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▶ ヴィラリス・セラピューティクス・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-27
(54)【発明の名称】抗ＣＤ１２２抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C12N 15/13 20060101AFI20240319BHJP
C07K 16/28 20060101ALI20240319BHJP
C07K 16/46 20060101ALI20240319BHJP
C12N 15/62 20060101ALI20240319BHJP
C12N 15/63 20060101ALI20240319BHJP
C12N 1/15 20060101ALI20240319BHJP
C12N 1/19 20060101ALI20240319BHJP
C12N 1/21 20060101ALI20240319BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240319BHJP
C12P 21/08 20060101ALI20240319BHJP
A61K 47/68 20170101ALI20240319BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240319BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240319BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240319BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240319BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240319BHJP
A61P 3/10 20060101ALI20240319BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240319BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240319BHJP
A61P 17/06 20060101ALI20240319BHJP
A61P 37/08 20060101ALI20240319BHJP
A61P 17/14 20060101ALI20240319BHJP
A61P 1/04 20060101ALI20240319BHJP
A61P 19/02 20060101ALI20240319BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240319BHJP
【ＦＩ】
C12N15/13
C07K16/28 ZNA
C07K16/46
C12N15/62 Z
C12N15/63 Z
C12N1/15
C12N1/19
C12N1/21
C12N5/10
C12P21/08
A61K47/68
A61K39/395 L
A61K45/00
A61P29/00
A61P37/06
A61P17/00
A61P3/10
A61P25/00
A61P37/02
A61P17/06
A61P37/08
A61P17/14
A61P1/04
A61P19/02
A61P29/00 101
A61P43/00 105
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023561755
(86)(22)【出願日】2022-04-13
(85)【翻訳文提出日】2023-10-05
(86)【国際出願番号】 US2022024620
(87)【国際公開番号】W WO2022221409
(87)【国際公開日】2022-10-20
(31)【優先権主張番号】63/174,772
(32)【優先日】2021-04-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/279,762
(32)【優先日】2021-11-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523379937
【氏名又は名称】ヴィラリス・セラピューティクス・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｖｉｌｌａｒｉｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100138911
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻井 陽子
(72)【発明者】
【氏名】フィンレイ，ウィリアム ジェームズ ジョナサン
(72)【発明者】
【氏名】ハリス，ジョン イー
【テーマコード（参考）】
4B064
4B065
4C076
4C084
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B064AG27
4B064CA10
4B064CA19
4B064CC24
4B064CE12
4B064DA01
4B065AA90X
4B065AA90Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA02
4B065CA25
4B065CA44
4C076AA95
4C076CC01
4C076CC04
4C076CC07
4C076CC16
4C076CC18
4C076CC20
4C076CC21
4C076CC26
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C084AA17
4C084NA13
4C084ZA02
4C084ZA68
4C084ZA89
4C084ZA92
4C084ZA96
4C084ZB05
4C084ZB08
4C084ZB11
4C084ZB13
4C084ZB15
4C084ZB21
4C084ZC35
4C085AA14
4C085AA21
4C085BB18
4C085BB33
4C085BB34
4C085BB35
4C085BB36
4C085BB37
4C085BB41
4C085BB43
4C085CC23
4H045AA11
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA76
4H045EA22
4H045EA28
4H045FA72
4H045FA74
4H045GA26
(57)【要約】
ＣＤ１２２及びその抗原結合部に特異的に結合する抗体分子、ならびに、関連する組成物、核酸分子、ベクター、及び宿主細胞を、本明細書で提供する。そのような抗体分子の医学的使用もまた、本明細書で開示する。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗ＣＤ１２２抗体、またはその抗原結合部であって、前記抗体または抗原結合部が、重鎖可変（ＶＨ）領域、及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、
前記抗体または抗原結合部。
【請求項2】
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、または（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、
請求項１に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項3】
前記抗体または抗原結合部がヒト化されている、またはキメラである、請求項１または２に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項4】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ及びＶＬ領域の両方が、１つ以上の、ヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項5】
前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ及びＶＬ領域の両方が、ＣＤＲアミノ酸配列が挿入されている、ヒト可変領域フレームワークのスキャフォールドアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項6】
前記ＶＨ領域が、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系のスキャフォールドアミノ酸配列を含む、請求項１及び３～５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項7】
前記ＶＬ領域が、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系のスキャフォールドアミノ酸配列を含む、請求項１及び３～６のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項8】
前記抗体が、免疫グロブリンの定常領域を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項9】
前記免疫グロブリンの定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹである、請求項８に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項10】
前記免疫グロブリンの定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２である、請求項９に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項11】
前記免疫グロブリンの定常領域が、免疫学的に不活性である、請求項８に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項12】
前記免疫グロブリンの定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域、または野生型ヒトＩｇＧ２定常領域であり、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従う、請求項８に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項13】
前記免疫グロブリンの定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、請求項８に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項14】
前記抗体または抗原結合部が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、またはビスｓｃＦｖである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項15】
前記抗体がモノクローナルである、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項16】
前記抗体が、四量体抗体、四価抗体、または多重特異性抗体である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項17】
前記抗体が、第１の抗原及び第２の抗原に特異的に結合する二重特異性抗体であり、前記第１の抗原はＣＤ１２２であり、前記第２の抗原はＣＤ１２２ではない、請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部。
【請求項18】
治療剤に結合した、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部を含む免疫複合体。
【請求項19】
前記治療剤が、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはプロアポトーシス剤である、請求項１８に記載の免疫複合体。
【請求項20】
請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部、または請求項１８もしくは１９に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【請求項21】
請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体または抗原結合部の、（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列、
（ｂ）前記ＶＬ領域のアミノ酸配列、または
（ｃ）前記ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列の両方
をコードする核酸分子。
【請求項22】
請求項２１に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項23】
請求項２１に記載の核酸分子、または請求項２２に記載の発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。
【請求項24】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の産生方法であって、請求項２２に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞を、前記核酸分子が発現する条件下で培養することにより、前記抗体または抗原結合部を産生することと、
前記宿主細胞または培養液から、前記抗体または抗原結合部を単離することと、
を含む、前記方法。
【請求項25】
対象における免疫応答の抑制方法であって、前記対象に、治療に有効な量の、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部、請求項１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または請求項２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項26】
前記免疫応答がＣＤ１２２により媒介される、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
対象における疾患の治療または予防方法であって、前記対象に、治療に有効な量の、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部、請求項１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または請求項２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【請求項28】
前記疾患が、炎症性疾患または自己免疫疾患である、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
前記疾患が、白斑、セリアック病、１型糖尿病、多発性硬化症、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、乾癬、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、潰瘍性大腸炎、または関節リウマチである、請求項２７に記載の方法。
【請求項30】
ＩＬ－１５が誘導するＴ細胞の皮膚からの移動の抑制方法であって、前記皮膚を、治療に有効な量の、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体もしくは抗原結合部、請求項１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または請求項２０に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。
【請求項31】
薬剤として使用するための、請求項１～１７のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部、請求項１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または請求項２０に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１１月１６日に出願された米国特許仮出願番号第６３／２７９，７６２号、及び２０２１年４月１４日に出願された同第６３／１７４，７７２号に対する優先権を主張し、これらはそれぞれ、あらゆる目的のため、本明細書中にそれら全体が参照により組み込まれている。
本出願は、２０２１年１１月１６日に出願された米国特許仮出願番号第６３／２７９，７６２号、及び２０２１年４月１４日に出願された同第６３／１７４，７７２号に対する優先権を主張し、これらはそれぞれ、あらゆる目的のため、本明細書中にそれら全体が参照により組み込まれている。
【0002】
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書と共に電子的に提出されるテキストファイルの内容は、参照により全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピューター可読形式のコピー（ファイル名：ＶＬＲＳ＿００１＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、データ記録日：２０２２年４月１３日、ファイルサイズ：約８７，９６４バイト）。
本明細書と共に電子的に提出されるテキストファイルの内容は、参照により全体が本明細書に組み込まれる：配列表のコンピューター可読形式のコピー（ファイル名：ＶＬＲＳ＿００１＿０２ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、データ記録日：２０２２年４月１３日、ファイルサイズ：約８７，９６４バイト）。
【0003】
本開示は、治療用抗体分子、及びその医学的使用に関する。
【背景技術】
【0004】
ＣＤ１２２は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである細胞表面受容体であり、ナチュラルキラー（ＮＫ）及びＴ細胞で主に発現する。ＣＤ１２２は、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）、セリアック病、白血病、白斑などを含む、これらの免疫細胞型のいずれかによりもたらされる、様々な状態に対する標的として提唱されている。このような、免疫媒介性疾患を標的にする治療薬が必要とされている。特に、白斑には、全身治療オプションがなく、疾患を改善する、米国食品医薬品局により認可された内科治療も存在しない。
【発明の概要】
【0005】
抗ＣＤ１２２抗体、またはその抗原結合部であって、上記抗体または抗原結合部が、重鎖可変（ＶＨ）領域、及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記抗体または抗原結合部を、本明細書において提供する。
【0006】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、上記抗体または抗原結合部が、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、上記抗体または抗原結合部を、本明細書において提供する。
【0007】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部は、ヒト化されている、またはキメラである。
【0008】
いくつかの実施形態では、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ及びＶＬ領域の両方は、１つ以上の、ヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ及びＶＬ領域の両方は、ＣＤＲアミノ酸配列が挿入されている、ヒト可変領域フレームワークのスキャフォールドアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系のスキャフォールドアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＬ領域は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系のスキャフォールドアミノ酸配列を含む。
【0009】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、免疫グロブリンの定常領域を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、免疫学的に不活性である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域、または野生型ヒトＩｇＧ２定常領域であり、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む。
【0010】
いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、またはビスｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナルである。いくつかの実施形態では、抗体は、四量体抗体、四価抗体、または多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、第１の抗原及び第２の抗原に特異的に結合する二重特異性抗体であり、第１の抗原はＣＤ１２２であり、第２の抗原はＣＤ１２２ではない。
【0011】
治療剤に結合する、本明細書で開示する抗体または抗原結合部を含む免疫複合体を、本明細書において提供する。いくつかの実施形態では、治療剤は、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはプロアポトーシス剤である。
【0012】
本明細書で開示する抗体、抗原結合部、または免疫複合体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物を、本明細書において提供する。
【0013】
本明細書で開示する抗体または抗原結合部の、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列、（ｂ）ＶＬ領域のアミノ酸配列、または（ｃ）ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列の両方をコードする核酸分子を、本明細書において提供する。本明細書で開示する核酸分子を含む発現ベクターを、本明細書において提供する。本明細書で開示する核酸分子または発現ベクターを含む組換え宿主細胞を、本明細書において提供する。
【0014】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の産生方法であって、本明細書で開示する発現ベクターを含む組換え宿主細胞を、核酸分子が発現する条件下で培養することにより、抗体または抗原結合部を産生することと、宿主細胞または培養液から、抗体または抗原結合部を単離することと、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。
【0015】
対象における免疫応答の抑制方法であって、上記対象に、治療に有効な量の、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を投与することを含む、上記方法を、本明細書において提供する。いくつかの実施形態では、免疫応答はＣＤ１２２により媒介される。
【0016】
対象における疾患の治療または予防方法であって、上記対象に、治療に有効な量の、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を投与することを含む、上記方法を、本明細書において提供する。いくつかの実施形態では、疾患は、炎症性疾患または自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、白斑、セリアック病、１型糖尿病、多発性硬化症、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、乾癬、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、潰瘍性大腸炎、または関節リウマチである。
【0017】
ＩＬ－１５が誘導するＴ細胞の皮膚からの移動の抑制方法であって、上記皮膚を、治療に有効な量の、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を接触させることを含む、上記方法を、本明細書において提供する。
【0018】
薬剤として使用するための、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を、本明細書において提供する。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【図1】抗ＣＤ１２２ ＩｇＧの、インビボ薬理学分析のための図を示す。
【図2】Ａ～Ｄは、Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２ ＩｇＧの特異性分析からのデータを示す。Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ技術を用いる、Ｖｉｌｌｍａｂ－１のプロテオミクス特異性プロファイリング。（Ａ）ＺＳ対照発現。（Ｂ）Ｖｉｌｌｍａｂ－１プローブ。（Ｃ）リツキシマブプローブ。（Ｄ）一次抗体なし。
【図3A】標的のトランスフェクト細胞における、Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２ ＩｇＧのフローサイトメトリー分析からのデータを示す。Ｖｉｌｌｍａｂ－１の結合。
【図3B】標的のトランスフェクト細胞における、Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２ ＩｇＧのフローサイトメトリー分析からのデータを示す。一次抗体なし。
【図3C】標的のトランスフェクト細胞における、Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２ ＩｇＧのフローサイトメトリー分析からのデータを示す。リツキシマブの結合。
【図4】抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎエピトープ競合からのデータを示す。Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイで新規のクローンをスクリーニングし、ヒトＣＤ１２２における、Ｖｉｌｌｍａｂ－１結合エピトープとの競合を調査した。
【図5】新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧに対する多反応性スコアを示す棒グラフを示す。抗体が、ＤＮＡ及びインスリンに非特異的に結合する能力を調査した。
【図6A】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０６Ｆ１１。
【図6B】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０７Ｃ０７。
【図6C】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０７Ｄ０６。
【図6D】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０７Ｅ０９。
【図6E】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０７Ｄ０７。
【図6F】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０６Ｄ１２。
