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特表2024-516837炎症性関節疾患の治療のためのメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-17

(54)【発明の名称】炎症性関節疾患の治療のためのメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体

(51)【国際特許分類】

A61K 31/5415 20060101AFI20240410BHJP

A61P 29/00 20060101ALI20240410BHJP

A61P 19/02 20060101ALI20240410BHJP

A61K 47/54 20170101ALI20240410BHJP

【ＦＩ】

A61K31/5415

A61P29/00

A61P19/02

A61K47/54

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023566934

(86)(22)【出願日】2022-04-29

(85)【翻訳文提出日】2023-12-05

(86)【国際出願番号】 FR2022050830

(87)【国際公開番号】W WO2022229576

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】2104538

(32)【優先日】2021-04-30

(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523408868

【氏名又は名称】アトゥランテラ

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人ＨＡＲＡＫＥＮＺＯＷＯＲＬＤＰＡＴＥＮＴ＆ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】エゴロヴ，マキシム

(72)【発明者】

【氏名】カグノル，セバスチアン

(72)【発明者】

【氏名】ルボ，ロナン

(72)【発明者】

【氏名】グジョン，ジャン－イヴ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB31

4C076CC04

4C076CC09

4C076DD63

4C076EE59

4C076FF31

4C076FF68

4C086AA01

4C086AA02

4C086DA38

4C086GA13

4C086GA14

4C086MA01

4C086MA04

4C086NA13

4C086NA14

4C086ZA96

4C086ZB11

(57)【要約】

本発明は、炎症性関節疾患を治療する分野に関する。より詳細には、本発明は、メロキシカムの新規水溶性ヒドロキシビスホスホン酸誘導体、特に炎症性関節疾患の治療のための医薬としてのそれらの使用、それらを含有する薬学的組成物、及びそれらの合成方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体又はその薬学的に許容される塩であって、

【化1】

式中、Ｒ１ラジカル及びＲ２ラジカルのうちの１つ及び１つのみがＨ基を表すか、又は存在せず、
－Ｒ２が存在しない場合、Ｘが、以下のＲ１－Ａ基、Ｒ１－Ｂ基及びＲ１－Ｃ基から選択され、

【化2】

－Ｒ１＝Ｈである場合、Ｘが、以下のＲ２－Ｄ基、Ｒ２－Ｅ基、Ｒ２－Ｆ基、Ｒ２－Ｇ基及びＲ２－Ｈ基から選択される、メロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体又はその薬学的に許容される塩。

【化3】

【請求項2】

Ｒ１＝Ｈであり、前記化合物が、その互変異性形態であってもよく、一般式（ＩＩ）によって表されており、

【化4】

－式中、Ｒ２が、以下のＲ２－Ｄ基、Ｒ２－Ｅ基、Ｒ２－Ｆ基、Ｒ２－Ｇ基及びＲ２－Ｈ基から選択される、請求項１に記載のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体。

【化5】

【請求項3】

薬物として使用するための、請求項１又は２に記載のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体。

【請求項4】

炎症性関節疾患の治療における請求項３に記載の使用のための、請求項３に記載のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体。

【請求項5】

化合物Ｃ又はＥから選択される、請求項４に記載の使用のための、請求項４に記載のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体。

【請求項6】

請求項１～３に記載のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体を合成するための方法であって、
・メロキシカムを、上記で定義した基Ｒ_１－Ａ、Ｒ_１－Ｂ及びＲ_１－Ｃ、Ｒ_２－Ｄ、Ｒ_２－Ｅ、Ｒ_２－Ｆ、Ｒ_２－Ｇ及びＲ_２－Ｈから選択されるリンカーＸにカップリングするステップと、
・前記ＨＢＰ誘導体を、メロキシカムに対してリンカーの反対端にカップリングするステップと、を含む、方法。

【請求項7】

前記リンカーＸが、関節レベルでメロキシカムの放出を可能にする切断可能なプロドラッグを取得するように、基Ｒ_１－Ａ、Ｒ_１－Ｂ、Ｒ_１－Ｃ、Ｒ_２－Ｅ、Ｒ_２－Ｇ及びＲ_２－Ｈから選択される、請求項６に記載の方法。

【請求項8】

請求項１～３のいずれか一項に記載のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体又はその薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

【請求項9】

前記ヒドロキシビスホスホン酸誘導体が、化合物Ｃ又はＥから選択される、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

前記ヒドロキシビスホスホン酸誘導体が、ナトリウム塩又はメグルミン塩の形態である、請求項８又は９に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【0001】

〔技術分野〕
本発明は、炎症性関節疾患を標的とする治療の分野に関する。より具体的には、本発明は、メロキシカムの新規水溶性ヒドロキシビスホスホン酸誘導体、特に炎症性関節疾患の治療のための薬物としてのその使用、それを含有する薬学的組成物、及びその合成のための方法に関する。

【0002】

骨組織は、ヒドロキシアパタイト結晶の形態のリン酸カルシウムからなるミネラル画分と、細胞外マトリックス及び特殊化細胞を含有する有機画分とで構成される結合組織である。骨組織は、「骨リモデリング」と呼ばれるプロセスによって絶えずリモデリングされている。これは、新しい有機マトリックスを合成し、その石灰化を誘導する骨芽細胞の活性に起因する付着相（Ｏｗｅｎｅｔａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．１９９８，７，３６３）、及び有機マトリックスを吸収し、ミネラルを溶解する破骨細胞によって確保される分解相（Ｒｏｏｄｍａｎｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．１９９６，１７，３０８）を特徴とする。この生理学的プロセスは、リン酸カルシウムホメオスタシス及び骨量を維持すること（Ｍａｎｏｌｏｇａｓｅｔａｌ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｖ．Ｒｅｖ．２０００，２１，１１５）及び機械的制約に適合させることを可能にする。炎症に関連するこの平衡の乱れは、骨凝縮又は溶骨性病理の出現をもたらし得る。ヒトでは、動物と同様に、この骨障害は慢性疼痛（腰痛）を引き起こし、患者の骨格を弱めて骨折を引き起こす。次いで、病理は、患者の一時的又は永久的な固定に向かって進展し得る。これらの障害の治療には、抗炎症分子の長期投与が必要である。

【0003】

非ステロイド性抗炎症薬（non-steroid anti-inflammatory drug、ＮＳＡＩＤ）は、関節炎及び変形性関節症などの慢性関節病態を含む、炎症状態及び疼痛状態の標準治療である。より良好な効能のために、定期的かつ頻繁な投与がしばしば必要である。しかしながら、長期投与において、これらの生成物は深刻な腎臓及び胃腸への影響を引き起こす可能性があり、これは真の問題である。

