特表 2024-515555 Ｌ－アスパラギナーゼの製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-10

(54)【発明の名称】Ｌ－アスパラギナーゼの製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/50 20060101AFI20240403BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240403BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240403BHJP

   A61K 47/04 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/12 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20240403BHJP

   C12N 9/82 20060101ALI20240403BHJP

   C12N 15/55 20060101ALN20240403BHJP

   C12N 5/09 20100101ALN20240403BHJP

【ＦＩ】

A61K38/50 ZNA

A61P35/00

A61P35/02

A61K45/00

A61K9/08

A61K9/14

A61K47/26

A61K47/18

A61K47/04

A61K47/12

A61K47/10

C12N9/82

C12N15/55

C12N5/09

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023561628

(86)(22)【出願日】2022-04-05

(85)【翻訳文提出日】2023-11-17

(86)【国際出願番号】 US2022071562

(87)【国際公開番号】W WO2022217231

(87)【国際公開日】2022-10-13

(31)【優先権主張番号】63/171,429

(32)【優先日】2021-04-06

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】519426911

【氏名又は名称】ジャズ ファーマシューティカルズ アイルランド リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】カナプラン セカール

(72)【発明者】

【氏名】マイティ ハリパダ

(72)【発明者】

【氏名】ジャン グイフェン

(72)【発明者】

【氏名】ナーワル ロジャ

【テーマコード（参考）】

4B065

4C076

4C084

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065BB21

4C076AA12

4C076AA29

4C076BB13

4C076BB15

4C076CC27

4C076DD23

4C076DD26Z

4C076DD41Z

4C076DD46

4C076EE23

4C076FF36

4C076FF63

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA02

4C084BA22

4C084BA23

4C084BA44

4C084CA59

4C084DC22

4C084MA05

4C084MA66

4C084NA03

4C084NA05

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

(57)【要約】

Ｌ－アスパラギナーゼの安定した水性の非凍結乾燥型製剤が本明細書で提供される。アスパラギン枯渇によって治療可能な１つ以上の疾患、障害、又は病状（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）などのがん）の治療においてこうした製剤を使用する方法も本明細書で提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

水性の非凍結乾燥型製剤であって、
（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、
（ｉｉ）１つ以上の安定剤、若しくは１つ以上の緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせと
を含む、前記製剤。

【請求項2】

前記１つ以上の安定剤が、１つ以上の二糖類、１つ以上のソルビトール、１つ以上のアミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１に記載の製剤。

【請求項3】

前記１つ以上の二糖類が、トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む、請求項２に記載の製剤。

【請求項4】

前記１つ以上の緩衝液が、アミノ酸を実質的に含まない、請求項１～３のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項5】

４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項6】

３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項7】

４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項8】

前記Ｌ－アスパラギナーゼが、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１～７のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項9】

前記Ｌ－アスパラギナーゼが、非ＰＥＧ化且つ非ＰＡＳ化（ｎｏｎ－ＰＡＳｙｌａｔｅ）されている、請求項１～８のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項10】

前記１つ以上の二糖類が、トレハロースを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項11】

前記１つ以上の緩衝液が、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項12】

前記１つ以上の緩衝液が、リン酸緩衝液を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項13】

前記１つ以上の緩衝液が、リン酸ナトリウムを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項14】

前記リン酸ナトリウムが、リン酸二ナトリウム（無水）、リン酸一ナトリウム一水和物、又はこれらの組み合わせである、請求項１３に記載の製剤。

【請求項15】

前記リン酸ナトリウムが、約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１３に記載の製剤。

【請求項16】

塩化ナトリウムを更に含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項17】

前記塩化ナトリウムが、２５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する、請求項１６に記載の製剤。

【請求項18】

１つ以上の賦形剤を更に含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項19】

前記１つ以上の賦形剤が、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８、又はこれらの任意の組み合わせを含む、請求項１８に記載の製剤。

【請求項20】

前記１つ以上の賦形剤が、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．３％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項１８に記載の製剤。

【請求項21】

約４．０～約８．５のｐＨを有する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の製剤。

【請求項22】

その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療する方法であって、請求項１～２１のいずれか一項に記載の製剤を前記対象に投与することを含む、前記方法。

【請求項23】

前記疾患、病状、又は障害ががんである、請求項２２に記載の方法。

【請求項24】

前記がんが急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、請求項２３に記載の方法。

【請求項25】

前記ＡＬＬが再発性ＡＬＬである、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

前記がんがリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である、請求項２３に記載の方法。

【請求項27】

前記ＬＢＬが再発性ＬＢＬである、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記製剤が筋肉内投与される、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項29】

前記製剤が静脈内投与される、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項30】

前記製剤が皮下投与される、請求項２２～２７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記製剤が、１つ以上の他の化学療法剤と同時投与される、請求項２２～３０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

（ｉ）請求項１～２１のいずれか一項に記載の製剤と、
（ｉｉ）その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療するための、説明書と
を含む、キット。

【請求項33】

前記疾患、病状、又は障害ががんである、請求項３２に記載のキット。

【請求項34】

前記がんが急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、請求項３３に記載のキット。

【請求項35】

前記ＡＬＬが再発性ＡＬＬである、請求項３４に記載のキット。

【請求項36】

前記がんがリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である、請求項３３に記載のキット。

【請求項37】

前記ＬＢＬが再発性ＬＢＬである、請求項３６に記載のキット。

【請求項38】

（ｉ）請求項１～２１のいずれか一項に記載の製剤と、
（ｉｉ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と
を含む、単位剤形。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる２０２１年４月６日出願の米国仮特許出願第６３／１７１，４２９号に対する優先権及び利益を主張する。

【0002】

ＡＳＣＩＩテキストファイルの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名称：２１０４６３０００３００ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年４月５日、サイズ：３ＫＢ）。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
一般にＬ－アスパラギナーゼとして知られる、Ｌ－アスパラギンアミノヒドロラーゼ活性を有するタンパク質は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及びリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）などのがんを含む、致死的となる可能性のある様々な疾患（これらの疾患に襲われる患者の大部分が小児である）の治療に対して成功裏に用いられてきている。

【0004】

細菌起源のＬ－アスパラギナーゼは高い免疫原性及び抗原性能を有する。現在の市場における第一選択治療は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来のＬ－アスパラギナーゼ及びペガスパルガーゼである。これらの生成物は、患者において、アレルギー反応、無症候性不活化、及びアナフィラキシー・ショックを含む有害な過敏性反応を誘発する場合がある。これらの生成物に対して過敏性反応を経験する患者は、多くの場合で治療を中止する必要があり、その結果、予後及び生存率は不良となる。これらの患者は、過敏性反応を経験した後でＥｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）に頼るようになった。Ｅｒｗｉｎａｚｅ（登録商標）は、長年にわたる供給の問題に悩まされており、報道によれば、これは調製に９ヶ月間かかる場合がある（例えば、“Ｓａｖｉｎｇ Ａｖａ：Ｗｈｅｎ ａ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｓｈｏｒｔａｇｅ ｉｍｐｅｒｉｌｅｄ ａ ｔｏｄｄｌｅｒ，ｈｅｒ ｍｏｍ ｇｏｔ ｔｏ ｗｏｒｋ”，Ｓｔａｔ Ｎｅｗｓ，Ｋａｒｅｎ Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ（Ｏｃｔ．３１，２０１６）；Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ Ｅｒｗｉｎｉａ Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ Ｄｒｕｇ Ｓｈｏｒｔａｇｅ，Ｄｒｕｇｓ．ｃｏｍを参照されたい）。現在でもこの問題は続いており、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の不足は一般的である。ＦＤＡは、製造業者に対して行政警告書を発令し、「原料物質又は細胞株の変更は、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）の同一性、力価、品質、純度、又は効力に悪影響を及ぼす相当な可能性を有する」と言明した。

【0005】

免疫原性的な交差反応性のない治療選択肢に対する必要性が存在する。大腸菌由来のアスパラギナーゼに対する免疫学的交差反応性のないＬ－アスパラギナーゼ（蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）中で組み換え産生されるＬ－アスパラギナーゼなど）が、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏症を発症した患者に対するアスパラギナーゼの利用可能性を保証することを助けることによって、（多剤式化学療法レジメンの一構成要素として）ＡＬＬ／リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）患者に対する大きな医学的ニーズに対処する。

【0006】

現在では、Ｅｒｗｉｎａｓｅ（登録商標）は、滅菌の凍結乾燥された白色粉末としてバイアル中で供給されている。各バイアルは、１０，０００国際単位のアスパラギナーゼであるエルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、及び以下の非活性成分：グルコース一水和物（５．０ｍｇ）、塩化ナトリウム（０．５ｍｇ）を含有する。非凍結乾燥型製剤が利用可能であれば、対象、例えばヒトに投与する前の再水和の必要性が排除される。この目的のために、代替的な非凍結乾燥型の治療選択肢であるＯｎｃａｓｐａｒ（登録商標）が、透明、無色、防腐剤不含有のリン酸緩衝食塩水中等張滅菌溶液としてｐＨ７．３で供給されている。各ミリリットルが、注入用水（ＵＳＰ）中の、７５０±１５０国際単位のペガスパルガーゼ、リン酸二ナトリウム（ＵＳＰ）（５．５８ｍｇ）、リン酸一ナトリウム（ＵＳＰ）（１．２０ｍｇ）、及び塩化ナトリウム（ＵＳＰ）（８．５０ｍｇ）を含有する。更に、別の非凍結乾燥型の代替物であるＡＳＰＡＲＬＡＳ（登録商標）が、静脈内注入前に希釈を必要とする、透明、無色、防腐剤不含有のリン酸緩衝食塩水中等張滅菌溶液としてｐＨ７．３で供給されている。ＡＳＰＡＲＬＡＳ（登録商標）の各バイアルは、５ｍＬの溶液中に３，７５０単位を含有する。各ミリリットルが、注入用水（ＵＳＰ）中の、７５０単位のカラスパルガーゼ・ペゴル－ｍｋｎｌ、リン酸二ナトリウム（ＵＳＰ）（５．５８ｍｇ）、リン酸一ナトリウム（ＵＳＰ）（１．２０ｍｇ）、及び塩化ナトリウム（ＵＳＰ）（８．５０ｍｇ）を含有する。しかしながら、非凍結乾燥型の製剤（Ｏｎｃａｓｐａｒ（登録商標）及びＡＳＰＡＲＬＡＳ（登録商標）など）が存在するものの、例えば、既存の製剤は、室温で貯蔵される場合は４８時間以内に使用しなければいけないなどの安定性の問題が存在する。

【0007】

したがって、当該技術分野では、非凍結乾燥型の安定したＬ－アスパラギナーゼの水性製剤に対する必要性が存在する。

【発明の概要】

【0008】

Ｌ－アスパラギナーゼの水性の非凍結乾燥型製剤が本明細書で提供される。いくつかの態様では、こうした製剤は、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及びリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）（再発性ＡＬＬ及び再発性ＬＢＬを含む）などのがんを含む、アスパラギン枯渇によって治療可能な１つ以上の疾患、障害、又は病状の治療における用途を見出し得る。

【0009】

一態様では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、
（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、
（ｉｉ）１つ以上の安定剤、若しくは１つ以上の緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせと
を含む当該製剤が、本明細書で提供される。

【0010】

いくつかの実施形態では、１つ以上の安定剤は、１つ以上の二糖類、１つ以上のソルビトール、１つ以上のアミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の二糖類は、トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の二糖類はトレハロースを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、アミノ酸を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、リン酸緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、リン酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、リン酸ナトリウムは、リン酸二ナトリウム（無水）、リン酸一ナトリウム一水和物、又はこれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、非ＰＥＧ化且つ非ＰＡＳ化（ｎｏｎ－ＰＡＳｙｌａｔｅ）されている。

【0011】

いくつかの実施形態では、製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。

【0012】

一態様では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、
（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、
（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、
（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と
を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。

【0013】

別の態様では、本明細書に記載される製剤のうちのいずれかを対象に投与することを含む、その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療する方法が、本明細書で提供される。

【0014】

別の態様では、（ｉ）本明細書に記載される製剤のうちのいずれかと、（ｉｉ）１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と、を含む単位剤形が、本明細書で提供される。

【0015】

別の態様では、（ｉ）本明細書に記載される製剤のうちのいずれかと、（ｉｉ）その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療するための説明書と、を含むキットが、本明細書で提供される。

【発明を実施するための形態】

【0016】

定義
「対象」とは哺乳動物を指し、これとしてはヒト及び非ヒト哺乳動物が挙げられる。個体の例としては、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ブタ、ウサギ、ネコ、イヌ、ヤギ、ヒツジ、雌ウシ、及びヒトが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象とはヒトを指す。

【0017】

冠詞「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」は、本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、文脈から明らかな別段の指示がない限り、１つ又は２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）の冠詞の文法的対象を指すために用いられる。一例として、「緩衝液（ａ ｂｕｆｆｅｒ）」は、１つの緩衝液又は２つ以上の緩衝液を意味する。

【0018】

本明細書で使用する場合、「約（ａｂｏｕｔ）」パラメータ又は値は、そのパラメータ又は値自体を含み且つ説明する。例えば「約Ｘ」は、Ｘ自体を含み且つ説明する。本明細書で使用する場合、例えば、寸法、体積、組成物中の成分の量、濃度、プロセス温度、プロセス時間、収率、流量、圧力、及び同様の値、並びにこれらの範囲を修飾する用語「約」は、例えば、化合物、組成物、濃縮物、又は使用製剤の作製に用いられる典型的な測定及び取り扱いの手順を介して、これらの手順における故意ではない誤りを介して、方法を実行するために使用される出発物質又は成分の製造、供給源、又は純度の差、及び同様の事情を介して、起こり得る数量の変動を指す。用語「約」は、例えば組成物、製剤、又は細胞培養物の経年変化に起因して、特定の初期濃度又は混合物とは異なる量、及び組成物又は製剤の混合又は加工に起因して、特定の初期濃度又は混合物とは異なる量も包含する。用語「約」によって修飾されるか否かにかかわらず、本明細書に添付される特許請求の範囲は、これらの量との均等物を含む。用語「約」は、更に、記載された基準値に類似する値の範囲を指す場合がある。特定の実施形態では、用語「約」は、記載された基準値の１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１パーセント以下に含まれる値の範囲を指す。

