▶ ディフェンス・セラピューティクス・インコーポレーテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-22
(54)【発明の名称】ステロイド酸ベースの免疫原エンハンサー
(51)【国際特許分類】
A61K 39/39 20060101AFI20240415BHJP
C12N 5/078 20100101ALI20240415BHJP
C12N 5/10 20060101ALI20240415BHJP
C07K 7/08 20060101ALI20240415BHJP
C07K 14/00 20060101ALI20240415BHJP
C07K 7/06 20060101ALI20240415BHJP
C12N 5/071 20100101ALI20240415BHJP
A61K 47/62 20170101ALI20240415BHJP
A61K 39/00 20060101ALI20240415BHJP
A61K 39/02 20060101ALI20240415BHJP
A61K 39/12 20060101ALI20240415BHJP
A61K 39/215 20060101ALI20240415BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240415BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20240415BHJP
A61P 31/10 20060101ALI20240415BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240415BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240415BHJP
【ＦＩ】
A61K39/39
C12N5/078 ZNA
C12N5/10
C07K7/08
C07K14/00
C07K7/06
C12N5/071
A61K47/62
A61K39/00 H
A61K39/02
A61K39/12
A61K39/215
A61K39/00 K
A61P35/00
A61P31/12
A61P31/10
A61P31/04
A61P37/04
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023568364
(86)(22)【出願日】2022-05-06
(85)【翻訳文提出日】2023-12-05
(86)【国際出願番号】 CA2022050714
(87)【国際公開番号】W WO2022232945
(87)【国際公開日】2022-11-10
(31)【優先権主張番号】63/201,620
(32)【優先日】2021-05-06
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/362,494
(32)【優先日】2022-04-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520423390
【氏名又は名称】ディフェンス・セラピューティクス・インコーポレーテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100105957
【弁理士】
【氏名又は名称】恩田 誠
(74)【代理人】
【識別番号】100068755
【弁理士】
【氏名又は名称】恩田 博宣
(74)【代理人】
【識別番号】100142907
【弁理士】
【氏名又は名称】本田 淳
(74)【代理人】
【識別番号】100152489
【弁理士】
【氏名又は名称】中村 美樹
(72)【発明者】
【氏名】ボードワン、シモン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C085
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA93X
4B065AA94X
4B065AB01
4B065AC14
4B065BD27
4B065BD29
4B065BD32
4B065BD34
4B065CA25
4B065CA45
4C076CC07
4C076CC41
4C076EE59
4C085AA03
4C085AA38
4C085BA07
4C085BA49
4C085BA51
4C085BA71
4C085BB01
4C085CC01
4C085CC03
4C085EE01
4C085EE06
4C085FF12
4C085FF17
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA15
4H045BA17
4H045BA18
4H045BA55
4H045EA20
4H045FA20
4H045FA50
(57)【要約】
目的の抗原と混和するための免疫原エンハンサーが本明細書に記載されている。エンハンサーは、一般に、混和された抗原に対する適応免疫応答を改善若しくは修飾するのに十分な量のステロイド酸及び／又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含む。実施形態では、ステロイド酸は、胆汁酸であってもよく、ペプチドは、抗原提示及び／又は抗原交差提示を促進し、それによって抗原に対する改善された細胞性免疫又は改善された細胞性及び体液性免疫を誘発し得る核局在化シグナルなどの１つ以上の機能性ドメインを含んでもよい。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
抗原提示のエンハンサーと混和された抗原を含む組成物であって、前記エンハンサーが、前記エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞への前記組成物の投与時に前記抗原の提示を改善するのに十分な量のステロイド酸及び／又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含む、組成物。
【請求項2】
前記エンハンサー中又は前記ステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中の前記ステロイド酸が、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発し、それによって前記抗原提示細胞内のエンドソーム膜を不安定化させ、前記抗原のサイトゾルへのエンドソーム脱出を促進するステロイド酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項3】
前記エンハンサー中又は前記ステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中の前記ステロイド酸が、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発するステロイド酸である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項4】
前記エンハンサー中又は前記ステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中の前記ステロイド酸が、胆汁酸である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項5】
前記エンハンサー中又は前記ステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中の前記ステロイド酸が、一次胆汁酸又は二次胆汁酸である、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項6】
前記エンハンサー中又は前記ステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中の前記ステロイド酸が、（ａ）コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、グリココール酸（ＧＣＡ）、タウロコール酸（ＴＣＡ）、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）、グリコリトコール酸（ＧＬＣＡ）、タウロリトコール酸（ＴＬＣＡ）、タウロヒオデオキシコール酸（ＴＨＤＣＡ）、タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣＡ）、ウルソコール酸（ＵＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、若しくはグリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ）である胆汁酸、
（ｂ）前記（ａ）の胆汁酸の類似体であって、エンドサイトーシスを誘導する、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発する、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発する、及び／若しくはコール酸の疎水性よりも大きい疎水性を有する類似体、
（ｃ）コール酸よりも疎水性である胆汁酸若しくは胆汁酸類似体（例えば、ＣＤＣＡ、ＤＣＡ、ＬＣＡ、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＣＤＣＡ、ＧＣＡ、ＧＤＣＡ、又はＧＣＤＣＡ）、又は
（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせであるか、あるいはそれらを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項7】
前記エンハンサー中又は前記ステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中の前記ステロイド酸が、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、若しくはリトコール酸（ＬＣＡ）であるか、又はそれらを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項8】
前記ペプチドが、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項9】
前記ＮＬＳが、古典的ＮＬＳ（例えば、Ｋ－Ｋ／Ｒ－Ｘ－Ｋ／Ｒモチーフを含む）、ＰＹ－ＮＬＳ（例えば、前記ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＹモチーフを含む、又はモチーフＲ－Ｘ２～５－ＰＹを含む及び／若しくはＫａｐβ２結合活性を有する）、ＰＬ－ＮＬＳ（例えば、前記ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＬモチーフを含む）、リボソームＮＬＳ、核小体標的化シグナルを更に含むＮＬＳ、又はそれらの任意の組み合わせである、請求項８に記載の組成物。
【請求項10】
前記ＮＬＳが、ＳＶ４０ ＮＬＳ、ｃＭｙｃ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ、ＨｕＲ ＮＬＳ、Ｔｕｓ ＮＬＳ、ヌクレオプラスミンＮＬＳ、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７、若しくはＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＳＰ１７であるか、又はそれらに由来する、請求項８又は９に記載の組成物。
【請求項11】
前記ＮＬＳが、少なくとも３つの酸性残基（例えば、Ｒ／Ｋ）及び／又は少なくとも３つの塩基性残基（例えば、Ｅ／Ｄ）を含む、請求項８～１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項12】
前記ペプチドが、エンドソーム脱出を促進するエンドソーム分解モチーフを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項13】
前記ペプチドが、エンドサイトーシス及び／又はエンドソーム形成を刺激するタンパク質形質導入ドメインを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項14】
前記ペプチドが、タンパク質形質導入ドメイン又は細胞膜透過性ペプチドを欠いている、請求項１～１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項15】
前記ペプチドが、非免疫原性ペプチドである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項16】
前記ペプチドが、少なくとも７、８、９、１０、１１、若しくは１２のアミノ酸長を有し、５０～１００以下のアミノ酸長を有し、かつ／又は１０～１００のアミノ酸長を有する、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項17】
前記ペプチドが、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチド、又はその変異体であって、（ａ）前記ステロイド酸にコンジュゲート化された場合、対応する非コンジュゲート化ステロイド酸の抗原提示活性と比較して、前記ステロイド酸に改善された抗原提示活性を付与するか、
（ｂ）核局在化及び／又はエンドソーム分解活性を有するか、
（ｃ）１、２、３、４、若しくは５個以下のアミノ酸の置換又は欠失で、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチドとは異なるか、又は
（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、又はその変異体を含むか、あるいはそれからなる、請求項１～１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項18】
前記エンハンサーが、ステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含み、前記ステロイド酸が、前記ペプチドであって、（ａ）１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、若しくは１０：１、又は１：１～１０：１のステロイド酸：ペプチドのモル比で、
（ｂ）前記ペプチドの遊離アミノ基及び／若しくは遊離チオール基（例えば、リシン又はシステインの）にある、
（ｃ）前記ペプチドのＮ末端にあるか、若しくはそれに向かう（例えば、Ｎ端残基の遊離アミノ基にある、及び／又はＮ端システイン残基のチオール基にある）、又は
（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、にコンジュゲート化されている、請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項19】
前記組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、少なくとも０．０１：１、０．０５：１、０．１：１、０．２：１、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１であり、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、５０：１、１００：１、２５０：１、５００：１、１０００：１以下であり、かつ／又は１：１～１０００：１、１：１～５００：１、１：１～２５０：１、１：１～２００：１である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項20】
前記抗原が、１つ以上のＭＨＣクラスＩエピトープ及び／又はＭＨＣクラスＩＩエピトープを含むポリペプチド抗原である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項21】
前記ポリペプチド抗原が、（ａ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、ネオアンチゲン、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、ワクチン接種及び／若しくは免疫療法による治療に適した疾患若しくは障害に関連する抗原、又はそれらの任意の抗原性断片、あるいは
（ｂ）コロナウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質、若しくはその抗原性断片、又は単一塩基変異体抗原、変異フレームシフト抗原、スプライス変異体抗原、遺伝子融合抗原、内因性レトロエレメント抗原などのがん抗原、又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－体細胞変異由来抗原あるいは翻訳後ＴＳＡ、ウイルス由来のがん抗原（例えばヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、サイトメガロウイルス、又はエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ））、がん－精巣抗原、ＨＥＲ２、ＰＳＡ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＥｐＣＡＭ、ＧＰＣ３、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＳＳＸ－２、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、細胞ライセート又は腫瘍由来の他の物質（例えば、腫瘍由来のエクソソーム）などの別のクラスの抗原であるか、又はそれらを含む、請求項２０に記載の組成物。
【請求項22】
