特表 2024-515086 敗血症の早期検出のためのＧＤＦ１５マーカーパネル

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-04

(54)【発明の名称】敗血症の早期検出のためのＧＤＦ１５マーカーパネル

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/68 20060101AFI20240328BHJP

【ＦＩ】

G01N33/68

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023563986

(86)(22)【出願日】2022-04-29

(85)【翻訳文提出日】2023-10-18

(86)【国際出願番号】 EP2022061543

(87)【国際公開番号】W WO2022229415

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】21171497.7

(32)【優先日】2021-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100157923

【弁理士】

【氏名又は名称】鶴喰 寿孝

(72)【発明者】

【氏名】グリューネバルト，フェリックス

(72)【発明者】

【氏名】イェーガー，ヴィクトル・ヨハン・ラウル

(72)【発明者】

【氏名】クラマー，マルティン

(72)【発明者】

【氏名】シュッツ，フィリップ

(72)【発明者】

【氏名】フォン ホルタイ，マリア

(72)【発明者】

【氏名】ヴェーバー，シュテフェン

(72)【発明者】

【氏名】ベクマイヤー，ハイケ

(72)【発明者】

【氏名】ビーンヒューズ－テレン，ウルスラ－ヘンリケ

【テーマコード（参考）】

2G045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA25

2G045CA25

2G045CA26

2G045DA36

(57)【要約】

本発明は、感染の疑いがある対象を評定するための方法であって、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程であって、前記第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程であって、前記第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程、バイオマーカーの量を前記バイオマーカーの基準と比較する工程、及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに比較及び／又は計算に基づいて前記対象を評定する工程を含む、感染の疑いがある対象を評定するための方法に関する。本発明はまた、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカー、又は前記第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤及び前記第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤の、感染の疑いがある対象を評定するための、使用に関する。更に、本発明は、感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法、並びに感染の疑いがある対象を評定するためのデバイス及びキットに更に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

感染の疑いがある対象を評定するための方法であって、
（ａ）前記対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程であって、前記第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、前記対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程、
（ｂ）前記対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程であって、前記第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、例えば心臓トロポニンＴ又はＩ、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、前記対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程、
（ｃ）前記バイオマーカーの量を、前記バイオマーカーの基準と比較する工程、及び／又は前記バイオマーカーの前記量に基づいて感染の疑いがある前記対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに
（ｄ）工程（ｃ）で行われた前記比較及び／又は前記計算に基づいて前記対象を評定する工程
を含む、感染の疑いがある対象を評定するための方法。

【請求項2】

工程（ｂ）において、
（ｉ）ｓＦＬＴ１の前記量が前記第２のバイオマーカーとして決定される場合、前記方法が、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの前記量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む、
（ｉｉ）シスタチンＣの前記量が前記第２のバイオマーカーとして決定される場合、前記方法が、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの前記量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７の前記量が前記第２のバイオマーカーとして決定される場合、前記方法が、ビリルビン又はプロカルシトニンの前記量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む、
（ｉｖ）ビリルビンの前記量が前記第２のバイオマーカーとして決定される場合、前記方法が、クレアチニンの前記量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１の前記量が前記第２のバイオマーカーとして決定される場合、前記方法が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの前記量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む、
請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象が、救急部に来院する対象である、請求項１又は２に記載の方法。

【請求項4】

前記評定が、敗血症を発症するリスクの評定及び／又は前記対象の症状が悪化するリスクの評定である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項5】

前記基準が、敗血症を発症するリスクがあることが知られている少なくとも１名の対象に由来する各バイオマーカーの基準であり、好ましくは、前記バイオマーカーの各々についての量が、対応する前記基準と本質的に同一若しくは類似であることが、敗血症を発症するリスクがある対象を示し、前記バイオマーカーの各々についての量が前記対応する基準と異なることが、敗血症を発症するリスクがない対象を示す、及び／又は、
前記基準が、敗血症を発症するリスクがないことが知られている少なくとも１名の対象に由来する各バイオマーカーの基準であり、好ましくは、前記バイオマーカーの各々についての量が、前記対応する基準と本質的に同一若しくは類似であることが、敗血症を発症するリスクがない対象を示し、前記バイオマーカーの各々についての量が、前記対応する基準と異なることが、敗血症を発症するリスクがある対象を示す、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記対象が、感染症に罹患しているか、又は感染症に罹患している疑いがある、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記試料が、血液試料若しくはそれに由来する試料、例えば血清又は血漿であり、かつ／又は前記対象がヒトである、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）前記対象の試料中の第１のバイオマーカーの量についての値を受け取る工程であって、前記第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、前記対象の試料中の第１のバイオマーカーの量の値を受け取る工程、
（ｂ）前記対象の試料中の第２のバイオマーカーの量についての値を受け取る工程であって、前記第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、前記対象の試料中の第２のバイオマーカーの量の値を受け取る工程、
（ｃ）前記バイオマーカーの前記量についての値を、前記バイオマーカーの基準と比較する工程及び／又は前記バイオマーカーの前記量に基づいて感染の疑いがある前記対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに
（ｄ）工程（ｃ）で行われた前記比較及び／又は前記計算に基づいて前記対象を評定する工程
を含み、
任意に、工程（ｂ）において、
（ｉ）ｓＦＬＴ１の前記量についての値が前記第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、前記方法が、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの前記量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む、
（ｉｉ）シスタチンＣの前記量についての値が前記第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、前記方法が、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの前記量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７の前記量についての値が前記第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、前記方法が、ビリルビン又はプロカルシトニンの前記量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む、
（ｉｖ）ビリルビンの前記量についての値が前記第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、前記方法が、クレアチニンの前記量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１の前記量についての値を前記第２のバイオマーカーとして受け取る場合、前記方法が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの前記量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む、
感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法。

【請求項9】

感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスであって、
（ａ）前記対象の試料中の、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーの量を測定するための測定ユニットであって、前記測定ユニットが、前記第１バイオマーカー及び前記第２バイオマーカーの検出システムを備える、測定ユニットと、
（ｂ）前記測定ユニットに動作可能に連結された評価ユニットであって、好ましくは請求項１～７のいずれか一項に記載の前記第１のバイオマーカー及び前記第２のバイオマーカーのための保存された基準を有するデータベースと、好ましくは請求項１～７のいずれか一項に記載の、前記第１のバイオマーカー及び前記第２のバイオマーカーの前記量と基準との比較を実行するための及び／又は前記バイオマーカーの前記量に基づいて感染の疑いがある前記対象を評定するためのスコアの計算を実行するための、並びに前記比較に基づいて前記対象を評定するための命令を含むデータプロセッサとを備え、前記測定ユニットから前記バイオマーカーの前記量についての値を自動的に受け取ることができる、評価ユニットと
を備える、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイス。

【請求項10】

前記測定ユニットが、第３のバイオマーカーを測定し、第３のバイオマーカーの検出システムを備え、前記データベースが、第３のバイオマーカーのための保存された基準を含み、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が前記第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣである、
（ｉｉ）シスタチンＣが前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンである、
（ｉｖ）ビリルビンが前記第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンである、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が前記第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
請求項９に記載のデバイス。

【請求項11】

前記検出システムが、前記バイオマーカーの各々を特異的に検出することができる少なくとも１つの検出剤を含む、請求項９又は１０に記載のデバイス。

【請求項12】

感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスであって、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーについての保存された基準を有するデータベースを含む評価ユニットと、好ましくは請求項１～８のいずれか一項に記載の前記第１のバイオマーカー及び前記第２のバイオマーカーの前記量と基準との比較を実行するための、並びに前記比較に基づいて前記対象を評定するための命令を含むデータプロセッサとを備え、前記評価ユニットが、前記対象の試料において決定された前記バイオマーカーの前記量についての値を受け取ることができ、
前記データベースが、第３のバイオマーカーについての保存された基準を含み、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が前記第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣである、
（ｉｉ）シスタチンＣが前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンである、
（ｉｖ）ビリルビンが前記第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンである、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が前記第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
感染の疑いがある対象を評定するためのデバイス。

【請求項13】

感染の疑いがある対象を評定するための、ｉ）ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカー、又はｉｉ）前記第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤及び前記第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤の使用。

【請求項14】

第３のバイオマーカー又は前記第３のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤が追加で使用され、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が前記第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣである、
（ｉｉ）シスタチンＣが前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンである、
（ｉｖ）ビリルビンが前記第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンである、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が前記第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
請求項１３に記載の使用。

【請求項15】

感染の疑いがある対象を評定するためのキットであって、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤と、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤とを含み、
任意に、前記キットが、第３のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤を更に含み、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が前記第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣである、
（ｉｉ）シスタチンＣが前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が前記第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンである、
（ｉｖ）ビリルビンが前記第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンである、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が前記第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、
感染の疑いがある対象を評定するためのキット。

【請求項16】

前記評定が、敗血症を発症するリスクの評定である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法、デバイス、使用又はキット。

【請求項17】

４８時間以内に敗血症を発症するリスクが予測される、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法、デバイス、使用又はキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、診断の分野に関する。具体的には、これは、感染の疑いがある対象を評定するための方法であって、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程であって、当該第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程であって、当該第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程、バイオマーカーの量を当該バイオマーカーの基準と比較する工程及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに比較及び／又は計算に基づいて当該対象を評定する工程を含む、感染の疑いがある対象を評定するための方法に関する。本発明はまた、感染の疑いがある対象を評定するための、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカー、又は当該第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤及び当該第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤の使用に関する。更に、本発明は更に、感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法、並びに感染の疑いがある対象を評定するためのデバイス及びキットに関する。

【背景技術】

【0002】

感染症、特に、より重篤な徴候及びその症候を有する患者、例えば救急ユニットに来院する患者に生じる感染症は、全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）及び敗血症を含むより生命を脅かす医学的症状に発展することがある。

【0003】

敗血症３の定義によれば、敗血症は、感染に対する調節不全の宿主応答によって引き起こされる生命を脅かす臓器機能不全として定義される。急速に発症するため、敗血症患者の管理及び入院の最初の１時間以内の適切な抗生物質療法を含む正しい治療措置の開始、並びに静脈内輸液及び血管作動薬による蘇生の開始のために、早期の認識が重要である（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ ｓｅｐｓｉｓ ｃａｍｐａｉｇｎ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ２０１６）。１時間ごとの遅延は、罹患率及び死亡率を徐々に増加させる。

【0004】

敗血症の診断は、非特異的で容易に見落とされ得る臨床的徴候及び症候に基づく。したがって、患者はしばしば誤診され、疾患の重症度はしばしば過小評価される。これまでのところ、敗血症の診断のためのゴールドスタンダードは一般的に存在せず、特に救急部では存在しない。高所得国では、ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、プロカルシトニン（ＰＣＴ）及び白血球（ＷＢＣ）数は、敗血症性ショックの検出のための乳酸塩と共に、敗血症を発症するリスクがある血流感染症を有する患者の検出のために救急ユニットでしばしば使用される。低所得国では、診断は、主に臨床徴候及び症候、場合によってはＳＩＲＳ及びＳＯＦＡ基準に基づく。しかしながら、最新のガイドラインでは、乳酸塩以外に、敗血症を診断するためのバイオマーカーは列挙されていない（臨床化学、ＢＧＥ及びＳＯＦＡスコアの血液学的成分を除く）。ＰＣＴは、抗生物質療法を潜在的に緩和するためにのみ推奨されているが、証拠は中程度である。敗血症診断におけるＰＣＴの限界は、主に中程度の感度及び特異性である。

【0005】

国際公開第２００７／００９０７１号は、ｓＦｌｔ－１に基づいて検査対象における炎症応答を診断する方法を開示している。開示される方法は、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、Ｄ－ダイマー、Ｐ－セレクチン、ＩＣＡＭ－Ｉ、ＶＣＡＭ－Ｉ、Ｃｏｘ－２、又はＰＡＩ－Ｉの少なくとも１つのレベルを分析することを更に含む。

【0006】

欧州特許第２１７４１４３号Ｂ１は、感染症ではない原発疾患を有する患者の予後診断のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ方法を開示しており、この方法はプロカルシトニンのレベルを決定することを含む。

【0007】

多数のマーカーが敗血症の検出又は診断に有用であることが示唆されている。これらには、数ある中でも、ＰＣＴ、プレセプシン、ＧＤＦ－１５、ｓＦＬＴ、ＣＲＰ若しくはインターロイキンなどの炎症マーカー、又は臓器不全に特異的なマーカーが含まれる（例えば、Ｓｐａｎｕｔｈ，２０１４，Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｓＣＤ１４－ＳＴ（рｒｅｓｅｐｓｉｎ）ｗｉｔｈ еｉｇｈｔ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｄｍｉｔｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｕｔｅ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ，２０１４ ＡＡＣＣ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ．Ｂ－３３１；ｖａｎ Ｅｎｇｅｌｅｎ，２０１８，Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｃｌｉｎ ３４（１）：１３９－１５２．を参照）。