【0019】

本明細書で使用する場合、用語「アスパラギンの枯渇によって治療可能な」及び「アスパラギン枯渇によって治療可能な」とは、疾患、病状、又は障害に関与するか又はこれの原因となる細胞が、Ｌ－アスパラギンを合成する能力を有さないか、又はこれが低減したかのいずれかである、疾患、病状、又は障害を指す。Ｌ－アスパラギンの枯渇又は欠乏は、部分的であってもよく、実質的に完全であってもよい（例えば、当該技術分野で既知の方法又は装置を用いて検出不可能なレベルで）。

【0020】

用語「配列番号１の配列を含む」は、タンパク質のアミノ酸配列が、配列番号１に厳しく限定されなくてもよく、追加のアミノ酸を含んでもよいことを意味する。

【0021】

「低分子量種」又は「ＬＭＷ種」とは、本明細書で使用する場合、Ｌ－アスパラギナーゼの分子量よりも低い分子量を有する種を指す。いくつかの実施形態では、ＬＭＷ種は、Ｌ－アスパラギナーゼの分子量の約１００％未満、約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４５％未満、約４０％未満、約３５％未満、約３０％未満、約２５％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満、約２％未満、又は約１％である分子量を有する。いくつかの実施形態では、ＬＭＷ種は、例えば、Ｌ－アスパラギナーゼ中の１つ以上の共有結合の加水分解を介した、Ｌ－アスパラギナーゼの分解又は崩壊によって形成される。

【0022】

「高分子量種」又は「ＨＭＷ種」とは、本明細書で使用する場合、Ｌ－アスパラギナーゼの分子量よりも高い分子量を有する種を指す。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ種は、Ｌ－アスパラギナーゼの分子量の約１００％超、約１５０％超、約２００％超、約２５０％超、約３００％超、約３５０％超、約４００％超、約４５０％、又は約５００％超である分子量を有する。

【0023】

「トレハロース」とは、以下の構造を有する二糖を指す：

。

【0024】

「スクロース」とは、以下の構造を有する二糖を指す：

。

【0025】

「ポリソルベート８０」又は「ＰＳ－８０」とは、以下の構造を有する賦形剤を指す：

。

【0026】

「ＰＥＧ化」とは、本明細書で使用する場合、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）がコンジュゲート又は結合している構造又は部分を説明するために使用される。任意の好適な数のＰＥＧ単位が、任意の好適な方法で（例えば、１つ以上の共有結合を介して）、且つ問題の構造又は部分の任意の好適な位置で、結合されてもよい。例えば、「ＰＥＧ化Ｌ－アスパラギナーゼ」は、１つ以上のＰＥＧ単位がコンジュゲート又は結合しているＬ－アスパラギナーゼを指す。したがって、「非ＰＥＧ化」部分とは、ＰＥＧがコンジュゲート又は結合していないものである。

【0027】

「ＰＡＳ化」とは、本明細書で使用する場合、プロリン、アラニン、若しくはセリン、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上のポリペプチド単位がコンジュゲート結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ａｔｔａｃｈｅｄ）している構造又は部分を説明するのに用いられる。任意の好適な数のこうしたポリペプチド単位が、任意の好適な方法で（例えば、１つ以上の共有結合を介して）、且つ問題の構造又は部分の任意の好適な位置で、結合されてもよい。例えば「ＰＡＳ化Ｌ－アスパラギナーゼ」とは、プロリン、アラニン、若しくはセリン、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上のポリペプチド単位がコンジュゲート又は結合しているＬ－アスパラギナーゼを指す。したがって、「非ＰＡＳ化」部分とは、プロリン、アラニン、若しくはセリン、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上のポリペプチド単位がコンジュゲート又は結合していないものである。

【0028】

「配列番号１」は以下の通りである：
ADKLPNIVILATGGTIAGSAATGTQTTGYKAGALGVDTLINAVPEVKKLANVKGEQFSNMASENMTGDVVLKLSQRVNELLARDDVDGVVITHGTDTVEESAYFLHLTVKSDKPVVFVAAMRPATAISADGPMNLLEAVRVAGDKQSRGRGVMVVLNDRIGSARYITKTNASTLDTFKANEEGYLGVIIGNRIYYQNRIDKLHTTRSVFDVRGLTSLPKVDILYGYQDDPEYLYDAAIQHGVKGIVYAGMGAGSVSVRGIAGMRKAMEKGVVVIRSTRTGNGIVPPDEELPGLVSDSLNPAHARILLMLALTRTSDPKVIQEYFHTY。

【0029】

製剤
一態様では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）１つ以上の安定剤、若しくは１つ以上の緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせと、を含む当該製剤が、本明細書で提供される。

【0030】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の安定剤を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の安定剤は、１つ以上の二糖類、１つ以上のソルビトール、１つ以上のアミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の二糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の二糖類は、トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液であって、アミノ酸を実質的に含まない、１つ以上の緩衝液。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の安定剤及び１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種及び２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。

【0031】

一態様では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。

【0032】

一態様では、本明細書で提供される本開示によるＬ－アスパラギナーゼは、組み換えＬ－アスパラギナーゼである。更なる態様では、本明細書に記載される本発明によるＬ－アスパラギナーゼは、Ｌ－アスパラギンアミノヒドロラーゼ活性を有する酵素である。こうしたＬ－アスパラギナーゼの酵素活性としては、アスパラギンからアスパラギン酸及びアンモニアへの脱アミド化のみならず、グルタミンからグルタミン酸及びアンモニアへの脱アミド化も挙げられ得る。

【0033】

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＬ－アスパラギナーゼは、多量体として活性である。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは四量体としての活性酵素である。四量体は、４つのサブユニット（単量体としても知られる）で構成される。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、４つの同一の３５ｋＤサブユニットからなる四量体である。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、非ジスルフィド結合四量体治療用タンパク質である。特定の実施形態では、多量体Ｌ－アスパラギナーゼのサブユニット又は単量体の各々が、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0034】

特定の実施形態では、四量体Ｌアスパラギナーゼのサブユニット又は単量体の各々が、配列番号１のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、シグナルペプチド及び／又はリーダー配列を含むか又は含まないかのいずれかである、エルウィニア・クリサンテミＮＣＰＰＢ１０６６（Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＣＡＡ３２８８４、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に由来する。

【0035】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは複数のサブユニット、例えば４つのサブユニット又は単量体（四量体）からなる。対応する修飾タンパク質は、続いて、例えば、その四量体の単量体の各々にコンジュゲートした１～２０（又はこれ以上）のペプチドからなり得る。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、単量体、並びにＬ－アスパラギナーゼの単量体の各々にコンジュゲートした１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、及び２０（又はこれ以上）のペプチドを含む。特定の実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、複数のサブユニット又は単量体を含む多量体、例えば四量体であり、その四量体中の単量体の各々が１つのペプチドにコンジュゲートし、４つのコンジュゲートしたペプチド（１つが各単量体に対する）を含む四量体をもたらす。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、単量体の各々にコンジュゲートした１～４個のペプチドを含む四量体である。

【0036】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、Ｌ－単量体の各々にコンジュゲートした４～２０個のペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態では、Ｌアスパラギナーゼは、単量体の各々にコンジュゲートした６～１８個のペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、単量体の各々にコンジュゲートした６～１８個のペプチドを含む四量体である。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、単量体の各々にコンジュゲートした１０～１５個のペプチドを含む四量体である。

【0037】

一態様では、本発明は、Ｌ－アスパラギナーゼ、及び複数の化学結合したペプチド配列を含む修飾タンパク質に関する。更なる態様では、ペプチド配列の長さは、約１０～約１００、約１５～約６０、又は約２０～約４０である。

【0038】

Ｌ－アスパラギナーゼのフラグメント、好ましくは配列番号１のＬ－アスパラギナーゼのフラグメントは、本明細書で説明される発明において役立ち得る。用語「Ｌ－アスパラギナーゼのフラグメント」（例えば、配列番号１のＬ－アスパラギナーゼのフラグメント）とは、Ｌ－アスパラギナーゼの配列が、本明細書で例示されるＬ－アスパラギナーゼ（例えば配列番号１のＬ－アスパラギナーゼ）よりも少ないアミノ酸であるが、Ｌ－アミノヒドロラーゼ活性を付与するのに十分なアミノ酸を含み得ることを意味する。例えば、「Ｌ－アスパラギナーゼのフラグメント」とは、本明細書で例示されるＬ－アスパラギナーゼのうち１つ（例えば、配列番号１のＬ－アスパラギナーゼ）の少なくとも約１５０又は２００個の連続するアミノ酸（例えば、約１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３２１、３２２、３２３、３２４、３２５、又は３２６個の連続するアミノ酸）である／からなるフラグメントであり、且つ／或いは、上記のフラグメントは、本明細書で例示される上記のＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１のＬ－アスパラギナーゼ）のＮ末端から、最大５０個（例えば、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、又は５０個）のアミノ酸が欠失している、並びに／又は、本明細書で例示される上記のＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１のＬアスパラギナーゼ）のＣ末端から、最大７５若しくは１００個（例えば、最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、又は１００個）のアミノ酸が欠失している、並びに／又は、本明細書で例示される上記のＬ－アスパラギナーゼ（例えば、配列番号１のＬ－アスパラギナーゼ）のＮ末端及びＣ末端の両方で、アミノ酸が欠失しており、ここで、欠失したアミノ酸の総数は、最大で１２５又は１５０個のアミノ酸であり得る。

【0039】

実際のところ、当業者であれば、そのＬ－アスパラギナーゼ活性を実質的に保持する相同タンパク質を選択及び設計するための方法を理解するであろう。典型的には、Ｍａｓｈｂｕｒｎ及びＷｒｉｓｔｏｎによって説明される方法（Ｍａｓｈｂｕｒｎ，Ｌ．，ａｎｄ Ｗｒｉｓｔｏｎ，Ｊ．（１９６３）“Ｔｕｍｏｒ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆＬＡｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ，”Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １２，５０（全体が参照により本明細書に組み込まれる））に従い、Ｌ－アスパラギナーゼ活性を決定するためにネスラー（Ｎｅｓｓｌｅｒ）アッセイが用いられる。

【0040】

ポリペプチドは、１つ以上のアミノ酸の置換、挿入、欠失、及び／又は付加によって、その酵素活性を保持しながらの修飾が可能であることは、当該技術分野で周知されている。この文脈において、用語「１つ以上のアミノ酸」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上のアミノ酸を指すことができる。例えば、所与の位置における、タンパク質の機能特性に影響を及ぼさない化学的に同等のアミノ酸による１つのアミノ酸の置換は、以下の基のうちの１つの中での交換として定義され得る一般的な置換である：小脂肪族の、非極性又はわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；極性の、負荷電残基及びそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；極性の、正荷電残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；大脂肪族の、非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；大芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。

【0041】

したがって、１つの不荷電残基から別の不荷電残基への（例えばアスパラギン酸からグルタミン酸への）置換、又は１つの正荷電残基から別の正荷電残基への（例えばアルギニンからリシンへの）置換をもたらす変化は、機能的に同等な生成物を産生することが期待され得る。

【0042】

アミノ酸が修飾される位置、及びアミノ酸配列中で修飾され得るアミノ酸の数は、特に限定されない。当業者であれば、タンパク質の活性に影響を及ぼすことなく導入可能な修飾を認識することができる。例えば、タンパク質のＮ又はＣ末端部分における修飾は、特定の環境下ではタンパク質の活性を変更しないことが予期され得る。特に、アスパラギナーゼに関しては、特に活性の触媒部位を形成する配列、構造、及び残基に関して多くの特性決定を行う必要がある。これにより、酵素の活性に影響を及ぼすことなく修飾が可能な残基に関する手引きが得られる。既知の細菌供給源由来のＬアスパラギナーゼは全て、共通の構造的特性を有する。全てが、２つの隣接する単量体のＮ末端ドメインとＣ末端ドメインとの間に４つの活性部位を有するホモ四量体である（Ａｇｈａｉｐｏｕｒ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４０，５６５５－５６６４（全体が参照により本明細書に組み込まれる））。全てが、その三次構造及び四次構造に高度な類似性を有している（Ｐａｐａｇｅｏｒｇｉｏｕ（２００８）ＦＥＢＳ Ｊ．２７５，４３０６－４３１６（全体が参照により本明細書に組み込まれる））。Ｌ－アスパラギナーゼの触媒部位の配列は、エルウィニア・クリサンテミ、エルウィニア・カロトボーラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、及び大腸菌のＬ－アスパラギナーゼＩＩの間で高度に保存されている（同書）。活性部位の可動性ループは、アミノ酸残基１４～３３を含有しており、構造解析は、Ｔｈｒｌ５、Ｔｈｒ９５、Ｓｅｒ６２、Ｇｌｕ６３、Ａｓｐ９６、及びＡｌａｌ２０がリガンドに接触することを示す（同書）。Ａｇｈａｉｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ．は、その基質と複合体を形成した酵素の高分解能結晶構造を調べることによって、エルウィニア・クリサンテミＬ－アスパラギナーゼの４つの活性部位の詳細な解析を実施した（Ａｇｈａｉｐｏｕｒ（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４０，５６５５－５６６４）。Ｋｏｔｚｉａ ｅｔ ａｌ．は、いくつかのエルウィニア（Ｅｒｗｉｎｉａ）の種及び亜種由来のＬ－アスパラギナーゼの配列を提供し、タンパク質は、エルウィニア・クリサンテミとエルウィニア・カロトボーラとの間で約７５～７７％の同一性しか有さないが、これらの各々は依然としてＬ－アスパラギナーゼ活性を有する（Ｋｏｔｚｉａ（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１２７，６５７－６６９）。Ｍｏｏｌａ ｅｔ ａｌは、エルウィニア・クリサンテミ３９３７Ｌ－アスパラギナーゼのエピトープマッピング研究を実施し、アスパラギナーゼの免疫原性を低下させる試みにおいて様々な抗原配列を突然変異させた後であっても、これらは酵素活性を保持することが可能であった（Ｍｏｏｌａ（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０２，９２１－９２７）。Ｌ－アスパラギナーゼ上で実施された広範囲の特性決定を考慮すると、当業者であれば、依然として酵素活性を保持しながらフラグメント及び／又は配列置換を行う方法を決定することが可能である。

【0043】

より具体的には、本発明のＬ－アスパラギナーゼに用いられるタンパク質の定義には、配列番号１のタンパク質のフラグメントも含まれる。用語「配列番号１のフラグメント」とは、ポリペプチドの配列が、完全長の配列番号１よりも少ないアミノ酸を含む場合があるが、Ｌアミノヒドロラーゼ活性を付与するのに十分なタンパク質を保持することを意味する。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼは、配列番号１を含むタンパク質と少なくとも約８０％の相同性又は同一性を有する。

