特表 2024-513841 細胞外小胞組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-27

(54)【発明の名称】細胞外小胞組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7088 20060101AFI20240319BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20240319BHJP

   C07K 14/47 20060101ALI20240319BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 47/02 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 47/64 20170101ALI20240319BHJP

   A61K 47/65 20170101ALI20240319BHJP

   A61K 9/72 20060101ALI20240319BHJP

   A61K 47/69 20170101ALI20240319BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 5/06 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 27/02 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 21/00 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 13/02 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20240319BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240319BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7088

C12N15/113 Z ZNA

C07K14/47

C12N5/10

A61K9/127

A61K48/00

A61K47/26

A61K47/02

A61K47/36

A61K47/64

A61K47/65

A61K9/72

A61K47/69

A61P43/00 105

A61P35/00

A61P7/04

A61P3/10

A61P5/06

A61P3/00

A61P27/02

A61P21/00

A61P13/02

A61P3/06

A61P35/02

A61P43/00 111

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023560441

(86)(22)【出願日】2022-04-01

(85)【翻訳文提出日】2023-11-14

(86)【国際出願番号】 US2022023120

(87)【国際公開番号】W WO2022212884

(87)【国際公開日】2022-10-06

(31)【優先権主張番号】63/169,751

(32)【優先日】2021-04-01

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】522228126

【氏名又は名称】ロンザ セールス アーゲー

【氏名又は名称原語表記】ＬＯＮＺＡ ＳＡＬＥＳ ＡＧ

(74)【代理人】

【識別番号】100107456

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 成人

(74)【代理人】

【識別番号】100162352

【弁理士】

【氏名又は名称】酒巻 順一郎

(74)【代理人】

【識別番号】100123995

【弁理士】

【氏名又は名称】野田 雅一

(72)【発明者】

【氏名】オニール， コンリン

(72)【発明者】

【氏名】ブルドー， レイモンド

(72)【発明者】

【氏名】エリス， キンバリー

(72)【発明者】

【氏名】ウッド， アンドリュー

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA23

4B065CA44

4C076AA19

4C076AA25

4C076AA93

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB11

4C076BB13

4C076BB14

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB21

4C076BB25

4C076BB29

4C076BB31

4C076CC10

4C076CC14

4C076CC17

4C076CC21

4C076CC27

4C076CC29

4C076CC41

4C076DD23

4C076DD23D

4C076DD26

4C076DD26Z

4C076DD38

4C076DD38D

4C076DD67

4C076DD67D

4C076EE30

4C076EE30D

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF11

4C084AA13

4C084MA05

4C084MA13

4C084MA24

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA60

4C084MA63

4C084MA66

4C084NA13

4C084NA14

4C084ZA331

4C084ZA332

4C084ZA531

4C084ZA532

4C084ZA811

4C084ZA812

4C084ZA941

4C084ZA942

4C084ZB211

4C084ZB212

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC041

4C084ZC042

4C084ZC211

4C084ZC212

4C084ZC331

4C084ZC332

4C084ZC351

4C084ZC352

4C084ZC411

4C084ZC412

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA13

4C086MA24

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA56

4C086MA59

4C086MA60

4C086MA63

4C086MA66

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZA33

4C086ZA53

4C086ZA81

4C086ZA94

4C086ZB21

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC04

4C086ZC21

4C086ZC33

4C086ZC35

4C086ZC41

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA09

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含むことができる細胞外小胞（例えば、エクソソーム）を含む組成物に関するものであり、組成物は、４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満である浸透圧濃度を有する。また、本明細書において、細胞外小胞を産生するための方法、及び細胞外小胞を使用して、ある範囲の医学的障害を治療及び／又は予防するための方法が提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む細胞外小胞を含む医薬組成物であって、前記ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含み、
前記組成物が約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満の浸透圧濃度を有する、医薬組成物。

【請求項2】

前記組成物の前記浸透圧濃度が、少なくとも約３００～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３１０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３２０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３３０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３４０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３５０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３５５～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３７０～約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３７５～約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３８０～約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３８５～約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３９０～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３９５～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は少なくとも約３９０～約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記組成物の前記浸透圧濃度が、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項4】

前記組成物の前記浸透圧濃度が、約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１又は２に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物の前記浸透圧濃度が、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇである、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

前記細胞外小胞が、エクソソームである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記組成物が、２５℃の温度で、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、又は少なくとも約７日の間保存することが可能である、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記組成物が、凍結及び解凍することが可能であり、解凍された組成物が、約７．２のｐＨを有する、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記組成物が、７．０、７．１、７．２、７．３、又は７．４のｐＨを有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記組成物が、７．２のｐＨを有する、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項11】

ｐＩが、約１～約６．５の範囲にある、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項12】

前記組成物が、（ｉ）低下した凝集物、（ｉｉ）ＥＶの改善した安定性、（ｉｉｉ）ＥＶアーキテクチャの改善した完全性、（ｉｖ）ＥＶ上又はＥＶ中に含まれた操作されたタンパク質の改善した安定性、（ｖ）改善した濾過性を有し、（ｖｉ）前記ＡＳＯの解離を低下させる、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

（ｉ）糖、（ｉｉ）リン酸ナトリウム、（ｉｉｉ）リン酸カリウム、（ｉｖ）リン酸ナトリウム、又は（ｖ）それらの任意の組み合わせを更に含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項14】

前記糖が、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖、糖アルコール、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３に記載の組成物。

【請求項15】

前記糖が、約１８０．００ｇ／ｍｏｌ～約３８０．００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する、請求項１３又は１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記糖が、ラクトース、グルコース、スクロース、トレハロース、及び／又はそれらの組み合わせを含む、請求項１３～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記糖が、約９０．００ｇ／ｍｏｌ～約１９０．００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する糖アルコールである、請求項１３～１６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項18】

前記糖アルコールが、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、及び／又はそれらの組み合わせを含む、請求項１７に記載の組成物。

【請求項19】

前記糖が、スクロース又はトレハロースである、請求項１３～１８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項20】

前記糖が、前記組成物中に、約５％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項１３～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記組成物が、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する、請求項１３～２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

前記導電率が、６ｍＳ／ｃｍ～約７ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ～約８ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ～約９ｍＳ／ｃｍ、又は約９ｍＳ／ｃｍ～約１０ｍＳ／ｃｍである、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記導電率が、約６ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ、約９ｍＳ／ｃｍ、又は約１０ｍＳ／ｃｍである、請求項２１又は２２に記載の組成物。

【請求項24】

塩化ナトリウムが、前記組成物中に、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１３～２３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項25】

塩化ナトリウムの前記濃度が、約５０ｍＭ～約１４０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１００ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭ、又は約９０ｍＭ～約１０５ｍＭである、請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

塩化ナトリウムの前記濃度が、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、又は約１５０ｍＭである、請求項２４又は２５に記載の組成物。

【請求項27】

塩化ナトリウムの前記濃度が、約９５ｍＭ、約９６ｍＭ、約９７ｍＭ、約９８ｍＭ、約９９ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０１ｍＭ、約１０２ｍＭ、約１０３ｍＭ、約１０４ｍＭ、又は約１０５ｍＭである、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項28】

前記リン酸カリウムが、前記組成物中に、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約９ｍＭ、約３ｍＭ～約８ｍＭ、約４ｍＭ～約７ｍＭ、約５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約４ｍＭ～約５ｍＭの濃度で存在する、請求項１３～２７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項29】

前記リン酸カリウムの前記濃度が、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、又は約５．５ｍＭである、請求項２８に記載の組成物。

【請求項30】

前記リン酸カリウムの前記濃度が、約５ｍＭである、請求項２８又は２９に記載の組成物。

【請求項31】

前記リン酸カリウムが、一塩基性リン酸カリウムである、請求項１３～３０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項32】

前記リン酸ナトリウムが、前記組成物中に、約５ｍＭ～約３０、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１１ｍＭ～約１９ｍＭ、約１２ｍＭ～約１８ｍＭ、約１３ｍＭ～約１７ｍＭ、約１４ｍＭ～約１６ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、又は約１４ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で存在する、請求項１３～３１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項33】

前記リン酸ナトリウムが、前記組成物中に、約１４．５ｍＭ、約１４．６ｍＭ、約１４．７ｍＭ、約１４．８ｍＭ、約１４．９ｍＭ、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ 約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４、ｍＭ、又は約１５．５ｍＭの濃度で存在する、請求項３２に記載の組成物。

【請求項34】

前記リン酸ナトリウムの前記濃度が、約１５ｍＭである、請求項３２又は３３に記載の組成物。

【請求項35】

前記リン酸ナトリウムが、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物である、請求項１３～３４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項36】

前記組成物が、凍結乾燥されていない、請求項１～３５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項37】

前記組成物が、キレート剤を含まない、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項38】

前記組成物が、アルブミンを含まない、請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項39】

ａ．約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース、
ｂ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｃ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｄ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
前記組成物が、７．２のｐＨの溶液中にあり、
前記組成物が、約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項40】

ａ．約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース、
ｂ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｃ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｄ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
前記組成物が、７．２のｐＨの溶液中にあり、
前記組成物が、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項41】

ａ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｂ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｃ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｄ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
前記組成物が、７．２のｐＨの溶液中にあり、
前記組成物が、約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項42】

ａ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｂ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｃ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｄ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
前記組成物が、７．２のｐＨの溶液中にあり、
前記組成物が、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～３８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項43】

前記組成物が、約－２０℃～約－８０℃の温度で保存することが可能であり、前記細胞外小胞の前記安定性が低下しない、請求項１～４２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項44】

前記組成物が、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１年、約２年、約３年、又は約４年の間保存することができる、請求項４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記細胞外小胞が、足場タンパク質を更に含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項46】

前記足場タンパク質が、足場Ｘである、請求項４５に記載の組成物。

【請求項47】

ペイロードが、前記足場タンパク質に連結されている、請求項４５又は４６に記載の組成物。

【請求項48】

前記ペイロードが、リンカーによって前記足場タンパク質に連結されている、請求項４７に記載の組成物。

【請求項49】

前記リンカーが、ポリペプチドである、請求項４８に記載の組成物。

【請求項50】

前記リンカーが、非ポリペプチド部分である、請求項４９に記載の組成物。

【請求項51】

足場Ｘが、前記細胞外小胞の外面に前記ペイロードを固定することが可能である足場タンパク質である、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項52】

前記足場タンパク質が、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）を含む、請求項４６～５１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項53】

前記足場タンパク質が、前記ＰＴＧＦＲＮタンパク質又はその断片を含む、請求項４５～５２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項54】

前記足場タンパク質が、配列番号１及び６～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む、請求項４５～５２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項55】

前記足場タンパク質が、配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む、請求項４５～５４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項56】

前記組成物が、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内髄腔内、若しくは脳室内経路によって、又は吸入剤として投与することができる、請求項１～５５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項57】

前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項58】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
前記組成物の前記ｐＨが、約７．２であり、
前記組成物が、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項59】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約４％～約６％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
前記組成物の前記ｐＨが、約７．２であり、
前記組成物が、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項60】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
前記組成物の前記ｐＨが、約７．２であり、
前記組成物が、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項61】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
前記組成物の前記ｐＨが、約７．２であり、
前記組成物が、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項62】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
前記組成物の前記ｐＨが、約７．２であり、
前記組成物が、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項63】

（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、前記ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
前記組成物の前記ｐＨが、約７．２であり、
前記組成物が、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項64】

前記細胞外小胞が、エクソソームである、請求項５８～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

前記ＡＳＯが、配列番号１４４に示される前記核酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項66】

前記ＡＳＯが、配列番号１４５に示される前記核酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項67】

前記ＡＳＯが、配列番号１９３に示される前記核酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項68】

前記ＡＳＯが、配列番号１８５に示される前記核酸配列を含む、請求項１～６４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項69】

前記ＡＳＯが、リンカーによって前記細胞外小胞と会合している、請求項１～６８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項70】

前記リンカーが、コレステロール、トコフェロール、脂肪酸、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項６９に記載の組成物。

【請求項71】

前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項６９又は７０に記載の組成物。

【請求項72】

前記リンカーが、切断可能なリンカーである、請求項４８～７１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項73】

疾患又は状態の治療を必要とする対象においてそれを行う方法であって、前記対象に、請求項１～７２のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項74】

前記疾患又は状態が、がん、線維症、血友病、糖尿病、成長因子欠乏症、眼疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積障害、ムコビシドーシス（ｍｕｃｏｖｉｃｉｄｏｓｉｓ）、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィー、トランスサイレチンアミロイドーシス、血友病Ａ、血友病Ｂ、アデノシン－デアミナーゼ欠乏症、Ｌｅｂｅｒ先天黒内障、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、ＯＴＣ欠乏症、糖原貯蔵障害１Ａ、クリグラー・ナジャール症候群、原発性高シュウ酸尿症１型、急性間欠性ポルフィリン症、フェニルケトン尿症、家族性高コレステロール血症、ムコ多糖症ＶＩ型、α１アンチトリプシン欠損症、並びに高コレステロール血症である、請求項７３に記載の方法。

【請求項75】

前記がんが、膀胱がん、子宮頸がん、腎細胞がん、精巣がん、結腸直腸がん、肺がん、頭頸部がん、卵巣、リンパ腫、肝臓がん、神経膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓がん、又はそれらの組み合わせである、請求項７４に記載の方法。

【請求項76】

疾患又は状態の治療を必要とする対象においてそれを行うための、請求項１～７２のいずれか一項に記載の医薬組成物。

【請求項77】

疾患又は状態を治療するための医薬品の製造における、請求項１～７２のいずれか一項に記載の組成物の、使用。

【請求項78】

（ｉ）ＡＳＯを含む細胞外小胞と、（ｉｉ）塩又は糖とを組み合わせることを含み、前記ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含み、前記組成物が、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満の浸透圧濃度を含む、請求項１～７２のいずれか一項に記載の医薬組成物を調製する、方法。

【請求項79】

前記塩が、
ａ．塩化ナトリウム、
ｂ．リン酸カリウム、
ｃ．リン酸ナトリウム、又は
ｄ．それらの任意の組み合わせを含む、請求項７８に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月１日に出願された米国仮出願第６３／１６９，７５１号の優先的利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0002】

ＥＦＳ－ＷＥＢを介して電子的に提出された配列表の参照
本出願において提出された、電子的に提出された配列表の内容（名称：４０００＿１２７ＰＣ０１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ：６６，５７１バイト、及び作成日：２０２２年３月３１日）は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0003】

本開示は、１つ以上の外因性の生物学的に活性な部分を含むことができる細胞外小胞（ＥＶ）、例えば、エクソソームの保存及び投与のための組成物、並びにかかる組成物を調製及び使用する方法に関する。

【背景技術】

【0004】

ＥＶ、例えば、エクソソームは、細胞間情報伝達の重要なメディエーターである。それらはまた、がんを含む多くの疾患の診断及び予後診断における重要なバイオマーカーである。薬物送達ビヒクルとして、ＥＶは、多くの治療分野における新しい治療モダリティとして、従来の薬物送達方法（例えば、ペプチド免疫、ＤＮＡワクチン）を超える利点を提供する。研究の１つの分野は、ＥＶの有効性を損なうことなく、患者投与前の長い保存期間中にＥＶを安定的に含むことができる組成物の製剤化である。既知の製剤は欠点に苦しんでいる。例えば、特定の製剤、例えば、ＴＲＩＳ緩衝液を含有するものは、様々な温度で（すなわち、製剤が凍結又は解凍されたときに）ｐＨが変動することを防止しない。ｐＨのわずかな変動でさえ、ＥＶの凝集を誘発し、それによってそれらの機能性を低下又は妨げ得る。更に、既知の組成物は、外因的に添加されたポリペプチド、例えば、ヒト血清アルブミン、又はキレート剤などの外部成分を含む。

【0005】

したがって、既知の製剤の欠点を克服し、したがって、ＥＶベースの技術の治療的使用及び他の用途をより可能にすることができる、ＥＶの保存及び投与のための効果的な組成物が必要とされている。

【発明の概要】

【0006】

本開示のいくつかの態様は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む細胞外小胞を含む医薬組成物に関するものであり、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含み、組成物は、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満の浸透圧濃度を有する。

【0007】

いくつかの態様において、組成物の浸透圧濃度は、少なくとも約３００～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３１０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３２０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３３０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３４０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３５０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３５５～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３７０～約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３７５～約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３８０～約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３８５～約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３９０～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３９５～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は少なくとも約３９０～約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、組成物の浸透圧濃度は、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、組成物の浸透圧濃度は、約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、組成物の浸透圧濃度は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇである。

【0008】

いくつかの態様において、細胞外小胞は、エクソソームである。

【0009】

いくつかの態様において、組成物は、２５℃の温度で、少なくとも約４時間、少なくとも約５時間、少なくとも約６時間、少なくとも約７時間、少なくとも約８時間、少なくとも約９時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１１時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、又は少なくとも約７日の間保存することが可能である。

【0010】

いくつかの態様において、本組成物は、凍結及び解凍することが可能であり、解凍された組成物は、約７．２のｐＨを有する。いくつかの態様において、本組成物は、約７．０、７．１、７．２、７．３、又は７．４のｐＨを有する。いくつかの態様において、本組成物は、７．２のｐＨを有する。いくつかの態様において、ｐＩは、約１～約６．５の範囲にある。

【0011】

いくつかの態様において、組成物は、（ｉ）低下した凝集物、（ｉｉ）ＥＶの改善した安定性、（ｉｉｉ）ＥＶアーキテクチャの改善した完全性、及び（ｉｖ）ＥＶ上又はＥＶ中に含まれた操作されたタンパク質の改善した安定性を有する。

【0012】

いくつかの態様において、組成物は、（ｉ）糖、（ｉｉ）リン酸ナトリウム、（ｉｉｉ）リン酸カリウム、（ｉｖ）リン酸ナトリウム、又は（ｖ）それらの任意の組み合わせを更に含む。

【0013】

いくつかの態様において、糖は、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖、多糖、糖アルコール、又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、糖は、約１８０．００ｇ／ｍｏｌ～約３８０．００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する。いくつかの態様において、糖は、ラクトース、グルコース、スクロース、トレハロース、及び／又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、糖は、約９０．００ｇ／ｍｏｌ～約１９０．００ｇ／ｍｏｌの分子量を有する糖アルコールである。いくつかの態様において、糖アルコールは、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、及び／又はそれらの組み合わせを含む。いくつかの態様において、糖は、スクロース又はトレハロースである。いくつかの態様において、糖は、組成物中に、約５％ｗ／ｖの濃度で存在する。

【0014】

いくつかの態様において、組成物は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する。いくつかの態様において、導電率は、６ｍＳ／ｃｍ～約７ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ～約８ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ～約９ｍＳ／ｃｍ、又は約９ｍＳ／ｃｍ～約１０ｍＳ／ｃｍである。いくつかの態様において、導電率は、約６ｍＳ／ｃｍ、約７ｍＳ／ｃｍ、約８ｍＳ／ｃｍ、約９ｍＳ／ｃｍ、又は約１０ｍＳ／ｃｍである。

【0015】

いくつかの態様において、塩化ナトリウムは、組成物中に、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約１４０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１００ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭ、又は約９０ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１４０ｍＭ、又は約１５０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９５ｍＭ、約９６ｍＭ、約９７ｍＭ、約９８ｍＭ、約９９ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０１ｍＭ、約１０２ｍＭ、約１０３ｍＭ、約１０４ｍＭ、又は約１０５ｍＭである。

【0016】

いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約９ｍＭ、約３ｍＭ～約８ｍＭ、約４ｍＭ～約７ｍＭ、約５ｍＭ～約６ｍＭ、又は約４ｍＭ～約５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムの濃度は、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、又は約５．５ｍＭである。いくつかの態様において、リン酸カリウムの濃度は、約５ｍＭである。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、一塩基性リン酸カリウムである。

【0017】

いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約５ｍＭ～約３０、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１１ｍＭ～約１９ｍＭ、約１２ｍＭ～約１８ｍＭ、約１３ｍＭ～約１７ｍＭ、約１４ｍＭ～約１６ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、又は約１４ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．５ｍＭ、約１４．６ｍＭ、約１４．７ｍＭ、約１４．８ｍＭ、約１４．９ｍＭ、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ 約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４、ｍＭ、又は約１５．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムの濃度は、約１５ｍＭである。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物である。

【0018】

いくつかの態様において、組成物は、凍結乾燥されていない。いくつかの態様において、組成物は、キレート剤を含まない。いくつかの態様において、組成物は、アルブミンを含まない。

【0019】

いくつかの態様において、組成物は、約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース、約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、組成物は、約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0020】

いくつかの態様において、組成物は、約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース、約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0021】

いくつかの態様において、組成物は、約１４６ｍＭの濃度でスクロース、約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、組成物は、約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0022】

いくつかの態様において、組成物は、約１４６ｍＭの濃度でスクロース、約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0023】

いくつかの態様において、組成物は、約－２０℃～約－８０℃の温度で保存することが可能であり、細胞外小胞の安定性は低下しない。いくつかの態様において、組成物は、約１週、約２週、約３週、約４週、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１年、約２年、約３年、又は約４年の間保存することができる。

【0024】

いくつかの態様において、細胞外小胞は、足場タンパク質を更に含む。いくつかの態様において、足場タンパク質は、足場Ｘである。

【0025】

いくつかの態様において、ペイロードは、足場タンパク質に連結されている。いくつかの態様において、ペイロードは、リンカーによって足場タンパク質に連結されている。いくつかの態様において、リンカーは、ポリペプチドである。いくつかの態様において、リンカーは、非ポリペプチド部分である。

【0026】

いくつかの態様において、足場Ｘは、細胞外小胞の外面にペイロードを固定することが可能である足場タンパク質である。いくつかの態様において、足場タンパク質は、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（ＰＴＧＦＲＮタンパク質）を含む。いくつかの態様において、足場タンパク質は、ＰＴＧＦＲＮタンパク質又はその断片を含む。いくつかの態様において、足場タンパク質は、配列番号１及び６～１２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、足場タンパク質は、配列番号１と少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

【0027】

いくつかの態様において、組成物は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内の経路によって、又は吸入剤として投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、髄腔内経路によって投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、脳室内経路によって投与することができる。

【0028】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。

【0029】

いくつかの態様において、組成物は、（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、（ｂ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度でスクロース、（ｃ）約１００ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、組成物のｐＨは約７．２であり、組成物は、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0030】

いくつかの態様において、組成物は、（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、（ｂ）約４％～約６％の濃度でスクロース、（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、組成物のｐＨは約７．２であり、組成物は、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0031】

いくつかの態様において、組成物は、（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、組成物のｐＨは約７．２であり、組成物は、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0032】

いくつかの態様において、組成物は、（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、（ｂ）約５％の濃度でスクロース、（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、組成物のｐＨは約７．２であり、組成物は、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0033】

いくつかの態様において、組成物は、（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、組成物のｐＨは約７．２であり、組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0034】

いくつかの態様において、組成物は、（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、（ｂ）約５％の濃度でスクロース、（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、組成物のｐＨは約７．２であり、組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0035】

いくつかの態様において、細胞外小胞は、エクソソームである。

【0036】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４４に示される核酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４５に示される核酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９３に示される核酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８５に示される核酸配列を含む。

【0037】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、リンカーによって細胞外小胞と会合している。いくつかの態様において、リンカーは、コレステロール、トコフェロール、脂肪酸、又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、リンカーは、切断可能なリンカーである。いくつかの態様において、リンカーは、切断可能なリンカーである。

【0038】

本開示のいくつかの態様は、疾患又は状態の治療を必要とする対象においてそれを行う方法に関するものであり、方法は、対象に、本明細書に開示の組成物を投与することを含む。いくつかの態様において、疾患又は状態は、がん、線維症、血友病、糖尿病、成長因子欠乏症、眼疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積障害、ムコビシドーシス（ｍｕｃｏｖｉｃｉｄｏｓｉｓ）、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィー、トランスサイレチンアミロイドーシス、血友病Ａ、血友病Ｂ、アデノシン－デアミナーゼ欠乏症、Ｌｅｂｅｒ先天黒内障、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、ＯＴＣ欠乏症、糖原貯蔵障害１Ａ、クリグラー・ナジャール症候群、原発性高シュウ酸尿症１型、急性間欠性ポルフィリン症、フェニルケトン尿症、家族性高コレステロール血症、ムコ多糖症ＶＩ型、α１アンチトリプシン欠損症、並びに高コレステロール血症である。いくつかの態様において、がんは、膀胱がん、子宮頸がん、腎細胞がん、精巣がん、結腸直腸がん、肺がん、頭頸部がん、卵巣、リンパ腫、肝臓がん、神経膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓がん、又はそれらの組み合わせである。

