特表 2024-514975 ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＦタンパク質を発現するキメラニューカッスル病ウイルス

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-03

(54)【発明の名称】ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＦタンパク質を発現するキメラニューカッスル病ウイルス

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/45 20060101AFI20240327BHJP

   C12N 15/50 20060101ALI20240327BHJP

   C12N 15/40 20060101ALI20240327BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240327BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20240327BHJP

   C12N 15/113 20100101ALI20240327BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240327BHJP

   C12N 7/02 20060101ALI20240327BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240327BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240327BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240327BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240327BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240327BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240327BHJP

   A61K 39/02 20060101ALI20240327BHJP

   A61K 39/12 20060101ALI20240327BHJP

   A61K 39/002 20060101ALI20240327BHJP

   A61K 39/215 20060101ALI20240327BHJP

【ＦＩ】

C12N15/45 ZNA

C12N15/50

C12N15/40

C12N15/12

C12N7/01

C12N15/113 Z

C12N5/10

C12N7/02

A61P37/04

A61P31/00

A61P35/00

A61K48/00

A61K35/76

A61K39/00 G

A61K39/02

A61K39/12

A61K39/00 K

A61K39/002

A61K39/215

A61K39/00 H

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023565511

(86)(22)【出願日】2022-04-25

(85)【翻訳文提出日】2023-12-22

(86)【国際出願番号】 US2022026185

(87)【国際公開番号】W WO2022232052

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】63/179,994

(32)【優先日】2021-04-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/302,434

(32)【優先日】2022-01-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513321467

【氏名又は名称】アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ

(74)【代理人】

【識別番号】100097456

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 徹

(72)【発明者】

【氏名】アドルフォ ガルシア‐サストレ

(72)【発明者】

【氏名】イグナチオ メナ

(72)【発明者】

【氏名】ピーター パレセ

(72)【発明者】

【氏名】フロリアン クラムメル

(72)【発明者】

【氏名】ウェイナ サン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA01

4B065CA24

4B065CA45

4C084AA13

4C084MA59

4C084NA14

4C084ZB091

4C084ZB092

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB311

4C084ZB312

4C085AA03

4C085BA01

4C085BA02

4C085BA07

4C085BA49

4C085BA51

4C085BA71

4C085BA74

4C085BB01

4C085EE01

4C085GG10

4C087AA01

4C087AA02

4C087BC83

4C087CA09

4C087CA12

4C087MA59

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB26

4C087ZB31

(57)【要約】

一つの態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（「ＮＤＶ」）が記載され、該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＨＮタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＦタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一部の実施形態では、パッケージ化ゲノムは、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をさらに含む。また本明細書において、当該組み換えＮＤＶを含む組成物、および対象において免疫応答を誘導するための当該組み換えＮＤＶの使用も記載される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はそれぞれ、ＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質ではない、前記核酸配列。

【請求項2】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる、請求項１に記載の核酸配列。

【請求項3】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＨＮタンパク質である、請求項１に記載の核酸配列。

【請求項4】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＦタンパク質である、請求項１または３に記載の核酸配列。

【請求項5】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である、請求項１に記載の核酸配列。

【請求項6】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である、請求項１または５に記載の核酸配列。

【請求項7】

前記ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の核酸配列。

【請求項8】

（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、および（５）配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列。

【請求項9】

前記ＮＤＶヌクレオカプシドタンパク質、ＮＤＶホスホタンパク質、ＮＤＶマトリクスタンパク質、およびＮＤＶ大型ポリメラーゼは、該ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のものである、請求項８に記載の核酸配列。

【請求項10】

配列番号４４のヌクレオチド配列を含む、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列を含む核酸配列。

【請求項11】

配列番号４４のヌクレオチド配列、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列。

【請求項12】

配列番号４５のヌクレオチド配列を含む、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸配列。

【請求項13】

配列番号４５のヌクレオチド配列、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列。

【請求項14】

導入遺伝子をさらに含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の核酸配列。

【請求項15】

抗原をコードする導入遺伝子をさらに含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の核酸配列。

【請求項16】

前記抗原が、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原である、請求項１４に記載の核酸配列。

【請求項17】

前記抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む、請求項１４に記載の核酸配列。

【請求項18】

前記断片が、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む、請求項１７に記載の核酸配列。

【請求項19】

前記断片が、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞外ドメインを含む、請求項１７に記載の核酸配列。

【請求項20】

前記抗原が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、呼吸器合胞体ウイルス抗原、ヒトメタニューモウイルス抗原、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原である、請求項１５に記載の核酸配列。

【請求項21】

前記抗原が、がんまたは腫瘍の抗原である、請求項１５に記載の核酸配列。

【請求項22】

パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）であって、該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、該非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、該非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はそれぞれ、ＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質ではない、前記組み換えＮＤＶ。

【請求項23】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる、請求項２２に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項24】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である、請求項２２に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項25】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である、請求項２２または２３に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項26】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＨＮタンパク質である、請求項２２に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項27】

前記非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＦタンパク質である、請求項２２または２６に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項28】

パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）であって、該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、配列番号１～１４のいずれか一つに記載されるｃＤＮＡ配列から転写されるネガティブセンスＲＮＡ配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている、前記組み換えＮＤＶ。

【請求項29】

パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）であって、該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列から転写されるネガティブセンスＲＮＡ配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている、前記組み換えＮＤＶ。

【請求項30】

前記ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａのＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む、請求項２２～２９のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項31】

前記パッケージ化ゲノムが導入遺伝子をさらに含む、請求項２２～３０のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項32】

前記導入遺伝子が、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項33】

前記導入遺伝子が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項34】

前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む、請求項３３に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項35】

前記断片が、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む、請求項３４に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項36】

前記導入遺伝子が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項37】

前記導入遺伝子が、呼吸器合胞体ウイルス抗原またはヒトメタニューモウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項38】

前記導入遺伝子が、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項39】

前記導入遺伝子が、がんまたは腫瘍の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項３１に記載の組み換えＮＤＶ。

【請求項40】

請求項２２～３１のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶである第一の組み換えＮＤＶを含む、免疫原性組成物。

【請求項41】

請求項３２～３８のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶである第一の組み換えＮＤＶを含む、免疫原性組成物。

【請求項42】

請求項３９に記載の組み換えＮＤＶである第一の組み換えＮＤＶを含む、免疫原性組成物。

【請求項43】

抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、請求項４０、４１、または４２に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項44】

感染性疾患を予防する方法であって、請求項４０または４１に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項45】

感染性疾患に対して対象に免疫を付与する方法であって、請求項４０または４１に記載の免疫原性組成物を該対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項46】

がんを治療する方法であって、請求項４０または４２に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項47】

前記組成物が、前記対象に鼻腔内投与される、請求項４３～４６のいずれか一つに記載の、前記方法。

【請求項48】

前記方法はさらに、パッケージ化ゲノムを含む第二の組み換えＮＤＶを投与することをさらに含み、該第二の組み換えＮＤＶの該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、該非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする該ヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、該非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに該第二の組み換えＮＤＶは、該第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる、請求項４３～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記対象が、ヒトである、請求項４３～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

請求項２２～３９のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶを含む、キット。

【請求項51】

請求項１～２１のいずれか一項に記載の核酸配列を含む、キット。

【請求項52】

請求項２２～３９のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶを含む、インビトロまたはエクスビボの細胞。

【請求項53】

請求項２２～３９のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶを含む、細胞株またはニワトリ発育卵。

【請求項54】

請求項２２～３９のいずれか一項に記載の組み換えＮＤＶを増殖させる方法であって、請求項５２または５３に記載の細胞または発育卵を培養することを含む、前記方法。

【請求項55】

前記方法が、前記細胞または発育卵から前記組み換えＮＤＶを単離することをさらに含む、請求項５４に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２２年１月２４日に出願された米国仮特許出願第６３／３０２，４３４号、および２０２１年４月２６日に出願された米国仮特許出願第６３／１７９，９９４号の利益を主張するものであり、これらの出願の各開示内容は、その全体で本明細書に組み込まれる。

【0002】

連邦政府が支援する研究に関する声明
本発明は、国立衛生研究所によって与えられたＡＩ０９７０９２の下、政府の支援によって行われた。政府は本発明に特定の権利を有する。

【0003】

配列表
本出願は、２０２２年４月２２日に作成され、サイズは１４７，４９９バイトである、０６９２３－３８２－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔというタイトルのテキストとして本出願とともに提出された配列表を参照により援用する。

【0004】

１．イントロダクション
一つの態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（「ＮＤＶ」）が記載され、パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＨＮタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＦタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一部の実施形態では、パッケージ化ゲノムは、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をさらに含む。また本明細書において、当該組み換えＮＤＶを含む組成物、および対象において免疫応答を誘導するための当該組み換えＮＤＶの使用も記載される。

【背景技術】

【0005】

２．背景技術
ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）は、パラミクソウイルス科のアブラウイルス亜科の一種であり、多くの鳥類に感染することが示されている（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，ＤＪ（１９８８）．Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ－－ａｎ ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ．Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ．ｐｐ １－２２）。ＮＤＶは、ネガティブセンスの一本鎖ＲＮＡゲノムを保有しており、宿主ゲノムとの組み換えを受けず、他のウイルスとの組み換えも受けない（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ，ＤＪ（１９８８）．Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ－－ａｎ ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ．Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ：Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ．ｐｐ １－２２）。ゲノムＲＮＡは、３’－ＮＰ－Ｐ－Ｍ－Ｆ－ＨＮ－Ｌ－５’の順で遺伝子を含有しており、以下に詳細に記載する。ＲＮＡ編集によって生成される別のｍＲＮＡによって、ＮＤＶは、ＶおよびＷの二つの追加タンパク質をＰ遺伝子から産生する。ゲノムＲＮＡは、３’末端にリーダー配列も含有している。

【0006】

ビリオンの構造的要素には、細胞膜に由来する脂質二重層であるウイルスエンベロープが含まれる。糖タンパク質であるヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）がエンベロープから突出しており、それによって、ウイルスはヘマグルチニン活性（例えば、受容体の結合／融合）とノイラミニダーゼ活性の両方を備えることが可能となる。ウイルス膜とも相互作用する融合糖タンパク質（Ｆ）は、最初は不活性前駆体として産生され、次いで翻訳後に切断されて、二つのジスルフィド結合型ポリペプチドが生成される。活性Ｆタンパク質は、宿主細胞へのＮＤＶの侵入に関与しており、ウイルスエンベロープと宿主細胞膜との融合を促進する。マトリクスタンパク質（Ｍ）は、ウイルスアセンブリに関与しており、ウイルス膜ならびにヌクレオカプシドタンパク質の両方と相互作用する。

【0007】

ヌクレオカプシドの主要なタンパク質サブユニットは、ヌクレオカプシドタンパク質（ＮＰ）であり、カプシドにらせん状の対称性を与えている。Ｐタンパク質およびＬタンパク質が、ヌクレオカプシドと関連付けられている。リン酸化を受けるホスホタンパク質（Ｐ）は、転写制御の役割を果たしていると考えられており、メチル化、リン酸化およびポリアデニル化にも関与している可能性がある。ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼをコードするＬ遺伝子は、Ｐタンパク質と協働して、ウイルスＲＮＡの合成に必要とされる。ウイルスゲノムのコードキャパシティのほぼ半分を占めるＬタンパク質が最大のウイルスタンパク質であり、転写および複製の両方において重要な役割を果たしている。Ｖタンパク質は、インターフェロンアルファを阻害し、ＮＤＶの毒性に寄与することが示されている（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００３）．Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ Ｖ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｖｉｒａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｓ ａｎ Ａｌｐｈａ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７７：８６７６－８６８５）。

【発明の概要】

【0008】

３．発明の概要
一つの態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、当該配列では、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、「非ＮＤＶ ＡＰＭＶ」という用語は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶを指すために使用される。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶとは異なる属に由来する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではないアブラウイルス亜科の一種に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属（ｇｅｎｕｓ ｍｅｔａａｖｕｌａｖｉｒｕｓ）に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属（ｇｅｎｕｓ ｐａｒａａｖｕｌａｖｉｒｕｓ）に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属（ｇｅｎｕｓ ｏｒｔｈｏａｖｕｌａｖｉｒｕｓ）に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む。

【0009】

一部の実施形態では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、および（５）配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、および（５）配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列、を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、ＮＤＶヌクレオカプシドタンパク質、ＮＤＶホスホタンパク質、ＮＤＶマトリクスタンパク質、およびＮＤＶ大型ポリメラーゼは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のものである。

【0010】

一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４４のヌクレオチド配列を含む、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４４のヌクレオチド配列、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４５のヌクレオチド配列、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。

【0011】

一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４４のヌクレオチド配列に対応する、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４４のヌクレオチド配列に対応する、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４５のヌクレオチド配列に対応する、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４５のヌクレオチド配列に対応する、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む核酸配列が提供される。

【0012】

一部の実施形態では、核酸配列は導入遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、核酸配列は、抗原をコードする導入遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む。一部の実施形態では、断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む。一部の実施形態では、断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞外ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、呼吸器合胞体ウイルス抗原、ヒトメタニューモウイルス抗原、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原を含む。一部の実施形態では、抗原は、がん抗原または腫瘍抗原である。

【0013】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＦタンパク質である。

【0014】

一部の実施形態では、核酸配列は、ｃＤＮＡ配列である。一部の実施形態では、核酸配列は、ネガティブセンス鎖ＲＮＡ配列である。

【0015】

一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列を含む組み換えＮＤＶが本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の非ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、本明細書に記載の非ＡＰＭＶ－ＨＮタンパク質、または本明細書に記載の非ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、および本明細書に記載の非ＡＰＭＶ－ＨＮタンパク質を含む組み換えＮＤＶが本明細書に提供される。一部の実施形態では、非ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列によってコードされる。一部の実施形態では、非ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。一部の実施形態では、非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列によってコードされる。一部の実施形態では、非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。

【0016】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）が提供され、当該ウイルスにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＦタンパク質（非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質）またはそのバリアントのコード配列と置き換えられており、および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質のコード配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＨＮタンパク質（非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質）またはそのバリアントのコード配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶとは異なる属に由来する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではないアブラウイルス亜科の一種に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属（ｇｅｎｕｓ ｐａｒａａｖｕｌａｖｉｒｕｓ）に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属（ｇｅｎｕｓ ｏｒｔｈｏａｖｕｌａｖｉｒｕｓ）に由来するＦタンパク質およびＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａのＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む。特定の実施形態では、パッケージ化ゲノムは、導入遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片である。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む。特定の実施形態では、断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞外ドメインである。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、呼吸器合胞体ウイルス抗原またはヒトメタニューモウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、がん抗原または腫瘍抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。

【0017】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントと交差反応しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0018】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントと交差反応しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＮＨタンパク質またはそのバリアントに２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＮＨタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントに０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0019】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶとは異なる属由来のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。

【0020】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質は、同じＡＰＭＶ株に由来する、または同じＡＰＭＶ株から誘導される。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質は、異なるＡＰＭＶ株に由来する、または異なるＡＰＭＶ株から誘導される。

【0021】

特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）が提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１～１４のいずれか一つに記載されるｃＤＮＡ配列から転写されるネガティブセンスＲＮＡ配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）が提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１～１４のいずれか一つに記載されるｃＤＮＡ配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるｃＤＮＡ配列から転写されるネガティブセンスＲＮＡ配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａのＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む。特定の実施形態では、パッケージ化ゲノムは、導入遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片である。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む。特定の実施形態では、断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞外ドメインである。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、呼吸器合胞体ウイルス抗原またはヒトメタニューモウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、がん抗原または腫瘍抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。

【0022】

別の態様では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含む免疫原性組成物が本明細書において提供される。免疫原性組成物は、薬学的に許容可能な担体をさらに含んでもよい。組成物は、１０^４～１０^１２ＰＦＵの本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含んでもよい。

【0023】

別の態様では、抗原に対する免疫応答を誘導するための方法が本明細書に提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。別の態様では、感染病を予防するための方法が本明細書に提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。別の態様では、感染性疾患に対して対象を免疫付与するための方法が本明細書に提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。別の態様では、がんを治療するための方法が本明細書に提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたは本明細書に記載の免疫原性組成物を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶまたは組成物は、対象に鼻腔内投与される。特定の実施形態では、方法はさらに、パッケージ化ゲノムを含む第二の組み換えＮＤＶを投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶのパッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、およびこの場合において当該第二の組み換えＮＤＶは、対象に投与された第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、過去にワクチン接種された、またはＮＤＶ組成物（例えば、ワクチン）を投与された対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、過去にワクチン接種された、またはＡＰＭＶをベースにした組成物（例えば、ワクチン）を投与された対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、過去にワクチン接種された、またはＮＤＶ組成物（例えば、ワクチン）およびＡＰＭＶをベースにした組成物（例えば、ワクチン）を投与された対象に投与される。

【0024】

特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１に記載されるものなどのウイルス中和アッセイにより評価されたときに、一方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶは、免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１に記載されるなどのウイルス中和アッセイにおいて、互いの複製を、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。

【0025】

別の態様では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含むキットが本明細書に提供される。別の態様では、組み換えＮＤＶを含むインビトロ細胞またはエクスビボ細胞が本明細書に提供される。別の態様では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含む細胞株またはニワトリ発育卵が本明細書に提供される。

【0026】

別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列を含むキットが提供され、当該配列では、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む。

【0027】

一部の実施形態では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、および（５）配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列を含むキットが提供される。一部の実施形態では、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、および（５）配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列、を含む核酸配列を含むキットである。一部の実施形態では、ＮＤＶヌクレオカプシドタンパク質、ＮＤＶホスホタンパク質、ＮＤＶマトリクスタンパク質、およびＮＤＶ大型ポリメラーゼは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のものである。

【0028】

別の態様では、本明細書に記載される組み換えＮＤＶを増殖させるための方法が本明細書に提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含む細胞または発育卵を培養することを含む。一部の実施形態では、方法は、卵または発育卵から組み換えＮＤＶを単離することをさらに含む。

【0029】

３．１ 用語
本明細書で使用される場合、数値と併せて使用されるときの「約」または「およそ」という用語は、参照される数値の１、５または１０％以内の任意の数値を指す。

【0030】

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、例えば免疫グロブリンなど、抗原結合部位を含有する分子を指す。抗体としては限定されないが、モノクローナル抗体、二特異性抗体、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ポリクローナル抗体、単一ドメイン抗体、ラクダ科抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド連結二特異性Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディおよび抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗体に対する抗Ｉｄおよび抗Ｉｄ抗体を含む）、ならびに前述のいずれかのエピトープ結合断片が挙げられる。特に抗体としては、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫活性断片が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、またはサブクラスであってもよい。

【0031】

本明細書で使用される場合、ＮＤＶに関連した「異種」という用語は、自然界では天然型ＮＤＶと関連して（例えば、天然型ＮＤＶにコードされ、そのゲノムにより発現され、またはその両方）存在しない実体を指す。特定の実施形態では、異種配列は、天然型ＮＤＶと関連して存在しないタンパク質をコードする。

【0032】

本明細書で使用される場合、核酸配列もしくはヌクレオチド配列、またはアミノ酸配列に関連した「異種」という用語は、自然界では第一の核酸配列もしくはヌクレオチド配列、または第一のアミノ酸配列と関連して存在しない、第二の核酸配列もしくはヌクレオチド配列、または第二のアミノ酸配列を指す。

【0033】

本明細書で使用される場合、「ＩＦＮ欠損系」または「ＩＦＮ欠損基質」という文言は、一種、二種もしくはそれ以上のタイプのインターフェロン（ＩＦＮ）を産生しない、または任意のタイプのＩＦＮを産生しない、または低レベルの一種、二種もしくはそれ以上のタイプのインターフェロン（ＩＦＮ）を産生する、または低レベルの任意のＩＦＮを産生する（すなわち、ＩＦＮ能を有する系と比較して、同条件下で５～１０％、１０～２０％、２０～３０％、３０～４０％、４０～５０％、５０～６０％、６０～７０％、７０～８０％、８０～９０％、またはそれ以上の任意のＩＦＮ発現の低下）、または一種、二種もしくはそれ以上のタイプのＩＦＮに反応しない、もしくは低効率に反応する、または任意のタイプのＩＦＮに反応しない、一種、二種もしくはそれ以上のタイプのＩＦＮに対する反応が遅延している、一種、二種もしくはそれ以上のタイプのＩＦＮにより誘導される抗ウイルス遺伝子の活性が欠損している、または任意のタイプのＩＦＮにより誘導される抗ウイルス遺伝子の活性が欠損している、またはそれらの任意の組み合わせである、例えば細胞、細胞株および動物、例えば、マウス、ニワトリ、七面鳥、ウサギ、ラット、ウマなどの系を指す。

【0034】

本明細書で使用される場合、「対象」または「患者」という用語は相互交換可能に使用される。本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、動物を指す。一部の実施形態では、対象は、非霊長類（例えば、ラクダ、ロバ、シマウマ、ウシ、ウマ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、およびマウス）および霊長類（例えば、サル、チンパンジー、およびヒト）を含む哺乳動物である。一部の実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物である。特定の実施形態では、対象は、ペット（例えば、イヌまたはネコ）または家畜（例えば、ウマ、ブタまたはウシ）である。特定の実施形態では、対象は、ヒトである。他の特定の実施形態では、対象は、ウシである。特定の実施形態では、哺乳動物（例えば、ヒト）は、４～６ヶ月齢、６～１２ヶ月齢、１～５歳、５～１０歳、１０～１５歳、１５～２０歳、２０～２５歳、２５～３０歳、３０～３５歳、３５～４０歳、４０～４５歳、４５～５０歳、５０～５５歳、５５～６０歳、６０～６５歳、６５～７０歳、７０～７５歳、７５～８０歳、８０～８５歳、８５～９０歳、９０～９５歳、または９５～１００歳である。特定の実施形態では、対象は、鳥類ではない動物である。

【0035】

本明細書で使用される場合、（ａ）対象への治療法の投与の文脈における「組み合わせて」という用語は、複数の治療法の使用を指す。「組み合わせて」という用語の使用は、治療法が対象に投与される順序を制限しない。第一の治療法は、対象への第二の治療法の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、３週、４週、５週、６週、８週、または１２週前）、同時、またはその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、３週、４週、５週、６週、８週、または１２週後）に投与されてもよい。例えば、本明細書に記載される組み換えＮＤＶは、別の治療法の投与の前（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、３週、４週、５週、６週、８週、または１２週前）、同時、またはその後（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週、２週、３週、４週、５週、６週、８週、または１２週後）に投与されてもよい。

【0036】

本明細書で使用される場合、ウイルスのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の文脈において「野生型」という用語は、自然界に存在するウイルス株のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を指す。特に、本明細書において野生型として記載される配列は、天然型ウイルス単離株に由来する配列として公開データベースで報告されている配列である。

【図面の簡単な説明】

【0037】

４．図面の簡単な説明

【図1】図１。組み換えキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶベクターの構築戦略。ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶまたはＡＰＭＶ－１）に相当する配列は、白色のボックスで示し、抗原的に異なる鳥パラミクソウイルス（例えば、ＡＰＭＶ－４）に相当する配列は灰色のボックスで示す。

【0038】

【図2】図２Ａ～２Ｃ。アクセプタープラスミドｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓの作製。レスキュープラスミドのｐＮＤＶ－ＬａＳｏｔａのＦ遺伝子およびＨＮ遺伝子（図２Ａ）を、２つの固有の制限酵素部位のＰｍｅｌおよびＮｒｕＩを含有するショート配列によって置換して、アクセプタープラスミドのｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓを作製した（図２Ｂ）。図２Ｃは、機能性レスキュープラスミドを示しており、その中でＮＤＶに由来するＦ遺伝子およびＨＮ遺伝子は、図２Ｂのアクセプタープラスミドに再挿入され、機能性レスキュープラスミドのｐＮＤＶ－ＬａＳｏｔａが作製された。図２Ａ～２Ｃは縮尺通りには描かれていない。

