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▶ セラニーズ・イーブイエイ・パフォーマンス・ポリマーズ・エルエルシーの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-01
(54)【発明の名称】核酸カプセル化粒子の送達用埋め込み型医療デバイス
(51)【国際特許分類】
A61K 9/00 20060101AFI20240325BHJP
A61K 47/32 20060101ALI20240325BHJP
A61K 31/7088 20060101ALI20240325BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240325BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20240325BHJP
A61K 47/36 20060101ALI20240325BHJP
A61K 47/44 20170101ALI20240325BHJP
A61K 47/24 20060101ALI20240325BHJP
A61K 47/28 20060101ALI20240325BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240325BHJP
A61K 47/38 20060101ALI20240325BHJP
A61K 47/34 20170101ALI20240325BHJP
A61P 17/00 20060101ALI20240325BHJP
【ＦＩ】
A61K9/00
A61K47/32
A61K31/7088
A61K48/00
A61K47/42
A61K47/36
A61K47/44
A61K47/24
A61K47/28
A61K39/395 D
A61K39/395 N
A61K47/38
A61K47/34
A61P17/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023560309
(86)(22)【出願日】2022-03-29
(85)【翻訳文提出日】2023-11-10
(86)【国際出願番号】 US2022022239
(87)【国際公開番号】W WO2022212300
(87)【国際公開日】2022-10-06
(31)【優先権主張番号】63/167,718
(32)【優先日】2021-03-30
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/179,627
(32)【優先日】2021-04-26
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520433115
【氏名又は名称】セラニーズ・イーブイエイ・パフォーマンス・ポリマーズ・エルエルシー
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100196243
【弁理士】
【氏名又は名称】運 敬太
(72)【発明者】
【氏名】ヘイリー，ジェフリー・シー
(72)【発明者】
【氏名】ギャナニ，ビジャイ
(72)【発明者】
【氏名】ウィルソン，ブライアン・ディー
(72)【発明者】
【氏名】パテル，ハーシュ
(72)【発明者】
【氏名】デバナサン，ナーシ
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076AA99
4C076BB32
4C076BB40
4C076CC18
4C076CC29
4C076DD41
4C076DD63
4C076DD66
4C076DD70
4C076EE06
4C076EE07
4C076EE16
4C076EE24
4C076EE27
4C076EE30
4C076EE32
4C076EE36
4C076EE37
4C076EE41
4C076EE43
4C076EE51
4C076FF65
4C084AA13
4C084MA34
4C084MA67
4C084NA03
4C084ZA89
4C085AA13
4C085AA14
4C085BB11
4C085EE01
4C085EE05
4C085GG10
4C086AA01
4C086EA16
4C086MA02
4C086MA05
4C086MA34
4C086MA67
4C086NA03
4C086ZA89
(57)【要約】
埋め込み型医療デバイスが提供される。デバイスは薬剤放出層を含み、薬剤放出層は、ポリマーマトリックス内に分散された粒子を含有する。脂質粒子は、担体（例えば、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ポリマーなど）を含有し、かつ核酸をカプセル化する担体成分を含み、ポリマーマトリックスは、エチレン酢酸ビニルコポリマーを含む。エチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度の担体の溶融温度に対する比は、約２℃／℃以下である。
【選択図】図１
【選択図】図１
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ポリマーマトリックス内に分散された粒子を含む埋め込み型医療デバイスであって、前記粒子が、担体を含有し、かつ核酸をカプセル化する担体成分を含み、前記ポリマーマトリックスが、エチレン酢酸ビニルコポリマーを含み、前記エチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度の前記担体の溶融温度に対する比が、約２℃／℃以下である、埋め込み型医療デバイス。
【請求項2】
前記ポリマーマトリックスの前記粒子に対する重量比が、約１～約１０である、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項3】
前記エチレン酢酸ビニルコポリマーが、ＡＳＴＭ Ｄ３４１８－１５に従って決定すると、約２０℃～約１００℃の溶融温度を有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項4】
前記担体が約２５℃～約１０５℃の溶融温度を有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項5】
前記担体成分が約２５℃～約１０５℃の溶融温度を有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項6】
前記エチレン酢酸ビニルコポリマーが、前記ポリマーマトリックスの全ポリマー含有量を構成する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項7】
前記ポリマーマトリックスが可塑剤を更に含む、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項8】
前記ポリマーマトリックスが疎水性ポリマーを更に含む、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項9】
前記ポリマーマトリックスが、第１のエチレン酢酸ビニルコポリマーおよび第２のエチレン酢酸ビニルコポリマーを含む、請求項８に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項10】
前記コポリマーの酢酸ビニル含有量が約１０ｗｔ％～約６０ｗｔ％である、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項11】
前記エチレン酢酸ビニルコポリマー（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｖｉｎｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｐｏｌｙｍｅｒ）が、１９０℃の温度および２．１６キログラムの荷重でＡＳＴＭ Ｄ１２３８－２０に従って決定すると、１０分あたり約０．２～約１００グラムのメルトフローインデックスを有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項12】
前記核酸がリボ核酸を含む、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項13】
前記リボ核酸がｍＲＮＡを含む、請求項１２に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項14】
前記ｍＲＮＡが、少なくとも１個の抗原ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１個のリボ核酸ポリヌクレオチドを含有する治療用ｍＲＮＡを含む、請求項１３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項15】
前記担体成分の前記核酸に対するモル比が、約２：１～約５０：１である、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項16】
前記担体が、ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ポリマー、またはこれらの組み合わせである、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項17】
前記担体が脂質である、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項18】
前記粒子が、リン脂質を含む脂質成分を含有する脂質小胞である、請求項１７に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項19】
前記リン脂質がアルキルホスホコリンを含む、請求項１８に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項20】
前記脂質成分が、構造脂質、ＰＥＧコンジュゲート脂質、またはこれらの組み合わせを更に含む、請求項１８に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項21】
前記粒子が、脂質成分を含有する固体脂質粒子である、請求項１７に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項22】
前記脂質成分が陽イオン性脂質を含む、請求項２１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項23】
前記脂質成分が、ヘルパー脂質、構造脂質、ＰＥＧコンジュゲート脂質、またはこれらの組み合わせを更に含む、請求項２２に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項24】
前記ヘルパー脂質が、炭素が少なくとも８個の脂肪酸鎖を有する脂肪酸を含む、請求項２３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項25】
前記ヘルパー脂質が、リン脂質部分および任意選択で脂肪酸部分を有するリン脂質を含む、請求項２３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項26】
前記構造脂質がステロールを含む、請求項２３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項27】
前記固体粒子が約１０～約１，０００ナノメートルの平均直径を有する、請求項２１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項28】
前記デバイスが全体的に円形の断面形状を有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項29】
前記デバイスが約０．５～約５０ミリメートルの直径を有する、請求項２８に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項30】
前記デバイスが円筒の形態である、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項31】
前記デバイスがディスクの形態である、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項32】
薬剤放出層がリボ核酸分解阻害剤を更に含む、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項33】
前記リボ核酸阻害剤が抗リボヌクレアーゼ抗体を含む、請求項３２に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項34】
前記リボ核酸阻害剤がキレート剤を含む、請求項３２に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項35】
薬剤放出層が細胞透過性向上剤を更に含む、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項36】
前記ポリマーマトリックスが親水性化合物も含有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項37】
前記親水性化合物が親水性ポリマーを含む、請求項３６に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項38】
前記親水性ポリマーが、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウムもしくはアルギン酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース、寒天、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリアルキレングリコール、コラーゲン、ペクチン、キチン、キトサン、ポリ－１－カプロラクトン、ポリビニルピロリドン、ポリ（ビニルピロリドン－ｃｏ－酢酸ビニル）、多糖、親水性ポリウレタン、ポリヒドロキシアクリレート、デキストラン、キサンタン、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、タンパク質、エチレンビニルアルコールコポリマー、水溶性ポリシラン、水溶性シリコーン、水溶性ポリウレタン、またはこれらの組み合わせを含む、請求項３７に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項39】
前記デバイスが薬剤放出層を含み、前記薬剤放出層が前記粒子および前記ポリマーマトリックスを含有する、請求項１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項40】
前記粒子が、前記薬剤放出層の約１ｗｔ％～約６０ｗｔ％を構成し、前記ポリマーマトリックスが、前記薬剤放出層の約４０ｗｔ％～約９９ｗｔ％を構成する、請求項３９に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項41】
前記薬剤放出層の外表面に隣接して位置する膜層を更に含む、請求項３９に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項42】
担体を含有し、かつ核酸をカプセル化する担体成分を含む粒子を、前記膜層が含まない、請求項４１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項43】
前記膜層が、疎水性ポリマーを含む膜ポリマーマトリックスを含む、請求項４１に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項44】
前記疎水性ポリマーがエチレン酢酸ビニルコポリマーを含む、請求項４３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項45】
前記膜ポリマーマトリックスが、全体的に疎水性ポリマーから形成される、請求項４３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項46】
前記膜ポリマーマトリックスが親水性化合物も含有する、請求項４３に記載の埋め込み型医療デバイス。
【請求項47】
請求項１に記載の埋め込み型医療デバイスを形成する方法であって、前記粒子および前記ポリマーマトリックスを押出機内で溶融ブレンドするステップを含む方法。
【請求項48】
溶融ブレンドするステップが約３０℃～約１００℃の温度で発生する、請求項４７に記載の方法。
【請求項49】
前記押出機が、長さおよび直径を有する回転可能なスクリューを含み、前記長さの前記直径に対する比が約１０～約５０である、請求項４７に記載の方法。
【請求項50】
患者の状態、疾患および／または美容状態を抑制および／または治療する方法であって、請求項１に記載のデバイスを患者の皮下に埋め込むステップを含む方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
[0001]本出願は、２０２１年３月３０日の出願日を有する米国特許仮出願第６３／１６７，７１８号および２０２１年４月２６日の出願日を有する米国特許仮出願第６３／１７９，６２７号の出願の利益を主張し、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
[0001]本出願は、２０２１年３月３０日の出願日を有する米国特許仮出願第６３／１６７，７１８号および２０２１年４月２６日の出願日を有する米国特許仮出願第６３／１７９，６２７号の出願の利益を主張し、これらは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【0002】
[0002]核酸、例えば、ｍＲＮＡおよびｓｉＲＮＡは、近年、相当量の遺伝子療法治療、例えば、癌治療、ワクチンなどの焦点になってきた。例えば、ＤＮＡと比較して、リボ核酸（例えば、ＲＮＡ）は、トランスフェクトされた細胞のゲノムに安定して統合されず、故に、導入された遺伝子材料が必須遺伝子の正常な機能を破壊する懸念を排除する。外来プロモーター配列もコード化タンパク質の有効な翻訳にとって必要ではなく、ここでも有害な副作用の可能性を回避する。しかし、リボ核酸遺伝子療法の１つの問題は、とりわけ、細胞の細胞質に到達し、分解酵素に曝露された場合、ＤＮＡより安定性がかなり低いことである。例えば、ｍＲＮＡの糖部分における第２炭素のヒドロキシル基の存在は、ｍＲＮＡがより安定したＤＮＡ二重らせん構造を形成することを妨げる立体障害を引き起こし、故に、ｍＲＮＡが加水分解的な分解を被りやすくする。上記を考慮して、リボ核酸は一般に、細胞外ＲＮアーゼ分解から保護し、同時に細胞取り込みおよびエンドソーム脱出を促進するために脂質粒子（例えば、リポソーム、固体脂質粒子など）にカプセル化される。しかし残念ながら、それでも多くの用途における使用に問題が残存している。例えば、核酸カプセル化脂質粒子を持続的な期間にわたって制御的に送達することが困難である。この困難さの１つの理由は、粒子に用いられる脂質が比較的低い融点を有する傾向があることであり、このことは、最も慣用的な埋め込み型医療デバイスの形成に使用される方法およびポリマー材料に組み込むことを困難にする。
