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▶ オスティオニューロジェン インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-10
(54)【発明の名称】細胞老化および細胞死を誘導する抗がん組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 31/496 20060101AFI20240403BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240403BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240403BHJP
A23L 33/10 20160101ALI20240403BHJP
【ＦＩ】
A61K31/496
A61P35/00
A61P35/02
A23L33/10
【審査請求】有
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023564576
(86)(22)【出願日】2022-04-14
(85)【翻訳文提出日】2023-10-20
(86)【国際出願番号】 KR2022005410
(87)【国際公開番号】W WO2022225259
(87)【国際公開日】2022-10-27
(31)【優先権主張番号】10-2021-0050983
(32)【優先日】2021-04-20
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2021-0069844
(32)【優先日】2021-05-31
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2021-0093288
(32)【優先日】2021-07-16
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2021-0186561
(32)【優先日】2021-12-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(31)【優先権主張番号】10-2022-0033299
(32)【優先日】2022-03-17
(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】519447558
【氏名又は名称】オスティオニューロジェン インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＯＳＴＥＯＮＥＵＲＯＧＥＮ ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ユン，ビョンス
(72)【発明者】
【氏名】メン，ムンギ
(72)【発明者】
【氏名】キム，セビョル
(72)【発明者】
【氏名】キム，イッカン
(72)【発明者】
【氏名】キム，ハンス
【テーマコード（参考）】
4B018
4C086
【Ｆターム（参考）】
4B018MD08
4B018ME08
4C086AA01
4C086AA02
4C086BC50
4C086GA02
4C086GA07
4C086MA01
4C086MA04
4C086NA14
4C086ZB26
4C086ZB27
4C086ZC41
(57)【要約】
本発明は、細胞老化および細胞死を誘導する化合物を有効成分として含有する抗がん組成物に関し、本発明化合物は、がん細胞と正常細胞を区別し、がん細胞特異的に細胞老化と細胞死を同時に誘導することができ、がん細胞特異的標的物質を付着する必要がなく、抗がん剤が正常細胞を攻撃して発生する頻繋な副作用を最小化することができ、上記した二重作用に基づいて強力な抗がん効果を発揮することができるという特徴がある。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または治療用薬学組成物：[化学式１]
【化1】
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【請求項2】
Ｒ１は、メチル、エチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはフェニルであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記化合物は、下記化学式２～５のうちいずれか１つで表されることを特徴とする請求項１に記載の組成物：[化学式２]
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【請求項5】
前記がんは、血液がんまたは固形がんであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記血液がんは、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫または再生不良性貧血であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
前記固形がんは、脳腫瘍、良性星状細胞腫、悪性星状細胞腫、脳下垂体腺腫、髄膜腫、脳リンパ腫、乏突起膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、脳幹腫瘍、頭頸部腫瘍、喉頭がん、口腔咽頭がん、鼻腔がん、鼻咽頭がん、唾液腺腫瘍、下咽頭がん、甲状腺がん、口腔がん、胸部腫瘍、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、胸腺がん、縦隔腫瘍、食道がん、乳がん、男性乳がん、腹部腫瘍、胃がん、肝がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、肛門がん、膀胱がん、腎臓がん、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項8】
前記化合物は、（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または改善用医薬部外品組成物：[化学式１]
【化6】
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【請求項10】
Ｒ１は、メチル、エチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはフェニルであることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項11】
Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項12】
前記化合物は、下記化学式２～５のうちいずれか１つで表されることを特徴とする請求項９に記載の組成物：[化学式２]
【化7】
【化8】
【化9】
【化10】
【請求項13】
前記がんは、血液がんまたは固形がんであることを特徴とする請求項９に記載の組成物。
【請求項14】
前記血液がんは、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫または再生不良性貧血であることを特徴とする請求項１３に記載の組成物。
【請求項15】
前記固形がんは、脳腫瘍、良性星状細胞腫、悪性星状細胞腫、脳下垂体腺腫、髄膜腫、脳リンパ腫、乏突起膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、脳幹腫瘍、頭頸部腫瘍、喉頭がん、口腔咽頭がん、鼻腔がん、鼻咽頭がん、唾液腺腫瘍、下咽頭がん、甲状腺がん、口腔がん、胸部腫瘍、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、胸腺がん、縦隔腫瘍、食道がん、乳がん、男性乳がん、腹部腫瘍、胃がん、肝がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、肛門がん、膀胱がん、腎臓がん、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とする請求項１３に記載の組成物。
【請求項16】
前記化合物は、（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とする請求項９に記載の組成物
。
【請求項17】
下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または改善用食品組成物：[化学式１]
【化11】
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【請求項18】
Ｒ１は、メチル、エチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはフェニルであることを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【請求項19】
Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【請求項20】
前記化合物は、下記化学式２～５のうちいずれか１つで表されることを特徴とする請求項１７に記載の組成物：[化学式２]
【化12】
【化13】
【化14】
【化15】
【請求項21】
前記がんは、血液がんまたは固形がんであることを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【請求項22】
前記血液がんは、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫または再生不良性貧血であることを特徴とする請求項２１に記載の組成物。
【請求項23】
前記固形がんは、脳腫瘍、良性星状細胞腫、悪性星状細胞腫、脳下垂体腺腫、髄膜腫、脳リンパ腫、乏突起膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、脳幹腫瘍、頭頸部腫瘍、喉頭がん、口腔咽頭がん、鼻腔がん、鼻咽頭がん、唾液腺腫瘍、下咽頭がん、甲状腺がん、口腔がん、胸部腫瘍、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、胸腺がん、縦隔腫瘍、食道がん、乳がん、男性乳がん、腹部腫瘍、胃がん、肝がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、肛門がん、膀胱がん、腎臓がん、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とする請求項２１に記載の組成物。
【請求項24】
前記化合物は、（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とする請求項１７に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、細胞老化および細胞死を誘導する化合物を有効成分として含有する抗がん組成物に関し、より詳細には、化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有し、腫瘍またはがん細胞特異的に細胞老化および細胞死を誘導し、抗腫瘍または抗がん効果を示す抗腫瘍または抗がん組成物に関する。
【背景技術】
【0002】
腫瘍（ｔｕｍｏｒ）は、身体組織の自律的な過剰成長によって異常に成長した塊りを意味し、良性腫瘍（ｂｅｎｉｇｎ ｔｕｍｏｒ）と悪性腫瘍（ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｕｍｏｒ）とに分けられる。良性腫瘍が比較的成長速度が遅く、転移（ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ；腫瘍が元々発生したところから遠く離れたところに移動）しないのに対し、悪性腫瘍は、周囲組織に浸潤し、迅速に成長し、身体の各部位に拡散または転移し、生命を威嚇する。したがって、悪性腫瘍をがんと同じ意味と考えることができる。
【0003】
