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特表2024-517260ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣＬ）の合成プロセス
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-19
(54)【発明の名称】ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣＬ）の合成プロセス
(51)【国際特許分類】
C07H 19/048 20060101AFI20240412BHJP
【ＦＩ】
C07H19/048
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023568280
(86)(22)【出願日】2022-05-04
(85)【翻訳文提出日】2023-12-14
(86)【国際出願番号】 EP2022061950
(87)【国際公開番号】W WO2022233923
(87)【国際公開日】2022-11-10
(31)【優先権主張番号】202121020313
(32)【優先日】2021-05-04
(33)【優先権主張国・地域又は機関】IN
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523416058
【氏名又は名称】ボーハン アンド カンパニー エーエス
(74)【代理人】
【識別番号】110000659
【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】マルカンナガリ，ラマニ
(72)【発明者】
【氏名】ガンダプネニ，ラーガバ ラオ
(72)【発明者】
【氏名】ボーハン，フロード
【テーマコード（参考）】
4C057
【Ｆターム（参考）】
4C057AA17
4C057BB02
4C057CC03
4C057DD01
4C057LL05
4C057LL41
(57)【要約】
本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）の合成に関する。より詳細には、本発明は、非晶質形態のＮＲＣｌを合成するための費用効果が高く、工業的に拡張可能なプロセス記載する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ）アセトンまたはアセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下で、ニコチンアミドまたは３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下で、前記トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたは前記トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；
を含む、ニコチンアミドリボシドクロリドを調製するための方法。
【請求項2】
ａ）アセトン中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；および、ｂ）アルコール性溶媒中、無水ＨＣｌの存在下、前記トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
ａ）アセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下で前記トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ることと、
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項4】
２，３，４，５－テトラ－Ｏ－アセチル－Ｄ－リボースの前記塩素化はまた、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、およびＣ４～Ｃ６ケトン溶媒からなる群から選択される溶媒中で行われ得る、請求項１に記載の方法。
【請求項5】
前記塩素化反応は、０～５℃の温度範囲で好都合に行われ得る、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
工程ａ）の前記反応は、０℃～５０℃の温度範囲で行われる、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
溶媒中で使用される前記乾燥ＨＣｌまたは無水ＨＣｌは、溶媒中に吸収された新たに調製された乾燥ＨＣｌもしくは無水ＨＣｌ、または溶媒中に吸収された市販の乾燥ＨＣｌもしくは無水ＨＣｌからなる群から選択され得、前記溶媒は、アセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノール、およびイソプロパノールから選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
リボース四酢酸対ニコチンアミドのモル比は、１：０．５～２．０である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
工程ｂ）で使用することができるアルコール性溶媒は、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ－プロピルアルコール、および他のＣ４～Ｃ６アルコール性溶媒からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
前記有機塩基は、ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＴＢＡ、またはＮ－アルキルピロリジンから選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
工程ｂ）の前記反応は、０～２５℃の温度範囲で行われ得る、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
ａ）ジクロロメタンまたはジクロロエタンから選択される溶媒中、ＴＭＳＯＴｆの存在下で、３－シアノピリジンでリボース四酢酸（ＲＴＡ）を処理することによりトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを調製すること；およびｂ）加水分解後、エタノール／水中のＨＣｌを用いて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；
を含む、ニコチンアミドリボシドクロリドを調製するための方法。
【請求項13】
上記で得られたニコチンアミドリボシドクロリドは、非晶質形態である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）の合成に関する。より詳細には、本発明は、非晶質形態のＮＲＣｌを合成するための費用効果が高く、工業的に拡張可能なプロセスに関する。
【背景技術】
【0002】
ニコチンアミドリボシドならびにニコチンアミドリボシドクロリドおよびニコチンアミドモノヌクレオチドなどのその誘導体は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ＋）の代謝産物である。ＮＡＤ＋前駆体として、ニコチンアミドリボシドは酸化代謝の増強を示し、マウスの高脂肪食誘導性肥満から保護し、ニコチンアミドリボシドおよびその誘導体に大きな関心が寄せられた。ニコチンアミドリボシドは天然に存在する化合物であるため、ニコチンアミドリボシドおよびその誘導体は、副作用を引き起こすことなく天然の栄養補助食品として大きな可能性を有する。ニコチンアミドリボシドおよびその誘導体の商業的利用における１つの限界は、ニコチンアミドリボシドおよびその誘導体を調製するための既知の合成方法がいくつかの欠点を有し、それらを商業的または工業的使用のためのスケールアップに適さないようにしている。
【0003】
例えば、特許文献１は、ニコチンアミドリボシドのトリフラート塩形態を介してニコチンアミドリボシドおよびその誘導体を調製する方法を記載している。したがって、ニコチンアミドリボシドのトリフラート塩形態は、その関連する毒性のために栄養補助食品ではない。したがって、これらの化合物は、逆相液体クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィーなどの方法を使用して、トリフラートアニオンを薬学的に許容可能な他のアニオンと交換するための追加の工程を必要とし、それによって製造プロセスのコストが増大する。さらに、クロマトグラフィー条件下でのニコチンアミドリボシドの不安定な性質を考慮すると、副生成物の生成により、純度および収率が低下する可能性がある。
【0004】
特許文献１（実施例１および２）は、還流下でＣＨ２Ｃｌ２中のトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ）の存在下で、１，２，３，５－テトラ－ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボフラノースをニコチン酸エチルと反応させて、化合物２’，３’，５’－トリアセチルエチルニコチンリボシド（エチルｌ－［３，４－ジアセチルオキシ－５－（アセチルオキシメチル）オキソラン－２－イル］－ピリジン－３－カルボキシレート）を生成することによる、ニコチンアミドリボシドの調製を記載しており、これを脱アセチル化し、メタノール性アンモニア中でアミド化してニコチンアミドリボシド（ＮＲ）をもたらし、続いて逆ＨＰＬＣを使用して精製する。しかしながら、これらの実施例は、得られた生成物が純粋であると言及しているが、純度も収率も報告されていない。合成を以下のスキーム１に示す。
【0005】
【化1】
【0006】
同様の手順は、特許文献２（実施例１～３、図３）に記載されており、ここでは、５当量のＴＭＳＯＴｆの存在下でのヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）中のビス－シリル化ニコチンアミド（ニコチンアミドおよびトリメチルシリルクロリド（ＴＭＳＣｌ）から調製）とリボース四酢酸とのカップリングが記載されている。この場合も、薬学的に許容可能な塩化物塩への変換は、いくつかの追加の工程を必要とする。
【0007】
ニコチンアミド誘導体と保護リボースとの間のＴＭＳＯＴｆ媒介カップリングは、非特許文献１～３に記載されている。これらの方法は、ＴＭＳＯＴｆを触媒として使用することによって必然的にトリフラート塩の調製をもたらし、イオン交換のさらなる工程をもたらすという欠点を有する。