【0003】
[0003]このように、核酸カプセル化粒子を持続的な期間にわたって送達することができる埋め込み型送達デバイスの存在が、継続的に必要である。
【発明の概要】
【0004】
[0004]本発明の１つの実施形態によると、埋め込み型医療デバイスが開示される。デバイスは、ポリマーマトリックス内に分散された粒子を含む。粒子は、担体を含有し、かつ核酸をカプセル化する担体成分を含み、ポリマーマトリックスは、エチレン酢酸ビニルコポリマーを含む。エチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度の担体の溶融温度に対する比は、約２℃／℃以下である。
【0005】
[0005]本発明の他の特徴および態様は、下記により詳細に記載される。
【0006】
[0006]当業者を対象とする、最適な様式を含む本発明の完全および可能な開示は、添付の図面を参照しながら、本明細書の残りの部分に、より特定的に記載される。
【図面の簡単な説明】
【0007】
【発明を実施するための形態】
【0008】
[0011]本明細書および図において繰り返し使用される参照符合は、本発明の同じまたは類似の特徴または要素を表すことが意図される。
【0009】
[0012]本考察は例示的な実施形態のみを記載しており、本発明のより広い態様を制限することを意図しないことが、当業者に理解されるべきである。
【0010】
[0013]一般的に言えば、本発明は、患者（例えば、ヒト、愛玩動物、家畜、競走馬など）に持続的な期間にわたって核酸を送達して、患者の状態、疾患および／または美容状態の抑制および／または治療を助けることができる、埋め込み型医療デバイスを対象とする。埋め込み型医療デバイスは、１つ以上のエチレン酢酸ビニルコポリマーを含むポリマーマトリックス内に分散されている核酸カプセル化粒子を含む。ポリマーマトリックスの粒子に対する重量比は、典型的には約１～約１０、いくつかの実施形態では約１．１～約８、いくつかの実施形態では約１．２～約６、およびいくつかの実施形態では約１．５～約４である。例えば、１つの実施形態において、埋め込み型医療デバイスは薬剤放出層を含有しうる。核酸カプセル化粒子は、薬剤放出層の約１ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５ｗｔ％～約５０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約１０ｗｔ％～約４５ｗｔ％を構成し、一方、ポリマーマトリックスは、薬剤放出層の約４０ｗｔ％～約９９ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５０ｗｔ％～約９５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５５ｗｔ％～約９０ｗｔ％を構成しうる。
【0011】
[0014]粒子は、１つ以上の種類および／または層の担体、例えば、ペプチド、タンパク質、炭水化物（例えば、糖）、ポリマー、脂質などを含有する担体成分を含む。１つの特定の実施形態において、例えば、担体は、疎水性または両親媒性を有する小分子と一般に呼ばれる脂質、例えば、脂肪、ワックス、ステロール含有代謝産物、ビタミン、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、糖脂質（ｓａｃｃｈａｒｏｌｉｐｉｄ）、ポリケチドおよびプレノール脂質（ｐｒｅｎｏｌ ｌｉｐｉｄ）でありうる。そのような脂質の例は、例えば、リン脂質、例えばアルキルホスホコリンおよび／または脂肪酸修飾ホスホコリン（例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）または１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ））；陽イオン性脂質、例えば２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイル－メチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）またはジ（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）９－（（４－（ジメチルアミノ）－ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）；ヘルパー脂質（例えば、脂肪酸）；構造脂質（ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｌｉｐｉｄ）（例えば、ステロール）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コンジュゲート脂質など、ならびに前述のいずれかの組み合わせを含みうる。それと無関係に、担体成分に用いられる少なくとも１つの担体（例えば、脂質）は、ポリマーマトリックス内のエチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度に類似している、またはより高い溶融温度を有するように選択される。事実、ある特定の実施形態において、担体成分内の多数の担体、またはさらにはすべての担体は、ポリマーマトリックス内のエチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度に類似している、またはより高い溶融温度を有するように選択されうる。このようにして、カプセル化粒子は、ポリマーマトリックスに用いられるエチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融加工温度またはそれに近い温度で安定したままであることができ、この溶融加工温度は、そのようなコポリマーの溶融温度より一般に高い。例えば、ポリマーマトリックス内のエチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度（℃）の、担体成分内の担体（例えば、脂質）の溶融温度（℃）に対する比は、約２℃／℃以下、いくつかの実施形態では約１．８℃／℃以下、いくつかの実施形態では約０．１～約１．６℃／℃、いくつかの実施形態では約０．２～約１．５℃／℃、およびいくつかの実施形態では約０．４～約１．２℃／℃でありうる。エチレン酢酸ビニルコポリマーおよび得られたポリマーマトリックスは、例えばＡＳＴＭ Ｄ３４１８－１５に従って決定すると、例えば、約２０℃～約１００℃、いくつかの実施形態では、約２５℃～約８０℃、いくつかの実施形態では約３０℃～約７０℃、いくつかの実施形態では約３５℃～約６５℃、およびいくつかの実施形態では約４０℃～約６０℃の溶融温度を有しうる。担体（例えば、脂質）も同様に、約２５℃～約１０５℃、いくつかの実施形態では約３０℃～約８５℃、いくつかの実施形態では約３５℃～約７５℃、いくつかの実施形態では約４０℃～約７０℃、およびいくつかの実施形態では約４５℃～約６５℃の溶融温度を有しうる。
【0012】
[0015]ここで本発明の様々な実施形態をより詳細に記載する。
【0013】
Ｉ．ポリマーマトリックス
[0016]上記に示されたように、ポリマーマトリックスは、少なくともエチレン酢酸ビニルコポリマーを含有し、これは、一般に少なくとも１つのエチレンモノマーおよび少なくとも１つの酢酸ビニルモノマーから誘導される。本発明者たちは、コポリマーのある特定の態様を選択的に制御して、望ましい放出特性の達成を助けることができることを発見した。例えば、コポリマーの酢酸ビニル含有量は、コポリマーの約１０ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２０ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２５ｗｔ％～約５５ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３０ｗｔ％～約５０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３５ｗｔ％～約４８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約３８ｗｔ％～約４５ｗｔ％の範囲内であるように選択的に制御されうる。逆に言えば、コポリマーのエチレン含有量も同様に、約４０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、４５ｗｔ％～約７５ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５２ｗｔ％～約６５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５５ｗｔ％～約６２ｗｔ％の範囲内でありうる。とりわけ、そのようなコモノマー含有量は、核酸カプセル化粒子の制御可能な持続放出プロファイルの達成を助けることができ、同時に、粒子に用いられる担体の溶融温度により類似した性質の比較的低い溶融温度を依然として有することもできる。またエチレン酢酸ビニルコポリマーおよび得られたポリマーマトリックスのメルトフローインデックスは、１９０℃の温度および２．１６キログラムの荷重でＡＳＴＭ Ｄ１２３８－２０に従って決定すると、約０．２～約１００ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約５～約９０ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約１０～約８０ｇ／１０分、およびいくつかの実施形態では約３０～約７０ｇ／１０分の範囲でありうる。またエチレン酢酸ビニルコポリマーの密度は、ＡＳＴＭ－Ｄ１５０５－１８に従って決定すると、約０．９００～約１．００グラム／立方センチメートル（ｇ／ｃｍ３）、いくつかの実施形態では約０．９１０～約０．９８０ｇ／ｃｍ３、およびいくつかの実施形態では約０．９４０～約０．９７０ｇ／ｃｍ３の範囲でありうる。用いてもよい特に適切なエチレン酢酸ビニルコポリマーの例には、名称ＡＴＥＶＡ（登録商標）（例えば、ＡＴＥＶＡ（登録商標）４０３０ＡＣ）でＣｅｌａｎｅｓｅから、名称ＥＬＶＡＸ（登録商標）（例えば、ＥＬＶＡＸ（登録商標）４０Ｗ）でＤｏｗから、および名称ＥＶＡＴＡＮＥ（登録商標）（例えば、ＥＶＡＴＡＮＥ４０－５５）でＡｒｋｅｍａから入手可能なものが含まれる。
[0016]上記に示されたように、ポリマーマトリックスは、少なくともエチレン酢酸ビニルコポリマーを含有し、これは、一般に少なくとも１つのエチレンモノマーおよび少なくとも１つの酢酸ビニルモノマーから誘導される。本発明者たちは、コポリマーのある特定の態様を選択的に制御して、望ましい放出特性の達成を助けることができることを発見した。例えば、コポリマーの酢酸ビニル含有量は、コポリマーの約１０ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２０ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２５ｗｔ％～約５５ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３０ｗｔ％～約５０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３５ｗｔ％～約４８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約３８ｗｔ％～約４５ｗｔ％の範囲内であるように選択的に制御されうる。逆に言えば、コポリマーのエチレン含有量も同様に、約４０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、４５ｗｔ％～約７５ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５２ｗｔ％～約６５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５５ｗｔ％～約６２ｗｔ％の範囲内でありうる。とりわけ、そのようなコモノマー含有量は、核酸カプセル化粒子の制御可能な持続放出プロファイルの達成を助けることができ、同時に、粒子に用いられる担体の溶融温度により類似した性質の比較的低い溶融温度を依然として有することもできる。またエチレン酢酸ビニルコポリマーおよび得られたポリマーマトリックスのメルトフローインデックスは、１９０℃の温度および２．１６キログラムの荷重でＡＳＴＭ Ｄ１２３８－２０に従って決定すると、約０．２～約１００ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約５～約９０ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約１０～約８０ｇ／１０分、およびいくつかの実施形態では約３０～約７０ｇ／１０分の範囲でありうる。またエチレン酢酸ビニルコポリマーの密度は、ＡＳＴＭ－Ｄ１５０５－１８に従って決定すると、約０．９００～約１．００グラム／立方センチメートル（ｇ／ｃｍ３）、いくつかの実施形態では約０．９１０～約０．９８０ｇ／ｃｍ３、およびいくつかの実施形態では約０．９４０～約０．９７０ｇ／ｃｍ３の範囲でありうる。用いてもよい特に適切なエチレン酢酸ビニルコポリマーの例には、名称ＡＴＥＶＡ（登録商標）（例えば、ＡＴＥＶＡ（登録商標）４０３０ＡＣ）でＣｅｌａｎｅｓｅから、名称ＥＬＶＡＸ（登録商標）（例えば、ＥＬＶＡＸ（登録商標）４０Ｗ）でＤｏｗから、および名称ＥＶＡＴＡＮＥ（登録商標）（例えば、ＥＶＡＴＡＮＥ４０－５５）でＡｒｋｅｍａから入手可能なものが含まれる。
【0014】
[0017]ある特定の実施形態において、エチレン酢酸ビニルコポリマーと、疎水性ポリマー、例えば下記に記載されているもの（例えば、エチレン酢酸ビニルコポリマー）とのブレンドを、ブレンドおよびポリマーマトリックスの全体が上記に示された範囲内の溶融温度および／またはメルトフローインデックスを有するように用いることが望ましいこともある。例えば、ポリマーマトリックスは、第１のエチレンコポリマー、および第１のエチレンコポリマーの溶融温度より高い溶融温度を有する第２のエチレンコポリマーを含有することができる。第２のエチレンコポリマーも同様に、第１のエチレンコポリマーの対応するメルトフローインデックスと同じ、より低い、またはより高いメルトフローインデックスを有することができる。第１のエチレン酢酸ビニルコポリマーは、例えば、ＡＳＴＭ Ｄ３４１８－１５に従って決定すると、約２０℃～約６０℃、いくつかの実施形態では約２５℃～約５５℃、およびいくつかの実施形態では約３０℃～約５０℃の溶融温度、ならびに／または１９０℃の温度および２．１６キログラムの荷重でＡＳＴＭ Ｄ１２３８－２０に従って決定すると、約４０～約９００ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約５０～約５００ｇ／１０分、およびいくつかの実施形態では約５５～約２５０ｇ／１０分のメルトフローインデックスを有することができる。第２のエチレン酢酸ビニルコポリマーも同様に、ＡＳＴＭ Ｄ３４１８－１５に従って決定すると、約５０℃～約１００℃、いくつかの実施形態では約５５℃～約９０℃、およびいくつかの実施形態では約６０℃～約８０℃の溶融温度、ならびに／または１９０℃の温度および２．１６キログラムの荷重でＡＳＴＭ Ｄ１２３８－２０に従って決定すると、約０．２～約５５ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約０．５～約５０ｇ／１０分、およびいくつかの実施形態では約１～約４０ｇ／１０分のメルトフローインデックスを有することができる。第１のエチレンコポリマーは、ポリマーマトリックスの約２０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３０ｗｔ％～約７０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約４０ｗｔ％～約６０ｗｔ％を構成してもよく、第２のエチレンコポリマーも同様に、ポリマーマトリックスの約２０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３０ｗｔ％～約７０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約４０ｗｔ％～約６０ｗｔ％を構成してもよい。エチレン酢酸ビニルコポリマーと他の疎水性ポリマー、例えば下記に記載されているものとのブレンドをポリマーマトリックス内に用いることもできる。
【0015】
[0018]当該技術において知られているように、様々な技術のいずれかを一般に使用して、望ましい特性を有するエチレン酢酸ビニルコポリマーを形成することができる。１つの実施形態において、ポリマーは、エチレンモノマーと酢酸ビニルモノマーを高圧反応で共重合させることにより生成される。酢酸ビニルは、ブタンを酸化して無水酢酸およびアセトアルデヒドを生じ、これらを一緒に反応させて、二酢酸エチリデンを形成することによって生成されうる。次いで二酢酸エチリデンを酸触媒の存在下で熱分解して、酢酸ビニルモノマーを形成することができる。適切な酸触媒の例には、芳香族スルホン酸（例えば、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、エチルベンゼンスルホン酸、キシレンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸）、硫酸、ならびに米国特許第２，４２５，３８９号、Ｏｘｌｅｙ ｅｔ ａｌ．、同第２，８５９，２４１号、Ｓｃｈｎｉｚｅｒおよび同第４，８４３，１７０号、Ｉｓｓｈｉｋｉ ｅｔ ａｌに記載されたものなどのアルカンスルホン酸が含まれる。酢酸ビニルモノマーは、アセトアルデヒドの代わりに触媒の存在下で無水酢酸を水素と反応させることによっても生成されうる。この方法は、二酢酸エチリデンを生成する必要なく、無水酢酸および水素から酢酸ビニルを直接変換する。なお別の実施形態において、酢酸ビニルモノマーは、ペルフルオロスルホン酸樹脂またはゼオライトなどの適切な固体触媒の存在下で、アセトアルデヒドとケトンの反応によって生成されうる。
【0016】
[0019]ある特定の場合において、エチレン酢酸ビニルコポリマーは、ポリマーマトリックスの全ポリマー含有量を構成する。しかし他の場合では、他のポリマー、例えば、他の疎水性ポリマーおよび／または親水性ポリマー、例えば、下記に記載されているものを含むことが望ましいことがある。用いられる場合、そのような他のポリマーは、ポリマーマトリックスのポリマー含有量の約０．００１ｗｔ％～約３０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約０．０１ｗｔ％～約２０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約１０ｗｔ％を構成することが一般に望ましい。そのような場合において、エチレン酢酸ビニルコポリマーは、ポリマーマトリックスのポリマー含有量の約７０ｗｔ％～約９９．９９９ｗｔ％、いくつかの実施形態では約８０ｗｔ％～約９９．９９ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約９０ｗｔ％～約９９．９ｗｔ％を構成しうる。