【0004】

副作用を制限するために、ＮＳＡＩＤをビスホスホン酸分子と組み合わせることが提案されている。ビスホスホン酸分子は、骨のヒドロキシアパタイト（hydroxyapatite、ＨＡ）に対する親和性で知られており、標的分子として使用することができ、ＮＳＡＩＤの全身作用を制限することを可能にする。さらに、これらの標的分子は、骨レベルで切断されて有効成分を放出することができる。骨に近接したこのｉｎ－ｓｉｔｕ放出は、それまで活性が阻害されていた分子の活性化を伴い得る。この２回の活性化はまた、長期の全身性副作用を制限するために興味深い。

【0005】

炎症性関節病理は、骨表面を解放することによる溶骨性障害及び骨隆起を誘導することによる骨凝縮損傷の両方を引き起こす。これらの２つのタイプの骨修飾はビスホスホン酸分子にとって魅力的であり、これにより、正常な骨と比較して病的な関節を標的とする選択性を増加させることが可能になる。ビスホスホネート（bisphosphonate、ＢＰ）の種類のうちの１つは、骨に対する親和性が高いことが知られているヒドロキシビスホスホネート（hydroxybisphosphonate、ＨＢＰ）である。

【0006】

散発的な研究は、抗炎症分子とビスホスホネート（ＢＰ）とのコンジュゲーション試験を報告している。このアプローチの目的は、骨組織中の抗炎症有効成分を標的とするための分子としてＢＰを使用し、ＮＳＡＩＤの全身分散を制限することである。加えて、有効成分の局所的切断は、標的化された作用を可能にする。例として、第１の研究は、ビスホスホン酸誘導体へのコルチゾンのコンジュゲーションを報告しているが（Ｇｕｅｒｖｅｎｏｕｅｔａｌ．，ＰｈｏｓｐｈｏｒｕｓＳｕｌｆｕｒａｎｄＳｉｌｉｃｏｎ，１９９４，８８，１－１３）、有効成分の放出能は確認されておらず、抗炎症効果は実証されていない。第２の研究は、ＮＳＡＩＤであるジクロフェナクのビスホスホン酸誘導体の使用を提示し、結果は、骨部位におけるジクロフェナクの濃縮、次いで有効成分の放出を示し、ＮＳＡＩＤの通常の胃腸副作用の消失を伴う有効用量の減少を可能にする（Ｈ．Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉｅｔａｌ．，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ７０，２００１，１８３－１９１、Ｈ．Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，１８（５），２００１，６４６－６５１）。この研究は、ＢＰ分子による局在化された標的化戦略の利益を確認するが、ジクロフェナクの選択は、メロキシカムなどの他のＮＳＡＩＤよりも高い胃腸毒性のリスクのために、依然として議論の余地がある（ＣＨａｗｋｅｙｅｔａｌ．，ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒｎａｌｏｆＲｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，３７，９３７－９４５）。さらに、この研究において、使用されたＢＰベクターは、ＨＢＰ誘導体よりも骨に対して低い親和性を有する。

【0007】

最後に、最近発表された研究は、別のＮＳＡＩＤであるイブプロフェンのＨＢＰ誘導体の使用を記載している。しかしながら、イブプロフェンをｉｎｓｉｔｕで放出する能力及び抗炎症効力については言及されていない（Ａｏｕｎｅｔａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ２０１９，５１，Ａ－Ｋ）。

【0008】

これらのいくつかの研究とは別に、ビスホスホン酸ベクターによる抗炎症性分子のベクター化のドメインは、実際に調査されておらず、変形性関節症及び変形性関節症の治療におけるこれらの分子の有効性に関するデータが欠けている。

【0009】

メロキシカムは、獣医学において一般的に使用されるＮＳＡＩＤである。それはまた、変形性関節症、関節リウマチ及び強直性脊椎炎の急性発作を軽減するためにヒト（Ｍｏｂｉｃ）において使用されるが、現在の製剤では、それが引き起こす全身性副作用のために、治療は短期間であり、可能な限り低用量でなければならない。

【0010】

並行して、抗がん及び抗菌分子のビスホスホン酸誘導体へのコンジュゲーションは、コンジュゲートの合成及びその生物学的活性の両方の観点から、より広く研究されている（Ｆａｒｒｅｌｌｅｔａｌ．，ＢｏｎｅＲｅｐｏｒｔｓ９，２０１８，４７－６０、Ｘｉｎｇｅｔａｌ．，Ｂｏｎｅ１３８，２０２０，１１５４９２）。

【0011】

今日まで、有効であり、長期間副作用のない関節疾患の抗炎症治療の必要性は満たされていない。

【0012】

〔発明の開示〕
本発明の主題である抗炎症分子は、骨組織を標的とするヒドロキシビスホスホン酸ベクター（ＨＢＰ）による、非ステロイド性抗炎症生成物（ＮＳＡＩＤ）、メロキシカム（meloxicam、ＭＬＸ）－ＣＯＸ－２の優先的阻害剤－のベクター化からなる。これらの二官能性分子は、関節炎症の治療のために提案されており、３つの部分からなる：（ｉ）骨を標的とし、そこに有効成分をもたらすＨＢＰベクター、（ｉｉ）有効成分、メロキシカム（ＭＬＸ）、及び（ｉｉｉ）ＨＢＰ及びＭＬＸ部分を一緒に接続し、ＭＬＸの放出を確実にすることができるリンカー。

【0013】

したがって、本発明は、以下に定義される式（Ｉ）のメロキシカムの新規ヒドロキシビスホスホン酸誘導体、又はその薬学的に許容される塩に関する。

【0014】

本発明はまた、式（Ｉ）のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体の、薬物としての使用、及びより具体的には炎症性関節疾患の治療のための使用に関する。

【0015】

本発明はまた、式（Ｉ）のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体、又はその薬学的に許容される塩を合成するための方法に関する。

【0016】

最後に、本発明は、式（Ｉ）のヒドロキシビスホスホン酸誘導体又はその薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の賦形剤と、を含む薬学的組成物に関する。

【0017】

〔発明の利点〕
本発明は、炎症を起こした骨領域におけるＮＳＡＩＤの効果的な標的化のための革新的なアプローチによって、炎症性関節疾患の治療において新しい展望を開く。このアプローチは、ＨＢＰ誘導体によるＮＳＡＩＤ（ここではメロキシカム）のベクター化からなる。

【0018】

関節領域へのＭＬＸの標的化のおかげで、全身性副作用を誘発することなく、ＭＬＸの局所濃度を増加させることができる。抗炎症効果が改善される。したがって、この戦略は、ＭＬＸの治療域を広げ、メロキシカムの進行性放出によって投与後により強くかつより持続する炎症起源の疼痛の軽減を提供するという利点を有する。治療はまた、全身毒性がより低いために、反復投与による長期的な治療を想定することもできる。加えて、メロキシカム単独では、疼痛を軽減するために毎日の投与が必要であるのに対して、進行性放出は、少なくとも２週間の抗炎症効果から利益を得ることを可能にする。したがって、炎症の治療（副作用の低減及び効能の増加）は、経時的に間隔をあけた投与を提案することによって著しく改善され、その有害作用は著しく減弱される。

