特表 2024-515676 ポリペプチド製剤

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-10

(54)【発明の名称】ポリペプチド製剤

(51)【国際特許分類】

   A61K 38/02 20060101AFI20240403BHJP

   A61K 47/22 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/19 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/50 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20240403BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240403BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 38/26 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 38/28 20060101ALI20240403BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240403BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 17/04 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 16/30 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 14/605 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 14/62 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 14/635 20060101ALI20240403BHJP

   C12N 11/04 20060101ALI20240403BHJP

   C12N 9/24 20060101ALI20240403BHJP

   C12N 9/20 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 14/745 20060101ALI20240403BHJP

   C07K 14/755 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 38/43 20060101ALI20240403BHJP

【ＦＩ】

A61K38/02

A61K47/22

A61K9/10

A61K9/19

A61K9/50

A61K9/48

A61K47/10

A61K47/26

A61K47/18

A61K39/395 T

A61K38/26

A61K38/28

A61P35/00

A61P3/10

C07K17/04

C07K19/00

C07K16/00

C07K16/30

C07K14/605

C07K14/62

C07K14/635

C12N11/04

C12N9/24

C12N9/20

C07K14/745

C07K14/755

A61K38/43

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023564032

(86)(22)【出願日】2022-04-13

(85)【翻訳文提出日】2023-10-27

(86)【国際出願番号】 IN2022050355

(87)【国際公開番号】W WO2022219646

(87)【国際公開日】2022-10-20

(31)【優先権主張番号】202141017881

(32)【優先日】2021-04-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523391696

【氏名又は名称】バーミズ リサーチ ラボラトリー， プライベート リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】パイ， スルヤカント モティラル

(72)【発明者】

【氏名】シェノイ， バーミ

【テーマコード（参考）】

4B033

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B033NA26

4B033NB62

4B033ND12

4C076AA16

4C076AA22

4C076AA54

4C076AA56

4C076AA58

4C076AA61

4C076AA95

4C076BB01

4C076CC21

4C076CC27

4C076DD09

4C076DD59

4C076DD59S

4C076DD60

4C076DD60D

4C076DD67

4C076EE41

4C076FF02

4C076FF14

4C076FF16

4C076FF24

4C076FF25

4C076FF36

4C076FF43

4C076FF51

4C076FF63

4C076FF68

4C076GG06

4C076GG16

4C084AA02

4C084AA03

4C084BA01

4C084BA44

4C084DB34

4C084DB35

4C084MA21

4C084MA23

4C084MA38

4C084MA44

4C084MA52

4C084NA10

4C084NA13

4C084ZB26

4C084ZC35

4C085AA14

4C085BB01

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG08

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA05

4H045BA41

4H045BA60

4H045CA40

4H045DA30

4H045DA37

4H045DA50

4H045DA65

4H045DA76

4H045DA89

4H045EA20

4H045FA84

4H045GA40

(57)【要約】

本開示は、とりわけ、ポリペプチドの経口投与のための方法及び組成物を提供する。典型的に、多くのポリペプチドは、静脈内または皮下注射により溶液で投与される。本開示は、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含む経口送達用のポリペプチド製剤を含む、方法及び組成物を提供し、ここでコアは、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む。本開示は、本明細書で開示するポリペプチド及びビタミンＥを含む製剤を経口投与することにより、ポリペプチドが首尾よく血流に送達されるという、驚くべき発見を含む。
【選択図】図１７

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む、経口送達用のポリペプチド製剤であって、
任意選択で、（ｉ）前記ポリペプチド製剤が、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含むカプセル化ポリペプチド製剤であって、前記コアが、前記結晶化ポリペプチド組成物もしくは非晶質ポリペプチド組成物と、前記医薬的に許容される担体とを含む、前記カプセル化ポリペプチド製剤である、または（ｉｉ）前記ポリペプチド製剤が懸濁液製剤である、前記ポリペプチド製剤。

【請求項2】

ポリペプチドを対象の血流に送達する方法であって、前記方法が、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含むポリペプチド製剤を、前記対象に経口投与することを含み、
任意選択で、（ｉ）前記ポリペプチド製剤が、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含むカプセル化ポリペプチド製剤であって、前記コアが、前記結晶化ポリペプチド組成物もしくは非晶質ポリペプチド組成物と、前記医薬的に許容される担体とを含む、前記カプセル化ポリペプチド製剤である、または（ｉｉ）前記ポリペプチド製剤が懸濁液製剤である、前記方法。

【請求項3】

前記ポリペプチドが、リンパ系を介して血流に送達され、任意選択で、前記ポリペプチドが、胸管を介して血流に送達される、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

対象の胸管またはリンパにポリペプチドを送達する方法であって、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含むポリペプチド製剤を、前記対象に経口投与することを含み、
任意選択で、（ｉ）前記ポリペプチド製剤が、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含むカプセル化ポリペプチド製剤であって、前記コアが、前記結晶化ポリペプチド組成物もしくは非晶質ポリペプチド組成物と、前記医薬的に許容される担体とを含む、前記カプセル化ポリペプチド製剤である、または（ｉｉ）前記ポリペプチド製剤が懸濁液製剤である、前記方法。

【請求項5】

経口送達用のカプセル化ポリペプチド製剤を生成する方法であって、前記方法が、（ｉ）非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含むコアを、カプセル内に封入することを含む、前記方法。

【請求項6】

経口投与用のポリペプチド懸濁液を生成する方法であって、前記方法が、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物を、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体に懸濁させることを含む、前記方法。

【請求項7】

前記ポリペプチドが、
（ｉ）治療用ポリペプチド、
（ｉｉ）抗体またはそのフラグメント、
（ｉｉｉ）モノクローナル抗体またはそのフラグメント、
（ｉｖ）融合ポリペプチド、
（ｖ）免疫グロブリン、
（ｖｉ）酵素、あるいは
（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）のいずれかのアナログ及び／または修飾形態であって、任意選択で、前記ポリペプチドが、ペグ化、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、リン酸化、グリコシル化、糖化、硫酸化、マンノシル化、ニトロシル化、アシル化、パルミトイル化、プレニル化、脂肪酸、またはこれらの組合せのうちの１つ以上によって修飾される、前記アナログ及び／または前記修飾形態を含む、請求項１～６に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項8】

前記ポリペプチドが、抗体（例えば、抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブ）、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、ヒトグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）もしくはそのアナログ（例えば、合成アナログ、例えば、リラグルチド）、副甲状腺ホルモン（例えば、組換えヒト副甲状腺ホルモンアナログ、例えば、テリパラチド）、インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標））、リツキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アガルシダーゼベータ、アガルシダーゼアルファ、イミグルセラーゼ、アリグルセラーゼ（ａｌｉｇｌｕｃｅｒａｓｅ）アルファ、ベラグルセラーゼアルファ、アルグルセラーゼ、セベリパーゼアルファ、ラロニダーゼ、イズルスルファーゼ、エロスルファーゼアルファ、ガルスルファーゼ、パンクレリパーゼ、サプロプテリン、エリグルスタット、ガルスルファーゼ、アスホターゼアルファ、ペグバリアーゼ、エラペガデマーゼ、サクロシダーゼ、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、第ＩＩＩ因子、第ＩＶ因子、第Ｖ因子、第ＶＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フォンウィルブランド因子、エタネルセプト、アフリベルセプト、リロナセプト、アレファセプト、ロミプロスチム、アバタセプト／ベラタセプト、及び／またはデニロイキン－ジフチトックス、あるいはこれらのアナログまたは誘導体から選択され、任意選択で、前記ポリペプチドが天然、合成、または操作されたものである、請求項１～７のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項9】

前記ポリペプチドが、約５０Ｄａ～約２５ｋＤａの間の分子量を有し、任意選択で、前記分子量が、約５０Ｄａ～約１ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約２ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約３ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約４ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約５ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約１０ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約１５ｋＤａの間、もしくは約５０Ｄａ～約２０ｋＤａの間であるか、
または、前記ポリペプチドが、約２５ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの間の分子量を有し、任意選択で、前記分子量が、約２５ｋＤａ～約５００ｋＤａの間、約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａの間、約１２０ｋＤａ～約２５０ｋＤａの間、もしくは約１５０ｋＤａ～約３００ｋＤａの間である、請求項１～８のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項10】

前記ポリペプチド製剤が、約１μｇ～約２，０００ｍｇの前記ポリペプチドを含み、任意選択で、前記ポリペプチド製剤が、約１μｇ～約１，０００ｍｇ、約１μｇ～約５００ｍｇ、約１μｇ～約４００ｍｇ、約１μｇ～約３００ｍｇ、約１μｇ～約２００ｍｇ、約１μｇ～約１００ｍｇ、約１μｇ～約５０ｍｇ、約１μｇ～約２５ｍｇ、約１μｇ～約２０ｍｇ、約１μｇ～約１５ｍｇ、約１μｇ～約１０ｍｇ、約１μｇ～約５ｍｇ、約１μｇ～約１ｍｇ、約１μｇ～約５００μｇ、約１μｇ～約２５０μｇ、約１μｇ～約２００μｇ、約１μｇ～約１５０μｇ、約１μｇ～約１００μｇ、約１μｇ～約５０μｇ、約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約４００ｍｇ、約１ｍｇ～約３００ｍｇ、約１ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約１ｍｇ～約２５ｍｇの前記ポリペプチドを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項11】

前記ポリペプチド製剤が、約１ｍｇ～約２，０００ｍｇのビタミンＥ剤を含み、任意選択で、前記ポリペプチド製剤が、約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約４００ｍｇ、約１ｍｇ～約３００ｍｇ、約１ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、または約１ｍｇ～約２５ｍｇのビタミンＥ剤を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項12】

前記ポリペプチド製剤が、前記ポリペプチド製剤中のポリペプチドの量に対するビタミンＥ剤のモル過剰または重量過剰を含み、任意選択で、前記過剰が、少なくとも１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、５００、または１，０００倍の倍数過剰である、請求項１～１１のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項13】

前記結晶化ポリペプチド組成物が、２５ミクロン未満、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、１、または０．５ミクロン未満の平均粒径を有するポリペプチドの結晶を含み、例えば、任意選択で、前記ポリペプチドの結晶が、０．５ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、もしくは２５ミクロンの間の平均粒径を有するか、または前記ポリペプチドの結晶が、１ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、もしくは２５ミクロンの間の平均粒径を有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項14】

前記非晶質ポリペプチド組成物が、２５ミクロン未満、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、１、または０．５ミクロン未満の平均粒径を有するポリペプチドの結晶を含み、任意選択で、前記ポリペプチドの粒子が、０．５ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、もしくは２５ミクロンの間の平均粒径を有するか、または前記ポリペプチドの粒子が、１ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、もしくは２５ミクロンの間の平均粒径を有する、請求項１～１２のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項15】

前記ポリペプチド組成物が凍結乾燥ポリペプチドを含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項16】

前記ポリペプチド組成物がポリペプチドの微結晶を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項17】

前記ポリペプチド組成物が、結晶化ポリペプチドを含む粉末を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項18】

前記コアが粘性溶液である、請求項１～１７のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項19】

前記カプセルが、ハードシェルカプセルまたはソフトシェルカプセルであり、任意選択で、前記カプセルが、ゼラチンカプセルまたはＨＰＭＣカプセルである、請求項１～１８のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項20】

前記カプセルが、腸への送達用に製剤化され、任意選択で、前記カプセルが、胃及び／または腸への送達用に製剤化される、請求項１～１９のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項21】

前記カプセルが腸溶性コーティングを含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項22】

前記コアが、凝集低減剤、糖もしくは糖アルコール、多糖、安定剤、ヒアルロニダーゼ、緩衝剤、防腐剤、担体、抗酸化剤、キレート化剤、天然もしくは合成ポリマー、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、界面活性剤、増量剤、酸性化剤、注射部位の不快感を低減する成分、消泡剤、キレート剤、天然または合成ポリマー、凍結保護剤、凍結保護剤、界面活性剤、増量剤、酸性化剤、注射部位の不快感を軽減する成分、消泡剤、アルカリ化剤、ビヒクル、凝集阻害剤、可溶化剤、張度調節剤、及び安定化剤、及びこれらの組合せからなる群より選択される１つ以上の賦形剤または添加剤をさらに含み、
任意選択で、前記１つ以上の賦形剤または添加剤が、個々にまたは累積的に、０．１ｍＭ～約１，０００ｍＭの間、約０．１ｍＭ～約５００ｍＭの間、約０．１ｍＭ～約２００ｍＭの間、または約０．１ｍＭ～約１００ｍＭの間の濃度で存在する、請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチド製剤または方法。

【請求項23】

（ｉ）前記凝集低減剤（複数可）が、ニコチン酸、クエン酸カフェイン、ニコチン酸カフェイン、カフェイン、オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシド、及びｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトシド、任意選択で、これらとアルギニン、トリプトファン、ヒスチジン、プロリン、システイン、メチオニン、β－アラニン、グルタミン酸カリウム、アルギニンエチルエステル、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、ＥＧＴＡ（アミノポリカルボン酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ヒドロキシプロピルベータ（ＨＰ－ベータ）シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルガンマ（ＨＰ－ガンマ）シクロデキストリン、スルホブチルエーテル（ＳＢＥ）シクロデキストリン、ＴＭＡＯ（トリメチルアミンＮ－オキシド）トレハロース、エチレングリコール、ベタイン、キシリトール、ソルビトール、６－（Ｎ－（７－ニトロベンゾ－２－オキサ－１，３－ジアゾール－４－イル）アミノ）ヘキサン酸（ＮＢＤ－Ｘ）、メチルアセチルホスフェート（ＭＡＰ）、シトラコン酸無水物、ピロホスフェート、クエン酸塩、及びこれらの組合せのうちの１つ以上との組合せからなる群より選択され、
（ｉｉ）前記張度調節剤（複数可）が、アルギニン、システイン、ヒスチジン、グリシン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、グリセリン、もしくはマンニトール）、及びこれらの組合せからなる群より選択され、
（ｉｉｉ）前記抗酸化剤（複数可）が、グリシン、リジン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ソルビトール、マンニトール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、トコフェロール、及びこれらの組合せからなる群より選択され、または
（ｉｖ）前記凍結乾燥保護剤（複数可）が、スクロース、ラクトース、トレハロース、デキストラン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロース、及びマンニトール；アミノ酸（例えば、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、もしくはグリシン）；リオトロピック塩（例えば、硫酸マグネシウム）；プロピレングリコール、グリセロール、ポリ（エチレングリコール）、もしくはポリ（プロピレングリコール）；ゼラチン、デキストリン、化工デンプン、カルボキシメチルセルロース、及びこれらの組合せからなる群より選択される、請求項２２に記載のポリペプチド製剤または方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

ポリペプチド治療薬は医学分野で重要な役割を果たしている。多くの最新の治療薬に酵素及び抗体などのポリペプチドが含まれている。ポリペプチド治療薬の典型的な投与経路は静脈注射または皮下注射である。治療薬の注射は周知の欠点を伴う。研究者は長年にわたり、ポリペプチド治療薬の代替的な組成物及び投与のための方法を模索している。

【発明の概要】

【0002】

本開示は、とりわけ、ポリペプチドの投与（例えば、経口投与）のための方法及び組成物を提供する。典型的に、多くのポリペプチドは、静脈または皮下注射による投与用の溶液として製剤化される。本開示は、とりわけ、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物（例えば、非晶質ポリペプチドまたは結晶化ポリペプチドを含む粉末形態）と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む、経口送達用のカプセル化ポリペプチド製剤及び懸濁液を提供する。本開示は、本明細書で開示するポリペプチド及びビタミンＥを含む製剤を経口投与することにより、ポリペプチドが首尾よく血流に送達されるという、驚くべき発見を含む。いかなる特定の科学理論にも拘束されることは望まないが、本開示はさらに、ビタミンＥ剤を含む本明細書で開示する製剤で経口投与するポリペプチドが、血流、リンパ系、及び胸管に効率的に送達されるという驚くべき発見を含む。様々な実施形態において、ビタミンＥ剤を含む本明細書で開示する製剤で経口投与するポリペプチドは、リンパ系を介し（例えば、少なくとも部分的には胸管を介し）血流に効率的に送達される。本開示は、ポリペプチド及びビタミンＥを含む本明細書で提供する製剤が、血流にポリペプチドを送達する全般的能力により汎用性を有するプラットフォームを提供するという認識を含む。したがって、当業者は、本開示（本実施例を含む）から、本明細書で提供する製剤が、製剤に含まれるポリペプチドを特定する必要なく有利かつ有用であることを理解するであろう。なおさらに、本開示は、本明細書で開示する製剤の様々な経口送達の予想外に有利な特性（改善された薬物動態学的特性、例えば、血流への送達速度及び／または半減期の増加を含む）を実証する。

【0003】

少なくとも１つの態様において、本開示は、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む、経口送達用のポリペプチド製剤を含み、任意選択で、（ｉ）ポリペプチド製剤は、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含むカプセル化ポリペプチド製剤であって、コアが、結晶化ポリペプチド組成物もしくは非晶質ポリペプチド組成物と、医薬的に許容される担体とを含む、カプセル化ポリペプチド製剤である、または（ｉｉ）ポリペプチド製剤は懸濁液製剤である。

【0004】

少なくとも１つの態様において、本開示は、ポリペプチドを対象の血流に送達する方法を含み、この方法は、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む、経口送達用のポリペプチド製剤を対象に経口投与することを含み、任意選択で、（ｉ）ポリペプチド製剤は、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含むカプセル化ポリペプチド製剤であって、コアが、結晶化ポリペプチド組成物もしくは非晶質ポリペプチド組成物と、医薬的に許容される担体とを含む、カプセル化ポリペプチド製剤である、または（ｉｉ）ポリペプチド製剤は懸濁液製剤である。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、リンパ系を介して血流に送達され、任意選択で、ポリペプチドは、胸管を介して血流に送達される。

【0005】

少なくとも１つの態様において、本開示は、対象の胸管またはリンパにポリペプチドを送達する方法を含み、この方法は、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む経口送達用のポリペプチド製剤を、対象に経口投与することを含み、任意選択で、（ｉ）ポリペプチド製剤は、コアと、医薬的に許容されるカプセルとを含むカプセル化ポリペプチド製剤であって、コアが、結晶化ポリペプチド組成物もしくは非晶質ポリペプチド組成物と、医薬的に許容される担体とを含む、カプセル化ポリペプチド製剤である、または（ｉｉ）ポリペプチド製剤は懸濁液製剤である。

【0006】

少なくとも１つの態様において、本開示は、経口送達用のカプセル化ポリペプチド製剤を生成する方法を含み、この方法は、（ｉ）非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物と、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含むコアを、カプセル内に封入することを含む。少なくとも１つの態様において、本開示は、経口送達用のポリペプチド懸濁液を生成する方法を含み、この方法は、（ｉ）結晶化ポリペプチド組成物または非晶質ポリペプチド組成物を、（ｉｉ）ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体に懸濁させることを含む。

【0007】

ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、（ｉ）治療用ポリペプチド、（ｉｉ）抗体薬剤またはそのフラグメント、（ｉｉｉ）モノクローナル抗体またはそのフラグメント、（ｉｖ）融合ポリペプチド、（ｖ）免疫グロブリン、（ｖｉ）酵素、あるいは（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）のいずれかのアナログ及び／または修飾形態を含み、任意選択で、ポリペプチドは、ペグ化、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、リン酸化、グリコシル化、糖化、硫酸化、マンノシル化、ニトロシル化、アシル化、パルミトイル化、プレニル化、脂肪酸、またはこれらの組合せのうちの１つ以上によって修飾される。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、抗体（例えば、抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブ）、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、ヒトグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）もしくはそのアナログ（例えば、合成アナログ、例えば、リラグルチド）、副甲状腺ホルモン（例えば、組換えヒト副甲状腺ホルモンアナログ、例えば、テリパラチド）、インスリン（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標））、リツキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、アガルシダーゼベータ、アガルシダーゼアルファ、イミグルセラーゼ、アリグルセラーゼ（ａｌｉｇｌｕｃｅｒａｓｅ）アルファ、ベラグルセラーゼアルファ、アルグルセラーゼ、セベリパーゼアルファ、ラロニダーゼ、イズルスルファーゼ、エロスルファーゼアルファ、ガルスルファーゼ、パンクレリパーゼ、サプロプテリン、エリグルスタット、ガルスルファーゼ、アスホターゼアルファ、ペグバリアーゼ、エラペガデマーゼ、サクロシダーゼ、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、第ＩＩＩ因子、第ＩＶ因子、第Ｖ因子、第ＶＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フォンウィルブランド因子、エタネルセプト、アフリベルセプト、リロナセプト、アレファセプト、ロミプロスチム、アバタセプト／ベラタセプト、及び／またはデニロイキン－ジフチトックス、あるいはこれらのアナログまたは誘導体から選択され、任意選択で、ポリペプチドは、天然、合成、または操作されたものである。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、約５０Ｄａ～約２５ｋＤａの間の分子量を有し、任意選択で、分子量は、約５０Ｄａ～約１ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約２ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約３ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約４ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約５ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約１０ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約１５ｋＤａの間、または約５０Ｄａ～約２０ｋＤａの間である。ある特定の実施形態において、ポリペプチドは、約２５ｋＤａ～約１，０００ｋＤａの間の分子量を有し、任意選択で、分子量は、約２５ｋＤａ～約５００ｋＤａの間、約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａの間、約１２０ｋＤａ～約２５０ｋＤａの間、または約１５０ｋＤａ～約３００ｋＤａの間である。ある特定の実施形態において、ポリペプチド製剤は、約１μｇ～約２，０００ｍｇのポリペプチドを含み、任意選択で、ポリペプチド製剤は、約１μｇ～約１，０００ｍｇ、約１μｇ～約５００ｍｇ、約１μｇ～約４００ｍｇ、約１μｇ～約３００ｍｇ、約１μｇ～約２００ｍｇ、約１μｇ～約１００ｍｇ、約１μｇ～約５０ｍｇ、約１μｇ～約２５ｍｇ、約１μｇ～約２０ｍｇ、約１μｇ～約１５ｍｇ、約１μｇ～約１０ｍｇ、約１μｇ～約５ｍｇ、約１μｇ～約１ｍｇ、約１μｇ～約５００μｇ、約１μｇ～約２５０μｇ、約１μｇ～約２００μｇ、約１μｇ～約１５０μｇ、約１μｇ～約１００μｇ、約１μｇ～約５０μｇ、約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約４００ｍｇ、約１ｍｇ～約３００ｍｇ、約１ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約１ｍｇ～約２５ｍｇのポリペプチドを含む。

【0008】

ある特定の実施形態において、ポリペプチド製剤は、約１ｍｇ～約２，０００ｍｇのビタミンＥ剤を含み、任意選択で、ポリペプチド製剤は、約１ｍｇ～約１，０００ｍｇ、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１ｍｇ～約４００ｍｇ、約１ｍｇ～約３００ｍｇ、約１ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約１００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、または約１ｍｇ～約２５ｍｇのビタミンＥ剤を含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチド製剤は、ポリペプチド製剤中のポリペプチドの量に対するビタミンＥ剤のモル過剰または重量過剰を含み、任意選択で、この過剰は、少なくとも１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、５００、または１，０００倍の倍数過剰である。

【0009】

ある特定の実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、２５ミクロン未満、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、１、または０．５ミクロン未満の平均粒径を有するポリペプチドの結晶を含み、例えば、任意選択で、ポリペプチドの結晶は、０．５ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均粒径を有するか、またはポリペプチドの結晶は、１ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均粒径を有する。ある特定の実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、２５ミクロン未満、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、１、または０．５ミクロン未満の平均粒径を有するポリペプチドの結晶を含み、任意選択で、ポリペプチドの粒子は、０．５ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均粒径を有するか、またはポリペプチドの粒子は、１ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均粒径を有する。

