特表 2024-517759 ヒト化キメラウシ抗体および使用方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-23

(54)【発明の名称】ヒト化キメラウシ抗体および使用方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/62 20060101AFI20240416BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240416BHJP

   C07K 16/00 20060101ALI20240416BHJP

   C07K 14/52 20060101ALI20240416BHJP

   C07K 14/54 20060101ALI20240416BHJP

   C07K 14/715 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 15/13 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 15/19 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240416BHJP

   C12P 21/02 20060101ALI20240416BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 5/078 20100101ALI20240416BHJP

   C12N 5/0783 20100101ALI20240416BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240416BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240416BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 15/12 20060101ALN20240416BHJP

【ＦＩ】

C12N15/62 Z

C07K19/00 ZNA

C07K16/00

C07K14/52

C07K14/54

C07K14/715

C12N15/13

C12N15/19

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/02 C

C12P21/08

C12N5/078

C12N5/0783

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K35/17

A61K45/00

A61P35/00

C12N15/12

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023566749

(86)(22)【出願日】2022-04-27

(85)【翻訳文提出日】2023-12-22

(86)【国際出願番号】 US2022026602

(87)【国際公開番号】W WO2022232321

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】63/181,223

(32)【優先日】2021-04-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

２．ＴＲＩＴＯＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523407182

【氏名又は名称】ミノトール セラピューティクス インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100102978

【弁理士】

【氏名又は名称】清水 初志

(74)【代理人】

【識別番号】100205707

【弁理士】

【氏名又は名称】小寺 秀紀

(74)【代理人】

【識別番号】100160923

【弁理士】

【氏名又は名称】山口 裕孝

(74)【代理人】

【識別番号】100119507

【弁理士】

【氏名又は名称】刑部 俊

(74)【代理人】

【識別番号】100142929

【弁理士】

【氏名又は名称】井上 隆一

(74)【代理人】

【識別番号】100148699

【弁理士】

【氏名又は名称】佐藤 利光

(74)【代理人】

【識別番号】100188433

【弁理士】

【氏名又は名称】梅村 幸輔

(74)【代理人】

【識別番号】100128048

【弁理士】

【氏名又は名称】新見 浩一

(74)【代理人】

【識別番号】100129506

【弁理士】

【氏名又は名称】小林 智彦

(74)【代理人】

【識別番号】100114340

【弁理士】

【氏名又は名称】大関 雅人

(74)【代理人】

【識別番号】100214396

【弁理士】

【氏名又は名称】塩田 真紀

(74)【代理人】

【識別番号】100121072

【弁理士】

【氏名又は名称】川本 和弥

(74)【代理人】

【識別番号】100221741

【弁理士】

【氏名又は名称】酒井 直子

(74)【代理人】

【識別番号】100114926

【弁理士】

【氏名又は名称】枝松 義恵

(72)【発明者】

【氏名】フアン ルイキ

(72)【発明者】

【氏名】スミデル ボーン

(72)【発明者】

【氏名】マクレガー ダンカン

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C084

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG03

4B064AG27

4B064CA10

4B064CA19

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA25

4B065CA44

4C084AA19

4C084NA05

4C084ZB26

4C085AA14

4C085AA16

4C085BB11

4C085BB36

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C087BB37

4C087BB64

4C087CA04

4C087MA02

4C087NA05

4C087ZB26

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045BA41

4H045CA40

4H045DA02

4H045DA50

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

重鎖のCDR3の一部が異種配列、例えばインターロイキン（IL）-15またはIL-2の配列によって置き換えられている、例えばウシ（bovine）抗体配列またはそのヒト化配列に基づく、超長CDR3を含有するキメラ抗体、および関連する抗体が提供される。本開示の分子には、IL15Rα sushiドメインなどのIL15Rαの細胞外部分とさらに連結または複合体化されているキメラIL-15改変抗体分子がある。本開示はまた、キメラ抗体を作製および使用する方法も提供する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（a）ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の改変可変重（VH）領域であって、前記改変VH領域が、改変超長CDR3を含み、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3の少なくとも一部が、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分によって置き換えられている、改変可変重（VH）領域と、
（b）野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域と
を含む重鎖を含む、キメラ改変抗体。

