特表 2024-515211 ＤＨＦＲ阻害剤を用いたＣＤ４７遮断療法の増強

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-05

(54)【発明の名称】ＤＨＦＲ阻害剤を用いたＣＤ４７遮断療法の増強

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/06 20060101AFI20240329BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240329BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240329BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240329BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240329BHJP

   A61K 31/519 20060101ALI20240329BHJP

   A61K 31/714 20060101ALI20240329BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240329BHJP

   C07K 14/705 20060101ALN20240329BHJP

   C07K 16/42 20060101ALN20240329BHJP

   C07K 19/00 20060101ALN20240329BHJP

【ＦＩ】

A61K45/06

A61P43/00 121

A61P35/00

A61K47/68

A61P35/02

A61K31/519

A61K31/714

A61K38/17

C07K14/705 ZNA

C07K16/42

C07K19/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023565346

(86)(22)【出願日】2022-04-25

(85)【翻訳文提出日】2023-12-18

(86)【国際出願番号】 IB2022053827

(87)【国際公開番号】W WO2022229818

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】63/180,604

(32)【優先日】2021-04-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/253,125

(32)【優先日】2021-10-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】593141953

【氏名又は名称】ファイザー・インク

(74)【代理人】

【識別番号】100133927

【弁理士】

【氏名又は名称】四本 能尚

(74)【代理人】

【識別番号】100147186

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 眞紀

(74)【代理人】

【識別番号】100174447

【弁理士】

【氏名又は名称】龍田 美幸

(74)【代理人】

【識別番号】100185960

【弁理士】

【氏名又は名称】池田 理愛

(72)【発明者】

【氏名】グロリア ホイ イング リン

(72)【発明者】

【氏名】ロバート アダム ウーガー

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4H045

【Ｆターム（参考）】

4C076AA94

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41M

4C076EE59

4C076EE59M

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA19

4C084AA20

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA41

4C084CA18

4C084DA27

4C084DC50

4C084MA02

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC202

4C084ZC412

4C084ZC751

4C086AA01

4C086AA02

4C086CB09

4C086DA39

4C086GA16

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086NA05

4C086ZB26

4C086ZB27

4C086ZC75

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA50

4H045DA75

4H045EA20

(57)【要約】

ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を遮断する薬剤と、ＤＨＦＲ阻害剤とを組み合わせる、がん療法を含む、療法にとって有用な材料および方法が提供される。
【図１】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象を処置するための方法であって、前記対象に、ＣＤ４７遮断剤、およびジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）を投与することを含む方法。

【請求項2】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象の処置を改善するための方法であって、前記対象がＣＤ４７遮断剤で処置されており、前記対象に、ジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）を投与することを含む方法。

【請求項3】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象の処置を改善するための方法であって、前記対象がジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）で処置されており、前記対象に、ＣＤ４７遮断剤を投与することを含む方法。

【請求項4】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象を処置するために組み合わせて使用するためのＣＤ４７遮断剤およびジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）。

【請求項5】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象を処置するためにＣＤ４７遮断剤と組み合わせて使用するためのジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）。

【請求項6】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象におけるがんの処置のためにジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）と組み合わせて使用するための薬剤の製造におけるＣＤ４７遮断剤の使用。

【請求項7】

ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象におけるがんの処置のためにＣＤ４７遮断剤と組み合わせて使用するための薬剤の製造におけるジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）の使用。

【請求項8】

ＤＨＦＲｉが、メトトレキサートまたはプララトレキサートを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項9】

ＤＨＦＲｉがプララトレキサートを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項10】

ＣＤ４７遮断剤が、ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合形態を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項11】

ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合形態が、ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合断片である、請求項１０に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項12】

ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合断片が、ヒトＳＩＲＰαのＶ領域を含む、請求項１１に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項13】

ＣＤ４７遮断剤が、抗体定常領域（Ｆｃ）に結合した可溶性ヒトＳＩＲＰαバリアント２のＶ領域を含むＦｃ融合タンパク質を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項14】

可溶性ＳＩＲＰαを含むＦｃ融合タンパク質が、配列番号９または配列番号１０を含む、請求項１３に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項15】

ＣＤ４７遮断剤が、Ｌ４Ｖ／Ｉ、Ｖ６Ｉ／Ｌ、Ａ２１Ｖ、Ｖ２７Ｉ／Ｌ、Ｉ３１Ｔ／Ｓ／Ｆ、Ｑ３７Ｗ／Ｈ、Ｅ４７Ｖ／Ｌ、Ｋ５３Ｒ、Ｅ５４Ｑ／Ｐ、Ｈ５６Ｐ／Ｒ、Ｓ６６Ｔ／Ｇ、Ｋ６８Ｒ、Ｖ９２Ｉ、Ｆ９４Ｖ／Ｌ、Ｖ６３Ｉ、Ｍ７２Ｒ、およびＦ１０３Ｖから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を有する可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項16】

ＣＤ４７遮断剤が、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を有する可溶性ＳＩＲＰαを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項17】

ＣＤ４７遮断剤が、抗体定常領域（Ｆｃ）に結合した可溶性ヒトＳＩＲＰαバリアント２のＶ領域を含むＦｃ融合タンパク質を含む、請求項１５から１６のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項18】

ＣＤ４７^＋がん細胞が、血液がん細胞または固形腫瘍細胞である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項19】

がん細胞が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）およびｐ５３突然変異型ＡＭＬ；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；骨髄増殖性障害／新生物（ＭＰＤＳ）；および骨髄異形成症候群から選択されるがん型の細胞である、請求項１８に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項20】

がん細胞が、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、侵攻性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、および小細胞型濾胞性リンパ腫、および大細胞型濾胞性リンパ腫から選択されるリンパ腫に由来する、請求項１８に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項21】

がん細胞が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫から選択される骨髄腫に由来する、請求項１８に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【請求項22】

葉酸またはビタミンＢ１２を対象に投与することをさらに含む、請求項１から３および８から２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

葉酸またはビタミンＢ１２と組み合わせて使用するための、請求項４から２１のいずれか一項に記載の使用または使用のための薬物。

【請求項24】

ＣＤ４７^＋疾患細胞を枯渇させるのに有効な、所定量のＣＤ４７遮断剤と、ＣＤ４７^＋疾患細胞の枯渇を増強させるのに有効な、所定量のプララトレキサートとを、請求項１から２３のいずれか一項に記載のその使用を教示する使用説明書と共に含む、抗がん薬の組合せ。

【請求項25】

ＣＤ４７^＋疾患細胞を呈する対象の処置における使用のための、請求項２４に記載の組合せ。

【請求項26】

ＣＤ４７^＋疾患細胞がＣＤ４７^＋がん細胞である、請求項２５に記載の使用のための組合せ。

【請求項27】

ＣＤ４７^＋がん細胞が、血液がんまたは固形腫瘍に由来する細胞を含む、請求項２６に記載の使用のための組合せ。

【請求項28】

ＣＤ４７遮断剤およびジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）の単位用量製剤を含むキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用を遮断する薬剤を使用する方法に関する。より具体的には、本発明は、組み合わせて、がん療法を改善するのに有用である方法および手段に関する。