【0010】

ある特定の実施形態において、ポリペプチド組成物は凍結乾燥ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチド組成物はポリペプチドの微結晶を含む。ある特定の実施形態において、ポリペプチド組成物は、結晶化ポリペプチドを含む粉末を含む。

【0011】

ある特定の実施形態において、コアは粘性溶液である。ある特定の実施形態において、カプセルは、ハードシェルカプセルまたはソフトシェルカプセルであり、任意選択で、カプセルは、ゼラチンカプセルまたはＨＰＭＣカプセルである。ある特定の実施形態において、カプセルは腸への送達用に製剤化され、任意選択で、カプセルは胃及び／または腸への送達用に製剤化される。ある特定の実施形態において、カプセルは腸溶性コーティングを含む。

【0012】

ある特定の実施形態において、コアは、凝集低減剤、糖もしくは糖アルコール、多糖、安定剤、ヒアルロニダーゼ、緩衝剤、防腐剤、担体、抗酸化剤、キレート化剤、天然もしくは合成ポリマー、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、界面活性剤、増量剤、酸性化剤、注射部位の不快感を低減する成分、消泡剤、キレート剤、天然または合成ポリマー、凍結保護剤、凍結保護剤、界面活性剤、増量剤、酸性化剤、注射部位の不快感を軽減する成分、消泡剤、アルカリ化剤、ビヒクル、凝集阻害剤、可溶化剤、張度調節剤、及び安定化剤、及びこれらの組合せからなる群より選択される１つ以上の賦形剤または添加剤をさらに含む。ある特定の実施形態において、１つ以上の賦形剤または添加剤は、個々にまたは累積的に、０．１ｍＭ～約１，０００ｍＭの間、約０．１ｍＭ～約５００ｍＭの間、約０．１ｍＭ～約２００ｍＭの間、または約０．１ｍＭ～約１００ｍＭの間の濃度で存在する。ある特定の実施形態において、（ｉ）凝集低減剤（複数可）は、ニコチン酸、クエン酸カフェイン、ニコチン酸カフェイン、カフェイン、オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシド、及びｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトシド、任意選択で、これらとアルギニン、トリプトファン、ヒスチジン、プロリン、システイン、メチオニン、β－アラニン、グルタミン酸カリウム、アルギニンエチルエステル、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、ＥＧＴＡ（アミノポリカルボン酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ヒドロキシプロピルベータ（ＨＰ－ベータ）シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルガンマ（ＨＰ－ガンマ）シクロデキストリン、スルホブチルエーテル（ＳＢＥ）シクロデキストリン、ＴＭＡＯ（トリメチルアミンＮ－オキシド）トレハロース、エチレングリコール、ベタイン、キシリトール、ソルビトール、６－（Ｎ－（７－ニトロベンゾ－２－オキサ－１，３－ジアゾール－４－イル）アミノ）ヘキサン酸（ＮＢＤ－Ｘ）、メチルアセチルホスフェート（ＭＡＰ）、シトラコン酸無水物、ピロホスフェート、クエン酸塩、及びこれらの組合せのうちの１つ以上との組合せからなる群より選択され、（ｉｉ）張度調節剤（複数可）は、アルギニン、システイン、ヒスチジン、グリシン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、糖（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、グリセリン、もしくはマンニトール）、及びこれらの組合せからなる群より選択され、抗酸化剤（複数可）は、グリシン、リジン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ソルビトール、マンニトール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、トコフェロール、及びこれらの組合せからなる群より選択され、または（ｉｖ）凍結乾燥保護剤（複数可）は、スクロース、ラクトース、トレハロース、デキストラン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロース、及びマンニトール；アミノ酸（例えば、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、もしくはグリシン）；リオトロピック塩（例えば、硫酸マグネシウム）；プロピレングリコール、グリセロール、ポリ（エチレングリコール）、もしくはポリ（プロピレングリコール）；ゼラチン、デキストリン、化工デンプン、カルボキシメチルセルロース、及びこれらの組合せからなる群より選択される。

【0013】

定義
ａ、ａｎ、ｔｈｅ：本明細書で使用する場合、冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、冠詞の文法上の目的語の１つまたは複数（すなわち、少なくとも１つ）を指す。例として、「要素」は、ちょうど１つの要素の実施形態及び２つ以上の要素を含む実施形態を開示する。

【0014】

約：本明細書で使用する場合「約」という用語は、値に関して使用する際、言及された値と文脈において類似する値を指す。概して、文脈に精通する当業者であれば、その文脈における「約」が包含する適切な程度の変動を理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態において、「約」という用語は、言及された値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の一連の値を包含し得る。

【0015】

投与：本明細書で使用する場合、「投与」という用語は、典型的には、対象または系に、組成物を、その組成物そのものである薬剤またはその組成物に含まれる薬剤の送達を達成するために投与することを指す。

【0016】

薬剤：本明細書で使用する場合、「薬剤」という用語は、任意の化学的実体を指すことができ、これには限定されるものではないが、原子、分子、化合物、アミノ酸、ポリペプチド、ヌクレオチド、核酸、ポリペプチド複合体、液体、溶液、糖、多糖、脂質、またはこれらの組合せもしくは複合体のいずれか１つ以上が含まれる。

【0017】

アミノ酸：本明細書で使用する場合、最も広い意味において、例えば、１つ以上のペプチド結合の形成を介し、ポリペプチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸は、一般構造Ｈ_２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態において、アミノ酸は天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸は非天然アミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸はＤ－アミノ酸である。いくつかの実施形態において、アミノ酸はＬ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」とは、天然に存在するペプチドに一般的に見出される２０種の標準Ｌ－アミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」とは、合成により調製されたか天然の供給源から得られたかにかかわらず、標準アミノ酸以外のアミノ酸を指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸（ポリペプチド中のカルボキシ末端アミノ酸及び／またはアミノ末端アミノ酸を含む）は、典型的またはカノニカルなアミノ酸構造と比較して構造的な修飾を含み得る。例えば、いくつかの実施形態において、アミノ酸は、一般構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ペグ化、グリコシル化、リン酸化、及び／または置換（例えば、アミノ基、カルボン酸基、１つ以上のプロトン、及び／またはヒドロキシル基のもの）により修飾され得る。いくつかの実施形態において、このような修飾は、例えば、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの循環半減期を、他の点では同一の非修飾アミノ酸を含むものと比較して改変することができる。いくつかの実施形態において、このような修飾は、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの関連する活性を、他の点では同一の非修飾アミノ酸を含むものと比較して顕著に改変しない。文脈から明らかであろうように、いくつかの実施形態において、「アミノ酸」という用語は遊離アミノ酸を指すために使用することがあり、いくつかの実施形態ではポリペプチドのアミノ酸残基を指すために使用することがある。

【0018】

非晶質：本明細書で使用する場合、「非晶質」という用語は、概して、ポリペプチドの非結晶性固体形態を指し、場合によっては「非晶質固体」または「非晶質沈殿物」とも称され、これは典型的には、結晶性固体状態に特徴的な分子格子構造を有しない、または本質的に有しない。

【0019】

アナログ：本明細書で使用する場合、「アナログ」という用語は、１つ以上の特定の構造的特徴、エレメント、構成要素、または部分を基準物質と共有する物質を指す。典型的には、「アナログ」は、例えばコアまたはコンセンサス構造を共有し、基準物質と顕著な構造的類似性を示すが、ある特定の個別的な点では異なるところもある。いくつかの実施形態において、アナログは、例えば基準物質の化学的操作により、基準物質から生成することができる物質である。いくつかの実施形態において、アナログとは、基準物質を生成するプロセスと実質的に類似した（例えば、複数のステップを共有する）合成プロセスの実施を通じて生成することができる物質である。いくつかの実施形態において、アナログは、基準物質の生成に使用されるプロセスとは異なる合成プロセスの実施を通じて生成される、または生成することができる。

【0020】

抗体：本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、特定の抗原に特異的結合を付与するのに十分な１つ以上のカノニカルな免疫グロブリン配列エレメント（例えば、重鎖可変ドメイン、軽鎖可変ドメイン、及び／または１つ以上のＣＤＲ）を含むポリペプチドを指す。したがって、抗体という用語は、限定されるものではないが、ヒト抗体、非ヒト抗体、合成抗体、及び／または操作抗体、これらのフラグメント、ならびにこれらを含む薬剤を含む。抗体は、天然に存在する免疫グロブリン（例えば、抗原に反応する生物によって生成されるもの）である。合成、非天然、または操作抗体は、組換え操作、化学合成、または当業者に知られている他の人工系または方法論によって生成することができる。

【0021】

当技術分野で周知されているように、典型的なヒト免疫グロブリンは、２つの同一の重（Ｈ）鎖ポリペプチド（各約５０ｋＤ）及び２つの同一の軽（Ｌ）鎖ポリペプチド（各約２５ｋＤ）を含むおよそ１５０ｋＤの四量体であり、これらのポリペプチドは、互いに会合して一般的に「Ｙ字型」と称される構造を形成する。典型的には、各重鎖は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含む。重鎖定常ドメインは、３つのＣＨドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。「スイッチ」として知られている短い領域は、重鎖可変領域及び定常領域を接続する。「ヒンジ」は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを免疫グロブリンの残部に接続する。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含み、別の「スイッチ」によって互いに隔てられている。各可変ドメインは、「相補性決定領域」（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）として知られている３つの超可変ループと、４つのある程度インバリアントな「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）とを含む。各ＶＨ及びＶＬにおいて、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４に並んでいる。典型的には、重鎖及び／または軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用することができる結合部分を提供すると理解されている。定常ドメインは、抗体と、様々な免疫系細胞（例えば、エフェクター細胞及び／または細胞毒性を仲介する細胞）、受容体、ならびに補体系のエレメントとの結合を媒介することができる。重鎖及び軽鎖は１つのジスルフィド結合によって互いに結合し、２つの他のジスルフィド結合が重鎖のヒンジ領域を互いに接続して、二量体が互いに接続され四量体が形成される。天然の免疫ブログリンがフォールディングするとき、ＦＲ領域は、ドメインに構造フレームワークをもたらすベータシートを形成し、重鎖及び軽鎖の両方からのＣＤＲループ領域は三次元空間内で一緒になって、Ｙ構造の先端に位置する１つの超可変抗原結合部位が生じる。

【0022】

いくつかの実施形態において、抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、または多重特異性抗体（二重特異抗体を含む）である。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも１つの軽鎖単量体もしくは二量体、少なくとも１つの重鎖単量体もしくは二量体、少なくとも１つの重鎖－軽鎖二量体、または２つの重鎖単量体及び２つの軽鎖単量体を含む四量体を含む。さらに、「抗体」という用語は、（別段の明記がない限り、または文脈から明らかでない限り）抗体の構造的及び／または機能的特徴を利用する任意の当技術分野で知られているコンストラクトまたは形式を含むことができ、限定されるものではないが、これにはＺｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄ’フラグメント、Ｆｄフラグメント、単離されたＣＤＲまたはそのセット、単鎖抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、ポリペプチド－Ｆｃ融合物、単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲなどのシャークシングルドメイン抗体またはそのフラグメント）、ラクダ抗体、ラクダ化抗体、遮蔽抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））、アフィボディ、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体を含む）、低分子免疫医薬品（「ＳＭＩＰ（商標）」）、単鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）ミニボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）、アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒ（登録商標）、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、Ａｄｎｅｃｔｉｎ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｙ（登録商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎ、Ｆｙｎｏｍｅｒ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ（登録商標）、ＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）、ＣＡＲ、操作ＴＣＲ、及び上記のいずれかの抗原結合フラグメントが含まれる。

【0023】

様々な実施形態において、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）または可変ドメインとして当業者に認識されている１つ以上の構造的エレメントを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、共有結合により修飾された（「結合体化された」）抗体（例えば、特定の抗原に特異的結合を付与するのに十分な１つ以上のカノニカルな免疫グロブリン配列エレメントを含むポリペプチドを含む抗体であって、ポリペプチドが治療剤、検出可能部分、別のポリペプチド、糖鎖、またはポリエチレングリコール分子のうちの１つ以上と共有結合している抗体）であり得る。いくつかの実施形態において、抗体の配列エレメントは、当技術分野で知られているように、ヒト化、霊長類化、キメラ化などがなされている。

【0024】

重鎖定常ドメインを含む抗体は、限定されるものではないが、重鎖定常ドメインアミノ酸配列（例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、及びミュー（μ））に基づいて、ＩｇＡ、分泌ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＭを含む任意の既知のクラスの抗体であり得る。ＩｇＧサブクラスも当業者に周知されており、限定されるものではないが、これにはヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４が含まれる。「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体のクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。本明細書で使用する場合、「軽鎖」は、軽鎖定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、別個のタイプ（例えば、カッパ（κ）またはラムダ（λ））であり得る。いくつかの実施形態において、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類、またはヒト免疫グロブリンに特徴的な１つ以上の定常領域配列を有する。天然に産生される免疫グロブリンは、典型的にはＣＨ２ドメイン上でグリコシル化されている。当技術分野で知られているように、Ｆｃ受容体におけるＦｃ領域の親和性／及び他の結合属性は、グリコシル化または他の修飾を通じて調節することができる。いくつかの実施形態において、抗体は、天然に産生された場合に有するであろう共有結合的修飾（例えば、グリカンの付着）が欠如している場合がある。いくつかの実施形態において、本発明に従って産生及び／または利用される抗体は、グリコシル化Ｆｃドメイン（修飾または操作されたこのようなグリコシル化を伴うＦｃドメインを含む）を含む。

【0025】

抗体フラグメント：本明細書で使用する場合、「抗体フラグメント」とは、本明細書に記載の抗体または抗体薬剤の部分を指し、典型的には、抗原結合部分またはその可変領域を含む部分を指す。抗体フラグメントは、任意の手段により生成することができる。例えば、いくつかの実施形態において、抗体フラグメントは、インタクトな抗体または抗体薬剤のフラグメント化により、酵素的または化学的に生成することができる。代替的に、いくつかの実施形態において、抗体フラグメントは、組換えにより（すなわち、操作された核酸配列の発現により）生成することができる。いくつかの実施形態において、抗体フラグメントは、全体的または部分的に合成により生成することができる。いくつかの実施形態において、抗体フラグメント（詳細には抗原結合抗体フラグメント）は、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０アミノ酸またはそれ以上の長さ、いくつかの実施形態では少なくとも約２００アミノ酸の長さを有し得る。

【0026】

～に関連する：本明細書でこの用語を使用する場合、２つの事象または実体が互いに「関連する」のは、一方の事象または実体の存在、レベル、及び／または形態が他方と相互関係を有する場合である。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝産物、微生物など）が特定の疾患、障害、または状態に関連すると考えられるのは、その存在、レベル、及び／または形態が（例えば、関係する集団全体における）この疾患、障害、または状態の発生及び／または感受性と相互関係を有する場合である。いくつかの実施形態において、２つ以上の実体が互いに物理的に「関連」するのは、これらの実体が直接的または間接的に相互作用して、互いに物理的に近接している及び／またはその状態を保っている場合である。いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連している２つ以上の実体は互いに共有結合しており、いくつかの実施形態において、互いに物理的に関連している２つ以上の実体は互いに共有結合しているのではなく、例えば水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水相互作用、磁気、及びその組合せによって非共有結合的に関連している。

【0027】

～の間（Ｂｅｔｗｅｅｎ）または～から（Ｆｒｏｍ）：本明細書で使用する場合、「～の間」という用語は、示された上方及び下方の、または第１及び第２の境界（ｂｏｕｎｄａｒｙ）（または「境界（ｂｏｕｎｄ）」）の間に入る（境界を含む）内容を指す。同様に、「～から」という用語は、値の範囲の文脈で使用される場合、その範囲が、示された上限及び下限、または第１及び第２の境界の間に位置する内容（境界を含む）を含むことを示す。

【0028】

バイオアベイラビリティ：本明細書で使用する場合、「バイオアベイラビリティ」という用語は、ｉｎ ｖｉｖｏ対象に投与される物質（例えば、抗体または抗体フラグメントなどのポリペプチド）が、その物質が標的とする組織（例えば、血流及び／または血漿）で利用可能になる程度を指すことができる。バイオアベイラビリティとは、ｉｎ ｖｉｖｏの対象に投与された物質が、その対象の血液に送達される程度を指すことができる。バイオアベイラビリティとは、ある物質が対象内で機能を発揮する能力を指すことができる。バイオアベイラビリティは、複数の方法で（例えば、血流または血漿中の物質の濃度として）測定することができる。いくつかの実施形態において、バイオアベイラビリティは、例えば、時間の関数としての血漿濃度のプロットにおける「曲線下面積」（ＡＵＣ）（ゼロ時間から血漿濃度がベースラインレベルに戻る時間までの血漿濃度曲線下面積）を比較することによって評価することができる。ＡＵＣは、例えば線形台形規則を用いて算出することができる。「ＡＵＣ０－ｔ」とは、ゼロ時間からｔ時間後まで、例えばベースラインに到達する時間までの血漿濃度曲線下面積を指す。

【0029】

がん：本明細書で使用する場合、「がん」という用語は、細胞が比較的異常な、制御不能な、及び／または自律的な増殖を示す疾患、障害、または状態を指し、そのため細胞増殖の制御が顕著に失われることを特徴とする増殖速度の異常な上昇及び／または異常な成長表現型を示す。いくつかの実施形態において、がんは、１つ以上の腫瘍を含み得る。いくつかの実施形態において、がんは、前がん性（例えば、良性）、悪性、前転移性、転移性、及び／または非転移性である細胞であり得る、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、がんは、固形腫瘍であり得る、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、がんは、血液腫瘍であり得る、またはそれを含み得る。

【0030】

操作された：本明細書で使用する場合、「操作された」という用語は、人手によって操作されたという態様を指す。例えば、ポリヌクレオチドが「操作された」とみなされるのは、自然界ではその順序で結合していない２つ以上の配列が、人手によって操作され、操作されたポリヌクレオチド内で互いに結合している場合である。当業者であれば、「操作された」核酸またはアミノ酸配列が組換え核酸またはアミノ酸配列であり得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、操作されたポリヌクレオチドは、自然界で第１の配列に作用可能に結合していることは認められるが、自然界で第２の配列に作用可能に結合していることは認められないコード配列及び／または調節配列を含み、これは操作されたポリヌクレオチド中に存在し、人手によって第２の配列と作用可能に結合している。いくつかの実施形態において、細胞または生物は、その遺伝情報が改変されるように処理された場合、「操作された」（例えば、形質転換、交配、体細胞ハイブリダイゼーション、形質移入、形質導入、もしくは他の機構により、それまで存在しなかった新たな遺伝子材料が導入された、または例えば、置換、欠失、もしくは交配により、それまで存在していた遺伝子材料が改変または除去されている）とみなされる。これは慣例であり、当業者は理解していることであるが、操作されたポリヌクレオチドまたは細胞の、完全または不完全な後代またはコピーは、直接の操作が先の実体のものであったとしても、典型的には依然として「操作された」と称される。

【0031】

賦形剤：本明細書で使用する場合、「賦形剤」とは、例えば、所望の粘性または安定化効果を提供するまたはそれに寄与するために、医薬組成物中に含まれてもよい非治療剤を指す。いくつかの実施形態において、好適な医薬賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。

【0032】

「改善する」、「増加させる」、「阻害する」、または「低減する」：本明細書で使用する場合、「改善する」、「増加させる」、「阻害する」、及び「低減する」、ならびにこれらの文法的等価物は、基準からの定性的または定量的な差異を示す。

【0033】

医薬的に許容される：本明細書で使用する場合、本明細書で開示する組成物の製剤化のための１つ以上、または全ての構成要素（複数可）に適用される「医薬的に許容される」という用語は、各構成要素が組成物の他の構成要素と適合性でなければならず、そのレシピエントにとって有害であってはならないことを意味する。

【0034】

医薬組成物または製剤：本明細書で使用する場合、「医薬組成物」、または「製剤」という用語は、治療剤が１つ以上の医薬的に許容される担体とともに製剤化された組成物を指す。

【0035】

ポリペプチド：本明細書で使用する場合、「ポリペプチド」とは、２つ以上のアミノ酸のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、自然界に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、自然界に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、人手の行為によって設計及び／または産生されるという点において操作されているアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはその両方であるか、またはそれらを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみまたは非天然アミノ酸のみであるか、またはそれらを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸、Ｌ－アミノ酸、またはその両方を含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸のみを含み得る。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、例えば、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、非末端アミノ酸、またはこれらの任意の組合せにおいて、１つ以上のペンダント基または他の修飾（例えば、１つ以上のアミノ酸側鎖）を含み得る。いくつかの実施形態において、このようなペンダント基または修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、リン酸化、グリコシル化、糖化、硫酸化、マンノシル化、ニトロシル化、アシル化、パルミトイル化、プレニル化、ペグ化など（これらの組合せを含む）から選択することができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドは環状であり得る、及び／または環状部分を含み得る。

【0036】

いくつかの実施形態において、「ポリペプチド」という用語は、基準ポリペプチド、活性、または構造の名称に付加して、関連する活性または構造を共有するポリペプチドのクラスを示すことがある。このようなクラスについて、本明細書は、アミノ酸配列及び／または機能が知られているクラス内の例示的なポリペプチドを提供し、及び／または当業者はそれらを認識するであろう。いくつかの実施形態において、ポリペプチドクラスまたはファミリーのメンバーは、そのクラスの基準ポリペプチドに対し、顕著な配列相同性もしくは同一性を示す、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列エレメント）を共有する、及び／または共通の活性（いくつかの実施形態では、同等のレベルもしくは指定された範囲内での活性）を共有する。例えば、いくつかの実施形態において、メンバーポリペプチドは、基準ポリペプチドとの少なくとも約３０～４０％、しばしば約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の全体的な配列相同性の程度を示し、及び／または非常に高い配列同一性、しばしば９０％超、もしくは９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％超を示す少なくとも１つの領域（例えば、いくつかの実施形態では特徴的な配列エレメントであるか、またはそれを含んでもよい保存領域）を含む。このような保存領域は、通常、少なくとも３～４個、場合によって最大２０個またはそれ以上のアミノ酸を包含し、いくつかの実施形態において、保存領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、またはそれ以上の連続したアミノ酸の少なくとも１つのストレッチを包含する。いくつかの実施形態において、関連するポリペプチドは、親ポリペプチドのフラグメントであり得る、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、有用なポリペプチドは、複数のフラグメントであり得る、またはそれらを含み得、それらの各々は、関心対象のポリペプチドがその親ポリペプチドの誘導体であるように、同じ親ポリペプチド内で、関心対象のポリペプチド内で見られるのとは互いに異なる空間的配置で見られる（例えば、親内で直接結合しているフラグメントが、関心対象のポリペプチド内で空間的に離れていてもよく、その逆であってもよく、及び／またはフラグメントが関心対象のポリペプチド内で親と異なる順序で存在していてもよい）。

【0037】

基準：本明細書で使用する場合、「基準」とは、比較を実施する標準または対照を指す。例えば、いくつかの実施形態において、薬剤、試料、配列、対象、動物、もしくは個体、またはそれらの集団、またはそれらを代表する測定値もしくは特性は、基準、薬剤、試料、配列、対象、動物、もしくは個体、またはそれらの集団、またはそれらを代表する測定値もしくは特性と比較される。いくつかの実施形態において、基準は測定値である。いくつかの実施形態において、基準は、確立された標準値または期待値である。いくつかの実施形態において、基準は歴史的基準である。基準は、定量的な場合も定性的な場合もある。典型的には、当業者には理解されるであろうように、基準及び基準と比較される値は、同等の条件下での測定値に相当する。当業者であれば、依拠及び／または比較を正当化するのに十分な類似点が存在する場合に理解するであろう。いくつかの実施形態において、適切な基準は、例えば、１つ以上の特定の変数（例えば、薬剤または状態の有無）、またはそれらを代表する測定値または特性を評価する目的で、当業者であれば同等と認識するであろう条件下における、薬剤、試料、配列、対象、動物、もしくは個体、またはそれらの集団であり得る。