前記エンハンサーが、（ｉ）前記エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、前記抗原のサイトゾル送達の増加、
（ｉｉ）前記エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、前記抗原の総細胞送達の増加、
（ｉｉｉ）前記エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、前記抗原に対する細胞性免疫の増強、
（ｉｖ）前記エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、前記抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加、
（ｖ）前記エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、前記抗原に対する体液性免疫の増強、
（ｖｉ）前記エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、前記抗原に対する抗体種の多様性の増大、又は
（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組み合わせを可能にする、請求項１～２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項23】
薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントを更に含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項24】
細胞集団及び請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物を含む、細胞培養物。
【請求項25】
前記細胞が、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、遺伝子操作された抗原提示細胞）、ＭＨＣクラスＩ発現細胞、ＭＨＣクラスＩＩ発現細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２４に記載の細胞培養物。
【請求項26】
請求項１～２２のいずれか一項に記載の組成物を含むか、又は請求項２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を含む、ワクチン。
【請求項27】
治療用又は予防用ワクチン（例えば、抗がんワクチン、抗ウイルスワクチン、又は抗細菌ワクチン）である、請求項２６に記載のワクチン。
【請求項28】
対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発するための方法であって、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を前記対象に投与することを含む、方法。
【請求項29】
感染症に対して対象にワクチン接種するための方法であって、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物又は請求項２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を前記対象に投与することを含み、前記抗原が、前記感染症を引き起こす病原体（例えば、ウイルス、細菌、真菌）の抗原性断片を含む、方法。
【請求項30】
対象におけるがんを治療するための方法であって、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物又は請求項２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を前記対象に投与することを含み、前記抗原が、前記がんを引き起こす細胞において過剰発現されるか、又は異常に発現される、方法。
【請求項31】
抗原と混和して、使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲート。
【請求項32】
前記ステロイド酸－コンジュゲート及び／又は前記抗原が、請求項１～２２のいずれか一項に記載されるものである、請求項３１に記載の使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲート。
【請求項33】
対象において免疫応答を生成するための、又は対象において免疫応答を生成するための医薬の製造のための、請求項１～２３のいずれか一項に記載の組成物又は請求項２４若しくは２５に記載の細胞培養物の使用。
【請求項34】
前記免疫応答が、前記エンハンサーを欠く対応する組成物又は細胞培養物から生成されるものと比較して、前記抗原に対する細胞性免疫の増強、前記抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増大、前記に対する体液性免疫の増強、又はそれらの任意の組み合わせを含む、請求項３３に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本明細書は、抗原の免疫原性を増強する方法に関する。より具体的には、本明細書は、抗原免疫原性を改善するためのステロイド酸及びステロイド酸－ペプチドコンジュゲートに関する。
【背景技術】
【0002】
サブユニットワクチンは一般に最も安全なワクチンと考えられているが、このような抗原は防御的かつ長期持続性の免疫を提供するための十分に強い免疫応答を惹起しない可能性がある。したがって、サブユニットワクチンの免疫原性及び有効性を改善する方法が非常に望ましい。
【発明の概要】
【0003】
第１の態様では、本明細書には、抗原提示のエンハンサーと混和された抗原を含む免疫原性組成物であって、エンハンサーが、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞への組成物の投与時に抗原の提示を改善するのに十分な量のステロイド酸及び／又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含む、免疫原性組成物、が記載される。実施形態では、ステロイド酸は、胆汁酸又は胆汁酸類似体であってもよく、ペプチドは、核局在化シグナル、エンドソーム脱出シグナル、及び／又はタンパク質形質導入ドメインなどの機能性ドメインを含んでもよい。
【0004】
更なる態様では、本明細書には、細胞集団、及び本明細書に記載される免疫原性組成物を含む細胞培養物が記載される。更なる態様では、本明細書には、本明細書に記載される免疫原性組成物を含むか、又は本明細書に記載される細胞培養物を使用して産生された細胞を含むワクチンが記載される。更なる態様では、本明細書には、対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発するための方法が記載され、方法は、本明細書に記載される組成物、又は本明細書に記載される細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含む。
【0005】
更なる態様では、本明細書には、免疫原性を増強するために抗原と混和して使用するための、又は対象において免疫応答を生成するための医薬の製造に使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲートが記載される。
【0006】
一般的定義
見出し及び他の識別子、例えば、（ａ）、（ｂ）、（ｉ）、（ｉｉ）などは、明細書及び特許請求の範囲を読みやすくするために提示されるにすぎない。明細書又は特許請求の範囲における見出し又は他の識別子の使用は、工程又は要素がアルファベット順若しくは数字順に、又はそれらが提示される順で実行されることを必ずしも必要とはしない。
見出し及び他の識別子、例えば、（ａ）、（ｂ）、（ｉ）、（ｉｉ）などは、明細書及び特許請求の範囲を読みやすくするために提示されるにすぎない。明細書又は特許請求の範囲における見出し又は他の識別子の使用は、工程又は要素がアルファベット順若しくは数字順に、又はそれらが提示される順で実行されることを必ずしも必要とはしない。
【0007】
特許請求の範囲及び／又は明細書において用語「含む」と併せて使用される場合の単語「ａ」又は「ａｎ」の使用は、「１つ」を意味する場合もあるが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、及び「１つ又は２つ以上」の意味とも一致する。
【0008】
本明細書及び特許請求の範囲において使用される場合、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含む）」（並びに「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」及び「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」などの任意の形態の「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」）、「ｈａｖｉｎｇ（有する）」（並びに「ｈａｖｅ」及び「ｈａｓ」などの任意の形態の「ｈａｖｉｎｇ」）「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」（並びに「ｉｎｃｌｕｄｅｓ」及び「ｉｎｃｌｕｄｅ」などの任意の形態の「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ」）又は「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ（含有する）」（並びに「ｃｏｎｔａｉｎｓ」及び「ｃｏｎｔａｉｎ」などの任意の形態の「ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ」）は、包括的又はオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素又は方法の工程を除外するものではない。
【0009】
用語「約」は、値がその値を決定するために使用される装置又は方法の誤差の標準偏差を含むことを示すために使用される。概して、「約」という用語は、１０％までの可能性のある変動を示すことを意味する。したがって、値の１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０％の変動は、「約」という用語に含まれる。別途指示がない限り、範囲の前の「約」という用語の使用は、範囲の両端に適用される。
【0010】
本説明の他の目的、利点、及び特徴は、添付の図面を参照して単なる例として示される、その特定の実施形態の以下の非限定的な説明を読むことによって、より明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【0011】
添付の図は以下のとおりである。
【図1】ＯＶＡ応答ＯＴ－Ｉ（ＣＤ８）細胞を評価するための骨髄由来樹状細胞（bone marrow-derived dendritic cell、ＢＭＤＣ）による抗原交差提示アッセイの結果を示す。マウスＢＭＤＣを、抗原（ovalbumin、ＯＶＡ）単独、コール酸（cholic acid、ＣＡ）単独、コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート（ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ）単独、ＣＡの抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）、又はコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原に対する種々の比（ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）で３時間パルスした。次いで、パルスしたＢＭＤＣをＯＴ－Ｉマウス由来ＣＤ８ Ｔ細胞と共培養し、ＩＦＮ－γレベルを交差提示活性の尺度として定量した。
【図2】胆汁酸－ＳＶ４０ＮＬＳコンジュゲートの抗原提示活性に対する種々の胆汁酸の効果を示す。この実験のために、ＢＭＤＣを抗原提示細胞として使用し（ｎ＝６）、モル比（胆汁酸／ペプチド／コンジュゲート）：抗原は、４：１であった。試験した対照は、抗原なし（「ＰＢＳ」）、抗原単独（「ＯＶＡ単独」）、非コンジュゲート化ＮＬＳペプチド（「ＳＶ４０ＮＬＳ」）、ＯＶＡと混合した非コンジュゲート化コール酸（「ＣＡ」）、及びＯＶＡと混合した陽性対照ペプチドＳＩＩＮＦＥＫＬ（配列番号９）（「ＳＩＩＮＦＥＫＬ」）を含んでいた。破線は、ＯＶＡ単独で得られたシグナルを表す。胆汁酸：コール酸（ＣＡ）；グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）；グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）；ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）；及びリトコール酸（ＬＣＡ）である。
【図3】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原提示活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。破線は、ＯＶＡ単独で得られたシグナルを表す。２４時間のインキュベーション後に読み出しを行い、エラーバーはＳＤ（ｎ＝６）を表す。この実験のために、ＢＭＤＣを抗原提示細胞として使用した。
【図4】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原提示活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。破線は、ＯＶＡ単独で得られたシグナルを表す。単一の実験からの２４時間のインキュベーション後に読み出しを行った。ＣＡ－ペプチドコンジュゲート：ＯＶＡのモル比は、２２：１であった。この実験のために、ＢＭＤＣを抗原提示細胞として使用した。
【図5】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原提示活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、ＢＭＤＣを抗原提示細胞として使用した。破線は、ＯＶＡ単独で得られたシグナルを表す。単一の実験からの２４時間のインキュベーション後に読み出しを行った。ＣＡ－ペプチドコンジュゲート：ＯＶＡのモル比は、以下のとおりであった：ＣＡ－ＧＷＧ－ＳＶ４０ＮＬＳ（１２：１）、ＣＡ－ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ（１２：１）、ＣＡ－ＮＬＳ２－ＲＰＳ１７ ＮＬＳ（２２：１）、ＣＡ－ＨｕＲ ＮＬＳ（２２：１）、ＣＡ－ｃＭｙｃ ＮＬＳ（２：１）、ＣＡ－ＮＬＳ３－ＲＰＳ１７ ＮＬＳ（２２：１）、ＣＡ－ＮＬＳ２－ＲＧ－ＲＰＳ１７ ＮＬＳ（２：１）、ＣＡ－ＰＱＢＰ１ ＮＬＳ（８：１）、ＣＡ－ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ（２２：１）、及びＣＡ－ＳＶ４０ ＮＬＳ（２：１）。
【図6】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原提示活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（mesenchymal stromal cell、ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用した。破線は、ＯＶＡ単独で得られたシグナルを表す。２４時間のインキュベーション後に読み出しを行った。ＣＡ－ペプチドコンジュゲート：ＯＶＡのモル比は、以下のとおりであった：ＣＡ－ＧＷＧ－ＳＶ４０ＮＬＳ（２：１）、ＣＡ－ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ（８：１）、ＣＡ－ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ（１２：１）、ＣＡ－ＮＬＳ２－ＲＧ－ＲＰＳ１７（４：１）、ＣＡ－ｃＭｙｃ ＮＬＳ（１２：１）、ＣＡ－ＨｕＲ ＮＬＳ（１２：１）、ＣＡ－Ｔｕｓ ＮＬＳ（２：１）、ＣＡ－ＮＬＳ２－ＲＰＳ１７ ＮＬＳ（４：１）、ＣＡ－ＰＱＢＰ１ ＮＬＳ（１２：１）、ＣＡ－ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ（２：１）、及びＣＡ－ＳＶ４０ ＮＬＳ（２：１）。
【図7A】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原内在化活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用し、これをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識したＯＶＡ（すなわち、ＯＶＡ６４７）（商標）でパルスした。ＯＶＡ６４７の蛍光をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＡ（ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７［図７Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図７Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図７Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図７Ｄ］）の抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）を試験した（２：１でのｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）。