【0017】
[0020]望ましい場合、ポリマーマトリックスは、１つ以上の可塑剤を含有して、加工温度を下げることを助けることもでき、それによって高融点コポリマーを、カプセル化粒子の分解を伴うことなく使用することを可能にする。適切な可塑剤には、例えば、脂肪酸、脂肪酸エステル、脂肪酸塩、脂肪酸アミド、有機リン酸エステル、炭化水素ワックスなど、ならびにこれらの混合物が含まれうる。脂肪酸は、一般に、約８～２２個の炭素原子、およびいくつかの実施形態では約１０～約１８個の炭素原子の炭素鎖長さを有する任意の飽和または不飽和酸でありうる。望ましい場合、酸は置換されていてもよい。適切な脂肪酸には、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ベヘン酸、オレイン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リシノール酸、カプリン酸、ネオデカン酸、水素化獣脂脂肪酸、ヒドロキシステアリン酸、水添ヒマシ油の脂肪酸、エルカ酸、ヤシ油脂肪酸など、ならびにこれらの混合物が含まれうる。脂肪酸誘導体を用いることもでき、例えば、脂肪酸アミド、例えば、オレアミド、エルカミド（ｅｒｕｃａｍｉｄｅ）、ステアラミド（ｓｔｅａｒａｍｉｄｅ）、エチレンビス（ステアラミド）など；脂肪酸塩（例えば、金属塩）、例えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸鉄、ステアリン酸マンガン、ステアリン酸ニッケル、ステアリン酸コバルトなど；脂肪酸エステル、例えば、脂肪族アルコールの脂肪酸エステル（例えば、２－エチルヘキサノール、モノエチレングリコール、イソトリデカノール、プロピレングリコール、ペンタエリトリトールなど）、グリセロールの脂肪酸エステル（例えば、ヒマシ油、ゴマ油など）、ポリフェノールの脂肪酸エステル、糖脂肪酸エステルなど；ならびに前述のいずれかの混合物でありうる。パラフィンワックス、ポリオレフィンおよび酸化ポリオレフィンワックス、ならびに微晶ワックスを含む炭化水素ワックスを用いることもできる。特に適切なものは、ステアリン酸の酸、塩またはアミド、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ペンタエリトリトールテトラステアレートまたはＮ，Ｎ’－エチレン－ビス－ステアラミドである。用いられる場合、可塑剤は、典型的には、ポリマーマトリックスの約０．０５ｗｔ％～約１．５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約０．５ｗｔ％を構成する。
【0018】
ＩＩ．カプセル化粒子
Ａ．核酸
[0021]上記に示されたように、核酸カプセル化粒子は、ポリマーマトリックス内に分散されている。本明細書で使用されるとき、用語「核酸」は、核酸塩基および酸部分を含む化合物、例えば、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを一般に指す。「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」とも呼ばれる）と組み合わせて含有する化合物を一般に指す。「ヌクレオチド」は、リン酸塩基を含むヌクレオシドを一般に指す。修飾ヌクレオチドは、任意の有用な方法、例えば、化学的、酵素的または組み換え的な合成により、１個以上の修飾または非天然ヌクレオシドを含むことができる。ポリヌクレオチドは、連結ヌクレオシドの領域を含むことができる。そのような領域は、可変主鎖連結を有してもよい。連結は、標準ホスホジエステル連結であってもよく、この場合には、ポリヌクレオチドがヌクレオチドの領域を含む。例えば、ポリヌクレオチドは、隣接ヌクレオチドがホスホジエステル連結により互いに連結している直鎖分子である３つ以上のヌクレオチドを含有してもよい。用語「核酸」は、ＲＮＡ、ならびに一本および／または二本鎖ＤＮＡも包含する。より特定的には、核酸は、例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）（ＬＮＡ、β－Ｄ－リボ立体配置を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ立体配置を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ機能化を有する２’－アミノ－ＬＮＡおよび２’－アミノ機能化を有する２’－アミノ－ｃ－ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、またはこれらのキメラもしくは組み合わせでありうる、またはこれらを含んでもよい。
Ａ．核酸
[0021]上記に示されたように、核酸カプセル化粒子は、ポリマーマトリックス内に分散されている。本明細書で使用されるとき、用語「核酸」は、核酸塩基および酸部分を含む化合物、例えば、ヌクレオシド、ヌクレオチド、ポリヌクレオチドまたはこれらの組み合わせを一般に指す。「ヌクレオシド」は、糖分子（例えば、ペントースもしくはリボース）またはその誘導体を、有機塩基（例えば、プリンもしくはピリミジン）またはその誘導体（本明細書において「核酸塩基」とも呼ばれる）と組み合わせて含有する化合物を一般に指す。「ヌクレオチド」は、リン酸塩基を含むヌクレオシドを一般に指す。修飾ヌクレオチドは、任意の有用な方法、例えば、化学的、酵素的または組み換え的な合成により、１個以上の修飾または非天然ヌクレオシドを含むことができる。ポリヌクレオチドは、連結ヌクレオシドの領域を含むことができる。そのような領域は、可変主鎖連結を有してもよい。連結は、標準ホスホジエステル連結であってもよく、この場合には、ポリヌクレオチドがヌクレオチドの領域を含む。例えば、ポリヌクレオチドは、隣接ヌクレオチドがホスホジエステル連結により互いに連結している直鎖分子である３つ以上のヌクレオチドを含有してもよい。用語「核酸」は、ＲＮＡ、ならびに一本および／または二本鎖ＤＮＡも包含する。より特定的には、核酸は、例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）（ＬＮＡ、β－Ｄ－リボ立体配置を有するＬＮＡ、α－Ｌ－リボ立体配置を有するα－ＬＮＡ（ＬＮＡのジアステレオマー）、２’－アミノ機能化を有する２’－アミノ－ＬＮＡおよび２’－アミノ機能化を有する２’－アミノ－ｃ－ＬＮＡを含む）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、シクロヘキセニル核酸（ＣｅＮＡ）、またはこれらのキメラもしくは組み合わせでありうる、またはこれらを含んでもよい。
【0019】
[0022]核酸は、例えば、ゲノム、転写物、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、プラスミド、コスミド、染色体、染色分体または他の天然に生じる核酸分子の文脈において天然に生じるものでありうる。一方で核酸分子は、非天然に生じる分子、例えば、組換えＤＮＡもしくはＲＮＡ、人工染色体、改変ゲノムもしくはその断片、または合成ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドでありうる、あるいは非天然に生じるヌクレオチドまたはヌクレオシドを含みうる。核酸は、天然源から精製されうる、組換え発現系を使用して産生され、任意選択で精製されうる、化学合成されうる、などでありうる。核酸は、ヌクレオシド類縁体、例えば、化学的に修飾された塩基または糖を有する、および主鎖修飾を有する類縁体を含むこともできる。いくつかの実施形態において、核酸は、天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジン）；ヌクレオシド類縁体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、Ｏ（６）－メチルグアニンおよび２－チオシチジン）；化学修飾塩基；生物学的修飾塩基（例えば、メチル化塩基）；介在塩基；修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース）；ならびに／または修飾リン酸塩基（例えば、ホスホロチオエートおよび５’－Ｎ－ホスホラミダイト連結）である、またはこれらを含有する。
【0020】
[0023]修飾ヌクレオチド塩基対形成を用いることができ、標準のアデノシン－チミン、アデノシン－ウラシルまたはグアノシン－シトシン塩基対のみならず、ヌクレオチド間および／または非標準塩基もしくは修飾塩基を含む修飾ヌクレオチド間で形成される塩基対も包含し、水素結合ドナーおよび水素結合アクセプターの配置は、非標準塩基と標準塩基との間または２つの相補的な非標準塩基構造間の水素結合を許容する。そのような非標準塩基対形成の１つの例は、修飾ヌクレオチドのイノシンとアデニン、シトシンまたはウラシルとの塩基対形成である。塩基／糖またはリンカーの任意の組み合わせを、本開示のポリヌクレオチドに組み込むことができる。
【0021】
[0024]ある特定の実施形態において、核酸は、１個以上核酸塩基が治療目的で修飾されているポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えばｍＲＮＡポリヌクレオチド）でありうる。事実、ある特定の実施形態において、少なくとも２個（例えば、２、３、４個、またはそれ以上）の修飾核酸塩基の組み合わせを含むポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）を用いることができる。例えば、ポリヌクレオチド中の適切な修飾核酸塩基は、修飾シトシン、例えば、５－メチルシトシン、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シチジン（ａｃ４Ｃ）、５－ハロ－シチジン（例えば、５－ヨード－シチジン）、５－ヒドロキシメチル－シチジン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－プソイドイソシチジン、２－チオ－シチジン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シチジンなど；修飾ウリジン、例えば、５－シアノウリジン、４’－チオウリジン、プソイドウリジン（ψ）、Ｎ１－メチルプソイドウリジン（ｍ１ψ）、Ｎ１－エチルプソイドウリジン、２－チオウリジン（ｓ２Ｕ）、４’－チオウリジン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、４－チオ－プソイドウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５－メチルウリジン（ｍｏ５Ｕ）、５－メトキシウリジン、２’－Ｏ－メチルウリジンなど；修飾グアノシン、例えば、α－チオ－グアノシン、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍ１Ｉ）、ウイオシン（ｉｍＧ）、メチルウイオシン（ｍｉｍＧ）、７－デアザ－グアノシン、７－シアノ－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ０）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアノシン（ｐｒｅＱ１）、７－メチル－グアノシン（ｍ７Ｇ）、１－メチル－グアノシン（ｍ１Ｇ）、８－オキソ－グアノシン、７－メチル－８－オキソ－グアノシンなど；修飾アデニン、例えば、α－チオ－アデノシン、７－デアザ－アデニン、１－メチル－アデノシン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデノシン（ｍ６Ａ）、２，６－ジアミノプリンなど；ならびにこれらの組み合わせでありうる。いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、少なくとも２個（例えば、２、３、４個、またはそれ以上）の前述の修飾核酸塩基の組み合わせを含む。
【0022】
[0025]いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチド（例えば、ＲＮＡポリヌクレオチド、例えば、ｍＲＮＡポリヌクレオチド）は、特定の修飾で均一に修飾されうる（例えば、完全に修飾されうる、全配列にわたって修飾されうる）。例えば、ポリヌクレオチドは、５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）で均一に修飾されてもよく、これは、ｍＲＮＡ配列のすべてのシトシン残基が５－メチル－シチジン（ｍ５Ｃ）に置き換えられていることを意味する。同様に、ポリヌクレオチドは、修飾残基、例えば上記に記載されたうちのいずれかに置き換えられることにより、配列に存在する任意の種類のヌクレオシド残基に均一に修飾されうる。
【0023】
[0026]いくつかの実施形態において、ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）として機能する。「メッセンジャーＲＮＡ」（ｍＲＮＡ）は、（少なくとも１個の）ポリペプチド（アミノ酸の天然に生じる、非天然に生じる、または修飾されたポリマー）をコードする任意のポリヌクレオチドを一般に指し、インビトロ、インビボ、インサイツまたはエキソビボでコード化ポリペプチドを産生するように翻訳されうる。ｍＲＮＡ分子の塩基性成分は、典型的には、少なくとも１つのコード領域、５’－非翻訳領域（ＵＴＲ）、３’－ＵＴＲ、５’キャップおよびポリ－Ａ尾部を含む。ポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡとして機能しうるが、有効なポリペプチド発現についての現存する問題を核酸ベース治療薬の使用により克服することに役立つ機能的および／または構造設計的な特徴の点において、野生型ｍＲＮＡと区別されうる。ｍＲＮＡは、少なくとも１個の目的のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１個（１個以上）のリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含有しうる。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、２～１０個、２～９個、２～８個、２～７個、２～６個、２～５個、２～４個、２～３個、３～１０個、３～９個、３～８個、３～７個、３～６個、３～５個、３～４個、４～１０個、４～９個、４～８個、４～７個、４～６個、４～５個、５～１０個、５～９個、５～８個、５～７個、５～６個、６～１０個、６～９個、６～８個、６～７個、７～１０個、７～９個、７～８個、８～１０個、８～９個または９～１０個のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個または１００個のポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、ｍＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは、少なくとも１００個または少なくとも２００個のポリペプチドをコードする。
【0024】
[0027]いくつかの実施形態において、核酸は治療用ｍＲＮＡである。本明細書で使用されるとき、用語「治療用ｍＲＮＡ」は、治療用タンパク質をコードするｍＲＮＡを指す。治療用タンパク質は、宿主細胞または対象に様々な効果を媒介して、疾患を治療する、または疾患の徴候および症状を改善する。例えば、治療用タンパク質は、欠損している、もしくは異常であるタンパク質を置き換える、内在性タンパク質の機能を増強する、細胞に新規機能を提供する（例えば、内在性細胞活性を阻害もしくは活性化する）、または別の治療化合物（例えば、抗体薬物複合体）の送達剤として作用することができる。治療用ｍＲＮＡは、様々な疾患および状態、例えば、細菌感染、ウイルス感染、寄生虫感染、細胞増殖障害、遺伝性障害、および自己免疫性障害の治療に有用でありうる。ｍＲＮＡは、生物製剤、抗体、ワクチン、治療用タンパク質またはペプチド、細胞透過性ペプチド、分泌タンパク質、細胞膜タンパク質、細胞質または細胞骨格タンパク質、細胞内膜結合タンパク質、核タンパク質、ヒト疾患に関連するタンパク質が含まれるが、これらに限定されない、治療適応症が確認されていないが、それでも研究および発見の分野に有用性を有する、ヒトゲノムによりコードされる部分またはタンパク質を標的にするいくつかの標的分類のいずれかから選択される目的のポリペプチドをコードするように設計されうる。
【0025】
[0028]特に適切な治療用ｍＲＮＡは、少なくとも１個の抗原ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを有する少なくとも１個のリボ核酸（ＲＮＡ）ポリヌクレオチドを含むものであり、ＲＮＡのＲＮＡポリヌクレオチドは少なくとも１個の化学修飾を含む。化学修飾は、例えば、プソイドウリジン、Ｎ１－メチルプソイドウリジン、Ｎ１－エチルプソイドウリジン、２－チオウリジン、４’－チオウリジン、５－メチルシトシン、２－チオ－１－メチル－１－デアザ－プソイドウリジン、２－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、２－チオ－５－アザ－ウリジン、２－チオ－ジヒドロプソイドウリジン、２－チオ－ジヒドロウリジン、２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－２－チオ－プソイドウリジン、４－メトキシ－プソイドウリジン、４－チオ－１－メチル－プソイドウリジン、４－チオ－プソイドウリジン、５－アザ－ウリジン、ジヒドロプソイドウリジン、５－メチルウリジン、５－メトキシウリジン、および２’－Ｏ－メチルウリジンでありうる。
【0026】
[0029]必ずしも必要ではないが、核酸の特定の性質を、ポリマーマトリックス内に分散され、かつ著しい分解なしに患者に送達される能力を改善する助けとなりうるように選択することもできる。例えば、従来のＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を自己増殖性ＲＮＡと共に同時送達することが望ましいこともある。従来のｍＲＮＡは、例えば、非翻訳領域にフランクし、かつ末端ポリ（Ａ）尾部を有する、標的抗原用のオープンリーディングフレームを一般に含む。トランスフェクトした後、一過性抗原発現を駆動する。一方で自己増殖性ＲＮＡは、ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ複合体の合成を介して自己増幅を導き、抗原コード化ｍＲＮＡの多数のコピーを生成することができ、宿主細胞の細胞質に導入されると、高レベルの異種遺伝子を発現する。頭尾結合一本鎖ＲＮＡである環状ＲＮＡ（ｃｉｒｃＲＮＡ）を用いることもできる。標的ＲＮＡは、例えば非哺乳類外来性イントロンのバックスプライシング（ｂａｃｋｓｐｌｉｃｉｎｇ）により、または直鎖ＲＮＡの５’および３’末端のスプリントライゲーション（ｓｐｌｉｎｔ ｌｉｇａｔｉｏｎ）によって環状化されうる。適切なｃｉｒｃＲＮＡの例は、例えば、米国特許公開第２０１９／０３４５５０３号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。アンチセンスＲＮＡを用いることもでき、これは一般に、モルホリノ主鎖基から構成される主鎖サブユニットに担持される塩基を有し、主鎖基は、化合物中の塩基がワトソン・クリック塩基対形成によりＲＮＡ中の標的配列とハイブリダイズし、それによって標的配列内におけるＲＮＡ：オリゴヌクレオチドヘテロ二重鎖の形成を可能にするサブユニット間連結（荷電と非荷電の両方）により連結されている。アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む非荷電主鎖連結を有するモルホリノオリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第５，６９８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、同第５，５２１，０６３号、および同第５，５０６，３３７号に詳述されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。他の例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、米国特許第９，４６４，２９２号、同第１０，１３１，９１０号、同第１０，１４４，７６２号、および同第１０，９１３，９４７号に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【0027】
