特表 2024-514203 ＣＤ５陽性がんを標的とするキメラ抗原受容体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-03-28

(54)【発明の名称】ＣＤ５陽性がんを標的とするキメラ抗原受容体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20240321BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/19 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/33 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/867 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/864 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/861 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 5/0775 20100101ALI20240321BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240321BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240321BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240321BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240321BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240321BHJP

   A61P 35/04 20060101ALI20240321BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240321BHJP

   A61K 35/15 20150101ALI20240321BHJP

   A61K 35/51 20150101ALI20240321BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20240321BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20240321BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240321BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240321BHJP

   C12N 15/88 20060101ALN20240321BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALN20240321BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALN20240321BHJP

   C12N 5/0784 20100101ALN20240321BHJP

   C12N 5/0786 20100101ALN20240321BHJP

   C12N 15/09 20060101ALN20240321BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12 ZNA

C12N15/62 Z

C12N15/19

C12N15/33

C12N15/63 Z

C12N15/867 Z

C12N15/864 100Z

C12N15/861 Z

C12N5/10

C12N5/0775

A61P43/00 105

A61P35/00

A61P35/02

A61P43/00 121

A61K35/12

A61K45/00

A61P35/04

A61K35/17

A61K35/15

A61K35/51

A61K35/545

A61K35/28

A61K39/395 N

A61K39/395 T

C12N15/13

C12N15/88 Z

C12N5/0781

C12N5/0783

C12N5/0784

C12N5/0786

C12N15/09 100

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023563211

(86)(22)【出願日】2022-04-14

(85)【翻訳文提出日】2023-12-13

(86)【国際出願番号】 US2022024842

(87)【国際公開番号】W WO2022221548

(87)【国際公開日】2022-10-20

(31)【優先権主張番号】63/174,990

(32)【優先日】2021-04-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】500039463

【氏名又は名称】ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム

【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ，ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ

【住所又は居所原語表記】２１０ Ｗｅｓｔ ７ｔｈ Ｓｔｒｅｅｔ Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ ７８７０１ Ｕ．Ｓ．Ａ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】レズヴァニ、ケイティ

(72)【発明者】

【氏名】シュポール、エリザベス

(72)【発明者】

【氏名】バサール、ラフェット

(72)【発明者】

【氏名】ダヘール、メイ

(72)【発明者】

【氏名】アチャリヤ、スニル

(72)【発明者】

【氏名】ウプレティ、ナディマ

(72)【発明者】

【氏名】ヌニェス コルテス、アナ カレン

(72)【発明者】

【氏名】エンスリー、エミリー

(72)【発明者】

【氏名】マリン コスタ、ダビド

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA92X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA17

4C084MA44

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB11

4C085CC23

4C085EE03

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB43

4C087BB44

4C087BB59

4C087BB64

4C087BB65

4C087MA02

4C087MA17

4C087MA44

4C087MA63

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA14

4C087ZB21

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZC75

(57)【要約】

【課題】 ＣＤ５（例えば、分化クラスター５またはＬＥＵ１またはＴ１としても知られている）を標的とする操作された細胞受容体に関連する方法および組成物
【解決手段】 本開示の実施形態には、特定の操作された受容体を用いたＣＤ５発現細胞の標的化に関連する方法および組成物が含まれる。特定の実施形態において、ＮＫ細胞は、特定のキメラ抗原受容体構築物を用いてＣＤ５抗原と結合するように特異的に操作される。特定の実施形態では、ＣＤ５標的化ＣＡＲを発現するベクターは、特定の自殺遺伝子および／または１つ以上の特定のサイトカインも発現する。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

操作されたＣＤ５特異的受容体をコードする配列を含む発現構築物であって、前記受容体は：
（ａ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＴＭ）およびＣＤ２８細胞質内ドメイン（ＩＣＤ）；
（ｂ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｃ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；
（ｄ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｅ）ＤＡＰ１２ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；
（ｆ）ＤＡＰ１２ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｇ）ＣＤ２８ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｈ）ＣＤ２８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｈ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、および４－１ＢＢ ＩＣＤ；
（ｉ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｊ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；
（ｋ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｌ）ＤＡＰ１０ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；
（ｍ）ＤＡＰ１０ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｎ）ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；
（ｏ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭ；
（ｐ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；
（ｑ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｒ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；
（ｓ）ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｔ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｕ）４－１ＢＢ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；
（ｖ）共刺激ドメインであるＩＣＤの不在下でのＣＤ２８ ＴＭおよびＣＤ３ゼータ；
（ｗ）ＣＤ８ ＴＭおよびＣＤ２８細胞質内ドメイン（ＩＣＤ）；
（ｘ）ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｙ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；
（ｚ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ａａ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；
（ｂｂ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｃｃ）ＣＤ８ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｅｅ）ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｄｄ）ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、および４－１ＢＢ ＩＣＤ；
（ｅｅ）ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｆｆ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；
（ｇｇ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｈｈ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；
（ｉｉ）ＣＤ８ ＩＣＤ；
（ｊｊ）ＣＤ８ ＴＭ；
（ｋｋ）ＣＤ８ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；
（ｌｌ）ＣＤ８ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｍｍ）共刺激ドメインであるＩＣＤの不在下でのＣＤ８ ＴＭおよびＣＤ３ゼータ
（ｎｎ）ＣＤ２７ ＴＭおよびＣＤ２８細胞質内ドメイン（ＩＣＤ）；
（ｏｏ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｐｐ）ＣＤ２７ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；
（ｑｑ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｒｒ）ＣＤ２７ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；
（ｓｓ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｔｔ）ＣＤ２７ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；
（ｕｕ）ＣＤ２７ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｖｖ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、および４－１ＢＢ ＩＣＤ；
（ｗｗ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｘｘ）ＣＤ２７ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；
（ｙｙ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；
（ｚｚ）ＣＤ２７ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；
（ａａａ）ＣＤ２７ ＴＭ；
（ｂｂｂ）ＣＤ２７ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；
（ｃｃｃ）ＣＤ２７ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；または
（ｄｄｄ）共刺激ドメインであるＩＣＤの不在下でのＣＤ２７ ＴＭおよびＣＤ ３ゼータ
のうちの１つを含む、発現構築体。

【請求項2】

前記操作されたＣＤ５特異的受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体である、請求項１に記載の発現構築物。

【請求項3】

前記操作されたＣＤ５特異的受容体はＣＡＲである、発現構築物。

【請求項4】

前記ＣＡＲは、ＣＤ５に対するｓｃＦｖまたはリガンドであるＣＤ標的化細胞外ドメインを含む、請求項３に記載の発現構築物。

【請求項5】

前記ＣＤ５特異的ＣＡＲは、重鎖および軽鎖を有するｓｃＦｖを含み、前記ＣＡＲをコードする配列内の重鎖は、５’から３’方向において軽鎖の上流にある、請求項４に記載の発現構築物。

【請求項6】

前記ＣＤ５特異的ＣＡＲは、重鎖および軽鎖を有するｓｃＦｖを含み、前記ＣＡＲをコードする配列内の重鎖は、５’から３’方向において軽鎖の下流にある、請求項４に記載の発現構築物。

【請求項7】

前記ＣＤ５特異的ＣＡＲは、コドン最適化されたｓｃＦｖを含む、請求項４～６のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項8】

前記ＣＤ５特異的ＣＡＲは、ヒト化ｓｃＦｖを含む、請求項４～６のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項9】

前記ｓｃＦｖは、配列番号１によってコードされる、請求項４～６および８のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項10】

前記ｓｃＦｖは、配列番号２を含む、請求項４～６および８のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項11】

前記ｓｃＦｖは、配列番号３によってコードされる、請求項４～６のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項12】

前記ｓｃＦｖは、配列番号４を含む、請求項４～６のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項13】

前記ＣＤ５特異的ＣＡＲは、シグナル伝達ペプチドを含む、請求項３～１２のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項14】

前記シグナル伝達ペプチドは、ＣＤ８アルファ、Ｉｇ重鎖、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体、ＣＤ３シグナル伝達ペプチド、ＣＤ４シグナル伝達ペプチド、または１つ以上の他の表面受容体に由来するシグナルペプチドに由来する、請求項１３に記載の発現構築物。

【請求項15】

前記ＴＭは、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、または配列番号１３によってコードされる、請求項１～１４のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項16】

前記ＴＭは、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、または配列番号１４を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項17】

前記ＩＣＤは、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、または配列番号２１によってコードされる、請求項１～１６のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項18】

前記ＩＣＤは、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、または配列番号２２を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項19】

前記受容体はさらに、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ４０Ｌ、２Ｂ４、ＤＮＡＭ、ＣＳ１、ＣＤ４８、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０、ＩＣＯＳ、またはそれらの組合せに由来するＩＣＤを含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項20】

前記操作されたＣＤ５特異的受容体は、ＣＤ５特異的ｓｃＦｖと前記膜貫通ドメインとの間にヒンジを含むＣＤ５特異的ＣＡＲである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項21】

前記ヒンジは、ＩｇＧヒンジ、ＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ８－アルファヒンジであり、前記ヒンジは、Ｇｌｙ３で構成される人工スペーサを含むか、または前記ヒンジは、ＩｇＧのＣＨ１、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３ドメインを含む、請求項２０に記載の発現構築物。

【請求項22】

前記ＩｇＧヒンジは、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＧ３ヒンジ、またはＩｇＧ４ヒンジである、請求項２１に記載の発現構築物。

【請求項23】

前記ヒンジは、配列番号２３または２５によってコードされる、請求項２１に記載の発現構築物。

【請求項24】

前記ヒンジは、配列番号２４または配列番号２６を含む、請求項２１に記載の発現構築物。

【請求項25】

前記サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－２３、またはそれらの組合せである、請求項１～２４のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項26】

前記操作されたＣＤ５特異的受容体は、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、または配列番号４７によってコードされるＣＡＲである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項27】

前記操作されたＣＤ５特異的受容体は、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、または配列番号４８を含むＣＡＲである、請求項１～２５のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項28】

前記操作されたＣＤ５特異的受容体以外の目的のポリペプチドをコードする、請求項１～２７のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項29】

前記目的のポリペプチドおよび前記操作されたＣＤ特異的受容体は、２Ａ要素またはＩＲＥＳ要素によって前記構築物上で分離されている、請求項２８に記載の発現構築物。

【請求項30】

前記２Ａ要素は、Ｅ２Ａ、Ｔ２Ａ、またはＰ２Ａである、請求項２９に記載の発現構築物。

【請求項31】

前記Ｅ２Ａ要素は、配列番号３１によってコードされる、請求項３０に記載の発現構築物。

【請求項32】

前記Ｅ２Ａ要素は配列番号３２を含む、請求項３０に記載の発現構築物。

【請求項33】

前記目的のポリペプチドは、治療用タンパク質、または含まれる細胞の細胞活性、増殖、および／もしくは持続性を増強するタンパク質である、請求項２８～３２のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項34】

前記目的のポリペプチドは、自殺遺伝子；サイトカイン；含まれる細胞の増殖、拡大、および／もしくは代謝フィットネスを増強するヒトもしくはウイルスタンパク質；またはそれらの組合せである、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の発現構築物。

【請求項35】

前記自殺遺伝子は、非分泌性変異ＴＮＦ－アルファ、誘導性カスパーゼ９、ＨＳＶ－チミジンキナーゼ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５２、またはＥＧＦＲｖ３である、請求項３４に記載の発現構築物。

【請求項36】

前記サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－７、またはそれらの組合せである、請求項３４または３５に記載の発現構築物。

【請求項37】

前記ＩＬ－１５は配列番号２９によってコードされる、請求項３６に記載の発現構築物。

【請求項38】

前記ＩＬ－１５は配列番号３０を含む、請求項３６に記載の発現構築物。

【請求項39】

請求項１～３８のいずれか一項に記載の発現構築物を含むベクター。

【請求項40】

ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターである、請求項３９に記載のベクター。

【請求項41】

前記ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターである、請求項４０に記載のベクター。

【請求項42】

前記非ウイルスベクターは、プラスミド、リポソーム、ナノ粒子、脂質、炭水化物、またはそれらの組合せである、請求項４０に記載のベクター。

【請求項43】

請求項１～３８のいずれか一項に記載の発現構築物または請求項３９～４２のいずれか一項に記載のベクターを含む免疫細胞。

【請求項44】

前記免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＭＳＣ、または樹状細胞である、請求項４３に記載の免疫細胞。

【請求項45】

ＮＫ細胞である、請求項４３または４４に記載の免疫細胞。

【請求項46】

前記ＮＫ細胞は、臍帯血、末梢血、人工多能性幹細胞、ヒト胚性幹細胞、骨髄、または細胞株に由来する、請求項４４または４５に記載の免疫細胞。

【請求項47】

前記ＮＫ細胞株は、ＮＫ－９２細胞株、または腫瘍に由来する別のＮＫ細胞株、または健康なＮＫ細胞もしくは前駆細胞である、請求項４６に記載の免疫細胞。

【請求項48】

前記ＮＫ細胞は、臍帯血単核細胞に由来する、請求項４４～４７のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項49】

前記ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞である、請求項４４～４８のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項50】

前記ＮＫ細胞は、１つ以上の外因的に提供されるサイトカインを発現する、請求項４３～４９のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項51】

前記サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、ＩＬ－２３、またはそれらの組合せである、請求項５０に記載の免疫細胞。

【請求項52】

前記免疫細胞内での１つ以上の内因性遺伝子の発現が修飾されている、請求項４３～５１のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項53】

前記発現は、発現が部分的または完全に引き下げられている、請求項５２に記載の免疫細胞。

【請求項54】

前記１つ以上の遺伝子の発現が、ＣＲＩＳＰＲまたはＴＡＬＥＮを用いて修飾されている、請求項５２または５３に記載の免疫細胞。

【請求項55】

前記遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＴＬＡ－４、ＴＤＡＧ８、ＣＤ３８、ＣＲＥＭ、およびそれらの組合せからなる群から選択される、請求項５２～５４のいずれか一項に記載の免疫細胞。

【請求項56】

前記細胞は、適切な培地中に存在する、請求項４３～５５のいずれか一項に記載の免疫細胞の集団。

【請求項57】

前記集団は、貯蔵施設に収容されている、請求項５６に記載の集団。

【請求項58】

前記集団は凍結されている、請求項５６または５７に記載の集団。

【請求項59】

前記培地は、１つ以上のサイトカインを有する凍結保護剤、または１つ以上のサイトカインを有していない凍結保護剤を含む、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の集団。

【請求項60】

前記免疫細胞はＮＫ細胞である、請求項５６～５９のいずれか一項に記載の集団。

【請求項61】

前記免疫細胞は、ＣＡＲおよびサイトカインをコードする発現構築物を含むＮＫ細胞である、請求項５６～６０のいずれか一項に記載の集団。

【請求項62】

前記免疫細胞は、ＣＡＲおよびＩＬ－１５をコードする発現構築物を含むＮＫ細胞である、請求項５６～６１のいずれか一項に記載の集団。

【請求項63】

前記ＣＡＲおよびＩＬ－１５は、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、または配列番号４７によってコードされる、請求項６１または６２に記載の集団。

【請求項64】

前記ＣＡＲおよびＩＬ－１５は、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、または配列番号４８に含まれる、請求項６１または６２に記載の集団。

【請求項65】

個体においてＣＤ５陽性細胞を死滅させる方法であって、請求項１～３８のいずれか一項に記載の発現構築物を有する有効量の細胞を前記個体に投与する工程を含む方法。

【請求項66】

前記細胞は免疫細胞である、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、樹状細胞、またはそれらの混合物である、請求項６６に記載の方法。

【請求項68】

前記ＮＫ細胞は、臍帯血、末梢血、人工多能性幹細胞、ヒト胚性幹細胞、骨髄、細胞株、またはそれらの混合物に由来する、請求項６７に記載の方法。

【請求項69】

前記ＮＫ細胞は、臍帯血単核細胞に由来する、請求項６７または６８に記載の方法。

【請求項70】

前記個体はがんを有する、請求項３４～３７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記がんは固形腫瘍のものである、請求項７０に記載の方法。

【請求項72】

前記がんは血液がんである、請求項７０に記載の方法。

【請求項73】

前記細胞は、前記個体に対して同種異系である、請求項６５～７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記細胞は、前記個体に対して自己由来である、請求項６５～７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記個体はヒトである、請求項６５～７４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

前記細胞は、前記個体に１回以上投与される、請求項６５～７５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項77】

前記個体への前記細胞の投与間の期間は、１～２４時間、１～７日、１～４週、１～１２ヶ月、または１年以上である、請求項７６に記載の方法。

【請求項78】

前記個体に有効量の追加の療法を施す工程をさらに含む、請求項６５～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記追加の療法は、外科手術、放射線、遺伝子療法、免疫療法、またはホルモン療法を含む、請求項７８に記載の方法。

【請求項80】

前記追加の療法は、１つ以上の抗体を含む、請求項７８または７９に記載の方法。

【請求項81】

前記細胞は、注射によって、静脈内、動脈内、腹腔内、胸膜内、気管内、腫瘍内、筋肉内、内視鏡的、病変内、頭蓋内、髄腔内、経皮的、皮下、局所的に、灌流によって、腫瘍微小環境内に、またはそれらを組み合わせて前記個体に投与される、請求項６５～８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

前記個体においてＣＤ５陽性がんを特定する工程をさらに含む、請求項６５～８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

前記発現構築物を有する前記細胞を生成する工程をさらに含む、請求項６５～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

個体においてがんを予防するか、またはがんの転移を予防する方法であって、治療有効量の、請求項１～３８のいずれか一項に記載の発現構築物を有する細胞を前記個体に投与する工程を含む方法。

【請求項85】

前記個体は、がんのリスクがあるか、または以前にがんを患ったことがある、請求項８４に記載の方法。

【請求項86】

前記投与工程が１回行われる、請求項８４または８５に記載の方法。

【請求項87】

前記投与工程が複数回行われる、請求項８４または８５に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本出願は、２０２１年４月１４日に出願された米国仮特許出願シリアルＮｏ．６３／１７４，９９０（２０２１年４月１４日出願）の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

本開示の実施形態は、細胞生物学、分子生物学、免疫学、およびがん医学を含む医学の分野を少なくとも含む。

【背景技術】

【0003】

再発難治性のＴ細胞悪性腫瘍は、特に予後不良な血液悪性腫瘍の一群を代表し、新規治療が切実に必要とされている。ＣＤ５はＴ細胞悪性腫瘍の大部分に存在するpan Ｔ細胞表面マーカーである。ＣＤ５はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）や慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）のような一部のＢ細胞性悪性腫瘍にも発現している（１，２）。一方、正常細胞によるＣＤ５の発現は胸腺細胞、末梢Ｔ細胞、Ｂリンパ球のごく一部に限られており、他の造血細胞では発現していない。したがって、ＣＤ５はＣＡＲを用いた養子細胞療法の標的抗原として最適である。しかし、Ｔ細胞由来の新生物を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞の開発は、ほとんどの標的抗原が悪性Ｔリンパ球と正常Ｔリンパ球の両方に共通して発現しているため、ＣＡＲ－Ｔ細胞のフラトリサイドを促進する可能性があり、妨げられてきた（３）。フラトリサイドの問題があるにもかかわらず、ＣＤ５ ＣＡＲ－Ｔ細胞は開発に成功し、前臨床での有効性（４）と臨床での安全性、Ｔ細胞悪性腫瘍患者における臨床的有効性の初期徴候を予備報告で示している。とはいえ、ＣＤ５を表面に発現しない代替免疫エフェクター細胞を使うことは、フラトリサイドの心配がなくなるので、魅力的なアプローチである。ＮＫ細胞は、ＣＤ５抗原を表面に発現していないため、ＣＤ５を標的とするＣＡＲ工学のプラットフォームとして魅力的な選択肢である。ＣＡＲ工学におけるＮＫ細胞のもう一つの利点は、Ｔ細胞とは対照的に、同種移植において移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こさないことである。そして、ポイント・オブ・ケアで使用される、完全に既製の細胞製品を製造する可能性を開く。ＣＢ由来のＮＫ細胞を遺伝子改変し、ＣＡＲを発現させ、ＩＬ－１５を異所的に産生させ、生体内でのＮＫ細胞の増殖と持続性をサポートし、自殺遺伝子である誘導性カスパーゼ９（ｉＣ９）を発現させることで、潜在的な安全性の懸念に対処する新しいプラットフォームが開発された。これらのｉＣ９／ＣＡＲ１９／ＩＬ１５－ＮＫ細胞は、前臨床試験および臨床試験において、Ｂ細胞悪性腫瘍に対する有効性を示した（６，７）。サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）、またはＣＡＲ－ＮＫ細胞産物に関連するその他の毒性は観察されていない。（７）本開示は、ＣＤ５を含む他のがん抗原を標的とするＣＡＲ－ＮＫ細胞プラットフォームの拡張に関するものであり、この療法の臨床的影響を拡大させる。

【0004】

複数の研究により、ＣＡＲ－Ｔ細胞における共刺激ドメインの選択が、その機能、持続性、代謝プロファイルに影響を与えることが実証されている（８－１０）。ＣＡＲ－ＮＫ細胞の分野では、臨床で試験された最初の構築物は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の設計から借用したＴ細胞特異的共刺激ドメインであるＣＤ２８を組み込んでいる。様々なＮＫ特異的共刺激分子の機能を調べた前臨床ＣＡＲ－ＮＫ細胞研究はあるが、共刺激ドメインがＮＫ細胞の増殖、トランスクリプトーム、プロテオームプロフィール、多機能性、代謝、体力に与える影響を系統的に調べた研究はない。本開示では、ＮＫ細胞生物学にとってより関連性の高いものも含め、共刺激ドメインの影響を包括的に研究して系統的に調べる目的を達成せんしている。特に、主要なアダプタータンパク質であり、ヒトＮＫ細胞におけるＮＫＧ２Ｄの唯一のシグナル伝達中間体であるＤＮＡＸ活性化タンパク質１０（ＤＡＰ１０）、複数の活性化レセプター（ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫｐ４４、活性化ＫＩＲなど）と会合する重要なアダプター分子であるＤＮＡＸ活性化タンパク質１２（ＤＡＰ１２）、抗腫瘍免疫に不可欠な最も強力なＮＫ細胞傷害性レセプターの一つであるＮＫＧ２Ｄなどである（１１）。その結果、ＤＡＰ１０共刺激分子を有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、他の共刺激分子を有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで有意に優れた性能を示し、抗腫瘍活性を増強する多機能性、代謝適性、メモリー様特性を示すことが示された。これらの前臨床データに基づいて、ＣＤ５－ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の安全性と有効性を評価する第Ｉ／ＩＩ相臨床試験が準備中である。

【0005】

このように、本開示は、特定の実施形態において、ＣＤ５陽性がんを含むがんを標的とする、ヒトＮＫ細胞を含む養子細胞療法用の細胞の遺伝子工学的操作に関する方法及び組成物に関する。

【発明の概要】

【0006】

本開示の実施形態は、ＣＤ５（例えば、分化クラスター５またはＬＥＵ１またはＴ１としても知られている）を標的とする操作された細胞受容体に関連する方法および組成物を包含する。特定の実施形態において、ＣＤ５を標的とする操作された受容体は、ポリヌクレオチド、ポリペプチドの形態であるか、または免疫細胞が挙げられるあらゆる種類の細胞の表面上に含まれる。特定の場合には、細胞は免疫細胞であり、特定の実施形態において、免疫細胞は、あらゆる源由来のＮＫ細胞、ＮＫ Ｔ細胞、インバリアントＮＫＴ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、樹状細胞等である。特定の実施形態において、臍帯血（ＣＢ－ＮＫ）由来の再プログラム化ＮＫ細胞が、ＣＤ５分子を発現するがんを標的とするために包含される。

【0007】

ＣＤ５は、慢性リンパ増殖性障害／リンパ腫、Ｔ細胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫、ならびに慢性リンパ性白血病およびマントル細胞リンパ腫等のいくつかのＢ細胞悪性腫瘍が挙げられる多数のがんで発現されるので、方法および組成物に標的抗原として利用される。また、胸腺がん、ならびに甲状腺がん、肝臓がん、結腸直腸がん、および子宮頸がんで発現される。

【0008】

特定の実施形態において、ＮＫ細胞療法が挙げられる本開示の養子細胞療法は、がんに再曝露されてすらがん細胞の根絶を可能にするのに特に有効である。したがって、一部の実施形態において、個体は、個体において検出可能ながんの不在下で、本明細書中に包含されるあらゆる細胞療法が施され得る。特定の場合には、個体は、一般集団よりも高いリスク等の、あらゆる種類のがんのリスクがあり得る。場合によっては、個体は、がんのための１つ以上の処置を受けた場合があり、本開示の細胞療法の投与時には、がんがないとみなされる場合もあるし、みなされない場合もある。ゆえに、種々の実施形態において、個体においてがんを予防するか、またはがんの転移を予防する方法であって、治療有効量の、本明細書中に包含されるいずれかの細胞を個体に投与する工程を含む方法が存在する。投与工程は、１回以上行われ得る。複数回行われる場合、投与間に適切なあらゆる期間が存在し得、投与間に１～２４時間、１～７日、１～４週、１～１２ヶ月、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、もしくはそれを超える年数が挙げられる。

【0009】

ＣＤ５標的化ＣＡＲ Ｔ細胞の一部の実施形態が、Ｔ細胞悪性腫瘍の処置について試験されてきた。しかしながら、ＣＤ５は、正常なＴ細胞によって、そしてＴ細胞白血病／リンパ腫上で構成的に発現され、そしてＣＡＲ Ｔ細胞療法におけるその使用は、ＣＡＲ Ｔ製造中のフラトリサイドを妨げるためにＣＤ５遺伝子の遺伝子欠失を必要とする。対照的に、正常なＮＫ細胞はＣＤ５を発現しないので、フラトリサイドに曝されない。ゆえに、本開示の特定の実施形態において、ＮＫ細胞（臍帯血（ＣＢ）由来のものが挙げられる）は、ＣＤ５を発現するがんを標的とするように再プログラム化されたＮＫ細胞である。本開示は、いくつかの新規のＣＡＲ分子を含み、このＣＡＲ分子には、ヒトＣＤ５抗原を標的とするｓｃＦｖの、１つ以上の活性化シグナル伝達エンドドメインとの融合物が含まれ、場合によっては、ＣＤ３ζを単独で、または共刺激シグナル伝達ドメインもしくはアダプターシグナル伝達ドメイン、例えば、ＮＫＧ２Ｄ、４１ＢＢ、ＣＤ２８、ＤＡＰ１０、および／またはＤＡＰ１２と組み合わせて組み込むことが含まれる。特定の場合には、同種異系ＣＢ－ＮＫ細胞は、ＣＤ５ ＣＡＲを発現するようにレトロウイルスにより形質導入される。

【0010】

特定の実施形態において、ＣＤ５ ＣＡＲ分子を包含する本開示の免疫細胞はまた、その生存および増殖を支持する１つ以上のタンパク質を発現する。特定の場合には、免疫細胞は、細胞の増殖および持続を促進する１つ以上のサイトカインを発現するように操作される。特定の場合には、サイトカインは、免疫細胞（例えばＮＫ細胞）の生存および維持を助けるインターロイキン１５（ＩＬ－１５）、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、および／またはＩＬ－２１である。特定の態様において、ＣＡＲをコードするベクターはまた、サイトカインをコードし、それぞれが最終的に別々のポリペプチドとして産生される。

【0011】

本開示の実施形態は、１つ以上のシグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３ζの細胞質部分、ならびにＣＤ２８、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、およびＮＫＧ２Ｄの１つ以上を含むものが挙げられる）に異種融合したＣＤ５ ｓｃＦｖを組み込んだ種々の新規の特異的ＣＡＲ構築物を包含する。ｓｃＦｖは、場合によっては、ヒトＣＤ５抗原に対する特異性を有するマウス抗体またはヒト抗体の重（Ｖ_Ｈ）鎖および軽（Ｖ_Ｌ）鎖に由来する可変断片の融合物を含み得る。ベクターはまた、ＮＫ細胞の生存および維持を助けるヒトＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２３、および／またはＩＬ－１８を産生する遺伝子が挙げられる１つ以上のサイトカイン遺伝子を含み得る。一例として、このように修飾されたＣＢ－ＮＫ細胞は、ＣＡＲとは別個の分子として産生されるＩＬ１５に加えて、１つ以上の共刺激ドメインおよびＣＤ３ζを含むＣＡＲ内のＣＤ５ ｓｃＦｖをコードするベクターを含む。

【0012】

本開示の特定の実施形態は、レシピエント個体に対して同種異系であり、あらゆる種類のＣＤ５陽性細胞を標的とし、かつＩＬ１５、ＩＬ－２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１２、ＩＬ－７、ＩＬ－２３、および／またはＩＬ－１８等の１つ以上のサイトカインを発現するように形質導入されていてもされていなくてもよい、少なくともＮＫ細胞が挙げられる既製の免疫細胞の使用を可能にする。

【0013】

本開示の特定の実施形態において、免疫細胞における１つ以上の内因性遺伝子の発現が修飾されており、例えば、発現は、発現が部分的または完全に引き下げられ得る。修飾は、あらゆる手段によって生じ得るが、特定の実施形態において、１つ以上の遺伝子の発現は、例えば発現レベルが引き下げられることによって修飾されており、これは、ＣＲＩＳＰＲまたは他のあらゆる遺伝子編集技術が挙げられる適切なあらゆる手段によって生じ得る。単なる例として、内因性遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＴＬＡ－４、ＴＤＡＧ８、ＣＤ３８、ＣＲＥＭ、およびそれらの組合せからなる群から選択され得る。

【0014】

一実施形態において、操作されたＣＤ５特異的受容体をコードし、かつ任意選択で以下の一方または双方をコードする配列を含む発現構築物が存在する：（ａ）自殺遺伝子；（ｂ）サイトカイン。特定の場合には、操作されたＣＤ５特異的受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体である。ＣＤ５特異的ＣＡＲは、重鎖および軽鎖を有するｓｃＦｖを含み得、ＣＡＲをコードする配列内の重鎖は、５’から３’方向において軽鎖の上流にある。他の場合には、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、重鎖および軽鎖を有するｓｃＦｖを含み、ＣＡＲをコードする配列内の重鎖は、５’から３’方向において軽鎖の下流にある。本明細書中のいずれの場合においても、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、コドン最適化されたｓｃＦｖを含むか、または含まない。本明細書中のいずれの場合においても、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、ヒト化ｓｃＦｖを含むか、または含まない。本明細書中のいずれの場合においても、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、ＣＤ８アルファ、Ｉｇ重鎖、または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体由来のもの等のシグナル伝達ペプチド、または１つ以上の他の表面受容体に由来するシグナルペプチドを含むか、または含まない。特定の実施形態において、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、１つ以上の共刺激ドメイン、例えばＣＤ２８、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ４０Ｌ、２Ｂ４、ＤＮＡＭ、ＣＳ１、ＣＤ４８、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０、ＩＣＯＳ、またはそれらの組合せからなる群から選択される１つ以上の共刺激ドメインを含む。

