特表 2024-514049 アルツハイマー病関連状態を診断するための生物流体ベースの方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-28

(54)【発明の名称】アルツハイマー病関連状態を診断するための生物流体ベースの方法

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/53 20060101AFI20240321BHJP

   G01N 33/543 20060101ALI20240321BHJP

【ＦＩ】

G01N33/53 D

G01N33/53 U

G01N33/53 S

G01N33/543 511B

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023557084

(86)(22)【出願日】2022-03-15

(85)【翻訳文提出日】2023-11-10

(86)【国際出願番号】 US2022020304

(87)【国際公開番号】W WO2022197651

(87)【国際公開日】2022-09-22

(31)【優先権主張番号】63/161,524

(32)【優先日】2021-03-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523351645

【氏名又は名称】ニューロビジョン イメージング， インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】アンダーソン， レイラ

(72)【発明者】

【氏名】ファンデルスティヘレ， フーゴ

(72)【発明者】

【氏名】バードゥーナー， スティーブン アール．

(57)【要約】

本発明はマトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための方法を提供し、その方法は（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識された分子とを混合する工程であって、その標識された分子はその状態に罹患している対象におけるその適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合にはその対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合にはその対象はその状態に罹患していない。本発明はまた関連する方法、キットおよび組成物を提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための方法であって、
（ａ）（ｉ）該対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識された分子とを混合する工程であって、該標識された分子は、該状態に罹患している対象における該適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、および
（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程
を含み、
工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量が該状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患しており、
該量が該状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患していない、方法。

【請求項2】

工程（ａ）が、前記標識された分子を、工程（ｂ）における該標識された分子の測定を容易にする様式で処理することをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記標識された分子を、工程（ｂ）における該標識された分子の測定を容易にする様式で処理することが、該標識された分子と、適切な量の、該標識された分子に特異的に結合する抗体とを接触させることを含む、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

工程（ａ）が、前記適切な量の標識された分子と、前記流体の複数の段階希釈されたサンプルとを混合することを含む、請求項１～３のいずれかに記載の方法。

【請求項5】

マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための方法であって、
（ａ）（ｉ）該対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識された分子および第２の標識された分子とを混合する工程であって、該標識された分子は、該状態に罹患している対象における該適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、および
（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識された分子とマトリックスの影響を受けていない第２の標識された分子との間の定量的関係を決定する工程
を含み、
工程（ｂ）において決定された該関係が該状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患しており、
該関係が該状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患していない、
方法。

【請求項6】

工程（ａ）が、前記標識された分子を、工程（ｂ）における該標識された分子の測定を容易にする様式で処理することをさらに含む、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

前記標識された分子を、工程（ｂ）における該標識された分子の測定を容易にする様式で処理することが、各々の標識された分子と、適切な量の該各々の標識された分子に特異的に結合する抗体とを接触させることを含む、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

工程（ａ）が、前記適切な量の標識された分子と、前記流体の複数の段階希釈されたサンプルとを混合することを含む、請求項５～７のいずれかに記載の方法。

【請求項9】

前記対象がヒトである、請求項１～８のいずれかに記載の方法。

【請求項10】

前記状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、軽度認知障害、および非アルツハイマー病認知症からなる群より選択される神経変性障害に関連する状態である、請求項１～９のいずれかに記載の方法。

【請求項11】

前記状態が、アミロイドパチー、タウオパチー、ニューロン損傷、シヌクレイノパチー、大脳プロテイノパチー、プログラニュリノパチー、およびニューロン炎症からなる群より選択される、請求項１～９のいずれかに記載の方法。

【請求項12】

前記適切な流体が、全血、血清、血漿、脳脊髄液、唾液、涙液、眼球液、鼻腔液、硝子体液、および間質液からなる群より選択される、請求項１～１１のいずれかに記載の方法。

【請求項13】

前記標識された分子が、標識されたＡβペプチドまたはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレインまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項１～４および９～１２のいずれかに記載の方法。

【請求項14】

前記第１の標識された分子および第２の標識された分子が、標識されたＡβペプチドまたはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレインまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項５～１２のいずれかに記載の方法。

【請求項15】

マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定することにおける使用のためのキットであって、
（ａ）該状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、標識された分子、および
（ｂ）該標識された分子を処理してマトリックスの影響を受けていない形態での該標識された分子の測定を容易にするために有用な作用物質
を別個の区画に含む、キット。

【請求項16】

前記標識された分子をそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を、別個の区画にさらに含む、請求項１５に記載のキット。

【請求項17】

前記標識された分子が、標識されたＡβペプチドまたはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレインまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項１５または１６に記載のキット。

【請求項18】

マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定することにおける使用のためのキットであって、
（ａ）標識された分子各々が、該状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、第１の標識された分子および第２の標識された分子、および
（ｂ）該第１の標識された分子および第２の標識された分子の各々を処理してマトリックスの影響を受けていない形態での該標識された分子の測定を容易にするために有用な作用物質
を別個の区画に含む、キット。

【請求項19】

前記第１の標識された分子および第２の標識された分子の各々をそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を１個またはそれより多くの別個の区画にさらに含む、請求項１８に記載のキット。

【請求項20】

前記第１の標識された分子および第２の標識された分子が、標識されたＡβペプチドまたはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレインまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項１８または１９に記載のキット。

【請求項21】

アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定するための方法であって、
（ａ）（ｉ）該対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたＡβペプチドとを混合する工程、および
（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量を決定する工程
を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量が該状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患しており、該量が該状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患していない、方法。

【請求項22】

工程（ａ）が、前記標識されたＡβペプチドを、工程（ｂ）における該標識されたＡβペプチドの測定を容易にする様式で処理することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。

【請求項23】

工程（ａ）が、前記適切な量の標識されたＡβペプチドと、前記流体の複数の段階希釈されたサンプルとを混合することを含む、請求項２１または２２に記載の方法。

【請求項24】

前記標識されたＡβペプチドが、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、および標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項２１～２３のいずれかに記載の方法。

【請求項25】

前記標識されたＡβペプチドがビオチン化Ａβ４０ペプチドまたはビオチン化Ａβ４２ペプチドである、請求項２１～２４のいずれかに記載の方法。

【請求項26】

アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定するための方法であって、
（ａ）（ｉ）該対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドとを混合する工程、ならびに
（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識されたＡβペプチドとマトリックスの影響を受けていない第２の標識されたＡβペプチドとの間の定量的関係を決定する工程
を含み、
工程（ｂ）において決定された関係が該状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患しており、
該関係が該状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、該対象は該状態に罹患していない、
方法。

【請求項27】

工程（ａ）が、前記標識されたＡβペプチドを、工程（ｂ）における該標識されたＡβペプチドの測定を容易にする様式で処理することをさらに含む、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

工程（ａ）が、前記適切な量の標識されたＡβペプチドと、前記流体の複数の段階希釈されたサンプルとを混合することを含む、請求項２６または２７に記載の方法。

【請求項29】

前記標識されたＡβペプチドの各々が、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、および標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項２６～２８のいずれかに記載の方法。

【請求項30】

前記第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドがビオチン化Ａβ４０ペプチドおよびビオチン化Ａβ４２ペプチドである、請求項２６～２９のいずれかに記載の方法。

【請求項31】

前記状態が、アミロイドパチー、タウオパチー、ニューロン損傷、シヌクレイノパチー、大脳プロテイノパチー、プログラニュリノパチー、およびニューロン炎症からなる群より選択される、請求項２１～３０のいずれかに記載の方法。

【請求項32】

前記適切な流体が、全血、血清、血漿、脳脊髄液、唾液、涙液、眼球液、鼻腔液、硝子体液、および間質液からなる群より選択される、請求項２１～３１のいずれかに記載の方法。

【請求項33】

（ａ）標識されたＡβペプチド、および
（ｂ）該標識されたＡβペプチドを処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態での該標識されたＡβペプチドの測定を容易にするために有用な作用物質
を別個の区画に含む、キット。

【請求項34】

前記標識されたＡβペプチドをそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質
を別個の区画にさらに含む、請求項３３に記載のキット。

【請求項35】

前記標識されたＡβペプチドが、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、および標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項３３または３４に記載のキット。

【請求項36】

前記標識されたＡβペプチドがビオチン化Ａβ４０ペプチドまたはビオチン化Ａβ４２ペプチドである、請求項３３～３５のいずれかに記載のキット。

【請求項37】

（ａ）第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチド、ならびに
（ｂ）該第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドの各々を処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態での該標識されたＡβペプチドの測定を容易にするために有用な作用物質
を別個の区画に含む、キット。

【請求項38】

前記第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドの各々をそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質
を１個またはそれより多くの別個の区画にさらに含む、請求項３７に記載のキット。

【請求項39】

前記標識されたＡβペプチドの各々が、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、および標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントからなる群より選択される、請求項３７または３８に記載の方法。

【請求項40】

前記第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドがビオチン化Ａβ４０ペプチドおよびビオチン化Ａβ４２ペプチドである、請求項３７～３９のいずれかに記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年３月１６日に出願された米国仮出願第６３／１６１，５２４号の利益を主張し、この米国仮出願の内容は参照によって本明細書において援用される。

【0002】

本出願全体を通して、種々の公開物が引用される。これらの公開物の開示は、本発明が属する分野の技術水準をより十分に記載するために本明細書によって参照によって本出願に援用される。

【0003】

（発明の分野）
本発明は、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための特定の方法に関する。これらの状態は、特定の障害（例えば、アルツハイマー病）について診断に役立ち得、予後判定に役立ち得、かつ／またはその特定の障害についての疾患の進行と相関関係があり得る。

【背景技術】

【0004】

（発明の背景）
アルツハイマー病は、種々の病態の重篤度の連続的変化（例えば、脳におけるβ－アミロイド（Ａβ）蓄積）として特徴付けられる。他のアルツハイマー病関連病態としては、例えば、タウオパチーおよびシナプス喪失が挙げられる。種々の血漿Ａβペプチドまたは（ホスホ）タウを測定することに基づくアルツハイマー病の診断方法および予後判定方法が、開発されてきた。しかし、これらの方法は矛盾する結果を生じており、健常対照の対象と罹患対象との間での絶対値の区別は制限されている。したがって、アルツハイマー病を診断するため、アルツハイマー病の発症を予測するため、およびアルツハイマー病の進行を評価するための、正確な生物流体ベースの方法の必要性が残っている。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0005】

（発明の概要）
本発明は、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための第１の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識された分子とを混合する工程であって、その標識された分子は、その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第１の方法を提供する。

【0006】

本発明はまた、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための第２の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識された分子および第２の標識された分子とを混合する工程であって、その標識された分子は、その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識された分子とマトリックスの影響を受けていない第２の標識された分子との間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第２の方法を提供する。

【0007】

本発明はさらに、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象（好ましくはヒト対象）が有するかどうかを決定することにおける使用のための第１のキットであって、（ａ）その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、標識された分子、および（ｂ）その標識された分子を処理してマトリックスの影響を受けていない形態での標識された分子の測定を容易にするために有用な作用物質を別個の区画に含む、第１のキットを提供する。

【0008】

本発明はなおさらに、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象（好ましくはヒト対象）が有するかどうかを決定することにおける使用のための第２のキットであって、（ａ）標識された分子各々が、その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、第１の標識された分子および第２の標識された分子、および（ｂ）第１の標識された分子および第２の標識された分子の各々を処理してマトリックスの影響を受けていない形態での標識された分子の測定を容易にするために有用な作用物質を別個の区画に含む、第２のキットを提供する。

【0009】

本発明は、アルツハイマー病と相関関係がある状態（すなわち、その対象が実際にアルツハイマー病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するための第１の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたＡβペプチドとを混合する工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第１の方法を提供する。