[0030]ある特定の場合において、核酸は、アプタマー、例えばＲＮＡアプタマーでありうる。ＲＮＡアプタマーは、それ自体独立型分子として使用されうる、または多数の機能を有するより大型のＲＮＡ分子、例えばＲＮＡ干渉分子の一部として統合されうる、任意の適切なＲＮＡ分子であってもよい。例えば、ＲＮＡアプタマーは、ｓｈＲＮＡ分子の露出領域（例えば、ｓｈＲＮＡ分子のループ領域）に配置されて、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡ分子が標的細胞の表面受容体と結合することを可能にすることができる。内部移行した後、標的細胞のＲＮＡ干渉経路により処理されうる。核酸アプタマーを形成する核酸には、天然に生じるヌクレオシド、修飾ヌクレオシド、１個以上ヌクレオシド間に挿入された炭化水素リンカー（例えば、アルキレン）および／もしくはポリエーテルリンカー（例えば、ＰＥＧリンカー）を有する天然に生じるヌクレオシド、１個以上ヌクレオシド間に挿入された炭化水素もしくはＰＥＧリンカーを有する修飾ヌクレオシド、またはこれらの組み合わせが含まれてもよい。いくつかの実施形態において、核酸アプタマーのヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドは、炭化水素リンカーまたはポリエーテルリンカーに置き換えられていてもよい。適切なアプタマーは、例えば、米国特許第９，４６４，２９３号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【0028】
[0031]タンパク質融合核酸も本発明における使用に適切でありうる。例えば、タンパク質（例えば、抗体）は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）に共有結合的に連結しうる。そのようなＲＮＡタンパク質融合体は、３’末端に結合したペプチド受容体を含有するｍＲＮＡプールのインビトロまたはインサイツ翻訳により合成されうる。１つの実施形態において、メッセージのオープンリーディングフレームを通読した後、リボソームは、指定の休止部位に達すると休止し、受容体部分がリボソームＡ部位を占有し、Ｐ部位のペプチジル－ｔＲＮＡから新生ペプチド鎖を受け取って、ＲＮＡタンパク質融合体を生成する。タンパク質とＲＮＡの共有結合的連結（ｍＲＮＡの３’末端と、ｍＲＮＡがコードするタンパク質のＣ末端とのアミド結合の形態）は、ＲＮＡの逆転写による選択の後に、タンパク質の遺伝子情報が回収および増幅されること（例えば、ＰＣＲにより）を可能にする。融合体が生成されると、選択または濃縮がｍＲＮＡタンパク質融合体の特性に基づいて実行される、あるいは、逆転写は、選択における一本鎖ＲＮＡの影響を回避するため、タンパク質に結合している間にｍＲＮＡ鋳型を使用して実行することができる。そのようなタンパク質融合核酸の例は、例えば、米国特許第６，５１８，０１８号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。ＲＮＡを酵素的に切断する配列を有する核酸に接合しているリボザイム（例えば、ＤＮＡザイムおよび／またはＲＮＡザイム）を用いることもでき、例えば、米国特許第１０，１５５，９４６号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
【0029】
[0032]例えば上記に記載された一本鎖核酸の他に、様々な特定の種類の二本鎖核酸を用いて安定性の改善を助けることもできる。環状ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）およびＤＮＡの閉環状形態であるプラスミド核酸（例えば、ｐＤＮＡ）を、ある特定の実施形態に用いることができる。そのような核酸の例は、例えば、国際公開第２００４／０６０２７７号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。長い二本鎖ＤＮＡを用いることもできる。例えば、足場ＤＮＡオリガミ（ｓｃａｆｆｏｌｄｅｄ ＤＮＡ ｏｒｉｇａｍｉ）を用いることができ、ここでは、長い一本鎖ＤＮＡが、足場に相補的な配列のセグメントまたは領域を含有する短いオリゴヌクレオチド（「ステープル（ｓｔａｐｌｅ）」）の存在下で足場をアニーリングすることにより、ある特定の形状に折り畳まれる。そのような構造の例は、例えば、米国特許公開第２０１９／０１４２８８２号および同第２０１８／０１７１３８６号に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【0030】
Ｂ．担体成分
[0033]粒子内の担体成分の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）に対するモル比は変動しうるが、典型的には約２：１～約５０：１、いくつかの実施形態では約５：１～約４０：１、いくつかの実施形態では約１０：１～約３５：１、およびいくつかの実施形態では約１５：１～約３０：１である。
[0033]粒子内の担体成分の核酸（例えば、ｍＲＮＡ）に対するモル比は変動しうるが、典型的には約２：１～約５０：１、いくつかの実施形態では約５：１～約４０：１、いくつかの実施形態では約１０：１～約３５：１、およびいくつかの実施形態では約１５：１～約３０：１である。
【0031】
[0034]上記に示されたように、担体成分は担体を含み、例えば、ペプチド（例えば、ＲＡＬＡ）、タンパク質、炭水化物（例えば、糖）、ポリマー（例えば、デキストランポリマー、例えばジエチルアミノエチルデキストラン、ポリエチレンイミン、ポリ（アミノエステル）、脂肪族ポリエステル、例えばポリ乳酸など）、脂質など、ならびに前述のいずれかの組み合わせ、例えば、ペプチド／ポリマーハイブリッド（例えば、ＲＡＬＡ－ＰＬＡ）である。１つの特定の実施形態において、例えば、担体成分は、１つ以上の脂質を含む脂質成分でありうる。そのような脂質粒子の性質は、一般にばらつきがあってもよく、このことは当業者に知られている。１つの実施形態において、例えば、脂質成分は、１つ以上の種類および／または層の脂質を含む脂質小胞（例えば、リポソーム）である。例えば、リポソームは一般に、１つ以上の脂質二重層に組み立てることができるリン脂質を含む。リン脂質は、リン脂質部分および任意選択で１つ以上の追加の部分（例えば、脂肪酸部分）を有する。リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リソホスファチジルコリン、およびスフィンゴミエリンを含みうる。用いられる場合、脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファリノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などを同様に含みうる。分岐、酸化、環状化およびアルキレンを含む修飾および置換を有する天然種を含む非天然種も、企図される。例えば、リン脂質は、１つ以上のアルキン（例えば、１つ以上の二重結合が三重結合に置き換えられているアルケニル基）で機能化または架橋されうる。適正な反応条件下では、アルキン基を、アジドへの曝露による銅触媒環化付加を受けさせることができる。そのような反応は、ナノ粒子組成物の脂質二重層を機能化して膜浸透または細胞認識を容易にすることに有用でありうる。適切なリン脂質の例には、例えば、アルキルホスホコリン、例えば、ヘキサデシルチオホスホコリン、テトラデシルホスホコリン、ヘキサデシルホスホコリン、ドコサノイルホスホコリン、１，２－ジヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－ホスホコリン、ＤＬ－α－リソホスファチジルコリン－ｒ－ｏ－ヘキサデシルなど；脂肪酸修飾ホスホコリン、例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＬＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジウンデカノイル－ｓｎ－グリセロ－ホスホコリン（ＤＵＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（１８：０ジエーテルＰＣ）、１－オレオイル－２－コレステリルヘミスクシノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＯＣｈｅｍｓＰＣ）、１－ヘキサデシル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（Ｃ１６ＬｙｓｏＰＣ）、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン、１，２－ジフィタノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＭＥ１６．０ ＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジリノレノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジアラキドノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジドコサヘキサエノイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホ－ｒａｃ－（１－グリセロール）ナトリウム塩（ＤＯＰＧ）、スフィンゴミエリンなど；ならびに前述のいずれかの混合物が含まれうる。
【0032】
[0035]望ましい場合、小胞の脂質成分は、他の種類の脂質を含むこともできる。例えば、脂質成分は、１つ以上の構造脂質を含有して、粒子中の他の脂質の凝集を緩和することを助けることができる。例えば、適切な構造脂質には、例えば、ステロイド；ステロール、例えば、コレステロール、フェコステロール、シトステロール、エルゴステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、フィトステロールなど；グリコアルカロイド、例えば、トマチジン、トマチンなど；テルペノイド、例えば、ウルソール酸；トコフェロール、例えば、アルファトコフェロール；ホパノイド（ｈｏｐａｎｏｉｄ）、スタノールエステル（ｓｔａｎｏｌ ｅｓｔｅｒ）；ならびにこれらの混合物が含まれうる。脂質成分は、１つ以上のＰＥＧコンジュゲート脂質を含んで、血漿タンパク質の特異的吸収を低減し、かつ粒子を覆うように水和層を形成することによって、生物学的環境にある粒子のコロイド安定性を改善することを助けることもできる。適切なＰＥＧコンジュゲート脂質の例には、例えば、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロールなど、ならびにこれらの混合物が含まれうる。例えば、ＰＥＧ脂質は、（Ｒ－３－［（Ω－メトキシ－ポリ（エチレングリコール）２０００）カルバモイル）］－１，２－ジミリスチルオキシプロピル－３－アミン）（ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ）、ＰＥＧ－ジステアロイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、ＰＥＧ－１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＥＧ－ＤＰＰＣ）、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＳＰＥなど、ならびにこれらの混合物でありうる。ＰＥＧコンジュゲート脂質を、ＰＥＧ鎖にヒドロキシル基を含むように修飾して、ＰＥＧ－ＯＨ脂質を形成することもできる。本明細書において一般的に定義されるように、「ＰＥＧ－ＯＨ脂質」（本明細書において「ヒドロキシＰＥＧ化脂質」とも呼ばれる）は、脂質に１つ以上のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有するＰＥＧ化脂質である。ある特定の実施形態において、ＰＥＧ－ＯＨ脂質は、ＰＥＧ鎖に１つ以上のヒドロキシル基を含む。ある特定の実施形態において、ＰＥＧ－ＯＨまたはドロキシＰＥＧ化脂質は、ＰＥＧ鎖の末端に－ＯＨ基を含む。
【0033】
[0036]様々な技術を用いて、核酸がカプセル化されている脂質小胞を形成することができる。例えば、核酸を最初に水性溶媒、例えば水または生体適合性緩衝液（例えば、リン酸塩緩衝生理食塩水、ＨＥＰＥＳ、ＴＲＩＳなど）に溶解することができる。有機溶媒を用いることもでき、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、メタノール、エタノール、プロパノール、プロパングリコール、ブタノール、イソプロパノール、ペンタノール、ペンタン、フルオロカールボン（例えば、フレオン）、エーテルなどである。界面活性剤を任意選択で用いて、溶媒中の薬剤の分散を助けることができる。脂質は、また、核酸の前、後または核酸と共に溶媒に溶解される。核酸および脂質は、約３：１～約１００：１以上、いくつかの実施形態では約３：１～約１０：１、およびいくつかの実施形態では約５：１～約７：１の脂質核酸モル比で混合されうる。溶媒に溶解されると、核酸および脂質は、任意の既知の技術を使用して混合されうる。１つの適切な技術は、例えばプローブまたはバスソニファイアー（ｓｏｎｉｆｉｅｒ）（例えば、Ｂｒａｎｓｏｎチップソニファイアー）を、脂質の融点により決定された制御温度で用いる超音波処理を含む。ホモジナイゼーションは、大型小胞を小型小胞に断片化する剪断エネルギーに依存する別の方法である。典型的なホモジナイゼーションの手順では、多層小胞が標準的なエマルションホモジナイザーを介して再循環される。他の適切な技術には、ボルテックス、押出、顕微溶液化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）、ホモジナイゼーションなどが含まれうる。膜（例えば、小さいポアを有するポリカーボネート、または非対称セラミック）を介した押出を使用することもできる。典型的には、懸濁液を、望ましいサイズ分布が達成されるまで膜を介して１回以上循環させる。小胞を、より小さいポアを有する膜を介して連続的に押し出して、サイズの勾配低減を達成することができる。好ましくは、小胞は約０．０５マイクロメートル（ミクロン）～約０．５マイクロメートル、およびいくつかの実施形態では約０．０５～約０．２マイクロメートルのサイズを有する。
【0034】
[0037]調製されると、ポリマーマトリックスに組み込む前に、小胞を脱水して、乾燥粒子の形態にすることができる。例えば、小胞を、標準的な乾燥機器（例えば、フリーズドライもしくは噴霧乾燥）または同等の装置を使用して、減圧下で脱水することができる。脂質小胞および周囲媒体を、脱水前に液体窒素で凍結し、次いで減圧下に設置することもできる。噴霧乾燥を乾燥粒子の形成に用いることもできる。
【0035】
[0038]脂質小胞の他に、他の種類の脂質粒子を核酸のカプセル化に用いることもできる。固体脂質粒子を、例えば、本発明のある特定の実施形態に用いることができる。一般的に言えば、そのような固体粒子は、例えばレーザー回折技術により決定すると、約１０～約１，０００ナノメートル、いくつかの実施形態では約２０～約８００ナノメートル、いくつかの実施形態では約３０～約６００ナノメートル、およびいくつかの実施形態では約４０～約３００ナノメートルの平均直径を有するナノ粒子の形態である。脂質小胞と同様に、固体粒子は、１つ以上の種類および／または層の脂質を含む脂質成分も含有する。
【0036】
[0039]１つの実施形態において、例えば固体粒子の脂質成分は、陽イオン性脂質を含む。陽イオン性脂質は、正荷電極性頭部基および疎水性尾部ドメインを含有する両親媒性分子であり、水溶液の中では、自発的に自己組織化して、高次凝集体になる。陽イオン性基（例えば、アミノ基）のため、核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）の負荷電リン酸塩基と静電気的に相互作用して、脂質ナノ粒子内への捕捉を可能にすることができる。カチオン性脂質の正電荷は、また、負荷電細胞膜との会合を促進して、細胞取り込みの向上を助け、負荷電脂質との組み合わせによって、細胞内層送達を容易にする非二重層構造を誘導することができる。用語「陽イオン性」は、生理的ｐＨで実効正荷電を有する脂質を含むこと、または酸性ｐＨでは実効正電荷を取得するが、生理的ｐＨでは中性電荷を維持するイオン化脂質を含むことが理解されるべきである。適切な陽イオン性脂質にはアミノ基を有するものが含まれてもよく、例えば、３－（ジドデシルアミノ）－Ｎ１，Ｎ１，４－トリドデシル－１－ピペラジンエタンアミン（ＫＬ１０）、Ｎ１－［２－（ジドデシルアミノ）エチル］Ｎ１，Ｎ４，Ｎ４－トリドデシル－１，４－ピペラジンジエタンアミン（ＫＬ２２）、１４，２５－ジトリデシル－１５，１８，２１，２４－テトラアザ－オクタトリアコンタン（ＫＬ２５）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル－４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＯＭＡ）、２－（｛８［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ）、（２Ｒ）－２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ－，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｒ））、および（２Ｓ）２－（｛８－［（３β）－コレスタ－５－エン－３－イルオキシ］オクチル｝オキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ－，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－１－アミン（オクチル－ＣＬｉｎＤＭＡ（２Ｓ））である。これらに加えて、陽イオン性脂質は、また、環状アミン基を含む脂質であってもよく、例えば、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノエチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－ＫＣ２－ＤＭＡ）、ジリノレイル－メチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ）、および／またはジ（（Ｚ）－ノナ－２－エン－１－イル）９－（（４－（ジメチルアミノ）－ブタノイル）オキシ）ヘプタデカンジオエート（Ｌ３１９）である。