身体を構成する最も小さい単位である細胞（ｃｅｌｌ）は、通常は細胞自体の調節機能によって分裂および成長し、寿命が尽きるか損傷すると、自ら死滅（死んで消滅する）して、全般的な数の均衡を維持する。しかしながら、様々な原因によってこれらの細胞自体の調節機能に問題が生じた場合、通常は死滅すべき異常細胞が過剰増殖し、場合によって周囲組織および臓器に侵入して腫瘤（塊り）を形成し、既存の構造を破壊したり変形させるが、このような状態をがん（ｃａｎｃｅｒ）と定義することができる。
【0004】
細胞周期を標的化する小分子は、幹細胞分化の全身的抑制または恒常性免疫の悪化のような好ましくない医学的危険性のため、がんを誘発することができると見なされてきた。しかしながら、フラボンやイソフラボンにおいて主に発見されるクロモンスキャフォールド（ｃｈｒｏｍｏｎｅ－ｓｃａｆｆｏｌｄ）のような天然薬物スキャフォールドは、天然物としてほとんど安全であることが立証されたので、医学的用途に開発する利点がある。実際に、クロモンスキャフォールド誘導体の１つであるＳＢ２０３５８０は、抗がん活性を有することが報告された（Ｙａｎ Ｗ ｅｔ ａｌ．，Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｌｅｔｔ ２０１６；２５９：２８－３４．ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｔｏｘｌｅｔ．２０１６．０７．５９１）。
【0005】
フラボンは、ポリフェノールファミリーメンバーであり、植物系でのみ１０，０００個以上の化合物グループが独占的に発見された。一般的に、これらの植物系化合物（ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ）は、植物を放射線損傷から保護する機能を果たす。フラボンは、抗酸化または抗炎症潜在力によって関節炎および喘息のような炎症性疾患を治療するのに長期間使用されてき、クロモン（Ｃｈｒｏｍｏｎｅ、１，４－ｂｅｎｚｏｐｙｒｏｎｅ－４－ｏｎｅ）は、フラボンとイソフラボンを構成する中心化学支持体である。
【0006】
本発明者らは、最近Ａｒｔｅｍｉｓｉａ種からのクロモンスキャフォールド含有化合物であるユーパチリン（ｅｕｐａｔｉｌｉｎ）と本発明化合物（韓国登録特許第１０－１８７１１６６号）がアクチン重合体を分解して線維症を抑制し、その結果、上皮間葉転換（ＥＭＴ）が抑制されることを確認した（Ｋｉｍ Ｈ－Ｓ ｅｔ ａｌ．，ｂｉｏＲｘｉｖ
２０２０；７７０４０４．ＤＯＩ：１０．１１０１／７７０４０４）。
２０２０；７７０４０４．ＤＯＩ：１０．１１０１／７７０４０４）。
【0007】
これと関連して、本発明者らは、さらなる研究を進めているところ、本発明化合物が様々な攻撃的がん細胞株で複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎ
ｃｅ，ＯＩＳ）の強力な誘導剤であり、このような細胞老化機序によってがん細胞の無制限増殖を抑制し、ＮＡＤ生合成によるＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転およびＲＯＳの上向き調節を通じて腫瘍化から脱出を誘導し、その他にも細胞死を誘導する一連の作用を通じてがん治療のための強力な治療剤として機能することができることを確認することによって、本発明を完成するに至った。
ｃｅ，ＯＩＳ）の強力な誘導剤であり、このような細胞老化機序によってがん細胞の無制限増殖を抑制し、ＮＡＤ生合成によるＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転およびＲＯＳの上向き調節を通じて腫瘍化から脱出を誘導し、その他にも細胞死を誘導する一連の作用を通じてがん治療のための強力な治療剤として機能することができることを確認することによって、本発明を完成するに至った。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0008】
本発明は、細胞老化および細胞死を同時に誘導するクロモンスキャフォールド誘導体の抗腫瘍および／または抗がん用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【0009】
上記目的を達成するために、本発明は、下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または治療用薬学組成物を提供する：
【0010】
[化学式１]
【化1】
【0011】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0012】
本発明は、また、下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または改善用医薬部外品組成物を提供する：
【0013】
[化学式１]
【化2】
【0014】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0015】
本発明は、また、下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または改善用食品組成物を提供する：
【0016】
[化学式１]
【化3】
【0017】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0018】
本発明は、また、下記化学式１で表される化合物またはその塩をこれを必要とする個体に投与する段階を含む、腫瘍またはがん疾患の予防または治療方法を提供する：
【0019】
[化学式１]
【化4】
【0020】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0021】
本発明は、また、下記化学式１で表される化合物またはその塩の腫瘍またはがん疾患の予防または治療のための用途を提供する：
【0022】
[化学式１]
【化5】
【0023】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0024】
本発明は、また、腫瘍またはがん疾患の予防または治療のための薬物の製造のための下記化学式１で表される化合物またはその塩の用途を提供する：
【0025】
[化学式１]
【化6】
【0026】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0027】
本発明において、Ｒ１は、メチル、エチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはフェニルであることを特徴とする。
【0028】
本発明において、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする。
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする。
【0029】
本発明において、前記化合物は、下記化学式２～５のうちいずれか１つで表されることを特徴とする：
【0030】
[化学式２]
【化7】
【0031】
[化学式３]
【化8】
【0032】
[化学式４]
【化9】
【0033】
[化学式５]
。
【化10】
【0034】
本発明において、前記がんは、血液がんまたは固形がんであることを特徴とする。
【0035】
本発明において、前記血液がんは、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫または再生不良性貧血であることを特徴とする。
【0036】
本発明において、前記固形がんは、脳腫瘍、良性星状細胞腫、悪性星状細胞腫、脳下垂体腺腫、髄膜腫、脳リンパ腫、乏突起膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、脳幹腫瘍、頭頸部腫瘍、喉頭がん、口腔咽頭がん、鼻腔がん、鼻咽頭がん、唾液腺腫瘍、下咽頭がん、甲状腺がん、口腔がん、胸部腫瘍、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、胸腺がん、縦隔腫瘍、食道がん、乳がん、男性乳がん、腹部腫瘍、胃がん、肝がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、肛門がん、膀胱がん、腎臓がん、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とする。
【0037】
本発明において、
前記化合物は、
（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とする。
前記化合物は、
（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とする。
【発明の効果】
【0038】
本発明化合物は、がん細胞と正常細胞を区別し、がん細胞特異的に細胞老化と細胞死を同時に誘導することができ、がん細胞特異的標的物質を付着する必要がなく、抗がん剤が正常細胞を攻撃して発生する頻繋な副作用を最小化することができ、上記した二重作用に基づいて強力な抗がん効果を発揮することができるという特徴がある。
【図面の簡単な説明】
【0039】
【図1】図１は、本発明の一実施例による化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）、ユーパチリン（ＯＮＧ２１００２）、他のクロモンスキャフォールド含有誘導体の処理によるＡ５４９細胞における細胞老化誘導効果を比較した結果である。
【図4a】図４ａは、本発明の一実施例による化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の濃度別処理２４時間経過後のｐ２１、ｐ１６、ｐ５３、ｐ－ｐ５３の発現量変化をウェスタンブロットで観察した結果である（当該タンパク質バンドの位置は黄色で表示される）。
【発明を実施するための最良の形態】
【0040】
別途定義されない限り、本明細書において使用されたすべての技術的および科学的用語は、本発明の属する技術分野における熟練した専門家によって通常的に理解されるものと同じ意味を有する。一般的に、本明細書において使用された命名法は、本技術分野においてよく知られており、通常的に使用されるものである。
【0041】
生体内で細胞周期は、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、分化（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）、細胞死（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）が調和を保つように精巧に調節される
が、このような精巧な調節機能に障害が発生すると、深刻な病気をもたらすことがあり、特に無限細胞増殖は、がんのような人体に非常に致命的かつ難治性疾患を発病させる。したがって、がんを治療するためには、細胞増殖を抑制する必要があり、細胞増殖抑制機能を示す抗がん剤は、細胞増殖抑制機能とともに、多くの副作用を発生させる。
が、このような精巧な調節機能に障害が発生すると、深刻な病気をもたらすことがあり、特に無限細胞増殖は、がんのような人体に非常に致命的かつ難治性疾患を発病させる。したがって、がんを治療するためには、細胞増殖を抑制する必要があり、細胞増殖抑制機能を示す抗がん剤は、細胞増殖抑制機能とともに、多くの副作用を発生させる。
【0042】
本発明では、クロモンスキャフォールド誘導体の１つである本発明化合物が細胞老化（すなわち、複製老化および発がん遺伝子誘導による老化）によって様々ながん細胞株の無制限増殖状態を解消することができることを確認した。興味深いことに、本発明化合物は、正常細胞ではこのような細胞老化を誘導せず、正常細胞増殖を阻害しないことが確認されたところ、一般抗がん剤のようにがん細胞を標的化する物質を別に付着する必要がないという長所を有していた。また、本発明化合物をマウスまたはラットに経口投与したとき、病理学的異常や毒性が観察されないことがさらに検証されたところ前臨床研究番号：Ｕ－１８１５６、投与量１ｇ）、本発明化合物は、副作用なく安全に抗がん効果を発揮することができることが分かった。
【0043】
したがって、本発明は、第１態様において、下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または治療用薬学組成物に関する：
【0044】
[化学式１]
【化11】
【0045】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0046】
