特表 2024-515796 嫌気性微生物を保存するための組成物ならびにその作製および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-10

(54)【発明の名称】嫌気性微生物を保存するための組成物ならびにその作製および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 1/04 20060101AFI20240403BHJP

   A61K 47/36 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/42 20170101ALI20240403BHJP

   A61K 47/32 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/38 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/46 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/26 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240403BHJP

   A61K 47/10 20170101ALI20240403BHJP

   A61K 35/74 20150101ALI20240403BHJP

   A61K 35/741 20150101ALI20240403BHJP

   A61K 35/745 20150101ALI20240403BHJP

   A61K 35/747 20150101ALI20240403BHJP

   A61K 35/742 20150101ALI20240403BHJP

   A61K 35/744 20150101ALI20240403BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20240403BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240403BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240403BHJP

   A23L 33/135 20160101ALI20240403BHJP

【ＦＩ】

C12N1/04

A61K47/36

A61K47/42

A61K47/32

A61K47/38

A61K47/46

A61K47/26

A61K47/18

A61K47/10

A61K35/74 A

A61K35/741

A61K35/745

A61K35/747

A61K35/742

A61K35/744

A61K9/20

A61K9/48

A61P1/00

A61P1/04

A61K35/74

A23L33/135

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023565944

(86)(22)【出願日】2022-04-29

(85)【翻訳文提出日】2023-12-14

(86)【国際出願番号】 US2022027058

(87)【国際公開番号】W WO2022232594

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】63/182,578

(32)【優先日】2021-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523403885

【氏名又は名称】アランタ バイオ ホールディングス，エルエルシー

(74)【代理人】

【識別番号】100113376

【弁理士】

【氏名又は名称】南条 雅裕

(74)【代理人】

【識別番号】100179394

【弁理士】

【氏名又は名称】瀬田 あや子

(74)【代理人】

【識別番号】100185384

【弁理士】

【氏名又は名称】伊波 興一朗

(74)【代理人】

【識別番号】100137811

【弁理士】

【氏名又は名称】原 秀貢人

(72)【発明者】

【氏名】カウリー アーロン ブレイク

【テーマコード（参考）】

4B018

4B065

4C076

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B018LE01

4B018LE02

4B018MD85

4B018MD86

4B018MD87

4B018ME02

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4B018MF08

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4B065AA30X

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4C076BB01

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4C076CC50

4C076DD51Q

4C076DD67

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4C076FF17

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4C076FF61

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4C087BC56

4C087BC60

4C087BC61

4C087BC68

4C087MA35

4C087MA37

4C087MA52

4C087NA03

4C087ZA66

4C087ZA68

(57)【要約】

１つまたは複数の種の嫌気性微生物を保存するための組成物が本明細書中に提供される。また、嫌気性微生物の保存組成物、たとえば凍結保存組成物、ならびに保存組成物を調製および使用する方法も提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源とを含み、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、嫌気性微生物を保存するための組成物。

【請求項2】

前記組成物が冷凍保存用組成物（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源とを含み、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物。

【請求項4】

１種または複数種の嫌気性微生物をさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記粘度が、約５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、または約１００ｃＰ～約１，０００ｃＰの範囲内にある、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

前記重量モル浸透圧濃度が、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、または約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲内にある、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記ｐＨが、約４～約８、約５～約８、約４～約７．５、約５～約７．５、または約５．５～約７．５の範囲内にある、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

水性溶媒中で溶媒和されている場合、前記組成物が約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の前記粘度調整剤を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記粘度調整剤がポリマー組成物である、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記ポリマー組成物が、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せを含む、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記ポリマー組成物がアルギネートを含む、請求項１０に記載の組成物。

【請求項12】

前記アルギネートがアルギン酸ナトリウムである、請求項１１に記載の組成物。

【請求項13】

前記アルギン酸ナトリウムが約２５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰの粘度範囲を有する、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記エネルギー源が、前記微生物の成長を可能にする細胞培養培地である、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

水性溶媒中で溶媒和されている場合、前記組成物が約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の前記エネルギー源を含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項16】

前記エネルギー源が、単糖、二糖、オリゴ糖、またはその組合せである、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記単糖が、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記二糖が、トレハロース、スクロース、またはその組合せである、請求項１６に記載の組成物。

【請求項19】

前記オリゴ糖がイヌリン誘導体である、請求項１６に記載の組成物。

【請求項20】

前記イヌリン誘導体がフルクトオリゴ糖である、請求項１７に記載の組成物。

【請求項21】

タンパク質安定化剤をさらに含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項22】

水性溶媒中で溶媒和されている場合、前記組成物が約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）の前記タンパク質安定化剤を含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記タンパク質安定化剤が、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択される、請求項２１または２２に記載の組成物。

【請求項24】

前記二糖が、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択される、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記１種または複数種の嫌気性微生物が、細胞ペーストまたは細胞スラリーの形態で存在する、請求項４から２４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項26】

水性溶媒中で溶媒和されている場合、前記組成物が約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の前記細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の前記微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｖ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、および約４～約８の範囲のｐＨを有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物。

【請求項28】

（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースと、
（ｉｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンと、
（ｉｖ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）のアルギン酸ナトリウムと、
（ｖ）約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、
（ｖｉ）０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
（ｖｉｉ）約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、および約４～約８の範囲のｐＨを有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物。

【請求項29】

前記組成物が－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、請求項２７または２８に記載の組成物。

【請求項30】

緩衝剤をさらに含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

１種または複数種の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、前記微生物のためのエネルギー源と、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位と、５％（ｗ／ｗ）未満の含水量とを含む、保存組成物。

【請求項32】

前記組成物が凍結保存組成物（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）である、請求項３１に記載の組成物。

【請求項33】

１種または複数種の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、前記微生物のためのエネルギー源と、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位と、５％（ｗ／ｗ）未満の含水量とを含む、凍結保存組成物。

【請求項34】

前記含水量が、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）または約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）の範囲内にある、請求項３１から３３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項35】

前記粘度調整剤がポリマー組成物である、請求項３１から３４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項36】

前記ポリマー組成物が、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せを含む、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

前記ポリマー組成物がアルギネートを含む、請求項３５または３６に記載の組成物。

【請求項38】

前記アルギネートがアルギン酸ナトリウムである、請求項３６に記載の組成物。

【請求項39】

前記アルギン酸ナトリウムが２５０～１４，０００ｃＰの粘度範囲を有する、請求項３８に記載の組成物。

【請求項40】

前記エネルギー源が、前記微生物の成長を可能にする細胞培養培地である、請求項３１から３９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項41】

前記エネルギー源が、単糖、二糖、オリゴ糖、またはその組合せである、請求項３１から４０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項42】

前記単糖が、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せからなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。

【請求項43】

前記二糖が、トレハロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、スクロース、およびその組合せからなる群から選択される、請求項４１に記載の組成物。

【請求項44】

前記オリゴ糖がイヌリン誘導体である、請求項４１に記載の組成物。

【請求項45】

前記イヌリン誘導体がフルクトオリゴ糖である、請求項４４に記載の組成物。

【請求項46】

タンパク質安定化剤をさらに含む、請求項２９から４５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項47】

前記タンパク質安定化剤が、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択される、請求項４６に記載の組成物。

【請求項48】

前記二糖が、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択される、請求項４７に記載の組成物。

【請求項49】

緩衝剤をさらに含む、請求項３１から４８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項50】

（ｉ）１種または複数種の嫌気性微生物と、
（ｉｉ）ラフチロースおよびマルトデキストリンを含むエネルギー源と、
（ｉｉｉ）アルギン酸ナトリウムと、
（ｉｖ）トレハロース、スクロース、およびその組合せを含むタンパク質安定化剤と、
（ｖｉ）５％（ｗ／ｗ）未満の含水量と
を含む、凍結保存組成物。

【請求項51】

前記組成物が－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、請求項５０に記載の組成物。

【請求項52】

前記１種または複数種の嫌気性微生物が、アッカーマンシア科（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａｃｅａｅ）、バシラス科（Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、バクテロイデス科（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）、ビフィズス菌科（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、クリステンセネラ科（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム科（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｃｅａｅ）、コリオバクテリウム科（Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、エガセラ科（Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａｃｅａｅ）、腸内細菌科（Ｅｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ユーバクテリウム科（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ラクノスピラ科（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、ラクトバシラス科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、ロイコノストック科（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃａｃｅａｅ）、オドリバクター科（Ｏｄｏｒｉｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、オキサロバクター科（Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ポルフィロモナス科（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、プレボテラ科（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ）、リケネラ科（Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、ルミノコッカス科（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、レンサ球菌科（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１から５１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項53】

４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、前記組成物が３、２、１、または０．５ｌｏｇ未満のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす、請求項３１から５２のいずれかに記載の組成物。

【請求項54】

４℃で約２年の間、前記組成物が実質的に安定に保たれる、請求項３１から５２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項55】

水性流体中で再水和させた場合に、前記組成物が再水和の５、４、３、または２時間以内に前記１種または複数種の微生物の再成長を可能にする、請求項３１から５２のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項56】

任意選択でカプセル、錠剤、またはカプレット内に配置した、請求項３１から５５のいずれか一項に記載の凍結保存組成物を含む、医薬組成物。

【請求項57】

任意選択でカプセル、錠剤、またはカプレット内に配置した、請求項３１から５５のいずれか一項に記載の凍結保存組成物を含む、食料製品またはプロバイオティクス。

【請求項58】

対象に、有効量の請求項３１から５５のいずれか一項に記載の組成物、請求項５６に記載の医薬組成物、または請求項５７に記載の食料製品もしくはプロバイオティクスを投与するステップを含む、それを必要としている対象の胃腸管系マイクロバイオームを調整する方法。

【請求項59】

（ａ）嫌気性微生物を、粘度調整剤を含む水性混合物を含む賦形剤ブレンドおよび前記微生物のためのエネルギー源と合わせて、冷凍保存用混合物を生成するステップであって、前記冷凍保存用混合物が、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有するステップと、
（ｂ）前記冷凍保存用混合物を凍結乾燥し、前記冷凍保存用混合物の含水量を約５％（ｗ／ｗ）未満まで減らして、前記凍結保存組成物を生成するステップと
を含む、請求項３１から５５のいずれか一項に記載の凍結保存組成物を生成する方法。

【請求項60】

ステップ（ａ）中において、前記微生物が細胞ペーストの形態である、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記細胞ペーストが細胞培養培地中の前記微生物を含む、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項62】

前記凍結保存組成物をカプセル、錠剤、またはカプレット中にパッケージングするステップをさらに含む、請求項５８から６０のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

相互参照
本出願は、その内容がその全体で本明細書中に参考として組み込まれている、２０２１年４月３０日に出願の米国仮出願第６３／１８２，５７８号の利益および優先権を主張するものである。

【0002】

本開示は、一般に、嫌気性微生物を保存するための方法および組成物に関する。

【背景技術】

【0003】

生存可能な微生物を含有する生きた生物療法製品（ＬＢＰ）は、たとえばクローン病および潰瘍性結腸炎などの胃腸管疾患を含めた多種多様な医学的障害の処置のために開発されている治療剤のクラスに属する。ＬＢＰは、マイクロバイオームを含めた胃腸管系環境の調整を通じてその治療効果を発揮すると考えられている。

【0004】

生きた微生物を胃腸管に送達するための一般的な手法は、ＬＢＰの経口送達を介するものである。しかし、ＬＢＰを開発する際には、これが安全かつ有効であることを確実にするために、重要な課題に対処しなければならない。そのような課題としては、それだけには限定されないが、所望の治療効果を達成するために、製造、貯蔵、および投与中に微生物の安定性および生存度を維持すること、生きた微生物の胃腸管内への所望の放出プロファイルを達成すること、ならびに胃腸管の適切な領域を通過する間に微生物が回復および増殖されることを確実にすることが挙げられる。

【0005】

凍結保存は、経口送達のためのＬＢＰを配合するためにしばしば使用される技法である。嫌気性生物を含めた生きた微生物が短い有限の寿命を有し得ることを考慮すると、凍結保存工程は、ＬＢＰに必要である、微生物が生存可能に保たれる長い期間を容易にし得る。しかし、凍結保存の使用自体が、細胞内および／または細胞外の氷結晶の形成に関連した細胞死によってしばしば引き起こされる、生きた微生物の生存度の顕著な低下をもたらす場合がある。さらに、凍結保存配合物の安定性も、貯蔵、再水和、および対象による摂取後における生物の適時回復中の生存度に影響を与え得る。凍結保護剤および凍結乾燥保護剤の使用を含めた微生物を凍結保存工程中の損傷から保護するため、ならびに凍結乾燥工程の制御のためのいくつかの手法が開発されているが、現在までに、これらの手法は、所望の治療効果を達成するためにより高い用量の生物の投与を必要とする、特に長期間にわたって実質的に減退した生存度を有するＬＢＳをもたらしている。

【0006】

現在までに行われてきた努力にもかかわらず、生物が対象の消化管を横断する際に治療効果を与えるように、製造、貯蔵、および投与中の微生物の生存度を改善させ、投与後の生物の適時回復を促進する保存用組成物、たとえば冷凍保存用組成物（ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）を開発する、未だ満たされていない必要性が依然として存在する。

【発明の概要】

【0007】

本発明は、部分的に、嫌気性微生物（ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｓｉｍｓ）の長期的生存度、および生物が対象の消化管を横断する際に複製できるように対象によって経口摂取された際の微生物の迅速な回復を促進する、保存用組成物および保存手法の発見に基づく。本明細書中に一般に記載されているように、本開示は、嫌気性微生物を冷凍保存するための組成物を含む、嫌気性微生物を保存するための組成物を提供する。組成物は、一般に、粘度調整剤と、対象に投与した際の迅速な回復を促進するための、微生物のためのエネルギー源と、嫌気性生物の生存度を支持するための酸化還元電位、たとえば約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶとを含む。さらに、本明細書中に開示する組成物は、一般に、１つまたは複数の様々な種類の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、嫌気性生物の生存度を支持するための酸化還元電位、たとえば約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶとを含む。

【0008】

一態様では、本開示は、１つまたは複数の種の嫌気性微生物を保存するための組成物（たとえば冷凍保存用組成物）を提供する。組成物は、粘度調整剤と微生物のためのエネルギー源とを含み、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0009】

別の態様では、本開示は、１つまたは複数の種の嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物を提供する。組成物は、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源とを含み、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0010】

前述の態様のそれぞれにおいて、組成物は、約５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、もしくは約１００ｃＰ～約１，０００ｃＰの範囲の粘度、および／または約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、もしくは約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、および／または約４～約８、約５～約８、約４～約７．５、約５～約７．５、もしくは約５．５～約７．５の範囲のｐＨを有する。

【0011】

前述の態様のそれぞれにおいて、組成物の組成は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含有することができる。粘度調整剤は、ポリマー組成物、たとえば、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せを含む組成物であることができる。ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、たとえば、たとえば約２５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰの粘度範囲を有するアルギン酸ナトリウムを含む。

【0012】

さらに、前述の組成物のそれぞれにおいて、エネルギー源は、微生物の成長を可能にする細胞培養培地であることができる。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。エネルギー源は、単糖、二糖、オリゴ糖、またはその組合せであることができる。単糖は、たとえば、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せからなる群から選択されることができる。二糖は、たとえば、トレハロース、スクロース、またはその組合せであることができる。オリゴ糖は、たとえばイヌリン誘導体、たとえばフルクトオリゴ糖であることができる。

【0013】

さらに、前述の組成物のそれぞれにおいて、組成物は、タンパク質安定化剤をさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定化剤を含む。タンパク質安定化剤は、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択されることができる。ある特定の実施形態では、二糖は、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択される。

【0014】

ある特定の実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物（生物は異なる属または種に属することができる）は、細胞ペーストまたは細胞スラリーの形態で存在する。状況に応じて、前述の組成物のそれぞれにおいて、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含むことができる。

【0015】

別の態様では、本開示は、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物を提供する。組成物は、（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストまたは細胞スラリーと、（ｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、（ｉｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、（ｉｖ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒とを含み、冷凍保存用組成物は、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、および約４～約８の範囲のｐＨを有する。