【背景技術】

【0002】

がん細胞は、がん細胞抗原に結合する抗体による、ならびにその抗体のＦｃ部分に結合するＦｃ受容体を手段としたマクロファージの動員および活性化を介する破壊のために標的化される。がん細胞上のＣＤ４７と、マクロファージ上のＳＩＲＰαとの間の結合は、多くの腫瘍細胞が、マクロファージによる破壊から逃れるのを可能にする「ドントイートミー（ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ）」シグナルを伝達する。ＣＤ４７／ＳＩＲＰα相互作用の阻害（ＣＤ４７遮断）は、マクロファージが、標的であるＣＤ４７＋がん細胞を「見る」および破壊するのを可能にするであろう。ＣＤ４７遮断によってがんを処置するためのＳＩＲＰαの使用は、参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／１３００５３に記載されている。

【0003】

その全体が参照により組み込まれる、国際特許出願公開ＷＯ２０１４／０９４１２２は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用を阻害するタンパク質薬物を記載する。このＣＤ４７遮断薬は、ＩｇＧに基づくＦｃ領域の特に有用な形態と連結されたその細胞外ドメインの特定の領域を含むヒトＳＩＲＰαの形態である。この形態では、ＳＩＲＰαＦｃ薬は、ＣＤ４７＋表現型を呈するがん細胞の生存能力に対して劇的な効果を示す。その効果は、特に、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞、および他の多くの型のがんについて見られる。一次構造が有意に変更され、ＣＤ４７結合親和性が増強された可溶性形態のＳＩＲＰが、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１３／１０９７５２に記載されている。

【0004】

他のＣＤ４７遮断薬は、文献に記載されており、これらのものとしては、それぞれ、異なる抗原結合部位を含むが、共通して、ＣＤ４７への結合について内因性ＲＩＲＰαと競合し、それによって、マクロファージとの相互作用を可能にし、最終的には、ＣＤ４７＋がん細胞枯渇の速度を増大させる能力を有する、種々のＣＤ４７抗体（例えば、ＳｔａｎｆｏｒｄのＵＳ８５６２９９７、およびＩｎｈｉｂＲｘのＷＯ２０１４／１２３５８０を参照されたい）が挙げられる。これらのＣＤ４７抗体は、ＳＩＲＰαに基づく薬物に固有のものとは全く異なるｉｎ ｖｉｖｏでの活性を有する。後者は、例えば、赤血球への無視できる程度の結合を示すが、ＣＤ４７抗体における反対の特性は、投与後に薬物「シンク」を収容する戦略に対する必要性を作出する。

【0005】

ＣＤ４７／ＳＩＲＰα軸の遮断における使用のために、さらに他の薬剤が提唱されている。これらのものとしては、ＣＤ４７Ｆｃタンパク質（Ｖｉｒａｌ ＬｏｇｉｃのＷＯ２０１０／０８３２５３を参照されたい）、およびＵＨＮのＷＯ２０１３／０５６３５２、ＳｔａｎｆｏｒｄのＷＯ２０１６／０２２９７１、ＥｂｅｒｈａｒｄのＵＳ６９１３８９４その他に記載されたＳＩＲＰα抗体が挙げられる。

【0006】

抗がん薬開発におけるＣＤ４７遮断手法は、非常に有望である。これらの薬物の効果を改善するため、および特に、ＣＤ４７遮断薬形態、特に、ＳＩＲＰαを含むものの効果を改善するための方法および手段を提供することが有用である。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0007】

現在、ＣＤ４７遮断の抗がん効果は、ジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）、またはプララトレキサートなどの抗葉酸剤と組み合わせた場合に改善されることが示されている。より具体的には、がん細胞枯渇の有意な改善は、ＣＤ４７^＋がん細胞が、ＤＨＦＲｉと組み合わせた、ＳＩＲＰαに基づく薬物などのＣＤ４７遮断剤（本明細書ではＣＤ４７遮断薬とも称される）で処理された場合に見られる。２つの薬物は、がん細胞に対するその効果において相乗作用し、その個別の効果の合計によって説明することができるよりも多くのがん細胞の枯渇をもたらす、すなわち、バックグラウンドを減算して、組合せの食作用（％）は、ＳＩＲＰａＦＣとプララトレキサートとから別々に加算された食作用（％）よりも大きい。

【課題を解決するための手段】

【0008】

一態様では、ＣＤ４７＋がん細胞を呈する対象を処置するための方法であって、ＣＤ４７結合形態のＳＩＲＰαまたは別の形態の抗ＣＤ４７剤、およびプララトレキサートなどのＤＨＦＲｉを含む処置有効薬物組合せを投与することを含む方法が提供される。

【0009】

関連する態様では、ＣＤ４７＋がんを呈する対象の処置のための、ＤＨＦＲｉと組み合わせたＳＩＲＰαに基づく薬物の使用が提供される。

【0010】

また、別の態様では、可溶性ＳＩＲＰαに基づく薬物（または別の形態の抗ＣＤ４７剤）などのＣＤ４７遮断薬と、ＤＨＦＲｉとを含む抗がん剤、すなわち、薬物の組合せと共に、本明細書に記載される処置方法におけるその使用を教示する使用説明書も提供される。

【0011】

実施形態、詳細、または変化が１つの特定のＳＩＲＰαに基づく薬物またはＤＨＦＲｉを参照して本明細書に記載される程度で、本出願または本文が別途明示的に指摘しない限り、同じ実施形態、詳細、および変化が本明細書で同定される他のものにも適用されると意図されることが理解されるべきである。

【0012】

種々の詳細および態様が、処置または処置方法として本明細書に記載される。全てのそのような環境において、関連するか、または等価な態様は、処置における使用のための本明細書に記載のペプチド、アナログ、誘導体、または組成物；および本明細書に記載の疾患または状態の処置のための薬剤の製造における使用のための本明細書に記載のペプチド、アナログ、誘導体、または組成物を含むことが理解されるべきである。

【0013】

本明細書における見出しは、読者の便宜のためのものであり、限定を意図するものではない。本発明の他の態様は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかであろう。

【0014】

本明細書に提供される本発明の例示的実施形態（Ｅ）は、以下を含む。

【0015】

Ｅ１．ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象を処置するための方法であって、前記対象に、ＣＤ４７遮断剤／遮断薬、およびジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）を投与することを含む方法。

【0016】

Ｅ２．ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象の処置を改善するための方法であって、前記対象がＣＤ４７遮断剤で処置されており、前記対象に、ジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）を投与することを含む方法。

【0017】

Ｅ３．ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象の処置を改善するための方法であって、前記対象がジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）で処置されており、前記対象に、ＣＤ４７遮断剤を投与することを含む方法。

【0018】

Ｅ４．ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象を処置するために組み合わせて使用するためのＣＤ４７遮断剤およびジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）。

【0019】

Ｅ５．ＣＤ４７^＋がん細胞を呈する対象を処置するためにＣＤ４７遮断剤と組み合わせて使用するためのジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）。

【0020】

Ｅ６．ＣＤ４７＋がん細胞を呈する対象におけるがんの処置のためにジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）と組み合わせて使用するための薬剤の製造におけるＣＤ４７遮断剤の使用。

【0021】

Ｅ７．ＣＤ４７＋がん細胞を呈する対象におけるがんの処置のためにＣＤ４７遮断剤と組み合わせて使用するための薬剤の製造におけるジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）の使用。

