知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」
特表2024-514154臓器保存溶液における脂質結合タンパク質ベースの複合体の使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-28
(54)【発明の名称】臓器保存溶液における脂質結合タンパク質ベースの複合体の使用
(51)【国際特許分類】
A01N 1/02 20060101AFI20240321BHJP
C07K 14/775 20060101ALN20240321BHJP
【ＦＩ】
A01N1/02
C07K14/775 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023562828
(86)(22)【出願日】2022-04-14
(85)【翻訳文提出日】2023-12-04
(86)【国際出願番号】 IB2022000227
(87)【国際公開番号】W WO2022219413
(87)【国際公開日】2022-10-20
(31)【優先権主張番号】63/175,330
(32)【優先日】2021-04-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】522403550
【氏名又は名称】アビオニクス ファーマ エスエー
(74)【代理人】
【識別番号】100092783
【弁理士】
【氏名又は名称】小林 浩
(74)【代理人】
【識別番号】100103182
【弁理士】
【氏名又は名称】日野 真美
(74)【代理人】
【識別番号】100120134
【弁理士】
【氏名又は名称】大森 規雄
(74)【代理人】
【識別番号】100139310
【弁理士】
【氏名又は名称】吉光 真紀
(72)【発明者】
【氏名】トゥピン，シリル
(72)【発明者】
【氏名】バルバラス，ロナルド
(72)【発明者】
【氏名】ゲスアルド，ロレト
(72)【発明者】
【氏名】フランツィン，ロッサーナ
(72)【発明者】
【氏名】スタシ，アレッサンドラ
【テーマコード（参考）】
4H011
4H045
【Ｆターム（参考）】
4H011BB17
4H011BB23
4H011CA01
4H011CB05
4H011CD02
4H011DA13
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA55
4H045CA40
4H045EA20
4H045EA34
(57)【要約】
臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液、臓器保存溶液を作製するためのキット、臓器保存溶液を使用して臓器を保存するプロセス、それによって保存された臓器、臓器保存溶液を含む、臓器を保存するためのシステム、および臓器保存プロセスによって得られた臓器を移植する方法。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項2】
再構成されたＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体である、請求項１に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項3】
スフィンゴミエリンを含む、請求項１または２に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項4】
負に帯電された脂質を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項5】
前記負に帯電された脂質が、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ＤＰＰＧ）またはその塩である、請求項４に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項6】
ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６である、請求項２に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項7】
ＣＥＲ－００１である、請求項６に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項8】
ＡｐｏｍｅｒまたはＣａｒｇｏｍｅｒである、請求項１から５のいずれか一項に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体。
【請求項9】
請求項１から８のいずれか一項に記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液。
【請求項10】
脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液。
【請求項11】
前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、再構成されたＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体である、請求項１０に記載の臓器保存溶液。
【請求項12】
前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、スフィンゴミエリンを含む、請求項１０または１１に記載の臓器保存溶液。
【請求項13】
前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、負に帯電された脂質を含む、請求項１０から１２のいずれか一項に記載の臓器保存溶液。
【請求項14】
前記負に帯電された脂質が、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ＤＰＰＧ）またはその塩である、請求項１３に記載の臓器保存溶液。
【請求項15】
前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６である、請求項１１に記載の臓器保存溶液。
【請求項16】
前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＣＥＲ－００１である、請求項１５に記載の臓器保存溶液。
【請求項17】
前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＡｐｏｍｅｒまたはＣａｒｇｏｍｅｒである、請求項１０から１４のいずれか一項に記載の臓器保存溶液。
【請求項18】
緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、請求項９から１７のいずれか一項に記載の臓器保存溶液。
【請求項19】
Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載）を含む、請求項１８に記載の臓器保存溶液。
【請求項20】
Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載）を含む、請求項１９に記載の臓器保存溶液。
【請求項21】
０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌの濃度で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、請求項９から２０のいずれか一項に記載の臓器保存溶液。
【請求項22】
０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、請求項９から２０のいずれか一項に記載の臓器保存溶液。
【請求項23】
脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキットであって、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、請求項１から８のいずれか一項に記載のものであってもよい、キット。
【請求項24】
前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項25】
前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載）を含む、請求項２４に記載のキット。
【請求項26】
請求項２３から２５のいずれか一項に記載のキットから臓器保存溶液を調製するプロセスであって、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体および前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を組み合わせることを含む、プロセス。
【請求項27】
脂質結合タンパク質ベースの複合体および臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を組み合わせることを含む、臓器保存溶液を調製するプロセスであって、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、請求項１から８のいずれか一項に記載のものであってもよい、プロセス。
【請求項28】
前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、請求項２７に記載のプロセス。
【請求項29】
請求項２６から２８のいずれか一項に記載のプロセスによって生産された臓器保存溶液。
【請求項30】
密封容器中に請求項９から２１および２９のいずれか一項に記載の臓器保存溶液を含む臓器保存溶液製品。
【請求項31】
前記容器が袋である、請求項３０に記載の臓器保存溶液製品。
【請求項32】
前記容器が、前記臓器保存溶液１Ｌを含む、請求項３０または３１に記載の臓器保存溶液製品。
【請求項33】
（ａ）請求項９から２１および２９のいずれか一項に記載の臓器保存溶液または請求項３０から３２のいずれか一項に記載の臓器保存溶液製品と、（ｂ）灌流機および／または臓器とを含むシステム。
【請求項34】
灌流機を含む、請求項３３に記載のシステム。
【請求項35】
前記灌流機が、心肺装置である、請求項３４に記載のシステム。
【請求項36】
臓器を含む、請求項３３から３５のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項37】
前記臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、請求項３６に記載のシステム。
【請求項38】
前記臓器が、腎臓である、請求項３７に記載のシステム。
【請求項39】
前記臓器が、ヒトまたはブタあってもよい哺乳動物由来である、、請求項３３から３８のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項40】
ドナー臓器を、請求項９から２１および２９のいずれか一項に記載の臓器保存溶液と接触させることを含む、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス。
【請求項41】
前記臓器を、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すこと（少なくとも１時間および／または最大１週間であってもよい）を含む、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項42】
機械灌流の非存在下での前記臓器の低温保管（２℃から６℃であってもよい）を含む、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項43】
前記臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、請求項４０から４２のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項44】
前記臓器が、腎臓である、請求項４３に記載のプロセス。
【請求項45】
前記臓器が、ヒトまたはブタであってもよい哺乳動物由来である、、請求項４０から４４のいずれか一項に記載のプロセス。
【請求項46】
請求項４０から４５のいずれか一項に記載のプロセスによって得られた臓器。
【請求項47】
臓器を移植する方法であって、請求項４６に記載の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植することを含む、方法。
【請求項48】
ドナー組織を、請求項９から２１および２９のいずれか一項に記載の臓器保存溶液と接触させることを含む、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセスであって、任意選択で、前記ドナー組織が、少なくとも１時間および／または最大４週間、前記臓器保存溶液中で保管される、プロセス。
【請求項49】
前記組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、請求項４８に記載のプロセス。
【請求項50】
前記組織が、角膜組織である、請求項４９に記載のプロセス。
【請求項51】
請求項４８から５０のいずれか一項に記載のプロセスによって得られた組織。
【請求項52】
組織を移植する方法であって、請求項５１に記載の組織を、組織移植を必要とする対象に移植することを含む、方法。
【請求項53】
ａ．ドナー臓器を得るステップ；ｂ．前記ドナー臓器を、請求項９から２１および２９のいずれか一項に記載の臓器保存溶液と接触させるステップであって、
前記接触させるステップは、
ｉ．前記臓器保存溶液を用いた前記臓器の機械灌流、または
ｉｉ．前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管
を含むステップ、および
ｃ．前記臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植するステップ
とを含む、移植方法。
【請求項54】
前記ドナー臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
前記接触させることが、少なくとも１時間および／または最大１週間の前記臓器保存溶液を用いた前記臓器の機械灌流または低温保管を含む、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項56】
ａ．ドナー組織を得るステップ；ｂ．前記ドナー組織を、請求項９から２１および２９のいずれか一項に記載の臓器保存溶液中で保管するステップ、
ｃ．前記組織を、組織移植を必要とする対象に移植するステップ
とを含む、移植方法。
【請求項57】
前記ドナー組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、請求項５６に記載の方法。
【請求項58】
前記保管することが、少なくとも１時間および／または最大４週間、前記臓器保存溶液を用いて前記組織を保管するステップを含む、請求項５６または５７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
１．関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月１５日に出願された米国特許仮出願第６３／１７５，３３０号明細書の優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年４月１５日に出願された米国特許仮出願第６３／１７５，３３０号明細書の優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
２．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年４月１１に作成された前記ＡＳＣＩＩの複写は、ＣＲＮ－０４３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、そのサイズは４，３２６バイトである。
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含有し、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる。２０２２年４月１１に作成された前記ＡＳＣＩＩの複写は、ＣＲＮ－０４３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、そのサイズは４，３２６バイトである。
【背景技術】
【0003】
３．背景
腎移植は、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の患者にとって救命処置である。後者は、慢性腎疾患を患う患者の世界人口の約１０％に相当し、２０３０年までには７６４万人に上昇すると予想されている（Liyanage et al., 2015, Lancet, 385(9981):1975-82；Levin et al., 2017, Lancet, 390(10105):1888-917）。しかしながら、腎移植は生活の質に劇的に影響を与え、高価な透析費用を節約することができるという事実にも関わらず、依然として未解決の問題が存在する。まず、利用可能なドナー腎臓の数が不十分であり、毎日２０人を超える人々が、移植臓器を待機しながら死亡している。この臓器不足により、移植の専門家は、心臓死または高齢者（６０歳以上）ドナー、即ち、ＤＣＤ（心停止死（Circulatory Death）後臓器提供）およびＥＣＤ（拡大適応（Expanded Criteria）ドナー）ドナー由来の「マージナル」臓器を受け入れざるを得ない。しかしながら、これらの腎臓の使用は、より乏しい生存率、拒絶の発生および移植片機能遅延（ＤＧＦ）と相関している。次に、使用されるドナーに関係なく、輸送および移植手術自体が、阻血／再灌流傷害（ＩＲＩ）の不可避なリスクを伴い、臓器の品質に大きく影響を及ぼし得る。腎臓の他に、心臓および肺などの他の臓器もまた、ＩＲＩが起きやすい（Fernandez et al., 2020, Int. J. Mol. Sci. 21:8549）。
腎移植は、末期腎疾患（ＥＳＲＤ）の患者にとって救命処置である。後者は、慢性腎疾患を患う患者の世界人口の約１０％に相当し、２０３０年までには７６４万人に上昇すると予想されている（Liyanage et al., 2015, Lancet, 385(9981):1975-82；Levin et al., 2017, Lancet, 390(10105):1888-917）。しかしながら、腎移植は生活の質に劇的に影響を与え、高価な透析費用を節約することができるという事実にも関わらず、依然として未解決の問題が存在する。まず、利用可能なドナー腎臓の数が不十分であり、毎日２０人を超える人々が、移植臓器を待機しながら死亡している。この臓器不足により、移植の専門家は、心臓死または高齢者（６０歳以上）ドナー、即ち、ＤＣＤ（心停止死（Circulatory Death）後臓器提供）およびＥＣＤ（拡大適応（Expanded Criteria）ドナー）ドナー由来の「マージナル」臓器を受け入れざるを得ない。しかしながら、これらの腎臓の使用は、より乏しい生存率、拒絶の発生および移植片機能遅延（ＤＧＦ）と相関している。次に、使用されるドナーに関係なく、輸送および移植手術自体が、阻血／再灌流傷害（ＩＲＩ）の不可避なリスクを伴い、臓器の品質に大きく影響を及ぼし得る。腎臓の他に、心臓および肺などの他の臓器もまた、ＩＲＩが起きやすい（Fernandez et al., 2020, Int. J. Mol. Sci. 21:8549）。
【0004】
保管および輸送中にドナー臓器に引き起こされる傷害を減らして、臓器移植後の移植片生存率を改善するために、臓器保存溶液が開発されてきた。機械灌流を用いたこれらの臓器保存溶液の使用は、静的低温保管（ＣＳ）と比較して、初期同種移植片機能不全において優れた転帰を示している。最近の研究により、ｅｘ ｖｉｖｏ正常温度（normothermic）機械灌流（ＮＭＰ）は、より低比率のＤＧＦ、腎代謝の改善および腎ＩＲＩの低減をもたらすことが示されている（Kataria et al., 2019, Curr Opin Organ Transplant. 24(4):378-384）。ＮＭＰは、ＣＳと比較した場合に、保存方法として優れているようであり（Hosgood et al., 2018, Br J Surg 105(4), 388-394）、したがって、拡大適応臓器提供（ＥＣＤ）由来、ならびに心停止後臓器提供（ＤＣＤ）由来の移植片の移植の転帰を改善することによって、ドナープールを潜在的に増加させている。ＮＭＰによって保存された腎移植片は、即座に移植された非保管腎臓と比較した場合でさえ、温阻血後に受ける阻血再灌流傷害はより少ない（Kaths et al., 2017, Transplantation 101(4), 754-763）。機能の保持を可能にすることに加えて、ＮＭＰは、制御された状態で臓器を維持するのに使用することができ、綿密な観察および生存能評価を可能にして首尾よい移植を可能にする（Hamar et al., 2018, Transplantation 102(8), 1262-1270）。移植前のドナー臓器傷害を減らすために様々な臓器保存溶液が開発されてきたが、移植前の臓器傷害は依然として問題である。
【0005】
したがって、臓器保存における新たなアプローチを開発することが差し迫って必要とされている。
【発明の概要】
【0006】
４．概要
本開示は、様々な態様では、臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液、脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキット、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液を調製するプロセス、本開示の臓器保存溶液と、灌流機および／または臓器とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス、本開示の臓器保存プロセスによって得られた臓器、ならびに本開示の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。本明細書中に記載される臓器保存溶液は、臓器および組織（例えば、角膜）の両方を保存するのに使用することができる。したがって、様々な態様では、本開示は、本開示の臓器保存溶液と、灌流機および／または組織とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセス、本開示の組織保存プロセスによって得られた組織、ならびに本開示の組織を、組織移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。
本開示は、様々な態様では、臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液、脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキット、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液を調製するプロセス、本開示の臓器保存溶液と、灌流機および／または臓器とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス、本開示の臓器保存プロセスによって得られた臓器、ならびに本開示の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。本明細書中に記載される臓器保存溶液は、臓器および組織（例えば、角膜）の両方を保存するのに使用することができる。したがって、様々な態様では、本開示は、本開示の臓器保存溶液と、灌流機および／または組織とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセス、本開示の組織保存プロセスによって得られた組織、ならびに本開示の組織を、組織移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。
【0007】
幾つかの研究により、末梢組織から肝臓へのコレステロールの中心的な輸送体である高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子は、重要な細胞保護機能に関与していることが実証されている。ＨＤＬ複合体は、抗炎症性、抗動脈硬化性、および抗線維化機能を発揮し、血管保護性効果を伴ってＲＯＳによるＬＤＬ酸化を防止し、凝固および血小板凝集を阻害する。ＨＤＬ粒子は、抗酸化酵素（例えば、血清パラオキソナーゼ／アリールエステラーゼ１（ＰＯＮ１）、レシチン－コレステロールアシルトランスフェラーゼＬＣＡＴおよびリポタンパク質関連ホスホリパーゼＡ２ＬｐＰＬＡ２）を運搬することができ、脂質過酸化を防ぐことが可能である（Rysz et al., 2020, Int J Mol Sci. 21(2):601）。
【0008】
腎ＩＲＩのラットモデルにおけるＨＤＬまたはＡｐｏＡ－Ｉの投与は、腎機能を著しく改善し、腎機能不全および尿細管機能不全を低減し、再灌流中に腎組織に浸潤する多形核白血球（ＰＭＮ）の数を減少し、これがＩ／Ｒによって引き起こされる腎ミエロペルオキシダーゼ活性の増加の減衰に反映されることがわかった（Kaths et al., 2017, Transplantation 101(4), 754-763；Rysz et al., 2020, Int J Mol Sci. 21(2):601）。さらに、ＨＤＬは、再灌流中に接着分子、細胞間接着分子－１（ＩＣＡＭ－１）、およびＰ－セレクチンの発現を顕著に低減させた（Thiemermann et al., 2003, J Am Soc Nephrol. 14(7):1833-1843；Lee et al., 2005, Atherosclerosis. 183(2):251-258）。特に、ＡｐｏＡ－Ｉの投与は、ＩＲＩ制御と比較して、血清クレアチニンレベル、血清ＴＮＦ－アルファおよびＩＬ－１ベータレベルならびに組織ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を大きく低減した。さらに、ＡｐｏＡ－Ｉ処置は、内皮上での細胞間接着分子－１（ＩＣＡＭ－１）およびＰ－セレクチンの発現を抑制し、したがって、好中球接着および続く組織傷害を減少させる（Shi., 2008, J Biomed Sci. 15(5):577-583）。
【0009】
ＨＤＬの保護機能および全身性炎症および酸化的ストレスを低減するその能力を考慮して、腎機能を保存し、内皮機能不全および尿細管不全に対抗するためには、理論に縛られないが、ＨＤＬ疑似薬ＣＥＲ－００１などの脂質結合タンパク質ベースの複合体は、臓器保存溶液においてｅｘ ｖｉｖｏで好適に使用することができると考えられている。再び理論に縛られないが、ＣＥＲ－００１などの脂質結合タンパク質ベースの複合体のｅｘ ｖｉｖｏ使用は、潜在的に有害な炎症促進性単核細胞の、移植片への動員を制御する接着分子を低減することによって、移植片内皮細胞を保護して、腎機能を改善することができ、したがって、ドナー腎臓のＤＧＦおよび急性拒絶のリスクの減少をもたらすと考えられている。さらに、ＨＤＬ疑似薬ＣＥＲ－００１などの脂質結合タンパク質ベースの複合体は同様に、保管および輸送中に、他の臓器、例えば、心臓および肺を保護することができる。
【0010】
したがって、一態様では、本開示は、臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）を提供する。脂質結合タンパク質ベースの複合体の例示的な特徴は、以下のセクション６．１ならびに特定実施形態１から２１および２４から４３に記載されている。
【0011】
別の態様では、本開示は、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）を含む臓器保存溶液を提供する。臓器保存溶液の例示的な特徴は、以下のセクション６．２ならびに特定実施形態２２から６３に記載されている。
【0012】
別の態様では、本開示は、脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキットを提供する。キットの例示的な特徴は、以下のセクション６．３ならびに特定実施形態６４から７８に記載されている。
【0013】
ある特定の態様では、本開示は、臓器保存溶液を調製するプロセスおよびそれによって調製された臓器保存溶液を提供する。本開示の臓器保存溶液を調製するプロセスおよびかかるプロセスによって調製された臓器保存溶液の例示的な特徴は、以下のセクション６．２ならびに特定実施形態７９から９５に記載されている。
【0014】
ある特定の態様では、本開示は、臓器保存溶液と、灌流機および／または臓器とを含むシステムを提供する。ある特定の態様では、本開示は、臓器保存溶液と組織とを含むシステムを提供する。本開示のシステムの例示的な特徴は、以下のセクション６．３ならびに特定実施形態９６から１１２に記載されている。
【0015】
ある特定の態様では、本開示は、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセスおよびそれによって得られた臓器を提供する。ある特定の態様では、本開示は、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセスおよびそれによって得られた組織を提供する。ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器および組織保存プロセスならびにそれらによって得られた臓器および組織の例示的な特徴は、以下のセクション６．４ならびに特定実施形態１１３から１５４および１５６から１７９に記載されている。
【0016】
さらなる態様では、本開示は、臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。さらなる態様では、本開示は、組織を、組織移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。本開示の移植方法の例示的な特徴は、以下のセクション６．４ならびに付番した実施形態１５５および１８０から１８６に記載されている。
【図面の簡単な説明】
【0017】
【図1】ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液（●）またはＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液（□）を用いて４時間、ＨＭＰ灌流させたブタ腎臓に関する血管抵抗（図１Ａ）および流速（図１Ｂ）（実施例４）。各群に関してｎ＝５。
【図2-1】ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液（対照）またはＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液（ＣＥＲ－００１）を用いてＨＭＰ灌流させたブタ腎臓由来の、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色によって実施した組織学的分析（図２Ａ）；尿細管傷害スコア（図２Ｂ）；
【図3-1】ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液（対照）またはＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液（ＣＥＲ－００１）を用いて灌流させたか、あるいは静的低温保管（ＳＣＳ）で維持された腎臓におけるＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）（図３Ａ）
【図3-2】ＩＬ－６（図３Ｂ）およびＥＴ－１（図３Ｃ）遺伝子発現（実施例４）。結果は、平均値±ＳＤである。ｎ＝５。＊＜０．０５。図３Ｂ～図３Ｃにおいて、ＳＣＳデータは△で示し、対照データは●で示し、ＣＥＲ－００１データは□で示す。
【図4】内皮細胞におけるＳｅｒ １１７７－ｅＮＯＳリン酸化を示すＦＡＣＳ分析（実施例５）。
【発明を実施するための形態】
【0018】
６．詳細な説明
本開示は、様々な態様では、臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液、脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキット、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液を調製するプロセス、本開示の臓器保存溶液と、灌流機および／または臓器とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス、本開示のプロセスによって得られた臓器、ならびに本開示の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。本開示の臓器保存溶液は、臓器および組織（例えば、眼（例えば、角膜または強膜）、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、および神経系）の両方を保存するのに使用することができる。したがって、本開示はさらに、本開示の臓器保存溶液と、組織とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセス、本開示のプロセスによって開示された組織、ならびに本開示の組織を、組織移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。
本開示は、様々な態様では、臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液、脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキット、脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液を調製するプロセス、本開示の臓器保存溶液と、灌流機および／または臓器とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス、本開示のプロセスによって得られた臓器、ならびに本開示の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。本開示の臓器保存溶液は、臓器および組織（例えば、眼（例えば、角膜または強膜）、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、および神経系）の両方を保存するのに使用することができる。したがって、本開示はさらに、本開示の臓器保存溶液と、組織とを含むシステム、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセス、本開示のプロセスによって開示された組織、ならびに本開示の組織を、組織移植を必要とする対象に移植する方法を提供する。
【0019】
脂質結合タンパク質ベースの複合体の例示的な特徴は、セクション６．１に記載されている。臓器保存溶液およびそれらの生産のプロセスの例示的な特徴は、セクション６．２に記載されている。キットおよびシステムの例示的な特徴は、セクション６．３に記載されている。ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器および組織保存プロセス、それによって得られた臓器および組織、ならびに移植方法の例示的な特徴は、セクション６．４に記載されている。
【0020】
６．１．脂質結合タンパク質ベースの複合体
６．１．１．ＨＤＬおよびＨＤＬ疑似体（mimetic）ベースの複合体
一態様では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、ＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体ベースの複合体を含む。例えば、複合体は、米国特許第８，２０６，７５０号明細書、ＰＣＴ国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット、ＰＣＴ国際公開第２０１５／１７３６３３号パンフレット（例えば、ＣＥＲ－００１）または米国特許出願公開第２００４／０２２９７９４号明細書に記載されるようなリポタンパク質複合体を含んでもよく、それらそれぞれの内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。「リポタンパク質」および「アポリポタンパク質」という用語は、本明細書中で言い換え可能に使用され、文脈によって他の状況が求められない限りは、「リポタンパク質」という用語は、リポタンパク質疑似体を包含する。「脂質結合タンパク質」および「脂質結合ポリペプチド」という用語もまた、本明細書中で言い換え可能に使用され、文脈によって他の状況が求められない限りは、当該用語は、特定の長さのアミノ酸配列を含意しない。
６．１．１．ＨＤＬおよびＨＤＬ疑似体（mimetic）ベースの複合体
一態様では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、ＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体ベースの複合体を含む。例えば、複合体は、米国特許第８，２０６，７５０号明細書、ＰＣＴ国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット、ＰＣＴ国際公開第２０１５／１７３６３３号パンフレット（例えば、ＣＥＲ－００１）または米国特許出願公開第２００４／０２２９７９４号明細書に記載されるようなリポタンパク質複合体を含んでもよく、それらそれぞれの内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。「リポタンパク質」および「アポリポタンパク質」という用語は、本明細書中で言い換え可能に使用され、文脈によって他の状況が求められない限りは、「リポタンパク質」という用語は、リポタンパク質疑似体を包含する。「脂質結合タンパク質」および「脂質結合ポリペプチド」という用語もまた、本明細書中で言い換え可能に使用され、文脈によって他の状況が求められない限りは、当該用語は、特定の長さのアミノ酸配列を含意しない。