【0016】

別の態様では、本開示は、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物を提供する。組成物は、（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、（ｉｉ）約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースと、（ｉｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンと、（ｉｖ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）のアルギン酸ナトリウムと、（ｖ）約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、（ｖｉ）０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースと、（ｖｉｉ）約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水とを含み、冷凍保存用組成物は、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、および約４～約８の範囲のｐＨを有する。組成物は、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有することができる。

【0017】

前述の組成物のそれぞれにおいて、組成物は緩衝剤も含むことができる。

【0018】

さらに、本開示は、１種または複数種の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位と、５％（ｗ／ｗ）未満の含水量とを含む、保存細胞組成物（たとえば凍結保存組成物（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ））を提供する。ある特定の実施形態では、含水量は、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）または約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）の範囲内にある。ある特定の実施形態では、粘度調整剤は、ポリマー組成物、たとえば、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せである。ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、たとえばアルギン酸ナトリウム、たとえば２５０～１４，０００ｃＰの粘度範囲を有するアルギン酸ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、エネルギー源は、微生物の成長を可能にする細胞培養培地である。エネルギー源は、単糖、二糖、オリゴ糖、またはその組合せであることができる。単糖は、たとえば、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せからなる群から選択されることができる。二糖は、たとえば、トレハロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、スクロース、およびその組合せからなる群から選択されることができる。オリゴ糖は、たとえばイヌリン誘導体、たとえばフルクトオリゴ糖であることができる。

【0019】

ある特定の実施形態では、組成物は、タンパク質安定化剤を含む。タンパク質安定化剤は、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択されることができる。二糖は、たとえば、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択されることができる。

【0020】

ある特定の実施形態では、緩衝剤を含む。

【0021】

別の態様では、本開示は、（ｉ）１種または複数種の嫌気性微生物と、（ｉｉ）たとえばラフチロースおよびマルトデキストリンを含むエネルギー源と、（ｉｉｉ）アルギン酸ナトリウムと、（ｉｖ）たとえば、トレハロース、スクロース、およびその組合せを含むタンパク質安定化剤と、（ｖｉ）５％（ｗ／ｗ）未満の含水量とを含む、凍結保存組成物を提供する。組成物は、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位をさらに含むことができる。

【0022】

前述の組成物のそれぞれにおいて、１種または複数種の嫌気性微生物は、アッカーマンシア科（Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａｃｅａｅ）、バシラス科（Ｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、バクテロイデス科（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ）、ビフィズス菌科（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、クリステンセネラ科（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム科（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｃｅａｅ）、コリオバクテリウム科（Ｃｏｒｉｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、エガセラ科（Ｅｇｇｅｒｔｈｅｌｌａｃｅａｅ）、腸内細菌科（Ｅｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ユーバクテリウム科（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ラクノスピラ科（Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、ラクトバシラス科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、ロイコノストック科（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃａｃｅａｅ）、オドリバクター科（Ｏｄｏｒｉｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、オキサロバクター科（Ｏｘａｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ポルフィロモナス科（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、プレボテラ科（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ）、リケネラ科（Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ）、ルミノコッカス科（Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、レンサ球菌科（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、およびその組合せからなる群から選択されることができる。

【0023】

ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の細胞組成物は、４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、３、２、１、または０．５ｌｏｇ未満のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす。ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で約２年の間、実質的に安定に保たれる。ある特定の実施形態では、組成物は、水性流体中で再水和させた場合に、再水和の５、４、３、または２時間以内に１種または複数種の微生物の再成長を可能にする。

【0024】

さらに、本開示は、任意選択でカプセル、錠剤、またはカプレット内に配置した、本明細書中に記載の細胞含有組成物のうちの任意のものの凍結保存組成物を含む医薬組成物を提供する。さらに、本開示は、任意選択でカプセル、錠剤、またはカプレット内に配置した、本明細書中に記載の細胞含有組成物のうちの任意のものの凍結保存組成物を含む食料製品またはプロバイオティクスを提供する。

【0025】

別の態様では、本開示は、対象に、有効量の、本明細書中に記載の組成物、医薬組成物、または食料製品もしくはプロバイオティクスのうちの任意のものを投与するステップを一般に含む、それを必要としている対象の胃腸管系マイクロバイオームを調整する方法を提供する。

【0026】

別の態様では、本開示は、本明細書中に記載の凍結保存組成物を生成する方法を提供する。本方法は、一般に、（ａ）嫌気性微生物を、粘度調整剤を含む水性混合物を含む賦形剤ブレンドおよび微生物のためのエネルギー源と合わせて、冷凍保存用混合物を生成するステップであって、冷凍保存用混合物が、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有するステップと、（ｂ）冷凍保存用混合物を凍結乾燥し、冷凍保存用混合物の含水量を約５％（ｗ／ｗ）未満まで減らして、凍結保存組成物を生成するステップとを含む。微生物は細胞ペーストの形態であることができ、たとえば、細胞ペーストは、細胞培養培地内に配置した微生物を含むことができる。本方法は、凍結保存組成物をカプセル、錠剤、またはカプレット中にパッケージングするステップをさらに含み得る。

【図面の簡単な説明】

【0027】

【図1】本明細書中に記載したその中に開示されている嫌気性微生物を保存するための例示的な組成物で使用することができる、例示的な温度および圧力プロファイルを示すグラフである。

【図2】実施例４に記載のように、（ｉ）本開示の例示的な冷凍保存用組成物（ＡＣＰ－００１、ＡＣＰ－００２、およびＡＣＰ－００３）、ならびに（ｉｉ）市販の冷凍保存用組成物（ＣＢ－００１およびＣＢ－００２、ＯＰＳ ＤＩａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＬＲ２Ｘ－５００－０２およびＭＦＤＢ－５００－０６）中での凍結保存後の、リケネラ科、バクテロイデス科、ユーバクテリウム科、ラクノスピラ科、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、オキサロバクター科、およびレンサ球菌科の微生物の生存度を示す棒グラフである。

【図3】実施例４に記載のように、（ｉ）本開示の例示的な冷凍保存用組成物ならびに（ｉｉ）市販の冷凍保存用組成物（ＯＰＳ ＤＩａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＬＲ２Ｘ－５００－０２およびＭＦＤＢ－５００－０６）を使用して保存した、バクテロイデス科およびラクノスピラ科の凍結保存組成物のＥＴＦ（時間）の関数としての光学密度（ＯＤ_６００）を示すグラフである。

【発明を実施するための形態】

【0028】

本発明は、部分的に、嫌気性微生物の長期的生存度、および生物が対象の消化管を横断する際に複製できるように対象によって経口摂取された際の微生物の迅速な回復を促進する、保存用組成物および保存手法の発見に基づく。本明細書中に一般に記載されているように、本開示は、嫌気性微生物を冷凍保存するための組成物を含む、嫌気性微生物を保存するための組成物を提供する。組成物は、一般に、粘度調整剤と、対象に投与した際の迅速な回復を促進するための、嫌気性微生物のためのエネルギー源と、嫌気性生物の生存度を支持するための酸化還元電位、たとえば約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶとを含む。さらに、本明細書中に開示する組成物は、一般に、１つまたは複数の様々な種類の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、嫌気性生物の生存度を支持するための酸化還元電位、たとえば約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶとを含む。

【0029】

定義
本開示の理解を容易にするために、いくつかの用語および語句を以下に定義する。

【0030】

別段に定義しない限りは、本明細書中で使用するすべての技術用語および科学用語は、本開示が属する分野の技術者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中で使用する略記は、化学および生物学分野におけるその慣用の意味を有する。

【0031】

説明の全体にわたって、組成物およびキットが特定の構成要素を有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）として記載されている場合、または工程および方法が特定のステップを有する、含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）、もしくは含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）として記載されている場合は、さらに、列挙した構成要素から本質的になるまたはそれからなる本開示の組成物およびキットが存在すること、ならびに列挙した処理ステップから本質的になるまたはそれからなる本開示による工程および方法が存在することが企図される。

【0032】

本出願中、要素または構成要素が列挙した要素または構成要素のリスト中に含まれるおよび／またはそれから選択されると言われる場合は、要素もしくは構成要素は、列挙した要素もしくは構成要素のうちの任意のものであることができる、または要素もしくは構成要素は、列挙した要素もしくは構成要素のうちの２つ以上からなる群から選択されることができることを理解されたい。

【0033】

さらに、本明細書中に記載の組成物または方法の要素および／または特長は、本明細書中で明示的であるか暗黙的であるかにかかわらず、本開示の精神および範囲から逸脱せずに様々な方法で組み合わせることができることを理解されたい。たとえば、特定の化合物に言及する場合、内容からそうでないと理解されない限りは、その化合物は、本開示の組成物の様々な実施形態および／または本開示の方法において使用することができる。言い換えれば、本出願内において、実施形態は、明白かつ簡潔な応用が書き描かれることを可能にするような方法で記載および描写されているが、本教示および本開示から離れずに実施形態を様々に組み合わせ得るまたは分離し得ることが意図され、理解されるであろう。たとえば、本明細書中に記載および描写されたすべての特長を、本明細書中に記載および描写された本開示のすべての態様に適用することができることを理解されたい。

【0034】

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、本開示において、内容が不適切でない限りは、冠詞の文法的目的語のうちの１つまたは複数（すなわち少なくとも１つ）をいうために使用する。例として、「ａｎ 要素」とは、１つの要素または複数の要素を意味する。

【0035】

用語「および／または」は、本開示において、別段に指摘しない限りは「および」または「または」のどちらかを意味するために使用する。

【0036】

表現「～のうちの少なくとも１つ」は、内容および使用からそうでないと理解されない限りは、表現の後に列挙した対象のそれぞれおよび列挙した対象のうちの２つ以上の様々な組合せを個々に含むことを理解されたい。３つ以上の列挙した対象に関連した表現「および／または」は、内容からそうでないと理解されない限りは、同じ意味を有することを理解されたい。

【0037】

用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、または「含有すること（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」の、その文法的均等物を含めた使用は、内容からそうでないと具体的に記述または理解されない限りは、一般に、開放型かつ非限定的である、たとえば追加の列挙していない要素またはステップを排除しないものであるとして理解されたい。

【0038】

用語「約」の使用が定量的な値の前である場合、別段に具体的に記述しない限りは、本開示は具体的な定量的値自体も含む。本明細書中で使用する用語「約」は、別段に指定されないまたは内用から暗示されない限りは、公称値からの±２０％の変動をいう。

【0039】

本明細書中の様々な箇所において、変数またはパラメータが群または範囲中に開示されている。説明は、そのような群および範囲のメンバーの一つ一つの個々の部分組合せを含むことが具体的に意図される。たとえば、０～４０の範囲の整数は、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、および４０を個々に開示することが具体的に意図され、１～２０の範囲の整数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および２０を個々に開示することが具体的に意図される。

【0040】

任意かつすべての例、またはそれ中の例示的な言葉の使用、たとえば「など（ｓｕｃｈ ａｓ）」または「挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は、本開示をより良好に例示することのみを意図し、特許請求されない限りは本開示の範囲に制限を課さない。明細書中のどの言葉も、任意の特許請求されていない要素を本発明の実施に必須であるとして示すものとして解釈されるべきでない。

【0041】

一般的な事項として、百分率を指定する組成は、別段に指定されない限りは重量によるものである。さらに、変数に定義が伴っていない場合は、変数の以前の定義が支配する。

【0042】

本明細書中で使用する「医薬組成物」または「医薬配合物」とは、組成物または配合物をｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏの診断的または治療的使用に特に適したものにする、活性薬剤と不活性または活性の賦形剤との組合せをいう。

【0043】

「薬学的に許容される」とは、連邦政府もしくは州政府の規制機関または米国以外の国では対応する機関によって認可されたまたは認可可能である、あるいは、動物、より詳細にはヒトにおける使用のために、米国薬局方または他の一般に認識されている薬局方中に列挙されていることを意味する。

【0044】

本明細書中で使用する「薬学的に許容される賦形剤」とは、活性薬剤の対象への投与および／または対象による吸収を支援し、患者に対して顕著な有害な毒性効果を引き起こさずに本開示の組成物中に含ませることができる物質をいう。薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、水、ＮａＣｌ、リン酸緩衝生理食塩水などの通常生理食塩水、乳濁液（たとえば油／水または水／油乳濁液など）、乳酸加リンゲル、通常スクロース、通常グルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、潤滑剤、コーティング、甘味料、香味料、塩溶液（リンゲル液など）、アルコール、油、ゼラチン、炭水化物、たとえばラクトース、アミロース、またはデンプン、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン、および着色料などが挙げられる。そのような調製物は、無菌的にし、所望する場合は、本開示の化合物と有害に反応しない、潤滑剤、保存料、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色料、および／または芳香族物質などの補助剤と混合することができる。賦形剤の例には、Ｍａｒｔｉｎ、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ、第１５版、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．、ペンシルベニア州Ｅａｓｔｏｎ（１９７５）を参照されたい。

【0045】

用語「対象」および「患者」は、本明細書中で互換性があるように使用される。投与が企図される「対象」または「患者」としては、それだけには限定されないが、ヒト（たとえば、任意の年齢層、たとえば小児対象（たとえば、乳児、小児、青年）または成人対象（たとえば、若年成人、中年成人、もしくは老人）の男性または女性）ならびに／あるいは非ヒト動物、たとえば、霊長類（たとえば、カニクイザル、アカゲザル）などの哺乳動物、畜牛、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、げっ歯動物、ネコ、および／またはイヌが挙げられる。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。ある特定の実施形態では、対象は非ヒト動物である。

【0046】

本明細書中で使用する「投与すること」とは、経口投与、坐薬としての投与、局所的接触、静脈内投与、非経口投与、腹腔内投与、筋肉内投与、病巣内投与、くも膜下腔内投与、頭蓋内投与、鼻腔内投与、もしくは皮下投与、または徐放性装置、たとえばミニ浸透圧ポンプの対象への植え込みを意味する。投与は、非経口および経粘膜（たとえば、頬側、舌下、口蓋、歯肉、経鼻、経膣、直腸、または経皮）を含めた任意の経路によるものであることができる。非経口投与としては、たとえば、静脈内、筋肉内、動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、および頭蓋内が挙げられる。他の送達様式としては、それだけには限定されないが、リポソーム配合物の使用、静脈内注入、経皮パッチなどが挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の保存組成物（たとえば凍結保存組成物）を対象に経口投与する。「同時投与する」とは、本明細書中に記載の組成物を、１つまたは複数の追加の療法の投与と同時、その直前、またはその直後に投与することを意味する。本明細書中に記載の保存組成物（たとえば凍結保存組成物）は、対象に、単独で投与することができるかまたは同時投与することができる。同時投与とは、組成物の、個々にまたは組み合わせて（複数の組成物または薬剤）の同時または逐次の投与を含むことを意味する。したがって、調製物は、所望に応じて、他の活性物質／組成物と組み合わせることもできる。

【0047】

用語「疾患」、「障害」、および「状態」は、本明細書中で互換性があるように使用される。

【0048】

別段に指定されない限りは、本明細書中で使用する用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」は、疾患、障害、もしくは状態の重篤度を下げる、または疾患、障害、もしくは状態の進行を遅延もしくは遅らせる、指定した疾患、障害、または状態を患っている間に起こる作用を企図する（たとえば「治療処置」）。

【0049】

一般に、「有効量」の組成物（たとえば、本明細書中に記載の保存組成物または凍結保存組成物）とは、所望の生物学的応答を誘発するため、たとえば対象の胃腸管系マイクロバイオームを調整するために十分な量をいう。当技術分野の技術者には理解されるように、有効量の本開示の組成物（たとえば、本明細書中に記載の保存組成物または凍結保存組成物）は、たとえば、所望の生物学的エンドポイント、組成物の滞留時間および生存度、処置される疾患、ならびに対象の年齢、重量、健康、および状態などの要因に応じて変動し得る。

【0050】

本明細書中で使用する用語「嫌気性微生物」とは、生存可能に保たれるおよび／または酸素が枯渇した環境中で繁殖することができる微生物を意味すると理解される。用語、嫌気性微生物は、偏性嫌気性生物、通性嫌気性生物、および耐気性微生物を含む。ある特定の実施形態では、嫌気性微生物は、通性嫌気性生物では約＋３００ｍＶ～－１００ｍＶおよび偏性嫌気性生物では＋１００ｍＶ～約－５００ｍＶの酸化還元電位を有する環境中において、生存可能に保たれ、成長および／または複製することができる。

