特表 2024-515803 キメラ抗原受容体を発現するウイルス特異的免疫細胞

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-10

(54)【発明の名称】キメラ抗原受容体を発現するウイルス特異的免疫細胞

(51)【国際特許分類】

   C12N 5/0783 20100101AFI20240403BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240403BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 39/245 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240403BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240403BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240403BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240403BHJP

   C12N 15/13 20060101ALN20240403BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240403BHJP

   C12N 15/62 20060101ALN20240403BHJP

   C12N 15/861 20060101ALN20240403BHJP

【ＦＩ】

C12N5/0783 ZNA

C12N5/10

C12N15/86 Z

A61K39/00 A

A61K39/245

A61K39/395 N

A61K35/17

A61P35/02

A61P37/02

C12N15/13

C12N15/12

C12N15/62 Z

C12N15/861

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023565968

(86)(22)【出願日】2022-04-27

(85)【翻訳文提出日】2023-12-22

(86)【国際出願番号】 US2022071950

(87)【国際公開番号】W WO2022232797

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】63/201,384

(32)【優先日】2021-04-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】391058060

【氏名又は名称】ベイラー カレッジ オブ メディスン

【氏名又は名称原語表記】ＢＡＹＬＯＲ ＣＯＬＬＥＧＥ ＯＦ ＭＥＤＩＣＩＮＥ

(74)【代理人】

【識別番号】110000729

【氏名又は名称】弁理士法人ユニアス国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】コーク、デビッド エイチ．

(72)【発明者】

【氏名】ルーニー、クリオナ エム．

(72)【発明者】

【氏名】ラモス、カルロス エー．

【テーマコード（参考）】

4B065

4C085

4C087

【Ｆターム（参考）】

4B065AA94X

4B065AA94Y

4B065AA95X

4B065AB01

4B065AC12

4B065AC14

4B065AC20

4B065BA02

4B065BB19

4B065CA24

4B065CA44

4C085AA02

4C085AA13

4C085AA14

4C085BA80

4C085BB01

4C085BB11

4C085CC03

4C085DD24

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB37

4C087BB64

4C087BB65

4C087CA04

4C087MA66

4C087NA06

4C087NA14

4C087ZB02

4C087ZB07

4C087ZB26

4C087ZB27

(57)【要約】

【要約】
本開示の実施形態は、ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成又は拡大するための方法であって、ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中で、（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド；又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することによって、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む方法を包含する。特定の実施形態において、細胞培養培地は、特定の割合のヒト血小板溶解物を含み、及び／又はＰＢＭＣは、例えばＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させる。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中で、（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む、ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成又は拡大する方法。

【請求項2】

細胞培養培地は、１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に細胞培養培地が５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

ＰＢＭＣはがＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇している、請求項１又は請求項２に記載の方法であって、任意選択で、該方法が、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇したＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させる、先行する工程を含む、方法。

【請求項4】

ウイルスがエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原が、以下から構成される群から選択されるＥＢＶ抗原を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【請求項5】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項7】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入することをさらに含み、任意選択で、ＣＡＲがＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

ＣＡＲをコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入することが、（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物をウイルスに特異的な免疫細胞に接触させることを含む、請求項１０に記載の方法。

【請求項9】

ウイルスに特異的な免疫細胞、又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を、ヒト白血球抗原陰性リンパ芽球系細胞（ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）の存在下で培養することをさらに含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

請求項９に記載の方法であって、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比、又はＣＡＲ、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比が１：２～１：５の間であり、任意選択で、比が１：３である、方法。

【請求項11】

ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下での培養が、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加の非存在下で行われる、請求項９又は請求項１０に記載の方法。

【請求項12】

ヒト白血球抗原陰性リンパ芽球系細胞（ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）の存在下、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加の非存在下で、ウイルスに特異的な免疫細胞を培養することを含む、ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を作製又は拡大する方法。

【請求項13】

請求項１２に記載の方法であって、該方法が以下を含む、方法：
（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；及び
ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外来性ペプチドを添加しない状態で、ウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること。

【請求項14】

請求項１２又は請求項１３に記載の方法であって、該方法が以下を含む方法：
（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入する工程であって、任意選択で、ＣＡＲがＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、工程；及び
ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること。

【請求項15】

ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比、又はＣＡＲ、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比が１：２～１：５の間であり、任意選択で、比が１：３である、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項16】

ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中でＰＢＭＣを培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む、請求項１２～１５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項17】

細胞培養培地が１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に細胞培養培地が５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

ＰＢＭＣがＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させる、請求項１２～１８のいずれか１項に記載の方法であって、任意選択で、該方法が、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させる、先行する工程を含む、方法。

【請求項19】

ウイルスがエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原が、以下から構成される群から選択されるＥＢＶ抗原を含む、請求項１２～１８のいずれか１項に記載の方法：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【請求項20】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む、請求項１２～１９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項21】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む、請求項１２～２０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項22】

ウイルスに特異的な免疫細胞にＣＡＲをコードする核酸を導入することが、ウイルスに特異的な免疫細胞を、（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物と接触させることを含む、請求項１４～２１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項23】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含んでなるウイルスに特異的な免疫細胞を産生する方法であって、ウイルスに特異的な免疫細胞を、（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含んでなる組成物と接触させることを含んでなる方法により、ウイルスに特異的な免疫細胞にＣＡＲをコードする核酸を導入することを含んでなる方法；
任意選択で、ＣＡＲはＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。

【請求項24】

請求項２３に記載の方法であって、該方法が以下を含む、方法：
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；及び
（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物をウイルスに特異的な免疫細胞に接触させることを含む方法によって、ＣＡＲをコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入すること。

【請求項25】

ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中でＰＢＭＣを培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む、請求項２４に記載の方法。

【請求項26】

細胞培養培地が１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に細胞培養培地が５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む、請求項２５に記載の方法。

【請求項27】

ＰＢＭＣがＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させる、請求項２４～２６のいずれか１項に記載の方法であって、任意選択で、該方法が、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させる、先行する工程を含む、方法。

【請求項28】

ウイルスがエプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原が、以下から構成される群から選択されるＥＢＶ抗原を含む、請求項２４から２７のいずれか１項に記載の方法：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【請求項29】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む、請求項２４～２８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項30】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む、請求項２４～２９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項31】

ヒト白血球抗原陰性リンパ芽球系細胞（ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）の存在下で、ウイルスに特異的な免疫細胞、又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養することをさらに含む、請求項２３～３０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項32】

ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比、又はＣＡＲ、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が、１：１～１：１０、任意選択で１：２～１：５、任意選択で１：３である、請求項３１に記載の方法。

【請求項33】

ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下での培養が、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加の非存在下で行われる、請求項３１又は請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞の集団を作製又は拡大する方法であって、以下を含む方法：
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中で、（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；
ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１（任意選択で、ここでＣＡＲはＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む）を含む組成物をウイルスに特異的な免疫細胞と接触させることを含む方法によって、ＣＡＲをコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入すること；及び
ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること。

【請求項35】

請求項３４に記載の方法であって、細胞培養培地が１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に、細胞培養培地が５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む方法。

【請求項36】

ＰＢＭＣがＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させる、請求項３４又は請求項３５に記載の方法であって、任意選択で、該方法が、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させる、先行する工程を包含する、方法。

【請求項37】

ウイルスがエプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原が、以下から構成される群から選択されるＥＢＶ抗原を含む、請求項３４から３６のいずれか１項に記載の方法：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【請求項38】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む、請求項３４～３７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項39】

細胞培養培地が５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含み、任意に、細胞培養培地が約１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む、請求項３４～３８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項40】

ＣＡＲ、又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比が１：２～１：５の間であり、任意選択で、比が１：３である、請求項３４～３９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項41】

ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下での培養が、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加の非存在下で行われる、請求項３４～４０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項42】

請求項１～４１のいずれか１項に記載の方法によって得られた、又は得られる細胞又は細胞の集団。

【請求項43】

請求項４２に記載の細胞又は細胞集団と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤又は希釈剤とを含む医薬組成物。

【請求項44】

医学的治療又は予防の方法において使用するための、請求項４２に記載の細胞又は細胞の集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物。

【請求項45】

がんを治療又は予防する方法に使用するための、請求項４２に記載の細胞又は細胞集団、あるいは請求項４３に記載の医薬組成物。

【請求項46】

がんを治療又は予防するための医薬の製造における、請求項４２に記載の細胞又は細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物の使用。

【請求項47】

がんを治療又は予防する方法であって、請求項４２に記載の細胞もしくは細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物の治療的もしくは予防的に有効な量を被験体に投与することを含む方法。

【請求項48】

がんが、ＣＤ３０陽性がん、ＥＢＶ関連がん、血液がん、骨髄性血液悪性腫瘍、造血器悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群、白血病、Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、ＨＩＶ感染／ＡＩＤＳに伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、口腔毛髪状白板症、バーキットリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、中枢神経系リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、多発性骨髄腫、固形がん、上皮細胞がん、胃がん、胃がん、胃腺がん、消化管腺がん、肝臓がん、肝細胞がん、胆管がん、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、口腔がん、中咽頭がん、口腔がん、喉頭がん、上咽頭がん、食道がん、大腸がん、大腸がん、結腸がん、子宮頸がん、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、膀胱がん、尿路上皮がん、皮膚がん、黒色腫、進行黒色腫、腎細胞がん、腎細胞がん、卵巣がん、卵巣がん、中皮腫、乳がん、脳腫瘍、神経膠芽腫、前立腺がん、膵臓がん、肥満細胞症、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍又は精巣胚性がんから構成される群から選択される、請求項４５～４７のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項49】

万能性免疫反応を特徴とする疾患又は病態を治療又は予防する方法に用いるための、請求項４２に記載の細胞又は細胞集団、あるいは請求項４３に記載の医薬組成物。

【請求項50】

アレルギー反応性免疫応答を特徴とする疾患又は病態を治療又は予防するための医薬の製造における、請求項４２に記載の細胞又は細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物の使用。

【請求項51】

請求項４２に記載の細胞もしくは細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物の治療的もしくは予防的に有効な量を被験体に投与することを含む、同種反応性免疫応答を特徴とする疾患又は状態を治療又は予防する方法。

【請求項52】

請求項４９～５１のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物であって、アロレアクティブ免疫応答によって特徴付けられる疾患又は状態が、同種移植に関連する疾患又は状態である、細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項53】

疾患又は病態が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である、請求項４９～５２のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項54】

疾患又は病態が移植片拒絶反応である、請求項４９～５２のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項55】

移植片を採取する前に、治療的又は予防的に有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を移植片のためのドナー被験体に投与することを含む、請求項４９～５４のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項56】

請求項４９～５５のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物であって、該方法が、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を、同種移植のためにレシピエント被験体に投与することを含む、細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項57】

請求項４９～５６のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物であって、該方法が、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は組成物と同系移植を接触させることを含む、細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項58】

同種移植により疾患又は状態を治療又は予防する方法に使用するための、請求項４２に記載の細胞又は細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物。

【請求項59】

同種移植による疾患又は状態の治療又は予防のための医薬の製造における、請求項４２に記載の細胞又は細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物の使用。

【請求項60】

請求項４２に記載の細胞もしくは細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物の治療的もしくは予防的に有効な量を被験体に投与することを含む、同種移植による疾患又は病態の治療又は予防方法。

【請求項61】

請求項５８～６０のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物であって、該方法が、同種移植を採取する前に、同種移植のためのドナー被験体に、治療的又は予防的に有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を投与することを含む、細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項62】

請求項５８～６１のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物であって、該方法が、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を、レシピエント被験体に同種移植のために投与することを含む、細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項63】

該方法が、治療的又は予防的に有効な量の該細胞、細胞集団、又は医薬組成物を同胞移植に接触させることを含む、請求項５８～６２のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項64】

同種移植が同種免疫細胞の養子移入を含む、請求項５８～６３のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項65】

疾患又は病態がＴ細胞機能不全障害、がん又は感染症である、請求項５８～６４のいずれか１項に記載の使用、使用、又は方法のための細胞、細胞集団、又は医薬組成物。

【請求項66】

アレルギー反応性免疫細胞を殺傷する方法であって、アレルギー反応性免疫細胞を、請求項４２に記載の細胞もしくは細胞集団、又は請求項４３に記載の医薬組成物と接触させることを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年４月２７日に出願された米国仮出願第６３／２０１，３８４号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

（技術分野）
本発明は、分子生物学及び細胞生物学に関するものであり、また医学的治療法及び予防法に関するものでもある。

【背景技術】

【0003】

血液悪性腫瘍における自己キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の成功にもかかわらず、この根治的治療となりうる治療法の普及には障壁が存在する。製造の失敗、注入前に病勢が進行すること、法外な費用がかかることなどが、多くの患者にとって禁忌となっている。すぐに利用できるＣＡＲ Ｔ細胞の選択肢が緊急に必要である。

【0004】

健康なドナーに由来し、迅速に投与できる「既製品」のＴ細胞製剤は、養子細胞免疫療法へのアクセスを改善し、コストを削減する。しかし、「市販の」ＣＡＲ Ｔ細胞療法の開発は、２つの大きな落とし穴によって妨げられてきた。すなわち、非血縁ドナー由来のポリクローナルに活性化されたＣＡＲ Ｔ細胞が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性と、レシピエントの同種反応性（ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ）Ｔ細胞による同種ＣＡＲ Ｔ細胞の拒絶反応である。

【発明の概要】

【0005】

第１の態様において、本開示は、ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成又は拡大するための方法であって、ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中で、（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド；又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することによって、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む方法を提供する。

【0006】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に、細胞培養培地は５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む。

【0007】

いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣはＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇しており、任意選択で、本方法は、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇したＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させるという先行工程を含む。

【0008】

いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原は、以下から構成される群より選択されるＥＢＶ抗原を含む：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【0009】

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。

【0010】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。

【0011】

いくつかの実施形態において、本方法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入することをさらに含み、任意選択で、ＣＡＲは、ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。

【0012】

いくつかの実施形態において、ウイルスに特異的な免疫細胞にＣＡＲをコードする核酸を導入することは、ウイルスに特異的な免疫細胞を、（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物と接触させることを含む。

【0013】

いくつかの実施形態において、本方法は、ヒト白血球抗原陰性リンパ芽球系細胞（ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）の存在下で、ウイルスに特異的な免疫細胞、又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養することをさらに含む。

【0014】

いくつかの実施形態において、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比、又はＣＡＲ、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比は、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比は１：２～１：５の間であり、任意選択で、比は１：３である。

【0015】

いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下での培養は、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加がない状態で行われる。

【0016】

本開示はまた、ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成又は拡大する方法であって、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドが添加されていない状態で、ヒト白血球抗原陰性リンパ芽球様細胞（ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）の存在下でウイルスに特異的な免疫細胞を培養することを含む方法を提供する。

【0017】

いくつかの実施形態において、本方法は以下を含む：
（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド；又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することによって、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；及び
ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外来性ペプチドを添加しない状態で、ウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること。

【0018】

いくつかの実施形態において、本方法は以下を含む：
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、（ｉ）ウイルスの１つ又は複数の抗原の全部又は一部に対応する１つ又は複数のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ又は複数の抗原の全部又は一部に対応する１つ又は複数のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で培養することによって、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入する工程であって、任意選択で、ＣＡＲがＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、工程；及び
ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること。

【0019】

いくつかの実施形態において、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比、又はＣＡＲ、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比は、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比は１：２～１：５の間であり、任意選択で、比は１：３である。

【0020】

いくつかの実施形態において、本方法は、ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中でＰＢＭＣを培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む。

【0021】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に、細胞培養培地は５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む。

【0022】

いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣはＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇しており、任意選択で、本方法は、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇したＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させるという先行工程を含む。

【0023】

いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原は、以下から構成される群より選択されるＥＢＶ抗原を含む：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【0024】

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。

【0025】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。

【0026】

いくつかの実施形態において、ウイルスに特異的な免疫細胞にＣＡＲをコードする核酸を導入することは、ウイルスに特異的な免疫細胞を、（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物と接触させることを含む。

【0027】

本開示はまた、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＣＡＲをコードする核酸を含む、ウイルスに特異的な免疫細胞を産生する方法であって、ウイルスに特異的な免疫細胞を、（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物と接触させることを含む方法によって、ウイルスに特異的な免疫細胞にＣＡＲをコードする核酸を導入することを含む方法を提供する；
任意選択で、ＣＡＲはＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む。

【0028】

いくつかの実施形態において、本方法は以下を含む：
以下の存在下で末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を培養することによって、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激する：（ｉ）ウイルスの１つもしくは複数の抗原の全部もしくは一部に対応する１つもしくは複数のペプチド；又は（ｉｉ）ウイルスの１つもしくは複数の抗原の全部もしくは一部に対応する１つもしくは複数のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）；及び
（ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物をウイルスに特異的な免疫細胞に接触させることを含む方法によって、ＣＡＲをコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入すること。

【0029】

いくつかの実施形態において、本方法は、ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中でＰＢＭＣを培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激することを含む。

【0030】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意選択で、細胞培養培地は、５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む。

【0031】

いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣはＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇しており、任意選択で、本方法は、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇したＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させるという先行工程を含む。

【0032】

いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原は、以下から構成される群より選択されるＥＢＶ抗原を含む：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【0033】

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。

【0034】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。

【0035】

いくつかの実施形態において、本方法は、ヒト白血球抗原陰性リンパ芽球系細胞（ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）の存在下で、ウイルスに特異的な免疫細胞、又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養することをさらに含む。

【0036】

いくつかの実施形態において、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比、又はＣＡＲ、もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比は、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比は１：２～１：５の間であり、任意選択で、比は１：３である。

【0037】

いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下での培養は、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加がない状態で行われる。

【0038】

本開示はまた、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞の集団を作製又は拡大する方法であって、以下を含む方法を提供する：
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、ヒト血小板溶解物を含む細胞培養培地中で、（ｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチド、又は（ｉｉ）ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドを提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で培養することにより、ウイルスに特異的な免疫細胞を刺激すること；
ａ）ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１（任意選択で、ここでＣＡＲはＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む）を含む組成物をウイルスに特異的な免疫細胞と接触させることを含む方法によって、ＣＡＲをコードする核酸をウイルスに特異的な免疫細胞に導入すること；及び
ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、キメラ抗原レセプター（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること。

【0039】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は１～２０％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含み、任意に、細胞培養培地は５％ｖ／ｖのヒト血小板溶解物を含む。

【0040】

いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣはＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇しており、任意選択で、本方法は、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞から枯渇したＰＢＭＣを得るために、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣ集団を枯渇させるという先行工程を含む。

【0041】

いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）であり、任意選択で、１つ以上のＥＢＶ抗原は、以下から構成される群より選択されるＥＢＶ抗原を含む：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。

【0042】

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。

【0043】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含み、任意に細胞培養培地は約１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。

【0044】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲ、又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比は、１：１～１：１０の間であり、任意選択で、比は１：２～１：５の間であり、任意選択で、比は１：３である。

【0045】

いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下での培養は、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加がない状態で行われる。

【0046】

本開示はまた、本開示による方法によって得られる、又は得られる細胞又は細胞の集団を提供する。

【0047】

本開示はまた、本開示による細胞又は細胞集団と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤又は希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。

【0048】

本開示はまた、医学的治療又は予防の方法において使用するための、本開示による細胞、細胞の集団、又は医薬組成物を提供する。

【0049】

本開示はまた、がんを治療又は予防する方法において使用するための、本開示による細胞、細胞の集団、又は医薬組成物を提供する。

【0050】

本開示はまた、がんを治療又は予防するための医薬の製造における、細胞、細胞の集団、又は本開示による医薬組成物の使用を提供する。

【0051】

本開示はまた、本開示による細胞、細胞集団、又は医薬組成物の治療的又は予防的に有効な量を被験体（対象、ｓｕｂｊｅｃｔ）に投与することを含む、がんを治療又は予防する方法を提供する。

【0052】

いくつかの実施形態において、がんは、ＣＤ３０陽性がん、ＥＢＶ関連がん、血液がん、骨髄性血液悪性腫瘍、造血器悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群、白血病、Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、ＨＩＶ感染／ＡＩＤＳに伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、口腔毛髪状白板症、バーキットリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、中枢神経系リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、多発性骨髄腫、固形がん、上皮細胞がん、胃がん、胃がん、胃腺がん、消化管腺がん、肝臓がん、肝細胞がん、胆管がん、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、口腔がん、中咽頭がん、口腔がん、喉頭がん、上咽頭がん、食道がん、大腸がん、大腸がん、結腸がん、子宮頸がん、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、膀胱がん、尿路上皮がん、皮膚がん、黒色腫、進行黒色腫、腎細胞がん、腎細胞がん、卵巣がん、卵巣がん、中皮腫、乳がん、脳腫瘍、神経膠芽腫、前立腺がん、膵臓がん、肥満細胞症、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍又は精巣胚性がんから構成される群から選択される。

【0053】

本開示はまた、同種反応性免疫応答を特徴とする疾患又は病態を治療又は予防する方法において使用するための、本開示による細胞、細胞集団、又は医薬組成物を提供する。

【0054】

本開示はまた、万能性免疫応答を特徴とする疾患又は状態を治療又は予防するための医薬の製造における、細胞、細胞の集団、又は本開示による医薬組成物の使用を提供する。

【0055】

本開示はまた、本開示による細胞、細胞集団、又は医薬組成物の治療的又は予防的に有効な量を被験体に投与することを含む、同種反応性免疫応答を特徴とする疾患又は状態を治療又は予防する方法を提供する。

【0056】

いくつかの実施形態において、同種移植に関連する疾患又は病態は、同種移植に関連する疾患又は病態である。

【0057】

いくつかの実施形態において、疾患又は状態は移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である。

【0058】

いくつかの実施形態では、疾患又は状態は移植片拒絶反応である。

【0059】

いくつかの実施形態において、本方法は、同胞移植を採取する前に、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を同胞移植のためのドナー被験体に投与することを含む。

【0060】

いくつかの実施形態において、本方法は、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を、同種移植のためにレシピエント被験体に投与することを含む。

【0061】

いくつかの実施形態において、本方法は、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は組成物を同胞移植に接触させることを含む。

【0062】

本開示はまた、同種移植による疾患又は病態の治療又は予防方法において使用するための、本開示による細胞、細胞集団、又は医薬組成物を提供する。

【0063】

本開示はまた、同種移植による疾患又は状態の治療又は予防のための医薬の製造における、本開示による細胞、細胞の集団、又は医薬組成物の使用を提供する。

【0064】

本開示はまた、本開示による細胞、細胞集団、又は医薬組成物の治療的又は予防的に有効な量を被験体に投与することを含む、同種移植による疾患又は状態の治療又は予防方法を提供する。

【0065】

いくつかの実施形態において、本方法は、同胞移植を採取する前に、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を同胞移植のためのドナー被験体に投与することを含む。

【0066】

いくつかの実施形態において、本方法は、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を、同種移植のためにレシピエント被験体に投与することを含む。

【0067】

いくつか実施形態では、この方法は、治療上又は予防上有効な量の細胞、細胞集団、又は医薬組成物を同胞移植に接触させることを含む。

【0068】

いくつかの実施形態において、同種移植は同種免疫細胞の養子移入を含んでいる。

【0069】

いくつかの実施形態では、疾患又は状態はＴ細胞機能障害、がん又は感染症である。

【0070】

本開示はまた、アレルギー反応性免疫細胞を死滅させる方法であって、アレルギー反応性免疫細胞を、本開示による細胞、細胞集団、又は医薬組成物と接触させることを含む方法を提供する。

【発明を実施するための形態】

【0071】

（概要）
本発明者らは、ＧＶＨＤを引き起こすことなく血液悪性腫瘍を除去し、同種拒絶反応を回避するためのＣＡＲ改変ウイルス特異的Ｔ細胞（ＣＡＲ－ＶＳＴ）アプローチを開発した。

【0072】

本開示は、既製の細胞療法を含む同種組織を移植片拒絶反応から保護するため、あるいはＧＶＨＤを治療するために、同種反応性Ｔ細胞を除去する戦略を提供する。

【0073】

ＣＤ３０は、同種反応性Ｔ細胞のマーカーとして同定されているため、本発明者らは、ＣＤ３０に対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する治療用Ｔ細胞（ＣＤ３０．ＣＡＲ）を工学的に作製することにより、ＣＤ３０．ＣＡＲを標的とした。ＣＤ３０．ＣＡＲを発現するＶＳＴは、レシピエント被験体における同種異系免疫反応を低下させるために、同種異系療法を用いる方法に用いることができる。

【0074】

ＨＬＡが不一致のレシピエントに同種Ｔ細胞を投与することは、Ｔ細胞の一部がもともと同種反応性を有するため、ＧＶＨＤなどの同種反応性免疫応答のリスクを伴う。本発明者らは、ＣＤ３０．ＣＡＲを発現させるためのプラットフォーム細胞としてウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）を用いた。ＶＳＴは同種レシピエントにおいてＧＶＨＤを引き起こすことがほとんどないことが示されており、これはＴＣＲレパートリーが制限されているためと考えられる。特に、エプスタイン・バー・ウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）は、３００人以上の同種レシピエントに投与されているが、ＧＶＨＤのエビデンスはない。

【0075】

加えて、ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＶＳＴは、それ自体がレシピエントの同種反応性Ｔ細胞による拒絶反応から保護されているため、例えばＣＤ３０＋がんの治療など、既製の治療薬として直接使用することができる。

【0076】

したがって、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＶＳＴは、（ｉ）同種宿主で誘発される同種反応性Ｔ細胞を排除し、（ｉｉ）ＧＶＨＤを引き起こすことなく、ＣＤ３０陽性がんを排除するのに必要な活性を十分な時間持続する。

【0077】

ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＶＳＴは、例えば、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的なＣＡＲを発現するように操作することで、さらなる標的抗原を標的とするように操作することもできる。このような細胞は、標的抗原を発現する細胞を殺すことができ、ＣＤ３０を発現する同種Ｔ細胞を排除することもできるため、関連する標的抗原を発現するがんなどの治療のための市販の治療薬として有用である。

【0078】

本開示は、ＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞を産生するための改善された方法を提供し、合理化されたプロセスにより、強化された機能を有する細胞をもたらす。

【0079】

ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の産生
本開示の態様及び実施形態は、ＣＡＲ発現、ウイルス特異的免疫細胞を産生する方法に関し、そのような細胞の集団を生成、生産及び／又は拡大する方法を含む。

【0080】

ウイルス特異的免疫細胞の集団をｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏで作製／増殖させる方法は、当業者によく知られている。典型的な培養条件（すなわち、細胞培養培地、添加剤、温度、ガス雰囲気）、細胞数、培養期間などは、例えば、Ｎｇｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１４）３７（４）：１９３－２０３を参照することができ、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0081】

好都合なことに、本開示による細胞の培養は、５％ＣＯ_２を含む加湿雰囲気中、３７℃で維持され得る。細胞培養物の細胞は、当業者によって容易に決定され得るように、任意の適切な密度で樹立及び／又は維持され得る。例えば、培養物は、～０．５×１０^６～５×１０^６細胞／ｍｌの培養物（例えば、～１×１０^６細胞／ｍｌ）の初期密度で樹立され得る。

【0082】

培養は、培養量に適した任意の容器、例えば細胞培養プレートのウェル、細胞培養フラスコ、バイオリアクターなどで行うことができる。いくつかの実施形態において、細胞はバイオリアクター、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＳｏｍｅｒｖｉｌｌｅ ａｎｄ Ｄｕｄｌｅｙ，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２）１（８）：１４３５－１４３７に記載されているバイオリアクターで培養される。いくつかの実施形態では、細胞はＧＲｅｘ細胞培養容器、例えばＧＲｅｘフラスコ又はＧＲｅｘ １００バイオリアクター中で培養される。

【0083】

この方法は一般に、ウイルス抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体を提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で、抗原特異的レセプターを有する細胞を含む免疫細胞集団（例えば、末梢血単核球などの異種免疫細胞集団）を、活性化と増殖を引き起こすように適切なコスト刺激とシグナル増幅を与える条件下で培養することを含む。ＡＰＣは、ウイルス抗原／ペプチドをコードするウイルスに感染していてもよいし、ウイルス抗原／ペプチドを構成／発現していてもよい。刺激によりＴ細胞が活性化され、細胞分裂（増殖）が促進され、その結果、ウイルス抗原に特異的なＴ細胞集団が生成及び／又は拡大される。Ｔ細胞活性化の過程は当業者によく知られており、例えばＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄｎ．Ｊａｎｅｗａｙ ＣＡ Ｊｒ，Ｔｒａｖｅｒｓ Ｐ，Ｗａｌｐｏｒｔ Ｍ，ら：Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）の第８章に詳細に記載されており、その全体が参照により組み込まれる。

【0084】

刺激後に得られる細胞集団は、刺激前の集団と比較して、ウイルスに特異的なＴ細胞が濃縮される（すなわち、ウイルス特異的Ｔ細胞は、刺激後の集団において増加した頻度で存在する）。このようにして、異なる特異性を有するＴ細胞の不均一な集団から、ウイルスに特異的なＴ細胞の集団が拡大／生成される。ウイルスに特異的なＴ細胞の集団は、刺激とそれに伴う細胞分裂によって、単一のＴ細胞から生成されることもある。ウイルスに特異的なＴ細胞の既存の集団は、ウイルスに特異的なＴ細胞の集団の細胞の刺激とその結果としての細胞分裂によって拡大することができる。

【0085】

本開示の態様及び実施形態は、特にＥＢＶ特異的免疫細胞に関する。したがって、いくつかの実施形態において、ウイルスはＥＢＶであってもよく、ウイルス抗原（複数可）はＥＢＶ抗原（複数可）であってもよい。ＥＢＶ特異的免疫細胞の集団を生成／拡大する方法は、例えば、ＷＯ２０１３／０８８１１４Ａ１、Ｌａｐｔｅｖａ ａｎｄ Ｖｅｒａ、Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔ．４３４３９２，Ｓｔｒａａｔｈｏｆら，Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（５）：１８９８－１９０４，ＷＯ２０１７／２０２４７８Ａ１，ＷＯ２０１８／０５２９４７Ａ１及びＷＯ２０２０／２１４４７９Ａ１，これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0086】

この方法は、ＥＢＶ抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体に特異的なＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を含むＴ細胞が、ＴＣＲが特異的であるＥＢＶ抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体を提示するＡＰＣによって刺激されるステップを含む。ＡＰＣは、ＥＢＶ抗原／ペプチドをコードするウイルスに感染していてもよいし、ＥＢＶ抗原／ペプチドを構成／発現していてもよく、ＥＢＶ抗原ペプチドをＭＨＣ分子に結合して提示します。刺激によりＴ細胞が活性化され、細胞分裂（増殖）が促進され、その結果、ＥＢＶ抗原に特異的なＴ細胞集団が生成及び／又は拡大される。

【0087】

本開示の方法は、典型的には、免疫細胞の集団を、ウイルス抗原に対応するペプチド（複数可）又はウイルス抗原に対応するペプチド（複数可）を提示するＡＰＣと接触させることにより、ウイルス／ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を刺激することを含む。このような方法ステップは、本明細書において「刺激」又は「刺激ステップ」と呼ばれることがある。このような方法ステップは、通常、ｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏでの細胞の培養維持を含み、「刺激培養」と呼ばれることがある。

【0088】

ある実施形態では、方法は１つ以上の追加刺激ステップを含む。すなわち、いくつかの実施形態において、方法は、刺激ステップによって得られた細胞を再刺激する１つ以上のさらなるステップを含む。このような更なる刺激ステップは、本明細書において「再刺激」又は「再刺激ステップ」と呼ばれることがある。このような方法ステップは、通常、細胞をｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏで培養維持することを含み、「再刺激培養」と呼ばれることがある。

【0089】

ＰＢＭＣ（刺激用）又は本明細書に記載の刺激工程により得られた細胞集団（再刺激用）を、ウイルス抗原に対応するペプチド（複数可）と「接触させる」ことは、一般に、ペプチド（複数可）を含む細胞培養培地中でＰＢＭＣ／細胞集団をｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏで培養することを含むことが理解されよう。同様に、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣとＰＢＭＣ／細胞集団との「接触」は、一般に、ＡＰＣとＰＢＭＣ／細胞集団とを細胞培養培地中でｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏで共培養することを含むことが理解されよう。

【0090】

いくつかの実施形態において、方法は、ウイルス抗原（例えば、ＥＢＶ抗原（複数可））に対応するペプチド（複数可）とＰＢＭＣを接触させることを含む。そのような実施形態において、ＰＢＭＣの集団内のＡＰＣ（例えば、樹状細胞、マクロファージ及びＢ細胞）は、ＰＢＭＣの集団内のＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞のその後の活性化のために、ＭＨＣクラスＩ分子（交差提示）及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子上に抗原を内在化（例えば、貪食、ピノサイトーシスによって）、処理及び提示する。

【0091】

参照抗原に「対応する」ペプチドは、参照抗原のアミノ酸配列を含むか、又はそのアミノ酸配列から構成される。例えば、ＥＢＶのＥＢＮＡ１に「対応する」ペプチドは、ＥＢＮＡ１のアミノ酸配列内に見出される（すなわち、ＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の部分配列である）アミノ酸配列を含むか、又はアミノ酸配列から構成される。本明細書において採用されるペプチドは、典型的には、５～３０アミノ酸の長さ、例えば、５～２５アミノ酸、１０～２０アミノ酸、又は１２～１８アミノ酸のうちの１つを有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０アミノ酸のいずれかの長さを有する。いくつかの実施形態において、ペプチドは、約１５アミノ酸の長さを有する。本明細書で使用される「ペプチド」は、非同一ペプチドを含む集団を指す場合がある。

【0092】

いくつかの実施形態では、本方法は複数の抗原に対応するペプチドを用いる。そのような実施形態では、各抗原に対応する少なくとも１つのペプチドが存在する。例えば、方法がＥＢＮＡ１及びＬＭＰ１に対応するペプチドを用いる場合、ペプチドは、ＥＢＮＡ１に対応する少なくとも１つのペプチド、及びＬＭＰ１に対応する少なくとも１つのペプチドを含む。

【0093】

ある実施形態では、本方法は参照抗原の全部又は一部に対応するペプチドを用いる。所定の抗原の全てに対応するペプチドは、抗原のアミノ酸配列の全長をカバーする。すなわち、ペプチドは一緒になって、所与の抗原のアミノ酸配列のすべてのアミノ酸を含む。所与の抗原の一部に対応するペプチドは、抗原のアミノ酸配列の一部をカバーする。ペプチドが抗原のアミノ酸配列の一部をカバーするいくつかの実施形態では、ペプチドは一緒になって、抗原のアミノ酸配列の例えば１０％以上、例えば１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％のうちの１つ以上をカバーすることができる。

【0094】

ある実施形態では、この方法はオーバーラッピングペプチドを用いる。「重なり合う（Ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）」ペプチドは、アミノ酸、より典型的にはアミノ酸の配列を共通して有する。例示すると、第一のペプチドはＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の１位から１５位に対応するアミノ酸配列からなり、第二のペプチドはＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の５位から２０位に対応するアミノ酸配列から構成される。第１及び第２のペプチドは、ＥＢＮＡ１に対応する重複ペプチドであり、１１アミノ酸だけ重複している。いくつかの実施形態では、重複ペプチドは、１～２０、５～２０、８～１５又は１０～１２アミノ酸のうちの１つだけ重複する。いくつかの実施形態において、重複ペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５アミノ酸のうちの１つだけ重複する。いくつかの実施形態では、重なり合うペプチドは１１アミノ酸だけ重なる。

【0095】

いくつかの実施形態において、本方法は、所定の参照抗原の全部又は一部に対応する、１～２０アミノ酸だけ重なった５～３０アミノ酸の長さを有するペプチドを用いる。

【0096】

いくつかの実施形態において、本方法は、所与の参照抗原の全てに対応する、１１アミノ酸だけ重なる１５アミノ酸の長さを有するペプチドを用いる。このようなペプチドの混合物は、本明細書では、所与の抗原について「ペプミックスペプチドプール」又は「ペプミックス」と呼ばれることがある。例えば、本明細書の実施例１で使用される「ＥＢＮＡ１ペプミックス」は、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０３２１１－１，ｖ１．

