特表 2024-515100 特定のＨＤＡＣ６阻害剤及び、少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤を含む組合せ

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-04

(54)【発明の名称】特定のＨＤＡＣ６阻害剤及び、少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤を含む組合せ

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/41 20060101AFI20240328BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240328BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240328BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240328BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240328BHJP

【ＦＩ】

A61K31/41

A61P43/00 121

A61P35/00

A61K45/00

A61K39/395 T

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023564130

(86)(22)【出願日】2022-04-19

(85)【翻訳文提出日】2023-10-19

(86)【国際出願番号】 EP2022060287

(87)【国際公開番号】W WO2022223543

(87)【国際公開日】2022-10-27

(31)【優先権主張番号】102021000009926

(32)【優先日】2021-04-20

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IT

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591279294

【氏名又は名称】イタルファルマコ ソシエタ ペル アチオニ

【氏名又は名称原語表記】ＩＴＡＬＦＡＲＭＡＣＯ ＳＯＣＩＥＴＡ ＰＥＲ ＡＺＩＯＮＩ

(74)【代理人】

【識別番号】110001243

【氏名又は名称】弁理士法人谷・阿部特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ジャンルカ フォサーティ

(72)【発明者】

【氏名】フラヴィオ レオーニ

(72)【発明者】

【氏名】ピエトロ サムエレ ポッツィ

(72)【発明者】

【氏名】エリザベッタ ガルビアーティ

(72)【発明者】

【氏名】クリスティアン ステインクーラー

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA66

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC751

4C085AA14

4C085BB31

4C085DD61

4C085EE03

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、腫瘍の免疫療法及び、ＨＤＡＣ６介在の一つ以上の疾患の治療において有用である、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤を含む組合せに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤を含む組合せ。

【請求項2】

前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤は、イピリムマブ又は、トレメリムマブである、請求項１に記載の組合せ。

【請求項3】

薬剤としての使用である、請求項１又は２に記載の組合せ。

【請求項4】

抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤ-Ｌ１抗体による治療により向上又は予防されやすい、いかなる疾患又は条件の治療における、請求項３に記載の使用のための組合せ。

【請求項5】

抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤＬ１抗体による治療の中止をした患者の治療における、請求項３又は４に記載の使用のための組合せ。

【請求項6】

腫瘍の免疫療法又は、ＨＤＡＣ６介在の一つ以上の疾患の治療における、請求項３～５のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。

【請求項7】

抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤＬ１抗体による治療を受けていない患者の治療における、請求項６に記載の使用のための組合せ。

【請求項8】

悪性黒色腫、乳がん、腎細胞がん、非小細胞肺がん、及び結腸直腸がんから選択される一つ以上の疾患の治療における、請求項６又は７に記載の使用のための組合せ。

【請求項9】

Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤が、同時、別途又は、順次に投与されることを特徴とする、請求項３～８のいずれか一項に記載の使用のための組合せ。

【請求項10】

Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミドが、毎日、好ましくは、一日に２～３回、より好ましくは、経口経路により、そして、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤は、２～４週毎に、好ましくは、静脈注射により、患者に投与されることを特徴とする、請求項９に記載の使用のための組合せ。

【請求項11】

Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミドが、２００ｍｇ～１０００ｍｇＢＩＤ又は、１００ｍｇ～１０００ｍｇＴＩＤの範囲の量で、そして、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤が、２～４週毎に０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、２～４週毎に１～３ｍｇ／ｋｇの範囲の量で、患者に投与されることを特徴とする、請求項９又は１０に記載の使用のための組合せ。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、腫瘍の免疫療法及び、ＨＤＡＣ６介在の一つ以上の疾患の治療において有用である、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、少なくとも一つのＣＴＬＡチェクポイント阻害剤を含む組合せに関する。

【背景技術】

【0002】

Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド（本明細書では、「ＩＴＦ３７５６」としても示す）は、特許文献１に開示されている化合物８であり、この文献は、その合成方法、及び、ＨＤＡＣ６阻害剤としてのその活性、並びに、移植片拒絶、ＧＶＨＤ、筋炎、異常なリンパ球機能と関連する疾患、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、末梢神経障害、自己免疫疾患、炎症性疾患、がん、神経変性病理などの治療を開示している。

【0003】

ヒトＨＤＡＣクラスは、２つの群、亜鉛依存性ＨＤＡＣと、サーチュイン（クラスＩＩＩ）としても知られるＮＡＤ依存性ＨＤＡＣとに分けられる、１８種の酵素からなる。亜鉛依存性ＨＤＡＣは、４つのクラス：１）主として核に所在が確認される偏在性アイソザイムであるＨＤＡＣ１、２、３、および８を含むクラスＩ、２）核および細胞質の両方に所在が確認されるアイソザイムであるＨＤＡＣ４、５、７、および９を含むクラスＩＩａ、３）主として細胞質に所在が確認されるＨＤＡＣ６およびＨＤＡＣ１０を含むクラスＩＩｂ、および４）ＨＤＡＣ１１だけを含むクラスＩＶにさらに分配される。クラスＩＩａおよびＩＩｂは、クラスＩ ＨＤＡＣとは異なり、組織特異的に発現する。

【0004】

ＨＤＡＣファミリー、または特定のアイソフォーム、特にＨＤＡＣ６のための選択的阻害剤は、増殖性障害およびタンパク質蓄積に関連した病理、免疫系障害、ならびに神経疾患および神経変性疾患、たとえば、卒中、ハンチントン病、ＡＬＳ、アルツハイマー病の治療に特に有用となり得る。

【0005】

特にＨＤＡＣ６アイソフォームについては、α－チューブリン、Ｈｓｐ９０（熱ショックタンパク質９０）、コルタクチン、β－カテニンなどの、異なる基質が確認されている。これらタンパク質のアセチル化のＨＤＡＣ６による変調は、免疫応答（非特許文献１；非特許文献２）、細胞移動および細胞－細胞相互作用を含む微小管動力学の調節（非特許文献３）、変性したタンパク質の分解などの、いくつかの重要な過程との相互関係が示されている。

【0006】

加えて、ＨＤＡＣ６は、アグリソームとして知られる複合体を介した、分解されたタンパク質の異化の過程にも関与する。ＨＤＡＣ６は、ポリユビキチン化タンパク質およびダイニンを結合し、したがって、変性したタンパク質の、微小管に沿ったアグリソームへの一種の送達を活性化することができる（非特許文献４）。

【0007】

このＨＤＡＣ６細胞保護活性の変化は、変性したタンパク質の蓄積を一般的な病理学的特色とする、パーキンソン病（非特許文献５）やハンチントン病（非特許文献６）などの種々の神経変性病理との相互関係が示されている。

【0008】

さらにＨＤＡＣ６は、特に、種々のタイプの白血病（非特許文献７）や多発性骨髄腫（非特許文献８）などの血液腫瘍において、多くの腫瘍学的タンパク質の調節に関与する。ＨＤＡＣ６によるα－チューブリンアセチル化の調節は、細胞の運動性が重要な役割を果たす、転移開始に関係している可能性もある（非特許文献９）。