【0044】

いくつかの実施形態では、製剤のＬ－アスパラギナーゼは４つの単量体単位を含み、各単量体単位は、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、各単量体単位は、配列番号１と少なくとも約７０％、約７１％、約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、または約８４％同一であるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、各単量体単位は、配列番号１と少なくとも約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％同一であるアミノ酸配列を有する。

【0045】

いくつかの実施形態では、製剤のＬ－アスパラギナーゼは、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

【0046】

いくつかの実施形態では、製剤のＬ－アスパラギナーゼは非ＰＥＧ化されている。いくつかの実施形態では、製剤のＬ－アスパラギナーゼは非ＰＡＳ化されている。いくつかの実施形態では、製剤のＬ－アスパラギナーゼは、非ＰＥＧ化且つ非ＰＡＳ化されている。

【0047】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の安定剤を含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、１つ以上の安定剤は、１つ以上の二糖類、１つ以上のソルビトール、１つ以上のアミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、１つ以上の緩衝液は、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、ヒドロキシメチルアミノメタン（例えば、Ｔｒｉｓ）、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、１つ以上の界面活性剤は、ポリソルベート８０（例えばＴｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（例えばＴｗｅｅｎ２０）、ポロキサマー１８８、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上のポリオール（例えばマンニトール及びソルビトール）、１つ以上の二糖類（例えばスクロース及びトレハロース）、及び１つ以上の多糖類（例えばデキストラン４０）を含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、塩化ナトリウムを含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上のアミノ酸（例えばプロリン、グリシン、及びアルギニー（ａｒｇｉｎｉｅ））を含む。

【0048】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、製剤は、１つ以上の安定剤を約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の安定剤を、約７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約１７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、約２２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約３００ｍＭ、又は約２７５ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の安定剤を、約５０ｍＭ～約２７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約５０ｍＭ～約７５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の安定剤を約１５０ｍＭ～約２７５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の安定剤を、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約１９０ｍＭ、約１５０ｍＭ～約１８０ｍＭ、１５０ｍＭ～約１７０ｍＭ、又は約１６０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の安定剤を、約１６０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１８０ｍＭ～約２００ｍＭ、又は約１９０ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の安定剤を約１７０ｍＭの濃度で含む。

【0049】

いくつかの実施形態では、製剤の１つ以上の二糖類はトレハロースを含む。その他の実施形態では、製剤の１つ以上の二糖類はスクロースを含む。いくつかの実施形態では、製剤の１つ以上の二糖類は、トレハロースとスクロースとの組み合わせを含む。

【0050】

いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を、約７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約１７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、約２２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約３００ｍＭ、又は約２７５ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を、約５０ｍＭ～約２７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約５０ｍＭ～約７５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を約１５０ｍＭ～約２７５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約１９０ｍＭ、約１５０ｍＭ～約１８０ｍＭ、１５０ｍＭ～約１７０ｍＭ、又は約１６０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を、約１６０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１８０ｍＭ～約２００ｍＭ、又は約１９０ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を約１７０ｍＭの濃度で含む。

【0051】

いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の二糖類を、約７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、約１２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約３００ｍＭ、約１７５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２００ｍＭ～約３００ｍＭ、約２２５ｍＭ～約３００ｍＭ、約２５０ｍＭ～約３００ｍＭ、又は約２７５ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを、約５０ｍＭ～約２７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約２２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約５０ｍＭ～約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１２５ｍＭ、約５０ｍＭ～約１００ｍＭ、又は約５０ｍＭ～約７５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを約１５０ｍＭ～約２７５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを、約１５０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１５０ｍＭ～約１９０ｍＭ、約１５０ｍＭ～約１８０ｍＭ、１５０ｍＭ～約１７０ｍＭ、又は約１６０ｍＭ～１５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを、約１６０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１７０ｍＭ～約２００ｍＭ、約１８０ｍＭ～約２００ｍＭ、又は約１９０ｍＭ～約２００ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、トレハロースを約１７０ｍＭの濃度で含む。

【0052】

いくつかの実施形態では、製剤の１つ以上の緩衝液は、アミノ酸を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤の１つ以上の緩衝液は、ヒスチジン若しくはアルギニン、又はその両方を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤の１つ以上の緩衝液は、ヒスチジンを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、製剤の１つ以上の緩衝液は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、リン酸緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、酢酸緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、リン酸緩衝液と酢酸緩衝液との組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液はアルカリ金属の酢酸塩を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液はアルカリ金属のリン酸塩を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液は、リン酸ナトリウムを含む。

【0053】

いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の緩衝液を約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の緩衝液を、約１ｍＭ～約５０ｍＭ、約２．５ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１５ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２５ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３５ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、又は約４５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の緩衝液を、約０．５ｍＭ～約４５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約４０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約３５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約３０ｍＭ、約０．５ｍＭ～２５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約５ｍＭ、約０．５Ｍ～約２．５ｍＭ、又は０．５ｍＭ～約１ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の緩衝液を、約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の緩衝液を、約１５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の緩衝液を約２０ｍＭの濃度で含む。

【0054】

いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウムを約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウムを、約１ｍＭ～約５０ｍＭ、約２．５ｍＭ～約５０ｍＭ、約５ｍＭ～約５０ｍＭ、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約１５ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２５ｍＭ～約５０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ、約３５ｍＭ～約５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約５０ｍＭ、又は約４５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウムを、約０．５ｍＭ～約４５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約４０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約３５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約３０ｍＭ、約０．５ｍＭ～２５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約２０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約１５ｍＭ、約０．５ｍＭ～約１０ｍＭ、約０．５ｍＭ～約５ｍＭ、約０．５Ｍ～約２．５ｍＭ、又は０．５ｍＭ～約１ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウムを約１０ｍＭ～約３０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウムを約１５ｍＭ～約２５ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、リン酸ナトリウムを約２０ｍＭの濃度で含む。

【0055】

いくつかの実施形態では、製剤は、アルカリ金属塩を更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ハロゲン化物塩を更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、アルカリ金属のハロゲン化物塩を更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを約２５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを、約３０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約４０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約６０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約７０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約８０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約９０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ～約１５０ｍＭ、約１１０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約１２０ｍＭ～約１５０ｍＭ、約１３０ｍＭ～約１５０ｍＭ、又は約１４０ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを、約２５ｍＭ～約１４０ｍＭ、約２５ｍＭ～１３０ｍＭ、約２５ｍＭ～約１２０ｍＭ、約２５ｍＭ～約１１０ｍＭ、約２５ｍＭ～約１００ｍＭ、約２５ｍＭ～約９０ｍＭ、約２５ｍＭ～約８０ｍＭ、約２５ｍＭ～約７０ｍＭ、約２５ｍＭ～約６０ｍＭ、約２５ｍＭ～約５０ｍＭ、約２５ｍＭ～約４０ｍＭ、又は約２５ｍＭ～３０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを、約３０ｍＭ～約７０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを、約４０ｍＭ～約６０ｍＭの濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、塩化ナトリウムを約５０ｍＭの濃度で含む。

【0056】

いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤は、１つ以上の界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤は、１つ以上の乳化剤を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤はソルビタン由来である。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤はポリソルベート８０（ＰＳ－８０としても知られる）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤はポリソルベート２０を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤は、ポリソルベート８０とポリソルベート２０との組み合わせを含む。

【0057】

いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を約０．３％（ｗ／ｖ）以下の濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を約０．２８％（ｗ／ｖ）以下の濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を約０．２６％（ｗ／ｖ）以下の濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を約０．２４％（ｗ／ｖ）以下の濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を約０．２２％（ｗ／ｖ）以下の濃度で含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．３％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．３％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。

【0058】

いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１８％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１６％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１４％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１２％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０３％、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０２５％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０１５％（ｗ／ｖ）、又は約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０１５％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０２５％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１２％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１６％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、又は約０．１８％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０３％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を、約０．０１５％（ｗ／ｖ）～約０．０２５％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、１つ以上の賦形剤を約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。

【0059】

いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０を、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０を、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１８％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１６％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１４％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１２％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０６％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０３％、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０２５％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０２％（ｗ／ｖ）、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０１５％（ｗ／ｖ）、又は約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．０１％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０を、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０１５％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０２％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０２５％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０３％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０５％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０６％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０７％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０８％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．０９％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１２％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．１６％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）、又は約０．１８％（ｗ／ｖ）～０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０を、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約０．０３％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０を、約０．０１５％（ｗ／ｖ）～約０．０２５％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。いくつかの実施形態では、製剤は、ポリソルベート８０を、約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度で更に含む。

【0060】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．５～約８．５、約５．０～約８．５、約５．５～約８．５、約６．０～約８．５、約６．５～約８．５、約７．０～約８．５、約７．５～約８．５、又は約８．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．５～約８．０、約４．５～約７．５、約４．５～約７．０、約４．５～約６．５、約４．５～約６．０、約４．５～約５．５、又は約４．５～約５．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される製剤は、約４．０～約８．０、約４．０～約７．５、約４．０～約７．０、約４．０～約６．５、約４．０～約６．０、約４．０～約５．５、約４．０～約５．０、又は約４．０～約４．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される製剤は、約５．５～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される製剤は、約６．０～約８．０のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される製剤は、６．５～約７．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される製剤は、７．０前後のｐＨを有する。

【0061】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）１つ以上の安定剤、若しくは１つ以上の緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせと、を含む当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の安定剤を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の安定剤は、１つ以上の二糖類、１つ以上のソルビトール、１つ以上のアミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の二糖類を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の二糖類は、トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、１つ以上の緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の緩衝液であって、アミノ酸を実質的に含まない、１つ以上の緩衝液。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種及び２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0062】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、（ｉ）Ｌ－アスパラギナーゼは、各単量体単位が配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する４つの単量体単位を含み、且つ２０ｍｇ／ｍＬ前後の濃度で存在する、（ｉｉ）約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で１つ以上の安定剤（例えば、二糖類、ソルビトール、アミノ酸、又はこれらの任意の組み合わせ）、（ｉｉｉ）約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度の１つ以上の緩衝液（例えば、酢酸塩、グルタミン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、ヒドロキシメチルアミノメタン、又はこれらの任意の組み合わせ）、（ｉｖ）約２５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する塩化ナトリウム、及び（ｖ）約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．３％（ｗ／ｖ）の濃度の１つ以上の界面活性剤（例えばポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８、又はこれらの任意の組み合わせ）。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0063】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、（ｉ）Ｌ－アスパラギナーゼは、各単量体単位が配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する４つの単量体単位を含み、且つ２０ｍｇ／ｍＬ前後の濃度で存在する、（ｉｉ）約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で存在するトレハロース、（ｉｉｉ）リン酸ナトリウムであって、当該リン酸ナトリウム（例えばリン酸二ナトリウム（無水）、リン酸一ナトリウム一水和物、又はこれらの組み合わせ）が約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、当該リン酸ナトリウム、（ｉｖ）約２５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する塩化ナトリウム；及び（ｖ）約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート８０。

【0064】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、Ｌ－アスパラギナーゼは単位剤形中に製剤化され得る。用語「単位剤形」とは、ヒト対象及びその他の哺乳動物への単位用量として好適な物理的に別個の単位を指し、各単位は、好適な薬学的賦形剤と共同して所望の治療効果を生むように計算された所定量の活性成分を含有する。いくつかの実施形態では、単位用量は、１２時間毎、２４時間毎、４８時間毎、又は７２時間毎に投与され得る。いくつかの実施形態では、単位用量は４８時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、単位用量は約５ｍｇ～約５０ｍｇ（例えば、約６ｍｇ、７ｍｇ、８ｍｇ、９ｍｇ、１０ｍｇ、１１ｍｇ、１２ｍｇ、１３ｍｇ、１４ｍｇ、１５ｍｇ、１６ｍｇ、１７ｍｇ、１８ｍｇ、１９ｍｇ、２０ｍｇ、２１ｍｇ、２２ｍｇ、２３ｍｇ、２４ｍｇ、２５ｍｇ、２６ｍｇ、２７ｍｇ、２８ｍｇ、２９ｍｇ、３０ｍｇ、３１ｍｇ、３２ｍｇ、３３ｍｇ、３４ｍｇ、３５ｍｇ、３６ｍｇ、３７ｍｇ、３８ｍｇ、３９ｍｇ、４０ｍｇ、４１ｍｇ、４２ｍｇ、４３ｍｇ、４４ｍｇ、４５ｍｇ、４６ｍｇ、４７ｍｇ、４８ｍｇ、及び４９ｍｇ）のＬ－アスパラギナーゼを含有する。

【0065】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、（ｉｖ）塩化ナトリウムと、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0066】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、（ｉｖ）１つ以上の賦形剤と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。

【0067】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、（ｉｖ）塩化ナトリウムと、（ｖ）１つ以上の賦形剤と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0068】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、（ｉｖ）ポリソルベート８０と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0069】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、（ｉｖ）塩化ナトリウムと、（ｖ）ポリソルベート８０と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0070】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロースと、（ｉｉｉ）リン酸ナトリウムと、（ｉｖ）塩化ナトリウムと、（ｖ）ポリソルベート８０と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0071】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）Ｌ－アスパラギナーゼであって、当該Ｌ－アスパラギナーゼが４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有し、当該Ｌ－アスパラギナーゼが、２０ｍｇ／ｍＬ前後の濃度で存在する、当該Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で存在するトレハロースと、（ｉｉｉ）約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在するリン酸ナトリウムと、（ｉｖ）約２５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する塩化ナトリウムと、（ｖ）約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート８０と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0072】

いくつかの実施形態では、水性の非凍結乾燥型製剤であって、（ｉ）Ｌ－アスパラギナーゼであって、当該Ｌ－アスパラギナーゼが４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有し、当該Ｌ－アスパラギナーゼが、２０ｍｇ／ｍＬ前後の濃度で存在する、当該Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）約１７０ｍＭの濃度で存在するトレハロースと、（ｉｉｉ）約２０ｍＭの濃度で存在するリン酸ナトリウムと、（ｉｖ）約５０ｍＭの濃度で存在する塩化ナトリウムと、（ｖ）約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート８０と、を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、当該製剤が、本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0073】

いくつかの実施形態では、本明細書の他の箇所で説明される製剤が本明細書で提供され、当該製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約４．５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約４％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約３．５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約３％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約２．５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約２％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約１．５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約１％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。

【0074】

本明細書で説明される製剤の各構成要素及び／又は特徴は、本明細書で説明される製剤の任意の他の構成要素及び／又は特徴との組み合わせで、あたかも本明細書で説明される構成要素及び／又は特徴のありとあらゆる組み合わせが個別に且つ具体的に列挙されているかのように存在し得ることを理解されたい。