【0039】

【図3A-1】図３Ａ～３Ｂ。最尤系統樹 全ゲノム配列が利用可能なすべての鳥パラミクソウイルス（ＮＤＶを除く）のＦアミノ酸配列およびＨＮアミノ酸配列の系統樹を、それぞれ図３Ａおよび３Ｂに示す。配列合成のために選択された１４個のウイルスのＦタンパク質およびＨＮタンパク質は太字である。

【図3A-2】同上。

【図3A-3】同上。

【図3B-1】同上。

【図3B-2】同上。

【図3B-3】同上。

【0040】

【図4】図４Ａ～４Ｃ。レスキュープラスミドキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶの構築。 異なるＡＰＭＶに由来するＦコード配列およびＨＮコード配列、ならびにＮＤＶ非コード隣接領域を含有する合成インサートをＰＣＲにより増幅させた。当該ＰＣＲのプライマーは、当該ＦおよびＨＮのオープンリーディングフレームに隣接するＮＤＶ配列のシームレスな再構築を目的として設計されたプライマーを用いた。図４Ａの白色のボックスは、ＮＤＶ非コード隣接領域を表し、灰色のボックスは、異なるＡＰＭＶに由来するＦおよびＨＮのコード配列を表す（正確な縮尺ではない）。図４Ｂは、アクセプタープラスミドｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓを示し、図４Ｃは、レセプタープラスミドのキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶを示している。その中で合成インサートは、アクセプタープラスミドｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓのＭ遺伝子とＬ遺伝子の間に挿入された。

【0041】

【図5A】図５Ａ～５Ｈ。ｑＰＣＲによるウイルス複製と炎症促進性遺伝子の転写解析。がん細胞を、１ＭＯＩで感染させ、またはモック感染させ、感染後８時間および１６時間でＲＮＡ抽出を行った。図５Ａ～５Ｄは、Ｎタンパク質のｍＲＮＡ発現として測定されたウイルス複製のレベルである。バーは、三つの独立した生物サンプルの平均±ＳＤを表し、ＬＳ－Ｌ２８９Ａ、ＡＰＭＶ－４、およびｒＡＰＭＶ－４の順で示されている。図５Ｅ～５Ｈは、図５Ａ～５Ｄに対応する独立した各生物サンプル（１、２、３）のＩＦＮ－ｂ、ＩＳＧ（ＳＴＡＴ１、ＩＳＧ１５、ＭＸ、ＯＡＳ－１）および炎症促進性サイトカイン（ＩＬ－６およびＩＬ－１Ｂ）の誘導レベルを示すヒートマップである。個々の各遺伝子の発現レベルを、モック感染細胞に対する誘導倍率のＬｏｇ１０として計算した。二元配置分散分析：＊ｐ＜０．０５；＊＊＊ｐ＜０．００１；＊＊＊＊ｐ＜０．０００１；ｎｓ：有意ではない。

【図5B】同上。

【図5C】同上。

【図5D】同上。

【図5E-F】同上。

【図5G-H】同上。

【0042】

【図6A】図６Ａ～６Ｂ。図６Ａは、鳥パラミクソウイルスのアブラウイルス亜科の系統樹を示す。この図は、Ｒｉｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．１００（１２）：１５９３－１５９４から適用された。図６Ｂは、ＮＤＶゲノム配列からＮＤＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする配列が除去されたこと、異なる鳥パラミクソウイルスのＦタンパク質およびＨＮタンパク質のコード配列が、ＮＤＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質のコード配列が除去されたＮＤＶゲノムに挿入されたこと、および例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする導入遺伝子などの導入遺伝子がＮＤＶゲノムに挿入されたことを示す図である。

【図6B】同上。

【0043】

【図7-1】図７は、系統樹中のＡＰＭＶ－２およびＡＰＭＶ－３の位置を示し、そしてＧＦＰをコードする導入遺伝子を含み、ＡＰＭＶ－２のＦタンパク質およびＨＮタンパク質をコードする配列（キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ－２－ＧＦＰ）、またはＡＰＭＶ－３のＦタンパク質およびＨＮタンパク質をコードする配列（キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ－３－ＧＦＰ）のいずれかとＮＤＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする配列が置き換えられたＮＤＶゲノムの概略図を示す。また、ＧＦＰをコードする導入遺伝子を含むＮＤＶゲノム（ＮＤＶ－ＧＦＰ）の概略図も示される。

【図7-2】同上。

【0044】

【図8A】図８Ａ～８Ｂ。図８Ａは、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰ、およびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３－ＧＦＰに感染したニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）細胞によるＧＦＰの発現を示す。図８Ｂは、野生型（ＷＴ）ＮＤＶウイルスに対して産生されたウサギ血清を使用した血球凝集抑制（ＨＩ）試験の結果を示す。ウサギ血清のＨＩ活性は、ＮＤＶ－ＧＦＰと比較して、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ－２－ＧＦＰおよびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ－３－ＧＦＰの両方に対し、有意に低下した。

【図8B】同上。

【発明を実施するための形態】

【0045】

５．発明を実施するための形態
５．１ 組み換えニューカッスル病ウイルス
一つの態様では、本明細書において、組み換えＮＤＶのパッケージ化ゲノムが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、セクション５．１．１に記載される核酸配列を含む。特定の実施形態では、セクション５．１．１に記載される核酸配列を含む組み換えＮＤＶが本明細書に提供される。

【0046】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＨＮタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、またはＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＦタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。本明細書の特定の例では、「非ＮＤＶ ＡＰＭＶ」という用語は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶを指すために使用される。一つの実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列またはバリアントＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列またはバリアントＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。ＮＤＶゲノムは、典型的には、Ｎ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｌ遺伝子、Ｍ遺伝子、ＨＮ遺伝子、およびＦ遺伝子を含む。

【0047】

別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0048】

別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該バリアントのＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該バリアントのＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントのコード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントのコード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0049】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＨＮタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＦタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一つの実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列、またはバリアントのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列の前、間、および後にＮＤＶ遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0050】

別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列の前、間、および後にＮＤＶ遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0051】

別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合においてバリアントのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列の前、間、および後にＮＤＶ遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、バリアントのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、同じ株のＡＰＭＶに由来する。例えば、バリアントのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は両方とも、同じＡＰＭＶ－１５株に由来してもよい。他の実施形態では、バリアントのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、異なる株のＡＰＭＶに由来する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0052】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、またはＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。例えば、キメラＦタンパク質およびキメラＨＮタンパク質の作製方法については、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，２００６，ＰＮＡＳ Ｍａｙ ２３，２００６ １０３（２１）８２０３－８２０８、国際特許出願公開ＷＯ ２００７／０６４８０２、および米国特許第９，３８７，２４２ Ｂ２号を参照のこと。一つの実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮの機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0053】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一つの実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術または本明細書に記載される技術を使用して決定されてもよい。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮの機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術または本明細書に記載される技術を使用して決定されてもよい。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。

【0054】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）またはそのバリアントをコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質またはそのバリアントをコードする転写単位、（５）ＮＤＶヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0055】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質またはそのバリアントをコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）またはそのバリアントをコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0056】

一つの態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0057】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質のバリアントをコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）のバリアントをコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＦタンパク質のバリアントは、同じ株のＡＰＭＶに由来する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質のバリアントは両方とも、同じＡＰＭＶ－１５株に由来してもよい。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質のバリアントは、異なる株のＡＰＭＶに由来する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ Ｆタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0058】

別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）キメラヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）キメラ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）ＮＤＶヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。別の態様では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは：（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）キメラ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）キメラヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮの機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。

【0059】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、免疫学的にＮＤＶとは異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶとＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶとＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。特定の実施形態では、例えば以下に記載される（例えば、実施例３に記載される）アッセイなどのＨＩアッセイにおいて、ＮＤＶ抗血清ＨＩ活性が、非ＮＤＶ ＡＰＭＶに対して有意に低下した場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。特定の実施形態では、例えば以下に記載される（例えば、実施例３に記載される）アッセイなどのＨＩアッセイにおいて、ＮＤＶに対するＮＤＶ抗血清ＨＩ活性と比較して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶに対するＮＤＶ抗血清ＨＩ活性が、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍またはそれ以上まで低下した場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１である。

【0060】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶは、ＡＰＭＶ７／ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２（アクセッション番号ＮＣ＿０３４９６８）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７（アクセッション番号ＮＣ＿０２５３４９）である。

【0061】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶとは異なる属に由来するアブラウイルス亜科の一種である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種に由来するが、ＮＤＶではない。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種、およびメタアブラウイルス属である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種、およびパラアブラウイルス属である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種、およびオルトアブラウイルス属であるが、ＮＤＶではない。

【0062】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントと交差反応しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶとは異なる属由来のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶとは異なる属に由来するアブラウイルス亜科の一種に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶではないアブラウイルス亜科の一種に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である。

【0063】

特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、当該キメラＦタンパク質と交差反応しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、キメラＦタンパク質に２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、キメラＦタンパク質に０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該キメラＦタンパク質を発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0064】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、多塩基切断部位を含有しない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば一つ以上のアミノ酸置換によって改変され、その結果、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はもはや多塩基切断部位を含有しない。一部の実施形態では、非ＮＤＶＡＰＭＶ Ｆタンパク質の切断部位の元の配列は、例えば、一つ以上のアミノ酸置換によって改変される。例えば、ＮＤＶ Ｆタンパク質の２８９位のアミノ酸に相当する、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸位置のロイシン（ＬａＳｏｔａ株Ｆタンパク質によりカウントされた場合）は、アラニンと置換されて、多塩基性切断部位が除去されてもよい。

【0065】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、多塩基切断部位を含有しない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、一つ以上のアミノ酸置換を含み、その結果、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はもはや多塩基切断部位を含有しない。一部の実施形態では、非ＮＤＶＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントの切断部位の元の配列は、例えば、一つ以上のアミノ酸置換によって改変される。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質の２８９位のアミノ酸に相当する、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸位置で、アラニンとロイシンのアミノ酸置換を含む（ＬａＳｏｔａ株Ｆタンパク質によりカウントされた場合）。

【0066】

特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、多塩基切断部位を含有しない。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、アミノ酸置換を含み、その結果、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメインはもはや多塩基切断部位を含有しない。一部の実施形態では、非ＮＤＶＡＰＭＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメインの切断部位の元の配列は、例えば、一つ以上のアミノ酸置換によって改変される。例えば、キメラタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質の２８９位のアミノ酸に相当する、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメインのアミノ酸位置で、アラニンとロイシンのアミノ酸置換を含む（ＬａＳｏｔａ株Ｆタンパク質によりカウントされた場合）。

【0067】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の一つ以上の機能を保持している。

【0068】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％同一である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質に対し、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質に対し、７５％～９０％、８０％～９５％、または９０％～９９．５％同一である。

【0069】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上、または２～５、２～１０、５～１０、５～１５、５～２０、１０～１５、または１５～２０個のアミノ酸変異（すなわち、付加、欠失、置換、またはそれらの任意の組み合わせ）を含有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸で置換された（例えば、保存的置換された）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、最大で約２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の保存的置換アミノ酸残基を含む、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸配列を含む。保存的アミノ酸置換の例としては、例えば、あるクラスのアミノ酸を、同じクラスの別のアミノ酸と置換することが挙げられる。特定の実施形態では、保存的置換は、ポリペプチドの構造もしくは機能、またはその両方を変化させない。アミノ酸のクラスとしては、疎水性（Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）、中性親水性（Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、酸性（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ）、立体構造攪乱因子（Ｇｌｙ、Ｐｒｏ）、および芳香族（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）が挙げられる。

【0070】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードする核酸配列に、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、または典型的なストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることができる核酸配列によってコードされるポリペプチドである。ハイブリダイゼーション条件は、当業者に公知である（例えば、米国特許出願２００５／００４８５４９の例えば７２段落と７３段落を参照のこと）。

【0071】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質と免疫学的に異なる任意の非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、図３Ａに示されるＡＰＭＶのＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、図３Ａおよび図６Ａに示される属の一種のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＦタンパク質である。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＦタンパク質ではない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ａＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質である。

【0072】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質のバリアントである。

【0073】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して６５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して６０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して５５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して４５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して４０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して３５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して少なくとも２０％または少なくとも２５％の同一性を有するが、その同一性は６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、または４５％未満である。一部の実施形態では、ＮＤＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ Ｆタンパク質である。

【0074】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントと交差反応しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントよりも、当該バリアントに２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントに０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶとは異なる属に由来するアブラウイルス亜科の一種に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。

【0075】

特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、当該キメラＨＮタンパク質と交差反応しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、キメラＨＮタンパク質に２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、キメラＨＮタンパク質に０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該キメラＨＮタンパク質を発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0076】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の一つ以上の機能を保持している。

【0077】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％同一である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質に対し、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質に対し、７５％～９０％、８０％～９５％、または９０％～９９．５％同一である。

【0078】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上、または２～５、２～１０、５～１０、５～１５、５～２０、１０～１５、または１５～２０個のアミノ酸変異（すなわち、付加、欠失、置換、またはそれらの任意の組み合わせ）を含有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸で置換された（例えば、保存的置換された）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、最大で約２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の保存的置換アミノ酸残基を含む、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のアミノ酸配列を含む。保存的アミノ酸置換の例としては、例えば、あるクラスのアミノ酸を、同じクラスの別のアミノ酸と置換することが挙げられる。特定の実施形態では、保存的置換は、ポリペプチドの構造もしくは機能、またはその両方を変化させない。アミノ酸のクラスとしては、疎水性（Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）、中性親水性（Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、酸性（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ）、立体構造攪乱因子（Ｇｌｙ、Ｐｒｏ）、および芳香族（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）が挙げられる。

【0079】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードする核酸配列に、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、または典型的なストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることができる核酸配列によってコードされるポリペプチドである。ハイブリダイゼーション条件は、当業者に公知である（例えば、米国特許出願２００５／００４８５４９の例えば７２段落と７３段落を参照のこと）。

【0080】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質と免疫学的に異なる任意の非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、図３Ｂに示されるＡＰＭＶのＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、図３Ｂおよび図６Ａに示される属の一種のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＨＮタンパク質である。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＨＮタンパク質ではない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ａＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＨＮタンパク質である。

【0081】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＨＮタンパク質のバリアントである。

【0082】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して６５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して６０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して５５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して４５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して４０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して３５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して少なくとも２０％または少なくとも２５％の同一性を有するが、その同一性は６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、または４５％未満である。一部の実施形態では、ＮＤＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ ＨＮタンパク質である。

【0083】

特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号２に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号３に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号４に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号５に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号６に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号７に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号８に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号９に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１０に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１１に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１２に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１３に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１４に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、置換されたＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質をコードする配列、ならびに（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。

【0084】

特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号２に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号３に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号４に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号５に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号６に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号７に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号８に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号９に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１０に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１１に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１２に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１３に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１４に記載されるｃＤＮＡ配列のコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列のヌクレオチド配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、置換されたＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質をコードする配列、ならびに（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。

【0085】

当業者に公知の技術を使用して、二つのアミノ酸配列の間の同一性割合パーセント、または二つのヌクレオチド配列の間の同一性割合パーセントを決定することができる。一般的に、二つのアミノ酸配列または二つの核酸配列の同一性割合パーセントを決定するためには、最適な比較目的に対して配列が整列される（例えば、第二のアミノ酸配列または核酸配列との最適アライメントを目的として、第一のアミノ酸配列または核酸配列の配列中に、ギャップが導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸の位置またはヌクレオチドの位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第一の配列の位置が、第二の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有される場合、当該分子は、その位置で同一である。二つの配列間の同一性割合パーセントは、配列によって共有される同一である位置の数の関数である（すなわち、同一性割合％＝同一である重複位置の数／位置の合計数×１００％）。一つの実施形態では、二つの配列は同じ長さである。特定の実施形態では、同一性割合パーセントは、アミノ酸配列またはヌクレオチド配列の全長にわたって決定される。一部の実施形態では、配列同一性の比較の長さは、比較される二つの配列の全長にわたるものであってもよい（例えば、遺伝子コード配列、またはその断片の全長）。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列の断片は、少なくとも２５、少なくとも５０、少なくとも７５、または少なくとも１００ヌクレオチドである。同様に、タンパク質またはその断片の全長にわたるアミノ酸配列の「配列同一性割合パーセント」も容易に決定することができる。一部の実施形態では、タンパク質の断片は、タンパク質の少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、またはそれ以上の連続アミノ酸を含む。特定の実施形態では、タンパク質の断片は、タンパク質の少なくとも７５個、少なくとも１００個、少なくとも１２５個、少なくとも１５０個、またはそれ以上の連続アミノ酸を含む。

【0086】

二つの配列（例えば、アミノ酸配列または核酸配列）の間の同一性割合パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して行うことができる。二つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：２２６４ ２２６８の、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：５８７３ ５８７７での改変版のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。例えば、スコアは１００、ワード長は１２などのＮＢＬＡＳＴヌクレオチドプログラムのパラメータセットを用いてＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施し、本明細書に記載される核酸分子に相同なヌクレオチド配列を取得することができる。例えば、スコアは５０、ワード長は３などのＸＢＬＡＳＴプログラムのパラメータセットを用いてＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施し、本明細書に記載されるタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得することができる。Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９ ３４０２に記載されるようにＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用して、ギャップ化アライメントを取得し、比較を行うことができる。あるいは、ＰＳＩ ＢＬＡＳＴを使用して、分子間の距離関係を検出する反復検索を行うことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる（例えば、ワールドワイドウェブ上のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）、ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照のこと）。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムに関するもう一つの好ましい非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８８，ＣＡＢＩＯＳ ４：１１ １７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列の比較のためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用することができる。

【0087】

二つの配列間の同一性割合パーセントは、ギャップを許容の有無にかかわらず、上述と類似した技術を使用して決定することができる。同一性割合パーセントの計算において、典型的には、正確な一致のみがカウントされる。

【0088】

別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号６に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列のヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号９に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１０に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１１に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１３に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１４に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、置換されたＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質をコードする配列、ならびに（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。

【0089】

当業者であれば、ＮＤＶゲノムのＲＮＡ配列が、ＮＤＶゲノムをコードするｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列であることを理解するであろう。したがって、ヌクレオチド配列をその逆相補配列へと転換する任意のプログラムを利用して、ＮＤＶゲノムをコードするｃＤＮＡ配列をゲノムＲＮＡ配列へと転換してもよい（例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｓｍｓ／ｒｅｖ＿ｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ，ｗｗｗ．ｆｒ３３．ｎｅｔ／ｓｅｑｅｄｉｔ．ｐｈｐ、およびＤＮＡＳｔａｒを参照のこと）。よって、以下の表１および表３に提供されるヌクレオチド配列は、当業者によって、ＮＤＶゲノムのネガティブセンスＲＮＡ配列へと容易に変換され得る。

【0090】

一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、当業者に公知の任意のＮＤＶ株の配列である。例示的な株については、セクション５．１．２を参照のこと。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、ＬａＳｏｔａ株のヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１５に記載されるｃＤＮＡ配列に対応するＲＮＡ配列を含む。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、長期潜伏性株のヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、亜病原性株のヌクレオチド配列である。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、短期潜伏性株のヌクレオチド配列である。ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列（例えば、ネガティブセンスＲＮＡまたはポジティブセンスＲＮＡ）であってもよい。

【0091】

一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、配列番号４４のｃＤＮＡ配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のｃＤＮＡ配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、配列番号４４のｃＤＮＡ配列に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のｃＤＮＡ配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。

【0092】

一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、配列番号４５のｃＤＮＡ配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のｃＤＮＡ配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、配列番号４５のｃＤＮＡ配列に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。一部の実施形態では、本明細書において、パッケージ化ゲノムを含む組み換えＮＤＶが提供され、当該パッケージ化ゲノムは、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のｃＤＮＡ配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列に対応するネガティブセンスＲＮＡ配列を含む。

【0093】

一部の実施形態では、本明細書に記載されるヌクレオチド配列は、コドン最適化される。コドン最適化の情報および技術の説明については、セクション５．１．４を参照のこと。

【0094】

特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、セクション６に記載されるものである。

【0095】

特定の実施形態では、本明細書に記載のパッケージ化ゲノムは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアント以外の異種タンパク質をコードする異種配列を含まない。特定の実施形態では、本明細書に記載のパッケージ化ゲノムは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアント以外の異種タンパク質をコードする異種配列を含まない。特定の実施形態では、本明細書に記載のパッケージ化ゲノムは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントおよび非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアント以外の異種タンパク質をコードする異種配列を含まない。

【0096】

特定の実施形態では、本明細書に記載のパッケージ化ゲノムは、異種配列をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をさらに含む。特定の実施形態では、本明細書に記載のパッケージ化ゲノムは、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をさらに含む。一部の実施形態では、本明細書に記載のパッケージ化ゲノムは、二つ以上の導入遺伝子をさらに含み、各導入遺伝子は、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。本明細書に記載のパッケージ化ゲノムに組み込まれ得る導入遺伝子の説明については、セクション５．１．３を参照のこと。一部の実施形態では、抗原は、例えば以下のセクション５．１．３に記載されるものなどのキメラタンパク質である。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、本明細書に記載の導入遺伝子によってコードされる抗原を含む。

【0097】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアント、および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、本明細書に記載のキメラＦタンパク質を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、本明細書に記載のキメラＨＮタンパク質を含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのビリオンは、本明細書に記載のキメラＦタンパク質および本明細書に記載のキメラＨＮタンパク質を含む。

【0098】

一部の実施形態では、組み換えＮＤＶのビリオン中に非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアント（例えば、ＡＰＭＶ－４ Ｆタンパク質）および／または非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質（例えば、ＡＰＭＶ－４ ＨＮタンパク質）が存在することによって、例えば非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質もしくはそのバリアントおよび／または非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質を含まないＮＤＶ（例えば、以下のセクション６に記載されるＮＤＶ株）と比較して、ウイルス感染細胞におけるインターフェロン（１型インターフェロン）の誘導が増加するなどの機能的な利益が得られる。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶのビリオン中にＡＰＭＶ－４ Ｆタンパク質およびＡＰＭＶ－４ ＨＮタンパク質が存在することによって、例えばＡＰＭＶ－４ Ｆタンパク質および／またはＡＰＭＶ－４ ＨＮタンパク質を含まないＮＤＶ（例えば、以下のセクション６に記載されるＮＤＶ株）と比較して、ウイルス感染細胞におけるインターフェロン（１型インターフェロン）の誘導が増加するなどの機能的な利益が得られる。特定の実施形態では、インターフェロンの誘導は、本明細書（例えば、以下のセクション６に記載）に記載されるアッセイまたは当業者に公知のアッセイにおいて、インビトロで評価される。

【0099】

５．１．１ 組み換え核酸配列
一つの態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＨＮタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、またはＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＦタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。本明細書の特定の例では、「非ＮＤＶ ＡＰＭＶ」という用語は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶを指すために使用される。一つの実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列またはバリアントＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列またはバリアントＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列またはバリアント非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列またはバリアント非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。ＮＤＶゲノムは、典型的には、Ｎ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｌ遺伝子、Ｍ遺伝子、ＨＮ遺伝子、およびＦ遺伝子を含む。

【0100】

別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、当該配列では、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0101】

別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、当該配列では、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合においてバリアントＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合においてバリアントＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントのコード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントのコード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0102】

別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）のＨＮタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、ＮＤＶ以外のＡＰＭＶのＦタンパク質または非ＮＤＶ－ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一つの実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列、またはバリアントのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列の前、間、および後にＮＤＶ遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列またはバリアント非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列またはバリアント非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0103】

別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列の前、間、および後にＮＤＶ遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0104】

別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合においてバリアントのＨＮタンパク質コード配列とＦタンパク質コード配列の前、間、および後にＮＤＶ遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントをコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、バリアントのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、同じ株のＡＰＭＶに由来する。例えば、バリアントのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は両方とも、同じＡＰＭＶ－１５株に由来してもよい。他の実施形態では、バリアントのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、異なる株のＡＰＭＶに由来する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0105】

別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、またはＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一つの実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、または（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮの機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0106】