【0015】

あらゆるＣＤ５特異的ＣＡＲは、ｓｃＦｖと膜貫通ドメインとの間にＣＤ３ゼータおよび／またはヒンジを含んでも含まなくてもよい。特定の場合には、ヒンジはＣＤ８－アルファヒンジであり、ヒンジは、Ｇｌｙ３で構成される人工スペーサを含み、またはヒンジは、ＩｇＧのＣＨ１、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３ドメインを含む。特定の実施形態において、サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、またはそれらの組合せである。自殺遺伝子が使用される場合、自殺遺伝子は、変異ＴＮＦ－アルファ（操作された非分泌性変異体等）、誘導性カスパーゼ９、ＨＳＶ－チミジンキナーゼ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５２、またはＥＧＦＲｖ３であり得る。

【0016】

本開示の実施形態は、本明細書中に包含されるあらゆる発現を含むあらゆる種類の免疫細胞を含む。特定の実施形態において、免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＭＳＣ、樹状細胞、またはそれらの混合物である。免疫細胞がＮＫ細胞である場合、ＮＫ細胞は、臍帯血（プールされた臍帯血単位が挙げられる）、末梢血、人工多能性幹細胞、骨髄、および／または細胞株に由来し得る。具体的な態様において、ＮＫ細胞株は、ＮＫ－９２細胞株、または腫瘍に由来する別のＮＫ細胞株、または健康なＮＫ細胞もしくは前駆細胞である。

【0017】

特定の実施形態において、免疫細胞は、ＮＫ細胞、例えば臍帯血に、例えば臍帯血単核細胞に由来するものである。ＮＫ細胞は、特定の場合には、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞であり得る。ＮＫ細胞は、１つ以上の外因的に提供されるサイトカイン、例えば、ＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、またはそれらの組合せを発現し得る。特定の実施形態は、本開示のあらゆる種類の免疫細胞の集団を含み、細胞は、適切な培地またはあらゆる種類の適切な担体中に存在し得る。

【0018】

一実施形態において、個体においてＣＤ５陽性細胞を死滅させる方法であって、本開示によって包含されるあらゆる発現構築物を有する有効量の細胞を個体に投与する工程を含む方法が存在する。特定の実施形態において、細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ガンマデルタＴ細胞、または樹状細胞である。ＮＫ細胞は、臍帯血、末梢血、人工多能性幹細胞、骨髄、または細胞株に由来し得る。ＮＫ細胞は、臍帯血単核細胞に由来し得る。場合によっては、ＣＤ５陽性細胞は、例えば造血がんまたは固形腫瘍に由来する、がん細胞である。細胞は、ヒトであってもなくてもよい個体に対して、同種異系であっても自己由来であってもよい。細胞は、注射によって、静脈内、動脈内、腹腔内、気管内、胸膜内、腫瘍内、筋肉内、内視鏡的、病変内、頭蓋内、経皮的、皮下、局所的に、灌流によって、腫瘍微小環境内に、またはそれらを組み合わせて個体に投与され得る。

【0019】

本方法の特定の実施形態において、細胞は、個体に１回以上投与され得る。個体への細胞の投与間の期間は、１～２４時間、１～７日、１～４週、１～１２ヶ月、または１年以上であり得る。方法はさらに、有効量の追加の療法、例えば、外科手術、放射線、遺伝子療法、免疫療法、および／またはホルモン療法を個体に施す工程を含み得る。追加の療法は、場合によっては、１つ以上の抗体または抗体ベースの剤を含み得る。本方法の一部の態様において、本方法はさらに、個体においてＣＤ５陽性細胞を特定する工程を含み得る。

【0020】

本開示の実施形態は、操作されたＣＤ５特異的受容体をコードする配列を含む発現構築物を含み、前記受容体は、以下のうちの１つを含む：（ａ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＴＭ）およびＣＤ２８細胞質内ドメイン（ＩＣＤ）；（ｂ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｃ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；（ｄ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｅ）ＤＡＰ１２ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；（ｆ）ＤＡＰ１２ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｇ）ＣＤ２８ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｈ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、および４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｉ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｊ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；（ｋ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｌ）ＤＡＰ１０ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；（ｍ）ＤＡＰ１０ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｎ）ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｏ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭ；（ｐ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｑ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｒ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｓ）ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｔ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｕ）４－１ＢＢ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｖ）共刺激ドメインであるＩＣＤの不存在下でのＣＤ２８ ＴＭおよびＣＤ３ゼータ；（ｗ）ＣＤ８ ＴＭおよびＣＤ２８細胞質内ドメイン（ＩＣＤ）；（ｘ）ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｙ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；（ｚ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ａａ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；（ｂｂ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｃｃ）ＣＤ８ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｄｄ）ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、および４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｅｅ）ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｆｆ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；（ｇｇ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｈｈ）ＣＤ８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；（ｉｉ）ＣＤ８ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｊｊ）ＣＤ８ ＩＣＤ；（ｋｋ）ＣＤ８ ＴＭ；（ＩＩ）ＣＤ８ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｍｍ）ＣＤ８ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｎｎ）ＣＤ８ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｏｏ）ＣＤ８、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｐｐ）ＣＤ８ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｑｑ）ＣＤ８ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；または（ｒｒ）共刺激ドメインであるＩＣＤの不在下でのＣＤ８ ＴＭおよびＣＤ３ゼータ。場合によっては、操作されたＣＤ５特異的受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体である。操作されたＣＤ５特異的受容体がＣＡＲである場合、ＣＡＲは、ＣＤ５に対するｓｃＦｖまたはリガンドであるＣＤ標的化細胞外ドメインを含み得る。ＣＤ５特異的ＣＡＲは、重鎖および軽鎖を有するｓｃＦｖを含み得、ＣＡＲをコードする配列内の重鎖は、５’から３’方向において軽鎖の上流にある。ＣＤ５特異的ＣＡＲは、重鎖および軽鎖を有するｓｃＦｖを含み得、ＣＡＲをコードする配列内の重鎖は、５’から３’方向において軽鎖の下流にある。特定の場合には、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、コドン最適化されたｓｃＦｖを含むか、またはヒト化ｓｃＦｖを含む。ｓｃＦｖは、配列番号１または配列番号３によってコードされ得る。ｓｃＦｖは、配列番号２または配列番号４を含み得る。

【0021】

特定の実施形態において、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、ＣＤ８アルファ、Ｉｇ重鎖、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体、ＣＤ３シグナル伝達ペプチド、ＣＤ４シグナル伝達ペプチド、または１つ以上の他の表面受容体に由来するシグナルペプチドに由来するもの等のシグナル伝達ペプチドを含む。

【0022】

ＣＤ５特異的ＣＡＲの一部の実施形態において、ＴＭは、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、または配列番号１３によってコードされる。ＴＭは、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、または配列番号１４を含み得る。特定のＩＣＤが利用される場合、これは、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、または配列番号２１によってコードされ得る。ＩＣＤは、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、または配列番号２２を含み得る。特定の場合には、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、ＣＤ２７、ＯＸ－４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ４０Ｌ、２Ｂ４、ＤＮＡＭ、ＣＳ１、ＣＤ４８、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０、ＩＣＯＳ、またはそれらの組合せに由来するＩＣＤを含む。

【0023】

特定の実施形態において、操作されたＣＤ５特異的受容体は、ＣＤ５特異的ｓｃＦｖと膜貫通ドメインとの間にヒンジを含むＣＤ５特異的ＣＡＲである。ヒンジは、ＩｇＧヒンジ（ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＧ３ヒンジ、またはＩｇＧ４ヒンジ、ＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ８－アルファヒンジ等）であってよく、ヒンジは、Ｇｌｙ３で構成される人工スペーサを含むか、またはヒンジは、ＩｇＧのＣＨ１、ＣＨ２、および／もしくはＣＨ３ドメインを含む。ヒンジは、配列番号２３もしくは２５によってコードされ得るか、または配列番号２４もしくは配列番号２６を含み得る。

【0024】

発現構築物は、操作されたＣＤ５特異的受容体以外の目的のポリペプチドをコードし得、これは、２Ａ要素（例えば、Ｅ２Ａ（配列番号３１によってコードされるものを含むか、または配列番号３２を含む））またはＩＲＥＳ要素によって構築物上で分離され得る。目的のポリペプチドは、治療用タンパク質、または細胞の活性、増殖、および／もしくは持続性を増強するタンパク質であり得る。目的のポリペプチドは、自殺遺伝子（例えば、非分泌性変異型ＴＮＦ－アルファ、誘導性カスパーゼ９、ＨＳＶ－チミジンキナーゼ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ５２、またはＥＧＦＲｖ３）、サイトカイン、増殖、拡大、および／もしくは代謝フィットネスを増強するヒトもしくはウイルスタンパク質、またはそれらの組合せであり得る。特定の実施形態において、発現構築物は、ＣＤ５特異的ＣＡＲに加えて、１つ以上のサイトカインをコードし、サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－７、またはそれらの組合せであり得る。ＩＬ－１５が利用される場合、これは、配列番号２９によってコードされ得るか、または配列番号３０を含み得る。

【0025】

特定の場合には、発現構築物は、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、または配列番号４７によってコードされるＣＤ５特異的ＣＡＲをコードする。操作されたＣＤ５特異的受容体は、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、または配列番号４８を含むＣＡＲであり得る。

【0026】

実施形態として、ウイルスベクター（アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、またはレトロウイルスベクター）または非ウイルスベクター（プラスミド、リポソーム、ナノ粒子、脂質、炭水化物、またはそれらの組合せ）が挙げられる、本明細書中に包含されるあらゆる発現構築物を含むあらゆるベクターが挙げられる。また、実施形態として、本開示の発現構築物を含むあらゆる免疫細胞が挙げられ、免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ＭＳＣ、または樹状細胞であり得る。免疫細胞がＮＫ細胞である場合、ＮＫ細胞は、臍帯血、末梢血、人工多能性幹細胞、骨髄、または細胞株に由来し得る。ＮＫ細胞株は、ＮＫ－９２細胞株、または腫瘍に由来する別のＮＫ細胞株、または健康なＮＫ細胞もしくは前駆細胞であり得る。特定の場合には、ＮＫ細胞は、臍帯血単核細胞に由来する。ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞であり得る。ＮＫ細胞は、ＩＬ－１５、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３、ＩＬ－７、またはそれらの組合せが挙げられる、１つ以上の外因的に提供されるサイトカインを発現し得る。免疫細胞において、１つ以上の内因性遺伝子は、例えばＣＲＩＳＰＲを用いて、発現が部分的または完全に引き下げられるように、発現が修飾され得る。内因性遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＴＬＡ－４、ＴＤＡＧ８、ＣＤ３８、ＣＲＥＭ、およびそれらの組合せからなる群から選択され得る。

【0027】

本開示の実施形態は、本明細書中に記載される免疫細胞の集団を含み、前記細胞は、適切な培地中に存在する。集団は、例えば凍結状態で、貯蔵施設に収容されてよく、培地は、１つ以上の凍結保護剤を含んでよい。特定の実施形態において、免疫細胞の集団は、ＣＡＲおよびＩＬ－１５をコードする発現構築物を含むＮＫ細胞である。ＣＡＲおよびＩＬ－１５は、配列番号３３、配列番号３５、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４５、または配列番号４７によってコードされ得、そして配列番号３４、配列番号３６、配列番号３８、配列番号４０、配列番号４２、配列番号４４、配列番号４６、または配列番号４８に含まれ得る。

【0028】

本開示の実施形態は、個体、例えばＣＤ５陽性がんを有する個体においてＣＤ５陽性細胞を死滅させる方法であって、本明細書中に包含されるあらゆる発現構築物を有する有効量の細胞を個体に投与する工程を含む方法を含む。細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、インバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ガンマデルタＴ細胞、樹状細胞、またはそれらの混合物等の免疫細胞であり得る。ＮＫ細胞は、臍帯血、臍帯血単核細胞、末梢血、人工多能性幹細胞、骨髄、細胞株、またはそれらの混合物に由来し得る。細胞は、個体に対して、同種異系であっても自己由来であってもよい。個体は、ヒト等の哺乳動物であり得る。細胞は、個体に１回以上投与され得る。個体への細胞の投与間の期間は、１～２４時間、１～７日、１～４週、１～１２ヶ月、または１年以上であり得る。あらゆる処置方法はさらに、有効量の追加の療法、例えば、外科手術、放射線、遺伝子療法、免疫療法（１つ以上の抗体を含む）、またはホルモン療法を個体に施す工程を含み得る。細胞は、注射によって、静脈内、動脈内、腹腔内、気管内、腫瘍内、筋肉内、内視鏡的、病変内、頭蓋内、経皮的、皮下、局所的、全身に、灌流によって、腫瘍微小環境内に、またはそれらを組み合わせて個体に投与され得る。本方法はさらに、個体においてＣＤ５陽性がんを特定する工程、および／または発現構築物を有する細胞を生成する工程を含み得る。

【0029】

本発明の一実施形態に関して論じられるあらゆる限定が、本発明の他のあらゆる実施形態に当て嵌まり得ることが具体的に企図される。さらに、本発明のあらゆる組成物が、本発明のあらゆる方法に用いられ得、そして本発明のあらゆる方法が用いられて、本発明のあらゆる組成物が製造または利用され得る。また、実施例に記載される実施形態の態様は、発明の概要、発明の詳細な説明、特許請求の範囲、および図面の簡単な説明等、異なる実施例における他の場所または本出願における他の場所で論じられる実施形態の文脈において実施され得る実施形態である。

【0030】

上記は、以下の発明の詳細な説明がよりよく理解され得るように、本開示の特徴および技術的利点をかなり広く概説している。特許請求の範囲の主題を形成する追加の特徴および利点を、本明細書中で以降に説明する。開示される概念および特定の実施形態は、本設計の同じ目的を実行するために他の構造を修正または設計するための基礎として容易に利用され得ることが当業者によって理解されるべきである。また、そのような等価の構成は、添付の特許請求の範囲に示される精神および範囲から逸脱しないことが当業者によって理解されるべきである。更なる目的および利点と共に、構成および操作方法の双方に関して、本明細書中で開示される設計の特徴であると考えられる新規の特徴は、添付の図面に関連して考慮される場合、以下の説明からよりよく理解されるであろう。しかしながら、各図は、例示および説明のみを目的として提供されており、本開示の限定の定義として意図されないことが明確に理解されるべきである。

【0031】

次に、本開示をより完全に理解するために、以下の説明を、添付の図面と併せて参照する。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1A】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物のマップ。

【図1B】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞と比較して、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物を形質導入したＮＫ細胞の形質導入効率を示す棒グラフ（左から右へ、バーは、形質導入されていない細胞、ＣＤ５ＣＡＲ ４１ＢＢ－ＣＤ３ζを有する細胞、およびＣＤ５ ＣＡＲ ＣＤ２８－ＣＤ３ζを有する細胞を表す）。

【図1C】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。ＮＴ ＮＫ細胞と比較したＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の倍率変化増殖を示すグラフであり、ここで０日目は形質導入の日を示す。

【図1D】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。ＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍と６時間共培養した後のＮＴ ＮＫ細胞と比較した、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のサイトカイン産生（ＩＦＮｇ、ＴＮＦα）および脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）のパーセンテージを示す棒グラフ（左から右へ、バーは、形質導入されていない細胞、ＣＤ５ＣＡＲ ４１ＢＢ－ＣＤ３ζを有する細胞、およびＣＤ５ＣＡＲ ＣＤ２８－ＣＤ３ζを有する細胞を表す）。

【図1E】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζまたはＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＮＴ ＮＫ細胞と４時間共培養した後のＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭの溶解パーセントを示すグラフ（ＮＴが下部にあり、ＣＤ５ＣＡＲ ＣＤ２８－ＣＤ３ζが上部にある）。

【図1F】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。ホタルルシフェラーゼ（Ｆｆｌｕｃ）を形質導入し、そして未処置のままにしたか、またはＮＴ ＮＫ細胞もしくはＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζもしくはＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置したＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍移植マウスにおいて、経時的な腫瘍増殖を示す生物発光イメージング（ＢＬＩ）。

【図1G】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。１Ｆパネルに示すマウスの様々な群を比較するＢＬＩデータの平均放射輝度をプロットしたグラフ（ＣＣＲＦ－ＣＥＭ単独が左に、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＋ＣＤ５ＣＡＲ ＣＤ２８－ＣＤ３ζが右にある）。

【図1H】臍帯血ＮＫ細胞は、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ構築物により首尾よく形質導入され得、そしてＣＤ５＋腫瘍細胞を標的とし得るが、インビボで長期治癒をもたらさない。１Ｆパネルに示すマウスの様々な群の生存曲線を示すグラフ（ＣＣＲＦ－ＣＥＭ単独が左に、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＋ＣＤ５ＣＡＲ ＣＤ２８－ＣＤ３ζが右にある）。

【0033】

【図2A】ＮＫ細胞生物学に関連する共刺激分子を組み込むことによるＣＤ５ ＣＡＲ構築物設計の最適化。膜貫通ドメインおよび共刺激ドメインが異なる種々のＣＤ５ ＣＡＲ構築物のマップ。

【図2B】ＮＫ細胞生物学に関連する共刺激分子を組み込むことによるＣＤ５ ＣＡＲ構築物設計の最適化。非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞と比較した、種々のＣＤ５ ＣＡＲ構築物を形質導入したＮＫ細胞の形質導入効率を示す棒グラフである。

【図2C】ＮＫ細胞生物学に関連する共刺激分子を組み込むことによるＣＤ５ ＣＡＲ構築物設計の最適化。ＮＴ ＮＫ細胞と比較した種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞生成物の拡大（経時的な百万単位の細胞数）を示すグラフであり、ここで０日目は形質導入の日を示す。

【図2D】ＮＫ細胞生物学に関連する共刺激分子を組み込むことによるＣＤ５ ＣＡＲ構築物設計の最適化。ＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍と６時間共培養した後のＮＴ ＮＫ細胞と比較した、種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のサイトカイン産生（ＩＦＮｇ、ＴＮＦα）および脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）のパーセンテージを示す棒グラフ。

【図2E】ＮＫ細胞生物学に関連する共刺激分子を組み込むことによるＣＤ５ ＣＡＲ構築物設計の最適化。種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞またはＮＴ ＮＫ細胞と４時間共培養した後のＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭの溶解パーセントを示すグラフ。

【0034】

【図3A】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ２８またはＤＡＰ１２共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、腫瘍制御を有意に向上させる。ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ２８またはＤＡＰ１２共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、腫瘍制御を有意に向上させる。ホタルシフェラーゼ（Ｆｆｌｕｃ）を形質導入し、そして未処置のままにしたか、またはＮＴ ＮＫ細胞もしくはＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζもしくはＣＤ５－ＤＡＰ１２－ＣＤ３ζもしくはＣＤ５－ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置したＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍移植マウスにおいて、経時的な腫瘍増殖を示す生物発光イメージング（ＢＬＩ）。

【図3B】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ２８またはＤＡＰ１２共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、腫瘍制御を有意に向上させる。３Ａパネルに示すマウスの様々な群を比較する、ＢＬＩデータの平均放射輝度をプロットしたグラフであり、各マウスのデータを別々にプロットしており、同じ群に属するマウスを異なる色で標識している（高ＣＤ５ ＣＣＲＦ－ＣＥＭ単独が左の線である；ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＋ＣＤ５ ＣＡＲ ＣＤ２８ＣＤ３ζが右側の線である）。

【図3C】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ２８またはＤＡＰ１２共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、腫瘍制御を有意に向上させる。３Ａパネルに示すマウスの様々な群の生存曲線を示すグラフ。

【図3D】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ２８またはＤＡＰ１２共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、腫瘍制御を有意に向上させる。パネル３Ａに記載する種々の群内のマウスの体重を示すグラフ。各マウスのデータを別々にプロットしており、同じ群に属するマウスを異なる色で標識している（ＮＴは左側の垂直線であり；ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＋ＣＤ５ ＣＡＲ ＣＤ２８ＣＤ３ζは右側の垂直線であり；ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＋ＣＤ５ ＣＡＲ ＤＡＰ１０ＣＤ３ζは、約４０日後のそれ自体の上部の水平線である）。

【図3E】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ２８またはＤＡＰ１２共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞と比較して、腫瘍制御を有意に向上させる。ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、低ＣＤ５発現であっても、Ｔ－ＡＬＬ細胞株に対して優れた活性を示す。ＣＤ５発現が低いＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍を移植してから、未処置のままにしたか、または非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞もしくは設計が種々（ＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ、ＣＤ５－ＤＡＰ１２－ＣＤ３ζ、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζ、ＣＤ５－ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζ）のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置したマウスの様々な群の生存曲線を示すグラフ（低ＣＤ５ ＣＲＦ単独が、最も左側の垂直線であり；低ＣＤ５ ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＋ＣＤ５ＣＡＲ ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζは、上部の水平線であり；低ＣＤ５ ＣＣＲＦ－ＣＥＭ＿ＣＤ５ＣＡＲ ＣＤ２８－ＣＤ３ζは、生存率約６０％にて最も右側で終わる短い垂直線である）。

【0035】

【図4A】ＤＡＰ１０シグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ５＋マントル細胞リンパ腫のＰＤＸマウスモデルにおいて転帰を向上させる。０日目にマウスにＰＤＸ細胞株を皮下注射し、２１日目にマウスに、ＤＡＰ１０共刺激と共にＣＤ５－ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζ ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を尾静脈を介して注射し、そして６０日目にマウスを屠殺して、フローサイトメトリによって組織を分析したことを示すマウス実験計画の概略図。

【図4B】ＤＡＰ１０シグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ５＋マントル細胞リンパ腫のＰＤＸマウスモデルにおいて転帰を向上させる。処置を受けなかったマウス、またはＤＡＰ１０共刺激と共にＣＤ５ ＣＡＲで処置したマウスにおける皮下腫瘍、脾臓、および骨髄におけるＣＤ４５＋ＣＤ５＋腫瘍細胞の絶対数を示す棒グラフ（腫瘍単独が左側の棒グラフである）。

【0036】

【図5A】ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、プロテオミクスレベルでの活性化プロファイルの増強を示す。一緒に組み合わせたＮＴおよびＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞由来の種々のクラスターを示すＴＳＮＥプロット。

【図5B】ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、プロテオミクスレベルでの活性化プロファイルの増強を示す。ＤＡＰ１０共刺激がある、非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞およびＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞におけるクラスターを示すＴＳＮＥプロット。クローン８および１１は、ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞に特異的であるようである。

【図5C】ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、プロテオミクスレベルでの活性化プロファイルの増強を示す。Ｘ軸上にＮＫ細胞の種々のマーカーを、そしてＹ軸上に種々のクラスターを示すヒートマップ。これは、ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞に特異的なクラスター８および１１の、ＮＫ細胞活性化マーカー（ＤＮＡＭ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ６９、成熟マーカー（ＥＯＭＥＳおよびＴ－ＢＥＴ）、および細胞傷害性マーカー（パーフォリン、グランザイムＢ、およびＴＲＡＩＬ）が富化されていることを示す。

【0037】

【図6A】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、多機能性および代謝フィットネスの増強を示す。非形質導入（ＮＴ）の、または種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を形質導入した（共刺激なし（ＣＤ３ζ単独）、またはＣＤ５＋抗原による刺激後の種々の共刺激ドメインを有する）ＮＫ細胞の多機能性を示す棒グラフであり、これは、抗原刺激に応答して、単一細胞レベルにて２、３、４、または５＋タンパク質のいずれかを産生しているＮＫ細胞のパーセンテージを示す。

【図6B】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、多機能性および代謝フィットネスの増強を示す。単一細胞レベルでのサイトカインの産生を示す多機能性ヒートマップ。各行は、ＮＫ細胞の状態を表し、各列は、特定のサイトカインのセットを産生するＮＫ細胞のクラスターを表し、クラスターが多いほどＮＫ細胞は多機能性である。

【図6C】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、多機能性および代謝フィットネスの増強を示す。多機能性強度指数を示す棒グラフであり、ＮＫ細胞（ＮＴまたは種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞設計）が幾らの割合で、単一細胞レベルにて、エフェクタ、刺激性、または化学誘引性サイトカインを産生するかを示す（化学誘引スコアリングがバーの上部にあり、エフェクタスコアリングがバーの下部にある）。

【図6D】ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、多機能性および代謝フィットネスの増強を示す。ＮＴ ＮＫ細胞、または種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞構築物を形質導入したＮＫ細胞の酸素消費速度（ＯＣＲ）を示すグラフである。これは、ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の、ミトコンドリア活性および代謝フィットネスの尺度であるＯＣＲが最も高いことを示している。

【0038】

【図7A】ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、記憶様特性を示し、そして複数回の腫瘍再チャレンジの後にＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭを死滅させ続ける。複数回のＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍再チャレンジがあったＩｎｃｕｃｙｔｅリアルタイム細胞傷害性アッセイについての実験計画を詳述する概略図。腫瘍細胞を赤色色素で標識してから、リアルタイムイメージングを行った。

【図7B】ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、記憶様特性を示し、そして複数回の腫瘍再チャレンジの後にＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭを死滅させ続ける。生腫瘍細胞の負荷と相関する経時的な赤色のカウントを示すグラフ。これは、最初に、非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞であっても、全てのＮＫ細胞がＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍を死滅させることができ、次いで、複数回の腫瘍再チャレンジの後に、経時的に、ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のみが腫瘍を制御することができることを示している。ＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ細胞およびＣＤ１９／ＩＬ－１５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、無関係のＣＡＲ対照として用いた。

【図7C】ＤＡＰ１０－ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、記憶様特性を示し、そして複数回の腫瘍再チャレンジの後にＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭを死滅させ続ける。生腫瘍細胞の負荷と相関する経時的な細胞コンフルエンス（％）を示すグラフ。これは、最初に、非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞であっても、全てのＮＫ細胞がＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍を死滅させることができ、次いで、複数回の腫瘍再チャレンジの後に、経時的に、ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のみが腫瘍を制御することができることを示している。

【0039】

【図8A】ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が持続して、インビボでの腫瘍再チャレンジに対するリコールを開始することができる。照射のタイミング、ＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍注射のタイミング、ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞注入のタイミング、およびＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍（ＧＦＰを形質導入した）による再チャレンジのタイミングを示すインビボマウスモデルの実験計画の詳細を示す概略図。

【図8B】ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が持続して、インビボでの腫瘍再チャレンジに対するリコールを開始することができる。ヒトＣＤ４５＋ゲートおよびＮＫ細胞ゲート（ＣＤ５６＋およびＧＦＰ－）を示す、再チャレンジ前のフローサイトメトリデータ（左側パネル）および再チャレンジ後のフローサイトメトリデータ（右側パネル）を示すＦＡＣＳプロット。これは、ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、腫瘍再チャレンジ後に増殖し、そしてＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍に対するリコール応答を開始することができることを示している。

【0040】

本開示の種々の実施形態が、本明細書中で示され、かつ説明されているが、そのような実施形態は、単なる例として提供されていることは、当業者であれば明らかであろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換を行うことができる。本明細書中に記載される本開示の実施形態に対する種々の代替形態が使用され得ることを理解されたい。

【発明を実施するための形態】

【0041】

１．定義の例
長年にわたる特許法の慣例に従い、本明細書において、特許請求の範囲を含め、ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇという語と共に使用される場合、「ａ」および「ａｎ」という語は、「１つ以上」を表す。本開示のいくつかの実施形態は、本開示の１つまたは複数の要素、方法ステップ、および／または方法から構成されるか、またはこれらから本質的に構成され得る。本明細書に記載される任意の方法または組成物が、本明細書に記載される任意の他の方法または組成物に関して実施され得、異なる実施形態が組み合わされ得ることが企図される。

【0042】

本明細書全体を通して、文脈上他に必要とされない限り、「含む」、「包含する」および「含んでいる」という語は、記載されたステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を含むことを意味するが、他のステップもしくは要素またはステップもしくは要素の群を排除することを意味しないと理解される。「からなる」とは、「～からなる」という語句の後に続くものを含むこと、およびそれらに限定されることを意味する。したがって、「～からなる」という表現は、列挙された要素が必須または必須であり、他の要素が存在しない可能性があることを示す。 から本質的になる」とは、その語句の後に列挙された要素を含むことを意味し、列挙された要素について開示で指定された活性または作用を妨げないか、またはそれに寄与しない他の要素に限定される。従って、「本質的にからなる」という語句は、列挙された要素が必須または必須であるが、他の要素は任意であり、列挙された要素の活性または作用に影響を及ぼすか否かに応じて存在してもしなくてもよいことを示す。

【0043】

本明細書全体を通して、「一実施形態」、「一実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある実施形態」、「追加の実施形態」、または「さらなる実施形態」、またはそれらの組み合わせへの言及は、実施形態に関連して記載される特定の特徴、構造、または特性が、本発明の少なくとも1つの実施形態に含まれることを意味する。 したがって、本明細書を通じて様々な場所に前述の語句が現れるが、必ずしもすべてが同じ実施形態を指すわけではない。さらに、特定の特徴、構造、または特性は、1つまたは複数の実施形態において任意の適切な方法で組み合わせることができる。

【0044】

本明細書で使用される場合、「または」および「および／または」という用語は、複数の構成要素を組み合わせて、または互いに排他的に説明するために利用される。例えば、″ｘ、ｙ、および／またはｚ″は、″ｘ″単独、″ｙ″単独、″ｚ″単独、″ｘ、ｙ、およびｚ″、″（ｘおよびｙ）またはｚ″、″ｘまたは（ｙおよびｚ）″、または″ｘまたはｙまたはｚ″を指すことができる。ｘ、ｙ、またはｚが実施形態から特に除外され得ることが特に企図される。

【0045】

本出願を通じて、用語「約」は、値を決定するために採用される装置または方法についての誤差の標準偏差を値が含むことを示すために、細胞および分子生物学の領域におけるその平明かつ通常の意味に従って使用される。

【0046】

本明細書で使用する「操作された」という用語は、細胞、核酸、ポリペプチド、ベクターなどを含む、人の手によって生成された実体を指す。少なくともいくつかの場合において、操作された実体は合成されたものであり、天然には存在しない要素、または本開示において利用される方法で構成された要素からなる。