【0010】

本発明はまた、アルツハイマー病と相関関係がある状態（すなわち、その対象が実際にアルツハイマー病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）有するかどうかを決定するための第２の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドとを混合する工程、ならびに（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識されたＡβペプチドとマトリックスの影響を受けていない第２の標識されたＡβペプチドとの間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第２の方法を提供する。

【0011】

本発明はさらに、アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第１のキットを提供し、そのキットは、（ａ）標識されたＡβペプチド、および（ｂ）その標識されたＡβペプチドを処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのその標識されたＡβペプチドの測定を容易にするために有用な作用物質（agent）を、別個の区画に含む。

【0012】

本発明はなおさらに、アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第２のキットを提供し、そのキットは、（ａ）第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチド、ならびに（ｂ）その第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドの各々を処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのそれらの標識されたＡβペプチドの測定を容易にするために有用な作用物質を、別個の区画に含む。

【0013】

本発明は、パーキンソン病と相関関係がある状態（すなわち、対象が実際にパーキンソン病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するための第１の方法を提供し、その方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたα－シヌクレインとを混合する工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインの量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインの量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。

【0014】

本発明はまた、パーキンソン病と相関関係がある状態（すなわち、対象が実際にパーキンソン病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するための第２の方法を提供し、その方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレインとを混合する工程、ならびに（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識されたα－シヌクレインとマトリックスの影響を受けていない第２の標識されたα－シヌクレインとの間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。

【0015】

本発明はさらに、パーキンソン病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第１のキットを提供し、そのキットは、（ａ）標識されたα－シヌクレイン、および（ｂ）その標識されたα－シヌクレインを処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのその標識されたα－シヌクレインの測定を容易にするために有用な作用物質を、別個の区画に含む。

【0016】

最後に、本発明は、パーキンソン病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第２のキットを提供し、そのキットは、（ａ）第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレイン、ならびに（ｂ）その第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレインの各々を処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのそれらの標識されたα－シヌクレインの測定を容易にするために有用な作用物質を、別個の区画に含む。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】この図は、下記の実施例２において記載されるアッセイ１からの結果を示す。結果は、各研究について箱ひげ図として示されている。アウトカムパラメータに関する詳細は、表１に記載されている。

【0018】

【図2】この図は、下記の実施例３において記載されるアッセイ２からの結果を示す。結果は、平均±標準誤差（ｎ＝８）として表されている。

【0019】

【図3】この図は、下記の実施例４において記載されるアッセイ３からの結果を示す。結果は、１種のサンプルについて、そのサンプルの種々の希釈での百万分率（ｐｐｍ）値として示されている。

【発明を実施するための形態】

【0020】

（発明の詳細な説明）
本発明は、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための特定の方法を提供する。これらのマトリックスに関連する相関関係は、特定の障害（特に、神経変性障害）について診断の役に立ち得、かつ／または予後判定の役に立ち得る。

【0021】

（定義）
本出願において、以下のとおりに示される意味を有する特定の用語が、使用される。

【0022】

本明細書において使用される場合、「Ａβペプチド」としては、実施例５において示されるアミノ酸配列を有するペプチドが挙げられるが、それらに限定はされない。Ａβペプチドとしてはまた、Ａβ１－３７ペプチド、Ａβ１－３８ペプチド、Ａβ１－４０ペプチド、Ａβ１－４２ペプチド、Ａβ１－４３ペプチド、Ａβ１－１０ペプチド、Ａβ１－１６ペプチド、Ａβ（－３）－３７ペプチド、Ａβ（－３）－３８ペプチド、Ａβ（－３）－４０ペプチド、Ａβ（－３）－４２ペプチド、Ａβ（－３）－４３ペプチド、Ａβ（－３）－１０ペプチド、またはＡβ（－３）－１６ペプチドのいずれかのフラグメントが挙げられるが、それらに限定はされない。これらのフラグメントとしては、例えば、（ｉ）Ａβ１－３７ペプチドのＮ末端切断型フラグメント、Ａβ１－３８ペプチドのＮ末端切断型フラグメント、Ａβ１－４０ペプチドのＮ末端切断型フラグメント、Ａβ１－４２ペプチドのＮ末端切断型フラグメント、Ａβ１－４３ペプチドのＮ末端切断型フラグメント、Ａβ１－１０ペプチドのＮ末端切断型フラグメント、およびＡβ１－１６ペプチドのＮ末端切断型フラグメント；（ｉｉ）Ａβ３７位置で終端するＣ末端切断型フラグメント、Ａβ３８位置で終端するＣ末端切断型フラグメント、Ａβ４０位置で終端するＣ末端切断型フラグメント、Ａβ４２位置で終端するＣ末端切断型フラグメント、Ａβ４３位置で終端するＣ末端切断型フラグメント、Ａβ１０位置で終端するＣ末端切断型フラグメント、およびＡβ１６位置で終端するＣ末端切断型フラグメント；ならびに（ｉｉｉ）Ａβ３７ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメント、Ａβ３８ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメント、Ａβ４０ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメント、Ａβ４２ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメント、Ａβ４３ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメント、Ａβ１０ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメント、ならびにＡβ１６ペプチドのＮ末端およびＣ末端の両方で切断または伸長されたフラグメントが挙げられる。

【0023】

本明細書において企図されるＡβペプチドフラグメントとしては、例えば、（ｉ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４，３５、または３６の長さを有するＡβ３７ペプチドフラグメント；（ｉｉ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４，３５、３６、または３７の長さを有するＡβ３８ペプチドフラグメント；（ｉｉｉ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４，３５、３６、３７、３８、または３９の長さを有するＡβ４０ペプチドフラグメント；（ｉｖ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４，３５、３６、３７、３８、３９、４０、または４１の長さを有するＡβ４２ペプチドフラグメント；（ｖ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４，３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、または４２の長さを有するＡβ４３ペプチドフラグメント；（ｖｉ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、または９の長さを有するＡβ１０ペプチドフラグメント；および（ｖｉｉ）（アミノ酸残基で）５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５の長さを有するＡβ１６ペプチドフラグメントが挙げられる。

【0024】

本明細書において企図されるＡβペプチドフラグメントとしてはまた、例えば、以下が挙げられ、そのフラグメントのＮ末端は、その全長対応物Ａβペプチドの対応するアミノ酸残基数として定義される：（ｉ）残基２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、または２７にそのＮ末端を有するＡβ３７ペプチドフラグメント；（ｉｉ）残基２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８にそのＮ末端を有するＡβ３８ペプチドフラグメント；（ｉｉｉ）残基２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０にそのＮ末端を有するＡβ４０ペプチドフラグメント；（ｉｖ）残基２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、または３２にそのＮ末端を有するＡβ４２ペプチドフラグメント；（ｖ）残基２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、または３３にそのＮ末端を有するＡβ４３ペプチドフラグメント；（ｖｉ）残基２、３、４、または５にそのＮ末端を有するＡβ１０ペプチドフラグメント；および（ｖｉｉ）残基２、３、４、５、または６にそのＮ末端を有するＡβ１６ペプチドフラグメント。Ａβペプチドおよびそのフラグメントは、アミノ酸誘導体（例えば、ピログルタミン酸（例えば、アミノ酸残基３および／または１１でのピログルタミン酸置換））を必要に応じて含み得る（ＧｕおよびＶｉｌｅｓ（２０１６）、ならびにＲｅｚａｅｉ－Ｇｈａｌｅｈら（２０１６））。

【0025】

本明細書において使用される場合、「マトリックス効果と相関関係がある状態」としては、アミロイドパチー（ａｍｙｌｏｉｄｏｐａｔｈｙ）、タウオパチー、ニューロン損傷、シヌクレイノパチー、大脳プロテイノパチー（cerebral proteinopathy）（例えば、ＴＤＰ－４３プロテイノパチー）、プログラニュリノパチー（ｐｒｏｇｒａｎｕｌｉｎｏｐａｔｈｙ）、およびニューロン炎症が挙げられるが、それらに限定はされない。本発明において、以下の状態（それらに限定はされない）が、マトリックス効果の影響を受け標識された場合に本方法を実施するために有用である、以下のタンパク質およびペプチドと一緒に想定される。（ｉ）アミロイドパチー（β－アミロイド；ＢＡＣＥ１（アミロイド前駆体タンパク質βサイト切断酵素）；およびＡＰＰ（β－アミロイド前駆体タンパク質））。（ｉｉ）タウオパチー（タウおよびリン酸化タウ）。（ｉｉｉ）シヌクレイノパチー（ｓｙｎｕｃｌｅｏｐａｔｈｙ）（α－シヌクレイン；ニューログラニン；ＳＮＡＰ－２５（シナプトソーム関連タンパク質２５）；ＧＡＰ－４３（成長関連タンパク質４３またはニューロモジュリン）；シナプトタグミン；ＶＡＭＰ２（小胞結合膜タンパク質２）およびシナプトブレビン（ｓｙｎｐａｔｏｂｒｅｖｉｎ））。（ｉｖ）ＴＤＰ－４３病態（ＴＤＰ－４３（トランス活性応答ＤＮＡ結合タンパク質））。（ｖ）神経炎症およびグリア活性化（ｓＴＲＥＭ２ Ｂ３６（骨髄性細胞上に発現する可溶性トリガー受容体２）；ＹＫＬ－４０（キチナーゼ３様タンパク質１）；ＩＰ－１０（インターフェロンγ誘導性タンパク質１０）；ＧＦＡＰ（グリア線維性酸性タンパク質）；プログラニュリン；オステオポンチン；ＭＣＰ－１（単球走化性タンパク質１）；およびＩＬ－６（インターロイキン６））。（ｖｉ）血管調節不全（ｈＦＡＢＰ（心臓型脂肪酸結合タンパク質））。（ｖｉｉ）ニューロン損傷（ＶＩＬＩＰ－１（ビジニン様タンパク質１）；およびニューロフィラメント）。

【0026】

本明細書において使用される場合、用語「抗体」としては、（ａ）２本の重鎖（すなわち、Ｈ鎖、例えば、μ、δ、γ、αおよびε）と２本の軽鎖（すなわち、Ｌ鎖、例えば、λおよびκ）とを含み抗原を認識する、免疫グロブリン分子；（ｂ）ポリクローナル免疫グロブリン分子およびモノクローナル免疫グロブリン分子；（ｃ）それらの一価フラグメントおよび二価フラグメント、ならびに（ｄ）それらの二重特異性形態が挙げられるが、それらに限定はされない。免疫グロブリン分子は、一般的に公知であるクラス（ＩｇＡ、分泌ＩｇＡ、ＩｇＧおよびＩｇＭが挙げられるが、それらに限定はされない）のいずれかに由来し得る。ＩｇＧサブクラスもまた当業者に周知であり、それらとしては、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３およびヒトＩｇＧ４が挙げられるが、それらに限定はされない。抗体は、天然に存在する抗体および天然に存在しない抗体の両方であり得る。さらに、抗体としては、キメラ抗体、全合成抗体、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、およびそれらのフラグメントが挙げられる。抗体は、例えば、定常領域（例えば、Ｆｃ領域）および可変領域のすべてもしくは一部を含み得、または可変領域（抗原結合を担う）のみを含み得る。抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、または非ヒト（例えば、ラクダ）抗体であり得る。