【0022】

Ｅ８．ＤＨＦＲｉが、メトトレキサートまたはプララトレキサートを含む、実施形態１から７のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0023】

Ｅ９．ＤＨＦＲｉがプララトレキサートを含む、実施形態１から７のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0024】

Ｅ１０．ＣＤ４７遮断剤が、ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合形態を含む、実施形態１から９のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0025】

Ｅ１１．ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合形態が、ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合断片である、実施形態１０に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0026】

Ｅ１２．ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合断片が、ヒトＳＩＲＰαのＶ領域を含む、実施形態１１に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0027】

Ｅ１３．ＣＤ４７遮断剤が、抗体定常領域（Ｆｃ）に結合した可溶性ヒトＳＩＲＰαバリアント２のＶ領域を含むＦｃ融合タンパク質を含む、実施形態１から１２のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0028】

Ｅ１４．可溶性ＳＩＲＰαを含むＦｃ融合タンパク質が、配列番号９または配列番号１０を含む、実施形態１３に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0029】

Ｅ１５．ＣＤ４７遮断剤が、Ｌ４Ｖ／Ｉ、Ｖ６Ｉ／Ｌ、Ａ２１Ｖ、Ｖ２７Ｉ／Ｌ、Ｉ３１Ｔ／Ｓ／Ｆ、Ｑ３７Ｗ／Ｈ、Ｅ４７Ｖ／Ｌ、Ｋ５３Ｒ、Ｅ５４Ｑ／Ｐ、Ｈ５６Ｐ／Ｒ、Ｓ６６Ｔ／Ｇ、Ｋ６８Ｒ、Ｖ９２Ｉ、Ｆ９４Ｖ／Ｌ、Ｖ６３Ｉ、Ｍ７２Ｒ、およびＦ１０３Ｖから選択される１つまたは複数のアミノ酸置換を有する可溶性ＳＩＲＰαを含む、実施形態１から９のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0030】

Ｅ１６．ＣＤ４７遮断剤が、１つまたは複数の保存的アミノ酸置換を有する可溶性ＳＩＲＰαを含む、実施形態１から９のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0031】

Ｅ１７．ＣＤ４７遮断剤が、抗体定常領域（Ｆｃ）に結合した可溶性ヒトＳＩＲＰαバリアント２のＶ領域を含むＦｃ融合タンパク質を含む、実施形態１５から１６のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0032】

Ｅ１８．ＣＤ４７^＋がん細胞が、血液がん細胞または固形腫瘍細胞である、実施形態１から１７のいずれか一項に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0033】

Ｅ１９．がん細胞が、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）およびｐ５３突然変異型ＡＭＬ；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；骨髄増殖性障害／新生物（ＭＰＤＳ）；および骨髄異形成症候群から選択されるがん型の細胞である、実施形態１８に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0034】

Ｅ２０．がん細胞が、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、無痛性非ホジキンリンパ腫、侵攻性非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、および小細胞型濾胞性リンパ腫、および大細胞型濾胞性リンパ腫から選択されるリンパ腫に由来する、実施形態１８に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0035】

Ｅ２１．がん細胞が、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫から選択される骨髄腫に由来する、実施形態１８に記載の方法、使用、または使用のための薬物。

【0036】

Ｅ２２．葉酸またはビタミンＢ１２を対象に投与することをさらに含む、実施形態１から３および８から２１のいずれか一項に記載の方法。

【0037】

Ｅ２３．葉酸またはビタミンＢ１２と組み合わせて使用するための、実施形態４から２１のいずれか一項に記載の使用または使用のための薬物。

【0038】

Ｅ２４．ＣＤ４７^＋疾患細胞を枯渇させるのに有効な、所定量のＣＤ４７遮断剤と、ＣＤ４７^＋疾患細胞の枯渇を増強させるのに有効な、所定量のプララトレキサートとを、実施形態１から２３のいずれか一項に記載のその使用を教示する使用説明書と共に含む、抗がん薬の組合せ。

【0039】

Ｅ２５．ＣＤ４７^＋疾患細胞を呈する対象の処置における使用のための、実施形態２４に記載の組合せ。

【0040】

Ｅ２６．ＣＤ４７^＋疾患細胞がＣＤ４７^＋がん細胞である、実施形態２５に記載の使用のための組合せ。

【0041】

Ｅ２７．ＣＤ４７^＋がん細胞が、血液がんまたは固形腫瘍に由来する細胞を含む、実施形態２６に記載の使用のための組合せ。

【0042】

Ｅ２８．ＣＤ４７遮断剤およびジヒドロ葉酸リダクターゼ阻害剤（ＤＨＦＲｉ）の単位用量製剤を含むキット。
本発明のこれらのおよびその他の態様を、添付の図面を参照して、より詳細にここで説明する。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】図１は、ヒトリンパ腫細胞系ＨＨ上でのマクロファージ食作用アッセイからの結果を示す。バーは、左から右へ、以下の実験条件：処理なし（「Ｔｘなし」）；プララトレキサートのみ（「Ｐｒａ」）；ＴＴＩ－６２１（ＳＩＲＰａ－ＩｇＧ１ Ｆｃ）（「６２１」）のみ；プララトレキサートとＴＴＩ－６２１との組合せ（「Ｐｒａ＋６２１」）に関する食作用のパーセンテージを示す。

【図2】図２は、ヒトリンパ腫細胞系Ｈ９上でのマクロファージ食作用アッセイからの結果を示す。バーは、左から右へ、以下の実験条件：処理なし（「Ｔｘなし」）；プララトレキサートのみ（「Ｐｒａ」）；ＴＴＩ－６２１（ＳＩＲＰａ－ＩｇＧ１ Ｆｃ）（「６２１」）のみ；プララトレキサートとＴＴＩ－６２１との組合せ（「Ｐｒａ＋６２１」）に関する食作用のパーセンテージを示す。

【図3】図３は、異なる形式での図１（ＨＨ細胞）のマクロファージ食作用アッセイからの結果を示し、バーは、処理なしの条件よりも大きい食作用のパーセンテージ（すなわち、処理なしの条件の値を減算した）を示す。条件は、左から右へ、プララトレキサートのみ（「Ｐｒａ」）；ＴＴＩ－６２１（ＳＩＲＰａ－ＩｇＧ１ Ｆｃ）（「６２１」）のみ；プララトレキサートとＴＴＩ－６２１との組合せ（「Ｐｒａ＋６２１」）である。

【図4】図４は、異なる形式での図２（Ｈ９細胞）のマクロファージ食作用アッセイからの結果を示し、バーは、処理なしの条件よりも大きい食作用のパーセンテージ（すなわち、処理なしの条件の値を減算した）を示す。条件は、左から右へ、プララトレキサートのみ（「Ｐｒａ」）；ＴＴＩ－６２１（ＳＩＲＰａ－ＩｇＧ１ Ｆｃ）（「６２１」）のみ；プララトレキサートとＴＴＩ－６２１との組合せ（「Ｐｒａ＋６２１」）である。