【0051】

Ｉ．嫌気性微生物を保存するための組成物
一態様では、一般に粘度調整剤と微生物のためのエネルギー源とを含む、嫌気性微生物を保存するための組成物が本明細書中に提供される。ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の嫌気性微生物を保存するための組成物は、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物である。

【0052】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度を有する。あるいはまたはそれに加えて、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位、および／または約４～約８の範囲のｐＨを有する。

【0053】

ある特定の実施形態では、嫌気性微生物を保存するための保存用（たとえば冷凍保存用）組成物は、粘度調整剤と微生物のためのエネルギー源とを含み、任意選択で、（ｉ）約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位であり、（ｉｉ）水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位、および約４～約８の範囲のｐＨを有する。

【0054】

ある特定の実施形態では、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物は、粘度調整剤、微生物のためのエネルギー源、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を含み、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位、および約４～約８の範囲のｐＨを有する。

【0055】

粘度および粘度調整剤
粘度は、保存している１種または複数種の微生物の生存度を維持するために選択する。

【0056】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約５００ｃＰ、約５ｃＰ～約４００ｃＰ、約５ｃＰ～約３００ｃＰ、約５ｃＰ～約２００ｃＰ、約５ｃＰ～約１００ｃＰ、約５ｃＰ～約５０ｃＰ、約５０ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４００ｃＰ、約５０ｃＰ～約３００ｃＰ、約５０ｃＰ～約２００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１００ｃＰ、約１００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４００ｃＰ、約１００ｃＰ～約３００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２００ｃＰ、約２００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約４００ｃＰ、約２００ｃＰ～約３００ｃＰ、約３００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約４００ｃＰ、約４００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約４，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約４，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰの範囲の粘度を有する。

【0057】

ある特定の実施形態では、粘度は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、または約１００ｃＰ～１，０００ｃＰの範囲内にある。

【0058】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５ｃＰ、約１０ｃＰ、約１５ｃＰ、約２０ｃＰ、約２５ｃＰ、約３０ｃＰ、約３５ｃＰ、約４０ｃＰ、約４５ｃＰ、約５０ｃＰ、約５５ｃＰ、約６０ｃＰ、約６５ｃＰ、約７０ｃＰ、約７５ｃＰ、約８０ｃＰ、約８５ｃＰ、約９０ｃＰ、約９５ｃＰ、約１００ｃＰ、約１１０ｃＰ、約１２０ｃＰ、約１３０ｃＰ、約１４０ｃＰ、約１５０ｃＰ、約１６０ｃＰ、約１７０ｃＰ、約１８０ｃＰ、約１９０ｃＰ、約２００ｃＰ、約２２５ｃＰ、約２５０ｃＰ、約２７５ｃＰ、約３００ｃＰ、約３５０ｃＰ、約４００ｃＰ、約４５０ｃＰ、約５００ｃＰ、約６００ｃＰ、約７００ｃＰ、約８００ｃＰ、約９００ｃＰ、約１，０００ｃＰ、約１，２５０ｃＰ、約１，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ、約３，０００ｃＰ、約３，５００ｃＰ、約４，０００ｃＰ、約４，５００ｃＰ、約５，０００ｃＰ、約５，５００ｃＰ、約６，０００ｃＰの粘度を有する。

【0059】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．３％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．３５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．０５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、または約０．３％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含む。

【0060】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．０１％（ｗ／ｗ）、約０．０２％（ｗ／ｗ）、約０．０３％（ｗ／ｗ）、約０．０４％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）、約０．０６％（ｗ／ｗ）、約０．０７％（ｗ／ｗ）、約０．０８％（ｗ／ｗ）、約０．０９％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．１１％（ｗ／ｗ）、約０．１２％（ｗ／ｗ）、約０．１３％（ｗ／ｗ）、約０．１４％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．１６％（ｗ／ｗ）、約０．１７％（ｗ／ｗ）、約０．１８％（ｗ／ｗ）、約０．１９％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．２１％（ｗ／ｗ）、約０．２２％（ｗ／ｗ）、約０．２３％（ｗ／ｗ）、約０．２４％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．２６％（ｗ／ｗ）、約０．２７％（ｗ／ｗ）、約０．２８％（ｗ／ｗ）、約０．２９％（ｗ／ｗ）、約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．３１％（ｗ／ｗ）、約０．３２％（ｗ／ｗ）、約０．３３％（ｗ／ｗ）、約０．３４％（ｗ／ｗ）、約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．３６％（ｗ／ｗ）、約０．３７％（ｗ／ｗ）、約０．３８％（ｗ／ｗ）、約０．３９％（ｗ／ｗ）、または約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含む。

【0061】

ある特定の実施形態では、粘度調整剤はポリマー組成物である。ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せを含む。ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、たとえばアルギン酸ナトリウムを含む。

【0062】

ある特定の実施形態では、アルギン酸ナトリウムは、約２５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１２，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１３，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約７５０ｃＰ、約２５０ｃＰ～約５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約７５０ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、または約１２，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰの範囲の粘度を有する。ある特定の実施形態では、アルギン酸ナトリウムは、約２５０ｃＰ～約１４０００ｃＰの粘度範囲を有する。

【0063】

重量モル浸透圧濃度および重量モル浸透圧濃度調整剤
重量モル浸透圧濃度は、保存している１種または複数種の微生物の生存度を維持するために選択する。

【0064】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、または約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度を有する。

【0065】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、または約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度を有する。

【0066】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３００Ｏｓｍ／Ｌ、約３５０Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ、約４５０Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，２５０Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，７５０Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，２５０Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，７５０Ｏｓｍ／Ｌ、約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、または約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの重量モル浸透圧濃度を有する。

【0067】

重量モル浸透圧濃度は、塩、糖類、およびポリマーなどの様々な薬剤を使用して調整することができる。例示的な塩としては、それだけには限定されないが、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ_２、ＣａＣｌ_２、Ｎａ_２ＨＰＯ_４、ＮａＨ_２ＰＯ_４、Ｋ_２ＨＰＯ_４、ＫＨ_２ＰＯ_４、またはその組合せが挙げられる。例示的な糖類としては、それだけには限定されないが、単糖および二糖、たとえば、グルコース、スクロース、トレハロースが挙げられる。例示的なポリマーとしては、それだけには限定されないが、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せが挙げられる。

【0068】

ｐＨ
ｐＨは、保存している１種または複数種の微生物の生存度を維持するために選択する。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約４～約８、約４．５～約８、約５～約８、約５．５～約８、約６～約８、約６．５～約８、約７～約８、約７．５～約８、約４～約７．５、約４～約７、約４～約６．５、約４～約６、約４～約５．５、約４～約５、約４～約４．５、約４．５～約７．５、約４．５～約７、約４．５～約６．５、約４．５～約６、約４．５～約５．５、約４．５～約５、約５～約７．５、約５～約７、約５～約６．５、約５～約６、約５～約５．５、約５．５～約７．５、約５．５～約７、約５．５～約６．５、約５．５～約６、約６～約７．５、約６～約７、約６～約６．５、約６．５～約７．５、約６．５～約７、または約７～約７．５の範囲のｐＨを有する。

【0069】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約４～約８、約５～約８、約４～約７．５、約５～約７．５、または約５．５～約７．５の範囲のｐＨを有する。

【0070】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約４、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、または約８のｐＨを有する。

【0071】

微生物のためのエネルギー源
ある特定の実施形態では、エネルギー源は、微生物の成長を可能にする細胞培養培地である。培養培地は、目的の嫌気性微生物に応じて変動してもよく、したがって、所定の微生物または微生物群に対してあつらえてもよいことが理解されよう。例示的な培養培地は、それだけには限定されないが、炭素源（たとえば糖）、窒素源（たとえば、アンモニアに富んだ構成要素（たとえば、酵母抽出物、ペプトン）およびアミノ酸）、ビタミン、ミネラル（たとえば、ホスフェート、アセテート）、緩衝用構成要素（たとえば、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウム緩衝剤）、微量金属、脂肪酸、ならびに酸素捕捉剤（たとえば、システイン、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、チオグリコレート、硫化鉄、ジチオトレイトール）を含めた構成要素のうちの１つまたは複数を含有し得る。

【0072】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約１１％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約１３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、または約１１％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。

【0073】

ある特定の実施形態では、組成物は、約３％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約１０％（ｗ／ｗ）、約１１％（ｗ／ｗ）、約１２％（ｗ／ｗ）、約１３％（ｗ／ｗ）、約１４％（ｗ／ｗ）、または約１５％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。

【0074】

ある特定の実施形態では、エネルギー源は、単糖、二糖、オリゴ糖、またはその組合せである。ある特定の実施形態では、単糖は、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、二糖は、トレハロース、スクロース、またはその組合せである。ある特定の実施形態では、オリゴ糖は、イヌリン誘導体、たとえばフルクトオリゴ糖、たとえばラフチロースである。ある特定の実施形態では、オリゴ糖はマルトデキストリンである。

【0075】

ある特定の実施形態では、エネルギー源は、ラフチロースおよびマルトデキストリンを含む。

【0076】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約１．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約１．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、または約４％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）のラフチロースを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースを含む。

【0077】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、または約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースを含む。

【0078】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンを含む。

【0079】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンを含む。

【0080】

酸化還元電位
細胞保存用（たとえば冷凍保存用）培地は、目的の微生物の生存度ならびに成長および／または複製を容易にする酸化還元電位を有することが理解されよう。酸化還元電位は、所定の微生物または微生物群の好ましい条件を満たすためにあつらえることができる。

【0081】

嫌気性細菌（たとえば本明細書中に記載の微生物）では、その自然の代謝状態に維持され、生存度を維持することができるように、組成物（たとえば本明細書中に記載の保存用または冷凍保存用組成物）が還元状態（すなわち負の酸化還元電位）であることが必要である。

【0082】

所望の負の酸化還元電位を有する本明細書中に記載の保存用組成物の調製は、以下の手法のうちの１つまたは複数を使用して達成し得る：
（１）前還元嫌気性培地を嫌気性微生物に、その成長および／もしくは収穫の前、または収穫の後に加えること。嫌気性培地は、還元された環境の維持を支援することができる、還元剤（たとえば、システイン、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、チオグリコレート、硫化鉄、ジチオトレイトール）、ならびに酸化還元媒介物質（たとえば、重金属（たとえば、鉄、亜鉛、マンガン、コバルト、銅、ニッケル、およびモリブデン（ｍｏｌｙｂｅｄｅｎｕｍ））とビタミン（たとえば、メナジオン、アスコルビン酸、葉酸、リボフラビン、ピリドキシン、ビオチン、チアミン、ニコチンアミド、Ｄ－パントテン（ｐａｔｈｏｔｈｅｎｉｃ）酸、ビタビミン（ｖｉｔａｂｉｍｉｎ）ｂ１２、リポ酸、および４－アミノ安息香酸））を含有し得る。
（２）本明細書中に記載の組成物を作製、保管、および使用するために使用される試薬ならびに材料（たとえば成長培地および他の構成要素）から酸素を除去すること。そのような技法としては、それだけには限定されないが、液体組成物または構成要素ブレンドを通して、嫌気性不活性ガス（たとえば、窒素、二酸化炭素、アルゴンなど）の気泡を発生させることを挙げ得る（本明細書中に開示する実施例２を参照）。
（３）嫌気性を維持するために、還元剤（たとえば、システイン、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、チオグリコレート、硫化鉄、ジチオトレイトール）ならびに／または酸化還元媒介物質（たとえば、重金属（たとえば、鉄、亜鉛、マンガン、コバルト、銅、ニッケル、およびモリブデン（ｍｏｌｙｂｅｄｅｎｕｍ））とビタミン（たとえば、メナジオン、アスコルビン酸、葉酸、リボフラビン、ピリドキシン、ビオチン、チアミン、ニコチンアミド、Ｄ－パントテン（ｐａｔｈｏｔｈｅｎｉｃ）酸、ビタビミン（ｖｉｔａｂｉｍｉｎ）ｂ１２、リポ酸、および４－アミノ安息香酸））を本明細書中に記載の組成物に加えること。
（４）様々な工程ステップ（たとえば、（ｉ）嫌気性微生物を培地、冷凍保存料などと混合するステップと、（ｉｉ）生じた組成物を凍結乾燥トレイ内に注ぐステップと、（ｉｉｉ）組成物を凍結させるステップと）を嫌気性環境下で行うこと。

【0083】

ある特定の実施形態では、酸化還元電位は、通性嫌気性生物では＋３００～－１００ｍＶおよび偏性嫌気性生物では＋１００ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲内となる。酸化還元電位は、典型的には、感知電極（たとえば、標準の水素電極、塩化銀電極、または飽和カロメル電極によって測定する。例示的な酸化還元電位測定機器としては、Ｍｅｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ ＯＲＰメーターおよびプローブが挙げられる。

【0084】

ある特定の実施形態では、組成物は、たとえば水性溶媒中で溶媒和されている場合、－５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－５０ｍＶ～－３５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－３００ｍＶ、－５０ｍＶ～－２５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－２００ｍＶ、－５０ｍＶ～－１５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－１００ｍＶ、－１００ｍＶ～－５００ｍＶ、－１００ｍＶ～－４５０ｍＶ、－１００ｍＶ～－４００ｍＶ、－１００ｍＶ～－３５０ｍＶ、－１００ｍＶ～－３００ｍＶ、－１００ｍＶ～－２５０ｍＶ、－１００ｍＶ～－２００ｍＶ、－１００ｍＶ～－１５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－１５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－１５０ｍＶ～－３５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－３００ｍＶ、－１５０ｍＶ～－２５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－２００ｍＶ、－２００ｍＶ～－５００ｍＶ、－２００ｍＶ～－４５０ｍＶ、－２００ｍＶ～－４００ｍＶ、－２００ｍＶ～－３５０ｍＶ、－２００ｍＶ～－３００ｍＶ、－２００ｍＶ～－２５０ｍＶ、－２５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－２５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－２５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－２５０ｍＶ～－３５０ｍＶ、－２５０ｍＶ～－３００ｍＶ、－３００ｍＶ～－５００ｍＶ、－３００ｍＶ～－４５０ｍＶ、－３００ｍＶ～－４００ｍＶ、－３００ｍＶ～－３５０ｍＶ、－３５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－３５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－３５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－４００ｍＶ～－５００ｍＶ、－４００ｍＶ～－４５０ｍＶ、または－４５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0085】

ある特定の実施形態では、組成物は、たとえば水性溶媒中で溶媒和されている場合、約－５０ｍＶ、約－６０ｍＶ、約－７０ｍＶ、約－８０ｍＶ、約－９０ｍＶ、約－１００ｍＶ、約－１１０ｍＶ、約－１２０ｍＶ、約－１３０ｍＶ、約－１４０ｍＶ、約－１５０ｍＶ、約－１６０ｍＶ、約－１７０ｍＶ、約－１８０ｍＶ、約－１９０ｍＶ、約－２００ｍＶ、約－２４０ｍＶ、約－２６０ｍＶ、約－２８０ｍＶ、約－３００ｍＶ、約－３２０ｍＶ、約－３４０ｍＶ、約－３６０ｍＶ、約－３８０ｍＶ、約－４００ｍＶ、約－４２０ｍＶ、約－４４０ｍＶ、約－４６０ｍＶ、約－４８０ｍＶ、または約－５００ｍＶの酸化還元電位を有する。

【0086】

微生物
ある特定の実施形態では、組成物は、保存しようとする１種または複数種の嫌気性微生物をさらに含む。嫌気性微生物は、偏性嫌気性生物または通性嫌気性生物であることができる。