【0027】

本明細書において使用される場合、「ヒト対象」は任意の年齢、性別、人種、または併存症状態のひと対象であり得る。一実施形態においてその対象は男性であり、別の実施形態においてその対象は女性である。別の実施形態において、その対象は、６０歳よりも若いか、５５歳よりも若いか、５０歳よりも若いか、４５歳よりも若いか、４０歳よりも若いか、３５歳よりも若いか、３０歳よりも若いか、２５歳よりも若いか、または２０歳よりも若い。別の実施形態において、その対象は、アルツハイマー病の早期発症と相関関係がある遺伝子変異（例えば、ＡＰＰにおける変異）を保有する。なお別の実施形態において、その対象は、少なくとも６０歳、少なくとも６５歳、少なくとも７０歳、少なくとも７５歳、少なくとも８０歳、少なくとも８５歳、または少なくとも９０歳である。さらなる実施形態において、そのヒト対象は、本方法を使用して検出される状態と関連がある障害（例えば、アルツハイマー病またはパーキンソン病）の症状がある。なおさらなる実施形態において、そのヒト対象は、本方法を使用して検出される状態と関連がある障害（例えば、アルツハイマー病またはパーキンソン病）の症状がない。

【0028】

本明細書において使用される場合、分子に関する「標識された」とは、検出可能な部分に共有結合または非共有結合で固定されていることを意味する。一実施形態において、その検出可能な部分は、その分子に直接固定されている（すなわち、その検出可能な部分は、中間部分を介して結合されることなく、その分子に結合されている）。別の実施形態において、その検出可能な部分は、その分子に間接的に固定されている（すなわち、その検出可能な部分は、中間部分（例えば、ポリペプチドまたは他の型のリンカー）を介してその分子に結合されている）。検出可能な部分としては、例えば、放射性同位体（例えば、^３２Ｐ、^３５Ｓ、および^１２５Ｉ）、フルオロフォア、ならびに他の非放射性化合物（例えば、ビオチン）が挙げられる。その標識された分子がペプチドまたはタンパク質である場合、例えば、その標識は、Ｎ末端に、Ｃ末端に、中央ドメインに、あるいはそのペプチドのアミノ酸残基またはタンパク質のアミノ酸残基の一部もしくはすべてに固定され得る。標識されたペプチドおよび標識されたタンパク質としては、例えば、標識されたβ－アミロイド、標識されたタウ、標識されたシヌクレイン、および標識されたＴＤＰ－４３が挙げられる。例えば、標識されたペプチドがビオチン標識されたＡβ４０ペプチドである場合には、そのビオチンは、Ｎ末端に結合されていても、Ｃ末端に結合されていても、または中央ドメインに結合されていてもよい。ビオチン標識されたペプチドのさらなる例としては、以下が挙げられる：（ｉ）Ｎ末端標識されたＡβ３７ペプチド、Ｃ末端標識されたＡβ３７ペプチド、および中央を標識されたＡβ３７ペプチド；（ｉｉ）Ｎ末端標識されたＡβ３８ペプチド、Ｃ末端標識されたＡβ３８ペプチド、および中央を標識されたＡβ３８ペプチド；（ｉｉｉ）Ｎ末端標識されたＡβ４２ペプチド、Ｃ末端標識されたＡβ４２ペプチド、および中央を標識されたＡβ４２ペプチド；（ｉｖ）Ｎ末端標識されたＡβ４３ペプチド、Ｃ末端標識されたＡβ４３ペプチド、および中央を標識されたＡβ４３ペプチド；（ｖ）Ｎ末端標識されたＡβ１０ペプチド、Ｃ末端標識されたＡβ１０ペプチド、および中央を標識されたＡβ１０ペプチド；（ｖｉ）Ｎ末端標識されたα－シヌクレイン、Ｃ末端標識されたα－シヌクレイン、および中央を標識されたα－シヌクレイン；（ｖｉｉ）Ｎ末端標識されたタウタンパク質、Ｃ末端標識されたタウタンパク質、および中央を標識されたタウタンパク質；（ｖｉｉｉ）Ｎ末端標識されたＴＤＰ－４３、Ｃ末端標識されたＴＤＰ－４３、および中央を標識されたＴＤＰ－４３；（ｉｘ）Ｎ末端標識されたプログラニュリン、Ｃ末端標識されたプログラニュリン、および中央を標識されたプログラニュリン；（ｘ）Ｎ末端標識されたＧＦＡＰ、Ｃ末端標識されたＧＦＡＰ、および中央を標識されたＧＦＡＰ；（ｘｉ）Ｎ末端標識されたニューログラニン、Ｃ末端標識されたニューログラニン、および中央を標識されたニューログラニン；（ｘｉｉ）Ｎ末端標識されたニューロフィラメント、Ｃ末端標識されたニューロフィラメント、および中央を標識されたニューロフィラメント；ならびに（ｘｉｉｉ）Ｎ末端標識されたリン酸化タウタンパク質、Ｃ末端標識されたリン酸化タウタンパク質、および中央を標識されたリン酸化タウタンパク質。上記の項目（ｉ）～（ｘｉｉｉ）において示された標識されたペプチドおよび標識されたタンパク質の各々のＮ末端標識されたフラグメント、Ｃ末端標識されたフラグメント、および中央を標識された．フラグメントもまた、本発明において想定される。好ましくは、標識された分子（例えば、ビオチン標識されたたＡβペプチド）について、その標識は、（ｉ）その標識された分子の測定にも、（ｉｉ）捕捉抗体への結合にも干渉しない様式で、その分子に結合されている。分子を標識してその目的と達成するための理想的な様式は、使用される分子、標識、および測定方法に依存する。したがって、例えば、その分子がＡβ４０ペプチドであり、その標識がビオチンであり、使用される測定方法が抗ビオチン抗体、アビジン、またはストレプトアビジン（例えば、放射性標識されたストレプトアビジン、酵素標識されたストレプトアビジン、もしくは磁性粒子に結合されたストレプトアビジン）を使用する場合、Ａβ４０ペプチドをビオチンで標識するために理想的な様式は、ビオチンをそのペプチドのＮ末端に結合することであり得る。

【0029】

本明細書において使用される場合、「マトリックス効果」とは、対象における特定の状態（例えば、アミロイドパチー）に関して、その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプル（例えば、３２倍希釈された血漿サンプル）が、適切な量の標識された分子（例えば、１００ｐｇ／ｍｌのビオチン標識されたＡβペプチド）と適切な条件下で適切な時間（例えば、室温にて３時間）混合された場合に、その流体がその状態を有する対象に由来する場合には、その状態を有しない対象に由来するよりも多量のマトリックスの影響を受けていない標識された分子を（すなわち、その流体中の生体分子（例えば、キャリアタンパク質）に結合する標識された分子の量がより少ない）生じる、現象である。例えば、マトリックス効果は、アミロイドパチーを有する対象について、その対象に由来する３２倍希釈された血漿サンプルが１００ｐｇ／ｍｌのビオチン標識されたＡβ４０ペプチドと室温にて３時間混合されて、アミロイドパチーを有しない対象に由来する血漿サンプルよりも多量のマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドを生じる場合に、実証される。いかなる特定の科学的理論によっても拘束されることは望まないが、その希釈された流体サンプル中のキャリアタンパク質（例えば、シャペロンタンパク質）などの利用可能な生体分子はその標識された分子に関して「マトリックス」として作用すると考えられ、その理由は、このマトリックスが、検出される状態の存在または非存在と相関関係がある程度までその標識された分子に結合するからである。詳細には、その状態が存在する場合は、そのマトリックスは、その状態が存在しない場合に有し得るのとは異なる量の利用可能な結合タンパク質、改変型三次元構造を有する結合タンパク質、二次修飾（例えば、リン酸化、ニトロ化、および糖化）を有する結合タンパク質、またはその標識された分子を担持する能力が減少しており、したがって、より少量のその標識された分子に結合する結合タンパク質を有し得る。したがって、その状態が存在する場合には、その状態が存在しない場合よりも多量のマトリックスの影響を受けていない標識された分子が生じる。

【0030】

本明細書において使用される場合、「マトリックスの影響を受けていない」標識された分子とは、対象の流体サンプルに由来しその標識された分子の検出に干渉するいかなる生体分子（例えば、キャリアタンパク質）にも吸着されず他の方法で結合もされない、標識された分子を意味する。

【0031】

本明細書において使用される場合、用語「分子」としては、アプタマー、ポリペプチド（例えば、ペプチド（例えば、合成ペプチド）またはタンパク質（例えば、組換えタンパク質））、核酸（例えば、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子）、リポタンパク質、および炭水化物が挙げられるが、それらに限定はされない。

【0032】

本明細書において使用される場合、本方法に関する「陰性対照」としては、（ｉ）試験される状態を有しないことが既知である対象に由来する流体を使用して併せて実施される並列方法において決定される、マトリックスの影響を受けていない標識された分子（または、適用可能である場合には、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子および第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子）の量；（ｉｉ）試験される状態を有しないことが既知である対象に由来する流体を使用して以前に実施された並列方法において決定された、マトリックスの影響を受けていない標識された分子（または、適用可能である場合には、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子および第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子）の量；（ｉｉｉ）試験される状態を有しないことが既知である１または複数の対象に由来する流体を使用して以前に実施された複数の並列方法において決定された、マトリックスの影響を受けていない標識された分子（または、適用可能である場合には、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子および第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子）の平均もしくは中央値の量（±１５％）；ならびに（ｉｖ）試験される状態を有しないことが既知である１または複数の対象に由来する流体を使用して以前に実施された複数の並列方法において決定された、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子と第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子との間の平均もしくは中央値の関係（例えば、平均比）が挙げられるが、それらに限定はされない。例として、一実施形態において、本方法は、アルツハイマー病と相関関係があるアミロイドパチーをヒト対象が有するかどうかを決定するためのものである。その方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する血漿の３２倍希釈されたサンプルと（ｉｉ）１００ｐｇ／ｍｌのビオチン標識されたＡβ４０ペプチドとを混合する工程、および（ｂ）室温にて３時間後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの量を決定する工程を含む。その陰性対照が１００ｐｐｍであると仮定する。それは、以前に実施された２０の並列方法（すなわち、本方法と同様に実施されたが、但し、それらの方法は、アルツハイマー病と相関関係があるアミロイドパチーを有しないことが既知である２０の対象に由来する３２倍希釈された血漿を使用する）において決定された、マトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの平均量である。また、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの量が１００ｐｐｍであると決定されると仮定する。その対象は、アミロイドパチーを有しない。その理由は、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量が、アミロイドパチーについての陰性対照と相関があるからである。本発明において、陰性対照との完全な相関関係は、試験される状態をその対象が有しないことを決定するためには必要ではない。例えば、上記の例において、混合物に存在するマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの量が１２５ｐｐｍであると決定され、その陰性対照が１００ｐｐｍであり、その陽性対照（本明細書において考察されている）が３００ｐｐｍであった場合には、アミロイドパチーをその対象が有しないと依然として決定し得る。