【0038】

低分子：本明細書で使用する場合、「低分子」という用語は、低分子量の有機及び／または無機化合物を意味する。概して、「低分子」とは、約５キロダルトン（ｋＤ）以下のサイズの分子のことである。いくつかの実施形態において、低分子は、約４ｋＤ、３ｋＤ、約２ｋＤ、または約１ｋＤ未満である。いくつかの実施形態において、低分子は、約８００ダルトン（Ｄ）未満、約６００ダルトン未満、約５００ダルトン未満、約４００ダルトン未満、約３００ダルトン未満、約２００ダルトン未満、または約１００ダルトン未満である。いくつかの実施形態において、低分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、約１０００ｇ／ｍｏｌ未満、約８００ｇ／ｍｏｌ未満、または約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。いくつかの実施形態において、低分子はポリマーではない。いくつかの実施形態において、低分子はポリマー部分を含まない。いくつかの実施形態において、低分子はポリペプチドではない、及び／またはポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態において、低分子は、ポリヌクレオチドではない、及び／またはそれを含まない（例えば、オリゴヌクレオチドではない）。いくつかの実施形態において、低分子は多糖ではない、及び／またはそれを含まない（例えば、いくつかの実施形態において、低分子は、糖タンパク質、プロテオグリカン、糖脂質などではない）。いくつかの実施形態において、低分子は脂質ではない。いくつかの実施形態において、低分子は調節剤である（例えば、阻害剤または活性化剤である）。いくつかの実施形態において、低分子は生物学的に活性である。いくつかの実施形態において、低分子は検出可能である（例えば、少なくとも１つの検出可能部分を含む）。いくつかの実施形態において、低分子は治療剤である。

【0039】

対象：本明細書で使用する場合、「対象」という用語は、生物、典型的には哺乳類（例えば、ヒト、ラット、またはマウス）を指す。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態を患っている。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態に感受性を有する。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、状態の１つ以上の症状または特徴を示す。いくつかの実施形態において、対象は疾患、障害、または状態を患っていない。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態のいかなる症状も特徴も示さない。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態に対する感受性またはリスクに特徴的な１つ以上の特徴を有する。いくつかの実施形態において、対象は、疾患、障害、または状態について検査された、及び／または治療が投与された対象である。場合によっては、ヒト対象は「患者」または「個体」と互換的に称されることがある。対象が関連する疾患、障害、または状態の治療に関連する薬剤を投与された対象は、その薬剤を必要とする対象、すなわち、それを必要とする対象と称することができる。

【0040】

治療剤：本明細書で使用する場合、「治療剤」という用語は、対象に投与したときに所望の薬理学的効果を引き出す任意の薬剤を指す。いくつかの実施形態において、薬剤が適切な集団全体において統計的に有意な効果を示す場合、その薬剤は治療剤とみなされる。いくつかの実施形態において、適切な集団は、モデル生物の集団またはヒトの集団であり得る。いくつかの実施形態において、適切な集団は、ある特定の年齢層、性別、遺伝的背景、既存の臨床状態などの様々な基準によって定義することができる。いくつかの実施形態において、治療薬は、疾患、障害、または状態の治療に使用することができる物質である。いくつかの実施形態において、「治療剤」とは、ヒトへの投与用に市販され得る前に政府機関によって承認された、または承認を要する薬剤である。いくつかの実施形態において、「治療剤」とは、ヒトへの投与に医学的処方箋を要する薬剤である。

【0041】

治療有効量：本明細書で使用する場合、「治療有効量」とは、投与に対し所望の効果をもたらす量を指す。いくつかの実施形態において、この用語は、ある疾患、障害、及び／または状態を患うまたはそれに感受性を有する集団に投与する場合に、この疾患、障害、及び／または状態を治療するのに十分である量を指す。いくつかの実施形態において、治療有効量は、疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状に対し、その発生及び／または重症度を低減する量、及び／またはその発症を遅延させる量である。当業者であれば、治療有効量が、必ずしも全ての特定の治療を行う個体において治療の成功を達成するとは限らないことを理解するであろう。むしろ、治療有効量とは、このような治療を必要とする患者に投与した場合に、意義ある数の対象において特定の所望される薬理学的応答をもたらす量であり得る。いくつかの実施形態において、治療有効量に対する言及は、１つ以上の特定の組織（例えば、疾患、障害、もしくは状態により罹患した組織）または体液（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙液、尿など）において測定されるような量に対する言及であり得る。当業者であれば、いくつかの実施形態において、治療有効量の特定の薬剤または療法は、単回用量で製剤化及び／または投与することができることを理解するであろう。いくつかの実施形態において、治療上有効な薬剤は、例えば、投与レジメンの一部として、複数の用量で製剤化及び／または投与することができる。

【0042】

治療：本明細書で使用する場合、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」）という用語は、特定の疾患、障害、または状態の１つ以上の症状、特徴、及び／または原因の部分的または完全な軽減、改善、緩和、阻害、発症遅延、重症度の低減、及び／または発生の低減を行う、あるいは任意のこのような結果を達成する目的で投与される療法の投与を指す。いくつかの実施形態において、このような治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態の徴候を示さない対象のもの、及び／またはその疾患、障害、及び／または状態の早期の徴候のみを示す対象の治療であり得る。代替的または追加的に、このような治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の確立した徴候を示す対象の治療であり得る。いくつかの実施形態において、治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態を患っていると診断された対象の治療であり得る。いくつかの実施形態において、治療は、関連する疾患、障害、または状態の発生リスクの増加と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが知られている対象の治療であり得る。

【図面の簡単な説明】

【0043】

【図1】乾燥前（左パネル）及び乾燥後（右パネル）のトラスツズマブの微粒子を示す４つの画像のセットである。

【0044】

【図2】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0045】

【図3】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0046】

【図4】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0047】

【図5】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0048】

【図6】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0049】

【図7】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0050】

【図8】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0051】

【図9】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたリラグルチドの微粒子を示す画像である。

【0052】

【図10】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0053】

【図11】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0054】

【図12】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0055】

【図13】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0056】

【図14】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0057】

【図15】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0058】

【図16】当業者に知られている典型的な結晶化アプローチによって生成されたインスリンの微粒子を示す画像である。

【0059】

【図17】リラグルチドの標準治療製剤を皮下投与した後、または本明細書で提供する形成物を経口投与した後のリラグルチドの経時的な血漿濃度を示すグラフである。

【0060】

【図18】リラグルチドの標準治療製剤を皮下投与した後、または本明細書で提供する形成物を経口投与した後のリラグルチドの経時的な血漿濃度を示すグラフの対である。

【0061】

【図19】リラグルチドの標準治療製剤を皮下投与した後、または本明細書で提供する形成物を経口投与した後のリラグルチドの経時的な血漿濃度を示すグラフの対である。

【0062】

【図20】トラスツズマブの標準治療製剤を皮下投与した後、または本明細書で提供する形成物を経口投与した後のトラスツズマブの経時的な血漿濃度を示すグラフである。

【0063】

【図21】トラスツズマブの標準治療製剤を皮下投与した後、または本明細書で提供する形成物を経口投与した後のトラスツズマブの経時的な血漿濃度を示すグラフである。

【0064】

【図22】インスリンの標準治療製剤を皮下投与した後、または本明細書で提供する形成物を経口投与した後のインスリンの経時的な血漿濃度を示すグラフである。

【0065】

【図23】トラスツズマブの標準治療製剤を皮下投与した後、またはビタミンＥ、ココナッツ油、タラ肝油、もしくはギーを含む製剤を経口投与した後のトラスツズマブの経時的な血漿濃度を示すグラフである。

【0066】

【図24】ニュージーランドホワイトウサギにリラグルチド経口製剤を投与した後のリラグルチドの血漿濃度を示すグラフである。

【0067】

【図25】ニュージーランドホワイトウサギにリラグルチド静注製剤を投与した後のリラグルチドの血漿濃度を示すグラフである。

【0068】

【図26】ニュージーランドホワイトウサギにリラグルチド皮下製剤を投与した後のリラグルチドの血漿濃度を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0069】

製薬業界は、ポリペプチド治療薬を上市するために多大な努力を費やしてきた。臨床試験には、１００超の状態の治療のために数百種ものポリペプチドが使用されている。しかし、ポリペプチドの臨床使用は、その送達の成功を妨げる多くの障害がネックとなっている。ポリペプチド送達のための製剤の開発において考慮される要因に含まれるものとして、バイオアベイラビリティ、安定性、及び治療有効性がある。多くのポリペプチドは、皮下注射、筋肉注射、及び静脈注射などの非経口経路により投与される。本開示は、経口投与が、ポリペプチド治療薬の注射よりも、例えば、患者の許容、家庭での使用、及び長期レジメンに対する遵守に関して、概して好ましいという認識を含む。とりわけこれらの利点により、ポリペプチド製剤の経口製剤は、非経口製剤とは異なる、及び／または非経口製剤よりも大きな治療的及び商業的価値を有すると考えられる。

【0070】

ポリペプチドの経口投与を達成するために多大な努力が払われているにもかかわらず、非経口送達は、依然としてポリペプチド治療薬において主要な投与様式である。経口投与は、低分子の投与に関しては標準的であり得るものの、ポリペプチドの経口投与が困難であることは、当業者に認識されている問題である。ポリペプチドの経口投与を非常に困難にしている要因に含まれるものとして、本質的な物理化学的及び生物学的特性があり、これには分子サイズが大きいこと、胃腸膜を浸透しにくいこと、胃液の低ｐＨにより安定性が低いこと、及びタンパク質分解酵素に感受性を有することが含まれる。様々な試験において、経口投与されたポリペプチドが１％未満のバイオアベイラビリティを示すことが観察されたが、治療有効性を得るために好ましいと考えられるのは、より高いレベル、場合によっては少なくとも３０％～５０％の目標バイオアベイラビリティである。ポリペプチドの安定性及び性能を改善するための努力としては、ポリペプチドの化学修飾（例えば、ＰＥＧ化、高グリコシル化、及びマンノシル化）、またはコロイド状担体（微粒子、ナノ粒子、リポソーム、カーボンナノチューブ、及びミセルを含む）の使用が挙げられる。このような努力にもかかわらず、ポリペプチドの非経口投与が標準として存続してきた。本開示は、経口投与用のポリペプチドの製剤化という長年の困難に対する解決策を提供するものである。

【0071】

本開示の様々な組成物は、医薬的に許容されるカプセル内にコアを含み得る。様々な実施形態において、コアは、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む。

【0072】

ビタミンＥ
本明細書で使用する場合、ビタミンＥ剤とは、対象に投与されると、その対象にビタミンＥ活性部分を送達する化合物または実体を指す。いくつかの実施形態において、ビタミンＥ剤は、塩、共結晶、遊離酸もしくは塩基、溶媒和物、エステル、水和物、多形体、または無水形態として提供及び／または利用される。いくつかの実施形態において、ビタミンＥ剤は、特定の立体異性体形態で、または立体異性体形態の混合物として提供及び／または利用される。いくつかの実施形態において、ビタミンＥ剤はビタミンＥのプロドラッグであり、ビタミンＥは、治療効果が意図された代謝産物である。

【0073】

ビタミンＥ剤（本明細書では互換的にビタミンＥと称される）は、１つ以上のビタミンＥトコフェロール及び／または１つ以上のビタミンＥトコトリエノールから選択される１つ以上のビタミンＥトコールであり得る、またはそれを含み得る。天然ビタミンＥトコールには、２つのシリーズの化合物：飽和側鎖を有するトコフェロール及び不飽和側鎖を有するトコトリエノールが含まれる。トコフェロール及びトコトリエノールは類似する化学構造を有し、この構造は、６－クロマノール環の２位で結合する長いイソプレノイド側鎖を特徴とする。トコフェロールは、クロマノール環及び１６炭素のテールを含む。トコトリエノールは、飽和イソプレノイドＣ１６側鎖ではなくファルネシルを有する点でトコフェロールと異なる。ビタミンＥトコール（例えば、トコフェロール及びトコトリエノール）は、クロマノール環のメチル化パターンに基づいて、α、β、γ、またはδとして命名される。β－及びγ－は、それぞれクロマノール環の５位及び８位、または７位及び８位でジメチル化されている。α－トコールはクロマノール環の５位、７位、及び８位でトリメチル化されており、δ－はクロマノール環の８位でモノメチル化されている。ビタミンＥ剤としては、α－、β－、γ－もしくはδ－トコール、またはこれらの混合物を挙げることができる。例えば、ビタミンＥトコフェロールとしては、トコフェロールα、β、γ、及びδのいずれか１つ以上、ならびにこれらの誘導体を挙げることができる。ビタミンＥトコトリエノールとしては、トコトリエノールα、β、γ、及びδのいずれか１つ以上、ならびにこれらの誘導体を挙げることができる。これらのビタミンＥアルコールのうち、α－トコフェロール及びγ－トコフェロールは自然界に最も多く存在する。ある特定の市販のビタミンＥサプリメントは、一般的にα－トコフェロールを含み得る。ある特定の市販のビタミンＥサプリメントは、一般的に様々な特定の構造を有するビタミンＥトコールの混合物を含み得る。

【0074】

ビタミンＥ剤は、ビタミンＥ剤の全ての立体異性体（例えば、エナンチオマーまたはジアステレオマー）形態及び全ての幾何または立体構造異性体形態を含み得る。例えば、ビタミンＥ剤の各立体中心のＲ及びＳ配置が本開示の一部として企図されている。そのため、ビタミンＥ剤の単一の立体化学異性体、ならびにエナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何的（または立体構造的）混合物は、本開示の範囲内である。例えば、ビタミンＥ剤は、ビタミンＥトコフェロールまたはトコトリエノールの立体異性体であり得る、またはそれを含み得る。トコフェロール分子は、Ｃ－２、Ｃ－４’、及びＣ－８’に少なくとも３つの立体中心を有し、これにより少なくとも８つの立体異性体が可能となる。例えば、ビタミンＥ剤は、ＲＲＲ、ＲＲＳ、ＲＳＳ、ＳＳＳ、ＲＳＲ、ＳＲＳ、ＳＲＲ、及びＳＳＲから選択されるα－トコフェロールの立体異性体であり得る、またはそれを含み得る。様々な実施形態において、ＲＲＲ立体異性体は天然に存在する。いくつかの実施形態において、ビタミンＥ剤は、１つ以上の立体異性体の混合物、例えば、１つ以上のα－トコフェロール立体異性体（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８つの立体異性体）を含む。天然のトコフェロールがＲＲＲ－構成で存在するのに対し、合成形態は８つの異なる立体異性体を含み得、ａｌｌ－ｒａｃ－アルファ－トコフェロールと呼ばれる。トコトリエノールはＣ－２にのみ立体中心を有し、天然に存在するトコトリエノールはもっぱら２Ｒ，３’Ｅ，７’Ｅ構造のみにある。

【0075】

ビタミンＥ剤には、ビタミンＥトコールの誘導体及び／またはアナログが含まれる。ビタミンＥは様々な修飾を、例えば、ビタミンＥトコールのクロマン部分に適用することができる。ビタミンＥトコールの誘導体の例としては、２－、５－、または６－置換クロマン誘導体が挙げられる。ビタミンＥトコールは、ペグ部分（ペグ化）または酸（例えば、ヒアルロン酸）などの薬剤との結合体化によって誘導体化することができる。

【0076】

ビタミンＥ剤は、ビタミンＥトコールのプロドラッグ、例えば、ビタミンＥトコールのエステル（例えば、酢酸、コハク酸、またはニコチン酸のエステル）であり得る、またはそれを含み得る。ある特定の実施形態において、ビタミンＥ剤のエステルは、当技術分野で知られている従来の方法を用いて、ビタミンＥ剤のフェノール形態から調製される。トコフェリルエステル（例えば、酢酸アルファ－トコフェリル、コハク酸トコフェリル、ニコチン酸トコフェリル、リノール酸トコフェリル、リン酸α－トコフェリルなど）は、酸化に対する感受性の低下を示し得る。トコフェロールエステルは、腸内で（例えば、酵素エステラーゼにより）脱エステル化され、遊離トコフェロールとして吸収される。ビタミンＥ剤は、非エステル化ビタミンＥトコールであり得る、またはそれを含み得る。様々な実施形態において、遊離及びエステル化ビタミンＥトコールは同等のバイオアベイラビリティを有すると理解されている。

【0077】

本開示は、例えば人体により、吸収されるビタミンＥ剤を含む。本開示は、ビタミンＥの液体及び固体形態の両方を含む。ビタミンＥの例示的な固体形態は、白色～薄黄褐色の粒状粉末であり得る。ビタミンＥの液体形態は、水に不溶性、アルコールに可溶性、及び／または混和性（例えば、エーテル、アセトン、植物油、及び／またはクロロホルムに対し）であり得る。ビタミンＥの様々な液体形態は、透明、黄色～褐色を帯びた赤色、及び／または粘性の油である。本開示は、脂溶性のビタミンＥ剤を含む。例えば、様々な実施形態において、コハク酸アルファトコフェリルなどの固体形態は、水に不溶性であるが、脂肪（例えば、植物油）には可溶性であり、様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド及び／またはポリペプチド粒子をコーティングすることができる。

【0078】

ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体としては、ビタミンＥ剤（例えば、脂溶性ビタミンＥ剤）及び油を挙げることができる。様々な実施形態において、ビタミンＥは担体に加えて栄養補助食品として機能することができる。様々な実施形態において、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体（例えば、天然に存在するかまたは添加されたビタミンＥ剤を含む油）は、ビタミンＥ剤及び植物由来の油である油を含み得、任意選択で、植物由来の油は、麦芽油、ヘーゼルナッツ油、カノーラ／ナタネ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、アーモンド油、グレープシード油、ヒマワリ種子仁、アーモンド、アーモンドバター、麦芽、カノーラ油、パーム油、ピーナッツ油、マーガリン、タブ、ヘーゼルナッツ、コーン油、オリーブ油、大豆油、松の実、ピーナッツバター、及びピーナッツから選択される。このようなある特定の組成物におけるビタミンＥの例示的濃度を表１に示す。示されるこれらの濃度は、単に例示的なものであり、場合によっては、典型的または天然に存在するビタミンＥ剤の量を反映するものの、本開示は、例えば、ビタミンＥを加えることにより、結晶化または非晶質ポリペプチドの懸濁液またはカプセル化製剤に使用するための本明細書で開示するビタミンＥの量または濃度を達成するように、油組成物におけるビタミンＥ剤の量が変更されてもよいことを含む。

【表1】

【0079】

医薬的に許容される担体
本開示の製剤は、ビタミンＥ剤であるまたはそれを含む医薬的に許容される担体を含み得る。本明細書で使用する場合、「医薬的に許容される担体」という用語は、薬剤（例えば、医薬薬剤）の製剤化を容易にし、薬剤のバイオアベイラビリティを修飾し、または対象の１つの器官または部分から別の器官または部分への薬剤の輸送を容易にする、医薬的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒カプセル化材料を指す。医薬的に許容される担体として機能し得る材料のいくつかの例としては、糖、例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン；セルロース及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、バージンココナッツ油、アーモンド油、麦芽油、任意の食用油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及びダイズ油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝液；ポリエステル、ポリカーボネート、及び／またはポリ酸無水物；ならびに医薬製剤で用いられる他の無毒の適合性物質が挙げられる。賦形剤は、例えば、所望の粘性または安定化効果を提供するまたはそれに寄与するために、医薬組成物中に含まれてもよい非治療剤を含むことができる。いくつかの実施形態において、好適な医薬賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、ココアバター、坐薬ワックス、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。様々な実施形態において、本開示のポリペプチド製剤（例えば、ポリペプチド製剤または懸濁液のカプセル化コア）は、１つ以上の医薬的に許容される担体をさらに含む。様々な特定の実施形態において、１つ以上の医薬的に許容される担体は、凝集低減剤、糖もしくは糖アルコール、多糖、安定剤、ヒアルロニダーゼ、緩衝剤、防腐剤、担体、抗酸化剤、キレート化剤、天然もしくは合成ポリマー、凍結保護剤、凍結乾燥保護剤、界面活性剤、増量剤、酸性化剤、注射部位の不快感を低減する成分、消泡剤、キレート剤、天然または合成ポリマー、凍結保護剤、凍結保護剤、界面活性剤、増量剤、酸性化剤、注射部位の不快感を軽減する成分、消泡剤、アルカリ化剤、ビヒクル、凝集阻害剤、可溶化剤、張度調節剤、及び安定化剤、及びこれらの組合せからなる群より選択される。

【0080】

様々な実施形態において、凝集低減剤は、ニコチン酸、クエン酸カフェイン、ニコチン酸カフェイン、カフェイン、オクチル－β－Ｄ－グルコピラノシド、及びｎ－ドデシル－β－Ｄ－マルトシド、任意選択で、これらとアルギニン、トリプトファン、ヒスチジン、プロリン、システイン、メチオニン、β－アラニン、グルタミン酸カリウム、アルギニンエチルエステル、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ＤＴＰＡ（ジエチレントリアミン五酢酸）、ＥＧＴＡ（アミノポリカルボン酸）、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、ヒドロキシプロピルベータ（ＨＰ－ベータ）シクロデキストリン、ヒドロキシプロピルガンマ（ＨＰ－ガンマ）シクロデキストリン、スルホブチルエーテル（ＳＢＥ）シクロデキストリン、ＴＭＡＯ（トリメチルアミンＮ－オキシド）トレハロース、エチレングリコール、ベタイン、キシリトール、ソルビトール、６－（Ｎ－（７－ニトロベンゾ－２－オキサ－１，３－ジアゾール－４－イル）アミノ）ヘキサン酸（ＮＢＤ－Ｘ）、メチルアセチルホスフェート（ＭＡＰ）、シトラコン酸無水物、ピロホスフェート、クエン酸塩、及びこれらの組合せのうちの１つ以上との組合せのうちの１つ以上を含み得る。

【0081】

様々な実施形態において、張度調節剤は、アルギニン、システイン、ヒスチジン、グリシン、塩化ナトリウム、塩化カリウム、クエン酸ナトリウム、糖、例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、グリセリン、またはマンニトール、及びこれらの組合せのうちの１つ以上を含み得る。

【0082】

様々な実施形態において、抗酸化剤は、グリシン、リジン、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ソルビトール、マンニトール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、二酸化硫黄、トコフェロール、及びこれらの組合せのうちの１つ以上を含み得る。

【0083】

様々な実施形態において、凍結乾燥保護剤は、スクロース、ラクトース、トレハロース、デキストラン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マルトース、ラクツロース、マルツロース、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、イソマルツロース、及びマンニトール；アミノ酸（例えば、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、もしくはグリシン）；リオトロピック塩（例えば、硫酸マグネシウム）；プロピレングリコール、グリセロール、ポリ（エチレングリコール）、もしくはポリ（プロピレングリコール）；ゼラチン、デキストリン、化工デンプン、カルボキシメチルセルロース、及びこれらの組合せのうちの１つ以上を含み得る。

【0084】

様々な実施形態において、医薬的に許容される担体は、医薬的に活性の薬剤を明示的に除外する。様々な実施形態において、医薬的に許容される担体は、１つ以上の、または全てのポリペプチドを明示的に除外する。