【0009】

近年、ＨＤＡＣ６は、この酵素が、免疫チェクポイント蛋白ＰＤ-Ｌ１の発現の必須の調節剤であることが示されたことから、新規ガン免疫療法のターゲットとして関心を集めている（非特許文献１０）。ＨＤＡＣ６は、臨床前のガン免疫療法モデルにおいて効果的であることが示され、そして、抗ＰＤ-Ｌ１抗体の活性を増強させることが示されている（非特許文献１１，非特許文献１２，非特許文献１３）。

【0010】

ＣＴＬＡ４又は、ＣＴＬＡ-４（細胞毒性Ｔ-リンパ球-関連蛋白４）は、免疫チェクポイントとして機能し、そして、免疫応答を低減させる蛋白レセプターである。ＣＴＬＡ４は、制御性Ｔ細胞中で、恒常的に発現され、しかし、活性化後に、典型的なＴ細胞中では低減される－ガンにおいて特に注目すべき現象。抗原-存在細胞の表面上でＣＤ８０又はＣＤ８６に結合されているとき、それは「オフ」スイッチとして働く。

【0011】

（ＣＴＬＡ４に対するアンタゴニスト抗体を使用して）ＣＴＬＡ４をブロックする可能な治療上の利点に対する興味が増加している。イピリムマブは、悪性黒色腫の治療に対して、２０１１年３月に、米国、食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された最初の抗ＣＴＬＡ４抗体である。ＦＤＡは、進行悪性黒色腫の患者に対して、抗ＣＴＬＡ４治療イピリムマブ３ｍｇ／ｋｇプラス抗ＰＤ-１治療ニモルマブ１ｍｇ／ｋｇの投与も承認している。この投与計画は、生存率を上げ、進行を抑制させ、そして、イピリムマブ単独と比較して、他覚的奏効果（ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を達成する患者数を増加させる（非特許文献１４）。しかし、これらの利点は、グレード３／４処置関連の有害事象の高い割合を含む、毒性の増加を伴う。例えば、ニモルマブによる治療は、以下の有害事象；腎炎、肝炎、膵炎及び、肺炎に関連している（非特許文献１５）。

【0012】

他の薬剤とチェクポイント阻害剤の組合せに、多くの興味が示されている。もちろん、目的は、適切な他の薬剤を見出すことである。肺がん、そして、現在は乳がん、そして、化学療法が効果的な他の疾患の世界で、研究者は、免疫チェクポイント阻害剤による治療と化学療法の組合せを探し、それらは、いくつかの成功を生み出している。

【0013】

しかしながら、組合せ治療は、ペムブロリズマブ単独に対して、プログレッションフリーサバイバルを改善する最初のプライマリーエンドポイントを欠くことから、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ-１）のフェーズＩＩＩトライアル、および、２０１８年４月に中止された、悪性黒色腫に対するインドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）阻害剤、エパカドスタットのようないくつかの失敗が起きている。

【0014】

機械論的な観点からは、この組合せは、良好な結果を生じさせる感覚を与えるが、しかし、この組合せの劇的な失敗は、開発を前に進めるための組合せを精査して良い仕事をするために、どのようなことが必要かを研究者に提供する良い教訓を与える。

【先行技術文献】

【特許文献】

【0015】

【特許文献1】国際公開第２０１８／１８９３４０号パンフレット

【非特許文献】

【0016】

【非特許文献1】Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． （２０１２）， ５５， ６３９－６５１

【非特許文献2】Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． （２０１１）， ３１（１０）， ２０６６－２０７８

【非特許文献3】Ａｌｄａｎａ－Ｍａｓａｎｇｋａｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． （２０１１）， ２０１１， ８７５８２４

【非特許文献4】Ｋａｗａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ （２００３） １１５ （６）， ７２７－７３８

【非特許文献5】Ｏｕｔｅｒｉｏ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ （２００７）， ３１７ （５８３７）， ５１６－５１９

【非特許文献6】Ｄｏｍｐｉｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． （２００７）， ２７（１３）， ３５７１－３５８３

【非特許文献7】Ｆｉｓｋｕｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ （２００８）， １１２（７）， ２８９６－２９０５

【非特許文献8】Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ （２００５）， １０２（２４）， ８５６７－８５７２

【非特許文献9】Ｓａｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． （２０１１）， ２０１１， ８７５８２４

【非特許文献10】Ｌｉｅｎｌａｆ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ Ｏｎｃｏｌ ２０１６ Ｍａｙ；１０（５）：７３５－７５０

【非特許文献11】Ｒａｙ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｕｋｅｍｉａ ２０１８ Ｍａｒ；３２（３）：８４３－８４６．

【非特許文献12】Ｋｅｒｅｍｕ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ２０１９ Ｆｅｂ；８３（２）：２５５－２６４

【非特許文献13】Ｋｎｏｘ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉ Ｒｅｐ． ２０１９ Ａｐｒ １６；９（１）：６１３６

【非特許文献14】Ｌａｒｋｉｎ Ｊ ｅｔ ａｌ． ｎ ｅｎｇｌ ｊ ｍｅｄ ３８１；１６ ２０１９

【非特許文献15】Ｋａｎｇ ＪＨ ｅｔ ａｌ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４２， ２９３， ２０２１

【非特許文献16】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ， ｓｉｘｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ ２００９

【非特許文献17】Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓａｌｔｓ， Ｐ． Ｓｔａｈｌ， Ｃ． Ｗｅｒｍｕｔｈ， ＷＩＬＥＹ－ＶＣＨ， １２７－１３３， ２００８

【非特許文献18】ＰＡＰＡＧＩＡＮＮＯＲＯＳ Ａ． ＥＴ ＡＬ． ＩＮ ＶＩＶＯ ２０：１２９－１３６， ２００６

【非特許文献19】ＪＥＮＳＥＮ Ｍ．Ｍ． ＥＴ ＡＬ． ＢＭＣ ＭＥＤＩＣＡＬ ＩＭＡＧＩＮＧ ８（１６）， ２００８

【非特許文献20】ＰＥＡＲＳＯＮ ＥＴ ＡＬ．， ２０１６， ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＡＵＴＯＩＭＭＵＮＩＴＹ ６６， ７６－８８

【非特許文献21】（ＡＮＳＡＲＩ ＥＴ ＡＬ．， ２００３， ＴＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ １９８， ６３－６９

【非特許文献22】（ＲＡＰＴＯＰＯＵＬＯＵ ＥＴ ＡＬ．， ２０１０． ＡＲＴＨＲＩＴＩＳ ＆ ＲＨＥＵＭＡＴＩＳＭ ６２， １８７０－１８８０

【非特許文献23】ＷＯＯＤ ＥＴ ＡＬ．， ２０２０， ＴＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ ２０４， ７３．１２

【非特許文献24】（ＺＨＡＮＧ ＡＮＤ ＢＲＡＵＮ， ２０１４， ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ ２６， ４０７－４１５