【図7B】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原内在化活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用し、これをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識したＯＶＡ（すなわち、ＯＶＡ６４７）（商標）でパルスした。ＯＶＡ６４７の蛍光をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＡ（ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７［図７Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図７Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図７Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図７Ｄ］）の抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）を試験した（２：１でのｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）。
【図7C】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原内在化活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用し、これをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識したＯＶＡ（すなわち、ＯＶＡ６４７）（商標）でパルスした。ＯＶＡ６４７の蛍光をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＡ（ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７［図７Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図７Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図７Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図７Ｄ］）の抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）を試験した（２：１でのｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）。
【図7D】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原内在化活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用し、これをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識したＯＶＡ（すなわち、ＯＶＡ６４７）（商標）でパルスした。ＯＶＡ６４７の蛍光をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＡ（ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７［図７Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図７Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図７Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図７Ｄ］）の抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）を試験した（２：１でのｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）。
【図8A】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原プロセシング活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用し、これをＤＱ（商標）オボアルブミン（すなわち、ＯＶＡＤＱ）でパルスした。ＯＶＡＤＱの蛍光をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＡ（ＮＬＳ１ ＲＳＰ１７［図８Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図８Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図８Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図８Ｄ］）の抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）を試験した（２：１でのｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）。
【図8B】コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原プロセシング活性に対する種々のＮＬＳペプチドの効果を示す。この実験のために、交差提示間葉系間質細胞（ＭＳＣ）株を抗原提示細胞として使用し、これをＤＱ（商標）オボアルブミン（すなわち、ＯＶＡＤＱ）でパルスした。ＯＶＡＤＱの蛍光をフローサイトメトリーによって測定した。ＣＡ（ＮＬＳ１ ＲＳＰ１７［図８Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図８Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図８Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図８Ｄ］）の抗原に対する種々の比（ＣＡ：ＯＶＡ＝２２：１、１２：１、８：１、４：１、及び２：１）を試験した（２：１でのｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）。
【0012】
配列表
本出願は２０２２年５月５日に作成されたコンピュータ可読形式の配列表を含む。コンピュータ可読形式は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は２０２２年５月５日に作成されたコンピュータ可読形式の配列表を含む。コンピュータ可読形式は参照により本明細書に組み込まれる。
【0013】
【表1】
【発明を実施するための形態】
【0014】
本明細書には、抗原に対する適応免疫応答を改善若しくは修飾することに関する組成物、細胞、及び方法が記載される。いくつかの態様では、本発明は、抗原をステロイド酸又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートと混和することによって、抗原に対する、抗原提示を改善する、並びに／又は改善された細胞性免疫若しくは改善された細胞性及び体液性免疫を誘発するという本明細書における実証に起因する。いくつかの実施形態では、本明細書には、抗原提示及び／又は適応免疫のエンハンサーとしてのステロイド酸又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートの使用が記載される。有利なことに、本明細書に記載のエンハンサーは、抗原に共有的にコンジュゲート化されず、それによって、目的の抗原に合わせて調整可能なエンハンサー：抗原モル比で種々の抗原を有する製剤に迅速に適合可能な多用途のプラットフォームを提供する。
【0015】
第１の態様では、本明細書には、抗原提示のエンハンサーと混和された抗原を含む組成物が記載される。本明細書で使用される場合、「混和」又は「混和すること」という用語は、２つの別個の成分の組み合わせを単一の組成物にすることを指し、これらの成分は、共有的にコンジュゲート化していないか、又は他の方法で一緒に反応していない。いくつかの実施形態では、エンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞への組成物の投与（例えば、インビトロ、エクスビボ、又はインビボ）時に抗原の提示を改善するのに十分な量のステロイド酸を含み得る。いくつかの実施形態では、エンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞への組成物の投与（例えば、インビトロ、エクスビボ、又はインビボ）時に抗原の提示を改善するのに十分な量のステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含み得る。
【0016】
ポリペプチド抗原は通常、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞）によって捕捉されるが、最初はエンドソームに捕捉される。リソソームへのエンドソームの成熟によって、ｐＨが低下し、非特異的な抗原の分解を媒介するタンパク質分解酵素を活性化させる。結果として、生成された抗原性断片のいくつかは、次いで、エンドソーム孔を通過してサイトゾルに到達することができ、そこで、ＭＨＣクラスＩの提示の前に更なる抗原の分解がプロテアソーム機構によって生じる。このプロセスは自然に生じるが、最終的にエンドソームから放出される生成された抗原性断片は、小さくかつ／又は損傷されている可能性があり、それらはプロテアソーム分解に適切ではなく、それによってそれらのＭＨＣクラスＩの提示が妨げられ、したがってそれに基づく細胞性免疫が妨げられる。理論に束縛されるものではないが、本明細書に記載の免疫原エンハンサーとの抗原の混和により、抗原の内在化／エンドソーム脱出を促進し、それら（又はより大きな抗原断片）がよりネイティブな立体構造でかつ／又はより大量にサイトゾルに到達することを可能にすることができる。結果として、これらのよりネイティブな抗原のプロテアソーム分解は、抗原提示細胞の表面でＭＨＣクラスＩを介して提示されるより多数のかつ／又は多様な免疫原性及び／又は安定性ペプチドをもたらし、それによって強力なＴ細胞の活性化を惹起することができる。
【0017】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸（例えば、エンハンサー中及び／又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中）は、内在化されたカーゴのエンドサイトーシス及び／又はエンドソーム脱出を増強するステロイド酸であってもよい。理論に束縛されるものではないが、ステロイド酸（例えば、胆汁酸及び胆汁酸類似体）は、ウイルスによって利用／活用され、例えば、ウイルスのエンドサイトーシス取り込み及び／又はエンドソーム脱出を増加させてサイトゾルへのアクセスを得ることによって、ウイルスの宿主細胞への感染を促進することが示されている（Ｓｈｉｖａｎｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｓｈｉｖａｎｎａ ｅｔ ａｌ．，２０１５；Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。例えば、胆汁酸は、酵素の酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）を始動させて、エンドソームの内側リーフレット上でスフィンゴミエリンをセラミドに切断することが示されている。セラミド量の増加によって、膜が不安定化してエンドソーム脱出が促進される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発し、それによってエンドソーム膜を不安定化させ、細胞内送達時に修飾ポリペプチド抗原のエンドソーム脱出を促進するものを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発するものを含んでもよい。
【0018】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、一次胆汁酸又は二次胆汁酸などの胆汁酸であってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、１つ以上の胆汁酸部分を含む胆汁酸オリゴマーであってもよい（Ａｌ－Ｈｉｌａｌ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（chenodeoxycholic acid、ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（deoxycholic acid、ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、グリココール酸（glycocholic acid、ＧＣＡ）、タウロコール酸（taurocholic acid、ＴＣＡ）、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）、グリコリトコール酸（ＧＬＣＡ）、タウロリトコール酸（taurolithocholic acid、ＴＬＣＡ）、タウロヒオデオキシコール酸（taurohyodeoxycholic acid、ＴＨＤＣＡ）、タウロケノデオキシコール酸（taurochenodeoxycholic acid、ＴＣＤＣＡ）、ウルソコール酸（ursocholic acid、ＵＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（tauroursodeoxycholic acid、ＴＵＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ursodeoxycholic acid、ＵＤＣＡ）、若しくはグリコウルソデオキシコール酸（glycoursodeoxycholic acid、ＧＵＤＣＡ）である胆汁酸であるか、又はそれらを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、又は本明細書に記載のエンハンサー中で採用される場合に抗原に対する抗原提示及び／若しくは適応免疫を増強するその類似体であるか、又はそれらを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、本明細書に記載の胆汁酸の類似体であって、エンドサイトーシスを誘導する、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発する、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発する、及び／又はコール酸の疎水性よりも大きい疎水性を有する、類似体であるか、又はそれを含んでもよい。
【0019】
ＧＣＤＣＡ、ＴＣＡ、ＧＣＡ、及びＣＡなどの疎水性胆汁酸（ＵＤＣＡなどの親水性胆汁酸ではない）は、頂端膜上のＡＳＭに媒介されるセラミド蓄積を介してエンドソーム取り込み及びエンドソーム脱出を増強することによって、宿主腸細胞におけるＧＩＩ．３ヒトノロウイルスの感染と複製を増加させることが示された（Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、コール酸よりも疎水性である胆汁酸又は胆汁酸類似体を含むか、又はそれからなり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリペプチド抗原とのコンジュゲート化に適したステロイド酸は、コール酸よりも疎水性である胆汁酸又は胆汁酸類似体（例えば、ＣＤＣＡ、ＤＣＡ、ＬＣＡ、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＣＤＣＡ、ＧＣＡ、ＧＤＣＡ、又はＧＣＤＣＡ；Ｈａｎａｆｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８）を含むか、又はそれからなる。
【0020】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸－ペプチドコンジュゲートに含まれるペプチドは、免疫原性を更に増強し得る所望の機能性をコンジュゲートに付与する（例えば、細胞内標的化、核局在化、核小体局在化、エンドソーム脱出、及び／又はタンパク質形質導入）１つ以上のドメインを含んでもよい。本明細書で使用される場合、「ドメイン」とは一般に、特定の機能性を有するタンパク質の一部を指す。いくつかのドメインはタンパク質の残りの部分から分離されたときにもそれらの機能を保存し、したがって、モジュールの様式で使用することができる。多くのタンパク質ドメインのモジュール特性は、本明細書に記載されるペプチド内でのそれらの配置に関して柔軟性を提供することができる。しかし、いくつかのドメインは、ペプチドの特定の位置（例えば、Ｎ又はＣ端領域、又はその間）で遺伝子操作された場合に、より良好に機能することができる。その内因性タンパク質内でのドメインの位置は、ドメインがペプチド内のどこに遺伝子操作されるべきかの指標であり得る。
【0021】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、特定の細胞内区画に対する修飾ポリペプチド抗原の標的化を促進する細胞内標的化シグナルを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、核局在化シグナル（nuclear localization signal、ＮＬＳ）を含んでもよい。いくつかの態様では、本明細書に記載のＮＬＳは、古典的ＮＬＳ（例えば、Ｋ－Ｋ／Ｒ－Ｘ－Ｋ／Ｒモチーフを含む）、ＰＹ－ＮＬＳ（例えば、ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＹモチーフを含む）、ＰＬ－ＮＬＳ（例えば、ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＬモチーフを含む）、リボソームＮＬＳ、核小体標的化シグナルを更に含むＮＬＳ、又はそれらの任意の組み合わせを含んでもよい。