【0085】

経口送達用のポリペプチド製剤が、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物を含むコアまたは懸濁液と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む、様々な実施形態において、コア、懸濁液、または医薬的に許容される担体は、重量、モル比、または体積に基づいて、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％であるビタミンＥ剤の量によって特徴付けられ得る。様々な実施形態において、コア、懸濁液、または医薬的に許容される担体は、重量、モル比、または体積に基づいて、１０％～９０％の間、２０％～９０％の間、３０％～９０％の間、４０％～９０％の間、５０％～９０％の間、６０％～９０％の間、７０％～９０％の間、８０％～９０％の間、１０％～７０％の間、２０％～７０％の間、３０％～７０％の間、４０％～７０％の間、５０％～７０％の間、６０％～７０％の間、１０％～５０％の間、２０％～５０％の間、３０％～５０％の間、または４０％～５０％の間であるビタミンＥ剤の量によって特徴付けられ得る。

【0086】

結晶化ポリペプチド及び非晶質ポリペプチド
本開示は、ビタミンＥ及びポリペプチド（例えば、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物中に存在するポリペプチド）を含む経口製剤を含む。医薬薬剤は、多形、溶媒和物、水和物、塩、共結晶、及び非晶質固体を含む様々な形態で存在し得る。

【0087】

非晶質ポリペプチド組成物には、ポリペプチド分子が無秩序または本質的に無秩序である組成物が含まれ得る。非晶質ポリペプチドは、原子の位置の長距離規則度が欠如している、または本質的に欠如していることがある。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチドは、同じポリペプチドの結晶化形態よりも溶解性が高い可能性がある。ある特定の実施形態において、非晶質ポリペプチドは、結晶化されていない、及び／または結晶化の方法に従って処理されていない組成物である。ある特定の実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、短距離規則度、残留結晶性、多形状態、及び異なる密度の領域を含み得、これらはいずれも必ずしも長距離規則度を構成するものではない。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、結晶化ポリペプチドの一部、例えば、質量、体積、またはモルに基づいて２０％未満の全ポリペプチド（例えば、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、または０．１％未満の結晶化ポリペプチド）である結晶化ポリペプチドの一部を含み得る。結晶化度を定量するための技法としては、ＸＲＤ、ＤＳＣ、溶液熱量測定、水分吸着、等温熱量測定、及び熱刺激電流（ＴＳＣ）が挙げられる。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、コヒーレントな方式でＸ線を回折せず、及び／または粉末Ｘ線回折パターンは、特徴的なピークがないもしくは非常に少ない幅広のハロである。

【0088】

様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、２５ミクロン未満、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、１、または０．５ミクロン未満の平均及び／または最大粒径を含み、例えば、任意選択で、この粒子は、０．５ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均及び／または最大粒径を有するか、あるいはポリペプチドの粒子は、１ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均及び／または最大粒径を有する。様々な実施形態において、本開示のポリペプチド組成物の粒子は、ポリペプチドの微粒子である。

【0089】

本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、他の薬剤または薬剤のタイプと比較して高い割合の（例えば、特定のアミノ酸配列によって特徴付けられるポリペプチドの）非晶質及び／または非結晶化ポリペプチドを含む組成物を含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、組成物または組成物中に存在するポリペプチドの重量、モル比、または体積に基づいて、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の（例えば、特定のアミノ酸配列によって特徴付けられるポリペプチドの）非晶質及び／または非結晶化ポリペプチドを含む。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、組成物または組成物中に存在するポリペプチドの重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％の下限から、組成物または組成物中に存在するポリペプチドの重量、モル比、または体積に基づいて、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の上限の間である（例えば、特定のアミノ酸配列によって特徴付けられるポリペプチドの）非晶質及び／または非結晶化ポリペプチドの量によって特徴付けられ得る。

【0090】

様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、非ポリペプチド薬剤（及び／または非晶質ポリペプチド以外の薬剤）を含まない、または実質的に含まず、例えば、非晶質ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の非ポリペプチド薬剤（及び／または非晶質ポリペプチド以外の薬剤）を含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の非ポリペプチド薬剤（及び／または非晶質ポリペプチド以外の薬剤）を含む。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、他のポリペプチド薬剤（任意選択で、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶化形態（複数可）を含む）を含まない、または実質的に含まず、例えば、非晶質ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他のポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他のポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、他の薬剤（任意選択で、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶化形態（複数可）を含む）を含まない、または実質的に含まず、例えば、非晶質ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他の薬剤を含む。様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他の薬剤を含む。

【0091】

様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、非ポリペプチド薬剤を含まない、または実質的に含まず、例えば、粒子は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の非ポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の非ポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、他のポリペプチドを含まない、または実質的に含まず、例えば、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他のポリペプチドを含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他のポリペプチドを含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、他の薬剤（任意選択で、１つ以上の特定のポリペプチドの非結晶化形態（複数可）を含む）を含まない、または実質的に含まず、例えば、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他の薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの粒子を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの粒子は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他の薬剤を含む。

【0092】

非晶質ポリペプチド組成物を生成するためのプロセスとしては、融解物の分子クエンチ、抗溶媒添加による急速沈殿、フリーズドライ、噴霧乾燥、噴霧フリーズドライ、超臨界流体中での沈殿、固体分散、及び結晶性前駆体の固体化学反応（分解）を挙げることができる。例えば、タンパク質／ＰＥＧブレンド溶液をフリーズドライし、続いてマトリックスからＰＥＧを除去すると、非晶質形態の沈殿したタンパク質粒子が得られることが判明している。機械的または化学的応力を導入するプロセス（粉砕、ミリング、及び湿式造粒）は、結晶性材料を完全または部分的に非晶質化することができる。

【0093】

いくつかの実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、水和形態であり得る、または水和形態から調製され得る。水和形態は、アルコール（例えば、エタノール）を含み得る。いくつかの実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物は、溶媒和形態である、または溶媒和形態から調製される。例示的な溶媒としては、例えば、酸性溶媒または有機溶媒を挙げることができる。いくつかの実施形態において、溶媒としては、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、酢酸、アセトニトリル、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、アニソール、１－ブタノール、２－ブタノール、酢酸ブチル、ｆｅｒ／－ブチルメチルエーテル、クメン、ジメチルスルホキシド、エタノール、酢酸エチル、エチルエーテル、ギ酸エチル、ギ酸、ヘプタン、酢酸イソブチル、酢酸イソプロピル、酢酸メチル、３－メチル－１－ブタノール、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、２－メチル－１－プロラノール、ペンタン、１－ペンタノール、１－プロパノール、２－プロパノール、酢酸プロピル、テトラヒドロフラン、エタノール、及び／または水を挙げることができる。非晶質ポリペプチド組成物を調製するある特定の方法としては、溶媒和形態からの迅速な溶媒蒸発による溶媒の除去、噴霧乾燥、ローラー乾燥、溶媒沈殿、またはフリーズドライを挙げることができる。いくつかの実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物はカチオン、例えば、２＋荷電カチオン（例えば、Ｂａ^２＋、Ｃａ^２＋、Ｃｒ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｆｅ^２＋、Ｐｂ^２＋、Ｍｇ^２＋、Ｍｎ^２＋、Ｎｉ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｓｎ^２＋、またはＺｎ^２＋）を含む。

【0094】

結晶形成は、非結晶性固体薬剤を結晶性固体形態に構築することを含み得る。結晶形成は、様々な分子間相互作用（例えば、水素結合、ｐスタッキング、及びファンデルワールス力を含む）を利用することができる。水素結合の形成は、しばしば分子固体における分子間相互作用に関与する。典型的には、結晶化は、低分子薬剤に関して考慮されており、ポリペプチドに関してはあまり考慮されていない。典型的には、ポリペプチドは、溶液中で明確に定義された立体構造が欠如している。ある特定の実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物は、ポリペプチドの結晶を含む粉末形態である。

【0095】

様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、２５ミクロン未満、例えば、２０、１５、１０、５、４、３、２、１、または０．５ミクロン未満の平均及び／または最大粒径を有するポリペプチドの結晶を含み、例えば、任意選択で、ポリペプチドの結晶は、０．５ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均及び／または最大粒径を有するか、あるいはポリペプチドの結晶は、１ミクロン～１、２、３、４、５、１０、１５、２０、または２５ミクロンの間の平均及び／または最大粒径を有する。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物の結晶はポリペプチドの微結晶である。

【0096】

本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、他の薬剤または薬剤のタイプと比較して高い割合の（例えば、特定のアミノ酸配列によって特徴付けられるポリペプチドの）結晶化ポリペプチドを含む組成物を含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、組成物または組成物中に存在するポリペプチドの重量、モル比、または体積に基づいて、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の（例えば、特定のアミノ酸配列によって特徴付けられるポリペプチドの）結晶化ポリペプチドを含む。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、組成物または組成物中に存在するポリペプチドの重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９０％の下限から、組成物または組成物中に存在するポリペプチドの重量、モル比、または体積に基づいて、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の上限の間である（例えば、特定のアミノ酸配列によって特徴付けられるポリペプチドの）結晶化ポリペプチドの量によって特徴付けられ得る。

【0097】

様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、非ポリペプチド薬剤を含まない、または実質的に含まず、例えば、結晶化ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の非ポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の非ポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、他のポリペプチド薬剤（任意選択で、１つ以上の特定のポリペプチドの非結晶化形態（複数可）を含む）を含まない、または実質的に含まず、例えば、結晶化ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他のポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他のポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、他の薬剤（任意選択で、１つ以上の特定のポリペプチドの非結晶化形態（複数可）を含む）を含まない、または実質的に含まず、例えば、結晶化ポリペプチド組成物は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他の薬剤を含む。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他の薬剤を含む。

【0098】

様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、非ポリペプチド薬剤を含まない、または実質的に含まず、例えば、結晶は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の非ポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、この結晶は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の非ポリペプチド薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、他のポリペプチドを含まない、または実質的に含まず、例えば、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他のポリペプチドを含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他のポリペプチドを含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、他の薬剤（任意選択で、１つ以上の特定のポリペプチドの非結晶化形態（複数可）を含む）を含まない、または実質的に含まず、例えば、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％以下の他の薬剤を含む。様々な実施形態において、本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上の特定のポリペプチドの結晶を含み、この１つ以上の特定のポリペプチドの結晶は、重量、モル比、または体積に基づいて、１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％以下の他の薬剤を含む。

【0099】

ポリペプチド結晶は、ポリペプチド試料から調製することができる。ポリペプチド結晶は、他の薬剤及び／または混入物から実質的に純粋であるポリペプチド試料から調製することができる。ポリペプチドの結晶は、非晶質材料、例えば、非晶質である凍結乾燥材料または沈殿した非晶質固体から調製することができる。いくつかの実施形態において、ポリペプチド結晶は、非晶質物質及び結晶性物質の混合物、例えば、非晶質物質及び結晶性物質の混合物である凍結乾燥物質、または沈殿した非晶質固体及び結晶性固体の混合物から調製することができる。様々な実施形態において、ポリペプチド結晶は、０．１～２００ｍｇ／ｍｌの間のポリペプチド濃度を有するポリペプチド試料、例えば、０．１、１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、または１００ｍｇ／ｍｌの下限から１５、２０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｍｇ／ｍｌの上限の間のポリペプチド濃度を有するポリペプチド試料から調製することができる。

【0100】

ポリペプチド結晶化の手段としては、限定されるものではないが、蒸発、緩慢拡散（例えば、周囲温度または低温での蒸気拡散）、緩慢冷却、スラリー化、ハンギングドロップ、シッティングドロップ、シード結晶発生、及び／または当技術分野で知られている他の結晶化方法が挙げられる。当業者であれば、多くの結晶化方法が当技術分野で十分に理解され知られており、ポリペプチドの結晶化が概して容易であることを理解するであろう。当業者であればさらに、ポリペプチドの結晶化が、特定の結晶サイズが要求されない場合、大きな結晶が要求されない場合、特定の結晶形態が要求されない場合、及び／または完全に規則的な結晶が要求されない場合は特に容易であり、これらのいずれかまたは全てが本開示の様々な実施形態を特徴付け得ることを理解するであろう。

【0101】

結晶性ポリペプチドは、ポリペプチドを好適な溶媒（例えば水）中で混合し、次いでポリペプチドを固相に戻すことによって調製することができる。例えば、ポリペプチドは、水溶液（例えば硫酸アンモニウム）から沈殿させると結晶を形成することができる。ある特定の例示的な実施形態において、ポリペプチド飽和溶液は、溶液中のポリペプチドの濃度を増加させることによって調製される。溶解度が最大になると、ポリペプチドの沈殿が生じ得、沈殿剤が結晶となり得る。沈殿速度が遅いと、少数の比較的大きな結晶が生じるが、沈殿速度が速いと、非常に多数の小さな結晶が生じ、そのため沈殿の速度は概して結晶の生成に決定的なものではない。

【0102】

蒸発（例えば、緩慢蒸発）は、ポリペプチドを結晶化する一般的な手段である。ポリペプチドの沈殿は、ポリペプチドの溶液の溶媒を、溶液が飽和に達するまで蒸発させ（例えば、ゆっくり蒸発させ）、それによりポリペプチドの沈殿を生じさせるによって起こり得る。

【0103】

冷却（例えば、緩慢冷却）は、ポリペプチドを結晶化するもう１つの方法である。ポリペプチドの沈殿は、ポリペプチドの溶液を冷却（例えば、ゆっくり冷却）させ、それにより溶液中のポリペプチドの最大溶解度を低減し、沈殿の発生を誘導することによって起こり得る。

【0104】

蒸気拡散法及びバッチ法も、ポリペプチドの結晶化に一般的に用いられている。蒸気拡散では、沈殿剤及び未沈殿ポリペプチドの混合物を含む液滴を、純粋な沈殿剤が入ったチャンバー内に密閉する。次いで水蒸気が液滴から、液滴及び沈殿物のオスモル濃度が等しくなるまで拡散する。液滴の脱水により、ポリペプチド及び沈殿物が、平衡が達成され得るまでゆっくり濃縮され、結晶化に好都合となる。蒸気拡散は、ハンギングドロップまたはシッティングドロップいずれかの形式で実施することができる。ハンギングドロップ法は、逆さにしたカバースリップにポリペプチド溶液の液滴を載せ、次いでこれをリザーバーの上に吊るす。シッティングドロップ法では、リザーバーから隔てられた台に液滴を載せることができる。これらの方法はいずれも、液滴とリザーバーとの間で平衡が生じるように環境を密閉する必要がある。

【0105】

バッチ法は、ポリペプチドを適切な量の沈殿剤と混合することにより、ポリペプチドを核生成ゾーンに直接持っていくことに依存する。本明細書で提供する様々な実施例は、バッチ結晶化を含む。バッチ結晶化は、バッチ実行の終了時に一度のみバッチ系用の結晶生成物を引き出す点において、連続結晶化と異なる。バッチ結晶化はセミバッチ系も含み得、セミバッチ系では、バッチの全部または一部を通じて、１つ以上のフィード溶液を一定または可変の速度で結晶器に加える。様々な実施形態において、バッチ結晶化は、例えば、１マイクロリットル（例えば、エッペンドルフチューブ内の）から１リットルまたはそれ以上（例えば、数千リットル）まで体積が変動し得る。様々な実施形態において、蒸気拡散法は伴わない。様々な実施形態において、蒸発は伴わない。様々な実施形態において、バッチ結晶化は、沈殿試薬を（例えば、バッチサイズに応じて、必要な場合は撹拌しながら）ゆっくり加えることを含む。

【0106】

典型的には、再現性及び製品品質を改善するために、バッチプロセスの初期に結晶化材料のシードを加えることができる。所望の量の固体が形成されると、典型的にはスラリーは固体－液体分離ユニットに移される。

【0107】

また、透析もポリペプチドの結晶化に一般的に用いられる別の方法である。この技法は、巨大分子が結晶化する濃度に徐々に近づける手段として、半透性膜を通じた沈殿分子の拡散と平衡化を利用する。大量のポリペプチドが利用可能な場合は、透析チューブを使用することができる。

【0108】

微量透析ボタンは、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅボタンとしても知られ、少量の試料から結晶を生成する好都合な方法をもたらす。ポリペプチド試料をボタン上部の小さなチャンバー内に入れ、試料を適切な分子量カットオフの透析膜で覆う。次いで装置を沈殿剤溶液が入ったリザーバーに浸漬する。沈殿剤分子の平衡は膜を通じて生じ得る。

【0109】

また、自由界面拡散もポリペプチドの結晶化に使用することができる。この技法は、キャピラリー内の濃縮ポリペプチド溶液の上部に沈殿剤溶液を注意深く積層し、その両端をワックスで封止することを含む。キャピラリーの直径が小さいため、系内の自然対流からの混合が最小限に抑えられる。したがって、沈殿剤及びポリペプチドがゆっくり相互拡散し、系は対拡散と呼ばれる現象によって平衡に達する。溶液が最初に接触し拡散混合が生じると、界面の近傍にあるポリペプチド溶液の領域は過飽和となり、核形成のための理想的条件が作出される。時間が進むに伴い、２つの溶液はキャピラリーの軸に沿って相互拡散し、互いに希釈され、このようにしてより小さな核の溶解及びより大きな核の成長が促進される。自由液体拡散により、一過性の核生成条件を達成することにより、ほとんどの場合において高品質の結晶を得ることができる。したがって、自由界面拡散は、結晶成長前面における過飽和度及び不純物レベルを最小化し、両方の値の安定性を確実にするための合理的な結晶化アプローチとみなすことができる。自由界面拡散法の１つの変形形態は、液体ブリッジ法と称され、この方法では、ポリペプチド試料の液滴及び沈殿剤溶液の液滴をカバーガラス上に極めて近接して設置し、薄い液体ブリッジにより接続する。２つの液滴間の液体拡散は、空気から密閉され、結晶成長を誘導し得る。

【0110】

場合によっては、結晶化核生成は、核生成剤、核生成促進物質（ｎｕｃｌｅａｎｔ）、またはシードなどの材料を使用することによって誘導することができる。核生成は、核生成剤、核生成促進物質、またはシードの表面で生じ得、これにより、巨大分子の局所濃度の上昇を誘導し、核生成のエネルギー障壁を低下させ、自発的核生成の動態学的障壁を回避する。このような状況下では過飽和が必要とされ得る。

【0111】

医薬品共結晶は、医薬的活性成分及び１つ以上の共結晶形成剤（「共形成剤」）から構成された結晶性物質であり、そのため、活性成分及び共形成剤は同じ結晶格子内に一緒に存在する。共結晶は、塩とは異なり、定義された化学量論で共結晶格子内に共存する構成要素が非イオン的に相互作用するため、塩とは区別される。さらに、共結晶は多形体とも異なる。多形体は、１）結晶格子内で異なる分子の配置または立体構造を有する単一構成要素の結晶形態、２）非晶質、ならびに３）溶媒和形態及び水和形態などの多成分相を含むものとして定義されている。共結晶は、少なくともいずれも格子中に複数の構成要素を含むという点で溶媒和物に類似する。いくつかの実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物は、共結晶化ポリペプチドを含まない。いくつかの実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物は共結晶化ポリペプチドを含む。

【0112】

当業者であれば、結晶化の効率及び／または純度を増減するように多くの結晶化条件を調整することができることを理解するであろう。例えば、調整することができる結晶化条件としては、可溶化系（水性系及び／または有機溶媒系）、ｐＨ、対イオン、塩、温度、賦形剤、コフォーマー、及びポリペプチド濃度が挙げられる。これらの因子を調節し、それらの範囲を試験することは、当業者にとっては単純なことである。結晶化の技術分野では、多種多様な条件をサンプリングすることが典型的とみなされている。さらに、当業者であれば理解するであろうように、本開示は、最も効率的な結晶化形態を特定することを必ずしも要求しておらず、結晶を形成できることのみである。

【0113】

本開示の結晶化ポリペプチド組成物は、複数の結晶化ポリペプチドを含み得る。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチドは、高濃度、高純度、及び／または高安定性によって特徴付けられ得る。当技術分野で知られている任意の好適な方法を使用して、提供される結晶化ポリペプチド組成物を特性評価することができ、限定されるものではないが、このような方法には、Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、熱重量分析（ＴＧＡ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣＭＳ）、レーザー回折、ホットステージ顕微鏡、偏光顕微鏡などが含まれる。

【0114】

様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上のまたは任意の沈殿試薬を含まない、または実質的に含まず、任意選択で、沈殿試薬は、塩、有機溶媒、またはポリマーのうちの１つ以上を含み、任意選択で、塩は、硫酸アンモニウム、クエン酸塩、及びセチルトリメチルアンモニウム塩から選択される塩を含むことができ、有機溶媒は、２－メチル－２，４－ペンタンジオールまたは２－メチル－２，４－ペンタンジオールから選択される有機溶媒を含むことができ、及び／またはポリマーは、ポリエチレングリコールであるポリマーを含むことができる。

【0115】

様々な実施形態において、本開示の非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物は、１つ以上のまたは任意の沈殿試薬を含まない、または実質的に含まないポリペプチド結晶を含み、任意選択で、沈殿試薬は、塩、有機溶媒、またはポリマーのうちの１つ以上を含み、任意選択で、塩は、硫酸アンモニウム、クエン酸塩、及びセチルトリメチルアンモニウム塩から選択される塩を含むことができ、有機溶媒は、２－メチル－２，４－ペンタンジオールまたは２－メチル－２，４－ペンタンジオールから選択される有機溶媒を含みことができ、及び／またはポリマーは、ポリエチレングリコールであるポリマーを含み得る。

【0116】

別段の指定がある場合を除き、当業者であれば、当技術分野における結晶化に関する言及が、ポリペプチドではない分子の結晶化、例えば、低分子である分子（例えば、低分子治療薬）の結晶化を指すことを理解するであろう。

【0117】

様々な適用において、ペプチド結晶化により、概して均一な含量を有する秩序ある結晶を得ることができる。本開示は、秩序ある結晶を含むポリペプチド組成物を含むものの、本開示の製剤は、特定のまたは一貫したサイズまたは特性を有する結晶を要しないという認識も特に含む。様々な実施形態において、結晶化ポリペプチド組成物は、ポリペプチドの１つ以上の結晶形態（例えば、ポリペプチドの１つ以上の多形体または水和物）を含む。

【0118】

いくつかの実施形態において、ポリペプチド／ペプチドは、ビタミンＥで覆われた液滴の形態で水性形態をとることができる。他の実施形態において、水溶液に溶解することができるビタミンＥの誘導体が担体として使用され得る。

【0119】

当業者であれば、本明細書で提供される組成物及び方法が、多種多様なポリペプチドの送達に有用であることを、本開示から理解するであろう。例えば、当業者であれば、本明細書で提供する組成物及び方法が、経口投与後、例えばリンパ系を通じて、例えば、有利な薬物動態学的特性により、血流及び／または血漿にポリペプチドを送達するため、少なくとも部分的には有利であることを、本開示から理解するであろう。

【0120】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、例えば、少なくとも約２５ｋＤａ、５０ｋＤａ、１００ｋＤａ、１５０ｋＤａ、２００ｋＤａ、２５０ｋＤａ、３００ｋＤａ、４００ｋＤａ、５００ｋＤａ、１，０００ｋＤａ、またはそれ以上であり得る分子量を有する。本開示のポリペプチドは、例えば、約１～約１，０００ｋＤａ、例えば、約２５ｋＤａ～約１，０００ｋＤａ、約２５ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約１００ｋＤａ～約５００ｋＤａ、約１２５ｋＤａ～約２５０ｋＤａ、約１２５ｋＤａ～約１７５ｋＤａ、または約１５０ｋＤａ～約３００ｋＤａの範囲の分子量を有し得る。様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは、例えば、約１、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ｋＤａの下限と、例えば、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、７５０、または１，０００ｋＤａの上限とを有する分子量を有し得る。