【0019】

ベクター化戦略は、リンカーの選択によって想定される治療アプローチに応じて適合させることができる。

【0020】

本発明の有利な実施形態では、ＭＬＸは、切断可能なリンカーによってＨＢＰベクターに接続される。次いで、ＨＢＰ－ＭＬＸ分子は、ＭＬＸの切断及び放出によって病理学的部位で活性分子に変換されるプロドラッグの形態である。

【0021】

別の実施形態では、ＨＢＰ－ＭＬＸ分子は切断可能ではない。これは、ＭＬＸのより低い効能をもたらすが、経口投与の可能性を開く。実際、この場合、分子は胃の非常に酸性の媒体中で安定でなければならない。

【0022】

本発明におけるメロキシカムと会合したヒドロキシビスホスホン酸ベクター（ＨＢＰベクター）は、特許（国際公開第２０１６／０７９３２７号）に記載されており、それを使用して、そのケトン基とイミン結合を形成することによって抗がん分子ドキソルビシンをベクター化した。ここで、メロキシカム（ＭＬＸ）は、リンカーによってＨＢＰベクターに連結されており、このリンカーは、一方の側で切断可能な結合を介してＭＬＸと、他方の側で安定なイミン結合を介してベクターとの間に架橋を形成する。この戦略は、合成を容易にし、最終ステップ中にベクター（ＨＢＰベクター）を添加することを可能にする。遊離ＨＢＰ誘導体は、非常に極性であり、親水性であり、キレート化し、通常の有機溶媒にほとんど不溶性であり、水が最良の溶媒である。このため、最良の戦略は、合成の最後にこの基を導入することであり、これにより、本発明において選択されるイミン戦略が可能になる。特許国際公開第２０１２／１３０９１１号及び国際公開第２０１６／０７９３２７号は、他のベクターを使用する同等のアプローチを例示し、このアプローチは、仏国特許出願第２９２６０８１号に記載されているように、直線型合成経路によって、より複雑であるか又は不可能でさえある複雑な多官能性分子をベクター化することを可能にする。したがって、ここで提案される合成方法は、直線型方法よりも普遍的であり、経済的であり、環境に優しく、置換可能である。

【0023】

最後に、ＨＢＰ部分は最終分子に良好な水溶性を与えるが、ＭＬＸは非常に難溶性である。したがって、ベクター化は、有効成分の生物学的利用能の改善に関与する。

【0024】

〔発明を実施するための形態〕
本発明の第１の主題は、一般式（Ｉ）のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体又はその薬学的に許容される塩に関し、

【0025】

【化1】

式中、Ｒ１ラジカル及びＲ２ラジカルのうちの１つ及び１つのみがＨ（水素）基を表すか、又は存在せず、
－Ｒ２が存在しない場合、Ｘが、以下のＲ１－Ａ基、Ｒ１－Ｂ基及びＲ１－Ｃ基から選択され、

【0026】

【化2】

－Ｒ１＝Ｈである場合、Ｘが、以下のＲ２－Ｄ基、Ｒ２－Ｅ基、Ｒ２－Ｆ基、Ｒ２－Ｇ基及びＲ２－Ｈ基から選択される。

【0027】

【化3】

【0028】

本発明の特定の実施形態では、上記のヒドロキシビスホスホン酸誘導体は、それらの互変異性形態であり得、一般式（ＩＩ）によって表され、

【0029】

【化4】

式中、Ｒ２は、上記の基Ｒ２－Ｄ、Ｒ２－Ｅ、Ｒ２－Ｆ、Ｒ２－Ｇ及びＲ２－Ｈから選択される。

【0030】

対応する分子は、化合物の提示順に、Ａ（１８Ａ１６６）、Ｂ（１９Ａ１４３）、Ｃ（１９Ａ１１５）、Ｄ（１８Ａ１３５）、Ｅ（１８Ａ１８４）、Ｆ（１８Ａ１８２）、Ｇ（１９Ａ４）及びＨ（１９Ａ２２）である。これらの分子を以下に示す。

【0031】

これらの化合物の薬学的に許容される塩は、有機塩基又は無機塩基との組み合わせによって得られる。本発明の好ましい実施形態では、これらは、ナトリウム塩又はメグルミン塩である。

【0032】

本発明の第２の主題は、上記のメロキシカムのメロキシカム誘導体の、薬物としての使用に関する。

【0033】

この薬物は、獣医学及びヒト医学において使用することができる。関節領域でのその標的化された作用に起因して、この生成物の投与の速度は、メロキシカムの段階的な放出（２週間の最小期間）によって効果が延長された注射に対してのみ低減され得る。これは、全身的副作用を制限することにより、長期にわたって、又は反復して投与することができる。

【0034】

骨指向性を有するＨＢＰベクター及び抗炎症特性を有するＭＬＸ、本発明によるメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体は、炎症性関節疾患の治療において有利に使用することができる。これは、変形性関節症及び関節炎などの慢性炎症関節疾患に関連する疼痛を治療するのに特に好適である。本発明の好ましい実施形態では、メロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体は、獣医学分野において、特にイヌ及びネコにおいて使用される。それにもかかわらず、この治療は、炎症性関節疾患に罹患している動物に好適である。

【0035】

好ましい実施形態では、リンカーＸは、関節レベルでのＭＬＸの切断を可能にする。次いで、式（Ｉ）の分子は、ＭＬＸの切断によって活性化されるプロドラッグの形態である。この配置において、Ｘは、基Ｒ_１－Ａ、Ｒ_１－Ｂ及びＲ_１－Ｃ、Ｒ_２－Ｅ、及びＲ_２－Ｇから選択される。対照的に、Ｒ_２－Ｄ及びＲ_２－Ｆ基を組み込む分子は、切断可能ではないが、基Ｒ_２－Ｈを組み込む分子は、理論的にインビボで切断可能である。

【0036】

完全に好ましい実施形態では、ＨＢＰ－ＭＬＸ分子は、化合物Ｃ（１９Ａ１１５）又は化合物Ｅ（１８Ａ１８４）である。

【0037】

本発明の第３の主題は、上記で定義した式（Ｉ）のメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体を合成するための方法に関し、
－メロキシカムを、上記で定義した基Ｒ_１－Ａ、Ｒ_１－Ｂ及びＲ_１－Ｃ、Ｒ_２－Ｄ、Ｒ_２－Ｅ、Ｒ_２－Ｆ、Ｒ_２－Ｇ及びＲ_２－Ｈから選択されるリンカーＸにカップリングするステップと、
－ＨＢＰ誘導体を、メロキシカムに対してリンカーの反対端にカップリングするステップと、を含む。