【0022】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、以下の一般コンセンサス配列を含んでもよく、（ｉ）Ｋ（Ｋ／Ｒ）Ｘ（Ｋ／Ｒ）、（ｉｉ）（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）Ｘ１０～１２（Ｋ／Ｒ）３／５、ここで、（Ｋ／Ｒ）３／５は５個の連続するアミノ酸のうちの３個のリシン又はアルギニン残基を表し、（ｉｉｉ）ＫＲＸ１０～１２ＫＲＲＫ、（ｉｖ）ＫＲＸ１０～１２Ｋ（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）、又は（ｖ）ＫＲＸ１０～１２Ｋ（Ｋ／Ｒ）Ｘ（Ｋ／Ｒ）、ここで、Ｘは任意のアミノ酸である（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６）。
【0023】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、疎水性及び／又は塩基性ＮＬＳであってもよい。いくつかの態様では、本明細書に記載のＮＬＳは、少なくとも３、４、若しくは５個の酸性残基（例えば、Ｒ／Ｋ）及び／又は少なくとも３、４、若しくは５個の塩基性残基（例えば、Ｅ／Ｄ）を含んでもよい。
【0024】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、ＳＶ－４０ラージＴ抗原からのＮＬＳ（例えば、ＳＶ４０ ＮＬＳ）、ｃ－Ｍｙｃ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ａ１タンパク中の酸性Ｍ９ドメイン（例えば、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ）、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ、ＨｕＲ ＮＬＳ、Ｔｕｓ ＮＬＳ、ヌクレオプラスミンＮＬＳ、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７、又はＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＳＰ１７であるか、又はそれらに由来し得る。
【0025】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核局在化シグナルは、ＳＶ－４０ラージＴ抗原由来のＮＬＳ（例えば、ＰＫＫＫＲＫＶ；配列番号１又は２）又は他の古典的ＮＬＳを含んでもよく、又はそれらに由来してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核局在化シグナルは、非古典的ＮＬＳ（例えば、ｈｎＲＮＰ Ａ１タンパク質中の酸性Ｍ９ドメイン、酵母の転写リプレッサーＭａｔα２中の配列ＫＩＰＩＫ；ＰＹ－ＮＬＳ；リボソームＮＬＳ；又はＵ ｓｎＲＮＰの複合シグナル）を含んでもよく、又はそれらに由来してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される核局在化シグナルは、配列番号１～８又は１０～１６のいずれか１つ又はその任意の部分のアミノ酸配列を含むか、又は本質的にそれからなる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の核局在化シグナルは、ＳＶ４０ ＮＬＳ（例えば配列番号１又は２に含まれる）、ＧＷＧ－ＳＶ４０ ＮＬＳ（例えば配列番号３に含まれる）、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ（例えば配列番号４に含まれる）、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ（例えば配列番号５に含まれる）、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ（例えば配列番号１０に含まれる）、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ（例えば配列番号６に含まれる）、ＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＰＳ１７（例えば配列番号１１に含まれる）、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７（例えば配列番号１５に含まれる）、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７（例えば配列番号７に含まれる）、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７（例えば配列番号８に含まれる）、ｃＭｙｃ ＮＬＳ（例えば配列番号１２に含まれる）、ＨｕＲ ＮＬＳ（例えば配列番号１３に含まれる）、Ｔｕｓ ＮＬＳ（例えば配列番号１４に含まれる）、又はヌクレオプラスミンＮＬＳ（例えば配列番号１６に含まれる）である核局在化シグナルを含むか、又はそれらから本質的になる。場合によっては、上記で言及された配列番号は、ポリペプチド抗原へのコンジュゲート化を容易にするために使用されたＮ端システイン残基（例えば、Ｎ端システイン残基のチオール基）を含む。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で言及されるＮＬＳ配列は、配列番号１～８又は１０～１６の任意の１つに含まれるＮ端システイン残基を除外してもよい。いくつかの実施形態では、所与のポリペプチド抗原とのステロイド酸－ペプチドのコンジュゲート化を容易にするために（例えば、本明細書に記載のペプチドのＮ端部分からＣ端部分に向かって）付加又は挿入される他の官能基もまた想定される（例えば、カルボキシル基、合成アミノ酸など）。例えば、ペプチドは、Ｃ端アミド及び／又はＮ端システインを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ペプチドは、エンドソーム脱出モチーフ、又はタンパク質形質導入、又は細胞膜透過性モチーフを含まない。
【0026】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ（例えば、配列番号６の少なくとも残基３～２１を含む）又は核内輸送受容体Ｋａｐβ２に結合する別のＮＬＳであってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、Ｋａｐβ２に結合するＰＱＢＰ－１に必要であることが見出されたモチーフＲ－Ｘ２～５－ＰＹを含んでもよい（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。
【0027】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、抗原提示細胞への内在化時に抗原のエンドソーム脱出を促進するエンドソーム分解モチーフを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、エンドサイトーシス及び／又はエンドソーム形成を刺激し、それによって抗原提示細胞への内在化を促進するタンパク質形質導入ドメインを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＮＬＳは、タンパク質形質導入ドメイン又は細胞膜透過性ペプチドを欠いていてもよく、これは、抗原と比較して、ステロイド酸コンジュゲートのより迅速な内在化の誘発を回避するのに有利であり得る。
【0028】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、エンドサイトーシス、エンドソーム形成、又は細胞内送達を細胞非特異的な様式で刺激するタンパク質形質導入ドメイン（protein transduction domain、ＰＴＤ）を含んでもよい。
【0029】
いくつかの実施形態では、ペプチドは、好ましくは非免疫原性ペプチドであり、それによって、ステロイド酸－ペプチドコンジュゲートエンハンサー中のペプチドに対してではなく、目的の抗原に対して生成される免疫応答を支持する。例えば、Ａｚｕａｒ ｅｔ ａｌ．，２０１９は、コール酸をＡ群レンサ球菌由来の抗原性ペプチドにコンジュゲート化し、これは、報告によれば、ロッド様ナノ粒子へと自己集合し、抗原性ペプチドに対するより強い体液性免疫反応を誘発した。本明細書に記載のエンハンサーに対するそのような体液性免疫応答は望ましくない。
【0030】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、少なくとも７、８、９、１０、１１、若しくは１２のアミノ酸長を有し、５０～１００以下のアミノ酸長を有し、かつ／又は１０～１００のアミノ酸長を有してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のペプチドは、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチド、又はその変異体であって、（ａ）ステロイド酸にコンジュゲート化された場合、対応する非コンジュゲート化ステロイド酸の抗原提示活性と比較して、ステロイド酸に改善された抗原提示活性を付与するか、（ｂ）核局在化及び／又はエンドソーム分解活性を有するか、（ｃ）１、２、３、４、若しくは５個以下のアミノ酸の置換又は欠失で、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチドとは異なるか、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、又はその変異体を含むか、又はそれからなり得る。
【0031】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のエンハンサーは、ステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含み、ステロイド酸が、ペプチドであって、（ａ）１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、若しくは１０：１、又は１：１～１０：１のステロイド酸：ペプチドのモル比で、（ｂ）ペプチドの遊離アミノ基及び／又は遊離チオール基（例えば、リシン又はシステインの）にある、（ｃ）ペプチドのＮ末端にあるか、又はそれに向かう（例えば、Ｎ端残基の遊離アミノ基にある、及び／又はＮ端システイン残基のチオール基にある）、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチドにコンジュゲート化されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のステロイド酸は、ペプチド内の任意の適切な官能基でペプチドにコンジュゲート化されてもよい。
【0032】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比は、少なくとも０．０１：１、０．０５：１、０．１：１、０．２：１、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１であり、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、５０：１、１００：１、２５０：１、５００：１、１０００：１以下であり、かつ／又は１：１～１０００：１、１：１～５００：１、１：１～２５０：１、１：１～２００：１であってもよい。
【0033】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗原は、腫瘍関連抗原（tumor-associated antigen、ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（tumor-specific antigen、ＴＳＡ）、ネオアンチゲン、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、ワクチン接種、及び／若しくは免疫療法による治療に適した疾患若しくは障害に関連する抗原、又はそれらの任意の抗原性断片であってもよいか、又はそれらを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗原は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２若しくはＳＡＲＳ－ＣｏＶ由来のスパイクタンパク質、又はその抗原性変異体若しくは抗原性断片であってもよく、又はそれを含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＴＡＡ、ＴＳＡ、及び／又はネオアンチゲンは、単一塩基変異体抗原、変異フレームシフト抗原、スプライス変異体抗原、遺伝子融合抗原、内因性レトロエレメント抗原、又は別のクラスの抗原、例えばヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－体細胞変異由来抗原あるいは翻訳後ＴＳＡであってもよい（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。いくつかの実施形態では、ＴＳＡは、ヒトパピローマウイルス（human papillomavirus、ＨＰＶ）、サイトメガロウイルス、又はエプスタイン－バールウイルス（Epstein-Barr virus、ＥＢＶ）などのウイルス由来がんの抗原であってもよい。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは、がん－精巣抗原、ＨＥＲ２、ＰＳＡ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＥｐＣＡＭ、ＧＰＣ３、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＳＳＸ－２、メソテリン（mesothelin、ＭＳＬＮ）、又はＥＧＦＲであってもよく、又はそれらを含んでもよい（Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１７；Ｔａｇｌｉａｍｏｎｔｅ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗原は、細胞ライセート又は腫瘍由来のエクソソームなどの腫瘍由来他の物質であってもよく、又はそれらを含んでもよい。
【0034】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるエンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原のサイトゾル送達の増加を可能にし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるエンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原の総細胞送達の増加を可能にし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるエンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強を可能にし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるエンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原への曝露時にＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加を可能にし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるエンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する体液性免疫の増強を可能にし得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるエンハンサーは、エンハンサーを欠く対応する組成物（例えば、免疫原性が乏しいエピトープに対する抗体を含む）と比較して、抗原に対する抗体種の多様性（又は生物学的多様性）の増大を可能にし得る。
【0035】
いくつかの態様では、本明細書には、細胞集団及び本明細書に記載される組成物（例えば、抗原及び抗原提示のエンハンサーを含む）を含む細胞培養物が記載される。いくつかの実施形態では、細胞は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、遺伝子操作された抗原提示細胞）、ＭＨＣクラスＩ発現細胞、ＭＨＣクラスＩＩ発現細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含んでもよい。
【0036】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバント（例えば、ヒト又は動物への使用に適切なワクチンアジュバント）を更に含んでもよい。
【0037】
いくつかの態様では、本明細書には、本明細書に記載される組成物を含むか、又は本明細書に記載される細胞培養物若しくは細胞集団を使用して産生された細胞を含むワクチンが記載される。いくつかの実施形態では、ワクチンは、治療用又は予防用のワクチン（例えば、抗がんワクチン、抗ウイルスワクチン、又は抗細菌ワクチン）であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫原エンハンサーは、免疫原エンハンサーが存在しないものと比較して、免疫応答を生成するために必要とされる免疫原性組成物（例えば、ワクチン）中に配合される抗原及び／又は抗原提示細胞の量を減らすことが可能であり得る。