【0039】

本開示のいくつかの態様は、疾患又は状態の治療を必要とする対象においてそれを行うための、本明細書に開示される医薬組成物に関する。

【0040】

本開示のいくつかの態様は、疾患又は状態を治療するための医薬品の製造における、本明細書に開示の組成物の使用に関する。

【0041】

本開示のいくつかの態様は、（ｉ）ＡＳＯを含む細胞外小胞と、（ｉｉ）塩又は糖とを組み合わせることを含む、本明細書に開示の医薬組成物を調製する方法に関するものであり、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含み、組成物は、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満の浸透圧濃度を含む。いくつかの態様において、塩は、（ａ）塩化ナトリウム、（ｂ）リン酸カリウム、（ｃ）リン酸ナトリウム、又は（ｄ）それらの任意の組み合わせを含む。

【図面の簡単な説明】

【0042】

【図1-1】ＳＴＡＴ６転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙する表である。表には、次の情報が含まれる（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯの説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も有しないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみについて指定された配列番号、（ｉｖ）ＡＳＯ長、（ｖ）化学構造を有するＡＳＯ配列、及び（ｖｉ）標的転写物配列（配列番号３）上の標的開始位置及び終結位置。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1-2】ＳＴＡＴ６転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙する表である。表には、次の情報が含まれる（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯの説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も有しないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみについて指定された配列番号、（ｉｖ）ＡＳＯ長、（ｖ）化学構造を有するＡＳＯ配列、及び（ｖｉ）標的転写物配列（配列番号３）上の標的開始位置及び終結位置。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1-3】ＳＴＡＴ６転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙する表である。表には、次の情報が含まれる（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯの説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も有しないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみについて指定された配列番号、（ｉｖ）ＡＳＯ長、（ｖ）化学構造を有するＡＳＯ配列、及び（ｖｉ）標的転写物配列（配列番号３）上の標的開始位置及び終結位置。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1-4】ＳＴＡＴ６転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙する表である。表には、次の情報が含まれる（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯの説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も有しないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみについて指定された配列番号、（ｉｖ）ＡＳＯ長、（ｖ）化学構造を有するＡＳＯ配列、及び（ｖｉ）標的転写物配列（配列番号３）上の標的開始位置及び終結位置。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1-5】ＳＴＡＴ６転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙する表である。表には、次の情報が含まれる（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯの説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も有しないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみについて指定された配列番号、（ｉｖ）ＡＳＯ長、（ｖ）化学構造を有するＡＳＯ配列、及び（ｖｉ）標的転写物配列（配列番号３）上の標的開始位置及び終結位置。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図1-6】ＳＴＡＴ６転写物を標的とする様々なＡＳＯ配列を列挙する表である。表には、次の情報が含まれる（左から右へ）：（ｉ）ＡＳＯの説明、（ｉｉ）いかなる特定の設計又は化学構造も有しないＡＳＯ配列、（ｉｉｉ）ＡＳＯ配列のみについて指定された配列番号、（ｉｖ）ＡＳＯ長、（ｖ）化学構造を有するＡＳＯ配列、及び（ｖｉ）標的転写物配列（配列番号３）上の標的開始位置及び終結位置。ＡＳＯは、５’から３’方向である。化学構造における記号は以下の通りである：ＮｂはＬＮＡを意味し、ｄＮはＤＮＡを意味し、５ＭｄＣは５－メチル－ｄＣを意味し、ＮｍはＭＯＥを意味し、ｓはホスホロチオエートを意味する。

【図2】ＡＳＯをロードしたエクソソームを精製するためのプロセスの概略図である。

【図3A】室温（ＲＴ）又は５℃で最大１５日間保存された試料のＡＳＯ濃度（図３Ａ）、遊離ＡＳＯ濃度（図３Ｂ）、及びＩＣ５０（図３Ｃ）。

【図3B】室温（ＲＴ）又は５℃で最大１５日間保存された試料のＡＳＯ濃度（図３Ａ）、遊離ＡＳＯ濃度（図３Ｂ）、及びＩＣ５０（図３Ｃ）。

【図3C】室温（ＲＴ）又は５℃で最大１５日間保存された試料のＡＳＯ濃度（図３Ａ）、遊離ＡＳＯ濃度（図３Ｂ）、及びＩＣ５０（図３Ｃ）。

【図4A】１５日間室温で保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図４Ａ）、ＵＶ（図４Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図４Ｃ）、及びＤＬＳ（図４Ｄ）のグラフ表示である。

【図4B】１５日間室温で保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図４Ａ）、ＵＶ（図４Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図４Ｃ）、及びＤＬＳ（図４Ｄ）のグラフ表示である。

【図4C】１５日間室温で保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図４Ａ）、ＵＶ（図４Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図４Ｃ）、及びＤＬＳ（図４Ｄ）のグラフ表示である。

【図4D】１５日間室温で保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図４Ａ）、ＵＶ（図４Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図４Ｃ）、及びＤＬＳ（図４Ｄ）のグラフ表示である。

【図5A】１５日間５℃に保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図５Ａ）、ＵＶ（図５Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図５Ｃ）、及びＤＬＳ（図５Ｄ）のグラフ表示である。

【図5B】１５日間５℃に保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図５Ａ）、ＵＶ（図５Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図５Ｃ）、及びＤＬＳ（図５Ｄ）のグラフ表示である。

【図5C】１５日間５℃に保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図５Ａ）、ＵＶ（図５Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図５Ｃ）、及びＤＬＳ（図５Ｄ）のグラフ表示である。

【図5D】１５日間５℃に保持されたＣＣ７００濾過した中間体について、ＮＴＡ（図５Ａ）、ＵＶ（図５Ｂ）、ＡＥＸ－ＵＨＰＬＣ（図５Ｃ）、及びＤＬＳ（図５Ｄ）のグラフ表示である。

【図6A】ＣＣ７００カラム濾過におけるローディング温度及びＮａＣｌ／スクロースを評価するためのプロセスの概略図である。

【図6B】ＣＣ７００カラム濾過におけるローディング温度及びＮａＣｌ／スクロースを評価するためのプロセスの概略図である。

【発明を実施するための形態】

【0043】

本開示は、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含むＥＶ、例えば、エクソソームを含む組成物に関するものであり、組成物は、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満の浸透圧濃度を含む。

【0044】

様々な態様の非限定的な例が本明細書に開示される。

【0045】

Ｉ．定義
本開示をより容易に理解し得るために、特定の用語が最初に定義される。追加の定義は、詳細な説明を通して示される。

【0046】

「ａ」又は「ａｎ」実体という用語は、１つ以上のその実体を指し、例えば、「ヌクレオチド配列（ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」は、１つ以上のヌクレオチド配列を表すと理解されることに留意されたい。したがって、「ａ」（又は「ａｎ」）、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書において互換的に使用することができる。

【0047】

更に、「及び／又は」は、本明細書で使用される場合、他方を伴うか若しくは伴わない２つの特定の特徴又は構成要素の各々の具体的な開示として理解されるべきである。したがって、本明細書の「Ａ及び／又はＢ」などの語句で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）、並びに「Ｂ」（単独）を含むことが意図される。同様に、「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」などの語句に使用される「及び／又は」という用語は、以下の態様の各々を包含することが意図される：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）。

【0048】

態様が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言葉で本明細書に記載されるときはいつも、それ以外の「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／又は「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載されている他の類似の態様もまた示されることが理解される。

【0049】

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。

【0050】

単位、接頭辞、及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で認められている形式で表記する。数値範囲は、範囲を定義する数値を含む。特に明記しない限り、ヌクレオチド配列は、５’から３’の方向に左から右に記載される。アミノ酸配列は、アミノからカルボキシ方向に左から右に記載される。本明細書に提供される見出しは、本開示の様々な態様の限定ではなく、本明細書に対して全体として参照によって有することができる。したがって、直下で定義される用語は、本明細書をその全体で参照することによってより完全に定義される。

【0051】

「約」という用語は、本明細書において、およそ、ざっと、おおむね、又はその領域内を意味するように使用される。「約」という用語が数値範囲と組み合わせて使用される場合、示された数値の上下の境界を広げることによって、その範囲を修正する。概して、「約」という用語は、数値を、記載された値の上下に、例えば、１０パーセントの変動で、上又は下（より高いか又はより低い）に修正することができる。

【0052】

本明細書で使用される場合、「細胞外小胞」又は「ＥＶ」という用語は、内部空間を囲む膜を含む細胞由来の小胞を指す。細胞外小胞は、それらが由来する細胞よりも小さい直径を有する全ての膜結合小胞（例えば、エクソソーム、ナノ小胞）を含む。いくつかの態様において、細胞外小胞は、直径が２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、内部空間（すなわち、管腔）内、細胞外小胞の外面での提示、及び／又は膜にまたがることのいずれかで様々な巨大分子ペイロードを含むことができる。いくつかの態様において、ペイロードは、核酸、タンパク質、炭水化物、脂質、低分子、及び／又はそれらの組み合わせを含むことができる。いくつかの態様において、ＥＶは、複数（例えば、２つ以上）のペイロード又は他の外因性の生物学的に活性な部分を含む。特定の態様において、細胞外小胞は、１つ以上の足場部分を更に含むことができる。例として、限定されないが、細胞外小胞には、アポトーシス小体、細胞の断片、直接的又は間接的な操作（例えば、連続押出又はアルカリ溶液による処理）による細胞由来の小胞、小胞化オルガネラ、及び生細胞によって産生される小胞（例えば、直接的な形質膜出芽又は後期エンドソームと形質膜との融合）が含まれる。細胞外小胞は、生きているか若しくは死んでいる有機体、外植化組織若しくは器官、原核生物細胞若しくは真核生物細胞、及び／又は培養細胞から引き出すことができる。いくつかの態様において、細胞外小胞は、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。本明細書に開示されるＥＶは改変されており、したがって、天然に存在するＥＶを含まない。

【0053】

本明細書で使用される場合、「エクソソーム」という用語は、直径が２０～３００ｎｍ（例えば、４０～２００ｎｍ）の細胞外小胞を指す。エクソソームは、内部空間（すなわち、管腔）を囲む膜を含み、いくつかの態様において、直接的な形質膜の出芽によって、又は後期エンドソームと形質膜との融合によって、細胞（例えば、産生細胞）から生成することができる。いくつかの態様において、エクソソームは、複数（例えば、２つ以上）の外因性の生物学的に活性な部分（例えば、本明細書に記載される）を含む。特定の態様において、エクソソームは、１つ以上の足場部分を更に含む。以下に記載されるように、エクソソームは、産生細胞に由来し、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、又はそれらの組み合わせに基づいて、産生細胞から単離することができる。いくつかの態様において、本開示のＥＶ（例えば、エクソソーム）は、１つ以上の導入遺伝子産物を発現する細胞によって産生される。本開示のエクソソームは改変されており、したがって、天然に存在するエクソソームを含まない。

【0054】

本明細書で使用される場合、「ナノ小胞」という用語は、２０～２５０ｎｍ（例えば、３０～１５０ｎｍ）の直径を有する細胞外小胞を指し、細胞（例えば、産生細胞）から直接的又は間接的な操作によって生成され、そのためナノ小胞が操作なしで細胞によって生成されることはない。ナノ小胞を産生するための細胞の適切な操作には、連続押出、アルカリ性溶液による処理、超音波処理、又はこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、ナノ小胞の産生は、産生細胞の破壊をもたらし得る。いくつかの態様において、本明細書に記載のナノ小胞集団は、形質膜からの直接的な発芽又は後期エンドソームと形質膜との融合による、細胞に由来する小胞を実質的に含まない。いくつかの態様において、ナノ小胞は、複数（例えば、少なくとも２つ）の外因性の生物学的に活性な部分を含む。特定の態様において、ナノ小胞は、１つ以上の足場部分を更に含む。ナノ小胞は、産生細胞から引き出されると、そのサイズ、密度、生化学的パラメータ、又はそれらの組み合わせに基づいて、産生細胞から単離することができる。本明細書で使用される場合、ナノ小胞は改変されており、したがって、天然に存在するナノ小胞を含まない。

【0055】

本明細書で使用される場合、「表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソーム」（例えば、足場Ｘ操作されたＥＶ、例えば、エクソソーム）という用語は、その組成に改変された膜又は表面を有するＥＶ（例えば、エクソソーム）を指し、それによって、操作されたＥＶ（例えば、エクソソーム）の膜又は表面は、改変前のＥＶ又は天然に存在するＥＶのいずれかのものと異なる。操作は、ＥＶ（例えば、エクソソーム）の表面上、又はＥＶ（例えば、エクソソーム）の膜内で行うことができ、それによって、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面が変化する。例えば、膜は、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物などのその組成において改変される。組成は、化学的、物理的、若しくは生物学的な方法によって、又は化学的、物理的、若しくは生物学的な方法によって以前に若しくは同時に改変された細胞から産生されることによって、変化させることができる。具体的には、組成は、遺伝子操作によって、又は遺伝子操作によって既に改変された細胞から産生されることによって変化させることができる。いくつかの態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、複数（例えば、少なくとも２つ）の外因性の生物学的に活性な部分を含む。特定の態様において、外因性の生物学的に活性な部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面に曝露され得るか、あるいはＥＶ、例えば、エクソソームの表面に曝露される部分のための固定点（結合）であることができる、外因性タンパク質（すなわち、ＥＶ、例えば、エクソソームが自然に発現しないタンパク質）又はその断片若しくはバリアントを含むことができる。他の態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面に曝露され得るか、あるいはＥＶ、例えば、エクソソームの表面に曝露される部分のための固定点（結合）であることができる、天然エクソソームタンパク質（例えば、足場Ｘ）又はその断片若しくはバリアントのより高い発現（例えば、より高い数）を含む。

【0056】

本明細書に記載されるＥＶ、例えば、エクソソームの文脈で使用される場合、「改変された」という用語は、改変されたＥＶ、例えば、エクソソームが、天然に存在するＥＶ、例えば、エクソソームとは異なるような、ＥＶ、例えば、エクソソーム及び／又はその産生細胞の変更又は操作を指す。いくつかの態様において、本明細書に記載される改変されたＥＶ、例えば、エクソソームは、天然に存在するＥＶ、例えば、エクソソームの膜と比較して、タンパク質、脂質、小分子、炭水化物などの組成で異なる膜を含む（例えば、膜は、より高い密度若しくは数の天然エクソソームタンパク質を含み、かつ／又は膜は、エクソソームに天然に見出されない複数（例えば、少なくとも２つ）の生物学的に活性な部分を含む。本明細書で使用される場合、エクソソームに天然には見出されない生物学的に活性な部分はまた、「外因性の生物学的に活性な部分」として記載される。特定の態様において、膜へのかかる改変は、ＥＶ、例えば、エクソソーム（例えば、本明細書に記載される表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソーム）の外面を変化させる。

【0057】

本明細書で使用される場合、「足場部分」という用語は、ペイロード又は目的の任意の他の外因性の生物学的に活性な部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームに、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面又は外面のいずれかで固定するために使用することができる分子を指す。特定の態様において、足場部分は、合成分子を含む。いくつかの態様において、足場部分は、非ポリペプチド部分を含む。他の態様において、足場部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然に存在する脂質、炭水化物、又はタンパク質を含む。いくつかの態様において、足場部分は、ＥＶ、例えば、エクソソームに天然に存在しない脂質、炭水化物、又はタンパク質を含む。特定の態様において、足場部分は、足場Ｘである。更なる態様において、足場部分は、足場Ｘ及び別の足場部分を含む。本開示で使用することができる他の足場部分の非限定的な例には、アミノペプチダーゼＮ（ＣＤ１３）、ネプリライシン、別名膜メタロエンドペプチダーゼ（ＭＭＥ）、エクトヌクレオチドピロホスファターゼ／ホスホジエステラーゼファミリーメンバー１（ＥＮＰＰ１）、ニューロピリン－１（ＮＲＰ１）、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン、ＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂが含まれる。

【0058】

本明細書で使用される場合、「足場Ｘ」という用語は、エクソソームの表面で最近同定されているエクソソームタンパク質を指す。例えば、米国特許第１０，１９５，２９０号を参照し、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。足場Ｘタンパク質の非限定的な例としては、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（「ＰＴＧＦＲＮタンパク質」）、ベイシジン（「ＢＳＧタンパク質」）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（「ＩＧＳＦ２タンパク質」）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（「ＩＧＳＦ３タンパク質」）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（「ＩＧＳＦ８タンパク質」）、インテグリンベータ－１（「ＩＴＧＢ１タンパク質」）、インテグリンアルファ－４（「ＩＴＧＡ４タンパク質」）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（「ＳＬＣ３Ａ２タンパク質」）、及びＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（「ＡＴＰ１Ａ１タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ２タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ３タンパク質」、「ＡＴＰ１Ａ４タンパク質」、「ＡＴＰ１Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ１タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ２タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂ３タンパク質」、「ＡＴＰ２Ｂタンパク質」）が挙げられる。いくつかの態様において、足場Ｘタンパク質は、タンパク質全体又はその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶ、例えば、エクソソームの外面又は管腔表面に別の部分を固定することが可能である最小断片）であることができる。いくつかの態様において、足場Ｘは、部分（例えば、ペイロード、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）をエクソソームの外面又は管腔表面に固定することができる。

【0059】

本明細書で使用される場合、「足場Ｙ」という用語は、エクソソームの管腔表面内で新たに同定されたエクソソームタンパク質を指す。例えば、国際公開第２０１９／０９９９４２号を参照し、それは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。足場Ｙタンパク質の非限定的な例としては、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）、及び脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）が挙げられる。いくつかの態様において、足場Ｙタンパク質は、タンパク質全体又はその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面に部分を固定することが可能である最小断片）であることができる。いくつかの態様において、足場Ｙは、部分（例えば、スティングアゴニスト及び／又はＩＬ－１２部分）をＥＶ、例えば、エクソソームの管腔に固定することができる。

【0060】

本明細書で使用される場合、タンパク質（例えば、治療用タンパク質、又は足場Ｘ）の「断片」という用語は、天然に存在するタンパク質と比較して、天然に存在する配列よりも短いか、Ｎ末端及び／若しくはＣ末端が欠失しているか、又は欠失したタンパク質の任意の部分である、タンパク質のアミノ酸配列を指す。本明細書で使用される場合、「機能的断片」という用語は、タンパク質機能を保持するタンパク質断片を指す。したがって、いくつかの態様において、足場Ｘタンパク質の機能的断片は、部分を、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面又は外面に固定する能力を保持する。断片が機能的断片であるかどうかは、ＥＶ、例えばエクソソームのタンパク質含有量を決定する任意の既知の方法によって評価することができ、この方法には、ウェスタンブロット、ＦＡＣＳ分析、及び自己蛍光タンパク質、例えば、ＧＦＰなどとの断片の融合が含まれる。特定の態様において、足場Ｘタンパク質の機能的断片は、天然に存在する足場Ｘタンパク質の能力、例えば、部分を固定する能力の少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約１００％を保持する。

【0061】

本明細書で使用される場合、分子（例えば、機能的分子、抗原、又は足場Ｘ）の「バリアント」という用語は、当該技術分野で既知の方法による比較で、特定の構造的及び機能的同一性を別の分子と共有する分子を指す。例えば、タンパク質のバリアントは、別のタンパク質における置換、挿入、欠失、フレームシフト、又は再配列を含むことができる。

【0062】

いくつかの態様において、足場Ｘのバリアントは、全長の成熟ＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、若しくはＡＴＰトランスポータータンパク質、又はＰＴＧＦＲＮ、ＢＳＧ、ＩＧＳＦ２、ＩＧＳＦ３、ＩＧＳＦ８、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＡ４、ＳＬＣ３Ａ２、若しくはＡＴＰトランスポータータンパク質の断片（例えば、機能的断片）に対して少なくとも約７０％の同一性を有するバリアントを含む。いくつかの態様において、ＰＴＧＦＲＮのバリアント又は断片のバリアントは、配列番号１に記載のＰＴＧＦＲＮ又はその機能的断片と、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を共有する。

【0063】

「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されており、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。したがって、ポリペプチドにおけるアミノ酸が同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸で置き換えられている場合、置換は保存的であると考えられる。別の態様において、アミノ酸の鎖は、側鎖ファミリーメンバーの順序及び／又は組成が異なる構造的に類似した鎖で保存的に置き換えることができる。

【0064】

２つのポリヌクレオチド配列又はポリペプチド配列間の「配列同一性パーセント」又は「同一性パーセント」という用語は、２つの配列の最適アラインメントのために導入されなければならない付加又は欠失（すなわち、ギャップ）を考慮に入れて、比較ウィンドウにわたって配列によって共有された同一の一致した位置の数を指す。一致した位置は、同一のヌクレオチド又はアミノ酸が、標的配列及び参照配列の両方で示される任意の位置である。標的配列で示されるギャップは、ギャップがヌクレオチド又はアミノ酸ではないため、計数されない。同様に、標的配列のヌクレオチド又はアミノ酸が計数され、参照配列からのヌクレオチド又はアミノ酸は計数されないため、参照配列に示されるギャップは計数されない。

【0065】

配列同一性のパーセンテージは、同一のアミノ酸残基又は核酸塩基が両方の配列で生じる位置の数を決定することによって計算され、一致した位置の数を得、一致した位置の数を、比較のウィンドウにおける位置の総数で除し、結果に１００を乗じて、配列同一性のパーセンテージを得る。配列の比較及び２つの配列間の配列同一性パーセントの決定は、オンライン使用及びダウンロードの両方で容易に利用可能なソフトウェアを使用して達成することができる。好適なソフトウェアプログラムは、種々の供給源から入手可能であり、タンパク質配列及びヌクレオチド配列の両方のアラインメントのためのものである。配列同一性パーセントを決定するのに好適な１つのプログラムは、米国政府の国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のＢＬＡＳＴウェブサイト（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）から入手可能なＢＬＡＳＴプログラム一式の一部であるｂｌ２ｓｅｑである。Ｂｌ２ｓｅｑは、ＢＬＡＳＴＮ又はＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して、２つの配列間の比較を行う。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列の比較に使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列の比較に使用される。他の適切なプログラムは、例えば、バイオインフォマティクスプログラムのＥＭＢＯＳＳ一式の一部であるＮｅｅｄｌｅ、Ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ、Ｗａｔｅｒ、又はＭａｔｃｈｅｒであり、欧州バイオインフォマティクス研究所（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（ＥＢＩ）からもｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｐｓａで入手可能である。

【0066】

ポリヌクレオチド又はポリペプチド参照配列と整列される単一のポリヌクレオチド又はポリペプチド標的配列内の異なる領域は、各々がそれら自体の配列同一性パーセントを有することができる。配列同一性パーセント値は、四捨五入して最も近い１０分の１にすることに留意されたい。例えば、８０．１１、８０．１２、８０．１３、及び８０．１４は切り捨てを行って８０．１となり、８０．１５、８０．１６、８０．１７、８０．１８、及び８０．１９は切り上げを行って８０．２となる。また、長さの値は常に整数であることに留意されたい。

【0067】

配列同一性パーセントの計算のための配列アラインメントの生成は、一次配列データによって排他的に駆動される二成分配列－配列比較に限定されない。配列アラインメントは、複数の配列アラインメントから引き出すことができる。複数の配列アラインメントを生成するための１つの適切なプログラムは、ＣｌｕｓｔａｌＷ２であり、ｗｗｗ．ｃｌｕｓｔａｌ．ｏｒｇから入手可能である。別の好適なプログラムは、ＭＵＳＣＬＥであり、ｗｗｗ．ｄｒｉｖｅ５．ｃｏｍ／ｍｕｓｃｌｅ／から入手可能である。ＣｌｕｓｔａｌＷ２及びＭＵＳＣＬＥは、代替的に、例えば、ＥＢＩから入手可能である。

【0068】

また、配列アラインメントは、配列データを、構造データ（例えば、結晶学的タンパク質構造）、機能データ（例えば、変異の位置）、又は系統発生データなどの異種の供給源からのデータと統合することによって生成することができることも認識されるであろう。複数の配列アラインメントを生成するために異種のデータを統合する好適なプログラムは、Ｔ－Ｃｏｆｆｅｅであり、ｗｗｗ．ｔｃｏｆｆｅｅ．ｏｒｇで入手可能であり、代替的に、例えば、ＥＢＩから入手可能である。また、配列同一性パーセントを計算するために使用される最終的なアラインメントは、自動又はマニュアルのいずれかでキュレートすることができることも認識されるであろう。