また、本発明は、第２態様において、下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または改善用医薬部外品組成物に関する：
【0047】
[化学式１]
【化12】
【0048】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0049】
また、本発明は、第３態様において、下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防または改善用食品組成物を提供する：
【0050】
[化学式１]
【化13】
【0051】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0052】
また、本発明は、第４態様において、下記化学式１で表される化合物またはその塩をこれを必要とする個体に投与する段階を含む、腫瘍またはがん疾患の予防または治療方法に関する：
【0053】
[化学式１]
【化14】
【0054】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0055】
また、本発明は、第５態様において、下記化学式１で表される化合物またはその塩の腫瘍またはがん疾患の予防または治療のための用途に関する：
【0056】
[化学式１]
【化15】
【0057】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾ
イルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾ
イルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0058】
また、本発明は、第６態様において、腫瘍またはがん疾患の予防または治療のための薬物の製造のための下記化学式１で表される化合物またはその塩の用途に関する：
【0059】
[化学式１]
【化16】
【0060】
上記化学式１中、
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【0061】
本発明の前記いずれか１つの態様において、Ｒ１は、メチル、エチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはフェニルであることを特徴とする。
【0062】
本発明の前記いずれか１つの態様において、
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする。
Ｒ１は、メチルであり、
Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする。
【0063】
本発明の前記いずれか１つの態様において、前記化合物は、下記化学式２～５のうちいずれか１つで表されることを特徴とする：
【0064】
[化学式２]
【化17】
【0065】
[化学式３]
【化18】
【0066】
[化学式４]
【化19】
【0067】
[化学式５]
。
【化20】
【0068】
本発明の前記いずれか１つの態様において、前記がんは、血液がんまたは固形がんであることを特徴とする。
【0069】
本発明の前記いずれか１つの態様において、前記血液がんは、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫または再生不良性貧血であることを特徴とするが、これらに限定されるものではない。
【0070】
本発明の前記いずれか１つの態様において、前記固形がんは、脳腫瘍、良性星状細胞腫、悪性星状細胞腫、脳下垂体腺腫、髄膜腫、脳リンパ腫、乏突起膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、脳幹腫瘍、頭頸部腫瘍、喉頭がん、口腔咽頭がん、鼻腔がん、鼻咽頭がん、唾液腺腫瘍、下咽頭がん、甲状腺がん、口腔がん、胸部腫瘍、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、胸腺がん、縦隔腫瘍、食道がん、乳がん、男性乳がん、腹部腫瘍、胃がん、肝がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、肛門がん、膀胱がん、腎臓がん
、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とするが、これらに限定されるものではない。
、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とするが、これらに限定されるものではない。
【0071】
本発明の前記いずれか１つの態様において、
前記化合物は、
（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とするが、これに限定されるものではない。
前記化合物は、
（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とするが、これに限定されるものではない。
【0072】
本発明の組成物は、本発明の化合物またはその塩それ自体、または薬学的、食品学的に許容された担体と混合した組成物であってもよい。
【0073】
本発明の組成物は、全体組成物の重量を基準として本発明の化合物またはその塩を０．０００１～１００重量％で含有することができる。
【0074】
本発明の組成物は、臨床投与時に経口または非経口で投与が可能であり、非経口投与時に腹腔内注射、直腸内注射、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、子宮内硬膜注射、脳血管内注射または胸部内注射によって投与することができ、一般的な医薬品製剤の形態で使用することができる。
【0075】
本発明の組成物は、単独で、または手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療および生物学的反応調節剤を用いた方法と併用して使用することができる。
【0076】
本発明組成物の一日投与量は、組成物に含有された本発明の化合物またはその塩を基準として体重１ｋｇ当たり約０．０００１～１００ｍｇ、または０．００１～１０ｍｇであってもよく、一日に１回～数回に分けて投与することができるが、投与対象の体重、年齢、性別、健康状態、食事、投与時間、投与方法、排泄率および疾患の重症度などによってその範囲が多様である。
【0077】
臨床投与時に経口または非経口の様々な形態の剤形で製剤化することができ、この際、一般的に使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を用いて調製することができる。
【0078】
本発明の薬学組成物は、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩に、さらに、同一または類似の機能を示す有効成分を１種以上含有することができる。
【0079】
本発明の医薬部外品組成物は、ヒトや動物の病気を診断、治療、改善、軽減、処置または予防する目的で使用される物品のうち医薬品より作用が軽微な物品を意味し、例えば、薬事法によれば、医薬部外品とは、医薬品の用途に使用される物品を除いたものであり、ヒトや動物の病気の治療や予防に使用される製品、人体に対する作用が軽微であるか、または直接作用しない製品などが含まれる。
【0080】
本発明の医薬部外品組成物は、ローション、軟膏、ゲル、クリーム、パッチまたは噴霧剤のような経皮投与型剤形であってもよい。各剤形において医薬部外品組成物は、他の成
分をその他医薬部外品の剤形または使用目的などに応じて任意に選定して配合することができる。有効成分の混合量は、使用目的（抑制または緩和）に応じて好適に決定することができる。例えば、増粘剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料および香料のような通常の補助剤、および担体などを含んでもよい。また、各剤形の医薬部外品組成物において、上記した必須成分以外の他の成分は、剤形または使用目的などに応じて当業者が困難なく適宜選定して配合することができる。
分をその他医薬部外品の剤形または使用目的などに応じて任意に選定して配合することができる。有効成分の混合量は、使用目的（抑制または緩和）に応じて好適に決定することができる。例えば、増粘剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料および香料のような通常の補助剤、および担体などを含んでもよい。また、各剤形の医薬部外品組成物において、上記した必須成分以外の他の成分は、剤形または使用目的などに応じて当業者が困難なく適宜選定して配合することができる。
【0081】
本発明の食品組成物は、本発明の化合物またはこれの薬学的に許容可能な塩それ自体、または食品学的に許容された担体と混合した組成物であってもよい。この際、本発明の化合物またはその薬学的に許容可能な塩の含有量は、前記薬学組成物中の含有量および投与量を基準として通常の方法によって適切に調節することができる。
【0082】
本発明食品組成物の最も好ましい実施形態は、健康機能食品組成物であってもよいが、これらに限定されず、他の実施形態として、食肉加工品、魚肉製品、豆腐、ムク、お粥、ラーメンやソバなどの麺類、醤油、味噌、コチュジャン、混合醤などの調味食品、ソース、菓子、発酵乳やチーズなどの乳加工品、キムチや漬物などの漬物食品、果実、野菜、豆乳、発酵飲料などの飲料水の一般的な食品形態も可能である。別の実施形態として、本発明の食品組成物は、食品添加剤であってもよい。
【0083】
なお、食品学的に許容された担体は、前記薬学的に許容された担体も使用することができる。
【0084】
実施例
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は、ただ本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されないことは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明だろう。
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明する。これらの実施例は、ただ本発明を例示するためのものであり、本発明の範囲がこれらの実施例によって制限されると解釈されないことは、当業界における通常の知識を有する者にとって自明だろう。
【0085】
実施例１．Ａ５４９細胞株に対する抗がん効果
１－１．細胞培養および試薬
Ａ５４９細胞株は、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。化学的に合成されたＯＮＧ４１００８（化学式２）、ＯＮＧ２１００１（ユーパチリン）は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。濃度に応じたＤＭＳＯを対照群に使用した。Ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎは、Ｓｉｇｍａ（ＳＭＬ０５８２）、Ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎは、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｓ０９３１）、Ａｐｉｇｅｎｉｎは、Ｓｉｇｍａ（１０７９８）から購入した。
１－１．細胞培養および試薬
Ａ５４９細胞株は、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。化学的に合成されたＯＮＧ４１００８（化学式２）、ＯＮＧ２１００１（ユーパチリン）は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。濃度に応じたＤＭＳＯを対照群に使用した。Ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎは、Ｓｉｇｍａ（ＳＭＬ０５８２）、Ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎは、Ｓｅｌｌｅｃｋｃｈｅｍ（Ｓ０９３１）、Ａｐｉｇｅｎｉｎは、Ｓｉｇｍａ（１０７９８）から購入した。
【0086】
本発明において一実施例に使用されたＯＮＧ４１００８は、下記化学式２の化合物である。