【図6G】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。アイソタイプコントロールＩｇＧ。
【図7A】Ｍ０７ｅ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。０６Ｆ１１。
【図7B】Ｍ０７ｅ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。０７Ｃ０７。
【図7C】Ｍ０７ｅ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。０７Ｄ０６。
【図7D】Ｍ０７ｅ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。０７Ｅ０９。
【図7E】Ｍ０７ｅ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。０７Ｄ０７。
【図7F】Ｍ０７ｅ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。０６Ｄ１２。
【図8A】ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のインビボ分析からのデータを示す。分析前のヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞。
【図8B】ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のインビボ分析からのデータを示す。分析前のヒトＮＫ細胞。
【図8C】ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のインビボ分析からのデータを示す。１週間後のヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞。
【図8D】ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のインビボ分析からのデータを示す。１週間後のヒトＮＫ細胞。
【図8E】ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のインビボ分析からのデータを示す。３週間後のヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞。
【図8F】ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のインビボ分析からのデータを示す。３週間後のヒトＮＫ細胞。
【図9A】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０６Ｆ１１。
【図9B】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。０７Ｃ０７。
【図9C】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。アイソタイプコントロールＩｇＧ。
【図9D】標的のトランスフェクト細胞における、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１のフローサイトメトリー分析からのデータを示す。リツキシマブ。
【図10A】Ｆａｂ及びＩｇＧフォーマットでの、Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２の新規クローンの特異性分析からのデータを示す。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）技術を用いて、ヒトニューデシンタンパク質に対するＦａｂの特異性プロファイリングを、Ｒｍａｘ（最大特異的結合応答値）として測定した。
【図10B】Ｆａｂ及びＩｇＧフォーマットでの、Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２の新規クローンの特異性分析からのデータを示す。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）技術を用いて、ＣＩＬＰ２タンパク質に対するＦａｂの特異性プロファイリングを、Ｒｍａｘ（最大特異的結合応答値）として測定した。
【図10C】ＥＬＩＳＡを用いて、ヒトＢＣＡＭタンパク質に対するＩｇＧの特異性プロファイリングを、ＯＤ４５０ｎｍとして測定した。
【図11A】Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２の新規のクローン可変ドメイン配列の、配列分析からのデータを示す。ＶＨ配列。配列は以下のとおりである：ＶｉｌｌＭＡＢ－１：配列番号２２、ＭＡＢ０５：配列番号１、ＭＡＢ０６：配列番号１、ＭＡＢ１４：配列番号５２、ＭＡＢ１５：配列番号５２、ＭＡＢ１７：配列番号５３、ＭＡＢ１８：配列番号５３。ＣＤＲは太字とし、かつ下線を引いている。ＶｉｌｌＭａｂ－１配列とは異なる残基は、灰色の四角形で強調している。ＢＣＡＭ、ＣＩＬＰ２、またはニューデシンに結合しない、本分析のクローンのみにおいて発見された固有の残基は、黒色で四角に囲む。
【図11B】Ｖｉｌｌｍａｂ－１（ＭＩＫβ１）抗ＣＤ１２２の新規のクローン可変ドメイン配列の、配列分析からのデータを示す。ＶＬ配列。配列は以下のとおりである：ＶｉｌｌＭＡＢ－１：配列番号２８、ＭＡＢ０５：配列番号９、ＭＡＢ０６：配列番号１７、ＭＡＢ１４：配列番号９、ＭＡＢ１５：配列番号１７、ＭＡＢ１７：配列番号９、ＭＡＢ１８：配列番号１７。ＣＤＲは太字とし、かつ下線を引いている。ＶｉｌｌＭａｂ－１配列とは異なる残基は、灰色の四角形で強調している。ＢＣＡＭ、ＣＩＬＰ２、またはニューデシンに結合しない、本分析のクローンのみにおいて発見された固有の残基は、黒色で四角に囲む。
【図12A】一次ＮＫ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。ＭＡＢ０５。
【図12B】一次ＮＫ細胞ＩＬ－１５増殖アッセイにおける、新規の抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ及びＶｉｌｌｍａｂ－１の分析からのデータを示す。ＭＡＢ０６。
【図13】Ａ～Ｂは、ヒト皮膚生検培養アッセイにおいて、ＩＬ１５が誘導する、皮膚生検から移動するＴ細胞の蓄積における、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の影響の分析からのデータを示す。Ａは、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数への影響を示す。Ｂは、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の数への影響を示す。
【図14A】ヒト皮膚生検培養アッセイにおいて、ＩＬ１５が誘導する、皮膚生検から移動するＴ細胞の蓄積における、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６濃度依存性拮抗の分析からのデータを示す。ＣＤ８＋ Ｔ細胞、及び関連するＩＣ５０への影響を示す。
【図14B】ヒト皮膚生検培養アッセイにおいて、ＩＬ１５が誘導する、皮膚生検から移動するＴ細胞の蓄積における、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６濃度依存性拮抗の分析からのデータを示す。ＣＤ４＋ Ｔ細胞、及び関連するＩＣ５０への影響を示す。
【発明を実施するための形態】
【0020】
抗ＣＤ１２２抗体、及びそのような抗体の治療上の使用を、本明細書で提供する。本明細書で開示する抗体は拮抗性であり、十分発現し、生物物理学的に安定しており、非常に可溶性で、好ましいヒト生殖細胞系に対して最大源の同一性を有する。
【0021】
ＣＤ１２２（ＩＬ２ＲＢ、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ１５ＲＢ、Ｐ７０－７５、インターロイキン２受容体サブユニットβ、及びＩＭＤ６３としても知られている）は、Ｉ型膜貫通糖タンパク質であり、Ｉｇスーパーファミリーのメンバーである。ＣＤ１２２は、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）受容体と、インターロイキン－２（ＩＬ－２）受容体との共有サブユニットである。ＣＤ１２２は、ＮＫ細胞、及びＴ細胞のサブセットにより発現する。ＩＬ－１５シグナル伝達は、ヒト白斑の病因で示唆されている。ＣＤ１２２を標的にすること、またはＩＬ－１５シグナル伝達を遮断することは、糖尿病、乾癬、多発性硬化症、及び円形脱毛症などの、他の免疫媒介性疾患のマウスモデル、加えて、関節リウマチ及びセリアック病の症状の改善において有益のようである。効果的な拮抗性抗ＣＤ１２２抗体を開発することは、免疫媒介性疾患の治療において価値がある。
【0022】
全体が本明細書に参考として組み込まれる、米国特許第５，５８５，０８９号は、「ＭＩＫβ１」と呼ばれる、拮抗性マウス抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ分子、加えて、ヒト化形態のＭＩＫβ１の調製について記載している。これらのヒト化形態のＭＩＫβ１は、古典的なヒト化技術を用いて、即ち、Ｋａｂａｔにより定義されるマウスＣＤＲを、ヒトの重鎖及び軽鎖フレームワーク配列にグラフトする（ヒトフレームワーク残基のいくつかは、場合により、対応して位置するＭＩＫβ１マウス残基に復帰突然変異している）ことにより産生した。部分的にヒト化したバージョンのＭＩＫβ１（表２０を参照されたい。）は、Ｔ細胞大顆粒リンパ球性（Ｔ－ＬＧＬ）白血病、及びヒトＴ細胞リンパ好性ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）関連脊髄症／熱帯性痙性麻痺（ＨＡＭ／ＴＳＰ）に対する第二ａ相臨床試験において、有効性を示さなかった。本抗体は、部分的にヒト化されており、薬物動態及び生体内分布に影響を及ぼし得るオフターゲット結合を有し、ＩｇＧ１アイソタイプを用いることで、疾患を媒介しない細胞における、望ましくない抗体依存性細胞毒性／抗体依存性細胞ファゴサイトーシスのリスクに繋がるという事実を含む、多数の不都合な事実を有する。これらの特徴によって、本抗体は、ヒト免疫媒介性疾患における標的治療薬として、さらなる試験の次善の候補となる。
【0023】
対照的に、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体は、ヒト免疫媒介性疾患及び障害の治療薬としてこれらが有用となる、本明細書に記載する利点を示す。
【0024】
抗体
ＣＤ１２２に特異的に結合する抗体、及びその抗原結合部を、本明細書で提供する。本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体は、ＵＳ ５，５８５，０８９に開示されている、マウス抗ＣＤ１２２抗体ＭＩＫβ１、及びそのヒト化バージョンよりも、いくつかの利点を有する。本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体は、ＣＤ１２２によるＩＬ－１５のシグナル伝達の遮断において、改善された効能を有するように選択されている。重要なことに、これらの抗体は、ヒト受容体ＢＣＡＭ（ＡＵ、ＣＤ２３９、ＬＵ、ＭＳＫ１９、基底接着分子（Ｌｕｔｈｅｒａｎ血液型）、ニューデシン（ＮＥＮＦとしても知られている）、及びＣＩＬＰ２（軟骨中間層タンパク質２としても知られている）への、オフターゲット結合をなくすことにより、ＭＩＫβ１と比較して、ＣＤ１２２結合の特異性が劇的に改善されている。
ＣＤ１２２に特異的に結合する抗体、及びその抗原結合部を、本明細書で提供する。本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体は、ＵＳ ５，５８５，０８９に開示されている、マウス抗ＣＤ１２２抗体ＭＩＫβ１、及びそのヒト化バージョンよりも、いくつかの利点を有する。本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体は、ＣＤ１２２によるＩＬ－１５のシグナル伝達の遮断において、改善された効能を有するように選択されている。重要なことに、これらの抗体は、ヒト受容体ＢＣＡＭ（ＡＵ、ＣＤ２３９、ＬＵ、ＭＳＫ１９、基底接着分子（Ｌｕｔｈｅｒａｎ血液型）、ニューデシン（ＮＥＮＦとしても知られている）、及びＣＩＬＰ２（軟骨中間層タンパク質２としても知られている）への、オフターゲット結合をなくすことにより、ＭＩＫβ１と比較して、ＣＤ１２２結合の特異性が劇的に改善されている。
【0025】
本明細書で開示する抗体及び抗原結合部は、ヒトＣＤ１２２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体及び抗原結合部は、ヒト以外の種に由来するＣＤ１２２、例えば、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＣＤ１２２、及び／またはアカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）ＣＤ１２２と交差反応し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ１２２のみに特異的であり得、非ヒト交差反応性を示し得ない。例示的なヒト、カニクイザル、及びアカゲザルＣＤ１２２のアミノ酸配列を表１６に示す。
【0026】
「抗体」という用語は幅広く、一般に、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、またはＩｇ分子の本質的な標的結合特徴を保持する、その任意の機能的断片、変異体、バリアント、もしくは誘導体を意味する。このような変異体、バリアント、または誘導体抗体フォーマットは、当該技術分野において既知である。
【0027】
完全長抗体においては、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では「ＶＨ領域」と略す）、及び重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメインであるＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では「ＶＬ領域」と略される）、及び軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、即ちＣＬを含む。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存された領域と共に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域に、さらに細分することができる。各ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へと、次の順序で配列される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本出願で用いるＣＤＲの定義は、Ｋａｂａｔの定義である（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ： Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（１９９１））。
【0028】
「Ｆｃ領域」という用語は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。「Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域、またはバリアントＦｃ領域であってよい。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域中の残基の番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従っている。免疫グロブリン遺伝子のＦｃ領域は、２つの定常ドメインのＣＨ２及びＣＨ３を含む。Ｆｃ領域は、二量体または単量体形態で存在することができる。Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体などの様々な細胞受容体、及び補体タンパク質などの他の免疫分子に結合する。
【0029】
免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、もしくはＩｇＹ）、及びクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、もしくはＩｇＡ２）またはサブクラスであることができる。ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体は一般に、２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖、ならびに、それぞれがＶＨ及びＶＬで構成される、２つの抗原組み合わせドメインを含有する。一般的に、ＩｇＡ抗体は、各モノマーが２つの重鎖及び２つの軽鎖（ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体に対するとおり）で構成される、２つのモノマーで構成され、このようにして、ＩｇＡ分子は、それぞれがここでも、ＶＨ及びＶＬで構成される、４つの抗原結合ドメインを有する。特定のＩｇＡ抗体は、それらが２つの重鎖及び２つの軽鎖で構成されるという点で、単量体である。分泌されるＩｇＭ抗体は一般的に、各モノマーが、２つの重鎖及び２つの軽鎖（ＩｇＧ及びＩｇＥ抗体に対するとおり）で構成される、５つのモノマーで構成される。したがって、ＩｇＭ分子は、それぞれがここでも、ＶＨ及びＶＬで構成される、１０個の抗原結合ドメインを有する。細胞表面形態のＩｇＭは、ＩｇＧ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ抗体と同様に、２つの重鎖／２つの軽鎖構造を有する。
【0030】
本明細書で使用する場合、抗体の「抗原結合部」または「抗原結合断片」（または「抗体部」または「抗体断片」）という用語は、ある抗原（例えば、ＣＤ１２２）に特異的に結合する能力を保持する抗体の、１つ以上の断片を意味する。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の一部または断片によって行われ得ることが示されてきた。抗体の「抗原結合部」という用語に包含される結合部の例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片の、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域にてジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一の可変ドメインを含む、ｄＡｂ（ドメイン抗体）断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６、ＷＯ ９０／０５１４４ Ａ１、それぞれの全体が本明細書に参照により組み込まれている。）、ならびに、（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。本開示は、Ｆａｂ’断片もまた包含する。Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片の還元により形成される。Ｆａｂ’は、Ｆ（ａｂ’）２に由来する、故に、Ｆａｂ’は、Ｆｃの小さな一部分を含有し得る。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬ及びＶＨは、別個の遺伝子によりコードされるものの、これらは、ＶＬ及びＶＨドメインのペアが一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ））を作製することを可能にする合成リンカーにより、組換え法を用いて結合することができる。例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい。そのような一本鎖抗体もまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されることが意図される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ分子は、融合タンパク質に組み込むことができる。いくつかの実施形態では、一本鎖ラクダ抗体を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、サメ重鎖抗体（Ｖ－ＮＡＲ）を本明細書で提供する。Ｅｎｇｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，３（１）：１－９を参照されたい。抗原結合部の例は、当該技術分野において既知である（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（２００１）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．７９０ ｐｐ．）。いくつかの実施形態では、単一ドメイン抗体を本明細書で提供する。一般的に、本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、「抗体部」を包含する。抗体部は一般に、完全長抗体の抗原結合特性を保持する。
【0031】
本明細書で提供する抗体及び抗体部は、多重特異的（例えば、二重特異的または三重特異的）フォーマットであってよい。このような多重特異的分子は、２つ以上の異なる分子標的またはエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部は、第１の抗原及び第２の抗原に特異的に結合する二重特異的分子であり、第１の抗原はＣＤ１２２であり、第２の抗原はＣＤ１２２ではない。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部はダイアボディである。ダイアボディは、ＶＨ及びＶＬドメインが単一ポリペプチド鎖で発現するが、同じ鎖の２つのドメイン間で対形成をするにはあまりにも短いリンカーを使用することにより、このドメインを、別の鎖の相補性領域と対形成させることにより、２つの抗原結合部位を作製する、二価の二重特異性抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８、Ｐｏｌｊａｋ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１－１１２３を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部は、トリアボディ、テトラボディ、ビスｓｃＦｖ、またはタンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部は、二重親和性再標的化タンパク質である。
【0032】
いくつかの実施形態では、本明細書で開示する抗ＣＤ１２２抗原結合部は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、またはビスｓｃＦｖである。
【0033】
本明細書で使用する場合、「免疫学的結合」及び「免疫学的結合特性」という用語は、免疫グロブリン分子（例えば、抗体またはその抗原結合部）と、その免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じる、その種の非共有結合的相互作用を指す。免疫学的結合相互作用の強度または親和性は、相互作用の解離定数（Ｋｄ）の観点から表すことができ、より小さなＫｄはより大きな親和性を表す。選択されるポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を用いて定量することができる。１つのそのような方法は、抗原結合部位／抗原複合体形成及び解離の速度の測定を伴い、それらの速度は、複合体パートナーの濃度、相互作用の親和性、及び両方向において速度に等しく影響する幾何的パラメータに依存する。したがって、「オン速度定数」（Ｋｏｎ）及び「オフ速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方とも、濃度ならびに会合及び解離の実際の速度を計算することによって決定され得る（Ｍａｌｍｑｖｉｓｔ，Ｎａｔｕｒｅ ３６１：１８６－１８７（１９９３）を参照されたい）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比率は、親和性に関連しない全てのパラメータの解除を可能にし、解離定数Ｋｄに等しい（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５９：４３９－４７３を参照されたい）。本明細書で提供する抗体または抗原結合部は、放射性リガンド結合アッセイ、または当業者に知られている同様のアッセイなどのアッセイにより測定すると、平衡結合定数（Ｋｄ）が≦１０μＭ、好ましくは≦１０ｎＭ、より好ましくは≦１０ｎＭ、及び最も好ましくは≦１００ｐＭ～約１ｐＭであるときに、ＣＤ１２２に特異的に結合する、と言われる。抗体のＫｄの測定方法の１つは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いる、通常、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを用いることによるものである。
【0034】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、一価または二価であり、一本鎖または二本鎖を含む。機能上、抗体または抗原結合部の結合親和性は、１０－５Ｍ～１０－１２Ｍの範囲内であり得る。例えば、抗体または抗原結合部の結合親和性は、１０－６Ｍ～１０－１２Ｍ、１０－７Ｍ～１０－１２Ｍ、１０－８Ｍ～１０－１２Ｍ、１０－９Ｍ～１０－１２Ｍ、１０－５Ｍ～１０－１１Ｍ、１０－６Ｍ～１０－１１Ｍ、１０－７Ｍ～１０－１１Ｍ、１０－８Ｍ～１０－１１Ｍ、１０－９Ｍ～１０－１１Ｍ、１０－１０Ｍ～１０－１１Ｍ、１０－５Ｍ～１０－１０Ｍ、１０－６Ｍ～１０－１０Ｍ、１０－７Ｍ～１０－１０Ｍ、１０－８Ｍ～１０－１０Ｍ、１０－９Ｍ～１０－１０Ｍ、１０－５Ｍ～１０－９Ｍ、１０－６Ｍ～１０－９Ｍ、１０－７Ｍ～１０－９Ｍ、１０－８Ｍ～１０－９Ｍ、１０－５Ｍ～１０－８Ｍ、１０－６Ｍ～１０－８Ｍ、１０－７Ｍ～１０－８Ｍ、１０－５Ｍ～１０－７Ｍ、１０－６Ｍ～１０－７Ｍ、または１０－５Ｍ～１０－６Ｍである。
【0035】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、当該抗体または抗原結合部が、ＣＤ１２２への結合に関して、抗体ＭＡＢ０５もしくはＭＡＢ０６と、または抗体ＭＡＢ０５もしくはＭＡＢ０６の１つ以上のアミノ酸配列を含む抗体と交差競合する、上記抗ＣＤ１２２抗体もしくは抗原結合部を、本明細書において提供する（表１８及び１９を参照されたい）。
【0036】
「交差競合する」、「交差競合」、「交差遮断する」、「交差遮断された」、及び「交差遮断」という用語は、本明細書では同じ意味で用いられ、抗体またはその抗原結合部が、標的ＣＤ１２２（例えば、ヒトＣＤ１２２）への直接的な結合、または本開示の抗ＣＤ１２２抗体のアロステリック調節による間接的な結合に干渉する能力を意味する。抗体またはその一部が、標的への別の抗体またはその一部の結合に干渉することができる度合い、及びそれ故、当該抗体またはその一部が交差遮断または交差競合することができると言えるか否かは、競合結合アッセイを用いて測定することができる。結合競合アッセイの一例は、均一時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）である。特に好適な、ある定量的交差競合アッセイは、標的への結合という観点で、標識した（例えば、Ｈｉｓタグ化した、ビオチン化した、または放射能標識した）抗体またはその一部とその他の抗体またはその一部との間の競合を測定するためにＦＡＣＳまたはＡｌｐｈａｓｃｒｅｅｎベースのアプローチを用いる。一般的に、交差競合抗体またはその一部は、例えば、アッセイ中、及び第２の抗体またはその一部の存在下において、本発明に従った免疫グロブリン単一可変ドメインまたはポリペプチドの、記録される置換が、所与の量で存在する、潜在的な交差遮断抗体またはその断片により、理論上の最大置換（例えば、交差遮断される必要がある、冷式（例えば、未標識）抗体またはその断片による置換）の、（例えば、ＦＡＣＳベースの競合アッセイにおいて）最大１００％となるように、交差競合アッセイで標的に結合するものである。いくつかの実施形態では、交差競合抗体またはその一部は、１０％～１００％、または５０％～１００％の、記録される置換を有する。
