特表 2024-516595 修飾された抗ＴＳＬＰ抗体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-16

(54)【発明の名称】修飾された抗ＴＳＬＰ抗体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240409BHJP

   C07K 16/24 20060101ALI20240409BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240409BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240409BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 37/08 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 11/06 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 11/00 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 11/02 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 13/12 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240409BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/24 ZNA

C07K16/46

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61K39/395 U

A61P29/00

A61P37/08

A61P11/06

A61P1/04

A61P11/00

A61P11/02

A61P13/12

A61P17/00

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023563978

(86)(22)【出願日】2022-04-22

(85)【翻訳文提出日】2023-11-16

(86)【国際出願番号】 US2022025999

(87)【国際公開番号】W WO2022226342

(87)【国際公開日】2022-10-27

(31)【優先権主張番号】63/178,915

(32)【優先日】2021-04-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．プルロニック

(71)【出願人】

【識別番号】500049716

【氏名又は名称】アムジエン・インコーポレーテツド

(74)【代理人】

【識別番号】110001173

【氏名又は名称】弁理士法人川口國際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ボンダレンコ，パベル

(72)【発明者】

【氏名】シー，リウチン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン，ハオ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B064DA08

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA87X

4B065AA94Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB17

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG01

4H045AA11

4H045AA30

4H045DA76

4H045EA20

4H045EA22

4H045FA74

(57)【要約】

本出願は、概して、長期間にわたって保存された場合にテゼペルマブと比較して上昇した安定性を有する抗ＴＳＬＰ抗体テゼペルマブの組成物又はバリアントに関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片であって、
（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、
（ｉ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
（ｉｉ）配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び
（ｉｉｉ）配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む軽鎖可変ドメイン；並びに
（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、
（ｉ）配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
（ｉｉ）配列番号７で示される以下の残基Ｄ５４又はＧ５５の１つに変異を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
（ｉｉｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む重鎖可変ドメイン
を含む抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項2】

ＨＣＤＲ２の前記変異は、Ｄ５４Ｅである、請求項１に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項3】

ＨＣＤＲ２の前記変異は、Ｇ５５Ａである、請求項１に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項4】

前記ＨＣＤＲ２は、配列ＶＩＷＹＸ_１Ｘ_２ＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_２は、Ｇ又はＡである）（配列番号１３）を有し、任意選択的に、前記ＨＣＤＲ２は、以下の配列：ＶＩＷＹＥＧＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＩＷＹＤＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）又はＶＩＷＹＥＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項5】

任意選択的に、配列番号４の以下の残基ＬＣＤＲ２ Ｄ４９、Ｄ５０又はＳ５１の少なくとも１つに変異を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項6】

前記変異は、Ｄ４９Ｅ、Ｄ５０Ｅ及び／又はＳ５１Ａのいずれか１つである、請求項５に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項7】

前記ＬＣＤＲ２は、配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＲＰＳ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_３は、Ｓ又はＡである）（配列番号１７）を有し、任意選択的に、前記ＬＣＤＲ２は、以下の配列：ＥＤＳＤＲＰＳ（配列番号１８）、ＤＥＳＤＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＥＳＤＲＰＳ（配列番号２０）、ＤＤＡＤＲＰＳ（配列番号２１）、ＤＥＡＤＲＰＳ（配列番号２２）、ＥＤＡＤＲＰＳ（配列番号２３）又はＥＥＡＤＲＰＳ（配列番号２４）を有する、請求項５又は６に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項8】

抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片であって、
（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、
（ｉ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
（ｉｉ）配列番号４の以下の残基Ｄ４９、Ｄ５０又はＳ５１の少なくとも１つに変異を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；及び
（ｉｉｉ）配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列
を含む軽鎖可変ドメイン；並びに
（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、
（ｉ）配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
（ｉｉ）配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び
（ｉｉｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列
を含む重鎖可変ドメイン
を含む抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項9】

ＬＣＤＲ２の前記変異は、Ｄ４９Ｅ、Ｄ５０Ｅ及び／又はＳ５１Ａである、請求項８に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項10】

ＬＣＤＲ２の前記変異は、Ｄ４９Ｅである、請求項８又は９に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項11】

ＬＣＤＲ２の前記変異は、Ｄ５０Ｅである、請求項８又は９に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項12】

ＬＣＤＲ２の前記変異は、Ｓ５１Ａである、請求項８又は９に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項13】

前記ＬＣＤＲ２は、配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＲＰＳ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_３は、Ｓ又はＡである）（配列番号１７）を有し、任意選択的に、前記ＬＣＤＲ２は、以下の配列：ＥＤＳＤＲＰＳ（配列番号１８）、ＤＥＳＤＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＥＳＤＲＰＳ（配列番号２０）、ＤＤＡＤＲＰＳ（配列番号２１）、ＤＥＡＤＲＰＳ（配列番号２２）、ＥＤＡＤＲＰＳ（配列番号２３）又はＥＥＡＤＲＰＳ（配列番号２４）を有する、請求項８～１２のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項14】

任意選択的に、配列番号７で示されるＨＣＤＲ２の以下の残基Ｄ５４又はＧ５５の１つ以上に変異を含む、請求項８～１３のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項15】

前記変異は、配列番号７で示されるＨＣＤＲ２のＤ５４Ｅ及び／又はＧ５５Ａのいずれか１つである、請求項１４に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項16】

前記ＨＣＤＲ２は、配列ＶＩＷＹＸ_１Ｘ_２ＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_２は、Ｇ又はＡである）（配列番号１３）を有し、任意選択的に、前記ＨＣＤＲ２は、以下の配列：ＶＩＷＹＥＧＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＩＷＹＤＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）又はＶＩＷＹＥＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）を有する、請求項１４又は１５に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項17】

（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１２に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列；
ｉｉ．配列番号１１に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；若しくは
ｉｉｉ．配列番号１１からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列
からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン；又は
（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、
ｉ．配列番号１０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列；
ｉｉ．配列番号９に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列；若しくは
ｉｉｉ．配列番号９からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列
からなる群から選択される重鎖可変ドメイン；又は
（Ｃ）（Ａ）の軽鎖可変ドメイン及び（Ｂ）の重鎖可変ドメイン
を含み、前記抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質又はその断片の前記ＣＤＲを保持する、請求項１～１６のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項18】

前記抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号１０又は配列番号２５～２８のアミノ酸配列を含む重鎖、配列番号１２又は配列番号２９～３６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の抗原結合タンパク質又はその断片。

【請求項19】

ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合抗体断片、一本鎖抗体、単量体抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ断片、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項20】

前記抗原結合タンパク質は、ヒト抗体である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項21】

ＩｇＧ２抗体である、請求項１９又は２０に記載の抗体。

【請求項22】

前記抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質又はその断片は、配列番号２のアミノ酸２９～１５９で示されるＴＳＬＰポリペプチドに特異的に結合する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項23】

前記抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質又はその断片の両方の結合部位は、ＴＳＬＰに対する同一の結合を有する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項24】

数値的に１０^－８Ｍ Ｋｄ以下の親和性でＴＳＬＰに結合する、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項25】

請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤とを含む組成物。

【請求項26】

請求項１～２４のいずれか一項に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の前記軽鎖可変ドメイン、前記重鎖可変ドメイン又は両方をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸。

【請求項27】

請求項２６に記載の核酸を含む組換え発現ベクター。

【請求項28】

請求項２７に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項29】

配列番号２のアミノ酸２９～１５９を含むＴＳＬＰポリペプチドに特異的に結合する免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を産生する方法であって、請求項２８に記載の宿主細胞を、それが前記免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を発現することを可能にする条件下でインキュベートすることを含み、前記宿主細胞は、（ｉ）請求項１～２４のいずれか一項に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の前記軽鎖可変ドメインをコードする組換え発現ベクター及び請求項１～２４のいずれか一項に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の前記重鎖可変ドメインをコードする組換え発現ベクター、又は（ｉｉ）請求項１～２４のいずれか一項に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の前記軽鎖可変ドメインと前記重鎖可変ドメインとの両方をコードする組換え発現ベクターを含む、方法。

【請求項30】

配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、２５℃で上昇した安定性を有する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項31】

配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、４週間後に４０℃で上昇した安定性を有する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項32】

配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、４週間後に４０℃で減少した高分子量種を有する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項33】

配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、５０℃で減少した異性化を有する、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項34】

前記抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の２％未満は、ＳＥＣによって決定されるとき、約２５℃で少なくとも２週間（任意選択的に少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月又は少なくとも６ヶ月）の貯蔵後に異性化及び／又は脱アミドを示す、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項35】

前記免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の２％未満は、ＳＥＣによって決定されるとき、約２２ヶ月～約３６ヶ月の２℃～８℃での貯蔵、続いて少なくとも２週間又は少なくとも１ヶ月若しくは少なくとも２ヶ月の約２５℃での貯蔵後に異性化及び／又は脱アミドを示す、請求項１～２４のいずれか一項に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片。

【請求項36】

対象の炎症性疾患を治療する方法であって、治療有効量の、請求項１～２４のいずれか一項に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片或いは請求項２５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。

【請求項37】

前記炎症性疾患は、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、鼻茸、慢性自然発症蕁麻疹、Ｉｇ駆動疾患、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、好酸球性胃炎、鼻茸を伴わない慢性副鼻腔炎及び特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。

【請求項38】

２週間ごと又は４週間ごとの間隔で前記組成物を投与することを含む、請求項３６又は３７に記載の方法。

【請求項39】

前記組成物は、少なくとも４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年又はそれを超える期間にわたって投与される、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記喘息は、重症喘息である、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記喘息は、好酸球性又は非好酸球性喘息である、請求項３７～４０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項42】

複数の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む組成物を製造する方法であって、前記複数の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、
配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列
をそれぞれ含み、前記方法は、以下の属性：
ＨＣ位置５４のイソアスパラギン酸（ｉｓｏＡｓｐ）若しくは環状アスパラギン酸（ｃＡｓｐ）と比較したＨＣ位置５４のＬ－アスパラギン酸；
酸化ＨＣ Ｗ１０２と比較した非酸化ＨＣ Ｗ１０２；
ＬＣ位置４９若しくは位置５０のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較したＬＣ位置４９若しくは位置５０のＬ－アスパラギン酸；
脱アミド化ＬＣ Ｎ６５と比較したＬＣ Ｎ６５；又は
ＬＣ位置９１のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較したＬＣ位置９１のＬ－アスパラギン酸
の少なくとも１つのために、ＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片について前記組成物を濃縮することを含む、方法。

【請求項43】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含む、請求項４２に記載の方法。

【請求項44】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含む、請求項４２又は４３に記載の方法。

【請求項45】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ５０又はＬＣ Ｄ４９を含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含む、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含む、請求項４２～４６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、ＩｇＧ２抗体である、請求項４２～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、（ｉ）ＨＣ Ｄ５４のＬ－アスパラギン酸、並びに（ｉｉ）ＬＣ Ｄ４９及び／又はＤ５０のＬ－アスパラギン酸を含む、請求項４２～４８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項50】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ Ｄ５４のＬ－アスパラギン酸において、ｉｓｏＡｓｐのレベルよりも少なくとも６倍濃縮される、請求項４２～４９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項51】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、配列番号１０で示される重鎖可変領域と、配列番号１２で示される軽鎖可変領域とを含む、請求項４２～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；
配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；
配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；
配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び
配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列
をそれぞれ含む抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物であって、前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が数値的に１０^－８Ｍ以下のＫｄでＴＬＳＰに結合するために有効である、制限された含有量の異性化ＨＣ Ｄ５４及び／又は制限された含有量の異性化ＬＣ Ｄ４９若しくはＤ５０を含む組成物。

【請求項53】

配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含むＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物であって、
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含むか；
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含むか；
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９若しくはＬＣ Ｄ５０を含むか；
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含むか；又は
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含むか
の少なくとも１つである、組成物。

【請求項54】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含む、請求項５３に記載の組成物。

【請求項55】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含む、請求項５３又は５４に記載の組成物。

【請求項56】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＬＣ Ｄ５０を含む、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項57】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含む、請求項５３～５６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項58】

前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含む、請求項５３～５７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項59】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、ＩｇＧ２抗体である、請求項５３～５８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項60】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ５４のＬ－アスパラギン酸とＬＣ４９及び／又はＬＣ５０のＬ－アスパラギン酸との組合せを含む、請求項５３～５９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項61】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ５４のＬ－アスパラギン酸において、ｉｓｏＡｓｐのレベルよりも少なくとも６倍濃縮される、請求項５３～６０のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項62】

前記抗ＴＳＬＰ抗体は、配列番号１０で示される重鎖可変領域と、配列番号１２で示される軽鎖可変領域とを含み、
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含むか；
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含むか；
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９若しくはＬＣ Ｄ５０を含むか；
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含むか；又は
前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含むか
の少なくとも１つである、請求項５３～６１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項63】

配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含む抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物であって、
前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の９８％超は、ＨＣ位置５４のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較してＨＣ位置５４にＬ－アスパラギン酸を含むか；
前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９９％は、酸化ＨＣ Ｗ１０２と比較した非酸化ＨＣ Ｗ１０２を含むか；
前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９７％は、ＬＣ位置４９若しくは５０のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較してＬＣ位置４９若しくは５０にＬ－アスパラギン酸を含むか；
前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９９．１％は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５と比較したＬＣ Ｎ６５を含むか；又は
前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９９．１％は、ＬＣ位置９１のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較してＬＣ位置９１にＬ－アスパラギン酸を含むか
の少なくとも１つである、組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／１７８，９１５号明細書の優先権の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

電子的に提出された資料の参照による組み込み
本開示の一部である配列表は、テキストファイルとして本明細書と同時に提出される。配列表を含むテキストファイルの名称は、「５５５８１＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」であり、２０２２年４月１２日に作成されたものであり、サイズが３２，６４９バイトである。配列表の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0003】

本出願は、概して、長期間にわたって保存された場合にテゼペルマブと比較して上昇した安定性を有する抗ＴＳＬＰ抗体テゼペルマブの組成物及びバリアントに関する。

【背景技術】

【0004】

環境刺激及び炎症誘発性刺激に応答して産生される上皮細胞由来サイトカインである胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）は、複数の炎症細胞及び下流の経路の活性化をもたらす（Ｓｏｕｍｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；３：６７３－８０；Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２００７；２０４：２５３－８）。ＴＳＬＰは、喘息患者の気道で増加し、Ｔｈ２サイトカイン及びケモカインの発現（Ｓｈｉｋｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２；１２９：１０４－１１ ｅ１－９）並びに疾患重症度（Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５；１７４：８１８３－９０；Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８；１８１：２７９０－８）と相関する。ＴＳＬＰは、Ｔｈ２免疫の調節の中心であるが、それは、炎症の他の経路でも重要な役割を果たし得、したがって複数の喘息表現型と関連し得る。

【0005】

テゼペルマブは、ＴＳＬＰに結合し、そのＴＳＬＰ受容体複合体との相互作用を妨げるヒト免疫グロブリンＧ２（ＩｇＧ２）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。軽症のアトピー性喘息患者を対象とした概念実証試験では、テゼペルマブは、早期及び後期の喘息反応を阻害し、吸入アレルゲン曝露後のＴｈ２炎症のバイオマーカーを抑制することが示された（Ｇａｕｖｒｅａｕ，ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７０：２１０２－１０）。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0006】

【非特許文献1】Ｓｏｕｍｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００２；３：６７３－８０

【非特許文献2】Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２００７；２０４：２５３－８

【非特許文献3】Ｓｈｉｋｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１２；１２９：１０４－１１ ｅ１－９

【非特許文献4】Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００５；１７４：８１８３－９０

【非特許文献5】Ｙｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８；１８１：２７９０－８

【非特許文献6】Ｇａｕｖｒｅａｕ，ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７０：２１０２－１０

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

製剤中の抗体治療薬を経時的に監視することは、治療薬の分解を減少させ、製品の完全性を維持する貯蔵条件を決定するために重要である。本開示は、貯蔵中に経時的に変化し得る抗ＴＳＬＰ抗体の属性及び抗体安定性に有益又は有害であり得る属性の研究を提供する。

【0008】

一態様では、本開示は、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を提供し、これは、（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び（ｉｉｉ）配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン、並びに（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号７で示される以下の残基Ｄ５４又はＧ５５の少なくとも１つに変異を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び（ｉｉｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメインを含む。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列ＶＩＷＹＸ_１Ｘ_２ＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１３）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_２は、Ｇ又はＡである）を有する。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＶＩＷＹＥＧＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＩＷＹＤＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）又はＶＩＷＹＥＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）。