【0047】

本明細書で使用される「単離された」という用語は、分子または生物学的物質または細胞物質が他の物質から実質的に遊離していることを指す。一態様において、「単離された」という用語は、天然源に存在するような、それぞれ他のＤＮＡもしくはＲＮＡ、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官から分離された、ＤＮＡもしくはＲＮＡのような核酸、またはタンパク質もしくはポリペプチド、または細胞もしくは細胞小器官、または組織もしくは器官を指す。また、「単離された」という用語は、組換えＤＮＡ技術によって産生された場合には細胞材料、ウイルス材料、培養培地、または化学合成された場合には化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない核酸またはペプチドを指す。さらに、「単離された核酸」とは、断片として天然に存在せず、天然の状態では見出されない核酸断片を含むことを意味する。用語「単離された」はまた、本明細書において、他の細胞タンパク質から単離されたポリペプチドを指すために使用され、精製ポリペプチドおよび組換えポリペプチドの両方を包含することを意味する。用語「単離された」はまた、本明細書において、他の細胞または組織から単離された細胞または組織を指すために使用され、培養された細胞または組織および操作された細胞または組織の両方を包含することを意味する。

【0048】

本明細書で使用される「予防する」、及び「防御する」、「予防される」等の類似の語は、疾患又は状態、例えばがんの発生又は再発の可能性を予防し、抑制し、又は低減するためのアプローチを示す。また、疾患または病態の発症もしくは再発を遅延させること、または疾患または病態の症状の発生もしくは再発を遅延させることも指す。本明細書で使用される場合、「予防」および同様の語は、疾患または状態の発症または再発の前に、疾患または状態の強度、影響、症状および／または負担を軽減することも含む。

【0049】

本明細書で使用される「試料」という用語は、一般に生物学的試料を指す。試料は、個体の組織又は細胞から採取することができる。いくつかの例では、試料は、組織生検、血液（例えば、全血）、血漿、細胞外液、乾燥血液斑、培養細胞、廃棄組織からなる、またはそれらに由来する。試料は、採取前に採取源から分離されていてもよい。非限定的な例としては、血液、脳脊髄液、胸水、羊水、リンパ液、唾液、尿、便、涙、汗、または粘膜排泄物、および採取前に一次供給源から分離された他の体液が挙げられる。いくつかの例では、試料は、試料調製中にその一次供給源（細胞、組織、血液などの体液、環境試料など）から分離される。試料は、その一次供給源から精製または濃縮されてもされなくてもよい。場合によっては、一次供給源はさらなる処理の前にホモジナイズされる。試料は、バフィーコート、脂質、または粒子状物質を除去するために、濾過または遠心分離される場合がある。サンプルはまた、核酸について精製または濃縮されるかもしれないし、ＲＮａｓｅで処理されるかもしれない。サンプルは、無傷、断片化、または部分的に分解された組織または細胞を含んでもよい。

【0050】

本明細書で使用される「対象」という用語は、一般に、処理または分析中の生物学的試料を有する個体であって、特定の場合には、がんを有するか、またはがんを有する疑いがある個体を指す。対象は、哺乳動物、例えばヒト、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス、ウサギ）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、七面鳥、ニワトリ）、家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類）、ウマ、およびトランスジェニック非ヒト動物を含む、方法または材料の対象である任意の生物または動物対象であり得る。対象は、例えば、良性もしくは悪性の新生物、またはがんなどの疾患（病状と称される場合がある）を有するか、または有する疑いのある患者であり得る。対象者は、治療中又は治療を受けたことがある。被験者が無症状の場合もある。対象者は、健康な個人であるが、がんの予防を希望している場合もある。「個体」という用語は、少なくとも場合によっては互換的に使用される。本明細書で使用される「対象」または「個人」は、医療施設に収容されていてもいなくてもよく、医療施設の外来患者として治療されていてもよい。個人は、インターネットを介して１つ以上の医療用組成物の投与を受けてもよい。個体は、ヒトまたは非ヒト動物の任意の年齢を含んでよく、したがって、成人および少年（すなわち、子供）および乳児の両方を含み、胎内の個体も含む。この用語は、医学的治療の必要性を意味するものではないため、個体は、臨床的であるか基礎科学研究の支援であるかにかかわらず、自発的であるか非自発的であるかを問わず、実験に参加することができる。

【0051】

本明細書で使用される「治療」または「治療する」には、疾患または病理学的状態の症状または病理学的状態に対するあらゆる有益なまたは望ましい効果が含まれ、治療される疾患または状態、例えばがんの１つまたは複数の測定可能なマーカーにおける最小限の減少さえも含まれ得る。治療は、任意に、疾患または病態の症状の軽減もしくは改善、または疾患または病態の進行の遅延のいずれかを含むことができる。「治療」は、必ずしも疾患もしくは状態、またはそれらに関連する症状の完全な根絶または治癒を示すものではない。

【0052】

本開示は、特にＣＤ５陽性がん細胞を標的とする養子細胞療法を利用する、ＣＤ５陽性がんの治療法を対象とする方法および組成物に関する。特定の実施形態において、ＣＤ５陽性がんを標的とする、あらゆる種類の遺伝子操作された哺乳動物免疫細胞（少なくともヒトＮＫ細胞が挙げられる）が生成される。本開示は、ＣＤ５に対するあらゆる種類の遺伝子操作された受容体（キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が挙げられる）を包含する。特定の実施形態において、ＣＡＲで使用されるＣＤ５標的化単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を発現し、場合によっては、細胞の生存および増殖を支援するためのＩＬ－１５等の１つ以上のサイトカインも発現するレトロウイルス構築物が挙げられる、いくつかの新規の発現構築物が提供される。

【0053】

本明細書中で提供されるのは、少なくともＴ細胞悪性腫瘍、例えばＴ細胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）およびＴ細胞リンパ腫上で発現されるＣＤ５を標的とする設計されたＣＡＲである。ＮＫ細胞は、正常Ｔ細胞とは異なり、全てのＴリンパ芽球性白血病細胞ならびに正常Ｔ細胞上で発現される分子であるＣＤ５を発現しないので、Ｔ細胞悪性腫瘍の免疫療法にとって、ＣＤ５を標的とするのにとりわけ有利である。したがって、ＣＡＲ Ｔ細胞とは異なり、ＣＡＲ ＮＫ細胞はＣＡＲ．ＣＤ５媒介フラトリサイドによって標的とされない。ゆえに、本開示は、ＣＤ５に対する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を発現し、場合によっては、ＮＫ細胞の生存および増殖を支援するためのＩＬ－１５も発現するいくつかの新規のレトロウイルス構築物を提供する。一連のインビトロ研究およびインビボ研究において、本発明者らは、Ｔ細胞悪性腫瘍に対するＣＡＲ５／ＩＬ－１５を形質導入したＣＢ－ＮＫ細胞の活性を確認した。
Ｉ．遺伝子操作された受容体

【0054】

本開示の免疫細胞は、ＣＤ５を標的とする１つ以上の抗原結合受容体、例えば操作されたＣＡＲまたはこれ以外にも操作されたＴＣＲを発現するように遺伝子操作され得る。例えば、免疫細胞は、ＣＤ５に対する抗原特異性を有するＣＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するように修飾された免疫細胞であり得る。他のＣＡＲおよび／またはＴＣＲは、ＣＤ５抗原受容体発現細胞と同じ細胞によって発現され得、そして異なる抗原に向けられ得る。一部の態様において、免疫細胞は、ＣＲＩＳＰＲを用いるＣＡＲまたはＴＣＲのノックインによってＣＤ５特異的ＣＡＲまたはＣＤ５特異的ＴＣＲを発現するように操作される。

【0055】

細胞の適切な修飾方法が、当該技術において知られている。例えば、上記のＳａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ参照。例えば、Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，２００８およびＪｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００９に記載されている形質導入技術を用いて、細胞は、がん抗原に対する抗原特異性を有するＣＡＲまたはＴＣＲを発現するように形質導入され得る。

【0056】

一部の態様において、細胞は、１つ以上の抗原標的化受容体（その少なくとも１つがＣＤ５に対するものである）をコードする、遺伝子操作を介して導入された１つ以上の核酸、およびそのような核酸の遺伝子操作された産物を含む。一部の実施形態において、核酸は異種である、すなわち、細胞または細胞から得られる試料において、通常存在せず、例えば、例えば操作されることとなる細胞および／またはそのような細胞が由来する生物において通常見出されない、別の生物または細胞から得られるものである。一部の実施形態において、核酸は、天然に存在せず、例えば、天然に見出されない核酸（例えばキメラ）である。

【0057】

ＣＡＲおよび組換えＴＣＲが挙げられる例示的な抗原受容体、ならびに当該受容体を操作して細胞中に導入する方法として、例えば、国際公開第２０００／１４２５７号パンフレット、国際公開第２０１３／１２６７２６号パンフレット、国際公開第２０１２／１２９５１４号パンフレット、国際公開第２０１４／０３１６８７号パンフレット、国際公開第２０１３／１６６３２１号パンフレット、国際公開第２０１３／０７１１５４号パンフレット、国際公開第２０１３／１２３０６１号パンフレット、米国特許出願公開第２００２／１３１９６０号明細書、米国特許出願公開第２０１３／２８７７４８号明細書、米国特許出願公開第２０１３／０１４９３３７号明細書、米国特許第６，４５１，９９５号明細書、米国特許第７，４４６，１９０号明細書、米国特許第８，２５２，５９２号明細書、米国特許第８，３３９，６４５号、米国特許第８，３９８，２８２号明細書、米国特許第７，４４６，１７９号明細書、米国特許第６，４１０，３１９号明細書、米国特許第７，０７０，９９５号明細書、米国特許第７，２６５，２０９号明細書、米国特許第７，３５４，７６２号明細書、米国特許第７，４４６，１９１号明細書、米国特許第８，３２４，３５３号明細書、および米国特許第８，４７９，１１８号明細書、ならびに欧州特許出願公開第２５３７４１６号明細書に記載されているもの、ならびに／またはＳａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１２によって記載されているものが挙げられる。一部の態様において、遺伝子操作された抗原受容体として、米国特許第７，４４６，１９０号明細書に記載されているＣＡＲ、および国際公開第２０１４／０５５６６８号パンフレットに記載されているものが挙げられる。
Ａ．キメラ抗原受容体

【0058】

特定の実施形態において、ａ）１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、ｂ）膜貫通ドメイン、およびｃ）ＣＤ５に特異的に結合することを含む、ＣＤ５を標的とする少なくとも１つの抗原結合領域を含む細胞外ドメインを少なくとも含むＣＤ５特異的ＣＡＲが利用される。特定の実施形態において、抗原結合領域は、抗体またはその機能的断片であるが、他の場合では、ＣＡＲの抗原結合領域は、抗体またはその機能的断片（ＣＤ５に対するリガンド等）ではない。一部の実施形態において、ＣＤ５特異的ＣＡＲはＣＤ５のみに結合するが、他の場合では、単一ポリペプチドとしてのＣＡＲは、２つ以上の抗原結合ドメインを含むことによって二重特異性であり、その一方はＣＤ５に結合し、他方は別の非同一抗原に結合する。

【0059】

一部の実施形態において、操作された抗原受容体として、活性化もしくは刺激ＣＡＲ、または共刺激ＣＡＲが挙げられるＣＡＲが挙げられる（国際公開第２０１４／０５５６６８号パンフレット参照）。ＣＡＲは一般に、一部の態様においてリンカーおよび／または膜貫通ドメインを介して、１つ以上の細胞内シグナル伝達構成要素に連結される細胞外抗原（またはリガンド）結合ドメインを含む。そのような分子は、典型的には、天然抗原受容体を介したシグナル、共刺激受容体と組み合わせたそのような受容体を介したシグナル、および／または共刺激受容体単独を介したシグナルを模倣するか、またはこれに近似する。

【0060】

キメラ構築物は、裸のＤＮＡとして、または適切なベクター内にあって免疫細胞中に導入され得ると考えられる。裸のＤＮＡを用いるエレクトロポレーションによって細胞を安定して形質移入する方法が、当該技術において知られている。例えば、米国特許第６，４１０，３１９号参照。裸のＤＮＡは、一般に、発現に適した向きにプラスミド発現ベクター内に含有される、キメラ受容体をコードするＤＮＡを指す。

【0061】

これ以外にも、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレンチウイルスベクター）を用いて、キメラＣＡＲ構築物を免疫細胞中に導入することができる。本開示の方法に従って用いるのに適したベクターは、免疫細胞において非複製性である。細胞内で維持されるウイルスのコピー数が、細胞の生存率を維持するほど十分に低い、ウイルスに基づく多数のベクター、例えば、ＨＩＶ、ＳＶ４０、ＥＢＶ、ＨＳＶ、またはＢＰＶに基づくベクターが知られている。

【0062】

本開示の特定の実施形態は、少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメイン、膜貫通ドメイン、および１つ以上のシグナル伝達モチーフを含む細胞外ドメインを含む、場合によっては免疫原性（ｈＣＡＲ）を引き下げるためにヒト化されたＣＡＲが挙げられる、ＣＤ５特異的ＣＡＲポリペプチドをコードする核酸が挙げられる核酸の使用に関する。特定の実施形態において、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、１つ以上の抗原間の共有空間を含むエピトープを認識し得る。特定の実施形態において、結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の可変領域、および／またはそれらの抗原結合断片を含み得る。別の実施形態において、その特異性は、受容体に結合するペプチド（例えばサイトカイン）に由来する。

【0063】

ヒトＣＤ５ ＣＡＲ核酸は、ヒト患者のための細胞免疫療法を強化するのに用いられるヒト遺伝子であり得ると考えられる。特定の実施形態において、本開示は、全長ＣＤ５特異的ＣＡＲ ｃＤＮＡまたはコード領域を含む。抗原結合領域またはドメインは、特定のヒトモノクローナル抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のＶ_Ｈ鎖およびＶ_Ｌ鎖の断片、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，１０９，３０４号明細書に記載されるものを含み得る。また、断片は、ヒト抗原特異的抗体の任意の数の異なる抗原結合ドメインであり得る。より具体的な実施形態において、断片は、ヒト細胞内での発現のためのヒトコドン使用頻度に最適化された配列によってコードされるＣＤ５特異的ｓｃＦｖである。

【0064】

構成は、ダイアボディまたはマルチマー等の多量体であり得る。マルチマーは、軽鎖および重鎖の可変部分の、ダイアボディへの交差対合によって形成される可能性が最も高い。構築物のヒンジ部分は、完全に欠失されることから、第１のシステインが維持されること、セリン置換ではなくプロリンになること、第１のシステインまで切断されることまで、多数の選択肢を有し得る。Ｆｃ部分は欠失され得る。安定および／または二量体化するあらゆるタンパク質が、この目的を果たし得る。Ｆｃドメインの１つのみ、例えばヒト免疫グロブリン由来のＣＨ２またはＣＨ３ドメインのいずれかを用いることができる。二量体化を向上させるように修飾されたヒト免疫グロブリンのヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域を用いることもできる。免疫グロブリンのヒンジ部分のみを用いることもできる。ＣＤ８アルファの一部を用いることもできる。

【0065】

一部の実施形態において、疾患細胞型上で発現されるＣＤ５等のＣＤ５に対する特異性を有するＣＤ５特異的ＣＡＲが構築される。ゆえに、ＣＡＲは、典型的には、その細胞外部分に、１つ以上のＣＤ５結合分子、例えば、１つ以上の抗原結合断片、ドメイン、抗体可変ドメイン、および／またはあらゆる種類の抗体分子を含む。ヒトＣＤ５核酸の例が、受託番号ＮＭ＿０１４２０７でＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎのＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）データベースにある。ヒトＣＤ５ポリペプチドの例が、受託番号ＮＰ＿０５５０２２でＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）にある。当業者であれば、少なくともポリペプチドの知識および日常的な実施に基づいて、ＣＤ５に対するｓｃＦｖを含む抗体を生成することができるが、多数の抗ＣＤ５ ｓｃＦｖおよびモノクローナル抗体が、当該技術において既に存在する。

【0066】

一部の実施形態において、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）に由来する単鎖抗体断片（ｓｃＦｖ）等の抗体分子の抗原結合部分を含む。特定の実施形態において、抗体またはその機能的断片は、Ｈ６５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｃａｌｉｆ．）；クローンＣＲＩＳ１もしくはクローン４Ｃ７（Ａｂｎｏｖａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；Ｗａｌｎｕｔ，Ｃａｌｉｆ．）；ＯＸ－１９（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，Ｃａｌｉｆ．）；Ｌｅｕ－１（Ｂｅｃｔｏｎ－Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆ．）およびＵＣＨＴ２（Ａｃｃｕｒａｔｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，Ｎ．Ｙ．）；５３－７．３（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ；Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，Ｃａｌｉｆ．）；４Ｈ８Ｅ６（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎ．Ｙ．）；Ｔ１０１；ＥＰ２９５２（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｍａｓｓ．）；またはＬ１７Ｆ１２であるか、またはこれに由来する。他の実施形態において、抗体、例えばｓｃＦｖは、抗ＣＤ５抗体Ｄ－９、Ｈ－３、ＨＫ２３１、Ｎ－２０、Ｙ２／１７８、Ｈ－３００、Ｌ１７Ｆ１２、ＣＤ５／５４／Ｆ６、Ｑ－２０、またはＣＣ１７（全てＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄａｌｌａｓ Ｔｅｘ．から入手可能）であるか、またはこれに由来する。また、抗体は、ＣＤ５に対してデノボで生成されるものであってもよく、ｓｃＦｖ配列は、そのようなデノボ抗体から得られ得るか、または誘導され得る。

【0067】

特定の実施形態において、抗ＣＤ５ ＣＡＲは、ＣＤ５に対するリガンドであるか、またはこれを含む細胞外ドメインを含む。特定の実施形態において、抗ＣＤ５ ＣＡＲは、ＣＤ７２（Ｌｙｂ－２）、ｇｐ４０－８０、ｇｐ１５０、ｇｐ２００、ＩｇＶＨフレームワーク領域、ＩＬ－６、ならびにそれらの断片および模擬物を含む細胞外ドメインを含む。

【0068】

キメラ受容体をコードするオープンリーディングフレームの配列は、ゲノムＤＮＡ源、ｃＤＮＡ源から得ることもできるし、（例えばＰＣＲを介して）合成することもできるし、それらの組合せであってもよい。ゲノムＤＮＡのサイズおよびイントロンの数に応じて、ｃＤＮＡまたはその組合せを用いることが望ましい場合がある。というのも、イントロンがｍＲＮＡを安定化することがわかっているからである。また、ｍＲＮＡを安定化するために内因性または外因性の非コード領域を用いることがさらに有利である場合がある。

【0069】

一部の態様において、抗原特異的結合または認識構成要素が、１つ以上の膜貫通および細胞内シグナル伝達ドメインに連結される。一部の実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合される膜貫通ドメインを含む。一実施形態において、ＣＡＲ内のドメインの１つと天然に結合する膜貫通ドメインが用いられる。一部の例において、膜貫通ドメインは、そのようなドメインの、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるように、アミノ酸置換によって選択または修飾される。一部の実施形態における膜貫通ドメインは、天然源または合成源のいずれかに由来する。源が天然である場合、一部の態様におけるドメインは、あらゆる膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域として、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖、またはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＤＡＰ１２、ＤＡＰ１０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、ＧＩＴＲ／ＣＤ３５７等に由来するものが挙げられる（すなわち、少なくともこれらの膜貫通領域を含む）。これ以外にも、一部の実施形態における膜貫通ドメインは、合成である。一部の態様において、合成膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリン等の疎水性残基を主に含む。一部の態様において、フェニルアラニン、トリプトファン、およびバリンのトリプレットが、合成膜貫通ドメインの各末端にて見出される。

【0070】

一部の実施形態において、ＣＤ５ ＣＡＲ核酸は、膜貫通ドメインおよび１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン等の他の共刺激受容体をコードする配列を含む。ＣＤ３ζおよび／またはＦｃεＲＩγによって開始され得るような一次Ｔ細胞活性化シグナルに加えて、キメラ受容体の、標的抗原との結合後の免疫エフェクタ細胞増殖およびエフェクタ機能用の追加の刺激シグナルが利用され得る。例えば、インビボ持続性を向上させ、かつ養子免疫療法の治療的成功を向上させるのに役立ち得る、細胞の活性化の増強のためのヒト共刺激受容体の一部または全部が利用され得る。例として、ＤＡＰ１２、ＤＡＰ１０、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＣＤ２７、４－１ＢＢ、（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、（ＣＤ２７８）、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ、ＣＤ４０、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、および／またはＩＣＡＭ－１等の分子由来の共刺激ドメインが挙げられるが、代替の特定の実施形態において、列挙されるこれらのいずれか１つが、ＣＡＲでの使用から除外され得る。

【0071】

特定の実施形態において、ＮＫ細胞等の免疫細胞を遺伝子修飾するための本明細書中で開示されるプラットフォーム技術は、（ｉ）エレクトロポレーションデバイス（例えばヌクレオフェクタ）を用いる非ウイルス遺伝子導入、（ｉｉ）エンドドメインを介してシグナル伝達するＣＡＲ（例えば、ＣＤ２８／ＣＤ３－ζ、ＣＤ１３７／ＣＤ３－ζ、または他の組合せ）、（ｉｉｉ）ＣＤ５認識ドメインを細胞表面に連結する可変長の細胞外ドメインを有するＣＡＲ、および場合によっては、（ｉｖ）ＣＡＲ^＋免疫細胞をロバストかつ数値的に増殖させることができるようにＫ５６２由来の人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）を含む（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２００８；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。
Ｂ．特定のＣＡＲ実施形態の例

【0072】

特定の実施形態において、特定のＣＤ５ ＣＡＲ分子が、本明細書中に包含される。場合によっては、ＣＡＲのＣＤ５結合ドメインはｓｃＦｖであり、ＣＤ５に結合するあらゆるｓｃＦｖ、および／またはＣＤ５に結合するリガンドが、本明細書中で利用され得る。抗ＣＤ５ ｓｃＦｖがＣＡＲの細胞外ドメインに利用される場合、ｓｃＦｖの可変重鎖および可変軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端の方向において、あらゆる順序であり得る。例えば、可変重鎖は、可変軽鎖のＮ末端側にあり得、またはその逆も同じである。ＣＡＲ内のＣＤ５に結合するｓｃＦｖおよび／またはリガンドは、コドン最適化されていてもされていなくてもよい。特定の実施形態において、ベクターは、ＣＤ５特異的ＣＡＲをコードし、そしてまた１つ以上の他の分子をコードする。例えば、ベクターは、ＣＤ５特異的ＣＡＲをコードし得、そしてまた、別の目的のタンパク質、例えば、別の操作された抗原受容体、自殺遺伝子、および／または特定のサイトカインをコードしてよい。

【0073】

同じ分子上で、ＣＤ５特異的ＣＡＲは、１つ以上の抗原特異的細胞外ドメイン、特異的ヒンジ、特異的膜貫通ドメイン、１つ以上の特異的共刺激ドメイン、および１つ以上の特異的活性化シグナルを含んでよい。例えば２つの異なる抗原（そのうちの１つがＣＤ５である）を標的とするのに、複数の抗原特異的細胞外ドメインが利用される場合、２つの抗原特異的細胞外ドメイン間にリンカーが存在し得る。

【0074】

特定のＣＡＲ分子の特定の実施形態において、ＣＡＲは、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、４－１ＢＢ、ＮＫＧ２Ｄ、または他の共刺激ドメイン（本明細書中で細胞質内ドメインと称され得る）を利用してよい。場合によっては、ＣＤ３ゼータは、いかなる共刺激ドメインもなしに利用される。特定のＣＡＲ分子の特定の実施形態において、ＣＡＲは、例えば、ＤＡＰ１２、ＤＡＰ１０、ＮＫＧ２Ｄ、またはＣＤ２８から、適切なあらゆる膜貫通ドメインを利用してよい。

【0075】

特定の実施形態において、操作された特定のＣＤ５特異的受容体をコードする配列を含む発現構築物が存在する。特定の実施形態において、あらゆるＣＤ５ ＣＡＲが、共刺激ドメインであるＩＣＤの不在下で、以下のうちの１つ：（ａ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン（ＴＭ）およびＣＤ２８細胞質内ドメイン（ＩＣＤ）；（ｂ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｃ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；（ｄ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｅ）ＤＡＰ１２ ＴＭおよびＤＡＰ１２ ＩＣＤ；（ｆ）ＤＡＰ１２ ＴＭ、ＤＡＰ１２ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｇ）ＣＤ２８ ＴＭおよび４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｈ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、および４－１ＢＢ ＩＣＤ；（ｉ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣＤ、４－１ＢＢ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｊ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；（ｋ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｌ）ＤＡＰ１０ ＴＭおよびＤＡＰ１０ ＩＣＤ；（ｍ）ＤＡＰ１０ ＴＭ、ＤＡＰ１０ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｎ）ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｏ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭ；（ｐ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｑ）ＮＫＧ２Ｄ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｒ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ；（ｓ）ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤおよびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；（ｔ）ＣＤ２８ ＴＭ、ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ、およびＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン；または（ｕ）ＣＤ２８ ＴＭおよびＣＤ３ゼータを含み得る。

【0076】

具体的な配列の実施形態の例を、以下に提供する。
１．抗原特異的細胞外ドメイン

【0077】

具体的な実施形態では、以下のような抗ＣＤ５ ｓｃＦｖ（ヒト化）塩基配列が利用される：
ＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＴＣＴＣＡＧＴＴＧＧＣＴＧＴＴＴＴＴＧＧＴＴＧＣＴＡＴＣＴＴＧＡＡＧＧＧＣＧＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＣＴＣＴＡＧＣＡＴＧＴＣＡＧＣＧＡＧＴＣＴＴＧＧＴＧＡＴＣＧＡＧＴＧＡＣＧＡＴＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＴＣＴＴＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＧＧＧＧＡＡＧＴＣＣＣＣＡＡＡＡＡＣＴＣＴＣＡＴＡＴＡＣＡＧＧＧＣＧＡＡＴＣＧＡＣＴＣＧＴＡＧＡＣＧＧＴＧＴＧＣＣＴＴＣＡＡＧＧＴＴＴＴＣＣＧＧＧＡＧＴＧＧＴＡＧＴＧＧＣＡＣＡＧＡＴＴＡＣＡＣＡＣＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＴＴＣＡＴＴＧＣＡＧＴＡＴＧＡＧＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＣＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＡＴＧＧＡＣＧＴＴＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＡＣＣＡＡＡＣＴＴＧＡＧＡＴＡＡＡＡＧＧＧＡＧＣＡＣＡＴＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＡＡＡＣＣＴＧＧＧＴＣＡＧＧＧＧＡＧＧＧＴＴＣＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＡＴＴＣＡＡＣＴＴＧＴＣＣＡＡＡＧＣＧＧＴＣＣＴＧＧＴＣＴＴＡＡＧＡＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＧＴＣＡＧＧＡＴＡＡＧＴＴＧＴＧＣＧＧＣＡＴＣＣＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＴＧＧＧＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＣＡＡＧＣＧＣＣＴＧＧＧＡＡＡＧＧＴＣＴＴＣＧＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＴＧＧＡＴＴＡＡＴＡＣＣＣＡＣＡＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣＣＡＣＴＴＡＣＧＣＴＧＡＴＧＡＴＴＴＣＡＡＡＧＧＡＣＧＡＴＴＴＡＣＣＴＴＣＴＣＣＴＴＧＧＡＴＡＣＴＴＣＣＡＡＧＡＧＴＡＣＣＧＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＡＡＴＣＡＡＣＡＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＡＡＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＡＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＧＡＧＡＧＧＧＴＡＴＧＡＣＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＡＣＡＡＣＣＧＴＧＡＣＴＧＴＴＴＣＡＡＧＣ （配列表の配列番号：１）

【0078】

翻訳scFv（ヒト化）（配列表の配列番号：１から翻訳）のアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＭＳＡＳＬＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＳＳＬＱＹＥＤＦＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＧＬＫＫＰＧＧＳＶＲＩＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＩＮＳＬＲＡＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ （配列表の配列番号：２）

【0079】

特定の実施形態において、抗CD5 scFv［マウス］塩基配列は、以下のように利用される：
ＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣ （配列表の配列番号：３）

【0080】

翻訳されたscFv（マウス）（配列表の配列番号：3から翻訳）のアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ （配列表の配列番号：４）
２．膜貫通ドメイン

【0081】

ＣＤ５特異的ＣＡＲでは、任意の適切な膜貫通ドメインを利用することができる。 例としては、少なくともＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ２８、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、Ｔ細胞受容体ａ鎖またはｂ鎖、ＣＤ３ゼータ鎖、ＩＣＯＳ、それらの機能的誘導体、およびそれらの組み合わせからのものが挙げられる。具体的には、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ２８、またはＮＫＧ２Ｄの膜貫通ドメインが利用される。特定の膜貫通ドメイン配列の例を以下に示す。

【0082】

４－１ＢＢ膜貫通ドメインの塩基配列：
ＡＴＣＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＴＴＣＴＴＧＣＧＣＴＧＡＣＧＴＣＧＡＣＴＧＣＧＴＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＧＣＴＧＴＴＣＴＴＣＣＴＣＡＣＧＣＴＣＣＧＴＴＴＣＴＣＴＧＴＴＧＴＴ（配列表の配列番号：５）

【0083】

４－１ＢＢ膜貫通ドメインのアミノ酸配列：
ＩＩＳＦＦＬＡＬＴＳＴＡＬＬＦＬＬＦＦＬＴＬＲＦＳＶＶ （配列表の配列番号：６）

【0084】

ＣＤ２８膜貫通ドメインの塩基配列：
ＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧ （配列表の配列番号：７）

【0085】

ＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列：
ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ （配列表の配列番号：８）

【0086】

ＤＡＰ１０膜貫通ドメインの塩基配列：
ＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＧＣＣＴＣＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＣＡＴＣＧＣＴＧＣＴＣＡＴＣＧＴＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＴＴＣ （配列表の配列番号：９）

【0087】

ＤＡＰ１０膜貫通ドメインのアミノ酸配列：
ＬＬＡＧＬＶＡＡＤＡＶＡＳＬＬＩＶＧＡＶＦ （配列表の配列番号：１０）

【0088】

ＤＡＰ１２膜貫通ドメインの塩基配列：
ＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＣＡＧＧＧＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＧＡＧＡＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧ （配列表の配列番号：１１）

【0089】

ＤＡＰ１２膜貫通ドメインのアミノ酸配列：
ＧＶＬＡＧＩＶＭＧＤＬＶＬＴＶＬＩＡＬＡＶ （配列表の配列番号：１２）

【0090】

ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインの塩基配列：
ＧＣＧＧＴＧＡＴＧＡＴＴＡＴＴＴＴＴＣＧＣＡＴＴＧＧＣＡＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧ （配列表の配列番号：１３）

