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2024-514708フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）阻害剤

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-02

(54)【発明の名称】フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）阻害剤

(51)【国際特許分類】

C07K 16/18 20060101AFI20240326BHJP

C12N 15/12 20060101ALI20240326BHJP

C12N 15/63 20060101ALI20240326BHJP

C12N 1/15 20060101ALI20240326BHJP

C12N 1/19 20060101ALI20240326BHJP

C12N 1/21 20060101ALI20240326BHJP

C12N 5/10 20060101ALI20240326BHJP

A61P 43/00 20060101ALI20240326BHJP

A61K 31/7088 20060101ALI20240326BHJP

A61K 31/713 20060101ALI20240326BHJP

A61K 48/00 20060101ALI20240326BHJP

A61K 39/395 20060101ALI20240326BHJP

A61P 7/02 20060101ALI20240326BHJP

A61P 7/04 20060101ALI20240326BHJP

A61P 9/10 20060101ALI20240326BHJP

A61P 9/00 20060101ALI20240326BHJP

A61P 7/06 20060101ALI20240326BHJP

A61P 13/12 20060101ALI20240326BHJP

A61P 31/04 20060101ALI20240326BHJP

【ＦＩ】

C07K16/18 ZNA

C12N15/12

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

A61P43/00 111

A61K31/7088

A61K31/713

A61K48/00

A61K39/395 N

A61P7/02

A61P7/04

A61P9/10 101

A61P9/00

A61P7/06

A61P13/12

A61P9/10

A61P31/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023565152

(86)(22)【出願日】2022-04-20

(85)【翻訳文提出日】2023-12-13

(86)【国際出願番号】 GB2022050989

(87)【国際公開番号】W WO2022223966

(87)【国際公開日】2022-10-27

(31)【優先権主張番号】2105625.4

(32)【優先日】2021-04-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】GB

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】505167543

【氏名又は名称】アイピー２アイピーオーイノベ－ションズリミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100135415

【弁理士】

【氏名又は名称】中濱明子

(72)【発明者】

【氏名】クレモ，ナディーン

(72)【発明者】

【氏名】ルイス，アラン

(72)【発明者】

【氏名】マッキノン，トム

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA43

4B065CA44

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZA36

4C084ZA45

4C084ZA53

4C084ZA54

4C084ZA55

4C084ZA81

4C084ZB35

4C084ZC41

4C085AA14

4C085DD62

4C085EE01

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA14

4C086ZA36

4C086ZA45

4C086ZA53

4C086ZA54

4C086ZA55

4C086ZA81

4C086ZB35

4C086ZC41

4H045AA11

4H045DA76

4H045EA24

4H045FA74

4H045GA21

(57)【要約】

本発明は、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）の阻害剤に関し、特に抗ＶＷＦ抗体に関する。本発明は、阻害剤を含む薬学的組成物などの組成物およびキットにまで及ぶ。本発明はまた、例えば、後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）、虚血性脳卒中、およびアテローム性動脈硬化などの様々な循環器疾患を含む、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の療法および診断において、阻害剤を作製し使用する方法にまで及ぶ。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）のＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つ以上に特異的に結合する阻害剤。

【請求項2】

ＶＷＦのＣ５ドメインに特異的に結合する、請求項１に記載の阻害剤。

【請求項3】

ＶＷＦのＡ１ドメイン、Ａ２ドメインおよび／またはＡ３ドメインに実質的に結合しない、請求項１または２に記載の阻害剤。

【請求項4】

配列番号１において実質的に規定されるとおりの、ＶＷＦのアミノ酸２２５５位から２７２２位の間の領域に結合する、請求項１から３のいずれかに記載の阻害剤。

【請求項5】

配列番号２、またはそのバリアントもしくはフラグメントにおける１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項１から４のいずれかに記載の阻害剤。

【請求項6】

配列番号３、４、５、６、７、および／もしくは８、またはそのバリアントもしくはフラグメントにおける１つ以上のアミノ酸に結合する、請求項１から５のいずれかに記載の阻害剤。

【請求項7】

生物学的薬剤、低分子薬物、タンパク質、核酸、または薬学的薬剤である、請求項１から６のいずれかに記載の阻害剤。

【請求項8】

ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つ以上をコードするｍＲＮＡの一部分を特異的に標的化する、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、またはｄｓＲＮＡである、請求項７に記載の阻害剤。

【請求項9】

抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１から６のいずれか一項に記載の阻害剤。

【請求項10】

請求項９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントであり、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、無効化されたＦｃフラグメントを含み、適宜、前記無効化されたＦｃフラグメントは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項11】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号９を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１１を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１８を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１９を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号２０を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン、または
（ｉｉ）配列番号１６４を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１１を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１８を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１９を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号２０を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン
を含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項12】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号１６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉ）配列番号１５６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉｉ）配列番号１６５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｖ）配列番号１７２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖ）配列番号１５６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉ）配列番号１５６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉ）配列番号１９４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｘ）配列番号１７２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘ）配列番号１９４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉ）配列番号１９４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉｉ）配列番号１６５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、または
（ｘｉｉｉ）配列番号１６５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域
を含む、請求項９から１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項13】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号２７を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号２８を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号２９を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号３６を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号３７を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号３８を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン、または
（ｉｉ）配列番号１６４を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号２８を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号２９を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号３６を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号３７を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号３８を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン
を含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項14】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号３４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉ）配列番号１５９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉｉ）配列番号１６５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｖ）配列番号１６６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖ）配列番号１６７を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉ）配列番号１６８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉ）配列番号１６９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｘ）配列番号１７１を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘ）配列番号１７２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉ）配列番号１５９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉｉ）配列番号１５９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉｉｉ）配列番号１９４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉｖ）配列番号１７２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｖ）配列番号１７２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｖｉ）配列番号１７１を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｖｉｉ）配列番号１７１を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｖｉｉｉ）配列番号１７０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉｘ）配列番号１７０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘ）配列番号１６９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｉ）配列番号１６９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｉｉ）配列番号１６８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｉｉｉ）配列番号１６８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｉｖ）配列番号１６７を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｖ）配列番号１６７を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｖｉ）配列番号１６６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｖｉｉ）配列番号１６６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｖｉｉｉ）配列番号１９４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｉｘ）配列番号１９４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｘｘ）配列番号１６５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、または
（ｘｘｘｉ）配列番号１６８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域
を含む、請求項９または１０または１３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項15】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号４５を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４６を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号４７を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号５４を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５５を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号５６を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン、または
（ｉｉ）配列番号１７３を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４６を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号４７を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号５４を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５５を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号５６を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン
を含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項16】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号５２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉ）配列番号１７４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉｉ）配列番号１７５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｖ）配列番号１７６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖ）配列番号５２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉ）配列番号５２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉ）配列番号１７６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７６を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｘ）配列番号１７５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘ）配列番号１７５を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉ）配列番号１７４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、または
（ｘｉｉ）配列番号１７４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域
を含む、請求項９または１０または１５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項17】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号６３を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６４を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号６５を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号７２を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７３を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号７４を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン、または
（ｉｉ）配列番号１７７を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６４を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号６５を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号７２を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７３を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号７４を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン
を含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項18】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号７０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉ）配列番号１６０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉｉ）配列番号１７８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｖ）配列番号１７９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖ）配列番号１８０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉ）配列番号１６０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉ）配列番号１８０を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）配列番号１７９を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、または
（ｉｘ）配列番号１７８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域
を含む、請求項９または１０または１７に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項19】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号８１を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８２を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号８３を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号９０を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９１を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号９２を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン、または
（ｉｉ）配列番号１８１を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８２を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号８３を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号９０を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９１を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／もしくは配列番号９２を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメイン
を含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲのうちの少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項20】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、
（ｉ）配列番号８８を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉ）配列番号１６１を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｉｉ）配列番号１８２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｖ）配列番号１８３を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖ）配列番号１８４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉ）配列番号１６１を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉ）配列番号１６１を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）配列番号１８４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｉｘ）配列番号１８４を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘ）配列番号１８３を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉ）配列番号１８３を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、
（ｘｉｉ）配列番号１８２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域、または
（ｘｉｉｉ）配列番号１８２を含むかもしくはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかもしくはそれからなる軽鎖可変領域
を含む、請求項９または１０または１９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項21】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号９９を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１００を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１０１を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１０８を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１０９を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号１１０を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントは、前記ＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項22】

配列番号１０６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１１５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む、請求項９または１０または２１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項23】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１１７を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１１８を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１１９を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１２６を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１２７を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号１２８を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項24】

配列番号１２４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１３３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む、請求項９または１０または２３に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項25】

前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号１３５を含むＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３６を含むＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１３７を含むＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１４４を含むＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１４５を含むＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号１４６を含むＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み、適宜、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記ＣＤＲのうち少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つを含む、請求項９または１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項26】

配列番号１４２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１５１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む、請求項９または１０または２５に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項27】

療法において使用するための、請求項１から８のいずれか一項に記載の阻害剤、または請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント。

【請求項28】

血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を処置、防止、または改善することにおいて使用するための、請求項１から８のいずれか一項に記載の阻害剤、または請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメント。

【請求項29】

血小板媒介凝集によって引き起こされる前記状態が、血栓関連状態、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化、虚血性脳卒中、心房細動（ＡＦ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、循環器疾患（ＣＶＤ）、血栓症、不安定狭心症、安定狭心症、狭心症、塞栓形成、深部静脈血栓症、溶血性尿毒症症候群、溶血性貧血、急性腎不全、血栓溶解性合併症、播種性血管内凝固、冠動脈心疾患、血栓塞栓性合併症、再狭窄、慢性不安定狭心症、末梢血管疾患、動脈血栓症、子癇前症、塞栓症、再狭窄、敗血症、血管炎症、糸球体腎炎、およびコロナウイルス感染から生じる血栓性状態からなる群から選択され得る、請求項２８に記載の使用のための、阻害剤、または抗体もしくはその抗原結合フラグメント。

【請求項30】

請求項１から８のいずれか一項に記載の阻害剤、または請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントと、適宜、薬学的に許容可能なビヒクルとを含む、薬学的組成物。

【請求項31】

抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）のＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つ以上を用いて宿主生物を免疫するステップと、
（ｉｉ）前記宿主から抗体またはその抗原結合フラグメントを収集するステップと
を含む方法によって取得された、抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項32】

請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列。

【請求項33】

請求項３２に記載のポリヌクレオチド配列を含む発現カセット。

【請求項34】

請求項３３に記載の発現カセットを含む組換えベクター。

【請求項35】

請求項３２に記載のポリヌクレオチド配列、請求項３３に記載の発現カセット、または請求項３４に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項36】

請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを調製する方法であって、
ａ）請求項３４に記載のベクターを宿主細胞に導入するステップと、
ｂ）請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合フラグメントの生産をもたらす条件下で前記宿主細胞を培養するステップと
を含む方法。

【請求項37】

診断または予後予測において使用するための、請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗体結合フラグメント。

【請求項38】

血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の診断または予後予測において使用するための、請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗体結合フラグメント。

【請求項39】

対象における血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の診断または予後予測を行う方法であって、請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗体結合フラグメントを用いて、前記対象から取得された生物学的サンプル中のＶＷＦを検出するステップを含む方法。

【請求項40】

血小板媒介凝集によって引き起こされる状態に罹患している対象を診断するための、または前記対象の状態の予後予測を提供するためのキットであって、試験対象からのサンプル中のＶＷＦを検出するための請求項９から２６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含むキット。

【請求項41】

血小板媒介凝集によって引き起こされる前記状態が、血栓関連状態、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）、後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化、虚血性脳卒中、心房細動（ＡＦ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、循環器疾患（ＣＶＤ）、血栓症、不安定狭心症、安定狭心症、狭心症、塞栓形成、深部静脈血栓症、溶血性尿毒症症候群、溶血性貧血、急性腎不全、血栓溶解性合併症、播種性血管内凝固、冠動脈心疾患、血栓塞栓性合併症、再狭窄、慢性不安定狭心症、末梢血管疾患、動脈血栓症、子癇前症、塞栓症、再狭窄、敗血症、血管炎症、糸球体腎炎、およびコロナウイルス感染から生じる血栓性状態からなる群から選択され得る、請求項３８に記載の使用、請求項３９に記載の方法、または請求項４０に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）の阻害剤に関し、特に、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインを標的化する阻害剤に関するが、これに限らない。本発明は、阻害剤を含む薬学的組成物などの組成物およびキットにまで及ぶ。本発明はまた、例えば、後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）、虚血性脳卒中、およびアテローム性動脈硬化などの様々な循環器疾患を含む、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の療法および診断において、阻害剤を使用する方法にまで及ぶ。

【背景技術】

【0002】

虚血性心疾患、脳卒中、心不全、末梢動脈疾患、ならびに心臓および血管に関する他の複数の状態を含む循環器疾患（ＣＶＤ）は、世界中で主な死因であり続けている。ＣＶＤは、細胞死および臓器不全の両方に寄与する、制御されない血小板凝集によって引き起こされる血栓性事象を特徴とする。血栓症の発生における血小板の中心的役割を考慮して、アスピリン、クロピドグレル、およびアブシキシマブなど、認可されているいくつかの抗血栓薬は、血小板を標的化する。これらの薬剤を組み合わせると、それらの相補的な作用機序のため、これらの薬剤のいずれかが単独で作用するよりも高い程度まで血小板凝集が阻害される。しかしながら、これらの抗血小板薬の使用は、出血リスクの増加によって妨げられ、より広範な患者集団におけるその有用性が低下する。したがって、重大な出血リスクを伴わずに血栓性障害を処置することのできる療法に対して、依然として満たされていない高い医療上の需要が存在する。

【0003】

フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）は、大きな多量体糖タンパク質であり、血漿、内皮細胞、巨核球、および血小板に存在し、血栓性事象の十分に確立されているリスク因子である。ＶＷＦは、止血、血管傷害部位に対する血小板接着の媒介、および分解からの凝固第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）の保護において主要な役割を果たす。傷害後、損傷した血管壁において、コラーゲンが血流および剪断力に曝露される。曝露されたコラーゲンに血漿ＶＷＦが結合し、その構造をほどき、循環血小板の接着を助ける。結合したＶＷＦは次に血小板受容体ＧＰＩｂと相互作用し、血小板のテザリングが起こる。臨界量の血小板、ＶＷＦ、および関連する凝固タンパク質が結合して血管壁を塞ぐと、血小板プラグ形成が達成される。ＶＷＦについては、炎症および血管新生の調節を含む他の機能も報告されている。

【0004】

ＶＷＦの蓄積は、ＣＶＤになるリスクの増加に関連付けられている。特に、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）患者におけるウルトラロングＶＷＦ（ＵＬｖＷＦ：ｕｌｔｒａ－ｌｏｎｇＶＷＦ）の蓄積は広く研究されている。現在、カプラシズマブ（モノクローナル抗体）が認可されている唯一の抗ＶＷＦ療法であり、血小板へのＶＷＦの結合を遮断し、ＴＴＰ患者における血栓形成を低減することが示されている。しかしながら、この抗体は、ＶＷＦのＡ１ドメインを標的化し阻害することによって機能する（図１参照）。Ａ１ドメインは、低剪断条件下のコラーゲン結合ひいては血小板結合のために、そして正常な止血が起こるために必須である。したがって、カプラシズマブによる処置は、この領域を標的化することにより、患者に重大な出血リスクをもたらす。稀で致死的な凝血障害であるＴＴＰに罹患している患者にとって、カプラシズマブを服用する利益は、重大な出血のリスクよりも重要である。しかしながら、この重大な出血リスクは、虚血性脳卒中および心筋梗塞を含む他のＣＶＤに罹患している患者には受け入れられない。したがって、重大な出血のリスクを伴わずにより広範囲の血栓性障害を処置するために使用され得る新たな抗血栓療法に対して、満たされていない重要な医療上の需要が存在する。

【発明の概要】

【0005】

本発明者らは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメイン内の（図１参照）、これまでに標的化されていなかった領域が、ＶＷＦをコラーゲンに結合させて、血栓性状態で見られるような高剪断速度下で血小板を凝固させるのに欠かせないことを特定した。重要なことに、Ｃ１～Ｃ６ドメインは、低剪断条件（すなわち正常な出血）下のコラーゲン結合ひいては血小板結合のために必須ではない。したがって、これにより、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインが、ａＴＴＰ、虚血性脳卒中、およびアテローム性動脈硬化を含む、血小板媒介凝集によって引き起こされる複数の状態または血栓関連状態の処置のための潜在的な新しい治療標的として特定される。

【0006】

そのため、本発明者らは、高剪断速度下でコラーゲンに結合するＶＷＦのＣ１～Ｃ６領域の能力を阻害することにより、血栓性状態における血小板凝固が低減し得るという仮説を立てた。重要なことに、この領域を標的化することにより、ＶＷＦが、正常な止血が起こるように通常どおり低剪断速度下で（Ａ１ドメインを介して）血小板に結合する能力を保持し、したがって、カプラシズマブの使用に関連する重大な問題の影響を受けない。これは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインを標的化してその血栓形成促進機能を阻害することが可能な抗体の開発における、本発明者らによるさらなる研究につながった。これらの抗ＶＷＦモノクローナル抗体は、複数の血栓関連状態の処置、改善、または防止において使用することができ、重大な出血のリスクを低減するため、現在利用可能な処置よりもはるかに安全なものとなる。

【0007】

したがって、本発明の第１の態様では、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）のＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（１つ以上）に特異的に結合する阻害剤が提供される。

【0008】

実施例において示されるように、本発明者らは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインに結合してその機能を阻害することが可能な抗体を開発した。例えば、図３Ａ～３Ｈに示されるように、本発明者らは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメイン内を標的化する８つの抗体を開発した。さらに、図５および６に示されるように、本発明者らは、これらの抗体が、驚くべきことに、高剪断速度すなわち病的条件下では血小板凝集を有意に低減するが、低剪断速度すなわち正常条件下では血小板捕捉が保たれることを実証した。これは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数を標的化することで、その正常な止血機能を阻害することなく、ＶＷＦの血栓形成促進機能が阻害されることを実証する。

【0009】

本発明者らは、本発明に係るモノクローナル抗体が、サブｎＭの親和性でＶＷＦのＣ５ドメインに結合することを実証した（図９参照）。さらに、抗体クローンのうちのいくつかは、ＶＷＦのＣ３ドメイン（抗体１－Ｄ５）およびＣ４ドメイン（抗体３－Ｈ９）に対して弱い結合を示した。

【0010】

よって、好ましい一実施形態において、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ３ドメインおよびＣ５ドメインに特異的に結合する（抗体１－Ｄ５）。あるいは、別の好ましい実施形態において、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ４ドメインおよびＣ５ドメインに特異的に結合する（抗体３－Ｈ９）。

【0011】

別の好ましい実施形態において、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ５ドメインに特異的に結合する。この実施形態では、阻害剤は、Ｃ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメインおよび／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数にさらに結合し得る。しかしながら、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメインおよび／またはＣ６ドメインに実質的に結合しなくてもよい。好ましくは、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメインおよび／またはＣ６ドメインとの交差反応性を実質的に有しない。好ましくは、阻害剤は、ＶＷＦのＣ３ドメインおよび／またはＣ４ドメインに実質的に結合しない。

【0012】

好ましくは、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数の機能を阻害することが可能である。ある好ましい実施形態において、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＣ５ドメインの機能を阻害することが可能である。好ましくは、阻害剤は、高剪断速度の条件、すなわち病的条件下で血小板結合が阻害されるように、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数の機能を阻害することが可能である。好ましくは、阻害剤は、低剪断速度の条件、すなわち正常条件下で血小板結合が阻害されないように、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数の機能を阻害することが可能である。