【請求項2】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の前記超長CDR3領域のノブ領域と置き換わっている、請求項1記載のキメラ改変抗体。

【請求項3】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、前記改変超長CDR3の上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にあり、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドが、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の前記超長CDR3の上行性ストークストランドと比較して変異体である、請求項1または請求項2記載のキメラ改変抗体。

【請求項4】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドおよび/または前記下行性ストークストランドに、柔軟なリンカー、任意でGGSまたはGSGリンカーを介して連結されている、請求項3記載のキメラ改変抗体。

【請求項5】

前記上行性ストークストランドが、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含み、X₂およびX₅が、任意のアミノ酸である、請求項3または請求項4記載のキメラ改変抗体。

【請求項6】

ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の改変可変重（VH）領域を含む重鎖を含む、キメラ改変抗体であって、
前記改変VH領域が、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3領域の少なくとも一部が異種配列によって置き換えられている改変超長CDR3を含み、前記異種配列が、前記改変超長CDR3の上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にあり、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドが、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含み、X₂およびX₅が任意のアミノ酸である、
キメラ改変抗体。

【請求項7】

X₂が、Ser、Thr、Gly、Asn、Ala、またはProであり、かつX₅が、His、Gln、Arg、Lys、Gly、Thr、Tyr、Phe、Trp、Met、Ile、Val、またはLeuである、請求項5または請求項6記載のキメラ改変抗体。

【請求項8】

X₂が、Ser、Ala、またはThrであり、かつX₅が、HisまたはTyrである、請求項5～7のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項9】

前記改変超長CDR3の上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される配列を含む、請求項3～8のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項10】

前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドの配列が、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される、請求項3～9のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項11】

前記異種配列が、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の前記超長CDR3領域のノブ領域と置き換わっている、請求項6～10のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項12】

前記異種配列が、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドおよび/または前記下行性ストークストランドに、柔軟なリンカー、任意でGGSまたはGSGリンカーを介して連結されている、請求項6～11のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項13】

前記異種配列が、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む、請求項6～12のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項14】

前記重鎖が、ヒトIgG重鎖定常領域をさらに含む、請求項6～13のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項15】

前記ヒトIgG重鎖定常領域が、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域である、請求項14記載のキメラ改変抗体。

【請求項16】

前記ヒトIgGがヒトIgG1である、請求項1～5、7～10、14、および15のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項17】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、FcR結合を低減するように改変されている、請求項1～5、7～10、15、および16のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項18】

前記低下したエフェクター活性が、低減された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）を含む、請求項1～5、7～10、および15～17のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項19】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Asn297（N297）、Ser298（S298）、Asn325（N325）、Ala327（A327）、およびPro329（P329）のうち1つまたは複数において変更されている、請求項1～5、7～10、および15～18のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項20】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、Leu234Ala（L234A）、Leu235Ala（L235A）、Leu235Glu（L235E）、Asp265Asn（D265N）、Asp265Ala（D265A）、Asp270Asn（D270N）、Ser298Asn（S298N）、Asn325Glu（N325E）、Ala327Ser（A327S）、Pro329Ala（P329A）、およびPro239Gly（P329G）より選択される1つまたは複数の変異を含む、請求項1～5、7～10、および15～19のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項21】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Asn297（N297）、Ser298（S298）、Asn325（N325）、Ala327（A327）、およびPro329（P329）のうち2つ以上において変更されている、請求項1～5、7～10、および15～20のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項22】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異;Leu234ValおよびLeu235Ala（L234V/L235A）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびAsn297Ala（L234A/L235A/N297A）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびPro239Ala（L234A/L235A/P329A）変異;Asp265AlaおよびPro329Ala（D265A/P329A）変異;Asp265AlaおよびPro329Gly（D265A/P329G）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびAsp265Ala（L234A/L235A/D265A）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびPro329Gly（L234A/L235A/P329G）変異;またはLeu234Ala、Leu235Ala、Asp265Ala、およびPro329Gly（L234A/L235A/D265A/P329G）変異を含む、請求項1～5、7～10、および15～21のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項23】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異を含む、請求項1～5、7～10、および15～22のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項24】