【0097】

本開示の様々な側面に従ったいくつかの実施形態では、所与のウイルス抗原に「対応するペプチド」は、抗原に対するペプミックスであり得る。

【0098】

特定の実施形態において、方法は、１つ以上のＥＢＶ抗原に対応するペプチドを用いる。特定の実施形態において、本方法は、１つ以上のＥＢＶ抗原に対応するペプチドを用いる。いくつかの実施形態において、１つ以上のＥＢＶ抗原は、以下から選択される：ＥＢＶ潜伏抗原、例えばＩＩＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２Ｂ、ＢＡＲＦ１、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３ＢもしくはＥＢＮＡ３Ｃ）、ＩＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２ＢもしくはＢＡＲＦ１）、又はＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１もしくはＢＡＲＦ１）から選択される。ＥＢＮＡ１又はＢＡＲＦ１）、ＥＢＶ溶解抗原、例えば即時型早期溶解抗原（例えばＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１又はＢＭＲＦ１）、早期溶解抗原（例えば、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＸＬＦ１、ＢＡＬＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＡＲＦ１、ＢＧＬＦ５、ＢＨＲＦ１、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＨＬＦ１、ＢＬＬＦ２、ＢＫＲＦ４、ＢＭＲＦ２、ＦＵ又はＥＢＮＡ１－ＦＵＫ）、及び後期溶原性抗原（例えば、ＢＡＬＦ４、ＢＩＬＦ１、ＢＩＬＦ２、ＢＮＦＲ１、ＢＶＲＦ２、ＢＡＬＦ３、ＢＡＬＦ５、ＢＤＬＦ３又はｇｐ３５０）。

【0099】

本開示の種々の局面に従ういくつかの実施形態において、１つ以上のＥＢＶ抗原は、ＢＺＬＦ１から選択されるＥＢＶ溶解抗原であるか、又はこれらを含む、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＸＬＦ１、ＢＡＬＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＧＬＦ５、ＢＨＲＦ１、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＨＬＦ１、ＢＬＬＦ２、ＢＫＲＦ４、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ４、ＢＩＬＦ１、ＢＩＬＦ２、ＢＮＦＲ１、ＢＶＲＦ２、ＢＡＬＦ３、ＢＡＬＦ５及びＢＤＬＦ３から選択されるＥＢＶ溶解性抗原であるか、又はそれらを含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＥＢＶ抗原は、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＭＲＦ２及びＢＤＬＦ３から選択されるＥＢＶ溶解性抗原であるか、又はこれらを含む。

【0100】

いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＥＢＶ抗原は、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ、ＥＢＮＡ３Ｃ、ＢＡＲＦ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂから選択されるＥＢＶ潜伏抗原であるか、又はこれらを含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＥＢＶ抗原は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂから選択されるＥＢＶ潜伏抗原であるか、又はこれらを含む。

【0101】

いくつかの実施形態において、１つ以上のＥＢＶ抗原は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂから選択される。

【0102】

いくつかの実施形態において、方法は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂに対応するペプチドを用いる。いくつかの実施形態において、本方法は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂのためのペプミックスを用いる。

【0103】

いくつかの実施形態において、方法は、ＰＢＭＣ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣ）を、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂに対応するペプチド（複数可）と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、方法は、ＰＢＭＣ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣ）を、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂのためのペプチドと接触させることを含む。

【0104】

いくつかの実施形態において、方法において採用されるＰＢＭＣは、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞が枯渇している。すなわち、いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣは、「ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞枯渇ＰＢＭＣ」であるか、又は「ＣＤ４５ＲＡ陰性ＰＢＭＣ」である。ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞の枯渇は、生成／拡大された細胞集団中のＮＫ細胞及び／又は制御性Ｔ細胞の数を減少させることを意図している。

【0105】

いくつかの実施形態において、方法は、例えば本開示による刺激ステップの前に、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣを枯渇させるステップを含む。いくつかの実施形態において、方法は、例えば再刺激ステップの前に、本開示による刺激ステップによって得られた細胞のＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させるステップを含む。ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞の枯渇は、任意の適切な方法、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（登録商標）Ｂｉｏｔｅｃカラム及び磁性抗ＣＤ４５ＲＡ抗体コートビーズを使用する磁気活性化細胞ソーティング（ＭＡＣＳ）などによって達成することができる。

【0106】

いくつかの実施形態において、本方法において採用されるＡＰＣを誘導するために使用される細胞の集団は、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞が枯渇している。すなわち、いくつかの実施形態において、ＡＰＣを誘導するために使用される細胞の集団は、「ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞が枯渇した」集団又は「ＣＤ４５ＲＡ陰性」集団である。例えば、ＡＰＣがＡＰＣとして採用される実施形態において、ＡＴＣは、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞欠失ＰＢＭＣの集団から誘導されてもよいし、ＣＤ４５ＲＡ陰性ＰＢＭＣの集団から誘導されてもよい。

【0107】

いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞の集団を、ウイルス抗原に対応するペプチド（複数可）と接触させることを含む。そのような実施形態において、細胞集団内のＡＰＣ（例えば、樹状細胞、マクロファージ及びＢ細胞）は、細胞集団内のＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋Ｔ細胞のその後の再刺激のために、ＭＨＣクラスＩ分子（交差提示）及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子上に抗原を内在化（例えば、貪食、ピノサイトーシスによって）、処理及び提示する。

【0108】

いくつかの実施形態において、本方法は、ＰＢＭＣを、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣと接触させることを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞集団を、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣと接触させることを含む。

【0109】

いくつかの実施形態において、方法は、ＰＢＭＣをＥＢＶ－ＬＣＬと接触させることを含む。ＥＢＶ－ＬＣＬでＰＢＭＣを刺激することによるＥＢＶ特異的免疫細胞の産生は、例えば、Ｓｔｒａａｔｈｏｆら、Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（５）．１８９８－１９０４に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

【0110】

ＥＢＶ－ＬＣＬは、例えば、Ｈｕｉ－Ｙｕｅｎら、Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（２０１１）５７：３３２１、及びＨｕｓｓａｉｎ及びＭｕｌｈｅｒｋａｒ、Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄ（２０１２）１（２）に記載されているように、ＰＢＭＣをＥＢＶで感染させ、長期培養後に不死化したＥＢＶ感染細胞を回収することによって調製することができる：７５－８７（いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、健康なドナーの血液サンプルから単離したＰＢＭＣを、ガンマ線照射した自己ＥＢＶ－ＬＣＬと共培養することによって調製することができる。

【0111】

刺激及び再刺激におけるＴ細胞及びＡＰＣの共培養は、細胞培養培地中で行われる。細胞培養培地は、本開示によるＴ細胞及びＡＰＣをｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏで培養維持できる任意の細胞培養培地であり得る。リンパ球の培養に使用するのに適した培養培地は当業者に周知であり、例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培地、ＡＩＭ－Ｖ培地、Ｉｓｃｏｖｅｓ培地などが挙げられる。

【0112】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、ＲＰＭＩ－１６４０培地（例えばＡｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ－１６４０培地）及び／又はクリック培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｈａｍ’ｓ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ（ＥＨＡＡ）培地としても知られる）を含んでもよい。これらの培地の組成は当業者に周知である。ＲＰＭＩ－１６４０培地の処方は、例えば、Ｍｏｏｒｅら、ＪＡＭＡ（１９６７）１９９：５１９－５２４に記載されており、クリック（Ｃｌｉｃｋ’ｓ）培地の処方は、Ｃｌｉｃｋら、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９７２）３：２６４－２７６に記載されている。ＲＰＭＩ－１６４０培地は、例えばＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから入手でき、クリック培地は、例えばＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｃ５５７２）から入手できる。Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ－１６４０培地は、例えばＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カタログ番号１２６３３０１２）から入手できる。

【0113】

いくつかの実施形態において、方法は、ＲＰＭＩ－１６４０培地及びクリック培地を含む細胞培養培地中で、ウイルス抗原（例えば、ＥＢＶ抗原（複数可））に対応するペプチド（複数可）と接触させたＰＢＭＣを、又はウイルス抗原（複数可）に対応するペプチド（複数可）を提示するＡＰＣの存在下で培養することを含む。いくつかの実施形態において、本方法は、ウイルス抗原に対応するペプチド（単数又は複数）と接触させた、又はウイルス抗原に対応するペプチド（単数又は複数）を提示するＡＰＣの存在下で、本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞の集団を、ＲＰＭＩ－１６４０培地及びクリック培地を含む細胞培養培地中で培養することを含む。

【0114】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、（体積比）２５～６５％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び２５～６５％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、３０～６０％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び３０～６０％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、３５～５５％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び３５～５５％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、４０～５０％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び４０～５０％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、４５％ＲＰＭＩ－１６４０培地、及び４５％クリック培地を含む。特定の実施形態では、細胞培養培地は４７．５％のＲＰＭＩ－１６４０培地と４７．５％のクリック培地を含む。

【0115】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は１つ以上の細胞培養培地添加物を含んでもよい。細胞培養培地添加剤は当業者に周知であり、抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン）、Ｌ－グルタミン、サイトカイン／成長因子、血清（例えば、ヒト血清、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））などの成長因子に富む添加剤などが含まれる。

【0116】

ｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏ培養によって免疫細胞の集団を産生、生成、及び／又は拡大する方法は、典型的には、成長因子を含む細胞培養培地の存在下で細胞を培養することを含む。成長因子は多くの場合、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒトＡＢ血清など、成長因子に富む添加物の形で細胞培養液に供給される。

【0117】

本実施例において、本発明者らは、ヒト血小板溶解液（ＨＰＬ）を含む細胞培養培地中で細胞を培養する方法によって産生されたＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が、従来の成長因子に富む添加剤ＦＢＳを用いる代わりに同等の方法によって産生されたＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞と比較して、非ウイルス抗原に対するバックグラウンド反応性が再び低くなることを予期せず見出した。例えば実施例５．２を参照。

【0118】

ヒト血小板溶解液とその製造については、例えばＳｃｈａｌｌｍｏｓｅｒ ａｎｄ Ｓｔｒｕｎｋ Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ．（２００９）（３２）：１５２３及びＳｃｈａｌｌｍｏｓｅｒら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０２０）３８（１）：１３－２３に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0119】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地（すなわち、本開示に従った刺激工程及び／又は再刺激工程の）は、ヒト血小板溶解物を含む。

【0120】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、（体積で）１～２０％（例えば５％）のヒト血小板溶解物、例えば２．５～２０％、２．５～１５％、２．５～１０％、又は～５％のヒト血小板溶解物のうちの１つを含む。

【0121】

本開示の種々の局面に従ういくつかの実施形態において、ＨＰＬは、Ｓｅｘｔｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手され得る。いくつかの実施形態において、ＨＰＬは、ｎＬｉｖｅｎ ＰＲ（Ｃａｔ＃ＰＬ－ＰＲ－１００、ＰＬ－ＰＲ－５００）、Ｓｔｅｍｕｌａｔｅ（Ｃａｔ＃ＰＬ－ＳＰ－１００、ＰＬ－ＳＰ－５００、ＰＬ－ＮＨ－１００、ＰＬ－ＮＨ－５００）及びＴ－Ｌｉｖｅｎ ＰＲ（Ｃａｔ＃ＴＬ－ＰＲ－１５０Ｃ）から選択され得る。いくつかの実施形態において、ＨＰＬは、Ｓｃｈａｌｌｍｏｓｅｒ ａｎｄ Ｓｔｒｕｎｋ Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ．（２００９）（３２）に開示される方法に従って製造され得る：１５２３又はＳｃｈａｌｌｍｏｓｅｒら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２０２０）３８（１）：１３－２３．

【0122】

細胞培養培地がＨＰＬを含む好ましい実施形態では、細胞培養培地はＨＰＬ以外の成長因子に富む添加物を加えない。すなわち、細胞培養培地は好ましくはＦＢＳ、ＢＳＡなどを欠いている。

【0123】

いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、０．５～５％のＧｌｕｔａＭａｘ、例えば１％のＧｌｕｔａＭａｘを含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、０．５～５％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、例えば１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含む。

【0124】

特定の実施形態において、細胞培養培地はＬ－グルタミンを含む。特定の実施形態において、細胞培養培地は、０．５～１０ｍＭのＬ－グルタミン、例えば１～５ｍＭのＬ－グルタミン、例えば２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0125】

本開示によるＡＰＣは、プロフェッショナルＡＰＣであってもよい。プロフェッショナルＡＰＣは、Ｔ細胞に抗原を提示するために特化された細胞であり、細胞表面でＭＨＣ－ペプチド複合体を処理して提示することに効率的であり、高レベルのコスティミュレイトリー分子を発現する。専門的ＡＰＣには樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、Ｂ細胞などがある。非専門的ＡＰＣは、ＭＨＣ－ペプチド複合体をＴ細胞、特にＭＨＣクラスＩ－ペプチド複合体をＣＤ８＋Ｔ細胞に提示することができる他の細胞である。

【0126】

いくつかの実施形態において、ＡＰＣは、ＡＰＣによって内在化された（例えば、エンドサイトーシス／ファゴサイトーシスによって取り込まれた）抗原のＭＨＣクラスＩ上での交差提示が可能なＡＰＣである。ＣＤ８＋Ｔ細胞への内在化抗原のＭＨＣクラスＩ上での交差提示は、例えば、Ａｌｌｏａｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１６）、２７２（１）に記載されている：９７－１０８に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。交差提示が可能なＡＰＣとしては、例えば樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、Ｂ細胞及び洞様内皮細胞が挙げられる。

【0127】

本明細書で説明するように、いくつかの実施形態において、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を刺激するためのＡＰＣは、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を構成する細胞集団（例えば、ＰＢＭＣ）内に構成され、そこからウイルス抗原に特異的な細胞集団を拡大する。このような実施形態において、ＡＰＣは、例えば樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、又はウイルス抗原に特異的な免疫細胞に抗原を提示することができる細胞集団内の他の細胞型であってもよい。

【0128】

いくつかの実施形態において、本方法は、ウイルス抗原（単数又は複数）／ペプチド（単数又は複数）を発現／含有するように改変されたＡＰＣを用いる。いくつかの実施形態において、ＡＰＣは、ペプチドと接触され、内在化された結果として、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示することができる。いくつかの実施形態において、ＡＰＣは、ペプチド（単数又は複数）と「パルス化」されている可能性があり、これは一般に、ＡＰＣがペプチド（単数又は複数）を内在化するのに十分な期間、ペプチド（単数又は複数）の存在下でＡＰＣをｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することを含む。

【0129】

いくつかの実施形態では、ＡＰＣは、細胞内で抗原をコードする核酸が発現した結果として、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示することができる。ＡＰＣは、ウイルスに感染した結果（例えば、ＥＢＶ感染Ｂ細胞、例えばＬＣＬの場合）、ウイルス抗原をコードする核酸を含んでいてもよい。ＡＰＣは、例えばトランスフェクション、導入、エレクトロポレーションなどを介して、抗原をコードする核酸が細胞内に導入された結果として、ウイルス抗原をコードする核酸を含んでいてもよい。ウイルス抗原をコードする核酸は、プラスミド／ベクターで提供することができる。

【0130】

いくつかの実施形態において、ＡＰＣは、活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）、樹状細胞、Ｂ細胞（例えば、ＬＣＬ、ＨＬＡ陰性ＬＣＬを含む）、及びＮｅａｌら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ（２０１７）２（１）：６８～７９及びＴｕｒｔｌｅ ａｎｄ Ｒｉｄｄｅｌｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．（２０１０）１６（４）：３７４～３８１に記載されているような人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）から選択される。

【0131】

いくつかの実施形態では、ＡＰＣは、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を含む免疫細胞集団の生成／増殖のために共培養される細胞集団に関して自己由来である。すなわち、いくつかの実施形態において、ＡＰＣは、共培養される細胞集団が得られた被験体と同じ被験体由来である（又は、被験体から得られた細胞由来である）。

【0132】

ＡＰＣとしてのポリクローナル活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）の使用及びＡＴＣの調製方法は、例えば、Ｎｇｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１４）３７（４）：１９３－２０３に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。手短に言えば、ＡＴＣは、ＩＬ－２の存在下、アゴニスト抗ＣＤ３抗体及びアゴニスト抗ＣＤ２８抗体でＰＢＭＣを刺激することによって、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞を非特異的に活性化することによって生成することができる。

【0133】

樹状細胞は、当技術分野で周知の方法、例えば、Ｎｇｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１４）３７（４）：１９３－２０３．樹状細胞は、ＰＢＭＣからのＣＤ１４選択によって得られ得る単球から調製され得る。単球は、例えばＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦを含む未熟樹状細胞への分化を引き起こす細胞培養培地中で培養することができる。未熟樹状細胞は、ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＴＮＦα、ＰＧＥ２、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－４の存在下で培養することにより成熟させることができる。

【0134】

ＬＣＬは、例えば、Ｈｕｉ－Ｙｕｅｎら，Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（２０１１）５７：３３２１、及びＨｕｓｓａｉｎ ａｎｄ Ｍｕｌｈｅｒｋａｒ，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄ（２０１２）１（２）：７５－８７は、いずれも参照によりその全体が本明細書に援用される。簡単に説明すると、ＬＣＬは、シクロスポリンＡの存在下で、ＥＢＶを産生する細胞、例えばＢ９５－８細胞の濃縮細胞培養上清とＰＢＭＣをインキュベートすることによって産生することができる。

【0135】

人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）には、コスティミュレイトリー分子ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、４－１ＢＢＬを発現するように操作されたＫ５６２ｃｓ細胞などが含まれる（Ｓｕｈｏｓｋｉら，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．（２００７）１５（５）：９８１－８）．

【0136】

いくつかの実施形態において、刺激ステップは、ＰＢＭＣをウイルス抗原に対応するペプチドと接触させることを含む。いくつかの実施形態において、再刺激ステップは、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣと接触させることを含む。いくつかの実施形態において、再刺激ステップは、ウイルス抗原（単数又は複数）に特異的な免疫細胞を、ウイルス抗原（単数又は複数）に対応するペプチド（単数又は複数）を提示するＡＴＣと接触させることを含む。

【0137】

本開示の種々の態様及び実施形態に従って、ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を産生、生成及び／又は拡大するための方法は、ＭＨＣクラスＩ及び／又はＭＨＣクラスＩＩの遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を欠くリンパ芽球系細胞株（ＬＣＬ）の細胞を用いる刺激及び／又は再刺激を含む。そのような細胞は、本明細書において、「ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）陰性リンパ芽球様細胞」、「ＨＬＡ陰性ＬＣＬ」、「ユニバーサルＬＣＬ」又は「ＵＬＣＬ」と呼ばれることがあり、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵＳ２０１８／０２５０３７９Ａ１に記載されている。

【0138】

ＬＣＬとその調製については本明細書で述べた。ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＭＨＣクラスＩポリペプチド及びＭＨＣクラスＩＩポリペプチドの表面発現を欠くことがある。ＭＨＣクラスＩポリペプチド」とは、ＭＨＣクラスＩ分子の構成ポリペプチド（すなわち、ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチドとＢ２Ｍポリペプチドとのポリペプチド複合体）を指す。ＭＨＣクラスＩＩポリペプチド」とは、ＭＨＣクラスＩＩ分子の構成ポリペプチド（すなわち、ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチドとＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチドとのポリペプチド複合体）を指す。表面発現とは、細胞表面（すなわち、細胞膜内又は細胞膜）で検出可能な関連ポリペプチド／ポリペプチド複合体の発現をいう。表面発現は、例えば、ポリペプチド／ポリペプチド複合体が細胞表面で発現しているときに細胞外にあるポリペプチド／ポリペプチド複合体の領域に特異的な抗原結合分子を用いて、インタクトな細胞上で分析することができる。

【0139】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、例えば遺伝子及び／又はタンパク質の発現を検出するための適切な方法によって決定されるように、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩの遺伝子／タンパク質の発現を実質的に示さない。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＭＨＣクラスＩ及びＭＨＣクラスＩＩの表面発現を実質的に示さないが、例えば、ＭＨＣクラスＩに結合可能な抗体及びＭＨＣクラスＩＩに結合可能な抗体を用いたフローサイトメトリーによる分析によって決定される。このようなアッセイでは、関連抗体によるＨＬＡ陰性ＬＣＬの染色レベルは、同じアイソタイプ（ｉｓｏｔｙｐｅ）の適切な陰性対照抗体による細胞の染色レベルより有意に大きくない場合がある。

【0140】

ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＭＨＣクラスＩ分子及びＭＨＣクラスＩ分子（例えば、Ｂ２Ｍポリペプチド、ＭＨＣクラスＩα鎖ポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ又はＨＬＡ－Ｃ）、ＭＨＣクラスＩＩα鎖ポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ２又はＨＬＡ－ＤＲＡ）及び／又はＭＨＣクラスＩＩβ鎖ポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、ＨＬＡ－ＤＱＢ２、ＨＬＡ－ＤＲＢ１、ＨＬＡ－ＤＲＢ３、ＨＬＡ－ＤＲＢ４又はＨＬＡ－ＤＲＢ５））の１つ以上のポリペプチドの遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を低減／防止するための改変（例えば、核酸に対する、例えば、１つ以上のヌクレオチドの挿入、置換又は欠失による）によって得られたものであってもよい。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、非修飾ＬＣＬによる遺伝子及び／又はタンパク質発現と比較して、ＭＨＣクラスＩポリペプチド（例えば、Ｂ２Ｍ）の遺伝子及び／又はタンパク質発現を低減／防止する修飾、ならびに１つ以上のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＰ）の遺伝子及び／又はタンパク質発現を低減／防止する修飾を含む。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ２、及びＨＬＡ－ＤＰの遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を減少／防止する改変を含む。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ２、及びＨＬＡ－ＤＰをコードする遺伝子を、例えば配列特異的ヌクレアーゼ（ＳＳＮ）を用いて標的化ノックアウトすることによって得られ得る。ＳＳＮを用いた遺伝子編集については、Ｅｉｄ ａｎｄ Ｍａｈｆｏｕｚ，Ｅｘｐ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０１６ Ｏｃｔｏｂｅｒ；４８（１０）：ｅ２６５に総説されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、ＭＨＣクラスＩポリペプチド（例えば、Ｂ２Ｍ）の遺伝子及び／又はタンパク質発現を低減／防止するための改変、及び／又は１つ以上のＭＨＣクラスＩＩポリペプチド（例えば、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－ＤＱ、及びＨＬＡ－ＤＰ）の遺伝子及び／又はタンパク質発現を低減／防止するための改変は、関連するポリペプチド（複数可）をコードする核酸を標的とするｃｒＲＮＡを含むＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ－９システムを使用して達成される。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、Ｂ２Ｍ、ＨＬＡ－ＤＲＡ、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ２、及びＨＬＡ－ＤＰをコードする遺伝子を順次ノックアウトすることによって得られる。

【0141】

いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬはさらに、ＥＢＶ複製／感染に必要な１つ以上のポリペプチドをコードする核酸に対する修飾を含んでなる。ＥＢＶ複製／感染を減少／予防するための修飾を含むＬＣＬは、本明細書においてＥＢＶ複製欠損であると記載され得る。従って、いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬはＥＢＶ複製欠損である。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＢＦＬＦ１、ＢＦＬＦ２、ＢＦＲＦ１、ＢＦＲＦ２及びＢＦＲＦ３のうちの１つ以上をコードする核酸に対する改変（例えば、１つ以上のヌクレオチドの挿入、置換又は欠失による）を含む。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＢＦＬＦ１をコードする核酸及び／又はＢＦＲＦ１をコードする核酸に対する改変を含む。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ウイルス複製を抑制する薬剤（例えば、アシクロビル）の存在下で培養することを含む方法によって得られる。いくつかの実施形態において、ＥＢＶ複製欠損ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、先行技術に記載されるＬＣＬとのＰＢＭＣの共培養後のＰＢＭＣの集団内からのＢ細胞の増殖レベルと比較して、ＰＢＭＣとの共培養後のＰＢＭＣの集団内からのＢ細胞の増殖をより少なく刺激する。いくつかの実施形態において、ＥＢＶ複製欠損ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＰＢＭＣとの共培養においてＢ細胞の伸長を促進する能力を欠く。ＥＢＶ複製に必要な１つ又は複数のポリペプチドの遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を低減／防止するように改変されたＨＬＡ陰性ＬＣＬは、ＥＢＶ複製に必要な１つ又は複数のポリペプチドの遺伝子発現及び／又はタンパク質発現を低減／防止するように改変されていないＬＣＬと比較して、改善された安全性プロファイルを有し得る。

【0142】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、本開示の方法に従う刺激及び／又は再刺激において採用される。

【0143】

ある実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは培養で増殖させる細胞に抗原刺激を与える細胞として採用される。

【0144】

本発明者らは、ＨＬＡ陰性ＬＣＬを用いてＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴに対する抗原刺激とコスト刺激の両方を行う、合理的な再刺激ステップを有する方法を開発した。

【0145】

ＨＬＡ陰性ＬＣＬはＥＢＶ抗原を発現するため、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞にＥＢＶ抗原刺激を与えるのに有用である。ＨＬＡ陰性ＬＣＬはＣＤ３０も発現しているので、ＣＤ３０特異的ＣＡＲ（例えばＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ）を発現する免疫細胞に抗原刺激を与えるのに有用である。ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、他のコスティミュレイトリー分子（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）も発現しており、これを介してｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｅｘ ｖｉｖｏ培養で増殖させる細胞にコスティミュレーション（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）を与えることができる。

【0146】

本開示の態様及び実施形態において、方法は、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、免疫細胞（例えば、ウイルスに特異的な免疫細胞、又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）もしくはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞）を培養することを含む。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、抗原刺激（例えば、ＥＢＶ及び／又はＣＤ３０刺激）を提供する細胞として採用される。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、コスト刺激を提供する細胞として採用される。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは抗原刺激及びコスティミュレーションを提供する細胞として採用される。

【0147】

いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬは、刺激／再刺激におけるそれらの使用の前に、それらの増殖を防止するために照射（例えば、セシウム源を用いて）又は物質（例えば、マイトマイシンＣ）で処理される。本発明の方法によるＬＣＬの照射は、典型的には５０～２００グレイ（ｇｒａｙ）、例えば約１００グレイである。

【0148】

特定の実施形態において、本開示の方法は、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下でウイルスに特異的な免疫細胞（例えば、ＥＢＶ特異的免疫細胞、例えば、ＥＢＶＳＴ）を培養することを含む。特定の実施形態において、本開示の方法は、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下でウイルスに特異的な免疫細胞を培養することを含む再刺激工程を含む。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬ（例えば、照射されたＨＬＡ陰性ＬＣＬ）は、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が１：１～１：１０の間、例えば、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、１：５、１：５．５、１：６、１：６．５、１：７、１：７．５又は１：８のうちの１つである。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬ（例えば、照射されたＨＬＡ陰性ＬＣＬ）は、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が１：２～１：５の間、例えば、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５又は１：５のいずれかで、ウイルスに特異的な免疫細胞との共培養において採用され得る。いくつかの実施形態では、ウイルスに特異的な免疫細胞とＨＬＡ陰性ＬＣＬの比率は～１：３である。

【0149】

特定の実施形態において、本開示の方法は、HLA陰性LCLの存在下で、本明細書に記載のCARを含む／発現する（又はそのようなCARをコードする核酸を含む／発現する）ウイルスに特異的な免疫細胞（例えば、EBV特異的免疫細胞、例えばEBVST）を培養することを含む。特定の実施形態において、本開示の方法は、HLA陰性LCLの存在下で、本明細書に記載のCARを含む／発現する（又はそのようなCARをコードする核酸を含む／発現する）ウイルスに特異的な免疫細胞を培養することを含む、再刺激工程を含む。いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬ（例えば、照射されたＨＬＡ陰性ＬＣＬ）は、本明細書に記載のＣＡＲを構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞）とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの共培養において、本明細書に記載のＣＡＲを構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞）とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が１：１～１：１０の間、例えば、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、１：５、１：５．５、１：６、１：６．５、１：７、１：７．５又は１：８のいずれかである。いくつかの実施形態において、ＨＬＡ陰性ＬＣＬ（例えば、照射されたＨＬＡ陰性ＬＣＬ）は、本明細書に記載のＣＡＲを構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞）とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの共培養において、本明細書に記載のＣＡＲを構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を構成／発現するウイルスに特異的な免疫細胞）とＨＬＡ陰性ＬＣＬとの比が１：２～１：５の間、例えば、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５又は１：５のいずれかである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを構成／発現する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を構成／発現する）ウイルスに特異的な免疫細胞のＨＬＡ陰性ＬＣＬに対する比は～１：３である。

【0150】

いくつかの実施形態では、ＨＬＡ陰性ＬＣＬを用いる本開示による刺激又は再刺激工程は、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する添加外来性ペプチドも用いない。ここで、「添加された外来性」ペプチドとは、培養物中の細胞によって産生された／細胞から発現されたペプチドではなく、培養物に意図的に添加されたペプチド（例えば、組換えタンパク質技術を用いて産生された）であってもよい。

【0151】

いくつかの実施形態において、ウイルスに特異的な免疫細胞及びＨＬＡ陰性ＬＣＬ（例えば、照射されたＨＬＡ陰性ＬＣＬ）を含んでなる本開示による刺激培養又は再刺激培養は、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドが添加されていない状態で行われる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を含む／発現する）ウイルスに特異的な免疫細胞及びＨＬＡ陰性ＬＣＬ（例えば、照射されたＨＬＡ陰性ＬＣＬ）を含む本開示による刺激培養又は再刺激培養は、ウイルスの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する外因性ペプチドの添加の非存在下で実施される。

【0152】

いくつかの実施形態において、本方法は、刺激及び／又は再刺激におけるコスティミュレーションを増強するための薬剤をさらに用いる。このような薬剤としては、例えばＬＣＬ又はＫ５６２ｃｓ細胞などのコスティミュレイトリー分子（例えばＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３及び／又は４－１ＢＢＬ）を発現する細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、コスティミュレイトリー分子を発現する細胞はＨＬＡ陰性ＬＣＬである。

【0153】

コスティミュレーションを増強するための薬剤の他の例としては、例えば、Ｔ細胞によって発現されるコスティミュレイトリーレセプター（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＩＣＯＳなど）に特異的なアゴニスト抗体、及びＴ細胞によって発現されるコスティミュレイトリーレセプター（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳＬなど）を活性化することができるコスティミュレイトリー分子などが挙げられる。このような薬剤は、例えばビーズに固定化して提供することができる。

【0154】

いくつかの実施形態において、再刺激ステップは、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＴＣと接触させることを含む。

【0155】

免疫細胞の集団とウイルス抗原に対応するペプチド、又はウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣとの接触は、Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進するために、１つ以上のサイトカインの存在下で実施することができる。いくつかの実施形態において、刺激は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２１のうちの１つ以上の存在下で行われる。サイトカインは培養に外因的に添加され、培養中の細胞によって産生されるサイトカインに追加されることが理解されよう。いくつかの実施形態において、添加されるサイトカインは組換え産生サイトカインである。

【0156】

従って、いくつかの実施形態において、方法は、ウイルス抗原（単数又は複数）に対応するペプチド（単数又は複数）と接触させたＰＢＭＣを、又はウイルス抗原（単数又は複数）に対応するペプチド（単数又は複数）を提示するＡＰＣの存在下で、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２１のうちの１つ又は複数の存在下で培養することを含む。

【0157】

いくつかの実施形態において、培養は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２１の存在下で行われる。いくつかの実施形態において、培養は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６及び／又はＩＬ－１２の存在下にある。いくつかの実施形態において、培養はＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５の存在下にある。

【0158】

いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ、例えば、１～１００ｎｇ／ｍｌである。２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－７の最終濃度は約１０ｎｇ／ｍｌである。

【0159】

いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ、例えば、１～１００ｎｇ／ｍｌである。２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は約１０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は、１０～１０００ｎｇ／ｍｌ、例えば、１０～１０００ｎｇ／ｍｌである。２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ、又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのいずれか。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は約１００ｎｇ／ｍｌである。

【0160】

いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－６の最終濃度は、１０～１０００ｎｇ／ｍｌ、例えば、１０～１０００ｎｇ／ｍｌである。２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ、又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのいずれか。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－６の最終濃度は約１００ｎｇ／ｍｌである。

【0161】

いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１２の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ、例えば、１～１００ｎｇ／ｍｌである。２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１２の最終濃度は１０ｎｇ／ｍｌである。

【0162】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－７の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば１０ｎｇ／ｍｌ）であり、そして、ＩＬ－１５の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌの１つ、例えば約１０ｎｇ／ｍｌ）である。

【0163】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－７の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば１０ｎｇ／ｍｌ）であり、そして、ＩＬ－１５の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌの１つ、例えば約１００ｎｇ／ｍｌ）である。

【0164】

いくつかの実施形態では、ＩＬ－７の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば１０ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－６の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌの１つ、例えば約１００ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－１２は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌの１つ、例えば１０ｎｇ／ｍｌ）であり、そして、ＩＬ－１５の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）である。

【0165】

いくつかの実施形態では、刺激培養物中のＩＬ－７の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、刺激培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ、又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）である。

【0166】

いくつかの実施形態では、刺激培養物中のＩＬ－７の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、刺激培養物中のＩＬ－６の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ、又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）であり、刺激培養物中のＩＬ１２の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、そして、刺激培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）である。

【0167】

いくつかの実施形態では、再刺激培養物中のＩＬ－７の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ、又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、再刺激培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ、又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのいずれか、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）である。

【0168】

本開示による刺激及び再刺激は、典型的には、ＡＰＣがＴ細胞を刺激し、Ｔ細胞が細胞分裂を起こすのに十分な期間、Ｔ細胞とＡＰＣを共培養することを含む。

【0169】

いくつかの実施形態では、本方法は、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させたＰＢＭＣを、又はウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣの存在下で、少なくとも１時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、４日間、５日間、６日間、又は少なくとも７日間培養することを含む。いくつかの実施形態では、培養は２４時間～２０日間の期間であり、例えば、４８時間～１４日、３日～１２日、４日～１１日、６日～１０日、又は、７日～９日のいずれかである。

【0170】

いくつかの実施形態では、方法は、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させられた、本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞集団を、又はウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣの存在下で、少なくとも１時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、４日間、５日間、６日間、又は少なくとも７日間培養することを含む。いくつかの実施形態では、培養は、２４時間から２０日間、例えば、４８時間～１４日、３日～１２日、４日～１１日、６日～１０日、又は７日～９日のいずれかである。

【0171】

刺激及び再刺激は、培養中の細胞を、それらが培養されていた培地から分離するか、又は培養物を希釈すること（例えば、細胞培養培地の添加により）によって終了することができる。いくつかの実施形態では、方法は、刺激又は再刺激培養の終わりに細胞を収集する工程を含む。いくつかの実施形態では、方法は、再刺激工程のための刺激又は再刺激培養の終わりに細胞を収集する工程を含む。

【0172】

所定の刺激又は再刺激ステップの培養期間の終わりに、細胞を収集し、細胞培養上清から分離することができる。細胞は遠心分離によって収集することができ、細胞培養上清を細胞ペレットから分離することができる。次いで、例えば再刺激のために、細胞ペレットを細胞培養培地、例えば培地に再懸濁してもよい。いくつかの実施形態では、細胞は収集後に洗浄工程を受けてもよい。洗浄工程は、細胞ペレットをリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）などの等張緩衝液に再懸濁し、遠心分離により細胞を収集し、上清を廃棄することを含んでもよい。