【非特許文献25】（ＡＮＳＡＲＩ ＥＴ ＡＬ．， ２００３， ＴＨＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ １９８， ６３－６９

【非特許文献26】Ｄｅｍａｒｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １１， ７２８-７３４， ２００５

【非特許文献27】Ｒｅｉｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． Ｃａｎｃｅｒ ７， ３２３， ２０１９

【非特許文献28】Ｒｅｉｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１９； Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． １１６， １０４５３-１０４６２， ２０１９

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0017】

したがって、本発明の目的は、公知の及び承認された組合せの治療効果の維持又は向上、並び／又は、単独で投与される医薬の治療効果の維持又は向上させ、同時に、より良い毒性プロファイルを有する新規な組合せを提供することである。

【0018】

本発明者らは、驚くべきことに、ＩＴＦ３７５６及び、抗ＣＴＬＡ４抗体を含む組合せが、単一の医薬の投与よりも、抗腫瘍効果に優れていることを示し、そして、前記組合せは相乗的な治療効果を示すことを見出した。特に、最も効能がある抗腫瘍効果は、抗ＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／ｋｇと組合せたＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを、１日３回で得られ、それは二次的な腫瘍の増殖を予防することにもなる。

【0019】

本発明者は、驚くべきことに、本発明に従った組合せの治療は、腫瘍増殖阻害で同等の効能を維持しつつ、抗ＣＴＬＡ４及び抗ＰＤ-１の組合せ、又は、抗ＣＴＬＡ４及び抗ＰＤ-Ｌ１の組合せよりもより良好で安全なプロファイルを有し得ることを見出した。

【課題を解決するための手段】

【0020】

したがって、本発明の第一の対象は、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤を含む組合せである。
本発明の第二の対象は、前記組合せの薬としての使用である。

【図面の簡単な説明】

【0021】

【図1】図１は、マウスにおける、ＣＴ２６腫瘍増殖に対するＩＴＦ３７５６処置効果を示す。

【図2】図２は、マウスにおける、ＣＴ２６腫瘍増殖に対する抗ＣＴＬＡ４ Ｍａｂの効果を示す。

【図3】図３は、マウスにおける、ＣＴ２６腫瘍増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４ Ｍａｂと組合せた２５ｍｇ／Ｋｇ用量のＩＴＦ３７５６の効果を示す。

【図4】図４は、マウスにおける、ＣＴ２６腫瘍増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４ Ｍａｂと組合せた５０ｍｇ／Ｋｇ用量のＩＴＦ３７５６の効果を示す。

【図5】図５は、マウスにおける、ＣＴ２６腫瘍増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４ Ｍａｂと組合せた５０ｍｇ／Ｋｇ×３用量のＩＴＦ３７５６の効果を示す。

【図6】図６は、マウスにおける、ＣＴ２６腫瘍増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４ Ｍａｂと組合せた５０ｍｇ／Ｋｇ用量を一日３回及び、一日１回のＩＴＦ３７５６の長期間投与の効果を示す。

【図7】図７は、ＣＴ２６マウスモデルにおける、第二腫瘍（腫瘍チャレンジ）の増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４と組合せたＩＴＦ３７５６の前投与の効果を示す。

【図8A】図８Ａは、ＣＴ２６マウスモデルにおける、第二腫瘍（腫瘍チャレンジ）の増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／ｋｇ）と組合せたＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回）の前投与の効果を示す。

【図8B】図８Ｂは、ＣＴ２６マウスモデルにおける、第二腫瘍（腫瘍チャレンジ）の増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／ｋｇ）と組合せたＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回）の前投与の効果を示す。

【図9A】図９Ａは、ＣＴ２６マウスモデルにおける、第二腫瘍の増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／ｋｇ）と組合せたＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回）の前投与効果を示す。

【図9B】図９Ｂは、ＣＴ２６マウスモデルにおける、第二腫瘍の増殖に対する、抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／ｋｇ）と組合せたＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回）の前投与の効果を示す。

【図10】図１０は、抗ＰＤ-Ｌ１＋抗ＣＴＬＡ４の組合せに対する、腫瘍増殖を予防するための抗ＣＴＬＡ４と組合せたＩＴＦ３７５６の効果を示す。

【図11】図１１は、雌ＮＯＤマウスにおける糖尿病に対する、ＩＴＦ３７５６単独又は、抗ＣＴＬＡ４と組合せたＩＴＦ３７５６の効果を示す。

【0022】

（定義）
別段定義しない限り、本明細書で使用するすべての技術用語、表記、および他の科学用語は、本開示特許が属する分野の技術者に一般に理解されている意味を有するものとする。いくつかの場合では、一般に理解されている意味を有する用語を、明確さのため、および／または即座に参照されるように、本明細書において定義しており、したがって、そのような定義を本明細書に含めることが、当業界で一般に理解されている定義に対する実質的な違いを表すことであると解釈されるべきでない。

【0023】

用語「生理学的に許容される賦形剤」とは、本明細書では、それ自体のいかなる薬理作用もなく、哺乳動物、好ましくはヒトに投与されたき、有害な反応を生じない物質を指す。生理学的に許容される賦形剤は、当業界で周知であり、たとえば、参照により本明細書に援用される非特許文献１６で開示されている。

【0024】

用語「薬学的に許容される塩」とは、本明細書では、塩化された化合物の生物学的有効性および特性を保持し、哺乳動物、好ましくはヒトに投与されたき、有害な反応を生じない塩を指す。薬学的に許容される塩は、無機または有機塩である場合があり、薬学的に許容される塩の例としては、限定されないが、炭酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、およびパラトルエンスルホン酸塩が挙げられる。薬学的に許容される塩に関するこれ以上の情報は、参照により本明細書に援用される非特許文献１７において見ることができる。

【0025】

用語「同時、別途又は、順次に投与」とは、本明細書では、第一及び第二の化合物を同時に投与すること、又は、２つの化合物が患者の体内で同時に作用するように投与すること、又は、治療効果を提供するように、もう片方の化合物の後に片方の化合物の投与することを言う。いくつかの実施形態では、化合物は食事と一緒に服用される。別の実施形態では、化合物は、食後３０分又は６０分後のように、食後に服用される。いくつかの実施形態では、片方の化合物は、もう片方の化合物の投与に続き、一定間隔で、患者に投与される。

【0026】

用語「ＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤」又は、「抗ＣＴＬＡ４」又は「抗ＣＴＬＡ４抗体」とは、本明細書に従うと、ＣＴＬＡ４の生物学的活性（細胞毒性Ｔ-リンパ球-関連蛋白４）免疫チェクポイントを、部分的又は完全に阻害できるいかなる化合物を言う。

【0027】

用語「およそ」及び「約」とは、本明細書では、測定において生じるかもしれない、測定誤差の範囲を言う。

【0028】

用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、非排他的な用語であると理解され（「限定されないが～を含む」を意味する）、「から本質的になる（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ、ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ、ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」などの用語もサポートするものであると考えられる。