【0037】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、当該抗体または抗原結合部が、ＣＤ１２２への結合に関して、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含む抗体と交差競合し、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。
【0038】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、当該抗体または抗原結合部が、ＣＤ１２２への結合に関して、本明細書で開示するＣＤＲのセットを含む、抗体または抗原結合部と交差競合し、（ａ）（ｉ）ヒトＣＤ１２２、ならびに（ｉｉ）カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２に特異的に結合し、（ｂ）ヒトＩＬ－１５により刺激されたときに、初代ＮＫ細胞などのヒトＣＤ１２２＋細胞の増殖を、１４ｎＭ未満のＥＣ５０でアンタゴナイズし、（ｃ）１０ｎＭを下回るＫＤでアカゲザルＣＤ１２２に結合し、（ｄ）カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２、ならびにヒトＣＤ１２２の、機能的に同一なエピトープに結合し、及び／または（ｅ）抗体ＭＩＫβ１の可変ドメイン配列を含む抗ＣＤ１２２抗体と比較して、ＢＣＡＭへの結合の低下、もしくはＢＣＡＭに結合しないことを示す、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部のＫｄ値は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定することができる。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部のＥＣ５０値は、ＣＤ１２２を発現する細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ細胞、Ｍ０７ｅ細胞、ＮＫ細胞、Ｔ細胞）のフローサイトメトリー染色により測定することができる。
【0039】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、低い免疫原性を有する。いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合部は、ＳＹＧＶＨ（配列番号２４）のＨＣＤＲ１、ＶＩＷＳＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＩＳ（配列番号５）のＨＣＤＲ２、ＡＧＤＹＮＹＤＧＦＡＹ（配列番号２７）のＨＣＤＲ３、ＳＧＳＳＳＶＳＦＭＹ（配列番号３０）のＬＣＤＲ１、ＤＴＳＮＬＡＳ（配列番号１３）のＬＣＤＲ２、及びＱＱＷＳＴＹＰＬＴ（配列番号１５）のＬＣＤＲ３を含む抗ＣＤ１２２抗体と比較して、低い免疫原性を示す。いくつかの実施例では、抗体または抗原結合部の免疫原性リスクは、抗体または一部における（例えば、抗体の可変領域または一部における）、Ｔ細胞エピトープの位置を同定することにより、インシリコで測定することができる。
【0040】
例えば、抗体または抗原結合部中のＴ細胞エピトープは、ｉＴｏｐｅ（商標）を用いることで同定することができる。ｉＴｏｐｅ（商標）を用いて、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対して無差別に高い親和性を伴って結合するペプチドの、ＶＬ及びＶＨ領域配列を分析することができる。無差別に高い親和性のＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドは、薬剤タンパク質の臨床上の免疫原性に対する高リスクインジケーターである、Ｔ細胞エピトープの存在と相関すると考えられている。ｉＴｏｐｅ（商標）ソフトウェアは、３４個のヒトＭＨＣクラスＩＩアレルの解放末端結合溝の中の、ペプチドのアミノ酸側鎖と特異的結合ポケット（特に、ポケット位置、ｐ１、ｐ４、ｐ６、ｐ７、及びｐ９）との好ましい相互作用を予測する。これらのアレルは、任意の特定の民族集団において最も一般的に発見されるものに対して重み付けをすることなく、世界的に発見される最も一般的なＨＬＡ－ＤＲアレルを示す。アレルのうちの２０個は、「オープン」ｐ１構成を含有し、１４個は、「クローズド」構成を含有し、８３位のグリシンはバリンにより置き換えられている。鍵となる結合残基の位置は、試験タンパク質配列にまたがる８個のアミノ酸と重なり合う、九量体ペプチドのインシリコ生成により達成される。本プロセスは、ＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するペプチドと、結合しないペプチドとを、非常に正確に、上手く区別する。
【0041】
抗体または抗原結合部中のＴ細胞エピトープは、他のタンパク質配列の、インビトロでのヒトＴ細胞エピトープマッピング分析により以前に同定されたＴ細胞エピトープへの一致を調査する、ＴＣＥＤ（商標）（Ｔ Ｃｅｌｌ Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｄａｔａｂａｓｅ（商標））を用いるＶＬ及びＶＨ領域配列を分析することにより同定することができる。ＴＣＥＤ（商標）を用いて、無関係のタンパク質及び抗体配列に由来するペプチドの、大型（１０，０００個のペプチドを超える）データベースに対して、任意の試験配列を調査する。
【0042】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、抗体または一部が、その配列中に小数の、以下のペプチドの１つ以上：高親和性外来（「ＨＡＦ」－高免疫原性リスク）、低親和性外来（「ＬＡＦ」－低免疫原性リスク）、及び／またはＴＣＥＤ＋（ＴＣＥＤ（商標）データベースで、以前に同定されたエピトープ）を有するため、低い免疫原性を示し得る。
【0043】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、その配列中に、高い生殖細胞系エピトープ（ＧＥ）含有量を有し得る。いくつかの実施例では、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、その配列中（例えば、ＶＬ及び／またはＶＨ領域配列中）に、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個（または２１個以上）の生殖細胞系エピトープを有する。生殖細胞系エピトープは、高いＭＨＣクラスＩＩ結合親和性を有する、ヒト生殖細胞系ペプチド配列と定義することができる。生殖細胞系エピトープの九量体ペプチドは、広範囲の生殖細胞系ペプチドを用いる以前の研究により立証されているとおり、Ｔ細胞耐性が原因で、免疫原性能を有しない可能性が高い。重要なことに、このような生殖細胞系ｖドメインエピトープ（ヒト抗体定常領域中の、同様の配列によりさらに補助される）は、抗原提示細胞の膜においてＭＨＣクラスＩＩ占有について競合し、Ｔ細胞刺激に必要な「活性化閾値」を実現するのに十分な外来ペプチド提示のリスクを低下させる。それ故、高いＧＥ含有量は、抗体治療薬の臨床開発において有益な質となり、低い免疫原性をもたらすことができる。いくつかの実施例では、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、ＬＣＤＲ２中で高いＭＨＣクラスＩＩ結合親和性を有する、ヒト生殖細胞系ペプチド配列（例えば、生殖細胞系エピトープ）を含む。
【0044】
特定の実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、抗体ＭＩＫβ１の可変ドメイン配列を含む抗ＣＤ１２２抗体と比較して、重鎖及び軽鎖可変領域の両方のフレームワークで見出される、ＨＡＦ、ＬＡＦ、及び／またはＴＣＥＤ＋エピトープの数が減少している場合がある。いくつかの実施形態では、ＨＡＦ、ＬＡＦ、及び／またはＴＣＥＤ＋エピトープは、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部のＶＬ及び／またはＶＨ領域配列中に存在しない。
【0045】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、表２０に示すＭＩＫβ１マウス／ヒト化抗体アミノ酸配列のうちの１つ以上を含まない。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、配列番号２４を含むＨＣＤＲ１、配列番号２７を含むＨＣＤＲ３、及び／または配列番号３０を含むＬＣＤＲ１を含まない。表１は、本明細書で定義する（「Ｋａｂａｔ」スキーム）、ＣＤＲが強調されたＭＩＫβ１マウス抗ＣＤ１２２抗体可変領域のアミノ酸配列を示す。「ＭＩＫβ１－ＩｇＧ１（ヒト化）」という用語は、表２で、「ＣＤ１２２－ＶＨ１」と標識された可変重鎖領域配列、及び「ＣＤ１２２－ＶＬ１」と標識された可変軽鎖領域配列、ならびに、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む、抗ＣＤ１２２抗体を意味する。
【0046】
本明細書で開示する抗体は、抗ＣＤ１２２アンタゴニスト抗体である。本明細書で使用する場合、「アンタゴニスト」、または「抗ＣＤ１２２アンタゴニスト抗体」（同じ意味で、「抗ＣＤ１２２抗体」とも呼ばれる）とは、ＣＤ１２２に結合可能であり、ＣＤ１２２シグナル伝達により媒介されるＣＤ１２２生物活性及び／または下流経路（複数可）を阻害することができる抗体を意味する。抗ＣＤ１２２アンタゴニスト抗体は、ＣＤ１２２シグナル伝達、例えば、ＣＤ１２２への受容体結合、及び／またはＣＤ１２２への細胞応答の誘発により媒介される下流通路を含む、ＣＤ１２２生物活性を（著しくを含み）遮断、アンタゴナイズ、抑制、または低下させることができる抗体を包含する。本開示の目的のために、「抗ＣＤ１２２アンタゴニスト抗体」という用語は、ＣＤ１２２自体、及びＣＤ１２２生物活性（Ｔ細胞の抗腫瘍細胞活性の活性化を抑制する能力を含むがこれらに限定されない）、または活性もしくは生物活性の結果が、有意な程度に実質的に無効化される、低下する、または中和される、用語、表題、ならびに機能的状態及び特徴全てを包含することが明示的に理解されよう。
【0047】
いくつかの実施形態では、抗体分子またはその抗原結合部は、ＣＤ１２２に特異的に結合し、膜タンパク質ＢＣＡＭには結合しない（または特異的に結合しない）。いくつかの実施形態では、ＢＣＡＭはヒトタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＢＣＡＭはアカゲザルタンパク質である。いくつかの実施形態では、ヒトＢＣＡＭタンパク質は、配列番号２１のアミノ酸配列、または配列番号２１と少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、もしくは少なくとも約９９％同一であるアミノ酸配列を含むか、またはこれからなる。一実施形態では、抗体分子またはその抗原結合部は、ＢＣＡＭに結合しない。いくつかの実施形態では、抗体分子またはその抗原結合部は、抗体ＭＩＫβ１またはＩｇＧ１－ＭＩＫβ１（ヒト化）により示される、上記膜受容体への結合と比較して、ＢＣＡＭへの結合の低下を示す。場合によっては、抗体またはその抗原結合部の、ＢＣＡＭへの結合は、ＥＬＩＳＡにより、またはフローサイトメトリー分析により測定することができる。
【0048】
抗体ＭＡＢ０６またはＭＡＢ０５の１つ以上のアミノ酸配列を含む、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部をさらに、本明細書で提供する。これらの抗体を形成する、ＶＨ領域、ＶＬ領域、及びＣＤＲ配列の組み合わせを、表１８及び１９に示す。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域配列及び／またはＶＬ領域配列は、アミノ末端に、シグナル配列（シグナルペプチドとしても知られている。）を含む。
【0049】
抗ＣＤ１２２抗体、またはその抗原結合部であって、上記抗体または抗原結合部が、重鎖可変（ＶＨ）領域、及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記抗体または抗原結合部を、本明細書において提供する。
【0050】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、当該抗体が、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含むＶＨ領域と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含むＶＬ領域と、を含み、（ａ）ＨＣＤＲ１が、アミノ酸配列Ｇ－Ｆ－Ｔ－Ｆ－Ｓ－Ｓ－Ｙ－Ｘ１－Ｍ－Ｓ［式中、Ｘ１はＬ、または任意の他のアミノ酸である。］（配列番号３９）を含み、（ｂ）ＨＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ１－Ａ－Ｘ２－Ｉ－Ｓ－Ｇ－Ｇ－Ｇ－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｙ－Ｙ－Ｘ６－Ｄ－Ｓ－Ｖ－Ｋ－Ｇ［式中、Ｘ１はＶ、またはＶの保存的置換であり、Ｘ２はＴまたはＮであり、Ｘ３はＡまたはＳであり、Ｘ４はＥまたはＮであり、Ｘ５はＴまたはＫであり、Ｘ６はＰまたはＶである。］（配列番号４０）を含み、（ｃ）ＨＣＤＲ３が、アミノ酸配列Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５－Ｄ－Ｙ［式中、Ｘ１はＱ、または任意の他のアミノ酸（例えば、Ｔ、Ｌ、Ｍ、もしくはＮ）であり、Ｘ２はＬ、または任意の他のアミノ酸（例えば、Ｇ、Ｋ、Ｍ、Ｑ、Ｓ、もしくはＶ）であり、Ｘ３はＹ、またはＹの保存的置換（例えば、Ｈ）であり、Ｘ４はＹ、または任意の他のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｄ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｅ、Ｉ、Ｋ、Ｓ、もしくはＷ）であり、Ｘ５はＦ、または任意の他のアミノ酸（例えば、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｋ、Ｍ、Ｓ、もしくはＷ）である。］（配列番号１６０）を含み、（ｄ）ＬＣＤＲ１が、アミノ酸配列Ｒ－Ａ－Ｓ－Ｑ－Ｓ－Ｉ－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ｘ５［式中、Ｘ１はＳ、またはＳの保存的置換であり、Ｘ２はＳ、またはＳの保存的置換であり、Ｘ３はＹ、またはＹの保存的置換であり、Ｘ４はＬ、またはＬの保存的置換であり、Ｘ５はＮもしくはＴ、またはＮもしくはＴの保存的置換である。］（配列番号１６１）を含み、（ｅ）ＬＣＤＲ２が、アミノ酸配列Ｘ１－Ａ－Ｘ２－Ｓ－Ｌ－Ｘ３－Ｘ４［式中、Ｘ１はＡもしくはＴ、またはＡもしくはＴの保存的置換であり、Ｘ２はＳ、またはＳの保存的置換であり、Ｘ３はＱ、または任意の他のアミノ酸であり、Ｘ４はＳ、または任意の他のアミノ酸である。］（配列番号１６２）を含み、（ｆ）ＬＣＤＲ３が、アミノ酸配列Ｑ－Ｑ－Ｘ１－Ｙ－Ｓ－Ｘ２－Ｐ－Ｘ３－Ｔ［式中、Ｘ１はＳまたは任意の他のアミノ酸であり、Ｘ２はＴ、または任意の他のアミノ酸であり、Ｘ３はＷ、または任意の他のアミノ酸である。］（配列番号１６３）を含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で開示する。
【0051】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、上記抗体または抗原結合部が、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記抗体または抗原結合部を、本明細書において提供する。
【0052】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１、または配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。
【0053】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、（ａ）配列番号１７、もしくは、配列番号９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列または（ｂ）配列番号１７、もしくは、配列番号９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。
【0054】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１、もしくは、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７、もしくは、配列番号９のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１、もしくは、配列番号１のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９、もしくは、配列番号１７のアミノ酸配列に少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、上記抗体またはその抗原結合部もまた、本明細書で提供する。
【0055】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含み、ＶＨ領域配列、ＶＬ領域配列、もしくは、ＶＨ領域とＶＬ領域配列の両方に１、２、もしくは３個の保存的アミノ酸置換が存在する、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含み、ＶＨ領域配列、ＶＬ領域配列、もしくは、ＶＨ領域とＶＬ領域配列の両方に１、２、もしくは３個の保存的アミノ酸置換が存在する、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換はＦＲ配列においてのみ行われ、抗体または抗原結合部のＣＤＲ配列では行われない。
【0056】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部はモノクローナルである。「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）という用語は、例えば、任意の真核性、原核性、またはファージクローンを含む、単独のコピーまたはクローンに由来する、抗体またはその抗原結合部を意味し、当該抗体またはその抗原結合部が産生される方法を意味するものではない。好ましくは、モノクローナル抗体は、均質な、または実質的に均質な集団に存在する。
【0057】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗体または抗原結合部は、単離することができる。
【0058】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、キメラである。「キメラ」という用語は、可変ドメイン配列が１つの種に由来し、少なくとも１つの定常領域配列が別の種に由来する、抗体分子、またはその抗原結合部を意味することを意図する。例えば、マウス抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）の、軽鎖（複数可）の可変ドメインの１つもしくは全て、及び／または重鎖（複数可）の可変ドメインの１つもしくは全てはそれぞれ、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４ヒト定常領域に限定されるものではない、ヒト定常領域に結合することができる。キメラ抗体、及び当該抗体を生成するための好適な技術の例は、米国特許第４，８１６，５６７号、同第４，９７５，３６９号、及び同第４，８１６，３９７号に記載されており、それらそれぞれの全体が本明細書に参照により組み込まれている。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、（ａ）配列番号１を含むＶＨ領域のアミノ酸配列、配列番号１７及びヒト定常領域を含むＶＬ領域のアミノ酸配列、または（ｂ）配列番号１を含むＶＨ領域のアミノ酸配列、配列番号９及びヒト定常領域を含むＶＬ領域のアミノ酸配列を含む。
【0059】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、ヒト化されている。「ヒト化」という用語は、重鎖及び／または軽鎖の非ヒト（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）ＣＤＲと共に、可変ドメインに１つ以上のヒトフレームワーク領域を含むように組換えされている、抗体またはその抗原結合部を意味することが意図される。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ＣＤＲを除いて完全にヒトである配列を含む。抗ＣＤ１２２抗体分子またはその抗原結合部は、ＣＤＲが挿入されている、１つ以上のヒト可変領域フレームワークスキャフォールドを含むことができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部の、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域とＶＬ領域の両方は、１つ以上の、ヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、抗体ＭＡＢ０６またはＭＡＢ０５のＣＤＲであるＣＤＲを除いて、完全にヒトである配列を含む。ヒト化抗体、及びその生成に好適な技術の例は、Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：３５，２００５、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９－１００３３，１９８９、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－３６，１９８８、Ｏｒｌａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：３８３３－３７，１９８９、Ｕ．Ｓ．５，２２５，５３９、Ｕ．Ｓ．５，５３０，１０１、Ｕ．Ｓ．５，５８５，０８９、Ｕ．Ｓ．５，６９３，７６１、Ｕ．Ｓ．５，６９３，７６２、Ｕ．Ｓ．６，１８０，３７０、及びＷＯ９０／０７８６１に提供されており、これらそれぞれの全体が、本明細書に参照により組み込まれている。ＦＲを選択してＣＤＲに隣接させる場合、例えば、抗体をヒト化または最適化する場合、同じ標準クラスにＣＤＲ配列を含有する抗体に由来するＦＲが好ましい。
【0060】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合断片は、必ずしも、対応するマウスＣＤＲ、または他の（フレームワークなどの）アミノ酸位置において、最大数のヒト生殖細胞系置換を有する必要はない。以下の実験の章で詳述するとおり、「最大限ヒト化した」抗体分子とは、抗ＣＤ１２２結合特性、及び／または他の望ましい特徴の観点から、必ずしも「最大限最適化された」ものではない。
【0061】
本開示は、本明細書で定義する抗体分子またはその抗原結合部のアミノ酸配列への修飾を包含する。例えば、本開示は、性質に著しい影響を及ぼさない、機能的に等価な可変領域及びＣＤＲ、加えて、活性及び／または親和性が向上した、または低下したバリアントを含む抗体分子、及び対応するその抗原結合部を含む。例えば、アミノ酸配列を変異させて、ＣＤ１２２に対する所望の結合親和性を有する抗体を得ることができる。１個の残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲の長さである、アミノ末端及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは多数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む挿入が、想到される。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体分子、またはエピトープタグに融合した抗体分子が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、血液循環中で抗体の半減期を増加させる、酵素またはポリペプチドの抗体のＮまたはＣ末端への融合が挙げられる。
【0062】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、グリコシル化及び非グリコシル化ポリペプチド、加えて、他の翻訳後修飾、例えば、異なる糖類によるグリコシル化、アセチル化、及びリン酸化が行われたポリペプチドを含むことができる。抗体または抗原結合部を、例えば、１つ以上のアミノ酸残基を付加する、除去する、または置き換えて、グリコシル化部位を形成する、または除去することにより変異させて、そのような翻訳後修飾を変化させることができる。
【0063】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部は、例えば、アミノ酸置換により修飾し、抗体または一部における、潜在的なタンパク質分解部位を除去することができる。
【0064】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部が、ＶＨ領域、ＶＬ領域、及び全ヒトフレームワーク領域配列を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記抗体またはその抗原結合部もまた、本明細書で提供する。
【0065】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部が、ＶＨ領域、ＶＬ領域、及び１つ以上のヒトフレームワーク領域配列を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記抗体またはその抗原結合部もまた、本明細書で提供する。
【0066】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、対応するＨＣＤＲ配列が挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系スキャフォールドを含むことができる。抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列のセットが挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系スキャフォールドアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域を含むことができる。
【0067】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、対応するＬＣＤＲ配列が挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系スキャフォールドを含むことができる。抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセットが挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系スキャフォールドアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域を含むことができる。