【0009】

様々な実施形態において、ＨＣＤＲ２における変異は、Ｄ５４Ｅである。様々な実施形態において、ＨＣＤＲ２における変異は、Ｇ５５Ａである。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質又はその断片は、任意選択的に、配列番号４のＬＣＤＲ２ Ｄ４９、Ｄ５０又はＳ５１の残基の少なくとも１つに変異を含む。様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２の変異は、Ｄ４９Ｅ、Ｄ５０Ｅ又はＳ５１Ａの１つ以上である。様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２は、配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＲＰＳ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_３は、Ｓ又はＡである）（配列番号１７）を有する。様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＥＤＳＤＲＰＳ（配列番号１８）、ＤＥＳＤＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＥＳＤＲＰＳ（配列番号２０）、ＤＤＡＤＲＰＳ（配列番号２１）、ＤＥＡＤＲＰＳ（配列番号２２）、ＥＤＡＤＲＰＳ（配列番号２３）又はＥＥＡＤＲＰＳ（配列番号２４）。

【0010】

様々な実施形態では、本開示は、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を提供し、これは、（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号４の以下の残基Ｄ４９、Ｄ５０又はＳ５１の少なくとも１つに変異を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；並びに（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び（ｉｉｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0011】

様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２は、配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＲＰＳ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_３は、Ｓ又はＡである）（配列番号１７）を有する。任意選択的に、ＬＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＥＤＳＤＲＰＳ（配列番号１８）、ＤＥＳＤＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＥＳＤＲＰＳ（配列番号２０）、ＤＤＡＤＲＰＳ（配列番号２１）、ＤＥＡＤＲＰＳ（配列番号２２）、ＥＤＡＤＲＰＳ（配列番号２３）又はＥＥＡＤＲＰＳ（配列番号２４）。様々な実施形態において、ＬＣＤＲ２における変異は、Ｄ４９Ｅである。様々な実施形態において、ＬＣＤＲ２における変異は、Ｄ５０Ｅである。様々な実施形態において、ＬＣＤＲ２における変異は、Ｓ５１Ａである。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、任意選択的に、配列番号７で示されるＨＣＤＲ２の以下の残基Ｄ５４又はＧ５５の１つに変異を含む。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２の変異は、配列番号７のＤ５４Ｅ又はＧ５５Ａの１つ以上である。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列ＶＩＷＹＸ_１Ｘ_２ＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１３）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_２は、Ｇ又はＡである）を有する。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＶＩＷＹＥＧＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＩＷＹＤＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）又はＶＩＷＹＥＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）。

【0012】

様々な実施形態では、本開示は、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を提供し、これは、（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、ｉ．配列番号１２に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸の配列；ｉｉ．配列番号１１に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列；又はｉｉｉ．配列番号１１からなるポリヌクレオチドの相補体に中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸の配列からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン；又は（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、ｉ．配列番号１０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸の配列；ｉｉ．配列番号９に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列；又はｉｉｉ．配列番号９からなるポリヌクレオチドの相補体に中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸の配列からなる群から選択される重鎖可変ドメイン；又は（Ｃ）（Ａ）の軽鎖可変ドメイン及び（Ｂ）の重鎖可変ドメインを含み、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質若しくはその断片のＣＤＲの１つ以上を保持し、且つ配列番号７のＨＣＤＲ２ Ｄ５４若しくはＧ５５又は配列番号４のＬＣＤＲ２ Ｄ４９、Ｄ５０若しくはＳ５１の１つ以上に変異を含む。

【0013】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号１０又は配列番号２５～２８のアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１２又は配列番号２９～３６のアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む。

【0014】

種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合抗体断片、一本鎖抗体、単量体抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ断片、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質を含む。

【0015】

様々な実施形態において、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又は抗体は、ヒト抗体である。様々な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号２のアミノ酸２９～１５９で示されるＴＳＬＰポリペプチドに特異的に結合する。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の両方の結合部位は、ＴＳＬＰに対する同一の結合を有する。

【0016】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、数値的に１０^－８Ｍ Ｋｄ以下の親和性でＴＳＬＰに結合する。

【0017】

本明細書に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤とを含む組成物がさらに企図される。

【0018】

本開示は、本明細書に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又は抗体の軽鎖可変ドメイン、重鎖可変ドメイン又は両方をコードするポリヌクレオチド配列を含む単離された核酸も提供する。

【0019】

本開示は、本明細書に記載の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又は抗体をコードする核酸を含む組換え発現ベクターをさらに企図する。発現ベクターを含む宿主細胞も提供される。

【0020】

配列番号２のアミノ酸２９～１５９を含むＴＳＬＰポリペプチドに特異的に結合する免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を産生する方法であって、宿主細胞を、それが免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又はその断片を発現することを可能にする条件下でインキュベートすることを含み、前記宿主細胞は、（ｉ）本明細書に記載の抗原結合タンパク質の軽鎖可変ドメインをコードする組換え発現ベクター及び本明細書に記載の抗原結合タンパク質の重鎖可変ドメインをコードする組換え発現ベクター、又は（ｉｉ）本明細書に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくは抗体の軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの両方をコードする組換え発現ベクターを含む、方法が本明細書でさらに企図される。

【0021】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、２５℃で上昇した安定性を有する。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、４週間後に４０℃で上昇した安定性を有する。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質又はその断片と比較して、４週間後に４０℃で減少した高分子量種を有する。

【0022】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、配列番号１０及び配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片と比較して、５０℃で減少した異性化を有する。

【0023】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の２％未満は、ＳＥＣ、例えば抗体－抗原複合体のＳＥＣによって決定されるとき、約２５℃で少なくとも２週間（任意選択的に少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月又は少なくとも６ヶ月）の貯蔵後に異性化を示す。様々な実施形態では、抗原結合タンパク質又はその断片の２％未満は、ＳＥＣによって決定されるとき、約２２ヶ月～約３６ヶ月の２℃～８℃での貯蔵、続いて少なくとも２週間又は少なくとも１ヶ月、若しくは少なくとも２ヶ月、若しくは少なくとも３ヶ月の約２５℃での貯蔵後に異性化を示す。

【0024】

対象の炎症性疾患を治療する方法であって、治療有効量の、本明細書に記載の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片或いはその組成物を対象に投与する工程を含む方法も本明細書で提供される。種々の態様では、炎症性疾患は、喘息、アトピー性皮膚炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、鼻茸、慢性自然発症蕁麻疹、Ｉｇ駆動疾患、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、好酸球性胃炎、鼻茸を伴わない慢性副鼻腔炎及び特発性肺線維症（ＩＰＦ）からなる群から選択される。様々な実施形態において、喘息は、軽度、中等度又は重度の喘息である。種々の実施形態では、喘息は、重度の喘息である。様々な実施形態では、喘息は、好酸球性又は非好酸球性喘息である。

【0025】

様々な実施形態では、方法は、２週間ごと又は４週間ごとの間隔で組成物を投与することを含む。様々な実施形態では、組成物は、少なくとも４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年又はそれを超える期間にわたって投与される。

【0026】

様々な実施形態では、本開示は、複数の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む組成物を製造する方法を提供し、複数の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み、方法は、配列番号７で示されるＨＣＤＲ２のイソアスパラギン酸（ｉｓｏＡｓｐ）若しくは環状アスパラギン酸（ｃＡｓｐ）と比較したＨＣ位置５４のＬ－アスパラギン酸；配列番号８で示されるＨＣＤＲ３中の酸化Ｗ１０２と比較した非酸化ＨＣ Ｗ１０２；配列番号４で示されるＬＣＤＲ２のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較したＬＣ位置４９若しくは位置５０のＬ－アスパラギン酸；ＬＣ配列番号１２で示される脱アミド化Ｎ６５と比較したＬＣ Ｎ６５；又はｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較した配列番号５で示されるＬＣＤＲ３のＬＣ位置９１のＬ－アスパラギン酸の少なくとも１つを含むＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体について組成物を濃縮することを含む。ｃＡｓｐは、Ａｓｐ又はｉｓｏＡｓｐと比較してＨ_２Ｏの損失を特徴とするスクシンイミドとしても公知である。

【0027】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２．０％未満は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２．０％未満は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含む。

【0028】

抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物がさらに企図され、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み、組成物は、前記組成物の前記抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が数値的に１０^－８Ｍ以下のＫｄでＴＬＳＰに結合するために有効である、限定された含有量の異性化ＨＣ Ｄ５４（配列番号７）及び／又は限定された含有量の異性化ＬＣ Ｄ４９若しくはＤ５０（配列番号４）を含む。

【0029】

ＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物も提供され、ＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の６．７％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含むか；又は抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含むかの少なくとも１つである。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＬＣ Ｄ５０を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含む。様々な実施形態では、の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含む。

【0030】

ＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物も提供され、ＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の１２．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含むか；又は抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含むかの少なくとも１つである。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ４９又はＬＣ Ｄ５０を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含む。

【0031】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ Ｄ５４のＬ－アスパラギン酸とＬＣ Ｄ４９又はＤ５０のＬ－アスパラギン酸との組合せを含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ Ｄ５４のＬ－アスパラギン酸において、ｉｓｏＡｓｐのレベルよりも少なくとも６倍濃縮される。

【0032】

種々の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体は、配列番号１０又は配列番号２５～２８で示される重鎖可変領域と、配列番号１２又は配列番号２９～３６で示される軽鎖可変領域とを含み、且つ本明細書に記載される配列修飾の１つ以上を含む。

【0033】

本開示は、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物も提供し、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み；組成物の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の９８％超は、位置５４（配列番号７）のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較してＨＣ位置５４にＬ－アスパラギン酸を含むか；組成物の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９９％は、酸化Ｗ１０２と比較した非酸化ＨＣ Ｗ１０２（配列番号８）を含むか；組成物の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９７％は、位置４９若しくは５０（配列番号４）のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較してＬＣ位置４９若しくは５０にＬ－アスパラギン酸を含むか；組成物の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９９．１％は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５（配列番号１２）と比較したＬＣ Ｎ６５を含むか；又は組成物の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の少なくとも９９．１％は、位置９１（配列番号５）のｉｓｏＡｓｐ若しくはｃＡｓｐと比較してＬＣ位置９１にＬ－アスパラギン酸を含むかの少なくとも１つである。

【0034】

本開示は、本明細書に記載の炎症性疾患の治療に使用するための、本明細書に記載の抗ＴＳＬＰ抗体又はその抗原結合断片を含む組成物も提供する。特定の実施形態において、本開示は、炎症性疾患を治療するための薬剤の調製における、本明細書に記載される抗ＴＳＬＰ抗体又はその抗原結合断片を含む組成物の使用を提供する。

【0035】

シリンジ、例えば単回使用又は予め充填されたシリンジ、滅菌密封容器、例えばバイアル、ボトル、容器及び／又は前述の抗体若しくは組成物のいずれかを含むキット若しくはパッケージも、任意選択的に使用のための適切な説明書と共に企図される。

【0036】

本明細書に記載される各特徴若しくは実施形態又は組合せは、本発明の態様のいずれかの非限定的で例示的な例であり、したがって本明細書に記載される任意の他の特徴若しくは実施形態又は組合せと組み合わせることが可能であると意図されることが理解される。例えば、特徴が「一実施形態」、「ある実施形態」、「特定の実施形態」、「さらなる実施形態」、「特定の例示的な実施形態」及び／又は「他の実施形態」などの用語を用いて記載される場合、これらのタイプの実施形態のそれぞれは、あらゆる可能な組合せを列挙する必要なく、本明細書に記載される任意の他の特徴又は特徴の組合せと組み合わされることが意図される特徴の非限定的な例である。このような特徴又は特徴の組合せは、本発明の態様のいずれかに適用される。範囲内に含まれる値の例が開示される場合、これらの例のいずれも範囲の可能な端点として考えられ、このような端点間のあらゆる数値が想定され、上端点及び下端点のあらゆる組合せが想定される。

【0037】

本明細書における見出しは、読者の便宜のためのものであり、限定的であることを意図されない。本発明のさらなる態様、実施形態及び変形形態は、詳細な説明、及び／又は図面、及び／又は特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0038】

【図1】熱ストレスＡＭＧ１５７（４０Ｃ４Ｗ）及びＴＳＬＰのＳＥＣ親和性結合によって決定される結合に潜在的に影響を与える残基及び修飾を特徴付けるためのワークフローを示す。インシリコ配列分析を示す（上）。修飾を有する残基のいくつかの変異は、室温でＡＭＧ１５７の安定性を改善すると考えられた（下）。

【図2】抗原抗体複合体のＳＥＣによって決定されたＡＭＧ１５７のＴ０、４０Ｃ４Ｗ及び２２Ｍ５Ｃ＋２Ｍ２５Ｃ試料の潜在的属性の相対的存在量を示す。これらの属性は、インシリコ配列によるＴＳＬＰ安定性に潜在的に影響を与えると予測された（図１に示す）。白色、黒色及び灰色のバーは、それぞれＡＭＧ１５７ Ｔ０、４０Ｃ４Ｗ及び２２Ｍ５Ｃ＋２Ｍ２５Ｃ試料修飾率を表す。破線は、２％を表すように示されている。

【図3A】ＡＭＧ１５７ Ｔ０、ＡＭＧ１５７ ４０Ｃ４Ｗ、ＴＳＬＰ、ＡＭＧ１５７ Ｔ０＋ＴＳＬＰ混合物及びＡＭＧ１５７ ４０Ｃ４Ｗ＋ＴＳＬＰ混合物のＳＥＣ－ＵＶプロファイルを示す。５つのＳＥＣ－ＵＶピーク領域は、ピーク形状及び分子量に基づいて割り当てられる。ピーク３は、ＴＳＬＰとのＡＭＧ１５７の結合画分を表し、ピーク５は、ＡＭＧ１５７の非結合画分に対応する。割り当てられた各ピークのイラストは、対応するピークの上に示されている。

【図3B】ＳＥＣ結合の結合画分及び非結合画分における５つの属性の修飾率を示す。

【図4】ＴＳＬＰ結合に影響を与えるためにＡＭＧ１５７の属性が統計学的にどのように分布するかを示すボルケーノプロットである。右上隅に示される属性は、ＴＳＬＰ結合に潜在的に影響を与えるＡＭＧ１５７の修飾である。Ｘ軸は、非結合と結合との間の変化倍数のｌｏｇ２値であり、ｙ軸は、統計学的有意性を表すｐ値の－ｌｏｇ１０値である。灰色の領域は、バックグラウンドと見なされる。

【図5A】インシリコ配列分析に基づいて潜在的に重要であると考えられた１０残基中の結合ＡＭＧ１５７画分及び非結合ＡＭＧ１５７画分の修飾率を示す。しかし、抗体－抗原のＳＥＣにより、非結合画分と結合画分との修飾の比は、統計的に異ならないことが明らかになった。修飾は、抗体－抗原法のＳＥＣによって測定される結合に影響を及ぼさないと仮定される。図５Ａ及び図５Ｂは、それぞれ０～５０％及び０～１％のパーセンテージスケールを有する。

【図5B】インシリコ配列分析に基づいて潜在的に重要であると考えられた１０残基中の結合ＡＭＧ１５７画分及び非結合ＡＭＧ１５７画分の修飾率を示す。しかし、抗体－抗原のＳＥＣにより、非結合画分と結合画分との修飾の比は、統計的に異ならないことが明らかになった。修飾は、抗体－抗原法のＳＥＣによって測定される結合に影響を及ぼさないと仮定される。図５Ａ及び図５Ｂは、それぞれ０～５０％及び０～１％のパーセンテージスケールを有する。

【図6】ＡＭＧ１５７ Ｔ０、４０℃４Ｗ及び５０℃１ＷのＳＥＣ－ＵＶプロファイルを示す。ＡＭＧ１５７ Ｔ０、４０℃４Ｗ及び５０℃１ＷのＳＥＣ－ＵＶプロファイルは、それぞれ黒色実線、青色点線及び赤色破線で示されている。ＡＭＧ１５７の溶出時間及び理論分子量に基づいて、約１０．５分で溶出するピークは、ＡＭＧ１５７（ＨＭＷ）の高分子量種として割り当てられ、約１５．５分で溶出するピークは、ＡＭＧ１５７のモノマーとして割り当てられる。積分ピーク面積によれば、４０℃４Ｗ及び５０℃１ＷにおけるＨＭＷ種の割合は、それぞれ約９％及び６７％であり、図の左上に示されている。

【図7A】５０Ｃ１Ｗストレス後のＡＭＧ１５７の属性がＨＭＷとモノマー種との間でどのように分布するかを示し、統計学的有意性を示すボルケーノプロットを示す。右上隅に示される属性は、５０Ｃ１ＷにおけるＨＭＷの形成に相関するＡＭＧ１５７の修飾である。Ｘ軸は、ＨＭＷとモノマー種との間の倍数変化のｌｏｇ２値であり、ｙ軸は、統計学的有意性を表すｐ値の－ｌｏｇ１０値である。灰色領域は、バックグラウンドノイズと見なされるが、より低い信頼度を有する真値を含み得る。