【0008】

国際公開第２０１５／０３１９９６号は、病気及び／又は処置応答に対する重大な又は生命を脅かす応答の早期決定のためのバイオマーカーを記載している。

【0009】

しかしながら、感染の徴候及び症候を示す患者の信頼できる早期の評定を可能にするバイオマーカーが依然として必要とされている。

【発明の概要】

【0010】

したがって、本発明は、これらの必要性に適合する手段及び方法を提供する。

【0011】

本発明は、感染の疑いがある対象を評定するための方法であって、
（ａ）対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程であって、当該第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程、
（ｂ）対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程であって、当該第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程、
（ｃ）バイオマーカーの量を、当該バイオマーカーの基準と比較する工程及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに
（ｄ）工程（ｃ）で行われた比較及び／又は計算に基づいて当該対象を評定する工程
を含む、感染の疑いがある当該対象を評定するための方法に関する。

【発明を実施するための形態】

【0012】

本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、それが使用される文脈に応じて、１つ以上を意味することができることを理解されたい。したがって、例えば、「１つの（ａｎ）」項目への言及は、少なくとも１つの項目を利用できることを意味することができる。

【0013】

以下で使用される場合、「有する（ｈａｖｅ）」、「備える（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、若しくは「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」という用語、又はそれらの任意の文法的変形は、包括的に使用される。したがって、これらの用語は、これらの用語によって導入される特徴に加えて、この文脈で説明されているエンティティに更なる特徴が存在しない状況と、１つ以上の追加の特徴が存在する状況との双方を指す場合がある。例として、「ＡはＢを有する」、「ＡはＢを備える」及び「ＡはＢを含む」という表現は、双方とも、Ｂ以外に、他の要素がＡに存在しない状況（すなわち、Ａが単独で且つ排他的にＢからなる状況）、及び、Ｂ以外に、要素Ｃ、要素Ｃ及びＤ、更には更なる要素など、１つ以上の更なる要素がエンティティＡに存在する状況を指す場合がある。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、言及される項目のみが存在する実施形態も包含する、すなわち、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という意味で限定的な意味を有する。

【0014】

更に、以下で使用するとき、「特に」、「より詳細には」、「典型的には」、及び「より典型的には」という用語、又は類似の用語は、代替の可能性を制限することなく、追加／代替の特徴と併せて使用される。したがって、これらの用語によって導入される特徴は、追加の／代替の特徴であり、決して特許請求の範囲を限定することを意図するものではない。本発明は、当業者が認識するように、代替の特徴を使用することによって実行されてもよい。同様に、「本発明の実施形態では」又は同様の表現によって導入される特徴は、本発明の代替の実施形態に関する制限なしに、本発明の範囲に関する制限なしに、及びそのように導入された特徴を本発明の他の追加の／代替の又は非追加の／代替の特徴と組み合わせる可能性に関する制限なしに、追加の／代替の特徴であることが意図される。

【0015】

更に、本明細書で使用される場合、「少なくとも１つ」という用語は、この用語に続いて言及される項目の１つ以上が本発明に従って使用され得ることを意味することが理解されよう。例えば、この用語が、少なくとも１つのサンプリングユニットが使用されるべきであることを示す場合、これは、１つのサンプリングユニット又は２つ以上、すなわち、２つ、３つ、４つ、５つ、又は任意の他の数のサンプリングユニットとして理解され得る。用語が言及する項目に応じて、当業者は、もしあれば用語がどの上限を指し得るかについて理解する。

【0016】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当該用語の後に列挙された任意の数に関して、技術的効果を達成することができる区間精度が存在することを意味する。したがって、本明細書で言及される場合、好ましくは、正確な数値又は当該正確な数値の周りの範囲±２０％、好ましくは±１５％、より好ましくは±１０％、又は更により好ましくは±５％を指す。

【0017】

更に、明細書及び特許請求の範囲における「第１」、「第２」、「第３」などの用語は、類似する要素を区別するために使用され、必ずしも連続的又は時系列的な順序を説明するためのものではない。

【0018】

本発明の方法は、上述の工程からなってもよく、又は工程（ｄ）で得られた評定の更なる評価のための工程、処置などの治療措置を推奨する工程などの追加の工程を含んでもよい。更に、これは、試料の前処理に関する工程などの工程（ａ）の前の工程を含み得る。しかしながら、好ましくは、上述の方法は、ヒト又は動物の身体に対して実施されるいかなる工程も必要としないｅｘ ｖｉｖｏ方法であることが想定される。更に、本方法は、自動化によって支援されてもよい。典型的には、バイオマーカーの決定はロボット装置によって支援されてもよく、比較及び評定はコンピュータなどのデータ処理機器によって支援されてもよい。

【0019】

本明細書で使用される場合、「評定する」という用語は、対象が敗血症に罹患しているかどうか、敗血症に罹患するリスクがあるかどうか、全身健康状態に関して、又は敗血症若しくは敗血症に伴う徴候に関して悪化する医学的症状を示すかどうか、又は敗血症及び／又は感染に伴う症候を示すかどうかを評定することを指す。したがって、本明細書で使用される評定は、敗血症を診断すること、敗血症を発症するリスクを予測すること、及び／又は特に敗血症及び／又は感染症に伴う徴候及び症候に関して、対象の健康状態のあらゆる悪化を予測することを含む。

【0020】

典型的には、本発明に従って言及される評定は、敗血症を発症するリスクの評定（したがって、敗血症を発症するリスクの予測）である。あるいは、評定は、対象の（健康）状態が悪化するリスクの予測である。更に、敗血症を発症するリスク又は健康状態の悪化のリスクが予測される場合、典型的には、予測は予測ウィンドウ内で行われることが理解されよう。より典型的には、当該予測ウィンドウは、好ましくは試料が得られてから、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約１６時間後、約２０時間後、約２４時間後、約４８時間後、特に少なくとも約４８時間後である。更に、好ましくは試験試料が得られた後の２４時間以内又は４８時間以内に敗血症を発症するリスクが予測され得る。

【0021】

一実施形態では、２４時間以内に敗血症を発症するリスクが予測される。

【0022】

代替的な実施形態では、４８時間以内に敗血症を発症するリスクが予測される。

【0023】

４８時間の期間を実施例のセクションで分析した。

【0024】

更に別の実施形態では、評定は、対象の（健康）状態が将来悪化するか否かのリスクの予測である。感染症に罹患している疑いがある及び／又は感染症に罹患している対象の「症状の悪化」という用語は、当業者にはよく理解されている。この用語は、典型的には、最終的に更なる投薬又は他の介入をもたらし得る症状の悪化に関する。

【0025】

好ましくは、対象の症状は、対象の疾患重症度が増加した場合、対象の抗生物質療法が強化された場合、対象がより高いレベルのケアのためにＩＣＵ若しくは別のユニットに入院した場合、対象が緊急手術を必要とする場合、対象が病院で死亡した場合、対象が入院後３０日以内に死亡した場合、対象が退院後３０日以内に再入院した場合、対象が、例えばＳＯＦＡスコアで測定されるような臓器機能不全若しくは不全を経験した場合、及び／又は対象が臓器支持を必要とする場合に悪化する。

【0026】

当業者は、対象の症状が悪化しない場合を理解する。典型的には、対象が前の段落で述べた結果を有さない場合、対象の症状は悪化しない。

【0027】

一実施形態では、対象が以下の転帰のうちの１つ以上を有する場合、対象の症状が悪化する：対象がＩＣＵに入院した場合、対象が病院で死亡した場合、対象が入院から３０日以内に死亡した場合、及び／又は対象が退院から３０日以内に再入院した場合。

【0028】

一実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、対象の抗生物質療法が強化されるリスクの予測である。

【0029】

一実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、ＩＣＵに入室する対象のリスクの予測である。したがって、対象がＩＣＵに入るリスクがあるか否かが評定される。

【0030】

別の実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、病院での対象の死亡リスクの予測である。したがって、対象が病院で死亡するリスクがあるかどうかが評定される。

【0031】

更に別の実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、入院から３０日以内の対象の死亡リスクの予測である。したがって、対象が病院への入院から３０日以内に死亡するリスクがあるかどうかが評定される。

【0032】

更に別の実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、退院後３０日以内の対象の再入院のリスクの予測である。したがって、対象が退院後３０日以内に再入院するリスクがあるかどうかを評定する。

【0033】

更に別の実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、対象が臓器機能不全又は不全を経験するリスクの予測である。臓器機能障害及び不全は、例えば、ＳＯＦＡスコアを介して評定することができる。したがって、本発明は更に、（試験試料が得られた後に）対象のＳＯＦＡスコアが増加するか、又は増加しないリスクの予測に関する。ＳＯＦＡスコアの上昇（例えば、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、又は少なくとも４つの点など）は、症状の悪化と考えられる。対照的に、ＳＯＦＡスコアが増加しない場合（対象が最も高いＳＯＦＡスコアを有さない場合）、症状は典型的には悪化しない。予測ウィンドウは、敗血症を発症するリスクの予測のための上記の予測ウィンドウであり得る。

【0034】

逐次臓器不全評価（ＳＯＦＡ）は、臓器の機能不全／不全を定量的に記述する臨床評価と実験室での測定値とを組み合わせた有効なスコアである。呼吸、凝固、肝臓、心血管系、中枢神経系及び腎臓の機能不全を個々にスコア化し、合計して０から２４の範囲のＳＯＦＡスコアに合計する。好ましくは、ＳＯＦＡスコアは、Ｖｉｎｃｅｎｔ １９９６（Ｖｉｎｃｅｎｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９６ Ｊｕｌ；２２（７）：７０７－１０．ｄｏｉ：１０．１００７／ＢＦ０１７０９７５１．ＰＭＩＤ：８８４４２３９．）に記載されるように決定される。

【0035】

更に別の実施形態では、対象の症状が悪化するリスクの予測は、対象が血管作動療法、血行力学的補助（例えば、流体療法）、（例えば、換気による、又は体外式膜型人工肺よる）酸素供給、及び／又は腎代替療法を必要とするリスクの予測など、対象が臓器支持を必要とするリスクの予測である。予測ウィンドウは、例えば試料が得られてから２４時間又は４８時間後に敗血症を発症するリスクを予測するための上記の予測ウィンドウであり得る。

【0036】

一実施形態では、「評定」という用語は敗血症の診断を指す。したがって、感染の疑いがある対象が敗血症に罹患しているか否かが診断される。好ましくは、評定は敗血症の早期検出を指す。

【0037】

当業者によって理解されるように、本発明に従って行われる評定は、好ましいが、通常、調査された対象の１００％については正しいことが好ましいが、そうでない場合もある。この用語は、典型的には、対象の統計学的に有意な部分が正確に評定され得ることを必要とする。部分が統計的に有意であるかどうかは、様々な周知の統計評価ツール、例えば、信頼区間の決定、ｐ値の決定、スチューデントｔ検定、マン－ホイットニー検定などを使用して、当業者によって更に難なく決定されることができる。詳細は、Ｄｏｗｄｙ ａｎｄ Ｗｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８３に見出すことができる。典型的に想定される信頼区間は、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％である。ｐ値は、典型的には、０．２、０．１、０．０５である。

【0038】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、より典型的にはヒトを指す。本発明の方法によって調査される対象は、感染の疑いがある対象であるものとする。本明細書で使用される場合、「感染の疑い」という用語は、対象が感染の臨床パラメータ、徴候及び／又は症候を示すことを意味する。したがって、本発明による対象は、典型的には、感染症に罹患しているか又は感染症に罹患している疑いがある対象である。典型的には、対象体は、救急部に来院する対象である。

【0039】

有利には、試料は来院時に得られている。好ましくは、試料は、救急部に来院の際に得られたものである。しかしながら、試料は、プライマリケア医への来院の際に取得されてもよい。

【0040】

本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、生理学的条件下で、本明細書で言及される第１、第２及び／又は第３のバイオマーカーを含む任意の試料を指す。より典型的には、試料は、体液試料、例えば血液試料又はそれに由来する試料、尿試料、唾液試料、リンパ液試料などである。最も典型的には、当該試料は血液試料又はそれに由来する試料である。したがって、試料は、血液、血清又は血漿試料であり得る。血液試料は、典型的には、毛細血管、静脈又は動脈の血液試料を含む。

【0041】

一実施形態では、試料は間質液試料である。

【0042】

「敗血症」という用語は当該技術分野で周知である。本明細書で使用される場合、この用語は、感染に対する調節不全の宿主応答によって引き起こされる生命を脅かす臓器機能不全を指す。敗血症の定義は、例えば、Ｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｓｅｐｓｉｓ－３ Ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｓｅｐｓｉｓ ａｎｄ Ｓｅｐｔｉｃ Ｓｈｏｃｋ．ＪＡＭＡ ２０１６；３１５：８０１－８１９）に見出すことができ、これは本開示内容全体に関して参照により組み込まれる。好ましくは、「敗血症」という用語は、Ｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｌｏｃ．ｃｉｔ．）に開示されている敗血症－３の定義による敗血症を指す。

【0043】

典型的には、試験される対象は、感染症に罹患している疑いがあるものとする。「感染／感染症」という用語は、当業者にはよく理解されている。本明細書で使用される場合、「感染／感染症」という用語は、好ましくは、疾患を引き起こす微生物による対象の身体組織の浸潤、その増殖、及び微生物に対する対象の組織の反応を指す。一実施形態では、感染は細菌感染である。したがって、対象は細菌感染症に罹患している疑いがある。