【0013】

一実施形態において、ＶＷＦのアミノ酸配列は、ＧｅｎｂａｎｋＩＤ番号：ＮＭ＿０００５５２．５によって表される場合があり、これは、本明細書では以下のとおり配列番号１として提供される：
ＭＩＰＡＲＦＡＧＶＬＬＡＬＡＬＩＬＰＧＴＬＣＡＥＧＴＲＧＲＳＳＴＡＲＣＳＬＦＧＳＤＦＶＮＴＦＤＧＳＭＹＳＦＡＧＹＣＳＹＬＬＡＧＧＣＱＫＲＳＦＳＩＩＧＤＦＱＮＧＫＲＶＳＬＳＶＹＬＧＥＦＦＤＩＨＬＦＶＮＧＴＶＴＱＧＤＱＲＶＳＭＰＹＡＳＫＧＬＹＬＥＴＥＡＧＹＹＫＬＳＧＥＡＹＧＦＶＡＲＩＤＧＳＧＮＦＱＶＬＬＳＤＲＹＦＮＫＴＣＧＬＣＧＮＦＮＩＦＡＥＤＤＦＭＴＱＥＧＴＬＴＳＤＰＹＤＦＡＮＳＷＡＬＳＳＧＥＱＷＣＥＲＡＳＰＰＳＳＳＣＮＩＳＳＧＥＭＱＫＧＬＷＥＱＣＱＬＬＫＳＴＳＶＦＡＲＣＨＰＬＶＤＰＥＰＦＶＡＬＣＥＫＴＬＣＥＣＡＧＧＬＥＣＡＣＰＡＬＬＥＹＡＲＴＣＡＱＥＧＭＶＬＹＧＷＴＤＨＳＡＣＳＰＶＣＰＡＧＭＥＹＲＱＣＶＳＰＣＡＲＴＣＱＳＬＨＩＮＥＭＣＱＥＲＣＶＤＧＣＳＣＰＥＧＱＬＬＤＥＧＬＣＶＥＳＴＥＣＰＣＶＨＳＧＫＲＹＰＰＧＴＳＬＳＲＤＣＮＴＣＩＣＲＮＳＱＷＩＣＳＮＥＥＣＰＧＥＣＬＶＴＧＱＳＨＦＫＳＦＤＮＲＹＦＴＦＳＧＩＣＱＹＬＬＡＲＤＣＱＤＨＳＦＳＩＶＩＥＴＶＱＣＡＤＤＲＤＡＶＣＴＲＳＶＴＶＲＬＰＧＬＨＮＳＬＶＫＬＫＨＧＡＧＶＡＭＤＧＱＤＶＱＬＰＬＬＫＧＤＬＲＩＱＨＴＶＴＡＳＶＲＬＳＹＧＥＤＬＱＭＤＷＤＧＲＧＲＬＬＶＫＬＳＰＶＹＡＧＫＴＣＧＬＣＧＮＹＮＧＮＱＧＤＤＦＬＴＰＳＧＬＡＥＰＲＶＥＤＦＧＮＡＷＫＬＨＧＤＣＱＤＬＱＫＱＨＳＤＰＣＡＬＮＰＲＭＴＲＦＳＥＥＡＣＡＶＬＴＳＰＴＦＥＡＣＨＲＡＶＳＰＬＰＹＬＲＮＣＲＹＤＶＣＳＣＳＤＧＲＥＣＬＣＧＡＬＡＳＹＡＡＡＣＡＧＲＧＶＲＶＡＷＲＥＰＧＲＣＥＬＮＣＰＫＧＱＶＹＬＱＣＧＴＰＣＮＬＴＣＲＳＬＳＹＰＤＥＥＣＮＥＡＣＬＥＧＣＦＣＰＰＧＬＹＭＤＥＲＧＤＣＶＰＫＡＱＣＰＣＹＹＤＧＥＩＦＱＰＥＤＩＦＳＤＨＨＴＭＣＹＣＥＤＧＦＭＨＣＴＭＳＧＶＰＧＳＬＬＰＤＡＶＬＳＳＰＬＳＨＲＳＫＲＳＬＳＣＲＰＰＭＶＫＬＶＣＰＡＤＮＬＲＡＥＧＬＥＣＴＫＴＣＱＮＹＤＬＥＣＭＳＭＧＣＶＳＧＣＬＣＰＰＧＭＶＲＨＥＮＲＣＶＡＬＥＲＣＰＣＦＨＱＧＫＥＹＡＰＧＥＴＶＫＩＧＣＮＴＣＶＣＱＤＲＫＷＮＣＴＤＨＶＣＤＡＴＣＳＴＩＧＭＡＨＹＬＴＦＤＧＬＫＹＬＦＰＧＥＣＱＹＶＬＶＱＤＹＣＧＳＮＰＧＴＦＲＩＬＶＧＮＫＧＣＳＨＰＳＶＫＣＫＫＲＶＴＩＬＶＥＧＧＥＩＥＬＦＤＧＥＶＮＶＫＲＰＭＫＤＥＴＨＦＥＶＶＥＳＧＲＹＩＩＬＬＬＧＫＡＬＳＶＶＷＤＲＨＬＳＩＳＶＶＬＫＱＴＹＱＥＫＶＣＧＬＣＧＮＦＤＧＩＱＮＮＤＬＴＳＳＮＬＱＶＥＥＤＰＶＤＦＧＮＳＷＫＶＳＳＱＣＡＤＴＲＫＶＰＬＤＳＳＰＡＴＣＨＮＮＩＭＫＱＴＭＶＤＳＳＣＲＩＬＴＳＤＶＦＱＤＣＮＫＬＶＤＰＥＰＹＬＤＶＣＩＹＤＴＣＳＣＥＳＩＧＤＣＡＣＦＣＤＴＩＡＡＹＡＨＶＣＡＱＨＧＫＶＶＴＷＲＴＡＴＬＣＰＱＳＣＥＥＲＮＬＲＥＮＧＹＥＣＥＷＲＹＮＳＣＡＰＡＣＱＶＴＣＱＨＰＥＰＬＡＣＰＶＱＣＶＥＧＣＨＡＨＣＰＰＧＫＩＬＤＥＬＬＱＴＣＶＤＰＥＤＣＰＶＣＥＶＡＧＲＲＦＡＳＧＫＫＶＴＬＮＰＳＤＰＥＨＣＱＩＣＨＣＤＶＶＮＬＴＣＥＡＣＱＥＰＧＧＬＶＶＰＰＴＤＡＰＶＳＰＴＴＬＹＶＥＤＩＳＥＰＰＬＨＤＦＹＣＳＲＬＬＤＬＶＦＬＬＤＧＳＳＲＬＳＥＡＥＦＥＶＬＫＡＦＶＶＤＭＭＥＲＬＲＩＳＱＫＷＶＲＶＡＶＶＥＹＨＤＧＳＨＡＹＩＧＬＫＤＲＫＲＰＳＥＬＲＲＩＡＳＱＶＫＹＡＧＳＱＶＡＳＴＳＥＶＬＫＹＴＬＦＱＩＦＳＫＩＤＲＰＥＡＳＲＩＴＬＬＬＭＡＳＱＥＰＱＲＭＳＲＮＦＶＲＹＶＱＧＬＫＫＫＫＶＩＶＩＰＶＧＩＧＰＨＡＮＬＫＱＩＲＬＩＥＫＱＡＰＥＮＫＡＦＶＬＳＳＶＤＥＬＥＱＱＲＤＥＩＶＳＹＬＣＤＬＡＰＥＡＰＰＰＴＬＰＰＤＭＡＱＶＴＶＧＰＧＬＬＧＶＳＴＬＧＰＫＲＮＳＭＶＬＤＶＡＦＶＬＥＧＳＤＫＩＧＥＡＤＦＮＲＳＫＥＦＭＥＥＶＩＱＲＭＤＶＧＱＤＳＩＨＶＴＶＬＱＹＳＹＭＶＴＶＥＹＰＦＳＥＡＱＳＫＧＤＩＬＱＲＶＲＥＩＲＹＱＧＧＮＲＴＮＴＧＬＡＬＲＹＬＳＤＨＳＦＬＶＳＱＧＤＲＥＱＡＰＮＬＶＹＭＶＴＧＮＰＡＳＤＥＩＫＲＬＰＧＤＩＱＶＶＰＩＧＶＧＰＮＡＮＶＱＥＬＥＲＩＧＷＰＮＡＰＩＬＩＱＤＦＥＴＬＰＲＥＡＰＤＬＶＬＱＲＣＣＳＧＥＧＬＱＩＰＴＬＳＰＡＰＤＣＳＱＰＬＤＶＩＬＬＬＤＧＳＳＳＦＰＡＳＹＦＤＥＭＫＳＦＡＫＡＦＩＳＫＡＮＩＧＰＲＬＴＱＶＳＶＬＱＹＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＶＰＥＫＡＨＬＬＳＬＶＤＶＭＱＲＥＧＧＰＳＱＩＧＤＡＬＧＦＡＶＲＹＬＴＳＥＭＨＧＡＲＰＧＡＳＫＡＶＶＩＬＶＴＤＶＳＶＤＳＶＤＡＡＡＤＡＡＲＳＮＲＶＴＶＦＰＩＧＩＧＤＲＹＤＡＡＱＬＲＩＬＡＧＰＡＧＤＳＮＶＶＫＬＱＲＩＥＤＬＰＴＭＶＴＬＧＮＳＦＬＨＫＬＣＳＧＦＶＲＩＣＭＤＥＤＧＮＥＫＲＰＧＤＶＷＴＬＰＤＱＣＨＴＶＴＣＱＰＤＧＱＴＬＬＫＳＨＲＶＮＣＤＲＧＬＲＰＳＣＰＮＳＱＳＰＶＫＶＥＥＴＣＧＣＲＷＴＣＰＣＶＣＴＧＳＳＴＲＨＩＶＴＦＤＧＱＮＦＫＬＴＧＳＣＳＹＶＬＦＱＮＫＥＱＤＬＥＶＩＬＨＮＧＡＣＳＰＧＡＲＱＧＣＭＫＳＩＥＶＫＨＳＡＬＳＶＥＬＨＳＤＭＥＶＴＶＮＧＲＬＶＳＶＰＹＶＧＧＮＭＥＶＮＶＹＧＡＩＭＨＥＶＲＦＮＨＬＧＨＩＦＴＦＴＰＱＮＮＥＦＱＬＱＬＳＰＫＴＦＡＳＫＴＹＧＬＣＧＩＣＤＥＮＧＡＮＤＦＭＬＲＤＧＴＶＴＴＤＷＫＴＬＶＱＥＷＴＶＱＲＰＧＱＴＣＱＰＩＬＥＥＱＣＬＶＰＤＳＳＨＣＱＶＬＬＬＰＬＦＡＥＣＨＫＶＬＡＰＡＴＦＹＡＩＣＱＱＤＳＣＨＱＥＱＶＣＥＶＩＡＳＹＡＨＬＣＲＴＮＧＶＣＶＤＷＲＴＰＤＦＣＡＭＳＣＰＰＳＬＶＹＮＨＣＥＨＧＣＰＲＨＣＤＧＮＶＳＳＣＧＤＨＰＳＥＧＣＦＣＰＰＤＫＶＭＬＥＧＳＣＶＰＥＥＡＣＴＱＣＩＧＥＤＧＶＱＨＱＦＬＥＡＷＶＰＤＨＱＰＣＱＩＣＴＣＬＳＧＲＫＶＮＣＴＴＱＰＣＰＴＡＫＡＰＴＣＧＬＣＥＶＡＲＬＲＱＮＡＤＱＣＣＰＥＹＥＣＶＣＤＰＶＳＣＤＬＰＰＶＰＨＣＥＲＧＬＱＰＴＬＴＮＰＧＥＣＲＰＮＦＴＣＡＣＲＫＥＥＣＫＲＶＳＰＰＳＣＰＰＨＲＬＰＴＬＲＫＴＱＣＣＤＥＹＥＣＡＣＮＣＶＮＳＴＶＳＣＰＬＧＹＬＡＳＴＡＴＮＤＣＧＣＴＴＴＴＣＬＰＤＫＶＣＶＨＲＳＴＩＹＰＶＧＱＦＷＥＥＧＣＤＶＣＴＣＴＤＭＥＤＡＶＭＧＬＲＶＡＱＣＳＱＫＰＣＥＤＳＣＲＳＧＦＴＹＶＬＨＥＧＥＣＣＧＲＣＬＰＳＡＣＥＶＶＴＧＳＰＲＧＤＳＱＳＳＷＫＳＶＧＳＱＷＡＳＰＥＮＰＣＬＩＮＥＣＶＲＶＫＥＥＶＦＩＱＱＲＮＶＳＣＰＱＬＥＶＰＶＣＰＳＧＦＱＬＳＣＫＴＳＡＣＣＰＳＣＲＣＥＲＭＥＡＣＭＬＮＧＴＶＩＧＰＧＫＴＶＭＩＤＶＣＴＴＣＲＣＭＶＱＶＧＶＩＳＧＦＫＬＥＣＲＫＴＴＣＮＰＣＰＬＧＹＫＥＥＮＮＴＧＥＣＣＧＲＣＬＰＴＡＣＴＩＱＬＲＧＧＱＩＭＴＬＫＲＤＥＴＬＱＤＧＣＤＴＨＦＣＫＶＮＥＲＧＥＹＦＷＥＫＲＶＴＧＣＰＰＦＤＥＨＫＣＬＡＥＧＧＫＩＭＫＩＰＧＴＣＣＤＴＣＥＥＰＥＣＮＤＩＴＡＲＬＱＹＶＫＶＧＳＣＫＳＥＶＥＶＤＩＨＹＣＱＧＫＣＡＳＫＡＭＹＳＩＤＩＮＤＶＱＤＱＣＳＣＣＳＰＴＲＴＥＰＭＱＶＡＬＨＣＴＮＧＳＶＶＹＨＥＶＬＮＡＭＥＣＫＣＳＰＲＫＣＳＫ
［配列番号１］
したがって、阻害剤は、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインに対応する、配列番号１のアミノ酸２２５５位から２７２２位の間の領域に結合し得る。

【0014】

よって、好ましくは、阻害剤は、本明細書では以下のとおり配列番号２として提供される、Ｃ１～Ｃ６ドメインに対応する、ＶＷＦのアミノ酸２２５５位から２７２２位の間の１つまたは複数のアミノ酸に結合することができる：
ＴＱＣＩＧＥＤＧＶＱＨＱＦＬＥＡＷＶＰＤＨＱＰＣＱＩＣＴＣＬＳＧＲＫＶＮＣＴＴＱＰＣＰＴＡＫＡＰＴＣＧＬＣＥＶＡＲＬＲＱＮＡＤＱＣＣＰＥＹＥＣＶＣＤＰＶＳＣＤＬＰＰＶＰＨＣＥＲＧＬＱＰＴＬＴＮＰＧＥＣＲＰＮＦＴＣＡＣＲＫＥＥＣＫＲＶＳＰＰＳＣＰＰＨＲＬＰＴＬＲＫＴＱＣＣＤＥＹＥＣＡＣＮＣＶＮＳＴＶＳＣＰＬＧＹＬＡＳＴＡＴＮＤＣＧＣＴＴＴＴＣＬＰＤＫＶＣＶＨＲＳＴＩＹＰＶＧＱＦＷＥＥＧＣＤＶＣＴＣＴＤＭＥＤＡＶＭＧＬＲＶＡＱＣＳＱＫＰＣＥＤＳＣＲＳＧＦＴＹＶＬＨＥＧＥＣＣＧＲＣＬＰＳＡＣＥＶＶＴＧＳＰＲＧＤＳＱＳＳＷＫＳＶＧＳＱＷＡＳＰＥＮＰＣＬＩＮＥＣＶＲＶＫＥＥＶＦＩＱＱＲＮＶＳＣＰＱＬＥＶＰＶＣＰＳＧＦＱＬＳＣＫＴＳＡＣＣＰＳＣＲＣＥＲＭＥＡＣＭＬＮＧＴＶＩＧＰＧＫＴＶＭＩＤＶＣＴＴＣＲＣＭＶＱＶＧＶＩＳＧＦＫＬＥＣＲＫＴＴＣＮＰＣＰＬＧＹＫＥＥＮＮＴＧＥＣＣＧＲＣＬＰＴＡＣＴＩＱＬＲＧＧＱＩＭＴＬＫＲＤＥＴＬＱＤＧＣＤＴＨＦＣＫＶＮＥＲＧＥＹＦＷＥＫＲＶＴＧＣＰＰＦＤＥＨＫＣＬＡＥＧＧＫＩＭＫＩＰＧＴＣＣＤＴＣＥＥＰ
［配列番号２］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸に結合する。

【0015】

ある実施形態において、ＶＷＦのＣ１ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号３として提供され得る：
ＴＱＣＩＧＥＤＧＶＱＨＱＦＬＥＡＷＶＰＤＨＱＰＣＱＩＣＴＣＬＳＧＲＫＶＮＣＴＴＱＰＣＰＴＡＫＡＰＴＣＧＬＣＥＶＡＲＬＲＱＮＡＤＱＣＣＰＥＹＥＣＶＣＤＰＶＳＣＤ
［配列番号３］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸またはエピトープに結合する。

【0016】

ある実施形態において、ＶＷＦのＣ２ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号４として提供され得る：
ＬＰＰＶＰＨＣＥＲＧＬＱＰＴＬＴＮＰＧＥＣＲＰＮＦＴＣＡＣＲＫＥＥＣＫＲＶＳＰＰＳＣＰＰＨＲＬＰＴＬＲＫＴＱＣＣＤＥＹＥＣＡＣＮＣＶＮＳＴ
［配列番号４］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸またはエピトープに結合する。

【0017】

ある実施形態において、ＶＷＦのＣ３ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号５として提供され得る：
ＶＣＶＨＲＳＴＩＹＰＶＧＱＦＷＥＥＧＣＤＶＣＴＣＴＤＭＥＤＡＶＭＧＬＲＶＡＱＣＳＱＫＰＣＥＤＳＣＲＳＧＦＴＹＶＬＨＥＧＥＣＣＧＲＣＬＰ
［配列番号５］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸またはエピトープに結合する。

【0018】

ある実施形態において、ＶＷＦのＣ４ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号６として提供され得る：
ＳＡＣＥＶＶＴＧＳＰＲＧＤＳＱＳＳＷＫＳＶＧＳＱＷＡＳＰＥＮＰＣＬＩＮＥＣＶＲＶＫＥＥＶＦＩＱＱＲＮＶＳＣＰＱＬＥＶＰＶＣＰＳＧＦＱＬＳＣＫＴＳＡＣＣＰＳＣＲＣＥ
［配列番号６］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸またはエピトープに結合する。

【0019】

ある実施形態において、ＶＷＦのＣ５ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号７として提供され得る：
ＲＭＥＡＣＭＬＮＧＴＶＩＧＰＧＫＴＶＭＩＤＶＣＴＴＣＲＣＭＶＱＶＧＶＩＳＧＦＫＬＥＣＲＫＴＴＣＮＰＣＰＬＧＹＫＥＥＮＮＴＧＥＣＣＧＲＣＬＰ
［配列番号７］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸またはエピトープに結合する。

【0020】

ある実施形態において、ＶＷＦのＣ６ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号８として提供され得る：
ＴＡＣＴＩＱＬＲＧＧＱＩＭＴＬＫＲＤＥＴＬＱＤＧＣＤＴＨＦＣＫＶＮＥＲＧＥＹＦＷＥＫＲＶＴＧＣＰＰＦＤＥＨＫＣＬＡＥＧＧＫＩＭＫＩＰＧＴＣＣＤＴＣＥＥＰ
［配列番号８］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる配列内の１つまたは複数のアミノ酸またはエピトープに結合する。

【0021】

例えばＡ１を標的化するカプラシズマブ、およびＡ３を標的化する８２Ｄ６Ａ３など、これまでのＶＷＦの治療的標的化は、Ａ１ドメインおよびＡ３ドメインに焦点を当てていた。しかしながら、Ａ１ドメインおよびＡ３ドメインは、コラーゲン結合ひいては血小板結合に必須である。そのため、Ａ１ドメインおよびＡ３ドメインを標的化すると、低剪断速度の条件、すなわち正常条件下で血小板結合が阻害され、患者に重大な出血リスクがもたらされる。

【0022】

したがって、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数を標的化する本発明の阻害剤が、それを特異的に行い、ＶＷＦのＡ１ドメイン、Ａ２ドメイン、および／またはＡ３ドメインとの交差反応性を全くまたはほとんど有しないことが重要であり、これはなぜなら、交差反応性は、重大な出血リスクなどの望まれない著しいオフターゲット効果をもたらし得るためである。

【0023】

したがって、好ましくは、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＡ１ドメイン、Ａ２ドメイン、および／またはＡ３ドメインに実質的に結合しない。好ましくは、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＡ１ドメイン、Ａ２ドメイン、および／またはＡ３ドメインとの交差反応性を実質的に有しない。最も好ましくは、本発明の阻害剤は、ＶＷＦのＡ１ドメインとの交差反応性を実質的に有しない。

【0024】

ある実施形態において、ＶＷＦのＡ１ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号１５３として提供され得る：
ＤＬＶＦＬＬＤＧＳＳＲＬＳＥＡＥＦＥＶＬＫＡＦＶＶＤＭＭＥＲＬＲＩＳＱＫＷＶＲＶＡＶＶＥＹＨＤＧＳＨＡＹＩＧＬＫＤＲＫＲＰＳＥＬＲＲＩＡＳＱＶＫＹＡＧＳＱＶＡＳＴＳＥＶＬＫＹＴＬＦＱＩＦＳＫＩＤＲＰＥＡＳＲＩＴＬＬＬＭＡＳＱＥＰＱＲＭＳＲＮＦＶＲＹＶＱＧＬＫＫＫＫＶＩＶＩＰＶＧＩＧＰＨＡＮＬＫＱＩＲＬＩＥＫＱＡＰＥＮＫＡＦＶＬＳＳＶＤＥＬＥＱＱＲＤＥＩ
［配列番号１５３］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号１５３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントに結合しない。

【0025】

ある実施形態において、ＶＷＦのＡ２ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号１５４として提供され得る：
ＤＶＡＦＶＬＥＧＳＤＫＩＧＥＡＤＦＮＲＳＫＥＦＭＥＥＶＩＱＲＭＤＶＧＱＤＳＩＨＶＴＶＬＱＹＳＹＭＶＴＶＥＹＰＦＳＥＡＱＳＫＧＤＩＬＱＲＶＲＥＩＲＹＱＧＧＮＲＴＮＴＧＬＡＬＲＹＬＳＤＨＳＦＬＶＳＱＧＤＲＥＱＡＰＮＬＶＹＭＶＴＧＮＰＡＳＤＥＩＫＲＬＰＧＤＩＱＶＶＰＩＧＶＧＰＮＡＮＶＱＥＬＥＲＩＧＷＰＮＡＰＩＬＩＱＤＦＥＴＬＰＲＥＡＰＤＬＶＱＲＣＣ
［配列番号１５４］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号１５４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントに結合しない。