【0121】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、例えば、約５０Ｄａ～約２５ｋＤａであり得る分子量を有し、任意選択で、分子量は、約５０Ｄａ～約１ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約２ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約３ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約４ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約５ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約１０ｋＤａの間、約５０Ｄａ～約１５ｋＤａの間、または約５０Ｄａ～約２０ｋＤａの間である。様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは、例えば、約５０Ｄａ、約１００Ｄａ、約１５０Ｄａ、約２００Ｄａ、約２５０Ｄａ、約３００Ｄａ、約４００Ｄａ、約５００Ｄａ、約６００Ｄａ、約７００Ｄａ、約８００Ｄａ、約９００Ｄａ、約１ｋＤａ、約２ｋＤａ、約３ｋＤａ、約４ｋＤａ、または約５ｋＤａの下限と、例えば、約２５０Ｄａ、３００Ｄａ、４００Ｄａ、５００Ｄａ、６００Ｄａ、７００Ｄａ、８００Ｄａ、９００Ｄａ、１ｋＤａ、２ｋＤａ、３ｋＤａ、４ｋＤａ、５ｋＤａ、１０ｋＤａ、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、または２５ｋＤａの上限とを有する分子量を有し得る。

【0122】

本開示のポリペプチドは、例えば、約１～約１，０００個のアミノ酸、例えば、約１０～約５００個、約１０～約２５０個、約１０～約１００個、約１００～約１，０００個、約１００～約７５０個、約１００～約５００個、約１００～約２５０個、約２５０～約１，０００個、約２５０～約７５０個、または約２５０～約５００個のアミノ酸を含み得る。様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは、例えば、約１、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００個のアミノ酸の下限と、例えば、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、７５０、または１，０００個のアミノ酸の上限とを有するアミノ酸数を含み得る。

【0123】

様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは治療用ポリペプチドであり得、例えば、それを必要とする対象に投与するための、例えば、酵素または抗体であり得る。当業者であれば、多種多様な治療用ポリペプチドの内容及び特性について精通しているであろう。

【0124】

様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは、組換えポリペプチド、単離もしくは合成ポリペプチド、細胞骨格タンパク質、細胞外マトリックスタンパク質、血漿タンパク質、凝固因子、急性期タンパク質、ヘムタンパク質、細胞接着タンパク質、膜貫通輸送タンパク質、シンポート／アンチポートタンパク質、ホルモン、成長因子、受容体、膜貫通受容体、細胞内受容体、ＤＮＡ結合タンパク質、転写調節タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、免疫系タンパク質、栄養貯蔵・輸送タンパク質、シャペロンタンパク質、酵素、糖タンパク質、リンタンパク質、膜タンパク質、輸送タンパク質、もしくはリポタンパク質、抗体、組み換え抗体、抗体フラグメント、モノクローナル抗体、修飾酵素、ペグ化ポリペプチド、治療用ポリペプチド、貯蔵ポリペプチド、酵素、成長因子もしくはホルモン、免疫修飾剤、抗感染剤、抗増殖剤、ワクチン、または他の治療薬、予防薬、診断用ポリペプチド、及びこれらの組合せであり得る、またはそれらを含み得る。

【0125】

様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは抗体または抗体フラグメントであり得る、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態において、抗体はモノクローナル抗体またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態において、抗体はポリクローナル抗体またはそのフラグメントである。いくつかの実施形態において、抗体は、天然、合成、または操作されたものである。

【0126】

抗体フラグメントには、Ｆａｂフラグメント（パパイン酵素で消化することにより完全な抗体から単離される単一のＦａｂ）及びＦ（ａｂ’）２フラグメント（抗体をペプシン酵素で消化することにより生成される互いに共有結合した２つのＦａｂ）が含まれる。Ｆａｂフラグメントは単特異性であり、一方Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは二重特異性である。抗体フラグメントは、二本鎖Ｆｖ（ｄｓＦｖ）フラグメント及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントを含む（いずれの場合も「ｖ」は「可変（ｖａｒｉａｂｌｅ）」の略である）。ｄｓＦｖフラグメントは、Ｆａｂフラグメントから定常領域を除いたものからなり、すなわち、互いに共有結合した重鎖及び軽鎖の可変領域のみからなる。ｓｃＦｖフラグメントは単一のポリペプチド鎖であり、ペプチドリンカーを介して軽鎖の可変領域と結合した重鎖の可変領域からなる。古典的には、ｄｓＦｖフラグメント及びｓｃＦｖフラグメントはいずれも一価である（したがって単特異性である）。ただし、２つのｄｓＦｖフラグメントまたは２つのｓｃＦｖフラグメントを結合して、二重特異性フラグメントを形成することができる（これは、定常領域なしのＦ（ａｂ’）２フラグメントに類似すると考えられる）。さらに、異なる抗原結合部位（すなわち、異なる特異性）を有する２つのｄｓＦｖフラグメントまたはｓｃＦｖフラグメントを結合して、二重特異性フラグメントを形成することも可能である。このようなフラグメントは、研究ツールとして、または治療用もしくは診断用試薬として使用することができる。

【0127】

いくつかの実施形態において、抗体は免疫グロブリンである。天然に存在する免疫グロブリンの場合、各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対を含み、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤ）及び１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識を担う約１００～１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変（「Ｖ」）領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能を担う不変領域を定義する。４つの鎖は、古典的な「Ｙ」モデルで配置されている。「Ｙ」の下の「脚」はＦｃ領域と呼ばれ（「ｃ」は「結晶化可能（ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｂｌｅ）」または「相補結合（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ－ｂｉｎｄｉｎｇ）」を表す）、抗体を細胞膜内に固定するために使用され、またマクロファージ細胞と結合して相補性を活性化するためにも使用される。「Ｙ」の上部にある２本の「腕」はＦａｂ領域と呼ばれる（「ａｂ」は「抗原結合（ａｎｔｉｇｅｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ）」を表す）。各Ｆａｂ領域は、不変領域（Ｆａｂ及びＦｃ領域の接合部）と、可変領域（「Ｙ」またはＦｃ領域の先端まで伸びる）とを含む。各可変領域は、「Ｙ」の各先端に同一の抗原結合部位（「超可変」領域と呼ばれる可変領域内の領域）を含む。「超可変」領域という用語は、相補性決定領域またはＣＤＲ（すなわち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に記載されているように、軽鎖可変ドメイン内の残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、及び８９～９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインの残基３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、及び９５～１０２（Ｈ３）のアミノ酸残基）を指す。「フレームワーク」またはＦＲ残基は、超可変領域残基以外の残りの可変領域残基である。各Ｆａｂ領域は１つの抗原結合部位を有し、そのため完全な抗体分子は２つの抗原結合部位を有する（すなわち、「二価」である）。天然に存在する抗体上にある２つの抗原結合部位は互いに同一であるため、抗体は１つの抗原に特異的である（すなわち、「単特異性」である）。

【0128】

免疫グロブリンは、重鎖の不変ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。重鎖はミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）、及びイプシロン（ε）に分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。典型的には、ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩｇＤは単量体として生じるが、ＩｇＡは単量体だけでなく二量体または三量体としても生じることがあり、ＩｇＭは五量体として生じることがある。上記のうちのいくつかは、サブクラスまたはアイソタイプにさらに分類することができる（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有し、例えば、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３のアイソタイプは抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。ヒト軽鎖は、カッパ（κ）軽鎖及びラムダ（λ）軽鎖として分類される。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び不変領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はさらに、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を包含する（概して、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）を参照）。

【0129】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドはキメラ抗体であり得る。天然に存在する抗体は単一の種に由来するが、操作された抗体及び抗体フラグメントは複数の動物種に由来することがあり、すなわちキメラであり得る。マウス（ネズミ）／ヒトのキメラ抗体が作成されているが、他の組合せも可能である。キメラ抗体はさらに、２つのサブタイプ：キメラ抗体及びヒト化抗体に分類される。典型的には、マウス／ヒトキメラ抗体は、およそ７５％のヒトアミノ酸配列及びおよそ２５％のマウスアミノ酸配列を含む。ヒト配列は抗体の不変領域に相当し、マウス配列は抗体の可変領域（したがって抗原結合部位を含む）に相当する。このようなキメラを使用する理論的根拠は、マウス抗体の抗原特異性を保持し、ただしマウス抗体の免疫原性（マウス抗体はマウス以外の種においてそれに対する免疫応答を引き起こす）を低減し、ヒトの治療にキメラを用いることができるようにするためである。キメラ抗体には、異なるヒト抗体のＣＤＲ領域を含む抗体も含まれる。ＣＤＲ領域は、超可変領域とも呼ばれ、抗原結合部位を形成する抗体分子の可変領域内にある配列である。ＣＤＲ領域がこのような名称であるのは、結合部位が抗原上で認識されるエピトープに対し形状及び電荷分布が相補的であるためである。代替的に、キメラ抗体は、ある抗体からのフレームワーク領域及び別の抗体からのＣＤＲ領域を含む。またキメラ抗体には、少なくとも２つの異なるヒト抗体のＣＤＲ領域を含む抗体も含まれる。典型的には、ヒト化抗体はおよそ９０％（またはそれ以上）のヒトアミノ酸配列を含む。このシナリオでは、存在する唯一のマウス配列は、超可変領域の配列である（可変領域内に含まれる実際の抗原結合部位である）。ヒト化抗体は、キメラ抗体と比較して最小限のマウス免疫原性を有する。

【0130】

抗体及び抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、イダルシズマブ（Ｐｒａｘｂｉｎｄ（登録商標））、ラキシバクマブ（ＡＢＳＴＲＡＸ（登録商標））、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標）、ＲＧ７４４６（Ｒｏｃｈｅ））、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標））、オビヌツズマブ（ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）、ＧＡ１０１（Ｒｏｃｈｅ））、ベズロトクスマブ（ＺＩＮＰＬＡＶＡ（商標））、ネシツムマブ（Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（商標））、オビルトキサキシマブ（ＡＮＴＨＩＭ（登録商標））、オララツマブ（Ｌａｒｔｒｕｖｏ（商標））、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、ＡＢＰ ７９８（Ａｍｇｅｎ）、ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、ＧＰ２０１３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、ＡＢＰ ９８０（Ａｍｇｅｎ）、ＨＥＲＴＲＡＺ（商標）、ＣＡＮＭＡＢ（商標））、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）、ＲＧ１２７３（Ｒｏｃｈｅ））、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＲＡ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、ＡＢＰ ２１５（Ａｍｇｅｎ））、ダラツムマブ（Ｄａｒｚａｌｅｘ（登録商標））、エロツズマブ（ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ（商標））、シルツキシマブ（ＳＹＬＶＡＮＴ（商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標））、ベドリズマブ（Ｅｎｔｙｖｉｏ（登録商標））、エクリズマブ（Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標））、ナタリズマブ（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標））、セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標））、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））、レスリズマブ（ＣＩＮＱＡＩＲ（登録商標））、ペンブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）、ＡＢＰ ７１０（Ａｍｇｅｎ）、ＦＬＩＸＡＢＩ（登録商標））、アブシキシマブ（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））、エボロクマブ（Ｒｅｐａｔｈａ（登録商標））、セクキヌマブ（Ｃｏｓｅｎｔｙｘ（登録商標））、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ（登録商標））、イキセキズマブ（ＴＡＬＴＺ（商標））、オマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））、カナキヌマブ（Ｉｌａｒｉｓ（登録商標））、アリロクマブ（Ｐｒａｌｕｅｎｔ（登録商標））、ダクリズマブ（ＺＩＮＢＲＹＴＡ（商標）、ＺＥＮＡＰＡＸ（登録商標））、デノスマブ（ＸＧＥＶＡ（登録商標））、デノスマブ（Ｐｒｏｌｉａ（登録商標））、メポリズマブ（Ｎｕｃａｌａ）、ウステキヌマブ（Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標））、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標））、アダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）、ＡＢＰ５０１（Ａｍｇｅｎ）、ＧＰ２０１７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、ラムシルマブ（ＣＹＲＡＭＺＡ（登録商標））、ラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）、ＲＧ３６４５（Ｒｏｃｈｅ＆Ｎｏｖａｒｔｉｓ））、エファリズマブ（Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標））、パリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））、Ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン（ＫＡＤＣＹＬＡ（商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、アレムツズマブ（ＬＥＭＴＲＡＤＡ（商標））、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））、ベリムマブ（Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標））、ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標））、ブレンツキシマブベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ）、カプロマブペンデチド（ＰｒｏｓｔａＳｃｉｎｔ（登録商標））、ジヌツキシマブ（Ｕｎｉｔｕｘｉｎ）、エロツズマブ（ＥＭＰＬＩＣＩＴＩ（商標））、ゲムツズマブオゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ）、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、イトリズマブ（Ａｌｚｕｍａｂ（商標））、ムロモナブ（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ ＯＫＴ３（登録商標））、ニモツズマブ（Ｔｈｅｒａｃｉｍ（登録商標））、ノフェツモマブ（Ｖｅｒｌｕｍａ（登録商標））、ならびにこれらのバイオシミラー及び組合せが挙げられる。様々な実施形態において、抗体及び抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、アブシキシマブ、パリビズマブ、ムルモナブ－ＣＤ３、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、エタネルセプト、イブリツモマブ、及び／またはチウキセタンが挙げられる。

【0131】

抗体及び抗体フラグメントの例としては、限定されるものではないが、抗サイトカイン抗体、抗ＣＤ抗原抗体（例えば、抗ＣＤ３、－ＣＤ２０（リツキシマブ）、抗ＣＤ２５、抗ＣＤ５２、抗ＣＤ３３、及び抗ＣＤ１１ａ）、抗ＴＮＦ－α（例えば、インフリキシマブ）、抗ガラガラヘビ毒液、抗ＩＣＡＭ（例えば、抗ＩＣＡＭ－１及び抗ＩＣＡＭ－３）、抗成長因子抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ）、抗成長因子受容体抗体（例えば、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ（トラスツズマブ）及び抗ＥＧＦＲ）、抗免疫グロブリン抗体（例えば、抗ＩｇＥ）、抗ポリクローナルＡｂ抗体、抗ウイルス抗体（例えば、抗ＣＭＶ、抗ＨＩＶ（抗ｇｐ１２０）、抗ＨＢＶ、抗ＲＳＶ（抗Ｆ糖タンパク質））、抗補体抗体（例えば、抗Ｃ５）、抗凝固因子抗体（例えば、抗ｇｐＩＩｂ／ＩＩＩａ及び抗第ＶＩＩ因子）、抗インターロイキン抗体（例えば、抗ＩＬ－５、抗ＩＬ－４、及び抗ＩＬ－８）、主要組織適合性複合体を標的とする抗体（例えば、抗ＨＬＡ）、抗イディオタイプ抗体、抗インテグリン抗体（例えば、抗β－２－インテグリン）、抗１７－ＩＡ細胞表面抗原、抗α４β７、抗ＶＬＡ－４、抗ＣＢＬ、ならびにこれらの組合せが挙げられる。

【0132】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドはバイオシミラー抗体である。概してバイオシミラーは、安全性及び有効性の両面において生理化学的または生物学的に基準に類似する。バイオシミラーは、１つ以上のｉｎ ｖｉｔｒｏ試験を用いて基準に対し評価することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏでの比較は、薬物動態、薬力学、及び／または安全性の類似性を示すｉｎ ｖｉｖｏ データと組み合わせることができる。臨床評価としては、薬物動態学的特性の比較（例えば、ＡＵＣ０－ｉｎｆ、ＡＵＣ０－ｔ、Ｃｍａｘ、ｔｍａｘ、Ｃトラフ）、薬力学的エンドポイント、または臨床有効性の類似性（例えば、ランダム化並行群間比較臨床試験を用いて）を挙げることができる。バイオシミラーと基準との間の違いとしては、翻訳後修飾、例えば、１つ以上の生化学的基（例えば、リン酸、様々な脂質、及び炭水化物）の結合体化によるもの、翻訳後のタンパク質分解切断によるもの、アミノ酸の化学的性質の変化によるもの（例えばホルミル化）、または他の多くの機序によるものを挙げることができる。他の翻訳後修飾は、製造プロセス操作の結果であり得る。例えば、糖化は、生成物が還元糖に曝露されることにより生じ得る。他の場合には、保存条件が、酸化、脱アミド化、凝集などのある特定の分解経路を許容することがある。

【0133】

概して、抗体は、その特異的な標的結合特性及び／または標的中和、例えば、疾患状態に関連する標的の結合及び／または中和により、例えば、がん、炎症、心血管疾患、及び移植拒絶反応の治療に使用することができる。例えば、モノクローナル抗体のインフリキシマブは腫瘍壊死因子に結合し、細胞表面受容体との相互作用を遮断することにより、炎症におけるその役割を中和する。リツキシマブは、悪性Ｂリンパ球の細胞表面ＣＤ２０抗原に結合することにより、悪性Ｂリンパ球を標的とする。臨床的に意義のある抗体は、用いられる治療領域に従って分類されることもある。いくつかの実施形態において、治療的使用に用いられる臨床抗体には、がん（例えば、膵臓癌）、炎症性疾患（例えば、自己免疫疾患、関節炎）、心血管疾患（例えば、卒中）、感染性疾患（例えば、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ）、呼吸器疾患（例えば、喘息）、組織移植拒絶反応及び臓器移植拒絶反応を治療するための抗体が含まれ得る。いくつかの実施形態において、臨床抗体が放射免疫療法に用いられる。

【0134】

様々な実施形態において、本開示のポリペプチドは、ポリペプチド置換療法、酵素（例えば、治療用置換酵素）、及び／または融合ポリペプチドであり得る、またはそれらを含み得る。ポリペプチド及び／または酵素の例としては、例えば、抗体（例えば、抗ＨＥＲ２抗体、例えば、トラスツズマブ）、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、ヒトグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）もしくはそのアナログ（例えば、合成アナログ、例えば、リラグルチド）、副甲状腺ホルモンもしくはそのアナログ（例えば、組換えヒト副甲状腺ホルモンアナログ、例えば、テリパラチド）、インスリンもしくはそのアナログ（例えば、Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標））、リツキシマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エタネルセプト、インフリキシマブ、またはこれらのアナログもしくは誘導体が挙げられる。酵素、例えば補充酵素療法用の酵素の例としては、アガルシダーゼベータ、アガルシダーゼアルファ、イミグルセラーゼ、アリグルセラーゼ（ａｌｉｇｌｕｃｅｒａｓｅ）アルファ、ベラグルセラーゼアルファ、アルグルセラーゼ、セベリパーゼアルファ、ラロニダーゼ、イズルスルファーゼ、エロスルファーゼアルファ、ガルスルファーゼ、パンクレリパーゼ、サプロプテリン、エリグルスタット、ガルスルファーゼ、アスホターゼアルファ、ペグバリアーゼ、エラペガデマーゼ、及び／またはサクロシダーゼを挙げることができる。置換ポリペプチドの例としては、第Ｉ因子、第ＩＩ因子、第ＩＩＩ因子、第ＩＶ因子、第Ｖ因子、第ＶＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、及び／またはフォンウィルブランド因子が挙げられる。融合ポリペプチドの例としては、例えば、エタネルセプト、アフリベルセプト、リロナセプト、アレフェセプト、ロミプロスチム、アバタセプト／ベラタセプト、及び／またはデニロイキン－ジフチトックスを挙げることができる。本開示は、本明細書で開示するポリペプチドのアナログ及び修飾形態を含み、例えば、１つ以上のペンダント基または修飾、例えば、ペグ化、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、リン酸化、グリコシル化、糖化、硫酸化、マンノシル化、ニトロシル化、アシル化、パルミトイル化、プレニル化、またはこれらの組合せを含む。様々な特定の実施形態において、本開示のポリペプチドは、ペグ化及び／または脂肪酸から選択される１つ以上のペンダント基または修飾を含む。

【0135】

本開示はさらに、本明細書で開示するポリペプチドの操作及び／またはバイオシミラー形態を含み、これらは例えば、本明細書で開示するポリペプチドに対し、少なくとも８０％の配列同一性を有し、例えば、本明細書で開示するポリペプチドに対し、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。

【0136】

本開示はさらに、ポリペプチド（例えば、抗体及び／または抗体フラグメントを含む）が、当技術分野では概して「低分子」または「化合物」とは称されないという認識を含む。したがって、低分子及び化合物は、本明細書で開示するポリペプチド（例えば、抗体及び／または抗体フラグメント）とは非常に異なる物理的及び薬物動態学的特性を有し得ることから、当業者であれば、低分子及び化合物に関する先行技術の開示内容が、本明細書で開示するポリペプチドに関する製剤及び方法に適用可能であるとは理解しないと考えられる。

【0137】

医薬的に許容されるカプセル
本開示の非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物を含むコアは、ポリマーカプセルに封入することができる。本開示のカプセルは、経口投与または経直腸投与に適した医薬的に許容されるカプセルを含む。様々な実施形態において、本開示のカプセルは、腸へのポリペプチドの送達（例えば、特異的送達）に適したカプセルである。様々な実施形態において、本開示のカプセルは、小腸及び／または大腸の一方または両方へのポリペプチドの送達（例えば、特異的送達）に適したカプセルである。

【0138】

本開示のカプセルは、ハードシェルカプセル及びソフトシェルカプセルを含む。様々な実施形態において、カプセルは、ゼラチンカプセルまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）カプセルである。例示的なカプセル材料としては、ポリマー、例えば、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）及びそのコポリマー、ポリ（ラクチド－co－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ならびに非イオン性セルロースエーテル、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）及びヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を挙げることができる。いくつかの実施形態において、カプセルは植物性カプセルである。

【0139】

ソフトゼラチンカプセルは、ソフトゲルとも呼ばれ、一片のゼラチンから生成することができる。これらは、水をベースとしない溶液（水はゼラチンを溶解するため）のカプセル化に使用することができる。摂取するとカプセルは溶解し、コアを露出させる。

【0140】

硬質ゼラチンカプセルは、本体及びキャップの２つの部分から作られている。ハードゼラチンカプセルは、粉末形態の乾燥成分を含むコアで充填することができる。最初に本体をコア組成物で充填し、次いでカプセルをキャップで閉じる。摂取すると硬質カプセルは溶解し、コアを露出させる。

【0141】

様々な実施形態において、カプセルは腸溶性コーティングを含み得る。典型的には、腸溶性コーティングは、経口製剤のコアが露出される、及び／または経口製剤のコアが送達されるレシピエント本体（例えば、消化器系、例えば、腸、例えば、小腸及び／または大腸）の位置を制御するバリアである。多くの腸溶性コーティングが低ｐＨでは不溶性であるが、腸管内の高ｐＨでは溶解、膨潤、または可溶化する。腸溶性コーティングに使用する典型的な材料としては、ＣＡＰ（セルロースアセテートフタレート）、ＣＡＴ（セルロースアセテートトリメリテート）、ＰＶＡＰ（ポリ（ビニルアセテートフタレート））、及びＨＰＭＣＰ（ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート）、ポリ（メタクリル酸－ｃｏ－メチルメタクリレート）、脂肪酸、ワックス、セラック（例えば、アロイリット酸のエステル）、プラスチック、及び植物繊維を挙げることができる。様々な実施形態において、腸溶性コーティングの溶解ｐＨは、例えば、約４．５～約７の間、例えば、約４．５～約５．５、約４．５～約６．０、５．５～約７．０、約５．０、約６．２、または約７．０であり得る。様々な実施形態において、腸溶性コーティングは、約４．５、５．０、５．５、または６．０の下限と、約５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、または７．５の上限とを有する範囲内のｐＨ放出を有する。

【0142】

本開示は、本開示の方法及び組成物に従って本明細書で開示するポリペプチドの、血流、血漿、リンパ系、及び／または胸管に、例えば治療有効量で到達するための送達には、腸溶性コーティングは必要ではないという認識を明示的に含む。