【0075】

治療方法
本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、対象（例えばヒト）における、アスパラギンの枯渇又はアスパラギナーゼの投与によって治療可能な疾患の治療に使用することができる。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、Ｌ－アスパラギナーゼを投与する前に、大腸菌由来のアスパラギナーゼの無症候性不活化を経験している。いくつかの実施形態では、対象は、Ｌ－アスパラギナーゼを投与する前に、大腸菌由来のアスパラギナーゼに対するアレルギー反応を経験している。いくつかの実施形態では、対象は、Ｌ－アスパラギナーゼを投与する前に、大腸菌由来のアスパラギナーゼに対するアナフィラキシーを経験している。アレルギー又は過敏症の他覚的徴候の非限定的な例としては、アスパラギナーゼ酵素に対する「抗体陽性」の試験が挙げられる。

【0076】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の治療、又はその治療に使用するための薬剤の製造に有用である。ＡＬＬ患者におけるＬ－アスパラギナーゼでの治療した後の再発率は依然として高く、小児ＡＬＬ患者の約１０～２５％で早期再発がある（例えば、一部は導入後３０～３６ヶ月における維持段階の間に）。大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼで治療された患者に再発があった場合、大腸菌調剤による後続の治療は、「ワクチン接種」効果をもたらすことができ、それにより、大腸菌調剤は後続の投与中で免疫原性が増加する。一実施形態では、本発明のＬ－アスパラギナーゼは、過去に他のアスパラギナーゼ調剤で治療を受けた再発性ＡＬＬ患者、特に、過去に大腸菌由来アスパラギナーゼで治療を受けた再発性ＡＬＬ患者の治療法に用いることができる。

【0077】

本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤が治療に有用である疾患又は障害としては、血液学的悪性腫瘍、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＮＫリンパ腫、膵臓がん、ホジキン病、大細胞型免疫芽球性リンパ腫、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球白血病、急性Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、混合型Ｂ細胞骨髄単球性白血病、慢性リンパ球性白血病、リンパ肉腫、細網肉腫、及び黒色肉腫、並びにびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）が挙げられるがこれらに限定されない、悪性腫瘍又はがんが挙げられるが、これらに限定されない。Ｌ－アスパラギナーゼ製剤が治療に有用なその他の疾患又は障害は、腎細胞癌、腎細胞腺癌、多形性膠芽腫及び膠芽細胞腫星状細胞腫を含む膠芽細胞腫、髄芽細胞腫、横紋筋肉腫、悪性黒色腫、類表皮癌、扁平上皮細胞癌腫、大細胞型肺癌及び小細胞型肺癌を含む肺癌、子宮内膜癌、卵巣腺癌、卵巣奇形癌、子宮頸腺癌、乳癌、乳腺癌、乳管癌、膵臓腺癌、膵管癌、結腸癌、結腸腺癌、結腸直腸腺癌、膀胱移行細胞癌、膀胱乳頭腫、前立腺癌、骨肉腫、骨類上皮癌、前立腺癌、及び甲状腺がんが挙げられるがこれらに限定されないがんである。がんは固形がん、例えば肺がん又は乳がんであり得る。アスパラギン枯渇に応答する代表的な非悪性の血液性疾患としては、免疫系媒介性の血液疾患が挙げられ、これとしては、ＨＩＶ感染症によって引き起こされるもの（即ちＡＩＤＳ）などの感染性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。アスパラギン依存性に関連する非血液学的疾患としては、自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ、膠原血管病、ＡＩＤＳ、変形性関節症、アイザック症候群、乾癬、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、硬化性汎脳炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、リウマチ熱、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、原発性胆汁性肝硬変、慢性活動性肝炎、糸球体腎炎、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、及びグレーブス病が挙げられる。疾患の原因と疑われる細胞は、任意の好適なインビトロ又はインビボアッセイ、例えば、成長培地がアスパラギンを欠如しているインビトロアッセイにて、アスパラギン依存性を試験されてもよい。

【0078】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、その必要のある対象におけるアスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害は、ＷＮＴ変異結腸直腸がん（ＣＲＣ）を含む。いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、その必要のある対象におけるアスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害は、再発寛解型（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を含む。

【0079】

本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤が治療に有用である疾患又は障害としては、肉腫、乳がん、転移性乳がん、肝がん、胃がん、結腸直腸がん、及び頭頸部がんが挙げられるが、これらに限定されない。

【0080】

医薬組成物及び同時投与
いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、多剤式化学療法レジメンと同時投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、多剤式化学療法レジメンの一部としての１つ以上の他の化学療法剤と同時投与される。いくつかの実施形態では、その他の剤に加えて本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤で患者を治療することは、大腸菌由来アスパラギナーゼに対する過敏症を発症した患者に対するアスパラギナーゼの利用可能性を保証することを助ける。

【0081】

本開示のＬ－アスパラギナーゼとの多剤式化学療法レジメンの一部となり得る剤の例としては、シタラビン、ビンクリスチン、ダウノルビシン、メトトレキサート、ロイコボリン、ドキソルビシン、アントラサイクリン、コルチコステロイド及びグルココルチオド（ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｏｄ）（プレドニゾン、プレドニゾロン、及び／又はデキサメタゾンが挙げられるが、これらに限定されない）シクロホスファミド、６－メルカプトプリン、ベネトクラクス、並びにエトポシドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、多剤式化学療法レジメンは、Ｌ－アスパラギナーゼ及び１つの追加の化学療法剤である。いくつかの実施形態では、多剤式化学療法レジメンは、Ｌ－アスパラギナーゼ及び２つ以上の追加の化学療法剤である。

【0082】

一例として、ＡＬＬ患者は、本開示のＬ－アスパラギナーゼは、導入、地固め、又は強化を含む３つの化学療法段階、及び維持の間に、多剤化学療法と共に同時投与されることになる。具体的な実施例では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、アスパラギン合成酵素阻害剤（例えば、その全体が参照に本明細書に組み込まれる国際公開第２００７／１０３２９０号パンフレットに記載されるような）と同時投与される。別の具体的な実施例では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、アスパラギン合成酵素阻害剤とは同時投与されないが、他の化学療法薬と同時投与される。別の具体的な実施例では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、アスパラギン合成酵素阻害剤及び他の化学療法薬と同時投与される。本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、多剤化学療法レジメンの一部として、その他の化合物の前に、後に、又はこれと同時に、同時投与され得る。特定の実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼは、蛍光菌中で組み換え産生されたタンパク質、より具体的には配列番号１の配列を含むＬ－アスパラギナーゼを含む。

【0083】

本明細書に記載の製剤は、医薬組成物として標準的技法を用いて患者に投与され得る。技法及び製剤は、一般的には、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０１５（参照により本明細書に組み込まれる）で見出され得る。

【0084】

好適な剤形は、一部には、例えば、経口的、経皮的、経粘膜的、又は注射による（非経口的）などの用法又は侵入経路に依存する。こうした剤形は、治療薬が標的細胞に到達することを可能にするか、又はその他の方法で所望の治療効果を有するべきである。例えば、血流中に注射された医薬組成物は、好ましくは可溶性である。本開示の医薬組成物は、薬学的に許容される塩及びその複合体として製剤化され得る。薬学的に許容される塩は、それが投与される量及び濃度で存在する非毒性塩である。こうした塩の調製は、化合物の物理的特性を変化させることにより、その生理学的効果の発揮を妨げることなしに薬学的使用を容易にさせ得る。物理的特性の有用な変化としては、経粘膜的投与を容易にするために融点を低下させること、及びより高濃度の薬物の投与を容易にするために可溶性を増加させることが挙げられる。当業者には理解されるように、本明細書に記載の修飾タンパク質の薬学的に許容される塩は、複合体として存在し得る。薬学的に許容される塩としては、硫酸塩、塩酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、及びキナ酸塩を含有するものなどの酸付加塩が挙げられる。薬学的に許容される塩は、塩酸、マレイン酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、フマル酸、及びキナ酸を含む酸から得ることができる。カルボン酸又はフェノールなどの酸性官能基が存在する場合、薬学的に許容される塩としては、ベンザチン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン、プロカイン、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、アンモニウム、アルキルアミン、及び亜鉛を含有するものなどの塩基付加塩も挙げられる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（上記）を参照されたい。こうした塩は、適した対応する塩基を用いて調製することができる。特定のアスパラギナーゼの投与を容易にするため、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤も、本発明の医薬組成物に組み込むことができる。本発明の実行における使用に好適な担体の例としては、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、ラクトース、グルコース若しくはスクロースなどの様々な糖類、又は一種のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコール、及び生理学的に適合した溶媒が挙げられる。生理学的に適合した溶媒の例としては、注射用蒸留水（ＷＦＩ）の滅菌溶液、食塩水、及びデキストロースが挙げられる。

【0085】

本発明の医薬組成物は、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、経口、局所（経皮）、又は経粘膜的投与を含む異なる経路によって投与可能である。経口投与の場合、例えば、化合物は、カプセル剤、錠剤、並びに液状製剤、例えば、シロップ、エリキシル剤、及び濃縮滴剤などの従来の経口剤形中に製剤化が可能である。或いは、筋肉内、静脈内、腹腔内、及び皮下注射などの注射（非経口投与）を使用してもよい。注射の場合、医薬組成物は、溶液、好ましくは、例えば、生理食塩液、ハンクス溶液、又はリンガー溶液などの生理学的に適合した緩衝液又は溶液中に製剤化される。特定の態様では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は筋肉内投与される。特定の態様では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は静脈内投与される。特定の態様では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は皮下投与される。

【0086】

全身投与もまた、経粘膜又は経皮的手段によって達成可能である。経粘膜又は経皮投与の場合、製剤中で、浸透させるべき障壁に適した浸透剤が使用される。こうした浸透剤は当該技術分野で周知されており、これとしては、例えば、経粘膜投与の場合では胆汁塩及びフシジン酸誘導体が挙げられる。更に、浸透を促進するために界面活性剤を用いてもよい。経粘膜投与は、例えば、鼻腔用スプレー、（肺送達用）吸入器、肛門坐剤、又は膣坐剤を介してもよい。局所投与の場合、当該技術分野で周知されるように、化合物は、軟膏（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏（ｓａｌｖｅ）、ゲル、又はクリーム中に製剤化することが可能である。

【0087】

投薬
いくつかの実施形態では、用量とは、特定の時間及び頻度にわたりヒト対象に投与される量である。いくつかの実施形態では、過敏症が減弱される場合にのみ、過敏症を有するヒト対象にＬ－アスパラギナーゼ製剤の用量が与えられる。

【0088】

例示的な一実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、約１０ｍｇ／ｍ^２～１００ｍｇ／ｍ^２の量でヒト対象に投与される。例示的な一実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、連続５日間にわたって１日おきに筋肉内投与され、これに連続２日間の休止期間が続き、量は約２５ｍｇ／ｍ^２である。例示的な一実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、連続５日間にわたって１日おきに静脈内投与され、これに連続２日間の休止期間が続き、量は約３７．５ｍｇ／ｍ^２である。例示的な一実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、連続５日間にわたって１日おきに静脈内投与され、これに連続２日間の休止期間が続き、量は約５０ｍｇ／ｍ^２である。

【0089】

更なる例示的な実施形態では、また、投薬に関する本明細書の考察のいずれかに従えば、こうした用量で投与されるＬ－アスパラギナーゼ製剤は、ＰＥＧ部分などのポリマーにコンジュゲートせず、且つ／或いは、アラニン及び／又はプロリン残基のみを含むペプチドにコンジュゲートしない。

【0090】

１．用量の量
送達するべき本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤の量は、多くの因子、例えばＩＣ５０、ＥＣ５０、化合物の生物学的半減期、患者の年齢、寸法、体重、及び健康状態、並びに治療対象の疾患又は障害によって変わる。考慮されるべきこれら及びその他の因子の重要性は、当業者に周知されている。一般に、ＡＬＬ又はＬＢＬが挙げられるがこれらの限定されない疾患を治療するためは、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤の量が、患者の身体の表面積１平方メートルあたり約１ミリグラム（ｍｇ／ｍ^２）から１，０００／ｍ^２の範囲で投与され、用量範囲は約１０ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２である。当然ながら、主治医によって決定されるとおり、他の用量及び／又は治療レジメンを用いてもよい。

【0091】

いくつかの実施形態では、方法は、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼを、約１０ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の量で投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤を、１０ｍｇ／ｍ^２～１００ｍｇ／ｍ^２の量で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９５、若しくは９５ｍｇ／ｍ^２の量、又はその同等量（例えば、タンパク質含量基準で）で投与される。より具体的な実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、及び約１００ｍｇ／ｍ^２からなる群から選択される量で投与される。別の具体的な実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９５、１００、２００、又は３００ｍｇ／ｍ^２以上の用量で投与される。別の具体的な実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３００、２００ １００、９５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、５、又は１ｍｇ／ｍ^２以下の用量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１２ｍｇ／ｍ^２～約９０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。別の例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２０ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。別の例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0092】

いくつかの実施形態では、方法は、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼを、約２５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤を、２５ｍｇ／ｍ^２～５０ｍｇ／ｍ^２の量で投与することを含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０ｍｇ／ｍ^２の量、又はその同等量（例えば、タンパク質含量基準で）で投与される。

【0093】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２０ｍｇ／ｍ^２～約３０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約２８．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２３ｍｇ／ｍ^２～約２７ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２４ｍｇ／ｍ^２～約２６ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２４．５ｍｇ／ｍ^２～約２５．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0094】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４２．５ｍｇ／ｍ^２～約５８．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４３ｍｇ／ｍ^２～約５７ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４４ｍｇ／ｍ^２～約５６ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４６ｍｇ／ｍ^２～約５４ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５２．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４８ｍｇ／ｍ^２～約５２ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４９ｍｇ／ｍ^２～約５１ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４９．５ｍｇ／ｍ^２～約５０．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0095】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0096】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0097】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0098】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約３５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0099】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約９５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約９０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約８５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約６０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0100】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４２．５ｍｇ／ｍ^２～約５７．５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0101】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で投与される。

【0102】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１０ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１２．５ｍｇ／ｍ^２～約４７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１５ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２０ｍｇ／ｍ^２～約４２．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約４０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２４ｍｇ／ｍ^２～約３９ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２７ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼは、２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３７．５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４７．５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約３５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0103】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１０ｍｇ／ｍ^２～約９５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２２．５ｍｇ／ｍ^２～約５７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２７．５ｍｇ／ｍ^２～約４７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３２．５ｍｇ／ｍ^２～約４２．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２１．５ｍｇ／ｍ^２～約３８．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３６ｍｇ／ｍ^２～約４５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。