【0091】

ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインのアミノ酸配列：
ＡＶＭＩＩＦＲＩＧＭＡＶＡＩＦＣＣＦＦＦＰ （配列表の配列番号：１４）
３．細胞質内ドメイン（ICD）

【0092】

１つまたは複数の細胞質内ドメイン（適切な場合には、本明細書においてコスティミュレイトリードメインとも呼ばれ得る）は、本開示の特定の抗ＣＤ５ ＣＡＲにおいて利用されても利用されなくてもよい。具体例としては、４－１ＢＢ、ＮＫＧ２Ｄ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、Ｂ７－１／ＣＤ８０、ＣＤ２８、４－１ＢＢＬ、Ｂ７－２／ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、ＩＣＯＳ、Ｂ７－Ｈ２、ＰＤ－ｌ、Ｂ７－Ｈ３、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ４、ＰＤＣＤ６、ＢＴＬＡ；またはそれらの組み合わせからのＩＣＤが挙げられる。

【0093】

特定のICD配列の例は、以下のように、CARにおいて使用され得る：

【0094】

４－１ＢＢ細胞質内ドメイン塩基配列
ＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧ （配列表の配列番号：１５）

【0095】

４－１ＢＢ細胞質内ドメインアミノ酸配列
ＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬ （配列表の配列番号：１６）

【0096】

ＤＡＰ１０細胞質内ドメイン塩基配列：
ＣＴＴＴＧＣＧＣＡＣＧＣＣＣＡＣＧＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＡＧＧＧＧＣ （配列表の配列番号：１７）

【0097】

ＤＡＰ１０細胞質内ドメインのアミノ酸配列：
ＬＣＡＲＰＲＲＳＰＡＱＥＤＧＫＶＹＩＮＭＰＧＲＧ （配列表の配列番号：１８）

【0098】

ＤＡＰ１２細胞質内ドメイン塩基配列：
ＴＡＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＣＣＴＣＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＣＣＣＧＧＡＡＡＣＡＧＣＧＴＡＴＣＡＣＴＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＴＣＡＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＧＧＴＣＧＧＡＴＧＴＣＴＡＣＡＧＣＧＡＣＣＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＡＴＴＡＣＡＡＡ （配列表の配列番号：１９）

【0099】

ＤＡＰ１２細胞質内ドメインのアミノ酸配列：
ＹＦＬＧＲＬＶＰＲＧＲＧＡＡＥＡＡＴＲＫＱＲＩＴＥＴＥＳＰＹＱＥＬＱＧＱＲＳＤＶＹＳＤＬＮＴＱＲＰＹＹＫ （配列表の配列番号：２０）

【0100】

ＮＫＧ２Ｄ細胞質内ドメイン塩基配列：
ＡＧＣＧＣＧＡＡＣＧＡＡＣＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＴＧＧＴＧＣＣＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＧＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＡＴＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＴＴＴＴＧＡＡＡＧＣＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＡＴＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＧ （配列表の配列番号：２１）

【0101】

ＮＫＧ２Ｄ細胞質内ドメインアミノ酸配列：
ＳＡＮＥＲＣＫＳＫＶＶＰＣＲＱＫＱＷＲＴＳＦＤＳＫＫＬＤＬＮＹＮＨＦＥＳＭＥＷＳＨＲＳＲＲＧＲＩＷＧＭ （配列表の配列番号：２２）
４．ヒンジ

【0102】

ＣＡＲのいくつかの実施形態では、１つ以上の細胞外抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にヒンジ領域が存在する。具体的な実施形態において、ヒンジは、例えば、１０～２０、１０～１５、１１～２０、１１～１５、１２～２０、１２～１５、または１５～２０アミノ酸のような特定の長さである。ヒンジは任意の適切なヒンジであってよく、場合によってはＩｇＧ、またはＣＤ２８由来のヒンジを含む。具体的な実施形態では、ヒンジは、ＩｇＧ ＦｃのＣＨ２－ＣＨ３ドメインとＣＨ１ドメインとを連結する小さな可撓性ポリペプチドである。例えば、様々なＩｇＧサブクラス（ＩｇＧ１～４、修飾されていてもいなくてもよい）のＣＨ２－ＣＨ３ヒンジ（一部または全部）を利用することができる。しかしながら、場合によっては、ＣＨ２－ＣＨ３ヒンジ全体が利用されるのではなく、ヒンジの一部が利用される（ＣＨ３単体またはＣＨ３の一部単体など）。特定の実施形態では、ＩｇＧ１由来のＣＨ２－ＣＨ３ヒンジが利用され、場合によっては、ＣＨ２－ＣＨ３ヒンジ全体が利用されるか（２２９アミノ酸すべて）、ＣＨ３ヒンジ（１１９アミノ酸）のみが利用されるか、または短いヒンジ（１２アミノ酸）が利用される。

【0103】

具体的な実施態様では、ＣＡＲの効率を最適化するために、スペーサーおよび／またはヒンジの同一性または長さを変更することができる。例えば、Ｈｕｄｅｃｅｋら（２０１４）およびＪｏｎｎａｌａｇａｄｄａら（２０１５）を参照されたい。具体的な実施形態では、ＣＤ５ ＣＡＲは、例えば、ＩｇＧ４ヒンジ＋ＣＨ３を利用するか、ＣＤ８ａストークを利用する。

【0104】

したがって、特定の実施形態において、利用されるＩｇＧヒンジ領域は、典型的にはＩｇＧ１またはＩｇＧ４であり、場合によっては、ＣＡＲはＩｇＧ ＦｃのＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む。ＩｇＧ Ｆｃドメインの使用は、ＣＡＲに柔軟性を与えることができ、免疫原性が低く、抗Ｆｃ試薬を用いたＣＡＲ発現の検出を容易にし、異なるスペーサー長に対応するために１つ以上のＣＨ２またはＣＨ３モジュールを除去することを可能にする。しかしながら、一実施形態では、ＦｃγＲ結合を回避するための特定のスペーサーの変異は、例えば可溶性および細胞表面Ｆｃガンマレセプターの結合を回避するために、ＣＡＲ＋Ｔ細胞の生着および抗腫瘍効力を改善し、なおかつ抗原特異的溶解を媒介する活性を維持する可能性がある。例えば、ＣＨ２領域を改変したＩｇＧ４－Ｆｃスペーサーを用いることができる。例えば、ＣＨ２領域は、点変異および／または欠失を含む、変異がされていてもよい。特定の改変は、ＣＨ２領域内の２つの部位（Ｌ２３５Ｅ；Ｎ２９７Ｑ）で実証されており、かつ／またはＣＨ２欠失を組み込んでいる（Ｊｏｎｎａｌａｇａｄｄａ ｅｔ ａｌ，２０１５）。特定の実施形態では、ＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン（長さ２２９ａａ）またはヒンジドメイン（長さ１２ａａ）のみを採用することができる（Ｈｕｄｅｃｅｃｋら、２０１５）。

【0105】

具体的な実施形態では、ヒンジはＩｇＧ、ＣＤ２８、ＣＤ－８α、４－１ＢＢ、０Ｘ４０、ＣＤ３－ゼータ、Ｔ細胞レセプターａ鎖またはｂ鎖、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ｅ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、またはＣＤ１５４のいずれかである。

【0106】

利用できるヒンジの具体的な配列の例としては、少なくとも以下のものがある：

【0107】

ＩｇＧヒンジ塩基配列：
ＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴ （配列表の配列番号：２３）

【0108】

ＩｇＧヒンジのアミノ酸配列：
ＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫ （配列表の配列番号：２４）

【0109】

ＣＤ２８ヒンジ塩基配列：
ＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣ（配列表の配列番号：２５）

【0110】

ＣＤ２８ヒンジアミノ酸配列
ＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰ（配列表の配列番号：２６）
５．シグナル活性化ドメイン

【0111】

具体的な態様において、抗ＣＤ５ ＣＡＲ分子は、例えばＣＤ３ｚｅｔａまたはＦｃεＲＩγからのようなシグナル活性化ドメインを含む。

【0112】

利用され得るＣＤ３ゼータ塩基配列の一例は、以下の通りである：
ＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣ （配列表の配列番号：２７）

【0113】

利用できるＣＤ３ゼータアミノ酸配列の一例は以下の通りである：
ＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧ （配列表の配列番号：２８）
６．その他のタンパク質

【0114】

いくつかの実施形態では、１つ以上の他のタンパク質が抗ＣＤ５ ＣＡＲとともに利用される。つまたは複数の他のタンパク質は、ＣＡＲ自体および／またはＣＡＲを発現するあらゆる種類の細胞の効力を促進することを含む、あらゆる理由で利用することができる。場合によっては、他のタンパク質は、他のタンパク質（複数可）がＣＡＲまたは細胞の活性に直接的または間接的に影響を及ぼすかどうかにかかわらず、治療としてＣＡＲを発現する細胞を受ける個体の治療を促進する。場合によっては、他のタンパク質は、自殺遺伝子、１つ以上のサイトカイン、またはその両方である。具体的な実施形態では、１つ以上の他のタンパク質はベクターから産生され、最終的に２つの別々のポリペプチドとして産生される。例えば、抗ＣＤ５ ＣＡＲおよび他のタンパク質（複数可）は、例えば、２Ａ配列またはＩＲＥＳによって分離され得る。

【0115】

具体的な実施形態では、ＩＬ－１５のようなサイトカインが抗ＣＤ５ ＣＡＲとともに利用される。

【0116】

ＩＬ－１５の塩基配列の一例は以下の通りである：

【0117】

ＩＬ－１５塩基配列：
ＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＡＴＴ （配列表の配列番号：２９）

【0118】

ＩＬ－１５のアミノ酸配列：
ＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：３０）

【0119】

同じベクター中のＣＡＲと別のタンパク質が、２つの異なるポリペプチドに産生されることが意図される場合には、特定の２Ａ配列が利用され得る。

【0120】

一例では、Ｅ２Ａ塩基配列は以下のように利用される：
ＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣ （配列表の配列番号：３１）

【0121】

Ｅ２Ａのアミノ酸配列は以下のように利用できる：
ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ （配列表の配列番号：３２）

【0122】

他の２Ａの例も利用でき、以下の通りである：
Ｔ２Ａ： ＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ （配列表の配列番号：４９）
Ｐ２Ａ： ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ （配列表の配列番号：５０）
Ｆ２Ａ： ＶＫＱＴＬＮＦＤＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ （配列表の配列番号：５１）

【0123】

本開示はまた、あらゆるタイプの免疫エフェクター細胞における発現を含む、特定のＣＡＲ分子を包含する。

【0124】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、およびＣＤ３ｚｅｔａを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５ ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：３３）

【0125】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：３４）

【0126】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＤＡＰ１０膜貫通ドメインおよびＤＡＰ１０細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例において、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＤＡＰ１０ＴＭＤ－ＤＡＰ１０ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＧＣＣＴＣＧＴＧＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＣＡＴＣＧＣＴＧＣＴＣＡＴＣＧＴＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＴＴＣＣＴＴＴＧＣＧＣＡＣＧＣＣＣＡＣＧＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＡＧＧＧＧＣＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：３５）

【0127】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＤＡＰ１０ＴＭＤ－ＤＡＰ１０ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＬＬＡＧＬＶＡＡＤＡＶＡＳＬＬＩＶＧＡＶＦＬＣＡＲＰＲＲＳＰＡＱＥＤＧＫＶＹＩＮＭＰＧＲＧＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：３６）

【0128】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよび４－１ＢＢ細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－４１ＢＢ－ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５ ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＡＡＣＧＧＧＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＡＴＴＣＡＡＡＣＡＡＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＧＡＣＣＡＧＴＡＣＡＡＡＣＴＡＣＴＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＴＧＧＣＴＧＴＡＧＣＴＧＣＣＧＡＴＴＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＧＧＡＴＧＴＧＡＡＣＴＧＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：３７）

【0129】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－４１ＢＢ－ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである。:
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：３８）

【0130】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＤＡＰ１０細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ｚｅｔａを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例において、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＤＡＰ１０ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＴＴＧＣＧＣＡＣＧＣＣＣＡＣＧＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＡＧＧＧＧＣＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：３９）

【0131】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＤＡＰ１０ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＬＣＡＲＰＲＲＳＰＡＱＥＤＧＫＶＹＩＮＭＰＧＲＧＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：４０）

【0132】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＤＡＰ１２膜貫通ドメインおよびＤＡＰ１２細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＤＡＰ１２ＴＭＤ－ＤＡＰ１２ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＧＧＣＧＴＧＣＴＧＧＣＡＧＧＧＡＴＣＧＴＧＡＴＧＧＧＡＧＡＣＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＣＴＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＣＣＴＣＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＣＣＣＧＧＡＡＡＣＡＧＣＧＴＡＴＣＡＣＴＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＴＣＡＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＧＧＴＣＧＧＡＴＧＴＣＴＡＣＡＧＣＧＡＣＣＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＡＴＴＡＣＡＡＡＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：４１）

【0133】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＤＡＰ１２ＴＭＤ－ＤＡＰ１２ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＧＶＬＡＧＩＶＭＧＤＬＶＬＴＶＬＩＡＬＡＶＹＦＬＧＲＬＶＰＲＧＲＧＡＡＥＡＡＴＲＫＱＲＩＴＥＴＥＳＰＹＱＥＬＱＧＱＲＳＤＶＹＳＤＬＮＴＱＲＰＹＹＫＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：４２）

【0134】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＤＡＰ１２細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ｚｅｔａからなる抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。 ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＤＡＰ１２ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧａｔｇｇａｇｔｔｃｇｇｃｔｔｇａｇｔｔｇｇｔｔｇｔｔｃｃｔｔｇｔｇｇｃｇａｔａｃｔｃａａａｇｇｃｇｔｔｃａａｔｇｔａｇｃｃｇａｇａｃａｔａａａａａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃｇｔｃａｔｃｔａｔｇｔａｔｇｃａａｇｃｃｔｃｇｇｃｇａｇｃｇａｇｔｇａｃｃａｔｃａｃｇｔｇｃａａｇｇｃｇａｇｔｃａａｇａｔａｔａａａｃａｇｃｔａｃｔｔｇｔｃａｔｇｇｔｔｃｃａａｃａａａａａｃｃａｇｇｇａａａｔｃａｃｃｔａａｇａｃｃｃｔｇａｔｃｔａｔａｇａｇｃｃａａｔｃｇｃｃｔｇｇｔｔｇａｃｇｇｔｇｔｃｃｃｃｔｃｃｃｇｃｔｔｔａｇｃｇｇｃｔｃｃｇｇａａｇｃｇｇｔｃａａｇａｔｔａｃｔｃｔｃｔｃａｃａａｔｔｔｃｔｔｃｃｔｔｇｇａｔｔａｔｇａａｇａｃａｔｇｇｇｇａｔｃｔａｃｔａｔｔｇｔｃａａｃａｇｔａｔｇａｃｇａａｔｃｃｃｃｇｔｇｇａｃｔｔｔｃｇｇｔｇｇｃｇｇｔａｃｃａａａｔｔｇｇａａａｔａａａｇｇｇｃｔｃｔａｃａａｇｃｇｇｃｔｃａｇｇａａａａｃｃｔｇｇａｔｃａｇｇｃｇａａｇｇｇｔｃｔａｃｇａａｇｇｇｃｃａｇａｔａｃａａｃｔｃｇｔｔｃａａａｇｔｇｇｇｃｃａｇａａｃｔｃａａａａａａｃｃｇｇｇａｇａａａｃａｇｔｇａａａａｔｔｔｃｔｔｇｔａａｇｇｃａｔｃａｇｇａｔａｃａｃａｔｔｃａｃａａａｃｔａｃｇｇｇａｔｇａａｔｔｇｇｇｔｃａａａｃａａｇｃａｃｃｃｇｇａａａｇｇｇｇｃｔｇｃｇｃｔｇｇａｔｇｇｇｇｔｇｇａｔｃａａｃａｃａｃａｔａｃｔｇｇｇｇａａｃｃｔａｃｔｔａｃｇｃａｇａｃｇａｔｔｔｃａａｇｇｇｃａｇａｔｔｃｇｃｃｔｔｔｔｃｔｔｔｇｇａｇａｃｃｔｃｃｇｃｃｔｃｔａｃｔｇｃａｔａｃｔｔｇｃａｇａｔａａａｃａａｃｃｔｇａａｇａａｔｇａａｇａｔａｃｃｇｃｃａｃｃｔａｃｔｔｃｔｇｔａｃｇｃｇｃａｇｇｇｇｃｔａｃｇａｔｔｇｇｔａｔｔｔｔｇａｔｇｔａｔｇｇｇｇｇｇｃａｇｇｃａｃｃａｃｔｇｔｔａｃｔｇｔｇｔｃａａｇｃＣＧＴＡＣＧｇＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＴＡＣＴＴＣＣＴＧＧＧＣＣＧＧＣＴＧＧＴＣＣＣＴＣＧＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＧＡＧＧＣＡＧＣＧＡＣＣＣＧＧＡＡＡＣＡＧＣＧＴＡＴＣＡＣＴＧＡＧＡＣＣＧＡＧＴＣＧＣＣＴＴＡＴＣＡＧＧＡＧＣＴＣＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＧＧＴＣＧＧＡＴＧＴＣＴＡＣＡＧＣＧＡＣＣＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＧＧＣＣＧＴＡＴＴＡＣＡＡＡＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：４３）

【0135】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＤＡＰ１２ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＹＦＬＧＲＬＶＰＲＧＲＧＡＡＥＡＡＴＲＫＱＲＩＴＥＴＥＳＰＹＱＥＬＱＧＱＲＳＤＶＹＳＤＬＮＴＱＲＰＹＹＫＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：４４）

【0136】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＮＫＧ２Ｄ膜貫通ドメインおよびＮＫＧ２Ｄ細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ｚｅｔａを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲは、２Ａ配列によってＣＡＲから分離され得るようなＩＬ－１５と共に発現され得る。具体例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＮＫＧ２ＤＴＭＤ－ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＧＣＧＧＴＧＡＴＧＡＴＴＡＴＴＴＴＴＣＧＣＡＴＴＧＧＣＡＴＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＡＴＴＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＧＡＧＣＧＣＧＡＡＣＧＡＡＣＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＴＧＧＴＧＣＣＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＧＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＡＴＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＴＴＴＴＧＡＡＡＧＣＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＡＴＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＧＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：４５）

【0137】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＮＫＧ２ＤＴＭＤ－ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＡＶＭＩＩＦＲＩＧＭＡＶＡＩＦＣＣＦＦＦＰＳＡＮＥＲＣＫＳＫＶＶＰＣＲＱＫＱＷＲＴＳＦＤＳＫＫＬＤＬＮＹＮＨＦＥＳＭＥＷＳＨＲＳＲＲＧＲＩＷＧＭＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：４６）

【0138】

一例では、ＩｇＧ１ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＮＫＧ２Ｄ細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもよく、例えば２Ａ配列によってＣＡＲから分離されてもよい。具体例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＴＧＡＧＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡＡＡＡＧＡＴＣＣＣＡＡＡＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＣＧＣＧＡＡＣＧＡＡＣＧＣＴＧＣＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＴＧＧＴＧＣＣＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＧＣＧＣＡＣＣＡＧＣＴＴＴＧＡＴＡＧＣＡＡＡＡＡＡＣＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＣＴＡＴＡＡＣＣＡＴＴＴＴＧＡＡＡＧＣＡＴＧＧＡＡＴＧＧＡＧＣＣＡＴＣＧＣＡＧＣＣＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＧＡＣＧＣＧＴｇｔＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：４７）

【0139】

ＣＤ５－ＩｇＧ１－ＣＤ２８ＴＭＤ－ＮＫＧ２Ｄ ＩＣＤ．ＣＤ３ｚｅｔａ－２Ａ－ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＶＴＶＳＳＱＤＰＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤＰＫＦＷＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＳＡＮＥＲＣＫＳＫＶＶＰＣＲＱＫＱＷＲＴＳＦＤＳＫＫＬＤＬＮＹＮＨＦＥＳＭＥＷＳＨＲＳＲＲＧＲＩＷＧＭＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：４８）

【0140】

一例では、ＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＤＡＰ１０細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータからなる抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもされなくてもよく、例えば、一例として、２Ａ配列によってＣＡＲから分離されていてもよい。具体的な例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ｉＣ９．ＣＤ５ＣＡＲＣＤ２８ｈｉｎｇｅ．ｔｍｄＤＡＰ１０３ｚ．ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＧＧＡＧＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＧＧＧＣＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＣＡＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＡＣＡＣＣＧＧＧＡＴＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＴＴＣＣＴＣＣＣＧＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＡＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＡＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＧＡＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧＧＴＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＡＧＴＧＴＧＧＧＴＣＡＧＡＧＡＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＡＴＡＴＣＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＣＴＣＧＴＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＴＣＧＡＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴＧＡＴＧＴＣＧＧＴＧＣＴＣＴＴＧＡＧＡＧＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＡＡＴＧＣＡＧＡＴＴＴＧＧＣＴＴＡＣＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＣＴＧＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＡＡＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＣＣＧＴＧＡＧＴＣＣＧＧＧＣＴＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＣＡＴＴＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＣＣＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＣＴＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣＡＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＴＣＴＡＣＧＧＣＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＧＣＣＣＴＧＴＧＴＣＧＧＴＣＧＡＧＡＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＴＴＴＴＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＴＧＧＴＧＧＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＣＡＴＧＧＧＴＴＴＧＡＧＧＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＣＣＣＴＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＡＣＣＣＣＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＧＡＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＧＡＣＧＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＴＴＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＣＡＧＴＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＴＧＴＣＣＴＡＣＴＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＴＴＴＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＧＡＣＣＣＣＡＡＧＡＧＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＡＣＧＴＴＧＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＧＧＧＴＣＧＣＴＡＡＴＧＣＴＧＴＴＴＣＧＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴＡＴＡＡＡＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＴＧＣＴＴＴＡＡＴＴＴＣＣＴＣＣＧＧＡＡＡＡＡＡＣＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＴＣＧＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＡＧＴＣＴＴＣＴＡＡＣＡＴＧＣＧＧＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＣＴＴＴＧＣＧＣＡＣＧＣＣＣＡＣＧＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＧＣＣＣＡＡＧＡＡＧＡＴＧＧＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＡＴＣＡＡＣＡＴＧＣＣＡＧＧＣＡＧＧＧＧＣＡＣＧＣＧＴＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：５２）

【0141】

ｉＣ９．ＣＤ５ＣＡＲＣＤ２８ｈｉｎｇｅ．ｔｍｄＤＡＰ１０３ｚ．ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳＡＳＲＡＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＬＣＡＲＰＲＲＳＰＡＱＥＤＧＫＶＹＩＮＭＰＧＲＧＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：５３）

【0142】

一例では、ＣＤ２８ヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメインおよびＣＤ２８細胞質内ドメイン、ならびにＣＤ３ゼータを含む抗ＣＤ５ ＣＡＲが利用される。ベクターにおいて、ＣＡＲはＩＬ－１５と共に発現されてもされなくてもよく、例えば、一例として、２Ａ配列によってＣＡＲから分離されていてもよい。具体的な例では、このようなＣＡＲおよびＩＬ－１５構築物は、以下のヌクレオチド配列を有していてもよい：
ｉＣ９．ＣＤ５ＣＡＲＣＤ２８ｈｉｎｇｅ．２８ｔｍｄ３ｚ．ＩＬ１５
ＡＴＧＣＴＣＧＡＧＧＧＡＧＴＧＣＡＧＧＴＧＧＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＡＧＧＣＧＡＣＧＧＧＣＧＣＡＣＣＴＴＣＣＣＣＡＡＧＣＧＣＧＧＣＣＡＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＡＣＡＣＣＧＧＧＡＴＧＣＴＴＧＡＡＧＡＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＧＴＴＧＡＴＴＣＣＴＣＣＣＧＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＡＡＧＣＣＣＴＴＴＡＡＧＴＴＴＡＴＧＣＴＡＧＧＣＡＡＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＡＴＣＣＧＡＧＧＣＴＧＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧＧＴＴＧＣＣＣＡＧＡＴＧＡＧＴＧＴＧＧＧＴＣＡＧＡＧＡＧＣＣＡＡＡＣＴＧＡＣＴＡＴＡＴＣＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＣＣＴＡＴＧＧＴＧＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＧＣＡＴＣＡＴＣＣＣＡＣＣＡＣＡＴＧＣＣＡＣＴＣＴＣＧＴＣＴＴＣＧＡＴＧＴＧＧＡＧＣＴＴＣＴＡＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＴＧＧＡＴＣＣＧＧＡＧＴＣＧＡＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴＧＡＴＧＴＣＧＧＴＧＣＴＣＴＴＧＡＧＡＧＴＴＴＧＡＧＧＧＧＡＡＡＴＧＣＡＧＡＴＴＴＧＧＣＴＴＡＣＡＴＣＣＴＧＡＧＣＡＴＧＧＡＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＣＡＣＴＧＣＣＴＣＡＴＴＡＴＣＡＡＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＴＴＣＴＧＣＣＧＴＧＡＧＴＣＣＧＧＧＣＴＣＣＧＣＡＣＣＣＧＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＴＧＴＧＡＧＡＡＧＴＴＧＣＧＧＣＧＴＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＣＡＴＴＴＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＧＡＣＣＴＧＡＣＴＧＣＣＡＡＧＡＡＡＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＣＧＣＡＧＣＡＧＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＣＴＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣＡＣＧＧＣＴＧＴＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＣＣＡＧＧＧＧＣＴＧＴＣＴＡＣＧＧＣＡＣＡＧＡＴＧＧＡＴＧＣＣＣＴＧＴＧＴＣＧＧＴＣＧＡＧＡＡＧＡＴＴＧＴＧＡＡＣＡＴＣＴＴＣＡＡＴＧＧＧＡＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＡＧＧＧＡＡＧＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＴＴＴＴＣＡＴＣＣＡＧＧＣＣＴＧＴＧＧＴＧＧＧＧＡＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＣＡＴＧＧＧＴＴＴＧＡＧＧＴＧＧＣＣＴＣＣＡＣＴＴＣＣＣＣＴＧＡＡＧＡＣＧＡＧＴＣＣＣＣＴＧＧＣＡＧＴＡＡＣＣＣＣＧＡＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＡＣＣＣＣＧＴＴＣＣＡＧＧＡＡＧＧＴＴＴＧＡＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＧＣＴＧＧＡＣＧＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＴＴＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＣＡＧＴＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＴＧＴＣＣＴＡＣＴＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＡＧＧＴＴＴＴＧＴＴＴＣＣＴＧＧＡＧＧＧＡＣＣＣＣＡＡＧＡＧＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＴＡＣＧＴＴＧＡＧＡＣＣＣＴＧＧＡＣＧＡＣＡＴＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＣＣＴＧＣＡＧＴＣＣＣＴＣＣＴＧＣＴＴＡＧＧＧＴＣＧＣＴＡＡＴＧＣＴＧＴＴＴＣＧＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＴＴＴＡＴＡＡＡＣＡＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＴＧＣＴＴＴＡＡＴＴＴＣＣＴＣＣＧＧＡＡＡＡＡＡＣＴＴＴＴＣＴＴＴＡＡＡＡＣＡＴＣＡＧＣＴＴＣＧＣＧＡＧＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＧＧＧＡＡＧＴＣＴＴＣＴＡＡＣＡＴＧＣＧＧＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＣＴＣＧＡＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＧＧＣＴＴＧＡＧＴＴＧＧＴＴＧＴＴＣＣＴＴＧＴＧＧＣＧＡＴＡＣＴＣＡＡＡＧＧＣＧＴＴＣＡＡＴＧＴＡＧＣＣＧＡＧＡＣＡＴＡＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＴＣＴＣＣＧＴＣＡＴＣＴＡＴＧＴＡＴＧＣＡＡＧＣＣＴＣＧＧＣＧＡＧＣＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡＧＧＣＧＡＧＴＣＡＡＧＡＴＡＴＡＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＴＣＣＡＡＣＡＡＡＡＡＣＣＡＧＧＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＡＧＡＧＣＣＡＡＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＴＣＣＧＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＴＣＴＣＴＣＡＣＡＡＴＴＴＣＴＴＣＣＴＴＧＧＡＴＴＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＧＧＧＧＡＴＣＴＡＣＴＡＴＴＧＴＣＡＡＣＡＧＴＡＴＧＡＣＧＡＡＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＧＣＧＧＴＡＣＣＡＡＡＴＴＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＣＴＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＡＡＧＧＧＴＣＴＡＣＧＡＡＧＧＧＣＣＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＣＧＴＴＣＡＡＡＧＴＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＡＣＡＧＴＧＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＡＴＣＡＧＧＡＴＡＣＡＣＡＴＴＣＡＣＡＡＡＣＴＡＣＧＧＧＡＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＡＡＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡＴＧＧＧＧＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＡＣＣＴＡＣＴＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＴＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＧＣＣＴＴＴＴＣＴＴＴＧＧＡＧＡＣＣＴＣＣＧＣＣＴＣＴＡＣＴＧＣＡＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＴＧＴＡＣＧＣＧＣＡＧＧＧＧＣＴＡＣＧＡＴＴＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＴＧＴＡＴＧＧＧＧＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＧＴＧＴＣＡＡＧＣＣＧＴＡＣＧＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＴＡＧＡＣＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＧＡＡＡＧＧＧＡＡＡＣＡＣＣＴＴＴＧＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＴＡＡＧＣＣＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＣＴＴＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＧＣＴＡＧＴＡＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＣＴＧＧＧＴＧＡＧＧＡＧＴＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＴＡＣＡＴＧＡＡＣＡＴＧＡＣＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＧＣＣＣＴＡＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＣＴＴＣＧＣＡＧＣＣＴＡＴＣＧＣＴＣＡＡＣＧＣＧＴＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＧＧＣＣＡＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＴＡＴＡＡＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＣＴＡＧＧＡＣＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＡＣＧＡＴＧＴＴＴＴＧＧＡＣＡＡＡＡＧＡＣＧＴＧＧＣＣＧＧＧＡＣＣＣＴＧＡＧＡＴＧＧＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＧＡＧＡＡＧＧＡＡＧＡＡＣＣＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＧＧＡＧＧＣＣＴＡＣＡＧＴＧＡＧＡＴＴＧＧＧＡＴＧＡＡＡＧＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＧＡＧＧＧＧＣＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＧＧＣＣＴＴＴＡＣＣＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＴＡＣＡＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＧＣＣＣＴＴＣＡＣＡＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＣＣＧＣＡＧＴＧＴＡＣＴＡＡＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＧＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＣＡＴＧＣＧＣＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＣＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＴＡＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＣＣＧＧＡＣＴＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＡＴＣＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＣＡＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＣＴＧＴＡＣＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＡＣＣＧＣＣＡＴＧＡＡＧＴＧＣＴＴＴＣＴＧＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＣＧＧＣＧＡＣＧＣＣＡＧＣＡＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＡＧＡＡＣＣＴＧＡＴＣＡＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＡＣＧＧＣＡＡＣＧＴＧＡＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＡＡＧＡＧＴＧＣＧＡＧＧＡＡＣＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＧＴＧＣＡＧＡＴＧＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡ （配列表の配列番号：５４）