【0038】

この方法では、メロキシカムのリンカーへのカップリングは、潜在的かつ優先的に切断可能な結合を介して行われるが、リンカーのＨＢＰへのカップリングは、安定なイミン－Ｃ＝Ｎ－型の切断耐性結合を介して行われる。

【0039】

得られた化合物は、クロマトグラフィー又は沈殿によって精製することができる。精製方法は、各分子についての各アプローチの有効性に応じて、及びその形態に従って、当業者によって選択される。特に、例えば、化合物Ｅ（１８Ａ１８４）は、クロマトグラフィー精製によってナトリウム塩の形態で、並びに沈殿によってナトリウム塩及びメグルミン塩の形態で得ることができることに留意されたい。塩基当量数は、遊離ヒドロキシビスホスホン酸に対応する０から、分子Ｃ（１９Ａ１１５）の４、さらには５まで可変であり得る。好ましい実施形態では、それは２～３当量の塩基である。

【0040】

本発明による分子を合成するための戦略は、最初にメロキシカムからメロキシカム－リンカーを合成し、次いで、以下の最終生成物を得るためにベクターとカップリングさせることからなる。
メロキシカム＋リンカー→メロキシカム－リンカー－［＋ＨＢＰベクター］→化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ又はＨ。

【0041】

化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨは、以下に示すとおりである。

【0042】

【化5】

【0043】

及び以下の化合物の互変異性体。

【0044】

【化6】

【0045】

【化7】

【0046】

本発明の第４の目的は、上記で定義したメロキシカムのヒドロキシビスホスホン酸誘導体又はその薬学的に許容される塩と、少なくとも１種の賦形剤と、を含む薬学的組成物に関する。塩は、ナトリウム塩などの無機塩基を用いて得られるもの、及びメグルミン塩などの有機塩基を用いて得られるもののいずれかから選択することができる。

【0047】

そのような組成物のヒドロキシビスホスホン酸誘導体は、化合物Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨから優先的に選択される。

【0048】

完全に好ましい実施形態では、組成物は、遊離酸又はナトリウム塩若しくはメグルミン塩などの塩の形態の化合物Ｃ（１９Ａ１１５）又は化合物Ｅ（１８Ａ１８４）を含む。

【0049】

この組成物は、特に皮下、静脈内、経口、筋肉内又は経皮経路による投与を可能にするように製剤化することができ、好ましくは注射溶液の形態又はパッチの形態であり、ヒト及び動物を対象とする。投薬量は、個体（体重、年齢など）及び疾患に従って適合される。

【0050】

本発明による化合物は、０．０１ｍｇ～１００ｍｇ／日の用量で使用することができ、１日１回の単回用量で与えられるか、又は数回用量、例えば２回の等価用量で投与される。１日当たり投与される用量は、有利には５ｍｇ～１００ｍｇであり、さらに有利には１０ｍｇ～２００ｍｇである。これらの範囲を超える用量を使用することが必要であり得、当業者は、この必要性を評価する方法を知っている。

【0051】

本発明は、説明のために提供され、本発明の範囲を限定するとは決して考えられない以下の実施例を読むことにより、より良く理解されるであろう。

【0052】

〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕化合物Ａの合成：化合物１及びメロキシカムからの中間体化合物２の調製
〔図２〕化合物Ａの合成：化合物２及びＨＢＰベクターからの化合物Ａの調製
〔図３〕化合物Ｂの合成：メロキシカムを含む中間体化合物５の調製
〔図４〕化合物Ｂの合成：化合物５及びＨＢＰベクターからの化合物Ｂの調製
〔図５〕化合物Ｃの合成：化合物６からの中間体化合物７の調製
〔図６〕化合物Ｃの合成：化合物７及びメロキシカムからの中間体化合物９の調製
〔図７〕化合物Ｃの合成：化合物９及びＨＢＰベクターからの化合物Ｃの調製
〔図８〕化合物Ｃの合成：中間体化合物１１の調製
〔図９〕化合物Ｄの合成：化合物１１からの中間体化合物１２の調製
〔図１０〕化合物Ｄの合成：化合物１２及びメロキシカムからの中間体化合物１３の調製
〔図１１〕化合物Ｄの合成：化合物１３及びＨＢＰベクターからの化合物Ｄの調製
〔図１２〕化合物Ｅの合成：中間体化合物１６の調製
〔図１３〕化合物Ｅの合成：化合物１６及びメロキシカムからの中間体化合物１７の調製
〔図１４〕化合物Ｅの合成：化合物１７及びＨＢＰベクターからの化合物Ｅの調製
〔図１５〕化合物Ｆの合成：化合物１８及び１９からの中間体化合物２０の調製
〔図１６〕化合物Ｆの合成：化合物２０及びメロキシカムからの中間体化合物２１の調製
〔図１７〕化合物Ｆの合成：化合物２１及びＨＢＰベクターからの化合物Ｆの調製
〔図１８〕化合物Ｇの合成：化合物１５及び２２からの中間体化合物２３の調製
〔図１９〕化合物Ｇの合成：化合物２３及びメロキシカムからの中間体化合物２４の調製
〔図２０〕化合物Ｇの合成：化合物２４及びＨＢＰベクターからの化合物Ｇの調製
〔図２１〕化合物Ｈの合成：化合物１１からの中間体化合物２５の調製
〔図２２〕化合物Ｈの合成：化合物２５及びメロキシカムからの中間体化合物２６の調製
〔図２３〕化合物Ｈの合成：化合物２６及びＨＢＰベクターからの化合物Ｈの調製
〔図２４〕ＨＢＰ－メロキシカム分子のヒドロキシアパタイト分子への固定能のインビトロ評価
〔図２５〕切断可能なＨＢＰ－メロキシカム分子によるメロキシカムを放出する能力の評価
〔図２６〕軟骨細胞に対するＨＢＰ－メロキシカム分子の抗ＣＯＸ２活性のＥＬＩＳＡによる分析
〔図２７〕ラットにおける投与後の胃、十二指腸及び腎臓に対するＨＢＰ－メロキシカムの毒性評価
〔図２８〕関節炎によって引き起こされる膝の腫張に対するＨＢＰ－メロキシカム化合物の治療効果。
〔図２９〕関節炎によって引き起こされる跛行に対するＨＢＰ－メロキシカム化合物の治療効果。