【0044】

本明細書の他の箇所に記載されるように、本発明は、リスクがある患者の早期の特定を可能にする。したがって、本明細書に記載の予測の一実施形態では、試験される対象は、試料が得られた時点で敗血症に罹患していない。特に好ましい実施形態では、試験される対象は、好ましくは、試料が得られる時点で敗血症性ショックに罹患していない。「敗血症性ショック」という用語は、Ｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｌｏｃ．ｃｉｔ．）において定義されている。したがって、以下の基準を満たす場合、対象は敗血症性ショックに罹患している。
● 敗血症、すなわち感染の疑い／感染の記録、及び感染の結果として２点以上の総ＳＯＦＡスコアの変化
● 及び十分な量の蘇生にもかかわらず、ＭＡＰ≧６５ｍｍＨｇを維持するために血管収縮薬を必要とし、かつ血清乳酸レベル＞２ｍｍｏｌ／Ｌ（１８ｍｇ／ｄＬ）を有する持続性低血圧

【0045】

更に、試験される対象は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染していてもいなくてもよいことが想定される。

【0046】

本明細書で使用される場合、「決定する」という用語は、本発明に従って言及されるバイオマーカーの定性的及び定量的決定を指し、すなわち、この用語は、当該バイオマーカーの存在若しくは非存在の決定、又は絶対量若しくは相対量の決定を包含する。

【0047】

本明細書で使用される場合、「量」という用語は、本明細書で言及される化合物の絶対量、当該化合物の相対量又は濃度、並びにそれらと相関するか又はそれらから導出され得る任意の値又はパラメータを指す。このような値又はパラメータは、直接的な測定により当該化合物から得られる、全ての具体的な物理的又は化学的特性に由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトル又はＮＭＲスペクトルにおける強度値を含む。更に、本明細書の他の箇所で明示される間接測定により得られる値又はパラメータ全て、例えば、特異的に結合したリガンドから得られる化合物又は強度シグナルに応答して生物学的読み出しシステムにより決定される応答レベルが包含される。上述の量又はパラメータと相関する値は、全ての標準的な数学的演算によっても得ることができるということを理解されたい。バイオマーカーが、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＴ）又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ又はＡＳＡＴ）などの酵素である場合、「量」という用語は、酵素の活性も包含し得る。

【0048】

本発明の方法における量の決定は、第１の分子からの放出時に当該第２の分子の存在若しくは非存在、又は量を検出することを可能にする任意の技術によって実施され得る。適切な技術は、分子の性質及びバイオマーカーの特性に依存し、本明細書の他の箇所でより詳細に論じられる。

【0049】

典型的には、本発明に従って言及されるバイオマーカーの量は、サンドイッチ、競合、又は他のアッセイ形式を使用するイムノアッセイによって決定することができる。当該アッセイは、バイオマーカーの有無又は量を示すシグナルを発生させる。更に適切な方法は、その正確な分子質量又はＮＭＲスペクトルなどのバイオマーカーに特異的な物理的又は化学的特性を測定することを含む。当該方法は、好ましくは、バイオセンサ、イムノアッセイに結合された光学デバイス、バイオチップ、質量分析計などの分析デバイス、ＮＭＲ分析器、表面プラズモン共鳴測定機器、又はクロマトグラフィーデバイスを含む。更に、方法は、マイクロプレートＥＬＩＳＡベースの方法、完全自動化又はロボットイムノアッセイ（例えば、Ｒｏｃｈｅから入手可能）を含む。本発明による適切な測定方法はまた、沈降（特に免疫沈降）、電気化学発光（電気発生化学発光）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、電気化学発光サンドイッチイムノアッセイ（ＥＣＬＩＡ）、解離増強ランタニドフルオロ免疫アッセイ（ＤＥＬＦＩＡ）、シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）、濁度測定、比濁法、ラテックス増強比濁法若しくはネフェロメトリー（ｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｙ）、又は固相免疫試験を含み得る。ゲル電気泳動、２Ｄゲル電気泳動、ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）又はウェスタンブロッティングなどの当該技術分野で公知の更なる方法。より典型的には、本明細書で言及されるバイオマーカーを決定するために特に想定される技術は、以下の添付の実施例に記載されている。

【0050】

本発明に従って決定されるバイオマーカーは、当該技術分野で周知である。更に、バイオマーカーの量を決定するための方法は公知である。例えば、バイオマーカーは、実施例の項に記載のように測定することができる（実施例１を参照）。試験したバイオマーカーのいくつかは酵素（ＡＬＡＴ及びＡＳＡＴ）である。これらのバイオマーカーの量は、試料中の当該酵素の活性を決定することによっても決定することができる。

【0051】

「増殖分化因子－１５」又は「ＧＤＦ－１５」という用語は、トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）サイトカインスーパーファミリーのメンバーであるポリペプチドに関する。ポリペプチド、ペプチド及びタンパク質という用語は、本明細書を通して互換的に使用される。ＧＤＦ－１５は、元々はマクロファージ阻害性サイトカイン１としてクローニングされ、後に、胎盤トランスフォーミング増殖因子－１５、胎盤骨形成タンパク質、非ステロイド性抗炎症薬活性化遺伝子１、及び前立腺由来因子としても同定された（Ｂｏｏｔｃｏｖ ｌｏｃ ｃｉｔ；Ｈｒｏｍａｓ，１９９７ Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １３５４：４０－４４；Ｌａｗｔｏｎ １９９７，Ｇｅｎｅ ２０３：１７－２６；Ｙｏｋｏｙａｍａ－Ｋｏｂａｙａｓｈｉ １９９７，Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｔｏｋｙｏ），１２２：６２２－６２６；Ｐａｒａｌｋａｒ １９９８，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７３：１３７６０－１３７６７）。ＧＤＦ－１５のアミノ酸配列は、以下に開示されている：国際公開第９９／０６４４５号、国際公開第００／７００５１号、国際公開第２００５／１１３５８５号、Ｂｏｔｔｎｅｒ １９９９，Ｇｅｎｅ ２３７：１０５－１１１、Ｂｏｏｔｃｏｖ ｌｏｃ．ｃｉｔ，Ｔａｎ ｌｏｃ．ｃｉｔ．，Ｂａｅｋ ２００１，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５９：９０１－９０８、Ｈｒｏｍａｓ ｌｏｃ ｃｉｔ，Ｐａｒａｌｋａｒ ｌｏｃ ｃｉｔ，Ｍｏｒｒｉｓｈ １９９６，Ｐｌａｃｅｎｔａ １７：４３１－４４１。

【0052】

インスリン様成長因子結合タンパク質７（＝ＩＧＦＢＰ７）は、内皮細胞、血管平滑筋細胞、線維芽細胞、上皮細胞から分泌されることが知られている３０ｋＤａのモジュラー糖タンパク質である（Ｏｎｏ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍ ２０２（１９９４）１４９０－１４９６）。好ましくは、「ＩＧＦＢＰ７」という用語は、ヒトＩＧＦＢＰ７を指す。タンパク質の配列は、当該技術分野で周知であり、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（ＮＰ＿００１２４０７６４．１）を介してアクセス可能である。

【0053】

本明細書で使用される場合、「ＢＮＰ型ペプチド」という用語は、好ましくは、ｐｒｅ－ｐｒｏＢＮＰ、ｐｒｏＢＮＰ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、及びＢＮＰを含む。より好ましくは、ＢＮＰ型ペプチドは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ又はＢＮＰである。最も好ましくは、ＢＮＰ型ペプチドはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰである。プレ－プロペプチド（ｐｒｅ－ｐｒｏＢＮＰの場合は１３４アミノ酸）は、短いシグナルペプチドを含み、該プレプロペプチドは、プロペプチド（ｐｒｏＢＮＰの場合は１０８アミノ酸）を放出するために酵素で切断される。プロペプチドは更に、Ｎ末端プロペプチド（ＮＴ－プロペプチド、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの場合は７６アミノ酸）及び活性ホルモン（ＢＮＰの場合は３２アミノ酸）へと切断される。好ましくは、本発明によるＢＮＰ型ペプチドは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、ＢＮＰ及びそれらの変異体である。ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）は、活性ホルモンであり、それぞれの不活性対応物ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰよりも短い半減期を有する。

【0054】

バイオマーカー内皮細胞特異的分子１（ＥＳＭ－１と略す）は当該技術分野でよく知られている。バイオマーカーは、しばしばエンドカンとも呼ばれる。ＥＳＭ－１は分泌タンパク質であり、主にヒトの肺及び腎臓組織の内皮細胞で発現される。パブリックドメインのデータは、甲状腺、肺、腎臓だけでなく、心臓組織でも発現することを示唆している。例えばＰｒｏｔｅｉｎ Ａｔｌａｓ ｄａｔａｂａｓｅ（Ｕｈｌｅｎ Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０１５；３４７（６２２０）：１２６０４１９）のＥＳＭ－１のエントリーを参照されたい。この遺伝子の発現はサイトカインによって調節されている。ＥＳＭ－１は、２０ｋＤａの成熟ポリペプチドと３０ｋＤａのＯ－結合型グリカン鎖で構成されるプロテオグリカンである（Ｂｅｃｈａｒｄ Ｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００１；２７６（５１）：４８３４１－４８３４９）。本発明の好ましい実施形態では、ヒトＥＳＭ－１ポリペプチドの量は、対象からの試料において測定される。ヒトＥＳＭ－１ポリペプチドの配列は当該技術分野で周知であり（例えば、Ｌａｓｓａｌｅ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９６；２７１：２０４５８－２０４６４を参照）、例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースを介して評定することができる（エントリーＱ９ＮＱ３０（ＥＳＭ１＿ＨＵＭＡＮ）を参照）。ＥＳＭ－１の２つのアイソフォームは、選択的スプライシングによって生成され、アイソフォーム１（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｑ９ＮＱ３０－１を有する）及びアイソフォーム２（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｑ９ＮＱ３０－２を有する）である。アイソフォーム１は、長さ１８４アミノ酸である。アイソフォーム２では、アイソフォーム１のアミノ酸１０１から１５０が欠損している。アミノ酸１から１９は、シグナルペプチドを形成する（該シグナルペプチドは切断され得る）。

【0055】

好ましい実施形態では、ＥＳＭ－１ポリペプチドのアイソフォーム１の量が決定され、すなわち、アイソフォーム１はＵｎｉＰｒｏｔ受入番号Ｑ９ＮＱ３０－１に示される配列を有する。

【0056】

別の好ましい実施形態では、ＥＳＭ－１ポリペプチドのアイソフォーム２の量が決定され、すなわち、アイソフォーム２はＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ９ＮＱ３０－２に示される配列を有する。

【0057】

別の好ましい実施形態では、ＥＳＭ－１ポリペプチドのアイソフォーム－１及びアイソフォーム２の量、すなわち総ＥＳＭ－１が決定される。

【0058】

ｓＴＲＥＭ－１又は可溶性ＴＲＥＭ１は、ＴＲＥＭ－１（骨髄細胞－１上で発現されるトリガー受容体）の可溶性形態である。したがって、この用語は、ＴＲＥＭ－１の非細胞結合形態を指す。ＴＲＥＭ－１は、好中球及び単球／マクロファージ上に発現することが知られている免疫受容体である。これは、自然免疫応答に関与する免疫グロブリンスーパーファミリーの最近発見されたメンバーである。ＴＲＥＭ－１は、１６アミノ酸のシグナルペプチド、１８４アミノ酸の細胞外ドメイン、２９アミノ酸の膜貫通ドメイン及び５アミノ酸の短い細胞質ドメインを有する２３４アミノ酸前駆体として合成された約３０ｋＤの単量体タンパク質である。感染中、受容体発現は変化し、ｓＴＲＥＭ－１が放出される。したがって、ｓＴＲＥＭ－１（１７ｋＤａ）は、活性化食細胞の膜から放出されるＴＲＥＭ－１の可溶性形態であり、典型的には、「ｓＴＲＥＭ－１」という用語は、少なくともＴＲＥＭ－１の細胞外部分を有する全ての天然に存在する切断又は放出形態を包含する。

【0059】

マーカーである「ビリルビン」は、当該技術分野で周知である。ビリルビンは、線状テトラピロールであるビラジエンのクラスのメンバーであり、ジピロールユニットはエキソビニル及びエンドビニルタイプの両方である。ヘム分解の産物であり、ビリベルジンの還元によって網内皮系で産生され、血清アルブミンとの複合体として肝臓に輸送される。酸化防止剤としての役割を有する。ビリルビン測定は、ほとんどの研究所で日常的に行われており、様々な方法（実施例のセクションに記載の方法など）によって測定することができる。