【0021】
リポタンパク質複合体は、タンパク質分画（例えば、アポリポタンパク質分画）および脂質分画（例えば、リン脂質分画）を含み得る。タンパク質分画は、アポリポタンパク質、ペプチド、もしくはアポリポタンパク質ペプチドの類似体または疑似体などの１つまたは複数の脂質結合タンパク質分子、例えば、セクション６．１．４に記載される１つまたは複数の脂質結合タンパク質分子を含む。
【0022】
脂質分画は通常、中性であり得るか、負に帯電され得るか、正に帯電され得るか、またはそれらの組合せであり得る１つまたは複数のリン脂質を含む。例示的なリン脂質および脂質分画に含まれ得る他の両親媒性分子は、セクション６．１．５に記載されている。
【0023】
ある特定の実施形態では、脂質分画は、少なくとも１つの中性リン脂質（例えば、スフィンゴミエリン（ＳＭ））および任意選択で、１つまたは複数の負に帯電されたリン脂質を含有する。中性リン脂質および負に帯電されたリン脂質の両方を含むリポタンパク質複合体において、中性リン脂質および負に帯電されたリン脂質は、同じ数または異なる数の炭素および同じ飽和度または異なる飽和度を有する脂肪酸鎖を有し得る。一部の場合において、中性および負に帯電されたリン脂質は、同じアシル尾部、例えば、Ｃ１６：０、またはパルミトイル、アシル鎖を有する。特定実施形態では、特に、卵ＳＭが中性脂質として使用される実施形態では、アポリポタンパク質分画：脂質分画の重量比は、約１：２．７から約１：３の範囲（例えば、１：２．７）である。
【0024】
生理学的ｐＨで少なくとも部分的な負の電荷を保有する任意のリン脂質は、負に帯電されたリン脂質として使用することができる。非限定的な例として、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロールおよびホスファチジン酸の負に帯電された形態、例えば塩が挙げられる。特定実施形態では、負に帯電されたリン脂質は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グロセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］、またはＤＰＰＧ、ホスファチジルグリセロールである。好ましい塩として、カリウム塩およびナトリウム塩が挙げられる。
【0025】
一部の実施形態では、本開示の組成物および方法で使用されるリポタンパク質複合体は、米国特許第８，２０６，７５０号明細書または国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット（およびその米国対応物である米国特許出願公開第２０１２／０２３２００５号明細書）に記載されるようなリポタンパク質複合体であり、それらそれぞれの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。特定の実施形態では、リポタンパク質複合体のタンパク質構成成分は、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット（および米国特許出願公開第２０１２／０２３２００５号明細書）のセクション６．１に、好ましくはセクション６．１．１に記載されている通りであり、脂質構成成分は、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット（および米国特許出願公開第２０１２／０２３２００５号明細書）のセクション６．２に記載されている通りであり、それらは任意選択で、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット（および米国特許出願公開第２０１２／０２３２００５号明細書）のセクション６．３に記載される量で一緒に複合体形成され得る。これらのセクションそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれている。ある特定の態様では、本開示のリポタンパク質複合体は、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレット（および米国特許出願公開第２０１２／０２３２００５号明細書）のセクション６．４に記載されるように、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または少なくとも９９％均質である複合体の集団で存在し、それらの内容は、参照により本明細書に組み込まれている。
【0026】
特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン５０～８０分子およびＳＭ２０～５０分子を含む。
【0027】
別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン５０分子およびＳＭ５０分子を含む。
【0028】
さらに別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン８０分子およびＳＭ２０分子を含む。
【0029】
さらに別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン７０分子およびＳＭ３０分子を含む。
【0030】
さらに別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン６０分子およびＳＭ４０分子を含む。
【0031】
特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的に２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン５０～８０分子およびＳＭ２０～５０分子からなる。
【0032】
別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的に２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン５０分子およびＳＭ５０分子からなる。
【0033】
さらに別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的に２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン８０分子およびＳＭ２０分子からなる。
【0034】
さらに別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的に２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン７０分子およびＳＭ３０分子からなる。
【0035】
さらに別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的に２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体、帯電されたリン脂質２分子、レシチン６０分子およびＳＭ４０分子からなる。
【0036】
特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、ＳＭ約９０から９９．８重量％および負に帯電されたリン脂質約０．２から１０重量％、例えば、負に帯電されたリン脂質（複合可）総計約０．２～１重量％、０．２～２重量％、０．２～３重量％、０．２～４重量％、０．２～５重量％、０．２～６重量％、０．２～７重量％、０．２～８重量％、０．２～９重量％、または０．２～１０重量％を含む脂質構成成分を含む。別の特定実施形態では、本開示の方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、レシチン約９０から９９．８重量％および負に帯電されたリン脂質約０．２から１０重量％、例えば、負に帯電されたリン脂質（複合可）総計約０．２～１重量％、０．２～２重量％、０．２～３重量％、０．２～４重量％、０．２～５重量％、０．２～６重量％、０．２～７重量％、０．２～８重量％、０．２～９重量％、または０．２～１０重量％を含む。
【0037】
特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的にＳＭ約９０から９９．８重量％および負に帯電されたリン脂質約０．２から１０重量％、例えば、負に帯電されたリン脂質（複合可）総計約０．２～１重量％、０．２～２重量％、０．２～３重量％、０．２～４重量％、０．２～５重量％、０．２～６重量％、０．２～７重量％、０．２～８重量％、０．２～９重量％、または０．２～１０重量％からなる液体構成分を含む。別の特定実施形態では、本開示の方法において使用することができるリポタンパク複合体は、本質的にレシチン約９０から９９．８重量％および負に帯電されたリン脂質約０．２から１０重量％、例えば、負に帯電されたリン脂質（複合可）総計約０．２～１重量％、０．２～２重量％、０．２～３重量％、０．２～４重量％、０．２～５重量％、０．２～６重量％、０．２～７重量％、０．２～８重量％、０．２～９重量％、または０．２～１０重量％からなる。
【0038】
さらなる別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、ＳＭ約９．８から９０重量％、レシチン約９．８から９０重量％および負に帯電されたリン脂質約０．２～１０重量％、例えば、負に帯電されたリン脂質（複合可）総計約０．２～１重量％、０．２～２重量％、０．２～３重量％、０．２～４重量％、０．２～５重量％、０．２～６重量％、０．２～７重量％、０．２～８重量％、０．２～９重量％から０．２～１０重量％を含む液体分画を含む。
【0039】
さらなる別の実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、本質的にＳＭ約９．８から９０重量％、レシチン約９．８から９０重量％および負に帯電されたリン脂質約０．２～１０重量％、例えば、負に帯電されたリン脂質（複合可）総計約０．２～１重量％、０．２～２重量％、０．２～３重量％、０．２～４重量％、０．２～５重量％、０．２～６重量％、０．２～７重量％、０．２～８重量％、０．２～９重量％から０．２～１０重量％からなる液体分画を含む。
【0040】
別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、ＡｐｏＡ－Ｉアポリポタンパク質および脂質分画を含み、ここで、脂質分画は、スフィンゴミエリンおよび約３重量％の負に帯電されたリン脂質を含み、脂質分画対ＡｐｏＡ－Ｉアポリポタンパク質のモル比は、約２：１から２００：１であり、前記複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体を含有する小または大円板状粒子である。
【0041】
別の特定実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができるリポタンパク質複合体は、ＡｐｏＡ－Ｉアポリポタンパク質および脂質分画を含み、ここで、脂質分画は、本質的にスフィンゴミエリンおよび約３重量％の負に帯電されたリン脂質からなり、脂質分画対ＡｐｏＡ－Ｉアポリポタンパク質のモル比は、約２：１から２００：１であり、前記複合体は、２～４ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体を含有する小または大円板状粒子である。
【0042】
ＨＤＬベースまたはＨＤＬ疑似体ベースの複合体は、単一タイプの脂質結合タンパク質、あるいは同じか、もしくは異なる種に由来し得る２つまたはそれを超える異なる脂質結合タンパク質の混合物を含み得る。必須ではないが、療法に対して免疫応答を誘導するのを回避するために、複合体は、好ましくは、処置される動物種または保存される臓器の種に由来するか、またはそれらにアミノ酸が相当する脂質結合タンパク質を含む。したがって、ヒト患者の処置および／またはヒト臓器の保存のために、ヒト起源の脂質結合タンパク質が使用されることが好ましい。ペプチド疑似体アポリポタンパク質の使用もまた、免疫応答を低減し得るか、または回避し得る。
【0043】
一部の実施形態では、脂質構成成分は、２つのタイプのリン脂質：スフィンゴミエリン（ＳＭ）および負に帯電されたリン脂質を含む。例示的なＳＭおよび負に帯電されたリン脂質は、セクション６．１．５．１に記載されている。
【0044】
ＳＭを含む脂質構成成分は、任意選択で、少量のさらなる脂質を含み得る。リゾリン脂質、ガラクトセレブロシド、ガングリオシド、セレブロシド、グリセリド、トリグリセリド、ならびにコレステロールおよびその誘導体を含むがこれらに限定されない事実上任意のタイプの脂質が使用され得る。
【0045】
含まれる場合、かかる任意選択の脂質は通常、脂質分画の約１５重量％未満を占めるが、一部の場合では、より多くの任意選択の脂質が含まれ得る。一部の実施形態では、任意選択の脂質は、約１０重量％未満、約５重量％未満、または約２重量％未満を占める。一部の実施形態では、脂質分画は、任意選択の脂質を含まない。
【0046】
特定実施形態では、リン脂質分画は、９０：１０から９９：１の範囲、より好ましくは９５：５から９８：２の範囲の重量比（ＳＭ：負に帯電されたリン脂質）で卵ＳＭまたはパルミトイルＳＭまたはフィトスフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含有する。一実施形態では、重量比は９７：３である。
【0047】
本開示の複合体の脂質構成成分対タンパク質構成成分のモル比は多様であり、因子の中でも特に、タンパク質構成成分を含むアポリポタンパク質の独自性（複数可）、脂質構成成分を含む脂質の独自性および量、ならびに複合体の所望のサイズに依存する。ＡｐｏＡ－Ｉなどのアポリポタンパク質の生物学的活性は、アポリポタンパク質を含む両親媒性ヘリックスによって媒介されると考えられるため、ＡｐｏＡ－Ｉタンパク質等価体を使用して脂質：アポリポタンパク質モル比のアポリポタンパク質分画を発現することは利便性が高い。ＡｐｏＡ－Ｉは、ヘリックスを算出するのに使用される方法に応じて、６～１０個の両親媒性ヘリックスを含有することが一般に受けられている。他のアポリポタンパク質は、それらが含有する両親媒性ヘリックスの数に基づいて、ＡｐｏＡ－Ｉ等価体に関して表され得る。例えば、通常ジスルフィド架橋二量体として存在するＡｐｏＡ－ＩＭは、ＡｐｏＡ－ＩＭの各分子がＡｐｏＡ－Ｉの分子の２倍多い両親媒性ヘリックスを含有するため、２ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体として表され得る。逆に、単一の両親媒性ヘリックスを含有するペプチドアポリポタンパク質は、各分子がＡｐｏＡ－Ｉの分子の１／１０～１／６倍の両親媒性ヘリックスを含有するため、１／１０～１／６ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体として表され得る。概して、リポタンパク質複合体の脂質：ＡｐｏＡ－Ｉ等価体モル比（本明細書中では、「Ｒｉ」と定義される）は、約１０５：１から１１０：１の範囲である。一部の実施形態では、Ｒｉは、約１０８：１である。重量の比は、リン脂質に関しておよそ６５０～８００のＭＷを使用して得ることができる。
【0048】
一部の実施形態では、脂質：ＡｐｏＡ－Ｉ等価体のモル比（「ＲＳＭ」）は、約８０：１から約１１０：１、例えば約８０：１から約１００：１の範囲である。具体例では、複合体に関するＲＳＭは、約８２：１であり得る。
【0049】
一部の実施形態では、本開示の組成物および方法において使用されるリポタンパク質複合体は、好ましくは成熟した完全長ＡｐｏＡ－Ｉであるタンパク質分画、ならびに中性リン脂質、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、および負に帯電されたリン脂質を含む脂質分画を含む、負に帯電された複合体である。
【0050】
特定実施形態では、脂質構成成分は、９０：１０から９９：１の範囲の、より好ましくは９５：５から９８：２の範囲の、例えば９７：３の重量比（ＳＭ：負に帯電されたリン脂質）でＳＭ（例えば、卵ＳＭ、パルミトイルＳＭ、フィトＳＭ、またはそれらの組合せ）および負に帯電されたリン脂質（例えば、ＤＰＰＧ）を含有する。
【0051】
特定実施形態では、タンパク質構成成分対脂質構成成分の比は、約１：２．７から約１：３の範囲であってもよく、１：２．７が好ましい。これは、およそ１：９０から１：１４０の範囲のＡｐｏＡ－Ｉタンパク質対脂質のモル比に相当する。一部の実施形態では、複合体におけるタンパク質対脂質のモル比は、約１：９０から約１：１２０、約１：１００から約１：１４０、または約１：９５から約１：１２５である。
【0052】
特定の実施形態では、複合体は、ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６を含む。好ましい実施形態では、複合体はＣＥＲ－００１である。
【0053】
文献および以下の実施例で使用される場合のＣＥＲ－００１は、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの実施例４に記載される複合体を指す。国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットは、ＳＭ：ＤＰＰＧの重量：重量比９７：３で１：２．７のリポタンパク質重量：総リン脂質重量比を有する複合体として、ＣＥＲ－００１に言及している。国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの実施例４はまた、その製造方法について記載している。
【0054】
本開示のＣＥＲ－００１投薬レジメンまたは組成の状況で使用される場合、ＣＥＲ－００１は、その個々の成分が最大２０％分、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの実施例４に記載されるようなＣＥＲ－００１とは異なり得るリポタンパク質複合体を指す。ある特定の実施形態では、リポタンパク質複合体の成分は、最大１０％分、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの実施例４に記載されるようなＣＥＲ－００１とは異なる。好ましくは、リポタンパク質複合体の成分は、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの実施例４に記載されるもの（＋／－受容可能な製作公差変動）である。ＣＥＲ－００１におけるＳＭは、天然または合成であり得る。一部の実施形態では、ＳＭは、天然ＳＭ、例えば、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットに記載される天然ＳＭ、例えば鶏卵ＳＭである。一部の実施形態では、ＳＭは、合成ＳＭ、例えば、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットに記載される合成ＳＭ、例えば国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットに記載されるような合成パルミトイルスフィンゴミエリンである。パルミトイルスフィンゴミエリンを合成する方法は、例えば国際公開第２０１４／１４０７８７号パンフレットに記載されるように、当該技術分野で既知である。ＣＥＲ－００１におけるリポタンパク質であるアポリポタンパク質Ａ－Ｉ（ＡｐｏＡ－Ｉ）は、好ましくは、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの配列番号１（国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの前記配列番号１は、本明細書中では配列番号２として開始される）のアミノ酸２５から２６７に相当するアミノ酸配列を有する。ＡｐｏＡ－Ｉは、動物供給源（特に、ヒト供給源由来）によって精製され得るか、または組換え的に産生され得る。好ましい実施形態では、ＣＥＲ－００１におけるＡｐｏＡ－Ｉは、組換えＡｐｏＡ－Ｉである。本開示の投薬レジメンで使用されるＣＥＲ－００１は好ましくは、非常に均質であり、ゲル浸透クロマトグラフィにおける単一ピークに反映されるように、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％均質である。例えば、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットのセクション６．４を参照のこと。
【0055】
ＣＳＬ－１１１は、ダイズホスファチジルコリン（ＳＢＰＣ）と複合体形成された血漿から精製された再構成されたＡｐｏＡ－Ｉである（Tardif et al., 2007, JAMA 297:1675-1682）。
【0056】
ＣＳＬ－１１２は、血漿から精製されて、静脈内注入に適したＨＤＬを形成するよう再構成されたＡｐｏＡ－Ｉの製剤である（Diditchenko et al., 2013, DOI 10.1161/ATVBAHA.113.301981）。
【0057】
ＥＴＣ－２１６（ＭＤＣＯ－２１６としても既知）は、組換えＡｐｏＡ－ＩＭｉｌａｎｏを含有するＨＤＬの脂質枯渇形態である。Nicholls et al., 2011, Expert Opin Biol Ther. 11(3):387-94. doi: 10.1517/14712598.2011.557061を参照のこと。
【0058】
別の実施形態では、本開示の組成物および方法において使用することができる複合体は、ＣＥＲ－５２２である。ＣＥＲ－５２２は、３個のリン脂質および２２個のアミノ酸ペプチドの組合せを含むリポタンパク質複合体、ＣＴ８０５２２である：
【0059】
【化1】
【0060】
ＣＥＲ－５２２のリン脂質構成成分は、４８．５：４８．５：３の重量比の卵スフィンゴミエリン、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ジパルミトイルホスファチジルコリン、ＤＰＰＣ）および１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ジパルミトイルホスファチジル－グリセロール、ＤＰＰＧ）からなる。ＣＥＲ－５２２複合体におけるペプチド対総リン脂質の比は、１：２．５（ｗ／ｗ）である。
【0061】
一部の実施形態では、リポタンパク質複合体は、脱脂ＨＤＬである。血漿中のほとんどのＨＤＬは、コレステロールに富んでいる。ＨＤＬにおける脂質は、例えばそのコレステロール含有量を低減するために、枯渇させることができ、例えば部分的におよび／または選択的に枯渇させることができる。一部の実施形態では、脱脂ＨＤＬは、ＨＤＬの小α、プレβ－１、および他のプレβ形態のようであり得る。ＨＤＬの選択的枯渇のプロセスは、Sacks et al., 2009, J Lipid Res. 50(5): 894-907に記載されている。
【0062】
ある特定の実施形態では、リポタンパク質複合体は、米国特許第２００４／０２２９７９４号明細書に記載されるような生理活性剤送達粒子を含む。
【0063】
生理活性剤送達粒子は、脂質結合ポリペプチド（例えば、本セクションまたはセクション６．１．４においてすでに記載されているようなアポリポタンパク質）、脂質二重層（例えば、本セクションまたはセクション６．１．５．１においてすでに記載されているような１つまたは複数のリン脂質を含む）、および生理活性剤（例えば、抗がん剤）を含むことができ、ここで、脂質二重層の内部は、疎水性領域を含み、生理活性剤は、脂質二重層の疎水性領域と結合されている。一部の実施形態では、生理活性剤送達粒子は、米国特許第２００４／０２２９７９４号明細書に記載されている。
【0064】
一部の実施形態では、生理活性剤送達粒子は、親水性コアを含まない。
【0065】
一部の実施形態では、生理活性剤送達粒子は、円盤形状（例えば、直径約７から約２９ｎｍを有する）である。
【0066】
生理活性剤送達粒子は、脂質二重層形成脂質、例えば、リン脂質（例えば、本セクションまたはセクション６．１．５．１においてすでに記載されているような）を含む。一部の実施形態では、生理活性剤送達粒子は、二重層形成脂質および非二重層形成脂質の両方を含む。一部の実施形態では、生理活性剤送達粒子の脂質二重層は、リン脂質を含む。一実施形態では、送達粒子に組み込まれたリン脂質は、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）およびジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）を含む。一実施形態では、リン脂質層は、７：３のモル比でＤＭＰＣおよびＤＭＰＧを含む。
【0067】
一部の実施形態では、脂質結合ポリペプチドは、アポリポタンパク質（例えば、本セクションまたはセクション６．１．４においてすでに記載されているような）である。脂質結合ポリペプチド、例えばアポリポタンパク質分子と、脂質二重層との間の主な相互作用は一般に、脂質結合ポリペプチドの両親媒性構造、α－ヘリックスの疎水面の残基と、粒子の外周にある外部面上の脂質の脂肪アシル残基との間の疎水性相互作用である。生理活性剤送達粒子は、交換可能および／または交換不可能なアポリポタンパク質を含み得る。一部の実施形態では、脂質結合ポリペプチドは、ＡｐｏＡ－Ｉである。
【0068】
一部の実施形態では、生理活性剤送達粒子は、粒子の安定性を高めるように修飾された脂質結合ポリペプチド分子、例えば、アポリポタンパク質分子を含む。一実施形態では、修飾は、分子内および／または分子間ジスルフィド結合を形成するためのシステイン残基の導入を含む。
【0069】
別の実施形態では、生理活性剤送達粒子は、１つまたは複数の結合機能性部分、例えば１つまたは複数のターゲティング部分および／または送達粒子に組み込まれた生理活性剤の活性と相乗して増強または機能し得る所望の生物学的活性、例えば抗菌活性を有する１つまたは複数の部分とのキメラ脂質結合ポリペプチド分子、例えばキメラアポリポタンパク質分子を含む。
【0070】
６．１．２．Ａｐｏｍｅｒベースの複合体
一態様では、本開示の方法および組成物において使用することができる脂質結合タンパク質ベースの複合体は、Ａｐｏｍｅｒを含む。Ａｐｏｍｅｒベースの複合体において含まれ得るＡｐｏｍｅｒの特徴は、国際公開第２０１９／０３０５７５号パンフレットに記載されており、その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。
一態様では、本開示の方法および組成物において使用することができる脂質結合タンパク質ベースの複合体は、Ａｐｏｍｅｒを含む。Ａｐｏｍｅｒベースの複合体において含まれ得るＡｐｏｍｅｒの特徴は、国際公開第２０１９／０３０５７５号パンフレットに記載されており、その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【0071】
Ａｐｏｍｅｒは概して、両親媒性分子と複合体形成された単量体または多量体形態でアポリポタンパク質を含む。概して、Ａｐｏｍｅｒは、それぞれが１つまたは複数の両親媒性分子と複合体形成された１つまたは複数のアポリポタンパク質分子を含む。ある特定の態様では、両親媒性分子はともに、Ａｐｏｍｅｒにおいてアポリポタンパク質分子１つ当たり少なくとも＋１または－１の正味電荷を付与する。Ａｐｏｍｅｒにおいて使用することができる例示的なアポリポタンパク質分子は、セクション６．１．４．１に記載されている。例示的な両親媒性分子は、セクション６．１．５に記載されている。
【0072】
６．１．３．Ｃａｒｇｏｍｅｒベースの複合体
一態様では、本開示の方法および組成物において使用することができる脂質結合タンパク質ベースの複合体は、１つまたは複数のカーゴ部分を有する脂質結合タンパク質ベースの複合体であるＣａｒｇｏｍｅｒを含む。Ｃａｒｇｏｍｅｒベースの複合体において含まれ得るＣａｒｇｏｍｅｒの特徴は、国際公開第２０１９／０３０５７４号パンフレットに記載されており、その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。
一態様では、本開示の方法および組成物において使用することができる脂質結合タンパク質ベースの複合体は、１つまたは複数のカーゴ部分を有する脂質結合タンパク質ベースの複合体であるＣａｒｇｏｍｅｒを含む。Ｃａｒｇｏｍｅｒベースの複合体において含まれ得るＣａｒｇｏｍｅｒの特徴は、国際公開第２０１９／０３０５７４号パンフレットに記載されており、その内容は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【0073】
Ｃａｒｇｏｍｅｒは概して、単量体もしくは多量体形態のアポリポタンパク質（例えば、２個、４個、または８個のアポリポタンパク質分子）および１つまたは複数のカーゴ部分を含む。カーゴ部分は、両親媒性または非両親媒性であり得る。両親媒性カーゴ部分は、アポリポタンパク質を可溶化して、それが凝集するのを防ぎ得る。カーゴ部分が、両親媒性でないか、またはアポリポタンパク質分子（複数可）を可溶化するのに不十分である場合、Ｃａｒｇｏｍｅｒはまた、アポリポタンパク質を可溶化するために１つまたは複数のさらなる両親媒性分子を含み得る。したがって、Ｃａｒｇｏｍｅｒの状況での両親媒性分子の言及は、カーゴ部分である両親媒性分子、カーゴ部分ではない両親媒性分子、またはそれらの幾つかの組合せを包含する。好ましくは、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、例えばＮＭＲ分光法を使用して決定される場合、円板状ではない。
【0074】
カーゴ部分は、生物学的に活性な分子（例えば、薬物、生物製剤、および／または免疫原）または他の薬剤、例えば、診断薬に使用される薬剤を含み得る。本明細書中で使用する場合、「分子」および「薬剤」という用語はまた、複合体およびコンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）を含む。「生物学的に活性な」、「診断上有用な」などの用語は、直接的な薬理学的または生物学的活性を有する物質に限定されず、例えばプロドラッグの代謝またはリンカーの切断に起因して、投与後に活性となる物質を含み得る。したがって、「生物学的に活性」および「診断上有用な」という用語はまた、薬理学的もしくは生物学的効果を発揮し、および／または診断検査で検出可能である生成または代謝産物または他の切断生成物を通して、投与後に生物学的に活性または診断上有用になる物質を含む。
【0075】
Ｃａｒｇｏｍｅｒにおける両親媒性分子は、アポリポタンパク質を可溶化し、および／またはアポリポタンパク質凝集を低減するか、もしくは最低限に抑えることができ、またＣａｒｇｏｍｅｒにおいて他の機能を有し得る。例えば、両親媒性分子は、治療的有用性を有することができ、したがって、対象への投与時のＣａｒｇｏｍｅｒによる送達を対象とするカーゴ部分であり得る。さらに、以下のセクション６．１．５で論述されるように、両親媒性分子は、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおいて非両親媒性カーゴ部分をアポリポタンパク質に固着させるのに使用することができる。したがって、一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるカーゴ部分および両親媒性分子は同じである。他の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるアンカー部分および両親媒性分子は同じである。さらに他の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるカーゴ部分、アンカー部分および両親媒性分子は同じである（例えば、両親媒性分子が治療的活性を有し、また別の生物学的に活性な分子をアポリポタンパク質分子（複数可）に固着させる場合）。
【0076】
アンカーおよび／またはリンカー部分は、両親媒性分子ではないカーゴ部分を有するＣａｒｇｏｍｅｒに特に有用である。
【0077】
一部の実施形態では、本開示のＣａｒｇｏｍｅｒにおけるカーゴ部分の少なくとも１つ、カーゴ部分の大部分、またはカーゴ部分の全てが、アンカーを介してＣａｒｇｏｍｅｒにカップリングされる。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるカーゴ部分の少なくとも１つが、アンカーを介してＣａｒｇｏｍｅｒにカップリングされる。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるカーゴ部分の大部分が、アンカーを介してＣａｒｇｏｍｅｒにカップリングされる。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるカーゴ部分の全てが、アンカーを介してＣａｒｇｏｍｅｒにカップリングされる。Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるアンカーはそれぞれ、同じであってもよく、あるいは、異なるタイプのアンカーが、単一Ｃａｒｇｏｍｅｒに含まれてもよい（例えば、１つのタイプのカーゴ部分が、１つのタイプのアンカーを介してＣａｒｇｏｍｅｒにカップリングされてもよく、第２のタイプのカーゴ部分が、第２のタイプのアンカーを介してＣａｒｇｏｍｅｒにカップリングされてもよい）。
【0078】
ある特定の態様では、両親媒性分子、カーゴ、および存在する場合、アンカーおよび／またはリンカーはともに、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるアポリポタンパク質分子１つ当たり少なくとも＋１または－１（例えば、＋１、＋２、＋３、－１、－２、または－３）の正味電荷に寄与する。一部の実施形態では、正味電荷は、負の電荷である。他の実施形態では、正味電荷は、正の電荷である。文脈によって他の状況が求められない限りは、電荷は、生理学的ｐＨで測定される。
【0079】
Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるアポリポタンパク質分子対両親媒性分子のモル比は、整数で存在し得るか、またはアポリポタンパク質と両親媒性分子との間で１：１の関係を反映し得るが、必ずしもそうである必要はない。例として、制限されずに、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比２：５、８：７、３：２、または４：７を有し得る。
【0080】
一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、８：１から１：１５（例えば、８：１から１：１５、７：１から１：１５、６：１から１：１５、５：１から１：１５、４：１から１：１５、３：１から１：１５、２：１から１：１５、１：１から１：１５、８：１から１：１４、７：１から１：１４、６：１から１：１４、５：１から１：１４、４：１から１：１４、３：１から１：１４、２：１から１：１４、１：１から１：１４、８：１から１：１３、７：１から１：１３、６：１から１：１３、５：１から１：１３、４：１から１：１３、３：１から１：１３、２：１から１：１３、１：１から１：１３、８：１から１：１２、７：１から１：１２、６：１から１：１２、５：１から１：１２、４：１から１：１２、３：１から１：１２、２：１から１：１２、１：１から１：１２、８：１から１：１１、７：１から１：１１、６：１から１：１１、５：１から１：１１、４：１から１：１１、３：１から１：１１、２：１から１：１１、１：１から１：１１、８：１から１：１０、７：１から１：１０、６：１から１：１０、５：１から１：１０、４：１から１：１０、３：１から１：１０、２：１から１：１０、１：１から１：１０、８：１から１：９、７：１から１：９、６：１から１：９、５：１から１：９、４：１から１：９、３：１から１：９、２：１から１：９、１：１から１：９、８：１から１：８、７：１から１：８、６：１から１：８、５：１から１：８、４：１から１：８、３：１から１：８、２：１から１：８、１：１から１：８、８：１から１：７、７：１から１：７、６：１から１：７、５：１から１：７、４：１から１：７、３：１から１：７、２：１から１：７、１：１から１：７、８：１から１：６、７：１から１：６、６：１から１：６、５：１から１：６、４：１から１：６、３：１から１：６、２：１から１：６、１：１から１：６、８：１から１：５、７：１から１：５、６：１から１：５、５：１から１：５、４：１から１：５、３：１から１：５、２：１から１：５、１：１から１：５、８：１から１：４、７：１から１：４、６：１から１：４、５：１から１：４、４：１から１：４、３：１から１：４、２：１から１：４、１：１から１：４、８：１から１：３、７：１から１：３、６：１から１：３、５：１から１：３、４：１から１：３、３：１から１：３、２：１から１：３、１：１から１：３、８：１から１：２、７：１から１：２、６：１から１：２、５：１から１：２、４：１から１：２、３：１から１：２、２：１から１：２、１：１から１：２、８：１から１：１、７：１から１：１、６：１から１：１、５：１から１：１、４：１から１：１、３：１から１：１、または２：１から１：１）の範囲のアポリポタンパク質：両親媒性分子のモル比で両親媒性分子と複合体形成されたアポリポタンパク質分子を含む。
【0081】