【0008】
特許文献３は、ＮＲＣｌを合成するための他のプロセスを開示しており、トリ－Ｏ－アセチルリボフラノシルクロリドを得るための１，２，３，５－テトラ－アセチル－Ｄ－リボフラノースの塩素化が、塩化アセチルまたはアセトニトリルに溶解したＨＣｌを任意に使用して反応溶媒としてジクロロメタンを使用してクロロ誘導体を得ることと、続いて、アセトニトリル中トリブチルアミンの存在下でニコチンアミドとカップリングさせて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ることと、によってジオキサンに溶解したＨＣｌの存在下で行われることが報告されており、これをさらにメタノール性アンモニアまたはジエチルアミンの存在下で加水分解して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得る。このプロセスは、１，４－ジオキサンおよびアセトニトリルなどの高価な溶媒を伴うため、ニコチンアミドリボシドクロリドの全合成のコストを増大させ、それにより、これらの溶媒の使用は、このプロセスの工業規模での実施を不可能にする。トリアセチルニコチンアミドリボシドの脱アセチル化は、メタノール中のジエチルアミンの溶液を使用して、長時間にわたる反応時間（３６時間）での極低温条件（－３℃）を必要とする。ＨＣｌを用いた反応塊からの生成物の再生は緩慢であり、低～中程度の収率をもたらす。
【0009】
他の先行技術（非特許文献４）において、トリ－Ｏ－アセチルリボフラノシルクロリドを得るための１，２，３，５－テトラ－アセチル－Ｄ－リボフラノースの塩素化は、エーテル性乾燥ＨＣｌの存在下、０℃で行われる。しかしながら、エーテルは、その高い揮発性および関連する安全性の問題のために、工業的使用のためのスケールアップに適した溶媒ではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【0010】
【特許文献1】国際公開第２００７／０６１７９８号公報
【特許文献2】国際公開第２０１５／０１４７２２号公報
【特許文献3】国際公開第２０１９／００６２６２号公報
【非特許文献】
【0011】
【非特許文献1】Ｆｒａｎｃｈｅｔｔｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００４，１４，４６５５－４６５８
【非特許文献2】Ｔａｎｉｍｏｒｉ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００２，１２，１１３５－１１３７
【非特許文献3】Ｙａｎｇ，Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００７，５０，６４５８－６４６１．
【非特許文献4】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９４８，９６７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0012】
上記から明らかなように、先行技術は、消費に適したニコチンアミドリボシドを作るためにトリフラートを適切な対イオンで置換するためのイオン交換クロマトグラフィーのような追加の工程、プロセスの工業的使用のためのスケールアップを実行不可能にする塩素化工程での高価な溶媒の使用、脱アセチル化プロセスのための極低温条件の必要性、クロマトグラフィー技術を用いたニコチンアミドリボシドクロリドの精製の困難さと相まったアセチル基の不完全な加水分解による収率の減少などの多くの欠点を抱えている。
【0013】
したがって、当技術分野では、ニコチンアミドリボシドクロリドを製造するための費用効果が高く、非常に効率的で、工業的に拡張可能なプロセスを開発する必要性が依然として存在する。
【0014】
上記に照らして、本発明の目的は、ニコチンアミドリボシドクロリドを調製するための工業的に実行可能で費用効果の高いプロセスを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0015】
発明の概要
上記の目的に沿って、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトンまたはアセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドまたは３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
上記の目的に沿って、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトンまたはアセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドまたは３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0016】
したがって、好ましい態様において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトン中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
ａ）アセトン中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0017】
他の好ましい態様において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
ａ）アセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0018】
さらに他の好ましい態様において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）ジクロロメタンまたはジクロロエタン中、ＴＭＳＯＴｆの存在下、３－シアノピリジンでリボース四酢酸（ＲＴＡ）を処理することによりトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを調製すること；および、
ｂ）加水分解後、エタノール／水中のＨＣｌを用いて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ることと、を含む。
ａ）ジクロロメタンまたはジクロロエタン中、ＴＭＳＯＴｆの存在下、３－シアノピリジンでリボース四酢酸（ＲＴＡ）を処理することによりトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを調製すること；および、
ｂ）加水分解後、エタノール／水中のＨＣｌを用いて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ることと、を含む。
【0019】
他の態様において、本発明の方法によって得られるニコチンアミドリボシドクロリドは、非晶質固体の形態である。
【発明を実施するための形態】
【0020】
発明の詳細な説明
ここで、本発明を、その様々な態様がより完全に理解および認識され得るように、特定の好ましいおよび任意選択の実施形態に関連して詳細に説明する。別段の指定がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明を説明するために、特定の用語は、本明細書では以下のように具体的に定義される。
ここで、本発明を、その様々な態様がより完全に理解および認識され得るように、特定の好ましいおよび任意選択の実施形態に関連して詳細に説明する。別段の指定がない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明を説明するために、特定の用語は、本明細書では以下のように具体的に定義される。
【0021】
そうではないと述べられていない限り、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」という語のいずれも「限定されないが含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｗｉｔｈｏｕｔ ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎ）」を意味し、特定のまたは類似の項目に続く一般的な記述を限定すると解釈されるべきではない。
【0022】
したがって、一実施形態において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトンまたはアセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドまたは３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
ａ）アセトンまたはアセトニトリル中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドまたは３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール性溶媒中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0023】
したがって、好ましい実施形態において、本発明は、ニコチンアミドリボシドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトン中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
ａ）アセトン中、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、ニコチンアミドでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）アルコール中、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0024】
プロセスを以下のスキーム２に示す。
【化2】
【0025】
リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化もまた、ｔ－ＢｕＯＭｅ（ＭＴＢＥ）、メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、２－メチルテトラヒドロフラン（２－メチル－ＴＨＦ）、１，２－ジクロロエタン、１，２－ジメトキシエタン、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、アセトニトリル、アセトンおよび１，４－ジオキサンなどの他の溶媒中で試験された。アセトン、アセトニトリル、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトンおよびＣ４～Ｃ６の他のケトン溶媒は、試験した他の溶媒よりも優れていることが分かったが、アセトンを溶媒として使用すると、より高い変換率および優れた純度が得られた。この変換のためのアセトンの使用に伴う利点は、上記の変換のためのジオキサンのような報告された溶媒と比較して、費用対効果の高い工業用溶媒であることである。さらに、アセトンを塩素化に使用する場合、利点は、ニコチンアミドとの後続のカップリング工程をその場で行うことができることである。したがって、アセトンがこの変換における好ましい溶媒である。
【0026】
したがって、好ましい実施形態の１つにおいて、１－クロロ－２，３，５トリ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボースを得るための２，３，４，５テトラ－Ｏ－アセチル－Ｄ－リボースの塩素化、および１－クロロ－２，３，５トリ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボースとニコチンアミドとのカップリング反応は、適切な溶媒としてアセトンを使用してワンポットで行われる。
【0027】
他の実施形態において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、ここで、１－クロロ－２，３，５－トリ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボースを得るための２，３，４，５－テトラ－Ｏ－アセチル－Ｄ－リボースの塩素化、および１－クロロ－２，３，５－トリ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボースとニコチンアミドとのカップリング反応は、適切な溶媒としてアセトンを使用して異なるポットで行われ得る。このプロセスでは、中間体１－クロロ－２，３，５トリ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボースを単離し、続いてニコチンアミドと反応させることができる。
【0028】
一実施形態において、塩素化反応は、０～５℃の温度範囲で好都合に行うことができる。
【0029】
他の実施形態において、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドのインサイチュー合成は、０℃～５０℃の温度範囲で好都合に行うことができる。
【0030】
他の実施形態において、溶媒中で使用される乾燥ＨＣｌまたは無水ＨＣｌは、溶媒中に吸収された、新たに調製された乾燥ＨＣｌもしくは無水ＨＣｌ、または溶媒中に吸収された、市販の乾燥ＨＣｌもしくは無水ＨＣｌからなる群から選択され得、ここで、溶媒は、アセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノールおよびイソプロパノールから選択される。
【0031】
さらなる実施形態において、リボース四酢酸対ニコチンアミドのモル比は、１：０．５～２．０の比である。
【0032】
１－クロロ－２，３，５トリ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボースとニコチンアミドとのカップリング反応については、トリエチルアミン、トリイソプロピルアミン、トリブチルアミン、トリイソブチルアミン、およびトリイソペンチルアミン、Ｎ－メチルモルホリン、Ｎ－エチルピロリジン、およびテトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）などの各種有機塩基が検討されている。しかしながら、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ＴＢＡまたはＮ－アルキルピロリジンなどの塩基が最良の結果を与えた。
【0033】
したがって、他の実施形態において、カップリング反応に使用することができる有機塩基は、ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＴＢＡまたはＮ－アルキルピロリジンから選択される。
【0034】
一実施形態において、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドまたはトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートの脱アセチル化に使用することができるアルコールは、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ｎ－プロピルアルコールおよび他のＣ４～Ｃ６アルコール溶媒からなる群から選択される。
【0035】
本発明によれば、アセトン中のＤ－リボース四酢酸の冷却された（０℃）反応混合物を、撹拌下で無水ＨＣｌガスと反応させた。得られた混合物を０～５℃でさらに４～５時間撹拌した。完全に変換したら、窒素ガスを反応混合物中に１０～１５分間パージし、０～５℃でアセトン中のニコチンアミドを仕込み、次いで、同じ温度でＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）をゆっくり添加し、得られた反応混合物を２５～５０℃の温度範囲で同じ温度で少なくとも２０時間撹拌した。完了したら、反応塊を１５～２０℃に冷却し、次いで濾過してウェットケーキを回収し、これを吸引下で冷却アセトンでさらに洗浄した。得られたウェットケーキを真空下３０℃で乾燥させて、トリアセチル－ＮＲＣｌを得た。
【0036】
上記の変換のためのアセトンの使用に伴う利点は、ジオキサンなどの報告された溶媒と比較して、費用対効果の高い工業用溶媒であることである。アセトンはまた、より低い温度で清浄な反応を促進し、さらなる後処理を排除し、それによってそれに関連するコストを低減させる。アセトンは、反応媒体ならびに精製溶媒として二重の役割を果たす。報告されたプロセスとは異なり、この方法は精製のために追加の溶媒を必要としない。
【0037】
次の段階では、トリアセチル－ＮＲＣｌの脱アセチル化を、ＨＣｌガスのエタノール溶液またはメタノール溶液と０～５℃で最大２４時間撹拌しながら反応させることによって行った。ＴＬＣによって示されるように完全に変換した後、反応塊を濾別し、メタノールに溶解させ、０～５℃で２～３時間撹拌した。反応終了後、生成物を濾過により単離し、アセトンで洗浄した。得られたウェット塊を真空下３０℃で約２～３時間乾燥させて、ニコチンアミドリボシドクロリドを定量的収率で得た。
【0038】
脱アセチル化反応について試験されたＨＣｌ、ＨＢｒおよびＨＩのような様々な脱アセチル化剤の中で、メタノールおよびエタノール中のＨＣｌが最良の結果をもたらした。調査したメタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔ－ブタノール、ジエチルエーテルおよびジオキサンのような異なる溶媒のうち、エタノールおよびメタノールが最良の結果をもたらした。さらに、本発明者らは、メタノール性アンモニア、エチルアミン、イソプロピルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、およびジイソブチルアミンなどの様々なアルカリ性脱アセチル化剤の有効性も評価した。しかしながら、この反応について試験した全ての脱アセチル化剤の中で、エタノール性ＨＣｌおよびメタノール性ＨＣｌが、この変換について試験した全ての脱アセチル化剤の中で最良の変換率をもたらした。
【0039】
本発明による脱アセチル化反応は、先行技術とは異なり、いかなる極低温条件も必要とせず、０～５℃で容易に行われて、ＮＲＣｌを定量的収率で得ることができる。極低温条件（－５から－７℃）を使用する脱アセチル化反応［Ｌｅｅ Ｊ，Ｃｈｕｒｃｈｉｌ Ｈ，Ｃｈｏｉ Ｗ－Ｂ，Ｌｙｎｃｈ Ｊ Ｅ，Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｆ Ｅ，Ｖｏｌａｎｔｅ Ｒ Ｐ，Ｒｅｉｄｅｒ Ｐ Ｊ．Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ．１９９９：７２９－７３０．ｄｏｉ：１０．１０３９／ａ８０９９３０ｈ］は、工業規模での極低温条件の適用が困難であるため、先行技術の方法における限界であった。したがって、本発明は、溶媒としてメタノールまたはエタノールなどのアルコール中の無水ＨＣｌを使用することによって脱アセチル化プロセスを単純化し、反応は０～５℃で行われた。また、従来の方法は、脱アセチル化剤として無水アンモニアまたはジアルキルアミンの使用を含み、アセトアミドまたはジアルキルアミドが副生成物であった。したがって、アセトアミドまたはジアルキルアミンおよび他の副生成物を除去するために、面倒な後処理および精製方法が必要であった。しかしながら、本方法では、無水ＨＣｌを脱アセチル化剤として使用したため、脱アセチル化中に形成される副生成物は酢酸エチルであり、これは揮発性で環境に優しい溶媒であり、したがって単純な蒸留または蒸発によってより容易に最終生成物から除去することができる。
【0040】
さらに、クロマトグラフィー技術による精製は、ＮＲＣｌの合成における他の課題であり、これは、０～５℃でメタノールまたはエタノールなどの容易に入手可能な溶媒を使用する精製によって解決される。
【0041】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）アセトニトリル中、０℃で、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）ＨＣｌ／アルコールの存在下で、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、β－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
ａ）アセトニトリル中、０℃で、乾燥ＨＣｌで処理し、続いて有機塩基の存在下、３－シアノピリジンでクロロ誘導体をインサイチューカップリングすることによりリボース四酢酸（ＲＴＡ）を塩素化して、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得ること；および、