【0143】

ｉＣ９．ＣＤ５ＣＡＲＣＤ２８ｈｉｎｇｅ．２８ｔｍｄ３ｚ．ＩＬ１５に対応するアミノ酸配列は以下の通りである：
ＭＬＥＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＶＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＥＳＧＧＧＳＧＶＤＧＦＧＤＶＧＡＬＥＳＬＲＧＮＡＤＬＡＹＩＬＳＭＥＰＣＧＨＣＬＩＩＮＮＶＮＦＣＲＥＳＧＬＲＴＲＴＧＳＮＩＤＣＥＫＬＲＲＲＦＳＳＬＨＦＭＶＥＶＫＧＤＬＴＡＫＫＭＶＬＡＬＬＥＬＡＱＱＤＨＧＡＬＤＣＣＶＶＶＩＬＳＨＧＣＱＡＳＨＬＱＦＰＧＡＶＹＧＴＤＧＣＰＶＳＶＥＫＩＶＮＩＦＮＧＴＳＣＰＳＬＧＧＫＰＫＬＦＦＩＱＡＣＧＧＥＱＫＤＨＧＦＥＶＡＳＴＳＰＥＤＥＳＰＧＳＮＰＥＰＤＡＴＰＦＱＥＧＬＲＴＦＤＱＬＤＡＩＳＳＬＰＴＰＳＤＩＦＶＳＹＳＴＦＰＧＦＶＳＷＲＤＰＫＳＧＳＷＹＶＥＴＬＤＤＩＦＥＱＷＡＨＳＥＤＬＱＳＬＬＬＲＶＡＮＡＶＳＶＫＧＩＹＫＱＭＰＧＣＦＮＦＬＲＫＫＬＦＦＫＴＳＡＳＲＡＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＬＥＭＥＦＧＬＳＷＬＦＬＶＡＩＬＫＧＶＱＣＳＲＤＩＫＭＴＱＳＰＳＳＭＹＡＳＬＧＥＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＤＩＮＳＹＬＳＷＦＱＱＫＰＧＫＳＰＫＴＬＩＹＲＡＮＲＬＶＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＱＤＹＳＬＴＩＳＳＬＤＹＥＤＭＧＩＹＹＣＱＱＹＤＥＳＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＩＱＬＶＱＳＧＰＥＬＫＫＰＧＥＴＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＫＱＡＰＧＫＧＬＲＷＭＧＷＩＮＴＨＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧＲＦＡＦＳＬＥＴＳＡＳＴＡＹＬＱＩＮＮＬＫＮＥＤＴＡＴＹＦＣＴＲＲＧＹＤＷＹＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳＲＴＩＥＶＭＹＰＰＰＹＬＤＮＥＫＳＮＧＴＩＩＨＶＫＧＫＨＬＣＰＳＰＬＦＰＧＰＳＫＰＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＲＳＫＲＳＲＬＬＨＳＤＹＭＮＭＴＰＲＲＰＧＰＴＲＫＨＹＱＰＹＡＰＰＲＤＦＡＡＹＲＳＴＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲＧＰＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ （配列表の配列番号：５５）
Ｃ．Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）

【0144】

一部の実施形態において、遺伝子操作されたＣＤ５標的化抗原受容体は、組換えＴＣＲおよび／または天然に存在するＴ細胞からクローニングされたＴＣＲを含む。「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、可変α鎖およびβ鎖（それぞれＴＣＲαおよびＴＣＲβとしても知られている）または可変γ鎖およびδ鎖（それぞれＴＣＲγおよびＴＣＲδとしても知られている）を含有し、かつＭＨＣ受容体に結合した抗原ペプチドに特異的に結合することができる分子を指す。一部の実施形態において、ＴＣＲはαβ形態である。

【0145】

典型的には、αβおよびγδ形態で存在するＴＣＲは、一般に構造的に類似しているが、それらを発現するＴ細胞は、異なる解剖学的位置または機能を有し得る。ＴＣＲは、細胞の表面上で、または可溶性の形態で見出され得る。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面上で見出され、そこで一般に主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識を担う。一部の実施形態において、ＴＣＲはまた、定常ドメイン、膜貫通ドメイン、および／または短い細胞質尾部を含有し得る（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ，１９９７参照）。例えば、一部の態様において、ＴＣＲの各鎖は、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびＣ末端に短い細胞質尾部を有し得る。一部の実施形態において、ＴＣＲは、シグナル伝達の媒介に関与するＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と関連する。特に明記しない限り、用語「ＴＣＲ」は、その機能的ＴＣＲ断片を包含すると理解されるべきである。当該用語はまた、αβ形態またはγδ形態のＴＣＲを含む、インタクトＴＣＲまたは全長ＴＣＲを包含する。

【0146】

ゆえに、本明細書における目的のために、ＴＣＲへの言及は、あらゆるＴＣＲまたは機能的断片、例えばＭＨＣ分子に結合した特定の抗原性ペプチド、すなわち、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するＴＣＲの抗原結合部分を含む。互換的に用いられ得るＴＣＲの「抗原結合部分」または「抗原結合断片」は、ＴＣＲの構造ドメインの一部を含有するが、完全なＴＣＲが結合する抗原（例えば、ＭＨＣ－ペプチド複合体）に結合する分子を指す。場合によっては、抗原結合部分は、例えば、一般に各鎖が３つの相補性決定領域を含有する場合、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分なＴＣＲの可変ドメイン、例えばＴＣＲの可変α鎖および可変β鎖を含有する。

【0147】

一部の実施形態において、ＴＣＲ鎖の可変ドメインは結合して、ループ、または免疫グロブリンに類似する相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成する。これにより、抗原認識が付与され、ＴＣＲ分子の結合部位を形成することによってペプチド特異性が決定され、そしてペプチド特異性が決定される。典型的には、免疫グロブリンと同様に、ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分離されている（例えば、Ｊｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，２００３参照）。一部の実施形態において、ＣＤＲ３は、プロセシングされた抗原の認識を担う主要なＣＤＲであるが、アルファ鎖のＣＤＲ１は、抗原性ペプチドのＮ末端部分と相互作用することも示されており、ベータ鎖のＣＤＲ１は、ペプチドのＣ末端部分と相互作用する。ＣＤＲ２は、ＭＨＣ分子を認識すると考えられている。一部の実施形態において、β鎖の可変領域は、更なる超可変性（ＨＶ４）領域を含有し得る。

【0148】

一部の実施形態において、ＴＣＲ鎖は、定常ドメインを含有する。例えば、免疫グロブリンと同様に、ＴＣＲ鎖の細胞外部分（例えば、α鎖、β鎖）は、２つの免疫グロブリンドメイン、Ｎ末端の可変ドメイン（例えば、Ｖ_ａまたはＶｐ；典型的には、Ｋａｂａｔナンバリング（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，″Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ″，ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１，５^ｔｈ ｅｄ．）に基づくアミノ酸１～１１６）、および細胞膜に隣接する１つの定常ドメイン（例えば、α鎖定常ドメインまたはＣ_ａ、典型的にはＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２５９、β鎖定常ドメインまたはＣｐ、典型的にはＫａｂａｔに基づくアミノ酸１１７～２９５）を含有し得る。例えば、場合によっては、２本の鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外部分は、２つの膜近位定常ドメイン、およびＣＤＲを含有する２つの膜遠位可変ドメインを含有する。ＴＣＲドメインの定常ドメインは、システイン残基がジスルフィド結合を形成して２本の鎖間を連結する短い連結配列を含有する。一部の実施形態において、ＴＣＲは、ＴＣＲが定常ドメイン内に２つのジスルフィド結合を含有するように、α鎖およびβ鎖のそれぞれに追加のシステイン残基を有し得る。

【0149】

一部の実施形態において、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含有し得る。一部の実施形態において、膜貫通ドメインは、正に帯電している。場合によっては、ＴＣＲ鎖は、細胞質尾部を含有する。場合によっては、この構造は、ＴＣＲがＣＤ３等の他の分子と結合することを可能にする。例えば、膜貫通領域を有する定常ドメインを含有するＴＣＲは、タンパク質を細胞膜内に固定して、ＣＤ３シグナル伝達装置または複合体のインバリアントサブユニットと結合し得る。

【0150】

一般に、ＣＤ３は、哺乳動物において３本の異なる鎖（γ、δ、およびε）およびζ鎖を有し得る多タンパク質複合体である。例えば、哺乳動物において、複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、２本のＣＤ３ε鎖、およびＣＤ３ζ鎖のホモ二量体を含有し得る。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、およびＣＤ３ε鎖は、単一の免疫グロブリンドメインを含有する免疫グロブリンスーパーファミリーの高度に関連する細胞表面タンパク質である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、およびＣＤ３ε鎖の膜貫通領域は、負に帯電しており、このことは、これらの鎖が正に帯電したＴ細胞受容体鎖と結合するのを可能にする特徴である。ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、およびＣＤ３ε鎖の細胞内尾部はそれぞれ、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られている単一の保存モチーフを含有するが、各ＣＤ３ζ鎖は３つを有する。一般に、ＩＴＡＭは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能力に関与する。これらのアクセサリ分子は、負に帯電した膜貫通領域を有しており、ＴＣＲからのシグナルを細胞中に伝達する役割を果たす。ＣＤ３鎖およびζ鎖は、ＴＣＲと共に、Ｔ細胞受容体複合体として知られているものを形成する。

【0151】

一部の実施形態において、ＴＣＲは、２本の鎖αおよびβ（または任意選択でγおよびδ）のヘテロ二量体であり得るか、または単鎖ＴＣＲ構築物であり得る。一部の実施形態において、ＴＣＲは、ジスルフィド結合等によって連結された２つの別個の鎖（αおよびβ鎖またはγおよびδ鎖）を含有するヘテロ二量体である。一部の実施形態において、標的抗原（例えばがん抗原）に対するＴＣＲが特定されて、細胞中に導入される。一部の実施形態において、ＴＣＲをコードする核酸は、公的に入手可能なＴＣＲ ＤＮＡ配列のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅等によって、種々の源から得られ得る。一部の実施形態において、ＴＣＲは、生物学的源から、例えば、Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマ、または他の公的に利用可能な源等由来の細胞から得られる。一部の実施形態において、Ｔ細胞は、インビボ単離細胞から得られ得る。一部の実施形態において、高親和性Ｔ細胞クローンが患者から単離されて、ＴＣＲが単離され得る。一部の実施形態において、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。一部の実施形態において、標的抗原に対するＴＣＲクローンは、ヒト免疫系遺伝子（例えば、ヒト白血球抗原系、またはＨＬＡ）により操作されたトランスジェニックマウスにおいて生成される。例えば、腫瘍抗原（例えば、Ｐａｒｋｈｕｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，２００９およびＣｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５参照）参照。一部の実施形態において、ファージディスプレイを用いて、標的抗原（例えば、Ｖａｒｅｌａ－Ｒｏｈｅｎａ ｅｔ ａｌ．，２００８およびＬｉ，２００５参照）に対するＴＣＲを単離する。一部の実施形態において、ＴＣＲまたはその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識から合成的に生成され得る。
ＩＩ．サイトカイン

【0152】

１つ以上のサイトカインが、遺伝子操作された１つ以上のＣＤ５標的化受容体、例えばＣＤ５特異的ＣＡＲと共に利用さてもよい。場合によっては、１つ以上のサイトカインが、操作された受容体と同じベクター分子上に存在するが、他の場合には、別個のベクター分子上に存在する。特定の実施形態において、１つ以上のサイトカインが、操作された受容体と同じベクターから共発現される。１つ以上のサイトカインが、ＣＤ５特異的受容体とは別個のポリペプチドとして生成され得る。一例として、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）が利用される。ＩＬ－１５が使用され得る。なぜなら、例えば、組織に制限されており、かつ病的条件下でのみ血清中で、または全身的に何らかのレベルにて観察されるからである。ＩＬ－１５は、養子療法に望ましいいくつかの属性を有する。ＩＬ－１５は、ナチュラルキラー細胞の発生および細胞増殖を誘導し、腫瘍内在細胞の機能的抑制の緩和を介して、確立された腫瘍の根絶を促進し、かつ活性化誘導細胞死を阻害する恒常性サイトカインである。ＩＬ－１５に加えて、他のサイトカインが想定される。これらとして、サイトカイン、ケモカイン、ならびにヒト用途に用いられる細胞の活性化および増殖に寄与する他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、サイトカインは、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－７、またはそれらの組合せである。ＩＬ－１５を発現するＮＫ細胞が利用され得、そして継続的な支援サイトカインシグナル伝達が可能であり、これは、注入後の生存に有用である。

【0153】

特定の実施形態において、ＮＫ細胞は、１つ以上の外因的に提供されるサイトカインを発現する。サイトカインは、ＮＫ細胞に外因的に提供され得る。なぜなら、細胞内の発現ベクターから発現され、かつ／または細胞の培養培地中に提供されるからである。代わりの場合には、細胞中の内因性サイトカインは、サイトカインのプロモータ部位での遺伝子組換え等の内因性サイトカインの発現の調節操作によって上方制御される。サイトカインが発現構築物上で細胞に提供される場合、サイトカインは、自殺と同じベクターからコードされ得る。サイトカインは、自殺遺伝子としての別個のポリペプチド分子として、そして細胞の操作された受容体とは別個のポリペプチドとして発現され得る。一部の実施形態において、本開示は、特にＮＫ細胞における、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲベクターの、ＩＬ－１５との共利用に関する。
ＩＩＩ．自殺遺伝子

【0154】

特定の実施形態において、自殺遺伝子は、あらゆる種類の細胞療法と共に利用されて、その使用を制御し、かつ所望の事象および／または時間での細胞療法の終了を可能にする。自殺遺伝子は、必要に応じて形質導入細胞の死を誘発する目的で、形質導入細胞に使用される。本開示によって包含されるベクターを有するように修飾された本開示のＣＤ５標的化細胞は、１つ以上の自殺遺伝子を含み得る。一部の実施形態において、本明細書中で用いられる用語「自殺遺伝子」は、プロドラッグまたは他の剤の投与により、その宿主細胞を死滅させる化合物への遺伝子産物の移行をもたらす遺伝子として定義される。他の実施形態において、自殺遺伝子は、所望の場合、自殺遺伝子産物を標的とする剤（抗体等）によって標的とされる遺伝子産物をコードする。

【0155】

用いられ得る自殺遺伝子／プロドラッグの組合せの例として、単純ヘルペスウイルス－チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－ｔｋ）およびガンシクロビル、アシクロビル、またはＦＩＡＵ；酸化還元酵素およびシクロヘキシミド；シトシンデアミナーゼおよび５－フルオロシトシン；チミジンキナーゼチミジラート（ｔｈｙｍｉｄｉｌａｔｅ）キナーゼ（Ｔｄｋ：：Ｔｍｋ）およびＡＺＴ；ならびにデオキシシチジンキナーゼおよびシトシンアラビノシドがある。大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、いわゆる、プロドラッグ６－メチルプリンデオキシリボシドを毒性プリン６－メチルプリンに変換する自殺遺伝子が用いられ得る。プロドラッグ療法に用いられる自殺遺伝子の他の例として、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）シトシンデアミナーゼ遺伝子およびＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子がある。

【0156】

また、例示的な自殺遺伝子として、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＥＧＦＲｖ３、または誘導性カスパーゼ９が挙げられる。一実施形態において、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖ３）の切断型バージョンが、セツキシマブによって除去され得る自殺抗原として用いられ得る。本開示に用いられ得る、当該技術において知られている更なる自殺遺伝子として、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）、シトクロムｐ４５０酵素（ＣＹＰ）、カルボキシペプチダーゼ（ＣＰ）、カルボキシルエステラーゼ（ＣＥ）、ニトロレダクターゼ（ＮＴＲ）、グアニンリボシルトランスフェラーゼ（ＸＧＲＴＰ）、グリコシダーゼ酵素、メチオニン－α、γ－リアーゼ（ＭＥＴ）、およびチミジンホスホリラーゼ（ＴＰ）が挙げられる。

【0157】

特定の実施形態において、ＣＤ５標的化ＣＡＲをコードするベクター、または本明細書中で包含されるＮＫ細胞内のあらゆるベクターが、１つ以上の自殺遺伝子を含む。自殺遺伝子は、ＣＤ５標的化ＣＡＲと同じベクター上にあってもなくてもよい。自殺遺伝子がＣＤ５標的化ＣＡＲと同じベクター上に存在する場合、自殺遺伝子およびＣＡＲは、例えば、ＩＲＥＳまたは２Ａ要素によって分離され得る。
ＩＶ．ベクター

【0158】

ＣＤ５標的化ＣＡＲは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクターが挙げられる適切なあらゆるベクターによってレシピエント免疫細胞に送達され得る。ウイルスベクターの例として、少なくともレトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、またはアデノ随伴ウイルスベクターが挙げられる。非ウイルスベクターの例として、少なくともプラスミド、トランスポゾン、脂質、ナノ粒子等が挙げられる。

【0159】

免疫細胞が、ＣＤ５標的化受容体をコードするベクターにより形質導入され、そしてまた、自殺遺伝子および／またはサイトカインおよび／または任意選択の治療用遺伝子産物等の別の遺伝子の、細胞中への形質導入を必要とする場合、ＣＤ５標的化受容体、自殺遺伝子、サイトカイン、および任意選択の治療用遺伝子は、同じベクターに含まれても含まれなくてもよい。場合によっては、ＣＤ５標的化ＣＡＲ、自殺遺伝子、サイトカイン、および任意選択の治療用遺伝子は、同じウイルスベクター分子等の同じベクター分子から発現される。そのような場合、ＣＤ５標的化ＣＡＲ、自殺遺伝子、サイトカイン、および任意選択の治療用遺伝子の発現は、同じ調節要素によって調節されてもされなくてもよい。ＣＤ５標的化ＣＡＲ、自殺遺伝子、サイトカイン、および任意選択の治療用遺伝子は、同じベクター上にある場合、別個のポリペプチドとして発現されてもされなくてもよい。それらは、別個のポリペプチドとして発現される場合、例えば、２Ａ要素またはＩＲＥＳ要素によってベクター上で分離され得る（または双方の種類が、１回以上、同じベクター上で用いられ得る）。
Ａ．一般的な実施形態

【0160】

当業者であれば、本開示の抗原受容体の発現のための標準的な組換え技術（例えば、いずれも参照により本明細書に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６参照）によってベクターを構築するのに十分な知識があろう。
１．調節要素

【0161】

本開示において有用なベクターに含まれる発現カセットは、特に、タンパク質コード配列に作動可能に連結された真核生物転写プロモータ、介在配列を含むスプライスシグナル、および転写終結／ポリアデニル化配列を（５’から３’方向に）含有する。真核細胞におけるタンパク質コード遺伝子の転写を制御するプロモータおよびエンハンサは、多数の遺伝要素で構成され得る。細胞機構は、各要素によって伝達される調節情報を集めて組み込むことができ、異なる遺伝子が、転写調節の異なる、多くの場合複雑なパターンを進化させることを可能にする。本開示に関連して用いられるプロモータとして、例えば、構成的プロモータ、誘導性プロモータ、および組織特異的プロモータが挙げられる。ベクターががん治療の生成に利用される場合、プロモータは、低酸素の条件下で有効であり得る。
２．プロモータ／エンハンサ

【0162】

本明細書中で提供される発現構築物は、抗原受容体および他のシストロン遺伝子産物の発現を駆動するためのプロモータを含む。プロモータは、一般に、ＲＮＡ合成のための開始部位を配置するように機能する配列を含む。この最もよく知られている例が、ＴＡＴＡボックスであるが、ＴＡＴＡボックスを欠くいくつかのプロモータ、例えば、哺乳動物末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ遺伝子用のプロモータ、およびＳＶ４０後期遺伝子用のプロモータにおいて、開始部位自体を覆う別個の要素が、開始の場所を固定するのに役立つ。追加のプロモータ要素が、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これは、開始部位の上流の領域に位置決めされているが、いくつかのプロモータは、開始部位の下流にも機能的要素を含有することが示されている。コード配列をプロモータの「制御下」に置くために、転写リーディングフレームの転写開始部位の５’末端が、選択されたプロモータの（すなわち３’の）「下流」に配置される。「上流」プロモータは、ＤＮＡの転写を刺激して、コードされたＲＮＡの発現を促進する。

【0163】

プロモータ要素間の間隔は高頻度で、要素が互いに対して反転または移動した場合にプロモータ機能が保存されるほどフレキシブルである。ｔｋプロモータにおいて、例えば、プロモータ要素間の間隔は、活性が落ち始める前の５０ｂｐまで広げることができる。プロモータに応じて、個々の要素は、転写を活性化するように協働的に、または独立して機能し得るようである。プロモータは、核酸配列の転写活性化に関与するシス作用性調節配列を指す「要素」と併用されてもされなくてもよい。

【0164】

プロモータは、コードセグメントおよび／またはエクソンの上流に位置決めされた５’非コード配列を単離することによって得られ得るように、核酸配列と天然に結合しているものであり得る。そのようなプロモータは、「内因性」と称され得る。同様に、エンハンサは、核酸配列と天然に結合して、当該配列の下流または上流のいずれかに位置決めされるものであり得る。これ以外にも、特定の利点が、コード核酸セグメントを、組換えまたは異種プロモータ（その天然環境において、核酸配列と通常関連しないプロモータを指す）の制御下に配置することによって得られることとなる。また、組換えまたは異種エンハンサは、その天然環境において核酸配列と通常関連しないエンハンサを指す。そのようなプロモータまたはエンハンサとして、他の遺伝子のプロモータまたはエンハンサ、ならびに他のあらゆるウイルスまたは原核細胞もしくは真核細胞から単離されたプロモータまたはエンハンサ、ならびに「天然に存在」しない、すなわち、異なる転写調節領域の異なる要素、および／または発現を変更する変異を含有するプロモータまたはエンハンサが挙げられ得る。例えば、組換えＤＮＡ構築に最も一般的に用いられるプロモータとして、β－ラクタマーゼ（ペニシリナーゼ）、ラクトース、およびトリプトファン（ｔｒｐ－）プロモータ系が挙げられる。プロモータおよびエンハンサの核酸配列を合成的に生成することに加えて、配列は、本明細書中で開示される組成物と関連して、ＰＣＲ（商標）が挙げられる組換えクローニングおよび／または核酸増幅技術を用いて生成され得る。さらに、ミトコンドリア、葉緑体等の非核オルガネラ内の配列の転写および／または発現を指示する制御配列も同様に使用することができると考えられる。

【0165】

当然のことながら、発現のために選択された細胞小器官、細胞型、組織、器官、または生物におけるＤＮＡセグメントの発現を効果的に指令するプロモータおよび／またはエンハンサを使用することが重要であろう。分子生物学の当業者であれば、一般に、タンパク質発現のためのプロモータ、エンハンサ、および細胞型の組合せの使用を知っている（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．１９８９参照）。使用されるプロモータは、組換えタンパク質および／またはペプチドの大規模生産において有利である等、導入されたＤＮＡセグメントの高レベル発現を指示するのに適切な条件下で構成的、組織特異的、誘導性、かつ／または有用であり得る。プロモータは、異種または内因性であり得る。

【0166】

加えて、あらゆるプロモータ／エンハンサの組合せ（例えば、ｅｐｄ．ｉｓｂ－ｓｉｂｉ．ｃｈ／のワールド・ワイド・ウェブを介した、Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ｄａｔａ Ｂａｓｅ ＥＰＤＢに従う）を用いて発現を駆動することもできる。Ｔ３、Ｔ７、またはＳＰ６細胞質発現系の使用が、別の可能な実施形態である。真核細胞は、適切な細菌ポリメラーゼが、送達複合体の一部として、または追加の遺伝子発現構築物として提供されるならば、特定の細菌プロモータからの細胞質転写を支持することができる。

【0167】

プロモータの非限定的な例として、初期または後期ウイルスプロモータ、例えばＳＶ４０初期または後期プロモータ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモータ、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）初期プロモータ、真核細胞プロモータ、例えば、ベータアクチンプロモータ、ＧＡＤＰＨプロモータ、メタロチオネインプロモータ、および連結された応答要素プロモータ、例えば、サイクリックＡＭＰ応答要素プロモータ（ｃｒｅ）、血清応答要素プロモータ（ｓｒｅ）、ホルボールエステルプロモータ（ＴＰＡ）、および最小ＴＡＴＡボックス付近の応答要素プロモータ（ｔｒｅ）が挙げられる。ヒト成長ホルモンプロモータ配列（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、受託番号Ｘ０５２４４、ヌクレオチド２８３～３４１に記載されるヒト成長ホルモン最小プロモータ）またはマウス乳腺腫瘍プロモータ（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ番号ＡＴＣＣ ４５００７から入手可能）を用いることも可能である。特定の実施形態において、プロモータは、ＣＭＶ ＩＥ、デクチン－１、デクチン－２、ヒトＣＤ１１ｃ、Ｆ４／８０、ＳＭ２２、ＲＳＶ、ＳＶ４０、Ａｄ ＭＬＰ、ベータ－アクチン、ＭＨＣクラスＩ、またはＭＨＣクラスＩＩプロモータである。しかしながら、治療用遺伝子の発現を駆動するのに有用な他のあらゆるプロモータが、本開示の実施に使用可能である。

【0168】

特定の態様において、本開示の方法はまた、エンハンサ配列、すなわち、プロモータの活性を増大させ、かつシスで、そしてその向きに拘わらず、比較的長い距離（標的プロモータから最大数キロベース離れている）にわたってすら作用する潜在性を有する核酸配列に関する。しかしながら、エンハンサ機能は、必ずしもそのような長い距離に制限されない。というのも、所与のプロモータに近接して機能する場合もあるからである。
３．開始シグナルおよび連結された発現

【0169】

また、特定の開始シグナルが、コード配列の効率的な翻訳のために、本開示において提供される発現構築物に用いられ得る。当該シグナルは、ＡＴＧ開始コドンまたは隣接配列を含む。ＡＴＧ開始コドンを含む外因性翻訳制御シグナルを提供する必要がある場合がある。当業者であれば、これを決定して、必要なシグナルを提供することが容易にできよう。挿入物全体の翻訳を確実にするために、開始コドンは、所望のコード配列のリーディングフレームと「インフレーム」でなければならないことは周知である。外因性翻訳制御シグナルおよび開始コドンは、天然または合成のいずれかであり得る。発現の効率は、適切な転写エンハンサ要素を含めることによって増強され得る。

【0170】

特定の実施形態において、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）要素が、多遺伝子またはポリシストロン性メッセージをもたらすのに用いられる。ＩＲＥＳ要素は、５’メチル化Ｃａｐ依存性翻訳のリボソームスキャニングモデルを迂回して、内部部位にて翻訳を開始することができる。ピコルナウイルス科の２つのメンバー（ポリオおよび脳心筋炎）由来のＩＲＥＳ要素、ならびに哺乳動物メッセージ由来のＩＲＥＳが記載されている。ＩＲＥＳ要素は、異種オープンリーディングフレームに連結され得る。それぞれがＩＲＥＳによって分離されてポリシストロン性メッセージをもたらす、多数のオープンリーディングフレームが、一緒に転写され得る。ＩＲＥＳ要素のおかげで、各オープンリーディングフレームは、効率的な翻訳のためのリボソームにアクセス可能である。単一のプロモータ／エンハンサを用いて単一のメッセージを転写することで、多遺伝子が効率的に発現され得る。

【0171】

本明細書中の他の箇所で詳述するように、特定の２Ａ配列要素を用いて、本開示中で提供される構築物中での遺伝子の連結発現または共発現をもたらすことができる。例えば、切断配列を用いて、オープンリーディングフレームを連結して単一シストロンを形成することによって、遺伝子を共発現させることができる。例示的な切断配列として、ウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）またはＦ２Ａ（口蹄疫ウイルス２Ａ）または「２Ａ様」配列（例えば、トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルス２Ａ；Ｔ２Ａ）またはブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）がある。特定の実施形態において、単一のベクターでは、多数の２Ａ配列は同一ではないが、代替の実施形態において、同じベクターは、２つ以上の同じ２Ａ配列を利用する。２Ａ配列の例が、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／００６５７７９号明細書に記載されている。
４．複製起点

【0172】

ベクターを宿主細胞内で増殖させるために、ベクターは、１つ以上の複製起点部位（しばしば「ｏｒｉ」と称される）、例えば、上記のＥＢＶのｏｒｉＰに対応する核酸配列、または複製が開始される特定の核酸配列である、プログラミングにおける機能が類似するか、または高い、遺伝子操作されたｏｒｉＰを含有してよい。これ以外にも、上記の他の染色体外で複製するウイルスの複製起点、または自己複製配列（ＡＲＳ）が使用され得る。
５．選択およびスクリーニング可能マーカー

【0173】

一部の実施形態において、本開示のＣＤ５標的化受容体構築物を含むＮＫ細胞は、発現ベクター内にマーカーを含めることによって、インビトロまたはインビボで特定され得る。そのようなマーカーは、発現ベクターを含有する細胞の容易な特定を可能にする、細胞に特定可能な変化を付与することとなる。一般に、選択マーカーは、選択を可能にする特性を付与するものである。陽性選択マーカーは、マーカーの存在が選択を可能にするものであり、陰性選択マーカーは、その存在が選択を妨げるものである。陽性選択マーカーの例として、薬物耐性マーカーがある。