前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、SEQ ID NO:187またはSEQ ID NO:188に示される配列を含む、請求項1～5、7～10、および15～23のキメラ改変抗体。

【請求項25】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、インターロイキン-15（IL-15）サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む、請求項1～5、7～10、および13～24のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項26】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、または少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項1～5、7～10、および13～25のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項27】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示される配列を含む、請求項1～5、7～10、および13～26のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項28】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、インターロイキン-12（IL-2）サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む、請求項1～5、7～10、および13～24のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項29】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:165に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、または少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、請求項1～5、7～10、13～24、および28のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項30】

前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:165に示されるアミノ酸の配列を含む、請求項1～5、7～10、13～24、28、および29のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項31】

前記ウシ（bovine）抗体または抗原結合断片が、ウシ（bovine）抗体BLV1H12またはその抗原結合断片である、請求項1～30のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項32】

前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含む、請求項3～31のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項33】

前記上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:183に示される配列を含み、前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、かつ前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含むか;
前記上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:184に示される配列を含み、前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、かつ前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含むか;または
前記上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:185に示される配列を含み、前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、かつ前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含む、
請求項3～5、7～10、13～27、31、および32のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項34】

前記改変超長CDR3が、SEQ ID NO:206～208のいずれかに示される配列を含む、請求項1～27および31～33のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項35】

前記改変VH領域が、BLV1H12のVH領域の変異体である、請求項1～34のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項36】

前記重鎖が、式V1-X-V2-Cを含み、式中、前記重鎖のV1領域が、SEQ ID NO:182に示される配列を含み;X領域が、前記改変超長CDR3を含み;V2領域が、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域が、前記改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む、請求項1～5、7～10、および15～35のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項37】

前記改変VH領域が、SEQ ID NO:200～202のいずれかに示される配列を含む、請求項1～27および31～36のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項38】

前記重鎖が、SEQ ID NO:189～191のいずれかに示される配列を含む、請求項1～27および31～37のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項39】

前記改変VH領域が、BLV1H12のVH領域のヒト化配列の変異体である、請求項1～34のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項40】

前記重鎖が、式V1-X-V2-Cを含み、式中、前記重鎖のV1領域が、SEQ ID NO:197に示される配列、またはSEQ ID NO:197に対して少なくとも65％の配列同一性を示す配列を含み;X領域が、前記改変超長CDR3を含み;V2領域が、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域が、前記改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む、請求項1～5、7～10、15～34、および39のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項41】

前記重鎖が、式V1-X-V2-Cを含み、式中、前記重鎖のV1領域が、SEQ ID NO:197に示される配列を含み;X領域が、前記改変超長CDR3を含み;V2領域が、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域が、前記改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む、請求項1～5、7～10、15～34、39、および40のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項42】

前記改変VH領域が、SEQ ID NO:203～205のいずれかに示される配列を含む、請求項1～27、31～34、および39～41のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項43】

前記重鎖が、SEQ ID NO:192～194のいずれかに示される配列を含む、請求項1～27、31～34、および39～42のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項44】

軽鎖をさらに含む、請求項1～43のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項45】

ヒト化軽鎖を含む、請求項1～44のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項46】

前記ヒト化軽鎖が、SEQ ID NO:181に示される配列、またはSEQ ID NO:181に対して少なくとも85％の配列同一性を示す配列を含む、請求項45記載のキメラ改変抗体。

【請求項47】

前記ヒト化軽鎖が、SEQ ID NO:181に示される配列を含む、請求項45または請求項46記載のキメラ改変抗体。

【請求項48】

前記キメラ改変抗体が、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインと複合体化されている、請求項1～27および31～47のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項49】

IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、前記IL-15配列と非共有結合的に会合している、請求項48記載のキメラ改変抗体。

【請求項50】

IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、前記キメラ改変抗体の前記軽鎖に連結されており、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、請求項48記載のキメラ改変抗体。

