特表 2024-516713 キメラ受容体およびその使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-16

(54)【発明の名称】キメラ受容体およびその使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/63 20060101AFI20240409BHJP

   C07K 16/42 20060101ALI20240409BHJP

   C07K 16/46 20060101ALI20240409BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240409BHJP

   C07K 14/705 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 15/12 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240409BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0781 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0784 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0786 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0787 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0735 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/074 20100101ALI20240409BHJP

   C12N 5/0775 20100101ALI20240409BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 37/04 20060101ALI20240409BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240409BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240409BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240409BHJP

   A61K 35/18 20150101ALI20240409BHJP

   A61K 35/19 20150101ALI20240409BHJP

   A61K 35/15 20150101ALI20240409BHJP

   A61K 35/12 20150101ALI20240409BHJP

   A61K 35/28 20150101ALI20240409BHJP

   A61K 35/545 20150101ALI20240409BHJP

【ＦＩ】

C12N15/63 Z

C07K16/42 ZNA

C07K16/46

C07K19/00

C07K14/705

C12N15/12

C12N15/13

C12N15/62 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N5/078

C12N5/0781

C12N5/0783

C12N5/0784

C12N5/0786

C12N5/0787

C12N5/0735

C12N5/074

C12N5/0775

A61K39/395 N

A61P35/00

A61P37/04

A61K48/00

A61P43/00 105

A61K35/17

A61K35/18

A61K35/19

A61K35/15

A61K35/12

A61K35/28

A61K35/545

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023568216

(86)(22)【出願日】2022-05-06

(85)【翻訳文提出日】2023-12-12

(86)【国際出願番号】 US2022028202

(87)【国際公開番号】W WO2022236142

(87)【国際公開日】2022-11-10

(31)【優先権主張番号】63/185,896

(32)【優先日】2021-05-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/283,147

(32)【優先日】2021-11-24

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】519028678

【氏名又は名称】センティ バイオサイエンシズ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】ゴンザレス－ジュンカ アルバ

(72)【発明者】

【氏名】ログエブ アッセン ボヤノブ

(72)【発明者】

【氏名】フランケル ニコラス

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B065AA91Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA13

4C084NA14

4C084ZB091

4C084ZB211

4C084ZB261

4C085AA14

4C085AA16

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C087AA01

4C087AA02

4C087AA03

4C087BB36

4C087BB37

4C087BB38

4C087BB44

4C087BB57

4C087BB63

4C087BB64

4C087BB65

4C087CA04

4C087CA12

4C087NA14

4C087ZB09

4C087ZB21

4C087ZB26

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインを含むキメラタンパク質が本明細書に提供される。ＶＳＩＧ２に特異的な抗原結合ドメインを含むキメラタンパク質を対象とする、細胞、ポリヌクレオチド、ベクター、組成物、および方法もまた、本明細書に提供される。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）前記ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）
を含み、かつ
前記ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）
を含む；または
（ｂ）前記ＶＨが、
配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）
を含み、かつ
前記ＶＬが、
配列番号９の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号９の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および配列番号９の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）
を含む；または
（ｃ）前記ＶＨが、
配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）
を含み、かつ
前記ＶＬが、
配列番号１０の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１０の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および配列番号１０の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）
を含み、
任意選択で、参照抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列が、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに基づき定義される、キメラタンパク質。

【請求項2】

前記ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のキメラタンパク質。

【請求項3】

前記ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、または前記ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１または請求項２に記載のキメラタンパク質。

【請求項4】

前記抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含み、
任意選択で前記ｓｃＦｖの前記ＶＨおよびＶＬが、ペプチドリンカーによって分離され、
任意選択で前記抗原結合ドメインが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌが前記ペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインであり、および／または
任意選択で前記ｓｃＦｖが、配列番号１９～３５および配列番号６９～７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１～３のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項5】

前記キメラタンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、前記異種分子または部分が、膜貫通ドメイン、一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、ヒンジドメイン、スペーサー領域、一つ以上のペプチドリンカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラタンパク質。

【請求項6】

前記ＣＡＲが、免疫応答を阻害する一つ以上の細胞内阻害ドメインを含む阻害ＣＡＲであり、前記一つ以上の細胞内阻害ドメインの各々が、酵素阻害ドメインまたは細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含む、請求項５に記載のキメラタンパク質。

【請求項7】

請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質をコードする、操作されたポリヌクレオチド。

【請求項8】

請求項７に記載の操作されたポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。

【請求項9】

請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質、請求項７に記載の操作されたポリヌクレオチド、または請求項８に記載の発現ベクターを含む、単離細胞。

【請求項10】

請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質、請求項７に記載の操作されたポリヌクレオチド、または請求項８に記載の発現ベクターを発現する、操作された細胞の集団。

【請求項11】

前記細胞または細胞の集団が、前記細胞表面上に発現された一つ以上の腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含み、任意選択で、前記一つ以上の腫瘍標的化キメラ受容体の各々が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、請求項９に記載の細胞または請求項１０に記載の細胞の集団。

【請求項12】

Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、およびｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、請求項９～１１のいずれか一項に記載の細胞または細胞の集団。

【請求項13】

有効量の請求項９～１２のいずれか一項に記載の細胞または操作された細胞の集団と、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせとを含む、医薬組成物。

【請求項14】

対象において腫瘍細胞に対する細胞介在性免疫応答を刺激する方法であって、腫瘍を有する対象に、治療有効用量の、請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質、請求項７に記載の操作されたポリヌクレオチド、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９～１２のいずれか一項に記載の細胞もしくは操作された細胞の集団、または請求項１３に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【請求項15】

腫瘍を有する対象を治療する方法であって、治療有効用量の、請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質、請求項７に記載の操作されたポリヌクレオチド、請求項８に記載の発現ベクター、請求項９～１２のいずれか一項に記載の細胞もしくは操作された細胞の集団、または請求項１３に記載の組成物を投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年５月７日に出願された米国仮出願第６３／１８５，８９６号、および２０２１年１１月２４日に出願された米国仮出願第６３／２８３，１４７号の利益ならびに優先権を主張し、これらの各々は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0002】

（配列表）
本出願には、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出され、その全体が参照により本明細書に援用される配列表が含まれる。２０ＸＸ年、ＸＸ月に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、ＸＸＸＸＸＵＳ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと称され、サイズがＸ，ＸＸＸ，ＸＸＸバイトである。

【背景技術】

【0003】

背景
Ｔ細胞などの免疫応答性細胞の特異性および機能をリダイレクトするために使用されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）系養子細胞療法は、リンパ系悪性腫瘍を有する患者において有効性を示している（Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． （１４）：１２６４－１２７０ （２００８）（非特許文献１）； Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． （３７１）：１５０７－１７ （２０１４）（非特許文献２）； Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ． （５）：１７７ｒａ３８ （２０１３）（非特許文献３））。ＣＡＲ Ｔ細胞は、化学療法によって薬剤耐性および腫瘍進行がもたらされたＣＤ１９発現悪性腫瘍を有する患者において完全寛解を誘導することが示されている。ＣＤ１９ ＣＡＲ療法の成功は、固形腫瘍などの他の悪性腫瘍の治療に対して楽観論を提供する。

【0004】

固形腫瘍のためのＣＡＲ療法を開発する際の１つの課題は、好適な標的の欠如である。適切なＣＡＲ標的を特定する能力は、同じ標的抗原を発現する正常な細胞を損傷することなく、腫瘍を効果的に標的化し、治療するために重要である。したがって、正常細胞または組織を標的とせずに、腫瘍細胞を標的とするＣＡＲベースの固形腫瘍療法に対するニーズがまだある。

【先行技術文献】

【非特許文献】

【0005】

【非特許文献1】Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｍｅｄ． （１４）：１２６４－１２７０ （２００８）

【非特許文献2】Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． （３７１）：１５０７－１７ （２０１４）

【非特許文献3】Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ． （５）：１７７ｒａ３８ （２０１３）

【発明の概要】

【0006】

概要
上述のニーズを満たすために、本開示は、ＶＳＩＧ２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインを含むキメラタンパク質に関する。

【0007】

一つの態様において、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（Ｖ－Ｓｅｔ Ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２、ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、または
（ｂ）ＶＨが、
配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＶＬが、
配列番号９のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号９のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および配列番号９のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、または
（ｃ）ＶＨが、
配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＶＬが、
配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列内に含有される軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列内に含有される軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、
任意選択で、参照抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列が、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに基づいて定義される、キメラタンパク質が本明細書に提供される。

【0008】

一部の実施形態では、ＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬ領域は、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、またはＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0009】

一部の実施形態では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含み、任意選択でｓｃＦｖのＶＨおよびＶＬは、ペプチドリンカーによって分離され、任意選択で抗原結合ドメインは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインであり、および／または任意選択でｓｃＦｖは、 配列番号１９～３５および配列番号６９～７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0010】

一部の実施形態では、キメラタンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、異種分子または部分は、膜貫通ドメイン、一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、ヒンジドメイン、スペーサー領域、一つまたは複数のペプチドリンカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドを含む。

【0011】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、免疫応答を阻害する一つ以上の細胞内阻害ドメインを含む阻害性ＣＡＲであり、一つ以上の細胞内阻害ドメインの各々は、酵素阻害ドメインまたは細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含む。

【0012】

別の態様では、上記の態様または実施形態のうちのいずれか一つのキメラタンパク質をコードする操作されたポリヌクレオチドが本明細書に提供される。

【0013】

別の態様では、上記の態様または実施形態のうちのいずれか一つの操作されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターが本明細書に提供される。

【0014】

別の態様では、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つのキメラタンパク質、上記の態様もしくは実施形態の操作されたポリヌクレオチド、または上記の態様もしくは実施形態の発現ベクターを含む単離細胞が本明細書に提供される。

【0015】

別の態様では、上記の態様のうちのいずれか一つのキメラタンパク質、上記の態様もしくは実施形態の操作されたポリヌクレオチド、または上記の態様もしくは実施形態の発現ベクターを発現する操作された細胞の集団が本明細書に提供される。

【0016】

一部の実施形態では、細胞または細胞の集団は、細胞表面上に発現された一つ以上の腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含み、任意選択で、一つ以上の腫瘍標的化キメラ受容体の各々は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。

【0017】

一部の実施形態では、細胞または細胞の集団は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、およびｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。

【0018】

別の態様では、有効量の上記の態様もしくは実施形態のいずれか一つの細胞もしくは操作された細胞の集団、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせ、を含む医薬組成物が本明細書に提供される。

【0019】

別の態様では、対象において腫瘍細胞に対する細胞介在性免疫応答を刺激する方法が本明細書に提供され、方法は、腫瘍を有する対象に、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つのキメラタンパク質、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つの操作されたポリヌクレオチド、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つの発現ベクター、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つの細胞もしくは操作された細胞の集団、または上記の態様もしくは実施形態の組成物の治療有効用量を投与することを含む。

【0020】

別の態様では、腫瘍を有する対象を治療する方法が本明細書に提供され、方法は、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つのキメラタンパク質、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つの操作されたポリヌクレオチド、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つの発現ベクター、上記の態様もしくは実施形態のうちのいずれか一つの細胞もしくは操作された細胞の集団、または上記の態様もしくは実施形態の組成物の治療有効用量を投与することを含む。

【0021】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨは、ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。一部の態様では、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される。一部の態様では、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0022】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨは、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される。一部の態様では、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の態様では、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0023】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。一部の態様では、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される。一部の態様では、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0024】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＬは、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される。一部の態様では、ＶＨは、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される。一部の態様では、ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。

【0025】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の態様では、ＶＨは、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される。一部の態様では、ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。

【0026】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0027】

一部の態様では、ＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0028】

一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0029】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号９のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0030】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片を含み、抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＬは、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＬ領域は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0031】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、ＶＳＩＧ２との結合について、参照抗体またはその抗原結合断片と競合し、
参照抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の態様では、参照抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、参照抗体またはその抗原結合断片のＶＬ領域は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0032】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、参照抗体またはその抗原結合断片と本質的に同じＶＳＩＧ２エピトープに結合し、参照抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の態様では、参照抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、参照抗体またはその抗原結合断片のＶＬ領域は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0033】

一部の態様では、本開示は、Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含むキメラタンパク質を提供し、抗原結合ドメインは、参照抗体またはその抗原結合断片によって結合されるＶＳＩＧ２エピトープと同じであるヒトＶＳＩＧ２のエピトープに結合し、参照抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の態様では、参照抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一部の態様では、参照抗体またはその抗原結合断片のＶＬ領域は、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む。

【0034】

一部の態様では、キメラタンパク質の抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一部の態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖのＶＨおよびＶＬは、ペプチドリンカーによって分離される。一部の態様では、抗原結合ドメインは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは、重鎖可変ドメインであり、Ｌは、ペプチドリンカーであり、ＶＬは、軽鎖可変ドメインである。一部の態様では、ペプチドリンカーは、配列番号１９～３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖは、配列番号７０～７５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

【0035】

一部の態様では、キメラタンパク質は、抗体－薬物コンジュゲートであり、異種分子または部分は、治療剤を含む。

【0036】

一部の態様では、キメラタンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、異種分子または部分は、膜貫通ドメイン、一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、ヒンジドメイン、スペーサー領域、一つまたは複数のペプチドリンカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドを含む。一部の態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、ＣＡＲは、一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の態様では、ＣＡＲは、免疫応答を刺激する一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む活性化ＣＡＲである。一部の態様では、ＣＡＲは、免疫応答を阻害する一つまたは複数の細胞内阻害ドメインを含む阻害ＣＡＲである。一部の態様では、細胞内阻害ドメインは、酵素阻害ドメインを含む。一部の態様では、細胞内阻害ドメインは、細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含む。一部の態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間のスペーサー領域を含む。一部の態様では、スペーサー領域は、配列番号３９～５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

【0037】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む組成物を提供する。

【0038】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質をコードする操作されたポリヌクレオチドを提供する。

【0039】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような操作されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。

【0040】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような操作されたポリヌクレオチドまたは本明細書に記載されるような発現ベクター、および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む組成物を提供する。

【0041】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような操作されたポリヌクレオチドまたは本明細書に記載されるような発現ベクターを用いて単離細胞に形質導入することを含む、操作された細胞を作製する方法を提供する。一部の態様では、本開示は、上記の方法によって産生された、操作された細胞を提供する。

【0042】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような操作されたポリヌクレオチド、本明細書に記載されるような発現ベクターを含む単離細胞、または本明細書に記載されるような操作されたポリヌクレオチドもしくは発現ベクターおよび薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、もしくはそれらの組み合わせを含む組成物を提供する。

【0043】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような操作されたポリヌクレオチドまたは本明細書に記載されるような発現ベクターを発現する操作された細胞の集団を提供する。

【0044】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質を含む単離細胞を提供する。一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質を発現する操作された細胞の集団を提供する。一部の態様では、キメラタンパク質は、単離細胞または細胞の集団において組換えにより発現される。一部の態様では、単離された細胞または細胞の集団は、細胞表面上で発現された一つまたは複数の腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む。一部の態様では、一つまたは複数の腫瘍標的化キメラ受容体のぞれぞれは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である。一部の態様では、細胞または細胞の集団は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、およびｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。一部の態様では、細胞または細胞の集団は、自家である。一部の態様では、細胞または細胞の集団は、同種である。

【0045】

一部の態様では、本開示は、有効量の本明細書に記載されるような細胞または操作された細胞の集団、および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物を提供する。

【0046】

一部の態様では、本開示は、有効量の本明細書に記載されるようなキメラタンパク質を発現する遺伝子修飾された細胞、および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む医薬組成物を提供する。一部の態様では、医薬組成物は、腫瘍を治療および／または予防するためのものである。

【0047】

一部の態様では、本開示は、それを必要とする対象を治療するための方法を提供し、方法は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、本明細書に記載されるような細胞または細胞の集団を含む組成物または医薬組成物の治療有効用量を投与することを含む。

【0048】

一部の態様では、本開示は、対象において腫瘍細胞に対する細胞介在性免疫応答を刺激する方法を提供し、方法は、腫瘍を有する対象に、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、本明細書に記載されるような細胞または細胞の集団を含む組成物または医薬組成物の治療有効用量を投与することを含む。

【0049】

一部の態様では、本開示は、腫瘍を有する対象を治療する方法を提供し、方法は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、本明細書に記載されるような細胞または細胞の集団を含む組成物または医薬組成物の治療有効用量を投与することを含む。

【0050】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるようなキメラタンパク質を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキットを提供する。一部の態様では、キットは、対象における腫瘍を治療および／または予防するための一つまたは複数の抗原特異的細胞を産生するためのキメラタンパク質を使用するための、記載された指示書をさらに含む。

【0051】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような細胞または細胞の集団を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキットを提供する。一部の態様では、キットは、対象における腫瘍を治療および／または予防するための細胞を使用するための記載された指示書をさらに含む。

【0052】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような単離ポリヌクレオチドを含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキットを提供する。一部の態様では、キットは、対象における腫瘍を治療および／または予防するための一つまたは複数の抗原特異的細胞を産生するためにポリヌクレオチドを使用するための記載された指示書をさらに含む。

【0053】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるようなベクターを含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキットを提供する。一部の態様では、キットは、対象における腫瘍を治療および／または予防するための一つまたは複数の抗原特異的細胞を産生するためのベクターを使用するための記載された指示書をさらに含む。

【0054】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような組成物を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキットを提供する。一部の態様では、キットは、対象における腫瘍を治療および／または予防するための組成物を使用するための記載された指示書をさらに含む。

【図面の簡単な説明】

【0055】

本特許または出願書類は、カラーで作成された少なくとも一つの図面を含む。カラー図面を含む本特許または特許出願公開の複写は、要請かつ必要な料金の支払により特許庁より提供される。

【0056】

本開示のこれらおよび他の特徴、態様、および利点は、以下の説明および添付の図面に関してより良好に理解されるであろう。

【0057】

【図1】図１は、Ｃｈｏｔｈｉａ命名スキームを使用した抗ＶＳＩＧ２抗体（Ａｂ）の軽鎖可変領域の配列決定結果を示す。

【図2】図２は、Ｃｈｏｔｈｉａ命名スキームを使用した抗ＶＳＩＧ２抗体（Ａｂ）の重鎖可変領域の配列決定結果を示す。

【図3-1】図３は、ＣＡＲ／ｉＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞からの様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図3-2】図３－１の続きの図である。

【図4】図４は、抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による、ＶＳＩＧ２を発現するかまたはＶＳＩＧ２発現を欠くＣＥＡ陽性標的細胞の殺傷を示す。

【図5】図５は、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを使用したＮＫ細胞によるＶＳＩＧ２陽性標的細胞の殺傷を示す。

【図6】図６は、形質導入ＮＫ細胞上の様々な抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図7A】図７Ａは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞Ｌｓ１７４ｔの殺傷を示す。

【図7B】図７Ｂは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞ＤＬＤ１の殺傷を示す。

【図7C】図７Ｃは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞Ｌｓ１７４ｔの殺傷を示す。

【図7D】図７Ｄは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞ＤＬＤ１の殺傷を示す。

【図8】図８は、ＦＬＴ３陽性標的細胞および様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞によるＦＬＴ３陽性標的細胞の殺傷を示す。

【図9】図９は、ＦＬＴ３活性化ＣＡＲ／ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲ ＮＫ細胞／標的細胞共培養におけるＴＮＦα産生の定量化を示す。

【図10A】図１０Ａは、形質導入ＮＫ細胞上の様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図10B】図１０Ｂは、対照ＮＫ細胞上の様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図11】図１１は、ＣＥＡ活性化ＣＡＲおよび様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞によるＣＥＡ陽性標的細胞の殺傷を示す。

【発明を実施するための形態】

【0058】

詳細な説明
本開示の実践は、別段の指示がない限り、当該技術分野の範囲内で、分子生物学、化学、生化学、ウイルス学、および免疫学の従来の方法を採用する。そのような手法は、文献で完全に説明される。例えば、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ Ｖｉｒｕｓｅｓ： Ｇｅｎｏｍｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｓ．Ｌ． Ｔａｎ ｅｄ．， Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ， ２００６）； Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ， ３^ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ， ｖｏｌ． Ｉ ＆ ＩＩ （Ｂ．Ｎ． Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ． Ｋｎｉｐｅ， ｅｄｓ．）； Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌｓ． Ｉ－ＩＶ （Ｄ．Ｍ． Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ ｅｄｓ．， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）； Ａ．Ｌ． Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， Ｉｎｃ．， ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）； Ｓａｍｂｒｏｏｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （３^ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ， ２００１）； Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （Ｓ． Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ． Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）を参照されたい。

【0059】

定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての用語、表記および他の科学用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有することが意図される。いくつかの事例では、一般的に理解される意味を有する用語は、明確におよび／またはすぐに参照するために本明細書で定義され、そのような定義を本明細書に含めることは、必ずしも、当該技術分野において一般的に理解されるものに対する差異を表すものと解釈されるべきではない。本明細書に記載または参照される技法および手順は、一般的に周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ４ｔｈ ｅｄ． （２０１２） Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， ＮＹに記載される広く利用されている分子クローニング方法論などの当業者による従来の方法論を使用して一般的に使用されている。必要に応じて、市販のキットおよび試薬の使用を伴う手順は、別段の記載がない限り、概して、製造業者が定義したプロトコルおよび条件に従って実施される。

【0060】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が別段であると明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。「含む」、「など」などの用語は、別段の指示がない限り、限定することなく包含を伝達することを意図する。

【0061】

本明細書で使用される場合、「含む」という用語はまた、別段の指示がない限り、列挙されている要素から「からなる」および「本質的にからなる」実施形態も具体的に含む。

【0062】

「約」という用語は、示される値およびその値の上下の範囲を示すとともに、それを包含する。特定の実施形態では、「約」という用語は、指定値±１０％、±５％、または±１％を示す。ある特定の実施形態では、適用可能である場合、「約」という用語は、指定値±その値の一つの標準偏差を示す。

【0063】

本明細書で使用される場合、「細胞介在性免疫応答を刺激すること」または「免疫応答を刺激すること」という用語は、一つまたは複数の細胞タイプまたは細胞集団による、免疫応答をもたらすシグナルを生成することを指す。免疫刺激活性は、炎症誘発性活性を含み得る。様々な実施形態では、免疫応答は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞もしくはＮＫ細胞）の活性化後に生じるか、または非限定的に、ＣＤ２８、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＯＸ４０、ＣＤ４０およびＩＣＯＳ、ならびにＢ７－１、Ｂ７－２、ＯＸ－４０Ｌ、および４－１ＢＢＬを含むそれらの対応するリガンドを含む、受容体を介して同時に媒介される。かかるポリペプチドは、腫瘍微小環境中に存在し得、腫瘍細胞に対する免疫応答を活性化し得る。様々な実施形態では、炎症誘発性ポリペプチドおよび／またはそれらのリガンドを促進、刺激、またはリガンドが受容体を刺激することは、免疫応答性細胞の免疫応答を増強し得る。特定の理論に拘束されるものではないが、複数の刺激シグナル（例えば、共刺激）を受け取ることは、Ｔ細胞が阻害され、共刺激シグナルの非存在下で抗原（「Ｔ細胞アネルギー」とも呼ぶ）に応答しない場合があるＴ細胞介在性免疫応答など、堅牢で長期的な細胞介在性免疫応答を担持するために重要である。共刺激シグナルの様々な効果は、特に互いに組み合わせて変化し、部分的にしか理解されないが、共刺激は概して、例えば、同族抗原を発現する標的細胞の完全および／または持続的な除去を仲介する際の、抗原に強力に応答する、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの長寿命、増殖性、およびアポトーシス抵抗性細胞を生成するために、遺伝子発現の増加をもたらす。

【0064】

本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または代替的に「ＣＡＲ」という用語は、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも称される）を含む組換えポリペプチド構築物を指す。

【0065】

本明細書で使用される場合、「活性化ＣＡＲ」または「ａＣＡＲ」という用語は、同族ａＣＡＲリガンドと結合する際に免疫応答を開始、活性化、刺激、または増加させる活性化ＣＡＲ発現細胞におけるシグナル伝達またはタンパク質発現の変化を誘導する能力があるＣＡＲ構築物／構造物を指す。

【0066】

本明細書で使用される場合、「阻害ＣＡＲ」または「ｉＣＡＲ」という用語は、共刺激シグナルを含む、一つまたは複数の一つまたは複数の刺激シグナルを受信しているか、または受信した免疫応答性細胞の活性化の低減などの、同族ｉＣＡＲリガンドの際の免疫応答を阻害、減弱、低減、減少、抑制、または抑制する阻害ＣＡＲ発現細胞におけるシグナル伝達またはタンパク質発現の変化を誘導する能力があるＣＡＲ構築物／構造物を指す。

【0067】

本明細書で使用される場合、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、第二のメッセンジャーを生成することによって、またはそのようなメッセンジャーに応答することによってエフェクターとして機能することによって、規定されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するために細胞内に情報を伝達することによって作用する、タンパク質の機能部分を指す。