【0104】

例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約３５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約９５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約９０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約８５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約８０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約６０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４２．５ｍｇ／ｍ^２～約５７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３０ｍｇ／ｍ^２～約７５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約３５ｍｇ／ｍ^２～約７０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４０ｍｇ／ｍ^２～約６５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４５ｍｇ／ｍ^２～約６０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。例示的な一実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約５０ｍｇ／ｍ^２～約５５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。

【0105】

別の実施形態では、方法は、非組み換えＬ－アスパラギナーゼと比較して低い免疫原性応答を患者において誘発する本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼを投与することを含む。

【0106】

２．投与頻度
特定の実施形態では、治療は、約１ｍｇ／ｍ^２～約１０００ｍｇ／ｍ^２、典型的には約１０ｍｇ／ｍ^２～約１００ｍｇ／ｍ^２の範囲の用量で、１週間に約３回から１ヶ月に約１回、典型的には１週間に１回又は１週間おきに１回の範囲のスケジュールで、単剤（例えば単剤療法）として、又はグルココルチコイド、コルチコステロイド、抗がん化合物、若しくはその他の剤、例えば、非限定的にメトトレキサート、デキサメタゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びアントラサイクリン、が挙げられるがこれらに限定されない化学療法薬の組み合わせの一部として投与される。

【0107】

本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、多剤化学療法レジメンの一部として、その他の化合物の前に、後に、又はこれと同時に、投与され得る。特定の実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、蛍光菌で組み換え産生されたタンパク質を含み、より具体的には、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は配列番号１の配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、単回用量で約３日間～約１０日間（例えば３、４、５、６、７、８、９、又は１０日間）の期間、当該技術分野で既知の方法及び機器を用いて、Ｌ－アスパラギンを検出不可能なレベルまで枯渇させる用量で投与される。

【0108】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、週３回投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、連続５日間にわたって１日おきに投与され、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は少なくとも１～３週間の間、週３回投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１～３週間の間、連続５日間にわたって１日おきに投与され、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約１～３週間の間、週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

【0109】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２週間の間、週３回投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２週間の間、連続５日間にわたって１日おきに投与され、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約２週間の間、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

【0110】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、２週間の間、週３回投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、２週間の間、連続５日間にわたって１日おきに投与され、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、２週間の間、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

【0111】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、アスパラギンの枯渇によって治療可能な疾患を患者が有さなくなるまで継続して、週３回投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、アスパラギンの枯渇によって治療可能な疾患を患者が有さなくなるまで継続して、連続５日間にわたって１日おきに投与され、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼは、アスパラギンの枯渇によって治療可能な疾患を患者が有さなくなるまで継続して、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

【0112】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、患者が治療を終了又は延期することを決定するまで継続して、週３回投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、患者が治療を終了又は延期することを決定するまで継続して、連続５日間にわたって１日おきに投与され、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、患者が治療を終了又は延期することを決定するまで継続して、同じ週の月曜日、水曜日、及び金曜日に投与される。

【0113】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４８時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４０～５８時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４２～５６時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４４～５２時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約４６～５０時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の組み換えＬ－アスパラギナーゼは、約７２時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、６４～８０時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約６６～７８時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約６８～７６時間毎に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、約７０～７４時間毎に投与される。

【0114】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、大腸菌由来Ｌ－アスパラギナーゼに対して過敏症であり、且つ／又は過去にエルウィニア・クリサンテミ由来Ｌ－アスパラギナーゼに対する過敏症を有していた可能性のある、患者の二次治療として投与される。

【0115】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、長時間作用型の大腸菌由来アスパラギナーゼの用量の代替品としてヒト対象に投与される。いくつかの実施形態では、６用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤が、１用量の長時間作用型の大腸菌由来アスパラギナーゼの代替品としてヒト対象に投与される。いくつかの実施形態では、７用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤が、１用量の長時間作用型の大腸菌由来アスパラギナーゼの代替品としてヒト対象に投与される。いくつかの実施形態では、長時間作用型の大腸菌由来アスパラギナーゼは、ペガスパルガーゼである。更なる実施形態では、約２週間にわたり６回の個別の用量が生じ得る。更に別の実施形態では、約２週間にわたり７回の個別の用量が生じ得る。

【0116】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、このサイクルは第１の用量、第２の用量、及び第３の用量を含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、第１の用量、第２の用量、及び第３の用量は、約４８～７２時間間隔で投与される。

【0117】

いくつかの実施形態では、用量の量はサイクル内で変化し得る。

【0118】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、サイクルは、連続５日間にわたる１日おきのＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与、及びこれに続く連続２日間の休止期間を含み、サイクルの第１の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第２の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第３の用量は５０ｍｇ／ｍ^２であり、これに連続２日間の休止期間が続く。

【0119】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、サイクルは、連続５日間にわたる１日おきのＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与、及びこれに続く連続２日間の休止期間を含み、サイクルの第１の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第２の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第３の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、これに連続２日間の休止期間が続く。

【0120】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、サイクルは、連続５日間にわたる１日おきのＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与、及びこれに続く連続２日間の休止期間を含み、サイクルの第１の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第２の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第３の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、これに連続２日間の休止期間が続く。

【0121】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、サイクルは、連続５日間にわたる１日おきのＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与、及びこれに続く連続２日間の休止期間を含み、サイクルの第１の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第２の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第３の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、これに連続２日間の休止期間が続く。

【0122】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、サイクルは、連続５日間にわたる１日おきのＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与、及びこれに続く連続２日間の休止期間を含み、サイクルの第１の用量は３７．５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第２の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第３の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、サイクルの第１の用量は月曜日に投与され、サイクルの第２の用量は水曜日に投与され、サイクルの第３の用量は金曜日に投与される。

【0123】

いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤の用量レジメンは、サイクルを含み、サイクルは任意選択的に反復可能であり、サイクルは、連続５日間にわたる１日おきのＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与、及びこれに続く連続２日間の休止期間を含み、サイクルの第１の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第２の用量は２５ｍｇ／ｍ^２であり、サイクルの第３の用量は５０ｍｇ／ｍ^２であり、これに連続２日間の休止期間が続く。いくつかの実施形態では、サイクルの第１の用量は月曜日に投与され、サイクルの第２の用量は水曜日に投与され、サイクルの第３の用量は金曜日に投与される。

【0124】

いくつかの実施形態では、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を治療するためにヒト対象におけるアスパラギナーゼを枯渇させるための方法を提供し、方法は、ヒト対象が２週間にわたって合計で７用量のＬ－アスパラギナーゼを投与されるように、月曜日、水曜日、及び金曜日に、ヒト対象に約２５ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼを筋肉内投与することを含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、本開示は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）又はリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を治療するためにヒト対象におけるアスパラギナーゼを枯渇させるための方法を提供し、方法は、ヒト対象が２週間にわたって合計で６用量のＬ－アスパラギナーゼを投与されるように、（ａ）月曜日及び水曜日に、ヒト対象に約２５ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼを筋肉内投与すること、並びに（ｂ）金曜日に、ヒト対象に約５０ｍｇ／ｍ^２のＬ－アスパラギナーゼを筋肉内投与すること、を含む。

【0126】

用量レジメンは、任意の数の週にわたる、又は本明細書で指定される任意のエンドポイントまでの、任意の数のサイクルを包含し得る。

【0127】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、（ｉ）月曜日に２５ｍｇ／ｍ^２、（ｉｉ）水曜日に２５ｍｇ／ｍ^２、及び（ｉｉｉ）金曜日に５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。

【0128】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４８時間毎に２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４８時間毎に３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４８時間毎に５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与される。

【0129】

いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４８時間毎に２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４８時間毎に３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、４８時間毎に５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0130】

いくつかの実施形態では、上記又は下記の実施形態と関連して、本開示のＬ－アスパラギナーゼ製剤は、（ｉ）月曜日に２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉ）水曜日に２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0131】

例えば、投与レジメンは、２週間にわたる６用量（例えば第１の用量、第２の用量、第３の用量、第４の用量、第５の用量、及び第６の用量）のＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与を含み得、ここでは、第１週目の間に、（ｉ）月曜日に、第１の用量が２５ｍｇ／ｍ^２又は３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内又は筋肉内投与され、（ｉｉ）水曜日に、第２の用量が２５ｍｇ／ｍ^２３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内又は筋肉内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に、第３の用量が２５ｍｇ／ｍ^２３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内又は筋肉内投与され、第２週目の間に、（ｉｖ）月曜日に、第４の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖ）水曜日に、第５の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖｉ）金曜日に、第６の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0132】

いくつかの実施形態では、投与レジメンは、２週間にわたる６用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与を含み、ここで、第１週目の間に、（ｉ）月曜日に、第１の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉ）水曜日に、第２の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に、第３の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、第２週目の間に、（ｉｖ）月曜日に、第４の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖ）水曜日に、第５の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖｉ）金曜日に、第６の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0133】

いくつかの実施形態では、投与レジメンは、２週間にわたる６用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与を含み、ここで、第１週目の間に、（ｉ）月曜日に、第１の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与され、（ｉｉ）水曜日に、第２の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に、第３の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与され、第２週目の間に、（ｉｖ）月曜日に、第４の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖ）水曜日に、第５の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖｉ）金曜日に、第６の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0134】

いくつかの実施形態では、投与レジメンは、２週間にわたる６用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与を含み、ここで、第１週目の間に、（ｉ）月曜日に、第１の用量が３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉ）水曜日に、第２の用量が３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に、第３の用量が３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、第２週目の間に、（ｉｖ）月曜日に、第４の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖ）水曜日に、第５の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖｉ）金曜日に、第６の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0135】

いくつかの実施形態では、投与レジメンは、２週間にわたる６用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与を含み、ここで、第１週目の間に、（ｉ）月曜日に、第１の用量が３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与され、（ｉｉ）水曜日に、第２の用量が３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に、第３の用量が３７．５ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与され、第２週目の間に、（ｉｖ）月曜日に、第４の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖ）水曜日に、第５の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖｉ）金曜日に、第６の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0136】

いくつかの実施形態では、投与レジメンは、２週間にわたる６用量のＬ－アスパラギナーゼ製剤の投与を含み、ここで、第１週目の間に、（ｉ）月曜日に、第１の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉ）水曜日に、第２の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｉｉｉ）金曜日に、第３の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、第２週目の間に、（ｉｖ）月曜日に、第４の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖ）水曜日に、第５の用量が２５ｍｇ／ｍ^２の量で静脈内投与され、（ｖｉ）金曜日に、第６の用量が５０ｍｇ／ｍ^２の量で筋肉内投与される。

【0137】

キット
一態様では、（ｉ）本明細書に記載される製剤のうちのいずれか１つと、（ｉｉ）その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療するための説明書と、を含むキットが、本明細書で提供される。

【0138】

いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）１つ以上の安定剤、若しくは１つ以上の緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせとを含む、製剤を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、４０℃で２ヶ月間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種及び２％未満の高分子量（ＨＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、Ｌ－アスパラギナーゼ製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。

【0139】

いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と、を含む、製剤を含み、当該製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。

【0140】

いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）Ｌ－アスパラギナーゼであって、当該Ｌ－アスパラギナーゼが４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約７０％同一であるアミノ酸配列を有し、当該Ｌ－アスパラギナーゼが、２０ｍｇ／ｍＬ前後の濃度で存在する、当該Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）約１７０ｍＭの濃度で存在するトレハロースと、（ｉｉｉ）約２０ｍＭの濃度で存在するリン酸ナトリウムと、（ｉｖ）約５０ｍＭの濃度で存在する塩化ナトリウムと、（ｖ）約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート８０と、を含む、製剤を含み、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約０．６％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0141】

いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）Ｌ－アスパラギナーゼであって、当該Ｌ－アスパラギナーゼが４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有し、当該Ｌ－アスパラギナーゼが、２０ｍｇ／ｍＬ前後の濃度で存在する、当該Ｌ－アスパラギナーゼと、（ｉｉ）約１７０ｍＭの濃度で存在するトレハロースと、（ｉｉｉ）約２０ｍＭの濃度で存在するリン酸ナトリウムと、（ｉｖ）約５０ｍＭの濃度で存在する塩化ナトリウムと、（ｖ）約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在するポリソルベート８０と、を含む、製剤を含み、製剤は、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む。いくつかの実施形態では、製剤は、約４．０～約８．５のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、製剤は約７．０のｐＨを有する。

【0142】

上記のいくつかの実施形態では、キットは、がんを治療するための説明書を含む。いくつかの実施形態では、キットは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を治療するための説明書を含む。いくつかの実施形態では、ＡＬＬは再発性である。いくつかの実施形態では、キットは、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）を治療するための説明書を含む。いくつかの実施形態では、ＬＢＬは再発性である。

【実施例】

【0143】

ネスラー活性
アスパラギナーゼの活性を、ネスラーアッセイで測定し、ここでアスパラギナーゼ活性の測定値はエンドポイント限界（ｅｎｄｐｏｉｎｔ ｌｉｍｉｔ）アッセイに基づき、酵素は＋３７℃のＬ－アスパラギン飽和濃度下で１５分間インキュベートされる。反応は、ネスラー試薬を添加することによって停止し、反応中に産生されたアンモニア量は、既知の量の硫酸アンモニウムから構築した較正曲線を用いた比色分析（４５０ｎｍの）で評価する。

【0144】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
注射の１時間前に、カラムを１ｍＬ／分の移動相でコンディショニングした（５０ｍＭのリン酸塩、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．０）。ＢｉｏＲａｄ Ｇｅｌ Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｓｔａｎｄａｒｄｓをブルーデキストランで１０倍希釈し、合計体積を１ｍＬにした。移動相中で試料及び参照標準を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、移動相ブランクを複数回注射してカラムをきれいにした後で注射した。