【0026】

ある実施形態において、ＶＷＦのＡ３ドメインのアミノ酸配列は、本明細書では以下のとおり配列番号１５５として提供され得る：
ＤＶＩＬＬＬＤＧＳＳＳＦＰＡＳＹＦＤＥＭＫＳＦＡＫＡＦＩＳＫＡＮＩＧＰＲＬＴＱＶＳＶＬＱＹＧＳＩＴＴＩＤＶＰＷＮＶＶＰＥＫＡＨＬＬＳＬＶＤＶＭＱＲＥＧＧＰＳＱＩＧＤＡＬＧＦＡＶＲＹＬＴＳＥＭＨＧＡＲＰＧＡＳＫＡＶＶＩＬＶＴＤＶＳＶＤＳＶＤＡＡＡＤＡＡＲＳＮＲＶＴＶＦＰＩＧＩＧＤＲＹＤＡＡＱＬＲＩＬＡＧＰＡＧＤＳＮＶＶＫＬＱＲＩＥＤＬＰＴＭＶＴＬＧＮＳＦＬＨＫＬ
［配列番号１５５］
よって、好ましくは、阻害剤は、配列番号１５５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントに結合しない。

【0027】

好ましい一実施形態において、阻害剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。
したがって、本発明のさらなる態様では、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）のＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数に特異的に結合し、好ましくはＶＷＦのＡ１ドメイン、Ａ２ドメイン、および／またはＡ３ドメインに実質的に結合しない、抗体またはその抗原結合フラグメントである阻害剤が提供される。

【0028】

本発明は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（好ましくはＣ５）に対する免疫特異性を有する全抗体（すなわち免疫グロブリン）、ならびに対応する完全長抗体の抗原結合フラグメントまたは領域の両方にまで及ぶ。

【0029】

抗体またはその抗原結合フラグメントは、一価、二価、または多価であり得る。一価抗体は、ジスルフィド橋によって軽鎖（Ｌ）と会合した重（Ｈ）鎖を含む二量体（ＨＬ）である。二価抗体は、少なくとも１つのジスルフィド橋によって会合した２つの二量体を含む四量体（Ｈ２Ｌ２）である。例えば複数の二量体を連結することにより、多価抗体を生産することもできる。抗体分子の基本構造は、非共有結合性に会合し、ジスルフィド結合によって連結されていてもよい、２本の同一の軽鎖と、２本の同一の重鎖とからなる。重鎖および軽鎖の各々は、約１１０アミノ酸のアミノ末端可変領域と、鎖残部の定常配列とを含む。可変領域には、いくつかの超可変領域または相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれ、これらは、抗体分子の抗原結合部位を形成し、抗原、すなわちＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（好ましくはＣ５）、またはそのバリアントもしくはフラグメント（例えばエピトープ）に対するその特異性を決定する。重鎖および軽鎖のＣＤＲの両側には、ＣＤＲを固定し、その位置を決定する、アミノ酸の比較的保存された配列である、フレームワーク領域がある。抗体フラグメントは、二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み得る。

【0030】

重鎖定常領域は、典型的に、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３の３つのドメインを含む。各軽鎖は、典型的に、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、典型的に、Ｃ_Ｌと略記される１つのドメインを含む。

【0031】

重鎖および軽鎖の各々は、概して、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４の順序で（Ｎ末端からＣ末端に）配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含む。ＣＤＲは、抗原結合に関与しており、抗原特異性および結合親和性を抗体に付与する。全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｋａｂａｔら、ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ第５版（１９９１年）、ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ、ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤを参照されたい。

【0032】

あらゆる脊椎動物種の重鎖には、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという５つの異なるクラス（またはアイソタイプ）のうちの１つが割り当てられ得る。これらのクラスはそれぞれ、α、δ、ε、γ、およびμとも表記される。ＩｇＧおよびＩｇＡクラスは、配列および機能における差異に基づいてサブクラスにさらに分割される。ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２のサブクラスを発現する。ＩｇＧ抗体クラスが好ましい。

【0033】

あらゆる脊椎動物種の軽鎖には、定常ドメインの配列に基づいて、カッパおよびラムダと呼ばれる２つのタイプのうちの１つが割り当てられ得る。
定常領域は、５つの重鎖配列のうちの１つ（μ、γ、ζ、α、またはε）および２つの軽鎖配列のうちの１つ（κまたはλ）からなる。重鎖定常領域配列は、抗体のアイソタイプおよび分子のエフェクター機能を決定する。

【0034】

好ましくは、抗体またはその抗原結合フラグメントは、単離または精製される。
好ましい一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ポリクローナル抗体、またはその抗原結合フラグメントを含む。抗体またはその抗原結合フラグメントは、ウサギ、マウス、またはラットにおいて生成され得る。

【0035】

好ましくは、抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃタンパク質、またはそのバリアントもしくはフラグメント、例えばＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちのいずれか１つまたは複数を用いて宿主動物を免疫し、次いで抗体またはその抗原結合フラグメントを収集することによって取得される。宿主動物はウサギであり得る。

【0036】

別の好ましい実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、モノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。抗体またはそのフラグメントは、哺乳動物のものであり得る。好ましくは、本発明の抗体はヒト抗体である。本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（好ましくはＣ５）、またはそのバリアントもしくはフラグメントに対する免疫特異性を呈する特定のヒト抗体に見出されるものと実質的に同じ重鎖および軽鎖のＣＤＲアミノ酸配列を含む、モノクローナル抗体などの抗体を意味し得る。重鎖または軽鎖のＣＤＲと実質的に同じであるアミノ酸配列は、基準配列と比較して、かなりの量の配列同一性を呈する。そのような同一性は、特定のヒト抗体のアミノ酸配列を表すものとして明らかに分かるか、または認識可能である。実質的に同じ重鎖および軽鎖のＣＤＲアミノ酸配列は、例えば、アミノ酸のわずかな修飾または保存的置換を有し得る。そのようなヒト抗体またはそのフラグメントは、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの少なくとも１つ（好ましくはＣ５）、またはそのバリアントもしくはフラグメントに選択的に結合するその機能を維持する。

【0037】

「ヒトモノクローナル抗体」という用語には、例えば、ファージライブラリ、リンパ球またはハイブリドーマ細胞による生産などの組換え法によって生産された、実質的にまたは完全にヒトのＣＤＲアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体が含まれ得る。

【0038】

「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団からの抗体を指す。実質的に均質な抗体の集団は、モノクローナル抗体の生産中に通常生じ得るバリアントを除いて、実質的に類似しており、同じエピトープに結合する抗体を含む。そのようなバリアントは、概して、ほんのわずかな量で存在する。モノクローナル抗体は、典型的には、複数の抗体から単一の抗体を選択することを含むプロセスによって取得される。例えば、選択プロセスは、ハイブリドーマクローン、ファージクローン、酵母クローン、細菌クローン、または他の組換えＤＮＡクローンのプールなどの、複数のクローンからのユニークなクローンの選択であり得る。選択された抗体をさらに改変することで、例えば、標的に対する親和性を向上させること（いわゆる「親和性成熟」による）、抗体をヒト化すること、細胞培養におけるその生産を向上させること、および／または対象におけるその免疫原性を低減することができる。

【0039】

「ヒト化抗体」という用語は、ヒトにおいて自然に生産される抗体との類似性が増加するようにタンパク質配列が修飾されている非ヒト種（例えばマウスまたはウサギ）由来の抗体を意味し得る。

【0040】

抗体は、組換え抗体であり得る。「組換えヒト抗体」という用語は、組換えＤＮＡ技術を使用して生産されたヒト抗体を含み得る。
「抗原結合フラグメント」という用語は、標的抗原、例えば、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（好ましくはＣ５）、またはそのバリアントもしくはフラグメントに対して特異的結合親和性を有する抗体の領域を意味し得る。好ましくは、フラグメントは、エピトープである。エピトープは、線状でも立体構造状でもよい。抗原結合領域は、超可変ＣＤＲまたはその機能的部分でもよい。ＣＤＲの「機能的部分」という用語は、標的抗原に対する特異的親和性を示すＣＤＲ内の配列を意味し得る。ＣＤＲの機能的部分は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（好ましくはＣ５）、またはそのフラグメントに特異的に結合するリガンドを含み得る。

【0041】

「ＣＤＲ」という用語は、重鎖および軽鎖の可変鎖中の超可変領域を意味し得る。抗体の重鎖および軽鎖の各々には、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上のＣＤＲが存在し得る。通常、各鎖に少なくとも３つのＣＤＲがあり、これらは一緒に構成されると抗原結合部位すなわち三次元結合部位を形成し、これと抗原が結合するか、または特異的に反応する。しかしながら、いくつかの抗体の重鎖には４つのＣＤＲが存在し得ると仮定されている。

【0042】

ＣＤＲの定義には、互いに対して比較した場合のアミノ酸残基のオーバーラップまたはサブセットも含まれる。特定のＣＤＲまたはその機能的部分を包含する正確な残基数は、ＣＤＲの配列およびサイズに応じて異なる。当業者であれば、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、どの残基が特定のＣＤＲを構成するかを定法により決定することができる。

【0043】

ＣＤＲのアミノ酸配列の境界は、上掲のＫａｂａｔらによって記述されたもの（「Ｋａｂａｔ」付番方式）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２７３：９２７～９４８によって記述されたもの（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番方式）、ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２～７４５によって記述されたもの（「Ｃｏｎｔａｃｔ」付番方式）、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００３年、２７：５５～７７によって記述されたもの（「ＩＭＧＴ」付番方式）、ならびにＨｏｎｅｇｇｅおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２００１年、３０９：６５７～７０によって記述されたもの（「ＡＨｏ」付番方式）を含む、複数の公知の付番方式のいずれかを使用して決定することができる。

【0044】

抗体の「機能的フラグメント」という用語は、機能的活性を保持する抗体の一部分を意味し得る。機能的活性は、例えば、抗原結合活性または特異性であり得る。機能的活性は、例えば、抗体定常領域によってもたらされるエフェクター機能でもあり得る。「機能的フラグメント」という用語は、例えば、ヒトモノクローナル抗体のプロテアーゼ消化または還元および当業者に知られている組換えＤＮＡ方法によって生産されたフラグメントを含むことも意図している。ヒトモノクローナル抗体機能的フラグメントには、例えば、ＶＬ、ＶＨおよびＦｄなどの個々の重鎖または軽鎖およびそれらのフラグメント、Ｆｖ、Ｆａｂ、およびＦａｂ’などの一価フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２などの二価フラグメント、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ならびにＦｃフラグメントが含まれる。あるいは、本明細書で後述され、例示されるように、抗体のＦｃフラグメントは、抗体のエフェクター機能を抑制または低減するアミノ酸置換をＦｃ領域に導入することによって無効化され得る。

【0045】

「ＶＬフラグメント」という用語は、ＣＤＲを含む、軽鎖可変領域の全部または一部を含む、ヒトモノクローナル抗体の軽鎖のフラグメントを意味し得る。ＶＬフラグメントは、軽鎖定常領域配列をさらに含み得る。

【0046】

「ＶＨフラグメント」という用語は、ＣＤＲを含む、重鎖可変領域の全部または一部を含む、ヒトモノクローナル抗体の重鎖のフラグメントを意味し得る。
「Ｆｄフラグメント」という用語は、第１の重鎖定常領域に結合した重鎖可変領域、すなわちＶＨおよびＣＨ－１を意味し得る。「Ｆｄフラグメント」は、軽鎖も、重鎖の第２および第３の定常領域も含まない。

【0047】

「Ｆｖフラグメント」という用語は、重鎖および軽鎖の可変領域の全部または一部を含み、重鎖および軽鎖の定常領域を含まない、ヒトモノクローナル抗体の一価抗原結合フラグメントを意味し得る。重鎖および軽鎖の可変領域は、例えば、ＣＤＲを含む。例えば、Ｆｖフラグメントは、重鎖および軽鎖の両方の約１１０アミノ酸のアミノ末端可変領域の全部または一部を含む。

【0048】

「Ｆａｂフラグメント」という用語は、Ｆｖフラグメントよりも大きいヒトモノクローナル抗体の一価抗原結合フラグメントを意味し得る。例えば、Ｆａｂフラグメントは、可変領域、ならびに重鎖および軽鎖の第１の定常ドメインの全部または一部を含む。よって、Ｆａｂフラグメントは、例えば、重鎖および軽鎖の約１１０～約２２０のアミノ酸残基をさらに含む。

【0049】

「Ｆａｂ’フラグメント」という用語は、Ｆａｂフラグメントよりも大きいヒトモノクローナル抗体の一価抗原結合フラグメントを意味し得る。例えば、Ｆａｂ’フラグメントは、軽鎖の全部、重鎖の可変領域の全部、ならびに重鎖の第１および第２の定常ドメインの全部または一部を含む。例えば、Ｆａｂ’フラグメントは、重鎖のアミノ酸残基２２０～３３０の一部または全部をさらに含み得る。

【0050】

「Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント」という用語は、ヒトモノクローナル抗体の二価抗原結合フラグメントを意味し得る。Ｆ（ａｂ’）_２フラグメントは、例えば、２つの重鎖の可変領域の全部または一部および２つの軽鎖を含み、２つの重鎖の第１の定常ドメインの全部または一部および２つの軽鎖をさらに含み得る。

【0051】

「一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」という用語は、短いリンカーペプチドで接続された重鎖の可変領域（ＶＨ）および軽鎖の可変領域（ＶＬ）の融合物を意味し得る。
「二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）」という用語は、より短い連結ペプチドによって互いに連結された２つのｓｃＦｖを含む二重特異性抗体を意味し得る。

【0052】

当業者は、フラグメントが機能的活性を維持する限り、抗体のフラグメントの正確な境界が重要ではないことを認識している。当業者は、よく知られている組換え法を使用して、特定の用途に望ましい端点を有する機能的フラグメントを発現するようにポリヌクレオチド配列をエンジニアリングすることができる。抗体の機能的フラグメントは、ヒト抗体と実質的に同じ重鎖および軽鎖の可変領域を有するフラグメントを含んでもよく、またはそれからなってもよい。

【0053】

好ましくは、本発明の第１の態様に関する抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数におけるエピトープに対して免疫特異的である。好ましい一実施形態において、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＷＦのＣ３ドメインおよびＣ５ドメイン内のエピトープに対して免疫特異的である（抗体１－Ｄ５）。あるいは、別の好ましい実施形態において、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＷＦのＣ４ドメインおよびＣ５ドメイン内のエピトープに対して免疫特異的である（抗体３－Ｈ９）。さらにより好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＷＦのＣ５ドメイン内のエピトープに対して免疫特異的である。その抗原結合フラグメントは、ＶＨ、ＶＬ、Ｆｄ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）_２およびＦｃフラグメントからなる群から選択されるフラグメントのいずれかを含んでもよく、またはそれからなってもよい。

【0054】

その抗原結合フラグメントは、別名ナノボディともいうシングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）であり得、これは、当業者であれば理解するように、単一の単量体可変抗体ドメインからなる抗体フラグメントである。

【0055】

その抗原結合フラグメントは、ヒト抗体のＶＬの抗原結合領域配列のいずれか１つ、ＶＨの抗原結合領域配列のいずれか１つ、またはＶＬおよびＶＨの抗原結合領域の組合せを含んでもよく、またはそれからなってもよい。ＶＨおよびＶＬの抗原結合領域配列の適切な数および組合せは、抗原結合フラグメントの所望の親和性および特異性ならびに用途に応じて当業者によって決定され得る。抗体の機能的フラグメントまたは抗原結合フラグメントは、当業者によく知られている方法を使用して容易に生産および単離され得る。そのような方法としては、例えば、タンパク分解法、組換え法、および化学合成が挙げられる。機能的フラグメントの単離のためのタンパク分解法は、出発材料としてヒト抗体を使用することを含む。ヒト免疫グロブリンのタンパク分解に好適な酵素は、例えば、パパインおよびペプシンを含み得る。適切な酵素は、例えば、一価フラグメントが必要か二価フラグメントが必要かに応じて、当業者によって容易に選択され得る。例えば、パパイン切断は、抗原に結合する２つの一価Ｆａｂ’フラグメントと、Ｆｃフラグメントとをもたらす。ペプシン切断は、例えば、二価Ｆ（ａｂ’）フラグメントをもたらす。本発明のＦ（ａｂ’）_２フラグメントは、２つの一価Ｆａｂ’フラグメントを生産するために、例えば、ＤＴＴまたは２－メルカプトエタノールを使用してさらに還元され得る。

【0056】

タンパク分解によって生産された抗体の機能的フラグメントまたは抗原結合フラグメントは、アフィニティクロマトグラフィーおよびカラムクロマトグラフィーの手順によって精製され得る。例えば、未消化の抗体およびＦｃフラグメントが、プロテインＡへの結合によって除去され得る。さらに、機能的フラグメントは、例えば、イオン交換およびゲル濾過クロマトグラフィーを使用して、それらの電荷およびサイズによって精製され得る。そのような方法は当業者によく知られている。

【0057】

抗体またはその抗原結合フラグメントは、組換え方法論によって生産され得る。抗体の重鎖および軽鎖の所望の領域をコードするポリヌクレオチドを最初に単離することが好ましい。そのような領域は、例えば、重鎖および軽鎖の可変領域の全部または一部を含み得る。好ましくは、そのような領域は、重鎖および軽鎖の抗原結合領域、好ましくは抗原結合部位、最も好ましくはＣＤＲを特に含み得る。

【0058】

本発明に係る抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、当業者に知られている方法を使用して生産され得る。抗体またはその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチドは、当技術分野で公知のオリゴヌクレオチド合成方法によって直接合成することができる。あるいは、当技術分野で公知の組換え法を使用して、より小さなフラグメントを合成し、結合させて、より大きな機能的フラグメントを形成してもよい。

【0059】

本明細書で使用される場合、「免疫特異性」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントの結合領域が、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数（好ましくはＣ５）、またはそのバリアントもしくはフラグメントと特異的に結合することによって、それらと免疫反応することが可能であることを意味し得る。抗体またはその抗原結合フラグメントは、およそ１０^－５から１０^－１３Ｍ^－１、好ましくは１０^－６から１０^－９Ｍ^－１、さらにより好ましくは１０^－１０から１０^－１２Ｍ^－１の親和性定数で、抗原（ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数、好ましくはＣ５）と選択的に相互作用できるのが好ましい。

【0060】

抗体またはその抗原結合フラグメントは、親和性定数がおよそ１０^－１０Ｍ^－１、１０^－９Ｍ^－１、１０^－８Ｍ^－１、１０^－７Ｍ^－１、または１０^－６Ｍ^－１を超える、好ましくは１０^－５Ｍ^－１、１０^－４Ｍ^－１または１０^－３Ｍ^－１を超える、さらにより好ましくは１０^－２Ｍ^－１、１０^－１Ｍ^－１または１０^－２Ｍ^－１を超える、最も好ましくは１０^＋１Ｍ^－１、１０^＋２Ｍ^－１または１０^＋３Ｍ^－１を超えるように、ＶＷＦのＡ１ドメイン、Ａ２ドメイン、および／またはＡ３ドメインに実質的に結合しないことが好ましい。

【0061】

「免疫反応する」という用語は、結合領域が、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／もしくはＣ６ドメインのうちの１つもしくは複数、またはそのエピトープと結合すると、免疫応答を導出することが可能であることを意味し得る。

【0062】

「エピトープ」という用語は、抗体またはその抗原結合フラグメントの結合領域を導出してそれと組み合わさる能力を有する抗原のあらゆる領域を意味し得る。エピトープは線状であり得る。これは、抗体が抗原のうちの複数の連続するアミノ酸と相互作用し、したがってエピトープがこれらの規定のアミノ酸からなり得ることを意味し得る。

【0063】

あるいは、エピトープは、立体構造状、すなわち非線状または非連続のものでもよい。これは、抗体が抗原の一次アミノ酸配列のうちの複数の異なるセグメントと相互作用することを意味し得る。

【0064】

よって、抗体またはその抗原結合フラグメントは、重鎖を含み得る。重鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭからなる群から選択され得る。好ましくは、重鎖はＩｇＧである。好ましくは、重鎖はＩｇＡである。

【0065】

重鎖は、ＩｇＧ１でもよい。重鎖は、ＩｇＧ２でもよい。重鎖は、ＩｇＧ３でもよい。重鎖は、ＩｇＧ４でもよい。重鎖は、ＩｇＡ１でもよい。重鎖は、ＩｇＡ２でもよい。
実施例に記載され、図３Ａ～３Ｈおよび図７Ａ～Ｅに示されるように、本発明者らは、驚くべきことに、本明細書で１－Ａ２、４－Ｈ３、１－Ｄ５、３－Ｈ９、１－Ｇ５、４－Ｈ９、４－Ｂ１２、および４－Ｃ６と称される抗体および抗原結合フラグメントが、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数を有意に標的化することができることを実証し、これらの抗体の各々は、以下に詳細に定義される。これら８つの抗体のＣＤＲ／ＦＲ／ＶＨ／ＶＬ、ＨＣおよびＬＣ配列は、便宜上、図８に示される表にまとめられている。