【0068】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、対応するＨＣＤＲ配列が挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系スキャフォールド、及び対応するＬＣＤＲ配列が挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系スキャフォールドを含むことができる。抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、対応するＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列のセットが挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系スキャフォールドアミノ酸配列を含む、ＶＨ領域、ならびに、対応するＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列のセットが挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系スキャフォールドアミノ酸配列を含む、ＶＬ領域を含むことができる。ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列は、表１８または１９におけるクローンのいずれか１つの、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列（６つ全てのＣＤＲ配列が、同じクローンに由来する）であってよい。
【0069】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、免疫グロブリンの定常領域を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹである。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、免疫学的に不活性である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、ＦｃγＲ結合、抗体依存性細胞傷害活性、及び／または補体依存性細胞傷害活性を低下させる、または防止する、１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１定常領域、またはアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域であり、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従う。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン分子の定常領域中でのアミノ酸残基の位置は、Ｋａｂａｔ（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５ Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７－９４）におけるＥＵインデックスに従って番号付けされる。
【0070】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、カッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である、免疫グロブリン軽鎖定常領域を含むことができる。
【0071】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、表１５のアミノ酸配列のいずれか１つを含む、免疫グロブリンの定常領域を含むことができる。表１５のＦｃ領域配列は、ＣＨ１ドメインから始まる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、ヒトＩｇＧ４、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ１エフェクターヌルのＦｃ領域のアミノ酸配列を含む、免疫グロブリンの定常領域を含むことができる。例えば、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域と比較して、以下の置換：Ｓ２２８Ｐを含む。例えば、ヒトＩｇＧ１エフェクターヌルＦｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、以下の置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンの定常領域は、ＲＤＥＬＴ（配列番号３９）モチーフ、またはＲＥＥＭ（配列番号４０）モチーフ（表１５で下線を引いている）を含むことができる。ＲＥＥＭ（配列番号４０）アロタイプは、ＲＤＥＬＴ（配列番号３９）アロタイプよりも小規模のヒト集団で発見される。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、免疫グロブリンの定常領域を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、表１８または１９のクローンのいずれか１つにおける、６つのＣＤＲアミノ酸配列、及び表１５のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含むことができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、表１５のＦｃ領域アミノ酸配列のいずれか１つを含む免疫グロブリン重鎖定常領域、及びカッパ軽鎖定常領域またはラムダ軽鎖定常領域である、免疫グロブリン軽鎖定常領域を含むことができる。
【0072】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体がＶＨ領域、ＶＬ領域、及び重鎖定常領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含み、重鎖定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含み、重鎖定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。
【0073】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体がＶＨ領域、ＶＬ領域、及び重鎖定常領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含み、重鎖定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、もしくは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含み、重鎖定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含み、重鎖定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ２定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、もしくは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域を含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。
【0074】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含み、もしくはこれからなり、重鎖定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含み、もしくはこれからなり、重鎖定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、上記抗体またはその抗原結合部を、本明細書で提供する。
【0075】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、免疫エフェクターヌルであってよい。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、免疫エフェクター機能を誘導せず、任意選択で、免疫エフェクター機能を抑制する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体は、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂ受容体への、測定可能な結合を欠いている場合があるが、ヒトＦｃγＲＩＩｂ受容体への結合を維持し得、任意選択で、ヒトＦｃＲｎ受容体への結合を維持し得る。ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、及びＦｃγＲＩＩＩｂは、活性化受容体の例である。ＦｃγＲＩＩｂは、阻害性受容体の例である。ＦｃＲｎは、リサイクリング受容体の例である。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃ受容体に対する抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析により測定することができる。いくつかの実施形態では、均一時間分解蛍光測定（ＨＴＲＦ）を用いて、抗ＣＤ１２２抗体の、ヒトＦｃ受容体への結合を調査することができる。ＨＴＲＦの一例では、ヒトＩｇＧ１（野生型）が、完全に揃ったＦｃγ受容体であるため標識され、その後、組換えＦｃ断片を含む抗体を、滴定競合において使用する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２２陽性細胞を、ヒト白血球細胞及び抗ＣＤ１２２抗体と混合することができ、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、及び／またはＡＤＣＰによる細胞殺傷を測定することができる。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のアミノ酸配列（表１５を参照されたい。）を含む抗ＣＤ１２２抗体は、エフェクターヌルである。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域のアミノ酸配列（表１５を参照されたい。）を含む抗ＣＤ１２２抗体は、エフェクターヌルではない。
【0076】
治療剤に結合した、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を含む免疫複合体をさらに、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、治療剤は、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはプロアポトーシス剤である。
【0077】
好適な治療剤の例としては、免疫調節剤、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、プロアポトーシス剤、ならびに、細胞増殖抑制酵素及び細胞溶解酵素（例えば、ＲＮＡｓｅ）が挙げられるが、これらに限定されない。さらなる治療剤としては、免疫調節剤、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはプロアポトーシス剤をコードする遺伝子などの治療用核酸が挙げられる。これらの薬剤についての語句は、相互に排他的ではないが故に、治療剤は、上記用語の１つ以上を用いて説明される場合がある。
【0078】
免疫複合体で用いるための好適な治療剤の例としては、ＪＡＫキナーゼ阻害剤、タキサン、メイタンシン、ＣＣ－１０６５及びデュオカルマイシン、カリケアマイシン及び他のエンジイン、ならびにオーリスタチンが挙げられるが、これらに限定されない。他の例としては、抗葉酸剤、ビンカアルカロイド、及びアントラサイクリンが挙げられる。植物性毒素、他の生物活性タンパク質、酵素（即ち、ＡＤＥＰＴ）、放射性同位体、光増感剤もまた、免疫複合体で使用することができる。加えて、複合体は、リポソームまたはポリマーなどの二次担体を細胞毒性剤として用いて作製することができる。好適な細胞毒素としては、細胞の機能を阻害もしくは防止する剤、及び／または細胞の破壊をもたらす剤が挙げられる。例示的な細胞毒素としては、抗生物質、チューブリン重合の阻害剤、ＤＮＡに結合してＤＮＡを破壊するアルキル化剤、ならびに、タンパク質合成を破壊する、または不可欠な細胞タンパク質の機能を破壊する剤（プロテインキナーゼ、ホスファターゼ、トポイソメラーゼ、酵素、及びサイクリンなど）が挙げられる。
【0079】
例示的な細胞毒素としては、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、アクラルビシン、ゾルビシン、マイトキサントロン、エピルビシン、カルビシン、ノガラマイシン、メノガリル、ピタルビシン、バルルビシン、シタラビン、ゲムシタビン、トリフルリジン、アンシタビン、エノシタビン、アザシチジン、ドキシフルフジン（ｄｏｘｉｆｌｕｈｄｉｎｅ）、ペントスタチン、ブロクスフジン（ｂｒｏｘｕｈｄｉｎｅ）、カペシタビン、クラドフビン（ｃｌａｄｈｂｉｎｅ）、デシタビン、フロクスフジン（ｆｌｏｘｕｈｄｉｎｅ）、フルダラビン、グーゲロチン、ピューロマイシン、テガフール、チアゾフーン（ｔｉａｚｏｆｕｈｎ）、アドハマイシン（ａｄｈａｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、マイトキサントロン、ブレオマイシン、メクロレタミン、プレドニゾン、プロカルバジン、メトトレキサート、フルオロウラシル、エトポシド、タキソール、タキソール類似体、ｃｉｓ－プラチン及びカルボプラチンなどのプラチン、マイトマイシン、チオテパ、タキサン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、タモキシフェン、イダルビシン、ドラスタチン／オーリスタチン、へミアステルリン、エスペラミシン、ならびにメイタンシノイドが挙げられるが、これらに限定されない。
【0080】
好適な免疫調節剤としては、腫瘍でのホルモン作用を遮断する抗ホルモン剤、及びサイトカイン産生を抑制する、自己抗原発現を下方制御する、またはＭＨＣ抗原をマスクする免疫抑制剤が挙げられる。
【0081】
医薬組成物
本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体及び抗原結合部（本明細書では、「活性化合物」とも呼ばれる）を、投与に好適な医薬組成物に組み込むことができる。このような組成物は通常、抗ＣＤ１２２抗体もしくは抗原結合部（または上記抗体もしくは部分を含む免疫複合体）と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む。このような材料は無毒性でなければならず、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合断片の有効性と干渉してはならない。担体または他の材料の厳密な性質は、注射、ボーラス、輸液、または以下で論じる任意の他の好適な経路であり得る、投与経路に左右されるであろう。
本明細書で提供する抗ＣＤ１２２抗体及び抗原結合部（本明細書では、「活性化合物」とも呼ばれる）を、投与に好適な医薬組成物に組み込むことができる。このような組成物は通常、抗ＣＤ１２２抗体もしくは抗原結合部（または上記抗体もしくは部分を含む免疫複合体）と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む。このような材料は無毒性でなければならず、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合断片の有効性と干渉してはならない。担体または他の材料の厳密な性質は、注射、ボーラス、輸液、または以下で論じる任意の他の好適な経路であり得る、投与経路に左右されるであろう。
【0082】
本明細書で使用する場合、用語「薬学的に許容される」とは、当該技術分野において周知の経路を用いて投与される際、アレルギーの、または他の深刻な拒絶反応を一般的に生み出さない、分子要素または組成物を意味する。米国の連邦もしくは州政府の監督機関により認可されている、または動物、及びより具体的にはヒトで使用するために、米国薬局方もしくは他の一般に認可された薬局方で列挙されている、分子要素または組成物は、「薬学的に許容される」と考えられる。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、薬学的投与において適合性がある、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌及び抗カビ剤、等張化剤及び吸収遅延剤などを含むことを意図する。好適な担体は、本分野での標準的な参考文献である、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されており、当該文献は、参照により本明細書に組み込まれている。このような担体または希釈剤のいくつかの例としては、水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソーム、及び不揮発性油などの非水性ビヒクルもまた使用可能である。薬剤的活性物質のためのそのような媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性化合物と不適合性である限りを除いて、組成物におけるその使用が企図される。補足的活性成分を組成物に組み込むこともできる。薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤は、二次反応を引き起こさず、例えば、抗ＣＤ１２２抗体もしくはその抗原結合部の投与を促進させる、その寿命、及び／または体内での有効性を増加させる、または溶液中での溶解度を増加させる、化合物、または化合物の組み合わせであってよい。
【0083】
（ｉ）抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、上記抗体または抗原結合部が、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記抗体または抗原結合部と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤と、を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、医薬組成物を、本明細書で提供する。
【0084】
（ｉ）抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部であって、上記抗体または抗原結合部が、ＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記抗体または抗原結合部と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物を、本明細書で提供する。
【0085】
本明細書で開示する医薬組成物を、目的の投与経路に適合するように製剤化してよい。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（即ち、局所）、経粘膜、及び直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下用途に使用される溶液または懸濁液としては、以下の構成成分を挙げることができる：注射用水、食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の合成溶媒などの滅菌希釈剤、ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなどの酸化防止剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤、アセテート、シトレート、またはホスフェートなどの緩衝液、及び塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの、張度調節剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基により調節可能である。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジ、または複数投与用バイアルに封入することができる。
【0086】
注射での使用に好適な医薬組成物としては、無菌の水溶液（水溶性の場合。）または分散液、及び無菌の注射剤または分散液を即時調製するための無菌の粉末が含まれる。静脈内投与に関して、好適な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（登録商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。いずれの場合も、組成物は滅菌されていなければならず、注射可能性が容易である流体でなければならない。組成物は製造及び保存の条件で安定でなければならず、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散の場合には必要とされる粒径の維持によって、及び界面活性剤の使用によって、維持することができる。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトール、または塩化ナトリウム等）を組成物中に含むことが好ましい。吸収を遅らせる作用物質、例えばモノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物に含めることにより、注射可能な組成物の吸収を遅らせることができる。
【0087】
必要に応じて、上に挙げた成分の１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を入れてから濾過滅菌することにより、無菌注射可能な溶液を調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上で列挙されたものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法は、活性成分に、その事前に滅菌濾過された溶液からの任意の追加的な所望の成分を添加した粉末をもたらす、真空乾燥及びフリーズドライである。
【0088】
経口組成物は通常、不活性希釈剤または食用担体を含む。不活性希釈剤または食用担体は、ゼラチンカプセルに封入することができる、または圧縮して錠剤にすることができる。経口治療用投与の目的のために、活性化合物を賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ剤、またはカプセルの形態で使用することが可能である。マウスウォッシュとして使用するための流体担体を使用しても、経口組成物を調製することができ、流体担体中の化合物は経口適用され、ブクブクしてから吐き出されるか、嚥下される。薬学的に適合性のある結合剤、及び／またはアジュバント材を、組成物の一部として含めることができる。錠剤、丸薬、カプセル、トローチ剤などは、以下の成分、または類似の性質を持つ化合物のいずれか：微結晶セルロース、トラガカントゴムもしくはゼラチンなどの結合剤、デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｊｅｌ（登録商標）、もしくはコーンスターチなどの崩壊剤、ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、コロイド状二酸化ケイ素などの滑剤、スクロースもしくはサッカリンなどの甘味剤、またはペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジフレーバリングなどの香味剤を含有することができる。
【0089】
吸入による投与に関して、化合物は、好適な噴射剤（例えば二酸化炭素などの気体）を含有する圧縮容器もしくは散布器、またはネブライザからのエアゾールスプレーの形態で送達され得る。
【0090】
全身投与は経粘膜または経皮的方法とすることもできる。経粘膜または経皮投与のために、浸透すべき障壁に適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は当該技術分野において一般に既知であり、例えば、経粘膜投与に関しては界面活性剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻内噴霧または座薬を使用することにより達成することができる。経皮投与のために、活性化合物は当該技術分野において一般に既知の軟膏、蝋膏、ゲル、またはクリームに製剤化される。
【0091】
医薬品は、座薬（例えば、カカオバターもしくは他のグリセリドなどの、従来の座薬基剤を用いる）、または直腸送達用の停留浣腸の形態でもまた調製することができる。
【0092】
いくつかの実施形態では、活性化合物は、化合物が体から急速に取り除かれることを防ぐ担体、例えばインプラント及びマイクロカプセル化デリバリーシステムなどの制御放出製剤により調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の調製方法は、当業者には明白であろう。材料は商業的に入手することもまた、可能である。リポソーム懸濁液もまた、薬学的に許容される担体として使用可能である。
【0093】
投与しやすく均一な用量の投薬単位形態で経口または非経口組成物を調製することが、特に有利である。本明細書で使用される単位剤形は、対象を治療するための単位の投薬として適した、物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要とされる医薬担体に関連して所望の治療効果をもたらすように算出された、既定量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は、活性化合物の固有の特徴及び達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体における治療のためにそのような活性化合物を調合する技術分野の本質的な制限によって決定付けられ、またそれに直接依存する。
【0094】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、投与前に、再構築のための凍結乾燥形態で提供することができる。例えば、凍結乾燥された抗体分子は、滅菌水中で再構築することができ、個体に投与する前に生理食塩水と混合することができる。
【0095】
本明細書で提供する医薬組成物は、容器、パック、またはディスペンサーに、投与用の取扱説明書と共に含めることができる。
【0096】
核酸分子、ベクター、宿主細胞、及び抗体の産生方法
本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体もしくは抗ＣＤ１２２抗原結合部のアミノ酸配列（または抗体または抗原結合部の（ｉ）ＶＨ領域、（ｉｉ）ＶＬ領域、もしくは（ｉｉｉ）ＶＨ領域及びＶＬ領域の両方のアミノ酸配列）をコードする、核酸分子（例えば、単離核酸分子）を、本明細書において提供する。本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体または抗ＣＤ１２２抗原結合部の（ｉ）重鎖、（ｉｉ）軽鎖、または（ｉｉｉ）重鎖及び軽鎖の両方をコードする核酸分子（例えば、単離核酸分子）をさらに、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域、ＶＬ領域、重鎖、または軽鎖をコードする核酸分子は、シグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域、ＶＬ領域、重鎖、または軽鎖をコードする核酸分子は、シグナル配列を含まない。