ｂ）ＨＣｌ／アルコールの存在下で、ＨＣｌの存在下、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを脱アセチル化して、β－ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0042】
この実施形態によるプロセスをスキーム３に示す。
【化3】
【0043】
上記スキーム３に従って、２，３，４，５－テトラ－Ｏ－アセチル－Ｄ－リボースの塩素化を、アセトニトリルの存在下、０～５℃で、乾燥ＨＣｌで処理することによって行った。アセトニトリルの使用に伴う利点は、その後の３－シアノピリジンとのカップリング工程をその場で行うことができることである。したがって、アセトニトリルは、スキーム３によるこの変換における好ましい溶媒である。
【0044】
第２のステップでは、ＴＢＡまたはＤＩＰＥＡから選択される有機塩基中、アセトニトリルの存在下で、クロロ誘導体を３－シアノピリジンとカップリングさせて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドを得た。
【0045】
第３のステップにおいて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドは、４０℃で、メタノール、エタノールまたはイソプロパノールなどのアルコール性溶媒中ＨＣｌ（メタノール、エタノールまたはイソプロパノール中塩酸）の存在下で脱アセチル化および加水分解を受けて、ＮＲＣｌを高収率で得る。
【0046】
他の好ましい実施形態において、本発明は、ニコチンアミドリボシドクロリドの調製方法を提供し、方法は、
ａ）ジクロロメタンまたはジクロロエタン中、ＴＭＳＯＴｆの存在下、３－シアノピリジンでリボース四酢酸（ＲＴＡ）を処理することによりトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを調製すること；および、
ｂ）加水分解後、エタノール／水中のＨＣｌを用いて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
ａ）ジクロロメタンまたはジクロロエタン中、ＴＭＳＯＴｆの存在下、３－シアノピリジンでリボース四酢酸（ＲＴＡ）を処理することによりトリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを調製すること；および、
ｂ）加水分解後、エタノール／水中のＨＣｌを用いて、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを脱アセチル化して、ニコチンアミドリボシドクロリドを得ること、を含む。
【0047】
この実施形態によるプロセスをスキーム４に示す。
【化4】
【0048】
上記の方法に従って、１，２，３，５－テトラ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボフラノースを室温で撹拌しながら乾燥ジクロロメタン中で３－シアノピリジンと反応させ、次いで、ＴＭＳＯＴｆの溶液を室温でゆっくり添加した。添加が完了した後、混合物を還流下、４５℃で１０～１２時間加熱した。反応の進行をＴＬＣでモニターし、反応の完了後、溶媒を除去し、粗生成物を１：１ＭｅＯＨ／ヘキサンで抽出し、トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートを無色液体としてメタノール層から回収した。
【0049】
トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドトリフラートの溶液を、ＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ（１：１）中のＨＣｌ（４０ｍｍｏｌ）で４０℃にて１２時間処理することによって、同時に加水分解および脱アセチル化した。完了後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をアセトンで希釈し、固体を濾過し、乾燥させて粗ＮＲＣｌを得、これをアセトンから精製して純粋な非晶質ＮＲＣｌを得た。
【0050】
一実施形態において、このようにして本発明の方法によって得られたニコチンアミドリボシドクロリドは、スキーム２、スキーム３およびスキーム４に示されるように、非晶質固体の形態である。
【0051】
したがって、本発明に記載されるようなプロセスは、改善された収率、より清浄な反応プロファイルのようないくつかの利点を提供し、合成プロセスならびに精製段階におけるアセトン、アセトニトリル、メタノール、エタノールおよびイソプロパノールのような容易に入手可能な低コストの工業用溶媒の使用を可能にし、それによって全合成を費用対効果が高く、工業的に拡張可能なものにする。
【0052】
以下の実施例は、実験条件を用いて本発明をさらに説明するために提示され、これらは純粋に例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【実施例】
【0053】
実施例１：
段階１パート－Ａ：無水ＨＣｌを用いたＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
段階１パート－Ａ：無水ＨＣｌを用いたＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
【化5】
【0054】
Ｄ－リボース四酢酸（１００ｇ）を２５０ｍＬのアセトン（２．５ｖｏｌ）に溶液した溶液を１Ｌ丸底フラスコに入れ、室温で撹拌した。溶液を０℃に冷却し、次いで、無水ＨＣｌガス（１８．３ｇ、１．６当量）を反応混合物に３０分間にわたって通した。得られた混合物を０～５℃でさらに４～５時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（１：１、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）およびＧＣ（ＩＰＣ限界：ＧＣによるＲＴＡの含有量はＮＭＴ５％である）によってモニターした。
【0055】
段階１パート－Ｂ：トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチンアミドリボシドクロリドの合成
【化6】
【0056】
段階１パート－Ａの完全な変換時に、窒素ガスを反応混合物に１０～１５分間パージし、０～５℃で１００ｍＬのアセトン（１ｖｏｌ）中のニコチンアミド（３８．４ｇ、１．０当量）を仕込み、次いで、同じ温度でＤＩＰＥＡ（４０．６ｇ、１．０当量）をゆっくり添加した。得られた混合物を２５～３０℃で、同じ温度で２０時間にわたって撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（１：９、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ）およびＨＰＬＣ（ＩＰＣ限界：ＨＰＬＣによるニコチンアミドの含有量はＮＭＴ２％である）によってモニターした。完了したら、反応塊を０℃に冷却し、次いで、濾別してウェットケーキを回収し、これを吸引下で冷却アセトン（５００ｍＬ）でさらに洗浄した。得られたウェットケーキを真空下、３０℃で２～３時間乾燥させて、所望のトリアセチル－ＮＲＣｌを得た。
【0057】
収量：湿重量：５７ｇ、乾燥重量：５０ｇ、理論収量：１３０ｇ
溶融範囲：１３６～１４２℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ ９．４５（ｓ，１Ｈ），９．２２（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝７．９，６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｄｄ，Ｊ＝５．３，４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４６（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９５－４．８８（ｍ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２０－２．０５（ｍ，９Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１７３．２９，１７２．４０，１７２．３４，１６５．４７，１４６．１９，１４３．０８，１４０．４０，１３５．２４，１３４．１４，１２８．５６，９７．２８，８２．５６，７６．３３，６９．３２，６２．５７，２０．１５，１９．８１，１９．７８。
Ｃ１７Ｈ２１Ｎ２Ｏ８のＨＲＭＳ計算値：３８１．１３０２、実測値３８１．１３１０
溶融範囲：１３６～１４２℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ ９．４５（ｓ，１Ｈ），９．２２（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），８．３０（ｄｄ，Ｊ＝７．９，６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｄｄ，Ｊ＝５．３，４．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４６（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ），４．９５－４．８８（ｍ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，２Ｈ），２．２０－２．０５（ｍ，９Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１７３．２９，１７２．４０，１７２．３４，１６５．４７，１４６．１９，１４３．０８，１４０．４０，１３５．２４，１３４．１４，１２８．５６，９７．２８，８２．５６，７６．３３，６９．３２，６２．５７，２０．１５，１９．８１，１９．７８。
Ｃ１７Ｈ２１Ｎ２Ｏ８のＨＲＭＳ計算値：３８１．１３０２、実測値３８１．１３１０
【0058】
段階２：ＥｔＯＨ中の無水ＨＣｌを用いたトリアセチル－ＮＲＣｌの脱アセチル化
【化7】
【0059】