【0087】
[化学式２]
【化21】
【0088】
１－２．本発明化合物によるＡ５４９細胞の細胞老化誘導効果
非小細胞性肺がん細胞株であるＡ５４９細胞を培地に接種した後、２４時間培養し、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）（２０μＭ）の処理の有無による遺伝子発現量の変化を確認し、上向きまたは下向き調節された遺伝子を分析した。
非小細胞性肺がん細胞株であるＡ５４９細胞を培地に接種した後、２４時間培養し、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）（２０μＭ）の処理の有無による遺伝子発現量の変化を確認し、上向きまたは下向き調節された遺伝子を分析した。
【0089】
このために、培養された細胞を冷たいＰＢＳで２回洗浄し、ＴａＫａＲａ ＭｉｎｉＢＥＳＴ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＲＮＡ抽出キット（Ｔａｋａｒａ，Ｊａｐａｎ）を用いて収穫した。ＲＮＡは、製造社のプロトコルに従って同じキットを用いて精製された。ＲＮＡは、ｃＤＮＡ合成キット（ＰＣＲＢｉｏ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）を用いて逆転写された。合成されたｃＤＮＡは、ＳｔｅｐＯｎｅ Ｐｌｕｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｘ ｑＰＣＲＢｉｏ Ｐｒｏｂｅ Ｍｉｘ Ｈｉ－ＲＯＸ（ＰＣＲＢｉｏ）で増幅された。ΔΔＣｔ方法を用いてｍＲＮＡレベル間の比較を行い、ＧＡＰＤＨを内部対照群に使用した。
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）および２ｘ ｑＰＣＲＢｉｏ Ｐｒｏｂｅ Ｍｉｘ Ｈｉ－ＲＯＸ（ＰＣＲＢｉｏ）で増幅された。ΔΔＣｔ方法を用いてｍＲＮＡレベル間の比較を行い、ＧＡＰＤＨを内部対照群に使用した。
【0090】
処理された読み取り値は、基本媒介変数とともにＴｏｐｈａｔおよびＣｕｆｆｌｉｎｋを用いてＨｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ参照ゲノムにマッピングされた。基本媒介変数を用いてＣｕｆｆｄｉｆｆを用いて微分分析を行った。また、ＣｕｆｆｄｉｆｆのＦＰＫＭ値を正規化し、ＲＴＣＣ（パッケージタグ数の比較）を用いて定量化して、統計的有意性（例：Ｐ値）および差次的発現（例：倍数変更）を決定した。遺伝子発現値は、社内で開発されたＲスクリプトを用いて倍数変更値を用いてＶｏｌｃａｎｏプロットでプロットされた。
【0091】
その結果、本発明化合物の処理の有無によって細胞老化（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ）に関連した遺伝子の発現様相が顕著に変化することが確認された（データ不図示）。
【0092】
本発明による化合物がクロモンスキャフォールド含有誘導体である点に着目し、細胞老化を誘導する効果が他のクロモンスキャフォールド含有誘導体でも発揮される効果であるかを確認するために、免疫細胞化学（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）を進めた。
【0093】
Ａ５４９細胞株に本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）、ユーパチリン（ＯＮＧ２１００１）または他のクロモンスキャフォールド含有誘導体であるヒスピズリン（Ｈｉｓｐｉｄｕｌｉｎ）、ジャセオシジン（Ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎ）、アピゲニン（Ａｐｉｇｅｎｉｎ）をそれぞれ２０μＭずつ処理して７２時間経過後、細胞を４％パラホルムアルデヒドを用いて固定し、０．４％ＴｒｉｔｏｎＸ１００で透過化して、１％ＢＳＡでブロッキングした。室温で４時間Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＫ）と共にインキュベートした。洗浄後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）結合二次抗体とともに培養した。ＥＶＯＳ Ｍ７０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて像を分析した。核は、ＤＡＰＩで対照染色した。
Ｆｉｓｈｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＫ）と共にインキュベートした。洗浄後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）結合二次抗体とともに培養した。ＥＶＯＳ Ｍ７０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて像を分析した。核は、ＤＡＰＩで対照染色した。
【0094】
その結果、図１のように、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）とユーパチリン（ＯＮＧ２１００１）が処理された細胞において特異的に細胞老化の形態学的変化である細胞扁平化（ｃｅｌｌ ｆｌａｔｎｅｓｓ）を観察することができた。すなわち、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）とユーパチリン（ＯＮＧ２１００１）が処理されたＡ５４９細胞において扁平細胞形態が観察されたが、他のクロモンスキャフォールド含有誘導体を処理した実験群では、このような細胞老化の形態学的特徴が観察されないので、細胞老化は、様々なクロモンスキャフォールド含有誘導体のうちでも本発明による化合物特異的効果であることが分かった。
【0095】
１－３．本発明化合物によるＡ５４９細胞の複製老化
様々な腫瘍抑制タンパク質が細胞周期進行の中断に関与することが知られている。ＴＰ５３は、リン酸化され、主にｐ２１またはｐ１６と結合することによって、細胞周期を抑制する。本発明による化合物処理がＡ５４９細胞においてＴＰ５３－ｐ２１－ｐ１６を中心とする複製老化を誘導するかを確認するために、免疫細胞化学（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）を進めた。
様々な腫瘍抑制タンパク質が細胞周期進行の中断に関与することが知られている。ＴＰ５３は、リン酸化され、主にｐ２１またはｐ１６と結合することによって、細胞周期を抑制する。本発明による化合物処理がＡ５４９細胞においてＴＰ５３－ｐ２１－ｐ１６を中心とする複製老化を誘導するかを確認するために、免疫細胞化学（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）を進めた。
【0096】
Ａ５４９細胞株に本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）をそれぞれ１、５、１０、２０μＭ処理して２４時間または７２時間経過後、細胞を４％パラホルムアルデヒドを用いて固定し、０．４％ＴｒｉｔｏｎＸ１００で透過化して、１％ＢＳＡでブロッキングした。室温で４時間Ａｎｔｉ－ｐ５３（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ｐ２１（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、Ａｎｔｉ－ｐ１６－ＩＮＫ４Ａ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，ＩＬ，ＵＳＡ）と共にインキュベートした。洗浄後、細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）結合二次抗体とともに培養した。ＥＶＯＳ Ｍ７０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて像を分析した。核は、ＤＡＰＩで対照染色した。
【0097】
その結果、図２ａ～図２ｃに示されたように、１μＭ処理時にＴＰ５３タンパク質発現量は変わらないが、核局在化が観察され、ｐ２１は、上向き調節と共に核局在化された。ｐ１６は、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の濃度に比例して上向き調節され、核と核周辺部に同時に位置した。
【0098】
化合物処理２４時間よりも化合物処理７２時間に細胞形態がさらに均一になることが確認されたが、これは、多核化したＡ５４９細胞が除去されることを反映する。ｐ１６の核への最大転位（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）は、７２時間に完了したと見られ、このようにｐ１６が飽和したＡ５４９細胞は細胞死すると予測される（図３）。
【0099】
ＴＰ５３のリン酸化は、細胞周期停止（ａｒｒｅｓｔ）を調節するのに必須なものと知られているところ、ｐｈｏｓｐｈｏ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＴＰ５３抗体を用いてウェスタンブロットを進めた。
【0100】
このために、Ａ５４９細胞を１００ｍｍの細胞培養皿に１ｘ１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで分注し、一晩中培養した後、様々な濃度の本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）で処理した。２４時間後、細胞溶解物を１４，０００ｘｇで１０分間遠心分離して浄化し、上澄み液を収集した。タンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ ａｓｓａｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）で定量した。その後、２５μｇの細胞タンパク質を１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにロードし、ニトロセルロースメンブレンにトランスファーした。５％ＢＳＡでブロッキング後、メンブレンをＡｎｔｉ－ｐ５３（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ｐｈｏｓｐｈｏｒ－ｐ５３（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ｐ２１（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）、Ａｎｔｉ－ｐ１６－ＩＮＫ４Ａ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ，ＩＬ，ＵＳＡ）、Ａｎｔｉ－ＧＡＰＤＨ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）と４℃で一晩中インキュベートした。完全に洗浄した後、メンブレンをＨＲＰ結合二次抗体とともにインキュベートした。ＥＣＬ試薬（Ａｂｆｒｏｎｔｉｅｒ，Ｋｏｒｅａ）とＵｖｉｔｅｃ ＨＤ９（ＵＶＩＴＥＣ，ＵＫ）を用いてタンパク質バンドを可視化した。
【0101】
その結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）濃度の増加に比例してＴＰ５３
がリン酸化し（図４ａ）、ＴＰ５３の総量は同一に維持された。また、ｐ２１およびｐ１６がいずれも濃度依存的方式で誘導されて、図２ａ～図２ｃの結果と一致した。
がリン酸化し（図４ａ）、ＴＰ５３の総量は同一に維持された。また、ｐ２１およびｐ１６がいずれも濃度依存的方式で誘導されて、図２ａ～図２ｃの結果と一致した。
【0102】
なお、Ａ５４９細胞をさらに増殖させるために、ＴＧＦβを処理し、Ａ５４９細胞を刺激し、この際、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）（１０μＭ）の処理の有無による細胞変化を観察した。
【0103】