【発明を実施するための形態】

【0044】

本発明は、ＣＤ４７＋表現型を有するがん細胞および腫瘍を呈する対象を処置するための改善された方法を提供する。この方法では、対象は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰａ軸をわたるシグナル伝達を遮断するＳＩＲＰαの任意のＣＤ４７結合形態、およびＤＨＦＲｉであってもよい、ＣＤ４７遮断薬（すなわち、ＳＩＲＰａＦｃなどの抗ＣＤ４７剤）の組合せを受ける。組み合わせた場合、この組合せの抗がん効果は、いずれかの薬剤のみの効果、または両方の薬剤の効果を加えたものよりも優れている。相乗作用は、特に、ＣＤ４７遮断薬が可溶性ＳＩＲＰαに基づく薬剤である場合に得られると考えられる。

【0045】

かくして、本発明の処置方法は、ＣＤ４７遮断薬または遮断剤としての、ＳＩＲＰαのＣＤ４７結合形態および遮断形態と、ＤＨＦＲｉとを組み合わせる。ＣＤ４７遮断活性を有する薬剤または薬物は、ＣＤ４７がマクロファージに提示されたＳＩＲＰαと相互作用する場合に得られるシグナル伝達を阻害し、弱める薬剤である。ヒトＳＩＲＰαのＣＤ４７結合形態は、本明細書に開示される組合せにおいて使用するための好ましいＣＤ４７遮断薬である。これらの薬物は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外領域に基づくものである。それらは、有効なＣＤ４７結合親和性および特異性を付与するのに十分な細胞外領域の少なくともある領域を含む。膜固定成分を欠く、いわゆる「可溶性」形態のＳＩＲＰαは、文献に記載されており、それぞれ、その全体が参照により組み込まれる、ＮｏｖａｒｔｉｓのＷＯ２０１０／０７００４７、およびＳｔａｎｆｏｒｄのＷＯ２０１３／１０９７５２、およびＴｒｉｌｌｉｕｍのＷＯ２０１４／０９４１２２において参照されたものが挙げられる。

【0046】

好ましい実施形態では、可溶性形態のＳＩＲＰαは、Ｆｃ融合物である。より具体的には、薬物は、好適には、抗体定常領域、またはＦｃ（フラグメント結晶化可能領域）と直接的に、または間接的に融合された形態の、ヒトＳＩＲＰαタンパク質を含む。別途記述しない限り、本明細書で使用される場合の用語「ヒトＳＩＲＰα」は、野生型、内因性、成熟形態のヒトＳＩＲＰαを指す。ヒトでは、ＳＩＲＰαタンパク質は、２つの主要な形態で見出される。１つの形態であるバリアント１またはＶ１形態は、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿５４２９７０．１として記載されたアミノ酸配列を有する（残基２７～５０４が成熟形態を構成する）。別の形態であるバリアント２またはＶ２形態は、１３アミノ酸によって異なり、ＣＡＡ７１４０３．１としてＧｅｎＢａｎｋに記載されたアミノ酸配列を有する（残基３０～５０４が成熟形態を構成する）。これらの２つの形態のＳＩＲＰαは、ヒトに存在するＳＩＲＰαの形態の約８０％を占め、両方とも用語「ヒトＳＩＲＰα」によって本明細書に包含される。また、ヒトにとって内因性であり、それに結合する際にＣＤ４７を介してシグナル伝達を誘発する同じ特性を有するそのマイナー形態も、用語「ヒトＳＩＲＰα」によって包含される。本発明は、ヒトＳＩＲＰバリアント２形態、またはＶ２を含む薬物組合せに対して最も具体的に向けられている。

【0047】

本発明の薬物組合せでは、有用なＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質は、ヒトＳＩＲＰαの細胞外領域内にある３つのいわゆる免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインのうちの１つを含む。より具体的には、本発明のＳＩＲＰαＦｃタンパク質は、現行の命名法によるＶ２形態のＩｇＶドメインを構成し、定義する、ヒトＳＩＲＰαの残基３２～１３７（１０６マー）を含む。以下に示される、このＳＩＲＰα配列は、配列番号１として本明細書で参照される。
ＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡ［配列番号１］

【0048】

好ましい実施形態では、ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質は、配列番号１によって定義されるＩｇＶドメイン、およびＳＩＲＰα配列内で近接するさらなる隣接残基を含む。Ｖ２形態のヒトＳＩＲＰαの残基３１～１４８によって表される、この好ましい形態のＩｇＶドメインは、以下に示される配列番号６を有する１１８マーである：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ［配列番号６］

【0049】

本発明のＳＩＲＰα融合タンパク質はまた、エフェクター機能を有するＦｃ領域を含んでもよい。Ｆｃとは、「フラグメント結晶化可能領域」を指し、主に重鎖定常領域およびヒンジ領域内の成分を含む抗体の定常領域を表す。かくして、好適なＦｃ成分は、エフェクター機能を有するものである。「エフェクター機能を有する」Ｆｃ成分は、抗体依存性細胞性細胞傷害への少なくともいくらかの寄与または補体を固定するいくらかの能力などの、少なくともいくらかのエフェクター機能を有するＦｃ成分である。また、Ｆｃは、少なくともＦｃ受容体に結合するであろう。これらの特性を、この目的のために確立されたアッセイを使用して明らかにすることができる。機能的アッセイとしては、標的細胞溶解を検出する標準的なクロム遊離アッセイが挙げられる。この定義によると、野生型ＩｇＧ１またはＩｇＧ４であるＦｃ領域はエフェクター機能を有するが、Ｐｒｏ２３３、Ｖａｌ２３４、Ａｌａ２３５を含み、Ｇｌｙ２３６（ＥＵ）の欠失を含む変更系列の組込みなどによる、エフェクター機能を除去するように突然変異させたヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、エフェクター機能を有しないと考えられる。好ましい実施形態では、Ｆｃは、ＩｇＧ１アイソタイプのヒト抗体に基づく。これらの抗体のＦｃ領域は、当業者には容易に同定可能であろう。実施形態では、Ｆｃ領域は、下側ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む。

【0050】

特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔにおいてＰ０１８５７、残基１０４～３３０と記載されたヒトＩｇＧ１のアミノ酸配列に基づくものであり、以下に示されるアミノ酸配列を有し、本明細書では配列番号２として参照される：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ^＊［配列番号２］

【0051】

かくして、実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１定常領域の野生型またはコンセンサス配列のいずれかを有する。代替的な実施形態では、融合タンパク質に含まれるＦｃ領域は、典型的なエフェクター活性定常領域を有する任意のＩｇＧ１抗体に由来する。そのようなＦｃ領域の配列は、例えば、以下のＩｇＧ１配列のいずれかのＦｃ領域（全てＧｅｎＢａｎｋから参照される）、例えば：ＢＡＧ６５２８３（残基２４２～４７３）、ＢＡＣ０４２２６．１（残基２４７～４７８）、ＢＡＣ０５０１４．１（残基２４０～４７１）、ＣＡＣ２０４５４．１（残基９９～３２０）、ＢＡＣ０５０１６．１（残基２３８～４６９）、ＢＡＣ８５３５０．１（残基２４３～４７４）、ＢＡＣ８５５２９．１（残基２４４～４７５）、およびＢＡＣ８５４２９．１（残基２３８～４６９）と一致してもよい。