別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中のＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられている。一つの実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において当該キメラＦタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域がある。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ ＨＮ遺伝子間領域である。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列の前後のＮＤＶ遺伝子間領域は、ＮＤＶ Ｆ遺伝子間領域である。別の態様では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードする転写単位は、キメラＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられ、および（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードする転写単位は、キメラＦタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む転写単位と置き換えられている。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術または本明細書に記載される技術を使用して決定されてもよい。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮの機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術または本明細書に記載される技術を使用して決定されてもよい。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントの細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。

【0107】

別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）またはそのバリアントをコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質またはそのバリアントをコードする転写単位、（５）ＮＤＶヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0108】

別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質またはそのバリアントをコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）またはそのバリアントをコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0109】

一つの態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質は、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0110】

別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ融合（Ｆ）タンパク質のバリアントをコードする転写単位、（５）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）のバリアントをコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＦタンパク質のバリアントは、同じ株のＡＰＭＶに由来する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質のバリアントは両方とも、同じＡＰＭＶ－１５株に由来してもよい。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質のバリアントは、異なる株のＡＰＭＶに由来する。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。

【0111】

別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）キメラヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）キメラ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）ＮＤＶヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。別の態様では、本明細書において、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）キメラ融合（Ｆ）タンパク質をコードする転写単位、（５）キメラヘマグルチニン－ノイラミニダーゼ（ＨＮ）をコードする転写単位、および（６）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む核酸配列が提供される。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＨＮタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ ＨＮの機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラＦタンパク質は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、インビトロ、インビボまたはその両方でＮＤＶが複製するために必要とされるＮＤＶ Ｆタンパク質の機能のうちの一つ以上、またはすべてを有している。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において同じ株のＡＰＭＶに存在する。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは両方とも、自然界において同じＡＰＭＶ－１５株に存在する。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質の細胞外ドメインは、自然界において異なる株のＡＰＭＶに存在する。

【0112】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、免疫学的にＮＤＶとは異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶとＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶとＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。特定の実施形態では、例えば以下に記載される（例えば、実施例３に記載される）アッセイなどのＨＩアッセイにおいて、ＮＤＶ抗血清ＨＩ活性が、非ＮＤＶ ＡＰＭＶに対して有意に低下した場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。特定の実施形態では、例えば以下に記載される（例えば、実施例３に記載される）アッセイなどのＨＩアッセイにおいて、ＮＤＶに対するＮＤＶ抗血清ＨＩ活性と比較して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶに対するＮＤＶ抗血清ＨＩ活性が、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍またはそれ以上まで低下した場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１である。

【0113】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶは、ＡＰＭＶ７／ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２（アクセッション番号ＮＣ＿０３４９６８）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）である。別の特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７（アクセッション番号ＮＣ＿０２５３４９）である。

【0114】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、ＮＤＶとは異なる属に由来するアブラウイルス亜科の一種である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種に由来するが、ＮＤＶではない。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種、およびメタアブラウイルス属である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種、およびパラアブラウイルス属である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶは、アブラウイルス亜科の一種、およびオルトアブラウイルス属であるが、ＮＤＶではない。

【0115】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントと交差反応しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0116】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶではないアブラウイルス亜科の一種に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である。

【0117】

特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、当該キメラＦタンパク質と交差反応しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、キメラＦタンパク質に２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ Ｆタンパク質よりも、キメラＦタンパク質に０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＦタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ Ｆ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該キメラＦタンパク質を発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ Ｆタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0118】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、多塩基切断部位を含有しない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば一つ以上のアミノ酸置換によって改変され、その結果、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はもはや多塩基切断部位を含有しない。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の切断部位の元の配列は、例えば、一つ以上のアミノ酸置換によって改変される。例えば、ＮＤＶ Ｆタンパク質の２８９位のアミノ酸に相当する、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸位置のロイシン（ＬａＳｏｔａ株Ｆタンパク質によりカウントされた場合）は、アラニンと置換されて、多塩基性切断部位が除去されてもよい。

【0119】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、多塩基切断部位を含有しない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、一つ以上のアミノ酸置換を含み、その結果、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はもはや多塩基切断部位を含有しない。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントの切断部位の元の配列は、例えば、一つ以上のアミノ酸置換によって改変される。例えば、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、ＮＤＶ Ｆタンパク質の２８９位のアミノ酸に相当する、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸位置で、アラニンとロイシンのアミノ酸置換を含む（ＬａＳｏｔａ株Ｆタンパク質によりカウントされた場合）。

【0120】

特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、多塩基切断部位を含有しない。特定の実施形態では、キメラＦタンパク質は、一つ以上のアミノ酸置換を含み、その結果、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメインはもはや多塩基切断部位を含有しない。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメインの切断部位の元の配列は、例えば、一つ以上のアミノ酸置換によって改変される。例えば、キメラタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質の２８９位のアミノ酸に相当する、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメインのアミノ酸位置で、アラニンとロイシンのアミノ酸置換を含む（ＬａＳｏｔａ株Ｆタンパク質によりカウントされた場合）。

【0121】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の一つ以上の機能を保持している。

【0122】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％同一である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質に対し、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質に対し、７５％～９０％、８０％～９５％、または９０％～９９．５％同一である。

【0123】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上、または２～５、２～１０、５～１０、５～１５、５～２０、１０～１５、または１５～２０個のアミノ酸変異（すなわち、付加、欠失、置換、またはそれらの任意の組み合わせ）を含有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質の２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸で置換された（例えば、保存的置換された）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、最大で約２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の保存的置換アミノ酸残基を含む、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のアミノ酸配列を含む。保存的アミノ酸置換の例としては、例えば、あるクラスのアミノ酸を、同じクラスの別のアミノ酸と置換することが挙げられる。特定の実施形態では、保存的置換は、ポリペプチドの構造もしくは機能、またはその両方を変化させない。アミノ酸のクラスとしては、疎水性（Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）、中性親水性（Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、酸性（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ）、立体構造攪乱因子（Ｇｌｙ、Ｐｒｏ）、および芳香族（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）が挙げられる。

【0124】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードする核酸配列に、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、または典型的なストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることができる核酸配列によってコードされるポリペプチドである。ハイブリダイゼーション条件は、当業者に公知である（例えば、米国特許出願２００５／００４８５４９の例えば７２段落と７３段落を参照のこと）。

【0125】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、図３Ａに示されるＡＰＭＶのＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、図３Ａおよび図６Ａに示される属の一種のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＦタンパク質である。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＦタンパク質ではない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＦタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質である。

【0126】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＦタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＦタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質のバリアントである。

【0127】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して６５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して６０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して５５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して４５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して４０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して３５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ Ｆタンパク質に対して少なくとも２０％または少なくとも２５％の同一性を有するが、その同一性は６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、または４５％未満である。一部の実施形態では、ＮＤＶ Ｆタンパク質は、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ ＨＮタンパク質である。

【0128】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントと交差反応しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントよりも、当該バリアントに２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントに０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントは、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0129】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびメタアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科の一種およびパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶではない、アブラウイルス亜科の一種およびオルトアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である。

【0130】

特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、当該キメラＨＮタンパク質と交差反応しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。一部の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、キメラＨＮタンパク質に２倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、当業者に公知のアッセイまたは本明細書に記載されるアッセイにおいて、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対する抗体が、ＮＤＶ ＨＮタンパク質よりも、キメラＨＮタンパク質に０．５ｌｏｇ、１ｌｏｇ、１．５ｌｏｇ、２ｌｏｇ、２．５ｌｏｇ、３ｌｏｇ、またはそれより低いアフィニティで結合する場合、キメラＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、当該非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントを発現するＮＤＶの複製を実質的に阻害しない場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、キメラＨＮタンパク質は、例えばＣｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２、およびＲｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、抗ＮＤＶ ＨＮ抗体が、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、当該キメラＨＮタンパク質を発現するＮＤＶの複製を阻害した場合、ＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる。

【0131】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の一つ以上の機能を保持している。

【0132】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、または少なくとも８５％同一である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質に対し、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質に対し、７５％～９０％、８０％～９５％、または９０％～９９．５％同一である。

【0133】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質と比較して、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０個以上、または２～５、２～１０、５～１０、５～１５、５～２０、１０～１５、または１５～２０個のアミノ酸変異（すなわち、付加、欠失、置換、またはそれらの任意の組み合わせ）を含有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質の２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個のアミノ酸残基が他のアミノ酸で置換された（例えば、保存的置換された）非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、最大で約２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１個の保存的置換アミノ酸残基を含む、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のアミノ酸配列を含む。保存的アミノ酸置換の例としては、例えば、あるクラスのアミノ酸を、同じクラスの別のアミノ酸と置換することが挙げられる。特定の実施形態では、保存的置換は、ポリペプチドの構造もしくは機能、またはその両方を変化させない。アミノ酸のクラスとしては、疎水性（Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ）、中性親水性（Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ）、酸性（Ａｓｐ、Ｇｌｕ）、塩基性（Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ）、立体構造攪乱因子（Ｇｌｙ、Ｐｒｏ）、および芳香族（Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）が挙げられる。

【0134】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードする核酸配列に、高ストリンジェンシー、中ストリンジェンシー、または典型的なストリンジェンシーなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることができる核酸配列によってコードされるポリペプチドである。ハイブリダイゼーション条件は、当業者に公知である（例えば、米国特許出願２００５／００４８５４９の例えば７２段落と７３段落を参照のこと）。

【0135】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、図３Ｂに示されるＡＰＭＶのＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、図３Ｂおよび図６Ａに示される属の一種のＦタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＨＮタンパク質である。他の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＡＰＭＶ－２ ＹｕｃａｉｐａのＨＮタンパク質ではない。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＨＮタンパク質である。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＨＮタンパク質である。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＨＮタンパク質である。

【0136】

特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、ＡＭＰＶ－２、ＡＭＰＶ－３、ＡＭＰＶ－４、ＡＭＰＶ－５、ＡＭＰＶ－６、ＡＭＰＶ－７、ＡＭＰＶ－８、ＡＭＰＶ－９、ＡＭＰＶ－１０、ＡＭＰＶ－１１、ＡＭＰＶ－１２、ＡＭＰＶ－１３、ＡＭＰＶ－１４、ＡＭＰＶ－１５、ＡＭＰＶ－１６、ＡＭＰＶ－１７、ＡＭＰＶ－１８、ＡＭＰＶ－１９、ＡＭＰＶ－２０、またはＡＭＰＶ－２１のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６（アクセッション番号ＥＵ３３８４１４）などのＡＰＭＶ－２のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８（アクセッション番号ＥＵ７８２０２５）などのＡＰＭＶ－３のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５（アクセッション番号ＦＪ１７７５１４）、）、ＡＰＭＶ４／Ｄｕｃｋ／Ｃｈｉｎａ／Ｇ３０２／２０１２（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＣ４３９３４６．１）、ＡＰＭＶ４／ｍａｌｌａｒｄ／Ｂｅｌｇｉｕｍ／１５１２９／０７（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＮ５７１４８５）、ＡＰＭＶ４／Ｕｒｉａｈ＿ａａｌｇｅ／Ｒｕｓｓｉａ／Ｔｙｕｌｅｎｉｙ＿Ｉｓｌａｎｄ／１１５／２０１５（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＫＵ６０１３９９．１）ＡＰＭＶ－４／Ｅｇｙｐｔｉａｎ ｇｏｏｓｅ／Ｓｏｕｔｈ Ａｆｒｉｃａ／Ｎ１４６８／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ１３３０７９．１）、またはＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／５４９２２７／２０１０（ＧｅｎＢａｎｋ番号ＪＸ９８７２８３．１）などのＡＰＭＶ－４のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－５ ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｋｕｎｉｔａｃｈｉ／７４（アクセッション番号ＧＵ２０６３５１）またはＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５（アクセッション番号ＬＣ１６８７５０）などのＡＰＭＶ－５のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－６ Ｇｏｏｓｅ／ＦａｒＥａｓｔ／４４４０／２００３（アクセッション番号ＥＦ５６９９７０）またはＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７（アクセッション番号ＥＵ６２２６３７）などのＡＰＭＶ－６のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－７ ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５（アクセッション番号ＦＪ２３１５２４）などのＡＰＭＶ－７のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－８ ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６（アクセッション番号ＦＪ２１５８６３）などのＡＰＭＶ－８のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８（アクセッション番号ＥＵ９１０９４２）などのＡＰＭＶ－９のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１０ ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／２００７（アクセッション番号ＨＭ１４７１４２またはＮＣ＿０２５３４９）などのＡＰＭＶ－１０のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１１ ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／２０１０（アクセッション番号ＪＱ８８６１８４）などのＡＰＭＶ－１１のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５（アクセッション番号ＫＣ３３３０５０）などのＡＰＭＶ－１２のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１４ ｄｕｃｋ／Ｊａｐａｎ／１１ＯＧ０３５２／２０１１（アクセッション番号ＫＸ２５８２００）などのＡＰＭＶ－１４のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－１５ ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／２０１２（アクセッション番号ＫＸ９３２４５４）などのＡＰＭＶ－１５のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３（アクセッション番号ＭＫ１６７２１１）などのＡＰＭＶ－１７のＨＮタンパク質のバリアントである。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ－２０ Ｇｕｌｌ／Ｋａｚａｋｈｓｔａｎ／２０１４（アクセッション番号ＭＦ０３３１３６）などのＡＰＭＶ－２０のＨＮタンパク質のバリアントである。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質のバリアントは、例えば、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７（アクセッション番号ＭＫ６７７４３）などのＡＰＭＶ－２１のＨＮタンパク質のバリアントである。

【0137】

一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して６５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して６０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して５５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して５０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して４５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して４０％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して３５％未満の同一性を有する。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＨＮタンパク質に対して少なくとも２０％または少なくとも２５％の同一性を有するが、その同一性は６５％未満、６０％未満、５５％未満、５０％未満、または４５％未満である。一部の実施形態では、ＮＤＶ ＨＮタンパク質は、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ ＨＮタンパク質である。

【0138】

特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号２に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号３に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号４に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号５に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号６に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号７に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号８に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号９に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１０に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１１に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１２に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１３に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１４に記載されるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、置換されたＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質をコードする配列、ならびに（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。

【0139】

特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号２に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号３に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号４に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号５に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号６に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号７に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号８に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号９に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１０に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１１に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１２に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１３に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中で、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質のコード配列は、配列番号１４に記載されるコード配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるコード配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、置換されたＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質をコードする配列、ならびに（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。

【0140】

別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号２に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号３に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号４に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号５に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号６に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号７に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号８に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号９に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１０に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１１に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１２に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１３に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。別の実施形態では、本明細書において、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供され、その中でＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１４に記載されるヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、置換されたＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質をコードする配列、ならびに（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む。

【0141】

当業者であれば、ＮＤＶゲノムのＲＮＡ配列が、ＮＤＶゲノムをコードするｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列であることを理解するであろう。したがって、ヌクレオチド配列をその逆相補配列へと転換する任意のプログラムを利用して、ＮＤＶゲノムをコードするｃＤＮＡ配列をゲノムＲＮＡ配列へと転換してもよい（例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｓｍｓ／ｒｅｖ＿ｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ，ｗｗｗ．ｆｒ３３．ｎｅｔ／ｓｅｑｅｄｉｔ．ｐｈｐ、およびＤＮＡＳｔａｒを参照のこと）。よって、以下の表１および３に提供されるヌクレオチド配列は、当業者によって、ＮＤＶゲノムのネガティブセンスＲＮＡ配列へと容易に変換され得る。一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、当業者に公知の任意のＮＤＶ株の配列である。例示的な株については、セクション５．１．２を参照のこと。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、ＬａＳｏｔａ株のヌクレオチド配列である。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、長期潜伏性株のヌクレオチド配列である。一部の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、亜病原性株のヌクレオチド配列である。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、短期潜伏性株のヌクレオチド配列である。ＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列は、ｃＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列（例えば、ネガティブセンスＲＮＡまたはポジティブセンスＲＮＡ）であってもよい。

【0142】

一部の実施形態では、配列番号４４のヌクレオチド配列を含む核酸配列が本明細書に提供される。一部の実施形態では、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列を含む核酸配列が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４４のヌクレオチド配列に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列、および例えば抗原などの異種配列をコードする導入遺伝子、を含む核酸配列が提供される。

【0143】

一部の実施形態では、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸配列が本明細書に提供される。一部の実施形態では、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸配列が本明細書に提供される。一部の実施形態では、本明細書において、配列番号４５のヌクレオチド配列に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列が提供される。一部の実施形態では、本明細書において、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列、および例えば抗原などの異種配列をコードする導入遺伝子、を含む核酸配列が提供される。

【0144】

一部の実施形態では、本明細書に記載される核酸配列またはヌクレオチド配列は、コドン最適化される。コドン最適化の情報および技術の説明については、セクション５．１．４を参照のこと。

【0145】

特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアント以外の異種タンパク質をコードする異種配列を含まない。特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアント以外の異種タンパク質をコードする異種配列を含まない。特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントおよび非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアント以外の異種タンパク質をコードする異種配列を含まない。

【0146】

特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、異種配列（例えば、異種タンパク質）をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をさらに含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子をさらに含む。本明細書に記載の核酸配列に組み込まれ得る導入遺伝子の説明については、セクション５．１．３を参照のこと。

【0147】

特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの作製に使用される。特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの一部である。

【0148】

特定の実施形態では、本明細書に記載の核酸配列またはヌクレオチド配列は、組み換え核酸配列または組み換えヌクレオチド配列である。特定の実施形態では、本明細書に記載のヌクレオチド配列または核酸配列は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ）、ＲＮＡ分子、またはＤＮＡ分子とＲＮＡ分子の組み合わせであってもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載のヌクレオチド配列または核酸配列は、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子のアナログを含んでもよい。かかるアナログは、例えば、限定されないが、イノシン、メチルシトシン、シュードウリジン、またはトリチル化塩基をはじめとするヌクレオチドアナログを使用して作製することができる。かかるアナログは、例えば、ヌクレアーゼ抵抗性、または細胞膜を横断する能力の向上など、分子に有益な属性を与える修飾骨格を含むＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を含むこともできる。核酸配列またはヌクレオチド配列は、一本鎖、二本鎖であってもよく、一本鎖部分と二本鎖部分の両方を含んでもよく、三本鎖部分を含んでもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載のヌクレオチド配列または核酸配列は、ネガティブセンスの一本鎖ＲＮＡである。別の実施形態では、本明細書に記載のヌクレオチド配列または核酸配列は、ポジティブセンスの一本鎖ＲＮＡである。別の実施形態では、本明細書に記載のヌクレオチド配列または核酸配列は、ｃＤＮＡである。

【0149】

特定の実施形態では、核酸配列は、単離される。特定の実施形態では、「単離された」核酸配列とは、当該核酸の天然の供給源中に存在する他の核酸分子から分離されている核酸分子を指す。言い換えると、単離された核酸配列は、自然界では関連しない異種核酸を含み得る。他の実施形態では、例えば、ｃＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列などの「単離された」核酸配列は、組み換え技術によって作製されたとき、他の細胞性物質または培養培地を実質的に含み得ず、または化学合成されたとき、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含み得ない。「細胞性物質を実質的に含まない」という用語は、単離され、または組み換え作製された細胞の細胞性構成要素から単離されている核酸配列の調製物を含む。したがって、細胞性物質を実質的に含まない核酸配列は、他の核酸が約３０％未満、２０％未満、１０％未満、または５％未満（乾燥重量による）である核酸配列の調製物を含む。「培養培地を実質的に含まない」という用語は、培養培地が調製物の体積の約５０％未満、２０％未満、１０％未満、または５％未満である核酸配列の調製物を含む。「化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」という用語は、核酸配列が、核酸配列の合成に関与する化学的前駆体または他の化学物質から分離されている調製物を含む。特定の実施形態では、核酸配列のかかる調製物は、対象の核酸配列以外の化学的前駆体または化合物が約５０％未満、３０％未満、２０％未満、１０％未満、５％未満（乾燥重量による）未満である。

【0150】

５．１．２ ＮＤＶの骨格
任意のＮＤＶのタイプまたは株は、ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列がそれぞれ、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列もしくはそのバリアント、および／または非ＮＤＶ ＨＮコード配列もしくはそのバリアントと置き換えられる「骨格」としての機能を果たし得る。さらに任意のＮＤＶのタイプまたは株は、ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列がそれぞれ、キメラＦタンパク質コード配列および／またはキメラＨＮコード配列と置き換えられる「骨格」としての機能を果たし得る。例えば、ＮＤＶは、天然株、バリアント、変異体、突然変異させたウイルス、および／または遺伝子操作されたウイルスであってもよい。特定の実施形態では、ＮＤＶの骨格は、長期潜伏性ＮＤＶである。別の特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、ＬａＳｏｔａ株である。ＮＤＶの骨格として使用され得るＮＤＶ株の他の例としては、ＮＤＶ Ｆｕｌｌｅｒ、ＮＤＶ Ｕｌｓｔｅｒ株またはＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株が挙げられる。一部の実施形態では、ＮＤＶ Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株以外の長期潜伏性株が、骨格として使用される。特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、天然株である。特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、溶解性（ｌｙｔｉｃ）株である。他の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、非溶解性株である。特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、長期潜伏性株である。一部の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、亜病原性株である。他の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、短期潜伏性株である。ＮＤＶ株の具体的な例としては限定されないが、７３－Ｔ株、ＮＤＶ ＨＵＪ株、Ｕｌｓｔｅｒ株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号Ｕ２５８３７を参照のこと）、Ｆｕｌｌｅｒ株、ＭＴＨ－６８株、Ｉｔａｌｉｅｎ株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＥＵ２９３９１４を参照のこと）、Ｈｉｃｋｍａｎ株（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ番号ＡＦ３０９４１８を参照のこと）、ＰＶ７０１株、Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＦ３０９４１８またはＮＣ＿００２６１７を参照のこと）、Ｌａ Ｓｏｔａ株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＹ８４５４００、ＡＦ０７７６１．１、およびＪＦ９５０５１０．１、ならびにＧＩ番号５６７９９４６３を参照のこと）、ＹＧ９７株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＹ３５１９５９またはＡＹ３９０３１０を参照のこと）、ＭＥＴ９５株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＹ１４３１５９を参照のこと）、Ｒｏａｋｉｎ株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＦ１２４４４３を参照のこと）、およびＦ４８Ｅ９株（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＦ１６３４４０およびＵ２５８３７）が挙げられる。特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株である。別の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＦ３０９４１８またはＮＣ＿００２６１７により識別されるＢ１株である。別の特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、Ｌａ Ｓｏｔａ株である。特定の実施形態では、Ｌａ Ｓｏｔａゲノムのヌクレオチド配列は、配列番号１５に記載されるｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列を含む。別の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、ＧｅｎＢａｎｋ番号ＡＹ８４５４００、ＡＦ０７７６１．１またはＪＦ９５０５１０．１により識別されるＬａＳｏｔａ株である。

【0151】

当業者であれば、ＮＤＶゲノムのＲＮＡ配列が、ＮＤＶゲノムをコードするｃＤＮＡ配列のネガティブセンスに対応するＲＮＡ配列であることを理解するであろう。したがって、ヌクレオチド配列をその逆相補配列へと転換する任意のプログラムを利用して、ＮＤＶゲノムをコードするｃＤＮＡ配列をゲノムＲＮＡ配列へと転換してもよい（例えば、ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．ｏｒｇ／ｓｍｓ／ｒｅｖ＿ｃｏｍｐ．ｈｔｍｌ，ｗｗｗ．ｆｒ３３．ｎｅｔ／ｓｅｑｅｄｉｔ．ｐｈｐ、およびＤＮＡＳｔａｒを参照のこと）。