【0066】

１－Ａ２
したがって、一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＩＤＬＴＳＮＡ
［配列番号９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0067】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＹＧＨＤＴＳ
［配列番号１０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0068】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＧＦＩＹＦＤＩ
［配列番号１１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0069】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号１１を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号１１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0070】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＰＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳ
［配列番号１２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0071】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＧ
［配列番号１３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0072】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＡＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＲＰＴＴＤＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号１４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0073】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１５のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＴＧＴＬＶＴＩＳＳ
［配列番号１５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0074】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１４を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号１５を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１４を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号１５を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0075】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１６において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＰＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＴＳＮＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＧＩＹＧＨＤＴＳＹＹＡＡＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＲＰＴＴＤＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＦＩＹＦＤＩＷＧＴＧＴＬＶＴＩＳＳ
［配列番号１６］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0076】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１７と称される：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＧＡＣＣＴＣＡＣＴＡＧＣＡＡＴＧＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＣＡＴＧＡＴＡＣＣＴＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＧＧＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＧＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＴＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＣＡ
［配列番号１７］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0077】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１８のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＥＤＩＹＳＧ
［配列番号１８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0078】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１９のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＧＡＳ
［配列番号１９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0079】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２０のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＬＧＧＨＳＨＳＴＴＤＬＴ
［配列番号２０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0080】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１９を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号２０を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号２０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0081】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２１のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＡＩＥＭＴＱＴＰＰＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＲＩＲＣＬＡＳ
［配列番号２１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0082】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２２のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＩＳＷＹＱＱＫＰＧＫＰＰＴＬＬＩＹ
［配列番号２２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0083】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２３のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＮＬＥＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＧＧＶＱＡＥＤＡＡＴＹＹＣ
［配列番号２３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0084】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２４のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ
［配列番号２４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0085】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号２２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号２３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号２４を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号２２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号２３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号２４を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0086】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２５において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＡＩＥＭＴＱＴＰＰＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＲＩＲＣＬＡＳＥＤＩＹＳＧＩＳＷＹＱＱＫＰＧＫＰＰＴＬＬＩＹＧＡＳＮＬＥＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＧＧＶＱＡＥＤＡＡＴＹＹＣＬＧＧＨＳＨＳＴＴＤＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ
［配列番号２５］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0087】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号２６と称される：
ＧＣＡＡＴＴＧＡＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＡＡＣＴＧＴＣＡＧＧＡＴＴＡＧＧＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＴＡＣＡＧＴＧＧＴＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＡＡＡＣＣＴＣＣＴＡＣＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＣＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＧＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＣＧＧＴＣＡＴＡＧＣＣＡＣＡＧＴＡＣＴＡＣＣＧＡＴＴＴＧＡＣＴＴＴＴＧＧＡＧＣＴＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
［配列番号２６］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２６において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0088】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、または少なくとも６つのＣＤＲを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくともＣＤＲ－Ｈ３を含む。

【0089】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号２０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0090】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0091】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号２６を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0092】

本発明者らは次に、１－Ａ２のヒト化抗体の生成を試みた。これらのヒト化抗体の配列は、図１０に示されている。特記なき限り、これらのヒト化抗体の６つのＣＤＲ配列は、親抗体１－Ａ２の６つのＣＤＲ配列と同一である。

【0093】

１－Ａ２＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）
一実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0094】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0095】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0096】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0097】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖定常（ＨＣ）領域を含む。

【0098】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖定常（ＬＣ）領域を含む。

【0099】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５７を含むかまたはそれからなる重鎖定常領域、および配列番号１５８を含むかまたはそれからなる軽鎖定常領域を含む。

【0100】

１－Ａ２＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）と称される。

【0101】

【0102】

【0103】

【0104】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖定常（ＨＣ）領域を含む。

【0105】

【0106】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６２を含むかまたはそれからなる重鎖定常領域、および配列番号１５８を含むかまたはそれからなる軽鎖定常領域を含む。

【0107】

１－Ａ２＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）と称される。

【0108】

【0109】

【0110】

【0111】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖定常（ＨＣ）領域を含む。

【0112】

【0113】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６３を含むかまたはそれからなる重鎖定常領域、および配列番号１５８を含むかまたはそれからなる軽鎖定常領域を含む。

【0114】

１－Ａ２＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0115】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0116】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0117】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号２０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0118】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0119】

【0120】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0121】

【0122】

【0123】

【0124】

１－Ａ２＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0125】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0126】

【0127】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0128】

【0129】

【0130】

【0131】

１－Ａ２＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0132】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0133】

【0134】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号２５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0135】

【0136】

【0137】

【0138】

１－Ａ２＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0139】

【0140】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0141】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0142】

【0143】

【0144】

【0145】

１－Ａ２＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0146】

【0147】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0148】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0149】

【0150】

【0151】

【0152】

１－Ａ２＿Ｈ２＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ２＿Ｌ１と称される。

【0153】

【0154】

【0155】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0156】

【0157】

【0158】

【0159】

１－Ａ２＿Ｈ２＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ２＿Ｌ０と称される。

【0160】

【0161】

【0162】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0163】

【0164】

【0165】

【0166】

１－Ａ２＿Ｈ１＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ１＿Ｌ１と称される。

【0167】

【0168】

【0169】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0170】

【0171】

【0172】

【0173】

１－Ａ２＿Ｈ１＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ１＿Ｌ０と称される。

【0174】

【0175】

【0176】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0177】

【0178】

【0179】

【0180】

１－Ａ２＿Ｈ０＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ０＿Ｌ１と称される。

【0181】

【0182】

【0183】

【0184】

【0185】

【0186】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0187】

【0188】

【0189】

【0190】

１－Ａ２＿Ｈ０＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ａ２＿Ｈ０＿Ｌ０と称される。

【0191】

【0192】

【0193】

【0194】

【0195】

【0196】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９０を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0197】

【0198】

【0199】

【0200】

４－Ｈ３
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２７のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＩＤＬＴＳＮＡ
［配列番号２７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0201】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２８のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＹＧＨＤＴＳ
［配列番号２８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0202】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号２９のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＧＦＩＹＦＤＩ
［配列番号２９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0203】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２７を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号２８を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号２９を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号２８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号２９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0204】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３０のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＰＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳ
［配列番号３０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0205】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３１のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＧ
［配列番号３１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0206】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３２のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＡＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＲＰＴＴＤＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号３２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0207】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３３のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＴＧＴＬＶＴＩＳＳ
［配列番号３３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0208】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号３１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号３２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号３３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号３１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号３２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号３３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0209】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３４において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＰＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＩＤＬＴＳＮＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＧＩＹＧＨＤＴＳＹＹＡＡＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＲＰＴＴＤＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＦＩＹＦＤＩＷＧＴＧＴＬＶＴＩＳＳ
［配列番号３４］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0210】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号３５と称される：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＧＡＣＣＴＣＡＣＴＡＧＣＡＡＴＧＣＡＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＡＴＴＴＡＴＧＧＴＣＡＴＧＡＴＡＣＣＴＣＡＴＡＴＴＡＣＧＣＧＧＣＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＧＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＣＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＴＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＣＡ
［配列番号３５］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0211】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３６のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＥＤＩＡＳＧ
［配列番号３６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0212】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３７のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＧＡＳ
［配列番号３７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0213】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３８のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＬＧＧＹＳＦＳＳＮＧＬＴ
［配列番号３８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0214】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号３７を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号３８を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号３７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号３８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0215】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号３９のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＰＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＲＩＲＣＬＡＳ
［配列番号３９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0216】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４０のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＩＳＷＹＱＱＫＰＧＫＰＰＴＬＬＩＹ
［配列番号４０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0217】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４１のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＮＬＥＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＧＧＶＱＡＥＤＡＡＴＹＹＣ
［配列番号４１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0218】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４２のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ
［配列番号４２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0219】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号４０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号４１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号４２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号４０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号４１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号４２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0220】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４３において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＰＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＲＩＲＣＬＡＳＥＤＩＡＳＧＩＳＷＹＱＱＫＰＧＫＰＰＴＬＬＩＹＧＡＳＮＬＥＳＧＶＰＰＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＴＬＴＩＧＧＶＱＡＥＤＡＡＴＹＹＣＬＧＧＹＳＦＳＳＮＧＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ
［配列番号４３］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0221】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号４４と称される：
ＧＣＴＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＣＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＡＡＣＴＧＴＣＡＧＧＡＴＴＡＧＧＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＣＣＡＧＴＧＧＴＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣＡＧＡＡＧＣＣＡＧＧＧＡＡＡＣＣＴＣＣＴＡＣＡＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＴＧＣＡＴＣＣＡＡＴＴＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＣＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＴＧＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＴＡＧＧＣＧＧＴＴＡＴＡＧＴＴＴＣＡＧＴＡＧＴＡＡＣＧＧＴＴＴＧＡＣＴＴＴＴＧＧＡＧＣＴＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
［配列番号４４］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４４において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0222】

【0223】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号２８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号２９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号３６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号３７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号３８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0224】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0225】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号４４を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0226】

本発明者らは次に、４－Ｈ３のヒト化抗体の生成を試みた。これらのヒト化抗体の配列は、図１０に示されている。特記なき限り、これらのヒト化抗体の６つのＣＤＲ配列は、親抗体４－Ｈ３の６つのＣＤＲ配列と同一である。

【0227】

４－Ｈ３＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）
一実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0228】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0229】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0230】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0231】

【0232】

【0233】

【0234】

４－Ｈ３＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）と称される。

【0235】

【0236】

【0237】

【0238】

【0239】

【0240】

【0241】

４－Ｈ３＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）と称される。

【0242】

【0243】

【0244】

【0245】

【0246】

【0247】

【0248】

４－Ｈ３＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0249】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0250】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0251】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号２８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号２９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号３６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号３７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号３８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0252】

【0253】

【0254】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0255】

【0256】

【0257】

【0258】

４－Ｈ３＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0259】

【0260】

【0261】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0262】

【0263】

【0264】

【0265】

４－Ｈ３＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0266】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0267】

【0268】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0269】

【0270】

【0271】

【0272】

４－Ｈ３＿Ｈ３（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ３（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0273】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0274】

【0275】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６７を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0276】

【0277】

【0278】

【0279】

４－Ｈ３＿Ｈ４（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ４（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0280】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0281】

【0282】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６８を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0283】

【0284】

【0285】

【0286】

４－Ｈ３＿Ｈ５（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ５（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0287】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0288】

【0289】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0290】

【0291】

【0292】

【0293】

４－Ｈ３＿Ｈ６（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ６（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0294】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0295】

【0296】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0297】

【0298】

【0299】

【0300】

４－Ｈ３＿Ｈ７（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ７（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0301】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0302】

【0303】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７１を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0304】

【0305】

【0306】

【0307】

４－Ｈ３＿Ｈ８（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ８（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0308】

【0309】

【0310】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号４３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0311】

【0312】

【0313】

【0314】

４－Ｈ３＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0315】

【0316】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0317】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0318】

【0319】

【0320】

【0321】

４－Ｈ３＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0322】

【0323】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0324】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0325】

【0326】

【0327】

【0328】

４－Ｈ３＿Ｈ８＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ８＿Ｌ１と称される。

【0329】

【0330】

【0331】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0332】

【0333】

【0334】

【0335】

４－Ｈ３＿Ｈ８＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ８＿Ｌ０と称される。

【0336】

【0337】

【0338】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0339】

【0340】

【0341】

【0342】

４－Ｈ３＿Ｈ７＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ７＿Ｌ１と称される。

【0343】

【0344】

【0345】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７１を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0346】

【0347】

【0348】

【0349】

４－Ｈ３＿Ｈ７＿Ｌ０ｒｅｐ
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ７＿Ｌ０ｒｅｐと称される。

【0350】

【0351】

【0352】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７１を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0353】

【0354】

【0355】

【0356】

４－Ｈ３＿Ｈ６＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ６＿Ｌ１と称される。

【0357】

【0358】

【0359】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0360】

【0361】

【0362】

【0363】

４－Ｈ３＿Ｈ６＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ６＿Ｌ０と称される。

【0364】

【0365】

【0366】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0367】

【0368】

【0369】

【0370】

４－Ｈ３＿Ｈ５＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ５＿Ｌ１と称される。

【0371】

【0372】

【0373】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0374】

【0375】

【0376】

【0377】

４－Ｈ３＿Ｈ５＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ５＿Ｌ０と称される。

【0378】

【0379】

【0380】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0381】

【0382】

【0383】

【0384】

４－Ｈ３＿Ｈ４＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ４＿Ｌ１と称される。

【0385】

【0386】

【0387】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６８を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0388】

【0389】

【0390】

【0391】

４－Ｈ３＿Ｈ４＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ４＿Ｌ０と称される。

【0392】

【0393】

【0394】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６８を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0395】

【0396】

【0397】

【0398】

４－Ｈ３＿Ｈ３＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ３＿Ｌ１と称される。

【0399】

【0400】

【0401】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６７を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0402】

【0403】

【0404】

【0405】

４－Ｈ３＿Ｈ３＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ３＿Ｌ０と称される。

【0406】

【0407】

【0408】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６７を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0409】

【0410】

【0411】

【0412】

４－Ｈ３＿Ｈ２＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ２＿Ｌ１と称される。

【0413】

【0414】

【0415】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0416】

【0417】

【0418】

【0419】

４－Ｈ３＿Ｈ２＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ２＿Ｌ０と称される。

【0420】

【0421】

【0422】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0423】

【0424】

【0425】

【0426】

４－Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ１と称される。

【0427】

【0428】

【0429】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0430】

【0431】

【0432】

【0433】

４－Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ１＿Ｌ０と称される。

【0434】

【0435】

【0436】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0437】

【0438】

【0439】

【0440】

４－Ｈ３＿Ｈ０＿Ｌ１ｒｅｐ
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ０＿Ｌ１ｒｅｐと称される。

【0441】

【0442】

【0443】

【0444】

【0445】

【0446】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８６を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0447】

【0448】

【0449】

【0450】

４－Ｈ３＿Ｈ０＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ３＿Ｈ０＿Ｌ０と称される。

【0451】

【0452】

【0453】

【0454】

【0455】

【0456】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0457】

【0458】

【0459】

【0460】

１－Ｄ５
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４５のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＦＳＬＮＮＹＩ
［配列番号４５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0461】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４６のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＳＴＧＧＳＴ
［配列番号４６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0462】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４７のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＧＧＳＳＡＧＡＧＦＮＩ
［配列番号４７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0463】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４５を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４６を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号４７を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号４７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0464】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４８のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＱＱＱＬＶＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＡＶＳ
［配列番号４８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0465】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号４９のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩ
［配列番号４９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0466】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５０のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＭＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号５０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0467】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５１のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号５１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0468】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４８を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号５０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号５１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４８を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号５０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号５１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0469】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５２において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＱＱＬＶＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＡＶＳＧＦＳＬＮＮＹＩＭＧＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＹＩＧＩＩＳＴＧＧＳＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＲＴＳＴＴＭＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＧＳＳＡＧＡＧＦＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号５２］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0470】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号５３と称される：
ＣＡＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＡＡＣＣＴＧＣＧＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＡＣＴＡＣＡＴＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＡＣＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＡＧＴＡＣＴＧＧＴＧＧＴＡＧＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＡＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＧＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＡＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＧＴＡＧＴＡＧＴＧＣＴＧＧＴＧＣＧＧＧＡＴＴＴＡＡＴＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
［配列番号５３］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５３において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0471】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５４のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＱＳＩＮＳＧ
［配列番号５４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0472】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５５のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＫＡＳ
［配列番号５５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0473】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５６のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＱＳＹＨＹＩＳＡＮＧＡＴ
［配列番号５６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0474】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５４を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５５を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号５６を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号５６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0475】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５７のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＤＴＶＴＩＱＣＱＡＳ
［配列番号５７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0476】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５８のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹ
［配列番号５８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0477】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号５９のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣ
［配列番号５９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0478】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６０のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＥ
［配列番号６０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0479】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５７を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５８を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号５９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号６０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５７を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５８を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号５９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号６０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0480】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６１において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＤＩＶＭＴＱＴＰＳＳＶＳＡＡＶＧＤＴＶＴＩＱＣＱＡＳＱＳＩＮＳＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＲＬＩＹＫＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＤＬＥＣＡＤＡＡＴＹＹＣＱＳＹＨＹＩＳＡＮＧＡＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＥ
［配列番号６１］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0481】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号６２と称される：
ＧＡＴＡＴＴＧＴＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＣＡＴＴＡＡＴＡＧＴＧＧＴＴＴＧＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＧＣＣＴＧＡＴＣＴＡＣＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＧＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＧＴＧＣＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＡＧＣＴＡＴＣＡＴＴＡＴＡＴＴＡＧＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＣＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＣＧＴＣＧＡＡ
［配列番号６２］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６２において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0482】

【0483】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号４７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号５４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号５６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0484】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0485】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５３を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号６２を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0486】

本発明者らは次に、１－Ｄ５のヒト化抗体の生成を試みた。これらのヒト化抗体の配列は、図１０に示されている。特記なき限り、これらのヒト化抗体の６つのＣＤＲ配列は、親抗体１－Ｄ５の６つのＣＤＲ配列と同一である。

【0487】

１－Ｄ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）
一実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0488】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0489】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0490】

【0491】

【0492】

【0493】

【0494】

１－Ｄ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）と称される。

【0495】

【0496】

【0497】

【0498】

【0499】

【0500】

【0501】

１－Ｄ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）と称される。

【0502】

【0503】

【0504】

【0505】

【0506】

【0507】

【0508】

１－Ｄ５＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0509】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号４７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0510】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0511】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号４６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号４７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号５４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号５５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号５６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0512】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0513】

【0514】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0515】

【0516】

【0517】

【0518】

１－Ｄ５＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0519】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0520】

【0521】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0522】

【0523】

【0524】

【0525】

１－Ｄ５＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0526】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0527】

【0528】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号６１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0529】

【0530】

【0531】

【0532】

１－Ｄ５＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0533】

【0534】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0535】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0536】

【0537】

【0538】

【0539】

１－Ｄ５＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0540】

【0541】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0542】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号５２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0543】

【0544】

【0545】

【0546】

１－Ｄ５＿Ｈ２＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ２＿Ｌ１と称される。

【0547】

【0548】

【0549】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0550】

【0551】

【0552】

【0553】

１－Ｄ５＿Ｈ２＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ２＿Ｌ０と称される。

【0554】

【0555】

【0556】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0557】

【0558】

【0559】

【0560】

１－Ｄ５＿Ｈ１＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ１＿Ｌ１と称される。

【0561】

【0562】

【0563】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0564】

【0565】

【0566】

【0567】

１－Ｄ５＿Ｈ１＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ１＿Ｌ０と称される。

【0568】

【0569】

【0570】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７５を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0571】

【0572】

【0573】

【0574】

１－Ｄ５＿Ｈ０＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ０＿Ｌ１と称される。

【0575】

【0576】

【0577】

【0578】

【0579】

【0580】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８８を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0581】

【0582】

【0583】

【0584】

１－Ｄ５＿Ｈ０＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｄ５＿Ｈ０＿Ｌ０と称される。

【0585】

【0586】

【0587】

【0588】

【0589】

【0590】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0591】

【0592】

【0593】

【0594】

３－Ｈ９
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６３のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＦＳＬＳＮＹＤ
［配列番号６３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0595】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６４のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＨＡＩＧＩＴ
［配列番号６４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0596】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６５のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＧＬＶＤＬＮＭ
［配列番号６５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0597】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６３を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６４を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号６５を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号６５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0598】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６６のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳ
［配列番号６６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0599】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６７のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳ
［配列番号６７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0600】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６８のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＮＷＡＥＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号６８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0601】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号６９のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号６９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0602】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６６を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６７を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号６８を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号６９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６６を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６７を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号６８を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号６９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0603】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７０において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳＧＦＳＬＳＮＹＤＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＨＡＩＧＩＴＹＹＡＮＷＡＥＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＬＶＤＬＮＭＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号７０］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0604】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号７１と称される：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＴＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＡＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＡＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＧＴＣＣＡＴＡＣＡＴＧＣＴＡＴＴＧＧＴＡＴＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＡＣＴＧＧＧＣＧＧＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＴＡＧＡＴＴＴＧＡＡＣＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＴＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
［配列番号７１］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７１において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0605】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７２のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＱＳＶＹＳＮＮＬ
［配列番号７２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0606】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７３のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＤＡＳ
［配列番号７３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0607】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７４のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＱＧＳＹＹＳＳＧＷＹＮＴ
［配列番号７４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0608】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７３を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号７４を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号７４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0609】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７５のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＡＩＫＭＴＱＴＰＳＳＶＳＶＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＳＳ
［配列番号７５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0610】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７６のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
［配列番号７６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0611】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７７のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＥＤＡＡＴＹＹＣ
［配列番号７７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0612】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７８のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＧＧＴＥＶＶＶＥ
［配列番号７８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0613】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７５を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７６を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号７７を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号７８を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７５を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７６を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号７７を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号７８を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0614】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号７９において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＡＩＫＭＴＱＴＰＳＳＶＳＶＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＳＳＱＳＶＹＳＮＮＬＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＫＧＳＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＥＤＡＡＴＹＹＣＱＧＳＹＹＳＳＧＷＹＮＴＦＧＧＧＴＥＶＶＶＥ
［配列番号７９］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0615】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号８０と称される：
ＧＣＴＡＴＴＡＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＧＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＴＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＧＴＡＡＣＡＡＣＣＴＣＴＴＡＴＣＴＴＧＧＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＣＧＧＴＴＣＡＡＡＧＧＣＡＧＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＴＧＡＧＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＧＧＣＡＧＴＴＡＴＴＡＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＴＧＧＴＡＣＡＡＴＡＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＧＡＧＧＴＧＧＴＣＧＴＣＧＡＡ
［配列番号８０］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８０において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0616】

【0617】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号６５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号７２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号７４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0618】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0619】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７１を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号８０を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0620】

本発明者らは次に、３－Ｈ９のヒト化抗体の生成を試みた。これらのヒト化抗体の配列は、図１０に示されている。特記なき限り、これらのヒト化抗体の６つのＣＤＲ配列は、親抗体３－Ｈ９の６つのＣＤＲ配列と同一である。