本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体もしくは抗ＣＤ１２２抗原結合部のアミノ酸配列（または抗体または抗原結合部の（ｉ）ＶＨ領域、（ｉｉ）ＶＬ領域、もしくは（ｉｉｉ）ＶＨ領域及びＶＬ領域の両方のアミノ酸配列）をコードする、核酸分子（例えば、単離核酸分子）を、本明細書において提供する。本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体または抗ＣＤ１２２抗原結合部の（ｉ）重鎖、（ｉｉ）軽鎖、または（ｉｉｉ）重鎖及び軽鎖の両方をコードする核酸分子（例えば、単離核酸分子）をさらに、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域、ＶＬ領域、重鎖、または軽鎖をコードする核酸分子は、シグナル配列を含む。いくつかの実施形態では、ＶＨ領域、ＶＬ領域、重鎖、または軽鎖をコードする核酸分子は、シグナル配列を含まない。
【0097】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列であって、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記アミノ酸配列をコードする。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列をさらにコードする。
【0098】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列であって、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記アミノ酸配列をコードする。
【0099】
本明細書に記載する核酸分子を含む発現ベクターもまた、本明細書において提供する。特定のベクターでは、核酸分子は、宿主細胞内での核酸セグメントの発現に好適な、１つ以上の調節配列に作動可能に連結している。場合によっては、発現ベクターは、複製を媒介する配列を含み、１つ以上の選択可能なマーカーを含む。本明細書で使用する場合、「ベクター」とは、宿主細胞にて、対象となる１つ以上の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達可能な、そして好ましくは、これを発現可能なコンストラクトを意味する。ベクターの例としては、ウイルスベクター、ネークドＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤と関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されるＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、及びプロデューサー細胞などの特定の真核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【0100】
本明細書で開示する発現ベクターまたは核酸分子を含む組換え宿主細胞を、本明細書において提供する。「宿主細胞」は、ポリヌクレオチドインサートを組み込むためのベクター（複数可）に対するレシピエントであることができる、またはレシピエントとなっている、個別の細胞、細胞株、または細胞培養物を含む。宿主細胞は、単一宿主細胞の後代を含む。後代は、自然変異、偶然変異、または意図的な変異によって、必ずしも、元の親細胞と（モルホロジー、またはゲノムＤＮＡ補体が）完全に同一である必要はなくてよい。発現ベクターを、標準的な技術により宿主細胞にトランスフェクトすることができる。非限定例としては、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラントランスフェクションなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、組換え宿主細胞は、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部のＶＨ領域及びＶＬ領域の両方をコードする、単一ベクターまたは単一の核酸分子を含む。いくつかの実施形態では、組換え宿主細胞は、（ｉ）抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部のＶＨ領域をコードする、第１のベクターまたは第１の核酸分子、及び（ｉｉ）抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部のＶＬ領域をコードする、第２のベクターまたは第２の核酸分子を含む。
【0101】
本発明の抗体分子、またはその抗原結合部は、当該技術分野において周知の技術、例えば、組換え技術、ファージディスプレイ技術、合成技術、計算技術、またはそのような技術、もしくは当該技術分野において速やかに知られる他の技術の組み合わせを用いて産生することができる。
【0102】
抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の産生方法であって、本明細書に記載する発現ベクターを含む組換え宿主細胞を、核酸セグメントが発現する条件下で培養して、抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部を産生することを含む、上記方法をさらに、本明細書で提供する。次いで、抗体または抗原結合部は、宿主細胞または培養液から単離することができる。抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、当業者に既知の様々な方法のいずれかにより産生することができる。特定の実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体及びその抗原結合部は、組換えにより産生することができる。例えば、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、もしくは配列番号１８の１つ以上をコードする核酸配列、またはその一部を、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、もしくは真核細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなどの酵母菌、もしくは、ＣＨＯ細胞株、様々なＣｏｓ細胞株、ヒーラー細胞、ＨＥＫ２９３細胞、様々な骨髄腫細胞株、もしくは形質転換したＢ細胞もしくはハイブリドーマなどの哺乳類細胞）、またはインビトロ翻訳システムに導入することができ、翻訳されたポリペプチドを単離することができる。いくつかの実施形態では、抗体の軽鎖タンパク質及び重鎖タンパク質は、成熟した抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の産生の際に取り除かれるシグナル配列を有する細胞内で産生される。
【0103】
当業者は、標準的な方法論、例えば、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどを用いて、過度な実験をすることなく、所与のポリペプチド配列を含む抗体または抗原結合部がＣＤ１２２タンパク質に結合するか否かを測定することができる。
【0104】
ヒトＣＤ１２２に、ならびに、任意選択で、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２にもまた特異的に結合する抗体、またはその抗原結合部の産生方法であって、
（１）非ヒト源由来の抗ＣＤ１２２ ＣＤＲをヒトｖドメインフレームワークにグラフトして、ヒト化抗ＣＤ１２２抗体分子またはその抗原結合部を産生する工程と、
（２）ＣＤＲに１つ以上の変異を含む、ヒト化抗ＣＤ１２２抗体分子またはその抗原結合部のクローンのライブラリーを生成する工程と、
（３）ライブラリーの、ヒトＣＤ１２２、ならびに、任意選択でまた、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２への結合をスクリーニングする工程と、
（４）スクリーニング工程（３）から、ヒトＣＤ１２２に、ならびに、任意選択で、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２にも結合特異性を有するが、ヒトＢＣＡＭ、ヒトＣＩＬＰ２、またはヒトニューデシンへの結合が低下している、または結合しないクローンを選択する工程と、
（５）工程（４）で選択したクローンから、ヒトＣＤ１２２に、ならびに、任意選択で、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２にもまた特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部を産生する工程と、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。
（１）非ヒト源由来の抗ＣＤ１２２ ＣＤＲをヒトｖドメインフレームワークにグラフトして、ヒト化抗ＣＤ１２２抗体分子またはその抗原結合部を産生する工程と、
（２）ＣＤＲに１つ以上の変異を含む、ヒト化抗ＣＤ１２２抗体分子またはその抗原結合部のクローンのライブラリーを生成する工程と、
（３）ライブラリーの、ヒトＣＤ１２２、ならびに、任意選択でまた、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２への結合をスクリーニングする工程と、
（４）スクリーニング工程（３）から、ヒトＣＤ１２２に、ならびに、任意選択で、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２にも結合特異性を有するが、ヒトＢＣＡＭ、ヒトＣＩＬＰ２、またはヒトニューデシンへの結合が低下している、または結合しないクローンを選択する工程と、
（５）工程（４）で選択したクローンから、ヒトＣＤ１２２に、ならびに、任意選択で、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２にもまた特異的に結合する抗体分子、またはその抗原結合部を産生する工程と、を含む、上記方法を、本明細書において提供する。
【0105】
方法は、工程（４）で選択したクローンに基づき、例えば、工程（４）で選択したクローンのＣＤＲの特定の位置における、さらなる調査用変異導入に基づき、追加のクローンを産生し、工程（５）で産生した抗体分子またはその抗原結合部において、ヒト化を向上させる、及び／またはヒトＴ細胞エピトープの含有量を最小限に抑える、及び／または製造特性を改善する、さらなる工程を含むことができる。
【0106】
抗体の使用
本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ１２２抗原結合部、免疫複合体、及び医薬組成物の、免疫媒介性疾患または障害を有する対象に治療的効果をもたらすための方法及び使用を、本明細書で提供する。
本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ１２２抗原結合部、免疫複合体、及び医薬組成物の、免疫媒介性疾患または障害を有する対象に治療的効果をもたらすための方法及び使用を、本明細書で提供する。
【0107】
対象における免疫応答の抑制方法であって、上記対象に、治療に有効な量の、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を投与することを含む、上記方法を、本明細書において提供する。対象における免疫応答（例えば、ＣＤ１２２陽性細胞により媒介される免疫応答）の抑制方法であって、対象に、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を投与することを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記方法を、本明細書において提供する。対象における免疫応答の抑制方法であって、対象に、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を投与することを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記方法を、本明細書において提供する。いくつかの実施形態では、免疫応答はＣＤ１２２により媒介される。
【0108】
ＩＬ－１５が誘導するＴ細胞の皮膚（例えば、ヒトの皮膚）からの移動の抑制方法であって、上記皮膚を、治療に有効な量の、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を接触させることを含む、上記方法を、本明細書において提供する。ＩＬ－１５が誘導するＴ細胞の皮膚（例えば、ヒトの皮膚）からの移動の抑制方法であって、皮膚を、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部と接触させることを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記方法を、本明細書において提供する。ＩＬ－１５が誘導するＴ細胞の皮膚（例えば、ヒトの皮膚）からの移動の抑制方法であって、皮膚を、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部と接触させることを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記方法を、本明細書において提供する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、皮膚は、ＣＤ１２２の過剰発現、または通常はＣＤ１２２を発現しない細胞でのＣＤ１２２の発現と関連する疾患または障害を有する、対象の皮膚である。
【0109】
本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部は、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）治療（例えば、対象において病状が開始する前に、対象で病状が生じるリスクを軽減する、開始を遅らせる、または開始後にその重症度を軽減するための治療）を含む、ヒトまたは動物の体の治療方法で使用することができる。治療方法は、必要とする対象に抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部を投与することを含むことができる。対象における疾患の治療または予防方法であって、上記対象に、治療に有効な量の、本明細書で開示する抗体、抗原結合部、免疫複合体、または医薬組成物を投与することを含む、上記方法を、本明細書において提供する。
【0110】
対象における疾患の治療または予防方法であって、対象に、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を投与することを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記方法を、本明細書において提供する。対象における疾患の治療または予防方法であって、対象に、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を投与することを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記方法を、本明細書において提供する。
【0111】
対象における疾患の症状の重症度の緩和、治療、または軽減方法であって、対象に、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を投与することを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、上記方法を、本明細書において提供する。対象における疾患の症状の重症度の緩和、治療、または軽減方法であって、対象に、治療に有効な量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部を投与することを含み、抗体または抗原結合部がＶＨ領域及びＶＬ領域を含み、（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、もしくはこれからなる、または（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、もしくはこれからなり、ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、もしくはこれからなる、上記方法を、本明細書において提供する。
【0112】
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、ＣＤ１２２の過剰発現、または通常ＣＤ１２２を発現しない細胞におけるＣＤ１２２の発現と関連する。いくつかの実施形態では、疾患または障害はＣＤ１２２により媒介される。
【0113】
いくつかの実施形態では、疾患は、炎症性疾患または自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患は、白斑、セリアック病、１型糖尿病、多発性硬化症、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、乾癬、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、潰瘍性大腸炎、または関節リウマチである。
【0114】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する方法で用いる抗ＣＤ１２２抗体または抗原結合部の、ＶＨ領域、ＶＬ領域、またはＶＨ領域とＶＬ領域の両方は、１つ以上の、ヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む。
【0115】
本明細書で使用する場合、「有効量」、または「治療に有効な量」という用語は、疾患、例えば、白斑、セリアック病、１型糖尿病、多発性硬化症、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、乾癬、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、潰瘍性大腸炎、もしくは関節リウマチ、もしくはこれらの１つ以上の症状の、重症度及び／または期間を小さくする、もしくは緩和する、疾患の進行を予防する、疾患の後退を引き起こす、疾患と関連する１つ以上の症状の再発、発症、開始、もしくは進行を予防する、疾患を検出する、またはＣＤ１２２媒介性疾患用の、別の関連する治療法（例えば、予防もしくは治療剤）の予防もしくは治療効果（複数可）を向上させる、もしくは改善するのに十分な、医薬品、例えば、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の量を意味する。
【0116】
投与される実際の量、ならびに、投与速度及び時間経過は、治療されているものの性質及び重症度、治療されている具体的な哺乳類、個別の患者の臨床状態、障害の原因、組成物の送達部位、投与方法、投与スケジューリング、ならびに、医師に知られている他の因子に左右されるであろう。治療の処方、例えば、用量の決定などは、一般医または他の医師の責任の範囲内であり、治療されている疾患の症状及び／または進行の深刻度に左右され得る。抗体分子の適切な用量は、当該技術分野において周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９－６６４、Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ４：９１５－９２２）。本明細書で、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００３）において、投与されている薬剤の種類に対して適切と示され得る具体的な用量を使用してよい。治療に有効な量、または好適な用量の抗体分子は、動物モデルにおいてインビトロ活性とインビボ活性を比較することで測定することができる。マウス及び他の試験動物における有効用量をヒトに当てはめる方法は既知である。正確な用量は、抗体が予防用のものであるのか治療用のものであるのか、治療される領域のサイズ及び位置、抗体（例えば、全抗体、断片）の正確な性質、ならびに、抗体に結合した任意の検出可能な標識または他の分子の性質を含む多数の因子に左右されるであろう。
【0117】
典型的な抗体の用量は、全身投与に対しては１００μｇ～１ｇ、皮内注射に対しては１μｇ～１ｍｇの範囲であろう。初回に多めの投与量、その後、１回以上の量の少ない用量を投与してよい。いくつかの実施形態では、抗体は全抗体、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプである。これは、成人対象の１回治療用の用量であり、子ども及び乳児にも相応に調整することができ、また、分子量に比例して他の抗体フォーマットにも調整することができる。治療は、毎日、週に２回、毎週または毎月の間隔で、医師の自由裁量で繰り返すことができる。対象の治療スケジュールは、抗体組成物の薬物動態及び薬力学特性、投与経路、ならびに、治療されている病状の性質に左右され得る。
【0118】
治療は周期的であることができ、投与間の周期は、約２週間以上、例えば、約３週間以上、約４週間以上、およそ月に１回以上、約５週間以上、または約６週間以上であることができる。例えば、治療は、２～４週毎、または４～８週毎であることができる。治療は、術前及び／または術後に行うことができ、及び／または外科治療もしくは侵襲的手順の解剖部位に直接投与もしくは適用することができる。好適な製剤及び投与経路は、上述している。
【0119】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体及び抗原結合部は、皮下注射として投与することができる。皮下注射は、例えば、長期予防／治療用の自動注射器を用いて投与することができる。
【0120】
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の治療効果は、用量に応じて、数半減期の間持続し得る。例えば、単回用量の抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の治療効果は、対象において１ヶ月以上、２ヶ月以上、３ヶ月以上、４ヶ月以上、５ヶ月以上、または６ヶ月以上持続し得る。
【0121】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体または抗ＣＤ１２２抗原結合部、免疫複合体または医薬組成物、及びＣＤ１２２媒介性疾患もしくは障害を、またはＣＤ１２２媒介性疾患もしくは障害の症状もしくは合併症を治療するために使用される追加の治療剤または治療法で治療することができる。抗ＣＤ１２２抗体または抗ＣＤ１２２抗原結合部、及び追加の治療剤または治療法は、同時にまたは連続して投与することができる。
【0122】
いくつかの実施形態では、対象はヒト、非ヒト霊長類、ブタ、ウマ、ウシ、イヌ、ネコ、モルモット、マウス、またはラットである。いくつかの実施形態では、対象は成人のヒトである。いくつかの実施形態では、対象は小児のヒトである。
【0123】
疾患または障害の治療で使用するための、本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体または抗ＣＤ１２２抗原結合部、免疫複合体または医薬組成物をさらに、本明細書で提供する。
【0124】
薬剤として使用するための、本明細書に記載する抗ＣＤ１２２抗体または抗ＣＤ１２２抗原結合部、免疫複合体または医薬組成物を、本明細書において提供する。
【0125】
定義
別途記載がない限り、本明細書で使用する用語は、当該技術分野において通常用いられるとおりの定義を有する。いくつかの用語を以下に定義し、追加の定義は、発明を実施するための形態の残りの箇所に見出すことができる。
別途記載がない限り、本明細書で使用する用語は、当該技術分野において通常用いられるとおりの定義を有する。いくつかの用語を以下に定義し、追加の定義は、発明を実施するための形態の残りの箇所に見出すことができる。
【0126】
「ａ」または「ａｎ」という用語は、当該要素の１つ以上を意味する、即ち、複数の指示対象を意味することができる。したがって、「ａ」、「ａｎ」、「１つ以上」、及び「少なくとも１つ」という用語は、本明細書では同じ意味で用いられる。加えて、不定冠詞「ａ」または「ａｎ」による「要素」への言及は、文脈上明白に薬剤のうちの１つ及び１つのみが存在することを必要としない限り、薬剤のうちの２つ以上が存在する可能性を排除しない。
【0127】
本明細書の全体を通して、用語「約」は、値が、この値を決定するために使用されるデバイス、または方法についての誤差の固有の変動、または測定される試料間で存在する変動を含むことを示すために使用される。別途明記されない限り、または文脈から明らかでない場合を除いて、「約」という用語は、報告される数値の上下１０％以内（そのような数が、可能な値の１００％を超える、または０％を下回る場合を除く。）を意味する。値の範囲、または一連の値と組み合わせて用いる場合、「約」という用語は、別途記載のない限り、一連で列挙される値の範囲の両端点、またはそれらのそれぞれに適用される。本出願にて使用する場合、「約」及び「およそ」という用語は、等価なものとして用いられる。
【0128】
本明細書で使用する場合、「配列同一性」という用語は、最適にアラインされた２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列が、残基、例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸のアラインメントウィンドウを通して不変である程度を意味する。試験配列及び参照配列の、アラインされたセグメントに関する「同一性部分」とは、アラインされた２つの配列により分かち合われている同一残基の数を参照配列セグメント中の残基の総数、即ち、参照配列全体、またはより細かく画定される参照配列の一部により除したものである。「同一性パーセント」とは、同一性部分を１００倍したものである。同一性パーセントは、デフォルトパラメータを用いて、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｍｓａ／ｃｌｕｓｔａｌｏで入手可能なアラインメントプログラムのＣｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａを用いて計算することができる。Ｓｉｅｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｆａｓｔ，ｓｃａｌａｂｌｅ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ－ｑｕａｌｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ ｕｓｉｎｇ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｏｍｅｇａ”（２０１１ Ｏｃｔｏｂｅｒ １１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍｓ ｂｉｏｌｏｇｙ ７：５３９を参照されたい。配列に対する同一性を計算する目的のため、タグなどの伸長は含めない。
【0129】
本明細書で使用する場合、「ＨＣＤＲ」という用語は、重鎖相補性決定領域を意味する。本明細書で使用する場合、「ＬＣＤＲ」という用語は、軽鎖相補性決定領域を意味する。
【0130】
本明細書で使用する場合、「保存的置換」という用語は、あるアミノ酸を、その機能活性を著しく有害に変化させない別のアミノ酸で置き換えることを意味する。「保存的置換」の好ましい例は、あるアミノ酸を、以下のＢＬＯＳＵＭ６２置換マトリックスにおいて≧０の値を有する別のアミノ酸で置き換えることである（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，１９９２，ＰＮＡＳ ８９：１０９１５－１０９１９を参照されたい）。
【0131】
「抗体薬物複合体」及び「免疫複合体」とは、ＣＤ１２２に結合し、細胞毒性、細胞増殖抑制、及び／または治療剤と複合体化した抗体誘導体を含む、抗体分子またはその抗原結合部を意味する。
【0132】