【0029】

用語「から本質的になる（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ、ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、本発明の新規な特徴に影響を及ぼす他の成分が含まれない（任意選択的な賦形剤は含まれる場合がある）ことを意味する、半閉鎖的な用語であると理解される。用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ、ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、限定的な用語であると理解される。

【発明を実施するための形態】

【0030】

実験セクションにおいて詳細に述べるように、本発明者は、ＩＴＦ３７５６（２５ｍｇ／Ｋｇ及び５０ｍｇ／Ｋｇ）＋抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／Ｋｇ）の処置（治療）組合せが、単一の医薬の投与よりもより活性を示したことを見出した。

【0031】

特に、得られたデータは、ＩＴＦ３７５６及び、抗ＣＴＬＡ４の単独投与に対して、ＩＴＦ３７５６及び抗ＣＴＬＡ４の組合せは相乗効果を示す。

【0032】

更に、本発明者は、最も有力な抗腫瘍効果が、抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／ｋｇ）と組合せたＩＴＦ３７５６（一日３回、５０ｍｇ／Ｋｇ）の投与で得られたことを見出した。

【0033】

得られた結果は、処置組合せにより誘導された免疫システムの活性化を示唆する。実際、本発明の組合せは、第二腫瘍の増殖を予防することになる。

【0034】

更に、本発明者は、ＩＴＦ３７５６が、インビトロで刺激されたヒトモノサイト中におけるＰＤ-Ｌ１のサイトカイン誘導発現を低減させること、並びに、ＩＴＦ３７５６（一日３回、５０ｍｇ／Ｋｇ）の投与が、インビボでマウス免疫細胞中のＰＤ-Ｌ１発現を低減させたことを見出した。抗ＰＤ-１抗体、抗ＰＤ-Ｌ１抗体又は、抗ＣＴＬＡ４抗体と抗ＰＤ-１抗体若しくは抗ＰＤ-Ｌ１抗体との組合せによる、ＮＯＤマウスの処置は、臨床医学の副作用として知られる、自己免疫性糖尿病の導入を強力に加速化させる。驚くべきことに、発明者は、ＩＴＦ３７５６（一日３回、５０ｍｇ／Ｋｇ）の単独又は、抗ＣＴＬＡ４抗体との組合せたものの何れかによる、ＮＯＤマウスの処置は、自己免疫性糖尿病の導入を加速化させなかったことから、この組合せ処置は、より優れており、そして、抗ＰＤ（Ｌ）１と抗ＣＴＬＡ４抗体との組合せと比較したとき、より少ない自己免疫性有害事象生じさせることになる。

【0035】

したがって、本発明の第一の目的は、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤を含む組合せである。

【0036】

本発明の好ましい実施形態に従うと、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤は、イピリムマブ又は、トレメリムマブから選択される。

【0037】

本発明の第二の目的は、前記組合せの薬としての使用である。

【0038】

好ましくは、組合せは、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤ-Ｌ１抗体による治療により向上又は予防されやすい、いかなる疾患又は条件の治療において有用である。

【0039】

本発明の好ましい実施形態に従うと、組合せは、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤＬ１抗体の治療が中止された患者の治療に有用である。特に、患者が、毒性により、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤＬ１抗体の治療を中止している。

【0040】

本発明の好ましい実施形態に従うと、組合せは、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤＬ１抗体で治療されていない患者の治療に有用である。特に、患者が、毒性が予想されるために、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ１及び／又は、抗ＰＤＬ１抗体の治療を受けていない。

【0041】

本発明の組合せは、好ましくは、腫瘍の免疫療法及び、ＨＤＡＣ６介在の疾患の治療に対して有用である。

【0042】

本発明の好ましい実施形態に従うと、組合せは、以下の群から選択される一つ以上の疾患の治療に有用である：副腎皮質がん、肛門がん、星細胞腫、皮膚基底細胞がん、膀胱がん、脳腫瘍、乳がん、原発不明がん、心臓腫瘍、子宮頸がん、胆管がん、大腸がん、子宮内膜がん、食道がん、眼内黒色腫、卵管がん、胆嚢がん、胃がん、 消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、精巣がん、頭頸部がん、肝細胞がん、膵島細胞腫瘍、膵神経内分泌腫瘍、ランゲルハンス細胞組織球症、白血病、肺がん（非小細胞がん、小細胞がん、胸膜肺芽腫、気管気管支腫瘍）、悪性黒色腫、メルケル細胞がん、中皮腫、NUT遺伝子変化を伴う正中線管がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫/形質細胞新生物、骨髄異形成症候群、骨髄異形成/骨髄増殖性新生物、神経芽腫、卵巣がん、膵がん、傍神経節腫、副甲状腺がん、陰茎がん、 褐色細胞腫、下垂体腫瘍、原発性腹膜がん、前立腺がん、腎細胞がん、網膜芽細胞腫、肉腫、皮膚の扁平上皮がん、胸腺腫および胸腺がん、甲状腺がん、腎盂および尿管の移行細胞がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、外陰がん、ウィルムス腫瘍。好ましくは、組合せは、悪性黒色腫、乳がん、腎細胞がん、非小細胞がんの治療に有用である。

【0043】

好ましい実施形態に従って、本発明に従った使用のための組合せは、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩、及び、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤が、同時、別途又は、順次に投与されることに特徴がある。

【0044】

好ましくは、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩は、毎日、好ましくは、一日に２～３回、そして、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤は、２～４週毎に、好ましくは、最大４用量が、患者に投与される。

【0045】

好ましくは、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩は、患者に経口経路で、投与される。好ましくは、ＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤は、静脈内注射により投与される。

【0046】

より好ましくは、Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド又はそれらの薬学的に許容される塩は、患者に、２００ｍｇ～１０００ｍｇＢＩＤ又は、１００ｍｇ～１０００ｍｇＴＩＤの範囲の量で投与され、そして、前記少なくとも一つのＣＴＬＡ４チェクポイント阻害剤は、患者に、２～４週毎に、０．５～１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、２～４週毎に、１～３ｍｇ／ｋｇの範囲の量で投与される。

【0047】

ＩＴＦ３７５６に対するヒト用量は、生理学的薬物速度論（ＰＢＰＫ）モデルに基づいて、ソフトウェア ＧａｓｔｒｏＰｌｕｓ（商標）（Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ Ｐｌｕｓ， Ｌａｎｃａｓｔｅｒ， ＣＡ） の使用を通じて予測された。予測用量の目標C_平均は、マウスで有効性が示された投与スケジュールの後に見いだされた２４時間中の平均レベルで、２００ｎｇ／ｍＬであった。

【0048】

モデリング戦略は、入手できるインビボ薬物動態データ（マウス、ラット、犬及びカニクイザル）の実験に基づいた動物種に対してモデルを最初に確立させ、そして、評価し、そして、その後、種特異的インプットを、そして、ヒト薬物動態の計画に対するインビトロからインビへのスケーリングアプローチと整合する生理学的データを使用することである。ＩＴＦ３７５６の除去に対してつくられた仮説をサポートするために、ＩＴＦ３７５６と除去メカニズムにおいて類似する、存在する医療データを有する化合物、ＩＴＦ３７５７（ジビノスタット）に対して同様の研究が行われた。