【0052】

他の実施形態では、Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ４定常領域の配列を有する。代替的な実施形態では、融合タンパク質に含まれるＦｃ領域は、存在するが、天然では、ＩｇＧ１Ｆｃ領域よりも有意に効力が低いエフェクター活性を示す定常領域を有する任意のＩｇＧ４抗体に由来する。そのようなＦｃ領域の配列は、例えば、以下のＩｇＧ４配列のいずれかのＦｃ領域：ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔからのＰ０１８６１（残基９９～３２７）およびＧｅｎＢａｎｋからのＣＡＣ２０４５７．１（残基９９～３２７）と一致してもよい。

【0053】

特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔにおいてＰ０１８６１、残基９９～３２７と記載されたヒトＩｇＧ４のアミノ酸配列に基づくものであり、以下に示されるアミノ酸配列を有し、本明細書では配列番号７として参照される：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ［配列番号７］

【0054】

実施形態では、Ｆｃ領域は、ある特定のＦｃ特性に影響するアミノ酸置換を含む、１つまたは複数の変更、通常、約１０個以下、例えば、最大で５個のそのような変更を含む。１つの特定の好ましい実施形態では、Ｆｃ領域は、２２８位（ＥＵナンバリング）に変更を含み、この位置のセリンはプロリンによって置換されており（Ｓ^２２８Ｐ）、それによって、Ｆｃ二量体内のジスルフィド結合を安定化する。Ｆｃ領域内の他の変更は、グリシンまたはアラニンによるＡｓｎ^２９７の置換などのグリコシル化を変更する置換；ＵＳ６２７７７３７５、およびその他多くに教示されたＴ^２５２Ｌ、Ｔ^２５３Ｓ、およびＴ^２５６Ｆなどの半減期を増強する変更を含んでもよい。コンフォメーションに関してサイレントを維持しながら、例えば、Ｆｃ受容体結合を維持しながら、Ｆｃ特性を増強する変更が特に有用である。別の実施形態では、Ｆｃ領域は、その生物学的半減期を増大させるように改変される。種々の手法が可能である。例えば、以下の突然変異の１つまたは複数を導入することができる；米国特許第６，２７７，３７５号に記載されたＴ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆ。

【0055】

特定の実施形態では、およびＦｃ成分がＩｇＧ４ Ｆｃである場合には、Ｆｃは、少なくともＳ^２２８Ｐ突然変異を含み、以下に記載され、配列番号８として本明細書で参照されるアミノ酸配列を有する：
ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ［配列番号８］

【0056】

組合せ中で使用されるＣＤ４７遮断薬は、かくして、好ましくは、ヒトＳＩＲＰαおよびヒトＣＤ４７の結合を阻害することによって、ＳＩＲＰαに結合したＣＤ４７によって媒介されるシグナルの伝達を阻害するか、または低減させるのに有用なＳＩＲＰ融合タンパク質であって、融合タンパク質が、ヒトＳＩＲＰα成分およびそれと共に融合された、Ｆｃ成分を含み、ＳＩＲＰα成分が、ヒトＳＩＲＰαＶ２の単一のＩｇＶドメインを含むか、またはそれからなり、Ｆｃ成分が、エフェクター機能を有するヒトＩｇＧの定常領域である、融合タンパク質である。

【0057】

一実施形態では、融合タンパク質は、Ｖ２形態の野生型ヒトＳＩＲＰαの少なくとも残基３２～１３７、すなわち、配列番号１からなるＳＩＲＰα成分を含む。好ましい実施形態では、ＳＩＲＰα成分は、Ｖ２形態のヒトＳＩＲＰαの残基３１～１４８、すなわち、配列番号６からなる。別の実施形態では、Ｆｃ成分は、Ｐ０１８５７と命名されたヒトＩｇＧ１のＦｃ成分であり、特定の実施形態では、その下側ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３領域を含むアミノ酸配列、すなわち、配列番号２を有する。

【0058】

好ましい実施形態では、したがって、ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質は、分泌された二量体融合物形態で提供および使用され、ここで、融合タンパク質は、配列番号１および好ましくは配列番号６を有するＳＩＲＰα成分、ならびにそれと共に融合された、エフェクター機能を有し、配列番号２を有するＦｃ領域を含む。ＳＩＲＰα成分が配列番号１である場合、この融合タンパク質は、以下に示される配列番号３を含む：
ＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ^＊
［配列番号３］

【0059】

ＳＩＲＰα成分が配列番号６である場合、この融合タンパク質は、以下に示される配列番号９を含む：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
［配列番号９］

【0060】

代替的な実施形態では、融合タンパク質のＦｃ成分は、ＩｇＧ４、および好ましくは、Ｓ^２２８Ｐ突然変異を含むＩｇＧ４に基づくものである。融合タンパク質が配列番号６の好ましいＳＩＲＰα ＩｇＶドメインを含む場合、得られるＩｇ４に基づくＳＩＲＰα－Ｆｃタンパク質は、以下に示される配列番号１０を有する：
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ［配列番号１０］

【0061】

好ましい実施形態では、融合タンパク質は、融合タンパク質のＳＩＲＰα ＩｇＶドメインとして、配列番号６である配列を含む。好ましいＳＩＲＰαＦｃは、配列番号９または配列番号１０である。

【0062】

ＣＤ４７遮断薬内に含まれるＳＩＲＰα配列は、文献に記載されたように、変化してもよい。これは、８９位およびその他の位置などの、タンパク質中のグリコシル化部位を除去し得る。ＳＩＲＰα内の他の有用な置換としては、以下の１つまたは複数：Ｌ４Ｖ／Ｉ、Ｖ６Ｉ／Ｌ、Ａ２１Ｖ、Ｖ２７Ｉ／Ｌ、１３１Ｔ／Ｓ／Ｆ、Ｅ４７Ｖ／Ｌ、Ｋ５３Ｒ、Ｅ５４Ｑ、Ｈ５６Ｐ／Ｒ、Ｓ６６Ｔ／Ｇ、Ｋ６８Ｒ、Ｖ９２Ｉ、Ｆ９４Ｖ／Ｌ、Ｖ６３Ｉ、および／またはＦ１０３Ｖが挙げられる。

【0063】

ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質では、ＳＩＲＰα成分と、Ｆｃ成分とが、直接的または間接的に融合され、必要に応じて、単鎖ポリペプチドがＦｃ領域内で形成される鎖間ジスルフィド結合を介してカップリングされる二量体として最終的に産生され得る単鎖ポリペプチドを提供する。融合領域の性質は重要ではない。融合は、２つの成分の間で直接のものであってよく、ＳＩＲＰ成分が融合物のＮ末端を構成し、Ｆｃ成分がＣ末端を構成する。あるいは、融合は、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸、または５～１００アミノ酸の任意数のアミノ酸、例えば、５～５０、５～３０もしくは５～２０アミノ酸などの、１つまたは複数のアミノ酸、望ましくは遺伝子コードされたアミノ酸を含むリンカーを介する間接のものであってもよい。リンカーは、ＢａｍＨＩ、ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＰｓｔＩ、ＳａｌＩおよびＸｈｏＩ部位などの制限部位を構成するＤＮＡによってコードされるペプチドを含んでもよい。