その結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）が処理されたＡ５４９細胞の相当部分が６日目から死に始め、１５日目に完全な細胞死が誘導されるのに対し、対照群Ａ５４９は、活気に満ちる状態を維持することが観察された。青色および赤色の円は、それぞれ、対照群Ａ５４９細胞およびＯＮＧ４１００８化合物が処理されたＡ５４９細胞を示す。本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）１０μＭに露出したすべての細胞は、７２時間細胞死シグナルを受信すると見られた（図４ｂ）。
【0104】
１－４．本発明化合物によるＡ５４９細胞の細胞老化媒介細胞死
本発明化合物によってＡ５４９細胞が複製老化に迅速に転換し、細胞死が誘導されると予測されるところ、本発明化合物の処理による細胞死を観察した。細胞死の特徴の１つは、多核化（ｍｕｌｔｉｎｕｃｅａｔｉｏｎ，ＭＮＣ）であり、特にがん細胞の多核化は、発がん遺伝子誘導による老化（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）により誘発されることが知られている。
本発明化合物によってＡ５４９細胞が複製老化に迅速に転換し、細胞死が誘導されると予測されるところ、本発明化合物の処理による細胞死を観察した。細胞死の特徴の１つは、多核化（ｍｕｌｔｉｎｕｃｅａｔｉｏｎ，ＭＮＣ）であり、特にがん細胞の多核化は、発がん遺伝子誘導による老化（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）により誘発されることが知られている。
【0105】
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）１０μＭをＡ５４９細胞に２４時間、４８時間または７２時間処理して細胞老化を確立し、免疫細胞化学を行って、形態学的変化とともに多核化を観察した。上皮間葉転換（ＥＭＴ）の正の調節因子であるＺＥＢ１が発現対照群に使用された。
【0106】
その結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理２４時間にＡ５４９で細胞扁平化が明確に確認され、多核化も観察され始め、処理４８時間後に最も多い数の多核化が観察され、処理７２時間には、かえってその数が減少したが、これは、細胞死による結果と予想される（図５ａ～図５ｃ）。
【0107】
１－５．本発明化合物によるＡ５４９細胞の発がん遺伝子誘導による老化
がん細胞を除去する本発明化合物の作用機序（ＭＯＡ）は、発がん遺伝子誘導による老化によるものと予想される。なお、一般的に、抗がん剤は、細胞周期調節、ＤＮＡ複製またはクロマチンリモデリングなどを標的とするが、本発明化合物を処理したＡ５４９細胞では、ＤＮＡ複製およびＤＮＡ修復に関与するＨＩＳＴ１Ｈ４Ｋ（Ｈ４ Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｈｉｓｔｏｎｅ １２）の発現量の変化が観察されたことがある（データ不図示）。これより、可逆的汎ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）抑制剤であるＳＡＨＡ（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅ ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ ａｃｉｄ）と本発明化合物が細胞周期調節に及ぼす影響を比較した。
がん細胞を除去する本発明化合物の作用機序（ＭＯＡ）は、発がん遺伝子誘導による老化によるものと予想される。なお、一般的に、抗がん剤は、細胞周期調節、ＤＮＡ複製またはクロマチンリモデリングなどを標的とするが、本発明化合物を処理したＡ５４９細胞では、ＤＮＡ複製およびＤＮＡ修復に関与するＨＩＳＴ１Ｈ４Ｋ（Ｈ４ Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ Ｈｉｓｔｏｎｅ １２）の発現量の変化が観察されたことがある（データ不図示）。これより、可逆的汎ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）抑制剤であるＳＡＨＡ（ｓｕｂｅｒｏｙｌａｎｉｌｉｄｅ ｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ ａｃｉｄ）と本発明化合物が細胞周期調節に及ぼす影響を比較した。
【0108】
このために、Ａ５４９細胞を２４時間９６個のウェルプレートに分注した後、異なる濃度の本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）またはＳＡＨＡに露出させた。その後、細胞をＴＭＲＥ（ａｂｃａｍ，ａｂ１１３８５２）とともに３７℃の暗所で３０分間共インキュベートし、製造社のプロトコルに従ってミトコンドリア膜電位を検査した。２０μＭのＦＣＣＰ処理された細胞を陽性対照群に使用した。
【0109】
その結果、細胞生存は、ＳＡＨＡ処理後２４時間に急激に減少し、７２時間に細胞の実質的生存が最大に抑制されることをミトコンドリア膜電位分析で確認した。一方、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）による抑制効果は、４８時間に始まって、すべての
細胞が除去されるまで４日まで続いて増加した。これは、発がん遺伝子誘導による老化が本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）処理４８時間に始まって、７２時間まで続くことが確認された免疫細胞化学によるデータとも同じコンテキストであった（図５ａ～図５ｃ）。ＳＡＨＡとＯＮＧ４１００８化合物のＩＣ５０は、約２０倍の差を示した（図６）。
細胞が除去されるまで４日まで続いて増加した。これは、発がん遺伝子誘導による老化が本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）処理４８時間に始まって、７２時間まで続くことが確認された免疫細胞化学によるデータとも同じコンテキストであった（図５ａ～図５ｃ）。ＳＡＨＡとＯＮＧ４１００８化合物のＩＣ５０は、約２０倍の差を示した（図６）。
【0110】
総合すると、ＳＡＨＡは、クロマチンリモデリング過程に対する広範囲なＨＤＡＣ抑制効果によって急速な細胞死を誘導するが、この過程で様々な好ましくない効果を共に誘導するのに対し、本発明化合物は、発がん遺伝子誘導による老化を通じて細胞死を誘導すると解釈され、このような差に起因して本発明の細胞死誘導効果と持続時間に優れていると判断される。
【0111】
１－６．本発明化合物によるＡ５４９細胞のＧ２／Ｍ細胞周期停止およびＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の変化
本発明化合物とＴＰ５３、ｐ１６、ｐ２１との関連性は、本発明化合物が細胞周期の制御に重要に機能することを意味する。本発明化合物が細胞周期にどのように作用するかを確認するために、Ａ５４９細胞に本発明化合物を処理して２４時間にウェスタンブロットを行い、それぞれ、２４時間と４８時間にＰＩ染色を行い、細胞周期分析を進めた。
本発明化合物とＴＰ５３、ｐ１６、ｐ２１との関連性は、本発明化合物が細胞周期の制御に重要に機能することを意味する。本発明化合物が細胞周期にどのように作用するかを確認するために、Ａ５４９細胞に本発明化合物を処理して２４時間にウェスタンブロットを行い、それぞれ、２４時間と４８時間にＰＩ染色を行い、細胞周期分析を進めた。
【0112】
ウェスタンブロットのために、Ａ５４９細胞を１００ｍｍの細胞培養皿に１×１０６ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで分注し、一晩中培養した後、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）５０μＭまたはＦｉｓｅｔｉｎ（Ｇｌａｎｔｈａｍ，ＧＬ７３８４－１００ＭＧ）５０μＭで処理した。Ｆｉｓｅｔｉｎは、細胞老化誘導剤であり、Ｇ０／Ｇ１ ｐｈａｓｅの停止（ａｒｒｅｓｔ）を誘導する。２４時間後、細胞溶解物を１４，０００×ｇで１０分間遠心分離して浄化し、上澄み液を収集した。タンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ
ａｓｓａｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）で定量した。その後、２５μｇの細胞タンパク質を１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにロードし、ニトロセルロースメンブレンにトランスファーした。５％ＢＳＡでブロッキングした後、メンブレンを４℃で一晩中Ａｎｔｉ－ＣＤＫ２（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ＣＤＫ４（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ＧＡＰＤＨ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）抗体とともにインキュベートした。完全に洗浄した後、メンブレンをＨＲＰ結合二次抗体とともにインキュベートした。ＥＣＬ試薬（Ａｂｆｒｏｎｔｉｅｒ，Ｋｏｒｅａ）とＵｖｉｔｅｃ ＨＤ９（ＵＶＩＴＥＣ，ＵＫ）を用いてタンパク質バンドを可視化した。
ａｓｓａｙ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）で定量した。その後、２５μｇの細胞タンパク質を１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルにロードし、ニトロセルロースメンブレンにトランスファーした。５％ＢＳＡでブロッキングした後、メンブレンを４℃で一晩中Ａｎｔｉ－ＣＤＫ２（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ＣＤＫ４（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭＡ）、Ａｎｔｉ－ＧＡＰＤＨ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）抗体とともにインキュベートした。完全に洗浄した後、メンブレンをＨＲＰ結合二次抗体とともにインキュベートした。ＥＣＬ試薬（Ａｂｆｒｏｎｔｉｅｒ，Ｋｏｒｅａ）とＵｖｉｔｅｃ ＨＤ９（ＵＶＩＴＥＣ，ＵＫ）を用いてタンパク質バンドを可視化した。
【0113】
ＰＩ染色のために、Ａ５４９細胞を１００ｍｍの細胞培養皿に２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌで分注し、２４時間後に収穫してＰＢＳで細胞を洗浄した後、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）１０μＭ、２０μＭ、５０μＭまたは対照群培地をそれぞれ添加した。２４時間後、細胞を収穫し、冷却された７０％エタノールに固定した後、２００μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅ（Ａｂｃａｍ、１３９４１８）を含有するプロピディウムヨウ化物（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅ）で３７℃暗室で３０分間染色した。細胞周期の各段階は、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて確認した。
【0114】
その結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、５０μＭでＣＤＫ２とＣＤＫ６発現を抑制して、Ｇ１－Ｓ－Ｇ２ ｐｈａｓｅの停止（ａｒｒｅｓｔ）を誘導することが確認された（図７ａ、図７ｂ）。したがって、本発明化合物は、腫瘍遺伝子誘導老化（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）によって有糸分裂崩壊（ｍｉｔｏｔｉｃ ｃｏｌｌａｐｓｅ）を招き、結果的に、細胞死を誘導すること
が分かった。
が分かった。
【0115】
代謝調節は、細胞周期調節または細胞死を制御する重要な因子と見なされてきた。ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比は、解糖過程とＴＣＡ周期を含むエネルギー代謝を調節するのに中心的な役割をし、発病または老化のようなミトコンドリア機能に相当な影響を及ぼすことがよく知られている。これより、本発明化合物がＡ５４９細胞においてＮＡＤ／ＮＡＤＨ比に影響を及ぼすかを確認しようとした。