一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒにおけるアポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、６：１から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：１から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、４：１から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：１から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、２：１から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：１から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、４：１から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：１から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、２：１から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：１から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、４：１から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：１から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、２：１から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：１から１：３の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、４：１から１：３の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：１から１：３の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、２：１から１：３の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：１から１：２の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、４：１から１：２の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：１から１：２の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、２：１から１：２の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：１から１：１の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、４：１から１：１の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：１から１：１の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、２：１から１：１の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：１から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：１から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：１から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：１から１：３の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：１から１：２の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：２から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：２から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：２から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：２から１：３の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：３から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：３から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：３から１：４の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：４から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：４から１：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１：５から１：６の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、１．５：１から１：２の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：４から４：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：３から３：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、５：２から２：５の範囲である。一部の実施形態では、アポリポタンパク質対両親媒性分子のモル比は、３：２から２：３の範囲である。
【0082】
一部の実施形態では、アポリポタンパク質分子対両親媒性分子の比は、約１：１である。他の実施形態では、アポリポタンパク質分子対両親媒性分子の比は、約１：２である。さらに他の実施形態では、アポリポタンパク質分子対両親媒性分子の比は、約１：３である。さらに他の実施形態では、アポリポタンパク質分子対両親媒性分子の比は、約１：４である。さらに他の実施形態では、アポリポタンパク質分子対両親媒性分子の比は、約１：５である。さらに他の実施形態では、アポリポタンパク質分子対両親媒性分子の比は、約１：６である。
【0083】
一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子１個を含む。
【0084】
他の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子２個を含む。アポリポタンパク質分子２個を含むＣａｒｇｏｍｅｒは好ましくは、３ｎｍまたはそれ未満のストークス半径を有する。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子２個、およびアポリポタンパク質分子１個当たり負に帯電された両親媒性分子（例えば、負に帯電されたリン脂質分子）１個、２個、または３個を含み得る。
【0085】
他の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子４個を含む。アポリポタンパク質分子４個を含むＣａｒｇｏｍｅｒは好ましくは、４ｎｍまたはそれ未満のストークス半径を有する。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子４個、およびアポリポタンパク質分子１個当たり負に帯電された両親媒性分子（例えば、負に帯電されたリン脂質分子）１個、２個、または３個を含み得る。
【0086】
他の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子８個を含む。アポリポタンパク質分子４個を含むＣａｒｇｏｍｅｒは好ましくは、５ｎｍまたはそれ未満のストークス半径を有する。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子８個、およびアポリポタンパク質分子１個当たり負に帯電された両親媒性分子（例えば、負に帯電されたリン脂質分子）１個、２個、または３個を含み得る。ある特定の実施形態では、本開示のＣａｒｇｏｍｅｒは、コレステロールおよび／またはコレステロール誘導体（例えば、コレステロールエステル）を含有しない。
【0087】
一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、約１：２から約１：３の範囲のアポリポタンパク質対リン脂質の重量比を含む。
【0088】
一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、１：２．７の範囲のアポリポタンパク質対リン脂質の重量比を含む。
【0089】
Ｃａｒｇｏｍｅｒは、生体液、例えば、リンパ、脳脊髄液、硝子体液、房水、および血液または血液分画（例えば、血清または血漿）の１つまたは複数の中に可溶性であり得る。
【0090】
Ｃａｒｇｏｍｅｒは、例えばＣａｒｇｏｍｅｒを特定の細胞または組織型へとターゲティングするためのターゲティング官能性を含み得る。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒは、アポリポタンパク質分子または両親媒性分子に結合されたターゲティング部分を含む。一部の実施形態では、Ｃａｒｇｏｍｅｒに組み込まれる１つまたは複数のカーゴ部分は、ターゲティング能を有する。
【0091】
６．１．４．脂質結合タンパク質分子
本明細書中で記載される複合体において使用することができる脂質結合タンパク質分子は、セクション６．１．４．１に記載されるものなどのアポリポタンパク質およびセクション６．１．４．２に記載されるものなどのアポリポタンパク質疑似体ペプチドを含む。一部の実施形態では、複合体は、脂質結合タンパク質分子の混合物を含む。一部の実施形態では、複合体は、１つまたは複数の脂質結合タンパク質分子および１つまたは複数のアポリポタンパク質疑似体ペプチドの混合物を含む。
本明細書中で記載される複合体において使用することができる脂質結合タンパク質分子は、セクション６．１．４．１に記載されるものなどのアポリポタンパク質およびセクション６．１．４．２に記載されるものなどのアポリポタンパク質疑似体ペプチドを含む。一部の実施形態では、複合体は、脂質結合タンパク質分子の混合物を含む。一部の実施形態では、複合体は、１つまたは複数の脂質結合タンパク質分子および１つまたは複数のアポリポタンパク質疑似体ペプチドの混合物を含む。
【0092】
一部の実施形態では、複合体は、１個から８個のＡｐｏＡ－Ｉ等価体（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、１個から７個、１個から６個、１個から５個、１個から４個、１個から３個、１個から２個、２個から８個、２個から６個、２個から４個、４個から６個、または４個から８個のＡｐｏＡ－Ｉ等価体）を含む。脂質結合タンパク質は、それらが含有する両親媒性ヘリックスの数に基づいてＡｐｏＡ－Ｉ等価体に関して表され得る。例えば、通常ジスルフィド架橋二量体として存在するＡｐｏＡ－ＩＭは、ＡｐｏＡ－ＩＭの各分子がＡｐｏＡ－Ｉ分子の２倍多い両親媒性ヘリックスを含有するため、２ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体として表され得る。逆に、単一両親媒性ヘリックスを含有するペプチド疑似体は、各分子がＡｐｏＡ－Ｉの分子の１／１０～１／６倍の両親媒性ヘリックスを含有するため、１／１０～１／６ ＡｐｏＡ－Ｉ等価体として表され得る。
【0093】
６．１．４．１．アポリポタンパク質
脂質結合タンパク質ベースの複合体に含まれ得る適切なアポリポタンパク質として、アポリポタンパク質ＡｐｏＡ－Ｉ、ＡｐｏＡ－ＩＩ、ＡｐｏＡ－ＩＶ、ＡｐｏＡ－Ｖ、ＡｐｏＢ、ＡｐｏＣ－Ｉ、ＡｐｏＣ－ＩＩ、ＡｐｏＣ－ＩＩＩ、ＡｐｏＤ、ＡｐｏＥ、ＡｐｏＪ、ＡｐｏＨ、および先述の２つまたはそれよりも多くの任意の組合せが挙げられる。多型形態、アイソフォーム、変異体および突然変異体ならびに先述のアポリポタンパク質の切断形態（それらの最も一般的なものは、アポリポタンパク質Ａ－ＩＭｉｌａｎｏ（ＡｐｏＡ－ＩＭ）、アポリポタンパク質Ａ－ＩＰａｒｉｓ（ＡｐｏＡ－ＩＰ）、およびアポリポタンパク質Ａ－ＩＺａｒａｇｏｚａ（ＡｐｏＡ－ＩＺ）である）もまた使用され得る。システイン残基を含有するアポリポタンパク質突然変異体もまた既知であり、同様に使用され得る（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１８１３７２号明細書を参照）。アポリポタンパク質は、単量体またはホモ二量体もしくはヘテロ二量体であり得る二量体の形態で存在し得る。例えば、ＡｐｏＡ－Ｉ（Duverger et al., 1996, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 16(12):1424-29）、ＡｐｏＡ－ＩＭ（Franceschini et al., 1985, J. Biol. Chem. 260:1632-35）、ＡｐｏＡ－Ｉｐ（Daum et al., 1999, J. Mol. Med. 77:614-22）、ＡｐｏＡ－ＩＩ（Shelness et al., 1985, J. Biol. Chem. 260(14):8637-46；Shelness et al., 1984, J. Biol. Chem. 259(15):9929-35）、ＡｐｏＡ－ＩＶ（Duverger et al., 1991, Euro. J. Biochem. 201(2):373-83）、ＡｐｏＥ（McLean et al., 1983, J. Biol. Chem. 258(14):8993-9000）、ＡｐｏＪおよびＡｐｏＨのホモおよびヘテロ二量体（実現可能である場合）が使用され得る。
脂質結合タンパク質ベースの複合体に含まれ得る適切なアポリポタンパク質として、アポリポタンパク質ＡｐｏＡ－Ｉ、ＡｐｏＡ－ＩＩ、ＡｐｏＡ－ＩＶ、ＡｐｏＡ－Ｖ、ＡｐｏＢ、ＡｐｏＣ－Ｉ、ＡｐｏＣ－ＩＩ、ＡｐｏＣ－ＩＩＩ、ＡｐｏＤ、ＡｐｏＥ、ＡｐｏＪ、ＡｐｏＨ、および先述の２つまたはそれよりも多くの任意の組合せが挙げられる。多型形態、アイソフォーム、変異体および突然変異体ならびに先述のアポリポタンパク質の切断形態（それらの最も一般的なものは、アポリポタンパク質Ａ－ＩＭｉｌａｎｏ（ＡｐｏＡ－ＩＭ）、アポリポタンパク質Ａ－ＩＰａｒｉｓ（ＡｐｏＡ－ＩＰ）、およびアポリポタンパク質Ａ－ＩＺａｒａｇｏｚａ（ＡｐｏＡ－ＩＺ）である）もまた使用され得る。システイン残基を含有するアポリポタンパク質突然変異体もまた既知であり、同様に使用され得る（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１８１３７２号明細書を参照）。アポリポタンパク質は、単量体またはホモ二量体もしくはヘテロ二量体であり得る二量体の形態で存在し得る。例えば、ＡｐｏＡ－Ｉ（Duverger et al., 1996, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 16(12):1424-29）、ＡｐｏＡ－ＩＭ（Franceschini et al., 1985, J. Biol. Chem. 260:1632-35）、ＡｐｏＡ－Ｉｐ（Daum et al., 1999, J. Mol. Med. 77:614-22）、ＡｐｏＡ－ＩＩ（Shelness et al., 1985, J. Biol. Chem. 260(14):8637-46；Shelness et al., 1984, J. Biol. Chem. 259(15):9929-35）、ＡｐｏＡ－ＩＶ（Duverger et al., 1991, Euro. J. Biochem. 201(2):373-83）、ＡｐｏＥ（McLean et al., 1983, J. Biol. Chem. 258(14):8993-9000）、ＡｐｏＪおよびＡｐｏＨのホモおよびヘテロ二量体（実現可能である場合）が使用され得る。
【0094】
アポリポタンパク質は、例えば、米国特許出願公開第２００８／０２３４１９２号明細書および同第２０１３／０１３７６２８号明細書、ならびに米国特許第８，１４３，２２４号明細書および同第８，５４１，２３６号明細書に記載されるように、酸化を受けにくくさせるようにそれらの一次配列において修飾され得る。アポリポタンパク質は、Ｈｉｓタグなどのそれらの単離を容易にするエレメント、または他の目的で設計された他のエレメントに相当する残基を含み得る。好ましくは、複合体におけるアポリポタンパク質は、生体液（例えば、リンパ、脳脊髄液、硝子体液、房水、および血液、または血液分画（例えば、血清または血漿））中に可溶性である。
【0095】
一部の実施形態では、複合体は、共有結合された脂質結合タンパク質モノマー、例えばシステインを含有するＡｐｏＡ－Ｉの突然変異形態である二量体アポリポタンパク質ＡｐｏＡ－ＩＭｉｌａｎｏを含む。システインは、ホモ二量体またはヘテロ二量体（例えば、ＡｐｏＡ－Ｉ Ｍｉｌａｎｏ－ＡｐｏＡ－ＩＩ）の形成をもたらし得るジスルフィド架橋の形成を可能にする。
【0096】
一部の実施形態では、アポリポタンパク質分子は、ＡｐｏＡ－Ｉ、ＡｐｏＡ－ＩＩ、ＡｐｏＡ－ＩＶ、ＡｐｏＡ－Ｖ、ＡｐｏＢ、ＡｐｏＣ－Ｉ、ＡｐｏＣ－ＩＩ、ＡｐｏＣ－ＩＩＩ、ＡｐｏＤ、ＡｐｏＥ、ＡｐｏＪ、もしくはＡｐｏＨ分子またはそれらの組合せを含む。
【0097】
一部の実施形態では、アポリポタンパク質分子は、ＡｐｏＡ－Ｉ分子を含むか、またはそれらからなる。一部の実施形態では、前記ＡｐｏＡ－Ｉ分子は、ヒトＡｐｏＡ－Ｉ分子である。一部の実施形態では、前記ＡｐｏＡ－Ｉ分子は組換えである。一部の実施形態では、ＡｐｏＡ－Ｉ分子は、ＡｐｏＡ－ＩＭｉｌａｎｏではない。
【0098】
一部の実施形態では、ＡｐｏＡ－Ｉ分子は、アポリポタンパク質Ａ－ＩＭｉｌａｎｏ（ＡｐｏＡ－ＩＭ）、アポリポタンパク質Ａ－ＩＰａｒｉｓ（ＡｐｏＡ－ＩＰ）、またはアポリポタンパク質Ａ－ＩＺａｒａｇｏｚａ（ＡｐｏＡ－ＩＺ）分子である。
【0099】
アポリポタンパク質は、動物供給源から（特に、ヒト供給源から）精製され得るか、または当業者に既知であるように組換え的に産生され得る。例えば、Chung et al., 1980, J. Lipid Res. 21(3):284-91；Cheung et al., 1987, J. Lipid Res. 28(8):913-29を参照のこと。同様に、米国特許第５，０５９，５２８号明細書、同第５，１２８，３１８号明細書、同第６，６１７，１３４号明細書；米国特許出願公開第２００２／０１５６００７号明細書、同第２００４／００６７８７３明細書、同第２００４／００７７５４１明細書、および同第２００４／０２６６６６０号明細書；ならびにＰＣＴ国際公開第２００８／１０４８９０号パンフレットおよび同第２００７／０２３４７６号パンフレットを参照のこと。例えばＰＣＴ国際公開第２０１２／１０９１６２号明細書に記載されるように、他の精製方法もまた可能であり、その開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【0100】
アポリポタンパク質は、プレプロ形態、プロ形態、または成熟形態で存在し得る。例えば、複合体は、ＡｐｏＡ－ＩがプレプロＡｐｏＡ－Ｉ、プロＡｐｏＡ－Ｉ、または成熟ＡｐｏＡ－ＩであるＡｐｏＡ－Ｉ（例えば、ヒトＡｐｏＡ－Ｉ）を含み得る。一部の実施形態では、複合体は、配列番号１に対して少なくとも９０％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。
【0101】
【化2】
【0102】
他の実施形態では、複合体は、配列番号１に対して少なくとも９５％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。他の実施形態では、複合体は、配列番号１に対して少なくとも９８％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。他の実施形態では、複合体は、配列番号１に対して少なくとも９９％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。他の実施形態では、複合体は、配列番号１に対して１００％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。
【0103】
他の実施形態では、複合体は、配列番号２のアミノ酸２５から２６７に対して少なくとも９５％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。他の実施形態では、複合体は、配列番号２のアミノ酸２５から２６７に対して少なくとも９８％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。他の実施形態では、複合体は、配列番号２のアミノ酸２５から２６７に対して少なくとも９９％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。他の実施形態では、複合体は、配列番号２のアミノ酸２５から２６７に対して少なくとも１００％配列同一性を有するＡｐｏＡ－Ｉを含む。
【0104】
一部の実施形態では、複合体は、１個から８個のアポリポタンパク質分子（例えば、１個から６個、１個から４個、１個から２個、２個から８個、２個から６個、２個から４個、４個から８個、４個から６個、または６個から８個のアポリポタンパク質分子）を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子１個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子２個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子３個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子４個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子５個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子６個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子７個を含む。一部の実施形態では、複合体は、アポリポタンパク質分子８個を含む。
【0105】
アポリポタンパク質分子（複数可）は、アポリポタンパク質と、例えば１つまたは複数のＣＲＮ－００１複合体（複数可）、１つまたは複数のターゲティング部分、所望の生物学的活性を有する部分、精製を補佐するための親和性タグ、および／または特性化もしくは局在化研究のためのレポーター分子などの１つまたは複数の結合された機能性部分とを含むキメラアポリポタンパク質を含み得る。生物学的活性を有する結合された部分は、本開示の複合体へ組み込まれた化合物またはカーゴ部分の生物学的活性を増強し、および／またはそれと相乗作用を発揮することが可能な活性を有し得る。例えば、生物学的活性を有する部分は、抗菌（例えば、抗真菌、抗細菌、抗原虫、静菌、静真菌、または抗ウイルス）活性を有し得る。一実施形態では、キメラアポリポタンパク質の結合された機能性部分は、複合体の疎水性表面と接触しない。別の実施形態では、結合された機能性部分は、複合体の疎水性表面と接触している。一部の実施形態では、キメラアポリポタンパク質の機能性部分は、天然タンパク質に固有であり得る。一部の実施形態では、キメラアポリポタンパク質は、細胞表面受容体または他の細胞表面部分によって認識されるか、もしくはそれとの相互作用が可能なリガンドまたは配列を含む。
【0106】
一実施形態では、キメラアポリポタンパク質は、例えばＳ．セレビシエ（S.cerevisiae）α－接合因子ペプチド、葉酸、トランスフェリン、またはラクトフェリンなどの自然アポリポタンパク質に固有ではないターゲティング部分を含む。別の実施形態では、キメラアポリポタンパク質は、本開示の複合体へ組み込まれた化合物またはカーゴ部分の活性を増強し、および／またはそれと相乗作用を発揮する所望の生物学的活性を有する部分を含む。一実施形態では、キメラアポリポタンパク質は、アポリポタンパク質に固有の機能性部分を含み得る。アポリポタンパク質固有の機能性部分の一例は、低密度リポタンパク質受容体ファミリーの成員によって認識される受容体結合領域を含むヒトＡｐｏＥのおよそアミノ酸１３０～１５０によって形成される固有のターゲティング部分である。アポリポタンパク質固有の機能性部分の他の例として、低密度リポタンパク質受容体と相互作用するＡｐｏＢ－１００の領域およびスカベンジャー受容体Ｂ１型と相互作用するＡｐｏＡ－Ｉの領域が挙げられる。他の実施形態では、機能性部分は、キメラアポリポタンパク質を産生するように合成的または組換え的に付加され得る。別の例は、別のプレプロアポリポタンパク質由来のプレプロまたはプロ配列（例えば、プレプロａｐｏＡ－Ｉのプレプロ配列に代わって置換されたプレプロａｐｏＡ－ＩＩ由来のプレプロ配列）を有するアポリポタンパク質である。別の例は、両親媒性配列セグメントの一部が、別のアポリポタンパク質由来の他の両親媒性配列セグメントによって置換されているアポリポタンパク質である。
【0107】
本明細書中で使用する場合、「キメラ」は、個々に存在することが可能であり、一緒に結合されて、その成分分子の全ての所望の機能性を有する単一分子形成する２つまたはそれよりも多い分子を指す。キメラ分子の成分分子は、キメラコンジュゲーションによって合成的に結合され得るか、または成分分子が全て、ポリペプチドまたはそれらの類似体である場合は、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが、単一の連続ポリペプチドが発現されるように一緒に組換え的に融合され得る。かかるキメラ分子は、融合タンパク質と称される。「融合タンパク質」は、成分分子が全てポリペプチドであり、キメラ分子が連続単一鎖を形成するように互いに結合（融合）されているキメラ分子である。様々な成分が、直接互いに結合され得るか、あるいは１つまたは複数のリンカーを通じてカップリングされ得る。様々な成分の１つまたは複数のセグメントは、例えば、アポリポタンパク質の配列において挿入され得るか、または別の例では、アポリポタンパク質の配列に対してＮ末端もしくはＣ末端で付加され得る。例えば、融合タンパク質は、抗体軽鎖、抗体断片、重鎖抗体、または単一ドメイン抗体を含み得る。
【0108】
一部の実施形態では、キメラアポリポタンパク質は、アポリポタンパク質および結合されるべき機能性部分を化学的にコンジュゲートすることによって調製される。分子を化学的にコンジュゲートする手段は、当業者に周知されている。かかる手段は、結合されるべき部分の構造に従って様々であるが、当業者には容易に確認可能である。ポリペプチドは通常、機能性部分上または部分をそれに結合するためのリンカー上の適切な官能基との反応に利用可能である、様々な官能基、例えばカルボン酸（－－ＣＯＯＨ）、遊離アミノ（－－ＮＨ２）、またはスルフヒドリル（－－ＳＨ基）を含有する。機能性部分は、アポリポタンパク質分子のＮ末端、Ｃ末端で、または内部残基（即ち、Ｎ末端とＣ末端との間の中間にある位置の残基）上の官能基に結合され得る。あるいは、アポリポタンパク質および／またはタグ付けされるべき部分は、さらなる反応性官能基を露出または結合するよう誘導体化され得る。
【0109】
一部の実施形態では、ポリペプチド機能性部分を含む融合タンパク質は、組換え発現系を使用して合成される。通常、これは、２つのポリペプチドが、発現される際にインフレームであるようにアポリポタンパク質および機能性部分をコードする核酸（例えば、ＤＮＡ）配列を創出するステップ、プロモーターの制御下にＤＮＡを配置するステップ、宿主細胞においてタンパク質を発現するステップ、発現されたタンパク質を単離するステップを包含する。
【0110】
キメラアポリポタンパク質をコードする核酸は、宿主細胞における発現に適した形態で、組換え発現ベクターへ組み込まれ得る。本明細書中で使用する場合、「発現ベクター」は、適切な宿主細胞へ導入されると、ポリペプチドに転写および翻訳され得る核酸である。また、ベクターは、プロモーター、エンハンサー、または他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）などの調節配列を含み得る。かかる調節配列は、当業者に既知である（例えば、Goeddel, 1990, Gene Expression Technology: Meth. Enzymol. 185, Academic Press, San Diego, Calif.；Berger and Kimmel, Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology 152 Academic Press, Inc., San Diego, Calif.；Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning--A Laboratory Manual (2nd ed.) Vol. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press, NYなどを参照）。
【0111】
一部の実施形態では、アポリポタンパク質が本開示の複合体へ組み込まれる場合に、修飾が、複合体の安定性を高めるか、ターゲティング能を付与するか、または容量を増加するように、アポリポタンパク質は修飾されている。一実施形態では、修飾は、例えば部位特異的突然変異誘発による分子内または分子間ジスルフィド結合の形成を可能にするためのアポリポタンパク質分子へのシステイン残基の導入を含む。別の実施形態では、キメラ架橋剤は、複合体の安定性を増強するためにアポリポタンパク質分子間に細胞間連結を形成するのに使用される。分子間架橋は、アポリポタンパク質分子の、複合体からの解離を防止もしくは低減し、および／または複合体が投与される個体内の内因性アポリポタンパク質分子による置き換えを防止する。他の実施形態では、アポリポタンパク質は、１つまたは複数のアミノ酸残基の化学的誘導体化によって、または部位突然変異誘発によって修飾されて、細胞表面受容体へのターゲティング能またはそれによる認識を付与する。
【0112】
複合体は、受容体認識特性を、アポリポタンパク質へ操作することによって、特定細胞表面受容体へとターゲティングされ得る。例えば、複合体は、アポリポタンパク質を、標的とされている細胞型の表面上の受容体と相互作用することが可能にさせるようそれを修飾することによって、特定のタイプの感染病原体を保有することが知られている特定の細胞型へとターゲティングされ得る。例えば、複合体は、マクロファージエンドサイトーシスクラスＡスカベンジャー受容体（ＳＲ－Ａ）による認識を付与するようアポリポタンパク質を変更させることによって、マクロファージへとターゲティングされ得る。ＳＲ－Ａ結合能力は、部位特異的突然変異誘発によって、１つまたは複数の正に帯電されたアミノ酸を中性または負に帯電されたアミノ酸で置き換えるよう、アポリポタンパク質を修飾することによって、複合体に付与され得る。ＳＲ－Ａ認識はまた、ＳＲ－Ａによって認識されるリガンドを有するＮ末端もしくはＣ末端伸長または高濃度の負に帯電された残基を有するアミノ酸配を含むキメラアポリポタンパク質を調製することによって付与され得る。アポリポタンパク質を含む複合体はまた、例えばＡＢＣＡ１受容体、ＡＢＣＧ１受容体、メガリン、キュブリン（Cubulin）およびＳＲ－Ｂ１などのＨＤＬ受容体であるがこれらに限定されないアポリポタンパク質受容体と相互作用することができる。
【0113】
複合体は、カーゴ部分をＣａｒｇｏｍｅｒへ固着する脂質結合タンパク質（例えば、アポリポタンパク質分子）を含み得る。一部の実施形態では、アポリポタンパク質分子は、直接的な結合によってカーゴ部分へカップリングされる。他の実施形態では、アポリポタンパク質分子は、例えばセクション６．１．７．に記載されるように、リンカーによってカーゴ部分へカップリングされる。
【0114】
６．１．４．２．アポリポタンパク質疑似体
アポリポタンパク質の活性を模倣するペプチド、ペプチド類似体、およびアゴニスト（本明細書中ではまとめて、「アポリポタンパク質ペプチド疑似体」と称する）はまた、本明細書中に記載される複合体において、単独で、あるいは１つまたは複数の他の脂質結合タンパク質と組み合わせて使用することができる。本明細書に記載される複合体および組成物における封入に適したアポリポタンパク質に相当するペプチドおよびペプチド類似体、ならびにＡｐｏＡ－Ｉ、ＡｐｏＡ－ＩＭ、ＡｐｏＡ－ＩＩ、ＡｐｏＡ－ＩＶ、およびＡｐｏＥの活性を模倣するアゴニストの非限定的な例は、米国特許第６，００４，９２５号明細書、同第６，０３７，３２３号明細書および同第６，０４６，１６６号明細書（Ｄａｓｓｅｕｘら）、米国特許第５，８４０，６８８号明細書（Ｔｓｏに発行）、米国特許第６，７４３，７７８号明細書（Ｋｏｈｎｏに発行）、米国特許出願公開第２００４／０２６６６７１号明細書、同第２００４／０２５４１２０号明細書、同第２００３／０１７１２７７号明細書および同第２００３／００４５４６０号明細書（Ｆｏｇｅｌｍａｎに）、米国特許出願公開第２００６／００６９０３０号明細書（Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎに）、米国特許出願公開第２００３／００８７８１９号明細書（Ｂｉｅｌｉｃｋｉに）、米国特許出願公開第２００９／００８１２９３号明細書（Ｍｕｒａｓｅらに）、およびＰＣＴ国際公開第２０１０／０９３９１８号パンフレット（Ｄａｓｓｅｕｘらに）に開示されており、それらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。これらのペプチドおよびペプチド類似体は、Ｌ－アミノ酸もしくはＤ－アミノ酸またはＬ－およびＤ－アミノ酸の混合物で構成され得る。これらのペプチドおよびペプチド類似体はまた、１つまたは複数の非ペプチドまたはアミド結合、例えば１つまたは複数の周知のペプチド／アミドアイソスターを含み得る。かかるアポリポタンパク質ペプチド疑似体は、例えば米国特許第６，００４，９２５号明細書、同第６，０３７，３２３号明細書および同第６，０４６，１６６号明細書に記載される技法を含む、当該技術分野で既知のペプチド合成に関する任意の技法を使用して合成または製造され得る。
アポリポタンパク質の活性を模倣するペプチド、ペプチド類似体、およびアゴニスト（本明細書中ではまとめて、「アポリポタンパク質ペプチド疑似体」と称する）はまた、本明細書中に記載される複合体において、単独で、あるいは１つまたは複数の他の脂質結合タンパク質と組み合わせて使用することができる。本明細書に記載される複合体および組成物における封入に適したアポリポタンパク質に相当するペプチドおよびペプチド類似体、ならびにＡｐｏＡ－Ｉ、ＡｐｏＡ－ＩＭ、ＡｐｏＡ－ＩＩ、ＡｐｏＡ－ＩＶ、およびＡｐｏＥの活性を模倣するアゴニストの非限定的な例は、米国特許第６，００４，９２５号明細書、同第６，０３７，３２３号明細書および同第６，０４６，１６６号明細書（Ｄａｓｓｅｕｘら）、米国特許第５，８４０，６８８号明細書（Ｔｓｏに発行）、米国特許第６，７４３，７７８号明細書（Ｋｏｈｎｏに発行）、米国特許出願公開第２００４／０２６６６７１号明細書、同第２００４／０２５４１２０号明細書、同第２００３／０１７１２７７号明細書および同第２００３／００４５４６０号明細書（Ｆｏｇｅｌｍａｎに）、米国特許出願公開第２００６／００６９０３０号明細書（Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎに）、米国特許出願公開第２００３／００８７８１９号明細書（Ｂｉｅｌｉｃｋｉに）、米国特許出願公開第２００９／００８１２９３号明細書（Ｍｕｒａｓｅらに）、およびＰＣＴ国際公開第２０１０／０９３９１８号パンフレット（Ｄａｓｓｅｕｘらに）に開示されており、それらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれている。これらのペプチドおよびペプチド類似体は、Ｌ－アミノ酸もしくはＤ－アミノ酸またはＬ－およびＤ－アミノ酸の混合物で構成され得る。これらのペプチドおよびペプチド類似体はまた、１つまたは複数の非ペプチドまたはアミド結合、例えば１つまたは複数の周知のペプチド／アミドアイソスターを含み得る。かかるアポリポタンパク質ペプチド疑似体は、例えば米国特許第６，００４，９２５号明細書、同第６，０３７，３２３号明細書および同第６，０４６，１６６号明細書に記載される技法を含む、当該技術分野で既知のペプチド合成に関する任意の技法を使用して合成または製造され得る。
【0115】
一部の実施形態では、脂質結合タンパク質分子は、アポリポタンパク質ペプチド疑似体分子および任意選択で、１つまたは複数の、上述するようなものなどのアポリポタンパク質分子を含む。
【0116】
一部の実施形態では、アポリポタンパク質ペプチド疑似体分子は、ＡｐｏＡ－Ｉペプチド疑似体、ＡｐｏＡ－ＩＩペプチド疑似体、ＡｐｏＡ－ＩＶペプチド疑似体、ＡｐｏＡ－Ｉペプチド疑似体、もしくはＡｐｏＥペプチド疑似体、またはそれらの組合せを含む。
【0117】
本開示の複合体は、カーゴ部分を複合体へ固着するアポリポタンパク質ペプチド疑似体分子を含み得る。一部の実施形態では、アポリポタンパク質ペプチド疑似体は、直接的な結合によってカーゴ部分にカップリングされる。他の実施形態では、アポリポタンパク質ペプチド疑似体分子は、例えば、セクション６．１．７．に記載されるように、リンカーによってカーゴ部分にカップリングされる。
【0118】
６．１．５．両親媒性分子