【0064】

リンカーアミノ酸は、典型的に、かつ望ましくは、ＦｃおよびＳＩＲＰ成分に、その活性コンフォメーションを採らせるいくらかの可撓性を有する。そのような可撓性を可能にする残基は、典型的には、Ｇｌｙ、ＡｓｎおよびＳｅｒであり、したがって、リンカー内のこれらの残基の実質的に任意の組合せ（特に、ＧｌｙおよびＳｅｒ）が、望ましい連結効果を提供する可能性が高い。一例では、そのようなリンカーは、（Ｇ４Ｓ）ｎ（式中、ｎは、１、２、３以上である）として反復してもよい、いわゆるＧ４Ｓ配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ［配列番号５］）に基づくか、または（Ｇｌｙ）ｎ、（Ｓｅｒ）ｎ、（Ｓｅｒ－Ｇｌｙ）ｎもしくは（Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎなどに基づく。別の実施形態では、リンカーは、ＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ［配列番号４］である。この配列は、ＩｇＶドメインをＣ末端で挟むＳＩＲＰα配列である（このフランキング配列は、リンカー、または上記のＩｇＶ最小配列とカップリングした場合、異なる形態のＩｇＶドメインのいずれかと考えることができることが理解される）。融合領域またはリンカーは、成分に、その活性コンフォメーションを採らせることだけが必要であり、これは当業界で有用な任意の形態のリンカーによって達成することができる。

【0065】

記載の通り、ＳＩＲＰαＦｃ融合物は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用を阻害することによって、この軸をわたるシグナル伝達を遮断するのに有用である。ＣＤ４７によるマクロファージ上のＳＩＲＰαの刺激は、ミオシン－ＩＩおよび標的をマクロファージ中に引き込むのに関与する収縮性細胞骨格活性を不活化することによってマクロファージ媒介性食作用を阻害することが知られている。このカスケードの活性化は、したがって、ＣＤ４７^＋疾患細胞の生存にとって重要であり、この経路の遮断は、マクロファージに、ＣＤ４７^＋疾患細胞集団を根絶させるか、または少なくとも減少させる。かくして、ＣＤ４７遮断薬は、ＣＤ４７抗体およびその二重特異性形態、ならびにＣＤ４７Ｆｃ融合物またはＳＩＲＰα抗体を含む、この目的を達成する任意の薬剤であってもよい。

【0066】

用語「ＣＤ４７^＋」（またはＣＤ４７＋）は、本発明のポリペプチドによる結合のために標的化される細胞の表現型を参照して使用される。ＣＤ４７^＋である細胞を、親和性リガンドとしてＣＤ４７抗体を使用するフローサイトメトリーによって同定することができる。適切に標識されたＣＤ４７抗体は、この使用のために商業的に入手可能である（例えば、クローンＢ６Ｈ１２の抗体生成物は、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから入手可能である）。ＣＤ４７表現型について検査される細胞は、特に、内因性ＣＤ４７^＋がん細胞を担持することが疑われる対象から採取された血液試料を含む標準的な腫瘍生検試料を含んでもよい。本発明の融合タンパク質を用いた療法のための標的としての特定の目的のＣＤ４７疾患細胞は、ＣＤ４７を「過剰発現する」ものである。これらのＣＤ４７^＋細胞は、典型的には、疾患細胞であり、所与の型の細胞に関する正常なＣＤ４７密度を超える、その表面上の密度でＣＤ４７を提示する。ＣＤ４７過剰発現は、異なる細胞型にわたって変化するであろうが、本明細書では、例えば、本明細書に例示されるフローサイトメトリーによって、または免疫染色によって、または遺伝子発現分析などによって、その細胞型に関して正常であるＣＤ４７表現型を有する対応する細胞上で測定可能なレベルよりも高いと決定される任意のＣＤ４７レベルを指すことを意味する。

【0067】

本発明の薬物組合せは、まさに記載される、ＣＤ４７結合形態のＳＩＲＰαであるＣＤ４７遮断剤と、ＤＨＦＲｉとの両方を含む。好ましい実施形態では、ＤＨＦＲｉはプララトレキサートであり、ＣＤ４７遮断剤はＣＤ４７結合形態のＳＩＲＰａＦｃである。

【0068】

プララトレキサートは、Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標）（Ａｃｒｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ）の名称の下で現在販売されている。それは、限定されるものではないが、再発性または難治性末梢Ｔ細胞リンパ腫、侵攻性であることが多い非ホジキンリンパ腫を含む、種々のがんの処置のために使用される薬剤である。それは、以下に示される構造を有する：

【0069】

【化1】

【0070】

プララトレキサートは、静脈内（ＩＶ）注射によって与えられる。あり得る副作用のリスクを低減させるために、プララトレキサートを用いた処置の間に、葉酸およびビタミンＢ１２栄養補助食品も処方される。プララトレキサートは、がん細胞中の葉酸を中和し、それと競合し、細胞の葉酸欠乏をもたらし、その細胞死を引き起こすことができることによってその化学療法効果を発揮する。

【0071】

ＳＩＲＰａＦｃまたは他のＣＤ４７遮断剤（ＳＩＲＰとＣＤ４７との間の結合を遮断する薬剤）と組み合わせて使用することもできる他の形態の抗葉酸剤（葉酸誘導体）としては、メトトレキサート、ラルチトレキセド、およびペメトレキセドが挙げられ、これらのものは本発明の実施形態である。

【0072】

組合せに含まれるそれぞれの薬物は、組み合わせて使用するために別々に製剤化することができる。両方の薬物のレシピエントにおいて、一方の薬物の効果が他方の効果を増強する場合、薬物は、「組み合わせて」使用され、所望の効果をもたらすか、または有効量を含むと言われる。

【0073】

この手法では、それぞれの薬物は、薬学的に許容できる担体、および治療有効量で含む剤形で提供される。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体」は、生理学的に適合し、タンパク質／抗体製剤の当業界で有用である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を意味する。薬学的に許容できる担体の例としては、水、食塩水、リン酸緩衝溶液、デキストロース、グリセロール、エタノールなどの１つまたは複数、ならびにその組合せが挙げられる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール、または塩化ナトリウムを組成物中に含有させることが好ましい。薬学的に許容できる担体は、薬剤の保存可能期間または有効性を増強する、湿潤剤または乳化剤、保存剤または緩衝剤などの少量の補助物質をさらに含んでもよい。ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質は、治療タンパク質製剤の当業界で標準的な実務を使用して製剤化される。注射または輸注などによる、静脈内投与にとって好適である食塩水などの溶液が、特に有用である。ＤＨＦＲｉは、ヒトにおけるその使用を認可した規制当局によって許可されたように製剤化されるであろう。

【0074】

必要に応じて、上に列挙された成分の１つまたは組合せと共に、適切な溶媒中に、必要な量の活性化合物を含有させた後、滅菌精密濾過を行うことによって、滅菌溶液を調製することができる。一般に、分散体は、活性化合物を、基本分散媒体および上に列挙されたものに由来する必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に含有させることによって調製される。調製のための滅菌粉末の場合、活性成分と、その予め滅菌濾過された溶液に由来するさらなる所望の成分との粉末を得る、減圧乾燥および凍結－乾燥（凍結乾燥）である。