【0173】

ウイルス抗原に特異的な免疫細胞の集団を作製及び／又は拡大する方法は、通常、１回以上の刺激工程を含む。実施され得る刺激工程の数に上限はない。いくつかの実施形態において、方法は、２、３、４又は５以上の刺激工程を含む。いくつかの実施形態において、方法は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５の刺激ステップのうちの１つを含む。方法における刺激ステップは互いに異なっていてもよい。

【0174】

いくつかの実施形態において、方法は、細胞におけるＩＬ－７媒介シグナル伝達を増加させるために、ウイルス抗原（複数可）に特異的な免疫細胞を改変することをさらに含む。ＩＬ－７媒介シグナル伝達は、腫瘍特異的Ｔ細胞の生存及び抗腫瘍活性を増加させることが示されている－例えば、Ｓｈｕｍら、Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１７）７（１１）：１２３８－１２４７、及びＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１を参照されたい。

【0175】

いくつかの実施形態において、方法は、ＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載される実施形態による核酸を、ウイルス抗原（複数可）に特異的なＰＢＭＣ又は免疫細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法は、ウイルス抗原（単数又は複数）に特異的なＰＢＭＣ又は免疫細胞に核酸を導入することを含み、核酸は、細胞内でＳＴＡＴ５媒介シグナルを増加させるためのポリペプチドをコードする。

【0176】

いくつかの実施形態において、核酸は、（ｉ）ポリペプチドのホモ二量化を促進するドメイン、及び（ｉｉ）ＩＬ－７Ｒαの細胞内ドメインを含むポリペプチドをコードする。

【0177】

いくつかの実施形態において、ポリペプチドのホモ二量化を促進するドメインは、ポリペプチドのモノマー間のジスルフィド結合の形成を提供するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのホモ二量化を促進するドメインは、ＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１～２４のうちの１つ（例えば、ＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１の段落［００７４］～［００７６］を参照）に従うアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0178】

ＩＬ－７Ｒαの細胞内ドメインは、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１６８７１－１、ｖ１の２６５位から４５９位（ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ２６５ ｔｏ ４５９ ｏｆ ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１６８７１－１，ｖ１）に対応するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される．

【0179】

核酸は、トランスダクション、トランスフェクション、エレクトロポレーションなど、当技術分野で周知の方法によって細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、核酸は、核酸を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター）を用いた導入により細胞に導入される。

【0180】

いくつかの実施形態において、本方法は、ＥＢＶ抗原に特異的なＰＢＭＣ又は免疫細胞を、（ｉ）ポリペプチドのホモ二量化を促進するドメイン、及び（ｉｉ）ＩＬ－７Ｒαの細胞内ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸を含むウイルスベクターでトランスフェクトすることを含む。

【0181】

本明細書に記載される方法の態様及び実施形態は、本開示によるＣＡＲを発現／構成するように、本明細書に記載される免疫細胞（例えば、本明細書に記載されるウイルス特異的免疫細胞）を改変することを含む。

【0182】

本明細書に記載の方法の態様及び実施形態は、本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現／含有するように、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、本明細書に記載のウイルス特異的免疫細胞）を改変することを含む。

【0183】

このような方法は通常、ＣＡＲをコードする核酸を免疫細胞に導入することを含む。

【0184】

免疫細胞（例えば、ウイルス特異的免疫細胞）は、当業者に周知の方法に従って、本明細書に記載のＣＡＲ又はＣＡＲをコードする核酸を含む／発現するように改変することができる。この方法は、一般に、移入された核酸（ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）の永続的（安定的）又は一過性の発現のための核酸移入を含む。

【0185】

本開示に従って細胞を改変するために、任意の適切な遺伝子工学プラットフォームを使用することができる。細胞を改変するための適切な方法には、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭａｕｓら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１４）３２：１８９－２２５に記載されるような、ガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンベースの遺伝子導入及びＲＮＡトランスフェクションなどの遺伝子工学プラットフォームの使用が含まれる。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ又はＣＡＲをコードする核酸を含むように細胞を改変することは、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで細胞を形質導入することを含む。

【0186】

いくつかの実施形態において、本開示の方法は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするレトロウイルスを用いる。

【0187】

方法はまた、例えば、Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｒｉｖｉｅｒｅ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓ．（２０１６）３：１６０１５に記載されているものも含まれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0188】

方法は、一般に、そのような核酸（単数又は複数）を含むベクター／複数のベクターをコードする核酸／複数の核酸を細胞に導入することを含む。いくつかの実施形態において、方法は細胞による核酸（単数又は複数）又はベクター（単数又は複数）の発現に適した条件下で細胞を培養することをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法はインビトロで実施される。核酸（単数又は複数）／ベクター（単数又は複数）を細胞に導入するための好適な方法には、導入、トランスフェクション及びエレクトロポレーション（ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）が含まれる。

【0189】

いくつかの実施形態において、核酸（単数又は複数）／ベクター（単数又は複数）を細胞に導入することは、トランスダクション、例えばレトロウイルストランスダクションを含む。したがって、いくつかの実施形態において、核酸（単数又は複数）は、ウイルスベクター（単数又は複数）に含まれるか、又はベクター（単数又は複数）は、ウイルスベクター（単数又は複数）である。ウイルスベクターによる免疫細胞の形質導入は、例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓ ａｎｄ Ａｌｂｅｒｏｌａ－Ｉｌａ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（２０１６）１３２３：９９－１０８に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0190】

いくつかの実施形態において、方法は、ＣＡＲをコードする核酸を導入することが所望される細胞を、核酸を含むウイルスベクターを含む細胞培養培地の存在下で遠心分離すること（当技術分野において「スピンフェクション（ｓｐｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）」と呼ばれる）を含む。

【0191】

いくつかの実施形態において、方法は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫｏｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ（２０１３）２、ｅ１１４に記載されるように、エレクトロポレーションにより本開示による核酸又はベクターを導入することを含む。

【0192】

本開示に従ってＣＡＲをコードする核酸を細胞に導入するための方法（例えば、ＣＡＲ又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスに特異的な免疫細胞を産生／生成する文脈において）は、細胞への核酸の導入を促進するための薬剤を用いることができる。

【0193】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードする核酸は、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスによる形質導入によって細胞に導入される。いくつかの実施形態において、ＣＡＲをコードするウイルス（例えば、レトロウイルス）による形質導入を含む本開示の方法は、形質導入の効率を高めるための薬剤を用いる。

【0194】

ウイルスベクターによる細胞の形質導入効率を高めるための薬剤は当該技術分野で知られており、例えば、ビリオンと細胞表面に発現するシアル酸残基との間の電荷反発を中和することにより形質導入を改善するカチオン性ポリマーである臭化ヘキサジメトリン（ポリブレン）が挙げられる。トランスダクションを向上させるために一般的に使用される他の薬剤としては、ＳｕｒｅＥＮＴＲＹ（Ｑｉａｇｅｎ）、ＶｉｒａＤｕｃｔｉｎ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）、ＬｅｎｔｉＢＯＯＳＴ（Ｓｉｒｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）、Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｃａｔ Ｎｏ．１７０－０７６－１６５）などがある。

【0195】

好ましい実施形態において、本開示の方法は、ＣＡＲをコードする核酸を細胞に導入する方法においてベクトフシン－１を使用する。ベクトフシン－１及びウイルスのトランスダクションを増強するためのその使用は、例えば、Ｆｅｎａｒｄら、Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ（２０１３）２（５）：ｅ９０に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ベクトフシン－１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４に示されるアミノ酸配列を有する、短い両親媒性のヒスタジンに富むカチオン性ペプチドである。ベクトフシン－１は、ウイルスと細胞膜の間の接着と融合を促進することにより、ウイルスの侵入を促進すると考えられている。ベクトフシン－１の変異体は当技術分野で知られており、例えば、Ｌｏｉｎｔｉｅｒら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ：Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ（２０２０）１８６２（８）：１８３２１２（これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）－例えばその表１を参照されたい－に記載されている。

【0196】

本明細書で使用される場合、ベクトフシン－１の「変異体」は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４に対して７０％以上（例えば、７５％、８０％、９０％、９５％以上）のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成され得る。Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１の変異体は、トランスダクションの適切なアッセイにおいて、ウイルスベクターによる細胞のトランスダクションを増加させる能力（すなわち、ペプチドを欠く対照条件と比較して）によって特徴付けられ得る。

【0197】

本発明者らは、導入においてベクトフシン－１を使用することにより、導入プロトコルから時間のかかる手間のかかる遠心分離ステップ（例えば、実施例２を参照のこと）を省くことができることを有利に見出した。Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を用いる形質導入はまた、遠心分離ステップを用いる形質導入によって達成されるのと同じレベルの形質導入を達成するために、より少ないレトロウイルスの使用を必要とすることが見出された。ベクトフシン－１はまた、遠心分離される組織培養プレートのウェルへの移植を必要とするのではなく、組織培養フラスコ中で高効率で細胞を形質導入する能力を提供し、それによって細胞の取り扱い量を減少させ、形質導入プロセスを著しく単純化する。

【0198】

いくつかの実施形態において、本開示に従って細胞内にＣＡＲをコードする核酸を導入することは、ベクトフシン－１又はその変異体を用いる。いくつかの実施形態において、方法は、ベクトフシン－１又はその変異体を、本開示に従ってＣＡＲをコードするウイルスベクター（例えば、レトロウイルス）と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、方法は、ベクトフシン－１又はその変異体を、本開示によるＣＡＲをコードするウイルスベクターと混合すること、及びベクトフシン－１／変異体：ウイルスベクター複合体が形成されるのに十分な時間、混合物をインキュベートすることを含む。いくつかの実施形態において、方法は、形質導入されるべき細胞（例えば、免疫細胞、例えば、ウイルスに特異的な免疫細胞）を、（ａ）本開示によるＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）ベクトフシン－１又はその変異体を含む組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、方法は、形質導入される細胞（例えば免疫細胞、例えばウイルスに特異的な免疫細胞）をＶｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１／変異体：ウイルスベクター複合体と接触させ、ウイルスベクターが細胞に入るのに十分な時間、混合物をインキュベートすることを含む。

【0199】

いくつかの実施形態において、方法はさらに、例えば他の細胞（例えば、ウイルスに特異的でない細胞、及び／又は、ＣＡＲを発現しない細胞）から、ＣＡＲ発現免疫細胞及び／又はウイルス特異的免疫細胞を精製／分離することを含む。不均一な細胞集団から免疫細胞を精製／分離する方法は当該技術分野において周知であり、例えば、免疫細胞のマーカーの発現に基づいて細胞集団を選別するためのＦＡＣＳ－又はＭＡＣＳ－ベースの方法を採用することができる。いくつかの実施形態において、この方法は、特定のタイプの細胞、例えばウイルス特異的Ｔ細胞（例えばウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、ウイルス特異的ＣＴＬ）、又はＣＡＲ発現ウイルス特異的Ｔ細胞（例えばＣＡＲ発現ウイルス特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＡＲ発現ウイルス特異的ＣＴＬ）を精製／分離するためのものである。

【0200】

本開示はまた、本明細書に記載される方法によって得られるか又は得られる細胞、及び／又は、その集団を提供する。

【0201】

本開示に従って免疫細胞の集団を産生、生成及び／又は拡大する特定の例示的方法
本開示は、以下のように、免疫細胞の集団を産生、生成及び／又は拡大する方法を提供する：

【0202】

（Ａ）（ｉ）ＨＰＬを含む細胞培養培地中で、ＥＢＶの１つ以上の抗原の全部又は一部に対応する１つ以上のペプチドの存在下でＰＢＭＣを培養すること；
（ｉｉ）ステップ（ｉ）で得られた細胞を、Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を用いる方法により、ＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードするウイルスベクターで形質導入すること；
（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）で得られた細胞を、ＨＰＬを含む細胞培養培地中で、ＨＬＡ陰性ＬＣＬの存在下で培養すること。

【0203】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ＰＢＭＣは、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣである。

【0204】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ＨＰＬを含む細胞培養培地は、１～２０％ｖ／ｖのＨＰＬを含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ＨＰＬを含む細胞培養培地は、～５％ｖ／ｖのＨＰＬを含む。

【0205】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、１つ以上のＥＢＶ抗原は、以下から構成される群より選択されるＥＢＶ抗原を含む：ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂ。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂのためのペプミックスの存在下でＰＢＭＣを培養することを含む。

【0206】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）は、ステップ（ｉ）で得られた細胞を、（ａ）ＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードするウイルスベクター、及び（ｂ）Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１を含む組成物と接触させることを含む。

【0207】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ＣＤ３０特異的ＣＡＲは、以下を含む：（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）シグナル伝達ドメインであって、シグナル伝達ドメインが、（ａ）ＣＤ２８の細胞内ドメイン由来のアミノ酸配列、及び（ｂ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列。Ａ）のいくつかの実施形態において、ＣＤ３０特異的ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５又は３６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

【0208】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）は、ステップ（ｉｉ）で得られた細胞を、ＨＬＡ陰性ＬＣＬに対するステップ（ｉｉ）細胞の比が１：１～１：１０の間で、ＨＬＡ陰性ＬＣＬとともに培養することを含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）は、ＨＬＡ陰性ＬＣＬに対するステップ（ｉｉ）細胞の比が１：２～１：５の間（例えば、～１：３）で、ステップ（ｉｉ）で得られた細胞をＨＬＡ陰性ＬＣＬとともに培養することを含む。

【0209】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７及び５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７及び～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。

【0210】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７及び５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７及び～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。

【0211】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７及び５～１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７及び～１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む。

【0212】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、３３～５５％の高度ＲＰＭＩ及び３３～５５％のクリック培地を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、４７．５％のＡｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ及び４７．５％のクリック培地を含む。

【0213】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、３３～５５％の高度ＲＰＭＩ及び３３～５５％のクリック培地を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、４７．５％のＡｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ及び４７．５％のクリック培地を含む。

【0214】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、３３～５５％のＡｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ及び３３～５５％のクリック培地を含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、４７．５％のＡｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ及び４７．５％のクリック培地を含む。

【0215】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、１～５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の細胞培養培地は、～２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0216】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、１～５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の細胞培養培地は、～２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0217】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、１～５ｍＭのＬ－グルタミンを含む。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の細胞培養培地は、～２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。

【0218】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の培養は３～１０日間実施される。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の培養は４～８日間行われる。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉ）の培養は、～５から６日間実施される。

【0219】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の培養は、１～５日間実施される。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の培養は、２～４日間実施される。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉ）の培養は、～３から４日間実施される。

【0220】

（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の培養は６～１４日間実施される。Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の培養は、７～１２日間実施される。（Ａ）のいくつかの実施形態において、ステップ（ｉｉｉ）の培養は、～８から１０日間実施される。

【0221】

ウイルス特異的免疫細胞
本開示は、ウイルス特異的免疫細胞、特にエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）特異的免疫細胞に関する。本明細書において細胞が単数形（すなわち「ａ／ｔｈｅ細胞」）で言及される場合、そのような細胞の複数／集団もまた企図されることが理解されよう。

【0222】

本明細書で用いる「ウイルス特異的免疫細胞」とは、ウイルスに特異的な免疫細胞を指す。ウイルス特異的免疫細胞は、ウイルスの抗原のペプチド（例えば、ＭＨＣ分子によって提示された場合）を認識することができるレセプター（好ましくは、Ｔ細胞レセプター）を発現／含む。ウイルス特異的免疫細胞は、そのような抗原レセプターをコードする内在性核酸の発現の結果として、又はそのようなレセプターを発現するように操作された結果として、そのようなレセプターを発現／含むことができる。好ましくは、ウイルス特異的免疫細胞は、ウイルスの抗原ペプチドに特異的なＴＣＲを発現／含む。

【0223】

免疫細胞は、例えば好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、単球などの造血系由来の細胞である。リンパ球は、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球（ＩＬＣ）、又はそれらの前駆体であってもよい。免疫細胞は、例えばＣＤ３ポリペプチド（例えばＣＤ３γ ＣＤ３ε ＣＤ３ζ又はＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲα又はＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４又はＣＤ８を発現していてもよい。いくつかの実施形態において、免疫細胞はＴ細胞、例えばＣＤ３＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はＴヘルパー細胞（ＴＨ細胞）である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。

【0224】

ウイルス特異的Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的であるウイルス抗原に応答して、又はウイルス／抗原を含む／発現する細胞に応答して、Ｔ細胞の特定の機能的特性を示すことがある。いくつかの実施形態において、その特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞に関連する機能的特性である。

【0225】

いくつかの実施形態において、ウイルス特異的Ｔ細胞は、以下の特性の１つ以上を示すことができる：ウイルス／Ｔ細胞が特異的であるウイルス抗原を含む／発現している細胞に対する細胞傷害性；Ｔ細胞が特異的であるウイルス／ウイルス抗原での刺激に応答して、あるいはＴ細胞が特異的であるウイルス／ウイルス抗原を含む／発現している細胞への曝露に応答しての、増殖、ＩＦＮγ発現、ＣＤ１０７ａ発現、ＩＬ－２発現、ＴＮＦα発現、パーフォリン発現、グランザイム発現、グラニュライシン発現、及び／又はＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現。

【0226】

ウイルス特異的Ｔ細胞は、適切なＭＨＣ分子によって提示されたときに、Ｔ細胞が特異的であるウイルス抗原のペプチドを認識できるＴＣＲを発現する／含む。ウイルス特異的Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞である可能性がある。

【0227】

ウイルス特異的免疫細胞が特異的に反応するウイルスは、どのようなウイルスでもよい。例えば、ウイルスはｄｓＤＮＡウイルス（アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルスなど）、ｓｓＲＮＡウイルス（パルボウイルスなど）、ｄｓＲＮＡウイルス（レオウイルスなど）、（＋）ｓｓＲＮＡウイルス（ピコルナウイルス、トガウイルスなど）、（－）ｓｓＲＮＡウイルス（オルソミクソウイルス、ラブドウイルスなど）、ｓｓＲＮＡ－ＲＴウイルス（レトロウイルスなど）、又はｄｓＤＮＡ－ＲＴウイルス（ヘパドナウイルスなど）である。特に、本開示は、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科のウイルス、パピローマウイルス科、ポリオーマウイルス科、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科、パルボウイルス科、アストロウイルス科、カリシウイルス科、ピコルナウイルス科、コロナウイルス科、フラビウイルス科、トガウイルス科、ヘペウイルス科、レトロウイルス科、オルソミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、ラブドウイルス科、レオウイルス科を企図する。いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタイン・バーウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペス１型ウイルス、単純ヘルペス２型ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒトパピローマウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、天然痘、Ｂ型肝炎ウイルス、パルボウイルスＢ１９、ヒトアストロウイルス、ノーウォークウイルス、コクサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、結核ウイルス、風疹ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、ラッサウイルス、クリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハンタンウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピコルナウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、狂犬病ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、オービウイルス、コルチウイルス、及びバンナウイルスから選択される。

【0228】

いくつかの実施形態において、ウイルスは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性絨毛膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）から選択される。

【0229】

いくつかの実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、例えば、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、麻疹ウイルス、肝炎ウイルスから選択されるウイルスのペプチド／ポリペプチドに特異的であり得る。例えば、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性絨毛膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）から選択される。

【0230】

ウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は、本明細書ではウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）と呼ぶことがある。特定のウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は、関連するウイルスに特異的であると表現されることがある。例えば、ＥＢＶの抗原に特異的なＴ細胞は、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞、又は「ＥＢＶＳＴ」と呼ばれることがある。

【0231】

したがって、いくつかの実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）、アデノウイルス特異的Ｔ細胞（ＡｄＶＳＴ）、サイトメガロビウス特異的Ｔ細胞（ＣＭＶＳＴ）、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶＳＴ）、インフルエンザウイルス特異的Ｔ細胞、麻疹ウイルス特異的Ｔ細胞、Ｂ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＢＶＳＴ）、Ｃ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＣＶＳＴ）、ヒト免疫不全ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＣＶＳＴ）、麻疹ウイルス特異的Ｔ細胞、Ｂ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＢＶＳＴ）、Ｃ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＣＶＳＴ）、ヒト免疫不全ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＩＶＳＴ）、リンパ球性絨毛膜炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＬＣＭＶＳＴ）、又は単純ヘルペスウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＳＶＳＴ）である。

【0232】

いくつかの好ましい実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、ＥＢＶ抗原のペプチド／ポリペプチドに特異的である。好ましい実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）である。

【0233】

ＥＢＶウイルス学は、例えばＳｔａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｌｕｆｔｉｑ，Ｆ１０００Ｒｅｓ．（２０１７）６：３８６及びＯｄｕｍａｄｅら，Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ（２０１１）２４（１）：１９３－２０９に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0234】

ＥＢＶは、ウイルスタンパク質ＢＭＦＲ２とβ１インテグリンとの結合、ウイルスタンパク質ｇＨ／ｇＬとインテグリンａｖβ６及びａｖβ８との結合を介して上皮細胞に感染する。ＥＢＶは、ウイルス糖タンパク質ｇｐ３５０とＣＤ２１及び／又はＣＤ３５との相互作用、次いでウイルスｇｐ４２とＭＨＣクラスＩＩとの相互作用を介してＢ細胞に感染する。これらの相互作用は、ウイルスエンベロープと細胞膜の融合を引き起こし、ウイルスが細胞内に侵入することを可能にする。細胞内に入ると、ウイルスキャプシドは溶解し、ウイルスゲノムは核に輸送される。

【0235】

ＥＢＶには潜伏と溶解の２つの複製様式がある。潜伏複製はビリオンの産生を伴わず、Ｂ細胞や上皮細胞で起こる。ＥＢＶのゲノム円形ＤＮＡはエピソームとして細胞核に存在し、宿主細胞のＤＮＡポリメラーゼによってコピーされる。潜伏期には、ＥＢＶの遺伝子の一部のみが、潜伏プログラムとして知られる３つの異なるパターンのいずれかで発現し、ウイルスタンパク質とＲＮＡの異なるセットを産生する。潜伏期のサイクルは、例えばＡｍｏｎ ａｎｄ Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００４）１５（３）：１４９－５６に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0236】

潜伏期プログラムＩ～ＩＩＩのそれぞれにおいて、ＥＢＮＡ１タンパク質とノンコーディングＲＮＡ ＥＢＥＲが発現する。潜伏期プログラムＩＩ及びＩＩＩでは、さらにＥＢＮＡＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂタンパク質が発現し、潜伏期プログラムＩＩＩでは、さらにＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ及びＥＢＮＡ３Ｃが発現する。

【0237】

ＥＢＮＡ１は多機能であり、遺伝子制御、染色体外複製、ウイルスプロモーターの正負制御（（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）によるＥＢＶエピソームゲノムの維持に関与している（Ｄｕｅｌｌｍａｎら．（２００９）；９０（Ｐｔ ９）：２２５１－２２５９）。ＥＢＮＡ２は潜伏ウイルス転写の制御に関与し、ＥＢＶ感染細胞の不死化に寄与している（Ｋｅｍｐｋｅｓ ａｎｄ Ｌｉｎｇ，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）３９１：３５－５９）。ＥＢＮＡ－ＬＰは、ネイティブＢ細胞の形質転換に必要であり、ウイルス複製のために転写因子をリクルートする（Ｓｚｙｍｕｌａら、ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．（２０１８）；１４（２）：ｅ１００６８９０）．ＥＢＮＡ３Ａ、３Ｂ、３ＣはＲＢＰＪと相互作用して遺伝子発現に影響を与え、感染細胞の生存と増殖に寄与する（Ｗａｎｇら、Ｊ Ｖｉｒｏｌ．（２０１６）９０（６）：２９０６－２９１９）。ＬＭＰ１はＢ細胞の活性化に関与する遺伝子の発現を制御している（Ｃｈａｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．（２００３）１０（５）：４９０－５０４）。ＬＭＰ２ＡとＬＭＰ２Ｂは、活性化されたＢ細胞レセプターを模倣することにより、正常なＢ細胞のシグナル伝達を阻害する（Ｐｏｒｔｉｓ ａｎｄ Ｌｏｎｇｎｅｃｋｅｒ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００４）２３（５３）：８６１９－８６２８）。ＥＢＥＲは宿主細胞のタンパク質とリボ核タンパク質複合体を形成し、細胞の形質転換に関与することが提唱されている。

【0238】

Ｂ細胞の潜伏期は、潜伏期プログラムＩからＩＩＩのいずれかに従って進行し、通常はＩＩＩからＩＩ、Ｉへと進行する。静止状態のナイーブＢ細胞に感染すると、ＥＢＶは潜伏期プログラムＩＩＩに入る。潜伏期ＩＩＩ遺伝子の発現によりＢ細胞は活性化され、増殖芽球となる。その後ＥＢＶは通常、一部の遺伝子の発現を制限することにより潜伏期ＩＩに移行し、芽球からメモリーＢ細胞への分化を引き起こす。さらに遺伝子の発現が制限されると、ＥＢＶは潜伏期Ｉに入る。ＥＢＮＡ１の発現により、メモリーＢ細胞が分裂する際にＥＢＶが複製できるようになる。上皮細胞では、潜伏期ＩＩのみが起こる。

【0239】

一次感染では、ＥＢＶは口腔咽頭上皮細胞で複製し、Ｂリンパ球で潜伏期ＩＩＩ、ＩＩ、Ｉ感染を確立する。Ｂリンパ球へのＥＢＶ潜伏感染は、ウイルスの持続、その後の上皮細胞での複製、唾液中への感染性ウイルスの放出に必要である。Ｂリンパ球のＥＢＶ潜伏期ＩＩＩ及びＩＩ感染、口腔上皮細胞の潜伏期ＩＩ感染、ＮＫ細胞又はＴ細胞の潜伏期ＩＩ感染は、均一なＥＢＶゲノムの存在と遺伝子発現によって特徴づけられる悪性腫瘍を引き起こす可能性がある。

【0240】

Ｂ細胞に潜伏しているＥＢＶは再活性化され、溶菌性複製に移行する。溶解サイクルは感染性ビリオンの産生をもたらし、Ｂ細胞と上皮細胞で起こりうる：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（２００７）の第２５章にＫｅｎｎｅｙにより概説されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0241】

溶菌複製にはＥＢＶゲノムが直鎖状であることが必要である。潜伏ＥＢＶゲノムはエピソーム型であるため、溶菌再活性化のためには線状化されていなければならない。Ｂ細胞では通常、潜伏期からの再活性化後にのみ溶菌複製が起こる。

【0242】

ＢＺＦＬ１やＢＲＬＦ１などの即時型溶菌遺伝子産物は、トランスアクチベーター（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒｓ）として働き、自身の発現を促進し、後期の溶菌周期遺伝子の発現を促進する。

【0243】

初期の溶原性遺伝子産物は、ウイルス複製（例えば、ＥＢＶ ＤＮＡポリメラーゼ触媒成分ＢＡＬＦ５；ＤＮＡポリメラーゼ処理因子ＢＭＲＦ１、ＤＮＡ結合タンパク質ＢＡＬＦ２、ヘリカーゼＢＢＬＦ４、プライマーゼＢＳＬＦ１、及びプライマーゼ関連タンパク質ＢＢＬＦ２／３）及びデオキシヌクレオチド代謝（例えば、チミジンキナーゼＢＸＬＦ１、ｄＵＴＰａｓｅ ＢＯＲＦ２）に関与している。他の初期溶原性遺伝子産物は、転写因子（例えばＢＭＲＦ１、ＢＲＲＦ１）、ＲＮＡの安定性とプロセシングにおける役割（例えばＢＭＬＦ１）、又は免疫回避（例えばアポトーシスを阻害するＢＨＲＦ１）に関与している。

【0244】

後期溶原性遺伝子産物は、伝統的にウイルス複製の開始後に発現するものとして分類されている。後期溶原性遺伝子産物は一般に、ヌクレオカプシドタンパク質などのビリオンの構造成分や、ＥＢＶとの結合や融合を仲介する糖タンパク質（ｇｐ３５０／２２０、ｇｐ８５、ｇｐ４２、ｇｐ２５など）をコードしている。ＢＣＬＦ１はＩＬ－１０のウイルスホモログをコードし、ＢＡＬＦ１は抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ２と相同性を持つタンパク質をコードする。

【0245】

本明細書で使用する「ＥＢＶ特異的免疫細胞」とは、エプスタイン・バーウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ、ＥＢＶ）に特異的な免疫細胞を指す。ＥＢＶ特異的免疫細胞は、ＥＢＶの抗原のペプチド（例えば、ＭＨＣ分子によって提示された場合）を認識することができる受容体（好ましくは、Ｔ細胞受容体）を発現／含む。好ましくは、ＥＢＶ特異的免疫細胞は、ＭＨＣクラスＩによって提示されるＥＢＶ抗原のペプチドに特異的なＴＣＲを発現／含む。

【0246】

いくつかの実施形態において、ＥＢＶ特異的免疫細胞は、Ｔ細胞、例えばＣＤ３＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞はＣＤ３＋、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞はＴヘルパー細胞（ＴＨ細胞）である）。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。

【0247】

ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的であるＥＢＶ抗原に応答して、又はＥＢＶを含む／発現する細胞（例えば、ＥＢＶに感染した細胞）若しくは関連するＥＢＶ抗原に応答して、Ｔ細胞の特定の機能的特性を示すことができる。いくつかの実施形態において、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）に関連する機能的特性である。

【0248】

いくつかの実施形態において、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、以下の特性の１つ以上を示し得る：ＥＢＶを含む／発現する細胞／Ｔ細胞が特異的であるＥＢＶ抗原に対する細胞傷害性；Ｔ細胞が特異的であるＥＢＶ／ＥＢＶ抗原での刺激に応答して、又はＴ細胞が特異的であるＥＢＶ／ＥＢＶ抗原を含む／発現している細胞への曝露に応答しての、増殖、ＩＦＮγ発現、ＣＤ１０７ａ発現、ＩＬ－２発現、ＴＮＦα発現、パーフォリン発現、グランザイム発現、グラニュライシン発現、及び／又は、ＦＡＳリガンド（ＦＡＳＬ）発現。

【0249】

ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、好ましくは、適切なＭＨＣ分子によって提示されたときに、Ｔ細胞が特異的であるＥＢＶ抗原のペプチドを認識することができるＴＣＲを発現／含む。ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞及び／又は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞であってもよい。

【0250】

ＥＢＶに特異的な免疫細胞は、任意のＥＢＶ抗原、例えば本明細書に記載のＥＢＶ抗原に特異的であってよい。ＥＢＶに特異的な免疫細胞の集団、又はＥＢＶに特異的な複数の免疫細胞を含む組成物は、１つ以上のＥＢＶ抗原に特異的な免疫細胞を含むことができる。

【0251】

いくつかの実施形態では、ＥＢＶ抗原は、ＥＢＶ潜伏抗原、例えば、ＩＩＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２Ｂ、ＢＡＲＦ１、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ又はＥＢＮＡ３Ｃ）、ＩＩ型潜伏抗原（例えばＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２Ｂ又はＢＡＲＦ１）、又はＩ型潜伏抗原（例えばＥＢＮＡ１又はＢＡＲＦ１）である。いくつかの実施形態では、ＥＢＶ抗原は、ＥＢＶ溶解抗原、例えば即時型早期溶解抗原（例えば、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１又はＢＭＲＦ１）、早期溶解抗原（例えば、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＸＬＦ１、ＢＡＬＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＡＲＦ１、ＢＧＬＦ５、ＢＨＲＦ１、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＨＬＦ１、ＢＬＬＦ２、ＢＫＲＦ４、ＢＭＲＦ２、ＦＵ又はＥＢＮＡ１－ＦＵＫ）、又は後期溶原性抗原（例えば、ＢＡＬＦ４、ＢＩＬＦ１、ＢＩＬＦ２、ＢＮＦＲ１、ＢＶＲＦ２、ＢＡＬＦ３、ＢＡＬＦ５、ＢＤＬＦ３又はｇｐ３５０）である。

【0252】

キメラ抗原受容体
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）を含む／発現するウイルス特異的免疫細胞に関する。

【0253】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）は、抗原結合機能とＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体分子である。ＣＡＲの構造と工学については、例えば、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）に概説されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0254】

ＣＡＲは、膜貫通ドメインとシグナル伝達ドメインが結合した抗原結合ドメインを含む。任意のヒンジドメイン又はスペーサードメインは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間に分離を提供し、柔軟なリンカー（Ｆｌｅｘｉｂｌｅ ｌｉｎｋｅｒ）として機能する。細胞で発現される場合、抗原結合ドメインは細胞外に存在し、シグナル伝達ドメインは細胞内に存在する。

【0255】

抗原結合ドメインは、ＣＡＲが特異的とする標的抗原への結合を媒介する。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＡＲが標的とする抗原に特異的な抗体の抗原結合領域に基づいている場合がある。例えば、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合する抗体の相補性決定領域（ＣＤＲｓ）のアミノ酸配列を含むことができる。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域のアミノ酸配列を含むか又はそれらから構成されていてもよい。抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖及び重鎖可変領域アミノ酸配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）として提供することができる。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、リガンド：受容体結合のような、他のタンパク質：タンパク質相互作用に基づいて抗原を標的とすることができる；例えば、ＩＬ－１３に基づく抗原結合ドメインを用いて、ＩＬ－１３Ｒα２を標的とするＣＡＲが開発されている（例えば、Ｋａｈｌｏｎら ２００４ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４（２４）：９１６０－９１６６）。

【0256】

膜貫通ドメインは、ＣＡＲの抗原結合ドメインとシグナル伝達ドメインの間に設けられている。膜貫通ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜にＣＡＲを固定するためのものであり、抗原結合ドメインは細胞外に、シグナル伝達ドメインは細胞内に存在する。ＣＡＲの膜貫通ドメインは、細胞膜結合タンパク質（ＣＤ２８、ＣＤ８など）の膜貫通領域配列に由来することがある。

【0257】

本明細書を通して、参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列に「由来する」ポリペプチド、ドメイン及びアミノ酸配列は、参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列に「由来する」ポリペプチド、ドメイン及びアミノ酸配列は、好ましくは、参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列の機能的及び／又は構造的特性を保持する。

【0258】

例示すると、ＣＤ２８の細胞内ドメイン由来のアミノ酸配列は、例えばＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６に示されるように、ＣＤ２８の細胞内ドメインに対して６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。さらに、ＣＤ２８の細胞内ドメイン由来のアミノ酸配列は、好ましくは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列の機能的特性、すなわちＣＤ２８媒介シグナル伝達を活性化する能力を保持する。

【0259】

所定のポリペプチド又はそのドメインのアミノ酸配列は、当業者に公知のデータベースから検索するか、又は検索した核酸配列から決定することができる。このようなデータベースには、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、ＵｎｉＰｒｏｔが含まれる。

【0260】

シグナル伝達ドメインは、免疫細胞機能の活性化に必要なアミノ酸配列を含む。ＣＡＲシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むことができ、このドメインは、ＣＡＲ発現細胞のリン酸化及び活性化のための免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する。ＦｃγＲＩのＩＴＡＭ含有領域を含むドメインなど、他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達ドメインもＣＡＲに採用されている（Ｈａｙｎｅｓら、２００１ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６（１）：１８２－１８７）。ＣＤ３－ζの細胞内ドメイン由来のシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、しばしば第一世代ＣＡＲと呼ばれる。

【0261】

ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは通常、免疫細胞の活性化及びエフェクター機能の増強に必要なコスト刺激シグナルを提供するためのコスト刺激タンパク質（ＣＤ２８、４－１ＢＢなど）のシグナル伝達ドメインも含む。追加のコスティミュレイトリー配列を含むシグナル伝達ドメインを有するＣＡＲは、しばしば第二世代ＣＡＲと呼ばれる。場合によっては、異なる細胞内シグナル伝達経路のコスト刺激に対応するようにＣＡＲが設計されることもある。例えば、ＣＤ２８のコスティミュレーションはホスファチジルイノシトール３キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を優先的に活性化するのに対し、４－１ＢＢのコスティミュレーションはＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介したシグナル伝達を引き起こす。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインには、１つ以上のコスティミュレイトリー分子のシグナル伝達ドメイン由来のコスティミュレイトリー配列が含まれることがある。複数のコスティミュレータリー配列を含むシグナル伝達ドメインから構成されるＣＡＲは、しばしば第三世代ＣＡＲと呼ばれる。