【0060】

「心臓トロポニン」という用語は、典型的には、ヒト心臓トロポニンＴ又は心臓トロポニンＩを指す。しかしながら、この用語は、前述の特定のトロポニンの変異体、すなわち、好ましくはトロポニンＩの変異体、より好ましくはトロポニンＴの変異体も含む。そのような変異体は、特定の心臓トロポニンと少なくとも同じ本質的な生物学的及び免疫学的特性を有する。特に、それらが本明細書で言及される同じ特異的アッセイによって、例えば当該心臓トロポニンを特異的に認識するポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体を使用するＥＬＩＳＡアッセイによって検出可能である場合、それらは同じ本質的な生物学的及び免疫学的特性を共有する。更に、本発明に従って言及される変異体は、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失及び／又は付加のために異なるアミノ酸配列を有するものとし、変異体のアミノ酸配列は、依然として、特定のトロポニンのアミノ酸配列と、好ましくは少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％同一であると理解されるべきである。変異体は、対立遺伝子変異体又は任意の他の種特異的ホモログ、パラログ若しくはオルソログであり得る。更に、本明細書で言及される変異体は、特定の心臓トロポニンの断片、又はこれらの断片が上記で言及される本質的な免疫学的及び生物学的特性を有する限り、上述の種類の変異体を含む。好ましくは、心臓トロポニン変異体は、ヒトトロポニンＴ又はトロポニンＩに匹敵する免疫学的特性（すなわち、エピトープ組成）を有する。したがって、変異体は、心臓トロポニンの濃度を決定するために使用される上述の手段又はリガンドによって認識可能であるものとする。したがって、変異体は、心臓トロポニンの濃度を決定するために使用される上述の手段又はリガンドによって認識可能であるものとする。そのような断片は、例えば、トロポニンの分解産物であり得る。リン酸化又はミリスチル化などの翻訳後修飾のために異なる変異体が更に含まれる。好ましくは、トロポニンＩ及びその変異体の生物学的特性は、アクトミオシンＡＴＰアーゼを阻害する能力、又はｉｎ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｔｒｏで血管新生を阻害する能力であり、これは、例えば、Ｍｏｓｅｓ ｅｔ ａｌ．１９９９ ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９６（６）：２６４５－２６５０）に記載されているアッセイに基づいて検出され得る。好ましくは、トロポニンＴ及びその変異体の生物学的特性は、トロポニンＣ及びＩと複合体を形成する能力、カルシウムイオンに結合する能力、又は好ましくはトロポニンＣ、Ｉ及びＴの複合体として存在する場合、若しくはトロポニンＣ、トロポニンＩ及びトロポニンＴの変異体によって形成される複合体として存在する場合、トロポミオシンに結合する能力である。トロポニンＴ又はトロポニンＩは、当該技術分野で周知であり、市販されているイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡによって測定することができる。本発明に従って特に好ましいのは、例えば市販のｈｓ－ｃＴｎアッセイを用いた高感度でのトロポニンＴの測定である。

【0061】

ＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）は、肺炎球菌のＣ多糖に結合する血液タンパク質であることが７５年以上前に発見された急性期タンパク質である。ＣＲＰは反応性炎症マーカーとして知られており、原発病変部位に由来するケモカイン又はインターロイキンに応答して又は反応して遠位臓器（すなわち、肝臓）によって産生される。ＣＲＰは、非共有結合で連結され、約１１０～１４０ｋＤａの分子量を有する環状五量体として組み立てられる５つの単一サブユニットからなることが知られている。好ましくは、本明細書で使用されるＣＲＰは、ヒトＣＲＰに関する。ヒトＣＲＰの配列は周知であり、例えば、Ｗｏｏ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８５．２６０（２４），１３３８４－１３３８８）によって開示されている。ＣＲＰのレベルは通常、正常個体では低いが、炎症、感染又は傷害のために１００～２００倍以上に上昇し得る（Ｙｅｈ（２００４）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．２００４；１０９：１１－１１－１１－１４）。ＣＲＰは心血管リスクの予測の独立因子であることが知られている。ＣＲＰは、当該技術分野で周知であり、市販されているイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡによって測定することができる。

【0062】

プロカルシトニン（ＰＣＴと略す）は、ホルモンカルシトニンのペプチド前駆体である。したがって、プロカルシトニンはカルシトニンの不活性プロペプチドである。これは１１６アミノ酸から構成され、甲状腺傍濾胞細胞（Ｃ細胞）、並びに肺及び腸の神経内分泌細胞によって産生される。ＰＣＴは、敗血症を全身性炎症の他の非感染性原因と区別するための有用な生化学的マーカーとして広く報告されている（Ｋｏｎｄｏ，Ｙ．，Ｕｍｅｍｕｒａ，Ｙ．，Ｈａｙａｓｈｉｄａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．Ｊ ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｃａｒｅ（２０１９）７：２２．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ４０５６０－０１９－０３７４－３０ ４）。マーカーのアミノ酸配列は当該技術分野で周知であり、例えば欧州特許第２３２０２３７号Ｂ１に開示されている。ＰＣＴは、当該技術分野で周知であり、市販されているイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡによって測定することができる。

【0063】

本明細書で使用される場合、「ｓＦｌｔ－１」という用語は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１の可溶性形態であるポリペプチドを指す。ポリペプチドは、当該技術分野で可溶性ＶＥＧＦ受容体１（ｓＶＥＧＦ Ｒ１）とも呼ばれる（例えば、Ｓｕｎｄｅｒｊｉ ２０１０，Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ ２０２：４０ｅ１－７を参照）。これは、ヒト臍帯静脈内皮細胞の馴化培養培地で同定された。内因性ｓＦｌｔ１受容体は、組換えヒトｓＦｌｔ１とクロマトグラフ的及び免疫学的に類似しており、同等の高親和性で［１２５Ｉ］ＶＥＧＦに結合する。ヒトｓＦｌｔ１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＫＤＲ／Ｆｌｋ－１の細胞外ドメインとＶＥＧＦ安定化複合体を形成することが示されている。好ましくは、ｓＦｌｔ１は、Ｋｅｎｄａｌｌ １９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２２６（２）：３２４－３２８に記載されているヒトｓＦｌｔ１を指し、アミノ酸配列については、例えば、ヒトについてはＧｅｎｅｂａｎｋ受託番号Ｐ１７９４８、ＧＩ：１２５３６１、及びマウスｓＦｌｔ－１についてはＢＡＡ２４４９９．１、ＧＩ：２８０９０７１（Ｇｅｎｅｂａｎｋは、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｅｎｔｒｅｚのもとＮＣＢＩ（米国）から利用可能）も参照されたい。

【0064】

アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＴ）は、Ｌ－アラニンのα－ケトグルタル酸（α－ＫＧ）へのアミノ基転移を触媒し、Ｌ－グルタミン酸及びピルビン酸を形成する。形成されたピルビン酸は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）によって乳酸塩に還元され、同時に還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）が酸化される。吸光度の変化はアラニンアミノトランスフェラーゼ活性に正比例し、例えば、二色性（３４０ｎｍ、７００ｎｍ）速度技術を用いて測定することができる。

【0065】

アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ又はＡＳＡＴ）は、Ｌ－アスパラギン酸からα－ケトグルタル酸へのアミノ基転移を触媒し、Ｌ－グルタミン酸及びシュウ酸を形成する。形成されたシュウ酸塩は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の同時酸化と共にリンゴ酸デヒドロゲナーゼ（ＭＤＨ）によってリンゴ酸塩に還元される。ＮＡＤＨのＮＡＤへの変換による経時的な吸光度変化はＡＳＴ活性に正比例し、例えば、二色性（３４０ｎｍ、７００ｎｍ）速度技術を用いて測定することができる。

【0066】

しばしばアンチトロンビンＩＩＩとも呼ばれるアンチトロンビン（ＡＴ）は、トロンビン、マトリプターゼ－３／ＴＭＰＲＳＳ７、並びに第ＩＸａ因子、第Ｘａ因子及び第ＸＩａ因子などの凝固系のいくつかの酵素を不活性化するタンパク質（ｐｒｏｅｉｎ）である。これは、３つのジスルフィド結合及び合計４つの可能なグリコシル化部位を含む。α－アンチトロンビンは、血漿中に見られるアンチトロンビンの主要な形態であり、その４つのグリコシル化部位の各々を占めるオリゴ糖を有する。ヒトＡＴの配列は当該技術分野で周知であり、例えばＵｎｉＰｒｏｔ（受託番号Ｐ０１００８を参照）によって評定することができる。

【0067】

本発明の方法では、第３バイオマーカーを決定してもよい。特に、本発明の方法の工程（ｂ）において、
（ｉ）ｓＦＬＴ１の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、
（ｉｉ）シスタチンＣの量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、ビリルビン又はプロカルシトニンの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、
（ｉｖ）ビリルビンの量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、クレアチニンの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む。

【0068】

したがって、本発明は、少なくとも２つのバイオマーカー（すなわち、本明細書で言及される第１及び第２のバイオマーカー）又は少なくとも３つのバイオマーカー（すなわち、本明細書で言及される第１、第２及び第３のバイオマーカー）の決定に関する。

【0069】

第１のバイオマーカーはＧＤＦ－１５である。第２のバイオマーカーは、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼから選択されるものとする。

【0070】

一実施形態では、第２のバイオマーカーは、心臓トロポニンＴ又はＩ、好ましくはトロポニンＴなどの心臓トロポニンである。

【0071】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーは、ＢＮＰ型ペプチド、例えばＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ又はＢＮＰ、好ましくはＮＴ－ｐｒｏＢＮＰである。

【0072】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーはＣｙｓＣである。

【0073】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーはＥＳＭ－１である。

【0074】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーはビリルビンである。

【0075】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーはＰＣＴ（プロカルシトニン）である。

【0076】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーはｓＦｌｔ－１である。ｓＦＬＴ１の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法は、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含み得る。

【0077】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＡＴ）である。

【0078】

代替的な実施形態では、第２のバイオマーカーは、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＴ）である。

【0079】

本発明が上記のマーカーに限定されないことを理解されたい。むしろ、本発明は、更なるマーカーの決定を包含し得る。

【0080】

本明細書で使用される場合、「基準」という用語は、疾患若しくは症状に罹患している若しくはそれを発症するリスクがある対象の群、又は当該疾患若しくは症状に罹患していない若しくはそれを発症するリスクがない対象の群のいずれかに対象を割り当てることを可能にする量又は値を指す。このような基準は、これらの群を互いに分離する閾値量とすることができる。したがって、基準は、疾患若しくは症状に罹患しているか、又はそれを発症するリスクがあるか否かにかかわらず、対象の群への対象の割り当てを可能にする量又はスコアであるものとする。例えば、基準は、敗血症を発症するリスクがあるか、又は配列を発症する（上記の予測ウィンドウ内、例えば約４８時間以内）リスクがない対象の群への対象の割り当てを可能にする量又はスコアであるものとする。

【0081】

２つの群を分離する適切な閾値量は、疾患若しくは症状に罹患していることが知られているか若しくはそれを発症するリスクがある対象若しくは対象群、又は疾患若しくは症状に罹患していないことが知られているか若しくはそれを発症するリスクがある対象若しくは対象群のいずれかからのバイオマーカーの量に基づいて、本明細書の他の箇所で言及される統計学的検定によって更に混乱することなく計算することができる。個々の対象に適用可能な基準量は、年齢、性別、又は亜集団などの様々な生理学的パラメータに応じて変化し得る。

【0082】

典型的には、当該基準は、敗血症を発症するリスクがあることが知られている少なくとも１名の対象に由来する各バイオマーカーの基準であり、好ましくは、バイオマーカーの各々についての量が、対応する基準と本質的に同一若しくは類似であることは、敗血症を発症するリスクがある対象を示し、バイオマーカーの各々についての量が対応する基準と異なることは、敗血症を発症するリスクがない対象を示す。

【0083】

また、典型的には、当該基準は、敗血症を発症するリスクがないことが知られている少なくとも１名の対象に由来する各バイオマーカーの基準であり、好ましくは、バイオマーカーの各々についての量が、対応する基準と本質的に同一若しくは類似であることは、敗血症を発症するリスクがない対象を示し、バイオマーカーの各々についての量が対応する基準と異なることは、敗血症を発症するリスクがある対象を示す。

【0084】

「少なくとも１名の対象」という用語は、１名の対象又は２名以上の対象、例えば少なくとも１０人、５０人、１００人、２００人、又は１０００人の対象を指す。

【0085】

一実施形態では、バイオマーカーの基準よりも大きい当該バイオマーカーの量は、リスクがある対象（例えば、本明細書の他の箇所に記載されている敗血症を発症すること）を示す。更に、バイオマーカーの基準よりも低い当該バイオマーカーの量は、リスクがない対象を示す（アンチトロンビンを除いて、アンチトロンビンの場合、バイオマーカーの基準よりも低い当該バイオマーカーの量は、リスクがある対象を示すが、バイオマーカーの基準よりも高い当該バイオマーカーの量は、リスクがない対象を示す）。