両親媒性分子は、疎水性（無極性）エレメントおよび親水性（極性）エレメントの両方を保有する分子である。本明細書中に記載される複合体において使用することができる両親媒性分子として、脂質（例えば、セクション６．１．５．１に記載されるような）、洗浄剤（例えば、６．１．５．２．に記載されるような）、脂肪酸（例えば、セクション６．１．５．３に記載されるような）、および例えば糖または核酸であるがこれらに限定されない極性分子に共有結合された無極性分子およびステロール（例えば、セクション６．１．５．４に記載されるような）が挙げられる。
両親媒性分子は、疎水性（無極性）エレメントおよび親水性（極性）エレメントの両方を保有する分子である。本明細書中に記載される複合体において使用することができる両親媒性分子として、脂質（例えば、セクション６．１．５．１に記載されるような）、洗浄剤（例えば、６．１．５．２．に記載されるような）、脂肪酸（例えば、セクション６．１．５．３に記載されるような）、および例えば糖または核酸であるがこれらに限定されない極性分子に共有結合された無極性分子およびステロール（例えば、セクション６．１．５．４に記載されるような）が挙げられる。
【0119】
複合体は、単一種類の両親媒性分子（例えば、単一種のリン脂質またはリン脂質の混合物）を含むことができるか、あるいは両親媒性分子（例えば、リン脂質および洗浄剤）の種類の組合せを含有することができる。複合体は、脂質結合タンパク質分子（複数可）の可溶化を容易にするよう設計された１種の両親媒性分子または両親媒性分子の組合せを含有し得る。
【0120】
一部の実施形態では、Ａｐｏｍｅｒおよび／またはＣａｒｇｏｍｅｒベースの複合体は、脂質結合タンパク質分子を可溶化するのに十分な量の両親媒性分子のみを含む。換言すると、Ａｐｏｍｅｒおよび／またはＣａｒｇｏｍｅｒベースの複合体は、脂質結合タンパク質分子を可溶化するのに必要な最小量の１つまたは複数の両親媒性分子を含み得る。
【0121】
一部の実施形態では、含まれる両親媒性分子は、リン脂質、洗浄剤、脂肪酸、糖に共有結合された無極性部分もしくはステロール、またはそれらの組合せ（例えば、上記で論述された両親媒性分子のタイプから選択される）を含む。
【0122】
一部の実施形態では、両親媒性分子は、リン脂質分子を含むか、またはそれらからなる。一部の実施形態では、リン脂質分子は、負に帯電されたリン脂質、中性リン脂質、正に帯電されたリン脂質またはそれらの組合せを含む。一部の実施形態では、リン脂質分子は、複合体においてアポリポタンパク質分子１つ当たり１～３の正味電荷に寄与する。一部の実施形態では、正味電荷は、負の正味電荷である。一部の実施形態では、正味電荷は、正の正味電荷である。一部の実施形態では、リン脂質分子は、負に帯電されたリン脂質および中性リン脂質の組合せからなる。一部の実施形態では、負に帯電されたリン脂質対中性リン脂質のモル比は、１：１から１：３の範囲である。一部の実施形態では、負に帯電されたリン脂質対中性リン脂質のモル比は、約１：１から約１：２の範囲である。
【0123】
一部の実施形態では、複合体は、アンカーである少なくとも１つの両親媒性分子を含む。
【0124】
一部の実施形態では、両親媒性分子は、９５：５から９９：１の重量比の中性リン脂質および負に帯電されたリン脂質を含む。
【0125】
６．１．５．１．脂質
脂質結合タンパク質ベースの複合体は、１つまたは複数の脂質を含み得る。様々な実施形態では、１つまたは複数の脂質は、飽和および／または不飽和の、天然および／または合成の、帯電されたか、または帯電されていない双性イオンであり得るか、あるいはそうでない。一部の実施形態では、脂質分子（例えば、リン脂質分子）はともに、複合体において脂質結合タンパク質分子１つ当たり１～３（例えば、１～３、１～２、２～３、１、２、または３）の正味電荷に寄与し得る。一部の実施形態では、正味電荷は負である。他の実施形態では、正味電荷は正である。
脂質結合タンパク質ベースの複合体は、１つまたは複数の脂質を含み得る。様々な実施形態では、１つまたは複数の脂質は、飽和および／または不飽和の、天然および／または合成の、帯電されたか、または帯電されていない双性イオンであり得るか、あるいはそうでない。一部の実施形態では、脂質分子（例えば、リン脂質分子）はともに、複合体において脂質結合タンパク質分子１つ当たり１～３（例えば、１～３、１～２、２～３、１、２、または３）の正味電荷に寄与し得る。一部の実施形態では、正味電荷は負である。他の実施形態では、正味電荷は正である。
【0126】
一部の実施形態では、脂質はリン脂質を含む。リン脂質は、同じか、または異なる２つのアシル鎖（例えば、異なる数の炭素原子、アシル鎖間で異なる飽和度、アシル鎖の異なる分岐、またはそれらの組合せを有する鎖）を有し得る。脂質はまた、蛍光プローブを含有するよう修飾され得る（例えば、avantilipids.com/product-category/products/fluorescent-lipids/に記載されるように）。好ましくは、脂質は少なくとも１つのリン脂質を含む。
【0127】
リン脂質は、約６から約２４個の炭素原子（例えば、６～２０個、６～１６個、６～１２個、１２～２４個、１２～２０個、１２～１６個、１６～２４個、１６～２０個、または２０～２４個）の範囲の不飽和または飽和アシル鎖を有し得る。一部の実施形態では、本開示の複合体において使用されるリン脂質は、１２個、１４個、１６個、１８個、２０個、２２個、または２４個の炭素原子の１つまたは２つのアシル鎖（例えば、同じ長さの２つのアシル鎖または異なる長さの２つのアシル鎖）を有する。
【0128】
リン脂質において含まれ得る一般に存在する脂肪酸中に存在するアシル鎖の非限定的な例を以下の表１に提示する：
【0129】
【表1】
【0130】
本開示の複合体中に存在し得る脂質として、小アルキル鎖リン脂質、卵ホスファチジルコリン、ダイズホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアリルホスファチジルコリン、１－ミリストイル－２－パルミトイルホスファチジルコリン、１－パルミトイル－２－ミリストイルホスファチジルコリン、１－パルミトイル－２－ステアロイルホスファチジルコリン、１－ステアロイル－２－パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジオレオホスファチジルエタノールアミン、ジラウロイルホスファチジルグリセロールホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール類、ジホスファチジルグリセロール類、例えばジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン、脳スフィンゴミエリン、パルミトイルスフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、卵スフィンゴミエリン、ミルクスフィンゴミエリン、フィトスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィンゴミエリン、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール塩、ホスファチジン酸、ガラクトセレブロシド、ガングリオシド類、セレブロシド類、ジラウリルホスファチジルコリン、（１，３）－Ｄ－マンノシル－（１，３）ジグリセリド、アミノフェニルグリコシド、３－コレステリル－６’－（グリコシルチオ）ヘキシルエーテル糖脂質類、およびコレステロールならびにその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。合成パルミトイルスフィンゴミエリンまたはＮ－パルミトイル－４－ヒドロキシスフィンガニン－１－ホスホコリン（フィトスフィンゴミエリンの形態）などの合成脂質を使用して、脂質酸化を最低限に抑えることができる。
【0131】
一部の実施形態では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、２つのタイプのリン脂質を含む：中性脂質、例えばレシチンおよび／またはスフィンゴミエリン（ＳＭと略記）、および帯電されたリン脂質（例えば、負に帯電されたリン脂質）。「中性」リン脂質は、生理学的ｐＨでほぼゼロの正味電荷を有する。多くの実施形態では、中性リン脂質は双性イオンであるが、他のタイプの正味中性リン脂質が知られており、使用することができる。一部の実施形態では、帯電されたリン脂質（例えば、負に帯電されたリン脂質）対中性リン脂質のモル比は、１：１から１：３、例えば、約１：１、約１：２、または約１：３の範囲である。
【0132】
中性リン脂質は、例えば、レシチンおよび／またはＳＭの一方あるいは両方を含むことができ、任意選択で、他の中性リン脂質を含み得る。一部の実施形態では、中性リン脂質はレシチンを含むが、ＳＭを含まない。他の実施形態では、中性リン脂質はＳＭを含むが、レシチンを含まない。さらなる他の実施形態では、中性リン脂質は、レシチンおよびＳＭの両方を含む。これらの特定の例示的な実施形態は全て、レシチンおよび／またはＳＭに加えて、中性リン脂質を含み得るが、多くの実施形態では、かかるさらなる中性リン脂質を含まない。
【0133】
本明細書中で使用する場合、「ＳＭ」という表現は、天然供給源に由来するか、またはそれらから得られたスフィンゴミエリン、ならびに天然に存在するＳＭでみられるようなＬＣＡＴによる加水分解に影響されない天然に存在するＳＭの類似体および誘導体を含む。ＳＭは、レシチンと構造が非常に類似したリン脂質であるが、レシチンとは異なり、ＳＭは、グリセロール骨格を有さず、したがって、アシル鎖を結合するエステル結合を有さない。どちらかといえば、ＳＭは、アシル鎖を結合するアミド結合を有するセラミド骨格を有する。ＳＭは、例えば、ミルク、卵または脳から得ることができる。ＳＭ類似体または誘導体もまた使用することができる。有用な類似体および誘導体の非限定的な例として、パルミトイルスフィンゴミエリン、Ｎ－パルミトイル－４－ヒドロキシスフィンガニン－１－ホスホコリン（フィトスフィンゴミエリンの形態）、パルミトイルスフィンゴミエリン、ステアロイルスフィンゴミエリン、Ｄ－エリスロ－Ｎ－１６：０－スフィンゴミエリンおよびそのジヒドロ異性体、Ｄ－エリスロ－Ｎ－１６：０－ジヒドロ－スフィンゴミエリンが挙げられるが、これらに限定されない。動物起源のスフィンゴ脂質よりも少ない混入物および／または酸化生成物を伴うより均質な複合体を生産するために、合成パルミトイルスフィンゴミエリンまたはＮ－パルミトイル－４－ヒドロキシスフィンガニン－１－ホスホコリン（フィトスフィンゴミエリン）などの合成ＳＭが使用され得る。ＳＭを合成する方法は、米国特許出願公開第２０１６／００７５６３４号明細書に記載されている。
【0134】
天然供給源から単離されたスフィンゴミエリンは、１つの特定の飽和または不飽和アシル鎖において人工的に富化され得る。例えば、ミルクスフィンゴミエリン（Ａｖａｎｔｉ Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ、Ａｌａｂａｓｔｅｒ社、Ａｌａ．）は、長い飽和アシル鎖を特徴とする（即ち、２０個またはそれよりも多い炭素原子を有するアシル鎖）。対比して、卵スフィンゴミエリンは、短い飽和アシル鎖を特徴とする（即ち、２０個よりも少ない炭素原子を有するアシル鎖）。例えば、ミルクスフィンゴミエリンの約２０％のみがＣ１６：０（炭素１６個、飽和）アシル鎖を占めるのに対して、卵スフィンゴミエリンの約８０％がＣ１６：０アシル鎖を占める。溶媒抽出を使用して、ミルクスフィンゴミエリンの組成は、卵スフィンゴミエリンの組成に匹敵するアシル鎖組成を有するように富化させることができ、またはその逆も同様である。
【0135】
ＳＭは、それが特定のアシル鎖を有するように半合成であってもよい。例えば、ミルクスフィンゴミエリンは、まずミルクから精製された後、１つの特定のアシル基、例えば、Ｃ１６：０アシル鎖が切断され、別のアシル鎖によって置き換えられ得る。ＳＭはまた、例えば大規模合成によって、完全に合成され得る。例えば、１９９３年６月１５に発行されたSynthesis of D-erythro-sphingomyelinsという表題のＤｏｎｇらの米国特許第５，２２０，０４３号明細書；Weis, 1999, Chem. Phys. Lipids 102 (1-2):3-12を参照のこと。ＳＭは、例えば米国特許出願公開第２０１４／０２７５５９０号明細書に記載されるように完全合成であってもよい。
【0136】
半合成または合成ＳＭを含むアシル鎖の長さおよび飽和レベルは、選択的に変化させることができる。アシル鎖は、飽和または不飽和であってもよく、約６から約２４個の炭素原子を含有し得る。鎖はそれぞれ、同数の炭素原子を含有することができ、あるいは、鎖はそれぞれ、異なる数の炭素原子を含有することができる。一部の実施形態では、半合成または合成ＳＭは、一方の鎖が飽和しており、一方の鎖が不飽和であるような混合アシル鎖を含む。かかる混合アシル鎖ＳＭでは、鎖長は、同じであり得るか、または異なり得る。他の実施形態では、半合成または合成ＳＭのアシル鎖は、ともに飽和しているか、またはともに不飽和である。さらに、鎖は、同数、または異なる数の炭素原子数を含有し得る。一部の実施形態では、半合成または合成ＳＭを含むアシル鎖はともに同一である。特定実施形態では、鎖は、例えばオレイン酸、パルミチン酸またはステアリン酸などの天然に存在する脂肪酸のアシル鎖に相当する。別の実施形態では、飽和または不飽和の官能基化された鎖を有するＳＭが使用される。別の特定実施形態では、アシル鎖はともに飽和されており、６から２４個の炭素原子を含有する。半合成および合成ＳＭに含まれ得る一般に存在する脂肪酸中に存在するアシル鎖の非限定的な例は、上記の表１に提示している。
【0137】
一部の実施形態では、ＳＭは、Ｃ１６：０アシル鎖を有する合成パルミトイルＳＭなどのパルミトイルＳＭであるか、または主成分としてパルミトイルＳＭを含む卵ＳＭである。
【0138】
特定実施形態では、フィトスフィンゴミエリンなどの官能基化されたＳＭが使用される。
【0139】
レシチンは、天然供給源に由来し得るか、またはそれらから単離され得るか、あるいはレシチンは、合成的に得られ得る。天然供給源から単離された適切なレシチンの例として、卵ホスファチジルコリンおよびダイズホスファチジルコリンが挙げられるが、これらに限定されない。適切なレシチンのさらなる非限定的な例として、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、１－ミリストイル－２－パルミトイルホスファリジルコリン、１－パルミトイル－２－ミリストイルホスファチジルコリン、１－パルミトイル－２－ステアロイルホスファチジルコリン、１－ステアロイル－２－パルミトイルホスファチジルコリン、１－パルミトイル－２－オレオイルホスファリジルコリン、１－オレオイル－２－パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリンおよびそれらのエーテル誘導体または類似体が挙げられるが、これらに限定されない。
【0140】
天然供給源に由来するか、またはそれらから単離されたレシチンは、特定のアシル鎖を含むよう富化され得る。半合成または合成レシチンを用いる実施形態では、アシル鎖の独自性（複数可）は、ＳＭに関連して上記で論述したように、選択的に変化させることができる。本明細書中に記載される複合体の一部の実施形態では、レシチン上のアシル鎖はともに同一である。ＳＭおよびレシチンの両方を含む複合体の一部の実施形態では、ＳＭおよびレシチンのアシル鎖は、全て同一である。特定実施形態では、アシル鎖は、ミリスチン酸、パルミチン酸、オレイン酸またはステアリン酸のアシル鎖に相当する。
【0141】
本開示の複合体は、１つまたは複数の負に帯電されたリン脂質を含み得る（例えば、単独で、あるいは１つまたは複数の中性リン脂質と組み合わせて）。本明細書中で使用する場合、「負に帯電されたリン脂質」は、生理学的ｐＨで正味負電荷を有するリン脂質である。負に帯電されたリン脂質は、単一タイプの負に帯電されたリン脂質、あるいは２つまたはそれよりも多い異なる負の帯電されたリン脂質の混合物を含み得る。一部の実施形態では、帯電されたリン脂質は、負に帯電されたグリセロリン脂質である。適切な負に帯電されたリン脂質の具体例として、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、およびそれらの塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、負に帯電されたリン脂質は、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロールおよび／またはホスファチジン酸の１つまたは複数を含む。特定実施形態では、負に帯電されたリン脂質は、ホスファチジルグリセロールの塩もしくはホスファチジルイノシトールの塩を含むか、またはそれらからなる。別の特定実施形態では、負に帯電されたリン脂質は、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］、もしくはＤＰＰＧ、もしくはそれらの塩を含むか、またはそれらからなる。
【0142】
負に帯電されたリン脂質は、天然供給源から得られ得るか、または化学合成によって調製され得る。合成の負に帯電されたリン脂質を用いる実施形態では、アシル鎖の独自性は、ＳＭと関連して上記で論述したように、選択的に変化させることができる。本開示の複合体の一部の実施形態では、負に帯電されたリン脂質上のアシル鎖はともに同一である。一部の実施形態では、本開示の複合体において含まれるリン脂質の全てのタイプのアシル鎖は、全て同一である。特定実施形態では、複合体は、負に帯電されたリン脂質（複数可）、および／または全てがＣ１６：０またはＣ１６：１のアシル鎖を有するＳＭを含む。特定実施形態では、ＳＭの脂肪酸部分は、主にＣ１６：１パルミトイルである。一特定実施形態では、帯電されたリン脂質（複数可）、レシチンおよび／ＳＭのアシル鎖は、パルミチン酸のアシル鎖に相当する。さらに別の特定実施形態では、帯電されたリン脂質（複数可）、レシチンおよび／またはＳＭのアシル鎖は、オレイン酸のアシル鎖に相当する。
【0143】
本開示の複合体において含まれ得る正に帯電されたリン脂質の例として、Ｎ１－［２－（（１Ｓ）－１－［（３－アミノプロピル）アミノ］－４－［ジ（３－アミノ－プロピル）アミノ］ブチルカルボキシアミド）エチル］－３，４－ジ［オレイルオキシ］－ベンズアミド、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン、１，２－ジミリストレオイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジラウロイル－ｓｎ－グロセロ－３－エチルホスホコリン、１，２－ジオレオイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン１，２－ジミリストイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン、１，２－ジパルミトイル－３－ジメチルアンモニウム－プロパン、Ｎ－（４－カルボキシベンジル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２，３－ビス（オレオイルオキシ）プロパン－１－アミニウム、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン、１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン、１，２－ステアロイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン、１，２－ジパルミトイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン、１，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウム－プロパン、Ｎ－［１－（２，３－ジミリスチルオキシ）プロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）アンモニウムブロミド、Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチル－２－ビス［（１－オキソ－９－オクタデセニル）オキシ］－（Ｚ，Ｚ）－１－プロパナミニウムメチルスルホン酸塩、およびそれらの塩（例えば、塩化物または臭化物塩）が挙げられる。
【0144】
使用される脂質は、好ましくは少なくとも９５％純粋であり、および／または低減したレベルの酸化剤（例えば過酸化物であるが、これに限定されない）を有する。天然供給源から得られる脂質は好ましくは、より少ない多価不飽和脂肪酸部分および酸化の影響を受けない脂肪酸部分を有する。試料における酸化のレベルは、ヨウ素滴定法を使用して決定することができ、ヨウ素滴定法は、ｍｅｑＯ／ｋｇで略記される試料１ｋｇ当たりの単離ヨウ素のミリ当量数で表される過酸化物値を提供する。例えば、Gray, 1978, Measurement of Lipid Oxidation: A Review, Journal of the American Oil Chemists Society 55:539-545；Heaton, F.W. and Ur, Improved Iodometric Methods for the Determination of Lipid Peroxides, 1958, Journal of the Science of Food and Agriculture 9:781-786を参照のこと。好ましくは、酸化のレベル、または過酸化物レベルは低く、例えば、５ｍｅｑＯ／ｋｇ未満、４ｍｅｑＯ／ｋｇ未満、３ｍｅｑＯ／ｋｇ未満、または２ｍｅｑＯ／ｋｇ未満である。
【0145】
複合体は、一部の実施形態では、少量のさらなる脂質を含み得る。リゾリン脂質、ガラクトセレブロシド、ガングリオシド、セレブロシド、グリセリド、トリグリセリド、ならびにステロールおよびステロール誘導体（例えば、植物ステロール、動物ステロール、例えばコレステロール、またはステロール誘導体、例えばコレステロール誘導体）を含むがこれらに限定されない事実上任意のタイプの脂質が使用され得る。例えば、本開示の複合体は、コレステロールまたはコレステロール誘導体、例えば、コレステロールエステルを含有し得る。コレステロール誘導体はまた、置換コレステロールまたは置換コレステロールエステルであり得る。本開示の複合体はまた、例えば酸化コレステロールまたは酸化ステロール誘導体（例えば、酸化コレステロールエステルであるが、これらに限定されない）であるが、これらに限定されない酸化ステロールを含有する。一部の実施形態では、複合体は、コレステロールおよび／またはその誘導体（例えば、コレステロールエステルまたは酸化コレステロールエステル）を含まない。
【0146】
６．１．５．２．洗浄剤
複合体は、１つまたは複数の洗浄剤を含有し得る。洗浄剤は、双性イオン性、非イオン性、陽イオン性、陰イオン性、またはそれらの組合せであり得る。例示的な双性イオン洗浄剤として、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳ）、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－２－ヒドロキシ－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳＯ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルドデシルアミンＮ－オキシド（ＬＤＡＯ）が挙げられる。例示的な非イオン性洗浄剤として、６－モノオレイン酸Ｄ－（＋）－トレハロース、Ｎ－オクタノイル－Ｎ－メチルグルカミン、Ｎ－ノナノイル－Ｎ－メチルグルカミン、Ｎ－デカノイル－Ｎ－メチルグルカミン、１－（７Ｚ－ヘキサデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－（８Ｚ－ヘキサデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－（８Ｚ－ヘプタデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－（９Ｚ－ヘキサデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－デカノイル－ｒａｃ－グリセロールが挙げられる。例示的な陽イオン性洗浄剤として、（Ｓ）－Ｏ－メチル－セリンドデシルアミド塩酸塩、塩化ドデシルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、および硫酸セチルトリメチルアンモニウムが挙げられる。例示的な陰イオン性洗浄剤として、ヘミコハク酸コレステリル、コール酸塩、硫酸アルキル、およびスルホン酸アルキルが挙げられる。
複合体は、１つまたは複数の洗浄剤を含有し得る。洗浄剤は、双性イオン性、非イオン性、陽イオン性、陰イオン性、またはそれらの組合せであり得る。例示的な双性イオン洗浄剤として、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳ）、３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－２－ヒドロキシ－１－プロパンスルホン酸塩（ＣＨＡＰＳＯ）、およびＮ，Ｎ－ジメチルドデシルアミンＮ－オキシド（ＬＤＡＯ）が挙げられる。例示的な非イオン性洗浄剤として、６－モノオレイン酸Ｄ－（＋）－トレハロース、Ｎ－オクタノイル－Ｎ－メチルグルカミン、Ｎ－ノナノイル－Ｎ－メチルグルカミン、Ｎ－デカノイル－Ｎ－メチルグルカミン、１－（７Ｚ－ヘキサデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－（８Ｚ－ヘキサデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－（８Ｚ－ヘプタデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－（９Ｚ－ヘキサデセノイル）－ｒａｃ－グリセロール、１－デカノイル－ｒａｃ－グリセロールが挙げられる。例示的な陽イオン性洗浄剤として、（Ｓ）－Ｏ－メチル－セリンドデシルアミド塩酸塩、塩化ドデシルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、および硫酸セチルトリメチルアンモニウムが挙げられる。例示的な陰イオン性洗浄剤として、ヘミコハク酸コレステリル、コール酸塩、硫酸アルキル、およびスルホン酸アルキルが挙げられる。
【0147】
６．１．５．３．脂肪酸
複合体は、１つまたは複数の脂肪酸を含有し得る。１つまたは複数の脂肪酸として、５個またはそれ未満の炭素の脂肪族尾部を有する短鎖脂肪酸（例えば、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、またはイソ吉草酸）、６から１２個の炭素の脂肪族尾部を有する中鎖脂肪酸（例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、またはラウリン酸）、１３から２１個の炭素の脂肪族尾部を有する長鎖脂肪酸尾部を有する長鎖脂肪酸（例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、またはアラキドン酸）、２２個またはそれを上回る炭素の脂肪族尾部を有する超長鎖脂肪酸（例えば、ベヘン酸、リグノセリン酸、またはセロチン酸）、またはそれらの組合せが挙げられ得る。１つまたは複数の脂肪酸は、飽和（例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、またはセロチン酸）、不飽和（例えば、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、α－リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、またはドコサヘキサエン酸）またはそれらの組合せであり得る。不飽和脂肪酸は、シスまたはトランス脂肪酸であり得る。一部の実施形態では、本開示の複合体において使用される不飽和脂肪酸は、シス脂肪酸である。
複合体は、１つまたは複数の脂肪酸を含有し得る。１つまたは複数の脂肪酸として、５個またはそれ未満の炭素の脂肪族尾部を有する短鎖脂肪酸（例えば、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、またはイソ吉草酸）、６から１２個の炭素の脂肪族尾部を有する中鎖脂肪酸（例えば、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、またはラウリン酸）、１３から２１個の炭素の脂肪族尾部を有する長鎖脂肪酸尾部を有する長鎖脂肪酸（例えば、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、またはアラキドン酸）、２２個またはそれを上回る炭素の脂肪族尾部を有する超長鎖脂肪酸（例えば、ベヘン酸、リグノセリン酸、またはセロチン酸）、またはそれらの組合せが挙げられ得る。１つまたは複数の脂肪酸は、飽和（例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、またはセロチン酸）、不飽和（例えば、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノエライジン酸、α－リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、またはドコサヘキサエン酸）またはそれらの組合せであり得る。不飽和脂肪酸は、シスまたはトランス脂肪酸であり得る。一部の実施形態では、本開示の複合体において使用される不飽和脂肪酸は、シス脂肪酸である。
【0148】
６．１．５．４．糖に結合された無極性分子およびステロール
複合体は、糖（例えば、グルコースもしくはガラクトースなどの単糖類、またはマルトースもしくはトレハロースなどの二糖類）に結合された無極性分子もしくは部分（例えば、炭化水素鎖、アシルまたはジアシル鎖）またはステロール（例えば、コレステロール）を含む１つまたは複数の両親媒性分子を含有し得る。糖は、修飾された糖または置換糖であり得る。糖に結合された無極性分子を含む例示的な両親媒性分子として、ドデカン－２－イルオキシ－β－Ｄ－マルトシド、トリデカン－３－イルオキシ－β－Ｄ－マルトシド、トリデカン－２－イルオキシ－β－Ｄ－マルトシド、ｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトシド（ＤＤＭ）、ｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコシド、ｎ－ノニル－β－Ｄ－グルコシド、ｎ－デシル－β－Ｄ－マルトシド、ｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトピラノシド、４－ｎ－ドデシル－α，α－トレハロース、６－ｎ－ドデシル－α，α－トレハロース、および３－ｎ－ドデシル－α，α－トレハロースが挙げられる。
複合体は、糖（例えば、グルコースもしくはガラクトースなどの単糖類、またはマルトースもしくはトレハロースなどの二糖類）に結合された無極性分子もしくは部分（例えば、炭化水素鎖、アシルまたはジアシル鎖）またはステロール（例えば、コレステロール）を含む１つまたは複数の両親媒性分子を含有し得る。糖は、修飾された糖または置換糖であり得る。糖に結合された無極性分子を含む例示的な両親媒性分子として、ドデカン－２－イルオキシ－β－Ｄ－マルトシド、トリデカン－３－イルオキシ－β－Ｄ－マルトシド、トリデカン－２－イルオキシ－β－Ｄ－マルトシド、ｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトシド（ＤＤＭ）、ｎ－オクチル－β－Ｄ－グルコシド、ｎ－ノニル－β－Ｄ－グルコシド、ｎ－デシル－β－Ｄ－マルトシド、ｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトピラノシド、４－ｎ－ドデシル－α，α－トレハロース、６－ｎ－ドデシル－α，α－トレハロース、および３－ｎ－ドデシル－α，α－トレハロースが挙げられる。
【0149】
一部の実施形態では、無極性部分は、アシルまたはジアシル鎖である。
【0150】
一部の実施形態では、糖は、修飾糖または置換糖である。
【0151】
６．１．６．アンカー
カーゴ部分は、脂質結合タンパク質ベースの複合体へのカーゴ部分のカップリングを促進するために両親媒性部分または無極性部分に共有結合され得る。両親媒性部分および無極性分は、脂質結合タンパク質ベースの複合体における無極性領域と相互作用することができ、それにより両親媒性部分および無極性部分に結合されたカーゴ部分を複合体に固着させる。
カーゴ部分は、脂質結合タンパク質ベースの複合体へのカーゴ部分のカップリングを促進するために両親媒性部分または無極性部分に共有結合され得る。両親媒性部分および無極性分は、脂質結合タンパク質ベースの複合体における無極性領域と相互作用することができ、それにより両親媒性部分および無極性部分に結合されたカーゴ部分を複合体に固着させる。
【0152】
アンカーとして使用することができる両親媒性部分として、脂質（例えば、セクション６．１．５．１に記載されるような）および脂肪酸（例えば、セクション６．１．５．３に記載されるような）が挙げられる。一部の実施形態では、アンカーは、ステロールまたはステロール誘導体、例えば植物ステロール、動物ステロール、またはビタミンなどのステロール誘導体を含む。例えば、コレステロールなどのステロールは、カーゴ部分に共有結合されて（例えば、ステロールのＡ環の３位にある水酸基を介して）、カーゴ部分を複合体に固着させるのに使用することができる。アンカーとして使用することができる無極性分として、アルキル鎖、アシル鎖、およびジアシル鎖が挙げられる。カーゴ部分は、直接的にまたはリンカーを介して（例えば、二官能性ペプチドまたはセクション６．１．７に記載される他のリンカーを介して）間接的に、アンカー部分に共有結合され得る。生物学的に活性であるカーゴ部分は、アンカー（またはアンカーに結合されたリンカー）に共有結合されている間、それらの生物学的活性を保持し得る一方で、他の部分は、カーゴ部分をアンカー（またはアンカーに結合されたリンカー）に結合する共有結合の切断（例えば、加水分解による）を要し得る。
【0153】
一部の実施形態では、少なくとも１つのカーゴ部分は、アンカーにカップリングされている。一部の実施形態では、アンカーは、脂肪族および／または無極性部分を含む。一部の実施形態では、アンカーは、両親媒性部分を含む。一部の実施形態では、両親媒性部分は、複合体において両親媒性分子の１つを含む。一部の実施形態では、両親媒性部分は、脂質、洗浄剤、脂肪酸、糖に結合された無極性分子、または糖に結合されたステロールを含む。
【0154】
一部の実施形態では、両親媒性部分は、ステロールを含む。一部の実施形態では、ステロールは、動物ステロールまたは植物ステロールを含む。一部の実施形態では、ステロールは、コレステロールを含む。
【0155】
他の実施形態では、アンカーは、無極性部分を含む。一部の実施形態では、無極性部分は、アルキル鎖、アシル鎖、またはジアシル鎖を含む。
【0156】
一部の実施形態では、カーゴ部分は、直接的な結合によってアンカーにカップリングされる。
【0157】
一部の実施形態では、カーゴ部分は、リンカーによってアンカーにカップリングされる。
【0158】
６．１．７．リンカー
リンカーは、カーゴ部分を、Ｃａｒｇｏｍｅｒなどのカーゴ運搬複合体における他の部分に、例えばアポリポタンパク質分子、両親媒性分子、およびアンカーに共有結合する原子鎖を指す。幾つかのリンカー分子が、例えばＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から市販されている。適切なリンカーは、当業者に周知されており、直鎖または分岐鎖炭素リンカー、複素環式炭素リンカー、およびペプチドリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。リンカーは、ホモ二官能性またはヘテロ二官能性のいずれかである二官能性リンカーであり得る。
リンカーは、カーゴ部分を、Ｃａｒｇｏｍｅｒなどのカーゴ運搬複合体における他の部分に、例えばアポリポタンパク質分子、両親媒性分子、およびアンカーに共有結合する原子鎖を指す。幾つかのリンカー分子が、例えばＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社から市販されている。適切なリンカーは、当業者に周知されており、直鎖または分岐鎖炭素リンカー、複素環式炭素リンカー、およびペプチドリンカーが挙げられるが、これらに限定されない。リンカーは、ホモ二官能性またはヘテロ二官能性のいずれかである二官能性リンカーであり得る。
【0159】
適切なリンカーとして、切断可能なリンカーおよび切断不可能なリンカーが挙げられる。
【0160】
リンカーは、切断可能なリンカーであってもよく、ｉｎ ｖｉｖｏでカーゴ部分の放出を促進する。切断可能なリンカーとして、酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラジンまたはシスアコニチルを含む）、プロテアーゼ感度（例えば、ペプチダーゼ感度）リンカー、光に不安定なリンカー、またはジスルフィド含有リンカーが挙げられる（Chari et al., 1992, Cancer Research 52:127-131；米国特許第５，２０８，０２０号明細書）。切断可能なリンカーは通常、細胞内条件下で切断の影響を受けやすい。適切な切断可能なリンカーとして、例えば、細胞内プロテアーゼ、例えばリソソームプロテアーゼまたはエンドソームプロテアーゼによって切断可能なペプチドリンカーが挙げられる。例示的な実施形態では、リンカーは、ジペプチドリンカー、例えばバリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）またはフェニルアラニン－リジン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカーであり得る。