【0069】

ポリヌクレオチドバリアントは、コード領域、非コード領域、又はそれらの両方に変化を含むことができる。一態様において、ポリヌクレオチドバリアントは、サイレント置換、付加、又は欠失を生成する変化を含むが、コードされたポリペプチドの特性又は活性を変更しない。別の態様において、ヌクレオチドバリアントは、遺伝コードの縮重に起因するサイレント置換によって生成される。他の態様において、バリアントは、５～１０、１～５、又は１～２個のアミノ酸が、任意の組み合わせで置換、欠失、又は付加されている。ポリヌクレオチドバリアントは、様々な理由、例えば、特定の宿主についてコドン発現を最適化するために生成することができる（ヒトｍＲＮＡにおけるコドンを他のもの、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉなどの細菌宿主に変化させる）。

【0070】

天然に存在するバリアントは、「対立遺伝子バリアント」と呼ばれ、生物の染色体上の所与の遺伝子座を占める遺伝子のいくつかの代替形態のうちの１つを指す（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ，Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．，ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８５））。これらの対立遺伝子バリアントは、ポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドレベルのいずれかで変化し得、本開示に含まれる。代替的に、非天然に存在するバリアントは、変異誘発技術によって、又は直接的合成によって生成することができる。

【0071】

タンパク質工学及び組換えＤＮＡ技術の既知の方法を使用して、バリアントを生成して、ポリペプチドの特徴を改善又は変更することができる。例えば、１つ以上のアミノ酸を、生物学的機能の実質的な喪失を伴わずに、分泌したタンパク質のＮ末端又はＣ末端から欠失させることができる。Ｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２９８４－２９８８（１９９３）（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、３、８、又は２７個のアミノ－末端アミノ酸残基を欠失した後でさえ、ヘパリン結合活性を有するバリアントＫＧＦタンパク質を報告した。同様に、インターフェロンガンマは、このタンパク質のカルボキシ末端から８～１０個のアミノ酸残基を欠失した後、最大１０倍高い活性を示した。（Ｄｏｂｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９－２１６（１９８８）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。）

【0072】

更に、十分な証拠によって、バリアントが、天然に存在するタンパク質と同様の生物学的活性をしばしば保持することが実証されている。例えば、Ｇａｙｌｅ及び共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２６８：２２１０５－２２１１１（１９９３）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）は、ヒトサイトカインＩＬ－１ａの広範な変異解析を行った。彼らは、ランダム変異誘発を使用して、分子の全長にわたってバリアントごとに平均２．５個のアミノ酸変化した３，５００を超える個々のＩＬ－１ａ変異体を生成した。全ての可能なアミノ酸位置で複数の変異を調べた。研究者らは、「分子の［ほ］とんど（［ｍ］ｏｓｔ）は、［結合又は生物学的活性］のいずれにもほとんど影響を及ぼさずに変化させることができた」ことを見出した。（要約を参照されたい。）実際、調査した３，５００を超えるヌクレオチド配列のうち、２３個の特有なアミノ酸配列のみが、野生型とは活性で著しく異なるタンパク質を生成した。

【0073】

上述のように、ポリペプチドバリアントには、例えば、修飾ポリペプチドが含まれる。修飾としては、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、交差結合、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有交差結合の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、ガンマ－カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩ足場形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、ペグ化（Ｍｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １１６：２７０－７９（２０１０）、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化などのタンパク質に対するアミノ酸のトランスファー－ＲＮＡ媒介性付加、及びユビキチン化が挙げられる。いくつかの態様において、足場Ｘは、任意の都合のよい位置で修飾される。

【0074】

本明細書で使用される場合、「に連結される」、「にコンジュゲートされる」、及び「に固定される」という用語は、互換的に使用され、それぞれ、第１の部分と第２の部分、例えば、それぞれ足場Ｘと、外因性の生物学的に活性な部分との間、例えば、細胞外小胞の管腔表面内又はその外面で、それぞれ細胞外小胞内又はその上に発現される足場部分と、抗原、例えば、足場Ｘ（例えば、ＰＴＧＦＲＮタンパク質）との間で形成される共有結合又は非共有結合を指す。いくつかの態様において、第１の部分は、本明細書に開示されるＡＳＯであり、第２の部分は、足場部分、例えば、脂質、ステロイド、又はそれらの類似体若しくは誘導体である。

【0075】

本明細書で使用される場合、「産生細胞」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームを生成するために使用される細胞を指す。産生細胞は、インビトロで培養された細胞であるか、又はインビボでの細胞にあることができる。産生細胞としては、ＥＶ、例えば、エクソソームを生成するのに有効であることが知られている細胞、例えば、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ＢＪヒト包皮線維芽細胞、ｆＨＤＦ線維芽細胞、ＡＧＥ．ＨＮ（登録商標）ニューロン前駆細胞、ＣＡＰ（登録商標）羊膜細胞、脂肪間葉系幹細胞、ＲＰＴＥＣ／ＴＥＲＴ１細胞が挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において、産生細胞は、抗原提示細胞ではない。いくつかの態様において、産生細胞は、樹状細胞、Ｂ細胞、肥満細胞、マクロファージ、好中球、Ｋｕｐｆｆｅｒ－Ｂｒｏｗｉｃｚ細胞、これらの細胞のうちのいずれかに由来する細胞、又はそれらの任意の組み合わせではない。いくつかの態様において、本開示で有用なＥＶ、例えば、エクソソームは、ＥＶ、例えば、エクソソームの表面に曝露されるＭＨＣクラスＩ又はクラスＩＩ分子に抗原を有しないが、代わりに、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔に、又はＥＶ、例えば、エクソソームの表面に、足場Ｘとの結合によって抗原を有することができる。

【0076】

本明細書で使用される場合、「単離する」、「単離された」、及び「単離すること」、又は「精製する」、「精製された」、及び「精製すること」、並びに「抽出された」及び「抽出すること」という用語は、互換的に使用され、１つ以上の精製プロセス、例えば、所望のＥＶ調製物の選択又は濃縮を受けている所望のＥＶの調製物（例えば、複数の既知又は未知の量及び／又は濃度）の状態を指す。いくつかの態様において、本明細書で使用される単離すること又は精製することは、産生細胞を含有する試料からＥＶを取り出す、部分的に取り出す（例えば、画分）プロセスである。いくつかの態様において、単離されたＥＶ組成物は、検出可能な望ましくない活性を有しないか、又は代替的に、望ましくない活性のレベル又は量は、許容されるレベル又は量以下である。他の態様において、単離されたＥＶ組成物は、所望のＥＶの量及び／又は濃度を、許容される量及び／又は濃度以上で有する。他の態様において、単離されたＥＶ組成物は、組成物が得られる出発材料（例えば、産生細胞調製物）と比較して濃縮されている。この濃縮は、出発物質と比較して、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、９９．９９％、９９．９９９％、９９．９９９９％、又は９９．９９９９％であることができる。いくつかの態様において、単離されたＥＶ調製物は、残留生物学的生成物を実質的に含まない。いくつかの態様において、単離されたＥＶ調製物は、任意の混入する生物学的物質が、１００％フリー、９９％フリー、９８％フリー、９７％フリー、９６％フリー、９５％フリー、９４％フリー、９３％フリー、９２％フリー、９１％フリー、又は９０％フリーである。残留生物学的生成物には、非生物的物質（化学物質を含む）又は不必要な核酸、タンパク質、脂質、若しくは代謝産物を含むことができる。残留生物学的生成物を実質的に含まないことはまた、ＥＶ組成物が検出可能な産生細胞を含有せず、ＥＶのみが検出可能であることを意味することができる。

【0077】

本明細書で使用される場合、「ペイロード」という用語は、ＥＶと接触する標的（例えば、標的細胞）に作用する薬剤を指す。ＥＶ、例えば、エクソソームに含むことができるペイロードの非限定的な例は、ＡＳＯである。ＥＶ、例えば、エクソソーム、及び／又は産生細胞に導入することができるペイロードとしては、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分若しくは毒素を含むか又は転写を破壊するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡ若しくはｍＲＮＡ分子、又はｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、及びｓｉＲＮＡなどの調節機能を有するＲＮＡ分子）、アミノ酸（例えば、検出可能な部分若しくは毒素を含むか又は翻訳を破壊するアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの薬剤が挙げられる。特定の態様において、ペイロードは、ＡＳＯを含む。

【0078】

本明細書で使用される場合、「標的化部分」という用語は、インビボ又はインビトロ（例えば、異なる種類の細胞の混合培養物中）で細胞外小胞（例えば、エクソソーム、ナノ小胞）の分布を変更することができる薬剤を指す。標的化部分は、タンパク質、ペプチド、脂質、若しくは炭水化物などの生体分子、又は合成分子であることができる。例えば、標的化部分は、抗体（例えば、抗ＣＤ１９ナノボディ、抗ＣＤ２２ナノボディ）、合成ポリマー（例えば、ＰＥＧ）、天然リガンド（例えば、ＣＤ４０Ｌ、アルブミン）、組換えタンパク質（例えば、ＸＴＥＮ）であることができるが、これらに限定されない。特定の態様において、標的化部分は、ＥＶの表面に提示される。標的化部分は、足場タンパク質（例えば、足場Ｘ）に融合されることによって（例えば、遺伝子的にコードされた融合分子として）、ＥＶ表面に提示され得る。いくつかの態様において、標的化部分は、標的化部分をＥＶ表面分子に結合させる化学反応によってＥＶ表面に提示され得る。非限定的な例は、ＰＥＧ化である。いくつかの態様において、本明細書に開示されるＥＶ（例えば、エクソソーム）は、（ペイロードに加えて）標的化部分を更に含むことができる。いくつかの態様において、上記の標的化部分は、小分子（例えば、ＡＳＯ）、薬物、及び／又は治療用タンパク質（例えば、抗ＣＤ３／抗ＣＤ１９抗体、抗メソセリン抗体／アポトーシス促進タンパク質）などの機能部分と組み合わせることができる。

【0079】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、天然か、又は部分的若しくは全体的に合成によって産生されたかにかかわらず、免疫グロブリン、及びその断片を包含する。本用語はまた、免疫グロブリン結合ドメインに相同的である結合ドメインを有するいずれのタンパク質も網羅する。「抗体」には、免疫グロブリン遺伝子からのフレームワーク領域を含むポリペプチド、又は抗原に特異的に結合して認識するその断片を更に含む。抗体という用語の使用は、全抗体、ポリクローナル、モノクローナル、及び組換え抗体、それらの断片を含むことを意味し、更に、単鎖抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体、マウス－ヒト抗体、マウス－霊長類抗体、霊長類－ヒトモノクローナル抗体、抗イディオタイプ抗体、抗体断片、例えば、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、及びＦ（ａｂ’）_２、Ｆ（ａｂ１）_２、Ｆｖ、ｄＡｂ、及びＦｄ断片、ダイアボディ、並びに抗体関連ポリペプチドが含まれる。抗体には、それらが望ましい生物学的活性又は生物学的機能を示す限り、二重特異性抗体及び多重特異性抗体が含まれる。「抗体」という用語は、例として、天然に存在及び非天然に存在する両方の抗体、モノクローナル及びポリクローナル抗体、キメラ及びヒト化Ａｂ、ヒト又は非ヒトＡｂ、完全な合成Ａｂ、並びに単鎖Ａｂを含む。非ヒト抗体は、ヒトにおけるその免疫原性を低減する組換え方法によってヒト化され得る。明示的に記載されていない場合、及び文脈が別段の指示をしない限り、「抗体」という用語はまた、前述の免疫グロブリンのうちのいずれかの抗原結合断片又は抗原結合部分を含み、一価及び二価の断片又は部分、並びに単鎖Ａｂを含む。

【0080】

「個体」、「対象」、「宿主」、及び「患者」という用語は、本明細書で互換的に使用され、診断、治療、又は療法が望まれる任意の哺乳動物対象、特にヒトを指す。本明細書に記載の組成物及び方法は、ヒト療法及び獣医学適用の両方に適用可能である。いくつかの態様において、対象は哺乳動物であり、他の態様において、対象はヒトである。本明細書で使用される場合、「哺乳動物対象」は、ヒト、愛玩動物（例えば、イヌ、ネコなど）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマなど）、及び実験動物（例えば、サル、ラット、マウス、ウサギ、モルモットなど）を含むが、これらに限定されない、全ての哺乳動物を含む。

【0081】

「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態にあり、組成物が投与される対象に対して許容できない毒性である、追加の成分を含有しない調製物を指す。かかる組成物は、無菌であり得る。

【0082】

本明細書で使用される場合、「実質的にフリー」という用語は、ＥＶ、例えば、エクソソームを含む試料が、質量／体積（ｍ／ｖ）パーセント濃度で１０％未満の巨大分子を含むことを意味する。いくつかの画分は、０．００１％未満、０．０１％未満、０．０５％未満、０．１％未満、０．２％未満、０．３％未満、０．４％未満、０．５％未満、０．６％未満、０．７％未満、０．８％未満、０．９％未満、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、６％未満、７％未満、８％未満、９％未満、又は１０％未満（ｍ／ｖ）の巨大分子を含有し得る。

【0083】

本明細書で使用される場合、「従来のエクソソームタンパク質」という用語は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＰＤＧＦＲ、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクタドヘリンＬＡＭＰ２、及びＬＡＭＰ２Ｂ、それらの断片、又はそれらに結合するペプチドを含むが、これらに限定されない、エクソソームで濃縮されることが既に知られているタンパク質を意味する。

【0084】

「投与すること」は、本明細書で使用される場合、本明細書に開示されるＥＶ、例えば、エクソソームを含む組成物を、薬学的に許容される経路を介して対象に与えることを意味する。投与経路は、静脈内、例えば、静脈内注射及び静脈内注入であることができる。追加の投与経路には、例えば、皮下、筋肉内、経口、鼻腔、及び肺投与が含まれる。ＥＶ、例えば、エクソソームは、少なくとも１つの賦形剤を含む医薬組成物の一部として投与することができる。

【0085】

例えば、本明細書に開示される細胞外小胞の「有効量」は、具体的に言明された目的を実行するのに十分な量である。

【0086】

本明細書で使用される「治療する」、「治療」、又は「治療すること」は、例えば、疾患又は状態を治癒することを必ずしも伴わずに、疾患又は状態の重症度の低減、疾患経過期間の低減、疾患又は状態に関連する１つ以上の症状の改善又は排除、疾患又は状態を有する対象への有益な効果の提供を指す。本用語はまた、疾患若しくは状態又はそれらの症状の予防又は防止を含む。一態様において、「治療すること」又は「治療」という用語は、抗原に対する対象における免疫応答を誘導することを意味する。

【0087】

「防止する」又は「防止すること」は、本明細書で使用される場合、特定の転帰の発生又は重症度を減少又は低減することを指す。いくつかの態様において、転帰を防止することは、予防的治療を介して達成される。

【0088】

ＩＩ．医薬組成物
本明細書において、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む、細胞外小胞、例えば、エクソソームの保存及び投与のための組成物が提供され、組成物は、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ未満の浸透圧濃度を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である、長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む。上述のように、本開示の組成物は、ＥＶの低下した凝集、ＥＶの改善した安定性、及びＥＶアーキテクチャの改善した完全性、ＥＶ上又はＥＶ中に含まれた操作されたタンパク質の改善した安定性、並びにＡＳＯなどのロード又はコンジュゲートされた材料の改善した安定性を含むが、これらに限定されない、複数の利点を提供する。本明細書に開示される組成物は、ある温度の範囲で様々な長さの期間にわたって、組成物内に含有されるＥＶの安定性を損なうことなく、凍結して保存することが可能である。

【0089】

いくつかの態様において、組成物の浸透圧濃度は、少なくとも約３００～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、少なくとも約３１０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３２０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３３０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３４０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３５０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３５５～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６０～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４４５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３７０～約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３７５～約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３８０～約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３８５～約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３９０～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約３９５～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は少なくとも約３９０～約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、少なくとも約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、少なくとも約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３６５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３８５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は約４３５ｍＯｓｍ／ｋｇ、約４４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、又は約４４５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約３７５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約３８０ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約３８５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約３９０ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約４０５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約４１０ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約４１５ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約４２０ｍＯｓｍ／ｋｇである。いくつかの態様において、溶液の浸透圧濃度は、約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇである。

【0090】

いくつかの態様において、本組成物は、糖、及び１つ以上の塩を更に含む。いくつかの態様において、塩には、塩化ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの態様において、本組成物は、約７．２のｐＨの溶液中にある。

【0091】

本開示は、細胞外小胞を含む医薬組成物を提供し、医薬組成物は、凍結及び／若しくは保存のために安定であり、かつ／又は哺乳動物、例えば、ヒトにおける投与に好適である。保存中の生物製剤の不安定性は、凝集、脱アミノ化、異性化、加水分解、酸化、及び／又は変性によって引き起こされ得る。これらの構造変更は、様々な異なる要因：生物製剤の特性、及び／又は温度、ｐＨ、及び生物製剤のイオン強度を含む他の要因、並びに生物製剤とともに製剤化される構成要素に起因し得る。

【0092】

いくつかの態様において、本開示の医薬組成物は、安定して製剤化され、それによって組成物は、キレート剤及び／又はアルブミン、例えば、組換えヒトアルブミンを必要としない。

【0093】

ヒトアルブミンは、血液中で最も普遍的なタンパク質であり、およそ４０ｇ／Ｌの量で存在する。血液中のその役割は、金属、ホルモン、脂肪酸、及び毒素などの多数のより小さい実体の輸送である。しかしながら、それはまた、血液のコロイド膨張（又はコロイド浸透）圧の約７５％を占め、アルブミンの単一の遊離システイン（３４位）は、血液中に存在する還元当量の大部分を占める。これらの特徴は全て、製剤中にアルブミンを用いる際に機能的な特性である。

【0094】

アルブミンは、歴史的に、ある範囲の異なる製剤で使用されてきている。当初、血漿由来のヒト血清アルブミンが用いられたが、化学的に定義された（組換え）ヒト血清アルブミンの使用に向けた製造業におけるシフトがあった。組換え産物は、動物由来産物の不存在、供給の確実性、高純度、宿主由来プロテアーゼの不存在、高い均質性、高い遊離チオール含有量、既知又は未知のヒト病原体の不存在、バッチ間の一貫性、及び確立された調節経路の存在などの要因により、有利である。

【0095】

製剤中のアルブミンは、表面吸着、凝集、フィブリル化、及び酸化を防止し、溶解性、凍結乾燥ケーキ形成、及び／又は凍結乾燥粉末からのＡＰＩの溶解特性を改善することが報告されている。これらの既知の利点にもかかわらず、本開示は、細胞外小胞を含む、安定したアルブミン無含有医薬組成物を提供する。

【0096】

キレート剤は、金属イオンと結合し、医薬製剤の安定性及び有効性に重要な役割を果たす成分である。キレート化のプロセスは、金属イオンを、それらがいずれの他の物質とも化学反応することを防ぐことによって安定させる。本組成物は、それがキレート剤を含有しないことを特徴とすることができる。

【0097】

いくつかの態様において、本明細書に開示の組成物は、ｐＩを約１～約６．５の範囲で有する。本開示のＥＶのｐＩ範囲は、本明細書に開示されている、表面巨大分子、例えば、ＰＴＧＦＲＮが過剰発現されている場合、生理学的ｐＨ値でコロイド的に安定なアニオン性エクソソームを可能にする。いくつかの態様において、表面分子は、ポリペプチド、オリゴヌクレオチド、又は炭水化物であり得る。いくつかの態様において、６．５を超えるｐＩは、ＥＶ、例えば、エクソソームに、毒性又は制限された体内分布をもたらし得る有用なｐＨ範囲で中性電荷（不安定）又はカチオン電荷のいずれかを引き起こすことができる。

【0098】

いくつかの態様において、本開示の組成物は、液体状態で製剤化され、組成物の温度を凍結及び氷点下温度に低下させることによって、保存のために凍結することができる。脱水又は凍結乾燥を介して組成物を凍結することは企図されない。いくつかの態様において、組成物は、凍結乾燥されていない。

【0099】

ＩＩ．Ａ．アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）
本開示は、ＳＴＡＴ６核酸、例えば、ＳＴＡＴ６プレｍＲＮＡ及びＳＴＡＴ６ ｍＲＮＡを含むＳＴＡＴ６転写物などの哺乳動物ＳＴＡＴ６をコードする核酸分子、又は哺乳動物ＳＴＡＴ６をコードするかかる核酸分子の天然に存在するバリアントの機能を調節する際に使用するためにアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を用いる。本開示の文脈における「ＡＳＯ」という用語は、２つ以上のヌクレオチドの共有結合によって形成される分子（すなわち、オリゴヌクレオチド）を指す。

【0100】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、少なくとも１つのＡＳＯを含む。いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、少なくとも２つのＡＳＯ、例えば、第１のヌクレオチド配列を含む第１のＡＳＯ、及び第２のヌクレオチド配列を含む第２のＡＳＯを含む。いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、少なくとも３つのＡＳＯ、少なくとも４つのＡＳＯ、少なくとも５つのＡＳＯ、少なくとも６つのＡＳＯ、又は６つを超えるＡＳＯを含む。いくつかの態様において、第１のＡＳＯ、第２のＡＳＯ、第３のＡＳＯ、第４のＡＳＯ、第５のＡＳＯ、第６のＡＳＯ、及び／又は第９のＡＳＯの各々は、異なる。

【0101】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、第１のＡＳＯ及び第２のＡＳＯを含み、第１のＡＳＯは、第１の転写物中の第１の標的配列に相補的である第１のヌクレオチド配列を含み、第２のＡＳＯは、第１の転写物中の第２の標的配列に相補的である第２のヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様において、第１の標的配列は、第２の標的配列と重複しない。いくつかの態様において、第１の標的配列は、転写物の５’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、５’ＵＴＲ内にあるヌクレオチドを含まない。いくつかの態様において、第１の標的配列は、転写物の３’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、３’ＵＴＲ内にあるヌクレオチドを含まない。いくつかの態様において、第１の標的配列は、転写物の５’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含み、第２の標的配列は、３’ＵＴＲ内にある少なくとも１つのヌクレオチドを含む。

【0102】

いくつかの態様において、第１のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とする。いくつかの態様において、第１のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とする。いくつかの態様において、第１のＡＳＯは、エクソン－イントロン接合部内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とする。いくつかの態様において、第１のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とする。いくつかの態様において、第１のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、エクソン内の配列を標的とする。いくつかの態様において、第１のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とし、第２のＡＳＯは、イントロン内の配列を標的とする。

【0103】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、第１のＡＳＯ及び第２のＡＳＯを含み、第１のＡＳＯは、第１の転写物中の第１の標的配列に相補的である第１のヌクレオチド配列を含み、第２のＡＳＯは、第２の転写物中の第２の標的配列に相補的である第２のヌクレオチド配列を含み、第１の転写物は、第２の転写物と同じ遺伝子の産物ではない。

【0104】

ＡＳＯは、長さが１０～２０、１４～２０、１６～２０、又は１５～２５ヌクレオチドなどの約１０～約３０の連続したヌクレオチド配列を含む。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２０ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１８ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１９ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１７ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１６ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１５ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１４ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１３ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１２ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１１ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが１０ヌクレオチドである。

【0105】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、長さが約１０～約５０ヌクレオチド、例えば、約１０～約４５、約１０～約４０、約１０、若しくは約３５、又は約１０～約３０の連続したヌクレオチド配列を含む。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２１ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２２ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２３ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２４ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２５ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２６ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２７ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２８ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが２９ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３０ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３１ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３２ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３３ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３４ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３５ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３６ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３７ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３８ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが３９ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４０ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４１ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４２ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４３ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４４ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４５ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４６ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４７ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４８ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが４９ヌクレオチドである。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが５０ヌクレオチドである。

【0106】

本明細書で使用される「アンチセンスＡＳＯ」、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、及び「オリゴマー」という用語は、「ＡＳＯ」という用語と互換性がある。

【0107】

配列番号への言及は、特定の核酸塩基配列を含むが、いかなる設計又は完全な化学構造も含まない。更に、本明細書の図に開示されるＡＳＯは、代表的な設計を示すが、別段の指示がない限り、図に示される特定の設計に限定されない。例えば、請求項（又は本明細書）が配列番号１０１を言及する場合、それは、配列番号１０１のヌクレオチド配列のみを含む。本明細書に開示される任意のＡＳＯの設計は、配列番号ＸＸとして記述することができ、５’末端からの第１のヌクレオチド、第２のヌクレオチド、第３のヌクレオチド、第１のヌクレオチド、第２のヌクレオチド、及び第Ｎのヌクレオチドの各々は、修飾ヌクレオチド、例えば、ＬＮＡであり、他のヌクレオチドの各々は、非修飾ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）である。