【0145】

下記の実施例の様々な表で、項目「ＮＤ」は、特定のデータ点が決定されなかったことを示すことに留意されたい。

【0146】

実施例１：ベースライン緩衝液／賦形剤のスクリーニング
Ｌ－アスパラギナーゼの安定性に対する、４．５～８．０の範囲の６つの緩衝液／ｐＨ組み合わせからのｐＨ及び緩衝液のタイプの効果を評価した。ｐＨ７．０の２０ｍＭヒスチジン緩衝液又はｐＨ８．０の２０ｍＭリン酸ナトリウムのいずれかの中の６つの異なる賦形剤を備える製剤の追加のセットを、初期賦形剤スクリーニングとして調製した（表１）。Ｌ－アスパラギナーゼ（１．０ｍＬの、２０．９ｍｇ／ｍＬのロットＲＭ－ＬＡＰ－Ｐ０３／Ｐ０５／Ｐ０６のバルクのプール）を、遠心限外濾過装置（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－４ １０ｋ ＭＷＣＯ）を用いて、１００ｍＬの対応する製剤緩衝液と緩衝液交換した。最後の緩衝液交換の後で、タンパク質濃度を測定し、試料を約２０ｍｇ／ｍＬに調整した。製剤化した試料を２つのアリコートに分割し、製剤化したＲＣを用いて３７℃及び５℃で１週間の安定性研究を実施した。１週間の貯蔵の終了時に、製剤を同時に分析した。

【0147】

（表１）

【0148】

賦形剤スクリーニングの目的は、ｐＨ４．５～８．５の酢酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、リン酸塩、及びＴｒｉｓ緩衝液を評価することであった。更に、ｐＨ７．０のヒスチジン緩衝液又はｐＨ８．０のリン酸緩衝液中の賦形剤プロリン、リジン、塩化ナトリウム、アルギニン、トレハロース、ソルビトール、及びスクロースを、賦形剤の影響に関して評価した。ＳＥＣ及びネスラー活性アッセイを用いて、選択された緩衝液中のこれらの賦形剤の存在下でのＲＣの安定性を評価した。

【0149】

２６個の製剤の純度をＳＥＣ－ＨＰＬＣによって評価した。結果を表２及び表３にまとめる。全ての製剤で、１週間貯蔵した後の５℃条件と３７℃条件との間ではＳＥＣプロファイルの差異はほとんど観察されなかった。しかし、異なる製剤間では差異が観察された。主ピーク純度は、６６．４～９８．３％の範囲を有した。ヒスチジン緩衝液製剤は全て、６６．４％～７４．０％の純度レベルを有し、一方で残りの製剤は９０．６％～９８．３％の純度レベルを有した。ヒスチジン、コハク酸塩、クエン酸塩、リジン含有リン酸塩、及びアルギニン含有リン酸塩の緩衝液においては、約１１．６分でＬＭＷ種が１．３～３２．４％の範囲で観察された。酢酸塩、リン酸塩、及びＴｒｉｓ緩衝液中の製剤は、０．２～０．６％のＬＭＷ種を示した。塩化ナトリウム、トレハロース、ソルビトール、及びスクロースを含むリン酸緩衝液中の製剤は、賦形剤なし製剤と近いレベルのＬＭＷ種を示した。

【0150】

（表２）

【0151】

（表３）

【0152】

最高の純度及び最低のＬＭＷ種のパーセンテージに基づき、酢酸及びリン酸緩衝液を更なる評価のために選択した。更に、トレハロース、ソルビトール、及び塩化ナトリウムを、ＤＯＥ中で評価すべき賦形剤として選択し、より厳しいストレス条件下での製剤安定性に対するその影響を評価した。

【0153】

実施例２：ＤＯＥ
１つの数値因子１（ｐＨ）及び１つの分類的因子（賦形剤）を考慮する統計的実験計画（ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ、ＤＯＥ）アプローチを用いて、それぞれ４．５～５．５及び７．０～８．０の範囲内にある酢酸及びリン酸緩衝液のｐＨ及び賦形剤の、Ｌ－アスパラギナーゼに対する効果を評価した。酢酸及びリン酸の２つの緩衝系の非重複範囲に対応するため、線形１因子設計（ｌｉｎｅａｒ ｏｎｅ－ｆａｃｔｏｒ ｄｅｓｉｇｎ）を用いた２つの独立したＤＯＥを、各緩衝系に対して同時に実施した。実験設計は、Ｓｔａｔ Ｅａｓｅ，Ｉｎｃ．のＤｅｓｉｇｎ－Ｅｘｐｅｒｔ（登録商標）バージョン９．０．６．２を使用して生成した。応答の有意性を、９５％の信頼水準で評価した。

【0154】

設計外（ｏｆｆ－ｄｅｓｉｇｎ）製剤の追加のセットは、ソルビトール及びトレハロースを用いるＤＯＥで、ｐＨ８．５のＴｒｉｓ緩衝液を使用する３つの選択された賦形剤の効果、並びにｐＨ５．３の酢酸塩及びｐＨ７．５のリン酸塩にＰＳ－８０を添加することの効果を評価した。製剤を２週間の４０℃の熱ストレス、及び単一の凍結／解凍サイクルに晒した。

【0155】

単一の凍結／解凍サイクルに晒された、又は４０℃で２週間貯蔵された製剤のネスラー活性アッセイは、６００～１２７０μｍｏｌ／分．ｍｇＥの範囲の活性を有した（表４及び表５）。熱又は凍結／解凍ストレス下で製剤の有意な活性の喪失は観察されず、活性が増加した製剤が、製剤緩衝液の結果であるかネスラー活性アッセイの変動性の結果であるかは不明である。製剤をＲＰ－ＨＰＬＣによって分析した。ＲＰ－ＨＰＬＣによって、酢酸及びリン酸緩衝液の両方の中の全ての製剤が、単一の凍結／解凍ストレス後に１００％主ピークであり、４０℃で２週間後に９８％主ピーク及び２％微小ピークであることが決定された。

【0156】

（表４）

【0157】

（表５）

【0158】

全ての製剤及びストレス条件をＳＥＣ－ＨＰＬＣによって分析した。結果を表６に示す。熱ストレスの後で、リン酸緩衝製剤の純度は８８．７０％～９９．３１％の範囲であり、ＨＭＷピークは０．６６％～１．００％の範囲であり、どのＬＭＷのショルダーも１０．９８％であると検出されず、どれもＬＭＷピークは検出されなかった。ｐＨ７．０では、３つの賦形剤の全てが熱ストレス後に近似するＳＥＣプロファイルを示し、各賦形剤の主ピークのパーセンテージは９９％であった。

【0159】

（表６）

【0160】

主ピーク純度の低下及びＬＭＷショルダーパーセンテージの増加を、ｐＨ７．０で観察された最大主ピーク純度のみを有するｐＨに依存する線形モデルに適合させた（表７）。ｐＨ８．５の設計外製剤はまた、熱ストレス後の大量のＬＭＷショルダーの形成を示す（表８）。ＨＭＷ種の形成は、ｐＨではなく賦形剤に依存することが判明し、ソルビトールはＨＭＷ種の全体的な最大のパーセンテージを有する。

【0161】

（表７）

【0162】

（表８）

【0163】

リン酸ナトリウム製剤に対する凍結／解凍ストレス下では、ＳＥＣ－ＨＰＬＣの主ピーク純度は９８．０５％～９９．３４％の範囲であり、ＨＭＷピークは０．６６％～０．７１％の範囲であり、ＬＭＷピークは非検出～１．２８％の範囲であった。トレハロース製剤中では、凍結／解凍ストレス下のＳＥＣに関する傾向は発見されず、ＬＭＷピークのみが観察された。

【0164】

酢酸ナトリウム製剤に対する凍結／解凍ストレス下では、ＳＥＣ－ＨＰＬＣの主ピーク純度は９７．６９％～９８．０７％の範囲であり、ＨＭＷピークは０．５４％～０．６９％の範囲であり、ＬＭＷピークは１．３４％～１．６２％の範囲であった。結果を表９に示す。凍結／解凍ストレス下のＳＥＣに関する傾向は発見されなかった。熱ストレス下で、酢酸塩製剤の純度は９７．６５％～９８．０２％の範囲であり、ＨＭＷピークは０．４６％～０．６８％の範囲であり、ＬＭＷピークは１．５２％～１．８２％の範囲であった。ＨＭＷパーセンテージの小さな差異は、ｐＨ及び賦形剤に依存することが判明し、ｐＨ５．５以上では、ＨＭＷ種はトレハロース又はソルビトールよりも塩化ナトリウムで高かった。

【0165】

（表９）

【0166】

全ての製剤及びストレス条件をＩＥＸ－ＨＰＬＣによって分析した。熱ストレスの後で、リン酸緩衝液製剤は、５２．９％～６３．１％の主ピーク純度範囲、９．３％～１８．８％の酸性種、及び２５．２％～３０．１％の塩基性種を示した。ｐＨが増加すると、酸性種の量は増加し、その一方で主ピークは低下した。主ピークのパーセンテージも賦形剤のタイプに依存した。結果を表１０及び表１１に示す。

【0167】

（表１０）

【0168】

（表１１）

【0169】

ｐＨ７．０では、主ピークのパーセンテージは、塩化ナトリウム、トレハロース、及びソルビトールでそれぞれ６２．１～６３．１％、５９．３～５９．９％、及び５７．２～５７．５％であった。熱ストレス下で塩基性種の量の傾向は観察されなかった。凍結／解凍ストレス下のこれらの製剤の主ピーク及び酸性種パーセンテージに関してｐＨの類似の傾向が観察された（表１２）が、賦形剤間で差異はほとんど観察されなかった。

【0170】

（表１２）

【0171】

熱ストレスの後で、酢酸緩衝液製剤の純度は５１．３％～５６．４％の範囲であり、酸性種は５．９％～７．３％、及び塩基性種は３７．２％～４１．８％であった（上記の表１１）。ｐＨが低下すると主ピークが低下し、主ピークのパーセンテージも賦形剤のタイプに依存した。ｐＨ５．０では、主ピークのパーセンテージは、ソルビトール、トレハロース、及び塩化ナトリウムでそれぞれ５４．０％、５５．２％、及び５２．１％であった。熱ストレス下で塩基性種の量の傾向は観察されなかった。酢酸ナトリウム緩衝液中の凍結／解凍ストレス下では、ｐＨ及び賦形剤で熱ストレスと類似する傾向が観察されたが、製剤間の差異は比較的小さい（上記の表１２）。設計外製剤のＩＥＸ－ＨＰＬＣ結果は、表１３及び表１４で見られる。

【0172】

（表１３）

【0173】

（表１４）

【0174】

全ての製剤は、バイアルに入れた後に無色透明であった。凍結／解凍ストレス後、全ての製剤は無色且つわずかに乳白色であった（表１５、表１６、及び表１７）。リン酸ナトリウム製剤に対する熱ストレス下では、ソルビトールの場合はｐＨ８．０で、トレハロースの場合はｐＨ７．５及び８．０で、並びに全ての塩化ナトリウム製剤で生成物に関連する沈殿物が観察された。酢酸ナトリウム製剤の場合、ｐＨ４．５の２５０ｍＭソルビトール及びｐＨ５．５の２５０ｍＭトレハロースを除く全ての製剤で微粒子が観察された。

【0175】

（表１５）

【0176】

（表１６）

【0177】

（表１７）

【0178】

熱ストレス下でのリン酸ナトリウム緩衝化製剤の分析データを、更なる分析のために、製剤間の差異の程度、及びリン酸緩衝液中のＲＣに関するクライアントの歴史的経験に基づいて選択した。ＳＥＣ、ＩＥＸ、及び外観試験からの結果は、ｐＨ７．０の製剤に対して賦形剤が効果の低下を示す、製剤の安定性に関するｐＨの明確な傾向を示した。

【0179】

ＳＥＣ及びＩＥＸの主ピークパーセンテージを最大化し、ＳＥＣにおけるＬＭＷ及びＨＭＷ種、並びにＩＥＸにおける酸性及び塩基性種の形成を最小化するために、Ｓｔａｔ－Ｅａｓｅ，Ｉｎｃ．のＤｅｓｉｇｎ－Ｅｘｐｅｒｔ（登録商標）バージョン９．０．６．２を用いて、熱ストレス下でのリン酸ナトリウム製剤に対して数値最適化を行った。数値最適化を、２週間の熱ストレス後の２０ｍＭのリン酸ナトリウムＤＯＥからの分析結果に対して実施した。ｐＨ又は賦形剤に関する制約のない最適な製剤を見つけるために、製剤最適化を実施した。最適化パラメータ及び結果は、表１８、表１９、表２０、及び表２１で見られる。応答として用いられる製剤中の微粒子の存在及び全ての結果に、等しい重要度が与えられたとき、最適な製剤は、ｐＨ７．２の２０ｍＭリン酸ナトリウム、２５０ｍＭトレハロースであると算出された。製剤中の微粒子の外観が、最適化における制約としての因子ではなく、全ての結果に同じ重要度が与えられた場合、最適な製剤は、ｐＨ７．０の２０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭ塩化ナトリウムであると算出された。ＤＯＥ及びＤＯＥ外製剤に基づき、２０ｍｇ／ｍＬ ＲＣでの２０ｍＭリン酸ナトリウム、２５０ｍＭトレハロース、ｐＨ７．０を、界面活性剤研究で更に試験するために選択した。

【0180】

（表１８）

【0181】

（表１９）

【0182】

（表２０）

【0183】

（表２１）

【0184】

実施例３：界面活性剤研究
界面活性剤のスクリーニング研究を実施して、凍結／解凍又は攪拌ストレス後に観察される乳白光に対するＰＳ－８０の濃度の影響を評価した。０．００％～０．０６％ｗ／ｖのＰＳ－８０濃度で、２５０ｍＭトレハロースを含むｐＨ６．５、７．０、及び７．５の２０ｍＭリン酸ナトリウム中で、Ｌ－アスパラギナーゼを製剤化した（表２２）。代替的製剤として、０．００％及び０．０４％ｗ／ｖのＰＳ－８０を伴う、ｐＨ５．５の、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、２５０ｍＭトレハロースが含まれる。

【0185】

（表２２）

【0186】

Ｌ－アスパラギナーゼ（２２ｍｇ／ｍＬの、１７６０ｍｇ）を、１０Ｋ ＭＷＣＯのＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｇ２透析カセットを用いて、ＰＳ－８０なしの対応する製剤緩衝液中に透析した。透析を、室温で、最小限の製剤緩衝液対試料の体積を４０：１として実施した。４回の透析緩衝液交換を実施した。透析の後に、材料をカセットから除去し、濃度及びｐＨを測定した。続いて材料を分割し、Ｈ_２Ｏ中の１０％（ｗ／ｖ）ＰＳ－８０溶液を用いて、適切な濃度になるまでＰＳ－８０を添加した。混合後、各製剤を、６つの２ｍＬバイアルへと均等に等分する。