【0086】

基準量は、原則として、標準的な統計学的方法を適用することによって、バイオマーカー量などの所与のパラメータの平均又は平均値に基づいて、対象のコホートについて計算することができる。特に、事象の診断を目的とする方法等の検査が正確であるか否かは、受信者動作特性（ＲＯＣ）により最もよく説明される（特に、Ｚｗｅｉｇ １９９３，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３９：５６１－５７７を参照）。ＲＯＣグラフは、観察されたデータの全範囲にわたって決定閾値を継続的に変動させることにより生じる、全ての感受性／特異性のペアのプロットである。診断方法の臨床成績は、その正確性、すなわち対象をある特定の予後又は診断に正確に割り当てる能力に依存する。ＲＯＣプロットは、区別を行うのに適した閾値の全範囲について、感度対１－特異性をプロットすることにより、２つの分布間の重なりを示す。ｙ軸は、感度、又は真陽性率であり、真陽性の検査結果の数及び偽陰性の検査結果の数の積に対する、真陽性の検査結果の数の比率として定義される。これは、疾患又は症状の存在下での陽性とも呼ばれている。ｙ軸は、影響を受ける下位群からのみ計算される。ｘ軸上は、偽陽性率、又は１－特異性であり、これは、真陰性の数及び偽陽性結果の数の積に対する、偽陽性結果の数の比率として定義される。ｘ軸は、特異性の指標であり、影響を受けない下位群からのみ計算される。真陽性率及び偽陽性率は、２つの異なる下位群からの検査結果を使用することによって完全に別個に計算されるので、ＲＯＣプロットはコホートにおける事象の有病率に非依存性である。ＲＯＣプロット上の各点は、特定の決定閾値に相当する感受性／－特異性の対を表す。完全な区別のある（結果の２つの分布に重なりがない）検査は、左上隅を通過するＲＯＣプロットを有しており、真陽性率は１．０、又は１００％（完全な感受性）であり、偽陽性率は０（完全な特異性）となる。区別のない（２つの群についての結果の分布が同一である）検査についての理論上のプロットは、左下隅から右上隅への４５°の対角線となる。ほとんどのプロットは、これらの２つの極値の間に収まる。ＲＯＣプロットが４５°対角線を完全に下回って収まる場合、これは、「陽性率」についての基準を「より高い」から「より低い」に入れ替え、逆もまた同様にすることによって、容易に修正される。定性的には、プロットが左上隅に近いほど、検査の全体的な精度が高くなる。所望の信頼区間に応じて、ＲＯＣ曲線から閾値を導くことができ、これにより、感度及び特異性の適切なバランスをそれぞれ備えた所与の事象についての診断又は予測が可能になる。したがって、本発明の前述の方法に使用される基準、すなわち、リスクがある対象とリスクがない対象とを識別することを可能にする閾値は、通常、上記のように当該コホートのＲＯＣを確立し、そこから閾値量を導出することによって生成することができる。診断方法についての所望の感度及び特異性に応じて、ＲＯＣプロットは、適切な閾値を導くことができる。リスクが高い又は疾患に罹患している対象を排除する（すなわち、ルールアウト）ためには最適な感度が望ましいが、リスクが高い又は疾患に罹患していると評定される対象については最適な特異度が想定される（すなわち、ルールイン）ことが理解されよう。

【0087】

本発明の方法の工程ｃ）は、バイオマーカー（すなわち、第１のバイオマーカー、第２のバイオマーカー、及び任意に第３のバイオマーカー）の量を当該バイオマーカーに対する基準と比較すること、及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアを計算することを含む。

【0088】

したがって、第１のバイオマーカー、第２のバイオマーカー、及び任意に第３のバイオマーカーの量は、それぞれ、第１のバイオマーカーの基準、第２のバイオマーカーの基準、及び任意に第３のバイオマーカーの基準と比較してもよい。

【0089】

あるいは、バイオマーカーの量に基づいて、すなわち第１のバイオマーカー、第２のバイオマーカー、及び任意に第３のバイオマーカーの量に基づいて、スコアを計算してもよい。当該スコアは、敗血症を発症するリスクを予測するなどのために、感染の疑いがある対象の評定を可能にするものとする。任意選択で、当該スコアは、適切な基準スコアと比較されてもよい。

【0090】

本明細書で使用される場合、「比較する」という用語は、本明細書で言及されるバイオマーカーの決定された量を基準と比較することを包含する。本明細書で使用される場合、比較は、量についての値と基準との間で行われる任意の種類の比較を指すことを理解されたい。しかしながら、好ましくは、同一のタイプの値が互いに比較され、例えば、本発明の方法において絶対量が決定され比較される場合、基準は絶対量でもあり、本発明の方法において相対量が決定され比較される場合、基準は相対量でもある、などと理解されるべきである。あるいは、本明細書で使用される場合、「比較する」という用語は、計算されたスコアを適切な基準コアと比較することを包含する。比較は、手動又はコンピュータ支援により実行することができる。量についての値及び基準は、例えば、互いに比較することができ、当該比較は、比較のためのアルゴリズムを実行するコンピュータプログラムによって自動的に実行することができる。当該評価を実行するコンピュータプログラムは、適切な出力形式で、所望の評定を提供する。

【0091】

上記のように、第１及び第２のバイオマーカー、又は第１、第２若しくは第３のバイオマーカーの量に基づいてスコア（特に単一のスコア）、すなわち単一のスコアを計算し、このスコアを基準スコアと比較することも想定される。好ましくは、スコアは、試験対象由来の試料中の第１及び第２のバイオマーカーの量に基づき、第３のバイオマーカーの量が決定される場合、試験対象由来の試料中の第１、第２及び第３のバイオマーカーの量に基づく。

【0092】

計算されたスコアは、少なくとも２つ又は３つのバイオマーカーの量に関する情報を組み合わせる。更に、スコアにおいて、バイオマーカーは、好ましくは、評定の確立への寄与に従って重み付けされる。したがって、個々のマーカーについての値は、典型的には、通常重み付けされ、重み付けされた値はスコアを計算するために使用される。適切な係数（重み）は、当業者が更に困難を伴わずに決定することができる。スコアは、少なくとも２つのバイオマーカーについて訓練された決定木又は決定木のセット（アンサンブル）から計算することもできる。本発明の方法で適用されるバイオマーカーの組み合わせに基づいて、個々のバイオマーカーの重み並びに決定木の構造は異なり得る。

【0093】

スコアは、本明細書に記載の対象を評定するための分類パラメータとみなすことができる。特に、単一のスコアに基づいて評定を提供する人を可能にする。基準スコアは、好ましくは値、特に本明細書に記載の感染の疑いがある対象を評定することを可能にするカットオフ値である。好ましくは、基準は単一の値である。したがって、人は、個々のバイオマーカーの量に関する情報全体を解釈する必要はない。本明細書に記載のスコアリングシステムを使用すると、有利には、値がスコアに数学的に変換されるため、バイオマーカーの異なる寸法又は単位の値を使用することができる。したがって、例えば、絶対濃度の値をピーク面積比を有するスコアに組み合わせることができる。適用される基準スコアは、所望の感度又は所望の特異度に基づいて選択され得る。適切な基準スコアをどのように選択するかは、当該技術分野で周知である。

【0094】

有利には、本発明の基礎となる研究では、第１のバイオマーカーと第２のバイオマーカー、好ましくは第３のバイオマーカーとの組み合わせが、感染症の徴候及び症候を示す患者の信頼できる早期評定を可能にすることが見出された。例えば、対象の評定は、試験試料が得られてから５時間以内に行うことができる。研究では、医学的（非外科的）緊急事態にある救急部に来院する患者を調査した。この目的のため、患者を、高い確率で敗血症に罹患している患者と、敗血症なしで感染症に罹患していると疑われる患者とに細分化した。様々なバイオマーカーの量を決定し、バイオマーカーを分析し、論理回帰分析によって数学的に組み合わせた。受信者動作特性下面積（ＡＵＣ）を使用して、バイオマーカーの性能を評価した。ＡＵＣ値は、区間［ａ］［ｂ］内の関数ｆ（ｘ）の数学的積分である。ＡＵＣを、バイオマーカー対及びトリプレットについても調査した。最良の単一バイオマーカーＡＵＣよりも改善されたＡＵＣを共に示すバイオマーカーの組み合わせを同定した。結果を、以下の添付の実施例に記載する。

【0095】

特に、これらの患者が、例えば救急ユニットに来院している場合、敗血症、ＳＩＲＳなどの重篤な合併症を発症するリスク、又は全身の健康状態の全体的な悪化の早期評定が、薬物投与、身体的又は他の治療的介入及び／又は入院を含む治療措置を開始することを決定付ける。これらの治療措置は、特に、例えば、広いスペクトラムの抗生物質の迅速な投与、輸液蘇生、血管作動薬療法、機械的換気、他の臓器支持（例えば、連続血液濾過、体外式膜型人工肺）を含み得る。より高いレベルのケア（例えば集中治療室、中間治療室）へのトリアージも治療措置として包含される。重度の合併症のリスクがない場合、患者は、自宅に退院し、外来設定で管理されるか、又は低レベルのケア（例えば一般病棟）で病院に入院することができる。本発明のおかげで、患者を早期にバイオマーカー決定によって評定することができるため、生命を脅かす発症を防ぐことができる。本発明の基礎となる研究で特定されたバイオマーカー対及びトリプレットは、医学的判断のための信頼できる基礎であり、評定は時間的及び費用効果的な方法で実行することができる。

【0096】

したがって、本発明の方法は、適切な治療措置を推奨又は開始することを更に含み得る。典型的には、当該適切な治療措置は、敗血症及び敗血症性ショックの管理のための国際ガイドライン（Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２０１７）などの敗血症の管理のための医療ガイドライン又は推奨から選択される。例えば、治療措置は、敗血症の処置、又は更なる診断調査、又は専門家が必要と考えるケアの他の態様であり得る。

【0097】

一実施形態では、患者にリスクがあると評定された場合に推奨又は開始される治療措置は、以下から選択される。
● 典型的には可能性の高い病原体と考えられる生物及び抗生物質感受性に応じて、セファロスポリン、ベータラクタム／ベータラクタマーゼ阻害剤（例えば、ピペラシリン）、又はカルバペネムなどの少なくとも１つ以上の広いスペクトラムの抗生物質を用いた経験的広域スペクトル療法の投与、
● 輸液蘇生
● ノルエピネフリンの投与等の１つ以上の血管収縮薬の投与
● ヒドロコルチゾンの投与等の１つ以上のコルチコステロイドの投与

【0098】

上記の本明細書に示される定義は、必要な変更を加えて以下に適用される。

【0099】

本発明はまた、感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）対象の試料中の第１のバイオマーカーの量についての値を受け取る工程であって、当該第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量の値を受け取る工程、
（ｂ）対象の試料中の第２のバイオマーカーの量についての値を受け取る工程であって、当該第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量の値を受け取る工程、
（ｃ）バイオマーカーの量についての値を、当該バイオマーカーの基準と比較する工程及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに
（ｄ）工程（ｃ）で行われた比較及び／又は計算に基づいて当該対象を評定する工程
を含む、感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法に関する。

【0100】

本明細書で使用される場合、「コンピュータ実装」という用語は、方法が、典型的には、コンピュータ又は同様のデータ処理デバイスに含まれるデータ処理ユニット上で自動化された方法で実行されることを意味する。データ処理ユニットは、バイオマーカーの量についての値を受け取るものとする。そのような値は、量、相対量、又は本明細書の他の箇所で詳細に説明される量を反映する任意の他の計算値であり得る。したがって、上述の方法は、バイオマーカーの量の決定を必要とせず、むしろ既に所定の量についての値を使用することを理解されたい。

【0101】

典型的には、当該方法工程（ｂ）において、
（ｉ）ｓＦＬＴ１の量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、
（ｉｉ）シスタチンＣの量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７の量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、ビリルビン又はプロカルシトニンの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、
（ｉｖ）ビリルビンの量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、クレアチニンの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１の量についての値を第２のバイオマーカーとして受け取る場合、方法は、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む。

【0102】

本発明はまた、原則として、コンピュータプログラム、コンピュータプログラム製品、又は当該コンピュータプログラムが有形的に組み込まれたコンピュータ可読記憶媒体も企図し、コンピュータプログラムは、データ処理デバイス又はコンピュータで実行されると上記のような本発明の方法を実行する、命令を含む。具体的には、本開示は、以下を更に包含する：
－ 少なくとも１つのプロセッサを備えており、プロセッサは、本明細書に記載の実施形態のうちの１つによる方法を実行するように構成されているコンピュータ又はコンピュータネットワーク、
－ データ構造がコンピュータ上で実行されている間に、本明細書に記載された実施形態のうちの１つにかかる方法を実行するように適合されたコンピュータロード可能データ構造、
－ コンピュータスクリプトであって、コンピュータプログラムが、プログラムがコンピュータ上で実行されている間に、本明細書に記載された実施形態のうちの１つの方法を実行するように適合されている、コンピュータスクリプト、
－ コンピュータプログラムがコンピュータ上又はコンピュータネットワーク上で実行されている間に、本明細書に記載された実施形態のうちの１つにかかる方法を実行するためのプログラム手段を備えるコンピュータプログラム、
－ プログラム手段がコンピュータに読み取り可能な記憶媒体上に保存された、先行する実施形態にかかるプログラム手段を備えるコンピュータプログラム、
－ データ構造が記憶媒体に保存され、データ構造が、コンピュータ若しくはコンピュータネットワークの主記憶装置及び／又は作業記憶装置にロードされた後、本明細書に記載の実施形態のうちの１つによる方法を実行するように適合された、記憶媒体、
－ コンピュータ又はコンピュータネットワーク上でプログラムコード手段が実行された場合に、この明細書に記載された実施形態のうちの１つによる方法を実行するために、プログラムコード手段が保存され得る、又は記憶媒体上に保存され得る、プログラムコード手段を有するコンピュータプログラム製品、
－ 本明細書の他の箇所で定義されているパラメータのデータを含む、典型的には暗号化されたデータストリーム信号、並びに
－ 本発明の方法によって提供される評定を含む、典型的には暗号化されたデータストリーム信号。

