽細胞腫、髄膜腫、星細胞腫、乏突起膠腫、乏突起膠腫；髄芽腫、又は神経膠芽腫）並びに頭頸部癌（限定されないが、頭頸部扁平上皮癌を含む）、胆管癌（限定されないが、胆管癌を含む）、気管支癌、脊索腫、絨毛癌、上皮癌、内皮肉腫（限定されないが、カポジ肉腫、多発性特発性出血性肉腫を含む）、食道癌（限定されないが、食道の腺癌、バレット腺癌を含む）、ユーイング肉腫、Ｈ鎖病（限定されないが、α鎖病、γ鎖病、μ鎖病を含む）、造血癌、免疫球性アミロイドーシス、意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性障害、特発性骨髄化生（ＡＭＭ）又は骨髄線維症（ＭＦ）、慢性特発性骨髄線維症、骨髄増殖性新生物、真性赤血球増加症、直腸腺癌、本態性血小板増加症、慢性好中球性白血病、好酸球増加症候群、軟部組織肉腫（例えば、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、軟骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫）及び関連転移が挙げられる。癌の更なる例は、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，§ ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．，２０１１（ＩＳＢＮ ９７８－０－９１１９１０－１９－３）；Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，§ ｏｎ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ．，２０１８（ＩＳＢＮ ９７８－０－９１１－９１０４２－１）（２０１８ ｄｉｇｉｔａｌ ｏｎｌｉｎｅ ｅｄｉｔｉｏｎ ａｔ ｉｎｔｅｒｎｅｔ ｗｅｂｓｉｔｅ ｏｆ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌｓ）；及びＳＥＥＲ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｃｏｄｉｎｇ ａｎｄ Ｓｔａｇｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ ２０１６に見出すことができ、これらの各々は、全ての目的のためにその全体が参照により組み込まれる。

【0197】

いくつかの実施形態では、癌は、ＢＣＭＡ発現癌又は障害である。いくつかの実施形態では、ＢＣＭＡ発現癌又は障害としては、急性骨髄白血病（ＡＭＬ）などの血液癌、又はリンパ腫（例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ））が挙げられる。

【0198】

本開示に記載される組成物及び方法は、感染性疾患を治療するために使用され得る。感染性疾患は当業者に周知であり、非限定的な例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザ、ヘルペス、ウイルス性肝炎、エプスタインバー、ポリオ、ウイルス性脳炎、はしか、水ぼうそう、乳頭腫ウイルス、サイトメガロウイルス、狂犬病ウイルス、水痘ウイルス、黄熱病ウイルス、西ナイルウイルス、エボラなどのウイルス病因の感染症；肺炎、結核、梅毒、ライム病、バベシア症などの細菌性病因の感染症；又はマラリア、トリパノソーマ症、リーシュマニア症、トリコモナス症、アメーバ赤痢などの寄生虫病因の感染症が挙げられるが、これらに限定されない。

【0199】

本開示に記載される組成物及び方法は、自己免疫疾患を治療するために使用され得る。このような自己免疫疾患の例としては、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、多発性硬化（ＭＳ）、シェーグレン症候群、類肉腫症、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、自己免疫甲状腺炎、反応性関節炎、強直性脊髄炎、硬皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、乾せん、血管炎、ウェゲナー肉芽腫症、クローン病、及び潰瘍性大腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。

【0200】

いくつかの実施形態では、組み合わせが、治療有効量で投与される。本発明の方法において投与される組成物の投与量は、対象の身体的パラメータ、投与頻度、投与様式、クリアランス速度などに応じて広範に変化する。最初の用量はより多くてもよく、より少ない維持用量が続いてもよい。用量は、有効な用量レベルを維持するために、週１回若しくは隔週という低頻度で投与されてもよく、又はより少ない用量に分割され、毎日、半週１回などで投与されてもよい。様々な用量が、改変された細胞のインビボ持続性を達成するために有効であることが企図される。様々な用量が、改変された細胞のインビボエフェクタ機能を改善するために有効であることも企図される。