【0087】

例示的な嫌気性微生物としては、ビフィズス菌科、コリオバクテリウム科、コリネバクテリウム科（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ」）、ディエジア科（Ｄｉｅｔｚｉａｃｅａｅ）、マイコバクテリウム科（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、ゴルドニア科（Ｇｏｒｄｏｎｉａｃｅａｅ）、ノカルディア科（Ｎｏｃａｒｄｉａｃｅａｅ）、ストレプトマイセス科（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）、ノカルディア２科（Ｎｏｃａｒｄｉａｃｅａｅ ２）、プロピオニバクテリウム亜目（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｎｅａｅ）、マイクロコッカス科（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ブレビバクテリウム科（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、デルマバクター科（Ｄｅｒｍａｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、アクチノマイセス科（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｃｅａｅ）、ボゴリエラ科（Ｂｏｇｏｒｉｅｌｌａｃｅａｅ）、プロミクロモノスポラ科（Ｐｒｏｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）、マイクロバクテリウム科（Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、セルロモナス科（Ｃｅｌｌｕｌｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、デルマコッカス科（Ｄｅｒｍａｃｏｃｃａｃｅａｅ）、イントラスポランギウム科（Ｉｎｔｒａｓｐｏｒａｎｇｉａｃｅａｅ）、ゲオデルマトラフィス科（Ｇｅｏｄｅｒｍａｔｏｐｈｉｌａｃｅａｅ）、ミクロモノスポラ科（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｃｅａｅ）、バクテロイデス科、プレボテラ科、ポルフィロモナス１科（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ １）、リケネラ科、ポルフィロモナス２科（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ ２）、フラボバクテリウム科（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、スフィンゴバクテリウム科（Ｓｐｈｉｎｇｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、未分類のバクテロイデス門（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ）、サイトファガ科（Ｃｙｔｏｐｈａｇａｃｅａｅ）、イプシロンプロテオバクテリア綱（Ｅｐｓｉｌｏｎｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ファーミキューテス門（Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ）、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、アエロコッカス科（Ａｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、カルノバクテリウム科（Ｃａｒｎｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、アエロコッカス２科（Ａｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ２）、ラクノスピラ科、レンサ球菌科、エンテロコッカス科（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、エリュシペロトリクス科（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈａｃｅａｅ）、スタフィロコッカス科（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、第ＸＩ所属不明科、リステリア科（Ｌｉｓｔｅｒｉａｃｅａｅ）、プラノコッカス１科（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ １）、第ＸＩＩ所属不明科、プラノコッカス２科（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ ２）、バシラス科、パニエバシラス科（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム科（クラスターＩ）、クロストリジウム科（クラスターＩＩ）、ラクノスピラ科（クラスターＸＩＶａ）、ルミノコッカス科（クラスターＩＶ）、ペプトストレプトコッカス科（Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）（クラスターＸＩ）、エリュシペロトリクス科（クラスターＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ）、フソバクテリウム門（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ）、ルミノコッカス科、未分類のクロストリジウム目（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａｌｅｓ）、オシロスピラ科（Ｏｓｃｉｌｌｏｓｐｉｒａｃｅａｅ）、ラクノスピラ科、ユーバクテリウム科、第ＸＩＩＩ所属不明科、ペプトストレプトコッカス科（クラスターＸＩ）、ラクノスピラ科（クラスターＸＩＶａ）、ルミノコッカス科（クラスターＩＶ）、クロストリジウム科（クラスターＩ）、エリュシペロトリクス科（クラスターＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ）、ペプトストレプトコッカス科、第ＸＩ所属不明科、エリュシペロトリクス綱（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｒｉｃｈｉ）およびバシラス綱、クロストリジウム綱、ネガティウィクテス綱、クロストリジウム２綱、クロストリジウム３綱／ハラナエロビウム目、ベイロネラ科、アシダミノコッカス科、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩＩ、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩＩＩ、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩ、テネリクテス門、エリュシペロトリクス科、フソバクテリウム科、レプトトリキア科、ロドバクター科、ブルセラ科、リゾビウム科、フィロバクテリウム科、アウランチモナス科、ブラジリゾビウム科（Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）、メチロバクテリウム科（Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、キサントバクター科（Ｘａｎｔｈｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、カウロバクター科（Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ヒフォミクロビウム科（Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉａｃｅａｅ）、スフィンゴモナス科（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、酢酸菌科（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ロドスピリルム科（Ｒｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌａｃｅａｅ）、ファーミキューテス門、コマモナス科（Ｃｏｍａｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、サテレラ科（Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａｃｅａｅ）、アルカリゲネス科（Ａｌｃａｌｉｇｅｎａｃｅａｅ）、バークホリデリア１科（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅａｅ １）、オキサロバクター科、バークホリデリア２科（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａｃｅａｅ ）、ロドシクルス科（Ｒｈｏｄｏｃｙｃｌａｃｅａｅ）、ナイセリア科（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ）、腸内細菌科、パスツレラ科（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｃｅａｅ）、ビブリオ科（Ｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）、アエロモナス科（Ａｅｒｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、サクシニビブリオ科（Ｓｕｃｃｉｎｉｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）、モラクセラ科（Ｍｏｒａｘｅｌｌａｃｅａｅ）、シュードモナス科（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、キサントモナス科（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、シノバクタ―科（Ｓｉｎｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ε－カンピロバクター１科（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ １）、ε－ヘリコバクター科（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ε－カンピロバクター２科（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ ２）、δ－デスルホビブリオ科（Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）、ウェルミコビウム門（Ｖｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａ）、レンティスパエラ門（Ｌｅｎｔｉｓｐｈａｅｒａｅ）、プランクトミセス門（Ｐｌａｎｃｔｏｍｙｃｅｔｅｓ）、スピロヘータ門（Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ）、デイノコッカス－サーマス門（Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ－Ｔｈｅｒｍｕｓ）、シネルギステス門（Ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｅｔｅｓ）、古細菌／ユーリアーキオータ（Ｅｕｒｙａｒｃｈａｅｏｔａ）、古細菌／クレンアーキオータ門（Ｃｒｅｎａｒｃｈａｅｏｔａ）、真菌－子嚢菌門（Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）、真菌－担子菌門（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）、ストラメノパイル類（Ｓｔｒａｍｅｎｏｐｉｌｅｓ）、アピコンプレックス類（Ａｐｉｃｏｍｐｌｅｘａ）、アメーバ動物門（Ａｍｏｅｂｏｚｏａ）、繊毛虫類（Ｃｉｌｉｏｐｈｏｒａ）、メタモナーダ類（Ｍｅｔａｍｏｎａｄａ）、微胞子虫門（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｉｄｉａ）、フォルニカータ綱（Ｆｏｒｎｉｃａｔａ）、アッカーマンシア科、クリステンセネラ科、オドリバクター科、エガセラ科、およびその組合せのうちの１種または複数が挙げられる。

【0088】

ある特定の実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物は、アッカーマンシア科、バシラス科、バクテロイデス科、ビフィズス菌科、クリステンセネラ科、クロストリジウム科、コリオバクテリウム科、エガセラ科、腸内細菌科、ユーバクテリウム科、ラクノスピラ科、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、オドリバクター科、オキサロバクター科、ポルフィロモナス科、プレボテラ科、リケネラ科、ルミノコッカス科、レンサ球菌科、およびその組合せからなる群から選択される。

【0089】

１種または複数種の嫌気性微生物は、細胞ペーストまたは細胞スラリーの形態で、本明細書中に記載の組成物中に存在することができる。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３６％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３４％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３２％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約３６％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約３４％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約３６％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、または約４６％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む。

【0090】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）、約３１％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）、約３３％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）、約３７％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）、約３９％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）、約４１％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）、約４３％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）、約４７％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）、約４９％（ｗ／ｗ）、または約５０％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む。

【0091】

ある特定の実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物は、細胞ペースト、たとえばコンパクトな固形物の形態で存在する。ある特定の実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物は、細胞スラリー、たとえば細胞懸濁液の形態で存在する。

【0092】

安定化剤
ある特定の実施形態では、組成物は、タンパク質安定化剤をさらに含むことができる。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定化剤を含む。

【0093】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定化剤を含む。

【0094】

ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤は、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、二糖は、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤はトレハロースを含む。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤は、スクロースおよびトレハロースを含む。

【0095】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のトレハロースを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースを含む。

【0096】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースを含む。

【0097】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、０％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。

【0098】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。

【0099】

溶媒和組成物
ある特定の実施形態では、組成物が水性溶媒、たとえば水または水性溶媒中で溶媒和されている場合、組成物は、約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約５０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約５５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、または約５０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水性溶媒を含む。

【0100】

ある特定の実施形態では、組成物がそのような水性溶媒中で溶媒和されている場合、組成物は、約３０％（ｗ／ｗ）、約３１％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）、約３３％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）、約３７％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）、約３９％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）、約４１％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）、約４３％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）、約４７％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）、約４９％（ｗ／ｗ）、約５０％（ｗ／ｗ）、約５１％（ｗ／ｗ）、約５２％（ｗ／ｗ）、約５３％（ｗ／ｗ）、約５４％（ｗ／ｗ）、約５５％（ｗ／ｗ）、約５６％（ｗ／ｗ）、約５７％（ｗ／ｗ）、約５８％（ｗ／ｗ）、約５９％（ｗ／ｗ）、または約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒を含む。

【0101】

ある特定の実施形態では、水性溶媒は水（たとえばイオン化水または脱イオン水）である。ある特定の実施形態では、組成物が水中で溶媒和されている場合、組成物は、約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約５０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約５５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、または約５０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水を含む。

【0102】

ある特定の実施形態では、組成物が水中で溶媒和されている場合、組成物は、約３０％（ｗ／ｗ）、約３１％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）、約３３％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）、約３７％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）、約３９％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）、約４１％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）、約４３％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）、約４７％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）、約４９％（ｗ／ｗ）、約５０％（ｗ／ｗ）、約５１％（ｗ／ｗ）、約５２％（ｗ／ｗ）、約５３％（ｗ／ｗ）、約５４％（ｗ／ｗ）、約５５％（ｗ／ｗ）、約５６％（ｗ／ｗ）、約５７％（ｗ／ｗ）、約５８％（ｗ／ｗ）、約５９％（ｗ／ｗ）、または約６０％（ｗ／ｗ）の水を含む。

【0103】

例示的な保存用組成物
様々な実施形態では、とりわけ、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、水性溶媒とを含む、嫌気性微生物を保存するための組成物が本明細書中に提供される。

【0104】

様々な実施形態では、嫌気性微生物を保存するための組成物は、
（ｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｉｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含む。

【0105】

様々な実施形態では、組成物は、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、水性溶媒とを含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0106】

様々な実施形態では、嫌気性微生物を保存するための組成物は、
（ｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｉｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0107】

様々な実施形態では、組成物は、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｖ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含む。

【0108】

様々な実施形態では、組成物は、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｖ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0109】

様々な実施形態では、組成物は、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースと、
（ｉｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンと、
（ｉｖ）約０％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）のアルギン酸ナトリウムと、
（ｖ）約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、
（ｖｉ）０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
（ｖｉｉ）約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水と
を含む。

【0110】

様々な実施形態では、組成物は、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースと、
（ｉｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンと、
（ｉｖ）約０％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）のアルギン酸ナトリウムと、
（ｖ）約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、
（ｖｉ）０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
（ｖｉｉ）約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0111】

様々な実施形態では、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、水性溶媒とを含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0112】

様々な実施形態では、
（ｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｉｉ）３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含む、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0113】

様々な実施形態では、
（ｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｉｉ）３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0114】

様々な実施形態では、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｖ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含む、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0115】

様々な実施形態では、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）の微生物のためのエネルギー源と、
（ｉｉｉ）約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤と、
（ｉｖ）約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）の水性溶媒と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0116】

様々な実施形態では、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースと、
（ｉｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンと、
（ｉｖ）約０％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）のアルギン酸ナトリウムと、
（ｖ）約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、
（ｖｉ）０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
（ｖｉｉ）約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水と
を含む、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0117】

様々な実施形態では、
（ｉ）約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の、１種または複数種の嫌気性微生物を含む細胞ペーストと、
（ｉｉ）約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースと、
（ｉｉｉ）約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンと、
（ｉｖ）約０％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）のアルギン酸ナトリウムと、
（ｖ）約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースと、
（ｖｉ）０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースと、
（ｖｉｉ）約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水と
を含み、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する、嫌気性微生物を冷凍保存するための冷凍保存用組成物が本明細書中に提供される。

【0118】

ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の保存組成物（たとえば凍結保存組成物）は、架橋結合された組成物ではない、または架橋結合された構成要素を含有しない。ある特定の実施形態では、組成物はガラスまたはガラス様ではない。

【0119】

２．保存組成物
一態様では、１種または複数種の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源とを一般に含む、保存組成物が本明細書中に提供される。ある特定の実施形態では、保存組成物は、５％（ｗ／ｗ）未満の含水量を有する。

【0120】

様々な実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物と、粘度調整剤と、微生物のためのエネルギー源と、５％（ｗ／ｗ）未満の含水量とを含む、保存組成物、たとえば凍結保存組成物が本明細書中に提供される。

【0121】

ある特定の実施形態では、保存組成物は凍結保存組成物である。

【0122】

ある特定の実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物は、通性嫌気性生物、偏性嫌気性生物、またはその組合せであることができる。嫌気性微生物は、ビフィズス菌科、コリオバクテリウム科、コリネバクテリウム科、ディエジア科、マイコバクテリウム科、ゴルドニア科、ノカルディア科、ストレプトマイセス科、ノカルディア２科、プロピオニバクテリウム亜目、マイクロコッカス科、ブレビバクテリウム科、デルマバクター科、アクチノマイセス科、ボゴリエラ科、プロミクロモノスポラ科、マイクロバクテリウム科、セルロモナス科、デルマコッカス科、イントラスポランギウム科、ゲオデルマトラフィス科、ミクロモノスポラ科、バクテロイデス科、プレボテラ科、ポルフィロモナス１科、リケネラ科、ポルフィロモナス２科、フラボバクテリウム科、スフィンゴバクテリウム科、未分類のバクテロイデス門、サイトファガ科、イプシロンプロテオバクテリア綱、ファーミキューテス門、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、アエロコッカス科、カルノバクテリウム科、アエロコッカス２科、ラクノスピラ科、レンサ球菌科、エンテロコッカス科、エリュシペロトリクス科、スタフィロコッカス科、第ＸＩ所属不明科、リステリア科、プラノコッカス１科、第ＸＩＩ所属不明科、プラノコッカス２科、バシラス科、パニエバシラス科、クロストリジウム科（クラスターＩ）、クロストリジウム科（クラスターＩＩ）、ラクノスピラ科（クラスターＸＩＶａ）、ルミノコッカス科（クラスターＩＶ）、ペプトストレプトコッカス科（クラスターＸＩ）、エリュシペロトリクス科（クラスターＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ）、フソバクテリウム門、ルミノコッカス科、未分類のクロストリジウム目、オシロスピラ科、ラクノスピラ科、ユーバクテリウム科、第ＸＩＩＩ所属不明科、ペプトストレプトコッカス科（クラスターＸＩ）、ラクノスピラ科（クラスターＸＩＶａ）、ルミノコッカス科（クラスターＩＶ）、クロストリジウム科（クラスターＩ）、エリュシペロトリクス科（クラスターＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ）、ペプトストレプトコッカス科、第ＸＩ所属不明科、エリュシペロトリクス綱およびバシラス綱（Ｂａｃｉｌｌｉ）、クロストリジウム綱（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）、ネガティウィクテス綱（Ｎｅｇａｔｉｖｉｃｕｔｅｓ）、クロストリジウム２綱（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ ２）、クロストリジウム３綱（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ ３）／ハラナエロビウム目（Ｈａｌａｎａｅｒｏｂｉａｌｅｓ）、ベイロネラ科（Ｖｅｉｌｌｏｎｅｌｌａｃｅａｅ）、アシダミノコッカス科（Ａｃｉｄａｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩＩ、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩＩＩ、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩ、テネリクテス門（Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ）、エリュシペロトリクス科、フソバクテリウム科（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、レプトトリキア科（Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉａｃｅａｅ）、ロドバクター科（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒａｃｅａｅ）、ブルセラ科（Ｂｒｕｃｅｌｌａｃｅａｅ）、リゾビウム科（Ｒｈｉｚｏｂｉａｃｅａｅ）、フィロバクテリウム科（Ｐｈｙｌｌｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、アウランチモナス科（Ａｕｒａｎｔｉｍｏｎａｄａｃｅａｅ）、ブラジリゾビウム科、メチロバクテリウム科、キサントバクター科、カウロバクター科、ヒフォミクロビウム科、スフィンゴモナス科、酢酸菌科、ロドスピリルム科、ファーミキューテス門、コマモナス科、サテレラ科、アルカリゲネス科、バークホリデリア１科、オキサロバクター科、バークホリデリア２科、ロドシクルス科、ナイセリア科、腸内細菌科、パスツレラ科、ビブリオ科、アエロモナス科、サクシニビブリオ科、モラクセラ科、シュードモナス科、キサントモナス科、シノバクタ―科、ε－カンピロバクター１科、ε－ヘリコバクター科、ε－カンピロバクター２科、δ－デスルホビブリオ科、ウェルミコビウム門、レンティスパエラ門、プランクトミセス門、スピロヘータ門、デイノコッカス－サーマス門、シネルギステス門、古細菌／ユーリアーキオータ、古細菌／クレンアーキオータ門、真菌－子嚢菌門、真菌－担子菌門、ストラメノパイル類、アピコンプレックス類、アメーバ動物門、繊毛虫類、メタモナーダ類、微胞子虫門、フォルニカータ綱、アッカーマンシア科、クリステンセネラ科、オドリバクター科、エガセラ科、およびその組合せからなる群から選択されることができる。