【0262】

任意のヒンジ領域又はスペーサー領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間の分離を提供し、柔軟なリンカーとして機能する。このような領域は、結合部位が異なる方向に配向することを可能にする柔軟なドメイン（ｆｌｅｘｉｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ）であるか、又はそれを含む可能性があり、例えばＩｇＧのＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域に由来する可能性がある。

【0263】

特定の標的抗原に特異的なＣＡＲを発現するように工学的に制御することで、免疫細胞（典型的にはＴ細胞だが、ＮＫ細胞など他の免疫細胞も同様）は標的抗原を発現する細胞を殺すように誘導することができる。ＣＡＲを発現するＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）と特異的な標的抗原との結合は、細胞内シグナル伝達を引き起こし、その結果Ｔ細胞を活性化する。活性化されたＣＡＲ－Ｔ細胞は分裂を促され、標的抗原を発現する細胞を死滅させる因子を産生する。

【0264】

抗原結合ドメイン
「抗原結合ドメイン」とは、標的抗原に結合可能なドメインを指す。標的抗原は、例えば、ペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、糖鎖、糖脂質、脂質、又はそれらの断片であり得る。本開示による抗原結合ドメインは、標的抗原、又は別の標的抗原結合分子（例えば、標的抗原結合ペプチド又は核酸アプタマー、リガンド又は他の分子）に対して指向される抗体／抗体フラグメント（例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、単一ドメイン抗体（例えば、ＶｈＨ）等）に由来し得る。

【0265】

いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合可能な抗体の抗体重鎖可変領域（ＶＨ）及び抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。標的抗原に結合可能なドメインは、抗原結合ペプチド／ポリペプチド、例．ペプチドアプタマー、チオレドキシン、モノボディ、アンチカリン、クニッツドメイン、アビマー、ノッティン、フィノマー、アトリマー、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、ナノボディ（すなわち、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ））、アフィリン、アルマジロリピートタンパク質（ＡｒｍＲＰ）、ＯＢｏｄｙ又はフィブロネクチン－例えば、Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏら、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２０１５；１５（１２）：１０８２－１１０１に総説されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる（例えば、Ｂｏｅｒｓｍａら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２０１１）２８６：４１２７３－８５及びＥｍａｎｕｅｌら、Ｍａｂｓ（２０１１）３：３８－４８も参照されたい）。

【0266】

本開示の抗原結合ドメインは一般に、標的抗原に特異的に結合できる抗体のＶＨとＶＬを含む。抗体は一般に、６つの相補性決定領域ＣＤＲを含む；重鎖可変領域（ＶＨ）に３つ：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３、及び軽鎖可変領域（ＶＬ）に３つ：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、ＬＣ－ＣＤＲ３である。これら６つのＣＤＲは、抗体のパラトープ（標的抗原と結合する部分）を規定する。ＶＨ領域とＶＬ領域は、各ＣＤＲの両側にあるフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、ＣＤＲの足場となる。Ｎ末端からＣ末端まで、ＶＨは以下の構造を含む：Ｎ末端－［ＨＣ－ＦＲ１］－［ＨＣ－ＣＤＲ１］－［ＨＣ－ＦＲ２］－［ＨＣ－ＣＤＲ２］－［ＨＣ－ＦＲ３］－［ＨＣ－ＣＤＲ３］－［ＨＣ－ＦＲ４］－Ｃ末端；及びＶＬは以下の構造を含む：Ｎ ｔｅｒｍ－［ＬＣ－ＦＲ１］－［ＬＣ－ＣＤＲ１］－［ＬＣ－ＦＲ２］－［ＬＣ－ＣＤＲ２］－［ＬＣ－ＦＲ３］－［ＬＣ－ＣＤＲ３］－［ＬＣ－ＦＲ４］－Ｃ ｔｅｒｍ。

【0267】

ＶＨ及びＶＬ配列は、抗原結合ドメインがＣＡＲの他のドメインに連結され得ることを条件として、任意の適切な様式で提供され得る。本開示の抗原結合ドメインに関連して企図される形式には、Ｃａｒｔｅｒ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００６），６：３４３－３５７に記載されているもの、例えば、ｓｃＦｖ、ｄｓＦＶ、（ｓｃＦｖ）_２ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ、ミニボディ、及びＦ（ａｂ）_２形式が挙げられる。

【0268】

いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合可能な抗体／抗体フラグメントのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合可能な抗体／抗体フラグメントのＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。抗体のＶＨとＶＬから含む部分は、本明細書では可変フラグメント（Ｆｖ）とも呼ばれることがある。ＶＨとＶＬは同じポリペプチド鎖上に存在し、リンカー配列を介して結合している場合があり、このような部位は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）と呼ばれる。ｓｃＦｖの調製に適したリンカー配列は当業者に知られており、セリン残基及びグリシン残基を含むことができる。

【0269】

いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合可能なＦｖを含むか、又はＦｖから構成される。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合可能なｓｃＦｖを含むか、又はそれらから構成される。

【0270】

抗原結合ドメイン（ひいてはＣＡＲ）が特異的である標的抗原は、任意の標的抗原であり得る。いくつかの実施形態において、標的抗原は、その発現／活性、又はその発現／活性の上昇が、疾患又は障害（例えば、がん、感染症又は自己免疫疾患）と正に（陽性に、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連する抗原である。標的抗原は、好ましくは、標的抗原を発現する細胞の細胞表面で発現される。ＣＡＲは、ＣＡＲが特異的抗原結合ドメインを含む標的抗原を発現する細胞／組織に対して、ＣＡＲを発現する細胞のエフェクター活性を誘導することが理解されよう。

【0271】

いくつかの実施形態では、標的抗原はがん細胞抗原である可能性がある。がん細胞抗原は、がん細胞によって発現される、又は過剰発現される抗原である。がん細胞抗原は、ペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、糖鎖、糖脂質、脂質、又はそれらの断片であってもよい。がん細胞抗原の発現は、がんと関連している可能性がある。がん細胞抗原は、がん細胞によって異常に発現されている場合（例えば、がん細胞抗原は異常な局在を伴って発現されている場合）、又は、がん細胞によって異常な構造を伴って発現されている場合がある。がん細胞抗原は、免疫応答を誘発することができる。いくつかの実施形態では、抗原はがん細胞の細胞表面に発現される（すなわち、がん細胞抗原はがん細胞表面抗原である）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の抗原結合分子によって結合される抗原の部分は、がん細胞の外表面に表示される（すなわち、細胞外である）。がん細胞抗原はがん関連抗原であってもよい。及び／又は、いくつかの実施形態において、がん細胞抗原は、その発現ががんの発症、進行又は症状の重篤度に関連する抗原である。がん関連抗原は、がんの原因や病態に関連することもあれば、がんの結果として異常に発現することもある。いくつかの実施形態において、がん細胞抗原は、がんの細胞によって、例えば、同等の非がん細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する非がん細胞）による発現レベルと比較して、発現が（例えば、ＲＮＡ及び／又はタンパク質レベルで）上昇する抗原である。いくつかの実施形態では、がん関連抗原はがん細胞によって優先的に発現され、同等の非がん細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する非がん細胞）では発現されないことがある。いくつかの実施形態において、がん関連抗原は、変異したがん遺伝子又は変異したがん抑制遺伝子の産物である可能性がある。及び／又は、いくつかの実施形態において、がん関連抗原は、過剰発現された細胞タンパク質、がん原性ウイルスによって産生されたがん抗原、オンコフェタール抗原、又は細胞表面の糖脂質若しくは糖タンパク質の産物であってもよい。

【0272】

がん細胞抗原については、Ｚａｒｏｕｒ ＨＭ，ＤｅＬｅｏ Ａ，Ｆｉｎｎ ＯＪ，ら：Ｋｕｆｅ ＤＷ、Ｐｏｌｌｏｃｋ ＲＥ、Ｗｅｉｃｈｓｅｌｂａｕｍ ＲＲ、他編、Ｈｏｌｌａｎｄ－Ｆｒｅｉ Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第６版。ハミルトン（ＯＮ）：ＢＣ Ｄｅｃｋｅｒ；２００３、がん細胞抗原にはオンコフェタール抗原が含まれる：ＣＥＡ、未熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２；ＨＰＶ Ｅ６やＥ７などのオンコウイルス抗原；過剰発現タンパク質：ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロライドチャネル２、サイクリンＢ１、９Ｄ７、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、メソセリン、ＳＡＰ－１、サバイビン；がん精巣抗原：ＢＡＧＥ、ＣＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＸＡＧＥ、ＣＴ９、ＣＴ１０、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２；系統制限抗原：ＭＡＲＴ１、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１／２、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異抗原；変異抗原：β－カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、Ｒａｓ、ＴＧＦ－βＲＩＩ；翻訳後変化抗原：ＭＵＣ１、イディオタイプ抗原：Ｉｇ、ＴＣＲ、に記載されている。その他のがん細胞抗原としては、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、グルコース制御タンパク質７８（ＧＲＰ７８）、ビメンチン、ヌクレオリン、フェトアシナール膵タンパク質（ＦＡＰＰ）、アルカリホスファターゼ胎盤様２（ＡＬＰＰＬ－２）、シグレック－５、ストレス誘導性リンタンパク質１（ＳＴＩＰ１）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、シクロフィリンＢなどがある。

【0273】

いくつかの実施形態において、がん細胞抗原は、Ｚｈａｏ ａｎｄ Ｃａｏ，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１９）；１０：２２５０に記載されるがん細胞抗原であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、がん細胞抗原は、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、メソセリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される。

【0274】

いくつかの実施形態では、がん細胞抗原は、血液学的悪性腫瘍の細胞によって発現される抗原である。いくつかの実施形態において、がん細胞抗原は、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８及びＢＣＭＡから選択される。

【0275】

いくつかの実施形態では、がん細胞抗原は固形腫瘍の細胞によって発現される抗原である。いくつかの実施形態において、がん細胞抗原は、メソセリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される。

【0276】

いくつかの実施形態では、がん細胞抗原はＣＤ１９である。ＣＤ１９はＢ細胞のマーカーであり、例えばＢ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の治療に有用な標的である－例えばＷａｎｇら、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．（２０１２）１：３６。

【0277】

いくつかの実施形態では、抗原結合ドメイン（ひいてはＣＡＲ）は多特異的である。多重特異性」とは、抗原結合ドメインが１つ以上の標的に特異的に結合することを意味する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは二重特異性抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、少なくとも２つの異なる抗原結合部分（すなわち、少なくとも２つの抗原結合部分、例えば、非同一のＶＨ及びＶＬを含む）を含む。多特異的抗原結合ドメインの個々の抗原結合部位は、例えばリンカー配列を介して連結されていてもよい。

【0278】

いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは少なくとも２つの、非同一の標的抗原に結合するので、少なくとも二重特異的である。用語「二重特異性」は、抗原結合ドメインが少なくとも２つの異なる抗原決定基と特異的に結合できることを意味する。いくつかの実施形態では、多特異的抗原結合ドメイン／ＣＡＲの標的抗原の少なくとも１つはＣＤ３０である。

【0279】

標的抗原の各々は、独立して、本明細書に記載されるような標的抗原であってもよい。いくつかの実施形態では、各標的抗原は独立して、本明細書に記載されるようながん細胞抗原である。

【0280】

本開示による抗原結合ドメイン（例えば、多特異的抗原結合ドメイン）は、抗原結合ドメインが特異的である標的（複数可）に結合可能な抗原結合部分を含むことが理解されよう。例えば、ＣＤ３０及びＣＤ３０以外の抗原に結合可能な抗原結合ドメインは、（ｉ）ＣＤ３０に結合可能な抗原結合部分、及び（ｉｉ）ＣＤ３０以外の標的抗原に結合可能な抗原結合部分を含むことができる。

【0281】

本開示の態様及び実施形態において、標的抗原はＣＤ３０である。従って、本開示のいくつかの態様及び実施形態において、抗原結合ドメインはＣＤ３０結合ドメインである。

【0282】

ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８としても知られる）はＵｎｉＰｒｏｔで同定されたタンパク質である：Ｐ２８９０８。ＣＤ３０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのシングルパス、Ｉ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３０の構造と機能は、例えばｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｙｄｅｎら，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１７）７：ｅ６０３やＭｕｔａ ａｎｄ Ｐｏｄａｃｋ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．（２０１３）５７（１－３）：１５１－８に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0283】

ヒトＴＮＦＲＳＦ８遺伝子によりコードされるｍＲＮＡの選択的スプライシングにより、３つのアイソフォームが生じる：アイソフォーム１（「長い」アイソフォーム；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８－１、ｖ１；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１位から４６３位に対応するアミノ酸配列が欠損しているアイソフォーム２（「細胞質」、「短い」又は「Ｃ３０Ｖ」アイソフォーム、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８－２；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、及び、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１位から１１１位及び４４６位に対応するアミノ酸配列が欠損しているアイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８－３；ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＮ末端１８アミノ酸はシグナルペプチド（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）を形成し、続いて３６７アミノ酸の細胞外ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の１９位から３８５位、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５に示される）、２１アミノ酸の細胞外ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．５に示される）が続く：５）、２１アミノ酸膜貫通ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の３８６位から４０６位、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６に示す）、及び１８９アミノ酸細胞質ドメイン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１の４０７位から５９５位、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７に示す）が続く。

【0284】

本明細書において「ＣＤ３０」とは、あらゆる種由来のＣＤ３０を指し、あらゆる種由来のＣＤ３０アイソフォーム、フラグメント、バリアント又はホモログを含む。本明細書で使用される場合、参照タンパク質の「フラグメント」、「バリアント」又は「ホモログ」は、参照タンパク質（例えば参照アイソフォーム）のアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するものとして任意に特徴付けられ得る。いくつかの実施形態において、参照タンパク質のフラグメント、変異体、アイソフォーム及びホモログは、参照タンパク質によって実行される機能を実行する能力によって特徴付けられ得る。

【0285】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０は、哺乳動物（例えば、霊長類（アカゲザル、カニクイザル、又はヒト）及び／又はげっ歯類（例えば、ラット又はマウス）ＣＤ３０）由来である。好ましい実施形態において、ＣＤ３０はヒトＣＤ３０である。アイソフォーム、フラグメント、バリアント又はホモログは、任意選択で、所与の種、例えばヒト由来の未成熟又は成熟ＣＤ３０アイソフォームのアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するものとして特徴付けられ得る。ＣＤ３０の断片は、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００又は５９０アミノ酸のいずれかの最小長を有することができ、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００又は５９５アミノ酸のいずれかの最大長を有することができる。

【0286】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２又は３に対して少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0287】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５に対して少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0288】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０のフラグメントは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５又は１９に対して少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0289】

本開示のＣＡＲのＣＤ３０結合ドメインは、好ましくは、ＣＤ３０又はそのフラグメントへの特異的結合を示す。本開示のＣＡＲのＣＤ３０結合ドメインは、好ましくは、ＣＤ３０の細胞外ドメインへの特異的結合を示す。ＣＤ３０結合ドメインは、抗ＣＤ３０抗体又は他のＣＤ３０結合剤、例えばＣＤ３０結合ペプチド又はＣＤ３０結合低分子に由来し得る。

【0290】

ＣＤ３０結合ドメインは、抗ＣＤ３０抗体の抗原結合部位に由来することがある。

【0291】

抗ＣＤ３０抗体には、ＨＲＳ３及びＨＲＳ４（例えば、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９８）４８（５）：４９７－５０１）、Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２００４）１７（１２）に記載のＨＲＳ３誘導体：８４７－８６０、ＢｅｒＨ２（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｔ＃ Ｋ０１４５－３、ＲＲＩＤ：ＡＢ＿５９０９７５）、ＳＧＮ－３０（ｃＡＣ１０としても知られ、例えばＦｏｒｅｒｏ－Ｔｏｒｒｅｓら、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ（２００９）１４６：１７１－９に記載）、ＭＤＸ－０６０（例えばＡｎｓｅｌｌら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ（２００７）２５：２７６４－９に記載；５Ｆ１１、ｉｒａｔｕｍｕｍａｂとしても知られる、）及びＭＤＸ－１４０１（例えば、Ｃａｒｄａｒｅｌｌｉら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００９）１５（１０）：３３７６－８３に記載）、ならびにＷＯ２０２０／０６８７６４Ａ１、ＷＯ２００３／０５９２８２Ａ２、ＷＯ２００６／０８９２３２Ａ２、ＷＯ２００７／０８４６７２Ａ２、ＷＯ２００７／０４４６１６Ａ２、ＷＯ２００５／００１０３８Ａ２、ＵＳ２００７／１６６３０９Ａ１、ＵＳ２００７／２５８９８７Ａ１、ＷＯ２００４／０１０９５７Ａ２及びＵＳ２００５／００９７６９Ａ１に記載されている抗ＣＤ３０抗体が含まれる。

【0292】

いくつかの実施形態において、本開示によるＣＤ３０結合ドメインは、抗ＣＤ３０抗体のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示によるＣＤ３０結合ドメインは、抗ＣＤ３０抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態において、本開示によるＣＤ３０結合ドメインは、抗ＣＤ３０抗体のＶＨ及びＶＬ領域を含むｓｃＦｖを含む。

【0293】

抗体のＣＤＲやＦＲの定義には、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、及びＶＢＡＳＥ２は、Ｒｅｔｔｅｒら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００５）３３（ｓｕｐｐｌ １）に記載されている：Ｄ６７１－Ｄ６７４に記載されている。本明細書に記載の抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のＣＤＲ及びＦＲは、ＶＢＡＳＥ２に従って定義される。

【0294】

いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合ドメインは以下を含む：
以下のＣＤＲを組み込んだＶＨ：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３、
又は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２又はＨＣ－ＣＤＲ３の１つ以上のアミノ酸の１つ又は２つ又は３つが別のアミノ酸で置換されたその変異体、
及び
以下のＣＤＲを組み込んだＶＬ：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３、
又は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、又はＬＣ－ＣＤＲ３の１つ以上のアミノ酸の１つ又は２つ又は３つが別のアミノ酸で置換されたその変異体。

【0295】

いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは以下を含む：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるＶＨ、
及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるＶＬ。

【0296】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０結合ドメインは、本明細書に記載されるようなＶＨ配列及びＶＬ配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むか、又はそれらからなり得る。ＶＨ配列とＶＬ配列は共有結合していてもよい。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列及びＶＬ配列は、柔軟なリンカー配列、例えば本明細書に記載されるような柔軟なリンカー配列によって連結される。柔軟なリンカー配列は、ＶＨ配列及びＶＬ配列の末端に結合され得、それによってＶＨ配列及びＶＬ配列が連結される。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又は１７のアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるリンカー配列を介して結合される。

【0297】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0298】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０結合ドメインは、ＣＤ３０、例えばＣＤ３０の細胞外ドメインに結合することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ３０結合ドメインは、抗体ＨＲＳ３によって結合されるＣＤ３０のエピトープ、例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９に示される、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に従って番号付けされたヒトＣＤ３０のアミノ酸位置１８５～３３５の領域内に結合することが可能である（Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２００４）１７（１２）：８４７－８６０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。

【0299】

いくつかの実施形態において、標的抗原はＣＤ１９である。従って、本開示のいくつかの態様及び実施形態において、抗原結合ドメインはＣＤ１９結合ドメインである。

【0300】

ＣＤ１９は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５３９１－１、ｖ６によって同定されるタンパク質である。本明細書において「ＣＤ１９」とは、あらゆる種由来のＣＤ１９を指し、あらゆる種由来のＣＤ１９アイソフォーム（例えば、Ｐ１５３９１－２）、フラグメント、変異体（変異体を含む）又はホモログを含む。

【0301】

ＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体の抗原結合部分に由来していてもよい。抗ＣＤ１９抗体には、例えばＺｏｌａら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）６９：４１１－４２２に記載されているＦＭＣ６３が含まれる。

【0302】

いくつかの実施形態において、本開示によるＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示によるＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態において、本開示によるＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含むｓｃＦｖを含む。

【0303】

いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合ドメインは以下を含む：
以下のＣＤＲを組み込んだＶＨ：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３、
又は、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２又はＨＣ－ＣＤＲ３の１つ以上のアミノ酸の１つ又は２つ又は３つが別のアミノ酸で置換されたその変異体、
及び
以下のＣＤＲを組み込んだＶＬ：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３、
又は、ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２又はＬＣ－ＣＤＲ３の１つ以上のアミノ酸の１つ又は２つ又は３つが別のアミノ酸で置換されたその変異体。

【0304】

いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは以下を含む：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）を有するアミノ酸配列かを含むか、又はそれらから構成されるＶＨ、
及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるＶＬ。

【0305】

いくつかの実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載されるようなＶＨ配列及びＶＬ配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含むか、又はそれらから構成され得る。ＶＨ配列とＶＬ配列は共有結合していてもよい。いくつかの実施形態では、ＶＨ配列及びＶＬ配列は、柔軟なリンカー配列、例えば本明細書に記載されるような柔軟なリンカー配列によって連結される。柔軟なリンカー配列は、ＶＨ配列及びＶＬ配列の末端に結合され得、それによってＶＨ配列及びＶＬ配列が連結される。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又は４５のアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるリンカー配列を介して結合される。

【0306】

いくつかの実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれから構成される。

【0307】

いくつかの実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、ＣＤ１９、例えばＣＤ１９の細胞外ドメインに結合することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、抗体ＦＭＣ６３によって結合されるＣＤ１９のエピトープに結合することができる。

【0308】

膜貫通ドメイン
本開示のＣＡＲは、膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインとは、生物学的膜、例えば細胞膜において熱力学的に安定なアミノ酸配列によって形成される任意の三次元構造を指す。本開示に関連して、膜貫通ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜にまたがるアミノ酸配列であり得る。

【0309】

膜貫通ドメインは、疎水性α－ヘリックス又はβ－バレルを形成するアミノ酸配列を含むか、又はそれから構成されることができる。本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、膜貫通ドメインを含むタンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であってもよいし、膜貫通ドメインのアミノ酸配列に由来してもよい。膜貫通ドメインは、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ、Ｅｎｓｅｍｂｌ、及びＩｎｔｅｒＰｒｏ等のデータベースに記録されており、及び／又は、例えばＴＭＨＭＭ（Ｋｒｏｇｈら、２００１ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３０５：５６７－５８０）等のアミノ酸配列解析ツールを用いて同定／予測することができる。

【0310】

いくつかの実施形態において、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、細胞表面で発現するタンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であってもよく、又はそれに由来してもよい。いくつかの実施形態では、細胞表面で発現されるタンパク質は、受容体又はリガンド、例えば免疫受容体又はリガンドである。いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ２８、ＣＤ８０、ＭＨＣクラスＩα、ＭＨＣクラスＩＩα、ＭＨＣクラスＩＩβ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ３－ζ、ＴＣＲα ＴＣＲβ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢ、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ－４、ＴＩＭ－１、ＩＣＡＭ１、ＬＦＡ－１、ＬＦＡ－３、ＣＤ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＬＲＢ４、ＬＩＬＲＢ２、ＶＴＣＮ１、ＣＤ２、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＤＲ３、ＴＬ１Ａ、ＣＤ２２６、ＣＤ１５５、ＣＤ１１２、及び、ＣＤ２７６のうちの１つの膜貫通ドメインのアミノ酸配列であってもよく、又はそれらに由来してもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通体は、ＣＤ２８、ＣＤ３－ζ、ＣＤ８α、ＣＤ８β又はＣＤ４の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来する。いくつかの実施形態において、膜貫通体は、ＣＤ２８の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来する。

【0311】

いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０又は４８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0312】

いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0313】

いくつかの実施形態において、膜貫通ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0314】

シグナル伝達ドメイン
本開示のキメラ抗原受容体は、シグナル伝達ドメインを含む。シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞において細胞内シグナル伝達を開始するための配列を提供する。

【0315】

ＩＴＡＭ含有配列
シグナル伝達ドメインはＩＴＡＭ含有配列を含む。ＩＴＡＭ含有配列は、１つ以上の免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。ＩＴＡＭはアミノ酸配列ＹＸＸＬ／Ｉ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）を含み、ここで、「Ｘ」は任意のアミノ酸を示す。ＩＴＡＭ含有タンパク質では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３による配列はしばしば６～８個のアミノ酸で区切られている；ＹＸＸＬ／Ｉ（Ｘ）６－８ＹＸＸＬ／Ｉ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）。チロシンキナーゼによってＩＴＡＭのチロシン残基にリン酸基が付加されると、細胞内でシグナル伝達カスケードが開始される。

【0316】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に従うアミノ酸配列の１つ以上のコピーを含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３によるアミノ酸配列の少なくとも１、２、３、４、５又は６コピーを含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に従うアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３コピーを含む。

【0317】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有アミノ酸配列を有するタンパク質のＩＴＡＭ含有配列のアミノ酸配列であるか、又は、ＩＴＡＭ含有配列に由来するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζ、ＦｃγＲＩ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＣ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＶ又はＤＡＰ１２のうちの１つの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含むか、又はそれらに由来するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζの細胞内ドメインであるか、又はＣＤ３－ζの細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。

【0318】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0319】

コスティミュレイトリー配列（Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）
シグナル伝達ドメインは、さらに１つ以上のコスティミュレーション配列を含むことができる。コスティミュレイトリー配列は、本開示のＣＡＲを発現する細胞のコスティミュレーションを提供するアミノ酸配列である。コスティミュレーションは、標的抗原との結合時にＣＡＲ発現細胞の増殖及び生存を促進し、またＣＡＲ発現細胞によるサイトカイン産生、分化、細胞傷害性機能及び記憶形成を促進し得る。Ｔ細胞コスティミュレーションの分子メカニズムは、Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｆｌｉｅｓ，（２０１３）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３（４）：２２７－２４２に概説されている。

【0320】

コスティミュレイトリー配列は、コスティミュレイトリータンパク質（Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）のアミノ酸配列であってもよいし、コスティミュレイトリータンパク質のアミノ酸配列に由来してもよい。いくつかの実施形態において、コスティミュレイトリー配列は、コスティミュレイトリータンパク質の細胞内ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来するアミノ酸配列である。

【0321】

ＣＡＲが標的抗原に結合すると、コスティミュレーション配列はＣＡＲを発現している細胞に対して、コスティミュレーション配列が由来するコスティミュレイトリータンパク質がコグネートリガンド（ｃｏｇｎａｔｅ ｌｉｇａｎｄ）に結合した際に提供するようなコスティミュレーションを提供する。例として、ＣＤ２８に由来するコスティミュレーション配列を含むシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲの場合、標的抗原への結合は、ＣＤ８０及び／又はＣＤ８６とＣＤ２８との結合によって引き起こされるようなシグナル伝達を、ＣＡＲを発現する細胞に引き起こす。このように、コスティミュレイトリー配列は、コスティミュレイトリー配列が由来するコスティミュレイトリータンパク質のコスティミュレーションシグナルを伝達することができる。

【0322】

いくつかの実施形態において、コスティミュレイトリータンパク質は、Ｂ７－ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ）、又はＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ）であってもよい。いくつかの実施形態において、コスティミュレイトリー配列は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＨＶＥＭ、ＣＤ２、ＳＬＡＭ、ＴＩＭ－１、ＣＤ３０、ＧＩＴＲ、ＤＲ３、ＣＤ２２６及びＬＩＧＨＴのうちの１つの細胞内ドメインであるか、又はそれらに由来する。いくつかの実施形態において、コスティミュレイトリー配列は、ＣＤ２８の細胞内ドメインであるか、又はＣＤ２８の細胞内ドメインに由来する。

【0323】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、１つ以上の重複しないコスティミュレイトリー配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、１、２、３、４、５又は６個のコスティミュレイトリー配列を含む。複数のコスティミュレイトリー配列は、タンデムに提供されてもよい。

【0324】

所与のアミノ酸配列が、所与のコスティミュレイトリータンパク質を介するシグナル伝達を開始することができるかどうかは、例えば、コスティミュレイトリータンパク質を介するシグナル伝達の相関関係（例えば、コスティミュレイトリータンパク質を介するシグナル伝達の結果として発現／活性がアップレギュレート又はダウンレギュレートされる因子の発現／活性）を分析することによって調べることができる。

【0325】

コスティミュレイトリータンパク質は、いくつかの伝達経路を通じて、細胞の増殖、エフェクター機能、生存を促進する遺伝子の発現をアップレギュレートする。例えば、ＣＤ２８とＩＣＯＳは、ホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）とＡＫＴを介してシグナルを伝達し、ＮＦ－κＢ、ｍＴＯＲ、ＮＦＡＴ、ＡＰ１／２を介して細胞増殖、エフェクター機能、生存を促進する遺伝子の発現をアップレギュレートする。ＣＤ２８はまた、ＣＤＣ４２／ＲＡＣ１を介してＡＰ１／２を活性化し、ＲＡＳを介してＥＲＫ１／２を活性化し、ＩＣＯＳはＣ－ＭＡＦを活性化する。４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７はＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）をリクルートし、ＭＡＰＫ経路やＰＩ３Ｋを介してシグナルを送る。

【0326】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８であるか、又はＣＤ２８に由来するコスティミュレイトリー配列を含む。

【0327】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるコスティミュレイトリー配列を含む。

【0328】

Ｋｏｆｌｅｒら Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１１）１９：７６０－７６７は、ＣＡＲライゲーション時のＩＬ－２産生誘導を減少させ、制御性Ｔ細胞が介在するＣＡＲ－Ｔ細胞活性の抑制を最小限に抑えるために、ｌｃｋキナーゼ結合部位が変異した変異型ＣＤ２８細胞内ドメインを記載している。変異型ＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７に示す。

【0329】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるコスティミュレイトリー配列を含む。

【0330】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0331】

いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢであるか、又は４－１ＢＢに由来するコスティミュレイトリー配列を含む。

【0332】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるコスティミュレイトリー配列を含む。

【0333】

いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0334】

ヒンジ領域
ＣＡＲは、ヒンジ領域をさらに含むことができる。ヒンジ領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に設けられてもよい。ヒンジ領域はスペーサー領域と呼ばれることもある。ヒンジ領域は、ＣＡＲの抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの柔軟な連結を提供するアミノ酸配列である。

【0335】

ヒンジ領域の有無や長さは、ＣＡＲの機能に影響を与えることが示されている（例えば、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）ｓｕｐｒａに総説あり）。

【0336】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域、ＣＤ８α由来のヒンジ領域、例えば、ＷＯ２０１２／０３１７４４Ａ１に記載されているようなヒンジ領域、又はＣＤ２８由来のヒンジ領域、例えばＷＯ２０１１／０４１０９３Ａ１に記載されているようなヒンジ領域であるアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域由来のヒンジ領域を含む。

【0337】

いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９又は３０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0338】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ４のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域に由来するヒンジ領域を含む。

【0339】

いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0340】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３領域（すなわち、Ｆｃ領域）であるか、又はそれに由来するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるヒンジ領域を含む。

【0341】

いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0342】

Ｈｏｍｂａｃｈら，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１０）１７：１２０６－１２１３には、単球やＮＫ細胞などのＦｃγＲ発現細胞の活性化を低下させるための変異型ＣＨ２－ＣＨ３領域が記載されている。変異型ＣＨ２－ＣＨ３領域のアミノ酸配列をＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２に示す。

【0343】

いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0344】

いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域であるか又はそれに由来するアミノ酸配列、及びヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３領域（すなわちＦｃ領域）であるか又はそれに由来するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0345】

いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0346】

その他の配列
シグナルペプチド
ＣＡＲはさらにシグナルペプチド（リーダー配列又はシグナル配列としても知られる）を含んでいてもよい。シグナルペプチドは通常、５～３０個の疎水性アミノ酸の配列からなり、１個のαヘリックスを形成する。分泌タンパク質や細胞表面で発現するタンパク質は、シグナルペプチドを含んでいることが多い。シグナルペプチドは多くのタンパク質で知られており、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｅｎｓｅｍｂｌなどのデータベースに記録されている、あるいはＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，２０１１ Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７８５－７８６）やＳｉｇｎａｌ－ＢＬＡＳＴ（Ｆｒａｎｋ ａｎｄ Ｓｉｐｐｌ，２００８ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２４：２１７２－２１７６）などのアミノ酸配列解析ツールを用いて同定／予測することができる。

【0347】

シグナルペプチドはＣＡＲのＮ末端に存在してもよく、新しく合成されたＣＡＲに存在してもよい。シグナルペプチドは、ＣＡＲの細胞表面への効率的な輸送を提供する。シグナルペプチドは切断により除去されるため、細胞表面で発現する成熟ＣＡＲには含まれない。

【0348】

いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はこれらから構成される。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0349】

リンカー配列及びさらなる機能的配列
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、異なるドメイン（すなわち、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、シグナル伝達ドメイン）間に１つ以上のリンカー配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ドメインの部分配列間（例えば、抗原結合ドメインのＶＨとＶＬの間）に１つ以上のリンカー配列を含む。

【0350】

リンカー配列は当業者に公知であり、例えば、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）．１３５７－１３６９に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、柔軟なリンカー配列であってもよい。柔軟なリンカー配列は、リンカー配列によって連結されるアミノ酸配列の相対的な移動を可能にする。柔軟なリンカーは当業者に知られており、Ｃｈｅｎら、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）．１３５７－１３６９。柔軟なリンカー配列は、多くの場合、高い割合のグリシン及び／又はセリン残基を含む。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、少なくとも１つのグリシン残基及び／又は少なくとも１つのセリン残基を含む。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、グリシン残基及びセリン残基を含む。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、１～２、１～３、１～４、１～５、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０又は１～５０アミノ酸の長さを有する。

【0351】

いくつかの実施形態において、リンカー配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又は４５に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又は４５に示されるアミノ酸配列の１、２、３、４又は５個のタンデムコピーを含むか、又はそれらから構成される。

【0352】

ＣＡＲは、さらにアミノ酸又はアミノ酸配列を含んでいてもよい。例えば、抗原結合分子及びポリペプチドは、発現、フォールディング、輸送、プロセシング、精製、又は検出を容易にするためのアミノ酸配列を含んでいてもよい。例えば、ＣＡＲは、Ｈｉｓ、（例えば６ＸＨｉｓ）、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｅ、又はビオチンタグをコードする配列を、任意でＮ末端又はＣ末端に含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、検出可能な部分、例えば、蛍光、発光、免疫検出、放射、化学、核酸又は酵素標識を含む。

【0353】

特に例示的なＣＡＲ
本開示のいくつかの実施形態において、ＣＡＲは、以下を含むか、又は以下から構成される：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される抗原結合ドメイン；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるヒンジ領域；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される膜貫通ドメイン；及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるシグナル伝達ドメイン。

【0354】

本開示のいくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５又は３６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0355】

いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９８）５８（６）：１１１６－９、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０００）７：１０６７－１０７５、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（１９９９）２２（６）：４７３－８０，Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００１）６１：１９７６－１９８２、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００１）１６７：６１２３－６１３１、Ｓａｖｏｌｄｏら、Ｂｌｏｏｄ（２００７）１１０（７）：２６２０－３０、Ｋｏｅｈｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００７）６７（５）：２２６５－２２７３、Ｄｉ Ｓｔａｓｉら、Ｂｌｏｏｄ（２００９）１１３（２５）：６３９２－４０２、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１０）１７：１２０６－１２１３、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１１）１８：６２－７２、Ｋｏｆｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１１）１９（４）：７６０－７６７，Ｇｉｌｈａｍ，Ａｂｋｅｎ ａｎｄ Ｐｕｌｅ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（２０１２）１８（７）：３７７－３８４、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１３）２０：１７７－１８６、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１６）２４（８）：１４２３－１４３４，Ｒａｍｏｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１７）１２７（９）：３４６２－３４７１、ＷＯ２０１５／０２８４４４Ａ１又はＷＯ２０１６／００８９７３Ａ１の実施形態から選択され、これらはすべて、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0356】