【0174】

通常、薬物選択マーカーを含めることは、形質転換体のクローニングおよび特定に役立ち、例えば、ネオマイシン、ピューロマイシン、ハイグロマイシン、ＤＨＦＲ、ＧＰＴ、ゼオシン、およびヒスチジノールに対する耐性を付与する遺伝子が、有用な選択マーカーである。条件の実施に基づいて形質転換体の識別を可能にする表現型を付与するマーカーに加えて、その基礎が比色分析であるＧＦＰ等のスクリーニング可能マーカーが挙げられる他の種類のマーカーも考えられる。これ以外にも、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ｔｋ）またはクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）等の陰性選択マーカーとしてのスクリーニング可能酵素が利用され得る。また、当業者であれば、おそらくＦＡＣＳ分析と組み合わせて、免疫学的マーカーを使用する方法を知っているであろう。用いられるマーカーは、遺伝子産物をコードする核酸と同時に発現され得る限り、重要ではないと考えられている。選択マーカーおよびスクリーニング可能マーカーの更なる例が、当業者に周知である。
Ｂ．マルチシストロン性ベクター

【0175】

特定の実施形態において、ＣＤ５標的化受容体、任意選択の自殺遺伝子、任意選択のサイトカイン、および／または任意選択の治療用遺伝子は、マルチシストロン性ベクターから発現される（本明細書中で用いられる用語「シストロン」は、遺伝子産物が生成され得る核酸配列を指す）。特定の実施形態において、マルチシストロン性ベクターは、ＣＤ５標的化受容体、自殺遺伝子、ならびに少なくとも１つのサイトカインおよび／もしくは操作された受容体、例えばＴ細胞受容体、ならびに／または追加の非ＣＤ５標的化ＣＡＲをコードする。場合により、マルチシストロン性ベクターは、少なくとも１つのＣＤ５標的化ＣＡＲ、少なくとも１つのＴＮＦ－アルファ変異体、および少なくとも１つのサイトカインをコードする。サイトカインは、ヒトもしくはマウス等、またはあらゆる種の特定の種類のサイトカインであり得る。特定の場合には、サイトカインは、ＩＬ１５、ＩＬ１２、ＩＬ２、ＩＬ１８、および／またはＩＬ２１である。

【0176】

特定の実施形態において、本開示は、多数のシストロンを実質的に同一のレベルで発現する能力を有するポリシストロン性ベクターを利用するフレキシブルなモジュール系（本明細書中で用いられる用語「モジュール」は、例えば標準的な組換え技術を用いることによる、例えばシストロン全体の、またはシストロンの構成要素のそれぞれの除去および置換等によって、その互換性を可能にするシストロンまたはシストロンの構成要素を指す）を提供する。当該系は、多遺伝子の組合せ発現（過剰発現が挙げられる）を可能にする細胞工学に用いられ得る。特定の実施形態において、ベクターによって発現される遺伝子の１つ以上が、１つ、２つ、またはそれを超える抗原受容体を含む。多遺伝子は、ＣＡＲ、ＴＣＲ、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング受容体、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性遺伝子変異、デコイ受容体、サイトカイン受容体、キメラサイトカイン受容体等を含み得るが、これらに限定されない。ベクターはさらに、以下を含み得る：（１）１つ以上のレポーター、例えば、細胞アッセイおよび動物イメージング等のための蛍光もしくは酵素レポーター；（２）１つ以上のサイトカインもしくは他のシグナル伝達分子；および／または（３）自殺遺伝子。

【0177】

特定の場合には、ベクターは、２Ａ切断部位等のあらゆる種類の切断部位によって分離された少なくとも４つのシストロンを含み得る。ベクターは、ｐＵＣ１９骨格内にｐｓｉパッケージング配列を有する、３’および５’ＬＴＲを含むモロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶまたはＭＭＬＶ）ベースであってもなくてもよい。ベクターは、３つ以上の２Ａ切断部位を有する４つ以上のシストロン、および遺伝子交換のための多数のＯＲＦを含み得る。当該系は、一部の実施形態において、サブクローニングによる迅速な組込みのための制限部位の側面に位置する多遺伝子（７つ以上）のコンビナトリアル過剰発現を可能にし、そしてまた、少なくとも３つの２Ａ自己切断部位を含む。ゆえに、当該系は、多数のＣＡＲ、ＴＣＲ、シグナル伝達分子、サイトカイン、サイトカイン受容体、および／またはホーミング受容体の発現を可能にする。また、当該系は、限定されないが、レンチウイルス、アデノウイルスＡＡＶ、および非ウイルスプラスミドが挙げられる他のウイルスベクターおよび非ウイルスベクターに使用され得る。

【0178】

また、系のモジュール性は、ポリシストロン性発現ベクター内の４つのシストロンのそれぞれへの遺伝子の効率的なサブクローニング、および迅速な試験等のための遺伝子の交換を可能にする。ポリシストロン性発現ベクター内に戦略的に位置決めされた制限部位は、遺伝子を効率的に交換することを可能にする。

【0179】

本開示の実施形態は、例えば、ベクターのモジュール使用を促進するために同一性および位置が特異的に選択される１つ以上の制限酵素部位を利用すること等による、１つ以上のシストロン（または１つ以上のシストロンの構成要素）の除去および置換を可能にすることによって、ベクターの少なくとも一部がモジュールであるポリシストロン性ベクターを利用する系を包含する。また、ベクターは、多数のシストロンが単一のポリペプチドに翻訳されて、別個のポリペプチドにプロセシングされることによって、ベクターが実質的に等モル濃度で別個の遺伝子産物を発現する利点を付与する実施形態を有する。

【0180】

本開示のベクターは、モジュラリティがベクターの１つ以上のシストロンを変えることができるように、かつ／または１つ以上の特定のシストロンの１つ以上の構成要素を変えることができるように構成されている。ベクターは、１つ以上のシストロンの末端の側面に位置し、かつ／または特定のシストロンの１つ以上の構成要素の末端の側面に位置する、固有の制限酵素部位を利用するように設計され得る。

【0181】

本開示の実施形態は、それぞれが１つ以上の制限酵素部位の側面に位置する少なくとも２つ、少なくとも３つ、または少なくとも４つのシストロンを含むポリシストロン性ベクターを含み、少なくとも１つのシストロンは、少なくとも１つの抗原受容体をコードする。場合によっては、２つ、３つ、４つ、またはそれを超えるシストロンが単一のポリペプチドに翻訳されて、別々のポリペプチドに切断されるが、他の場合では、多数のシストロンが単一のポリペプチドに翻訳されて、別々のポリペプチドに切断される。ベクター上の隣接するシストロンが、２Ａ自己切断部位等の自己切断部位によって分離され得る。場合によっては、各シストロンは、ベクターから別個のポリペプチドを発現する。特定の場合には、ベクター上の隣接するシストロンが、ＩＲＥＳ要素によって分離されている。

【0182】

特定の実施形態において、本開示は、例えば、１つ、２つ、またはそれを超える抗原受容体を含み得る多数のシストロンの、過剰発現が挙げられるコンビナトリアル発現を可能にする細胞工学用の系を提供する。特定の実施形態において、本明細書中に記載されるポリシストロニックベクターの使用により、ベクターは、同じｍＲＮＡから等モルレベルの多遺伝子産物を生成することが可能となる。多遺伝子は、ＣＡＲ、ＴＣＲ、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング受容体、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９媒介性遺伝子変異、デコイ受容体、サイトカイン受容体、キメラサイトカイン受容体等を含み得るが、これらに限定されない。ベクターは、細胞アッセイおよび動物イメージング等のための１つ以上の蛍光または酵素レポーターをさらに含み得る。また、ベクターは、ベクターを有する細胞がもはや必要とされない場合の、またはこれが提供される宿主にとって有害となる場合の、当該細胞の終結のための自殺遺伝子産物を含み得る。

【0183】

特定の実施形態において、ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはアデノ随伴ウイルスベクター）または非ウイルスベクターである。ベクターは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）５’ＬＴＲ、３’ＬＴＲ、および／またはｐｓｉパッケージング要素を含み得る。特定の場合には、ｐｓｉパッケージングは、５’ＬＴＲと抗原受容体コード配列との間に組み込まれる。ベクターは、ｐＵＣ１９配列を含んでも含まなくてもよい。ベクターの一部の態様において、少なくとも１つのシストロンは、サイトカイン（例えば、インターロイキン１５（ＩＬ－１５）、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１８、ＩＬ－１２、またはＩＬ－２）、ケモカイン、サイトカイン受容体、および／またはホーミング受容体をコードする。

【0184】

２Ａ切断部位がベクターに利用される場合、２Ａ切断部位は、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、および／またはＦ２Ａ部位を含み得る。

【0185】

制限酵素部位は、いかなる種類のものであってもよく、その認識部位に任意の数の塩基、例えば４～８塩基を含んでもよい；認識部位内の塩基数は、少なくとも４、５、６、７、８、またはそれを超えてもよい。切断された場合の部位は、平滑切断末端または粘着末端を生成し得る。制限酵素は、例えば、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、またはＩＶ型のものであり得る。制限酵素部位は、利用可能なデータベース、例えばＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｒｅｌａｔｉｏｎａｌ Ｅｎｚｙｍｅ ｄａｔａｂａｓｅ（ＩｎｔＥｎｚ）またはＢＲＥＮＤＡ（Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ）から得ることができる。

【0186】

例示的なベクターは、環状であってよく、慣例により、位置１（円の上部の１２時の位置、残りの配列は時計回りの方向にある）が５’ＬＴＲの出発点に設定される。

【0187】

自己切断性２Ａペプチドが利用される実施形態において、２Ａペプチドは、真核細胞における翻訳中にポリペプチドの「切断」を媒介する１８～２２アミノ酸（ａａ）長のウイルスオリゴペプチドであり得る。呼称「２Ａ」は、ウイルスゲノムの特定の領域を指し、様々なウイルス２Ａが一般的に、それらが由来するウイルスの後に命名されている。最初に発見された２ＡはＦ２Ａ（口蹄疫ウイルス）であり、その後、Ｅ２Ａ（ウマ鼻炎Ａウイルス）、Ｐ２Ａ（ブタテッショウウイルス－１ ２Ａ）、およびＴ２Ａ（トセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルス２Ａ）も特定された。２Ａ媒介「自己切断」の機構は、２ＡのＣ末端でのグリシル－プロリルペプチド結合の形成をスキップするリボソームスキッピングであることが発見された。

【0188】

特定の場合には、ベクターはγ－レトロウイルス移入ベクターであり得る。レトロウイルス移入ベクターは、ｐＵＣ１９プラスミド（ＨｉｎｄＩＩＩとＥｃｏＲＩの制限酵素部位間の大きな断片（２．６３ｋｂ））等のプラスミドに基づく骨格を含み得る。骨格は、５’ＬＴＲ、ｐｓｉパッケージング配列、および３’ＬＴＲを含むモロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）由来のウイルス構成要素を有し得る。ＬＴＲは、レトロウイルスプロウイルスの両側に見出される長い末端反復配列であり、移入ベクターの場合、ＣＤ５標的化ＣＡＲおよび関連する構成要素等の目的の遺伝的カーゴを囲っている。また、ヌクレオカプシドによるパッケージング用の標的部位であるｐｓｉパッケージング配列は、シスで組み込まれて、５’ＬＴＲとＣＡＲコード配列との間に挟まれている。ゆえに、トランスファベクターの例の基本構造は、ｐＵＣ１９配列－５’ＬＴＲ－ｐｓｉパッケージング配列－目的の遺伝的カーゴ－３’ＬＴＲ－ｐＵＣ１９配列のように構成され得る。また、当該系は、限定されないが、レンチウイルス、アデノウイルスＡＡＶ、および非ウイルスプラスミドが挙げられる他のウイルスベクターおよび非ウイルスベクターに使用され得る。
Ｖ．細胞

【0189】

本開示は、ＣＤ５標的化受容体をコードし、かつ少なくとも１つのサイトカインおよび／または少なくとも１つの自殺遺伝子をもコードし得る少なくとも１つのベクターを有するあらゆる種類の免疫細胞または幹細胞を包含する。場合によっては、様々なベクターが、自殺遺伝子および／またはサイトカインをコードするのと対比して、ＣＡＲをコードする。ＮＫ細胞が挙げられる免疫細胞は、臍帯血（複数の源からプールされた臍帯血が挙げられる）、末梢血、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、骨髄、またはそれらの混合物に由来し得る。ＮＫ細胞は、例えば、以下に限定されないが、ＮＫ－９２細胞等の細胞株に由来し得る。ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞等の臍帯血単核細胞であり得る。

【0190】

本開示は、従来のＴ細胞、ガンマ－デルタＴ細胞、ＮＫ ＴおよびインバリアントＮＫ Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、樹状細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、またはそれらの混合物が挙げられる、あらゆる種類の免疫細胞または他の細胞を包含する。

【0191】

場合によっては、細胞は、適切なあらゆる比率が挙げられる有効量のユニバーサル抗原提示細胞（ＵＡＰＣ）の存在下で増殖された。細胞は、ＵＡＰＣと、１０：１～１：１０；９：１～１：９；８：１～１：８；７：１～１：７；６：１～１：６；５：１～１：５；４：１～１：４；３：１～１：３；２：１～１：２；または１：１の比率（例えば１：２の比率が挙げられる）にて培養され得る。場合によっては、ＮＫ細胞を、例えば１０～５００、１０～４００、１０～３００、１０～２００、１０～１００、１０～５０、１００～５００、１００～４００、１００～３００、１００～２００、２００～５００、２００～４００、２００～３００、３００～５００、３００～４００、または４００～５００Ｕ／ｍＬの濃度でのＩＬ－２の存在下で、増殖させた。

【0192】

ベクターによる遺伝子修飾の後に、ＮＫ細胞は、直ちに注入されてもよいし、保存されてもよい。特定の態様において、遺伝子修飾後、細胞中への遺伝子導入後の約１、２、３、４、５日以内に、またはそれを超えて、細胞をバルク集団としてエクスビボで数日間、数週間、または数ヶ月間増殖させることができる。更なる態様において、トランスフェクタントがクローニングされて（クローンは、単一の組み込まれたか、またはエピソームによって維持された発現カセットまたはプラスミドの存在を示す）、ＣＤ５標的化ＣＡＲの発現がエクスビボで拡大される。増殖のために選択されたクローンは、ＣＤ５発現標的細胞を特異的に認識して溶解する能力を実証する。組換え免疫細胞は、ＩＬ－２、または共通のガンマ鎖に結合する他のサイトカイン（例えば、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２３等）による刺激によって増殖させることができる。組換え免疫細胞は、人工抗原提示細胞による刺激によって増殖し得る。更なる態様において、遺伝子修飾細胞は、凍結保存され得る。

【0193】

本開示の実施形態は、本明細書中に包含される１つ以上のＣＤ５標的化ＣＡＲおよび１つ以上の自殺遺伝子を発現する細胞を包含する。ＮＫ細胞は、特定の実施形態において、１つ以上のＣＤ５標的化ＣＡＲおよび１つ以上の操作された、分泌不能な膜結合ＴＮＦ－アルファ変異体ポリペプチドをコードする組換え核酸を含む。特定の実施形態において、１つ以上のＣＤ５標的化ＣＡＲおよびＴＮＦ－アルファ変異体ポリペプチドを発現することに加えて、細胞はまた、１つ以上の治療用遺伝子産物をコードする核酸を含む。

【0194】

細胞は、個体から直接得られてもよいし、保管所または他の貯蔵施設から得られてもよい。治療法としての細胞は、治療法として細胞が提供される個体に対して自己由来であっても同種異系であってもよい。

【0195】

細胞は、医学的症状について治療を必要とする個体に由来し得、そしてＣＤ５標的化ＣＡＲ、任意選択の自殺遺伝子、任意選択のサイトカイン、および任意選択の治療用遺伝子産物を（例えば、養子細胞療法のための形質導入および増殖のための標準的な技術を用いて）発現させる操作の後に、最初に供給された個体に戻され得る。場合によっては、細胞は、個体または別の個体に後に用いるために保存される。

【0196】

免疫細胞は、細胞の集団内に含まれ得、当該集団は、大部分が、１つ以上のＣＤ５標的化受容体および／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインで形質導入されていてよい。細胞集団は、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％の、１つ以上のＣＤ５標的化受容体および／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインを形質導入した免疫細胞を含み得る。１つ以上のＣＤ５標的化受容体および／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインは、別個のポリペプチドであり得る。

【0197】

免疫細胞は、特定の目的に関してモジュールであるという意図のために、１つ以上のＣＤ５標的化受容体および／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインにより生成され得る。例えば、ＣＤ５標的化ＣＡＲおよび／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインを発現する（またはその後の形質導入のために変異体をコードする核酸が分配されている）細胞が、例えば商業的流通用に生成され得、ユーザは、意図される目的に応じて、１つ以上の他の目的の遺伝子（治療用遺伝子が挙げられる）を発現するように細胞を修飾することができる。例えば、ＣＤ５陽性がんが挙げられるＣＤ５陽性細胞の処置に関心がある個体が、自殺遺伝子発現細胞（または異種サイトカイン発現細胞）を得るか、または生成して、ＣＤ５特異的ｓｃＦｖを含む受容体を発現するように修飾することができ、またはその逆も同じである。

【0198】

特定の実施形態において、ＮＫ細胞が利用されて、１つ以上のＣＤ５標的化ＣＡＲおよび／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインを発現する、形質導入されたＮＫ細胞のゲノムが修飾され得る。ゲノムは、あらゆる様式で修飾され得るが、特定の実施形態において、ゲノムは、例えば、ＣＲＩＳＰＲ遺伝子編集によって修飾される。細胞のゲノムは、あらゆる目的について細胞の有効性を増強するように修飾され得る。
ＶＩ．ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞の遺伝子編集

【0199】

特定の実施形態において、少なくとも、操作されたＣＤ５特異的受容体を含む細胞は、細胞内での１つ以上の内因性遺伝子の発現を修飾するように遺伝子編集されている。特定の場合には、ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞は、１つ以上の内因性遺伝子の発現の阻害（ノックアウトと称され得る）が挙げられる、１つ以上の内因性遺伝子の発現レベルが引き下げられるように修飾されている。そのような細胞は、増殖されてもされなくてもよい。

【0200】

特定の場合には、ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞の１つ以上の内因性遺伝子が修飾されて、例えば、発現が破壊されて、発現が部分的または完全に引き下げられる。特定の場合には、１つ以上の遺伝子が、本開示のプロセスを用いてノックダウンまたはノックアウトされる。特定の場合には、多遺伝子がノックダウンまたはノックアウトされ、これは、それらの生成における同じ工程において起こっても起こらなくてもよい。ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞において編集される遺伝子は、いかなる種類のものであってもよいが、具体的な実施形態において、当該遺伝子は、遺伝子産物が、ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞（一例として、臍帯血に由来するもの等のＣＤ５特異的ＣＡＲ ＮＫ細胞が挙げられる）の活性および／または増殖を阻害する遺伝子である。特定の場合には、ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞内で編集される遺伝子は、ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞が腫瘍微小環境においてより効果的に作用することを可能にする。特定の場合には、遺伝子は、ＮＫＧ２Ａ、ＳＩＧＬＥＣ－７、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＣＩＳＨ、ＦＯＸＯ１、ＴＧＦＢＲ２、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＡＤＯＲＡ２、ＮＲ３Ｃ１、ＰＤ１、ＰＤＬ－１、ＰＤＬ－２、ＣＤ４７、ＳＩＲＰＡ、ＳＨＩＰ１、ＡＤＡＭ１７、ＲＰＳ６、４ＥＢＰ１、ＣＤ２５、ＣＤ４０、ＩＬ２１Ｒ、ＩＣＡＭ１、ＣＤ９５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ３８、ＣＲＥＭ、ＩＬ１０Ｒ、ＣＤ５、およびＣＤ７の１つ以上である。特定の実施形態において、ＴＧＦＢＲ２遺伝子は、ＣＤ５特異的ＣＡＲ細胞においてノックアウトまたはノックダウンされる。

【0201】

一部の実施形態において、遺伝子編集は、１つ以上のＤＮＡ結合核酸を用いて実行され、例えばＲＮＡガイドエンドヌクレアーゼ（ＲＧＥＮ）を介した変更である。例えば、変更は、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）およびＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）タンパク質を用いて実行され得る。一部の実施形態において、Ｃａｓ９の代わりにＣｐＦ１が利用される。一般に、「ＣＲＩＳＰＲ系」は、集合的に、Ｃａｓ遺伝子をコードする配列、ｔｒａｃｒ（トランス活性化ＣＲＩＳＰＲ）配列（例えば、ｔｒａｃｒＲＮＡまたは活性部分ｔｒａｃｒＲＮＡ）、ｔｒａｃｒ－ｍａｔｅ配列（「直接反復」、内因性ＣＲＩＳＰＲ系の文脈においてｔｒａｃｒＲＮＡプロセスド部分直接反復を包含する）、ガイド配列（内因性ＣＲＩＳＰＲ系の文脈において「スペーサ」とも称される）、ならびに／またはＣＲＩＳＰＲ遺伝子座からの他の配列および転写物が挙げられる、ＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の発現に関与するか、またはＣＲＩＳＰＲ関連（「Ｃａｓ」）遺伝子の活性を指示する転写物および他の要素を指す。

【0202】

ＣＲＩＳＰＲ／ＣａｓヌクレアーゼまたはＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ系は、ＤＮＡに配列特異的に結合する非コードＲＮＡ分子（ガイド）ＲＮＡ、およびヌクレアーゼ機能性（例えば２つのヌクレアーゼドメイン）を有するＣａｓタンパク質（例えばＣａｓ９）を含み得る。ＣＲＩＳＰＲ系の１つ以上の要素が、Ｉ型、ＩＩ型、またはＩＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ系に由来し得、例えば、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）等の、内因性ＣＲＩＳＰＲ系を含む特定の生物に由来する。

【0203】

一部の態様において、ＣａｓヌクレアーゼおよびｇＲＮＡ（標的配列に特異的なｃｒＲＮＡ、および固定ｔｒａｃｒＲＮＡの融合物が挙げられる）が細胞中に導入される。一般に、ｇＲＮＡの５’末端の標的部位が、相補的塩基対合を用いて、Ｃａｓヌクレアーゼを標的部位、例えば遺伝子に標的化する。標的部位は、典型的にはＮＧＧまたはＮＡＧ等のプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列のすぐ５’側の位置に基づいて選択され得る。この点において、ｇＲＮＡは、ガイドＲＮＡの最初の２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１４、１２、１１、または１０ヌクレオチドを、標的ＤＮＡ配列に対応するように修飾することによって、所望の配列に標的化される。一般に、ＣＲＩＳＰＲ系は、標的配列の部位にてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する要素を特徴とする。典型的には、「標的配列」は、一般に、ガイド配列が相補性を有するように設計されている配列であって、標的配列とガイド配列との間のハイブリダイゼーションがＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進する配列を指す。ハイブリダイゼーションを引き起こして、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を促進するのに十分な相補性があるならば、完全な相補性は必ずしも必要とされない。

【0204】

ＣＲＩＳＰＲ系は、本明細書中で論じられるように、標的部位にて二本鎖切断（ＤＳＢ）を、続いて破壊または変更を誘導することができる。他の実施形態において、「ニッカーゼ」とみなされるＣａｓ９バリアントが用いられて、標的部位にて一本鎖にニックを入れる。対になったニッカーゼは、例えば特異性を向上させるのに用いられ得、それぞれ、ニックが同時に導入されると、５’オーバーハングが導入されるように、一対の異なるｇＲＮＡ標的化配列によって導かれる。他の実施形態において、触媒的に不活性なＣａｓ９は、遺伝子発現に影響を及ぼすように、転写リプレッサまたは活性化因子等の異種エフェクタドメインに融合される。

【0205】

標的配列は、あらゆるポリヌクレオチド、例えばＤＮＡまたはＲＮＡポリヌクレオチドを含み得る。標的配列は、細胞の核または細胞質内、例えば細胞の細胞小器官内に位置決めされ得る。一般に、標的配列を含む標的遺伝子座中への組換えに使用され得る配列または鋳型が、「編集鋳型」または「編集ポリヌクレオチド」または「編集配列」と称される。一部の態様において、外因性鋳型ポリヌクレオチドが、編集鋳型と称される場合がある。一部の態様において、組換えは相同組換えである。

【0206】

典型的には、内因性ＣＲＩＳＰＲ系の文脈において、ＣＲＩＳＰＲ複合体の形成（標的配列にハイブリダイズされて、１つ以上のＣａｓタンパク質と複合体形成されるガイド配列を含む）は、標的配列内またはその近傍（例えば、標的配列から１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、５０、またはそれを超える塩基対以内）で一方または双方の鎖の切断をもたらす。また、ｔｒａｃｒ配列は、野生型ｔｒａｃｒ配列（例えば、野生型ｔｒａｃｒ配列の約２０、２６、３２、４５、４８、５４、６３、６７、８５、またはそれを超えるヌクレオチド）の全部または一部を含み得るか、またはそれからなり得るが、例えば、ｔｒａｃｒ配列の少なくとも一部に沿った、ガイド配列に作動可能に連結されたｔｒａｃｒ ｍａｔｅ配列の全部または一部とのハイブリダイゼーションによって、ＣＲＩＳＰＲ複合体の一部を形成し得る。ｔｒａｃｒ配列は、ハイブリダイズしてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成に関与するのに十分な、ｔｒａｃｒ ｍａｔｅ配列に対する相補性（最適にアラインメントされたときのｔｒａｃｒ ｍａｔｅ配列の長さに沿って少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％の配列相補性等）を有する。

【0207】

ＣＲＩＳＰＲ系の要素の発現が１つ以上の標的部位にてＣＲＩＳＰＲ複合体の形成を指示するように、ＣＲＩＳＰＲ系の１つ以上の要素の発現を駆動する１つ以上のベクターが細胞中に導入され得る。また、構成要素は、タンパク質および／またはＲＮＡとして細胞に送達され得る。例えば、Ｃａｓ酵素、ｔｒａｃｒ－ｍａｔｅ配列に連結されたガイド配列、およびｔｒａｃｒ配列がそれぞれ、別個のベクター上の別個の調節要素に作動可能に連結され得る。これ以外にも、同じまたは異なる調節要素から発現される要素の２つ以上が、単一のベクター内で、第１のベクター内に含まれないＣＲＩＳＰＲ系のあらゆる構成要素を提供する１つ以上の追加のベクターと組み合わされ得る。ベクターは、制限エンドヌクレアーゼ認識配列等の１つ以上の挿入部位（「クローニング部位」とも称される）を含み得る。一部の実施形態において、１つ以上の挿入部位は、１つ以上のベクターの１つ以上の配列要素の上流および／または下流に位置決めされている。多数の異なるガイド配列が用いられる場合、単一の発現構築物が用いられて、ＣＲＩＳＰＲ活性を、細胞内の多数の異なる、対応する標的配列に標的化し得る。

【0208】

ベクターは、Ｃａｓタンパク質等のＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列に作動可能に連結された調節要素を含み得る。Ｃａｓタンパク質の非限定的な例として、Ｃａｓ１、Ｃａｓ１Ｂ、Ｃａｓ２、Ｃａｓ３、Ｃａｓ４、Ｃａｓ５、Ｃａｓ６、Ｃａｓ７、Ｃａｓ８、Ｃａｓ９（Ｃｓｎ１およびＣｓｘ１２としても知られている）、Ｃａｓ１０、Ｃｓｙ１、Ｃｓｙ２、Ｃｓｙ３、Ｃｓｅ１、Ｃｓｅ２、Ｃｓｃ１、Ｃｓｃ２、Ｃｓａ５、Ｃｓｎ２、Ｃｓｍ２、Ｃｓｍ３、Ｃｓｍ４、Ｃｓｍ５、Ｃｓｍ６、Ｃｍｒ１、Ｃｍｒ３、Ｃｍｒ４、Ｃｍｒ５、Ｃｍｒ６、Ｃｓｂ１、Ｃｓｂ２、Ｃｓｂ３、Ｃｓｘ１７、Ｃｓｘ１４、Ｃｓｘ１０、Ｃｓｘ１６、ＣｓａＸ、Ｃｓｘ３、Ｃｓｘ１、Ｃｓｘ１５、Ｃｓｆｌ、Ｃｓｆ２、Ｃｓｆ３、Ｃｓｆ４、それらのホモログ、またはそれらの修飾バージョンが挙げられる。これらの酵素は知られている。例えば、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）Ｃａｓ９タンパク質のアミノ酸配列は、受託番号Ｑ９９ＺＷ２でＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベース内に見出され得る。

【0209】

ＣＲＩＳＰＲ酵素は、Ｃａｓ９（例えば、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）または肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）由来）であってよい。場合によっては、Ｃａｓ９の代わりにＣｐＦ１がエンドヌクレアーゼとして用いられてもよい。ＣＲＩＳＰＲ酵素は、標的配列内かつ／または標的配列の相補体内等の標的配列の位置での一方または双方の鎖の切断を指示し得る。ベクターは、変異ＣＲＩＳＰＲ酵素が、標的配列を含有する標的ポリヌクレオチドの一方または双方の鎖を切断する能力を欠くように、対応する野生型酵素に対して変異したＣＲＩＳＰＲ酵素をコードし得る。例えば、化膿連鎖球菌（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）由来のＣａｓ９のＲｕｖＣＩ触媒ドメインにおけるアスパラギン酸からアラニンへの置換（Ｄ１０Ａ）が、Ｃａｓ９を、双方の鎖を切断するヌクレアーゼからニッカーゼ（一本鎖を切断する）に変換する。一部の実施形態において、Ｃａｓ９ニッカーゼが、ＤＮＡ標的のセンス鎖およびアンチセンス鎖をそれぞれ標的とするガイド配列、例えば２つのガイド配列と組み合わせて用いられ得る。この組合せは、双方の鎖にニックを入れて、ＮＨＥＪまたはＨＤＲを誘導するのに用いられるのを可能にする。

【0210】

一部の実施形態において、ＣＲＩＳＰＲ酵素をコードする酵素コード配列が、真核細胞等の特定の細胞における発現のためにコドン最適化されている。真核細胞は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、または非ヒト霊長類が挙げられるがこれらに限定されない哺乳動物等の特定の生物のものであり得るか、またはそれらに由来し得る。一般に、コドン最適化とは、目的の宿主細胞における発現を、ネイティブアミノ酸配列を維持しながら、ネイティブ配列の少なくとも１つのコドンを、当該宿主細胞の遺伝子においてより頻繁に、または最も頻繁に用いられるコドンで置換することによって増強するために核酸配列を修飾するプロセスを指す。種々の種が、特定のアミノ酸の特定のコドンについて、特定のバイアスを示す。コドンバイアス（生物間のコドン使用頻度の差異）は、多くの場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の翻訳効率と相関し、これは、とりわけ、翻訳されることとなるコドンの特性、および特定の転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）分子の利用可能性に依存すると考えられる。細胞における選択されたｔＲＮＡの優位性は、一般に、ペプチド合成において最も頻繁に用いられるコドンの反映である。したがって、コドン最適化に基づいて、所与の生物における最適な遺伝子発現のために遺伝子を調整することができる。