【0123】

ある特定の実施形態では、１種または複数種の嫌気性微生物は、アッカーマンシア科、バシラス科、バクテロイデス科、ビフィズス菌科、クリステンセネラ科、クロストリジウム科、コリオバクテリウム科、エガセラ科、腸内細菌科、ユーバクテリウム科、ラクノスピラ科、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、オドリバクター科、オキサロバクター科、ポルフィロモナス科、プレボテラ科、リケネラ科、ルミノコッカス科、レンサ球菌科、およびその組合せからなる群から選択されることができる。

【0124】

ある特定の実施形態では、組成物は、約５％（ｗ／ｗ）未満、約４．５％（ｗ／ｗ）未満、約４％（ｗ／ｗ）未満、約３．５％（ｗ／ｗ）未満、約３％（ｗ／ｗ）未満、約２．５％（ｗ／ｗ）未満、約２％（ｗ／ｗ）未満、約１．５％（ｗ／ｗ）未満、約１％（ｗ／ｗ）未満、または約０．５％（ｗ／ｗ）未満の含水量を有する。

【0125】

ある特定の実施形態では、組成物は、約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約１．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、または約４％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）の範囲の含水量を有する。ある特定の実施形態では、組成物は、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）または約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）の範囲の含水量を有する。ある特定の実施形態では、組成物は約１．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）の範囲の含水量を有する。

【0126】

ある特定の実施形態では、組成物は、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、または約５％（ｗ／ｗ）の含水量を有する。

【0127】

ある特定の実施形態では、粘度調整剤はポリマー組成物である。ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せを含む。

【0128】

ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、たとえばアルギン酸ナトリウムを含む。ある特定の実施形態では、アルギン酸ナトリウムは、約２５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１２，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１３，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約７５０ｃＰ、約２５０ｃＰ～約５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約７５０ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、または約１２，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰの範囲の粘度を有する。ある特定の実施形態では、アルギン酸ナトリウムは約２５０ｃＰ～約１４０００ｃＰの粘度範囲を有する。

【0129】

ある特定の実施形態では、エネルギー源は、微生物の成長を可能にする細胞培養培地である。ある特定の実施形態では、エネルギー源は、単糖、二糖、オリゴ糖、またはその組合せである。ある特定の実施形態では、単糖は、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、二糖は、トレハロース、スクロース、またはその組合せである。ある特定の実施形態では、オリゴ糖はイヌリン誘導体である。ある特定の実施形態では、イヌリン誘導体はフルクトオリゴ糖である。ある特定の実施形態では、フルクトオリゴ糖はラフチロースである。ある特定の実施形態では、オリゴ糖はマルトデキストリンである。

【0130】

ある特定の実施形態では、エネルギー源は、ラフチロースおよびマルトデキストリンを含む。

【0131】

ある特定の実施形態では、組成物は、タンパク質安定化剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤は、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択される。

【0132】

ある特定の実施形態では、二糖は、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤はトレハロースを含む。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤は、スクロースおよびトレハロースを含む。

【0133】

ある特定の実施形態では、組成物は緩衝剤をさらに含む。

【0134】

ある特定の実施形態では、保存組成物は、
（ｉ）１種または複数種の嫌気性微生物と、
（ｉｉ）ラフチロースおよびマルトデキストリンを含むエネルギー源と、
（ｉｉｉ）アルギン酸ナトリウムと、
（ｉｖ）トレハロース、スクロース、およびその組合せを含むタンパク質安定化剤と
を含む。

【0135】

ある特定の実施形態では、保存組成物は、
（ｉ）１種または複数種の嫌気性微生物と、
（ｉｉ）ラフチロースおよびマルトデキストリンを含むエネルギー源と、
（ｉｉｉ）アルギン酸ナトリウムと、
（ｉｖ）トレハロース、スクロース、およびその組合せを含むタンパク質安定化剤と、
（ｖ）５％（ｗ／ｗ）未満の含水量と
を含む。

【0136】

ある特定の実施形態では、保存組成物は、
（ｉ）１種または複数種の嫌気性微生物と、
（ｉｉ）ラフチロースおよびマルトデキストリンを含むエネルギー源と、
（ｉｉｉ）アルギン酸ナトリウムと、
（ｉｖ）トレハロース、スクロース、およびその組合せを含むタンパク質安定化剤と
を含む。

【0137】

ある特定の実施形態では、保存組成物は、
（ｉ）１種または複数種の嫌気性微生物と、
（ｉｉ）ラフチロースおよびマルトデキストリンを含むエネルギー源と、
（ｉｉｉ）アルギン酸ナトリウムと、
（ｉｖ）トレハロース、スクロース、およびその組合せを含むタンパク質安定化剤と、
（ｖ）５％（ｗ／ｗ）未満の含水量と
を含む。

【0138】

ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、３、２、１、または０．５ｌｏｇ未満のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす。ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、３ｌｏｇ未満のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす。ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、２ｌｏｇ未満のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす。ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、１ｌｏｇ未満のコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす。ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で６カ月または１２カ月間保管し、その後、再水和させた場合に、０．５ｌｏｇ未満ののコロニー形成単位（ＣＦＵ）の損失をもたらす。

【0139】

ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で約０．５年、約１年、約１．５年、約２年、約２．５年、または約３年の間、実質的に安定に保たれる（たとえば、効力（ＣＦＵ／ｇ）の０．５ｌｏｇ未満の損失）。ある特定の実施形態では、組成物は、４℃で約２年の間、実質的に安定に保たれる。

【0140】

ある特定の実施形態では、組成物は、水性流体中で再水和させた場合に、再水和の２、３、４、または５時間以内に１種または複数種の微生物の再成長を可能にする。ある特定の実施形態では、組成物は、水性流体中で再水和させた場合に、再水和の２時間以内に１種または複数種の微生物の再成長を可能にする。ある特定の実施形態では、組成物は、水性流体中で再水和させた場合に、再水和の３時間以内に１種または複数種の微生物の再成長を可能にする。ある特定の実施形態では、組成物は、水性流体中で再水和させた場合に、再水和の４時間以内に１種または複数種の微生物の再成長を可能にする。ある特定の実施形態では、組成物は、水性流体中で再水和させた場合に、再水和の５時間以内に１種または複数種の微生物の再成長を可能にする。

【0141】

ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の保存組成物（たとえば凍結保存組成物）は架橋結合された組成物ではない。ある特定の実施形態では、組成物はガラスまたはガラス様ではない。

【0142】

３．医薬組成物および食料製品
一態様では、本明細書中に記載の保存組成物または凍結保存組成物を一般に含み、任意選択で１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物が、本明細書中に提供される。

【0143】

様々な実施形態では、本明細書中に記載の保存組成物（たとえば凍結保存組成物）と１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物が本明細書中に提供される。

【0144】

本明細書中に提供される医薬組成物は、それだけには限定されないが、経口（経腸）投与、非経口（注射による）投与、または直腸投与を含めた様々な経路によって投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書中に開示した医薬組成物は経口投与する。ある特定の実施形態では、本明細書中に記載の医薬組成物は、注射によって、たとえば皮下注射もしくは筋肉内注射を介して、または医療行為を必要とする組織、たとえば癌性組織内への注射によって、投与する。

【0145】

本明細書中に提供される医薬組成物はまた、慢性的に投与してもよい（「慢性投与」）。慢性投与とは、長期間にわたる、たとえば、３カ月間、６カ月間、１年間、２年間、３年間、５年間などにわたる、または、無期限に、たとえば対象の今後の人生の間ずっと続け得る、化合物またはその医薬組成物の投与をいう。ある特定の実施形態では、慢性投与は、一定レベルの１つまたは複数の本明細書中に記載の微生物を対象の胃腸管中において提供することを意図する。

【0146】

本明細書中に提供される医薬組成物は、正確な投薬を容易にするために単位剤形で提示し得る。用語「単位剤形」とは、ヒト対象および他の哺乳動物への単位投薬量として適した、物理的に別個の単位をいい、それぞれの単位は、所望の治療効果を生じるように計算された、事前に決定された量の活性物質を、適切な製薬的賦形剤と関連して含有する。典型的な単位剤形としては、液体組成物の事前充填、事前測定されたアンプルもしくはシリンジ、または固形組成物の場合は丸薬、錠剤、カプセルなどが挙げられる。

【0147】

ある特定の実施形態では、本明細書中に提供される医薬組成物は、固形剤形として患者に投与する。ある特定の実施形態では、固形剤形は錠剤である。ある特定の実施形態では、固形剤形はカプセルである。ある特定の実施形態では、固形剤形はカプレットである。

【0148】

本明細書中に提供される医薬組成物の説明は、ヒトへの投与に適した医薬組成物に主に向けられているが、そのような組成物は、あらゆる動物への投与に一般に適していることが当業者には理解されよう。組成物を様々な動物への投与に適するようにするための、ヒトへの投与に適した医薬組成物の修飾は十分に理解されており、通常の技量を持つ獣医学的薬理学者は、通常の実験を用いてそのような修飾を設計および／または行うことができる。医薬組成物の配合および／または製造における一般的な考慮事項は、たとえば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ：ＴＨＥ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＥ、第２１版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、２００５中に見つけることができる。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、カプセル、錠剤、またはカプレット内に配置する。

【0149】

別の態様では、本明細書中に記載の保存組成物または凍結保存組成物を一般に含む、食料製品およびプロバイオティクスが本明細書中に提供される。ある特定の実施形態では、食料製品またはプロバイオティクスは、カプセル、錠剤、またはカプレット内に配置する。

【0150】

特定の状況下では、医薬組成物または食料製品／プロバイオティクスを経口送達によって投与することが望ましい場合がある。微生物を、微生物の回復および成長に適切な環境（たとえば酸化還元電位）を有する腸管に送達するために、カプセル、錠剤、またはカプレットを機能的コーティング、たとえば、微生物を微生物の回復および成長を促進するために適切な環境（たとえば、適切なｐＨおよび／または酸化還元電位を有する環境）中で放出するコーティング）でコーティングすることが望ましい場合がある。

【0151】

たとえば、カプセル、錠剤、またはカプレットは、腸溶コーティングなどの遅延放出コーティングでコーティングし得る。腸溶コーティングは一般に酸耐性であり、これは、剤形の構成要素が胃中で放出されることを保護するにもかかわらず、胃の後に典型的に遭遇する中性または弱アルカリ性の条件下では溶解または崩壊する。例示的なコーティングとしては、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メタクリル酸／メテュ（ｍｅｔｈｕ）メタクリル酸メチルポリマー（たとえば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００－５５、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ３０Ｄ、およびＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｓ－１００などのＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）材料）、酢酸フタル酸セルロース、酢酸セルロース、トリメリテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ポリ（ＭＡ－ＥＡ）^＊１：１、ポリ（ＭＡ－ＭＭＡ）^＊１：１、ポリ（ＭＡ－ＭＭＡ）^＊１：２、ＨＰ－Ｆ、ｓｕｒｅｔｅｒｉｃ、ａｃｒｙｌ－Ｅｚｅ、Ａｄｖａｎｔｉａ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ、ａｑｕａｔｅｒｉｃ、ａｑｕｏｃｏａｔ ＥＣＤ、ａｑｏａｔ、ＣＡＰ、ＣＡＴ、ならびに酢酸フタル酸ポリビニル（たとえば米国特許第９，６２９，８０３ Ｂ２号およびＵＳ２０１８／０３２５８２５号を参照）が挙げられる。これらのコーティングされたカプセル、錠剤、およびカプレットは、カプセル、錠剤、およびカプレットが適切な環境、たとえばｐＨおよび／または酸化還元電位に到達するまでその内容物を乾いたままにしておくことができ、そこで、コーティングが分解され、微生物を対象中の所望の環境内へと放出して、回復および成長を促進する。

【0152】

さらに、状況に応じて、凍結保存生物は、摂取前に炭酸溶液と混合することができる。食品なしで経口摂取した場合（たとえば空腹で）、生物は、胃内で短い滞留時間（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｉｍｅ）を有し、摂取の３０分以内に腸管に入り得る。

【0153】

４．嫌気性微生物の凍結保存組成物を作製する方法
本開示はまた、本明細書中に記載の凍結保存組成物を生成する方法も提供する。

【0154】

ある特定の実施形態では、本方法は一般に２つのステップを含む。第１のステップは、嫌気性微生物を、粘度調整剤を含む水性混合物を含む賦形剤ブレンドおよび微生物のためのエネルギー源と合わせて、冷凍保存用混合物を生成するステップであって、冷凍保存用混合物が、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰの範囲の粘度、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度、約４～約８の範囲のｐＨ、および任意選択で－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有するステップを含む。その後、別個のステップで、冷凍保存用混合物を凍結乾燥し、冷凍保存用混合物の含水量を約５％（ｗ／ｗ）未満まで減らして、凍結保存組成物を生成する。

【0155】

ある特定の実施形態では、第１のステップ（ステップ（ａ））中において、嫌気性微生物は、ビフィズス菌科、コリオバクテリウム科、コリネバクテリウム科、ディエジア科、マイコバクテリウム科、ゴルドニア科、ノカルディア科、ストレプトマイセス科、ノカルディア２科、プロピオニバクテリウム亜目、マイクロコッカス科、ブレビバクテリウム科、デルマバクター科、アクチノマイセス科、ボゴリエラ科、プロミクロモノスポラ科、マイクロバクテリウム科、セルロモナス科、デルマコッカス科、イントラスポランギウム科、ゲオデルマトラフィス科、ミクロモノスポラ科、バクテロイデス科、プレボテラ科、ポルフィロモナス１科、リケネラ科、ポルフィロモナス２科、フラボバクテリウム科、スフィンゴバクテリウム科、未分類のバクテロイデス門、サイトファガ科、イプシロンプロテオバクテリア綱、ファーミキューテス門、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、アエロコッカス科、カルノバクテリウム科、アエロコッカス２科、ラクノスピラ科、レンサ球菌科、エンテロコッカス科、エリュシペロトリクス科、スタフィロコッカス科、第ＸＩ所属不明科、リステリア科、プラノコッカス１科、第ＸＩＩ所属不明科、プラノコッカス２科、バシラス科、パニエバシラス科、クロストリジウム科（クラスターＩ）、クロストリジウム科（クラスターＩＩ）、ラクノスピラ科（クラスターＸＩＶａ）、ルミノコッカス科（クラスターＩＶ）、ペプトストレプトコッカス科（クラスターＸＩ）、エリュシペロトリクス科（クラスターＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ）、フソバクテリウム門、ルミノコッカス科、未分類のクロストリジウム目、オシロスピラ科、ラクノスピラ科、ユーバクテリウム科、第ＸＩＩＩ所属不明科、ペプトストレプトコッカス科（クラスターＸＩ）、ラクノスピラ科（クラスターＸＩＶａ）、ルミノコッカス科（クラスターＩＶ）、クロストリジウム科（クラスターＩ）、エリュシペロトリクス科（クラスターＸＶＩＩおよびＸＶＩＩＩ）、ペプトストレプトコッカス科、第ＸＩ所属不明科、エリュシペロトリクス綱およびバシラス綱、クロストリジウム綱、ネガティウィクテス綱、クロストリジウム２綱、クロストリジウム３綱／ハラナエロビウム目、ベイロネラ科、アシダミノコッカス科、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩＩ、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩＩＩ、エリュシペロトリクス科クラスターＸＶＩ、テネリクテス門、エリュシペロトリクス科、フソバクテリウム科、レプトトリキア科、ロドバクター科、ブルセラ科、リゾビウム科、フィロバクテリウム科、アウランチモナス科、ブラジリゾビウム科、メチロバクテリウム科、キサントバクター科、カウロバクター科、ヒフォミクロビウム科、スフィンゴモナス科、酢酸菌科、ロドスピリルム科、ファーミキューテス門、コマモナス科、サテレラ科、アルカリゲネス科、バークホリデリア１科、オキサロバクター科、バークホリデリア２科、ロドシクルス科、ナイセリア科、腸内細菌科、パスツレラ科、ビブリオ科、アエロモナス科、サクシニビブリオ科、モラクセラ科、シュードモナス科、キサントモナス科、シノバクタ―科、ε－カンピロバクター１科、ε－ヘリコバクター科、ε－カンピロバクター２科、δ－デスルホビブリオ科、ウェルミコビウム門、レンティスパエラ門、プランクトミセス門、スピロヘータ門、デイノコッカス－サーマス門、シネルギステス門、古細菌／ユーリアーキオータ、古細菌／クレンアーキオータ門、真菌－子嚢菌門、真菌－担子菌門、ストラメノパイル類、アピコンプレックス類、アメーバ動物門、繊毛虫類、メタモナーダ類、微胞子虫門、フォルニカータ綱、アッカーマンシア科、クリステンセネラ科、オドリバクター科、エガセラ科、およびその組合せからなる群から選択される。