【0068】

本明細書で使用される場合、「細胞外抗原結合ドメイン」または「抗原結合ドメイン」（ＡＢＤ）という用語は、ＶＳＩＧ２特異的結合をもたらす、本明細書に記載されるキメラタンパク質のポリペプチド配列またはポリペプチド複合体部分などの、所定の抗原またはエピトープを特異的に認識するか、または結合するポリペプチド配列またはポリペプチド複合体を指す。ＡＢＤ（または抗体、抗原結合断片、および／もしくはそれを含むキメラタンパク質）は、ＡＢＤが特異的に結合するエピトープ（またはより一般的には、抗原）を「認識する」と言われ、エピトープは、ＡＢＤの「認識特異性」または「結合特異性」であると言われる。ＡＢＤは、特定の親和性でその特異的な抗原またはエピトープと結合すると言われる。本明細書に記載されるように、「親和性」は、ある分子と別の分子の間の非共有結合分子間力の相互作用の強さを指す。親和性、すなわち、相互作用の強さは、解離平衡定数（ＫＤ）として表すことができ、ＫＤ値が低いほど、分子間の相互作用が強いことを指す。抗体構築物のＫＤ値は、非限定的に、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ／ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）テクノロジー（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））、および細胞結合アッセイ（例えば、フローサイトメトリー）を含む、当該技術分野で周知の方法によって測定される。親和性によって評価される特異的結合は、ＡＢＤとその同族抗原またはエピトープの間の親和性を有する結合分子を指してもよく、ＫＤ値は、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、または１０^－１０Ｍ未満である。特異的結合はまた、対象の生物学的分子（例えば、ポリペプチド）の認識および結合を含むことができ、一方、試料、例えば、本開示のポリペプチドを天然に含む生物学的試料中の他の分子を特異的に認識せず、結合しない。ある特定の実施形態では、特異的に結合することは、結合が、同一または類似のエピトープ、抗原、または抗原決定基の第二の調製物と置換または競合し得るような方法で、ＡＢＤ、抗体、または抗原結合断片のエピトープまたは抗原または抗原決定基の結合を指す。

【0069】

ＡＢＤは、抗体であり得る。本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質、またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルもしくはモノクローナル、多重鎖もしくは単鎖、またはインタクトな免疫グロブリンであり得、天然源または組換え源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。

【0070】

ＡＢＤは、抗体の抗原結合断片であり得る。本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という用語は、抗原またはエピトープなどの標的との認識および特異的結合を付与するのに十分である、インタクトな抗体、またはその組換えバリアントの少なくとも１つの部分を指す。抗原結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、直鎖状抗体、ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨ）などの単一ドメイン抗体、ラクダＶ_ＨＨドメイン、およびヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片などの抗原結合断片から形成された多重特異性抗体、および抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられるが、これらに限定されない。抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、およびビス－ｓｃＦｖに組み込むこともできる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１ １３６，２００５を参照されたい）。抗原結合断片は、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づいて足場に移植することもできる（フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。

【0071】

本明細書に記載されるキメラタンパク質などの結合分子中のＡＢＤの数は、結合分子の「結合価」を定義する。単一のＡＢＤを有する結合分子は、「一価」である。複数のＡＢＤを有する結合分子は、「多価」であると言われる。２つのＡＢＤを有する多価結合分子は、「二価」である。３つのＡＢＤを有する多価結合分子は、「三価」である。４つのＡＢＤを有する多価結合分子は、「四価」である。様々な多価の実施形態では、複数のＡＢＤの全ては、同じ認識特異性を有し、「単一特異性多価」結合分子と呼ぶことができる。他の多価の実施形態では、複数のＡＢＤのうちの少なくとも２つは、異なる認識特異性を有する。かかる結合分子は、多価であり、「多特異性」である。ＡＢＤが２つの認識特異性をまとめて有する多価の実施形態では、結合分子は、「二重特異性」である。ＡＢＤが３つの認識特異性をまとめて有する多価の実施形態では、結合分子は、「三重特異性」である。ＡＢＤが、同じ抗原に存在する異なるエピトープに対する複数の認識特異性をまとめて有する多価の実施形態では、結合分子は、「多重パラトープ」である。ＡＢＤが同じ抗原上の二つのエピトープをまとめて認識する多価の実施形態は、「二重パラトープ」である。

【0072】

様々な多価の実施形態では、多結合価の結合分子は、特定の標的に対する結合分子の結合活性を改善する。本明細書に記載される場合、「結合活性」は、二つ以上の分子、例えば、特定の標的に対する多価結合分子間の相互作用の全体的な強さを指し、結合活性は、複数のＡＢＤの親和性によって提供される相互作用の累積的な強さである。結合活性は、上記の通り、親和性を決定するために使用されるものと同じ方法によって測定することができる。ある特定の実施形態では、特異的な標的に対する結合分子の結合活性は、相互作用が、特定の結合相互作用であり、二つの分子間の結合活性は、１０^－６Ｍ、１０^－７Ｍ、１０^－８Ｍ、１０^－９Ｍ、または１０^－１０Ｍ未満のＫＤ値を有する。ある特定の実施形態では、特異的な標的に対する結合分子の結合活性は、相互作用が、特定の結合相互作用であるようなＫＤ値を有し、個々のＡＢＤの一つまたは複数の親和性は、それら自体のそれぞれの抗原またはエピトープへの特異的な結合と認識するＫＤ値を有さない。ある特定の実施形態では、結合活性は、個々の細胞に見られる別個の抗原などの、共有される特異的な標的または複合体上の別個の抗原に対する複数のＡＢＤの親和性によってもたらされる相互作用の累積的な強さである。ある特定の実施形態では、結合活性は、共有される個々の抗原上の別個のエピトープに対する複数のＡＢＤの親和性によってもたらされる相互作用の累積的な強さである。

【0073】

本明細書で使用される場合、「一本鎖可変断片」または「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも一つの抗原結合断片および重鎖の可変領域を含む少なくとも一つの抗原結合断片を含む融合タンパク質を指し、軽鎖および重鎖可変領域は、短い可動性ポリペプチドリンカーを介して連結され、一本鎖ポリペプチドとして発現することが可能であり、ｓｃＦｖは、それが由来する無傷抗体の特異性を保持する。本明細書で使用される場合、指定されない限り、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端およびＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬおよびＶＨ可変領域を有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。

【0074】

本明細書で使用される場合、「可変領域」は、例えば、Ｂ細胞中の免疫グロブリン遺伝子またはＴ細胞中のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子におけるＶ、Ｊ、および／またはＤセグメント組換え後の、組換え現象から生じる可変領域を指す。免疫グロブリン遺伝子では、可変領域は、典型的には、それらが誘導される抗体鎖から定義され、例えば、ＶＨは、抗体重鎖の可変領域を指し、ＶＬは、抗体軽鎖の可変領域を指す。選択ＶＨおよび選択ＶＬは、一緒に結合して、抗原特異性および結合親和性を付与する抗原結合ドメインを形成することができる。

【0075】

本明細書で使用される「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域ＶＨおよびＶＬ内の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域には三つのＣＤＲが存在し（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、各軽鎖可変領域には三つのＣＤＲが存在する（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（“Ｋａｂａｔ”ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（“Ｃｈｏｔｈｉａ”ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ）、またはそれらの組み合わせによって記載されるものを含む、いくつかの周知のスキームのいずれかを使用して決定することができる。Ｋａｂａｔナンバリングスキームの下で、いくつかの実施形態では、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けされ、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＣＤＲアミノ酸残基は、２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、および８９～９７（ＬＣＤＲ３）と番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームの下で、いくつかの実施形態では、ＶＨのＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＨＣＤＲ１）、５２～５６（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）と番号付けされ、ＶＬのＣＤＲアミノ酸残基は、２６～３２（ＬＣＤＲ１）、５０～５２（ＬＣＤＲ２）、および９１～９６（ＬＣＤＲ３）と番号付けされる。組み合わせたＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームでは、いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、またはそれらの両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば、哺乳動物ＶＨ、例えば、ヒトＶＨのアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、および９５～１０２（ＨＣＤＲ３）、ならびにＶＬ、例えば、哺乳動物ＶＬ、例えば、ヒトＶＬのアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、および８９～９７（ＬＣＤＲ３）に対応する。様々な実施形態では、ＣＤＲは、非限定的に、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヤギ、およびヒト配列を含む、哺乳類配列である。好ましい実施形態では、ＣＤＲは、ヒト配列である。様々な実施形態では、ＣＤＲは、天然に存在する配列である。

【0076】

本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」という用語は、典型的には、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４配置（Ｎ末端からＣ末端）で、散在性ＣＤＲのスキャフォールドとして機能する、抗体可変領域ＶＨおよびＶＬ内の一般的に保存された配列を指す。様々な実施形態では、ＦＲは、非限定的に、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヤギ、およびヒト配列を含む、哺乳動物配列である。特定の実施形態では、ＦＲは、ヒト配列である。様々な実施形態では、ＦＲは、天然に存在する配列である。様々な実施形態では、ＦＲは、非限定的に、合理的に設計された配列を含む合成された配列である。

【0077】

本明細書で使用される場合、「抗体重鎖」という用語は、それらの天然起源立体構造で抗体分子に存在し、通常、抗体が属するクラスを決定する二つの種類のポリペプチド鎖のうちの大きい方を指す。

【0078】

本明細書で使用される場合、「抗体軽鎖」という用語は、それらの天然起源立体構造で抗体分子に存在する二つの種類のポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。カッパ（κ）およびラムダ（λ）軽鎖は、二つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。

【0079】

本明細書で使用される場合、「組換え抗体」という用語は、例えば、バクテリオファージまたは酵母発現系によって発現される抗体などの、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体を指す。この用語はまた、抗体をコードするＤＮＡ分子の合成によって生成され、ＤＮＡ分子が抗体タンパク質を発現する抗体、または抗体を特定するアミノ酸配列を意味すると解釈されるべきであり、ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、当該技術分野において入手可能かつ周知の組換えＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して取得されている。

【0080】

本明細書で使用される場合、「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を誘発する分子を指す。この免疫応答は、抗体産生、または特定の免疫学的能力を有する細胞の活性化のいずれか、またはその両方を伴い得る。当業者は、事実上全てのタンパク質またはペプチドを含む任意の巨大分子が、抗原として機能することができることを理解するであろう。

【0081】

本明細書で使用される場合、「抗腫瘍効果」または「抗腫瘍活性」という用語は、例えば、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞の数の減少、転移の数の減少、寿命の増加、腫瘍細胞増殖の減少、腫瘍細胞生存率の減少、またはがん性状態に関連する様々な生理学的症状の改善を含むが、これらに限定されない、様々な手段によって現れることができる生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、本開示のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞および抗体が、予防的療法または処置などの、そもそも腫瘍の発生を防止する能力によっても現れることができる。

【0082】

本明細書で使用されるとき、「自家」という用語は、それが後に対象に再導入される同じ対象に由来する任意の物質を指す。

【0083】

本明細書で使用されるとき、「同種異系」という用語は、物質が導入される対象と同じ種の異なる動物に由来する任意の物質を指す。１つ以上の遺伝子座における遺伝子が同一でない場合、２つ以上の対象が互いに同種異系であると言われる。一部の実施形態では、同じ種の個体由来の同種異系材料は、例えば、ＭＨＣ対立遺伝子などの特定の遺伝子で、抗原的に相互作用するように、十分に遺伝的に異なっていてもよい。一部の実施形態では、同じ種の個体由来の同種異系材料は、例えば、ＭＨＣ対立遺伝子などの特定の遺伝子で、抗原的に相互作用しないように、十分に遺伝的に同じであってもよい。

【0084】

本開示の単離ヌクレオチド分子には、本開示のポリペプチドまたはその断片をコードする任意のポリヌクレオチド分子または核酸配列が含まれる。かかるポリヌクレオチド分子は、内因性核酸配列と１００％相同であるか、または同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示す。内因性配列に対して「実質的な同一性」または「実質的な相同性」を有する核酸配列は、典型的には、二本鎖ポリヌクレオチド分子の少なくとも一つの鎖とハイブリダイズすることができる。本明細書で使用される場合、「ハイブリダイゼーション」は、様々な厳密性の条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載の遺伝子）またはその一部との間に二本鎖分子を形成するための対形成を指す。例えば、厳密な塩濃度は、通常、約７５０ｍＭ ＮａＣｌおよび７５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満、約５００ｍＭ ＮａＣｌおよび５０ｍＭクエン酸三ナトリウム未満、または約２５０ｍＭ ＮａＣｌおよび２５ｍＭクエン酸三ナトリウム未満であり得る。有機溶媒、例えば、ホルムアミドがない場合に、低い厳密性のハイブリダイゼーションを得ることができる一方で、少なくとも約３５％のホルムアミドまたは少なくとも約５０％のホルムアミドの存在下で、高い厳密性のハイブリダイゼーションを得ることができる。厳密な温度条件は、通常、少なくとも約３０℃、少なくとも約３７℃、または少なくとも約４２℃の温度を含む。ハイブリダイゼーション時間、洗剤、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）の濃度、および担体ＤＮＡの包含または除外等の様々な付加的パラメータが、当業者に周知である。必要に応じて、これらの様々な条件を組み合わせることによって、様々なレベルの厳密性を達成することができる。

【0085】

「実質的に同一」または「実質的に相同」とは、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド分子が、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載のアミノ酸配列のいずれか一つ）または核酸配列（例えば、本明細書に記載の核酸配列のいずれか一つ）と少なくとも５０％の相同性または同一性を示すことを意味する。好ましくは、かかる配列は、比較に使用される配列とアミノ酸レベルで、または核酸レベルで、少なくとも約６０％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％相同または同一である。配列同一性は、通常、配列分析ソフトウェアを使用して測定される（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ，１７１０ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ａｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ． ５３７０５、ＢＬＡＳＴ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＧＡＰ、またはＰＩＬＥＵＰ／ＰＲＥＴＴＹＢＯＸプログラム）。かかるソフトウェアは、種々の置換、欠失、および／または他の修飾に相同性の程度を割り当てることによって、同一または類似の配列を一致させる。保存的置換は、通常、以下の群、すなわち、グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、リジン、アルギニン、およびフェニルアラニン、チロシン内の置換を含む。同一性の程度を測定する例示的な方法では、ｅ－３～ｅ－１００の確率スコアが密接に関連した配列を示すＢＬＡＳＴプログラムが使用される場合がある。

【0086】

本明細書で使用される場合、「コードする」という用語は、ヌクレオチドの規定の配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、およびｍＲＮＡ）またはアミノ酸の規定の配列のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマーおよび巨大分子の合成のための鋳型として機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性、またはそれから得られる生物学的特性を指す。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡは、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物学的系においてタンパク質を産生する場合、タンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常配列表に提供されるコード鎖、および遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用される非コード鎖の両方は、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると称され得る。別段の指示がない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮退版であり、かつ同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。「タンパク質またはＲＮＡをコードするヌクレオチド配列」という語句は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかのバージョンにおいてイントロンを含み得る範囲で、イントロンも含み得る。

【0087】

本明細書で使用される場合、「リガンド」という用語は、受容体と結合する分子を指す。具体的には、リガンドは、別の細胞上の受容体と結合し、細胞間認識および／または相互作用を可能にする。

【0088】

「有効量」および「治療有効量」という用語は、本明細書で互換的に使用され、特定の生物学的結果を達成するのに有効な、本明細書に記載される化合物、製剤、物質、または組成物の量を指す。一部の実施形態では、「有効量」または「治療有効量」は、目的の疾患または障害、例えば、固形腫瘍の継続的な増殖、成長、または転移を阻止、改善、または阻害するのに十分な量である。

【0089】

本明細書で使用される場合、「免疫応答性細胞」という用語は、免疫応答（例えば、免疫エフェクター応答）または前駆体、またはその子孫で機能する細胞を指す。免疫エフェクター細胞の例には、アルファ／ベータＴ細胞、ガンマ／デルタＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、肥満細胞、骨髄由来食細胞が含まれるが、これらに限定されない。

【0090】

本明細書で使用される場合、「免疫エフェクター応答」または「免疫エフェクター機能」という用語は、標的細胞の免疫攻撃を増強または促進する、例えば、免疫応答性細胞の機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の死滅または成長もしくは増殖の阻害を促進するＴ細胞またはＮＫ細胞の特性を指し得る。Ｔ細胞の場合、一次刺激および共刺激は、免疫エフェクター機能または応答の例である。

【0091】

本明細書で使用される場合、「可動性ポリペプチドリンカー」または「リンカー」という用語は、可変重鎖および可変軽鎖領域を一緒に連結するために、単独でまたは組み合わせて使用されるグリシンおよび／またはセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_ｎまたは（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_ｎを含み、ｎは、１を超える正の整数である。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、またはｎ＝１０である。一部の実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ［配列番号２７］または（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３［配列番号２９］を含むが、これらに限定されない。他の実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ_２Ｓｅｒ）、（ＧｌｙＳｅｒ）、または（Ｇｌｙ_３Ｓｅｒ）［配列番号２２］の複数の反復を含む。一部の実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー（例えば、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ［配列番号３２］）を含む。一部の実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、（ＥＡＡＡＫ）３［配列番号３３］を含む。本開示の範囲内には、例えば、ＷＯ２０１２／１３８４７５に記載されているリンカーも含まれる。

【0092】

本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、増殖性障害（例えば、癌）の進行、重症度および／または持続時間の低減もしくは緩和、または一つ以上の療法（例えば、本開示のＣＡＲなどの一つ以上の治療剤）の投与から生じる増殖性障害の一つ以上の症状（好ましくは、一つ以上の識別可能な症状）の緩和を指す。いくつかの実施形態では、低減または改善は、患者によって必ずしも識別可能ではない、腫瘍の成長などの増殖性障害の少なくとも１つの測定可能な身体パラメータの改善を指す。他の実施形態では、「治療（ｔｒｅａｔ）」、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、および「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、物理的に、例えば、識別可能な症状の安定化によって、生理学的に、例えば、物理的パラメータの安定化によって、またはその両方によって、増殖性障害の進行の阻害を指す。一部の実施形態では、低減または改善は、腫瘍サイズまたは癌細胞数の減低減または安定化を含む。

【0093】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、免疫応答が誘発され得る生体（例えば、哺乳動物、ヒト）を含むことが意図される。

【0094】

本開示の他の態様は、以下のセクションにおいて記載され、特許請求の範囲内である。

【0095】

他の解釈規則
本明細書に列挙される範囲は、列挙される端点を含む範囲内の値の全ての省略表現であると理解される。例えば、１～５０の範囲は、任意の数、数の組み合わせ、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０の部分範囲を含むことが理解される。

【0096】

ＶＳＩＧ２特異的キメラタンパク質および抗原結合ドメイン
本開示は、キメラタンパク質、ならびにＶセットおよび免疫グロブリンドメイン含有タンパク質２（ＶＳＩＧ２）に結合するかかるキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的キメラタンパク質は、ヒトＶＳＩＧ２（例えば、Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ９６ＩＱ７、全ての目的について参照により本明細書に組み込まれる）またはそのエピトープ断片に結合する。ＶＳＩＧ２は、上皮細胞上で発現され得る。ＶＳＩＧ２は、健常な上皮細胞などの、一般的に健常であるとみなされる細胞上で発現し得る。ＶＳＩＧ２特異的抗体の例としては、ＯＴＩ２Ｄ８（「２Ｄ８」としても知られ、本明細書ではＡｂと称される）およびＯＴＩ５Ａ１０（「５Ａ１０」としても知られる）が挙げられる。

【0097】

本開示は、キメラタンパク質、および表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つ以上を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインを含む、かかるキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドを提供する。

【0098】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有し、ＶＨは、ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有されるＣＤＲ－Ｈ１およびＣＤＲ－Ｈ２のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、および重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）をさらに含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）をさらに含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0099】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有し、ＶＨは、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）をさらに含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0100】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有し、ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）をさらに含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列は、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0101】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有し、ＶＬは、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有されるＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）をさらに含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列は、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。

【0102】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有し、ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有されるＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）をさらに含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む。

【0103】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有し、（１）ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、（２）ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0104】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ領域を有する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域を有する。

【0105】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を有する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域を有する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、（１）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および（２）配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、または配列番号９もしくは配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を有する。

【0106】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、（１）配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域、および（２）配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域、または配列番号９もしくは配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ領域を有する。

【0107】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、（１）配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ領域、および（２）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ領域または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域を有する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬ領域および（２）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ領域または配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ領域を有する。

【0108】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有する参照抗体またはその抗原結合断片と競合し、（１）ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、（２）ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。

【0109】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を有する参照抗体またはその抗原結合断片と同じまたは本質的に同じエピトープ（例えば、別個のヒトＶＳＩＧ２エピトープ）に結合し、（１）ＶＨは、ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、およびＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、（２）ＶＬは、ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、およびＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨを有する参照抗体またはその抗原結合断片と同じまたは本質的に同じエピトープ（例えば、別個のヒトＶＳＩＧ２エピトープ）に結合する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬを有する参照抗体またはその抗原結合断片と同じまたは本質的に同じエピトープ（例えば、別個のヒトＶＳＩＧ２エピトープ）に結合する。

【0110】

ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、直鎖状抗体、ｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨのいずれか）などの単一ドメイン抗体、ラクダＶＨＨ、および多重特異性フォーマットなどの、本明細書に記載されるフォーマットのいずれかであることができる。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）フォーマットである。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）フォーマットである。

【0111】

一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、本明細書（例えば、表１を参照）に記載されるペプチドリンカーのいずれかを有するｓｃＦｖフォーマットを含む、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）フォーマットである。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを有し、式中、Ｌはペプチドリンカーである。

【0112】

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインのいずれか一つを有し、ＶＳＩＧ２タンパク質、ＶＳＩＧ２由来抗原、またはＶＳＩＧ２由来エピトープに特異的に結合する能力があるキメラ受容体に関する。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一般に、ＣＡＲは、抗原結合ドメインおよび抗原結合ドメインが誘導され得る抗体に対して異種性のペプチドなどの、抗原結合ドメインに対して異種性であるポリペプチド分子を含むキメラタンパク質である。抗原結合ドメインに対して異種性であるポリペプチド分子としては、膜貫通ドメイン、一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、ヒンジドメイン、スペーサー領域、一つまたは複数のペプチドリンカー、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

【0113】

一部の実施形態では、ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞に目的（例えば、ＶＳＩＧ２）の特異性を移植または付与する操作された受容体である。特定の実施形態では、ＣＡＲを使用して、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫応答性細胞に抗体の特異性を移植することができる。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインに融合された、膜貫通ドメインに融合された細胞外抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。

【0114】

一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、活性化キメラ抗原受容体（ａＣＡＲおよび別段指定されない限り、一般的にＣＡＲとも称される）である。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体のその同族リガンドとの結合は、免疫応答性細胞の活性化を誘導するのに十分である。いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体のその同族リガンドとの結合は、免疫応答性細胞の刺激を誘導するのに十分である。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞の活性化は、標的細胞の死滅をもたらす。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞の活性化は、免疫応答性細胞によるサイトカインもしくはケモカイン発現および／または分泌をもたらす。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞の刺激は、免疫応答性細胞によるサイトカインもしくはケモカインの発現および／または分泌をもたらす。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞の刺激は、免疫応答性細胞の分化を誘導する。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞の刺激は、免疫応答性細胞の増殖を誘導する。一部の実施形態では、免疫応答性細胞の活性化および／または刺激は、上記の応答の組み合わせであることができる。

【0115】

本開示のＣＡＲは、第一、第二、または第三世代のＣＡＲであり得る。「第一世代」のＣＡＲは、一般的にＴ細胞受容体鎖に由来する、単一の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「第一世代」ＣＡＲは、概して、ＣＤ３－ゼータ（ＣＤ３ζ）鎖からの細胞内シグナル伝達ドメインを有し、これは、内因性ＴＣＲからのシグナルの主要な伝達因子である。「第一世代」のＣＡＲはデノボ抗原認識を与え、ＨＬＡを介した抗原提示とは無関係に、単一の融合分子内のＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介してＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の両方の活性化を引き起こす。「第二世代」ＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）のうちの一つからの第二の細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲの細胞質尾部に追加して、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供する。「第二世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８または４－１ＢＢ）および活性化（ＣＤ３ζ）の両方を提供する。前臨床試験において、「第二世代」のＣＡＲがＴ細胞などの免疫応答性細胞の抗腫瘍活性を高めることができることが示されている。「第三世代」ＣＡＲは、複数の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８および４－１ＢＢ）および細胞内活性化シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ζ）を有する。

【0116】

一部の実施形態では、キメラ抗原受容体は、キメラ阻害性受容体（ｉＣＡＲ）である。一部の実施形態では、一つ以上のキメラ阻害性受容体は、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、内皮組織、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、および皮膚から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する。

【0117】

一部の実施形態では、キメラ阻害性受容体（例えば、ＶＳＩＧ２特異的キメラ阻害性受容体）は、例えば、一つまたは複数の活性化キメラ受容体の一つまたは複数の活性を制御、調節、またはそれ以外の場合阻害するための論理ゲートではないものとして、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）上に発現される一つまたは複数の活性化キメラ受容体（例えば、活性化キメラＴＣＲまたはＣＡＲ）と共に使用され得る。例えば、健常細胞が、腫瘍標的化キメラ受容体によって認識される抗原、および阻害性キメラ受容体によって認識される抗原の両方を発現する場合、腫瘍抗原を発現する免疫応答性細胞は、健常細胞と結合し得る。このような場合、阻害性キメラ抗原はまた、健常細胞上でその同族リガンドと結合し、阻害性キメラ受容体の阻害機能は、腫瘍標的化キメラ受容体を介して（「論理的ゲーティングではない」）免疫応答性細胞の活性化を減少、低減、防止、または阻害する。いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）の一つ以上の活性を阻害し得る。一部の実施形態では、免疫応答性細胞は、一つまたは複数の腫瘍標的化キメラ受容体、および腫瘍上で発現されないか、一般的に発現するとみなされない抗原（例えば、ＶＳＩＧ２）を標的とする一つまたは複数の阻害性キメラ受容体を含み得る。同じ免疫応答性細胞における腫瘍標的化キメラ受容体および阻害性キメラ受容体の組み合わせを使用して、標的上の腫瘍外毒性を減少させることができる。