【0152】

特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、当業者に公知の技術により評価されたとき、鳥類において病原性ではない。ある特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、１日齢のひよこへのウイルスの頭蓋内注射、ならびに８日間のスコア評価としての発症および死亡により評価されたときに、病原性ではない。一部の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、頭蓋内病原性指数が、０．７未満、０．６未満、０．５未満、０．４未満、０．３未満、０．２未満、または０．１未満である。特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、頭蓋内病原性指数がゼロである。例えば、当該アッセイの説明については、ＯＩＥ Ｔｅｒｒｅｓｔｒｉａｌ Ｍａｎｕａｌ ２０１２，Ｃｈａｐｔｅｒ ２．３．１４，ｅｎｔｉｔｌｅｄ “Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ）を参照のこと。これは以下のウェブサイトに見出すことができ、その全体で参照により本明細書に援用される（ｗｗｗ．ｏｉｅ．ｉｎｔ／ｆｉｌｅａｄｍｉｎ／Ｈｏｍｅ／ｅｎｇ／Ｈｅａｌｔｈ＿ｓｔａｎｄａｒｄｓ／ｔａｈｍ／２．０３．１４＿ＮＥＷＣＡＳＴＬＥ＿ＤＩＳ．ｐｄｆ）。

【0153】

特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、当業者に公知の技術により評価されたときに、鳥類において病原性であるとみなされないよう遺伝子操作された亜病原性株である。特定の実施形態では、ＮＤＶ骨格は、当業者に公知の技術により評価されたときに、鳥類において病原性であるとみなされないよう遺伝子操作された短期潜伏性株である。

【0154】

好ましい実施形態では、ＮＤＶ骨格は、ヒトまたはウシにおいて非病原性である。好ましい実施形態では、ＮＤＶ骨格は、ヒト、ウシ、および鳥類において非病原性である。特定の実施形態では、ＮＤＶは少なくとも部分的には感染性を保持し、インビボで複製することができるが、生じる力価は低く、非病原性の無症候性レベルの感染を引き起こすように、ＮＤＶ骨格が弱毒化される（例えば、Ｋｈａｔｔａｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８３：７７７９－７７８２を参照のこと）。そのような弱毒化ＮＤＶは、例えば生ワクチンなど、対象にウイルスが投与されて免疫原としての機能を果たすような実施形態に特に適し得る。ウイルスは当分野に公知の任意の方法で弱毒化され得る。特定の実施形態では、ＮＤＶゲノムは、子孫が産生され、感染レベルが無症候性であるように弱毒化されたウイルスの感染と複製に必要な配列を含む。

【0155】

５．１．３ 導入遺伝子
特定の実施形態では、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子が、本明細書（例えば、セクション５．１．１またはセクション６）に記載の核酸配列に組み込まれ、当該配列は、ＮＤＶ Ｆタンパク質コード配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質コード配列が本明細書に記載されるように置き換えられているＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列を含む。導入遺伝子は、ＮＤＶ Ｆタンパク質コード配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質コード配列が本明細書に記載されるように置き換えられている任意のＮＤＶのタイプまたは株（例えば、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株）のＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列に挿入され得る。当業者であれば、抗原の配列情報を使用して、ＮＤＶ Ｆタンパク質コード配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質コード配列が本明細書に記載されるように置き換えられている任意のＮＤＶのタイプまたは株のＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列に組み込むための導入遺伝子を作製することができるであろう。核酸コードの縮重を考慮すると、同じ抗原をコードし得る多数の異なる核酸配列が存在する。特定の実施形態では、抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子は、コドン最適化される。特定の実施形態では、抗原のコード配列は、コドン最適化される。コドン最適化に関する検討については、例えば以下のセクション５．１．４を参照のこと。抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子は、任意の二つのＮＤＶ転写単位の間（例えば、ＮＤＶ のＰ転写単位とＭ転写単位の間、またはＨＮ転写単位とＬ転写単位の間）に組み込まれ得る。ＮＤＶゲノムに組み込まれる本明細書に記載の導入遺伝子は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶに感染した細胞によって、当該導入遺伝子によりコードされる抗原を発現させる。

【0156】

別の実施形態では、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子が本明細書に記載され、当該キメラ抗原は、抗原の細胞外ドメインならびにＮＤＶ Ｆタンパク質膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、抗原の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラタンパク質は、抗原の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。特定の実施形態では、抗原の膜貫通ドメインの一個、二個、またはそれ以上のアミノ酸残基、ただし、抗原の膜貫通ドメインの１０個未満のアミノ酸残基が、キメラ抗原の一部である。抗原およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、抗原およびＮＤＶ Ｆタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。例えば、キメラ抗原の作製方法については、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，２００６，ＰＮＡＳ Ｍａｙ ２３，２００６ １０３（２１）８２０３－８２０８、国際特許出願公開ＷＯ２００７／０６４８０２、およびＵ．Ｓ．９，３８７，２４２ Ｂ２を参照のこと。特定の実施形態では、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子が本明細書に記載され、当該キメラ抗原は、クラスＩタンパク質抗原の細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。

【0157】

別の実施形態では、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子が本明細書に記載され、当該キメラ抗原は、抗原の細胞外ドメインならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。言い換えると、ＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインと細胞質ドメインは、抗原の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを置き換えており、そのため、キメラタンパク質は、抗原の膜貫通ドメインと細胞質ドメインを含まない。特定の実施形態では、抗原の膜貫通ドメインの一個、二個、またはそれ以上のアミノ酸残基、ただし、抗原の膜貫通ドメインの１０個未満のアミノ酸残基が、キメラ抗原の一部である。抗原およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインは、当業者に公知の技術を使用して決定されてもよい。例えば、公開されている情報、ＧｅｎＢａｎｋ、または例えばＶＩＰＲ ｖｉｒｕｓ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｖｉｐｒｂｒｃ．ｏｒｇ）などのウェブサイト、ＤＴＵ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ｄｏｍａｉｎ ｗｅｂｓｉｔｅ（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＴＭＨＭＭ／）、または膜貫通ドメインの決定に利用可能なプログラムを使用して、抗原およびＮＤＶ ＨＮタンパク質の細胞外ドメイン、膜貫通ドメインならびに細胞質ドメインを決定してもよい。例えば、キメラ抗原の作製方法については、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，２００６，ＰＮＡＳ Ｍａｙ ２３，２００６ １０３（２１）８２０３－８２０８、国際特許出願公開ＷＯ２００７／０６４８０２、およびＵ．Ｓ．９，３８７，２４２ Ｂ２を参照のこと。特定の実施形態では、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子が本明細書に記載され、当該キメラ抗原は、クラスＩＩタンパク質抗原の細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ ＨＮタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。

【0158】

特定の実施形態では、導入遺伝子は、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含み、当該キメラ抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質細胞外ドメインまたはその断片（例えば、受容体結合ドメインを含む断片）、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。一部の実施形態では、導入遺伝子は、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含み、当該キメラ抗原は、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質細胞外ドメインまたはその断片、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。特定の実施形態では、導入遺伝子は、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含み、当該キメラ抗原は、ＲＳＶ Ｆタンパク質細胞外ドメインまたはその断片、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含む。

【0159】

導入遺伝子は、ＮＤＶ Ｆタンパク質コード配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質コード配列が本明細書に記載されるように置き換えられている任意のＮＤＶのタイプまたは株（例えば、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株）のＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列に挿入され得る。当業者であれば、キメラ抗原の配列情報を使用して、ＮＤＶ Ｆタンパク質コード配列および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質コード配列が本明細書に記載されるように置き換えられている任意のＮＤＶのタイプまたは株のＮＤＶゲノムのヌクレオチド配列に組み込むための導入遺伝子を作製することができるであろう。核酸コードの縮重を考慮すると、同じキメラ抗原をコードし得る多数の異なる核酸配列が存在する。特定の実施形態では、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子は、コドン最適化される。特定の実施形態では、キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子が本明細書に記載され、当該キメラ抗原は、抗原細胞外ドメイン、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含み、当該抗原の細胞外ドメインは、コドン最適化された核酸配列によってコードされる。コドン最適化に関する検討については、例えば以下のセクション５．１．４を参照のこと。キメラ抗原をコードするヌクレオチド配列をコードする導入遺伝子は、任意の二つのＮＤＶ転写単位の間（例えば、ＮＤＶのＰ転写単位とＭ転写単位の間、またはＨＮ転写単位とＬ転写単位の間）に組み込まれ得る。

【0160】

特定の実施形態では、抗原またはキメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子は、ＮＤＶ制御シグナル（例えば、遺伝子末端配列、遺伝子間配列および遺伝子開始配列）およびＫｏｚａｋ配列を含む。一部の実施形態では、抗原またはキメラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子は、ＮＤＶ制御シグナル（例えば、遺伝子末端配列、遺伝子間配列および遺伝子開始配列）、Ｋｏｚａｋ配列、およびクローニングを容易にするための制限酵素部位を含む。特定の実施形態では、抗原またはキメラ抗原をコードする導入遺伝子は、ＮＤＶ制御シグナル（遺伝子末端配列、遺伝子間配列および遺伝子開始配列）、Ｋｏｚａｋ配列、クローニングを容易にするための制限酵素部位、およびルールオブシックス（ｒｕｌｅ ｏｆ ｓｉｘ）との適合を確保するための非コード領域中の追加ヌクレオチドを含む。好ましい実施形態では、導入遺伝子は、ルールオブシックスに適合する。

【0161】

特定の実施形態では、抗原は、感染性疾患の抗原である。感染性疾患には、ウイルス、細菌、真菌、および原虫によって引き起こされる疾患が含まれる。一部の実施形態では、抗原は、病原体の抗原である。特定の実施形態では、抗原は、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原である。抗原は、ウイルス、細菌、真菌、原虫、または他の病原体によって発現されるタンパク質の断片であってもよい。特定の実施形態では、抗原は、ウイルス抗原である。ウイルス抗原は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）抗原、ヒトメタニューモウイルス抗原、呼吸器合胞体ウイルス抗原、エボラ抗原、ラッサウイルス抗原、ニパウイルス抗原、または中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）抗原であってもよい。一部の実施形態では、ウイルス抗原は、表面糖タンパク質である。ウイルス抗原は、表面糖タンパク質またはエンベロープタンパク質の断片であってもよい。一部の実施形態では、本明細書で使用される抗原は、自然界に存在する抗原に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有する。例えば、抗原は、天然型のウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原、ＲＳＶ抗原、エボラウイルス抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、ｈＭＰＶ抗原、ラッサウイルス抗原、またはニパウイルス抗原）に対し、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の同一性を有してもよい。特定の実施形態では、抗原は、パンデミックまたはエピデミックを引き起こす病原体（例えば、ウイルス、細菌など）に由来する、またはそれから誘導される抗原である。

【0162】

一つの実施形態では、ウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原である。別の実施形態では、ウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質またはその断片である。本明細書で使用される場合、「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシド」という用語は、当業者に公知のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドを指す。特定の実施形態では、ヌクレオカプシドタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＴ０８１０６８．１、ＭＴ０８１０６６．１またはＭＮ９０８９４７．３に見いだされるアミノ酸配列または核酸配列を含む。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のヌクレオカプシドタンパク質のアミノ酸配列およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質をコードするヌクレオチド配列の例に関して、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３、ＭＴ４４７１６０、ＭＴ４４６３６、ＭＴ４４６３６０、ＭＴ４４４５９３、ＭＴ４４４５２９、ＭＴ３７０８８７、およびＭＴ３３４５５８を参照のこと。

【0163】

別の実施形態では、ウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質またはその断片である。一部の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の断片は、当該タンパク質の受容体結合ドメインを含む（またはそれからなる）。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の断片は、当該タンパク質のＳ１ドメインまたはＳ２ドメインを含む（またはそれからなる）。一部の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の断片は、当該タンパク質の細胞外ドメインを含む（またはそれからなる）。本明細書で使用される場合、「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質」および「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質」という用語は、当業者に公知のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質を指す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質のアミノ酸配列およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするヌクレオチド配列の例に関して、例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３、ＭＴ４４７１６０、ＭＴ４４６３６、ＭＴ４４６３６０、ＭＴ４４４５９３、ＭＴ４４４５２９、ＭＴ３７０８８７、およびＭＴ３３４５５８を参照のこと。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３に見いだされるアミノ酸配列または核酸配列を含む。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のバリアントのアミノ酸配列または核酸配列を含む。一部の実施形態では、スパイクタンパク質は、Ｂ．１．１．７のアミノ酸配列または核酸配列を含む。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、２０Ｉ／５０１Ｙ．Ｖ１（ＢＥＩ参照単離株ＮＲ－５４０００）のアミノ酸配列または核酸配列を含む。一部の実施形態では、スパイクタンパク質は、Ｐ．１のアミノ酸配列または核酸配列を含む。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、２０Ｊ／５０１Ｙ．Ｖ３（ＢＥＩ参照単離株ＮＲ－５４９８２）のアミノ酸配列または核酸配列を含む。一部の実施形態では、スパイクタンパク質は、Ｂ．１．３５１のアミノ酸配列または核酸配列を含む。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、２０Ｈ／５０１．Ｖ２（ＢＥＩ参照単離株ＮＲ－５４００９）のアミノ酸配列または核酸配列を含む。一部の実施形態では、スパイクタンパク質は、Ｂ．１．４２７１のアミノ酸配列または核酸配列を含む。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、２０Ｃ／Ｓ：４５２Ｒのアミノ酸配列または核酸配列を含む。一部の実施形態では、スパイクタンパク質は、Ｂ．１．４２９のアミノ酸配列または核酸配列を含む。特定の実施形態では、スパイクタンパク質は、２０Ｃ／Ｓ：４５２Ｒのアミノ酸配列または核酸配列を含む。典型的なスパイクタンパク質は、Ｓ１ドメイン、受容体結合ドメイン、Ｓ２ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインを含む、当業者に公知のドメインを含む。例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質（特に、かかるタンパク質の構造）の説明については、Ｗｒａｐｐ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３６７：１２６０－１２６３を参照のこと。スパイクタンパク質は、シグナルペプチド（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３のアミノ酸配列の１～１４アミノ酸残基のシグナルペプチド）、受容体結合ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３の３１９～５４１アミノ酸残基の受容体結合ドメイン）、細胞外ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３の１５～１２１３アミノ酸残基の細胞外ドメイン）、並びに膜貫通ドメインおよび細胞質ドメイン（例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３の１２１４～１２７３アミノ酸残基）を有することを特徴とし得る。特定の実施形態では、ウイルス抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の断片である。断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含んでもよい。断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のＳ１ドメイン、Ｓ２ドメイン、または細胞外ドメインを含んでもよい。「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質」という用語は、例えばシグナルペプチド切断、ジスルフィド結合形成、グリコシル化（例えば、Ｎ結合型グリコシル化）、プロテアーゼ切断、および脂質修飾（例えば、Ｓ－パルミトイル化）などの翻訳後プロセッシングにより改変されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクポリペプチドを包含する。一部の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、シグナル配列を含む。他の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質は、シグナル配列を含まない。シグナル配列は、天然シグナルペプチド配列またはそのバリアントであってもよい。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のシグナルペプチドである。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のシグナルペプチドに対して異種であるである。

【0164】

一部の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質細胞外ドメインの誘導体、ならびにＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原が本明細書に提供され、当該誘導体は、（１）ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３に見いだされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のアミノ酸残基８１７、８９２、８９９、９４２、９８６、および９８７に対応するアミノ酸残基が、プロリンに置換されている、および（２）多塩基性切断部位が不活化されるようにアミノ酸残基６８２～６８５に対応するアミノ酸残基が置換されている、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質細胞外ドメインを含む。特定の実施形態では、多塩基性切断部位は、例えば、フーリン（ｆｕｒｉｎ）などにより当該部位が切断され得ない場合、不活化されている。特定の実施形態では、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＭＮ９０８９４７．３に見いだされるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質のアミノ酸残基６８２～６８５の多塩基性切断部位に対応するアミノ酸残基は、単一のアラニンで置換される。特定の実施形態では、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインは、リンカー配列（例えば、ＧＧＧＧＳ（配列番号４６））を介してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質細胞外ドメインの誘導体に融合される。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン（Ｇ）リンカーまたはグリシンとセリンの（ＧＳ）リンカーである。例えば、リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）_ｎの配列を含んでもよく、式中、ｎは、１、２、３、４、５またはそれ以上である（配列番号４７）。別の例では、リンカーは、（Ｇ）_ｎを含んでもよく、式中、ｎは、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上である。特定の実施形態では、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳ（配列番号４６）を含む。一部の実施形態では、ＮＤＶ Ｆタンパク質の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質細胞外ドメインの誘導体に直接融合される。特定の実施形態では、ＮＤＶ Ｆタンパク質およびキメラＦタンパク質は、ＮＤＶビリオンに組み込まれる。

【0165】

一つの実施形態では、ウイルス抗原は、ヒトメタニューモウイルス抗原である。別の実施形態では、ウイルス抗原は、ヒトメタニューモウイルスのＧタンパク質またはその断片である。「ヒトメタニューモウイルスＧタンパク質」および「ｈＭＰＶ Ｇタンパク質」とは、当業者に公知の任意のヒトメタニューモウイルスのＧタンパク質を指す。別の実施形態では、ウイルス抗原は、ヒトメタニューモウイルスのＦタンパク質またはその断片である。「ヒトメタニューモウイルスＦタンパク質」および「ｈＭＰＶ Ｆタンパク質」とは、当業者に公知の任意のヒトメタニューモウイルスのＦタンパク質を指す。ｈＭＰＶ Ｆタンパク質は、Ｆ０不活性前駆体として合成される。Ｆ０不活性前駆体は、細胞内成熟中に切断を必要とする。ｈＭＰＶ Ｆが切断されて、Ｆ１およびＦ２が形成される。ｈＭＰＶ Ｆタンパク質は、融合前および融合後で二種の立体構造で存在する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセッション番号ＡＹ１４５３０１．１およびＫＪ６２７４３７．１は、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質をコードする核酸配列の例を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセッション番号ＡＡＮ５２９１５．１、ＡＨＶ７９９７５．１、ＡＧＪ７４０３５．１、およびＡＧＺ４８８４５．１は、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質のアミノ酸配列の例を提供する。「ｈＭＰＶ Ｆタンパク質」および「ヒトメタニューモウイルスＦタンパク質」という用語は、例えばシグナルペプチド切断、ジスルフィド結合形成、グリコシル化（例えば、Ｎ結合型グリコシル化）、プロテアーゼ切断、および脂質修飾（例えば、Ｓ－パルミトイル化）などの翻訳後プロセッシングにより改変されるｈＭＰＶ Ｆポリペプチドを包含する。一部の実施形態では、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質は、シグナル配列を含む。他の実施形態では、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質は、シグナル配列を含まない。シグナル配列は、天然シグナルペプチド配列またはそのバリアントであってもよい。ｈＭＰＶ Ｆタンパク質のシグナル配列は、典型的には、１８アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質のシグナルペプチドである。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質のシグナルペプチドに対して異種である。

【0166】

一つの実施形態では、ウイルス抗原は、ＲＳＶ Ｇタンパク質またはその断片である。「ＲＳＶ Ｇタンパク質」および「呼吸器合胞体ウイルスＧタンパク質」とは、当業者に公知の任意の呼吸器合胞体Ｇタンパク質を指す。一つの実施形態では、ウイルス抗原は、ＲＳＶ Ｆタンパク質またはその断片である。「ＲＳＶ Ｆタンパク質」および「呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質」とは、当業者に公知の任意の呼吸器合胞体Ｆタンパク質を指す。ＲＳＶ Ｆタンパク質は、典型的にはホモ三量体として存在する。ＲＳＶ Ｆタンパク質は、多重にＮ－グリコシル化されているＦ０不活性前駆体として合成される。Ｆ０不活性前駆体は、フーリン様プロテアーゼによる細胞内成熟中の切断を必要とする。ＲＳＶ Ｆは、二つのフーリン部位を含有しており、フーリン様プロテアーゼにより切断されると、以下の三種のポリペプチドが生じる：Ｆ２、ｐ２７およびＦ１。後者はそのＮ末端に疎水性融合ペプチドを含有する。ＲＳＶ Ｆタンパク質は、融合前および融合後に、二つの立体構造で存在する。ＲＳＶ Ｆタンパク質は、ヒトＲＳＶ Ｆタンパク質またはウシＦタンパク質であってもよい。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセッション番号ＫＪ１５５６９４．１、ＫＵ９５０６８６．１、ＫＪ６７２４８１．１、ＫＰ１１９７４７、およびＡＦ０３５００６．１は、ヒトＲＳＶ Ｆタンパク質をコードする核酸配列の例を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセッション番号ＡＨＬ８４１９４．１、ＡＭＴ７９８１７．１、ＡＨＸ５７６０３．１、ＡＩＹ７０２２０．１、およびＡＡＣ１４９０２．１は、ヒトＲＳＶ Ｆタンパク質アミノ酸配列の例を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセッション番号ＡＦ２９５５４３．１、ＡＦ０９２９４２．１、およびＹ１７９７０．１は、ウシＲＳＶ Ｆタンパク質をコードする核酸配列の例を提供する。ＧｅｎＢａｎｋ（商標）アクセッション番号ＡＡＬ４９３９９．１、ＮＰ＿０４８０５５．１、ＡＡＣ９６３０８．１、およびＣＡＡ７６９８０．１は、ウシＲＳＶ Ｆタンパク質アミノ酸配列の例を提供する。「ＲＳＶ Ｆタンパク質」および「呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質」という用語は、例えばシグナルペプチド切断、ジスルフィド結合形成、グリコシル化（例えば、Ｎ結合型グリコシル化）、プロテアーゼ切断、および脂質修飾（例えば、Ｓ－パルミトイル化）などの翻訳後プロセッシングにより改変されるＲＳＶ Ｆポリペプチドを包含する。一部の実施形態では、ＲＳＶ Ｆタンパク質は、シグナル配列を含む。他の実施形態では、ＲＳＶ Ｆタンパク質は、シグナル配列を含まない。シグナル配列は、天然シグナルペプチド配列またはそのバリアントであってもよい。ＲＳＶ Ｆタンパク質のシグナル配列は、典型的には、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ＲＳＶ Ｆタンパク質のシグナルペプチドである。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ＲＳＶ Ｆタンパク質のシグナルペプチドに対して異種である。

【0167】

一つの実施形態では、抗原は、エボラウイルス抗原（例えば、エボラウイルス糖タンパク質ＧＰもしくはその断片、またはエボラウイルスヌクレオカプシドもしくはその断片）である。別の実施形態では、抗原は、ラッサウイルス抗原（例えば、ラッサウイルスエンベロープ糖タンパク質ＧＰ１もしくはその断片、またはラッサウイルスエンベロープ糖タンパク質ＧＰ２もしくはその断片）である。別の実施形態では、抗原は、ニパウイルス抗原（例えば、ニパウイルスＦもしくはその断片、またはニパウイルスＧタンパク質もしくはその断片）である。別の実施形態では、抗原は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原（例えば、ＭＥＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質もしくはその断片、またはヌクレオカプシドタンパク質もしくはその断片）である。

【0168】

特定の実施形態では、タンパク質の断片は、タンパク質の少なくとも８個、少なくとも１０個、少なくとも１２個、少なくとも１５個、またはそれ以上の連続アミノ酸を含む。一部の実施形態では、タンパク質の断片は、タンパク質の少なくとも２０個、少なくとも３０個、少なくとも４０個、少なくとも５０個、またはそれ以上の連続アミノ酸を含む。特定の実施形態では、タンパク質の断片は、タンパク質の少なくとも７５個、少なくとも１００個、少なくとも１２５個、少なくとも１５０個、またはそれ以上の連続アミノ酸を含む。一部の実施形態では、タンパク質の断片は、タンパク質の少なくとも１７５個、少なくとも２００個、少なくとも２５０個、少なくとも３００個、少なくとも３５０個、またはそれ以上の連続アミノ酸を含む。