【図7B】ＡＭＧ１５７ ５０Ｃ１Ｗ試料のＨＭＷ種及びモノマーにおける２０の修飾の割合を示す。これらの２０個の修飾には、右上の白いコーナからの統計的に有意な修飾（アスタリスクを有する７個の修飾市場）及び隣接する「統計的有意性に近い灰色領域」からの修飾が含まれる。これらの２０個の修飾のそれぞれは、倍数変化及び有意性の比較的高い値を有する。これらの２０個の修飾についての倍数変化のｐ値の－ｌｏｇ１０及びｌｏｇ２値の合計は、４．６超であった。

【図8A】ペプチドマッピングによる異性化レベル測定並びに４０℃で４週間ストレスをかけた抗体原薬及び抗体の効力測定を示す。

【図8B】抗体のＣＥＸ－ＨＰＬＣプロファイルを示す。

【図8C】ペプチドマッピングによる化学修飾及び相対効力についてのＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗ試料のＣＥＸ画分の特性評価の従来の方法の結果を示す。

【図8D】貯蔵寿命の終わりに近い長期安定性研究の結果を示す。

【発明を実施するための形態】

【0039】

テゼペルマブによる治療は、日々の疾患活動を除去し、より多くの患者をステロイド不使用とすることができるか、又は喘息などの炎症性疾患の治療でのステロイドの使用の必要性を減少させることができるとさらに考えられる。

【0040】

特に明記しない限り、本明細書及び特許請求の範囲を含む本出願で使用される以下の用語は、下記の定義を有する。

【0041】

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、不定冠詞「１つの（ａ）」及び「１つの（ａｎ）」並びに定冠詞「その」は、文脈が明確に別段の指示をしない限り、複数及び単数の指示対象を含む。

【0042】

他に定義されない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。以下の参考文献は、本開示で使用される多くの用語の一般的な定義を当業者に提供するが、これらに限定されるものではない：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（２ｄ Ｅｄ．１９９４）；ＴＨＥ ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｗａｌｋｅｒ Ｅｄ．，１９８８）；ＴＨＥ ＧＬＯＳＳＡＲＹ ＯＦ ＧＥＮＥＴＩＣＳ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）；及びＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，ＴＨＥ ＨＡＲＰＥＲ ＣＯＬＬＩＮＳ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ（１９９１）。

【0043】

「約」又は「略」という用語は、当業者によって決定される特定の値に対する許容可能な誤差を意味し、これは、値がどのように測定又は決定されるかに部分的に依存する。特定の実施形態では、「約」又は「略」という用語は、１、２、３又は４標準偏差内であることを意味する。特定の実施形態では、「約」又は「略」という用語は、与えられた数値又は範囲の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％又は０．０５％内であることを意味する。「約」又は「略」という用語が一連の２つ以上の数値中の第１の数値に先行する場合には常に、「約」又は「略」という用語は、その一連の数値のそれぞれに適用されると理解される。

【0044】

用語「炎症性疾患」は、免疫系が自らの細胞又は組織を攻撃して異常な炎症を起こし、慢性的な痛み、発赤、腫れ、こわばり及び正常な組織の損傷などを引き起こす病状を指す。炎症性疾患としては、例えば、喘息、慢性消化性潰瘍、結核、歯周炎、副鼻腔炎、活動性肝炎、強直性脊椎炎、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、クローン病、潰瘍性大腸炎、変形性関節症、アテローム性動脈硬化症、全身性エリテマトーデス、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、鼻茸、慢性自然発症蕁麻疹、Ｉｇ駆動疾患（ＩｇＡ腎症及びループス腎炎など）、好酸球性胃炎、鼻茸を伴わない慢性副鼻腔炎、特発性肺線維症（ＩＰＦ）などが挙げられる。例示的な態様では、炎症性疾患は、喘息、アトピー性皮膚炎又はＣＯＰＤである。例示的な態様では、炎症性は、喘息であり、いくつかの場合、喘息は、重症喘息、好酸球性喘息、非好酸球性喘息又は低好酸球性喘息である。

【0045】

本明細書では、「喘息」という用語は、アレルギー性、非アレルギー性、好酸球性及び非好酸球性喘息を指す。

【0046】

本明細書では、「アレルギー性喘息」という用語は、１つ以上の吸入したアレルゲンによって誘発される喘息を指す。そのような患者は、喘息反応を誘発する１つ以上のアレルゲンに対して陽性のＩｇＥ蛍光酵素免疫アッセイ（ＦＥＩＡ）レベルを有する。ほとんどのアレルギー性喘息は、通常、Ｔｈ２型炎症に関連する。

【0047】

「非アレルギー性喘息」という用語は、診断時に低好酸球、低Ｔｈ２又は低ＩｇＥを有する患者を指す。「非アレルギー性喘息」を有する患者は、通常、地域に固有のアレルゲンを含むアレルゲンパネルに反応するＩｇＥ蛍光酵素免疫アッセイ（ＦＥＩＡ）で陰性である。低ＩｇＥに加えて、これらの患者は、多くの場合、診断時、好酸球数が低いか又は全くなく、且つＴｈ２数が低い。

【0048】

本明細書では、「重度の喘息」という用語は、良好な制御を維持するために、高強度の治療（例えば、ＧＩＮＡステップ４及びステップ５）を必要とするか、又は高強度の治療にもかかわらず良好な制御が達成されない喘息を指す（ＧＩＮＡ，Ｇｌｏｂａｌ Ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ Ａｓｔｈｍａ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｇｌｏｂａｌ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ ｆｏｒ Ａｓｔｈｍａ（ＧＩＮＡ）Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１２）。

【0049】

本明細書で使用される「好酸球性喘息」という用語は、スクリーニング血中好酸球数が３００細胞／μＬ以下又は２５０細胞／μＬ以下である喘息患者を指し、「低好酸球性」喘息は、２５０細胞／μＬ未満の血液又は血清を有する喘息患者を指す。代わりに、「低好酸球性」喘息は、３００細胞／μＬ未満の血液又は血清を有する喘息患者を指す。

【0050】

「Ｔヘルパー（Ｔｈ）１サイトカイン」又は「Ｔｈ１特異的サイトカイン」は、Ｔｈ１ Ｔ細胞によって発現され（細胞内に、且つ／又は分泌される）、ＩＦＮ－ｇ、ＴＮＦ－ａ及びＩＬ－１２を含むサイトカインを指す。「Ｔｈ２サイトカイン」又は「Ｔｈ２特異的サイトカイン」は、Ｔｈ２ Ｔ細胞によって発現される（細胞内に、且つ／又は分泌される）、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３及びＩＬ－１０を含むサイトカインを指す。「Ｔｈ１７サイトカイン」又は「Ｔｈ１７特異的サイトカイン」は、Ｔｈ１７ Ｔ細胞によって発現され（細胞内に、且つ／又は分泌される）、ＩＬ－１７Ａ、ＩＬ－１７Ｆ、ＩＬ－２２及びＩＬ－２１を含むサイトカインを指す。Ｔｈ１７細胞の特定の集団は、本明細書中に列挙したＴｈ１７サイトカインに加えてＩＦＮ－ｇ及び／又はＩＬ－２を発現する。多機能性ＣＴＬサイトカインには、ＩＦＮ－ｇ、ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－２及びＩＬ－１７が含まれる。

【0051】

「特異的に結合する」という用語は「抗原特異的」であり、「特異的」、「選択的結合剤」、「特異的結合剤」、「抗原標的」であるか又は抗原に対して「免疫反応性」があり、類似配列の他の抗原よりも高い親和性で標的抗原に結合する抗体又はポリペプチドを指す。本明細書では、本薬剤は、免疫細胞型、例えば、表面抗原（例えば、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３）、サイトカイン（例えば、ＴＳＬＰ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＦＮ－ｇ、ＴＮＦ－ａ）などを同定するのに有用な標的タンパク質に特異的に結合すると考えられる。種々の実施形態では、抗体は、標的抗原に特異的に結合するが、密接に関連する種のオルソログと交差反応することができ、例えば、抗体はヒトタンパク質であり得、密接に関連する霊長類タンパク質にも結合し得る。様々な実施形態では、ＴＬＳＰに特異的な免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、数値的に１０^－８Ｍ以下のＫｄで結合する。様々な実施形態では、本明細書に記載される抗ＴＳＬＰ抗体は、少なくとも１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、１０^－１３Ｍ以下の親和性（Ｋｄ）で結合する。

【0052】

「抗体」という用語は、それぞれ可変領域及び定常領域を含む、２本の重鎖及び２本の軽鎖からなる四量体糖タンパク質を指す。「重鎖」及び「軽鎖」は、実質的に完全長のカノニカル免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖を指す（例えば、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｔｒａｖｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．，２００１）を参照されたい）。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術又は無傷の抗体に酵素的若しくは化学的切断によって生成され得る。

【0053】

抗原結合タンパク質には、カノニカル四量体抗体の構造に構造変化を有し得る抗体、抗体断片及び抗体様タンパク質が含まれる。抗体「バリアント」は、公知の配列を有する親抗体と比較して抗体配列又は機能に構造変化を有し得る抗原結合タンパク質又はその断片を指す。抗体バリアントとしては、定常領域に変化を有するＶ領域又は代わりに任意選択的に非カノニカル法で、Ｖ領域を定常領域に付加することが挙げられる。例としては、多重特異性抗体（例えば、余分なＶ領域を有する二重特異性抗体）、抗原に結合することができる抗体断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ）、所望の生物学的活性を示す限り、上記を含むバイパラトピックペプチド及び組換えペプチドが挙げられる。

【0054】

抗体断片には、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、ＣＤＲグラフト化抗体結合領域、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体の断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、線状抗体；キレート化組換え抗体、トリボディ若しくはバイボディ、イントラボディ、ナノボディ、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、単一ドメイン抗体（ラクダ化抗体を含む）、ＶＨＨ含有抗体又はこれらの変異体若しくは誘導体並びに抗体が所望の生物学的活性を保持する限り、ポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチド、例えば１、２、３、４、５又は６個のＣＤＲ配列を含む抗体の抗原結合部分が含まれる。

【0055】

「結合価」は、エピトープを標的とする各抗体又は抗体断片上の抗原結合部位の数を指す。典型的な完全長ＩｇＧ分子又はＦ（ａｂ）２は、２つの同一の標的結合部位を有するという点で「二価」である。単一の抗原結合部位を有するＦ（ａｂ）’又はｓｃＦｃなどの「一価」抗体断片。三価又は四価の抗原結合タンパク質は、多価となるように操作することもできる。

【0056】

「モノクローナル抗体」は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に発生する可能な突然変異を除いて同一である。

【0057】

「ＴＳＬＰ活性を阻害する」という用語は、以下の任意の１つ以上を阻害することを含む：ＴＳＬＰのその受容体への結合；ＴＳＬＰ存在下のＴＳＬＰＲ発現細胞の増殖、活性化又は分化；ＴＳＬＰ存在下の分極アッセイにおけるＴｈ２サイトカイン産生の阻害；ＴＳＬＰ存在下の樹状細胞の活性化又は成熟；及びＴＳＬＰ存在下の肥満細胞サイトカインの放出。例えば、米国特許第７９８２０１６Ｂ２号明細書、カラム６及び実施例８並びに米国特許出願公開第２０１２／００２０９８８Ａ１号明細書、実施例７～１０を参照されたい。

【0058】

「試料」又は「生体試料」という用語は、本方法で使用するために対象から得た標本を指し、尿、全血、血漿、血清、唾液、痰、組織生検、脳脊髄液、インビトロ刺激を伴う末梢血単核細胞、インビトロ刺激を伴わない末梢血単核細胞、インビトロ刺激を伴う腸リンパ組織、インビトロ刺激を伴わない腸リンパ組織、腸洗浄、細気管支肺胞洗浄、鼻洗浄及び誘発痰を含む。

【0059】

「治療する」、「治療すること」及び「治療」という用語は、本明細書に記載の炎症性障害に関連する事象、疾患又は状態の臨床症状、発症又は進行を一時的又は永久的に部分的又は完全に排除、減少、抑制又は改善することを指す。関連分野で認識されているように、治療剤として使用される薬物は、所与の病状の重症度を低下させ得るが、有用な治療薬と見なされるために、疾患のあらゆる症状を消失させる必要はない。同様に、予防的に投与される治療は、存続可能な予防剤を構成するために、状態の発症を予防するのに完全に有効である必要はない。単に、疾患の影響を軽減すること（例えば、その症状の数又は重症度を軽減するか、又は別の処置の有効性を増大させるか、又は別の有益な効果を生じさせることにより）又は疾患が対象において発症するか若しくは悪化する可能性を低下させることで十分である。本発明の一実施形態は、特定の障害の重症度を反映する指標の、ベースラインを超える持続的改善を誘導するのに十分な量及び時間で、患者に治療薬を投与することを含む、治療の有効性を決定するための方法に関する。

【0060】

「治療有効量」という用語は、疾患又は障害に関連する疾患の症状又は兆候を改善又は軽減するのに有効な治療薬の量を指す。

【0061】

ＴＳＬＰ
胸腺間質性リンパ球新生因子（ＴＳＬＰ）は、炎症誘発刺激に応答して産生され、主に樹状細胞（Ｇｉｌｌｉｅｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９７：１０５９－１０６７，２００３；Ｓｏｕｍｅｌｉｓ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：６７３－６８０，２００２；Ｒｅｃｈｅ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：３３６－３４３，２００１），ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ（Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０４：２５３－２５８，２００７）ａｎｄ ＣＤ３４＋ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓ（Ｓｗｅｄｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ ２０１７；１６９：１３－３４）。ＴＳＬＰは、インターロイキン（ＩＬ）－７受容体アルファ（ＩＬ－７Ｒα）鎖及び一般的なγ鎖様受容体（ＴＳＬＰＲ）からなるヘテロダイマー受容体を介してシグナル伝達する（Ｐａｎｄｅｙ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：５９－６４，２０００；Ｐａｒｋ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９２：６５９－６６９，２０００）。

【0062】

ヒトＴＳＬＰ ｍＲＮＡ（Ｂｒｉｇｈｔｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８；１２１：５－１０；ｑｕｉｚ １－２；Ｏｒｔｅｇａ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７１：１１９８－２０７）及びタンパク質レベル（前出のＯｒｔｅｇａ ｅｔ ａｌ．）は、対照と比較して喘息個体の気道で増加し、この発現の大きさは疾患重症度と相関する（前出のＢｒｉｇｈｔｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．）。最近の研究は、ヒトＴＳＬＰ遺伝子座における一塩基多型と、喘息、アトピー性喘息及び気道過敏症からの保護との関連を実証しており、これはＴＳＬＰ遺伝子発現の差次的調節が疾患感受性に影響を及ぼし得ることを示唆している（Ｏｒｔｅｇａ ｅｔ ａｌ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１４；３７１：１１９８－２０７；Ｔｏ ｅｔ ａｌ．ＢＭＣ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ２０１２；１２：２０４）。これらのデータは、ＴＳＬＰを標的とすることで、喘息に関与する複数の生物学的経路を阻害し得ることを示唆している。

【0063】

ＴＳＬＰの初期の非臨床研究では、ＴＳＬＰが気道上皮細胞又は間質細胞から解放された後、それが肥満細胞、樹状細胞及びＴ細胞を活性化してＴｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ－４／１３／５）を放出すると示唆されていた。最近発表されたヒトデータでは、重度の喘息において、組織ＴＳＬＰ遺伝子と、タンパク質発現、Ｔｈ２遺伝子シグネチャスコア及び組織好酸球との間に良好な相関が示された。したがって、抗ＴＳＬＰ標的療法は、Ｔｈ２型炎症を有する喘息患者に有効であり得る（Ｓｈｉｋｏｔｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２９（１）：１０４－１１，２０１２）。

【0064】

他の研究からのデータでは、ＴＳＬＰは気道平滑筋と肥満細胞との間のクロストークなどのＴｈ２非依存経路を介して気道炎症を促進し得ることが示唆されている（Ａｌｌａｋｈｖｅｒｄｉ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２３（４）：９５８－６０，２００９；Ｓｈｉｋｏｔｒａ ｅｔ ａｌ．，上掲）。ＴＳＬＰは、Ｔ細胞の誘導も促進して、Ｔｈ－１７－サイトカイン産生細胞に分化させ、その結果、より重度の喘息で一般的に見られる好中球性炎症を増加させ得る（Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ．３９（１）：８９－１００，２００９）。これらのデータ及び他の新たな証拠は、ＴＳＬＰを遮断することが、限定されないが、Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ－４／１３／５）を含むものを含む複数の生物学的経路を抑制するのに役立ち得ることを示唆する。