【0108】

様々な態様において、本開示のＡＳＯは、ＲＮＡ（単位）を含まない。いくつかの態様において、ＡＳＯは、１つ以上のＤＮＡ単位を含む。一態様において、本開示によるＡＳＯは、線状分子であるか、又は線状分子として合成される。いくつかの態様において、ＡＳＯは一本鎖分子であり、例えば、同じＡＳＯ内の等価領域に相補的である（すなわち、二本鎖）少なくとも３、４、又は５個の連続したヌクレオチドの短い領域を含まず、この観点において、ＡＳＯは（本質的に）二本鎖ではない。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本質的に、二本鎖ではない。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ｓｉＲＮＡではない。様々な態様において、本開示のＡＳＯは、連続したヌクレオチド領域から完全に構成することができる。したがって、いくつかの態様において、ＡＳＯは、実質的に自己相補的ではない。

【0109】

他の態様において、本開示は、ＡＳＯの断片を含む。例えば、本開示は、本明細書に開示されるＡＳＯの少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも２つの連続したヌクレオチド、少なくとも３つの連続したヌクレオチド、少なくとも４つの連続したヌクレオチド、少なくとも５つの連続したヌクレオチド、少なくとも６つの連続したヌクレオチド、少なくとも７つの連続したヌクレオチド、少なくとも８つの連続したヌクレオチド、又は少なくとも９つの連続したヌクレオチドを含む。本明細書に開示される配列のいずれの断片も、本開示の一部として企図される。

【0110】

いくつかの態様において、本開示におけるＡＳＯは、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）又はペプチドコンジュゲート化ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＰＭＯ）を含む。

【0111】

ＩＩ．Ａ．１．ＳＴＡＴ６を標的とするＡＳＯ
好適には、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６ ｍＲＮＡの発現又はＳＴＡＴ６タンパク質を下方調節（例えば、低下するか又は除去する）することが可能である。これに関して、本開示のＡＳＯは、Ｍ２マクロファージの分化を促進し、かつ／又はＭ１マクロファージの分化を減少させることができる。特に、本開示は、ＳＴＡＴ６プレｍＲＮＡの１つ以上の領域（例えば、イントロン領域、エクソン領域、及び／又はエクソン－イントロン接合部領域）を標的とするＡＳＯに関する。

【0112】

別途示されない限り、「ＳＴＡＴ６」という用語は、本明細書で使用される場合、１つ以上の種（例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ウシ、及びクマ）からのＳＴＡＴ６を指すことができる。

【0113】

ＳＴＡＴ６（ＳＴＡＴ６）は、シグナルトランスデューサー及び転写活性化因子６としても知られている。ＳＴＡＴ６／ＳＴＡＴ６の同義語が知られており、ＩＬ－４ ＳＴＡＴ、インターロイキン４誘導性ＳＴＡＴ、転写因子ＩＬ－４ ＳＴＡＴ、ＳＴＡＴ６Ｂ、ＳＴＡＴ６Ｃ、及びＤ１２Ｓ１６４４が含まれる。ヒトＳＴＡＴ６遺伝子における配列は、公的に利用可能なＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＣ＿００００１２．１２：ｃ５７１１１４１３～５７０９５４０４に見出すことができる。ヒトＳＴＡＴ６遺伝子は、染色体位置１２ｑ１３．３で５７１１１４１３～５７０９５４０４、相補体で見出される。

【0114】

ヒトＳＴＡＴ６プレ－ｍＲＮＡ転写物（配列番号１）における配列は、染色体１２ｑ１３．３の残基５７１１１４１３～５７０９５４０４、相補体の逆相補体に対応する。ＳＴＡＴ６ ｍＲＮＡ配列（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿００１１７８０７８．１）は、配列番号３におけるヌクレオチド「ｔ」がｍＲＮＡにおいて「ｕ」として示されることを除いて、配列番号３（表１）に提供される。ヒトＳＴＡＴ６タンパク質における配列は、公開されて利用可能な受託番号：Ｐ４２２２６－１、（標準配列、配列番号２、表１）、Ｐ４２２２６－２（配列番号４）、及びＰ４２２２６－３（配列番号５）で見出すことができ、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【表1】

【0115】

ヒトＳＴＡＴ６遺伝子産物の天然バリアントが知られている。例えば、ヒトＳＴＡＴ６タンパク質の天然バリアントは、Ｍ１１８Ｒ、Ｄ４１９Ｎ、及びそれらの任意の組み合わせから選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むことができる。選択的スプライシングに起因するヒトＳＴＡＴ６タンパク質の追加のバリアントも、当該技術分野で知られている。ＳＴＡＴ６アイソフォーム２（識別子：ＵｎｉＰｒｏｔにおけるＰ４２２２６－２）は、標準配列（配列番号３）とは以下：配列番号３と比較して残基１～１７４の欠失及び_１７５ＰＳＥ_１７７の_１７５ＭＥＱ_１７７による置換、で異なる。ＳＴＡＴ６アイソフォーム３の配列（識別子：Ｐ４２２２６－３）は、標準配列（配列番号３）とは以下：配列番号３と比較して残基１～１１０の欠失、で異なる。したがって、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の天然バリアントの発現を低下又は阻害するように設計することができる。

【0116】

ＡＳＯの標的核酸配列の例は、ＳＴＡＴ６プレｍＲＮＡである。配列番号１は、ヒトＳＴＡＴ６ゲノム配列（すなわち、染色体１２ｑ１３．３のヌクレオチド５７１１１４１３～５７０９５４０４、相補体の逆補体）を表す。配列番号１は、配列番号１におけるヌクレオチド「ｔ」が、プレｍＲＮＡにおいて「ｕ」として示されることを除いて、ＳＴＡＴ６プレｍＲＮＡ配列と同一である。特定の態様において、「標的核酸」は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸又はその天然に存在するバリアントのイントロン、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡを含む。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸又はその天然に存在するバリアントのエクソン領域、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡを含む。更に他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸又はその天然に存在するバリアントのエクソン－イントロン接合部、及びそれに由来するＲＮＡ核酸、例えば、プレｍＲＮＡを含む。いくつかの態様において、例えば、研究又は診断で使用する場合、「標的核酸」は、上記ＤＮＡ又はＲＮＡ核酸標的に由来するｃＤＮＡ又は合成オリゴヌクレオチドであることができる。ＳＴＡＴ６プレｍＲＮＡによってコードされるヒトＳＴＡＴ６タンパク質配列は、配列番号３として示される。他の態様において、標的核酸は、ＳＴＡＴ６タンパク質をコードする核酸又はその天然に存在するバリアントの非翻訳領域、例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、又はその両方を含む。

【0117】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１のイントロン内の領域にハイブリダイズする。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１のエクソン内の領域にハイブリダイズする。他の態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１のエクソン－イントロン接合部内の領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内、例えば、配列番号１内の領域（例えば、イントロン、エクソン、又はエクソン－イントロン接合部）にハイブリダイズし、ＡＳＯは、本明細書の別の箇所に記載されているように式：５’Ａ－Ｂ－Ｃ３’による設計を有する。

【0118】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の特定のアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１）をコードするｍＲＮＡを標的とする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の全てのアイソフォームを標的とする。他の態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６タンパク質の２つのアイソフォーム（例えば、アイソフォーム１及びアイソフォーム２、アイソフォーム１及びアイソフォーム３、又はアイソフォーム２及びアイソフォーム３）を標的とする。

【0119】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列、例えば、配列番号１又は配列番号３に対応する領域に相補的な連続したヌクレオチド配列（例えば、長さが１０～３０ヌクレオチド、例えば、長さが２０ヌクレオチド）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物の核酸配列、又は配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続したヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド１～７００、（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１０００～１５００、（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１５００～２０００、（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド２０００～２５００、（ｖ）配列番号３の２５００～３０００、又は（ｖｉ）配列番号３の３０００～３７００に対応し、任意選択的に、ＡＳＯは、本明細書に記載される設計のうちの１つ、又は本明細書の他の箇所に示される化学構造を有する。

【0120】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物の核酸配列、又は配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続したヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド４１３～８０３、（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド９５２～１６８８、（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１７２６～２４８９、（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド２６８２～２９１２、（ｖ）配列番号３の２９７０～３２０３、又は（ｖｉ）配列番号３の３３３１～３５６１に対応し、任意選択的に、ＡＳＯは、本明細書に記載される設計のうちの１つ、又は本明細書の他の箇所に示される化学構造を有する。

【0121】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物の核酸配列、又は配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続したヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド４６３～７５３、（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１００２～１６３８、（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１７７６～２４３９、（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド２６８２～２８６２、（ｖ）配列番号３の３０２０～３１５３、又は（ｖｉ）配列番号３の３３８１～３５１１に対応し、任意選択的に、ＡＳＯは、本明細書に記載される設計のうちの１つ、又は本明細書の他の箇所に示される化学構造を有する。

【0122】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物の核酸配列、又は配列内の領域（「標的領域」）にハイブリダイズする連続したヌクレオチド配列を含み、核酸配列は、（ｉ）配列番号３のヌクレオチド５０３～７１３、（ｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１０４２～１５９８、（ｉｉｉ）配列番号３のヌクレオチド１８１６～２３９９、（ｉｖ）配列番号３のヌクレオチド２７２２～２８２２、（ｖ）配列番号３の３０６０～３１１３、又は（ｖｉ）配列番号３の３４２１～３４７１に対応し、任意選択的に、ＡＳＯは、本明細書に記載される設計のうちの１つ、又は本明細書の他の箇所に示される化学構造を有する。

【0123】

いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５３～１０６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３、配列番号９１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５９～１３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９、配列番号９２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９０～１９０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０、配列番号９３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９２～１９０６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９２、配列番号９４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１５～１９２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５、配列番号９５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１６～１９３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６、配列番号９６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号９７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１８～１９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１８、配列番号９８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１９～１９３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９、配列番号９９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９２０～１９３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９２０、配列番号１００）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３７～１９５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３７、配列番号１０１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３８～１９５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８、配列番号１０２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６１～２０７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６１、配列番号１０３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６２～２０７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２、配列番号１０４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６３～２０７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３、配列番号１０５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６４～２０７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４、配列番号１０６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６６～２０８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６、配列番号１０７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６７～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６７、配列番号１０８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６８～２０８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８、配列番号１０９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５２～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２、配列番号１１０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０７３～３０８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７３、配列番号１１１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５３～１０６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３、配列番号１１２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５４～１０６９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５４、配列番号１１３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６、配列番号１１４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４７～１８６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７、配列番号１１５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８６～１９０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８６、配列番号１１６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８７～１９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８７、配列番号１１７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８８～１９０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８８、配列番号１１８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８９～１９０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９、配列番号１１９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９０～１９０５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０、配列番号１２０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９３～１９０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９３、配列番号１２１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号１２２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１９～１９３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９、配列番号１２３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５６～２０７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６、配列番号１２４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６０～２０７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０、配列番号１２５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６６～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６、配列番号１２６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０７０～２０８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０７０、配列番号１２７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５１～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１、配列番号１２８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５２～２３６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２、配列番号１２９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５９～２３７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５９、配列番号１３０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３６３３～３６４８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３６３３、配列番号１３１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド６７３～６８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７３、配列番号１３２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５２～１０６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５２、配列番号１３３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６、配列番号１３４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５７～１３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５７、配列番号１３５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５９～１３７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９、配列番号１３６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３６０～１３７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３６０、配列番号１３７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８３９～１８５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３９、配列番号１３８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４８～１８６４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４８、配列番号１３９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４９～１８６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４９、配列番号１４０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９１～１９０７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１、配列番号１４１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１５～１９３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５、配列番号１４２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１６～１９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６、配列番号１４３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号１４４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３８～１９５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８、配列番号１４５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３９～１９５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３９、配列番号１４６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６３～２０７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３、配列番号１４７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６４～２０８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４、配列番号１４８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６５～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５、配列番号１４９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６６～２０８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６、配列番号１５０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６８～２０８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８、配列番号１５１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２１８７～２２０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２１８７、配列番号１５２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５０～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５０、配列番号１５３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５１～２３６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１、配列番号１５４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５２～２３６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２、配列番号１５５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５７～２３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５７、配列番号１５６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１３～５３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－５１３、配列番号１５７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド６７１～６９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７１、配列番号１５８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１３１～１１５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１１３１、配列番号１５９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５４～１３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５４、配列番号１６０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオ
チド１３５５～１３７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５５、配列番号１６１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６、配列番号１６２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４３２～１４５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１４３２、配列番号１６３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５５～１５７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５５、配列番号１６４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５６～１５７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５６、配列番号１６５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５７～１５７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５７、配列番号１６６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５８～１５７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５８、配列番号１６７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８２６～１８４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２６、配列番号１６８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８２７～１８４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２７、配列番号１６９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８３３～１８５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３３、配列番号１７０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４３～１８６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４３、配列番号１７１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４６～１８６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４６、配列番号１７２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４７～１８６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７、配列番号１７３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８３～１９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８３、配列番号１７４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８９～１９０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９、配列番号１７５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９０～１９０９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０、配列番号１７６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９１～１９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１、配列番号１７７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１６～１９３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６、配列番号１７８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号１７９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５６～２０７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６、配列番号１８０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５７～２０７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５７、配列番号１８１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６０～２０７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０、配列番号１８２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６２～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２、配列番号１８３）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６３～２０８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３、配列番号１８４）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６５～２０８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５、配列番号１８５）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６８～２０８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８、配列番号１８６）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３４７～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４７、配列番号１８７）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３４８～２３６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４８、配列番号１８８）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５８～２３７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５８、配列番号１８９）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２７８２～２８０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２７８２、配列番号１９０）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０７０～３０８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７０、配列番号１９１）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０７１～３０９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７１、配列番号１９２）に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４３１～３４５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３４３１、配列番号１９３）に対応する。

【0124】

いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５３～１０６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３、配列番号９１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５９～１３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９、配列番号９２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９０～１９０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０、配列番号９３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９２～１９０６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９２、配列番号９４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１５～１９２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５、配列番号９５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１６～１９３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６、配列番号９６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号９７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１８～１９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１８、配列番号９８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１９～１９３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９、配列番号９９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９２０～１９３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９２０、配列番号１００）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３７～１９５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３７、配列番号１０１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３８～１９５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８、配列番号１０２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６１～２０７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６１、配列番号１０３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６２～２０７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２、配列番号１０４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６３～２０７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３、配列番号１０５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６４～２０７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４、配列番号１０６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６６～２０８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６、配列番号１０７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６７～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６７、配列番号１０８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６８～２０８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８、配列番号１０９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５２～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２、配列番号１１０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０７３～３０８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７３、配列番号１１１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５３～１０６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３、配列番号１１２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５４～１０６９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５４、配列番号１１３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６、配列番号１１４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４７～１８６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７、配列番号１１５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８６～１９０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８６、配列番号１１６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８７～１９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８７、配列番号１１７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８８～１９０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８８、配列番号１１８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８９～１９０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９、配列番号１１９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９０～１９０５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０、配列番号１２０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９３～１９０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９３、配列番号１２１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号１２２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１９～１９３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９、配列番号１２３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５６～２０７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６、配列番号１２４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６０～２０７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０、配列番号１２５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６６～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６、配列番号１２６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０７０～２０８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０７０、配列番号１２７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５１～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１、配列番号１２８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５２～２３
６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２、配列番号１２９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５９～２３７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５９、配列番号１３０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３６３３～３６４８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３６３３、配列番号１３１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド６７３～６８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７３、配列番号１３２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１０５２～１０６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５２、配列番号１３３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６、配列番号１３４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５７～１３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５７、配列番号１３５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５９～１３７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９、配列番号１３６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３６０～１３７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３６０、配列番号１３７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８３９～１８５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３９、配列番号１３８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４８～１８６４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４８、配列番号１３９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４９～１８６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４９、配列番号１４０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９１～１９０７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１、配列番号１４１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１５～１９３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５、配列番号１４２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１６～１９３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６、配列番号１４３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号１４４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３８～１９５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８、配列番号１４５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９３９～１９５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３９、配列番号１４６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６３～２０７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３、配列番号１４７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６４～２０８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４、配列番号１４８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６５～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５、配列番号１４９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６６～２０８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６、配列番号１５０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６８～２０８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８、配列番号１５１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２１８７～２２０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２１８７、配列番号１５２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５０～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５０、配列番号１５３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５１～２３６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１、配列番号１５４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５２～２３６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２、配列番号１５５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５７～２３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５７、配列番号１５６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド５１３～５３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－５１３、配列番号１５７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド６７１～６９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７１、配列番号１５８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１１３１～１１５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１１３１、配列番号１５９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５４～１３７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５４、配列番号１６０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５５～１３７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５５、配列番号１６１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１３５６～１３７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６、配列番号１６２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１４３２～１４５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１４３２、配列番号１６３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５５～１５７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５５、配列番号１６４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５６～１５７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５６、配列番号１６５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５７～１５７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５７、配列番号１６６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１５５８～１５７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５８、配列番号１６７）の３’末端及び／
又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８２６～１８４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２６、配列番号１６８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８２７～１８４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２７、配列番号１６９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８３３～１８５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３３、配列番号１７０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４３～１８６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４３、配列番号１７１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４６～１８６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４６、配列番号１７２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８４７～１８６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７、配列番号１７３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８３～１９０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８３、配列番号１７４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８８９～１９０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９、配列番号１７５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９０～１９０９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０、配列番号１７６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１８９１～１９１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１、配列番号１７７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１６～１９３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６、配列番号１７８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１９１７～１９３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７、配列番号１７９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５６～２０７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６、配列番号１８０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５７～２０７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５７、配列番号１８１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６０～２０７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０、配列番号１８２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６２～２０８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２、配列番号１８３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６３～２０８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３、配列番号１８４）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６５～２０８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５、配列番号１８５）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０６８～２０８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８、配列番号１８６）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３４７～２３６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４７、配列番号１８７）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３４８～２３６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４８、配列番号１８８）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２３５８～２３７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５８、配列番号１８９）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２７８２～２８０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２７８２、配列番号１９０）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０７０～３０８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７０、配列番号１９１）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３０７１～３０９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７１、配列番号１９２）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチドに対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド３４３１～３４５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３４３１、配列番号１９３）の３’末端及び／又は５’末端における±１０、±２０、±３０、±４０、±５０、±６０、±７０、±８０、又は±９０ヌクレオチド）に対応する。

【0125】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＴＧＡＧＣＧＡＡＴＧＧＡＣＡＧＧＴＣＴＴ（配列番号８９）ではない。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５６内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５５内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５４内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５２内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５１内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０５０内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４９内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４８内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４７内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４６内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４５内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４４内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４２内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４１内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０４０内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０３９内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド１～２０３８内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。

【0126】

いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４１～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４２～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４３～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４４～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４５～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４６～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４７～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４８～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０４９～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５０～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５１～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５２～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５３～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５４～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５５～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５６～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５７～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５８～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。いくつかの態様において、標的領域は、配列番号３のヌクレオチド２０５９～３９６３内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列に対応する。

【0127】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の複数の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内の２つの異なる標的領域にハイブリダイズする。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物内の３つの異なる標的領域にハイブリダイズする。複数の標的領域にハイブリダイズする例示的なＡＳＯの配列、及び異なる標的領域の開始／終結部位は、図１Ａに提供される。いくつかの態様において、ＳＴＡＴ６転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の複数の領域にハイブリダイズするＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物（例えば、ゲノム配列、配列番号１）内の単一領域にハイブリダイズするＡＳＯと比較して、ＳＴＡＴ６発現を低下させることに、より強力である（例えば、より低いＥＣ５０を有する）。

【0128】

ＩＩ．Ａ．２．ＡＳＯ ＳＴＡＴ６配列
いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ＳＴＡＴ６転写物、例えば、配列番号１又は配列番号３に対応するヌクレオチド配列の領域の相補体に対応する連続したヌクレオチド配列を含む。

【0129】

特定の態様において、本開示は、長さが１０～１５ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチド、１０～２５ヌクレオチドなどの１０～３０、又は長さが約２０ヌクレオチドのＡＳＯを提供し、連続したヌクレオチド配列は、配列番号１若しくは配列番号３、又はその天然に存在するバリアントなどのＳＴＡＴ６転写物の相補体内の領域と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％の配列同一性を有する。したがって、例えば、ＡＳＯは、配列番号１若しくは配列番号３の配列、又はその一部を有する一本鎖核酸分子にハイブリダイズする。

【0130】

ＡＳＯは、哺乳動物ＳＴＡＴ６タンパク質（例えば、配列番号１又は配列番号３）をコードする核酸の等価領域に対して十分に相補的（完全に相補的）である連続したヌクレオチド配列を含むことができる。ＡＳＯは、配列番号１又は配列番号３のヌクレオチドＸ～Ｙに対応する、核酸配列、又は配列内の領域に対して十分に相補的（完全に相補的）である連続したヌクレオチド配列を含むことができ、式中、Ｘ及びＹは、それぞれ、図１Ａに示すように、開始部位及び終結部位である。

【0131】

ＡＳＯは、哺乳動物ＳＴＡＴ６タンパク質（例えば、配列番号３）をコードするｍＲＮＡの等価領域に対して十分に相補的（完全に相補的）である連続したヌクレオチド配列を含むことができる。ＡＳＯは、配列番号３のヌクレオチドＸ～Ｙに対応する、ｍＲＮＡ配列、又は配列内の領域に対して十分に相補的（完全に相補的）である連続したヌクレオチド配列を含むことができ、式中、Ｘ及びＹは、それぞれ、開始部位及び終結部位である。

【0132】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯ又は連続したヌクレオチド配列のヌクレオチド配列は、配列番号９１～１９３（すなわち、図１Ａの配列）から選択される配列と少なくとも約８０％の配列同一性、例えば、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％の配列同一性、少なくとも約９７％の配列同一性、少なくとも約９８％の配列同一性、少なくとも約９９％の配列同一性、例えば約１００％の配列同一性（相同）を有する。いくつかの態様において、ＡＳＯは、本明細書の他の箇所に記載される設計、又は本明細書の他の箇所に示される化学構造（例えば、図１Ａ）を有する。

【0133】

いくつかの態様において、ＡＳＯ（又はその連続したヌクレオチド部分）は、配列番号９１～１９３からなる群から選択される配列のうちの１つ、又はその少なくとも１０個の連続したヌクレオチドの領域から選択されるか、又はそれを含み、ＡＳＯ（又はその連続したヌクレオチド部分）は、対応するＳＴＡＴ６転写物と比較したときに、任意選択的に、１つ、２つ、３つ、又は４つのミスマッチを含むことができる。

【0134】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、９１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３）、９２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９）、９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）、９４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９２）、９５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５）、９６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）、９７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）、９８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１８）、９９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９）、１００（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９２０）、１０１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３７）、１０２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８）、１０３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６１）、１０４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２）、１０５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）、１０６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４）、１０７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）、１０８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６７）、１０９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）、１１０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）、１１１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７３）、１１２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３）、１１３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５４）、１１４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）、１１５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７）、１１６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８６）、１１７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８７）、１１８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８８）、１１９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９）、１２０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）、１２１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９３）、１２２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）、１２３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９）、１２４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６）、１２５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０）、１２６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）、１２７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０７０）、１２８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１）、１２９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）、１３０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５９）、１３１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３６３３）、１３２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７３）、１３３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５２）、１３４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）、１３５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５７）、１３６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９）、１３７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３６０）、１３８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３９）、１３９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４８）、１４０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４９）、１４１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１）、１４２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５）、１４３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）、１４４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）、１４５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８）、１４６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３９）、１４７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）、１４８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４）、１４９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５）、１５０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）、１５１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）、１５２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２１８７）、１５３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５０）、１５４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１）、１５５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）、１５６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５７）、１５７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－５１３）、１５８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７１）、１５９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１１３１）、１６０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５４）、１６１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５５）、１６２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）、１６３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１４３２）、１６４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５５）、１６５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５６）、１６６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５７）、１６７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５８）、１６８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２６）、１６９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２７）、１７０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３３）、１７１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４３）、１７２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４６）、１７３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７）、１７４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８３）、１７５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９）、１７６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）、１７７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１）、１７８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）、１７９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）、１８０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６）、１８１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５７）、１８２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０）、１８３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２）、１８４（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）、１８５（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５）、１８６（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）、１８７（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４７）、１８８（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４８）、１８９（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５８）、１９０（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２７８２）、１９１（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７０）、１９２（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７１）、及び１９３（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３４３１）からなる群から選択される配列を含む。

【0135】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１００に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９２０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１０９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５４）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１１９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０７０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１２９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３６３３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１０５２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３６０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１３９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９３９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６４）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１４９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２１８７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－５１３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－６７１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１５９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１１３１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５４）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１３５６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１４３２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１５５８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１６９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８２７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８３３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８４７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８８９）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１８９１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１７９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－１９１７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５６）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０５７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、
配列番号１８４に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８５に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８６に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２０６８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８７に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４７）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８８に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３４８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１８９に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２３５８）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９０に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－２７８２）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９１に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７０）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９２に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３０７１）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号１９３に示される配列（例えば、ＡＳＯ－ＳＴＡＴ６－３４３１）を含む。