「単離分子」（分子は、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体である。）という用語は、起源、または由来源によって、（１）天然状態で付随する、自然に関連する構成要素と関連しない、（２）同一種の他の分子を実質的に含まない、（３）異なる種の細胞により発現される、または（４）自然で発生しない分子である。したがって、自然に由来する細胞とは異なる細胞系で化学的に合成される、または発現する分子は、その自然に関連する構成要素から「単離」されるであろう。分子は、当該技術分野において周知の精製技術を用いる単離により、自然に関連する構成要素を実質的に含まないようにすることができる。分子の純度または均質性は、当該技術分野において周知の多数の手段により分析することができる。例えば、ポリペプチド試料の純度は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用い、当該技術分野において周知の技術を用いてゲルを染色し、ポリペプチドを可視化することでアッセイすることができる。特定の目的のために、ＨＰＬＣ、または精製のための当該技術分野において周知の他の手段を用いて、より高い解像を行うことができる。
【0133】
「エピトープ」という用語は、抗体分子の抗原結合領域の１箇所以上において、抗体分子またはその抗原結合部により認識され結合されることが可能な、分子の部分を意味する。エピトープは、一次、二次、または三次タンパク質構造の、画定される領域で構成されることができ、抗体またはその抗原結合部の抗原結合領域により認識される標的の、二次構造ユニットまたは構造ドメインの組み合わせを含む。エピトープも同様に、アミノ酸または糖側鎖などの、画定される化学的に活性な表面のグルーピングした分子からなることができ、特定の３次元構造特性、加えて、特定の電荷特性を有することができる。本明細書で使用する場合、「抗原性エピトープ」という用語は、当該技術分野において周知の任意の方法によって、例えば、従来のイムノアッセイ、抗体競合結合アッセイによって、またはｘ線結晶学、もしくは関連する構造測定法（例えば、核磁気共鳴分光法）によって定義されるように、抗体分子が特異的に結合することができるポリペプチドの部分と定義される。
【0134】
「効力」という用語は、生物活性の測定値であり、ＩＣ５０、ＥＣ５０、または本明細書に記載するＣＤ１２２活性アッセイにおいて測定する活性の５０％を阻害する、抗体または抗体薬物複合体の、抗原ＣＤ１２２に対する有効濃度として示すことができる。
【0135】
本明細書で開示する抗体の生物活性に関して本明細書で使用する、「阻害する」、または「中和する」という用語は、抗体が、例えば、抗体分子の、ＣＤ１２２に対する生物活性または結合相互作用を含むがこれらに限定されない、阻害されているものの進行または深刻度を実質的にアンタゴナイズする、阻害する、予防する、制限する、遅くする、妨害する、排除する、停止する、軽減する、または逆転させる能力を意味する。
【0136】
本明細書において、いかなる濃度範囲、百分率範囲、比範囲、または整数範囲も、特に明記しない限り、記載された範囲内の任意の整数の値、及び適切な場合には、その分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解されるべきである。代替手段（例えば、「または」）の使用は、代替手段の一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語は同義語として使用される。
【0137】
本明細書において使用される見出しは、単に編成のためであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。
【0138】
特許、特許出願、記事、書籍及び論文を含むが、これらに限定されない、本明細書で引用される全ての文書または文書の一部は、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に明確に援用される。援用される文書または文書の一部のうちの１つ以上が、本出願における用語の定義と矛盾する用語の定義をしている場合、本出願に示される定義が優先される。しかしながら、本明細書で引用された任意の参考文献、記事、刊行物、特許、特許公開、及び特許出願の言及は、それらが有効な先行技術を構成するか、または世界の任意の国における一般的知識の一部を形成するという認識、または示唆の任意の形態ではなく、そのように受け取られるべきではない。
【0139】
本明細書に記載する態様及び実施形態のいずれかを、要約、図面、及び／または発明を実施するための形態（以下の、本開示の具体的な非限定例／実施形態を含む。）において、本明細書で開示した任意の他の態様または実施形態と組み合わせることができる。
【0140】
番号付けされた実施形態
添付の特許請求の範囲にかかわらず、本開示は、以下の番号付けされた本開示の実施形態を記載する。
添付の特許請求の範囲にかかわらず、本開示は、以下の番号付けされた本開示の実施形態を記載する。
【0141】
１．抗ＣＤ１２２抗体、またはその抗原結合部であって、前記抗体または抗原結合部が、重鎖可変（ＶＨ）領域、及び軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、前記抗体または抗原結合部。
（ａ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１８を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、または
（ｂ）ＶＨ領域のアミノ酸配列が、配列番号３を含むＨＣＤＲ１、配列番号５を含むＨＣＤＲ２、及び配列番号７を含むＨＣＤＲ３を含み、ＶＬ領域のアミノ酸配列が、配列番号１１を含むＬＣＤＲ１、配列番号１３を含むＬＣＤＲ２、及び配列番号１５を含むＬＣＤＲ３を含む、前記抗体または抗原結合部。
【0142】
２．
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、または
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、実施形態１に記載の抗体または抗原結合部。
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号１７を含む、または
（ｂ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列が配列番号１を含み、前記ＶＬ領域のアミノ酸配列が配列番号９を含む、実施形態１に記載の抗体または抗原結合部。
【0143】
３．前記抗体または抗原結合部がヒト化されている、またはキメラである、実施形態１または２に記載の抗体または抗原結合部。
【0144】
４．前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ及びＶＬ領域の両方が、１つ以上の、ヒトフレームワーク領域のアミノ酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0145】
５．前記ＶＨ領域、前記ＶＬ領域、または前記ＶＨ及びＶＬ領域の両方が、ＣＤＲアミノ酸配列が挿入されている、ヒト可変領域フレームワークのスキャフォールドアミノ酸配列を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0146】
６．前記ＶＨ領域が、前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されている、ＩＧＨＶ３－２３ヒト生殖細胞系のスキャフォールドアミノ酸配列を含む、実施形態１及び３～５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0147】
７．前記ＶＬ領域が、前記ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列が挿入されている、ＩＧＫＶ１－３３ヒト生殖細胞系のスキャフォールドアミノ酸配列を含む、実施形態１及び３～６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0148】
８．前記抗体が、免疫グロブリンの定常領域を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0149】
９．前記免疫グロブリンの定常領域が、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹである、実施形態８に記載の抗体または抗原結合部。
【0150】
１０．前記免疫グロブリンの定常領域が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、またはＩｇＡ２である、実施形態９に記載の抗体または抗原結合部。
【0151】
１１．前記免疫グロブリンの定常領域が、免疫学的に不活性である、実施形態８に記載の抗体または抗原結合部。
【0152】
１２．前記免疫グロブリンの定常領域が、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含むヒトＩｇＧ４定常領域、野生型ヒトＩｇＧ１定常領域、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含むヒトＩｇＧ１定常領域、または野生型ヒトＩｇＧ２定常領域であり、番号付けは、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックスに従う、実施形態８に記載の抗体または抗原結合部。
【0153】
１３．前記免疫グロブリンの定常領域が、配列番号３２～３８のいずれか１つを含む、実施形態８に記載の抗体または抗原結合部。
【0154】
１４．前記抗体または抗原結合部が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、マキシボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、またはビスｓｃＦｖである、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0155】
１５．前記抗体がモノクローナルである、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0156】
１６．前記抗体が、四量体抗体、四価抗体、または多重特異性抗体である、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0157】
１７．前記抗体が、第１の抗原及び第２の抗原に特異的に結合する二重特異性抗体であり、前記第１の抗原はＣＤ１２２であり、前記第２の抗原はＣＤ１２２ではない、実施形態１～１６のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部。
【0158】
１８．治療剤に結合した、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体または抗原結合部を含む免疫複合体。
【0159】
１９．前記治療剤が、細胞毒素、放射性同位体、化学療法剤、免疫調節剤、細胞増殖抑制酵素、細胞溶解酵素、治療用核酸、抗血管新生剤、抗増殖剤、またはプロアポトーシス剤である、実施形態１８に記載の免疫複合体。
【0160】
２０．実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部、または実施形態１８もしくは１９に記載の免疫複合体と、薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
【0161】
２１．実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体または抗体結合部の
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列、
（ｂ）前記ＶＬ領域のアミノ酸配列、または
（ｃ）前記ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列の両方
をコードする核酸分子。
（ａ）前記ＶＨ領域のアミノ酸配列、
（ｂ）前記ＶＬ領域のアミノ酸配列、または
（ｃ）前記ＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列の両方
をコードする核酸分子。
【0162】
２２．実施形態２１に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【0163】
２３．実施形態２１に記載の核酸分子、または実施形態２２に記載の発現ベクターを含む、組換え宿主細胞。
【0164】
２４．抗ＣＤ１２２抗体またはその抗原結合部の産生方法であって、実施形態２２に記載の発現ベクターを含む組換え宿主細胞を、前記核酸分子が発現する条件下で培養することにより、前記抗体または抗原結合部を産生することと、前記宿主細胞または培養液から、前記抗体または抗原結合部を単離することと、を含む、前記方法。
【0165】
２５．対象における免疫応答の抑制方法であって、前記対象に、治療に有効な量の、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部、実施形態１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または実施形態２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【0166】
２６．前記免疫応答がＣＤ１２２により媒介される、実施形態２５に記載の方法。
【0167】
２７．対象における疾患の治療または予防方法であって、前記対象に、治療に有効な量の、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部、実施形態１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または実施形態２０に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【0168】
２８．前記疾患が、炎症性疾患または自己免疫疾患である、実施形態２７に記載の方法。
【0169】
２９．前記疾患が、白斑、セリアック病、１型糖尿病、多発性硬化症、移植片対宿主病、全身性エリテマトーデス、乾癬、アトピー性皮膚炎、円形脱毛症、潰瘍性大腸炎、または関節リウマチである、実施形態２７に記載の方法。
【0170】
３０．ＩＬ－１５が誘導するＴ細胞の皮膚からの移動の抑制方法であって、前記皮膚を、治療に有効な量の、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部、実施形態１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または実施形態２０に記載の医薬組成物と接触させることを含む、前記方法。
【0171】
３１．薬剤として使用するための、実施形態１～１７のいずれか１つに記載の抗体もしくは抗原結合部、実施形態１８もしくは１９に記載の免疫複合体、または実施形態２０に記載の医薬組成物。
【0172】
本開示は、以下の実施例によりさらに明確となり、これらは単に、本開示を例示するものであることが意図され、本開示をいかなる方法でも限定することを意図するものではない。
【実施例】
【0173】
実施例１。最適化された抗ＣＤ１２２治療用抗体の生成
緒言
本実施例では、我々は、拮抗性の最適化された抗ＣＤ１２２抗体のパネルの生成に成功する。これらの抗ＣＤ１２２抗体は十分発現し、生物物理学的に安定しており、非常に可溶性で、好ましいヒト生殖細胞系に対して最大源の同一性を有する。
緒言
本実施例では、我々は、拮抗性の最適化された抗ＣＤ１２２抗体のパネルの生成に成功する。これらの抗ＣＤ１２２抗体は十分発現し、生物物理学的に安定しており、非常に可溶性で、好ましいヒト生殖細胞系に対して最大源の同一性を有する。
【0174】
材料及び方法
抗体ｖドメイン特異性検査：ヒト受容体アレイ分析
ヒト細胞膜受容体プロテオームアレイを、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ Ｌｔｄ．にて行った。一次スクリーニング：５μｇ／ｍＬのＩｇＧ１－ＭＩＫβ１（ヒト化、ＶｉｌｌＭａｂ－１とも呼ばれる）抗体の、４９７５個のヒト原形質膜タンパク質を個別に発現する、固定されたＨＥＫ２９３細胞／スライド（１４個のスライドセット、スライドセット１個当たりｎ＝２個のスライド）に対する結合をスクリーニングした。全てのトランスフェクション効率が、最低閾値を超過した。ＡＦ６４７蛍光二次抗ヒトＩｇＧ１抗体を用いて、抗体結合を検出した。一次ヒット（重複スポット）は、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔにて蛍光（ＡＦ６４７及びＺｓＧｒｅｅｎ１）を分析することで同定した。全てのヒットをコードするベクターを配列決定し、その正確な同一性を確認した。
抗体ｖドメイン特異性検査：ヒト受容体アレイ分析
ヒト細胞膜受容体プロテオームアレイを、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ Ｌｔｄ．にて行った。一次スクリーニング：５μｇ／ｍＬのＩｇＧ１－ＭＩＫβ１（ヒト化、ＶｉｌｌＭａｂ－１とも呼ばれる）抗体の、４９７５個のヒト原形質膜タンパク質を個別に発現する、固定されたＨＥＫ２９３細胞／スライド（１４個のスライドセット、スライドセット１個当たりｎ＝２個のスライド）に対する結合をスクリーニングした。全てのトランスフェクション効率が、最低閾値を超過した。ＡＦ６４７蛍光二次抗ヒトＩｇＧ１抗体を用いて、抗体結合を検出した。一次ヒット（重複スポット）は、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔにて蛍光（ＡＦ６４７及びＺｓＧｒｅｅｎ１）を分析することで同定した。全てのヒットをコードするベクターを配列決定し、その正確な同一性を確認した。
【0175】
確認／特異性スクリーン：全てのヒットをコードするベクター、加えて、ＭＳ４Ａ１（ＣＤ２０）及びＥＧＦＲをコードする対照ベクターを、新たなスライドで２通りにスポットし、これを用いて、前述のとおりヒトＨＥＫ２９３細胞を逆トランスフェクトした。全てのトランスフェクション効率が、最低閾値を超過した。同一の固定スライドを、５μｇ／ｍＬの各試験抗体、５μｇ／ｍＬの陰性対照抗体、１μｇ／ｍＬのリツキシマブバイオシミラー（陽性対照）、アイソタイプＩｇＧ１（Ａｂ００１０２ヒトＩｇＧ１抗フルオレセイン）、または試験分子なし（二次のみ、陰性対照）で処理した（処理当たりｎ＝２個のスライド）。スライドを、上述のとおり分析した。
【0176】
フローサイトメトリー確認スクリーン：ＺｓＧｒｅｅｎ１のみ、またはＺｓＧｒｅｅｎ１及びＣＤ１２２、ＢＣＡＭをコードする発現ベクターを、ヒトＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクトした。生きた各トランスフェクタントを、１及び５ｍｇ／ｍＬの、試験抗体及びアイソタイプコントロール抗体のそれぞれでインキュベートした。細胞を洗浄し、細胞マイクロアレイスクリーンで使用したのと同じＡＦ６４７抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ検出抗体でインキュベートした。細胞を再び洗浄し、Ａｃｃｕｒｉフローサイトメーター（ＢＤ）を用いてフローサイトメトリーにより分析した。７ＡＡＤ生／死染料を用いて死細胞を除外し、ＺｓＧｒｅｅｎ１陽性細胞（即ち、トランスフェクト細胞）を分析のために選択した。
【0177】
ＣＤ１２２ライブラリーの生成及び選択
ＣＤ１２２ Ｆａｂレパートリーを、マスオリゴ合成及びＰＣＲにより構築した。次に、増幅したＦａｂレパートリーを、制限ライゲーションによりファージミドベクターにクローニングし、Ｅ．Ｃｏｌｉ ＴＧ－１細胞に形質転換し、ファージレパートリーを、以前に詳述したとおり基本的にレスキューした（Ｆｉｎｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ６８１：３８３－４０１）。ストレプトアビジン磁気マイクロビーズを、ビオチン化ＣＤ１２２標的タンパク質（ヒトまたはカニクイザルのいずれか）でコーティングし、ビーズを３回ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４＋５％スキム乳タンパク質）に再懸濁することにより、ファージ選択を行った。これらのビーズを、１ラウンド目の選択において１００ｎＭの標的タンパク質で、続けて、３回の連続ラウンドで、抗原濃度を低下させてコーティングした。各ラウンドにおいて、ファージを、トリプシンを用いて溶出した後、ＴＧ１細胞に再感染させた。
ＣＤ１２２ Ｆａｂレパートリーを、マスオリゴ合成及びＰＣＲにより構築した。次に、増幅したＦａｂレパートリーを、制限ライゲーションによりファージミドベクターにクローニングし、Ｅ．Ｃｏｌｉ ＴＧ－１細胞に形質転換し、ファージレパートリーを、以前に詳述したとおり基本的にレスキューした（Ｆｉｎｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ６８１：３８３－４０１）。ストレプトアビジン磁気マイクロビーズを、ビオチン化ＣＤ１２２標的タンパク質（ヒトまたはカニクイザルのいずれか）でコーティングし、ビーズを３回ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４＋５％スキム乳タンパク質）に再懸濁することにより、ファージ選択を行った。これらのビーズを、１ラウンド目の選択において１００ｎＭの標的タンパク質で、続けて、３回の連続ラウンドで、抗原濃度を低下させてコーティングした。各ラウンドにおいて、ファージを、トリプシンを用いて溶出した後、ＴＧ１細胞に再感染させた。
【0178】
Ｆａｂ及びＩｇＧ発現及び精製
リードパネル抗ＣＤ１２２抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメインをコードする、哺乳類コドン最適化合成遺伝子、加えてＭＩＫβ１バリアントを、エフェクター機能ヌルヒトＩｇＧ１（「ＩｇＧ１－３Ｍ」：通常の免疫グロブリンＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣ機能をなくす、低ヒンジにＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ変異を含有するヒトＩｇＧ１）、ならびに、ヒトＣκドメインをそれぞれを含む哺乳類発現ベクターにクローニングした。哺乳類発現系において、重鎖及び軽鎖含有ベクターのコトランスフェクションを行った後、プロテインＡベースのＩｇＧ精製を行い、定量し、変性及び非変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥにてＱＣを行った。
リードパネル抗ＣＤ１２２抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメインをコードする、哺乳類コドン最適化合成遺伝子、加えてＭＩＫβ１バリアントを、エフェクター機能ヌルヒトＩｇＧ１（「ＩｇＧ１－３Ｍ」：通常の免疫グロブリンＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣ機能をなくす、低ヒンジにＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ変異を含有するヒトＩｇＧ１）、ならびに、ヒトＣκドメインをそれぞれを含む哺乳類発現ベクターにクローニングした。哺乳類発現系において、重鎖及び軽鎖含有ベクターのコトランスフェクションを行った後、プロテインＡベースのＩｇＧ精製を行い、定量し、変性及び非変性ＳＤＳ－ＰＡＧＥにてＱＣを行った。
【0179】
Ｆａｂ及びＩｇＧに対する直接結合ＥＬＩＳＡ
リードパネルの、組換えタンパク質への結合及び交差反応性をまず、結合ＥＬＩＳＡにより評価した。ヒトＣＤ１２２ヒトＦｃタグ組換えタンパク質、ならびに、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２ヒトＦｃタグ組換えタンパク質を、ＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）平底９６ウェルプレートの表面に、１μｇ／ｍＬでコーティングした。精製したＦａｂまたはＩｇＧ試料を、５００ｎＭから始まって０．９８ｎＭまで、２倍連続希釈で滴定し、コーティングした抗原に結合させた。マウス抗ｃ－ｍｙｃ抗体、続けて、ホースラディッシュペルオキシダーゼと複合体化した、ロバ抗マウスＩｇＧを用いてＦａｂを検出した。ホースラディッシュペルオキシダーゼと複合体化したマウス抗ヒトＩｇＧを用いて、ＩｇＧを検出した。３，３’５，５’－テトラメチルベンジジン基質溶液（ＴＭＢ）で結合シグナルを可視化し、４５０ｎｍで吸光度を測定した。
リードパネルの、組換えタンパク質への結合及び交差反応性をまず、結合ＥＬＩＳＡにより評価した。ヒトＣＤ１２２ヒトＦｃタグ組換えタンパク質、ならびに、カニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２ヒトＦｃタグ組換えタンパク質を、ＭａｘｉＳｏｒｐ（商標）平底９６ウェルプレートの表面に、１μｇ／ｍＬでコーティングした。精製したＦａｂまたはＩｇＧ試料を、５００ｎＭから始まって０．９８ｎＭまで、２倍連続希釈で滴定し、コーティングした抗原に結合させた。マウス抗ｃ－ｍｙｃ抗体、続けて、ホースラディッシュペルオキシダーゼと複合体化した、ロバ抗マウスＩｇＧを用いてＦａｂを検出した。ホースラディッシュペルオキシダーゼと複合体化したマウス抗ヒトＩｇＧを用いて、ＩｇＧを検出した。３，３’５，５’－テトラメチルベンジジン基質溶液（ＴＭＢ）で結合シグナルを可視化し、４５０ｎｍで吸光度を測定した。
【0180】
ヒト及びアカゲザルＣＤ１２２に対するＦａｂ親和性のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＧＥ）にて、溶液中抗原を用いるＳＰＲにより、精製ＩｇＧの親和性（ＫＤ）を測定した。２つのチャンネルに対するＷｉｚａｒｄ取扱説明書に従い、マウス抗ヒト抗体（ＣＨ１特異的）をＣＭ５センサーチップに、アミンカップリングを用いてｐＨ４．５にて、酢酸緩衝液中で２０００ＲＵのレベルまで不動化した。片方のチャンネルは、バックグラウンドシグナル補正に用いた。標準的なランニング緩衝液であるＨＢＳ－ＥＰ（ｐＨ７．４）を用いた。ｐＨ１．５で、２０μＬ／分にて、１０μＬの１０ｍＭグリシンを単回注射することで、再生成を行った。５０ｎＭで、３０μＬ／分で２分間、続いて、６０秒の乖離速度で、ＩｇＧ試料を注射した。モノマー抗原（ヒトＣＤ１２２ Ｈｉｓタグ、またはカニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２ Ｈｉｓタグ）を、１００ｎＭから３．１ｎＭまで下げる２倍連続希釈で、３０μＬ／分で２分間、続けて３００秒の乖離速度で注射した。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００評価（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）ソフトウェアを用いて、得られたセンサーグラムを分析した。会合及び乖離段階を、１：１のラングミュア結合モデルに同時適合させることで、ＫＤを計算した。
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＧＥ）にて、溶液中抗原を用いるＳＰＲにより、精製ＩｇＧの親和性（ＫＤ）を測定した。２つのチャンネルに対するＷｉｚａｒｄ取扱説明書に従い、マウス抗ヒト抗体（ＣＨ１特異的）をＣＭ５センサーチップに、アミンカップリングを用いてｐＨ４．５にて、酢酸緩衝液中で２０００ＲＵのレベルまで不動化した。片方のチャンネルは、バックグラウンドシグナル補正に用いた。標準的なランニング緩衝液であるＨＢＳ－ＥＰ（ｐＨ７．４）を用いた。ｐＨ１．５で、２０μＬ／分にて、１０μＬの１０ｍＭグリシンを単回注射することで、再生成を行った。５０ｎＭで、３０μＬ／分で２分間、続いて、６０秒の乖離速度で、ＩｇＧ試料を注射した。モノマー抗原（ヒトＣＤ１２２ Ｈｉｓタグ、またはカニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２ Ｈｉｓタグ）を、１００ｎＭから３．１ｎＭまで下げる２倍連続希釈で、３０μＬ／分で２分間、続けて３００秒の乖離速度で注射した。ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００評価（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ）ソフトウェアを用いて、得られたセンサーグラムを分析した。会合及び乖離段階を、１：１のラングミュア結合モデルに同時適合させることで、ＫＤを計算した。