【0037】
[0040]適切な陽イオン性脂質のなお他の例には、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ（ｄｉｍｅｍｙｌｈｅｘａｃｏｓａ）－１７，２０－ジエン－９－アミン、（１Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ５Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６、１９－ジエン－８－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルドコサ－１３，１６－ジエン－５－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘンイコサ－１２，１５－ジエン－４－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－６－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－７－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８，２１－ジエン－１０－アミン、（１５Ｚ，１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルテトラコサ－１５，１８－ジエン－５－アミン、（１４Ｚ，１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリコサ－１４，１７－ジエン－４－アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタコサ（ｄｉｍｅｉｈｙｌｏｃｔａｃｏｓａ）－１９，２２－ジエン－９－アミン、（１８Ｚ，２１Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－１８，２１－ジエン－８－アミン、（１７Ｚ，２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７，２０－ジエン－７－アミン、（１６Ｚ，１９Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６，１９－ジエン－６－アミン、（２２Ｚ，２５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコンタ－２２，２５－ジエン－１０－アミン、（２１Ｚ，２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリアコンタ－２１，２４－ジエン－９－アミン、（１８Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ（ｄｉｍｅｔｙｌｈｅｐｔａｃｏｓ）－１８－エン－１０－アミン、（１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘキサコサ－１７－エン－９－アミン、（１９Ｚ，２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタコサ－１９，２２－ジエン－７－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサン－１０－アミン、（２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ－エチル－Ｎ－メチルノナコサ－２０，２３－ジエン－１０－アミン、１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－１－ノニルイコサ－１１，１４－ジエン－１－イル］ピロリジン、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘプタコサ－２０－エン－１０－アミン、（１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルエプタコサ－１５－エン－１０－アミン、（１４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１４－エン－１０－アミン、（１７Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１７－エン－１０－アミン、（２４Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルトリトリアコンタ－２４－エン－１０－アミン、（２０Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－２０－エン－１０－アミン、（２２Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルヘントリアコンタ－２２－エン－１０－アミン、（１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタコサ－１６－エン－８－アミン、（１２Ｚ，１５Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－２－ノニルヘンイコサ－１２，１５－ジエン－１－アミン、（１３Ｚ，１６Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－ノニルドコサ－１３，１６－ジエン－１－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］エプタデカン－８－アミン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－ヘキシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－２１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘンイコサン－１０－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］メチル｝シクロプロピル］ノナデカン－１０－アミン，Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル－］ヘキサデカン－８－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ウンデシルシクロプロピル］テトラデカン－５－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－｛７－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ヘプチル｝ドデカン－１－アミン、１－［（１Ｒ，２Ｓ）－２－ヘプチルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルオクタデカン－９－アミン、１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－デシルシクロプロピル］－Ｎ，Ｎ－ジメチルペンタデカン－６－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（１Ｓ，２Ｒ）－２－オクチルシクロプロピル］ペンタデカン－８－アミン、Ｒ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、Ｓ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－｛２－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－１－［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝ピロリジン、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－３－［（５Ｚ－ ）－オクタ－５－エン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、１－｛２－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］－１－［（オクチルオキシ）メチル］エチル｝アゼチジン、（２Ｓ）－１－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－（ヘプチルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（ノニルオキシ）－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（９Ｚ）－オクタデカ－９－エン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－［（６Ｚ，９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－６，９，１２－トリエン－１－イルオキシ］－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（ペンチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－（ヘキシルオキシ）－３－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、１－［（１１Ｚ，１４Ｚ）－イコサ－１１，１４－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－［（１３Ｚ，１６Ｚ）－ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１３Ｚ，１６Ｚ）－ドコサ－１３，１６－ジエン－１－イルオキシ］－３－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、（２Ｓ）－１－［（１３Ｚ）－ドコサ－１３－エン－１－イルオキシ］－３－（ヘキシルオキシ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルプロパン－２－アミン、１－［（１３Ｚ）－ドコサ－１３－エン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、１－［（９Ｚ）－ヘキサデカ－９－エン－１－イルオキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミン、（２Ｒ）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｈ（１－メチルオクチル（ｍｅｔｏｙｌｏｃｔｙｌ））オキシ］－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、（２Ｒ）－１－［（３，７－ジメチルオクチル）オキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－［（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－イルオキシ］プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－（オクチルオキシ）－３－（｛８－［（１Ｓ，２Ｓ）－２－｛［（１Ｒ，２Ｒ）－２－ペンチルシクロプロピル］－メチル｝シクロプロピル］オクチル｝オキシ）プロパン－２－アミン、Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－｛［８－（２－オシルシクロプロピル）オクチル］オキシ｝－３－（オクチルオキシ）プロパン－２－アミンおよび（１１Ｅ，２０Ｚ，２３Ｚ）－Ｎ，Ｎ－ジメチルノナコサ－１１，２０，２－トリエン－１０－アミン、またはこれらの薬学的に許容される塩もしくは立体異性体が含まれうる。
【0038】
[0041]陽イオン性脂質の他に、固体粒子の脂質成分は、他の種類の脂質を含むこともできる。例えば、脂質成分はヘルパー脂質を含有することができ、ヘルパー脂質は、一般に、生理的ｐＨで中性または非陽イオン性である。そのようなヘルパー脂質には、上記に記載されたリン脂質、脂肪酸、グリセロ脂質（例えば、モノ－、ジ－およびトリ－グリセリド）、プレノール脂質などが含まれうる。適切な脂肪酸には、炭素原子が少なくとも８個の脂肪酸を有するもの、例えば、不飽和脂肪酸（例えば、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、サピエン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン酸、リノール酸、リノレイド酸（ｌｉｎｏｅｌａｉｄｉｃ ａｃｉｄ）、アルファリノレイド酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、エルカ酸、ドコサヘキサエン酸など、またはこれらの任意のシス／トランス二重結合異性体）、飽和脂肪酸（例えば、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、セロチン酸など、またはこれらの任意のシス／トランス二重結合異性体）、ならびにこれらの組み合わせが含まれうる。特に適切なヘルパー脂質には、例えば、オレイン酸またはその類縁体、ならびに脂肪酸修飾リン脂質、例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）および／もしくは１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ならびにホスホコリン部分が異なる双性イオン性基、例えばアミノ酸またはその誘導体に置き換えられている化合物の類縁体が含まれうる。
【0039】
[0042]上記に記載された構造脂質および／またはＰＥＧコンジュゲート脂質を、固体粒子の脂質成分に用いることもできる。特に好ましい構造脂質は、コレステロールなどのステロールである。１つの特定の実施形態において、固体脂質粒子の脂質成分は、陽イオン性脂質、ヘルパー脂質（例えば、リン脂質および／または脂肪酸）、および構造脂質（例えば、ステロール）の組み合わせを含有する。陽イオン性脂質は、例えば、脂質成分の約１０ｍｏｌ％～約９０ｍｏｌ％、いくつかの実施形態では約１５ｍｏｌ％～約８０ｍｏｌ％、およびいくつかの実施形態では約２０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％を構成しうる。ヘルパー脂質は、脂質成分の約１ｍｏｌ％～約５０ｍｏｌ％、いくつかの実施形態では約２ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％、およびいくつかの実施形態では約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％を構成しうる。構造脂質も同様に、脂質成分の約５ｍｏｌ％～約７０ｍｏｌ％、いくつかの実施形態では約１５ｍｏｌ％～約６５ｍｏｌ％、およびいくつかの実施形態では約２５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％を構成しうる。ある特定の場合において、脂質成分は、一般にＰＥＧコンジュゲート脂質を含まなくてもよい。他の場合では、ＰＥＧコンジュゲート脂質が用いられてもよく、例えば、脂質成分の約０．１ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％、いくつかの実施形態では約０．２ｍｏｌ％～約２０ｍｏｌ％、およびいくつかの実施形態では約０．５ｍｏｌ％～約１５ｍｏｌ％の量である。
【0040】
[0043]核酸をカプセル化する固体脂質粒子の形成は、当該技術に既知の様々な方法によって達成されうる。そのような方法の例は、例えば、米国特許第５，７９５，５８７号、同第７，６５５，４６８号、同第７，９９３，６７２号、同第８，４９２，３５９号、同第８，７７１，７２８号および同第８，９５６，５７２号、ならびに米国特許公開第２００４／０２６２２２３号、同第２０１０／０１５２１８号、同第２０１２／０２２５１２９号、同第２０１２／０２７６２０９号、同第２０１２／０３０２６２２号、同第２０１３／００３７９７７号、同第２０１３／０１５６８４５号、同第２０１４／０２９６３２２号および同第２０１５／０２０９４４０号に記載されており、これらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。例えば、固体脂質粒子は、顕微溶液ミキサーを使用して合成されうる。例示的な顕微溶液ミキサーには、スリット・インターデジタル・マイクロミキサー（ｓｌｉｔ ｉｎｔｅｒｄｉｇｉｔｉａｌ ｍｉｃｒｏｍｉｘｅｒ）および／またはスタッガード・ヘリンボーン・マイクロミキサー（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ ｈｅｒｒｉｎｇｂｏｎｅ ｍｉｃｒｏｍｉｘｅｒ）（ＳＨＭ）が含まれうるが、これらに限定されない。マイクロミキサー内では、例えば脂質および核酸は、微細構造誘導性カオス的移流によって一緒に混合されうる。この方法によると、流体の流れは、ヘリンボーンパターンに存在するチャンネルを通って流動し、回転流を引き起こし、周囲の流れを互いに折り重ねる。この方法は、また、流体混合の表面を含むこともあり、流体循環の際に表面が方向を変える。いったん形成されると、固体粒子は、ポリマーマトリックスに組み込まれる前に脱水されうる。例えば、粒子は、標準的なフリーズドライ機器または同等の装置を使用して、減圧下で脱水されうる。噴霧乾燥を用いることもできる。噴霧乾燥の際に湿気が粒子の周りにフィルムを形成することがあり、そのことが外部環境の温度より低く温度を下げ、故に、乾燥過程で任意の脂質が溶融する可能性を最小限にする。加えて、様々な技術（例えば、静電気的手法）を用いて、液滴を霧化することができ、より低い温度の使用を可能にすることができる。
【0041】
[0044]上記で考察された実施形態において、脂質小胞（例えば、リポソーム）および固体脂質粒子は、核酸をカプセル化する脂質成分の主要なものとして形成される。しかし、本発明にとって必ずしも必要というわけではない。ある特定の実施形態において、例えば、ポリマー成分、脂質成分および核酸を含むハイブリッド粒子を用いることができる。そのようなハイブリッド粒子は、リポソームと従来のポリマーナノ粒子の利益および特徴を一緒に合わせることができる。例えば、ハイブリッド粒子は、核酸をカプセル化し、かつポリマーを含有するコア、コアを取り囲み、かつ脂質を含有する中間層（例えば、単層または二重層）、およびＰＥＧコンジュゲート脂質を含有する外側シェルを含有することができる。適切なポリマーには、例えば、生分解性ポリマー、例えば脂肪族ポリエステル（例えば、ポリ乳酸）、脂肪族芳香族コポリエステルなどが含まれうる。中間層および／または外側シェルは、上記に記載された陽イオン性脂質、ヘルパー脂質およびＰＥＧコンジュゲート脂質の組み合わせを含有することができる。
