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特表2024-516173間葉系前駆体又は幹細胞を使用する特定の患者における急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を治療するための方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-12
(54)【発明の名称】間葉系前駆体又は幹細胞を使用する特定の患者における急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を治療するための方法
(51)【国際特許分類】
A61K 35/28 20150101AFI20240405BHJP
A61P 11/00 20060101ALI20240405BHJP
A61K 31/58 20060101ALI20240405BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20240405BHJP
A61P 31/16 20060101ALI20240405BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240405BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240405BHJP
A61K 47/20 20060101ALI20240405BHJP
A61K 47/42 20170101ALI20240405BHJP
G01N 33/68 20060101ALI20240405BHJP
C12N 5/0775 20100101ALN20240405BHJP
C07K 14/52 20060101ALN20240405BHJP
C12Q 1/06 20060101ALN20240405BHJP
C07K 14/55 20060101ALN20240405BHJP
【ＦＩ】
A61K35/28
A61P11/00
A61K31/58
A61P31/12
A61P31/16
A61P31/14
A61K9/08
A61K47/20
A61K47/42
G01N33/68
C12N5/0775
C07K14/52
C12Q1/06
C07K14/55
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023564584
(86)(22)【出願日】2022-04-22
(85)【翻訳文提出日】2023-12-07
(86)【国際出願番号】 IB2022053762
(87)【国際公開番号】W WO2022224206
(87)【国際公開日】2022-10-27
(31)【優先権主張番号】2021901214
(32)【優先日】2021-04-23
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】2021902180
(32)【優先日】2021-07-15
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】2022900260
(32)【優先日】2022-02-09
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(31)【優先権主張番号】2022900372
(32)【優先日】2022-02-18
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】516300656
【氏名又は名称】メゾブラスト・インターナショナル・エスアーエールエル
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】シルヴィウ・イテスク
【テーマコード（参考）】
2G045
4B063
4B065
4C076
4C086
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
2G045AA25
2G045CA25
2G045CA26
2G045DA13
2G045DA14
2G045DA36
2G045FB02
2G045FB03
2G045FB07
2G045FB12
4B063QA01
4B063QA19
4B063QQ02
4B063QQ08
4B063QQ79
4B063QS10
4B065AA93X
4B065BC11
4B065CA44
4C076AA11
4C076CC15
4C076CC35
4C076DD55
4C076EE41
4C086AA01
4C086AA02
4C086EA19
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086ZA59
4C086ZC75
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB63
4C087MA02
4C087MA17
4C087NA14
4C087ZA59
4C087ZB33
4C087ZC75
4H045AA10
4H045AA30
4H045CA40
4H045DA01
4H045DA04
4H045EA50
(57)【要約】
本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療又は予防を必要とする対象においてそれを行うための方法に関し、方法は、間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含む。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法であって、６５歳以上であるＡＲＤＳを有する対象を選択することと、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を前記対象に投与することと、を含む、前記方法。
【請求項2】
前記対象が、（ａ）肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
（ｂ）マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
（ｃ）Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す、増加した炎症性バイオマーカーを有する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法であって、（ａ）肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
（ｂ）マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
（ｃ）Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す、増加した炎症性バイオマーカーを有する、ＡＲＤＳを有する対象を選択することと、
体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を前記対象に投与することと、を含む、前記方法。
【請求項4】
前記対象が、人工呼吸器を付けている、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
肺への好中球及びマクロファージ流入の増加を示す前記炎症性バイオマーカーが、ＣＣＲ２又はＣＸＣＲ３結合ケモカインである、請求項２～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
前記ＣＣＲ２結合ケモカイン（複数可）が、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、又はＣＣＬ７、好ましくはＣＣＬ２である、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
ＣＸＣＲ３結合ケモカインが、ＣＸＣＬ１０又はＣＸＣＬ９、好ましくはＣＸＣＬ１０である、請求項５に記載の方法。
【請求項8】
マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大を示す前記炎症性バイオマーカーが、ＩＬ－６又はＩＬ－８である、請求項２～７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項9】
Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す前記炎症性バイオマーカーが、ＣＣＬ１９又はＩＬ－２である、請求項２～８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項10】
炎症性バイオマーカー（複数可）の前記対象のレベルが、６５歳未満である対象と比較して増加する、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記対象の炎症性バイオマーカー（複数可）の前記対象のレベルが、６５歳未満である対象と比較して少なくとも２倍増加する、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記対象の炎症性バイオマーカー（複数可）の前記対象のレベルが、６５歳未満である対象と比較して少なくとも５倍増加する、請求項１０に記載の方法。
【請求項13】
前記対象が、６５歳以上である、請求項３～１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項14】
前記対象が、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個未満のＭＬＰＳＣを含む第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後に、持続的なＣＲＰレベルを有する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記対象が、前記第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後３日間、持続的なＣＲＰレベルを有する、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記対象が、治療後に、前記人工呼吸器を外される、請求項４～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
前記対象が、治療の６０日以内に人工呼吸器を外される、請求項１６に記載の方法。
【請求項18】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療又は予防を必要とするヒト対象においてそれを行う方法であって、－（ｉ）ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、好ましくはＣＸＣＬ１０、及び／又はＣＸＣＬ９、（ｉｉ）ＣＣＲ２結合ケモカイン、好ましくはＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及び／又はＣＣＬ７、（ｉｉｉ）ＩＬ－６、（ｖ）ＩＬ－８、（ｖｉ）ＣＣＬ１９、（ｖｉｉ）ＩＬ－２、及び／又は（ｖｉｉｉ）ＣＲＰを含むリストから選択される１つ以上の炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定すること、又は決定していることと、
－
〇６５歳以上である、及び／又は、
〇６５歳未満である対象と比較して、１つ以上の炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する、及び／又は、
〇体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個未満の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後３日間、持続的なＣＲＰレベルを有する
対象を選択することと、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を前記対象に投与することと、を含む、前記方法。
【請求項19】
治療が、ベースラインと比較して、前記少なくとも１つの炎症性バイオマーカー（複数可）のレベルを低下させ、前記少なくとも１つの炎症性バイオマーカー（複数可）が、（ａ）肺への好中球及びマクロファージ流入の減少、
（ｂ）インフラマソームの減少、
（ｃ）マクロファージ活性化及び肺への好中球遊走の減少、
（ｄ）Ｔ細胞流入及び活性化の減少、又は
（ｅ）マクロファージ及び好中球炎症の循環バイオマーカーの減少を示す、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項20】
前記炎症性バイオマーカー（複数可）が、以下：－ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、好ましくはＣＸＣＬ１０及び／又はＣＸＣＬ９、
－ＣＣＲ２結合ケモカイン、好ましくはＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及び／又はＣＣＬ７、
－ＩＬ－６、
－ＩＬ－８、
－ＴＮＦ、
－ＩＬ－１８、
－ＣＣＬ１９、
－ＩＬ－４、
－ＩＬ－１３、
－ＧＭ－ＣＳＦ、
－ＣＲＰ、又は
フェリチンのうちの１つ以上である、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
治療が、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超のＭＬＰＳＣを投与してから３～１４日以内に、ＣＲＰ及び／又はフェリチンレベルを減少させる、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項22】
治療が、前記対象における呼吸機能を改善する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項23】
ベルリン基準によって定義される呼吸機能が、１４日目及び／又は２１日目に改善される、請求項２２に記載の方法。
【請求項24】
前記対象が、５００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超、６００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超、又は８００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を投与される、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項25】
前記４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超が、少なくとも２～３回の用量にわたって投与される、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項26】
前記対象が、第１の用量を投与されてから５～９日以内に、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超のＭＬＰＳＣを受ける、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
前記対象が、第１の用量が投与されてから７日以内に、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超のＭＬＰＳＣを受ける、請求項２５に記載の方法。
【請求項28】
１用量当たり１×１０８～２．５×１０８個のＭＬＰＳＣを投与することを含む、請求項２５～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項29】
１用量当たり約１．６×１０８個のＭＬＰＳＣを投与することを含む、請求項２５～２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項30】
前記対象がまた、コルチコステロイドも服用している、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項31】
コルチコステロイドを投与することを更に含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項32】
前記コルチコステロイドが、デキサメタゾンである、請求項３０又は３１に記載の方法。
【請求項33】
前記ＡＲＤＳが、中等度又は重度である、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項34】
前記ＡＲＤＳが、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスなどのウイルス感染症によって引き起こされる、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項35】
前記ウイルス感染症が、コロナウイルスによって引き起こされる、請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記コロナウイルスが、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、又はＣＯＶＩＤ－１９である、請求項３５に記載の方法。
【請求項37】
前記ＭＬＰＳＣが、凍結保存されており、解凍されている、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項38】
前記ＭＬＰＳＣが、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から培養増殖される、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項39】
前記ＭＬＰＳＣが、少なくとも約５の継代にわたって培養増殖される、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
前記ＭＬＰＳＣが、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり少なくとも１３ｐｇのＴＮＦＲ１を発現する、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項41】
前記ＭＬＰＳＣが、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり約１３ｐｇ～約４４ｐｇのＴＮＦＲ１を発現する、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項42】
前記培養増殖が、少なくとも２０回又は３０回の集団倍加を含む、請求項３８～４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項43】
前記ＭＬＰＳＣが間葉幹細胞（ＭＳＣ）である、請求項１～４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項44】
前記ＭＬＰＳＣが同種である、請求項１～４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項45】
前記ＭＬＰＳＣが、抗ウイルス薬又は血栓溶解剤を担持又は発現するように改変される、請求項１～４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項46】
前記ＭＬＰＳＣが、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含む組成物（複数可）中で投与される、請求項１～４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項47】
前記組成物が、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を含み、前記ＨＳＡ溶液が、５％ＨＳＡ及び１５％緩衝液を含む、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
前記組成物が、６．６８×１０６生存細胞／ｍＬ超を含む、請求項４６又は４７に記載の方法。
【請求項49】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法であって、－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を前記対象に投与することと、
－ＭＬＰＳＣを投与する前に、バイオマーカー（複数可）のベースラインレベルと比較して、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの前記対象のレベルを決定するか、又は決定していることと、
－前記１つ以上のバイオマーカーのレベルがベースラインから低下しない場合、更なる用量のＭＬＰＳＣを前記対象に投与することであって、前記更なる用量に続いて、前記対象が、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与されている、前記投与することと、を含む、前記方法。
【請求項50】
前記バイオマーカーが、ＣＲＰ及び／又はフェリチンである、請求項４９に記載の方法。