【0156】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、嫌気性微生物は、アッカーマンシア科、バシラス科、バクテロイデス科、ビフィズス菌科、クリステンセネラ科、クロストリジウム科、コリオバクテリウム科、エガセラ科、腸内細菌科、ユーバクテリウム科、ラクノスピラ科、ラクトバシラス科、ロイコノストック科、オドリバクター科、オキサロバクター科、ポルフィロモナス科、プレボテラ科、リケネラ科、ルミノコッカス科、レンサ球菌科、およびその組合せからなる群から選択される。

【0157】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、微生物は細胞ペーストの形態である。ある特定の実施形態では、細胞ペーストは、微生物を細胞培養培地中に含む。細胞ペーストは、微生物を栽培し、その後、微生物を収穫して、たとえば、細胞ペーストを形成するために含水量を除去することによって調製することができる。

【0158】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、賦形剤ブレンドと合わせる前に、細胞培養培地を除去するために細胞ペーストを洗浄しない、たとえば水、緩衝液、または塩溶液で洗浄しない。

【0159】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３６％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３４％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３２％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約３６％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）～約３４％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）～約３６％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）～約３８％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４２％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）～約４４％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）～約４６％（ｗ／ｗ）、または約４６％（ｗ／ｗ）～約４８％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む。

【0160】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、水性溶媒、たとえば水（たとえばイオン化または脱イオン水）中で溶媒和されている場合、約３０％（ｗ／ｗ）、約３１％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）、約３３％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）、約３７％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）、約３９％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）、約４１％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）、約４３％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）、約４７％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）、約４９％（ｗ／ｗ）、または約５０％（ｗ／ｗ）の細胞ペーストまたは細胞スラリーを含む。

【0161】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、水性混合物は脱イオン水を含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約５０％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約５５％（ｗ／ｗ）～約６０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約３０％（ｗ／ｗ）～約３５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）～約４０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）～約４５％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）～約５０％（ｗ／ｗ）、または約５０％（ｗ／ｗ）～約５５％（ｗ／ｗ）の水を含む。

【0162】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３０％（ｗ／ｗ）、約３１％（ｗ／ｗ）、約３２％（ｗ／ｗ）、約３３％（ｗ／ｗ）、約３４％（ｗ／ｗ）、約３５％（ｗ／ｗ）、約３６％（ｗ／ｗ）、約３７％（ｗ／ｗ）、約３８％（ｗ／ｗ）、約３９％（ｗ／ｗ）、約４０％（ｗ／ｗ）、約４１％（ｗ／ｗ）、約４２％（ｗ／ｗ）、約４３％（ｗ／ｗ）、約４４％（ｗ／ｗ）、約４５％（ｗ／ｗ）、約４６％（ｗ／ｗ）、約４７％（ｗ／ｗ）、約４８％（ｗ／ｗ）、約４９％（ｗ／ｗ）、約５０％（ｗ／ｗ）、約５１％（ｗ／ｗ）、約５２％（ｗ／ｗ）、約５３％（ｗ／ｗ）、約５４％（ｗ／ｗ）、約５５％（ｗ／ｗ）、約５６％（ｗ／ｗ）、約５７％（ｗ／ｗ）、約５８％（ｗ／ｗ）、約５９％（ｗ／ｗ）、または約６０％（ｗ／ｗ）の水を含む。

【0163】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．３％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．３５％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．０５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）～約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）～約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）～約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）～約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）～約０．３％（ｗ／ｗ）、または約０．３％（ｗ／ｗ）～約０．３５％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は約０．０１％（ｗ／ｗ）～約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含む。

【0164】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約０．０１％（ｗ／ｗ）、約０．０２％（ｗ／ｗ）、約０．０３％（ｗ／ｗ）、約０．０４％（ｗ／ｗ）、約０．０５％（ｗ／ｗ）、約０．０６％（ｗ／ｗ）、約０．０７％（ｗ／ｗ）、約０．０８％（ｗ／ｗ）、約０．０９％（ｗ／ｗ）、約０．１％（ｗ／ｗ）、約０．１１％（ｗ／ｗ）、約０．１２％（ｗ／ｗ）、約０．１３％（ｗ／ｗ）、約０．１４％（ｗ／ｗ）、約０．１５％（ｗ／ｗ）、約０．１６％（ｗ／ｗ）、約０．１７％（ｗ／ｗ）、約０．１８％（ｗ／ｗ）、約０．１９％（ｗ／ｗ）、約０．２％（ｗ／ｗ）、約０．２１％（ｗ／ｗ）、約０．２２％（ｗ／ｗ）、約０．２３％（ｗ／ｗ）、約０．２４％（ｗ／ｗ）、約０．２５％（ｗ／ｗ）、約０．２６％（ｗ／ｗ）、約０．２７％（ｗ／ｗ）、約０．２８％（ｗ／ｗ）、約０．２９％（ｗ／ｗ）、約０．３％（ｗ／ｗ）、約０．３１％（ｗ／ｗ）、約０．３２％（ｗ／ｗ）、約０．３３％（ｗ／ｗ）、約０．３４％（ｗ／ｗ）、約０．３５％（ｗ／ｗ）、約０．３６％（ｗ／ｗ）、約０．３７％（ｗ／ｗ）、約０．３８％（ｗ／ｗ）、約０．３９％（ｗ／ｗ）、または約０．４％（ｗ／ｗ）の粘度調整剤を含む。

【0165】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、粘度調整剤はポリマー組成物である。ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、アカシア、アルギン酸、寒天、アラミン酸、ベントナイト、カルボマー、カラゲナン、セルロース、デキストリン、ゼラチン、ジェランガム、グアルガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ムチン、ペクチン、デンプン、キサンタンガム、またはその組合せを含む。

【0166】

ある特定の実施形態では、ポリマー組成物は、アルギネート、たとえばアルギン酸ナトリウムを含む。Ｔｈｅは、約２５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１２，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約１３，０００ｃＰ～約１４，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約２５０ｃＰ～約７５０ｃＰ、約２５０ｃＰ～約５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約７５０ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約７５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約６，０００ｃＰ～約７，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約７，０００ｃＰ～約８，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約８，０００ｃＰ～約９，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約９，０００ｃＰ～約１０，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、約１０，０００ｃＰ～約１１，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰ、約１１，０００ｃＰ～約１２，０００ｃＰ、または約１２，０００ｃＰ～約１３，０００ｃＰの範囲の粘度を有し得る。ある特定の実施形態では、アルギン酸ナトリウムは約２５０ｃＰ～約１４０００ｃＰの粘度範囲を有する。

【0167】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約１１％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約１３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１１％（ｗ／ｗ）、または約１１％（ｗ／ｗ）～約１３％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は約３％（ｗ／ｗ）～約１５％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。

【0168】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約１０％（ｗ／ｗ）、約１１％（ｗ／ｗ）、約１２％（ｗ／ｗ）、約１３％（ｗ／ｗ）、約１４％（ｗ／ｗ）、または約１５％（ｗ／ｗ）のエネルギー源を含む。

【0169】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、エネルギー源は、単糖（たとえば、グルコース、フルクトース、キシロース、およびその組合せ）、二糖（たとえば、トレハロース、スクロース、もしくはその組合せ）、オリゴ糖（たとえば、マルトデキストリンもしくはイヌリン誘導体（たとえばラフチロースなどのフルクトオリゴ糖）、またはその組合せである。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、エネルギー源は、ラフチロースおよびマルトデキストリンを含む。

【0170】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約１．５％（ｗ／ｗ）、約０．５％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約１．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、または約４％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）のラフチロースを含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約０．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースを含む。

【0171】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用組成物は、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、または約５％（ｗ／ｗ）のラフチロースを含む。

【0172】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンを含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリンを含む。

【0173】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のマルトデキストリン。

【0174】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、水性混合物はタンパク質安定化剤をさらに含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定化剤を含む。

【0175】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のタンパク質安定化剤を含む。

【0176】

ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤は、アミノ酸、抗酸化剤、二糖、還元剤、ポリエチレングリコール、およびその組合せからなる群から選択されることができる。二糖は、トレハロース、スクロース、イソマルトース、ラクトース、マルトース、ラクツロース、セロビオース、およびその組合せからなる群から選択されることができる。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤はトレハロースを含む。ある特定の実施形態では、タンパク質安定化剤は、スクロースおよびトレハロースを含む。

【0177】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のトレハロースを含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースを含む。

【0178】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のトレハロースを含む。

【0179】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、０％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、０％（ｗ／ｗ）～約１％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）～約６％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）～約７％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）～約８％（ｗ／ｗ）、または約８％（ｗ／ｗ）～約９％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、約５％（ｗ／ｗ）～約１０％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は０％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。

【0180】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、約５％（ｗ／ｗ）、約５．５％（ｗ／ｗ）、約６％（ｗ／ｗ）、約６．５％（ｗ／ｗ）、約７％（ｗ／ｗ）、約７．５％（ｗ／ｗ）、約８％（ｗ／ｗ）、約８．５％（ｗ／ｗ）、約９％（ｗ／ｗ）、約９．５％（ｗ／ｗ）、または約１０％（ｗ／ｗ）のスクロースを含む。

【0181】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、水性混合物は、緩衝剤、たとえばリン酸ナトリウム緩衝系またはリン酸カリウム緩衝系をさらに含む。

【0182】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約４，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５，５００ｃＰ～約６，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約５ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５ｃＰ～約５００ｃＰ、約５ｃＰ～約４００ｃＰ、約５ｃＰ～約３００ｃＰ、約５ｃＰ～約２００ｃＰ、約５ｃＰ～約１００ｃＰ、約５ｃＰ～約５０ｃＰ、約５０ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約５０ｃＰ～約５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約４００ｃＰ、約５０ｃＰ～約３００ｃＰ、約５０ｃＰ～約２００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１００ｃＰ、約１００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約５００ｃＰ、約１００ｃＰ～約４００ｃＰ、約１００ｃＰ～約３００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２００ｃＰ、約２００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約２００ｃＰ～約５００ｃＰ、約２００ｃＰ～約４００ｃＰ、約２００ｃＰ～約３００ｃＰ、約３００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約３００ｃＰ～約５００ｃＰ、約３００ｃＰ～約４００ｃＰ、約４００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約４００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約４００ｃＰ～約５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約５００ｃＰ～約１，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約１，０００ｃＰ～約１，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約１，５００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約２，０００ｃＰ～約２，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約２，５００ｃＰ～約３，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約３，０００ｃＰ～約３，５００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約３，５００ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約４，０００ｃＰ～約４，５００ｃＰ、約４，５００ｃＰ～約５，５００ｃＰ、約４，５００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約５，０００ｃＰ～約５，５００ｃＰの範囲の粘度を有する。

【0183】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５０ｃＰ～約４，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約２，０００ｃＰ、または約１００ｃＰ～１，０００ｃＰの範囲の粘度を有する。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約１００ｃＰ～約１，０００ｃＰの範囲の粘度を有する。

【0184】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約５ｃＰ、約１０ｃＰ、約１５ｃＰ、約２０ｃＰ、約２５ｃＰ、約３０ｃＰ、約３５ｃＰ、約４０ｃＰ、約４５ｃＰ、約５０ｃＰ、約５５ｃＰ、約６０ｃＰ、約６５ｃＰ、約７０ｃＰ、約７５ｃＰ、約８０ｃＰ、約８５ｃＰ、約９０ｃＰ、約９５ｃＰ、約１００ｃＰ、約１１０ｃＰ、約１２０ｃＰ、約１３０ｃＰ、約１４０ｃＰ、約１５０ｃＰ、約１６０ｃＰ、約１７０ｃＰ、約１８０ｃＰ、約１９０ｃＰ、約２００ｃＰ、約２２５ｃＰ、約２５０ｃＰ、約２７５ｃＰ、約３００ｃＰ、約３５０ｃＰ、約４００ｃＰ、約４５０ｃＰ、約５００ｃＰ、約６００ｃＰ、約７００ｃＰ、約８００ｃＰ、約９００ｃＰ、約１，０００ｃＰ、約１，２５０ｃＰ、約１，５００ｃＰ、約２，０００ｃＰ、約２，５００ｃＰ、約３，０００ｃＰ、約３，５００ｃＰ、約４，０００ｃＰ、約４，５００ｃＰ、約５，０００ｃＰ、約５，５００ｃＰ、約６，０００ｃＰの粘度を有する。

【0185】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約４，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約５００Ｏｓｍ／Ｌ、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約４００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ～約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ～約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ～約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、または約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，５００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度を有する。

【0186】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、または約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度を有する。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は約５００Ｏｓｍ／Ｌ～約３，０００Ｏｓｍ／Ｌの範囲の重量モル浸透圧濃度を有する。

【0187】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約３００Ｏｓｍ／Ｌ、約３５０Ｏｓｍ／Ｌ、約４００Ｏｓｍ／Ｌ、約４５０Ｏｓｍ／Ｌ、約５００Ｏｓｍ／Ｌ、約６００Ｏｓｍ／Ｌ、約７００Ｏｓｍ／Ｌ、約８００Ｏｓｍ／Ｌ、約９００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，２５０Ｏｓｍ／Ｌ、約１，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約１，７５０Ｏｓｍ／Ｌ、約２，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，２５０Ｏｓｍ／Ｌ、約２，５００Ｏｓｍ／Ｌ、約２，７５０Ｏｓｍ／Ｌ、約３，０００Ｏｓｍ／Ｌ、約３，５００Ｏｓｍ／Ｌ、または約４，０００Ｏｓｍ／Ｌの重量モル浸透圧濃度を有する。

【0188】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約４～約８、約４．５～約８、約５～約８、約５．５～約８、約６～約８、約６．５～約８、約７～約８、約７．５～約８、約４～約７．５、約４～約７、約４～約６．５、約４～約６、約４～約５．５、約４～約５、約４～約４．５、約４．５～約７．５、約４．５～約７、約４．５～約６．５、約４．５～約６、約４．５～約５．５、約４．５～約５、約５～約７．５、約５～約７、約５～約６．５、約５～約６、約５～約５．５、約５．５～約７．５、約５．５～約７、約５．５～約６．５、約５．５～約６、約６～約７．５、約６～約７、約６～約６．５、約６．５～約７．５、約６．５～約７、または約７～約７．５の範囲のｐＨを有する。