【0116】
このために、製造社のプロトコルに従ってＮＡＤ＋／ＮＡＤＨ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ａｂｃａｍ，ａｂ６５３４８）を用いてＡ５４９細胞溶解物からトータルＮＡＤを抽出し、定量化した。１ｘ１０６細胞を４００μｌ ＮＡＤ／ＮＡＤＨ抽出緩衝液に溶解させ、１０ｋＤスピンカラム（ａｂ９３３４９）を介してろ過し、純水または１／５希釈して測定した。要約すると、トータルＮＡＤの量は、標準曲線（ｐｍｏｌ）を反応ウェルに添加されたサンプル体積（μＬ）で割って、希釈係数を掛けて計算した。
【0117】
その結果、Ａ５４９細胞が本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）で刺激されたとき、ＮＡＤ生合成が増加し、ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比が顕著に増加することが確認された（図７ｃ）。一方、ＳＡＨＡは、このような効果を全く誘導しなかった。Ａ５４９細胞自体のＮＡＤ／ＮＡＤＨ比は、マイナス値を示し、Ａ５４９細胞は、好気性解糖過程を独占的に用いることができることが分かる。本発明化合物は、ＮＡＤの細胞内濃度を向上させることができるので、前記経路で速度制限酵素であるＮａｍｐｔ（ニコチンアミドホリボシルトランスフェラーゼ）が本発明化合物の主な標的になりうる。
【0118】
本発明化合物は、ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比を６０～１００の範囲で正規化することができ、このように正規化されたＮＡＤ／ＮＡＤＨ比が、本発明による化合物が処理されたがん細胞でＲＯＳ生成に影響を及ぼすかを確認した。
【0119】
このために、１ｘ１０４ｃｅｌｌｓ／ｍｌのＡ５４９細胞を９６ウェルプレートに分注して２４時間経過後、細胞に１０μＭのＨ２ＤＣＦＤＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣＡ）を処理し、３７℃の暗室で１時間インキュベートした。その後、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）または陽性対照群としてＲＯＳ誘導剤であるＴＢＨＰ（Ａｂｃａｍ，ＵＫ）を様々な濃度で２４時間処理した。細胞内ＲＯＳは、蛍光顕微鏡（Ｔｈｅｒｍｏ，ＭＡ）で検査し、蛍光分光器（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，ＭＡ）で定量化した。
【0120】
その結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を処理する場合、濃度依存的にＲＯＳが増加することが示されたが（図７ｄ）、これは、ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比が増加してがん細胞のＲＯＳ生産に影響を及ぼし、発がん遺伝子誘導による老化を起こすと解釈される。
【0121】
なお、比較例から確認できるように、本発明化合物は、がん細胞と正常細胞を区別してがん細胞特異的に作用するが、これは、本発明化合物のクロモンスキャフォールドがＮＡＤ、ＮＡＤＨ、ｐＨまたはＡＴＰを含む細胞内微細環境を構成する一部の構成要素をエネルギーセンサーとして認識するためである。
【0122】
１－７．本発明化合物処理による細胞死の動態解析
本発明化合物の処理後、時間経過によるＡ５４９細胞の細胞死を観察するために、ＴＵＮＥＬ分析と７ＡＡＤ分析を進めた。
本発明化合物の処理後、時間経過によるＡ５４９細胞の細胞死を観察するために、ＴＵＮＥＬ分析と７ＡＡＤ分析を進めた。
【0123】
ＴＵＮＥＬ分析は、製造社の指針に従ってＴＵＮＥＬ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ａｂｃａ
ｍ，ａｂ６６１１０）を用いて進めた。Ａ５４９細胞を１００ｍｍの細胞培養皿に２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌで分注し、２４時間後に収穫し、ＰＢＳで洗浄した後、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）１０μＭ、２０μＭ、５０μＭまたは対照群培地をそれぞれ添加した。２４時間後、細胞を収穫し、冷却された７０％エタノールに固定し、ＤＮＡ標識溶液５０μＬ（ＴｄＴ反応緩衝液１０μＬ、ＴｄＴ Ｅｎｚｙｍｅ ０．７５μＬ、Ｂｒ－ｄＵＴＰ８μＬ、ｄｄＨ２Ｏ３２．５μＬ）を添加した。３７℃で１時間インキュベートした後、細胞を３００μＬリンス緩衝液で２回洗浄し、抗体溶液（５μＬのＡｎｔｉ－ＢｒｄＵ－Ｒｅｄ抗体、９５μＬのリンス緩衝液）を製造し、洗浄した細胞に添加し、室温の暗室で３０分間インキュベートした。３００μＬの７－ＡＡＤ／ＲＮａｓｅ溶液を最後に添加した。各試料は、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて分析した。
ｍ，ａｂ６６１１０）を用いて進めた。Ａ５４９細胞を１００ｍｍの細胞培養皿に２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌで分注し、２４時間後に収穫し、ＰＢＳで洗浄した後、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）１０μＭ、２０μＭ、５０μＭまたは対照群培地をそれぞれ添加した。２４時間後、細胞を収穫し、冷却された７０％エタノールに固定し、ＤＮＡ標識溶液５０μＬ（ＴｄＴ反応緩衝液１０μＬ、ＴｄＴ Ｅｎｚｙｍｅ ０．７５μＬ、Ｂｒ－ｄＵＴＰ８μＬ、ｄｄＨ２Ｏ３２．５μＬ）を添加した。３７℃で１時間インキュベートした後、細胞を３００μＬリンス緩衝液で２回洗浄し、抗体溶液（５μＬのＡｎｔｉ－ＢｒｄＵ－Ｒｅｄ抗体、９５μＬのリンス緩衝液）を製造し、洗浄した細胞に添加し、室温の暗室で３０分間インキュベートした。３００μＬの７－ＡＡＤ／ＲＮａｓｅ溶液を最後に添加した。各試料は、Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて分析した。
【0124】
その結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理４８時間に細胞死が観察され始め、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理７２時間には、化合物濃度依存的に細胞死が明確に観察された（図８）。
【0125】
実施例２．Ｈ３５８、Ｈ１２９９細胞に対する抗がん効果
２－１．細胞培養および試薬
非小細胞性肺がん１次細胞であるＨ３５８、Ｈ１２９９は、いずれも、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。化学的に合成されたＯＮＧ４１００８は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。
２－１．細胞培養および試薬
非小細胞性肺がん１次細胞であるＨ３５８、Ｈ１２９９は、いずれも、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。化学的に合成されたＯＮＧ４１００８は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。
【0126】
２－２．本発明化合物によるＨ３５８細胞の増殖抑制
本発明化合物によるＨ３５８細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、卵巣がん、乳がん、肺がんまたは胃がんの治療に使用が承認された抗がん治療剤であるパクリタキセルによる効果と比較した。
本発明化合物によるＨ３５８細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、卵巣がん、乳がん、肺がんまたは胃がんの治療に使用が承認された抗がん治療剤であるパクリタキセルによる効果と比較した。
【0127】
Ｈ３５８細胞を２４時間３ｘ１０４細胞／ウェルになるように９６ウェルプレートに分注した。本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）またはパクリタキセル（Ａｂｃａｍ，ａｂ１２０１４３）をそれぞれ０．１、１、１０、２０、３０、５０μＭで処理して７２時間経過後の細胞生存率は、製造社のプロトコルに従ってｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ
ｋｉｔ－８（Ｄｏｊｉｎｄｏ，ＣＫ０４）で測定した。また、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理７２時間経過した後、Ｈ３５８細胞を光学顕微鏡（ＥＶＯＳ Ｍ７０００）で観察した。
ｋｉｔ－８（Ｄｏｊｉｎｄｏ，ＣＫ０４）で測定した。また、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理７２時間経過した後、Ｈ３５８細胞を光学顕微鏡（ＥＶＯＳ Ｍ７０００）で観察した。
【0128】
実験結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）およびパクリタキセルの両方は、３０μＭ以上の処理で同様のレベルで非小細胞性肺がん細胞の増殖を抑制させ、ただし、パクリタキセルとＯＮＧ４１００８のＩＣ５０は、約１４倍の差を示した（図９）。なお、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）１０μＭの処理７２時間経過後、Ｈ３５８細胞の有糸分裂崩壊が観察された（図１０）。
【0129】
２－３．本発明化合物によるＨ１２９９細胞の多核化
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
【0130】
実験結果、図１１のように、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理によって発がん遺伝子誘導による老化の指標である多核化が観察されることを確認した。
【0131】
実施例３．ＰＡＮＣ１細胞に対する抗がん効果
３－１．細胞培養および試薬
ヒト膵臓がん細胞株であるＰＡＮＣ１細胞は、韓国細胞株バンクから購入、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。
３－１．細胞培養および試薬
ヒト膵臓がん細胞株であるＰＡＮＣ１細胞は、韓国細胞株バンクから購入、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。
【0132】
化学的に合成されたＯＮＧ４１００８は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。
【0133】
３－２．本発明化合物によるＰＡＮＣ１細胞の増殖抑制
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＰＡＮＣ１細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、パクリタキセルによる効果と比較した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＰＡＮＣ１細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、パクリタキセルによる効果と比較した。
【0134】
実験方法は、使用される細胞のみを除いて、実施例２の記載と同一に進めた。
【0135】
実験結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、パクリタキセルと比較して、１０μＭ以上の濃度でさらに優れた膵臓がん細胞の増殖抑制効果を発揮し、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）のＰＡＮＣ１に対するＩＣ５０は、１１．８μＭ、パクリタキセルのＰＡＮＣ１に対するＩＣ５０は、８４．７μＭであることが確認された（図１２）。