【請求項51】
ＣＲＰ及び／又はフェリチンの前記対象のレベルが、７日目及び／又は１４日目のベースラインと比較して決定される、請求項４９に記載の方法。
【請求項52】
前記更なる用量が、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）２００万個のＭＬＰＳＣを含む、請求項４９～５１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療又は予防を必要とする対象において急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を治療又は予防するための方法に関する。
【背景技術】
【0002】
ウイルス感染などの様々な状態に関連する呼吸器疾患は、一般集団において問題となる。多くの場合、これらは炎症を伴い、肺の状態を悪化させ、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を引き起こす可能性がある。６５歳を超える患者は、６５歳未満の患者よりも増加した疾患の重症度を有し、悪化した臨床転帰を有する可能性が高い。
【0003】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を有する高齢患者において、特に新たな治療選択肢が必要とされるウイルス感染に続発する場合に、満たされていない治療的必要性が残る。
【発明の概要】
【0004】
本発明者らは、間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）の投与が、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を有する患者の呼吸機能を改善することができることを示した。バイオマーカー分析は、炎症経路が、ＭＬＰＳＣ治療された＜６５歳の患者において下方制御され、かつ、これが、予後の改善及び呼吸機能の持続的な改善に対応することを明らかにした。６５歳を超えるＭＬＰＳＣ治療された患者における対応するバイオマーカー分析は、驚くべきことに、これらの患者がより高いベースラインレベルの炎症を有し、かつ、これが、持続しない呼吸機能の初期改善に対応することを明らかにした。同様の炎症経路は、年齢に関係なく（＜６５歳対＞６５歳）ＡＲＤＳ患者に関与するので、本発明者の知見は、炎症性バイオマーカーのベースラインレベルが増加した患者及び／又は＞６５歳の患者の改善された治療は、ＭＬＰＳＣのより高度な又はより長期の投薬で治療される場合に達成されることができることを示唆する。ある特定の例では、＜６５歳の患者と同等の転帰は、ＭＬＰＳＣのより高度な又はより長期の投薬で達成され得る。
【0005】
したがって、第１の例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、６５歳以上であるＡＲＤＳを有する対象を選択することと、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、を含む。
【0006】
一例では、対象は、
－肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
－マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
－Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する。
－肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
－マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
－Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する。
【0007】
別の例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、ベースライン炎症のレベルの増加を有するＡＲＤＳを有する対象を選択することを含む。一例では、ベースライン炎症のレベルの増加は、炎症性バイオマーカーの増加に基づいて決定される。したがって、一例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、
－肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
－マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
－Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す、増加した炎症性バイオマーカーを有する、ＡＲＤＳを有する対象を選択することと、
体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体もしくは幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、を含む。
－肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
－マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
－Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す、増加した炎症性バイオマーカーを有する、ＡＲＤＳを有する対象を選択することと、
体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体もしくは幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、を含む。
【0008】
別の例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療又は予防を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することを含み、対象は、６５歳以上であり、及び／又は
－肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
－マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
－Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す増加した炎症性バイオマーカーを有する。
－肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、
－マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又は、
－Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す増加した炎症性バイオマーカーを有する。
【0009】
一例では、対象は、人工呼吸器を付けている。例えば、対象は、ＭＬＰＳＣを投与する前に機械的に換気されることができる。
【0010】
一例では、肺への好中球及びマクロファージ流入の増加を示す炎症性バイオマーカー（複数可）は、ＣＣＲ２又はＣＸＣＲ３結合ケモカインである。例えば、ＣＣＲ２結合ケモカインは、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、又はＣＣＬ７であり得る。一例では、ＣＣＲ２結合ケモカインは、ＣＣＬ２である。別の例では、ＣＸＣＲ３結合ケモカインは、ＣＸＣＬ１０又はＣＸＣＬ９である。一例では、ＣＸＣＲ３結合ケモカインはＣＸＣＬ１０である。一例では、マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大を示す炎症性バイオマーカー（複数可）は、ＩＬ－６又はＩＬ－８である。一例では、Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す炎症性バイオマーカー（複数可）は、ＣＣＬ１９又はＩＬ－２である。
【0011】
本発明者らの知見は、ある特定のバイオマーカー（複数可）及び／又は年齢のレベルに基づいて、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する対象を、有効な治療のために選択することができることを示唆する。一例では、本開示の方法は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＣＣＬ２のレベルに基づいて対象を選択することを含む。別の例では、対象は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＣＣＬ３のレベルに基づいて選択される。別の例では、対象は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＣＣＬ７のレベルに基づいて選択される。別の例では、本開示の方法は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＣＸＣＬ１０のレベルに基づいて対象を選択することを含む。別の例では、対象は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＣＸＣＬ９のレベルに基づいて選択される。別の例では、本開示の方法は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＩＬ－６のレベルに基づいて対象を選択することを含む。別の例では、対象は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＩＬ－８のレベルに基づいて選択される。別の例では、本開示の方法は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＣＣＬ１９のレベルに基づいて対象を選択することを含む。別の例では、対象は、＜６５歳の対象と比較して増加しているＩＬ－２のレベルに基づいて選択される。これらの例では、炎症性バイオマーカーのレベルの増加は、＜６５歳である患者と比較して、１倍を超えて増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳である患者と比較して、少なくとも２倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳である患者と比較して、少なくとも３倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳である患者と比較して、少なくとも４倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳である患者と比較して、少なくとも５倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳である患者と比較して、５倍を超えて増加する。一例では、＜６５歳である患者は、コルチコステロイドを服用していない。
【0012】
別の例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後、持続的なＣＲＰレベルに基づいて選択される。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後７日間の持続的なＣＲＰレベルに基づいて選択される。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後１４日間の持続的なＣＲＰレベルに基づいて選択される。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後２１日間の持続的なＣＲＰレベルに基づいて選択される。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後３０日間の持続的なＣＲＰレベルに基づいて選択される。
【0013】
一例では、本明細書に開示される方法による治療は、対象を人工呼吸器から外すことを可能にする。一例では、対象は、治療の６０日以内に人工呼吸器を外される。
【0014】
一例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療又は予防を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、
－６５歳以上である、及び／又は、
－６５歳未満である対象と比較して、１つ以上の炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する、及び／又は、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個未満の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後３日間、持続的なＣＲＰレベルを有する対象を選択することと、
体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、を含む。一例では、本方法は、（ｉ）ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、好ましくはＣＸＣＬ１０及び／又はＣＸＣＬ９、（ｉｉ）ＣＣＲ２結合ケモカイン、好ましくはＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及び／又はＣＣＬ７、（ｉｉｉ）ＩＬ－６、（ｖ）ＩＬ－８、（ｖｉ）ＣＣＬ１９、（ｖｉｉ）ＩＬ－２、及び／又は（ｖｉｉｉ）ＣＲＰを含むリストから選択される１つ以上の炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定すること、又は決定していることを更に含む。
－６５歳以上である、及び／又は、
－６５歳未満である対象と比較して、１つ以上の炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する、及び／又は、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個未満の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後３日間、持続的なＣＲＰレベルを有する対象を選択することと、
体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、を含む。一例では、本方法は、（ｉ）ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、好ましくはＣＸＣＬ１０及び／又はＣＸＣＬ９、（ｉｉ）ＣＣＲ２結合ケモカイン、好ましくはＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及び／又はＣＣＬ７、（ｉｉｉ）ＩＬ－６、（ｖ）ＩＬ－８、（ｖｉ）ＣＣＬ１９、（ｖｉｉ）ＩＬ－２、及び／又は（ｖｉｉｉ）ＣＲＰを含むリストから選択される１つ以上の炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定すること、又は決定していることを更に含む。
【0015】
本発明者らはまた、細胞療法による治療が、患者における炎症性バイオマーカーのレベルを減少させることができることを特定した。したがって、別の例では、本開示による組成物による治療は、
－肺への好中球及びマクロファージ流入の減少、
－インフラマソームの減少、
－マクロファージ活性化及び肺への好中球遊走の減少、
－Ｔ細胞流入及び活性化の減少、又は
－マクロファージ及び好中球炎症の循環バイオマーカーの減少を示す、炎症性バイオマーカーのうちの少なくとも１つのレベルを低下させる。
－肺への好中球及びマクロファージ流入の減少、
－インフラマソームの減少、
－マクロファージ活性化及び肺への好中球遊走の減少、
－Ｔ細胞流入及び活性化の減少、又は
－マクロファージ及び好中球炎症の循環バイオマーカーの減少を示す、炎症性バイオマーカーのうちの少なくとも１つのレベルを低下させる。
【0016】
一例では、炎症性バイオマーカーは、ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、例えば、ＣＸＣＬ１０である。別の例では、ＣＸＣＲ３結合ケモカインは、ＣＸＣＬ９である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＣＣＲ２結合ケモカイン、例えば、ＣＣＬ２である。別の例では、ＣＣＲ２結合ケモカインは、ＣＣＬ３である。別の例では、ＣＣＲ２結合ケモカインは、ＣＣＬ７である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＩＬ－６である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＩＬ－８である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＴＮＦである。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＩＬ－１８である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＣＣＬ１９である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＩＬ－４である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＩＬ－１３である。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＧＭ－ＣＳＦである。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＣＲＰである。別の例では、炎症性バイオマーカーは、フェリチンである。
【0017】
一例では、本開示による治療は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超のＭＬＰＳＣを投与してから３～１４日以内に、ＣＲＰ及び／又はフェリチンレベルを減少させる。別の例では、治療は、対象の呼吸機能を改善する。例えば、改善された呼吸機能は、ベルリン基準を使用して決定することができる。一例では、治療は、１４日目及び／又は２１日目の対象のベルリン基準を改善する。一例では、改善された呼吸機能は、ベースライン呼吸機能と比較して、７日目以降も維持される。一例では、改善された呼吸機能は、ベースライン呼吸機能と比較して１４日目に維持される。
【0018】
一例では、対象は、５００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を投与される。別の例では、対象は、６００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を投与される。別の例では、対象は、８００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を投与される。一例では、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超は、少なくとも２～３回の用量にわたって投与される。一例では、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超は、３回の用量にわたって投与される。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与されてから５～９日以内に、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超のＭＬＰＳＣを受ける。一例では、本開示の方法は、１用量当たり１×１０８～２．５×１０８個のＭＬＰＳＣを投与することを含む。別の例では、本開示の方法は、１用量当たり約１．６×１０８個のＭＬＰＳＣを投与することを含む。別の例では、本開示の方法は、１用量当たり約２００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇを投与することを含む。
【0019】
一例では、対象のＡＲＤＳは、中等度又は重度である。
【0020】
一例では、対象は、本明細書に開示される細胞組成物を投与する前に、コルチコステロイドを服用している。別の例では、本開示による方法は、コルチコステロイドを投与することを更に含む。一例では、コルチコステロイドは、デキサメタゾンである。
【0021】
一例では、ＡＲＤＳは、ウイルス感染症によって引き起こされる。ウイルス感染は、例えば、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）又はコロナウイルスによって引き起こされ得る。
【0022】
一例では、ＡＲＤＳは、コロナウイルス感染症によって引き起こされる。コロナウイルスは、例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、ＣＯＶＩＤ－１９、２２９Ｅ、ＮＬ６３、ＯＣ４３、又はＫＨＵ１であり得る。一例では、コロナウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＣＯＶＩＤ－１９（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）である。一例では、ＡＲＤＳは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染に続発する。