【0136】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、標的核酸配列（例えば、ＳＴＡＴ６転写物）に結合し、ＳＴＡＴ６転写物の発現を、細胞における正常（すなわち、対照）発現レベルと比較して、少なくとも１０％又は２０％、例えば、正常な発現レベル（例えば、ＡＳＯに曝露されていない細胞における発現レベル）と比較して、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％、阻害又は低下することが可能である。

【0137】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、標的細胞において、ＡＳＯと接触している細胞をＡＳＯと接触していない（例えば、生理食塩水と接触している）細胞と比較したとき、インビトロでＳＴＡＴ６ ｍＲＮＡの発現を、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％低下することが可能である。

【0138】

ＩＩ．Ａ．３．ＡＳＯ長
ＡＳＯは、長さが合計１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０の連続したヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含むことができる。ある範囲がＡＳＯ、又は連続したヌクレオチド配列長に与えられるとき、この範囲は、例えば、１０～３０（又はその間）の範囲に提供される、より低い長さ及びより高い長さを含み、１０及び３０の両方を含むことを理解されたい。

【0139】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、長さが合計で約１４～２０、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０の連続したヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む。特定の態様において、ＡＳＯは、長さが合計約２０の連続したヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、長さが１４ヌクレオチドである。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、長さが１５ヌクレオチドである。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、長さが１６ヌクレオチドである。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、長さが１７ヌクレオチドである。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、長さが１８ヌクレオチドである。特定の態様において、本開示のＡＳＯは、長さが１９ヌクレオチドである。

【0140】

ＩＩ．Ａ．４．ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体
本開示の一態様において、ＡＳＯは、１つ以上の非天然に存在するヌクレオシド類似体を含む。本明細書で使用される「ヌクレオシド類似体」は、糖及び／又は塩基部分における修飾による、ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドなどの天然ヌクレオシドのバリアントである。類似体は、原則として、オリゴヌクレオチドの文脈における天然ヌクレオシドに単に「サイレント」又は「等価」であり得、すなわち、オリゴヌクレオチドが標的遺伝子発現を阻害するために働く方法に機能的効果を有しない。かかる「等価」類似体は、それにもかかわらず、例えば、それらが製造にとって容易若しくは安価である場合、又は保存若しくは製造条件に対してより安定である場合、又はタグ若しくは標識を表す場合に有用であることができる。しかしながら、いくつかの態様において、類似体は、例えば、標的に対する増加した結合親和性及び／又は細胞内ヌクレアーゼに対する増加した耐性及び／又は細胞内への輸送の増加した容易さによって、ＡＳＯが発現を阻害するように作用する方法に、機能的効果を有するであろう。ヌクレオシド類似体の具体例は、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、並びにスキーム１によって記載されている。本開示のＡＳＯは、１超、２超、３超、４超、５超、６超、７超、８超、９超、１０超、１１超、１２超、１３超、１４超、１５超、１６超、１８超、１９超、又は２０個超のヌクレオシド類似体を含むことができる。いくつかの態様において、ＡＳＯにおけるヌクレオシド類似体は、同じである。他の態様において、ＡＳＯにおけるヌクレオシド類似体は、異なる。ＡＳＯにおけるヌクレオチド類似体は、以下のヌクレオシド類似体のうちのいずれか１つ又は組み合わせであることができる。

【0141】

いくつかの態様において、ヌクレオシド類似体には、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（２’－ＯＭｅ）、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（２’－ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ、二環式ヌクレオシド類似体、又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの態様において、ヌクレオシド類似体は、糖修飾ヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、ヌクレオシド類似体は、二環式糖を含むヌクレオシドを含む。いくつかの態様において、ヌクレオシド類似体は、ＬＮＡを含む。

【0142】

いくつかの態様において、ヌクレオシド類似体は、拘束エチルヌクレオシド（ｃＥｔ）、２’，４’－拘束２’－Ｏ－メトキシエチル（ｃＭＯＥ）、α－Ｌ－ＬＮＡ、β－Ｄ－ＬＮＡ、２’－Ｏ，４’－Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）、アミノ－ＬＮＡ、オキシ－ＬＮＡ、チオ－ＬＮＡ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様において、ＡＳＯは、１つ以上の５’－メチル－シトシン核酸塩基を含む。

【0143】

核酸塩基という用語は、核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成するヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えば、アデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えば、ウラシル、チミン、及びシトシン）部分を含む。本開示の文脈において、核酸塩基という用語はまた、天然に存在する核酸塩基とは異なり得るが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能的である修飾核酸塩基を包含する。いくつかの態様において、核酸塩基部分は、核酸塩基を修飾又は置換することによって改変される。この文脈において、「核酸塩基」は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基、並びに非天然に存在するバリアントの両方を指す。かかるバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５、及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。

【0144】

いくつかの態様において、核酸塩基部分は、プリン又はピリミジンを、イソシトシン、プソイドイソシトシン、５－メチル－シトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル、５－チアゾロウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン、及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基などの置換プリン又は置換ピリミジンなどの修飾されたプリン又はピリミジンに変更することによって改変される。

【0145】

核酸塩基部分は、対応する各核酸塩基、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、又はＵについて文字コードによって示され得、各文字は、任意選択的に、等価機能の修飾核酸塩基を含み得る。例えば、例示されるオリゴヌクレオチドでは、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及び５－メチル－シトシンから選択される。任意選択的に、ＬＮＡギャップマーについて、５－メチル－シトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。

【0146】

本開示のＡＳＯは、ＤＮＡ及びＲＮＡに見出されるリボース糖部分と比較したとき、修飾された糖部分、すなわち糖部分の修飾を有する１つ以上のヌクレオシドを含むことができる。リボース糖部分の修飾を有する多数のヌクレオシドが、主に、親和性及び／又はヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドの特定の特性を改善することを目的として作製されている。

【0147】

かかる修飾は、リボース環構造が、例えば、ヘキソース環（ＨＮＡ）、又はリボース環上のＣ２’とＣ４’炭素との間に典型的にはバイラジカル架橋を有する二環式環（ＬＮＡ）、又はＣ２’とＣ３’炭素との間の結合を典型的には欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）を用いた置き換えによって修飾されているものを含む。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えば、ビシクロヘキソース核酸（ＷＯ２０１１／０１７５２１）又は三環式核酸（ＷＯ２０１３／１５４７９８）が含まれる。修飾ヌクレオシドはまた、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、又はモルホリノ核酸の場合、糖部分が非糖部分で置き換えられているヌクレオシドを含む。

【0148】

糖修飾はまた、リボース環上の置換基を水素以外の基、又はＲＮＡヌクレオシドに天然に見出される２’－ＯＨ基に変更することによって行われる修飾を含む。置換基は、例えば、２’、３’、４’、又は５’位に導入され得る。修飾糖部分を有するヌクレオシドとしては、２’置換ヌクレオシドなどの２’修飾ヌクレオシドも挙げられる。実際、２’置換ヌクレオシドを開発することに多くの集中が費やされており、多数の２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれるときに、増強したヌクレオシド耐性及び増強した親和性などの有益な特性を有することが見出されている。

【0149】

２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨ又は－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）であるか、又は２’結合したバイラジカルを含み、２’置換ヌクレオシド及びＬＮＡ（２’－４’バイラジカル架橋）ヌクレオシドが含まれる。例えば、２’修飾糖は、オリゴヌクレオチドに対する増強した結合親和性（例えば、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシド）及び／又は増加したヌクレアーゼ耐性を提供し得る。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシドである。更なる例について、例えば、Ｆｒｅｉｅｒ ＆ Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３、Ｕｈｌｍａｎｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、いくつかの２’置換修飾ヌクレオシドの例示である。

【化1】

【0150】

ＬＮＡヌクレオシドは、ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’との間のリンカー基（バイラジカル又は架橋と呼ばれる）（すなわち、２’－４’架橋）を含む修飾ヌクレオシドであり、リボース環の立体構造を制限又はロックする。これらのヌクレオシドはまた、文献では架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも称される。リボースの立体構造のロックは、ＬＮＡが相補的なＲＮＡ又はＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれるとき、ハイブリダイゼーションの増強した親和性（二本鎖の安定化）に関連する。これは、オリゴヌクレオチド／相補体二本鎖の融解温度を測定することによって日常的に決定することができる。

【0151】

非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ００／６６６０４、ＷＯ９８／０３９３５２、ＷＯ２００４／０４６１６０、ＷＯ００／０４７５９９、ＷＯ２００７／１３４１８１、ＷＯ２０１０／０７７５７８、ＷＯ２０１０／０３６６９８、ＷＯ２００７／０９００７１、ＷＯ２００９／００６４７８、ＷＯ２０１１／１５６２０２、ＷＯ２００８／１５４４０１、ＷＯ２００９／０６７６４７、ＷＯ２００８／１５０７２９、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６、Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されている。

【0152】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯの修飾ヌクレオシド又はＬＮＡヌクレオシドは、式Ｉ又はＩＩの一般構造を有し、

【化2】

式Ｉ 式ＩＩ
式中、
Ｗは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ^ａ）－、－Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）－、特に－Ｏ－から選択され、
Ｂは、核酸塩基又は修飾核酸塩基部分であり、
Ｚは、隣接するヌクレオシド又は５’末端基とのヌクレオシド間結合であり、
Ｚ＊は、隣接するヌクレオシド又は３’末端基とのヌクレオシド間結合であり、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、独立して、水素、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルケニルオキシ、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルキルカルボニル、ホルミル、アジド、複素環、及びアリールから選択され、
Ｘ、Ｙ、Ｒ^ａ、及びＲ^ｂは、本明細書に定義される通りである。

【0153】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－、Ｒ^ａは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－Ｙ－のいくつかの態様において、Ｒ^ｂは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－Ｙ－の他の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方又は両方は、水素である。－Ｘ－Ｙ－の更なる態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つのみが、水素である。－Ｘ－Ｙ－のいくつかの態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方はメチルであり、他方は水素である。－Ｘ－Ｙ－の特定の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、両方とも、同時にメチルである。

【0154】

いくつかの態様において、－Ｘ－、Ｒ^ａは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－のいくつかの態様において、Ｒ^ｂは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｘ－の他の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方又は両方は、水素である。－Ｘ－の特定の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つのみが、水素である。－Ｘ－の特定の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの一方は、メチルであり、他方は、水素である。－Ｘ－の他の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、両方とも同時にメチルである。

【0155】

いくつかの態様において、－Ｙ－、Ｒ^ａは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｙ－の特定の態様において、Ｒ^ｂは、水素又はアルキル、特に水素又はメチルである。－Ｙ－の他の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方又は両方は、水素である。－Ｙ－のいくつかの態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂのうちの１つのみが、水素である。－Ｙ－の他の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方は、メチルであり、他方は、水素である。－Ｙ－のいくつかの態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、両方とも同時にメチルである。

【0156】

いくつかの態様において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、独立して、水素及びアルキル、特に水素及びメチルから選択される。

【0157】

いくつかの態様において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。

【0158】

いくつかの態様において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、同時に全て水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は水素であり、他方は上記で定義された通り、特に、アルキル、より具体的には、メチルである。

【0159】

いくつかの態様において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、同時に全て水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は水素であり、他方はアジドである。

【0160】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかるＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６、ＷＯ００／６６６０４、ＷＯ９８／０３９３５２、及びＷＯ２００４／０４６１６０に開示されており、これらは全て参照により本明細書に組み込まれ、ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ及びアルファ－Ｌ－オキシＬＮＡヌクレオシドとして当該技術分野で一般に知られているものを含む。

【0161】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｓ－ＣＨ_２－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかるチオＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６及びＷＯ２００４／０４６１６０に開示されており、それは参照により本明細書に組み込まれる。

【0162】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－ＮＨ－ＣＨ_２－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかるアミノＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ９９／０１４２２６及びＷＯ２００４／０４６１６０に開示されており、それは参照により本明細書に組み込まれる。

【0163】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２－又は－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２－であり、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかるＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ００／０４７５９９及びＭｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６に開示されており、それらは参照により本明細書に組み込まれ、２’－Ｏ－４’Ｃ－エチレン架橋核酸（ＥＮＡ）として当技術分野で一般に知られているものを含む。

【0164】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、同時に全て水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊のうちの一方は、水素であり、他方は、アルキル、例えば、メチルなど、水素ではない。かかる５’置換ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２００７／１３４１８１に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。

【0165】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｒ^ａ及びＲ^ｂの一方又は両方は、水素ではなく、特に、アルキル、例えば、メチルであり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、同時に全て水素であり、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は、水素であり、他方は、水素ではなく、特に、アルキル、例えば、メチルである。かかるビス修飾ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２０１０／０７７５７８に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。

【0166】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３）－である（“２’Ｏ－ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ”，Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１）。

【0167】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨＲ^ａ－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかる６’－置換ＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２０１０／０３６６９８及びＷＯ２００７／０９００７１に開示されており、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。かかる６’－置換ＬＮＡヌクレオシドでは、Ｒ^ａは、メチルなどの特にＣ１－Ｃ６アルキルである。

【0168】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_３）－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかるＬＮＡヌクレオシドはまた、当該技術分野において環状ＭＯＥ（ｃＭＯＥ）としても知られており、ＷＯ２００７／０９００７１に開示されている。

【0169】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－である。

【0170】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－である（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０、前掲）

【0171】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかる６’－メチルＬＮＡヌクレオシドは、当該技術分野では、ｃＥＴヌクレオシドとしても知られており、（Ｓ）－ｃＥＴ又は（Ｒ）－ｃＥＴジアステレオ異性体のいずれかであり得、ＷＯ２００７／０９００７１（ベータ－Ｄ）及びＷＯ２０１０／０３６６９８（アルファ－Ｌ）に開示されており、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。

【0172】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｒ^ａもＲ^ｂも水素ではなく、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。特定の態様において、Ｒ^ａ及びＲ^ｂは、同時に両方ともアルキルであり、特に、同時に両方ともメチルである。かかる６’－二置換ＬＮＡヌクレオシドは、本明細書に参照により組み込まれるＷＯ２００９／００６４７８に開示されている。

【0173】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｓ－ＣＨＲ^ａ－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかる６’置換チオＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２０１１／１５６２０２に開示されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。かかる６’－置換チオＬＮＡの特定の態様において、Ｒ^ａはアルキル、特にメチルである。

【0174】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｃ（＝ＣＨ_２）Ｃ（Ｒ^ａＲ^ｂ）－であり、例えば、Ｗは酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかるビニルカルボＬＮＡヌクレオシドは、ＷＯ２００８／１５４４０１及びＷＯ２００９／０６７６４７に開示されており、これらは両方とも参照により本明細書に組み込まれる。

【0175】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｎ（ＯＲ^ａ）－ＣＨ_２－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。いくつかの態様において、Ｒ^ａは、メチルなどのアルキルである。かかるＬＮＡヌクレオシドは、Ｎ置換ＬＮＡとしても知られており、ＷＯ２００８／１５０７２９に開示されており、本明細書に参照により組み込まれる。

【0176】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＮＣＨ_３－である（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０、前掲）。

【0177】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、ＯＮ（Ｒ^ａ）－ －Ｎ（Ｒ^ａ）－Ｏ－、－ＮＲ^ａ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－、又は－ＮＲ^ａ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。特定の態様において、Ｒ^ａは、メチルなどのアルキルである。（Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ ２０１０、前掲）。

【0178】

いくつかの態様において、Ｒ^５及びＲ^５＊は、同時に両方とも水素である。他の態様において、Ｒ^５及びＲ^５＊の一方は、水素であり、他方は、メチルなどのアルキルである。かかる態様において、Ｒ^１、Ｒ^２、及びＲ^３は、特に水素であることができ、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ_３）－などの特に－Ｏ－ＣＨ_２－又は－Ｏ－ＣＨＣ（Ｒ^ａ）_３－であることができる。

【0179】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－などの－ＣＲ^ａＲ^ｂ－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。かかる態様において、Ｒ^ａは、特に、メチルなどのアルキルであることができる。かかるＬＮＡヌクレオシドは、立体構造的に制限されたヌクレオチド（ＣＲＮ）としても知られ、ＷＯ２０１３／０３６８６８に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。

【0180】

いくつかの態様において、－Ｘ－Ｙ－は、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－ＣＨ_２－などの－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－Ｏ－ＣＲ^ａＲ^ｂ－であり、Ｗは、酸素であり、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^５、及びＲ^５＊は、同時に全て水素である。特定の態様において、Ｒ^ａは、メチルなどの特にアルキルであることができる。かかるＬＮＡヌクレオシドは、ＣＯＣヌクレオチドとしても知られ、Ｍｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８に開示されており、参照により本明細書に組み込まれる。

【0181】

特定されない限り、ＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ又はアルファ－Ｌの立体異性体にあり得るよりも認識される。

【0182】

ＬＮＡヌクレオシドの特定の例がスキーム１に示される。

【化3】

【0183】

他の箇所で例示されるように、本開示のいくつかの態様において、オリゴヌクレオチドにおけるＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡヌクレオシドである。

【0184】

ＩＩ．Ａ．５．ヌクレアーゼ媒介性分解
ヌクレアーゼ媒介性分解は、相補的ヌクレオチド配列の分解を、かかる配列と二本鎖を形成するときに媒介することが可能であるオリゴヌクレオチドを指す。

【0185】

いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、標的核酸のヌクレアーゼ媒介性分解を介して機能し得、本開示のオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ、具体的には、エンドヌクレアーゼ、好ましくはエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）、例えばＲＮａｓｅＨを動員することが可能である。ヌクレアーゼ媒介性メカニズムを介して作用するオリゴヌクレオチド設計の例は、典型的には、少なくとも５又は６個のＤＮＡヌクレオシドの領域を含み、親和性増強ヌクレオシド、例えばギャップマーと片側又は両側で隣接するオリゴヌクレオチドである。

【0186】

ＩＩ．Ａ．６．ＲＮａｓｅＨ活性及び動員
アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅＨ活性は、相補的ＲＮＡ分子を有する二本鎖でＲＮａｓｅＨを動員して、相補的ＲＮＡ分子の分解を誘導する能力を指す。ＷＯ０１／２３６１３は、ＲＮａｓｅＨ活性を決定するためのインビトロ方法を提供し、ＲＮａｓｅＨを動員する能力を決定するために使用され得る。典型的には、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸配列とともに提供されるとき、それが、試験される修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチド内の全てのモノマー間にホスホロチオエート結合を有するＤＮＡモノマーのみを含むオリゴヌクレオチドを使用し、ＷＯ０１／２３６１３の実施例９１～９５によって提供される方法論を使用して、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定された決定された初期速度の、少なくとも１０％、又は２０％超などの少なくとも５％の初期速度を有する場合、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能であるとみなされる。

【0187】

いくつかの態様において、オリゴヌクレオチドは、相補的標的核酸とともに提供されるとき、ｐｍｏｌ／ｌ／分で測定されたＲＮａｓｅＨ初期速度が、試験されるオリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、２’置換を有さず、オリゴヌクレオチド内の全てのモノマー間にホスホロチオエート結合を有する、ＤＮＡモノマーのみを含むオリゴヌクレオチドを使用し、ＷＯ０１／２３６１３の実施例９１～９５によって提供される方法論を使用したとき、決定される初期速度の少なくとも１０％未満など、５％未満などの２０％未満である場合、ＲＮａｓｅＨを動員することが可能ではないとみなされる。

【0188】

ＩＩ．Ａ．７．ＡＳＯ設計
本開示のＡＳＯは、ヌクレオシド及びヌクレオシド類似体の両方を含むヌクレオチド配列を含むことができ、ギャップマーの形態にあることができる。本開示のＡＳＯで使用することができるギャップマーの立体配置の例は、米国特許出願公開第２０１２／０３２２８５１号に記載されている。

【0189】

本明細書で使用される「ギャップマー」という用語は、１つ以上の親和性増強修飾ヌクレオシドが５’及び３’に隣接する（フランク）、ＲＮａｓｅＨ動員オリゴヌクレオチドの領域（ギャップ）を含むアンチセンスオリゴヌクレオチドを指す。「ＬＮＡギャップマー」という用語は、親和性増強修飾ヌクレオシドのうちの少なくとも１つがＬＮＡヌクレオシドであるギャップマーオリゴヌクレオチドである。「混合ウイングギャップマー」という用語は、隣接領域が、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド及び少なくとも１つのＤＮＡヌクレオシド又は非ＬＮＡ修飾ヌクレオシド、例えば、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、及び２’－フルオロ－ＡＮＡヌクレオシドなどの少なくとも１つの２’置換修飾ヌクレオシドを含むＬＮＡギャップマーを指す。

【0190】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ミックスマーの形態であることができる。いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、トータルマーの形態であり得る。いくつかの態様において、標的領域に対するＡＳＯの親和性を増強することに加えて、いくつかのヌクレオシド類似体はまた、ＲＮａｓｅ（例えば、ＲＮａｓｅＨ）結合及び切断を媒介する。α－Ｌ－ＬＮＡモノマーは、ある程度ＲＮａｓｅＨ活性を動員するため、いくつかの態様において、α－Ｌ－ＬＮＡモノマーを含むＡＳＯのギャップ領域（例えば、本明細書で言及される領域Ｂ）は、ＲＮａｓｅＨによって認識可能で切断可能なより少ないモノマーからなり、ミックスマー構築におけるより多くのフレキシビリティが導入される。

【0191】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、ギャップマーであり、領域Ｂ（Ｂ）として本明細書で言及されるＲＮａｓｅＨなどのＲＮａｓｅを動員することが可能であるヌクレオチド（例えば、１つ以上のＤＮＡ）の連続した伸長を含み、領域Ｂは、５’及び３’の両方で、領域Ｂのヌクレオチドの連続した伸長にヌクレオシド類似体５’及び３’の領域が隣接しており、これらの領域は、それぞれ、領域Ａ（Ａ）及びＣ（Ｃ）と呼ばれる。いくつかの態様において、ヌクレオシド類似体は、糖修飾ヌクレオシド（例えば、高親和性糖修飾ヌクレオシド）である。特定の態様において、領域Ａ及びＣの糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に対するＡＳＯの親和性を増強する（すなわち、親和性増強２’糖修飾ヌクレオシド）。いくつかの態様において、糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡ及び／又は２’－ＭＯＥなどの高親和性２’糖修飾などの２’糖修飾ヌクレオシドである。

【0192】

ギャップマーでは、領域Ｂの５’及び３’のほとんどのヌクレオシドは、ＤＮＡヌクレオシドであり、それぞれ領域Ａ及びＣのヌクレオシド類似体（例えば、高親和性糖修飾ヌクレオシド）に隣接して配置される。いくつかの態様において、領域Ａ及びＣは、領域Ｂから最も遠い末端（すなわち、領域Ａの５’末端及び領域Ｃの３’末端）にヌクレオシド類似体を有することによって更に定義することができる。

【0193】

いくつかの態様において、本開示のＡＳＯは、式（５’から３’に）Ａ－Ｂ－Ｃのヌクレオチド配列を含み、式中、（Ａ）（５’領域又は第１のウイング配列）は、少なくとも１つのヌクレオシド類似体（例えば、３～５個のＬＮＡ単位）を含み、（Ｂ）ＲＮａｓｅを動員することが可能である（プレｍＲＮＡ又はｍＲＮＡ標的などの相補的なＲＮＡ分子と二本鎖で形成される場合）、少なくとも４つの連続したヌクレオシド（例えば、４～２４個のＤＮＡ単位）を含み、（Ｃ）（３’領域又は第２のウイング配列）は、少なくとも１つのヌクレオシド類似体（例えば、３～５個のＬＮＡ単位）を含む。

【0194】

いくつかの態様において、領域Ａは、ＬＮＡなどの３～５個のヌクレオシド類似体を含み、領域Ｂは、６～２４（例えば、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４）個のＤＮＡ単位からなり、領域Ｃは、ＬＮＡなどの３又は４個のヌクレオシド類似体からなる。かかる設計には、（Ａ－Ｂ－Ｃ）３－１４－３、３－１１－３、３－１２－３、３－１３－３、４－９－４、４－１０－４、４－１１－４、４－１２－４、及び５－１０－５が含まれる。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＬＬＬＤ_ｎＬＬＬ、ＬＬＬＬＤ_ｎＬＬＬＬ、又はＬＬＬＬＬＤ_ｎＬＬＬＬＬの設計を有し、式中、Ｌは、ヌクレオシド類似体であり、Ｄは、ＤＮＡであり、ｎは、４～２４の任意の整数であることができる。いくつかの態様において、ｎは、６～１４の任意の整数であることができる。いくつかの態様において、ｎは、８～１２の任意の整数であることができる。いくつかの態様において、ＡＳＯは、ＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬ、ＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬ、ＬＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬＬ、ＬＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬＬ、ＬＬＬＬＬＬＭＭＤｎＭＭＬＬＬＬＬ、又はＬＬＬＬＬＬＭＤｎＭＬＬＬＬＬの設計を有し、Ｄは、ＤＮＡであり、ｎは、３～１５の任意の整数であることができ、Ｌは、ＬＮＡであり、Ｍは、２’ＭＯＥである。