【0103】

本発明は、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスであって、
（ａ）対象の試料中の、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーの量を測定するための測定ユニットであって、当該測定ユニットが、第１バイオマーカー及び第２バイオマーカーの検出システムを備える、測定ユニットと、
（ｂ）測定ユニットに動作可能に連結された評価ユニットであって、好ましくは上記に記載の第１のバイオマーカー及び第２のバイオマーカーのための保存された基準を有するデータベースと、好ましくは上記に記載の、第１のバイオマーカー及び第２のバイオマーカーの量と基準との比較を実行するための及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアの計算を実行するための、並びに比較に基づいて当該対象を評定するための命令を含むデータプロセッサとを備え、測定ユニットからバイオマーカーの量についての値を自動的に受け取ることができる、評価ユニットと
を備える、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスに関する。

【0104】

本明細書で使用される場合、「デバイス」という用語は、評定が提供され得るように、本発明の方法によるバイオマーカーの量の決定及びその評価を可能にするように互いに動作可能に連結された前述のユニットを含むシステムに関する。

【0105】

分析ユニットは、典型的には、試料と接触させる固体支持体又は担体上に固定化された形態で、第１及び第２のバイオマーカー、好ましくはまた第３のバイオマーカーのためのバイオマーカー検出剤を有する少なくとも１つの反応ゾーンを含む。更に、反応ゾーンでは、試料に含まれるバイオマーカーへの検出剤（複数可）の特異的結合を可能にする条件を適用することが可能である。

【0106】

反応ゾーンは、試料適用を直接可能にしてもよく、又は試料が適用されるローディングゾーンに接続されてもよい。後者の場合、試料は、ローディングゾーンと反応ゾーンとの間の接続部を介して反応ゾーンに能動的又は受動的に輸送され得る。更に、反応ゾーンは検出器にも接続されるものとする。連結は、検出器がバイオマーカーのそれらの検出剤への結合を検出できるようなものでなければならない。適切な連結は、バイオマーカーの存在又は量を測定するために使用される技術に依存する。例えば、光学的検出のため、検出器と反応ゾーンとの間に光の透過が必要とされ得る一方で、電気化学的判定のために、例えば反応ゾーンと電極との間に流体接続が必要とされ得る。

【0107】

検出器は、バイオマーカーの量の決定を検出するように適合されるものとする。決定された量は、続いて評価ユニットに送信することができる。当該評価ユニットは、試料中に存在する量を決定するための実装されたアルゴリズムを有するコンピュータなどのデータ処理要素を含む。

【0108】

本発明の方法により参照される処理ユニットは、典型的には、中央処理装置（ＣＰＵ）及び／又は１つ以上のグラフィック処理ユニット（ＧＰＵ）及び／又は１つ以上の特定用途向け集積回路（ＡＳＩＣ）及び／又は１つ以上のテンソル処理ユニット（ＴＰＵ）及び／又は１つ以上のフィールドプログラマブルゲートアレイ（ＦＰＧＡ）などを備える。データ処理要素は、例えば、汎用コンピュータ又はポータブルコンピューティングデバイスであってもよい。本明細書に開示された方法の１つ以上の工程を実行するために、ネットワーク又はデータを転送する他の方法を介してなど、複数のコンピューティングデバイスを一緒が使用され得ることも理解されたい。例示的なコンピューティングデバイスとしては、デスクトップコンピュータ、ラップトップコンピュータ、パーソナルデータアシスタント（「ＰＤＡ」）、セルラデバイス、スマート又はモバイルデバイス、タブレットコンピュータ、サーバなどが挙げられる。一般に、データ処理要素は、複数の命令（ソフトウェアのプログラムなど）を実行することができるプロセッサを備える。

【0109】

評価ユニットは、典型的には、メモリを備えるか、又はメモリへのアクセスを有する。メモリは、コンピュータ可読媒体であり、例えば、コンピューティングデバイスと共にローカルに配置されるか、又はネットワークを介してコンピューティングデバイスにアクセス可能な単一の記憶デバイス又は複数の記憶デバイスを含んでもよい。コンピュータ可読媒体は、コンピューティングデバイスによってアクセスすることができ、揮発性媒体と不揮発性媒体の両方を含む任意の利用可能な媒体であってもよい。更に、コンピュータ可読媒体は、リムーバブル媒体及び非リムーバブル媒体の一方又は両方であってもよい。限定ではなく例として、コンピュータ可読媒体は、コンピュータ記憶媒体を含んでもよい。例示的なコンピュータ記憶媒体は、ＲＡＭ、ＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭ、フラッシュメモリ又は任意の他のメモリ技術、ＣＤ－ＲＯＭ、デジタルバーサタイルディスク（ＤＶＤ）又は他の光ディスク記憶装置、磁気カセット、磁気テープ、磁気ディスク記憶装置又は他の磁気記憶装置、あるいはコンピューティングデバイスによってアクセスされ、コンピューティングデバイスのプロセッサによって実行されることが可能な複数の命令を保存するために使用することができる任意の他の媒体を含むが、これらに限定されない。

【0110】

本開示の実施形態によれば、ソフトウェアは、コンピューティングデバイスのプロセッサによって実行されると、本明細書に開示される方法の１つ以上の工程を実行し得る命令を含んでもよい。命令のいくつかは、他の機械の動作を制御する信号を生成するように適合されてもよく、したがって、コンピュータ自体から遠く離れた材料を変換するためにそれらの制御信号を介して動作してもよい。これらの説明及び表現は、例えば、それらの研究の内容を他の当業者に最も効果的に伝えるために、データ処理の当業者によって使用される手段である。

【0111】

複数の命令はまた、所望の結果をもたらす自己矛盾のない一連の工程であると一般に考えられるアルゴリズムを含んでもよい。これらの工程は、物理量の物理的操作を必要とするものである。必ずしもそうとは限らないが、通常、これらの量は、保存、転送、変換、結合、比較、及び他の方法で操作することができる電気又は磁気パルス又は信号の形態をとる。これらの信号を、そのような信号が具体化又は表現される物理的なアイテム又は表現の基準として、値、文字、表示データ、数字などとして参照することは、主に一般的な使用上の理由から、時には便利であることが判明している。しかしながら、これら及び類似の用語の全ては、適切な物理量に関連付けられるべきであり、単にこれらの量に適用される便利なラベルとして使用されることに留意されたい。

【0112】

評価ユニットはまた、出力デバイスを備えてもよく、又は出力デバイスへのアクセスを有してもよい。出力デバイスとしては、例えば、ファックス、ディスプレイ、プリンタ、及びファイル等が挙げられる。本開示のいくつかの実施形態によれば、コンピューティングデバイスは、本明細書に開示される方法の１つ以上の工程を実行し、その後、出力デバイスを介して、方法の結果、指示、比又は他の要因に関する出力を提供し得る。

【0113】

典型的には、当該測定ユニットは、第３のバイオマーカーを測定し、第３のバイオマーカーの検出システムを備え、当該データベースは、第３のバイオマーカーのための保存された基準を含み、当該第３のバイオマーカーは、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである。

【0114】

より典型的には、当該検出システムは、バイオマーカーの各々を特異的に検出することができる少なくとも１つの検出剤を含む。

【0115】

本発明は、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスであって、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーについての保存された基準を有するデータベースを含む評価ユニットと、好ましくは上記に記載の、第１のバイオマーカー及び第２のバイオマーカーの量と基準との比較を実行するための、並びに比較に基づいて当該対象を評定するための命令を含むデータプロセッサとを備え、当該評価ユニットが、対象の試料において決定されたバイオマーカーの量についての値を受け取ることができる、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスを企図する。

【0116】

典型的には、当該データベースが、第３のバイオマーカーについての保存された基準を含み、当該第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである。

【0117】

本発明はまた、原則として、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカー、又は当該第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤及び当該第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤の、感染の疑いがある対象を評定するための、使用に関する。

【0118】

本明細書で使用される場合、「検出剤」という用語は、典型的には、バイオマーカーに特異的に結合する任意の薬剤、すなわち試料中に存在する他の成分と交差反応しない薬剤を指す。典型的には、本明細書で言及されるバイオマーカーに特異的に結合する検出剤は、抗体、抗体断片又は誘導体、アプタマー、バイオマーカーのリガンド、バイオマーカーの受容体、バイオマーカーに結合及び／又はバイオマーカーを変換することが知られている酵素、又はバイオマーカーに特異的に結合することが知られている小分子であり得る。例えば、本明細書で検出剤と呼ばれる抗体は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方、並びに抗原又はハプテンに結合することができるＦｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）２断片などのその断片を含む。本発明はまた、所望の抗原特異性を示す非ヒトドナー抗体のアミノ酸配列がヒトアクセプター抗体の配列と組み合わされた一本鎖抗体及びヒト化ハイブリッド抗体を含む。ドナー配列は、通常、少なくともドナーの抗原結合アミノ酸残基を含むが、ドナー抗体の他の構造的及び／又は機能的に関連するアミノ酸残基も含み得る。そのようなハイブリッドは、当該技術分野で周知のいくつかの方法によって調製することができる。アプタマー検出剤は、例えば、核酸又はペプチドアプタマーであってもよい。そのようなアプタマーを調製する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、アプタマーの基礎となる核酸又はペプチドにランダム突然変異を導入することができる。次いで、これらの誘導体を、当該技術分野で公知のスクリーニング手順、例えばファージディスプレイに従って結合について試験することができる。検出剤の特異的結合は、分析される試料中に存在する別のペプチド、ポリペプチド又は物質に実質的に結合してはいけない、すなわち交差反応してはいけないことを意味する。好ましくは、特異的に結合したバイオマーカーは、試料の任意の他の成分よりも少なくとも３倍高い、より好ましくは少なくとも１０倍高い、更により好ましくは少なくとも５０倍高い親和性で結合するべきである。非特異的結合は、例えばウエスタンブロット上のそのサイズに応じて、又は試料中のその比較的高い存在量によって、依然として明確に区別及び測定することができる場合、許容され得る。

【0119】

検出剤は、検出可能な標識に永久的又は可逆的に融合又は連結され得る。適切な標識は当業者に周知である。適切な検出可能な標識は、適切な検出方法によって検出可能な任意の標識である。典型的な標識としては、金粒子、ラテックスビーズ、アクリダンエステル、ルミノール、ルテニウム、酵素的に活性な標識、放射性標識、磁気標識（「例えば磁気ビーズ」、常磁性及び超常磁性標識を含む）、及び蛍光標識が挙げられる。酵素的に活性な標識としては、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、βガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、及びそれらの誘導体が挙げられる。検出に適した基質としては、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、３，３’－５，５’－テトラメチルベンジジン、ＮＢＴ－ＢＣＩＰ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製の既成の保存溶液として入手可能な４－ニトロブルーテトラゾリウムクロリド及び５－ブロモ－４－クロロ－３－インドリル－ホスファート）、ＣＤＰ－Ｓｔａｒ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＥＣＦ（商標）（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。適切な酵素－基質の組み合わせにより、着色された反応産物、蛍光又は化学発光が生じてもよく、これは、当該技術分野で公知の方法によって（例えば感光フィルム又は適切なカメラシステムを使用して）、測定することができる。酵素反応を測定することについては、上記の基準が同様に適用される。典型的な蛍光標識としては、蛍光タンパク質（例えば、ＧＦＰ及びその誘導体）、Ｃｙ３、Ｃｙ５、テキサスレッド、フルオレセイン、及びＡｌｅｘａ色素（例えばＡｌｅｘａ５６８）が挙げられる。更なる蛍光標識が、例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（オレゴン州）から入手可能である。また、蛍光標識としての量子ドットの使用が、企図される。典型的な放射性標識には、３５Ｓ、１２５Ｉ、３２Ｐ、３３Ｐなどが含まれる。放射性標識は、公知且つ適切な、例えば感光膜又はホスホイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｒ ｉｍａｇｅｒ）等の任意の方法により検出され得る。適切な標識はまた、ビオチン、ジゴキシゲニン、Ｈｉｓ－Ｔａｇ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ、ＦＬＡＧ、ＧＦＰ、ｍｙｃ－ｔａｇ、インフルエンザＡウイルス赤血球凝集素（ＨＡ）、マルトース結合タンパク質などのタグであってもよく、又はそれらを含んでもよい。

