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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-03-29
(54)【発明の名称】増強された抗ＨＶＥＭ抗体及びその使用
(51)【国際特許分類】
C07K 16/30 20060101AFI20240322BHJP
C07K 14/705 20060101ALI20240322BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240322BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240322BHJP
A61P 31/00 20060101ALI20240322BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240322BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240322BHJP
C12N 15/09 20060101ALN20240322BHJP
【ＦＩ】
C07K16/30 ZNA
C07K14/705
A61K39/395 N
A61P37/04
A61P31/00
A61P35/00
A61P43/00 121
C12N15/09 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023561005
(86)(22)【出願日】2022-03-31
(85)【翻訳文提出日】2023-11-28
(86)【国際出願番号】 IL2022050348
(87)【国際公開番号】W WO2022208505
(87)【国際公開日】2022-10-06
(31)【優先権主張番号】63/169,335
(32)【優先日】2021-04-01
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】521473310
【氏名又は名称】４シー バイオメッド リミテッド
(71)【出願人】
【識別番号】523374138
【氏名又は名称】シバ インパクト リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】グリーンバーグ，エヤル
(72)【発明者】
【氏名】ガロア－ハスケル，ジリ
(72)【発明者】
【氏名】メルハヴィ－ショハム，エフラット
(72)【発明者】
【氏名】マーケル，ガル
【テーマコード（参考）】
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085DD62
4C085EE01
4C085GG01
4H045AA11
4H045AA20
4H045AA30
4H045DA76
4H045DA86
4H045EA28
4H045FA74
(57)【要約】
ＨＶＥＭを結合し、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ相互作用を阻害し、かつＬＩＧＨＴへの結合を可能にする、抗体又はその抗原結合断片が提供される。これらの抗体又はその抗原結合断片、これらの抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子及びこれらの抗体又はその抗原結合断片を含むキットを用いて疾患を治療する方法もまた提供される。
【選択図】図７Ｂ
【選択図】図７Ｂ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）及び３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む、抗体又はその抗原結合断片であって、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号４９に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ１８Ｘ７Ｘ１９ＹＹＡＤＳＶＸ２０Ｇ）を含みその配列中Ｘ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ１８が、Ｃ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ１９が、Ｓ又はＣ以外の任意のアミノ酸であり、かつＸ２０が、任意のアミノ酸であり、かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列(ＡＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＹＸ１５ＤＹ)を含みその配列中Ｘ９が、Ｐ又はＳであり、Ｘ１０が、Ｇ又はＹであり、Ｘ１１が、Ｄ又はＲであり、Ｘ１２が、Ｙ、Ｎ、Ｐ又はＳであり、Ｘ１３が、Ｔ又はＹであり、Ｘ１４が、Ａ又はＮであり、Ｘ１５が、Ｆ、Ｇ又はＹであり、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１９に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＸ１６ＰＰＸ１７Ｔ）を含みその配列中Ｘ１６が、Ｓ又はＹでありかつＸ１７が、Ｙ又はＬであり；ならびに配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列(ＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹ)を含むＣＤＲ－Ｈ３及び配列番号６に記載のアミノ酸配列(ＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴ)を含むＣＤＲ－Ｌ３の全てを含まない、抗体又はその抗原結合断片。
【請求項2】
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号１７に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ２１ＹＹＡＤＳＶＸ８Ｇ）を含みその配列中Ｘ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ６が、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｑ又はＮであり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ２１が、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｇ又はＮでありかつＸ８が、Ｅ又はＫである、請求項１に記載の抗体又は抗原結合断片。
【請求項3】
Ｘ２０が、Ｃ又はＳ以外の任意のアミノ酸である、請求項１に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項4】
Ｘ２０が、任意の正に荷電していないアミノ酸である、請求項１又は３に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項5】
Ｘ２０が、Ｋ又はＥである、請求項１、３及び４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項6】
ＣＤＲ－Ｈ２が、ＮＩＹＳＮＰＮＲＸ２３ＹＹＡＤＳＶＥＧ（配列番号１０７）を含みその配列中Ｘ２３が、Ｓ、Ｔ及びＣ以外の任意のアミノ酸である、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項7】
ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２、配列番号２０（ＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号２１（ＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号２２（ＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号２３（ＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号４７（ＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号４８（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５７（ＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５８（ＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５９（ＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６０（ＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６１（ＮＩＹＳＮＰＳＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６２（ＮＩＹＳＮＰＮＲＡＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６３（ＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６４（ＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧ）及び配列番号６５（ＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧ）から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項8】
ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３、配列番号２４（ＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹ）、配列番号２５（ＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹ）及び配列番号２６（ＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹ）から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項9】
ＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６及び配列番号２７（ＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴ）から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項10】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項11】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項12】
ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項13】
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５１）、
ＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６７）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６８）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６９）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＳＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＡＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）、
ＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）、及び
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）
から選択される配列を含む重鎖を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項14】
ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）及びＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３５）
から選択される配列を含む軽鎖を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項15】
配列番号８５～１０３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項16】
配列番号１０４及び配列番号１０５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項17】
配列番号９７を含む重鎖及び配列番号１０４を含む軽鎖を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片。
【請求項18】
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片及び医薬として許容される担体、賦形剤又はアジュバントを含む医薬組成物。
【請求項19】
それを必要とする対象においてＨＶＥＭ陽性細胞により特徴づけられる疾患又は状態を治療する方法であって、請求項１８に記載の医薬組成物又は請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片を対象に投与することを含み、それにより前記疾患又は状態を治療する、方法。
【請求項20】
非ＨＶＥＭ免疫チェックポイントタンパク質の阻害又は阻止をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を施すことを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項22】
養子細胞療法を施すことをさらに含む、請求項１９～２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
前記養子細胞療法が、養子ＴＩＬ療法を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記養子細胞療法が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞を投与することを含み、前記ＣＡＲが、前記ＨＶＥＭを発現する細胞の表面上の非ＨＶＥＭタンパク質を標的とする、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項25】
前記疾患又は状態が、ＨＶＥＭ陽性の癌又は前癌病変である、請求項１９～２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
前記疾患又は状態が、感染性疾患でありかつ前記感染細胞が、ＨＶＥＭ発現を含む、請求項１９～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
請求項１９～２６のいずれか一項に記載の方法により治療される対象の適合性を決定する方法であって、前記対象から疾患試料を取得することおよび前記試料中のＨＶＥＭレベルを決定することを含み、ＨＶＥＭの陽性発現が、前記対象が請求項１９～２６のいずれか一項に記載の治療方法に適していることを示す、方法。
【請求項28】
ＨＶＥＭの陽性発現が、健常試料又は所定の閾値と比較して上昇されたＨＶＥＭレベルを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項29】
試料中のＨＶＥＭを検出する方法であって、前記試料を請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片と接触させることを含み、それによりＨＶＥＭを検出する、方法。
【請求項30】
請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子。
【請求項31】
請求項１８に記載の医薬組成物並びにａ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法；
ｂ．本発明の医薬組成物が抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法との使用のためであることを示すラベル;及び
ｃ．請求項１～１７のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片を検出するための二次検出分子
の少なくとも１つを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願への相互参照
本出願は、２０２１年４月１日に出願された米国仮特許出願第６３／１６９，３３５号の優先権の恩恵を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年４月１日に出願された米国仮特許出願第６３／１６９，３３５号の優先権の恩恵を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0002】
発明の分野
本発明は免疫療法の分野にある。
本発明は免疫療法の分野にある。
【背景技術】
【0003】
発明の背景
免疫応答を増強するように設計された免疫療法は、活性化免疫療法と見なされ、癌治療の最前線にある。現在、免疫チェックポイント遮断療法は、進行性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移性黒色腫、進行性腎細胞癌（ＲＣＣ）、転移性尿路上皮癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、ＭＳＩ高腫瘍、メルケル細胞癌及び多くの他のものの治療にうまく使用されている。異なる企業によって開発及び製造されたいくつかのそのような薬物は、免疫チェックポイントプログラム細胞死タンパク質１受容体（ＰＤ１）、プログラム細胞死タンパク質１リガンド（ＰＤＬ１）及び細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）に対する抗体を含み、異なる癌種で大きな期待が寄せられており、ＦＤＡに承認されている。患者の奏効率は、しかし、治療を受けた患者の１０％～４０％のみが通常恩恵を受け、かつ同時に患者は免疫療法後の治療の副作用に苦しむ可能性があるので、まだ最適ではない。加えて、これらの抗体又はその抗原結合断片による治療は、さらなる免疫チェックポイントのアップレギュレーションを介して耐性を誘導し得る。黒色腫患者における抗ＰＤ１と抗ＣＴＬＡ－４の併用療法は、単一の抗体又はその抗原結合断片と比較して高い奏効率（６０％）を実証したが、この併用療法は重篤な治療関連副作用も伴う。そのため、新たな抗腫瘍免疫活性化抗体又はその抗原結合断片に対する明確な必要性がある。
免疫応答を増強するように設計された免疫療法は、活性化免疫療法と見なされ、癌治療の最前線にある。現在、免疫チェックポイント遮断療法は、進行性非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、転移性黒色腫、進行性腎細胞癌（ＲＣＣ）、転移性尿路上皮癌、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、ＭＳＩ高腫瘍、メルケル細胞癌及び多くの他のものの治療にうまく使用されている。異なる企業によって開発及び製造されたいくつかのそのような薬物は、免疫チェックポイントプログラム細胞死タンパク質１受容体（ＰＤ１）、プログラム細胞死タンパク質１リガンド（ＰＤＬ１）及び細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ－４）に対する抗体を含み、異なる癌種で大きな期待が寄せられており、ＦＤＡに承認されている。患者の奏効率は、しかし、治療を受けた患者の１０％～４０％のみが通常恩恵を受け、かつ同時に患者は免疫療法後の治療の副作用に苦しむ可能性があるので、まだ最適ではない。加えて、これらの抗体又はその抗原結合断片による治療は、さらなる免疫チェックポイントのアップレギュレーションを介して耐性を誘導し得る。黒色腫患者における抗ＰＤ１と抗ＣＴＬＡ－４の併用療法は、単一の抗体又はその抗原結合断片と比較して高い奏効率（６０％）を実証したが、この併用療法は重篤な治療関連副作用も伴う。そのため、新たな抗腫瘍免疫活性化抗体又はその抗原結合断片に対する明確な必要性がある。
【発明の概要】
【0004】
ヘルペスウイルス侵入メディエーター（ＨＶＥＭ）は、造血細胞及び非造血細胞を含む様々な細胞型の表面に見出されるタンパク質である。ＨＶＥＭは、ＬＩＧＨＴ及びＬＴαなどの標準的なＴＮＦ関連リガンドの受容体として作用し、そのためシグナル伝達受容体として機能する。しかし、それは、阻害性受容体ＢＴＬＡ及びＣＤ１６０などの免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリー分子のリガンドとしても機能する。したがって、双方向シグナル伝達が、ＨＶＥＭ媒介シグナル伝達ネットワークで可能であり、それは、異なる状況下で正又は負の免疫応答に関与できる。このネットワークの調節不全は、自己免疫疾患、炎症性疾患及び癌の病因に関与し、ＨＶＥＭを免疫療法の標的にする。シグナル伝達の活性化を維持しながら、特にＢＴＬＡ相互作用を介してＨＶＥＭ阻害性シグナル伝達を阻止できる抗体又はその抗原結合断片が、大いに必要とされている。
【0005】
本発明は、ＨＶＥＭを結合し、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ相互作用を阻害し、下流のＢＴＬＡシグナル伝達を阻害する、抗体又はその抗原結合断片を提供する。これらの抗体又はその抗原結合断片、これらの抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子及びこれらの抗体又はその抗原結合断片を含むキットを用いて疾患を治療する方法もまた、提供される。
【0006】
第１の態様によれば、抗体又はその抗原結合断片であって、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）及び３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号４９に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ１８Ｘ７Ｘ１９ＹＹＡＤＳＶＸ２０Ｇ）を含み、その中でＸ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ１８が、Ｃ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ１９が、Ｓ又はＣ以外の任意のアミノ酸であり、かつＸ２０が、任意のアミノ酸であり、かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列(ＡＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＹＸ１５ＤＹ)を含み、その中でＸ９が、Ｐ又はＳであり、Ｘ１０が、Ｇ又はＹであり、Ｘ１１が、Ｄ又はＲであり、Ｘ１２が、Ｙ、Ｎ、Ｐ又はＳであり、Ｘ１３が、Ｔ又はＹであり、Ｘ１４が、Ａ又はＮであり、Ｘ１５が、Ｆ、Ｇ又はＹであり、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１９に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＸ１６ＰＰＸ１７Ｔ）を含み、その中でＸ１６が、Ｓ又はＹであり、Ｘ１７が、Ｙ又はＬであり；配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列(ＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹ)を含むＣＤＲ－Ｈ３及び配列番号６に記載のアミノ酸配列(ＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴ)を含むＣＤＲ－Ｌ３の全てを含まない、抗体又はその抗原結合断片が提供される。
【0007】
別の態様によれば、本発明の抗体又は抗原結合断片及び医薬として許容される担体、賦形剤又はアジュバントを含む医薬組成物が、提供される。
【0008】
別の態様によれば、それを必要とする対象においてＨＶＥＭ陽性細胞を特徴とする疾患又は状態を治療する方法が提供され、方法は、本発明の医薬組成物又は本発明の抗体もしくは抗原結合断片を対象に投与すること、それにより疾患又は状態を治療することを含む。
【0009】
別の態様によれば、対象から疾患試料を取得することおよび試料中のＨＶＥＭレベルを決定することを含む、本発明の方法により治療される対象の適合性を決定する方法が提供され、ＨＶＥＭの陽性発現は、対象が本発明の治療方法に適していることを示す。
【0010】
別の態様によれば、試料中のＨＶＥＭを検出する方法が提供され、方法は、試料を本発明の抗体又は抗原結合断片と接触させること、それによりＨＶＥＭを検出することを含む。
【0011】
別の態様によれば、本発明の抗体又は抗原結合断片をコードする核酸分子が、提供される。
【0012】
別の態様によれば、本発明の医薬組成物並びに
ａ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法；
ｂ．本発明の医薬組成物が抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法との使用のためであることを示すラベル;及び
ｃ．本発明の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片を検出するための二次検出分子
の少なくとも１つを含むキットが、提供される。
ａ．抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法；
ｂ．本発明の医薬組成物が抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法との使用のためであることを示すラベル;及び
ｃ．本発明の少なくとも１つの抗体又はその抗原結合断片を検出するための二次検出分子
の少なくとも１つを含むキットが、提供される。
【0013】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ２１ＹＹＡＤＳＶＸ８Ｇ）を含み、その中でＸ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ６が、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｑ又はＮであり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ２１が、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｇ又はＮであり、かつＸ８が、Ｅ又はＫである。
【0014】
いくつかの実施形態によれば、Ｘ２０は、Ｃ又はＳ以外の任意のアミノ酸である。
【0015】
いくつかの実施形態によれば、Ｘ２０は、任意の正に荷電していないアミノ酸である。
【0016】
いくつかの実施形態によれば、Ｘ２０は、Ｋ又はＥである。
【0017】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２、配列番号２０（ＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号２１（ＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号２２（ＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号２３（ＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号４７（ＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号４８（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５７（ＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５８（ＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５９（ＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６０（ＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６１（ＮＩＹＳＮＰＳＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６２（ＮＩＹＳＮＰＮＲＡＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６３（ＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６４（ＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧ）及び配列番号６５（ＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧ）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0018】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３、配列番号２４（ＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹ）、配列番号２５（ＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹ）及び配列番号２６（ＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹ）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0019】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６及び配列番号２７（ＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴ）から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0020】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。
【0021】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。
【0022】
いくつかの実施形態によれば、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。
【0023】
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体又は抗原結合断片は、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５１）、
ＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６７）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６８）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６９）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＳＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＡＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）、
ＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）、
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ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）、及び
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）
から選択される配列を含む重鎖を含む。
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５１）、
ＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６７）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６８）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６９）、
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ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）、
ＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）、
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）、及び
ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）
から選択される配列を含む重鎖を含む。
【0024】
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体又は抗原結合断片は、
ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）及び
ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３５）
から選択される配列を含む軽鎖を含む。
ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８）及び
ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３５）
から選択される配列を含む軽鎖を含む。
【0025】
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体又は抗原結合断片は、配列番号８５～１０３から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖を含む。
【0026】
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体又は抗原結合断片は、配列番号１０４及び配列番号１０５から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
【0027】
いくつかの実施形態によれば、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９７を含む重鎖及び配列番号１０４を含む軽鎖を含む。
【0028】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、非ＨＶＥＭ免疫チェックポイントタンパク質の阻害又は阻止をさらに含む。
【0029】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ベースの免疫療法を施すことをさらに含む。
【0030】
いくつかの実施形態によれば、本発明の方法は、養子細胞療法を施すことをさらに含む。
【0031】
いくつかの実施形態によれば、養子細胞療法は、養子ＴＩＬ療法を含む。
【0032】
いくつかの実施形態によれば、養子細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞を投与することを含み、ＣＡＲは、ＨＶＥＭ発現細胞の表面上の非ＨＶＥＭタンパク質を標的とする。
【0033】
いくつかの実施形態によれば、疾患又は状態は、ＨＶＥＭ陽性の癌又は前癌病変である。
【0034】
いくつかの実施形態によれば、疾患又は状態は、感染性疾患であり、感染した細胞は、ＨＶＥＭ発現を含む。
【0035】
いくつかの実施形態によれば、ＨＶＥＭの陽性発現は、健常試料又は所定の閾値と比較して上昇されたＨＶＥＭレベルを含む。
【0036】
本発明のさらなる実施形態及び適用可能性の全範囲は、以下に与えられる詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、本発明の趣旨及び範囲内の様々な変更及び修正がこの詳細な説明から当業者に明らかになるので、詳細な説明及び具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示す一方で、例示としてのみ与えられることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【0037】
【図1】図１：非還元条件下及び還元条件下における様々な精製抗体のＳＤＳ－ＰＡＧＥの写真。Ｈ４抗体の重鎖バンドは、グリコシル化により高い位置に移動し、グリコシル化は、ＮＸＳ／Ｔグリコシル化部位が除去された３つの変異体抗体では失われる。
【図3】図３Ａ～３Ｄ：（３Ａ～３Ｂ）Ｂｉａｃｏｒｅ（３Ａ）マルチサイクルカイネティクス及び（３Ｂ）シングルサイクルカイネティクスの生のセンサーグラムおよび（３Ａ）ＳＥＣ精製抗体Ｈ４、Ｈ４ Ｔ５７Ａ、Ｈ４ Ｔ５７Ｇ、Ｈ４ Ｔ５７Ｎと親抗体、及び（３Ｂ）Ｈ４ Ｎ５５Ｇ、Ｈ４ Ｎ５５Ｓ、Ｈ４ Ｎ５５Ｄ、Ｈ４ Ｎ５５Ｑ、Ｈ４Ｎ５５Ｅ、Ｈ４Ｔ５７Ｅの上清と親抗体のｈＨＶＥＭへの結合について１：１モデルで適合させた曲線。（３Ｃ）ＣＨＯ細胞表面のｈＨＶＥＭへの４つの抗体の結合のヒストグラムのオーバーレイ。（３Ｄ）様々な濃度で親抗体又はＨ４ Ｔ５７Ａ抗体を使用するフローサイトメトリーにより検出されたＣＨＯ細胞上のｈＨＶＥＭ発現の棒グラフ。
【図4】図４Ａ～４Ｈ：（４Ａ～４Ｅ）（４Ａ）親、Ｈ４ Ｔ５７Ａ、Ｈ４ Ｔ５７Ｇ及びＨ４ Ｔ５７Ｎの抗－ＨＶＥＭ抗体、（４Ｂ）親、Ｈ４ Ｔ５７Ａ、Ｈ４ Ｔ５７Ｇ及びＨ４ Ｔ５７Ｎの抗－ＨＶＥＭ抗体と組換えｈＢＴＬＡ、（４Ｃ）親、Ｈ４ Ｔ５７Ａ、Ｈ４ Ｔ５７Ｇ及びＨ４ Ｔ５７Ｎの抗－ＨＶＥＭ抗体と組換えｈＬＩＧＨＴ、（４Ｄ）親、Ｈ４及びＰａｒ－Ｋ６４Ｅの抗－ＨＶＥＭ抗体と組換えｈＢＴＬＡ、（４Ｅ）親、Ｈ４及びＰａｒ－Ｋ６４Ｅの抗－ＨＶＥＭ抗体と組換えｈＬＩＧＨＴの存在下での組換えｈＨＶＥＭでコートされたプレート、又は（４Ｆ～４Ｇ）（４Ｆ）親、Ｈ４ Ｔ５７Ａ、Ｈ４ Ｔ５７Ｇ及びＨ４ Ｔ５７Ｎの抗－ＨＶＥＭ抗体並びに（４Ｇ）親、Ｈ４ Ｔ５７Ａ、Ｈ４ Ｔ５７Ｇ及びＨ４ Ｔ５７Ｎの抗－ＨＶＥＭ抗体と組換えｃＢＴＬＡの存在下での組換えｃＨＶＥＭでコートされたプレート上でのＥＬＩＳＡの４５０ｎｍ及び５７０ｎｍにおける吸光度の読み取りの棒グラフ。４Ａ及び４Ｆでは抗体の検出。４Ｂ、４Ｄ及び４ＧではＢＴＬＡの検出。４Ｃ及び４ＥではＬＩＧＨＴの検出。（４Ｈ）組換えｈＢＴＬＡの存在下での抗体の漸増濃度での吸光度の折れ線グラフ。
【図5】図５Ａ～５Ｂ：（５Ａ）抗ＨＶＥＭ抗体又は（５Ｂ）抗ＰＤ－１抗体と組み合わせた抗ＨＶＥＭ抗体とのプレインキュベーション後に、ＴＩＬと共培養した黒色腫細胞の特異的細胞死の折れ線グラフ。＊＊＝ｐ＜０.０１、＊＊＊＝ｐ＜０.００１。
【発明を実施するための形態】
【0038】
発明の詳細な説明
本発明は、いくつかの実施形態において、ＨＶＥＭを結合し、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ相互作用を阻害し、かつＨＶＥＭ－ＬＩＧＨＴ相互作用を顕著に阻害しない、抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明はさらに、これらの抗体又はその抗原結合断片、これらの抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子、並びにこれらの抗体又はその抗原結合断片を含むキットを投与することにより、それを必要とする対象におけるＨＶＥＭ陽性疾患を治療する方法に関する。
本発明は、いくつかの実施形態において、ＨＶＥＭを結合し、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ相互作用を阻害し、かつＨＶＥＭ－ＬＩＧＨＴ相互作用を顕著に阻害しない、抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明はさらに、これらの抗体又はその抗原結合断片、これらの抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸分子、並びにこれらの抗体又はその抗原結合断片を含むキットを投与することにより、それを必要とする対象におけるＨＶＥＭ陽性疾患を治療する方法に関する。
【0039】
ＨＶＥＭ陽性癌が免疫細胞の表面上のＢＴＬＡを結合することにより免疫監視を回避できることは、よく知られている。ＢＴＬＡの結合は、免疫細胞内で阻害シグナルを生成し、それは、Ｔ細胞の活性化を低下させ、癌の生存率を高める。ＨＶＥＭを結合する抗体又はＢＴＬＡを結合する抗体によりこのシグナル伝達を阻害することが、知られている。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許公開ＷＯ２０２０２２２２３５は、ＨＶＥＭを特異的に結合し、かつＬＩＧＨＴなどの他のＨＶＥＭリガンドの結合を阻害しない抗体を提供する。ＨＶＥＭは、免疫細胞の表面でも発現し、それは、状況に応じて阻害と活性化の両方の役割を担う。それらの抗体は、病原性細胞上でＨＶＥＭ上に結合することによりＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ相互作用を阻止し従って免疫細胞を阻害から解放するだけでなく、ＨＶＥＭが活性化リガンド（例えば、ＬＩＧＨＴ）を結合することを可能にする。本発明は、ＷＯ２０２０２２２２３５で提示されたものよりも優れた抗体の発見に基づく。本発明の抗体は、既に知られている抗ＨＶＥＭ抗体よりも高い強度（より低いＫＤ）でＨＶＥＭに結合する。
【0040】
第１の態様により、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）及び３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供され、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号１７に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ２１ＹＹＡＤＳＶＸ８Ｇ）を含み、その中でＸ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ６が、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｑ又はＮであり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ２１が、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｇ又はＮであり、かつＸ８が、Ｅ又はＫであり、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列(ＡＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＹＸ１５ＤＹ)を含み、その中でＸ９が、Ｐ又はＳであり、Ｘ１０が、Ｇ又はＹであり、Ｘ１１が、Ｄ又はＲであり、Ｘ１２が、Ｙ、Ｎ、Ｐ又はＳであり、Ｘ１３が、Ｔ又はＹであり、Ｘ１４が、Ａ又はＮであり、Ｘ１５が、Ｆ、Ｇ又はＹであり、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１９に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＸ１６ＰＰＸ１７Ｔ）を含み、その中でＸ１６が、Ｓ又はＹであり、Ｘ１７が、Ｙ又はＬである。
【0041】
別の態様により、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）及び３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む、抗体又はその抗原結合断片が提供され、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号４９に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ１８Ｘ７Ｘ１９ＹＹＡＤＳＶＸ２０Ｇ）を含み、その中でＸ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ１８が、Ｃ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ１９が、Ｓ又はＣ以外の任意のアミノ酸であり、かつＸ２０が、任意のアミノ酸であり、かつＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１８に記載のアミノ酸配列(ＡＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＹＸ１５ＤＹ)を含み、その中でＸ９が、Ｐ又はＳであり、Ｘ１０が、Ｇ又はＹであり、Ｘ１１が、Ｄ又はＲであり、Ｘ１２が、Ｙ、Ｎ、Ｐ又はＳであり、Ｘ１３が、Ｔ又はＹであり、Ｘ１４が、Ａ又はＮであり、Ｘ１５が、Ｆ、Ｇ又はＹであり、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１９に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＸ１６ＰＰＸ１７Ｔ）を含み、その中でＸ１６が、Ｓ又はＹであり、Ｘ１７が、Ｙ又はＬである。
【0042】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭに結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野において公知の抗体と比較して優れたＨＶＥＭ結合を有する。いくつかの実施形態では、当技術分野で公知の抗体は、親抗体である。いくつかの実施形態では、当分野で公知の抗体は、３つの重鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ）及び３つの軽鎖ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ）を含む抗体であり、ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴ）を含む。当業者なら、ＣＤＲを計算する方法が複数あることは理解するであろう。配列番号１～３の重鎖ＣＤＲ及び配列番号４～６の軽鎖ＣＤＲは、ＫＡＢＡＴナンバリングシステムによる。いくつかの実施形態では、当技術分野で公知の抗体は、以下のＣＤＲを含む：ＣＤＲ－Ｈ１が、配列番号１１に記載のアミノ酸配列（ＧＦＴＦＳＳＹＡ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ２が、配列番号１２に記載のアミノ酸配列（ＩＳＧＳＧＧＳＴ）を含み、ＣＤＲ－Ｈ３が、配列番号１３に記載のアミノ酸配列（ＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ１が、配列番号１４に記載のアミノ酸配列（ＱＳＶＳＳＹ）を含み、ＣＤＲ－Ｌ２が、配列番号１５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳ）を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３が、配列番号１６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴ）を含む。配列番号１１～１３の重鎖ＣＤＲ及び配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリングシステムによる。いくつかの実施形態では、当技術分野で公知の抗体は、配列番号７を含むか又はそれからなる重鎖可変領域及び配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む抗体である。いくつかの実施形態では、当技術分野で公知の抗体は、配列番号９の重鎖と配列番号１０の軽鎖を有する抗体である。
【0043】
いくつかの実施形態では、優れた結合は、より強い結合である。いくつかの実施形態では、優れた結合は、より高い親和性を有する結合である。いくつかの実施形態では、優れた結合は、より低いＫＤを有する結合である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗ＨＶＥＭ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭをブロックする抗体である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＢＴＬＡの間の相互作用を阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野で公知の抗体と比較して優れた阻止能を有する。いくつかの実施形態では、優れているとは、より強いことである。いくつかの実施形態では、優れているとは、より長く持続することである。いくつかの実施形態では、優れているとは、より特異的であることである。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭを介して下流のシグナル伝達を活性化する。いくつかの実施形態は、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野で公知の抗体と比較して優れた活性化を有する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＢＴＬＡを介して下流のシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野で公知の抗体と比較して優れた阻害作用を有する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭを介して下流のシグナル伝達を活性化し、かつＢＴＬＡを介して下流のシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭとＢＴＬＡの間の相互作用の阻害は、ＢＴＬＡを介して下流のシグナル伝達を阻害する。
【0044】
いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、哺乳動物のＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、げっ歯類のＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、サルのＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ヒトのＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、マウス、サル及びヒトのＨＶＥＭのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、膜結合ＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、細胞上のＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、細胞表面上のＨＶＥＭである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、可溶性ＨＶＥＭである。
【0045】
いくつかの実施形態では、細胞は、病原性細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、癌性細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、病原体の細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、細菌細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、真菌細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、病原体が感染した真核細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、細菌が感染した細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ウイルスが感染した細胞である。いくつかの実施形態では、病原体は、細菌、ウイルス及び真菌から選択される。
【0046】
いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、造血細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性ＣＤ８陽性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４陽性Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４陽性ヘルパーＴ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞及びＣＤ４陽性Ｔ細胞から選択される。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞又はその両方である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ガンマ／デルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、末梢血免疫細胞ではない。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、好中球である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、樹状細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、マクロファージである。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）である。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、樹状細胞、ＭＤＳＣ及びマクロファージから選択される。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、好中球、樹状細胞、及びマクロファージから選択される。
【0047】
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ－Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ－ＮＫ細胞である。本明細書で使用する場合、用語「ＣＡＲ」は、目的の少なくとも１つのタンパク質（例えば、ＨＶＥＭ発現細胞により発現されるタンパク質）に対する特異性を有しかつ免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞又はＮＫ細胞など）に移植される、操作された受容体を指す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｔ細胞に移植されたモノクローナル抗体の特異性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－ＮＫ細胞は、ＮＫ細胞に移植されたモノクローナル抗体の特異性を有する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球及び制御性Ｔ細胞から選択される。ＭＡＲＴ１は、標的細胞上でＨＶＥＭと共発現される標的タンパク質の一例である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＨＶＥＭ発現細胞により発現されるタンパク質を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質は、ＨＶＥＭではない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＨＶＥＭを発現する細胞の表面上のタンパク質を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体を標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、本発明の抗体を標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、細胞傷害性抗体を標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗体定常ドメインを標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、Ｆｃドメインを標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ療法は、ＨＶＥＭを発現する細胞を標的とする抗体を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲにより標的とされる抗体は、本発明の抗体ではない。
【0048】
ＣＡＲ－Ｔ及びＣＡＲ－ＮＫ細胞並びにそれらのベクターは、当技術分野において周知である。そのような細胞は、受容体が結合するタンパク質を標的とし、それに対し細胞傷害性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ又はＣＡＲ－ＮＫ細胞は、少なくとも１つの癌タンパク質を標的とする。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ又はＣＡＲ－ＮＫ細胞は、複数の癌タンパク質を標的とする。
【0049】
ＣＡＲ－Ｔ細胞の構築は、当技術分野において周知である。１つの非限定的な例では、癌タンパク質に対するモノクローナル抗体が、作製され得、次いでその抗体をコードするベクターが、構築される。そのベクターはまた、共刺激シグナル領域も含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル領域は、既知のＴ細胞又はＮＫ細胞刺激分子の細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、以下の：ＣＤ３Ｚ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ３８に特異的に結合するリガンド、の少なくとも１つから選択される。いくつかの実施形態では、ベクターはまた、ＣＤ３Ｚシグナル伝達ドメインも含む。このベクターは次いで、例えばレンチウイルス感染により、Ｔ細胞中にトランスフェクトされる。
【0050】
いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＣＤ２７０である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＢＴＬＡの受容体である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＢＴＬＡのリガンドである。いくつかの実施形態では、ＢＴＬＡは、ＣＤ２７２である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＳＦ１４）の受容体である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＴＮＦＳＦ１４のリガンドである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＳＦ１４は、ＬＩＧＨＴである。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＳＦ１４は、ＣＤ２５８である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＣＤ１６０の受容体である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＣＤ１６０のリガンドである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、リンホトキシンアルファ（ＬＴα）の受容体である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＬＴαのリガンドである。いくつかの実施形態では、ＬＴαは、ＴＮＦ－βである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＳＡＬＭ５の受容体である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭは、ＳＡＬＭ５のリガンドである。
【0051】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭ以外の他のタンパク質を結合しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭの細胞外ドメインを結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭのリガンド結合ドメインで結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭのＢＴＬＡ結合ドメインで結合する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭのＢＴＬＡ結合ドメインを閉塞する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＢＴＬＡの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＢＴＬＡの間の相互作用を阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭに媒介され、ＢＴＬＡに誘導される免疫抑制を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭを結合し、結合されたＨＶＥＭがＢＴＬＡをさらに結合することを妨げる。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＢＴＬＡを介して下流のシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＢＴＬＡを介して下流のシグナル伝達を低下させた。