【0201】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法によって生成された細胞を含む組成物は、１０^２～１０^１０細胞／ｋｇ体重、１０^５～１０^９細胞／ｋｇ体重、１０^５～１０^８細胞／ｋｇ体重、１０^５～１０^７細胞／ｋｇ体重、１０^７～１０^９細胞／ｋｇ体重、又は１０^７～１０^８細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内の全ての整数値を含む）の投与量で投与され得る。細胞の数は、組成物が意図される治療用途に応じて異なる。治療用細胞は、上に列挙した投与量で複数回投与され得る。

【0202】

本開示に記載の組成物及び方法は、化学療法、手術、放射線、遺伝子治療などの他のタイプの癌療法と併用して利用され得る。様々な疾患／障害を治療するために使用される場合、本開示の組成物及び方法は、同じ又は類似の疾患／障害に適した他の治療方法／薬剤と共に利用することができることも企図される。そのような他の治療方法／薬剤は、相加的又は相乗的効果を生じさせるために共投与（同時に又は逐次）され得る。各薬剤の好適な治療有効投与量は、相加作用又は相乗作用により減少され得る。

【0203】

上記治療方法のいずれかのいくつかの実施形態では、本方法は、免疫抑制剤、生物学的製剤、プロバイオティクス、プレバイオティクス、及びサイトカイン（例えば、ＩＦＮ又はＩＬ－２）からなる群から選択される１つ以上の追加の化合物を対象に投与することを更に含む。

【0204】

非限定的な例として、本発明は、炎症を遮断する（例えば、ＩＬ１、ＩＮＦα／β、ＩＬ６、ＴＮＦ、ＩＬ２３などの遮断を介して）他の療法と組み合わせることができる。

【0205】

本開示の方法及び組成物は、例えば、治療ワクチン（ＧＶＡＸ、ＤＣベースのワクチンなどを含むが、これらに限定されない）、チェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３などを遮断する薬剤を含むが、これらに限定されない）、又は活性化因子（４－１ＢＢ、ＯＸ４０などを増強する薬剤を含むが、これらに限定されない）などの他の免疫調節治療薬と組み合わせることができる。本開示の方法はまた、ＮＫＴ機能又は安定性を調節する能力を有する他の治療薬、限定するものではないが、ＣＤ１ｄ、ＣＤ１ｄ融合タンパク質、抗原が負荷されていないか又は負荷されているＣＤ１ｄのＣＤ１ｄ二量体若しくはより大きなポリマー、ＣＤ１ｄキメラ抗原受容体（ＣＤ１ｄ－ＣＡＲ）、又は任意の他のヒトに存在する５つの公知のＣＤ１異性体（ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｅ）と組み合わせることができる。本発明の方法はまた、ミドスタウリン、エナジデニブ、又はそれらの組み合わせなどの他の治療薬と組み合わせることができる。

【0206】

本開示の治療方法は、追加の細胞療法、免疫療法及び療法と組み合わせることができる。例えば、癌を治療するために使用される場合、本発明の組成物は、腫瘍の型、患者の病状、他の健康上の問題、及び様々な因子に応じて、従来の癌療法、例えば、手術、放射線療法、化学療法又はそれらの組み合わせと併用して使用することができる。特定の態様では、本発明の阻害剤との併用癌治療に有用な他の治療剤としては、抗血管新生剤が挙げられる。例えば、ＴＮＰ－４７０、血小板因子４、トロンボスポンジン－１、メタロプロテアーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ１及びＴＩＭＰ２）、プロラクチン（１６Ｋｄ断片）、アンジオスタチン（プラスミノーゲンの３８Ｋｄ断片）、エンドスタチン、ｂＦＧＦ可溶性受容体、トランスフォーミング増殖因子β、インターフェロンα、可溶性ＫＤＲ及びＦＬＴ－１受容体、胎盤プロリフェリン関連タンパク質、並びにＣａｒｍｅｌｉｅｔ及びＪａｉｎ（２０００）によって列挙されたものを含む、多くの抗血管新生剤が同定されており、当技術分野で公知である。一実施形態では、本発明のＴ細胞は、抗ＶＥＧＦ抗体、ＶＥＧＦ変異体、可溶性ＶＥＧＦ受容体断片、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲを遮断することができるアプタマー、中和抗ＶＥＧＦＲ抗体、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの阻害剤及びそれらの任意の組合せ（例えば、抗ｈＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１、ベバシズマブ又はラニビズマブ）などのＶＥＧＦ拮抗剤又はＶＥＧＦ受容体拮抗剤と組み合わせて使用することができる。