【0161】
切断可能なリンカーは、ｐＨ感受性であってもよく、即ち、ある特定のｐＨ値での加水分解に感受性があり得る。通常、ｐＨ感受性リンカーは、酸性条件下で加水分解可能である。例えば、リソソームで加水分解可能な酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シスアコニチン酸アミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなど）が使用され得る。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号明細書；同第５，８２４，８０５号明細書；同第５，６２２，９２９号明細書；Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123；Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661を参照）。かかるリンカーは、血中の条件などの中性ｐＨ条件下で比較的安定であるが、リソソームのおおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０未満で不安定である。ある特定の実施形態では、加水分解可能なリンカーは、チオエーテルリンカー（例えば、アシルヒドラゾン結合を介してカーゴ部分に結合されたチオエーテル（例えば米国特許第５，６２２，９２９号明細書を参照））である。
【0162】
一部の実施形態では、リンカーは、還元条件下で切断可能である（例えば、ジスルフィドリンカー）。例えば、ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－５－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－２－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルチオ）ブチレート）およびＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジルオキシカルボニル－アルファ－メチル－アルファ－（２－ピリジル－ジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢおよびＳＭＰＴを使用して形成され得るものを含む、様々なジスルフィドリンカーが当該技術分野で既知である（例えば、Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931；Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer, C.W.Vogel ed., Oxford U. Press, 1987を参照。また、米国特許第４，８８０，９３５号明細書を参照）。
【0163】
一部の実施形態では、リンカーは、細胞内環境中に（例えば、リソソームまたはエンドソームまたはカベオラ内に）存在する切断剤、例えば酵素によって切断可能である。リンカーは、例えば、リソソームもしくはエンドソームプロテアーゼを含むがこれらに限定されない細胞内ペプチダーゼまたはプロテアーゼ酵素によって切断されるペプチジルリンカーであってもよい。一部の実施形態では、ペプチジルリンカーは、少なくとも２つのアミノ酸長または少なくとも３つのアミノ酸長である。切断剤は、カテプシンＢおよびＤならびにプラスミンを含んでもよく、それらは全て、ジペプチド薬誘導体を加水分解して、標的細胞の内側で活性薬物の放出をもたらすことが知られている（例えば、Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123を参照）。一部の実施形態では、細胞内プロテアーゼによって切断可能なペプチジルリンカーは、Ｖａｌ－ＣｉｔリンカーまたはＰｈｅ－Ｌｙｓリンカーである。
【0164】
一部の実施形態では、リンカーは、マロネートリンカー（Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93）、マレイミドベンゾイルリンカー（Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304）、または３’－Ｎ－アミド類似体（Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10): 1305-12）である。
【0165】
他の実施形態では、リンカー単位は、切断不可能であり、カーゴ部分は、例えば複合体分解によって放出される。例示的な切断不可能なリンカーとして、マレイミドカプロイル、４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ－スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）および４－（ヨードアセチル）アミノ安息香酸Ｎ－スクシンイミジル（ＳＩＡＢ）が挙げられる。
【0166】
一部の実施形態では、カーゴ部分は、リンカーによってアンカー（例えば、セクション６．１．６に記載されるような）にカップリングされる。一部の実施形態では、カーゴ部分をアンカーにカップリングさせるリンカーは、二官能性リンカーである。一部の実施形態では、カーゴ部分をアンカーにカップリングするリンカーは、切断可能なリンカーである。一部の実施形態では、切断可能なリンカーは、バリン－シトルリン（ｖａｌ－ｃｉｔ）またはフェニルアラニン－リジン（ｐｈｅ－ｌｙｓ）リンカーなどのジペプチドリンカーである。一部の実施形態では、カーゴ部分をアンカーにカップリングするリンカーは、切断不可能なリンカーである。例示的な切断不可能なリンカーとして、マレイミドカプロイル、４－（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ－スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）および４－（ヨードアセチル）アミノ安息香酸Ｎ－スクシンイミジル（ＳＩＡＢ）が挙げられる。
【0167】
６．２．臓器保存溶液
市販の臓器保存溶液が幾つか存在する。これらの臓器保存溶液の多くは、保管および輸送中に外植される臓器および組織に引き起こされる損傷を最低限に抑える構成成分を含有する。臓器保存溶液はまた、移植片拒絶の可能性を低減するよう調整されている。臓器保存溶液は、様々な構成成分、例えば、コロイド、非透過性物質（impermeants）、気体、電解質、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、緩衝液、およびそれらの組合せから選択される構成成分を含み得る。
市販の臓器保存溶液が幾つか存在する。これらの臓器保存溶液の多くは、保管および輸送中に外植される臓器および組織に引き起こされる損傷を最低限に抑える構成成分を含有する。臓器保存溶液はまた、移植片拒絶の可能性を低減するよう調整されている。臓器保存溶液は、様々な構成成分、例えば、コロイド、非透過性物質（impermeants）、気体、電解質、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、緩衝液、およびそれらの組合せから選択される構成成分を含み得る。
【0168】
一部の市販の腎臓保存溶液として、コリンズ溶液、ＥＣ溶液、ウィスコンシン大学溶液（ＵＷ溶液）、ヒスチジン－トリプトファン－ケトグルタル酸溶液（ＨＴＫ溶液）、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、高張クエン酸アデニン溶液（ＨＣ－Ａ溶液およびＨＣ－Ａ ＩＩ溶液）、リン酸緩衝スクロース（ＰＢＳ）１４０、ＨＰ１６、ＨＢＳ、Ｂ２、Ｌｉｆｏｒ、Ｅｃｏｓｏｌ、Ｂｉｏｌａｓｏｌ、腎保存溶液２（ＲＰＳ－２）、Ｆ－Ｍ、ＡＱＩＸＲＳ－Ｉ、ＷＭＯ－ＩＩ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｇｅｏｒｇｅｓ Ｌｏｐｅｚ－１（ＩＧＬ－１（登録商標））およびＣＺ－１溶液が挙げられる（Chen et al., 2019, Cell Transplantation, 28(12): 1472-1489）。移植後に阻血／低酸素傷害を最小限に抑えて、臓器機能を最大限にするために、様々な構成成分が臓器保存溶液中に含まれ得る。
【0169】
市販の臓器保存溶液の例示的な構成成分を以下の表２に提示する：
【0170】
【表2-1】
【0171】
【表2-2】
【0172】
本開示の臓器保存溶液は、例えば、脂質結合タンパク質ベースの複合体と、表２に列挙した１つまたは複数の構成成分とを含み得る。例えば、臓器保存溶液は、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）と、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ液、ＵＷ液、ＨＴＫ液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、またはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分とを含み得る。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液は、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）と、Ｃｅｌｓｉｏｒ溶液（登録商標）、ＥＣ液、ＵＷ液、ＨＴＫ液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、またはＨＣ－Ａ溶液の構成成分とを含み、任意選択で、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ液、ＵＷ液、ＨＴＫ液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、またはＨＣ－Ａ溶液の構成成分は、表２に示される濃度で、または表２に示される濃度の±２０％、±１５％、±１０％、または±５％で存在する。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液は、ＣＥＲ－００１と、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分とを含む。一部の実施形態では、ＣＥＲ－００１は、タンパク質ベースで０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ（例えば、０．３ｍｇ／ｍｌから０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌから０．６ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌ、または２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ）の濃度で存在する。一部の実施形態では、ＣＥＲ－００１は、タンパク質ベースで０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。本明細書中で使用する場合、「タンパク質ベース」という表現は、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）の量が、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）における脂質結合タンパク質（例えば、ＡｐｏＡ－Ｉ）の量に基づいて算出されることを意味する。
【0173】
使用することができる別の例示的な臓器保存溶液は、０．５ｍＭの塩化カルシウム（二水和物）、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（遊離酸）、２５ｍＭのリン酸カリウム（一塩基）、３０ｍＭのマンニトール、１０ｍＭのグルコース（無水）、８０ｍＭのグルコン酸ナトリウム、５ｍＭのグルコン酸マグネシウム、５ｍＭのＤ－リボース、５０ｇ／Ｌのペンタフラクション（ＨＥＳ）、３ｍＭのグルタチオン（還元型）、３ｍＭのアデニン（遊離塩基）を含むＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液である。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液は、脂質結合タンパクベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）と、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分とを含む。一部の実施形態では、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分は、このパラグラフに列挙した濃度または±２０％、±１５％、±１０％、または±５％で存在する。
【0174】
硫酸コンドロイチンおよびデキストランを含有する溶液（例えば、Ｏｐｔｉｓｏｌ（商標）、Ｏｐｔｉｓｏｌ ＧＳ（商標））は、角膜組織を保存するための溶液において使用することができる。ＭｃＣａｒｅｙ－Ｋａｕｆｍａｎ（ＭＫ）培地、Ｃｈｅｎ培地、およびＣｏｒｎｉｓｏｌもまた使用することができる。例えば、市販の角膜保存溶液は、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）で補充され得る。一部の実施形態では、角膜組織を保存するための溶液は、脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）と、１つまたは複数の（例えば、任意の１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、または８個の）下記：硫酸コンドロイチン、デキストラン、炭酸水素ナトリウム、抗生物質（例えば、ゲンタマイシンおよび／またはストレプトマイシン）、アミノ酸の混合物、ピルビン酸ナトリウム、Ｌ－グルタミン酸、および２－メルカプトエタノールとを含む。
【0175】
本開示の臓器保存溶液は、例えば、脂質結合タンパク質ベースの複合体を、溶液の他の構成成分と組み合わせることによって作製され得る。例えば、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、あらかじめ作製された（例えば、市販の）臓器保存溶液と組み合わせることができる。あるいは、臓器保存溶液の構成成分は、任意の他の様式で組み合わせられ、例えば順次添加および混合され得る。
【0176】
一部の態様では、本開示は、臓器保存溶液製品を提供する。かかる製品は、密封容器、例えば袋（例えば、溶液１Ｌを含有する）または瓶（例えば、溶液１Ｌを含有する）中に本開示の臓器保存溶液を含み得る。
【0177】
６．２．１．コロイド
コロイド、特に高分子量コロイドは、臓器保存溶液中に含まれ得る。臓器保存溶液において、高分子量コロイドの添加は、血管内膠質浸透圧を維持して、間質浮腫を防止することができる。臓器保存溶液中に含まれ得る例示的なコロイドとして、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）（例えば、５０ｋＤａ）、デキストラン（例えば、４０ｋＤａ）、ＰＥＧ３５（３５ｋＤａ）またはＰＥＧ２０（２０ｋＤａ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
コロイド、特に高分子量コロイドは、臓器保存溶液中に含まれ得る。臓器保存溶液において、高分子量コロイドの添加は、血管内膠質浸透圧を維持して、間質浮腫を防止することができる。臓器保存溶液中に含まれ得る例示的なコロイドとして、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）（例えば、５０ｋＤａ）、デキストラン（例えば、４０ｋＤａ）、ＰＥＧ３５（３５ｋＤａ）またはＰＥＧ２０（２０ｋＤａ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【0178】
６．２．２．非透過性物質
非透過性物質は、細胞浮腫を制限するために臓器保存溶液中に含まれ得る。細胞膨潤の防止における非透過性物質の有効性は概して、それらの分子量によって決定される。一般に、より大きな分子は、細胞膨潤を防止するのにより優れている。非透過性物質の例として、グルコース（分子量１８０ｋＤａ）、マンニトール（分子量１８２ｋＤａ）、スクロース（分子量３４２Ｄａ）、ラフィノース（分子量５０４ｋＤａ）、ラクトビオン酸塩およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
非透過性物質は、細胞浮腫を制限するために臓器保存溶液中に含まれ得る。細胞膨潤の防止における非透過性物質の有効性は概して、それらの分子量によって決定される。一般に、より大きな分子は、細胞膨潤を防止するのにより優れている。非透過性物質の例として、グルコース（分子量１８０ｋＤａ）、マンニトール（分子量１８２ｋＤａ）、スクロース（分子量３４２Ｄａ）、ラフィノース（分子量５０４ｋＤａ）、ラクトビオン酸塩およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【0179】
６．２．３．気体
酸素（Ｏ２）、水素（Ｈ２）、一酸化炭素（ＣＯ）、一酸化窒素（ＮＯ）、硫化水素（Ｈ２Ｓ）およびアルゴン（Ａｒ）を含む幾つかの気体が、臓器移植において阻血／低酸素傷害を低減するのに使用されている。気体は、臓器保存溶液に添加され得る。
酸素（Ｏ２）、水素（Ｈ２）、一酸化炭素（ＣＯ）、一酸化窒素（ＮＯ）、硫化水素（Ｈ２Ｓ）およびアルゴン（Ａｒ）を含む幾つかの気体が、臓器移植において阻血／低酸素傷害を低減するのに使用されている。気体は、臓器保存溶液に添加され得る。
【0180】
６．２．４．電解質
例えば塩由来の電解質は、ドナー臓器における電解質恒常性を維持する助けとなるように臓器保存溶液中に含まれ得る。例示的な電解質として、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ－、ＳＯ４ ２－、ＰＯ４ ３－、ＨＣＯ３－、クエン酸塩およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
例えば塩由来の電解質は、ドナー臓器における電解質恒常性を維持する助けとなるように臓器保存溶液中に含まれ得る。例示的な電解質として、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ－、ＳＯ４ ２－、ＰＯ４ ３－、ＨＣＯ３－、クエン酸塩およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【0181】
６．２．５．抗酸化剤
臓器保存溶液は、外植された臓器に対する阻血／低酸素傷害を制限する助けとなるように抗酸化剤および／またはラジカルスカベンジャーを含み得る。ＲＯＳ生成経路を妨げて、既存のＲＯＳを除去する添加剤は、臓器保存中の阻血／低酸素傷害を防止または低減する助けとなり得る。例示的な抗酸化剤および／またはラジカルスカベンジャーとして、アロプリノール（キサンタンオキシダーゼ阻害剤）、還元型グルタチオン（チオール含有アミノ酸）、トリプトファンまたはＬ－アルギニンおよびヒスチジンなどのＲＯＳ除去アミノ酸、レシチン化（lecithinized）スーパーオキシドジムスターゼ（ｌｅｃ－ＳＯＤ）、Ｈ２Ｓ、Ｎ－アセチルシステイン、プロポフォール、ＴＭＺ、ｒｈ－ＢＭＰ－７、トロロクス、エダラボン、セレン、ニカラベン、プロスタグランジンＥ１、タンシノンＩＩＡおよびそれらの組合せが挙げられる。
臓器保存溶液は、外植された臓器に対する阻血／低酸素傷害を制限する助けとなるように抗酸化剤および／またはラジカルスカベンジャーを含み得る。ＲＯＳ生成経路を妨げて、既存のＲＯＳを除去する添加剤は、臓器保存中の阻血／低酸素傷害を防止または低減する助けとなり得る。例示的な抗酸化剤および／またはラジカルスカベンジャーとして、アロプリノール（キサンタンオキシダーゼ阻害剤）、還元型グルタチオン（チオール含有アミノ酸）、トリプトファンまたはＬ－アルギニンおよびヒスチジンなどのＲＯＳ除去アミノ酸、レシチン化（lecithinized）スーパーオキシドジムスターゼ（ｌｅｃ－ＳＯＤ）、Ｈ２Ｓ、Ｎ－アセチルシステイン、プロポフォール、ＴＭＺ、ｒｈ－ＢＭＰ－７、トロロクス、エダラボン、セレン、ニカラベン、プロスタグランジンＥ１、タンシノンＩＩＡおよびそれらの組合せが挙げられる。
【0182】
６．２．６．栄養分および／または代謝基質
アミノ酸は、栄養分を提供するために、および／または代謝基質として作用するために臓器保存溶液中に含まれ得る。一部の実施形態では、アミノ酸は、トリプトファン、グルタミン酸、ヒスチジン、Ｌ－アルギニン、Ｎ－アセチルシステイン、およびＤ－システインの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、臓器保存溶液中に含まれる栄養分として、環状ヘリックスＢペプチド栄養因子、例えば、ウシ好中球ペプチド－１（ＢＮＰ－１）、サブスタンスＰ（ＳＰ）、神経成長因子－β（ＮＧＦ－β）、インスリン様増殖因子－１（ＩＧＦ－１）、上皮様増殖因子（ＥＧＥ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、組換えヒト骨形成タンパク質－７（ｒｈ ＢＭＰ－７）、レシチン化スーパーオキシドジムスターゼ（ｌｅｃ－ＳＯＤ）、ＴＮＦ－受容体融合タンパク質（ＴＮＦ－ＲＦＰ）およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
アミノ酸は、栄養分を提供するために、および／または代謝基質として作用するために臓器保存溶液中に含まれ得る。一部の実施形態では、アミノ酸は、トリプトファン、グルタミン酸、ヒスチジン、Ｌ－アルギニン、Ｎ－アセチルシステイン、およびＤ－システインの１つまたは複数から選択される。一部の実施形態では、臓器保存溶液中に含まれる栄養分として、環状ヘリックスＢペプチド栄養因子、例えば、ウシ好中球ペプチド－１（ＢＮＰ－１）、サブスタンスＰ（ＳＰ）、神経成長因子－β（ＮＧＦ－β）、インスリン様増殖因子－１（ＩＧＦ－１）、上皮様増殖因子（ＥＧＥ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、組換えヒト骨形成タンパク質－７（ｒｈ ＢＭＰ－７）、レシチン化スーパーオキシドジムスターゼ（ｌｅｃ－ＳＯＤ）、ＴＮＦ－受容体融合タンパク質（ＴＮＦ－ＲＦＰ）およびそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
【0183】
６．２．７．緩衝液
緩衝剤は、細胞ｐＨを制御するために臓器保存溶液中に含まれ得る。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液のｐＨは、約７．０から約７．４である。一部の実施形態では、緩衝剤は、ホウ酸塩、ホウ酸塩－ポリオール複合体、コハク酸塩、リン酸塩緩衝剤、クエン塩酸緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、炭酸塩緩衝剤、有機緩衝剤、ヒスチジンなどのアミノ酸緩衝剤、およびそれらの組合せから選択される。
緩衝剤は、細胞ｐＨを制御するために臓器保存溶液中に含まれ得る。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液のｐＨは、約７．０から約７．４である。一部の実施形態では、緩衝剤は、ホウ酸塩、ホウ酸塩－ポリオール複合体、コハク酸塩、リン酸塩緩衝剤、クエン塩酸緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、炭酸塩緩衝剤、有機緩衝剤、ヒスチジンなどのアミノ酸緩衝剤、およびそれらの組合せから選択される。
【0184】
６．２．８．他の構成成分
ミトコンドリア機能不全は、ＡＴＰ合成の障害および考え得るＡＴＰ欠乏をもたらし得る阻血中の重大な事象である。ミトコンドリア完全性を維持すること、およびミトコンドリア機能を保護することは、臓器保存溶液の重要な要件である。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液は、１つまたは複数のミトコンドリア保護試薬を含有する。適切なミトコンドリア保護試薬として、Ｈ２Ｓ、ＭｉｔｏＱ、キナクリン、ＴＭＺ、およびＡＰ３９が挙げられるが、これらに限定されない。
ミトコンドリア機能不全は、ＡＴＰ合成の障害および考え得るＡＴＰ欠乏をもたらし得る阻血中の重大な事象である。ミトコンドリア完全性を維持すること、およびミトコンドリア機能を保護することは、臓器保存溶液の重要な要件である。一部の実施形態では、本開示の臓器保存溶液は、１つまたは複数のミトコンドリア保護試薬を含有する。適切なミトコンドリア保護試薬として、Ｈ２Ｓ、ＭｉｔｏＱ、キナクリン、ＴＭＺ、およびＡＰ３９が挙げられるが、これらに限定されない。
【0185】
多重の炎症経路および因子は、阻血後傷害をもたらし得る臓器の再灌流中に活性化され得る。一部の実施形態では、特定抗体または経路阻害剤は、炎症応答を調節し、阻血後傷害を減衰させるために臓器保存溶液中に含まれ得る。適切な化合物として、内皮受容体アンタゴニスト、ＴＮＦ－受容体融合タンパク質（ＴＮＦ－ＲＦＰ）、ＩＣＡＭ－１アンチセンスデオキシヌクレオチド、内皮受容体アンタゴニスト、ｐ３８ＭＡＰＫ阻害剤、例えばＦＲ１６７６５３、外因性ＣＯまたはＣＯ放出分子、Ｈ２Ｓ、Ｏ２、Ａｒ、メラガトラン、環状ヘリックスＢペプチド、ＴＭＺ、ｌｅｃ－ＳＯＤ、Ｒｈｏ－キナーゼ阻害剤ＨＡ１０７７、トロンビン阻害剤、例えばメラガトラン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）受容体アンタゴニスト、プロテアソーム阻害剤およびそれらの組合せが挙げられる。
【0186】
阻血／低酸素、続く再灌流傷害は、アポトーシス、ネクローシスおよびオートファジー関連細胞死などの細胞死プログラムの活性化を引き起こす。一部の実施形態では、臓器保存溶液は、グルココルチコイド、例えばデキサメタゾン、ネイキッドカスパーゼ３ ｓｉＲＮＡ、マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）－２ ｓｉＲＮＡ、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）活性化因子およびそれらの組合せなどの細胞死プログラムの活性化を阻止する添加剤を含有する。
【0187】
一部の実施形態では、アデノシンなどのエネルギー物質は、保存中の迅速なＡＴＰ再生を可能にするために臓器保存溶液中に添加され得る。
【0188】
臓器保存溶液への他の有用な添加物として、ベラパミルのようなカルシムチャネルブロッカーなどのＣａ２＋恒常性を補助する薬剤またはＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ＰＫＧ依存性経路を介してＮａ＋／Ｈ＋交換体活性を阻止し得るカルシウム過負荷を防止し得る他の薬理学的試薬、例えばＨ２Ｓが挙げられる。
【0189】
ある特定の実施形態では、プロスタグランジンＥ１、タウリン、ラノラジンおよびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない１つまたは複数の添加剤が、臓器保存溶液中に含まれる。
【0190】
６．３．キットおよびシステム
ある特定の態様では、本開示は、例えばセクション６．１に記載されるような脂質結合タンパク質ベースの複合体と、例えばセクション６．２に記載されるような臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、キットにおいて溶液の形態で提供される。ある特定の実施形態では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、キットにおいて凍結乾燥形態で提供される。
ある特定の態様では、本開示は、例えばセクション６．１に記載されるような脂質結合タンパク質ベースの複合体と、例えばセクション６．２に記載されるような臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、キットにおいて溶液の形態で提供される。ある特定の実施形態では、脂質結合タンパク質ベースの複合体は、キットにおいて凍結乾燥形態で提供される。
【0191】
ある特定の実施形態では、キットの１つまたは複数の構成成分は、密封容器中に提供される。一部の実施形態では、密封容器は袋である。
【0192】
ある特定の実施形態では、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分は、キットにおいて溶液の形態で存在する。
【0193】
ある特定の実施形態では、臓器保存溶液複合体の１つまたは複数の構成成分は、密封容器中に存在する。一部の実施形態では、密封容器は袋である。
【0194】
一部の実施形態では、キットは、１つの容器中に脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）を、また１つまたは複数のさらなる容器中に臓器保存溶液の残りの構成成分を含む。例えば、キットは、１つの容器中に脂質結合タンパク質ベースの複合体（例えば、ＣＥＲ－００１）を、また第２の容器中にＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、またはＨＣ－Ａ溶液を含み得る。一部の実施形態では、キットは、１つの容器中にＣＥＲ－００１を、またまた別の容器中にＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を含む。完成臓器保存溶液は、脂質結合タンパク質ベースの複合体を、他の構成成分と組み合わせることによってかかるキットから作製され得る。
【0195】
別の態様では、本開示は、（ａ）本開示の臓器保存溶液または臓器保存溶液製品と、（ｂ）灌流機および／または臓器（例えば、ヒトもしくはブタなどの例えば哺乳動物由来であり得る腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸または気管）とを含むシステムを提供する。一部の実施形態では、システムは、灌流機を含む。他の実施形態では、システムは、臓器を含む。さらに別の実施形態では、システムは、灌流機と、臓器とを含む。例示的な灌流機として、心肺装置、正常温度灌流機および正常温度以下の（subnormothermic）灌流機が挙げられるが、これらに限定されない。
【0196】
別の態様では、本開示は、（ａ）本開示の臓器保存溶液または臓器保存溶液製品と、（ｂ）ヒトまたはブタなどの例えば哺乳動物由来であり得る組織（例えば、眼（例えば、角膜または強膜）、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織）とを含むシステムを提供する。一部の実施形態では、システムは、灌流機をさらに含む。
【0197】
６．４．臓器、組織、臓器および組織保存のプロセスならびに移植方法
一部の態様では、本開示は、本開示の臓器保存溶液を使用したｅｘ ｖｉｖｏ臓器保存のプロセスを提供する。臓器は、例えば、ヒトまたはブタ臓器などの哺乳動物臓器であり得る。例示的な臓器として、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、および気管が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、臓器は腎臓である。一部の実施形態では、臓器は眼である。
一部の態様では、本開示は、本開示の臓器保存溶液を使用したｅｘ ｖｉｖｏ臓器保存のプロセスを提供する。臓器は、例えば、ヒトまたはブタ臓器などの哺乳動物臓器であり得る。例示的な臓器として、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、および気管が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、臓器は腎臓である。一部の実施形態では、臓器は眼である。
【0198】
上記プロセスは、例えば、本開示の臓器保存溶液を使用して臓器の機械灌流を実施するステップを含み得る。臓器保存溶液は、一部の実施形態では、血液、例えば全血で希釈され得る。例えば、臓器保存溶液は、臓器保存溶液対全血の容量：容量比１：１から１：３で、全血を用いて希釈され得る。一部の実施形態では、比は１：１である。他の実施形態では、比は１：３である。あるいは、臓器保存溶液は、希釈なしで使用され得る。
【0199】
機械灌流は、例えば、正常温度、例えば３０℃から３８℃、または正常温度未満、例えば２℃から８℃であり得る。一部の実施形態では、機械灌流は、３０℃から３８℃で実施される。他の実施形態では、機械灌流は、２℃から８℃で実施される。他の実施形態では、機械灌流は、８℃～３０℃（例えば、２０℃から２５℃）の温度で実施される。機械灌流は、一部の実施形態では、臓器を臓器保存溶液で、例えば低温臓器保存溶液（例えば、２℃から８℃）で流すステップが先行され得る。
【0200】
低温保管（ＣＳ）を使用して臓器を保存するプロセスもまた提供される。一部の実施形態では、低温保管は、臓器を、機械灌流の非存在下で、例えば２℃から６℃で臓器保存溶液中に保管するステップを含む。低温保管は、一部の実施形態では、臓器を、臓器保存溶液で、例えば低温臓器保存溶液（例えば、２℃から８℃）で流すステップが先行され得る。
【0201】
機械灌流および低温保管は、任意の適切な時間、例えば臓器がドナーから収集される時間（またはその直後）からレシピエントへの移植までの時間（またはその直前）で実施され得る。一部の実施形態では、機械灌流または低温保管は、臓器で少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、および／または最大１週間、最大５日間、最大４日間、最大３日間、最大２日間、最大３６時間、最大１日間、最大１２時間、あるいは先述の値の任意の２つで囲まれた任意の範囲、例えば２から４時間、２から６時間、４から６時間、６時間から１２時間、１２時間から１日間、１日間から２日間
などで実施される。
などで実施される。
【0202】
一部の実施形態では、腎臓は、最大２４時間または最大３６時間、機械灌流または低温保管に付される。
【0203】
一部の実施形態では、肝臓は、最大１２時間、機械灌流または低温保管に付される。
【0204】
一部の実施形態では、肺は、最大６時間または最大８時間、機械灌流または低温保管に付される。
【0205】
一部の実施形態では、心臓は、最大４時間または最大６時間、機械灌流または低温保管に付される。
【0206】
一部の実施形態では、膵臓は、最大１２時間または最大１日間、機械灌流または低温保管に付される。
【0207】
一部の実施形態では、腸は、最大１２時間または最大１日間、機械灌流または低温保管に付される。
【0208】
一部の実施形態では、気管は、最大１２時間または最大１日間、機械灌流または低温保管に付される。
【0209】
臓器保存のプロセスは、臓器を臓器ドナーから取り出すステップをさらに含み得る。一部の実施形態では、臓器ドナーは、生存ドナー（例えば、腎臓ドナー）である。他の実施形態では、ドナーは死亡している。
【0210】
本開示は、本開示の臓器保存プロセスによって保存された臓器を、臓器移植を必要とする対象へ移植するステップを含む、臓器移植の方法をさらに提供する。本明細書中に記載される方法に従って処置され得る対象は、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトである。
【0211】
一部の態様では、本開示は、本開示の臓器保存溶液を使用したｅｘ ｖｉｖｏ組織保存のプロセスを提供する。組織は、例えば、ヒトまたはブタ組織などの哺乳動物組織であり得る。例示的な組織として、眼（例えば、角膜または強膜）、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、および神経組織が挙げられるが、これらに限定されない。一部の実施形態では、組織は角膜組織である。
【0212】
プロセスは、例えば、組織を、本開示の臓器保存溶液中に保管するステップ（例えば、低温保管（ＣＳ））を含み得る。一部の実施形態では、低温保管は、組織を、臓器保存溶液中で、例えば２℃から６℃にて保管するステップを含む。
【0213】
臓器保存溶液中での組織の保管は、任意の適切な時間、例えば組織がドナーから収集される時間（またはその直後）からレシピエントへの移植までの時間（またはその直前）で実施され得る。一部の実施形態では、保管は、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、および／または最大４週間、最大２週間、最大１週間、最大５日間、最大４日間、最大３日間、最大２日間、最大３６時間、最大１日、最大１２時間、あるいは先述の値の任意の２つで囲まれた任意の範囲、例えば２から４時間、２から６時間、４から６時間、６時間から１２時間、１２時間から１日間、１日間から２日間、１日間から１週間、１週間から２週間、２週間から４週間などで実施される。一部の実施形態では、角膜組織は、臓器保存溶液中で、最大４週間保管される。
【0214】
臓器保存のプロセスは、組織を組織ドナーから取り出すステップをさらに含み得る。一部の実施形態では、組織ドナーは生存ドナーである。他の実施形態では、ドナーは死亡している。
【0215】
本開示は、本開示の臓器保存プロセスによって保存された組織を、臓器移植を必要とする対象に移植するステップを含む、組織移植の方法をさらに提供する。本明細書中に記載される方法に従って処置され得る対象は、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトである。