【0023】
一例では、ＡＲＤＳは、静脈血栓症又は動脈血栓症などの血栓症によって引き起こされる。別の例では、ＡＲＤＳは、肺塞栓症によって引き起こされる。
【0024】
一例では、ＭＬＰＳＣは、凍結保存されており、解凍されている。一例では、ＭＬＰＳＣは、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から培養増殖される。別の例では、ＭＬＰＳＣは、少なくとも約５の継代にわたって培養増殖される。一例では、ＭＬＰＳＣは、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり少なくとも１３ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１を発現する。一例では、ＭＬＰＳＣは、１００万個のＭＬＰＳＣ当たり約１３ｐｇ～約４４ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１を発現する。一例では、培養増殖ＭＬＰＳＣは、少なくとも２０回の集団倍加にわたって培養増殖される。別の例では、培養増殖ＭＬＰＳＣは、少なくとも３０回の集団倍加にわたって培養増殖される。一例では、ＭＬＰＳＣは、間葉幹細胞（ＭＳＣ）である。別の例では、ＭＬＰＳＣは、同種である。例えば、ＭＬＰＳＣは、同種ＭＳＣであり得る。
【0025】
別の例では、ＭＬＰＳＣは、抗ウイルス薬又は血栓溶解剤を担持又は発現するように改変される。一例では、抗ウイルス薬は、レムデシビルである。一例では、血栓溶解剤は、Ｅｍｉｎａｓｅ（アニストレプラーゼ（ａｎｉｓｔｒｅｐｌａｓｅ））Ｒｅｔａｖａｓｅ（レテプラーゼ）Ｓｔｒｅｐｔａｓｅ（ストレプトキナーゼ、カビキナーゼ（ｋａｂｉｋｉｎａｓｅ））からなる群から選択される。
【0026】
別の例では、ＭＬＰＳＣは、抗ウイルスペプチド又はそれをコードする核酸を発現するように遺伝子改変される。
【0027】
一例では、組成物は、静脈内に投与される。
【0028】
一例では、対象は、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超が少なくとも２～３回の用量にわたって投与される。一例では、対象は、第１の用量が投与されてから５～９日以内に４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を受ける。別の例では、対象は、第１の用量が投与されてから７日以内に、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を受ける。これらの例では、用量は、１用量当たり１×１０８～２．５×１０８個の細胞を含む。例えば、用量は、１．６×１０８個の細胞を含む。別の例では、用量は、２００万個の細胞／ｋｇを含む。
【0029】
一例では、本開示のＭＬＰＳＣは、組成物中に投与される。一例では、組成物は、プラズマライトＡ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を更に含む。一例では、組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を更に含み、ＨＳＡ溶液は、５％ＨＳＡ及び１５％緩衝液を含む。
【0030】
一例では、組成物は、６．６８×１０６生存細胞／ｍＬ超を含む。
【0031】
別の例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、
－ＭＬＰＳＣを投与する前に、バイオマーカー（複数可）のベースラインレベルと比較して、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの対象のレベルを決定するか、又は決定していることと、
１つ以上のバイオマーカーのレベルがベースラインから低下しない場合、対象に更なる用量のＭＬＰＳＣを投与することであって、更なる用量に続いて、対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与されている、投与することと、を含む。
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、
－ＭＬＰＳＣを投与する前に、バイオマーカー（複数可）のベースラインレベルと比較して、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの対象のレベルを決定するか、又は決定していることと、
１つ以上のバイオマーカーのレベルがベースラインから低下しない場合、対象に更なる用量のＭＬＰＳＣを投与することであって、更なる用量に続いて、対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与されている、投与することと、を含む。
【0032】
一例では、バイオマーカーは、ＣＲＰ及び／又はフェリチンである。一例では、ＣＲＰ及び／又はフェリチンの対象のレベルは、７日目及び／又は１４日目のベースラインと比較して決定される。
【0033】
一例では、更なる用量は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）２００万個のＭＬＰＳＣを含む。
【図面の簡単な説明】
【0034】
【図1】細胞療法は、＜６５歳の患者における６０日目の死亡に対する保護を提供する。Ａ：＜６５歳のＩＴＴ患者、Ｂ：≧６５歳のＩＴＴ患者。
【図2】細胞療法は、＜６５歳の患者における６０日目の死亡に対する保護を提供する。Ａ：＜６５歳のＰＰ患者（ｎ＝１２３）、Ｂ：≧６５歳のＰＰ患者（ｎ＝９４）。
【図3】＜６５歳の患者及び＞６５歳の患者におけるＡＲＤＳ重症度（ベルリン基準によって定義されるＡＲＤＳの解消及び／又は改善として測定される）。
【図4A】ベースラインならびに３日目、７日目、及び１４日目のＣＲＰレベル。
【図4B】ベースラインならびに３日目、７日目、及び１４日目のフェリチンレベル。
【図4C】ベースラインならびに３日目、７日目、及び１４日目のＤ－ダイマー。
【図5】＞６５歳の患者は、ベースライン炎症のより高いレベルを有する。データはレベルの倍率変化である。
【図6】年齢グループ別の炎症性バイオマーカー層別分析。データは、ベースラインからのレベルの倍率変化である。
【発明を実施するための形態】
【0035】
本明細書全体を通じて、別途特に明記されない限り、又は文脈上そうでないとする要求がない限り、単一のステップ、組成物（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｔｅｒ）、ステップの群又は組成物の群への言及は、１つ及び複数の（すなわち１つ以上の）それらのステップ、組成物、ステップの群又は組成物の群を包含するように受け取られるものとする。
【0036】
当業者は、本明細書に記載される開示が、具体的に記載されるもの以外の変形及び改良を受ける余地があることを理解するであろう。本開示が全てのこのような変形及び改変を含むことを理解されたい。本開示は、本明細書において個別に又は集合的に言及又は示されるステップ、特徴、組成物、及び化合物の全て、ならびにありとあらゆる組み合わせ、又は任意の２つ以上の該ステップもしくは特徴も含む。
【0037】
本開示は、例示のみを目的とする、本明細書に記載される特定の実施形態によって、範囲が限定されるべきではない。機能的に均等な生成物、組成物、及び方法は、本明細書に記載されるように、明らかに本開示の範囲内である。
【0038】
本明細書に開示される任意の例は、別途特に明記されない限り、任意の他の例に準用されるものとする。
【0039】
特に別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、（例えば、細胞培養、分子遺伝学、幹細胞治療、免疫学、免疫組織化学、タンパク質化学、及び生化学の）当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するものと理解されるべきである。
【0040】
別段の指示がない限り、本開示で利用される外科的技法は、当業者に周知の標準的な手順である。
【0041】
間葉系幹細胞又は前駆体細胞の集団を得る及び富化する方法は、当該技術分野で既知である。例えば、間葉系幹細胞又は前駆体細胞の富化集団は、間葉系幹細胞又は前駆体細胞上で発現される細胞表面マーカーの使用に基づくフローサイトメトリー及び細胞選別手順の使用によって得ることができる。
【0042】
本明細書で引用又は参照される全ての文書、及び本明細書で引用される文書内で引用又は参照される全ての文書は、本明細書で又は本明細書での参照により組み込まれる任意の文書内で言及される任意の製品に対する、任意の製造業者の指示、記述、製品仕様、及び製品シートとともに、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0043】
選択された定義
「及び／又は」、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」という用語は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解され、両方の意味又はいずれかの意味に明確なサポートを提供するものとみなされる。
「及び／又は」、例えば、「Ｘ及び／又はＹ」という用語は、「Ｘ及びＹ」又は「Ｘ又はＹ」のいずれかを意味すると理解され、両方の意味又はいずれかの意味に明確なサポートを提供するものとみなされる。
【0044】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、そうでないと述べられない限り、指定された値の＋／－１０％、より好ましくは、＋／－５％を指す。
【0045】
「レベル」及び「量」という用語は、対象からの試料中、又は細胞調製物（又はそこからの試料）中の特定の物質の量を定義するために使用される。例えば、特定の濃度、重量、パーセンテージ（例えば、ｖ／ｖ％）又は比率を使用して、特定の物質のレベルを定義することができる。
【0046】
一例では、特定のマーカーのレベルは、患者又は対象から得られた試料（複数可）（例えば、血液試料、血漿試料、又は血清試料）において決定される。例えば、本開示による炎症性バイオマーカーのレベルは、血液試料中で決定することができる。
【0047】
一例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、対象から得られた試料中のタンパク質発現のレベルを測定することによって決定される。試料中の炎症性バイオマーカーのタンパク質発現レベルを測定するために利用可能な様々なアッセイが当該技術分野で既知である。例えば、炎症性バイオマーカーレベルは、酵素結合免疫吸着剤（ＥＬＩＳＡ）アッセイなどの抗体ベースのイムノアッセイを使用して、試料中で測定されることができる。一例では、血液試料は、患者から得られ、次いで、本開示による炎症性バイオマーカーに結合する抗体と接触する前に精製される。この例では、抗体結合の程度を使用して、試料中の炎症性バイオマーカーのレベルを定量化する（例えば、ｐｇ／ｍＬ）。別の例では、炎症性バイオマーカーレベルは、多重イムノアッセイ、例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１５８：２７－３２．２０１９を参照）を使用して、試料中で測定されることができる。別の例では、炎症性バイオマーカーレベルは、蛍光ビーズベースのイムノアッセイを使用して、試料中で測定することができる。これらの例では、複数の炎症性バイオマーカーのタンパク質発現は、単一の試料において測定される。別の例では、炎症性バイオマーカーのタンパク質発現は、別個の試料中で測定される。
【0048】
別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、対象から得られた試料中の遺伝子発現のレベルを測定することによって決定される。試料中の炎症性バイオマーカーの遺伝子発現レベルを測定するために利用可能な様々なアッセイが当該技術分野で既知である。例えば、炎症性バイオマーカーレベルは、定性ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ベースのアッセイのような、分子ベースのアッセイを使用して、試料中で測定されることができる。一例では、血液試料は、対象から得られ、次いで精製され、溶解されて、血液細胞溶解物を得る。この例では、分子プライマー及びプローブの結合を使用して、試料中の炎症性バイオマーカーの遺伝子発現のレベルを定量化する。一例では、レベルは、適切な制御に対する倍率変化として表される。「倍率変化」は、２つの量の差の比率である。別の例では、炎症性バイオマーカーの遺伝子発現のレベルは、多重ＰＣＲアッセイ、例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１５８：２７－３２．２０１９を参照）を使用して、試料中で測定されることができる。これらの例では、複数の炎症性バイオマーカーの遺伝子発現は、単一の試料において測定される。別の例では、複数の炎症性バイオマーカーの遺伝子発現は、別個の試料中で測定される。
【0049】
一例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、血清中で測定される。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、血漿中で測定される。
【0050】
一例では、複数の試料は、経時的に対象から得られる。炎症性バイオマーカーレベルは、これらの試料において決定して、炎症の対象のレベルを経時的にモニタリングすることができる。ある例では、試料は、ベースラインで（すなわち、細胞療法を投与する前に）、及び細胞療法の投与後に採取される。炎症性バイオマーカーのレベルを試料間で比較して、炎症性バイオマーカーのレベルが変化した（例えば、減少した）かどうかを判定することができる。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、経時的に採取した（例えば、ベースライン、７日目、１４日目、２１日目、３０日目）複数の試料において決定することができる。これらの例では、試料は、炎症が変化した（例えば、減少した）かどうか、及び減少の文脈において、炎症の減少が持続的であるかどうかを判定するために評価されることができる。一例では、炎症の持続的な減少は、細胞療法の投与後の少なくとも２つの試料におけるベースラインからの観察される炎症の減少に基づいて決定される。一例では、試料は、７日目及び１４日目に採取される。別の例では、試料は、１４日目及び２１日目に採取される。別の例では、試料は、２１日目及び３０日目に採取される。別の例では、試料は、７日目、１４日目、２１日目、及び３０日目に採取される。一例では、炎症の持続的な変化は、細胞療法を投与した後、７日目及び１４日目に変化が観察されることを意味する。別の例では、炎症の持続的な変化は、細胞療法を投与した後、７日目、１４日目、及び２１日目に変化が観察されることを意味する。一例では、炎症の持続的な変化は、細胞療法を投与した後、１４日目及び２１日目に変化が観察されることを意味する。
【0051】
一例では、レベルは、適切な制御と比較して、倍率変化として表される。「倍率変化」は、２つの量の差の比率である。一例では、倍率変化は、ｌｏｇ２（倍率－変化）として計算される。例では、レベルは、＜６５歳であるＡＲＤＳを有する患者と比較して、倍率変化として表される。別の例では、レベルは、ベースラインレベルと比較して、倍率変化として表される。別の例では、レベルは、ＡＲＤＳを有さない患者と比較して、倍率変化として表される。例では、レベルは、＜６５歳であり、コルチコステロイドを服用していない、ＡＲＤＳを有する患者と比較して、倍率変化として表される。
【0052】
別の例では、レベルは、培養条件下で本開示の細胞によってどのくらいの量の特定のマーカーが発現されるかという点で表される。一例では、発現は、細胞表面発現を表す。別の例では、レベルは、培養条件下で本明細書に記載の細胞からどのくらいの量の特定のマーカーが放出されるかという点で表される。一例では、レベルはｐｇ／ｍｌで表される。別の例では、レベルは、１０６個の細胞当たりのｐｇで発現される。ｐｇ／ｍｌのレベルは、必要に応じて１０６個の細胞当たりのｐｇに変換され得る。例えば、ＴＮＦ－Ｒ１の文脈では、一例では、２００ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ－Ｒ１は、１０６個の細胞当たり約２３．５ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１に対応する。一例では、ＴＮＦ－Ｒ１の文脈では、一例では、２２５ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ－Ｒ１は、１０６個の細胞当たり約２６．５ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１に対応する。一例では、２３０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ－Ｒ１は、１０６個の細胞当たり約２７ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１に対応する。別の例では、２６０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ－Ｒ１は、１０６個の細胞当たり約３０ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１に対応する。別の例では、２７０ｐｇ／ｍｌのＴＮＦ－Ｒ１は、１０６個の細胞当たり約３２ｐｇのＴＮＦ－Ｒ１に対応する、などである。
【0053】
一例では、特定のマーカーのレベルは、培養条件下で決定される。「培養条件」という用語は、培養物中で成長する細胞を指すために使用される。一例では、培養条件は、細胞の積極的な分裂集団を指す。そのような細胞は、一例では、指数関数的成長段階であり得る。例えば、特定のマーカーのレベルは、細胞培養培地の試料を採取し、試料中のマーカーのレベルを測定することによって決定することができる。別の例では、特定のマーカーのレベルは、細胞の試料を採取し、細胞溶解物中のマーカーのレベルを測定することによって決定することができる。当業者であれば、分泌されたマーカーは培養培地をサンプリングして測定できるが、細胞表面に発現したマーカーは細胞溶解液の試料を評価して測定することができることを理解するであろう。一例では、細胞が指数関数的成長段階にあるときに試料が採取される。一例では、試料は、培養物中で少なくとも２日後に採取される。
【0054】
凍結保存された中間体から細胞を増殖させる培養とは、細胞の成長に適した条件下で、低温凍結及びインビトロ培養を受けた細胞を解凍することを意味する。
【0055】
一例では、ＴＮＦ－Ｒ１などの特定のマーカーの「レベル」又は「量」は、細胞が凍結保存された後に決定され、次いで培養物に再び播種される。例えば、レベルは、細胞の最初の凍結保存後に決定される。別の例では、レベルは、細胞の第２回目の凍結保存後に決定される。例えば、特定のマーカーのレベルを培養条件下で決定できるように、細胞を凍結保存された中間体から培養増殖し、培養で再播種する前に２回目の凍結保存をし得る。
【0056】
「バイオマーカー」は、特定の病理学的又は生理学的プロセス、疾患などを同定することができる天然に存在する分子、遺伝子、又は特徴を指す。本明細書で使用される場合、「炎症性バイオマーカー」は、活性型炎症性疾患及び／又は活性型炎症経路の存在又は非存在を示す、天然に存在する分子を指す。一例では、炎症性バイオマーカーは、サイトカインである。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ケモカインである。炎症性バイオマーカーの例は、以下で更に説明され、例えば、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰが含まれる。
【0057】
「持続的なＣＲＰレベル」とは、対象が、ＭＬＰＳＣでの治療後に有意に減少しないＣＲＰレベル（例えば、ｐ＜０．０５）を有することを意味する。一例では、持続的なＣＲＰレベルは、第１の用量のＭＬＰＳＣを受けた後に、対象ＣＲＰレベルが維持される（すなわち、有意に変化しない）ことを意味する。
【0058】
一例では、本開示の方法は、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する、患者を治療すること、及び／又は治療のための患者を選択することに関する。一例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、対照集団と比較して増加する。一例では、患者は、＜６５歳である患者と比較して、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する。別の例では、患者は、ベースラインレベルと比較して、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する。