【0181】
ＩｇＧのフローサイトメトリー
ＣＨＯ－Ｋ１安定細胞株及びＣＨＯ－Ｋ１野生型細胞で発現するヒト及びアカゲザルＣＤ１２２への結合について、精製ＩｇＧをＦＡＣｓで試験した。ＩｇＧ試料を、５００ｎＭから開始して０．９８ｎＭまで、３倍連続希釈で滴定した。ＩｇＧの結合を、ＦＩＴＣと複合体化したマウス抗ヒトＩｇＧを用いて検出した。フローサイトメーター（Ａｔｔｕｎｅ（商標） ＮｘＴ Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＢＬ－１チャネル検出器にて、試料当たり１００００細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を調査することにより、結果を分析した。
ＣＨＯ－Ｋ１安定細胞株及びＣＨＯ－Ｋ１野生型細胞で発現するヒト及びアカゲザルＣＤ１２２への結合について、精製ＩｇＧをＦＡＣｓで試験した。ＩｇＧ試料を、５００ｎＭから開始して０．９８ｎＭまで、３倍連続希釈で滴定した。ＩｇＧの結合を、ＦＩＴＣと複合体化したマウス抗ヒトＩｇＧを用いて検出した。フローサイトメーター（Ａｔｔｕｎｅ（商標） ＮｘＴ Ａｃｏｕｓｔｉｃ Ｆｏｃｕｓｉｎｇ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のＢＬ－１チャネル検出器にて、試料当たり１００００細胞の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を調査することにより、結果を分析した。
【0182】
Ｍ０７ｅ細胞系アッセイ
Ｍ０７ｅ細胞を、微生物及び細胞培養液のＤＳＭＺ－Ｇｅｒｍａｎコレクションから入手し、販売業者により提供されるガイドラインに従い、１０％ ＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、及びＬ－グルタミン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を補充したＲＰＭＩに維持した。１日目に、細胞をＲＰＭＩ中で洗浄し、１０％ ＦＢＳ及びＬ－グルタミン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を補充したＲＰＭＩ中で、２．５×１０５細胞／ｍＬの密度で再懸濁した。２００μＬの最終体積で、合計５．０×１０４個の細胞を、５０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ１５（ｒｈＩＬ１５）（Ｒ＆Ｄ）、またはｒｈＩＬ１５と抗体の存在下で３７℃で７２時間、９６ウェル平底プレートのウェルで培養した。７２時間後、細胞を３時間、３７℃で、２０μＬのＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）によりインキュベートした。走査型マルチウェル光分析装置により、細胞増殖の定量化を行い、４５０ｎＭで測定した吸光度を、生残細胞の数に対して補正した。
Ｍ０７ｅ細胞を、微生物及び細胞培養液のＤＳＭＺ－Ｇｅｒｍａｎコレクションから入手し、販売業者により提供されるガイドラインに従い、１０％ ＦＢＳ、１０ｎｇ／ｍＬのＧＭ－ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）、及びＬ－グルタミン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を補充したＲＰＭＩに維持した。１日目に、細胞をＲＰＭＩ中で洗浄し、１０％ ＦＢＳ及びＬ－グルタミン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を補充したＲＰＭＩ中で、２．５×１０５細胞／ｍＬの密度で再懸濁した。２００μＬの最終体積で、合計５．０×１０４個の細胞を、５０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ１５（ｒｈＩＬ１５）（Ｒ＆Ｄ）、またはｒｈＩＬ１５と抗体の存在下で３７℃で７２時間、９６ウェル平底プレートのウェルで培養した。７２時間後、細胞を３時間、３７℃で、２０μＬのＷＳＴ－１細胞増殖試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）によりインキュベートした。走査型マルチウェル光分析装置により、細胞増殖の定量化を行い、４５０ｎＭで測定した吸光度を、生残細胞の数に対して補正した。
【0183】
ヒトＮＫ細胞系アッセイ
Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅによる密度勾配遠心分離を用いて、ドナーの全血からヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、メーカーの指示に従い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）ヒトＮＫ細胞単離キットを用いて、単離ＰＢＭＣからＮＫ細胞を濃縮した。メーカーの指示に従い、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ細胞増殖キットによりＮＫ細胞を染色し、１０％ ＦＢＳ及びペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＲＰＭＩ中で再懸濁した。合計１０５個のＮＫ細胞を、２０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ１５（ｒｈＩＬ１５）（Ｒ＆Ｄ）、またはｒｈＩＬ１５と抗体の存在下で３７℃で１２０時間、９６ウェル丸底プレートのウェルで培養した。１２０時間後、ＮＫ細胞を洗浄し、抗ヒトＣＤ３（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ５６（５．１Ｈ１１）、ＣＤ１６（３Ｇ８）（１：２０希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色して、ＢＤ ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）でＣＦＳＥ希釈を分析した。
Ｆｉｃｏｌｌ Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅによる密度勾配遠心分離を用いて、ドナーの全血からヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、メーカーの指示に従い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）ヒトＮＫ細胞単離キットを用いて、単離ＰＢＭＣからＮＫ細胞を濃縮した。メーカーの指示に従い、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）ＣＦＳＥ細胞増殖キットによりＮＫ細胞を染色し、１０％ ＦＢＳ及びペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を補充したＲＰＭＩ中で再懸濁した。合計１０５個のＮＫ細胞を、２０ｎｇ／ｍＬ組換えヒトＩＬ１５（ｒｈＩＬ１５）（Ｒ＆Ｄ）、またはｒｈＩＬ１５と抗体の存在下で３７℃で１２０時間、９６ウェル丸底プレートのウェルで培養した。１２０時間後、ＮＫ細胞を洗浄し、抗ヒトＣＤ３（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ５６（５．１Ｈ１１）、ＣＤ１６（３Ｇ８）（１：２０希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色して、ＢＤ ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）でＣＦＳＥ希釈を分析した。
【0184】
ＮＳＧ－ＩＬ１５マウスモデル
ヒトＩＬ１５（ＮＳＧ－Ｔｇ）を発現するＮＯＤスキッドガンママウスに、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植することにより、ヒト化マウスを生成した。６～８週齢のＮＳＧ－Ｔｇマウスはまず、２００ｃＧｙの照射を受けた後、臍帯血由来の１０５ ＣＤ３４＋ＨＳＣを注射した。ＨＳＣ移植ＮＳＧ－Ｔｇマウスを、１２及び１６週でスクリーニングして、血液中でのベースライン移植を測定した。ＣＤ５６＋が２％を超える、２０％超のヒトＣＤ４５＋細胞を有するＮＳＧ－Ｔｇマウスを、抗体治療に選択した。マウスを、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射で週に２回（月／木のスケジュール）、３週間治療した。治療開始後１及び３週の時点で、次いで、治療後１、３、及び５週の時点で、フローサイトメトリーを用いて、血液中でのヒト免疫細胞の量を定量した。治療後５週の時点で、マウスを安楽死させ、脾臓及び血液中でのヒト免疫細胞の量をフローサイトメトリーにより測定した。全組織からの細胞を、抗ヒトＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ５６、ＣＤ１６、Ｍｉｋ－ｂ２、及びＭｉｋ－ｂ３（１：２０希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色し、ＢＤ ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）で分析した。
ヒトＩＬ１５（ＮＳＧ－Ｔｇ）を発現するＮＯＤスキッドガンママウスに、ヒト造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植することにより、ヒト化マウスを生成した。６～８週齢のＮＳＧ－Ｔｇマウスはまず、２００ｃＧｙの照射を受けた後、臍帯血由来の１０５ ＣＤ３４＋ＨＳＣを注射した。ＨＳＣ移植ＮＳＧ－Ｔｇマウスを、１２及び１６週でスクリーニングして、血液中でのベースライン移植を測定した。ＣＤ５６＋が２％を超える、２０％超のヒトＣＤ４５＋細胞を有するＮＳＧ－Ｔｇマウスを、抗体治療に選択した。マウスを、腹腔内（ｉ．ｐ．）注射で週に２回（月／木のスケジュール）、３週間治療した。治療開始後１及び３週の時点で、次いで、治療後１、３、及び５週の時点で、フローサイトメトリーを用いて、血液中でのヒト免疫細胞の量を定量した。治療後５週の時点で、マウスを安楽死させ、脾臓及び血液中でのヒト免疫細胞の量をフローサイトメトリーにより測定した。全組織からの細胞を、抗ヒトＣＤ４５、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ７、ＣＤ５６、ＣＤ１６、Ｍｉｋ－ｂ２、及びＭｉｋ－ｂ３（１：２０希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色し、ＢＤ ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）で分析した。
【0185】
結果及び考察
薬理学的モデリング：皮膚での疾患治療用ＩＬ１５Ｒβアンタゴニスト抗体の実現可能性の評価
インシリコモデリングを実施して、皮膚などの特定の組織において有効性を最大化するように設計された、抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ１抗体に治療上の成功をもたらし得る薬理学的パラメータ及び特性を画定した。これらの分析は、ＣＤ１２２標的生物学に対する、確立された値（表１）、ならびに、二価のＩｇＧ抗体に対する、既知の潜在的な薬剤特性及び投与パラメータ（表２）に基づいた。
薬理学的モデリング：皮膚での疾患治療用ＩＬ１５Ｒβアンタゴニスト抗体の実現可能性の評価
インシリコモデリングを実施して、皮膚などの特定の組織において有効性を最大化するように設計された、抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ１抗体に治療上の成功をもたらし得る薬理学的パラメータ及び特性を画定した。これらの分析は、ＣＤ１２２標的生物学に対する、確立された値（表１）、ならびに、二価のＩｇＧ抗体に対する、既知の潜在的な薬剤特性及び投与パラメータ（表２）に基づいた。
【0186】
次に、上で概略を述べたパラメータを分析して、図１に概要を示すとおり、薬剤効力及び分布における影響をサンプリングした。ヒト化抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ１抗体「ＭＩＫβ１」を以前に投与したｔ細胞白血病患者から報告されるＰＫデータを用いて、ボトムアップ推定アプローチを確証した。これらの分析は、平均体重のヒト対象における、ＩＶ及び／またはＳＣ投与、ならびに、抗体ＣＤ１２２結合親和性に関する一連の知見をもたらした。
【0187】
１．１０ｎＭ ＫＤの見かけの薬剤親和性において、皮膚におけるＩＬ１５Ｒβの持続性阻害（＞９０％）は、７００ｍｇ ＩＶ Ｑ４Ｗ、または１００ｍｇ ＳＣ Ｑ１Ｗ（表３、表４）で実現可能であると予想された。
【0188】
２．１０ｎＭ ＫＤを超える機能的親和性は、ＩＶ及びＳＣにおける投与要件を下げることが可能であり、ＫＤ値が１ｎＭに近いほど、最大投与量において皮膚で９９％の標的占有が可能となる。このパターンは、ＩＶ及びＳＣ投与経路に対しても質的に同様である（表３、表４）。
【0189】
３．１０ｎＭの見かけの薬剤結合親和性において、１００ｍｇのＳＣ Ｑ１Ｗは、皮膚において９０％の受容体占有率を維持するのに十分であるが、１００ｍｇのＳＣ Ｑ１Ｗは、９５％を超える受容体占有率を維持するのに十分ではない。より高い親和性が、１００ｍｇのＳＣ Ｑ１Ｗ投与スケジュールにおいて、９５％を超える受容体占有率を実現するのに必要であろう（表４）。
【0190】
４．全身標的の沈み込みを取り除くことは、皮膚における高い（＞９０％）標的占有を達成するのに必要な用量に、最小限の影響を有するのみである。既知の濃度で全身性ＣＤ１２２が存在する中での、及びＣＤ１２２が存在しない中での、ＩＶ Ｑ４Ｗ投与のシミュレーションを行うことは、皮膚及び薬剤分布効果において最適な活性を有するためには、合計用量が全身標的負荷を克服しなければならないことを示唆している（表５）。
【0191】
まとめると、最適な抗ＣＤ１２２拮抗性治療用抗体は、ＣＤ１２２に対して１０ｎＭを上回る機能的親和性を有し、７００ｍｇのＩＶ Ｑ４Ｗ、または１００ｍｇのＳＣ Ｑ１Ｗでの投与を可能にすることを、これらの分析は示唆した。親和性が増加することで、より低用量でより大きな標的カバー率が可能となる。
【0192】
抗体の結合特異性分析
初期の臨床試験において、ヒト化抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ１抗体「ＭＩＫβ１」は、クリアランスを加速させる証拠を示すことが報告されている。クリアランスの加速は、標的が媒介する薬剤分布（ＴＭＤＤ）効果が、効力に負の影響を及ぼす可能性があるために、上で概要を述べた、理想的な薬剤特性を達成することが不可能になるリスク因子である。ＭＩＫβ１は、ＣＤ１２２のみに結合することができない可能性があるが、同定されておらず予測不可能なヒトタンパク質に結合する可能性があると、我々は仮説を立てた。この可能性を調査するため、５５００個を超える固有のヒト膜受容体及び膜テザー分泌タンパク質を発現する細胞の高密度アレイの使用に基づく、インビトロ技術（Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ，Ｌｔｄ．）を用いて、ヒト化ＩｇＧ１－ＭＩＫβ１（ＶｉｌｌＭａｂ－１）におけるオフターゲット結合特異性をスクリーニングした。ＶｉｌｌＭａｂ－１は、膜発現ＣＤ１２２に強力な結合を示したが、ＢＣＡＭ（ＡＵ、ＣＤ２３９、ＬＵ、ＭＳＫ１９、基底接着分子（Ｌｕｔｈｅｒａｎ血液群）としても知られている）に対する、潜在的なオフターゲット結合特異性もまた有することを、本受容体アレイ結合スクリーンは同定した。ＢＣＡＭは、ＰＫの低下を引き起こし得、治療用量の抗ＣＤ１２２抗体の「沈み込み」効果を強め得る、広く発現する膜接着タンパク質である。
初期の臨床試験において、ヒト化抗ＣＤ１２２ ＩｇＧ１抗体「ＭＩＫβ１」は、クリアランスを加速させる証拠を示すことが報告されている。クリアランスの加速は、標的が媒介する薬剤分布（ＴＭＤＤ）効果が、効力に負の影響を及ぼす可能性があるために、上で概要を述べた、理想的な薬剤特性を達成することが不可能になるリスク因子である。ＭＩＫβ１は、ＣＤ１２２のみに結合することができない可能性があるが、同定されておらず予測不可能なヒトタンパク質に結合する可能性があると、我々は仮説を立てた。この可能性を調査するため、５５００個を超える固有のヒト膜受容体及び膜テザー分泌タンパク質を発現する細胞の高密度アレイの使用に基づく、インビトロ技術（Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ，Ｌｔｄ．）を用いて、ヒト化ＩｇＧ１－ＭＩＫβ１（ＶｉｌｌＭａｂ－１）におけるオフターゲット結合特異性をスクリーニングした。ＶｉｌｌＭａｂ－１は、膜発現ＣＤ１２２に強力な結合を示したが、ＢＣＡＭ（ＡＵ、ＣＤ２３９、ＬＵ、ＭＳＫ１９、基底接着分子（Ｌｕｔｈｅｒａｎ血液群）としても知られている）に対する、潜在的なオフターゲット結合特異性もまた有することを、本受容体アレイ結合スクリーンは同定した。ＢＣＡＭは、ＰＫの低下を引き起こし得、治療用量の抗ＣＤ１２２抗体の「沈み込み」効果を強め得る、広く発現する膜接着タンパク質である。
【0193】
このオフターゲット結合事象を確認するために、ＢＣＡＭ及び対照タンパク質をコードするプラスミドを、ＤＮＡ配列決定に供した。コードされたタンパク質は実際に正しい配列であったことが、これらの分析により確認された。次に、対照及び潜在的な標的受容体に対するプラスミド試料を、２通りでの反復分析用の新しいチップに再配置した。内部対照マーカーとして、発現プラスミド全てにおいて同時にコードされるＺＳグリーン用チップをスキャンすることにより、再配置したプラスミド全てから効果的な発現が誘発されたことが確認された。この分析は、プラスミドがスポットされた全ての位置において、はっきりと検出可能なＺＳ発現を示した（図２Ａ）。さらに、次には、同じようにスポットしたスライドを用いて、ＶｉｌｌＭａｂ－１（図２Ｂ）、リツキシマブ（ＩｇＧ１陽性対照、図２Ｃ）、及び一次抗体プローブが適用されないチップ（図２Ｄ）をトランスフェクトした細胞を再プローブした。ＶｉｌｌＭａｂ－１は再び、ＢＣＡＭをトランスフェクトした細胞において、（両方のチップにおいて）バックグラウンドを超える、測定可能な結合を示すことを、これらの分析は示した（図２Ｂ）。リツキシマブは、予想通りＣＤ２０への結合を示し、任意の他のタンパク質には、観察可能な結合を示さなかった（図２Ｃ）。一次抗体をプローブしなかったチップにおいては（図２Ｄ）、予想される対照タンパク質のみが何らかのシグナルを示した。対照チップのこの明確な状態により、ＣＤ１２２及びＢＣＡＭでのＶｉｌｌＭａｂ－１結合シグナルが特異的であることが確認された。これらのオフターゲット結合についての結果をさらに確認するため、配列が確認されたプラスミドを再び、ＨＥＫ－２９３細胞にトランスフェクトし、フローサイトメトリーにより結合を調べた（図３）。本実験では、ＶｉｌｌＭａｂ－１は、ＣＤ１２２及びＢＣＡＭトランスフェクト細胞の両方への明らかな結合を示したが、ＺＳをトランスフェクトした細胞には、バックグラウンド結合を示さなかった（「ＺＳのみ」、図３Ａ）。同じ細胞を用いるが、一次抗体を用いない（図３Ｂ）対照実験は、ＢＣＡＭシグナルが抗体に関連していることを示し、リツキシマブ ＩｇＧ１抗ＣＤ２０での染色（図３Ｃ）は、ＣＤ２０トランスフェクト細胞のみで結合シグナルを示し、これらは、ＢＣＡＭでのシグナルが、ＶｉｌｌＭａｂ－１の結合ドメインにより特異的に媒介されていることを証明している。
【0194】
オフターゲット結合が、ＩｇＧのＰＫ、生体内分布、及び毒性プロファイルに負の影響を有する可能性があることを示しているため、治療用抗体は、理想的には、所望の標的に対して優れた特異性を有する必要がある。ＶｉｌｌＭａｂ－１におけるこの問題に取り組むため、ＶｉｌｌＭａｂ－１結合界面を実験的に調節することを、以下のとおりに実施した。
【0195】
ＶｉｌｌＭａｂ－１の変異導入及びパラトープ調節
我々の組換えの試みを、最適な薬剤様特性を備えた最終的なリード治療用ＩｇＧ化合物に偏らせるために、ＶｉｌｌＭａｂ－１抗体の変異導入由来バリアントを調査することを選択した。元のヒト化プロセスは、良好な溶解度及び薬剤開発品質を有することが知られており、発現したヒト抗体レパートリーにおいて高頻度で用いられている、ヒト生殖細胞系フレームワークのＩＧＨＶ３－２３及びＩＧＫＶ１－３３に関係するスキャフォールドを用いていたことが、ＶｉｌｌＭａｂ－１のｖドメインの配列分析により示された（表６）。周知のスキャフォールドをこのように用いているにもかかわらず、可変ドメインのフレームワークは両方、著しい数の、生殖細胞系配列からの逸脱を含んでいた。加えて、ＣＤＲ配列は、ヒト生殖細胞系とは異なる多くの残基もまた含んでいた（表６）。
我々の組換えの試みを、最適な薬剤様特性を備えた最終的なリード治療用ＩｇＧ化合物に偏らせるために、ＶｉｌｌＭａｂ－１抗体の変異導入由来バリアントを調査することを選択した。元のヒト化プロセスは、良好な溶解度及び薬剤開発品質を有することが知られており、発現したヒト抗体レパートリーにおいて高頻度で用いられている、ヒト生殖細胞系フレームワークのＩＧＨＶ３－２３及びＩＧＫＶ１－３３に関係するスキャフォールドを用いていたことが、ＶｉｌｌＭａｂ－１のｖドメインの配列分析により示された（表６）。周知のスキャフォールドをこのように用いているにもかかわらず、可変ドメインのフレームワークは両方、著しい数の、生殖細胞系配列からの逸脱を含んでいた。加えて、ＣＤＲ配列は、ヒト生殖細胞系とは異なる多くの残基もまた含んでいた（表６）。
【0196】
ＶｉｌｌＭａｂ－１のｖドメイン配列を、Ｆａｂファージディスプレイフォーマットと組み合わせ、別個の変異導入ライブラリーカセットを、オリゴ合成及びアセンブリにより、ＶＨ及びＶＬドメイン用に生成した。各変異導入カセットは、表６で下線を引いた各位置において、ＶｉｌｌＭａｂ－１残基、ヒト生殖細胞系残基、または相同アミノ酸をコードした。ＶＬ用の変異カセットをＶｉｌｌＭａｂ－１のＶＨと、またはＶｉｌｌＭａｂ－１のＶＬをＶＨ用の変異導入カセットと組み合わせることで、別個のＦａｂライブラリーを生成した。各最終Ｆａｂライブラリーをファージディスプレイベクターにライゲーションし、電気穿孔法によりＥ．ｃｏｌｉに形質転換して、１０７個を超える独立したクローンを生成した。ライブラリー構築の質を、ライブラリー当たり９６個のクローンを配列決定することで検証した。変異した位置が、設計した多様性を効率的にサンプリングしたことを、この配列決定データは示した。ヘルパーファージＭ１３を用いてライブラリーをレスキューし、複数の個別のブランチで、ビオチン化ヒトならびにカニクイザル及び／またはアカゲザルＣＤ１２２－Ｆｃタンパク質における選択を実施した。１ラウンドの選択を行った後、予め選択した変異ＶＨ及びＶＬの組み合わせを用いて、第３の、両方のＶドメインで選択された変動性を同時にサンプリングするコンビナトリアルライブラリーを作製した。
【0197】
選択後の血漿周辺調製スクリーニング及びＤＮＡ配列決定により、ＥＬＩＳＡにおいてヒト及びアカゲザルＣＤ１２２に強力な結合を示し、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎアッセイにおいてヒト及びアカゲザルＣＤ１２２に、５０％を超えるＶｉｌｌＭａｂ－１結合の阻害を示す、６４個の固有の、ヒト及びアカゲザルＣＤ１２２結合Ｆａｂクローンが存在することが明らかとなった。これらの固有の、ライブラリーに由来するリードから、アッセイシグナルの強度、ヒト生殖細胞系に対する変異度、及び主たる発達不全／化学分解モチーフが存在しないことに基づき、上位１５個のクローンを同定した（表７）。この分析により、各ＣＤＲにおける一連の固有の配列も同定された（表８）。これらの固有のＣＤＲ配列プロファイルを用いて、（表９）に概略を示すような、上位１５個のライブラリー由来のクローンの中で発見されない、潜在的なＣＤＲの組み合わせを有する、さらなる１５個のクローン（ＭＡＢ０１～ＭＡＢ１５）を設計した。これらの合計３０個の固有のクローンを、ＣＨＯ一過性培養液中でヒトＩｇＧ１フォーマットにて発現させ、プロテインＡにより精製して、９５％を超える単量体性をサイズ排除クロマトグラフィーによって確認した。
【0198】
リードＩｇＧの特異性、及び効力特性
次に、上述した精製ＩｇＧの、ヒトＣＤ１２２－ＦｃでのＶｉｌｌＭａｂ－１結合エピトープに対する競合を、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎフォーマットで試験した。３０個のクローンのうち２４個で、濃度に依存して、ＶｉｌｌＭａｂ－１のＣＤ１２２への結合が低下したことを、この分析は示し、このことは、これらが親抗体の機能性エピトープを保持したことを証明している（図４）。次の、これら２４個のクローンを多反応性アッセイで調査し、最初の組換えからの最終リードクローンが、短いＰＫと強力に関係するＤＮＡまたはインスリン結合プロファイルを有しないことを確認した（図５）。２４個のクローンは全て、陽性対照であるボコシズマブよりも著しく低いシグナルを示したものの、サブセットは、陰性対照抗体であるベバシズマブ、ウステキヌマブ、及びペムブロリズマブに等しい、またはこれよりも改善された、特に低いシグナルを生成したことを、この分析は示した（図５）。これらの知見により、６つの鍵となるリードを、さらなる分析のために優先順位を付けることができた。
次に、上述した精製ＩｇＧの、ヒトＣＤ１２２－ＦｃでのＶｉｌｌＭａｂ－１結合エピトープに対する競合を、Ａｌｐｈａｓｃｒｅｅｎフォーマットで試験した。３０個のクローンのうち２４個で、濃度に依存して、ＶｉｌｌＭａｂ－１のＣＤ１２２への結合が低下したことを、この分析は示し、このことは、これらが親抗体の機能性エピトープを保持したことを証明している（図４）。次の、これら２４個のクローンを多反応性アッセイで調査し、最初の組換えからの最終リードクローンが、短いＰＫと強力に関係するＤＮＡまたはインスリン結合プロファイルを有しないことを確認した（図５）。２４個のクローンは全て、陽性対照であるボコシズマブよりも著しく低いシグナルを示したものの、サブセットは、陰性対照抗体であるベバシズマブ、ウステキヌマブ、及びペムブロリズマブに等しい、またはこれよりも改善された、特に低いシグナルを生成したことを、この分析は示した（図５）。これらの知見により、６つの鍵となるリードを、さらなる分析のために優先順位を付けることができた。
【0199】
フローサイトメトリーにより、細胞表面にて、優先順位を付けた６つの、ライブラリー由来のリードクローンの、ヒト及びアカゲザルＣＤ１２２への濃度依存性結合を分析した（図６）。クローン０６Ｆ１１（図６Ａ）、０７Ｃ０７（図６Ｂ）、０７Ｄ０６（図６Ｃ）、０７Ｅ０９（図６Ｄ）、０７Ｄ０７（図６Ｅ）、及び０６Ｄ１２（図６Ｆ）のそれぞれは、ＶｉｌｌＭａｂ－１に対して観察されたものと非常に似た結合曲線を有する、ＣＤ１２２特異的結合プロファイルを示した一方で、アイソタイプコントロールのＩｇＧ１は、あらゆる細胞型に結合を示さなかった（図６Ｇ）。
【0200】
ＣＤ１２２－ＩＬ－１５遮断アッセイにおけるリードＩｇＧの分析
Ｍ０７ｅ細胞ベースのＣＤ１２２／ＩＬ－１５遮断レポーターアッセイにおいて、クローン０６Ｆ１１（図７Ａ）、０７Ｃ０７（図７Ｂ）、０７Ｄ０６（図７Ｃ）、０７Ｅ０９（図７Ｄ）、０７Ｄ０７（図７Ｅ）、及び０６Ｄ１２（図７Ｆ）は、ＣＤ１２２の濃度依存性拮抗を示した。ＶｉｌｌＭＡＢ－１に対するＩＣ５０は、９．７９２μｇ／ｍＬであった。６Ｆ１１及び７Ｃ０７に対するＩＣ５０は、それぞれ１４．８μｇ／ｍＬ及び２０．８μｇ／ｍＬであり、リードクローンの中で最低であった。０６Ｄ１２、０７Ｄ０６、０７Ｄ０７、及び０７Ｅ０９に対するＩＣ５０は、それぞれ３８．６１０μｇ／ｍＬ、２７．８２０μｇ／ｍＬ、３４．１７０μｇ／ｍＬ、及び２３．６１０μｇ／ｍＬであった。この分析では、さらなる評価の理想的な候補として、０６Ｆ１１及び０７Ｃ０７が際立った。