【0033】

本明細書において使用される場合、「神経変性障害」としては、アルツハイマー病およびパーキンソン病が挙げられるが、それらに限定はされない。

【0034】

本明細書において使用される場合、「複数の段階希釈されたサンプル」（例えば、血漿サンプル）としては、種々の希釈係数の２種もしくはそれより多くのサンプルが挙げられるが、それらに限定はされない。一実施形態において、複数の段階希釈されたサンプルは、そのサンプル中の流体が（ｉ）４倍および８倍；（ｉｉ）８倍および１６倍；（ｉｉｉ）１６倍および３２倍；（ｉｖ）３２倍および６４倍；（ｖ）６４倍および１２８倍；ならびに（ｖｉ）１２８倍および２５６倍希釈されている、２種のサンプルを含む。別の実施形態において、複数の段階希釈されたサンプルは、そのサンプル中の流体が（ｉ）４倍、８倍、および１６倍；（ｉｉ）８倍、１６倍、および３２倍；（ｉｉｉ）１６倍、３２倍、および６４倍；（ｉｖ）３２倍、６４倍、および１２８倍；ならびに（ｖ）６４倍、１２８倍、および２５６倍希釈されている、３種のサンプルを含む。さらなる実施形態において、複数の段階希釈されたサンプルは、そのサンプル中の流体が（ｉ）４倍、８倍、１６倍、および３２倍；（ｉｉ）８倍、１６倍、３２倍、および６４倍；（ｉｉｉ）１６倍、３２倍、６４倍、および１２８倍；ならびに（ｉｖ）３２倍、６４倍、１２８倍、および２５６倍希釈されている、４種のサンプルを含む。なおさらなる実施形態において、複数の段階希釈されたサンプルは、そのサンプル中の流体が（ｉ）４倍、８倍、１６倍、３２倍、および６４倍；（ｉｉ）８倍、１６倍、３２倍、６４倍、および１２８倍；ならびに（ｉｉｉ）１６倍、３２倍、６４倍、１２８倍、および２５６倍希釈されている、５種のサンプルを含む。なおさらなる実施形態において、複数の段階希釈されたサンプルは、そのサンプル中の流体が（ｉ）４倍、８倍、１６倍、３２倍、６４倍、および１２８倍；ならびに（ｉｉ）８倍、１６倍、３２倍、６４倍、１２８倍、および２５６倍希釈されている、６種のサンプルを含む。なおさらなる実施形態において、複数の段階希釈されたサンプルは、そのサンプル中の流体が４倍、８倍、１６倍、３２倍、６４倍、１２８倍、および２５６倍希釈されている、７種のサンプルを含む。

【0035】

本明細書において使用される場合、本方法に関する「陽性対照」としては、（ｉ）試験される状態を有することが既知である対象に由来する流体を使用して併せて実施される並列方法において決定される、マトリックスの影響を受けていない標識された分子（または、適用可能である場合には、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子および第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子）の量；（ｉｉ）試験される状態を有することが既知である対象に由来する流体を使用して以前に実施された並列方法において決定された、マトリックスの影響を受けていない標識された分子（または、適用可能である場合には、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子および第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子）の量；（ｉｉｉ）試験される状態を有することが既知である１または複数の対象に由来する流体を使用して以前に実施された複数の並列方法において決定された、マトリックスの影響を受けていない標識された分子（または、適用可能である場合には、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子および第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子）の平均もしくは中央値の量；ならびに（ｉｖ）試験される状態を有することが既知である１または複数の対象に由来する流体を使用して以前に実施された複数の並列方法において決定された、第１のマトリックスの影響を受けていない標識された分子と第２のマトリックスの影響を受けていない標識された分子との間の平均もしくは中央値の関係（例えば、平均比）が挙げられるが、それらに限定はされない。例として、一実施形態において、本方法は、アルツハイマー病と相関関係があるアミロイドパチーをヒト対象が有するかどうかを決定するためのものである。その方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する血漿の３２倍希釈されたサンプルと（ｉｉ）１００ｐｇ／ｍｌのビオチン標識されたＡβ４０ペプチドとを混合する工程、および（ｂ）室温にて３時間後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの量を決定する工程を含む。その陽性対照が３００ｐｐｍであると仮定する。それは、以前に実施された２０の並列方法（すなわち、本方法と同様に実施されたが、但し、それらの方法は、アルツハイマー病と相関関係があるアミロイドパチーを有することが既知である２０の対象に由来する３２倍希釈された血漿を使用する）において決定された、マトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの平均量である。また、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの量が３００ｐｐｍであると決定されると仮定する。その対象は、アミロイドパチーを有する。その理由は、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量が、アミロイドパチーについての陽性対照と相関があるからである。本発明において、陽性対照との完全な相関関係は、試験される状態をその対象が有することを決定するためには必要ではない。例えば、上記の例において、混合物に存在するマトリックスの影響を受けていないビオチン標識されたＡβ４０ペプチドの量が２７５ｐｐｍであると決定され、その陽性対照が３００ｐｐｍであり、その陰性対照（本明細書において考察されている）が１００ｐｐｍであった場合には、アミロイドパチーをその対象が有すると依然として決定し得る。

【0036】

本明細書において使用される場合、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識された分子とマトリックスの影響を受けていない第２の標識された分子との間の「量的関係」としては、（ｉ）それらの分子のうちの一方における、他方に対する変化；（ｉｉ）それら２種の分子のうちの一方の量と他方の量との比（例えば、マトリックスの影響を受けていない第１の標識された分子とマトリックスの影響を受けていない第２の標識された分子との比）；（ｉｉｉ）アルゴリズムによって規定された関係（例えば、ｘ＊Ａ＋ｂ＊Ｂ＋ｚ）；（ｉｖ）各分子の希釈曲線の勾配間の関係；（ｖ）各分子の相対的最終希釈力価；および（ｖｉ）それらの組合せが挙げられるが、それらに限定はされない。

【0037】

本明細書において使用される場合、抗体は、その抗体が以下のうちの少なくとも１つを行う場合に、その標的（例えば、Ａβペプチド上のエピトープ）に「特異的に結合する」：（ｉ）その抗体が他のいかなる標的に結合するよりも大きな親和性でその標的に結合する；または（ｉｉ）その標的に少なくとも５×１０^－４Ｍ（例えば、少なくとも１×１０^－４Ｍ、少なくとも５×１０^－５Ｍ、少なくとも１×１０^－５Ｍ、少なくとも５×１０^－６Ｍ、少なくとも１×１０^－６Ｍ、少なくとも５×１０^－７Ｍ、少なくとも１×１０^－７Ｍ、少なくとも５×１０^－８Ｍ、少なくとも１×１０^－８Ｍ、少なくとも５×１０^－９Ｍ、もしくは少なくとも１×１０^－９Ｍ）の親和性（すなわち、平衡解離定数）で結合する。好ましくは、抗体は、その抗体が上記の項目（ｉ）および（ｉｉ）の両方を行う場合に、その標的に特異的に結合する。

【0038】

本明細書において使用される場合、用語「対象」としては、哺乳動物、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ、ハムスター、ラットおよびマウスが挙げられるが、それらに限定はされない。本方法は本発明においてヒト対象のためのものであるので、必要な変更を加えて、本方法を、これらの非ヒト実施形態について、想定する。

【0039】

本明細書において使用される場合、標識された分子の「適切な量」とは、本方法の工程（ｂ）においてマトリックスの影響を受けていない形態でのその分子の実験による検出を可能にするのに十分な量である。標識された分子の適切な量としては、（ｉ）１ｐｇ／ｍｌ（すなわち、１ｐｇ／ｍｌの濃度を達成する標的分子の量）、５ｐｇ／ｍｌ、１０ｐｇ／ｍｌ、２０ｐｇ／ｍｌ、３０ｐｇ／ｍｌ、４０ｐｇ／ｍｌ、５０ｐｇ／ｍｌ、６０ｐｇ／ｍｌ、７０ｐｇ／ｍｌ、８０ｐｇ／ｍｌ、９０ｐｇ／ｍｌ、１００ｐｇ／ｍｌ、１１０ｐｇ／ｍｌ、１２０ｐｇ／ｍｌ、１３０ｐｇ／ｍｌ、１４０ｐｇ／ｍｌ、１５０ｐｇ／ｍｌ、１６０ｐｇ／ｍｌ、１７０ｐｇ／ｍｌ、１８０ｐｇ／ｍｌ、１９０ｐｇ／ｍｌ、２００ｐｇ／ｍｌ、３００ｐｇ／ｍｌ、４００ｐｇ／ｍｌ、５００ｐｇ／ｍｌ、６００ｐｇ／ｍｌ、７００ｐｇ／ｍｌ、８００ｐｇ／ｍｌ、９００ｐｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、５ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ、および１００ｎｇ／ｍｌ；（ｉｉ）１ｐｇ／ｍｌ～２０ｐｇ／ｍｌ、２０ｐｇ／ｍｌ～５０ｐｇ／ｍｌ、５０ｐｇ／ｍｌ～１００ｐｇ／ｍｌ、１００ｐｇ／ｍｌ～１５０ｐｇ／ｍｌ、１５０ｐｇ／ｍｌ～２００ｐｇ／ｍｌ、２００ｐｇ／ｍｌ～５００ｐｇ／ｍｌ、５００ｐｇ／ｍｌ～１ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ～１０ｎｇ／ｍｌ、および１０ｎｇ／ｍｌ～１００ｎｇ／ｍｌ；ならびに（ｉｉｉ）１ｐｇ／ｍｌ～１００ｐｇ／ｍｌ、１００ｐｇ／ｍｌ～１ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ～１０ｎｇ／ｍｌ、および１０ｎｇ／ｍｌ～１００ｎｇ／ｍｌが挙げられるが、それらに限定はされない。

【0040】

本明細書において使用される場合、「適切な流体」としては、全血、血清、血漿（例えば、未処理の血漿、ならびにＥＤＴＡで処理した血漿、ヘパリンで処理した血漿、および／またはシトレートで処理した血漿）、脳脊髄液（例えば、腰椎脳脊髄液、脳室脳脊髄液、または大槽脳脊髄液であり、シャントによって収集したかドレーンによって収集したかに関わらない）、硝子体液、唾液、涙液、眼球液、鼻腔液、および間質液が挙げられるが、それらに限定はされない。

【0041】

本明細書において使用される場合、本方法の工程（ｂ）に関する「適切な条件」としては、（ｉ）室温、３７℃、および／または２℃～８℃；（ｉｉ）回転、オービタル振盪（ｏｒｂｉｔａｌ ｓｈａｋｉｎｇ）および／または静置；（ｉｉｉ）新鮮、凍結（種々のサイクル／方法）（例えば、その温度が凍結まで低下する）、加熱（すなわち、その温度が５６℃またはそれより高く上昇する）、および／または不変；（ｉｖ）超音波処理；（ｖ）変性（例えば、ＧｕＨＣｌ、ギ酸、高濃度の界面活性剤、およびそれらの組合せによる）；ならびに（ｖｉ）それらの組合せが挙げられるが、それらに限定はされない。

【0042】

本明細書において使用される場合、本方法の工程（ｂ）に関する「適切な期間」としては、５分間、１０分間、２０分間、３０分間、４０分間、５０分間、６０分間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１８時間、２４時間、４８時間、７２時間、またはより長い期間が挙げられるが、それらに限定はされない。

【0043】

本明細書において使用される場合、適切な流体（例えば、血漿）の「適切に希釈された」サンプルとしては、その流体が４倍希釈されているサンプル、８倍希釈されているサンプル、１６倍希釈されているサンプル、３２倍希釈されているサンプル、６４倍希釈されているサンプル、１２８倍希釈されているサンプル、および２５６倍希釈されているサンプルが挙げられるが、それらに限定はされない。

【0044】

本明細書において使用される場合、標識された分子をその測定を容易にする様式で（直接的であろうと、または間接的であろうと）「処理すること」としては、（ｉ）その分子と、その分子に（例えば、Ｎ末端で、Ｃ末端で、中央ドメインで、または他の任意のドメインで）特異的に結合する抗体とを接触させること；（ｉｉ）その分子を（例えば、酸性化、アルカリ化、加熱、凍結、および／または超音波処理によって）前処理すること；ならびに（ｉｉ）その分子を（例えば、リン酸化、脱リン酸化、酸化、および／またはオリゴマー化によって）化学的に処理することが挙げられるが、それらに限定はされない。他の作用物質、例えば、色素またはクルクミンが、この目的のために抗体の代わりに使用され得る。標識された分子をその測定を容易にする様式で処理するために有用な抗体としては、３Ｄ６（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）、およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；１Ｅ８（Ｗｉｌｔｆａｎｇら（２００１））；ＷＯ２（Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；８２Ｅ１（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉａら（２００４））；６Ｅ１０（Ｂａｇｈａｌｌａｂら（２０１８）およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；２Ｇ３（Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；ならびに２１Ｆ１２（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）、およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））挙げられるが、それらに限定はされない。