本開示のいくつかの実施形態において、ＣＡＲは、以下を含むか、又は以下から構成される：
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される抗原結合ドメイン；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７のアミノ酸配列に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるヒンジ領域；
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される膜貫通ドメイン；及び
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成されるシグナル伝達ドメイン。

【0357】

本開示のいくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２又は５３のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれらから構成される。

【0358】

ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲｓ）を含む／発現するウイルス特異的免疫細胞に関する。

【0359】

ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、本開示によるＣＡＲを発現するか、又はそれを含んでもよい。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、本開示によるＣＡＲをコードする核酸を含むか、又は発現し得る。ＣＡＲ発現細胞は、それが発現するＣＡＲを構成することが理解されよう。また、ＣＡＲをコードする核酸を発現する細胞は、その核酸によってコードされるＣＡＲも発現し、それを構成することも理解されよう。

【0360】

本開示によるＣＡＲ／ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルス特異的免疫細胞は、細胞の機能的特性を参照することによって特徴付けることができる。

【0361】

いくつかの実施形態において、本開示によるＣＡＲ／ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルス特異的免疫細胞は、以下の特性の１つ以上を示す：
（ａ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染した細胞に応答して、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染した細胞に応答して、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示する細胞に応答して、１つ以上の細胞傷害性／エフェクター因子（例えば、ＩＦＮγ、グランザイム、パーフォリン、グラニュライシン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬ）の発現、増殖／集団拡大、及び／又は増殖因子（例えば、ＩＬ－２）を発現する；
（ｂ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染した細胞、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示する細胞に対する細胞傷害性；
（ｃ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現していない細胞、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染していない細胞、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示しない細胞に対する細胞傷害性がない（すなわち、ベースラインを超える）；
（ｄ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞を含むがん、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染した細胞を含むがん、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示する細胞を含むがんに対する抗がん活性（例えば、がん細胞に対する細胞傷害性、腫瘍増殖抑制、転移の減少など）；並びに
（ｅ）同種反応性免疫細胞、例えば、ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する同種反応性免疫細胞に対する細胞傷害性。

【0362】

細胞増殖／個体数の増加は、細胞分裂や一定期間の細胞数を分析することによって調べることができる。細胞分裂は、例えば、Ｆｕｌｃｈｅｒ ａｎｄ Ｗｏｎｇ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ（１９９９）７７（６）：５５９－５６４に記載されている。増殖細胞はまた、例えばＢｕｃｋら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．２００８ Ｊｕｎ；４４（７）：９２７－９、及びＳａｌｉ及びＭｉｔｃｈｉｓｏｎ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ２００８ Ｆｅｂ １９；１０５（７）：２４１５－２４２０に記載されており、いずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0363】

本明細書で使用される「発現」は、遺伝子発現又はタンパク質発現であり得る。遺伝子発現は、ＤＮＡからＲＮＡへの転写を包含し、当業者に公知の種々の手段、例えば定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）によるｍＲＮＡのレベルの測定、又はレポーターベースの方法によって測定することができる。同様に、タンパク質発現は、当業者に周知の様々な方法、例えば、抗体ベースの方法、例えば、ウェスタンブロット法、免疫組織化学法、免疫細胞化学法、フローサイトメトリー法、ＥＬＩＳＡ法、ＥＬＩＳＰＯＴ法、又はレポーターベースの方法によって測定することができる。

【0364】

細胞毒性及び殺細胞性は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＺａｒｉｔｓｋａｙａら、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２０１１）、９（６）：６０１－６１６に総説されている方法のいずれかを用いて調べることができる。細胞毒性／殺細胞のインビトロアッセイの例としては、５１Ｃｒ放出アッセイ、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出アッセイ、３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）放出アッセイ、及びカルセイン－アセトキシメチル（カルセイン－ＡＭ）放出アッセイなどの放出アッセイが挙げられる。これらのアッセイは、溶解した細胞から放出される因子の検出に基づいて殺細胞を測定する。所定の細胞型による殺細胞は、例えば、被験細胞を所定の細胞型と共培養し、適当な期間後に生存／死滅した被験細胞の数／割合を測定することにより分析することができる。

【0365】

細胞は、適切なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイやｉｎ ｖｉｖｏのがんモデルで分析することで、抗がん活性を評価することができる。

【0366】

いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３０特異的ＣＡＲ発現ＥＢＶ特異的免疫細胞は、以下の特性の１つ以上を示す：
（ａ）ＣＤ３０を発現する細胞に応答して、ＥＢＶに感染した細胞に応答して、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞に応答して、１つ以上の細胞傷害性／エフェクター因子（例えば、ＩＦＮγ、グランザイム、パーフォリン、グラニュライシン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬ）を発現する；
（ｂ）ＣＤ３０を発現する細胞、ＥＢＶに感染した細胞、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞に対する細胞傷害性；
（ｃ）ＣＤ３０を発現していない細胞、ＥＢＶに感染していない細胞、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示していない細胞に対する細胞傷害性なし（すなわち、ベースライン以上）；
（ｄ）ＣＤ３０を発現する細胞からなるがん、ＥＢＶに感染した細胞からなるがん、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞からなるがんに対する抗がん活性（例えば、がん細胞に対する細胞傷害性、腫瘍増殖抑制、転移の減少など）；並びに
（ｅ）同種反応性免疫細胞、例えばＣＤ３０を発現する同種反応性免疫細胞に対する細胞傷害性。

【0367】

本開示の様々な側面に従ったいくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、１つ以上（例えば、２、３、４など）のＣＡＲを構成／発現し得る。

【0368】

いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、１つ以上の非同一ＣＡＲを構成／発現することができる。つ以上の非同一ＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞は、非同一標的抗原に特異的なＣＡＲを含む／発現することができる。例えば、本明細書の実施例４は、ＣＤ３０特異的ＣＡＲ及びＣＤ１９特異的ＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞を記載する。非同一標的抗原の各々は、独立して、本明細書に記載の標的抗原であってもよい。いくつかの実施形態では、各非同一標的抗原は、独立して、本明細書に記載されるようながん細胞抗原である。

【0369】

いくつかの実施形態において、非同一標的抗原の１つはＣＤ３０である。いくつかの実施形態において、１つ以上の非同一ＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０特異的ＣＡＲ、及びＣＤ３０以外の標的抗原に特異的なＣＡＲを含む。

【0370】

組成物
本開示はさらに、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の１つ以上（例えば、集団）を含む組成物を提供する。

【0371】

本明細書に記載される細胞は、臨床使用のための医薬組成物又は医薬品として製剤化することができ、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤又はアジュバントを含むことができる。組成物は、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、髄腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、髄腔内、経口、経皮の投与経路に製剤化することができ、これには注射や点滴が含まれる。

【0372】

適切な製剤は、無菌培地又は等張培地中に細胞を含有している。医薬品や医薬組成物は、ゲルを含む流体の形態で製剤化することができる。流体製剤は、ヒト又は動物の体内の選択された部位への注射又は注入（例えば、カテーテルを介して）による投与用に製剤化することができる。

【0373】

いくつかの実施形態において、組成物は、例えば血管又は腫瘍への注射又は注入のために処方される。

【0374】

本開示はまた、薬学的に有用な組成物の製造方法を提供し、このような製造方法は、以下から選択される１つ以上の工程を含み得る：本明細書に記載される細胞を製造する工程；本明細書に記載される細胞を単離する工程；及び／又は本明細書に記載される細胞を薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤もしくは希釈剤と混合する工程。

【0375】

例えば、本開示のさらなる態様は、疾患／状態（例えばがん）の治療に使用するための医薬組成物又は医薬組成物を製剤化又は製造する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の細胞を薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤又は希釈剤と混合することによって医薬組成物又は医薬を製剤化することを含む。

【0376】

ＭＨＣの変異とマッチング
ＭＨＣクラスＩ分子は、α（アルファ）鎖とβ（ベータ）２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の非共有結合ヘテロダイマーである。α鎖にはα１、α２、α３と呼ばれる３つのドメインがある。α１ドメインとα２ドメインは、ＭＨＣクラスＩ分子が提示するペプチドが結合する溝を形成し、ペプチド：ＭＨＣ複合体を形成する。ヒトでは、ＭＨＣクラスＩのα鎖はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子によってコードされている。ＨＬＡ遺伝子座には３つの主要遺伝子座（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ）と３つのマイナー遺伝子座（ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ、ＨＬＡ－Ｇ）がある。

【0377】

ＭＨＣクラスＩα鎖は多型であり、異なるα鎖は異なるペプチドを結合し提示することができる。ＭＨＣクラスＩαポリペプチドをコードする遺伝子は非常に多様であり、その結果、異なる被験者の細胞はしばしば異なるＭＨＣクラスＩ分子を発現する。

【0378】

この変異性は、臓器移植や個人間の養子細胞移植に影響を与える。移植や養子移入された細胞のレシピエントの免疫系は、非自己のＭＨＣ分子を異物として認識し、移植や養子移入された細胞に対する免疫反応を引き起こし、移植片拒絶反応につながる可能性がある。あるいは、移植される細胞／組織／臓器の集団の中に、レシピエントのＭＨＣ分子を異物として認識する免疫細胞が含まれている可能性があり、これがレシピエント組織に対する免疫反応を引き起こし、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性がある。

【0379】

同種反応性Ｔ細胞は、非自己ＭＨＣ分子（すなわち同種ＭＨＣ）を認識し、それに対する免疫応答を開始する能力を有するＴＣＲを含んでいる。同種反応性（ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ）Ｔ細胞は、非自己ＭＨＣ分子を発現する細胞に応答して、以下の特性の１つ以上を示すことがある：細胞増殖、増殖因子（例えばＩＬ－２）の発現、細胞傷害性／エフェクター因子（例えばＩＦＮγ、グランザイム、パーフォリン、グラニュライシン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬ）の発現、及び／又は細胞傷害活性。

【0380】

本明細書で用いる「同種反応性」及び「同種反応性免疫応答」とは、エフェクター免疫細胞と遺伝的に非同一である細胞／組織／器官に対して向けられる免疫応答を指す。エフェクター免疫細胞は、非自己のＭＨＣ／ＨＬＡ分子（すなわち、エフェクター免疫細胞がコードするＭＨＣ／ＨＬＡ分子と非同一のＭＨＣ／ＨＬＡ分子）を発現する細胞－又は細胞を構成する組織／器官－に対して、同種反応性又は同種反応性免疫応答を示すことがある。

【0381】

本明細書でいう「ＭＨＣ不一致」及び「ＨＬＡ不一致」被験者とは、非同一のＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する被験者をいう。いくつかの実施形態において、ＭＨＣ不一致又はＨＬＡ不一致被検体は、非同一のＭＨＣクラスＩα分子及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する。本明細書でいう「ＭＨＣ一致」及び「ＨＬＡ一致」被検体は、同一のＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する被検体である。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ一致又はＨＬＡ一致被検体は、同一のＭＨＣクラスＩα分子及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する。

【0382】

本明細書において、細胞／組織／臓器が参照被検体／治療に関して同種であると言及される場合、細胞／組織／臓器は、参照被検体以外の被検体の細胞／組織／臓器から得られた／由来する。いくつかの実施形態において、同種材料は、参照被検体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα分子及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と非同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα分子及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含む。

【0383】

本明細書において、細胞／組織／臓器が治療に関して同種異系であると称される場合、細胞／組織／臓器は、治療される被検体以外の被検体の細胞／組織／臓器から得られた／由来する。いくつかの実施形態において、同種材料は、治療される被検体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と非同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含む。

【0384】

本明細書において、細胞／組織／臓器が参照被検体に関して自己由来であると称される場合、細胞／組織／臓器は参照被検体の細胞／組織／臓器から得られた／由来する。本明細書において、細胞／組織／器官が参照被検体に関して同種であると称される場合、細胞／組織／器官は参照被検体と遺伝的に同一であるか、又は遺伝的に同一の被検体から得られた／由来する。本明細書において、被験体の治療（例えば、被験体への自家細胞の投与による治療）の文脈で細胞／組織／器官が自家由来であると言われる場合、その細胞／組織／器官は、治療される被験体の細胞／組織／器官から得られた／由来する。本明細書において、被験体の治療という文脈で細胞／組織／臓器が同種であると称される場合、その細胞／組織／臓器は、治療される被験体と遺伝的に同一であるか、遺伝的に同一の被験体に由来／得られたものである。自己及び同種細胞／組織／臓器は、参照被検体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含む。

【0385】

本明細書中で細胞／組織／臓器が、参照被検体に関して同種であると言及される場合、細胞／組織／臓器は参照被検体と遺伝的に非同一であるか、遺伝的に非同一な被検体から誘導／得られたものである。本明細書において、細胞／組織／臓器が被験体の治療の文脈で同種同 系であると言及される場合、その細胞／組織／臓器は、治療される被験体と遺伝的に非同一であるか、遺伝的に非同一な被験体に由来／得られたものである。同種細胞／組織／臓器は、参照被検体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と非同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含んでいてもよい。

【0386】

いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って被験体に投与される、本明細書に記載のＣＡＲを発現／含有するウイルス（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／含有するウイルス）に特異的な免疫細胞は、治療される被験体のＨＬＡ／ＭＨＣプロファイルに基づいて選択される。

【0387】

いくつかの実施形態では、被験体に投与される細胞は、被験体に関してＨＬＡ／ＭＨＣが一致することに基づいて選択される。いくつかの実施形態において、被験体に投与される細胞は、被験体に関してＨＬＡ／ＭＨＣがほぼ又は完全に一致することに基づいて選択される。

【0388】

本明細書で使用する場合、ＨＬＡ／ＭＨＣ対立遺伝子は、同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする場合に「一致する」と判定される。すなわち、「一致」は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列における同義的な相違及び／又は非コード領域における相違の存在の可能性に関係なく、タンパク質レベルで決定される。

【0389】

参照被検体に関して「ＨＬＡが一致」している細胞は、以下の通りである：（ｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１が８／８一致する；又は（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１及び－ＤＱＢ１にまたがる１０／１０一致する、又は（ｉｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１及び－ＤＰＢ１にまたがる１２／１２一致する。参照被検体に関して「ほぼ又は完全にＨＬＡが一致する」細胞は、以下のものである：（ｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ及び－ＤＲＢ１が４／８以上（すなわち、４／８、５／８、６／８、７／８又は８／８）一致する；又は（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１及び－ＤＱＢ１にまたがる５／１０以上（すなわち、５／１０、６／１０、７／１０、８／１０、９／１０又は１０／１０）の一致する；又は、（ｉｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１及び－ＤＰＢ１にまたがる６／１２以上（すなわち、６／１２、７／１２、８／１２、９／１２、１０／１２、１１／１２又は１２／１２）一致する。

【0390】

特に、免疫細胞が特異的であるウイルスの感染に起因する、又は感染に関連する疾患／状態の治療のために、本明細書に記載のＣＡＲを発現／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／含有する）ウイルスに特異的な免疫細胞を投与する場合には、（同種由来であるかにかかわらず）ＨＬＡがほぼ一致する、又は完全に一致する細胞を被験体に投与することが有利になりうる。このような場合、宿主の細胞による投与細胞へのウイルス抗原の提示は、（本来のＴＣＲを介して）インビボでの細胞の活性化、増殖、生存を増加させ、その結果、治療効果を向上させることが期待される。

【0391】

ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞を使用する方法
本明細書に記載のＣＡＲ発現、ウイルス特異的免疫細胞（例えば、本明細書に記載のＣＤ３０特異的ＣＡＲ発現ＥＢＶ特異的Ｔ細胞（ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ））は、治療的及び／又は予防的方法における使用を見出す。

【0392】

本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞を被験体に投与することを含む、被験体における疾患／状態を治療／予防する方法が提供される。

【0393】

また、医学的治療／予防方法における使用のための、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞も提供される。また、疾患／状態を治療／予防する方法における使用のための、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞も提供される。また、疾患／状態を治療／予防するための方法において使用するための医薬の製造における、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞の使用も提供される。

【0394】

本方法は一般に、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞の集団を被験体に投与することを含むことが理解されよう。いくつかの実施形態において、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞は、そのような細胞を含む医薬組成物の形態で投与され得る。

【0395】

特に、養子細胞移植（ＡＣＴ）による疾患／病態の治療／予防方法において、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞を使用することが企図されている。

【0396】

本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞は、同種移植による疾患／病態の治療方法において特に有用である。

【0397】

本明細書において「同種移植」とは、レシピエント被験体と遺伝的に非同一である細胞、組織又は臓器をレシピエント被験体に移植することをいう。細胞、組織、又は臓器は、レシピエント対象者と遺伝的に非同一であるドナー対象者の細胞、組織、又は臓器に由来するものであってもよいし、ドナー対象者の細胞、組織、又は臓器に由来するものであってもよい。同種移植は、自己移植とは異なり、レシピエントと遺伝的に同一のドナーの細胞、組織又は臓器の移植を指す。

【0398】

同種免疫細胞の養子移入は同種移植の一形態であることが理解されよう。いくつかの実施形態において、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、同種移植による疾患／病態の治療／予防方法における治療／予防剤として使用される。

【0399】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物の投与は、好ましくは「治療上有効な量」又は「予防上有効な量」であり、これは被験体に治療的又は予防的利益を示すのに十分な量である。実際の投与量、及び投与の速度及び時間経過は、疾患／状態の性質及び重篤度、ならびに投与される特定の物品に依存する。治療の処方、例えば投与量などの決定は、一般開業医や他の医師の責任の範囲内であり、通常、治療される疾患／障害、個々の被験者の状態、投与部位、投与方法、及び開業医に知られている他の要因を考慮する。上記の技術やプロトコールの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００，ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓに記載されている。

【0400】

複数回投与してもよい。複数回の投与は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、もしくはそれ以上の時間、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、もしくは３１日、又は１、２、３、４、５、もしくは６ヶ月である。例として、投与は７日、１４日、２１日、又は２８日（プラスマイナス３日、２日、又は１日）に１回行うことができる。

【0401】

いくつかの実施形態において、治療は、他の治療的又は予防的介入、例えば化学療法、免疫療法、放射線療法、手術、ワクチン接種及び／又はホルモン療法をさらに含んでもよい。このような他の治療的又は予防的介入は、本開示によって包含される療法の前、最中、及び／又は後に行われてもよく、他の治療的又は予防的介入の送達は、本開示の療法とは異なる投与経路を介して行われてもよい。

【0402】

投与は、単独で又は他の治療と組み合わせて、治療される状態に依存して同時又は逐次的に行うことができる。本明細書に記載のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、別の治療介入と同時又は逐次的に投与することができる。

【0403】

同時投与とは、２つ以上の治療的介入を一緒に、例えば両方の活性薬剤を含む医薬組成物として（すなわち配合製剤として）、あるいは互いに直後に、任意で同じ投与経路、例えば同じ動脈、静脈又は他の血管に投与することをいう。

【0404】

逐次投与とは、１つの治療介入を投与した後、所定の時間間隔をおいて１つ以上のさらなる治療介入を別々に投与することをいう。いくつかの実施形態ではそうであるが、治療が同じ経路で投与されることは必須ではない。時間間隔は任意である。

【0405】

養子細胞移植（Ａｄｏｐｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ）は一般に、細胞（例えば免疫細胞）を被検体から採取するプロセスを指し、典型的には血液サンプルを採取し、そこから細胞を単離する。その後、細胞は一般的に改変及び／又は拡大され、同一の対象者（自己／同種細胞の養子移入の場合）又は異なる対象者（同種細胞の養子移入の場合）に投与される。この処置は、典型的には、特定の所望の特性を有する細胞の集団を被験者に提供すること、あるいはそのような特性を有する細胞の頻度をその被験者に増加させることを目的とする。養子移入は、被験体に細胞又は細胞集団を導入すること、及び／又は被験体における細胞又は細胞集団の頻度を増加させることを目的として実施されうる。

【0406】

免疫細胞の養子移入については、例えばＫａｌｏｓ ａｎｄ Ｊｕｎｅ（２０１３），Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：４９－６０、及びＤａｖｉｓら（２０１５）、Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２１（６）：４８６－４９１に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。当業者は、例えば、参照によりその全体が組み込まれるＤａｉら、（２０１６）Ｊ Ｎａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ １０８（７）：ｄｊｖ４３９を参照することにより、本開示による細胞の養子移入のための適切な試薬及び手順を決定することができる。

【0407】

本開示は、本開示によるＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を含む／発現するウイルス特異的免疫細胞を被験体に投与することを含む方法を提供する。

【0408】

いくつかの実施形態において、方法は、ウイルスに特異的な免疫細胞を生成すること、又はウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、本開示によるＣＡＲを構成／発現するように、ウイルスに特異的な免疫細胞を改変することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、本開示によるＣＡＲをコードする核酸を含む／発現するように、ウイルスに特異的な免疫細胞を改変することを含む。

【0409】

いくつかの実施形態において、方法は、本開示によるＣＡＲを発現／構成するように改変された（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／構成するように改変された）ウイルスに特異的な免疫細胞を被験体に投与することを含む。

【0410】

いくつかの実施形態において、方法は以下を含む：
（ａ）ウイルスに特異的な免疫細胞を、本開示に従ったＣＡＲを発現するかもしくはそれを含むように、又は本開示に従ったＣＡＲをコードする核酸を発現するかもしくはそれを含むように改変すること、及び、
（ｂ）本開示に従ってＣＡＲを発現するように改変された、又はＣＡＲを含むように改変されたウイルスに特異的な免疫細胞、又は本開示に従ってＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又はＣＡＲを含むように改変されたウイルスに特異的な免疫細胞を、被験体に投与すること。

【0411】

いくつかの実施形態において、方法は以下を含む：
（ａ）ウイルスに特異的な免疫細胞を単離又は取得すること、
（ｂ）ウイルスに特異的な免疫細胞を、本開示に従ったＣＡＲを発現もしくは構成するように、又は本開示に従ったＣＡＲをコードする核酸を発現もしくは構成するように改変すること、及び、
（ｃ）本開示に従ってＣＡＲを発現もしくは構成するように改変された、又は本開示に従ってＣＡＲをコードする核酸を発現もしくは構成するように改変された、ウイルスに特異的な免疫細胞を被験体に投与すること。

【0412】

いくつかの実施形態において、方法は以下を含む：
（ａ）被検体から免疫細胞（例えばＰＢＭＣ）を単離すること
（ｂ）ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大すること
（ｃ）ウイルスに特異的な免疫細胞を、本開示によるＣＡＲを発現もしくは含んでなるように、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現もしくは含んでなるように改変すること、及び
（ｄ）本開示に従ってＣＡＲを発現もしくは構成するように改変された、又は本開示に従ってＣＡＲをコードする核酸を発現もしくは構成するように改変された、ウイルスに特異的な免疫細胞を被験体に投与すること。

【0413】

いくつかの実施形態において、本方法は、本開示に従ってＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するか、又はそれを含むように改変されたＥＢＶ特異的免疫細胞、又は本開示に従ってＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するか、又はそれを含むように改変されたＥＢＶ特異的免疫細胞を被験体に投与することを含む。

【0414】

いくつかの実施形態において、方法は以下を含む：
（ａ）本開示に従ったＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するかもしくはそれを含むように、又は本開示に従ったＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するかもしくはそれを含むように、ＥＢＶ特異的免疫細胞を改変すること、ならびに
（ｂ）本開示に従ってＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するかもしくはそれからなるように改変された、又は本開示に従ってＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するかもしくはそれからなるように改変された、ＥＢＶ特異的免疫細胞を被験体に投与すること。

【0415】

いくつかの実施形態において、方法は以下を含む：
（ａ）被験体から免疫細胞（例えば、ＰＢＭＣ）を単離すること、
（ｂ）ＥＢＶ特異的免疫細胞の集団を生成／拡大すること、
（ｃ）ＥＢＶ特異的免疫細胞を、本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するかもしくはそれを含むように、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するかもしくはそれを含むように改変すること、ならびに
（ｄ）本開示に従ってＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するかもしくはそれからなるように改変された、又は本開示に従ってＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するかもしくはそれからなるように改変された、ＥＢＶ特異的免疫細胞を、被験体に投与すること。

【0416】

いくつかの実施形態では、免疫細胞（例えばＰＢＭＣ）が単離された被検体は、細胞が投与された被検体と同じ被検体である（すなわち、養子移入は自家／同種細胞の場合がある）。いくつかの実施形態では、免疫細胞（例えばＰＢＭＣ）が単離される被検体は、細胞が投与される被検体とは異なる被検体である（すなわち、養子移入は同種細胞であってもよい）。

【0417】

いくつかの実施形態において、方法は以下の１つ以上を含む：
被験体から血液サンプルを得ること、
被験体から得られた血液試料から免疫細胞（例えばＰＢＭＣ）を単離すること；
ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大すること（例えば、ウイルスの抗原／ペプチドを含む／発現する細胞（ＡＰＣなど）の存在下でＰＢＭＣを培養すること、又はウイルスに感染した細胞（ＡＰＣなど）の存在下でＰＢＭＣを培養すること）；
ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏ細胞培養において、ウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること；
本開示によるＣＡＲを発現もしくは構成するように、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現もしくは構成するように、ウイルスに特異的な免疫細胞を改変すること（例えば、そのようなＣＡＲをコードするウイルスベクター、又はそのような核酸を構成するウイルスベクターによる形質導入によって）；
ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏ細胞培養において、本開示によるＣＡＲを発現／コードするウイルス、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現／コードするウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること、
本開示によるＣＡＲを発現する／含むウイルス、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞を収集／単離すること；
本開示に従ったＣＡＲを発現／構成するウイルスに特異的な免疫細胞、又は本開示に従ったＣＡＲをコードする核酸を、医薬組成物に製剤化すること、例えば、細胞を薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、又は担体と混合することによって製剤化すること、
本開示によるＣＡＲを発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞、又はそのような細胞を含む医薬組成物を、被験体に投与すること。

【0418】

いくつかの実施形態において、方法は、ＣＡＲの発現を誘導／増強するため、及び／又はＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞の増殖もしくは生存を誘導／増強するために、細胞又は被験体を処理することをさらに含み得る。

【0419】

治療的及び／又は予防的方法は、疾患／状態の発症／進行を抑制する、疾患／状態の症状を緩和する、又は疾患／状態の病態を軽減するために有効であり得る。方法は、疾患／状態の進行を予防するために、例えば、疾患／状態の悪化を予防するために、又は疾患／状態の発症速度を遅らせるために有効であり得る。いくつかの実施形態において、方法は、疾患／状態の改善、例えば、疾患／状態の症状の重篤度の軽減、又は疾患／状態の重篤度／活性の他の相関物の軽減をもたらし得る。いくつかの実施形態において、本方法は、疾患／状態の後期段階（例えば、慢性期又は転移）への進展を防止し得る。

【0420】

本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の治療的及び予防的有用性は、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現する細胞の数／活性、及び／又はウイルスに感染した細胞の数／活性の減少から治療的又は予防的利益を得る任意の疾患／状態の治療／予防に及ぶことが理解されよう。

【0421】

いくつかの実施形態において、本開示に従って治療／予防される疾患／状態は、免疫細胞が特異的であるウイルスが病理学的に関与する疾患／状態である。すなわち、いくつかの実施形態において、疾患／状態は、ウイルスへの感染によって引き起こされるか又は悪化する疾患／状態、ウイルスへの感染が危険因子である疾患／状態、及び／又はウイルスへの感染が疾患／状態の発症、発症、進行、及び／又は重症度と正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連性を有する疾患／状態である。

【0422】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲの標的抗原が病理学的に関与する、本開示に従って治療／予防される疾患／状態である。すなわち、いくつかの実施形態において、疾患／状態は、標的抗原の発現／過剰発現によって引き起こされるか又は悪化する疾患／状態、標的抗原の発現／過剰発現が危険因子である疾患／状態、及び／又は標的抗原の発現／過剰発現が疾患／状態の発症、発症、進行、及び／又は重症度と正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連性を有する疾患／状態である。

【0423】

疾患／状態は、ＣＤ３０又はＣＤ３０を発現／過剰発現している細胞が病理学的に関与している疾患／状態、例えば、ＣＤ３０を発現／過剰発現している細胞が疾患／状態の発症、発症もしくは進行、及び／又は疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重篤度に正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連している疾患／状態、又はＣＤ３０の発現／過剰発現が疾患／状態の発症、発症もしくは進行の危険因子である疾患／状態であってもよい。

【0424】

本開示に従って処置／予防される疾患／状態は、ＥＢＶ感染を特徴とする疾患／状態であってもよい。例えば、疾患／状態は、ＥＢＶ又はＥＢＶに感染した細胞が病理学的に関与する疾患／状態であってもよく、例えば、ＥＢＶ感染が疾患／状態の発症、発症又は進行、及び／又は疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重篤度に正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連する疾患／状態、又はＥＢＶ感染が疾患／状態の発症、発症又は進行の危険因子である疾患／状態であってもよい。

【0425】

治療は、ウイルス量を減少させること、ウイルス陽性細胞（例えば、ＥＢＶ陽性細胞）の数／割合を減少させること、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現する細胞（例えば、ＣＤ３０発現細胞）の数／割合を減少させること、ウイルス陽性細胞（例えば、ＥＢＶ陽性細胞）の活性を減少させること、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現する細胞（例えば、ＣＤ３０発現細胞）の数／割合を減少させること、ウイルス陽性細胞（例えば、ＥＢＶ陽性細胞）の活性を減少させること、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現する細胞（例えば、ＣＤ３０発現細胞）の活性を減少させること、疾患／状態の症状の発症／進行を遅延／予防すること、疾患／状態の症状の重症度を軽減すること、ウイルス陽性細胞（例えばＥＢＶ陽性細胞）の生存／増殖を軽減すること、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現する細胞（例えばＣＤ３０発現細胞）の生存／増殖を軽減すること、又は被験体の生存を増加させることのうちの１つ以上を目的とすることができる。

【0426】

いくつかの実施形態では、被検体は、ウイルス（例えばＥＢＶ）、ウイルス（例えばＥＢＶ）に感染した細胞、又はＣＡＲの標的抗原（例えばＣＤ３０）を発現／過剰発現する細胞（例えば、末梢において、又は疾患／状態（例えば、疾患／状態の症状が現れる臓器／組織）に罹患している器官／組織において）、又はウイルス陽性がん細胞（例えばＥＢＶ陽性がん細胞）の検出、又はＣＡＲの標的抗原（例えばＣＤ３０）を発現／過剰発現するがん細胞の検出に基づいて、本明細書に記載の治療のために選択され得る。疾患／状態は、任意の組織又は器官又は器官系に影響を及ぼす可能性がある。いくつかの実施形態では、疾患／状態は複数の組織／臓器／器官系に影響を及ぼす可能性がある。

【0427】

いくつかの実施形態において、被験体は、被験体がＥＢＶに感染しているか、又はＥＢＶに感染した細胞を含んでいるという決定に基づいて、本開示に従った治療／予防のために選択され得る。いくつかの実施形態において、被検体は、被検体がＣＤ３０を発現／過剰発現する細胞、例えばＣＤ３０を発現／過剰発現するがん細胞を含むという決定に基づいて、本開示に従った治療／予防のために選択され得る。

【0428】

いくつかの実施形態において、被検体は、本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞を投与する前に、リンパ削除化学療法を投与される。

【0429】

すなわち、いくつかの実施形態において、本開示に従った疾患／状態を治療／予防する方法は、（ｉ）被験体にリンパ節削除化学療法を投与することと、（ｉｉ）その後、本開示に従ったＣＡＲを発現する／含むウイルス、又は本開示に従ったＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞を投与することとを含む。

【0430】

本明細書において、「リンパ球枯渇性化学療法」とは、治療が投与される被験体内のリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、又は自然リンパ球（ＩＬＣ）、又はそれらの前駆体）の枯渇をもたらす化学療法剤による治療をいう。リンパ球枯渇性化学療法剤」とは、リンパ球の枯渇をもたらす化学療法剤を指す。

【0431】

リンパ節削除化学療法及び養子細胞移植による治療方法におけるその使用については、例えば、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００５）２６（２）：１１１－７及びＭｕｒａｎｓｋｉら、Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｏｎｃｏｌ．（２００６）（１２）：６６８－８１に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。リンパ球除去化学療法の目的は、レシピエント被験体の内因性リンパ球集団を枯渇させることである。

【0432】

免疫細胞の養子移入による疾患治療の文脈では、養子移入された細胞を受け取るためにレシピエント被験体のコンディションを整えるために、養子移入細胞移植の前にリンパ節削除化学療法が一般的に投与される。リンパ節削除化学療法は、例えば免疫抑制性サイトカインを発現する細胞を除去することによって寛容な環境を作り出し、養子移入リンパ球の増殖と活性に必要な「リンパ球空間」を作り出すことによって、養子移入細胞の持続と活性を促進すると考えられている。

【0433】

リンパ節削除化学療法で一般的に使用される化学療法剤には、フルダラビン、シクロホスファミド、ベダムスチン、ペントスタチンなどがある。

【0434】

本開示の態様及び実施形態は、特に、フルダラビン及び／又はシクロホスファミドの投与を含むリンパ削除化学療法に関する。特定の実施形態において、本開示によるリンパ節削除化学療法は、フルダラビン及びシクロホスファミドの投与を含む。

【0435】

フルダラビンはプリンアナログで、リボヌクレオチド還元酵素とＤＮＡポリメラーゼを阻害することによりＤＮＡ合成を阻害する。白血病（特に慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病）及びリンパ腫（特に非ホジキンリンパ腫）の治療のための化学療法剤としてしばしば使用される。フルダラビンは静脈内又は経口投与することができる。

【0436】

シクロホスファミドはアルキル化剤であり、ＤＮＡ塩基間の不可逆的な鎖内及び鎖間架橋を引き起こす。シクロホスファミドは、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫を含むがんの化学療法剤としてしばしば使用される。シクロホスファミドは静脈内又は経口投与される。

【0437】

本開示に従ったリンパ節削除化学療法のコースは、１つ以上の化学療法剤の複数回の投与を含み得る。リンパ節削除化学療法のコースは、フルダラビン及びシクロホスファミドを、本明細書中に記載される用量で、本明細書中に記載される日数投与することからなり得る。例示すると、リンパ節削除化学療法のコースは、フルダラビンを１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２の用量で３日間連続して投与し、シクロホスファミドを１日当たり５００ｍｇ／ｍ^２の用量で３日間連続して投与することからなり得る。

【0438】

リンパ節削除化学療法のコースに従って化学療法剤の最終用量を投与した日を、リンパ節削除化学療法のコースの完了日とみなすことができる。

【0439】

いくつかの実施形態において、フルダラビンは、１日当たり５～１００ｍｇ／ｍ^２の用量、例えば、１日当たり１５～９０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１５～８０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１５～７０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１５～６０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１５～５０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１０～４０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり５～６０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１０～６０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１５～６０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり２０～６０ｍｇ／ｍ^２、又は１日当たり２５～６０ｍｇ／ｍ^２のいずれかで投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１日当たり２０～４０ｍｇ／ｍ^２、例えば１日当たり２５～３５ｍｇ／ｍ^２、例えば１日当たり約３０ｍｇ／ｍ^２の用量で投与される。

【0440】

いくつかの実施形態において、フルダラビンは、１日以上１４日未満連続して、前項による用量で投与される。いくつかの実施形態において、フルダラビンは、２～１４日、例えば２～１３日、２～１２日、２～１１日、２～１０日、２～９日、２～８日、２～７日、２～６日、２～５日又は２～４日のいずれかの連続日数、前項による用量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、２～６日間連続、例えば２～４日間連続、例えば３日間連続、前項による用量で投与される。

【0441】

いくつかの実施形態では、フルダラビンを１日あたり１５～６０ｍｇ／ｍ^２の用量で、２～６日間連続して、例えば１日あたり３０ｍｇ／ｍ^２の用量で、３日間連続して投与する。