【0169】

一部の実施形態では、抗原は、がん、または腫瘍抗原または腫瘍抗原（例えば、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原）である。腫瘍抗原に特徴的である抗原は、腫瘍組織の細胞の細胞表面、細胞質、核、小器官などから誘導され得る。例としては、変異したがん遺伝子によってコードされるタンパク質、腫瘍に関連するウイルスタンパク質、および糖タンパク質をはじめとする腫瘍タンパク質に特徴的な抗原が挙げられる。腫瘍としては限定されないが、唇のがん、鼻咽頭がん、咽頭がんおよび口腔がん、食道がん、胃がん、結腸がん、直腸がん、肝臓がん、胆嚢がん、膵臓がん、喉頭がん、肺がんおよび気管支がん、皮膚の黒色腫、乳がん、子宮頸がん、子宮（ｕｔｅｒｉｎｅ）がん、卵巣がん、膀胱がん、腎臓がん、子宮（ｕｔｅｒｕｓ）がん、脳および神経系の他の部分のがん、甲状腺がん、前立腺がん、精巣がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫および白血病などのタイプのがんに由来するものが挙げられる。一部の実施形態では、が抗原または腫瘍抗原は、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＣＤ３３、ＣＤ２０、ＥｒｂＢ２、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＡＰＯ－１、またはＭＵＣ－１である。

【0170】

５．１．４ コドン最適化
当業者に公知の任意のコドン最適化技術を使用して、本明細書に記載される核酸配列またはヌクレオチド配列をコドン最適化してもよい。コドン最適化の方法は、当分野で公知であり、例えば、ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅ（商標）（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ（登録商標）プロトコルおよびＧｅｎｅｗｉｚ（登録商標）プロトコルがあり、それらはその全体で参照により本明細書に組み込まれる。コドン最適化の方法については、米国特許第８，３２６，５４７号も参照されたい。当該特許は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。

【0171】

コドン最適化の方法の例として、本明細書に記載される核酸配列またはヌクレオチド配列のオープンフレーム中の各コドンを、哺乳動物タンパク質において最も高い頻度で使用されるコドンに置き換えるものが挙げられる。日本、かずさのＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈにより維持されているＣｏｄｏｎ Ｕｓａｇｅ Ｄａｔａｂａｓｅを使用する、ウェブベースのプログラム（ｗｗｗ．ｅｎｃｏｒｂｉｏ．ｃｏｍ／ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ／Ｃｏｄｏｎ．ｈｔｍ）を使用してコドン最適化を行ってもよい。哺乳動物発現に最適化された核酸配列またはヌクレオチド配列は、以下に関して調べられてもよい：（１）転写終結因子として作用する可能性がある５ｘＡ以上のストレッチの存在、（２）サブクローニングに干渉する可能性がある制限酵素部位の存在、（３）ルールオブシックスとの適合。調査後、（１）転写終結因子として作用する可能性がある５ｘＡ以上のストレッチは、同義変異と置き換えてもよい、（２）サブクローニングに干渉する可能性がある制限酵素部位は、同義変異と置き換えてもよい、（３）最適なタンパク質発現のために、ＮＤＶ制御シグナル（遺伝子末端配列、遺伝子間配列、および遺伝子開始配列）およびＫｏｚａｋ配列を付加してもよい、および（４）ルールオブシックスとの適合を確保するために、非コード領域中にヌクレオチドを付加してもよい。同義変異は、典型的には、コードされるアミノ酸を変化させないヌクレオチドの変化である。例えば、６Ａ（ＡＡＡＡＡＡ）のストレッチの場合、当該配列はＬｙｓ－Ｌｙｓをコードしている。同義配列は、ＡＡＧＡＡＧとなり、当該配列もＬｙｓ－Ｌｙｓをコードしている。

【0172】

５．２ ＮＤＶの構築
本明細書（例えば、セクション５．１および６を参照）に記載の組み換えＮＤＶは、リバースジェネティクス技術を使用して作製することができる。リバースジェネティクス法には、ネガティブ鎖の非コード領域を含有する合成組み換えウイルスＲＮＡ、ウイルスポリメラーゼによる認識に必須なウイルスＲＮＡ、および成熟ビリオンを形成するために必要なパッケージングシグナルに必須なウイルスＲＮＡを作製することが含まれる。組み換えＲＮＡは、組み換えＤＮＡ鋳型から合成され、精製ウイルスポリメラーゼ複合体を用いてインビトロで再構築され、組み換えリボ核タンパク質（ＲＮＰ）を形成し、これをトランスフェクト細胞中で使用することができる。インビトロまたはインビボのいずれかでの合成ＲＮＡの転写中にウイルスポリメラーゼタンパク質が存在している場合、より効率的なトランスフェクションが実現される。合成組み換えＲＮＰは、感染性ウイルス粒子内にレスキューされ得る。前述の技術は、１９９２年１１月２４日に発行された米国特許第５，１６６，０５７号、１９９８年１２月２９日に発行された米国特許第５，８５４，０３７号、２０００年１１月１４日に発行された米国特許第６，１４６，６４２号、１９９６年２月２０日に公表された欧州特許公開ＥＰ０７０２０８５Ａ１、米国特許出願０９／１５２，８４５、１９９７年４月３日に公開された国際特許出願公開ＷＯ９７／１２０３２、１９９６年１１月７日に公開されたＷＯ９６／３４６２５、欧州特許公開ＥＰＡ７８０４７５、１９９９年１月２１日に公開されたＷＯ９９／０２６５７、１９９８年１１月２６日に公開されたＷＯ９８／５３０７８、１９９８年１月２２日に公開されたＷＯ９８／０２５３０、１９９９年４月１日に公開されたＷＯ９９／１５６７２、１９９８年４月２日に公開されたＷＯ９８／１３５０１、１９９７年２月２０日に公開されたＷＯ９７／０６２７０、および１９９７年６月２５日に公開されたＥＰＯ７８０４７５Ａ１に記載されている。各文献は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。

【0173】

ヘルパーを含まないプラスミド技術を利用して、本明細書に記載されるＮＤＶを操作することもできる。簡潔に述べると、ＮＤＶ（例えば、Ｈｉｔｃｈｎｅｒ Ｂ１株またはＬａＳｏｔａ株）のｃＤＮＡが構築され、プラスミドベクターに挿入され、操作されて、二つの転写単位（例えば、ＮＤＶ Ｐ遺伝子とＭ遺伝子、またはＮＤＶ ＨＮ遺伝子とＬ遺伝子）の間の固有制限酵素部位を含有する。異種アミノ酸配列（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするヌクレオチド配列、ＲＳＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列、キメラＦタンパク質、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質などの本明細書に記載される導入遺伝子または他の配列）をコードするヌクレオチド配列を、固有制限酵素部位でウイルスゲノム内に挿入してもよい。あるいは異種アミノ酸配列（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質をコードするヌクレオチド配列、ＲＳＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列、キメラＦタンパク質、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質などの本明細書に記載される導入遺伝子または他の配列）をコードするヌクレオチド配列を、ＮＤＶ転写単位内に操作挿入してもよいが、ただし当該挿入が、ウイルスの感染および複製の能力に影響を及ぼさないものとする。単一セグメントは、Ｔ７プロモーターとデルタ型肝炎ウイルスリボザイムとの間に配置されて、Ｔ７ポリメラーゼから精密にネガティブまたはポジティブの転写物が生成される。必要なウイルスタンパク質を含むプラスミドベクターおよび発現ベクターが細胞にトランスフェクトされ、組み換えウイルス粒子が生成される（例えば、国際特許出願公開０１／０４３３３、米国特許第７，４４２，３７９号、第６，１４６，６４２号、第６，６４９，３７２号、第６，５４４，７８５号、および第７，３８４，７７４号、Ｓｗａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００３）．Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．４７：１０４７－１０５０、ならびにＳｗａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．（２００１）．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．１１８６８－１１８７３を参照のこと。当該文献はそれぞれ、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる）。

【0174】

単一のｍＲＮＡから複数のタンパク質を生成するためのバイシストロニック技術は、当業者に公知である。バイシストロニック技術は、ＩＲＥＳ配列を使用することにより、単一のＲＮＡに、複数のタンパク質のコード配列を操作挿入することを可能にする。ＩＲＥＳ配列は、ＲＮＡ分子へのリボソームの内部リクルートを指示し、キャップ非依存性の下流翻訳を可能にする。簡潔に述べると、一つのタンパク質のコード領域が、第二のタンパク質のＯＲＦの下流に挿入される。挿入は、ＩＲＥＳと、適切な発現および／または機能に必要な任意の非翻訳シグナル配列に隣接される。挿入は、第二のタンパク質のオープンリーディングフレーム、ポリアデニル化、または転写プロモーターを妨げてはならない（例えば、Ｇａｒｃｉａ－Ｓａｓｔｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６８：６２５４－６２６１およびＧａｒｃｉａ－Ｓａｓｔｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９９４ Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄ．８２：２３７－２４６を参照のこと。各文献は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる）。

【0175】

導入遺伝子をコードし、当該導入遺伝子（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、ＲＳＶ Ｆタンパク質、キメラＦタンパク質、ｈＭＰＶ Ｆタンパク質をコードする導入遺伝子）によりコードされた異種タンパク質を発現する組み換えＮＤＶをクローニングする方法は、当業者に公知であり、例えば、ＮＤＶゲノム内に挿入操作された制限酵素部位に導入遺伝子を挿入すること、ＮＤＶ ＲＮＡ－依存性－ＲＮＡポリメラーゼにより認識させるために、導入遺伝子中に適切なシグナル（例えば、ＮＤＶポリメラーゼに前の遺伝子の末端と導入遺伝子の開始部位を認識させることを可能にする、導入遺伝子のオープンリーディングフレームの上流配列であって、これは、例えば、一ヌクレオチド遺伝子間配列により間隔を空けられてもよい）を含有させること、（例えば、真核細胞リボソーム翻訳を改善するために）有効なＫｏｚａｋ配列を含有させること、「ＮＤＶクローニング」のルールオブシックスを満たす導入遺伝子を組み込むこと、およびサイレンと変異を含有させて、無関係な遺伝子末端を除去し、および／または導入遺伝子内の遺伝子開始配列を除去すること、がある。ルールオブシックスに関し、当業者であれば、ＮＤＶ（および通常は、パラミクソウイルス科のほとんどの種）の効率的な複製は、ゲノム長が六の倍数であることに依存しており、これが「ルールオブシックス」として知られていることを理解するであろう（例えば、Ｃａｌａｉｎ，Ｐ．＆ Ｒｏｕｘ，Ｌ．Ｔｈｅ ｒｕｌｅ ｏｆ ｓｉｘ，ａ ｂａｓｉｃ ｆｅａｔｕｒｅ ｏｆ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｅｎｄａｉ ｖｉｒｕｓ ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７，４８２２－４８３０（１９９３）を参照のこと）。したがって、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを構築する場合、ＮＤＶクローニングに関して「ルールオブシックス」を満たすよう注意しなければならない。ＮＤＶクローニングに関するルールオブシックスを満たすための当業者に公知の方法を使用してもよく、例えば、導入遺伝子の下流にヌクレオチドを付加することがある。例えば、Ａｙｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ．Ｊ．Ｖｉｓ．Ｅｘｐ．（８０），ｅ５０８３０，ｄｏｉ：１０．３７９１／５０８３０（２０１３）をＮＤＶ（例えば、組み換えＮＤＶ）のクローニングとレスキューに関する方法の検討について参照のこと。当該文献は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。

【0176】

特定の実施形態では、本明細書（例えば、セクション５．１および６を参照）に記載のＮＤＶは、以下のセクション６に記載される方法に従い作製されてもよい。

【0177】

５．３ ＮＤＶの増殖
本明細書（例えば、セクション５．１および６）に記載される組み換えＮＤＶは、本明細書に記載されるウイルスの用途を許容する力価にまでウイルスを生育させる任意の基質中で増殖させることができる。一つの実施形態では、基質は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶが、対応する野生型ウイルスについて判定される力価と同等の力価にまで生育することを可能にする。

【0178】

本明細書（例えば、セクション５．１および６）に記載される組み換えＮＤＶは、ウイルスの感染に感受性のある細胞、発育卵（例えば、ニワトリ卵またはウズラ卵）、または動物（例えば、トリ）において生育してもよい。かかる方法は、当業者に公知である。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、がん細胞、例えば、癌腫細胞（例えば、乳がん細胞および前立腺がん細胞）、肉腫細胞、白血病細胞、リンパ腫細胞、および胚細胞主要細胞（例えば、精巣がん細胞および卵巣がん細胞）において増殖してもよい。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、細胞株、例えば、ＨｅＬａ細胞、ＭＣＦ７細胞、ＴＨＰ－１細胞、Ｕ８７細胞、ＤＵ１４５細胞、Ｌｎｃａｐ細胞、およびＴ４７Ｄ細胞などのがん細胞株で増殖してもよい。特定の実施形態では、細胞または細胞株（例えば、がん細胞またはがん細胞株）は、ヒトから取得され、ヒトから誘導され、またはヒトから取得および誘導される。別の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、インターフェロン欠損系またはインターフェロン（ＩＦＮ）欠損基質、例えば、ＩＦＮ欠損細胞（例えば、ＩＦＮ欠損細胞株）またはＩＦＮ欠損発育卵において増殖する。別の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、ニワトリ細胞またはニワトリ発育卵において増殖する。代表的なニワトリ細胞としては、限定されないが、ニワトリ胚線維芽細胞およびニワトリ胚腎細胞が挙げられる。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、Ｖｅｒｏ細胞で増殖する。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、ニワトリ卵またはウズラ卵において増殖する。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶウイルスは、まず発育卵で増殖し、次いで細胞（例えば、細胞株）において増殖する。

【0179】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、例えば、６～１４日齢、６～１２日齢、６～１０日齢、６～９日齢、６～８日齢、８～１０日齢、または１０～１２日齢などの発育卵で増殖してもよい。特定の実施形態では、１０日齢のニワトリ発育卵を使用して、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを増殖させる。若い、または未熟な発育卵を使用して、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを増殖させることができる。未熟な発育卵には、１０日齢未満の卵、例えば、ＩＦＮ欠損した、６～９日齢の卵、または６～８日齢の卵が包含される。未熟な発育卵には、インキュベーション温度の変更、薬物処理、または卵に発育遅延を生じさせる任意の他の変更などの生育条件を変更した結果、１０～１２日齢の卵と比較してＩＦＮ系が充分に発育していない１０日齢未満の未熟な卵を人工的に模倣した発育卵も包含される。本明細書に記載の組み換えＮＤＶは発育卵の様々な位置、例えば尿膜腔で増殖することができる。ウイルスの生育および増殖に関する詳細な検討については、例えば、米国特許第６，８５２，５２２号および米国特許第７，４９４，８０８号を参照のこと。両特許は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。

【0180】

ウイルス単離について、本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、発育卵または細胞培養物から取り出され、および典型的には公知の清浄化手順、例えば遠心分離、深層濾過、およびマイクロ濾過などによって細胞成分から分離することができ、さらに、望ましい場合には、例えば接線流濾過（ＴＦＦ）、密度勾配遠心分離、差動（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ）抽出またはクロマトグラフィーなどの当業者に公知の手順を使用して精製されてもよい。

【0181】

特定の実施形態では、感染卵（例えば、ニワトリ卵）の尿膜腔液からのウイルス単離は、尿膜腔液を回収することから始まり、濾過系を使用してこれを清浄化させ、宿主細胞ＤＮＡが測定可能なほどに低下するように、細胞や他の大きな残渣、特に正味正電荷を有する膜を含む残渣を除去する。浄化されたバルクはその後、接線流濾過により処理される。次いで、濃縮された浄化バルクを、４透析体積の高塩緩衝液で透析濾過し、続いて４透析体積の低塩製剤緩衝液で透析濾過して、その後、およそ１０倍に濃縮する。したがって、残留卵タンパク質、例えば主にはオボアルブミンと残留ＤＮＡは、受容可能なレベルにまで低下し、緩衝液は、組み換えＮＤＶ製剤と適合性のある緩衝液と交換され、対象へ投与される組成物となる。次いで、得られた生成物を例えば０．２μｍフィルターなどのフィルターを通して滅菌濾過し、適切な滅菌保管容器に分注して凍結し、－７０℃で保存する。

【0182】

特定の実施形態では、本明細書（例えば、セクション５．１および６を参照）に記載の組み換えＮＤＶは、セクション６に記載される方法に従い増殖し、単離され、および／または精製される。特定の実施形態では、本明細書（例えば、セクション５．１および６を参照）に記載の組み換えＮＤＶは、増殖し、単離され、もしくは精製され、または前述のいずれか二つまたはすべてが行われる。

【0183】

特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含む細胞（例えば、細胞株）または発育卵（例えば、ニワトリ発育卵）が本明細書に提供される。一部の実施形態では、細胞は、インビトロまたはエクスビボである。細胞は、初代細胞または細胞株であってもよい。細胞は、哺乳動物（例えば、ヒト）の細胞または細胞株であってもよい。一部の実施形態では、細胞は、本明細書に列挙される細胞または細胞株である。一部の実施形態では、発育卵は、ＩＦＮが欠損した基質である。一部の実施形態では、発育卵は、本明細書に記載される発育卵である。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを増殖させる方法が本明細書に提供され、当該方法は、組み換えＮＤＶに感染した細胞（例えば、細胞株）または発育卵（例えば、ニワトリ発育卵）を培養することを含む。一部の実施形態では、当該方法は、細胞または発育卵から組み換えＮＤＶを単離または精製することをさらに含んでもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを増殖させる方法が本明細書に提供され、当該方法は、（ａ）本明細書に記載の組み換えＮＤＶに感染した細胞（例えば、細胞株）または発育卵を培養すること、および（ｂ）当該細胞または発育卵から組み換えＮＤＶを単離することを含む。細胞または発育卵は、本明細書に記載されるもの、または当業者に公知のものであってもよい。一部の実施形態では、細胞または発育卵は、ＩＦＮを欠損している。

【0184】

特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含む医薬組成物（例えば、免疫原性組成物）を作製する方法が本明細書において提供され、当該方法は、（ａ）本明細書に記載の組み換えＮＤＶを細胞（例えば、細胞株）または発育卵で増殖させること、および（ｂ）当該細胞または発育卵から組み換えＮＤＶを単離することを含む。当該方法は、組み換えＮＤＶを、薬学的に許容可能な担体とともに容器に添加することをさらに含んでもよい。

【0185】

５．４ 組成物および投与経路
本明細書（例えば、セクション５．１または６）に記載の組み換えＮＤＶを含む組成物が本明細書において提供される。特定の実施形態では、組成物は、例えば免疫原性組成物（例えば、ワクチン組成物）などの医薬組成物である。特定の実施形態では、本明細書（例えば、セクション５．１または６）に記載の組み換えＮＤＶを含む免疫原性組成物が本明細書において提供される。組成物は、例えば本明細書（例えば、セクション５．１．３）に記載される抗原に対する免疫応答を誘導する方法において使用されてもよい。組成物は、抗原（例えば、本明細書（例えば、セクション５．１．３）に記載される抗原）に対して免疫付与する方法において使用されてもよい。組成物は、抗原（例えば、本明細書（例えば、セクション５．１．３）に記載される抗原）に関連した疾患に対して免疫付与する方法において使用されてもよい。組成物は、例えば本明細書に記載される抗原などの抗原が関連している疾患を予防するための方法において使用されてもよい。

【0186】

一つの実施形態では、医薬組成物（例えば、免疫原性組成物）は、本明細書（例えば、セクション５．１または６）に記載の組み換えＮＤＶを、薬学的に許容可能な担体と混合させた状態で含む。組成物は、１０^４～１０^１２ＰＦＵの本明細書に記載の組み換えＮＤＶを含んでもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、以下のセクション５．５．２に記載されるものなどの追加の予剤または治療剤を一つ以上さらに含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書（例えば、セクション５．１または６）に記載の組み換えＮＤＶの有効量、および任意選択的に一つ以上の追加の予防剤または治療剤を、薬学的に許容可能な担体中に含む。特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載の二つの組み換えＮＤＶを含み、当該本明細書に記載の二つの組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なる。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶ（例えば、セクション５．１または６）は、医薬組成物に含まれる唯一の有効成分である。特定の実施形態では、二つ以上の組み換えＮＤＶが、医薬組成物中に含有される。特定の実施形態では、医薬組成物は、免疫原性組成物である。

【0187】

特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物中に含有される組み換えＮＤＶは、生きたウイルスである。特定の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物中に含有される組み換えＮＤＶは、弱毒化された生きたウイルスである。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物中に含有される組み換えＮＤＶは、不活化されている。当業者に公知の技術を使用して、組み換えＮＤＶを不活化してもよい。

【0188】

本明細書に提供される医薬組成物は、組成物が対象に投与されることを可能にする任意の形態であってもよい。特定の実施形態では、医薬組成物は、獣医学的投与、ヒトへの投与、またはその両方に適している。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容可能な」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制当局による承認を意味するか、または米国薬局方、もしくは動物、より具体的にはヒトでの使用に関し、一般的に認識されている他の薬局方に列挙されていることを意味する。「担体」という用語 は、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指し、それらとともに医薬組成物は投与される。生理食塩水ならびにデキストロース水溶液およびグリセロール水溶液も、特に注射溶液に関し、液性担体として採用され得る。適切な賦形剤としては、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、滑石、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。適切な医薬担体の例は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ” ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎに記載されている。製剤は、投与様式に適合していなくてはならない。

【0189】

特定の実施形態では、医薬組成物は、対象への意図される投与経路に適するように製剤化される。例えば、医薬組成物は、非経口、静脈内、動脈内、胸膜内、吸入、鼻腔内、腹腔内、経口、皮内、結腸直腸、腹腔内、頭蓋内、および腫瘍内への投与に適するように製剤化され得る。一つの実施形態では、医薬組成物は、静脈内、動脈内、経口、腹腔内、鼻腔内、気管内、胸膜内、頭蓋内、皮下、筋肉内、局所、肺、または腫瘍内への投与のために製剤化され得る。特定の実施形態では、医薬組成物は、鼻腔内投与のために製剤化され得る。

【0190】

特定の実施形態では、本明細書（例えば、セクション５．１または６を参照）に記載の組み換えＮＤＶを含む医薬組成物は、対象（例えば、ヒト対象）への鼻腔内投与に適するように製剤化される。

【0191】

５．５ 組み換えＮＤＶの使用
別の態様では、対象（例えば、ヒト対象）において免疫応答を誘導するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。一つの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）において免疫応答を誘導する方法が本明細書において提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの有効量を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。組み換えＮＤＶについては、例えば、セクション５．１および６を参照のこと。特定の実施形態では、誘導される免疫応答は、抗原（例えば、感染性疾患の抗原またはがんもしくは腫瘍の抗原）に対する免疫応答である。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0192】

一部の実施形態では、対象において抗体を誘導する方法が本明細書において提供される。一部の実施形態では、対象に抗体を誘導する方法が本明細書において提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたは本明細書に記載の組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、非ヒト対象（例えば、マウス、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、サル、チンパンジーなど）である。他の実施形態では、対象は、ヒトである。産生される抗体は、単離され、クローニングされ、ならびに例えば当該抗体の性能の一つ以上を改善するために組み換え操作されてもよい。一部の実施形態では、誘導される抗体は、組み換えＮＤＶによって発現される抗原に結合する。

【0193】

別の態様では、抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）に関連する疾患に対して免疫付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、疾患に関連する抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）をコードするヌクレオチド配列を含む。一つの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）において、抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）に関連する疾患に対し、免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの有効量を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、疾患に関連する抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）をコードする導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含む。組み換えＮＤＶについては、例えば、セクション５．１および６を参照のこと。特定の実施形態では、抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0194】

特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疾患（例えば、ＣＯＶＩＤ－１９）に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片、例えば、受容体結合ドメインを含む断片）をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0195】

特定の実施形態では、エボラウイルス疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、エボラウイルス疾患抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、エボラウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0196】

特定の実施形態では、ニパウイルス疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ニパウイルス疾患抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ニパウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0197】

特定の実施形態では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0198】

特定の実施形態では、ラッサウイルス疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ラッサウイルス疾患抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ラッサウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。

【0199】

別の態様では、対象（例えば、ヒト対象）に、感染性疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与すること、および対象に、第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、この場合において第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。一つの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に、連続して感染性疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与すること、および対象に、第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、この場合において第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与されてもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導した場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、別の組み換えＮＤＶの複製を阻害する抗体を誘導した場合、組み換えＮＤＶは、別の組み換えＮＤＶと免疫学的に異なるとみなされる。