【0049】

このモデルは、物理化学的特徴並びに、ＬｏｇＤ、ｐｋＡ、水及びバイオリレバント流体中の溶解性、透過性、並びに、それぞれの種に対して生じたプラズマ分布に対する蛋白結合及び血液のような、ＩＴＦ３７５６のインビトロデータを使用して確立された。

【0050】

肝臓代謝は、種特異的な凍結保存された肝細胞とＩＴＦ３７５６の培養後にインビトロで生じたデータから出発して研究された。腎臓及び腸の代謝は、補助因子としてのＮＡＤＰＨ及びＵＤＰＧＡと、種特異的な腎臓及び腸ミクロソームとを試験品と培養した後に収集されたインビトデータから控除された。適切なスケール係数を使用して、その後、インビトロからインビボへの推定がされた。肝臓外代謝の代わりに、全血クリアランスが使用された。組織濃度は、全ての組織は、灌流速度限定分布で良く攪拌された部分として振る舞い、そして、医薬及び組織は、プラズマ分配係数Ｋｐで組織特異的に振る舞うと仮定して、予測された。Ｋｐ値は、一般的に、医薬の物理化学的特性及び組織組成から予想された。

【0051】

腸壁を通る吸収及び輸送は、全身ＰＢＰＫモデルと一体化された、ＡＣＡＴモデル
（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｉｔ）を使用して予測された。

【0052】

第一の工程で、静脈注射投与後の薬物動態パラメータが、各動物種において予測された。経験上のスケール係数が、肝臓外代謝に対して使用されて全身クリアランスが得られ、そして、ＬｏｇＤに対して使用されて分配用量が得られた。経験上のスケール係数に基づいて、低い及び高いクリアランスシナリオが見つかった。

【0053】

経口投与の後の薬物動態が、その後、モデル化され、種間の多様性により、透過性、可溶性、及び溶解性の不確実性が見つかった。８つのシナリオの概略を示し、その後、それらの中で、最悪及び最高のケースを、経口吸収のシナリオにおいて見つけることができる。

【0054】

ヒト薬物動態の計画は、その後、バイオアベイラビリティの最高及び最悪の組合せ、高い及び低いクリアランス、並び、高い及び低い容量分配に由来して、８つのシナリオを使用してつくられた。ヒト薬物動態を最高にさせるシュミレーションされたシナリオによって、目的の暴露に達すると予測される投与計画は、上記に述べるように、２００ｍｇ～１０００ｍｇＢＩＤ又は、１００ｍｇ～１０００ｍｇＴＩＤの範囲である。

【0055】

さらに、本発明は以下の実験セクションにより詳細に説明されることになるであろう。

【実施例】

【0056】

（実験セクション）
（実施例１）
「ＣＴ２６マウスモデルにおける、抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて投与されたＩＴＦ３７５６の抗腫瘍効果」
マウス結腸癌セルラインＣＴ２６の使用に基づくマウスモデルを使用して、抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて投与されたＩＴＦ３７５６の抗腫瘍効果が決定された。このモデルでは、ＣＴ２６細胞は、同系統のマウスの皮下に移植され、そして、その効能は、腫瘍結節（tumor nodule）の容量に基づいて腫瘍増殖阻害として決定された。

【0057】

（材料および方法）
ＩＴＦ３７５６（Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド）
ＩＴＦ３７５６は、ＩＴＡＬＦＡＲＭＡＣＯ ＳＰＡ．医薬品化学部により合成された。ＩＴＦ３７５６、バッチ５は、粉体としてＤＭＳＯ中に溶解され、そして、－２０℃で保存された。投与の各日に、溶液は、Ｈ_２Ｏ／ＰＥＧ４００ １：１で希釈して、ＤＭＳＯ ０．５％中に、Ｈ_２Ｏ／ＰＥＧ４００ １：１の溶液、２．５及び５．０ｍｇ／ｍＬを得た。

【0058】

溶液は、２００μＬ（最終用量２５及び５０ｍｇ／Ｋｇ）の容量で、マウスに胃管栄養針を使用して経口投与された。ＩＴＦ３７５６投与は、腫瘍結節が明白になったとき（細胞接種からおよそ１０日目）に開始された。ＩＴＦ３７５６投与は、表１に報告されるように、一日１回又は一日３回、経口投与（ｏｓ）された。

【0059】

（抗ＣＴＬＡ４抗体）
シリアンハムスターＩｇＧ Ｍａｂ抗マウスＣＴＬＡ４は、ＢｉｏＸｅｌｌ （ｃａｔ． ＢＥ０１３１， ｃｌｏｎｅ ９Ｈ１０）から購入され、ＰＢＳで、１、０．３及び、０．１ｍｇ／ｍＬの最終濃度に希釈され、＋４℃で保存された。各マウスは、個々の溶液（最終用量１０．０、３．０及び、１．０ｍｇ／Ｋｇ）を、２００μＬで処置された。

【0060】

抗ＣＴＬＡ４ Ｍａｂ投与は、腫瘍結節が明白になったとき（細胞接種からおよそ１０日目）に開始された。抗ＣＴＬＡ４は、表１に報告されているように、腹腔内（ｉｐ）に、一日おきに一日１回、合計で４処置に対して投与され、続いて、７日目にウォシュアウトされた。この処置サイクルは、研究の終了まで継続された。

【0061】

（インビボ研究）
雌６週齢ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｉｔａｌｉａから購入し、そして、１２時間の明暗サイクル下、食餌および水は自由に与えて維持した。順化の５日後、マウスは、腫瘍細胞の注入が施された。ＣＴ２６（マウスＢＡＬＢ／ｃ 結腸癌、ＣＴ２６．ＷＴ ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２６３８）細胞は、ＲＰＭＩ １６４０細胞培養培地＋１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）中で増殖させた。

【0062】

細胞は、トリプシンにより、対数期の間に分離され、ＦＣＳなしの培養培地で洗浄され、最終濃度、５×１０^６細胞／ｍｌで懸濁させた。細胞（１×１０^６細胞／マウス）は、２００μＬの容量で、マウスの右側面の鼠径部分に注入 s. c.された。

【0063】

動物の少なくとも８０％で腫瘍結節が明白になったとき、以下の実験群で、無作為に選び、医薬の投与が開始された。

【0064】

【表1】

【0065】

体重は、医薬投与の第一日目から開始して、一日おきに測定された。
皮下腫瘍結節の容量は、以下の式（非特許文献１８）
容量（ｍｍ^３）＝（Ｄ×ｄ^２）／２
ここで、Ｄ＝結節の長径であり、ｄ＝結節の短径である。

【0066】

腫瘍結節の重量は、１．０５ｇ／ｍＬの腫瘍密度（非特許文献１９）を考慮して、腫瘍容量により決定した。
腫瘍重量が体重の１０％に等しくなったとき、又は、腫瘍結節が潰瘍化（人道的エンドポイント）のとき、動物は安楽死させた。
医薬の統計的な分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８ソフトウェアを使用した、Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ比較テストで、２－ｗａｙ ＡＮＯＶＡにより、実施された。