【0053】

〔実施例〕
ＨＢＰベクターは、文献国際公開第２０１６／０７９３２７号に記載されている方法に従って合成される。

【0054】

実施例１：化合物Ａ（１８Ａ１６６）の合成
化合物Ａの合成を図１及び図２に示す。

【0055】

化合物１（１．０８８ｇ、４．９８ｍｍｏｌ、１．１７当量）を、ジクロロメタンＤＣＭ（６ｍＬ）中のメロキシカム溶液（１．５ｇ、４．２７ｍｍｏｌ、１当量）及びトリエタノールアミン（triethanolamine、ＴＥＡ）（０．７５ｍＬ、５．４ｍｍｏｌ、１．２６当量）に添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。形成された固体を遠心分離し、ＤＣＭ（２×７ｍＬ）で洗浄し、真空下、室温で乾燥させた。化合物２が得られ（淡黄色固体、１．８６７ｇ、３．５ｍｍｏｌ、収率８２％、ＵＰＬＣ－ＭＳ：１００％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図１）。

【0056】

５％ＴＦＡ／ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中の化合物２（１．５ｇ、２．８１ｍｍｏｌ、１当量）及びＨＢＰベクター（７０％質量、１ｇ、２．９５ｍｍｏｌ、１．０５当量）の溶液を、室温で１６時間撹拌した。次いで、ＮａＨＣＯ３水溶液（０．５Ｍ、４６ｍＬ）を添加し、続いて３５０ｍＬの水を添加した。得られたコロイド溶液をＣ１８カラム（４×４０ｇ）に導入し、３％ＥｔＯＨから５０％ＥｔＯＨまでの勾配で溶出した。画分（ＨＰＬＣ＞９０％）をまとめた。ＥｔＯＨを真空下で蒸発させ、得られた溶液を凍結乾燥させた。化合物Ａ（１８Ａ１６６）が得られ（淡黄色固体、１．１１ｇ、１．３９ｍｍｏｌ、収率５０％）、ＨＰＬＣ：９５％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図２）。

【0057】

実施例２：化合物Ｂ（１９Ａ１４３）の合成
原理は、化合物Ａと同じである。

【0058】

化合物Ｂの合成を図３及び図４に示す。

【0059】

メロキシカム（１当量、６８６ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）をアルゴン下でＤＣＭ（３ｍＬ）及びＥｔ３Ｎ（１．３当量、３５０μＬ、２．５４ｍｍｏｌ）中で可溶化し、黄色溶液を形成した。次いで、３－アセチルベンゼンスルホニルクロリド（４）（１．１７当量、５００ｍｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物をシリカゲルを用いて真空下で蒸発させ、カラム（シリカゲル）に導入し、９／１～５／５のｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ勾配で溶出した。画分を真空下で蒸発させた（ＴＬＣ：４／６ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ）。化合物５が得られ（黄色固体、５３０ｍｇ、７９％ＵＰＬＣ－ＭＳ、収率４０％）。ＵＰＬＣ－ＭＳ：６０～８０％であり、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図３）。

【0060】

化合物５（１当量、５３０ｍｇ、０．７８５ｍｍｏｌ）を、１％ＴＦＡ／ＤＭＳＯ（４ｍＬ）中のＨＢＰベクター溶液（１．２５当量、３１４ｍｇ、０．９９４ｍｍｏｌ）に添加した。反応混合物をアルゴン下、室温で４時間撹拌し、続いてＨＰＬＣクロマトグラフィーに供した。中性ｐＨ（沈殿）に達するまで０．５ＭＮａＨＣＯ３を反応混合物に添加し、続いてＭｅＯＨを添加した。固体を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空下、室温で乾燥させた。得られた黄色固体をＭｉｌｌｉＱ水中で可溶化し、３％ＥｔＯＨから３０％ＥｔＯＨの勾配を用いてＣ１８カラム上で精製した。＞９０％のＨＰＬＣ画分をまとめ、凍結乾燥させた。化合物Ｃ（１９Ａ１４３）が得られ（淡黄色固体、２２６ｍｇ、収率３６％）、ＨＰＬＣ：９５％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図４）。

【0061】

実施例３：化合物Ｃ（１９Ａ１１５）の合成
原理は、化合物Ａと同じである。

【0062】

化合物Ｃの合成を図５、図６及び図７に示す。

【0063】

ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＴＥＡ（５．７ｍＬ、４１ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の化合物６（５ｇ、４１ｍｍｏｌ、１当量）及びＰＯＣｌ３（３８ｍＬ、４０８ｍｍｏｌ、９．９６当量）の溶液に０℃で８分間滴下添加すると、沈殿物の形成が起こる。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次いで真空下で濃縮した。エーテル（５０ｍＬ）を添加し、固体を濾過し、得られた溶液を真空下で５時間濃縮した。粗化合物７が得られ（粘性のあるオレンジ色の油、８．５ｇ、３５．６ｍｍｏｌ、収率８７％）、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図５）。

【0064】

化合物７（１．５ｇ、６．２８ｍｍｏｌ、２．２１当量）を、ＤＣＭ（８ｍＬ）中のメロキシカム溶液（１ｇ、２．８５ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（１ｍＬ、７．１９ｍｍｏｌ、２．５３当量）に室温で添加した。反応混合物を室温で４５分間撹拌し、次いでペンタン／０．５ＭＨＣｌ混合物に添加し、振盪し、濾過し、固体を０．５ＭＨＣｌで洗浄し、真空下で乾燥させた。化合物９が得られ（黄色固体１．８４ｇ、純度８１％、純粋な複合体について収率９２％）、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図６）。

【0065】

化合物９（２．８４ｇ、４．９７ｍｍｏｌ、１当量）を、５％ＴＦＡ／ＤＭＳＯ（８ｍＬ）中のＨＢＰベクター（１．８ｇ、５．４７ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液に添加し、得られた粘性溶液を撹拌し、室温で２０分間ボルテックスし、次いで反応混合物をリン酸緩衝液中で可溶化してコロイド溶液を形成し、これをＣ１８カラムに導入し、３％ＥｔＯＨから２０％ＥｔＯＨの勾配で溶出した。＞９０％のＨＰＬＣ画分をまとめ、凍結乾燥させた。化合物Ｃ（１９Ａ１１５）が得られ（淡黄色固体、１．２０５ｇ、収率３４％）、ＨＰＬＣ：９８％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図７）。

【0066】

実施例４：化合物Ｄ（１８Ａ１３５）の合成
原理は、化合物Ａと同じである。

【0067】

化合物Ｄの合成を図８、図９、図１０及び図１１に示す。

【0068】

１，４－フタルアルデヒド１０（４当量、１０ｇ、７４．６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２５ｍＬ）中４０℃で可溶化し、黄色溶液を形成した。得られた溶液を冷水浴中で冷却し、ＮａＢＨ４（１当量、０．７０５ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）を５分間添加し、不透明な黄色溶液を得た。反応は即時であった。ＴＬＣ対照、ＤＣＭ：１００％。シリカゲル（２０ｇ）を添加し、溶媒を真空下で完全に蒸発させ、混合物を１００％ＤＣＭから１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの勾配を用いてシリカゲルカラムで溶出した。純粋な画分を真空下で濃縮した。生成物１１が黄色油として５．３ｇ得られ、これは結晶化し（５２％、ＵＰＬＣ－ＭＳ：１００％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられる（図８）。