【0621】

３－Ｈ９＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）
一実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0622】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0623】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0624】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0625】

【0626】

【0627】

【0628】

３－Ｈ９＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）と称される。

【0629】

【0630】

【0631】

【0632】

【0633】

【0634】

【0635】

３－Ｈ９＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）と称される。

【0636】

【0637】

【0638】

【0639】

【0640】

【0641】

【0642】

３－Ｈ９＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0643】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号６５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0644】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号７４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0645】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号６４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号６５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号７２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号７３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号７４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0646】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0647】

【0648】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７８を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0649】

【0650】

【0651】

【0652】

３－Ｈ９＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0653】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0654】

【0655】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0656】

【0657】

【0658】

【0659】

３－Ｈ９＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0660】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0661】

【0662】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号７９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0663】

【0664】

【0665】

【0666】

３－Ｈ９＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0667】

【0668】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0669】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0670】

【0671】

【0672】

【0673】

３－Ｈ９＿Ｈ２＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｈ２＿Ｌ０と称される。

【0674】

【0675】

【0676】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８０を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0677】

【0678】

【0679】

【0680】

３－Ｈ９＿Ｈ１＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｈ１＿Ｌ０と称される。

【0681】

【0682】

【0683】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７９を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0684】

【0685】

【0686】

【0687】

３－Ｈ９＿Ｈ０＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では３－Ｈ９＿Ｈ０＿Ｌ０と称される。

【0688】

【0689】

【0690】

【0691】

【0692】

【0693】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１７８を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１８９を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0694】

【0695】

【0696】

【0697】

１－Ｇ５
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８１のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＦＳＬＳＳＹＤ
［配列番号８１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0698】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８２のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＨＡＴＧＩＴ
［配列番号８２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0699】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８３のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＧＬＶＤＬＮＭ
［配列番号８３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0700】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８２を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号８３を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号８３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0701】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８４のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳ
［配列番号８４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0702】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８５のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳ
［配列番号８５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0703】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８６のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＦＹＡＮＷＡＫＧＲＦＴＴＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号８６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0704】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８７のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号８７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0705】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８５を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号８６を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号８７を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８４を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８５を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号８６を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号８７を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0706】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号８８において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＳＶＳＧＦＳＬＳＳＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＳＩＨＡＴＧＩＴＦＹＡＮＷＡＫＧＲＦＴＴＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＭＴＳＬＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＧＬＶＤＬＮＭＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号８８］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0707】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号８９と称される：
ＣＡＧＴＣＧＴＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＴＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＴＴＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＡＣＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＧＴＣＣＡＴＡＣＡＴＧＣＴＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＣＡＴＴＣＴＡＣＧＣＧＡＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＣＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＧＡＣＣＡＧＴＣＴＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＴＡＧＡＴＴＴＧＡＡＣＡＴＧＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
［配列番号８９］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0708】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９０のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＱＳＶＹＮＮＮＹ
［配列番号９０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0709】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９１のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＤＡＳ
［配列番号９１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0710】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９２のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＱＧＳＹＹＳＧＧＷＤＴＡ
［配列番号９２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0711】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９１を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号９２を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号９２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0712】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９３のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＤＰＶＭＴＱＴＡＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳ
［配列番号９３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0713】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９４のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
［配列番号９４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0714】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９５のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＮＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣ
［配列番号９５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0715】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９６のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＧＧＴＫＶＶＶＫ
［配列番号９６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0716】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９４を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号９５を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号９６を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９４を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号９５を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号９６を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0717】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９７において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＤＰＶＭＴＱＴＡＳＳＶＳＡＡＶＧＧＴＶＴＩＮＣＱＡＳＱＳＶＹＮＮＮＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＤＡＳＴＬＡＳＧＶＰＳＲＦＳＧＮＧＳＧＴＱＦＴＬＴＩＳＧＶＱＣＤＤＡＡＴＹＹＣＱＧＳＹＹＳＧＧＷＤＴＡＦＧＧＧＴＫＶＶＶＫ
［配列番号９７］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0718】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号９８と称される：
ＧＡＴＣＣＣＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＧＣＧＴＣＣＴＣＣＧＴＧＴＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＡＡＴＡＡＣＡＡＣＴＡＣＴＴＡＴＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＴＴＧＡＴＣＴＡＣＧＡＴＧＣＡＴＣＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＴＴＣＡＧＣＧＧＣＡＡＴＧＧＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＣＡＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＧＧＣＧＴＡＣＡＧＴＧＴＧＡＣＧＡＴＧＣＴＧＣＣＡＣＴＴＡＣＴＡＣＴＧＴＣＡＡＧＧＣＡＧＴＴＡＴＴＡＴＡＧＴＧＧＴＧＧＴＴＧＧＧＡＣＡＣＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＴＣＧＴＣＡＡＡ
［配列番号９８］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９８において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0719】

【0720】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号８３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号９０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号９２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0721】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８８を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0722】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８９を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号９８を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0723】

本発明者らは次に、１－Ｇ５のヒト化抗体の生成を試みた。これらのヒト化抗体の配列は、図１０に示されている。特記なき限り、これらのヒト化抗体の６つのＣＤＲ配列は、親抗体１－Ｇ５の６つのＣＤＲ配列と同一である。

【0724】

１－Ｇ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）
一実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0725】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0726】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0727】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６１を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0728】

【0729】

【0730】

【0731】

１－Ｇ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｌ２３４Ａ－Ｌ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇ）と称される。

【0732】

【0733】

【0734】

【0735】

【0736】

【0737】

【0738】

１－Ｇ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿ｐａｒｅｎｔａｌ（ｈＩｇＧ１－Ｆａｂ）と称される。

【0739】

【0740】

【0741】

【0742】

【0743】

【0744】

【0745】

１－Ｇ５＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ０（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0746】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号８３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0747】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0748】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号８２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号８３を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号９０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号９１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号９２を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0749】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0750】

【0751】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0752】

【0753】

【0754】

【0755】

１－Ｇ５＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ１（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0756】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0757】

【0758】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８３を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0759】

【0760】

【0761】

【0762】

１－Ｇ５＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ２（ｈＩｇＧ１）と称される。

【0763】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0764】

【0765】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号９７を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0766】

【0767】

【0768】

【0769】

１－Ｇ５＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｌ０（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0770】

【0771】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0772】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６１を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0773】

【0774】

【0775】

【0776】

１－Ｇ５＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｌ１（ｈＩｇＧ１Ｋ）と称される。

【0777】

【0778】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１９３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変（ＶＬ）領域を含む。

【0779】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１６１を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0780】

【0781】

【0782】

【0783】

１－Ｇ５＿Ｈ２＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ２＿Ｌ１と称される。

【0784】

【0785】

【0786】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0787】

【0788】

【0789】

【0790】

１－Ｇ５＿Ｈ２＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ２＿Ｌ０と称される。

【0791】

【0792】

【0793】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0794】

【0795】

【0796】

【0797】

１－Ｇ５＿Ｈ１＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ１＿Ｌ１と称される。

【0798】

【0799】

【0800】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８３を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0801】

【0802】

【0803】

【0804】

１－Ｇ５＿Ｈ１＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ１＿Ｌ１と称される。

【0805】

【0806】

【0807】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８３を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0808】

【0809】

【0810】

【0811】

１－Ｇ５＿Ｈ０＿Ｌ１
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ０＿Ｌ１と称される。

【0812】

【0813】

【0814】

【0815】

【0816】

【0817】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0818】

【0819】

【0820】

【0821】

１－Ｇ５＿Ｈ０＿Ｌ０
あるいは、別の実施形態において、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では１－Ｇ５＿Ｈ０＿Ｌ０と称される。

【0822】

【0823】

【0824】

【0825】

【0826】

【0827】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１８２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１９２を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0828】

【0829】

【0830】

【0831】

４－Ｈ９
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｈ９と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号９９のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＦＳＬＮＳＦＡ
［配列番号９９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0832】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１００のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＴＶＤＧＨＴ
［配列番号１００］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１００において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0833】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０１のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＥＤＡＧＤＡＧＹＩＹＡＴＹＮＩ
［配列番号１０１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0834】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１００を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号１０１を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１００を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号１０１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0835】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０２のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳ
［配列番号１０２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0836】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０３のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩ
［配列番号１０３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0837】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０４のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＡＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号１０４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0838】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０５のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号１０５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0839】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１０４を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号１０５を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１０３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１０４を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号１０５を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0840】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０６において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＶＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＴＶＤＧＨＴＹＹＡＳＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＡＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＤＡＧＤＡＧＹＩＹＡＴＹＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号１０６］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0841】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１０７と称される：
ＣＡＡＴＣＧＧＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＧＣＴＴＴＧＣＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＴＡＣＴＧＴＴＧＡＴＧＧＴＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＧＣＴＧＧＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＡＴＴＴＡＴＧＣＴＡＣＣＴＡＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＣＣＴＣＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＴＴＣＡ
［配列番号１０７］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0842】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０８のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＥＤＩＧＹＧ
［配列番号１０８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0843】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１０９のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＧＡＮ
［配列番号１０９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0844】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１０のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＱＱＧＹＳＴＰＰＴ
［配列番号１１０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0845】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１０９を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号１１０を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１０９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号１１０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0846】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１１のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＡＩＥＭＴＱＴＰＳＳＬＡＡＳＶＧＤＴＶＴＩＴＣＫＡＳ
［配列番号１１１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0847】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１２のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＬＡＷＹＱＱＫＬＧＩＡＰＫＬＬＩＹ
［配列番号１１２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0848】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１３のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＥＴＤＹＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＡＧＩＹＹＣ
［配列番号１１３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0849】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１４のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＡＧＴＭＶＥＩＱ
［配列番号１１４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0850】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１１２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号１１３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号１１４を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１１２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号１１３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号１１４を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0851】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１５において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＡＩＥＭＴＱＴＰＳＳＬＡＡＳＶＧＤＴＶＴＩＴＣＫＡＳＥＤＩＧＹＧＬＡＷＹＱＱＫＬＧＩＡＰＫＬＬＩＹＧＡＮＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＥＴＤＹＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＡＧＩＹＹＣＱＱＧＹＳＴＰＰＴＦＧＡＧＴＭＶＥＩＱ
［配列番号１１５］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0852】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１１６と称される：
ＧＣＧＡＴＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＧＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＴＧＧＧＧＡＴＡＧＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＴＴＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＡＧＡＧＡＣＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＡＴＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＡＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣＡＡ
［配列番号１１６］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１６において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0853】

【0854】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号９９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１００を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１０１を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１０８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１０９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号１１０を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0855】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０６を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１１５を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0856】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１０７を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号１１６を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0857】

４－Ｂ１２
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｂ１２と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１７のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＦＳＬＮＳＦＡ
［配列番号１１７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0858】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１８のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＴＶＤＧＨＴ
［配列番号１１８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0859】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１１９のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＥＤＡＧＤＡＧＹＩＹＡＴＹＮＩ
［配列番号１１９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0860】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１７を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１１８を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号１１９を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１１８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号１１９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0861】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２０のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＶＫＥＳＥＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳ
［配列番号１２０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0862】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２１のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩ
［配列番号１２１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0863】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２２のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＮＷＡＫＤＲＦＴＩＳＫＡＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号１２２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0864】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２３のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号１２３］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0865】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１２１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１２２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号１２３を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１２１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１２２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号１２３を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0866】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２４において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＶＫＥＳＥＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＮＳＦＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＴＶＤＧＨＴＹＹＡＮＷＡＫＤＲＦＴＩＳＫＡＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＤＡＧＤＡＧＹＩＹＡＴＹＮＩＷＧＰＧＴＬＶＴＶＳＳ
［配列番号１２４］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0867】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１２５と称される：
ＣＡＧＴＣＧＧＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＣＧＡＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＧＣＴＴＴＧＣＧＡＴＧＡＧＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＡＴＣＡＴＡＡＣＴＧＴＴＧＡＴＧＧＴＣＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＡＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＧＣＴＧＧＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＡＴＴＴＡＴＧＣＴＡＣＣＴＡＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡ
［配列番号１２５］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２５において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0868】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２６のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＥＤＩＧＹＧ
［配列番号１２６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0869】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２７のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＧＡＮ
［配列番号１２７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0870】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２８のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＱＱＧＹＳＴＰＰＴ
［配列番号１２８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0871】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２６を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１２７を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号１２８を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１２７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号１２８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0872】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１２９のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＤＰＶＬＴＱＴＡＳＳＬＡＡＳＶＧＤＴＶＴＩＴＣＫＡＳ
［配列番号１２９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0873】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３０のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹ
［配列番号１３０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0874】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３１のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＥＴＤＹＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＡＧＩＹＹＣ
［配列番号１３１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0875】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３２のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ
［配列番号１３２］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0876】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１３０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号１３１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号１３２を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１３０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号１３１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号１３２を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0877】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３３において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＤＰＶＬＴＱＴＡＳＳＬＡＡＳＶＧＤＴＶＴＩＴＣＫＡＳＥＤＩＧＹＧＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＧＡＮＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＥＴＤＹＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＡＧＩＹＹＣＱＱＧＹＳＴＰＰＴＦＧＡＧＴＫＶＥＩＫ
［配列番号１３３］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３３において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0878】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１３４と称される：
ＧＡＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＧＣＧＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＧＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＡＧＧＧＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＡＴＧＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＴＴＴＡＧＡＡＴＣＴＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＡＧＧＴＴＣＡＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＡＧＡＧＡＣＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＡＴＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＣＧＧＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＡＧＡＡＡＴＣＡＡＡ
［配列番号１３４］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３４において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0879】

【0880】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１１７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１１８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１１９を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１２６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１２７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号１２８を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0881】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２４を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１３３を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0882】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１２５を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号１３４を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0883】

４－Ｃ６
一実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書では４－Ｃ６と称される。この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３５のＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＧＦＳＬＮＴＹＶ
［配列番号１３５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0884】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３６のＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＩＮＧＤＳＮＴ
［配列番号１３６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0885】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３７のＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＡＲＥＤＡＡＤＡＧＹＶＹＡＴＹＮＩ
［配列番号１３７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0886】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３５を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３６を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および／または配列番号１３７を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、および配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0887】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３８のＦＲ－Ｈ１ドメインを含み得る：
ＳＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳ
［配列番号１３８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメインを含む。

【0888】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１３９のＦＲ－Ｈ２ドメインを含み得る：
ＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＦ
［配列番号１３９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメインを含む。

【0889】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４０のＦＲ－Ｈ３ドメインを含み得る：
ＹＹＡＮＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣ
［配列番号１４０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメインを含む。

【0890】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４１のＦＲ－Ｈ４ドメインを含み得る：
ＷＧＴＧＴＬＶＴＩＳＳ
［配列番号１４１］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0891】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３８を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１４０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および／または配列番号１４１を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３８を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１４０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ３ドメイン、および配列番号１４１を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｈ４ドメインを含む。

【0892】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４２において規定されるとおりの重鎖可変（ＶＨ）配列を含み得る：
ＱＳＬＥＥＳＧＧＲＬＶＴＰＧＴＰＬＴＬＴＣＴＡＳＧＦＳＬＮＴＹＶＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＩＧＦＩＮＧＤＳＮＴＹＹＡＮＷＡＫＧＲＦＴＩＳＫＴＳＴＴＶＤＬＫＩＴＳＰＴＴＥＤＴＡＴＹＦＣＡＲＥＤＡＡＤＡＧＹＶＹＡＴＹＮＩＷＧＴＧＴＬＶＴＩＳＳ
［配列番号１４２］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４２において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる重鎖可変（ＶＨ）領域を含む。

【0893】

重鎖可変（ＶＨ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１４３と称される：
ＣＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＧＧＧＧＧＴＣＧＣＣＴＧＧＴＣＡＣＧＣＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＣＣＣＴＣＡＡＴＡＣＣＴＡＴＧＴＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＣＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＣＧＧＡＴＴＣＡＴＴＡＡＴＧＧＴＧＡＴＡＧＴＡＡＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＧＡＡＣＴＧＧＧＣＧＡＡＡＧＧＣＣＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＴＣＧＡＣＣＡＣＧＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＣＣＡＧＴＣＣＧＡＣＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＴＴＣＴＧＴＧＣＣＡＧＡＧＡＧＧＡＴＧＣＴＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＧＴＴＴＡＴＧＣＴＡＣＣＴＡＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＴＴＣＡ
［配列番号１４３］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４３において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる重鎖可変（ＶＨ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0894】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４４のＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＥＤＩＧＹＧ
［配列番号１４４］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４４において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0895】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４５のＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＧＡＮ
［配列番号１４５］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４５において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0896】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４６のＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＱＱＧＹＳＴＰＰＴ
［配列番号１４６］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４６において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0897】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４４を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１４５を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および／または配列番号１４６を含むかもしくはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１４５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号１４６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0898】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４７のＦＲ－Ｌ１ドメインを含み得る：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＳＳＬＡＡＳＶＧＤＴＶＴＩＴＣＫＡＳ
［配列番号１４７］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４７において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメインを含む。

【0899】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４８のＦＲ－Ｌ２ドメインを含み得る：
ＬＮＷＹＱＱＫＬＧＩＡＰＫＬＬＩＹ
［配列番号１４８］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４８において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメインを含む。

【0900】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１４９のＦＲ－Ｌ３ドメインを含み得る：
ＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＥＴＤＹＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＡＧＩＹＹＣ
［配列番号１４９］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４９において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0901】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１５０のＦＲ－Ｌ４ドメインを含み得る：
ＦＧＡＧＴＭＶＥＩＫ
［配列番号１５０］
よって、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５０において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0902】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４７を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１４８を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号１４９を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および／または配列番号１５０を含むかもしくはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。しかしながら、好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４７を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１４８を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ２ドメイン、配列番号１４９を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ３ドメイン、および配列番号１５０を含むかまたはそれからなるＦＲ－Ｌ４ドメインを含む。

【0903】

この抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書で以下のとおり提供される配列番号１５１において規定されるとおりの軽鎖可変（ＶＬ）配列を含み得る：
ＡＹＤＭＴＱＴＰＳＳＬＡＡＳＶＧＤＴＶＴＩＴＣＫＡＳＥＤＩＧＹＧＬＮＷＹＱＱＫＬＧＩＡＰＫＬＬＩＹＧＡＮＴＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＥＴＤＹＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＡＧＩＹＹＣＱＱＧＹＳＴＰＰＴＦＧＡＧＴＭＶＥＩＫ
［配列番号１５１］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５１において実質的に規定されるとおりの配列またはそのバリアントもしくはフラグメントを含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0904】

軽鎖可変（ＶＬ）領域をコードするヌクレオチド配列の一実施形態は、本明細書では以下のとおり配列番号１５２と称される：
ＧＣＡＴＡＴＧＡＴＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＣＴＧＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣＴＴＧＴＡＡＧＧＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＣＡＴＴＧＧＴＴＡＴＧＧＧＴＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＴＡＧＧＧＡＴＡＧＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＡＴＧＧＧＧＣＡＡＡＣＡＣＴＴＴＡＧＡＡＴＣＣＧＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＧＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＡＧＡＧＡＣＣＧＡＴＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＧＣＴＧＡＡＧＡＴＧＣＡＧＧＡＡＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＴＣＡＧＣＡＡＧＧＡＴＡＴＡＧＴＡＣＣＣＣＴＣＣＴＡＣＴＴＴＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＡＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡ
［配列番号１５２］
好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１５２において実質的に規定されるとおりの核酸配列によってコードされる軽鎖可変（ＶＬ）領域、またはそのバリアントもしくはフラグメントを含む。

【0905】

【0906】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１３５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ１ドメイン、配列番号１３６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ２ドメイン、配列番号１３７を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｈ３ドメイン、配列番号１４４を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ１ドメイン、配列番号１４５を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ２ドメイン、および配列番号１４６を含むかまたはそれからなるＣＤＲ－Ｌ３ドメインを含む。

【0907】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４２を含むかまたはそれからなる重鎖可変領域、および配列番号１５１を含むかまたはそれからなる軽鎖可変領域を含む。

【0908】

好ましくは、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号１４３を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる重鎖可変領域、および配列番号１５２を含むかまたはそれからなる核酸配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む。

【0909】

図７Ａ～７Ｅに示されるように、本発明者らは、驚くべきことに、無効化されたＦｃフラグメントを含む、本明細書で１－Ａ２、４－Ｈ３、１－Ｄ５、３－Ｈ９および１－Ｇ５と称される抗体およびそれらの抗原結合フラグメントが、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインに結合できることを実証した。Ｆｃフラグメントは、血小板凝集に関与しており、したがって、凝血および血栓症のリスク増加に関連している。そのため、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を有する患者を処置する際には、抗体のＦｃフラグメントを無効化し、凝血のリスクを低減することが特に有利である。

【0910】

よって、一実施形態において、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントは、無効化されたＦｃフラグメントを含む。好ましくは、無効化されたＦｃフラグメントは、抗体またはその抗原結合フラグメントのエフェクター機能を抑制または低減する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。好ましくは、無効化されたＦｃフラグメントは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。好ましくは、無効化されたＦｃフラグメントは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇを含む。