【0059】
「単離された」又は「精製された」とは、その天然の環境の少なくともいくつかの構成要素から分離された細胞を意味する。この用語は、細胞の天然の環境からの全体的な物理的分離（例えば、ドナーからの除去）を含む。「単離された」という用語は、例えば、解離による、それが直接的に関与している隣接細胞との細胞の関係の変化を含む。「単離された」という用語は、組織切片にある細胞を指すものではない。細胞の集団を指すために使用される場合、「単離された」という用語は、本開示の単離された細胞の増殖から生じる細胞の集団を含む。
【0060】
「継代」、「継代させる」又は「継代培養」という用語は、細胞数が継続的に増加することができるように、細胞を生存させ、長期間培養条件下で成長させるために使用される既知の細胞培養技術を指すために本開示の文脈で使用される。細胞株が経た継代培養の程度は、「継代数」として表されることが多く、これは、一般に、細胞が継代培養された回数を指すために使用される。一例では、１回の継代は、非接着細胞を除去し、接着した間葉系前駆体又は幹細胞を残すことを含む。そのような間葉系前駆体又は幹細胞は、次いで、基質又はフラスコから（例えば、トリプシン又はコラゲナーゼなどのプロテアーゼを使用することによって）解離することができ、培地を添加することができ、任意選択的な洗浄（例えば、遠心分離による）を行うことができ、次いで、間葉系前駆体又は幹細胞は、全体としてより大きな表面積を含む１つ以上の培養容器に再プレーティング又は再播種することができる。間葉系前駆体又は幹細胞は次いで、培養で増殖し続けることができる。別の例では、非接着細胞を除去する方法として、非酵素処理のステップ（例えば、ＥＤＴＡによる）が挙げられる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、コンフルエンスで又はほぼコンフルエンス（例えば、約７５％～約９５％のコンフルエンス）で継代される。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、培養培地の約１０％、約１５％、又は約２０％細胞／ｍｌの濃度で播種される。
【0061】
「培地」（単数又は複数）という用語は、本開示の文脈で使用される場合、培養中の細胞を取り囲む環境の構成要素を含む。培地は、細胞の成長を可能にするのに好適な条件に寄与する、及び／又は条件を提供することが想定される。培地は、固体、液体、気体、又は相及び材料の混合物であり得る。培地は、液体増殖培地ならびに細胞成長を維持しない液体培地を含むことができる。例示的な気体培地としては、ペトリ皿又は他の固体もしくは半固体支持体上で成長する細胞が曝露される気体相が挙げられる。
【0062】
本明細書で使用される場合、「治療すること」、「治療する」又は「治療」という用語は、間葉系幹細胞もしくは前駆体細胞の集団及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子を投与し、それによってＡＲＤＳの少なくとも１つの症状を低減又は排除することを含む。一例では、治療は、培養増殖された間葉系幹細胞又は前駆体細胞の集団を投与することを含む。一例では、治療応答は、ベースラインと比較して決定される。一例では、治療応答は、対象患者集団と比較して決定される。一例では、治療は、対象のＡＲＤＳを重度から中等度に改善する。一例では、治療は、呼吸機能を改善する。一例では、治療は、対象が機械的換気を終えることを可能にする。
【0063】
一例では、本開示の方法は、対象における疾患進行又は疾患合併症を阻害する。対象における疾患進行又は疾患合併症の「阻害」は、対象における疾患進行及び／又は疾患合併症を予防又は軽減することを意味する。したがって、一例では、本開示の方法は、ＡＲＤＳ重症度の進行を阻害する。
【0064】
本明細書で使用される場合、「予防する」又は「予防すること」という用語は、間葉系幹細胞又は前駆体細胞及び／又はその子孫及び／又はそれに由来する可溶性因子の集団を投与することを含み、それにより、ＡＲＤＳの少なくとも１つの症状の発症を停止又は阻害する。
【0065】
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒト対象を指す。例えば、対象は成人であってもよい。「対象」、「患者」、又は「個人」などの用語は、文脈上、本開示で互換的に使用することができる用語である。
【0066】
「血栓症」という用語は、血栓又は凝血塊の形成を指すために本明細書において使用される。一例では、血栓症は、動脈内に凝血塊が発生する「動脈血栓症」である。そのような凝血塊は、心臓又は脳などの主要な器官への血流を妨げる可能性があるため、対象にとって特に危険である。一例では、血栓症は、静脈内に凝血塊が発生する「静脈血栓症」である。
【0067】
「肺塞栓症」という用語は、血流を通って体内の他の場所から移動した物質による肺の動脈の閉塞を指すために本明細書において使用される。
【0068】
本明細書で使用される場合、「遺伝的に修飾されていない」という用語は、核酸によるトランスフェクションによって修飾されていない細胞を指す。疑義を避けるために、本開示の文脈において、Ａｎｇ１をコードする核酸でトランスフェクトされた間葉系前駆体又は幹細胞は、遺伝的に修飾されるとみなされる。
【0069】
「総用量」という用語は、本開示の文脈において、本開示に従って治療される対象によって受容される細胞の総数を指すために使用される。一例では、総用量は、１回の細胞の投与からなる。別の例では、総用量は、２回の細胞の投与からなる。別の例では、総用量は、３回の細胞の投与からなる。別の例では、総用量は、４回以上の細胞の投与からなる。例えば、総用量は、２～５回の細胞の投与からなり得る。各例では、総用量は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）である。例えば、体重の１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）の総用量は、少なくとも３回の用量にわたって投与することができる。この例では、対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）２００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）の２回の事前投与を受けていてもよい。
【0070】
「臨床的に証明された」という用語（独立して使用されるか、又は「有効な」という用語を修飾するために使用される）は、有効性が、Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ、ＥＭＥＡ、又は対応する国の規制当局の承認基準を満たした臨床試験によって証明されたことを意味するものとする。例えば、臨床研究は、組成物の効果を臨床的に証明するために使用される、適切なサイズの、無作為化、二重盲検研究であり得る。一例では、臨床的に証明された有効量は、特定のエンドポイントを満たすために臨床試験によって示される量である。一例では、エンドポイントは、死に対する保護である。
【0071】
したがって、「臨床的に証明された有効性」及び「臨床的に証明された有効な」という用語は、本開示の文脈において、本明細書に開示される用量、投与レジメン、治療、又は方法を指すために使用され得る。有効性は、本明細書に開示される組成物を投与することに応答して疾患の経過の変化に基づいて測定することができる。例えば、本開示の組成物は、ＡＲＤＳの重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、好ましくは持続的な改善を誘導するのに十分な量及び時間で、対象に投与される。治療の量及び時間が十分であるかどうかを判定するために、ＡＲＤＳの重症度を反映する様々な指標が評価され得る。そのような指標としては、例えば、疾患重症度又は症状の臨床的に認識される指標が挙げられる。一例では、改善の程度は、徴候、症状、又は他の試験結果に基づいてこの決定を行うことができる医師によって決定される。一例では、臨床的に証明された有効量は、患者生存を改善する。別の例では、臨床的に証明された有効量は、対象の死亡リスクを低減する。別の例では、臨床的に証明された有効量は、対象の循環ＣＲＰレベルを低減する。別の例では、臨床的に証明された有効量は、対象の呼吸機能を改善する。
【0072】
本明細書を通して、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」という用語、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は、記載された要素、整数もしくはステップ、又は要素、整数もしくはステップの群を含むことを意味すると理解されるが、任意の他の要素、整数もしくはステップ、又は要素、整数もしくはステップの群を除外しない。
【0073】
本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈によりそうではないと指示されない限り、単数及び複数の指示参照を含む。
【0074】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）
本開示の方法は、本明細書に開示される組成物を投与することによる急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療に関する。一例では、方法は、ＭＬＰＳＣを含む組成物を投与することを含む。したがって、一例では、組成物は、ＭＳＣを含むことができる。
本開示の方法は、本明細書に開示される組成物を投与することによる急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療に関する。一例では、方法は、ＭＬＰＳＣを含む組成物を投与することを含む。したがって、一例では、組成物は、ＭＳＣを含むことができる。
【0075】
「急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）」という用語は、肺の広範囲の炎症、酸素化の不良、及び不従順な又は「硬い」肺を特徴とする呼吸不全の一種である。この障害は、一般に、毛細血管内皮損傷及びびまん性肺胞損傷に関連している。
【0076】
一例では、本開示の方法は、軽度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、中等度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、重度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。別の例では、本開示の方法は、中等度又は重度のＡＲＤＳを有する対象を予防又は治療する。一例では、本開示の方法は、換気を必要とするＡＲＤＳを有する対象を治療する。例えば、対象は、機械的人工呼吸器を付けることができる。
【0077】
一例では、ＡＲＤＳの重症度は、ＰａＯ２／ＦｉＯ２比に応じて診断される。例えば、ＡＲＤＳの重症度は、以下のように診断することができる：（軽度：２６．６ｋＰａ＜ＰａＯ２／ＦｉＯ２≦３９．９ｋＰａ、中等度：１３．３ｋＰａ＜ＰａＯ２／ＦｉＯ２≦２６．６ｋＰａ、重度：ＰａＯ２／ＦｉＯ２≦１３．３ｋＰａ）。一例では、ＡＲＤＳの重症度は、以下の表に要約されるように、ベルリン基準に従って診断されることができる：
【表1】
【0078】
別の例では、ＡＲＤＳの重症度は、以下のように診断することができる：軽度（ＰａＯ２／ＦｉＯ２ ２００～３００ｍｍＨｇ）、中等度（ＰａＯ２／ＦｉＯ２ １００～２００ｍｍＨｇ）、重度（ＰａＯ２／ＦｉＯ２ １００ｍｍＨｇ未満）。
【0079】
一例では、本開示の方法に従って治療される対象は、６５歳以上である。
【0080】
別の例では、本開示の方法に従って治療される対象は、コルチコステロイドを服用している。一例では、コルチコステロイドは、長時間作用型又は中間作用型（半減期＜３６時間）コルチコステロイドである。一例では、コルチコステロイドは、長時間作用型（３６～７２時間の半減期）である。一例では、コルチコステロイドは、デキサメタゾンである。コルチコステロイドの他の例としては、プレドニゾン及びメチルプレドニゾロンが挙げられる。例えば、対象は、デキサメタゾンを服用していてもよい。一例では、対象は、６５歳以上であり、デキサメタゾンなどのコルチコステロイドを服用している。
【0081】
一例では、本開示の方法は、ＭＬＰＳＣを含む組成物などの、本明細書に開示される細胞組成物を投与することを含む。別の例では、本開示の方法は、本明細書に開示される細胞組成物及びコルチコステロイドを投与することを含む。この例では、コルチコステロイドは、細胞組成物と同時に又は連続して投与することができる。一例では、対象は、本明細書に開示される細胞組成物を投与する前に、コルチコステロイドを事前に服用している。この例では、コルチコステロイドは、細胞組成物とともに投与され続けることができる。
【0082】
本開示に従って治療される対象は、ＡＲＤＳを示す症状を有し得る。例示的な症状には、疲労、呼吸困難、息切れ、運動不能又は運動能力の低下、血液又は粘液を伴う又は伴わない咳、息を吸う又は吐く際の疼痛、喘鳴、胸の圧迫感、原因不明の体重減少、筋骨格系の疼痛、呼吸促迫（頻呼吸）、及び青白い皮膚の色（チアノーゼ）が含まれ得る。
【0083】
別の例では、対象は、肺炎を有する。
【0084】
別の例では、対象は、ウイルス感染に続発するＡＲＤＳを有する。一例では、対象のＡＲＤＳは、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスによる感染に続発する。一例では、対象のＡＲＤＳは、コロナウイルスによる感染に続発する。例えば、対象のＡＲＤＳは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、又はＣＯＶＩＤ－１９による感染に続発し得る。一例では、対象のＡＲＤＳは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染に続発する。
【0085】
一例では、対象は、心筋炎、心膜炎、又は弁膜炎のうちの１つ以上を有する。一例では、対象は、ウイルス誘発性の心筋炎、心膜炎、又は弁膜炎を有する。例えば、対象は、ウイルス性心筋炎を有し得る。
【0086】
一例では、ＡＲＤＳは、ウイルス感染によって引き起こされる。例えば、ＡＲＤＳは、ライノウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、又はコロナウイルスによって引き起こされ得る。一例では、ＡＲＤＳは、コロナウイルスによって引き起こされ得る。例えば、コロナウイルスは、コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）、又はＣＯＶＩＤ－１９であり得る。一例では、ＡＲＤＳは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）によって引き起こされる。
【0087】
別の例では、ＡＲＤＳは、血栓症によって引き起こされる。別の例では、ＡＲＤＳは、塞栓症によって引き起こされる。一例では、ＡＲＤＳは、肺塞栓症によって引き起こされる。
【0088】
別の例では、ＡＲＤＳは、血球貪食リンパ組織球症（ＨＬＨ）に続発する。ＨＬＨは、リンパ球及びマクロファージ過炎症を特徴とする生命を脅かす疾患である。ＨＬＨは、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＨＨＶなどのウイルス感染症によって引き起こされ得る。したがって、一例では、ＨＬＨは、二次的又は後天的ＨＬＨである。例えば、ＨＬＨは、ウイルス感染に続発し、対象におけるＡＲＤＳの発症につながり得る。
【0089】
一例では、治療は、死亡から保護するか、又は改善された生存を付与する。一例では、治療後６０日間に死亡に対する保護が決定される。別の例では、死亡に対する保護は、治療後５０～７０日間に決定される。例えば、治療された対象の死亡リスクは、治療後に低減され得る。一例では、治療された対象の死亡リスクは、３０～６０％低減される。一例では、治療された対象の死亡リスクは、４０～５０％低減される。一例では、治療された対象の死亡リスクは、少なくとも３０％低減される。一例では、治療された対象の死亡リスクは、少なくとも４０％低減される。
【0090】
一例では、治療は、対象の酸素化を改善する。一例では、改善された酸素化は、ベルリン基準の変化に対応する。一例では、治療は、酸素化を、より軽度のグレードのＡＲＤＳに対応するレベルまで改善する。一例では、治療は、酸素化レベルを重度から中等度に改善する。
【0091】
一例では、本開示の方法による治療は、対象の血栓症のリスクを低減する。一例では、対象のリスクは、治療を受けない対象と比較して低減する。一例では、治療は、動脈血栓症である血栓症のリスクを低減する。したがって、一例では、治療は、ＡＲＤＳを有する患者の心臓発作又は脳卒中のリスクを低減する。
【0092】
別の例では、本開示は、治療のためにＡＲＤＳを有する対象を選択することを包含する。一例では、対象は、中等度又は重度のＡＲＤＳを有する。一例では、本方法は、６５歳以上のＡＲＤＳを有する対象を選択することを含む。一例では、本方法は、６５歳以上の対象を選択することと、コルチコステロイドを服用することと、を含む。一例では、選択された対象は、本明細書に開示される方法に従って治療される。
【0093】
炎症性バイオマーカー
本開示の方法は、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する、ＡＲＤＳを有する患者を選択し、治療することに関する。炎症性バイオマーカーは、増加した疾患重症度に関連する炎症経路の上方制御に関連している。
本開示の方法は、炎症性バイオマーカーのレベルの増加を有する、ＡＲＤＳを有する患者を選択し、治療することに関する。炎症性バイオマーカーは、増加した疾患重症度に関連する炎症経路の上方制御に関連している。
【0094】
一例では、炎症性バイオマーカーは、肺への好中球及びマクロファージ流入の増加を示し、例えば、ＣＣＲ２結合ケモカインである。Ｃ－Ｃケモカイン受容体２型（ＣＣＲ２）は、Ｇタンパク質共役型受容体であり、そのリガンドは、ＣＣＬ２（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド２）、ＣＣＬ３（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド３）、及びＣＣＬ７（Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド７）を含むケモカインの単球化学誘引タンパク質（ＭＣＰ）ファミリーを含む。ＣＣＲ２結合ケモカインのレベルの増加は、ＣＸＣＲ３好中球及び好中球前駆体の肺へのより大きな誘引をもたらすと考えられる。したがって、一例では、対象は、ＣＣＬ２のレベルの増加を有する。別の例では、対象は、ＣＣＬ３のレベルの増加を有する。別の例では、対象は、ＣＣＬ７のレベルの増加を有する。
【0095】
別の例では、肺への好中球及びマクロファージ流入の増加を示す炎症性バイオマーカーは、ＣＸＣＲ３（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体３）結合ケモカインである。ＣＸＣＲ３結合ケモカインの例は、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１０（ＣＸＣＬ１０）及びＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド９（ＣＸＣＬ９）を含む。別の例では、対象は、ＣＸＣＬ１０のレベルの増加を有する。別の例では、対象は、ＣＸＣＬ９のレベルの増加を有する。
【0096】
別の例では、炎症性バイオマーカーは、マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大を示し、例えば、インターロイキン－６（ＩＬ－６）及びインターロイキン－８（ＩＬ－８）である。一例では、対象は、ＩＬ－６のレベルの増加を有する。一例では、対象は、ＩＬ－８のレベルの増加を有する。
【0097】
別の例では、炎症性バイオマーカーは、Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示し、例えば、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド（ＣＣＬ１９）及びインターロイキン－２（ＩＬ－２）である。一例では、対象は、ＣＣＬ１９のレベルの増加を有する。一例では、対象は、ＩＬ－２のレベルの増加を有する。
【0098】
炎症性バイオマーカーのレベルは、本開示の組成物による治療後にも低下させることができる。一例では、炎症性バイオマーカーの低下は、肺への好中球及びマクロファージ流入の減少を示し、例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３及びＣＣＬ７などのＣＣＲ２結合ケモカインである。一例では、対象は、ＣＣＬ２のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＣＣＬ３のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＣＣＬ７のレベルの低下を有する。別の例では、炎症性バイオマーカーは、ＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ９などのＣＸＣＲ３結合ケモカインである。一例では、対象は、ＣＸＣＬ１０のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＣＸＣＬ９のレベルの低下を有する。