【0118】

一部の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、約２×１０^－７Ｍ以下、約１×１０^－７Ｍ以下、約９×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－８Ｍ以下、約９×１０^－９Ｍ以下、約５×１０^－９Ｍ以下、約４×１０^－９Ｍ以下、約３×１０^－９Ｍ以下、約２×１０^－９Ｍ以下、または約１×１０^－９Ｍ以下の解離定数（Ｋ_ｄ）で一つまたは複数の抗原（例えば、ＶＳＩＧ２）に結合する。いくつかの実施形態では、Ｋ_ｄは、約２×１０^－７Ｍ～約１×１０^－９Ｍの範囲である。

【0119】

本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインの結合は、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、ＦＡＣＳ分析、バイオアッセイ（例えば、成長阻害）、バイオレイヤー干渉法（例えば、Ｏｃｔｅｔ／ＦＯＲＴＥＢＩＯ（登録商標））、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）テクノロジー（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標））、またはウエスタンブロットアッセイによって決定することができる。これらのアッセイの各々は、概して、目的の複合体と特異的な標識試薬（例えば、抗体またはｓｃＦｖ）を用いることによって、特定の目的のタンパク質－抗体複合体の存在を検出する。例えば、ｓｃＦｖは、放射性標識され、ＲＩＡアッセイで使用され得る。放射性同位体は、γカウンタまたはシンチレーションカウンタの使用などの手段によって、またはオートラジオグラフィによって検出することができる。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、蛍光マーカーで標識される。蛍光マーカーの非限定的な例には、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、青色蛍光タンパク質（例えば、ＥＢＦＰ、ＥＢＦＰ２、Ａｚｕｒｉｔｅ、およびｍＫａｌａｍａｌ）、シアン蛍光タンパク質（例えば、ＥＣＦＰ、Ｃｅｒｕｌｅａｎ、およびＣｙＰｅｔ）、および黄色蛍光タンパク質（例えば、ＹＦＰ、Ｃｉｔｒｉｎｅ、Ｖｅｎｕｓ、およびＹＰｅｔ）が含まれる。ある特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、細胞外抗原結合ドメインに特異的な二次抗体で標識され、二次抗体は、（例えば、放射性または蛍光マーカーで）標識される。

【0120】

一部の実施形態では、本開示のＣＡＲは、ＶＳＩＧ２（例えば、ＶＳＩＧ２タンパク質、ＶＳＩＧ２由来抗原、またはＶＳＩＧ２由来エピトープ）に結合する細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆａｂ断片を含み、それは架橋され得る。特定の実施形態では、細胞外結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）_２断片である。

【0121】

細胞外抗原結合ドメイン
本開示のＣＡＲの細胞外抗原結合ドメインは、ＶＳＩＧ２（例えば、ＶＳＩＧ２タンパク質、ＶＳＩＧ２由来抗原、またはＶＳＩＧ２由来エピトープ）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、上皮細胞に発現したＶＳＩＧ２に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、健常な上皮細胞などの、健常であると一般的にみなされる細胞で発現したＶＳＩＧ２に結合する。一部の実施形態では、ＶＳＩＧ２は、ヒトＶＳＩＧ２である。

【0122】

本開示の抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、例えば、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、およびラクダ由来ナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）を含むが、これらに限定されない、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、二重特異性抗体、複合化抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、およびその機能的断片、ならびに組換えフィブロネクチンドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、親和性を向上させた組換えＴＣＲ、またはその断片、例えば、一本鎖ＴＣＲなどの、抗原結合ドメインとして機能することが当技術分野で公知の代替骨格と結合する任意のドメインを含むことができる。いくつかの事例では、抗原結合ドメインは、ＣＡＲが最終的に使用される同じ種に由来することが有益である。

【0123】

いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、抗体を含む。特定の実施形態では、抗体は、ヒト抗体である。特定の実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、抗体の抗原結合断片を含む。

【0124】

いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ）断片を含む。特定の実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、Ｆ（ａｂ’）断片を含む。

【0125】

いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、二つの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｃＦｖの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、第１のｓｃＦｖおよび第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、第一のｓｃＦｖおよび第二のｓｃＦｖは、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、哺乳類ｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、キメラｓｃＦｖである。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。

【0126】

一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号６９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、配列番号７４のアミノ酸配列を含む。

【0127】

一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号７５の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号７６の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号７７の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号７８の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号７９の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８０の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８１の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８２の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８３の核酸配列を含む。一部の実施形態では、本開示のｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドは、配列番号８４の核酸配列を含む。特定の実施形態では、ＶＨとＶＬとは、ペプチドリンカーによって分離されている。特定の実施形態では、ペプチドリンカーは、表１に示されるアミノ酸配列のいずれかを含む。特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。いくつかの実施形態では、一つ以上のｓｃＦｖの各々が、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが、重鎖可変ドメインであり、Ｌが、ペプチドリンカーであり、ＶＬが、軽鎖可変ドメインである。二つ以上のｓｃＦｖが互いに連結されている場合、各ｓｃＦｖは、ペプチドが連結された次のｓｃＦｖに連結することができる。いくつかの実施形態では、一つ以上のｓｃＦｖのそれぞれは、ペプチドリンカーによって分離されている。

【0128】

（表１）ペプチドリンカー

【0129】

一部の実施形態では、本開示は、第一のＣＡＲおよび第二のＣＡＲを提供する。第一のＣＡＲの抗原結合ドメインおよび第二のＣＡＲの抗原結合ドメインは、本明細書に記載されるか、または当該技術分野において既知の適切な抗原結合ドメインであり得る。例えば、第１または第２の抗原結合ドメインは、１つ以上の抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）であり得る。一部の実施形態では、第一のＣＡＲおよび／または第二のＣＡＲの抗原結合ドメインは、二つの一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｃＦｖの各々が、同じ抗原上の別個のエピトープと結合する。一部の実施形態では、第一のＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＶＳＩＧ２に特異的であることができ、第二のＣＡＲの抗原結合ドメインは、癌抗原（例えば、結腸直腸がん細胞などの、腫瘍細胞で発現した抗原）などの、第二の別個の抗原に特異的であることができる。

【0130】

いくつかの実施形態では、細胞外抗原結合ドメインは、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。特定の実施形態では、ｓｄＡｂは、ヒト化ｓｄＡｂである。特定の実施形態では、ｓｄＡｂは、キメラｓｄＡｂである。

【0131】

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、二つ以上の抗原結合ドメイン、三つ以上の抗原結合ドメイン、四つ以上の抗原結合ドメイン、五つ以上の抗原結合ドメイン、六つ以上の抗原結合ドメイン、七つ以上の抗原結合ドメイン、八つ以上の抗原結合ドメイン、九つ以上の抗原結合ドメイン、または十以上の抗原結合ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、２つ以上の抗原結合ドメインの各々は、同じ抗原と結合する。いくつかの実施形態では、２つ以上の抗原結合ドメインの各々は、同じ抗原の異なるエピトープと結合する。いくつかの実施形態では、二つ以上の抗原結合ドメインの各々は、異なる抗原と結合する。

【0132】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、二つの抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、２つの抗原結合ドメインは、可動性リンカーを介して互いに結合される。いくつかの実施形態では、２つの抗原結合ドメインの各々は独立して、抗体、抗体の抗原結合断片、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、組換えフィブロネクチンドメイン、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、親和性を向上させた組換えＴＣＲ、および単鎖ＴＣＲから選択され得る。いくつかの実施形態では、二つの抗原結合ドメインを含むＣＡＲは、二重特異性ＣＡＲまたはタンデムＣＡＲ（ｔａｎＣＡＲ）である。

【0133】

ある特定の実施形態では、二重特異性ＣＡＲまたはｔａｎＣＡＲは、二重特異性抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含む抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体分子の各抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）内で、ＶＨは、ＶＬの上流または下流であり得る。いくつかの実施形態では、上流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ_１）の上流にそのＶＨ（ＶＨ_１）と配置され、下流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ_２）の上流にそのＶＬ（ＶＬ_２）と配置され、その結果、全体的な二重特異性抗体分子は、配置ＶＨ_１－ＶＬ_１－ＶＬ_２－ＶＨ_２を有する。他の実施形態では、上流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ_１）の上流にそのＶＬ（ＶＬ_１）と配置され、下流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ_２）の上流にそのＶＨ（ＶＨ_２）と配置され、全体的な二重特異性抗体分子は、配置ＶＬ_１ ＶＨ_１－ＶＨ_２－ＶＬ_２を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、２つの抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）の間に、例えば、構築物がＶＨ_１－ＶＬ_１－ＶＬ_２－ＶＨ_２として配置される場合はＶＬ_１とＶＬ_２との間に、または構築物がＶＬ_１－ＶＨ_１－ＶＨ_２－ＶＬ_２として配置される場合はＶＨ_１とＶＨ_２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば、（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）ｎリンカーであり得、ｎは、１、２、３、４、５、または６である。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を回避するのに十分な長さでなければならない。いくつかの実施形態では、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。いくつかの実施形態では、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数のリンカーを有する構築物では、任意の２つ以上のリンカーは、同じであっても異なっていてもよい。したがって、いくつかの実施形態では、二重特異性ＣＡＲまたはｔａｎＣＡＲは、ＶＬ、ＶＨを含み、本明細書に記載される配置で１つ以上のリンカーを更に含み得る。

【0134】

一部の実施形態では、本開示のキメラ受容体は、二価ＣＡＲを含む。一部の実施形態では、二価ＣＡＲは、ＶＳＩＧ２二価ＣＡＲである。一部の実施形態では、二価のＶＳＩＧ２ ＣＡＲは、表Ａに示される抗ＶＳＩＧ２配列のうちの一つまたは複数を含む。一部の実施形態では、二価のＶＳＩＧ２ ＣＡＲのＡＢＤは、それぞれ、同じＡＢＤを含む。

【0135】

いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、バイシストロニック性キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、バイシストロニック性キメラ抗原受容体は、ＶＳＩＧ２ ＣＡＲを含む。一部の実施形態では、バイシストロニック性ＶＳＩＧ２ ＣＡＲは、表Ａに示される抗ＶＳＩＧ２配列のうちの一つまたは複数を含む。

【0136】

膜貫通ドメイン
一部の実施形態では、本開示のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）の膜貫通ドメインは、細胞膜の少なくとも一部にまたがる疎水性アルファヘリックスを含む。異なる膜貫通ドメインが異なる受容体の安定性をもたらし得ることが示されている。抗原認識後、受容体はクラスター化し、シグナルが細胞に伝達される。いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド、ＣＤ２８ポリペプチド、ＣＤ３－ゼータポリペプチド、ＣＤ４ポリペプチド、４－１ＢＢポリペプチド、ＯＸ４０ポリペプチド、ＩＣＯＳポリペプチド、ＣＴＬＡ－４ポリペプチド、ＰＤ－１ポリペプチド、ＬＡＧ－３ポリペプチド、２Ｂ４ポリペプチド、ＢＴＬＡポリペプチド、ＬＩＲ－１（ＬＩＬＲＢ１）ポリペプチドの膜貫通ドメインを含み得るか、または合成ペプチド、もしくはその任意の組み合わせであり得る。

【0137】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８ポリペプチド由来のものである。任意の好適なＣＤ８ポリペプチドが使用され得る。例示的なＣＤ８ポリペプチドは、限定されないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５およびＡＡＡ９２５３３．１を含む。ＣＤ８膜貫通ドメインの例は、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号３６）、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲ（配列番号３７）、およびＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ（配列番号３８）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号３６）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲ（配列番号３７）を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮ（配列番号３８）を含む。

【0138】

いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８ポリペプチド由来のものである。任意の好適なＣＤ２８ポリペプチドが使用され得る。例示的なＣＤ２８ポリペプチドとしては、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００６１３０．１およびＮＰ＿０３１６６８．３が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３－ゼータポリペプチド由来のものである。任意の好適なＣＤ３－ゼータポリペプチドが使用され得る。例示的なＣＤ３－ゼータポリペプチドとしては、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿９３２１７０．１およびＮＰ＿００１１０６８６２．１が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ４ポリペプチド由来のものである。任意の好適なＣＤ４ポリペプチドを使用することができる。例示的ＣＤ４ポリペプチドには、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０００６０７．１およびＮＰ＿０３８５１６．１が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、４－１ＢＢポリペプチド由来のものである。任意の好適な４－１ＢＢポリペプチドを使用することができる。例示的な４－１ＢＢポリペプチドとしては、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１５５２．２およびＮＰ＿００１０７０９７７．１が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＯＸ４０ポリペプチドに由来する。任意の好適なＯＸ４０ポリペプチドが使用され得る。例示的なＯＸ４０ポリペプチドには、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００３３１８．１およびＮＰ＿０３５７８９．１が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＩＣＯＳポリペプチドに由来する。任意の好適なＩＣＯＳポリペプチドが使用され得る。例示的なＩＣＯＳポリペプチドには、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０３６２２４およびＮＰ＿０５９５０８が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＴＬＡ－４ポリペプチドに由来する。任意の好適なＣＴＬＡ－４ポリペプチドが使用され得る。例示的なＣＴＬＡ－４ポリペプチドには、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００５２０５．２およびＮＰ＿０３３９７３．２が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＰＤ－１ポリペプチドに由来する。任意の好適なＰＤ－１ポリペプチドが使用され得る。例示的なＰＤ－１ポリペプチドには、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００５００９およびＮＰ＿０３２８２４が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＬＡＧ－３ポリペプチド由来のものである。任意の好適なＬＡＧ－３ポリペプチドが使用され得る。例示的なＬＡＧ－３ポリペプチドには、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００２２７７．４およびＮＰ＿０３２５０５．１が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、２Ｂ４ポリペプチド由来のものである。任意の好適な２Ｂ４ポリペプチドが使用され得る。例示的な２Ｂ４ポリペプチドには、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿０５７４６６．１およびＮＰ＿０６１１９９．２が含まれる。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＢＴＬＡポリペプチドに由来する。任意の好適なＢＴＬＡポリペプチドが使用され得る。例示的なＢＴＬＡポリペプチドとしては、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿８６１４４５．４およびＮＰ＿００１０３２８０８．２が含まれる。任意の好適なＬＩＲ－１（ＬＩＬＲＢ１）ポリペプチドが使用され得る。例示的なＬＩＲ－１（ＬＩＬＲＢ１）ポリペプチドには、これらに限定されるものではないが、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１０７５１０６．２およびＮＰ＿００１０７５１０７．２が含まれる。

【0139】

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５、ＡＡＡ９２５３３．１、ＮＰ＿００６１３０．１、ＮＰ＿０３１６６８．３、ＮＰ＿９３２１７０．１、ＮＰ＿００１１０６８６２．１、ＮＰ＿０００６０７．１、ＮＰ＿０３８５１６．１、ＮＰ＿００１５５２．２、ＮＰ＿００１０７０９７７．１、ＮＰ＿００３３１８．１、ＮＰ＿０３５７８９．１、ＮＰ＿０３６２２４、ＮＰ＿０５９５０８、ＮＰ＿００５２０５．２、ＮＰ＿０３３９７３．２、ＮＰ＿００５００９、ＮＰ＿０３２８２４、ＮＰ＿００２２７７．４、ＮＰ＿０３２５０５．１、ＮＰ＿０５７４６６．１、ＮＰ＿０６１１９９．２、ＮＰ＿８６１４４５．４、もしくはＮＰ＿００１０３２８０８．２の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列、またはその断片を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、相同性は、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡなどの標準的なソフトウェアを使用して決定することができる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、一個の保存的アミノ酸置換、二個以下の保存的アミノ酸置換、または三個以下の保存的アミノ酸置換を含むことができる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２００、少なくとも２１０、少なくとも２２０、少なくとも２３０、または少なくとも２４０アミノ酸長であるＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００１１３９３４５、ＡＡＡ９２５３３．１、ＮＰ＿００６１３０．１、ＮＰ＿０３１６６８．３、ＮＰ＿９３２１７０．１、ＮＰ＿００１１０６８６２．１、ＮＰ＿０００６０７．１、ＮＰ＿０３８５１６．１、ＮＰ＿００１５５２．２、ＮＰ＿００１０７０９７７．１、ＮＰ＿００３３１８．１、ＮＰ＿０３５７８９．１、ＮＰ＿０３６２２４、ＮＰ＿０５９５０８、ＮＰ＿００５２０５．２、ＮＰ＿０３３９７３．２、ＮＰ＿００５００９、ＮＰ＿０３２８２４、ＮＰ＿００２２７７．４、ＮＰ＿０３２５０５．１、ＮＰ＿０５７４６６．１、ＮＰ＿０６１１９９．２、ＮＰ＿８６１４４５．４、またはＮＰ＿００１０３２８０８．２の連続する部分であるアミノ酸配列を有することができる。

【0140】

膜貫通ドメインが由来し得る好適なポリペプチドのさらなる例には、Ｔ細胞受容体、ＣＤ２７、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（触覚）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、およびＮＧ２Ｃのアルファ、ベータ、またはゼータ鎖の膜貫通領域が含まれるが、これらに限定されない。

【0141】

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞内ドメインと同じタンパク質に由来する。

【0142】

スペーサー領域
一部の実施形態では、本開示のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）は、細胞外抗原結合ドメインを膜貫通ドメインに連結するスペーサー領域も含むことができる。スペーサー領域は、抗原認識を容易にするために、抗原結合ドメインが異なる方向に配向することを可能にするのに十分に柔軟であり得る。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、ヒトタンパク質由来のヒンジであり得る。例えば、ヒンジは、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＧ２ヒンジ、ＣＤ８ａヒンジ、またはＩｇＤヒンジを含むがこれらに限定されないヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジであり得る。いくつかの実施形態では、スペーサー領域は、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＧ２ヒンジ、ＩｇＤヒンジ、ＣＤ２８ヒンジ、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ、ＬＮＧＦＲヒンジ、またはＰＤＧＦＲ－ベータ細胞外リンカーを含み得る。いくつかの態様では、スペーサー領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に局在化される。一部の実施形態では、スペーサー領域は、表２に列挙されるアミノ酸配列、または表２に列挙されるアミノ酸配列のいずれかと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列のいずれかを含んでもよい。

【0143】

（表２）スペーサーアミノ酸配列

【0144】

一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号３９に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４０に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４１に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４２に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４３に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４４に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４５に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４６に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４７に示される配列を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列番号４８に示される配列を含む。

【0145】

一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＬＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号４９）を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列ＡＬＳＮＳＩＭＹＦＳＨＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号５０）を含む。一部の実施形態では、スペーサー領域は、配列ＦＶＰＶＦＬＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＬＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号５１）を含む。

【0146】

一部の実施形態では、本開示のスペーサー領域のいずれかをコードするポリヌクレオチドは、表３に列挙される核酸配列、または表３に列挙される核酸配列のいずれかと少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である核酸配列のいずれかを含んでもよい。

【0147】

（表３）スペーサー核酸配列

【0148】

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲは、２アミノ酸残基～１０アミノ酸残基の長さであり、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間の結合を形成し得る短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーを更に含み得る。好適なリンカーの非限定的な例は、グリシン－セリン二重鎖である。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＣＫＪＳＧＧＣＫＪＳ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含む。

【0149】

細胞内シグナル伝達ドメイン
一部の実施形態では、本開示のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）は、一つ以上の細胞質ドメインまたは領域を含む。ＣＡＲの細胞質ドメインまたは領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。

【0150】

本開示のＣＡＲに使用され得る好適な細胞内シグナル伝達ドメインの例には、限定されないが、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列、および抗原受容体関与後にシグナル伝達を調節するように協調的に作用する共受容体、ならびにこれらの配列の任意の誘導体またはバリアント、および同じ機能能力を有する任意の組換え配列が含まれる。

【0151】

理論に拘束されることを望むものではないが、ＴＣＲ単独を通して生成されるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であり、したがって、典型的には、完全な活性化には二次および／または共刺激シグナルも必要であると考えられる。したがって、Ｔ細胞活性化は、二つの異なるクラスの細胞質シグナル伝達配列、ＴＣＲを介して抗原依存性一次活性化を開始するもの（一次細胞内シグナル伝達ドメイン）、および二次または共刺激シグナルを提供するために抗原非依存的な方法で作用するもの（二次細胞質ドメイン、例えば、共刺激ドメイン）によって媒介され得る。さらに、Ｔ細胞シグナル伝達および機能（例えば、活性化シグナル伝達カスケード）は、細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを介してＴ細胞に存在する阻害性受容体によって負に制御することができる。

【0152】

一部の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、阻害性細胞内シグナル伝達ドメインを含むことができる。一部の実施形態では、阻害性細胞内シグナル伝達ドメインは、一つまたは複数の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一つまたは複数の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインは、ペプチドリンカー（例えば、表１を参照）またはスペーサーもしくはヒンジ配列（例えば、表２を参照）を介して他のドメイン（例えば、膜貫通ドメイン）に連結される。一部の実施形態では、二つ以上の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインが存在するとき、二つ以上の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインは、ペプチドリンカー （例えば、表１を参照）またはスペーサーもしくはヒンジ配列（例えば、表２を参照）を介して連結することができる。一部の実施形態では、細胞内阻害共シグナル伝達ドメインは、阻害性ドメインである。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質の一つ以上の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインは、一つ以上のＩＴＩＭ含有タンパク質、またはそのフラグメントを含む。ＩＴＩＭは、多くの阻害性免疫受容体の細胞質末端に見られる保存されたアミノ酸配列である。一部の実施形態では、一つ以上のＩＴＩＭ含有タンパク質、またはその断片は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡ、ＬＡＩＲ１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ２、およびＳＩＲＰａｌｐｈａ（ＳＩＲＰａ）から選択される。一部の実施形態では、一つまたは複数の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインは、一つまたは複数の非ＩＴＩＭスキャフォールドタンパク質、またはその断片を含む。いくつかの実施形態では、一つ以上の非ＩＴＩＭ足場タンパク質、またはそのフラグメントは、ＧＲＢ－２、Ｄｏｋ－１、Ｄｏｋ－２、ＳＬＡＰ、ＬＡＧ３、ＨＡＶＲ、ＧＩＴＲ、およびＰＤ－Ｌ１から選択される。阻害性細胞内シグナル伝達ドメインは、酵素阻害ドメインをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、酵素阻害ドメインは、酵素触媒ドメインを含む。一部の実施形態では、酵素触媒ドメインは、ＣＳＫ、ＳＨＰ－１、ＰＴＥＮ、ＣＤ４５、ＣＤ１４８、ＰＴＰ－ＭＥＧ１、ＰＴＰ－ＰＥＳＴ、ｃ－ＣＢＬ、ＣＢＬ－ｂ、ＰＴＰＮ２２、ＬＡＲ、ＰＴＰＨ１、ＳＨＩＰ－１、またはＲａｓＧＡＰを含むがこれらに限定されない酵素に由来する。シグナル伝達の酵素調節の例は、Ｐａｖｅｌ Ｏｔａｈａｌ ｅｔ ａｌ． （Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ． ２０１１ Ｆｅｂ；１８１３（２）：３６７－７６）， Ｋｏｓｕｇｉ Ａ．， ｅｔ ａｌ． （Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ＳＨＰ－１ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ｉｎ ＴＣＲ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｒａｆｔｓ， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ２００１ Ｊｕｎ； １４（６）： ６６９－８０）、およびＳｔａｎｆｏｒｄ， ｅｔ ａｌ． （Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＣＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｂｙ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓ： ｆｒｏｍ ｉｍｍｕｎｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｔｏ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ， Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ２０１２ Ｓｅｐ； １３７（１）： １－１９）により詳細に記載され、そのそれぞれが、全ての目的について参照により本明細書に組み込まれる。

【0153】

一部の実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、刺激的な方法、または阻害的な方法のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を制御する一次シグナル伝達ドメインを含むことができる。刺激的な方法で作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として即知のシグナル伝達モチーフを含み得る。本開示のＣＡＲに使用され得る好適なＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインの例には、ＣＤ３－ゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、およびＣＤ６６ｄのものが含まれるが、これらに限定されない。

【0154】

一部の実施形態では、本開示のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）は、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３－ゼータポリペプチドの一次シグナル伝達ドメインを含む。本開示のＣＤ３－ゼータポリペプチドは、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿９３２１７０もしくはＮＰ＿００１１０６８６４．２の配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％相同であるアミノ酸配列を有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３－ゼータポリペプチドは、一つの保存的アミノ酸置換、最大二つの保存的アミノ酸置換、または最大三つの保存的アミノ酸置換を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、または少なくとも１６０、少なくとも１７０、または少なくとも１８０アミノ酸の長さである、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿９３２１７０またはＮＰ＿００１１０６８６４．２の連続する部分であるアミノ酸配列を有することができる。

【0155】

他の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、天然ＩＴＡＭドメインと比較して、活性を改変（例えば、増加または減少）した修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば、変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化されたおよび／または切断されたＩＴＡＭ含有一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、一つ、二つ、三つ、四つ、またはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。