【0065】

抗体
ＴＳＬＰに特異的な抗体又は抗体バリアント又は抗原結合タンパク質は、重度の喘息、好酸球性喘息、非好酸球性／低好酸球性及び本明細書に記載の他の形態の喘息を含む喘息、アトピー性皮膚炎及びＣＯＰＤの治療において有用であると考えられる。

【0066】

標的抗原、例えばＴＳＬＰに結合する抗体及び抗体変異体又は断片などの特異的結合剤は、本発明の方法において有用である。一実施形態では、特異的結合剤は抗体である。抗体は、モノクローナル（ＭＡｂ）；組換え；キメラ；相補性決定領域（ＣＤＲ）グラフト化などのヒト化；ヒト；単鎖を含む抗体変異体；及び／又は二重特異性；並びにそれらの断片；変異体；又は誘導体であり得る。抗体断片は、目的のポリペプチド上のエピトープに結合する抗体のそうした部分を含む。このような断片の例としては、完全長抗体の酵素的切断によって生成されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）断片が挙げられる。他の結合断片としては、抗体可変領域をコードする核酸配列を含む組換えプラスミドの発現などの、組換えＤＮＡ手法によって生成される断片が挙げられる。

【0067】

モノクローナル抗体は、治療薬又は診断薬として使用するために修飾され得る。一実施形態は、重鎖（Ｈ）及び／又は軽鎖（Ｌ）の一部が特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、又は相同であり、鎖の残りは、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一であるか、又は相同である「キメラ」抗体である。所望の生物学的活性を示す限り、そのような抗体の断片も含まれる。米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１－５５を参照されたい。

【0068】

別の実施形態では、モノクローナル抗体は、「ヒト化」抗体である。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当技術分野でよく知られている。米国特許第５，５８５，０８９号明細書及び同第５，６９３，７６２号明細書を参照されたい。一般的に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は、例えば、齧歯動物の相補性決定領域の少なくとも一部をヒト抗体の対応する領域に置換することにより、当技術分野で記述されている方法を使用して（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－３６）実施することができる。

【0069】

ＴＳＬＰに結合するヒト抗体バリアント（抗体断片を含む）も本発明に包含される。内因性免疫グロブリンを産生せずにヒト抗体のレパートリーを産生できる遺伝子導入動物（例えば、マウス）を使用して、そのような抗体は、任意選択的に担体に結合体化されたポリペプチド抗原（すなわち少なくとも６つの連続するアミノ酸を有する）による免疫化によって産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：２５５１－５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５－５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３を参照されたい。ＰＣＴ出願ＰＣＴ／米国特許第９６／０５９２８号明細書及びＰＣＴ／米国特許第９３／０６９２６号明細書も参照されたい。さらなる方法は、米国特許第５，５４５，８０７号明細書、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第９１／２４５号明細書及びＰＣＴ／英国特許出願公開第８９／０１２０７号明細書並びに欧州特許第５４６０７３Ｂ１号明細書及び欧州特許出願公開第５４６０７３Ａ１号明細書に記載されている。ヒト抗体は、宿主細胞中で組換えＤＮＡの発現又は本明細書に記載のハイブリドーマ細胞中での発現によって産生することもできる。

【0070】

キメラ、ＣＤＲグラフト化及びヒト化抗体並びに／又は抗体変異体は、通常、組換え法によって生成される。抗体をコードする核酸を宿主細胞に導入し、本明細書に記載の材料及び手順を用いて発現させる。好ましい実施形態では、抗体は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物宿主細胞中で産生される。モノクローナル（例えば、ヒト）抗体は、宿主細胞中で組換えＤＮＡの発現又は本明細書に記載のハイブリドーマ細胞中での発現によって産生し得る。

【0071】

抗ＴＳＬＰ抗体テゼペルマブは、米国特許第７，９８２，０１６号明細書及び米国特許出願公開第１５／９５１，６０２号明細書に記載されている。ストレスを受けた貯蔵条件下、例えば４０℃で４週間（４０Ｃ４Ｗ）又は５０℃で１週間（５０Ｃ１Ｗ）では、テゼペルマブ抗体上の残基は、抗体安定性に有害な異性化、脱アミド又は酸化などの変化を受けることが本明細書で発見された。抗ＴＳＬＰ抗体テゼペルマブＣＤＲ（配列番号３～８）又は可変領域（配列番号１０及び１２）の安定性低下の原因として同定された残基には、ＣＤＲＨ１ Ｍ３４、ＣＤＲＨ２ Ｗ５２、ＣＤＲＨ２ Ｄ５４、ＣＤＲＨ２ Ｎ５７、ＣＤＲＨ２ Ｄ６２、ＣＤＲＨ３ Ｗ１０２、ＦＲＨ１ Ｎ２５、ＦＲＨ１ Ｎ２６、ＣＤＲＬ２ Ｄ４９、ＣＤＲＬ２ Ｄ５０、ＦＲＬ２ Ｎ６５、ＣＤＲＬ３ Ｗ９０、ＣＤＲＬ３ Ｄ９１、ＣＤＲＬ３ Ｓ９２、Ｓ９３、Ｓ９４、ＣＤＲＬ３ Ｄ９５が含まれる。テゼペルマブ中の残基の番号付けは、それぞれ配列番号１０及び１２に記載の重鎖及び軽鎖配列に基づく。

【0072】

本方法において有用な抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質（その断片を含む）は、抗ＴＳＬＰ抗体であって、ａ．軽鎖可変ドメインであり：ｉ．配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；ｉｉ．配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；ｉｉｉ．配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン、並びにｂ．重鎖可変ドメインであり：ｉ．配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；ｉｉ．配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及びｉｉｉ．配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体を含み、抗体又は抗体バリアントは、配列番号２のアミノ酸２９～１５９で示されるＴＳＬＰポリペプチドに特異的に結合する。

【0073】

抗体又は抗体バリアントも企図され、抗体又は抗体バリアントは、ａ．軽鎖可変ドメインであって、以下からなる群：ｉ．配列番号１２に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸の配列；ｉｉ．配列番号１１に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列；ｉｉｉ．配列番号１１からなるポリヌクレオチドの相補体に中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸の配列から選択される軽鎖可変ドメイン；並びにｂ．重鎖可変ドメインであり、以下からなる群：ｉ．配列番号１０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸配列；ｉｉ．配列番号９に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列；ｉｉｉ．配列番号９からなるポリヌクレオチドの相補体と中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列から選択される重鎖可変ドメイン；又はｃ．（ａ）の軽鎖可変ドメイン及び（ｂ）の重鎖可変ドメインを含み、抗体又は抗体バリアントは、配列番号２のアミノ酸２９～１５９で示されるＴＳＬＰポリペプチドに特異的に結合する。

【0074】

テゼペルマブは、例示的な抗ＴＳＬＰ抗体であり、ａ．ｉ．配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；ｉｉ．配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；ｉｉｉ．配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン、並びにｂ．ｉ．配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；ｉｉ．配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及びｉｉｉ．配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0075】

テゼペルマブは、配列番号１１で示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる、配列番号１２で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン；及び配列番号９で示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる、配列番号１０で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインも含む。

【0076】

テゼペルマブは、ＩｇＧ２抗体である。ＩｇＧ２鎖を含むテゼペルマブの完全長重鎖及び軽鎖の配列は、それぞれ配列番号３７及び３８に記載されている。

【0077】

種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又はその抗体変異体は、二価であり、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合抗体断片、一本鎖抗体、単量体抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ断片、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体及びＩｇＧ４抗体からなる群から選択される。

【0078】

種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体変異体は、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ断片、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖからなる群から選択され、その用量は結合部位が二価抗体によって投与される場合と等モルであるように調節される。

【0079】

抗体又は抗体変異体は、ＩｇＧ２抗体であると考えられる。ヒトＩｇＧ２定常領域の例示的な配列は、ＵｎｉｐｒｏｔデータベースからＵｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ０１８５９として入手可能であり、参照により本明細書に組み込まれる。他の抗体の重鎖及び軽鎖の定常領域に関する配列情報を含む情報は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースを介して並びに抗体工学及び産生の分野の技術者によく知られた他のデータベースを介して公に利用可能でもある。

【0080】

特定の実施形態では、抗体の誘導体は、親ポリペプチドのアミノ酸配列と比較してグリコシル化部位の数及び／又はタイプが変化した、四量体型のグリコシル化抗体を含む。ある特定の実施形態では、バリアントは、天然タンパク質よりも数が多い又は少ないＮ結合グリコシル化部位を含む。代わりに、この配列を削除する置換によって既存のＮ結合糖鎖が除去される。また、１つ以上のＮ結合グリコシル化部位（典型的には天然に存在するもの）が削除されて、１つ以上の新しいＮ結合部位が生成される、Ｎ結合糖鎖の再配置がもたらされる。さらなる好ましい抗体変異体には、親アミノ酸配列と比較して、１つ以上のシステイン残基が別のアミノ酸（例えば、セリン）から削除されているか、又は別のアミノ酸（例えば、セリン）に置換されているシステイン変異体が含まれる。システイン変異体は、不溶性封入体の単離後など、抗体が生物学的に活性な立体構造に再折り畳みしなければならない場合に有用であり得る。システインバリアントは一般に、天然タンパク質よりも少ないシステイン残基を有し、典型的には不対システインから生じる相互作用を最小限に抑えるために偶数個のシステイン残基を有する。

【0081】

所望のアミノ酸置換（保存的であるか又は非保存的であるかにかかわらず）は、そのような置換を所望する時点で当業者が決定し得る。特定の実施形態では、アミノ酸置換は、ヒトＴＳＬＰに対する抗体の重要な残基を同定するか、又は本明細書に記載のヒトＴＳＬＰに対する抗体の親和性を増加又は減少させるために使用することができる。

【0082】

特定の実施形態によれば、好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させ、（２）酸化に対する感受性を低下させ、（３）結合親和性を変化させ、（４）高分子量（ＨＭＷ）種の形成を阻害し、且つ／又は（５）そのようなポリペプチドに他の物理化学的又は機能的特性を付与又は修飾する。特定の実施形態によれば、単一又は複数のアミノ酸置換（ある特定の実施形態では保存的アミノ酸置換）は、天然の配列（ある特定の実施形態では、分子間接触を形成するドメインの外側のポリペプチドの部分）において行われ得る。特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換は、典型的には、親配列の構造的特徴を実質的に変化させ得ない（例えば、置換アミノ酸により、親配列中に存在するヘリックスが破壊されるか、又は親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造が破壊される傾向があるべきではない）。当業者に認識されるポリペプチドの二次構造及び三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；及びＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５（１９９１）に記載があり、それぞれが参照により本明細書中に組み込まれる。

【0083】

安定性及びタンパク質結合に寄与する属性の同定
タンパク質の結合及び活性に寄与する属性を決定するために、本明細書に記載の抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質は、その構造の変化、例えば治療用タンパク質のアミノ酸の構造の変化をもたらし、治療用タンパク質の種の形成をもたらす状態に置かれる。例示的な態様では、アミノ酸の変化した構造は、「属性」と呼ばれ、その化学的同一性又は属性型及び抗原結合タンパク質のアミノ酸配列内の位置（例えば、その属性が存在するアミノ酸の位置）に関して特徴付けられ得る。例えば、アスパラギン残基及びグルタミン残基は、脱アミド化に対する感受性を示す。タンパク質のアミノ酸配列の１０位の脱アミド化アスパラギンは、属性の一例である。特定のアミノ酸の例示的な属性型の一覧を表Ａに示す。したがって、本明細書で使用される「構造」は、表Ａに列挙した属性型又は表Ａに列挙した２つ以上の属性型の組合せを含み得るか、実質的にそれから構成され得るか又はそれから構成され得る。属性は、構造の例であり、特に明記しない限り、本明細書で「構造」に言及する場合には常に、構造の例として属性が企図されることが理解されるであろう。例えば、高分子量種（ＨＭＷ）及び断片も属性の例である。

【0084】

【表1】

【0085】

免疫グロブリン又はその断片として、抗体又は抗原結合タンパク質は複数のアミノ酸を含み、本明細書に記載の抗体又は抗原結合タンパク質は、２つ以上の属性（例えば、変更された構造を有する２つ以上のアミノ酸）を有し得、その属性プロファイルに関して記載され得る。本明細書で使用される場合、用語「属性プロファイル」は、抗原結合タンパク質の属性の一覧を指す。様々な例において、属性プロファイルは、任意選択的に、治療用タンパク質の天然構造に対して化学的同一性又は属性型、例えば脱アミドを提供する。様々な例において、属性プロファイルは、属性の位置、例えば属性が存在するアミノ酸の位置を提供する。いくつかの態様における属性プロファイルは、抗原結合タンパク質に存在する全ての属性の説明を提供する。他の態様では、属性プロファイルは、タンパク質に存在する一部の属性の説明を提供する。例えば、属性プロファイルは、タンパク質の特定の部分、例えば定常領域、可変領域、ＣＤＲに存在する属性のみを提供し得る。抗体又は抗原結合タンパク質などの治療用タンパク質の種は、タンパク質上に存在する属性によって特徴付けられる。標的結合タンパク質の種は、異なる属性プロファイルを有することにより、同じタンパク質の別の種と異なり得る。２つの治療用タンパク質が異なる属性プロファイルを有する場合、これらの治療用タンパク質は、治療用タンパク質の２つの異なる種を表す。２つの治療用タンパク質が同一の属性プロファイルを有する場合、これらの治療用タンパク質は、治療用タンパク質の同じ種と見なされる。

【0086】

様々な例において、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質は、その構造の変化、例えば１つ以上の属性の形成をもたらす状態に置かれ、構造の変化は、その標的に対する治療用タンパク質の親和性を変化させる。様々な態様において、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質は、その構造の変化、例えば１つ以上の属性の形成をもたらす状態に置かれ、構造の変化は、その標的に対する抗原結合タンパク質の親和性を低下させる。いくつかの態様における低下した親和性は、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質が標的と相互作用する（例えば、結合する）能力の部分的又は全体的な喪失をもたらす。様々な例では、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質が標的と相互作用する（例えば、結合する）能力の部分的又は全体的な喪失は、最終的に抗原結合タンパク質の有効性を低下させる。代替的な例では、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質は、その構造の変化、例えば１つ以上の属性の形成をもたらす状態に置かれ、構造の変化は、その標的に対する免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質の親和性を変化させない。種々の態様において、構造の変化は、その標的に対するタンパク質の親和性を低下させない。いかなる特定の理論にも束縛されないが、本開示の方法は、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質と標的との間の相互作用に影響を及ぼす免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質の属性を、相互作用に影響を及ぼさない属性から精密且つ正確に好都合に区別する。

【0087】

様々な態様では、本明細書の組成物は、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の種の集団を含む。様々な例では、集団は、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の均一な集団であり、任意選択的に、組成物試料中に存在する各タンパク質は同じ種である。様々な例において、集団は、本明細書に記載の属性を有する免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の少なくとも２つの異なる種を含む不均一な集団である。様々な態様では、不均一集団は、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ又はそれを超える異なる種を含む。任意選択的に、異種集団は、タンパク質の７つを超える、８つを超える、９つを超える、１０を超える、２０を超える、３０を超える、４０を超える、５０を超える異なる種を含む。いくつかの態様では、集団の各種は、固有の属性プロファイルを有する。例示的な例では、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の種が、組成物中に存在する唯一のタンパク質である。いくつかの態様では、組成物は、（ｉ）集団免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片、及び（ｉｉ）薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤又はその組合せを含む。いくつかの実施形態では、不均一集団の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％が、本明細書に記載の属性を含む。いくつかの実施形態では、不均一集団の免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片の２０％、１５％、１０％、５％又は１％以下が、本明細書に記載の属性を含む。

【0088】

例示的態様において、本方法は、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片試料にストレスを印加することを含む。様々な場合、ストレスは、免疫グロブリンのアミノ酸、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片若しくは標的の構造の少なくとも１つの変化をもたらす任意の状態であり得、例えば、ストレスは、免疫グロブリンのアミノ酸、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片若しくは標的において少なくとも１つの属性の形成をもたらす任意の状態であり得る。任意選択的に、ストレスは、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片若しくは標的の２つ以上のアミノ酸の構造の変化をもたらし、例えば、ストレスは、形成又は２つ以上の属性（例えば、少なくとも若しくは約２、少なくとも若しくは約３、少なくとも若しくは約４、少なくとも若しくは約５、少なくとも若しくは約６、少なくとも若しくは約７、少なくとも若しくは約８、少なくとも若しくは約９、少なくとも若しくは約１０又はそれを超える属性）をもたらす。様々な例におけるストレスは、ストレスの印加前に免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片若しくは標的に存在しない１つ以上の属性の形成をもたらす。したがって、いくつかの態様では、ストレスの印加は、ストレスの印加前に試料中に存在しなかった免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片若しくは標的の種の形成をもたらす。