【0042】
ＩＩＩ．賦形剤
[0045]薬剤放出層は、任意選択で１つ以上の賦形剤、例えば、細胞透過性向上剤、リボ核酸分解阻害剤（例えば、ＲＮアーゼおよび／またはＤＮアーゼ阻害剤）、造影剤、親水性化合物、増量剤、可塑剤、界面活性剤、架橋剤、流動助剤、着色剤（例えば、クロロフィル、メチレンブルーなど）、抗酸化剤、安定剤、滑沢剤、他の種類の抗微生物剤、防腐剤などを含有して、特性および加工性を向上させることもできる。用いられる場合、任意選択の賦形剤は、典型的には、薬剤放出層の約０．０１ｗｔ％～約２０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．０５ｗｔ％～約１５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約１０ｗｔ％を構成する。１つの実施形態において、例えば、造影剤を用いて、デバイスがＸ線ベース画像化技術（例えば、コンピュータ断層撮影法、投影Ｘ線撮影法（ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎａｌ ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｙ）、蛍光透視法など）において検出されうることを確実にすることを助けることができる。そのような薬剤の例には、例えば、バリウムベース化合物、ヨウ素ベース化合物、ジルコニウムベース化合物（例えば、二酸化ジルコニウム）などが含まれる。そのような薬剤の１つの特定例は、硫酸バリウムである。他の既知の抗微生物剤および／または防腐剤も用いて、細菌の表面成長および付着を防止するのを助けることもでき、例えば、金属化合物（例えば、銀、銅または亜鉛）、金属塩、第四級アンモニウム化合物などである。
[0045]薬剤放出層は、任意選択で１つ以上の賦形剤、例えば、細胞透過性向上剤、リボ核酸分解阻害剤（例えば、ＲＮアーゼおよび／またはＤＮアーゼ阻害剤）、造影剤、親水性化合物、増量剤、可塑剤、界面活性剤、架橋剤、流動助剤、着色剤（例えば、クロロフィル、メチレンブルーなど）、抗酸化剤、安定剤、滑沢剤、他の種類の抗微生物剤、防腐剤などを含有して、特性および加工性を向上させることもできる。用いられる場合、任意選択の賦形剤は、典型的には、薬剤放出層の約０．０１ｗｔ％～約２０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．０５ｗｔ％～約１５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約１０ｗｔ％を構成する。１つの実施形態において、例えば、造影剤を用いて、デバイスがＸ線ベース画像化技術（例えば、コンピュータ断層撮影法、投影Ｘ線撮影法（ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎａｌ ｒａｄｉｏｇｒａｐｈｙ）、蛍光透視法など）において検出されうることを確実にすることを助けることができる。そのような薬剤の例には、例えば、バリウムベース化合物、ヨウ素ベース化合物、ジルコニウムベース化合物（例えば、二酸化ジルコニウム）などが含まれる。そのような薬剤の１つの特定例は、硫酸バリウムである。他の既知の抗微生物剤および／または防腐剤も用いて、細菌の表面成長および付着を防止するのを助けることもでき、例えば、金属化合物（例えば、銀、銅または亜鉛）、金属塩、第四級アンモニウム化合物などである。
【0043】
[0046]細胞透過性向上剤を用いて核酸の送達の助けとしてもよい。そのような向上剤の例には、例えば、密着結合調節剤、シクロデキストリン、トリヒドロキシ塩（例えば、胆汁塩、例えばグリココール酸ナトリウムまたはフシジン酸ナトリウム）、界面活性剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、ラウリルベタイン、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテートなど）、サポニン、フシジン酸およびその誘導体、脂肪酸およびその誘導体（例えば、オレイン酸、モノオレイン、カプリン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウムなど）、ピロリドン（例えば、２－ピロリドン）、アルコール（例えば、エタノール）、グリコール（例えば、プロピレングリコール）、アゾン（例えば、ラウロカプラム）、テルペン、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、デンドリマー、オキサゾリジン、ジオオキソラン（例えば、２－ｎ－ノニル－１，３－ジオキソラン）、脂質（例えば、リン脂質）などが含まれうる。
【0044】
[0047]核酸分解のリスクを最小限にすることを助けるために、リボ核酸阻害剤を用いることができる。この目的の代表的な阻害剤には、例えば、アンチヌクレアーゼ抗体および／または非抗体阻害剤が含まれうる。適切なヌクレアーゼ抗体は、アンチリボヌクレアーゼ抗体またはアンチデオキシリボヌクレアーゼ抗体でありうる。アンチリボヌクレアーゼ抗体は、以下のリボヌクレアーゼまたはデオキシリボヌクレアーゼ：ＲＮアーゼＡ、ＲＮアーゼＢ、ＲＮアーゼＣ、ＲＮアーゼ１、ＲＮアーゼＴ１、小球菌ヌクレアーゼ、Ｓ１ヌクレアーゼ、哺乳類リボヌクレアーゼ１ファミリー、リボヌクレアーゼ２ファミリー、哺乳類アンジオゲニン、ＲＮアーゼＨファミリー、ＲＮアーゼＬ、好酸球ＲＮアーゼ、メッセンジャーＲＮＡリボヌクレアーゼ（５’－３’エキソリボヌクレアーゼ、３’－５’エキソリボヌクレアーゼ）、デキャッピング酵素、デアデニラーゼ（ｄｅａｄｅｎｙｌａｓｅ）、大腸菌エンドリボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼＰ、ＲＮアーゼＩＩＩ、ＲＮアーゼＥ、ＲＮアーゼＩ，Ｉ＊、ＲＮアーゼＨＩ、ＲＮアーゼＨＩＩ、ＲＮアーゼＭ、ＲＮアーゼＲ、ＲＮアーゼＩＶ、Ｆ；ＲＮアーゼＰ２，Ｏ、ＰＩＶ、ＰＣ、ＲＮアーゼＮ）、大腸菌エキソリボヌクレアーゼ（ＲＮアーゼＩＩ、ＰＮＰアーゼ、ＲＮアーゼＤ、ＲＮアーゼＢＮ、ＲＮアーゼＴ、ＲＮアーゼＰＨ、オリゴＲＮアーゼ、ＲＮアーゼＲ）、ＲＮアーゼＳａ、ＲＮアーゼＦ１、ＲＮアーゼＵ２、ＲＮアーゼＭｓ、ＲＮアーゼＳｔ、ＤＮアーゼ１、Ｓ１ヌクレアーゼおよび小球菌ヌクレアーゼのうちの１つ以上を阻害する抗体でありうる。適切な非抗体ヌクレアーゼ阻害剤も同様に、ピロ炭酸ジエチル、エタノール、ホルムアミド、チオシアン酸グアニジニウム、バナジル－リボヌクレオシド複合体、マカロイド（ｍａｃａｌｏｉｄ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、プロテイナーゼＫ、ヘパリン、ヒドロキシルアミン－酸素第二銅イオン、ベントナイト、硫酸アンモニウム、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、β－メルカプトエタノール、システイン、ジチオエリトリトール、尿素、ポリアミン（スペルミジン、スペルミン）、洗剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム）、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフェン塩酸塩（ＴＣＥＰ）などを含みうるが、これらに限定されない。キレート剤も適切な非抗体ヌクレアーゼ阻害剤であり、それはこのような化合物がそうでなければ分解を引き起こす陽イオン（例えば、カルシウム、鉄など）に結合することを助けることができるからである。キレート剤には、例えば、アミノカルボン酸（例えば、エチレンジアミン四酢酸）およびその塩、ヒドロキシカルボン酸（例えば、クエン酸、酒石酸、アスコルビン酸など）およびその塩、ポリリン酸（例えば、トリポリリン酸、ヘキサメタリン酸など）およびその塩などが含まれうる。望ましくは、キレート剤は、金属イオンと多重配位結合を形成して、いずれかの自由金属イオンの可能性を低減することができる点において、多座配位である。１つの実施形態において、例えば、２つ以上のアミノ二酢酸（時には、イミノ二酢酸と呼ばれる）基またはその塩を含有する多座配位キレート剤を利用することができる。そのようなキレート剤の１つの例は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）である。適切なＥＤＴＡ塩の例には、ＥＤＴＡカルシウム二ナトリウム、ＥＤＴＡ二アンモニウム、ＥＤＴＡ二ナトリウムおよびＥＤＴＡ二カリウム、ＥＤＴＡ三ナトリウムおよびＥＤＴＡ三カリウム、ＥＤＴＡ四ナトリウムおよびＥＤＴＡ四カリウムが含まれる。同様のアミノ二酢酸キレート剤のなお他の例には、ブチレンジアミン四酢酸、（１，２－シクロヘキシレンジアミン四酢酸（ＣｙＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミンテトラプロピオン酸、（ヒドロキシエチル）エチレンジアミン三酢酸（ＨＥＤＴＡ）、トリエタノールアミンＥＤＴＡ、トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）、１，３－ジアミノ－２－ヒドロキシプロパン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＤＨＰＴＡ）、メチルイミノ二酢酸、プロピレンジアミン四酢酸、エチレンジイミノジプロパン二酸（ＥＤＤＭ）、２，２’－ビス（カルボキシメチル）イミノ二酢酸（ＩＳＡ）、エチレンジイミノジブタン二酸（ＥＤＤＳ）などが含まれるが、これらに限定されない。なお他の適切な多座配位キレート剤には、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－エチレンジアミンテトラ（メチレンホスホン）酸（ＥＤＴＭＰ）、ニトリロトリメチルホスホン酸、リン酸二水素２－アミノエチル、２，３－ジカルボキシプロパン－１，１－ジホスホン酸、メソ－オキシビス（ブタン二酸）（ＯＤＳ）などが含まれる。
【0045】
[0048]埋め込み型医療デバイスからの放出速度の更なる制御を助けるため、例えば、親水性化合物を、水溶性および／または水膨張性である薬剤放出層に組み込むこともできる。用いられる場合、薬剤放出層内のエチレン酢酸ビニルコポリマーの親水性化合物に対する重量比は、約０．２５～約２００、いくつかの実施形態では約０．４～約８０、いくつかの実施形態では約０．８～約２０、いくつかの実施形態では約１～約１６、およびいくつかの実施形態では約１．２～約１０の範囲でありうる。そのような親水性化合物は、例えば、薬剤放出層の約１ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２ｗｔ％～約５０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５ｗｔ％～約４０ｗｔ％を構成してもよく、一方、エチレン酢酸ビニルコポリマーは、典型的には、薬剤放出層の約４０ｗｔ％～約９９ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５０ｗｔ％～約９８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約６０ｗｔ％～約９５ｗｔ％を構成する。適切な親水性化合物には、例えば、ポリマー、非ポリマー材料、例えば、脂肪酸またはその塩（例えば、ステアリン酸、クエン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸など、ならびにこれらの塩）、生体適合性塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウムなど）、下記に記載されているヒドロキシ機能性化合物などが含まれうる。適切な親水性ポリマーの例には、例えば、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウムおよびアルギン酸カルシウム、セルロース化合物（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロースなど）、寒天、ゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリアルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール）、コラーゲン、ペクチン、キチン、キトサン、ポリ－１－カプロラクトン、ポリビニルピロリドン、ポリ（ビニルピロリドン－ｃｏ－酢酸ビニル）、多糖、親水性ポリウレタン、ポリヒドロキシアクリレート、デキストラン、キサンタン、タンパク質、エチレンビニルアルコールコポリマー、水溶性ポリシランおよびシリコーン、水溶性ポリウレタンなど、ならびにこれらの組み合わせが含まれる。特に適切な親水性ポリマーは、ポリアルキレングリコールであり、例えば、１モルあたり約１００～５００，０００グラム、いくつかの実施形態では１モルあたり約５００～２００，０００グラム、およびいくつかの実施形態では１モルあたり約１，０００～約１００，０００グラムの分子量を有するものである。そのようなポリアルキレングリコールの特定例には、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリテトラメチレングリコール、ポリエピクロロヒドリンなどが含まれる。
【0046】
[0049]１つ以上の非イオン性、陰イオン性および／または両性界面活性剤を用いて、均一の分散を作り出すことを助けることもできる。用いられる場合、そのような界面活性剤は、典型的には、膜層の約０．０５ｗｔ％～約８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約６ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．５ｗｔ％～約３ｗｔ％を構成する。疎水性基剤（例えば、長鎖アルキル基またはアルキル化アリール基）と親水性鎖（例えば、エトキシおよび／またはプロポキシ部分を含有する鎖）とを典型的に有する非イオン性界面活性剤が、特に適している。使用してもよいいくつかの適切な非イオン性界面活性剤には、エトキシル化アルキルフェノール、エトキシル化およびプロポキシル化脂肪アルコール、メチルグルコースのポリエチレングリコールエーテル、ソルビトールのポリエチレングリコールエーテル、エチレンオキシド－プロピレンオキシドブロックコポリマー、脂肪（Ｃ８～Ｃ１８）酸のエトキシル化エステル、エチレンオキシドと長鎖アミンまたはアミドとの縮合生成物、エチレンオキシドとアルコールとの縮合生成物、脂肪酸エステル、長鎖アルコールのモノグリセリドまたはジグリセリド、ならびにこれらの混合物が含まれうるが、これらに限定されない。特に適切な非イオン性界面活性剤には、脂肪アルコールのエチレンオキシド縮合物、脂肪酸のポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびソルビタン脂肪酸エステルなどが含まれうる。そのような乳化剤を形成するために使用される脂肪成分は、飽和または不飽和、置換または非置換であってもよく、６～２２個の炭素原子、いくつかの実施形態では８～１８個の炭素原子、およびいくつかの実施形態では１２～１４個の炭素原子を含有しうる。ポリオキシエチレンで変性されているソルビタン脂肪酸エステル（例えば、モノエステル、ジエステル、トリエステルなど）は、非イオン性界面活性剤の特に有用な一群である。これらの物質は、典型的には１，４－ソルビタンエステルへのエチレンオキシドの添加によって調製される。ポリオキシエチレンの添加は、親油性ソルビタンエステル界面活性剤を、水に一般に可溶性または分散性である親水性界面活性剤に変換する。そのような物質は、名称ＴＷＥＥＮ（登録商標）（例えば、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０またはポリエチレン（２０）ソルビタンモノオレエート）で市販されている。
【0047】
ＩＶ．デバイスの構成
Ａ．薬剤放出層
[0050]上記に示されたように、薬剤放出層は、ポリマーマトリックス、カプセル化粒子および任意選択で賦形剤から形成されうる。薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスは、様々な異なる幾何学的形状、例えば、円筒形（ロッド）、ディスク、リング、ドーナッツ形、らせん形、楕円形、三角形、卵形などを有することができる。１つの実施形態において、例えば、薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスは全体の構造が円筒（ロッド）またはディスクの形態になるように、全体的に円形の断面形状を有していてもよい。そのような実施形態において、薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスは、典型的には、約０．５～約５０ミリメートル、いくつかの実施形態では約１～約４０ミリメートル、およびいくつかの実施形態では約５～約３０ミリメートルの直径を有する。薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスの長さは変動しうるが、典型的には、約１～約２５ミリメートルの範囲である。円筒形デバイスは、例えば、約５～約５０ミリメートルの長さを有していてもよく、一方、ディスク形状のデバイスは、約０．５～約５ミリメートルの長さを有していてもよい。
Ａ．薬剤放出層
[0050]上記に示されたように、薬剤放出層は、ポリマーマトリックス、カプセル化粒子および任意選択で賦形剤から形成されうる。薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスは、様々な異なる幾何学的形状、例えば、円筒形（ロッド）、ディスク、リング、ドーナッツ形、らせん形、楕円形、三角形、卵形などを有することができる。１つの実施形態において、例えば、薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスは全体の構造が円筒（ロッド）またはディスクの形態になるように、全体的に円形の断面形状を有していてもよい。そのような実施形態において、薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスは、典型的には、約０．５～約５０ミリメートル、いくつかの実施形態では約１～約４０ミリメートル、およびいくつかの実施形態では約５～約３０ミリメートルの直径を有する。薬剤放出層および／または埋め込み型医療デバイスの長さは変動しうるが、典型的には、約１～約２５ミリメートルの範囲である。円筒形デバイスは、例えば、約５～約５０ミリメートルの長さを有していてもよく、一方、ディスク形状のデバイスは、約０．５～約５ミリメートルの長さを有していてもよい。
【0048】