【0120】

ＡＳＴ、ＡＬＴ、ビリルビン及びクレアチニンなどのバイオマーカーのための好ましい薬剤は、例えば実施例に記載されており、実施例１を参照されたい。

【0121】

バイオマーカーがＡＳＴ又はＡＬＴなどの酵素である場合、検出剤は、酵素の基質、又は検出に使用される任意の薬剤であり得る（実施例を参照）。

【0122】

一実施形態では、ＡＬＴ（ＡＬＡＴ）の検出剤は、例えばＬ－アラニンである。

【0123】

一実施形態では、ＡＳＴ（ＡＳＡＴ）のための検出剤は、例えば、Ｌ－アスパラギン酸である。

【0124】

クレアチニンの検出剤は、例えば、クレアチニナーゼ、又は検出に使用される任意の薬剤である（実施例を参照）。

【0125】

アルブミンの検出剤は、例えばブロムクレゾールパープルである。

【0126】

ビリルビンの検出剤は、例えば亜硝酸ナトリウム及びスルファニル酸、又は検出に使用される任意の薬剤である（実施例を参照）。

【0127】

本明細書に記載のバイオマーカーの決定は、分離工程（例えば、ＬＣ又はＨＰＬＣによって）の後に実行される質量分析（ＭＳ）を含み得る。本明細書で使用される質量分析は、本発明に従って決定される化合物、すなわちバイオマーカーに対応する分子量（すなわち、質量）又は質量変数の決定を可能にする全ての技術を包含する。好ましくは、本明細書で使用される質量分析は、ＧＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ、直接注入質量分析、ＦＴ－ＩＣＲ－ＭＳ、ＣＥ－ＭＳ、ＨＰＬＣ－ＭＳ、四重極質量分析、ＭＳ－ＭＳ若しくはＭＳ－ＭＳ－ＭＳなどの任意の連続的に結合された質量分析、ＩＣＰ－ＭＳ、Ｐｙ－ＭＳ、ＴＯＦ、又は前述の技術を使用する任意の組み合わせアプローチに関する。これらの技術をどのように適用するかは、当業者に周知である。更に、適切なデバイスが市販されている。より好ましくは、本明細書で使用される質量分析は、ＬＣ－ＭＳ及び／又はＨＰＬＣ－ＭＳ、すなわち、事前の液体クロマトグラフィー分離工程に動作可能に連結された質量分析に関する。好ましくは、質量分析はタンデム質量分析（ＭＳ／ＭＳとしても知られる）である。タンデム質量分析は、ＭＳ／ＭＳとしても知られており、２つ以上の質量分析工程を含み、段階の間に断片化が生じる。タンデム質量分析では、コリジョンセルによって接続された直列の２つの質量分析計がある。質量分析計は、クロマトグラフィーデバイスに連結されている。クロマトグラフィーにより分離された試料は、第１の質量分析装置において選別及び秤量された後、コリジョンセルにおいて不活性ガスにより断片化され、第２の質量分析装置において選別及び秤量される。断片を選別し、第２の質量分析計で秤量する。ＭＳ／ＭＳによる同定はより正確である。

【0128】

一実施形態では、本明細書で使用される質量分析は四重極ＭＳを包含する。最も好ましくは、当該四重極ＭＳは、以下のように実行される：ａ）質量分析計の第１の分析四重極でのイオン化によって生成されたイオンの質量／電荷商（ｍ／ｚ）の選択、ｂ）コリジョンガスで満たされ、コリジョンチャンバとして作用する追加の後続の四重極で加速電圧を印加することによる、工程ａ）で選択されたイオンのフラグメンテーション、ｃ）追加の後続の四重極での工程ｂ）のフラグメンテーションプロセスによって生成されたイオンの質量／電荷商の選択、それによって方法の工程ａ）～ｃ）が少なくとも１回実行され、イオン化プロセスの結果として物質の混合物中に存在する全てのイオンの質量／電荷商の分析が実行され、それによって四重極はコリジョンガスで満たされるが、分析中に加速電圧は印加されない。本発明に従って使用される当該最も好ましい質量分析に関する詳細は、国際公開第２００３／０７３４６４号に見出すことができる。

【0129】

より好ましくは、当該質量分析は、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）ＭＳ、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ＭＳ、特にＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳである。本明細書で使用される液体クロマトグラフィーは、液体又は超臨界相での化合物（すなわち、代謝産物）の分離を可能にする全ての技術を指す。

【0130】

質量分析のため、試料中の分析物は、荷電分子又は分子断片を生成するためにイオン化される。その後、イオン化された分析物、特にイオン化されたバイオマーカー又はその断片の質量電荷が測定される。イオン化の前に、試料をプロテアーゼ、例えばトリプシンによる切断に供してもよい。プロテアーゼは、タンパク質バイオマーカーをより小さな断片に切断する。

【0131】

したがって、質量分析工程は、好ましくは、決定されるバイオマーカーがイオン化されるイオン化工程を含む。もちろん、試料／溶離液中に存在する他の化合物もイオン化される。バイオマーカーのイオン化は、適切と考えられる任意の方法によって、特に電子衝撃イオン化、高速原子衝撃、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化（ＡＰＣＩ）、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）によって行うことができる。

【0132】

好ましい実施形態では、（質量分析のための）イオン化工程は、エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）によって行われる。したがって、質量分析はＥＳＩ－ＭＳ（又はタンデムＭＳを行う場合：ＥＳＩ－ＭＳ／ＭＳ）が好ましい。エレクトロスプレーは、化学結合を破壊することなくイオンを形成するソフトイオン化法である。

【0133】

より典型的には、第３のバイオマーカー又は当該第３のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤が更に使用され、当該第３のバイオマーカーは、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである。

【0134】

本発明はまた、感染の疑いがある対象を評定するためのキットであって、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤と、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤とを含む、感染の疑いがある対象を評定するためのキットに関する。

【0135】

本明細書で使用される場合、「キット」という用語は、典型的には、別個の又は単一の容器内に提供される上述の成分の集合を指す。容器はまた、典型的には、本発明の方法を実行するための指示書も含む。これらの指示書は、マニュアルの形態であってもよく、又はコンピュータ若しくはデータ処理デバイスに実装されたときに本発明の方法で言及されるバイオマーカーの決定を実行又は支援することができるコンピュータプログラムコードによって提供されてもよい。コンピュータプログラムコードは、光記憶媒体（例えば、コンパクトディスク）などのデータ記憶媒体若しくはデバイス上に、又はコンピュータ若しくはデータ処理デバイス上に直接提供されてもよく、又はアクセス可能なサーバ若しくはクラウドへのリンクなどのダウンロード形式で提供されてもよい。更に、キットは、通常、本明細書の他の箇所に詳細に記載されているように、較正目的のためのバイオマーカーの基準量の標準を含み得る。本発明によるキットはまた、放出された第２の分子の検出に必要な溶媒、緩衝液、洗浄液及び／又は試薬などの本発明の方法を実行するために必要な更なる成分を含み得る。更に、本発明のデバイスを部分的に又は全体的に含むことができる。

【0136】

より典型的には、当該キットは、第３のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤を更に含み、第３のバイオマーカーは、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである。

【0137】

したがって、上記の用語の定義及び説明は、本明細書及び添付の特許請求の範囲に記載された全ての実施形態に適用されることを理解されたい。以下の実施形態は、本発明に従って想定される特定の実施形態である。

【0138】

実施形態１：感染の疑いがある対象を評定するための方法であって、
（ａ）対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程であって、当該第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量を決定する工程、
（ｂ）対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程であって、当該第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量を決定する工程、
（ｃ）バイオマーカーの量を、当該バイオマーカーの基準と比較する工程及び／又はバイオマーカーの量に基づいて感染の疑いがある対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに
（ｄ）工程（ｃ）で行われた比較及び／又は計算に基づいて当該対象を評定する工程
を含む、感染の疑いがある当該対象を評定するための方法。

【0139】

実施形態２：工程（ｂ）において、
（ｉ）ｓＦＬＴ１の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、
（ｉｉ）シスタチンＣの量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、ビリルビン又はプロカルシトニンの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、
（ｉｖ）ビリルビンの量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、クレアチニンの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含むか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１の量が第２のバイオマーカーとして決定される場合、方法が、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量を第３のバイオマーカーとして決定することを更に含む、実施形態の方法。

【0140】

実施形態３：前記対象が、救急部に来院する対象である、実施形態１又は２の方法。

【0141】

実施形態４：前記評定が、敗血症を発症するリスクの評定及び／又は前記対象の前記対象の症状が悪化するリスクの評定である、実施形態１～３のいずれか１つの方法。

【0142】

実施形態５：前記基準が、敗血症を発症するリスクがあることが知られている少なくとも１名の対象に由来する各バイオマーカーの基準であり、好ましくは、前記バイオマーカーの各々についての量が、対応する前記基準と本質的に同一若しくは類似であることが、敗血症を発症するリスクがある対象を示し、前記バイオマーカーの各々についての量が前記対応する基準と異なることが、敗血症を発症するリスクがない対象を示す、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

【0143】

実施形態６：前記基準が、敗血症を発症するリスクがないことが知られている少なくとも１名の対象に由来する各バイオマーカーの基準であり、好ましくは、前記バイオマーカーの各々についての量が、対応する前記基準と本質的に同一若しくは類似であることが、敗血症を発症するリスクがない対象を示し、前記バイオマーカーの各々についての量が前記対応する基準と異なることが、敗血症を発症するリスクがある対象を示す、実施形態１～４のいずれか１つの方法。

【0144】

実施形態７：前記対象が、感染症に罹患しているか又は感染症に罹患している疑いがある、実施形態１～６のいずれか１つの方法。

【0145】

実施形態８：前記試料が、血液試料又はそれに由来する試料である、実施形態１～７のいずれか１つの方法。

【0146】

実施形態９：前記対象がヒトである、実施形態１～８のいずれか１つの方法。

【0147】

実施形態１０：感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）対象の試料中の第１のバイオマーカーの量についての値を受け取る工程であって、当該第１のバイオマーカーがＧＤＦ－１５である、対象の試料中の第１のバイオマーカーの量の値を受け取る工程、
（ｂ）対象の試料中の第２のバイオマーカーの量についての値を受け取る工程であって、当該第２のバイオマーカーが、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される、対象の試料中の第２のバイオマーカーの量の値を受け取る工程、
（ｃ）前記バイオマーカーの前記量についての値を、前記バイオマーカーの基準と比較する工程及び／又は前記バイオマーカーの前記量に基づいて感染の疑いがある前記対象を評定するためのスコアを計算する工程、並びに
（ｄ）工程（ｃ）で行われた比較及び／又は計算に基づいて当該対象を評定する工程
を含む、感染の疑いがある対象を評定するためのコンピュータ実装方法。

【0148】

実施形態１１：工程（ｂ）において、
（ｉ）ｓＦＬＴ１の量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン又はシスタチンＣの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、
（ｉｉ）シスタチンＣの量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７の量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、ビリルビン又はプロカルシトニンの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、
（ｉｖ）ビリルビンの量についての値が第２のバイオマーカーとして受け取られる場合、方法は、クレアチニンの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含むか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１の量についての値を第２のバイオマーカーとして受け取る場合、方法は、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの量についての値を第３のバイオマーカーとして受け取ることを更に含む、実施形態１０の方法。

【0149】

実施形態１２：感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスであって、
（ａ）対象の試料中の、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーの量を測定するための測定ユニットであって、当該測定ユニットが、第１バイオマーカー及び第２バイオマーカーの検出システムを備える、測定ユニットと、
（ｂ）前記測定ユニットに動作可能に連結された評価ユニットであって、好ましくは実施形態１～９のいずれか１つの前記第１のバイオマーカー及び前記第２のバイオマーカーのための保存された基準を有するデータベースと、好ましくは実施形態１～９のいずれか１つの、前記第１のバイオマーカー及び前記第２のバイオマーカーの前記量と基準との比較を実行するための及び／又は前記バイオマーカーの前記量に基づいて感染の疑いがある前記対象を評定するためのスコアの計算を実行するための、並びに前記比較に基づいて前記対象を評定するための命令を含むデータプロセッサとを備え、前記測定ユニットから前記バイオマーカーの前記量についての値を自動的に受け取ることができる、評価ユニットと
を備える、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイス。

【0150】

実施形態１３：前記測定ユニットが、第３のバイオマーカーを測定し、第３のバイオマーカーの検出システムを備え、前記データベースが、第３のバイオマーカーのための保存された基準を含み、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、実施形態１２のデバイス。

【0151】

実施形態１４：前記検出システムが、前記バイオマーカーの各々を特異的に検出することができる少なくとも１つの検出剤を含む、実施形態１２又は１３のデバイス。

【0152】

実施形態１５：感染の疑いがある対象を評定するためのデバイスであって、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーについての保存された基準を有するデータベースを含む評価ユニットと、好ましくは実施形態１～１１のいずれか１つの、前記第１のバイオマーカー及び前記第２のバイオマーカーの前記量と基準との比較を実行するための、並びに前記比較に基づいて前記対象を評定するための命令を含むデータプロセッサとを備え、前記評価ユニットが、前記対象の試料において決定された前記バイオマーカーの前記量についての値を受け取ることができる、感染の疑いがある対象を評定するためのデバイス。

【0153】

実施形態１６：前記データベースが、第３のバイオマーカーについての保存された基準を含み、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、実施形態１５のデバイス。

【0154】

実施形態１７：感染の疑いがある対象を評定するための、ｉ）ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカー、並びにｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカー、又はｉｉ）前記第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤及び前記第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤の使用。

【0155】

実施形態１８：第３のバイオマーカー又は前記第３のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤が追加で使用され、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、実施形態１７の使用。

【0156】

実施形態１９：感染の疑いがある対象を評定するためのキットであって、ＧＤＦ－１５である第１のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤と、ｓＦＬＴ１、シスタチンＣ、ＩＧＦＢＰ－７、ビリルビン、ＥＳＭ－１、ｓＴＲＥＭ－１、プロカルシトニン、心臓トロポニン、ＢＮＰ型ペプチド、アラニンアミノトランスフェラーゼ及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼからなる群から選択される第２のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤とを含む、感染の疑いがある対象を評定するためのキット。