【0187】

凍結／解凍及び攪拌評価の間、初回時点試験のために各製剤からの１つのバイアルを５℃で維持した（合計で８つ）。各製剤の個別のバイアル上で独立して１回及び３回の凍結／解凍サイクルを実施した。各凍結／解凍サイクルは、－７５±１０℃で最低２時間の凍結、及び室温で最低２時間、且つ完全に解凍するまでの解凍であった。攪拌評価には各製剤からの３個のバイアルを必要とした（合計で２４個）。１つのバイアルは、雰囲気温度で２４時間、６０ｒｐｍのローテータ上で攪拌し、１つのバイアルは、同じ条件下で４８時間攪拌し、１つのバイアルは、対照として研究中はローテータの隣に配置した。

【0188】

０．００％、０．０２％、０．０４％、及び０．０６％のＰＳ－８０を含むｐＨ６．５、７．０、及び７．５の２０ｍＭリン酸塩、２５０ｍＭトレハロース中のＲＣ製剤に関する、凍結／解凍又は攪拌ストレス下での乳白光の形成についてＰＳ－８０に対する影響を評価するために、界面活性剤研究を実施した（表２２）。潜在的な緩衝液の代替物として、以下の２つの追加の製剤を研究に加えた：０．００％及び０．０４％のＰＳ－８０を含むｐＨ５．５の２０ｍＭ酢酸塩、２５０ｍＭトレハロース。続いて製剤を、－７５℃で１回及び３回の凍結／解凍サイクルに晒し、室温で２４及び４８時間の攪拌でストレスを加えた。各製剤の対照を、攪拌せずに、凍結／解凍ストレスの場合で５℃、及び室温で、４８時間保持した。

【0189】

外観試験によって、全ての対照及びストレスを加えられた試料は、生成物に関連する微粒子のない、無色且つわずかに乳白色であった。対照の試料と凍結／解凍及び攪拌試料との間で、又は異なるレベルのＰＳ－８０の間で、乳白光の程度の差異は観察されなかった。対照及びストレスを加えた製剤のタンパク質濃度も評価した。タンパク質濃度は、１９～２２ｍｇ／ｍＬであった（表２２）。凍結／解凍又は攪拌ストレスの際に有意な変化又は傾向は観察されなかった。

【0190】

ＤＬＳ分析は、全ての試料が４．１～４．５の流体力学的半径を有し、多分散度百分率は１０．７％～１９．４％であったことを示した（表２３及び表２４）。製剤又はストレス条件に対するＤＬＳの有意な差異又は傾向は観察されなかった。

【0191】

（表２３）

【0192】

（表２４）

【0193】

ＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果は、ストレスに関係なく、２０ｍＭリン酸緩衝液中の全ての製剤は、ストレス条件の前後で同様のプロファイルを有し、主ピークパーセンテージは９９．３％であり、ＨＭＷピークは０．７％であったことを示す（表２５）。同様に、２０ｍＭ酢酸塩製剤のＳＥＣＨＰＬＣは、０．７％のＨＭＷピーク、９７．９％～９８．１％の主ピーク、及び１．３％～１．４％のＬＭＷピークを示した（表２６）。

【0194】

（表２５）

【0195】

（表２６）

【0196】

様々なＰＳ－８０濃度の、Ｔ０、１回凍結／解凍サイクル、３回凍結／解凍サイクル、攪拌対照、２４時間攪拌、及び４８時間攪拌試料に関して、可視未満（Ｓｕｂ－ｖｉｓｉｂｌｅ）の微粒子をＨＩＡＣによって測定した。結果を表２７及び表２８にまとめる。全ての試料で、累積係数／ｍＬは、≧２μｍ、５μｍ、≧１０μｍ、≧２５μｍの場合にそれぞれ２３３０～４５２７０、３９０～３５８５７、７８～６４３０、及び０～１５０の範囲であった。同じ製剤の他の条件と比較して、いくつかの条件が微粒子のレベルを増加させたが、これらの試料は、傾向を表すものではなく、異常値であると考えられる。例えば、２０ｍＭリン酸塩、２５０ｍＭトレハロース、０．０４％ＰＳ－８０、ｐＨ７．０溶液は、初期時点で２８４２個の≧１０μｍ粒子を有したが、攪拌対照中にはわずか１５５個の粒子しか存在しなかった。

【0197】

（表２７）

^１試料の試験は中断され、完全に完了しなかった。しかし、取られた測定値（複数可）は、試料の実際の結果を示す。

【0198】

（表２８）

【0199】

ＩＥＸ－ＨＰＬＣを、全ての条件で全ての２０ｍＭリン酸塩製剤に対して実施した。０％、０．０２％、０．０４％、及び０．０６％のＰＳ－８０を含むｐＨ７．０のＴ０対照の主ピークパーセンテージは、それぞれ６８．８８％、６９．８３％、７１．３６％、及び７０．３８％であった（表２９）。０．０４％のＰＳ－８０では、ｐＨ６．５、７．０、及び７．５のＴ０対照の主ピークパーセンテージは、それぞれ７０．１１％、７１．３６％、及び６８．０４％であった。凍結／解凍又は攪拌ストレスに晒した後で、全ての製剤のＩＥＸプロファイルに有意な変化は観察されなかった。これらの結果は、０．０６％ｗ／ｖ以下のＰＳ－８０の添加に利益がほとんどないことを示す。

【0200】

（表２９）

【0201】

実施例４：塩／トレハロース依存性研究
２２ｍｇ／ｍＬのＬ－アスパラギナーゼで実施される予形成された塩／トレハロースの依存性研究を、表３０に従い、９つの異なる製剤緩衝液中で策定した。２７ｍＬのロットＲＥ－ＬＡＰ－Ｐ５９のアリコートを、約３ｍＬ（３部分）及び６ｍＬ（３部分）の６部分に分割した。製剤１～６に対し、１０Ｋ ＭＷＣＯのＳｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ Ｇ２カセットを用いた透析による緩衝液交換を実施した。透析を、室温で、最小限の緩衝液対試料の体積比を４０：１として実施した。各製剤に対して４回の透析緩衝液交換を約２時間毎に実施し、１回の交換は終夜行った。

【0202】

（表３０）

【0203】

透析に続いて、材料を透析カセットから除去し、ｐＨ及びタンパク質濃度を確認した。続いて、対応する緩衝液で試料の濃度を２０±２ｍｇ／ｍＬに調節した。調節後、緩衝液１～３中の材料を、各３ｍＬの等分に分割した。これらのアリコートのうち１つの組に１０％のＰＳ－８０を補充して、最終濃度を０．０２％とした。続いてすべての試料を濾過し、安全キャビネット内のバイアルに入れた。製剤のうち１つの組は、５℃で初期材料品質評価の試験まで貯蔵し、１つの組は５℃で３週間貯蔵し、１つの組は４０℃で３週間の熱ストレスに供した。４０℃で１．５週間貯蔵した後の外観評価の後で、３週間の時点を選択した。５℃の製剤１及び２を、７週間後にＩＥＸ及びＳＥＣ ＨＰＬＣによって更に試験した。

【0204】

０．０２％のＰＳ－８０を含む及び含まないｐＨ７．０の２０ｍＭ又は５０ｍＭのリン酸塩、１７５ｍＭのトレハロース中のＬ－アスパラギナーゼ製剤に対する塩化ナトリウム濃度の影響を評価するために、塩／トレハロース依存性研究を実施した（表３０）。製剤を、１．５及び３週間の５℃及び４０℃に晒した。サイズ排除及びＩＥＸクロマトグラフィーを用いて、選択された緩衝液中のこれらの様々な塩濃度の存在下でのＲＣの安定性を評価した。オスモル濃度及び導電度も初期の時点で決定し、これを表３１に示す。

【0205】

（表３１）

【0206】

外観試験によって、全ての初期試料及びストレスを加えられた試料は、生成物に関連する微粒子がほとんどないから全くないまでの、無色且つわずかに乳白色であった。全ての製剤は、ストレスに応じてより強い乳白色となった。０．０２％のＰＳ－８０を含有する製剤には、貯蔵期間に関わらず、粒子が全く存在しなかった（表３２）。この結果は、０．０２％のＰＳ－８０を添加することで、長期貯蔵中の粒子の形成が遅延し得ることを示す。塩濃度に対する外観の依存性は存在しなかった。初期製剤及びストレスを加えた製剤のタンパク質濃度も評価した。タンパク質濃度は、１９．７～２５．２ｍｇ／ｍＬであった（表３３）。ストレスを加えられた試料における有意な変化又は傾向は観察されなかった。

【0207】

（表３２）

【0208】

（表３３）

【0209】

初期時点でのＩＥＸ－ＨＰＬＣの結果は同様のプロファイルを示し、主ピークパーセンテージが６４．１％～６６．４％であり、酸性種パーセンテージが５．９％～７．５％であり、塩基性種パーセンテージが２７．７％～２８．７％であった。４０℃で３週間後、試料は、電荷不均一性プロファイルの有意な差異を示し、主ピークパーセンテージが３５．０％～４２．３％であり、酸性種パーセンテージが２２．５％～３２．０％であり、塩基性種パーセンテージが３３．０％～３６．２％であった。５℃で７週間後、わずかな変動のみが観察され、主ピークパーセンテージが５９．３％～６１．３％であり、酸性種パーセンテージが９．７％～１２．８％であり、塩基性種パーセンテージが２７．９％～２９．０％であった（表３４）。塩を含む製剤は、塩を含まない製剤と比較してわずかに高い主ピークパーセンテージを有する。０．０２％のＰＳ－８０を添加しても、電荷不均一性の点で利益はほとんど又は全くなかった。

【0210】

（表３４）

^１研究開始から７週間後まで試料を分析しなかった。

【0211】

初期時点でのＳＥＣ－ＨＰＬＣの結果は、同様のプロファイルを示し、主ピークパーセンテージが９８．０％～９８．２％であり、ＨＭＷピークパーセンテージが１．９％～２．０％であった。４０℃で３週間後、試料は、ＬＭＷピークの出現に起因する純度のわずかな劣化を示した。３週間ストレスを加えた試料の主ピークパーセンテージは９４．８％～９５．４％であり、ＨＭＷピークパーセンテージは１．９％～２．１％であり、ＬＭＷピークパーセンテージは２．７％～３．１％であった。５℃で３週間後、主ピーク及びＨＭＷピークのパーセンテージの有意な変化は観察されなかった（表３５）。高分子量及び低分子量種は、塩を添加することで最小化され、製剤に０．０２％のＰＳ－８０を補充したとき利益は観察されなかった。

【0212】

（表３５）

【0213】

実施例５：シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）由来の組み換えクリサンタスパーゼ（ＲＣ－Ｐ）とＥｒｗｉｎａｓｅとの比較
シュードモナス由来の組み換えクリサンタスパーゼ（ＲＣ－Ｐ）及びＥｒｗｉｎａｓｅの関連する品質属性を比較するために実験を実施した。同等性を示すためにＲＣ－ＰとＥｒｗｉｎａｓｅと比較するデータ及び結果の要約を表３６に示す。結果は、ＲＣ－ＰとＥｒｗｉｎａｓｅとがその構造及び酵素活性の点で同等であることを示す。サイズ及び電荷の差異が観察された。

【0214】

（表３６）同等性結果の要約

【0215】

ペプチドをマッピングするＭＳデータを、酸化、脱アミド化、スクシンイミド、異性化、糖化、メチル化、及びアセチル化を含むペプチドを含有する一般的な又は既知の修飾に関してマイニングした。修飾及び被修飾の合計ペプチドに対して正規化した修飾ペプチドの計数を用いて、各修飾の相対的程度を計算した。本明細書で報告される相対レベルは半定量的であった。メチル化及びアセチル化修飾は、いずれの材料でも見られなかった。酸化、脱アミド化、及びスクシンイミドは、ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方で見られた。表３７に示すように、これらのレベルは同等であり、且つ比較的低かった（注記：０．５％未満のＰＴＭは報告していない）。更に、Ｅｒｗｉｎａｓｅでのみ、複数のリジン位置で低レベルの糖化が観察された。Ｅｒｗｉｎａｓｅにおける追加の糖化修飾は、その電荷特性に影響を与え、その酸性バリアントの増加をもたらす。全体として、ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方が、確立された一次アミノ酸構造を有する。これらのＰＴＭは、Ｅｒｗｉｎａｓｅで観察された追加の糖化修飾を除いて同等である。

【0216】

（表３７）観察された翻訳後修飾

【0217】

サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＨＰＬＣ）は、天然タンパク質の分子サイズ分布に関する定量的情報を提供する。表３８に示すように、ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのＳＥ－ＵＨＰＬＣプロファイルは、サイズ排除ピークの相対的なピーク面積の分布を示した。ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方が、優位な主ピーク含有量を有した。Ｅｒｗｉｎａｓｅで観察された高分子量種（ＨＭＷ）の量（７．３％）はＲＣ－Ｐ（０．２％）よりも高かった。ＲＣ－Ｐ（０．１％）及びＥｒｗｉｎａｓｅ（０．３％）の両方で観察された低分子量種（ＬＭＷ）の量は同等であった。

【0218】

（表３８）ＳＥ－ＵＨＰＬＣ分析からのＨＭＷ、主ピーク、及びＬＭＷパーセント

【0219】

マルチアングルレーザー光散乱を用いるサイズ排除クロマトグラフィー：ＳＥ－ＨＰＬＣ＿ＭＡＬＬＳを、ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方に対して実施した。サイズ排除ピークの識別を表３９に列挙した。ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方に対して実施されたＭＡＬＬＳと組み合わせたＳＥ－ＨＰＬＣ分離により、四量体としてのＳＥＣの主要含有量が同定され、分子量は１３３～１３４ｋＤａの範囲内であった。どちらの材料も優位な四量体含有量を示した。両方の材料のＨＭＷ１種は、ＭＷが２７７～２８６ｋＤａの範囲の八量体であると同定され、これは、理論的な八量体質量である２８０ｋＤａに近似していた。Ｅｒｗｉｎａｓｅでのみ観察されたＨＭＷ２種は、ＭＷが５５４ｋＤａのヘキサデカマー（１６量体）として同定され、これは、理論的ヘキサデカマー質量の５６０ｋＤａと一致していた。ＬＭＷ種のサイズは、ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのどちらもこれらの型の存在量が非常に低いため、ＭＡＬＬＳによって正確に評価することができなかった。ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳの結果は、ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方が優位な四量体型を含有し、これらのＨＭＷ型は類似しており、八量体であると同定されたことを示した。更に、Ｅｒｗｉｎａｓｅは低レベルの１６量体を含有した。