【0052】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＴＮＦＳＦ１４の間の相互作用を阻害しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＴＮＦＳＦ１４の間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＳＦ１４は、膜ＴＮＦＳＦ１４（ｍＴＮＦＳ１４）である。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＳＦ１４は、可溶性ＴＮＦＳＦ１４（ｓＴＮＦＳ１４）である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ｍＴＮＦＳ１４及びｓＴＮＦＳ１４の一方とＨＶＥＭの間の相互作用を阻害しないが、他方との相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ｍＴＮＦＳ１４とｓＴＮＦＳ１４の両方とＨＶＥＭの間の相互作用を阻害しない。いくつかの実施形態では、阻害は、実質的な阻害である。いくつかの実施形態では、阻害は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９７、９９又は１００％の低下である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＴＮＦＳＦ１４の間の相互作用を阻止しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＴＮＦＳＦ１４の間の相互作用を実質的に阻止しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＴＮＦＳＦ１４媒介シグナル伝達を阻止／阻害しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＴＮＦＳＦ１４媒介性細胞生存を阻止／阻害しない。
【0053】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭを介してシグナル伝達を活性化する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野で公知の抗体と比較して優れた活性化を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭアゴニストである。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野で公知の抗体と比較して優れたアゴニストである。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭを介してシグナル伝達を誘導する。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭを介するシグナル伝達は、ＨＶＥＭ下流のシグナル伝達である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、細胞上のＨＶＥＭを結合し、細胞中のＨＶＥＭシグナル伝達を活性化／誘導する。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭシグナル伝達は、活性化Ｂ細胞の核因子κ軽鎖エンハンサー（ＮＦ－κＢ）シグナル伝達の活性化を含む。いくつかの実施形態では、ＮＦ－κＢシグナル伝達は、それらのプロモーター中にＮＦ－κＢ応答エレメントを有する遺伝子の制御を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達は、細胞の増加された細胞傷害性を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達は、抗体又はその抗原結合断片により接触されたＨＶＥＭを発現する細胞の増加された細胞傷害性を含む。いくつかの実施形態では、増加された細胞傷害性は、増加された炎症性サイトカインの分泌を含む。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮγ、ＭＣＰ１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２３及びＣＭ－ＣＳＦから選択される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＦＮγである。いくつかの実施形態では、増加は、本発明の抗体又はその抗原結合断片により接触されない細胞と比較したものである。いくつかの実施形態では、増加は、少なくとも１０、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００％の増加である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0054】
いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞であり、シグナル伝達は、免疫活性化を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、リンパ球である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ガンマ／デルタＴ細胞ではない。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ガンマ／デルタＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭシグナル伝達の活性化は、免疫細胞の活性化を含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、増殖の増加を含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、増加された細胞傷害性を含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、増加された遊走を含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、増加されたホーミングを含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、増加された細胞クラスタリングを含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、Ｔ細胞活性化である。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、Ｔｈ１ Ｔ細胞の数の増加を含む。いくつかの実施形態では、増加は、Ｔｈ２ Ｔ細胞と比較した相対的増加である。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の増加を含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、制御性Ｔ細胞の減少を含む。いくつかの実施形態では、免疫活性化は、４１ＢＢ、ＣＤ６９、ＣＤ２５、ＣＤ１０７ａ、ＨＬＡ－ＤＲから選択されるマーカーの発現及びサイトカインの分泌の増加を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、炎症性サイトカインである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞活性化は、増加されたＴ細胞クラスタリングを含む。
【0055】
いくつかの実施形態では、細胞は、癌性細胞であり、シグナル伝達は、抗腫瘍効果を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、増加されたアポトーシスを含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、減少された増殖を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、増加された化学療法感受性を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、減少された運動性を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、減少された浸潤を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、減少された転移を含む。いくつかの実施形態では、抗腫瘍効果は、減少された自己複製を含む。いくつかの実施形態では、効果は、本発明の抗体又はその抗原結合断片により接触されなかった癌細胞と比較したものである。いくつかの実施形態では、減少は、少なくとも１０、２０、２５、３０、４０、５０、６０、７０、７５、８０、９０、９５、９７、９９又は１００％の減少である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0056】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アポトーシスを誘導しない。いくつかの実施形態では、アポトーシスの誘導は、直接的なアポトーシス誘導である。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、アポトーシスを直接誘導しない。本明細書で使用する場合、「直接誘導」は、抗体又はその抗原結合断片の結合の即時の結果として生じる結果を指し、結合された細胞内の下流シグナル伝達を特徴としない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、細胞傷害性ではない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、それ自体細胞傷害性ではない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、抗体指向性細胞傷害（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）を誘導しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、細胞傷害性部分を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、細胞により発現されるＨＶＥＭの結合時に、ＨＶＥＭを発現する細胞のアポトーシスを誘導しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、別の細胞との相互作用を介するアポトーシスを誘導しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭを発現する細胞の死を直接誘導しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、殺傷のために細胞を標的としない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、間接的にアポトーシスを誘導する。いくつかの実施形態では、間接的アポトーシスは、アポトーシスをもたらすＨＶＥＭ受容体を介する下流シグナル伝達により誘導されるアポトーシスである。いくつかの実施形態では、間接的アポトーシスは、シグナル伝達を必要とするアポトーシスである。いくつかの実施形態では、間接的アポトーシスは、第２の細胞の関与を必要としないアポトーシスである。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、免疫細胞中でアポトーシスを誘導しない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、癌細胞中でアポトーシスを誘導する。
【0057】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＣＤ１６０の間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、当技術分野で公知の抗体と比較して優れた阻害を誘導する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＬＴαの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭと単純ヘルペスウイルス１型糖タンパク質Ｄ（ＨＳＶ１－ｇＤ）の間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１６０、ＨＳＶ１－ｇＤ及びＬＴαの少なくとも２つとＨＶＥＭの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＣＤ１６０の間の相互作用を阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＬＴαの間の相互作用を阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＨＶＥＭとＨＳＶ１－ｇＤの間の相互作用を阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１６０、ＨＳＶ１－ｇＤ及びＬＴαの少なくとも２つとＨＶＥＭの間の相互作用を阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１６０、ＨＳＶ１－ｇＤ及びＬＴαの全てとＨＶＥＭの間の相互作用を阻害／阻止する。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ１６０、ＨＳＶ１－ｇＤ及びＬＴαの少なくとも１つとＨＶＥＭの間の相互作用を阻害又は阻止しない。
【0058】
いくつかの実施形態では、抗体又はその断片は、ｆａｂ断片である。いくつかの実施形態では、抗体又はその断片は、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、抗体又はその断片は、単一ドメイン抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ブロッキング抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、親和性成熟抗体である。
【0059】
本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、抗原の抗原決定基の特徴に相補的な内部表面形状及び電荷分布を有する三次元の結合空間を有するポリペプチド鎖の折り畳みから形成される少なくとも１つの結合ドメインを含む、ポリペプチド又はポリペプチドのグループを指す。抗体は典型的には、ポリペプチド鎖の２つの同一のペアを含む四量体形態を有し、各ペアは１つの「軽」鎖と１つの「重」鎖を有する。各軽鎖／重鎖ペアの可変領域は、抗体結合部位を形成する。抗体は、オリゴクローナル抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ラクダ抗体、ＣＤＲ移植抗体、多重特異性抗体、二重特異性抗体、触媒抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、抗イディオタイプ抗体及び可溶性形態又は結合された形態で標識され得る抗体並びに断片であってよく、単独で又は他のアミノ酸配列と組み合わせて、エピトープ結合断片、その変異体もしくは誘導体を含む。抗体は、任意の種由来であり得る。抗体という用語は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（ｓｖＦＣ）、二量体可変領域（ダイアボディy）及びジスルフィド結合可変領域（ｄｓＦｖ）を含むが、これらに限定されない、結合断片も含む。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫学的に活性な免疫グロブリン分子の断片、すなわち、抗原結合部位を含有する分子、を含む。抗体断片は、Ｆｃ領域又はその断片を含むがこれらに限定されない別の免疫グロブリンドメインに融合されてよく、又はされなくてもよい。当業者であれば、ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合物、可変領域（例えば、ＶＬ及びＶＨ）～Ｆｃ融合物並びにｓｃＦｖ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合物を含むが、これらに限定されない他の融合生成物が生成され得ることを、さらに認識するであろう。
【0060】
免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡｌ及びＩｇＡ２）又はサブクラスのものであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、低減された毒性を有する改変されたＩｇＧ１又はＩｇＧ３を含む。
【0061】
天然に存在する抗体構造の基本単位は、非共有結合及びジスルフィド結合の両方によって互いに連結された、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質複合体である。各重鎖及び軽鎖はまた、規則的間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。５つのヒト抗体クラス（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ及びＩｇＥ）が存在し、これらのクラス内では、様々なサブクラスが、単一抗体分子中の免疫グロブリン単位の数、個々の単位のジスルフィド架橋構造、並びに鎖の長さ及び配列の違いなどの構造の違いに基づき認識される。抗体のクラスとサブクラスは、そのアイソタイプである。
【0062】
重鎖及び軽鎖のアミノ末端領域は、カルボキシ末端領域よりも配列が多様であり、したがって可変ドメインと呼ばれる。抗体構造のこの部分は、抗体の抗原結合特異性を付与する。重可変（ＶＨ）ドメインと軽可変（ＶＬ）ドメインは、一緒になって単一抗原結合部位を形成し、そのため、基本の免疫グロブリン単位は、２つの抗原結合部位を有する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の界面を形成すると考えられている（Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６，６５１－６３（１９８５）；Ｎｏｖｏｔｎｙ及びＨａｂｅｒ，（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２ ４５９２－４５９６）。
【0063】
重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端部分は、定常ドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＬを形成する。これらのドメインでは多様性はずっと低いが、動物種ごとに差があり、さらに、同じ個体内にいくつかの異なる抗体のアイソタイプがあり、各々が異なる機能を有する。
【0064】
用語「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」は、抗体の可変ドメイン中のアミノ酸残基を指し、それらは、本明細書で定義される超可変領域のアミノ酸残基以外である。本明細書で使用される用語「超可変領域」は、抗原結合を担う、抗体の可変ドメイン中のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは主に、抗原のエピトープへの結合に関与する。ＦＲとＣＤＲの範囲は、正確に定義されている（Ｋａｂａｔらを参照されたい）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲの位置は、ナンバリングシステムによって決定される。いくつかの実施形態では、ＣＤＲの位置は、ＥＵナンバリングシステムによって決定される。
【0065】
免疫グロブリン可変ドメインは、ＣＤＲを含む可変領域セグメントを同定するために、ＩＭＧＴ情報システム（ｗｗｗ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／）（ＩＭＧＴ（登録商標）／Ｖ－Ｑｕｅｓｔ）を使用して分析することもできる。例えば、Ｂｒｏｃｈｅｔ，Ｘ．ら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｊ６：Ｗ５０３－５０８（２００８）を参照されたい。
【0066】
本明細書で使用する場合、用語「ヒト化抗体」は、ヒト抗体との類似性を高めるためにそのタンパク質配列が改変された、非ヒト種由来の抗体を指す。ヒト化抗体は、ヒト抗体に類似した配列で囲まれた非ヒト抗体のＣＤＲをコードする組換えＤＮＡの生成により生成され得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、ヒト化は、ヒト抗体の足場又は骨格中への本発明のＣＤＲの挿入を含む。ヒト化抗体は、当技術分野で周知であり、本発明のＣＤＲを保持する抗体を生成する任意の方法が採用されてよい。
【0067】
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」又は「ｍＡｂ」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を含む個々の抗体は、モノクローナル抗体の生成中に生じ得る可能性のある変異体を除き、同一であり、かつ／又は同じエピトープを結合し、そのような変異体は一般に、少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、それらに他の免疫グロブリンが夾雑していないという点で有利である。修飾語「モノクローナル」は、実質的に均質な抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の調製方法により生成されると解釈されるべきではない。本明細書に提供される方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は組換えＤＮＡ法により作製され得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９１）に記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離され得る。
【0068】
本発明のｍＡｂは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＡを含む任意の免疫グロブリンクラスのものであり得る。ｍＡｂを生成するハイブリドーマは、インビトロ又はインビボで培養され得る。高力価のｍＡｂは、個々のハイブリドーマ由来の細胞を、プリスティン刺激したＢａｌｂ／ｃマウスに腹腔内注射して、高濃度の所望のｍＡｂを含有する腹水を生成する、インビボ生成で取得できる。アイソタイプＩｇＭ又はＩｇＧのｍＡｂは、そのような腹水から、又は培養上清から、当業者に周知のカラムクロマトグラフィー法を使用して精製され得る。
【0069】
「抗体断片」は、好ましくはその抗原結合領域を含む、インタクトな抗体の一部を含む。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片;ダイアボディ;タンデムダイアボディ（ｔａＤｂ）、線状抗体（例えば、米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２;Ｚａｐａｔａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２（１９９５）);片腕抗体、単一可変ドメイン抗体、ミニボディ、一本鎖抗体分子;抗体断片から形成された多重特異性抗体（例えば、Ｄｂ－Ｆｃ、ｔａＤｂ－Ｆｃ、ｔａＤｂ－ＣＨ３、（ｓｃＦｖ）４－Ｆｃ、ジ－ｓｃＦｖ、ｂｉ－ｓｃＦｖ、又はタンデム（ジ、トリ）－ｓｃＦｖを含むが、これらに限定されない）;及び二重特異的Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）を含む。
【0070】
抗体のパパイン消化は、各々が単一抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、２つの同一な抗原結合断片と、その名前が容易に結晶化するその能力を反映する、残りの「Ｆｃ」断片を生成する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、かつなお抗原を架橋できる、Ｆ（ａｂ'）２断片を生じる。
【0071】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位と抗原結合部位を含有する最小抗体断片である。この領域は、密接な非共有結合での１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。ＶＨ－ＶＬ二量体の３つの面は、この構成である。共同で、６つの超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。しかし、単一の可変ドメイン（又は抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識し結合する能力を有する。
【0072】
Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ'断片は、抗体ヒンジ領域からの１以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数残基が付加されている点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ'－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が少なくとも１つの遊離チオール基を保有するＦａｂ'の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ'断片のペアとして生成された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた、公知である。
【0073】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に異なる種類の１つに割り当てることができる。
【0074】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体は、異なるクラスに割り当てることができる。インタクトな抗体の５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれａ、デルタ、ｅ、ガンマ、及びマイクロと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は、周知である。
【0075】
「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、その中でこれらのドメインは、単一のポリペプチド鎖中に存在する。いくつかの実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓｃＦｖが抗原結合のために望まれる構造を形成することを可能にする。ｓｃＦｖの概要については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、モノクローナル抗体の薬理学（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ），１１３巻，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ（編），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい。
【0076】
用語「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、その断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）中の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインと対を形成するように強制され、２つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディ生成は、当技術分野で公知であり、Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）に記載されている。
【0077】
本発明のモノクローナル抗体は、当技術分野において周知の方法を使用して調製され得る。例は、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．及びＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２（１９８３）；Ｃｏｌｅら，モノクローナル抗体と癌治療（ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ）の中のｐｇ．７７－９６，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ.（１９８５）の技術などの、様々な技術を含む。
【0078】
抗体をインビボで作る従来の方法に加えて、抗体を、ファージディスプレイ技術を使用してインビトロで作製できる。このような組換え抗体の生成は、従来の抗体生成と比較してはるかに速く、それらを、膨大な数の抗原に対し作製できる。さらに、従来の方法を使用した場合、多くの抗原は、非免疫原性か又は非常に毒性が高いことが判明しており、そのため動物での抗体作製には使用できない。さらに、組換え抗体の親和性成熟（すなわち、親和性及び特異性の増加）は、非常に単純で、比較的速い。最後に、特定の抗原に対する多数の異なる抗体を、１つの選択手順で作製できる。組換えモノクローナル抗体を作製するために、ディスプレイライブラリに基づく様々な方法全てを使用して、異なる抗原認識部位を有する抗体の大規模なプールを作製できる。このようなライブラリーは、いくつかの方法で作成できる：重鎖生殖細胞系列遺伝子のプールに合成ＣＤＲ３領域をクローニングし、従って大きな抗体レパートリーを作製することにより、合成レパートリーを作製でき、そこから様々な特異性を有する組換え抗体断片を、選択できる。ヒトのリンパ球プールを、抗体ライブラリー構築の出発物質として使用できる。ヒトＩｇＭ抗体のナイーブレパートリーを構築し、従って多様性の高いヒトライブラリーを作成することが可能である。この方法は、異なる抗原に対する多数の抗体を選択するためにうまく広く使用されている。バクテリオファージライブラリの構築と組換え抗体の選択のためのプロトコルは、周知の参考文献である免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ），Ｃｏｌｌｉｇａｎら（編），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ社（１９９２－２０００），１７章，第１７．１節に記載されている。
【0079】
いくつかの実施形態では、抗体及びその部分は、抗体、抗体の断片、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２、単一ドメイン抗原結合組換え断片及び天然ナノボディを含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ２又はｓｃＦｖ４断片からなる群から選択される。
【0080】
いくつかの実施形態では、本発明は、本発明の抗体又は抗原結合部分をコードする核酸配列を提供する。
【0081】
例えば、ポリヌクレオチドは、軽鎖又は重鎖などの免疫グロブリン分子鎖全体をコードし得る。完全な重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）だけでなく、通常、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つの定常ドメインを含む重鎖定常領域（ＣＨ）；並びに「ヒンジ」領域も含む。場合によって、定常領域の存在が望ましい。
【0082】
ポリヌクレオチドによってコードされ得る他のポリペプチドは、単一ドメイン抗体（「ｄＡｂ」）、Ｆｖ、sｃＦｖ、Ｆａｂ'及びＣＨＩなどの抗原結合抗体断片を含み、ＣＫ又はＣＬドメインは、切除されている。ミニボディは従来の抗体よりも小さいため、それらは、臨床／診断用途でより良好な組織浸透を達成するはずであるが、二価であるため、それらはｄＡｂなどの一価抗体断片よりも高い結合親和性を保持するはずである。したがって、文脈が別段の指示をしない限り、本明細書で使用される用語「抗体」は、抗体分子全体だけでなく、上で論じた種類の抗原結合抗体断片も包含する。コードされたポリペプチド中に存在する各フレームワーク領域は、対応するヒトアクセプターフレームワークに対して少なくとも１つのアミノ酸置換を含み得る。そのため、例えば、フレームワーク領域は、アクセプターフレームワーク領域に対して、合計で３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸置換を含み得る。開示されるタンパク質生成物を含む個々のアミノ酸の特性を考慮して、いくつかの合理的な置換が当業者によって認識されるであろう。アミノ酸置換、すなわち「保存的置換」は、例えば、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性、及び／又は両親媒性の性質における類似性に基づいて行われ得る。