【0156】

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、それ自体でＣＤ３－ゼータシグナル伝達ドメインを含み得るか、またはそれは、本開示のＣＡＲの文脈で有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わされ得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖の一部および共刺激シグナル伝達ドメインを含むことができる。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの一部を指し得る。本開示の共刺激分子は、抗原に対するリンパ球の効率的な応答に必要とされ得る、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。好適な共刺激分子の例には、ＣＤ９７、ＣＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＣＤ１５４、ＣＤ８、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＺＡＰ４０、ＣＤ３０、ＧＩＴＲ、ＨＶＥＭ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＭｙＤ８８、２Ｂ４、ＣＤ４０、ＰＤ－１、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＢＡＦＦＲ、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡｌ、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（触覚）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａなどが含まれるが、これらに限定されない。

【0157】

いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲの細胞質の一部内の細胞内シグナル伝達配列は、ランダムまたは特定の順序で互いに連結され得る。いくつかの実施形態では、例えば、２アミノ酸～１０アミノ酸長（例えば、２アミノ酸、３アミノ酸、４アミノ酸、５アミノ酸、６アミノ酸、７アミノ酸、８アミノ酸、９アミノ酸、または１０アミノ酸）の短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーは、細胞内シグナル伝達配列との間の結合を形成し得る。一実施形態では、グリシン－セリン二重鎖を好適なリンカーとして使用することができる。一実施形態では、単一アミノ酸、例えば、アラニンまたはグリシンを、好適なリンカーとして使用することができる。

【0158】

一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、二つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメイン、例えば、二つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、三つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、四つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、五つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、六つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、七つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、八つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、九つの共刺激性シグナル伝達ドメイン、１０の共刺激性シグナル伝達ドメイン、またはそれ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、二つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、二つ以上の共刺激性シグナル伝達ドメインは、本開示のリンカー（例えば、表１に記載されるリンカーのいずれか）によって分離される。一実施形態では、リンカーは、グリシン残基である。別の実施形態では、リンカーは、アラニン残基である。

【0159】

一部の実施形態では、本開示の細胞は、ＶＳＩＧ２に結合する抗原結合ドメイン、本開示の膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメイン、および一つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する。

【0160】

一部の実施形態では、本開示の細胞は、ＶＳＩＧ２に結合する抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメイン）、本開示の膜貫通ドメイン、および一つまたは複数の細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含むｉＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、本開示の細胞は、（１）ＶＳＩＧ２（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメイン）に結合する抗原結合ドメイン、本開示の膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメイン、および一つまたは複数の共刺激性シグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現する。

【0161】

ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）ＣＡＲ
一部の実施形態では、本開示のＣＡＲ（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）は、ナチュラルキラー細胞受容体（ＮＫＲ）の一つ以上の成分を含み、それによってＮＫＲ－ＣＡＲを形成する。ＮＫＲ成分は、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＫＩＲ２ＤＬ２／Ｌ３、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＫＩＲ２ＤＬ５Ａ、ＫＩＲ２ＤＬ５Ｂ、ＫＩＲ２ＤＳ１、ＫＩＲ２ＤＳ２、ＫＩＲ２ＤＳ３、ＫＩＲ２ＤＳ４、ＤＩＲ２ＤＳ５、ＫＩＲ３ＤＬ１／Ｓ１、ＫＩＲ３ＤＬ２、ＫＩＲ３ＤＬ３、ＫＩＲ２ＤＰ１、およびＫＩＲＳ ＤＰＩなどのキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）；ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６などの天然細胞傷害性受容体（ＮＣＲ）；ＣＤ４８、ＣＤ２２９、２Ｂ４、ＣＤ８４、ＮＴＢ－Ａ、ＣＲＡＣＣ、ＢＬＡＭＥ、ＣＤ２Ｆ－１０などの免疫細胞受容体のシグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭ）ファミリー；ＣＤ１６およびＣＤ６４などのＦｃ受容体（ＦｃＲ）；ならびにＬＹ４９ＡおよびＬＹ４９ＣなどのＬｙ４９受容体を含むが、これらに限定されない、任意の好適なナチュラルキラー細胞受容体からの膜貫通ドメイン、ヒンジドメイン、または細胞質ドメインであり得る。いくつかの実施形態では、ＮＫＲ－ＣＡＲは、アダプタ分子またはＤＡＰ１２などの細胞内シグナル伝達ドメインと相互作用し得る。ＮＫＲ成分を含むＣＡＲの例示的な構成および配列は、２０１４年９月１８日に公開された国際特許公開ＷＯ２０１４／１４５２５２に記載される。

【0162】

さらなるキメラ受容体標的
本開示のある特定の態様は、ＶＳＩＧ２に加えて、目的の抗原と結合するキメラ受容体およびかかるキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドに関する。本開示の特定の態様は、ＶＳＩＧ２に加えて、目的の抗原と結合するかかるキメラ受容体のうちの一つ以上を発現するように遺伝子修飾されたキメラ受容体および免疫応答性細胞などの細胞、ならびにかかる受容体および細胞を使用して、固形腫瘍などの悪性腫瘍、および抗原特異的免疫応答が望まれる他の病状を治療および／または予防する方法に関する。悪性細胞は、免疫認識および排除から自身を保護するための一連のメカニズムを開発している。本開示は、かかる悪性細胞を治療するための腫瘍微小環境内の免疫原性を提供する。

【0163】

一部の実施形態では、第一のキメラ受容体は、ＶＳＩＧ２に結合する抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメイン）を含み、第二のキメラ受容体は、腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原に結合するさらなる抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞は、ＶＳＩＧ２に特異的な第一のキメラ受容体（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインを含むＣＡＲ）および腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原に特異的な第二のキメラ受容体を発現することができる。一部の実施形態では、細胞は、ＶＳＩＧ２に特異的な第一の阻害性キメラ受容体（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインを含む阻害性ＣＡＲ）および腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原に特異的な第二のキメラ受容体を発現することができる。例えば、細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、ＶＳＩＧ２に結合する抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメイン）を含むｉＣＡＲおよび腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）を標的にするａＣＡＲを共発現するか、または共発現する能力があるように操作することができる。ＶＳＩＧ２に加えて、抗原に結合する適当な抗体は、天然または合成、全長またはその断片、モノクローナルまたはポリクローナルに関わらず、腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原に十分な強さかつ特異的に結合する、任意の抗体を含む。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原に結合する市販の抗体が使用されてもよい。市販の抗体のＣＤＲは、従来の配列決定技術を使用して当業者によって容易にアクセス可能である。更に、当業者は、かかる市販の抗体のＣＤＲに基づいて、ｓｃＦｖおよびキメラ受容体（例えば、ＣＡＲおよびＴＣＲ）をコードするポリヌクレオチドを構築することができる。

【0164】

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
本開示のある特定の態様は、腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原に特異的に結合するキメラ受容体に関し、第二の抗原のキメラ受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。本開示のＴＣＲは、インバリアントＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現される２つの可変鎖を含むジスルフィド結合ヘテロ二量体タンパク質である。ＴＣＲは、Ｔ細胞の表面に見出され、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と結合したペプチドとして抗原を認識する役割を担う。特定の実施形態では、本開示のＴＣＲは、ＴＲＡによってコードされるアルファ鎖およびＴＲＢによってコードされるベータ鎖を含む。特定の実施形態では、ＴＣＲは、ガンマ鎖およびデルタ鎖（それぞれ、ＴＲＧおよびＴＲＤによってコードされる）を含む。

【0165】

ＴＣＲの各鎖は、可変（Ｖ）領域および定常（Ｃ）領域の二つの細胞外ドメインからなる。定常領域は、細胞膜の近位であり、膜貫通領域および短い細胞質尾部がそれに続く。可変領域は、ペプチド／ＭＨＣ複合体と結合する。可変領域の各々は、三つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。

【0166】

特定の実施形態では、ＴＣＲは、三つの二量体シグナル伝達モジュールＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／ε、およびＣＤ２４７ζ／ζまたはＣＤ２４７ζ／ηと受容体複合体を形成することができる。ＴＣＲ複合体がその抗原およびＭＨＣ（ペプチド／ＭＨＣ）と複合すると、ＴＣＲ複合体を発現するＴ細胞が活性化される。

【0167】

いくつかの実施形態では、本開示のＴＣＲは、組換えＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲは、非天然起源ＴＣＲである。特定の実施形態では、ＴＣＲは、天然起源ＴＣＲとは、少なくとも１つのアミノ酸残基が異なる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、天然起源ＴＣＲとは、少なくとも２個のアミノ酸残基、少なくとも３個のアミノ酸残基、少なくとも４個のアミノ酸残基、少なくとも５個のアミノ酸残基、少なくとも６個のアミノ酸残基、少なくとも７個のアミノ酸残基、少なくとも８個のアミノ酸残基、少なくとも９個のアミノ酸残基、少なくとも１０個のアミノ酸残基、少なくとも１１個のアミノ酸残基、少なくとも１２個のアミノ酸残基、少なくとも１３個のアミノ酸残基、少なくとも１４個のアミノ酸残基、少なくとも１５個のアミノ酸残基、少なくとも２０個のアミノ酸残基、少なくとも２５個のアミノ酸残基、少なくとも３０個のアミノ酸残基、少なくとも４０個のアミノ酸残基、少なくとも５０個のアミノ酸残基、少なくとも６０個のアミノ酸残基、少なくとも７０個のアミノ酸残基、少なくとも８０個のアミノ酸残基、少なくとも９０個のアミノ酸残基、少なくとも１００個のアミノ酸残基、またはそれ以上のアミノ酸残基が異なる。特定の実施形態では、ＴＣＲは、天然起源ＴＣＲが、少なくとも１つのアミノ酸残基によって修飾される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、天然起源ＴＣＲが、少なくとも２個のアミノ酸残基、少なくとも３個のアミノ酸残基、少なくとも４個のアミノ酸残基、少なくとも５個のアミノ酸残基、少なくとも６個のアミノ酸残基、少なくとも７個のアミノ酸残基、少なくとも８個のアミノ酸残基、少なくとも９個のアミノ酸残基、少なくとも１０個のアミノ酸残基、少なくとも１１個のアミノ酸残基、少なくとも１２個のアミノ酸残基、少なくとも１３個のアミノ酸残基、少なくとも１４個のアミノ酸残基、少なくとも１５個のアミノ酸残基、少なくとも２０個のアミノ酸残基、少なくとも２５個のアミノ酸残基、少なくとも３０個のアミノ酸残基、少なくとも４０個のアミノ酸残基、少なくとも５０個のアミノ酸残基、少なくとも６０個のアミノ酸残基、少なくとも７０個のアミノ酸残基、少なくとも８０個のアミノ酸残基、少なくとも９０個のアミノ酸残基、少なくとも１００個のアミノ酸残基、またはそれ以上のアミノ酸残基によって修飾される。

【0168】

キメラＴＣＲ
一部の実施形態では、本開示のＴＣＲは、腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、目的の第二の抗原に特異的に結合するキメラＴＣＲを作製するために、ＴＣＲ鎖、例えば、ＴＣＲアルファ鎖またはＴＣＲベータ鎖の一つまたは複数の定常ドメインに移植され得る一つまたは複数の抗原結合ドメインを含む。理論に束縛されることを望まないが、キメラＴＣＲは、抗原結合時にＴＣＲ複合体を通してシグナル伝達し得ると考えられている。例えば、抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、ＴＣＲアルファ鎖および／またはＴＣＲベータ鎖などのＴＣＲ鎖の定常ドメイン、例えば、細胞外定常ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインの少なくとも一部に移植することができる。別の例として、抗体または抗体断片のＣＤＲを、ＴＣＲアルファ鎖および／またはベータ鎖に移植して、腫瘍関連抗原（例えば、結腸直腸がん関連抗原）などの、第二の抗原と特異的に結合するキメラＴＣＲを作製することができる。そのようなキメラＴＣＲは、当該技術分野では周知の方法によって作製することができる（例えば、Ｗｉｌｌｅｍｓｅｎ ＲＡ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０００； ７：１３６９－１３７７； Ｚｈａｎｇ Ｔ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ２００４ １１： ４８７－４９６；およびＡｇｇｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２０１２ Ａｐｒ； １９（４）： ３６５－７４を参照のこと）。

【0169】

免疫応答性細胞
本開示の特定の態様は、本開示の一つ以上のキメラ受容体またはかかるキメラ受容体をコードする一つ以上のポリヌクレオチドを含むように遺伝子操作された細胞（免疫応答性細胞など）、および固形腫瘍（例えば結腸直腸がん）を治療するためにかかる細胞を使用する方法に関する。

【0170】

いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、初代細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、細胞株である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、骨髄細胞、血液細胞、皮膚細胞、骨細胞、筋細胞、神経細胞、脂肪細胞、肝細胞、または心臓細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、幹細胞である。例示的な幹細胞には、胚性幹細胞（ＥＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、成体幹細胞、および造血幹細胞（血液幹細胞）、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、神経幹細胞、上皮幹細胞、または皮膚幹細胞などの組織特異的幹細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞は、本開示の幹細胞に由来するか、または分化した細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞である。本開示の免疫細胞は、本開示の幹細胞から（例えば、ＥＳＣまたはｉＰＳＣから）単離または分化され得る。例示的な免疫細胞には、Ｔ細胞（例えば、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、制御性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、アルファベータＴ細胞、およびガンマデルタＴ細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、および単球が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞は、神経細胞である。本開示の神経細胞は、本開示の幹細胞から（例えば、ＥＳＣまたはｉＰＳＣから）単離または分化され得る。例示的なニューロン細胞には、神経前駆細胞、ニューロン（例えば、感覚ニューロン、運動ニューロン、コリン作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、グルタミン酸作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、またはセロトニン作動性ニューロン）、星状細胞、オリゴデンドロサイト、およびミクログリアが含まれるが、これらに限定されない。

【0171】

いくつかの実施形態では、細胞は、免疫応答性細胞である。本開示の免疫応答性細胞は、本開示の幹細胞から（例えば、ＥＳＣまたはｉＰＳＣから）単離または分化され得る。本開示の例示的な免疫応答性細胞には、リンパ球系統の細胞が含まれるが、これに限定されない。Ｂ細胞、Ｔ細胞、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むリンパ系統は、抗体の産生、細胞免疫系の制御、血液中の外来物質の検出、宿主に外来する細胞の検出などを提供する。リンパ系統の免疫応答性細胞の例には、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、胚性幹細胞、多能性幹細胞、および人工多能性幹細胞（例えば、リンパ球系細胞由来もしくは分化し得るもの）が含まれるが、これらに限定されない。Ｔ細胞は、胸腺で成熟し、細胞介在性免疫を主に担うリンパ球であり得る。Ｔ細胞は、適応免疫系に関与する。いくつかの実施形態では、本開示のＴ細胞は、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）、および二種類のエフェクターメモリＴ細胞、例えば、Ｔ_ＥＭ細胞およびＴ_ＥＭＲＡ細胞、制御性Ｔ細胞（サプレッサーＴ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞、およびγδ Ｔ細胞を含むがこれらに限定されない任意の種類のＴ細胞であり得る。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死を誘導することができるＴリンパ球のサブセットである。患者自身のＴ細胞は、キメラＴＣＲまたはＣＡＲなどの一つ以上のキメラ受容体の導入を通じて、特定の抗原を標的とするように遺伝子修飾され得る。

【0172】

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、細胞介在性免疫の一部であり、自然免疫応答中に作用するリンパ球であり得る。ＮＫ細胞は、標的細胞に対してその細胞傷害性効果を発揮するため、事前の活性化を必要としない。

【0173】

いくつかの実施形態では、本開示の免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。本開示のＴ細胞は、自家、同種異系、または操作前駆もしくは幹細胞からインビトロで誘導され得る。

【0174】

いくつかの実施形態では、本開示の免疫応答性細胞は、欠損ＴＣＲ－αβを有する普遍的なＴ細胞である。普遍的なＴ細胞を開発する方法は、当技術分野、例えば、Ｖａｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ （２０１５）； ２３ ９， １５０７－１５１８、およびＴｏｒｉｋａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ ２０１２ １１９：５６９７－５７０５に記載される。

【0175】

いくつかの実施形態では、本開示の免疫応答性細胞は、本開示の一つ以上のキメラ受容体を含む単離免疫応答性細胞である。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞は、本開示の一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上、六つ以上、七つ以上、八つ以上、九つ以上、または十以上のキメラ受容体を含む。

【0176】

いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞は、Ｔ細胞である。一部の実施形態では、免疫応答性細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。

【0177】

一部の実施形態では、免疫応答性細胞は、免疫受容体を発現するか、または発現する能力がある。免疫受容体は一般的に、免疫受容体発現細胞におけるシグナル伝達またはタンパク質発現の変化を誘導することができ、これにより、同種のリガンドに結合する際の免疫応答が調節される（例えば、免疫応答を調節、活性化、開始、刺激、増加、防止、減弱、阻害、低下、減少、阻害、または抑制する）。例えば、ＴＣＲ／ＣＡＲに存在するＣＤ３鎖がリガンド結合に応答してクラスター化する際、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を介したシグナル伝達カスケードが生じる。具体的には、特定の実施形態において、内因性ＴＣＲ、外因性ＴＣＲ、キメラＴＣＲ、またはＣＡＲ（具体的には活性化ＣＡＲ）がそれぞれの抗原に結合すると、結合受容体の近くの多くの分子（例：ＣＤ４またはＣＤ８、ＣＤ３γ／δ／ε／ζなど）のクラスター化を含む免疫シナプスの形成が起こる。膜結合シグナル伝達分子のこのようなクラスター化により、ＣＤ３鎖内に含まれるＩＴＡＭモチーフがリン酸化され、これにより、Ｔ細胞活性化経路が開始され、最終的にＮＦ－κＢおよびＡＰ－１などの転写因子が活性化される。これらの転写因子は、Ｔ細胞のグローバルな遺伝子発現を誘導して、マスターレギュレーターＴ細胞タンパク質の増殖および発現のためのＩＬ－２産生を増加させることにより、サイトカイン産生および／またはＴ細胞媒介傷害などのＴ細胞介在性免疫応答を開始させることができる。

【0178】

複数のキメラ受容体を発現する細胞
いくつかの実施形態では、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、本開示の２つ以上のキメラ受容体を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、２つ以上のキメラ受容体を含み、２つ以上のキメラ受容体のうちの１つは、キメラ阻害性受容体である。いくつかの実施形態では、細胞は、３つ以上のキメラ受容体を含み、３つ以上のキメラ受容体のうちの少なくとも１つは、キメラ阻害性受容体である。いくつかの実施形態では、細胞は、４つ以上のキメラ受容体を含み、４つ以上のキメラ受容体の少なくとも１つは、キメラ阻害性受容体である。いくつかの実施形態では、細胞は、五つ以上のキメラ受容体を含み、五つ以上のキメラ受容体の少なくとも一つは、キメラ阻害性受容体である。

【0179】

いくつかの実施形態では、二つ以上のキメラ受容体の各々は、異なる抗原結合ドメイン、例えば、同じ抗原または異なる抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、二つ以上のキメラ受容体によって結合される各抗原は、上皮細胞型（例えば、同じ上皮細胞型）などの、同じ細胞で発現される。

【0180】

本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）が２つ以上の別個のキメラ受容体を発現する実施形態では、異なるキメラ受容体の各々の抗原結合ドメインは、抗原結合ドメインが互いに相互作用しないように設計され得る。例えば、第一のキメラ受容体（例えば、ＶＳＩＧ２特異的キメラ受容体）および第二のキメラ受容体を発現する本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、第二のキメラ受容体の抗原結合ドメインとの会合を形成しない抗原結合ドメインを含む第一のキメラ受容体を含み得る。例えば、第一のキメラ受容体の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖなどの抗体断片を含み得、一方、第二のキメラ受容体の抗原結合ドメインは、ＶＨＨを含み得る。

【0181】

理論に拘束されることを望まないが、各々が抗原結合ドメインを含む複数のキメラ膜埋め込み型受容体を有する細胞において、各受容体の抗原結合ドメイン間の相互作用は、かかる相互作用が、それらの同族抗原と結合する一つ以上の抗原結合ドメインの能力を阻害し得る望ましくない可能性があると考えられる。したがって、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）が２つ以上のキメラ受容体を発現する実施形態では、キメラ受容体は、かかる阻害性相互作用を最小化する抗原結合ドメインを含む。一実施形態では、１つのキメラ受容体の抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖを含み、第２のキメラ受容体の抗原結合ドメインは、単一ＶＨドメイン、例えば、ラクダ、サメ、もしくはヤツメウナギ単一ＶＨドメイン、またはヒトもしくはマウス配列に由来する単一ＶＨドメインを含む。

【0182】

一部の実施形態では、細胞の表面上に存在する場合、第一のキメラ受容体のその同族抗原との抗原結合ドメインの結合（例えば、ＶＳＩＧ２に結合するＶＳＩＧ２特異的キメラ受容体）は、第二のキメラ受容体の存在によって実質的に低減されない。いくつかの実施形態では、第２のキメラ受容体の存在下での第１のキメラ受容体の抗原結合ドメインのその同族抗原との結合は、第２のキメラ受容体の非存在下での第１のキメラ受容体の抗原結合ドメインのその同族抗原との結合の８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％である。いくつかの実施形態では、細胞の表面に存在する場合、第１のキメラ受容体および第２のキメラ受容体の抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合よりも少なく互いに会合する。いくつかの実施形態では、第一のキメラ受容体および第二のキメラ受容体の抗原結合ドメインは、両方がｓｃＦｖ抗原結合ドメインである場合よりも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％少なく互いに会合する。

【0183】

キメラ阻害性受容体
いくつかの実施形態では、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、本開示の一つ以上のキメラ阻害性受容体を含む。一部の実施形態では、一つまたは複数のキメラ阻害性受容体のそれぞれは、正常な細胞上で一般的に発現される（例えば、健常であると一般的にみなされる細胞）が、結腸直腸がん細胞などの腫瘍細胞上では発現されない抗原と結合する抗原結合ドメインを含む。一部の実施形態では、阻害性キメラ受容体は、ＶＳＩＧ２に結合する抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有するＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメイン）を含む。

【0184】

一部の実施形態では、一つ以上のキメラ阻害性受容体は、脳、神経組織、内分泌、骨、骨髄、免疫系、内皮組織、筋肉、肺、肝臓、胆嚢、膵臓、消化管、腎臓、膀胱、雄性生殖器、雌性生殖器、脂肪、軟組織、および皮膚から選択される組織に由来する非腫瘍細胞上で発現される抗原と結合する。

【0185】

一部の実施形態では、キメラ阻害性受容体（例えば、ＶＳＩＧ２特異的キメラ阻害性受容体）は、例えば、一つまたは複数の活性化キメラ受容体の一つまたは複数の活性を制御、調節、またはそれ以外の場合阻害するための論理ゲートではないものとして、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）上に発現される一つまたは複数の活性化キメラ受容体（例えば、活性化キメラＴＣＲまたはＣＡＲ）と共に使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の阻害性キメラ受容体は、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）の一つ以上の活性を阻害し得る。

【0186】

共刺激リガンド
いくつかの実施形態では、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、一つ以上の組換えまたは外因性共刺激リガンドをさらに含むことができる。例えば、細胞が、本開示の一つ以上のキメラ受容体（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）および一つ以上の共刺激リガンドを共発現するか、または共発現するように誘導されるように、細胞を一つ以上の共刺激リガンドでさらに形質導入することができる。理論に拘束されることを望まないが、一つ以上のキメラ受容体と一つ以上の共刺激リガンドとの間の相互作用は、細胞の完全な活性化に重要な非抗原特異的シグナルを提供し得ると考えられる。好適な共刺激リガンドの例には、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバー、および免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドが含まれるが、これらに限定されない。ＴＮＦは、全身炎症に関与するサイトカインであり、急性期反応を刺激する。その主な役割は、免疫細胞の制御である。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーは、いくつかの共通の特徴を共有している。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーの大部分は、短い細胞質セグメントおよび比較的長い細胞外領域を含むＩＩ型膜貫通タンパク質（細胞外Ｃ末端）として合成される。好適なＴＮＦスーパーファミリーメンバーの例には、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０Ｌ）／ＣＤ１５４、ＣＤ１３７Ｌ／４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ－α、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４０Ｌ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３０Ｌ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦＰ）／リンホトキシン－アルファ（ＬＴａ）、リンホトキシン－ベータ（ＬＴＰ）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞活性化因子（Ｂ ＡＦＦ）／Ｂｌｙ ｓ／ＴＨＡＮＫ／Ｔａｌｌ－１、糖質コルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）、およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導性リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）が含まれるが、これらに限定されない。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識、結合、または接着プロセスに関与する細胞表面および可溶性タンパク質の大きなグループである。これらのタンパク質は、免疫グロブリンと構造的特徴を共有し、免疫グロブリンドメイン（折り畳み）を有する。好適な免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドの例には、ＣＤ８０およびＣＤ８６、両方のＣＤ２８のリガンド、ＰＤ－１のリガンドであるＰＤ－Ｌ１／（Ｂ７－Ｈ１）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、一つ以上の共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４、ＰＤ－Ｌ１、およびそれらの組み合わせから選択される。