【0038】
いくつかの態様では、本明細書には、対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発する方法が記載され、方法は、本明細書に記載される組成物又は本明細書に記載される細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含む。
【0039】
いくつかの態様では、本明細書には、感染症に対して対象にワクチン接種するための方法が記載され、方法は、本明細書に記載される組成物又は本明細書に記載される細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含み、抗原が、感染症を引き起こす病原体（例えば、ウイルス、細菌、真菌）の抗原性断片を含む。
【0040】
いくつかの態様では、本明細書には、対象におけるがんを治療するための方法が記載され、方法は、本明細書に記載される組成物又は本明細書に記載される細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含み、抗原が、がんを引き起こす細胞において過剰発現されるか、又は異常に発現される。
【0041】
更なる態様において、本明細書は、ワクチン接種及び／又は免疫療法による治療に適した疾患又は障害を治療又は予防するための方法を記載し、方法は、本明細書に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む。
【0042】
いくつかの態様では、本明細書には、抗原と混和して使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲートが記載される。いくつかの実施形態では、ステロイド酸－ペプチドコンジュゲートの抗原との混和は、（ｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原のサイトゾル送達の増加、（ｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原の総細胞送達の増加、（ｉｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強、（ｉｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加、（ｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する体液性免疫の増強、（ｖｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する抗体種の多様性の増大、又は（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組み合わせを可能にする。
【0043】
いくつかの態様では、本明細書には、療法に使用するための、本明細書に記載される組成物、又は本明細書に記載される培養物を使用して産生された細胞集団が記載される。
【0044】
いくつかの態様では、本明細書には、対象において免疫応答を生成するための、又は対象において免疫応答を生成するための医薬（例えば、ワクチン）の製造のための、本明細書に記載される組成物又は本明細書に記載される培養物を使用して産生された細胞集団の使用が記載される。いくつかの実施形態では、免疫応答は、エンハンサーを欠く対応する組成物又は細胞培養物から生成されるものと比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強、上記抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増大、上記に対する体液性免疫の増強、又はそれらの任意の組み合わせを含んでもよい。
【0045】
項目
いくつかの態様では、本明細書には、以下の項目のうちの１つ以上が記載される。
１．抗原提示のエンハンサーと混和された抗原を含む組成物であって、エンハンサーが、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞への組成物の投与時に抗原の提示を改善するのに十分な量のステロイド酸及び／又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含む、組成物。
２．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発し、それによって抗原提示細胞内のエンドソーム膜を不安定化させ、抗原のサイトゾルへのエンドソーム脱出を促進するステロイド酸である、項目１に記載の組成物。
３．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発するステロイド酸である、項目１又は２に記載の組成物。
４．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、胆汁酸である、項目１～３のいずれか１つに記載の組成物。
５．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、一次胆汁酸又は二次胆汁酸である、項目１～４のいずれか１つに記載の組成物。
６．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、（ａ）コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、グリココール酸（ＧＣＡ）、タウロコール酸（ＴＣＡ）、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）、グリコリトコール酸（ＧＬＣＡ）、タウロリトコール酸（ＴＬＣＡ）、タウロヒオデオキシコール酸（ＴＨＤＣＡ）、タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣＡ）、ウルソコール酸（ＵＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はグリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ）である胆汁酸、（ｂ）（ａ）の胆汁酸の類似体であって、エンドサイトーシスを誘導する、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発する、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発する、及び／又はコール酸の疎水性よりも大きい疎水性を有する類似体、（ｃ）コール酸よりも疎水性である胆汁酸又は胆汁酸類似体（例えば、ＣＤＣＡ、ＤＣＡ、ＬＣＡ、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＣＤＣＡ、ＧＣＡ、ＧＤＣＡ、又はＧＣＤＣＡ）、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせであるか、又はそれらを含む、項目１～５のいずれか１つに記載の組成物。
７．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、若しくはリトコール酸（ＬＣＡ）であるか、又はそれらを含む、項目１～６のいずれか１つに記載の組成物。
８．ペプチドが、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、項目１～７のいずれか１つに記載の組成物。
９．ＮＬＳが、古典的ＮＬＳ（例えば、Ｋ－Ｋ／Ｒ－Ｘ－Ｋ／Ｒモチーフを含む）、ＰＹ－ＮＬＳ（例えば、ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＹモチーフを含む、又はモチーフＲ－Ｘ２～５－ＰＹを含む及び／若しくはＫａｐβ２結合活性を有する）、ＰＬ－ＮＬＳ（例えば、ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＬモチーフを含む）、リボソームＮＬＳ、核小体標的化シグナルを更に含むＮＬＳ、又はそれらの任意の組み合わせである、項目８に記載の組成物。
１０．ＮＬＳが、ＳＶ４０ ＮＬＳ、ｃＭｙｃ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ、ＨｕＲ ＮＬＳ、Ｔｕｓ ＮＬＳ、ヌクレオプラスミンＮＬＳ、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７、若しくはＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＳＰ１７であるか、又はそれらに由来する、項目８又は９に記載の組成物。
１１．ＮＬＳが、少なくとも３つの酸性残基（例えば、Ｒ／Ｋ）及び／又は少なくとも３つの塩基性残基（例えば、Ｅ／Ｄ）を含む、項目８～１０のいずれか１つに記載の組成物。
１２．ペプチドが、エンドソーム脱出を促進するエンドソーム分解モチーフを含む、項目１～１１のいずれか１つに記載の組成物。
１３．ペプチドが、エンドサイトーシス及び／又はエンドソーム形成を刺激するタンパク質形質導入ドメインを含む、項目１～１２のいずれか１つに記載の組成物。
１４．ペプチドが、タンパク質形質導入ドメイン又は細胞膜透過性ペプチドを欠いている、項目１～１２のいずれか１つに記載の組成物。
１５．ペプチドが、非免疫原性ペプチドである、項目１～１４のいずれか１つに記載の組成物。
１６．ペプチドが、少なくとも７、８、９、１０、１１、若しくは１２のアミノ酸長を有し、５０～１００以下のアミノ酸長を有し、かつ／又は１０～１００のアミノ酸長を有する、項目１～１５のいずれか１つに記載の組成物。
１７．ペプチドが、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチド、又はその変異体であって、（ａ）ステロイド酸にコンジュゲート化された場合、対応する非コンジュゲート化ステロイド酸の抗原提示活性と比較して、ステロイド酸に改善された抗原提示活性を付与するか、（ｂ）核局在化及び／又はエンドソーム分解活性を有するか、（ｃ）１、２、３、４、若しくは５個以下のアミノ酸の置換又は欠失で、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチドとは異なるか、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、又はその変異体を含むか、又はそれからなる、項目１～１６のいずれか１つに記載の組成物。
１８．エンハンサーが、ステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含み、ステロイド酸が、ペプチドであって、（ａ）１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、若しくは１０：１、又は１：１～１０：１のステロイド酸：ペプチドのモル比で、（ｂ）ペプチドの遊離アミノ基及び／若しくは遊離チオール基（例えば、リシン又はシステインの）にある、（ｃ）ペプチドのＮ末端にあるか、若しくはそれに向かう（例えば、Ｎ端残基の遊離アミノ基にある、及び／又はＮ端システイン残基のチオール基にある）、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、にコンジュゲート化されている、項目１～１７のいずれか１つに記載の組成物。
１９．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、少なくとも０．０１：１、０．０５：１、０．１：１、０．２：１、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１であり、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、５０：１、１００：１、２５０：１、５００：１、１０００：１以下であり、かつ／又は１：１～１０００：１、１：１～５００：１、１：１～２５０：１、１：１～２００：１である、項目１～１８のいずれか１つに記載の組成物。
２０．抗原が、１つ以上のＭＨＣクラスＩエピトープ及び／又はＭＨＣクラスＩＩエピトープを含むポリペプチド抗原である、項目１～１９のいずれか１つに記載の組成物。
２１．ポリペプチド抗原が、（ａ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、ネオアンチゲン、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、ワクチン接種及び／若しくは免疫療法による治療に適した疾若しくは障害に関連する抗原、又はそれらの任意の抗原性断片、あるいは（ｂ）コロナウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質、又はその抗原性断片、又は単一塩基変異体抗原、変異フレームシフト抗原、スプライス変異体抗原、遺伝子融合抗原、内因性レトロエレメント抗原などのがん抗原、又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－体細胞変異由来抗原あるいは翻訳後ＴＳＡ、ウイルス由来のがん抗原（例えばヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、サイトメガロウイルス、又はエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ））、がん－精巣抗原、ＨＥＲ２、ＰＳＡ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＥｐＣＡＭ、ＧＰＣ３、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＳＳＸ－２、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、細胞ライセート又は腫瘍由来の他の物質（例えば、腫瘍由来のエクソソーム）などの別のクラスの抗原であるか、又はそれらを含む、項目２０に記載の組成物。
２２．エンハンサーが、（ｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原のサイトゾル送達の増加、（ｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原の総細胞送達の増加、（ｉｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強、（ｉｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加、（ｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する体液性免疫の増強、（ｖｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する抗体種の多様性の増大、又は（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組み合わせを可能にする、項目１～２１のいずれか１つに記載の組成物。
２３．薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントを更に含む、項目１～２２のいずれか１つに記載の組成物。
２４．細胞集団及び項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物を含む、細胞培養物。
２５．細胞が、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、遺伝子操作された抗原提示細胞）、ＭＨＣクラスＩ発現細胞、ＭＨＣクラスＩＩ発現細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項目２４に記載の細胞培養物。
２６．項目１～２２のいずれか１つに記載の組成物を含むか、又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を含む、ワクチン。
２７．治療用又は予防用ワクチン（例えば、抗がんワクチン、抗ウイルスワクチン、又は抗細菌ワクチン）である、項目２６に記載のワクチン。
２８．対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発するための方法であって、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物、又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含む、方法。
２９．感染症に対して対象にワクチン接種するための方法であって、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含み、抗原が、感染症を引き起こす病原体（例えば、ウイルス、細菌、真菌）の抗原性断片を含む、方法。
３０．対象におけるがんを治療するための方法であって、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含み、抗原が、がんを引き起こす細胞において過剰発現されるか、又は異常に発現される、方法。
３１．抗原と混和して、使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲート。
３２．ステロイド酸－コンジュゲート及び／又は抗原が、項目１～２２のいずれか１つに記載されるものである、項目３１に記載の使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲート。