【0200】

一つの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に、連続して感染性疾患に対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶを投与すること、対象に、第二の組み換えＮＤＶを投与すること、および対象に、第三の組み換えＮＤＶを投与することを含み、この場合において当該第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶおよび第三の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。特定の実施形態では、第一、第二および第三の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第三の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１０のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。

【0201】

特定の実施形態では、互いに免疫学的に異なる本明細書に記載の二つ以上の組み換えＮＤＶを使用して、対象（例えば、ヒト）に、感染性疾患に対する免疫を付与してもよい。別の特定の実施形態では、互いに免疫学的に異なる本明細書に記載の二つ以上の組み換えＮＤＶを使用して、対象（例えば、ヒト）に、がんに対する免疫を付与してもよい。特定の実施形態では、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＮＤＶ ＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質もしくはそのバリアントおよび／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質もしくはそのバリアントと置き換えられている組み換えＮＤＶを二つ以上使用することで、対象（例えば、ヒト）に抗原を複数投与して、抗原に対する安定的な免疫応答を誘導することが可能となる。

【0202】

別の態様では、対象（例えば、ヒト対象）に、感染性疾患の抗原に対する免疫応答を誘導する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与すること、および対象に、第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、この場合において第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与されてもよい。一部の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶにより発現される抗原、および第二の組み換えＮＤＶにより発現される抗原は、異なる病原体に由来する、または異なる病原体から誘導される。他の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶにより発現される抗原、および第二の組み換えＮＤＶにより発現される抗原は、同じ病原体に由来する、または同じ病原体から誘導される。第一および第二の組み換えＮＤＶにより発現される抗原は、同一であってもよく、または第二の組み換えＮＤＶにより発現される抗原は、そのバリアントであってもよい。例えば、第一の組み換えＮＤＶにより発現される抗原は、ある株に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片（例えば、受容体結合ドメインを含む断片）であってもよく、第二の組み換えＮＤＶにより発現される抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のバリアント株に由来するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片（例えば、受容体結合ドメインを含む断片）であってもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。

【0203】

別の態様では、対象（例えば、ヒト対象）に、がんに対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与すること、および対象に、第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、この場合において第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。一つの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）に、連続してがんに対する免疫を付与する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与すること、および対象に、第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、この場合において第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与されてもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。

【0204】

別の態様では、対象（例えば、ヒト対象）に、がんまたは腫瘍の抗原に対する免疫応答を誘導する方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象に、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与すること、および対象に、第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、この場合において第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原、および第二の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原は、異なっている。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原、および第二の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原は、同じタイプのがんもしくは腫瘍に由来する、またはそれらから誘導される。第一および第二の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原は、同一であってもよく、または第二の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原は、そのバリアントであってもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。

【0205】

別の態様では、感染性疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、感染性疾患に関連する抗原をコードする導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含む。一つの実施形態では、感染性疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの有効量を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、感染性疾患に関連する抗原をコードする導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含む。組み換えＮＤＶについては、例えば、セクション５．１および６を参照のこと。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与されてもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。

【0206】

特定の実施形態では、ＲＳＶ疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ＲＳＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＲＳＶ抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じＲＳＶ抗原または異なるＲＳＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0207】

特定の実施形態では、ヒトメタニューモウイルス疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ヒトメタニューモウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ヒトメタニューモウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じｈＭＰＶ抗原または異なるｈＭＰＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0208】

特定の実施形態では、ＣＯＶＩＤ－１９を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片、例えば、受容体結合ドメインを含む断片）をコードするヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原または異なるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0209】

特定の実施形態では、エボラウイルス疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、エボラウイルス疾患抗原を含む。特定の実施形態では、エボラウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じエボラウイルス抗原または異なるエボラ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0210】

特定の実施形態では、ニパウイルス疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ニパウイルス疾患抗原を含む。特定の実施形態では、ニパウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じニパ抗原または異なるニパ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0211】

特定の実施形態では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患抗原を含む。特定の実施形態では、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原または異なるＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0212】

特定の実施形態では、ラッサウイルス疾患を予防するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、ラッサウイルス疾患抗原を含む。特定の実施形態では、ラッサウイルス抗原は、組み換えＮＤＶに感染した細胞によって発現される。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。第二の組み換えＮＤＶは、同じラッサウイルス抗原または異なるラッサウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む導入遺伝子を含んでもよい。

【0213】

特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。

【0214】

別の態様では、がんを治療するための方法が本明細書に提供され、当該方法は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を対象（例えば、ヒト対象）に投与することを含む。組み換えＮＤＶについては、例えば、セクション５．１および６を参照のこと。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与されてもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。

【0215】

別の態様では、がんを治療するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、がんまたは腫瘍の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。一つの実施形態では、がんを治療するための方法が本明細書において提供され、当該方法は、対象（例えば、ヒト対象）に、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの有効量を投与することを含み、当該組み換えＮＤＶは、導入遺伝子を含むパッケージ化ゲノムを含み、当該導入遺伝子は、がんに関連するがんまたは腫瘍の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む。組み換えＮＤＶについては、例えば、セクション５．１および６を参照のこと。組み換えＮＤＶは、任意の投与経路によって対象に投与されてもよい。別の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。一部の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に筋肉内投与される。一部の実施形態では、方法は、対象に第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２週間、３週間、４週間、６週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、または１年の間隔で投与されてもよい。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、２～４週間、４～６週間、１～３か月、３～６か月、３～９か月、６か月～１年、または１～２年の間隔で投与されてもよい。第一の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原は、第二の組み換えＮＤＶにより発現されるがんまたは腫瘍の抗原と同じであっても、異なっていてもよい。第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、同じ投与経路または異なる投与経路によって投与されてもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、ＮＤＶ Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および／または互いに異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質で置き換えられているために、互いに免疫学的に異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－１５のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、ＡＰＭＶ－２１のＦタンパク質およびＨＮタンパク質を含んでもよい。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイで評価されたときに、他方の複製を実質的に阻害する抗体を誘導しない場合、第一の組み換えＮＤＶは、第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる。特定の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶと第二の組み換えＮＤＶが、例えば、Ｃｈｕｍｂｅ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ １４：２３２ ａｎｄ Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ａｖｉａｎ Ｄｉｓ．１４３：５６４－７１、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０、ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ６２：１０３１３２、またはＳｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ８：７７１、または本明細書に記載されるアッセイなどのウイルス中和アッセイにおいて、約０．５ｌｏｇ未満、約１ｌｏｇ未満、約１．５ｌｏｇ未満、または約２ｌｏｇ未満まで、互いの複製を阻害する抗体を誘導する場合、第一の組み換えＮＤＶは第二の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なるとみなされる。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、方法は、対象に第三の組み換えＮＤＶまたはその組成物、および第四の組み換えＮＤＶまたはその組成物を投与することをさらに含み、当該第三の組み換えＮＤＶおよび第四の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっており、ならびに第三および第四の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶ、第二の組み換えＮＤＶ、または第一と第二の組み換えＮＤＶの両方とは免疫学的に異なっている。

【0216】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶは、一つ以上の他の治療と組み合わせて対象に投与されてもよい。組み換えＮＤＶ、および一つ以上の他の治療は、同じ、または異なる投与経路で対象に投与されてもよい。特定の特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、対象に鼻腔内投与される。例えば、組み換えＮＤＶに関する情報については以下のセクション５．１および６を参照のこと。他の治療に関する情報についてはセクション５．５．２を参照のこと。組成物および投与経路に関する情報については以下のセクション５．４を参照のこと。

【0217】

組み換えＮＤＶおよび一つ以上の追加の治療は、同時または連続的に対象に投与されてもよい。特定の実施形態では、組み換えＮＤＶおよび一つ以上の追加の治療は、同じ組成物中で投与される。他の実施形態では、組み換えＮＤＶおよび一つ以上の追加の治療は、異なる組成物中で投与される。組み換えＮＤＶ、および一つ以上の他の治療は、同じ、または異なる投与経路で対象に投与されてもよい。当業者に公知の任意の経路、または本明細書に記載の任意の経路を使用して、組み換えＮＤＶおよび一つ以上の他の治療を投与してもよい。特定の実施形態では、組み換えＮＤＶは、鼻腔内投与され、一つ以上の他の治療は静脈内投与される。

【0218】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、過去にワクチン接種された、またはＮＤＶ組成物（例えば、ワクチン）を投与された対象に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、過去にワクチン接種された、またはＡＰＭＶをベースにした組成物（例えば、ワクチン）を投与された対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、過去にワクチン接種された、またはＮＤＶ組成物（例えば、ワクチン）およびＡＰＭＶをベースにした組成物（例えば、ワクチン）を投与された対象に投与される。特定の実施形態では、ＡＰＭＶをベースにした組成物は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶである。

【0219】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、感染性疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される（かかる患者は、感染症を発症するリスクがあり得る）。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、感染性疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、感染性疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、または感染性疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、および感染性疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。

【0220】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ＲＳＶ疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＲＳＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、ＲＳＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはＲＳＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびＲＳＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。ＲＳＶ疾患の症状には、鼻のうっ血または鼻水、咳、発熱、咽頭通、頭痛、喘鳴、急速もしくは浅い呼吸または呼吸困難、酸素欠乏による皮膚の青み、食欲の欠如、嗜眠および過敏性が含まれる。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＲＳＶ感染によって引き起こされる中耳炎が予防される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＲＳＶ感染によって引き起こされる細気管支炎が予防される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＲＳＶ感染によって引き起こされる肺炎が予防される。

【0221】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、エボラウイルス疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、エボラウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、エボラウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはエボラウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびエボラウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。エボラウイルス疾患の症状には、発熱、うずきおよび疼痛（例えば、重度の頭痛、筋肉と関節の痛み、および腹部（胃）の疼痛）、衰弱および疲労、消化管症状（例えば、下痢および嘔吐）、腹部（胃）の疼痛、ならびに原因不明の多量出血、出血またはあざが含まれる。

【0222】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ｈＭＰＶ疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される（かかる患者は、ｈＭＰＶ感染症を発症するリスクがある）。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ｈＭＰＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、ｈＭＰＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはｈＭＰＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびｈＭＰＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。ｈＭＰＶ疾患の症状には、鼻閉、鼻水、発熱、咳、喉の痛み、喘鳴、呼吸困難、食欲不振、嗜眠、および過敏性が含まれる。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ｈＭＰＶ感染によって引き起こされる細気管支炎が予防される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ｈＭＰＶ感染によって引き起こされる肺炎が予防される。

【0223】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ラッサウイルス疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ラッサウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、ラッサウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはラッサウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびラッサウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。ラッサウイルス疾患の症状には、微熱、全身の倦調および衰弱、頭痛、出血、呼吸困難、反復嘔吐、顔面腫脹、胸部、背部、および腹部の疼痛、ショック、難聴、振戦、および脳炎が含まれる。

【0224】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。ＭＥＲＳ－ＣｏＶ疾患の症状には、発熱、咳、および息切れが含まれる。

【0225】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ニパウイルス疾患の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発現を発生するために患者に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ニパウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、ニパウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはニパウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびニパウイルス疾患の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。ニパウウイルス疾患の症状には、見当識障害、眠気、精神錯乱、発作、昏睡、および脳腫脹（脳炎）が含まれる。

【0226】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ＣＯＶＩＤ－１９の一つ、二つ、またはそれ以上の症状の発生を予防するために患者に投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＣＯＶＩＤ－１９の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、ＣＯＶＩＤ－１９の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させ、またはＣＯＶＩＤ－１９の一つ、二つまたはそれ以上の症状の発生または発症を予防し、およびＣＯＶＩＤ－１９の一つ、二つまたはそれ以上の症状の重症度を低下させる。ＣＯＶＩＤ－１９の症状には、鼻閉または鼻水、咳、発熱、喉の痛み、頭痛、喘鳴、急速もしくは浅い呼吸または呼吸困難、酸素欠乏による皮膚の青み、悪寒、筋肉の痛み、味覚喪失および／または臭覚喪失、吐き気、嘔吐、ならびに下痢が含まれる。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって引き起こされる肺炎が予防される。

【0227】

特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、感染症の拡大が予防される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、入院が予防される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、感染の再発生が予防される。

【0228】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、感染性疾患に罹患する対象に投与される。他の実施形態では、本明細書に記載のＮＤＶ（例えば、組み換えＮＤＶ）もしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、感染性疾患に罹患し易い、または感受性がある対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、感染性疾患と診断された対象に投与される。一部の実施形態では、ＮＤＶ（例えば、組み換えＮＤＶ）もしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、病原体に対する抗体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原、ＲＳＶ抗原、ヒトメタニューモウイルス抗原、ニパウイルス抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、ラッサウイルス抗原、またはエボラウイルス抗原に対する抗体）が血清反応陰性である対象に投与される。一部の実施形態では、ＮＤＶ（例えば、組み換えＮＤＶ）もしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、病原体に対する抗体（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原、ＲＳＶ抗原、ヒトメタニューモウイルス抗原、ニパウイルス抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、ラッサウイルス抗原、またはエボラウイルス抗原に対する抗体）が血清反応陽性である対象に投与される。特定の実施形態では、対象は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を投与する前に、抗体について評価される。他の実施形態では、対象は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を投与する前に、抗体について評価されない。

【0229】

特定の実施形態では、本明細書に記載されるがんの治療方法によって、例えば、がんもしくはその症状の発生または進行の低下、減少、減衰、縮小、安定化、軽減、抑制、阻害または停止など、対象に対して有益な効果を生じさせ得る。特定の実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法によって、以下の効果のうちの少なくとも一つ、二つまたはそれ以上が得られる：（ｉ）がんおよび／もしくはがんに関連する症状の減少または改善、（ｉｉ）がんに関連する症状の持続期間の減少、（ｉｉｉ）がんに関連する症状の再発の防止、（ｉｖ）がんおよび／またはがんに関連した症状の軽減、（ｖ）対象の入院頻度の短縮、（ｖｉ）入院期間の短縮、（ｖｉｉ）対象の生存率の増加、（ｖｉｉｉ）がんおよび／またはがんに関連する症状の進行の阻害、（ｉｘ）別の治療法の治療効果の向上または改善、（ｘ）がん細胞集団の減少または消失、（ｘｉ）腫瘍または新生物の増殖低下、（ｘｉｉ）腫瘍サイズの減少、（ｘｉｉｉ）腫瘍形成の減少、（ｘｉｖ）原発がん、局所がんおよび／または転移がんの根絶、除去または制御、（ｘｖ）転移の数または大きさの減少、（ｘｖｉ）死亡率の低下、（ｘｖｉｉ）患者のがん消失生存率の上昇、（ｘｖｉｉｉ）無再発生存期間の上昇、（ｘｉｘ）寛解状態の患者の数の増加、（ｘｘ）入院率の減少、（ｘｘｉ）例えばＭＲＩ、Ｘ線、ＣＴスキャン、およびＰＥＴスキャンなどの当業者が利用可能な標準的な方法により測定されたときに、治療投与後、腫瘍のサイズが維持され、および大きくならない、または５％未満もしくは１０％未満まで腫瘍のサイズが大きくなる、（ｘｘｉｉ）がんおよび／またはがんに関連する症状の発生または発症の防止、（ｘｘｉｉｉ）患者の寛解期間の増加、（ｘｘｉｖ）がんに関連する症状の数の減少、（ｘｘｖ）がん患者の無症状生存期間の上昇、（ｘｘｖｉ）限定的な転移または転移の減少、（ｘｘｖｉｉ）全生存、（ｘｘｖｉｉｉ）無進行生存期間（例えば、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１により評価される）、（ｘｘｉｘ）全奏効率、ならびに／または（ｘｘｘ）奏功期間の上昇。一部の実施形態では、対象が受ける治療／療法は、がんを治癒しないが、疾患の進行または悪化を防止する。特定の実施形態では、本明細書に記載されるがんの治療方法は、がんの発生／発症を予防しないが、がんの症状の発生を予防し得る。当業者に公知の任意の方法を利用して、対象が受ける治療／療法を評価してもよい。特定の実施形態では、治療／療法の有効性は、Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ Ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）が公開した規則に従って評価される。特定の実施形態では、治療／療法の有効性は、２０００年２月に公開されたＲＥＣＩＳＴの規則（ＲＥＣＩＳＴ １とも呼称される）（例えば、Ｔｈｅｒａｓｓｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９２（３）：２０５－２１６を参照のこと。当該文献は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる）に従い評価される。特定の実施形態では、治療／療法の有効性は、２００９年１月に公開されたＲＥＣＩＳＴの規則（ＲＥＣＩＳＴ １．１とも呼称される）（例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，４５：２２８－２４７を参照のこと。当該文献は、その全体で参照により本明細書に組み込まれる）に従い評価される。特定の実施形態では、治療／療法の有効性は、評価時に当業者によって利用されているＲＥＣＩＳＴ規則に従って評価される。特定の実施形態では、有効性は、免疫関連ＲＥＣＩＳＴ（ｉｒＲＥＣＩＳＴ）の公開された規則（例えば、Ｂｏｈｎｓａｃｋ ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＥＳＭＯ Ａｂｓｔｒａｃｔ ４９５８を参照のこと。当該文献は参照によりその全体で本明細書に組み込まれる）に従って評価される。

【0230】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、以下の細胞型のうちの一つ、二つ、またはすべての腫瘍内への浸潤が増加する：（ｉ）Ｔ細胞、（ｉｉ）ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、および（ｉｉｉ）樹状細胞。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、腫瘍内へのリンパ球浸潤が増加する。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、腫瘍内へのＴ細胞浸潤（ＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤）が増加する。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または併用療法を対象に投与することによって、腫瘍におけるサイトカイン産生が増加する（例えば、ＩＮＦγ、ＩＬ－２および／またはＴＮＦの産生が増加する）。

【0231】

別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を投与することによって、抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）に対する抗体が誘導される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を投与することによって、抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）に対する粘膜抗体および全身抗体（例えば、中和抗体）の両方が誘導される。別の特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法を対象に投与することによって、抗原（例えば、感染性疾患の抗原、またはがんもしくは腫瘍の抗原）に対する中和抗体が誘導される。

【0232】

一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、がんに罹患する対象に投与される。他の実施形態では、本明細書に記載のＮＤＶ（例えば、組み換えＮＤＶ）もしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、がんに罹患し易い、または感受性がある対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、がんと診断された対象に投与される。

【0233】

特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、ヒトに投与される。

【0234】

５．５．１ 用量および頻度
疾患の予防、病原体に対する免疫付与、またはがんの治療に有効な組み換えＮＤＶまたはその組成物の量は、投与経路、対象の全般的な健康状態などに依存する。投与を目的とした組み換えＮＤＶの適切な用量範囲は、一般的に約１０^４～約１０^１２であり、必要に応じて間隔を空けて、一回、二回、三回、四回、またはそれ以上の回数で対象に投与され得る。特定の実施形態では、ＮＤＶの臨床試験で現在使用されている用量と類似した用量が、対象に投与される。

【0235】

特定の実施形態では、組み換えＮＤＶまたはその組成物は、単回投与として対象に投与され、その後、１～６週間後、１～５週間後、１～４週間後、１～３週間後、１～２週間後、６～１２週間後、３～６か月後、６～９か月後、６～１２か月後、または６～９か月後に、第二の用量が投与される。これらの実施形態によると、ブースター接種は、第二の接種後、３～６ヶ月または６～１２ヶ月の間隔で対象に投与されてもよい。

【0236】

特定の実施形態では、同じ組み換えＮＤＶまたはその組成物の投与が反復されてもよく、当該投与は、少なくとも１日、２日、３日、５日、６日、７日、１０日、１４日、１５日、２１日、２８日、３０日、４５日、２ヶ月、７５日、３ヶ月、または少なくとも６ヶ月、離されてもよい。他の実施形態では、同じ組み換えＮＤＶまたはその組成物の投与が反復されてもよく、当該投与は、１～１４日、１～７日、７～１４日、１～３０日、１５～３０日、１５～４５日、１５～７５日、１５～９０日、１～３ヶ月、３～６ヶ月、３～１２ヶ月、または６～１２ヶ月、離されてもよい。一部の実施形態では、第一の組み換えＮＤＶまたはその組成物が対象に投与され、続いて第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物が投与される。一部の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに異なっている。例えば、第一の組み換えＮＤＶは、第一のタイプの非ＮＤＶ ＡＰＭＶ（例えば、ＡＰＭＶ－１２）のＦタンパク質およびＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでもよく、第二の組み換えＮＤＶは、第二のタイプの非ＮＤＶ ＡＰＭＶ（例えば、ＡＰＭＶ－１０）のＦタンパク質およびＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含んでもよい。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶは、互いに免疫学的に異なっている。特定の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、少なくとも１日、２日、３日、５日、６日、７日、１０日、１４日、１５日、２１日、２８日、３０日、４５日、２ヶ月、７５日、３ヶ月、または少なくとも６ヶ月、離されてもよい。他の実施形態では、第一および第二の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、１～１４日、１～７日、７～１４日、１～３０日、１５～３０日、１５～４５日、１５～７５日、１５～９０日、１～３ヶ月、３～６ヶ月、３～１２ヶ月、または６～１２ヶ月、離されてもよい。

【0237】

特定の実施形態では、組み換えＮＤＶまたはその組成物は、例えば以下のセクション５．５．２に記載される治療法などの一つ以上の追加の治療法と組み合わされて対象に投与される。他の一つ以上の追加の治療法の用量は、例えば、治療法、投与経路、対象の全般的な健康状態などをはじめとする様々な因子に依存し、医師の判断に従い決定されなければならない。特定の実施形態では、他の治療法の投与量は、単剤としての使用する治療法に推奨される治療法の投与の投与量および／または頻度であり、本明細書に開示される方法に従い使用される。承認された治療法の推奨される投与量は、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅに見出すことができる。

【0238】

特定の実施形態では、組み換えＮＤＶまたはその組成物は、一つ以上の追加の治療法の投与と同時に対象に投与される。特定の実施形態では、組み換えＮＤＶおよび／またはその組成物、ならびに一つ以上の追加の治療法は、互いに１分、２分、５分、１０分、１５分、２０分、３０分、４５分、６０分、１．５時間、２時間、３時間、４時間、５時間、または６時間以内に対象に投与される。特定の実施形態では、組み換えＮＤＶおよび／またはその組成物、ならびに一つ以上の追加の治療法は、互いに１２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、または１２週間以内に対象に投与される。特定の実施形態では、組み換えＮＤＶおよび／またはその組成物、ならびに一つ以上の追加の治療法は、互いに３～６ヶ月、６～９ヶ月、６～１２ヶ月、または３ヶ月、４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、もしくは１２ヶ月以内に対象に投与される。

【0239】

特定の実施形態では、第一の医薬組成物は、プライミング用量として対象に投与され、特定の期間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、または１～６ヶ月）の後、第二の医薬組成物のブースター用量が投与される。一部の実施形態では、第二の医薬組成物は、第一の医薬組成物と同じ組み換えＮＤＶを含む。他の実施形態では、第二の医薬組成物は、第一の医薬組成物の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる組み換えＮＤＶを含む。特定の実施形態では、第二の医薬組成物は、Ｆタンパク質および／またはＨＮタンパク質が、異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質もしくはそのバリアント、および／または異なる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質もしくはそのバリアントに由来することを除いて、第一の医薬組成物と同じ組み換えＮＤＶを含む。

【0240】

５．５．２ 追加の治療法
本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物と組み合わせて使用され得る追加の治療法としては限定されないが、アセトアミノフェン、化学療法剤、チェックポイント阻害剤、免疫療法、イブプロフェン、のど飴、鎮咳剤、吸入器、抗生物質および酸素が挙げられる。特定の実施形態では、追加の治療法は、本明細書に記載の第二の組み換えＮＤＶである。