【0187】

ケモカイン受容体
一部の実施形態では、本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、一つ以上のキメラ受容体（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）を含み、一つ以上のケモカイン受容体をさらに含み得る。例えば、Ｔ細胞などの細胞におけるケモカイン受容体ＣＣＲ２ｂまたはＣＸＣＲ２のトランスジェニック発現は、ＣＣＬ２分泌性またはＣＸＣＬ１分泌性固形腫瘍への輸送を増強する（Ｃｒａｄｄｏｃｋ ｅｔ ａｌ， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ． ２０１０ Ｏｃｔ； ３３（８）：７８０－８およびＫｅｒｓｈａｗ ｅｔ ａｌ． Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ２００２ Ｎｏｖ １； １３（１６）： １９７１ －８０）。理論に拘束されることを望まないが、本開示のキメラ受容体発現細胞上に発現されるケモカイン受容体は、腫瘍によって分泌されるケモカインを認識し、細胞の腫瘍への標的化を改善し得、これは、細胞の腫瘍への浸潤を促進し、細胞の抗腫瘍効果を増強し得ると考えられる。本開示のケモカイン受容体は、天然起源ケモカイン受容体、組換えケモカイン受容体、またはそのケモカイン結合断片を含み得る。本開示の細胞上に発現し得る好適なケモカイン受容体には、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、またはＣＸＣＲ７などのＣＸＣケモカイン受容体、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、またはＣＣＲ１１などのＣＣケモカイン受容体、ＣＸ３ＣＲ１などのＣＸ３Ｃケモカイン受容体、ＸＣＲ１などのＸＣケモカイン受容体、およびこれらのケモカイン結合断片が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞上で発現されるケモカイン受容体は、腫瘍によって分泌されるケモカインに基づいて選択される。

【0188】

キメラ受容体制御
本開示のいくつかの実施形態は、本開示のキメラ受容体発現細胞（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）の一つ以上のキメラ受容体活性を制御することに関する。キメラ受容体活性を制御するいくつかの方法が存在する。いくつかの実施形態では、一つ以上のキメラ受容体活性を制御することができる制御可能なキメラ受容体は、キメラ受容体療法の安全性および／または有効性を最適化するために望ましい場合がある。例えば、二量体化ドメインに融合されたカスパーゼを使用してアポトーシスを誘導すること（例えば、Ｄｉ ｅｔ ａｌ．， Ｎ Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ２０１１ Ｎｏｖ． ３； ３６５（１８）： １６７３－１６８３を参照）は、キメラ受容体療法における安全性スイッチとして使用することができる。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体発現細胞はまた、リミドゥシド（ＩＵＰＡＣ名称：［（１Ｒ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）－１－［３－［２－［２－［［２－［３－［（１Ｒ）－３－（３，４－ジメトキシフェニル）－１－［（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）ブタノイル］ピペリジン－２－カルボニル］オキシプロピル］フェノキシ］アセチル］アミノ］エチルアミノ］－２－オキソエトキシ］フェニル］プロピル］（２Ｓ）－１－［（２Ｓ）－２－（３，４，５－トリメトキシフェニル）ブタノイル］ピペリジン－２－カルボキシレート）などの二量体化剤の投与時に、カスパーゼ－９の活性化を誘導し、細胞のアポトーシスをもたらす、誘導性カスパーゼ－９（ｉカスパーゼ－９）を発現することができる。いくつかの実施形態では、ｉカスパーゼ－９は、ＣＩＤの存在下で二量体化を媒介する二量体化の化学的誘導物質（ＣＩＤ）を含む結合ドメインを含み、これは、キメラ受容体発現細胞の誘導性かつ選択的な枯渇をもたらす。

【0189】

代替的に、いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体は、キメラ受容体活性を不活性化するか、もしくは阻害する低分子または抗体を利用することによって制御され得る。例えば、抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することによって、キメラ受容体発現細胞を欠失し得る。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体発現細胞は、ＡＤＣＣによる細胞死または補体誘導性細胞死を誘導することができる分子によって認識される抗原を更に発現し得る。例えば、本開示のキメラ受容体発現細胞は、抗体または抗体断片によって標的化されることができる受容体をさらに発現し得る。抗体または抗体断片によって標的化され得る好適な受容体の例には、ＥｐＣＡＭ、ＶＥＧＦＲ、インテグリン（例えば、ανβ３、α４、αΙ３／４β３、α４β７、α５β１、ανβ３、αν）、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１およびＴＲＡＩＬ－Ｒ２）、ＰＤＧＦ受容体、インターフェロン受容体、葉酸受容体、ＧＰＮＭＢ、ＩＣＡＭ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＥＡ、ＣＡ－１２５、ＭＵＣ１、ＴＡＧ－７２、ＩＬ－６受容体、５Ｔ４、ＧＤ２、ＧＤ３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ１１、ＣＤ１１ａ／ＬＦＡ－１、ＣＤ１５、ＣＤ１８／ＩＴＧＢ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３／ＩｇＥ受容体、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ７４、ＣＤ８０、ＣＤ１２５、ＣＤ１４７／ベイシジン、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ－４、ＣＤ１５４／ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ１９５／ＣＣＲ５、ＣＤ３１９／ＳＬＡＭＦ７、およびＥＧＦＲ、ならびにそれらの切断型バージョンが含まれるが、これらに限定されない。

【0190】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体発現細胞は、シグナル伝達能力を欠くが、ＡＤＣＣを誘導することができる分子によって認識されるエピトープを保持する切断型上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）も発現し得る（例えば、ＷＯ２０１１／０５６８９４）。

【0191】

いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体発現細胞は、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）と結合し、ＡＤＣＣによるキメラ受容体発現細胞の選択的枯渇をもたらす、キメラ受容体発現細胞においてＣＤ３２およびＣＤ２０抗原の両方からの標的エピトープを組み合わせる高度に発現する小型マーカー／自殺遺伝子をさらに含む。本開示のキメラ受容体発現細胞を枯渇させるための他の方法には、ＡＤＣＣを誘導することによる破壊のためにキメラ受容体発現細胞に選択的に結合および標的化するモノクローナル抗ＣＤ５２抗体の投与が含まれるが、これに限定されない。いくつかの実施形態では、キメラ受容体発現細胞は、抗イディオタイプ抗体などのキメラ受容体リガンドを使用して選択的に標的化され得る。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、ＡＤＣＣまたはＡＤＣ活性などのエフェクター細胞活性を引き起こすことができる。いくつかの実施形態では、キメラ受容体リガンドは、毒素などの細胞死を誘導する薬剤に更に結合することができる。いくつかの実施形態では、本開示のキメラ受容体発現細胞は、本開示の細胞枯渇剤によって認識される標的タンパク質を更に発現し得る。いくつかの実施形態では、標的タンパク質は、ＣＤ２０であり、細胞枯渇剤は、抗ＣＤ２０抗体である。かかる実施形態では、細胞枯渇剤は、キメラ受容体発現細胞を低減または排除することが望ましい場合に投与される。いくつかの実施形態では、細胞枯渇剤は、抗ＣＤ５２抗体である。

【0192】

いくつかの実施形態では、制御されたキメラ受容体は、本開示のキメラ受容体の成分が別個のポリペプチドまたはメンバー上に分配されているポリペプチドのセットを含む。例えば、ポリペプチドのセットは、二量体化分子の存在下で、ポリペプチドを互いに結合させて機能的キメラ受容体を形成することができる、二量体化スイッチを含み得る。

【0193】

キメラ受容体をコードするポリヌクレオチド構築物
本開示の特定の態様は、本開示の一つ以上のキメラ受容体（例えば、本明細書に記載されるＶＳＩＧ２特異的ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチド（例えば、単離ポリヌクレオチド）に関する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物または修飾ＲＮＡなどのＲＮＡ構築物である。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ構築物である。

【0194】

一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、一つ以上の抗原結合ドメインを含むキメラ受容体をコードし、各ドメインは、標的抗原（例えば、ＶＳＩＧ２）、膜貫通ドメイン、および一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインと結合する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、一次シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ３－ゼータドメイン）、および１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体をコードする。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、スペーサー領域をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、スペーサー領域によって膜貫通ドメインと接続される。一部の実施形態では、スペーサー領域は、表３に列挙される核酸配列のいずれかから選択される核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、リーダー配列をコードするヌクレオチド配列をさらに含む。

【0195】

本開示のポリヌクレオチドは、目的の遺伝子を発現する細胞からライブラリをスクリーニングすること、遺伝子を含むことが既知であるベクターから目的の遺伝子を誘導すること、または標準的な技法を使用して、目的の遺伝子を細胞および遺伝子を含有する組織から直接的に単離することを含むが、これらに限定されない、当該技術分野で既知の任意の好適な組換え方法を使用して得ることができる。代替的に、目的の遺伝子は、合成的に産生され得る。

【0196】

一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、ベクター内に含まれる。一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドは、トランスポゾン、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系、ＴＡＬＥＮ、またはジンクフィンガーヌクレアーゼを介して細胞内で発現される。

【0197】

一部の実施形態では、本開示のキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドの発現は、核酸をプロモーターと作動可能に連結し、構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成され得る。好適なベクターは、真核細胞で複製および組み込むことができる。典型的なクローニングベクターは、所望の核酸の発現を制御するのに有用な転写および翻訳ターミネーター、開始配列、ならびにプロモーターを含む。

【0198】

いくつかの実施形態では、本開示の発現構築物はまた、標準的な遺伝子送達プロトコル（例えば、ＵＳ５３９９３４６、ＵＳ５５８０８５９、およびＵＳ５５８９４６６）を使用して、核酸免疫化および遺伝子療法のために使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、遺伝子療法ベクターである。

【0199】

本開示のポリヌクレオチドは、いくつかの種類のベクターにクローニングされ得る。例えば、ポリヌクレオチドは、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、またはコスミドを含むが、これらに限定されないベクターにクローニングされ得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、または配列決定ベクターであり得る。

【0200】

一部の実施形態では、プラスミドベクターは、本開示のポリヌクレオチドを宿主細胞ゲノムに組み込むためのトランスポゾン／トランスポザーゼ系を含む。トランスポゾンおよびトランスポザーゼプラスミド系を使用して免疫細胞でタンパク質を発現する方法は、概して、Ｃｈｉｃａｙｂａｍ Ｌ，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．２０１９ Ａｐｒ；３０（４）：５１１－５２２． ｄｏｉ： １０．１０８９／ｈｕｍ．２０１８．２１８；およびＰｔａｃｋｏｖａ Ｐ， Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ． ２０１８ Ａｐｒ；２０（４）：５０７－５２０． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｃｙｔ．２０１７．１０．００１に記載されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、トランスポゾン系は、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン／トランスポザーゼまたはｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン／トランスポザーゼである。

【0201】

いくつかの実施形態では、本開示の発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供され得る。好適なウイルスベクター系が当技術分野で周知である。例えば、ウイルスベクターは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスに由来し得る。いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、レンチウイルスベクターである。レンチウイルスベクターは、かかるベクターが導入遺伝子の長期的で安定的な組み込みおよび娘細胞におけるその増殖を可能にするため、長期的な遺伝子導入に好適である。レンチウイルスベクターはまた、レンチウイルスベクターが非増殖細胞を形質導入することができるという点で、腫瘍レトロウイルス（例えば、マウス白血病ウイルス）に由来するベクターよりも有利である。いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、アデノウイルスベクター（Ａ５／３５）である。いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、少なくとも１つの生物における機能的複製起点、プロモーター配列、簡便な制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択可能なマーカーを含む（例えば、ＷＯ０１／９６５８４、ＷＯ０１／２９０５８、およびＵＳ６３２６１９３）。哺乳動物細胞への遺伝子導入のための多数のウイルスベースのシステムが開発されている。選択された遺伝子は、当該技術分野において既知の技法を使用して、ベクターに挿入され、レトロウイルス粒子にパッケージングされ得る。その後、組換えウイルスを単離し、哺乳類細胞にインビボまたはエクスビボのいずれかで送達することができる。いくつかのレトロウイルス系が当該技術分野で既知である。

【0202】

いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、転写開始の頻度を制御するエンハンサーなどの追加のプロモーター要素を含む。エンハンサーは、典型的には、開始部位の３０ｂｐ～１１０ｂｐ上流の領域に位置するが、いくつかのプロモーターは開始部位の下流にも機能要素を含むことが示されている。プロモーター要素間の間隔は、要素が互いに反転または移動されるときにプロモーター機能が維持されるように、柔軟であり得る。例えば、チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーター要素間の間隔を５０ｂｐ離して増やすことができる。プロモーターに応じて、個々の要素は、協力的にまたは独立して機能して、転写を活性化し得る。例示的なプロモーターには、ＳＦＦＶ遺伝子プロモーター、ＥＦＳ遺伝子プロモーター、ＣＭＶ ＩＥ遺伝子プロモーター、ＥＦ１ａプロモーター、ユビキチンＣプロモーター、およびホスホグリセロキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーターが含まれ得るが、これらに限定されない。

【0203】

一部の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞などの哺乳動物細胞において本開示のポリヌクレオチドを発現することができるプロモーターは、ＥＦ１ａプロモーターである。天然ＥＦ１ａプロモーターは、リボソームへのアミノアシルｔＲＮＡの酵素送達を担う伸長因子－１複合体のアルファサブユニットの発現を駆動する。ＥＦ１ａプロモーターは、哺乳動物発現プラスミドに広く使用されており、レンチウイルスベクターにクローニングされたポリヌクレオチドからのキメラ受容体発現を促進するのに有効であることが示されている。

【0204】

一部の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞などの哺乳動物細胞において本開示のポリヌクレオチドを発現することができるプロモーターは、構成的プロモーターである。例えば、好適な構成的プロモーターは、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーターである。好適な構成的プロモーターの別の例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターである。ＣＭＶプロモーターは、プロモーターと作動可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーターである。他の好適な構成的プロモーターには、ユビキチンＣ（ＵｂｉＣ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳がんウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタインバーウイルス前初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子１ａプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。

【0205】

一部の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞などの哺乳動物細胞において本開示のポリヌクレオチドを発現することができるプロモーターは、誘導性プロモーターである。誘導性プロモーターの使用は、プロモーターがポリヌクレオチドと作動可能に連結されている場合に、本開示のポリヌクレオチドの発現を誘導または抑制することができる分子スイッチを提供し得る。誘導性プロモーターの例には、メタロチオネインプロモーター、糖質コルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリンプロモーターが含まれるが、これらに限定されない。

【0206】

いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、分泌を促進するためのシグナル配列、ポリアデニル化シグナルおよび転写ターミネーター、エピソーム複製を可能にする因子、および／または選択を可能にする因子をさらに含むことができる。

【0207】

いくつかの実施形態では、本開示のベクターは、ベクターで形質導入された細胞の集団からのキメラ受容体発現細胞の同定および選択を容易にするための選択可能なマーカー遺伝子および／またはレポーター遺伝子をさらに含み得る。一部の実施形態では、選択可能なマーカーは、ベクターから分離され、同時形質移入手順で使用されるポリヌクレオチドによってコードされ得る。選択可能なマーカーまたはレポーター遺伝子のいずれかは、宿主細胞での発現を可能にするために適切な制御配列と隣接され得る。選択可能なマーカーの例には、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。

【0208】

いくつかの実施形態では、レポーター遺伝子は、形質導入された細胞を同定するために、および制御配列の機能性を評価するために使用され得る。本明細書に開示されるように、レポーター遺伝子は、レシピエント生物もしくは組織には存在または発現されず、その発現が酵素活性などの容易に検出可能な特性がもたらされるポリペプチドをコードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ポリヌクレオチドがレシピエント細胞に導入された後の好適な時期にアッセイすることができる。レポーター遺伝子の例には、ルシフェラーゼをコードする遺伝子、ベータガラクトシダーゼをコードする遺伝子、クロランフェニコールアセチルトランスフェラーゼをコードする遺伝子、分泌型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、および緑色蛍光タンパク質をコードする遺伝子が含まれるが、これらに限定されない。好適な発現系が当技術分野で周知であり、既知の技法を使用して調製されるか、または商業的に入手され得る。いくつかの実施形態では、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小の５’隣接領域を有する構築物がプロモーターとして同定される。かかるプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結され、プロモーター駆動転写を調節する能力について薬剤を評価するために使用され得る。

【0209】

一部の実施形態では、本開示のキメラ受容体をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターは、キメラ受容体の活性を増加させるポリペプチドをコードする第二のポリヌクレオチドを更に含む。

【0210】

キメラ受容体発現細胞が２つ以上のキメラ受容体を含む実施形態では、単一のポリヌクレオチドは、単一の制御制御要素（例えば、プロモーター）の下で、またはポリヌクレオチドに含まれる各キメラ受容体をコードするヌクレオチド配列について別個の制御制御要素の下で、２つ以上のキメラ受容体をコードし得る。キメラ受容体発現細胞が２つ以上のキメラ受容体を含む一部の実施形態では、各キメラ受容体は、別個のポリヌクレオチドによってコードされ得る。一部の実施形態では、各別個のポリヌクレオチドは、その独自の制御要素（例えば、プロモーター）を含む。一部の実施形態では、単一のポリヌクレオチドは、２つ以上のキメラ受容体をコードし、キメラ受容体をコードするヌクレオチド配列は、同じリーディングフレーム内にあり、単一のポリペプチド鎖として発現される。そのような実施形態では、２つ以上のキメラ受容体は、１つ以上のペプチド切断部位、例えば、細胞内プロテアーゼの自己切断部位または基質によって分離され得る。好適なペプチド切断部位には、Ｔ２Ａペプチド切断部位、Ｐ２Ａペプチド切断部位、Ｅ２Ａペプチド切断部位、およびＦ２Ａペプチド切断部位が含まれ得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、２つ以上のキメラ受容体は、Ｔ２Ａペプチド切断部位を含む。いくつかの実施形態では、２つ以上のキメラ受容体は、Ｅ２Ａペプチド切断部位を含む。いくつかの実施形態では、二つ以上のキメラ受容体は、Ｔ２ＡおよびＥ２Ａペプチド切断部位を含む。

【0211】

遺伝子を細胞に導入および発現する方法は、当技術分野において周知である。例えば、いくつかの実施形態では、発現ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって宿主細胞に移行することができる。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的手段の例には、リン酸カルシウム沈殿、リポフェクション、微粒子銃、マイクロインジェクション、およびエレクトロポレーションが含まれるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段の例には、コロイド分散系、巨大分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む脂質に基づく系が含まれるが、これらに限定されない。宿主細胞にポリヌクレオチドを導入するための生物学的手段の例には、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が含まれるが、これらに限定されない。

【0212】

一部の実施形態では、リポソームは、本開示のポリヌクレオチドまたはベクターをインビトロ、エクスビボ、またはインビボで宿主細胞に導入するための非ウイルス送達系として使用され得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、例えば、リポソームの水性内部にカプセル化され、リポソームの脂質二重層内に散在することによって、リポソームとポリヌクレオチドの両方と会合する連結分子を介してリポソームに付着することによって、リポソームに閉じ込められることによって、リポソームと複合体化されることによって、脂質を含有する溶液中に分散されることによって、脂質と混合されることによって、脂質と組み合わされることによって、脂質中に懸濁液として含有されることによって、ミセルに含有または複合体化されることによって、または別の方法で脂質と会合されることによって、脂質と会合し得る。本明細書に開示されるように、脂質会合ポリヌクレオチドまたはベクター組成物は、溶液中の任意の特定の構造に限定されない。いくつかの実施形態では、かかる組成物は、ミセルとして、または「崩壊した」構造を有する二重層構造中に存在し得る。かかる組成物はまた、溶液中に散在して、サイズまたは形状が均一ではない凝集体を形成し得る。本明細書に開示されるように、脂質は、天然に存在するかまたは合成され得る脂肪性物質である。いくつかの実施形態では、脂質は、細胞質内に天然に存在する脂肪液滴、または長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体、例えば、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、およびアルデヒドを含有する化合物のクラスを含むことができる。好適な脂質は、商業的供給源から得られてもよく、ジミリスチルホスファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）、ジセチルホスフェート（「ＤＣＰ」）、コレステロール、およびジミリスチルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）が含まれるが、これらに限定されない。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質の保存溶液は、約－２０℃で保存することができる。クロロホルムは、メタノールよりも容易に蒸発するため、溶媒として使用される。本明細書で使用される場合、「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によって形成される様々な単一および多層脂質ビヒクルを包含し得る。いくつかの実施形態では、リポソームは、リン脂質二重層膜および内部水性媒体を有する小胞構造を有するものとして特徴付けすることができる。いくつかの実施形態では、多層リポソームは、水性媒体によって分離された複数の脂質層を有し得る。リン脂質を過剰な水溶液中に懸濁させると、多層リポソームが自発的に形成され得る。いくつかの実施形態では、脂質成分は、閉鎖構造の形成前に自己再配列を受けてもよく、脂質二重層間で水および溶解溶質を捕捉することができる。いくつかの実施形態では、脂質は、ミセル構造を想定し得るか、または脂質分子の不均一な凝集体としてのみ存在し得る。

【0213】

一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドまたはベクターは、本開示の免疫応答性細胞などの哺乳動物宿主細胞に導入される。一部の実施形態では、宿主細胞における本開示のポリヌクレオチドまたはベクターの存在は、サザンブロットアッセイ、ノーザンブロットアッセイ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびウエスタンブロットアッセイを含むが、これらに限定されない、当該技術分野において既知の任意の好適なアッセイによって確認され得る。

【0214】

一部の実施形態では、本開示のポリヌクレオチドまたはベクターは、本開示の免疫応答性細胞に安定的に形質導入される。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはベクターの安定した発現を示す細胞は、形質導入後、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、または少なくとも１２ヶ月、コードされたキメラ受容体を発現する。

【0215】

本開示のキメラ受容体が細胞内で一過性に発現される実施形態では、本開示のキメラ受容体をコードするポリヌクレオチドまたはベクターは、本開示の免疫応答性細胞にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞は、トランスフェクション後約４日間、約５日間、約６日間、約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、約１１日間、約１２日間、約１３日間、約１４日間、または約１５日間、キメラ受容体を発現する。

【0216】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、バイシストロン性キメラ抗原受容体をコードする。一部の実施形態では、コードされるバイシストロニック性キメラ抗原受容体は、ＶＳＩＧ２ ＣＡＲ（例えば、ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲ）および第二の抗原に特異的なＣＡＲ（例えば、腫瘍標的化キメラ受容体）を含む。

【0217】

一部の実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、二価キメラ抗原受容体をコードする。一部の実施形態では、コードされる二価のキメラ抗原受容体は、ＶＳＩＧ２抗原結合ドメインおよび第二の抗原結合ドメインを含む。

【0218】

医薬組成物および投与
本開示の特定の態様は、本開示の１つ以上のキメラ受容体またはかかる１つ以上のキメラ受容体を発現する本開示の免疫応答性細胞を含む組成物（例えば、薬学的組成物）に関する。一部の実施形態では、キメラ受容体またはかかるキメラ受容体を発現する遺伝子修飾免疫応答性細胞を含む組成物は、骨髄障害などの増殖性障害の治療のために対象に全身的または直接的に提供され得る。特定の実施形態では、組成物は、目的の臓器（例えば、障害によって影響を受ける臓器）に直接的に注入される。代替的に、組成物は、例えば、循環系（例えば、腫瘍脈管系）への投与によって、目的の臓器に間接的に提供され得る。増殖剤および分化剤は、組成物の投与前、投与中、または投与後に提供されて、インビトロまたはインビボでのＴ細胞、ＮＫ細胞、もしくはＣＴＬ細胞の産生を増加させることができる。

【0219】

本開示の遺伝子修飾細胞を含む組成物は、任意の生理学的に許容されるビヒクル、例えば、血管内投与され得るが、それらはまた、骨または遺伝子修飾細胞が再生および分化のための適切な部位（例えば、胸腺）を見つけ得る他の好都合な部位に導入され得る。いくつかの実施形態では、少なくとも１×１０^５個の細胞が投与され得、最終的には１×１０^１０個以上の細胞に到達する。本開示の遺伝子修飾細胞を含む組成物は、精製された細胞集団を含むことができる。細胞集団中の遺伝子修飾細胞の割合を決定するための方法は、当該技術分野で周知であり、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、細胞の集団における遺伝子修飾細胞の純度は、細胞の集団における細胞の約５０％、約５５％、約６０％、または約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％、またはそれ以上であり得る。投薬量は、当業者によって容易に調整することができる（例えば、純度の低下は、投薬量の増加を必要とし得る）。細胞は、注射、カテーテルなどによって導入され得る。いくつかの実施形態では、因子は、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＩＬ－１１、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｇ－ＣＳＦ、ＭＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、ガンマインターフェロン、およびエリスロポエチンも含むことができる。

【0220】

ある特定の実施形態では、組成物は、免疫応答性細胞またはその前駆細胞などの、遺伝子修飾された細胞および薬学的に許容可能な担体を含む医薬組成物である。投与は、自家または異種であり得る。例えば、免疫応答性細胞または前駆体は、一つの対象から得ることができ、同じ対象または異なる適合性の対象に投与することができる。一部の実施形態では、本開示の免疫応答性細胞またはその子孫は、抹消血液細胞由来（例えば、インビボ、エクスビボ、またはインビトロ由来）であってもよく、カテーテル投与、全身注射、局所注射、静脈注射、または非経口投与を含む局所注射によって投与することができる。本開示の治療用組成物（例えば、本開示の遺伝子組修飾細胞を含む医薬組成物）を投与する場合、一般に、単位用量の注入可能な形態（溶液、懸濁液、乳剤）で製剤化される。