【0911】

よって、最も好ましくは、本明細書で１－Ａ２、４－Ｈ３、１－Ｄ５、３－Ｈ９または１－Ｇ５と称される抗体またはその抗原結合フラグメントは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＰ３２９Ｇを含む無効化されたＦｃフラグメントを含む。

【0912】

さらに、また図７Ａ～７Ｅに示されるように、本発明者らは、抗体クローン１－Ａ２、４－Ｈ３、１－Ｄ５、３－Ｈ９および１－Ｇ５のＦａｂフラグメントが、驚くべきことに、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインに結合できることを実証した。よって、別の実施形態において、その抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメントを含むかまたはそれからなる。好ましくは、本明細書で１－Ａ２、４－Ｈ３、１－Ｄ５、３－Ｈ９および１－Ｇ５と称されるその抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメントを含むかまたはそれからなる。

【0913】

別の実施形態において、阻害剤は、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数をコードするｍＲＮＡの一部分を特異的に標的化する、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、またはｄｓＲＮＡを含む干渉核酸分子であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ分子、またはｄｓＲＮＡ分子を含む機能的干渉核酸分子は、標的遺伝子、好ましくはその１つまたは複数のエキソンを特異的に下方調節することが可能である。

【0914】

別の実施形態において、阻害剤は、生物学的薬剤、低分子薬物、タンパク質、核酸、または薬学的薬剤であり得る。
よって、有利なことに、本発明の第１の態様に係る阻害剤の抗Ｃ１－Ｃ６－ＶＷＦ活性は、それが単独で治療用薬剤としての有意な有用性を有し、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態、例えば血栓関連状態の処置、改善または防止において使用され得ることを意味する。

【0915】

したがって、本発明の第２の態様では、療法において使用するための、第１の態様に係る阻害剤が提供される。
本発明の第３の態様では、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を処置、防止、または改善することにおいて使用するための、第１の態様に係る阻害剤が提供される。

【0916】

本発明の第４の態様によれば、対象における血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を処置、防止、または改善する方法が提供され、この方法は、そのような処置を必要とする患者に、第１の態様に係る阻害剤を治療有効量で投与すること、または投与したことを含む。

【0917】

血小板媒介凝集によって引き起こされる状態は、血栓関連状態、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）（後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）ともいう）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化、虚血性脳卒中、心房細動（ＡＦ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、循環器疾患（ＣＶＤ）、血栓症、不安定狭心症、安定狭心症、狭心症、塞栓形成、深部静脈血栓症、溶血性尿毒症症候群、溶血性貧血、急性腎不全、血栓溶解性合併症、播種性血管内凝固、冠動脈心疾患、血栓塞栓性合併症、再狭窄、慢性不安定狭心症、末梢血管疾患、動脈血栓症、子癇前症、塞栓症、再狭窄、敗血症、血管炎症、糸球体腎炎、およびコロナウイルス感染から生じる血栓性状態からなる群から選択され得る。

【0918】

好ましくは、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を処置、防止、または改善することにおける使用または方法は、高剪断速度の条件、すなわち病的条件下で血小板結合を阻害することを含む。

【0919】

層状層における血流速度の勾配（速度プロファイルの傾き）は、血管壁において最も高い。この剪断速度は、壁剪断速度と称される。通常の生理学的流動条件下では、壁剪断速度は静脈内の約１０ｓ^－１から最小の動脈内の約１５０００ｓ^－１まで増加するが、重度アテローム硬化性の動脈では４０，０００ｓ^－１に至る最大壁剪断速度が報告されている。剪断速度をｉｎｖｉｖｏで測定するための可能な方法の１つは、Ｂｒａｎｄｓら、１９９９年、「Ａｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｓｙｓｔｅｍｆｏｒｔｈｅｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｖｅｓｓｅｌｗａｌｌａｎｄｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｌａｒｇｅａｒｔｅｒｉｅｓｂｙｍｅａｎｓｏｆｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ」にさらに記述されている。具体的には、動脈検査室（ＡＲＴ－ｌａｂ：ａｒｔｅｒｉａｌｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）と称されるシステムが、無線周波数超音波シグナルを測定して、動脈の血行動態特性を決定する。エコースキャナから受信された無線周波数シグナルが、データ獲得システムを用いて獲得され、次いでハードディスク上に格納される。血流速度の評価は、反射と散乱とを区別するために、クラッタフィルタによってフィルタリングされた無線周波数サンプルを含む、所定の推定ウィンドウ内の時間的および空間的な平均周波数の推定に基づく。時間的および空間的な平均周波数は、ドップラー方程式を用いて速度に直接関連付けられる。この速度プロファイルから、半径についての観察された空間的速度分布の導関数の最大値に基づいて、壁剪断速度が計算される。

【0920】

好ましくは、阻害剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。最も好ましくは、阻害剤は、図８の抗体のうちの１つ、またはその抗原結合フラグメントである。
本発明に係る阻害剤（本明細書では「薬剤」と称される）が、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を処置、改善、または防止するために、単独療法（例えば、阻害剤単独、より好ましくは本明細書に記載される抗体のうちの１つの使用）で使用され得ることは理解されるであろう。あるいは、本発明に係る薬剤は、アスピリン、クロピドグレル、アブシキシマブ、ヘパリン、ワルファリン、および直接経口抗凝固剤（ＤＯＡＣ）、例えばダビガトラン（Ｐｒａｄａｘａ）、リバーロキサバン（Ｘａｒｅｌｔｏ）、アピキサバン（Ｅｌｉｑｕｉｓ）、エドキサバン（Ｓａｖａｙｓａ）、およびベトリキサバン（Ｂｅｖｙｘｘａ）など、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態を処置、改善、または防止するための公知の療法の補助剤として、またはそれらと組み合わせて使用されてもよい。

【0921】

本発明に係る薬剤は、特に組成物が使用される様式に依存して、複数の異なる形態を有する組成物において組み合わされ得る。よって、例えば、組成物は、粉末、錠剤、カプセル、液体、軟膏、クリーム、ゲル、ヒドロゲル、エアロゾル、スプレー、ミセル溶液、経皮パッチ、リポソーム懸濁液、または処置を必要とする人物もしくは動物に投与され得る任意の他の好適な形態であり得る。本発明に係る医薬のビヒクルが、それが与えられる対象によって良好に忍容されるものでなければならないことは理解されるであろう。

【0922】

本発明の薬剤を含む医薬は、複数の方途で使用され得る。例えば、経口投与が必要とされる場合があり、その場合、薬剤は、例えば、錠剤、カプセル、または液体の形態で経口摂取され得る組成物中に含有されていてもよい。本発明の薬剤および医薬を含む組成物は、吸入によって（例えば鼻腔内に）投与されてもよい。組成物は、局所的使用のために製剤されてもよい。例えば、クリームまたは軟膏が皮膚に適用され得る。

【0923】

本発明に係る薬剤および医薬は、徐放式または遅延放出式のデバイスに組み込まれてもよい。そのようなデバイスは、例えば、皮膚上または皮膚下に挿入されてもよく、医薬は、数週間またはさらには数か月にわたって放出されてもよい。デバイスは、少なくとも処置部位に隣接して位置付けられ得る。そのようなデバイスは、本発明に従って使用される薬剤での長期処置が必要とされ、高頻度の投与（例えば少なくとも日１回の注射）が通常必要とされる場合に、特に有利であり得る。

【0924】

ある好ましい実施形態において、本発明に係る薬剤および医薬は、注射によって対象の血流に、または処置を必要とする部位に直接投与されてもよい。注射は、静脈内（ボーラスもしくは注入）または皮下（ボーラスもしくは注入）、または皮内（ボーラスもしくは注入）でもよい。

【0925】

必要とされる阻害剤（すなわち薬剤）の量がその生物学的活性およびバイオアベイラビリティによって決定され、これが投与形式、薬剤の生理化学的特性、およびそれが単独療法として使用されるか併用療法において使用されるかに依存することは理解されるであろう。投与の頻度もまた、処置される対象における薬剤の半減期に影響される。投与される最適な投薬量は、当業者によって決定され得、使用される特定の薬剤、薬学的組成物の強さ、投与形式、および血栓関連状態の進歩によって異なる。対象の年齢、体重、性別、食事、および投与時間を含む、処置される特定の対象に依存するさらなる要因により、投薬量を調節する必要が生じる。

【0926】

概して、どの薬剤かに応じて、０．０１μｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の間の日用量の本発明に係る薬剤が、血栓関連状態を処置、改善、または防止するために使用され得る。より好ましくは、薬剤の日用量は、１μｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の間、より好ましくは１０μｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ体重の間、最も好ましくはおよそ１００μｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ体重の間である。

【0927】

薬剤は、血栓関連状態の発生前、発生中、または発生後に投与され得る。日用量は、単回投与（例えば、単回の日１回注射）として与えられ得る。あるいは、薬剤は、１日の間に２回以上の投与を必要とする場合もある。一例として、薬剤は、０．０７μｇから７００ｍｇの間（すなわち、７０ｋｇの体重を想定した場合）の、２回（または処置される血栓関連状態の重篤度に応じてそれ以上）の日用量として投与され得る。処置を受ける患者は、起床時に第１の用量を服用し、次いで夕方に第２の用量を服用するか（２用量計画の場合）、またはその後は３時間もしくは４時間の間隔で服用してもよい。あるいは、徐放デバイスを使用して、繰り返し投与を行う必要なく、本発明に係る薬剤の最適用量を患者に提供してもよい。製薬業界によって従来用いられているものなどの公知の手順（例えばｉｎｖｉｖｏ実験、臨床試験など）を使用して、本発明に係る薬剤の特定の製剤および正確な治療計画（薬剤の日用量および投与頻度など）を形成することができる。

【0928】

本発明の第５の態様では、第１の態様に係る阻害剤と、適宜、薬学的に許容可能なビヒクルとを含む、薬学的組成物が提供される。
薬学的組成物は、好ましくは抗血栓薬、すなわち、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の治療的改善、防止または処置において使用される医薬製剤である。

【0929】

本発明は、第６の態様において、第５の態様に係る薬学的組成物を作製するプロセスも提供し、このプロセスは、治療有効量の、第１の態様で定義されたような阻害剤を、薬学的に許容可能なビヒクルと組み合わせることを含む。

【0930】

阻害剤は、第１の態様に関して定義されたとおりであり得る。好ましくは、阻害剤は、抗体またはその抗原結合フラグメントである。最も好ましくは、阻害剤は、図８の抗体のうちの１つ、またはその抗原結合フラグメントである。

【0931】

「対象」は、脊椎動物、哺乳動物、または飼育動物であり得る。したがって、本発明に係る医薬は、任意の哺乳動物、例えば家畜（例えばウマ）、ペットを処置するために使用されてもよいし、または他の獣医学的用途で使用されてもよい。最も好ましくは、対象はヒトである。

【0932】

阻害剤の「治療有効量」は、対象に投与されたとき、血栓関連状態を処置するため、または所望の効果をもたらすために必要な薬剤の量である、任意の量である。
例えば、使用される阻害剤の治療有効量は、約０．１ｎｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｎｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇであり得る。阻害剤の量は、約１０ｎｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの量であることが好ましく、最も好ましくは約５０ｎｇ／ｋｇから約５ｍｇ／ｋｇである。

【0933】

本明細書で言及される「薬学的に許容可能なビヒクル」とは、薬学的組成物の製剤において有用であることが当業者に知られている、任意の既知の化合物または既知の化合物の組合せである。

【0934】

一実施形態において、薬学的に許容可能なビヒクルは固体であり得、組成物は粉末または錠剤の形態であり得る。固体の薬学的に許容可能なビヒクルには、香味剤、滑沢剤、可溶化剤、懸濁化剤、色素、充填剤、流動促進剤、圧縮助剤、不活性結合剤、甘味料、防腐剤、色素、コーティング、または錠剤崩壊剤としても機能し得る１つまたは複数の物質が含まれ得る。ビヒクルは、封入材料であってもよい。粉末において、ビヒクルは、微粉化された本発明に係る活性薬剤と混和している、微粉化された固体である。錠剤において、活性薬剤は、必要な圧縮特性を有するビヒクルと好適な割合で混合され、所望の形状およびサイズに押し固められ得る。粉末および錠剤は、好ましくは、最大９９％の活性薬剤を含有する。好適な固体ビヒクルとしては、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖類、ラクトース、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、ポリビニルピロリジン、低融点ワックス、およびイオン交換樹脂が挙げられる。別の実施形態において、薬学的ビヒクルはゲルであり得、組成物はクリームなどの形態であり得る。

【0935】

しかしながら、薬学的ビヒクルは液体でもよく、薬学的組成物は溶液の形態である。液体ビヒクルは、溶液、懸濁液、エマルション、シロップ、エリキシル剤、および加圧組成物の調製において使用される。本発明に係る活性薬剤は、水、有機溶媒、両方の混合物、または薬学的に許容可能な油もしくは脂肪などの薬学的に許容可能な液体ビヒクルに溶解または懸濁することができる。液体ビヒクルは、可溶化剤、乳化剤、バッファー、防腐剤、甘味料、香味剤、懸濁化剤、増粘剤、着色料、粘度調節剤、安定化剤または浸透圧調節剤など、他の好適な薬学的添加剤を含有し得る。経口投与および非経口投与のための液体ビヒクルの好適な例としては、水（上記のような添加剤、例えばセルロース誘導体を部分的に含有するもの、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコール、例えばグリコールを含む）およびそれらの誘導体、ならびに油（例えば分留ココナッツ油およびラッカセイ油）が挙げられる。非経口投与の場合、ビヒクルは、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの油性エステルでもよい。非経口投与用の無菌液状組成物では無菌液体ビヒクルが有用である。加圧組成物用の液体ビヒクルは、ハロゲン化炭化水素または他の薬学的に許容可能な噴射剤であり得る。

【0936】

無菌の溶液または懸濁液である液体の薬学的組成物は、例えば、筋肉内、鞘内、硬膜外、腹腔内、静脈内、そして特に皮下への注射によって利用され得る。薬剤は、滅菌水、食塩水、または他の適切な無菌の注射媒体を使用して投与時に溶解または懸濁することができる無菌の固体組成物として調製され得る。

【0937】

本発明の薬剤および組成物は、他の溶質または懸濁化剤（例えば、溶液を等張にするのに十分な食塩水またはグルコース）、胆汁酸塩、アカシア、ゼラチン、モノオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート８０（エチレンオキシドと共重合したソルビトールおよびその無水物のオレイン酸エステル）などを含有する無菌の溶液または懸濁液の形態で経口投与され得る。本発明に従って使用される薬剤は、液体または固体のいずれの組成物形態で経口投与されてもよい。経口投与に好適な組成物としては、丸剤、カプセル、顆粒、錠剤、および粉末などの固体形態、ならびに溶液、シロップ、エリキシル剤、および懸濁液などの液体形態が挙げられる。非経口投与に有用な形態としては、無菌の溶液、エマルション、および懸濁液が挙げられる。

【0938】

本発明はまた、第１の態様の抗体またはその抗原結合フラグメントを生産する方法、およびそのように生産された抗体またはその抗原結合フラグメントにまで及ぶ。
第７の態様では、抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
（ｉ）フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）のＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数を用いて宿主生物を免疫するステップと、
（ｉｉ）宿主から抗体またはその抗原結合フラグメントを収集するステップと
を含む方法によって取得された、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。

【0939】

宿主は、哺乳動物であり得、ヒト、ウサギ、マウス、またはニワトリであり得る。好ましくは、宿主はウサギである。より好ましくは、宿主はニュージーランド白（ＮＺＷ）ウサギである。

【0940】

この方法は、ヒトＣ１－Ｃ６－Ｆｃ融合タンパク質を用いて宿主を免疫するステップを含み得る。好ましくは、この方法は、ＶＷＦのＣ５ドメインを用いて宿主を免疫するステップを含む。

【0941】

この方法は、少なくとも５０μｇ、７５μｇ、または１００μｇの免疫原を用いて宿主を免疫するステップを含み得る。好ましくは、この方法は、少なくとも２５μｇ、３５μｇまたは５０μｇの免疫原による第１のブーストを用いて宿主を追加免疫するステップを含む。好ましくは、第１のブーストは、第１の免疫から少なくとも２０日後、３０日後、または４０日後に投与される。さらにより好ましくは、この方法は、少なくとも２５μｇ、３５μｇまたは５０μｇの免疫原による第２のブーストを用いて宿主を追加免疫するステップを含む。

【0942】

好ましくは、この方法は、宿主動物から採血した後、好ましくは血液から、最も好ましくは血清から抗体またはその抗原結合フラグメントを収集するステップを含む。好ましくは、この方法は、第１の免疫から少なくとも３０日後、４０日後、または５０日後に宿主動物から採血するステップを含む。

【0943】

好ましくは、血清は、共有結合したペプチド支持体を含む重力カラムに通される。洗浄後、抗体またはその抗原結合フラグメントは、好ましくは酸性バッファーであるバッファーで溶出されるのが好ましく、次いで溶液が中和され得る。この方法は、好適なバッファー（例えばＰＢＳ）に対する透析と、適宜、凍結乾燥とをさらに含み得る。

【0944】

第８の態様では、ファージライブラリを使用して、フォンウィルブランド因子（ＶＷＦ）のＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数に特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを選択するステップを含む方法によって取得された、抗体またはその抗原結合フラグメントが提供される。

【0945】

好ましくは、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ファージライブラリを使用して、ＶＷＦのＣ５ドメインに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを選択するステップを含む方法によって取得される。ファージディスプレイは、当業者には公知であり、実施例において詳細に記載される。

【0946】

本発明の第９の態様では、第１の態様で定義されたような抗体または抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列が提供される。
本発明の第１０の態様では、第９の態様に係るポリヌクレオチド配列を含む発現カセットが提供される。

【0947】

本発明の抗体または抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列は、例えば、抗体またはその抗原結合フラグメントの生産を可能にするために目的の宿主細胞中に送達するための組換えベクターのような、組換えベクターに内包されていることが好ましい。

【0948】

したがって、本発明の第１１の態様では、第１０の態様に係る発現カセットを含む組換えベクターが提供される。
抗体または抗原結合フラグメントをコードするベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、もしくはファージ、および／またはウイルスベクターであり得る。そのような組換えベクターは、ヌクレオチド配列によって細胞を形質転換するために、本発明の送達系において非常に有用である。ヌクレオチド配列は、好ましくはＤＮＡ配列であり得、抗体または抗原結合フラグメントをコードするのはこのＤＮＡ配列である。

【0949】

抗体または抗原結合フラグメントをコードする組換えベクターは、他の機能的エレメントも含み得る。例えば、それらは、ベクターが宿主細胞に導入されたら導入遺伝子の発現を開始するための好適なプロモーターなど、様々な他の機能的エレメントをさらに含み得る。例えば、ベクターは、好ましくは、宿主細胞の核内で自律的に複製することが可能である。この場合、組換えベクターには、ＤＮＡ複製を誘導または調節するエレメントが必要であり得る。あるいは、組換えベクターは、宿主細胞のゲノム内に組み込まれるように設計されてもよい。この場合、標的を定めた組み込み（例えば相同組換えによる）に有利に働くＤＮＡ配列が想定される。好適なプロモーターには、例として、ＳＶ４０プロモーター、ＣＭＶ、ＥＦ１ａ、ＰＧＫ、ウイルス末端反復配列に加え、テトラサイクリン誘導系などの誘導性プロモーターが含まれ得る。カセットまたはベクターは、ベータグロビン、ＳＶ４０ポリアデニル化配列、または合成ポリアデニル化配列などのターミネーターも含み得る。組換えベクターは、必要に応じて核酸の発現を制御するためのプロモーターまたはレギュレーターまたはエンハンサーも含み得る。

【0950】

ベクターには、クローニングプロセスにおいて選択マーカーとして使用され得る、すなわち、トランスフェクトまたは形質転換された細胞の選択を可能にし、異種ＤＮＡを組み込んだベクターを内包する細胞の選択を可能にする、遺伝子をコードするＤＮＡも含まれ得る。例えば、アンピシリン、ネオマイシン、ピューロマイシン、またはクロラムフェニコールへの耐性が想定される。あるいは、選択マーカー遺伝子は、導入遺伝子を含有するベクターと同時に使用される異なるベクター中にあってもよい。カセットまたはベクターには、ヌクレオチド配列の発現の調節に関与する、または発現されるポリペプチドを宿主細胞の特定の部分に標的化するためのＤＮＡも含まれ得る。

【0951】

精製されたベクターが、直接的な飲食作用による取り込みなどの好適な手段によって、宿主細胞に直接挿入されてもよい。ベクターは、トランスフェクション、感染、電気穿孔、微量注射、細胞融合、原形質融合、リン酸カルシウム、カチオン性脂質に基づくリポフェクション、ポリマーもしくはデンドリマーに基づく方法、または弾道衝撃（ｂａｌｌｉｓｔｉｃｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ）によって、宿主細胞（例えば真核細胞または原核細胞）に直接導入され得る。あるいは、本発明のベクターは、粒子銃を使用して宿主細胞に直接導入されてもよい。

【0952】

あるいは、送達系が、ポリヌクレオチドをベクターに組み込むことなく宿主細胞に提供してもよい。例えば、核酸分子は、リポソームまたはウイルス粒子中に組み込まれ得る。あるいは、「裸の」ポリヌクレオチドが、直接的な飲食作用による取り込みなどの好適な手段によって、宿主細胞に挿入されてもよい。

【0953】

本発明の第１２の態様では、第９の態様に係るポリヌクレオチド配列、第１０の態様に係る発現カセット、または第１１の態様に係るベクターを含む、宿主細胞が提供される。
宿主細胞は、真核生物または原核生物の宿主細胞であり得る。好ましくは、宿主細胞は、真核生物の宿主細胞である。より好ましくは、宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、ヒト胎児腎臓２９３細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳動物の宿主細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。