【0195】

更なるギャップマー設計は、ＷＯ２００４／０４６１６０、ＷＯ２００７／１４６５１１、及びＷＯ２００８／１１３８３２に開示されており、各々が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0196】

ＩＩ．Ａ．９．ヌクレオチド間結合
本明細書に記載のＡＳＯのモノマーは、結合基を介して一緒にカップリングされる。好適には、各モノマーは、結合基を介して３’隣接モノマーに連結される。

【0197】

当業者は、本開示の文脈において、ＡＳＯの末端での５’モノマーが、５’結合基を含まないが、それは、５’末端基を含み得るか、又は含み得ないことを理解するであろう。

【0198】

いくつかの態様において、連続したヌクレオチド配列は、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。「結合基」又は「ヌクレオシド間結合」という用語は、２つのヌクレオシドを共有結合することが可能である基を意味することが意図される。非限定的な例としては、リン酸基及びホスホロチオエート基が挙げられる。

【0199】

本開示のＡＳＯのヌクレオシド又はその連続したヌクレオシド配列は、結合基を介して一緒にカップリングされる。好適には、各ヌクレオシドは、結合基を介して３’隣接ヌクレオシドに連結される。

【0200】

いくつかの態様において、ヌクレオシド間結合は、その正常なホスホジエステルから、切断可能であるホスホロチオエートなどのヌクレアーゼ攻撃に対してより耐性のあるものに修飾され、それはＲＮａｓｅＨによって切断可能であり、標的遺伝子の発現を低下させるアンチセンス阻害のその経路も可能にする。いくつかの態様において、ヌクレオシド間結合の少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％が修飾されている。

【0201】

ＩＩ．Ｂ．ｐＨ
いくつかの態様において、医薬組成物は、ＥＶを安定して製剤化することができるｐＨを有する。ｐＨは、約７．０～約７．４、例えば、約７．１～約７．３、例えば、約７．２の範囲にあることができる。いくつかの態様において、本組成物は、約７．２のｐＨの溶液中にある。ＥＶは、本明細書の他の箇所に開示されており、糖は、単糖、二糖、三糖、又は任意の他の糖であることができ、塩化ナトリウムは、以下に示され、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムは、以下に示される。

【0202】

いくつかの態様において、凍結前及び凍結後の組成物は、同じままである。例えば、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．１のｐＨを有する。いくつかの態様において、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．２のｐＨを有する。いくつかの態様において、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．３のｐＨを有する。いくつかの態様において、凍結前及び凍結後の組成物は、約７．４のｐＨを有する。

【0203】

いくつかの態様において、組成物のｐＨは、リン酸塩の濃度を変更することによって調整することができる。いくつかの態様において、組成物のｐＨは、リン酸カリウムの濃度を変更することによって調整することができる。いくつかの態様において、組成物のｐＨは、リン酸カリウムの濃度を添加又は増加させることによって上昇させることができる。いくつかの態様において、リン酸カリウムの濃度は、リン酸ナトリウムの濃度よりも高い。

【0204】

いくつかの態様において、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムの一塩基性形態と二塩基性形態との比率を使用して、医薬組成物のｐＨを調整することができる。いくつかの態様において、一塩基性リン酸ナトリウム及び／又は一塩基性リン酸カリウムを使用して、医薬組成物のｐＨを上昇させることができる。いくつかの態様において、二塩基性リン酸ナトリウム及び／又は二塩基性リン酸カリウムを使用して、医薬組成物のｐＨを低下させることができる。いくつかの態様において、開示される組成物のｐＨ範囲は、約６．８～約７．６である。したがって、組成物のｐＨが所望よりも低い場合、ｐＨは、塩（すなわち、カリウム又はナトリウム）の二塩基性形態に対する一塩基性形態の比率を変更することによって変化させることができる。いくつかの態様において、リン酸ナトリウム及びリン酸カリウムの一塩基性形態と二塩基性形態との比率は、組成物のｐＨが７．０～７．４、例えば、７．１～７．３、例えば、７．２になるまで、組成物のｐＨを調整するために使用することができる。いくつかの態様において、ｐＨの上限は、サポン化としてより一般的に知られている加水分解を受ける、開示されたＥＶ、例えば、エクソソームの脂質の破壊に起因する。いくつかの態様において、カリウム塩は、凍結時にｐＨを安定させる。

【0205】

ＩＩ．Ｃ．塩化ナトリウム
いくつかの態様において、塩化ナトリウムは、組成物中に、約１０ｍＭ～約２００ｍＭの塩化ナトリウムの濃度で存在する。いくつかの態様において、塩化ナトリウムは、組成物中に、約１０ｍＭ～１３４ｍＭ、約１０ｍＭ～約１９０ｍＭ、約２０ｍＭ～約１８０ｍＭ、約３０ｍＭ～約１７０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１６０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１４０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭ、約９０ｍＭ～約１００ｍＭ、約１００ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１００ｍＭ、約１００ｍＭ～約１０５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１４０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１３０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１２０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭ、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭ、又は約９０ｍＭ～約１０５ｍＭの濃度で存在する、。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ～約１４０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約６０ｍＭ～約１４０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約６０ｍＭ～約１３０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約７０ｍＭ～約１３０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約７０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約８０ｍＭ～約１２０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約８０ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９０ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９０ｍＭ～約１００ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９５ｍＭ～約１１０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９５ｍＭ～約１０５ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９５ｍＭ～約１００ｍＭである。

【0206】

いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、又は約１５０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約６０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約７０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約８０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約９５ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１００ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１０５ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１１０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１２０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１３０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１４０ｍＭである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭである。

【0207】

いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約３．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約４．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約５．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約６．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、塩化ナトリウムの濃度は、少なくとも約７．０ｍｇ／ｍｌである。

【0208】

ＩＩ．Ｄ．リン酸塩
いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、約１ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約１０ｍＭ、約３ｍＭ～約１０ｍＭ、約４ｍＭ～約１０ｍＭ、約５ｍＭ～約１０ｍＭ、約２ｍＭ～約９ｍＭ、約３ｍＭ～約８ｍＭ、約４ｍＭ～約７ｍＭ、約４ｍＭ～約６ｍＭ、約３ｍＭ～約６ｍＭ、又は約４．５ｍＭ～約５．５ｍＭの濃度で存在する。

【0209】

いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、約４．５ｍＭ、約４．６ｍＭ、約４．７ｍＭ、約４．８ｍＭ、約４．９ｍＭ、約５．０ｍＭ、約５．１ｍＭ、約５．２ｍＭ、約５．３ｍＭ、約５．４ｍＭ、又は約５．５ｍＭである。

【0210】

いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約１ｍＭ～約２０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約１ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約２ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約３ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５ｍＭ～約１０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約２ｍＭ～約９ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約３ｍＭ～約８ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４ｍＭ～約７ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４ｍＭ～約６ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約３ｍＭ～約６ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４．５ｍＭ～約５．５ｍＭの濃度で存在する。

【0211】

いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約３．０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約３．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約４．０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約４．１ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約４．２ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約４．３ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約４．４ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムは、組成物中に、約４．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４．６ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４．７ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４．８ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約４．９ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．１ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．２ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．３ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．４ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．６ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．７ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．８ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約５．９ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸カリウムは、組成物中に、約６．０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、組成物中のリン酸カリウムの濃度は、５．１５ｍＭである。

【0212】

本明細書に開示される一塩基性リン酸カリウムの濃度のいずれも、体積当たりの重量、例えば、ｍｇ／ｍｌの用語で表すことができる。当業者は、本明細書に開示されるｍＭ濃度を体積当たりの重量濃度に容易に変換することができるであろう。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．１４ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２．７５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．１４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．１５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．１７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．２３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．２５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．６９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約０．７５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．２５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．５０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約１．７５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．０５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．１ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．２ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．３ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．４ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．６ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．７ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．８ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌである。いくつかの態様において、リン酸カリウム、例えば、一塩基性リン酸カリウムの濃度は、少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌである。

【0213】

いくつかの態様において、リン酸ナトリウム、例えば、二塩基性リン酸ナトリウム七水和物は、組成物中に、約５ｍＭ～約１００ｍＭ、５ｍＭ～約３０、約１０ｍＭ～約２０ｍＭ、約１１ｍＭ～約１９ｍＭ、約１２ｍＭ～約１８ｍＭ、約１３ｍＭ～約１７ｍＭ、約１４ｍＭ～約１６ｍＭ、約１５ｍＭ～約１６ｍＭ、又は約１４ｍＭ～約１５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１１ｍＭ～約１９ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１２ｍＭ～約１８ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１３ｍＭ～約１７ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４ｍＭ～約１６ｍＭの濃度で存在する。

【0214】

いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．５ｍＭ、約１４．６ｍＭ、約１４．７ｍＭ、約１４．８ｍＭ、約１４．９ｍＭ、約１５．０ｍＭ、約１５．１ｍＭ 約１５．２ｍＭ、約１５．３ｍＭ、約１５．４、ｍＭ、又は約１５．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．６ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．７ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．８ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１４．９ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１５．０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１５．１ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１５．２ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１５．３ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１５．４ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、約１５．５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムの濃度は、１４．９ｍＭである。

【0215】

本明細書における一塩基性リン酸ナトリウムの濃度のいずれも、体積当たりの重量、例えば、ｍｇ／ｍｌの用語で表すことができる。当業者は、本明細書に開示されるｍＭ濃度を体積当たりの重量濃度に容易に変換することができるであろう。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．４２ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１４．２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．６ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．８ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１．９ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．１ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．１３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．２ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．６ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．７ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．７５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．８ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約２．９ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．７５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．８ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．８３ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．８５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約３．９ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約４．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約４．２５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約４．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約４．７５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約５．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約６．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約６．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約７．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約７．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約８．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約８．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約９．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約９．５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１１．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１２．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１３．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１４．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、リン酸ナトリウムは、組成物中に、少なくとも約１４．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0216】

ＩＩ．Ｅ．糖
いくつかの態様において、組成物中に存在する糖は、単糖、二糖、三糖、又は任意の他の糖である。いくつかの態様において、糖は、スクロースである。いくつかの態様において、糖は、トレハロースである。

【0217】

組成物中の好適な量のスクロース又はトレハロースは、組成物を安定化し、かつ／又はいずれの凝集体も減少させる。いくつかの態様において、医薬組成物は、（ｉ）細胞外小胞、及び（ｉｉ）約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース又はトレハロースである糖を含む。

【0218】

本明細書に開示する糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、５％ｗ／ｖの濃度で、１％ｗ／ｖのスクロースを含む組成物よりも優れた安定性を提供することができる。特に、（ｉ）細胞外小胞、例えば、エクソソーム及び（ｉｉ）約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース又はトレハロースである糖を含む医薬組成物は、（ｉ）ＥＶの低下した凝集、（ｉｉ）ＥＶの改善した安定性、（ｉｉｉ）ＥＶアーキテクチャの改善した完全性、（ｉｖ）ＥＶ上又はＥＶ中に含まれた操作されたタンパク質の改善した安定性、及び（ｖ）小分子薬物又はタンパク質などの受動的にロード又はコンジュゲートされた物質の改善した安定性を含むが、これらに限定されない利点を提供する。いくつかの態様において、利点は、ＡＳＯの改善した濾過性及び低下した解離速度を更に含む。いくつかの態様において、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば１％の濃度でスクロース又はトレハロースを含む参照組成物と比較して、低下した凝集を有する。いくつかの態様において、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば１％の濃度でスクロース又はトレハロースを含む参照組成物と比較して、改善した安定性を有する。いくつかの態様において、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば１％の濃度でスクロース又はトレハロースを含む参照組成物と比較して、ＥＶアーキテクチャの改善した完全性を有する。

【0219】

いくつかの態様において、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば１％の濃度でスクロース又はトレハロースを含む参照組成物と比較して、ＥＶ上又はＥＶ中に含まれる操作されたタンパク質の改善した安定性を有する。

【0220】

いくつかの態様において、組成物は、１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、例えば１％の濃度でスクロース又はトレハロースを含む参照組成物と比較して、小分子薬物又はタンパク質などの受動的にロード又はコンジュゲートされた物質の改善した安定性を有する。

【0221】

他の態様において、組成物は、５．５％ｗ／ｖ、６％ｗ／ｖ、７％ｗ／ｖ、８％ｗ／ｖ、９％ｗ／ｖ、又は１０％ｗ／ｖを超える濃度でスクロース又はトレハロースを含む参照組成物と比較して、改善した安定性を有する。

【0222】

いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１％～少なくとも約１０％、少なくとも約２％～少なくとも約９％、少なくとも約３％～少なくとも約８％、少なくとも約４％～少なくとも約７％、少なくとも約４％～少なくとも約６％、少なくとも約３％～少なくとも約７％、少なくとも約５％～少なくとも約１０％、少なくとも約５％～少なくとも約９％、少なくとも約５％～少なくとも約８％、又は少なくとも約５％～少なくとも約７％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約２％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約３％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約４％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約５％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約６％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約７％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約８％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約９％の濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１０％の濃度で存在する。

【0223】

いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約２％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約２．５％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約３％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約４％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約５％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約６％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約７％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約８％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約９％のスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１０％のスクロースを含む。

【0224】

いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約２％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約３％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約４％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約５％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約６％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約７％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約８％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約９％のトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１０％のトレハロースを含む。

【0225】

いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約２００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌ、又は少なくとも１４０ｍｇ／ｍｌ～少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１４６ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１４５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１３５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１５５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。いくつかの態様において、糖、例えば、スクロース又はトレハロースは、組成物中に、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。

【0226】

いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１３５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１４５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１４６ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１５５ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌのスクロースを含む。

【0227】

いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１３５ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１４５ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１４６ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１５５ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌのトレハロースを含む。

【0228】

特定の態様において、組成物は、少なくとも約２．５％のスクロースを含み、組成物は、約２％未満のスクロースを含む同様の組成物と比較して改善した安定性を有する。

【0229】

ＩＩ．Ｆ．導電率
いくつかの態様において、本開示の組成物は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する。いくつかの態様において、導電率は、６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、又は約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％、又は約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。

【0230】

いくつかの態様において、組成物は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％～約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％の導電率を有する。いくつかの態様において、導電率は、約６ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、約７ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、約８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、約９ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、約１０ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、７．２３ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。いくつかの態様において、導電率は、８．８ｍＳ／ｃｍ＋／－１０％である。

【0231】

ＩＩ．Ｇ．抗酸化剤
いくつかの態様において、本開示の組成物は、抗酸化剤を更に含む。いくつかの態様において、抗酸化剤には、Ｄ－メチオニン、Ｌ－メチオニン、アスコルビン酸、エリトルビン酸、アスコルビン酸Ｎａ、チオグリセロール、システイン、アセチルシステイン、シスチン、ジチオエリスリトール、グルタチオン、トコフェロール、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、重硫酸ナトリウム、亜ジチオン酸ナトリウム、Ａ－トコフェロール、γ－トコフェロール、没食子酸プロピル、パルミチン酸アスコルビル、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、チオ硫酸ナトリウム、没食子酸プロピル、ビタミンＣ、Ｎ－アセチルシステイン、セレニウム、及びチオグリコール酸ナトリウムが含まれ、いくつかの態様において、抗酸化剤は、メチオニンである。他の態様において、抗酸化剤は、Ｄ－メチオニンである。他の態様において、抗酸化剤は、Ｌ－メチオニンである。

【0232】

いくつかの態様において、組成物は、チオ硫酸又はその塩を含む。いくつかの態様において、チオ硫酸又はその塩は、チオ硫酸ナトリウムを含む。

【0233】

いくつかの態様において、本明細書に開示の組成物は、抗還元剤を含む。いくつかの態様において、抗還元剤は、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＣｕＳＯ４、Ｓ－アデノシルメチオニン、システイン、又はそれらの任意の組み合わせを含む。

【0234】

ＩＩ．Ｈ．プロテアーゼ阻害剤
いくつかの態様において、本明細書に開示される組成物は、プロテアーゼ阻害剤を含む。チオレドキシンなどのタンパク質は、ジスルフィド結合を有するタンパク質を還元することができる。ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、及びＣｕＳＯ４などの阻害剤の添加は、ヘキソキナーゼなどのメタロプロテアーゼの活性を特に低下させることができる。ＥＥＧＴＡ／ＥＤＴＡは、二価カチオンをキレート化することによって阻害する。したがって、いくつかの態様において、組成物は、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡ、ＣｕＳＯ４、及びそれらの任意の組み合わせから選択されるプロテアーゼ阻害剤を更に含む。いくつかの態様において、温度は、プロテアーゼの活性を低下させるために低下される。

【0235】

ＩＩ．Ｉ．組成物の特徴
本開示の組成物は、組成物のＥＶが、変動する温度条件下、例えば、凍結及び／若しくは解凍並びに／又は対象に投与されたときに安定であるように製剤化されている。拘束されることを望むものではないが、本開示の糖、例えば、約５％ｗ／ｖのスクロースと、リン酸カリウム及びリン酸ナトリウムとの本開示の特定の比率での組み合わせは、組成物及びその中に含有されるＥＶに優れた安定性を提供すると考えられる。例えば、いくつかの態様において、本開示の組成物は、様々な長さの期間及び様々な温度で保存することが可能であり、細胞外小胞、例えば、エクソソームの安定性は低下しない。更に、いくつかの態様において、本開示の組成物は、周囲温度で液体として製剤化し、その後、組成物を－８０℃の冷凍庫に入れて凍結させ、次いで解凍することができる。したがって、いくつかの態様において、組成物は、凍結前に液体として保存することができ、組成物は、凍結中に固体として保存することができ、組成物は、以下に記載されるように、ＥＶの安定性を損なうことなく、解凍後に液体として保存することができる。

【0236】

いくつかの態様において、組成物は、凍結する前に、液体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、凍結前に、約２５℃～約１℃の温度で液体として保存することができ、ＥＶ、例えば、エクソソームの安定性は低下しない。いくつかの態様において、組成物は、凍結前に、ＥＶ、例えば、エクソソームの安定性を損なうことなく、約２５℃～約１℃で液体として保存することができる。

【0237】

いくつかの態様において、組成物は、凍結する前に、少なくとも約４時間、少なくとも約１０時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１５時間、少なくとも約２０時間、少なくとも約２４時間、液体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、凍結する前に、約４時間～約１２時間、約５時間～約１２時間、約６時間～約１２時間、約４時間～約２４時間、約６時間～約２４時間、約１２時間～約２４時間、又は約４時間～約１６時間、液体として保存される。いくつかの態様において、組成物は、凍結する前に、３６時間未満、３０日未満、２４時間未満、２３時間未満、２２時間未満、２１時間未満、２０時間未満、１９時間未満、１８時間未満、１７時間未満、１６時間未満、１５時間未満、１４時間未満、１３時間未満、１２時間未満、１１時間未満、１０時間未満、９時間未満、８時間未満、７時間未満、６時間未満、５時間未満、又は４時間未満、液体として保存することができる。

【0238】

いくつかの態様において、組成物は、凍結する前に、約１週間、約４℃で液体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、４℃で最大１週間安定であることができる。いくつかの態様において、組成物は、凍結する前に、約４℃で液体として約１週間保存し、次いで、それを必要とする対象に投与することができる。

【0239】

いくつかの態様において、組成物は、解凍される前に長期間、凍結した固体として保存することが可能である。いくつかの態様において、組成物は、ゼロ及びゼロ未満の温度、例えば、約０℃～－８０℃又は－８０℃の温度で、固体として保存することができ、ＥＶ、例えば、エクソソームの安定性は低下しない。いくつかの態様において、組成物は、約０℃～－８０℃又は－８０℃の温度で、凍結した固体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、約０℃～－５０℃の温度で、凍結した固体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、約０℃～－２０℃の温度で、凍結した固体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、約０℃～－１５℃の温度で、凍結した固体として保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、－８０℃で最大６ヶ月間保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、－８０℃で１年間安定であることができる。いくつかの態様において、組成物は、－８０℃で２年間安定であることができる。

【0240】

本開示の組成物は、様々な長さの時間にわたって凍結した固体として保存し、その後それを必要とする対象への投与のための調製時に解凍することができる。いくつかの態様において、解凍した液体は、ＥＶ、例えば、エクソソームの安定性を損なうことなく、投与前に様々な長さ及び様々な温度で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍し、約１℃～約２５℃の温度で液体として保存することが可能であり、ＥＶ、例えば、エクソソームの安定性は低下しない。

【0241】

いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約３℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約４℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約５℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約６℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約７℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約８℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約９℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１０℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１１℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１２℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１３℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１４℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１５℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１６℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１７℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１８℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約１９℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２０℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２１℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２２℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２３℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２４℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、約２５℃で保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍した液体として、４℃で約１週間保存することができる。いくつかの態様において、組成物は、解凍して液体として、４℃で最大１週間、安定であることができる。

【0242】

いくつかの態様において、組成物を保存し、次いで、それを必要とする対象に直接投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、２５℃で最大２４時間保存し、次いで、それを必要とする対象に直接投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、４℃で最大３日間保存し、次いで、それを必要とする対象に直接投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、４℃で最大７日間保存し、次いで、それを必要とする対象に直接投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、－８０℃で最大６ヶ月間保存し、解凍し、次いで、それを必要とする対象に直接投与することができる。

【0243】

ＩＩ．Ｊ．例示的な組成物
いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0244】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％ｗ／ｖの濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0245】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
ｂ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３６５～約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0246】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
ｂ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0247】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％の濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0248】

いくつかの態様において、組成物は、
ｆ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
ｇ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｈ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｉ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｊ．約１５ｍＭの濃度での二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0249】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％の濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0250】

いくつかの態様において、組成物は、
ｆ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む、細胞外小胞、
ｇ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｈ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｉ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｊ．約１５ｍＭの濃度での二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0251】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％の濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0252】

いくつかの態様において、組成物は、
ｆ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む、細胞外小胞、
ｇ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｈ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｉ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｊ．約１５ｍＭの濃度での二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0253】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％の濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0254】

いくつかの態様において、組成物は、
ｆ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む、細胞外小胞、
ｇ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｈ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｉ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｊ．約１５ｍＭの濃度での二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0255】

いくつかの態様において、組成物は、
ａ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む、細胞外小胞、
ｂ．約５％の濃度でスクロース、
ｃ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｄ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｅ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0256】

いくつかの態様において、組成物は、
ｆ．ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む、細胞外小胞、
ｇ．約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
ｈ．約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
ｉ．約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
ｊ．約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウム七水和物を含み、
組成物は、７．２のｐＨの溶液中にあり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0257】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む。いくつかの態様において、ＡＳＯは、核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む。

【0258】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）スクロース、
（ｃ）塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
スクロースは、約７３ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり、
塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0259】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞、
（ｂ）スクロース、
（ｃ）塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
スクロースは、約７３ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、約１４６ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり、
塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0260】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。

【0261】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞、
（ｂ）スクロース、
（ｃ）塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
スクロースは、約２．５％、約２．６％、約２．７％、約２．８％、約２．９％、約３．０％、約３．１％、約３．２％、約３．３％、約３．４％、約３．５％、約３．６％、約３．７％、約３．８％、約３．９％、約４．０％、約４．１％、約４．２％、約４．３％、約４．４％、約４．５％、約４．６％、約４．７％、約４．８％、約４．９％、及び約５．０％から選択される濃度であり、
塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、約１００ｍＭ、約１０５ｍＭ、約１１０ｍＭ、約１１５ｍＭ、約１２０ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１３０ｍＭ、約１３５ｍＭ、約１４０ｍＭ、約１４５ｍＭ、及び約１５０ｍＭから選択される濃度であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0262】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む。

【0263】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約７３ｍＭ～約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0264】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約２．５％～約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0265】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約７３ｍＭ～約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0266】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約２．５％～約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0267】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0268】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、ＳＴＡＴ６転写物内の核酸配列に相補的である長さが１０～３０ヌクレオチドの連続したヌクレオチド配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約２．５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0269】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、配列番号９１～９３から選択される核酸配列を含む。

【0270】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0271】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0272】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約４．５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0273】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約４％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0274】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約３．５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0275】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約３％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0276】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが、配列番号９１～１９３から選択される核酸配列を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約２．５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0277】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0278】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＡＡＡＧＧＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＣ（配列番号１４４）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0279】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0280】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＣＴＧＡＧＴＣＧＣＴＧＡＡＧＣＧＧ（配列番号１４５）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0281】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0282】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＣＣＴＴＧＴＡＣＴＴＴＴＧＣＡＴＡＧ（配列番号１９３）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0283】