【0089】

例示的な態様では、ストレスは、任意選択的に、１つ以上の緩衝剤又は製剤中における、例えば２５℃、４０℃、５０℃の高い温度への暴露である。例示的な例では、このような高温への暴露は、加速ストレスプログラムを模倣する。

【0090】

任意選択的に、ストレスは、免疫グロブリン、抗体又は抗原結合タンパク質と標的との間で形成された複合体の約５％～約３０％、約１０％～約３０％、約１５％～約３０％、約２０％～約３０％、約２５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％又は約５％～約１０％を分解又は解離させる。様々な態様では、ストレスは、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片とその標的との間の相互作用レベルの低下を引き起こす。いくつかの態様では、ストレスは、ストレスのない対応する条件における相互作用と比較して、相互作用を約１０％～約５０％（例えば、約１０％～約４５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％、約１０％～約１５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％又は約１０％～約１５％）減少させる。いくつかの態様では、ストレスは、抗体又は抗原結合タンパクのその標的に対するＫ_Ｄを増加させ、このＫ_Ｄは、より弱い結合に関連する。いくつかの態様では、ストレスは、非結合抗体又は抗原結合タンパク質の量を１０％～約５０％（例えば、約１０％～約４５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％、約１０％～約１５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％又は約１０％～約１５％）増加させる。特定の理論に束縛されるものではないが、本明細書に開示される方法において加えられるストレスは、製造中、貯蔵中及びヒト循環（ヒト対象における静脈内空間又は皮下空間）において作製され得る種の検出を増強させるための豊富且つ多様な種を得る抗体又は抗原結合タンパク質種のより迅速且つより強固で再現可能な方法での生成をもたらす。

【0091】

分離
例示的態様において、本開示の方法は、異なる種の抗原を含む混合物を少なくとも２つの画分に分離することを含む。いくつかの態様では、混合物を複数（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）の画分に分離する。いくつかの態様では、本明細書中に開示される方法の分離工程は、抗原結合タンパク質及びその標的の天然のフォールディング、高次構造及び結合能力を保存する。様々な態様では、混合物は、非結合抗体又は抗原結合タンパク質又は標的を含む非結合画分と、抗体／抗原結合タンパク質－標的複合体を含む結合画分とに分離される。

【0092】

混合物を画分に分離する好適な方法及び技術は、当技術分野で知られている。例えば、Ｃｏｓｋｕｎ，Ｎｏｒｔｈ Ｃｌｉｎ Ｉｓｔａｎｂ ３（２）：１５６－１６０（２０１６）；Ｓｎｙｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒａｃｔｉｃａｌ ＨＰＬＣ Ｍｅｔｈｏｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．１９９７；Ｓｎｙｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｍｏｄｅｒｎ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ，２０１０；Ｈｅｆｔｍａｎｎ，Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ，６ｔｈｅｄ．，Ｖｏｌｕｍｅ６９Ａ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，２００４；Ｍｏｒｉ ａｎｄ Ｂａｒｔｈ，Ｓｉｚｅ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，１９９９を参照されたい。いくつかの態様では、分離は、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）及び／又はキャピラリーゾーン電気泳動（ＣＺＥ）など、電荷に基づくか、又は例えば逆相（ＲＰ；例えば、ＲＰ－ＨＰＬＣ）及び疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）など、疎水性に基づく。種々の態様では、分離は、例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ；例えば、ＳＥ－ＨＰＬＣ）、ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）、ドデシル硫酸ナトリウムを用いるキャピラリー電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ）など、サイズに基づく。本明細書に記載の方法は、Ｍｅｔ又はＴｒｐ残基の生成物酸化、断片化／クリッピング、Ａｓｐの異性化、脱アミド化、Ｎ末端でのピログルタミン酸の形成を検出するために使用される。種々の実施形態において、混合物は、サイズ、電荷、疎水性、捕捉分子に対する親和性又はそれらの組合せに基づいて混合物の成分を分離する技術を使用して少なくとも２つの画分に分離される。種々の例において、この技術は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、アフィニティクロマトグラフィー、ビーズ若しくは細胞を使用する沈殿、フリーフロー分画（ＦＦＦ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）又は超遠心分離（ＵＣ）である。任意選択的に、混合物は、サイズに基づいて混合物の成分を分離する技術を使用して少なくとも２つの画分に分離され、任意選択的に、この技術は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）である。

【0093】

種々の態様では、混合物は、固体支持体、任意選択的にビーズ又は細胞に結合された捕捉分子に対する親和性に基づいて混合物の成分を分離する技術を使用して少なくとも２つの画分に分離される。種々の例において、混合物は、（ｉ）捕捉分子に結合されたビーズ又は細胞であって、その表面において捕捉分子を発現する細胞を含む容器、例えばチューブに混合物を加え、（ｉｉ）容器（例えば、チューブ）を遠心分離にかけて上清及びペレットを得、（ｉｉｉ）ペレットから上清を回収して非結合画分を得、（ｉｖ）ペレットから結合画分を溶液で放出させ、（ｖ）ペレット及び溶液を含む容器（例えば、チューブ）を遠心分離にかけて、結合画分を含む第２の上清及びビーズ又は細胞を含む第２のペレットを得、及び（ｖｉ）第２の上清を回収して結合画分を得ることによって分離される。いくつかの態様では、混合物は、（ｉ）捕捉分子に結合されたビーズを含む混合物をカラムに加えて、フロースルー及び結合画分を得、（ｉｉ）フロースルーを回収して非結合画分を得、（ｉｉｉ）ビーズから結合画分を溶液で放出させ、且つ結合画分を含む溶液を回収することによって分離される。好適な固体支持体としては、例えば、任意選択的にセルロース、シリカ、アルミナ、ガラス、プラスチック又はこれらの組合せから作製されたビーズ、樹脂、紙が挙げられる。例示的な態様では、固体支持体に結合された捕捉分子は、タンパク質である。捕捉分子は、標的と同一であり得る。有利には、捕捉分子は、特定の分子に限定されない。

【0094】

抗原結合タンパク質と標的との間の相互作用に影響を及ぼす免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又は標的の属性を同定する方法の様々な実施形態では、非結合画分及び結合画分のそれぞれについて、方法は、抗原結合タンパク質又は標的の種に存在する各属性の存在量を同定及び定量することを含み、非結合画分中の属性の存在量が結合画分中の属性の存在量よりも大きい場合、属性は抗原結合タンパク質と標的との間の相互作用に悪影響を及ぼす。種々の態様において、方法は、質量分析計を使用して、非結合画分及び結合画分のそれぞれにおける抗原結合タンパク質又は標的の種の各属性の存在量を特定及び定量する工程を含む。

【0095】

抗原結合タンパク質又は標的の種に存在する公知の属性が抗原結合タンパク質と標的との間の相互作用に及ぼす影響を決定する方法の様々な実施形態において、方法は、非結合画分及び結合画分のそれぞれについて、公知の属性の存在量を定量化することを含み、非結合画分中の公知の属性の存在量が結合画分中の公知の属性の存在量よりも大きい場合、公知の属性は、抗原結合タンパク質と標的との間の相互作用に悪影響を及ぼす。種々の態様において、この方法は、質量分析計を使用して、非結合画分及び結合画分のそれぞれにおける既知の属性の存在量を定量する工程を含む。

【0096】

安定性は、アミノ酸残基の化学修飾及び生物物理学的タンパク質修飾、例えば、製造、貯蔵及び／又は追加の若しくは代替のストレス条件中に起こり得るストレス条件中のＨＭＷ種の形成に対する耐性を指す。本明細書に記載される実施形態の方法及び免疫グロブリン、抗原結合タンパク質及びそれらの断片について、「安定性」及び／又は「ＨＭＷ」種は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して決定し得る。免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又は断片を含む組成物は、ＳＥＣ－ＵＶなどのＳＥＣによって分離し得る。ＳＥＣは、１００ｍＭリン酸ナトリウム及び２５０ｍＭ ＮａＣｌを含む移動相（ｐＨ６．８）を使用し得、流速は、０．５ｍｌ／分に設定され得、カラム温度は、３７℃に設定され得、実行時間は、３５分であり得、オートサンプラーは、４℃に設定され得る。ＳＥＣに適したカラムの例には、ジオール官能基を含み、平均直径が５μｍであり、平均孔径が約２５ｎＭ（例えば、ＴＯＳＯＨ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅからＧ３０００ＳＷｘｌカラムとして市販されている）のシリカ粒子を含むゲルカラムが含まれる。ＳＥＣ－ＵＶの場合、紫外／可視分光法（ＵＶ／ＶＩＳ）検出は、２１４ｎｍ及び２８０ｎｍで実行することができる。分離後、モノマー及びＨＭＷ種を表すピークは、ＳＥＣ溶出プロファイルの異なる時間に溶出することができることが理解されるであろう。

【0097】

安定性の測定の場合、ＳＥＣ分析のための組成物は、ストレス負荷された免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又は断片を含み得、これらは、高温で一定期間、例えば４０℃で４週間ストレス負荷され得る。４０℃で４週間は、一般的に、免疫グロブリン、抗原結合タンパク質及びその断片（貯蔵寿命安定性は、典型的には、２～８℃で２年（２Ｙ４Ｃ）、その後、地理的位置に応じて２５℃又は３０℃である室温で１ヶ月である）の貯蔵寿命安定性に十分に外挿されることに留意されたい。追加的又は代替的に、紫外光（２５℃で７日間、ｋｌｕｘ／ｈｒ冷却白色光及び１０Ｗ／ｍ^２ＵＶＡ光）、極端なｐＨ（ｐＨ８以上又は３．６以下）又は酸化試薬（例えば、０．１％Ｈ_２Ｏ_２、２５℃で５時間）をストレス源として使用し得る。本明細書で別段の記載がない限り又は科学的文脈により別段の必要がない限り、「安定性」の目的のためのストレスは、４０℃で４週間を指すと理解される。ストレス要因及びＳＥＣ分析に関する追加の情報は、例えば参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０２０／２４７７９０号パンフレットに見出すことができる。

【0098】

ＳＥＣ分析に続いて、ペプチドマッピングを任意選択的に行うことができ、結合種及び非結合種に関連するペプチド修飾を、例えば本明細書及び／又は国際公開国際公開第２０２０／２４７７９０号パンフレットに記載されているように特定し得る。ペプチドマッピングのために、溶出画分を、分子量カットオフ（例えば、１０ｋＤａ超）を有するフィルターを用いて回収し、７．５Ｍグアニジン溶出緩衝液で溶出し得る。抗原への結合に影響を及ぼす化学修飾を決定するために、ストレス負荷された免疫グロブリン（又は抗原結合タンパク質若しくはその断片）及び抗原を一緒に混合し、抗原結合複合体を先に溶出し、非結合免疫グロブリン（又は抗原結合タンパク質若しくはその断片）を後に溶出する際に分離することができる。ＨＭＷに影響を与えるか又はＨＭＷと相関する化学修飾を決定するために、モノマー種及びＨＭＷ種を収集することができる。記載された研究では、４０℃で１ヶ月間（４０Ｃ１Ｍ）の熱的強制ストレス及び関連する抗体の分解を使用した。ストレス負荷した抗体をその標的（ＴＳＬＰ）と混合し、混合物を抗体－標的複合体及び非結合抗体についてＳＥＣによって分離した。この適用されるＳＥＣ抗体－抗原法の２つの制限に留意すべきである。４０Ｃ１Ｍストレスは、２５Ｃ又は３０Ｃでの室温劣化と比較してより大きい劣化をもたらし得る。また、ある残基の分解／修飾は、別の残基の修飾を長距離のアロステリック相互作用によって引き起こされ得る。この効果は、構造が動的運動により適しているため、より高い温度で増加し得る。また、記載されたＳＥＣ抗原抗体法は、試料中の全ての種を分析する。これは、個々のピークでのＣＥＸ分離、それに続く特性評価を含む従来の方法と異なり、収集された種がより明確に定義され、１分子あたり２つ以上の修飾を有する「主ピーク間」の種が回避される。

【0099】

「親和性」又は「結合」は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法又は本明細書に記載のＳＥＣ結合親和性実験によっても決定し得ることが理解されるであろう。本明細書で別段の記載がない限り又は科学的文脈によってそうでないことが必要とされない限り、「親和性」は、ＳＰＲによって測定される親和性を指すと理解される。Ｋｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサシステムを使用してＳＰＲによって測定することができる。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システムによる分析は、表面に固定化分子（例えば、本明細書中に記載されるような抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質又はその断片）を有するチップからの抗原（例えば、ＴＳＬＰ）の結合及び解離を分析することを含み得る。１０^－６Ｍ未満の結合複合体は、ＳＰＲを用いて検出することができる。様々な実施形態では、ＳＰＲは、２０℃、２５℃、３０℃又は３７℃で行われ得る。

【0100】

組成物
様々な実施形態では、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含む複数の抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を含む組成物が提供され、イソアスパラギン酸（ｉｓｏＡｓｐ）も環状アスパラギン酸（ｃＡｓｐ）も含まない、配列番号７のＨＣ位置５４のＬ－アスパラギン酸；配列番号８の非酸化ＨＣ Ｗ１０２；ｉｓｏＡｓｐもｃＡｓｐも含まない、配列番号７のＬＣ位置４９又は５０にあるＬ－アスパラギン酸；脱アミド化Ｎ６５を含まない、配列番号１２で示されるＬＣ Ｎ６５；又はｉｓｏＡｓｐもｃＡｓｐも含まない、配列番号５のＬＣ位置９１のＬ－アスパラギン酸の少なくとも１つを含む。

【0101】

様々な実施形態では、複数の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片を含む組成物が提供され、複数の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列；配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列；及び配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列をそれぞれ含み；イソアスパラギン酸（ｉｓｏＡｓｐ）も環状アスパラギン酸（ｃＡｓｐ）も含まない、配列番号７のＨＣ位置５４のＬ－アスパラギン酸；配列番号８の非酸化ＨＣ Ｗ１０２；ｉｓｏＡｓｐもｃＡｓｐも含まない、配列番号４のＬＣ位置４９又は５０にあるＬ－アスパラギン酸；配列番号１２の脱アミド化ＬＣ Ｎ６５；又はｉｓｏＡｓｐもｃＡｓｐも含まない、配列番号５のＬＣ位置９１のＬ－アスパラギン酸の少なくとも１つを含む。

【0102】

様々な実施形態では、０．９％以下の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が異性化ＨＣ Ｄ５４を含む。様々な実施形態では、２％以下の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が酸化ＨＣ Ｗ１０２を含む。様々な実施形態では、０．９％以下の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が異性化ＬＣ Ｄ５０を含む。様々な実施形態では、０．５％以下の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含む。様々な実施形態では、０．９％以下の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が異性化ＨＣ Ｄ９１を含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ５４のＬ－アスパラギン酸とＬＣ ４９又は５０のＬ－アスパラギン酸との組合せを含む。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体は、ＨＣ５４のＬ－アスパラギン酸において、ｉｓｏＡｓｐのレベルよりも少なくとも６倍濃縮される。種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体は、ＩｇＧ２抗体である。

【0103】

一態様では、組成物は、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を含み、これは、（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列、（ｉｉ）配列番号４で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列、及び（ｉｉｉ）配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン、並びに（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号７で示される以下の残基Ｄ５４又はＧ５５の少なくとも１つに変異を有するアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び（ｉｉｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメインを含む。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列ＶＩＷＹＸ_１Ｘ_２ＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_２は、Ｇ又はＡである）（配列番号１３）を有する。任意選択的に、ＨＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＶＩＷＹＥＧＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＩＷＹＤＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）又はＶＩＷＹＥＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）。

【0104】

様々な実施形態において、ＨＣＤＲ２における変異は、Ｄ５４Ｅである。様々な実施形態において、ＨＣＤＲ２における変異は、Ｇ５５Ａである。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質又はその断片は、任意選択的に、配列番号４のＬＣＤＲ２ Ｄ４９、Ｄ５０又はＳ５１の残基の少なくとも１つに変異を含む。様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２の変異は、Ｄ４９Ｅ、Ｄ５０Ｅ又はＳ５１Ａの１つ以上である。様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２は、配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＲＰＳ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_３は、Ｓ又はＡである）（配列番号１７）を有する。任意選択的に、ＬＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＥＤＳＤＲＰＳ（配列番号１８）、ＤＥＳＤＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＥＳＤＲＰＳ（配列番号２０）、ＤＤＡＤＲＰＳ（配列番号２１）、ＤＥＡＤＲＰＳ（配列番号２２）、ＥＤＡＤＲＰＳ（配列番号２３）又はＥＥＡＤＲＰＳ（配列番号２４）。