【0207】

本発明の組合せ治療薬において使用され得る化学療法化合物の非限定的な例としては、例えば、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、アザシチジン、ｂｃｇ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カンポトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コルチシン、シクロホスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デシタビン、ジエネストロール、ジエチルスチルベストロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオルウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ゼニジェシン、ゲニステイン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イフォスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、イロノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトザントロン、ニルタミド、ノコダゾール、オクトレオチド、オキザリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレキセド、リツキシマブ、ストレプトゾシン、スラミン、タモキシフェン、テモゾロマイド、テニポシド、テストステロン、チオグアニン、チオテパ、チタノセンジクロリド、トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンが挙げられる。

【0208】

これらの化学療法化合物は、それらの作用機序によって、例えば以下の群に分類することができる：ピリミジン類似体（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン、及びシタラビン）及びプリン類似体などの代謝拮抗物質／抗癌剤、葉酸拮抗剤及び関連阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；天然物、例えばビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）、微小管破壊剤、例えばタクサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン及びナベルビン、エピポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロランブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、シトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチレンテトラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メルクロルエチルアミン、マイトマイシン、ミトザントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミド及びエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物質、例えばダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、及びマイトマイシン；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身的に代謝し、自身のアスパラギンを合成する能力を有していない細胞を奪うＬ－アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖性／抗有糸分裂性アルキル化剤、例えばナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミド及び類似体、メルファラン、クロラムブチル）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、アルキルスルホネート－ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及び類似体、ストレプトゾシン）、トラゼン－ダカルバジン（ＤＴＩＣ）；葉酸類似体（メトトレキサート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗剤；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩、及び他のトロンビン阻害剤）；線維溶解剤（例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤；抗分泌剤（ブレベルジン）；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管新生化合物（例えば、ＴＮＰ－４７０、ゲニステイン、ベバシズマブ）及び増殖因子阻害剤（例えば、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断薬；一酸化窒素供与体；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤及び分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エトポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン及びミトザントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコーチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、及びプレドニゾロン）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能不全誘導因子及びカスパーゼ活性化因子；並びにクロマチン破壊因子。

【0209】

本明細書で記載される方法の様々な実施形態では、対象は、ヒトである。対象は、任意の年齢又は性別の年少者又は成人であってもよい。

【実施例】

【0210】

本明細書において開示した実施形態のいくつかを更に説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例示を目的とするものであり、本開示の実施形態を制限するものではない。

【0211】

実施例１．ＣＡＲ－Ｔの設計及び操作
本実施例の第２世代ＣＡＲ－Ｔは、図１Ａに示すように、ヒトＣＤ８Ａ及び細胞内ドメイン、例えば、４－１ＢＢ及びＣＤ３ζに由来するヒンジ及び膜貫通配列と融合した、目的の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、例えば、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を標的とする単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含んでいた。ＣＡＲ－Ｔ構築物のｓｃＦｖを、ウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターにおけるＥｃｏＲＩ及びＳｐｅＩ制限部位に対応する５’及び３’オーバーラップを含むように特異的に設計した。設計されたＤＮＡインサートは、ホモサピエンスのためにコドン最適化され、その後、合成された。構築物のクローニングは、Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ（登録商標）クローニング法を用いて実行した。トランスフェクションの前に、全ての構築物を配列確認した。本明細書に提示される実験で使用されるＢＣＭＡ ＣＡＲ－Ｔ構築物の配列を図１Ｂに示す。

【0212】

以下は、本明細書に開示されるＣＡＲ－Ｔ細胞アッセイ法のいずれかに有用な試薬のリストである。

【0213】

試薬：
－ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）
－ナイーブＰａｎ－Ｔ細胞
－Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）２４ウェルＣｌｅａｒ ＴＣ処理マルチウェルプレート
－マウス抗ヒトＣＤ４抗体
－マウス抗ヒトＣＤ８抗体
－マウス抗ヒトＣＤ６２Ｌ抗体
－マウス抗ヒトＣＣＲ７抗体
－マウス抗ヒトＣＤ２７抗体
－抗ヒトＣＤ４５ＲＯ抗体
－抗ヒトＣＤ４５ＲＡ抗体
－抗ヒトＣＤ２７９（ＰＤ－１）
－抗ヒトＣＤ２３３（ＬＡＧ－３）
－抗ヒトＣＤ３６６（Ｔｉｍ－３）
－抗ヒトＴＩＧＩＴ