【0221】

製剤
本開示の特定の態様は、本開示のキメラ受容体、またはかかるキメラ受容体を発現する遺伝子修飾細胞（例えば、本開示の免疫応答性細胞）を含む組成物の製剤に関する。いくつかの実施形態では、遺伝子改変細胞を含む本開示の組成物は、選択されたｐＨに緩衝され得る等張性水溶液、懸濁液、乳剤、分散液、および粘性組成物が含まれるが、これらに限定されない滅菌液体調製物として提供されてもよい。液体調製物は、典型的には、ゲル、他の粘性組成物、および固体組成物よりも調製が容易である。追加的に、液体組成物は、特に注入によって、より便利に投与することができる。いくつかの実施形態では、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触期間を提供するために、適切な粘度範囲内で製剤化され得る。液体または粘性組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る担体を含み得る。

【0222】

いくつかの実施形態では、滅菌注入可能溶液は、本開示の遺伝子改変細胞を、所望の様々な量の任意の他の成分とともに、十分な量の適切な溶媒に組み込むことによって調製することができる。かかる組成物は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの好適な担体、希釈剤、または賦形剤と混合され得る。いくつかの実施形態では、組成物はまた、凍結乾燥され得る。組成物は、投与経路および所望の調製物に応じて、湿潤剤、分散剤、ｐＨ緩衝剤、および抗菌剤などの補助物質を含むことができる。

【0223】

いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、組成物の安定性および滅菌性を増強し得る様々な添加剤をさらに含み得る。かかる添加剤の例には、抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、および緩衝液が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、微生物汚染は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などを含むがこれらに限定されない様々な抗菌剤および抗真菌剤のいずれかを含めることによって防止することができる。本開示の注入可能な製剤の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる好適な薬剤の使用によってもたらすことができる。

【0224】

いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、等張性、すなわち、血液および涙液と同じ浸透圧を有することができる。いくつかの実施形態では、所望の等張性は、例えば、塩化ナトリウム、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、または他の無機もしくは有機溶質を使用して達成され得る。

【0225】

いくつかの実施形態では、本開示の製剤の成分は、化学的に不活性であり、かつ本開示の遺伝子改変細胞の生存率または有効性に影響を及ぼさないように選択される。

【0226】

本開示の遺伝子改変細胞の治療的使用に関する一つの考慮事項は、最適な有効性を達成するために必要な細胞の量である。いくつかの実施形態では、投与される細胞の量は、治療される対象によって変化する。特定の実施形態では、遺伝子修飾細胞の、それを必要とする対象に投与される量は、１×１０^４個の細胞～１×１０^１０個の細胞の範囲であり得る。一部の実施形態では、有効用量とみなされる細胞の正確な量は、特定の対象のサイズ、年齢、性別、体重、および状態を含む、各対象に対する個々の因子に基づいてもよい。投与量は本開示および技術的知識に基づいて当業者によって容易に確認することができる。

【0227】

異種性部分および修飾
さらなる一連の実施形態では、本明細書のＶＳＩＧ２特異的タンパク質（例えば、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する抗原結合ドメインを含むＶＳＩＧ２特異的キメラタンパク質）は、追加の部分および／または修飾を含む。

【0228】

薬物コンジュゲート
様々な実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的キメラタンパク質は、治療剤（すなわち、薬物）にコンジュゲートして抗体－薬物コンジュゲートを形成する、表Ａに列挙されるアミノ酸配列のうちの一つ以上を有する抗原結合ドメインを含む。治療剤としては、化学療法剤、造影剤（例えば、ラジオアイソトープ）、免疫調節物質（例えば、サイトカイン、ケモカイン、またはチェックポイント阻害剤）、および毒素（例えば、細胞毒性剤）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、治療剤は、本明細書でより詳細に論じる通り、リンカーペプチドを介して抗原結合ドメインに結合される。

【0229】

本明細書に開示される抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する）に薬物をコンジュゲートするように適合することができる抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を調製する方法は、例えば、米国特許第８，６２４，００３号（ポット法）、米国特許第８，１６３，８８８号（一工程）、米国特許第５，２０８，０２０号（二工程の方法）、米国特許第８，３３７，８５６号、米国特許第５，７７３，００１号、米国特許第７，８２９，５３１号、米国特許第５，２０８，０２０号、米国特許第７，７４５，３９４号、国際公開第２０１７／１３６６２３号、国際公開第２０１７／０１５５０２号、国際公開第２０１７／０１５４９６号、国際公開第２０１７／０１５４９５号、国際公開第２００４／０１０９５７号、国際公開第２００５／０７７０９０号、国際公開第２００５／０８２０２３号、国際公開第２００６／０６５５３３号、国際公開第２００７／０３０６４２号、国際公開第２００７／１０３２８８号、国際公開第２０１３／１７３３３７号、国際公開第２０１５／０５７６９９号、国際公開第２０１５／０９５７５５号、国際公開第２０１５／１２３６７９号、国際公開第２０１５／１５７２８６号、国際公開第２０１７／１６５８５１号、国際公開第２００９／０７３４４５号、国際公開第２０１０／０６８７５９号、国際公開第２０１０／１３８７１９号、国際公開第２０１２／１７１０２０号、国際公開第２０１４／００８３７５号、国際公開第２０１４／０９３３９４号、国際公開第２０１４／０９３６４０号、国際公開第２０１４／１６０３６０号、国際公開第２０１５／０５４６５９号、国際公開第２０１５／１９５９２５号、国際公開第２０１７／１６０７５４号、Ｓｔｏｒｚ （ＭＡｂｓ． ２０１５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ－Ｄｅｃｅｍｂｅｒ； ７（６）： ９８９－１００９）、Ｌａｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ． （Ａｄｖ Ｔｈｅｒ，２０１７ ３４： １０１５）． Ｄｉａｍａｎｔｉｓ ｅｔ ａｌ． （Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，２０１６， １１４， ３６２－３６７）、Ｃａｒｒｉｃｏ ｅｔ ａｌ． （Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ，２００７． ３： ３２１－２）、Ｗｅ ｅｔ ａｌ． （Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００９． １０６： ３０００－５）、Ｒａｂｕｋａ ｅｔ ａｌ． （Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．，２０１１ １４： ７９０－６）、Ｈｕｄａｋ ｅｔ ａｌ． （Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ．，２０１２： ４１６１－５）、Ｒａｂｕｋａ ｅｔ ａｌ． （Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ．，２０１２ ７：１０５２－６７）、Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ． （Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．，２０１３， １１０： ４６－５１）、Ａｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ． （Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１３， ２４： ８４６－８５１）、Ｂａｒｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ． （Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． ａｎｄ Ｄ．，２０１４， １４：３４－４１）、Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ． （Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１４， ２５：１３３１－４１）、Ｌｉａｎｇ ｅｔ ａｌ． （Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．，２０１４， １３６：１０８５０－３）、Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ． （Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ．，２０１５， ２８：１７４－８０）、およびＹｏｒｋ ｅｔ ａｌ． （ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１６， １６（１）：２３）に記載され、そのそれぞれが、その教示のすべてについて、参照によりその全体が本明細書に取り込まれる。

【0230】

さらなる結合部分
様々な実施形態では、ＶＳＩＧ２特異的キメラタンパク質は、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する抗原結合ドメインおよび一つまたは複数のさらなる結合部分を含む。ある特定の実施形態では、結合部分は、非限定的に、全長抗体、Ｆａｂ断片、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、ディアボディ、ｓｃディアボディ、ＤＡＲＴ、ｔａｎｄＡｂ、ミニボディ、ラクダＶＨＨ、および当業者に公知の他の抗体断片またはフォーマットを含む、抗体断片または抗体フォーマットである。例示的な抗体および抗体断片フォーマットは、Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ｅｔ ａｌ． （ＭＡＢＳ，２０１７， Ｖｏｌ． ９， Ｎｏ． ２， １８２－２１２）に詳細に記載され、その教示のすべてについて、参照により本明細書に取り込まれる。

【0231】

特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、ＶＨおよび／もしくはＶＬ、Ｆａｂ重鎖および／もしくは軽鎖断片、またはｓｃＦｖなどの、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインの一つまたは複数のペプチドのＣ末端に結合される。特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、ＶＨおよび／もしくはＶＬ、Ｆａｂ重鎖および／もしくは軽鎖断片、またはｓｃＦｖなどの、ＶＳＩＧ２特異的抗原結合ドメインの一つまたは複数のペプチドのＮ末端に結合される。

【0232】

ある特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、ＶＳＩＧ２と異なる抗原またはエピトープに特異的である。ある特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、ＶＳＩＧ２に特異的である。

【0233】

ある特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、非限定的に、反応性化学（例えば、クリック化学）および親和性タグ付けシステムを含むインビトロの方法を使用して、本明細書に記載される抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する）に結合される。ある特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、Ｆｃ介在性結合（例えば、タンパク質Ａ／Ｇ）を介して本明細書に記載される抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する）に結合される。ある特定の実施形態では、一つまたは複数のさらなる結合部分は、本明細書に記載される抗原結合ドメインと同じ発現ベクター（例えば、プラスミド）のさらなる結合部分の間の融合生成物のヌクレオチド配列をコードすることなどの、組換えＤＮＡ技術を使用して、本明細書に記載される抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する）に結合される。

【0234】

官能基／反応基
様々な実施形態では、本明細書に記載される抗原結合ドメイン（例えば、表Ａに列挙されたアミノ酸配列のうちの一つまたは複数を有する）は、さらなる部分（例えば、薬物コンジュゲートおよびさらなる結合部分）に結合することなどの、下流のプロセスならびに下流の精製プロセスにおいて使用することができる官能基または化学反応基を有する。

【0235】

ある特定の実施形態では、修飾は、非限定的に、反応性チオール（例えば、マレイミドベースの反応基）、反応性アミン（例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドベースの反応基）、「クリック化学」基（例えば、反応性アルキン基）、およびホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）を生じるアルデヒドを含む、化学反応基である。ある特定の実施形態では、修飾は、非限定的に、親和性ペプチド配列（例えば、ＨＡ、ＨＩＳ、ＦＬＡＧ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、およびストレプトシステムなど）を含む官能基である。ある特定の実施形態では、官能基または化学反応基は、切断可能なペプチド配列を有する。特定の実施形態では、切断可能なペプチドは、非限定的に、光切断、化学切断、プロテアーゼ切断、還元条件、およびｐＨ条件を含む手段によって切断される。特定の実施形態では、プロテアーゼ切断は、細胞内プロテアーゼによって行われる。特定の実施形態では、プロテアーゼ切断は、細胞外または膜結合プロテアーゼによって行われる。プロテアーゼ切断を用いるＡＤＣ療法は、Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ． （Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ，２０１２； ２（２）： １５６－１７８．）により詳細に記載され、その教示のすべてについて、参照により本明細書に取り込まれる。

【0236】

治療方法
本開示のある特定の態様は、キメラ受容体を必要とする対象を治療するために、かかるキメラ受容体を発現する本開示のキメラ受容体および遺伝子修飾細胞（例えば、免疫応答性細胞）を使用する方法に関する。一部の実施形態では、本開示の方法は、固形腫瘍などの対象におけるがんを治療するのに有用である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、結腸直腸がん、膵臓がん、肺がん、および／または胃がんから選択される。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、結腸直腸がんである。一部の実施形態では、結腸直腸がんは、結腸直腸癌腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、肺がんである。一部の実施形態では、肺がんは、肺腺がんである。本開示の他の態様は、免疫不全のヒト対象などの対象における病原体感染または他の感染性疾患を治療するための方法において、かかるキメラ受容体を発現する本開示のキメラ受容体および遺伝子修飾細胞（例えば、免疫応答性細胞）の使用に関する。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、既存の状態の緩和、状態の予防、既存の状態の治療、既存の状態の管理、または状態の再発もしくは再発の予防を含むが、これらに限定されない、所望の効果を達成するのに有効な量で、本開示の遺伝子修飾細胞を投与することを含み得る。いくつかの実施形態では、有効量は、本開示の遺伝子修飾細胞（例えば、免疫応答性細胞）の一回または一連の投与において提供され得る。いくつかの実施形態では、有効量は、ボーラスまたは連続灌流によって提供され得る。

【0237】

本明細書に開示されるように、「有効量」または「治療有効量」は、治療時に有益または所望の臨床結果に影響を及ぼすのに十分な量である。有効量は、一回以上の用量で対象に投与することができる。治療に関して、有効量は、疾患の進行を緩和する、改善する、安定させる、逆転させる、または遅延させる、または疾患の病理学的帰結を低減するのに十分な量である。有効量は、概して、ケースバイケースで医師によって決定され、当業者の技能の範囲内である。有効量を達成するための適切な投薬量を決定する際に、典型的にはいくつかの要因が考慮される。これらの要因には、対象の年齢、性別および体重、治療される状態、状態の重症度、ならびに投与される免疫応答性細胞の形態および有効濃度が含まれる。

【0238】

抗原特異的細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞などの免疫応答性細胞）を使用する養子免疫療法の場合、約１×１０^５～１×１０^１０個の細胞／ｋｇ（例えば、約１×１０^９個の細胞）の範囲の細胞用量が通常注入される。対象への細胞の投与およびその後の分化の際に、免疫応答性細胞が、特定の抗原に対して特異的に向けられるように誘導される。いくつかの実施形態では、免疫応答性細胞の誘導には、欠失またはアネルギーなどによる抗原特異的細胞の不活性化が含まれ得るが、これらに限定されない。不活性化は、自己免疫障害などで耐容性を確立または再確立するために特に有用である。遺伝子修飾細胞は、静脈内、皮下、結節内、腫瘍内、髄腔内、胸膜内、腹腔内、および胸腺へ直接を含むがこれらに限定されない、当該技術分野において既知の任意の方法によって投与され得る。

【0239】

治療処置
いくつかの実施形態では、本開示の方法は、それを必要とする対象における免疫応答を増加させる。いくつかの実施形態では、本開示の方法は、対象における骨髄障害を治療および／または予防するための方法を含む。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、治療に好適なヒト対象は、臨床基準によって区別され得る２つの治療群を含み得る。「進行性疾患」または「高い腫瘍負荷」を有する対象は、臨床的に測定可能な腫瘍を有する対象である。臨床的に測定可能な腫瘍は、腫瘍質量に基づいて（例えば、触診、ＣＡＴスキャン、超音波検査、マンモグラム、またはＸ線による白血病細胞の割合に基づく；陽性の生化学的または組織病理学的マーカーは、それ自体ではこの集団を特定するには不十分である）検出され得る腫瘍である。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、それらの状態を緩和する目的で、抗腫瘍応答を誘発するためにこれらの対象に投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍量の低減は、医薬組成物の投与の結果として生じるが、任意の臨床的改善は、利益を構成するであろう。いくつかの実施形態では、臨床的改善には、腫瘍の病理学的結果におけるリスクの減少または進行速度の低減が含まれる。いくつかの実施形態では、好適なヒト対象の第二の群は、「アジュバント群」対象である。これらの対象は、骨髄障害の既往歴があるが、別の治療法に応答している個体である。以前の療法には、外科的切除、放射線療法、および／または従来の化学療法が含まれ得るが、これらに限定されない。その結果、これらの個体は、臨床的に測定可能な腫瘍を有しない。しかしながら、それらは、元の腫瘍部位の近くで、または転移によって、疾患の進行のリスクにあると疑われる。いくつかの実施形態では、この群は、高リスクおよび低リスク個体に更に細分することができる。細分化は、初期処置の前または後に観察される特徴に基づいて行うことができる。これらの特徴は、臨床技術において既知であり、異なる骨髄疾患ごとに好適に定義される。高リスクサブグループの典型的な特徴は、腫瘍が隣接組織に浸潤した、またはリンパ節の関与を示すものである。

【0240】

本明細書に記載の免疫応答の増加の任意の態様およびすべての態様では、特徴または機能の態様の任意の増加もしくは減少または変化は、本明細書に記載の免疫応答性細胞と接触していない細胞と比較される。

【0241】

免疫応答の増加は、免疫応答の増強または免疫応答の誘導の両方であり得る。例えば、免疫応答を増加することは、免疫応答の始動もしくは開始、または進行中の免疫応答もしくは既存の免疫応答の増加もしくは増幅の両方を包含する。いくつかの実施形態では、治療は、免疫応答を誘導する。いくつかの実施形態では、誘導免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、誘導免疫応答は、自然免疫応答である。いくつかの実施形態では、治療は、免疫応答を増強する。いくつかの実施形態では、増強免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、増強免疫応答は、自然免疫応答である。いくつかの実施形態では、治療は、免疫応答を増加する。いくつかの実施形態では、増加免疫応答は、適応免疫応答である。いくつかの実施形態では、増加免疫応答は、自然免疫応答である。

【0242】

一部の実施形態では、さらなる対象群は、悪性疾患に対する遺伝的素因を有するが、悪性疾患の臨床徴候をまだ証明していない対象である。例えば、悪性疾患に関連する遺伝子変異の陽性を検出したが、依然として出産可能年齢の女性は、化学療法、放射線ベースの療法、および／または予防的手術を実施するのに好適になるまで、悪性疾患の発生を予防するための予防的治療において、本開示の一つ以上の細胞（例えば、免疫応答性細胞）を受け取ることから利益を得ることができる。いくつかの実施形態では、対象は、疾患の進行形態を有し得、その場合、治療目標は、疾患の進行の緩和もしくは逆転、および／または副作用の改善を含み得る。いくつかの実施形態では、対象は、それらが既に治療されている状態の既往歴を有し得、その場合、治療目的は典型的には、再発のリスクの減少または遅延を含み得る。

【0243】

併用療法
いくつかの実施形態では、本開示の１つ以上のキメラ受容体を発現する本開示の遺伝子修飾細胞（例えば、免疫応答性細胞）は、他の既知の薬剤および療法と組み合わせて使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の併用療法は、一つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与され得る、本開示の遺伝子修飾細胞を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子組み換え細胞および一つ以上の追加の治療剤は、同時に、同じもしくは別個の組成物で、または連続的に投与され得る。連続投与について、遺伝子修飾物質が最初に投与され得、一つ以上の追加の薬剤が二回目に投与され得るか、または投与順序を逆にすることができる。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾細胞は、一つ以上の追加の治療剤を発現するようにさらに改変される。

【0244】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、手術、化学療法、放射線、免疫抑制剤（例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキセート、マイコフェノレート、およびＦＫ５０６）、抗体、または他の免疫抑制剤（例えば、ＣＡＭＰＡＴＨまたは抗ＣＤ３抗体）、サイトキシン、フルダラブメ、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１２２８、サイトカイン、照射法、およびペプチドワクチンと組み合わせて、治療レジメンで使用され得る。

【0245】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、リンパ枯渇剤と組み合わせて使用され得る。好適なリンパ枯渇剤は、免疫療法の前に、リンパ球、例えば、Ｂ細胞リンパ球および／またはＴ細胞リンパ球を低減または減少させる。好適なリンパ枯渇剤の例には、フルダラビン、シクロホスファミド、コルチコステロイド、アレムツズマブ、全身照射（ＴＢＩ）、およびそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

【0246】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、化学療法剤と組み合わせて使用され得る。好適な化学療法剤には、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）、免疫細胞抗体（例えば、アレムツザマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗剤、ピリミジン類似体、プリン類似体、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤、例えば、フルダラビン）、ｍＴＯＲ阻害剤、ＴＮＦＲグルココルチコイド誘導性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）アゴニスト、プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラルビシンＡ、グリオトキシン、ボルテゾミブ）、免疫誘導体、例えば、サリドマイドまたはサリドマイド誘導体（例えば、レナリドマイド）などが含まれるが、これらに限定されない。

【0247】

併用療法での使用に好適な一般的な化学療法剤の例には、アナストロゾール（アリミデックス（登録商標））、ビカルタミド（カソデックス（登録商標））、ブレオマイシンスルフェート（ブレオマイシン（登録商標））、ブスルファン（ミレラン（登録商標））、ブスルファン注入（ブスルフェクス（登録商標））、カペシタビン（ゼローダ（登録商標））、Ｎ４－ペントキシカルボニル－５－デオキシ－５－フルオロシチジン、カルボプラチン（パラプラチン（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（ロイケラン（登録商標））、シスプラチン（ピアチノール（登録商標））、クラドリビン（ロイスタチン（登録商標））、シクロホスファミド（シトキサン（登録商標）またはネオサル（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（シトサール－Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注入（デポサイト（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ－ドーム（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ、コスメガン）、塩酸ダウノルビシン（セルビジン（登録商標））、ダウノルビシンシトラートリポソーム注入（ダウノゾム（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（タキソテール（登録商標））、塩酸ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、ルベックス（登録商標））、エトポシド（ベプシド（登録商標））、リン酸フルダラビン（フルダラ（登録商標））、５－フルオロウラシル（アドルシル（登録商標）、エフデックス（登録商標））、フルタミド（ユーレクシン（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシ尿素（ハイドレア（登録商標））、イダルビシン（イダニシン（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（カンプトサル（登録商標））、Ｌ－アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（アルケラン（登録商標））、６－メルカプトプリン（プリントール（登録商標））、メトトレキサート（フォレックス（登録商標））、ミトキサントロン（ノバントロン（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（タキソール（登録商標））、フェニックス（Ｙｔｔｒｉｕｍ９０／ＭＸ－ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラントを含むポリフェプロサン２０（ギリアデル（登録商標））、クエン酸タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標））、テニポシド（ブモン（登録商標））、６－チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（チラゾン（登録商標））、注入用トポテカン塩酸塩（ハイカンプチン（登録商標））、ビンブラスチン（ベルボン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、およびビノレルビン（ナベルビン（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。

【0248】

適当なアルキル化剤の例としては、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、スルホン酸アルキル、ニトロソウレアおよびトリアゼン）：ウラシルマスタード（アミノウラシルマスタード（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、ウラシルナイトロジェンマスタード（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖ ｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブチル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、およびダカルバジン（ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられるが、これらに限定されない。追加の例示的なアルキル化剤の例には、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤとしても知られる、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））、メルファラン（Ｌ－ＰＡＭ， Ｌ－サルコリシン、およびフェニルアラニンマスターとしても知られる、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても知られる、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）およびＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、ロムスチン（ＣＣＮＵとしても知られる、ＣｅｅＮＵ（登録商標））、シスプラチン（ＣＤＤＰとしても知られる、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）およびＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）－ＡＱ）、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）およびＮｅｏｓａｒ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミドとしても知られる、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（登録商標））、アイトレタミン（Ａｉｔｒｅｔａｍｉｎｅ）（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても知られる、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））、イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））、プレドヌムスチン（Ｐｒｅｄｎｕｍｕｓｔｉｎｅ）、プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチン、および塩酸メクロレタミンとしても知られる、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、チオテパ（チオホスホアミド（ｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏａｍｉｄｅ）、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡとしても知られる、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））、およびベンダムスチンＨＣ１（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が含まれるが、これらに限定されない。

【0249】

好適なｍＴＯＲ阻害剤の例には、テムシロリムス、リダフォロリムス（デフェロリムス）、ＡＰ２３５７３、ＭＫ８６６９、エベロリムス（Ａｆｉｍｔｏｒ（登録商標）またはＲＡＤ００１）、ラパマイシン（ＡＹ２２９８９、シロルミウス（登録商標））、およびＸＬ７６５が含まれるが、これらに限定されない。

【0250】

好適な免疫調節剤の例には、アフツズマブ、ペグフィルグラスチム（ニューラスタ（Ｎｅｕｌａｓｔａ）（登録商標））、レナリドマイド（ＣＣ－５０１３、レブリミド（登録商標））、サリドマイド（サロミド（登録商標））、アクチミド（ＣＣ４０４７）、およびＩＲＸ－２が含まれるが、これらに限定されない。

【0251】

好適なアントラサイクリンの例には、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）およびルベックス（Ｒｕｂｅｘ）（登録商標））、ブレオマイシン（レノキサン（ｌｅｎｏｘａｎｅ）（登録商標））、ダウノルビシン（ダウオルビシンハイドロクロライド、ダウノマイエム、およびルビドマイシンハイドロクロライド、セルビジン（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ）（登録商標））、ダウノルビシンリポソーム（ダウノルビシンクエン酸リポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、ノバントロン（登録商標））、エピルビシン（エレンス（Ｅｌｌｅｎｃｅ）（商標））、イダルビシン（イダマイシン（登録商標）、イダマイシンＰＥＳ（登録商標）、マイトマイシンＣ（ムタマイシン（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ）（登録商標））、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、ラビドマイシン、およびデサセトラマイシンが含まれるが、これらに限定されない。

【0252】

好適なビンカアルカロイドの例としては、限定されるものではないが、ビノレルビン酒石酸塩（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビンデシン（エルジシン（登録商標））、ビンブラスチン（ビンブラスチン硫酸塩、ビンカルウコブラスチンおよびＶＬＢ、アルカバン－ＡＱ（登録商標）およびベルバン（登録商標）としても知られる）、ならびにビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂme（登録商標））が挙げられる。

【0253】

好適なプロテオソーム阻害剤の例としては、ボルテゾミブ（ベルケイド（登録商標））、カルフィルゾミブ、マリゾミブ（ＮＰＩ－００５２）、イキサゾミブクエン酸エステル（ＭＬＮ－９７０８）、デランゾミブ（ＣＥＰ－１８７７０）、およびＯＮＸ－０９１２が含まれるが、これらに限定されない。

【0254】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、ＣＤ２０阻害剤、例えば、抗ＣＤ２０抗体、またはその断片と組み合わせて投与される。例示的な抗ＣＤ２０抗体には、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、ＴＲＵ－０１５（Ｔｒｕｂｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、オカラツズマブ、およびＰｒｏｌ３１９２１が含まれるが、これらに限定されない。