【0099】
別の例では、炎症性バイオマーカーの低下は、インフラマソームの減少を示す。インフラマソームは、刺激誘導細胞質多量体タンパク質複合体である。別の例では、炎症性バイオマーカーの低下は、マクロファージ活性化及び肺への好中球ホーミングの減少を示す。低下した場合、インフラマソームの減少及びマクロファージ活性化／肺への好中球ホーミングの減少を示す炎症性バイオマーカーの例は、ＩＬ－６、ＩＬ－８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、及びインターロイキン－１８（ＩＬ－１８）である。一例では、対象は、ＩＬ－６のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＩＬ－８のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＴＮＦのレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＩＬ－１８のレベルの低下を有する。
【0100】
別の例では、炎症性バイオマーカーの低下は、Ｔ細胞流入及び活性化の減少を示す。低下した場合、Ｔ細胞流入及び活性化の減少を示す炎症性バイオマーカーの例は、Ｃ－Ｃモチーフケモカインリガンド１９（ＣＣＬ１９）、インターロイキン－４（ＩＬ－４）インターロイキン－１３（ＩＬ－１３）、及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）である。一例では、対象は、ＣＣＬ１９のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＩＬ－４のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＩＬ－１３のレベルの低下を有する。別の例では、対象は、ＧＭ－ＣＳＦのレベルの低下を有する。
【0101】
別の例では、炎症性バイオマーカーの低下は、マクロファージ及び好中球炎症の循環バイオマーカーの減少を示し、例えば、ＣＲＰ、フェリチン、又はＤ－ダイマーである。一例では、減少した循環バイオマーカーは、「Ｃ反応性タンパク質」又は「ＣＲＰ」である。ＣＲＰは、そのレベルが急性炎症再発の条件下で上昇し、炎症が沈静化すると急速に正常化する炎症性メディエーターである。循環ＣＲＰレベルは、対象の炎症の尺度を提供するために、血漿試料中で測定されることができる。
【0102】
一例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを低減する。一例では、治療は、ベースラインと比較して、ＣＲＰを少なくとも１００ｍｇ／ｄｌ低減する。別の例では、治療は、ベースラインと比較して、ＣＲＰを少なくとも１５０ｍｇ／ｄｌ低減する。一例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを約０．１倍低減する。別の例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを約０．２倍低減する。別の例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを約０．３倍低減する。別の例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを約０．４倍低減する。別の例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを約０．５倍低減する。別の例では、治療は、対象のＣＲＰレベルを０．６倍低減する。これらの例では、治療は、対象のベースラインＣＲＰレベルと比較して、対象のＣＲＰレベルを、倍率変化低減する。
【0103】
例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後、持続的なＣＲＰレベルを有する。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後７日間持続的なＣＲＰレベルを有する。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後１４日間持続的なＣＲＰレベルを有する。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後２１日間持続的なＣＲＰレベルを有する。一例では、対象は、第１の用量のＭＬＰＳＣを投与された後３０日間持続的なＣＲＰレベルを有する。
【0104】
別の例では、減少した循環バイオマーカーは、フェリチンである。フェリチンは、鉄を含有する血液タンパク質である。フェリチンレベルは、対象の鉄レベルの尺度を提供するために、血液試料中で測定されることができる。一例では、治療は、対象のフェリチンレベルを低減する。一例では、治療は、対象のフェリチンレベルを約０．１倍低減する。別の例では、治療は、対象のフェリチンレベルを約０．２倍低減する。別の例では、治療は、対象のフェリチンレベルを約０．３倍低減する。別の例では、治療は、対象のフェリチンレベルを約０．４倍低減する。別の例では、治療は、対象のフェリチンレベルを約０．５倍低減する。これらの例では、治療は、対象のベースラインフェリチンレベルと比較して、対象のフェリチンレベルを、倍率変化低減する。
【0105】
本明細書に開示される炎症性バイオマーカーのレベルを決定するための方法は、当技術分野で知られている。一例では、特定のマーカーのレベルは、患者又は対象から得られた試料（例えば、血液試料、血漿試料、又は血清試料）中で決定される。例えば、本開示による炎症性バイオマーカーのレベルは、血漿試料中で決定される。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、血清試料中で決定される。
【0106】
一例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、対象から得られた試料中のタンパク質発現のレベルを測定することによって決定される。例えば、炎症性バイオマーカーレベルは、酵素結合免疫吸着剤（ＥＬＩＳＡ）アッセイなどの抗体ベースのイムノアッセイ、多重イムノアッセイ、例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１５８：２７－３２．２０１９を参照）、又は蛍光ビーズベースのイムノアッセイを使用して、試料中で測定されることができる。これらの例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ｐｇ／ｍＬで発現される。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、適切な対照と比較して、倍率変化として表される。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、対象から得られた試料中の遺伝子発現のレベルを測定することによって決定される。例えば、炎症性バイオマーカーレベルは、定性ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）ベースのアッセイのような分子ベースのアッセイ、又は多重ＰＣＲアッセイ、例えば、Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイ（例えば、Ｃｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．１５８：２７－３２．２０１９を参照）を使用して、試料中で測定されることができる。一例では、炎症性バイオマーカーの遺伝子発現のレベルは、適切な対照と比較して、倍率変化として表される。例えば、倍率変化は、ｌｏｇ２（倍率－変化）として計算される。
【0107】
例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳であるＡＲＤＳを有する患者と比較して、倍率変化として表される。
【0108】
一例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳であるＡＲＤＳを有する患者と比較して、１倍超増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ベースラインレベルと比較して、１倍超増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ＡＲＤＳを有さない患者と比較して、１倍超増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳であるＡＲＤＳを有する患者と比較して、少なくとも２倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ベースラインレベルと比較して、少なくとも２倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ＡＲＤＳを有しない患者と比較して、少なくとも２倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、＜６５歳であるＡＲＤＳを有する患者と比較して、少なくとも５倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ベースラインレベルと比較して、少なくとも５倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ＡＲＤＳを有しない患者と比較して、少なくとも５倍増加する。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルは、ＡＲＤＳを有さない患者と比較して、５倍超増加する。
【0109】
一例では、複数の炎症性バイオマーカーのレベルは、単一の試料中で測定される。別の例では、複数の炎症性バイオマーカーのレベルは、別個の試料中で測定される。一例では、バイオマーカーのレベルは、ＭＬＰＳＣでの治療の前に測定される。別の例では、バイオマーカーのレベルは、ＭＬＰＳＣでの治療の後に測定される。別の例では、バイオマーカーのレベルは、ベースラインで測定され、経時的にモニタリングされて、対象がより高度な、又はより長期の投薬を必要とするかを決定する。
【0110】
炎症性バイオマーカーのレベルを試料間で比較して、炎症性バイオマーカーのレベルが低減したかどうかを判定することができる。これらの例では、試料を評価して、炎症が減少したかどうか、及び炎症の減少が持続的であるかどうかを判定することができる。一例では、炎症の持続的な減少は、細胞療法の投与後の少なくとも２つの試料におけるベースラインからの観察される炎症の減少に基づいて決定される。
【0111】
ＡＲＤＳを有する患者集団を治療する方法
一例では、本開示の方法は、ＡＲＤＳを有する患者集団を治療することに関する。別の例では、本開示の方法は、本明細書に開示される方法による治療のためにＡＲＤＳを有する患者を選択することに関する。
一例では、本開示の方法は、ＡＲＤＳを有する患者集団を治療することに関する。別の例では、本開示の方法は、本明細書に開示される方法による治療のためにＡＲＤＳを有する患者を選択することに関する。
【0112】
一例では、本方法は、肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又はＴ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す炎症性バイオマーカーの増加を有する対象を選択することと、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することと、を含む。
【0113】
別の例では、本方法は、６５歳以上であるＡＲＤＳを有する対象を選択することと、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することと、を含む。
【0114】
別の例では、本方法は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することを含み、対象は、６５歳以上であり、及び／又は肺への好中球及びマクロファージ流入の増加、マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大、及び／又はＴ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示す炎症性バイオマーカーの増加を有する。
【0115】
別の例では、本方法は、
－（ｉ）ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、好ましくはＣＸＣＬ１０及び／又はＣＸＣＬ９、（ｉｉ）ＣＣＲ２結合ケモカイン、好ましくはＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及び／又はＣＣＬ７、（ｉｉｉ）ＩＬ－６、（ｖ）ＩＬ－８、（ｖｉ）ＣＣＬ１９、（ｖｉｉ）ＩＬ－２、及び／又は（ｖｉｉｉ）ＣＲＰを含むリストから選択される１つ以上の炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定すること、又は決定していることと、
－６５歳以上である、及び／又は第１の用量の間葉系前駆体もしくは幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与された後７日間に１つ以上の炎症性バイオマーカーのレベルの増加及び／又は持続的なＣＲＰレベルを有する対象を選択することと、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することと、を含む。
－（ｉ）ＣＸＣＲ３結合ケモカイン、好ましくはＣＸＣＬ１０及び／又はＣＸＣＬ９、（ｉｉ）ＣＣＲ２結合ケモカイン、好ましくはＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及び／又はＣＣＬ７、（ｉｉｉ）ＩＬ－６、（ｖ）ＩＬ－８、（ｖｉ）ＣＣＬ１９、（ｖｉｉ）ＩＬ－２、及び／又は（ｖｉｉｉ）ＣＲＰを含むリストから選択される１つ以上の炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定すること、又は決定していることと、
－６５歳以上である、及び／又は第１の用量の間葉系前駆体もしくは幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与された後７日間に１つ以上の炎症性バイオマーカーのレベルの増加及び／又は持続的なＣＲＰレベルを有する対象を選択することと、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む組成物を対象に投与することと、を含む。
【0116】
別の例では、対象は、細胞療法を投与され、モニタリングされて、治療に応答して炎症性バイオマーカーが減少するかどうかを判定する。炎症性バイオマーカーが減少しない場合、対象は次いで、更なる用量の細胞を投与される。一例では、ＡＲＤＳを有する対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与され、モニタリングされて、炎症性バイオマーカーが減少するかどうかを判定する。一例では、対象は、ＭＬＰＳＣを投与する前に炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定し、次いで、ＭＬＰＳＣを投与した後に炎症性バイオマーカーの対象のレベルを決定することによってモニタリングされる。一例では、炎症性バイオマーカーは、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰからなる群から選択される。一例では、バイオマーカーは、ＣＲＰである。別の例では、バイオマーカーは、フェリチンである。一例では、バイオマーカーのレベルは、ベースラインレベルと比較して、治療後７日目に低減しない。別の例では、バイオマーカーのレベルは、ベースラインレベルと比較して、治療後１４日目に低減しない。一例では、更なる用量のＭＬＰＳＣは、１つ以上のバイオマーカーのレベルがベースラインから低下しない場合、対象に投与される。一例では、更なる用量は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）２００万個のＭＬＰＳＣを含む。一例では、更なる用量が、初回治療後７日目に投与される。別の例では、更なる用量は、初回治療後１４日目に投与される。別の例では、更なる用量は、初回治療後２１日目に投与される。別の例では、２回以上の更なる用量が投与される。例えば、対象は、初回治療後７日目、１４日目、及び２１日目に更なる用量を受け得る。別の例では、炎症性バイオマーカーのレベルがベースラインと比較して低下するまで、更なる用量が投与される。別の例では、対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）３００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）の２回用量を受けることができる。例えば、用量は、７日目及び１４日目に投与され得る。
【0117】
したがって、一例では、本開示は、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療を必要とするヒト対象においてそれを行う方法に関し、方法は、
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、
－ＭＬＰＳＣを投与する前に、バイオマーカー（複数可）のベースラインレベルと比較して、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの対象のレベルを決定するか、又は決定していることと、
１つ以上のバイオマーカーのレベルがベースラインから低下しない場合、対象に更なる用量のＭＬＰＳＣを投与することであって、更なる用量に続いて、対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与されている、投与することと、を含む。
－体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を対象に投与することと、
－ＭＬＰＳＣを投与する前に、バイオマーカー（複数可）のベースラインレベルと比較して、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ９、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ７、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＣＣＬ１９、ＩＬ－２、フェリチン、及び／又はＣＲＰからなる群から選択される１つ以上のバイオマーカーの対象のレベルを決定するか、又は決定していることと、
１つ以上のバイオマーカーのレベルがベースラインから低下しない場合、対象に更なる用量のＭＬＰＳＣを投与することであって、更なる用量に続いて、対象は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を投与されている、投与することと、を含む。
【0118】
一例では、治療は、対象における呼吸機能を改善する。一例では、改善された呼吸機能は、ベルリン基準によって定義されるＡＲＤＳの解消及び／又は改善として定義される。一例では、改善された血液酸素化は、改善された呼吸機能を示す。一例では、治療は、１４日目に呼吸機能を改善する。別の例では、治療は、２１日目に呼吸機能を改善する。
【0119】
間葉系前駆体細胞
本明細書で使用される場合「間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）」という用語は、多能性を維持しながら自己再生する能力を有し、間葉起源、例えば、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、間質細胞、線維芽細胞及び腱など、又は非中胚葉起源、例えば、肝細胞、神経細胞、及び上皮細胞などのいくつかの細胞型に分化する能力を有する未分化多能性細胞を指す。疑義を避けるために、「間葉系前駆体細胞」は、骨、軟骨、筋肉及び脂肪細胞、ならびに繊維性結合組織などの間葉細胞に分化することができる細胞を指す。
本明細書で使用される場合「間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）」という用語は、多能性を維持しながら自己再生する能力を有し、間葉起源、例えば、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、間質細胞、線維芽細胞及び腱など、又は非中胚葉起源、例えば、肝細胞、神経細胞、及び上皮細胞などのいくつかの細胞型に分化する能力を有する未分化多能性細胞を指す。疑義を避けるために、「間葉系前駆体細胞」は、骨、軟骨、筋肉及び脂肪細胞、ならびに繊維性結合組織などの間葉細胞に分化することができる細胞を指す。
【0120】