【0214】

実施例２．ヒトＴ細胞の培養及びエレクトロポレーション
ヒトＰａｎ－Ｔ細胞を、健康なドナーの末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）から単離し、１０％のウシ胎児血清（ＦＣＳ）、２ｍＭのＧｌｕｔａＭａｘ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、５５μＭのβ－メルカプトエタノール、及び１００Ｕペニシリン／ストレプトマイシンを含むＴ細胞用完全培地／ＲＰＭＩ培地で培養した。

【0215】

Ｐａｎ－Ｔ細胞をエクスビボで、抗ＣＤ３／ＣＤ２８のＤｙｎａｂｅａｄｓ磁気ビーズを用いて、約１２～１４日間、製造元のプロトコルに従って増大させた。これらの細胞を、１×１０^６個／バイアルの密度で凍結させて、液体窒素中で保管した。

【0216】

実施例３．Ｔ細胞活性化及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）形質導入
０日目に、３人のドナーからのナイーブＰａｎ－Ｔ細胞を解凍し、完全Ｔ細胞培地／ＲＰＭＩ培地（例えば、実施例２を参照されたい）中で１×１０^６Ｔ細胞／ｍｌの密度に希釈した。Ｔ細胞活性化の前に、解凍したナイーブＴ細胞を免疫表現型検査した。免疫表現型パネルは、例えば、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔサブセットを含んでいた。Ｔ細胞活性化のために、１０μｌのＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）／ｍｌを２４ウェルプレートの各ウェルに１×１０^６Ｔ細胞／ウェルの密度で添加した。プレートを、３７℃／５％ ＣＯ_２で一晩インキュベートした。１日目に、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）－ＨＬ ＣＡＲレンチウイルス粒子を、５に等しい感染多重度（ＭＯＩ）で細胞に形質導入した。

【0217】

実施例４．ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入されたＴ細胞の表現型の特徴付け
ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞を、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞サブセットにおける幹細胞様メモリーＴ細胞（Ｔ_ＳＣＭ）表現型を増強するサイトカイン調節を使用して、１４日間増大させた。具体的には、次世代Ｔ_ＳＣＭ様細胞を、例えば、ＩＬ－７単独の存在下、又はＩＬ－１５と組み合わせたＩＬ－７（ＩＬ－７＋ＩＬ－１５）若しくはＩＬ－１５及びＩＬ－２１（ＩＬ７＋ＩＬ－１５及びＩＬ－２１）の存在下のいずれかで、サイトカインを使用して生成させた。

【0218】

表現型の特徴付けのために、ＣＡＲ Ｔ細胞を、形質導入後１４日目に蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）フローサイトメトリー分析を使用して、メモリー及びエフェクタＴ細胞マーカーについて評価した。ＦＡＣＳ染色のために、ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞からの１００μｌ細胞／ウェルをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で２回洗浄し、次いで、蛍光コンジュゲートで標識された細胞マーカー特異的抗体を使用した。本実験で使用した抗体は、各々１：２００に希釈され、例えば、ＣＤ４、ＣＤ８、ＦＶＤ（生死）、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＣＲ７、ＣＤ６９、及びＣＡＲ＋（１μｇ／ｍｌ）、並びにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）６４７（ＡＦ６４７）二次抗体を含んだ。全ての試料を、Ｆｏｒｔｅｓｓａ細胞ソータシステムを使用して評価した。