０℃の１Ｌ丸底フラスコ中の３００ｍＬエタノール（３ｖｏｌ）中のトリアセチル－ＮＲＣｌ（１００ｇ）の撹拌溶液に、無水ＨＣｌガス（２８．３ｇ、３当量）を添加した。得られた溶液を２５℃で２４時間にわたって撹拌した。ＴＬＣ（２：８、ＭｅＯＨ：ＤＣＭ）によって示される完全な変換後、反応塊を濾別し、次いで、アセトン（３００ｍＬ）に溶解した。２５℃で２～３時間撹拌し、次いで、濾過し、アセトン（１００ｍＬ）で洗浄した。得られたウェット塊を真空下、３０℃で２～３時間乾燥させて、ＮＲＣｌを非晶質固体として得た。
【0060】
収量：湿重量５３ｇ、乾燥重量：４７ｇ、理論収量：６９ｇ
溶融範囲：１２５～１２８℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ９．５３（ｓ，１Ｈ），９．２０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），９．０４－８．７７（ｍ，１Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｔ，Ｊ＝７．２，４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２９（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，３．６Ｈｚ，１Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１６５．７６，１４５．５８，１４２．５９，１４０．３６，１３３．９１，１２８．３０，９９．８６，８７．５９，７７．３７，６９．６９，６０．０８。
Ｃ１１Ｈ１５Ｎ２Ｏ５のＨＲＭＳ計算値：２５５．１０２３、実測値２５５．０９８２
溶融範囲：１２５～１２８℃。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ９．５３（ｓ，１Ｈ），９．２０（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），９．０４－８．７７（ｍ，１Ｈ），８．２１（ｄｄ，Ｊ＝８．０，６．４Ｈｚ，１Ｈ），６．１８（ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｔ，Ｊ＝７．２，４．０Ｈｚ，２Ｈ），４．２９（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９８（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄｄ，Ｊ＝１２．９，３．６Ｈｚ，１Ｈ）。
１３Ｃ ＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ１６５．７６，１４５．５８，１４２．５９，１４０．３６，１３３．９１，１２８．３０，９９．８６，８７．５９，７７．３７，６９．６９，６０．０８。
Ｃ１１Ｈ１５Ｎ２Ｏ５のＨＲＭＳ計算値：２５５．１０２３、実測値２５５．０９８２
【0061】
実施例２：
ＨＣｌでのパージによるＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
ＨＣｌでのパージによるＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
【化8】
【0062】
段階－１
段階Ｉの合成プロセス：
２５～３０℃で清浄で乾燥したＲＢＦに、撹拌しながら穏やかな窒素雰囲気下、２５～３０℃で、室温でアセトン（容量：２５０ｍｌ）ｌｏｔ－１を投入した。アセトンを穏やかな窒素下で０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９６ｇ）を秤量し、乾燥塩酸をパージして、５℃未満で１８．３ｇのＨＣｌ重量を得るまで反応塊に入れた。反応塊（重量：２１４．３４ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは８．４％である）。０～５℃でＤ－リボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）（重量：１００ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃でさらに１５分間維持した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を４時間維持した。注釈：反応塊は３０分後に透明溶液になる。試料をＧＣによって出発物質含有量について分析した（注釈：Ｄ－ＲＴＡ含量５％未満）。反応塊を０～５℃に冷却し、中程度の窒素を１５分間パージした。０～５℃でニコチンアミド（３８．２７ｇｍまたは１．０当量のＤ－ＲＴＡ）を投入した。ＤＩＰＥＡ、（重量２７．６１ｇまたは０．６８当量）ｌｏｔ－１を０～５℃で添加した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を１５分間維持した。反応物を３８～４３℃に加温し、反応塊を１６～１８時間維持した。試料をＨＰＬＣにより生成物含量（ニコチンアミドリボシドアセテート）について分析した。１６時間の試料分析により、生成物純度：３３～３５％、ニコチンアミド：３６～３８％、未知不純物：２１～２３％であることが示された。反応塊を１５～２０℃に冷却した。１５～２０℃で、塩基ｌｏｔ－２（重量：１５ｇまたは０．３７当量）を投入した（注釈：未反応のニコチンアミドに基づいて塩基量を算出する）。反応塊を１５～２０℃でさらに１～２時間連続して撹拌した。塊を濾過し、底（ｂｅｄ）を０．５ｖｏｌのアセトン（容量：５０ｍｌ）ｌｏｔ－２で洗浄した。吸引し、真空を用いて底（ｂｅｄ）を１５～２０分間乾燥させた。丸底フラスコに材料を入れず、３０－３５℃で２時間真空下で材料を乾燥させ、ＬＯＤ含有量およびＨＰＬＣ純度を確認した。
段階Ｉの合成プロセス：
２５～３０℃で清浄で乾燥したＲＢＦに、撹拌しながら穏やかな窒素雰囲気下、２５～３０℃で、室温でアセトン（容量：２５０ｍｌ）ｌｏｔ－１を投入した。アセトンを穏やかな窒素下で０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９６ｇ）を秤量し、乾燥塩酸をパージして、５℃未満で１８．３ｇのＨＣｌ重量を得るまで反応塊に入れた。反応塊（重量：２１４．３４ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは８．４％である）。０～５℃でＤ－リボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）（重量：１００ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃でさらに１５分間維持した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を４時間維持した。注釈：反応塊は３０分後に透明溶液になる。試料をＧＣによって出発物質含有量について分析した（注釈：Ｄ－ＲＴＡ含量５％未満）。反応塊を０～５℃に冷却し、中程度の窒素を１５分間パージした。０～５℃でニコチンアミド（３８．２７ｇｍまたは１．０当量のＤ－ＲＴＡ）を投入した。ＤＩＰＥＡ、（重量２７．６１ｇまたは０．６８当量）ｌｏｔ－１を０～５℃で添加した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を１５分間維持した。反応物を３８～４３℃に加温し、反応塊を１６～１８時間維持した。試料をＨＰＬＣにより生成物含量（ニコチンアミドリボシドアセテート）について分析した。１６時間の試料分析により、生成物純度：３３～３５％、ニコチンアミド：３６～３８％、未知不純物：２１～２３％であることが示された。反応塊を１５～２０℃に冷却した。１５～２０℃で、塩基ｌｏｔ－２（重量：１５ｇまたは０．３７当量）を投入した（注釈：未反応のニコチンアミドに基づいて塩基量を算出する）。反応塊を１５～２０℃でさらに１～２時間連続して撹拌した。塊を濾過し、底（ｂｅｄ）を０．５ｖｏｌのアセトン（容量：５０ｍｌ）ｌｏｔ－２で洗浄した。吸引し、真空を用いて底（ｂｅｄ）を１５～２０分間乾燥させた。丸底フラスコに材料を入れず、３０－３５℃で２時間真空下で材料を乾燥させ、ＬＯＤ含有量およびＨＰＬＣ純度を確認した。
【0063】
ニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ）の収量：乾燥重量として５０ｇ
ニコチンアミドリボシドアセテートのＨＰＬＣ純度：９７．０５％
ニコチンアミドリボシドアセテートのＨＰＬＣ純度：９７．０５％
【0064】
段階ＩＩ：
【化9】
【0065】
段階ＩＩの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、２５～３０℃でメタノール（容量：２５０ｍｌまたは５容量）ｌｏｔ－１を投入した。メタノールを０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９８ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．８７ｇまたは４．３当量のＨＣｌ重量を得るまで、乾燥塩酸を反応塊中にパージした。反応塊（重量２１６．８６ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは１０．４％である）。段階Ｉから得られたように、０～５℃でニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ、重量：５０ｇ）を投入した。０～５℃で１０～１２時間、反応塊を維持した（注釈：反応塊は、２～３時間後に透明溶液になり、６～７時間後に固体が再形成される）。試料をＨＰＬＣによって出発物質含有量、ＮＲＴ－Ｃｌについて分析した（注釈：ＮＲＴ－Ｃｌ含有量は１％未満であるべきである）。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－２で底（ｂｅｄ）を洗浄した（注釈：ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）：９２～９５％およびニコチンアミド：２～３％）。