【0211】

一般に、ガイド配列は、標的配列とハイブリダイズして、標的配列へのＣＲＩＳＰＲ複合体の配列特異的結合を指示するのに十分な、標的ポリ塩基配列との相補性を有するあらゆるポリ塩基配列である。一部の実施形態において、ガイド配列とその対応する標的配列との間の相補性の程度は、適切なアラインメントアルゴリズムを用いて最適にアラインメントされた場合、約５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、またはそれを超える。

【0212】

最適なアラインメントは、配列をアラインするのに適したあらゆるアルゴリズムの使用により決定することができ、その非限定的な例として、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｂｕｒｒｏｗｓ－Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍに基づくアルゴリズム（例えば、Ｂｕｒｒｏｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ）、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ、ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＥＬＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎにて入手可能）、およびＭａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔにて入手可能）が挙げられる。

【0213】

ＣＲＩＳＰＲ酵素は、１つ以上の異種タンパク質ドメインを含む融合タンパク質の一部であり得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素融合タンパク質は、追加のあらゆるタンパク質配列、および任意選択で２つのあらゆるドメイン間のリンカー配列を含み得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素に融合され得るタンパク質ドメインの例として、限定されないが、エピトープタグ、レポーター遺伝子配列、ならびに以下の活性：メチラーゼ活性、デメチラーゼ活性、転写活性化活性、転写抑制活性、転写放出因子活性、ヒストン修飾活性、ＲＮＡ切断活性、および核酸結合活性のうちの１つ以上を有するタンパク質ドメインが挙げられる。エピトープタグの非限定的な例として、ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグ、Ｖ５タグ、ＦＬＡＧタグ、インフルエンザヘマグルチニン（ＨＡ）タグ、Ｍｙｃタグ、ＶＳＶ－Ｇタグ、およびチオレドキシン（Ｔｒｘ）タグが挙げられる。レポーター遺伝子の例として、グルタチオン－５－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）ベータガラクトシダーゼ、ベータ－グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ＨｃＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ、シアン蛍光タンパク質（ＣＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）、および青色蛍光タンパク質（ＢＦＰ）が挙げられる自己蛍光タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＲＩＳＰＲ酵素は、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）、Ｓタグ、Ｌｅｘ Ａ ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）融合物、ＧＡＬ４Ａ ＤＮＡ結合ドメイン融合物、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＢＰ１６タンパク質融合物が挙げられるがこれらに限定されないＤＮＡ分子または他の細胞分子に結合するタンパク質またはタンパク質の断片をコードする遺伝子配列に融合され得る。ＣＲＩＳＰＲ酵素を含む融合タンパク質の一部を形成し得る追加のドメインが、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１１／００５９５０２号明細書に記載されている。
ＶＩＩ．処置方法

【0214】

種々の実施形態において、その表面上で内因性ＣＤ５を発現する疾患細胞または他の細胞が、医学的症状を有する個体において医学的症状を向上させるために、あるいは個体において医学的症状のリスクを引き下げるか、または重症度および／もしくは発症を遅延させるために標的とされる。特定の場合には、内因性ＣＤ５を発現するがん細胞が、がん細胞を死滅させる目的で標的とされる。

【0215】

本明細書中で企図されるＣＤ５標的化ＣＡＲ構築物、核酸配列、ベクター、免疫細胞等、および／またはそれらを含む医薬組成物が、腫瘍性疾患等のがん性疾患の予防、処置、または改善に用いられる。特定の実施形態において、本開示の医薬組成物は、例えば、ＣＤ５を発現し、かつ固形腫瘍であってもなくてもよいがんが挙げられるがんの予防、改善、および／または処置に特に有用であり得る。

【0216】

ＣＤ５標的化受容体が利用される免疫細胞は、特定の実施形態において、ＮＫ、Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはＮＫＴもしくはインバリアントＮＫＴ（ｉＮＫＴ）、あるいは哺乳動物用の細胞療法のために操作されたインバリアントＮＫＴ細胞であり得る。細胞がＮＫ細胞である場合、ＮＫ細胞療法は、いかなる種類のものであってもよく、ＮＫ細胞は、いかなる種類のものであってもよい。特定の実施形態において、細胞は、１つ以上のＣＤ５標的化ＣＡＲおよび／または１つ以上の自殺遺伝子および／または１つ以上のサイトカインを発現するように操作されたＮＫ細胞である。特定の実施形態において、細胞は、ＣＤ５標的化ＣＡＲを形質導入したＮＫ細胞である。

【0217】

特定の実施形態において、本開示は、部分的には、標準的なベクターおよび／または遺伝子送達系を用いて単独で、またはあらゆる組合せで、そして少なくとも一部の態様において、薬学的に許容される担体または賦形剤と共に投与され得るＣＤ５ ＣＡＲ発現細胞、ＣＤ５標的化ＣＡＲ構築物、ＣＤ５標的化ＣＡＲ核酸分子、ならびにＣＤ５標的化ＣＡＲベクターを企図する。特定の実施形態において、投与後、核酸分子またはベクターは、対象のゲノム中に安定して組み込まれ得る。

【0218】

特定の実施形態において、特定の細胞または組織に特異的であり、かつＮＫ細胞内で持続するウイルスベクターが用いられ得る。適切な医薬担体および賦形剤が、当該技術において周知である。本開示に従って調製される組成物は、上記の特定された疾患の予防もしくは処置または遅延のために用いられ得る。

【0219】

さらに、本開示は、腫瘍性疾患の予防、処置、または改善のための方法であって、それを必要とする対象に、本明細書中で企図されるような、かつ／または本明細書中で企図されるようなプロセスによって生成されるＣＤ５標的化ＣＡＲ、核酸配列、ベクターを発現する有効量の細胞を投与する工程を含む方法に関する。

【0220】

例示的なＣＤ５標的化ＣＡＲ細胞の組成物の投与の可能な適応症は、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍、多発性骨髄腫、乳がん、神経膠芽腫、腎がん、膵臓がん、または肺がんが挙げられる腫瘍性疾患が挙げられるがん性疾患である。ＣＤ５標的化ＣＡＲ細胞の組成物の投与のための例示的な適応症は、ＣＤ５を発現するあらゆる悪性腫瘍が挙げられるがん性疾患である。本開示の組成物の投与は、例えば、微小残存病変、早期がん、進行がん、ならびに／または転移がんおよび／もしくは難治性がんが挙げられる、全てのステージ（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶ）および種類のがんに有用である。

【0221】

本開示はさらに、他の化合物、例えば、二重特異性抗体構築物、標的毒素、または免疫細胞を介して作用する他の化合物との同時投与プロトコルを包含する。本発明の化合物の同時投与のための臨床レジメンは、他の成分の投与と同時、前、または後の同時投与を包含し得る。特定の併用療法として、化学療法、放射線、外科手術、ホルモン療法、または他の種類の免疫療法が挙げられる。

【0222】

実施形態は、本明細書中で定義されるＣＤ５標的化ＣＡＲ構築物、本明細書中で定義される核酸配列、本明細書中で定義されるベクター、および／または本明細書中で定義される宿主細胞（免疫細胞等）を含むキットに関する。また、本開示のキットは、単独で、または医学的処置もしくは介入を必要とする個体に投与されることとなる更なる薬剤と組み合わせて、本明細書中で先に記載されるような医薬組成物を含むことが企図される。
Ａ．医薬組成物

【0223】

また、本明細書中で提供されるのは、形質導入されたＮＫ細胞および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物および製剤である。形質導入された細胞は、個体への移入に適した培地、および／または個体への移入前を含む凍結保存等の保存に適した培地中に含まれ得る。

【0224】

本明細書中に記載される医薬組成物および製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の純度を有する活性成分（細胞等）を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２２^ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１２）と混合することによって調製され得る。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される投与量および濃度にて、レシピエントに対して非毒性であり、以下に限定されないが：リン酸、クエン酸、および他の有機酸等のバッファ；アスコルビン酸およびメチオニンが挙げられる酸化防止剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；およびｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンが挙げられる他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。本明細書中の例示的な薬学的に許容される担体としてさらに、間質性薬物分散剤、例えば、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えばヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）が挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０が挙げられる特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法が、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号明細書および米国特許出願公開第２００６／０１０４９６８号明細書に記載されている。一態様において、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼ等の１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
Ｂ．併用療法

【0225】

特定の実施形態において、本実施形態の組成物および方法は、少なくとも１つの追加の療法と組み合わせた免疫細胞集団（ＮＫ細胞集団が挙げられる）を含む。追加の療法として、放射線療法、外科手術（例えば、腫瘍摘出術および乳房切除術）、化学療法、遺伝子療法、ＤＮＡ療法、ウイルス療法、ＲＮＡ療法、免疫療法、骨髄移植、ナノ療法、モノクローナル抗体療法、ホルモン療法、腫瘍溶解性ウイルス、または前述の組合せがあり得る。追加の療法は、アジュバント療法またはネオアジュバント療法の形態であり得る。

【0226】

一部の実施形態において、追加の療法は、小分子酵素阻害剤または抗転移剤の投与である。一部の実施形態において、追加の療法は、副作用制限剤（例えば、処置の副作用の発生および／または重症度を軽減することが意図される剤、例えば嘔吐抑制剤、その他）の投与である。一部の実施形態において、追加の療法は放射線療法である。一部の実施形態において、追加の療法は外科手術である。一部の実施形態において、追加の療法は、放射線療法および外科手術の組合せである。一部の実施形態において、追加の療法はガンマ線照射である。一部の実施形態において、追加の療法は、ＰＢＫ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を標的とする療法、ＨＳＰ９０阻害剤、チューブリン阻害剤、アポトーシス阻害剤、および／または化学予防剤である。追加の療法は、当該技術において知られている１つ以上の化学療法剤であり得る。

【0227】

特定の実施形態において、本開示の本発明の細胞療法に加えて、個体は、外科手術、放射線、免疫療法（本開示の細胞療法以外）、ホルモン療法、遺伝子療法、化学療法等のうちの１つ以上が挙げられる、がん用の特定の追加の療法が施されていてもよく、施されてもよく、かつ／または施されることとなる。

【0228】

免疫細胞療法は、追加のがん治療に対して前、間、後に、または種々の組合せで施され得る。施用は、同時～数分～数日～数週に及ぶ間隔であり得る。免疫細胞療法が、追加の治療剤とは別に患者に提供される実施形態において、当業者であれば、一般に、２つの化合物が、有利に組み合わされた効果を患者に対してなお発揮することができるように、重要な期間が各送達時間の間に失効しないことを確実にするであろう。そのような場合、互いに約１２～２４または７２時間以内、より具体的には互いに約６～１２時間以内に抗体療法および抗がん療法が患者に施され得ると考えられる。一部の状況では、それぞれの投与の間に数日（２、３、４、５、６、または７）～数週（１、２、３、４、５、６、７、または８）が経過する場合、処置期間を大きく延長することが望ましい場合がある。

【0229】

種々の組合せを使用することができる。以下の例では、免疫細胞療法は「Ａ」であり、抗がん療法は「Ｂ」である。
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ
Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ

【0230】

本実施形態のあらゆる化合物または細胞療法を患者に施すには、もしあれば剤の毒性を考慮して、そのような化合物の投与のための一般的なプロトコルに従うこととなる。したがって、一部の実施形態において、併用療法に起因する毒性を監視する工程が存在する。
１．化学療法

【0231】

多種多様な化学療法剤が、本実施形態に従って用いられ得る。用語「化学療法」は、がんを処置するための薬物の使用を指す。「化学療法剤」は、がんの処置の際に投与される化合物または組成物を意味するのに用いられる。当該剤または薬物は、細胞内の活性様式によって、例えば、細胞周期に影響を及ぼすか、そしてどの段階で影響を及ぼすかで分類される。これ以外にも、剤は、ＤＮＡを直接架橋する能力、ＤＮＡ中にインターカレートする能力、または核酸合成に影響を及ぼすことによって染色体異常および有糸分裂異常を誘導する能力に基づいて特徴付けられ得る。

【0232】

化学療法剤の例として、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド；スルホン酸アルキル、例えば、ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ；エチレンイミンおよびメチルアメラミン（アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、およびトリメチロメラミンが挙げられる）；アセトゲニン（とりわけ、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンが挙げられる）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成類似体が挙げられる）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ－２１８９、およびＣＢ１－ＴＭ１が挙げられる）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロフォスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、およびウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、とりわけ、カリケアマイシンガンマＩＩ（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ ｇａｍｍａＩＩ）、およびカリケアマイシンオメガＩＩ（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ ｏｍｅｇａＩＩ））；ダイネマイシン（ダイネマイシンＡが挙げられる）；ビスホスホナート、例えばクロドロナート；エスペラマイシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連する色素タンパク質エンジインアンチビオティッククロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラルマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンが挙げられる）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラルナイシン（ｎｏｇａｌａｒｎｙｃｉｎ）、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、およびゾルビシン；代謝拮抗薬、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、プテロプテリン、およびトリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、およびチオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、およびフロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、およびテストラクトン；抗副腎剤（ａｎｔｉ－ａｄｒｅｎａｌｓ）、例えば、ミトタンおよびトリロスタン；葉酸補充剤、例えばフロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクォン；エルフォルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、例えば、マイタンシンおよびアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ多糖複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２´－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（とりわけ、Ｔ－２トキシン、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセルゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；白金配位錯体、例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、およびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼロダ；イバンドロナート；イリノテカン（例えばＣＰＴ－１１）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えばレチノイン酸；カペシタビン；カルボプラチン、プロカルバジン、プリカマイシン、ゲムシタビン、ナベルビン、ファルネシル－タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、トランス白金、ならびに先のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体が挙げられる。
２．放射線療法

【0233】

ＤＮＡ損傷を引き起こし、かつ広く用いられてきた他の因子として、γ線、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位体の指向性送達として一般に知られているものが挙げられる。また、マイクロ波、陽子ビーム照射（米国特許第５，７６０，３９５号明細書および米国特許第４，８７０，２８７号明細書）、およびＵＶ照射等の他の形態のＤＮＡ損傷因子が企図される。これらの因子は全て、ＤＮＡ、ＤＮＡの前駆体、ＤＮＡの複製および修復、ならびに染色体のアセンブリおよび維持に対する広範囲の損傷に影響を及ぼす可能性が最も高い。Ｘ線の線量範囲は、長期間（３～４週）の５０～２００レントゲンの１日線量から、２０００～６０００レントゲンの単回線量に及ぶ。放射性同位体の線量範囲は、広く変動し、同位体の半減期、放たれる放射線の強度および種類、ならびに新生物細胞による取込みによって決まる。
３．免疫療法

【0234】

当業者であれば、追加の免疫療法が、実施形態の方法と併用され得、または組み合わせて用いられ得ることを理解するであろう。がん処置の文脈において、免疫療法は、一般に、がん細胞を標的として破壊するための免疫エフェクタ細胞および分子の使用に依存する。リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標））がそのような例である。免疫エフェクタは、例えば、腫瘍細胞の表面上のいくつかのマーカーに特異的な抗体であり得る。抗体は単独で、療法のエフェクタとして機能し得るか、または他の細胞を動員して細胞死に実際に影響を及ぼし得る。また、抗体は、薬物または毒素（化学療法剤、放射性核種、リシンＡ鎖、コレラ毒素、百日咳毒素、その他）にコンジュゲートされて、標的化剤として機能し得る。これ以外にも、エフェクタは、腫瘍細胞標的と直接的または間接的に相互作用する表面分子を担持するリンパ球であり得る。種々のエフェクタ細胞として、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞が挙げられる。

【0235】

抗体－薬物コンジュゲートは、がん治療薬の開発への画期的なアプローチとして出現した。がんは、世界における主要な死因の１つである。抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、細胞死滅薬物に共有結合したモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を含む。このアプローチは、抗原標的に対するＭＡｂの高い特異性を、高度に強力な細胞傷害性薬物と組み合わせて、抗原レベルが富化された腫瘍細胞にペイロード（薬物）を送達する「武装」ＭＡｂをもたらす。また、薬物の標的送達は、正常組織における曝露を最小限に抑えて、毒性の低下および治療指数の改善をもたらす。ＦＤＡによる２０１１年のＡＤＣＥＴＲＩＳ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）および２０１３年のＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシンまたはＴ－ＤＭ１）という２つのＡＤＣ薬物の承認は、当該アプローチを検証した。現在、がん処置のための臨床試験の種々の段階において、３０を超えるＡＤＣ薬物候補が存在する（Ｌｅａｌ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。抗体工学およびリンカー－ペイロード最適化がますます成熟してきているので、新しいＡＤＣの発見および開発は、このアプローチおよび標的化ＭＡｂの生成に適した新しい標的の同定および検証にますます依存している。ＡＤＣ標的についての２つの基準は、腫瘍細胞における発現の上方制御／高いレベル、およびロバストな内在化である。

【0236】

免疫療法の一態様において、腫瘍細胞は、標的化に適した、すなわち他の細胞の大部分に存在しない何らかのマーカーを有していなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらはいずれも、本実施形態の文脈における標的化に適し得る。一般的な腫瘍マーカーとして、ＣＤ２０、がん胎児性抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ－７２、ＨＭＦＧ、シアリルルイス抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、ラミニン受容体、ｅｒｂＢ、およびｐ１５５が挙げられる。免疫療法の代替的な態様は、抗がん効果を免疫刺激効果と組み合わせるものである。また、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＧＭ－ＣＳＦ、ガンマ－ＩＦＮ等のサイトカイン、ＭＩＰ－１、ＭＣＰ－１、ＩＬ－８等のケモカイン、およびＦＬＴ３リガンド等の増殖因子が挙げられる免疫刺激分子が存在する。

【0237】

現在調査中または使用中の免疫療法の例として、免疫アジュバント、例えば、ウシ型結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、ジニトロクロロベンゼン、および芳香族化合物（米国特許第５，８０１，００５号明細書および米国特許第５，７３９，１６９号明細書；Ｈｕｉ ａｎｄ Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ，１９９８；Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９８）；サイトカイン療法、例えば、インターフェロンα、β、およびγ、ＩＬ－１、ＧＭ－ＣＳＦ、ならびにＴＮＦ（Ｂｕｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｄａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｈｅｌｌｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９８）；遺伝子療法、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＩＬ－２、およびｐ５３（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ａｕｓｔｉｎ－Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｖｉｌｌａｓｅｃａ，１９９８年；米国特許第５，８３０，８８０号明細書および米国特許第５，８４６，９４５号明細書）；ならびにモノクローナル抗体、例えば、抗ＣＤ２０、抗ガングリオシドＧＭ２、および抗ｐ１８５（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ，２０１２；Ｈａｎｉｂｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８；米国特許第５，８２４，３１１号明細書）がある。１つ以上の抗がん療法が、本明細書中に記載される抗体療法と共に使用され得ることが企図される。

【0238】

一部の実施形態において、免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤であり得る。免疫チェックポイントは、シグナル（例えば共刺激分子）を強くするか、またはシグナルを弱くする。免疫チェックポイント遮断によって標的とされ得る阻害性免疫チェックポイントとして、アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２ＡＲ）、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られている）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５２としても知られている）、インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、キラー細胞免疫グロブリン（ＫＩＲ）、リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）、プログラム死１（ＰＤ－１）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３（ＴＩＭ－３）、ならびにＴ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサ（ＶＩＳＴＡ）が挙げられる。特に、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１軸および／またはＣＴＬＡ－４を標的とする。

【0239】

免疫チェックポイント阻害剤は、小分子等の薬物、リガンドもしくは受容体の組換え形態であり得るか、または特に、ヒト抗体（例えば、国際公開第２０１５０１６７１８号パンフレット；Ｐａｒｄｏｌｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，１２（４）：２５２－６４，２０１２；双方とも参照により本明細書に組み込まれる）等の抗体である。免疫チェックポイントタンパク質またはその類似体の知られている阻害剤が使用され得、特にキメラ化、ヒト化、またはヒト形態の抗体が用いられ得る。当業者が知っている代替的かつ／または同等の名称が、本開示において言及される特定の抗体に用いられ得る。そのような代替的かつ／または同等の名称は、本開示の文脈において交換可能である。例えば、ラムブロリズマブは、ＭＫ－３４７５およびペンブロリズマブという代替的かつ同等の名称でも知られていることが知られている。

【0240】

一部の実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、ＰＤ－１の、そのリガンド結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤ－１リガンド結合パートナーは、ＰＤＬ１および／またはＰＤＬ２である。別の実施形態において、ＰＤＬ１結合アンタゴニストは、ＰＤＬ１の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤＬ１結合パートナーは、ＰＤ－１および／またはＢ７－１である。別の実施形態において、ＰＤＬ２結合アンタゴニストは、ＰＤＬ２の、その結合パートナーへの結合を阻害する分子である。特定の態様において、ＰＤＬ２結合パートナーはＰＤ－１である。アンタゴニストは、抗体、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドであり得る。例示的な抗体が、米国特許第８，７３５，５５３号明細書、米国特許第８，３５４，５０９号明細書、および米国特許第８，００８，４４９号明細書に記載されており、これらは全て、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書中で提供される方法に用いられる他のＰＤ－１軸アンタゴニストが、米国特許出願公開第２０１４／０２９４８９８号明細書、米国特許出願公開第２０１４／０２２０２１号明細書、および米国特許出願公開第２０１１／０００８３６９号明細書（全て、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、当該技術において知られている。

【0241】

一部の実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）である。一部の実施形態において、抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびＣＴ－０１１からなる群から選択される。一部の実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストは、イムノアドヘシン（例えば、定常領域（例えば、免疫グロブリン配列のＦｃ領域）に融合されたＰＤＬ１またはＰＤＬ２の細胞外またはＰＤ－１結合部分を含むイムノアドヘシン）である。一部の実施形態において、ＰＤ－１結合アンタゴニストはＡＭＰ－２２４である。ニボルマブは、ＭＤＸ－１１０６－０４、ＭＤＸ－１１０６、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８、およびＯＰＤＩＶＯ（登録商標）としても知られており、国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレットに記載される抗ＰＤ－１抗体である。ペンブロリズマブは、ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ ３４７５、ラムブロリズマブ、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標）、およびＳＣＨ－９００４７５としても知られており、国際公開第２００９／１１４３３５号パンフレットに記載される抗ＰＤ－１抗体である。ＣＴ－０１１は、ｈＢＡＴまたはｈＢＡＴ－１としても知られており、国際公開第２００９／１０１６１１号パンフレットに記載される抗ＰＤ－１抗体である。ＡＭＰ－２２４は、Ｂ７－ＤＣＩｇとしても知られており、国際公開第２０１０／０２７８２７号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０６６３４２号パンフレットに記載されるＰＤＬ２－Ｆｃ融合可溶性受容体である。

【0242】

本明細書中で提供される方法において標的とされ得る別の免疫チェックポイントは、ＣＤ１５２としても知られている細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）である。ヒトＣＴＬＡ－４の完全なｃＤＮＡ配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号Ｌ１５００６を有する。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上に見出され、抗原提示細胞の表面のＣＤ８０またはＣＤ８６に結合した場合に、「オフ」スイッチとして作用する。ＣＴＬＡ４は、ヘルパーＴ細胞の表面上に発現されて、阻害性シグナルをＴ細胞に伝達する免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８に類似しており、双方の分子は、抗原提示細胞上のそれぞれＢ７－１およびＢ７－２とも呼ばれるＣＤ８０およびＣＤ８６に結合する。ＣＴＬＡ４は阻害シグナルをＴ細胞に伝達するが、ＣＤ２８は刺激シグナルを伝達する。また、細胞内ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞において見出され、その機能にとって重要であり得る。Ｔ細胞受容体およびＣＤ２８を介したＴ細胞活性化は、Ｂ７分子の阻害性受容体であるＣＴＬＡ－４の発現の増大をもたらす。

【0243】

一部の実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＣＴＬＡ－４抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体）、その抗原結合断片、イムノアドヘシン、融合タンパク質、またはオリゴペプチドである。

【0244】

本方法での使用に適した抗ヒトＣＴＬＡ－４抗体（またはそれに由来するＶＨおよび／またはＶＬドメイン）は、当該技術において周知の方法を用いて生成され得る。これ以外にも、当該技術において認識されている抗ＣＴＬＡ－４抗体が用いられ得る。例えば、米国特許第８，１１９，１２９号明細書、国際公開第０１／１４４２４号パンフレット、国際公開第９８／４２７５２号パンフレット、国際公開第００／３７５０４号パンフレット（ＣＰ６７５，２０６号明細書、トレメリムマブとしても知られている；以前はチシリムマブ）、米国特許第６，２０７，１５６号明細書；Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５（１７）：１００６７－１００７１；Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．２５０５（抗体ＣＰ－６７５２０６）；およびＭｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８：５３０１－５３０４に開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体が、本明細書中で開示される方法に用いられ得る。前述の刊行物の各々の教示は、参照により本明細書に組み込まれる。また、ＣＴＬＡ－４への結合について、これらの当該技術において認識されている抗体のいずれかと競合する抗体が用いられ得る。例えば、ヒト化ＣＴＬＡ－４抗体は、国際公開第２００１／０１４４２４号パンフレット、国際公開第２０００／０３７５０４号パンフレット、および米国特許第８，０１７，１１４号明細書（全て、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

【0245】

例示的な抗ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブ（１０Ｄ１、ＭＤＸ－０１０、ＭＤＸ－１０１、およびＹｅｒｖｏｙ（登録商標）としても知られている）またはその抗原結合断片およびバリアント（例えば、国際公開第０１／１４４２４号パンフレット参照）である。他の実施形態において、抗体は、イピリムマブの重鎖および軽鎖のＣＤＲまたはＶＲを含む。したがって、一実施形態において、抗体は、イピリムマブのＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメイン、ならびにイピリムマブのＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３ドメインを含む。別の実施形態において、抗体は、上記の抗体と同じ、ＣＴＬＡ－４上のエピトープとの結合について競合し、かつ／またはこれに結合する。別の実施形態において、抗体は、上述の抗体と少なくとも約９０％の可変領域アミノ酸配列同一性（例えば、イピリムマブと少なくとも約９０％、９５％、または９９％の可変領域同一性）を有する。

【0246】

ＣＴＬＡ－４を調節するための他の分子として、米国特許第５，８４４，９０５号明細書、米国特許第５，８８５，７９６号明細書、ならびに国際公開第１９９５／００１９９４号パンフレットおよび国際公開第１９９８／０４２７５２号パンフレット（全て、参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようなＣＴＬＡ－４リガンドおよび受容体、ならびに米国特許第８，３２９，８６７号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるようなイムノアドヘシンが挙げられる。
４．外科手術

【0247】

がんを患う人のおよそ６０％は、予防的手術、診断手術、または病期分類手術、治癒的手術、および緩和手術が挙げられる何らかの種類の外科手術を受けることとなる。治癒的手術として、がん性組織の全てまたは一部が物理的に除去、切除、かつ／または破壊される切除が挙げられ、本実施形態の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子療法、免疫療法、および／または代替療法等の他の療法と組み合わせて用いられ得る。腫瘍切除術は、腫瘍の少なくとも一部の物理的除去を指す。腫瘍切除術に加えて、外科手術による処置として、レーザー手術、凍結手術、電気手術、および顕微鏡下手術（Ｍｏｈｓ手術）が挙げられる。

【0248】

がん性細胞、組織、または腫瘍の一部または全てを切除すると、体内に空洞が形成され得る。処置は、追加の抗がん療法による領域の灌流、直接注射、または局所施用によって達成され得る。そのような処置は、例えば、１、２、３、４、５、６、もしくは７日毎、または１、２、３、４、および５週毎、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、もしくは１２ヶ月毎に繰り返され得る。これらの処置は、同様に、投与量を変えるものであってもよい。
５．その他の薬剤

【0249】

他の薬剤が、本実施形態の特定の態様と組み合わせて用いられて、処置の治療有効性を向上させることができると考えられる。これらの追加の剤として、細胞表面受容体およびＧＡＰ接合部の上方制御に影響を及ぼす剤、細胞増殖抑制剤および分化剤、細胞接着の阻害剤、アポトーシス誘導因子に対する過剰増殖性細胞の感受性を増大させる剤、または他の生物学的剤が挙げられる。ＧＡＰ接合部の数を増やすことによる細胞間シグナル伝達の増大は、隣接する過剰増殖性細胞集団に及ぼす抗過剰増殖効果を増大させるであろう。他の実施形態において、細胞増殖抑制剤または分化剤が、本実施形態の特定の態様と組み合わせて用いられて、処置の抗過剰増殖効果を向上させることができる。細胞接着の阻害剤が、本実施形態の有効性を向上させると考えられる。細胞接着阻害剤の例として、焦点接着キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤およびロバスタチンがある。さらに、アポトーシスに対する過剰増殖性細胞の感受性を増大させる他の剤、例えば抗体ｃ２２５が、本実施形態の特定の態様と組み合わせて用いられて、処置効力を向上させることができると考えられる。
ＶＩＩＩ．本開示のキット

【0250】

本明細書中に記載されるあらゆる組成物が、キットに含まれ得る。非限定的な例において、細胞、細胞を生成するための試薬、ベクター、ならびにベクターおよび／またはその構成要素を生成するための試薬がキットに含まれ得る。特定の実施形態において、ＮＫ細胞がキットに含まれてもよく、これは、ＣＤ５標的化受容体、任意選択のサイトカイン、または任意選択の自殺遺伝子を発現してもしなくてもよい。そのようなキットは、細胞の操作のための１つ以上の試薬を有していても有していなくてもよい。そのような試薬として、例えば、小分子、タンパク質、核酸、抗体、バッファ、プライマー、ヌクレオチド、塩、および／またはそれらの組合せが挙げられる。１つ以上のＣＤ５標的化ＣＡＲ、自殺遺伝子産物、および／またはサイトカインをコードするヌクレオチドがキット内に含まれ得る。サイトカイン、またはモノクローナル抗体が挙げられる抗体等のタンパク質がキット内に含まれ得る。操作されたＣＡＲ受容体の構成要素をコードするヌクレオチドが、当該構成要素を生成するための試薬を含めて、キット内に含められ得る。

【0251】

特定の態様において、キットは、本開示のＮＫ細胞療法および別のがん治療も含む。場合によっては、キットは、細胞療法の実施形態に加えて、例えば、化学療法、ホルモン療法、および／または免疫療法等の第２のがん治療も含む。キットは、個体の特定のがんに合わせて調整され得、かつ個体に対するそれぞれの第２のがん治療を含み得る。