[0051]薬剤放出層は、様々な既知の技術、例えば、ホットメルト押出、圧縮成形（例えば、真空圧縮成形）、射出成形、溶液流延、ディップコーティング、スプレーコーティング、マイクロ押出成形（ｍｉｃｒｏｅｘｔｒｕｓｉｏｎ）、コアセルベーションなどを介して形成されうる。１つの実施形態において、ホットメルト押出技術を用いることができる。ホットメルト押出は一般に無溶媒法であり、薬剤放出層の成分（例えば、エチレン酢酸ビニルコポリマー、核酸、担体成分、任意選択の賦形剤など）を溶融ブレンドし、連続製造過程で任意選択に造形して、高い処理率（ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｒａｔｅ）で一貫した出力品質を可能にすることができる。この技術はエチレン酢酸ビニルコポリマーに特に適しており、それはこれらが、典型的には広い分子量分布を伴って比較的高い程度の長鎖分岐を示すからである。この特質の組み合わせは、押出過程の際にコポリマーの剪断減粘をもたらして、ホットメルト押出を容易にすることの助けとなりうる。更に、極性酢酸ビニルコモノマー単位は、ポリエチレン鎖セグメントの結晶化を阻害することによって「内部」可塑剤として機能することができる。このことはコポリマーの融点の低下をもたらすことができ、これは、カプセル化粒子と共に加工される能力を更に向上させる。
【0049】
[0052]ホットメルト押出法の際に、溶融ブレンドは、一般に、カプセル化粒子に用いられている担体（例えば、脂質）の溶融温度に類似した温度、または更にそれより低い温度であっても発生する。溶融ブレンドは、エチレン酢酸ビニルコポリマーの溶融温度に類似した温度、または僅かに上回る温度でも発生しうる。溶融ブレンド温度の、カプセル化粒子中の担体の溶融温度に対する比は、例えば約２以下、いくつかの実施形態では約１．８以下、いくつかの実施形態では約０．１～約１．６、いくつかの実施形態では約０．２～約１．５、およびいくつかの実施形態では約０．４～約１．２でありうる。溶融ブレンド温度は、例えば、約３０℃～約１００℃、いくつかの実施形態では約４０℃～約８０℃、およびいくつかの実施形態では約５０℃～約７０℃でありうる。様々な溶融ブレンド技術のいずれかを一般に用いることができる。例えば、成分を別々にまたは組み合わせて、バレル（例えば、円筒バレル）内に回転可能に装填および収容されている少なくとも１本のスクリューを含む押出機に供給することができる。押出機は、一軸スクリューまたは二軸スクリュー押出機でありうる。例えば、一軸スクリュー押出機の１つの実施形態は、ハウジングまたはバレル、ならびに適切な駆動機（典型的にはモーターおよびギヤボックスを含む）により一端が回転的に駆動されるスクリューを含むことができる。望ましい場合、２本の別々のスクリューを含む二軸スクリュー押出機を用いてもよい。スクリューの構成は特に重要ではなく、任意の数および／または方向のねじ山および溝を含んでもよく、このことは当該技術において知られている。例えば、スクリューは、典型的には、スクリューの中心の周囲に遠心方向に伸びて全体的にらせん溝を形成するねじ山を含む。供給セクションおよび溶融セクションが、スクリューの長さに沿って画定されうる。供給セクションはバレルの投入部分であり、そこにエチレン酢酸ビニルコポリマーおよび／またはカプセル化粒子が添加される。溶融セクションは相変化セクションであり、そこではコポリマーが固体から液体様状態に変化する。押出機が製造されるときに、これらのセクションに正確に画定された線引きはないが、供給セクション、および固体から液体への相変化が発生する溶融セクションを確実に確認することは、十分に当業者の通常の技能の範囲内である。必ずしも必要ではないが、押出機は、バレルの押出端に隣接し、溶融セクションの下流に配置されている混合セクションを有することもできる。望ましい場合、１つ以上の分配および／または分散混合要素を、押出機の混合および／または溶融セクション内に用いてもよい。一軸スクリュー押出機に適切な分配ミキサーには、例えば、Ｓａｘｏｎ、Ｄｕｌｍａｇｅ、Ｃａｖｉｔｙ Ｔｒａｎｓｆｅｒミキサーなどが含まれうる。同様に、適切な分散ミキサーには、Ｂｌｉｓｔｅｒリング、Ｌｅｒｏｙ／Ｍａｄｄｏｃｋ、ＣＲＤミキサーなどが含まれうる。当該技術に良く知られているように、混合は、ポリマー溶融物の折り畳みおよび再方向付けを作り出すバレル内のピンを使用することによって更に改善することができ、例えば、Ｂｕｓｓ Ｋｎｅａｄｅｒ押出機、Ｃａｖｉｔｙ ＴｒａｎｓｆｅｒミキサーおよびＶｏｒｔｅｘ Ｉｎｔｅｒｍｅｓｈｉｎｇ Ｐｉｎミキサーに使用されているものである。
【0050】
[0053]望ましい場合、スクリューの長さ（「Ｌ」）の直径（「Ｄ」）に対する比を選択して、成分の処理量（ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ）とブレンドの最適なバランスを達成することができる。Ｌ／Ｄ値は、例えば、約１０～約５０、いくつかの実施形態では約１５～約４５、およびいくつかの実施形態では約２０～約４０の範囲でありうる。スクリューの長さは、例えば、約０．１～約５メートル、いくつかの実施形態では約０．４～約４メートル、およびいくつかの実施形態では約０．５～約２メートルの範囲でありうる。同様にスクリューの直径は、約５～約１５０ミリメートル、いくつかの実施形態では約１０～約１２０ミリメートル、およびいくつかの実施形態では約２０～約８０ミリメートルでありうる。長さおよび直径に加えて、押出機の他の態様を選択して、望ましい程度のブレンドを達成することを助けることもできる。例えば、スクリューの速度を選択して、望ましい滞留時間、剪断速度、溶融加工温度などを達成することができる。例えば、スクリュー速度は、約１０～約８００毎分回転数（「ｒｐｍ」）、いくつかの実施形態では約２０～約５００ｒｐｍ、およびいくつかの実施形態では約３０～約４００ｒｐｍの範囲でありうる。また溶融ブレンドの際の見掛け剪断速度は、約１００秒－１～約１０，０００秒－１、いくつかの実施形態では約５００秒－１～約５０００秒－１、およびいくつかの実施形態では約８００秒－１～約１２００秒－１の範囲でありうる。見掛け剪断速度は、４Ｑ／ΠＲ３に等しく、ここで、Ｑはポリマー溶融物の体積流量（「ｍ３／ｓ」）であり、Ｒは溶融ポリマーが流れるキャピラリー（例えば、押出機ダイ）の半径（「ｍ」）である。
【0051】
[0054]一緒に溶融ブレンドされると、得られたポリマー組成物は、オリフィス（例えば、ダイ）を通して押し出され、ペレット、シート、ファイバー、フィラメントなどに形成されてもよく、その後にこれらを様々な既知の造形技術、例えば、射出成形、圧縮成形、ナノ成形（ｎａｎｏｍｏｌｄｉｎｇ）、オーバー成形（ｏｖｅｒｍｏｌｄｉｎｇ）、ブロー成形、三次元印刷などを使用して薬剤放出層に造形することができる。射出成形は、例えば、２つの主要な段階、すなわち、射出段階および保持段階を生じることがある。射出段階では、成形型キャビティを溶融ポリマー組成物で充填する。保持段階は、射出段階が終了した後に開始され、保持圧力を制御して、追加の物質をキャビティに詰め、冷却の際に生じる体積収縮を補う。ショット（ｓｈｏｔ）を造った後、次いでこれを冷却することができる。冷却が完了すると、成形型を開け、成形型内の排出ピンの助けを借りながら、部品を排出させて、成形サイクルを完了させる。任意の適切な射出成形機器を一般に本発明に用いることができる。１つの実施形態では、薬剤放出層の形状を有する成形型キャビティを一緒に画定する第１の成形型ベースおよび第２の成形型ベースを含む、射出成形装置を用いることができる。成形装置は、第１の成形型の半分の外側外表面からスプルーを通って成形型キャビティまで伸びている樹脂流路を含む。ポリマー組成物を、様々な技術を使用して樹脂流路に供給することができる。例えば、組成物を、回転スクリュー（示されず）を含有する押出機バレルに取り付けられた供給ホッパーに（例えば、ペレットの形態で）供給することができる。スクリューが回転すると、ペレットは前進して、圧力および摩擦を受け、そのことが熱を発生してペレットを溶融させる。冷却機構を備えて、樹脂を成形型キャビティ内で望ましい薬剤放出層の形状（例えば、ディスク、ロッドなど）に凝固させることもできる。例えば、成形型ベースは、１つ以上の冷却ラインを含んでもよく、冷却媒体がその中を流れて、溶融物質の凝固のために望ましい成形型温度を成形型ベースの表面に付与する。成形型温度（例えば、成形型の表面の温度）は、約５０℃～約１２０℃、いくつかの実施形態では約６０℃～約１１０℃、およびいくつかの実施形態では約７０℃～約９０℃の範囲でありうる。
【0052】
[0055]上記に示されたように、望ましい形状およびサイズの薬剤放出層を形成するのに適切な別の技術は、三次元印刷である。この方法では、ポリマー組成物を、プリンターシステムによる使用に容易に適合されるプリンターカートリッジに組み込むことができる。プリンターカートリッジは、例えば、ポリマー組成物を担持するスプールまたは他の同様のデバイスを含有することができる。例えば、フィラメントの形態で供給される場合、スプールは全体的に円筒形のリムを有してもよく、その周りにフィラメントが巻かれている。スプールは、同様に、使用時にプリンターに容易に装填されるようにボアまたはスピンドルを画定してもよい。様々な三次元プリンターシステムのいずれかを本発明に用いることができる。特に適切なプリンターシステムは、押出ベースシステムであり、これは多くの場合「熱溶解積層法（ｆｕｓｅｄ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌｉｎｇ）」システムと呼ばれる。例えば、ポリマー組成物を、プラテンおよびガントリーを含有するプリントヘッドの造形チャンバー（ｂｕｉｌｄ ｃｈａｍｂｅｒ）に供給することができる。プラテンは、コンピュータ操作コントローラーから提供される信号に基づいて、垂直ｚ軸に沿って移動することができる。ガントリーは、コントローラーから提供される信号に基づいて、造形チャンバー内でプリントヘッドを水平ｘ－ｙ平面に移動させるように構成されうる。プリントヘッドはガントリーにより支持され、コントローラーから提供される信号に基づいて、造形構造をプラテンに交互積層法（ｌａｙｅｒ－ｂｙ－ｌａｙｅｒ ｍａｎｎｅｒ）で印刷するように構成される。例えば、プリントヘッドは、二重チップ押出ヘッドであってもよい。
【0053】
[0056]圧縮成形（例えば、真空圧縮成形）を用いることもできる。そのような方法では、真空下にある間にポリマー圧縮物（ｐｏｌｙｍｅｒ ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ）を所望の形状に加熱および圧縮することによって、デバイスの層を形成することができる。より詳細には、この方法は、ポリマー組成物を、圧縮成形型のチャンバー内に適合する前駆体に形成し、前駆体を加熱し、前駆体を加熱している間に、前駆体を圧縮成形して望ましい層にすることを含むことができる。ポリマー組成物は、様々な技術を介して、例えば乾式粉末混合、押出などにより前駆体に形成されうる。圧縮の際の温度は、約５０℃～約１２０℃、いくつかの実施形態では約６０℃～約１１０℃、およびいくつかの実施形態では約７０℃～約９０℃の範囲でありうる。真空供給源は、また、成形の際に負圧を前駆体に適用して、正確な形状の保持を確実にすることを助けることができる。そのような圧縮成形技術の例は、例えば、Ｔｒｅｆｆｅｒらの米国特許第１０，６２５，４４４号に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0054】
Ｂ．膜層
[0057]いくつかの場合において、埋め込み型医療デバイスは、薬剤放出層（すなわち、「コア」）の外表面に隣接して位置する少なくとも１つの膜層を含有するという点において多層でありうる。膜層の数は、デバイス特定の構成、核酸の性質および望ましい放出プロファイルに応じて変わりうる。例えば、デバイスは、１つの膜層のみを含有してもよい。例えば、図１および２を参照すると、全体的に円形の断面形状を有するコア４０を含有し、かつ得られたデバイスが全体的に本質的に円筒状になるように伸長されている、埋め込み型医療デバイス１０の１つの実施形態が示されている。コア４０は、膜層２０が周囲に配置されている外側周囲表面６１を画定する。コア４０と同様に、膜層２０も全体的に円形の断面形状を有し、コア４０の全長を覆うように伸長されている。デバイス１０を使用すると、核酸は、コア４０から膜層２０を通って放出され、それによってデバイスの外部表面２１から出る。
[0057]いくつかの場合において、埋め込み型医療デバイスは、薬剤放出層（すなわち、「コア」）の外表面に隣接して位置する少なくとも１つの膜層を含有するという点において多層でありうる。膜層の数は、デバイス特定の構成、核酸の性質および望ましい放出プロファイルに応じて変わりうる。例えば、デバイスは、１つの膜層のみを含有してもよい。例えば、図１および２を参照すると、全体的に円形の断面形状を有するコア４０を含有し、かつ得られたデバイスが全体的に本質的に円筒状になるように伸長されている、埋め込み型医療デバイス１０の１つの実施形態が示されている。コア４０は、膜層２０が周囲に配置されている外側周囲表面６１を画定する。コア４０と同様に、膜層２０も全体的に円形の断面形状を有し、コア４０の全長を覆うように伸長されている。デバイス１０を使用すると、核酸は、コア４０から膜層２０を通って放出され、それによってデバイスの外部表面２１から出る。
【0055】
[0058]当然のことながら、他の実施形態において、デバイスは、多重膜層を含有してもよい。例えば、図１および２のデバイスでは、１つ以上の追加の膜層（示されず）を膜層２０の上に配置して、核酸の更なる制御放出を助けることができる。他の実施形態では、コアが別々の膜層の間に位置するまたは挟まるように、デバイスを構成することができる。例えば、図３および４を参照すると、全体的に円形の断面形状を有するコア１４０を含有し、かつ得られたデバイスが全体的に本質的にディスク形状になるように伸長されている、埋め込み型医療デバイス１００の１つの実施形態が示されている。コア１４０は、第１の膜層１２０が位置している上部外表面１６１および第２膜層１２２が位置している下部外表面１６３を画定する。コア１４０と同様に、第１の膜層１２０および第２の膜層１２２も、コア１４０を全体的に覆っている、全体的に円形の断面形状を有する。望ましい場合、膜層１２０および１２２の縁がコア１４０の周辺を越えて延長してもよく、それによって、コア１４０の外部周囲表面１７０の任意の露出領域を覆うように一緒に封止することができる。デバイス１００を使用すると、核酸は、コア１４０から第１の膜層１２０および第２の膜層１２２を通って放出され、それによってデバイスの外部表面１２１および１２３から出ることができる。当然のことながら、望ましい場合は、１つ以上の追加の膜層（示されず）を第１の膜層１２０および／または第２の膜層１２２の上に配置して、核酸の更なる制御放出を助けることもできる。
【0056】
[0059]用いられる特定の構成にかかわらず、膜層は、一般に、疎水性ポリマーを含有する膜ポリマーマトリックスを含有する。膜ポリマーマトリックスは、典型的には、膜層の約３０ｗｔ％～１００ｗｔ％、いくつかの実施形態では約４０ｗｔ％～約９９ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５０ｗｔ％～約９０ｗｔ％を構成する。多重膜層を用いる場合、各膜層は、そのような疎水性ポリマーを含む膜ポリマーマトリックスを含有することが、典型的に望ましい。例えば、第１の膜層は第１の膜ポリマーマトリックスを含有することができ、第２膜層は第２の膜ポリマーマトリックスを含有することができる。そのような実施形態において、第１および第２の膜ポリマーマトリックスは、それぞれ疎水性ポリマーを含有し、これらは同一であっても、異なっていてもよい。
【0057】
[0060]膜ポリマーマトリックスに使用されるポリマーは、哺乳動物の身体などの水性環境に設置された場合にある特定の期間にわたって構造整合性を保持できるように、および使用前に長期間にわたって保存するのに十分に安定でありうるように、一般に本質的に疎水性である。この目的に適切な疎水性ポリマーの例には、例えば、シリコーンポリマー、ポリオレフィン、ポリ塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリスルホン、スチレンアクリロニトリルコポリマー、ポリウレタン、シリコーンポリエーテル－ウレタン、ポリカーボネート－ウレタン、シリコーンポリカーボネート－ウレタンなど、ならびにこれらの組み合わせが含まれてもよい。当然のことながら、疎水性ポリマーでコートされている、そうでなければカプセル化されている親水性ポリマーも、膜ポリマーマトリックスにおける使用に適している。ある特定の実施形態において、膜ポリマーマトリックスは、半結晶オレフィンコポリマーを含有してもよい。そのようなオレフィンコポリマーの溶融温度は、例えばＡＳＴＭ Ｄ３４１８－１５に従って決定すると、例えば、約２０℃～約１００℃、いくつかの実施形態では、約２５℃～約８０℃、いくつかの実施形態では約３０℃～約７０℃、いくつかの実施形態では約３５℃～約６５℃、およびいくつかの実施形態では約４０℃～約６０℃の範囲でありうる。そのようなコポリマーは、少なくとも１つのオレフィンモノマー（例えば、エチレン、プロピレンなど）、ならびにポリマー主鎖にグラフトされている、および／またはポリマーの構成成分として組み込まれている（例えば、ブロックもしくはランダムコポリマー）少なくとも１つの極性モノマーから、一般に誘導される。適切な極性モノマーには、例えば、酢酸ビニル、ビニルアルコール、無水マレイン酸、マレイン酸、（メタ）アクリル酸（例えば、アクリル酸、メタクリル酸など）、（メタ）アクリレート（例えば、アクリレート、メタクリレート、アクリル酸エチル、メタクリル酸メチル、メタクリル酸エチルなど）などが含まれる。多種多様なそのようなコポリマーは、一般にポリマー組成物において使用され、例えば、エチレン酢酸ビニルコポリマー、エチレン（メタ）アクリル酸ポリマー（例えば、エチレンアクリル酸コポリマーおよびこれらのコポリマーの部分中和イオノマー、エチレンメタクリル酸コポリマーおよびこれらのコポリマーの部分中和イオノマーなど）、エチレン（メタ）アクリレートポリマー（例えば、エチレンメチルアクリレートコポリマー、エチレンアクリル酸エチルコポリマー、エチレンアクリル酸ブチルコポリマーなど）などでありうる。選択される特定のモノマーにかかわらず、本発明者たちは、コポリマーのある特定の態様を選択的に制御して、望ましい放出特性の達成を助けることができることを発見した。例えば、コポリマーの極性モノマー含有量は、コポリマーの約２０ｗｔ％～約６０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２５ｗｔ％～約５５ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３０ｗｔ％～約５０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約３５ｗｔ％～約４８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約３８ｗｔ％～約４５ｗｔ％の範囲内であるように選択的に制御されうる。逆に言えば、コポリマーのオレフィンモノマー含有量も同様に、約４０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、４５ｗｔ％～約７５ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５０ｗｔ％～約８０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５２ｗｔ％～約６５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５５ｗｔ％～約６２ｗｔ％の範囲内でありうる。