【0067】

（結果）
ＣＴ２６腫瘍の増殖に対するＩＴＦ３７５６の効果を、図１に要約する。
２５ｍｇ／Ｋｇの用量（一日１回）は、全体の実験的な期間を通して、腫瘍増殖の顕著な阻害を示さなかった。より高い用量（５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回）は、２４日目では検出されなかった腫瘍の増殖（９％阻害）を、２１日目で３４％阻害（０．８８ｇ対１．３４ｇ）するという顕著な効果を示した。

【0068】

反対に、ＩＴＦ３７５６、５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回の処置をした動物は、１９日目から始まり２４日目までで顕著な腫瘍の減少（３０％阻害、１．３２ｇ対１．８９ｇ）を示し、この計画の処置は、単独の毎日の投与よりも優れた薬物動態効果を示した。

【0069】

【表2】

【0070】

抗ＣＴＬＡ４抗体の効果を図２に要約する。抗体の３つの用量の全ては、２４日目において、同様の活性と、腫瘍阻害の最大効果（６６－５７％）を示した。

【0071】

【表3】

【0072】

抗ＣＴＬＡ４抗体の最も高い用量（１０ｍｇ／Ｋｇ）と組合せた、２５ｍｇ／Ｋｇで投与されたＩＴＦ３７５６の効果を、図３に報告する。

【0073】

【表4】

【0074】

本発明に従ったＩＴＦ３７５６（２５ｍｇ／Ｋｇ）＋抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／Ｋｇ）の処置の組合せは、単独の医薬の投与よりもより活性を示す結果を示した。更に、前記組合せは、相乗的な治療効果を示している。

【0075】

実際、２４日目に、医薬の組合せは、腫瘍の増殖の８２％阻害（０．３９ｇ対１．８９ｇ）を誘導したが、一方、ＩＴＦ３７５６及び、抗ＣＴＬＡ４単独は、それぞれ、７％（１．７６対１．８９）及び、５７％の阻害（０．８２対１．８９ｇ）を誘導した。

【0076】

抗ＣＴＬＡ４抗体の最も高い用量（１０ｍｇ／Ｋｇ）と組合せて、５０ｍｇ／Ｋｇで投与されたＩＴＦ３７５６の効果を、図４に報告する。

【0077】

【表5】

【0078】

ＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇ）＋抗ＣＴＬＡ（１０ｍｇ／Ｋｇ）の処置の組合せは、単独の医薬投与よりもより活性を示す結果を示した。更に、前記組合せは、相乗的な治療効果を示している。

【0079】

実際、２４日目に、医薬の組合せは、腫瘍の増殖の８３％阻害（０．３２ｇ対１．８９ｇ）を誘導したが、一方、ＩＴＦ３７５６及び、抗ＣＴＬＡ４単独は、それぞれ、９％（１．７２対１．８９）及び、５７％阻害（０．８２対１．８９ｇ）を誘導した。

【0080】

抗ＣＴＬＡ４抗体の最も高い用量（１０ｍｇ／Ｋｇ）と組合せて、５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回投与されたＩＴＦ３７５６の効果を、図５に報告する。

【0081】

【表6】

【0082】

ＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇ×３）＋抗ＣＴＬＡ（１０ｍｇ／Ｋｇ）の処置の組合せは、単独の医薬投与よりもより活性を示す結果を示した。更に、前記組合せは、相乗的な治療効果を示している。

【0083】

実際、２４日目に、医薬の組合せは、腫瘍の増殖の８９％阻害（０．２ｇ対１．８９ｇ）を誘導したが、一方、ＩＴＦ３７５６及び、抗ＣＴＬＡ４単独は、それぞれ、３０％（１．３２対１．８９）及び、５７％阻害（０．８２対１．８９ｇ）を誘導した。更に、２４日目の処置の組合せの効果は、抗ＣＴＬＡ４抗体単独により与えられるものより、顕著に高かった（ｐ＜０．００１）。

【0084】

両方の医薬の組合せ（抗ＣＴＬＡ４＋ＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回又は３回）で処置された動物の腫瘍増殖は、２４日目（コントロール群の最終実験日）にほぼ完全に終わるため、これらの２つの群に対する医薬投与は、４２日まで長期になった。

【0085】

得られた結果を、図６に報告する。このグラフでは、測定できる腫瘍の平均容量を報告する。

【0086】

本発明に従った両方の医薬の組合せは、重ね合わせが可能（superimposable）で、且つ、強力な腫瘍増殖の阻害を、３５日まで誘導させた。ＩＴＦ３７５６を一日１回＋抗ＣＴＬＡ４で処置された動物の腫瘍は、処置日から４８日目まで増殖し続けたが、一方、ＩＴＦ３７５６を一日３回＋抗ＣＴＬＡ４で処置された動物の腫瘍は、４２日目まで一定に維持され、その後、それらの容量は減少した。

【0087】

予想外に、ＩＴＦ３７５６を一日１回＋抗ＣＴＬＡ４で処置された群の５分の２のマウス、及び、ＩＴＦ３７５６を一日３回＋抗ＣＴＬＡ４で処置された群の４分の２のマウスは、腫瘍がなかった。

【0088】

更に、２つの医薬の組合せ群（抗ＣＴＬＡ４＋ＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回及び、３回）は、第二の腫瘍が注入（腫瘍チャレンジ）されて、第二の腫瘍の増殖がモニターされた。

【0089】

第二の注入（１×１０^６ＣＴ２６細胞／マウス s.c.）は、４９日目に、左鼠径部分中に行なわれ、そして、７３日目まで、動物は無処置に維持させた。第二の注入に使用されたＣＴ２６細胞の好適な増殖のコントロールとして、５匹のナイーブマウス(naive mice)は、同日に注入された。

【0090】

得られた結果を図７に報告する。
ナイーブ動物（naive animal）（コントロール群）の左わき腹に注入されたＣＴ２６細胞は、予想された増殖示した。

【0091】

第二の腫瘍は、図８（Ａ－Ｂ）に報告されているように、ＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回）＋抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置された５匹のマウス中の３匹（＃３，５及び６）において、若干増殖した（６３日目）。

【0092】

この群（ＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回＋抗ＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／ｋｇ）において、４８日目に、腫瘍耐性動物においてのみ、第二の腫瘍が発達したが、一方、腫瘍フリー動物（マウス＃２及び４）では増殖しなかった。

【0093】

図９（Ａ－Ｂ）に報告されているように、４８日目に、第一の腫瘍の存在（マウス＃６のように）又は不存在（マウス＃２，４、及び５のように）に関わらず、ＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回）＋抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／Ｋｇ）で処置されたマウスでは、第二の腫瘍は発達しなかった。

【0094】

（結論）
得られた結果は、以下のように要約し得る。
１．抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて、２５ｍｇ及び、５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回投与されたＩＴＦ３７５６は、単独医薬の投与よりも優れた抗腫瘍効果を示し、そして、この治療効果は、相乗的である。