【0157】

実施形態２０：前記キットが、第３のバイオマーカーに特異的に結合する検出剤を更に含み、前記第３のバイオマーカーが、
（ｉ）ｓＦＬＴ１が第２のバイオマーカーである場合、ｓＴＲＥＭ－１、アンチトロンビン若しくはシスタチンＣであるか、
（ｉｉ）シスタチンＣが第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン、アラニンアミノトランスフェラーゼ若しくはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼであるか、
（ｉｉｉ）ＩＧＦＢＰ－７が第２のバイオマーカーである場合、ビリルビン若しくはプロカルシトニンであるか、
（ｉｖ）ビリルビンが第２のバイオマーカーである場合、クレアチニンであるか、又は
（ｖ）ｓＴＲＥＭ－１が第２のバイオマーカーである場合、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである、実施形態１９のキット。

【0158】

実施形態２１：前記評定が、敗血症を発症するリスクの評定である、先行する実施形態のいずれか１つの方法、デバイス、使用又はキット。

【0159】

実施形態２１：４８時間以内に敗血症を発症するリスクが予測される、先行する実施形態のいずれか１つの方法、デバイス、使用又はキット。

【0160】

本明細書を通して引用された全ての参考文献は、上記で具体的に言及された開示内容及びその全体に関して本明細書に組み込まれる。

【実施例】

【0161】

実施例は、単に本発明を例示するものである。それらは、その範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。

【0162】

実施例１：バイオマーカーの決定
ＧＤＦ－１５の測定について、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）Ｅｌｅｃｔｒｏ－ＣｈｅｍｉＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ）技術及びアッセイ方法を以下に簡単に説明する。ＧＤＦ－１５の濃度を、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置によって決定した。Ｃｏｂａｓ ｅ ８０１分析装置によるＧＤＦ－１５の検出は、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）Ｅｌｅｃｔｒｏ－ＣｈｅｍｉＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＥＣＬ）技術に基づいている。簡潔には、ビオチン標識及びルテニウム標識抗体をそれぞれの量の未希釈試料と合わせ、分析装置でインキュベートする。続いて、ビオチン標識免疫複合体の結合を促進するために、ストレプトアビジン被覆磁性微粒子を添加し、機器でインキュベートする。このインキュベーション工程の後、反応混合物を測定セルに移し、そこでビーズを電極の表面に磁気的に捕捉する。次いで、結合したイムノアッセイ複合体を遊離の残りの粒子から分離するために、その後のＥＣＬ反応のためのトリプロピルアミン（ＴＰＡ）を含有するＰｒｏＣｅｌｌ Ｍ緩衝液を測定セルに導入する。次いで、作用電極と対電極との間の電圧の誘導は、ルテニウム錯体及びＴＰＡによる光子の放出をもたらす反応を開始させる。光電子増倍管によって得られた電気化学発光シグナルは、記録され、それぞれの分析物の濃度レベルを示す数値に変換される。

【0163】

ＳＦＬＴ１又はｓＦＬＴ－１（可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ－１）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に開発されたサンドイッチ免疫アッセイであるｓＦＬＴ－１の市販のＥＣＬＩＡアッセイで測定した。このアッセイは、ｓＦＬＴ－１に特異的に結合するビオチン化モノクローナル抗体及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から１２μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0164】

ＰＣＴ（プロカルシトニン）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に開発されたサンドイッチ免疫アッセイであるプロカルシトニンの市販のＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ＰＣＴに特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から１８μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0165】

ＧＤＦ１５（増殖／分化因子１５）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に開発されたサンドイッチ免疫アッセイである、ＧＤＦ－１５の市販のＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ＧＤＦ－１５に特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から２１μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0166】

ＣｙｓＣ２（シスタチンＣ）は、ｃｏｂａｓ（登録商標）臨床化学分析装置プラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）用に開発されたＣｙｓＣの市販のＰＥＴＩＡ（粒子増強免疫比濁アッセイ）で測定した。アッセイは、ＣｙｓＣに特異的に結合する抗体でコーティングされたラテックス粒子を含む。抗体試薬と試料とを混合してインキュベートすると、ラテックスは、試薬中の抗シスタチンＣ抗体でコーティングされた粒子を増強し、試料中のヒトシスタチンＣと凝集する。凝集物によって引き起こされる濁度の程度は、５４６ｎｍで比濁法によって決定することができ、試料中のシスタチンＣの量に比例する。各血清試料から２μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｃ ５０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で測定した。

【0167】

ＴＮＴＨＳ又はｃＴＮＴｈ（心臓トロポニンＴ）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）のために開発されたサンドイッチ免疫アッセイである高感度－ｃＴｒｏｐｏｎｉｎＴのための市販のＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ｃＴｎＴｈｓに特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から５０μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0168】

ＦＥＲＲ（フェリチン）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に開発されたサンドイッチ免疫アッセイである、フェリチンの市販のＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、フェリチンに特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から１０μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0169】

ＰＢＮＰ又はＮＴｐＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチドのＮ末端プロホルモン）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に開発されたサンドイッチ免疫アッセイであるＮＴｐｒｏＢＮＰの市販のＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ＮＴｐｒｏＢＮＰに特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から１５μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ８０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0170】

ＩＧＦＢＰ７（インスリン様成長因子結合タンパク質７）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に社内で開発されたサンドイッチ免疫アッセイである、ＩＧＦＢＰ－７のロバストなプロトタイプＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ＩＧＦＢＰ－７に特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から１０μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ６０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0171】

ＥＳＭ１（内皮細胞特異的分子１）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に社内で開発されたサンドイッチ免疫アッセイである、ＥＳＭ－１のロバストなプロトタイプＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ＥＳＭ－１に特異的に結合するビオチン化及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から２０μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ６０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0172】

ＳＴＲＥＭ１又はｓＴＲＥＭ－１（骨髄細胞１上に発現される可溶性トリガー受容体）を、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国からのＥＣＬＩＡアッセイ）用に社内で開発されたサンドイッチ免疫アッセイであるｓＴＲＥＭ－１のロバストなプロトタイプＥＣＬＩＡアッセイで測定した。このアッセイは、ＴＲＥＭ－１に特異的に結合するビオチン化モノクローナル抗体及びルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から５０μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ６０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で希釈せずに測定した。

【0173】

ＣＲＥＰ２（クレアチニン）：この酵素法は、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ、及びサルコシンオキシダーゼの助けによるクレアチニンのグリシン、ホルムアルデヒド、及び過酸化水素への変換に基づく。ペルオキシダーゼによって触媒されると、遊離した過酸化水素は４－アミノフェナゾン及びＨＴＩＢ ａ）と反応してキノンイミン色素原を形成する。形成されたキノンイミン色素原の着色強度は、反応混合物中のクレアチニン濃度に正比例する。Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ドイツ）からのアッセイ。１．７μＬの血漿を分析した。試料を、ｃｏｂａｓ ｃ ５０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で測定した。

【0174】

ＡＴ．ｐｃ（アンチトロンビンパーセンテージ）：速度論的比色試験。この試験は、アンチトロンビン（ＡＴ）ヘパリン補因子アッセイの原理に従って機能する。ヘパリン及び所定量のトロンビンを過剰に試料に添加する。存在する全ての遊離アンチトロンビンは、トロンビンに結合して不活性複合体を形成する。非阻害トロンビンは、発色基質ＭｅＯＣＯ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－ｐＮＡからｐ－ニトロアニリンを遊離する。トロンビンの残存量は試料のアンチトロンビン含有量に反比例するため、波長４１５ｎｍでの吸光度の増加を使用してアンチトロンビン活性を計算することができる。Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（ドイツ）からのアッセイ。１μＬの血漿を分析した。試料を、ｃｏｂａｓ ｃ ５０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ国）で測定した。

【0175】

ＢＩＬＩ（ビリルビン）：ジアゾ化されたスルファニル酸は、低ｐＨで亜硝酸ナトリウムとスルファニル酸とを組み合わせることによって形成される。試料中のビリルビン（非抱合）を、カフェイン／安息香酸塩／酢酸塩／ＥＤＴＡの混合物中で希釈することによって可溶化する。ジアゾ化スルファニル酸を添加すると、コンジュゲート化ビリルビン（モノグルコニド及びジグルコニド）及びデルタ形態２（アルブミンに共有結合したビリタンパク質－ビリルビン）を含む可溶化ビリルビンがジアゾビリルビンに変換され、これは５４０ｎｍで吸収する総ビリルビンを表す赤色発色団であり、二色性（５４０ｎｍ、７００ｎｍ）エンドポイント技術を用いて測定される。試料ブランク補正を使用する。

【0176】

ＡＬＡＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）：アラニンアミノトランスフェラーゼは、Ｌ－アラニンのα－ケトグルタル酸（α－ＫＧ）へのアミノ基転移を触媒し、Ｌ－グルタル酸及びピルビン酸を形成する。形成されたピルビン酸は、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）によって乳酸塩に還元され、同時に還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）が酸化される。吸光度の変化はアラニンアミノトランスフェラーゼ活性に正比例し、二色性（３４０ｎｍ、７００ｎｍ）速度技術を用いて測定される。

【0177】

ＡＳＡＴ（アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ）：アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）は、Ｌ－アスパラギン酸からα－ケトグルタル酸へのアミノ基転移を触媒し、Ｌ－グルタミン酸及びシュウ酸を形成する。形成されたシュウ酸塩は、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）の同時酸化と共にリンゴ酸デヒドロゲナーゼ（ＭＤＨ）によってリンゴ酸塩に還元される。ＮＡＤＨのＮＡＤへの変換による経時的な吸光度変化はＡＳＴ活性に正比例し、二色性（３４０ｎｍ、７００ｎｍ）速度技術を用いて測定される。

【0178】

ＡＬＢ（アルブミン）：可溶化剤の存在下で、ＢＣＰはｐＨ４．９でアルブミンに結合する。アルブミン－ＢＣＰ複合体の量はアルブミン濃度に正比例する。複合体は６００ｎｍで吸収し、多色（６００ｎｍ、５４０ｎｍ、７００ｎｍ）エンドポイント技術を使用して測定される。

【0179】

実施例２：ＴＲＩＡＧＥ試験からの患者の分析
ＴＲＩＡＧＥ Ｓｔｕｄｙ，Ｋａｎｔｏｎｓｓｐｉｔａｌ Ａａｒａｕ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ，Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ．（Ｓｃｈｕｅｔｚ ２０１３，ＢＭＣ ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１３（１），１２）．

【0180】

医療上の緊急事態のために救急部（ＥＤ）のケアを受けようとしている全ての継続受診患者をＥＤ入院時に含めた。合計４０００人の患者から、以下に従って、入院時に感染の疑いがある患者のサブセットを選択し、蓋然性の高い敗血症症例群又は感染症対照群に分類した。
● 症例（Ｎ＝６４）：ＩＣＵに入院しているか、又はＲｈｅｅ ２０１７、“Ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｒｅｎｄｓ ｏｆ Ｓｅｐｓｉｓ ｉｎ ＵＳ Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ Ｕｓｉｎｇ Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｖｓ Ｃｌａｉｍｓ Ｄａｔａ，２００９－２０１４．”ＪＡＭＡ ３１８（１３）：１２４１－１２４９の基準を満たす場合、ＥＤ来院の４８時間以内に悪化／より高い重症度を有する可能性の高い敗血症症例。
● 対照（Ｎ＝２０７）：ＥＤ来院の４８時間以内に感染の疑いがある敗血症はない患者。

【0181】

マーカーをロジスティック回帰によって数学的に組み合わせ、「受信者動作特性下面積」（ＡＵＣ）をマーカー性能の一般的な尺度として使用した。

【0182】

敗血症のエンドポイントに加えて、ＥＤ入院時に感染の疑いがある患者の集団における「一般的な悪化」エンドポイント（すなわち、敗血症診断とは無関係に患者の症状が悪化したかどうか）も評定した。患者を以下に従って症例及び対照に分類した：
症例：悪化を以下のように定義する：介護の増加（すなわち、ＩＣＵへの入院）、又は病院内での死亡、又は入院から３０日以内の死亡、又は退院から３０日以内の再入院。
対照：感染の疑いがあるが悪化していない患者

【0183】

少なくとも１パーセンテージポイントだけ単一マーカーよりもＡＵＣが改善されたマーカー対の組み合わせ（二変量マーカー組み合わせ）を表１に示す（敗血症エンドポイントについて）。

【表1】

【0184】

二変量マーカー対並びに３つ全ての単一マーカーの組み合わせよりもＡＵＣが少なくとも１パーセンテージポイント改善されたマーカートリプレットの組み合わせ（三変量マーカー組み合わせ）を表２に示す（敗血症エンドポイントについて）。

【表2】

【0185】

単一のマーカーよりも改善されていないマーカーの二変量組合せの例を表３に示す（敗血症エンドポイントについて）。表３は、敗血症マーカーを組み合わせることの非自明性を実証している。

【表3】

【0186】

悪化エンドポイントについて、単一マーカーよりも少なくとも１パーセントポイントだけＡＵＣが改善されたマーカー対の組み合わせ（二変量マーカー組み合わせ）を表４に示す。

【表4】

【0187】

単一のマーカーよりも改善されていない悪化エンドポイントについてのマーカーの二変量組み合わせの例を表５に示す。表５は、敗血症マーカーを組み合わせることの非自明性を実証している。

【表5】

【国際調査報告】