【0083】
適切には、本明細書に記載のポリヌクレオチドは、単離及び／又は精製され得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、単離されたポリヌクレオチドである。
【0084】
本明細書で使用する場合、用語「天然に存在しない」物質、組成物、実体、及び／又は物質、組成物、もしくは実体の任意の組み合わせ、又はそれらの文法的変形は、当業者によって「天然に存在する」と十分に理解されている物質、組成物、もしくは実体、及び／又は物質、組成物、もしくは実体の任意の組み合わせのそれらの形態を明示的に除外するが、除外するだけの条件付き用語であるか、又は裁判官もしくは行政機関もしくは司法機関によって「天然に存在する」と決定もしくは解釈される、又はいつでも決定もしくは解釈される可能性がある条件付き用語である。
【0085】
いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１を含まない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体は、変異されたＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ３を含み、変異は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ又はその両方の誘導を阻害する。いくつかの実施形態では、変異は、ＦｃＲガンマ結合モチーフにある。
【0086】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＷＯ２０２０２２２２３５に存在する抗体ではない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹ）を含むＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴ）を含むＣＤＲ－Ｌ３の全てを含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３の全てを含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２と配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３の両方を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１に記載のアミノ酸配列（ＳＹＡＭＳ）からなるＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２に記載のアミノ酸配列（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列（ＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹ）からなるＣＤＲ－Ｈ３、配列番号４に記載のアミノ酸配列（ＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡ）からなるＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５に記載のアミノ酸配列（ＧＡＳＳＲＡＴ）からなるＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列（ＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴ）からなるＣＤＲ－Ｌ３の全てを含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３、及び配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３の全てを含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２と配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３の両方を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ２を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｈ３を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号６に記載のアミノ酸配列からなるＣＤＲ－Ｌ３を含まない。
【0087】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１７に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ２１ＹＹＡＤＳＶＸ８Ｇ）を含み、その中でＸ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ６が、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｑ又はＮであり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ２１が、Ｔ、Ａ、Ｅ、Ｇ又はＮであり、かつＸ８が、Ｅ又はＫである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４９に記載のアミノ酸配列（Ｘ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ１８Ｘ７Ｘ１９ＹＹＡＤＳＶＸ２０Ｇ）を含み、その中でＸ１が、Ａ、Ｇ又はＮであり、Ｘ２が、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹであり、Ｘ３が、Ｇ又はＳであり、Ｘ４が、Ｓ、Ｎ又はＰであり、Ｘ５が、Ｇ又はＰであり、Ｘ１８が、Ｃ以外の任意のアミノ酸であり、Ｘ７が、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲであり、Ｘ１９が、Ｓ又はＣ以外の任意のアミノ酸であり、かつＸ２０が、任意のアミノ酸である。
【0088】
いくつかの実施形態では、Ｘ１８は、Ｃ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１８は、Ｃ以外の任意のアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１８は、Ｘ６である。いくつかの実施形態では、Ｘ１８は、Ｇ、Ｄ、Ｓ、又はＮである。いくつかの実施形態では、Ｘ１８は、Ｇ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１８は、Ｇ以外の任意のアミノ酸から選択される。
【0089】
いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｃ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｃ以外の任意のアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｓ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｓ以外の任意のアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｃ及びＳ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｃ及びＳ以外の任意のアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｔ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｔ以外の任意のアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ１９は、Ｔである。
【0090】
いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、任意のアミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋ以外のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｃ又はＳ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋ、Ｃ又はＳ以外のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、正に荷電していないアミノ酸である。いくつかの実施形態では、正に荷電したアミノ酸は、Ｋ、Ｒ又はＨである。いくつかの実施形態では、正に荷電したアミノ酸は、Ｋ、Ｒ及びＨのいずれか１つである。いくつかの実施形態では、荷電は、ｐＨ７．０で荷電される。いくつかの実施形態では、荷電は、中性ｐＨで荷電され
る。いくつかの実施形態では、荷電は、荷電された側鎖を含んでいる。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、負に荷電したアミノ酸である。いくつかの実施形態では、負に荷電したアミノ酸は、Ｅ又はＤである。いくつかの実施形態では、負に荷電したアミノ酸は、Ｅ及びＤから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋ又はＥである。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋ及びＥから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、負に荷電したアミノ酸又は極性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、負に荷電したアミノ酸及び極性アミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、極性アミノ酸は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｎ又はＱである。いくつかの実施形態では、極性アミノ酸は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｅである。
る。いくつかの実施形態では、荷電は、荷電された側鎖を含んでいる。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、負に荷電したアミノ酸である。いくつかの実施形態では、負に荷電したアミノ酸は、Ｅ又はＤである。いくつかの実施形態では、負に荷電したアミノ酸は、Ｅ及びＤから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋ又はＥである。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋ及びＥから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、負に荷電したアミノ酸又は極性アミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、負に荷電したアミノ酸及び極性アミノ酸から選択される。いくつかの実施形態では、極性アミノ酸は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｎ又はＱである。いくつかの実施形態では、極性アミノ酸は、Ｙ、Ｓ、Ｔ、Ｎ及びＱから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｋである。いくつかの実施形態では、Ｘ２０は、Ｅである。
【0091】
いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ａ、Ｇ又はＮである。いくつかの実施形態では、Ｘ１は、Ａ、Ｇ及びＮから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、Ｓ、Ｎ、Ｇ又はＹである。いくつかの実施形態では、Ｘ２は、Ｓ、Ｎ、Ｇ及びＹから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｇ又はＳである。いくつかの実施形態では、Ｘ３は、Ｇ及びＳから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ４はＳ、Ｎ又はＰである。いくつかの実施形態では、Ｘ４は、Ｓ、Ｎ及びＰから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、Ｇ又はＰである。いくつかの実施形態では、Ｘ５は、Ｇ及びＰから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ６は、Ｇ、Ｄ、Ｓ、又はＮである。いくつかの実施形態では、Ｘ６は、Ｇ、Ｄ、Ｓ、及びＮから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ７は、Ｓ、Ｙ、Ｇ又はＲである。いくつかの実施形態では、Ｘ７は、Ｓ、Ｙ、Ｇ及びＲから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘ８は、Ｅ又はＫである。いくつかの実施形態では、Ｘ８は、Ｅ及びＫから選択される。
【0092】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２、配列番号２０（ＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号２１（ＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号２２（ＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号２３（ＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号４７（ＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧ）、配列番号４８（ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５７（ＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５８（ＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号５９（ＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６０（ＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６１（ＮＩＹＳＮＰＳＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６２（ＮＩＹＳＮＰＮＲＡＹＹＡＤＳＶＥＧ)、配列番号６３（ＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧ）、配列番号６４（ＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧ）及び配列番号６５（ＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧ）から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２０を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２０からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２１からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２２を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２２からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２３からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１７である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１７を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１７からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４７を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４７からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４８を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４８からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５７を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５７からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５８を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５８からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５９を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５９からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６０を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６０からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６１を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６１からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６２を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６２からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６３からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６４を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６４からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６５を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６５からなる。
【0093】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３、配列番号２４（ＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹ）、配列番号２５（ＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹ）及び配列番号２６（ＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹ）から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２４を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２４からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２５を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２５からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２６を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２６からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号１８である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１８を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１８からなる。
【0094】
いくつか実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６及び配列番号２７（ＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴ）から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号２７を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号２７からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号１９である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１９を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１９からなる。
【0095】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、不安定性傾向が無い。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ（複数）は、不安定性傾向が無い。いくつかの実施形態では、不安定性傾向は、酸不安定性傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、劣化への傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、切断への傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＤＰジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、Ｘ１１Ｘ１２は、ＤＰではない。いくつかの実施形態では、Ｘ１１がＤである場合、Ｘ１２は、Ｐ、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｔ又はＨではない。いくつかの実施形態では、Ｘ１１がＤである場合、Ｘ１２は、Ｐではない。いくつかの実施形態では、傾向は、アスパラギン酸異性化への傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＤＧジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＤＴジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＤＳジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＤＤジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＤＨジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、脱アミノ化への傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＧジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＳジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＴジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＨジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＮジアミノ酸である。いくつかの実施形態では、傾向は、Ｎ結合グリコシル化への傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＸＳ／Ｔ（配列番号８４）である。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＸＳである。いくつかの実施形態では、傾向は、ＮＸＴである。これらの傾向配列におけるＸは、任意のアミノ酸であり得ることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、傾向は、遊離システイン残基である。いくつかの実施形態では、全てのＣＤＲは、遊離システイン残基が無い。いくつかの実施形態では、傾向は、酸化傾向である。いくつかの実施形態では、傾向は、表面に露出したメチオニン又はトリプトファン残基である。いくつかの実施形態では、傾向は、表面に露出したメチオニン残基である。いくつかの実施形態では、傾向は、表面に露出したトリプトファン残基である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、傾向を消失させる単一のアミノ酸変化を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ジアミノ酸配列を消失させる単一のアミノ酸変化を含む。
【0096】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、Ｎ－グリコシル化部位が無い。いくつかの実施形態では、Ｎ－グリコシル化部位は、ＮＸＳ／Ｔを含み、Ｘは、任意のアミノ酸であり、第３のアミノ酸は、Ｓ又はＴである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０６（ＮＩＹＳＮＰＮＲＸ２２ＹＹＡＤＳＶＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ２２は、Ｓ及びＴ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０７（ＮＩＹＳＮＰＮＲＸ２３ＹＹＡＤＳＶＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ２３は、Ｓ、Ｔ及びＣ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０６からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１０７からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１１２（ＮＩＹＳＮＰＸ２４ＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ２４は、Ｎ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１１３（ＮＩＹＳＮＰＸ２５ＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ２５は、Ｎ及びＣ以外の任意のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１１４（ＮＩＹＳＮＰＸ２６ＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧ）を含む。いくつかの実施形態では、Ｘ２６は、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｑ又はＮである。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１１２からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１１３からなる。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号１１４からなる。
【0097】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号４７、配列番号４８、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４及び配列番号６５を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２０に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５７に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５８に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号５９に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６０に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号６５に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。
【0098】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号２６に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む。
【0099】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号２７に記載のアミノ酸配列を含む。
【0100】
いくつかの実施形態では、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号２、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２及び配列番号２３から選択されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号３、配列番号２４、配列番号２５及び配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含み、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含み、かつＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号６及び配列番号２７から選択されるアミノ酸配列を含む。
【0101】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７）を含む重鎖を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７を含むか又はそれからなる重鎖可変領域を含まない。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号７を含む重鎖及び配列番号２７を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む軽鎖を含む。