３３．対象において免疫応答を生成するための、又は対象において免疫応答を生成するための医薬（例えば、ワクチン）の製造のための、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物の使用。
３４．免疫応答が、エンハンサーを欠く対応する組成物又は細胞培養物から生成されるものと比較して、上記抗原に対する細胞性免疫の増強、上記抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増大、上記に対する体液性免疫の増強、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項目３３に記載の使用。
３５．ポリペプチド抗原の免疫原性を改善する方法であって、方法が、ポリペプチド抗原を抗原提示のエンハンサーと混和することを含み、エンハンサーが、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞又は対象への投与時にポリペプチド抗原の提示を改善するのに十分な量の胆汁酸－ペプチドコンジュゲートを含み、胆汁酸－ペプチドコンジュゲートに含まれるペプチドが、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、方法。
３６．胆汁酸が、コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、グリココール酸（ＧＣＡ）、タウロコール酸（ＴＣＡ）、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）、グリコリトコール酸（ＧＬＣＡ）、タウロリトコール酸（ＴＬＣＡ）、タウロヒオデオキシコール酸（ＴＨＤＣＡ）、タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣＡ）、ウルソコール酸（ＵＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はグリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ）である、項目３５に記載の方法。
３７．胆汁酸が、ＣＡ、ＣＤＣＡ、ＤＣＡ、ＬＣＡ、ＧＣＡ、ＴＣＡ、ＧＤＣＡ、ＧＣＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＧＬＣＡ、ＴＬＣＡ、ＴＨＤＣＡ、ＴＣＤＣＡ、ＵＣＡ、ＴＵＤＣＡ、ＵＤＣＡ、又はＧＵＤＣＡの類似体であり、類似体が、エンドサイトーシスを誘導する、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発する、又はセラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を引き起こす、項目３５又は３６に記載の方法。
３８．ステロイド酸が、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はリトコール酸（ＬＣＡ）であるか、又はそれらを含む、項目３５又は３６に記載の方法。
３９．ＮＬＳが、ＳＶ４０ ＮＬＳ（配列番号１又は２）、ＧＷＧ－ＳＶ４０ＮＬＳ（配列番号３）、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ（配列番号４）、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ（配列番号５）、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ（配列番号１０）、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ（配列番号６）、ＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＰＳ１７（配列番号１１）、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７（配列番号１５）、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７（配列番号７）、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７（配列番号８）、ｃＭｙｃ ＮＬＳ（配列番号１２）、ＨｕＲ ＮＬＳ（配列番号１３）、Ｔｕｓ ＮＬＳ（配列番号１４）又はヌクレオプラスミンＮＬＳ（配列番号１６）である、項目３５～３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．ＮＬＳが、核局在化活性を有するＮＬＳの変異体であり、ＮＬＳが、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、項目３５～３８のいずれか１つに記載の方法。
４１．ペプチドが、非免疫原性ペプチドである、項目３５～４０のいずれか１つに記載の方法。
４２．ペプチドが、１０～１００のアミノ酸長を有する、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４３．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、１：１～１０００：１である、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４４．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、１：１～５００：１である、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４５．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、１：１～２５０：１である、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４６．抗原が、１つ以上のＭＨＣクラスＩエピトープ及び／又はＭＨＣクラスＩＩエピトープを含むポリペプチド抗原である、項目３５～４５のいずれか１つに記載の方法。
４７．ポリペプチド抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、腫瘍由来の細胞ライセート、腫瘍由来のエクソソーム、ネオアンチゲン、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、又はワクチン接種及び／若しくは免疫療法による治療に適した疾患又は障害に関連する他の抗原であるか、又はそれを含む、項目３５～４６のいずれか１つに記載の方法。
４８．ポリペプチド抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質若しくはその抗原性断片であるか、又はそれを含む、項目３５～４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．エンハンサーが、（ｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原のサイトゾル送達の増加、（ｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原の総細胞送達の増加、（ｉｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強、（ｉｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加、（ｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する体液性免疫の増強、（ｖｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する抗体種の多様性の増大、又は（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組み合わせを可能にする、項目３５～４８のいずれか１つに記載の方法。
５０．免疫原性組成物であって、項目３５に記載のポリペプチド抗原及び抗原提示エンハンサー、又は項目１に記載のポリペプチド抗原及び抗原提示エンハンサーを含む細胞集団、並びに薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントを含む、免疫原性組成物。
５１．細胞集団が、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、遺伝子操作された抗原提示細胞、ＭＨＣクラスＩ発現細胞、ＭＨＣクラスＩＩ発現細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項目５０に記載の免疫原性組成物。
５２．対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発するための方法であって、項目５０又は５１に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法。
いくつかの態様では、本明細書には、以下の項目のうちの１つ以上が記載される。
１．抗原提示のエンハンサーと混和された抗原を含む組成物であって、エンハンサーが、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞への組成物の投与時に抗原の提示を改善するのに十分な量のステロイド酸及び／又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含む、組成物。
２．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発し、それによって抗原提示細胞内のエンドソーム膜を不安定化させ、抗原のサイトゾルへのエンドソーム脱出を促進するステロイド酸である、項目１に記載の組成物。
３．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発するステロイド酸である、項目１又は２に記載の組成物。
４．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、胆汁酸である、項目１～３のいずれか１つに記載の組成物。
５．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、一次胆汁酸又は二次胆汁酸である、項目１～４のいずれか１つに記載の組成物。
６．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、（ａ）コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、グリココール酸（ＧＣＡ）、タウロコール酸（ＴＣＡ）、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）、グリコリトコール酸（ＧＬＣＡ）、タウロリトコール酸（ＴＬＣＡ）、タウロヒオデオキシコール酸（ＴＨＤＣＡ）、タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣＡ）、ウルソコール酸（ＵＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はグリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ）である胆汁酸、（ｂ）（ａ）の胆汁酸の類似体であって、エンドサイトーシスを誘導する、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発する、セラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を誘発する、及び／又はコール酸の疎水性よりも大きい疎水性を有する類似体、（ｃ）コール酸よりも疎水性である胆汁酸又は胆汁酸類似体（例えば、ＣＤＣＡ、ＤＣＡ、ＬＣＡ、ＴＣＡ、ＴＤＣＡ、ＴＣＤＣＡ、ＧＣＡ、ＧＤＣＡ、又はＧＣＤＣＡ）、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせであるか、又はそれらを含む、項目１～５のいずれか１つに記載の組成物。
７．エンハンサー中又はステロイド酸－ペプチドコンジュゲート中のステロイド酸が、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、若しくはリトコール酸（ＬＣＡ）であるか、又はそれらを含む、項目１～６のいずれか１つに記載の組成物。
８．ペプチドが、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、項目１～７のいずれか１つに記載の組成物。
９．ＮＬＳが、古典的ＮＬＳ（例えば、Ｋ－Ｋ／Ｒ－Ｘ－Ｋ／Ｒモチーフを含む）、ＰＹ－ＮＬＳ（例えば、ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＹモチーフを含む、又はモチーフＲ－Ｘ２～５－ＰＹを含む及び／若しくはＫａｐβ２結合活性を有する）、ＰＬ－ＮＬＳ（例えば、ＮＬＳのＣ末端に向かうものなどの１つ以上のＰＬモチーフを含む）、リボソームＮＬＳ、核小体標的化シグナルを更に含むＮＬＳ、又はそれらの任意の組み合わせである、項目８に記載の組成物。
１０．ＮＬＳが、ＳＶ４０ ＮＬＳ、ｃＭｙｃ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ、ＨｕＲ ＮＬＳ、Ｔｕｓ ＮＬＳ、ヌクレオプラスミンＮＬＳ、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７、若しくはＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＳＰ１７であるか、又はそれらに由来する、項目８又は９に記載の組成物。
１１．ＮＬＳが、少なくとも３つの酸性残基（例えば、Ｒ／Ｋ）及び／又は少なくとも３つの塩基性残基（例えば、Ｅ／Ｄ）を含む、項目８～１０のいずれか１つに記載の組成物。
１２．ペプチドが、エンドソーム脱出を促進するエンドソーム分解モチーフを含む、項目１～１１のいずれか１つに記載の組成物。
１３．ペプチドが、エンドサイトーシス及び／又はエンドソーム形成を刺激するタンパク質形質導入ドメインを含む、項目１～１２のいずれか１つに記載の組成物。
１４．ペプチドが、タンパク質形質導入ドメイン又は細胞膜透過性ペプチドを欠いている、項目１～１２のいずれか１つに記載の組成物。
１５．ペプチドが、非免疫原性ペプチドである、項目１～１４のいずれか１つに記載の組成物。
１６．ペプチドが、少なくとも７、８、９、１０、１１、若しくは１２のアミノ酸長を有し、５０～１００以下のアミノ酸長を有し、かつ／又は１０～１００のアミノ酸長を有する、項目１～１５のいずれか１つに記載の組成物。
１７．ペプチドが、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチド、又はその変異体であって、（ａ）ステロイド酸にコンジュゲート化された場合、対応する非コンジュゲート化ステロイド酸の抗原提示活性と比較して、ステロイド酸に改善された抗原提示活性を付与するか、（ｂ）核局在化及び／又はエンドソーム分解活性を有するか、（ｃ）１、２、３、４、若しくは５個以下のアミノ酸の置換又は欠失で、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのペプチドとは異なるか、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、又はその変異体を含むか、又はそれからなる、項目１～１６のいずれか１つに記載の組成物。
１８．エンハンサーが、ステロイド酸－ペプチドコンジュゲートを含み、ステロイド酸が、ペプチドであって、（ａ）１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、若しくは１０：１、又は１：１～１０：１のステロイド酸：ペプチドのモル比で、（ｂ）ペプチドの遊離アミノ基及び／若しくは遊離チオール基（例えば、リシン又はシステインの）にある、（ｃ）ペプチドのＮ末端にあるか、若しくはそれに向かう（例えば、Ｎ端残基の遊離アミノ基にある、及び／又はＮ端システイン残基のチオール基にある）、又は（ｄ）（ａ）～（ｃ）の任意の組み合わせである、ペプチド、にコンジュゲート化されている、項目１～１７のいずれか１つに記載の組成物。
１９．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、少なくとも０．０１：１、０．０５：１、０．１：１、０．２：１、０．５：１、１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１であり、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、５０：１、１００：１、２５０：１、５００：１、１０００：１以下であり、かつ／又は１：１～１０００：１、１：１～５００：１、１：１～２５０：１、１：１～２００：１である、項目１～１８のいずれか１つに記載の組成物。
２０．抗原が、１つ以上のＭＨＣクラスＩエピトープ及び／又はＭＨＣクラスＩＩエピトープを含むポリペプチド抗原である、項目１～１９のいずれか１つに記載の組成物。