【0241】

５．６ 生物学的アッセイ
特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶ、または抗原を特徴解析するための生物学的アッセイが陶業ｈさに公知である。特定の実施形態では、当業者に公知、または本明細書に記載されるマイクロ中和アッセイを使用して、本明細書に記載される組み換えＮＤＶに結合する抗体が評価される。一部の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質またはそのバリアントに結合する抗ＮＤＶ Ｆ抗体の能力は、当業者に公知の任意の方法（例えば、免疫アッセイ）により評価されてもよい。特定の実施形態では、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質またはそのバリアントに結合する抗ＮＤＶ ＨＮ抗体の能力は、当業者に公知の任意の方法（例えば、免疫アッセイ）により評価されてもよい。一部の実施形態では、当業者に公知、または本明細書に記載されるヘマグルチニン阻害アッセイを使用してもよく、またこれを使用して、本明細書に記載される二つの組み換えＮＤＶ、またはＮＤＶと非ＮＤＶ ＡＰＭＶが免疫学的に異なるかどうかを評価してもよい。

【0242】

５．６．１ インビトロのウイルスアッセイ
ウイルスアッセイとしては、当業者に公知の方法を使用してインビトロで培養された細胞中のウイルスの複製（例えば、プラーク形成により判定される）またはウイルスタンパク質の産生（例えば、ウェスタンブロット解析により判定される）またはウイルスＲＮＡ（例えば、ＲＴ－ＰＣＲまたはノーザンブロット解析により判定される）を間接的に測定するアッセイが挙げられる。

【0243】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶの生育は、当分野に公知または本明細書に記載される任意の方法により評価することができる（例えば、細胞培養において（例えば、ニワトリ胚腎細胞の培養またはニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）の培養物））。ウイルス力価は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶの連続希釈を細胞培養物（例えば、ＣＥＦ、ＭＤＣＫ、ＥＦＫ－２細胞、Ｖｅｒｏ細胞、初代ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）、Ｈ２９２ヒト上皮細胞株またはＨｅＬａ細胞）、ニワトリ胚、または生きた動物（例えば、鳥類）に接種することにより判定されてもよい。特定の時間、ウイルスをインキュベーションした後、標準的な方法を使用してウイルスを単離する。ウイルス力価の物理的な定量は、ウイルス上清に適合されたＰＣＲ（Ｑｕｉｎｎ ＆ Ｔｒｅｖｏｒ，１９９７； Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０）、血球凝集アッセイ、組織培養感染量（ＴＣＩＤ５０）または卵感染量（ＥＩＤ５０）を使用して実施することができる。

【0244】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶのゲノム内への異種のペプチドまたはタンパク質（例えば、導入遺伝子）をコードするヌクレオチド配列の組み込みは、当分野に公知または本明細書に記載される任意の方法（例えば、細胞培養、動物モデルまたは発育卵）により評価することができる。例えば、発育卵の尿膜腔液の細胞培養に由来するウイルス粒子は、スクロースクッションを通した遠心分離により精製することができ、続いて当分野に公知の方法を使用したウェスタンブロッティングによりタンパク質発現を分析することができる。ＥＬＩＳＡなどの他の免疫アッセイを使用して、タンパク質発現を検出してもよい。

【0245】

免疫蛍光をベースにした方法を使用して、ウイルスを検出し、ウイルスの生育を評価してもよい。そのような方法は当業者に公知であり、例えば、蛍光顕微鏡およびフローサイトメトリーがある。蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）をはじめとするフローサイトメトリー法も利用可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ； Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２^ｎｄ ｅｄ．； Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ； Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照のこと）。例えば、診断薬としての使用を目的とした、核酸プライマーおよびプローブ、ポリペプチドならびに抗体の改変に適した蛍光試薬も利用可能である（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓｙ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ； Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。

【0246】

免疫系の組織学的な標準方法も記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（ｅｄ．）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ； Ｈｉａｔｔ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ； Ｌｏｕｉｓ，ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照のこと）。

【0247】

５．６．２ インターフェロンアッセイ
本明細書に記載の組み換えＮＤＶによるＩＦＮの誘導および放出は、当業者に公知の技術を使用して判定してもよい。例えば、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを用いた感染後の細胞において誘導されたＩＦＮの量は、ＩＦＮ発現を測定するための、またはＩＦＮにより発現が誘導されるタンパク質の発現を測定するための免疫アッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロッティングアッセイ）を使用して判定してもよい。あるいは誘導されるＩＦＮの量は、例えば、当業者に公知のノーザンブロットおよび定量的ＲＴ－ＰＣＲなどのアッセイにより、ＲＮＡレベルで測定されてもよい。特定の実施形態では、放出されるＩＦＮの量は、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを使用して測定されてもよい。さらに、サイトカインに刺激される、および／またはインターフェロンに刺激される遺伝子の誘導と放出は、例えばタンパク質レベルでの免疫アッセイもしくはＥＬＩＳＰＯＴ、および／またはＲＮＡレベルでの定量的ＲＴ－ＰＣＲもしくはノーザンブロットなどにより判定されてもよい。

【0248】

５．６．３ 活性化マーカーアッセイおよび免疫細胞浸潤アッセイ
免疫細胞によるＴ細胞マーカー、Ｂ細胞マーカー、活性化マーカー、共刺激分子、リガンド、または阻害性分子の発現を評価する技術は、当業者に公知である。例えば、免疫細胞によるＴ細胞マーカー、Ｂ細胞マーカー、活性化マーカー、共刺激分子、リガンド、または阻害性分子の発現は、フローサイトメトリーによって評価することができる。

【0249】

５．６．４ 毒性試験
一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、哺乳動物、好ましくはヒト、細胞株における細胞毒性について検査される。ある特定の実施形態では、細胞傷害性は、以下の非限定的な例の細胞株のうちの一つ以上において評価される：Ｕ９３７、ヒト単球細胞株；初代末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）；Ｈｕｈ７、ヒト肝芽腫細胞株；ＨＬ６０細胞、ＨＴ１０８０、ＨＥＫ ２９３Ｔおよび２９３Ｈ、ＭＬＰＣ細胞、ヒト胚腎細胞株；ヒトメラノーマ細胞株、例えば、ＳｋＭｅｌ２、ＳｋＭｅｌ－１１９およびＳｋＭｅｌ－１９７；ＴＨＰ－１、単球細胞；ＨｅＬａ細胞株；ならびに神経芽細胞腫細胞株、例えば、ＭＣ－ＩＸＣ、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＳＫ－Ｎ－ＤＺ、ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、およびＢＥ（２）－Ｃ。一部の実施形態では、ＴｏｘＬｉｔｅアッセイを使用して細胞毒性が評価される。

【0250】

当分野で公知の多くのアッセイを使用して、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を観戦させた後の細胞または細胞株の生存性を評価して、組み換えＮＤＶまたはその組成物の細胞毒性を判定することができる。例えば、細胞増殖は、ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の取り込み、（^３Ｈ）チミジンの取り込みを測定することにより分析することができ、細胞を直接計数することにより分析することができ、または例えばがん原遺伝子（例えば、ｆｏｓ、ｍｙｃ）もしくは細胞サイクルマーカー（Ｒｂ、ｃｄｃ２、サイクリンＡ、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｅなど）といった公知の遺伝子の転写、翻訳、または活性の変化を検出することにより分析することができる。そのようなタンパク質およびｍＲＮＡおよび活性のレベルは、当分野に公知の任意の方法により判定することができる。例えば、タンパク質は、市販抗体を含む抗体を使用したＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロッティング、または免疫沈降などの公知の免疫診断方法によって定量化することができる。ｍＲＮＡは、当分野で公知であり、日常的な方法を使用して定量化することができ、例えば、ノーザン解析、ＲＮａｓｅ保護、またはポリメラーゼ連鎖反応からの逆転写を使用して定量化することができる。細胞の生存性は、トリパンブルー染色、または当分野で公知の他の細胞死マーカーまたは生存性マーカーを使用して評価することができる。特定の実施形態では、細胞ＡＴＰのレベルを測定して、細胞の生存性を判定する。好ましい実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物は、健康な（すなわち、非がん性）細胞を殺傷しない。

【0251】

特定の実施形態では、細胞の生存性は、細胞内ＡＴＰのレベルを測定するＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏアッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）などの当分野の標準的なアッセイを使用して、三日間、および七日間で測定されてもよい。細胞ＡＴＰの減少は、細胞毒性の作用を示す。別の特定の実施形態では、細胞の生存性は、ニュートラルレッドの取り込みアッセイにおいて測定することができる。他の実施形態では、形態学的変化の視覚的観察には、拡張、粒度、端がほつれた細胞、フィルム状の外観、丸み、ウェル表面からの剥離、または他の変化が含まれる。

【0252】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または併用療法は、動物モデルにおいてインビボ毒性について検査することができる。例えば、ＲＳＶ感染またはｈＭＰＶ感染に対する化合物の効果を検査するための当分野で公知の動物モデルを使用して、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または併用療法のインビボ毒性を判定することもできる。例えば、ある範囲のｐｆｕの本明細書に記載の組み換えＮＤＶを動物に投与し、その後に当該動物を様々なパラメータ、例えば以下のうちの一つ、二つまたはそれ以上について経時的にモニタリングする：死亡率、体重減少または体重増加不全、および組織損傷の指標となり得る血清マーカーのレベル（例えば、全般的な組織損傷の指標としてのクレアチンホスホキナーゼのレベル、肝損傷の可能性を示すグルタミンシュウ酸トランスアミナーゼまたはピルビン酸トランスアミナーゼのレベル）。これらのインビボアッセイを適合させて、用量に加えて様々な投与様式とレジメンの毒性を検査してもよい。

【0253】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法の毒性、有効性、またはその両方は、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療有効な用量）を決定するための、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる。毒性と治療効果の間の用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比率として表すことができる。大きな治療指標を呈する治療法が好ましい。

【0254】

細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、対象での使用を目的とした、治療法の用量範囲の策定に使用することができる。そのような剤の用量は、毒性がほとんどない、または毒性がないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内であることが好ましい。用量は、採用される剤形、および利用される投与経路に応じて、当該範囲内で変化し得る。本明細書に記載される任意の治療法について、治療有効用量は、最初に細胞培養アッセイから推定されてもよい。

【0255】

５．６．５ 生物学的活性のアッセイ
本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、動物モデルを使用して、感染性疾患またはがんの阻害、組み換えＮＤＶに対する抗体応答について生物学的活性を検査してもよい。そのような動物モデルシステムとしては限定されないが、ラット、マウス、ハムスター、コットンラット、ニワトリ、ウシ、サル（例えば、アフリカミドリザル）、ブタ、イヌ、ウサギなどが挙げられる。

【0256】

特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載併用療法は、動物モデルを使用して、抗原に結合する抗体の特定の幾何平均力価を誘導する能力について検証されてもよい。別の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載併用療法は、動物モデルを使用して、マイクロ中和アッセイにおいて抗原に対し中和活性を有する抗体を誘導する能力について検証されてもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、動物モデルを使用して、抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原、エボラウイルス抗原、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、ラッサウイルス抗原、ＲＳＶ抗原、またはヒトメタニューモウイルス抗原）に結合する、およびマイクロ中和アッセイにて抗原と関連付けられるウイルスを中和する、抗体の特定の幾何平均力価を誘導する能力について検証されてもよい。特定の実施形態では、本明細書に記載の組み換えＮＤＶもしくはその組成物、または本明細書に記載の併用療法は、動物モデルを使用して、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を用いた免疫付与後の、抗原に結合する抗体のレベルにおける、免疫付与前の当該抗体のレベルと比較した特定の増加倍率を誘導する能力について検証されてもよい。例えば、本明細書に記載の組み換えＮＤＶまたはその組成物を用いた免疫付与後の、抗原に結合する抗体のレベルは、免疫付与前の当該抗体のレベルと比較して３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、またはそれ以上増加する。

【0257】

５．６．６ 導入遺伝子の発現
本明細書に記載の組み換えＮＤＶに感染した細胞における非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）の発現を検証するためのアッセイは、当分野に公知の任意のアッセイ、例えば、ウェスタンブロット、免疫蛍光法、ＥＬＩＳＡまたは本明細書に記載の任意のアッセイを使用して実施されてもよい。

【0258】

特定の態様では、ＥＬＩＳＡを利用して、本明細書に記載の組み換えＮＤＶに感染した細胞における非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）の発現を検出する。

【0259】

一つの実施形態では、当分野に公知の抗体－抗原の相互作用に関する任意のアッセイを使用して、抗体に特異的に結合する能力を検証することにより、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのパッケージ化ゲノムによりコードされる非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）を、適切なフォールディングについて分析する。別の実施形態では、例えば、ＮＭＲ、Ｘ線結晶解析法、または例えば円偏光二色法といった二次構造予測法などの当分野に公知の任意の方法を使用して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）の構造または立体構造を決定することによって、本明細書に記載の組み換えＮＤＶのパッケージ化ゲノムによりコードされるものを、適切なフォールディングについて解析する。非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）の立体構造および抗原性を評価する追加的なアッセイには、例えば、免疫蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、ウェスタンブロットおよびＥＬＩＳＡが含まれ、これを使用してもよい。例えばコットンラットまたはマウスなどの動物モデルにおけるインビボでの免疫付与を使用して、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）の抗原性を評価してもよい。

【0260】

本明細書に記載の組み換えＮＤＶに感染した細胞における非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質、キメラＦタンパク質、キメラＨＮタンパク質、抗原（キメラ抗原を含む）の機能を検証するためのアッセイは、当分野に公知の任意のアッセイを使用して実施されてもよい。例えば、ＨＮタンパク質の受容体結合およびノイラミニダーゼ活性が評価されてもよい。ウイルスと宿主細胞の融合が評価されてもよい。

【0261】

５．７ キット
一つの態様では、本明細書に記載の組成物（例えば、医薬組成物）の成分のうちの一つ以上で満たされた容器を一つ以上備えた医薬パックまたはキットが本明細書において提供される。特定の実施形態では、容器を備えた医薬パックまたはキットが本明細書において提供され、当該容器は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶ、または当該組み換えＮＤＶを含む医薬組成物を含む。特定の実施形態では、医薬パックまたはキットは、第二の組み換えＮＤＶ、または当該第二の組み換えＮＤＶを含む医薬組成物をさらに含む。特定の実施形態では、第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは互いに免疫学的に異なっている。一部の実施形態では、セクション６に記載されるｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓアクセプタープラスミドを含む医薬パックまたはキットが本明細書において提供される。特定の実施形態では、パックまたはキットは、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチドを含む核酸配列をさらに含む。特定の実施形態では、本明細書において、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列を含む、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む、核酸配列を含む医薬パックまたはキットが提供される。医薬品または生物製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定されるフォームの通知書が、任意選択的に当該容器に関連付けられてもよく、当該通知書は、ヒト投与を目的とした製造、使用または販売に関する当局による承認を反映させている。

【0262】

一部の実施形態では、本明細書において、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列を含む医薬パックまたはキットが提供される。一部の実施形態では、医薬パックまたはキットは、（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、および（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、を含む（またはそれらからなる）核酸配列をさらに含む。一部の実施形態では、ＮＤＶは、ＬａＳｏｔａ株のＮＤＶである。

【0263】

一部の実施形態では、配列番号４４または４５を含む核酸配列を含む医薬パックまたはキットが本明細書において提供される。一部の実施形態では、ＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４または４５を含む核酸配列を含む医薬パックまたはキットが本明細書において提供される。一部の実施形態では、パックまたはキットは、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列を含む核酸配列をさらに含む。一部の実施形態では、パックまたはキットは、配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸配列をさらに含む。医薬品または生物製品の製造、使用または販売を規制する政府当局により規定されるフォームの通知書が、任意選択的に当該容器に関連付けられてもよく、当該通知書は、ヒト投与を目的とした製造、使用または販売に関する当局による承認を反映させている。

【0264】

５．８ 配列
本セクションに開示される配列は、本明細書に記載の組み換えＮＤＶを生成するために使用され得る。

【0265】

【表1】

５．９ 実施形態
例示的な実施形態を本明細書の以下に提供する。
１．ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含む核酸配列であって、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はそれぞれ、ＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質ではない、核酸配列。
２．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる、実施形態１に記載の核酸配列。
３．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＨＮタンパク質である、実施形態１に記載の核酸配列。
４．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＦタンパク質である、実施形態１または３に記載の核酸配列。
５．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である、実施形態１に記載の核酸配列。
６．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である、実施形態１または５に記載の核酸配列。
７．ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む、実施形態１～６のいずれか一つに記載の核酸配列。
８．（１）ＮＤＶヌクレオカプシド（Ｎ）タンパク質をコードする転写単位、（２）ＮＤＶホスホタンパク質（Ｐ）をコードする転写単位、（３）ＮＤＶマトリクス（Ｍ）タンパク質をコードする転写単位、（４）ＮＤＶ大型ポリメラーゼ（Ｌ）をコードする転写単位、および（５）配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列、または配列番号１～１４のいずれか一つのヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列。
９．ＮＤＶヌクレオカプシドタンパク質、ＮＤＶホスホタンパク質、ＮＤＶマトリクスタンパク質、およびＮＤＶ大型ポリメラーゼは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａ株のものである、実施形態８に記載の核酸配列。
１０．配列番号４４のヌクレオチド配列を含む、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列を含む核酸配列。
１１．配列番号４４のヌクレオチド配列、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４４のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列。
１２．配列番号４５のヌクレオチド配列を含む、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸配列。
１３．配列番号４５のヌクレオチド配列、またはＧＦＰコード配列を含まない配列番号４５のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列、を含む核酸配列。
１４．導入遺伝子をさらに含む、実施形態１～１３のいずれか一つに記載の核酸配列。
１５．抗原をコードする導入遺伝子をさらに含む、実施形態１～１３のいずれか一つに記載の核酸配列。
１６．抗原が、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原である、実施形態１４に記載の核酸配列。
１７．抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む、実施形態１４に記載の核酸配列。
１８．断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む、実施形態１７に記載の核酸配列。
１９．断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の細胞外ドメインを含む、実施形態１７に記載の核酸配列。
２０．抗原が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原、呼吸器合胞体ウイルス抗原、ヒトメタニューモウイルス抗原、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原である、実施形態１５に記載の核酸配列。
２１．抗原が、がんまたは腫瘍の抗原である、実施形態１５に記載の核酸配列。
２２．パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）であって、パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質はそれぞれ、ＮＤＶのＨＮタンパク質およびＦタンパク質ではない、組み換えＮＤＶ。
２３．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質および非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質はそれぞれ、ＮＤＦ Ｆタンパク質およびＮＤＶ ＨＮタンパク質とは免疫学的に異なる、実施形態２２に記載の組み換えＮＤＶ。
２４．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＨＮタンパク質である、実施形態２２に記載の組み換えＮＤＶ。
２５．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質は、アブラウイルス亜科およびオルトアブラウイルス属、メタアブラウイルス属またはパラアブラウイルス属に由来するＦタンパク質である、実施形態２２または２３に記載の組み換えＮＤＶ。
２６．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＨＮタンパク質である、実施形態２２に記載の組み換えＮＤＶ。
２７．非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆは、ＡＰＭＶ４／ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇｋｏｎｇ／Ｄ３／７５、ＡＰＭＶ１７／Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ／１０７／１３、ＡＰＭＶ９／ｄｕｃｋ／Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ／２２／７８、ＡＰＭＶ７／Ｄｏｖｅ／Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ／４／７５、ＡＰＭＶ２１／ｐｉｇｅｏｎ／Ｔａｉｗａｎ／ＡＨＲＩ１２８／１７、ＡＰＭＶ６／ｄｕｃｋ／ＨｏｎｇＫｏｎｇ／１８／１９９／７７、ＡＰＭＶ１１／ｃｏｍｍｏｎ＿ｓｎｉｐｅ／Ｆｒａｎｃｅ／１００２１２／１０、ＡＰＭＶ１５／ｃａｌｉｄｒｉｓ＿ｆｕｓｃｉｃｏｌｌｉｓ／Ｂｒａｚｉｌ／ＲＳ－１１７７／１２、ＡＰＭＶ８／Ｇｏｏｓｅ／Ｄｅｌａｗａｒｅ／１０５３／７６、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／Ｙｕｃａｉｐａ／５６、ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８、ＡＰＭＶ１２／Ｗｉｇｅｏｎ／Ｉｔａｌｙ／３９２０＿１／０５、ＡＰＭＶ５／ｂｕｄｇｅｒｉｇａｒ／Ｊａｐａｎ／ＴＩ／７５、またはＡＰＭＶ１０／ｐｅｎｇｕｉｎ／Ｆａｌｋｌａｎｄ Ｉｓｌａｎｄｓ／３２４／０７のＦタンパク質である、実施形態２２または２６に記載の組み換えＮＤＶ。
２８．パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）であって、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１～１４のいずれか一つに記載されるｃＤＮＡ配列から転写されるネガティブセンスＲＮＡ配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている、組み換えＮＤＶ。
２９．パッケージ化ゲノムを含む組み換えニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）であって、当該パッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、ＮＤＶ ＨＮタンパク質およびＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、配列番号１～１４のいずれか一つに記載されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列から転写されるネガティブセンスＲＮＡ配列を含むヌクレオチド配列と置き換えられている、組み換えＮＤＶ。
３０．当該ＮＤＶゲノムは、ＮＤＶ ＬａＳｏｔａのＮＰ遺伝子、Ｐ遺伝子、Ｍ遺伝子、およびＬ遺伝子を含む、実施形態２２～２９のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶ。
３１．当該パッケージ化ゲノムが導入遺伝子をさらに含む、実施形態２２～３０のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶ。
３２．当該導入遺伝子が、ウイルス、細菌、真菌、または原虫の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の組み換えＮＤＶ。
３３．当該導入遺伝子が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の組み換えＮＤＶ。
３４．当該ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質またはその断片を含む、実施形態３３に記載の組み換えＮＤＶ。
３５．当該断片が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインを含む、実施形態３４に記載の組み換えＮＤＶ。
３６．当該導入遺伝子が、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の組み換えＮＤＶ。
３７．当該導入遺伝子は、呼吸器合胞体ウイルス抗原またはヒトメタニューモウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の組み換えＮＤＶ。
３８．当該導入遺伝子は、ラッサウイルス抗原、エボラウイルス抗原、またはニパウイルス抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の組み換えＮＤＶ。
３９．当該導入遺伝子が、がんまたは腫瘍の抗原をコードするヌクレオチド配列を含む、実施形態３１に記載の組み換えＮＤＶ。
４０．実施形態２２～３１のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶである第一の組み換えＮＤＶを含む、免疫原性組成物。
４１．実施形態３２～３８のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶである第一の組み換えＮＤＶを含む、免疫原性組成物。
４２．実施形態３９に記載の組み換えＮＤＶである第一の組み換えＮＤＶを含む、免疫原性組成物。
４３．抗原に対する免疫応答を誘導する方法であって、実施形態４０、４１、または４２に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法。
４４．感染性疾患を予防する方法であって、実施形態４０または４１に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法。
４５．感染性疾患に対して対象に免疫を付与する方法であって、実施形態４０または４１に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法。
４６．がんを治療する方法であって、実施形態４０または４２に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法。
４７．当該組成物が、対象に鼻腔内投与される、実施形態４３～４６のいずれか一つに記載の方法。
４８．当該方法はさらに、パッケージ化ゲノムを含む第二の組み換えＮＤＶを投与することをさらに含み、当該第二の組み換えＮＤＶのパッケージ化ゲノムは、ニューカッスル病ウイルスゲノムのヌクレオチド配列を含み、その配列において、（１）ＮＤＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ ＨＮタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、ならびに（２）ＮＤＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列は、非ＮＤＶ ＡＰＭＶ Ｆタンパク質をコードするヌクレオチド配列と置き換えられ、この場合において非ＮＤＶ ＡＭＰＶ Ｆタンパク質コード配列の前後にＮＤＶの遺伝子間領域があり、およびこの場合において当該第二の組み換えＮＤＶは、第一の組み換えＮＤＶとは免疫学的に異なる、実施形態４３～４７のいずれか一つに記載の方法。
４９．当該対象が、ヒトである、実施形態４３～４８のいずれか一つに記載の方法。
５０．実施形態２２～３９のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶを含むキット。
５１．実施形態１～２１のいずれか一つに記載の核酸配列を含むキット。
５２．実施形態２２～３９のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶを含むインビトロまたはエクスビボの細胞。
５３．実施形態２２～３９のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶを含む細胞株またはニワトリ発育卵。
５４．実施形態２２～３９のいずれか一つに記載の組み換えＮＤＶを増殖させる方法であって、実施形態５２または５３に記載の細胞または発育卵を培養することを含む、方法。
５５．当該方法が、当該細胞または発育卵に由来する組み換えＮＤＶ単離することをさらに含む、実施形態５４に記載の方法。