【0069】

４－（ヒドロキシメチル）ベンズアルデヒド１１（１当量、１．０ｇ、７．３４ｍｍｏｌ）をトルエン（７ｍＬ）中で可溶化した。次いで、Ｈ２Ｏ中４８重量％のＨＢｒ（３．３当量、４．０ｇ、２．７ｍＬ、２４．２４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３時間還流した。反応をＵＰＬＣ－ＭＳによってモニターした。反応が完了した。クロロホルム（６０ｍＬ）を添加し、得られた溶液を、酸が完全に中和されるまでＮａＨＣＯ３水溶液で抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。化合物１２のベージュ色の結晶が１．６９ｇ得られ（収率１００％、ＵＰＬＣ－ＭＳ：９７％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた。（図９）

【0070】

メロキシカム（１．１当量、０．５０ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）をアルゴン下、ＤＭＦ（２０ｍＬ）中で可溶化した。次いで、ＮａＨ（２．３当量、０．１３ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で５～１０分間撹拌した。反応混合物を氷浴で冷却し、４－（ブロモメチル）ベンズアルデヒド１２（１当量、０．２５５ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。反応をＮＨ４Ｃｌ（水溶液）で５～１０分間阻害（クエンチ）すると、沈殿物が形成された。反応混合物をＥｔＯＡｃで抽出した後、有機相をＮａＣｌ（飽和）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、次のステップで使用した。生成物１３を、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けた（図１０）。

【0071】

ＨＢＰベクター（１当量、０．３５ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を、数滴のＴＦＡを含むＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中で可溶化した。この無色混合物に、前のステップの粗生成物１３（１当量、１．２０ｇ、１．１１ｍｍｏｌ）を添加した。得られた黄色溶液を室温で１時間撹拌した。０．５ＭＮａＨＣＯ３水溶液（３０ｍＬ）、続いてＭｅＯＨを添加し、固体を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させた。得られた黄色固体（５００ｍｇ）をＭｉｌｌｉＱ水中で可溶化し、２０ｍＬ／分のＣ１８勾配（３％→２５％ＥｔＯＨ）で精製し、ＨＰＬＣ画分＞９０％（ＨＰＬＣ、３６０ｎｍでのＵＶ）を真空下で濃縮し、凍結乾燥させた。化合物Ｄ（１８Ａ１３５）が１５０ｍｇ得られ（黄色固体、収率２０％）、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図１１）。

【0072】

実施例５：化合物Ｅ（１８Ａ１８４）の合成
原理は、化合物Ａと同じである。

【0073】

化合物Ｅの合成を図１２、図１３及び図１４に示す。

【0074】

化合物１５（１．３１ｍＬ、１２．７３ｍｍｏｌ、１．２１当量）を、水（２２ｍＬ）及びＤＣＭ（２２ｍＬ）の混合物中の化合物１４（１．５８ｇ、１０．５２ｍｍｏｌ、１当量）、硫酸水素テトラブチルアンモニウム（０．３５３ｇ、１．０４ｍｍｏｌ、０．１当量）及びＮａＨＣＯ３（３．５３ｇ、４２ｍｍｏｌ、４当量）の溶液に、激しく撹拌しながら室温で添加した。３時間後、ＤＣＭ／０．５ＭＮａＨＣＯ３、続いて水で抽出し、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。化合物１６が得られ（＋４℃で固化して無色固体を形成する透明油、２．１２ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ、収率１００％）、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。生成物をＵＰＬＣ並びに１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けた（図１２）。

【0075】

化合物１６（２．１２ｇ、１０．６７ｍｍｏｌ、１．２５当量）を、ＤＣＭ（１２ｍＬ）中のメロキシカム溶液（３ｇ、８．５４ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（２．４ｍＬ、１７．２７ｍｍｏｌ、２当量）に添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ溶液で抽出した後、有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。化合物１７が得られ（黄色固体、４．４４ｇ、８．６５ｍｍｏｌ、収率１００％、ＵＰＬＣ－ＭＳ：１００％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた。（図１３）

【0076】

ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中の化合物１７（１．６６ｇ、３．２３ｍｍｏｌ、１当量）、ＨＢＰベクター（７８％、１．１１ｇ、３．６６ｍｍｏｌ、１．１３当量）及びＴＦＡ（０．１ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ、０．４２当量）の溶液を、室温で２０分間撹拌した。次いで、０．５ＭＮａＨＣＯ３の水溶液を添加し、続いて水を添加した。得られたコロイド溶液をＣ１８カラムに導入し、３％ＥｔＯＨから５０％ＥｔＯＨの勾配で溶出した。ＨＰＬＣ画分＞９０％を一緒にまとめ、ＥｔＯＨを真空下で蒸発させ、得られた溶液を凍結乾燥させた。化合物Ｅ（１８Ａ１８４）が得られ（黄色固体、０．７８ｇ、１ｍｍｏｌ、収率３１％）、ＨＰＬＣ：９８％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた。（図１４）

【0077】

実施例６：化合物Ｆ（１８Ａ１８２）の合成
原理は、化合物Ａと同じである。

【0078】

化合物Ｆの合成を図１５、図１６及び図１７に示す。

【0079】

エチレングリコール（１５ｍＬ）中の３－ヒドロキシベンズアルデヒド（化合物１８）（１当量、２．０ｇ、１６．３８ｍｍｏｌ）、１，３－ジブロモプロパン（化合物１９）（４当量、６．６ｍＬ、６５．５１ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１．３当量、２．９ｇ、２１．２９ｍｍｏｌ）の溶液を、８０℃で５時間撹拌した。反応をＵＰＬＣ－ＭＳによってモニターした。反応混合物を、水及びエーテル抽出物で希釈した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下、４０℃で濃縮した。得られた無色油（ＵＰＬＣ－ＭＳ６９％）をシリカゲルカラム上で精製し、１００％ｃＨｅｘ勾配→６％ＥｔＯＡｃ／ｃＨｅｘ、ＣＣＭ：ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ＝９／１で溶出した。溶媒を、減圧下で蒸発させた。化合物２０が１ｇ得られ（収率２６％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図１５）。

【0080】

メロキシカム（１当量、０．５ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）をアルゴン下、ＤＭＦ（２５ｍＬ）中で可溶化した。次いで、ＮａＨ（４．４当量、０．１５ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）及びＮａＩ（１当量、０．２１ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で５～１０分間撹拌した。化合物２０（２当量、０．７ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を添加し、１時間後、ＮＨ４Ｃｌ（飽和）溶液を添加した。ＥｔＯＡｃで抽出した後、有機相をＮａＣｌ（飽和）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下、４０℃で濃縮した。化合物２１が１．６５ｇ得られ（収率６５％）、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図１６）。