【0219】

形質導入後１４日目のＣＤ４^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞サブセット及びＣＤ８^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞サブセットにおけるＴ_ＳＣＭ細胞表現型の代表的なサイトカイン増強を、それぞれ図２Ａ～２Ｃ及び図３Ａ～３Ｃに示す。ＣＤ４^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞の表現型の特徴付けのために（図２Ａ～２Ｃ）、ｐａｎ－Ｔ細胞を、上記のサイトカイン調節パラダイムに従ってサイトカインの存在下又は非存在下で活性化した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞をＣＤ４^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞にゲーティングし、ＣＤ４^＋ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞内のＣＤ６２Ｌ（図２Ａ）、ＣＣＲ７（図２Ｂ）、及びＣＤ２７（図２Ｃ）についての発現の頻度レベル（親の頻度、％）を判定した。ＣＤ８^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞の表現型の特徴付けのために（図３Ａ～３Ｃ）、Ｐａｎ－Ｔ細胞を、上記のサイトカイン調節パラダイムに従ってサイトカインの存在下又は非存在下で同様に活性化した。ＦＡＣＳ分析のために、細胞をＣＤ８^＋ＣＡＲ^＋Ｔ細胞にゲーティングし、ＣＤ８＋ＢＣＭＡ－ＨＬ ＣＡＲ形質導入細胞内のＣＤ６２Ｌ（図３Ａ）、ＣＣＲ７（図３Ｂ）、及びＣＤ２７（図３Ｃ）についての発現の頻度レベル（親の頻度、％）を判定した。図４Ａ～Ｂに示すように、また、ＣＤ４^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞（図４Ａ）及びＣＤ８^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞（図４Ｂ）サブセットの両方におけるＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋の発現の頻度レベル（親の頻度、％）の定量化について上述したものと同じ方法に従って、表現型特徴付けを実行した。サイトカイン調節は、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ＣＡＲ－Ｔ細胞サブセットの両方においてＣＤ４５ＲＯ^－／ＣＤ４５ＲＡ^＋Ｔ_ＳＣＭ細胞表現型を増強した。

【0220】

上記の結果に基づいて、単一サイトカイン（ＩＬ－７）は、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋サブセットの両方においてＴ_ＳＣＭ様細胞を効果的に濃縮した。ＩＬ－１５及びＩＬ－２１をＩＬ－７サイトカイン調節に加えた場合、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方におけるＴ_ＳＣＭ表現型が増強されることが更に観察された。ＩＬ－７＋ＩＬ－１５＋ＩＬ－２１サイトカイン調節したＣＡＲ Ｔ細胞を腫瘍標的と共培養したとき、ＩＬ－７＋ＩＬ－１５＋ＩＬ－２１ ＣＡＲ Ｔ細胞は、増強されたサイトカイン産生を有する。理論に束縛されることを望むものではないが、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１を加えると、ＳＴＡＴ５及びＳＴＡＴ３シグナル伝達をそれぞれ活性化すると考えられ、これは、単一のサイトカイン調節と比較して有利であり得る。

【0221】

増強されたエフェクタ機能及び減少した疲弊マーカーを有するサイトカイン調節したＣＡＲ－Ｔ細胞を生成するための上記のアプローチは、ＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋ＣＡＲ－Ｔ_ＳＣＭ細胞の両方を生成して、抗腫瘍免疫を増強するという概念実証を裏付けた。

【0222】

参考文献
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^{＊ ＊ ＊}

【0223】

本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態及び実施例による範囲内に限定されるものではない。実際、本明細書に記載されるものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の説明から当業者には明らかになるであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内であることが意図される。

【0224】

本明細書に引用される全ての特許、出願、刊行物、試験方法、文献、及び他の資料は、本明細書に物理的に存在する場合と同様に、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。

【0225】

配列表
配列番号１ リーダー
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ

【0226】

配列番号２ ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ－ＨＬ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ

【0227】

配列番号３ ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ－ＬＨ
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

【0228】

配列番号４ リンカー
ＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ

【0229】

配列番号５ ＣＤ８ａヒンジ
ＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ

【0230】

配列番号６ ＣＤ８ａ－ＴＭ
ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣ

【0231】

配列番号７ ＣＤ１３７強刺激
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ

【0232】

配列番号８ Ｚｅｔａ
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0233】

配列番号９ 細胞外ドメイン
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ

【0234】

配列番号１０ 細胞質ドメイン
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0235】

配列番号１１ ＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＨＬ
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【0236】

配列番号１２ ＢＣＭＡ ＣＡＲ－ＬＨ
ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＰＰＧＱＡＰＶＶＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＶＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＴＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＳＧＳＹＦＷＧＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＹＹＳＧＩＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＤＧＡＶＡＧＬＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

【図1A】

【図1B】

【図2A】

【図2B】

【図2C】

【図3】

【図4A】

【図4B】

【配列表】

2024513453000001.app

【国際調査報告】