【0102】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２９）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３０）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３１）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５０）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号５１）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６６）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６７）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６８）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＱＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号６９）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＳＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７０）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＡＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７１）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＥＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７２）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＧＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７３）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＮＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７４）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３２）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３３）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号３４）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２８～３４、５０～５１及び６６～７４から選択される配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７、２８～３４、５０～５１及び６６～７４から選択される配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２８～３４、５０～５１及び６６～７４から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７、２８～３４、５０～５１及び６６～７４から選択される配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号２８～３４、５０～５１及び６６～７４から選択される配列からなる重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号７、２８～３４、５０～５１及び６６～７４から選択される配列からなる重鎖可変領域を含む。
【0103】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８)及びＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３５)から選択される配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８及び配列番号３５から選択される配列を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３５を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８及び３５から選択される配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３５を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８及び３５から選択される配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３５からなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８及び３５から選択される配列からなる軽鎖可変領域を含む。
【0104】
いくつかの実施形態では、重鎖は、ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号３６）を含むＮ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３６からなるＮ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号５０、配列番号５１、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３及び配列番号７４のいずれか１つのＮ末端に配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端ペプチドは、シグナルペプチドである。いくつかの実施形態では、重鎖は、シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、シグナルペプチドが無い。いくつかの実施形態では、重鎖は、シグナルペプチドを欠く。いくつかの実施形態では、重鎖は、細胞中で最初に発現されるときにシグナルペプチドを含み、シグナルペプチドは、切断され、分泌される重鎖は、シグナルペプチドを欠く。シグナルペプチドは、当技術分野において周知であり、抗体鎖の分泌をもたらすように機能する任意のシグナルペプチドが、使用され得る。
【0105】
いくつかの実施形態では、重鎖は、ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３７）を含むＣ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３７からなるＣ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、重鎖定常領域である。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号５０、配列番号５１、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３及び配列番号７４のいずれか１つのＣ末端に配列番号３７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、ＩｇＧ骨格である。一実施形態は、抗原結合断片は、Ｃ末端ペプチドを欠く。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｃ末端ペプチドが無い。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、細胞傷害性ではない。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、細胞傷害性を低下させるために変異される。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、抗体ヒンジドメインを含む。重鎖のヒンジドメインに存在するジスルフィド架橋が重鎖二量体化のために十分であることは、当業者なら理解するであろう。ヒンジ領域自体は、細胞傷害性を付与しない。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、ＣＨ１ドメインを含む。重鎖のＣＨ１ドメインと軽鎖のＣＬドメインの間に形成されるジスルフィド架橋が、重鎖－軽鎖二量体化及び機能抗体又は抗原結合断片の形成のために十分であることは、当業者なら理解するであろう。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、二量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、２つの重鎖間の二量体化を誘導するのに十分である。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、重鎖と軽鎖の間で二量体化を誘導するのに十分である。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、２つの重鎖間の二量体化を誘導するのに十分な第１の二量体化ドメインと、重鎖と軽鎖の間の二量体化を誘導するのに十分な第２の二量体化ドメインの２つの二量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二量体化は、ジスルフィド結合を形成することである。
【0106】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号９の配列からなる。配列番号９はまた、シグナルペプチド（配列番号３６）を欠いてよく、それはＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８５）を生成すること、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。
【0107】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＸ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７ＴＹＹＡＤＳＶＸ８ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５４）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号５４の配列からなる。配列番号５４はまた、本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。
【0108】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＸ１ＩＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ１８Ｘ７Ｘ１９ＹＹＡＤＳＶＸ２０ＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５５）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号５５の配列からなる。配列番号５５はまた、本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。
【0109】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＸ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＹＸ１５ＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５６）を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号５６の配列からなる。配列番号５６はまた、本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。
【0110】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＧＩＮＧＮＧＤＹＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８６）を含む重鎖を含む。配列番号８６はまた、配列番号３９を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８６又は３９からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＧＧＳＧＳＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８７）を含む重鎖を含む。配列番号８７はまた、配列番号４０を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８７又は４０からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８８）を含む重鎖を含む。配列番号８８はまた、配列番号４１を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８８又は４１からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＮＧＰＧＮＧＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号８９）を含む重鎖を含む。配列番号８９はまた、配列番号４２を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号８９又は４２からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９０）を含む重鎖を含む。配列番号９０はまた、配列番号５２を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９０又は５２からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９１）を含む重鎖を含む。配列番号９１はまた、配列番号５３を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９１又は５３からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＤＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９２）を含む重鎖を含む。配列番号９２はまた、配列番号７５を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９２又は７５からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＥＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号９３）を含む重鎖を含む。配列番号９３はまた、配列番号７６を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号９３又は７６からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＧＲＴＹＹＡＤ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【0111】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＮＹＮＹＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１０１）を含む重鎖を含む。配列番号１０１はまた、配列番号４３を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０１又は４３からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＤＰＴＮＹＹＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１０２）を含む重鎖を含む。配列番号１０２はまた、配列番号４４を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０２又は４４からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＳＹＲＳＴＮＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１０３）を含む重鎖を含む。配列番号１０３はまた、配列番号４５を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０３又は４５からなる重鎖を含む。
【0112】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＸ２２ＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１０８）を含む重鎖を含み、その中でＸ２２は、Ｓ及びＴ以外の任意のアミノ酸である。配列番号１０８はまた、配列番号１０９を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＮＲＸ２３ＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１１０）を含む重鎖を含み、その中でＸ２３は、Ｓ、Ｔ及びＣ以外の任意のアミノ酸である。配列番号１１０はまた、配列番号１１１を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＸ２４ＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１１５）を含む重鎖を含み、その中でＸ２４は、Ｎ以外の任意のアミノ酸である。配列番号１１５はまた、配列番号１１６を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＸ２５ＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１１７）を含む重鎖を含み、その中でＸ２５は、Ｎ及びＣ以外の任意のアミノ酸である。配列番号１１７はまた、配列番号１１８を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＮＩＹＳＮＰＸ２６ＲＴＹＹＡＤＳＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＡＰＧＤＹＴＡＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１１９）を含む重鎖を含み、その中でＸ２６は、Ｇ、Ｄ、Ｓ、Ｅ、Ｑ又はＮである。配列番号１１９はまた、配列番号１２０を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０８～１１１のいずれか１つからなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０８～１１１のいずれか１つからなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１１５～１２０のいずれか１つからなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０８～１１１及び１１５～１２０のいずれか１つからなる重鎖を含む。
【0113】
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９～４５、５２～５３及び７５～８３から選択される配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８６～１０３から選択される配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号９、３９～４５、５２～５３及び７５～８３から選択される配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８５～１０３から選択される配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号３９～４５、５２～５３及び７５～８３から選択される配列からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８６～１０３から選択される配列からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号９、３９～４５、５２～５３及び７５～８３から選択される配列からなる重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号８５～１０３から選択される配列からなる重鎖を含む。
【0114】
いくつか実施形態では、軽鎖は、配列番号３６を含むＮ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３６からなるＮ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号８及び配列番号３５のいずれか１つのＮ末端に配列番号３６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｎ末端ペプチドは、シグナルペプチドである。いくつかの実施形態では、軽鎖は、シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、シグナルペプチドが無い。いくつかの実施形態では、軽鎖は、シグナルペプチドを欠く。いくつかの実施形態では、軽鎖は、細胞中で最初に発現されるときにシグナルペプチドを含み、シグナルペプチドは、切断され、分泌される軽鎖は、シグナルペプチドを欠く。
【0115】
いくつか実施形態では、軽鎖は、ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号３８）を含むＣ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３８からなるＣ末端ペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、軽鎖定常領域である。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、軽鎖は、配列番号８、及び配列番号３５のいずれか１つのＣ末端に配列番号３８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、ＣＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬは、カッパＣＬドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＬは、ラムダＣＬドメインである。重鎖のＣＨ１ドメインと軽鎖のＣＬドメインの間に形成されるジスルフィド架橋が、重鎖－軽鎖二量体化及び機能抗体又は抗原結合断片の形成のために十分であることは、当業者なら理解するであろう。いくつかの実施形態では、Ｃ末端ペプチドは、二量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、重鎖と軽鎖の間の二量体化を誘導するのに十分である。
【0116】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＳＰＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０４）を含む軽鎖を含む。配列番号１０４はまた、配列番号１０を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、ＥＬＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＳＹＰＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１０５）を含む軽鎖を含む。配列番号１０５はまた、配列番号４６を生成する本発明のシグナルペプチド（配列番号３６）を含むか、又は異なるシグナルペプチドを含有できることが理解されるであろう。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０４又は１０からなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０５又は４６からなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１０及び配列番号４６から選択される配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１０４及び配列番号１０５から選択される配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１０及び配列番号４６から選択される配列からなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、配列番号１０４及び配列番号１０５から選択される配列からなる軽鎖を含む。
【0117】
いくつかの実施形態では、重鎖と軽鎖は、リンカーによって結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、アミノ酸リンカーである。いくつかの実施形態では、リンカーは、最長１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２２、２４又は２５アミノ酸長である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１５、１６、１８、２０、２２、２４又は２５アミノ酸長である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、１～２５、５～２５、１０～２５、１５～２５、２０～２５、１～２０、５～２０、１０～２０、１５～２０、１～１５、５～１５、１０～１５、１～１０、５～１０又は１～５アミノ酸長である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。
【0118】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、表１に提供されるものから選択される。
表１：本発明の抗体
表１：本発明の抗体
【表1】
【0119】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３２を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０１を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４３を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0120】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３３を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０２を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４４を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0121】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３４を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１０３を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４５を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0122】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３０を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８８を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４１を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0123】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５０を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９０を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５２を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0124】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６６を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９２を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７５を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0125】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６７を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９３を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７６を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0126】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６８を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９４を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７７を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0127】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号６９を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９５を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７８を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0128】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７０を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９６を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７９を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0129】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７１を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９７を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８０を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0130】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