【0075】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な用量で、必要な特定の期間にわたって有効な量を指す。組合せ中の各薬物の治療有効量は、個体の疾患段階、年齢、性別、および体重、ならびにレシピエントにおいて所望の応答を惹起する薬剤の能力などの因子に応じて変化してもよい。治療有効量はまた、薬剤の任意の毒性効果または有害効果を、治療的に有益な効果が上回るものである。ＤＨＦＲｉは、ヒトにおけるその使用を認可した規制当局によって許可されたように患者への投薬にとって好適である量で製剤化されるであろう。プララトレキサートについては、有効用量は、疾患進行または許容できない毒性まで、７週のサイクルで６週にわたって週１回、３～５分かけた静注による３０ｍｇ／ｍ２を含むであろう。ＳＩＲＰａＦｃ、ＴＴＩ－６２１については、例示的な投薬は、毎週、０．２～２．０ｍｇ／ｋｇ ＩＶの投与、またはおそらくより低い頻度（Ｑ２ＷもしくはＱ３Ｗ）での投与である。

【0076】

本発明の組合せで処置される患者は、プララトレキサート投薬のため、低用量（１ｍｇ～１．２５ｍｇ）の経口葉酸を毎日摂取してもよい。葉酸は、プララトレキサートの１回目の用量の１０日前に開始し、最後の用量後、３０日間継続してもよい。患者は、プララトレキサートの第１の用量の前の１０週以内およびその後８～１０週毎にＢ１２（１ｍｇ）の注射を受けてもよい。その後のＢ１２注射を、例えば、５～１５分の経過にわたる輸注などによって静脈内投与される２～４ミリグラムのプララトレキサートを用いた処置と同じ日に投与してもよい。

【0077】

ＳＩＲＰαＦｃ融合タンパク質を、タンパク質送達のために確立された経路のいずれか、特に、静脈内、皮内および皮下注射もしくは輸注、または経口もしくは経鼻投与によって対象に投与することができる。

【0078】

本発明の組合せ中の薬物を、連続的に、または本質的に同時に投与することができる。実施形態では、ＤＨＦＲｉは、ＳＩＲＰαＦｃの投与の前に与えられる。ＣＤ４７遮断薬が投与される場合、ＤＨＦＲｉが患者の系内に存在することは必須ではないが、これが好適である。かくして、一実施形態では、ＣＤ４７^＋疾患細胞を呈する対象を処置するための方法であって、プララトレキサートを対象に投与すること、次いで、疾患細胞集団を減少させるのに十分な量のＳＩＲＰαＦｃをその対象に投与することを含む方法が提供される。

【0079】

投薬レジメンは、最適な望ましい応答（例えば、治療応答）を提供するために調整される。例えば、各薬物の単回ボーラスを投与するか、またはいくつかの分割された用量を時間をかけて投与するか、または治療状況によって示されるように用量を比例的に減少させるか、もしくは増加させることができる。投与の容易性および投与量の均一性のために単位剤形中で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される場合、「単位剤形」とは、治療しようとする対象のための単一の用量として適した物理的に個別の単位を指す；それぞれの単位は、必要とされる薬学的担体と関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含有する。

【0080】

薬物を組み合わせて製剤化することができるので、その組合せを１回の投与で、例えば、１回の注射または１回の輸注バッグでレシピエントに導入することができる。あるいは、薬物を、単一のパッケージ中で一緒に提供される別々の単位として、本発明の方法に従うその使用のための使用説明書と共に組み合わせることができる。別の実施形態では、本明細書に記載の障害の処置にとって有用な量のＳＩＲＰαＦｃ薬物とＤＨＦＲｉとの組合せを含有する製品が提供される。製品は、本発明の抗体薬物組合せの一方または両方の薬物、ならびに容器およびラベルを含む。好適な容器としては、例えば、ビン、バイアル、シリンジ、および試験管が挙げられる。容器を、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成させることができる。容器は、状態を処置するのに有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。容器上の、または容器と関連するラベルは、組成物が本発明に従って別のＣＤ４７遮断薬と組み合わせて使用されることによって、ＣＤ４７^＋疾患細胞に対する相乗効果を惹起することを示す。製品は、リン酸緩衝溶液、リンゲル溶液、またはデキストロース溶液などの薬学的に許容できる緩衝剤を含む第2の容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、充填剤、針、シリンジ、および使用のための説明書を含む添付文書などの、商業的観点および使用の観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。

【0081】

投与のために、ＣＤ４７遮断薬の用量は、ＴＴＩ－６２１が使用される場合、宿主体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は、０．０１～３０ｍｇ／ｋｇの範囲内にあるであろう。例えば、投与量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重であってもよい。薬物がＴＴＩ－６２２（配列番号１０）（ＦｃがＧ４アイソタイプであり、Ｓ^２２８ＰとしてＦｃ中で置換が生じるＳＩＲＰａＦｃ）である場合、より高い用量、例えば、０．１～５０ｍｇ／ｋｇの一般的な範囲内などを使用することができる。

【0082】

ＳＩＲＰαＦｃタンパク質は、赤血球への無視できる程度の結合を示す。したがって、薬物組合せと共に投薬する場合、ＲＢＣ「シンク」について説明する必要はない。ＲＢＣによって結合された他のＣＤ４７遮断薬と比較して、本発明のＳＩＲＰαＦｃ融合物は、ＣＤ４７抗体などの、ＲＢＣと結合するようになる薬物にとって必要とされる用量の半分未満である用量で有効であり得ると見積もられている。さらに、ＳＩＲＰα－Ｆｃ融合タンパク質は、それが結合している場合に無視できる程度のＣＤ４７アゴニズムを示すため、ＳＩＲＰα媒介性シグナルの専用のアンタゴニストである。したがって、医学的に有用な単位投与レジメンを確立する場合、薬物によって誘導されるいかなる刺激についても説明する必要はない。

【0083】

薬物組合せは、様々なＣＤ４７^＋疾患細胞を処置するのに有用である。これらのものは、特に、液性（血液学的）腫瘍および固形腫瘍を含む、ＣＤ４７^＋がん細胞を含む。抗葉酸剤（ＤＨＦＲｉ）自体、かくして、組合せはまた、白血病リンパ腫、骨肉腫、非小細胞肺がん、中皮腫、結腸直腸がんおよび乳がんの処置のために使用される。固形腫瘍を本発明の薬物組合せを用いて処置して、そのサイズ、数または成長速度を低減させ、がん幹細胞の増殖を制御することができる。そのような固形腫瘍は、同様に、膀胱、脳、乳房、肺、結腸、卵巣、前立腺、肝臓および他の組織におけるＣＤ４７^＋腫瘍を含む。一実施形態では、薬物組合せを使用して、血液がんの成長または増殖を阻害することができる。本明細書で使用される場合、「血液がん」とは、血液のがんを指し、特に、白血病、リンパ腫および骨髄腫を含む。「白血病」とは、感染と戦うには無効である多すぎる白血球が作られ、かくして、血小板および赤血球などの、血液を構成する他の部分を閉め出す、血液のがんを指す。白血病の症例は急性または慢性と分類されることが理解される。ある特定の形態の白血病は、例として、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；骨髄増殖性障害／新生物（ＭＰＤＳ）；および骨髄異形成症候群であってもよい。「リンパ腫」は、特に、ホジキンリンパ腫、無痛性と侵攻性の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、および濾胞性リンパ腫（小細胞および大細胞）を指してもよい。骨髄腫は、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫を指してもよい。特定の実施形態では、組合せは、それ自身、節性または節外性に分割される、皮膚および末梢ＴＣＬに分割されるリンパ性悪性疾患の非常に異種性の群であるＴ細胞リンパ腫を処置するのに有用である。ＣＴＣＬは、皮膚ホーミングＴ細胞に由来し、菌状息肉腫、セザリー症候群、原発性皮膚Ｔ細胞リンパ増殖性障害、および未分化大細胞リンパ腫からなる。ＴＣＬの一般的な特徴は、ＡＬＫおよびＡＬＣＬを除いて、侵攻性の経過および療法に対する弱い応答である。