【0255】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞において選択的に複製し、がん細胞の死を誘発するか、または増殖を遅延させることができる。いくつかの事例では、腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞に対して効果を有さないか、または最小限の効果を有する。好適な腫瘍溶解性ウイルスとしては、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、または腫瘍溶解性ＲＮＡウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、または腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ））が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、腫瘍溶解性ウイルスは、組換え腫瘍溶解性ウイルスである。

【0256】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば、ＳＨＰ－１阻害剤またはＳＨＰ－２阻害剤と組み合わせて対象に投与される。一実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、キナーゼ阻害剤と組み合わせて使用することができる。好適なキナーゼ阻害剤の例には、ＣＤＫ４阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＢＴＫ阻害剤、ホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ＭＮＫ阻害剤、および未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。

【0257】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の調節因子と組み合わせて対象に投与される。ＭＤＳＣは、多くの固形腫瘍の末梢および腫瘍部位に蓄積する。これらの細胞は、Ｔ細胞応答を抑制し、それによってキメラ受容体発現細胞療法の有効性を妨げる。理論に拘束されるものではないが、ＭＤＳＣ調節物質の投与は、本開示の遺伝子修飾細胞の有効性を増強すると考えられる。ＭＤＳＣの好適な調節因子の例には、ＭＣＳ１１０およびＢＬＺ９４５が含まれるが、これらに限定されない。

【0258】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、免疫抑制性形質細胞の活性を阻害または低減する薬剤と組み合わせて対象に投与される。免疫抑制性形質細胞は、Ｔ細胞依存性免疫原性化学療法、例えば、オキサリプラチンを阻害することが示されている（Ｓｈａｌａｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ２０１５， ５２１ ：９４－ １０１）。一実施形態では、免疫抑制性形質細胞は、ＩｇＡ、インターロイキン（ＩＬ）－１０、およびＰＤ－Ｌ１のうちの一つ以上を発現することができる。

【0259】

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド、またはＩＬ－１５ポリペプチドおよびＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせと組み合わせて対象に投与される。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）ポリペプチド、インターロイキン－１５受容体アルファ（ＩＬ－１５Ｒａ）ポリペプチド、またはＩＬ－１５ポリペプチドおよびＩＬ－１５Ｒａポリペプチドの両方の組み合わせを発現するようにさらに修飾される。

【0260】

いくつかの実施形態では、悪性腫瘍（例えば、固形腫瘍）を有する対象は、薬剤、例えば、細胞傷害性剤もしくは化学療法剤、生物学的療法（例えば、抗体、例えば、モノクローナル抗体、または細胞療法）、または阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、細胞傷害性薬剤、例えば、ＣＰＸ－３５１（Ｃｅｌａｔｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シタラビン、ダウノルビシン、ボサロキシン（Ｓｕｎｅｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、サパシタビン（Ｃｙｃｌａｃｅｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、イダルビシン、またはミトキサントロンと組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。ＣＰＸ－３５１は、シタラビンおよびダウノルビシンを５：１のモル比で含むリポソーム製剤である。いくつかの実施形態では、対象は、低メチル化剤、例えば、ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、アザシチジンまたはデシタビンと組み合わせて、本明細書に記載のキメラ受容体発現細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、生物学的療法、例えば、抗体または細胞療法、例えば、２２５Ａｃ－リンツズマブ（アクチマブ（Ａｃｔｉｍａｂ）－Ａ；Ａｃｔｉｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＰＨ２１０２（Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、またはゲムツズマブオゾガマイシン（マイロターグ；Ｐｆｉｚｅｒ）と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、ＦＬＴ３阻害剤、例えば、ソラフェニブ（Ｂａｙｅｒ）、ミドスタウリン（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、キザルチニブ（Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ）、クレノラニブ（Ａｒｏｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＰＬＸ３３９７（Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ）、ＡＫＮ－０２８（Ａｋｉｎｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＡＳＰ２２１５（Ａｓｔｅｌｉａｓ）と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）阻害剤、例えば、ＡＧ－２２１（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ａｇｉｏｓ）またはＡＧ－１２０（Ａｇｉｏｓ／Ｃｅｌｇｅｎｅ）と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、細胞周期調節因子、例えば、ポロ様キナーゼ１（Ｐｌｋｌ）、例えば、ボラセルチブ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、またはサイクリン依存性キナーゼ９（Ｃｄｋ９）の阻害剤、例えば、アルボシジブ（Ｔｏｌｅｒｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｓａｎｏｆｉ Ａｖｅｎｔｉｓ）の阻害剤と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、Ｂ細胞受容体シグナル伝達ネットワーク阻害剤、例えば、Ｂ細胞リンパ腫２（Ｂｃｌ－２）の阻害剤、例えば、ベネトクラクス（Ａｂｂｖｉｅ／Ｒｏｃｈｅ）、またはブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）の阻害剤、例えば、イブルチニブ（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ／Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。いくつかの実施形態では、対象は、Ｍ１アミノペプチダーゼの阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤、例えば、プラシノスタット（ＭＥＩ Ｐｈａｒｍａ）、マルチキナーゼ阻害剤、例えば、リゴセルチブ（Ｏｎｃｏｎｏｖａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ／Ｂａｘｔｅｒ／ＳｙｍＢｉｏ）、またはペプチド性ＣＸＣＲ４逆アゴニスト、例えば、ＢＬ－８０４０（ＢｉｏＬｉｎｅＲｘ）と組み合わせて、本開示の遺伝子修飾細胞を投与される。

【0261】

いくつかの実施形態では、対象は、本開示の遺伝子修飾細胞の活性または適合性を増強する薬剤を投与され得る。例えば、薬剤は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞またはＮＫ細胞）の機能を調節または制御する分子を阻害し得る。いくつかの実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する分子は、阻害分子である。いくつかの実施形態では、プログラム死１（ＰＤ－１）などの阻害分子は、免疫エフェクター応答を開始する遺伝子修飾細胞の能力を低下させることができる。好適な阻害分子の例には、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、ＣＥＡＣＡＭ（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、ＣＥＡＣＡＭ－５）、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＨＶＥＭ（ＴＮＦＲＳＦ１４またはＣＤ２７０）、ＫＩＲ、Ａ２ａＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬ９、アデノシン、およびＴＧＦベータが含まれるが、これらに限定されない。例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはタンパク質レベルでの阻害によって、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の阻害は、本開示の遺伝子修飾細胞の性能を最適化することができる。一部の実施形態では、薬剤、例えば、阻害性ポリヌクレオチド、例えば、阻害性ポリヌクレオチド、例えば、阻害性ポリヌクレオチド、例えば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、遺伝子修飾細胞における阻害性分子の発現を阻害するために使用され得る。一実施形態では、阻害剤は、ｓｈＲＮＡである。一部の実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、阻害性ポリヌクレオチド、例えば、阻害性ポリヌクレオチド、例えば、阻害性ポリヌクレオチド、例えば、ｄｓＲＮＡ、例えば、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡ、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ＺＦＮ）を発現するようにさらに修飾され得、遺伝子修飾細胞における阻害性分子の発現を阻害するために使用され得る。

【0262】

一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する薬剤は、本開示の遺伝子修飾細胞内で阻害される。かかる実施形態では、免疫細胞機能を調節または調節する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子は、本開示のキメラ受容体の成分、例えば、すべての成分をコードするポリヌクレオチドに連結される。一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、例えば、免疫細胞機能を調節または制御する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子が、例えば、遺伝子組み換え細胞内で発現されるように、プロモーター、例えば、ＨＩまたはＵ６由来のプロモーターに作動可能に連結される。一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、キメラ受容体の成分、例えば、すべての成分をコードするポリヌクレオチド分子を含む同じベクター、例えば、レンチウイルスベクター上に存在する。かかる実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、キメラ受容体の成分、例えばすべての成分をコードするポリヌクレオチドの５’－または３’－のベクター、例えばレンチウイルスベクター上に位置する。免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、キメラ受容体の成分、例えば、すべての成分をコードするポリヌクレオチドと同じまたは異なる方向に転写され得る。一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、キメラ受容体の成分、例えば、すべての成分をコードするポリヌクレオチド分子を含むベクター以外のベクター上に存在する。一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、それを遺伝子修飾細胞内で一過性に発現する。一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する分子の発現を阻害するｄｓＲＮＡ分子をコードするポリヌクレオチド分子は、本開示の遺伝子修飾細胞のゲノムに安定して組み込まれる。

【0263】

一実施形態では、免疫細胞機能を調節または制御する、例えば、阻害する薬剤は、阻害分子と結合する抗体または抗体断片であり得る。例えば、薬剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、もしくはＣＴＬＡ４と結合する抗体または抗体断片であり得る。一実施形態では、薬剤は、ＴＩＭ３と結合する抗体または抗体断片である。一実施形態では、薬剤は、ＬＡＧ３と結合する抗体または抗体断片である。

【0264】

いくつかの実施形態では、遺伝子修飾細胞の活性を増強する薬剤は、ＣＥＡＣＡＭ阻害剤（例えば、ＣＥＡＣＡＭ－１、ＣＥＡＣＡＭ－３、および／またはＣＥＡＣＡＭ－５阻害剤）である。一実施形態では、ＣＥＡＣＡＭの阻害剤は、抗ＣＥＡＣＡＭ抗体分子である。一実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞の活性を増強する薬剤は、ｍｉＲ－１７－９２である。いくつかの実施形態において、遺伝子修飾細胞の活性を増強する薬剤は、ＣＤ４０Ｌである。いくつかの実施形態において、遺伝子修飾細胞の活性を増強する薬剤は、ＧＭ－ＣＳＦである。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞は、本開示の阻害分子と結合する抗体または抗体断片を発現するようにさらに修飾される。

【0265】

一実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞の活性を増強する薬剤は、サイトカインである。サイトカインは、免疫応答性細胞拡大、分化、生存、および恒常性に関連する重要な機能を有する。本開示の遺伝子修飾細胞を受ける対象に投与することができるサイトカインには、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＩＬ－１２、Ｌ－１５、ＩＬ－１８、およびＩＬ－２１、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。サイトカインは、１日１回、または１日１回を超えて、例えば、１日２回、１日３回、または１日４回投与することができる。サイトカインは、１日を超えて投与することができ、例えば、サイトカインは、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、または４週間投与される。例えば、サイトカインは、７日間、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子修飾細胞はＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１２、Ｌ－１５、ＩＬ－１８、およびＩＬ－２１などの一つ以上のサイトカインを発現するようにさらに修飾される。

【0266】

いくつかの実施形態では、サイトカインは、遺伝子修飾細胞と同時に、または同時発生的に、例えば、同じ日に投与され得る。サイトカインは、遺伝子修飾細胞と同じ薬学的組成物で調製され得るか、または別個の医薬組成物で調製され得る。サイトカインは、遺伝子修飾細胞の投与直後、例えば、遺伝子修飾細胞の投与後１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日で投与することができる。サイトカインが１日を超えて生じる投薬レジメンにおいて投与されるいくつかの実施形態では、サイトカイン投薬レジメンの最初の日は、遺伝子修飾細胞との投与と同じ日であり得るか、またはサイトカイン投薬レジメンの最初の日は、遺伝子修飾細胞の投与後１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日であり得る。一実施形態では、最初の日に、遺伝子修飾細胞を対象に投与し、２日目に、サイトカインを１日１回、次の７日間投与する。いくつかの実施形態では、サイトカインは、遺伝子修飾細胞の投与後の期間、例えば、遺伝子修飾細胞の投与後、少なくとも２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、または１年間以上投与される。一実施形態では、サイトカインは、遺伝子修飾細胞に対する対象の応答の評価の後に投与される。

【0267】

キット
本開示の特定の態様は、がん（例えば、固形腫瘍）の治療および／または予防のためのキットに関する。特定の実施形態では、キットは、有効量の本開示の１つ以上のキメラ受容体、本開示の単離核酸、本開示のベクター、および／または本開示の細胞（例えば、免疫応答性細胞）を含む治療組成物または予防組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、滅菌容器を含む。いくつかの実施形態では、そのような容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、ポーチ、ブリスターパック、または当該技術分野で既知の他の好適な容器形態であることができる。容器はプラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属ホイル、または薬物を保持するのに好適な他の材料で作られてもよい。

【0268】

一部の実施形態では、治療または予防組成物は、癌（例えば、固形腫瘍）を有するか、または発症するリスクのある対象に治療または予防組成物を投与するための指示とともに提供される。いくつかの実施形態では、指示は、障害の治療および／または予防のための組成物の使用に関する情報を含み得る。いくつかの実施形態では、指示は、これらに限定されるものではないが、治療的または予防的組成物の説明、投薬スケジュール、疾患またはその症状の治療または予防のための投与スケジュール、予防措置、警告、適応症、禁忌、過剰投与情報、有害反応、動物薬理学、臨床試験、および／または参考文献を含む。いくつかの実施形態では、指示は、容器に直接印刷することができ（存在する場合）、または容器に貼付されるラベルとして、または容器内または容器と共に提供される別個のシート、パンフレット、カード、またはフォルダとして印刷することができる。

【0269】

（列挙される実施形態）

【0270】

１． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、キメラタンパク質。

【0271】

２． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列が、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される、キメラタンパク質。

【0272】

３． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、キメラタンパク質。

【0273】

４． ＶＬが、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列が、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される、実施形態１～３のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0274】

５． ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、実施形態１～４のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0275】

６． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＬが、軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含み、
ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列が、配列番号９または配列番号１０のＶＬ領域アミノ酸配列に含有される、キメラタンパク質。

【0276】

７． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、キメラタンパク質。

【0277】

８． ＶＨが、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３のアミノ酸配列が、配列番号１のＶＨ領域アミノ酸配列に含有される、実施形態６または実施形態７に記載のキメラタンパク質。

【0278】

９． ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む、実施形態６～８のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0279】

１０． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、キメラタンパク質。

【0280】

１１． ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～１０のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0281】

１２． ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１１のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0282】

１３． ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～１２のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0283】

１４． ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１２のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0284】

１５． ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～１２のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0285】

１６． ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１２のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0286】

１７． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインは、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、キメラタンパク質。

【0287】

１８． ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態１７に記載のキメラタンパク質。

【0288】

１９． ＶＬ領域が、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１７または実施形態１８に記載のキメラ。

【0289】

２０． ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１７または実施形態１８に記載のキメラ。

【0290】

２１． ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態１７または実施形態１８に記載のキメラタンパク質。

【0291】

２２． ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１７または実施形態１８に記載のキメラ。

【0292】

２３． ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１７または実施形態１８に記載のキメラタンパク質。

【0293】

２４． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、抗体または抗原結合断片を含み、
抗体または抗原結合断片が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＬが、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、キメラタンパク質。

【0294】

２５． ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、実施形態２４に記載のキメラタンパク質。

【0295】

２６． ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態２４に記載のキメラタンパク質。

【0296】

２７． ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態２４～２６のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0297】

２８． ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態２４～２６のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0298】

２９． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、ＶＳＩＧ２への結合について参照抗体またはその抗原結合断片と競合し、
参照抗体またはその抗原結合断片が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、キメラタンパク質。

【0299】

３０． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、
参照抗体またはその抗原結合断片と同じＶＳＩＧ２エピトープに本質的に結合し、参照抗体またはその抗原結合断片が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）のアミノ酸配列またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、キメラタンパク質。

【0300】

３１． Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
抗原結合ドメインが、参照抗体またはその抗原結合断片によって結合されるＶＳＩＧ２エピトープと同じヒトＶＳＩＧ２のエピトープに結合し、
参照抗体またはその抗原結合断片が、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、
ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、キメラタンパク質。

【0301】

３２． 参照抗体またはその抗原結合断片のＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、実施形態２９～３１のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0302】

３３． 参照抗体またはその抗原結合断片のＶＬ領域が、配列番号９または配列番号１０のアミノ酸配列を含む、実施形態２９～３２のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0303】

３４． 抗原結合ドメインが、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、または一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態１～３３のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0304】

３５． 抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、実施形態３４に記載のキメラタンパク質。

【0305】

３６． ＶＨおよびＶＬが、ペプチドリンカーによって分離されている、実施形態１～３５のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0306】

３７． 抗原結合ドメインが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが、重鎖可変ドメインであり、Ｌが、ペプチドリンカーであり、ＶＬが、軽鎖可変ドメインである、実施形態３６に記載のキメラタンパク質。

【0307】

３８． ペプチドリンカーが、配列番号１９～３５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態３６または実施形態３７に記載のキメラタンパク質。

【0308】

３９． ｓｃＦｖが、配列番号６９～７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態３５または実施形態３６に記載のキメラタンパク質。

【0309】

４０． キメラタンパク質が、抗体－薬物コンジュゲートであり、異種分子または部分が、治療剤を含む、実施形態１～３９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0310】

４１． キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、異種分子または部分が、膜貫通ドメイン、一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、ヒンジドメイン、スペーサー領域、一つまたは複数のペプチドリンカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドを含む、実施形態１～３９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0311】

４２． ＣＡＲが、膜貫通ドメインを含む、実施形態４１に記載のキメラタンパク質。

【0312】

４３． ＣＡＲが、一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４１または実施形態４２に記載のキメラタンパク質。

【0313】

４４． ＣＡＲが、免疫応答を刺激する一つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む活性化ＣＡＲである、実施形態４１～４３のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0314】

４５． ＣＡＲが、免疫応答を阻害する一つまたは複数の細胞内阻害ドメインを含む阻害ＣＡＲである、実施形態４１～４３のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0315】

４６． 細胞内阻害ドメインが、酵素阻害ドメインを含む、実施形態４５に記載のキメラタンパク質。

【0316】

４７． 細胞内阻害ドメインが、細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４５に記載のキメラタンパク質。

【0317】

４８． ＣＡＲが、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む、実施形態４１～４７のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【0318】

４９． スペーサー領域が、配列番号３９～５１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、実施形態４８に記載のキメラタンパク質。

【0319】

５０． 実施形態１～４９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、組成物。

【0320】

５１． 実施形態１～４９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質をコードする、操作されたポリヌクレオチド。

【0321】

５２． 実施形態５１に記載の操作されたポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。

【0322】

５３． 実施形態５１に記載の操作されたポリヌクレオチドまたは実施形態５２に記載の発現ベクター、および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、組成物。

【0323】

５４． 単離細胞を、実施形態５１に記載の操作されたポリヌクレオチドまたは実施形態５２に記載の発現ベクターを用いて形質導入することを含む、操作された細胞を作製する方法。

【0324】

５５． 実施形態５４に記載の方法によって産生された、操作された細胞。

【0325】

５６． 実施形態５１に記載の操作されたポリヌクレオチド、実施形態５２に記載の発現ベクター、または実施形態５３に記載の組成物を含む、単離細胞。

【0326】

５７． 実施形態５１に記載の操作されたポリヌクレオチド、実施形態５２に記載の発現ベクターを発現する、操作された細胞の集団。

【0327】

５８． 実施形態１～４９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質を含む、単離細胞。

【0328】

５９． 実施形態１～４９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質を発現する、操作された細胞の集団。

【0329】

６０． キメラタンパク質が、組換えにより発現される、実施形態５６～５９のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団。

【0330】

６１． キメラタンパク質が、ベクターまたは細胞のゲノム由来の選択された遺伝子座から発現される、実施形態５６～６０のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団。

【0331】

６２． 細胞または細胞の集団が、細胞表面上で発現される一つまたは複数の腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含む、実施形態５６～６１のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団。

【0332】

６３． 一つまたは複数の腫瘍標的化キメラ受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、実施形態６２に記載の細胞または細胞の集団。

【0333】

６４． 細胞または細胞の集団が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、およびｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、実施形態５６～６３のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団。

【0334】

６５． 細胞が自家である、実施形態５６～６４のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団。

【0335】

６６． 細胞が同種である、実施形態５６～６４のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団。

【0336】

６７． 有効量の、実施形態５６～６６のいずれか一項に記載の細胞または操作された細胞の集団、および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、医薬組成物。

【0337】

６８． 有効量の、実施形態１～４９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質を発現する遺伝子修飾された細胞および薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせを含む、医薬組成物。

【0338】

６９． 腫瘍を治療および／または予防するためのものである、実施形態６７または実施形態６８に記載の医薬組成物。

【0339】

７０． 治療有効用量の、実施形態５３に記載の組成物、または実施形態５５～６６のいずれか一つに記載の細胞のいずれか、または実施形態６７～６９のいずれか一つに記載の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象を治療する方法。

【0340】

７１． 対象において腫瘍細胞に対する細胞介在性免疫応答を刺激する方法であって、腫瘍を有する対象に、治療有効用量の、実施形態５３に記載の組成物、または実施形態５５～６６のいずれか一つに記載の細胞のいずれか、または実施形態６７～６９のいずれか一つに記載の組成物を投与することを含む、方法。

【0341】

７２． 腫瘍を有する対象を治療する方法であって、治療有効用量の、実施形態５３、または実施形態５５～６６のいずれか一つに記載の細胞のいずれか、または実施形態６７～６９のいずれか一つに記載の組成物を投与することを含む、方法。

【0342】

７３． 実施形態１～４９のいずれか一つに記載のキメラタンパク質を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキット。

【0343】

７４． 対象における腫瘍を治療および／または予防するための、一つまたは複数の抗原特異的細胞を産生するためのキメラタンパク質を使用するための記載された指示書をさらに含む、実施形態７３に記載のキット。

【0344】

７５． 実施形態５５～６６のいずれか一つに記載の細胞または細胞の集団を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキット。

【0345】

７６． 対象における腫瘍を治療および／または予防するための細胞を使用するための記載された指示書をさらに含む、実施形態７５に記載のキット。

【0346】

７７． 実施形態５１に記載の操作されたポリヌクレオチドを含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキット。

【0347】

７８． 対象における腫瘍を治療および／または予防するための一つまたは複数の抗原特異的細胞を産生するためにポリヌクレオチドを使用するための記載された指示書をさらに含む、実施形態７７に記載のキット。

【0348】

７９． 実施形態５２に記載のベクターを含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキット。

【0349】

８０． 対象における腫瘍を治療および／または予防するための一つまたは複数の抗原特異的細胞を産生するためにベクターを使用するための記載された指示書をさらに含む、実施形態７９に記載のキット。

【0350】

８１． 実施形態５３、または実施形態６７～６９のいずれか一つに記載の組成物を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキット。

【0351】

８２． 対象における腫瘍を治療および／または予防するための組成物を使用するための記載された指示書をさらに含む、実施形態８１に記載のキット。

【実施例】

【0352】

以下は、本開示の方法および組成物の例である。本明細書に提供される一般的な記載を考慮して、様々な他の実施形態が実施され得ることが理解される。

【0353】

以下は、本開示の特許請求される主題を実施するための具体的な実施形態の例である。実施例は、あくまで例示の目的で示されるものにすぎず、本開示の範囲をいかなる意味においても限定することを意図しない。使用する数値（例えば、量、温度など）については正確を期すよう努めるが、ある程度の実験誤差および偏差は、もちろん許容されるべきである。

【0354】

実施例１： 抗ＶＳＩＧ２抗体配列決定
方法
抗体配列決定
マウス抗ヒトＶＳＩＧ２モノクローナル抗体クローン（「Ａｂ」）を配列決定した。簡潔に述べると、免疫グロブリン鎖の各々を含有する試料を、様々な酵素によって消化し、次いでＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析した。ペプチドを、新規ペプチドシーケンシングを使用してＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータから特徴決定し、次いで抗体配列を構築した。

【0355】

Ａｂ抗ＶＳＩＧ２抗体をペプチド配列決定した。複数の酵素消化のＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータを、構築した抗体配列にマッピングした。重鎖および軽鎖では、アミノ酸残基の１００％が、有意なサポート断片イオンを用いた少なくとも５つのペプチドスキャンによってカバーされた（データは示していない）。

【0356】

軽鎖および重鎖可変領域の配列決定の結果を、それぞれ、図１および図２に示す。フレームワークおよび相補性決定領域（ＣＤＲ）を、Ｃｈｏｔｈｉａアノテーションおよびナンバリングスキームに従って注釈付けする。配列を表Ａに示す。ロイシン（Ｌ）およびイソロイシン（Ｉ）が同じ残基質量を有することを考慮して、これらの残基を特定するために追加の分析技術を使用した。図１に示すように、ＣＤＲ－Ｌ１の２１位のイソロイシン残基は、イソロイシンであると決定されたが、１００％の信頼度では確認されなかった。

【0357】

（表Ａ）抗ＶＳＩＧ２抗体（Ａｂ）配列

【0358】

実施例２： 抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲの産生および評価
ＣＡＲ構築物をレンチウイルスベクターにクローニングした。レンチウイルスを、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ ２９３Ｔシステムを使用して産生する。調べたＣＡＲ構築物の抗原特異性およびドメイン構成を以下の表Ｂに示し、ｓｃＦｖアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を、それぞれ、表Ｃおよび表Ｄに示す。

【0359】

（表Ｂ）ＣＡＲ構築物の活性化（活性化）

【0360】

（表Ｃ）ＣＡＲ ｓｃＦｖアミノ酸配列

【0361】

（表Ｄ）ＣＡＲ ｓｃＦｖヌクレオチド配列

【0362】

活性化ＣＡＲ ＮＫ細胞アッセイ
初代ＮＫ細胞をヒトドナーＰＢＭＣから単離して凍結する。表Ｃに記載されるように、選択された活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）を含有するＣＡＲレンチウイルスで、ＮＫ細胞を形質導入する。