【0143】

様々な実施形態において、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物を含む本開示の製剤は、生体接着性製剤である、または、例えばカプセルまたは錠剤の中または表面にそれを含む。様々な実施形態において、生体接着性製剤は、粘膜内層などの特定の生物学的位置に接着する（粘膜付着）。生体接着性投与形態は、ポリペプチド薬剤を少用量で長期間にわたって送達する、及び／または生体接着によって腸内に局在化させることにより、ポリペプチド薬剤の経口吸収を改善することができる。様々な生体接着性ポリマーは、大まかには特異性または非特異性であり得る。特異性生体接着性ポリマー（例えば、レクチン及びフィンブリン）が、生体分子内の特定の化学構造に接着する能力を有するのに対し、非特異性生体接着性高分子（ポリアクリル酸［ＰＡＡ］及びシアノアクリレート）は、細胞表面及び粘膜層の両方に結合する能力を有する。生体接着性ポリマーのさらなる例としては、ＣＭＣナトリウム、カーボポール、ポリカルボフィル、トラガカント、アルギン酸ナトリウム、ＨＰＭＣ、カラヤガム、ゼラチン、グアーガム、ペクチン、アラビアゴム、キトサン、及びヒドロキシプロピルセルロースが挙げられる。生体接着性ポリマーの例としては、親水性ポリマー（例えば、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ＨＰＭＣ、Ｎａ ＣＭＣ、及びカルボマー）、チオール化ポリマー（例えば、キトサン－イミノチオラン、ＰＡＡ－システイン、ＰＡＡ－ホモシステイン、キトサン－チオグリコール酸、キトサン－チオエチルアミジン、アルギン酸－システイン、ポリ（メタ）アクリル酸－システイン、カルボキシメチルセルロースナトリウム－システイン）、レクチンベースポリマー（例えば、レンチルレクチン、ピーナッツアグルチニン、及びｕｌｅｘ ｅｕｒｏｐａｅｕｓアグルチニン）、Ｐｏｌｙｏｘ ＷＳＲ（例えば、ＷＳＲ Ｎ－１０、ＷＳＲ Ｎ－８０、ＷＳＲ Ｎ－２０５、及びＷＳＲ Ｎ－７５０）、ならびに他のポリマー（例えば、トマトレクチン、ＰＡＡ－ｃｏ－ＰＥＧ、及びＰＳＡ）が挙げられる。本開示はさらに、経直腸送達に適した坐薬を含む。様々な実施形態において、坐薬は、投与すると融解または溶解する。様々な実施形態において、坐薬は、コアを封入するカプセル（例えば、本明細書で開示するカプセル、例えば、硬質ゼラチンカプセルまたは軟質ゼラチンカプセル）を含む。様々な実施形態において、坐薬はカプセルを含まない（すなわち、コアを封入するカプセルを含まない）。坐薬は、ワックス状物質、構造化グリセリン、水素化植物油、ポリエチレングリコールワックス誘導体、またはポロキサマーベース混合物から形成することができる。様々な実施形態において、坐薬は、周囲温度では固体であるが、体温では急速に融解する。乳化剤は、坐薬塊中の結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの溶解度を高めるため、及び／または坐薬が融解した後の結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの分散を促進するために使用することができる。

【0144】

様々な実施形態において、本開示はさらに、錠剤、速溶性錠剤、液体ゲルカプセル、シロップ、ロゼンジ、エアゾールスプレー、チューインガムなどを含む。

【0145】

製剤
本開示は、医薬的に許容されるカプセルまたは懸濁液内にコアを含む経口または直腸送達用のポリペプチド製剤を含む方法及び組成物を含み、コアまたは懸濁液は、ポリペプチド組成物（例えば、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物）と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含む。

【0146】

様々な実施形態において、本開示の懸濁液は、ビタミンＥ剤及び／またはビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体中に、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物の懸濁液を含む。本開示の懸濁液は、非晶質ポリペプチド薬剤または結晶化ポリペプチド薬剤が懸濁媒体（例えば、ビタミンＥ剤、医薬的に許容される担体、またはこれらの組合せ）中に分布する液体製剤を含む。様々な実施形態において、本開示の懸濁液は、希釈懸濁液（例えば、重量または体積に基づいて１０％以下のポリペプチド薬剤を含む懸濁液）または濃縮懸濁液（例えば、重量または体積に基づいて１０～５０％以上のポリペプチド薬剤を含む懸濁液）であり得る。様々な実施形態において、本開示の懸濁液は、凝集懸濁液または脱凝集懸濁液であり得る。様々な実施形態において、懸濁液は、粗懸濁液（例えば、直径１μｍ超の粒子の懸濁液）、コロイド懸濁液（例えば、直径１μｍ未満の粒子の懸濁液）、またはナノ懸濁液（例えば、直径１～１００ｎｍの粒子の懸濁液）であり得る。本開示の懸濁液は、例えば経口または経直腸により、投与することができる。

【0147】

様々な実施形態において、コアまたは懸濁液は、約１ｍｇ～２，０００ｍｇのポリペプチド（例えば、結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチド）を含む。様々な実施形態において、コアまたは懸濁液は、約１ｍｇ～１，０００ｍｇ、１ｍｇ～５００ｍｇ、１ｍｇ～４００ｍｇ、１ｍｇ～３００ｍｇ、１ｍｇ～２００ｍｇ、または１ｍｇ～１００ｍｇの結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、製剤は、例えば、１、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、または５００ｍｇの結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの下限と、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、１，０００、または２，０００ｍｇの上限とを有する量の結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドを含む。様々な実施形態において、コアまたは懸濁液は、約５０μｇ～２，０００ｍｇのポリペプチドを含み、任意選択で、ポリペプチド製剤は、約５０μｇ～１，０００ｍｇ、５０μｇ～５００ｍｇ、５０μｇ～４００ｍｇ、５０μｇ～３００ｍｇ、５０μｇ～２００ｍｇ、５０μｇ～１００ｍｇ、５０μｇ～５０ｍｇ、５０μｇ～２５ｍｇ、５０μｇ～２０ｍｇ、５０μｇ～１５ｍｇ、５０μｇ～１０ｍｇ、５０μｇ～５ｍｇ、５０μｇ～１ｍｇ、５０μｇ～５００μｇ、１ｍｇ～１，０００ｍｇ、１ｍｇ～５００ｍｇ、１ｍｇ～４００ｍｇ、１ｍｇ～３００ｍｇ、１ｍｇ～２００ｍｇ、１ｍｇ～１００ｍｇ、１ｍｇ～５０ｍｇ、１ｍｇ～２５ｍｇの結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドを含む。様々な実施形態において、コアまたは懸濁液は、約１μｇ～２，０００ｍｇのポリペプチドを含み、任意選択で、ポリペプチド製剤は、約１μｇ～１，０００ｍｇ、１μｇ～５００ｍｇ、１μｇ～４００ｍｇ、１μｇ～３００ｍｇ、１μｇ～２００ｍｇ、１μｇ～１００ｍｇ、１μｇ～５０ｍｇ、１μｇ～２５ｍｇ、１μｇ～２０ｍｇ、１μｇ～１５ｍｇ、１μｇ～１０ｍｇ、１μｇ～５ｍｇ、１μｇ～１ｍｇ、１μｇ～５００μｇ、１μｇ～２５０μｇ、１μｇ～２００μｇ、１μｇ～１５０μｇ、１μｇ～１００μｇ、１μｇ～５０μｇの結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、製剤は、例えば、１μｇ、５μｇ、１０μｇ、１５μｇ、２０μｇ、２５μｇ ５０μｇ、１００μｇ、２００μｇ、３００μｇ、４００μｇ、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、または２５ｍｇの結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの下限と、５００μｇ、６００μｇ、７００μｇ、８００μｇ、９００μｇ、１ｍｇ、２ｍｇ、３ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、５００ｍｇ、１，０００ｍｇ、または２，０００ｍｇの結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの上限とを有する量の結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドを含む。

【0148】

様々な実施形態において、本開示の製剤（例えば、カプセル化または懸濁製剤）及び／またはそのコアは、製剤中の結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの量に対するビタミンＥ剤のモル過剰または重量過剰を含み、任意選択で、この過剰は、少なくとも１．１、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、５００、または１，０００倍の倍数過剰であり、例えば、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０、１～５０、１～１００、または１～１，０００倍の範囲内の倍数増加である。様々な実施形態において、製剤中の結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドの量に対するビタミンＥ剤のモル過剰または重量過剰の倍数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０、２００、または２５０の下限と、３０、４０、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、５００、または１，０００の上限とを有する範囲内の倍数増加である。

【0149】

様々な実施形態において、１つ以上の医薬的に許容される担体が、０．１ｍＭ～約１，０００ｍＭの間、約０．１ｍＭ～約５００ｍＭの間、約０．１ｍＭ～約２００ｍＭの間、または約１ｍＭ～約１００ｍＭの間の濃度で、本開示の製剤（例えば、カプセル化もしくは懸濁製剤）またはそのコア中に存在する。様々な実施形態において、１つ以上の医薬的に許容される担体が、０．１、１、５、１０、２０、３０、４０、５０、７５、または１００ｍＭの下限と、１０、２０、３０、４０、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、または５００ｍＭの上限とを有する濃度で、本開示の製剤（例えば、カプセル化製剤または懸濁製剤）またはそのコア中に存在する。

【0150】

本開示のある特定の坐薬製剤は、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物と、坐薬賦形剤、例えば、親油性基剤（例えば、ココアバター、ココナッツ油、バージンココナッツ油、アーモンド油、麦芽油、任意の食用油、水素化植物油、及び硬質脂肪）または親水性基剤（例えば、グリセリン化ゼラチン及びポリエチレングリコール）とを含み得る。親油性基剤は体液と混和せず、体温で容易に融解して粘膜表面で薬物を放出するのに対し、親水性基剤は、薬物を放出させるために生理的液体中で溶解する必要がある。坐薬製剤には、固体、半固体、及び液体形態が含まれ得る。

【0151】

様々な実施形態において、本開示の坐薬製剤は、ゲルまたは泡沫などの半固体の投与形態を含む。経直腸ゲルは、ポリマーネットワーク内に溶媒を閉じ込めて粘性の軟度を作出する半固体製剤である。ゲルの粘性は、共溶媒（例えば、グリセリン及びプロピレングリコール）ならびに電解質を加えるによって修飾することができる。

【0152】

様々な実施形態において、本開示の坐薬製剤は、液体坐薬、例えば、感熱性ポリマー（例えば、ポロキサマー）、粘膜付着性ポリマー（例えば、カーボポール、アルギン酸ナトリウム、ポリカルボフィル、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びメチルセルロース）、または感熱性ポリマーと粘膜付着性ポリマーとの組合せを含む液体坐薬を含む。坐薬はさらに、例えば、セルロースエーテルポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、及びメチルセルロース）を含み得る。

【0153】

様々な実施形態において、本開示の坐薬製剤は泡沫、例えば、発泡剤を含む親水性液体連続相及び全体に分散した気体分散相を有するコロイド状投与形態を含む。経直腸投与後、ある特定のこのような製剤は、粘膜表面上で泡沫状態から液体または半固体状態に移行する。発泡剤は、泡の生成及び安定化に重要である両親媒性物質を含む。

【0154】

上記に加えて、本開示の医薬組成物は、当技術分野で知られている任意の形態をとり得る。このような形態としては、例えば、液体、半固体、及び固体の投与形態、例えば、溶液（例えば、注射用液及び注入用液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、粉末、リポソーム、ならびに坐薬が挙げられる。本開示の医薬組成物は、経腸または局所投与、例えば頬側投与することができる。本開示の医薬組成物は、注射用液または注入用液の形態をとり得る。本開示の医薬組成物は、非経口様式（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内注射）による投与のために製剤化することができる。本明細書で使用する場合、非経口投与とは、経経腸及び局所投与以外の投与様式、例えば、注射による投与様式を指し、限定されるものではないが、これには静脈内、鼻腔内、経鼻、眼内、経肺、肺内、肺内外、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、腹腔内、経気管、皮下、経皮、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、脳内、頭蓋内、頸動脈内、及び胸骨内の注射及び注入が含まれる。医薬組成物は、滅菌溶液または懸濁液を含む注射用製剤の形態で非経口投与することができる。例えば、ポリペプチド組成物を１つ以上の医薬的に許容される担体と好適に組み合わせることにより、医薬組成物を製剤化することができる。投与は、全身的であっても局所的であってもよい。

【0155】

いくつかの実施形態において、組成物は、肺内投与（例えば、吸入器またはネブライザーを介した投与）用に製剤化することができる。このような組成物を製剤化するための方法は、当技術分野で周知されている。肺投与は、経口及び／または経鼻であり得る。肺送達用の医薬デバイスの例としては、定量吸入器、乾燥粉末吸入器（ＤＰＩ）、及びネブライザーが挙げられる。

【0156】

いくつかの実施形態において、組成物は、例えば、医薬的に許容される溶液、懸濁液、または軟膏の形態（例えば、点眼薬）で、眼への送達用に製剤化することができる。眼の治療に使用する製剤は、例えば、限定されるものではないが、防腐剤、緩衝剤、張度調節剤、抗酸化剤及び安定化剤、非イオン性湿潤剤または清澄化剤、ならびに粘度増加剤などの追加成分を含む、滅菌水溶液の形態をとり得る。本明細書に記載の製剤は、治療を必要とする対象の眼に、従来の方法、例えば、液滴の形態で、または治療用溶液に眼を浸すことにより、局所投与することができる。

【0157】

対象の年齢及び状態に基づいて、好適な投与手段を選択することができる。医薬製剤に含まれる有効成分の量は、指定された範囲内の好適な用量が提供されるような量である。用量及び投与方法は、患者の体重、年齢、状態、及び他の特徴に応じて異なり、当業者であれば必要に応じて好適に選択することができる。

【0158】

ポリペプチドの送達及び適用
本開示の組成物及び方法は、対象への経口投与用の製剤を含み、経口投与は、対象の胸管、リンパ系、及び／または血流へのポリペプチドの送達をもたらす。いかなる特定の科学理論、本発明者らの知識にも拘束されることは望まないが、本開示は、胸管及び／またはリンパ系を介して血流にポリペプチドを送達するために、経口製剤及び／またはビタミンＥ剤を含む経口製剤を初めて利用している。

【0159】

長い間、ビタミンＥは受動拡散によって吸収されると想定されていたが、最近のデータにより、実際には、このプロセスが以前考えられていたよりもはるかに複雑であることが示されている。いかなる特定の科学理論にも拘束されることは望まないが、典型的な食物摂取後のビタミンＥ剤消化、消化－吸収プロセスの第一段階は、食事の脂質相へのビタミンＥの溶解である。脂肪消化プロセスは、舌リパーゼによって口腔内で開始し、胃内で主細胞によって生成される胃リパーゼが加えられて継続する。胃内でのビタミンＥの代謝（すなわち、分解または吸収）は存在しないように思われる。脂肪消化の大部分は、乳化胆汁酸の支援を伴って、膵臓のリパーゼ及びコリパーゼにより十二指腸内で行われる。脂質は、胃及び十二指腸の両方のレベルで乳化されて脂質小滴となる。加えて、液滴のサイズは、その後のビタミンＥの吸収効率にいかなる影響も及ぼさないように思われる。十二指腸では、脂肪分解から生じたモノグリセリド及び長鎖脂肪酸は、リン脂質、コレステロール、及び脂溶性ビタミンとともに、胆汁酸塩とミセルを形成する。ビタミンＥは、脂質消化産物とともに混合ミセルに取り込まれ、腸細胞による吸収へのステップとなる。混合ミセルは疎水性構成要素を可溶化し、撹拌されていない水層（グリコカリックス）に拡散して腸細胞の刷子縁膜に近づくことができる。刷子縁膜に近づくと、混合ミセルは既存のｐＨ勾配により解離し得る。すると放出された構成成分は、腸細胞に吸収されるための様々な系により（例えば、受動拡散及び／またはスカベンジャー受容体により）捕捉される。ひとたび吸収されると、腸管を横断したビタミンＥの運命は十分に説明されていない。疎水性であることから、ビタミンＥは、おそらくはオルガネラ膜、細胞質脂質小滴、または結合タンパク質に結合するトラフィックに局在すると考えられる。細胞内局在により、ビタミンＥがミクロソーム膜、すなわち、小胞体、ゴルジ、リソソーム及びペルオキシソーム膜に蓄積し得ることが明らかになった。長鎖脂肪酸及びモノグリセリドは再エステル化されてトリグリセリドとなり、続いてポリペプチド、リン脂質、及びコレステロールと結合してカイロミクロンを形成する。ビタミンＥのほとんどは、ゴルジ体レベルでその遊離形態でカイロミクロンに取り込まれてからリンパに放出される。この後、カイロミクロンは胸管を通じて腸管リンパ管に入り、最終的には末梢循環に入る。リンパ系は様々な免疫系細胞を循環させ、またある特定の栄養素の主な吸収部位でもある。大きな分子量の消化産物は、リンパ系に吸収されてから静脈系を通じて全身循環に達する。全体的に見て、ビタミンＥ吸収の機序はまだ部分的な理解にとどまっている。当業者であれば、ビタミンＥ吸収の大部分が腸の遠位部で生じることを一般的に理解するであろう。

【0160】

いかなる特定の科学理論にも拘束されることは望まないが、本発明者らは、驚くべきことに、ビタミンＥ剤及びポリペプチドを含むコアまたは懸濁液において経口投与されたポリペプチドが、血流に、例えば、胸管及び／またはリンパ系を介して、効率的に送達されることを発見した。したがって、本開示は、多様なポリペプチドを胸管、リンパ系、及び／または血流に送達するための、本明細書で開示する組成物及び方法を含めた一般的なプラットフォームまたは系を提供する。

【0161】

本開示は、例えば、対象へのポリペプチドの送達、例えば、対象の胸管、リンパ系、及び／または血流への送達のための、組成物及び方法を提供する。様々な実施形態において、本開示の組成物または方法は、有益な薬物動態学的特性により、ポリペプチドを血流に送達する。様々な実施形態において、有益な薬物動態学的特性は、リンパ系を通じた（例えば、胸管を介した）ポリペプチドの分布からもたらされ得る。したがって本開示は、具体的には、リンパ系への（例えば、胸管を介した）ポリペプチドの送達のための方法及び組成物を含む。

【0162】

様々な実施形態において、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、複数の試料、系、及び／またはポリペプチド分子において（例えば、ポリペプチド製剤を各対象に投与した後の複数の対象において）、少なくとも１５時間の半減期の中央値、平均値、または最頻値を有することを特徴とし、任意選択で、半減期は、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０時間、またはそれ以上であり、任意選択で、半減期の中央値、平均値、または最頻値は、３０、３５、４０、４５、または５０時間の下限値及び３５、４０、４５、５０、５５、６０時間、またはそれ以上の上限値を有する範囲にある。様々な実施形態において、本開示のポリペプチド製剤を対象に経口投与した後、ポリペプチド製剤のポリペプチドは少なくとも１５時間の半減期を有し、任意選択で、半減期は、少なくとも２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、または６０時間、またはそれ以上であり、任意選択で、半減期は、３０、３５、４０、４５、または５０時間の下限及び３５、４０、４５、５０、５５、６０時間、またはそれ以上の上限を有する範囲にある。

【0163】

様々な実施形態において、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、複数の試料、系、及び／またはポリペプチド分子において（例えば、ポリペプチド製剤を各対象に経口投与した後の複数の対象において）、（例えば、ポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成される半減期の中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも１０％大きい半減期の中央値、平均値、または最頻値を有することを特徴とし、任意選択で、ポリペプチド製剤のポリペプチドの（例えば、経口投与後の）半減期の中央値、平均値、または最頻値は、（例えば、ポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成される半減期の中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、または４倍大きい。様々な実施形態において、ポリペプチド製剤を対象に経口投与した後、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、（例えば、ポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成される半減期よりも、基準に対し少なくとも１０％大きい半減期を有し、任意選択で、対象に経口投与した後のポリペプチド製剤のポリペプチドの半減期は、（例えば、ポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成される半減期よりも、基準に対し少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、または４倍大きい。

【0164】

様々な実施形態において、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、複数の試料、系、及び／またはポリペプチド分子において（例えば、ポリペプチド製剤を各対象に経口投与した後の複数の対象において）、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＴ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも１０％大きいＴ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値を有することを特徴とし、任意選択で、（例えば、経口投与後の）ポリペプチド製剤のポリペプチドのＴ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値は、（例えば、ポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＴ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、または４倍、５倍、１０倍、または２０倍大きい。様々な実施形態において、ポリペプチド製剤を対象に経口投与した後、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＴ_ｍａｘよりも、基準に対し少なくとも１０％大きいＴ_ｍａｘを有し、任意選択で、対象に経口投与した後のポリペプチド製剤のポリペプチドのＴ_ｍａｘは、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＴ_ｍａｘよりも、基準に対し少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、または４倍、５倍、１０倍、または２０倍大きい。

【0165】

様々な実施形態において、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、複数の試料、系、及び／またはポリペプチド分子において（例えば、各対象にポリペプチド製剤を経口投与した後の複数の対象において）、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるバイオアベイラビリティの中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも１％大きいバイオアベイラビリティを有することを特徴とし、任意選択で、（例えば、経口投与後の）ポリペプチド製剤のポリペプチドのバイオアベイラビリティの中央値、平均値、または最頻値は、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるバイオアベイラビリティよりも、基準に対し少なくとも１％、１．５％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、４倍、または５倍大きい。様々な実施形態において、ポリペプチド製剤を対象に経口投与した後、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるバイオアベイラビリティよりも、基準に対し少なくとも１％大きいバイオアベイラビリティを有し、任意選択で、対象に経口投与した後のポリペプチド製剤のポリペプチドのバイオアベイラビリティは、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるバイオアベイラビリティよりも、基準に対し少なくとも１％、１．５％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２倍、３倍、４倍、または５倍大きい。様々な実施形態において、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、複数の試料、系、及び／またはポリペプチド分子において（例えば、各対象にポリペプチド製剤を経口投与した後の複数の対象において）、少なくとも１％、例えば、少なくとも１％、１．５％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％であるバイオアベイラビリティの中央値、平均値、または最頻値を有することを特徴とする。

【0166】

様々な実施形態において、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、複数の試料、系、及び／またはポリペプチド分子において（例えば、各対象にポリペプチド製剤を経口投与した後の複数の対象において）、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＣ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも１０％小さいＣ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値を有することを特徴とし、任意選択で、（例えば、経口投与後の）ポリペプチド製剤のポリペプチドのＣ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値は、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＣ_ｍａｘの中央値、平均値、または最頻値よりも、基準に対し少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％小さい。様々な実施形態において、ポリペプチド製剤を対象に経口投与した後、ポリペプチド製剤のポリペプチドは、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＣ_ｍａｘよりも、基準に対し少なくとも１０％小さいＣ_ｍａｘを有し、任意選択で、対象に経口投与した後のポリペプチド製剤のポリペプチドのＣ_ｍａｘは、（例えば、このポリペプチドの標準治療投与経路に従う）ポリペプチドの注射（例えば、皮下投与）によって達成されるＣ_ｍａｘよりも、基準に対し少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％小さい。

【0167】

様々な実施形態において、本開示の方法は、本開示の組成物の投与を、それを必要とする対象において行うことを含むことができ、組成物は、対象が患う疾患または状態の治療のためのポリペプチドを含む。

【0168】

本明細書ではさらに、哺乳類における疾患または障害を治療する方法であって、ポリペプチドの治療有効量を含む本開示の組成物を哺乳類に投与することを含み、製剤が、医薬的に許容される粘度低減剤、凝集低減剤、または上記のような他の添加剤をさらに含み、治療用製剤が、疾患または障害の治療に有効である、方法が開示される。いくつかの実施形態において、治療用製剤は、基準製剤と比較して改善された安定性を有する。いくつかの実施形態において、賦形剤化合物は本質的に純粋である。