【0136】
３－３．本発明化合物によるＰＡＮＣ１細胞の多核化
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
【0137】
その結果、図１３のように、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理によって発がん遺伝子誘導による老化の指標である多核化が観察された。
【0138】
実施例４．ＭＣＦ７細胞に対する抗がん効果
４－１．細胞培養および試薬
ヒト乳がん細胞株であるＭＣＦ７細胞は、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。
４－１．細胞培養および試薬
ヒト乳がん細胞株であるＭＣＦ７細胞は、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。
【0139】
化学的に合成されたＯＮＧ４１００８は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。
【0140】
４－２．本発明化合物によるＭＣＦ７細胞の増殖抑制
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＭＣＦ７細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、ＳＡＨＡによる効果と比較した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＭＣＦ７細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、ＳＡＨＡによる効果と比較した。
【0141】
実験方法は、使用された細胞と陽性対照群試薬のみを除いて、実施例２の記載と同一に進めた。
【0142】
実験結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、ＳＡＨＡと非常に類似の細胞増殖抑制効果を発揮し、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）のＭＣＦ７に対するＩＣ５０は、１５．３８μＭ、ＳＡＨＡのＭＣＦ７に対するＩＣ５０は、１１．１８μＭであることが確認された（図１４）。
【0143】
４－３．本発明化合物によるＭＣＦ７細胞の多核化
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
【0144】
実験結果、図１５のように、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理によって発がん遺伝子誘導による老化の指標である多核化が観察された。
【0145】
実施例５．ＰＣ３細胞に対する抗がん効果
５－１．細胞培養および試薬
ヒト前立腺がん細胞株であるＰＣ３細胞は、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。
５－１．細胞培養および試薬
ヒト前立腺がん細胞株であるＰＣ３細胞は、韓国細胞株バンクから購入し、ＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ）で培養した。
【0146】
化学的に合成されたＯＮＧ４１００８は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。
【0147】
５－２．本発明化合物によるＰＣ３細胞の増殖抑制
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＰＣ３細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、ＳＡＨＡによる効果と比較した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＰＣ３細胞の増殖抑制効果をＣＣＫ－８分析で確認し、ＳＡＨＡによる効果と比較した。
【0148】
実験方法は、使用された細胞と陽性対照群試薬のみを除いて、実施例２の記載と同一に進めた。
【0149】
実験結果、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の細胞増殖抑制効果が確認され、具体的には、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）のＰＣ３に対するＩＣ５０は、３２．０５μＭと確認され、ＳＡＨＡのＰＣ３に対するＩＣ５０は、３．８４μＭと確認された（図１６）。たとえＰＣ３に対するＩＣ５０は、ＳＡＨＡがさらに低いことが確認されたが、時間が経過するにつれて、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）も、ＳＡＨＡと類似のレベルでＰＣ３細胞の死を誘導することを確認することができた。
【0150】
５－３．本発明化合物によるＰＣ３細胞の細胞死誘導
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＰＣ３細胞の細胞死誘導効果をＣａｓｐａｓｅ－３／７活性で確認し、ＳＡＨＡによる効果と比較した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によるＰＣ３細胞の細胞死誘導効果をＣａｓｐａｓｅ－３／７活性で確認し、ＳＡＨＡによる効果と比較した。
【0151】
Ｃａｓｐａｓｅ－３／７活性は、Ｃａｓｐａｓｅ－３／７ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｇ８０９１）を用いて測定した。様々な濃度の本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）またはＳＡＨＡで処理された細胞を収穫し、氷上で溶解させた。その後、ＢＣＡ（Ｔｈｅｒｍｏ、２３２２７）でタンパク質を測定し、細胞溶解緩衝液５０μＬ当たりタンパク質５０μｇに調節した。その後、製造社のプロトコルに従ってＣａｓｐａｓｅ－３／７活性を分析した。
【0152】
実験結果、図１７のように、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）およびＳＡＨＡの両方は、濃度依存的にＰＣ３細胞死を誘導することが確認された。この場合、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）のＥＣ５０は、２０．３７μＭ、ＳＡＨＡのＥＣ５０は、１３．５１μＭと確認された。
【0153】
５－４．本発明化合物によるＰＣ３細胞の多核化
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）を濃度別に処理し、実施例１と同じ方法で免疫細胞化学を行い、細胞変化を観察した。
【0154】
その結果、図１８のように、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）の処理によっ
て発がん遺伝子誘導による老化の指標である多核化が観察された。
て発がん遺伝子誘導による老化の指標である多核化が観察された。
【0155】
比較例．本発明化合物が正常細胞に及ぼす影響
１－１．細胞培養および試薬
ヒト正常肺線維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＮＨＬＦ）は、Ｌｏｎｚａ（ＣＣ－２５１２）から購入し、Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ ｍｅｄｉｕｍ（０．１％ｉｎｓｕｌｉｎ、０．１％ｈＦＧＦ－Ｂ、０．１％ＧＡ－１０００、２％ＦＢＳ）で培養した。
１－１．細胞培養および試薬
ヒト正常肺線維芽細胞（Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＮＨＬＦ）は、Ｌｏｎｚａ（ＣＣ－２５１２）から購入し、Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ Ｇｒｏｗｔｈ ｍｅｄｉｕｍ（０．１％ｉｎｓｕｌｉｎ、０．１％ｈＦＧＦ－Ｂ、０．１％ＧＡ－１０００、２％ＦＢＳ）で培養した。
【0156】
化学的に合成されたＯＮＧ４１００８は、Ｓｙｎｇｅｎｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｌｔｄ．（Ｂａｎｇａｌｏｒｅ，Ｉｎｄｉａ）から入手し、ＤＭＳＯに５０ｍＭのストック濃度で溶解し、－２０℃で分取量で保管した。
【0157】
１－２．本発明化合物による細胞増殖抑制の有無の確認
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）により正常細胞であるＮＨＬＦ細胞の細胞増殖が抑制されるか否かをＣＣＫ－８分析で確認した。この場合、ＳＡＨＡおよび実用化された抗がん剤であるニンテダニブと正常細胞に及ぼす影響を比較した。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）により正常細胞であるＮＨＬＦ細胞の細胞増殖が抑制されるか否かをＣＣＫ－８分析で確認した。この場合、ＳＡＨＡおよび実用化された抗がん剤であるニンテダニブと正常細胞に及ぼす影響を比較した。
【0158】
実験方法は、使用された細胞と陽性対照群試薬のみを除いて、実施例２の記載と同一に進めた。
【0159】
実験結果、図１９のように、ＳＡＨＡおよびニンテダニブの両方は、ヒト正常肺線維芽細胞（ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｏｍａ，ＮＨＬＦ）に細胞増殖を抑制し、非常に強い毒性を示したが、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、細胞増殖を抑制させなかった。
【0160】
１－３．本発明化合物による細胞死の有無確認
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によりＮＨＬＦ細胞の細胞死が誘導されるかを確認するために、（ｉ）ミトコンドリア膜電位分析、（ｉｉ）Ｃａｓｐａｓｅ－３活性分析、（ｉｉｉ）ＬＤＨ細胞毒性分析の３つの分析を進めた。
本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）によりＮＨＬＦ細胞の細胞死が誘導されるかを確認するために、（ｉ）ミトコンドリア膜電位分析、（ｉｉ）Ｃａｓｐａｓｅ－３活性分析、（ｉｉｉ）ＬＤＨ細胞毒性分析の３つの分析を進めた。
【0161】
（ｉ）ミトコンドリア膜電位分析は、実施例１に記載の方法と同一に進めた。
【0162】
（ｉｉ）Ｃａｓｐａｓｅ－３活性分析は、Ｃａｓｐａｓｅ－３ ａｓｓａｙ ｋｉｔ（ａｂｃａｍ，ａｂ３７４０１）を用いて測定した。簡略に記述すると、様々な濃度の本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）またはニンテダニブで処理された細胞を収穫し、氷上で溶解させた。その後、ＢＣＡ（Ｔｈｅｒｍｏ、２３２２７）でタンパク質を測定し、細胞溶解緩衝液５０μＬ当たりタンパク質５０μｇに調節した。その後、製造社のプロトコルに従ってＣａｓｐａｓｅ－３活性を分析した。
【0163】
（ｉｉｉ）ＬＤＨ細胞毒性分析は、ＬＤＨ分析キット（ａｂｃａｍ，ａｂ５６３９３）を用いてＬＤＨ放出を検出した。簡略に記述すると、様々な濃度の本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）またはニンテダニブまたはＳＡＨＡで処理された細胞培養プレートを４８０×ｇで１０分間遠心分離し、上澄み液（１０μＬ／ウェル）を他の９６ウェルプレートで抽出した後、１００μＬのＬＤＧ反応混合物を各ウェルに添加し、室温で３０分間インキュベートした。吸光度の値は、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍで測定された。
【0164】
実験結果、図２０のように、ＭＴＭＰ、Ｃａｓｐａｓｅ３およびＬＤＨで測定したとき、ＳＡＨＡとニンテダニブは、正常細胞でも強力な細胞死を誘導したが（［ＳＡＨＡ］Ｍ