【0189】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約４～約８、約５～約８、約４～約７．５、約５～約７．５、または約５．５～約７．５の範囲のｐＨを有する。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用組成物は、約５．５～約７．５の範囲のｐＨを有する。

【0190】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約４、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、または約８のｐＨを有する。

【0191】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、－５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－５０ｍＶ～－３５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－３００ｍＶ、－５０ｍＶ～－２５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－２００ｍＶ、－５０ｍＶ～－１５０ｍＶ、－５０ｍＶ～－１００ｍＶ、－１００ｍＶ～－５００ｍＶ、－１００ｍＶ～－４５０ｍＶ、－１００ｍＶ～－４００ｍＶ、－１００ｍＶ～－３５０ｍＶ、－１００ｍＶ～－３００ｍＶ、－１００ｍＶ～－２５０ｍＶ、－１００ｍＶ～－２００ｍＶ、－１００ｍＶ～－１５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－１５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－１５０ｍＶ～－３５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－３００ｍＶ、－１５０ｍＶ～－２５０ｍＶ、－１５０ｍＶ～－２００ｍＶ、－２００ｍＶ～－５００ｍＶ、－２００ｍＶ～－４５０ｍＶ、－２００ｍＶ～－４００ｍＶ、－２００ｍＶ～－３５０ｍＶ、－２００ｍＶ～－３００ｍＶ、－２００ｍＶ～－２５０ｍＶ、－２５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－２５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－２５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－２５０ｍＶ～－３５０ｍＶ、－２５０ｍＶ～－３００ｍＶ、－３００ｍＶ～－５００ｍＶ、－３００ｍＶ～－４５０ｍＶ、－３００ｍＶ～－４００ｍＶ、－３００ｍＶ～－３５０ｍＶ、－３５０ｍＶ～－５００ｍＶ、－３５０ｍＶ～－４５０ｍＶ、－３５０ｍＶ～－４００ｍＶ、－４００ｍＶ～－５００ｍＶ、－４００ｍＶ～－４５０ｍＶ、または－４５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、水性溶媒中で溶媒和されている場合、－５０ｍＶ～－５００ｍＶの範囲の酸化還元電位を有する。

【0192】

ある特定の実施形態では、ステップ（ａ）中において、冷凍保存用混合物は、約－５０ｍＶ、約－６０ｍＶ、約－７０ｍＶ、約－８０ｍＶ、約－９０ｍＶ、約－１００ｍＶ、約－１１０ｍＶ、約－１２０ｍＶ、約－１３０ｍＶ、約－１４０ｍＶ、約－１５０ｍＶ、約－１６０ｍＶ、約－１７０ｍＶ、約－１８０ｍＶ、約－１９０ｍＶ、約－２００ｍＶ、約－２４０ｍＶ、約－２６０ｍＶ、約－２８０ｍＶ、約－３００ｍＶ、約－３２０ｍＶ、約－３４０ｍＶ、約－３６０ｍＶ、約－３８０ｍＶ、約－４００ｍＶ、約－４２０ｍＶ、約－４４０ｍＶ、約－４６０ｍＶ、約－４８０ｍＶ、または約－５００ｍＶの酸化還元電位を有する。

【0193】

ある特定の実施形態では、凍結保存方法は、ステップ（ｂ）の前に冷凍保存用混合物を凍結するステップをさらに含む。凍結工程は、凍結保存される生物または生物群に対してあつらえるべきであることが理解されよう。ある特定の実施形態では、冷凍保存用混合物は、凍結保護剤および／または凍結乾燥保護剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）を含有することができる。所望する生物に応じて、細胞組成物を様々な凍結速度に供することができる。その後、生じた混合物を試験して、微生物または微生物群のための適切な凍結速度を決定することができる。微生物群が一緒に凍結される場合、選択された凍結速度は、個々の生物の最適な凍結速度の間の妥協であり得ることが理解されよう。この状況では、凍結速度は、一緒に凍結される様々な生物の生存度が最適化されるように選択する。ある特定の実施形態では、冷凍保存用組成物は、ステップ（ｂ）の前に、－３５℃以下の温度で少なくとも２４時間の期間の間保つ。

【0194】

例示的な凍結保護剤としては、たとえば、アセトアミド、アルブミン、酢酸アンモニウム、コリン 塩化マグネシウム、臭化ナトリウム、ジエチルグリコール、ジメチルアセトアミド、ジメチルスルホキシド、エタノール、エリスリトール、グリセロール、グルコース、ホルムアミド、グリセロホスフェート、プロリン、ピリジン－Ｎ－オキシド、プロピレングリコール、リボース、セリン、塩化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、硫酸ナトリウム、ソルビトール、スクロース、トレハロース、トリエチエン（ｔｒｉｅｔｈｙｅｎｅ）グリコール、トリメチルアミン、バリン、キシロースが挙げられる。例示的な凍結乾燥保護剤としては、たとえば、アルギネート、マルトデキストリン、オリゴフルクトースなどが挙げられる。特定の凍結保護剤は、凍結乾燥保護剤としても作用することができることが理解されよう。

【0195】

ステップ（ｂ）中において、凍結乾燥条件は、冷凍保存用混合物中の生物または様々な生物の群の生存度が最適化するように選択することができる。

【0196】

ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）中において、冷凍保存用組成物の凍結乾燥は、（ｉ）冷凍保存用組成物を約－３５℃の第１の温度で約２時間、平衡化するステップと、（ｉｉ）冷凍保存用組成物の温度を約－２５℃～－３０℃の第２の温度まで上げるステップと、（ｉｉｉ）冷凍保存用組成物を、第２の温度および５５ｍＴｏｒｒ以下の第１の圧力で、約２０～７２時間保つステップと、（ｉｖ）冷凍保存用組成物の温度を約４～２０℃の第３の温度まで上げるステップと、（ｖ）冷凍保存用組成物を、第３の温度および約１００ｍＴｏｒｒの第２の圧力で、約２０～４８時間または冷凍保存用組成物の水分活性が約０．１５未満になるまで保ち、それによって凍結保存組成物を生成するステップとを含む。

【0197】

ある特定の実施形態では、ステップ（ｉｉ）では、冷凍保存用組成物の温度を、約－２５℃の第２の温度まで、０．０１℃／分の加温速度で上げる。ある特定の実施形態では、ステップ（ｉｖ）では、冷凍保存用組成物の温度を、約２０℃の第３の温度まで、約０．１℃／分の加温速度で上げる。

【0198】

ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）中において、凍結保存組成物は、約０．５％（ｗ／ｗ）未満、約１％（ｗ／ｗ）未満、約１．５％（ｗ／ｗ）未満、約２％（ｗ／ｗ）未満、約２．５％（ｗ／ｗ）未満、約３％（ｗ／ｗ）未満、約３．５％（ｗ／ｗ）未満、約４％（ｗ／ｗ）未満、約４．５％（ｗ／ｗ）未満、または約５％（ｗ／ｗ）未満の含水量を有する。

【0199】

ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）中において、凍結保存組成物は、約１％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）～約５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）～約１．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）～約２％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）～約２．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）～約３．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）、または約４％（ｗ／ｗ）～約４．５％（ｗ／ｗ）の範囲の含水量を有する。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）中において、凍結保存組成物は、約２％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）または約２％（ｗ／ｗ）～約３％（ｗ／ｗ）の範囲の含水量を有する。ある特定の実施形態では、組成物は、約１．５％（ｗ／ｗ）～約４％（ｗ／ｗ）の範囲の含水量を有する。

【0200】

ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）中において、凍結保存組成物は、約０．５％（ｗ／ｗ）、約１％（ｗ／ｗ）、約１．５％（ｗ／ｗ）、約２％（ｗ／ｗ）、約２．５％（ｗ／ｗ）、約３％（ｗ／ｗ）、約３．５％（ｗ／ｗ）、約４％（ｗ／ｗ）、約４．５％（ｗ／ｗ）、または約５％（ｗ／ｗ）の含水量を有する。

【0201】

様々な実施形態では、本方法は、上述のように凍結保存組成物をカプセル、錠剤、またはカプレット内にパッケージングするステップをさらに含み、カプセル、錠剤、またはカプレットは、遅延放出コーティングでコーティングされていてもよい。

【0202】

様々な実施形態では、本方法は、（ｃ）凍結保存組成物を、＃２０ ＵＳメッシュ（０．８５ｍｍ）スクリーンを通して篩にかけるステップと、（ｄ）凍結保存組成物を混合するステップと、（ｅ）凍結保存組成物をカプセル、錠剤、またはカプレット中にパッケージングするステップとを含む、様々なステップを任意選択でさらに含む。

【0203】

様々な実施形態では、本方法は、（ｃ）凍結保存組成物を、＃２０ ＵＳメッシュ（０．８５ｍｍ）スクリーンを通して篩にかけるステップと、（ｄ）凍結保存組成物を、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と混合して、本明細書中に記載の医薬組成物を生成するステップと、（ｅ）医薬組成物をカプセル、錠剤、またはカプレット中にパッケージングするステップとを任意選択でさらに含む。

【0204】

５．使用および処置の方法
本明細書中に記載の組成物は、それを必要としている対象の胃腸管系マイクロバイオームを調整する方法において使用することができる。本方法は、対象に、有効量の本明細書中に記載の保存組成物、たとえば凍結保存組成物を、たとえば医薬組成物または食料製品／プロバイオティクスの形態で投与するステップを一般に含む。特定の状況次第では、本方法は、対象に、有効量の本明細書中に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、または、本方法は、対象に、有効量の本明細書中に記載の食料製品もしくはプロバイオティクスを投与するステップを含む。

【0205】

本明細書中に記載の保存（たとえば凍結保存）組成物は、様々な状態、疾患、または障害、たとえば胃腸管系の状態、疾患、または障害を処置するために使用することができる。胃腸管系の状態、疾患、または障害は、小腸の状態、疾患、または障害、たとえばクローン病または潰瘍性結腸炎であることができる。

【実施例】

【0206】

本明細書中に記載の本開示をより完全に理解し得るために、以下の実施例を記載する。本出願中に記載した工程および分析例は、本明細書中に提供される組成物および方法を例示するために提供し、いかなる様式でもその範囲を限定するものとして解釈されるべきでない。

【実施例1】

【0207】

アッセイプロトコル
生細胞数／全細胞数／非生細胞数：
本明細書中で使用したアッセイでは、細菌生存度の二色蛍光アッセイである、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＰｒｏｂｅのＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ（登録商標）ＢａｃＬｉｇｈｔ（商標）細菌生存度キットを用いた。このキットは、ＳＹＴＯ（登録商標）９緑色蛍光核酸染色および赤色蛍光核酸染色、ヨウ化プロピジウムの混合物を使用する。染色は、そのスペクトル特徴および健康な細菌細胞に浸透するその能力のどちらにおいても異なる。単独で使用した場合、ＳＹＴＯ（登録商標）９染色は、一般に、集団中のすべての細菌、すなわち、無傷の膜を有するものおよび損傷した膜を有するものを標識する。対照的に、ヨウ化プロピジウムは損傷した膜を有する細菌にのみ浸透し、両方の色素が存在する場合にＳＹＴＯ（登録商標）９染色蛍光の低下を引き起こす。したがって、ＳＹＴＯ（登録商標）９およびヨウ化プロピジウム染色の適切な混合物を用いて、無傷の細胞膜を有する細菌は蛍光緑色に染色される一方で、損傷した膜を有する細菌は蛍光赤色に染色される。これらの色素の励起／発光の最大は、ＳＹＴＯ（登録商標）９染色では約４８０／５００ｎｍであり、ヨウ化プロピジウムでは４９０／６３５ｎｍである。バックグラウンドは事実上非蛍光に保たれる。蛍光強度は、Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴマルチ検出マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ（登録商標））などを使用して、４８８／２０ｎｍの励起フィルター（ＳＹＴＯ（登録商標）９およびヨウ化プロピジウムの両方用）ならびに５２８／２０ｎｍ（ＳＹＴＯ９の発光波長）および６４５／４０ｎｍ（ヨウ化プロピジウムの発光波長）の発光フィルターを使用して測定する。

【0208】

方法を実行するために、キットの等体積の構成要素Ａ（ＳＹＴＯ（登録商標）９色素、３．３４ｍＭ）および構成要素Ｂ（ヨウ化プロピジウム、２０ｍＭ）を合わせ、しっかりと混合し、その後、１ｍＬの細菌懸濁液あたり３μＬの色素混合物を加えた（８～１０ｍｇ／ｍＬ）。その後、色素混合物および細菌懸濁液をしっかりと混合し、室温、暗所で１５分間インキュベートした。その後、５μＬの染色した細菌懸濁液を、カバーガラスを備えた顕微鏡スライド上に拡げ、製造者の指示に従って設定したフィルターを備えた蛍光顕微鏡を使用して観察した。

【0209】

生物の外見は、米国薬局方（ＵＳＰ）＜６３１＞（色および無彩色性（Ｃｏｌｏｒ ａｎｄ Ａｃｈｒｏｍｉｃｉｔｙ））に従って決定した。

【0210】

含水量
凍結乾燥粉末中の全水（遊離および結合）は、カール・フィッシャー方法を使用して、ＵＳＰ＜９２１＞（水の決定（Ｗａｔｅｒ Ｄｅｔｅｒｉｎａｔｉｏｎ））に従って決定した。

【0211】

水分活性
以下に記載した凍結保存粉末中の水分活性は、水分活性の方法、ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ正式方法９７８．１８（ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの分析の正式方法、第１７版、ＡＯＡＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に基づいた方法を使用して、ＵＳＰ＜１１１２＞、非無菌的医薬生成物への水分活性の決定の適用（Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔｅｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｔｏ Ｎｏｎｓｔｅｒｉｌｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）中に与えられた手引きに従って、試験した。

【0212】

全好気性微生物計数
ＵＳＰ＜６１＞（非無菌的生成物の微生物学的検査：微生物計数試験（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｓｔｅｒｉｌｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｓ））に従って、全好気性微生物計数（ＴＡＭＣ）を使用して、再水和させた凍結保存試料中に中温性の温度度（３０～３７℃）で存在する好気性細菌の総数を決定した。

【0213】

酵母およびカビの合わせた総数
酵母およびカビの合わせた総数（ＴＹＭＣ）は、ＵＳＰ＜６２＞（非無菌的生成物の微生物学的検査：指定した微生物のための試験（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｏｎｓｔｅｒｉｌｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ：Ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｓｐｅｃｉｆｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ））に従って試験した。

【0214】

凍結保存試料の光学密度（６００ｎｍのＯＤ）
１ｃｃのシリンジおよび２１ゲージの針を使用して、１ｍＬの凍結保存試料を成長中の培養バイアル／ボトルから採取した。サンプリングの前に、バイアルの内容物をしっかりと混合し、シリンジをＣＯ_２で十分にフラッシュした。その後、１ｍＬの試料を微量遠心管内に分注し、光学密度の測定を６００ｎｍ（ＯＤ_６００）で記録した。ＯＤ_６００が０．５未満であった場合、細胞懸濁液をキュベット内に直接分注し、光学密度を６００ｎｍで測定した。ＯＤ_６００が０．５より高かった場合、ＯＤ_６００が０．５未満となるまで蒸留Ｈ_２Ｏ中で段階希釈を調製し、測定を記録した。

【0215】

凍結保存試料のｐＨ
凍結保存試料のｐＨは、ＵＳＰ＜７９１＞（製薬、食品飲料、患者ケア、および栄養補助食品業界において使用される、ｐＨ測定のための標準試験方法（ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｔｅｓｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｐＨ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｅｕｔｉｃａｌ，ｆｏｏｄ ａｎｄ ｂｅｖｅｒａｇｅ，ｐａｔｉｅｎｔ ｃａｒｅ，ａｎｄ ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ））を使用して試験した。

【0216】

凍結保存試料の重量モル浸透圧濃度
凍結保存試料の重量モル浸透圧濃度は、ＵＳＰ＜７８５＞（重量モル浸透圧濃度および容積モル浸透圧濃度（ｏｓｍｏｌａｌｉｔｙ ａｎｄ ｏｓｍｏｌａｒｉｔｙ））を使用して試験した。

【0217】

凍結保存試料の粘度
凍結保存試料の粘度は、ＵＳＰ＜９１１＞（粘度（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ））を使用して試験した。