【0058】
[0061]膜ポリマーマトリックスに使用される疎水性ポリマーは、また、薬剤放出層に用いられるエチレン酢酸ビニルコポリマーと同一であっても、異なっていてもよい。１つの実施形態において、例えば、薬剤放出層（コア）および膜層は、両方とも同じポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニルコポリマー）を用いる。なお他の実施形態において、膜層は、薬剤放出層に用いられるエチレン酢酸ビニルコポリマーより低いメルトフローインデックスを有する疎水性ポリマー（例えば、α－オレフィンコポリマー）を用いてもよい。とりわけ、このことはデバイスからの核酸の放出の制御を更に助けることができる。例えば、薬剤放出層に用いられるエチレン酢酸ビニルコポリマーのメルトフローインデックスの、膜層に用いられる疎水性ポリマーのメルトフローインデックスに対する比は、約１～約２０、いくつかの実施形態では約２～約１５、およびいくつかの実施形態では約４～約１２でありうる。膜層の疎水性ポリマーのメルトフローインデックスは、例えば、１９０℃の温度および２．１６キログラムの荷重でＡＳＴＭ Ｄ１２３８－１３に従って決定すると、約１～約８０ｇ／１０分、いくつかの実施形態では約２～約７０ｇ／１０分、およびいくつかの実施形態では約５～約６０ｇ／１０分の範囲でありうる。用いてもよい適切なエチレン酢酸ビニルコポリマーの例には、名称ＡＴＥＶＡ（登録商標）（例えば、ＡＴＥＶＡ（登録商標）４０３０ＡＣまたは２８６１Ａ）でＣｅｌａｎｅｓｅから入手可能なものが含まれる。
【0059】
[0062]デバイスに使用される膜層は、膜層ポリマーマトリックス内に分散されている上記に記載された核酸カプセル化粒子を任意選択で含有することができる。膜層中のカプセル化粒子の核酸および担体成分は、コアに用いられるものと同一であっても、異なっていてもよい。それと無関係に、そのようなカプセル化粒子が膜層に用いられる場合、膜層は、一般に、コア中のカプセル化粒子の濃度（ｗｔ％）の膜層中のカプセル化粒子の濃度（ｗｔ％）に対する比が１を超える、いくつかの実施形態では約１．５以上である、およびいくつかの実施形態では約１．８～約４であるような量で粒子を含有することが一般的に望ましい。用いられる場合、カプセル化粒子は、典型的に、膜層の僅か約１ｗｔ％～約４０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約５ｗｔ％～約３５ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約１０ｗｔ％～約３０ｗｔ％を構成する。当然のことながら、他の実施形態において、膜層は、一般に、薬剤放出層から放出される前にそのような核酸カプセル化粒子を含まない。多重膜層が用いられる場合、各膜層は、薬剤放出層中のカプセル化粒子の重量百分率の膜層中の粒子の重量百分率に対する比が１を超える、いくつかの実施形態では約１．５以上である、およびいくつかの実施形態では約１．８～約４であるような量で、一般にカプセル化粒子を含有しうる。
【0060】
[0063]膜層は、任意選択で上記に記載された１つ以上の賦形剤、例えば、造影剤、親水性化合物、増量剤、可塑剤、界面活性剤、架橋剤、流動助剤、着色剤（例えば、クロロフィル、メチレンブルーなど）、抗酸化剤、安定剤、滑沢剤、他の種類の抗微生物剤、防腐剤などを含有して、特性および加工性を向上させることもできる。用いられる場合、任意選択の賦形剤は、典型的には、膜層の約０．０１ｗｔ％～約６０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．０５ｗｔ％～約５０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約４０ｗｔ％を構成する。
【0061】
[0064]埋め込み型医療デバイスからの放出速度の更なる制御を助けるため、例えば、親水性化合物を上記に記載された膜層に組み込むこともできる。用いられる場合、膜層内の疎水性ポリマーの親水性化合物に対する重量比は、約０．２５～約２００、いくつかの実施形態では約０．４～約８０、いくつかの実施形態では約０．８～約２０、いくつかの実施形態では約１～約１６、およびいくつかの実施形態では約１．２～約１０の範囲でありうる。そのような親水性化合物は、例えば、膜層の約１ｗｔ％～約５０ｗｔ％、いくつかの実施形態では約２ｗｔ％～約４０ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約５ｗｔ％～約３０ｗｔ％を構成してもよく、一方、疎水性ポリマーは、典型的には、膜層の約５０ｗｔ％～約９９ｗｔ％、いくつかの実施形態では約６０ｗｔ％～約９８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約７０ｗｔ％～約９５ｗｔ％を構成する。
【0062】
[0065]１つの特定の実施形態において、膜層は、膜ポリマーマトリックス内に分布した複数の水溶性粒子の形態である親水性化合物を含有してもよい。そのような実施形態では、水溶性粒子の粒径を制御して、望ましい送達率を達成することを助けることができる。より詳細には、粒子の直径中央値（Ｄ５０）は、例えばレーザー散乱粒径分布分析器（例えば、ＨｏｒｉｂａのＬＡ－９６０）を使用して決定すると、約１００マイクロメートル以下、いくつかの実施形態では約８０マイクロメートル以下、いくつかの実施形態では約６０マイクロメートル以下、およびいくつかの実施形態では約１～約４０マイクロメートルでありうる。粒子は、粒子量の９０％以上（Ｄ９０）が上記に示された範囲内の直径を有するような狭いサイズ分布を有することもできる。様々な異なる物質を用いてそのような粒子を形成することができ、例えば、脂肪酸またはその塩（例えば、ステアリン酸、クエン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、リノール酸など、ならびにこれらの塩）、セルロース化合物（例えば、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロースなど）、生体適合性塩（例えば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウムなど）、ヒドロキシ機能性化合物などである。特に適切な実施形態において、水溶性粒子は、一般に、ポリマーではないヒドロキシ機能性化合物を含有する。用語「ヒドロキシ機能性」は、少なくとも１個のヒドロキシル基、ある特定の場合では多数のヒドロキシル基、例えば２個以上、いくつかの実施形態では３個以上、いくつかの実施形態では４～２０個、およびいくつかの実施形態では５～１６個のヒドロキシル基を含有する化合物を一般に意味する。同様に用語「非ポリマー」も、大きい数の反復単位を含有しない、例えば１０個以下の反復単位、いくつかの実施形態では５個以下の反復単位、いくつかの実施形態では３個以下の反復単位、およびいくつかの実施形態では２個以下の反復単位を含有する化合物を一般に意味する。いくつかの場合において、そのような化合物は任意の反復単位を欠いている。故に、そのような非ポリマー化合物は比較的低い分子量を有し、例えば、１モルあたり約１～約６５０グラム、いくつかの実施形態では１モルあたり約５～約６００グラム、いくつかの実施形態では１モルあたり約１０～約５５０グラム、いくつかの実施形態では１モルあたり約５０～約５００グラム、いくつかの実施形態では１モルあたり約８０～約４５０グラム、およびいくつかの実施形態では１モルあたり約１００～約４００グラムである。本発明に用いることができる特に適切な非ポリマーヒドロキシ機能性化合物には、例えば、糖およびその誘導体、例えば、単糖（例えば、デキストロース、フルクトース、ガラクトース、リボース、デオキシリボースなど）、二糖（例えば、スクロース、ラクトース、マルトースなど）、糖アルコール（例えば、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、マルチトール、エリスリトール、ガラクチトール、イソマルト、イノシトール、ラクチトールなど）など、ならびにこれらの組み合わせが含まれる。
【0063】
[0066]上記に記載された１つ以上の非イオン性、陰イオン性および／または両性界面活性剤を用いて、均一の分散を作り出すことを助けることもできる。用いられる場合、そのような界面活性剤は、典型的には、膜層の約０．０５ｗｔ％～約８ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．１ｗｔ％～約６ｗｔ％、およびいくつかの実施形態では約０．５ｗｔ％～約３ｗｔ％を構成する。
【0064】
[0067]膜層は、コアの形成に使用されるものと同じまたは異なる技術、例えば、ホットメルト押出、射出成形、溶液流延、ディップコーティング、スプレーコーティング、マイクロ押出成形、コアセルベーションなどを使用して形成されうる。１つの実施形態において、ホットメルト押出技術を用いることができる。コアおよび膜層を別々または同時に形成することもできる。１つの実施形態において、例えば、コアおよび膜層は別々に形成され、次いで既知の接合技術を使用して、例えば、スタンピング（ｓｔａｍｐｉｎｇ）、ホットシール（ｈｏｔ ｓｅａｌｉｎｇ）、接着剤接合などにより一緒に合わされる。圧縮成形（例えば、真空圧縮成形）を用いて、埋め込み型デバイスを形成することもできる。上記に記載されたように、薬剤放出層および膜層は、それぞれ個別に、真空下にある間に対応するポリマー圧縮物の加熱および圧縮により所望の形状に形成されうる。形成されると、薬剤放出層および膜層は積層されて、多層前駆体を形成し、その後、上記に記載された方法で圧縮成形されて、得られる埋め込み型デバイスを形成することができる。
【0065】
Ｖ．デバイスの使用
[0068]デバイスの特定の性質におよぶ、およびそれが形成される方法におよぶ選択的制御によって、得られたデバイスは、核酸の長期間にわたる持続放出に有効でありうる。例えば、埋め込み型医療デバイスは、約５日間以上、いくつかの実施形態では約１０日間以上、いくつかの実施形態では約２０日間～約６０日間、およびいくつかの実施形態では約２５日間～約５０日間（例えば、約３０日間）にわたって、核酸を放出することができる。更に、核酸は放出時間にわたって制御的な方法（例えば、ゼロ次またはほぼゼロ次）で放出されうる。例えば１５日の期間後に、埋め込み型医療デバイスの累積放出率は、約２０％～約７０％、いくつかの実施形態では約３０％～約６５％、およびいくつかの実施形態では約４０％～約６０％でありうる。同様に、３０日の期間後に、埋め込み型医療デバイスの累積放出率は、依然として、約４０％～約８５％、いくつかの実施形態では約５０％～約８０％、およびいくつかの実施形態では約６０％～約８０％でありうる。「累積放出率」は、特定の時間間隔で放出された核酸の量を、初めに存在した核酸の総量で割り、次いでこの数値に１００を掛けることによって決定することができる。
[0068]デバイスの特定の性質におよぶ、およびそれが形成される方法におよぶ選択的制御によって、得られたデバイスは、核酸の長期間にわたる持続放出に有効でありうる。例えば、埋め込み型医療デバイスは、約５日間以上、いくつかの実施形態では約１０日間以上、いくつかの実施形態では約２０日間～約６０日間、およびいくつかの実施形態では約２５日間～約５０日間（例えば、約３０日間）にわたって、核酸を放出することができる。更に、核酸は放出時間にわたって制御的な方法（例えば、ゼロ次またはほぼゼロ次）で放出されうる。例えば１５日の期間後に、埋め込み型医療デバイスの累積放出率は、約２０％～約７０％、いくつかの実施形態では約３０％～約６５％、およびいくつかの実施形態では約４０％～約６０％でありうる。同様に、３０日の期間後に、埋め込み型医療デバイスの累積放出率は、依然として、約４０％～約８５％、いくつかの実施形態では約５０％～約８０％、およびいくつかの実施形態では約６０％～約８０％でありうる。「累積放出率」は、特定の時間間隔で放出された核酸の量を、初めに存在した核酸の総量で割り、次いでこの数値に１００を掛けることによって決定することができる。
【0066】
[0069]当然のことながら、送達される核酸の実際の投与量レベルは、用いられる特定の核酸およびその放出が意図される期間に応じて変わる。投与量レベルは、望ましい治療結果をもたらす核酸の治療有効量を提供するため、すなわち、核酸が投与される状態の症状を低減または緩和させるのに有効なレベルまたは量を提供するために、一般に十分に高いものである。必要とされる正確な量は、数ある要因のなかで、治療される対象、核酸が送達される対象の年齢および一般的な状態、対象の免疫系の能力、望ましい効果の程度、治療される状態の重症度、選択される特定の核酸、ならびに組成物の投与様式に応じて変わる。適正な有効量は、当業者によって容易に決定することができる。例えば、有効量は、典型的には、約５μｇ～約２００ｍｇ、いくつかの実施形態では１日あたり約５μｇ～約１００ｍｇ、およびいくつかの実施形態では、１日あたり送達される核酸の約１０μｇ～約１ｍｇの範囲である。
【0067】
[0070]デバイスは、標準的な技術を使用して、皮下、経口的、粘膜などに埋め込むことができる。送達経路は、肺内、胃腸内、皮下、筋肉内、中枢神経系内（例えば、髄腔内）、腹膜内、または臓器内などでありうる。１つの実施形態において、埋め込み型デバイスは、がん治療のために核酸を送達するのに特に適しうる。そのような実施形態では、デバイスを腫瘍、例えば、膵臓、胆道系、胆嚢、肝臓、小腸、結腸、脳、肺、目などの腫瘍の中、腫瘍の上、腫瘍に隣接する、または腫瘍の近くの患者の組織部位に設置することができる。デバイスを現在の全身化学療法、外部放射線および／または外科手術と一緒に用いることもできる。デバイスを、様々な状態、例えば、がん、神経疾患（例えば、神経変性疾患、例えば、脊髄性筋萎縮症または筋萎縮性側索硬化症など）を治療および／もしくは抑制するため、ならびに／または疼痛管理に使用するために髄腔内に送達することもできる。そのような実施形態では、デバイスを、脊柱管に、または脳脊髄液を保持する空間である髄腔内の空間（くも膜下の空間）に直接埋め込むことができる。例えば、髄腔内投与は、デバイスをオマヤレザバー（手術の際に頭皮の下に設置され、薬剤を、小管から脳内に流すように保持する、ドーム型容器）に埋め込むことによって、または脊柱の下部の脳脊髄液の中に直接埋め込むことによって、達成することができる。
【0068】
[0071]望ましい場合、デバイスは、使用前にパッケージ（例えば、滅菌ブリスターパッケージ）内に封止されていてもよい。パッケージを封止する物質および方法は様々であり、当該技術において知られている。１つの実施形態において、例えば、パッケージは、望ましいレベルの保護特性を達成するのに望ましい任意の数の層、例えば、１つ以上、いくつかの実施形態では１～４つの層、およびいくつかの実施形態では１～３つの層を含む基材を含有してもよい。典型的には、基材は、ポリマーフィルムを含有し、例えば、ポリオレフィン（例えば、エチレンコポリマー、プロピレンコポリマー、プロピレンホモポリマーなど）、ポリエステル（例えば、ポリエチレンテレフタレート、ポリエチレンナフタレート、ポリブチレンテレフタレートなど）、塩化ビニルポリマー、ビニルクロリジンポリマー、イオノマーなど、ならびにこれらの組み合わせから形成されるものである。フィルムの１つまたは多数のパネルを、例えば周辺の縁で一緒に封止（例えば、熱封止）して、デバイスが保存されうるキャビティを形成することができる。例えば、単一フィルムを１つ以上の地点で折り畳み、周辺に沿って封止して、デバイスが中に配置されるキャビティを画定することができる。デバイスを使用するため、パッケージを、例えばシールを破って開封し、次いでデバイスを取り出し、患者に埋め込むことができる。
【0069】
試験方法
[0072]核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の放出は、インビトロ方法を使用して決定されうる。より詳細には、埋め込み型デバイス試料を１５０ミリリットルのアジ化ナトリウム水溶液に入れることができる。溶液を、ＵＶ保護された２５０ｍｌのＤｕｒａｎ（登録商標）フラスコ内に封入することができる。次いでフラスコを温度制御水浴の中に置き、１００ｒｐｍで連続的に振とうすることができる。３７℃の温度を、放出実験の全体を通して維持して、インビボ条件を模倣することができる。アジ化ナトリウム水溶液を完全に交換することによって、試料を定期的に取り出すことができる。溶液中の核酸の濃度は、Ｃａｒｙ １スプリットビーム器具を使用して、ＵＶ／Ｖｉｓ吸収分光分析法を介して決定することができる。このデータから、試料採取間隔毎に放出された核酸の量（１時間あたりのマイクログラム）を計算し、経時的に（時間で）プロットすることができる。更に、核酸の累積放出率も、それぞれの試料採取間隔で放出された核酸の量を、初めに存在した核酸の総量で割り、次いでこの数値に１００を掛けることによって百分率として計算する。次いで、この百分率を経時的に（時間で）プロットする。
[0072]核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の放出は、インビトロ方法を使用して決定されうる。より詳細には、埋め込み型デバイス試料を１５０ミリリットルのアジ化ナトリウム水溶液に入れることができる。溶液を、ＵＶ保護された２５０ｍｌのＤｕｒａｎ（登録商標）フラスコ内に封入することができる。次いでフラスコを温度制御水浴の中に置き、１００ｒｐｍで連続的に振とうすることができる。３７℃の温度を、放出実験の全体を通して維持して、インビボ条件を模倣することができる。アジ化ナトリウム水溶液を完全に交換することによって、試料を定期的に取り出すことができる。溶液中の核酸の濃度は、Ｃａｒｙ １スプリットビーム器具を使用して、ＵＶ／Ｖｉｓ吸収分光分析法を介して決定することができる。このデータから、試料採取間隔毎に放出された核酸の量（１時間あたりのマイクログラム）を計算し、経時的に（時間で）プロットすることができる。更に、核酸の累積放出率も、それぞれの試料採取間隔で放出された核酸の量を、初めに存在した核酸の総量で割り、次いでこの数値に１００を掛けることによって百分率として計算する。次いで、この百分率を経時的に（時間で）プロットする。
【0070】
[0073]本発明のこれらおよび他の変更および変形は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、当業者によって実践されうる。加えて、様々な実施形態の態様は、全体的にも部分的にも交換されうることが理解されるべきである。更に、当業者は、前述の記載は単なる例であり、本発明を制限することを意図せず、添付の特許請求の範囲に更に記載されていることを理解する。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【国際調査報告】