【実施例】

【0266】

６．実施例
６．１ 実施例１：キメラニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）－鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）の構築物
本実施例は、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ構築物の作製について記載する。本実施例において、ＮＤＶ（鳥パラミクソウイルス１）のウイルス糖タンパク質のＦおよびＨＮのコード領域は、組み換えキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶベクターを作製するために他の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）に由来する同種の糖タンパク質（すなわち、ＦおよびＨＮ）のコード領域と置き換えられる（図１）。

【0267】

６．１．１ 材料および方法
キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶベクターは、Ａｙｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ．Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ．２０１３ Ｏｃｔ １１；（８０）：５０８３０．ｄｏｉ：１０．３７９１／５０８３０に記載されるプロトコルを使用したリバースジェネティクスにより作製される。

【0268】

６．１．１．１ アクセプタープラスミドｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓの作製
簡潔に述べると、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼプロモーターの制御下にある、ＮＤＶゲノムの全長ｃＤＮＡを含有するレスキュープラスミドのｐＮＤＶ－ＬａＳｏｔａのＦコード配列およびＨＮコード配列を含有する３．７Ｋｂの領域を除去し、二つの新しい固有制限酵素部位（ＰｍｅｌおよびＮｒｕｌ）を含有する短い配列と置換して、アクセプタープラスミドのｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓを作製する（図２Ａ～２Ｂ）。次いで、他のＡＰＭＶのＦタンパク質およびＨＮタンパク質をコードする合成インサートを、アクセプタープラスミドｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓのＭ遺伝子とＬ遺伝子との間に挿入する。Ｆ配列およびＨＮ配列をアクセプタープラスミド（ｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓ）に挿入して、機能性プラスミドが得られることを示すために、ＮＤＶのＦタンパク質およびＨＮタンパク質をコードする配列を、Ｍ遺伝子とＬ遺伝子の間で、アクセプタープラスミドｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓのｃＤＮＡ中に挿入し、図２Ｃに示されるように、機能性レスキュープラスミドのｐＮＤＶ－ＬａＳｏｔａを作製した。この機能性レスキュープラスミドｐＮＤＶ－ＬａＳｏｔａは、生存可能なウイルスのレスキューに成功した（データは示さず）。

【0269】

６．１．１．２ ＡＰＭＶ Ｆ配列およびＨＮ配列のインサートの設計
ＧｅｎＢａｎｋで入手可能なすべてのＡＰＭＶ全ゲノムのＦ配列およびＨＮ配列を使用した系統樹を使用して、ｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓアクセプタープラスミドにクローニングされるＦ配列およびＨＮ配列を選択した（図３Ａおよび３Ｂ）。系統樹全体の遺伝的多様性を表すために、１４個の候補配列を系統樹から選択した。例えば、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＦＪ１７７５１４、ＭＫ１６７２１１、ＥＵ９１０９４２、ＦＪ２３１５２４、ＭＫ６７７４３３、ＥＵ６２２６３７、ＪＱ８８６１８４、ＮＣ＿０３４９６８、ＦＪ２１５８６３、ＥＵ３３８４１４、ＥＵ７８２０２５、ＫＣ３３３０５０、ＬＣ１６８７５０、およびＮＣ＿０２５３４９のＡＭＰＶ全ゲノムに由来するＦ配列とＨＮ配列を選択した。

【0270】

ＡＭＰＶ Ｆ－ＨＮ配列を合成するために、ＮＤＶの遺伝子間領域を、ＦおよびＨＮのオープンリーディングフレームの前、その間、および後に付加した。ＡＰＭＶ Ｆ配列（病原性を示す）を、多塩基切断部位についてチェックし、必要に応じて、利用可能な最も近縁の非病原性の切断部位と置き換える。ＡＰＭＶ－Ｆ－ＨＮ配列中のＳａｃＩＩ制限酵素部位はすべてサイレントな点変異によって除去され、固有のＳａｃＩＩ制限酵素部位は、追加遺伝子のクローニングに使用する。さらに任意のパラミクソウイルスゲノムの完全なヌクレオチドサイズは、六の倍数でなければならないため、ＡＰＭＶ－Ｆ－ＨＮ配列を、ルールオブシックスとの適合についてチェックし、必要に応じて第二の停止コドンをＦオープンリーディングフレームの後に付加し、この要件を満たした。

【0271】

ＡＭＰＶ Ｆ－ＨＮ配列は、Ｇｅｎｅｗｉｚ社（ｗｗｗ．ｇｅｎｅｗｉｚ．ｃｏｍ）によって合成され、例えば、配列番号 １～１４のいずれか一つであり得る。表１を参照のこと。ＡＰＭＶのＦ配列およびＨＮ配列のインサートはすべて両端に共通のＮＤＶ由来配列を有しているため、当該インサートは、同じプライマーで増幅させ、クローニングすることができる。簡潔に述べると、ＡＭＰＶ Ｆ－ＨＮ配列は、ＦおよびＨＮのオープンリーディングフレームに隣接するＮＤＶ配列の再構築のために設計されたＰＣＲプライマーを使用して、ＰＣＲによって増幅される（図４Ａ～４Ｃ）。次いで、各ＡＭＰＶ Ｆ－ＨＮ配列（またはＰＣＲ産物）を、ｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓアクセプタープラスミドに、Ｍ遺伝子とＬ遺伝子の間にクローニングして、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶプラスミドを作製する。表１の配列のそれぞれを、ｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓアクセプタープラスミドに、Ｍ遺伝子とＬ遺伝子の間にクローニングして、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶプラスミドを作製する。

【0272】

６．１．１．３ 生存性の評価
レスキューされたキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶの生存性は、例えば、プラークアッセイによって評価される。キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶを検証して、マイクロ中和アッセイなどを使用し、既存のＮＤＶ特異的液性免疫により中和されないことを確認する。

【0273】

６．１．２ 結果
本実施例は、キメラベクターの作製について記載する。ＦおよびＨＮは中和抗体応答の主な標的であり、異なるＡＰＭＶは抗原的にも異なっている。そのためキメラベクターも抗原的に異なっており、したがって既存のＮＤＶ特異的液性免疫によって中和されない。一方で、増殖性は、全てのウイルスタンパク質の複合的な機能によって決定され、そして全ての鳥パラミクソウイルスが複製戦略を共有しているため、キメラベクターは完全に生存性があり、親のＮＤＶベクターと同様に複製する。

【0274】

６．２ 実施例２：ＡＰＭＶ－４
本実施例は、ＡＰＭＶ－４が、ＮＤＶよりも強力な免疫刺激因子であることが判明したことを示すデータを提供する。

【0275】

６．２．１ 材料および方法
細胞株、抗体、および他の試薬

【0276】

マウスがん細胞株Ｂ１６－Ｆ１０（マウス皮膚メラノーマ細胞；ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ－６４７５）およびＣＴ２６．ＷＴ（マウス結腸がん腫細胞；ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ－２６３８）を、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）ならびに２％ペニシリンおよびストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ培地中で維持した。ヒトメラノーマＳＫ－ＭＥＬ－２（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＴＢ－６８（商標））および結腸がん腫ＲＫＯ－Ｅ６細胞（ＡＴＣＣカタログ番号ＣＲＬ－２５７８（商標））を、ＡＴＣＣ製イーグル最小必須培地を使用して増殖させた。マスターがん細胞バンクは購入後に作製され、初期継代細胞は、実験工程ごとに解凍された。培養が始まれば８週間以内で細胞を維持し、遺伝子型の安定性を保証し、顕微鏡検査によって日常的にモニタリングした。本発明者らのインビボ実験に含まれるがん細胞について必要なＩＭＰＡＣＴ試験は、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｓｕｒｇｅｒｙ ａｔ Ｉｃａｈｎ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｔ Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ（Ｍｏｕｎｔ Ｓｉｎａｉ Ｈｏｓｐｉｔａｌ、ニューヨーク州ニューヨーク）により実施された。低血清培地Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（商標）（Ｇｉｂｃｏ（商標））を、インビトロのウイルス感染培地用に使用した。

【0277】

ウイルス

【0278】

改変ニューカッスル病ウイルスＬａＳｏｔａ－Ｌ２８９Ａは過去に報告されている（Ｖｉｊａｙａｋｕｍａｒ Ｇ，Ｐａｌｅｓｅ Ｐ，Ｇｏｆｆ ＰＨ．Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ａ ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ａｓ ａ ｒａｄｉｏｅｎｈａｎｃｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｆｏｒ ｍｕｒｉｎｅ ｍｅｌａｎｏｍａ．ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ２０１９；４９：９６－１０５）。ＡＰＭＶ－４ Ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／Ｄ３／１９７５（１７５ＡＤＶ０６０１）単離株は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（ＵＳＤＡ、Ａｍｅｓ、アイオワ州）から取得した。ウイルスストックを９日齢のニワトリ発育卵において増殖させ、不連続スクロース密度勾配超遠心分離法によって尿膜腔液から清浄化し、ＰＢＳ中に再懸濁させて保存した。ウイルス力価は、Ｖｅｒｏ細胞での間接免疫蛍光法によって計算された。

【0279】

ＲＴ－ｑＰＣＲによる転写解析

【0280】

がん細胞をモック処理、または２５０μｌのＯｐｔｉＭＥＭ－Ｉ中、１ＰＦＵ／細胞のＭＯＩで特定のウイルスに感染させた。１時間ウイルスを吸着させ、細胞を追加の７５０μｌの補充培地でインキュベートした。総ＲＮＡを、感染後の指定時にＱｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉｋｉｔ（カタログ番号７４１０６、Ｑｉａｇｅｎ社）を使用して単離した。ｃＤＮＡ合成は、Ｍａｘｉｍａ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ ｆｏｒ ＲＴ－ｑＰＣＲ（カタログ番号Ｋ１６７１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）を使用して実施された。三つの個別の生物サンプルからのｃＤＮＡの平均ｎ倍の発現値を、１８Ｓ ｒＲＮＡに対して標準化し、２－ΔΔＣＴ法（Ｌｉｖａｋ ＫＪ，Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ ＴＤ．Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄａｔａ ｕｓｉｎｇ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎｄ ｔｈｅ ２（－Ｄｅｌｔａ Ｃ（Ｔ））Ｍｅｔｈｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２００１；２５：４０２－８）に従いモック処理サンプルに対して較正した。ヒートマップは、Ｍｏｒｐｈｅｕｓ、ｈｔｔｐｓ：／／ｓｏｆｔｗａｒｅ．ｂｒｏａｄｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．ｏｒｇ／ｍｏｒｐｈｅｕｓを使用して生成した。ヒトプライマー配列およびマウスプライマー配列を表２にまとめた。

【表2】

【0281】

統計解析

【0282】

ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９を使用してデータ解析を実施した。一元配置ＡＮＯＶＡまたは二元配置ＡＮＯＶＡを使用して、複数の群を、それぞれ一つまたは二つの独立した変数を用いて比較した。結果は、示されるように平均値±ＳＥＭまたは±ＳＤとして表される。ログランク（マンテル－コックス）検定を使用して生存曲線の比較を実施した。ｐ値＞０．０５を統計的に有意ではない（ｎｓ）とみなした。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

【0283】

６．２．２ 結果
ＡＰＭＶ－４（組み換えＡＰＭＶ－４）の感染クローンは、ＮＤＶおよび他のパラミクソウイルスの既に確立されている系を原型としたプラスミドベースのレスキュー戦略を設計して作製した（Ａｙｌｌｏｎ Ｊ，Ｇａｒｃｉａ－Ｓａｓｔｒｅ Ａ，Ｍａｒｔｉｎｅｚ－Ｓｏｂｒｉｄｏ Ｌ．Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ．Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ ２０１３）。

【0284】

ＡＰＭＶ－４または組み換えＡＰＭＶ－４（ｒＡＰＭＶ－４）が感染したがんによって誘発された炎症促進性応答を、感染から８時間後および１６時間後に評価した（図５Ｅ～５Ｈ）。ｑＰＣＲによるｍＲＮＡ発現解析は、感染から８時間後にＬＳ－Ｌ２８９Ａによって誘導された発現値と比較して、ＡＰＭＶ－４感染細胞によるＩＮＦ－β、ＳＴＡＴ－１、ＩＳＧ１５、ＯＡＳ１、およびＭＸ１遺伝子の上方制御の増加を示した。この早期的で強力なＩ型インターフェロンの特徴は、その起源とは無関係にすべてのがん細胞株により呈され、この特徴は、ｒＡＰＭＶ－４感染によって再現された。８時間または１６時間のいずれかで、ＩＳＧ－１５およびＭＸ－１の発現においてＡＰＭＶ－４ウイルスとＮＤＶとの間に有意差が見出された。ＩＬ－６はマウスがん細胞において特に上方制御されており、一方でＯＡＳ１は、ヒトがん細胞によって有意に上方制御されていた。ウイルス核タンパク質ＮのｍＲＮＡ発現レベルの解析（図５Ａ～５Ｄ）は、ウイルスの複製能力と早期的な免疫特徴との間に直接的な関連性を示さず、Ｂ１６－Ｆ１０（図５Ａ、５Ｅ）およびＳＫ－ＭＥＬ－２メラノーマがん細胞（図５Ｃ、５Ｇ）は高レベルのＬＳ－Ｌ２８９ＡウイルスのＮ ｍＲＮＡを示したが、免疫刺激はＡＰＭＶ－４およびｒＡＰＭＶ－４に応答したほうが強かった。

【0285】

６．２．３ 考察
ＡＰＭＶ－４ Ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／Ｄ３／１９７５は、最初に同定されたＡＰＭＶ－４ウイルスであり、鳥パラアブラウイルス種のプロトタイプ株とみなされている（Ｇｏｇｏｉ Ｐ，Ｇａｎａｒ Ｋ，Ｋｕｍａｒ Ｓ．Ａｖｉａｎ Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ：Ａ Ｂｒｉｅｆ Ｒｅｖｉｅｗ．Ｔｒａｎｓｂｏｕｎｄ Ｅｍｅｒｇ Ｄｉｓ ２０１７；６４：５３－６７； Ｓｈｏｒｔｒｉｄｇｅ ＫＦ，Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＤＪ．Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｈｉｔｈｅｒｔｏ ｕｎｒｅｐｏｒｔｅｄ，ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｄｉｓｔｉｎｃｔ，ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ．Ｒｅｓ Ｖｅｔ Ｓｃｉ １９７８；２５：１２８－３０）。この単離株は世界中の野生の水鳥から採取されることが多く、稀にアヒル、ガチョウ、およびニワトリからも採取されるが、これらに感染した動物において疾患の臨床兆候はこれまで報告されていない（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＤＪ．Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓｅｓ．Ｒｅｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈ ２０００；１９：４４３－６２； Ｗａｒｋｅ Ａ，Ｓｔａｌｌｋｎｅｃｈｔ Ｄ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＳＭ，Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ Ｎ，Ｍｕｎｄｔ Ｅ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｗｉｌｄ ｂｉｒｄ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ２，４，ａｎｄ ６ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ．Ａｖｉａｎ Ｐａｔｈｏｌ ２００８；３７：４２９－３４）。この非病原性の表現型は、鳥類および哺乳動物の実験的接種によって確認されている（Ｓａｍｕｅｌ ＡＳ，Ｓｕｂｂｉａｈ Ｍ，Ｓｈｉｖｅ Ｈ，Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＬ，Ｓａｍａｌ ＳＫ．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｍｓｔｅｒｓ ｗｉｔｈ ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ １ ｔｏ ９．Ｖｅｔ Ｒｅｓ ２０１１；４２：３８）。高用量のＡＰＭＶ－４（１０^７ ＰＦＵ）を鼻腔内投与しても、接種マウスの健康は損なわれなかった（データは示さず）。Ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／Ｄ３／１９７５株の完全ゲノム配列および分子的特徴解析は過去に報告されている（Ｎａｙａｋ Ｂ，Ｋｕｍａｒ Ｓ，Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＬ，Ｓａｍａｌ ＳＫ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｖｉａｎ ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ４ ｐｒｏｔｏｔｙｐｅ ｓｔｒａｉｎ ｄｕｃｋ／Ｈｏｎｇ Ｋｏｎｇ／Ｄ３／７５．Ｖｉｒｏｌ Ｊ ２００８；５：１２４）。ＡＰＭＶ－４のＲＢＰ ＨＮタンパク質は、ヘマグルチニンおよびノイラミニダーゼ活性を有しており、シアル酸を認識すると予測されている。非病原性の長期潜伏性ＮＤＶ株と似て、そのＦタンパク質は一塩基性切断部位（ＤＩＰＱＲ↓Ｆ）を有するが、正当なフーリン切断部位を呈していないにも関わらず、インビトロで特定の細胞株においてＡＰＭＶ－４に複数サイクルの複製能力を与えると示唆されている。本発明者らが行ったがん細胞における複製実験においては、感染培地に外来性のＴＰＣＫ－トリプシンを添加した場合の複数サイクルの複製のみが進行可能であった。しかし、ＡＰＭＶ－４は、ＬＳ－Ｌ２８９Ａウイルスよりも高い力価に達することが観察された一方で、増殖動態は類似していた（データは示さず）。上記すべてを考慮すると、内因性プロテアーゼまたは分泌性プロテアーゼのいずれかによるタンパク質分解の活性化にＡＰＭＶ４ Ｆタンパク質は明確に依存しており、これによってウイルス適応度における差異がサポートされ得る。

【0286】

さらに、ＡＰＭＶ－４は、感染したがん細胞において炎症促進性および死滅的な応答を誘発する能力を示している（図５Ａ～５Ｈを参照）。ＮＤＶと比較した場合、ＡＰＭＶ－４は、より強力な免疫刺激因子であり、ホストとなり得ることが見出された（同上）。ＮＤＶと比較した場合、ＡＰＭＶ－４は、より強力な免疫刺激因子であり、Ｉ型インターフェロン応答の早期的で、より安定的な上方制御をもたらすことも見出された。興味深いことに、この効果は、試験された様々ながん細胞で保存されており（図５Ｅ～５Ｈ）、ウイルス複製のレベルとは無関係であった（図５Ａ～５Ｄ）。

【0287】

６．３ 実施例３：キメラニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）－鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）の構築物ＮＤＶ－ＡＰＭＶ２およびＮＤＶ－ＡＰＭＶ３
鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）は、アブラウイルス亜科に属している。ＡＰＭＶには、抗原的に異なる多様な種が存在する。ＡＰＭＶは、メタアブラウイルス属、オルトアブラウイルス属、およびパラアブラウイルス属にさらに分類される。ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）は、オルトアブラウイルス属に属しており、ＡＭＰＶ血清型－１（ＡＰＭＶ－１）としても知られている（図６Ａ）。様々なウイルス病原体に対するワクチンベクターとしてのＮＤＶの可能性を活用し、ＮＤＶベースのワクチンにより導かれる既存の免疫性能に克つために、本実施例はキメラのＮＤＶ－ＡＰＭＶ２ウイルスおよびＮＤＶ－ＡＰＭＶ３ウイルスの作製を報告し、これらのウイルスが野生型ＮＤＶとは抗原的に異なることを実証するデータを提供する。本実施例において、ＮＤＶ（鳥パラミクソウイルス１）のウイルス糖タンパク質のＦおよびＨＮのコード領域は、組み換えキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶウイルスを作製するために他の鳥パラミクソウイルス（ＡＰＭＶ）に由来する同種の糖タンパク質（すなわち、ＦおよびＨＮ）のコード領域と置き換えられた（図６Ｂ）。

【0288】

６．３．１ 材料および方法
ウイルス

【0289】

キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶベクターを、実施例１に記載されるように作製した。簡潔に述べると、ＡＰＭＶ２／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／ Ｙｕｃａｉｐａ／５６のＦ配列およびＨＮ配列を、ｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓアクセプタープラスミドにクローニングし、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２ベクターを作製した。ＡＰＭＶ３／Ｔｕｒｋｅｙ／Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ／６８のＦ配列およびＨＮ配列をｐＮＤＶ－Ｆ－ＨＮｌｅｓｓアクセプタープラスミドにクローニングし、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３を作製した。系統樹に示されるように（図６Ａ）、ＡＰＭＶ２は、メタアブラウイルス属に属し、ＡＭＰＶ３は、パラアブラウイルス属に属した。ＡＰＭＶ２およびＡＰＭＶ３は、ＮＤＶ（オルトアブラウイルス）とは抗原的に異なるのみならず、互いも抗原的に異なる（図７）。

【0290】

バイオマーカーとして、および撮像目的のために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）の遺伝子をキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２のＰ遺伝子とＭ遺伝子との間に挿入して、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰ構築物を作製した。キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰのヌクレオチド配列については、配列番号４４を参照のこと。同様に、ＧＦＰ遺伝子をキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３のＰ遺伝子とＭ遺伝子の間に挿入して、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３－ＧＦＰ構築物を作製した（図７）。キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３のヌクレオチド配列については、配列番号４５を参照のこと。組み換えウイルスのレスキューは、標準的な方法を使用して実施した（例えば、Ｊ．Ａｙｌｌｏｎ，Ａ．Ｇａｒｃｉａ－Ｓａｓｔｒｅ，Ｌ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ－Ｓｏｂｒｉｄｏ，Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｃＤＮＡ．Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ，（２０１３）を参照のこと）。

【0291】

導入遺伝子の発現および抗原性

【0292】

導入遺伝子の発現を実証するために、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）細胞を、それぞれキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰウイルスおよびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３－ＧＦＰウイルスに感染させた。導入遺伝子の発現は蛍光顕微鏡を使用して、感染後１８時間でＧＦＰ発現を調べることによって検証された。キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰウイルスおよびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３－ＧＦＰウイルスが、ＮＤＶとは抗原的に異なるかを調べるために、ＡＰＭＶ ＨＮタンパク質が赤血球を凝集させることを利用して、血球凝集阻害（ＨＩ）アッセイを使用した。ＨＩアッセイは、野生型（ＷＴ）ＮＤＶウイルスに対して産生されたウサギ血清において実施された。

【0293】

６．３．２ 結果
導入遺伝子の発現は、蛍光顕微鏡下で観察されたＧＦＰ発現によって実証された。図８Ａに示されるように、ＧＦＰ発現のシグナルは、感染後１８時間で、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰウイルスおよびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３－ＧＦＰウイルスに感染したＣＥＦ細胞の両方において観察された。この結果から、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ２－ＧＦＰウイルスおよびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ３－ＧＦＰウイルスの両方が導入遺伝子を発現し得たことが示される。

【0294】

キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶウイルスとＷＴ ＮＤＶとの間の抗原性の差異を、ＨＩアッセイによって評価した。図８Ｂの結果から、ウサギ血清のＨＩ活性は、ＮＤＶ－ＧＦＰ構築物と比較して、キメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ－２－ＧＦＰ構築物およびキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶ－３－ＧＦＰ構築物の両方で有意に低下したことが示された。この結果から、両方のキメラＮＤＶ－ＡＰＭＶウイルスが野生型ＮＤＶとは抗原的に異なることが示される。

【0295】

【表3】

【0296】

本発明は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲を限定されないものとする。実際に、記載される内容に加えて本発明の様々な改変が、前述の説明および添付の図面から当業者には明白であろう。そのような改変は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。

【0297】

本明細書に引用されるすべての参考文献は、すべての目的に対し、各公表文献または特許または特許出願が具体的におよび個々にすべての目的に対しその全体で参照により本明細書に組み込まれると示される場合と同程度まで、その全体で参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3A-1】

【図3A-2】

【図3A-3】

【図3B-1】

【図3B-2】

【図3B-3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図5C】

【図5D】

【図5E-F】

【図5G-H】

【図6A】

【図6B】

【図7-1】

【図7-2】

【図8A】

【図8B】

【手続補正書】

【提出日】2024-01-31

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024514975000001.app

【国際調査報告】