【0045】

（発明の実施形態）
本発明は、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための特定の方法を提供する。これらの状態（例えば、アミロイドパチー）は、特定の障害（例えば、アルツハイマー病）について診断に役立ち得、かつ／または予後判定に役立ち得る。

【0046】

具体的には、本発明は、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための第１の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識された分子とを混合する工程であって、その標識された分子は、その状態に罹患している対象におけるその適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第１の方法を提供する。

【0047】

第１の方法の一実施形態において、工程（ａ）は、その標識された分子を、工程（ｂ）における標識された分子の測定を容易にする様式で処理することをさらに含む。好ましくは、その標識された分子を、工程（ｂ）における標識された分子の測定を容易にする様式で処理することは、その標識された分子と、適切な量の、その標識された分子に特異的に結合する抗体とを接触させることを含む。

【0048】

第１の方法において、工程（ａ）は、その適切な量の標識された分子と、その流体の１回希釈されたサンプル、またはその流体の複数の段階希釈されたサンプルのいずれかとを混合することによって、実施され得る。

【0049】

本発明はまた、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象が有するかどうかを決定するための第２の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識された分子および第２の標識された分子（および必要に応じて３種もしくはそれより多くの標識分子）とを混合する工程であって、その標識された分子は、その状態に罹患している対象におけるその適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識された分子とマトリックスの影響を受けていない第２の標識された分子との間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象は状態に罹患しており、関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象は状態に罹患していない、第２の方法を提供する。

【0050】

一実施形態において、第２の方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の３種もしくはそれより多くの標識された分子（例えば、標識されたＡβ４０ペプチド、標識されたＡβ４２ペプチド、および標識されたＡβ１０ペプチド）とを混合する工程であって、その標識された分子は、その状態に罹患している対象におけるその適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、工程、ならびに（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない分子の各々の間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。

【0051】

第２の方法の別の実施形態において、工程（ａ）は、その標識された分子を、工程（ｂ）における標識された分子の測定を容易にする様式で処理することをさらに含む。好ましくは、その標識された分子を、工程（ｂ）における標識された分子の測定を容易にする様式で処理することは、各々の標識された分子と、適切な量の各々の標識された分子に特異的に結合する抗体とを接触させることを含む。

【0052】

第２の方法において、工程（ａ）は、その適切な量の標識された分子と、その流体の１回希釈されたサンプル、またはその流体の複数の段階希釈されたサンプルのいずれかとを混合することによって、実施され得る。

【0053】

第１の方法および第２の方法において、その対象は好ましくはヒトである。

【0054】

第１の方法および第２の方法の一実施形態において、その状態は、神経変性障害（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、軽度認知障害、非アルツハイマー病認知症、前頭側頭型認知症、加齢黄斑変性（例えば、滲出型加齢黄斑変性）、およびレビー小体型認知症）に関連する状態である。この実施形態において、その対象は、（ｉ）アルツハイマー病、パーキンソン病、軽度認知障害、非アルツハイマー病認知症、前頭側頭型認知症、加齢黄斑変性、もしくはレビー小体型認知症の症状があるか、または（ｉｉ）アルツハイマー病、パーキンソン病、軽度認知障害、非アルツハイマー病認知症、前頭側頭型認知症、加齢黄斑変性、もしくはレビー小体型認知症の症状がないかのいずれかであり得る。第１の方法および第２の方法の別の実施形態において、その状態は、ダウン症候群に関連する状態である。第１の方法および第２の方法のさらなる実施形態において、その状態は、アミロイドパチー、タウオパチー、ニューロン損傷、シヌクレイノパチー、大脳プロテイノパチー（例えば、ＴＤＰプロテイノパチー）、プログラニュリノパチー、およびニューロン炎症である。

【0055】

第１の方法および第２の方法において、その適切な流体は、好ましくは、全血、血清、血漿、脳脊髄液、唾液、涙液、眼球液、硝子体液、鼻腔液、および間質液である。

【0056】

第１の方法の好ましい実施形態において、その標識された分子は、標識されたＡβペプチド（例えば、標識されたＡβ４０ペプチド、標識されたＡβ４２ペプチド、標識されたＡβ３７ペプチド、標識されたＡβ３８ペプチド、標識されたＡβ１０ペプチド、標識されたＡβ１６ペプチド、もしくは標識されたＡβ４３ペプチド）またはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、あるいは標識されたシヌクレイン（例えば、α－シヌクレインもしくはβ－シヌクレイン）またはそのフラグメントである。

【0057】

第２の方法の好ましい実施形態において、その第１の標識された分子および第２の標識された分子は、標識されたＡβペプチド（例えば、標識されたＡβ４０ペプチド、標識されたＡβ４２ペプチド、標識されたＡβ３７ペプチド、標識されたＡβ３８ペプチド、標識されたＡβ１０ペプチド、標識されたＡβ１６ペプチド、もしくは標識されたＡβ４３ペプチド）またはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレイン（例えば、α－シヌクレインもしくはβ－シヌクレイン）またはそのフラグメントからなる群より選択される。

【0058】

第１の方法および第２の方法において、マトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程は、絶対的に（例えば、ｐｇ／ｍｌもしくは総ｐｇで）または比較により（例えば、別の分子と比較したｐｐｍまたは倍数の差で）達成され得る。

【0059】

本発明において、マトリックス効果と相関関係がある状態の対象における進行を測定するための方法が想定され、その方法は、（ａ）上記の第１の方法を複数の時点（例えば、１か月間隔、２か月間隔、または３か月間隔）で実施する工程、および（ｂ）それらの時点の各々でその第１の方法によって決定されたマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を互いに比較する工程を含む。この方法の一実施形態において、その対象はその状態についての処置を経験中であり、この方法はその処置の成功をモニターするために使用される。本発明において、マトリックス効果と相関関係がある状態の対象における進行を測定するための別の方法が想定され、その方法は、（ａ）上記の第２の方法を複数の時点（例えば、１か月間隔、２か月間隔、または３か月間隔）で実施する工程、および（ｂ）それらの時点の各々でその第２の方法によって決定されたマトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を互いに比較する工程を含む。この方法の一実施形態において、その対象はその状態についての処置を経験中であり、この方法はその処置の成功をモニターするために使用される。これらの状態の進行を測定する方法の種々の実施形態は本発明の第１の方法および第２の方法のためのものであるので、必要な変更を加えて、これらの状態の進行を測定する方法の種々の実施形態を想定する。

【0060】

本発明はさらに、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象（好ましくはヒト対象）が有するかどうかを決定することにおける使用のための第１のキットであって、（ａ）その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、標識された分子、および（ｂ）その標識された分子を処理してマトリックスの影響を受けていない形態での標識された分子の測定を容易にするために有用な作用物質を別個の区画に含む、第１のキットを提供する。第１のキットの好ましい実施形態において、そのキットは、その標識された分子をそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を、別個の区画にさらに含む。第１のキットの別の好ましい実施形態において、その標識された分子は、標識されたＡβペプチド（例えば、標識されたＡβ４０ペプチド、標識されたＡβ４２ペプチド、標識されたＡβ３７ペプチド、標識されたＡβ３８ペプチド、標識されたＡβ１０ペプチド、標識されたＡβ１６ペプチド、もしくは標識されたＡβ４３ペプチド）またはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレイン（例えば、α－シヌクレイン）またはそのフラグメントからなる群より選択される。

【0061】

本発明はなおさらに、マトリックス効果と相関関係がある状態を対象（好ましくはヒト対象）が有するかどうかを決定することにおける使用のための第２のキットであって、（ａ）標識された分子各々が、その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、第１の標識された分子および第２の標識された分子、および（ｂ）第１の標識された分子および第２の標識された分子の各々を処理してマトリックスの影響を受けていない形態での標識された分子の測定を容易にするために有用な作用物質を別個の区画に含む、第２のキットを提供する。第２のキットの好ましい実施形態において、そのキットは、第１の標識された分子および第２の標識された分子の各々をそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を１個またはそれより多くの別個の区画にさらに含む。第２のキットの別の好ましい実施形態において、第１の標識された分子および第２の標識された分子は、標識されたＡβペプチド（例えば、標識されたＡβ４０ペプチド、標識されたＡβ４２ペプチド、標識されたＡβ３７ペプチド、標識されたＡβ３８ペプチド、標識されたＡβ１０ペプチド、標識されたＡβ１６ペプチド、もしくは標識されたＡβ４３ペプチド）またはそのフラグメント、標識されたタウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたリン酸化タウタンパク質またはそのフラグメント、標識されたプログラニュリンまたはそのフラグメント、標識されたＴＤＰ－４３またはそのフラグメント、標識されたＧＦＡＰまたはそのフラグメント、標識されたニューログラニンまたはそのフラグメント、標識されたニューロフィラメントまたはそのフラグメント、および標識されたシヌクレイン（例えば、α－シヌクレイン）またはそのフラグメントからなる群より選択される。

【0062】

一実施形態において、第２のキットは、（ａ）３種もしくはそれより多くの標識された分子（例えば、標識されたＡβ４０ペプチド、標識されたＡβ４２ペプチド、および標識されたＡβ１０ペプチド）であって、標識された分子各々は、その状態に罹患している対象における適切な流体に関してマトリックス効果の影響を受ける、３種もしくはそれより多くの標識された分子；ならびに（ｂ）それらの標識された分子を処理してマトリックスの影響を受けていない形態でのそれらの測定を容易にするために有用な１種もしくはそれより多くの作用物質を、別個の区画に含む。

【0063】

本発明は、アルツハイマー病と相関関係がある状態（すなわち、その対象が実際にアルツハイマー病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するための第１の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたＡβペプチドとを混合する工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第１の方法を提供する。

【0064】

一実施形態において、第１の方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の第１の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたＡβペプチドとを混合する工程であって、（ｉ）その対象に由来する適切な流体の第２の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたＡβペプチドとを別に混合する、混合する工程、（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在する第１の希釈でのマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドと、第２の希釈でのマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドとの間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。例えば、一実施形態において、決定される関係は、１：８で希釈された血漿サンプル（第１の適切に希釈されたサンプル）について測定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドと、１：１２８で希釈された血漿サンプル（第２の適切に希釈されたサンプル）について測定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドとの比である。

【0065】

第１の方法の別の実施形態において、工程（ａ）は、その標識されたＡβペプチドを工程（ｂ）におけるその標識されたＡβペプチドの測定を容易にする様式で処理することをさらに含む。好ましくは、その標識されたＡβペプチドを工程（ｂ）におけるその標識されたＡβペプチドの測定を容易にする様式で処理することは、その標識されたＡβペプチドと、その標識されたＡβペプチドに（好ましくは特異的に）結合する適切な量の作用物質（例えば、抗体）とを接触させることを含む。そのような作用物質としては、抗体３Ｄ６（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）、およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；抗体１Ｅ８（Ｗｉｌｔｆａｎｇら（２００１））；抗体ＷＯ２（Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；抗体８２Ｅ１（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉａら（２００４））；抗体６Ｅ１０（Ｂａｇｈａｌｌａｂら（２０１８）およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；抗体２Ｇ３（Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；ならびに抗体２１Ｆ１２（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）、およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））が挙げられるが、それらに限定はされない。