【0169】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、がん、例えば、乳癌、胃癌、非ホジキンリンパ腫、尿路上皮癌・固形腫瘍、転移性大腸癌、非扁平上皮非小細胞肺癌、転移性乳癌、ホジキンリンパ腫、胆道癌、急性骨髄性白血病、前立腺癌、多発性骨髄腫、骨の固形腫瘍、神経芽腫、膵臓癌、急性骨髄性白血病、転移性黒色腫、転移性扁平上皮非小細胞癌、退形成性星細胞腫、脳腫瘍、膠芽腫、神経膠腫、頭頸部癌、メルケル細胞癌、上咽頭癌、食道癌、肝細胞癌、難治性神経芽腫、骨肉腫、腹膜癌、卵管癌、中皮腫、転移性黒色腫、腎細胞癌、がんのためのＮＲ－ＬＵ－１０、ループス、慢性リンパ性白血病、軟部肉腫、卵巣癌、膀胱癌、食道癌、胃上咽頭癌、副腎皮質癌、ＨＥＲ２陽性乳癌、腺癌、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）、顕微鏡的多発血管炎、特発性肺線維症、巣状分節性糸球体硬化症、プロラクチノーマ、及びこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0170】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、自己免疫疾患、例えば、関節リウマチ（ＲＡ）、変形性関節症、若年性特発性関節炎（ＪＩＡ）、乾癬性関節炎（ＰｓＡ）、強直性脊椎炎（ＡＳ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、尋常性乾癬（Ｐｓ）、全身性エリテマトーデス、ループス腎炎、家族性寒冷自己炎症症候群（ＦＣＡＳ）、シェーグレン症候群、及びこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0171】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、別の免疫関連疾患、例えば、白血球減少症、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、血栓性微小血管症（ＴＭＡ）、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎及び移植拒絶反応、手術関連の生命を脅かす制御不能な出血、ならびにこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0172】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、感染性疾患、例えば、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ感染症、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）疾患、炭疽、流感ウイルス感染症、インフルエンザウイルス感染症、Ｂ型肝炎ウイルス感染症、狂犬病ウイルス感染症、侵襲性カンジダ感染症、細菌性敗血症性ショック、ＨＩＶ感染症、院内肺炎、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ感染症、下痢及びＨＵＳ（溶血性尿毒症症候群）を引き起こすＳＴＥＣ（志賀様毒素産生Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉまたはＥ．ｃｏｌｉ血清型Ｏ１２１）感染症、サイトメガロウイルス、ボツリヌス症、エボラウイルス、ならびにこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0173】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、心血管疾患、例えば、心虚血性合併症、経皮的冠動脈インターベンション、急性心筋梗塞、肺塞栓症、深部静脈血栓症、動脈血栓症または塞栓症、動静脈カニューレの閉塞、慢性免疫（特発性）血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）を伴う血小板減少症、及びこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0174】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、眼科障害、例えば、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、黄斑浮腫、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫、視神経脊髄炎、及びこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0175】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、呼吸器障害、例えば、喘息、慢性特発性蕁麻疹、急性気管支痙攣または喘息状態、慢性閉塞性肺疾患、及びこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0176】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、代謝障害、例えば、高脂血症、１型及び２型糖尿病、高コレステロール血症、脂質異常症、ならびにこれらの組合せの治療及び／または検出を含み得る。

【0177】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、血友病Ａ及びＢ、プラダー・ウィリー症候群、ターナー症候群、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、マックル・ウェルズ症候群（ＭＷＳ）、Ｘ連鎖性低リン血症、鎌状赤血球疼痛発作、及びこれらの組合せのような遺伝子障害の治療及び／または検出を含み得る。

【0178】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、骨粗鬆症、再生不良性貧血、及びこれらの組合せのような骨関連疾患の治療及び／または検出を含み得る。

【0179】

いくつかの実施形態において、本開示の組成物の治療的使用は、毒液の除去、アルツハイマー病、背部痛（坐骨神経痛）、偏頭痛、アトピー性皮膚炎、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肝線維症、嚢胞性線維症、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ感染症、人工呼吸器関連肺炎、及びこれらの組合せを含む他の障害の治療及び／または検出を含み得る。

【0180】

様々な実施形態において、本開示は、本開示の製剤を生成する方法であって、例えば、（１）非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含むコアを調製するステップ、及び（２）医薬的に許容されるカプセルにコアを封入するステップを含む、方法を提供する。様々な実施形態において、本開示は、本開示の製剤を生成する方法であって、例えば、（１）ポリペプチドを結晶化して、非晶質ポリペプチド組成物または結晶化ポリペプチド組成物を生成するステップ、（２）結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチド組成物と、ビタミンＥ剤を含む医薬的に許容される担体とを含むコアを調製するステップ、及び（３）医薬的に許容されるカプセルにコアを封入するステップを含む、方法を提供する。

【実施例】

【0181】

以下の実施例は、ポリペプチド及びビタミンＥ剤を含むポリペプチドを経口投与するための方法及び組成物を実証するものである。以下の実施例は、本開示の経口製剤の利点（注射による投与用の同じポリペプチドの基準液体製剤と比較しての半減期及びバイオアベイラビリティの改善を含む）をさらに実証するものである。

【0182】

本実施例は、結晶化ポリペプチドまたは非晶質ポリペプチドであるポリペプチドとビタミンＥ剤とを含む経口製剤の製剤化及び試験を提供する。本実施例は、バッチ結晶化を利用して結晶化ポリペプチド組成物を生成する。当業者であれば本開示から理解するであろうように、結晶の特定の生成方法、サイズ、サイズ分布、形状、及び形状分布は、本明細書で提供する方法及び組成物に従ってポリペプチドを首尾よく製剤化するために不可欠な特徴ではない。本実施例は、非晶質ポリペプチドまたは結晶化ポリペプチドを含む本開示の経口製剤を有利に生成することができることを明示的に実証するものである。

【0183】

実施例１：トラスツズマブの結晶化
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤に使用するための結晶化トラスツズマブの形成を示す。トラスツズマブは、Ｈｅｒｃｌｏｎ（登録商標）（Ｒｏｃｈｅ）として市販されているヒト化モノクローナル抗体である。トラスツズマブは、ヒトフレームワーク領域と、ＨＥＲ２と結合するマウス抗体（４Ｄ５）の相補性決定領域とを含むＩｇＧ１カッパ抗体である。トラスツズマブは、上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）タンパク質の細胞外ドメインを過剰発現する乳癌の治療に広く使用されている。本実施例は、トラスツズマブが、経口製剤が有利と考えられるポリペプチドの例示であるという認識を含む。

【0184】

トラスツズマブを無菌凍結乾燥粉末としてその元の４４０ｍｇバイアルに保存し、続いて５ｍｌの無菌水に溶解した。溶解したトラスツズマブ溶液には、８８ｍｇ／ｍｌのトラスツズマブ、３９．６ｍｇのＬ－ヒスチジンＨＣｌ、２５．６ｍｇのＬ－ヒスチジン、１６００ｍｇのα，α－トレハロース二水和物、及び７．２ｍｇのポリソルベート２０（ＵＳＰ）が含まれた。

【0185】

トラスツズマブ微粒子を生成するため、３．９６ｍｇ／ｍｌのＬ－ヒスチジン塩酸塩、２．５６ｍｇ／ｍｌのＬ－ヒスチジン、１６０ｍｇ／ｍｌのα，α－トレハロース二水和物、及び０．７２ｍｇ／ｍｌのポリソルベート２０（ＵＳＰ）を含む緩衝液に入った５００μｌアリコートのトラスツズマブ（８８ｍｇ／ｍｌ）を、２０％のＰＥＧ３００、１０％のＰＥＧ８０００、１０％のグリセロール、１００ｍＭのトリス（ｐＨ８．５）を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のトラスツズマブの最終濃度は２９．３３ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、トラスツズマブ微粒子を得た（図１）。この方法により、投入したトラスツズマブの９５％が微粒子を形成した。

【0186】

実施例２：リラグルチドの結晶化
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤に使用するための結晶化リラグルチドの形成を示す。リラグルチドはＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）の商品名で販売されている。リラグルチドは、組換え技術を用いて生成されたヒトグルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）の合成アナログであり、ＧＬＰ－１受容体アゴニストとして作用する。リラグルチドはネイティブヒトＧＬＰ－１と９７％相同であり、３４位のリジンをアルギニンに置換している。リラグルチドは、ペプチド前駆体の２６位の残りのリジン残基上にグルタミン酸スペーサーを有するＣ－１６脂肪酸（パルミチン酸）を含む。リラグルチドの治療効果としては、膵臓からのインスリン放出の増加及び過剰なグルカゴン放出の減少が挙げられる。本実施例は、リラグルチドが、経口製剤が有利と考えられるポリペプチドの例示であるという認識を含む。

【0187】

リラグルチドの半減期は治療滴使用において重要な考慮事項である。内在性ＧＬＰ－１は、ジペプチジルペプチダーゼ－４（ＤＰＰ４）及び中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）という遍在性の酵素によって分解されるため、１．５～２分という血漿半減期を有する。筋肉注射後の半減期はおよそ３０分であるため、この方法で投与しても治療薬としての使用が限定される。ＧＬＰ－１の代謝活性形態は、内在性ＧＬＰ－１－（７－３６）ＮＨ_２、及びより希少なＧＬＰ－１－（７－３７）である。リラグルチドの作用の持続は、ＧＬＰ－１－（７－３７）分子の１つの位置に脂肪酸分子を結合して、自己会合及びアルブミンへの結合の両方を可能にすることによって達成される。すると、活性ＧＬＰ－１がアルブミンからゆっくりと一定の速度で放出される。

【0188】

本実施例で使用するために、リラグルチドを無色透明またはほぼ無色の溶液のＶＩＣＴＯＺＡとして得た。ＶＩＣＴＯＺＡ溶液の各１ｍＬには、６ｍｇのリラグルチドならびに以下の不活性成分：リン酸二ナトリウム二水和物１．４２ｍｇ、プロピレングリコール１４ｍｇ、フェノール５．５ｍｇ、及び注射用水が含まれる。事前充填された各ペンには、１８ｍｇのリラグルチド（遊離塩基、無水）に相当するＶＩＣＴＯＺＡの３ｍＬ溶液が含まれる。

【0189】

リラグルチド微粒子を生成するため、リラグルチドを水に対し、３回交換しながら２４時間透析し、凍結乾燥して乾燥粉末を得た。次いで、リラグルチドの凍結乾燥粉末を８０ｍｇ／ｍＬの濃度で水に溶解した。次いで、以下に記載する様々な方法を用いてリラグルチドのアリコートを結晶化した。

【0190】

結晶化方法１：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、１．３４Ｍの硫酸アンモニウム、３．３５％（ｖ／ｖ）のＰＥＧ４００、０．０５Ｍの硫酸マグネシウム、０．１Ｍのトリス塩基／塩酸ｐＨ ８．５を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図２）。この方法により、投入したリラグルチドの７５％が微粒子を形成した。

【0191】

結晶化方法２：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、３５％（ｖ／ｖ）のＭＰＤ、１００ｍＭのトリス塩基／塩酸ｐＨ７．０、２００ｍＭの塩化ナトリウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図３）。この方法により、投入したリラグルチドの８５％が微粒子を形成した。

【0192】

結晶化方法３：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、１，０００ｍＭの二塩基性リン酸アンモニウム、１００ｍＭのクエン酸ナトリウム／クエン酸ｐＨ５．５、２００ｍＭの塩化ナトリウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図４）。この方法により、投入したリラグルチドの９０％が微粒子を形成した。

【0193】

結晶化方法４：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、２５％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ１５００、１００ｍＭのＳＰＧ緩衝液ｐＨ８．５を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図５）。この方法により、投入したリラグルチドの８５％が微粒子を形成した。

【0194】

結晶化方法５：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、４０％（ｖ／ｖ）のエチレングリコール、１００ｍＭのＭＥＳ／水酸化ナトリウムｐＨ６．０、２００ｍＭの酢酸亜鉛を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図６）。この方法により、投入したリラグルチドの７５％が微粒子を形成した。

【0195】

結晶化方法６：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、３Ｍの塩化ナトリウム、５％（ｖ／ｖ）のＭＰＤ、０．１Ｍの塩化カルシウム、０．１Ｍのイミダゾール／塩酸ｐＨ６．５を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図７）。この方法により、投入したリラグルチドの８０％が微粒子を形成した。

【0196】

結晶化方法７：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、０．４２９Ｍの塩化ナトリウム、９．９％（ｖ／ｖ）のイソプロパノール、０．１Ｍの塩化カルシウム、０．１Ｍのイミダゾール／塩酸ｐＨ６．５を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図８）。この方法により、投入したリラグルチドの７０％が微粒子を形成した。

【0197】

結晶化方法８：水中５００μｌのリラグルチド（８０ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、５．３６％（ｖ／ｖ）のＭＰＤ、０．６７Ｍの二塩基性リン酸カリウム／一塩基性リン酸ナトリウムｐＨ８．５を含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のリラグルチドの最終濃度は２６．６７ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、リラグルチド微粒子を得た （図９）。この方法により、投入したリラグルチドの８５％が微粒子を形成した。

【0198】

実施例３：インスリンの結晶化
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤に使用するための結晶化インスリンの形成を示す。Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標）Ｒは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ細菌の非疾患生成実験室株においてｒＤＮＡ技術を通じて合成されたヒトインスリンと構造的に同一のポリペプチドホルモンである。Ｈｕｍｕｌｉｎ Ｒは、成人及び小児の１型及び２型糖尿病患者において、血糖制御を改善するために食事及び運動の補助治療として適用される。Ｈｕｍｕｌｉｎ Ｒは、皮下に使用する場合、通常は１日３回以上食前に投与する。本実施例は、インスリンが、経口製剤が有利と考えられるポリペプチドの例示であるという認識を含む。

【0199】

本実施例は、Ｈｕｍｕｌｉｎ Ｒ（インスリン（ヒト遺伝子組換え））Ｕ－１００（１００単位／ｍＬ）を利用する。インスリン微粒子を生成するため、インスリン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）を０．０１Ｎ ＮａＯＨを用いて以下のように脱塩した。６２ｍｇのインスリンを４ｍＬの０．０１Ｎ ＨＣｌ（ｐＨ２．０）に溶解した。各回に１０ｕＬの０．１Ｎ ＮａＯＨを加えることにより、ポリペプチド溶液のｐＨをポリペプチドが沈殿するまで増加させた。沈殿したポリペプチドを採取し、５ｍＬの水で２回洗浄し、各回ごとに水を別々に採取した。採取した水に０．１Ｎ ＮａＯＨを加えて、溶解したポリペプチドを水から採取した。最後に、全ての沈殿物を１ｍＬの０．０１Ｎ ＨＣＬに溶解した。次いで、以下に記載する様々な方法を用いてインスリンのアリコートを結晶化した。

【0200】

結晶化方法１：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、４０％（ｖ／ｖ）のＰＥＧ３００、１００ｍＭのカコジル酸ナトリウム／塩酸ｐＨ６．５、２００ｍＭの酢酸カルシウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１０）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0201】

結晶化方法２：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、４０％（ｖ／ｖ）のＰＥＧ６００、１００ｍＭのカコジル酸ナトリウム／塩酸ｐＨ６．５、２００ｍＭ酢酸カルシウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１１）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0202】

結晶化方法３：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、４０％（ｖ／ｖ）の１，２－プロパンジオール、１００ｍＭの酢酸ナトリウム／酢酸ｐＨ４．５、５０ｍＭの酢酸カルシウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１２）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0203】

結晶化方法４：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、１４．４％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ８０００、８０ｍＭのカコジル酸ナトリウム／塩酸ｐＨ６．５、１６０ｍＭの酢酸カルシウム、２０％（ｖ／ｖ）のグリセロールを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１３）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0204】

結晶化方法５：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ３０００、１００ｍＭのトリス塩基／塩酸ｐＨ７．０、２００ｍＭの酢酸カルシウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１４）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0205】

結晶化方法６：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、２０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ１０００、１００ｍＭのカコジル酸ナトリウム／塩酸ｐＨ６．５、２００ｍＭの塩化マグネシウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１５）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0206】

結晶化方法７：水中５００μｌのインスリン（約６２ｍｇ／ｍｌ）のアリコートを、１０％（ｖ／ｖ）の２－プロパノール、１００ｍＭのＭＥＳ／水酸化ナトリウムｐＨ６．０、２００ｍＭの酢酸カルシウムを含む１，０００μｌの試薬と混合し、室温で一晩インキュベートした。溶液中のインスリンの最終濃度は１５．５ｍｇ／ｍｌであった。次いでボルテックスを用いてこの混合物を混合し、室温で放置した。翌日、インスリン微粒子を得た （図１６）。この方法により、投入したインスリンの９０％が微粒子を形成した。

【0207】

実施例４：ニュージーランドホワイトウサギにおけるビタミンＥ含有リラグルチド製剤の薬物動態試験
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤の例示であるリラグルチドの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。

【0208】

本実施例には、以下のように調製した結晶化ポリペプチドの経口製剤が含まれる：市販のＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）（３ｍＬ溶液に６ｍｇ／ｍＬのリラグルチド、５．５ｍｇのフェノール、水酸化ナトリウム、塩酸、及び注射用水が含まれる）を、水に対し４℃で２４時間、３回交換しながら透析した。次いで、透析したリラグルチドを使用して、実施例２で言及した手順に従って微粒子を調製した。次いで、微粒子リラグルチドを低温のイソプロパノールで洗浄した後に凍結乾燥した。次いで、５０μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）が入ったサイズ１の透明ゼラチンカプセルに、凍結乾燥リラグルチド（表２で言及した投与量）を移した。次いで、カプセルをさらなる使用まで４℃で保存した。

【0209】

体重１．５ｋｇの雄のニュージーランドホワイトウサギにおいて薬物動態学的分析を５日間行った。実験計画を表２に示す。重炭酸ナトリウムを含む飼料（２０ｇｍの通常の飼料＋３ｇｍの重炭酸ナトリウム（水を加えることにより調製したペレット／飼料ボール））でウサギを飼育した。動物を、投与の前の－３日目～０日目までは上記の飼料で飼育し、続いて実験期間中のみ通常の飼料で飼育した。異なる時点で採取した血漿試料を、ＡＢＢＥＸＡのプロトコルに従ってＬＲＴ ＥＬＩＳＡキットにより分析した。このキットは、競合的酵素結合免疫吸着アッセイ技術に基づく。抗体の抗リラグルチドを９６ウェルプレートにプレコーティングした。標準物質、試験試料、及びビオチン結合体化試薬をウェルに加え、インキュベートした。ビオチン標識ＬＲＴとプレコーティング抗体上の非標識ＬＲＴとの間で競合的阻害反応が起こる。次いでＨＲＰ結合体化試薬を加え、プレート全体をインキュベートした。各段階で、結合していない結合体を洗浄緩衝液で除去した。ＴＭＢ基質を使用してＨＲＰ酵素反応を定量化した。ＴＭＢ基質を加えた後、十分なＬＲＴが入ったウェルのみが青色の生成物を生成し、これは次に酸性の停止液を加えた後は黄色に変化する。黄色の濃さは、プレート上で結合したＬＲＴ量に反比例する。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおけるＯＤを分光測定し、そこからＬＲＴの濃度を算出することができる。

【0210】

特定の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿中でリラグルチドを分析した。ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いた非コンパートメント法を用いて薬物動態エンドポイントを決定した。観察濃度に台形則を用いてＡＵＣを近似した。各リラグルチド用量のＣ_ｍａｘを、全ての有効濃度の最大値として導出し、次いでｔ_ｍａｘをＣ_ｍａｘに対応する時点として決定した。最終消失速度定数（λ_ｚ）は、濃度－時間曲線の最終部分に対する対数線形回帰によって推定し、次いでｔ_１／２をｔ_１／２＝ｌｎ２／λ_ｚとして算出した。

【0211】

表３及び図１７のデータは、種々の時点におけるリラグルチドの平均血漿濃度を示している。経口投与したリラグルチド製剤は、皮下製剤と比較すると３９％のバイオアベイラビリティを示した。

【表2】

【表3】

【0212】

実施例５：ビーグル犬におけるビタミンＥ含有リラグルチド製剤の薬物動態試験
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤の例示であるリラグルチドの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。

【0213】

本実施例には、以下のように調製した結晶化ポリペプチドの経口製剤が含まれる：市販のＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）（３ｍＬ溶液に６ｍｇ／ｍＬのリラグルチド、５．５ｍｇのフェノール、水酸化ナトリウム、塩酸、及び注射用水が含まれる）を、水に対し４℃で２４時間、３回交換しながら透析した。次いで、透析したリラグルチドを実施例２で言及した手順に従って処理して、微粒子を調製した。次いで、微粒子リラグルチドを低温のイソプロパノールで洗浄した後に凍結乾燥した。次いで、５０μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）が入ったサイズ１の透明ゼラチンカプセルに、凍結乾燥リラグルチド（表４で言及した投与量）を移した。次いで、カプセルをさらなる使用まで４℃で保存した。

【0214】

体重１５ｋｇのビーグル犬を用いて薬物動態分析を５日間行った。実験計画を表４に示す。異なる時点で採取した血漿試料を、ＡＢＢＥＸＡのプロトコルに従ってＬＲＴ ＥＬＩＳＡキットにより分析した。このキットは、競合的酵素結合免疫吸着アッセイ技術に基づく。抗体の抗リラグルチドを９６ウェルプレートにプレコーティングした。標準物質、試験試料、及びビオチン結合体化試薬をウェルに加え、インキュベートした。ビオチン標識ＬＲＴとプレコーティング抗体上の非標識ＬＲＴとの間で競合的阻害反応が起こる。次いでＨＲＰ結合体化試薬を加え、プレート全体をインキュベートした。各段階で、結合していない結合体を洗浄緩衝液で除去した。ＴＭＢ基質を使用してＨＲＰ酵素反応を定量化した。ＴＭＢ基質を加えた後、十分なＬＲＴが入ったウェルのみが青色の生成物を生成し、これは次に酸性の停止液を加えた後は黄色に変化する。黄色の濃さは、プレート上で結合したＬＲＴ量に反比例する。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおけるＯＤを分光測定し、そこからＬＲＴの濃度を算出することができる。

【0215】

表５及び図１８のデータは、種々の時点におけるリラグルチドの平均血漿濃度を示している。経口投与したリラグルチド製剤（カプセル製剤において１５ｍｇ）は、皮下対照（皮下、１．５ｍｇ、１回目の注射から９６時間後に２回目の注射）と比較すると１９％のバイオアベイラビリティを示した。

【0216】

特定の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿中でリラグルチドを分析した。ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いた非コンパートメント法を用いて薬物動態エンドポイントを決定した。観察濃度に台形則を用いてＡＵＣを近似した。各リラグルチド用量のＣ_ｍａｘを、全ての有効濃度の最大値として導出し、次いでｔ_ｍａｘをＣ_ｍａｘに対応する時点として決定した。最終消失速度定数（λ_ｚ）は、濃度－時間曲線の最終部分に対する対数線形回帰によって推定し、次いでｔ_１／２をｔ_１／２＝ｌｎ２／λ_ｚとして算出した。

【表4】

【表5】

【0217】

実施例６：ミニブタにおけるビタミンＥ含有リラグルチド製剤の薬物動態試験
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤の例示であるリラグルチドの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。