【0954】

第１３の態様では、第１の態様に係る抗体または抗原結合フラグメントを調製する方法であって、
ａ）第１１の態様のベクターを宿主細胞に導入するステップと、
ｂ）第１の態様に係る抗体または抗原結合フラグメントの生産をもたらす条件下で宿主細胞を培養するステップと
を含む方法が提供される。

【0955】

ステップａ）の宿主細胞は、真核生物または原核生物の宿主細胞であり得る。好ましくは、宿主細胞は、真核生物の宿主細胞である。より好ましくは、宿主細胞は、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）ヒト細胞、ヒト胎児腎臓２９３細胞、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のような哺乳動物の宿主細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はＣＨＯ細胞である。

【0956】

この方法は、（ｃ）細胞培養培地を採取、遠心分離、および／または濾過して、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む細胞培養上清を取得するステップをさらに含み得る。

【0957】

この方法は、（ｄ）細胞培養上清から抗体またはその抗原結合フラグメントを分離および精製するステップをさらに含み得る。好ましくは、精製は、少なくとも１つのクロマトグラフィーステップによって行われる。

【0958】

好適なクロマトグラフィーステップとしては、アフィニティクロマトグラフィーおよび／またはイオン交換クロマトグラフィーが挙げられる。好ましくは、アフィニティクロマトグラフィーは、プロテインＡクロマトグラフィーである。イオン交換クロマトグラフィーは、アニオン交換クロマトグラフィーおよび／またはカチオン交換クロマトグラフィーでもよい。

【0959】

好ましくは、ステップ（ｄ）は、
ｉ）プロテインＡクロマトグラフィー、
ｉｉ）アニオン交換クロマトグラフィー、および／または
ｉｉｉ）カチオン交換クロマトグラフィー
によって、細胞培養上清から抗体またはその抗原結合フラグメントを分離および精製するステップを含む。

【0960】

この方法は、（ｅ）ステップ（ｄ）の結果として得られた精製済み抗体またはその抗原結合フラグメントを濾過するステップをさらに含み得る。好ましくは、ステップ（ｅ）は、ウイルス濾過を含む。よって、好ましくは、ステップ（ｄ）の結果として得られた精製済み抗体またはその抗原結合フラグメントは、ウイルス濾過膜を使用して濾過される。好適な膜は、当業者には公知であろう。

【0961】

本明細書に記述されるように、ＶＷＦ発現は、虚血性脳卒中、心臓発作、後天性血栓性血小板減少性紫斑病、および心房細動を含め、血小板媒介凝集によって引き起こされる複数の状態において増加する。よって、本発明の抗体が、ＶＷＦのＣ１ドメイン、Ｃ２ドメイン、Ｃ３ドメイン、Ｃ４ドメイン、Ｃ５ドメイン、および／またはＣ６ドメインのうちの１つまたは複数に結合できることを考慮すると、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＶＷＦの存在を検出し、その濃度を決定することにより、ロバストな診断ツールとして使用され得る。

【0962】

よって、第１４の態様では、診断または予後予測において使用するための、第１の態様に係る抗体またはその抗体結合フラグメントが提供される。
本発明の第１５の態様によれば、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の診断または予後予測において使用するための、第１の態様に係る抗体またはその抗体結合フラグメントが提供される。

【0963】

第１６の態様によれば、対象における血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の診断または予後予測を行う方法であって、第１の態様に係る抗体またはその抗体結合フラグメントを用いて、対象から取得された生物学的サンプル中のＶＷＦを検出するステップを含む方法が提供される。

【0964】

血小板媒介凝集によって引き起こされる状態は、血栓関連状態、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）（後天性血栓性血小板減少性紫斑病（ａＴＴＰ）ともいう）、急性冠症候群（ＡＣＳ）、アテローム性動脈硬化、虚血性脳卒中、心房細動（ＡＦ）、急性心筋梗塞（ＡＭＩ）、循環器疾患（ＣＶＤ）、血栓症、不安定狭心症、安定狭心症、狭心症、塞栓形成、深部静脈血栓症、溶血性尿毒症症候群、溶血性貧血、急性腎不全、血栓溶解性合併症、播種性血管内凝固、冠動脈心疾患、血栓塞栓性合併症、再狭窄、慢性不安定狭心症、末梢血管疾患、動脈血栓症、子癇前症、塞栓症、再狭窄、敗血症、血管炎症、糸球体腎炎、およびコロナウイルス感染（例えばＣＯＶＩＤ－１９）から生じる血栓性状態からなる群から選択され得る。

【0965】

この方法は、ｉｎｖｉｔｒｏ法またはｅｘｖｉｖｏ法であり得る。好ましくは、この方法はｉｎｖｉｔｒｏ法である。
この使用または方法は、対象におけるＶＷＦの発現のレベルを決定するステップを含み得、好ましくは、健康な対照集団からの基準濃度と比較した場合の生物学的サンプル中のＶＷＦの濃度の上昇は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態または予後不良を示す。

【0966】

一実施形態において、健康な対照集団からの基準と比較した場合の、ＶＷＦの１倍の増加は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態または予後不良を示す。一実施形態において、健康な対照集団からの基準と比較した場合の、ＶＷＦの２倍、３倍、４倍または５倍の増加は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態または予後不良を示す。一実施形態において、健康な対照集団からの基準と比較した場合の、ＶＷＦの１０倍、５０倍、または１００倍の増加は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態または予後不良を示す。

【0967】

本発明の第１７の態様によれば、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態に罹患している対象を診断するための、または対象の状態の予後予測を提供するためのキットであって、試験対象からのサンプル中のＶＷＦを検出するための第１の態様に係る抗体またはその抗原結合フラグメントを含むキットが提供される。

【0968】

キットは、対象から生物学的サンプルを取得するための使用説明書および／または受け器をさらに含み得る。
好ましくは、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態は、上記で定義されたとおりである。

【0969】

予後予測は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態と診断された対象における治療転帰を決定することに関し得る。予後予測は、対象における血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の進行もしくは向上の速度および／または持続期間、生存確率、および／または様々な処置計画の有効性を予測することに関し得る。よって、予後不良は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の進行、低い生存確率、および低い処置計画有効性を示し得る。好ましい予後予測は、血小板媒介凝集によって引き起こされる状態の解消、高い生存確率、および高い処置計画有効性を示し得る。

【0970】

好ましくは、サンプルは生物学的サンプルを含む。サンプルは、タンパク質が取得可能な対象から取得可能である任意の材料であり得る。
生物学的サンプルは、組織または生体液であり得る。生物学的サンプルは、血漿、内皮細胞、巨核球、および血小板が取得可能な対象から取得可能である任意の材料であり得る。さらに、サンプルは、血液、血漿、血清、髄液、尿、汗液、唾液、涙液、乳腺吸引液、母乳、前立腺液、精液、膣液、糞便、子宮頸部擦過物、嚢胞、羊水、眼内液、粘膜、呼気中水分、動物組織、細胞溶解物、腫瘍組織、毛髪、皮膚、口腔内擦過物、リンパ、間質液、爪、骨髄、軟骨、プリオン、骨粉、耳垢、リンパ、肉芽腫、がん生検、またはそれらの組合せであり得る。

【0971】

サンプルは吸引液であり得る。例えば、サンプルは、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）、腹水、胸腔洗浄液、または心膜洗浄液であり得る。
サンプルは、血液、尿、組織などを含み得る。好ましい一実施形態において、生物学的サンプルは血液サンプルを含む。血液は、静脈血でも動脈血でもよい。血液サンプルは、直ちにアッセイしてもよい。あるいは、本発明の方法を行う前に、血液サンプルを低温で、例えば冷蔵庫で保管してもよく、またはさらには凍結してもよい。あるいは、本発明の方法を行う前に、血液サンプルを室温で、例えば摂氏１８～２２度で保管してもよい。血液サンプルは、血清を含み得る。血液サンプルは、血漿を含み得る。しかしながら、好ましくは、検出は全血で行われ、最も好ましくは、血液サンプルは末梢血である。

【0972】

血液は、第１の態様の使用が行われる前にさらに処理されてもよい。例えば、クエン酸塩（クエン酸ナトリウムなど）、ヒルジン、ヘパリン、ＰＰＡＣＫ、またはフッ化ナトリウムなどの抗凝固剤が添加され得る。よって、サンプル収集容器は、血液サンプルの凝固を防ぐために抗凝固剤を含み得る。

【0973】

好ましくは、サンプルは、血漿、内皮細胞、巨核球、および／または血小板を含み得る。
本発明が、本明細書で言及される配列のいずれかのアミノ酸または核酸配列（それらのバリアントまたはフラグメントを含む）を実質的に含む、あらゆる核酸もしくはペプチド、またはそれらのバリアント、誘導体もしくは類似体にまで及ぶことは理解されるであろう。「実質的にアミノ酸／ヌクレオチド／ペプチド配列」、「バリアント」および「フラグメント」という用語は、本明細書で言及される配列のいずれか１つのアミノ酸／ヌクレオチド／ペプチド配列との少なくとも４０％の配列同一性、例えば、配列番号１～１９４などとして特定される配列との４０％の同一性を有する配列であり得る。

【0974】

言及される配列のいずれかとの６５％超、より好ましくは７０％超、さらにより好ましくは７５％超、さらにより好ましくは８０％超の配列同一性である配列同一性を有するアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列も想定される。好ましくは、アミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列は、言及される配列のいずれかとの少なくとも８５％の同一性、より好ましくは、本明細書で言及される配列のいずれかとの少なくとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９２％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９７％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％の同一性、最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する。

【0975】

当業者であれば、２つのアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の間の同一性パーセンテージの計算の仕方を理解しているであろう。２つのアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の間の同一性パーセンテージを計算するためには、２つの配列のアラインメントをまず作成する必要があり、その後に配列同一性値を計算する。２つの配列の同一性パーセンテージは、（ｉ）配列をアラインするために使用される方法、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ、Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ（異なるプログラムに実装されている）、または３Ｄ比較からの構造的アラインメント、ならびに（ｉｉ）アラインメント方法によって使用されるパラメータ、例えば、ローカルアラインメントかグローバルアラインメントか、使用されるペアスコア行列（例えばＢＬＯＳＵＭ６２、ＰＡＭ２５０、Ｇｏｎｎｅｔなど）、およびギャップペナルティ、例えば関数形式および定数に応じて、異なる値をとり得る。

【0976】

アラインメントを行ったら、２つの配列の間の同一性パーセンテージを計算するには多くの異なる方途がある。例えば、同一性の数を、（ｉ）最も短い配列の長さ、（ｉｉ）アラインメントの長さ、（ｉｉｉ）配列の長さの平均、（ｉｖ）ギャップ以外の位置の数、または（ｖ）オーバーハングを除いた等価の位置の数で割ることができる。さらに、同一性パーセンテージが長さにも大きく依存することは理解されるであろう。したがって、配列のペアが短いほど、偶然発生すると予想され得る配列同一性が高くなる。

【0977】

そのため、タンパク質またはＤＮＡ配列の正確なアラインメントは複雑なプロセスであることが理解されるであろう。広く用いられているマルチプルアライメントプログラムであるＣｌｕｓｔａｌＷ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９９４年、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ、２２、４６７３～４６８０、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９９７年、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ、２４、４８７６～４８８２）は、本発明に従ってタンパク質またはＤＮＡのマルチプルアライメントを生成するための好ましい方途である。ＣｌｕｓｔａｌＷの好適なパラメータは次のとおりであり得る。ＤＮＡアラインメントの場合：ギャップオープンペナルティ＝１５．０、ギャップエクステンションペナルティ＝６．６６、および行列＝同一性。タンパク質アラインメントの場合：ギャップオープンペナルティ＝１０．０、ギャップエクステンションペナルティ＝０．２、および行列＝Ｇｏｎｎｅｔ。ＤＮＡおよびタンパク質アラインメントの場合：ＥＮＤＧＡＰ＝－１、およびＧＡＰＤＩＳＴ＝４。当業者には、最適な配列アラインメントのためには、これらおよび他のパラメータの変更が必要な場合があることが分かるであろう。

【0978】

好ましくは、２つのアミノ酸／ポリヌクレオチド／ポリペプチド配列の間の同一性パーセンテージの計算が、そのようなアラインメントから（Ｎ／Ｔ）×１００として計算され得、ここで、Ｎは、配列が同一の残基を共有する位置の数であり、Ｔは、ギャップを含み、オーバーハングを含むかまたは除外した、比較される位置の総数である。好ましくは、オーバーハングは計算に含まれる。したがって、２つの配列の間の同一性パーセンテージを計算するための最も好ましい方法は、（ｉ）ＣｌｕｓｔａｌＷプログラムを使用して、例えば上記に規定したような好適なパラメータセットを使用して、配列アラインメントを作成すること、ならびに（ｉｉ）次式：配列同一性＝（Ｎ／Ｔ）×１００にＮおよびＴの値を挿入することを含む。

【0979】

類似する配列を特定するための代替的方法は、当業者には公知であろう。例えば、実質的に類似するヌクレオチド配列は、ストリンジェントな条件下でＤＮＡ配列またはそれらの相補体にハイブリダイズする配列によってコードされる。ストリンジェントな条件によって本発明者らが意味するのは、およそ４５℃の３×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、続いておよそ２０～６５℃の０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での少なくとも１回の洗浄において、フィルタに結合したＤＮＡまたはＲＮＡにヌクレオチドがハイブリダイズするということである。あるいは、実質的に類似するポリペプチドは、例えば、配列番号１～１９４のうちアミノ酸配列であるものにおいて示される配列から、少なくとも１、ただし５未満、１０未満、２０未満、５０未満または１００未満のアミノ酸だけ異なり得る。

【0980】

遺伝コードの縮重のため、本明細書に記載されるいずれの核酸配列も、それによってコードされるタンパク質の配列に実質的に影響を及ぼすことなく、その機能的バリアントをもたらすように改変または変更され得ることは明らかである。好適なヌクレオチドバリアントは、配列内の同じアミノ酸をコードする異なるコドンの置換によって改変された故にサイレント（同義）変化が生じた配列を有するものである。他の好適なバリアントは、相同ヌクレオチド配列を有するが、置換されるアミノ酸と類似する生物物理学的特性を持つ側鎖を有するアミノ酸をコードする異なるコドンの置換によって改変されて保存的変化が生じた配列の全部または一部を含むものである。例えば、小さい非極性疎水性アミノ酸としては、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、およびメチオニンが挙げられる。大きい非極性疎水性アミノ酸としては、フェニルアラニン、トリプトファン、およびチロシンが挙げられる。極性中性アミノ酸としては、セリン、スレオニン、システイン、アスパラギン、およびグルタミンが挙げられる。正電荷を持つ（塩基性）アミノ酸としては、リジン、アルギニン、およびヒスチジンが挙げられる。負電荷を持つ（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。したがって、どのアミノ酸が類似する生物物理学的特性を有するアミノ酸で置き換えられ得るかは理解されるであろう。また、当業者には、これらのアミノ酸をコードするヌクレオチド配列が分かるであろう。

【0981】

本明細書（添付の特許請求の範囲、要約、および図面を含む）に記載される特徴のすべて、および／または開示される方法もしくはプロセスのステップのすべてが、任意の組合せで上記態様のいずれかと組み合わされ得るが、そのような特徴および／またはステップのうちの少なくともいくつかが相互排他的である組合せは除く。

【0982】

本発明がよりよく理解されるように、また、その実施形態がどのように実施され得るかを示すために、ここで、例として、添付図面を参照する。

【図面の簡単な説明】

【0983】

【図1】図１は、プロペプチドおよび成熟ＶＷＦ領域を示すＶＷＦペプチド構造の概略図である。血小板結合は、主に、カプラシズマブを含む現行療法によって標的化されるＡ１ドメインおよびＡ３ドメインを介する。本発明の阻害剤は、Ｃ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数を標的化する。

【図2】図２は、組換えＶＷＦタンパク質に対する、ヒトＣ１－Ｃ６－Ｆｃタンパク質で免疫されたＮＺＷ－１ウサギ由来の血漿のＥＬＩＳＡに基づく反応性スクリーニングを示す図であり、血漿がヒト天然ＶＷＦおよびＣ１－Ｃ６－Ｆｃ組換え生産タンパク質に対して良好な反応性を示したことを示している。

【図3-1】図３Ａ～Ｈは、天然ＶＷＦタンパク質および組換えＣ１－Ｃ６タンパク質に対する８つのユニークな抗ＶＷＦ抗体のＥＬＩＳＡ結合を示す図であり、複数の抗体がＣ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数に特異的に結合することを実証している。

【図3-2】図３Ａ～Ｈは、天然ＶＷＦタンパク質および組換えＣ１－Ｃ６タンパク質に対する８つのユニークな抗ＶＷＦ抗体のＥＬＩＳＡ結合を示す図であり、複数の抗体がＣ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数に特異的に結合することを実証している。

【図3-3】図３Ａ～Ｈは、天然ＶＷＦタンパク質および組換えＣ１－Ｃ６タンパク質に対する８つのユニークな抗ＶＷＦ抗体のＥＬＩＳＡ結合を示す図であり、複数の抗体がＣ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数に特異的に結合することを実証している。

【図4】図４は、ヒト天然ＶＷＦに対する５つの選択された抗ＶＷＦモノクローナル抗体の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）親和性決定を示す図である。

【図5】図５は、高剪断速度（１０，０００ｓ^－１）での血小板フローアッセイの結果を示す図であり、病的条件下での血小板凝集を低減する抗体の能力を実証している。

【図6-1】図６Ａ～Ｃは、４－Ｈ３、１－Ａ２および１－Ｇ５抗体についての、正常な剪断速度（１５００ｓ^－１）および高剪断速度（５０００ｓ^－１）下での全血フローアッセイの結果を示す図であり、病的条件下で血小板捕捉を阻害すると共にＶＷＦの正常な止血機能を維持するそれらの能力を実証している。

【図6-2】図６Ａ～Ｃは、４－Ｈ３、１－Ａ２および１－Ｇ５抗体についての、正常な剪断速度（１５００ｓ^－１）および高剪断速度（５０００ｓ^－１）下での全血フローアッセイの結果を示す図であり、病的条件下で血小板捕捉を阻害すると共にＶＷＦの正常な止血機能を維持するそれらの能力を実証している。

【図7-1】図７Ａ～Ｅは、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃに対する５つのモノクローナル抗体（Ｆｃ無効化Ｌ２３４ＡＬ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇヌルエフェクター骨格、およびＦａｂフラグメント抗体）のＥＬＩＳＡに基づく反応性スクリーニングを示す図である。

【図7-2】図７Ａ～Ｅは、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃに対する５つのモノクローナル抗体（Ｆｃ無効化Ｌ２３４ＡＬ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇヌルエフェクター骨格、およびＦａｂフラグメント抗体）のＥＬＩＳＡに基づく反応性スクリーニングを示す図である。

【図7-3】図７Ａ～Ｅは、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃに対する５つのモノクローナル抗体（Ｆｃ無効化Ｌ２３４ＡＬ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇヌルエフェクター骨格、およびＦａｂフラグメント抗体）のＥＬＩＳＡに基づく反応性スクリーニングを示す図である。

【図8-1】図８は、本発明の抗ＶＷＦ抗体の８つの実施形態の様々な配列を示す表である。ＦＲ＝フレームワーク領域、ＣＤＲ＝相補性決定領域、ＶＨ＝可変重鎖配列、ＶＬ＝可変軽鎖配列、ＨＣ＝定常重鎖配列、ＬＣ＝定常軽鎖配列。

【図8-2】図８の続き。

【図9】図９は、ヒトＶＷＦの個々のＣドメインに対する５つの選択されたモノクローナル抗体のＳＰＲ親和性決定を示す表である。ヒトＶＷＦの各Ｃドメインへの結合に関する親和性（ＫＤ）の決定ならびに結合速度（ｏｎ－ｒａｔｅ）（Ｋａ）および解離速度（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋｄ）の決定のために、５つのウサギ由来モノクローナル抗体を選択した。５つすべてのモノクローナル抗体が、サブｎＭの親和性でＣ５ドメインへの結合を示した。Ｃ４（３－Ｈ９）およびＣ３（１－Ｄ５）に対する、より弱い結合も観察された。

【図10-1】図１０は、ヒト化ｍＡｂの配列を示す表である。

【図10-2】図１０の続き。

【図10-3】図１０の続き。

【図10-4】図１０の続き。

【図10-5】図１０の続き。

【図10-6】図１０の続き。

【図10-7】図１０の続き。

【図10-8】図１０の続き。

【図10-9】図１０の続き。

【図10-10】図１０の続き。

【図10-11】図１０の続き。

【図10-12】図１０の続き。

【図10-13】図１０の続き。

【図10-14】図１０の続き。

【図10-15】図１０の続き。

【図10-16】図１０の続き。

【図10-17】図１０の続き。

【図10-18】図１０の続き。

【図10-19】図１０の続き。

【図11-1】図１１は、ヒト化モノクローナル抗体のヒト完全長ＶＷＦに対するＳＰＲ親和性決定を示す表である。ヒト完全長ＶＷＦへの結合に関する親和性（ＫＤ）の決定ならびに結合速度（Ｋａ）および解離速度（ｋｄ）の決定のために、すべてのヒト化モノクローナル抗体を選択した。すべてのクローンが、長い解離速度およびサブｎＭの親和性を示した。