特定の態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約１４６ｍＭの濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0284】

いくつかの態様において、組成物は、
（ａ）ＡＳＯを含む細胞外小胞であって、ＡＳＯが核酸配列ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＣＧＧＡＴＴＣＧＧＴＣ（配列番号１８５）を含む、細胞外小胞、
（ｂ）約５％の濃度でスクロース、
（ｃ）約１００ｍＭの濃度で塩化ナトリウム、
（ｄ）約５ｍＭの濃度で一塩基性リン酸カリウム、
（ｅ）約１５ｍＭの濃度で二塩基性リン酸ナトリウムを含み、
（ｆ）組成物のｐＨは、約７．２であり、
組成物は、約３９５ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧濃度を含む。

【0285】

いくつかの態様において、組成物は、凍結乾燥されている。

【0286】

ＩＩＩ．細胞外小胞、例えば、エクソソーム
本明細書において、対象の免疫系を調節することが可能である改変ＥＶ、例えば、エクソソームが開示される。本開示において有用なＥＶ、例えば、エクソソームは、少なくとも１つの外因性の生物学的に活性な部分を産生するように操作されている。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、２つの外因性の生物学的に活性な部分を含む。いくつかの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、３つの外因性の生物学的に活性な部分を含む。他の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、４つの外因性の生物学的に活性な部分を含む。更なる態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、５つ以上の外因性の生物学的に活性な部分を含む。いずれの態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれ以上の外因性の生物学的に活性な部分を含む。

【0287】

上記に記載されるように、本明細書に記載のＥＶ、例えば、エクソソームは、約２０～３００ｎｍの直径を有する細胞外小胞である。特定の態様において、本開示のＥＶ、例えば、エクソソームは、約２０～２９０ｎｍ、２０～２８０ｎｍ、２０～２７０ｎｍ、２０～２６０ｎｍ、２０～２５０ｎｍ、２０～２４０ｎｍ、２０～２３０ｎｍ、２０～２２０ｎｍ、２０～２１０ｎｍ、２０～２００ｎｍ、２０～１９０ｎｍ、２０～１８０ｎｍ、２０～１７０ｎｍ、２０～１６０ｎｍ、２０～１５０ｎｍ、２０～１４０ｎｍ、２０～１３０ｎｍ、２０～１２０ｎｍ、２０～１１０ｎｍ、２０～１００ｎｍ、２０～９０ｎｍ、２０～８０ｎｍ、２０～７０ｎｍ、２０～６０ｎｍ、２０～５０ｎｍ、２０～４０ｎｍ、２０～３０ｎｍ、３０～３００ｎｍ、３０～２９０ｎｍ、３０～２８０ｎｍ、３０～２７０ｎｍ、３０～２６０ｎｍ、３０～２５０ｎｍ、３０～２４０ｎｍ、３０～２３０ｎｍ、３０～２２０ｎｍ、３０～２１０ｎｍ、３０～２００ｎｍ、３０～１９０ｎｍ、３０～１８０ｎｍ、３０～１７０ｎｍ、３０～１６０ｎｍ、３０～１５０ｎｍ、３０～１４０ｎｍ、３０～１３０ｎｍ、３０～１２０ｎｍ、３０～１１０ｎｍ、３０～１００ｎｍ、３０～９０ｎｍ、３０～８０ｎｍ、３０～７０ｎｍ、３０～６０ｎｍ、３０～５０ｎｍ、３０～４０ｎｍ、４０～３００ｎｍ、４０～２９０ｎｍ、４０～２８０ｎｍ、４０～２７０ｎｍ、４０～２６０ｎｍ、４０～２５０ｎｍ、４０～２４０ｎｍ、４０～２３０ｎｍ、４０～２２０ｎｍ、４０～２１０ｎｍ、４０～２００ｎｍ、４０～１９０ｎｍ、４０～１８０ｎｍ、４０～１７０ｎｍ、４０～１６０ｎｍ、４０～１５０ｎｍ、４０～１４０ｎｍ、４０～１３０ｎｍ、４０～１２０ｎｍ、４０～１１０ｎｍ、４０～１００ｎｍ、４０～９０ｎｍ、４０～８０ｎｍ、４０～７０ｎｍ、４０～６０ｎｍ、４０～５０ｎｍ、５０～３００ｎｍ、５０～２９０ｎｍ、５０～２８０ｎｍ、５０～２７０ｎｍ、５０～２６０ｎｍ、５０～２５０ｎｍ、５０～２４０ｎｍ、５０～２３０ｎｍ、５０～２２０ｎｍ、５０～２１０ｎｍ、５０～２００ｎｍ、５０～１９０ｎｍ、５０～１８０ｎｍ、５０～１７０ｎｍ、５０～１６０ｎｍ、５０～１５０ｎｍ、５０～１４０ｎｍ、５０～１３０ｎｍ、５０～１２０ｎｍ、５０～１１０ｎｍ、５０～１００ｎｍ、５０～９０ｎｍ、５０～８０ｎｍ、５０～７０ｎｍ、５０～６０ｎｍ、６０～３００ｎｍ、６０～２９０ｎｍ、６０～２８０ｎｍ、６０～２７０ｎｍ、６０～２６０ｎｍ、６０～２５０ｎｍ、６０～２４０ｎｍ、６０～２３０ｎｍ、６０～２２０ｎｍ、６０～２１０ｎｍ、６０～２００ｎｍ、６０～１９０ｎｍ、６０～１８０ｎｍ、６０～１７０ｎｍ、６０～１６０ｎｍ、６０～１５０ｎｍ、６０～１４０ｎｍ、６０～１３０ｎｍ、６０～１２０ｎｍ、６０～１１０ｎｍ、６０～１００ｎｍ、６０～９０ｎｍ、６０～８０ｎｍ、６０～７０ｎｍ、７０～３００ｎｍ、７０～２９０ｎｍ、７０～２８０ｎｍ、７０～２７０ｎｍ、７０～２６０ｎｍ、７０～２５０ｎｍ、７０～２４０ｎｍ、７０～２３０ｎｍ、７０～２２０ｎｍ、７０～２１０ｎｍ、７０～２００ｎｍ、７０～１９０ｎｍ、７０～１８０ｎｍ、７０～１７０ｎｍ、７０～１６０ｎｍ、７０～１５０ｎｍ、７０～１４０ｎｍ、７０～１３０ｎｍ、７０～１２０ｎｍ、７０～１１０ｎｍ、７０～１００ｎｍ、７０～９０ｎｍ、７０～８０ｎｍ、８０～３００ｎｍ、８０～２９０ｎｍ、８０～２８０ｎｍ、８０～２７０ｎｍ、８０～２６０ｎｍ、８０～２５０ｎｍ、８０～２４０ｎｍ、８０～２３０ｎｍ、８０～２２０ｎｍ、８０～２１０ｎｍ、８０～２００ｎｍ、８０～１９０ｎｍ、８０～１８０ｎｍ、８０～１７０ｎｍ、８０～１６０ｎｍ、８０～１５０ｎｍ、８０～１４０ｎｍ、８０～１３０ｎｍ、８０～１２０ｎｍ、８０～１１０ｎｍ、８０～１００ｎｍ、８０～９０ｎｍ、９０～３００ｎｍ、９０～２９０ｎｍ、９０～２８０ｎｍ、９０～２７０ｎｍ、９０～２６０ｎｍ、９０～２５０ｎｍ、９０～２４０ｎｍ、９０～２３０ｎｍ、９０～２２０ｎｍ、９０～２１０ｎｍ、９０～２００ｎｍ、９０～１９０ｎｍ、９０～１８０ｎｍ、９０～１７０ｎｍ、９０～１６０ｎｍ、９０～１５０ｎｍ、９０～１４０ｎｍ、９０～１３０ｎｍ、９０～１２０ｎｍ、９０～１１０ｎｍ、９０～１００ｎｍ、１００～３００ｎｍ、１１０～２９０ｎｍ、１２０～２８０ｎｍ、１３０～２７０ｎｍ、１４０～２６０ｎｍ、１５０～２５０ｎｍ、１６０～２４０ｎｍ、１７０～２３０ｎｍ、１８０～２２０ｎｍ、又は１９０～２１０ｎｍの直径を有する。本明細書に記載のＥＶ、例えば、エクソソームのサイズは、以下に記載される方法に従って測定することができる。

【0288】

いくつかの態様において、本開示のＥＶ、例えば、エクソソームは、内面及び外面を含む、二重脂質膜（「ＥＶ、例えば、エクソソーム、膜」）を含む。特定の態様において、内面は、ＥＶ、例えば、エクソソームの内核（すなわち、管腔）に面する。特定の態様において、外面は、産生細胞又は標的細胞のエンドソーム、多胞体、又は膜／細胞質と接触していることができる。

【0289】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームの膜は、脂質及び脂肪酸を含む。いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームの膜は、リン脂質、糖脂質、脂肪酸、スフィンゴ脂質、ホスホグリセリド、ステロール、コレステロール、及びホスファチジルセリンを含む。

【0290】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームの膜は、内側リーフレット及び外側リーフレットを含む。内側リーフレット及び外側リーフレットの組成は、当該技術分野で既知の二重層横断分布アッセイによって決定することができ、例えば、Ｋｕｙｐｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９８５ ８１９：１７０を参照されたい。いくつかの態様において、外側リーフレットの組成は、およそ７０～９０％のコリンリン脂質、およそ０～１５％の酸性リン脂質、及びおよそ５～３０％のホスファチジルエタノールアミンである。いくつかの態様において、内側リーフレットの組成は、およそ１５～４０％のコリンリン脂質、およそ１０～５０％の酸性リン脂質、及びおよそ３０～６０％のホスファチジルエタノールアミンである。

【0291】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームの膜は、グリカンなどの１つ以上の多糖を含む。

【0292】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームの膜は、複数の外因性の生物学的に活性な部分をＥＶ、例えば、エクソソームに固定することが可能である（例えば、管腔表面又は外面のいずれかで）、１つ以上の足場部分を更に含む。いくつかの態様において、足場部分は、複数の外因性の生物学的に活性な部分のうちの少なくとも１つをＥＶに固定又は連結する。いくつかの態様において、足場部分は、複数（例えば、少なくとも２つ）の外因性の生物学的に活性な部分の各々をＥＶに固定又は連結する。特定の態様において、足場部分は、ポリペプチド（「エクソソームタンパク質」）である。他の態様において、足場部分は、非ポリペプチド部分である。いくつかの態様において、エクソソームタンパク質は、エクソソーム膜で濃縮される、膜貫通タンパク質、内在性タンパク質、及び末梢タンパク質などの様々な膜タンパク質を含む。それらは、様々なＣＤタンパク質、トランスポーター、インテグリン、レクチン、及びカドヘリンを含むことができる。特定の態様において、足場部分（例えば、エクソソームタンパク質）は、足場Ｘを含む。更なる態様において、足場部分（例えば、エクソソームタンパク質）は、１つを超える足場Ｘ部分を含む。

【0293】

いくつかの態様において、本明細書に開示されるＥＶ、例えば、エクソソームは、１つ以上のペイロード（例えば、生物学的に活性な部分）を標的に送達することが可能である。したがって、特定の態様において、ＥＶ（例えば、エクソソーム）は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の異なるペイロードを含む。ペイロードは、ＥＶと接触している標的（例えば、標的細胞）に作用する薬剤である。接触することは、インビトロ又は対象において生じ得る。ＥＶに導入することができるペイロードの非限定的な例としては、ヌクレオチド（例えば、検出可能な部分若しくは毒素を含んでいるか又は転写を破壊するヌクレオチド）、核酸（例えば、酵素などのポリペプチドをコードするＤＮＡ若しくはｍＲＮＡ分子、又はｍｉＲＮＡ、ｄｓＤＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、若しくはｓｉＲＮＡなどの調節機能を有するＲＮＡ分子）、ＭＳ２などのＲＮＡ結合タンパク質、アミノ酸（例えば、検出可能な部分又は翻訳を破壊する毒素を含むアミノ酸）、ポリペプチド（例えば、酵素）、脂質、炭水化物、及び小分子（例えば、小分子薬物及び毒素）などの薬剤が挙げられる。いくつかの態様において、ペイロードは、外因性の生物学的に活性な部分（例えば、本明細書に開示されるもの）を含む。

【0294】

ＩＩＩ．Ａ．足場部分、例えば、足場Ｘ又は足場Ｙ
いくつかの態様において、本開示のＥＶ、例えば、エクソソームは、その組成物に改変された膜を含む。例えば、それらの膜組成物は、膜のタンパク質、脂質、又はグリカン含有量を変更することによって改変することができる。

【0295】

いくつかの態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、ＰＥＧ誘導融合及び／又は超音波融合などの化学的方法及び／又は物理的方法によって生成される。他の態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、遺伝子操作によって生成される。遺伝子改変された産生細胞又は遺伝子改変された細胞の子孫から産生されたＥＶ、例えばエクソソームは、改変された膜組成物を含むことができる。いくつかの態様において、表面操作されたＥＶ、例えば、エクソソームは、足場部分（例えば、エクソソームタンパク質、例えば、足場Ｘ）をより高いか若しくはより低い密度（例えば、より高い数）で有するか、又は足場部分のバリアント若しくは断片を含む。

【0296】

例えば、表面（例えば、足場Ｘ）操作されたＥＶは、足場部分（例えば、エクソソームタンパク質、例えば、足場Ｘ）をコードする外因性配列又はそのバリアント若しくは断片で形質転換された細胞（例えば、ＨＥＫ２９３細胞）から産生することができる。外因性配列から発現された足場部分を含むＥＶは、改変された膜組成物を含むことができる。

【0297】

足場部分の様々な改変又は断片は、本開示の態様のために使用することができる。例えば、結合剤に対する増強した親和性を有するように改変された足場部分は、結合剤を使用して精製することができる表面操作されたＥＶを生成するために使用することができる。ＥＶ及び／又は膜をより効果的に標的化するように改変された足場部分を使用することができる。エクソソーム膜を特異的及び効果的に標的とするために必要とされる最小断片を含むように改変された足場部分も使用することができる。

【0298】

足場部分の非限定的な例としては、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（ＰＴＧＦＲＮ）、ベイシジン（ＢＳＧ）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー２（ＩＧＳＦ２）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー３（ＩＧＳＦ３）、免疫グロブリンスーパーファミリーメンバー８（ＩＧＳＦ８）、インテグリンベータ－１（ＩＴＧＢ１）、インテグリンアルファ－４（ＩＴＧＡ４）、４Ｆ２細胞表面抗原重鎖（ＳＬＣ３Ａ２）、及びＡＴＰトランスポータータンパク質のクラス（ＡＴＰ１Ａ１、ＡＴＰ１Ａ２、ＡＴＰ１Ａ３、ＡＴＰ１Ａ４、ＡＴＰ１Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ１、ＡＴＰ２Ｂ２、ＡＴＰ２Ｂ３、ＡＴＰ２Ｂ）が挙げられる。特定の態様において、足場部分は、タンパク質全体である。他の態様において、足場部分は、タンパク質断片（例えば、機能的断片）である。

【0299】

他の態様において、本開示に有用な足場部分、第１の足場部分、第２の足場部分、及び／又は第３の足場部分は、従来のエクソソームタンパク質を含み、限定されないが、テトラスパニン分子（例えば、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ９、及び他）、リソソーム関連膜タンパク質２（ＬＡＭＰ２及びＬＡＭＰ２Ｂ）、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、ＧＰＩアンカータンパク質、ラクトアドヘリン及びその断片、これらのタンパク質若しくはその断片のいずれかに対して親和性を有するペプチド、又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。

【0300】

いくつかの態様において、本明細書に記載の表面（例えば、足場Ｘ）－操作されたＥＶは、当該技術分野で既知のＥＶと比較して優れた特徴を示す。例えば、表面（例えば、足場Ｘ）－操作されたＥＶは、天然に存在するＥＶ又は従来のエクソソームタンパク質を使用して産生されたＥＶよりも、それらの表面により高度に濃縮された改変タンパク質を含む。更に、本開示の表面（例えば、足場Ｘ）－操作されたＥＶは、天然に存在するＥＶ又は従来のエクソソームタンパク質を使用して産生されたＥＶと比較して、より大きな、より特異的な、又はより制御された生物学的活性を有することができる。

【0301】

いくつかの態様において、足場Ｘは、プロスタグランジンＦ２受容体ネガティブレギュレーター（ＰＴＧＦＲＮポリペプチド）を含む。ＰＴＧＦＲＮタンパク質は、ＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ－１）、Ｇｌｕ－Ｔｒｐ－Ｉｌｅ ＥＷＩモチーフ含有タンパク質Ｆ（ＥＷＩ－Ｆ）、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体調節タンパク質、プロスタグランジンＦ２－アルファ受容体関連タンパク質、又はＣＤ３１５とも称することができる。ヒトＰＴＧＦＲＮタンパク質の全長アミノ酸配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ９Ｐ２Ｂ２）は、配列番号１として表２に示される。ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチド（配列番号１のアミノ酸１～２５）、細胞外ドメイン（配列番号１のアミノ酸２６～８３２）、膜貫通ドメイン（配列番号１のアミノ酸８３３～８５３）、及び細胞質ドメイン（配列番号１のアミノ酸８５４～８７９）を含む。成熟ＰＴＧＦＲＮポリペプチドは、シグナルペプチドを伴わない配列番号１、すなわち、配列番号１のアミノ酸２６～８７９からなる。いくつかの態様において、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインを含む。他の態様において、本開示に有用なＰＴＧＦＲＮポリペプチド断片は、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの膜貫通ドメインと、（ｉ）膜貫通ドメインのＮ末端に、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０個のアミノ酸、（ｉｉ）膜貫通ドメインのＣ末端に、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、若しくは少なくとも２５個のアミノ酸、又は（ｉ）及び（ｉｉ）の両方と、を含む。

【0302】

いくつかの態様において、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドの断片は、ＩｇＶなどの１つ以上の機能的又は構造的ドメインを欠いている。

【0303】

他の態様において、足場Ｘは、配列番号１のアミノ酸２６～８７９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、足場Ｘは、配列番号９と少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、又は７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号９のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、又はそれらの任意の組み合わせであることができる。いくつかの態様において、足場Ｘは、配列番号９のアミノ酸配列と、配列番号９のＮ末端及び／又はＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、又は２０個以上のアミノ酸と、を含む。

【0304】

他の態様において、足場Ｘは、配列番号６、７、８、１０、１１、又は１２と少なくとも約少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は約１００％同一のアミノ酸配列を含む。他の態様において、足場Ｘは、１つのアミノ酸変異、２つのアミノ酸変異、３つのアミノ酸変異、４つのアミノ酸変異、５つのアミノ酸変異、６つのアミノ酸変異、又は７つのアミノ酸変異を除いて、配列番号６、７、８、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列を含む。変異は、置換、挿入、欠失、又はそれらの任意の組み合わせであることができる。いくつかの態様において、足場Ｘは、配列番号６、７、８、１０、１１、又は１２のアミノ酸配列と、配列番号６、７、８、１０、１１、又は１２のＮ末端及び／又はＣ末端に１個のアミノ酸、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、又は２０個以上のアミノ酸と、を含む。

【表2】

【0305】

他の足場Ｘタンパク質の非限定的な例は、米国特許第１０，１９５，２９０Ｂ１号及び同第１０，５６１，７４０Ｂ２号に見出すことができ、それらの各々は、参照によりその全体が組み込まれる。

【0306】

いくつかの態様において、足場Ｘを使用して、任意の部分を、ＥＶ、例えばエクソソームの管腔表面及び外面に、同時に連結することができる。例えば、ＰＴＧＦＲＮポリペプチドを使用して、ＥＶ、例えば、エクソソームの外面に加えて、管腔内（例えば、管腔表面上）で抗原、アジュバント、及び／又は免疫調節物質を連結することができる。したがって、特定の態様において、足場Ｘは、二重の目的、例えば、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面での抗原及び外面でのアジュバント若しくは免疫調節剤、ＥＶ、例えば、エクソソームの外面での抗原及び管腔表面でのアジュバント若しくは免疫調節剤、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面でのアジュバント及び外面での免疫調節剤、又はＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面での免疫調節剤及び外面でのアジュバントのために使用することができる。

【0307】

いくつかの態様において、足場タンパク質は、足場Ｙを含む。本明細書に開示の組成物及び方法に使用することができる足場Ｙタンパク質の非限定的な例には、例えば、国際公開第２０１９／０９９９４２号又は同第２０２０／１０１７４０号に開示されるこれらの足場Ｙタンパク質が含まれ、それらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの態様において、足場Ｙタンパク質は、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質（「ＭＡＲＣＫＳタンパク質」）、ミリストイル化アラニンリッチプロテインキナーゼＣ基質様１（「ＭＡＲＣＫＳＬ１タンパク質」）、脳酸可溶性タンパク質１（「ＢＡＳＰ１タンパク質」）から選択される。いくつかの態様において、足場Ｙタンパク質は、タンパク質全体又はその断片（例えば、機能的断片、例えば、ＥＶ、例えば、エクソソームの管腔表面に部分を固定することが可能である最小断片）であることができる。いくつかの態様において、足場Ｙは、部分をＥＶ、例えば、エクソソームの管腔に固定することができる。

【0308】

ＩＩＩ．Ｂ．固定化部分
いくつかの態様において、本明細書に開示されるＡＳＯ又は本明細書に開示される１つ以上のペイロードは、固定化部分に連結することができる。いくつかの態様において、ペイロードをＥＶ（例えば、エクソソーム）の外面及び／又は管腔表面に連結するために使用することができる固定化部分は、ステロール（例えば、コレステロール）、ＧＭ１、脂質（例えば、脂肪酸）、ビタミン、小分子、ペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。

【0309】

いくつかの態様において、固定化部分は、脂質である。脂質固定化部分は、当該技術分野で既知の任意の脂質、例えば、パルミチン酸又はグリコシルホスファチジルイノシトールであることができる。いくつかの態様において、脂質は、脂肪酸、ホスファチド、リン脂質（例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、又はホスファチジルエタノールアミン）、又はそれらの類似体（例えば、ホファチジルコリン、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン、セファリン、若しくはホスファチジルセリン、又はそれらの類似体若しくは部分、例えば、その部分的に加水分解された部分）である。

【0310】

一般に、固定化部分は、化学的に結合される。しかしながら、固定化部分は、ペイロードに酵素的に結合させることができる。

【0311】

本開示の方法を行うために使用することができるいくつかのタイプの膜固定が、以下の表に示される。

【表3】

【0312】

いくつかの態様において、本開示の固定化部分は、本明細書に開示の２つ以上のタイプの固定化部分を含むことができる。例えば、いくつかの態様において、足場部分は、２つの脂質、例えば、リン脂質及び脂肪酸、又は２つのリン脂質、又は２つの脂肪酸、又は脂質及びビタミン、又はコレステロール及びビタミンを含むことができる。

【0313】

いくつかの態様において、本開示に有用な固定化部分は、ステロール、ステロイド、ホパノイド、ヒドロキシステロイド、セコステロイド、又は親油性特性を有するそれらの類似体を含む。いくつかの態様において、固定化部分は、植物ステロール、ミコステロール、又は動物ステロールなどのステロールを含む。例示的な動物ステロールとしては、コレステロール及び２４Ｓ－ヒドロキシコレステロールが挙げられ、例示的な植物ステロールとしては、エルゴステロール（ミコステロール）、カンペステロール、シトステロール、及びスチグマステロールが挙げられる。いくつかの態様において、ステロールは、エルゴステロール、７－デヒドロコレステロール、コレステロール、２４Ｓ－ヒドロキシコレステロール、ラノステロール、シクロアルテノール、フコステロール、サリンゴステロール、カンペステロール、β－シトステロール、シトスタノール、コプロスタノール、アベナステロール、又はスチグマステロールから選択される。ステロールは、遊離ステロール、アシル化（ステロールエステル）、アルキル化（ステリルアルキルエーテル）、硫酸化（硫酸ステロール）、又はそれ自体がアシル化（アシル化ステロールグリコシド）され得るグリコシド部分（ステリルグリコシド）に連結したもののいずれかとして見出され得る。いくつかの態様において、固定化部分は、コレステロールである。

【0314】

いくつかの態様において、固定化部分は、ステロイドを含む。いくつかの態様において、ステロイドは、ジヒドロテストステロン、ウバオール、ヘシゲニン、ジオスゲニン、プロゲステロン、又はコルチゾールから選択される。