【0220】

（表３９）ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳの結果

【0221】

画像化キャピラリー等電点電気泳動法（ｉＣＩＥＦ）：ｉＣＩＥＦは、ＲＣ－Ｐタンパク質の電荷不均一性の定量的測定値を提供する直交アッセイである。ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのｉＣＩＥＦプロファイル、合計面積に対する主ピーク、酸性基、及び塩基性基の相対的ピーク面積を表４０に列挙した。どちらの材料も、主含有量に関して非常に同等なｐＩ値を示した。Ｅｒｗｉｎａｓｅは、より高い酸性バリアント含有量を有した。

【0222】

（表４０）ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのｉＣＩＥＦ電荷バリアントの分布

注：丸めをするため、合計の％は正確に１００％とはならない場合がある。

【0223】

酸化研究：
ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅ試料の両方を、それぞれ室温で４時間０．０１％（ｖ／ｖ）のＨ_２Ｏ_２で処理することにより、強制酸化に供した。分析試験の結果は、酸化されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅ試料が、合計で３０％前後のメチオニン残基の酸化、ＲＰ－ＵＨＰＬＣのピーク前含有量の約２０％の増加、ｉＣＩＥＦの酸性バリアントの増加、ＳＥＣのＨＭＷ含有量の微増を有し、また、同等なＣＩＥＸ、ＨＩＣ、活性特性を有したことを示した。詳細な分析結果を以下で説明する。

【0224】

ペプチドマッピングの結果：トリプシンペプチドマッピングＬＣ－ＭＳ法を用いて、タンパク質の一次構造を確認し、強制酸化条件、特にメチオニン酸化によって誘発される潜在的な翻訳後修飾を同定した。ペプチドマッピングの結果は、強制酸化されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅが、複数の位置でメチオニンの酸化を有する予期された一次構造を有していたことを示した（表４１）。Ｈ_２Ｏ_２で処理されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのペプチドマッピングプロファイルのオーバーレイは、同等である。どちらの酸化試料のトレースも、それぞれＭ１３３、Ｍ６０、及びＭ１２１を含有する酸化ペプチドのピーク強度の増加を示した。Ｈ_２Ｏ_２で処理されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅは、複数のメチオニン位置で様々なレベルの酸化を示した（表４１）。最も酸化しやすいものから最も酸化しにくいものまでの、酸化傾向のあるメチオニン位置は、Ｍ１３３（～２０％）＞Ｍ６０（～８％）＞Ｍ１２１（～４％）＞Ｍ３０８（～１％）である。両方の試料で３３％前後の合計メチオニン酸化が観察された。両方の酸化試料及び参照標準で、Ａｓｎ２８１において同様のレベルの脱アミド化及びスクシンイミド中間体が観察された。

【0225】

（表４１）酸化ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのＰＴＭ

【0226】

ＳＥ－ＵＨＰＬＣの結果：ＳＥ－ＵＨＰＬＣ法を用いて、非変性条件下での天然状態のＲＣ－Ｐのサイズ分布を評価した。酸化ＲＣ－Ｐ、酸化Ｅｒｗｉｎａｓｅ、及び参照標準のオーバーレイを分析した。酸化試料及びＲＳの間で有意なプロファイルの差異は観察されなかった。両方の酸化試料は、参照標準と比較して、主に四量体のピーク、ＨＭＷ含有量の微増、同等なＬＭＷ含有量を示した。相対的ピーク強度を表４２に列挙する。

【0227】

（表４２）ＳＥ－ＵＨＰＬＣの結果

【0228】

ＣＩＥＸの結果：ＣＩＥＸ法を用いて、非変性条件下での天然状態のＲＣ－Ｐの電荷分布を評価した。酸化ＲＣ－Ｐ、酸化Ｅｒｗｉｎａｓｅ、及び参照標準のオーバーレイを分析した。酸化試料及び参照標準の間で有意なプロファイルの変化は存在しなかった。酸化した試料のどちらも、主に主ピークの含有量を示した。ストレスを加えた試料、及び参照標準の相対的ピーク強度を表４３に列挙する。

【0229】

（表４３）ＣＩＥＸの結果

【0230】

ｉＣＩＥＦの結果：ｉＣＩＥＦ法は、電場を印加されたＲＣ－Ｐの電荷分布を評価するための直交法である。酸化試料及び参照標準のオーバーレイを分析した。これらの相対的ピーク強度を表４４に列挙する。どちらの酸化試料も、８．５前後のｐＩで酸性ピークの増加を示した。酸化は、塩基性バリアントに対する影響を有さない。

【0231】

（表４４）酸化試料及びＲＳからのｉＣＩＥＦ結果

【0232】

低ｐＨ研究：
ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅ試料の両方を、室温でｐＨ３．４の５０ｍＭリン酸ナトリウムを用いた低ｐＨ処理に供し、続いて－８０℃で凍結させた。前研究は、ｐＨ３．４での、１５分間から７日間までのインキュベーション時間は重要ではなく、処理された試料のＳＥ－ＵＨＰＬＣプロファイルは同等であったことを示した。処理された試料は、－８０℃で最大８週間、比較的安定して貯蔵された。分析試験の結果は、処理したＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの試料が、１０％前後の単量体含有量を有し、活性が低下したことを示した。これらのペプチドマッピングプロファイル、ＰＴＭ、ＣＩＥＸ、ＲＰ－ＵＨＰＬＣ、及びＨＩＣ特性は、未処理のものと同等であった。詳細な分析結果を以下で説明する。

【0233】

ＳＥ－ＵＨＰＬＣの結果：ＳＥ－ＵＨＰＬＣ法を用いて、非変性条件下での天然状態のＲＣ－Ｐのサイズ分布を評価する。低ｐＨで処理されたＲＣ－Ｐ、Ｅｒｗｉｎａｓｅ、及び参照標準のオーバーレイを分析した。低ｐＨで処理されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方が、参照標準と比較して、主に四量体のピーク、及び１０％前後のＬＭＷ含有量の増加を示した。低ｐＨ処理は、Ｅｒｗｉｎａｓｅに対しては７．３％から１０．６％までのＨＭＷ含有量の微増をもたらしたが、ＲＣ－Ｐに対する影響はなかった。これらの相対的ピーク強度を表４５に列挙する。

【0234】

（表４５）ＳＥ－ＵＨＰＬＣの結果

【0235】

ＣＩＥＸの結果：ＣＩＥＸ法を用いて、非変性条件下での天然状態のＲＣ－Ｐの電荷分布を評価する。低ｐＨで処理されたＲＣ－Ｐ、Ｅｒｗｉｎａｓｅ、及び参照標準のオーバーレイを分析した。ｐＨで処理された試料及び参照標準の間で有意なプロファイルの変化は存在しなかった。処理された試料のどちらも、主に主ピークの含有量を示した。処理された試料、及び参照標準の相対的ピーク強度を表４６に列挙する。

【0236】

（表４６）ＣＩＥＸの結果

【0237】

ｉＣＩＥＦの結果：ｉＣＩＥＦ法は、電場を印加されたＲＣ－Ｐの電荷分布を評価するための直交法である。低ｐＨで処理されたＲＣ－Ｐ、Ｅｒｗｉｎａｓｅ、及び参照標準のオーバーレイを分析した。これらの相対的ピーク強度を表４７に列挙する。低ｐＨで処理されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅのどちらも、７．２前後のｐＩで酸性ピークの増加を示し、これは既に単量体であると同定されている。低ｐＨ処理は、塩基性バリアントに対する影響を有さなかった。

【0238】

（表４７）酸化試料及びＲＳからのｉＣＩＥＦ結果

【0239】

ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの同等性を、これらの物理化学、純度、構造、及び効力特性を比較することによって評価した。ＳＥ－ＵＨＰＬＣ、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳ、及びＳＥＣ－ＭＳによって分析されたサイズに基づく不均一性は、同等であった。どちらの材料も優位な四量体構造を有する。ＨＭＷ種は、八量体であると同定された。Ｅｒｗｉｎａｓｅは、より高レベルの八量体を有する。低レベルの１６量体種も、Ｅｒｗｉｎａｓｅ中で観察された（＜２％）。ＲＣ－Ｐのサイズバリアント特性評価（ｓｉｚｅ ｖａｒｉａｎｔ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を介して、八量体が四量体と同等な活性を示すことは既に実証されている。全体的に、ＥｒｗｉｎａｓｅとＲＣ－Ｐとの間で観察されるサイズ分布の差異が薬物の効力に対して有する影響は最小限である。Ｅｒｗｉｎａｓｅは、酸性バリアントの差異に寄与する糖化修飾を有する。Ｅｒｗｉｎａｓｅ中で観察されるより高レベルの八量体／１６量体は、ＣＩＥＸ上で示される後期溶出性の塩基性バリアントに寄与した。以前のＲＣ－Ｐの強制分解研究は、糖化ＲＣ－ＰがＲＣ－Ｐと同等な構造及び活性を有することを実証する。ＨＩＣ及びＲＰ－ＵＨＰＬＣによって測定した疎水性プロファイルは、両方の材料で同等である。観察されたわずかな差異は、Ｅｒｗｉｎａｓｅの糖化修飾及びより高いレベルのＨＭＷ含有量に起因するものである。両方の材料の一次構造及び高次構造は同等である。効力の結果は同等である。強制分解研究は、Ｅｒｗｉｎａｓｅ及びＲＣ－Ｐが、酸化及び低ｐＨストレス下で同等な安定性を有することを示す。ＲＰ－ＵＨＰＬＣのプレピークが２０％前後増加した酸化ＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方が、これらの未処理の材料と比較して同等な活性を有する。低ｐＨストレス条件で処置されたＲＣ－Ｐ及びＥｒｗｉｎａｓｅの両方が、活性の低減を有し、これは、処理された試料の単量体含有量と非常によく相関する。これらのデータに基づけば、ＲＣ－ＰはＥｒｗｉｎａｓｅと同等な構造、生物学的特性、及び機能を示す。

【0240】

列挙される実施形態
以下で列挙される実施形態は、本発明の一部の態様を表す。

【0241】

実施形態１：水性の非凍結乾燥型製剤であって、
（ｉ）４つの単量体単位を含み、各単量体単位が、配列番号１と少なくとも約９５％同一であるアミノ酸配列を有する、Ｌ－アスパラギナーゼと、
（ｉｉ）トレハロース、スクロース、又はこれらの任意の組み合わせを含む１つ以上の二糖類と、
（ｉｉｉ）アミノ酸を実質的に含まない１つ以上の緩衝液と
を含み、３７℃で１週間貯蔵した後で、約５％未満の低分子量（ＬＭＷ）種を含む、前記製剤。

【0242】

実施形態２：Ｌ－アスパラギナーゼが、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、実施形態１に記載の製剤。

【0243】

実施形態３：Ｌ－アスパラギナーゼが、非ＰＥＧ化且つ非ＰＡＳ化（ｎｏｎ－ＰＡＳｙｌａｔｅ）されている、実施形態１又は実施形態２に記載の製剤。

【0244】

実施形態４：１つ以上の二糖類が、トレハロースを含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の製剤。

【0245】

実施形態５：トレハロースが、約５０ｍＭ～約３００ｍＭの濃度で存在する、実施形態４に記載の製剤。

【0246】

実施形態６：トレハロースが、約１５０ｍＭ～約２７５ｍＭの濃度で存在する、実施形態４に記載の製剤。

【0247】

実施形態７：トレハロースが、約１７０ｍＭの濃度で存在する、実施形態４に記載の製剤。

【0248】

実施形態８：１つ以上の緩衝液が、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、又はこれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の製剤。

【0249】

実施形態９：１つ以上の緩衝液が、リン酸緩衝液を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の製剤。

【0250】

実施形態１０：１つ以上の緩衝液が、リン酸ナトリウムを含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の製剤。

【0251】

実施形態１１：リン酸ナトリウムが、約０．５ｍＭ～約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１０に記載の製剤。

【0252】

実施形態１２：リン酸ナトリウムが約２０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１０に記載の製剤。

【0253】

実施形態１３：塩化ナトリウムを更に含む、実施形態１～１２のいずれか１つに記載の製剤。

【0254】

実施形態１４：塩化ナトリウムが、約２５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３に記載の製剤。

【0255】

実施形態１５：塩化ナトリウムが約５０ｍＭの濃度で存在する、実施形態１３に記載の製剤。

【0256】

実施形態１６：１つ以上の賦形剤を更に含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の製剤。

【0257】

実施形態１７：１つ以上の賦形剤がポリソルベート８０を含む、実施形態１６に記載の製剤。

【0258】

実施形態１８：ポリソルベート８０が、約０．００４％（ｗ／ｖ）～約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１７に記載の製剤。

【0259】

実施形態１９：ポリソルベート８０が約０．０２％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、実施形態１７に記載の製剤。

【0260】

実施形態２０：約４．０～約８．５のｐＨを有する、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の製剤。

【0261】

実施形態２１：約７．０のｐＨを有する、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の製剤。

【0262】

実施形態２２：その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療する方法であって、実施形態１～２１のいずれか１つに記載の製剤を対象に投与することを含む、前記方法。

【0263】

実施形態２３：疾患、病状、又は障害ががんである、実施形態２２に記載の方法。

【0264】

実施形態２４：がんが急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、実施形態２３に記載の方法。

【0265】

実施形態２５：ＡＬＬが再発性ＡＬＬである、実施形態２４に記載の方法。

【0266】

実施形態２６：がんがリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である、実施形態２３に記載の方法。

【0267】

実施形態２７：ＬＢＬが再発性ＬＢＬである、実施形態２６に記載の方法。

【0268】

実施形態２８：前記製剤が筋肉内投与される、実施形態２２～２７のいずれか１つに記載の方法。

【0269】

実施形態２９：前記製剤が静脈内投与される、実施形態２２～２７のいずれか１つに記載の方法。

【0270】

実施形態３０：前記製剤が、１つ以上の他の化学療法剤と同時投与される、実施形態２２～２９のいずれか１つに記載の方法。

【0271】

実施形態３１：
（ｉ）実施形態１～２１のいずれか１つに記載の製剤と、
（ｉｉ）その必要のある対象において、アスパラギン枯渇によって治療可能な疾患、病状、又は障害を治療するための、説明書と
を含む、キット。

【0272】

実施形態３２：疾患、病状、又は障害ががんである、実施形態３１に記載のキット。

【0273】

実施形態３３：がんが急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、実施形態３２に記載のキット。

【0274】

実施形態３４：ＡＬＬが再発性ＡＬＬである、実施形態３３に記載のキット。

【0275】

実施形態３５：がんがリンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）である、実施形態３２に記載のキット。

【0276】

実施形態３６：ＬＢＬが再発性ＬＢＬである、実施形態３５に記載のキット。

【配列表】

2024515555000001.app

【国際調査報告】