７２を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９８を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８１を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0131】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７３を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９９を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８２を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0132】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７４を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１００を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８３を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0133】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３１を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８９を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４２を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0134】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２８を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８６を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３９を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0135】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号２９を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８７を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４０を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0136】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５１を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号８を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９１を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０４を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号５３を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0137】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号３５を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８５を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０５を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号９を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号４６を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0138】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３０を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号３５を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８８を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０５を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４１を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号４６を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0139】
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号３１を含むか又はそれからなる重鎖可変領域と、配列番号３５を含むか又はそれからなる軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号８９を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号１０５を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４２を含むか又はそれからなる重鎖と、配列番号４６を含むか又はそれからなる軽鎖を含む。
【0140】
別の態様により、表１に提供される抗体又は抗原結合断片に対して少なくとも７０％のアミノ酸同一性を含み、かつその抗体と同じＣＤＲを含む抗体又は抗原結合断片が、提供される。
【0141】
ＣＤＲが抗体／結合断片の結合特異性を規定し、そのためＣＤＲが保持される限り、ＣＤＲの周囲の配列が改変／変更されてよいことを、当業者なら理解するであろう。いくつかの実施形態では、少なくとも７０％は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９９％又は１００％である。各可能性は、本発明の別々の実施形態を表す。いくつかの実施形態では、少なくとも７０％は、少なくとも８０％である。いくつかの実施形態では、少なくとも７０％は、少なくとも９０％である。
【0142】
本発明の操作された抗体は、例えば、抗体の特性を改善するために、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基に対し修飾が行われたものを含む。通常、このようなフレームワークの修飾は、抗体の免疫原性を減少させるために行われる。例えば、１つのアプローチは、１以上のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系列配列に「逆変異」させることである。より具体的には、体細胞変異を受けた抗体は、抗体が由来する生殖細胞系列配列とは異なるフレームワーク残基を含有できる。そのような残基は、抗体フレームワーク配列を、抗体が由来する生殖細胞系列配列と比較することにより同定できる。
【0143】
例えば、４Ｃ７ＶＨ領域において、２５、６８及び８２ａ位のフレームワークアミノ酸は全て、生殖細胞系列と異なり、それぞれ、Ｈ２５Ｓ、Ｓ６８Ｔ及びＴ８２ａＴの置換により生殖細胞系列に逆変異させることができる。
【0144】
別の種類のフレームワーク修飾は、フレームワーク領域内の、又はさらに１以上のＣＤＲ領域内の１以上の残基を変異させて、Ｔ細胞エピトープを除去し、それにより抗体の潜在的な免疫原性を低下させることを含む。このアプローチはまた、「脱免疫化」とも呼ばれ、米国特許公開第２００３０１５３０４３号にさらに詳細に記載される。
【0145】
フレームワークもしくはＣＤＲ領域内で行われる修飾に加えて、又はその代替として、本発明の抗体は、通常、血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合、及び／又は抗原依存性細胞傷害性などの、抗体の１以上の機能的特性を変更するために、Ｆｃ領域内に修飾を含むように操作できる。さらに、本発明の抗体は、化学的に修飾できる（例えば、１以上の化学的部分が抗体に付着されてよい）か、又はそのグリコシル化を変更し、再び抗体の１以上の機能的特性を変更するように修飾できる。これらの実施形態の各々は、以下でさらに詳細に説明される。Ｆｃ領域の残基のナンバリングは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのナンバリングである。
【0146】
好ましい実施形態では、抗体は、重鎖定常領域のヒンジ領域内の２２８位に対応する位置でセリンからプロリンへの変異（Ｓ２２８Ｐ；ＥＵインデックス）を含むＩｇＧ４アイソタイプ抗体である。この変異は、ヒンジ領域における重鎖間ジスルフィド架橋の不均一性を消失させると報告されている（Ａｎｇａｌら 上述；２４１位は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに基づく）。
【0147】
一実施形態では、ＣＨ１のヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更される、例えば、増加又は減少されるように修飾される。このアプローチは、米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載される。ＣＨ１のヒンジ領域内のシステイン残基の数は、例えば、軽鎖と重鎖のアセンブリを容易にするか、又は抗体の安定性を増加又は減少させるために変更される。
【0148】
別の実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるために変異される。より具体的には、１以上のアミノ酸変異が、抗体が天然のＦｃヒンジドメインＳｐＡ結合に対し損なわれたブドウ球菌プロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメインインターフェース領域中に導入される。このアプローチは、米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載される。
【0149】
別の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾される。様々なアプローチが、可能である。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように、以下の変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆの１以上を、導入できる。あるいは、生物学的半減期を増加させるために、抗体を、米国特許第５，８６９，０４６号及び第６，１２１，０２２号に記載されるように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取得したサルベージ受容体結合エピトープを含有するように、ＣＨ１又はＣＬ領域内で変更できる。
【0150】
さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域が、抗体のエフェクター機能（複数可）を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基と置換することにより変更される。例えば、抗体がエフェクターリガンドに対する変更された親和性を有するが親抗体の抗原結合能を保持するように、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０及び３２２から選択される１以上のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基と置換できる。それに対する親和性が変更されたエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣ１構成成分であり得る。このアプローチは、米国特許第５，６２４，８２１号及び第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載される。
【0151】
別の例では、抗体が変更されたＣ１q結合かつ／又は低下もしくは消失された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を有するように、アミノ酸残基３２９、３３１及び３２２から選択される１以上のアミノ酸を、異なるアミノ酸残基と置換できる。このアプローチは、米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載される。
【0152】
別の例では、アミノ酸位置２３１から２３９内の１以上のアミノ酸残基を変更し、それにより補体を固定する抗体の能力を変更する。このアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ ９４／２９３５１にさらに記載される。
【0153】
さらに別の例では、Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する抗体の能力を増大させるように、かつ／又は以下の位置：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３２０、３２２、３２４、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８又は４３９における１以上のアミノ酸を修飾することによりＦｃγ受容体に対する抗体の親和性を増加させるように修飾される。このアプローチは、ＰＣＴ公開ＷＯ ００／４２０７２にさらに記載される。さらに、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎに対するヒトＩｇＧ１上の結合部位が、マッピングされており、結合が改善された変異体が、記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００１） Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４を参照されたい）。２５６、２９０、２９８、３３３、３３４及び３３９位での特定の変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。さらに、以下の組み合わせ変異体：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４Ａ及びＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａは、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示された。
【0154】
さらに別の実施形態では、抗体のグリコシル化が、変更される。例えば、非グリコシル化抗体を、作製できる（すなわち、抗体は、グリコシル化を欠く）。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を高めるように変更できる。そのような糖修飾は、例えば、抗体配列内の１以上のグリコシル化部位を変更することによって達成できる。例えば、１以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除をもたらす１以上のアミノ酸置換を行い、それによりその部位でのグリコシル化を排除できる。このような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増強し得る。例えば、米国特許第５，７１４，３５０号及び同第６，３５０，８６１号を参照されたい。
【0155】
さらに、又は代替的に、変更された種類のグリコシル化を有する抗体、例えば、低減された量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体、又は増加されたＧｌｃＮａｃ二分構造を有する抗体を、作製できる。このような変更されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能を高めることが実証されている。このような糖修飾は、例えば、変更されたグリコシル化機構を有する宿主細胞中で抗体を発現させることにより達成できる。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野で説明されており、本発明の組換え抗体を発現させそれによりグリコシル化が変更された抗体を生成するための宿主細胞として使用できる。例えば、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（α（１，６）－フコシルトランスフェラーゼ）を欠き、そのためＭｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９細胞株で発現される抗体は、その糖にフコースを欠く。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９ ＦＵＴ８－／－細胞株は、２つの置換ベクターを使用するＣＨＯ／ＤＧ４４細胞におけるＦＵＴ８遺伝子の標的破壊によって作製された（米国特許公開第２００４０１１０７０４号及びＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８７：６１４－２２を参照されたい）。別の例として、ＥＰ１，１７６，１９５は、フコシルトランスフェラーゼをコードするＦＵＴ８遺伝子を機能的に破壊した細胞株を記載し、そのような細胞株で発現される抗体は、α－１,６結合関連酵素を低下させるか又は排除することによる低フコシル化を呈する。ＥＰ１，１７６，１９５もまた、抗体のＦｃ領域に結合するＮ－アセチルグルコサミンにフコースを付加する活性が低い酵素を有する細胞株、又は酵素活性を有しない細胞株、例えば、ラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ １６６２）を記載する。ＰＣＴ公開ＷＯ ０３／０３５８３５は、Ａｓｎ（２９７）結合糖にフコースを付着させる能力が低下され、その宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化ももたらす、変異型ＣＨＯ細胞株のＬｅｃ１３細胞を記載する（Ｓｈｉｅｌｄｓら（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照されたい）。グリコシル化プロファイルが変更された抗体は、ＰＣＴ公開ＷＯ ０６／０８９２３１に記載されるように、ニワトリの卵の中で生成することもできる。あるいは、グリコシル化プロファイルが変更された抗体は、Ｌｅｍｎａなどの植物細胞中で生成できる（米国特許第７，６３２，９８３号）。植物系での抗体の生成のための方法は、米国特許第６，９９８，２６７号及び同第７，３８８，０８１号に開示されている。ＰＣＴ公開ＷＯ ９９／５４３４２は、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株について記載しており、その操作された細胞株で発現される抗体は、ＧｌｃＮａｃの二分構造が増加しており、それは、抗体の増強されたＡＤＣＣ活性をもたらす（Ｕｍａｎａら（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照されたい）。あるいは、抗体のフコース残基を、フコシダーゼ酵素を使用して切断できる。例えば、フコシダーゼのα－Ｌ－フコシダーゼは、抗体からフコシル残基を除去する（Ｔａｒｅｎｔｉｎｏら（１９７５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４：５５１６－２３）。
【0156】
本開示によって企図される本明細書の抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させるためにペグ化できる。抗体をペグ化するために、抗体又はその断片を通常、１以上のＰＥＧ基が抗体又は抗体断片に付着するようになる条件下で、ＰＥＧの反応性エステル又はアルデヒド誘導体などの、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（又は類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応又はアルキル化反応を介して行われる。本明細書で使用する場合、用語「ポリエチレングリコール」は、モノ（Ｃ１～Ｃ１０）アルコキシ又はアリールオキシ－ポリエチレングリコール又はポリエチレングリコール－マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの任意の形態を包含することを意図する。特定の実施形態では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は、当技術分野で公知であり、本発明の抗体に適用できる。例えば、ＥＰ ０１５４３１６及びＥＰ ０４０１３８４を参照されたい。
【0157】
別の態様により、本発明の抗体又はその抗原結合断片を含む医薬組成物が、提供される。
【0158】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬として許容される担体、賦形剤又はアジュバントをさらに含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本発明の抗体又はその抗原結合断片の治療的有効量を含む。
【0159】
本明細書で使用する場合、用語「担体」、「賦形剤」、又は「アジュバント」は、活性抗体又はその抗原結合断片ではない医薬組成物の任意の成分を指す。本明細書で使用する場合、用語「医薬として許容される担体」は、非毒性、不活性固体、半固体液体充填剤、希釈剤、封入材料、任意の種類の製剤補助剤、又は生理食塩水などの、単に滅菌水性媒体を指す。医薬として許容される担体として機能できる物質のいくつかの例は、糖類、例えばラクトース、グルコース及びスクロース、デンプン、例えばトウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン、セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース；粉末トラガカント；麦芽、ゼラチン、タルク；賦形剤、例えばカカオバター及び坐剤ワックス；油類、例えば落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油；グリコール類、例えばプロピレングリコール、ポリオール類、例えばグリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール；エステル、例えばオレイン酸エチル及びラウリン酸エチル、寒天；抗体又はその抗原結合断片の緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水、リンゲル溶液；エチルアルコール及びリン酸緩衝液、並びに医薬製剤に使用される他の無毒の適合性物質である。本明細書において担体として機能できる物質のいくつかの非限定的な例は、糖、デンプン、セルロース及びその誘導体、粉末トラガント、麦芽、ゼラチン、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、硫酸カルシウム、植物油類、ポリオール類、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張食塩水、リン酸緩衝液、カカオ脂（坐剤基剤）、乳化剤並びに他の医薬製剤において使用される他の非毒性の医薬として適合性のある物質を含む。湿潤抗体又はその抗原結合断片及びラウリル硫酸ナトリウムなどの滑沢剤、並びに抗体又はその抗原結合断片の着色剤、抗体又はその抗原結合断片の香味剤、賦形剤、安定剤、抗酸化剤、及び保存剤も、存在し得る。任意の非毒性で、不活性で、かつ有効な担体を使用して、本明細書で企図される組成物を製剤化できる。この点に関して、適切な医薬として許容される担体、賦形剤、及び希釈剤、例えば、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，第１３版，Ｂｕｄａｖａｒｉら（編），Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．社，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（２００１）；ｔｈｅ ＣＴＦＡ（化粧品・トイレタリー・フレグランス協会（Ｃｏｓｍｅｔｉｃ，Ｔｏｉｌｅｔｒｙ，ａｎｄ Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ））国際化粧品成分辞典及びハンドブック（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｓｍｅｔｉｃ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ），第１０版（２００４）；及び「不活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）」米国食品医薬品局（ＦＤＡ）医薬品評価研究センター（ＣＤＥＲ）管理局に記載されたものなどは、当業者に周知であり、これらの全ての内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本組成物において有用な医薬として許容される賦形剤、担体及び希釈剤の例は、蒸留水、生理食塩水、リンゲル液、デキストロース液、ハンクス液、及びＤＭＳＯを含む。これらの追加の不活性成分、並びに有効な製剤及び投与手順は、当技術分野において周知であり、標準的なテキストブック、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ及びＧｉｌｌｍａｎ：治療薬の薬理学的基礎（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏf Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ），第８版，Ｇｉｌｍａｎら（編）Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ（１９９０）；レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ.，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ.（１９９０）；及びレミントン：薬学の科学と実践（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ），第２１版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｐａ.，（２００５）に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に記載の組成物はまた、リポソーム、ＩＳＣＯＭＳ、徐放性粒子、及び血清中のペプチド又はポリペプチドの半減期を増加させる他のビヒクルなどの人工的に作成された構造中に含有され得る。リポソームは、エマルジョン、フォーム、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、ラメラ層などを含む。本明細書に記載のペプチドと共に使用するためのリポソームは、中性及び負に荷電したリン脂質及びコレステロールなどのステロールを一般に含む標準的な小胞形成脂質から形成される。脂質の選択は一般に、リポソームのサイズや血中の安定性などの考慮事項によって決定される。様々な方法が、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．ら，タンパク質科学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ），１９９９，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ社，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋにより概説されるように、リポソームを調製するために利用可能であり、米国特許第４，２３５，８７１号，同第４，５０１，７２８号，同第４，８３７，０２８号，及び同第５，０１９，３６９号も参照されたい。
【0160】
担体は、合計で、本明細書に提示される医薬組成物の約０．１重量％～約９９．９９９９９重量％を含み得る。
【0161】
用語「治療的有効量」は、哺乳動物における疾患又は障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。いくつかの実施形態では、治療的有効量は、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な投薬量及び期間で有効な量である。正確な剤形及び投薬計画は、患者の状態に応じて医師により決定される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本発明の抗体又は抗原結合断片の治療的有効量を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療用組成物である。
【0162】
いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、疾患又は状態を処置する際に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、疾患又は状態を治療する際に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、ＨＶＥＭを発現する細胞を特徴とする。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＶＥＭを発現することを特徴とする疾患細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＶＥＭを過剰発現することを特徴とする。いくつかの実施形態では、過剰発現は、健常細胞と比較したものである。いくつかの実施形態では、健常細胞は、非罹患細胞である。いくつかの実施形態では、過剰発現は、増加された発現である。いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、ＨＶＥＭ陽性の疾患又は状態である。いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、ＢＴＬＡ陽性の疾患又は状態である。
【0163】
いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、ＨＶＥＭ陽性癌である。いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、ＢＴＬＡ陽性常在細胞を含む癌である。いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、ＨＶＥＭ陽性の前癌性病変である。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は、腎細胞癌である。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫、腎癌、子宮頸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、卵巣癌、結腸癌、乳癌、肝細胞癌、胆管癌、胸腺腫及び頭頸部癌から選択される。いくつかの実施形態では、腎癌は、腎細胞癌である。当業者は、ＨＶＥＭを発現するあらゆる癌が治療標的であり得ることを認識するだろう。いくつかの実施形態では、疾患は、感染性疾患である。いくつかの実施形態では、感染の細胞は、ＨＶＥＭ発現を含む。いくつかの実施形態では、感染細胞は、ＨＶＥＭ発現を含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、細菌感染症であり、細菌細胞は、ＨＶＥＭ発現を含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、真菌感染症であり、真菌細胞は、ＨＶＥＭ発現を含む。いくつかの実施形態では、感染性疾患は、ウイルス感染症であり、ウイルス感染した対象の細胞は、ＨＶＥＭ発現を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭ発現は、ＨＶＥＭ過剰発現である。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭ発現は、増加されたＨＶＥＭ発現である。