【0315】

いくつかの態様において、固定化部分は、脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、短鎖、中鎖、又は長鎖脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、飽和脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、不飽和脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、一価不飽和脂肪酸である。いくつかの態様において、脂肪酸は、オメガ－３又はオメガ－６脂肪酸などの多価不飽和脂肪酸である。

【0316】

いくつかの態様において、固定化部分は、リン脂質を含む。リン脂質は、全ての細胞膜の主要成分である脂質クラスである。それらは、それらの両親媒性特性のために脂質二重層を形成することができる。リン脂質分子の構造は、概して、２つの疎水性脂肪酸「尾部」及びリン酸基からなる親水性「頭部」から構成される。例えば、リン脂質は、以下の式による脂質であることができ、

【化4】

式中、Ｒ_ｐは、リン脂質部分を表し、Ｒ_１及びＲ_２は、同じか又は異なり得る、不飽和を有するか又は有しない脂肪酸部分を表す。

【0317】

いくつかの態様において、ペイロードは、本明細書に開示される固定化部分にリンカーの組み合わせを介して連結され、切断可能及び／又は切断不能なリンカーの任意の組み合わせを含むことができる。いずれの理論にも拘束されることなく、リンカーの組み合わせの機能の１つは、固定化部分とペイロードとの間に最適な間隔を提供することである。

【0318】

ＩＩＩ．Ｃ．リンカー
上記に記載されるように、本開示の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、エクソソーム及びナノ小胞）は、本明細書に開示される１つ以上の外因性の生物学的に活性な部分をＥＶに（例えば、外面に、又は管腔表面上に）連結する１つ以上のリンカーを含むことができる。いくつかの態様において、１つ以上の外因性の生物学的に活性な部分は、ＥＶに直接的に、又は１つ以上の足場部分（例えば、足場Ｘ）を介して連結される。例えば、特定の態様において、１つ以上の外因性の生物学的に活性な部分は、足場Ｘを介してエクソソームの外面に連結される。更なる態様において、１つ以上の外因性の生物学的に活性な部分は、足場Ｘを介してエクソソームの管腔表面に連結される。リンカーは、当該技術分野で既知の任意の化学的部分であることができる。

【0319】

本明細書で使用される場合、「リンカー」という用語は、ペプチド配列若しくはポリペプチド配列（例えば、合成ペプチド配列又はポリペプチド配列）、又は非ポリペプチド、例えば、アルキル鎖を指す。いくつかの態様において、２つ以上のリンカーを直列に連結することができる。複数のリンカーが存在する場合、各リンカーは、同じか又は異なることができる。一般に、リンカーは、可撓性を提供するか、又は立体障害を防止／改善する。リンカーは、典型的には切断されないが、特定の態様において、かかる切断が望ましいものであり得る。したがって、いくつかの態様において、リンカーは、リンカーの配列内に位置し得るか、又はリンカー配列のいずれかの末端でリンカーに隣接し得る、１つ以上のプロテアーゼ切断可能な部位を含むことができる。

【0320】

いくつかの態様において、リンカーは、ペプチドリンカーである。いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、少なくとも６５個、少なくとも７０個、少なくとも７５個、少なくとも８０個、少なくとも８５個、少なくとも９０個、少なくとも９５個、又は少なくとも１００個のアミノ酸を含むことができる。

【0321】

いくつかの態様において、ペプチドリンカーは、合成であり、すなわち、非天然に存在する。一態様において、ペプチドリンカーは、アミノ酸の第１の直鎖配列を、天然には連結又は遺伝子的に融合されていないアミノ酸の第２の直鎖配列に、連結又は遺伝子的に融合するアミノ酸配列を含むペプチド（又はポリペプチド）（例えば、天然又は非天然に存在するペプチド）を含む。例えば、一態様において、ペプチドリンカーは、天然に存在するポリペプチドの改変形態（例えば、付加、置換、又は欠失などの変異を含む）である非天然に存在するポリペプチドを含むことができる。

【0322】

リンカーは、切断に感受性であることができ（「切断可能なリンカー」）、それによって、外因性の生物学的に活性な部分の放出を容易する。

【0323】

いくつかの態様において、リンカーは、「還元－感受性リンカー」である。いくつかの態様において、還元－感受性リンカーは、ジスルフィド結合を含む。いくつかの態様において、リンカーは、「酸不安定性リンカー」である。いくつかの態様において、酸不安定性リンカーは、ヒドラゾンを含む。好適な酸不安定性リンカーにはまた、例えば、シス－アコニット酸リンカー、ヒドラジドリンカー、チオカルバモイルリンカー、又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。

【0324】

いくつかの態様において、ＡＳＯは、リンカーによって、ＥＶ、例えば、エクソソームと会合される。いくつかの態様において、リンカーには、アクリルホスホラミダイト（例えば、ＡＣＲＹＤＩＴＥ（商標））、アデニル化、アジド（ＮＨＳエステル）、ジゴキシゲニン（ＮＨＳエステル）、コレステロール－ＴＥＧ、Ｉ－ＬＩＮＫＥＲ（商標）、アミノ修飾子（例えば、アミノ修飾子Ｃ６、アミノ修飾子Ｃ１２、アミノ修飾子Ｃ６ ｄＴ、又はＵｎｉ－Ｌｉｎｋ（商標）アミノ修飾子）、アルキン、５’ヘキシニル、５－オクタジニルｄＵ、ビオチン化（例えば、ビオチン、ビオチン（アジド）、ビオチンｄＴ、ビオチン－ＴＥＧ、デュアルビオチン、ＰＣビオチン、又はデスチオビオチン）、チオール修飾（チオール修飾子Ｃ３ Ｓ－Ｓ、ジチオール、又はチオール修飾子Ｃ６ Ｓ－Ｓ）、又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。

【0325】

いくつかの態様において、リンカーは、テルペン、例えば、ネロリドール、ファルネソール、リモネン、リナロール、ゲラニオール、カルボン、フェンコン、若しくはメントールなど、脂質、例えば、パルミチン酸若しくはミリスチン酸など、コレステロール、オレイル、レチニル、コレステリル残基、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシヘキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、フェノキサジン、マレイミド部分、グルコリニナーゼ（ｇｌｕｃｏｒｉｎｉｄａｓｅ）型、ＣＬ２Ａ－ＳＮ３８型、葉酸、炭水化物、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、又はそれらの任意の組み合わせを含む。特定の態様において、ＡＳＯは、コレステロールタグを含み、コレステロールタグは、ＥＶの膜、例えば、エクソソームと会合する。いくつかの態様において、リンカーは、切断不能なリンカーを含む。

【0326】

いくつかの態様において、リンカーは、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、スクシンイミド、又はそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの態様において、リンカーは、生物学的に活性な分子をリンカーに連結するスペーサーユニットを含む。

【0327】

いくつかの態様において、１つ以上のリンカーは、一緒に連結される、より小さな単位（例えば、ＨＥＧ、ＴＥＧ、グリセロール、Ｃ２～Ｃ１２アルキルなど）を含む。一態様において、結合は、エステル結合（例えば、ホスホジエステル又はホスホロチオエートエステル）又は他の結合である。

【0328】

いくつかの態様において、リンカーは、Ｒ^３－（Ｏ－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－又はＲ^３－（０－ＣＨ_２－ＣＨ_２）_ｎ－Ｏ－を特徴とするポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含み、Ｒ^３は、水素、メチル、又はエチルであり、ｎは、２～２００の値を有する。いくつかの態様において、リンカーは、スペーサーを含み、スペーサーは、ＰＥＧである。

【0329】

いくつかの態様において、ＰＥＧリンカーは、オリゴ－エチレングリコール、例えば、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレングリコール（ＴＥＧ）、ペンタエチレングリコール、又はヘキサエチレングリコール（ＨＥＧ）リンカーである。

【0330】

ＩＶ．治療方法
ＥＶの投与が対象に有益な効果がある複数の疾患又は状態を治療するための、本開示の医薬組成物の投与が、更に企図される。いくつかの態様において、本明細書に開示の対象における疾患又は状態を治療する方法は、医薬組成物を対象に投与することを含む。

【0331】

いくつかの態様において、本開示は、非経口、局所、静脈内、経口、皮下、動脈内、皮内、経皮、直腸、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、筋肉内の経路によって、又は吸入剤として投与することができる組成物を提供する。いくつかの態様において、ＥＶを含む医薬組成物は、静脈内、例えば、注射によって投与される。いくつかの態様において、組成物は、髄腔内経路によって投与することができる。いくつかの態様において、組成物は、脳室内経路によって投与することができる。経粘膜投与又は経皮投与のために、浸透させるバリアに適切な浸透剤が製剤に使用される。かかる浸透剤は、当該技術分野で一般的に知られており、例えば、経粘膜投与のために、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻腔スプレー又は坐剤の使用によって達成することができる。経皮投与のために、改変されたエクソソームは、当該技術分野で一般的に既知のように、軟膏、膏薬、ゲル、又はクリームに製剤化される。

【0332】

いくつかの態様において、ＥＶは、対象の循環器系に静脈内で投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、好適な液体に注入され、対象の静脈に投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、対象の循環器系に動脈内で投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、好適な液体に注入され、対象の動脈に投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、髄腔内投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達するように、脊柱管への、又はクモ膜下腔への注射を介して投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、対象の１つ以上の腫瘍に腫瘍内で投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、鼻腔内投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、局所投与又は全身投与のいずれかの形態で、鼻を通して吹き込むことができる。特定の態様において、ＥＶは、鼻腔スプレーとして投与される。

【0333】

いくつかの態様において、ＥＶは、腹腔内投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ＥＶは、適切な液体中に注入され、対象の腹膜に注射される。いくつかの態様において、腹腔内投与は、リンパ管へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様において、腹腔内投与は、胸腺、脾臓、及び／又は骨髄へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様において、腹腔内投与は、１つ以上のリンパ節へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様において、腹腔内投与は、頸部リンパ節、鼠径リンパ節、縦隔リンパ節、又は胸骨リンパ節のうちの１つ以上へのＥＶの分布をもたらす。いくつかの態様において、腹腔内投与は、膵臓へのＥＶの分布をもたらす。

【0334】

いくつかの態様において、ＥＶ、例えば、エクソソームは、眼球周囲投与によって対象に投与される。いくつかの態様において、ｓは、眼球周囲組織に注射される。眼球周囲薬物投与には、結膜下、テノン嚢下前部、テノン嚢下後部、及び眼球後部の投与経路が含まれる。

【0335】

いくつかの態様において、治療は、予防的である。いくつかの態様において、本開示でのＥＶは、免疫応答を誘導するために使用される。いくつかの態様において、本開示でのＥＶは、対象にワクチン接種するために使用される。

【0336】

いくつかの態様において、疾患又は状態は、がん、線維症、血友病、糖尿病、成長因子欠乏症、眼疾患、ポンペ病、リソソーム蓄積障害、ムコビシドーシス（ｍｕｃｏｖｉｃｉｄｏｓｉｓ）、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型及びベッカー型筋ジストロフィー、トランスサイレチンアミロイドーシス、血友病Ａ、血友病Ｂ、アデノシン－デアミナーゼ欠乏症、Ｌｅｂｅｒ先天黒内障、Ｘ連鎖副腎白質ジストロフィー、異染性白質ジストロフィー、ＯＴＣ欠乏症、糖原貯蔵障害１Ａ、クリグラー・ナジャール症候群、原発性高シュウ酸尿症１型、急性間欠性ポルフィリン症、フェニルケトン尿症、家族性高コレステロール血症、ムコ多糖症ＶＩ型、α１アンチトリプシン欠損症、並びに高コレステロール血症である。

【0337】

いくつかの態様において、疾患又は障害は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）である。いくつかの態様において、本開示で治療することができる疾患又は障害は、自己免疫疾患である。自己免疫疾患の非限定的な例には、多発性硬化症、末梢神経炎、シェーグレン症候群、関節リウマチ、脱毛症、自己免疫性膵炎、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、セリアック病、デビック病（視神経脊髄炎）、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎障害、分類した脈管炎、強皮症、糖尿病、動脈炎、白斑、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、乾癬、ブドウ膜炎、全身性エリテマトーデス、及びそれらの組み合わせが含まれる。

【0338】

いくつかの態様において、疾患又は障害は、感染性疾患である。特定の態様において、疾患又は障害は、腫瘍ウイルスである。いくつかの態様において、本開示で治療することができる感染症には、ヒトガンマヘルペスウイルス４（エプスタイン・バーウイルス）、インフルエンザＡウイルス、インフルエンザＢウイルス、サイトメガロウイルス、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、コロナウイルス（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ ＣｏＶ）、フィロウイルス（例えば、マールブルグ及びエボラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉａ種（例えば、ｖｉｖａｘ及びｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、チクングンヤウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒトヘルペスウイルス８、単純ヘルペスウイルス２（ＨＳＶ２）、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ種、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ種、Ｐｒｏｔｅｕｓ種、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ種、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒ種、コアグラーゼ陰性ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ（ＣｏＮＳ）、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ種、又はそれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

【0339】

いくつかの態様において、がんは、膀胱がん、子宮頸がん、腎細胞がん、精巣がん、結腸直腸がん、肺がん、頭頸部がん、卵巣がん、リンパ腫、肝臓がん、神経膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓がん、又はそれらの組み合わせである。

【0340】

特定の態様において、がんは、ＳＴＡＴ６タンパク質の増加した発現に関連する。本開示で治療することができるがんの非限定的な例には、結腸直腸がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、膵臓がん（例えば、膵管腺がん（ＰＤＡＣ））、白血病、子宮がん、卵巣がん、膀胱がん、胆管がん、胃がん、又はそれらの任意の組み合わせが含まれる。いくつかの態様において、がんは、結腸腺がん、直腸腺がん、膵臓腺がん、膵管腺がん、膵管腺がん（ＰＤＡＣ）、卵巣漿液性嚢胞腺がん、急性骨髄性白血病、精巣がん（例えば、精巣胚細胞腫瘍、精上皮腫、非精上皮腫、及び絨毛腺がん）、肺腺がん、脳低悪性度神経膠腫、多形性神経膠芽細胞腫、ブドウ膜黒色腫、甲状腺がん、子宮体内膜がん、子宮がん肉腫、褐色細胞腫、傍神経節腫、及びそれらの任意の組み合わせから選択される。特定の態様において、がんは、骨髄増多がん（ｍｙｅｌｏｉｄ－ｒｉｃｈ ｃａｎｃｅｒ）である。いくつかの態様において、がんは、肝臓がんを含む。いくつかの態様において、がんは、肝細胞がん（ＨＣＣ）を含む。いくつかの態様において、がんは、膵管腺がん（ＰＤＡＣ）を含み、いくつかの態様において、がんは、結腸直腸がん（ＣＲＣ）を含む。いくつかの態様において、がんは、卵巣がんを含む。いくつかの態様において、がんは、軟膜腫を含む。

【0341】

がんを有する対象に投与されるとき、特定の態様において、本開示のＥＶは、免疫応答を上方調節し、対象の免疫系の腫瘍標的化を増強することができる。いくつかの態様において、治療されるがんは、腫瘍微小環境、又はいわゆる「高温腫瘍」若しくは「炎症性腫瘍」への白血球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、単球）の浸潤を特徴とする。いくつかの態様において、治療されるがんは、腫瘍微小環境への低レベル若しくは検出できないレベルの白血球浸潤、又はいわゆる「低温腫瘍」若しくは「非炎症性腫瘍」を特徴とする。いくつかの態様において、ＥＶは、「低温腫瘍」を「高温腫瘍」に変換するのに十分な量及び時間で投与され、すなわち、当該投与することは、腫瘍微小環境への白血球（Ｔ細胞など）の浸潤をもたらす。特定の態様において、がんは、膀胱がん、子宮頸がん、腎細胞がん、精巣がん、結腸直腸がん、肺がん、頭頸部がん、及び卵巣、リンパ腫、肝臓がん、神経膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄腫、白血病、膵臓がん、又はそれらの組み合わせを含む。他の用語では、「遠位腫瘍」又は「遠隔腫瘍」は、元の（又は原発の）腫瘍から遠位臓器又は遠隔組織、例えば、リンパ節に拡散している腫瘍を指す。いくつかの態様において、本開示のＥＶは、転移性拡散後の腫瘍を治療する。

【0342】

上記に引用される全ての参考文献、並びに本明細書に引用される全ての参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0343】

以下の実施例は、限定ではなく、例示として提供される。

【実施例】

【0344】

本発明は、以下の実施例によって更に例示される。実施例は、例示的な目的のためのみに提供され、本開示の範囲及び内容を決して制限するものとして解釈されるべきではない。本開示の実施は、別途指示がない限り、当該技術分野内のタンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、及び薬理学の従来の方法を用いる。かかる技術は文献で十分に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）、Ｇｒｅｅｎ ＆ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）、Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ＆ Ｋａｐｌａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１２）、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ ＆ Ｃａｒｅｙ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐａｒｔｓ Ａ ａｎｄ Ｂ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２００７）を参照されたい。

【0345】

実施例１：例示的な組成物０４製剤開発
アンチセンスオリゴマーをロードしたエクソソームのための医薬品製剤が開発される。Ｃ－０３医薬品製剤が出発点として使用される。リン酸緩衝液濃度（５ｍＭの一塩基性リン酸カリウム及び１５ｍＭの二塩基性リン酸ナトリウム）及びｐＨ（ｐＨ７．２）は、Ｃ－０３医薬品と比較して変わらずそのままである。塩化ナトリウム濃度は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの範囲の濃度で試験し、スクロース濃度は、約２．５％～５％（約７３ｍＭ～約１４６ｍＭ）の濃度で試験する。条件は監視される。本明細書に開示されるように、ＳＴＡＴ６を標的とするＡＳＯをロードしたエクソソームを含む、様々なＡＳＯをロードしたエクソソーム構築物を分析する。水性トリスＥＤＴＡ緩衝液又は純水中で、ＡＳＯはエクソソームから解離し、したがって、塩化ナトリウム及びスクロースの組み合わせは、ロードされたＡＳＯを保持する役割を果たす可能性が高い。

【0346】

実施例２：ＡＳＯをロードしたエクソソームを含む組成物の濾過
本明細書に開示されるように、ＳＴＡＴ６を標的とするＡＳＯをロードしたエクソソームを、図２に示されるプロトコールに従って精製した。濾過ステップの後、試料を室温又は５℃で１５日間保持し、ＡＳＯ濃度（図３Ａ）、遊離ＡＳＯパーセント（図３Ｂ）、及びＩＣ５０（図７Ｃ）を分析した。材料を２０～２２℃（室温）及び５℃で１５日間保持し、全量及び遊離の両方のＡＳＯ含有量、Ａ２６０、Ａ２８０、Ａ４０５、ＳＴＡＴ６ ｍＲＮＡノックダウン細胞レポーターアッセイを用いたインビトロ効力（図４Ｂ及び図５Ｂ）、粒子濃度のＮＴＡ（図４Ａ及び図５Ａ）、並びに平均粒子直径及び多分散性指数を測定するＤＬＳ（図４Ｄ及び図５Ｄ）について、保持時間全体にわたって試験した。ＡＥＸ－ＵＰＬＣ（図４Ｃ）によって測定された総ＡＳＯ含有量は、両方の保持温度で１５日間（約２週間）にわたる安定性を示す。ＡＳＯの遊離パーセントは、保持時間の関数としてわずかに増加するが、５℃保持は、遊離ＡＳＯパーセントを減少させるようである。インビトロ効力データは、室温で８日間保持にわたって匹敵するＩＣ５０値を示す。５℃は、長時間保持すると強度が低下する傾向があるが、変化はわずかである。

【0347】

室温保持（２０～２２℃）後、ＮＴＡは８日間保持を通して安定性を示す。Ａ２６０、Ａ２８０、Ａ４０５に変化は観察されず、沈殿物又は容器を保持するための吸着による生成物の損失も、濁度の上昇も示さない。ＤＬＳは、平均粒子直径にそのような変化を示し、保持にわたって凝集が観察されないことを示す。

【0348】

５℃の保持に続いて、ＮＴＡは１５日の保持を通じて安定性を示し、Ａ２６０、Ａ２８０、Ａ４０５に変化は観察されず、これは、沈殿又は容器を保持するための吸着による生成物の損失がなく、濁りが増加しないことを示す。ＤＬＳは、保持８日目まで平均粒子直径に変化を示さず、保持にわたって凝集が観察されなかったことを示す。保持１５日目は、直径のわずかな増加を示す。

【0349】

図６Ａは、３７℃でのロードと比較して室温で、及びより低い塩（５０ｍＭのＮａＣｌ）条件と比較してより高い塩（１５０ｍＭのＮａＣｌ）でロードしたとき、ロード及びクリーンアップされた材料のＡＳＯ／ＥＶにおける差を示すプロトコールの概略図を提供する。３７℃でロードした時の最も高い塩条件は、クリーンアップした材料中で最も高いＡＳＯ／ＥＶをもたらす。この比率は、３７℃でより低い塩濃度でロードする時に減少する。ローディング温度を２４℃（又は２０～２５℃の範囲の室温）に低下させると、ＡＳＯ／ＥＶの更なる低下が観察される。遊離ＡＳＯパーセントは、ｃａｐｔｏ ｃｏｒｅがローディング温度及び塩濃度とは無関係に遊離ＡＳＯをクリーンアップすることができることを示し、この方法が堅牢なクリーンアップ能力を有することを示す。

【0350】

図６Ｂは、上記で実行された３つの条件におけるＣａｐｔｏ Ｃｏｒｅのクリーンアップ能力、並びに希釈係数、希釈剤（ＣＥＦ、ＨＩ、及びＰＢＳ）、及びそれらがＣａｐｔｏ Ｃｏｒｅからクリーンアップされた後にエクソソームから解離するＡＳＯに対する希釈した材料の保持時間に重点を置いたプロトコールの概略図を提供する。ＰＢＳは、注射前にｅｘｏＡＳＯを希釈するためにクリニックで使用することができる一般的で可能性のある希釈剤（０．９％生理食塩水）と同様の塩濃度を有する。遊離ＡＳＯパーセントは、より低い塩濃度を含む緩衝液中でロード及びクリーンアップされた材料を希釈すると、より多くのＡＳＯがＥＶから解離することを示す（表３）。希釈係数が増加するにつれて、解離はより劇的になる。しかしながら、より高い塩含有緩衝液（１５０ｍＭのＮａＣｌ）で材料を希釈する場合、ＡＳＯの解離は観察されない。希釈されたクリーンアップした材料を室温で２０時間保持すると、希釈液がより低い塩濃度（５０ｍＭ）を含む場合にのみ、更なる解離が観察される。より高い塩含有希釈剤では、希釈された材料を室温で２０時間保持した場合、解離は観察されない。これらのデータは、ロードされたエクソソームの安定性が、塩濃度を維持することによって最適化できることを示す。

【表4】

【0351】

概要及び要約セクションではなく、詳細な説明セクションが、特許請求の範囲を解釈するために使用されることが意図されることが理解されるべきである。概要及び要約セクションは、発明者によって企図されるように、本開示の１つ以上だが全てではない例示的な態様を説明することができ、したがって、本開示及び添付の特許請求の範囲をいかなる方法でも限定することを意図するものではない。

【0352】

本開示は、指定された機能及びその関係の実行を例示する機能的ビルディングブロックの補助によって上記で説明されている。これらの機能的ビルディングブロックの境界は、本明細書において、説明の便宜のために任意に定義されている。指定された機能及びその関係が適切に行われる限り、代替的な境界を定義することができる。

【0353】

特定の態様の前述の説明は、本開示の一般的な性質を非常に完全に明らかにするため、他の者は、当業者の技術の範囲内で知識を適用することによって、本開示の一般的な概念から逸脱することなく、過度の実験を伴わずに、かかる特定の態様を様々な用途に容易に修正及び／又は適応させることができる。したがって、かかる適応及び修正は、本明細書に提示される教示及びガイダンスに基づいて、開示される態様の等価物の意味及び範囲内にあることが意図される。本明細書における用語又は専門用語は、本明細書の用語又は専門用語が、教示及びガイダンスに照らして当業者によって解釈されるように、説明の目的であり、限定の目的ではないことが理解されるべきである。

【0354】

本開示の幅及び範囲は、上記の例示的な態様のいずれかによって制限されるべきではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの等価物に従ってのみ定義されるべきである。

【0355】

本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願、及び他の文書は、各個々の刊行物、特許、特許出願、又は他の文書が、全ての目的のために参照により組み込まれることが個別に示されているかのように同程度まで、全ての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0356】

様々な具体的な態様が例示及び記載されているが、上記の明細書は限定的ではない。本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更が行われ得ることが認識されるであろう。

【図1-1】

【図1-2】

【図1-3】

【図1-4】

【図1-5】

【図1-6】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図6A】

【図6B】

【配列表】

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【国際調査報告】