【0442】

いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、１日当たり５０～１０００ｍｇ／ｍ^２、例えば、１日当たり１００～９００ｍｇ／ｍ^２、１日当たり１５０～８５０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり２００～８００ｍｇ／ｍ^２、１日当たり２５０～７５０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり３００～７００ｍｇ／ｍ^２、１日当たり３５０～６５０ｍｇ／ｍ^２、１日当たり４００～６００ｍｇ／ｍ^２、又は１日当たり４５０～５５０ｍｇ／ｍ^２のいずれかの用量で投与される。いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、１日当たり４００～６００ｍｇ／ｍ^２、例えば１日当たり４５０～５５０ｍｇ／ｍ^２、例えば１日当たり約５００ｍｇ／ｍ^２の用量で投与される。

【0443】

いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、１日以上１４日未満連続して、前項による用量で投与される。いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、２～１４日、例えば、２～１３日、２～１２日、２～１１日、２～１０日、２～９日、２～８日、２～７日、２～６日、２～５日又は２～４日のいずれかの連続日数、前項による用量で投与される。いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、２～６日間連続、例えば２～４日間連続、例えば３日間連続、前項による用量で投与される。

【0444】

いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、１日あたり４００～６００ｍｇ／ｍ^２の用量で、２～６日間連続して投与され、例えば、１日あたり５００ｍｇ／ｍ^２の用量で、３日間連続して投与される。

【0445】

クロホスファミドは同時又は逐次投与することができる。同時投与とは、例えば、両剤を含む医薬組成物として（すなわち、併用製剤において）一緒に投与すること、又は互いに直後に投与することであり、任意に、同じ投与経路、例えば、同じ動脈、静脈又は他の血管に投与することである。逐次投与とは、一方の薬剤を投与した後、所定の時間間隔をおいて他方の薬剤を別々に投与することをいう。いくつかの実施形態ではそうであるが、薬剤が同じ経路で投与されることは必須ではない。

【0446】

本開示に従うリンパ節削除化学療法のコースのいくつかの実施形態において、フルダラビン及びシクロホスファミドは、同じ日又は日に投与される。例示として、１日当たり３０ｍｇ／ｍ^２の用量のフルダラビンを３日間連続して投与し、１日当たり５００ｍｇ／ｍ^２の用量のシクロホスファミドを３日間連続して投与することからなるリンパ節削除化学療法のコースの例において、フルダラビン及びシクロホスファミドは、同じ３日間連続して投与され得る。このような例では、フルダラビン及びシクロホスファミドが被験体に投与された連続する３日間の最終日に、リンパ削除化学療法のコースが完了したということができる。

【0447】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現／含有する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／含有する）ウイルスに特異的な免疫細胞を、リンパ節削除化学療法のコースの終了後、特定の期間内に被験体に投与する。

【0448】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現／コードするウイルスに特異的な免疫細胞（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／コードするウイルスに特異的な免疫細胞）は、本明細書に記載のリンパ節削除化学療法のコースの完了から１～２８日以内、例えば、１～２１日、１～１４日、１～７日、２～７日、２～５日、又は３～５日のうちの１日以内に被験体に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞は、本明細書に記載のリンパ節削除化学療法のコースの完了から２～１４日以内（例えば、３～５日以内）に被験体に投与される。

【0449】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現／含有する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／含有する）ウイルスに特異的な免疫細胞を、１×１０^７細胞／ｍ２～１×１０^９細胞／ｍ^２、例えば２×１０^７細胞／ｍ２～１×１０^９細胞／ｍ^２、２．５×１０^７細胞／ｍ^２～８×１０^８細胞／ｍ^２、３×１０^７細胞／ｍ^２～６×１０^８細胞／ｍ^２、又は４×１０^７細胞／ｍ^２～４×１０^８細胞／ｍ^２のいずれかの用量で投与する。

【0450】

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現／含有する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／含有する）ウイルスに特異的な免疫細胞が、４×１０^７細胞／ｍ^２、１×１０^８細胞／ｍ^２又は４×１０^８細胞／ｍ^２の用量で投与される。

【0451】

本明細書に記載のＣＡＲを発現／含有する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現／含有する）ウイルスに特異的な免疫細胞の投与は、静脈内注入により行うことができる。投与は、１～５０ｍｌの容量で、１～１０分間にわたって行うことができる。

【0452】

いくつかの実施形態において、本開示に従って治療／予防される疾患はがんである。

【0453】

がんとは、望ましくない細胞の増殖（又は望ましくない細胞の増殖によって発現する疾患）、新生物又は腫瘍を指す。がんは良性でも悪性でもよく、原発性でも二次性（転移性）でもよい。 新生物又は腫瘍は、細胞の異常な増殖又は成長であり、どのような組織にも存在する。がんは、例えば、副腎、副腎髄質、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含む、又は脳を除く）小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（例えば、腎上皮）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽球、上顎、縦隔、腸間膜、子宮筋層、鼻咽頭、卵管、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、軟部組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃、気管、子宮、外陰部、及び／又は白血球に由来する組織／細胞であってもよい。

【0454】

腫瘍には神経系腫瘍と非神経系腫瘍がある。神経系腫瘍は、中枢神経系又は末梢神経系のいずれに発生してもよく、例えば、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、シュワンノーマ、神経線維肉腫、星細胞腫、乏突起膠腫などが挙げられる。非神経系のがん／腫瘍は、他の非神経系組織に由来するものであってもよく、その例としては、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、肝がん、表皮がん、前立腺がん、乳がん、肺がん、結腸がん、卵巣がん、膵がん、胸腺がん、ＮＳＣＬＣ、血液がん、肉腫などがある

【0455】

いくつかの実施形態において、がんは、以下からなる群より選択される：固形がん、血液がん、胃がん（例えば、胃がん、胃腺がん、胃腸腺がん）、肝臓がん（肝細胞がん、胆管がん）、頭頸部がん（例えば、頭頸部扁平上皮がん）、口腔がん（例：口腔咽頭がん（例：口腔咽頭がん）、口腔がん、喉頭がん、上咽頭がん、食道がん）、大腸がん（例：大腸がん）、結腸がん、大腸がん、子宮頸がん、前立腺がん、肺がん（例：ＮＳＣＬＣ、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん）、膀胱がん、尿路上皮がん、皮膚がん（例：黒色腫、進行黒色腫）、腎細胞がん（例：腎細胞がん）、卵巣がん（例：卵巣がん）、中皮腫、乳がん、脳腫瘍（膠芽腫など）、前立腺がん、膵がん、骨髄性血液悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、胸腺腫又は多発性骨髄腫（ＭＭ）。

【0456】

いくつかの実施形態において、がんは、免疫細胞が特異的であるウイルスが病理学的に関与するがんである。すなわち、いくつかの実施形態において、がんは、ウイルスへの感染によって引き起こされるか又は悪化するがん、ウイルスへの感染が危険因子であるがん、及び／又はウイルスへの感染ががんの発症、発症、進行、重症度もしくは転移と正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連性を有するがんである。

【0457】

ＥＢＶ感染は、例えばＪｈａら、Ｆｒｏｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（２０１６）７：１６０２に概説されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

【0458】

いくつかの実施形態において、治療／予防されるがんは、ＥＢＶ関連がんである。いくつかの実施形態において、がんは、ＥＢＶの感染によって引き起こされるか又は悪化するがん、ＥＢＶの感染が危険因子であるがん、及び／又はＥＢＶの感染ががんの発症、発症、進行、重症度もしくは転移と正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連性を有するがんである。がんはＥＢＶ感染によって特徴付けられ、例えばがんはＥＢＶに感染した細胞から構成される。このようながんはＥＢＶ陽性がんと呼ばれることがある。

【0459】

本開示に従って治療／予防され得るＥＢＶ関連がんには、バーキットリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳリンパ腫）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、及び免疫不全に関連するＥＢＶ関連リンパ腫（Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害に関連するＥＢＶ陽性リンパ腫、ＨＩＶ感染／ＡＩＤＳに関連するＥＢＶ陽性リンパ腫、及び口腔毛髪状白板症など）、ならびに上咽頭がん（ＮＰＣ）及び胃がん（ＧＣ）などの上皮細胞関連がんなどのＢ細胞関連がんが含まれる。

【0460】

いくつかの実施形態において、がんは、リンパ腫（例えば、ＥＢＶ陽性リンパ腫）、頭頸部扁平上皮がん（ＨＮＳＣＣ；例えば、ＥＢＶ陽性ＨＮＳＣＣ）、上咽頭がん（ＮＰＣ；例えば、ＥＢＶ陽性ＮＰＣ）、及び胃がん（ＧＣ；例えば、ＥＢＶ陽性ＧＣ）から選択される。

【0461】

いくつかの実施形態では、がんは、ＣＡＲの標的抗原が病理学的に関与するがんである。すなわち、いくつかの実施形態において、がんは、標的抗原の発現によって引き起こされる、又は増悪するがん、標的抗原の発現が危険因子であるがん、及び／又は標的抗原の発現ががんの発症、発症、進行、重症度又は転移と正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連性を有するがんである。がんは、標的抗原の発現によって特徴づけられる可能性があり、例えば、がんは標的抗原を発現する細胞から構成される可能性がある。このようながんは、標的抗原陽性と呼ばれることがある。

【0462】

標的抗原に対して「陽性（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）」であるがんは、標的抗原を（例えば細胞表面で）発現している細胞からなるがんである可能性がある。標的抗原に対して「陽性」であるがんは、標的抗原を過剰発現している可能性がある。標的抗原の過剰発現は、同等の非がん細胞／非腫瘍組織による発現レベルよりも高い標的抗原の遺伝子又はタンパク質の発現レベルを検出することによって決定することができる。

【0463】

いくつかの実施形態では、標的抗原は本明細書に記載されるようながん細胞抗原である。いくつかの実施形態において、標的抗原はＣＤ３０である。

【0464】

いくつかの実施形態において、がんは、ＣＤ３０が病理学的に関与するがんである。すなわち、いくつかの実施形態において、がんは、ＣＤ３０の発現が原因又は増悪するがん、ＣＤ３０の発現が危険因子であるがん、及び／又はＣＤ３０の発現ががんの発症、発症、進行、重篤度もしくは転移と正の（陽性の、ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ）関連性を有するがんである。がんは、ＣＤ３０の発現によって特徴付けられる可能性があり、例えば、がんはＣＤ３０を発現する細胞から構成される可能性がある。このようながんはＣＤ３０陽性がんと呼ばれる。

【0465】

ＣＤ３０陽性がんは、ＣＤ３０を発現する細胞（例えば、細胞表面でＣＤ３０タンパク質を発現する細胞）からなるがんであり得る。ＣＤ３０陽性がんは、ＣＤ３０を過剰発現している可能性がある。ＣＤ３０の過剰発現は、同等の非がん細胞／非腫瘍組織による発現レベルよりも大きいＣＤ３０の遺伝子又はタンパク質発現レベルの検出によって決定することができる。

【0466】

ＣＤ３０陽性がんは、例えばｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｙｄｅｎら，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１７）７：ｅ６０３及びＭｕｔａ及びＰｏｄａｃｋ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ（２０１３），５７（１－３）：１５１－８に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＣＤ３０は、活性化Ｔ及びＢリンパ球の小さなサブセット、ならびに古典的ホジキンリンパ腫及び未分化大細胞リンパ腫を含む様々なリンパ系新生物で発現する。また、特定不能の末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、結節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、様々なＢ細胞非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、特にＥＢＶ陽性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む）、及び進行性全身性肥満細胞症でもＣＤ３０の多様な発現が示されている。ＣＤ３０の発現は、生殖細胞腫瘍や精巣胚性がんなど、一部の非造血性悪性腫瘍でも観察されている。

【0467】

膜貫通型糖タンパク質ＣＤ３０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである（Ｆａｌｉｎｉら，Ｂｌｏｏｄ（１９９５）８５（１）：１－１４）。ＴＮＦ／ＴＮＦレセプター（ＴＮＦ－Ｒ）スーパーファミリーのメンバーは複数のレベルで免疫反応を調整し、ＣＤ３０は正常なリンパ球の機能や増殖を制御する役割を担っている。ＣＤ３０はもともと、ＨＬ由来の細胞株Ｌ４２８でマウスを免疫することによって作製されたモノクローナル抗体Ｋｉ－１によって認識される抗原として報告された（Ｍｕｔａ ａｎｄ Ｐｏｄａｃｋ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ（２０１３）５７：１５１－１５８）。ＣＤ３０抗原の発現は、ホジキン病におけるＡＬＣＬとリード－スタンバーグ細胞の同定に用いられてきた（Ｆａｌｉｎｉら、Ｂｌｏｏｄ（１９９５）８５（１）：１－１４）。リンパ腫の悪性細胞に広く発現していることから、ＣＤ３０は抗体ベースの免疫療法と細胞療法の両方を開発するための潜在的な標的である。重要なことは、ＣＤ３０は生理的条件下では通常正常組織には発現しないため、安静時の成熟Ｂ細胞や前駆Ｂ細胞、Ｔ細胞には存在しないことである（Ｙｏｕｎｅｓ ａｎｄ Ａｎｓｅｌｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ（２０１６）５３：１８６－１８９）。ＣＤ３０を標的とする抗体薬物複合体であるブレンツキシマブ・ベドチンは、当初ＣＤ３０陽性ＨＬの治療薬として承認された（アドセトリス（登録商標）米国添付文書２０１８年版）。ブレンツキシマブ・ベドチンの臨床試験のデータは、ＣＤ３０陽性リンパ腫の治療標的としてのＣＤ３０を支持しているが、その使用に伴う毒性が懸念されている。

【0468】

ホジキンリンパ腫（ＨＬ）は、リンパ節及びリンパ系を侵すまれな悪性腫瘍である。ＨＬの罹患率は二峰性で、ほとんどの患者が１５～３０歳で診断され、その後５５歳以上の成人にもう一つのピークがある。２０１９年には、米国で８，１１０人（女性３，５４０人、男性４５７０人）が新たに発症し、１，０００人（女性４１０人、男性５９０人）が死亡すると推定されている（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２０１９）。米国国立がん研究所のＳＥＥＲデータベースの２０１２～２０１６年の症例に基づくと、米国の小児ＨＬ患者のＨＬ罹患率は以下の通りである： １～４歳：０．１、５～９歳：０．３、１０～１４歳：１．３、１５～１９歳：１０万人当たり３．３人（ＳＥＥＲ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ，１９７５－２０１６）。世界保健機関（ＷＨＯ）の分類では、ＨＬは古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）と結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）の２種類に大別される。欧米諸国では、ｃＨＬが全ＨＬの９５％を占め、ＮＬＰＨＬは５％である（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ２０１９）。

【0469】

進行したｃＨＬ患者に対する一次化学療法は、７０％から７５％の治癒率と関連している（Ｋａｒａｎｔａｎｏｓら、Ｂｌｏｏｄ Ｌｙｍｐｈａｔ Ｃａｎｃｅｒ（２０１７）７：３７－５２）。一次治療後に再発した患者には、サルベージ化学療法後に自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を行うのが一般的である。残念ながら、ｃＨＬ患者の最大５０％がＡＳＣＴ後に疾患再発を経験する。ＡＳＣＴ後に再発した患者の全生存期間中央値は約２年である（Ａｌｉｎａｒｉ Ｂｌｏｏｄ（２０１６）１２７：２８７－２９５）。積極的な併用化学療法にもかかわらず、患者の１０％～４０％は救済化学療法に奏効せず、奏効しない患者に対するＡＳＣＴを支持する無作為化臨床試験データはない。救済化学療法に反応しない患者、ＡＳＣＴ後に再発した患者、又はこのアプローチの候補でない患者にとって、予後は引き続き深刻であり、新たな治療アプローチが緊急に必要とされている（Ｋｅｕｄｅｌｌ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１９）１８４：１０５－１１２）。

【0470】

小児集団（小児、青年、若年成人）の大部分は現在利用可能な治療法で治癒するが、ごく一部の患者は難治性又は再発性疾患を有し、改善された有効性の利益とともに許容可能な安全性プロファイルを有する新規治療法を必要とする可能性がある（Ｆｌｅｒｌａｇｅら、Ｂｌｏｏｄ（２０１８）１３２：３７６－３８４；Ｋｅｌｌｙ、Ｂｌｏｏｄ（２０１５）１２６：２４５２－２４５８；ＭｃＣｌａｉｎ ａｎｄ Ｋａｍｄａｒ、ＵｐＴｏＤａｔｅ ２０１９内；Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ、ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ（２０１９）４７７－４８６）。小児期に高用量化学療法を受けたＨＬ患者は、心臓、肺、性腺、内分泌毒性や二次悪性新生物など、治療に関連した長期後遺症を一般的に経験する（Ｃａｓｔｅｌｌｉｎｏら、Ｂｌｏｏｄ（２０１１）１１７（６）：１８０６－１８１６）．

【0471】

いくつかの実施形態において、ＣＤ３０陽性がんは、以下から選択され得る：固形がん、血液がん、造血器悪性腫瘍、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫（例えば、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫（節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫など）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫－ＮＯＳなど）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍、精巣胚性がん。

【0472】

いくつかの実施形態において、がんは、ＣＤ３０陽性がん、ＥＢＶ関連がん、血液がん、骨髄性血液悪性腫瘍、造血器悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群、白血病、Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、ＨＩＶ感染／ＡＩＤＳに伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、口腔毛髪状白板症、バーキットリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、中枢神経系リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、結節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、多発性骨髄腫、固形がん、上皮細胞がん、胃がん、胃がん、胃腺がん、消化管腺がん、肝がん、肝細胞がん、胆管がん、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮がん、口腔がん、中咽頭がん、口腔がん、喉頭がん、上咽頭がん、食道がん、大腸がん、結腸がん、結腸がん、子宮頸がん、前立腺がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、膀胱がん、尿路上皮がん、皮膚がん、黒色腫、進行黒色腫、腎細胞がん、腎細胞がん、卵巣がん、卵巣がん、中皮腫、乳がん、脳腫瘍、神経膠芽腫、前立腺がん、膵臓がん、肥満細胞症、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍又は精巣胚性がんから選択される。

【0473】

いくつかの実施形態では、がんは再発がんであり得る。本明細書で使用される場合、「再発した」がんとは、治療（例えば、がんに対する第一選択療法）に反応したが、その後、例えば寛解期間の後に再出現／進行したがんを指す。例えば、再発がんとは、治療（例えば、がんに対する一次治療）によって増殖／進行が抑制され、その後に増殖／進行したがんのことである。

【0474】

いくつかの実施形態では、がんは難治性がんであってもよい。本明細書で使用される場合、「難治性」がんとは、治療（例えば、がんに対する第一選択療法）に反応しなかったがんを指す。例えば、難治性がんは、治療（例えば、がんに対する第一選択療法）によって増殖／進行が阻害されなかったがんであり得る。いくつかの実施形態において、難治性がんは、がんの治療を受けている被験体が治療に対して部分奏効又は完全奏効を示さなかったがんであってもよい。

【0475】

がんが未分化大細胞リンパ腫である実施形態において、がんは、化学療法、ブレンツキシマブ・ベドチン、又はクリゾチニブによる治療に関して再発又は難治性であってもよい。がんが末梢性Ｔ細胞リンパ腫である実施形態において、がんは、化学療法又はブレンツキシマブ・ベドチンによる治療に関して再発又は難治性であってもよい。がんが節外性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫である実施形態において、がんは、化学療法（アスパラギナーゼを伴うか伴わない）又はブレンツキシマブ・ベドチンによる治療に関して再発性又は難治性であってもよい。がんがびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である実施形態において、がんは、化学療法（リツキシマブを伴うか伴わない）又はＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法による治療に関して再発性又は難治性であってもよい。がんが原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫である実施形態において、がんは、化学療法、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）又はＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法による治療に関して再発又は難治性である可能性がある。

【0476】

本開示の方法に従うがんの治療は、以下の治療効果のうちの１つ以上を達成する：被験体中のがん細胞の数を減少させる、被験体中のがん性腫瘍／病変のサイズを減少させる、被験体中のがん細胞の増殖を阻害する（例えば、防止又は遅らせる）、被験体中のがん性腫瘍／病変の増殖を阻害する（例えば、防止又は遅らせる）、がんの発生／進行（例えば、より後の段階、又は転移）を阻害する（例えば、防止又は遅らせる）、被験体におけるがんの症状の重篤度を軽減し、被験体の生存期間（例えば、無増悪生存期間又は全生存期間）を延長させる、被験体におけるがん細胞の数又は活性の相関を軽減し、及び／又は被験体におけるがんの負担を軽減する。

【0477】

被験体は、Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔに従って評価することができる：治療に対する応答を決定するために、Ｌｕｇａｎｏ分類（例えば、Ｃｈｅｓｏｎら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ（２０１４）３２：３０５９～３０６８に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる）が使用される。くつかの実施形態では、本開示の方法に従って被験体を治療することにより、完全奏効、部分奏効、又は病勢安定のうちの１つが達成される。

【0478】

いくつかの実施形態において、がんの治療は、化学療法及び／又は放射線療法をさらに含む。

【0479】

化学療法と放射線療法はそれぞれ、薬物又は電離放射線（Ｘ線やγ線を用いた放射線療法など）によるがんの治療を指す。薬物は、化学的実体、例えば低分子医薬品、抗生物質、ＤＮＡインターカレーター、タンパク質阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）、又は生物学的薬剤、例えば抗体、抗体フラグメント、アプタマー、核酸（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質であってもよい。薬剤は、医薬組成物又は医薬品として製剤化することができる。製剤は、１つ又は複数の薬物（例えば、１つ又は複数の活性剤）を、１つ又は複数の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体とともに含んでもよい。

【0480】

化学療法では、複数の薬剤を投与することがある。薬物は単独で投与されることもあれば、他の治療法と併用されることもあり、同時に投与されることもあれば、順次投与されることもある。

【0481】

化学療法は、１つ以上の投与経路、例えば非経口、静脈注射、経口、皮下、皮内又は腫瘍内により投与することができる。

【0482】

化学療法は治療レジームに従って投与することができる。治療レジメは、医師又は開業医によって作成され、治療を必要とする患者に合わせて調整されうる、化学療法投与のあらかじめ決められたタイムテーブル、計画、スキーム又はスケジュールであってもよい。治療レジメは、患者に投与する化学療法の種類、各薬剤又は放射線の投与量、投与間隔、各治療の長さ、休薬期間がある場合はその回数と性質などの１つ以上を示す。共同療法の場合は、各薬剤の投与方法を示す単一の治療レジメを提供することができる。

【0483】

化学療法薬は、Ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ、Ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅアセテート、Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、Ａｂｒａｘａｎｅ（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ－ＰＣ、ＡＣ、Ａｃａｌａｂｒｕｔｉｎｉｂ、ＡＣ－Ｔ、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ）、ＡＤＥ、Ａｄｏ－Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ Ｅｍｔａｎｓｉｎｅ、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩）、Ａｆａｔｉｎｉｂ Ｄｉｍａｌｅａｔｅ、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ）、Ａｋｙｎｚｅｏ（Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ ａｎｄ Ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ塩酸塩）、Ａｌｄａｒａ（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）、Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ、Ａｌｅｃｅｎｓａ（Ａｌｅｃｔｉｎｉｂ）、Ａｌｅｃｔｉｎｉｂ、Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ、Ａｌｉｍｔａ（Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ）、Ａｌｉｑｏｐａ（Ｃｏｐａｎｌｉｓｉｂ塩酸塩）、Ａｌｋｅｒａｎ ｆｏｒ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（Ｍｅｌｐｈａｌａｎ塩酸塩）、Ａｌｋｅｒａｎ Ｔａｂｌｅｔｓ（Ｍｅｌｐｈａｌａｎ）、Ａｌｏｘｉ（Ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ塩酸塩）、Ａｌｕｎｂｒｉｇ（Ｂｒｉｇａｔｉｎｉｂ）、Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎ（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、Ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ、Ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ Ａｃｉｄ、Ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ、Ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ、Ａｒｅｄｉａ（Ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（Ａｎａｓｔｒｏｚｏｌｅ）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（Ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ）、Ａｒｒａｎｏｎ（Ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ）、Ａｒｓｅｎｉｃ Ｔｒｉｏｘｉｄｅ、Ａｒｚｅｒｒａ（Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ）、Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ、Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ、Ａｖａｓｔｉｎ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、Ａｖｅｌｕｍａｂ、Ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ Ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ、Ａｘｉｔｉｎｉｂ、Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ、Ｂａｖｅｎｃｉｏ（Ａｖｅｌｕｍａｂ）、ＢＥＡＣＯＰＰ、Ｂｅｃｅｎｕｍ（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、Ｂｅｌｅｏｄａｑ（Ｂｅｌｉｎｏｓｔａｔ）、Ｂｅｌｉｎｏｓｔａｔ、Ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ塩酸塩、ＢＥＰ、Ｂｅｓｐｏｎｓａ（Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ、Ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ、Ｂｅｘｘａｒ（Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ ａｎｄ Ｉｏｄｉｎｅ Ｉ １３１ Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ）、Ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ、ＢｉＣＮＵ（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ、Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ、Ｂｌｉｎｃｙｔｏ（Ｂｌｉｎａｔｕｍｏｍａｂ）、Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ、Ｂｏｓｕｌｉｆ（Ｂｏｓｕｔｉｎｉｂ）、Ｂｏｓｕｔｉｎｉｂ、Ｂｒｅｎｔｕｘｉｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ、Ｂｒｉｇａｔｉｎｉｂ、ＢｕＭｅｌ、Ｂｕｓｕｌｆａｎ、Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）、Ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ、Ｃａｂｏｍｅｔｙｘ（Ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ－Ｓ－リンゴ酸塩）、Ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ－Ｓ－Ｍａｌａｔｅ、ＣＡＦ、Ｃａｌｑｕｅｎｃｅ（Ａｃａｌａｂｒｕｔｉｎｉｂ）、Ｃａｍｐａｔｈ（Ａｌｅｍｔｕｚｕｍａｂ）、Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ塩酸塩）、Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ、ＣＡＰＯＸ、Ｃａｒａｃ（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ－－Ｔｏｐｉｃａｌ）、Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ、ＣＡＲＢＯＰＬＡＴＩＮ－ＴＡＸＯＬ、Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ、Ｃａｒｍｕｂｒｉｓ（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ、Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ Ｉｍｐｌａｎｔ、Ｃａｓｏｄｅｘ（Ｂｉｃａｌｕｔａｍｉｄｅ）、ＣＥＭ、Ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩）、Ｃｅｒｖａｒｉｘ（組み換え ＨＰＶ Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ）、Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ、ＣＥＶ、Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ、ＣＨＬＯＲＡＭＢＵＣＩＬ－ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ、ＣＨＯＰ、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ、Ｃｌａｆｅｎ（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、Ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ、Ｃｌｏｆａｒｅｘ（Ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）、Ｃｌｏｌａｒ（Ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ）、ＣＭＦ、Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ、Ｃｏｍｅｔｒｉｑ（Ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ－Ｓ－Ｍａｌａｔｅ）、Ｃｏｐａｎｌｉｓｉｂ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ－ＡＢＶ、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、Ｃｏｔｅｌｌｉｃ（Ｃｏｂｉｍｅｔｉｎｉｂ）、Ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ、ＣＶＰ、Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ、Ｃｙｆｏｓ（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、Ｃｙｒａｍｚａ（Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ）、Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ、Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅリポソーム、Ｃｙｔｏｓａｒ－Ｕ（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、Ｃｙｔｏｘａｎ（シクロホスファミド）、Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ、Ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ、Ｄａｃｏｇｅｎ（Ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、Ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ、Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ、Ｄａｒｚａｌｅｘ（Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ）、Ｄａｓａｔｉｎｉｂ、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩、Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩及びＣｙｔａｒａｂｉｎｅリポソーム、Ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ、Ｄｅｆｉｂｒｏｔｉｄｅ Ｓｏｄｉｕｍ、Ｄｅｆｉｔｅｌｉｏ（Ｄｅｆｉｂｒｏｔｉｄｅ Ｓｏｄｉｕｍ）、Ｄｅｇａｒｅｌｉｘ、Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ Ｄｉｆｔｉｔｏｘ、Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ、ＤｅｐｏＣｙｔ（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅリポソーム）、Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ、Ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ塩酸塩、Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ、Ｄｏｘｉｌ（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩リポソーム）、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩、Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ－ＳＬ（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（Ｄａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ、Ｅｆｕｄｅｘ（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ－－Ｔｏｐｉｃａｌ）、Ｅｌｉｔｅｋ（Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩）、Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ、Ｅｌｏｘａｔｉｎ（Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ）、Ｅｌｔｒｏｍｂｏｐａｇ Ｏｌａｍｉｎｅ、Ｅｍｅｎｄ（Ａｐｒｅｐｉｔａｎｔ）、Ｅｍｐｌｉｃｉｔｉ（Ｅｌｏｔｕｚｕｍａｂ）、Ｅｎａｓｉｄｅｎｉｂメシレート、Ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ、Ｅｐｉｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、Ｅｒｂｉｔｕｘ（Ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）、Ｅｒｉｂｕｌｉｎメシレート、Ｅｒｉｖｅｄｇｅ（Ｖｉｓｍｏｄｅｇｉｂ）、Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ塩酸塩、Ｅｒｗｉｎａｚｅ（Ａｓｐａｒａｇｉｎａｓｅ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、Ｅｔｈｙｏｌ（Ａｍｉｆｏｓｔｉｎｅ）、Ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ（Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅリン酸塩）、Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ、Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅリン酸塩、Ｅｖａｃｅｔ（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩リポソーム）、Ｅｖｅｒｏｌｉｍｕｓ、Ｅｖｉｓｔａ（Ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ塩酸塩）、Ｅｖｏｍｅｌａ（Ｍｅｌｐｈａｌａｎ塩酸塩）、Ｅｘｅｍｅｓｔａｎｅ、５－ＦＵ（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、５－ＦＵ（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ－－Ｔｏｐｉｃａｌ）、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（Ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ）、Ｆａｒｙｄａｋ（Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（Ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ）、ＦＥＣ、Ｆｅｍａｒａ（Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ、Ｆｌｕｄａｒａ（Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅリン酸塩）、Ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅリン酸塩、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ－－Ｔｏｐｉｃａｌ）、Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ、Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ－－Ｔｏｐｉｃａｌ、Ｆｌｕｔａｍｉｄｅ、Ｆｏｌｅｘ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、Ｆｏｌｅｘ ＰＦＳ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩ－ＢＥＶＡＣＩＺＵＭＡＢ、ＦＯＬＦＩＲＩ－ＣＥＴＵＸＩＭＡＢ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、Ｆｏｌｏｔｙｎ（Ｐｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ）、ＦＵ－ＬＶ、Ｆｕｌｖｅｓｔｒａｎｔ、Ｇａｒｄａｓｉｌ（組み換え ＨＰＶ Ｑｕａｄｒｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ）、Ｇａｒｄａｓｉｌ ９（組み換え ＨＰＶ Ｎｏｎａｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ）、Ｇａｚｙｖａ（Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ）、Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ、Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ塩酸塩、ＧＥＭＣＩＴＡＢＩＮＥ－ＣＩＳＰＬＡＴＩＮ、ＧＥＭＣＩＴＡＢＩＮＥ－ＯＸＡＬＩＰＬＡＴＩＮ、Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ、Ｇｅｍｚａｒ（Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ塩酸塩）、Ｇｉｌｏｔｒｉｆ（Ａｆａｔｉｎｉｂ Ｄｉｍａｌｅａｔｅ）、Ｇｌｅｅｖｅｃ（Ｉｍａｔｉｎｉｂメシレート）、Ｇｌｉａｄｅｌ（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ Ｉｍｐｌａｎｔ）、Ｇｌｉａｄｅｌ ｗａｆｅｒ（Ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ Ｉｍｐｌａｎｔ）、Ｇｌｕｃａｒｐｉｄａｓｅ、Ｇｏｓｅｒｅｌｉｎアセテート、Ｈａｌａｖｅｎ（Ｅｒｉｂｕｌｉｎメシレート）、Ｈｅｍａｎｇｅｏｌ（Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ塩酸塩）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、ＨＰＶ Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ、組み換え、ＨＰＶ Ｎｏｎａｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ、組み換え、ＨＰＶ Ｑｕａｄｒｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ、組み換え、Ｈｙｃａｍｔｉｎ（Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ塩酸塩）、Ｈｙｄｒｅａ（Ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ）、Ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ、Ｈｙｐｅｒ－ＣＶＡＤ、Ｉｂｒａｎｃｅ（Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ）、Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ Ｔｉｕｘｅｔａｎ、Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ、ＩＣＥ、Ｉｃｌｕｓｉｇ（Ｐｏｎａｔｉｎｉｂ塩酸塩）、Ｉｄａｍｙｃｉｎ（Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩）、Ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩、Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ、Ｉｄｈｉｆａ（Ｅｎａｓｉｄｅｎｉｂメシレート）、Ｉｆｅｘ（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ、Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｕｍ（Ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ＩＬ－２（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）、Ｉｍａｔｉｎｉｂメシレート、Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（Ｉｂｒｕｔｉｎｉｂ）、Ｉｍｆｉｎｚｉ（Ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ）、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ、Ｉｍｌｙｇｉｃ（Ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ Ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ）、Ｉｎｌｙｔａ（Ａｘｉｔｉｎｉｂ）、Ｉｎｏｔｕｚｕｍａｂ Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ、Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ－２ｂ、組み換え、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（組み換え Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ－２ｂ）、Ｉｏｄｉｎｅ Ｉ １３１ Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ及びＴｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ、Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ、Ｉｒｅｓｓａ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）、Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ塩酸塩、Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ塩酸塩リポソーム、Ｉｓｔｏｄａｘ（Ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ）、Ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ、Ｉｘａｚｏｍｉｂ Ｃｉｔｒａｔｅ、Ｉｘｅｍｐｒａ（Ｉｘａｂｅｐｉｌｏｎｅ）、Ｊａｋａｆｉ（Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂリン酸塩）、ＪＥＢ、Ｊｅｖｔａｎａ（Ｃａｂａｚｉｔａｘｅｌ）、Ｋａｄｃｙｌａ（Ａｄｏ－Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ Ｅｍｔａｎｓｉｎｅ）、Ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ（Ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ塩酸塩）、Ｋｅｐｉｖａｎｃｅ（Ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ）、Ｋｅｙｔｒｕｄａ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）、Ｋｉｓｑａｌｉ（Ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ）、Ｋｙｍｒｉａｈ（Ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｅｕｃｅｌ）、Ｋｙｐｒｏｌｉｓ（Ｃａｒｆｉｌｚｏｍｉｂ）、Ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅアセテート、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ Ｄｉｔｏｓｙｌａｔｅ、Ｌａｒｔｒｕｖｏ（Ｏｌａｒａｔｕｍａｂ）、Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ、Ｌｅｎｖａｔｉｎｉｂメシレート、Ｌｅｎｖｉｍａ（Ｌｅｎｖａｔｉｎｉｂメシレート）、Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ、Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ Ｃａｌｃｉｕｍ、Ｌｅｕｋｅｒａｎ（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅアセテート、Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（Ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ）、Ｌｅｖｕｌａｎ（Ａｍｉｎｏｌｅｖｕｌｉｎｉｃ Ａｃｉｄ）、Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ（Ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ





）、ＬｉｐｏＤｏｘ（Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩リポソーム）、Ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ、Ｌｏｎｓｕｒｆ（Ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ及びＴｉｐｉｒａｃｉｌ塩酸塩）、Ｌｕｐｒｏｎ（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅアセテート）、Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅアセテート）、Ｌｕｐｒｏｎ Ｄｅｐｏｔ－Ｐｅｄ（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅアセテート）、Ｌｙｎｐａｒｚａ（Ｏｌａｐａｒｉｂ）、Ｍａｒｑｉｂｏ（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ硫酸塩リポソーム）、Ｍａｔｕｌａｎｅ（Ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ塩酸塩）、Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ塩酸塩、Ｍｅｇｅｓｔｒｏｌアセテート、Ｍｅｋｉｎｉｓｔ（Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ）、Ｍｅｌｐｈａｌａｎ、Ｍｅｌｐｈａｌａｎ塩酸塩、Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ、Ｍｅｓｎａ、Ｍｅｓｎｅｘ（Ｍｅｓｎａ）、Ｍｅｔｈａｚｏｌａｓｔｏｎｅ（Ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ、Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ ＬＰＦ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、Ｍｅｔｈｙｌｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ Ｂｒｏｍｉｄｅ、Ｍｅｘａｔｅ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、Ｍｅｘａｔｅ－ＡＱ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、Ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎ、Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ、Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ塩酸塩、Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ）、ＭＯＰＰ、Ｍｏｚｏｂｉｌ（Ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ）、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（Ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ塩酸塩）、Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ）、Ｍｙｌｅｒａｎ（Ｂｕｓｕｌｆａｎ）、Ｍｙｌｏｓａｒ（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、Ｍｙｌｏｔａｒｇ（Ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ Ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ）、Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ Ｔａｒｔｒａｔｅ）、Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ、Ｎｅｌａｒａｂｉｎｅ、Ｎｅｏｓａｒ（Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、Ｎｅｒａｔｉｎｉｂ Ｍａｌｅａｔｅ、Ｎｅｒｌｙｎｘ（Ｎｅｒａｔｉｎｉｂ Ｍａｌｅａｔｅ）、Ｎｅｔｕｐｉｔａｎｔ及びＰａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ塩酸塩、Ｎｅｕｌａｓｔａ（Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、Ｎｅｘａｖａｒ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂトシレート）、Ｎｉｌａｎｄｒｏｎ（Ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、Ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ、Ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ、Ｎｉｎｌａｒｏ（Ｉｘａｚｏｍｉｂ Ｃｉｔｒａｔｅ）、Ｎｉｒａｐａｒｉｂトシレート１水和物、Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ、Ｎｏｌｖａｄｅｘ（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ Ｃｉｔｒａｔｅ）、Ｎｐｌａｔｅ（Ｒｏｍｉｐｌｏｓｔｉｍ）、Ｏｂｉｎｕｔｕｚｕｍａｂ、Ｏｄｏｍｚｏ（Ｓｏｎｉｄｅｇｉｂ）、ＯＥＰＡ、Ｏｆａｔｕｍｕｍａｂ、ＯＦＦ、Ｏｌａｐａｒｉｂ、Ｏｌａｒａｔｕｍａｂ、Ｏｍａｃｅｔａｘｉｎｅ Ｍｅｐｅｓｕｃｃｉｎａｔｅ、Ｏｎｃａｓｐａｒ（Ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、Ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ塩酸塩、Ｏｎｉｖｙｄｅ（Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ塩酸塩リポソーム）、Ｏｎｔａｋ（Ｄｅｎｉｌｅｕｋｉｎ Ｄｉｆｔｉｔｏｘ）、Ｏｐｄｉｖｏ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、ＯＰＰＡ、Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ、Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ、パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、Ｐａｌｂｏｃｉｃｌｉｂ、Ｐａｌｉｆｅｒｍｉｎ、Ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ塩酸塩、Ｐａｌｏｎｏｓｅｔｒｏｎ塩酸塩及びＮｅｔｕｐｉｔａｎｔ、Ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ、Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ、Ｐａｎｏｂｉｎｏｓｔａｔ、Ｐａｒａｐｌａｔ（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（Ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ）、Ｐａｚｏｐａｎｉｂ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、Ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ、Ｐｅｇｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ、Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ－２ｂ、ＰＥＧ－Ｉｎｔｒｏｎ（Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ－２ｂ）、Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ、Ｐｅｍｅｔｒｅｘｅｄ Ｄｉｓｏｄｉｕｍ、Ｐｅｒｊｅｔａ（Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ）、Ｐｅｒｔｕｚｕｍａｂ、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、Ｐｌａｔｉｎｏｌ－ＡＱ（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）、Ｐｌｅｒｉｘａｆｏｒ、Ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ、Ｐｏｍａｌｙｓｔ（Ｐｏｍａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、Ｐｏｎａｔｉｎｉｂ塩酸塩、Ｐｏｒｔｒａｚｚａ（Ｎｅｃｉｔｕｍｕｍａｂ）、Ｐｒａｌａｔｒｅｘａｔｅ、Ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ、Ｐｒｏｃａｒｂａｚｉｎｅ塩酸塩、Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）、Ｐｒｏｌｉａ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、Ｐｒｏｍａｃｔａ（Ｅｌｔｒｏｍｂｏｐａｇ Ｏｌａｍｉｎｅ）、Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ塩酸塩、Ｐｒｏｖｅｎｇｅ（Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ）、Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、Ｐｕｒｉｘａｎ（Ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、Ｒａｄｉｕｍ ２２３ Ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ、Ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ塩酸塩、Ｒａｍｕｃｉｒｕｍａｂ、Ｒａｓｂｕｒｉｃａｓｅ、Ｒ－ＣＨＯＰ、Ｒ－ＣＶＰ、組み換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｂｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ、組み換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｎｏｎａｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ、組み換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）Ｑｕａｄｒｉｖａｌｅｎｔ Ｖａｃｃｉｎｅ、組み換え Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ－２ｂ、Ｒｅｇｏｒａｆｅｎｉｂ、Ｒｅｌｉｓｔｏｒ（Ｍｅｔｈｙｌｎａｌｔｒｅｘｏｎｅ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、Ｒ－ＥＰＯＣＨ、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、Ｒｈｅｕｍａｔｒｅｘ（Ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ）、Ｒｉｂｏｃｉｃｌｉｂ、Ｒ－ＩＣＥ、Ｒｉｔｕｘａｎ（リツキシマブ）、Ｒｉｔｕｘａｎ Ｈｙｃｅｌａ（リツキシマブ及びＨｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ Ｈｕｍａｎ）、リツキシマブ、リツキシマブ及びＨｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ Ｈｕｍａｎ、Ｒｏｌａｐｉｔａｎｔ塩酸塩、Ｒｏｍｉｄｅｐｓｉｎ、Ｒｏｍｉｐｌｏｓｔｉｍ、Ｒｕｂｉｄｏｍｙｃｉｎ（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩）、Ｒｕｂｒａｃａ（Ｒｕｃａｐａｒｉｂ Ｃａｍｓｙｌａｔｅ）、Ｒｕｃａｐａｒｉｂ Ｃａｍｓｙｌａｔｅ、Ｒｕｘｏｌｉｔｉｎｉｂリン酸塩、Ｒｙｄａｐｔ（Ｍｉｄｏｓｔａｕｒｉｎ）、Ｓｃｌｅｒｏｓｏｌ Ｉｎｔｒａｐｌｅｕｒａｌ Ａｅｒｏｓｏｌ（Ｔａｌｃ）、Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ、Ｓｉｐｕｌｅｕｃｅｌ－Ｔ、Ｓｏｍａｔｕｌｉｎｅ Ｄｅｐｏｔ（Ｌａｎｒｅｏｔｉｄｅアセテート）、Ｓｏｎｉｄｅｇｉｂ、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂトシレート、Ｓｐｒｙｃｅｌ（Ｄａｓａｔｉｎｉｂ）、ＳＴＡＮＦＯＲＤ Ｖ、Ｓｔｅｒｉｌｅ Ｔａｌｃ Ｐｏｗｄｅｒ（Ｔａｌｃ）、Ｓｔｅｒｉｔａｌｃ（Ｔａｌｃ）、Ｓｔｉｖａｒｇａ（Ｒｅｇｏｒａｆｅｎｉｂ）、Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂリンゴ酸塩、Ｓｕｔｅｎｔ（Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂリンゴ酸塩）、Ｓｙｌａｔｒｏｎ（Ｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ａｌｆａ－２ｂ）、Ｓｙｌｖａｎｔ（Ｓｉｌｔｕｘｉｍａｂ）、Ｓｙｎｒｉｂｏ（Ｏｍａｃｅｔａｘｉｎｅ Ｍｅｐｅｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、Ｔａｂｌｏｉｄ（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ）、ＴＡＣ、Ｔａｆｉｎｌａｒ（Ｄａｂｒａｆｅｎｉｂ）、Ｔａｇｒｉｓｓｏ（Ｏｓｉｍｅｒｔｉｎｉｂ）、Ｔａｌｃ、Ｔａｌｉｍｏｇｅｎｅ Ｌａｈｅｒｐａｒｅｐｖｅｃ、Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ Ｃｉｔｒａｔｅ、Ｔａｒａｂｉｎｅ ＰＦＳ（Ｃｙｔａｒａｂｉｎｅ）、Ｔａｒｃｅｖａ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ塩酸塩）、Ｔａｒｇｒｅｔｉｎ（Ｂｅｘａｒｏｔｅｎｅ）、Ｔａｓｉｇｎａ（Ｎｉｌｏｔｉｎｉｂ）、Ｔａｘｏｌ（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（Ａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ）、Ｔｅｍｏｄａｒ（Ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）、Ｔｅｍｏｚｏｌｏｍｉｄｅ、Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ、Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（Ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ）、Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ、Ｔｈｉｏｔｅｐａ、Ｔｉｓａｇｅｎｌｅｃｌｅｕｃｅｌ、Ｔｏｌａｋ（フルオロウラシル－－Ｔｏｐｉｃａｌ）、Ｔｏｐｏｔｅｃａｎ塩酸塩、Ｔｏｒｅｍｉｆｅｎｅ、Ｔｏｒｉｓｅｌ（Ｔｅｍｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）、Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ及びＩｏｄｉｎｅ Ｉ １３１ Ｔｏｓｉｔｕｍｏｍａｂ、Ｔｏｔｅｃｔ（Ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ塩酸塩）、ＴＰＦ、Ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ、Ｔｒａｍｅｔｉｎｉｂ、Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ、Ｔｒｅａｎｄａ（Ｂｅｎｄａｍｕｓｔｉｎｅ塩酸塩）、Ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ及びＴｉｐｉｒａｃｉｌ塩酸塩、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（Ａｒｓｅｎｉｃ Ｔｒｉｏｘｉｄｅ）、Ｔｙｋｅｒｂ（Ｌａｐａｔｉｎｉｂ Ｄｉｔｏｓｙｌａｔｅ）、Ｕｎｉｔｕｘｉｎ（Ｄｉｎｕｔｕｘｉｍａｂ）、Ｕｒｉｄｉｎｅ Ｔｒｉアセテート、ＶＡＣ、Ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ、Ｖａｌｓｔａｒ（Ｖａｌｒｕｂｉｃｉｎ）、Ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ、ＶＡＭＰ、Ｖａｒｕｂｉ（Ｒｏｌａｐｉｔａｎｔ塩酸塩）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ＶｅＩＰ、Ｖｅｌｂａｎ（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ硫酸塩）、Ｖｅｌｃａｄｅ（Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ）、Ｖｅｌｓａｒ（Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ硫酸塩）、Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ、Ｖｅｎｃｌｅｘｔａ（Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ）、Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ、Ｖｅｒｚｅｎｉｏ（Ａｂｅｍａｃｉｃｌｉｂ）、Ｖｉａｄｕｒ（Ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅアセテート）、Ｖｉｄａｚａ（Ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、Ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ硫酸塩、Ｖｉｎｃａｓａｒ ＰＦＳ（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ硫酸塩）、Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ硫酸塩、Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ硫酸塩リポソーム、Ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ Ｔａｒｔｒａｔｅ、ＶＩＰ、Ｖｉｓｍｏｄｅｇｉｂ、Ｖｉｓｔｏｇａｒｄ（Ｕｒｉｄｉｎｅ Ｔｒｉアセテート）、Ｖｏｒａｘａｚｅ（Ｇｌｕｃａｒｐｉｄａｓｅ）、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（Ｐａｚｏｐａｎｉｂ塩酸塩）、Ｖｙｘｅｏｓ（Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ塩酸塩及びＣｙｔａｒａｂｉｎｅリポソーム）、Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（Ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ Ｃａｌｃｉｕｍ）、Ｘａｌｋｏｒｉ（Ｃｒｉｚｏｔｉｎｉｂ）、Ｘｅｌｏｄａ（Ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、Ｘｏｆｉｇｏ（Ｒａｄｉｕｍ ２２３ Ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）、Ｘｔａｎｄｉ（Ｅｎｚａｌｕｔａｍｉｄｅ）、Ｙｅｒｖｏｙ（Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ）、Ｙｅｓｃａｒｔａ（Ａｘｉｃａｂｔａｇｅｎｅ Ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ）、Ｙｏｎｄｅｌｉｓ（Ｔｒａｂｅｃｔｅｄｉｎ）、Ｚａｌｔｒａｐ（Ｚｉｖ－Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）、Ｚａｒｘｉｏ（Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、Ｚｅｊｕｌａ（Ｎｉｒａｐａｒｉｂトシレート１水和物）、Ｚｅｌｂｏｒａｆ（Ｖｅｍｕｒａｆｅｎｉｂ）、Ｚｅｖａｌｉｎ（Ｉｂｒｉｔｕｍｏｍａｂ Ｔｉｕｘｅｔａｎ）、Ｚｉｎｅｃａｒｄ（Ｄｅｘｒａｚｏｘａｎｅ塩酸塩）、Ｚｉｖ－Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ、Ｚｏｆｒａｎ（Ｏｎｄａｎｓｅｔｒｏｎ塩酸塩）、Ｚｏｌａｄｅｘ（Ｇｏｓｅｒｅｌｉｎアセテート）、Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ、Ｚｏｌｉｎｚａ（Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、Ｚｏｍｅｔａ（Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ）、Ｚｙｄｅｌｉｇ（Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ）、Ｚｙｋａｄｉａ（Ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ）、及び、Ｚｙｔｉｇａ（Ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅアセテート）から選択することができる。

【0484】

ＥＢＶ感染は、多発性硬化症や全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ；Ａｓｃｈｅｒｉｏ ａｎｄ Ｍｕｎｇｅｒ Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）；３９０（Ｐｔ １）：３６５－８５など参照）、ＥＢＶ抗原ＥＢＮＡ２は最近、ＳＬＥ、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、１型糖尿病、若年性特発性関節炎、セリアック病発症の危険因子として関与する遺伝子領域と関連することが示されている（Ｈａｒｌｅｙら、Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．（２０１８）５０（５）：６９９－７０７）．

【0485】

したがって、いくつかの実施形態において、本開示に従って治療／予防される疾患／状態は、自己免疫疾患、ＳＬＥ、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、１型糖尿病、若年性特発性関節炎及びセリアック病から選択される。

【0486】

本開示の態様及び実施形態は、１つ以上の非同一の標的抗原に特異的な１つ以上のＣＡＲを含むＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞に関する。いくつかの実施形態において、ＣＤ３０に特異的なＣＡＲを含んでなるウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の抗原に特異的なＣＡＲを含んでなる。例えば、本明細書の実施例４は、ＣＤ３０特異的ＣＡＲ及びＣＤ１９特異的ＣＡＲを含んでなるウイルス特異的免疫細胞を記載する。

【0487】

いくつかの実施形態において、本発明に従って治療／予防されるがんは、１つ以上の非同一標的抗原を発現する細胞を含むがんである。いくつかの実施形態において、がんは、非同一標的抗原の各々の両方を発現するがんである。

【0488】

同種免疫応答の治療／予防に関する応用
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、例えば、被験体における疾患／状態を治療／予防するための同種移植を含む方法において使用することができる。

【0489】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、万能性免疫応答（特にＴ細胞媒介性の万能性免疫応答）及びその有害な結果を軽減／予防する方法に有用である。

【0490】

万能性Ｔ細胞はＣＤ３０を発現する。Ｃｈａｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００２）１６９（４）：１７８４－９１は、ＣＤ３０発現Ｔ細胞はＣＤ３０アロ免疫応答に重要な役割を持つ活性化Ｔ細胞のサブセット（ＣＤ２５とＣＤ４５ＲＯも発現）であると同定している。ＣＤ３０発現とＣＤ３０発現Ｔ細胞の増殖は、アロ抗原に応答して増加する。Ｃｈｅｎら，Ｂｌｏｏｄ（２０１２）１２０（３）：６９１－６は、ＣＤ８＋Ｔ細胞サブセット上のＣＤ３０発現をＧＶＨＤの潜在的バイオマーカーとして同定し、ＣＤ３０をＧＶＨＤの治療標的として提案している。

【0491】

さらに、ウイルス特異的Ｔ細胞は、ポリクローナル活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）よりも制限されたＴＣＲレパートリーを持つため、同種移植の被験者に投与してもＧＶＨＤを起こしにくい。このことは、同種ＥＢＶ特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）の研究におけるＧＶＨＤの発生率の低さにも反映されている。

【0492】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種移植を含む方法において、また同種移植の処理／生産において特に有用である。

【0493】

特に、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種材料の投与からなる治療的及び予防的方法において使用するための「既製品」材料の生産及び投与における使用が企図されている。

【0494】

上記で説明したように、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、養子細胞移入による疾患／病態の治療／予防に有用である。本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、養子移入後のレシピエントのＴ細胞媒介性の同種反応性免疫応答の影響を受けにくく、従って、移入後のレシピエントにおける増殖／生存が増強され、優れた治療／予防効果を示す。

【0495】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞以外の同種細胞の同種移植を含む方法においても有用である。特に、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種移植体（細胞、組織及び臓器の集団）及び被験体の同種反応性免疫細胞（例えば同種反応性Ｔ細胞）の枯渇に有用である。

【0496】

このような方法において、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、ドナー及び／又はレシピエント被験体のコンディショニング、及び／又は同種移植後の同種反応性免疫応答を低減／予防するための同種移植の治療に有用である。

【0497】

同種移植される細胞、組織、臓器には、免疫細胞（養子細胞移植など）、心臓、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、顔、角膜、皮膚、造血幹細胞（骨髄）、血液、手、脚、陰茎、骨、子宮、胸腺、ランゲルハンス島、心臓弁、卵巣などが含まれる。同種移植される細胞、組織、臓器の集団は「同種移植」と呼ばれることがある。

【0498】

同種移植によって治療／予防される疾患／状態は、同種移植から治療的又は予防的利益を得ることができる任意の疾患／状態であることができる。いくつかの実施形態において、同種移植によって治療／予防される疾患／状態は、例えば、Ｔ細胞機能障害、がん、感染性疾患又は自己免疫疾患である。

【0499】

Ｔ細胞機能障害とは、正常なＴ細胞の機能が損なわれ、病原性抗原（例えば、微生物、細菌、ウイルスなどの外因性病原体による感染によって生じるもの、あるいは、ある種のがんなどの疾患状態において宿主によって生じるもの（例えば、腫瘍関連抗原の形で））に対する免疫応答のダウンレギュレーションを引き起こす疾患／状態をいう。Ｔ細胞機能障害は、Ｔ細胞疲弊症又はＴ細胞アレルギーからなる可能性がある。Ｔ細胞疲弊は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞が増殖しないか、又は抗原刺激に応答して細胞傷害性やサイトカイン（例えばＩＦＮγ）分泌などのＴ細胞エフェクター機能を発揮しない状態からなる。疲弊したＴ細胞はまた、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３などのＴ細胞疲弊の１つ以上のマーカーの持続的発現によっても特徴付けられる。Ｔ細胞機能障害は、感染症、あるいは感染症に対する有効な免疫応答の不能として現れる。感染症は、慢性感染、持続感染、潜伏感染、緩徐感染であり、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、寄生虫感染の結果である。そのため、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染に罹患している患者に治療が行われることがある。細菌感染の例としては、ヘリコバクター・ピロリ菌の感染が挙げられる。ウイルス感染症の例としては、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎の感染が挙げられる。Ｔ細胞の機能障害は、腫瘍免疫逃避などのがんと関連している可能性がある。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、免疫応答を誘導することができる腫瘍関連抗原を発現している。

【0500】

感染症は、例えば細菌、ウイルス、真菌、寄生虫感染である。いくつかの実施形態では、慢性／持続性感染症、例えば、そのような感染症がＴ細胞機能不全又はＴ細胞疲弊と関連している場合、その治療が特に望ましい場合がある。Ｔ細胞疲弊は、多くの慢性感染症（ウイルス性、細菌性、寄生虫性を含む）やがんにおいて生じるＴ細胞機能不全の状態であることがよく知られている（Ｗｈｅｒｒｙ Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．６，ｐ４９２－４９９，Ｊｕｎｅ ２０１１）。治療され得る細菌感染の例としては、バチルス属、百日咳菌、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、ビブリオ・クロエラ、ブドウ球菌属、レンサ球菌属、エシェリヒア属、クレブシエラ属、プロテウス属、エルシニア属、エルウィナ属、サルモネラ属、リステリア属、ヘロバクター・ピロリ、マイコバクター（ｍｏｂａｃｔｅｒ）が挙げられる、 レンサ球菌属、エシェリヒア属、クレブシエラ属、プロテウス属、エルシニア属、エルビナ属、サルモネラ属、リステリア属、ヘリコバクター・ピロリ、マイコバクテリア（結核菌など）、緑膿菌があげられる。例えば、細菌感染は敗血症や結核である。治療され得るウイルス感染の例としては、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性絨毛膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス及びヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）による感染が挙げられる。治療可能な真菌感染症の例としては、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｓｐによる感染が挙げられる。真菌感染症は、真菌敗血症又はヒストプラズマ症であってもよい。治療され得る寄生虫感染の例としては、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ種（例えば、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｙｏｅｌｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、又はＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｃｈａｂａｕｄｉ ｃｈａｂａｕｄｉ）による感染が挙げられる。寄生虫感染は、マラリア、リーシュマニア症、トキソプラズマ症などの疾患であってもよい。

【0501】

いくつかの実施形態では、疾患／状態は自己免疫疾患である。そのような実施形態において、治療は、自己免疫エフェクター細胞の数を減少させることを目的とし得る。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、１型糖尿病、セリアック病、バセドウ病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、及び全身性エリテマトーデスから選択される。

【0502】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物はまた、万能性免疫応答、及び万能性免疫応答を特徴とする疾患／病態の治療／予防にも有用である。

【0503】

同種移植に関連する同種反応性免疫応答によって引き起こされる、あるいは悪化する疾患や病態も、同種反応性免疫応答によって特徴づけられる疾患や病態に含まれる。このような疾患／状態には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）及び移植片拒絶が含まれ、Ｐｅｒｋｙ ａｎｄ Ｍａｉｌｌａｒｄ Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐａｔｈｏｌ．（２０１８）１３：２１９－２４５に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0504】

移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、大量のドナー免疫細胞の同種移植後に起こる可能性があり、同種レシピエント細胞／組織／器官に対するドナー由来の免疫細胞の反応性を伴う。移植片拒絶反応とは、移植後にレシピエントの免疫系が移植細胞／組織／器官を破壊することを指す。移植片拒絶反応が同種移植の場合、同種移植片拒絶反応と呼ばれることもある。

【0505】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種移植において、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性のある同種反応性（ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ）Ｔ細胞を枯渇させるために使用することができる。

【0506】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種移植のためのドナーの同種反応性Ｔ細胞を枯渇させるために（例えば、同種移植を採取／回収する前に）使用することができ、そうでなければ、同種移植時にレシピエントにおいてＧＶＨＤを引き起こす可能性がある。

【0507】

本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、そうでなければ移植片拒絶反応を引き起こす／促進する可能性のある、同種移植のレシピエントの同種反応性Ｔ細胞を枯渇させるために使用することができる。

【0508】

本開示は、移植片移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療／予防する方法であって、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を、移植片移植のためのドナー被験体に投与することを含む方法を提供する。本開示はまた、同種移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療／予防する方法であって、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を同種移植に接触させることを含む方法を提供する。このような方法の目的は、移植片中の同種異系免疫細胞が、移植片のレシピエントの細胞、組織及び／又は臓器に対して同種異系免疫応答を行う能力を低減／除去することである。

【0509】

本開示は、同種移植後の移植片拒絶反応を治療／予防する方法であって、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を、同種移植のためのレシピエント被験体に投与することを含む方法を提供する。このような方法の目的は、レシピエント被験体が同種移植に対して同種反応性免疫応答を行う能力を低下させる／除去することである。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、そうでなければドナーの細胞、組織及び／又は臓器に対して同種反応性免疫応答を起こすであろうレシピエントの免疫細胞を排除するのに有用である。

【0510】

本開示は、同種移植物（例えば、移植される細胞、組織又は臓器の集団）を、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させることを含む、同種移植物の同種反応性免疫細胞（例えば、同種反応性Ｔ細胞）を枯渇させることを含む方法を提供する。本方法は、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を、同種移植のためのドナー被験体に投与することを含み得る。このような方法の目的は、同種移植片中の同種反応性免疫細胞が、同種移植のためのレシピエントの細胞、組織及び／又は臓器に対して同種反応性免疫応答を行う能力を低減／除去することである。

【0511】

いくつかの実施形態において、方法は以下の１つ以上を含む：
被験体から細胞、組織又は臓器の集団を取得／収集すること、
細胞、組織又は臓器の集団を、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させること
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の存在下で、細胞、組織又は臓器の集団をｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏで培養すること
同種反応性免疫細胞が枯渇した細胞、組織又は臓器の集団を採取／収集すること；及び
同種反応性（ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ）免疫細胞が枯渇した細胞、組織又は臓器の集団を被験体に移植する／投与すること。

【0512】

本開示はまた、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は本開示の組成物を被験体に投与することを含む、被験体の同種異系免疫細胞（例えば同種異系Ｔ細胞）を枯渇させることを含む方法を提供する。被験体は、同種移植のためのドナー被験体であってもよく、同種移植のための意図されたレシピエント被験体であってもよい。

【0513】

いくつかの実施形態において、方法は、以下の１つ以上を含む：
被験体における同種反応性免疫細胞を枯渇させるために、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を被験体に投与すること
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物が投与された被験体から、細胞、組織又は臓器の集団を取得／収集すること；及び
同種反応性免疫細胞が枯渇した細胞、組織又は臓器の集団を被験体に移植／投与すること。

【0514】

いくつかの実施形態において、方法は、以下の１つ以上を含む：
被験体中の同種反応性免疫細胞を枯渇させるために、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を被験体に投与すること；及び
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物が以前に投与された被験体に、細胞、組織又は臓器の集団を移植／投与すること。

【0515】

同種異系免疫細胞の枯渇は、同種移植体又は被験体における同種異系免疫細胞の量を、例えば２倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍又はそれ以上に減少させる。

【0516】

本方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏもしくはｅｘ ｖｉｖｏ、又は被験体においてｉｎ ｖｉｖｏで実施することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏで実施される方法ステップは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｅｘ ｖｉｖｏでの細胞培養を含んでよい。

【0517】

方法はさらに、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物を産生するための方法工程を含み得る。

【0518】

いくつかの実施形態において、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物のレシピエント被験体への投与は、同種移植と同種移植のために同時に（すなわち、同時に、又は例えば１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間以内に）行われる。

【0519】

いくつかの実施形態では、同種移植のためのレシピエント被験体への本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と同種移植とは、順次行われる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と同種移植との間の時間間隔は、数時間、数日、数週間、数ヶ月、又は数年を含む任意の時間間隔であり得る。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、同種移植の前又は後にレシピエント被験体に投与することができる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、好ましくは、同種移植の前にレシピエント被験体に投与される。

【0520】

いくつかの実施形態では、同種移植のためのドナー被験体への本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と、被験体からの同種移植の採取（すなわち、細胞、組織及び／又は臓器の採取）は、同時に（すなわち、同時に、又は例えば１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、８時間、１２時間、２４時間、３６時間もしくは４８時間以内に）行われる。いくつかの実施形態では、同種移植のためのドナー被験体への本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と、被験体からの同種移植の採取（すなわち、細胞、組織及び／又は臓器の採取）は、順次行われる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と同種移植の採取との間の時間間隔は、数時間、数日、数週間、数ヶ月、又は数年を含む任意の時間間隔であってよい。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、同胞移植の採取前又は採取後にドナー被験体に投与することができる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、好ましくは、移植片の採取前にドナー被験体に投与される。

【0521】

いくつかの実施形態において、本方法は、同種反応性免疫応答、移植片拒絶及び／又はＧＶＨＤを処置／予防するための追加介入を含む。

【0522】

いくつかの実施形態において、アロレアクチオン、移植片拒絶反応及び／又はＧＶＨＤを治療／予防する方法は、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス）、抗増殖剤（例えば、アザチオプリネム、ミコフェノール酸）、及び／又はｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムス、エベロリムス）による治療などの免疫抑制療法及び／又はリンパ除去療法の投与を含む。

【0523】

いくつかの実施形態において、異反応性及び／又は移植片拒絶反応を治療／予防する方法は、抗体療法、例えば、モノクローナル抗ＩＬ－２Ｒα受容体抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ）、抗Ｔ細胞抗体（例えば、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン）及び／又は抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）による治療を含む。

【0524】

いくつかの実施形態において、アロレアクチン及び／又は移植片拒絶反応を治療／予防する方法は、輸血及び／又は骨髄移植を含む。

【0525】

方法が本明細書に開示される場合、本開示は、そのような方法において使用するための本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物も提供する。また、そのような方法において使用するための製品（例えば、医薬品）の製造における、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の使用も提供する。

【0526】

いくつかの実施形態において、本開示の種々の態様の方法は、免疫抑制剤（単数又は複数）を用いる方法と比較して、非反応性免疫細胞の枯渇が少なく、及び／又は生存が増加する。例えば、本方法は、同種移植のためのレシピエント被験体において、又は同種移植において、非反応性免疫細胞コンパートメントを保存／維持するために有用である。

【0527】

同種移植を含む本開示の方法のいくつかの実施形態において、本方法は、免疫抑制剤による治療を含む方法と比較して、同種移植についてレシピエント被験体における非反応性免疫細胞の数／割合の増加と関連する。同種免疫細胞の養子移入を含む本開示の方法のいくつかの実施形態において、本方法は、免疫抑制剤による治療を含む方法と比較して、同種免疫細胞についてレシピエント被験体における非反応性免疫細胞の数／割合の増加と関連する。

【0528】

同種移植を含む本開示の方法のいくつかの実施形態において、本方法は、免疫抑制剤による治療を含む方法と比較して、同種移植における非反応性免疫細胞の数／割合の増加と関連する。

【0529】

本開示はまた、以下の方法における使用のための、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を提供する：
ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞（例えば、ＣＤ３０を発現する細胞）を殺傷すること、
ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原に感染した細胞、又は抗原のペプチドを提示する細胞（例えば、ＥＢＶに感染した細胞、又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞）を殺傷すること；及び／又は
同種反応性免疫細胞（ＣＤ３０を発現するＴ細胞など）を殺すこと。

【0530】

本開示はまた、そのような方法におけるそのようなＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物の使用、ならびにそのような目的のためにＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物を使用する方法を提供する。

【0531】

被験者（Ｓｕｂｊｅｃｔ）
本開示の側面に従った被験体（対象）は、いかなる動物又はヒトであってもよい。被験体は好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。被験体は非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。被験体は雄であっても雌であってもよい。被験体は患者であってもよい。被験体は、治療を必要とする本明細書に記載の疾患／状態と診断されている場合があり、そのような疾患／状態であることが疑われる場合があり、又はそのような疾患／状態を発症／罹患する危険性がある場合がある。

【0532】

本開示による実施形態において、被験体は、好ましくはヒト被験体である。いくつかの実施形態において、本開示の治療的又は予防的方法に従って処置される被験体は、本明細書に記載される疾患／状態を有する、又は発症する危険性のある被験体である。本発明による実施形態において、被験体は、そのような疾患／状態の特定のマーカーに関する特徴付けに基づいて、方法に従って治療するために選択され得る。

【0533】

被験体は、本開示に従った介入に関して同種異系の被験体であってもよい。本開示に従って治療／予防される被験体は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が由来する被験体に対して遺伝的に非同一であってもよい。本開示に従って治療／予防される被験体は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が由来する被験体に関してＨＬＡ不一致であってもよい。本開示に従って治療／予防される被験体は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が由来する被験体に関してＨＬＡ一致であってもよい。

【0534】

本開示に従って細胞が投与される被験体は、細胞が由来する供給源に関して同種／非自己であってもよい。細胞が投与される被験体は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた被験体とは異なる被験体であってもよい。細胞が投与される被験体は、投与される細胞の産生のために細胞が得られる／得られた被験体とは遺伝的に非同一であってもよい。

【0535】

細胞が投与される被験体は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた被験体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子がコードするＭＨＣ／ＨＬＡ分子と非同一のＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含んでいてもよい。細胞が投与される被験体は、投与される細胞の産生のために細胞が得られる／得られた被験体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子と同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含んでいてもよい。

【0536】

いくつかの実施形態では、細胞が投与される被験体は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた／得られた被験体に関してＨＬＡが一致する。いくつかの実施形態において、細胞が投与される被験体は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた／得られた被験体に関して、ほぼ又は完全にＨＬＡが一致する。

【0537】

いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、及び－ＤＲＢ１にわたって≧４／８（すなわち、４／８、５／８、６／８、７／８、又は８／８）一致する。いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、及び－ＤＱＢ１にわたって≧５／１０（すなわち、５／１０、６／１０、７／１０、８／１０、９／１０又は１０／１０）一致する。いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１及び－ＤＰＢ１にわたって６／１２以上（すなわち、６／１２、７／１２ ８／１２、９／１２、１０／１２、１１／１２又は１２／１２）一致する。いくつかの実施形態では、被験体は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、及び－ＤＲＢ１にわたって８／８一致する。いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１及び－ＤＱＢ１にわたって１０／１０一致する。いくつかの実施形態において、被験体は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１及び－ＤＰＢ１にわたって１２／１２一致する。

【0538】

配列の同一性
１つ以上のアミノ酸配列又は核酸配列間の同一性パーセントを決定する目的のための一対及び多重配列アラインメントは、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ，Ｊ．２００５，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１，９５１－９６０）、Ｔ－ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら．Ｂｉｏｌ．（２０００）３０２，２０５－２１７）、Ｋａｌｉｇｎ （Ｌａｓｓｍａｎｎ ａｎｄ Ｓｏｎｎｈａｍｍｅｒ ２００５，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，６（２９８））、ＭＡＦＦＴ（Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｓｔａｎｄｌｅｙ ２０１３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，３０（４）７７２－７８０）などのソフトウェアを使用した。このようなソフトウェアを使用する場合は、ギャップ・ペナルティやエクステンション・ペナルティなどのデフォルト・パラメータを使用することが望ましい。

【0539】

【表1】

【0540】

本発明は、そのような組み合わせが明らかに許されないか、明示的に回避される場合を除き、記載された態様と好ましい特徴の組み合わせを含む。

【0541】

本明細書で使用されているセクションの見出しは、整理の目的のみのものであり、記載されている主題を限定するものとして解釈されるものではない。

【0542】

次に、本発明の態様及び実施形態を、添付の図を参照して例示的に説明する。さらなる態様及び実施形態は、当業者には明らかであろう。本文中で言及した全ての文書は、参照により本明細書に組み込まれる。

【0543】

本明細書全体を通じて、後に続く特許請求の範囲を含め、文脈上別段の定めがない限り、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」や「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」などの変形は、記載された整数もしくはステップ又は整数もしくはステップの群を含むことを意味するが、他の整数もしくはステップ又は整数もしくはステップの群を排除することを意味しないと理解される。

【0544】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明らかにそうでないことが指示されない限り、複数の参照語を含むことに留意しなければならない。本明細書において、範囲は、ある特定の値の「約」から、及び／又は別の特定の値の「約」までとして表現される場合がある。このような範囲が表現される場合、別の実施形態では、１つの特定の値から、及び／又は他の特定の値までが含まれる。同様に、値が近似値として表現される場合、先行詞「約」の使用により、特定の値が別の実施形態を形成することが理解される。

【0545】

核酸配列が本明細書に開示されている場合、その逆相補体も明示的に企図されている。

【0546】

本明細書に記載の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで実施することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法はインビトロで実施される。用語「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」は、培養中の細胞を用いる実験を包含することを意図しており、一方、用語「ｉｎ ｖｉｖｏ」は、無傷の多細胞生物を用いる実験を包含することを意図している。

【図面の簡単な説明】

【0547】

次に、本発明の原理を示す実施形態及び実験について、添付の図を参照して説明する。

【0548】

【図1】ＨＬＡ－Ａ２とＣＤ３の発現を示す散布図：ＨＬＡ－Ａ２陽性被験者に由来する非導入ＥＢＶＳＴ（左上パネル）又はＨＬＡ－Ａ２陽性被験者に由来するＣＤ３０－ＣＡＲ構築物導入ＥＢＶＳＴ（右上パネル）；又は、ＨＬＡ－Ａ２陰性被験体由来の同種反応性Ｔ細胞及びＨＬＡ－Ａ２陽性被験体由来の非導入ＥＢＶＳＴ（左下パネル）、又はＨＬＡ－Ａ２陽性被験体由来のＣＤ３０－ＣＡＲ構築物導入ＥＢＶＳＴ（右下パネル）の７日間共培養後。