【0066】

第１の方法において、工程（ａ）は、その適切な量の標識されたＡβペプチドと、その流体の１回希釈されたサンプル、またはその流体の複数の段階希釈されたサンプルのいずれかとを混合することによって、実施され得る。

【0067】

第１の方法の好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドは、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、あるいは標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントである。第１の方法のさらに好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドはビオチン化Ａβ４０ペプチド、ビオチン化Ａβ４２ペプチド、またはそれらのフラグメントである。

【0068】

本発明はまた、アルツハイマー病と相関関係がある状態（すなわち、その対象が実際にアルツハイマー病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）有するかどうかを決定するための第２の方法であって、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドとを混合する工程、ならびに（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識されたＡβペプチドとマトリックスの影響を受けていない第２の標識されたＡβペプチドとの間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない、第２の方法を提供する。

【0069】

第２の方法の一実施形態において、工程（ａ）は、その標識されたＡβペプチドを工程（ｂ）におけるその標識されたＡβペプチドの測定を容易にする様式で処理することをさらに含む。好ましくは、その標識されたＡβペプチドを工程（ｂ）におけるその標識されたＡβペプチドの測定を容易にする様式で処理することは、その標識されたＡβペプチドと、その標識されたＡβペプチドに（好ましくは特異的に）結合する適切な量の作用物質（例えば、抗体）とを接触させることを含む。そのような作用物質としては、抗体３Ｄ６（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）、およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；抗体１Ｅ８（Ｗｉｌｔｆａｎｇら（２００１））；抗体ＷＯ２（Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；抗体８２Ｅ１（Ｈｏｒｉｋｏｓｈｉａら（２００４））；抗体６Ｅ１０（Ｂａｇｈａｌｌａｂら（２０１８）およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；抗体２Ｇ３（Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））；ならびに抗体２１Ｆ１２（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）、およびＶａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５））が挙げられるが、それらに限定はされない。

【0070】

第２の方法において、工程（ａ）は、その適切な量の標識されたＡβペプチドと、その流体の１回希釈されたサンプル、またはその流体の複数の段階希釈されたサンプルのいずれかとを混合することによって、実施され得る。

【0071】

第２の方法の好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドの各々は、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、あるいは標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントである。第２の方法のさらに好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドの各々は、ビオチン化Ａβ４０ペプチド、ビオチン化Ａβ４２ペプチド、またはそれらのフラグメントである。

【0072】

第１の方法および第２の方法において、アルツハイマー病と相関関係がある状態は、その相関関係を有すると同時にマトリックス効果ともまた相関関係がある、任意のそのような状態であり得る。好ましくは、その状態は、アミロイドパチー、タウオパチー、ニューロン損傷、シヌクレイノパチー、大脳プロテイノパチー（例えば、ＴＤＰ－４３）、プログラニュリノパチー、およびニューロン炎症である。

【0073】

第１の方法および第２の方法において、その適切な流体は、好ましくは、全血、血清、血漿、脳脊髄液、唾液、涙液、眼球液、硝子体液、鼻腔液、または間質液である。

【0074】

第１の方法および第２の方法において、マトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程は、絶対的に（例えば、ｐｇ／ｍｌもしくは総ｐｇで）または比較により（例えば、別の分子と比較したｐｐｍまたは倍数の差で）達成され得る。

【0075】

本発明において、アルツハイマー病と相関関係がある状態の対象における進行を測定するための方法が想定され、その方法は、（ａ）上記の第１の方法を複数の時点（例えば、１か月間隔、２か月間隔、または３か月間隔）で実施する工程、および（ｂ）それらの時点の各々でその第１の方法によって決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量を互いに比較する工程を含む。この方法の一実施形態において、その対象はその状態についての処置を経験中であり、この方法はその処置の成功をモニターするために使用される。本発明において、アルツハイマー病と相関関係がある状態の対象における進行を測定するための別の方法が想定され、その方法は、（ａ）上記の第２の方法を複数の時点（例えば、１か月間隔、２か月間隔、または３か月間隔）で実施する工程、および（ｂ）それらの時点の各々でその第２の方法によって決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたＡβペプチドの量を互いに比較する工程を含む。この方法の一実施形態において、その対象はその状態についての処置を経験中であり、この方法はその処置の成功をモニターするために使用される。これらの状態の進行を測定する方法の種々の実施形態は発明の第１の方法および第２の方法のためのものであるので、必要な変更を加えて、これらの状態の進行を測定する方法の種々の実施形態を想定する。

【0076】

本発明はさらに、アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第１のキットを提供し、そのキットは、（ａ）標識されたＡβペプチド、および（ｂ）その標識されたＡβペプチドを処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのその標識されたＡβペプチドの測定を容易にするために有用な作用物質（agent）を、別個の区画に含む。第１のキットの好ましい実施形態において、そのキットは、その標識されたＡβペプチドをそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を別個の区画にさらに含む。第１のキットの別の好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドは、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、あるいは標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントである。第１のキットのさらに好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドはビオチン化Ａβ４０ペプチドもしくはビオチン化Ａβ４２ペプチド、またはそれらのフラグメントである。

【0077】

本発明はなおさらに、アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第２のキットを提供し、そのキットは、（ａ）第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチド、ならびに（ｂ）その第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドの各々を処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのそれらの標識されたＡβペプチドの測定を容易にするために有用な作用物質を、別個の区画に含む。第２のキットの好ましい実施形態において、そのキットは、第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドの各々をそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を１個またはそれより多くの別個の区画にさらに含む。第２のキットの別の好ましい実施形態において、その標識されたＡβペプチドの各々は、標識されたＡβ４０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ４２ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３７ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ３８ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１０ペプチドまたはそのフラグメント、標識されたＡβ１６ペプチドまたはそのフラグメント、あるいは標識されたＡβ４３ペプチドまたはそのフラグメントである。第２のキットのさらに好ましい実施形態において、第１の標識されたＡβペプチドおよび第２の標識されたＡβペプチドは、ビオチン化Ａβ４０ペプチドおよびビオチン化Ａβ４２ペプチド、またはそれらのフラグメントである。

【0078】

本発明は、パーキンソン病と相関関係がある状態（すなわち、対象が実際にパーキンソン病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するための第１の方法を提供し、その方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたα－シヌクレインとを混合する工程、および（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインの量を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインの量がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その量がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。

【0079】

一実施形態において、第１の方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の第１の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたα－シヌクレインとを混合する工程であって、（ｉ）その対象に由来する適切な流体の第２の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の標識されたα－シヌクレインとを別に混合する、混合する工程、（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在する第１の希釈でのマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインと、第２の希釈でのマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインとの間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。例えば、一実施形態において、決定される関係は、１：８で希釈された血漿サンプル（第１の適切に希釈されたサンプル）について測定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインと、１：１２８で希釈された血漿サンプル（第２の適切に希釈されたサンプル）について測定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインとの比である。

【0080】

第１の方法の別の実施形態において、工程（ａ）は、その標識されたα－シヌクレインを工程（ｂ）におけるその標識されたα－シヌクレインの測定を容易にする様式で処理することをさらに含む。好ましくは、その標識されたα－シヌクレインを工程（ｂ）におけるその標識されたα－シヌクレインの測定を容易にする様式で処理することは、その標識されたα－シヌクレインと、その標識されたα－シヌクレインに特異的に結合する適切な量の抗体とを接触させることを含む。

【0081】

第１の方法において、工程（ａ）は、その適切な量の標識されたα－シヌクレインと、その流体の１回希釈されたサンプル、またはその流体の複数の段階希釈されたサンプルのいずれかとを混合することによって、実施され得る。

【0082】

本発明はまた、パーキンソン病と相関関係がある状態（すなわち、対象が実際にパーキンソン病に罹患しているかもしれず、またはまだ罹患していないかもしれない）をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するための第２の方法を提供し、その方法は、（ａ）（ｉ）その対象に由来する適切な流体の適切に希釈されたサンプルと（ｉｉ）適切な量の第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレインとを混合する工程、ならびに（ｂ）適切な条件下での適切な期間の後に、生じた混合物に存在するマトリックスの影響を受けていない第１の標識されたα－シヌクレインとマトリックスの影響を受けていない第２の標識されたα－シヌクレインとの間の定量的関係を決定する工程を含み、工程（ｂ）において決定された関係がその状態についての陽性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患しており、その関係がその状態についての陰性対照と相関関係がある場合には、その対象はその状態に罹患していない。

【0083】

第２の方法の一実施形態において、工程（ａ）は、その標識されたα－シヌクレインを工程（ｂ）におけるその標識されたα－シヌクレインの測定を容易にする様式で処理することをさらに含む。好ましくは、その標識されたα－シヌクレインを工程（ｂ）におけるその標識されたα－シヌクレインの測定を容易にする様式で処理することは、その標識されたα－シヌクレインと、その標識されたα－シヌクレインに特異的に結合する適切な量の抗体とを接触させることを含む。

【0084】

第２の方法において、工程（ａ）は、その適切な量の標識されたα－シヌクレインと、その流体の１回希釈されたサンプル、またはその流体の複数の段階希釈されたサンプルのいずれかとを混合することによって、実施され得る。

【0085】

第１の方法および第２の方法において、その適切な流体は、好ましくは、全血、血清、血漿、脳脊髄液、唾液、涙液、鼻腔液、眼球液、硝子体液、または間質液である。

【0086】

第１の方法および第２の方法において、マトリックスの影響を受けていない標識された分子の量を決定する工程は、絶対的に（例えば、ｐｇ／ｍｌもしくは総ｐｇで）または比較により（例えば、別の分子と比較したｐｐｍまたは倍数の差で）達成され得る。

【0087】

本発明において、パーキンソン病と相関関係がある状態の対象における進行を測定するための方法が想定され、その方法は、（ａ）上記の第１の方法を複数の時点（例えば、１か月間隔、２か月間隔、または３か月間隔）で実施する工程、および（ｂ）それらの時点の各々でその第１の方法によって決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインの量を互いに比較する工程を含む。この方法の一実施形態において、その対象はその状態についての処置を経験中であり、この方法はその処置の成功をモニターするために使用される。本発明において、パーキンソン病と相関関係がある状態の対象における進行を測定するための別の方法が想定され、その方法は、（ａ）上記の第２の方法を複数の時点（例えば、１か月間隔、２か月間隔、または３か月間隔）で実施する工程、および（ｂ）それらの時点の各々でその第２の方法によって決定されたマトリックスの影響を受けていない標識されたα－シヌクレインの量を互いに比較する工程を含む。この方法の一実施形態において、その対象はその状態についての処置を経験中であり、この方法はその処置の成功をモニターするために使用される。これらの状態の進行を測定する方法の種々の実施形態は本発明の第１の方法および第２の方法のためのものであるので、必要な変更を加えて、これらの状態の進行を測定する方法の種々の実施形態を想定する。

【0088】

本発明はさらに、パーキンソン病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第１のキットを提供し、そのキットは、（ａ）標識されたα－シヌクレイン、および（ｂ）その標識されたα－シヌクレインを処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのその標識されたα－シヌクレインの測定を容易にするために有用な作用物質を、別個の区画に含む。第１のキットの好ましい実施形態において、そのキットは、その標識されたα－シヌクレインをそのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を、別個の区画にさらに含む。第１のキットのさらに好ましい実施形態において、その標識されたα－シヌクレインはビオチン化α－シヌクレインまたはそのフラグメントである。