【0164】
別の態様により、それを必要とする対象におけるＨＶＥＭ陽性の疾患又は状態を治療する方法が提供され、方法は、本発明の抗体又はその抗原結合断片を対象に投与すること、それにより対象を治療することを含む。
【0165】
別の態様により、それを必要とする対象におけるＨＶＥＭ陽性の疾患又は状態を治療する方法が提供され、方法は、本発明の医薬組成物を対象に投与すること、それにより対象を治療することを含む。
【0166】
いくつかの実施形態では、本方法は、ＨＶＥＭ－ＴＮＦＳＦ１４相互作用を阻害しないことをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＨＶＥＭ－ＴＮＦＳＦ１４相互作用を実質的に阻害しないことをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＨＶＥＭ－ＴＮＦＳＦ１４相互作用を完全に阻害しないことをさらに含む。
【0167】
いくつかの実施形態では、本方法は、非ＨＶＥＭチェックポイントタンパク質の免疫チェックポイント阻害をさらに含む。いくつかの実施形態では、非ＨＶＥＭチェックポイントタンパク質は、ＰＤ－１である。いくつかの実施形態では、本方法は、非ＨＶＥＭチェックポイントタンパク質の免疫チェックポイント阻止をさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＰＤ－１とそのリガンドの１つの間の相互作用を阻害することをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１リガンドは、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２から選択される。いくつかの実施形態では、本方法は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２を阻害することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＰＤ－１対ＰＤ－Ｌ１の相互作用を阻害することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＰＤ－１対ＰＤ－Ｌ２の相互作用を阻害することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本方法は、ＰＤ－１対ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の相互作用を阻害することをさらに含む。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害することは、ＰＤ－１対ＰＤ－Ｌ１の相互作用又はＰＤ－１対ＰＤ－Ｌ２の相互作用を阻害する抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害することは、ＰＤ－１とそのリガンドの少なくとも１つの間の相互作用を阻害する抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのリガンドは、２つのリガンドである。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害することは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻止を含む。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害することは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２阻止を含む。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害することは、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法を含む。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害することは、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２療法を含む。いくつかの実施形態では、療法は、免疫療法である。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害する抗体又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害する抗体又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体である。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害する抗体又はその抗原結合断片は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。いくつかの実施形態では、相互作用を阻害する抗体又はその抗原結合断片は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗体は、ブロッキング抗体である。ＰＤ－Ｌ１／Ｌ２及びＰＤ－１療法は、当技術分野で周知であり、ニボルマブ（オプジーボ）、ペムブロリズマブ（キイトルーダ）、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、セミプリマブ（リブタヨ）、ピディリズマブ、ＡＭＰ－２２４、ＡＭＰ－５１４及びＰＤＲ００１を含むが、これらに限定されない。
【0168】
いくつかの実施形態では、治療の方法は、ＨＶＥＭ発現細胞に対し別の治療薬を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、他の治療薬は、抗癌治療薬である。いくつかの実施形態では、治療薬は、非自己免疫細胞である。いくつかの実施形態では、他の治療薬は、自己免疫細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＡＲ発現免疫細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ－Ｔである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲ－ＮＫである。いくつかの実施形態では、自己免疫細胞は、ＴＩＬ療法である。いくつかの実施形態では、非自己免疫細胞は、養子細胞療法である。いくつかの実施形態では、自己免疫細胞は、養子細胞療法である。いくつかの実施形態では、養子細胞は、ＣＡＲ細胞である。いくつかの実施形態では、養子細胞は、ＴＩＬである。
【0169】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物と別の治療薬は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、別の治療薬の前に、後で又は同時に投与される。
【0170】
いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＶＥＭ陽性の疾患又は状態に罹患している対象である。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＶＥＭ陽性細胞によって特徴付けられる疾患に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、癌に罹患している。いくつかの実施形態では、癌は、ＨＶＥＭ陽性癌である。いくつかの実施形態では、対象は、療法を経験していない。いくつかの実施形態では、対象は、抗ＨＶＥＭ療法を経験していない。いくつかの実施形態では、対象は、免疫療法を経験していない。
【0171】
本明細書で使用する場合、用語「投与する」、「投与」、及び同様の用語は、健全な医療行為において、治療効果を提供するように、活性剤を含有する組成物を対象に送達する任意の方法を指す。本主題の一態様は、それを必要とする患者への、本主題の組成物の治療的有効量の静脈内投与を提供する。他の適切な投与経路は、非経口、皮下、経口、筋肉内、髄腔内、又は腹腔内を含み得る。
【0172】
投与される投薬量は、レシピエントの年齢、健康状態、及び体重、同時治療の種類、もしあれば、治療の頻度、及び所望される効果の性質に依存する。
【0173】
別の態様により、本発明の方法により治療される対象の適合性を決定する方法が提供され、方法は、対象から試料を取得すること、および試料中のＨＶＥＭレベルを決定することを含み、ＨＶＥＭの陽性発現は、対象が本発明の治療方法に適していることを示す。
【0174】
別の態様により、試料中のＨＶＥＭを検出する方法が提供され、方法は、試料を本発明の抗体もしくはその抗原結合断片と接触させること、それによりＨＶＥＭを検出することを含む。
【0175】
いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭレベルを決定することは、ＨＶＥＭを検出することを含む。いくつかの実施形態では、検出することは、ＨＶＥＭの量を定量化することを含む。いくつかの実施形態では、接触させることは、抗体もしくは抗原結合断片がＨＶＥＭに結合するのに適する条件下で行われる。いくつかの実施形態では、条件は、ＨＶＥＭへの特異的結合に適する。いくつかの実施形態では、結合することは、ハイブリダイズすることである。抗体／抗体又はその抗原結合断片が結合する条件は、試料に依存する。当業者なら、組織試料への結合に必要な条件（固定の方法／種類に依存する）が、細胞可溶化物全体などの溶液中での結合の条件とは異なることを認識するであろう。このような結合条件は、当技術分野で周知であり、当業者は、所与の試料に対して適切な条件を選択できる。
【0176】
いくつかの実施形態では、試料は、組織試料である。いくつかの実施形態では、試料は、パラフィン包埋された試料である。いくつかの実施形態では、試料は、灌流された試料である。いくつかの実施形態では、試料は、対象由来である。いくつかの実施形態では、試料は、健常試料である。いくつかの実施形態では、試料は、罹患試料である。いくつかの実施形態では、試料は、診断用試料である。
【0177】
いくつかの実施形態では、本方法は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、検出は、免疫組織化学的検出である。いくつかの実施形態では、検出は、免疫蛍光検出である。いくつかの実施形態では、検出は、ＦＡＣＳ検出である。いくつかの実施形態では、検出は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を認識した二次抗体と試料を接触させることをさらに含む。いくつかの実施形態では、検出は、二次抗体を検出することを含む。いくつかの実施形態では、検出は、顕微鏡観察を含む。
【0178】
いくつかの実施形態では、対象は、疾患又は状態に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、疾患又は状態に罹患していると疑われる。一実施形態は、対象は、疾患又は状態を発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、対象は、増加されたＨＶＥＭ発現を含み得る疾患又は状態に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、増加されたＨＶＥＭ発現により特徴付けられ得る疾患又は状態に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、癌に罹患している。いくつかの実施形態では、癌は、第一選択治療に応答しなかった癌である。いくつかの実施形態では、癌は、癌再発である。いくつかの実施形態では、癌は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法に応答しなかった癌である。
【0179】
いくつかの実施形態では、試料は、疾患試料である。いくつかの実施形態では、試料は、生体液である。いくつかの実施形態では、生体液は、血液、血清、血漿、尿、糞便、胆汁、精液、腫瘍液、及び脳脊髄液から選択される。いくつかの実施形態では、試料は、血液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、細胞試料である。いくつかの実施形態では、試料は、細胞を含む。いくつかの実施形態では、試料は、疾患細胞を含む。いくつかの実施形態では、試料は、腫瘍試料である。いくつかの実施形態では、試料は、生検試料である。
【0180】
いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭの陽性発現は、ＨＶＥＭ発現を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭの陽性発現は、上昇されたＨＶＥＭレベルを含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭの陽性発現は、増加されたＨＶＥＭレベルを含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭの陽性発現は、ＨＶＥＭの過剰発現を含む。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭの陽性発現は、健常試料と比較したものある。いくつかの実施形態では、健常試料は、疾患組織及び／又は疾患細胞に隣接する健常組織及び／又は健常細胞由来のものである。いくつかの実施形態では、健常試料は、非感染細胞を含む。いくつかの実施形態では、健常試料は、健常ドナーについてである。いくつかの実施形態では、ＨＶＥＭの陽性発現は、所定の閾値と比較したものある。
【0181】
別の態様により、本発明の医薬組成物、又は本発明の抗体もしくはその抗原結合断片を含むキットが提供される。
【0182】
いくつかの実施形態では、キットは、ＰＤ－１ベースの療法をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、ＰＤ－Ｌ１ベースの療法をさらに含む。いくつかの実施形態では、療法は、免疫療法である。いくつかの実施形態では、療法は、抗ＰＤ－１療法である。いくつかの実施形態では、療法は、抗ＰＤ－Ｌ１療法である。いくつかの実施形態では、療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１阻止療法である。いくつかの実施形態では、療法は、ブロッキング抗体である。いくつかの実施形態では、療法は、抗ＰＤ－１抗体である。いくつかの実施形態では、療法は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ブロッキング抗体である。
【0183】
いくつかの実施形態では、キットは、本発明の医薬組成物がＰＤ－１及び／又はＰＤ－Ｌ１ベースの療法との使用のためであることを示す標識をさらに含む。いくつかの実施形態では、キットは、本発明の抗体又はその抗原結合断片がＰＤ－１及び／又はＰＤ－Ｌ１ベースの療法との使用のためであることを示す標識をさらに含む。
【0184】
いくつかの実施形態では、キットは、二次検出分子をさらに含む。いくつかの実施形態では、検出分子は、本発明の抗体又はその抗原結合断片を検出するためのものである。いくつかの実施形態では、二次検出分子は、本発明の抗体又はその抗原結合断片に結合する抗体である。いくつかの実施形態では、検出分子は、検出可能な部分を含む。検出可能な部分の例は、蛍光部分、タグ、放射標識、色素及び化学発光部分を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、検出可能な部分は、蛍光部分である。蛍光部分の例は、ＧＦＰ、ＲＦＰ、ＹＦＰ、ＡＰＣ、ＣＹ５、ＣＹ７、及びパシフィックブルーを含むが、これらに限定されない。二次検出分子は、当技術分野で周知であり、本発明の抗体又はその抗原結合断片を検出するであろう任意のそのような分子が、使用され得る。
【0185】
別の態様により、本発明の抗体又は抗原結合断片をコードする核酸分子が、提供される。
【0186】
別の態様により、本発明の抗体又は抗原結合断片の重鎖をコードする核酸分子、及び本発明の抗体又は抗原結合断片の軽鎖をコードする核酸分子が、提供される。
【0187】
いくつかの実施形態では、核酸分子は、発現用に構成される。いくつかの実施形態では、発現は、細胞における発現である。いくつかの実施形態では、発現は、インビトロ発現系における発現である。本明細書で使用される用語「発現」は、コード領域の転写及び／又は翻訳を含むコード領域の生合成を指す。そのため、核酸分子の発現は、核酸断片の転写（例えば、ｍＲＮＡ又は他の機能的ＲＮＡをもたらす転写）及び／又は前駆体又は成熟タンパク質（ポリペプチド）へのＲＮＡの翻訳を指し得る。いくつかの実施形態では、コード領域は、本発明の抗体又は抗原結合断片をコードする。いくつかの実施形態では、コード領域は、重鎖をコードする。いくつかの実施形態では、コード領域は、軽鎖をコードする。
【0188】
細胞内でのコード領域の発現は、当業者に周知である。これは、多くの方法の中で、トランスフェクション、ウイルス感染、又は細胞のゲノムの直接的な変更によって行われ得る。いくつかの実施形態では、コード領域は、プラスミド又はウイルスベクターなどの発現ベクター中にある。いくつかの実施形態では、核酸分子は、ベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。
【0189】
ベクターの核酸配列は一般に、少なくとも細胞における増殖のための複製起点、及び任意に異種ポリヌクレオチド配列、発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー）、選択マーカー（例えば、抗生物質耐性）、ポリアデニン配列などの、追加のエレメントを含有する。
【0190】
ベクターは、非ウイルス法を介して、又はウイルス法を介して送達されるＤＮＡプラスミドであり得る。ウイルスベクターは、レトロウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター又はポックスウイルスベクターであり得る。プロモーターは、哺乳動物細胞中で活性であり得る。プロモーターは、ウイルスプロモーターであり得る。
【0191】
いくつかの実施形態では、コード領域は、調節エレメントに作用可能に連結される。いくつかの実施形態では、コード領域は、プロモーターに作用可能に連結される。いくつかの実施形態では、調節エレメントは、タンパク質である。いくつかの実施形態では、調節エレメントは、エンハンサーである。用語「作用可能に連結される」は、目的のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列の発現を可能にするように（例えば、インビトロ転写／翻訳系において、又はベクターが宿主細胞中に導入される場合宿主細胞中で）、調節エレメント又は複数のエレメントに連結されることを意味すると意図される。
【0192】
いくつかの実施形態では、ベクターは、エレクトロポレーション（例えば、Ｆｒｏｍら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２，５８２４（１９８５）に記載されている）、熱ショック、ウイルスベクターによる感染、小ビーズ又は粒子のマトリックス内で、又は表面上（Ｋｌｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３２７．７０－７３（１９８７））のいずれかで核酸を有する小粒子による高速弾道貫通などを含む標準的な方法により細胞内に導入される。
【0193】
本明細書で使用される用語「プロモーター」は、ＲＮＡポリメラーゼ、すなわち、ＲＮＡポリメラーゼＩＩの開始部位の周りにクラスター化される一群の転写制御モジュールを指す。プロモーターは、各々が約７～２０ｂｐのＤＮＡからなり、かつ転写活性化因子又は抑制因子のタンパク質の１以上の認識部位を含有する、個別の機能モジュールで構成される。
【0194】
いくつかの実施形態では、核酸配列は、ＲＮＡポリメラーゼＩＩ（ＲＮＡＰ ＩＩ及びＰｏｌ ＩＩ）により転写される。ＲＮＡＰ ＩＩは、真核細胞で見出される酵素である。それは、ＤＮＡの転写を触媒して、ｍＲＮＡ及びほとんどのｓｎＲＮＡ及びマイクロＲＮＡの前駆体を合成する。
【0195】
いくつかの実施形態では、哺乳動物発現ベクターは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社から入手可能であるｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（±）、ｐＧＬ３、ｐＺｅｏＳＶ２（±）、ｐＳｅｃＴａｇ２、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙＣ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙＣ／ｃｙｔｏ、ｐＣＲ３．１、ｐＳｉｎＲｅｐ５、ＤＨ２６ｓ、ＤＨＢＢ、ｐＮＭＴ１、ｐＮＭＴ４１、ｐＮＭＴ８１、Ｐｒｏｍｅｇａ社から入手可能であるｐＣＩ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ社から入手可能であるｐＭｂａｃ、ｐＰｂａｃ、ｐＢＫ－ＲＳＶ及びｐＢＫ－ＣＭＶ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から入手可能であるｐＴＲＥＳ、並びにそれらの誘導体を含むが、これらに限定されない。
【0196】
いくつかの実施形態では、レトロウイルスなどの真核生物ウイルス由来の調節エレメントを含有する発現ベクターを、本発明で使用する。ＳＶ４０ベクターは、ｐＳＶＴ７及びｐＭＴ２を含む。いくつかの実施形態では、ウシ乳頭腫ウイルス由来のベクターは、ｐＢＶ－１ＭＴＨＡを含み、エプスタインバーウイルス由来のベクターは、ｐＨＥＢＯ、及びｐ２Ｏ５を含む。他の例示的なベクターは、ｐＭＳＧ、ｐＡＶ００９／Ａ＋、ｐＭＴＯ１０／Ａ＋、ｐＭＡＭｎｅｏ－５、バキュロウイルスｐＤＳＶＥ、及びＳＶ－４０初期プロモーター、ＳＶ－４０後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルスプロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ポリヘドリンプロモーター、又は真核細胞内での発現に有効であることが示された他のプロモーターの指示の下でタンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターを含む。
【0197】
いくつかの実施形態では、側方感染及び標的化特異性などの利点を提供する組換えウイルスベクターが、インビボ発現のために使用される。一実施形態では、側方感染は、例えば、レトロウイルスの生活環に固有であり、それにより単一の感染細胞が多くの子孫ビリオンを生成し、それが発芽して隣接細胞に感染する、プロセスである。一実施形態では、その結果、広い領域が急速に感染するようになり、そのほとんどは、元のウイルス粒子により最初に感染されたものではなかった。一実施形態では、側方に広がることができないウイルスベクターが、生成される。一実施形態では、この特徴は、所望の目的が限局した数の標的細胞のみへと特定の遺伝子を導入することである場合、有用であり得る。
【0198】
様々な方法が、本発明の発現ベクターを細胞に導入するために使用できる。このような方法は、一般に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，分子クローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ），Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９，１９９２）、Ａｕｓｕｂｅｌら，分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９８９），Ｃｈａｎｇら，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，Ｍｉｃｈ．（１９９５），Ｖｅｇａら，遺伝子ターゲティング（Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ Ｍｉｃｈ．（１９９５），Ｖｅｃｔｏｒｓ：分子クローニングベクターの概要及びその使用（Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ），Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ Ｍａｓｓ．（１９８８）及びＧｉｌｂｏａら［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４（６）：５０４－５１２，１９８６］に記載されており、例えば、安定な又は一過性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション及び組換えウイルスベクターによる感染を含む。加えて、ポジティブ－ネガティブ選択方法については、米国特許第５，４６４，７６４号及び同第５，４８７，９９２号を参照されたい。
【0199】
一実施形態では、植物発現ベクターが、使用される。一実施形態では、ポリペプチドコード配列の発現は、多数のプロモーターによって促進される。いくつかの実施形態では、ＣａＭＶの３５Ｓ ＲＮＡ及び１９Ｓ ＲＮＡプロモーターなどのウイルスプロモーター［Ｂｒｉｓｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３１０：５１１－５１４（１９８４）］、又はＴＭＶに対するコートタンパク質プロモーター［Ｔａｋａｍａｔｓｕら，ＥＭＢＯ Ｊ．６：３０７－３１１（１９８７）］が、使用される。別の実施形態では、例えば、ＲＵＢＩＳＣＯの小サブユニット［Ｃｏｒｕｚｚｉら，ＥＭＢＯ Ｊ．３：１６７１－１６８０（１９８４）；及びＢｒｏｇｌｉら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８３８－８４３（１９８４）］又は熱ショックプロモーター、例えば、ダイズｈｓｐ１７．５－Ｅ又はｈｓｐ１７．３－Ｂ［Ｇｕｒｌｅｙら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６：５５９－５６５（１９８６）］などの植物プロモーターが、使用される。一実施形態では、コンストラクトは、Ｔｉプラスミド、Ｒｉプラスミド、植物ウイルスベクター、ダイレクトＤＮＡ形質転換、マイクロインジェクション、エレクトロポレーション及び当業者に周知の他の技術を使用して植物細胞に導入される。例えば、Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ ＆ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ［植物分子生物学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，第ＶＩＩＩ節，ｐｐ４２１－４６３（１９８８）］を参照されたい。当技術分野で周知である昆虫及び哺乳動物宿主細胞系などの他の発現系も、本発明により使用され得る。
【0200】
挿入されるコード配列（ポリペプチドをコードする）の転写及び翻訳に必要なエレメントを含有すること以外に、本発明の発現コンストラクトは、発現されるポリペプチドの安定性、生成、精製、収率又は活性を最適化するように操作された配列も含んでよいことが認識されるであろう。
【0201】
本明細書で使用する場合、用語「約」は、値と組み合わされる場合、基準値のプラスマイナス１０％を指す。例えば、約１０００ナノメートル（ｎｍ）の長さは、１０００ｎｍ±１００ｎｍの長さを指す。
【0202】
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、及び「その」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。そのため、例えば、「ポリヌクレオチド」への言及は、複数のそのようなポリヌクレオチドを含み、「ポリペプチド」への言及は、当業者に公知の１以上のポリペプチド及びその等価物などへの言及を含む。さらに、特許請求の範囲は、いずれの任意のエレメントも除外するように起草され得ることに留意されたい。そのため、この声明は、特許請求の範囲の要素の列挙、又は「否定的な」制限の使用に関連して、「単独で」、「のみ」などの排他的な用語を使用するための先行根拠として機能することを意図する。
【0203】
「Ａ、Ｂ、及びＣなどの少なくとも１つ」に類似する慣例が使用される場合、一般にそのような構成は、当業者が慣例を理解する意味で意図される（例えば、「Ａ、Ｂ、及びＣの少なくとも１つを有するシステム」は、Ａのみ、Ｂのみ、Ｃのみ、ＡとＢの併用、ＡとＣの併用、ＢとＣの併用、及び／又はＡ、Ｂ、とＣの併用などを有するシステムを含むが、これらに限定されない）。明細書、特許請求の範囲、又は図面の中にかかわらず、２以上の代替用語を提示する事実上任意の選言的な単語及び／又は語句は、用語の１つ、用語のいずれか、又は両方の用語を含む可能性を企図すると理解されるべきであることは、当業者ならさらに理解するであろう。例えば、語句「Ａ又はＢ」は、「Ａ」又は「Ｂ」又は「Ａ及びＢ」の可能性を含むと理解されるであろう。
【0204】
本発明の特定の特徴は、明確にするために、別々の実施形態の文脈で説明され、単一の実施形態で組み合わせて提供され得ることが認識される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で説明される本発明の様々な特徴は、別々に又は任意の適切なサブコンビネーションでも提供され得る。本発明に関連する実施形態の全ての組み合わせは、本発明によって具体的に包含され、各々及び全ての組み合わせが個々にかつ明示的に開示されたかのように本明細書に開示される。加えて、様々な実施形態及びその要素の全てのサブコンビネーションも、本発明によって具体的に包含され、そのようなサブコンビネーションの各々及び全てが個々にかつ明示的に本明細書に開示されたかのように本明細書に開示される。
【0205】
本発明のさらなる目的、利点、及び新たな特徴は、限定することを意図するものではない、以下の実施例の検討の際に、当業者に明らかになるであろう。さらに、本明細書の上で描写され、かつ以下の特許請求の範囲の項において請求される本発明の様々な実施形態及び態様の各々は、以下の実施例において実験により支持される。
【0206】
さらに、本明細書の上で描写され、かつ以下の特許請求の範囲の節において請求される本発明の様々な実施形態及び態様は、以下の実施例において実験により支持される。
【0207】
実施例