【0105】

様々な実施形態では、組成物は、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を含み、これは、（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号４の以下の残基Ｄ４９、Ｄ５０又はＳ５１の少なくとも１つに変異を有するアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２配列；（ｉｉｉ）配列番号５で示されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；並びに（Ｂ）重鎖可変ドメインであって、（ｉ）配列番号６で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１配列；（ｉｉ）配列番号７で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２配列、及び（ｉｉｉ）配列番号８で示されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメインを含む。

【0106】

様々な実施形態では、ＬＣＤＲ２は、配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３ＤＲＰＳ（配列番号１７）（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_３は、Ｓ又はＡである）を有する。任意選択的に、ＬＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＥＤＳＤＲＰＳ（配列番号１８）、ＤＥＳＤＲＰＳ（配列番号１９）、ＥＥＳＤＲＰＳ（配列番号２０）、ＤＤＡＤＲＰＳ（配列番号２１）、ＤＥＡＤＲＰＳ（配列番号２２）、ＥＤＡＤＲＰＳ（配列番号２３）又はＥＥＡＤＲＰＳ（配列番号２４）。様々な実施形態において、ＬＣＤＲ２における変異は、Ｄ４９Ｅである。様々な実施形態において、ＬＣＤＲ２における変異は、Ｄ５０Ｅである。様々な実施形態において、ＬＣＤＲ２における変異は、Ｓ５１Ａである。様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、任意選択的に、配列番号７で示されるＨＣＤＲ２の以下の残基Ｄ５４又はＧ５５の１つに変異を含む。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２の変異は、配列番号７のＤ５４Ｅ又はＧ５５Ａの１つ以上である。様々な実施形態では、ＨＣＤＲ２は、配列ＶＩＷＹＸ_１Ｘ_２ＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（ここで、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、及びＸ_２は、Ｇ又はＡである）（配列番号１３）を有する。任意選択的に、ＨＣＤＲ２は、以下の配列を有する：ＶＩＷＹＥＧＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＩＷＹＤＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５）又はＶＩＷＹＥＡＳＮＫＨＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６）。

【0107】

様々な実施形態では、組成物は、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片を含み、これは、（Ａ）軽鎖可変ドメインであって、ｉ．配列番号１２に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸の配列；ｉｉ．配列番号１１に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列；又はｉｉｉ．配列番号１１からなるポリヌクレオチドの相補体に中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸の配列からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン；又は（Ｂ）ｉ．配列番号１０に対して少なくとも８０％同一のアミノ酸の配列；ｉｉ．配列番号９に対して少なくとも８０％同一のポリヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸の配列；又はｉｉｉ．配列番号９からなるポリヌクレオチドの相補体に中程度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸の配列からなる群から選択される重鎖可変ドメイン；又は（Ｃ）（Ａ）の軽鎖可変ドメイン及び（Ｂ）の重鎖可変ドメインを含み、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、抗ＴＳＬＰ抗原結合タンパク質若しくはその断片のＣＤＲの１つ以上を保持し、且つ配列番号７のＨＣＤＲ２ Ｄ５４若しくはＧ５５又は配列番号４のＬＣＤＲ２ Ｄ４９、Ｄ５０若しくはＳ５１の１つ以上に変異を含む。

【0108】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、

【化1】

（ＨＣＤＲ２に下線を付す）
（式中、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｇ又はＡであり、任意選択的に、

【化2】

又はそれらの混合物である）のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。

【0109】

様々な実施形態では、抗ＴＳＬＰ免疫グロブリン、抗原結合タンパク質若しくはその断片又は抗体若しくはその断片は、

【化3】

（ＬＣＤＲ１～３に下線を付す）
（式中、Ｘ_１は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_２は、Ｄ又はＥであり、Ｘ_３は、Ｓ又はＡであり、任意選択的に、

【化4】

又はそれらの混合物である）のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。

【0110】

本明細書に記載の配列、例えば配列番号３～８及び配列番号１３～２４に記載の１つ以上のＣＤＲ並びに配列番号１０及び１２及び配列番号２５～３６に記載の１つ以上の可変領域を有するＴＳＬＰ抗体をそれぞれ含む抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物も提供され、組成物は、組成物の抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体が１０^－８Ｍ以下の数値ＫｄでＴＬＳＰに結合するのに有効な、制限された含有量の異性化ＨＣ Ｄ５４及び／又は制限された含有量の異性化ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０を含む。様々な実施形態では、本明細書に記載の抗ＴＳＬＰ抗体は、少なくとも１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、１０^－１０Ｍ、１０^－１１Ｍ、１０^－１２Ｍ、１０^－１３Ｍ以下の親和性（Ｋｄ）で結合する。

【0111】

本明細書に記載の配列、例えば、配列番号３～８若しくは配列番号１３～２４で示されるＣＤＲ及び／又は配列番号１０及び１２若しくは配列番号２５～３６で示される可変領域を有するＴＳＬＰ抗体をそれぞれ含む抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含む組成物も提供され、組成物は、ＩｇＧ２抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体を含み、抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＨＣ Ｄ５４を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の２％以下は、酸化ＨＣ Ｗ１０２を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ５０を含むか；抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．５％以下は、脱アミド化ＬＣ Ｎ６５を含むか；又は抗ＴＳＬＰモノクローナル抗体の０．９％以下は、異性化ＬＣ Ｄ９１を含むかの少なくとも１つである。

【0112】

いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の製剤の一部である。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の製剤を製造するために使用される原薬である。

【0113】

投与方法
一態様では、本開示の方法は、本明細書に記載の治療用抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体を、任意選択的に薬学的に許容される担体又は賦形剤中に入れて投与することを含む。特定の実施形態において、医薬組成物は、滅菌組成物である。

【0114】

喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アトピー性皮膚炎、好酸球性食道炎（ＥｏＥ）、鼻ポリープ、慢性自発性蕁麻疹、Ｉｇ誘発性疾患、ＩｇＡ腎症、ループス腎炎、好酸球性胃炎、鼻ポリープを伴わない慢性副鼻腔炎及び特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの炎症性疾患、状態又は障害を、本明細書に記載の抗ＴＳＬＰ抗体又は抗原結合タンパク質又はその断片で治療する方法が本明細書で企図される。様々な実施形態において、疾患、状態又は障害は、重症喘息、好酸球性又は非好酸球性喘息及び低好酸球性喘息を含む喘息である。

【0115】

喘息は、気道の慢性炎症性障害である。毎年、喘息は、推定１１０万人の外来患者の診療、１６０万人の救急外来患者の診療、４４４，０００人の入院（Ｄｅｆｒａｎｃｅｓ ｅｔ ａｌ，２００８）を占めている。Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌのウェブサイト、ｗｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｎｃｈｓ／ｄａｔａ／ｎｈｓｒ／ｎｈｓｒ００５．ｐｄｆ，で入手可能であり、米国では３，５００人が死亡している。感受性個体において、喘息性炎症は、喘鳴、息切れ、胸部圧迫及び咳の再発性エピソードを引き起こす。喘息の病因は、両方の遺伝的環境機構（Ｔｏ ｅｔ ａｌ．，ＢＭＣ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ２０１２；１２：２０４；Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ ２０１４；４３：３４３－７３）に影響される多因子性であると考えられ、環境アレルゲンが重要な原因である（前出Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，；Ｐａｖｏｒｄ ＩＤ，ｅｔ ａｌ．，ＮＰＪ Ｐｒｉｍ Ｃａｒｅ Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ ２０１７；２７：１７）。症例の大部分は、人がアレルゲンに対して過敏になるときに生じる（アトピー）。アトピーは、Ｔｈ２細胞及びＴｈ２サイトカイン発現の増加及びＩｇＥ産生の増加を特徴とする。米国では略１０００万人の患者がアレルギー誘発性喘息に罹患していると考えられている。利用可能な治療選択肢があるにもかかわらず、喘息は、依然として主要な健康問題である。世界中で、現在略３億人が喘息に罹患しており、２０２０年までに、４億人が喘息に罹患すると予想されている（Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ，Ｅｕｒ Ｒｅｓｐ Ｒｅｖ．１６：６７－７２，２００７）。

【0116】

アトピー性喘息患者によるアレルゲン吸入は、可逆性気流閉塞、気道過敏性、好酸球性及び好塩基性気道炎症を含む喘息の症状のいくつかを誘発する。アレルゲン吸入チャレンジは、多くの種において喘息の優勢なモデルになっている（Ｂａｔｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９７（３）：Ｌ４０１－１０，２００９；Ｄｉａｍａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３２（５）：１０４５－１０５５，２０１３）。

【0117】

ステロイド治療では効果がない、様々な喘息サブタイプが確認されている。好酸球は、Ｔｈ２型ＣＤ４＋Ｔ細胞によって特徴的に媒介される、アレルギー性喘息の重要な炎症細胞である。好中球性気道炎症は、重度喘息のコルチコステロイド治療と関連し、またＴｈ１型又はＴｈ１７型Ｔ細胞によって媒介され得る（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉｓ．Ｍｏｄｅｌ．Ｍｅｃｈ．６：８７７－８８８，２０１３）。

【0118】

喘息の診断及び評価の尺度には、以下のものが含まれる：標準化した単回呼吸画分の呼気一酸化窒素濃度（ＦｅＮＯ）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ；ＡＴＳ、Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１７１（８）：９１２－３０，２００５）試験を使用して評価した気道炎症。肺活量測定は、ＡＴＳ／Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＥＲＳ）のガイドライン（（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ．２６（１）：１５３－６１，２００５）に従って行われる。気管支拡張薬後（ＢＤ後）肺活量測定試験は、対象がＢＤ前肺活量測定を行った後で評価される。最大気管支拡張は、アルブテロール（９０μｇの計量用量）又はサルブタモール（１００μｇの計量用量）などのＳＡＢＡ又は最大８回の全パフ用のスペーサー装置と同等のものを使用して誘導される（Ｓｏｒｋｎｅｓｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０４（２）：３９４－４０３，２００８）。４回、６回又は８回のパフの後に得られた最高のＢＤ前及びＢＤ後ＦＥＶ_１は、可逆性の決定及び分析に使用される。喘息コントロール質問票（ＡＣＱ）６は、喘息症状（すなわち夜間の目覚め、目覚めた時の症状、活動制限、息切れ、喘鳴）及び毎日のレスキュー気管支拡張薬の使用及びＦＥＶ_１を評価する患者報告の質問票である（Ｊｕｎｉｐｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｏｃｔ １９９９）。ＡＣＱ－６は、元のＡＣＱスコアからＦＥＶ_１測定を省略したＡＣＱの短縮版である。平均ＡＣＱスコアは、応答の平均である。平均スコア≦０．７５は、よく制御された喘息を示し、スコア０．７５～≦１．５は部分的に制御された喘息を示し、スコア＞１．５は制御されていない喘息を示す（Ｊｕｎｉｐｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ．１００（４）：６１６－２１，２００６）。少なくとも０．５の個々の変化は、臨床的に有意であると考えられる（Ｊｕｎｉｐｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ．９９（５）：５５３－８，２００５）。喘息生活の質質問票、標準化（ＡＱＬＱ［Ｓ］）＋１２（ＡＱＬＱ（Ｓ）＋１２）は、喘息患者が経験するＨＲＱｏＬを評価する３２項目の質問票である（Ｊｕｎｉｐｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｃｈｅｓｔ．１１５（５）：１２６５－７０，Ｍａｙ １９９９）。喘息日報も評価に用いられる。

【0119】

関連する米国特許出願公開第２０１８－０２９６６６９号明細書（参照により本明細書に組み込まれる）は、抗ＴＳＬＰ抗体による治療が、無好酸球／低好酸球集団において喘息症状を減少させるのに有効であることを、高好酸球集団においてそのまま開示している。また、対象の喘息増悪の頻度を減少させる方法が企図されている。

【0120】

また、本明細書では、高Ｔｈ２喘息プロファイル又は低Ｔｈ２喘息プロファイルを有する対象の喘息を治療する方法も企図されている。ＴＳＬＰタンパク質がその受容体複合体と結合することを阻害するＴＳＬＰアンタゴニストは、本明細書中に記載の抗体と同様に、低好酸球性喘息集団を効果的に治療すると考えられる。同様に、ＴＳＬＰがその受容体複合体と結合することを阻害するＴＳＬＰアンタゴニストは、Ｔｈ２低喘息集団の治療に有効であると考えられる。また、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体バリアント又は抗原結合タンパク質を投与することを含む、対象の慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療するための方法が企図されている。治療される対象は、ヒトであることが考えられる。対象は、成人、青年又は小児であり得る。

【0121】

治療用抗体（又は抗体変異体）組成物は、複数の部位で患者に送達され得る。複数の投与は、同時に行われ得るか又はある期間にわたって投与され得る。特定の場合、治療組成物の連続流を提供することが有益である。追加の治療は例えば、毎時、毎日、毎週、２週間毎、３週間毎、毎月又はより長い間隔にわたって期間ベースで行われ得る。

【0122】

種々の実施形態では、２つのＴＳＬＰ結合部位を有する二価抗体など、所定用量中の治療薬の量は、治療が行われる個体の大きさ及び治療される障害の特徴によって変化し得る。

【0123】

例示的な治療では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、１日用量あたり約７０ｍｇ～約２８０ｍｇの用量範囲で投与される。例えば、用量は、約７０ｍｇ、２１０ｍｇ又は２８０ｍｇで与えられ得る。種々の実施形態において、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体バリアントは、１回の投与あたり７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０又は２８０ｍｇの用量で投与し得る。これらの濃縮物は、単回投与形態又は反復投与で投与され得る。上記の用量は、２週間毎又は４週間毎に与えられる。種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、２週間毎又は４週間毎に７０ｍｇの単回用量で投与される。種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、２週間毎又は４週間毎に２１０ｍｇの単回用量で投与される。種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、２週間毎又は４週間毎に２８０ｍｇの単回用量で投与される。

【0124】

抗体変異体について、抗体変異体の量は、用量中にあるＴＳＬＰ結合部位の数が上記のカノニカル二価抗体に対して等モル数のＴＳＬＰ結合部位を有するような量であるべきである。

【0125】

抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、少なくとも４ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年又はそれを超える期間、２週間毎又は４週間毎に投与されると考えられる。種々の実施形態では、投与は、皮下又は静脈内投与である。

【0126】

抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体による治療は、対象の血液、痰、気管支肺胞液又は肺中の好酸球を減少させることが考えられる。投与は、高Ｔｈ２集団から低Ｔｈ２集団の対象の細胞数を変化させるとも考えられる。さらに、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体の投与は、努力呼気肺活量（ＦＥＶ）、ＦＥＶ１可逆性、努力肺活量（ＦＶＣ）、ＦｅＮＯ、喘息コントロール質問票－６のスコア及びＡＱＬＱ（Ｓ）＋１２のスコアからなる群から選択される、対象の喘息の１つ以上の尺度を改善すると考えられる。

【0127】

喘息の改善は、以下の１つ以上として評価し得る：ＡＥＲの減少（年換算増悪率）、喘息での入院／重度の増悪の減少、最初の喘息増悪までの時間のベースラインからの変化（増加）（抗ＴＳＬＰ抗体による治療開始後）、治療の過程、例えば５２週間にわたって、プラセボと比較して１回以上の喘息増悪があった対象又は重度の増悪があった対象の割合の減少、ベースラインからのＦＥＶ１及びＦＶＣの変化（増加）（気管支拡張薬前及び気管支拡張薬後）、ベースラインからの血液又は痰の好酸球（又は生検若しくはＢＡＬ液が得られる場合には肺の好酸球）の変化（減少）、ベースラインからのＦｅＮＯの変化（減少）、ベースラインからのＩｇＥの変化（減少）、ＡＣＱ及び変形版、ＡＱＬＱ及び変形版、ＳＧＲＱ並びに喘息症状日誌ＰＲＯにより評価された喘息症状及び制御の改善、ＳＧＲＱ、レスキュー薬の使用の変化（減少）、全身性コルチコステロイドの使用の減少、血中のＴｈ２／Ｔｈ１細胞比の減少。これらの評価のほとんど／全ては、高及び低好酸球（２５０以上が高く、２５０未満が低い）、アレルギー性及び非アレルギー性、高及び低Ｔｈ２、高及び低ペリオスチン（中央値と比較して）並びに高及び低ＦｅＮＯ（２４以上又は２４未満）を含む全集団及び亜集団におけるべきものである。

【0128】

本開示では、限定されないが、抗炎症剤又は喘息治療を含む、本明細書に記載の第２の薬剤と併用した抗体組成物などの複数の薬剤の投与も企図されている。

【0129】

しかしながら、種々の実施形態では、その投与は、対象における同時投与治療の頻度又はレベルを減少させると考えられる。例示的な同時投与治療には、吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）、長時間作用型β２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト［ＬＴＲＡ］、長時間作用型抗ムスカリン薬［ＬＡＭＡ］、クロモン、短時間作用型β２アゴニスト（ＳＡＢＡ）及びテオフィリン又は経口コルチコステロイドが含まれるが、これらに限定されない。種々の実施形態では、投与は、コルチコステロイド治療の必要性を排除する。