【0084】

一部の他の実施形態では、薬物組合せで処置される血液がんは、好ましくは、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、および骨髄異形成症候群、好ましくは、ヒト急性骨髄性白血病から選択される、ＣＤ４７^＋白血病である。

【0085】

他の実施形態では、薬物組合せで処置される血液がんは、ホジキンリンパ腫、無痛性と侵攻性の両方の非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫（小細胞および大細胞）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、巨細胞性骨髄腫、重鎖骨髄腫、および軽鎖またはベンス・ジョーンズ骨髄腫ならびに平滑筋肉腫から選択されるＣＤ４７^＋リンパ腫または骨髄腫である。

【0086】

ヒト非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）異種移植片では、プララトレキサートは、増大した抗腫瘍活性を示した。２ｍｇ／ｋｇのプララトレキサート処置群では、３８％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が観察された。ＮＣＩ－Ｈ４６０ ＮＳＣＬＣ異種移植片では、プララトレキサートは、用量依存的様式で抗腫瘍活性を示した。１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇのプララトレキサート処置群のＴＧＩは、それぞれ、３４％および５２％であった。かくして、本発明の組合せは、肺腫瘍および他の固形組織の腫瘍などの固形腫瘍を処置するのに有用であり得る。

【0087】

ＣＤ４７遮断薬と、プララトレキサートなどの抗葉酸剤とを含む併用療法を、アジュバント療法における外科手術、またはネオアジュバント療法における追加の化学療法などの、標的適応症の処置において有用な任意の他の薬剤またはモダリティと一緒に活用することもできる。

【実施例】

【0088】

ヒトリンパ腫細胞のマクロファージ食作用に対する、個別の薬剤と比較した、ＤＨＦＲｉとＣＤ４７遮断剤との組合せの効果を評価するために、マクロファージ食作用アッセイを行った。

【0089】

このアッセイについては、ＤＨＦＲｉはプララトレキサートであり、ＣＤ４７遮断剤は可溶性ＳＩＲＰαを含むＦｃ融合タンパク質（ＴＴＩ－６２１）であった。リンパ腫細胞は、ヒトＴ細胞リンパ腫細胞系ＨＨ（ＡＴＣＣ参照番号ＣＲＬ－２１０５）（侵攻性皮膚Ｔ細胞白血病／リンパ腫を有する患者の末梢血に由来する成熟Ｔ細胞系）またはＨ９（ＡＴＣＣ参照番号ＨＴＢ－１７６）（皮膚Ｔ細胞リンパ腫）であった。かくして、それぞれのリンパ腫細胞型について４つの実験条件：Ａ）処理なし；Ｂ）プララトレキサートのみ；Ｃ）ＴＴＩ－６２１（ＳＩＲＰａ－ＩｇＧ１ Ｆｃ）のみ；およびＤ）プララトレキサートとＴＴＩ－６２１との組合せがあった。

【0090】

正常なドナーに由来するＰＢＭＣを、ＢｉｏｌＶＴから購入し、インフォームドコンセントを全てのドナーから得た。ＣＤ１４＋単球を、ヒト単球単離キットを使用する陽性選択によってＰＢＭＣから単離した。Ｍ－ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）を添加したＸ－Ｖｉｖｏ－１５培地（Ｌｏｎｚａ）中で少なくとも１０日間培養することによって、単球をマクロファージに分化させ、その時点で、プララトレキサート処理実験条件については、プララトレキサート（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）をさらに３日間にわたってマクロファージ培養物に添加した。同様に、プララトレキサート処理実験条件について、ヒトリンパ腫細胞系ＨＨまたはＨ９も、食作用アッセイの前に３日間にわたってプララトレキサート（Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ）で処理した。食作用アッセイの１日前に、マクロファージをＩＦＮｇ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ）でプライミングした。食作用アッセイの当日、マクロファージを、バイオレット増殖染料４５０（ＶＰＤ４５０）処理したＨＨまたはＨ９細胞と共に２時間同時培養し、ＴＴＩ－６２１処理条件については、ＴＴＩ－６２１を２時間の同時培養の前に添加した。食作用を、フローサイトメトリーによって、生きた単一のＣＤ１４＋ＣＤ１１ｂ＋マクロファージのＶＰＤ４５０＋細胞（％）として評価した。結果を、図１～４に示す。

【0091】

図１は、細胞系ＨＨのマクロファージ食作用および一元配置分散分析によって確立された、単剤のみまたは処理なしの対照に対する、プララトレキサート＋ＴＴＩ－６２１の組合せ処理に関する^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１を示す。図２は、細胞系Ｈ９のマクロファージ食作用および一元配置分散分析によって確立された、単剤のみまたは処理なしの対照に対する、プララトレキサート＋ＴＴＩ－６２１の組合せ処理に関する^＊＊＊＊ｐ＜０．０００１を示す。図１および図２に示されるように、がん細胞と共に培養したマクロファージを、プララトレキサートとＴＴＩ－６２１（配列番号９）との組合せで処理した場合、単剤のみを用いた処理、または非処理対照に対してがん細胞食作用の有意な増加があった。さらに、この効果は、ＣＤ４７感受性細胞系（ＨＨ細胞；図１）と、ＣＤ４７非感受性細胞系（Ｈ９細胞；図２）との両方について存在していた（ＣＤ４７感受性の指標については、ＨＨ細胞対Ｈ９細胞に関する６２１のみの食作用（％）を比較されたい；非処理対照と比較して、６２１のみに関してＨＨ細胞の食作用が増加する；６２１のみに関するこの増加は、Ｈ９細胞については存在しない）。

【0092】

次いで、図１および図２におけるデータを、バックグラウンドを減算して再評価した；これを、それぞれ、図３および図４に提供する。図３および図４に示されるように、組合せの食作用パーセンテージは、ＨＨ細胞（図３）とＨ９細胞（図４）との両方について、ＳＩＲＰａＦｃおよびプララトレキサートに個別に由来する食作用パーセンテージを加算したものよりも大きい。かくして、単剤処置と比較して、プララトレキサートとＴＴＩ－６２１との組合せについて、有意な、さらには相乗的な効果が存在する。

【0093】

本明細書で参照される全ての特許および特許公開は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。限定されるものではないが、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔおよび／またはＧｅｎＢａｎｋにおける実体を含む、本明細書で参照される全ての配列データベース実体は、２０２１年４月２７日の時点で存在するバージョンに関して本明細書に組み込まれる。

【0094】

米国仮特許出願第６３／１８０，６０４号（２０２１年４月２７日出願）および同第６３／２５３，１２５号（２０２１年１０月６日出願）の内容は、あらゆる目的で参照により本明細書に組み込まれる。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【配列表】

2024515211000001.app

【国際調査報告】