「間葉系前駆体又は幹細胞」という用語は、親細胞及びその未分化の子孫の両方を含む。この用語はまた、間葉前駆体細胞、多能性間質細胞、間葉幹細胞（ＭＳＣ）、血管周囲間葉前駆体細胞、及びそれらの未分化子孫を含む。
【0121】
間葉系前駆体又は幹細胞は、自己、同種、異種、同系、又は同質であり得る。自己細胞は、それらが再移植される同じ個体から単離される。同種細胞は、同種のドナーから単離される。異種細胞は、別の種のドナーから単離される。同系又は同質細胞は、例えば、双子、クローン、又は高度に近交系の研究動物モデルなどの遺伝的に同一の生物から単離される。
【0122】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、同種である。一例では、同種間葉系前駆体又は幹細胞を培養増殖して、凍結保存する。
【0123】
間葉系前駆体又は幹細胞は、主に骨髄に存在するが、例えば、臍帯血及び臍帯、成人末梢血、脂肪組織、骨梁及び歯髄を含む多様な宿主組織に存在することも示されている。それらはまた、皮膚、脾臓、膵臓、脳、腎臓、肝臓、心臓、網膜、脳、毛包、腸、肺、リンパ節、胸腺、靭帯、腱、骨格筋、真皮、及び骨膜にも見出され、中胚葉及び／又は内胚葉及び／又は外胚葉などの生殖系列に分化することができる。したがって、間葉系前駆体又は幹細胞は、脂肪組織、骨組織、軟骨組織、弾性組織、筋肉組織、及び繊維性結合組織を含むが、これらに限定されない多数の細胞型に分化することができる。これらの細胞が入る特定の分化系列決定及び分化経路は、機械的影響、及び／又は、成長因子、サイトカインなどの内因性生物活性因子、及び／又は、宿主組織によって確立された局所的微小環境条件から受ける様々な影響に依存する。
【0124】
「濃縮された」、「濃縮」という用語、又はそれらの変形は、本明細書において、細胞集団を説明するために使用され、この細胞集団において、１種の特定の細胞型の割合又は多数の特定の細胞型の割合は、細胞の未処理の集団（例えば、それらの天然環境における細胞）と比較した場合、増加する。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞が濃縮された集団は、少なくとも約０．１％又は０．５％又は１％又は２％又は５％又は１０％又は１５％又は２０％又は２５％又は３０％又は５０％又は７５％の間葉系前駆体又は幹細胞を含む。この点で、「間葉系前駆体又は幹細胞について濃縮された細胞の集団」という用語は、「Ｘ％の間葉系前駆体又は幹細胞を含む細胞の集団」という用語に明示的な支持を与えるために使用され、ここで、Ｘ％は、本明細書に記載されるパーセンテージである。間葉系前駆体又は幹細胞は、いくつかの例では、クローン原性コロニーを形成することができ、例えばＣＦＵ－Ｆ（線維芽細胞）又はそのサブセット（例えば、５０％又は６０％又は７０％又は７０％又は９０％又は９５％）がこの活性を有することができる。
【0125】
本開示の一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、間葉幹細胞（ＭＳＣ）である。ＭＳＣは、均質な組成物であってもよいし、ＭＳＣにおいて濃縮された混合細胞集団であってもよい。均質なＭＳＣ組成物は、接着性骨髄細胞又は骨膜細胞を培養することによって得られ得、ＭＳＣは、独自のモノクローナル抗体で識別される特定の細胞表面マーカーによって識別され得る。ＭＳＣにおいて濃縮された細胞集団を得るための方法は、例えば、米国特許第５，４８６，３５９号に記載されている。ＭＳＣの代替的な供給源としては、血液、皮膚、臍帯血、筋肉、脂肪、骨、及び軟骨膜が挙げられるが、これらに限定されない。一例では、ＭＳＣは同種である。一例では、ＭＳＣは凍結保存される。一例では、ＭＳＣは、培養増殖されており、凍結保存されている。
【0126】
別の例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、ＣＤ２９＋、ＣＤ５４＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０２＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１０６＋、ＣＤ１６６＋、ＭＨＣ１＋ＭＳＣである。
【0127】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、及びＣＤ１６６を含むマーカーを発現し、かつＣＤ４５及びＣＤ３１などの造血細胞表面抗原の発現を欠くＭＳＣの集団から培養増殖される。例えば、間葉系前駆体又は幹細胞は、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１６６＋、ＣＤ４５－、及びＣＤ３１－であるＭＳＣの集団から培養増殖され得る。一例では、ＭＳＣの集団は、低レベルの主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩによって更に特徴付けられる。別の例では、ＭＳＣは、主要組織適合性複合体クラスＩＩ分子について陰性であり、共刺激分子ＣＤ４０、ＣＤ８０、及びＣＤ８６について陰性である。一例では、培養増殖は、５継代を含む。
【0128】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、ＣＤ１０５＋、ＣＤ１５６＋、及びＣＤ４５－である。別の例では、間葉系前駆体又は幹細胞はまた、ＴＮＦＲ１を発現し、活性化リンパ球上のＩＬ－２Ｒα発現を抑制する。
【0129】
単離又は濃縮された間葉系前駆体又は幹細胞は、培養によってインビトロで増殖させることができる。単離又は濃縮された間葉系前駆体又は幹細胞は、凍結保存され、解凍され、その後、培養によってインビトロで増殖させることができる。
【0130】
一例では、単離又は濃縮された間葉系前駆体又は幹細胞を、培養培地（無血清又は血清補充）、例えば、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及びグルタミンを補充したアルファ最小必須培地（αＭＥＭ）中に５０，０００個の生存細胞／ｃｍ２で播種し、３７℃、２０％Ｏ２で一晩培養容器に付着させる。その後、必要に応じて培養培地を交換及び／又は変更し、細胞を更に６８～７２時間、３７℃、５％Ｏ２で培養する。
【0131】
当業者には理解されるように、培養された間葉系前駆体又は幹細胞は、インビボでの細胞と表現型が異なる。例えば、一実施形態において、それらは、以下のマーカー、ＣＤ４４、ＮＧ２、ＤＣ１４６、及びＣＤ１４０ｂのうちの１種以上を発現する。培養された間葉系前駆体又は幹細胞は、インビボでの細胞とは生物学的にも異なり、インビボにおける大部分の非循環（静止）細胞と比較して、高い増殖率を有する。
【0132】
一例では、細胞の集団は、選択可能な形態のＳＴＲＯ－１＋細胞を含む細胞調製物から濃縮される。この関連において、「選択可能な形態」という用語は、細胞が、ＳＴＲＯ－１＋細胞の選択を可能にするマーカー（例えば、細胞表面マーカー）を発現することを意味すると理解される。マーカーはＳＴＲＯ－１であり得るが、必ずしもそうである必要はない。例えば、本明細書に記載及び／又は例示されるように、ＳＴＲＯ－２及び／又はＳＴＲＯ－３（ＴＮＡＰ）及び／又はＳＴＲＯ－４及び／又はＶＣＡＭ－１及び／又はＣＤ１４６及び／又は３Ｇ５を発現する細胞（例えば、間葉前駆体細胞）は、ＳＴＲＯ－１も発現する（そしてＳＴＲＯ－１ブライトであり得る）。したがって、細胞がＳＴＲＯ－１＋であることを示すことは、細胞がＳＴＲＯ－１発現によってのみ選択されることを意味しない。一例では、細胞は、少なくともＳＴＲＯ－３発現、例えば、ＳＴＲＯ－３＋（ＴＮＡＰ＋）に基づいて、選択される。
【0133】
細胞又はその集団の選択への言及は、必ずしも特定の組織源からの選択を必要としない。本明細書に記載されるように、ＳＴＲＯ－１＋細胞は、多種多様な供給源から選択され得るか、単離され得るか、又はそれから濃縮され得る。そうは言っても、いくつかの例では、これらの用語は、ＳＴＲＯ－１＋細胞（例えば、間葉前駆体細胞）又は血管組織もしくは周皮細胞（例えば、ＳＴＲＯ－１＋周皮細胞）を含む組織、あるいは本明細書に記載された組織のうちのいずれか１種以上からなる任意の組織からの選択に対する支持を示す。
【0134】
一例では、本開示で使用される細胞は、ＴＮＡＰ＋、ＶＣＡＭ－１＋、ＴＨＹ－１＋、ＳＴＲＯ－２＋、ＳＴＲＯ－４＋（ＨＳＰ－９０β）、ＣＤ４５＋、ＣＤ１４６＋、３Ｇ５＋、又はそれらの任意の組み合わせからなる群から個別に又は集合的に選択される１種以上のマーカーを発現する。
【0135】
「個別に」とは、本開示が、列挙されたマーカー又はマーカーの群を個別に包含し、個々のマーカー又はマーカーの群が本明細書に個別に列挙されない場合があるにもかかわらず、添付の特許請求の範囲は、そのようなマーカー又はマーカーの群を互いに個別かつ分割可能に定義し得ることを意味する。
【0136】
「集合的に」は、本開示が列挙されたマーカー又はマーカーの群の任意の数又は組み合わせを包含し、そのようなマーカー又はマーカーの群の数又は組み合わせが本明細書に具体的に列挙されていない場合があるにもかかわらず、添付の特許請求の範囲は、そのような組み合わせ又はサブ組み合わせを、マーカー又はマーカーの群の任意の他の組み合わせから別々にかつ分割可能に定義し得ることを意味する。
【0137】
本明細書で使用される場合、「ＴＮＡＰ」という用語は、組織非特異的アルカリホスファターゼの全てのアイソフォームを包含することが意図される。例えば、この用語は、肝臓アイソフォーム（ＬＡＰ）、骨アイソフォーム（ＢＡＰ）、及び腎臓アイソフォーム（ＫＡＰ）を包含する。一例では、ＴＮＡＰは、ＢＡＰである。一例では、本明細書で使用される場合、ＴＮＡＰは、ブダペスト条約の規定の下で、２００５年１２月１９日にＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマ細胞株（寄託受託番号ＰＴＡ－７２８２）によって産生されるＳＴＲＯ－３抗体に結合することができる分子を指す。
【0138】
更に、一例では、ＳＴＲＯ－１＋細胞は、クローン原性ＣＦＵ－Ｆを生じることができる。
【0139】
一例では、ＳＴＲＯ－１＋細胞のかなりの割合は、少なくとも２つの異なる生殖系列への分化が可能である。ＳＴＲＯ－１＋細胞が傾注し得る系統の非限定的な例としては、骨前駆体細胞（ｂｏｎｅ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌ）、胆管上皮細胞及び肝細胞に対して多能性である肝細胞前駆体（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）、乏突起膠細胞及び星状細胞に進行するグリア細胞前駆体（ｇｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）を生成することができる神経制限細胞、神経細胞に進行する神経細胞前駆体（ｎｅｕｒｏｎａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、心筋及び心筋細胞の前駆体（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）、グルコース応答性インスリン分泌膵ベータ細胞株などが挙げられる。他の系統としては、歯芽細胞、象牙質産生細胞及び軟骨細胞、ならびに以下の前駆体細胞（ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌ）：網膜色素上皮細胞、線維芽細胞、角化細胞などの皮膚細胞、樹状細胞、毛包細胞、腎管上皮細胞、平滑及び骨格筋細胞、精巣前駆体（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ）、血管内皮細胞、腱、靭帯、軟骨、脂肪細胞、線維芽細胞、骨髄間質、心筋、平滑筋、骨格筋、周皮細胞、血管、上皮、グリア、神経細胞、星状細胞及び乏突起膠細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【0140】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、単一のドナー又は複数のドナーから得られ、ドナー試料又は間葉系前駆体もしくは幹細胞は、続いてプールされ、次いで培養増殖される。
【0141】
本開示に包含される間葉系前駆体又は幹細胞も、対象に投与する前に凍結保存され得る。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞を、対象に投与する前に、培養増殖し、凍結保存する。
【0142】
一例では、本開示は、間葉系前駆体又は幹細胞、ならびにその子孫、それに由来する可溶性因子、及び／又はそれから単離された細胞外小胞を包含する。別の例では、本開示は、間葉系前駆体又は幹細胞、ならびにそこから単離された細胞外小胞を包含する。例えば、細胞外小胞の細胞培養培地への分泌に適した期間と条件下で、本開示の間葉前駆体系又は幹細胞を培養増殖することが可能である。その後、分泌された細胞外小胞を、療法に使用するために、培養培地から得ることができる。
【0143】
本明細書で使用される場合、「細胞外小胞」という用語は、細胞から自然に放出され、サイズが約３０ｎｍ～１０ミクロン程度の範囲の脂質粒子を指すが、通常、それらはサイズが２００ｎｍ未満である。それらは、放出細胞（例えば、間葉幹細胞、ＳＴＲＯ－１＋細胞）からの、タンパク質、核酸、脂質、代謝産物、又はオルガネラを含有し得る。
【0144】
本明細書で使用される「エクソソーム」という用語は、一般的に約３０ｎｍから約１５０ｎｍの大きさで、哺乳類細胞の細胞膜に輸送されて放出されるエンドソーム小胞区画に由来する細胞外小胞の一種を指す。それらは、核酸（例えば、ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ）、タンパク質、脂質、及び代謝産物を含み、１つの細胞から分泌され、他の細胞に取り込まれ、荷物を運搬することにより、細胞間コミュニケーションで機能することができる。
【0145】
細胞の培養増殖
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞を培養増殖させる。「培養増殖された」間葉系前駆体又は幹細胞培地は、細胞培養培地中で培養され、継代培養された（すなわち、再培養された）という点で、新たに単離された細胞と区別される。一例では、培養増殖された間葉系前駆体又は幹細胞は、約４～１０の継代にわたって培養増殖する。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞を、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０の継代にわたって培養増殖する。例えば、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５～１０の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５～８の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５～７の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、１０代を超える継代にわたって培養増殖できる。別の例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、７代を超える継代にわたって培養増殖できる。これらの例では、幹細胞は、凍結保存される前に培養増殖してもよく、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団を提供する。一例では、本開示の組成物は、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から調製される。例えば、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団は、後に更に考察するように、投与前に更に培養増殖され得る。したがって、一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、培養増殖され、凍結保存される。これらの例の一実施形態において、間葉系前駆体又は幹細胞は、単一のドナー、又は複数のドナーから得ることができ、ドナー試料又は間葉系前駆体もしくは幹細胞は、その後プールされ、次いで培養増殖される。一例では、培養増殖プロセスは、
－ｉ．継代増殖によって生存細胞の数を増加させ、少なくとも約１０億個の生存細胞の調製物を提供することであって、継代増殖は、単離された間葉系前駆体又は幹細胞の一次培養物を確立することと、次いで、前の培養物から単離された間葉系前駆体又は幹細胞の第１の非一次（Ｐ１）培養物を連続的に確立することと、を含む、提供すること、
－ｉｉ．単離された間葉系前駆体又は幹細胞のＰ１培養物を、継代増殖によって間葉系前駆体又は幹細胞の第２の非一次（Ｐ２）培養物に増殖させること、
－ｉｉｉ．間葉系前駆体又は幹細胞のＰ２培養物から得られたプロセス内中間体である間葉系前駆体又は幹細胞調製物を調製し、凍結保存すること、及び
－ｉｖ．凍結保存されたプロセス内中間体である間葉系前駆体又は幹細胞調製物を解凍し、プロセス内中間体である間葉系前駆体又は幹細胞調製物の継代増殖によって増殖させることを含む。
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞を培養増殖させる。「培養増殖された」間葉系前駆体又は幹細胞培地は、細胞培養培地中で培養され、継代培養された（すなわち、再培養された）という点で、新たに単離された細胞と区別される。一例では、培養増殖された間葉系前駆体又は幹細胞は、約４～１０の継代にわたって培養増殖する。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞を、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０の継代にわたって培養増殖する。例えば、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５～１０の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５～８の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５～７の継代にわたって培養増殖できる。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、１０代を超える継代にわたって培養増殖できる。別の例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、７代を超える継代にわたって培養増殖できる。これらの例では、幹細胞は、凍結保存される前に培養増殖してもよく、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団を提供する。一例では、本開示の組成物は、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団から調製される。例えば、中間凍結保存ＭＬＰＳＣ集団は、後に更に考察するように、投与前に更に培養増殖され得る。したがって、一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、培養増殖され、凍結保存される。これらの例の一実施形態において、間葉系前駆体又は幹細胞は、単一のドナー、又は複数のドナーから得ることができ、ドナー試料又は間葉系前駆体もしくは幹細胞は、その後プールされ、次いで培養増殖される。一例では、培養増殖プロセスは、
－ｉ．継代増殖によって生存細胞の数を増加させ、少なくとも約１０億個の生存細胞の調製物を提供することであって、継代増殖は、単離された間葉系前駆体又は幹細胞の一次培養物を確立することと、次いで、前の培養物から単離された間葉系前駆体又は幹細胞の第１の非一次（Ｐ１）培養物を連続的に確立することと、を含む、提供すること、
－ｉｉ．単離された間葉系前駆体又は幹細胞のＰ１培養物を、継代増殖によって間葉系前駆体又は幹細胞の第２の非一次（Ｐ２）培養物に増殖させること、
－ｉｉｉ．間葉系前駆体又は幹細胞のＰ２培養物から得られたプロセス内中間体である間葉系前駆体又は幹細胞調製物を調製し、凍結保存すること、及び
－ｉｖ．凍結保存されたプロセス内中間体である間葉系前駆体又は幹細胞調製物を解凍し、プロセス内中間体である間葉系前駆体又は幹細胞調製物の継代増殖によって増殖させることを含む。
【0146】
一例では、増殖された間葉系前駆体又は幹細胞調製物は、以下を含む抗原プロファイル及び活性プロファイルを有する：
－ｉ．約０．７５％未満のＣＤ４５＋細胞、
－ｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１０５＋細胞、
－ｉｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１６６＋細胞。
－ｉ．約０．７５％未満のＣＤ４５＋細胞、
－ｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１０５＋細胞、
－ｉｉｉ．少なくとも約９５％のＣＤ１６６＋細胞。
【0147】