【0363】

殺傷アッセイを実施して、ＶＳＩＧ－２を内因的に発現するヒト結腸直腸腺がん細胞株であるＨＴ２９細胞、ＶＳＩＧ２を外因的に発現するＬｓ１７４ｔ細胞、およびＶＳＩＧ２を外因的に発現するＤＬＤ１細胞を含む、ＶＳＩＧ－２発現細胞の殺傷を評価する。殺傷アッセイは、抗ＶＳＩＧ２ ａＣＡＲを発現するＮＫ細胞が、ＶＳＩＧ２発現細胞を殺傷する能力を有することを実証する。

【0364】

実施例３： 抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲの生成
抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）構築物を各々レンチウイルスベクターにクローニングした。ＣＡＲ構築物の抗原特異性およびドメイン構成を、以下の表Ｅに記載する。ｉＣＡＲ構築物の各抗ＶＳＩＧ２ ｓｃＦｖのアミノ酸配列を表Ｃに示す。各抗ＶＳＩＧ２ ｓｃＦｖのヌクレオチド配列を以下の表Ｆに示す。

【0365】

（表Ｅ）阻害性ＣＡＲ構築物

【0366】

ＮＯＴゲート抗ＶＳＩＧ２ ｉＣＡＲの阻害活性を試験するために、個々の抗ＶＳＩＧ２ ｉＣＡＲおよび抗ＣＥＡ ａＣＡＲ構築物をレンチウイルス粒子にパッケージングし、初代ＮＫ細胞に形質導入するために使用する。ウイルスの量はｐ２４力価（形質導入あたり７５０，０００ｐｇ）によって設定する。ｉＣＡＲ構築物はｐｕｒｏＲカセットを含有したので、形質導入後４～７日目にピューロマイシンをＮＫ細胞培養物に添加し、その時点で発現をフローサイトメトリーで評価し、殺傷アッセイのためにＮＫ細胞をマイクロウェルプレートに移した。（１）ａＣＡＲ抗原ＣＥＡのみを発現している腫瘍細胞とともに、（２）ａＣＡＲ抗原ＣＥＡおよびｉＣＡＲ抗原ＶＳＩＧ２の双方を発現している腫瘍細胞とともに、または（３）混合した双方の腫瘍細胞型とともにＮＫ細胞を培養する。１６～１８時間後、培養物をフローサイトメトリーによって分析し、各型の残りの生きている標的細胞を数える。所与のＮＫ細胞型のａＣＡＲが介在する殺傷（基本差分）は、先ず総殺傷（標的のみの条件と比較した標的の減少）を計算し、次に対照（ｉＣＡＲのみ）ＮＫ細胞による総殺傷を差し引くことによって定量する。ｉＣＡＲが介在する保護はｉＣＡＲ抗原の有無にかかわらず、標的間のａＣＡＲが介在する殺傷の変化として定量する。殺傷アッセイの上清を、ＴＮＦα分泌について分析し、ａＣＡＲおよびｉＣＡＲ性能測定基準を、殺傷と同様に計算する。発現分析については、ｉＣＡＲおよびａＣＡＲを、それらのそれぞれのエピトープタグについて染色する。結果は、ＮＯＴゲート抗ＶＳＩＧ２ ｉＣＡＲの阻害活性を示す。

【0367】

実施例４： ＮＯＴゲートに基づく安全性抗原陽性細胞の保護
本実施例では、ＣＥＡ活性化ＣＡＲと組み合わせたＮＯＴ－ゲートの使用を、安全性抗原（ＶＳＩＧ２）を発現する細胞を使用して評価した。

【0368】

まず、安全性抗原（ＶＳＩＧ２）を発現する細胞株を生成した。ＳＥＭ細胞に、ＶＳＩＧ２タンパク質を発現するレンチウイルスおよび耐性選択マーカー（ブラストシジン）を使用して形質導入した。細胞を抗生物質抵抗性について選択し、フローサイトメトリーを介して所望のタンパク質の発現を評価した。またＳＥＭ細胞に、ＣＥＡＣＡＭ５－ＥＧＦＰの膜結合型をコードするレンチウイルスを形質導入した。細胞を、ＥＧＦＰ陽性について選別し、ＣＥＡＣＡＭ５およびＶＳＩＧ２の共発現をフローサイトメトリーで測定した。

【0369】

次に、ＣＥＡ活性化ＣＡＲ、および抗ＨＥＲ２阻害性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞を生成した。様々な阻害性ドメインを有する様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲ（複数の細胞内ドメインを有するものは、膜貫通ドメインに近接する順序で列挙される：ＬＩＲ１－ＬＩＲ１、ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ１－ＫＩＲ３ＤＬ１、ＬＩＲ１－ＫＩＲ３ＤＬ１、ＫＩＲ３ＤＬ１－ＬＩＲ１、ＫＩＲ２ＤＬ１、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ２、およびＳＩＲＰａ）。単一の細胞内ドメインのみを有する各々については、同じタンパク質からの膜貫通ドメインを使用した。二つの細胞内ドメインを有するものについては、第一の細胞内ドメインと同じタンパク質からの膜貫通ドメインを使用した。加えて、各ＣＡＲは、ＣＤ８ヒンジ、およびｓｃＦｖとヒンジの間のＶ５エピトープタグを含んだ。構築物の説明を表Ｆに提供する。

【0370】

（表Ｆ）抗ＶＳＩＧ２阻害ＣＡＲドメインおよび構成の説明

【0371】

抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲの構成要素を表Ｇに提供する。

【0372】

（表Ｇ）－抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲの構成要素および配列

【0373】

ドナー由来の初代ＮＫ細胞をまず増殖させ、次にＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質導入した。ａＣＡＲの発現を、ＭＹＣタグを使用してフローサイトメトリーを介して決定した。ＶＳＩＧ２安全性抗原系についての発現を図３に示す。

【0374】

ＣＥＡ－ａＣＡＲおよび様々な抗ＶＳＩＧ２ ｉＣＡＲを発現するＮＫ細胞を、ＣＥＡＣＡＭ５単独またはＣＥＡＣＡＭ５／安全性抗原（ＶＳＩＧ２）のいずれかを発現する標的細胞と共培養した。ａＣＡＲ単独、ｉＣＡＲ単独、および非標的化ｉＣＡＲなどの適切な対照を使用した。

【0375】

図４に示すように、フローサイトメトリーを使用して、ＮＯＴゲート化ＣＡＲ ＮＫ細胞との一晩の共培養後に、標的細胞の低減パーセントを測定した。図４に見られるように、様々な阻害性ドメインを含む様々なＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲは、安全性抗原を発現する標的細胞 （ＶＳＩＧ２、青色のバー）においてＣＡＲ媒介性細胞殺傷の有意な低減を示し、ＣＥＡＣＡＭ５のみを発現する標的細胞（赤色のバー）では示さない。この結果は、ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲの発現が、安全性抗原依存的な様式でＣＡＲ媒介性シグナル伝達の活性化を低減することを示す。

【0376】

実施例５： ＶＳＩＧ２結合剤の特徴解析および安全抗原としての使用
この実施例では、上記の実施例に記載されるＶＳＩＧ２結合剤を含むＣＡＲを、活性化ＣＡＲ（ａＣＡＲ）および阻害性ＣＡＲ（ｉＣＡＲ）としての活性について分析した。

【0377】

本実施例で使用されるＶＳＩＧ２ ＣＡＲの概要を以下の表Ｈに提供する。対応する配列は、上記の実施例３に提供されている。

【0378】

（表Ｈ）－評価したＶＳＩＧ２ ＣＡＲ構築物の概要

【0379】

ＶＳＩＧ２ ｓｃＦｖ配列を使用して、異なるリンカーおよび配向を使用したＣＤ２８ｚ ａＣＡＲを構築し、ＮＫ細胞によるＶＳＩＧ２陽性標的細胞の発現、結合、および殺傷を確認した。ＮＫ細胞に、異なるＶＳＩＧ２－ａＣＡＲｓを発現するレトロウイルスで形質導入した（上記の表Ｈに示す通り）。モノクローナルＶＳＩＧ２抗体のマウス配列に基づいて異なるＶＳＩＧ２結合剤を設計し、ＣＤ２８ ＩＣＤおよびＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインを有する活性化ＣＡＲとして構築した。上記の実施例４に記載される方法論を使用して、１：８のエフェクター細胞：標的細胞（Ｅ：Ｔ）比でヒトＶＳＩＧ２を過剰発現するように操作されたＳＥＭ標的細胞と、形質導入されたＮＫ細胞を共培養した。野生型（ＶＳＩＧ２発現なし）標的細胞と比較して、標的細胞死を定量化した。結果を図５に示す。

【0380】

形質導入後６日目に、異なる結合剤を有するＶＳＩＧ２ ａＣＡＲの発現を決定した（図６）。ＶＬ／ＶＨ配向は、ｓｃＦｖのＶＨ／ＶＬ配向よりも高い平均蛍光強度（ＭＦＩ）をもたらしたことが観察された。ＳＢＳＢ０４７５０、ＳＢ０４７４６、およびＳＢ０４７４４について最も高い発現が観察された。

【0381】

ＶＳＩＧ２－ＣＡＲ ＮＫ細胞を、ｍＫａｔｅおよびＶＳＩＧ２を発現する結腸直腸がん（ＣＲＣ）標的細胞と共培養した（Ｌｓ１７４ｔ、図７ＡおよびＤＬＤ１、図 ７Ｂ）。標的細胞増殖を、赤色蛍光（ｍＫＡＴＥ）を介してＩｎｃｕｃｙｔｅ（登録商標）で測定した。試験したすべてのＶＳＩＧ２ ａＣＡＲは、非形質導入（ＮＶ）および対照（ＳＢ０４５０１、ｓｃＦｖを含まない非標的化ａＣＡＲ）と比較して、殺傷の増加を示した。ＳＢＳＢ０４７５０、ＳＢ０４７４６、およびＳＢ０４７４４について最も高い殺傷が観察された。選択されたｓｃＦｖによる殺傷を、図７Ｃ（Ｌｓ１７４ｔ細胞）および図７Ｄ（ＤＬＤ１細胞）にさらに示す。

【0382】

ＦＬＴ３ ＮＯＴゲートとしてのＶＳＩＧ２
次いで、ＦＬＴ３ ＮＯＴゲートとしてのＶＳＩＧ２ ｉＣＡＲの使用を試験した。ＦＬＴ３およびＶＳＩＧ２の両方を１：４のＥ：Ｔ比で発現する標的細胞と比較して、ＦＬＴ３を過剰発現するＳＥＭ標的細胞（上述の方法論を使用して生成）と、ＮＫ細胞を共培養した。ＮＫ細胞に、異なる結合剤を有するＦＬＴ３－ａＣＡＲおよびＶＳＩＧ２－ｉＣＡＲを発現するレトロウイルスで形質導入した。図８は、ＶＳＩＧ２ ＣＡＲが両方の標的細胞株で殺傷の増加を示すことを示す。

【0383】

次いで、ＮＫ細胞およびＦＬＴ３標的細胞との共培養実験からの上清を、Ｌｕｍｉｎｅｘを使用して分析し、サイトカイン産生を定量した。図９に示すように、ＮＯＴゲートＣＡＲ－ＮＫ細胞をＶＳＩＧ２陽性標的細胞と共培養したとき、ＴＮＦα産生は減少した。

【0384】

ＣＥＡ ＮＯＴゲートとしてのＶＳＩＧ２
ＮＫ細胞に、選択されたＶＳＩＧ２結合剤を使用して構築されたＣＥＡ－ａＣＡＲおよび様々なＶＳＩＧ２－ｉＣＡＲを発現するレトロウイルスで形質導入し、フローサイトメトリーを使用して、ＮＫ細胞上のＣＥＡ－ａＣＡＲおよびＶＳＩＧ２－ｉＣＡＲの発現を決定した（図１０Ａ、対照株は、図１０Ｂに示す）。

【0385】

次いで、形質導入されたＮＫ細胞を、１：２のＥ：Ｔ比でヒトＶＳＩＧ２を過剰発現するように操作された標的細胞と共培養した。標的細胞の減少を、ＶＳＩＧ２を発現しない標的細胞（左カラム）と比較した。重要なことに、いくつかのＶＳＩＧ２ ｉＣＡＲＳは、ＶＳＩＧ２依存的様式で、標的細胞のＮＫ媒介性殺傷を有意に減少させた（図１１に示す）。

【0386】

これらのデータは、試験されたＶＳＩＧ２ ｓｃＦｖが、例えば、活性化ＣＡＲと組み合わせたＮＯＴゲート技術に対して、安全抗原として使用され得ることを示す。

【0387】

（参照による組み込み）
本出願に引用された公開文献、特許、特許出願、および他の文献は全て、あたかも各個別の公開文献、特許、特許出願、または他の文献があらゆる目的のために参照により組み込まれるように個別に示されるのと同じ範囲まで、あらゆる目的のために、それらの全体において参照により本明細書に組み込まれる。

【0388】

（均等物）
様々な特定の実施形態が図示および記載されてきたが、上記明細書は制限的ではない。本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解されるであろう。多くの変型は、本明細書の範囲を考慮すれば当業者に明らかとなるであろう。

【0389】

（他の配列）
本開示に関連する他の配列を以下に示す。

【0390】

【図1】

【図2】

【図3-1】

【図3-2】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【図7D】

【図8】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図11】

【手続補正書】

【提出日】2024-01-19

【手続補正1】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0054】

一部の態様では、本開示は、本明細書に記載されるような組成物を含む、腫瘍を治療および／または予防するためのキットを提供する。一部の態様では、キットは、対象における腫瘍を治療および／または予防するための組成物を使用するための記載された指示書をさらに含む。
[本発明１００１]
Ｖセットおよび免疫グロブリンドメイン含有２（ＶＳＩＧ２）に特異的な抗原結合ドメインと、異種分子または部分とを含む、キメラタンパク質であって、
前記抗原結合ドメインが、重鎖可変（ＶＨ）領域および軽鎖可変（ＶＬ）領域を含み、
（ａ）前記ＶＨが、
ＧＦＴＦＳＮＳ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、
ＳＤＧＧＬＹ（配列番号３）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および
ＱＧＶＲＰＦＦＤＹ（配列番号４）のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）
を含み、かつ
前記ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）
を含む；または
（ｂ）前記ＶＨが、
配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）
を含み、かつ
前記ＶＬが、
配列番号９の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号９の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および配列番号９の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）
を含む；または
（ｃ）前記ＶＨが、
配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）、および配列番号１の前記ＶＨ領域アミノ酸配列に含有される重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）
を含み、かつ
前記ＶＬが、
配列番号１０の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、配列番号１０の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および配列番号１０の前記ＶＬ領域アミノ酸配列に含有される軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）
を含み、
任意選択で、参照抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、およびＣＤＲ－Ｌ３のアミノ酸配列が、ＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに基づき定義される、キメラタンパク質。
[本発明１００２]
前記ＶＨ領域が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、本発明１００１のキメラタンパク質。
[本発明１００３]
前記ＶＬ領域が、配列番号９のアミノ酸配列を含むか、または前記ＶＬ領域が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、本発明１００１または本発明１００２のキメラタンパク質。
[本発明１００４]
前記抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含み、
任意選択で前記ｓｃＦｖの前記ＶＨおよびＶＬが、ペプチドリンカーによって分離され、
任意選択で前記抗原結合ドメインが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌが前記ペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインであり、および／または
任意選択で前記ｓｃＦｖが、配列番号１９～３５および配列番号６９～７４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
本発明１００１～１００３のいずれかのキメラタンパク質。
[本発明１００５]
前記キメラタンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、前記異種分子または部分が、膜貫通ドメイン、一つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、ヒンジドメイン、スペーサー領域、一つ以上のペプチドリンカー、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるポリペプチドを含む、本発明１００１～１００４のいずれかのキメラタンパク質。
[本発明１００６]
前記ＣＡＲが、免疫応答を阻害する一つ以上の細胞内阻害ドメインを含む阻害ＣＡＲであり、前記一つ以上の細胞内阻害ドメインの各々が、酵素阻害ドメインまたは細胞内阻害共シグナル伝達ドメインを含む、本発明１００５のキメラタンパク質。
[本発明１００７]
本発明１００１～１００６のいずれかのキメラタンパク質をコードする、操作されたポリヌクレオチド。
[本発明１００８]
本発明１００７の操作されたポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
[本発明１００９]
本発明１００１～１００６のいずれかのキメラタンパク質、本発明１００７の操作されたポリヌクレオチド、または本発明１００８の発現ベクターを含む、単離細胞。
[本発明１０１０]
本発明１００１～１００６のいずれかのキメラタンパク質、本発明１００７の操作されたポリヌクレオチド、または本発明１００８の発現ベクターを発現する、操作された細胞の集団。
[本発明１０１１]
前記細胞または細胞の集団が、前記細胞表面上に発現された一つ以上の腫瘍標的化キメラ受容体をさらに含み、任意選択で、前記一つ以上の腫瘍標的化キメラ受容体の各々が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）または操作されたＴ細胞受容体である、本発明１００９の細胞または本発明１０１０の細胞の集団。
[本発明１０１２]
Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、およびｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、本発明１００９～１０１１のいずれかの細胞または細胞の集団。
[本発明１０１３]
有効量の本発明１００９～１０１２のいずれかの細胞または操作された細胞の集団と、薬学的に許容可能な担体、薬学的に許容可能な賦形剤、またはそれらの組み合わせとを含む、医薬組成物。
[本発明１０１４]
対象において腫瘍細胞に対する細胞介在性免疫応答を刺激する方法であって、腫瘍を有する対象に、治療有効用量の、本発明１００１～１００６のいずれかのキメラタンパク質、本発明１００７の操作されたポリヌクレオチド、本発明１００８の発現ベクター、本発明１００９～１０１２のいずれかの細胞もしくは操作された細胞の集団、または本発明１０１３の組成物を投与することを含む、方法。
[本発明１０１５]
腫瘍を有する対象を治療する方法であって、治療有効用量の、本発明１００１～１００６のいずれかのキメラタンパク質、本発明１００７の操作されたポリヌクレオチド、本発明１００８の発現ベクター、本発明１００９～１０１２のいずれかの細胞もしくは操作された細胞の集団、または本発明１０１３の組成物を投与することを含む、方法。

【手続補正2】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００５７

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0057】

【図1】図１は、Ｃｈｏｔｈｉａ命名スキームを使用した抗ＶＳＩＧ２抗体（Ａｂ）の軽鎖可変領域の配列決定結果を示す（配列番号１０３）。

【図2】図２は、Ｃｈｏｔｈｉａ命名スキームを使用した抗ＶＳＩＧ２抗体（Ａｂ）の重鎖可変領域の配列決定結果を示す（配列番号１０４）。

【図3-1】図３は、ＣＡＲ／ｉＣＡＲ形質導入ＮＫ細胞からの様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図3-2】図３－１の続きの図である。

【図4】図４は、抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による、ＶＳＩＧ２を発現するかまたはＶＳＩＧ２発現を欠くＣＥＡ陽性標的細胞の殺傷を示す。

【図5】図５は、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを使用したＮＫ細胞によるＶＳＩＧ２陽性標的細胞の殺傷を示す。図５は「（Ｇ４Ｓ）１」を配列番号２９として開示する。

【図6】図６は、形質導入ＮＫ細胞上の様々な抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲの発現を示す。図６は「（Ｇ４Ｓ）３」を配列番号３１として、「（Ｇ４Ｓ）１」を配列番号２９として開示する。

【図7A】図７Ａは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞Ｌｓ１７４ｔの殺傷を示す。

【図7B】図７Ｂは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞ＤＬＤ１の殺傷を示す。

【図7C】図７Ｃは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞Ｌｓ１７４ｔの殺傷を示す。

【図7D】図７Ｄは、抗ＶＳＩＧ２活性化ＣＡＲを発現するＮＫ細胞による標的細胞ＤＬＤ１の殺傷を示す。

【図8】図８は、ＦＬＴ３陽性標的細胞および様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞によるＦＬＴ３陽性標的細胞の殺傷を示す。図８は「（Ｇ４Ｓ）３」を配列番号３１として開示する。

【図9】図９は、ＦＬＴ３活性化ＣＡＲ／ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲ ＮＫ細胞／標的細胞共培養におけるＴＮＦα産生の定量化を示す。図9は「（Ｇ４Ｓ）３」を配列番号３１として開示する。

【図10A】図１０Ａは、形質導入ＮＫ細胞上の様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図10B】図１０Ｂは、対照ＮＫ細胞上の様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲおよび抗ＣＥＡ活性化ＣＡＲの発現を示す。

【図11】図１１は、ＣＥＡ活性化ＣＡＲおよび様々な抗ＶＳＩＧ２阻害性ＣＡＲを発現するＮＫ細胞によるＣＥＡ陽性標的細胞の殺傷を示す。

【手続補正3】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００９１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0091】

本明細書で使用される場合、「可動性ポリペプチドリンカー」または「リンカー」という用語は、可変重鎖および可変軽鎖領域を一緒に連結するために、単独でまたは組み合わせて使用されるグリシンおよび／またはセリン残基などのアミノ酸からなるペプチドリンカーを指す。一実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ／Ｓｅｒリンカーであり、アミノ酸配列（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_ｎ （配列番号２９)または（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）_ｎ （配列番号２４）を含み、ｎは、１を超える正の整数である。例えば、ｎ＝１、ｎ＝２、ｎ＝３、ｎ＝４、ｎ＝５、ｎ＝６、ｎ＝７、ｎ＝８、ｎ＝９、またはｎ＝１０である。一部の実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ［配列番号２９］または（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３［配列番号３１］を含むが、これらに限定されない。他の実施形態では、リンカーは、（Ｇｌｙ_２Ｓｅｒ）（配列番号１９)、（ＧｌｙＳｅｒ）、または（Ｇｌｙ_３Ｓｅｒ）［配列番号２４］の複数の反復を含む。一部の実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、Ｗｈｉｔｌｏｗリンカー（例えば、ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ［配列番号３４］）を含む。一部の実施形態では、可動性ポリペプチドリンカーは、（ＥＡＡＡＫ）３［配列番号１０５］を含む。本開示の範囲内には、例えば、ＷＯ２０１２／１３８４７５に記載されているリンカーも含まれる。

【手続補正4】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０１３３

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0133】

ある特定の実施形態では、二重特異性ＣＡＲまたはｔａｎＣＡＲは、二重特異性抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含む抗原結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体分子の各抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）内で、ＶＨは、ＶＬの上流または下流であり得る。いくつかの実施形態では、上流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ_１）の上流にそのＶＨ（ＶＨ_１）と配置され、下流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ_２）の上流にそのＶＬ（ＶＬ_２）と配置され、その結果、全体的な二重特異性抗体分子は、配置ＶＨ_１－ＶＬ_１－ＶＬ_２－ＶＨ_２を有する。他の実施形態では、上流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＨ（ＶＨ_１）の上流にそのＶＬ（ＶＬ_１）と配置され、下流抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）は、そのＶＬ（ＶＬ_２）の上流にそのＶＨ（ＶＨ_２）と配置され、全体的な二重特異性抗体分子は、配置ＶＬ_１ ＶＨ_１－ＶＨ_２－ＶＬ_２を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、２つの抗体または抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ）の間に、例えば、構築物がＶＨ_１－ＶＬ_１－ＶＬ_２－ＶＨ_２として配置される場合はＶＬ_１とＶＬ_２との間に、または構築物がＶＬ_１－ＶＨ_１－ＶＨ_２－ＶＬ_２として配置される場合はＶＨ_１とＶＨ_２との間に配置される。リンカーは、本明細書に記載のリンカー、例えば、（Ｇｌｙ_４－Ｓｅｒ）ｎリンカーであり得、ｎは、１、２、３、４、５、または６である（配列番号１０１）。一般に、２つのｓｃＦｖ間のリンカーは、２つのｓｃＦｖのドメイン間の誤対合を回避するのに十分な長さでなければならない。いくつかの実施形態では、リンカーは、第１のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。いくつかの実施形態では、リンカーは、第２のｓｃＦｖのＶＬとＶＨとの間に配置される。複数のリンカーを有する構築物では、任意の２つ以上のリンカーは、同じであっても異なっていてもよい。したがって、いくつかの実施形態では、二重特異性ＣＡＲまたはｔａｎＣＡＲは、ＶＬ、ＶＨを含み、本明細書に記載される配置で１つ以上のリンカーを更に含み得る。

【手続補正5】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０２７４

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0274】

５． ＶＬが、
ＲＡＳＥＮＩＹＳＹＬＡ（配列番号１１）またはＲＡＳＥＮＬＹＳＹＬＡ（配列番号１２）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、
ＮＡＥＴＬＰＥ（配列番号１３）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、および
ＱＨＨＹＶＩＰＷＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）を含む、実施形態１～４のいずれか一つに記載のキメラタンパク質。

【手続補正6】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３５９

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0359】

（表Ｂ）ＣＡＲ構築物の活性化（活性化）

【手続補正7】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３７８

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0378】

（表Ｈ）－評価したＶＳＩＧ２ ＣＡＲ構築物の概要

【手続補正8】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０３９０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【0390】

【手続補正9】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】配列表

【補正方法】追加

【補正の内容】

【配列表】

2024516713000001.app

【国際調査報告】