２１．ポリペプチド抗原が、（ａ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、ネオアンチゲン、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、ワクチン接種及び／若しくは免疫療法による治療に適した疾若しくは障害に関連する抗原、又はそれらの任意の抗原性断片、あるいは（ｂ）コロナウイルス抗原（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質、又はその抗原性断片、又は単一塩基変異体抗原、変異フレームシフト抗原、スプライス変異体抗原、遺伝子融合抗原、内因性レトロエレメント抗原などのがん抗原、又はヒト白血球抗原（ＨＬＡ）－体細胞変異由来抗原あるいは翻訳後ＴＳＡ、ウイルス由来のがん抗原（例えばヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、サイトメガロウイルス、又はエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ））、がん－精巣抗原、ＨＥＲ２、ＰＳＡ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＥｐＣＡＭ、ＧＰＣ３、ＣＥＡ、ＭＵＣ１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＳＳＸ－２、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＥＧＦＲ、細胞ライセート又は腫瘍由来の他の物質（例えば、腫瘍由来のエクソソーム）などの別のクラスの抗原であるか、又はそれらを含む、項目２０に記載の組成物。
２２．エンハンサーが、（ｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原のサイトゾル送達の増加、（ｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原の総細胞送達の増加、（ｉｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強、（ｉｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加、（ｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する体液性免疫の増強、（ｖｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する抗体種の多様性の増大、又は（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組み合わせを可能にする、項目１～２１のいずれか１つに記載の組成物。
２３．薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントを更に含む、項目１～２２のいずれか１つに記載の組成物。
２４．細胞集団及び項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物を含む、細胞培養物。
２５．細胞が、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）、抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、遺伝子操作された抗原提示細胞）、ＭＨＣクラスＩ発現細胞、ＭＨＣクラスＩＩ発現細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項目２４に記載の細胞培養物。
２６．項目１～２２のいずれか１つに記載の組成物を含むか、又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を含む、ワクチン。
２７．治療用又は予防用ワクチン（例えば、抗がんワクチン、抗ウイルスワクチン、又は抗細菌ワクチン）である、項目２６に記載のワクチン。
２８．対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発するための方法であって、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物、又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含む、方法。
２９．感染症に対して対象にワクチン接種するための方法であって、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含み、抗原が、感染症を引き起こす病原体（例えば、ウイルス、細菌、真菌）の抗原性断片を含む、方法。
３０．対象におけるがんを治療するための方法であって、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物を使用して産生された細胞を対象に投与することを含み、抗原が、がんを引き起こす細胞において過剰発現されるか、又は異常に発現される、方法。
３１．抗原と混和して、使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲート。
３２．ステロイド酸－コンジュゲート及び／又は抗原が、項目１～２２のいずれか１つに記載されるものである、項目３１に記載の使用するためのステロイド酸－ペプチドコンジュゲート。
３３．対象において免疫応答を生成するための、又は対象において免疫応答を生成するための医薬（例えば、ワクチン）の製造のための、項目１～２３のいずれか１つに記載の組成物又は項目２４若しくは２５に記載の細胞培養物の使用。
３４．免疫応答が、エンハンサーを欠く対応する組成物又は細胞培養物から生成されるものと比較して、上記抗原に対する細胞性免疫の増強、上記抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増大、上記に対する体液性免疫の増強、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項目３３に記載の使用。
３５．ポリペプチド抗原の免疫原性を改善する方法であって、方法が、ポリペプチド抗原を抗原提示のエンハンサーと混和することを含み、エンハンサーが、エンハンサーを欠く対応する組成物の投与と比較して、抗原提示細胞又は対象への投与時にポリペプチド抗原の提示を改善するのに十分な量の胆汁酸－ペプチドコンジュゲートを含み、胆汁酸－ペプチドコンジュゲートに含まれるペプチドが、核局在化シグナル（ＮＬＳ）を含む、方法。
３６．胆汁酸が、コール酸（ＣＡ）、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、グリココール酸（ＧＣＡ）、タウロコール酸（ＴＣＡ）、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、タウロデオキシコール酸（ＴＤＣＡ）、グリコリトコール酸（ＧＬＣＡ）、タウロリトコール酸（ＴＬＣＡ）、タウロヒオデオキシコール酸（ＴＨＤＣＡ）、タウロケノデオキシコール酸（ＴＣＤＣＡ）、ウルソコール酸（ＵＣＡ）、タウロウルソデオキシコール酸（ＴＵＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はグリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ）である、項目３５に記載の方法。
３７．胆汁酸が、ＣＡ、ＣＤＣＡ、ＤＣＡ、ＬＣＡ、ＧＣＡ、ＴＣＡ、ＧＤＣＡ、ＧＣＤＣＡ、ＴＤＣＡ、ＧＬＣＡ、ＴＬＣＡ、ＴＨＤＣＡ、ＴＣＤＣＡ、ＵＣＡ、ＴＵＤＣＡ、ＵＤＣＡ、又はＧＵＤＣＡの類似体であり、類似体が、エンドサイトーシスを誘導する、エンドソームの内側リーフレット上へのセラミド蓄積を誘発する、又はセラミドを形成する酸性スフィンゴミエリナーゼ（ＡＳＭ）に媒介されるスフィンゴミエリンの切断の増加を引き起こす、項目３５又は３６に記載の方法。
３８．ステロイド酸が、グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はリトコール酸（ＬＣＡ）であるか、又はそれらを含む、項目３５又は３６に記載の方法。
３９．ＮＬＳが、ＳＶ４０ ＮＬＳ（配列番号１又は２）、ＧＷＧ－ＳＶ４０ＮＬＳ（配列番号３）、ｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ（配列番号４）、ｈｎＲＮＰ Ｄ ＮＬＳ（配列番号５）、ｈｎＲＮＰ Ｍ ＮＬＳ（配列番号１０）、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ（配列番号６）、ＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＰＳ１７（配列番号１１）、ＮＬＳ１ ＲＰＳ１７（配列番号１５）、ＮＬＳ２ ＲＰＳ１７（配列番号７）、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７（配列番号８）、ｃＭｙｃ ＮＬＳ（配列番号１２）、ＨｕＲ ＮＬＳ（配列番号１３）、Ｔｕｓ ＮＬＳ（配列番号１４）又はヌクレオプラスミンＮＬＳ（配列番号１６）である、項目３５～３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．ＮＬＳが、核局在化活性を有するＮＬＳの変異体であり、ＮＬＳが、配列番号１～８若しくは１０～１６のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる、項目３５～３８のいずれか１つに記載の方法。
４１．ペプチドが、非免疫原性ペプチドである、項目３５～４０のいずれか１つに記載の方法。
４２．ペプチドが、１０～１００のアミノ酸長を有する、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４３．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、１：１～１０００：１である、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４４．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、１：１～５００：１である、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４５．組成物中のエンハンサーの抗原に対するモル比が、１：１～２５０：１である、項目３５～４１のいずれか１つに記載の方法。
４６．抗原が、１つ以上のＭＨＣクラスＩエピトープ及び／又はＭＨＣクラスＩＩエピトープを含むポリペプチド抗原である、項目３５～４５のいずれか１つに記載の方法。
４７．ポリペプチド抗原が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）、腫瘍由来の細胞ライセート、腫瘍由来のエクソソーム、ネオアンチゲン、ウイルス抗原、細菌抗原、真菌抗原、又はワクチン接種及び／若しくは免疫療法による治療に適した疾患又は障害に関連する他の抗原であるか、又はそれを含む、項目３５～４６のいずれか１つに記載の方法。
４８．ポリペプチド抗原が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイクタンパク質若しくはその抗原性断片であるか、又はそれを含む、項目３５～４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．エンハンサーが、（ｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原のサイトゾル送達の増加、（ｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原の総細胞送達の増加、（ｉｉｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する細胞性免疫の増強、（ｉｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原への曝露時のＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮ－γ産生の増加、（ｖ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する体液性免疫の増強、（ｖｉ）エンハンサーを欠く対応する組成物と比較して、抗原に対する抗体種の多様性の増大、又は（ｖｉｉ）（ｉ）～（ｖｉ）の任意の組み合わせを可能にする、項目３５～４８のいずれか１つに記載の方法。
５０．免疫原性組成物であって、項目３５に記載のポリペプチド抗原及び抗原提示エンハンサー、又は項目１に記載のポリペプチド抗原及び抗原提示エンハンサーを含む細胞集団、並びに薬学的に許容される賦形剤及び／又はアジュバントを含む、免疫原性組成物。
５１．細胞集団が、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、マクロファージ、遺伝子操作された抗原提示細胞、ＭＨＣクラスＩ発現細胞、ＭＨＣクラスＩＩ発現細胞、又はそれらの任意の組み合わせを含む、項目５０に記載の免疫原性組成物。
５２．対象における目的の抗原に対する増強された適応免疫応答を誘発するための方法であって、項目５０又は５１に記載の免疫原性組成物を対象に投与することを含む、方法。
【実施例】
【0046】
実施例１：一般的な材料及び方法
胆汁酸－ＮＬＳ部分の生成
胆汁酸－ＮＬＳ部分を、以前にＢｅａｕｄｏｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６に記載されたコール酸－ＮＬＳ（ＣｈＡｃＮＬＳ）の合成と同様に合成した。例えば、ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳでは、コール酸を、リンカーアミノ酸に隣接するＳＶ４０ラージＴ抗原（配列番号２）由来の核局在化シグナルを含む１３ｍｅｒペプチド（ＣＧＹＧＰＫＫＫＲＫＶＧＧ；配列番号１）のＮ端システイン残基の遊離アミノ基とコンジュゲート化した。
胆汁酸－ＮＬＳ部分の生成
胆汁酸－ＮＬＳ部分を、以前にＢｅａｕｄｏｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６に記載されたコール酸－ＮＬＳ（ＣｈＡｃＮＬＳ）の合成と同様に合成した。例えば、ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳでは、コール酸を、リンカーアミノ酸に隣接するＳＶ４０ラージＴ抗原（配列番号２）由来の核局在化シグナルを含む１３ｍｅｒペプチド（ＣＧＹＧＰＫＫＫＲＫＶＧＧ；配列番号１）のＮ端システイン残基の遊離アミノ基とコンジュゲート化した。
【0047】
骨髄由来樹状細胞の生成
マウス骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を、１０％ウシ胎児血清（fetal bovine serum、ＦＢＳ）、５０Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン、２ｍＭのＬ－グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、０．５ｍＭのベータ－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ（商標）１６４０を使用して、マウス大腿骨から全骨髄を洗い流すことによって生成した。赤血球を溶解させた後、細胞を５０ｎｇ／ｍＬのマウス組換えＧＭ－ＣＳＦを補充した培地中で培養した。培地を２、４、６及び８日目に交換した。９日目に、培地を、組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ及び大腸菌Ｏ１１１由来のＬＰＳ（１ｎｇ／ｍＬ）を含むように置き換えて、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を刺激した。成熟したＤＣを、それらの表面のＣＤ３、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＩ－Ａｂの発現についてフローサイトメトリーで評価した。
マウス骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を、１０％ウシ胎児血清（fetal bovine serum、ＦＢＳ）、５０Ｕ／ｍＬのペニシリン－ストレプトマイシン、２ｍＭのＬ－グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１％ＭＥＭ非必須アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、０．５ｍＭのベータ－メルカプトエタノールを補充したＲＰＭＩ（商標）１６４０を使用して、マウス大腿骨から全骨髄を洗い流すことによって生成した。赤血球を溶解させた後、細胞を５０ｎｇ／ｍＬのマウス組換えＧＭ－ＣＳＦを補充した培地中で培養した。培地を２、４、６及び８日目に交換した。９日目に、培地を、組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ及び大腸菌Ｏ１１１由来のＬＰＳ（１ｎｇ／ｍＬ）を含むように置き換えて、樹状細胞（ＤＣ）の成熟を刺激した。成熟したＤＣを、それらの表面のＣＤ３、ＣＤ１９、ＮＫ１．１、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＩ－Ａｂの発現についてフローサイトメトリーで評価した。
【0048】
抗原交差提示アッセイ
抗原交差提示を評価するために、細胞を２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）にウェル当たり２５×１０３個の細胞で播種し、次いで、種々の濃度の抗原又は抗原含有混和物を３時間パルスした。パルス時間の終わりに、細胞を洗浄して過剰な抗原を除去し、製造業者のプロトコルに従ってＴ細胞単離キットを使用して、ＯＴ－Ｉマウスの脾臓から精製した１０６個／ｍＬのＣＤ８ Ｔ細胞と共培養した。７２時間後、上清を回収して、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってサイトカインの産生を定量するために使用した。