Ｍ０７ｅ細胞ベースのＣＤ１２２／ＩＬ－１５遮断レポーターアッセイにおいて、クローン０６Ｆ１１（図７Ａ）、０７Ｃ０７（図７Ｂ）、０７Ｄ０６（図７Ｃ）、０７Ｅ０９（図７Ｄ）、０７Ｄ０７（図７Ｅ）、及び０６Ｄ１２（図７Ｆ）は、ＣＤ１２２の濃度依存性拮抗を示した。ＶｉｌｌＭＡＢ－１に対するＩＣ５０は、９．７９２μｇ／ｍＬであった。６Ｆ１１及び７Ｃ０７に対するＩＣ５０は、それぞれ１４．８μｇ／ｍＬ及び２０．８μｇ／ｍＬであり、リードクローンの中で最低であった。０６Ｄ１２、０７Ｄ０６、０７Ｄ０７、及び０７Ｅ０９に対するＩＣ５０は、それぞれ３８．６１０μｇ／ｍＬ、２７．８２０μｇ／ｍＬ、３４．１７０μｇ／ｍＬ、及び２３．６１０μｇ／ｍＬであった。この分析では、さらなる評価の理想的な候補として、０６Ｆ１１及び０７Ｃ０７が際立った。
【0201】
１：１結合親和性に関する、ＣＤ１２２結合ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）におけるリードＦａｂの分析
クローンの０６Ｆ１１及び０７Ｃ０７、加えて、ＦＷ１における変異を正した０６Ｆ１１のバリアント（０６Ｆ１１－Ｖ）に対する１：１親和性値を特性決定するために、これら、及び陽性対照であるＶｉｌｌｍａｂ－１クローンを、ヒトＦａｂフォーマット（即ち、一価であり、ヒンジとＦｃ領域の両方を欠いている）でクローニングし、発現させて精製した。完全に精製したＦａｂタンパク質の、ヒトＣＤ１２２（表１０）及びアカゲザルＣＤ１２２（表１１）の両方に対する結合を調査した。クローンＦＡＢ０６Ｆ１１－Ｖ、ＦＡＢ０６Ｆ１１、及びＦＡＢ０７Ｃ０７は、ヒト及びアカゲザルＣＤ１２２の両方に対して、ＶｉｌｌＦａｂ－１と比較して、全体的に穏やかに低下したＫＤ値を示し、重要なことに、オン（ｋａ）及びオフ（ｋｄ）速度の両方の増加もまた示したことを、これらの分析は示した。
クローンの０６Ｆ１１及び０７Ｃ０７、加えて、ＦＷ１における変異を正した０６Ｆ１１のバリアント（０６Ｆ１１－Ｖ）に対する１：１親和性値を特性決定するために、これら、及び陽性対照であるＶｉｌｌｍａｂ－１クローンを、ヒトＦａｂフォーマット（即ち、一価であり、ヒンジとＦｃ領域の両方を欠いている）でクローニングし、発現させて精製した。完全に精製したＦａｂタンパク質の、ヒトＣＤ１２２（表１０）及びアカゲザルＣＤ１２２（表１１）の両方に対する結合を調査した。クローンＦＡＢ０６Ｆ１１－Ｖ、ＦＡＢ０６Ｆ１１、及びＦＡＢ０７Ｃ０７は、ヒト及びアカゲザルＣＤ１２２の両方に対して、ＶｉｌｌＦａｂ－１と比較して、全体的に穏やかに低下したＫＤ値を示し、重要なことに、オン（ｋａ）及びオフ（ｋｄ）速度の両方の増加もまた示したことを、これらの分析は示した。
【0202】
ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルにおけるリードＩｇＧの分析
ヒト化ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルを使用して、ＶｉｌｌＭＡＢ－１、７Ｃ０７、及び６Ｆ１１－ｖ（全て、ＩｇＧ１－３Ｍエフェクターヌルフォーマット）の、インビボでの、ヒトＮＫ及びＣＤ８ Ｔ細胞のＣＤ１２２／ＩＬ１５シグナル伝達により支持される移植を阻害する能力を比較した。細胞による完全な移植を確立した後、マウスをビヒクル、低用量（１ｍｇ／ｋｇ）、または高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗体で処理した。
ヒト化ｈＩＬ－１５ ＮＳＧマウスモデルを使用して、ＶｉｌｌＭＡＢ－１、７Ｃ０７、及び６Ｆ１１－ｖ（全て、ＩｇＧ１－３Ｍエフェクターヌルフォーマット）の、インビボでの、ヒトＮＫ及びＣＤ８ Ｔ細胞のＣＤ１２２／ＩＬ１５シグナル伝達により支持される移植を阻害する能力を比較した。細胞による完全な移植を確立した後、マウスをビヒクル、低用量（１ｍｇ／ｋｇ）、または高用量（１０ｍｇ／ｋｇ）抗体で処理した。
【0203】
抗体処理の前では、血中のヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞（図８Ａ）及びＮＫ（図８Ｂ）細胞の数は、マウスの群の間で類似していた。１週間の処理後、１０ｍｇ／ｋｇのＶｉｌｌＭＡＢ－１で処理したマウスのみが、アイソタイプで処理したマウスと比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数の統計的に有意な減少を示した（図８Ｃ）。アイソタイプで処理したマウスと比較した際に、抗体処理群の全てにおいて、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の減少が観察された。血中でのＮＫ細胞の数は、群全てにおいて類似していた（図８Ｄ）。
【0204】
３週間の処理の後、アイソタイプ処理マウスと比較して、抗体処理群全ての血中で、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の数が減少した（図８Ｅ）。これらの変化は、統計的に有意ではなかった。ＮＫ細胞の数は、抗体処理マウスの群全てで減少し、この減少は、１ｍｇ／ｋｇの０７Ｃ０７で処理したマウスを除き、全ての群で統計的に有意であった（図８Ｆ）。高用量及び低用量のＶｉｌｌＭＡＢ－１処理によって、いずれの用量においても、０６Ｆ１１－Ｖまたは０７Ｃ０７処理を超えて、ＮＫ細胞の数が減少した。
【0205】
重要なことに、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰエフェクター機能が存在しない中で、クローンＶｉｌｌｍａｂ－１、０６Ｆ１１－Ｖ、または０７Ｃ０７によりＣＤ１２２－ＩＬ１５シグナル伝達を慢性的に遮断することは、ＮＫ及びＣＤ８＋ ｔ細胞集団の両方の枯渇をもたらす能力があることが、これらの知見により確認された。
【0206】
クローン０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７の、抗体結合特異性の分析
クローン０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７が、ｖドメインのフレームワーク領域及びＣＤＲの両方において、高レベルのヒト化、加えて、インビトロ及びインビボにおいて効果的なＣＤ１２２の遮断を上記で示したため、これらを、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘプロテオミクスプラットフォームにおける特異性分析のために再度スクリーニングした。予想外なことに、Ｖｉｌｌｍａｂ－１に対して観察されたＢＣＡＭ結合が完全に消失しており、０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７ ＩｇＧのいずれにも観察されなかったことを、この分析は示した。しかしながら、加えて、Ｖｉｌｌｍａｂ－１に対しては観察されなかった２つの新しい相互作用が観察された（図９）。標的及び対照の発現を駆動するプラスミドをトランスフェクトした細胞への結合についてのフローサイトメトリー分析において、ＣＤ１２２結合に加えて、クローン０６Ｆ１１－Ｖが、ニューデシン（ノイロトロピン）及びＣＩＬＰ２（軟骨構造タンパク質）の両方に結合することが分かった一方で、０７Ｃ０７はＣＩＬＰ２のみに結合することが分かった（図９Ａ、図９Ｂ）。対照的に、「二次抗体のみ」（図９Ｃ）、及びリツキシマブ一次抗体（図９Ｄ）対照実験は、それぞれ、バックグラウンドを超える結合を示さないか、またはＣＤ２０トランスフェクト細胞のみに結合するかのいずれかを示した。０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７ ＩｇＧに対して観察されたオフターゲット結合は本物であり、特異的であることが、これらの発見により確認された。
クローン０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７が、ｖドメインのフレームワーク領域及びＣＤＲの両方において、高レベルのヒト化、加えて、インビトロ及びインビボにおいて効果的なＣＤ１２２の遮断を上記で示したため、これらを、Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘプロテオミクスプラットフォームにおける特異性分析のために再度スクリーニングした。予想外なことに、Ｖｉｌｌｍａｂ－１に対して観察されたＢＣＡＭ結合が完全に消失しており、０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７ ＩｇＧのいずれにも観察されなかったことを、この分析は示した。しかしながら、加えて、Ｖｉｌｌｍａｂ－１に対しては観察されなかった２つの新しい相互作用が観察された（図９）。標的及び対照の発現を駆動するプラスミドをトランスフェクトした細胞への結合についてのフローサイトメトリー分析において、ＣＤ１２２結合に加えて、クローン０６Ｆ１１－Ｖが、ニューデシン（ノイロトロピン）及びＣＩＬＰ２（軟骨構造タンパク質）の両方に結合することが分かった一方で、０７Ｃ０７はＣＩＬＰ２のみに結合することが分かった（図９Ａ、図９Ｂ）。対照的に、「二次抗体のみ」（図９Ｃ）、及びリツキシマブ一次抗体（図９Ｄ）対照実験は、それぞれ、バックグラウンドを超える結合を示さないか、またはＣＤ２０トランスフェクト細胞のみに結合するかのいずれかを示した。０６Ｆ１１－Ｖ及び０７Ｃ０７ ＩｇＧに対して観察されたオフターゲット結合は本物であり、特異的であることが、これらの発見により確認された。
【0207】
クローン０６Ｆ１１－Ｖの最適化
有益な特性を最大化し、オフターゲット結合を最小限にするためのさらなる最適化のために、クローン０６Ｆ１１－Ｖを選択した。０６Ｆ－１１Ｖの重鎖及び軽鎖配列の両方の、ＣＤＲ１、及び／または２、及び／または３におけるマウス配列に戻る変異の組み合わせを実験で分析することにより、この最適化を行った。本プロセスにより、それぞれが、３個のＶＬ配列のうちの１つと組み合わさった、６個のＶＨ配列のうちの１つを有する、１８個の新規のクローンが作製された（表１２）。これら１８個の新規のバリアント、Ｖｉｌｌｍａｂ－１、及び０６Ｆ１１Ｖを、ヒトの一価Ｆａｂ断片フォーマットでクローニングし、ＣＨＯ細胞で発現させて、プロテインＡカラム、続いてＳＥＣにより、モノマー状態に精製した。
有益な特性を最大化し、オフターゲット結合を最小限にするためのさらなる最適化のために、クローン０６Ｆ１１－Ｖを選択した。０６Ｆ－１１Ｖの重鎖及び軽鎖配列の両方の、ＣＤＲ１、及び／または２、及び／または３におけるマウス配列に戻る変異の組み合わせを実験で分析することにより、この最適化を行った。本プロセスにより、それぞれが、３個のＶＬ配列のうちの１つと組み合わさった、６個のＶＨ配列のうちの１つを有する、１８個の新規のクローンが作製された（表１２）。これら１８個の新規のバリアント、Ｖｉｌｌｍａｂ－１、及び０６Ｆ１１Ｖを、ヒトの一価Ｆａｂ断片フォーマットでクローニングし、ＣＨＯ細胞で発現させて、プロテインＡカラム、続いてＳＥＣにより、モノマー状態に精製した。
【0208】
次に、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）により、精製したＦａｂの、ヒト及びアカゲザルＣＤ１２２への結合親和性を調査した（表１３）。一連のクローンが、０６Ｆ１１－Ｖよりも、及びさらに、ＶｉｌｌＭａｂ－１よりも、ＣＤ１２２に対して改善された親和性を示すことを、この分析は示した。このコホートからは、クローンＭＡＢ０５、ＭＡＢ０６、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１７、及びＭＡＢ１８をさらなる分析のために優先順位を付け、効力及び特異性分析のために、ヒトＩｇＧ１－３Ｍフォーマットでさらに発現させ、精製した。優先順位を付けたクローン全てのＦａｂバージョンを、ヒトニューデシン及びＣＩＬＰ２タンパク質において、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）結合で試験した際（図１０Ａ、図１０Ｂ）、クローン０６Ｆ１１－Ｖのみが、いずれかのタンパク質に対して測定可能な結合を示すことが分かった。このことは、新規のリードクローンが、これら２つのオフターゲット結合リスクをなくしたことを示唆している。ヒトＢＣＡＭタンパク質におけるクローン全てに対する、ＩｇＧのＥＬＩＳＡ分析において、クローンは全て、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６以外のオフターゲット結合を保持しており、ＣＤ１２２に対して完全な特異性を示した（図１０Ｃ、表１４）。
【0209】
このように密接に関連した抗体配列が、特異性プロファイルにおいてこのような根本的な違いを有するのはどのようにして可能であるかを調査するために、ＶｉｌｌＭａｂ－１と、クローン０５、０６、１４、１５、１７、及び１８に対する、ＶＨ及びＶＬドメインの両方の配列アラインメントを行った（図１１Ａ、１１Ｂ）。注目すべきは、（完全なＣＤ１２２特異的）クローンＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６に対して固有のＶｉｌｌＭａｂ－１配列との、唯一の変化は、ＶＨドメインのＣＤＲ１の中で、及びＣＤＲ１の近くの、３つの（非常に相同な）変異が見つかったことであった。この発見は、抗体結合が入り乱れているという予測不可能な性質を示している。
【0210】
クローンＭＡＢ０５、ＭＡＢ０６、ＭＡＢ１４、ＭＡＢ１５、ＭＡＢ１７、及びＭＡＢ１８における生物学的効力の確認は、ＩＬ－１５刺激Ｍ０７ｅアッセイにおいて行った（表１４）。クローンＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の親和性がＶｉｌｌＭａｂ－１よりも改善しているだけでなく、ＩＬ－１５シグナル伝達を遮断する効力もまた、約２倍改善していることを、本分析は示した（表１４）。次に、クローンＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の、機能的に関連する最終的な効力を、ＩＬ－１５刺激の下でヒト初代ＮＫ細胞の増殖を測定するアッセイで確認した（図１２Ａ、図１２Ｂ）。本アッセイは、Ｍ０７ｅアッセイでの発見を再現しており、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６がＶｉｌｌＭａｂ－１よりも、実際に改善されていることを示している。
【0211】
ヒト及びマウスＦｃ受容体への結合に関する、ＩｇＧ１－３Ｍ ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）分析
クローン０６Ｆ１１－Ｖ ＩｇＧ１－３Ｍ、及び陽性対照ＩｇＧの親和性を特性決定するために、完全に精製したタンパク質の、ヒト及びマウスＦｃγＲ及びＦｃＲｎ両方への結合を調査した（表１７）。陽性対照は全て、ヒト及びマウス受容体の両方との、予想された強力な相互作用を示す一方で、クローン０６Ｆ１１－Ｖ ＩｇＧ１－３Ｍは、ｐＨ７．４において、ヒトまたはマウスＦｃγＲ及びＦｃＲｎのいずれにも、非常に低い親和性を示すこと、または測定可能な親和性がないことを示すことを、これらの分析は示した。しかし、重要なことに、０６Ｆ１１－Ｖ ＩｇＧ１－３Ｍは、ｐＨ６．０において、ヒト及びマウスＦｃＲｎに対して、完全な親和性を保持した。ＩｇＧエフェクター機能が存在しない中での、ＣＤ１２２シグナル伝達の遮断は、ＣＤ１２２＋細胞を枯渇させるのに十分であるという、ＮＳＧ／ＩＬ－１５マウスモデルにおいてインビボで観察された上記のことが、これらの発見により確認された。
クローン０６Ｆ１１－Ｖ ＩｇＧ１－３Ｍ、及び陽性対照ＩｇＧの親和性を特性決定するために、完全に精製したタンパク質の、ヒト及びマウスＦｃγＲ及びＦｃＲｎ両方への結合を調査した（表１７）。陽性対照は全て、ヒト及びマウス受容体の両方との、予想された強力な相互作用を示す一方で、クローン０６Ｆ１１－Ｖ ＩｇＧ１－３Ｍは、ｐＨ７．４において、ヒトまたはマウスＦｃγＲ及びＦｃＲｎのいずれにも、非常に低い親和性を示すこと、または測定可能な親和性がないことを示すことを、これらの分析は示した。しかし、重要なことに、０６Ｆ１１－Ｖ ＩｇＧ１－３Ｍは、ｐＨ６．０において、ヒト及びマウスＦｃＲｎに対して、完全な親和性を保持した。ＩｇＧエフェクター機能が存在しない中での、ＣＤ１２２シグナル伝達の遮断は、ＣＤ１２２＋細胞を枯渇させるのに十分であるという、ＮＳＧ／ＩＬ－１５マウスモデルにおいてインビボで観察された上記のことが、これらの発見により確認された。
【0212】
実施例２。ヒトの皮膚Ｔ細胞のクロールアウトアッセイにおける、抗ＣＤ１２２治療用抗体の機能
ヒト皮膚生検培養アッセイを用いて、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の、皮膚常在Ｔ細胞におけるＣＤ１２２／ＩＬ－１５シグナル伝達を阻害する能力を調査した。
ヒト皮膚生検培養アッセイを用いて、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の、皮膚常在Ｔ細胞におけるＣＤ１２２／ＩＬ－１５シグナル伝達を阻害する能力を調査した。
【0213】
４ｍｍのＩｎｔｅｇｒａ使い捨て生検パンチ（Ｉｎｔｅｇｒａ）を用いて、外科標本からヒト皮膚生検（直径４ｍｍ×厚さ２ｍｍ）を回収した（皮下脂肪組織切除）。皮膚生検を、ＰＢＳに希釈したＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃ－Ａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃ（Ｇｉｂｃｏ）で３０分間、４℃でインキュベートした後、ＰＢＳで３回すすいだ。３つの皮膚生検を、２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のうちのウェル１個に入れ、短時間乾燥させ、ウェル表面への生検の接着を促進した。次に、２０％の加熱不活性化ウシ胎児血清、ペニシリン及びストレプトマイシン（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、ならびに、３．５μＬ／Ｌのβ－メルカプトエタノール（Ｓｉｇｍａ）を含む、２ｍＬのイスコフ改変培地（Ｓｉｇｍａ）で生検を培養し、３７℃で２１日間インキュベートした。各ウェルから１ｍＬの培地を吸引し、１ｍＬの新鮮な培地を加え直すことにより、培養液に、週に３回栄養を与えた。ＩＬ－１５または抗ＣＤ１２２抗体で処理した培養液に関しては、培養開始時から、２１日目のＴ細胞の回収時まで、２０ｎｇ／ｍＬの組換えヒトＩＬ１５（ｒｈＩＬ１５）（Ｒ＆Ｄ）、及び抗ＣＤ１２２抗体（ＭＡＢ０５またはＭＡＢ０６）を加えた。２１日後、ウェルから培養培地を回収し、５ｍＬのポリスチレン丸底チューブで１０分間、３３０×ｇで遠心沈殿させた。上清を吸引し、残りのＴ細胞を洗浄し、抗ヒトＣＤ３、ＣＤ４、及びＣＤ８（１：２０希釈、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）で染色して、ＢＤ ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＦｌｏｗＪｏ（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）で定量した。
【0214】
本アッセイでは、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６は、ＩＬ１５が誘導する、皮膚生検から移動するＣＤ８＋ Ｔ細胞の蓄積を阻害する。生検をＩＬ－１５で培養する場合、生検をＩＬ－１５なしで培養する場合よりも多くのＣＤ８＋ Ｔ細胞が蓄積する：１１，１０１±６０１１対４３８．３±６６．０５（平均±ＳＤ）（図１３Ａ）。生検をＩＬ－１５及びＭＡＢ０５で培養する場合、蓄積するＣＤ８＋ Ｔ細胞の数は、ＩＬ－１５のみでの培養液と比較して少ない：２０９６±１１００対１１，１０１±６０１１（平均±ＳＤ）（図１３Ａ）。同様に、生検をＩＬ－１５及びＭＡＢ０６で培養する場合、ＩＬ－１５のみでの培養液と比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の蓄積は少ない：２４３６±５０１．６対１１，１０１±６０１１（平均±ＳＤ）（図１３Ａ）。
【0215】
ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６は、ＩＬ１５が誘導する、皮膚生検から移動するＣＤ４＋ Ｔ細胞の蓄積もまた阻害する。生検をＩＬ－１５で培養する場合、生検をＩＬ－１５なしで培養する場合よりも多くのＣＤ４＋ Ｔ細胞が蓄積する：４０，５２３±１５，３９１対１２６１±４７３．６（平均±ＳＤ）（図１３Ｂ）。生検をＩＬ－１５及びＭＡＢ０５で培養する場合、蓄積するＣＤ４＋ Ｔ細胞の数は、ＩＬ－１５のみでの培養液と比較して少ない：３４７１±１６２７対４０，５２３±１５，３９１（平均±ＳＤ）（図１３Ｂ）。同様に、生検をＩＬ－１５及びＭＡＢ０６で培養する場合、ＩＬ－１５のみでの培養液と比較して、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の蓄積は少ない：４３０８±２１１１対４０，５２３±１５，３９１（平均±ＳＤ）（図１３Ｂ）。
【0216】
皮膚生検培養アッセイにおいて、ＭＡＢ０５は、１．９μｇ／ｍＬのＩＣ５０で、ＩＬ－１５が誘導する皮膚常在ＣＤ８＋ Ｔ細胞の蓄積に対する、濃度依存性拮抗を示した（図１４Ａ）。ＭＡＢ０６は、１．８μｇ／ｍＬのＩＣ５０で、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の蓄積に対する、相当の濃度依存性拮抗を示した（図１４Ａ）。さらに、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６は、それぞれ２．１μｇ／ｍＬ及び１．８μｇ／ｍＬのＩＣ５０で、ＩＬ－１５が誘導するＣＤ４＋ Ｔ細胞の蓄積に対する、相当の濃度依存性拮抗を示した（図１４Ｂ）。
【0217】
実施例３。カニクイザルにおける、抗ＣＤ１２２治療用抗体の薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）研究
カニクイザルに、１～２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルで、抗ＣＤ１２２抗体（ＭＡＢ０５またはＭＡＢ０６）を単回静脈内注射で投与した。投与前、及び投与後１時間～投与後１６日の範囲の様々な時点で、血液試料を採取した。ＥＬＩＳＡ法による、抗ＣＤ１２２抗体血漿濃度の定量化に従い、薬物動態パラメータを測定した。フローサイトメトリー法を用いて、血液試料の、ＮＫ細胞におけるＣＤ１２２受容体占有率を分析し、全Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びＮＫ細胞の定量化を行った。
カニクイザルに、１～２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルで、抗ＣＤ１２２抗体（ＭＡＢ０５またはＭＡＢ０６）を単回静脈内注射で投与した。投与前、及び投与後１時間～投与後１６日の範囲の様々な時点で、血液試料を採取した。ＥＬＩＳＡ法による、抗ＣＤ１２２抗体血漿濃度の定量化に従い、薬物動態パラメータを測定した。フローサイトメトリー法を用いて、血液試料の、ＮＫ細胞におけるＣＤ１２２受容体占有率を分析し、全Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、及びＮＫ細胞の定量化を行った。
【0218】
１ｍｇ／ｋｇ～２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量レベルでの単回静脈内投与の後、カニクイザルにおいて、ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６は臨床上の異常を示さず、線形性の薬物動態を示した。ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の、１ｍｇ／ｋｇでの単回投与は、サンプリング期間（投与後１６日間）を通して、ＮＫ細胞での９０％を超えるＣＤ１２２受容体占有率を維持するのに十分であった。ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇの単回用量での投与は、循環ＮＫ細胞数の減少を誘発した。循環ＮＫ細胞は、投与のおよそ７日後に最低に達し、残りのサンプリング期間（投与後１６日間）を通して、１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇの投与後に、安定した回復を示した。循環ＮＫ細胞の数の調節は、機能活性のマーカーであると考えられており、抗ＣＤ１２２抗体がインビボで効果的である（Ｗａｌｄｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（２０２０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１７：ｅ２０１９１０６２を参照されたい。）ことを示すのに重要であり、故に、患者での最適用量を定めるのに有利に用いることができる。ヘルパーＴ細胞または細胞傷害性Ｔ細胞では、効果は観察されなかった。
【0219】
実施例４。抗ＣＤ１２２治療用抗体の、製剤化前開発及び安定性研究
安定性研究のパネルを用いて、抗ＣＤ１２２抗体の製造開発可能性を評価した。５ｍｇ／ｍＬの濃度での、安定性及び凝集可能性に関して、緩衝液と賦形剤の組み合わせから、抗ＣＤ１２２抗体の１０種類の製剤を調査した。低ｐＨストレス、熱ストレス、凍結解凍条件、及び強制酸化の条件下にて、抗体を調査した。抗体の、＞１００ｍｇ／ｍＬの濃度における自己会合及び粘度についてもまた、調査した。
安定性研究のパネルを用いて、抗ＣＤ１２２抗体の製造開発可能性を評価した。５ｍｇ／ｍＬの濃度での、安定性及び凝集可能性に関して、緩衝液と賦形剤の組み合わせから、抗ＣＤ１２２抗体の１０種類の製剤を調査した。低ｐＨストレス、熱ストレス、凍結解凍条件、及び強制酸化の条件下にて、抗体を調査した。抗体の、＞１００ｍｇ／ｍＬの濃度における自己会合及び粘度についてもまた、調査した。
【0220】
ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６は、２５ｍＭのＬ－ヒスチジン、９％（ｗ／ｖ）スクロース、０．０２％（ｗ／ｖ）ポリソルベート８０の組成を有する緩衝液（ｐＨ６．０）において、高い熱的安定性、低ｐＨ（ｐＨ３．０）に対する高い耐性、低凝集能、低酸化及びアミド分解感度、ならびに優れた凍結／解凍安定性を示した。ＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６を、９０～１２０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で、これと同じ緩衝溶液に可溶化した。１１５ｍｇ／ｍＬの濃度におけるＭＡＢ０５及びＭＡＢ０６の粘度は低かった（およそ、４～６センチポアズ）。このことは、抗ＣＤ１２２抗体の皮下送達用臨床製剤を実現することが可能であることを示している。
【表1】
【表2】
【表3】
【表4】
【表5】
【表6】
【表7-1】
【表7-2】
【表8-1】
【表8-2】
【表8-3】
【表8-4】
【表9】
【表10】
【表11】
【表12-1】
【表12-2】
【表13】
【表14】
【表15-1】
【表15-2】
【表16】
【表17】
【表18】
【表19】
【表20】
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図3C】
【図4】
【図5】
【図6A】
【図6B】
【図6C】
【図6D】
【図6E】
【図6F】
【図6G】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図7E】
【図7F】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【図8E】
【図8F】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【図9D】
【図10A】
【図10B】
【図10C】
【図11A】
【図11B】
【図12A】
【図12B】
【図13A】
【図13B】
【図14A】
【図14B】
【配列表】
【国際調査報告】