【実施例】
【0216】
７．実施例
免疫抑制療法における、および移植手術技法の分野における近年の改善にもかかわらず、阻血／再灌流傷害は、移植された臓器の機能的損失の主な原因の１つとなり続けている。
免疫抑制療法における、および移植手術技法の分野における近年の改善にもかかわらず、阻血／再灌流傷害は、移植された臓器の機能的損失の主な原因の１つとなり続けている。
【0217】
ＩＲＩ損傷を制限することが可能な新たな戦略における関心は、臓器保存に必要な灌流機の成長過程にある技術的な向上に起因してここ数十年で膨大な力を受けてきた。レシピエントの輸送または準備中に臓器の品質を保存する優れた機会であることに加えて、灌流機は、臓器が移植前に薬理学的に処置されることを可能にする。腎ＩＲＩ損傷の状況で、酸化的ストレスを調節することが可能なモノクローナル抗体αＣＤ４７Ａｂ、可溶性補体受容体因子ｓＣＲ１および抗凝固の役割を有する組換えタンパク質トロンボモジュリン（ｒＴＭ）などの幾つかの薬理学的アプローチが、マウスモデルにおいて試行されている。しかしながら、これらの薬物の多くは、臨床状況に移されると効果的ではなかった（Hameed et al., 2020, Sci Rep. 10(1):6930）。理論に縛られないが、ＨＤＬおよびＣＥＲ－００１などのＨＤＬ疑似体は、酸化的ストレス、炎症および凝固の同じメカニズムで作用することによって臓器保存溶液中でｅｘ ｖｉｖｏでＩＲＩ損傷を制限することが可能であると考えられる。さらに、ＨＤＬおよびＣＥＲ－００１などのＨＤＬ疑似体は、モノクローナル抗体の同じ二次効果を引き起こすと予想されない内因性タンパク質を含む。
【0218】
実施例１は、ＩＲＩ腎臓損傷のブタモデルにおける臓器保存研究について記載する。ＩＲＩブタモデルは、それが血清クレアチニンの低減、間質性線維症、尿細管委縮、循環性白血球の浸潤を模倣するため、腎臓移植のヒト系で起きることの良好な動物モデルである（Delpech et al 2016, J Transl Med 14, 277）。
【0219】
ブタモデルの別の利点は、薬物によって調節されるプロセスが、明らかに強調されるのを可能にする、温阻血および冷阻血から再灌流までの腎動脈のクランピングを特徴とする手順全体を制御する能力である。細胞内ＡＴＰの低減、乳酸の増加、Ｃａ＋＋の細胞内蓄積およびミトコンドリアレベルでのＯ２のフリーラジカルの形成の代謝変化は、モデルにおいて正確に研究することができる。
【0220】
ブタおよびヒトの腎臓は、解剖学的に類似している（齧歯類および単葉マウスの腎臓と対比して多葉性構造を特徴とする）。ブタの身体サイズは、ヒトの身体サイズと類似した外科的処置、予備灌流技術の評価および最適化のための末梢血またはバイオプシーの反復収集を可能にする。最終的に、免疫系の生理学との密接な類似性が、臓器保存溶液におけるＨＤＬおよびＣＥＲ－００１などのＨＤＬ疑似体の有効性の評価を可能にする。
【0221】
７．１．[実施例１]：ブタｅｘ ｖｉｖｏ灌流モデルにおける阻血／再灌流傷害を低減するためのＣＥＲ－００１の有効性の評価
総計２８匹のブタを本研究に使用する。体重４５～６０ｋｇのブタを、研究前の２４時間絶食させる。動物には全て、咽頭および気管分泌物を低減して、挿管後の徐脈を防止するためにアザペロン（８ｍｇ／ｋｇ）およびアトロピン（０．０３ｍｇ／ｋｇ）の筋内混合物を前投与する。大腿静脈のカニューレ挿入後、腎臓のｅｘ ｖｉｖｏ灌流のための静脈血６００ｍＬを、それぞれヘパリン５，０００ＩＵを充填した滅菌血液袋に採取する（活性凝固時間、ＡＣＴ４８０秒まで）。麻酔後、両方の腎臓に、正中腹側切開を介して接近する。その後、腎動脈および静脈を単離して、直角クランプを用いて、血管ループを腎動脈周辺に配置する。血管ループをたぐり寄せることによって、温阻血を６０分間誘導した後、３時間灌流する。次に、１ｍＬ／ｋｇ（体重）のペントバルビタールのＩＶ投与によって、動物を安楽死させる。臓器外植後、腎臓を秤量し、４℃にてＣｅｌｓｉｏｒｙ溶液で流した。各ブタに関して、一方の腎臓を４℃で静的に保管する（低温静的保管、ＣＳ）のに対して、他方の腎臓を機械灌流システムに挿入する。灌流されている腎臓に関して、腎動脈にカニューレ挿入し（逆光性心筋保護カテーテル）、腎静脈（１／４”チューブコネクター、１／４”管組織）および尿管（１４Ｆｒ．カテーテル）にカニューレ挿入する。心拍数、酸素ヘモグロビン飽和、呼吸気体組成、呼吸数、一回呼吸量、気道圧、収縮期血圧および中心静脈圧を連続的にモニタリングして、自動的に記録する（Ｏｈｍｅｄａ Ｍｏｄｕｌｕｓ ＣＤ；Ｄａｔｅｘ Ｏｈｍｅｄａ社、ヘルシンキ、フィンランド）。
総計２８匹のブタを本研究に使用する。体重４５～６０ｋｇのブタを、研究前の２４時間絶食させる。動物には全て、咽頭および気管分泌物を低減して、挿管後の徐脈を防止するためにアザペロン（８ｍｇ／ｋｇ）およびアトロピン（０．０３ｍｇ／ｋｇ）の筋内混合物を前投与する。大腿静脈のカニューレ挿入後、腎臓のｅｘ ｖｉｖｏ灌流のための静脈血６００ｍＬを、それぞれヘパリン５，０００ＩＵを充填した滅菌血液袋に採取する（活性凝固時間、ＡＣＴ４８０秒まで）。麻酔後、両方の腎臓に、正中腹側切開を介して接近する。その後、腎動脈および静脈を単離して、直角クランプを用いて、血管ループを腎動脈周辺に配置する。血管ループをたぐり寄せることによって、温阻血を６０分間誘導した後、３時間灌流する。次に、１ｍＬ／ｋｇ（体重）のペントバルビタールのＩＶ投与によって、動物を安楽死させる。臓器外植後、腎臓を秤量し、４℃にてＣｅｌｓｉｏｒｙ溶液で流した。各ブタに関して、一方の腎臓を４℃で静的に保管する（低温静的保管、ＣＳ）のに対して、他方の腎臓を機械灌流システムに挿入する。灌流されている腎臓に関して、腎動脈にカニューレ挿入し（逆光性心筋保護カテーテル）、腎静脈（１／４”チューブコネクター、１／４”管組織）および尿管（１４Ｆｒ．カテーテル）にカニューレ挿入する。心拍数、酸素ヘモグロビン飽和、呼吸気体組成、呼吸数、一回呼吸量、気道圧、収縮期血圧および中心静脈圧を連続的にモニタリングして、自動的に記録する（Ｏｈｍｅｄａ Ｍｏｄｕｌｕｓ ＣＤ；Ｄａｔｅｘ Ｏｈｍｅｄａ社、ヘルシンキ、フィンランド）。
【0222】
７．１．１研究設計
臓器外植食後、腎臓を下記の群へ無作為化する：
臓器外植食後、腎臓を下記の群へ無作為化する：
【0223】
群１：４℃で６時間、保存溶液としてＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）を用いて低温保管した腎臓（ＣＳ）、Ｎ＝７。
【0224】
群２：４℃で６時間、ＣＥＲ－００１（０．４ｍｇ／ｍｌ）を補充した保存溶液としてＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）を用いて低温保管した腎臓（ＣＳ＋ＣＥＲ－００１）、Ｎ＝７。
【0225】
群３：３２℃で６時間、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液＋全血（１：１比）を用いた正常温度灌流機で灌流させた腎臓（ＮＭＰ）、Ｎ＝７。
【0226】
群４：３２℃で６時間、ＣＥＲ－００１（０．４ｍｇ／ｍｌ）を補充したＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液＋全血（１：１比）を用いた正常温度灌流機で灌流させた腎臓（ＮＭＰ＋ＣＥＲ－００１）。
【0227】
Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いて腎動脈を通して腎臓全てを流した後、各腎臓にカニューレ挿入する。正確な温度制御を可能にする３Ｔ Ｈｅａｔｅｒ－Ｃｏｏｌｅｒデバイス（Ｓｔｏｃｋｅｒｔ ＧｍｂＨ社、ドイツ）を装備したＳ３心肺装置（ＨＬＭ）（Ｓｔｏｃｋｅｒｔ ＧｍｂＨ社、ドイツ）によってＮＭＰを実施する。さらに、Ｓ３ ＨＬＭには、掃引流速および吸入酸素濃度（ＦｉＯ２）の観点で正確な気体送達を保証するＳｅｃｈｒｉｓｔ Ｍｏｄｅｌ ３５００ＣＰ－Ｇ低流速気体ブレンダー（Ｓｅｃｈｒｉｓｔ社、米国）が装備されている。灌流回路は幾つかの消耗品を含む：ホスホリルコリン（ＰＣ）コーティングを有する小児人工肺Ｌｉｌｌｉｐｕｔ２（ＬｉｖａＮｏｖａ社、イタリア）；遠心ポンプ（ＬｉｖａＮｏｖａ社、イタリア）、心臓切開術（ＬｉｖａＮｏｖａ社、イタリア）、管組織におけるＰＶＣ１／４（ＬｉｖａＮｏｖａ社、イタリア）。特注設計したポンプコントローラーを手動で調節することによって標的平均動脈圧（ＭＡＰ）７５ｍｍＨｇを維持して、連続的にモニタリングする。腎血流（ＲＢＦ）を、超音波流量センサーを介してモニタリングする。
【0228】
７．１．２．灌流液および尿のサンプリングならびに分析
動脈および静脈灌流液ならびに尿の試料を、別個の時点で収集する。動脈および静脈ｐＯ２ならびにｐＨレベルを、血液気体アナライザーを使用して測定する。腎代謝活性は、動脈および静脈の酸素含有量、動脈および静脈ＳＯ２およびｐＯ２値ならびにヘモグロビン濃度を使用することによって、酸素消費の算出（（ｃａＯ２－ｃｖＯ２）＊ＲＢＦ／腎臓の重さ）によって概算される（ｃａ／ｖＯ２＝Ｓａ／ｖＯ２＊１．３４＊ｃ（Ｈｂ）＋ｐａ／ｖＯ２＊０．００３１）。尿は別々に収集して、尿量を記録する。
動脈および静脈灌流液ならびに尿の試料を、別個の時点で収集する。動脈および静脈ｐＯ２ならびにｐＨレベルを、血液気体アナライザーを使用して測定する。腎代謝活性は、動脈および静脈の酸素含有量、動脈および静脈ＳＯ２およびｐＯ２値ならびにヘモグロビン濃度を使用することによって、酸素消費の算出（（ｃａＯ２－ｃｖＯ２）＊ＲＢＦ／腎臓の重さ）によって概算される（ｃａ／ｖＯ２＝Ｓａ／ｖＯ２＊１．３４＊ｃ（Ｈｂ）＋ｐａ／ｖＯ２＊０．００３１）。尿は別々に収集して、尿量を記録する。
【0229】
灌流液血漿試料および尿試料は、次の分析のために－８０℃で保管する。灌流液試料は、ナトリウムおよびクレアチニンレベルに関して分析する。尿試料中のタンパク質、ナトリウムおよびクレアチニン濃度を決定する。動脈灌流液および尿レベルを使用して、クレアチニンクリアランス（尿クレアチニン＊尿流／血漿クレアチニン／腎臓の重さ）およびナトリウム排泄率（尿ナトリウム＊血漿クレアチニン／血漿ナトリウム／尿クレアチニン）を算出する。
【0230】
灌流パラメーター
・ 灌流液溶液：Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液＋全血（ヘマトクリットＨＣＴに基づいて１：１／１：３の比）；
・ Ｈｂ：９～１１ｍｇ／ｄＬ（このパラメーター未満の場合、回収手順中に細胞セーバーデバイスを介して得られた白血球欠乏の無血漿血液が添加される）；
・ 未分画ヘパリン（ＵＦＨ）のＵ．Ｉ．；
・ 灌流の持続期間：６時間；
・ 灌流圧：７５ｍｍＨｇ超；
・ 腎静脈圧：０～３ｍｍＨｇ；
・ 流速：代謝パラメーターおよび血管抵抗に基づいて調節；
・ 灌流温度：３２℃。
・ 灌流液溶液：Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液＋全血（ヘマトクリットＨＣＴに基づいて１：１／１：３の比）；
・ Ｈｂ：９～１１ｍｇ／ｄＬ（このパラメーター未満の場合、回収手順中に細胞セーバーデバイスを介して得られた白血球欠乏の無血漿血液が添加される）；
・ 未分画ヘパリン（ＵＦＨ）のＵ．Ｉ．；
・ 灌流の持続期間：６時間；
・ 灌流圧：７５ｍｍＨｇ超；
・ 腎静脈圧：０～３ｍｍＨｇ；
・ 流速：代謝パラメーターおよび血管抵抗に基づいて調節；
・ 灌流温度：３２℃。
【0231】
モニタリング
・ 流速（ｍＬ／分）：連続的なモニタリング；
・ 圧力（ｍｍＨｇ）：連続的なモニタリング；
・ 腎臓内抵抗（ｍｍＨｇ／ｍＬ／分）：１０分で点検；
・ 血液－気体分析（酸－塩基恒常性、電解質、Ｈｂ、ＰａＯ２、ＰａＣＯ２など）：３０分で点検；
・ 代謝パラメーター（ＤＯ２、ＶＯ２、Ｏ２ＥＲ）：３０分で点検；
・ 灌流温度：連続的なモニタリング。
・ 流速（ｍＬ／分）：連続的なモニタリング；
・ 圧力（ｍｍＨｇ）：連続的なモニタリング；
・ 腎臓内抵抗（ｍｍＨｇ／ｍＬ／分）：１０分で点検；
・ 血液－気体分析（酸－塩基恒常性、電解質、Ｈｂ、ＰａＯ２、ＰａＣＯ２など）：３０分で点検；
・ 代謝パラメーター（ＤＯ２、ＶＯ２、Ｏ２ＥＲ）：３０分で点検；
・ 灌流温度：連続的なモニタリング。
【0232】
分析
灌流前および灌流後：
・ 重量
血液気体測定：
・ 動脈：ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ－、Ｃａ２＋
・ 静脈：ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ－、Ｃａ２＋
腎臓機能：
・ 尿量（ｍｌ／ｈ）
・ 血清クレアチニンレベル（ｕｍｏｌ／ｌ）
・ クレアチニンクリアランス（ｍｌ／分／１００ｇ）
・ 腎酸素消費（ｍｌ／分／グラム（ｐＯ２動脈－ｐＯ２静脈）×（流速）／体重（gewicht））、ナトリウム排泄率（ＦＥＮａ＝［Ｎａ＋］尿×クレアチン濃度血漿／［Ｎａ＋］血漿×クレアチン濃度尿）
損傷マーカー：
・ ＡＳＴ
・ ＬＤＨ
・ サイトカイン：ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＣＲＰ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＣＸＣＬ－１０、ＰＡＩ－１
灌流前および灌流後：
・ 重量
血液気体測定：
・ 動脈：ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ－、Ｃａ２＋
・ 静脈：ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｃｌ－、Ｃａ２＋
腎臓機能：
・ 尿量（ｍｌ／ｈ）
・ 血清クレアチニンレベル（ｕｍｏｌ／ｌ）
・ クレアチニンクリアランス（ｍｌ／分／１００ｇ）
・ 腎酸素消費（ｍｌ／分／グラム（ｐＯ２動脈－ｐＯ２静脈）×（流速）／体重（gewicht））、ナトリウム排泄率（ＦＥＮａ＝［Ｎａ＋］尿×クレアチン濃度血漿／［Ｎａ＋］血漿×クレアチン濃度尿）
損傷マーカー：
・ ＡＳＴ
・ ＬＤＨ
・ サイトカイン：ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＣＲＰ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＣＸＣＬ－１０、ＰＡＩ－１
【0233】
腎バイオプシーを、手順のＴ０およびＴｅｎｄで実施して、下記を測定する：
・ ＡＴＰ
・ 補体
・ 組織学
・ 染色Ｈ＆Ｅ形態、ＰＭＮ浸潤物、ＩＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、ＭＰＯ
・ ＡＴＰ
・ 補体
・ 組織学
・ 染色Ｈ＆Ｅ形態、ＰＭＮ浸潤物、ＩＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、ＭＰＯ
【0234】
７．１．３．結果
予備結果において、ＣＥＲ－００１を補充していないＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いて保存した外移腎臓に対して、ＣＥＲ－００１を補充したＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いて保存した外移腎臓において、腎流体力学、炎症性サイトカインレベル、および組織学の改善が観察された。
予備結果において、ＣＥＲ－００１を補充していないＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いて保存した外移腎臓に対して、ＣＥＲ－００１を補充したＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いて保存した外移腎臓において、腎流体力学、炎症性サイトカインレベル、および組織学の改善が観察された。
【0235】
７．２．[実施例２]：ヒト内皮細胞および尿細管上皮細胞を保護するためのＣＥＲ－００１の有効性のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価
このｉｎ ｖｉｔｒｏ研究の目的は、内皮細胞および尿細管外皮細胞に関するＣＥＲ－００１保護の分子メカニズムを評価することである。Ｃ５ａおよびＨ２０２刺激、続くＣＥＲ－００１への曝露後のヒト内皮細胞および尿細管上皮細胞に対するＣＥＲ－００１（５０μｇ／ｍｌおよび５００μｇ／ｍｌ）の効果を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価する。Ｃ５ａ補体構成成分は、細胞培養において強力な炎症を誘導することが可能な最も強力な補体アナフィラトキシンであり、阻血／再灌流関連免疫活性化を模倣するのに使用される（Peng et al., 2012, J Am Soc Nephrol. 23(9):1474-1485；Curci et al., 2014, Nephrol Dial Transplant. 29(4):799-808；Franzin et al., 2020, Front Immunol. 11:734）。ＣＥＲ－００１による前処置、続くＣ５ａおよびＨ２０２刺激も評価する。
このｉｎ ｖｉｔｒｏ研究の目的は、内皮細胞および尿細管外皮細胞に関するＣＥＲ－００１保護の分子メカニズムを評価することである。Ｃ５ａおよびＨ２０２刺激、続くＣＥＲ－００１への曝露後のヒト内皮細胞および尿細管上皮細胞に対するＣＥＲ－００１（５０μｇ／ｍｌおよび５００μｇ／ｍｌ）の効果を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価する。Ｃ５ａ補体構成成分は、細胞培養において強力な炎症を誘導することが可能な最も強力な補体アナフィラトキシンであり、阻血／再灌流関連免疫活性化を模倣するのに使用される（Peng et al., 2012, J Am Soc Nephrol. 23(9):1474-1485；Curci et al., 2014, Nephrol Dial Transplant. 29(4):799-808；Franzin et al., 2020, Front Immunol. 11:734）。ＣＥＲ－００１による前処置、続くＣ５ａおよびＨ２０２刺激も評価する。
【0236】
下記の分析を実施する：
・ バイタリティー検査（ＭＴＴ、アネキシンＶ／ＰＩ）
・ サイトカイン（ＩＬ－６、ＭＣＰ－１として）に関するＥＬＩＳＡ検査
・ 酸化的ストレス分析に関する検査（即ち、ＡＯＰＰ ＡＳＳＡＹ ＫＩＴ Ｏｘｉｓｅｌｅｃｔ）
・ ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１
・内皮細胞におけるＳＲ－ＢＩによるシグナル伝達経路分析およびＨＤＬ媒介性シグナル伝達を検出するためのｅＮＯＳタンパク質におけるＳｅｒ １１７７のリン酸化に関するウェスタンブロット（Uittenbogaard et al., 2000, J Biol Chem, 275:11278-11283；Adelheid Kratzer et al., 2014, Cardiovascular Research, Vol. 103(3): 350-361）。
・ バイタリティー検査（ＭＴＴ、アネキシンＶ／ＰＩ）
・ サイトカイン（ＩＬ－６、ＭＣＰ－１として）に関するＥＬＩＳＡ検査
・ 酸化的ストレス分析に関する検査（即ち、ＡＯＰＰ ＡＳＳＡＹ ＫＩＴ Ｏｘｉｓｅｌｅｃｔ）
・ ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭ－１
・内皮細胞におけるＳＲ－ＢＩによるシグナル伝達経路分析およびＨＤＬ媒介性シグナル伝達を検出するためのｅＮＯＳタンパク質におけるＳｅｒ １１７７のリン酸化に関するウェスタンブロット（Uittenbogaard et al., 2000, J Biol Chem, 275:11278-11283；Adelheid Kratzer et al., 2014, Cardiovascular Research, Vol. 103(3): 350-361）。
【0237】
ＣＥＲ－００１は、Ｃ５ａおよびＨ２０２刺激後に免疫活性化を低減する。
【0238】
７．３．[実施例３]：ＥＣＤおよびＤＣＤドナー由来の廃棄される腎臓の品質を改善するためのｅｘ－ｖｉｖｏ正常温度機械灌流におけるＣＥＲ－００１の使用
この実施例の目的は、ＣＥＲ－００１によるＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の補充に基づく新たな正常温度未満の保存戦略の状況において腎臓機能、内皮機能不全、サイトカイン放出および組織学的損傷のレベルを比較することである。廃棄されるＤＣＤおよびＥＣＤ腎臓のｅｘ－ｖｉｖｏ灌流中の腎臓機能、炎症、アポトーシス、内皮機能不全および移植脈管障害を評価する。この研究の目標の１つは、ＣＥＲ－００１の送達によって臓器移植用の市販の灌流システムを最適化して、移植片生着を改善することである。
この実施例の目的は、ＣＥＲ－００１によるＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の補充に基づく新たな正常温度未満の保存戦略の状況において腎臓機能、内皮機能不全、サイトカイン放出および組織学的損傷のレベルを比較することである。廃棄されるＤＣＤおよびＥＣＤ腎臓のｅｘ－ｖｉｖｏ灌流中の腎臓機能、炎症、アポトーシス、内皮機能不全および移植脈管障害を評価する。この研究の目標の１つは、ＣＥＲ－００１の送達によって臓器移植用の市販の灌流システムを最適化して、移植片生着を改善することである。
【0239】
７．３．１．研究設計
研究は２つの群を有する。両方の群において、腎臓は、非管理の心停止後臓器提供（ｕＤＣＤ）ドナーおよび／または拡大基準ドナー（ＥＣＤ）由来であるか、あるいは組織学的スコア（Ｋａｒｐｉｎｓｋｙスコア）ならびに腎臓ドナーリスク指数（ＫＤＲＩ）および腎臓ドナープロファイル指数（ＫＤＰＩ）などの移植片転帰を予測することが可能な指標に基づいて移植可能な臓器ではないと断言されている。
研究は２つの群を有する。両方の群において、腎臓は、非管理の心停止後臓器提供（ｕＤＣＤ）ドナーおよび／または拡大基準ドナー（ＥＣＤ）由来であるか、あるいは組織学的スコア（Ｋａｒｐｉｎｓｋｙスコア）ならびに腎臓ドナーリスク指数（ＫＤＲＩ）および腎臓ドナープロファイル指数（ＫＤＰＩ）などの移植片転帰を予測することが可能な指標に基づいて移植可能な臓器ではないと断言されている。
【0240】
ＫＤＲＩは、年齢、高血圧および糖尿病の有病率、死因、および血清クレアチニン（ｓＣｒ）レベルを含むドナー因子を使用した移植片評価および意思決定のために開発された。ＫＤＲＩに倣って、ＫＤＰＩは、術後の移植片機能の予測および配分プロセスに広く使用されている。
【0241】
ＫＤＲＩおよびＫＤＰＩのスコアは、幾つかの臨床因子に基づいている。しかしながら、年齢は、これらのスコアを算出するのに最も重要な因子である。
【0242】
２つの群は以下である：
・ 従来のＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いたｉｎ－ｓｉｔｕ低温フラッシュ、続く６時間の正常温度機械灌流による標準的な腎臓獲得を受ける対照群。
・０．４ｍｇ／ｍｌでＣＥＲ－００１を補充した従来のＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いたｉｎ－ｓｉｔｕ低温フラッシュ、続く６時間の正常温度機械灌流による標準的な腎臓獲得を受けるＣＥＲ－００１群。
・ 従来のＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いたｉｎ－ｓｉｔｕ低温フラッシュ、続く６時間の正常温度機械灌流による標準的な腎臓獲得を受ける対照群。
・０．４ｍｇ／ｍｌでＣＥＲ－００１を補充した従来のＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液を用いたｉｎ－ｓｉｔｕ低温フラッシュ、続く６時間の正常温度機械灌流による標準的な腎臓獲得を受けるＣＥＲ－００１群。
【0243】
７．３．２．分析
分析される主な出力は、尿産生を含む腎臓機能である：
分析される主な出力は、尿産生を含む腎臓機能である：
【0244】
腎機能：
・ 尿量（ｍｌ／ｈ）
・ 血清クレアチンレベル（ｕｍｏｌ／ｌ）
・ クレアチニンクリアランス（ｍｌ／分／１００ｇ）
・ 腎酸素消費（ｍｌ／分／グラム（ｐＯ２動脈－ｐＯ２静脈）×（流速）／体重）、ナトリウム排泄率（ＦＥＮａ＝［Ｎａ＋］尿×クレアチン濃度血漿／［Ｎａ＋］血漿×クレアチン濃度尿）
・ 尿量（ｍｌ／ｈ）
・ 血清クレアチンレベル（ｕｍｏｌ／ｌ）
・ クレアチニンクリアランス（ｍｌ／分／１００ｇ）
・ 腎酸素消費（ｍｌ／分／グラム（ｐＯ２動脈－ｐＯ２静脈）×（流速）／体重）、ナトリウム排泄率（ＦＥＮａ＝［Ｎａ＋］尿×クレアチン濃度血漿／［Ｎａ＋］血漿×クレアチン濃度尿）
【0245】
灌流前および灌流後：
・ 体重
・ 体重
【0246】
血液気体測定：
・ 動脈：ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＣＬ－、Ｃａ２＋
・ 静脈 ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＣＬ－、Ｃａ２＋
・ 動脈：ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＣＬ－、Ｃａ２＋
・ 静脈 ｐＨ、ｐＯｓ、ｐＣＯ２、ＨＣＯ３－、塩基過剰、乳酸塩、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＣＬ－、Ｃａ２＋
【0247】
腎バイオプシーを、Ｔ０およびＴｅｎｄで実施して、下記を測定する：
・ ＡＴＰ
・ 補体
・ 組織学
・ 染色Ｈ＆Ｅ形態、ＰＭＮ浸潤物
・ ＩＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、ＭＰＯ
・ ＡＴＰ
・ 補体
・ 組織学
・ 染色Ｈ＆Ｅ形態、ＰＭＮ浸潤物
・ ＩＣＡＭ－１、Ｐ－セレクチン、ＭＰＯ
【0248】
灌流パラメーター：
・ 灌流液溶液Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液＋全血（ヘマトクリットＨＣＴに基づいて１：１／１：３の比）
・ Ｈｂ：７ｍｇ／ｄＬ超（未満の場合、回収手順中に細胞セーバーデバイスを介して得られた白血球欠乏の無血漿血液が添加される）
・ 未分画ヘパリン（ＵＦＨ）のＵ．Ｉ．
・ 灌流圧：７５ｍｍＨｇ超
・ 腎静脈圧：０～３ｍｍＨｇ
・ 流速：代謝パラメーターおよび血管抵抗に基づいて調節
・ 灌流温度：３２℃
・ 灌流液溶液Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液＋全血（ヘマトクリットＨＣＴに基づいて１：１／１：３の比）
・ Ｈｂ：７ｍｇ／ｄＬ超（未満の場合、回収手順中に細胞セーバーデバイスを介して得られた白血球欠乏の無血漿血液が添加される）
・ 未分画ヘパリン（ＵＦＨ）のＵ．Ｉ．
・ 灌流圧：７５ｍｍＨｇ超
・ 腎静脈圧：０～３ｍｍＨｇ
・ 流速：代謝パラメーターおよび血管抵抗に基づいて調節
・ 灌流温度：３２℃
【0249】
モニタリング
・ 流速（ｍＬ／分）：連続的なモニタリング
・ 圧力（ｍｍＨｇ）：連続的なモニタリング
・ 腎臓内抵抗（ｍｍＨｇ／ｍＬ／分）：１０分で点検
・ 血液－気体分析（酸－塩基恒常性、電解質、Ｈｂ、ＰａＯ２、ＰａＣＯ２など）：３０分で点検
・ 代謝パラメーター（ＤＯ２、ＶＯ２、Ｏ２ＥＲ）：３０分で点検
・ 灌流温度：連続的なモニタリング
・ 流速（ｍＬ／分）：連続的なモニタリング
・ 圧力（ｍｍＨｇ）：連続的なモニタリング
・ 腎臓内抵抗（ｍｍＨｇ／ｍＬ／分）：１０分で点検
・ 血液－気体分析（酸－塩基恒常性、電解質、Ｈｂ、ＰａＯ２、ＰａＣＯ２など）：３０分で点検
・ 代謝パラメーター（ＤＯ２、ＶＯ２、Ｏ２ＥＲ）：３０分で点検
・ 灌流温度：連続的なモニタリング
【0250】
損傷マーカー：
・ ＡＳＴ
・ ＬＤＨ
・サイトカイン：ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＣＲＰ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－アルファ、ＣＸＣＬ－１０、ＰＡＩ－１
・ ＡＳＴ
・ ＬＤＨ
・サイトカイン：ＩＬ－６、ＭＣＰ－１、ＣＲＰ、ＩＬ－８、ＴＮＦ－アルファ、ＣＸＣＬ－１０、ＰＡＩ－１
【0251】
７．３．３．結果
ＣＥＲ－００１の存在下でＮＭＰに付した腎臓は、ＣＥＲ－００１の非存在下でＮＭＰに付した腎臓と比較して、腎損傷の低減を示す。理論に縛られないが、ＣＥＲ－００１、ならびに他の脂質結合タンパク質ベースの複合体は、本明細書中に記載される臓器保存溶液において使用される場合、例えば、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、および気管において、臓器機能を保存する助けとなり、臓器損傷を制限することができると考えられる。
ＣＥＲ－００１の存在下でＮＭＰに付した腎臓は、ＣＥＲ－００１の非存在下でＮＭＰに付した腎臓と比較して、腎損傷の低減を示す。理論に縛られないが、ＣＥＲ－００１、ならびに他の脂質結合タンパク質ベースの複合体は、本明細書中に記載される臓器保存溶液において使用される場合、例えば、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、および気管において、臓器機能を保存する助けとなり、臓器損傷を制限することができると考えられる。
【0252】
７．４．[実施例４]：ブタｅｘ ｖｉｖｏ灌流モデルにおける阻血／再灌流傷害を低減するためのＣＥＲ－００１の有効性の評価
７．４．１．材料および方法
総計１０匹のブタを、両耳側電気ショックで気絶させ、続いて、正常な屠殺場の手順に従って血を抜いた（ＵＮＩ Ｅｎ ＩＳＯ ９００１）。温阻血の６０分後、腎臓を流して、４℃にて乳酸リンゲル液５００ｍｌで冷却し、これが冷阻血の開始を示した（Ｔ－１）。次に、腎臓を一晩低温保管して、損傷のレベルを増加させた。翌日、臓器由来の血管を露出させて、腎灌流機デバイスに接続した（Ｔ０）。ＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液およびＣＥＲ－００１を補充していないＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を使用して、酸素処理した拍動性低温機械灌流（ＨＭＰ）を、平均動脈圧２５ｍｍＨｇで４時間実施した（Ｔ４またはＴｅｎｄ）。
７．４．１．材料および方法
総計１０匹のブタを、両耳側電気ショックで気絶させ、続いて、正常な屠殺場の手順に従って血を抜いた（ＵＮＩ Ｅｎ ＩＳＯ ９００１）。温阻血の６０分後、腎臓を流して、４℃にて乳酸リンゲル液５００ｍｌで冷却し、これが冷阻血の開始を示した（Ｔ－１）。次に、腎臓を一晩低温保管して、損傷のレベルを増加させた。翌日、臓器由来の血管を露出させて、腎灌流機デバイスに接続した（Ｔ０）。ＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液およびＣＥＲ－００１を補充していないＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を使用して、酸素処理した拍動性低温機械灌流（ＨＭＰ）を、平均動脈圧２５ｍｍＨｇで４時間実施した（Ｔ４またはＴｅｎｄ）。
【0253】
過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）染色によってＴ０、Ｔ２、およびＴｅｎｄで、組織学的分析を実施した。デジタルスライドを、ＡｐｅｒｉｏＳｃａｎＳｃｏｐｅ ＣＳ２デバイス（Ａｐｅｒｉｏ、Ｖｉｓｔａ社、ＣＡ、米国）を使用することによって獲得および分析した。尿細管傷害スコア測定を、Ａｐｅｒｉｏ Ｓｃａｎスコアソフトウェアを使用して実施した。尿細管損傷は、２名の盲検観測者によって半定量的にスコア付けした。各動物におけるスコア指数は、得られたスコア全ての平均値として表し、またメジアン±ＩＱＲと表した。
【0254】
ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）およびＴＮＦ－αレベルならびにアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼレベルを、灌流液中でＴ－１、Ｔ０、Ｔ２、およびＴｅｎｄにて測定した。
【0255】
ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＩＬ－６およびエンドセリン－１（ＥＴ－１）遺伝子発現レベルを、腎バイオプシーにおいてＴ０およびＴｅｎｄにて、ｑＲＴ－ＰＣＲによって測定した。
【0256】
７．４．２．結果
ＣＥＲ－００１を補充していないＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓に対して、ＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓において、腎血管抵抗パラメーターの改善が観察された（図１Ａ～１Ｂ）。
ＣＥＲ－００１を補充していないＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓に対して、ＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓において、腎血管抵抗パラメーターの改善が観察された（図１Ａ～１Ｂ）。
【0257】
組織学的分析は、心臓死後のブタ腎臓の腎形態の典型的な変化を示した。これらの変化は、尿細管刷子縁の損失、尿細管細胞の空胞形成および拡張を含み、一晩の静的低温保管（ＳＣＳ）後により明白になった（図２Ａ、Ｔ０）。従来のＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いたＨＭＰ処置は、腎生理学的形態を部分的に保存し、傷害を低減した（図２Ａ、対照）。しかしながら、ＣＥＲ－００１補充溶液を用いたＨＭＰ処置は、膨張および尿細管上皮細胞のネクローシス／アポトーシスの低減、扁平上皮の減少、浮腫の低減および腎組織の全体的な改善を伴って、腎組織を著しく改善した（図２Ａ、「ＣＥＲ００１」）。
【0258】
ＣＥＲ－００１を補充していないＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓に対して、ＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓において、尿細管傷害が低減された（図２Ｂ）。炎症性サイトカインの灌流液分析により、非補充溶液と比較して、ＣＥＲ－００１補充保存溶液中でのＨＭＰ処置後にＭＣＰ－１およびＴＮＦ－αレベルの低減が明らかとなった（図２Ｃ～２Ｄ）。アスパラギン酸トランスフェラーゼレベル（腎傷害のマーカーとして評価される）は、ＣＥＲ－００１を補充していないＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した外植腎臓に対して、ＣＥＲ－００１を補充したＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて保存した腎臓に関して、Ｔ２およびＴｅｎｄで低減された（図２Ｅ）。
【0259】
ＣＥＲ－００１補充ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液を用いて灌流させた腎臓おけるＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＩＬ－６およびＥＴ－１遺伝子発現は、非補充溶液を用いて灌流させた腎臓と比較して減少した（図３Ａ～３Ｃ）。
【0260】
７．５．[実施例５]：ヒト内皮細胞を保護するためのＣＥＲ－００１の有効性のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価
このｉｎ ｖｉｔｒｏ研究の目的は、内皮細胞に関するＣＥＲ－００１保護の分子メカニズムを評価することであった。
このｉｎ ｖｉｔｒｏ研究の目的は、内皮細胞に関するＣＥＲ－００１保護の分子メカニズムを評価することであった。
【0261】
内皮細胞において、Ｓｅｒ－１１７７でのｅＮＯＳのリン酸化は、ｉｎ ｖｉｖｏ ＮＯ生成を調節し、保護的な抗アポトーシス、抗酸化および抗炎症性効果を伴って、酵素のＣａ２＋感度およびＮＯ形成の速度の両方を変更させる。通常、Ｓｅｒ－１１７７でのｅＮＯＳのリン酸化は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）によって刺激される。Ｔｈｒ－４９５のリン酸化は、カルモジュリンおよびカベオリン相互作用の調節を通じてこのプロセスに間接的に影響を及ぼす（Chen et al., 2008, J Biol Chem. 283(40):27038-27047）。
【0262】
この研究において、ヒト内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ＥｎｄｏＧｒｏ培地中で成長させた後、（ｉ）１０－７ｎＭのＣ５ａとともに６０分間、（ｉｉ）４μｇ／ｍｌのＬＰＳとともに６０分間、（ｉｉｉ）ＣＥＲ－００１（５～１００μｇ／ｌの範囲）とともに６０分間、または（ｉｖ）１０－７ｎＭのＣ５ａとともに３０分間、続いてＣＥＲ－００１とともに３０分間、インキュベートした。５０ｎｇ／ｍｌのＶＥＧＦとともに６０分間インキュベートしたＨＵＶＥＣ細胞を、Ｓｅｒ－１１７７でのｅＮＯＳのリン酸化の陽性対照として使用した。Ｓｅｒ １１７７－ｅＮＯＳのリン酸化は、ＦＡＣＳによって分析した。
【0263】
ＣＥＲ－００１は、Ｃ５ａ刺激後に内皮細胞機能不全を低減させた（図４）。未処置の条件（基礎）と比較して、Ｃ５ａおよびＬＰＳはともに、ホスホＳｅｒ１１７７－ｅＮＯＳの著しい減少を誘導したのに対して、ＣＥＲ－００１は、ホスホＳｅｒ１１７７－ｅＮＯＳレベルを増加させた。Ｃ５ａに３０分間、続いてＣＥＲ－００１にもう３０分間曝露した内皮細胞は、Ｃ５ａ条件と比較して、ホスホＳｅｒ１１７７－ｅＮＯＳレベルの回復を示し、ＣＥＲ－００１の保護的な役割を示した。