【0218】

本実施例には、以下のように調製した結晶化ポリペプチドの経口製剤が含まれる：市販のＶｉｃｔｏｚａ（登録商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）（３ｍＬ溶液に６ｍｇ／ｍＬのリラグルチド、５．５ｍｇのフェノール、水酸化ナトリウム、塩酸、及び注射用水が含まれる）を、水に対し４℃で２４時間、３回交換しながら透析した。次いで、透析したリラグルチドを実施例２で言及した手順に従って処理して、微粒子を調製した。次いで、微粒子リラグルチドを低温のイソプロパノールで洗浄した後に凍結乾燥した。次いで、５０μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）が入ったサイズ１の透明ゼラチンカプセルに、凍結乾燥リラグルチド（表６で言及した投与量）を移した。次いで、カプセルをさらなる使用まで４℃で保存した。

【0219】

体重１２ｋｇのミニブタを用いて薬物動態分析を５日間行った。実験計画を表６に示す。異なる時点で採取した血漿試料を、ＡＢＢＥＸＡのプロトコルに従ってＬＲＴ ＥＬＩＳＡキットにより分析した。このキットは、競合的酵素結合免疫吸着アッセイ技術に基づく。抗体の抗リラグルチドを９６ウェルプレートにプレコーティングした。標準物質、試験試料、及びビオチン結合体化試薬をウェルに加え、インキュベートした。ビオチン標識ＬＲＴとプレコーティング抗体上の非標識ＬＲＴとの間で競合的阻害反応が起こる。次いでＨＲＰ結合体化試薬を加え、プレート全体をインキュベートした。各段階で、結合していない結合体を洗浄緩衝液で除去した。ＴＭＢ基質を使用してＨＲＰ酵素反応を定量化した。ＴＭＢ基質を加えた後、十分なＬＲＴが入ったウェルのみが青色の生成物を生成し、これは次に酸性の停止液を加えた後は黄色に変化する。黄色の濃さは、プレート上で結合したＬＲＴ量に反比例する。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおけるＯＤを分光測定し、そこからＬＲＴの濃度を算出することができる。

【0220】

表７及び図１９のデータは、種々の時点におけるリラグルチドの平均血漿濃度を示している。経口投与したリラグルチド製剤（カプセル製剤において１．２５０ｍｇ）は、皮下（０．０６２５ｍｇ）と比較すると３８％のバイオアベイラビリティを示した。

【0221】

特定の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿中でリラグルチドを分析した。ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いた非コンパートメント法を用いて薬物動態エンドポイントを決定した。観察濃度に台形則を用いてＡＵＣを近似した。各リラグルチド用量のＣ_ｍａｘを、全ての有効濃度の最大値として導出し、次いでｔ_ｍａｘをＣ_ｍａｘに対応する時点として決定した。最終消失速度定数（λ_ｚ）は、濃度－時間曲線の最終部分に対する対数線形回帰によって推定し、次いでｔ_１／２をｔ_１／２＝ｌｎ２／λ_ｚとして算出した。

【表6】

【表7】

【0222】

実施例７：ニュージーランドホワイトウサギにおけるビタミンＥ含有トラスツズマブ製剤の薬物動態試験
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤の例示であるトラスツズマブの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。

【0223】

本実施例に含まれる結晶化ポリペプチドの経口製剤を以下のように調製した。商業的に入手したトラスツズマブ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（凍結乾燥粉末は、４４０ｍｇのトラスツズマブ、９．９ｍｇのＬ－ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇのＬ－ヒスチジン、４００ｍｇのα，α，－トレハロース二水和物、及び１．８ｍｇのポリソルベート２０（ＵＳＰ）、ならびに再構成の注射用水としての２０ｍＬの水を含む）、６ｍＬの注射用水に再構成した。次いで、再構成したトラスツズマブを実施例１で言及した手順に従って処理して、微粒子を調製した。次いで、微粒子トラスツズマブを低温のイソプロパノールで洗浄した。次いで、５０μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）が入ったサイズ００の透明ゼラチンカプセルに、トラスツズマブ（表８で言及した投与量）を移した。次いで、カプセルをさらなる使用まで４℃で保存した。

【0224】

体重１．５ｋｇの雄のニュージーランドホワイトウサギにおいて薬物動態学的分析を１４日間行った。実験計画を表８に示す。重炭酸ナトリウムを含む飼料（２０ｇｍの通常の飼料＋３ｇｍの重炭酸ナトリウム（水を加えることにより調製したペレット／飼料ボール））でウサギを飼育した。動物を、投与の前の－３日目～０日目までは上記の飼料で飼育し、続いて実験期間中のみ通常の飼料で飼育した。異なる時点で採取した血漿試料をＥＬＩＳＡにより分析した。簡潔に説明すると、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＮＵＮＣ免疫プレートをｐＨ９．６の炭酸ナトリウム緩衝液中２μｇ／ｍＬの抗トラスツズマブコーティング抗体（Ａｂｃａｍ）で４℃で一晩コーティングした。コーティングしたプレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で洗浄した。洗浄後、プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＢＳＡ）により室温で３時間ブロッキングした。分析を行う血漿試料をＰＢＳで希釈し、コーティング抗体とともに１時間インキュベートし、次に洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異性）－ペルオキシダーゼ捕捉抗体（Ｓｉｇｍａ）を加えた。ＴＭＢ基質を用いて検出を４５０ｎｍで行った。
結果
表９及び図２０のデータは、種々の時点におけるトラスツズマブの平均血漿濃度を示している。経口投与したトラスツズマブ製剤は、静注と比較すると２６％のバイオアベイラビリティを示した（再構成Ｈｅｒｃｌｏｎ（Ｒｏｃｈｅ）バイアルには２１ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブ、Ｌ－ヒスチジン（ｈｉｓｔｉｄｉｂｅ）塩酸塩、Ｌ－ヒスチジン、－トレハロース二水和物、ポリソルベート２０、及び注射用水が含まれる）。
特定の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿中でトラスツズマブを分析した。ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いた非コンパートメント法を用いて薬物動態エンドポイントを決定した。観察濃度に台形則を用いてＡＵＣを近似した。各トラスツズマブ用量のＣ_ｍａｘを、全ての有効濃度の最大値として導出し、次いでｔ_ｍａｘをＣ_ｍａｘに対応する時点として決定した。最終消失速度定数（λ_ｚ）は、濃度－時間曲線の最終部分に対する対数線形回帰によって推定し、次いでｔ_１／２をｔ_１／２＝ｌｎ２／λ_ｚとして算出した。

【表8】

【表9】

【0225】

実施例８：ニュージーランドホワイトウサギにおけるビタミンＥ含有トラスツズマブ製剤の薬物動態試験
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤の例示であるトラスツズマブの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。

【0226】

本実施例に含まれる結晶化ポリペプチドの経口製剤を以下のように調製した。商業的に入手したトラスツズマブ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（凍結乾燥粉末は、４４０ｍｇのトラスツズマブ、９．９ｍｇのＬ－ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇのＬ－ヒスチジン、４００ｍｇのα，α，－トレハロース二水和物、及び１．８ｍｇのポリソルベート２０（ＵＳＰ）、ならびに再構成の注射用水としての２０ｍＬの水を含む）、６ｍＬの注射用水に再構成した。次いで、再構成したトラスツズマブを実施例１で言及した手順に従って処理して、微粒子を調製した。次いで、微粒子トラスツズマブを低温のイソプロパノールで洗浄した後に凍結乾燥した。次いで、５０μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）が入ったサイズ００の透明ゼラチンカプセルに、凍結乾燥トラスツズマブ（表１０で言及した投与量）を移した。次いで、カプセルをさらなる使用まで４℃で保存した。

【0227】

体重１．５ｋｇの雄のニュージーランドホワイトウサギにおいて薬物動態学的分析を５日間行った。実験計画を表１０に示す。重炭酸ナトリウムを含む飼料（２０ｇｍの通常の飼料＋３ｇｍの重炭酸ナトリウム（水を加えることにより調製したペレット／飼料ボール））でウサギを飼育した。動物を、投与の前の－３日目～０日目までは上記の飼料で飼育し、続いて実験期間中のみ通常の飼料で飼育した。異なる時点で採取した血漿試料をＥＬＩＳＡにより分析した。簡潔に説明すると、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＮＵＮＣ免疫プレートをｐＨ９．６の炭酸ナトリウム緩衝液中２μｇ／ｍＬの抗トラスツズマブコーティング抗体（Ａｂｃａｍ）で４℃で一晩コーティングした。コーティングしたプレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で洗浄した。洗浄後、プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＢＳＡ）により室温で３時間ブロッキングした。分析を行う血漿試料をＰＢＳで希釈し、コーティング抗体とともに１時間インキュベートし、次に洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異性）－ペルオキシダーゼ捕捉抗体（Ｓｉｇｍａ）を加えた。ＴＭＢ基質を用いて検出を４５０ｎｍで行った。

【0228】

表１１及び図２１のデータは、種々の時点におけるトラスツズマブの平均血漿濃度を示している。経口投与したトラスツズマブ製剤（Ｈｅｒｃｌｏｎ（Ｒｏｃｈｅ）再構成バイアルには２１ｍｇ／ｍＬトラスツズマブ、Ｌ－ヒスチジン塩酸塩、Ｌ－ヒスチジン、トレハロース二水和物、ポリソルベート２０、及び注射用水が含まれる）は、静注と比較すると２％のバイオアベイラビリティを示した。特定の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿中でトラスツズマブを分析した。ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いた非コンパートメント法を用いて薬物動態エンドポイントを決定した。観察濃度に台形則を用いてＡＵＣを近似した。各トラスツズマブ用量のＣ_ｍａｘを、全ての有効濃度の最大値として導出し、次いでｔ_ｍａｘをＣ_ｍａｘに対応する時点として決定した。最終消失速度定数（λ_ｚ）は、濃度－時間曲線の最終部分に対する対数線形回帰によって推定し、次いでｔ_１／２をｔ_１／２＝ｌｎ２／λ_ｚとして算出した。

【表10】

【表11】

【0229】

実施例９：ニュージーランドホワイトウサギにおけるビタミンＥ含有インスリン製剤の薬物動態試験
本実施例は、本明細書で開示する経口製剤の例示であるインスリンの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。本実施例はビタミンＥのインスリン懸濁製剤について実証し、本開示の製剤の有利な適用に腸溶性製剤が必要とされないことを実証する。

【0230】

本実施例には、以下のように調製した結晶化ポリペプチドの経口製剤が含まれる：商業的に入手した通常のインスリン、Ｈｕｍｕｌｉｎ Ｒ（インスリンヒト遺伝子組換え）Ｕ－１００は、ヒトインスリン（ｒＤＮＡ由来）１００単位／ｍＬ、グリセリン１６ｍｇ／ｍＬ、及びメタクレゾール２．５ｍｇ／ｍＬ、内在性亜鉛（およそ０．０１５ｍｇ／１００単位）、及び注射用水を含む、無菌、透明、水性、及び無色の溶液である。ｐＨは７．０～７．８とする。インスリンを水に対し２４時間透析し、凍結乾燥した。凍結乾燥したインスリンを希酸で再構成した。次いで、再構成したインスリンを実施例３で言及した手順に従って処理して、微粒子を調製した。次いで、微粒子インスリンを低温のイソプロパノールで洗浄した後に凍結乾燥した。次いで、凍結乾燥したインスリン（表１２で言及した投与量）を５００μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）に懸濁した。次いで、試料をさらなる使用まで４℃で保存した。

【0231】

体重１．５ｋｇの雄のニュージーランドホワイトウサギにおいて薬物動態学的分析を２日間行った。実験計画を表１２に示す。重炭酸ナトリウムを含む飼料（２０ｇｍの通常の飼料＋３ｇｍの重炭酸ナトリウム（水を加えることにより調製したペレット／飼料ボール））でウサギを飼育した。動物を、投与の前の－３日目～０日目までは上記の飼料で飼育し、続いて実験期間中のみ通常の飼料で飼育した。胃まで達するＧチューブを通じてインスリンの経口送達を行った。次いでＧチューブを１０ｍＬのココナッツオイルでフラッシュして、チューブ壁に付着する試料を除去した。異なる時点で採取した血漿試料をＥＬＩＳＡにより分析した。簡潔に説明すると、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＮＵＮＣ免疫プレートをｐＨ９．６の炭酸ナトリウム緩衝液中２μｇ／ｍＬの抗インスリンコーティング抗体（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｃｈｅｍ）で４℃で一晩コーティングした。コーティングしたプレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で洗浄した。洗浄後、プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＢＳＡ）により室温で３時間ブロッキングした。分析を行う血漿試料をＰＢＳで希釈し、コーティング抗体とともに１時間インキュベートし、次に洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異性）－ペルオキシダーゼ捕捉抗体（Ｓｉｇｍａ）を加えた。ＴＭＢ基質を用いて検出を４５０ｎｍで行った。

【0232】

表１３及び図２２のデータは、種々の時点におけるインスリンの平均血漿濃度を示している。経口投与したインスリン製剤は、静注と比較すると４％のバイオアベイラビリティを示した。特定の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を用いて、血漿中でインスリンを分析した。ＰＫ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアを用いた非コンパートメント法を用いて薬物動態エンドポイントを決定した。観察濃度に台形則を用いてＡＵＣを近似した。各インスリン用量のＣ_ｍａｘを、全ての有効濃度の最大値として導出し、次いでｔ_ｍａｘをＣ_ｍａｘに対応する時点として決定した。最終消失速度定数（λ_ｚ）は、濃度－時間曲線の最終部分に対する対数線形回帰によって推定し、次いでｔ_１／２をｔ_１／２＝ｌｎ２／λ_ｚとして算出した。

【表12】

【表13】

【0233】

実施例１０：ニュージーランドホワイトウサギにおけるトラスツズマブ製剤の薬物動態試験
本実施例は、トラスツズマブの経口製剤をビタミンＥで製剤化すると、他の同様の医薬的に許容される担体による製剤と比較して、経口投与に関して独特の特性を有することを実証するものである。本実施例は、ビタミンＥのトラスツズマブ懸濁製剤について実証し、本開示の製剤の有利な適用に腸溶性製剤が必要とされないことを実証する。

【0234】

本実施例に含まれる結晶化ポリペプチドの経口製剤を以下のように調製した。商業的に入手したトラスツズマブ、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（凍結乾燥粉末は、４４０ｍｇのトラスツズマブ、９．９ｍｇのＬ－ヒスチジンＨＣｌ、６．４ｍｇのＬ－ヒスチジン、４００ｍｇのα，α，－トレハロース二水和物、及び１．８ｍｇのポリソルベート２０、ＵＳＰ、ならびに再構成の注射用水としての２０ｍＬの水を含む）、６ｍＬの注射用水に再構成した。次いで、再構成したトラスツズマブを上記の実施例に記載のように処理して微粒子を調製した。次いで、微粒子トラスツズマブを低温のイソプロパノールで洗浄した。以下の医薬的に許容される各経口製剤用担体：ビタミンＥ、ココナッツ油、タラ肝油、及びギーに、微粒子トラスツズマブの試料を２１ｍｇ／ｍＬで懸濁した。

【0235】

体重１．５ｋｇの雄のニュージーランドホワイトウサギにおいて薬物動態学的分析を１４日間行った。実験計画を表１４に示す。表１４に示すように各経口製剤を経口投与した。表１４に示すように、対照の標準治療製剤（微粒子も懸濁液を含まない）も皮下注射により投与した（再構成Ｈｅｒｃｌｏｎ（Ｒｏｃｈｅ社製）バイアルには、２１ｍｇ／ｍＬのトラスツズマブ、Ｌ－ヒスチジン塩酸塩、Ｌ－ヒスチジン、α，α，－－トレハロース二水和物、ポリソルベート２０及び注射用水が含まれる）。重炭酸ナトリウムを含む飼料（２０ｇｍの通常の飼料＋３ｇｍの重炭酸ナトリウム（水を加えることにより調製したペレット／飼料ボール））でウサギを飼育した。動物を、投与の前の－３日目～０日目までは上記の飼料で飼育し、続いて実験期間中のみ通常の飼料で飼育した。Ｇチューブを用いて動物への経口投与を行った。シリンジを用いて懸濁製剤をＧチューブに通した。投与後、５ｍＬのココナッツオイルで、次いで５ｍＬの水でチューブを洗浄した。

【0236】

異なる時点で採取した血漿試料をＥＬＩＳＡにより分析した。簡潔に説明すると、ＭＡＸＩＳＯＲＰ ＮＵＮＣ免疫プレートをｐＨ９．６の炭酸ナトリウム緩衝液中２μｇ／ｍＬの抗トラスツズマブコーティング抗体（Ａｂｃａｍ）で４℃で一晩コーティングした。コーティングしたプレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０１％ Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）で洗浄した。洗浄後、プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ＋１％のＢＳＡ）により室温で３時間ブロッキングした。分析を行う血漿試料をＰＢＳで希釈し、コーティング抗体とともに１時間インキュベートし、次に洗浄し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異性）－ペルオキシダーゼ捕捉抗体（Ｓｉｇｍａ）を加えた。ＴＭＢ基質を用いて検出を４５０ｎｍで行った。

【表14】

【0237】

結果
図２３のデータは、種々の時点におけるインスリンの平均血漿濃度を示している。ココナッツ油、ギー、またはタラ肝油が、いかなる時点にもゼロを上回る有意な血漿濃度を示さなかったのに対し、市販の「イノベーター」製剤の皮下投与及びビタミンＥ経口製剤の場合には、ともにかなりの血漿濃度が得られた（例えば、ビタミンＥ経口製剤では１００時間で約５０μｇ／ｍＬ、市販の「イノベーター」製剤の皮下投与では１００時間で約１５０μｇ／ｍＬ）。これらのデータは、驚くべきことに、かつ予想外に、本開示のビタミンＥ経口製剤の投与が、他の様々な類似の製剤とは異なり、治療的及び商業的に有力であることを実証するものである。

【0238】

実施例１１：ニュージーランドホワイトウサギにおけるビタミンＥ含有リラグルチド製剤（非晶質）の薬物動態試験
本実施例は、非晶質リラグルチドを含み本開示の経口製剤の例示であるリラグルチドの経口製剤が、例えば、同じポリペプチドの非経口投与と比較して有利な特性を伴って、治療的に有効な薬物動態プロファイルを有することを実証するものである。

【0239】

本実施例は、以下のように調製した非晶質リラグルチドの経口製剤を含む：市販の凍結乾燥原薬リラグルチド（非晶質形態）を粉末化し、２５ミクロンシーブに通して２５ミクロン未満の粒径を得た。次いで、１００μＬのビタミンＥ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ）及び５０μＬの麦芽油が入ったサイズ００の腸溶性コーティングカプセルに、凍結乾燥リラグルチド（表１５で言及した投与量）を移した。次いで、カプセルをさらなる使用まで４℃で保存した。

【0240】

体重１．５ｋｇの雄のニュージーランドホワイトウサギにおいて薬物動態学的分析を５日間行った。実験計画を表１５に示す。ウサギを通常の飼料で飼育した。異なる時点で採取した血漿試料を、ＡＢＢＥＸＡのプロトコルに従ってリラグルチド（ＬＲＴ）ＥＬＩＳＡキットにより分析した。このキットは、競合的酵素結合免疫吸着アッセイ技術に基づく。抗体の抗リラグルチドを９６ウェルプレートにプレコーティングした。標準物質、試験試料、及びビオチン結合体化試薬をウェルに加え、インキュベートした。ビオチン標識ＬＲＴとプレコーティング抗体上の非標識ＬＲＴとの間で競合的阻害反応が起こる。次いでＨＲＰ結合体化試薬を加え、プレート全体をインキュベートした。各段階で、結合していない結合体を洗浄緩衝液で除去した。ＴＭＢ基質を使用してＨＲＰ酵素反応を定量化した。ＴＭＢ基質を加えた後、十分なＬＲＴが入ったウェルのみが青色の生成物を生成し、これは次に酸性の停止液を加えた後は黄色に変化する。黄色の濃さは、プレート上で結合したＬＲＴ量に反比例する。マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍにおけるＯＤを分光測定し、そこからＬＲＴの濃度を算出することができる。

【表15】

【0241】

本実施例のリラグルチドＥＬＩＳＡプロトコルを以下に記載する。以下のような試薬を室温にしてから使用した：（１）検出試薬Ａ、Ｂ：検出試薬Ａ、Ｂをそれぞれアッセイ希釈液Ａ、Ｂを用いて１：１００に希釈した。（２）洗浄緩衝液（３０Ｘ）：希釈：洗浄緩衝液（１Ｘ）を作るため、５８０ｍｌの脱イオン水に２０ｍｌの洗浄緩衝液（３０Ｘ）を加える。これが作業溶液である。（３）標準リラグルチド（１ｍｌ）：標準バイアルを短時間遠心分離し、１ｍｌの試料希釈液をバイアルに加えて１０００ｐｇ／ｍｌを得、さらに段階希釈して３３３．３３ｐｇ／ｍｌ、１１１．１ｐｇ／ｍｌ、３７．０３ｐｇ／ｍｌ、１２．３４ｐｇ／ｍｌを得た。（４）ＴＭＢ基質溶液： 試薬を解凍したら、適切に分取し、２回を超えて凍結融解しないようにした。全ての試薬を使用の直前に希釈した。低体積に適用可能な場合は、バイアルを素早くスピンダウンして希釈前にバイアルの底に沈殿物が得られるようにした。ＥＬＩＳＡを以下のステップに従って行った：（１）事前に指定した各ウェルに、５０μｌの標準物質、ブランク、または試料を加えた。（２）直ちに５０μｌの検出試薬Ａ作業溶液を各ウェルに加え、プレートシーラーで覆った。プレートを静かに撹拌して、十分な混合を確実に行い、３７℃で１時間インキュベートした。（３）各ウェルからの液を吸引し、マルチチャネルピペットを用いて、およそ３５０μｌの洗浄緩衝液を加えて３回洗浄した。（４）完全に吸引する前に各洗浄を１～２分行った。（５）最後の洗浄の後、残った任意の洗浄液を吸引し、次いでプレートを清潔な吸水紙にブロットした。（６）全てのウェルに対し、１００μｌの検出試薬Ｂ作業溶液を加え、静かに撹拌して十分な混合を確実に行い、プレートを新たなプレートシーラーで覆い、３７℃で３０分間インキュベートした。（７）各ウェルからの液を吸引し、マルチチャネルピペットを用いておよそ３５０μｌの洗浄緩衝液を加えることにより３回洗浄した。（８）９０μｌのＴＭＢ基質溶液を各ウェルに加え、プレートを３７℃で１０～２０分間暗所でインキュベートした。（９）インキュベート後、５０μｌの停止液を各ウェルにＴＭＢ基質溶液と同じ順序及びタイミングで加え、プレートを静かに撹拌した。（１０）４５０ｎｍに設定したマイクロプレートリーダーを用いて、直ちに各ウェルの光学密度（ＯＤ値）を読み取った。結果を表１６～２７に示す。

【表16-1】

【表16-2】

【表16-3】

【表16-4】

【表16-5】

【表16-6】

【表17】

【表18】

【表19-1】

【表19-2】

【表20-1】

【表20-2】

【表21】

【表22】

【表23-1】

【表23-2】

【表24-1】

【表24-2】

【表25】

【表26-1】

【表26-2】

【表27-1】

【表27-2】

【0242】

他の実施形態
多数の実施形態について説明したが、発明者らの基本的な開示内容及び実施例が、本明細書に記載の組成物及び方法を利用する、またはそれに包含される他の実施形態を提供し得ることは明らかである。そのため、その範囲は、例として示した特定の実施形態によってではなく、本開示内容及び添付の特許請求の範囲から理解され得るものによって定義されることが理解されよう。

【0243】

本明細書で引用する全ての文献は、参照により本明細書に援用される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20】

【図21】

【図22】

【図23】

【図24】

【図25】

【図26】

【国際調査報告】