抗原交差提示を評価するために、細胞を２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ）にウェル当たり２５×１０３個の細胞で播種し、次いで、種々の濃度の抗原又は抗原含有混和物を３時間パルスした。パルス時間の終わりに、細胞を洗浄して過剰な抗原を除去し、製造業者のプロトコルに従ってＴ細胞単離キットを使用して、ＯＴ－Ｉマウスの脾臓から精製した１０６個／ｍＬのＣＤ８ Ｔ細胞と共培養した。７２時間後、上清を回収して、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）によってサイトカインの産生を定量するために使用した。
【0049】
Ｂ３Ｚレポーター系を用いた抗原提示アッセイ
様々な胆汁酸－ＮＬＳ結合体を、Ｂ３Ｚレポーター系を用いてスクリーニングした。Ｂ３Ｚ細胞株は、Ｈ２－Ｋｂ－ＳＩＩＮＦＥＫＬ複合体に特異的なＴ細胞ハイブリドーマである。そのＴＣＲを介して活性化されると、ＬａｃＺレポーター遺伝子（ＮＦＡＴプロモーターの制御下）が発現される。簡潔には、１．５×１０５個のＢＭＤＣ又は２．５×１０５個のＭＳＣを、オボアルブミン（ＯＶＡ）及び胆汁酸－ＮＬＳコンジュゲートの混合条件で処理した５×１０４個のＢ３Ｚ細胞と、３７℃、５％ ＣＯ２で一晩共培養した。翌日、全ての細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で２回洗浄し、細胞ペレットを、０．１５ｍＭのクロロフェノールレッド－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（ＣＰＲＧ）基質（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、０．１２５％ＮＰ４０（ＥＭＤ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、９ｍＭのＭｇＣｌ２（Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）、及び１００ｍＭの２－メルカプトエタノールをＰＢＳ中に含有する１００μＬの溶解バッファーを加えることによって溶解させた。３７℃で５時間又は２４時間インキュベートした後、６３６ｎｍを参照波長として５７０ｎｍで吸光度を測定した。これらの実験のために、ＯＶＡを５～１０ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（ｐＨ７．３）に再懸濁した。種々の胆汁酸－ＮＬＳコンジュゲートを、１０ｍｇ／ｍＬでＨ２Ｏに再懸濁した。胆汁酸－ＮＬＳコンジュゲート：抗原混和物を、表２に従って種々のモル比で調製した。
様々な胆汁酸－ＮＬＳ結合体を、Ｂ３Ｚレポーター系を用いてスクリーニングした。Ｂ３Ｚ細胞株は、Ｈ２－Ｋｂ－ＳＩＩＮＦＥＫＬ複合体に特異的なＴ細胞ハイブリドーマである。そのＴＣＲを介して活性化されると、ＬａｃＺレポーター遺伝子（ＮＦＡＴプロモーターの制御下）が発現される。簡潔には、１．５×１０５個のＢＭＤＣ又は２．５×１０５個のＭＳＣを、オボアルブミン（ＯＶＡ）及び胆汁酸－ＮＬＳコンジュゲートの混合条件で処理した５×１０４個のＢ３Ｚ細胞と、３７℃、５％ ＣＯ２で一晩共培養した。翌日、全ての細胞をＰＢＳ（ｐＨ７．４）で２回洗浄し、細胞ペレットを、０．１５ｍＭのクロロフェノールレッド－β－Ｄ－ガラクトピラノシド（ＣＰＲＧ）基質（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、０．１２５％ＮＰ４０（ＥＭＤ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）、９ｍＭのＭｇＣｌ２（Ａｌｄｒｉｃｈ，ＵＳＡ）、及び１００ｍＭの２－メルカプトエタノールをＰＢＳ中に含有する１００μＬの溶解バッファーを加えることによって溶解させた。３７℃で５時間又は２４時間インキュベートした後、６３６ｎｍを参照波長として５７０ｎｍで吸光度を測定した。これらの実験のために、ＯＶＡを５～１０ｍｇ／ｍＬでＰＢＳ（ｐＨ７．３）に再懸濁した。種々の胆汁酸－ＮＬＳコンジュゲートを、１０ｍｇ／ｍＬでＨ２Ｏに再懸濁した。胆汁酸－ＮＬＳコンジュゲート：抗原混和物を、表２に従って種々のモル比で調製した。
【0050】
【表2】
【0051】
実施例２：コール酸及びコール酸－ＳＶ４０ＮＬＳがＯＶＡ抗原の交差提示／免疫原性を増強する
交差提示アッセイを実行して、抗原との非共有結合混和物における抗原の交差提示及び／又は免疫原性を改善し得る薬剤についてスクリーニングした。マウスＢＭＤＣを、抗原単独、又は種々の比で候補免疫原エンハンサーと混合した抗原のいずれかでプレパルスした。次いで、パルスしたＢＭＤＣをＯＴ－Ｉマウスの脾臓由来のＣＤ８ Ｔ細胞と共培養し、ＣＤ８ Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γの量を交差提示活性の尺度として定量した。予備スクリーニングにより、コール酸及びコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートを潜在的な免疫原エンハンサーとして同定した。図１は、ＢＭＤＣを、抗原オボアルブミン単独（「ＯＶＡ単独」）、コール酸単独（「ＣＡ単独」）、コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート単独（「ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ単独」）、又はコール酸：抗原混和物（「ＣＡ：ＯＶＡ」）若しくはコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート：抗原混和物（「ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ：ＯＶＡ」）の種々の比でプレパルスした交差提示アッセイの結果を示す。興味深いことに、試験したコール酸：抗原混和物（ＣＡ：ＯＶＡ）の最も高い比でプレパルスしたＢＭＤＣは、ＯＶＡ抗原単独でプレパルスしたＢＭＤＣと比較して、産生されたＩＦＮ－γの量の最大３倍の増加をもたらした。際立って、試験したコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート：抗原混和物（ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ：ＯＶＡ）の最も高い比でプレパルスしたＢＭＤＣは、ＯＶＡ抗原単独でプレパルスしたＢＭＤＣと比較して、産生されたＩＦＮ－γの量の６～７倍の増加をもたらした。
交差提示アッセイを実行して、抗原との非共有結合混和物における抗原の交差提示及び／又は免疫原性を改善し得る薬剤についてスクリーニングした。マウスＢＭＤＣを、抗原単独、又は種々の比で候補免疫原エンハンサーと混合した抗原のいずれかでプレパルスした。次いで、パルスしたＢＭＤＣをＯＴ－Ｉマウスの脾臓由来のＣＤ８ Ｔ細胞と共培養し、ＣＤ８ Ｔ細胞によって産生されたＩＦＮ－γの量を交差提示活性の尺度として定量した。予備スクリーニングにより、コール酸及びコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲートを潜在的な免疫原エンハンサーとして同定した。図１は、ＢＭＤＣを、抗原オボアルブミン単独（「ＯＶＡ単独」）、コール酸単独（「ＣＡ単独」）、コール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート単独（「ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ単独」）、又はコール酸：抗原混和物（「ＣＡ：ＯＶＡ」）若しくはコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート：抗原混和物（「ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ：ＯＶＡ」）の種々の比でプレパルスした交差提示アッセイの結果を示す。興味深いことに、試験したコール酸：抗原混和物（ＣＡ：ＯＶＡ）の最も高い比でプレパルスしたＢＭＤＣは、ＯＶＡ抗原単独でプレパルスしたＢＭＤＣと比較して、産生されたＩＦＮ－γの量の最大３倍の増加をもたらした。際立って、試験したコール酸－ＮＬＳペプチドコンジュゲート：抗原混和物（ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳ：ＯＶＡ）の最も高い比でプレパルスしたＢＭＤＣは、ＯＶＡ抗原単独でプレパルスしたＢＭＤＣと比較して、産生されたＩＦＮ－γの量の６～７倍の増加をもたらした。
【0052】
実施例３：種々の胆汁酸とコンジュゲート化したＳＶ４０ＮＬＳの存在下での抗原提示の増強
ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳの変異体を、このコンジュゲートについて観察された抗原交差提示増強活性に関する構造－活性関係を調査するために合成した。より具体的には、ＳＶ４０ＮＬＳペプチド（配列番号１）にコンジュゲート化した種々の胆汁酸を有するコンジュゲートを合成し、抗原提示に対するそれらの効果を、実施例１に記載されるように、ＯＶＡ抗原とともにＢ３Ｚレポーター系を使用することによって評価した。図２の結果は、ＯＶＡをＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳコンジュゲートと混合した場合、ＯＶＡ抗原単独（「ＯＶＡ単独」；破線）と比較して、抗原交差提示の増大を観察したことを示す。これらの結果は、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８ Ｔ細胞ベースのアッセイを使用して観察されたものと一致した（図１）。興味深いことに、コール酸を胆汁酸：グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はリトコール酸（ＬＣＡ）で置き換えた場合、ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳに匹敵するか、又はより高い抗原交差提示が観察された。図２では、ＯＶＡを非コンジュゲート化コール酸（「ＣＡ」）又はＳＶ４０ＮＬＳペプチド（「ＳＶ４０ＮＬＳ」）のいずれかと混合した場合、抗原単独（「ＯＶＡ」）よりも優れた抗原交差提示の増加は観察されなかったが、図１で使用したＯＴ－Ｉ ＣＤ８ Ｔ細胞ベースのアッセイと比較して、Ｂ３Ｚレポーター系の低い感度が要因であった可能性がある。興味深いことに、同じＢ３Ｚレポーター系を使用したその後のアッセイでは、ＯＶＡを非コンジュゲート化グリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ；２２：１）と混合した場合、ＯＶＡ単独（データで示さず）よりも優れた最大約３０％のＢ３Ｚ応答（ＯＤ５７０）の増加が明らかになった。更に、ＧＵＤＣＡの免疫原エンハンサー活性は、試験した全てのＧＵＤＣＡ：ＯＶＡモル比（すなわち、２：１、４：１、８：１、１２：１、及び２２：１）で観察された。
ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳの変異体を、このコンジュゲートについて観察された抗原交差提示増強活性に関する構造－活性関係を調査するために合成した。より具体的には、ＳＶ４０ＮＬＳペプチド（配列番号１）にコンジュゲート化した種々の胆汁酸を有するコンジュゲートを合成し、抗原提示に対するそれらの効果を、実施例１に記載されるように、ＯＶＡ抗原とともにＢ３Ｚレポーター系を使用することによって評価した。図２の結果は、ＯＶＡをＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳコンジュゲートと混合した場合、ＯＶＡ抗原単独（「ＯＶＡ単独」；破線）と比較して、抗原交差提示の増大を観察したことを示す。これらの結果は、ＯＴ－Ｉ ＣＤ８ Ｔ細胞ベースのアッセイを使用して観察されたものと一致した（図１）。興味深いことに、コール酸を胆汁酸：グリコデオキシコール酸（ＧＤＣＡ）、グリコケノデオキシコール酸（ＧＣＤＣＡ）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、又はリトコール酸（ＬＣＡ）で置き換えた場合、ＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳに匹敵するか、又はより高い抗原交差提示が観察された。図２では、ＯＶＡを非コンジュゲート化コール酸（「ＣＡ」）又はＳＶ４０ＮＬＳペプチド（「ＳＶ４０ＮＬＳ」）のいずれかと混合した場合、抗原単独（「ＯＶＡ」）よりも優れた抗原交差提示の増加は観察されなかったが、図１で使用したＯＴ－Ｉ ＣＤ８ Ｔ細胞ベースのアッセイと比較して、Ｂ３Ｚレポーター系の低い感度が要因であった可能性がある。興味深いことに、同じＢ３Ｚレポーター系を使用したその後のアッセイでは、ＯＶＡを非コンジュゲート化グリコウルソデオキシコール酸（ＧＵＤＣＡ；２２：１）と混合した場合、ＯＶＡ単独（データで示さず）よりも優れた最大約３０％のＢ３Ｚ応答（ＯＤ５７０）の増加が明らかになった。更に、ＧＵＤＣＡの免疫原エンハンサー活性は、試験した全てのＧＵＤＣＡ：ＯＶＡモル比（すなわち、２：１、４：１、８：１、１２：１、及び２２：１）で観察された。
【0053】
実施例４：種々の胆汁酸とコンジュゲート化したＳＶ４０ＮＬＳの存在下での抗原提示の増強
ＳＶ４０ＮＬＳペプチドが他のＮＬＳのペプチドを含むペプチドで置き換えられたたＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳの更なる変異体を合成し（表３）、ＣＡ－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原提示活性を、実施例１に記載されるようにＢ３Ｚレポーター系を使用して評価した。以下のコンジュゲート：抗原のモル比を各コンジュゲートについて試験した：２：１、４：１、８：１、１２：１及び２２：１。図３～６の結果は、種々のコンジュゲートの抗原提示活性をそのコンジュゲートについて最も高いＢ３Ｚ応答（ＯＤ５７０）をもたらしたコンジュゲート：抗原の比で比較する。
ＳＶ４０ＮＬＳペプチドが他のＮＬＳのペプチドを含むペプチドで置き換えられたたＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳの更なる変異体を合成し（表３）、ＣＡ－ＮＬＳペプチドコンジュゲートの抗原提示活性を、実施例１に記載されるようにＢ３Ｚレポーター系を使用して評価した。以下のコンジュゲート：抗原のモル比を各コンジュゲートについて試験した：２：１、４：１、８：１、１２：１及び２２：１。図３～６の結果は、種々のコンジュゲートの抗原提示活性をそのコンジュゲートについて最も高いＢ３Ｚ応答（ＯＤ５７０）をもたらしたコンジュゲート：抗原の比で比較する。
【0054】
【表3】
【0055】
図３～６の結果は、一般に、抗原提示の増加が、種々のタイプの核局在化シグナルを含み、かつ種々のアミノ酸配列を有するペプチドにコンジュゲート化されたコール酸の存在下で、抗原提示細胞を抗原に曝露することによって達成することができることを示す。
【0056】
ＢＭＤＣを抗原提示細胞として使用して、グルタメートが豊富なペプチドＰＱＢＰ－１ ＮＬＳを、際立って高い抗原提示活性と関連付けた（図３及び５）。更に、ＮＬＳ２－ＲＧドメインＲＰＳ１７、ＮＬＳ３－ＲＰＳ１７、ｃＭｙｃ ＮＬＳ、及びＨｕＲ ＮＬＳペプチドもまた、高い抗原提示活性と関連付けた。興味深いことに、ペプチドＧＷＧ－ＳＶ４０ＮＬＳを、ＳＶ４０ＮＬＳよりも高い抗原提示活性と関連付け、これは、隣接する芳香族アミノ酸（ＷＷ又はＧＷＷＧ）の添加が活性に有益であることを示唆している（図３～５を参照されたい）。同様の結果を、抗原提示細胞としてＤＣ細胞株（ＤＣ２．４）を使用して観察した。
【0057】
抗原提示細胞としてＭＳＣの交差提示細胞株を使用して、様々なコール酸ペプチドコンジュゲートがＯＶＡの抗原提示を増強した（図６）。ＢＭＤＣと同様に、ＰＱＢＰ－１ ＮＬＳ、ＨｕＲ ＮＬＳ、及びＧＷＧ－ＳＶ４０ＮＬＳを、ＯＶＡ単独又はＣＡ－ＳＶ４０ＮＬＳと混合したＯＶＡと比較して、際立って高い抗原提示活性と関連付けた。
【0058】
抗原提示に対する胆汁酸ペプチドコンジュゲートの効果を更に詳細に調べるために、抗原内在化及びプロセシングを評価した。ＭＳＣ細胞株を、様々なモル比の種々の胆汁酸ペプチドコンジュゲート、ＮＬＳ１－ＲＰＳ１７［図７Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図７Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図７Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図７Ｄ］）の存在下で、ＡＦ６４７でＯＶＡ標識してパルスし、蛍光をフローサイトメトリーによって評価した。胆汁酸コンジュゲートでは、一般に比率の増加とともに、ＯＶＡ内在化を増強することが示された。ＯＶＡプロセシングを、図７Ａ～７Ｄと同じ胆汁酸ペプチドコンジュゲートの存在下で、ＭＳＣ細胞株をＤＱ（商標）－オボアルブミン（ＯＶＡ－ＤＱ）でパルスすることによって評価した。胆汁酸コンジュゲートＮＬＳ１－ＲＰＳ１７［図８Ａ］、ＮＬＳ３ ＲＰＳ１７［図８Ｂ］、ＰＱＢＰ－１［図８Ｃ］、及びｈｎＲＮＰＡ１ Ｍ９ ＮＬＳ［図８Ｄ］）では、一般に比率の増加とともに、ＯＶＡプロセシングを増強することが示された。
【0059】
要するに、これらのデータは、抗原提示の増強における胆汁酸ペプチドコンジュゲートの多用途性及び能力を実証する。
【0060】
参考文献
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【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図7C】
【図7D】
【図8A】
【図8B】
【図8C】
【図8D】
【配列表】
【国際調査報告】