一例では、増殖された間葉系前駆体又は幹細胞調製物は、対照と比較して、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化ＰＢＭＣによるＩＬ２Ｒα発現を少なくとも約３０％阻害することができる。
【0148】
一例では、培養増殖した間葉系前駆体又は幹細胞は、約４～１０の継代にわたって培養増殖され、ここで、間葉系前駆体又は幹細胞は、更に培養増殖される前に、少なくとも２又は３の継代後に凍結保存される。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５の継代にわたって培養増殖され、凍結保存され、次いで、投与又は更に凍結保存される前に、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５の継代にわたって更に培養増殖される。
【0149】
一例では、本開示の組成物中の間葉系前駆体又は幹細胞の大部分は、ほぼ同じ世代数である（すなわち、それらは、互いの約１回又は約２回又は約３回又は約４回の細胞倍加以内である）。一例では、本組成物における細胞倍加の平均数は、約２０～約２５回の倍加である。一例では、本組成物における細胞倍加の平均数は、一次培養物から生じる約９～約１３（例えば、約１１又は約１１．２）倍加、加えて、１継代当たり約１回、約２回、約３回、又は約４回の倍加（例えば、１継代当たり約２．５回の倍加）である。本組成物における例示的な平均細胞倍加は、それぞれ、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、及び約１０の継代によって産生される場合、約１３．５回、約１６回、約１８．５回、約２１回、約２３．５回、約２６回、約２８．５回、約３１回、約３３．５回、及び約３６回のいずれかである。
【0150】
間葉系前駆体又は幹細胞単離及びエクスビボ増殖のプロセスは、当該技術分野で既知の任意の機器及び細胞取り扱い方法を使用して実施できる。本開示の様々な培養増殖の実施形態は、細胞の操作を必要とするステップ、例えば、播種、栄養補給、接着培養物の解離、又は洗浄のステップを使用する。細胞を操作する任意のステップは、細胞を損傷する可能性がある。間葉系前駆体又は幹細胞は、一般的に、調製中、ある程度の損傷に耐えることができるが、細胞への損傷を最小限に抑えながら、所与のステップ（複数可）を適切に実施する手順及び／又は機器を取り扱うことによって、細胞を操作することが好ましい。
【0151】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＵＳ６，２５１，２９５に記載されているように、細胞供給源バッグ、洗浄液バッグ、再循環洗浄バッグ、入口及び出口ポートを有する紡績膜フィルター、濾液バッグ、混合ゾーン、洗浄された細胞のための最終生成物バッグ、ならびに適切なチューブを含む装置で洗浄される。
【0152】
一例では、本開示による間葉系前駆体又は幹細胞組成物は、ＣＤ１０５陽性及びＣＤ１６６陽性であり、ＣＤ４５陰性であることに関して、９５％均一である。一例では、この均一性は、エクスビボ増殖、すなわち、複数の集団倍加によって、持続する。一例では、組成物は、少なくとも１つの治療用量の間葉系前駆体又は幹細胞を含み、間葉系前駆体又は幹細胞は、約１．２５％未満のＣＤ４５＋細胞、少なくとも約９５％のＣＤ１０５＋細胞、及び少なくとも約９５％のＣＤ１６６＋細胞を含む。一例では、この均一性は低温保存及び解凍後も持続し、細胞はまた、概して約７０％以上の生存率も有する。
【0153】
一例では、本開示の組成物は、実質的なレベルのＴＮＦ－Ｒ１、例えば、１００万個の間葉系前駆体又は幹細胞当たり１３ｐｇ超のＴＮＦ－Ｒ１を発現する間葉系前駆体又は幹細胞を含む。一例では、この表現型は、エクスビボ増殖及び低温保存を通じて安定である。一例では、１００万個の間葉系前駆体又は幹細胞当たり約１３～約１７９ｐｇ（例えば、約１３ｐｇ～約４４ｐｇ）の範囲におけるＴＮＦ－Ｒ１のレベルの発現は、エクスビボ増殖及び凍結保存を通じても持続する所望の治療電位と関連付けられる。
【0154】
一例では、培養増殖された間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも１１０ｐｇ／ｍｌの量で腫瘍壊死因子受容体１（ＴＮＦ－Ｒ１）を発現する。例えば、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも１５０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも２００ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも２５０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３００ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３２０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３３０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３４０ｐｇ／ｍｌ、又は少なくとも３５０ｐｇ／ｍｌの量でＴＮＦ－Ｒ１を発現することができる。
【0155】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも１３ｐｇ／１０６個の細胞の量でＴＮＦ－Ｒ１を発現する。例えば、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも１５ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも２０ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも２５ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも３０ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも３５ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも４０ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも４５ｐｇ／１０６個の細胞、又は少なくとも５０ｐｇ／１０６個の細胞の量でＴＮＦ－Ｒ１を発現する。
【0156】
別の例では、本明細書に開示される間葉系前駆体又は幹細胞は、Ｔ細胞上のＩＬ－２Ｒα発現を阻害する。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも約３０％、代替的には少なくとも約３５％、代替的には少なくとも約４０％、代替的には少なくとも約４５％、代替的には少なくとも約５０％、代替的には少なくとも約５５％、代替的には少なくとも約６０％、ＩＬ－２Ｒα発現を阻害することができる。
【0157】
一例では、本開示の組成物は、例えば、少なくとも約１億個の細胞又は約１億２５００万個の細胞を含むことができる、少なくとも１つの治療用量の間葉系前駆体又は幹細胞を含む。
【0158】
細胞の改変
一例では、本開示の間葉系前駆体又は幹細胞は、投与時に細胞の溶解が阻害されるような方法で変更され得る。抗原の変化は、免疫学的非反応性又は耐性を誘導することができ、それによって、正常な免疫反応における外来細胞の拒絶を最終的に引き起こす、免疫反応のエフェクター相（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞生成、抗体産生など）の誘導を防止する。この目的を達成するために変更され得る抗原としては、例えば、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＬＦＡ－３及びＩＣＡＭ－１が挙げられる。
一例では、本開示の間葉系前駆体又は幹細胞は、投与時に細胞の溶解が阻害されるような方法で変更され得る。抗原の変化は、免疫学的非反応性又は耐性を誘導することができ、それによって、正常な免疫反応における外来細胞の拒絶を最終的に引き起こす、免疫反応のエフェクター相（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞生成、抗体産生など）の誘導を防止する。この目的を達成するために変更され得る抗原としては、例えば、ＭＨＣクラスＩ抗原、ＭＨＣクラスＩＩ抗原、ＬＦＡ－３及びＩＣＡＭ－１が挙げられる。
【0159】
間葉系前駆体又は幹細胞もまた、横紋骨格筋細胞の分化及び／又は維持にとって重要なタンパク質を発現するように遺伝子改変され得る。例示的なタンパク質としては、成長因子（ＴＧＦ－β、インスリン様成長因子１（ＩＧＦ－１）、ＦＧＦ）、筋原性因子（例えば、ｍｙｏＤ、ミオゲニン、筋原性因子５（Ｍｙｆ５）、筋原性調節因子（ＭＲＦ））、転写因子（例えば、ＧＡＴＡ－４）、サイトカイン（例えば、カーディオトロピン－１）、ニューレグリンファミリーのメンバー（例えば、ニューレグリン１、２及び３）、ならびにホメオボックス遺伝子（例えば、Ｃｓｘ、ティンマン及びＮＫｘファミリー）が挙げられる。
【0160】
本開示の間葉系前駆体又は幹細胞はまた、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤を担持又は発現するように改変されることもできる。一例では、薬剤は、抗ウイルス薬である。一例では、薬剤は、抗インフルエンザ剤である。一例では、薬剤は、抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（例えば、ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ２）である。例示的な薬剤は、レムデシビルである。一例では、薬剤は、血栓溶解薬である。血栓溶解剤の例として、Ｅｍｉｎａｓｅ（アニストレプラーゼ）、Ｒｅｔａｖａｓｅ（レテプラーゼ）、Ｓｔｒｅｐｔａｓｅ（ストレプトキナーゼ、カビキナーゼ）が挙げられる。一例では、血栓溶解剤はヘパリンである。
【0161】
本開示の間葉前駆体又は幹細胞は、薬剤が細胞に吸収されることを可能にするのに十分な時間及び条件下で細胞を薬剤とともに培養することにより、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤を担持するように改変され得る。一例では、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤は、本明細書に開示される間葉系前駆体又は幹細胞の培養培地に添加される。例えば、本明細書に開示される間葉系前駆体又は幹細胞は、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤を含む培養培地で培養増殖させることができる。
【0162】
別の例では、抗ウイルス剤又は血栓溶解剤は、ペプチドである。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、抗ウイルス又は血栓溶解ペプチド、又はそれをコードする核酸を発現するように遺伝子改変される。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、インビトロでウイルスベクターとの接触を介して改変される。例えば、ウイルスを細胞培養培地に添加することができる。遺伝子改変の非ウイルス法を用いてもよい。例としては、インテグラーゼ又はトランスポザーゼ技術、リポソーム又はタンパク質形質導入ドメイン媒介送達、及びエレクトロポレーションなどの物理的方法の使用によるプラスミド移動及び標的遺伝子組み込みの適用が挙げられる。
【0163】
遺伝子改変の効率は、稀に１００％であり、通常、改変に成功した細胞の集団を濃縮することが望ましい。一例では、改変細胞は、新しい遺伝子型の機能的特徴を利用することによって濃縮することができる。改変細胞を富化する１つの例示的な方法は、選択可能な又はスクリーニング可能なマーカー遺伝子を使用する陽性選択である。「マーカー遺伝子」とは、マーカー遺伝子を発現する細胞に明確な表現型を付与する遺伝子を指し、したがって、そのような形質転換された細胞を、マーカーを有しない細胞と区別することができる。選択可能なマーカー遺伝子は、選択的薬剤（例えば、抗生物質）に対する耐性に基づいて「選択」することができる形質を付与する。スクリーニング可能なマーカー遺伝子（又はレポーター遺伝子）は、観察又は試験を通して、すなわち、「スクリーニング」（例えば、β－グルクロニダーゼ、ルシフェラーゼ、ＧＦＰ、又は非形質転換細胞に存在しない他の酵素活性）によって識別することができる形質を付与する。一例では、遺伝子改変された間葉系前駆体又は幹細胞は、ネオマイシンなどの薬物に対する耐性、又はｌａｃＺの発現に基づく比色選択に基づいて選択される。
【0164】
本開示の組成物
本開示の一例では、間葉系前駆体もしくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子は、組成物の形態で投与される。一例では、そのような組成物は、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を含む。したがって、一例では、本開示の組成物は、培養増殖された間葉系前駆体又は幹細胞を含むことができる。
本開示の一例では、間葉系前駆体もしくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子は、組成物の形態で投与される。一例では、そのような組成物は、薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤を含む。したがって、一例では、本開示の組成物は、培養増殖された間葉系前駆体又は幹細胞を含むことができる。
【0165】
「担体」及び「賦形剤」という用語は、活性化合物の保存、投与、及び／又は生物学的活性を促進するために、当技術分野で従来から使用される物質の組成物を指す（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１６ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ（１９８０）を参照）。担体は、活性化合物の任意の望ましくない副作用も低減し得る。好適な担体は、例えば、安定しており、例えば、担体内の他の成分と反応することができない。一例では、担体は、治療に使用される用量及び濃度では、レシピエントに有意な局所的又は全身的有害作用を生じさせない。
【0166】
本開示に好適な担体としては、従来使用されているものが挙げられ、例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、ラクトース、リンゲル溶液、緩衝溶液、ヒアルロナン及びグリコールが、特に（等張の場合）溶液のための例示的な液体担体である。好適な医薬担体及び賦形剤としては、デンプン、セルロース、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどが挙げられる。
【0167】
別の例では、担体は、例えば、細胞が成長又は懸濁される培地組成物である。例えば、そのような培地組成物は、それが投与された対象においていかなる副作用も誘発しない。
【0168】
例示的な担体及び賦形剤は、細胞の生存能、及び／又は代謝症候群及び／又は肥満を軽減、予防、もしくは遅延させる細胞の能力に悪影響を及ぼさない。
【0169】
一例では、担体又は賦形剤は、細胞及び／又は可溶性因子を好適なｐＨに維持するための緩衝活性を提供し、それによって生物学的活性を発揮し、例えば、担体又は賦形剤は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。ＰＢＳは、細胞及び因子の相互作用が最小限であり、細胞及び因子の迅速な放出を可能にするので、魅力的な担体又は賦形剤を示し、このような場合、本開示の組成物は、血流に、又は組織もしくは組織を取り囲むもしくは組織に隣接する領域に、例えば注射により直接適用するための液体として製造され得る。
【0170】
間葉系前駆体もしくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子はまた、レシピエント適合性であり、かつ、レシピエントに有害ではない生成物に分解する足場内に組み込まれ得るか、又は埋め込まれ得る。これらの足場は、レシピエント対象に移植される細胞に支持及び保護を提供する。天然及び／又は合成の生分解性足場は、そのような足場の例である。
【0171】
様々な異なる足場が、本開示の実施において成功裏に使用され得る。例示的な足場は、限定されないが、生物学的に分解可能な足場を含む。天然の生分解性足場は、コラーゲン、フィブロネクチン、及びラミニンの足場を含む。細胞移植の足場に好適な合成材料は、広範な細胞成長及び細胞機能を支持することができるはずである。そのような足場はまた、再吸収可能であってもよい。好適な足場としては、ポリグリコール酸足場（例えば、Ｖａｃａｎｔｉ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄ．Ｓｕｒｇ．２３：３－９ １９８８、Ｃｉｍａ，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．３８：１４５ １９９１、Ｖａｃａｎｔｉ，ｅｔ ａｌ．Ｐｌａｓｔ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒ．Ｓｕｒｇ．８８：７５３－９ １９９１に記載されるような）、又はポリ酸無水物、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの合成ポリマーが挙げられる。
【0172】
別の例では、間葉系前駆体もしくは幹細胞及び／又はそれらの子孫及び／又はそれらに由来する可溶性因子は、ゲル足場（例えば、Ｕｐｊｏｈｎ ＣｏｍｐａｎｙのＧｅｌｆｏａｍ）において投与され得る。
【0173】
本明細書に開示される組成物は、単独で、又は他の細胞との混合物として投与され得る。異なる種類の細胞は、投与直前又は投与の少し前に本開示の組成物と混合されてもよいか、あるいは投与前にある期間共培養されてもよい。
【0174】
一例では、組成物又は総用量は、有効量又は治療的もしくは予防的有効量の間葉系前駆体もしくは幹細胞、及び／又はその子孫、及び／又はそれに由来する可溶性因子を含む。例えば、総用量は、体重１キログラム当たり（細胞／ｋｇ）４００万個超の間葉系前駆体又は幹細胞（ＭＬＰＳＣ）を含む。別の例では、総用量は、６００万個の細胞／ｋｇ超を含む。一例では、総用量は、５００万個の細胞／ｋｇ超を含む。別の例では、対象は、６００万個の細胞／ｋｇ超を投与される。別の例では、対象は、８００万個の細胞／ｋｇ超を投与される。
【0175】
一例では、対象は、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超が少なくとも２～３回の用量にわたって投与される。別の例では、対象は、少なくとも３回の用量を受ける。別の例では、対象は、第１の用量が投与されてから５～９日以内に、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を受ける。別の例では、対象は、第１の用量が投与されてから７日以内に、４００万個のＭＬＰＳＣ／ｋｇ超を受ける。これらの例では、用量は、１用量当たり１×１０８～２．５×１０８個の細胞を含む。例えば、用量は、１．６×１０８個の細胞を含む。別の例では、用量は、２００万個の細胞／ｋｇを含む。
【0176】
一例では、組成物は、５．００×１０６個の生存細胞／ｍＬ超を含む。別の例では、組成物は、５．５０×１０６個の生存細胞／ｍＬ超を含む。別の例では、組成物は、６．００×１０６個の生存細胞／ｍＬ超を含む。別の例では、組成物は、６．５０×１０６個の生存細胞／ｍＬ超を含む。別の実施例において、組成物は、６．６８×１０６個の生存細胞／ｍＬ超を含む。
【0177】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、組成物の細胞集団の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９９％を構成する。
【0178】
本開示の組成物は、凍結保存してもよい。間葉系前駆体又は幹細胞の凍結保存は、当技術分野で既知の低速冷却方法又は「高速」凍結プロトコルを使用して、行われることができる。好ましくは、凍結保存方法は、未凍結細胞と比較して、凍結保存細胞の同様の表現型、細胞表面マーカー、及び成長率を維持する。
【0179】
凍結保存された組成物は、凍結保存溶液を含み得る。凍結保存溶液のｐＨは、通常、６．５～８、好ましくは７．４である。
【0180】
凍結保存溶液は、例えば、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ（商標）などの滅菌された非発熱性等張溶液を含み得る。１００ｍＬのＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ（商標）は、５２６ｍｇの塩化ナトリウムＵＳＰ（ＮａＣｌ）、５０２ｍｇのグルコン酸ナトリウム（Ｃ６Ｈ１１ＮａＯ７）、３６８ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物ＵＳＰ（Ｃ２Ｈ３ＮａＯ２・３Ｈ２Ｏ）、３７ｍｇの塩化カリウムＵＳＰ（ＫＣｌ）、及び３０ｍｇの塩化マグネシウムＵＳＰ（ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を含有する。抗菌剤は、含まれない。ｐＨは、水酸化ナトリウムで調整する。ｐＨは７．４（６．５～８．０）である。