【0549】

【図2A-2B】７日後の（図２Ａ）ＥＢＶＳＴ（すなわちＣＤ３＋、ＨＬＡ－Ａ２陽性）細胞と（図２Ｂ）同種反応性Ｔ細胞（すなわちＣＤ３＋、ＨＬＡ－Ａ２陰性）細胞の細胞数を示す棒グラフ。

【0550】

【図3】ＨＬＡ－Ａ２陽性ＰＢＭＣと非導入（ＮＴ；左上パネル）、ＣＤ３０－ＣＡＲ構築物導入（ＣＤ３０．ＣＡＲ；右上パネル）、ＣＤ１９－ＣＡＲ構築物導入（ＣＤ１９．ＣＡＲ；左下パネル）、又はＣＤ３０－ＣＡＲ及びＣＤ１９－ＣＡＲ構築物導入（ＣＤ３０＋ＣＤ１９．ＣＡＲ；右下パネル）のＨＬＡ－Ａ２陰性被験者由来のＥＢＶＳＴからなる共培養で７日後に得られた細胞。

【0551】

【図4】代表的な４人のドナーから採取した血液サンプルから調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの増殖を示すグラフ。グラフは培養で増殖した細胞の累積倍率を示す。

【0552】

【図5A-5B】ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（エフェクター）と５１Ｃｒ標識標的細胞（ターゲット）を指示した比率で共培養した後の、（図５Ａ）ＣＤ３０陰性ＢＪＡＢバーキットリンパ腫細胞及び（図５Ｂ）ＣＤ３０陽性ＨＤＬＭ２ホジキンリンパ腫細胞に対するＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの細胞傷害性を、５１Ｃｒ放出アッセイにより決定したグラフ。

【0553】

【図6A-6B】代表的な４人のドナーから採取した血液検体から調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴのＥＢＶ抗原に対する反応性を、ＥＬＩＳｐｏｔ分析によって示したグラフ。細胞をＥＢＶ潜伏抗原のペプチド（Ｌａｔｅｎｔ）、ＥＢＶ溶解抗原のペプチド（Ｌｙｔｉｃ）で刺激するか、抗原で刺激せず（Ｎｅｇａｔｉｖｅ）、５×１０^４細胞あたりのスポット形成単位数を測定した。（図６Ａ）は、ＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質転換されていないＥＢＶＳＴの反応性を示す。（図６Ｂ）は、ＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質転換されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの反応性を示す。

【0554】

【図7】患者１のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ注入前と注入６週間後のＰＥＴスキャン結果を示す代表的な画像。

【0555】

【図8】患者２のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ注入前と注入６週間後のＰＥＴとＣＴ検査の結果を示す代表的な画像。

【0556】

【図9】Ｄ３０．ＣＡＲのＥＢＶＳＴを注入する前（ｐｒｅ）、及び注入後の指定された期間に得られた血液サンプル内の、ｑＲＴ－ＰＣＲによって決定された末梢血細胞内のベクターコピー数を示す表。

【0557】

【図10】ＥＬＩＳｐｏｔ分析によって決定された、リンパ除去前（ｐｒｅ－ＬＤ）、及びＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの注入後の指示された期間における、患者＃１の末梢血内の異なる抗原に対する細胞の特異性の分析結果を示す棒グラフ。指示された時点の血液サンプルから単離されたＰＢＭＣを、ＥＢＶ潜伏抗原のペプチド（Ｌａｔｅｎｔ）、ＥＢＶ溶解抗原のペプチド（Ｌｙｔｉｃ）、他のウイルスの抗原のペプチド（Ｏｔｈｅｒ Ｖｉｒｕｓｅｓ）、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）抗原のペプチドで刺激するか、抗原を刺激しない（Ｎｏ ｐｅｐｍｉｘ）ようにし、３×１０^５細胞あたりのスポット形成単位数を決定した。

【0558】

【図11A-11B】ＥＬＩＳｐｏｔ分析によって決定された、異なる抗原に対する異なる方法によって調製されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの分析結果を示す棒グラフ。ＣＤ３０．ＣＡＲＥＢＶＳＴ（ＣＤ３０．ＣＡＲ）、又はＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質転換されていない同等の細胞（非形質転換）を、（図１１Ａ）ＦＢＳ、又は（図１１Ｂ）ＨＰＬの存在下で培養することからなる方法で調製し、示されたＥＢＶ抗原（ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２）のペプチド混合物で刺激し、又はウイルスペプチドで刺激せず（Ｎｅｇａｔｉｖｅ）、５×１０^４細胞あたりのスポット形成単位数を決定した。

【実施例】

【0559】

実施例
以下の実施例において、本発明者らはＣＤ３０．ＣＡＲを発現するＥＢＶＳＴの作製と、そのがん細胞に対するエフェクター活性及び同種再注入に対する抵抗性について説明する。

【0560】

実施例１：ＣＡＲ構築物（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ）をコードするレトロウイルスの作製

【0561】

【表2】

【0562】

ＣＤ３０．ＣＡＲ構築物をコードするレトロウイルスは、ＣＡＲをコードするｃＤＮＡをｐＳＦＧ－ＴＧＦｂＤＮＲＩＩレトロウイルスバックボーン（ＡＴＵＭ，Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ）にクローニングすることにより調製した。

【0563】

ＣＤ３０．ＣＡＲ配列を有するプラスミドｐＳＦＧ＿ＣＤ３０ＣＡＲを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いてＨＥＫ ２９３ Ｖｅｃ－ＲＤ１１４細胞にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞の細胞培養上清を用い、ＨＥＫ ２９３Ｖｅｃ－Ｇａｌｖ細胞（ＢｉｏＶｅｃ Ｐｈａｒｍａ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）を６ウェルプレートの５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの密度でトランスフェクトした。

【0564】

２９３Ｖｅｃ－Ｇａｌｖ＿ＣＤ３０－ＣＡＲ細胞をトリプシン処理し、２×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度で１５ｍｌチューブに再懸濁した。一連の希釈を２回行い、最終細胞懸濁液１．６５ｍｌを希釈し、２２０ｍｌのＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳと混合した。この懸濁液２００μｌを９６ウェルプレートのウェルに移し、１プレートあたり３０個の細胞を得た。その後、最も成績の良いクローンを選び、レトロウイルス含有上清の生成に用いた。その後、レトロウイルス含有上清を回収し、濾過し、使用まで－８０℃で保存した。

【0565】

ＣＤ１９．ＣＡＲ構成物（コンストラクト）をコードするレトロウイルスは、ＣＤ１９．ＣＡＲをコードするＤＮＡをｐＳＦＧレトロウイルスバックボーンにクローニングすることにより作製した。ＣＤ１９．ＣＡＲ配列を有するプラスミド、８５ｂＣＤ１９Ｃを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いてＨＥＫ ２９３ Ｖｅｃ－ＲＤ１１４細胞にトランスフェクトするために使用した。その後、レトロウイルスを含む上清を回収し、濾過し、使用するまで－８０℃で保存した。

【0566】

実施例２：ＣＡＲ発現ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の作製
末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心法に従って、健康なドナー又はリンパ腫患者から得た血液サンプルから単離した。

【0567】

ＡＴＣの作製
抗ＣＤ３抗体（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を、１ｍｇ／ｍｌ抗体の１：１０００希釈液を０．５ｍｌ添加することにより組織培養プレートのウェルにコートし、３７℃で２～４時間、又は４℃で一晩インキュベートした。細胞培養培地（４４．５％Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ培地、４４．５％ クリック培地、１０％ＦＢＳ及び１％ＧｌｕｔａＭａｘを含む）中、抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体をコートしたプレート上で培養することにより、１×１０^６ＰＢＭＣ（ウェルあたり２ｍｌの培地中）を刺激した。細胞は５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃に保たれた。翌日、細胞培養液１ｍｌを、２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－７と２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ－１５を含む新鮮な細胞培養液に交換した。培養中のＡＴＣを維持するために、２－４日ごとに、細胞培養培地とサイトカインを必要に応じて補充するか、又はＡＴＣを回収し、サイトカインを含む新鮮な細胞培養培地に再プレートした。ＡＴＣを回収し、７－１０日目にＥＢＶＳＴで再刺激する実験に用いた。

【0568】

ユニバーサルＬＣＬ
ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩの表面発現を欠くＬＣＬ（すなわちＨＬＡ陰性ＬＣＬ）は、Ｂ細胞のＥＢＶ形質転換によって調製されたリンパ芽球系細胞株の細胞において、ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩ分子をコードする遺伝子の標的化ノックアウトによって得られた。ＨＬＡ陰性細胞はさらに、ＥＢＶ複製に必要な遺伝子をノックアウトするように改変された。このようにして得られた細胞を、本明細書ではユニバーサルＬＣＬ（ｕＬＣＬ）と呼ぶ。

【0569】

ＥＢＶ特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）の増幅と導入
健康なドナーのＰＢＭＣを、ＣＤ４５ＲＡ ＭＡＣＳマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を用いた磁気細胞分離によりＣＤ４５ＲＡ発現細胞を除去した。２×１０^６個のＣＤ４５ＲＡを除去したＰＢＭＣをＥＢＮＡ１ ｐｅｐｍｉｘ（ＪＰＴ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＭ－ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１）、ＬＭＰ１ ｐｅｐｍｉｘ（ＪＰＴ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＭ－ＥＢＶ－ＬＭＰ１）及びＬＭＰ２ ｐｅｐｍｉｘ（ＪＰＴ Ｃａｔ．Ｎｏ．ＰＭ－ＥＢＶ－ＬＭＰ２）（該当抗原の全アミノ酸配列にまたがる、１１アミノ酸重複の１５ｍｅｒアミノ酸ペプチドライブラリー）を、４４．５－４７％Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ、４４．５－４７％クリック培地、１０％ＦＢＳ又は５％成長因子リッチ添加剤及び１％ＧｌｕｔａＭａｘを含む細胞培養培地中で、ＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を補充した。ＥＢＶＳＴは５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で維持した。

【0570】

４－６日後、ＥＢＶＳＴを実施例１に記載のＣＡＲコード化レトロウイルスで以下のように形質導入した。

【0571】

レトロウイルス含有上清（１ウェル当たり０．５－１ｍｌ）を、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）でプレコートした非組織培養処理２４ウェルプレートに加えた。プレートを２０００×ｇで６０－９０分間遠心した後、レトロウイルス上清を除去し、細胞を１ウェル当たり０．２５－０．５×１０^６細胞で再プレートした。

【0572】

培養８－１０日後、ｕＬＣＬ存在下、照射しペプチドパルスした自己活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）と共培養することにより、細胞を再刺激した。簡単に述べると、２×１０^６個のＡＴＣをＣＴＬ培地中、３７℃で３０分間ペプチド（１×１０^６個のＡＴＣあたり１０ｎｇのペプチド混合物）とインキュベートし、その後３０Ｇｙの放射線を照射して回収した。次に、ペプチドパルスしたＡＴＣを、ＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１００ｎｇ／ｍｌ）を含むＣＴＬ培地中で、レスポンダー細胞：ペプチドパルスしたＡＴＣ：照射したｕＬＣＬの比率が１：１：５となるように、培養細胞及びｕＬＣＬ（１００Ｇｙで照射）と混合した。具体的には、１×１０^５個のレスポンダー細胞、１×１０^５個のペプチドパルス化ＡＴＣ及び０．５×１０^６個の照射ｕＬＣＬを、２４ウェル組織培養プレートのウェル中、２ｍＬのＣＴＬ培地中で培養した。

【0573】

培養中のＥＢＶＳＴを維持するため、２～４日ごとに細胞培養液とサイトカインを必要に応じて補充し、及び／又は、ＥＢＶＳＴを回収し、サイトカインを含む新鮮な細胞培養液に再プレートした。ＥＢＶＳＴを回収し、１５～２０日目に混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイに使用した。

【0574】

実施例３：ＣＤ３０特異的ＣＡＲによる同種移植ＶＳＴの拒絶反応除去能の評価
本発明者らは、ＣＤ３０．ＣＡＲ発現がＶＳＴの拒絶反応抵抗能に及ぼす影響をｉｎ ｖｉｔｒｏで検討した。

【0575】

プライミングされた同種反応性Ｔ細胞（アロレアクティブＴ細胞）の作製
ＥＢＶＳＴの作製に用いたのと同じ健康なドナーの１－２×１０^６個のＰＢＭＣ（１ウェル当たり）を３０グレイで照射し、ＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加した４４．５％Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ、４４．５％クリック培地、１０％血清、及び１％ＧｌｕｔａＭａｘを含む細胞培養培地中で、不一致のドナーの１×１０^６個のＰＢＭＣ（１ウェル当たり）と共培養した（ＨＬＡ－Ａ２の発現が異なる）。プライミング ミスマッチしたドナーのＰＢＭＣから拡大した同種反応性Ｔ細胞を、６－１０日目に抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体をコートしたプレートに０．５×１０^６細胞（２ｍｌの細胞培養培地中）をプレーティングすることにより再刺激した。培養中の同種反応性Ｔ細胞を維持するために、２～４日ごとに、細胞培養培地とサイトカインを必要に応じて補充するか、同種反応性Ｔ細胞を回収し、サイトカインを含む新鮮な細胞培養培地に再プレートした。アロエ活性Ｔ細胞を回収し、１３～１７日目にＥＢＶＳＴを用いた混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイに用いた。

【0576】

ＨＬＡ－Ａ２ 陰性の被験者から採取した０．２×１０^４個のＰＢＭＣを、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイで、以下のものと共培養した：
（ｉ）ＨＬＡ－Ａ２陽性被験者のＰＢＭＣから作製された０．２×１０^４個のＥＢＶＳＴであって、同種反応性Ｔ細胞のプライミングに使用されたもの、又は、
（ｉｉ）ＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする構築物で追加形質導入された、同種反応性Ｔ細胞のプライミングに使用されたＨＬＡ－Ａ２陽性被験者のＰＢＭＣから生成された０．２×１０^４個のＥＢＶＳＴ。

【0577】

ヒトＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）をＭＬＲアッセイに添加した。

【0578】

７日後にフローサイトメトリー分析を行い、絶対細胞数を計数ビーズを用いて決定した。異なる被験者に由来するＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２の発現に基づいて、共培養後に得られた集団で同定することができた。イベントの取得にはＧａｌｌｉｏｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社製）を用い、データ解析とグラフ表示にはＫａｌｕｚａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ社製）を用いた。

【0579】

図１に示すように、ＨＬＡ－Ａ２陽性被験者に由来する非導入型（ＮＴ）ＥＢＶＳＴの数は、ＨＬＡ－Ａ２陰性被験者に由来する同種反応性Ｔ細胞と７日間共培養した場合（左下パネル）、同種反応性Ｔ細胞非存在下で培養した場合（左上パネル）に比べて大幅に減少した。一方、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの数は、同種反応性Ｔ細胞と７日間共培養した場合（右下パネル）、同種反応性Ｔ細胞非下で培養した場合（右上パネル）と比較して増加した。

【0580】

図２にフローサイトメトリーデータの定量化を示す。非形質転換ＥＢＶＳＴ（ＮＴ）は同種反応性Ｔ細胞の存在下でほとんど排除されたが、ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＥＢＶＳＴは同種反応性Ｔ細胞による排除に抵抗性であった（図２Ａ）。さらに、同種反応性Ｔ細胞集団（ＣＤ３＋、ＨＬＡ－Ａ２陰性）の定量化により、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは、非形質転換ＥＢＶＳＴ条件と比較して同種反応性Ｔ細胞数を減少させることが明らかになった（図２Ｂ）。

【0581】

こうして、ＣＤ３０．ＣＡＲを発現するＥＢＶＳＴは、同種反応性Ｔ細胞の数を減少させる能力を有し、同種拒絶反応から保護されることが示された。

【0582】

実施例４：ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するＥＢＶ特異的Ｔ細胞の特性評価
本発明者らは、ＣＤ１９．ＣＡＲとＣＤ３０．ＣＡＲの両方を発現するように操作したウイルス特異的Ｔ細胞を作製し、特徴づけ、混合リンパ球反応において同種反応性Ｔ細胞を排除できるかどうかを調べた。

【0583】

簡単に説明すると、ＣＤ１９及びＣＤ５６発現細胞を除去したＨＬＡ－Ａ２陽性被験者の１×１０^５ ＰＢＭＣの集団を、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイで以下のものと共培養した：
（ｉ）ＨＬＡ－Ａ２陰性被験者のＰＢＭＣから作製した０．１×１０^５個のＥＢＶＳＴ、又は
（ｉｉ）（ａ）ＣＤ３０．ＣＡＲ、（ｂ）ＣＤ１９．ＣＡＲ、又は（ｃ）ＣＤ３０．ＣＡＲ及びＣＤ１９．ＣＡＲの両方（ＣＤ３０＋ＣＤ１９．ＣＡＲ）をコードする構築物で追加形質導入された、ＨＬＡ－Ａ２陰性被験体のＰＢＭＣから生成された０．１×１０^５個のＥＢＶＳＴ。

【0584】

ヒトＩＬ－２を２０ ＩＵ／ｍｌでＭＬＲアッセイに添加した。

【0585】

図３に示すように、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（右上パネル）及びＣＤ３０＋ＣＤ１９．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（右下パネル）はいずれも、非形質転換（ＮＴ）ＥＢＶＳＴ（左上パネル）及びＣＤ１９．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（左下パネル）と比較して、７日目までにＨＬＡ－Ａ２＋アロレアクティブＴ細胞（活性化マーカーＣＤ７１によって区別される）の割合を大幅に減少させた（したがって、これによる拒絶反応を回避した）。

【0586】

このように、本発明者らは、標的抗原（本実施例ではＣＤ１９）に特異的なＣＡＲとＣＤ３０特異的ＣＡＲの両方を導入したＥＢＶＳＴを用いて、所定の標的抗原に特異的な「市販の」ＣＡＲ Ｔ細胞を作製する新規アプローチを提供する。このような二重ＣＡＲ－ＥＢＶＳＴがｉｎ ｖｉｔｒｏで同種反応性Ｔ細胞を排除できることから、ｉｎ ｖｉｖｏの同種移植レシピエントにおいて拒絶反応を回避し、長期に持続できる可能性が示唆される。

【0587】

実施例５：ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの改良生産
５．１ ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの製造
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴをＧＭＰ施設で製造した。約２５０～４００ｍＬの血液を、インフォームド・コンセントを得た後、ヘルシンキ宣言で確立されたガイドラインに従って、健康な、血液バンクで承認されたドナーから採取した。

【0588】

末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を密度勾配遠心法により血液から分離した。ＰＢＭＣは、磁気ビーズに結合させた臨床グレードの抗ＣＤ４５ＲＡ抗体を用い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて磁気細胞分離することにより、ＣＤ４５ＲＡ発現細胞を除去した。

【0589】

２×１０^６個のＣＤ４５ＲＡ欠失ＰＢＭＣ（１ウェルあたり２ｍｌの培地中）を、４４．５－４７％ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ、４４．５－４７％ クリック培地、５％ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｌｙｓａｔｅ （ＨＰＬ；Ｓｅｘｔｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び１％ＧｌｕｔａＭａｘを含み、ＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を補充し、１１個のアミノ酸が重なり、ＥＢＶ抗原の全タンパク質配列にまたがる１５ｍｅｒのアミノ酸から含む重複ペプチドライブラリー（ｐｅｐｍｉｘｅｓ）で刺激して活性化した。ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２ａ及びＢＮＬＦ２ｂに対応するペプチドミックスは、ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手し、刺激には、刺激する細胞１×１０^６個当たり、各抗原について５ｎｇのペプチドミックスを使用した。刺激培養は、５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で維持した。

【0590】

４－６日後、ＥＢＶＳＴを実施例１に記載したＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質導入した。簡単に述べると、レトロウイルス含有上清（１ウェル当たり０．５－１ｍｌ）を、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）でプレコートした非組織培養処理２４ウェルプレートに添加した。プレートを２０００×ｇで６０－９０分間遠心した後、レトロウイルス上清を除去し、細胞を１ウェル当たり０．２５－０．５×１０６細胞で再プレートした。

【0591】

培養８日目から１０日目の間に、前項に記載した形質導入により産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴをＧ－Ｒｅｘ血管に移し、ｕＬＣＬの存在下で、照射しペプチドパルスした自己活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）と共培養することにより再刺激した。簡単に述べると、２×１０^６個のＡＴＣをペプチド（１×１０^６個のＡＴＣあたり１０ｎｇのペプチド混合物）と共に３７℃で３０分間インキュベートし、その後３０Ｇｙの放射線を照射して回収した。その後、ペプチドパルスしたＡＴＣを、ＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）とＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を含むＣＴＬ培地中で、レスポンダー細胞：ペプチドパルスしたＡＴＣ：照射したｕＬＣＬの比率が１：１：５となるように、培養細胞及びｕＬＣＬ（１００Ｇｙで照射）と混合した。

【0592】

７～１２日後、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを採取し、機能アッセイに用いた。

【0593】

５．２ 異なる方法で産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの比較
ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ分析を実施し、（ｉ）実施例２に記載の方法で産生したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ、及び（ｉｉ）実施例５．１に記載の方法で産生したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴについて、ＥＢＶ抗原による刺激に対する応答を比較した。

【0594】

ＩＦＮ－γ産生は、ＥＢＶ抗原ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１及びＬＭＰ２に対するペプミックス（ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手）での刺激に応答して測定した。簡単に説明すると、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを９６ウェルＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎプレート（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）のウェルに５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで二重にプレーティングした。ウェルあたり合計０．１μｇのペプチドを用いて刺激を行った。５％ＣＯ_２中、３７℃で１６～２０時間インキュベートした後、プレートをＩＦＮ－γ＋スポットについて現像し、定量化のためにＺｅｌｌＮｅｔ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ社（ニュージャージー州フォートリー）に送った。抗原特異的応答の頻度は、５×１０^４細胞あたりのスポット形成単位（ＳＦＵ）で表される。

【0595】

図１１は、ＦＢＳ存在下での培養を含む実施例２の方法によって産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴが、ＥＢＶ抗原による刺激の非存在下でＩＦＮγの高いバックグラウンド発現を示すことを示している。対照的に、ＦＢＳの代わりにＨＰＬ存在下での培養を含む実施例５．１の方法により産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは、ＥＢＶ抗原による刺激の非存在下で、ＩＦＮγのバックグラウンド発現がはるかに低い。

【0596】

したがって、ヒト血小板溶解液（ＨＰＬ）存在下での培養を含む方法によるＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの産生は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの集団におけるＥＢＶ特異的細胞の割合を増加させる。

【0597】

増殖因子の供給源としてヒト血小板溶解液（ＨＰＬ）を含む細胞培養液でＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの集団を作製／拡大すると、ＥＢＶ特異性が向上し、ウシ胎児血清を含む細胞培養液で作製した場合と比較して、バックグラウンドのＩＦＮγ分泌が劇的に減少することが観察された。ＣＡＲと内因性ＴＣＲの両方の機能を維持するＨＰＬ含有細胞培養液の能力は、ＣＡＲ発現ＶＳＴの最適性能にとって重要である。

【0598】

実施例６：ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを用いたがんの治療
６．１ 健康なドナー被験者から製造されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの製造と特性評価
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴをＧＭＰ施設で製造した。インフォームド・コンセントを得た後、ヘルシンキ宣言で定められたガイドラインに従って、血液バンクから承認された健康なドナー７人から約２５０～４００ｍＬの血液を採取した。

【0599】

末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を密度勾配遠心法により血液から分離した。ＰＢＭＣは、磁気ビーズに結合させた臨床グレードの抗ＣＤ４５ＲＡ抗体を用い、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｃｏｌｕｍｎｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて磁気細胞分離することにより、ＣＤ４５ＲＡ発現細胞を除去した。

【0600】

ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を除去した１．５～２．５×１０^７個のＰＢＭＣを、４７．５％ Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ、４７．５％ クリック（ＥＨＡＡ）培地（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５％ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｌｙｓａｔｅ（ＨＰＬ；Ｓｅｘｔｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む３０ｍｌ培養液に播種し、Ｇ－Ｒｅｘ１０容器中でＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）とＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加し、ＥＢＶ抗原の全タンパク質配列にまたがる、１１アミノ酸重複する１５ｍｅｒのアミノ酸から含む重複ペプチドライブラリー（ｐｅｐｍｉｘｅｓ）で刺激して活性化した。ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２ａ及びＢＮＬＦ２ｂに対応するペプチドミックスは、ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手し、刺激には、刺激する細胞１×１０^６個当たり、各抗原について５ｎｇのペプチドミックスを使用した（すなわち、２×１０^６個の細胞を使用して刺激を行った場合）。すなわち、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を除去した２×１０^７個のＰＢＭＣを用いた刺激には、各ペプミックスを１００ｎｇ使用した）。刺激培養は５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で維持した。

【0601】

４～６日後、前項の刺激培養により産生されたＥＢＶＳＴを、実施例１に記載のＣＡＲをコードするレトロウイルスで以下のように形質導入した。２ｍｌのレトロウイルス含有上清を１５０μｇのＶｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１と２ｍｌの容量で混合し、最終容量を４ｍｌとし、室温で５～３０分間インキュベートした。レトロウイルス：Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ－１混合物を、Ｔ７５容器中、８．５ｍｌの培地（前項に記載）中、７－１０×１０^６個の細胞に添加した。培養は５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃で維持した。

【0602】

培養８日目から１０日目の間に、前項に記載した形質導入により産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴｓ １～２×１０^７個をＧ－Ｒｅｘ１００血管に移し、照射した（１００グレイで）ｕＬＣＬ（実施例２に記載）との共培養により、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴｓ対照射したｕＬＣＬの比が１：２～１：５（典型的には約１：３）の範囲で再刺激した。ＵＬＣＬは、ＥＢＶ抗原及びＣＤ３０、ならびに他のコスティミュレイトリー分子を発現しているため、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴに抗原刺激及びコスティミュレーションを与え、ＥＢＶ特異性を失うことなくＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの強固な増殖を誘導します。

【0603】

再刺激培養は、２００ｍｌの培養液（実施例６．１の段落３に記載）で行い、必要に応じて培養液を追加した。７～１２日後、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを採取し、その後の注入のために凍結保存した。

【0604】

代表的な４人の健常人から調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖能力、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＤ３０発現がん細胞株及びＣＤ３０陰性がん細胞株に対する細胞傷害性、ならびに異なるＥＢＶ抗原に対する特異性を評価した。

【0605】

ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ増殖の解析
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの増殖は、培養中の様々な時点（０日目、６日目、１０日目、１７日目、１８日目、１９日目）において、血球計数器を用いて細胞数をカウントすることにより決定し、累積倍数拡大を算出した。

【0606】

図４は、４つの異なる健常ドナー被験者から産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴがｉｎ ｖｉｔｒｏ培養で良好に拡大し、～１７～２０日以内にＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの治療用量を達成するのに十分であったことを示しています。 膨張した細胞は、７７％から９９％の細胞でＣＤ３０．ＣＡＲを発現した（データは示さず）。

【0607】

ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの細胞毒性の解析
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの細胞傷害特異性は、クロム５１（５１Ｃｒ）放出アッセイを用いて測定した。簡単に述べると、標的細胞であるＣＤ３０陰性ＢＪＡＢバーキットリンパ腫細胞又はＣＤ３０陽性ＨＤＬＭ２ホジキンリンパ腫細胞を５１Ｃｒとともに１時間インキュベートした。非導入ＥＢＶＳＴ又はＣＤ３０．ＣＡＲ導入ＥＢＶＳＴをエフェクターとして用い、９６ウェルプレートのウェル内でエフェクター対ターゲットの比率を４０：１、２０：１、１０：１、５：１、２．５：１としてターゲットとインキュベートした。４－６時間培養後、共培養上清を回収し、５１Ｃｒ放出をガンマカウンターで検出した。特異的溶解のパーセンテージは、以下の式を用いて３連の平均値から求めた：［実験的放出－自然放出）／（最大放出－自然放出）］×１００。

【0608】

図５は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴがＣＤ３０陰性のバーキットリンパ腫ＢＪＡＢ細胞株に対しては実質的に細胞毒性を示さなかったが、ＣＤ３０陽性のホジキンリンパ腫ＨＤＬＭ２細胞株に対しては高い細胞毒性を示したことを示している。

【0609】

ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴのＥＢＶ抗原に対する反応性の解析
ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ分析を行い、４つの異なる健常ドナー被験者から調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴのＥＢＶ抗原刺激に対する反応を評価した。

【0610】

ＩＦＮ－γ産生は、ＥＢＶ潜伏期抗原（ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１）及びＥＢＶ溶解期抗原（ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２ａ、ＢＮＬＦ２ｂ）のペプミックス（ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙより入手）での刺激に応答して測定した。簡単に説明すると、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを９６ウェルＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎプレート（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）のウェルに５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ウェルで二重にプレーティングした。ウェルあたり合計０．１μｇのペプチドを用いて刺激を行った。５％ＣＯ_２中、３７℃で１６～２０時間インキュベートした後、プレートをＩＦＮ－γ＋スポットについて現像し、定量化のためにＺｅｌｌＮｅｔ Ｃｏｎｓｕｌｔｉｎｇ社（ニュージャージー州フォートリー）に送った。抗原特異的反応の頻度は、５×１０^４細胞あたりのスポット形成単位（ＳＦＵ）で表される。

【0611】

図６は、４つの異なる健常人ドナーから産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴが、ＥＢＶ抗原に対する特異性を保持していることを示している。

【0612】

４つのＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴｓ株はすべて、潜在性及び溶解性ＥＢＶ抗原による刺激に応答して、１０５細胞あたり１００以上のＩＦＮ＿２６３スポット形成単位（ＳＦＵ）を産生し、ＣＤ３０陽性ホジキンリンパ腫細胞株ＨＤＬＭ２に対して２０％以上の特異的細胞溶解をエフェクター対標的比２０：１で示すという機能放出基準をクリアした。

【0613】

６．２ ＣＤ３０＋リンパ腫に対する同種養子細胞療法としてのＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの投与
本試験では、ＣＤ３０＋の難治性又は再発のホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、その他の末梢性Ｔ細胞リンパ腫を有する１２～７５歳の患者を治療の被験体とした。

【0614】

患者はリンパ球減少を誘発するため、シクロホスファミド（Ｃｙ：５００ｍｇ／ｍ^２／日）とフルダラビン（Ｆｌｕ：３０ｍｇ／ｍ^２／日）を１日３回投与され、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞注入の少なくとも４８時間前までに完了したが、注入の２週間前までとした。

【0615】

試験開始０日目に、患者は計画された単回投与量の同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを、１～５０ｍｌの容量で約１～１０分かけて点滴静注した。患者に投与されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは、ＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩが最もよく一致しました。

【0616】

本研究では、合計５人の患者に同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞が投与された。３人の患者は、４×１０^７個のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞の投与量レベル１（ＤＬ１）を受けた。２名の患者には１×１０^８個のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞を投与した。

【0617】

モニタリングは、注射が医師によって行われたことを除いて、血液製剤の投与に関する施設の基準に従って行われた。注入後少なくとも３時間は患者をモニターした。患者は臨床状態及び検査データの変化を含む有害事象について評価された。特に、いくつかのＣＡＲ－Ｔ細胞免疫療法で観察されているサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）と神経毒性の相関について評価した。

【0618】

血液サンプルは以下の時点で患者から採取された：試験前、注入後３－４時間、１、２、３、４、６週間、０日目の細胞注入後３ヵ月。サンプルはＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの持続性と有効性を評価するために分析された。

【0619】

いずれの患者にも用量制限毒性は認められず、グレードを問わずサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）や移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）も観察されなかった。

【0620】

同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを投与された患者における臨床効果
診断画像は、測定可能な病変と治療に対する反応を記録するために（ＰＥＴスキャン、ＣＴスキャン、ＭＲＩ及び核画像診断により）、注入前及び注入０日目から６～８週間後に実施された。

【0621】

患者＃１には左前頸窩に１１．９ｍＣｉのＦＤＧを静脈注射した（注射時の血糖値は９９ｍｇ／ｄＬ）。ＰＥＴ画像とＣＴ画像は、大腿骨正中部から大腿骨近位部にかけて撮影され、その後、軸位面、冠状面、矢状面の多平面再構成と３次元再構成により画像が融合された。

【0622】

患者＃２には７．２９ｍＣｉのＦＤＧが静脈注射された（注射時の血糖値は９９ｍｇ／ｄＬ）。約６０分後、ＰＥＴ－ＣＴスキャナーを用いて頭蓋底部から大腿近位部までの画像をＣＴ減弱補正法を用いて取得した。ＣＴスライスは低線量法で取得し、マルチプレーナ再フォーマット画像を得た。

【0623】

図７及び図８は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴによる治療を受けた２人の患者における臨床反応を示しています。患者＃１の画像は複数の病変領域の消失を示し、患者＃２の画像は病変の著明な縮小を示しており、これらの患者における同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴによる治療の有効性を示している。

【0624】

投与後のＣＤ３０．ＣＡＲベクターコピー数の解析
ＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスの統合ゲノムをリアルタイムｑＰＣＲで定量した。複数の時点（リンパ節除去前、３時間後、１週目、２週目、３週目、４週目、６週目、３ヶ月目）で患者から採取した末梢血サンプルからＰＢＭＣを単離した。ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社製）を用いてＰＢＭＣからＤＮＡを抽出した後、レトロウイルスベクター内の特定の配列に相補的なプライマーとプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社製）を用いてＤＮＡを増幅した。導入遺伝子をコードするプラスミドの連続希釈液を用いて標準曲線を作成した。増幅はＡＢＩ７９００ＨＦ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、製造元の指示に従って行った。

【0625】

図９は、患者＃１と患者＃２のＣＤ３０．ＣＡＲ導入遺伝子のベクターコピー数を示しており、これらの患者ではＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴがｉｎ ｖｉｖｏで拡大せず、末梢血ですぐに検出されなくなることを示唆している。

【0626】

同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ投与患者におけるエピトープ拡散の解析
エピトープの広がりを評価するために、患者＃１から免疫細胞をいくつかの時点で採取し、腫瘍関連抗原で刺激して同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの注入前後の反応性を測定した。

【0627】

いくつかの時点（リンパ球減少前、３時間後、１週目、２週目、３週目、４週目、６週目、及び３ヶ月目）で患者から採取した末梢血サンプルからＰＢＭＣを単離し、実施例６に記載したように本質的に実施したＥＬＩＳｐｏｔアッセイで使用した。ただし、ＰＢＭＣをウェル当たり３×１０^５でプレーティングし、ＥＢＶ潜伏抗原及び溶解抗原の評価に加え、ＰＢＭＣを刺激するためにさらに２つの抗原群を使用した；（１）「その他のウイルス」（アデノウイルスのタンパク質ＨｅｘｏｎとＰｅｎｔｏｎ、及びＣＭＶのタンパク質ＰＰ６５）からの抗原のペプミックスのプール、及び（２）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ＭＡＧＥ－Ａ４、ＮＹ－ＥＳＯ、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ２、及びＳｕｒｖｉｖｉｎに対応するペプミックスのプール。

【0628】

図１０は、患者＃１がどの時点でも腫瘍関連抗原に対する応答を示さなかったことを示しており、患者＃１ではエピトープの拡散がなかったことを示唆している。この結果は、同種異系ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴによる治療が、これらの他の腫瘍抗原に対して患者の免疫系を感作させなかったことを示唆している。

【0629】

６．３ 結論
本発明者らは、健康なドナー被験者から産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは、ＣＤ３０＋がん患者に対する既製の治療法として使用することに従い、ＥＢＶ特異性とＣＤ３０陽性腫瘍細胞を排除する能力を保持したまま、十分な数まで増殖させ、そのＴＣＲとＣＤ３０．ＣＡＲの両方の機能を保持できることを示した。

【0630】

ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは安全であり、同種レシピエントにおいてｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ３０陽性リンパ腫に対する治療効果を示すことが判明した。末梢血中のＣＡＲ発現細胞の持続性は限定的であり、他の腫瘍関連抗原へのエピトープ拡散の証拠がないにもかかわらず、臨床反応が観察された。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11A】

【図11B】

【配列表】

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【国際調査報告】