【0089】

本発明は、パーキンソン病と相関関係がある状態をヒト対象が有するかどうかを決定することにおける使用のための第２のキットをなおさらに提供し、そのキットは、（ａ）第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレイン、ならびに（ｂ）その第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレインの各々を処理してそのマトリックスの影響を受けていない形態でのそれらの標識されたα－シヌクレインの測定を容易にするために有用な作用物質を、別個の区画に含む。第２キットの好ましい実施形態において、そのキットは、その第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレインの各々をそれらのマトリックスの影響を受けていない形態で測定するために有用な作用物質を、１個またはそれより多くの別個の区画にさらに含む。第２キットのさらに好ましい実施形態において、その第１の標識されたα－シヌクレインおよび第２の標識されたα－シヌクレインはビオチン化α－シヌクレイン、またはそのフラグメントである。

【0090】

パーキンソン病に関する使用のための上記の第１の方法および第２の方法ならびに第１のキットおよび第２のキットにおいて、α－シヌクレインは、１種またはそれより多くのリン酸化タンパク質、ニューログラニン、あるいは１種またはそれより多くのＲａｂタンパク質で置換され得る。

【0091】

最後に、本発明は、特定の組成物を提供する。第１の組成物は、標識されたＡβペプチド（例えば、ビオチン化Ａβペプチド）と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、（ｉ）ビオチン化Ａβ３７ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｉｉ）ビオチン化Ａβ３８ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｉｉｉ）ビオチン化Ａβ４０ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｉｖ）ビオチン化Ａβ４２ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｖ）ビオチン化Ａβ４３ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｖｉ）ビオチン化Ａβ１０ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；あるいは（ｖｉｉ）ビオチン化Ａβ１６ペプチド（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。第２の組成物は、標識されたＡβペプチド（またはそのフラグメント）と、その標識されたＡβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、（ｉ）ビオチン化Ａβ３７ペプチド（またはそのフラグメント）と、その標識されたＡβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｉｉ）ビオチン化Ａβ３８ペプチド（またはそのフラグメント）と、その標識されたＡβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｉｉｉ）ビオチン化Ａβ４０ペプチド（またはそのフラグメント）と、その標識されたＡβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｉｖ）ビオチン化Ａβ４２ペプチド（またはそのフラグメント）と、その標識されたＡβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｖ）ビオチン化Ａβ４３ペプチド（またはそのフラグメント）と、そのビオチン化Ａβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；（ｖｉ）ビオチン化Ａβ１０ペプチド（またはそのフラグメント）と、そのビオチン化Ａβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物；あるいは（ｖｉｉ）ビオチン化Ａβ１６ペプチド（またはそのフラグメント）と、そのビオチン化Ａβペプチド（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。

【0092】

第３の組成物は、標識されたタウタンパク質（例えば、ビオチン化タウタンパク質）（またはそのフラグメント）と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、ビオチン化タウタンパク質（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。第４の組成物は、標識されたタウタンパク質（またはそのフラグメント）と、その標識されたタウタンパク質（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、ビオチン化タウタンパク質（またはそのフラグメント）と、そのビオチン化タウタンパク質（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。

【0093】

第５の組成物は、標識されたリン酸化タウタンパク質（例えば、ビオチン化リン酸化タウタンパク質）（またはそのフラグメント）と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、ビオチン化リン酸化タウタンパク質（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。第６の組成物は、標識されたリン酸化タウタンパク質（またはそのフラグメント）と、その標識されたリン酸化タウタンパク質（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、ビオチン化リン酸化タウタンパク質（またはそのフラグメント）と、そのビオチン化リン酸化タウタンパク質（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。

【0094】

第７の組成物は、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルと標識されたシヌクレイン（例えば、ビオチン化α－シヌクレイン）（またはそのフラグメント）との混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、ビオチン化α－シヌクレイン（またはそのフラグメント）と希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。第８の組成物は、標識されたシヌクレイン（またはそのフラグメント）と、その標識されたシヌクレイン（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルとの混合物を含む。一実施形態において、その組成物は、ビオチン化α－シヌクレイン（またはそのフラグメント）と、そのビオチン化α－シヌクレイン（またはそのフラグメント）に特異的に結合する抗体と、希釈されたヒト血漿サンプルとの混合物を含む。

【0095】

第９の組成物は、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルと標識されたプログラニュリン（例えば、ビオチン化プログラニュリン）（またはそのフラグメント）との混合物を含む。第１０の組成物は、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルと標識されたＴＤＰ－４３（例えば、ビオチン化ＴＤＰ－４３）（またはそのフラグメント）との混合物を含む。第１１の組成物は、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルと標識されたＧＦＡＰ（例えば、ビオチン化ＧＦＡＰ）（またはそのフラグメント）との混合物を含む。第１２の組成物は、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルと標識されたニューログラニン（例えば、ビオチン化ニューログラニン）（またはそのフラグメント）との混合物を含む。第１３の組成物は、ヒト対象に由来する希釈された流体サンプルと標識されたニューロフィラメント（例えば、ビオチン化ニューロフィラメント）（またはそのフラグメント）との混合物を含む。

【0096】

本方法および本キットは本発明においてＡβペプチドベースの方法およびキットのためのものであるので、必要な変更を加えて、本方法および本キットを、タウタンパク質ベースの方法およびタウタンパク質ベースのキット、リン酸化タウタンパク質ベースの方法およびリン酸化タウタンパク質ベースのキット、ならびにシヌクレインベースの方法およびシヌクレインベースのキットについて、想定する。

【0097】

本方法および本キットは本発明において標識された分子のためのものであるので、必要な変更を加えて、本方法および本キットを、標識されていない分子（例えば、α－シヌクレイン）について、想定する。本方法および本キットは本発明において、アルツハイマー病と相関関係がある状態をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するためのものであるので、必要な変更を加えて、本方法および本キットをまた、認知機能低下と相関関係がある状態をヒト対象（症候性かまたは無症候性かのいずれか）が有するかどうかを決定するために、想定する。

【0098】

本発明は、以下の実施例を参照することによってより良く理解されるが、当業者は、詳述されるそれらの具体的な実施例は、添付の特許請求の範囲においてより十分に記載されるとおりの本発明を単に例示するに過ぎないことを容易に認識する。

【実施例】

【0099】

（実施例１－技術）
図１におけるすべてのデータは、ＭａｇＡｒｒａｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｍｉｌｐｉｔａｓ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で生成された。そのアッセイは、ＭａｇＡｒｒａｙ ＭＲ－８１３機器システム（すなわち、Ｈａｎｎｏインキュベーションユニット、およびＲｅａｄｅｒユニット）で行った。ＭａｇＡｒｒａｙ Ｇｉａｎｔ Ｍａｇｎｅｔｏ－ｒｅｓｉｓｔｉｖｅ（ＧＭＲ）センサー技術および関連機器は、光学もマイクロフルイディクスも必要としない多重化形式で低量の生体分子の超高感度検出を可能にし、それと同時に、同時リアルタイム読取りを提供する（Ｊ．Ｒ．Ｌｅｅら（２０１７）およびＲ．Ｓ．Ｇａｓｔｅｒら（２００９））。

【0100】

本研究において使用するアッセイ形式は、プリント回路基板（ＰＣＢ）のセンサーにスポットした１種またはそれより多くのモノクローナル抗体（ｍＡｂ）で構成される。各ＰＣＢは、８個のチップを含む。各チップは、同じ抗体または異なる抗体をスポットされ得る８０個のセンサーを含む。数個のセンサーには、より強固で正確な分析物ごとまたは標的抗原ごとのシグナルを得るために、同じ抗体をスポットした。結合された分析物（ビオチン化ペプチド）を、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）から得られた特製磁性ナノテクノロジー（磁性ナノ粒子（ＭＮＰ）に結合された抗ビオチン抗体）を使用して検出した。すべてのＰＣＢは、ＭａｇＡｒｒａｙによって、専用のプロセスを使用して表面処理され調製された。ＰＣＢ表面処理の後に、抗体をスポットし、新たに調製したか、新鮮なまま凍結したか、または焼いて凍結したかのいずれかである、これらの事前に機能を持たせたＰＣＢを使用した。凍結保存した場合、ＰＣＢは、このアッセイにおいて使用する前に室温（ＲＴ）に戻した。一部のセンサーには、ウシ血清アルブミンを参照タンパク質としてスポットした。参照タンパク質センサーシグナルを使用して、センサーの行および列におけるチップ特異的変動性について正規化し、一方では、空のセンサーによって、臨床サンプルにおける非特異的シグナルの評価を可能にした。

【0101】

（実施例２－アッセイ１）
このアッセイは、ＭａｇＡｒｒａｙ ＭＲ－８１３機器システム（すなわち、Ｈａｎｎｏインキュベーションユニット、およびＲｅａｄｅｒユニット）で行った。各血漿サンプルを、安定化緩衝溶液としてアルブミンを含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）溶液で段階希釈した。各成分を、同じＰＢＳ緩衝液中で調製した。簡単に述べると、このプロセスは、特定の濃度のＮ末端ビオチン化Ａβ１－４０ペプチドまたはＮ末端ビオチン化Ａβ１－４２ペプチド（ｒＰｅｐｔｉｄｅ、Ｗａｔｋｉｎｓｖｉｌｌｅ、Ｇｅｏｒｇｉａ、ＵＳ）を含む前希釈したＥＤＴＡ－血漿サンプル（希釈係数：１／８～１／１０２４）のオービタルシェーカーでのプレインキュベーション工程と、その後に続く、血漿サンプルをチップ上の捕捉抗体に曝露するＨａｎｎｏユニットでの室温にて２時間のインキュベーションとを含む。その後、ＰＣＢをＲｅａｄｅｒユニットに移し、上記のＭＮＰ試薬に磁場の存在下で２０分間～３０分間浸漬し、その間に、各ＧＭＲセンサーからのシグナルを得る。

【0102】

（抗体）
モノクローナル抗体を種々の供給源から入手した。抗体２１Ｆ１２、抗体２Ｇ３、および抗体３Ｄ６の特徴が、以前に記載された（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）およびＢａｒｄら（２００３））。さらに、エピトープマッピング実験が、Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５）に記載された。

【0103】

（サンプル）
ＥＤＴＡ－血漿サンプルを、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ（Ｓｏｌａｎａ Ｂｅａｃｈ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳ）、ＧｏｌｄｏｎＷｅｓｔ Ｂｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｔｅｍｅｃｕｌａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）またはＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｅｎｔｅｒｓから入手した。性別、年齢、ミニメンタルステート検査（ｍｉｎｉ ｍｅｎｔａｌ ｓｔａｔｕｓ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓ）（ＭＭＳＥ）、およびＣＳＦバイオマーカープロファイルに関する詳細な情報は、それらのサンプルを注文した時点で入手可能であった。サンプルはドライアイス上で輸送され、実験室に到着してすぐに、それを＜－２０℃で保存した。サンプルの調製中またはアリコート中は、タンパク質吸着能力が低いポリプロピレン受容容器（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）を常に使うように注意を払った。

【0104】

３種の異なるサンプルセットを使用した（研究１、研究２、研究３）。各サンプルセットを、健常対照から得られたＥＤＴＡ－血漿またはアルツハイマー病と診断された対象から得られたＥＤＴＡ－血漿に分割した。対象の数は、研究プロトコルの関数として、ならびにこのアッセイの研究設計またはアウトカムに関して、異なる（表１を参照のこと）。