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、２５～３０℃でメタノール（容量：２５０ｍｌまたは５容量）ｌｏｔ－１を投入した。メタノールを０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９８ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．８７ｇまたは４．３当量のＨＣｌ重量を得るまで、乾燥塩酸を反応塊中にパージした。反応塊（重量２１６．８６ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは１０．４％である）。段階Ｉから得られたように、０～５℃でニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ、重量：５０ｇ）を投入した。０～５℃で１０～１２時間、反応塊を維持した（注釈：反応塊は、２～３時間後に透明溶液になり、６～７時間後に固体が再形成される）。試料をＨＰＬＣによって出発物質含有量、ＮＲＴ－Ｃｌについて分析した（注釈：ＮＲＴ－Ｃｌ含有量は１％未満であるべきである）。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－２で底（ｂｅｄ）を洗浄した（注釈：ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）：９２～９５％およびニコチンアミド：２～３％）。
【0066】
精製：
０～５℃で冷却したメタノール（７５ｍｌまたは１．５容量）ｌｏｔ－３を投入した。ＮＲＣｌを０～５℃で投入し、０～５℃で１～２時間撹拌した。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－４で底（ｂｅｄ）を洗浄した。底（ｂｅｄ）を真空下で１５～２０分間吸引乾燥した。非晶質材料を丸底フラスコに入れず、材料を真空下で３０～３５℃で２時間乾燥させた。（注釈：ＨＰＬＣ純度が仕様を満たさない場合、精製工程を繰り返す必要がある。）
０～５℃で冷却したメタノール（７５ｍｌまたは１．５容量）ｌｏｔ－３を投入した。ＮＲＣｌを０～５℃で投入し、０～５℃で１～２時間撹拌した。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－４で底（ｂｅｄ）を洗浄した。底（ｂｅｄ）を真空下で１５～２０分間吸引乾燥した。非晶質材料を丸底フラスコに入れず、材料を真空下で３０～３５℃で２時間乾燥させた。（注釈：ＨＰＬＣ純度が仕様を満たさない場合、精製工程を繰り返す必要がある。）
【0067】
ニコチンアミドリボシドクロリドの収量：乾燥重量２３．５ｇ
ニコチンアミドリボシドクロリドのＨＰＬＣ純度：９８．５９％
ニコチンアミドリボシドクロリドのＨＰＬＣ純度：９８．５９％
【0068】
実施例３：
ＨＣｌシリンダーを用いたＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
ＨＣｌシリンダーを用いたＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
【0069】
段階Ｉ：
【化10】
【0070】
段階－１
段階Ｉの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、アセトン（容量：２５０ｍｌ）ｌｏｔ－１を、撹拌しながら穏やかな窒素雰囲気下、２５～３０℃で、室温で投入した。アセトンを穏やかな窒素下で０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９６ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．３ｇのＨＣｌ重量を得るまで、ＨＣｌシリンダーから反応塊中に乾燥塩酸を通した。反応塊（重量：２１４．３４ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは８．４％である）。０～５℃でＤ－リボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）（重量：１００ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃でさらに１５分間維持した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を４時間維持した。（注釈：反応塊は３０分後に透明溶液になる）。試料をＧＣによって出発物質含有量について分析した。（注釈：Ｄ－ＲＴＡ含有量５％未満）。反応塊を０～５℃に冷却し、中程度の窒素を１５分間パージした。０～５℃でニコチンアミド（３８．２７ｇｍまたは１．０当量のＤ－ＲＴＡ）を投入した。ＤＩＰＥＡ、（重量２７．６１ｇまたは０．６８当量）ｌｏｔ－１を０～５℃で添加した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を１５分間維持した。反応物を３８～４３℃に加温し、反応塊を１６～１８時間維持した。試料をＨＰＬＣにより生成物含量（ニコチンアミドリボシドアセテート）について分析した。１６時間の試料分析により、生成物純度：３３～３５％、ニコチンアミド：３６～３８％、未知不純物：２１～２３％であることが示された。反応塊を１５～２０℃に冷却した。１５～２０℃で、塩基ｌｏｔ－２（重量：１５ｇまたは０．３７当量）を投入した。（注釈：塩基量は、未反応のニコチンアミドに基づいて計算される）。塊の撹拌を１５～２０℃でさらに１～２時間続けた。塊を濾過し、底（ｂｅｄ）を０．５ｖｏｌのアセトン（容量：５０ｍｌ）ｌｏｔ－２で洗浄した。吸引し、真空を用いて底（ｂｅｄ）を１５～２０分間乾燥させ、非晶質材料を丸底フラスコ中で取り出し、材料を真空下、３０～３５℃で２時間乾燥させ、ＬＯＤ含有量およびＨＰＬＣ純度を確認した。
段階Ｉの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、アセトン（容量：２５０ｍｌ）ｌｏｔ－１を、撹拌しながら穏やかな窒素雰囲気下、２５～３０℃で、室温で投入した。アセトンを穏やかな窒素下で０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９６ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．３ｇのＨＣｌ重量を得るまで、ＨＣｌシリンダーから反応塊中に乾燥塩酸を通した。反応塊（重量：２１４．３４ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは８．４％である）。０～５℃でＤ－リボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）（重量：１００ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃でさらに１５分間維持した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を４時間維持した。（注釈：反応塊は３０分後に透明溶液になる）。試料をＧＣによって出発物質含有量について分析した。（注釈：Ｄ－ＲＴＡ含有量５％未満）。反応塊を０～５℃に冷却し、中程度の窒素を１５分間パージした。０～５℃でニコチンアミド（３８．２７ｇｍまたは１．０当量のＤ－ＲＴＡ）を投入した。ＤＩＰＥＡ、（重量２７．６１ｇまたは０．６８当量）ｌｏｔ－１を０～５℃で添加した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を１５分間維持した。反応物を３８～４３℃に加温し、反応塊を１６～１８時間維持した。試料をＨＰＬＣにより生成物含量（ニコチンアミドリボシドアセテート）について分析した。１６時間の試料分析により、生成物純度：３３～３５％、ニコチンアミド：３６～３８％、未知不純物：２１～２３％であることが示された。反応塊を１５～２０℃に冷却した。１５～２０℃で、塩基ｌｏｔ－２（重量：１５ｇまたは０．３７当量）を投入した。（注釈：塩基量は、未反応のニコチンアミドに基づいて計算される）。塊の撹拌を１５～２０℃でさらに１～２時間続けた。塊を濾過し、底（ｂｅｄ）を０．５ｖｏｌのアセトン（容量：５０ｍｌ）ｌｏｔ－２で洗浄した。吸引し、真空を用いて底（ｂｅｄ）を１５～２０分間乾燥させ、非晶質材料を丸底フラスコ中で取り出し、材料を真空下、３０～３５℃で２時間乾燥させ、ＬＯＤ含有量およびＨＰＬＣ純度を確認した。
【0071】
ニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ）の収量：乾燥重量として５１ｇ
ニコチンアミドリボシドアセテートのＨＰＬＣ純度：９６．０５％
ニコチンアミドリボシドアセテートのＨＰＬＣ純度：９６．０５％
【0072】
段階ＩＩ：
【化11】
【0073】
段階ＩＩの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、２５～３０℃でメタノール（容量：２５０ｍｌまたは５容量）ｌｏｔ－１を投入した。メタノールを０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９８ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．８７ｇまたは４．３当量のＨＣｌ重量を得るまで、ＨＣｌシリンダーから反応塊中に乾燥塩酸を通した。反応塊（重量２１６．８６ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは１０．４％である）。段階Ｉから得られた０～５℃のニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ、重量：５１ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃で１０～１２時間維持した（注釈：反応塊は２～３時間後に透明溶液になり、６～７時間後に固体が再形成される）。試料をＨＰＬＣによって出発物質含有量、ＮＲＴ－Ｃｌについて分析した。（注釈：ＮＲＴ－Ｃｌ含有量は１％未満であるべきである）。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－２で底（ｂｅｄ）を洗浄した。（注釈：ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）：９２～９５％およびニコチンアミド：２～３％）。