【0264】
７．６．[実施例６]：腎臓の品質を改善するためのｅｘ－ｖｉｖｏ正常温度機械灌流におけるＣＥＲ－００１の使用
腎臓を、従来の臓器保存溶液を用いた、またはＣＥＲ－００１を補充した従来の臓器保存溶液を用いた正常温度機械灌流（ＮＭＰ）に付した。
腎臓を、従来の臓器保存溶液を用いた、またはＣＥＲ－００１を補充した従来の臓器保存溶液を用いた正常温度機械灌流（ＮＭＰ）に付した。
【0265】
結果を図５Ａ～５Ｅに示す。ＣＥＲ－００１を補充していない従来の溶液を用いて灌流させたＮＭＰ灌流腎臓と比較して、ＣＥＲ－００１を補充した従来の溶液を用いて灌流させたＮＭＰ灌流腎臓の血管腎抵抗（図５Ａ～５Ｃ）および腎流（図５Ｄ）において、著しい改善が観察された。尿量は、ＣＥＲ－００１補充溶液を用いて灌流させた腎臓においてレベルの増加を示した（図５Ｅ）。
【0266】
８．特定実施形態
本開示の様々な態様は、下記の番号が付されたパラグラフに記載される実施形態に記載されている。
１．臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２．再構成されたＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体である、実施形態１に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
３．スフィンゴミエリンを含む、実施形態１または実施形態２に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
４．負に帯電された脂質を含む、実施形態１から３のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
５．前記負に帯電された脂質が、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ＤＰＰＧ）またはその塩である、実施形態４に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
６．ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６である、実施形態２に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
７．ＣＥＲ－００１である、実施形態６に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
８．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－２０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－２０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態７に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
９．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－１０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－１０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態７に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１０．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態７に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１１．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの配列番号１のアミノ酸２５～２６７のアミノ酸配列を有する、実施形態７から１０のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１２．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、組換え的に発現される、実施形態７から１１のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１３．前記ＣＥＲ－００１が、天然スフィンゴミエリンを含む、実施形態７から１２のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１４．前記天然スフィンゴミエリンが、鶏卵スフィンゴミエリンである、実施形態１３に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１５．前記ＣＥＲ－００１が、合成スフィンゴミエリンを含む、実施形態７から１４のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１６．前記合成スフィンゴミエリンが、パルミトイルスフィンゴミエリンである、実施形態１５に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１７．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９５％均質である、実施形態７から１６のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１８．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９７％均質である、実施形態７から１７のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１９．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９８％均質である、実施形態７から１８のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２０．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９９％均質である、実施形態７から１９のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２１．ＡｐｏｍｅｒまたはＣａｒｇｏｍｅｒである、実施形態１から５のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２２．実施形態１から２１のいずれか１つに記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液。
２３．脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液。
２４．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、再構成されたＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体である、実施形態２３の臓器保存溶液。
２５．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、スフィンゴミエリンを含む、実施形態２３または実施形態２４の臓器保存溶液。
２６．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、負に帯電された脂質を含む、実施形態２３から２５のいずれか１つの臓器保存溶液。
２７．前記負に帯電された脂質が、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ＤＰＰＧ）またはその塩である、実施形態２６の臓器保存溶液。
２８．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６である、実施形態２４の臓器保存溶液。
２９．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＣＥＲ－００１である、実施形態２８の臓器保存溶液。
３０．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－２０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－２０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態２９の臓器保存溶液。
３１．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－１０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－１０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態２９の臓器保存溶液。
３２．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態２９の臓器保存溶液。
３３．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの配列番号１のアミノ酸２５～２６７のアミノ酸配列を有する、実施形態２９から３２のいずれか１つの臓器保存溶液。
３４．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、組換え的に発現される、実施形態２９から３３のいずれか１つの臓器保存溶液。
３５．前記ＣＥＲ－００１が、天然スフィンゴミエリンを含む、実施形態２９から３４のいずれか１つの臓器保存溶液。
３６．前記天然スフィンゴミエリンが、鶏卵スフィンゴミエリンである、実施形態３５の臓器保存溶液。
３７．前記ＣＥＲ－００１が、合成スフィンゴミエリンを含む、実施形態２９から３６のいずれか１つの臓器保存溶液。
３８．前記合成スフィンゴミエリンが、パルミトイルスフィンゴミエリンである、実施形態３７の臓器保存溶液。
３９．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９５％均質である、実施形態２９から３８のいずれか１つの臓器保存溶液。
４０．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９７％均質である、実施形態２９から３９のいずれか１つの臓器保存溶液。
４１．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９８％均質である、実施形態２９から４０のいずれか１つの臓器保存溶液。
４２．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９９％均質である、実施形態２９から４１のいずれか１つの臓器保存溶液。
４３．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＡｐｏｍｅｒまたはＣａｒｇｏｍｅｒである、実施形態２３から２７のいずれか１つの臓器保存溶液。
４４．緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、実施形態２２から４３のいずれか１つの臓器保存溶液。
４５．緩衝液を含む、実施形態４４の臓器保存溶液であって、任意選択で、前記緩衝液が、ホウ酸塩、ホウ酸塩－ポリオール複合体、コハク酸塩、リン酸塩緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、炭酸塩緩衝剤、有機緩衝剤、ヒスチジンなどのアミノ酸緩衝剤、またはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４６．抗酸化剤を含む、実施形態４４または実施形態４５の保存溶液であって、任意選択で、前記抗酸化剤が、アロプリノール、還元型グルタチオン、トリプトファンまたはｌ－アルギニンまたはヒスチジンなどのＲＯＳ除去アミノ酸、レシチン化スーパーオキシドジムスターゼ（ｌｅｃ－ＳＯＤ）、Ｈ２Ｓ、Ｎ－アセチルシステイン、プロポフォール、ＴＭＺ、ｒｈ－ＢＭＰ－７、トロロクス、エダラボン、セレン、ニカラベン、プロスタグランジンＥ１、タンシノンＩＩＡまたはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４７．栄養分および／または代謝基質を含む、実施形態４４から４６のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記栄養分および／または代謝基質が、トリプトファン、グルタミン酸、ヒスチジン、ｌ－アルギニン、Ｎ－アセチルシステイン、ｄ－システインなどのアミノ酸、またはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４８．電解質を含む、実施形態４４から４７のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記電解質が、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ－、ＳＯ４ ２－、ＰＯ４ ３－、ＨＣＯ３－、クエン酸塩またはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４９．コロイドを含む、実施形態４４から４８のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記コロイドが、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）（例えば、５０ｋＤａ）、デキストラン（例えば、４０ｋＤａ）、ＰＥＧ３５（３５ｋＤａ）もしくはＰＥＧ２０（２０ｋＤａ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、またはそれらの組合せである、臓器保存溶液。
５０．非透過性物質を含む、実施形態４４から４９のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記非透過性物質が、グルコース、マンニトール、スクロース、ラフィノース、ラクトビオン酸塩またはそれらの組合せである、臓器保存溶液。
５１．気体を含む、実施形態４４から５０のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記気体が、酸素（Ｏ２）、水素（Ｈ２）、一酸化炭素（ＣＯ）、酸化窒素（ＮＯ）、硫化水素（Ｈ２Ｓ）、アルゴン（Ａｒ）、またはそれらの組合せである、臓器保存溶液。
５２．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態４４の臓器保存溶液。
５３．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態４５の臓器保存溶液。
５４．表２に記載される濃度±２０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５５．表２に記載される濃度±１５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５６．表２に記載される濃度±１０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５７．表２に記載される濃度±５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５８．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３から５７のいずれか１つの臓器保存溶液。
５９．ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態４４の臓器保存溶液。
６０．ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態５９の臓器保存溶液。
６１．セクション６．２に記載される濃度±２０％、±１５％、±１０％、または±５％でＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態６０の臓器保存溶液。
６２．０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ（例えば、０．３ｍｇ／ｍｌから０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌから０．６ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌ、または２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ）の濃度で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、実施形態２２から６１のいずれか１つの臓器保存溶液。
６３．０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、実施形態２２から６１のいずれかの臓器保存溶液。
６４．脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキットであって、任意選択で、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、実施形態１から２１のいずれか１つに記載されている、キット。
６５．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、実施形態６４のキット。
６６．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６５のキット。
６７．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６６のキット。
６８．表２に記載される濃度±２０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
６９．表２に記載される濃度±１５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
７０．表２に記載される濃度±１０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
７１．表２に記載される濃度±５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
７２．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７から７１のいずれか１つのキット。
７３．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態６５のキット。
７４．ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態７３のキット。
７５．セクション６．２に記載される濃度±２０％、±１５％、±１０％、または±５％でＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態７４のキット。
７６．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を含有する溶液を含む、実施形態６４から７５のいずれか１つのキット。
７７．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体の溶液を含む、実施形態６４から７６のいずれか１つのキット。
７８．凍結乾燥形態で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、実施形態６４から７６のいずれか１つのキット。
７９．実施形態６４から７８のいずれか１つのキットから臓器保存溶液を調製するプロセスであって、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体および前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を組み合わせることを含む、プロセス。
８０．脂質結合タンパク質ベースの複合体および臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を組み合わせることを含む、臓器保存溶液を調製するプロセスであって、任意選択で、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、実施形態１から２１のいずれか１つに記載されている、プロセス。
８１．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、実施形態８０のプロセス。
８２．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態８１のプロセス。
８３．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態８２のプロセス。
８４．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±２０％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８５．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±１５％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８６．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±１０％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８７．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±５％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８８．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態８３から８７のいずれか１つのプロセス。
８９．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態８１のプロセス。
９０．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態８９のプロセス。
９１．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、セクション６．２に記載される濃度±２０％、±１５％、±１０％、または±５％でＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態９０のプロセス。
９２．実施形態８０から９１のいずれか１つのプロセスによって生産される臓器保存溶液。
９３．密封容器中に実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液を含む臓器保存溶液製品。
９４．前記容器が袋である、実施形態９３の臓器保存溶液製品。
９５．前記容器が、前記保存溶液１Ｌを含む、実施形態９３または実施形態９４の臓器保存溶液製品。
９６．（ａ）実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液または実施形態９３から９５のいずれか１つの臓器保存溶液製品と、（ｂ）灌流機および／または臓器とを含むシステム。
９７．灌流機を含む、実施形態９６のシステム。
９８．前記灌流機が、心肺装置である、実施形態９７のシステム。
９９．臓器を含む、実施形態９６から９８のいずれか１つのシステム。
１００．前記臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、実施形態９９のシステム。
１０１．前記臓器が、腎臓である、実施形態１００のシステム。
１０２．前記臓器が、哺乳動物由来である、実施形態９６から１０１のいずれか１つのシステム。
１０３．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１０２のシステム。
１０４．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１０３のシステム。
１０５．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１０３のシステム。
１０６．（ａ）実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液または実施形態９３から９５のいずれか１つの臓器保存溶液製品と、（ｂ）組織とを含むシステム。
１０７．前記組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、実施形態１０６のシステム。
１０８．前記組織が、角膜組織である、実施形態１０７のシステム。
１０９．前記組織が、哺乳動物由来である、実施形態１０６から１０８のいずれか１つのシステム。
１１０．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１０９のシステム。
１１１．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１１０のシステム。
１１２．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１１０のシステム。
１１３．ドナー臓器を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液と接触させることを含む、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス。
１１４．前記臓器を、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１３のプロセス。
１１５．前記臓器を、最大２日間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１６．前記臓器を、最大３６時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１７．前記臓器を、最大１日間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１８．前記臓器を、最大１２時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１９．前記臓器を、少なくとも１時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２０．前記臓器を、少なくとも２時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２１．前記臓器を、少なくとも４時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２２．前記臓器を、少なくとも６時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２３．前記機械灌流が、実施形態９６から１０５のいずれか１つのシステムを使用して実施される、実施形態１１４から１２２のいずれか１つのプロセス。
１２４．前記臓器保存溶液が、全血で希釈される、実施形態１１３から１２３のいずれか１つのプロセス。
１２５．臓器保存溶液対全血の容量：容量比が、１：１から１：３である、実施形態１２４のプロセス。
１２６．前記臓器保存溶液が、希釈されない、実施形態１１３から１２３のいずれか１つのプロセス。
１２７．前記機械灌流が、正常温度、任意選択で３０℃から３８℃である、実施形態１１４から１２６のいずれか１つのプロセス。
１２８．前記機械灌流が、８℃から２５℃、任意選択で２０℃から２５℃である、実施形態１１４から１２６のいずれか１つのプロセス。
１２９．前記機械灌流が、正常温度未満、任意選択で２℃から８℃である、実施形態１１４から１２６のいずれか１つのプロセス。
１３０．前記臓器を、前記機械灌流の前に前記保存溶液で流すことを含む、実施形態１１４から１２９のいずれか１つのプロセスであって、任意選択で、前記臓器保存溶液が、前記臓器を流す前に２℃から８℃である、プロセス。
１３１．任意選択で２℃から６℃で、前記機械灌流の前および／または後に前記臓器の低温保管をさらに含む、実施形態１１４から１３０のいずれか１つのプロセス。
１３２．任意選択で２℃から６℃で、機械灌流の非存在下で前記臓器の低温保管を含む、実施形態１１３のプロセス。
１３３．最大１週間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３４．最大５日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３５．最大４日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３６．最大３日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３７．最大２日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３８．最大３６時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３９．最大１日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１４０．最大１２時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１４１．少なくとも１時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４２．少なくとも２時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４３．少なくとも４時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４４．少なくとも６時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４５．前記ドナーから前記臓器を取り出す前および／または取り出した後に、前記臓器を、任意選択で、２℃から８℃または２℃から６℃である前記保存溶液で流すことを含む、実施形態１１３から１４４のいずれか１つのプロセス。
１４６．前記保存溶液が、低温保管および／または輸送中の前記臓器の血管系に残される、実施形態１４５のプロセス。
１４７．前記臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、実施形態１１３から１４６のいずれか１つのプロセス。
１４８．前記臓器が、腎臓である、実施形態１４７のプロセス。
１４９．前記臓器が、哺乳動物由来である、実施形態１１３から１４８のいずれか１つのプロセス。
１５０．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１４９のプロセス。
１５１．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１５０のプロセス。
１５２．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１５０のプロセス。
１５３．前記臓器を、前記臓器ドナーから取り出すことをさらに含む、実施形態１１３から１５２のいずれか１つのプロセス。
１５４．実施形態１１３から１５３のいずれか１つのプロセスによって得られた臓器。
１５５．臓器を移植する方法であって、実施形態１５４の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植することを含む、方法。
１５６．ドナー組織を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液と接触させることを含む、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセス。
１５７．前記臓器保存溶液中での前記組織の保管を含む、実施形態１５６のプロセス。
１５８．任意選択で３０℃から３８℃の前記臓器保存溶液における前記組織の正常温度保管を含む、実施形態１５６のプロセス。
１５９．任意選択で２℃から６℃の前記臓器保存溶液における前記組織の低温保管を含む、実施形態１５６のプロセス。
１６０．前記組織を、最大４週間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６１．前記組織を、最大２週間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６２．前記組織を、最大１週間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６３．前記組織を、最大４日間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６４．前記組織を、最大２日間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６５．前記組織を、最大３６時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６６．前記組織を、最大１日間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６７．前記組織を、最大１２時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６８．前記組織を、少なくとも１時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１６９．前記組織を、少なくとも２時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１７０．前記組織を、少なくとも４時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１７１．前記組織を、少なくとも６時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１７２．前記組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、実施形態１５６から１７１のいずれか１つのプロセス。
１７３．前記組織が、角膜組織である、実施形態１７２のプロセス。
１７４．前記組織が、哺乳動物由来である、実施形態１５６から１７３のいずれか１つのプロセス。
１７５．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１７４のプロセス。
１７６．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１７５のプロセス。
１７７．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１７５のプロセス。
１７８．前記組織を、前記組織ドナーから取り出すことをさらに含む、実施形態１５６から１７７のいずれか１つのプロセス。
１７９．実施形態１５６から１７９のいずれか１つのプロセスによって得られた組織。
１８０．組織を移植する方法であって、実施形態１７９の組織を、組織移植を必要とする対象に移植することを含む、方法。
１８１．ａ．ドナー臓器を得るステップ；
ｂ．前記ドナー臓器を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液と接触させるステップであって、
前記接触させるステップは、
ｉ．前記臓器保存溶液を用いた前記臓器の機械灌流、または
ｉｉ．前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管
を含むステップ、および、
ｃ．前記臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植するステップ
とを含む、移植方法。
１８２．前記ドナー臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、実施形態１８１の方法。
１８３．前記接触させるステップが、少なくとも１時間および／または最大１週間の前記臓器保存溶液を用いた前記臓器の機械灌流または低温保管を含む、実施形態１８１または実施形態１８２に記載の方法。
１８４．ａ．ドナー組織を得るステップ；
ｂ．前記ドナー組織を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液中で保管するステップ、
ｃ．前記組織を、組織移植を必要とする対象に移植するステップ
とを含む、移植方法。
１８５．前記ドナー組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、実施形態１８４に記載の方法。
１８６．前記保管することが、少なくとも１時間および／または最大４週間、前記臓器保存溶液を用いて前記組織を保管するステップを含む、実施形態１８４または実施形態１８５に記載の方法。
本開示の様々な態様は、下記の番号が付されたパラグラフに記載される実施形態に記載されている。