【0130】

製剤
いくつかの実施形態では、本開示は、薬学的に許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存料及び／又はアジュバントと共に、治療有効量の抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体を含む医薬組成物の使用を考える。さらに、本開示は、そのような医薬組成物を投与することによって対象を治療する方法を提供する。

【0131】

特定の実施形態では、許容可能な製剤材料は、好ましくは使用する用量及び濃度でレシピエントに対して無毒である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、この組成物のｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、等張性、匂い、無菌状態、安定性、溶解又は放出の速度、吸着又は浸透性を修正、維持又は保存するための製剤材料を含み得る。そのような実施形態では、適切な製剤材料として下記が挙げられるが、これらに限定されない：アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリシン）；抗菌剤；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウム）；緩衝剤（例えば、ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス－ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩又は他の有機酸）；増量剤（例えば、マンニトール又はグリシン）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；錯化剤（例えば、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ－シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリン）；充填剤；単糖類；二糖類；及び他の炭水化物（例えば、グルコース、スクロース、マンノース又はデキストリン）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）；着色、香味及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；低分子量ポリペプチド；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；保存料（例えば、塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素）；溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール）；糖アルコール（例えば、マンニトール又はソルビトール）；懸濁剤；界面活性剤又は湿潤剤（例えば、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパール）；安定性促進剤（例えば、スクロース又はソルビトール）；等張化促進剤（例えば、アルカリ金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウム又は塩化カリウム、マンニトールソルビトール）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／又は医薬アジュバント。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，１８’’Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｒｍｏ，ｅｄ．），１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙを参照されたい。

【0132】

好適なビヒクル又は担体は、注射用水、生理食塩水溶液又は人工脳脊髄液であり得、場合により非経口投与用組成物で一般的な他の材料が補充される。中性緩衝生理食塩水又は血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらなる例示的なビヒクルである。特定の実施形態では、医薬組成物は、約ｐＨ７．０～８．５のトリス緩衝液又は約ｐＨ４．０～５．５の酢酸塩緩衝液を含み、ソルビトール又はその適切な代替物をさらに含み得る。

【0133】

製剤構成成分は、好ましくは、投与部位に許容可能な濃度で存在する。ある特定の実施形態では、緩衝液は、本組成物を、生理学的ｐＨ又はわずかに低いｐＨ（典型的には約４．５～約８のｐＨ範囲内）に維持するために使用される。約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９及び約８．０を含む。

【0134】

種々の実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、酢酸塩及びプロリン、スクロース、ポリソルベート２０又はポリソルベート８０の１つ以上を含有する製剤中に存在する。種々の実施形態では、製剤は、ｐＨが４．９～６．０で、５～５０ｍＭの酢酸塩、３％（ｗ／ｖ）未満のプロリン、０．０１５％（ｗ／ｖ）±０．００５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート２０又はポリソルベート８０を含む。任意選択的に、抗体又は抗体断片は、約１００～約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度である。製剤を－２０℃～－７０℃で保存し得る。これらの賦形剤を含む例示的な抗ＴＳＬＰ製剤は、参照により本明細書に組み込まれる国際出願第ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０２１／０１８５６１号明細書に記載されている。

【0135】

代替的な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体変異体は、界面活性剤と、少なくとも１つの塩基性アミノ酸又はその塩とを含有する製剤中にある。例示的な例では、塩基性アミノ酸はアルギニン又はヒスチジンである。様々な実施形態では、塩は、任意選択的に１０～２００ｍＭの濃度のグルタミン酸アルギニン又はグルタミン酸ヒスチジンである。任意選択的に、製剤はプロリンをさらに含む。代替的な実施形態では、抗ＴＳＬＰ抗体又は抗体バリアントは、界面活性剤及びカルシウム又はその塩を含有する製剤中にある。様々な実施形態では、塩は、任意選択的に１５ｍＭ～約１５０ｍＭの濃度のグルタミン酸カルシウムである。任意選択的に、製剤はプロリンをさらに含む。様々な実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０若しくはポリソルベート８０又はそれらの混合物である。任意選択的に、抗体又は抗体断片は、約１１０ｍｇ／ｍｌ超又は約１４０ｍｇ／ｍｌ超の濃度である。これらの賦形剤を含む例示的な抗ＴＳＬＰ製剤は、参照により本明細書に組み込まれる国際特許出願第ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０２１／０１７８８０号明細書に記載されている。

【0136】

非経口投与が考えられる場合、使用のための治療組成物は、薬学的に許容されるビヒクル中に、所望の抗ＴＳＬＰ抗体を含み、発熱物質を含まない、非経口的に許容される水溶液の形態で提供し得る。非経口注射のための特に適切なビヒクルは、無菌の蒸留水であり、その中では、抗体は、適切に保存された無菌の等張溶液として処方される。ある特定の実施形態では、製剤は、デポ注射を介して送達できる産物の制御性又は持続放出を提供し得る薬剤、例えば注射可能なミクロスフェア、生体内分解性粒子、ポリマー性化合物（ポリ乳酸若しくはポリグリコール酸など）、ビーズ又はリポソームと、所望の分子との製剤を含み得る。ある特定の実施形態では、循環中の持続期間を増進する効果を有するヒアルロン酸も使用され得る。特定の実施形態では、抗体を導入するために、インプラント可能な薬剤送達デバイスを使用し得る。様々な実施形態では、投与は、プレフィルドシリンジ又は自動注射器を介したものであり得る。様々な実施形態では、自動注入装置は、Ｙｐｓｏｍｅｄ ＹｐｓｏＭａｔｅ（登録商標）デバイスである。種々の実施形態では、自動注入装置は、国際公開第２０１８／２２６５６５号パンフレット、同第２０１９／０９４１３８号パンフレット、同第２０１９／１７８１５１号パンフレット、同第２０１２０／０７２５７７号パンフレット、同第２０２０／０８１４７９号パンフレット、同第２０２０／０８１４８０号パンフレット、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／７０５９０号明細書、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／７０５９１号明細書、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／５３１８０号明細書、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／５３１７９号明細書、ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／５３１７８号明細書又はＰＣＴ／米国特許出願公開第２０／５３１７６号明細書で開示されている。

【0137】

キット
さらなる態様として、本開示は、本開示の方法を実施するためのそれらの使用を容易にする方法で包装された１つ以上の化合物又は組成物を含むキットを含む。一実施形態では、そのようなキットは、本明細書に記載の化合物又は組成物を含み、密封されたボトル又は容器などの容器に包装され、容器に貼付されるか、又は方法を実施する際の化合物又は組成物の使用を記載する包装に含まれるラベルを有する。好ましくは、化合物又は組成物は、単位剤形で包装される。キットは、特定の投与経路に従って組成物を投与するか又はスクリーニングアッセイを実施するために適したデバイスをさらに含み得る。好ましくは、キットは、抗体組成物の使用を記載するラベルを含む。

【0138】

本開示のさらなる態様及び詳細は、限定ではなく、例示を目的とする以下の実施例から明らかになるであろう。

【実施例】

【0139】

実施例１：
テゼペルマブ（ＡＭＧ１５７）を、高いストレス温度においてその安定性及びＨＭＷ種を形成する能力について試験した。テゼペルマブを温度ストレス条件に供し、抗体を３７℃で製剤に入れ、温度を以下に記載される条件まで上昇させた。結合及び安定性に影響を与える属性を、サイズ排除クロマトグラフィー及びペプチドマッピングを用いて決定した。

【0140】

材料及び方法
ＡＭＧ１５７及び潜在的に結合に影響を及ぼす不安定な残基：配列Ａ５（及び鎖Ｈ５、Ｌ５として）としてのＡＭＧ１５７のアミノ酸配列及びいくつかの他のＴＳＬＰ結合抗体も、米国特許第７，９８２，０１６Ｂ２号明細書に以前に記載されていた。

【0141】

Ａ２Ｇ０Ｆ／Ａ２Ｇ０Ｆグリコシル化を有する抗体（Ｃ６５００ Ｈ９９９８ Ｏ２０６８ Ｎ１７３４ Ｓ５２）の分子量は１４７１８９．４Ｄａであり、重鎖Ｎ末端ピログルタメートが含まれており、且つＣ末端Ｋが除去されている。ＴＳＬＰは、７４％の単量体種、２３％の二量体種及び３％の四量体種を含有した。

【0142】

分子評価に続く配列のインシリコ評価では、結合及び効力に影響を及ぼし得る化学修飾を潜在的に受けやすいＣＤＲ中のいくつかの残基が同定された。それらのＣＤＲ残基並びにフレームワークからのいくつかの他の残基が考慮され、それらは現在の理解に基づいて（図１、上部）目標範囲を含む。ＣＤＲ中の残基及びそれらの共通の修飾は、標的への結合及び効力に潜在的に影響を及ぼし得るため、可能な属性として選択される。

【0143】

結合に影響を及ぼす化学修飾の同定方法；サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）及び画分収集：インキュベーション後、ＡＭＧ１５７混合物を、Ｇ３０００ＳＷｘｌ ＴＯＳＯＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、７．８ｍｍ ＩＤ×３０ｃｍカラム（カタログ番号０８５４１、ＴＯＳＯＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）を使用するＳＥＣによって分離し、移動相は、１００ｍＭリン酸ナトリウム及び２５０ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ６．８）を含んだ。流量を０．５ｍｌ／分に設定し、カラム温度を３７℃に設定し、実行時間を３５分に設定し、オートサンプラーを４℃に設定した。紫外／可視分光法（ＵＶ／ＶＩＳ）検出を２１４ｎｍ及び２８０ｎｍで行った。溶出画分は、１０ｋＤａ超の分子量カットオフを有するフィルターを用いて収集し、７．５Ｍグアニジン溶出緩衝剤で溶出した。溶出された画分を、以下に記載するペプチドマッピングのための試料調製に供した。

【0144】

リガンド複合体を有する抗体のＳＥＣとそれに続くＬＣ－ＭＳ／ＭＳ特性評価は、抗体の非結合画分及び結合画分における修飾の比を決定する。この方法は、抗体自体の凝集だけでなく、抗体とリガンドとの間の結合を検出するため、典型的にはタンパク質の凝集、例えばモノマーとダイマーとの間の分化などを検出するＳＥＣ法と異なる。ＳＥＣ結合親和性実験は、ＡＭＧ１５７タンパク質をその標的と混合することによって開始した。ＳＥＣ－ＵＶによって抗体－抗原混合物を分離すると、治療用タンパク質、リガンド及び非結合治療用タンパク質含有属性の結合複合体を表すピークが、ＳＥＣ溶出プロファイルの異なる時間に溶出した。これにより、結合した抗体－抗原複合体及び結合していない抗体の画分の収集が可能になった。回収した画分をトリプシンによって消化し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を用いて分析すると、結合画分及び非結合画分中の治療用タンパク質の属性の存在量プロットが生成された。ｘ軸をｌｏｇ２倍、ｙ軸を－ｌｏｇ１０ ｐ値としてボルケーノプロットも作成した。Ｌｏｇ２倍数変化は、非結合／結合画分における属性の比を表し、これは、属性が治療用タンパク質のリガンドへの結合にどの程度影響するかを示す。ｐ値のマイナスｌｏｇ１０は、変化倍数がどの程度確信的に表されるかを表す。

【0145】

５０℃で凝集に影響を及ぼす化学修飾の同定方法：同様のアプローチを使用して、ＡＭＧ１５７の５０℃１Ｗ試料の高分子量（ＨＭＷ）種及びモノマー種の属性を研究した。ＡＭＧ１５７ ５０℃１ＷのＳＥＣ－ＵＶ後のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ特性評価により、抗体のＨＭＷ及びモノマー画分中の修飾の比率が決定される。ＳＥＣ分離時、同定された属性を有するモノマー及びＨＭＷ種を表すピークは、ＳＥＣ溶出プロファイルの異なる時間に溶出することができる。ＡＭＧ１５７ ５０℃１ＷのＨＷＷ及びモノマー画分を収集し、消化し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法を使用して分析した。ＨＭＷ及びモノマー画分における治療用タンパク質の属性の存在プロットを作成した。ｘ軸をｌｏｇ２倍数変化、ｙ軸を－ｌｏｇ１０ ｐ値としてボルケーノプロットも作成した。ｌｏｇ２倍数変化は、ＨＭＷ／モノマー画分における属性の比を表し、これは、属性がＨＭＷ抗体の形成をどの程度引き起こすかを示す。ｐ値のマイナスｌｏｇ１０は、変化倍数がどの程度確信的であるかを表す。

【0146】

ペプチドマッピング：（Ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９２：１２－２１（２００９））に記載されているように、ＬＣ－ＭＳ分析に適したペプチドに対するグアニジンによるリフォールディング、ジスルフィド結合の還元及びアルキル化、緩衝液交換及びトリプシンによる消化を含む試料調製手順を使用して、収集した画分のペプチドマッピングを行った。簡潔に記載すると、ＡＭＧ１５７を含む試料を０．５ｍｌのｐＨ７．５の変性緩衝剤（７．５Ｍ塩酸グアニジン（ＧｄｎＨＣｌ）及び０．２５Ｍトリス）で約１ｍｇ／ｍｌに希釈した。還元は、３μｌの０．５Ｍジチオトレイトール（ＤＴＴ）を添加し、続いて室温で３０分間インキュベートすることによって達成した。カルボキシメチル化は、７μｌの０．５Ｍヨード酢酸（ＩＡＡ）の添加により達成した。反応は、暗所において室温で１５分間行った。４μｌの０．５Ｍ ＤＴＴを添加して、過剰のＩＡＡをクエンチした。還元し、アルキル化したＡＭＧ１５７試料を、ＮＡＰ－５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）を用いてｐＨ７．５の消化バッファ（０．１Ｍトリス又は０．１Ｍ重炭酸アンモニウム）にバッファ交換した。凍結乾燥トリプシンを水に溶解し、最終濃度を１ｍｇ／ｍｌとした。還元、アルキル化及び緩衝剤交換された抗体１試料に１ｍｇ／ｍｌのトリプシン溶液を添加することにより、消化を開始し、１：２５の酵素／基質比を達成した。消化を３７℃で３０分間行った。最終消化物を、５ｔｌの２０％ＦＡを添加してクエンチした。消化された抗体試料のＬＣ－ＭＳ／ＭＳペプチドマッピング分析を、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｑ－Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｐｈａｒｍａ質量分析計に接続されたＡｇｉｌｅｎｔ １２９０ ＵＨＰＬＣシステムにより、（Ｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９２：１２－２１，２００９）に記載のように実施した。得られたＬＣ－ＭＳ／ＭＳ生データ並びにＡＭＧ１５７の配列を使用して、ＭａｓｓＡｎａｌｙｚｅｒソフトウェアによって修飾を同定及び定量化した（Ｚｈａｎｇ，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８１：８３５４－８３６４（２００９））。

【0147】

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）は、結合複合体に対する結合親和性を測定することができる伝統的なアプローチの１つである。１０^－６Ｍ未満の結合複合体は、ＳＰＲを用いて検出することができる。対照的に、ＳＥＣ結合親和性実験は、１０^－８Ｍ未満のＫｄで抗体／リガンド複合体を測定することができる。弱く結合した複合体（１０^－８Ｍ超のＫｄ）は、ＳＥＣカラムで解離する。結果として、抗体分子及びリガンド分子は、非結合種として別々に溶出する。

【0148】

テゼペルマブの５０℃１週間（１Ｗ）ストレスは、非常に大きい割合（約６７％）の高分子量（ＨＭＷ）種を産生した。ＨＭＷ種は、いくつかの残基上の異性化及び脱アミド化、特にＬＣ Ｄ９１の異性化を含む高い割合の化学修飾を含んでいた。Ｄ９１異性化は、ＨＭＷ画分では約２３％に劇的に増加したのに対して、モノマーでは１％であった。