【0218】

凍結保存試料の熱的特徴づけ
（ｉ）示差走査熱量（ＤＳＣ）方法
本明細書中の実施例において記載した凍結保存試料の熱的特徴づけ（たとえばガラス転移温度（Ｔｇ’）の決定）に使用したＤＳＣ機器は、冷蔵冷却システムが取り付けられたＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＤＳＣ２５変調ＤＳＣであった。

【0219】

凍結保存試料の特徴づけを行う前に、ＤＳＣ機器の較正を１％塩化ナトリウム溶液で点検した。塩化ナトリウム較正試料は、－２１．７１℃（理論値＝－２１．５℃）の溶融開始を有すると決定された。

【0220】

ＤＳＣ分析のための凍結の調製にあたって、ピペットを使用して、１８μＬアリコートの分析する液体（たとえば、塩化ナトリウム較正試料または冷凍保存用溶液の液体試料）をアルミニウムＤＳＣ試料パン内にピペッティングして入れ、密閉した。

【0221】

ＤＳＣ方法：試料および参照パン（空のアルミニウムパン）をＤＳＣに４０℃でロードし、その後、１０℃／分で－９０℃まで冷却した。その後、パンを２分間、－９０℃で保ち、続いて１０℃／分で３０℃まで加熱した。

【0222】

（ｉｉ）凍結乾燥顕微鏡観察方法
凍結乾燥顕微鏡観察機器は、Ｌｉｎｋａｍ ＦＤＣＳ １９６サーマルステージ、Ｔ９６コントローラ、ＬＮＰ９６液体窒素ポンプ、およびＥｄｗａｒｄｓ Ｅ２Ｍ１．５真空ポンプを備えたＮｉｋｏｎ Ｅｃｌｉｐｓｅ ＬＶ１００Ｎｐｏｌ 偏光顕微鏡を含む。

【0223】

方法：５μＬアリコートの試料（たとえば冷凍保存用溶液の液体試料）を、シリコン油の小滴を施用した後にサーマルステージ上に置かれたスライドガラス上に置いた。カバーガラスを試料の上に置き、チャンバーを密封した。試料を１０℃／分で－４５℃まで冷却し、２分間保ち、顕微鏡写真を撮影した。真空を開始し、昇華面が見えてくるまで試料を－４５℃の固定温度に保った。その後、別の顕微鏡写真を撮影した。その後、試料を１０℃／分で－１０℃まで温めた。試料が様々な熱転移（たとえば崩壊温度（Ｔｃ））を通過する間に顕微鏡写真を収集した。

【実施例2】

【0224】

細胞の培養および収穫
本実施例は、本明細書中に記載の生物のそれぞれ培養および収穫するために使用した手順を記載する。

【0225】

細胞バンクを室温の水浴中でおよそ１５分間解凍した。フィルタリングした鈍化した針を、５０ｍＬのファルコンンチューブ内へと流れる嫌気性ガスを用いて調製した。シリンジをファルコンチューブ中の嫌気性ガス（たとえば、Ｎ_２、ＣＯ_２、アルゴン）でフラッシュして、酸素を除去した。針を用いて、所望のパーセント接種に必要な量の解凍されたバンク培地を嫌気性培地のバイアル、またはボトル内に導入した。

【0226】

培地の構成要素を秤量し、水を指定体積まて加え、溶解するまで混合し、その後、６０分間の液体サイクルを用いて１２１℃でオートクレーブしたか、または滅菌した容器内へ滅菌濾過した。培地を、１００％のＣＯ_２またはＮ_２を用いて、２リットル／分で、１５０ｒｐｍの攪拌速度（６ブレードのＲｕｓｈｔｏｎ羽根車）を用いてスパージングした。セットポイントを３７℃に設定し、スパージングを、２リットル／分で、酸化還元電位が十分に負となるまで、すなわち約－５０ｍＶ～約－５００ｍＶの範囲となるまで続けた。酸化還元電位が指定した基準を満たした後、ガスを、培地のスパージングから、１リットル／分の嫌気性ガスを用いたヘッドスペースのパージングへと切り替え、その後、１リットル／分のオーバーフローを維持した。

【0227】

２Ｌの嫌気性ボトルが指定したＯＤ_６００に最初に到達した際、培養を発酵槽に移す準備ができた。その後、１００ｍＬの培養培地をボトルから取り出し、接種口を介して発酵槽に加えた。発酵は、指定した期間の間継続させた。

【0228】

収穫はＲｅｐｌｉｇｅｎ中空繊維（Ｈｏｌｌｏｗ Ｆｉｂｅｒ）ＰＥＳ ７５０ｋＤａ膜を介して行い、１０Ｌがおよそ４００～６００ｍＬまで濃縮される。濃縮水を収集し、嫌気性チャンバー内で遠心分離ボトルに満たした。濃縮水を３０分間、１０，０００ｒｐｍで遠心分離し、細胞ペーストを嫌気性チャンバー内で収集し、さらに処理加工した。

【実施例3】

【0229】

嫌気性微生物のための保存組成物の調製
以下の表１中に記載したそれぞれの賦形剤ブレンドについて、すべての乾燥構成要素（たとえば、ラフチロース、マルトデキストリン、アルギン酸ナトリウム、ならびにトレハロースおよび／またはスクロース）を、粉末混合物が均質に見えるまで乾燥混合した。その後、粉末混合物を第２の容器中の脱イオン（ＤＩ）水にゆっくりと加え、すべての構成要素が溶けるまで攪拌した。その後、生じた溶液を嫌気性チャンバーに入れ、６０分間、継続して攪拌した。賦形剤ブレンドのｐＨを、ｐＨ計を使用してｐＨをモニタリングしながら、ｐＨが生物／複数の生物に最適なレベルに到達するまで、ＮａＯＨまたはＨＣｌのいずれかを使用して調節した。その後、０．４５ミクロンのフィルターを使用して、賦形剤ブレンドを無菌的容器内へ滅菌濾過した。

【0230】

嫌気性チャンバー内で、凍結細胞ペースト（細胞濃縮物）または新鮮な細胞ペーストを無菌的容器内に入れた。細胞ペーストを、望みに応じて、嫌気性緩衝液、使用済み培地、または新鮮な培地と１：１、１：２、または１：３の比で混合した。混合物を２０～３０分間混合し、生じたブレンドを凍結乾燥トレイ内に、定義された充填深度まで注いだ。凍結乾燥トレイをプラスチックバッグ内およびラミネート箔パウチ内に入れ、最後に熱密封し、これらはすべて、－５０～－５００ｍＶの範囲内の還元された酸化還元電位を維持するために嫌気性チャンバー内で行った。密封されたトレイは、冷凍庫または凍結乾燥棚に投入して凍結させ、凍結乾燥を開始する前に少なくとも２４時間凍結させた。

【0231】

【表1】

【実施例4】

【0232】

嫌気性微生物を冷凍保存するための組成物の調製および効力の試験
実施例３のように調製した凍結保存組成物を、その後、以下のように凍結乾燥した：

【0233】

凍結乾燥の前に、凍結組成物を－３５℃～－１５０℃の温度で凍結させ、その後、凍結乾燥機（Ｖｉｒｔｉｓ、Ｇｅｎｅｓｉｓ ＳＱ Ｓｕｐｅｒ ＸＬ７０）内に入れ、－３５℃で平衡化させた。三段階勾配サイクルを使用して、凍結保存組成物を凍結乾燥させ、水分活性が二次乾燥中に＜０．１５であった場合に凍結乾燥工程を終わらせた。凍結乾燥パラメータを表２中に列挙し、凍結乾燥サイクル中に使用した温度／圧力プロファイルを図１に示す。凍結乾燥サイクルは合計でおよそ９０時間である。その後、凍結乾燥させたケークを、さらなる処理まで－２０℃で保管した。

【0234】

凍結乾燥させたケークのガラス転移温度Ｔｇ’は－２４℃であると決定された。

【0235】

【表2】

【0236】

その後、凍結乾燥させたケークを、＃２０ ＵＳメッシュ（０．８５ｍｍ）スクリーンを通して篩にかけ、続いて、篩パン内で２分間の間混合した。篩にかけること、混合すること、およびパッケージングすることはすべて、≦１５％の相対湿度（ＲＨ）を有する雰囲気中、窒素グローブボックスまたは嫌気性チャンバー内で実施した。生じた材料（原薬）を分配し、ポリエチレンバッグ中にパッケージングし、乾燥パウチと共に箔ラミネートパウチ内に入れ、その後、密封した。原薬を有する密封されたパウチは、－２０℃未満で保管した。試料を抜き取り、％生存度について試験した。

【0237】

２つの市販のブレンド混合物（ＣＰ－００１およびＣＰ－００２）（ＯＰＳ ＤＩａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＬＲ２Ｘ－５００－０２およびＭＦＤＢ－５００－０６）と比較した、３つの凍結保存混合物（ＡＣＰ－００１、ＡＣＰ－００２、およびＡＣＰ－００３）についての生存度の結果を、表３中に表す。

【0238】

【表3】

【0239】

表３からの結果は、検査した様々な細菌の科および属について、３つのＡＣＰブレンドについて生じた効力（生存度）が、２つの市販のブレンド（ＯＰＳ ＤＩａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＬＲ２Ｘ－５００－０２およびＭＦＤＢ－５００－０６）を使用して達成されたものよりも良好であることを示す。

【実施例5】

【0240】

凍結保存組成物の安定性
凍結解凍の安定性
それぞれの凍結解凍サイクルは、試料をそのパッケージング内で－２０±５℃での貯蔵から取り出し、周囲の室温（２２℃）に少なくとも６時間置くことによって実行した。解凍後、試料を－２０±５℃で１２～２４時間の貯蔵に戻した。すべての試料が同時に分析されたことを確実にするために、試料を４回までの凍結－解凍サイクルに交互に通した（ｓｔａｇｇｅｒｅｄ）。

【0241】

結果は表４中に要約されている。

【0242】

【表4】

【0243】

この研究の結果は、原薬（試験した４つすべての細菌の科）が、推奨された貯蔵温度（－２０±５℃）から室温（２２℃）までの少なくとも４回の凍結－解凍サイクルの間安定であることを示す。

【0244】

凍結サイクルの安定性
それぞれの温度サイクルは、試料をそのパッケージング内で－２０±５℃での貯蔵から取り出し、ドライアイス上に２時間置くことによって実行した。－８０℃で平衡化させた後、試料を－２０±５℃で２時間の貯蔵に戻した。すべての試料が同時に分析されたことを確実にするために、試料を４回までの凍結－解凍サイクルに交互に通した。

【0245】

結果は表５中に要約されている。

【0246】

【表5】

【0247】

この研究の結果は、原薬（試験した４つすべての細菌の科）が、－８０℃での低温曝露、および推奨された貯蔵温度（－２０±５℃）とより低い温度（－８０℃）との間の少なくとも４回の温度サイクルで安定であったことを示す。

【0248】

長期的安定性
実施例４において調製した凍結保存組成物の長期的安定性研究を、表６中に提供する分析方法を使用して、貯蔵条件毎（制御対加速）に実施した。

【0249】

安定性研究はＩＣＨ Ｑ１およびＩＣＨ Ｑ５指針に従って実施した。

【0250】

【表6】

【0251】

明確性のため、２～８℃および２５℃で保管した材料では効力データ（ＣＦＵ／ｇの原薬粉末）のみを提示する。さらに、安定性に対する含水量の影響を決定するために、５％未満または５％を超える全水分を有していた材料のバッチを安定性プログラムに含めた。

【0252】

結果は表７～９に示される。

【0253】

表７は、原薬粉末が５％（ｗ／ｗ）未満の全含水量を有する、２～８℃での安定性（ＣＦＵ／ｇのＬｏｇスケール）を示す。

【0254】

【表7】

【0255】

表８は、原薬粉末が５％（ｗ／ｗ）未満の全含水量を有する、２５℃での安定性（ＣＦＵ／ｇのＬｏｇスケール）を示す。

【0256】

【表8】

【0257】

表９は、原薬粉末が５％を超えるが８％未満である全含水量を有する、２５℃での安定性（ＣＦＵ／ｇのＬｏｇスケール）を示す。

【0258】

【表9】

【0259】

表７～９の結果は、５％未満の含水量を維持することが長期的安定性に重要であることを示す。５％（ｗ／ｗ）以下の含水量で保管した、検査したすべての生物は、２～８℃および２５℃のどちらで保管した場合も２４カ月間の間安定であった。

【実施例6】

【0260】

凍結保存組成物の特徴づけ
原薬の大気曝露
実施例４において調製した凍結保存組成物の酸素感受性の評価は、飽和４０％ＮａＯＨ溶液を７日間まで使用することを介して、密封されたポリエチレンバッグ中の試料（大気の空気中に密封）を２２℃の温度および１９％の相対湿度に置くことによって実施した。すべての試料が同時に分析されたことを確実にするために、試料の曝露は時点に交互に通した。

【0261】

原薬の外見、含水量、および生存度の試験を、空気の存在下で時間の関数として測定した。この研究の結果は表１０中に要約されている。

【0262】

【表10】

【0263】

この研究の結果は、検査した４つすべての細菌の科について、２２℃および１９％の相対湿度、大気酸素レベル（約２０．９５％）の存在下で、７日間までにわたって保管した場合に、原薬が安定であったことを示す。乾燥休眠状態で保管した場合、生物は酸素曝露に対して感受性がより低い。

【0264】

原薬水分吸着研究
水分取り込みの特徴および影響を、表１１中に記載の条件下で評価した。相対湿度の条件は飽和塩溶液の使用を介して維持し、様々な試料を曝露させたＡｃｕｒｉｔｅデジタル温度／湿度計を使用して確認した。

【0265】

【表11】

【0266】

試料は、曝露前の初期試験に加えて、２、４、８、および２４時間の間、条件に曝露させた。

【0267】

結果は表１２～１５中に要約されており、生物の外見、含水量、および生存度を試験した。

【0268】

【表12】

【0269】

【表13】

【0270】

【表14】

【0271】

【表15】

【0272】

本実施例中に記載した結果は、漸増する湿度レベルへの曝露が、凍結乾燥された材料の含水の増加量をもたらすことを実証している。水分吸収は、より高い湿度レベルおよびより長い曝露時間で最も明白である。

【0273】

結果から、増加する凍結乾燥された材料の含水量に関連して、増加する湿度および期間への曝露に伴って生存度の対応する損失が存在すると考えられる。どちらもより高い温度（２２℃）および推奨される貯蔵条件（－２０±５℃）である対照試料は、含水量の増加も生存度の低下も示さず、これは、生成物の品質への影響は含水量の結果であることを示唆している。

【0274】

さらに、上昇した湿度への曝露と生物の生存度の損失との間に関係性が存在すると考えられる。生存度の損失には、水分吸収と一貫した、易流動性粉末からケーク様外見への対応するシフトが伴っている。水分値の増加は生存度の損失と相関するが、絶対的含水量（％ｗｔ／ｗｔ）の変化は実際には小さく、これは、初期水分レベルが重大な品質特質であり、処理環境が制御を必要とする重大な工程パラメータであることを示唆している。

【0275】

参考としての組込み
本出願は、すべて本明細書中に参考として組み込まれている、様々な発行された特許、公開された特許出願、学術論文、および他の出版物に言及する。さらに、従来技術の範囲内にある本開示の任意の特定の実施形態は、特許請求の範囲のうちの任意の１つまたは複数から明示的に排除し得る。そのような実施形態は当業者に知られているとみなされるため、これらは、排除が本明細書中に明示的に記載されていない場合においても、排除され得る。本開示の任意の特定の実施形態は、従来技術の存在に関連しているかにかかわらず、任意の特許請求の範囲から、任意の理由で排除することができる。

【0276】

均等物
本発明は、その精神または必須の特徴から逸脱せずに、他の具体的な形態において具現化し得る。したがって、前述の実施形態は、すべての観点から、本明細書中に記載の本発明を限定するよりむしろ、例示的であるとみなされるべきである。したがって、本発明の範囲は、前述の説明によるよりむしろ、添付の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲の均等性の意味および範囲内にあるすべての変化は、その中に包含されることを意図する。

【図1】

【図2】

【図3】

【国際調査報告】