１．臓器保存溶液に用いられる脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２．再構成されたＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体である、実施形態１に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
３．スフィンゴミエリンを含む、実施形態１または実施形態２に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
４．負に帯電された脂質を含む、実施形態１から３のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
５．前記負に帯電された脂質が、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ＤＰＰＧ）またはその塩である、実施形態４に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
６．ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６である、実施形態２に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
７．ＣＥＲ－００１である、実施形態６に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
８．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－２０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－２０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態７に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
９．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－１０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－１０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態７に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１０．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態７に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１１．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの配列番号１のアミノ酸２５～２６７のアミノ酸配列を有する、実施形態７から１０のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１２．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、組換え的に発現される、実施形態７から１１のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１３．前記ＣＥＲ－００１が、天然スフィンゴミエリンを含む、実施形態７から１２のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１４．前記天然スフィンゴミエリンが、鶏卵スフィンゴミエリンである、実施形態１３に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１５．前記ＣＥＲ－００１が、合成スフィンゴミエリンを含む、実施形態７から１４のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１６．前記合成スフィンゴミエリンが、パルミトイルスフィンゴミエリンである、実施形態１５に記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１７．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９５％均質である、実施形態７から１６のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１８．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９７％均質である、実施形態７から１７のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
１９．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９８％均質である、実施形態７から１８のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２０．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９９％均質である、実施形態７から１９のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２１．ＡｐｏｍｅｒまたはＣａｒｇｏｍｅｒである、実施形態１から５のいずれか１つに記載の使用のための脂質結合タンパク質ベースの複合体。
２２．実施形態１から２１のいずれか１つに記載の脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液。
２３．脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む臓器保存溶液。
２４．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、再構成されたＨＤＬまたはＨＤＬ疑似体である、実施形態２３の臓器保存溶液。
２５．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、スフィンゴミエリンを含む、実施形態２３または実施形態２４の臓器保存溶液。
２６．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、負に帯電された脂質を含む、実施形態２３から２５のいずれか１つの臓器保存溶液。
２７．前記負に帯電された脂質が、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－［ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）］（ＤＰＰＧ）またはその塩である、実施形態２６の臓器保存溶液。
２８．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＣＥＲ－００１、ＣＳＬ－１１１、ＣＳＬ－１１２、ＣＥＲ－５２２またはＥＴＣ－２１６である、実施形態２４の臓器保存溶液。
２９．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＣＥＲ－００１である、実施形態２８の臓器保存溶液。
３０．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－２０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－２０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態２９の臓器保存溶液。
３１．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７＋／－１０％のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３＋／－１０％の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態２９の臓器保存溶液。
３２．前記ＣＥＲ－００１が、ＡｐｏＡ－Ｉ重量：総リン脂質重量比１：２．７のＡｐｏＡ－Ｉおよびリン脂質ならびにスフィンゴミエリン：ＤＰＰＧ重量：重量比９７：３の前記リン脂質スフィンゴミエリンおよびＤＰＰＧを含むリポタンパク質複合体である、実施形態２９の臓器保存溶液。
３３．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、国際公開第２０１２／１０９１６２号パンフレットの配列番号１のアミノ酸２５～２６７のアミノ酸配列を有する、実施形態２９から３２のいずれか１つの臓器保存溶液。
３４．前記ＡｐｏＡ－Ｉが、組換え的に発現される、実施形態２９から３３のいずれか１つの臓器保存溶液。
３５．前記ＣＥＲ－００１が、天然スフィンゴミエリンを含む、実施形態２９から３４のいずれか１つの臓器保存溶液。
３６．前記天然スフィンゴミエリンが、鶏卵スフィンゴミエリンである、実施形態３５の臓器保存溶液。
３７．前記ＣＥＲ－００１が、合成スフィンゴミエリンを含む、実施形態２９から３６のいずれか１つの臓器保存溶液。
３８．前記合成スフィンゴミエリンが、パルミトイルスフィンゴミエリンである、実施形態３７の臓器保存溶液。
３９．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９５％均質である、実施形態２９から３８のいずれか１つの臓器保存溶液。
４０．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９７％均質である、実施形態２９から３９のいずれか１つの臓器保存溶液。
４１．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９８％均質である、実施形態２９から４０のいずれか１つの臓器保存溶液。
４２．ＣＥＲ－００１が、少なくとも９９％均質である、実施形態２９から４１のいずれか１つの臓器保存溶液。
４３．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、ＡｐｏｍｅｒまたはＣａｒｇｏｍｅｒである、実施形態２３から２７のいずれか１つの臓器保存溶液。
４４．緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、実施形態２２から４３のいずれか１つの臓器保存溶液。
４５．緩衝液を含む、実施形態４４の臓器保存溶液であって、任意選択で、前記緩衝液が、ホウ酸塩、ホウ酸塩－ポリオール複合体、コハク酸塩、リン酸塩緩衝剤、クエン酸塩緩衝剤、酢酸塩緩衝剤、炭酸塩緩衝剤、有機緩衝剤、ヒスチジンなどのアミノ酸緩衝剤、またはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４６．抗酸化剤を含む、実施形態４４または実施形態４５の保存溶液であって、任意選択で、前記抗酸化剤が、アロプリノール、還元型グルタチオン、トリプトファンまたはｌ－アルギニンまたはヒスチジンなどのＲＯＳ除去アミノ酸、レシチン化スーパーオキシドジムスターゼ（ｌｅｃ－ＳＯＤ）、Ｈ２Ｓ、Ｎ－アセチルシステイン、プロポフォール、ＴＭＺ、ｒｈ－ＢＭＰ－７、トロロクス、エダラボン、セレン、ニカラベン、プロスタグランジンＥ１、タンシノンＩＩＡまたはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４７．栄養分および／または代謝基質を含む、実施形態４４から４６のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記栄養分および／または代謝基質が、トリプトファン、グルタミン酸、ヒスチジン、ｌ－アルギニン、Ｎ－アセチルシステイン、ｄ－システインなどのアミノ酸、またはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４８．電解質を含む、実施形態４４から４７のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記電解質が、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋、Ｃｌ－、ＳＯ４ ２－、ＰＯ４ ３－、ＨＣＯ３－、クエン酸塩またはそれらの組合せを含む、臓器保存溶液。
４９．コロイドを含む、実施形態４４から４８のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記コロイドが、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）（例えば、５０ｋＤａ）、デキストラン（例えば、４０ｋＤａ）、ＰＥＧ３５（３５ｋＤａ）もしくはＰＥＧ２０（２０ｋＤａ）などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、またはそれらの組合せである、臓器保存溶液。
５０．非透過性物質を含む、実施形態４４から４９のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記非透過性物質が、グルコース、マンニトール、スクロース、ラフィノース、ラクトビオン酸塩またはそれらの組合せである、臓器保存溶液。
５１．気体を含む、実施形態４４から５０のいずれか１つの臓器保存溶液であって、任意選択で、前記気体が、酸素（Ｏ２）、水素（Ｈ２）、一酸化炭素（ＣＯ）、酸化窒素（ＮＯ）、硫化水素（Ｈ２Ｓ）、アルゴン（Ａｒ）、またはそれらの組合せである、臓器保存溶液。
５２．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態４４の臓器保存溶液。
５３．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態４５の臓器保存溶液。
５４．表２に記載される濃度±２０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５５．表２に記載される濃度±１５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５６．表２に記載される濃度±１０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５７．表２に記載される濃度±５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３の臓器保存溶液。
５８．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態５３から５７のいずれか１つの臓器保存溶液。
５９．ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態４４の臓器保存溶液。
６０．ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態５９の臓器保存溶液。
６１．セクション６．２に記載される濃度±２０％、±１５％、±１０％、または±５％でＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態６０の臓器保存溶液。
６２．０．１ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ（例えば、０．３ｍｇ／ｍｌから０．５ｍｇ／ｍｌ、０．２ｍｇ／ｍｌから０．６ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌから１ｍｇ／ｍｌ、１ｍｇ／ｍｌから２ｍｇ／ｍｌ、または２ｍｇ／ｍｌから５ｍｇ／ｍｌ）の濃度で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、実施形態２２から６１のいずれか１つの臓器保存溶液。
６３．０．４ｍｇ／ｍｌの濃度で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、実施形態２２から６１のいずれかの臓器保存溶液。
６４．脂質結合タンパク質ベースの複合体と、臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分とを含むキットであって、任意選択で、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、実施形態１から２１のいずれか１つに記載されている、キット。
６５．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、実施形態６４のキット。
６６．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６５のキット。
６７．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６６のキット。
６８．表２に記載される濃度±２０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
６９．表２に記載される濃度±１５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
７０．表２に記載される濃度±１０％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
７１．表２に記載される濃度±５％でＣｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７のキット。
７２．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態６７から７１のいずれか１つのキット。
７３．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態６５のキット。
７４．ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態７３のキット。
７５．セクション６．２に記載される濃度±２０％、±１５％、±１０％、または±５％でＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態７４のキット。
７６．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を含有する溶液を含む、実施形態６４から７５のいずれか１つのキット。
７７．前記脂質結合タンパク質ベースの複合体の溶液を含む、実施形態６４から７６のいずれか１つのキット。
７８．凍結乾燥形態で前記脂質結合タンパク質ベースの複合体を含む、実施形態６４から７６のいずれか１つのキット。
７９．実施形態６４から７８のいずれか１つのキットから臓器保存溶液を調製するプロセスであって、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体および前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を組み合わせることを含む、プロセス。
８０．脂質結合タンパク質ベースの複合体および臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分を組み合わせることを含む、臓器保存溶液を調製するプロセスであって、任意選択で、前記脂質結合タンパク質ベースの複合体が、実施形態１から２１のいずれか１つに記載されている、プロセス。
８１．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、緩衝液、抗酸化剤、栄養分および／または代謝基質、電解質、コロイド、非透過性物質、気体、またはそれらの組合せを含む、実施形態８０のプロセス。
８２．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の１つまたは複数の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態８１のプロセス。
８３．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態８２のプロセス。
８４．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±２０％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８５．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±１５％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８６．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±１０％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８７．Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液、ＥＣ溶液、ＵＷ溶液、ＨＴＫ溶液、ＩＧＬ－１（登録商標）溶液、もしくはＨＣ－Ａ溶液の構成成分（表２に記載されるような）が、表２に記載される濃度±５％で存在する、実施形態８３のプロセス。
８８．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、Ｃｅｌｓｉｏｒ（登録商標）溶液の構成成分（表２に記載されるような）を含む、実施形態８３から８７のいずれか１つのプロセス。
８９．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の１つまたは複数の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態８１のプロセス。
９０．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、ＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態８９のプロセス。
９１．前記臓器保存溶液の１つまたは複数の構成成分が、セクション６．２に記載される濃度±２０％、±１５％、±１０％、または±５％でＰｕｍｐＰｒｏｔｅｃｔ（登録商標）溶液の構成成分（セクション６．２に記載されるような）を含む、実施形態９０のプロセス。
９２．実施形態８０から９１のいずれか１つのプロセスによって生産される臓器保存溶液。
９３．密封容器中に実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液を含む臓器保存溶液製品。
９４．前記容器が袋である、実施形態９３の臓器保存溶液製品。
９５．前記容器が、前記保存溶液１Ｌを含む、実施形態９３または実施形態９４の臓器保存溶液製品。
９６．（ａ）実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液または実施形態９３から９５のいずれか１つの臓器保存溶液製品と、（ｂ）灌流機および／または臓器とを含むシステム。
９７．灌流機を含む、実施形態９６のシステム。
９８．前記灌流機が、心肺装置である、実施形態９７のシステム。
９９．臓器を含む、実施形態９６から９８のいずれか１つのシステム。
１００．前記臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、実施形態９９のシステム。
１０１．前記臓器が、腎臓である、実施形態１００のシステム。
１０２．前記臓器が、哺乳動物由来である、実施形態９６から１０１のいずれか１つのシステム。
１０３．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１０２のシステム。
１０４．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１０３のシステム。
１０５．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１０３のシステム。
１０６．（ａ）実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液または実施形態９３から９５のいずれか１つの臓器保存溶液製品と、（ｂ）組織とを含むシステム。
１０７．前記組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、実施形態１０６のシステム。
１０８．前記組織が、角膜組織である、実施形態１０７のシステム。
１０９．前記組織が、哺乳動物由来である、実施形態１０６から１０８のいずれか１つのシステム。
１１０．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１０９のシステム。
１１１．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１１０のシステム。
１１２．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１１０のシステム。
１１３．ドナー臓器を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液と接触させることを含む、ｅｘ－ｖｉｖｏ臓器保存のプロセス。
１１４．前記臓器を、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１３のプロセス。
１１５．前記臓器を、最大２日間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１６．前記臓器を、最大３６時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１７．前記臓器を、最大１日間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１８．前記臓器を、最大１２時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４のプロセス。
１１９．前記臓器を、少なくとも１時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２０．前記臓器を、少なくとも２時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２１．前記臓器を、少なくとも４時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２２．前記臓器を、少なくとも６時間、前記臓器保存溶液を用いて機械灌流に付すことを含む、実施形態１１４から１１８のいずれか１つのプロセス。
１２３．前記機械灌流が、実施形態９６から１０５のいずれか１つのシステムを使用して実施される、実施形態１１４から１２２のいずれか１つのプロセス。
１２４．前記臓器保存溶液が、全血で希釈される、実施形態１１３から１２３のいずれか１つのプロセス。
１２５．臓器保存溶液対全血の容量：容量比が、１：１から１：３である、実施形態１２４のプロセス。
１２６．前記臓器保存溶液が、希釈されない、実施形態１１３から１２３のいずれか１つのプロセス。
１２７．前記機械灌流が、正常温度、任意選択で３０℃から３８℃である、実施形態１１４から１２６のいずれか１つのプロセス。
１２８．前記機械灌流が、８℃から２５℃、任意選択で２０℃から２５℃である、実施形態１１４から１２６のいずれか１つのプロセス。
１２９．前記機械灌流が、正常温度未満、任意選択で２℃から８℃である、実施形態１１４から１２６のいずれか１つのプロセス。
１３０．前記臓器を、前記機械灌流の前に前記保存溶液で流すことを含む、実施形態１１４から１２９のいずれか１つのプロセスであって、任意選択で、前記臓器保存溶液が、前記臓器を流す前に２℃から８℃である、プロセス。
１３１．任意選択で２℃から６℃で、前記機械灌流の前および／または後に前記臓器の低温保管をさらに含む、実施形態１１４から１３０のいずれか１つのプロセス。
１３２．任意選択で２℃から６℃で、機械灌流の非存在下で前記臓器の低温保管を含む、実施形態１１３のプロセス。
１３３．最大１週間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３４．最大５日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３５．最大４日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３６．最大３日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３７．最大２日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３８．最大３６時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１３９．最大１日間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１４０．最大１２時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１または１３２のプロセス。
１４１．少なくとも１時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４２．少なくとも２時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４３．少なくとも４時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４４．少なくとも６時間、前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管を含む、実施形態１３１から１４０のいずれか１つのプロセス。
１４５．前記ドナーから前記臓器を取り出す前および／または取り出した後に、前記臓器を、任意選択で、２℃から８℃または２℃から６℃である前記保存溶液で流すことを含む、実施形態１１３から１４４のいずれか１つのプロセス。
１４６．前記保存溶液が、低温保管および／または輸送中の前記臓器の血管系に残される、実施形態１４５のプロセス。
１４７．前記臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、実施形態１１３から１４６のいずれか１つのプロセス。
１４８．前記臓器が、腎臓である、実施形態１４７のプロセス。
１４９．前記臓器が、哺乳動物由来である、実施形態１１３から１４８のいずれか１つのプロセス。
１５０．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１４９のプロセス。
１５１．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１５０のプロセス。
１５２．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１５０のプロセス。
１５３．前記臓器を、前記臓器ドナーから取り出すことをさらに含む、実施形態１１３から１５２のいずれか１つのプロセス。
１５４．実施形態１１３から１５３のいずれか１つのプロセスによって得られた臓器。
１５５．臓器を移植する方法であって、実施形態１５４の臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植することを含む、方法。
１５６．ドナー組織を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液と接触させることを含む、ｅｘ－ｖｉｖｏ組織保存のプロセス。
１５７．前記臓器保存溶液中での前記組織の保管を含む、実施形態１５６のプロセス。
１５８．任意選択で３０℃から３８℃の前記臓器保存溶液における前記組織の正常温度保管を含む、実施形態１５６のプロセス。
１５９．任意選択で２℃から６℃の前記臓器保存溶液における前記組織の低温保管を含む、実施形態１５６のプロセス。
１６０．前記組織を、最大４週間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６１．前記組織を、最大２週間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６２．前記組織を、最大１週間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６３．前記組織を、最大４日間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６４．前記組織を、最大２日間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６５．前記組織を、最大３６時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６６．前記組織を、最大１日間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６７．前記組織を、最大１２時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１５９のいずれか１つのプロセス。
１６８．前記組織を、少なくとも１時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１６９．前記組織を、少なくとも２時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１７０．前記組織を、少なくとも４時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１７１．前記組織を、少なくとも６時間、前記臓器保存溶液中で保管することを含む、実施形態１５７から１６７のいずれか１つのプロセス。
１７２．前記組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、実施形態１５６から１７１のいずれか１つのプロセス。
１７３．前記組織が、角膜組織である、実施形態１７２のプロセス。
１７４．前記組織が、哺乳動物由来である、実施形態１５６から１７３のいずれか１つのプロセス。
１７５．前記哺乳動物が、ヒトまたはブタである、実施形態１７４のプロセス。
１７６．前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態１７５のプロセス。
１７７．前記哺乳動物が、ブタである、実施形態１７５のプロセス。
１７８．前記組織を、前記組織ドナーから取り出すことをさらに含む、実施形態１５６から１７７のいずれか１つのプロセス。
１７９．実施形態１５６から１７９のいずれか１つのプロセスによって得られた組織。
１８０．組織を移植する方法であって、実施形態１７９の組織を、組織移植を必要とする対象に移植することを含む、方法。
１８１．ａ．ドナー臓器を得るステップ；
ｂ．前記ドナー臓器を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液と接触させるステップであって、
前記接触させるステップは、
ｉ．前記臓器保存溶液を用いた前記臓器の機械灌流、または
ｉｉ．前記臓器保存溶液中での前記臓器の低温保管
を含むステップ、および、
ｃ．前記臓器を、臓器移植を必要とする対象に移植するステップ
とを含む、移植方法。
１８２．前記ドナー臓器が、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓、腸、または気管である、実施形態１８１の方法。
１８３．前記接触させるステップが、少なくとも１時間および／または最大１週間の前記臓器保存溶液を用いた前記臓器の機械灌流または低温保管を含む、実施形態１８１または実施形態１８２に記載の方法。
１８４．ａ．ドナー組織を得るステップ；
ｂ．前記ドナー組織を、実施形態２２から６３および９２のいずれか１つの臓器保存溶液中で保管するステップ、
ｃ．前記組織を、組織移植を必要とする対象に移植するステップ
とを含む、移植方法。
１８５．前記ドナー組織が、眼、皮膚、脂肪、筋肉、骨、軟骨、胎児胸腺、または神経組織である、実施形態１８４に記載の方法。
１８６．前記保管することが、少なくとも１時間および／または最大４週間、前記臓器保存溶液を用いて前記組織を保管するステップを含む、実施形態１８４または実施形態１８５に記載の方法。
【0267】
様々な特定実施形態が説明および記載されてきたが、本開示（複数可）の主旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更が成され得ることは理解されよう。
【0268】
９．参照による組み込み
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願および他の文書は、全ての目的で参照により組み込まれるよう個々の刊行物、特許、特許出願または他の文書が別個に示されたのと同じ程度で、全ての目的でそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願で引用される全ての刊行物、特許、特許出願および他の文書は、全ての目的で参照により組み込まれるよう個々の刊行物、特許、特許出願または他の文書が別個に示されたのと同じ程度で、全ての目的でそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0269】
本明細書中に含まれている文書、行動、材料、デバイス、論文等の任意の議論は、本開示に関して文脈を単に提供する目的だけのためである。本開示が本出願の優先日より前にあらゆる場所に存在した場合、これらの事柄のいずれかまたは全てが、従来技術の土台の一部を成すか、または本開示に関連した分野において共通の一般常識であったという承認と解釈されるべきではない。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5-1】
【図5-2】
【図5-3】
【配列表】
【国際調査報告】