【0095】

２．最も効能がある抗腫瘍効果は、抗ＣＴＬＡ４（１０ｍｇ／Ｋｇ）と組合せたＩＴＦ３７５６（５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回）の投与で得られた。

【0096】

３．抗ＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／Ｋｇと組合せたＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回又は、一日３回は、顕著な腫瘍増殖の遅れを生じさせ、そして、処置の７３日後、５分の２及び、４分の４のマウスが、それぞれ腫瘍なしであった。

【0097】

４．第二の腫瘍は、発達しなかった（ＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを一日３回＋抗ＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／Ｋｇで処置された群のように）、又は、５匹のマウス中３匹において、ゆっくりと発達した（ＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／Ｋｇを一日１回＋抗ＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／Ｋｇで処置された群のように）。ＩＴＦ３７５６及び抗ＣＴＬＡ４の両方は、それらの抗腫瘍効果を果たすには有効な免疫系を必要とすることから、この結果は、効果的な抗腫瘍免疫応答、第二の腫瘍の増殖を予防する応答が、処理された動物において誘導されたことを示す。

【0098】

（実施例２）
「抗ＰＤ-１＋抗ＣＴＬＡ４の組合せに対する、腫瘍増殖を防止するための抗ＣＴＬＡ４と組合せたＩＴＦ３７５６の効果」
Ｂａｌｂ／ｃ雌６週齢は、右側面中にＣＴ２６ＷＴ腫瘍細胞注入が注入された。約１０日後、腫瘍が検出できるときは何時でも、以下のスキームに従った処置が開始された。

【0099】

１）ＩＴＦ３７５６ ５０ｍｇ／ｋｇを、ｏｓ毎に、一日３回（Ｑ３×５）＋αＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／ｋｇ ｉｐ 一日おきに４回、続いて６日目にウォシュアウト（本発明）
２）αＰＤ１ ３ｍｇ／ｋｇ、ｉｐ、ｅｏｄ＋αＣＴＬＡ４ １０ｍｇ／ｋｇ、ｉｐを、一日おきに４回、続いて６日目にウォシュアウト（参考例）

【0100】

腫瘍結節が動物の少なくとも８０～８５％において検出できるときは何時でも、処置が開始され、そして、実験は、コントロール群の腫瘍重量が、動物体重の１０％に等しいとき、又は、（人道的エンドポイント）いくつかの結節が潰瘍化したとき、中止された。動物は、週２回体重を測定され、そして、腫瘍は週３回測定された。

【0101】

腫瘍結節の測定は、以下の式により計算された。
容量（ｍｍ^３）＝（Ｄ×ｄ^２）／２、ここで、Ｄ＝結節の長径であり、ｄ＝結節の短径である。

【0102】

図１０に報告されている結果は、腫瘍増殖阻害における２つの組合せ処置の間で、統計的有意差はなかったことを示す。

【0103】

本発明に従ったＴＦ３７５６＋抗ＣＴＬＡ４の組合せは、参考例として使用され、承認されている抗ＰＤ-１＋抗ＣＴＬＡ４の組合せと同じような抗腫瘍活性を有する。

【0104】

（実施例３）
「糖尿病雌ＮＯＤマウスにおける、ＩＴＦ３７５６単独又は、抗ＣＴＬＡ４と組合せたＩＴＦ３７５６の効果」
ＮＯＤマウスは、内発的に糖尿病を発症し、そして、それらは、タイプ１型糖尿病の承認された自然発症モデルを代表する（非特許文献２０）。

【0105】

プログラムされたデス-１（Programmed Death-1）（ＰＤ-１）経路は、ＮＯＤマウス中の自己免疫糖尿病を制御する。ＰＤ-１又はＰＤ-Ｌ１は、前糖尿病の１０週齢マウスを、１週間未満で、誘発された糖尿病を迅速に遮断した（非特許文献２１）。

【0106】

ＰＤ-１／ＰＤ-Ｌ１軸(axis)の遮断は、別の自己免疫モデルに対しても有害である。例えば、ＰＤ-１^-/-マウスは、野生型マウスよりも、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）の事象を増加と、そして、症状の重症化の両方を説明している（非特許文献２２）。マクロファージ上で発現されたＰＤ-Ｌ１は、コラーゲンが誘導する関節炎がより重度の関節炎になる間、ＣＩＡ及び、ＰＤ-Ｌ１のブロックから保護する（非特許文献２３）。複数の硬化症の実験的自己免疫脳髄膜炎（ＥＡＥ）モデルにおいて、ＰＤ-１は、重要な役割を果たし、そして、ＰＤ-Ｌ１の欠如は、病的状況の経過を悪化させる（非特許文献２４）。

【0107】

ＨＤＡＣ６阻害は、異なる刺激にさらされた多数の細胞タイプ中で、ＰＤ-Ｌ１の発現を低減させ、それにより、免疫システムの潜在的な活性化を伴うＰＤ-１／ＰＤ-Ｌ１軸に影響を与え得る。

【0108】

しかしながら、ＨＤＡＣ６阻害は、ＣＩＡ及びＥＡＥのような自己免疫病理のモデルに効果的である。更に、我々の手で、ＨＤＡＣ６ ＫＯマウスは、週齢及び性別が一致するＨＤＡＣ６野生型コントロールと比較して、より穏やかにＥＡＥを発達させた。

【0109】

トータルで、これらのデータは、自己免疫反応の状況下におけるＨＤＡＣ６阻害は、ＰＤ-Ｌ１発現を低減させるＨＤＡＣ６阻害剤の広く知られている役割にも拘らず、保護的である。

【0110】

ＰＤ-Ｌ１上のＨＤＡＣ６ｉの効果を考慮して、本発明者は、ＩＴＦ３７５６で処置されたＮＯＤマウスが、抗ＰＤ-（Ｌ）１により処理したマウスのように、糖尿病を迅速に誘導し得るのか、又は、代わりに、糖尿病の誘導が影響を受けたのか、を問うた。

【0111】

抗ＣＴＬＡ４を持つ１０－１２週齢マウスの処置は、糖尿病の誘導に影響を与えなかった。しかしながら、本発明者は、抗ＰＤ-（Ｌ）１／抗ＣＴＬＡ-４の併用処置は、抗ＰＤ-（Ｌ）１単独と同等の効果を生じさせると予測する。

【0112】

我々の仮説は、選択的なＨＤＡＣ６阻害剤ＩＴＦ３７５６単独又は、抗ＣＴＬＡ-４との組合せで処置されたＮＯＤマウスは、糖尿病の経過を変更させるものではなく又は、限定された効果のみが誘導されるということである。

【0113】

（材料及び方法）
ＩＴＦ３７５６（Ｎ-ヒドロキシ-４-（（５-（チオフェン-２-イル）-１Ｈ-テトラゾール-１-イル）メチル）ベンズアミド）
ＩＴＦ３７５６は、Ｉｔａｌｆａｒｍａｃｏ ＳｐＡの医薬品化学部により合成された。ＩＴＦ３７５６、バッチ９は粉末としてＤＭＳＯ中に溶解され、そして、-２０℃で保存された。