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、２５～３０℃でメタノール（容量：２５０ｍｌまたは５容量）ｌｏｔ－１を投入した。メタノールを０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９８ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．８７ｇまたは４．３当量のＨＣｌ重量を得るまで、ＨＣｌシリンダーから反応塊中に乾燥塩酸を通した。反応塊（重量２１６．８６ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは１０．４％である）。段階Ｉから得られた０～５℃のニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ、重量：５１ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃で１０～１２時間維持した（注釈：反応塊は２～３時間後に透明溶液になり、６～７時間後に固体が再形成される）。試料をＨＰＬＣによって出発物質含有量、ＮＲＴ－Ｃｌについて分析した。（注釈：ＮＲＴ－Ｃｌ含有量は１％未満であるべきである）。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－２で底（ｂｅｄ）を洗浄した。（注釈：ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）：９２～９５％およびニコチンアミド：２～３％）。
【0074】
精製：
０～５℃で冷却したメタノール（７５ｍｌまたは１．５容量）ｌｏｔ－３を投入した。ＮＲＣｌを０～５℃で投入し、０～５℃で１～２時間撹拌した。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－４で底（ｂｅｄ）を洗浄した。底（ｂｅｄ）を真空下で１５～２０分間吸引乾燥し、非晶質材料を丸底フラスコに入れず、材料を真空下で３０～３５℃で２時間乾燥させた。（注釈：ＨＰＬＣ純度が仕様を満たさない場合、必要なＨＰＬＣ純度を得るまで精製工程を繰り返す必要がある。）
０～５℃で冷却したメタノール（７５ｍｌまたは１．５容量）ｌｏｔ－３を投入した。ＮＲＣｌを０～５℃で投入し、０～５℃で１～２時間撹拌した。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－４で底（ｂｅｄ）を洗浄した。底（ｂｅｄ）を真空下で１５～２０分間吸引乾燥し、非晶質材料を丸底フラスコに入れず、材料を真空下で３０～３５℃で２時間乾燥させた。（注釈：ＨＰＬＣ純度が仕様を満たさない場合、必要なＨＰＬＣ純度を得るまで精製工程を繰り返す必要がある。）
【0075】
ニコチンアミドリボシドクロリドの収量：乾燥重量として２４．４ｇ
ニコチンアミドリボシドクロリドのＨＰＬＣ純度：９８．４３％
ニコチンアミドリボシドクロリドのＨＰＬＣ純度：９８．４３％
【0076】
実施例４：
段階ＩＩにおける市販のメタノール性ＨＣｌの使用
段階ＩＩにおける市販のメタノール性ＨＣｌの使用
【0077】
段階Ｉ：
【化12】
【0078】
段階－１
段階Ｉの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、アセトン（容量：２５０ｍｌ）ｌｏｔ－１を、撹拌しながら穏やかな窒素雰囲気下、２５～３０℃で、室温で投入した。アセトンを穏やかな窒素下で０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９６ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．３ｇのＨＣｌ重量を得るまで、ＨＣｌシリンダーから反応塊中に乾燥塩酸を通した。反応塊（重量：２１４．３４ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは８．４％である）。０～５℃でＤ－リボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）（重量：１００ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃でさらに１５分間維持した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を４時間維持した。（注釈：反応塊は３０分後に透明溶液になる）。試料をＧＣによって出発物質含有量について分析した。（注釈：Ｄ－ＲＴＡ含有量５％未満）。反応塊を０～５℃に冷却し、中程度の窒素を１５分間パージした。０～５℃でニコチンアミド（３８．２７ｇｍまたは１．０当量のＤ－ＲＴＡ）を投入した。ＤＩＰＥＡ、（重量２７．６１ｇまたは０．６８当量）ｌｏｔ－１を０～５℃で添加した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を１５分間維持した。反応物を３８～４３℃に加温し、反応塊を１６～１８時間維持した。試料をＨＰＬＣにより生成物含量（ニコチンアミドリボシドアセテート）について分析した。１６時間の試料分析により、生成物純度：３３～３５％、ニコチンアミド：３６～３８％、未知不純物：２１～２３％であることが示された。反応塊を１５～２０℃に冷却した。１５～２０℃で塩基ｌｏｔ－２（重量：１５ｇまたは０．３７当量）を投入した（注釈：塩基量は、未反応のニコチンアミドに基づいて計算される）。塊を１５～２０℃でさらに１～２時間撹拌し続けた。塊を濾過し、底（ｂｅｄ）を０．５ｖｏｌのアセトン（容量：５０ｍｌ）ｌｏｔ－２で洗浄した。吸引し、真空を用いて底（ｂｅｄ）を１５～２０分間乾燥させた。丸底フラスコに材料を入れず、３０－３５℃で、２時間真空下で材料を乾燥させ、ＬＯＤ含有量およびＨＰＬＣ純度を確認した。
段階Ｉの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、アセトン（容量：２５０ｍｌ）ｌｏｔ－１を、撹拌しながら穏やかな窒素雰囲気下、２５～３０℃で、室温で投入した。アセトンを穏やかな窒素下で０～５℃に冷却した。反応塊（重量：１９６ｇ）を秤量した。５℃未満で反応塊中に１８．３ｇのＨＣｌ重量を得るまで、ＨＣｌシリンダーから反応塊中に乾燥塩酸を通した。反応塊（重量：２１４．３４ｇ）を秤量した（ＨＣｌアッセイは８．４％である）。０～５℃でＤ－リボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）（重量：１００ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃でさらに１５分間維持した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を４時間維持した。（注釈：反応塊は３０分後に透明溶液になる）。試料をＧＣによって出発物質含有量について分析した。（注釈：Ｄ－ＲＴＡ含有量５％未満）。反応塊を０～５℃に冷却し、中程度の窒素を１５分間パージした。０～５℃でニコチンアミド（３８．２７ｇｍまたは１．０当量のＤ－ＲＴＡ）を投入した。ＤＩＰＥＡ、（重量２７．６１ｇまたは０．６８当量）ｌｏｔ－１を０～５℃で添加した。反応物を８～１０℃に加温し、反応塊を１５分間維持した。反応物を３８～４３℃に加温し、反応塊を１６～１８時間維持した。試料をＨＰＬＣにより生成物含量（ニコチンアミドリボシドアセテート）について分析した。１６時間の試料分析により、生成物純度：３３～３５％、ニコチンアミド：３６～３８％、未知不純物：２１～２３％であることが示された。反応塊を１５～２０℃に冷却した。１５～２０℃で塩基ｌｏｔ－２（重量：１５ｇまたは０．３７当量）を投入した（注釈：塩基量は、未反応のニコチンアミドに基づいて計算される）。塊を１５～２０℃でさらに１～２時間撹拌し続けた。塊を濾過し、底（ｂｅｄ）を０．５ｖｏｌのアセトン（容量：５０ｍｌ）ｌｏｔ－２で洗浄した。吸引し、真空を用いて底（ｂｅｄ）を１５～２０分間乾燥させた。丸底フラスコに材料を入れず、３０－３５℃で、２時間真空下で材料を乾燥させ、ＬＯＤ含有量およびＨＰＬＣ純度を確認した。
【0079】
ニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ）の収量：乾燥重量として５１ｇ
ニコチンアミドリボシドアセテートのＨＰＬＣ純度：９６．３％
ニコチンアミドリボシドアセテートのＨＰＬＣ純度：９６．３％
【0080】
段階ＩＩ：
【化13】
【0081】
段階ＩＩの合成プロセス：
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、２５～３０℃で容易に入手可能なメタノール－ＨＣｌ（容量：２６２ｍｌまたは５．２容量）ｌｏｔ－１を投入した。メタノール－ＨＣｌを０～５℃に冷却した。反応塊を秤量した（重量２１６．８６ｇ、ＨＣｌアッセイは１０．４％である）。段階Ｉから得られた０～５℃のニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ、重量：５１ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃で１０～１２時間維持した（注釈：反応塊は２～３時間後に透明溶液になり、６～７時間後に固体が再形成される。試料をＨＰＬＣによって出発物質含有量、ＮＲＴ－Ｃｌについて分析した。注釈：ＮＲＴ－Ｃｌ含有量は１％未満であるべきである）。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－２で底（ｂｅｄ）を洗浄した。（注釈：ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）：９２～９５％およびニコチンアミド：２～３％）。
２５～３０℃の清浄で乾燥したＲＢＦに、２５～３０℃で容易に入手可能なメタノール－ＨＣｌ（容量：２６２ｍｌまたは５．２容量）ｌｏｔ－１を投入した。メタノール－ＨＣｌを０～５℃に冷却した。反応塊を秤量した（重量２１６．８６ｇ、ＨＣｌアッセイは１０．４％である）。段階Ｉから得られた０～５℃のニコチンアミドリボシドトリアセテートクロリド（ＮＲＴ－Ｃｌ、重量：５１ｇ）を投入した。反応塊を０～５℃で１０～１２時間維持した（注釈：反応塊は２～３時間後に透明溶液になり、６～７時間後に固体が再形成される。試料をＨＰＬＣによって出発物質含有量、ＮＲＴ－Ｃｌについて分析した。注釈：ＮＲＴ－Ｃｌ含有量は１％未満であるべきである）。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－２で底（ｂｅｄ）を洗浄した。（注釈：ニコチンアミドリボシドクロリド（ＮＲＣｌ）：９２～９５％およびニコチンアミド：２～３％）。
【0082】
精製：