【0252】

キットは、本開示の適切に等分された組成物を含み得る。キットの構成要素は、水性媒体または凍結乾燥形態のいずれかでパッケージされ得る。キットの容器手段として、一般に、その中に構成要素が配置され得、好ましくは適切に等分され得る、少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ、または他の容器手段が挙げられる。キット内に複数の構成要素が存在する場合、キットはまた、一般に、追加の構成要素が別々に配置され得る第２、第３、または他の追加の容器を含有し得る。しかしながら、構成要素の種々の組合せがバイアル内に含まれ得る。本発明のキットはまた、典型的には、組成物および他のあらゆる試薬容器を商業的販売のために密閉して収容するための手段を含む。そのような容器として、所望のバイアルが保持される射出またはブロー成形プラスチック容器が挙げられ得る。
ＩＸ．実施例

【実施例】

【0253】

以下の実施例は、本開示の特定の非限定的な態様を実証するために含まれる。以下の実施例に開示される技術は、開示される主題の実施において良好に機能するように本発明者らによって発見された技術を表すことが当業者によって理解されるべきである。しかしながら、当業者であれば、本開示に照らして、開示される特定の実施形態において多くの変更を行って、開示される主題の精神および範囲から逸脱することなく同様または類似の結果を依然として得ることができることを理解すべきである。
（実施例１）
ＤＡＰ１０共刺激は、ＣＤ５標的化臍帯血由来ＣＡＲ－ＮＫ細胞に記憶様の特徴を付与する

【0254】

本実施例は、ＣＤ５＋がん細胞の処置のための養子細胞療法に用いられる種々のＣＤ５キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）関連構築物の分析に関する。

【0255】

ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の設計におけるＴ細胞中心性共刺激ドメインＣＤ２８または４－１ＢＢの試験。ＣＡＲ構築物における共刺激ドメインとしてＣＤ２８または４－１ＢＢを組み込んだＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の有効性を特徴付けた。ＣＤ２８または４－１ＢＢ共刺激ドメインのいずれか、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ならびにインビボ増殖および持続性を増強するためのサイトカインとしてのＩＬ－１５を有する、ＣＤ５抗原に対するｓｃＦｖを有する２つのＣＤ５ ＣＡＲ構築物を生成した（図１Ａ）。臍帯血（ＣＢ）由来ＮＫ細胞は、これらの構築物による形質導入に成功し（図１Ｂ）、フラトリサイドの証拠のない良好な増殖を示した（図１Ｃ）。また、これらのＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ５＋Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）細胞株であるＣＣＲＦ－ＣＥＭに対する非形質導入（ＮＴ）ＮＫ細胞と比較して、サイトカイン産生（ＩＦＮγ、ＴＮＦα）、脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）、および細胞傷害性の増強を示した（図１Ｄ、Ｅ）。Ｔ－ＡＬＬのインビボマウスモデルでは、ホタルルシフェラーゼを形質導入したＣＣＲＦ－ＣＥＭ（ＣＣＲＦ－ＣＥＭ－ＦＦｌｕｃ）を移植し、かつＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζ－ＩＬ－１５またはＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζ－ＩＬ－１５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置したマウスは、腫瘍単独を移植したマウス、または腫瘍を移植して、ＮＴ ＮＫ細胞で処置したマウス（図１Ｆ～１Ｈ）と比較して、腫瘍制御および生存の向上を示した。しかしながら、全てのマウスは最終的に腫瘍に屈した。

【0256】

ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビトロ機能におけるＮＫ関連共刺激ドメインの役割の評価。ＣＤ２８および４－１ＢＢがＴ細胞中心性共刺激ドメインであり、かつＣＤ２８が非操作ＮＫ細胞で発現されないという事実を考慮すると、特定の実施形態において、ＮＫ細胞生物学およびシグナル伝達により関連する共刺激分子を組み込むと、ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の有効性が増強すると考えられた。３つの追加のレトロウイルス構築物を設計した；当該構築物は、ＣＤ５に対する同じｓｃＦｖ、ＣＤ２８膜貫通（ＴＭ）ドメイン、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、ならびにインビボ持続性および増殖を増強するためのサイトカインとしてのＩＬ－１５を共通して有していたが、共刺激ドメインの選択が異なっていた（ＮＫＧ２Ｄ対ＤＡＰ１０対ＤＡＰ１２）（図２Ａ）。ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２共刺激ドメインを有する構築物については、ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２ ＴＭドメインを有する設計も含めた（図２Ａ）。共刺激ドメインを含まない第１世代ＣＡＲ構築物を陰性対照として用いて、ＣＡＲ－ＮＫ細胞の機能における共刺激の役割を調べた。ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζ－ＩＬ－１５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ５＋Ｔ－ＡＬＬ標的に対するインビトロおよびインビボ有効性を示したので、Ｔ細胞中心性共刺激を有する陽性対照としての役割を果たした。感染多重度（ＭＯＩ）を調整することによって、試験した全ての構築物について同様の形質導入効率が得られた（５０～６０％）（図２Ｂ）。種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の増殖は、以前に記載されたように^１２、増殖プロトコルが、ユニバーサル抗原提示細胞（ｕＡＰＣ）およびＩＬ－２を含み、そしてその操作に拘わらず、ＮＫ細胞の増殖を最適化するので、インビトロで非常に類似していた（図２Ｃ）。ＣＡＲ設計に拘わらず、全てのＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、無関係の標的ＣＡＲ対照として用いた対照ＮＴ ＮＫ細胞およびＣＤ１９ ＣＡＲ－ＮＫ細胞（ＩＬ－１５ありまたはなし）と比較して、ＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍細胞と６時間共培養した場合、サイトカイン産生（ＩＦＮγおよびＴＮＦα）および脱顆粒（ＣＤ１０７ａ）の増強を示した（図２Ｄ）。^５１Ｃｒ放出細胞傷害性アッセイでは、全てのＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞がＮＴ ＮＫ細胞よりも良好にＣＤ５＋腫瘍標的を死滅させた。しかしながら、種々のＣＡＲ－ＮＫ細胞設計の間で細胞傷害性の有意差は認められなかった（図２Ｅ）。

【0257】

ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＣＤ５＋悪性腫瘍のマウスモデルにおいて腫瘍制御および生存の増強をもたらした。種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞設計のインビボ抗腫瘍活性を調査するために、先に用いたＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭの同じＮＳＧマウスモデルを用いて、ＣＤ５－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ５－４１ＢＢ－ＣＤ３ζＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞のインビボ有効性を試験した。腫瘍単独を移植したマウス、および腫瘍を移植し、かつＮＴ ＮＫ細胞で処置したマウスを、陰性対照とした。マウスに、－１日目に照射（２２５ｃＧｙ）してから、０日目にマウスあたり１００，０００個のＣＣＲＦ－ＣＥＭ－ＦＦｌｕｃ腫瘍細胞を静脈内注射した。２日目に、処置群は、２×１０^６個のＮＴ ＮＫ細胞または２×１０^６個のＣＡＲ－ＮＫ細胞の種々の調製物のいずれかを受けた。ＤＡＰ１０シグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、対照マウス、および他の共刺激ドメインを組み込んだＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を受けたマウスと比較して、明らかに優れた腫瘍制御および生存の有意な向上を示した（図３Ａ～Ｃ）。さらに、これらのＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置した動物は、体重モニタリングによって証明されるように、毒性の徴候を示さなかった（体重減少なし）（図３Ｄ）。興味深いことに、ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞によってもたらされる生存上の利点は、ＣＤ５発現が低いＣＣＲＦ－ＣＥＭを移植したマウスにおいてすら維持されていた（図３Ｅ）。さらに、皮下注射したＣＤ５＋マントル細胞リンパ腫のインビボＰＤＸマウスモデルにおいて、ＤＡＰ１０共刺激があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、腫瘍制御の向上をもたらし、腫瘍単独を移植した未処置マウスと比較して、ＣＡＲ－ＮＫ細胞処置マウスの皮下腫瘍、脾臓、および骨髄からのＣＤ４５＋ＣＤ５＋リンパ腫細胞の絶対数の顕著な低下を伴った（図４Ａ、図４Ｂ）。

【0258】

ＤＡＰ１０共刺激は、ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞に活性化表現型を付与する。ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、他のＣＡＲ設計と比較して、インビボで著しく良好に機能する理由を特徴付けるために、そのプロテオミクスプロファイルをより深く検討した。ＮＴ ＮＫ細胞に関して種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の表現型を調査するために、マスサイトメトリを、そして活性化ＮＫ細胞受容体および阻害性ＮＫ細胞受容体に対する４７抗体のパネル、ならびに増殖、分化、および成熟マーカーを用いた。ｔ分布確率的近傍埋込み（ｔ－ＳＮＥ）アルゴリズムであるｖｉＳＮＥを用いて、ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、ＮＴ ＮＫ細胞と比較して、２つの特定のクラスター（クラスター８および１１）を示すことが観察された（図５Ａ、図５Ｂ）。各クラスターを定義するマーカーの組合せをより詳細に検討することによって、これらのクラスター８および１１は、活性化マーカー（ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ、ＣＤ６９、ＣＤ３ζ）、細胞傷害性マーカー（パーフォリン、グランザイムＢ、ＴＲＡＩＬ）、および成熟マーカー（ｅｏｍｅｓｏｄｅｒｍｉｎ（ｅｏｍｅｓ）およびＴ－ｂｅｔ）が豊富であった（図５Ｃ）。

【0259】

ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、多機能性および代謝フィットネスの増強を示す。
ＤＡＰ１０シグナル伝達があるＣＡＲ－ＮＫ細胞が、他のＣＡＲ－ＮＫ細胞設計と比較してインビボで機能的疲弊が少ないことを示す理由についての洞察を得るために、種々の共刺激ドメインを有するＣＡＲ－ＮＫ細胞の多機能性および代謝を評価するための一連の実験を実行した。サイトカイン分泌を単一細胞レベルで評価するために、免疫細胞効力と相関する多機能性を評価するための十分に検証されたツールであるＩｓｏＰｌｅｘｉｓ単一細胞セクレトームアッセイを用いた。プレートに結合したＣＤ５抗原により４時間刺激した後に、ＤＡＰ１０シグナル伝達があるＣＡＲ－ＮＫ細胞は、最も高い多機能性を示し、単一細胞レベルで３、４、または５＋サイトカインを分泌する細胞の割合がより高かった（図６Ａ、図６Ｂ）。ＤＡＰ１０含有ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞におけるこれらの分泌サイトカインのより高い割合が、エフェクタ、刺激性、または化学誘引性カテゴリーに属していた（図６Ｃ）。代謝の見地から、ＤＡＰ１０シグナル伝達を有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、他の構築物および対照ＮＴ ＮＫ細胞と比較して、有意に高い、酸化的リン酸化およびミトコンドリアフィットネスの尺度である酸素消費速度（ＯＣＲ）を示した（図６Ｄ）。

【0260】

ＤＡＰ１０共刺激ドメインを有するＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、記憶様の特徴を示す。
次に、ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞におけるＤＡＰ１０共刺激に伴う好ましいトランスクリプトーム、プロテオミクス、および代謝変化が、顕著なインビボ有効性を説明し得る記憶様の特徴に変換されるかを調べた。したがって、ＣＡＲ－ＮＫ細胞が、腫瘍を十分に制御するために連続死滅能力を示さなければならないので、疲弊の傾向があるインビボ設定をシミュレートした。２～３日毎に実行される腫瘍再チャレンジが複数回ある長期のＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）細胞傷害性アッセイ（図７Ａ）では、ＤＡＰ１０シグナル伝達があるＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、複数回の腫瘍再チャレンジ後に死滅させる持続的な能力を有する他のＣＡＲ－ＮＫ細胞設計と比較して、ＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭに対してより優れた細胞傷害性を示した一方、ＮＴ ＮＫ細胞、無関係の標的ＣＤ１９またはＣＤ１９／ＩＬ－１５ ＣＡＲを形質導入したＮＫ細胞、および他のＣＤ５ ＣＡＲ構築物を形質導入したＮＫ細胞は、経時的に死滅させる能力を失った（図７Ｂ、Ｃ）。同様に、インビボモデルにおいて、長期間生存し、かつ疾患から治癒したと思われる、ＤＡＰ１０含有ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞で処置したマウスは、ＣＤ５＋ＣＣＲＦ－ＣＥＭで再チャレンジして、腫瘍発生の証拠を呈さず、このことは、これらのＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞が記憶の特徴を備え、かつ再曝露後に腫瘍を根絶することができることを示唆している（図７Ｄ～７Ｆ）。
材料および方法の例
細胞株および培養培地

【0261】

ＣＣＲＦ－ＣＥＭ（Ｔ－ＡＬＬ細胞株）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａ，ＶＡ，ＵＳＡ）から購入した。ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞に、インビボ実験のためにホタルルシフェラーゼ（ＣＣＲＦ－ＣＥＭ－ＦＦｌｕｃ）を形質導入した。低ＣＤ５モデルについて、ｓｈＲＮＡを用いて、ＣＣＲＦ－ＣＥＭにおけるＣＤ５の発現をノックダウンした。Ｋ５６２ベースのフィーダ細胞を、４－１ＢＢＬ、ＣＤ４８、および膜結合ＩＬ－２１を共発現するようにレトロウイルスにより形質導入した。これをｕＡＰＣと称する。全ての細胞株を、１０％胎仔ウシ血清（ＦＢＳ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、および１％Ｌ－グルタミンを補充したＲｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）培地中で培養した。ＮＫ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン、および１％Ｌ－グルタミンを補充した幹細胞増殖培地（ＳＣＧＭ）中で培養した。
臍帯血ＮＫ細胞増殖

【0262】

研究用のＣＢユニットが、ＭＤ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ ＣＢ Ｂａｎｋによって提供された。ＣＢを、密度勾配技術（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ；Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）によって単離した。ＮＫ単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）により精製したＣＤ５６＋ＮＫ細胞を、０日目に、完全幹細胞増殖培地（ＣｅｌｌＧｅｎｉｘ ＧｍｂＨ，Ｆｒｅｉｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中で、照射（１００Ｇｙ）ｕＡＰＣ（フィーダ細胞：ＮＫ比２：１）および組換えヒトＩＬ－２（プロロイキン、２００Ｕ／ｍｌ；Ｃｈｉｒｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）により刺激した。ヒトフィブロネクチンでコーティングしたプレート（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ，ＵＳＡ）内で＋６日目に、活性化ＮＫ細胞をレトロウイルス上清により形質導入した。＋７日目および＋１４日目に、ＮＫ細胞を、照射ｕＡＰＣおよびＩＬ－２により再び刺激した。＋２１日目に、ＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞を、前述の実験に用いるために収集した。
レトロウイルスの形質移入および形質導入

【0263】

種々のＣＤ５構築物をコードするレトロウイルスベクターを社内で設計し、そしてプラスミドをＧｅｎｅＡｒｔ（商標）から注文した。ＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＤ３ζおよびＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＤ３ζ－ＩＬ－１５ベクターが以前に記載されている^６。以前に記載されるように^１４、一過性レトロウイルス上清を生成した。ヒトフィブロネクチンでコーティングしたプレート（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ，ＵＳＡ）内で＋６日目に、活性化ＮＫ細胞をレトロウイルス上清により形質導入した。＋８日目に、ＣＡＲ形質導入効率を、フローサイトメトリによって測定して、ＮＫ細胞を、照射ｕＡＰＣおよびＩＬ－２により再び刺激した。
機能的アッセイ

【0264】

１００×１０ｅ３個の細胞／ウェルのＣＡＲ１９もしくはＣＡＲ１９／ＩＬ－１５ ＮＫ細胞、またはＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を、丸底９６ウェルプレート内でブレフェルディンＡの存在下で６時間、ＣＣＲ－ＣＥＭ細胞またはＫ５６２標的（陽性対照）と、エフェクタ：標的細胞比（Ｅ：Ｔ）２：１にて共培養した。脱顆粒を測定するために、共培養の開始時にＣＤ１０７ａ抗体（Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ７８５（商標）抗ヒトＣＤ１０７ａ（ＬＡＭＰ－１）抗体、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）をウェルに加えた。ＣＤ５６、ＣＤ３、およびＣＡＲについての細胞の収集および表面染色の後に、細胞を固定して、細胞内染色を、ＴＮＦα（ＴＮＦアルファモノクローナル抗体（ＭＡｂ１１）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）およびＩＦＮγ（ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ（商標）Ｖ４５０マウス抗ヒトＩＦＮγ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）について行った。細胞を、以前に記載されるように^１５、フローサイトメトリによって評価した。
細胞傷害性アッセイ
クロム放出アッセイ

【0265】

細胞傷害性を評価するために、エクスビボで増殖させた、ＮＴまたはＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞を、^５１Ｃｒ標識ＣＣＲＦ－ＣＥＭ標的と多数のＥ：Ｔ比にて共培養した。細胞傷害性を、前述のように^１５、^５１Ｃｒ放出によって測定した。
Ｉｎｃｕｃｙｔｅ生細胞イメージングアッセイ

【0266】

エクスビボ増殖させたＮＴおよびＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞を、９６ウェルまたは４８ウェルプレート内で、レンチウイルスで形質導入したＣＣＲＦ－ＣＥＭ腫瘍標的と、１：１のＥ：Ｔ比にて共培養して、赤色色素（ＰＥ－Ｔｅｘａｓ ｒｅｄ）を発現させた。各ウェルは、５×１０４個のＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞および５×１０４個のＮＫ細胞を含有していた。ＣｅｌｌＥｖｅｎｔ（商標）カスパーゼ－３／７Ｃａｓｐａｓｅ－３／７ Ｇｒｅｅｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて、アポトーシスを検出した。腫瘍単独群またはＮＫ細胞単独群を含有するウェルを陰性対照とした。ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３生細胞分析システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を用いて、１０×対物レンズにより、ウェルあたり４つの別々の１．７５×１．２９ｍｍ^２領域から１時間間隔でフレームを経時的にキャプチャした。各ウェルの４つ全ての領域からの値をプールして、３つ全ての反復にわたって平均した。結果を、重なり合う赤色シグナルおよび緑色シグナル（画像あたりのカウント）を赤色シグナル（画像あたりのカウント）で割った比率を算出することによって、細胞毒性パーセントとしてグラフで表した。再チャレンジ実験について、ＣＣＲＦ－ＣＥＭを、全てのウェル（ＮＫ細胞単独群を含有する対照ウェルを除く）に２～３日毎に加えた。赤色カウントおよびコンフルエンスを経時的にプロットして、ＮＫ細胞による腫瘍の増殖または排除を追跡した。
マスサイトメトリ
抗体コンジュゲーション

【0267】

３８個の金属タグ付き抗体を含むパネルを、ＮＫ細胞の詳細な特徴付けに用いた。対応する金属タグ同位体を有する抗体のリストを表に示す。全ての非標識抗体を、キャリアフリーの形態で購入して、Ｍａｘｐａｒ Ｘ８またはＭＣＰ９ポリマーを、製造者の説明書（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）に従って用いて、対応する金属タグと社内でコンジュゲートさせた。全ての金属同位体は、塩化インジウム（ＩＩＩ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を除いて、Ｆｌｕｉｄｉｇｍから得た。抗体濃度を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いてＡ２８０タンパク質の量を測定することによって判定した。次いで、コンジュゲートされた抗体を、０．０５％アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を補充したＰＢＳベースの抗体安定化溶液またはＬｏｗＣｒｏｓｓ－Ｂｕｆｆｅｒ（Ｃａｎｄｏｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ，Ｗａｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中で、０．５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に希釈した。段階滴定実験を実行して、抗体毎の最適なシグナル対ノイズ比により濃度を判定した。

【表1】

試料の調製および取得：

【0268】

ＮＴ ＮＫ細胞または種々のＣＤ５ ＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞を収集して、４℃、４００ｇにて５分間、細胞染色バッファ（ＰＢＳ中０．５％ウシ血清アルブミン、０．０２％アジ化ナトリウム）で２回洗浄して、２．５μＭシスプラチン－１９８Ｐｔと暗所で２分間インキュベートした。次いで、細胞を、ＦＡＣＳバッファ（ＰＢＳ中２％胎仔ウシ血清）で１回、そして細胞染色バッファで１回洗浄した。１０μｌのヒトＦｃ受容体ブロッキング溶液（Ｍｉｌｔｅｎｙ Ｂｉｏｔｅｃ，１３０－０５９－９０１）、室温にて１０分間。次いで、細胞を、ＰＢＳ中１％ウシ血清アルブミン中に希釈した細胞表面マーカーに対するフレッシュに調製した抗体混合液により、シェーカー（１３０ｒｐｍ）上で室温にて４０分間染色した。細胞を、細胞染色バッファで２回洗浄して、１．８％パラホルムアルデヒドを用いて暗所、室温にて１０分間固定した。細胞を、細胞染色バッファで４℃、８００ｇにて５分間、２回洗浄して、１ｍｌのメタノール中で－８０℃にて一晩保存した。翌日、試料を、細胞染色バッファで２回洗浄して、ＰＢＳ中１％ウシ血清アルブミン＋０．２％サポニン中に希釈した細胞内マーカーに対するフレッシュに調製した抗体混合液により染色した。細胞を、細胞染色バッファで２回洗浄して、１ｍｌインターカレーターイリジウム（１ｍｌＰＢＳ中１μｌの１２５μＭ Ｉｒ）中で室温にて２０分間インキュベートした。細胞を細胞染色バッファで２回洗浄して、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ（登録商標）ｄＨ２Ｏ中０．１％ウシ血清アルブミン１ｍｌ中に再懸濁させて、３５μｍナイロンメッシュ（セルストレーナキャップチューブ、ＢＤ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で濾過して、カウントした。分析前に、試料を、０．５×１０５／ｍｌの濃度にてＥＱ（商標）ｆｏｕｒ ｅｌｅｍｅｎｔ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｂｅａｄｓを補充したＭｉｌｌｉ－Ｑ（登録商標）ｄＨ２Ｏ中に懸濁させた。試料を、Ｈｅｌｉｏｓ ６．５．３５８取得ソフトウェア（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）を用いてＨｅｌｉｏｓ機器（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）により３００イベント／秒にて得た。
データ解析

【0269】

マスサイトメトリデータを、Ｆｌｕｉｄｉｇｍ正規化ソフトウェア２を用いて、経時的なＥＱ（商標）４エレメントシグナルシフトに基づいて正規化した。Ｆｌｏｗｊｏバージョン１０．２を用いて、初期データ品質管理を実行した。較正ビーズをゲートアウトして、シングレットを、イリジウム１９３染色およびイベント長に基づいて選択した。死細胞をＰｔ１９５チャネルによって排除して、さらにゲーティングを実行して、ＣＤ４５＋細胞の後に目的のＮＫ細胞集団（ＣＤ３－ＣＤ５６＋）を選択した。自動クラスタリングを実行するために、全試料から合計３２０，０００個の細胞を比例的にサンプリングした。以前に公開された^１７のような免疫細胞のディープ表現型タイピングのためのクラスタリング用のＦｌｏｗＳＯＭ^１６と組み合わせた（ｖｉＳＮＥ）を含む自動化次元削減を用いて、データを分析した。
Ｉｓｏｐｌｅｘｉｓ単一細胞セクレトームアッセイ

【0270】

ＮＴ ＮＫ細胞または種々のＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞を蛍光色素（Ｉｓｏｐｌｅｘｉｓ染色細胞膜４０５）により標識して、プレート結合ＣＤ５抗原で４時間刺激するか、またはＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞と４時間共培養してから、ＣＤ５６＋マイクロビーズによる陽性選択を用いて精製した。精製された集団から、３×１０^４個のＮＫ細胞を、製造者のプロトコル（Ｉｓｏｐｌｅｘｉｓ，Ｂｒａｎｆｏｒｄ，ＣＴ，ＵＳＡ）に従って、個々のＩｓｏコードチップ上にロードして、ＩｓｏＰｌｅｘｉｓ単一細胞プラットフォーム上でサイトカインの完全に検証されたパネルを用いて、単一細胞３２プレックスサイトカインセクレトームプロファイリングに供した。以前に記載されるように^{１８、１９}、ＩｓｏＳｐｅａｋソフトウェアを用いて、多機能性ＮＫ細胞の数を定量し、多数のサイトカインを分泌する各試料中の細胞のパーセンテージを測定し（２＋、３＋、４＋、または５＋）、分泌されているサイトカインのカテゴリー（エフェクタ、刺激性、調節性、または化学誘引性）を割り当て、そしてＮＫ細胞によって分泌されるタンパク質の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を乗算した多機能性細胞のパーセンテージとして定義される多機能性強度指数（ＰＳＩ）を測定した。
Ｓｅａｈｏｒｓｅアッセイ

【0271】

ＮＴ－ＮＫ細胞または種々のＣＤ５ ＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ Ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ Ｓｔｒｅｓｓ Ｔｅｓｔ ＫｉｔおよびＭｉｔｏ Ｓｔｒｅｓｓ Ｔｅｓｔ Ｋｉｔ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を用いてアッセイした。細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）および酸素消費速度（ＯＣＲ）を、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦｅ９６ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を製造者の説明書に従って用いて測定した。
異種マウスモデル

【0272】

インビボでのＣＤ５ ＣＡＲ形質導入ＣＢ－ＮＫ細胞の抗腫瘍効果を評価するために、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞株を移植したＮＯＤ／ＳＣＩＤ ＩＬ－２ Ｒγｎｕｌｌ（ＮＳＧ）異種移植モデルを用いた。マウス実験を、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコルに従うＮＩＨ勧告に従って実行した。ＮＳＧマウス（１０～１２週齢；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ，ＵＳＡ）に、－１日目に３００ｃＧｙを照射して、０日目にホタルルシフェラーゼ標識ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細胞（１×１０ｅ５個）を静脈内接種した。示す場合、フレッシュな、増殖した、ＮＴまたはＣＤ５ ＣＡＲ形質導入ＣＢ－ＮＫ細胞を、２日目に尾静脈を介して注射した。マウスを、毎週の生物発光イメージング（Ｘｅｎｏｇｅｎ－ＩＶＩＳ ２００ Ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ；Ｃａｌｉｐｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）に供した。光子／秒でのシグナル定量化を、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅソフトウェア（Ｃａｌｉｐｅｒ）^２０を用いて、標準化された目的の領域内の光子束率を判定することによって実行した。ＮＫ細胞のトラフィッキング、持続性、および増殖を、フローサイトメトリによって測定した。また、マウスを、体重およびスコアリングを記録することによって、生存および毒性についてモニターした。
ＮＫ細胞のインビボ輸送、持続性、および増殖を調べるのに用いた抗体

【0273】

以下の抗体をフローサイトメトリ染色に用いた：ＡＰＣ／Ｃｙ７抗ヒトＣＤ３抗体（クローンＨＩＴ３ａ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｖｉｏｌｅｔ ６０５（商標）抗ヒトＣＤ５６（ＮＣＡＭ）抗体（クローンＨＣＤ５６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗ＣＡＲ抗体ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ｊａｃｋｓｏｎ）、ＰＥマウス抗ヒトＣＤ７クローンＭ－Ｔ７０１（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＢＶ７１１マウス抗ヒトＣＤ５クローンＵＣＨＴ２（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＢＶ６５０マウス抗ヒトＣＤ１６クローン３Ｇ８（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＰｅｒＣＰ抗ヒトＣＤ４５抗体クローンＨＩ３０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、生／死アクア死細胞染色（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）。
統計

【0274】

二元配置Ａｎｏｖａ検定を用いて、群間の定量的差異（平均±ｓｄ）を比較した。Ｐ値は両側であり、Ｐ＜０．０５を有意とみなした。全ての生物発光実験について、強度シグナルを、ベースラインおよびその後の多数の時点での平均±ｓｄとしてマウスの群毎に要約した^２０。生存確率は、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を用いて算出した。示す統計学的検定を、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄバージョン７．０ｃ）を用いて実行した。
特定の実施形態の重要性

【0275】

ＣＡＲ－Ｔ細胞の機能およびフィットネスに及ぼす種々の共刺激ドメインの効果が、十分に研究されてきた。ＣＡＲ－ＮＫ細胞分野では、様々な共刺激分子の役割を調査する研究はほとんど報告されていないが、増殖、トランスクリプトームプロファイル、表現型、多機能性、代謝、細胞傷害性、および記憶形成に及ぼす共刺激の選択の影響を体系的に調べた研究はない。本研究は、これらの具体的な疑問を詳しく調べて、ＮＫ中心性共刺激ドメインであるＤＡＰ１０が、好ましい表現型変化および相乗的シグナル伝達をもたらして、ＣＤ５ ＣＡＲ－ＮＫ細胞の最適な全体的抗腫瘍活性およびフィットネス、ならびに記憶形成の特徴となることを示す。

【0276】

ＣＡＲ－Ｔ細胞では、Ｔ細胞のシグナル伝達および代謝に及ぼす４－１ＢＢ対ＣＤ２８共刺激の影響が徹底的に調査されており、細胞療法産物の持続性および消耗に関する臨床転帰およびデータと相関している^２１。ＤＡＰ１０は、ＣＡＲ－Ｔ細胞およびＮＫＧ２ＤベースのＣＡＲ－ＮＫ細胞の機能を増強することが以前に示されている^{２２、２３}が、他の共刺激分子に勝るその利点を説明するための機構的洞察は提供されていない。さらに、ＤＡＰ１０共刺激の下流のシグナル伝達経路は、ＣＡＲ－ＴまたはＣＡＲ－ＮＫ細胞の状況では分析されていない。

【0277】

参考文献
以下の参考文献は、それらが本明細書に記載されたものを補足する例示的な手順または他の詳細を提供する限りにおいて、参照により本明細書に具体的に組み込まれる。
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【0278】

本開示およびその利点について詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲によって定義される設計の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書において様々な変更、置換および改変を行うことができることを理解されたい。 さらに、本出願の範囲は、本明細書に記載されたプロセス、機械、製造、物質組成、手段、方法およびステップの特定の実施形態に限定されることを意図するものではない。 当業者であれば、本開示から容易に理解されるように、本明細書に記載される対応する実施形態と実質的に同じ機能を果たすか、または実質的に同じ結果を達成する、現在存在するか、または後に開発されるプロセス、機械、製造、物質組成物、手段、方法、またはステップが、本開示に従って利用され得る。 従って、添付の特許請求の範囲は、そのようなプロセス、機械、製造、物質組成物、手段、方法、またはステップをその範囲内に含むことを意図している。

【図1A-C】

【図1D-E】

【図1F】

【図1G-H】

【図2A】

【図2B-C】

【図2D】

【図2E】

【図3A】

【図3B-C】

【図3D】

【図3E】

【図4A-B】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図6D】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図8A】

【図8B】

【配列表】

2024514203000001.app

【国際調査報告】