【0114】

【表7】

【0115】

（抗体）
抗体処理は、非特許文献２５に従った。

【0116】

【表8】

【0117】

【表9】

【0118】

【表10】

【0119】

【表11】

【0120】

【表12】

【0121】

【表13】

【0122】

（血糖値の測定）
血糖は、０日（開始日）から２１日（終了日）の３週間、全てのマウスで評価された。血糖値は、血糖測定器 ＯｎｅＴｏｕｃｈ（登録商標）Ｖｅｒｉｏで測定した。血液サンプルは、針を刺して、尾静脈から抜かれた。血液一滴をテスト片中に挿入し、そして、血糖測定器が自動で血糖値を計算した。結果は、測定器のディスプレイに示された。測定器は、２０～６００ｍｇ／ｄＬを測定する。２０以下又は６００ｍｇ／ｄＬ以上の結果は、「２０以下」又は「６００以上」として、装置により可視化される。

【0123】

糖尿病は、２日連続して、≧２５０ｍｇ／ｄＬ以上の血糖測定値により規定される。
マウスは、この間、３週間モニターされて、体重は７回測定された。

【0124】

（結果）
ＩＣＩによる処置は、臨床実践により確認されている自己免疫反応を生じさせる、内在的な可能性を与える。抗ＣＴＬＡ及び、抗ＰＤ-１のような２つのＩＣＩの組合せは、高い発生率の有害事象により効果的である。したがって、腫瘍免疫療法の目的は、効能を向上させて、そして、副作用を低減させ、管理可能な水準にさせることである。選択的なＨＤＡＣ６阻害剤ＩＴＦ３７５６と抗ＣＴＬＡ４との組合せは、抗ＣＴＬＡ４＋抗ＰＤ-１と同等の抗腫瘍効力を有し、そして、我々のデータは、ＮＯＤマウスが、優れた安全性プロファイルを有することを示。

【0125】

ＮＯＤモデルで得られた結果は、抗ＰＤ-Ｌ１及び、組合せ（抗ＰＤ-Ｌ１＋抗ＣＴＬＡ-４）の処理マウスにおいて糖尿病の劇的な誘導を示す。これらの知見は、文献的なデータと、発明者の予測、それぞれと一致している（図１１）。

【0126】

糖尿病事案の増加を示した別の２つの群は、抗ＰＤ-１及び、（抗ＰＤ-１＋抗ＣＴＬＡ４）で、２１日目に、それぞれ、６０％及び、５０％の糖尿病事案であった。

【0127】

（ＩＴＦ３７５６＋抗ＣＴＬＡ４）群のマウスだけが、１１日目及び、１４日目の間に血糖値の一時的な上昇があったのは、著しい対照を成している。しかしながら、前記マウスは、コントロール群の平均値よりも高かったが、１５日目後の全ての測定は２５０ｍｇ／ｄＬ以下であったことから、部分的には回復した。

【0128】

別の群では、糖尿病の誘導は検出されなかった。
抗体で処理された群で得られた結果は、ＮＯＤマウスにおいてＰＤ-１／ＰＤ-Ｌ１軸の重要な役割を記載した文献データと一致している。結果は明らかに、ＨＤＡＣ６阻害が糖尿病事案を増加させず、そして、選択的なＨＤＡＣ６阻害剤ＩＴＦ３７５６と抗ＣＴＬＡ４抗体との組合せは、糖尿病の誘導に非常に僅かな影響しか有しないことを示す。

【0129】

一方で、抗ＰＤ-１及び抗ＰＤ-Ｌ１抗体の両方と、抗ＣＴＬＡ４抗体との組合せは、強く糖尿病を悪化させる。

【0130】

この結果は、（抗ＣＴＬＡ-４＋ＩＴＦ３７５６）処置は、抗ＣＴＬＡ-４＋抗ＰＤ-（Ｌ）１よりも、より安全なプロファイルを有し得ることを示唆する。

【0131】

（実施例４）
「４Ｔ１乳がんモデルにおける、抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて投与されたＩＴＦ３７５６の抗腫瘍効果」
同系の腫瘍セルライン４Ｔトリプルネガティブ乳癌を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスが使用された。

【0132】

４Ｔ１腫瘍モデルは、免疫原性の低い腫瘍と考えられている（非特許文献２６）。以前の実験に従って、この腫瘍の抗ＣＴＬＡ-４処置は、一般的な有効性を示したが、処置動物の中では変動を示し、そして、従って、４Ｔ１は、免疫療法ベースの組合せ治療を試験する良いモデルを構成している。

【0133】

ＩＴＦ３７５６は、ＣＴ２６結腸癌の処置のために同じ用量、つまり、５０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）ＴＩＤが、１つの剤として、そして、抗ＣＴＬＡ-４抗体と組合せて使用される。後者は、１日おきに、週３回、３ｍｐｋで投与する。以前の実験では、本発明者は、両方の医薬に対して、およそ平均で４０％の腫瘍増殖の減少と同等のものを観察した。抗ＣＴＬＡ-４は、１ｍｐｋの活性はわずかであるが、一方、３ｍｐｋ及び１０ｍｐｋで同等の腫瘍減少を与えた。

【0134】

腫瘍の増殖は、セルラインの皮下注入の後に誘導され、そして、マウスは少なくとも注入後少なくとも３週間モニターされる。

【0135】

（実施例５）
「Ｂ１６Ｆ１０悪性黒色腫モデルにおける、抗ＣＴＬＡ４抗体と組合せて投与されたＩＴＦ３７５６の抗腫瘍効果」
同系の腫瘍セルラインＢ１６Ｆ１０悪性黒色腫を接種したＣ５７ＢＬ／６マウスが使用された。

【0136】

Ｂ１６Ｆ１０悪性黒色腫モデルも、免疫原性の低い腫瘍と考えられており（非特許文献２７）、従って、免疫療法のベースの組合せを試験するためにもう一つの良好なモデルを代表する。

【0137】

ＩＴＦ３７５６は、ＣＴ２６結腸癌の処置のために同じ用量、つまり、５０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）ＴＩＤが、１つの剤として、そして、抗ＣＴＬＡ-４抗体と組合せて使用される。

【0138】

このモデルにおける抗ＣＴＬＡ-４抗体の用量に関して、本発明者は、ＩＴＦ３７５６と組合せることが出来る好適な用量を確かめるために、予備実験を行った。文献に従って、抗ＣＴＬＡ-４抗体が、異なる用量、腫瘍細胞の注入後３日目に、用量２００μｇ／マウスで、続いて、６，９及び１２日目に、用量１００μｇ／マウスで、投与され、非特許文献２８が、この実験のガイドとして使用された。

【0139】

腫瘍の増殖は、セルラインの皮下注入の後に誘導され、そして、マウスは少なくとも注入後少なくとも３週間モニターされる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9A】

【図9B】

【図10】

【図11】

【国際調査報告】