０～５℃で冷却したメタノール（７５ｍｌまたは１．５容量）ｌｏｔ－３を投入した。ＮＲＣｌを０～５℃で投入し、０～５℃で１～２時間撹拌した。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－４で底（ｂｅｄ）を洗浄した。底（ｂｅｄ）を真空下で１５～２０分間吸引乾燥した。非晶質材料を丸底フラスコに入れず、材料を真空下で３０～３５℃で２時間乾燥させた。（注釈：ＨＰＬＣ純度が仕様を満たさない場合、必要な純度を得るまで上記の精製工程を繰り返す必要がある。）
０～５℃で冷却したメタノール（７５ｍｌまたは１．５容量）ｌｏｔ－３を投入した。ＮＲＣｌを０～５℃で投入し、０～５℃で１～２時間撹拌した。固体を濾過し、窒素下、冷却したメタノール（２５ｍｌまたは０．５容量）ｌｏｔ－４で底（ｂｅｄ）を洗浄した。底（ｂｅｄ）を真空下で１５～２０分間吸引乾燥した。非晶質材料を丸底フラスコに入れず、材料を真空下で３０～３５℃で２時間乾燥させた。（注釈：ＨＰＬＣ純度が仕様を満たさない場合、必要な純度を得るまで上記の精製工程を繰り返す必要がある。）
【0083】
ニコチンアミドリボシドクロリドの収量：乾燥重量として２４．５ｇ
ニコチンアミドリボシドクロリドのＨＰＬＣ純度：９８．３０％以上
ニコチンアミドリボシドクロリドのＨＰＬＣ純度：９８．３０％以上
【0084】
実施例５：
３－シアノピリジンを用いたＮＲＣｌの合成
３－シアノピリジンを用いたＮＲＣｌの合成
【化14】
【0085】
乾燥ジクロロメタン（１００ｍＬ）中の１，２，３，５－テトラ－Ｏ－アセチル－β－Ｄ－リボフラノース（３．１８ｇ、１０ｍｍｏｌ）および３－シアノピリジン（１．５６、１５ｍｍｏｌ）の混合物をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌し、次いで、ＴＭＳＯＴｆ（２．２２ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液を、シリンジを用いて室温でゆっくり添加した。添加が完了した後、混合物を還流下、４５℃で１０～１２時間加熱した。反応の進行をＴＬＣ（５：０．３：０．０５ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／トリエチルアミン溶離液）でモニターし、１０％Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨを含むＴＬＣプレートを可視化した。出発リボース四酢酸が完全に消失し、生成物が単一のＵＶ活性スポットとして出現した後、溶媒を除去し、粗生成物を１：１ＭｅＯＨ／ヘキサン（５×１００ｍＬ）で抽出した。ｎ－ヘキサン層を分離し、メタノール層を濃縮して、３．２３ｇの生成物４ａを収率８９％で無色液体として得た。
【0086】
【化15】
【0087】
４ａ（３．６３ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＨＣｌ（４０ｍｍｏｌ）を含むＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ（８：２）の溶液を、４０℃で１２時間撹拌した。完了後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をアセトンで希釈し、固体を濾過し、乾燥させて粗ＮＲＣｌを得、これをアセトンから精製して、ＮＲＣｌの純粋な非晶質固体（２．１６ｇ）を白色固体として収率８５％で得た。
【0088】
実施例６：
段階Ｉ：無水ＨＣｌを用いたＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
段階Ｉ：無水ＨＣｌを用いたＤ－リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化
【化16】
【0089】
Ｄ－リボース四酢酸（１０ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）を２５ｍＬのアセトニトリル（２．５ｖｏｌ）に溶液した溶液を２５０ｍＬ丸底フラスコに入れ、室温で撹拌した。溶液を０℃に冷却し、次いで、無水ＨＣｌガス（１８．３ｇ、１．６当量）を反応混合物に３０分間にわたって通した。得られた混合物を０～５℃でさらに３時間撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（１：１、ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）およびＧＣ（ＩＰＣ限界：ＧＣによるＲＴＡの含有量はＮＭＴ５％である）によってモニターした。
【0090】
段階ＩＩ：
トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドの合成
トリ－Ｏ－アセチルβ－ニコチノニトリルリボシドクロリドの合成
【化17】
【0091】
段階１の完全な変換時に、窒素ガスを反応混合物に１０～１５分間パージし、３－シアノピリジン（３．２７ｇ、１．０当量）を含む１０ｍＬのアセトニトリル（１ｖｏｌ）を０～５℃で投入し、次いで、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、４．０ｇ、１．０当量）またはトリブチルアミン（ＴＢＡ、５．８２ｇ、１．０当量）を同じ温度でゆっくり添加した。得られた混合物を２５℃で、同じ温度で１５時間にわたって撹拌した。反応の進行をＴＬＣ（５：０．３：０．０５ ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／トリエチルアミン溶離液）でモニターし、１０％Ｈ２ＳＯ４／ＭｅＯＨを含むＴＬＣプレートを可視化した。出発リボース四酢酸が完全に消失し、生成物が単一のＵＶ活性スポットとして出現した後、溶媒を除去し、粗生成物を１：１ＭｅＯＨ／ヘキサン（５×１００ｍＬ）で抽出した。ｎ－ヘキサン層を分離し、メタノール層を濃縮して、４．０ｇの生成物４ａを収率３５％で無色液体として得、これをさらに特徴づけすることなく次の工程で使用した。
【0092】
段階ＩＩＩ：４ａの加水分解／脱アセチル化
【化18】
【0093】
４ａ（３．６３ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＨＣｌ（４０ｍｍｏｌ）を含むＥｔＯＨ：Ｈ２Ｏ（８：２）の溶液を、４０℃で１２時間撹拌した。完了後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をアセトンで希釈し、固体を濾過し、乾燥させて粗ＮＲＣｌを得、これをアセトンから精製して、ＮＲＣｌの純粋な非晶質固体（１．７ｇ）を白色固体として収率７０％で得た。
【0094】
産業上の利点：
本発明では、アセトンを、１，２，３，５－テトラ－Ｏ－アシル－Ｄ－リボフラノースの塩素化およびニコチンアミドとのカップリング反応のための溶媒として初めて使用した。さらに、アセトンは、スキーム２において、トリアセチル－ＮＲＣｌの合成における反応および精製の両方に使用されている。
本発明では、アセトンを、１，２，３，５－テトラ－Ｏ－アシル－Ｄ－リボフラノースの塩素化およびニコチンアミドとのカップリング反応のための溶媒として初めて使用した。さらに、アセトンは、スキーム２において、トリアセチル－ＮＲＣｌの合成における反応および精製の両方に使用されている。
【0095】
スキーム３に示すように、アセトニトリルを、１，２，３，５－テトラ－Ｏ－アシル－Ｄ－リボフラノースの塩素化およびその後の３－シアノピリジンとの反応のための溶媒として使用した。
【0096】
２，３，５－トリアセチル－ＮＲＣｌの脱アセチル化は、０～２５℃の温度でメタノールまたはエタノールまたはイソプロパノール中のＨＣｌを使用して初めて行われ、それにより、極低温条件の必要性が回避された。この反応では、メタノールまたはエタノールまたはイソプロパノールが、ＮＲＣｌの合成における反応および精製の両方のための溶媒として作用する。
【0097】
この方法は、リボース四酢酸（ＲＴＡ）の塩素化および２，３，５－トリアセチル－ＮＲＣｌの脱アセチル化の両方のために、費用対効果の高いアセトン、メタノールおよびエタノールのような溶媒ならびにＨＣｌのような試薬を使用するため、商業的に実行可能である。この方法はまた、スキーム２に示すように塩素化およびニコチンアミドとのカップリング反応の両方のためにアセトンのような溶媒を使用するインサイチュー反応、またはスキーム３に示すようにアセトニトリルによっても実現可能である。
【0098】
第１の工程でアセトンを使用すると、方法が費用効果的になり、それは反応および精製のための溶媒として使用される。第２のステップでは、メタノールまたはエタノールを反応および精製に使用したが、これは、複数の溶媒を反応および精製に使用した以前の報告とは逆のものである。
【0099】
この方法は、スキーム３に示されるように、塩素化および３－シアノピリジンとのカップリング反応の両方のためのアセトニトリルのような溶媒、ならびにリボセトラアセテート（ＲＴＡ）の塩素化および２，３，５－トリアセチル－ＮＲＣｌの脱アセチル化の両方のためのＨＣｌのような試薬を使用するインサイチュー反応によって商業的に実現可能である。
【0100】
本プロセスは、２段階のプロセスである。全プロセスにおいて、反応溶媒として、および精製のために２つの溶媒のみを使用した。
【0101】
また、従来の方法は、脱アセチル化剤として無水アンモニアまたはジアルキルアミンを使用することを含み、アセトアミドまたはジアルキルアミドが副生成物であった。したがって、アセトアミドまたはジアルキルアミンおよび他の副生成物を除去するために、面倒な後処理および精製方法が必要であった。しかしながら、本方法では、無水ＨＣｌを脱アセチル化剤として使用したため、脱アセチル化中に形成される副生成物は酢酸エチルであり、これは揮発性で環境に優しい溶媒であり、簡単な後処理によって最終生成物から容易に除去され得る。
【0102】
従来の方法では、脱アセチル化のために極低温条件（－５～－７℃）を使用した。しかしながら、本発明における脱アセチル化反応は０～２５℃で行った。
【0103】
したがって、本発明は、より清浄な反応プロファイル、改善された収率、高い選択性および純度、ならびに単純な後処理および精製をもたらし、それによってプロセスが費用効果的かつ工業的に拡張可能となる。
【0104】
アセトニトリルまたはアセトン中のＴＭＳＯＴｆまたは無水ＨＣｌを使用したリボース四酢酸（Ｄ－ＲＴＡ）および３－シアノピリジンからのＮＲＣｌ合成の第１の例が本発明に開示されており、これはＮＲＣｌ合成のための新規アプローチである。ＮＲＣｌの合成において３－シアノピリジンを使用することには、いくつかの利点があり、それは操作の単純さ、収率の改善および高いβ選択性を含む。
【国際調査報告】