【0105】

各サンプルを、安定化緩衝溶液としてアルブミンを含むＰＢＳ溶液で段階希釈した。

【0106】

【表1】

【0107】

（実施例３－アッセイ２）
このアッセイプロトコルは、ＭａｇＡｒｒａｙ ＭＲ－８１３機器システムで行った。各サンプルを、安定化緩衝溶液としてアルブミンを含むＰＢＳ溶液で段階希釈した。各成分を、同じＰＢＳ緩衝液中で調製した。簡単に述べると、このプロセスは、特定の濃度のＡβ１－１０－ｂｉｏ（ＡｎａＳｐｅｃ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）を含む前希釈したＥＤＴＡ－血漿サンプル（希釈係数：１／８～１／１０２４）のオービタルシェーカーでのプレインキュベーション工程と、その後に続く、血漿サンプルをチップ上の捕捉抗体に曝露するＨａｎｎｏユニットでの室温にて２時間のインキュベーションとを含む。その後、ＰＣＢをＲｅａｄｅｒユニットに移し、上記のＭＮＰ試薬に磁場の存在下で２０分間～３０分間浸漬し、その間に、各ＧＭＲセンサーからのシグナルを得る。

【0108】

（抗体）
抗体２１Ｆ１２、抗体２Ｇ３、および抗体３Ｄ６の特徴が、以前に記載された（Ｊｏｈｎｓｏｎ－Ｗｏｏｄら（１９９７）およびＢａｒｄら（２００３））。さらに、エピトープマッピング実験が、Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００５）に記載された。

【0109】

（サンプル）
ＥＤＴＡ－血漿サンプルを、ＰｒｅｃｉｓｉｏｎＭｅｄ（Ｓｏｌａｎａ Ｂｅａｃｈ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳ）、ＧｏｌｄｏｎＷｅｓｔ Ｂｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｔｅｍｅｃｕｌａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）、またはＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｅｎｔｅｒｓから入手した。性別、年齢、ＭＭＳＥ、およびＣＳＦバイオマーカープロファイルに関する詳細な情報は、それらの材料を注文した時点で入手可能であった。材料はドライアイス上で輸送され、実験室に到着してすぐに、それを＜－２０℃で保存した。サンプルの調製中またはアリコート中は、タンパク質吸着能力が低いポリプロピレン受容容器を常に使うように注意を払った。健常対照およびアルツハイマー病と診断された４人の対象から得られた４種のＥＤＴＡ－血漿サンプルを、この研究において使用した。各サンプルを、安定化剤としてアルブミンを含むＰＢＳ溶液で段階希釈した。各サンプルを、陰性対照、内部コントロール、および実行検証コントロールとして使用する他のｍＡｂとともに３Ｄ６でコーティングした４種の異なる基板にて、個別に試験した。

【0110】

（実施例４－アッセイ３）
基板を、タウ特異的捕捉抗体またはホスホタウ特異的捕捉抗体の混合物を使用して調製した。モノクローナル抗体を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）から入手した。この実施例において、ＡＴ２７０（１８１位でリン酸化されたタウに特異的なｍＡｂ）を捕捉抗体として使用し、一方で、ビオチン化ＨＴ７（このタウタンパク質のエピトープ１５９～１６３）を検出抗体として使用した。これらのｍＡｂの特徴は、以前に公開された（Ｅ．Ｖａｎｍｅｃｈｅｌｅｎら（２０００）およびＨ．Ｖａｎｄｅｒｓｔｉｃｈｅｌｅら（２００６））。ＥＤＴＡ－血漿サンプルをＧｏｌｄｏｎＷｅｓｔ Ｂｉｏｓｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｔｅｍｅｃｕｌａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡ）から入手した。サンプルはドライアイス上で輸送され、実験室に到着してすぐに、それを＜－２０℃で保存した。その血漿の種々の希釈物の調製中は、タンパク質吸着能力が低いポリプロピレン受容容器を常に使うように注意を払った。

【0111】

このアッセイは、ＭａｇＡｒｒａｙ ＭＲ－８１３機器システムで行った。このアッセイにおけるすべての成分（ペプチド、希釈された血漿、およびビオチン化抗体）は、同じＰＢＳ緩衝液を使用して調製した。血漿サンプルを、安定化タンパク質としてアルブミンを含むＰＢＳで（１：２から１：３２まで）段階希釈した。２４０μＬのこの前希釈した血漿を、ＨＴ７のエピトープを含み１８１位でリン酸化された２，５００ｐｇ／ｍＬの合成ペプチド（Ｐｒｏｔｅｏｇｅｎｉｘ、Ｓｃｈｉｌｔｉｇｈｅｉｍ、Ｆｒａｎｃｅから入手した）を含む１０μＬの緩衝液と、混合した。この添加したペプチドは、ビオチン化していなかった。その後、ビオチン化ＨＴ７（２００ｎｇ／ｍＬ）を含む等体積の緩衝液を添加した。この混合物を、Ｈａｎｎｏユニットにて室温で１時間プレインキュベートし、その後、ＰＣＢにて上記の捕捉抗体とともに４時間のインキュベーションを行った。このインキュベーション時間の終わりに、このＰＣＢを上記のＭＮＰ試薬に磁場の存在下で２０分間～３０分間浸漬し、その間に、各ＧＭＲセンサーからのシグナルを得た。

【0112】

（実施例５－特定のヒトＡβペプチドのアミノ酸配列）
この実施例は、特定のヒトＡβペプチドのアミノ酸配列を示す。
Ａβ１－３７のアミノ酸配列は以下のとおりである：１－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬ－ＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧ－３７。Ａβ１－３８のアミノ酸配列は以下のとおりである：１－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧ－３８。Ａβ１－４０のアミノ酸配列は以下のとおりである：１－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬ－ＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶ－４０。Ａβ１－４２のアミノ酸配列は以下のとおりである：１－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡ－４２。Ａβ４３のアミノ酸配列は以下のとおりである：１－ＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶ－ＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶＧＧＶＶＩＡＴ－４３。Ａβ－３－４０のアミノ酸配列は以下のとおりである：（－３）－ＶＫＭＤＡＥＦＲＨＤＳＧＹＥＶＨＨＱＫＬＶＦＦＡＥＤＶＧＳＮＫＧＡＩＩＧＬＭＶ－ＧＧＶＶ－４０。

【0113】

（参考文献）
I. Baghallab, et al., Epitomic Characterization of the Specificity of the Anti-Amyloid A Monoclonal Antibodies 6E10 and 4G8, Journal of Alzheimer’s Disease 66 (2018) 1235－1244 DOI 10.3233/JAD-180582.
F. Bard, et al., Epitope and isotype specificities of antibodies to beta-amyloid peptide for protection against Alzheimer's disease-like neuropathology. Proc Natl Acad Sci USA 2003; 100:2023-2028.
S. Barrio, Methods and reagents for improved detection of amyloid beta peptides, U.S. Publication No. 2012/0264642 (October 18, 2012).
M. Bjerke, et al., Confounding Factors Influencing Amyloid Beta Concentration in Cerebrospinal Fluid, Int’l J. of Alzheimer’s Disease (2010), https://doi.org/ 10.4061/ 2010/986310.
C. Carroll, et al., Heart-type fatty acid binding protein as an early marker for myocardial infarction: systematic review and meta-analysis. J. Emerg Med 2013 (30):280-286.
V.C. Cullen, et al., Development and Advanced Validation of an Optimized Method for the Quantitation of Aβ₄₂ in Human Cerebrospinal Fluid, The AAPS Journal (2012), 14, 510－518.
R.S. Gaster, et al., Matrix-insensitive protein assays push the limits of biosensors in medicine. Nat Med. 2009 Nov;15(11):1327-32. doi: 10.1038/nm.2032).
N.P. Groome, et al., Region-specific immunoassays for human myelin basic protein, 1986, J. Neuroimmunol 12: 253-264.
M. Gu and J. Viles, Methionine oxidation reduces lag-times for amyloid-β(1－40) fiber formation but generates highly fragmented fibers, Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics 2016; 1864: 1260-1269.
M.K. Herbert, et al., Optimisation of the quantification of glutamine synthetase and myelin basic protein in cerebrospinal fluid by a combined acidification and neutralisation protocol, J. Immunol Methods 381:1-8 (2012).
Y. Horikoshia, et al., Development of Aβ terminal end-specific antibodies and sensitive ELISA for Aβ variant, Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 319, Issue 3, July 2, 2004, 733-737.
J. Ilzecka, Decreased cerebrospinal fluid cGMP levels in patients with amyotrophic lateral sclerosis, 2004 J. Neural Transm 111: 167-72.
K. Johnson-Wood, et al., Amyloid precursor protein processing and A beta42 deposition in a transgenic mouse model of Alzheimer disease, Proc Natl Acad Sci USA. 1997 Feb 18;94(4):1550-1555. doi: 10.1073/pnas.94.4.1550.
J.R. Lee, et al., Longitudinal monitoring of antibody responses against tumor cells using magneto-nanosensors with a nanoliter of blood. Nano Lett 17: 6644-6652 (2017).
Q. Li, et al., Improvement of a low pH antigen-antibody dissociation procedure for ELISA measurement of circulating anti-Aβ antibodies. BMC Neurosci 8, 22 (2007). https://doi.org/10.1186/1471-2202-8-22.
R.M. Lyons, et al., Proteolytic activation of latent transforming growth factor-beta from fibroblast-conditioned medium, 1988 J. Cell Biol 106: 1659-1665.
E. Mandelkow, et al., Structural principles of tau and the paired helical filaments of Alzheimer's disease, Brain Pathol 2007; 17:83-90.
C.M. Mastroianni, et al., Detection of cerebrospinal fluid antibodies against myelin basic protein in patients with AIDS dementia complex, 1991 Mol Cell Neuropathol 14: 227-236.
D.A. McGrowder, et al., Cerebrospinal Fluid Biomarkers of Alzheimer's Disease: Current Evidence and Future Perspectives. Brain Sci 2021; 11:215. doi: 10.3390/brainsci11020215.
N. Rezaei-Ghaleh, et al., Phosphorylation modifies the molecular stability of β-amyloid deposits, Nat Commun 2016; Apr 13;7:11359.
J.R. Slemmon, et al., Measurement of Aβ1-42 in cerebrospinal fluid is influenced by matrix effects, Journal of Neurochemistry, 2012, 120:325-333.
H. Shahpasand-Kroner, et al., A two-step immunoassay for the simultaneous assessment of Aβ38, Aβ40 and Aβ42 in human blood plasma supports the Aβ42/Aβ40 ratio as a promising biomarker candidate of Alzheimer’s disease, Alzheimer’s Research & Therapy (2018), 10:121.
H. Vanderstichele, et al., Amino-truncated beta-amyloid42 peptides in cerebrospinal fluid and prediction of progression of mild cognitive impairment, Clin Chem. 2005 Sep;51(9):1650-60. doi: 10.1373/clinchem.2005.051201.
H. Vanderstichele, et al., Analytical performance and clinical utility of the INNOTEST PHOSPHO-TAU181P assay for discrimination between Alzheimer's disease and dementia with Lewy bodies. Clin Chem Lab Med 2006; 44:1472-80.
E. Vanmechelen, et al., Quantification of tau phosphorylated at threonine 181 in human cerebrospinal fluid: a sandwich ELISA with a synthetic phosphopeptide for standardization. Neurosci Lett 2000; 285:49-52.
K.G. Warren and I. Catz, A correlation between cerebrospinal fluid mylein basic protein and anti－myelin basic protein in multiple sclerosis patients, 1987 Annal Neurol 21: 183-189.
N.C. Wildburger, et al., Diversity of Amyloid-beta Proteoforms in the Alzheimer's Disease Brain, Sci Rep 2017; 7:9520. doi: 10.1038.
J. Wiltfang, et al. (2001) Elevation of β-Amyloid Peptide 2-42 in Sporadic and Familial Alzheimer’s Disease and its Generation in PS1 Knockout Cells. J. Biol Chem 276:42645－42657.
C. Zettler, et al., Detection of increased tissue concentrations of nerve growth factor with an improved extraction procedure, 1996 J. Neurosci Res 46: 581-594.

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

2024514049000001.app

【国際調査報告】