一般に、本明細書で使用される命名法及び本発明で利用される実験室手順は、分子的、生化学的、微生物学的及び組換えＤＮＡ技術を含む。そのような技術は文献で完全に説明されている。例えば、「分子クローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）」 Ｓａｍｂｒｏｏｋら，（１９８９）；「分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｉ～ＩＩＩ巻、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ.，（編）（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら，「（分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，「分子クローニングの実践ガイド（Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら，「組換えＤＮＡ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ）」，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎら（編） 「ゲノム分析：実験室マニュアルシリーズ（Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ）」，１～４巻，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号；及び同第５，２７２，０５７号に記載の方法論；「細胞生物学：実験室ハンドブック（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ）」，Ｉ～ＩＩＩ巻 Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，（編）（１９９４）；「動物細胞の培養－基本技術のマニュアル（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），第３版；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｉ～ＩＩＩ巻 Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．，（編）（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓら（編），「基礎免疫学及び臨床免疫学（Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」（第８版），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ（編），「タンパク質の精製と特性評価のための戦略－実験コースマニュアル（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ）」 ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたく；これら全ては参照により組み込まれる。他の一般的な参考資料は、この文章全体に提供されている。
一般に、本明細書で使用される命名法及び本発明で利用される実験室手順は、分子的、生化学的、微生物学的及び組換えＤＮＡ技術を含む。そのような技術は文献で完全に説明されている。例えば、「分子クローニング：実験室マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）」 Ｓａｍｂｒｏｏｋら，（１９８９）；「分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｉ～ＩＩＩ巻、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ.，（編）（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌら，「（分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ，「分子クローニングの実践ガイド（Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）」，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎら，「組換えＤＮＡ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ）」，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｉｒｒｅｎら（編） 「ゲノム分析：実験室マニュアルシリーズ（Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ）」，１～４巻，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）；米国特許第４，６６６，８２８号；同第４，６８３，２０２号；同第４，８０１，５３１号；同第５，１９２，６５９号；及び同第５，２７２，０５７号に記載の方法論；「細胞生物学：実験室ハンドブック（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ）」，Ｉ～ＩＩＩ巻 Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．，（編）（１９９４）；「動物細胞の培養－基本技術のマニュアル（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ－Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９４），第３版；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｉ～ＩＩＩ巻 Ｃｏｌｉｇａｎ Ｊ．Ｅ．，（編）（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓら（編），「基礎免疫学及び臨床免疫学（Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」（第８版），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ（１９９４）；Ｍｉｓｈｅｌｌ及びＳｈｉｉｇｉ（編），「タンパク質の精製と特性評価のための戦略－実験コースマニュアル（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ－Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ）」 ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）を参照されたく；これら全ては参照により組み込まれる。他の一般的な参考資料は、この文章全体に提供されている。
【0208】
材料と方法
親和性成熟：結合親和性を改善するために、親抗体を、ファージディスプレイを使用して親和性成熟させた。可変ドメイン領域の重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲを、オリゴヌクレオチド変異誘発を使用して半ランダム化した。選択を、別々の重鎖ファージライブラリーと軽鎖ファージライブラリーを使用して、かつビオチン化Ｈｉｓタグ付きＨＶＥＭ標的の濃度を下げて行って、各ライブラリーから最も親和性の高いバインダーを選択した。４ラウンドの選択の後、個々のクローンを、結合ＥＬＩＳＡにおいてｓｃＦｖ上清としてスクリーニングして、同じアッセイで発現された親ｓｃＦｖよりも高いシグナルを有するリード候補を同定した。同定したヒットを、ＩｇＧに変換し、哺乳類発現ベクター中にクローニングした。適切な親の重鎖又は軽鎖で対を形成させ親和性を向上させた変異体、及び親抗体をコードするプラスミドを、ＨＥＫ ＥＢＮＡ接着細胞（ＬＧＣ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ，Ｔｅｄｄｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）中に小規模で一過的にトランスフェクトした。トランスフェクション後の５日目に、上清を、回収し、Ｏｃｔｅｔ(シリアル番号ＦＢ－３０２０３)で定量化し、Ｂｉａｃｏｒｅシングルサイクルカイネティクスにより分析した。
親和性成熟：結合親和性を改善するために、親抗体を、ファージディスプレイを使用して親和性成熟させた。可変ドメイン領域の重鎖及び／又は軽鎖ＣＤＲを、オリゴヌクレオチド変異誘発を使用して半ランダム化した。選択を、別々の重鎖ファージライブラリーと軽鎖ファージライブラリーを使用して、かつビオチン化Ｈｉｓタグ付きＨＶＥＭ標的の濃度を下げて行って、各ライブラリーから最も親和性の高いバインダーを選択した。４ラウンドの選択の後、個々のクローンを、結合ＥＬＩＳＡにおいてｓｃＦｖ上清としてスクリーニングして、同じアッセイで発現された親ｓｃＦｖよりも高いシグナルを有するリード候補を同定した。同定したヒットを、ＩｇＧに変換し、哺乳類発現ベクター中にクローニングした。適切な親の重鎖又は軽鎖で対を形成させ親和性を向上させた変異体、及び親抗体をコードするプラスミドを、ＨＥＫ ＥＢＮＡ接着細胞（ＬＧＣ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ，Ｔｅｄｄｉｎｇｔｏｎ，ＵＫ）中に小規模で一過的にトランスフェクトした。トランスフェクション後の５日目に、上清を、回収し、Ｏｃｔｅｔ(シリアル番号ＦＢ－３０２０３)で定量化し、Ｂｉａｃｏｒｅシングルサイクルカイネティクスにより分析した。
【0209】
シングルサイクルカイネティクス：親和性成熟ＩｇＧの結合を評価するために、シングルサイクルカイネティクス分析を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００(シリアル番号１９０９９１３)を使用して上清について行った。カイネティクス実験を、２５℃で稼働するＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００にてコントロールソフトウェアＶ２.０．１及び評価ソフトウェアＶ３．０（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＳＡ）を用いて行った。抗体を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含有するＨＢＳ－Ｐ＋（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＳＡ）で、最終濃度１．０μｇ／ｍｌに希釈した。抗体を、プロテインＡ捕捉センサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＳＡ）のＦｃ２、Ｆｃ３及びＦｃ４上にロードした。ＩｇＧを、１０μｌ／分の流速で捕捉して、約５０ＲＵの固定化レベル（ＲＬ）を得た。表面を次いで、安定化させた。シングルサイクルカイネティクスデータを、４０μＬ／分の流速で分析物としてＨｉｓタグ付きＨＶＥＭ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｎｅｗａｒｋ，ＵＳＡ）を用いて取得した。各濃度間で再生なしに、６．１２５ｎＭ～１００ｎＭの範囲の２倍希釈Ｈｉｓタグ付き抗原を、使用した。
【0210】
マルチサイクルカイネティクス：マルチサイクルカイネティクス分析を、精製抗体にて行った。カイネティクス実験を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋにて、２５℃で行った。ＨＢＳ－Ｐ＋ ０．１％ ＢＳＡ（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＳＡ）を、ランニング緩衝液として使用した。精製抗体を、ランニング緩衝液で１．０μｇ／ｍＬに希釈し、各サイクルの開始時に、プロテインＡセンサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＵＳＡ）のＦｃ２、Ｆｃ３、及びＦｃ４上にロードした。抗体を、１０μｌ／分の流速で捕捉して、約１００ＲＵの固定化レベル（ＲＬ）を得た。表面を次いで、安定化させた。マルチサイクルカイネティクスデータを、５０μｌ／分の流速で注入される分析物としてＨｉｓタグ付きヒトＨＶＥＭを使用して取得した。０．７８ｎＭ～１００ｎＭの範囲で８点の２倍希釈抗原を、ランニング緩衝液中で調製した。各濃度について、会合相を、１８０秒間モニターし、解離相を、３００秒間測定した。センサーチップ表面の再生を、１０ｍＭのＧｌｙｃｉｎｅ－ＨＣｌ、ｐＨ１．５の２回の注入を使用してサイクル間で実施した。
【0211】
細胞傷害性アッセイ：核ＲＦＰ染色した黒色腫細胞を、一晩のインキュベーションのために播種して、それらを付着させた。次いで、黒色腫細胞を、２０μｇ／ｍｌの本発明の親ｍＡｂ又は親和性成熟ｍＡｂ又はｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体(Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ)とプレインキュベートし、ＴＩＬを、２０μｇ／ｍｌの抗ＰＤ１ ｍＡｂ（ニボルマブ、ＢＭＳ）又はｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｆｒａｎｃｅ）と又はそれらを含まずプレインキュベートした。プレインキュベートしたＴＩＬ又は抗ＰＤ１又はｈＩｇＧ４アイソタイプ対照ｍＡｂのみを有する培地を、ＣｅｌｌＥｖｅｎｔカスパーゼ－３／７緑色検出試薬（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、ＵＳＡ）と共に黒色腫細胞に添加した。プレートを、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＺＯＯＭシステム（ＥＳＳＥＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＵＳＡ）に入れ、１時間ごとにスキャンした。黒色腫の特異的殺傷を反映する、カスパーゼ３／７陽性事象を、計数した。
【0212】
Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＺＯＯＭシステムによるＴ細胞活性化アッセイ：核ＲＦＰ染色黒色腫細胞を、一晩のインキュベーションのために播種して、それらを付着させた。一晩インキュベーションした後に、黒色腫細胞を、２０μｇ／ｍｌの本発明のｍＡｂ、親ｍＡｂ又はｈＩｇＧ４アイソタイプ対照と３７℃で１時間インキュベートした。次いで、ＴＩＬ又は培地を、コンジュゲートＣＤ１０７ａ抗体と共に黒色腫細胞に添加した。プレートを、Ｉｎｃｕｃｙｔｅ ＺＯＯＭシステムに入れ、１時間ごとにスキャンした。
【0213】
実施例１：抗ＨＶＥＭ抗体の親和性成熟
ＷＯ２０２０２２２２３５のリード抗体は、配列番号９で提供される重鎖と、配列番号１０で提供される軽鎖からなった。ＣＤＲは、Ｓ２２８Ｐ変異を保有するＩｇＧ４骨格を含むヒト骨格に存在した。この抗体は、ヒトＨＶＥＭ、並びにマウス及びカニクイザルＨＶＥＭに結合し、かつ溶液中及び細胞表面上のタンパク質を結合できた。抗体は、ＨＶＥＭへのＢＴＬＡの結合を阻害したが、ＨＶＥＭへのＬＩＧＨＴの結合を阻害しなかった。さらに、抗体自体は、低レベルの活性化効果を有し、その結合によりＨＶＥＭを介してシグナル伝達を誘導した。最も重要なことに、抗体は、癌に対する免疫細胞の細胞傷害性を増強し、かつ非自己免疫細胞の細胞傷害性を高めることができ、したがって標準的な養子免疫細胞療法を強化できた。
ＷＯ２０２０２２２２３５のリード抗体は、配列番号９で提供される重鎖と、配列番号１０で提供される軽鎖からなった。ＣＤＲは、Ｓ２２８Ｐ変異を保有するＩｇＧ４骨格を含むヒト骨格に存在した。この抗体は、ヒトＨＶＥＭ、並びにマウス及びカニクイザルＨＶＥＭに結合し、かつ溶液中及び細胞表面上のタンパク質を結合できた。抗体は、ＨＶＥＭへのＢＴＬＡの結合を阻害したが、ＨＶＥＭへのＬＩＧＨＴの結合を阻害しなかった。さらに、抗体自体は、低レベルの活性化効果を有し、その結合によりＨＶＥＭを介してシグナル伝達を誘導した。最も重要なことに、抗体は、癌に対する免疫細胞の細胞傷害性を増強し、かつ非自己免疫細胞の細胞傷害性を高めることができ、したがって標準的な養子免疫細胞療法を強化できた。
【0214】
この抗体の機能を改善するために、親和性成熟手順を、抗体のＣＤＲ領域に対し行った。親和性成熟は、親和性を改善し、免疫原性を低下させ、構造における傾向を克服し、かつ上記の任意の組み合わせを行うことが知られている。
【0215】
親和性成熟を、ＶＨ及びＶＬのＣＤＲ領域にて行った。生成したクローンを、配列決定し、ＨＶＥＭ細胞外ドメインペプチドに対するそれらのＫＤについてアッセイした。親抗体で観察されるＫＤに対する改善倍数を、表２に提示する。親和性成熟クローンは、親抗体と比較して増強された結合を示し、それらの優位性を示した。様々な変異型ＣＤＲを組み合わせて、改善されたＣＤＲを組み合わせた抗体を作成する。これらの組み合わせ抗体の結合親和性を、評価する。
【0216】
Ｈ４抗体は、親抗体と比較して最高の改善を有することが判明した（９．５７倍の増加）。しかし、このＣＤＲ２は、最終抗体ではグリコシル化されていることが判明したＮ結合グリコシル化部位（ＮＸＳ／Ｔグリコシル化部位）を含有する（図１）。グリコシル化は、抗体のバッチ生成にばらつきをもたらし、機能に影響を与える可能性がある。したがって、いくつかの変異体を、特異的に作製し、そこで５５位のアスパラギン又は５７位のスレオニンを異なるアミノ酸に変異させた。予想通り、Ｈ４のこれらの変異体は、もはやグリコシル化されなかった（図１）。特に、これらの抗体の２つＴ５７Ａ及びＴ５７Ｎは、非修飾Ｈ４よりもさらに優れた結合（親と比較して２０．６６及び２３．５１倍の増加）を有した。
【0217】
表２：ＨＶＥＭへの抗体結合のＫＤ評価
【表2】
【0218】
実施例２：親和性成熟抗体のさらなる特性評価
新たに作製した抗体を、それらの機能性をさらに評価するために親抗体と比較した。プレートを、４℃で一晩インキュベートすることにより、タンパク質なしでコートするか、又はＰＢＳ中で希釈した２．５μｇ／ｍｌのヒト組換えＨＶＥＭ（ｈＨＶＥＭ）でコートした。プレートを、洗浄し、室温で１時間、２％ＢＳＡでブロックし、再度洗浄した。次に、４つの抗体：アイソタイプ対照、親、Ｈ４及びＰａｒ－Ｋ６４Ｅを、プレートへの結合について別々に試験した。抗体を、ブロッキング緩衝液中で１０μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、室温で１時間インキュベートした。プレートを次いで、洗浄し、ペルオキシダーゼ及び抗ヒトＦｃと共に室温で３０分間インキュベートした。再度洗浄した後、ＴＭＢを、停止液と共に添加した。吸光度を、４５０ｎｍ及び５７０ｎｍで読み取った。改変された抗体の両方は、親抗体より優れた結合を示した（図２）。実際に、Ｈ４は、大幅に増強された結合を示し、明らかに優れたオプションである。
新たに作製した抗体を、それらの機能性をさらに評価するために親抗体と比較した。プレートを、４℃で一晩インキュベートすることにより、タンパク質なしでコートするか、又はＰＢＳ中で希釈した２．５μｇ／ｍｌのヒト組換えＨＶＥＭ（ｈＨＶＥＭ）でコートした。プレートを、洗浄し、室温で１時間、２％ＢＳＡでブロックし、再度洗浄した。次に、４つの抗体：アイソタイプ対照、親、Ｈ４及びＰａｒ－Ｋ６４Ｅを、プレートへの結合について別々に試験した。抗体を、ブロッキング緩衝液中で１０μｇ／ｍｌの濃度に希釈し、室温で１時間インキュベートした。プレートを次いで、洗浄し、ペルオキシダーゼ及び抗ヒトＦｃと共に室温で３０分間インキュベートした。再度洗浄した後、ＴＭＢを、停止液と共に添加した。吸光度を、４５０ｎｍ及び５７０ｎｍで読み取った。改変された抗体の両方は、親抗体より優れた結合を示した（図２）。実際に、Ｈ４は、大幅に増強された結合を示し、明らかに優れたオプションである。
【0219】
実施例３：Ｈ４抗体及びＨ４誘導体抗体の特性評価
最高のＨＶＥＭ結合を示したＨ４抗体、特に推定グリコシル化部位（ＮＲＴ）を除去した変異体を用いて進めることを、決定した。最初に、マルチサイクルカイネティクスＢｉａｃｏｒｅ親和性アッセイを実施して、Ｈ４、Ｔ５７Ａ、Ｔ５７Ｇ及びＴ５７Ｎ抗体の改善された結合を確認した（図３Ａ）。精製した各抗体を、漸増濃度の抗原（ｈＨＶＥＭ）を注入する前にプロテインＡセンサーチップに捕捉させた。親和性の改善倍数を、親抗体の平均ＫＤを各変異体抗体の平均ＫＤで割ることにより計算した。ＫＤ値及び改善倍数を、表３に要約する。見てわかるように、Ｈ４抗体は確かに、親抗体よりも優れており、Ｔ５７Ａ及びＴ５７Ｎ変異体の両方は、Ｈ４よりもさらに優れたバインダーである。シングルサイクルカイネティクスＢｉａｃｏｒｅアッセイをまた、Ｈ４ Ｎ５５Ｇ、Ｈ４ Ｎ５５Ｓ、Ｈ４ Ｎ５５Ｄ、Ｈ４ Ｎ５５Ｑ、Ｈ４ Ｎ５５Ｅ、及びＨ４ Ｔ５７Ｅ抗体を使用して実施した（図３Ｂ）。これらの抗体についてのＫＤ値及び改善倍数を、表４に要約する。これらの抗体もまた、親抗体よりも優れていることが判明した。
最高のＨＶＥＭ結合を示したＨ４抗体、特に推定グリコシル化部位（ＮＲＴ）を除去した変異体を用いて進めることを、決定した。最初に、マルチサイクルカイネティクスＢｉａｃｏｒｅ親和性アッセイを実施して、Ｈ４、Ｔ５７Ａ、Ｔ５７Ｇ及びＴ５７Ｎ抗体の改善された結合を確認した（図３Ａ）。精製した各抗体を、漸増濃度の抗原（ｈＨＶＥＭ）を注入する前にプロテインＡセンサーチップに捕捉させた。親和性の改善倍数を、親抗体の平均ＫＤを各変異体抗体の平均ＫＤで割ることにより計算した。ＫＤ値及び改善倍数を、表３に要約する。見てわかるように、Ｈ４抗体は確かに、親抗体よりも優れており、Ｔ５７Ａ及びＴ５７Ｎ変異体の両方は、Ｈ４よりもさらに優れたバインダーである。シングルサイクルカイネティクスＢｉａｃｏｒｅアッセイをまた、Ｈ４ Ｎ５５Ｇ、Ｈ４ Ｎ５５Ｓ、Ｈ４ Ｎ５５Ｄ、Ｈ４ Ｎ５５Ｑ、Ｈ４ Ｎ５５Ｅ、及びＨ４ Ｔ５７Ｅ抗体を使用して実施した（図３Ｂ）。これらの抗体についてのＫＤ値及び改善倍数を、表４に要約する。これらの抗体もまた、親抗体よりも優れていることが判明した。
【0220】
表３：マルチサイクルカイネティクスＢｉａｃｏｒｅ結合アッセイ
【表3】
【0221】
表４：シングルサイクルカイネティクスＢｉａｃｏｒｅ結合アッセイ
【表4】
【0222】
次に、細胞の表面上のＨＶＥＭへの結合を、調べた。ＣＨＯ－Ｋ１細胞を、ヒトＨＶＥＭ（ｈＨＶＥＭ）を過剰発現するように作製した。細胞を次いで、２０μｇ／ｍｌの抗体と氷上で１時間インキュベートし、次いで抗ヒトＩｇＧ Ｆｃビオチン及び抗ビオチンＦＩＴＣで染色した。発現を、フローサイトメトリーにより解析した。４つの抗体全てが、ｈＨＶＥＭに結合でき、重要なことに表面発現を検出した（図３Ｃ）。このような高濃度（２０μｇ／ｍｌ）は親抗体と親和性成熟抗体の間の結合における違いを隠すと仮定し、それにより結合を、様々な抗体濃度で親抗体とＴ５７Ａ抗体の間で比較した。Ｔ５７Ａ抗体は、確かに親より強く、より低い濃度で結合することが判明し、それが、表面ｈＨＶＥＭの優れたバインダーであることを示す（図３Ｄ）。
【0223】
次に、ＢＴＬＡとの相互作用を阻止する抗体の能力を、評価した。この目的のために、結合ＥＬＩＳＡシステムを、設定した。プレートを、４℃で一晩、ＰＢＳで希釈した２．５μｇ／ｍｌの組換えｈＨＶＥＭでコートした。プレートを、洗浄し、室温で１時間、２％ＢＳＡでブロックした。様々な抗体及びアイソタイプ対照を、ブロッキング緩衝液で１０μｇ／ｍｌの濃度に希釈した。最初に、この系における結合を、評価した。抗体を、室温で１時間インキュベートし、続いて洗浄し、ペルオキシダーゼ抗ヒトＦＣと室温で３０分間さらにインキュベートした。最後に、さらに洗浄した後、ＴＭＢを、添加し、続いて停止液を添加した。最後に、吸光度を、４５０ｎｍ及び５７０ｎｍにて読み取った。
【0224】
図４Ａに見られるように、４つの抗体全てが、この設定でｈＨＶＥＭを結合する。さらに、４つの抗体全ては、ｈＢＴＬＡとｈＨＶＥＭの相互作用を阻止することが判明し（図４Ｂ）、ｈＬＩＧＨＴとの相互作用を実質的に阻止しなかった（図４Ｃ）（ｈＢＴＬＡ－Ｆｃ及びｈＬＩＧＨＴ－Ｈｉｓ並びに抗ＢＴＬＡビオチン又は抗ＬＩＧＨＴをそれぞれ使用して実施したアッセイ）。同様の結果が、元のＨ４抗体及びＰａｒ－Ｋ６４Ｅ抗体についても見られた（図４Ｄ～４Ｅ）。興味深いことに、サルＨＶＥＭ（ｃＨＶＥＭ）を評価したところ、全ての試験された抗体は、組換えタンパク質への結合を示した（図４Ｆ）が、親抗体は、ｃＨＶＥＭ－ｃＢＴＬＡ相互作用の阻止に乏しく、全ての親和性成熟抗体は、より優れた阻止を示した（図４Ｇ）。
【0225】
親抗体及び親和性成熟抗体の間のＢＴＬＡ阻止における類似性は、高い抗体濃度によるものであると仮定した。そのため、ｈＨＶＥＭ及びｈＢＴＬＡ相互作用の阻止のＩＣ５０を、親抗体及びＨ４ Ｔ５７Ａ抗体の段階希釈によって計算した。図４Ｈに見られるように、親和性成熟変異体は実際に、親と比較してｈＢＴＬＡの優れたブロッカーであった。ＩＣ５０を、他の変異体抗体について段階希釈により計算し、同様の結果が、他の親和性成熟抗体についても観察される。
【0226】
実施例４：Ｈ４抗体及びＨ４誘導体抗体の機能評価
ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ Ｔ細胞阻害軸を緩和することは、Ｔ細胞による癌細胞殺傷を促進する。親和性成熟抗体の細胞傷害性効果を試験するために、ＲＦＰ陽性黒色腫細胞（ＨＶＥＭ陽性）を、一晩培養し、次いで抗ＨＶＥＭ抗体（２０μｇ／ｍｌ）と３７℃で１時間インキュベートした。その時間の終わりに、自己腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を、黒色腫細胞に添加し、細胞死事象を、１時間ごとにＣｅｌｌＥｖｅｎｔカスパーゼ３／７検出試薬及びＩｎｃｕｃｙｔｅ ＺＯＯＭシステムスキャニングを使用して計数した。９時間の共培養後、親抗体は、アイソタイプ対照と比較して、癌細胞において特異的殺傷事象を９％増加させた（図５Ａ）。Ｈ４－Ｔ５７Ｎ変異体は親と同様の殺傷を示した（９％増加）が、Ｔ５７ＡとＴ５７Ｇ抗体の両方は、著しく多くの殺傷事象（１９％増加、ｐ＜０．０１）を示し、優れた細胞傷害性効果を示した（図５Ａ）。
ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ Ｔ細胞阻害軸を緩和することは、Ｔ細胞による癌細胞殺傷を促進する。親和性成熟抗体の細胞傷害性効果を試験するために、ＲＦＰ陽性黒色腫細胞（ＨＶＥＭ陽性）を、一晩培養し、次いで抗ＨＶＥＭ抗体（２０μｇ／ｍｌ）と３７℃で１時間インキュベートした。その時間の終わりに、自己腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を、黒色腫細胞に添加し、細胞死事象を、１時間ごとにＣｅｌｌＥｖｅｎｔカスパーゼ３／７検出試薬及びＩｎｃｕｃｙｔｅ ＺＯＯＭシステムスキャニングを使用して計数した。９時間の共培養後、親抗体は、アイソタイプ対照と比較して、癌細胞において特異的殺傷事象を９％増加させた（図５Ａ）。Ｈ４－Ｔ５７Ｎ変異体は親と同様の殺傷を示した（９％増加）が、Ｔ５７ＡとＴ５７Ｇ抗体の両方は、著しく多くの殺傷事象（１９％増加、ｐ＜０．０１）を示し、優れた細胞傷害性効果を示した（図５Ａ）。
【0227】
Ｔ５７Ａ変異体はグリコシル化部位を欠き、Ｈ４の２倍以上強くｈＨＶＥＭに結合すること（Ｔ５７Ｇと比較しても優れた結合）が判明し、かつ親と比較して増加された割合で細胞殺傷を誘導すること（Ｔ５７Ｎと比較しても優れた殺傷）が判明したので、この変異体抗体を、全てのさらなる試験のために選択した。
【0228】
親抗体が抗ＰＤ－１媒介Ｔ細胞活性化を増強し、かつそれにより癌細胞殺傷を増強できることが、知られている。したがって、上記の殺傷アッセイを、抗ＰＤ－１抗体の存在下でも実施した。再び、Ｈ４ Ｔ５７Ａ抗体は親抗体よりも優れていることが判明し、親の増加がわずか４４％なのに対し、アイソタイプ対照と比較して特異的細胞殺傷を６４％増加させた（図５Ｂ）。抗ＰＤ－１抗体の存在下での特異的殺傷を、他の親和性成熟抗体についても測定し、同様の優位性が、観察される。
【0229】
抗ＨＶＥＭ抗体によって引き起こされるＴＩＬにおける活性化をより良好に定量化するために、活性化マーカーＣＤ１０７ａを、アイソタイプ対照、親抗ＨＶＥＭ抗体又はＨ４ Ｔ５７Ａ変異体抗体の存在下で黒色腫細胞と共培養してこれらの細胞において測定した。両方の抗ＨＶＥＭ抗体は、アイソタイプ対照と比較してより多くのＣＤ１０７ａ陽性細胞を生成したが、親和性成熟抗体は、著しく多くの活性化細胞を生成した（図６Ａ）。第２の黒色腫細胞株を試験すると、同じ傾向が、しかし変異体抗体と親抗体の間にさらに大きな差を有して観察された（図６Ｂ）。ＣＤ１０７ａレベルによって評価される活性化をまた、他の親和性成熟抗体の存在下でも測定し、類似の優位性が、観察される。
【0230】
最後に、エクスビボ殺傷アッセイも、細胞株にて実施したのと同様の方法で初代癌細胞を用いて実施した。卵巣癌から新たに単離した細胞を、アイソタイプ対照、抗ＰＤ１抗体、親ｍＡｂ又はＨ４ Ｔ５７Ａ変異体抗体の存在下で自己ＰＢＭＣと共培養した。特異的癌細胞殺傷を、５５時間にわたってモニターした。抗ＰＤ－１抗体は、アイソタイプ対照と比較して非常に軽微な改善（５５時間で９％の改善）をもたらしたのに対し、親抗体は、４８％の改善をもたらし、Ｈ４ Ｔ５７Ａ抗体は、６８％の改善をもたらした（図７Ａ）。これもまた、親和性成熟抗体の優位性を実証する。細胞殺傷は親抗体との共培養ではほぼ横ばいであったが、着実かつ継続的な増加が、変異体抗体で観察された。同じアッセイを実施したが、抗ＰＤ－１を親抗体及び変異体抗体と組み合わせて用いた。以前と同様に、抗ＰＤ－１の含有は、親抗体と変異体の違いを高めた。抗ＰＤ－１と親抗体の組み合わせは、抗ＰＤ－１及びアイソタイプ対照と比較して特異的殺傷にわずかな増加しか生じなかった（５５時間で１３％の増加）が、抗ＰＤ－１とＨ４ Ｔ５７Ａ抗体の組み合わせは、７９％の強力な増加を生じた（図７Ｂ）。そのため、変異体抗体は、親抗体と比較して、単独でも、かつ抗ＰＤ－１と組み合わせても、優れた治療効果を有することが明らかである。
【0231】
本発明の他の親和性成熟抗体もまた、上と同様の方法で試験される。親抗体と比較して改善された結合及び有効性を示す、同様の結果が、観察される。
【0232】
加えて、ヒトＨＶＥＭを発現するマウス癌細胞を、ヒトＢＴＬＡを発現するトランスジェニック免疫コンピテントマウスに移植し、増殖させて腫瘍を形成させる。親和性成熟抗体、抗ＰＤ－１抗体、それらの組み合わせ又はＩｇＧアイソタイプ対照を、投与する。腫瘍増殖阻害を、測定する。新しい抗体は、親よりも優れており、癌の成長を阻害する点で少なくともＰＤ－１単独に匹敵すると見出される。さらに、新しい抗体は、抗ＰＤ－１との高められた相乗効果を生じた。
【0233】
実施例５：変異体抗体の診断的及び実験室での使用
Ｈ４抗体及びその誘導体は組換えＨＶＥＭ及び細胞表面上に結合したＨＶＥＭに対する優れたバインダーであることが判明したので、親和性成熟抗体を、ＨＶＥＭの臨床評価並びに実験室での染色／検出に使用できると仮定した。ｈＨＶＥＭを過剰発現するＣＨＯ細胞のホルマリン固定パラフィン包埋(ＦＦＰＥ)細胞ブロックを、スライスし、免疫蛍光検出のためにスライドにマウントした。親抗体及びＨ４ Ｔ５７Ａ抗体を、Ｃｙ３（赤色シグナル）二次抗体と共に使用した。顕著により陽性に染色された細胞とより強い染色が、変異体抗体を使用した場合に観察され、それが診断／検査目的のためにも優れた抗体であることを示している（図８）。
Ｈ４抗体及びその誘導体は組換えＨＶＥＭ及び細胞表面上に結合したＨＶＥＭに対する優れたバインダーであることが判明したので、親和性成熟抗体を、ＨＶＥＭの臨床評価並びに実験室での染色／検出に使用できると仮定した。ｈＨＶＥＭを過剰発現するＣＨＯ細胞のホルマリン固定パラフィン包埋(ＦＦＰＥ)細胞ブロックを、スライスし、免疫蛍光検出のためにスライドにマウントした。親抗体及びＨ４ Ｔ５７Ａ抗体を、Ｃｙ３（赤色シグナル）二次抗体と共に使用した。顕著により陽性に染色された細胞とより強い染色が、変異体抗体を使用した場合に観察され、それが診断／検査目的のためにも優れた抗体であることを示している（図８）。
【0234】
本発明をその特定の実施形態と併せて説明してきたが、多くの代替、修正及び変形が当業者には明らかであろうことは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨及び広い範囲に含まれる全てのそのような代替、修正及び変形を包含することが意図される。
【図1】
【図2】
【図3A-1】
【図3A-2】
【図3B-1】
【図3B-2】
【図3B-3】
【図3C】
【図3D】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図4D】
【図4E】
【図4F】
【図4G】
【図4H】
【図5A】
【図5B】
【図6A】
【図6B】
【図7A】
【図7B】
【図8】
【手続補正書】
【提出日】2023-12-14
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】