ＴＭＰ：ＩＣ５０２２．３６μＭ、ＬＤＨ：ＥＣ５０１１５．０μＭ／［ニンテダニブ］ＭＴＭＰ：ＩＣ５０４１．０２μＭ、Ｃａｓｐａｓｅ３：ＥＣ５０１２８．２μＭ、ＬＤＨ：ＥＣ５０２１８．２μＭ）、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、正常細胞で明確な細胞死を誘導しなかった。
ＴＭＰ：ＩＣ５０２２．３６μＭ、ＬＤＨ：ＥＣ５０１１５．０μＭ／［ニンテダニブ］ＭＴＭＰ：ＩＣ５０４１．０２μＭ、Ｃａｓｐａｓｅ３：ＥＣ５０１２８．２μＭ、ＬＤＨ：ＥＣ５０２１８．２μＭ）、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、正常細胞で明確な細胞死を誘導しなかった。
【0165】
なお、さらに進めたＣａｓｐａｓｅ３／７分析でも、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）は、がん細胞株（ＰＣ３）とは異なって、ｃａｓｐａｓｅ３／７活性を誘導しないところ、本発明化学式２化合物（ＯＮＧ４１００８）が正常細胞に細胞死を誘導しないことをもう一度確認することができた（データ不図示）。
【0166】
本発明による化合物は、腫瘍細胞またはがん細胞特異的細胞老化（複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ））の強力な誘導剤であり、無制限増殖ループから細胞老化の方式でこれら細胞を解放させると同時に、がん細胞特異的細胞死を誘導し、卓越した抗腫瘍または抗がん特性を示す。
【0167】
このような特性は、様々なクロモンスキャフォールド誘導体のうちでも本発明化合物だけで発揮される固有な特性といえるが、他のクロモンスキャフォールド誘導体としてＣ６位置に酸素を有するＨｉｓｔｉｄｕｌｉｎ、Ｊａｃｅｏｃｉｄｉｎは、抗線維化効果を発揮するが、がん細胞特異的細胞老化を誘導したり老化した細胞を除去する効果を全く発揮せず、Ａｐｉｇｅｎｉｎは、抗線維化、がん細胞特異的細胞老化または老化細胞を除去する効果を全部誘導せず、Ｆｉｓｅｔｉｎ、Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎは、細胞死を誘導するが、老化細胞を除去または抗線維化効果を誘導しないところ、本発明化合物は、がん細胞特異的細胞老化（Ｓｅｎｏｇｅｎｉｃ）とともに、老化細胞を効果的に除去（Ｓｅｎｏｌｙｔｉｃ）することができるので、本発明において確認されたような優れた抗腫瘍または抗がん特性を発揮すると解釈される（図２１を参照）。
【0168】
最近、抗がん剤の治療効果を強化させるために、ＤａｓａｔｉｎｉｂとＱｕｅｒｃｅｔｉｎを併用投与したり、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））とＦｉｓｅｔｉｎを併用投与する報告がある。これは、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎのような抗がん剤により誘導されるＳｅｎｏｇｅｎｉｃ効果とＱｕｅｒｃｅｔｉｎ、Ｆｉｓｅｔｉｎのようなクロモンスキャフォールド誘導体により誘導されるＳｙｎｏｌｙｔｉｃ効果をがん細胞に同時に発揮することによって、抗がんにシナジー効果を発揮するためである。本発明による化合物は、１つの化合物がＳｅｎｏｇｅｎｉｃおよびＳｅｎｏｌｙｔｉｃ効果を同時に発揮するところ、最近活発に研究されている上記のような併用投与制の効果を１つの化合物の単独使用で発揮することができる（図２２参照）。
【0169】
以上、本発明内容の特定の部分を詳細に記述したところ、当業界における通常の知識を有する者にとって、このような具体的な記述は、ただ好ましい実施様態であり、これによって本発明の範囲が制限されるものではない点は明白だろう。したがって、本発明の実質的な範囲は、添付の請求項とそれらの等価物によって定義されるといえる。
【0170】
ＣＳ：クロモンスキャフォールド、Ｃｈｒｏｍｏｎｅ Ｓｃａｆｆｏｌｄ
ＣＳＤ：クロモンスキャフォールド含有誘導体、Ｃｈｒｏｍｏｎｅ Ｓｃａｆｆｏｌｄ
Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ
ＮＨＬＦ：ヒト正常肺線維芽細胞、Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＲＳ：複製老化、Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ
ＯＩＳ：発がん遺伝子誘導による老化、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ
ＭＮＣ：多核化、Ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ
ＭＴＭＰ：ミトコンドリア膜電位、Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ＮＡＤ：ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ＮＡＭＰＴ：ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ、Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
ＣＳＤ：クロモンスキャフォールド含有誘導体、Ｃｈｒｏｍｏｎｅ Ｓｃａｆｆｏｌｄ
Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ
ＮＨＬＦ：ヒト正常肺線維芽細胞、Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｌｕｎｇ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
ＲＳ：複製老化、Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ
ＯＩＳ：発がん遺伝子誘導による老化、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ
ＭＮＣ：多核化、Ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅａｔｉｏｎ
ＭＴＭＰ：ミトコンドリア膜電位、Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ＮＡＤ：ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド、Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ ａｄｅｎｉｎｅ ｄｉｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ＮＡＭＰＴ：ニコチンアミドホスホリボシルトランスフェラーゼ、Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
【産業上の利用可能性】
【0171】
本発明化合物は、がん細胞と正常細胞を区別してがん細胞特異的に細胞老化と細胞死を同時に誘導することができ、がん細胞特異的標的物質を付着する必要がなく、抗がん剤が正常細胞を攻撃して発生する頻繋な副作用を最小化することができ、上記した二重作用に基づいて強力な抗がん効果を発揮することができる。
【図1】
【図2a】
【図2b】
【図2c】
【図3】
【図4a】
【図4b】
【図5a】
【図5b】
【図5c】
【図6】
【図7a】
【図7b】
【図7c】
【図7d】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【図12】
【図13】
【図14】
【図15】
【図16】
【図17】
【図18】
【図19】
【図20】
【図21】
【図22】
【手続補正書】
【提出日】2023-10-20
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
下記化学式１で表される化合物またはその塩を有効成分として含有する腫瘍またはがん疾患の予防、治療または改善用組成物：[化学式１]
【化1】
Ｒ１は、Ｃ１－５のアルキル、Ｃ５－６の環状アルキル、ＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６の環状アルキル、Ｃ６－１２のアリール、またはＯまたはＮのうち１つ以上のヘテロ原子を含有するＣ５－６のヘテロアリールであり、
Ｒ２は、水素、エチル、アセチル、アセトキシ、カルボキシ、ベンゾイルオキシまたは３，４，５－トリヒドロキシベンゾイルオキシであり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、メチル、メトキシ、アセトキシ、カルボキシまたはベンゾイルオキシである。
【請求項2】
Ｒ１は、メチル、エチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはフェニルであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
Ｒ１は、メチルであり、Ｒ２は、水素であり、
Ｒ３は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ４は、ヒドロキシまたはメトキシであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシまたはメトキシであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項4】
前記化合物は、下記化学式２～５のうちいずれか１つで表されることを特徴とする請求項１に記載の組成物：[化学式２]
【化2】
【化3】
【化4】
【化5】
【請求項5】
前記がんは、血液がんまたは固形がんであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項6】
前記血液がんは、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫または再生不良性貧血であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項7】
前記固形がんは、脳腫瘍、良性星状細胞腫、悪性星状細胞腫、脳下垂体腺腫、髄膜腫、脳リンパ腫、乏突起膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、脳幹腫瘍、頭頸部腫瘍、喉頭がん、口腔咽頭がん、鼻腔がん、鼻咽頭がん、唾液腺腫瘍、下咽頭がん、甲状腺がん、口腔がん、胸部腫瘍、小細胞性肺がん、非小細胞性肺がん、胸腺がん、縦隔腫瘍、食道がん、乳がん、男性乳がん、腹部腫瘍、胃がん、肝がん、胆嚢がん、胆道がん、膵臓がん、小腸がん、大腸がん、肛門がん、膀胱がん、腎臓がん、男性生殖器腫瘍、陰茎がん、前立腺がん、女性生殖器腫瘍、子宮頸がん、子宮内膜がん、卵巣がん、子宮肉腫、膣がん、女性外部生殖器腫瘍、女性尿道がんまたは皮膚がんであることを特徴とする請求項５に記載の組成物。
【請求項8】
前記化合物は、（ｉ）複製老化（ｒｅｐｌｉｃａｔｉｖｅ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＲＳ）および／または腫瘍遺伝子誘導老化（ｏｎｃｏｇｅｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ＯＩＳ）の誘導による腫瘍またはがん細胞特異的増殖の抑制；
（ｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＮＡＤ／ＮＡＤＨ比の逆転；
（ｉｉｉ）腫瘍またはがん細胞ＲＯＳの上向き調節；および
（ｉv）腫瘍またはがん細胞特異的細胞死誘導；で構成される群から選ばれる１つ以上
の作用によって抗腫瘍または抗がん活性を示すことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項9】
医薬品である、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
医薬部外品である、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項11】
食品である、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
【国際調査報告】