【0081】

ＢＰベクター（１当量、０．４５ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を、数滴のＴＦＡを含むＤＭＳＯ（１０ｍＬ）中で可溶化した。得られた無色溶液に、化合物２１（１当量、１．６５ｇ、１．４２ｍｍｏｌ）を添加し、黄色溶液を室温で１時間撹拌した。０．５ＭＮａＨＣＯ３（２０ｍＬ）、続いてＭｅＯＨを添加し、固体を濾過し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空下で乾燥させた。得られた黄色固体（１ｇ）をＭｉｌｌｉＱ水中で可溶化し、３％ＥｔＯＨから２５％ＥｔＯＨの勾配を用いてＣ１８カラム上で精製し、ＨＰＬＣ画分＞９０％を真空下で濃縮し、凍結乾燥させた。化合物Ｆ（１８Ａ１８２）が３５０ｍｇ得られ（黄色固体、収率３０％）、ＨＰＬＣ：９５％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図１７）。

【0082】

実施例７：化合物Ｇ（１９Ａ４）の合成
原理は、化合物Ｇと同じである。

【0083】

化合物Ｇの合成を図１８、図１９及び図２０に示す。

【0084】

化合物１５（１．８１ｍＬ、１７．５８ｍｍｏｌ、１当量）を、水（５０ｍＬ）とＤＣＭ（５０ｍＬ）との混合物中の化合物２２（２．９２ｍＬ、２８．４２ｍｍｏｌ、１．６２当量）、硫酸水素テトラブチルアンモニウム（０．７８ｇ、２．３ｍｍｏｌ、０．１３当量）及びＮａＨＣＯ３（７．８４ｇ、９３ｍｍｏｌ、５．３当量）の溶液に、室温で激しく撹拌しながら添加した。３時間後、ＤＣＭ／０．５ＭＮａＨＣＯ_３で抽出し、有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。化合物２３が無色油として得られ（２．６８ｇ、１６．２８ｍｍｏｌ、収率９３％）、さらに精製することなく次のステップで使用され、１ＨＮＭＲスペクトル（図１８）によって特徴付けられた。

【0085】

化合物２３（２．３ｇ、１４ｍｍｏｌ、１．４当量）を、ＤＣＭ（１４ｍＬ）中のメロキシカム溶液（３．５ｇ、１０ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（２．８ｍＬ、２０．１４ｍｍｏｌ、２当量）に添加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌し、シリカゲルを有するカラムに導入し、ｃＨｅｘ→ＥＡ勾配、ＣＣＭ：ＤＣＭ／ＥＡ＝３／１で溶出した。溶媒を、減圧下で蒸発させた。化合物２４が得られ（黄色固体、１．７８２ｇ、３．７１６ｍｍｏｌ、収率３７％、ＵＰＬＣ－ＭＳ：８５％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図１９）。

【0086】

化合物２４（１．６６ｇ、３．４６ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中のＨＢＰベクター溶液（１．１１ｇ、３．６５ｍｍｏｌ、１．０６当量）及びＴＦＡ（０．１ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ、０．３９当量）に添加し、室温で２４時間撹拌した。次いで、０．５ＭＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、続いて水を添加した。得られたコロイド溶液をＣ１８カラムに導入し、３％ＥｔＯＨから５０％ＥｔＯＨの勾配で溶出した。ＨＰＬＣ画分＞９０％を一緒にまとめ、ＥｔＯＨを真空下で蒸発させ、得られた溶液（約１００ｍＬ）を凍結乾燥させた。化合物Ｇ（１９Ａ４）が得られ（黄色固体、０．８２ｇ、１．１ｍｍｏｌ、収率３２％）、ＨＰＬＣ：９５％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図２０）。

【0087】

実施例８：化合物Ｈ（１９Ａ２２）の合成
原理は、化合物Ａと同じである。

【0088】

化合物Ｈの合成を図２１、図２２及び図２３に示す。

【0089】

化合物１１（４．０８ｍＬ、３０ｍｍｏｌ、１当量）、パラホルムアルデヒド（０．９ｇ、３０ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＭＳＣｌ（１．５ｍＬ、１１７ｍｍｏｌ、３．９２当量）の混合物を室温で５０分間撹拌し、真空下、室温で５０分間濃縮した。得られた粗生成物２５（褐色油、５．５３ｇ、約１００％）を、次のステップで直ちに使用した（図２１）。

【0090】

化合物２５（５．５３ｇ、３０ｍｍｏｌ、１．６３当量）を、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中のメロキシカム溶液（６．４５ｇ、１８．３６ｍｍｏｌ、１当量）及びＴＥＡ（６ｍＬ、４３．１７ｍｍｏｌ、２．３５当量）に添加した。反応混合物を室温で１５０分間撹拌し、次いでシリカゲルを有するカラムに導入し、ｃＨｅｘ勾配→ｃＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ＝２／３、ＣＣＭ：ＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ＝３／１で溶出した。化合物２６が得られ（黄色固体、１．７３ｇ、３．４６ｍｍｏｌ、収率１９％、ＵＰＬＣ－ＭＳ：８１％）、１ＨＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図２２）。

【0091】

化合物２６（１．７２７ｇ、３．４６ｍｍｏｌ、１当量）を、ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中のＨＢＰベクター（１．２７ｇ、４．１８ｍｍｏｌ、１．２１当量）及びＴＦＡ（０．１ｍＬ、１．３５ｍｍｏｌ、０．３９当量）の溶液に添加し、得られた混合物を室温で２０分間撹拌し、次いでＮａＨＣＯ３溶液に注ぎ、５分間超音波処理した。コロイドとして得られた濁った溶液をＣ１８カラムに導入し、３％ＥｔＯＨから５０％ＥｔＯＨの勾配で溶出した。ＨＰＬＣ＞９０％のＥｔＯＨを真空下で蒸発させ、水溶液を凍結乾燥させた。化合物Ｈ（１９Ａ２２）が１．３１４ｇ得られ（黄色固体、収率５０％）、ＨＰＬＣ：９４～９５％であり、１ＨＮＭＲ、３１ＰＮＭＲ、ＭＳ及びＵＶスペクトルによって特徴付けられた（図２３）。

【0092】

実施例９：ＨＢＰ－メロキシカム分子のヒドロキシアパタイトへの固定能の評価
分子Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ及びＨの溶液を、ヒドロキシアパタイト（１０ｍｇのＨＡを含む１ｍＭで１ｍＬ）の存在下に置き、室温で３０分間撹拌した後、ＨＰＬＣによって付着の程度を推定した。試験は三回行った。