【0149】

ＴＳＬＰへのテゼペルマブ結合に対する４０℃で４週間の４週間のストレス（４０Ｃ４Ｗ）の影響も評価した。ＳＥＣ親和性結合、引き続いてペプチドマッピングを使用することにより、ＴＳＬＰ結合に影響を与える可能性があるＡＭＧ１５７の５つの属性（例えば、化学修飾）を分析のために選択した：ＨＣ Ｄ５４異性化、ＨＣ Ｗ１０２酸化、ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０異性化、ＬＣ Ｎ６５脱アミド及びＬＣ Ｄ９１異性化（図３）。Ｄ４９又はＤ５０対について、２つの残基の両方が結合に寄与するため、それらの間の結合に対する影響を区別することは、困難であった。結合に対する影響は、Ｄ５４＞Ｗ１０２＞Ｄ４９／Ｄ５０＞Ｎ６５＞Ｄ９１の順序であった。５℃で２年、続いて２５℃で２ヶ月（２Ｙ５Ｃ＋２Ｍ２５Ｃ）として確立された貯蔵寿命条件の試験終了後、修飾の１つ（ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０異性化）のみが２％の検出可能レベルを超え得る。結合は、Ｋｄ＝１０^－１０Ｍの典型的な抗体－抗原平衡解離定数から、Ｋｄ＝１０^－８Ｍより弱くなり、ＳＥＣカラムでの抗体－抗原複合体の解離及び２つの分子の分離溶出をもたらした。この方法は、ＣＥＸ画分の特性評価の従来の方法と良好な相関を示し、これにより、ＨＣ Ｄ５４異性化が、細胞ベースのアッセイによって測定される効力の喪失と強く相関することが明らかになった。

【0150】

ペプチドマッピング方法の適合性を検証するために、ＣＤＲ及び隣接領域の不安定な残基がインシリコで予測されており、テゼペルマブ（ＡＭＧ１５７）の１６個の修飾（属性）が起こる可能性があり、ＴＳＬＰへのＡＭＧ１５７の結合に影響を及ぼし得ることを示唆している。ペプチドマッピングをＡＭＧ１５７ Ｔ０及び４０Ｃ４Ｗ試料で実施し、１６の予測される修飾を同定した。ＨＣ Ｄ６２含有ペプチドは回収率が悪く、ＨＣ Ｄ６２の異性化を確実に定量化することができなかった。ペプチドマッピング結果は、ペプチドマッピング方法が、ＨＣ Ｄ６２を除く全ての修飾を検出することができ、研究に適していることを確認した（図２）。

【0151】

ＨＣ Ｄ５４Ｅ、ＨＣ Ｇ５５Ａ、ＬＣ Ｄ４９Ｅ又はＤ５０Ｅ、ＬＣ Ｓ５１Ａを含む、可能性のある抗体属性のいくつかの変異（化学修飾及び後続の残基を有する残基）が室温安定性を高めるために提案された。米国特許第７，９８２，０１６号明細書は、配列Ａ５（また鎖Ｈ５、Ｌ５）としての抗ＴＳＬＰ抗体を開示しており、これは配列番号３～８のＣＤＲに記載されている。

【0152】

テゼペルマブの５０Ｃ１Ｗストレスは、非常に大きい割合（約６７％）のＨＭＷ種を産生した。ＨＭＷ種は、いくつかの残基上の異性化及び脱アミド化、特にＬＣ Ｄ９１及びＨＣ Ｄ５４の異性化を含む、高い割合の化学修飾を含んでおり、ＨＭＷ画分が、結合に影響を及ぼす化学修飾（属性）のために、より低い効力を有し得ることを示唆している。また、テゼペルマブ４０Ｃ４Ｗ試料のＨＭＷ種は、結合後も同じままであり、ＴＳＬＰ結合に関与しなかったことを示唆した。

【0153】

結果
合計で１５個の修飾が、インシリコ配列分析に基づくＴＳＬＰへのＡＭＧ１５７の結合における潜在的な修飾属性と考えられる（図１）。ペプチドマッピングを適用して、ＡＭＧ１５７ Ｔ０及び４０℃４Ｗ試料における予測された属性のパーセンテージを測定した（図２）。４０℃４Ｗは、液体製剤（４℃２Ｙ）の貯蔵寿命に対応し、製造及び貯蔵の合理的な条件と考えられる。合理的な製造及び貯蔵条件下での２％を超える修飾は、ＨＣ Ｄ５４異性化、ＨＣ Ｎ５７脱アミド、ＨＣ Ｄ６２異性化及びＬＣ Ｄ４９Ｄ５０異性化であるが、これらの修飾の全てがＴＳＬＰへの結合に影響を及ぼすわけではない。

【0154】

ＴＳＬＰへの結合に影響を与えるＡＭＧ１５７の化学修飾：ＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗ及びＴＳＬＰのＳＥＣ親和性結合を使用して、結合に影響する残基及び修飾を実験的に決定した。ＳＥＣ－ＵＶプロファイルは、４０℃４Ｗストレス後、１５．５分で溶出する非結合ＡＭＧ１５７が１０％未満を構成することを示唆しており、効力の喪失が１０％未満であるべきであることを示しており、これは効力測定値とよく一致する（図８Ａ）。ＡＭＧ１５７（１４７ｋＤａ）及びＴＳＬＰ（１６ｋＤａ）の溶出時間及び理論分子量に基づいて、１４分で溶出するピークを１つの抗体及び２つのＴＳＬＴ分子を含む複合体とし、１５分のピークを１つの抗体及び１つのＴＳＬＰ分子を含むものとした。同じＳＥＣ条件及び多角度光散乱（ＭＡＬＳ）検出器を使用した他の実験では、これらの時間に溶出する質量複合体において同様のものが同定された。ＡＭＧ１５７ Ｔ０又は４０℃４ＷがＴＳＬＰに結合した場合、約１０．５～１２．５分で溶出する大きい複合体も観察された（図３Ａ）。それらは、ＴＳＬＰが２３％の二量体種及び３％の四量体種を含有し（材料及び方法の節を参照されたい）、いくつかの抗体を潜在的に架橋し、より大きい複合体をもたらすことができるという事実によって説明することができる。ＣＥＸ塩基性画分の生物学的特徴付けは、受容体－リガンド結合及び細胞ベースのレポーター遺伝子効力の減少を明らかにしたことに留意されたい（図８Ｃ）。生化学的特徴付け（ペプチドマッピングを含む）により、ＣＤＲアスパラギン酸異性化と、断片化種（ＨＭＷ）の凝集、部分的に還元された種、高マンノース及びフコシル化グリカン、非ＣＤＲ Ｍｅｔ酸化、重鎖Ｃ末端リジン及びＮ末端シグナル伝達ペプチド、ジスルフィドアイソフォームＡを含む塩基性ＣＥＸ画分が濃縮されたいくつかの他の修飾とが同定された。抗体－抗原のＳＥＣを含む方法を直交アプローチとして利用して、ＴＳＬＰへの結合に影響を与える抗体の化学修飾を、結合に影響を与えない修飾から評価及び区別した。

【0155】

ＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗ及びＴＳＬＰ複合体のＳＥＣとそれに続くＬＣ－ＭＳ／ＭＳ特性評価により、ＡＭＧ１５７の非結合画分（５）及び結合画分（３）における修飾の比を決定した。統計学的有意性ｐ＜０．０３で、以下の５つの残基を関連属性と見なした：ＨＣ Ｄ５４異性化、ＨＣ Ｗ１０２酸化、ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０異性化、ＬＣ Ｎ６５脱アミド及びＬＣ Ｄ９１異性化。Ｄ４９ Ｄ５０対について、２つの残基のいずれが変異しているかの影響を区別することは、困難であり、両方が結合に寄与する。各修飾の相対的存在量を図３Ｂに要約する。ＡＭＧ１５７の結合画分及び非結合画分では、５つの属性は、全て１０％未満である。結合画分と非結合画分との間の修飾率の最大の差（比又は倍率変化）は、ＡＭＧ１５７のＨＣ Ｄ５４異性化に見られる。結合画分及び非結合画分中のＨＣ Ｄ５４異性化の存在量は、それぞれ約０．５％及び約３．５％である。ＬＣ Ｄ４９Ｄ５０異性化は、ＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗの非結合画分中で最も高いパーセンテージ（約６．２％）を示す。

【0156】

アスパラギン酸（Ｄ）は、ＨＣＤＲ２の現在のＤＧモチーフにおける異性化を受けやすいが、残基の１つが、例えば、ＧからＡ又はＤからＥに変更される場合、異なる立体配置はそれほどではない。同様に、ＬＣＤＲ２は、アスパラギン酸が異性化しやすいモチーフＤＤＳＤＲＰＳを有するため、残基への変化が、安定性、例えばＤからＥ又はＳからＡを改善するために提案される。

【0157】

図４は、ＴＳＬＰへのＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗ結合における関連属性を決定するためのボルケーノプロットを示す。統計プロットにおいて、ｌｏｇ２（非結合／結合）は結合の強度を示し、Ｄ５４＞Ｗ１０２＞Ｄ４９Ｄ５０＞Ｎ６５＞Ｄ９１である。ＴＳＰＬに対する非結合ＡＭＧ１５７の平衡解離定数（Ｋｄ）はＫｄが１０^－８Ｍになると推定され、その時点で分解抗体はＴＳＬＰからカラム上で解離した。非結合ＡＭＧ１５７は、ｎＭ範囲の典型的なＡＭＧ１５７Ｋｄと比較してはるかに弱い結合を示した。ＳＥＣ親和性結合法では、Ｄ５４異性化は、非結合％／結合％の最大倍率変化（６の値）を示し、同定の信頼性が高かった（ｐ値＝４×１０－４）。ＡＭＧ１５７の属性モデリングと組み合わせて、ＳＥＣ親和性結合実験は、関連する属性のいくつかの変異（化学修飾及び後続の残基を有する残基）が、ＨＣ Ｄ５４Ｅ、ＨＣ Ｇ５５Ａ、ＬＣ Ｄ４９Ｄ５０Ｅ及びＬＣ Ｓ５１Ａ（図１、下パネル）を含む室温安定性を向上させ得ることを示した。

【0158】

結合に潜在的な影響を示す残基及び修飾（ＨＣ Ｄ５４異性化、ＨＣ Ｗ１０２酸化、ＬＣ Ｄ４９Ｄ５０異性化、ＬＣ Ｎ６５脱アミド及びＬＣ Ｄ９１異性化）を可能な属性として列挙した。一方、可能な属性と考えられるいくつかの他の残基は、ＳＥＣ親和性法による結合に影響を及ぼさなかった。図５は、結合画分と非結合画分との間で統計的に有意に変化しなかった１１の修飾について、ＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗにおける結合画分と非結合画分の相対存在量を要約している（図１及び図４）。また、ＨＣ Ｍ３４酸化及びＨＣ Ｄ６２異性化を除いて、全ての修飾率は、製剤中４０℃で４週間のストレス後に１％未満であり、有意な割合の修飾を構成しないことを示す。

【0159】

１５．６分で溶出する非結合抗体（ピーク５）対１０．５～１２．５分で溶出する複合体（ピーク１＋２）の属性は、ピーク５対ピーク３と同じであったが、統計は劣っていた。これは、大きい複合体が抗体－ＴＳＬＰ複合体であることを示している。

【0160】

本所見は、ＴＳＬＰに結合するＡＭＧ１５７ Ｆａｂの結晶構造と一致し、ＨＣ Ｄ５４、ＨＣ Ｗ１０２及びＬＣ Ｄ４９がＴＳＬＰと近接しており（６Å以内）、直接結合に関与する可能性が非常に高いことを示唆する。イソアスパラギン酸形成（ＨＣ Ｄ５４、ＬＣ Ｄ４９Ｄ５０、Ｄ９１）は、主鎖の伸長（及び短縮側鎖）をもたらし、これにより、これら及び近傍の残基の位置及び配向が変化することに留意すべきである。これは、結合の喪失をもたらし得る。複合体中の最も近い原子を選択して、相互作用の可能性のある性質（疎水性、水素結合、塩橋）を考慮せずに距離を測定した。要約すると、ＬＣ Ｄ４９Ｄ５０、ＬＣ Ｎ６５及びＬＣ Ｄ９１での異性化後に長距離のアロステリック効果が起こり、ＴＳＬＰへの結合の喪失をもたらし得る。

【0161】

従来の手法との相関：従来のアプローチに従って、ＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗ試料を主画分及び３つの塩基性画分上のＣＥＸによって分離し、それらを収集し、ペプチドマッピングによる化学修飾及び相対効力について特徴付けた。相対効力を細胞ベースのアッセイ及び結合アッセイによって測定した。アッセイの結果は、塩基性画分３が３９％のＤ５４異性化を含有し、その細胞ベースの効力がわずか６１％であることを示し、この化学修飾がこの細胞ベースのアッセイにおける効力に影響を及ぼすことを示した。この結果は、ＴＳＬＰへのＳＥＣ親和性結合と良好に一致しており、これにより、非結合画分対結合画分の比が最も高く、結合に最も影響を与えるＨＣ Ｄ５４異性化が特定された。

【0162】

５０℃での凝集と相関する化学修飾：ＨＭＷ種の割合は、ＡＭＧ１５７ ４０℃４Ｗ試料で約９％であった。ＡＭＧ１５７の５０℃１Ｗストレスは、非常に大きい割合（約６７％）のＨＭＷ種を産生し、これは、この温度での抗体分子の部分的なアンフォールディングを示唆した。ＳＥＣによる分離時、ＡＭＧ１５７ ５０℃１Ｗ中のＨＭＷ及びモノマー種を収集し、ペプチドマッピングを使用して分析した。ＳＥＣ親和性結合測定で使用される同様の統計的手法を使用することにより、ボルケーノプロットを作成して、ＡＭＧ１５７のＨＭＷ種の形成に関与する属性を評価した（図６Ａ）。ボルケーノプロットの右上隅では、７つの属性がＨＭＷ形成に関連していると思われ、統計学的有意性がある（図６Ｂにおいてアスタリスクで示されている）。「略統計学的に有意な灰色領域」からのこれら及びいくつかの他の修飾の存在をＨＭＷ及びモノマーについてプロットした（図６Ｂ）。異性化、脱アミド及びスクシンイミド形成（Ｈ_２Ｏ損失）は、ＨＭＷ形成と強く相関する修飾の大部分を構成する。例えば、ＬＣ Ｄ９１異性化は、ＨＭＷ画分で約２３％に劇的に増加したのに対して、モノマーでは１％であった。結合に影響を与える可能性のある別の修飾、ＨＣ Ｄ５４異性化は、単量体中２％に対してＨＭＷ画分中１０％であった。すなわち、ＬＣ Ｄ９１異性化及びＨＣ Ｄ５４異性化は、それぞれＨＭＷ種の形成と相関していた。ＨＭＷ画分中の結合に影響を与える高レベルの化学修飾は、それがモノマーと比較してより低い効力を有し得ることを示唆している。また、１０．５分でＳＥＣから溶出するＡＭＧ１５７のＨＭＷ種は、ＴＳＬＰへの結合後も「未消費」のままであり、ＨＭＷ種が弱い結合を有することをさらに示唆した。ＡＭＧ１５７ ４０Ｃ４Ｗ ＨＭＷ種はサイズが大きく、サイズ分離の極端で溶出することに留意されたい。

【0163】

５０℃１Ｗ後のＡＭＧ１５７で部分的なアンフォールディングが疑われ、劇的なＨＭＷ種形成が観察され、典型的なプロセスで曝露及び修飾されていない残基が曝露された可能性がある。ＨＭＷ種及び改質がより少ない４０℃４Ｗストレス材料の利用は、典型的なプロセスをより代表的に表すはずである。

【0164】

全体として、ＳＥＣ親和性結合法は、ＡＭＧ１５７のＴＳＬＰへの結合に影響する残基及び修飾を実験的に決定した。統計的有意性がｐ＜０．０３である場合、ＨＣ Ｄ５４異性化、ＨＣ Ｗ１０２酸化、ＬＣ Ｄ４９又はＤ５０異性化、ＬＣ Ｎ６５脱アミド及びＬＣ Ｄ９１異性化が、ＴＳＬＰへのＡＭＧ１５７結合の関連属性であると思われる。４０℃４Ｗ後に高い統計的有意性及び２％超で結合に影響を与える修飾は、ＨＣ Ｄ５４及びＬＣ Ｄ５０異性化である。Ｄ４９／５０異性化は、生物学的アッセイなどの他の研究における効力の喪失と相関せず、高ストレス条件下での本知見は、本方法のアーチファクトであり得ることに留意されたい。化学修飾は、５０℃１Ｗストレス後のＨＭＷ種の形成、特にＬＣ Ｄ９１異性化と相関する。これらの結果を考慮して、室温安定性を改善するために、ＨＣ Ｄ５４Ｅ、ＨＣ Ｇ５５Ａ、ＬＣ Ｄ４９Ｅ又はＬＣ Ｄ５０Ｅ、ＬＣ Ｓ５１Ａを含むＡＭＧ１５７属性のいくつかの変異（化学修飾及び後続残基を有する残基）が提案された。

【0165】

本明細書において論じられ、且つ引用された全ての刊行物、特許及び特許出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。開示した本発明は、記載された特定の方法論、プロトコル及び材料に限定されず、これらは、変化し得ることが理解される。本明細書中で用いられる専門用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、添付の特許請求の範囲を限定することを意図するものではないことも理解される。

【0166】

当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識又は確認することができるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。

【図1】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図8A】

【図8B】

【図8C】

【図8D】

【配列表】

2024516595000001.app

【国際調査報告】