【0181】
凍結保存溶液は、Ｐｒｏｆｒｅｅｚｅ（商標）を含み得る。凍結保存溶液は、追加的又は代替的に、培養培地、例えば、αＭＥＭを含み得る。
【0182】
凍結を容易にするために、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの凍結保護剤を、通常、凍結保存溶液に加える。理想的には、凍結保護剤は、細胞及び患者にとって非毒性であり、非抗原性であり、化学的に不活性であり、解凍後の高い生存率を提供し、洗浄せずに移植できるようにするべきである。しかしながら、最も一般的に使用される凍結保護剤、ＤＭＳＯは、いくらかの細胞毒性を示す。ヒドロキシルエチルデンプン（ＨＥＳ）は、凍結保存溶液の細胞毒性を低減するために、ＤＭＳＯの代替物として、又はＤＭＳＯと組み合わせて使用され得る。
【0183】
凍結保存溶液は、ＤＭＳＯ、ヒドロキシエチルデンプン、ヒト血清成分、及び他のタンパク質増量剤のうちの１種以上を含み得る。一例では、凍結保存溶液は、約５％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及び約１０％のＤＭＳＯを含む。凍結保存溶液は、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、及びトレハロースのうちの１つ以上を更に含み得る。
【0184】
一実施形態では、細胞を４２．５％Ｐｒｏｆｒｅｅｚｅ（商標）／５０％αＭＥＭ／７．５％ＤＭＳＯ中に懸濁し、制御速度冷凍庫中で冷却する。
【0185】
凍結保存された組成物は、解凍されて対象に直接投与されてもよいか、又は例えばＨＡを含む別の溶液に添加されてもよい。代替的に、凍結保存された組成物を解凍し、投与前に間葉系前駆体又は幹細胞を代替キャリアに再懸濁し得る。
【0186】
一例では、本開示の細胞組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むことができる。例えば、本開示の組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ（７０％）、ＤＭＳＯ（１０％）、ＨＳＡ（２５％）溶液を含み得、ＨＳＡ溶液は、５％のＨＳＡ及び１５％の緩衝液を含む。
【0187】
一例では、本明細書に記載の組成物は、単回用量として投与され得る。
【0188】
いくつかの例では、本明細書に記載の組成物は、複数回用量にわたって投与され得る。例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回の用量。他の例では、本明細書に記載の組成物は、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、少なくとも９回、少なくとも１０回の用量にわたって投与され得る。
【0189】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、対象に投与する前に培養増殖され得る。細胞培養の様々な方法が、当該技術分野で既知である。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、約４～１０の継代にわたって培養増殖される。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０の継代にわたって培養増殖される。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、少なくとも５の継代にわたって培養増殖される。これらの例では、幹細胞は、凍結保存される前に培養増殖され得る。
【0190】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、投与前に無血清培地中で培養増殖される。
【0191】
いくつかの例では、細胞は、細胞が対象の循環に出ることは許容しないが、細胞によって分泌される因子が循環に入ることを許容するチャンバ内に含まれる。このようにして、可溶性因子は、細胞が対象の循環内に因子を分泌することを許容することによって対象に投与され得る。そのようなチャンバは、可溶性因子の局所レベルを増加させるために、対象の部位に同様に植え込むことができる。
【0192】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、全身的に投与され得る。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、対象の気道に投与され得る。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、対象の肺（複数可）に投与され得る。別の例では、本開示の組成物は、静脈内に投与される。別の例では、組成物は、静脈内投与され、対象の気道に投与される。
【0193】
一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、週２回投与される。一例では、間葉系前駆体又は幹細胞は、毎月１回投与され得る。一例では、２回用量の間葉系前駆体又は幹細胞が、２週間にわたって週１回投与される。別の例では、２回用量の間葉系前駆体又は幹細胞が、２週間毎に週１回投与される。別の例では、４回用量の間葉系前駆体又は幹細胞が、後続の用量が毎月投与される前に、２週間にわたって投与される。一例では、２回用量の間葉系前駆体又は幹細胞は、後続の用量が毎月１回投与される前に、２週間毎に週１回投与され得る。一例では、４回用量が毎月投与される。
【0194】
一例では、本開示の組成物は、「臨床的に証明された有効な」量のＭＬＰＳＣを含む。一例では、本開示の組成物は、「臨床的に証明された有効な」量のＭＳＣを含む。
【0195】
本開示の広範な一般的範囲から逸脱することなく、上述の実施形態に対して多数の変形及び／又は修正が行われ得ることが、当業者によって理解されるであろう。したがって、本実施形態は、全ての点で例示的であり、限定的ではないとみなされるべきである。
【0196】
以下の具体的な実施例は、単に例示として解釈すべきであり、いかなる方法においても本開示の残りの部分を限定するものではないと解釈すべきである。当業者は、更なる詳細を伴わずに、本明細書の説明に基づいて本発明を最大限に利用できると考えられる。
【実施例】
【0197】
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）の治療のための、エクスビボで培養増殖された成人同種骨髄由来間葉幹細胞（ＭＳＣ）
組成物
組成物は、健常な成人ドナーの骨髄から単離された、培養増殖された間葉幹細胞（ｃｅＭＳＣ）からなる。最終組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）中に製剤化されたｃｅＭＳＣを含む。
組成物
組成物は、健常な成人ドナーの骨髄から単離された、培養増殖された間葉幹細胞（ｃｅＭＳＣ）からなる。最終組成物は、Ｐｌａｓｍａ－Ｌｙｔｅ Ａ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）及びヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）中に製剤化されたｃｅＭＳＣを含む。
【0198】
目的
以下を決定すること：
－安全性
－生存及び呼吸機能の改善
－バイオマーカーレベルの変化。
以下を決定すること：
－安全性
－生存及び呼吸機能の改善
－バイオマーカーレベルの変化。
【0199】
対象
中等度のＣＯＶＩＤ－１９関連ＡＲＤＳを有することを特徴とする患者は、間葉幹細胞（静脈内、３～５日以内に２００万（２×１０６）個の細胞／ｋｇ×２回用量の固定投薬レジメン）又は対照療法を受けた。１２５人の患者は、＜６５歳であった（すなわち、＜６５歳の治療企図（ＩＴＴ）集団、表１）。＜６５歳のＩＴＴ集団の５８人が細胞療法を受け、６７人が対照療法を受けた。一部の＜６５歳のＩＴＴ患者は、循環ＣＲＰ＜４によって特徴付けられるように、軽度のＡＲＤＳ及び／又は低レベルの炎症を有すると同定された。これらの患者は、パープロトコル（ＰＰ）患者集団から除外された。したがって、ＰＰ集団は、（１２５人から）８９人に減少し、３８人が細胞療法を受け、５１人が対照療法を受けた。更に、ＰＰ集団は、全て中等度から重度のＡＲＤＳを有していたため、一貫して最も重度の疾患を有する研究集団を表す。９７人の患者は、＞６５歳であった（すなわち、＞６５歳の治療企図（ＩＴＴ）集団、表１）。＞６５歳のＩＴＴ集団のうち５４人が細胞療法を受け、４３人が対照療法を受けた。一部の＞６５歳のＩＴＴ患者は、分析から除外され、総患者数を９４人に減少させた（修正された治療企図集団（ｍＩＴＴ）と称される）。
中等度のＣＯＶＩＤ－１９関連ＡＲＤＳを有することを特徴とする患者は、間葉幹細胞（静脈内、３～５日以内に２００万（２×１０６）個の細胞／ｋｇ×２回用量の固定投薬レジメン）又は対照療法を受けた。１２５人の患者は、＜６５歳であった（すなわち、＜６５歳の治療企図（ＩＴＴ）集団、表１）。＜６５歳のＩＴＴ集団の５８人が細胞療法を受け、６７人が対照療法を受けた。一部の＜６５歳のＩＴＴ患者は、循環ＣＲＰ＜４によって特徴付けられるように、軽度のＡＲＤＳ及び／又は低レベルの炎症を有すると同定された。これらの患者は、パープロトコル（ＰＰ）患者集団から除外された。したがって、ＰＰ集団は、（１２５人から）８９人に減少し、３８人が細胞療法を受け、５１人が対照療法を受けた。更に、ＰＰ集団は、全て中等度から重度のＡＲＤＳを有していたため、一貫して最も重度の疾患を有する研究集団を表す。９７人の患者は、＞６５歳であった（すなわち、＞６５歳の治療企図（ＩＴＴ）集団、表１）。＞６５歳のＩＴＴ集団のうち５４人が細胞療法を受け、４３人が対照療法を受けた。一部の＞６５歳のＩＴＴ患者は、分析から除外され、総患者数を９４人に減少させた（修正された治療企図集団（ｍＩＴＴ）と称される）。
【表2】
【0200】
分析
治療された患者の分析は、細胞療法は、６５歳を超える患者（図１及び２；Ｂ）と比較して、６５歳未満の患者（図１及び２；Ａ）における６０日目の死亡に対する有意な保護を提供することを驚くべきことに明らかにした。有意には、６５歳未満の患者における６０日目の死亡に対する保護は、治療企図（ＩＴＴ）患者（対照と比較して３８．３％の死亡の減少、ｐ＝０．０４８４、図１）及びパープロトコル（ＰＰ）患者（対照と比較して４３．３％の死亡の減少、ｐ＝０．０２８５、図２）の両方において明らかであった。図１及び２にも示されるように、ＩＴＴ患者と比較して、ＰＰ患者においてより大きな死亡の減少が観察された。ＰＰ患者は、ＩＴＴ患者よりも一貫して重篤な疾患を有していたため、これは予期しない転帰である。
治療された患者の分析は、細胞療法は、６５歳を超える患者（図１及び２；Ｂ）と比較して、６５歳未満の患者（図１及び２；Ａ）における６０日目の死亡に対する有意な保護を提供することを驚くべきことに明らかにした。有意には、６５歳未満の患者における６０日目の死亡に対する保護は、治療企図（ＩＴＴ）患者（対照と比較して３８．３％の死亡の減少、ｐ＝０．０４８４、図１）及びパープロトコル（ＰＰ）患者（対照と比較して４３．３％の死亡の減少、ｐ＝０．０２８５、図２）の両方において明らかであった。図１及び２にも示されるように、ＩＴＴ患者と比較して、ＰＰ患者においてより大きな死亡の減少が観察された。ＰＰ患者は、ＩＴＴ患者よりも一貫して重篤な疾患を有していたため、これは予期しない転帰である。
【0201】
治療された患者の更なる分析は、７日目から３０日目までの＜６５歳の患者における呼吸機能の持続的な改善を明らかにした（図３、無作為化後７日目、１４日目、２１日目、及び３０日目のベルリン基準によって定義される、ＡＲＤＳの解消及び／又は改善としての改善尺度）。＞６５歳の治療された患者においても、改善された呼吸機能が観察された（図３）。しかしながら、＜６５歳の患者とは対照的に、１４日目以降の＞６５歳の治療された対象では、呼吸機能の改善が持続しなかった（図３）。これらの所見は、＞６５歳の患者におけるより高度な又はより長期の投薬（すなわち、４００万個の細胞／ｋｇ超）の必要性を支持する。
【0202】
バイオマーカー分析
炎症性バイオマーカーのレベルを、ベースライン時、及び細胞療法（３～５日以内に２００万（２×１０６）個の細胞／ｋｇ×２回用量の固定投薬レジメン）での治療後、１０７人の治療された患者及び１０６人の対照（治療された＜６５ ｎ＝５５、対照＜６５ ｎ＝６５、治療された＞６５ ｎ＝５２、対照＞６５ ｎ＝４１）で測定した。細胞療法は、＜６５歳の患者において、３日目、７日目、及び１４日目のＣＲＰレベル（図４Ａ）ならびに７日目及び１４日目のフェリチンレベル（図４Ｂ）を有意に低減させた。しかしながら、＞６５歳の患者では同様の結果は観察されず、これらの患者におけるより高度な又はより長期の投薬のための上記の参照される要件を更に支持した（図４Ａ及び４Ｂ）。細胞療法は、全ての治療された患者におけるＤ－ダイマーレベルの有意な増加を防止した（図４Ｃ）。
炎症性バイオマーカーのレベルを、ベースライン時、及び細胞療法（３～５日以内に２００万（２×１０６）個の細胞／ｋｇ×２回用量の固定投薬レジメン）での治療後、１０７人の治療された患者及び１０６人の対照（治療された＜６５ ｎ＝５５、対照＜６５ ｎ＝６５、治療された＞６５ ｎ＝５２、対照＞６５ ｎ＝４１）で測定した。細胞療法は、＜６５歳の患者において、３日目、７日目、及び１４日目のＣＲＰレベル（図４Ａ）ならびに７日目及び１４日目のフェリチンレベル（図４Ｂ）を有意に低減させた。しかしながら、＞６５歳の患者では同様の結果は観察されず、これらの患者におけるより高度な又はより長期の投薬のための上記の参照される要件を更に支持した（図４Ａ及び４Ｂ）。細胞療法は、全ての治療された患者におけるＤ－ダイマーレベルの有意な増加を防止した（図４Ｃ）。
【0203】
＜６５歳の治療された対象と＞６５歳の治療された対象との間の炎症性バイオマーカーレベルを比較することは、より高度な又はより長期の投薬（すなわち、４００万個の細胞／ｋｇ超）での治療のための患者を選択するための測定可能な基準を特定するための独自の機会を提供した。驚くべきことに、図５及び６に示すように、年齢＞６５歳は、患者がコルチコステロイドを使用していたかどうかにかかわらず、ベースラインでの炎症活性の増加と関連しているようである。実際、ベースラインでコルチコステロイドを使用している全ての患者の分析では、＞６５歳の患者では、＜６５歳の患者と比較して、＞５倍の高い炎症活性（サイトカイン／ケモカイン）が示された。
【0204】
図５は、６５歳超の患者が、＜６５歳の患者よりも高いベースラインレベルの炎症性サイトカイン／ケモカイン、特に：
【0205】
（ｉ）ＣＣＲ２結合ケモカイン（ＣＸＣＬ１０／ＩＰ１０及びＣＸＣＬ９を含む）及びＣＸＣＲ３結合ケモカイン（ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、及びＣＣＬ７／ＭＣＰ３を含む）。ケモカインのこのグループは、肺への好中球及びマクロファージ流入の増加を示す。
（ｉｉ）マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大を示すＩＬ－６及びＩＬ－８。
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示すＣＣＬ１９及びＩＬ－２。
を有したことを示す。
（ｉｉ）マクロファージ炎症の増加及び肺への好中球遊走の増大を示すＩＬ－６及びＩＬ－８。
（ｉｉ）Ｔ細胞活性化／増殖及びアポトーシス死を示すＣＣＬ１９及びＩＬ－２。
を有したことを示す。
【0206】
＞６５の患者で増加した他の炎症性バイオマーカーとしては、ＴＧＦ－アルファ、ＴＮＦ、ＣＸＣＬ８、Ｇ－ＣＳＦ／ＣＳＦ－３、及びＩＬ１７Ｃが挙げられた（図５及び６）。
【0207】
＜６５歳の患者と＞６５歳の患者との間の炎症経路の比較は、＞６５歳の患者及び／又はバイオマーカーが、定義されたベースラインでの炎症活性の増加を有する患者における、より高度な又はより長期の投薬に対する上記の参照される要件に対する更なる支持を明らかにした。＜６５歳の患者は、ベースラインレベルが低いにもかかわらず、＞６５歳の患者と同じ炎症経路を発現した。＜６５歳の患者において、細胞療法は、特に、＜６５歳の患者におけるＣＯＶＩＤ－１９ ＡＲＤＳ重症度に関連する炎症マーカー、特に：
－肺への好中球及びマクロファージ流入の減少をもたらす可能性が高い、ＣＣＲ２及びＣＸＣＲ３に結合するケモカイン、
－ＩＬ－１８駆動のインフラマソームの減少、及びマクロファージ活性化／肺への好中球ホーミングの減少を示す、ＩＬ－６／ＩＬ－８／ＴＮＦ／ＩＬ－１８、
－Ｔ細胞流入及び活性化の減少を示す、減少したＣＣＬ１９、及びＩＬ－４／ＩＬ－１３／ＧＭ－ＣＳＦを低減させた。
－肺への好中球及びマクロファージ流入の減少をもたらす可能性が高い、ＣＣＲ２及びＣＸＣＲ３に結合するケモカイン、
－ＩＬ－１８駆動のインフラマソームの減少、及びマクロファージ活性化／肺への好中球ホーミングの減少を示す、ＩＬ－６／ＩＬ－８／ＴＮＦ／ＩＬ－１８、
－Ｔ細胞流入及び活性化の減少を示す、減少したＣＣＬ１９、及びＩＬ－４／ＩＬ－１３／ＧＭ－ＣＳＦを低減させた。
【0208】
同じ経路が年齢に関係なく患者に関与しているため、これらの経路が＞６５歳の患者でより高レベルで過剰発現されたままであることを示すデータは、より高度な投薬レジメンで使用された場合、細胞療法が高齢の患者（又はより高いベースラインレベルの炎症を有する患者）にも効果的であることを示唆している。
【0209】
要約すれば：
－＜６５歳の治療された患者では、炎症経路が下方制御され（図５及び６）、これは、予後の改善（図１及び２）及び呼吸機能の持続的な改善（図３）に対応した；
－７日目に＞６５歳の治療された患者において、改善された呼吸機能が観察されたが、持続しなかった（図３）；後続のバイオマーカー分析は、これらの患者がより高いベースラインレベルの炎症を有することを明らかにした（図５及び６）；
－バイオマーカー分析により、年齢にかかわらず（＜６５歳対＞６５歳）、同様の炎症経路がＡＲＤＳ患者に関与していることが明らかになった。したがって、＞６５歳の患者で観察されるより高いベースラインレベルの炎症と、これらの患者で７日目に観察される肺機能の初期改善とを合わせると、改善された転帰（例えば、＜６５歳の患者と同等の転帰）は、幹細胞のより高度な又はより長期の投薬で達成されることができることを示す。
－＜６５歳の治療された患者では、炎症経路が下方制御され（図５及び６）、これは、予後の改善（図１及び２）及び呼吸機能の持続的な改善（図３）に対応した；
－７日目に＞６５歳の治療された患者において、改善された呼吸機能が観察されたが、持続しなかった（図３）；後続のバイオマーカー分析は、これらの患者がより高いベースラインレベルの炎症を有することを明らかにした（図５及び６）；
－バイオマーカー分析により、年齢にかかわらず（＜６５歳対＞６５歳）、同様の炎症経路がＡＲＤＳ患者に関与していることが明らかになった。したがって、＞６５歳の患者で観察されるより高いベースラインレベルの炎症と、これらの患者で７日目に観察される肺機能の初期改善とを合わせると、改善された転帰（例えば、＜６５歳の患者と同等の転帰）は、幹細胞のより高度な又はより長期の投薬で達成されることができることを示す。
【0210】
特に、データは、２×１０６個の細胞／ｋｇ×２回用量（すなわち、４００万個の細胞／ｋｇ）を投与する事を含む投薬レジメンが、ベースラインで炎症性バイオマーカーのベースラインレベルの増加を有する患者及び／又は＞６５歳の患者において治療上有効であることを示唆する。
【0211】
（安全性）
注入関連の有害事象は認められなかった。
注入関連の有害事象は認められなかった。
【0212】
当業者であれば、広範に説明される本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、多くの変形及び／又は修正が特定の実施形態に示されるように本発明に加えられてもよいことを理解する。したがって、本実施形態は、全ての点で例示的であり、限定的ではないとみなされるべきである。
【0213】
上で考察された全ての刊行物は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。
【0214】
本出願は、２０２１年４月２３日に出願されたＡＵ２０２１９０１２１４、２０２１年７月１５日に出願されたＡＵ２０２１９０２１８０、２０２２年２月９日に出願されたＡＵ２０２２９００２６０、及び２０２２年２月１８日に出願されたＡＵ２０２２９００３７２からの優先権を主張し、それらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0215】
本明細書に含まれている文書、行為、材料、デバイス、物品などの任意の議論は、単に本発明の文脈を示す目的のためである。これらの事項の一部又は全部が、本出願の各請求項の優先日以前に存在した、本発明に関連する分野における先行技術基盤の一部を形成していること、又は一般的な一般知識であったことを認めるものと解釈してはならない。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4A】
【図4B】
【図4C】
【図5】
【図6】
【国際調査報告】