【図11-2】図１１の続き。

【図11-3】図１１の続き。

【図12】図１２は、正常な剪断速度および高剪断速度下での全血フローアッセイにおける選択されたヒト化抗ＶＷＦ抗体の結果を示す図である。全血フローアッセイにおいて、高剪断速度（５０００ｓ^－１）下のヒト化抗体は、正常な剪断速度条件（１５００ｓ^－１）下よりも高い程度まで血小板捕捉を阻害し、これは、これらの抗体がＶＷＦの血栓形成促進機能を遮断すると共に、その正常な止血機能を維持し得ることを示している。

【発明を実施するための形態】

【0984】

実施例
ＶＷＦの蓄積は、様々な循環器疾患および血栓関連状態を含め、血小板媒介凝集によって引き起こされる複数の状態になるリスクの増加と関連付けられてきた。しかしながら、現行療法は、ＶＷＦに必須のＡ１ドメインを標的化するため、止血に必要な血小板結合を阻害し、患者の出血リスクの増加につながっている。したがって、本発明者らは、ＶＷＦのうちこれまでに標的化されていなかった領域、すなわちＣ１～Ｃ６ドメインを阻害することを試みた。本発明者らは、複数の血栓関連状態の処置を向上させる、Ｃ１～Ｃ６領域（すなわち、図１に示されるようなＣ１～Ｃ６ドメインのうちの１つまたは複数）に特異的に結合することが可能な抗体を開発した。後述するように、いくつかの新規Ｃ５標的化抗体（およびヒト化抗体）が生産され、これらは、所望の効果を呈する（すなわち、これらの抗体が機能的活性を持つことを示す、高剪断速度下で血小板捕捉を阻害することが可能である）故に、療法および診断において使用され得る。

【実施例1】

【0985】

実施例１－抗ＶＷＦ抗体の生成
ニュージーランド白（ＮＺＷ）ウサギを１００μｇの組換え生産ヒトＣ１－Ｃ６－Ｆｃタンパク質で免疫した。２１日後、ウサギにヒトＣ１－Ｃ６－Ｆｃ５０μｇの第１のブーストを与え、４２日後、動物にＣ１－Ｃ６－Ｆｃ５０μｇの第２のブーストを与えた。第１の免疫から５２日後に分析のために採血を行った。

【0986】

標的タンパク質（Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃ、ＶＷＦΔＤ４－Ｃ６およびＢＳＡ：１００ｎｇ／ウェル；ＶＷＦ－Ｈｉｓ：５００ｎｇ／ウェルおよび天然ＶＷＦ：２０ｎｇ／ウェル）をＥＬＩＳＡプレート上で一晩固定化し、ブロッキングし、ＮＺＷ－１ウサギ血漿サンプルの半対数希釈系列（出発希釈度１：１００）と共にインキュベートした。抗ウサギＨＲＰおよびＴＭＢを用いて抗体結合を検出した。

【0987】

組換えＶＷＦタンパク質に対するウサギ血漿反応性の例を図２に提示する。ＮＺＷ－１ウサギ由来の血漿は、ヒト天然ＶＷＦおよびＣ１－Ｃ６－Ｆｃ組換え生産タンパク質に対して良好な反応性を示した。血漿は、より低い程度ではあるが、組換え生産されたＶＷＦ－Ｈｉｓタグ付きタンパク質に対する反応性を示した。ＢＳＡおよびＣ１～Ｃ６ドメインが欠失したＶＷＦの組換えフラグメント（ＶＷＦΔＤ４－Ｃ６）に対するバックグラウンド反応性はごくわずかであった。ＮＺＷ－１ウサギを採取前ブーストおよび後のライブラリ生成のために選択した。

【実施例2】

【0988】

実施例２－ファージライブラリ生成およびスクリーニング
Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃ免疫ＮＺＷ－１ウサギからＴＲＩｚｏｌによって脾細胞および骨髄のＲＮＡが単離された後、Ｓ２８およびＳ１８ｒＲＮＡバンドの明らかな存在によって、ＲＮＡサンプルの完全性が証明された。ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩを使用してＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写し、ＧＡＰＤＨのＰＣＲ増幅およびその後のアガロースゲル電気泳動によってｃＤＮＡの質を確認した。

【0989】

ＶＫおよびＶＨのＰＣＲ増幅を脾細胞に対して行うことでｃＤＮＡを導出し、骨髄に対して行うことでｃＤＮＡを導出した。定常領域ＦＲ１フォワードプライマーおよびＳｆｉＩ制限部位を含むＦＲ４リバースプライマーを使用してＶＫおよびＶＨフラグメントを増幅した。産物の予想サイズは約４００ｂｐであった。ＶＫおよびＶＨ遺伝子の増幅には、多様なフォワードプライマーおよびリバースプライマーを使用した。ＰＣＲ産物を脾臓起源か骨髄起源かによってプールし、適正なサイズのフラグメントをゲル精製し、ｓｃＦｖオーバーラップアセンブリＰＣＲのために使用した。その後、適正なサイズのゲル精製済みアセンブリ産物をＳｆｉＩ消化し、２つのｓｃＦｖファージライブラリの生成のために使用した。すなわち、１つのライブラリを脾細胞由来Ｖ遺伝子から生成し、１つのライブラリを骨髄由来Ｖ遺伝子から生成した。

【0990】

独占権下にあるファージミドベクターにおけるｓｃＦｖレパートリーの大規模ライゲーション、およびその後のＥ．ｃｏｌｉＴＧ－１菌における形質転換の後、合計８．９×１０＾７個の形質転換体を取得した。ランダムにピッキングした１８０個のコロニー（脾臓および骨髄の各ライブラリから９０クローンを導出）を、完全長ｓｃＦｖインサートの存在について、ＰＣＲによって分析した。選択された９０個の完全長インサート含有クローン（脾臓および骨髄の各ライブラリから４５クローンを導出）のうち８６個を、その後、正確にシーケンシングしたところ（クオリティトレースデータに基づく）、そのうち６０個が適正な完全長ｓｃＦｖインサートを含有していることが判明し、５．９×１０＾７個の適正な完全長ｓｃＦｖを含有する形質転換体の最終ライブラリが得られた。

【0991】

最終ファージライブラリを、ヒトＣ１－Ｃ６－Ｆｃおよびヒト天然ＶＷＦタンパク質に対する４ラウンドの選択にかけた。４ラウンドの選択からのアウトプットを、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃ、ＶＷＦ－Ｈｉｓ、ＶＷＦ－ΔＤ４－Ｃ６、ｈＩｇＧ、ＢＳＡ、およびストレプトアビジンへの結合についてスクリーニングした。複数の反応性クローンをシーケンシングのために選択した。

【0992】

全体として、最初のシーケンシング手順と追加のシーケンシング手順とを組み合わせたものから取得されたｓｃＦｖ配列は、５つのＶＨ－ＣＤＲ３ファミリーに分類することができた。８つのユニークなｓｃＦｖ配列に由来する、合計８つのユニークなＶＨ配列および８つのユニークなＶＬ配列が特定された。これらの配列をヒトＩｇＧ１発現ベクターにクローニングし、一過性に発現させ、精製した。組換え抗体の精製は、プロテインＡを使用して行った。

【実施例3】

【0993】

実施例３－天然ＶＷＦタンパク質および組換えＣ１－Ｃ６タンパク質への抗ＶＷＦ抗体の結合を示すＥＬＩＳＡ実験
ウサギ免疫ライブラリから選択されたｓｃＦｖに元々由来した精製済みのモノクローナル抗体を、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃ、ＶＷＦΔＤ４－Ｃ６、ＢＳＡ（１００ｎｇ／ウェル）、およびヒト天然ＶＷＦ（ＩｍｐｅｒｉａｌＣｏｌｌｅｇｅ、２０ｎｇ／ウェル）に対する結合について試験した。８つのユニークな配列をＩｇＧ１ヒト発現ベクターにクローニングし、モノクローナル抗体として発現させた。タンパク質標的をＥＬＩＳＡプレート上で一晩固定化し、ブロッキングし、精製済みの組換えモノクローナル抗体の半対数希釈系列（出発濃度１０μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートした。重複値の平均を示す。ヒト天然ＶＷＦ、ＶＷＦΔＤ４－Ｃ６およびＢＳＡに対する抗体結合を、抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰまたは抗ヒトＩｇＧ－ＨＲＰおよびＴＭＢ染色によって検出した。Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃに対する反応性についてＥＬＩＳＡを別個のＥＬＩＳＡ実験で行い、抗ヒトＩｇＧκ－ＨＲＰおよびＴＭＢ染色によって検出した。結果を図３Ａ～３Ｈに示す。

【0994】

クローン４－Ｈ９（図３Ｅ）、４－Ｃ６（図３Ｆ）、および４－Ｂ１２（図３Ｈ）は、Ｃ１～Ｃ６ドメインに対する反応性のみを示した。クローン１－Ｇ５（図３Ｇ）、３－Ｈ９（図３Ｄ）、４－Ｈ３（図３Ｃ）、１－Ｄ５（図３Ｂ）、および１－Ａ２（図３Ａ）は、天然ＶＷＦおよびＣ１－Ｃ６タンパク質の両方に対する陽性反応性を示した。すべてのクローンが、Ｃ１～Ｃ６ドメインを有しないＶＷＦ（ＶＷＦΔＣ１－Ｃ６）に対してごくわずかな結合を示した。

【実施例4】

【0995】

実施例４－ＳＰＲによって決定したヒト天然ＶＷＦへの抗ＶＷＦ抗体の結合
研究グレードのプロテインＡシリーズＳセンサーチップを備えたＢｉａｃｏｒｅ８Ｋ（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を行った。３００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡおよび０．０５％Ｐ２０バッファーを含有する１０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．４において０．１５６μｇ／ｍｌまたは０．３１２μｇ／ｍｌの濃度の抗体を、フローセル２でおよそ１２ＲＵの密度まで、プロテインＡシリーズＳセンサーチップ上に固定化した。フローセル１は参照表面として用いるためにブランクのままにした。シングルサイクルカイネティクス結合データを収集するために、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌｐＨ１．５を３０秒間５０μｌ／分で用い、続いてランニングバッファー（３００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡおよび０．０５％Ｐ２０を含有する１０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．４）を６０秒間３０μｌ／分で用いることで、表面をまず前処理し、その後、３００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡおよび０．０５％Ｐ２０を含有する１０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．４における天然ＶＷＦ（３０５ｋＤａ）を、２つのフローセル上に、濃度４．４、６．６、９．９、１４．８、２２、３３、および５０ｎＭ、流量３０μｌ／分、コンパートメント温度１０℃、フローセル温度２５℃で注入した。複合体の結合および解離を、それぞれ１２０秒間および７２００秒間行った。１０ｍＭグリシン－ＨＣｌｐＨ１．５を３０秒間注入することで、表面を再生した。

【0996】

１０Ｈｚの速度でデータを収集した。ＢｉａｃｏｒｅＩｎｓｉｇｈｔＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．０．１２．１５６５５において利用可能なグローバルデータ分析オプションを使用して、データを単純な１：１相互作用モデルに当てはめた。結果を図４に示す。

【0997】

天然ＶＷＦへの結合に関する親和性（ＫＤ）の決定ならびに結合速度（Ｋａ）および解離速度（ｋｄ）の決定のために、５クローンを選択した。５クローンすべてが、再現性のある動態を示し、長い解離速度およびサブｎＭの親和性を有していた。

【実施例5】

【0998】

実施例５－血小板フローアッセイ
フロースライドを精製済みＶＷＦでコーティングし、高剪断速度（１００００ｓ^－１）で血漿不含血液を灌流した。血漿不含血液とは、全血から血漿画分が除去され、赤血球および血小板のみが残ったものである。可溶性ＶＷＦの非存在下では、血小板はＶＷＦ表面に付着するが、血小板およびＶＷＦの凝集体が生じない。可溶性ＶＷＦを加えると、血小板およびＶＷＦの凝集体が生じる。剪断力が非常に高いので、可溶性ＶＷＦが溶解してアンフォールドし、血小板を捕捉し得る（アイソタイプ対照画像を参照されたい）。この発生は、抗体（１０μｇ／ｍｌ）の添加によって様々な程度に妨げられる。

【0999】

この血漿不含フローアッセイから生成された画像が図５に提示されており、血小板捕捉が白で示されている（白い「凝集塊」は正常な凝集を示す）。アイソタイプ対照は、抗ＶＷＦＣ１－Ｃ６抗体の非存在下での血小板捕捉のレベルを示す。クローン１－Ａ２および４－Ｈ３の存在下では、血小板捕捉がなくなる。クローン１－Ｄ５、３－Ｈ９および１－Ｇ５もまた、病的条件下で血小板および血栓の形成を低減する。したがって、これらの結果は、「病的な」高剪断速度（１０，０００ｓ^－１）において５つの異なるＣ１－Ｃ６ｍＡｂの存在下で血小板凝集が低減することを示し、５つすべての抗体が機能的活性を持つことを裏付けている。これらは、天然ＶＷＦおよびＣ１－Ｃ６に対して最大の結合を示した同じ５クローンである（実施例３を参照されたい）。

【実施例6】

【1000】

実施例６－全血フローアッセイ
スライドをコラーゲンでコーティングし、図６に示されている濃度の試験抗体と共に全血を灌流した。流動の５分後に撮影した画像から平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算し、アイソタイプ対照に対して正規化した（ＭＦＩ％）。各流量で同じ血液ドナーを使用した。

【1001】

図６Ａ～６Ｃに示されるように、全血フローアッセイにおいて、４－Ｈ３、１－Ａ２および１－Ｇ５抗体は、高剪断速度（５０００ｓ^－１）下では、正常な剪断速度条件（１５００ｓ^－１）下よりも高い程度まで血小板捕捉を阻害する。これは、これらの抗体が、ＶＷＦの血栓形成促進機能を遮断すると共に、その正常な止血機能を維持し得ることを実証する。

【実施例7】

【1002】

実施例７－Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃに対するＦｃ無効化抗ＶＷＦ抗体および抗ＶＷＦＦａｂフラグメントの結合を示すＥＬＩＳＡ実験
ＥＬＩＳＡに基づく反応性スクリーニングを、（ｉ）Ｆｃ無効化Ｌ２３４ＡＬ２３５Ａ－Ｐ３２９Ｇヌルエフェクター骨格を含む精製済みモノクローナルｖＷＦ抗体、および（ｉｉ）ｖＷＦＦａｂフラグメントに対して行って、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃ（１００ｎｇ／ウェル）に対するそれらの結合を試験した。タンパク質標的をＥＬＩＳＡプレート上で一晩固定化し、ブロッキングし、精製済みの組換えモノクローナル抗体またはＦａｂフラグメントの半対数希釈系列（出発濃度１０μｇ／ｍｌ、１１個の希釈物）と共にインキュベートした。重複値の平均を示す。抗ヒトＩｇＧ_Ｋ－ＨＲＰおよびＴＭＢ染色を用いて、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃに対する抗体またはＦａｂフラグメントの結合を検出した。

【1003】

図７Ａ～７Ｅに示されるように、クローン１－Ａ２（図７Ａ）、４－Ｈ３（図７Ｂ）、１－Ｄ５（図７Ｃ）、３－Ｈ９（図７Ｄ）および１－Ｇ５（図７Ｅ）のＦａｂフラグメントおよびＦｃ無効化抗体はすべて、Ｃ１－Ｃ６－Ｆｃへの陽性反応性および結合を示した。

【実施例8】

【1004】

実施例８－個々のＣドメインに対する５つのｍＡｂのＳＰＲ分析
プロテインＡセンサーチップ上に抗体を捕捉した。ランニングバッファー（１０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４、３００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ２０）を使用してシステムをパージし、シリーズＳプロテインＡチップをＢｉａｃｏｒｅＴ２００にドッキングした。表面を１０ｍＭグリシン－ＨＣｌｐＨ１．５再生溶液（３回注入）で調整した。各抗体をランニングバッファー中で約０．８μｇ／ｍｌに希釈して、フローセル２、３および４において約３５０ＲＵを捕捉させた（フローセル１はインライン参照セルとして使用した）。以下のパラメータを使用して、抗体に対する各Ｃドメインの結合のシングルサイクルカイネティクス分析を行った。

【1005】

【表1】

【1006】

各サイクル後に、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌｐＨ１．５を３０秒間５０μｌ／分で用い、チップ表面を再生した。ヒトの各Ｃドメインに対する各被験抗体についての親和性および動態が図９に記録される。

【1007】

図９に示されるように、モノクローナル抗体の５つすべてが、サブｎＭの親和性でＣ５ドメインへの結合を示した。Ｃ４（３－Ｈ９）およびＣ３（１－Ｄ５）に対する、より弱い結合も観察された。

【実施例9】

【1008】

実施例９－ヒト化バリアントのクローニングおよび発現
哺乳動物発現ベクターにクローニングするための制限部位およびヒトシグナル配列を含む、オーバーラップするオリゴヌクレオチドの構築により、ヒト化抗体バリアントをコードするＤＮＡ発現構築物をｄｅｎｏｖｏで調製した。ヒトγ１定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターにクローニングするためのシグナル配列を含有するＶＨドメインを挟むように、ＨｉｎｄｌｌｌおよびＳｐｅｌ制限部位を導入した。ヒトカッパ定常領域を含有する哺乳動物発現ベクターにクローニングするためのシグナル配列を含有するＶＬドメインを挟むように、ＨｉｎｄｌｌｌおよびＢｓｉＷＩ制限部位を導入した。重鎖および軽鎖をそれぞれコードする発現プラスミドをＨＥＫ２９３６Ｅ細胞に一過性にコトランスフェクトし、発現させ、抗体を生産させた。プロテインＡを使用して調製物を精製し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して濃度を測定した。

【実施例10】

【1009】

実施例１０－ヒト完全長ＶＷＦに対するヒト化ｍＡｂのＳＰＲ分析
プロテインＡセンサーチップ上に抗体を捕捉した。ランニングバッファー（１０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．４、３００ｍＭＮａＣｌ、３ｍＭＥＤＴＡ、０．０５％Ｐ２０）を使用してシステムをパージし、シリーズＳプロテインＡチップをＢｉａｃｏｒｅＴ２００にドッキングした。表面を１０ｍＭグリシン－ＨＣｌｐＨ１．５再生溶液（３回注入）で調整した。各抗体をランニングバッファー中で約０．８μｇ／ｍｌに希釈して、フローセル２、３および４において約３５０ＲＵを捕捉させた（フローセル１はインライン参照セルとして使用した）。以下のパラメータを使用して、抗体に対するヒト完全長ＶＷＦの結合のシングルサイクルカイネティクス分析を行った。

【1010】

【表2】

【1011】

各サイクル後に、１０ｍＭグリシン－ＨＣｌｐＨ１．５を３０秒間５０μｌ／分で用い、チップ表面を再生した。ヒト完全長ＶＷＦに対する各被験抗体についての親和性および動態が記録される。図１１に示されるように、すべてのヒト化モノクローナル抗体クローンが、ヒト完全長ＶＷＦに対して長い解離速度およびサブｎＭの親和性を示した。

【実施例11】

【1012】

実施例１１－正常な剪断速度および高剪断速度下での全血フローアッセイにおけるヒト化抗ＶＷＦ抗体による血小板捕捉の阻害
スライドをコラーゲンでコーティングし、示されている濃度の試験抗体と共に全血を灌流した。流動の５分後に撮影した画像から平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算し、アイソタイプ対照に対して正規化した（ＭＦＩ％）。各流量で同じ血液ドナーを使用した。

【1013】

図１２に示されるように、全血フローアッセイにおいて、高剪断速度（５０００ｓ^－１）下のヒト化抗体の５つすべてが、正常な剪断速度条件（１５００ｓ^－１）下よりも高い程度まで血小板捕捉を阻害し、これは、これらの抗体がＶＷＦの血栓形成促進機能を遮断すると共に、その正常な止血機能を維持し得ることを示している。したがって、これらの結果は、ヒト化モノクローナル抗体が機能的活性を持つことを裏付けている。

【1014】

考察および結論
本発明者らは、ＶＷＦタンパク質のＣ１～Ｃ６ドメインが血栓形成促進性の病的条件においてＶＷＦの機能に重要であることを特定し、したがって、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６に結合してその機能を阻害することが可能な抗体を開発した。例えば、図３Ａ～３Ｈおよび図７Ａ～７Ｅに示されるように、本発明者らは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインを特異的に標的化する能力を示した複数の抗体およびそれらの抗原結合フラグメントを開発した。特に、図９に示されるように、本発明者らは、本発明のモノクローナル抗体がＶＷＦのＣ５ドメインに結合することを実証した。さらに、図５および６に示されるように、本発明者らは、これらの抗体が、Ｃ１～Ｃ６ドメインを標的化することにより、病的な高剪断速度下では血小板凝集を低減することができるが、正常条件下では血小板捕捉が維持されることを実証した。

【1015】

さらに、本発明者らは、本発明に係る抗体のヒト化型を生成し、これらのヒト化抗体が高い親和性でヒト完全長ＶＷＦに結合できることを実証した。本発明者らは、これらのヒト化抗体が高剪断速度下で血小板捕捉を阻害することが可能であることも実証し、このことは、これらのヒト化モノクローナル抗体が機能的活性を持つことを示している。

【1016】

現行の抗ＶＷＦ療法はＶＷＦのＡ１ドメインを標的化して阻害し、そのため、低剪断条件下での血小板結合を阻害する。これは、正常な止血の発生を妨げ、患者に重大な出血リスクをもたらす。本発明者らは、ＶＷＦのＣ１～Ｃ６ドメインを標的化することにより、血小板結合が、正常な止血に関連する低剪断速度下では阻害されず、病的な高剪断速度下でのみ阻害され得ることを実証した。したがって、本発明者らは、重大な出血のリスクを増加させることなく、血栓関連状態を防止または処置するための新規戦略を特定した。

【図1】