【0093】

得られた分子は、図２４に示されるように、ヒドロキシアパタイト（ＨＡ）に迅速に結合する。

【0094】

実施例１０：切断可能なＨＢＰ－メロキシカム分子によるメロキシカムを放出する能力の評価
得られた分子は、溶液中でのメロキシカムの放出について異なる能力を有する。３７℃のラット血清中又はｐＨ７．４、５及び３の３種の緩衝液中の化合物を、ＨＰＬＣによって分析した。４８時間で放出されたＭＬＸの量を図２５に示す。

【0095】

実施例１１：ＨＢＰ－メロキシカム分子の抗炎症活性のインビトロ評価
得られた分子を、ラット初代関節軟骨細胞に対するＣＯＸ２炎症促進性酵素の活性を阻害する能力について試験した。軟骨細胞を１μｇ／ｍＬの濃度のＬＰＳで２４時間刺激することによって、ＣＯＸ２活性を誘導した。ＬＰＳ刺激の間、軟骨細胞を、２５ｍＭＨＥＰＥＳ及び０．５％ＢＳＡを含む無血清ＤＭＥＭ培地中で培養した。分子１８Ａ１３５、１８Ａ１６６、１８Ａ１８２、１８Ａ１８４、１９Ａ４、１９Ａ２２、１９Ａ１１５、１９Ａ１４３又はメロキシカムを、０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭ、５μＭ又は１０μＭの濃度でＬＰＳと同時に２４時間添加した。

【0096】

ＨＢＰ－メロキシカム分子を滅菌水中で可溶化し、メロキシカムを１０％ＤＭＳＯを含むＰＢＳ中で可溶化した（細胞と接触させて最終的に０．１％ＤＭＳＯ）。ＣＯＸ２活性をＥＬＩＳＡ分析によって測定した。結果を図２６に示す。

【0097】

切断可能な分子１８Ａ１６６、１８Ａ１８４、１９Ａ４、１９Ａ１１５及び１９Ａ１４３は、メロキシカムに類似したＣＯＸ２に対する阻害活性を示す。切断不可能な分子は、切断可能な分子及びメロキシカムよりも低いＣＯＸ２阻害活性を示すが、存在する。

【0098】

実施例１２：ラットにおける最大耐容量及び毒性の評価
これらの試験は、２つの異なる研究を通して行われた。分子１８Ａ１３５、１８Ａ１６６、１８Ａ１８２、１８Ａ１８４、１９Ａ２２、１９Ａ１１５及び１９Ａ１４３を５％グルコース中で可溶化し、次いで、少なくとも１６週齢の雄及び雌のＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ系統を有するラットに単回静脈内注射（尾静脈、５分間注入、１０ｍＬ／ｋｇの体積）によって投与した。ＨＢＰ－メロキシカム分子は、用量３０、４５、６７．５及び１０１．２５μｍｏｌ／ｋｇで投与した。分子の急性毒性を、７日間の重量による進化を追跡することによって決定した。動物が７日間連続して体重減少しなかった場合、又は、治療の日のその体重の９０％未満への体重減少が３日間なかった場合、用量は耐容可能であるとみなした。

【0099】

第２の研究におけるメロキシカムの毒性の制御において、雄ラット及び雌ラットを、２８日間、１ｍｇ／ｋｇ～２．８５μｍｏｌ／ｋｇの用量（すなわち、７９．８μｍｏｌ／ｋｇの累積用量）で経口メロキシカムにより毎日治療した。

【0100】

各分子の最大耐量（maximum tolerated dose、ＭＴＤ）の値を以下の表１に示す。

【0101】

【表1】

【0102】

分子１８Ａ１３５及び１８Ａ１６６は、最も高いＭＴＤ値（６７．５μｍｏｌ／ｋｇ）を有するが、他の分子は、４５μｍｏｌ／ｋｇのＭＴＤを有する。

【0103】

それらのＭＴＤ用量を受けた動物（３匹の雄及び３匹の雌）を投与の４週間後に屠殺した。メロキシカムの毒性に特徴的な器官（胃、十二指腸、腎臓）を採取し、ホルムアルデヒド中で固定し、組織学的検査において調製し、獣医学病理学者によって分析して、これらの器官に対する全体的な毒性を評価した（第１の研究において０～１２．５のスケール、第２の研究において０～１３．５のスケール）。

【0104】

各試験に対応する組織学的分析を図２７に提示する。メジアン値は、水平バーによって表される。

【0105】

ＭＴＤ用量のＨＢＰ－メロキシカム分子は、毎日投与されたメロキシカムと同一の毒性値（分子１８Ａ１６６）又はより低い毒性（分子１８Ａ１３５、１８Ａ１８２、１８Ａ１８４、１９Ａ４、１９Ａ１１５及び１９Ａ１４３）を有する。

【0106】

実施例１３：ラットの単関節炎モデルにおけるＨＢＰ－メロキシカム分子の抗炎症効力の評価。
５００μｇのｍＢＳＡを含有するＣＦＡエマルジョンの皮下注射による２回の予備感作後（誘導の２週間前及び３週間前）に、１００μｇのｍＢＳＡの関節内注射（膝）によってラット（雄、ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ系統、１４週齢）において単関節炎を誘導した。群間の均質性を得るために、腫張の強度に応じて、誘導後２４時間のＤ２に分配を行った。動物を分配した後、３０μｍｏｌ／ｋｇの同一用量で単回静脈内注射（尾静脈、５分間注入、１０ｍＬ／ｋｇの体積）によって分子１８Ａ１８４及び１９Ａ１１５により治療を施した。ＨＢＰ－メロキシカム分子を５％グルコース中で可溶化した。対照において、病的動物（ｍＢＳＡ）は、５％グルコースの単回注射（尾静脈、５分間注入、１０ｍＬ／ｋｇの体積）を受けた。

【0107】

標準治療において、動物は、０．２ｍｇ／ｋｇ～０．５７μｍｏｌ／ｋｇのＮＯＥＬ用量、すなわち１５．９６μｍｏｌ／ｋｇの累積用量で２８日間、メロキシカムの経口投与を毎日受けた。

【0108】

関節炎の進展は、病的な膝の腫張及び動物の跛行を測定することによってモニターした。

【0109】

図２８は、Ｄ２に治療を施した後の腫脹の進展を示す。

【0110】

分子１８Ａ１８４及び１９Ａ１１５は、関節炎の急性期（第１週）において、毎日投与されるメロキシカムよりも良好な有効性を示す。

【0111】

分子１８Ａ１８４は、分子１９Ａ１１５と比較して延長された有効性を示す。

【0112】

図２９は、Ｄ１に関節炎を誘導してから、及びＤ２に治療を施した後の跛行の進展を示す。