【請求項51】

IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、SEQ ID NO:2に示される配列を含む、請求項48～50のいずれか一項記載のキメラ改変抗体。

【請求項52】

請求項1～51のいずれか一項記載のキメラ改変抗体をコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項53】

請求項1～51のいずれか一項記載のキメラ改変抗体の重鎖またはその可変領域をコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項54】

請求項1～51のいずれか一項記載のキメラ改変抗体の軽鎖またはその可変領域をコードする、ポリヌクレオチド。

【請求項55】

請求項52～54のいずれか一項記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。

【請求項56】

請求項52～54のいずれか一項記載のポリヌクレオチドまたは請求項55記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。

【請求項57】

IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチドまたはベクターをさらに含む、請求項56記載の宿主細胞。

【請求項58】

IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、SEQ ID NO:2に示される配列を含む、請求項57記載の宿主細胞。

【請求項59】

キメラ改変抗体を産生する方法であって、前記キメラ改変抗体、前記キメラ改変抗体の前記重鎖もしくはその可変領域、または前記キメラ改変抗体の前記軽鎖もしくはその可変領域を、前記宿主細胞によって発現させるための条件下で、請求項56～58のいずれか一項記載の宿主細胞を培養する工程を含む、方法。

【請求項60】

前記キメラ改変抗体、前記重鎖もしくはその可変領域、または前記軽鎖もしくはその可変領域を回収または精製する工程をさらに含む、請求項59記載の方法。

【請求項61】

請求項59もしくは請求項60記載の方法によって産生されるか、または請求項59もしくは請求項60記載の方法によって産生される前記重鎖もしくはその可変領域または前記軽鎖もしくはその可変領域を含む、キメラ改変抗体。

【請求項62】

請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体を含む、薬学的組成物。

【請求項63】

請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体と免疫細胞の集団を接触させる工程であって、それによって前記免疫細胞の集団の細胞を刺激する、工程を含む、免疫細胞を刺激する方法。

【請求項64】

請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体と免疫細胞の集団を接触させる工程であって、それによって前記免疫細胞の集団の細胞の増殖を促進する、工程を含む、免疫細胞を拡大させる方法。

【請求項65】

前記免疫細胞の集団が、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む、請求項63または請求項64記載の方法。

【請求項66】

前記免疫細胞の集団がT細胞を含む、請求項63～65のいずれか一項記載の方法。

【請求項67】

前記免疫細胞の集団がナチュラルキラー（NK）細胞を含む、請求項63～66のいずれか一項記載の方法。

【請求項68】

エクスビボまたはインビトロで実施される、請求項63～67のいずれか一項記載の方法。

【請求項69】

対象への前記キメラ改変抗体の投与時にインビボで実施される、請求項63～67のいずれか一項記載の方法。

【請求項70】

請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体の治療有効量を対象に投与する工程を含む、対象のがんを処置する方法。

【請求項71】

請求項62記載の薬学的組成物を対象に投与する工程を含む、対象のがんを処置する方法。

【請求項72】

抗腫瘍剤を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項69～71のいずれか一項記載の方法。

【請求項73】

前記抗腫瘍剤が、前記がんを処置するための剤である、請求項72記載の方法。

【請求項74】

前記抗腫瘍剤が、前記がんに関連する抗原に対して指向されている、請求項72または請求項73記載の方法。

【請求項75】

前記抗腫瘍剤がモノクローナル抗体を含む、請求項72～74のいずれか一項記載の方法。

【請求項76】

前記抗腫瘍剤がチェックポイント阻害剤を含む、請求項72～75のいずれか一項記載の方法。

【請求項77】

前記抗腫瘍剤が細胞療法を含む、請求項72～76のいずれか一項記載の方法。

【請求項78】

前記細胞療法がT細胞療法である、請求項77記載の方法。

【請求項79】

前記細胞療法がNK細胞療法である、請求項77記載の方法。

【請求項80】

前記細胞療法が、（i）キメラ抗原受容体（CAR）および/または（ii）IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む、請求項77～79のいずれか一項記載の方法。

【請求項81】

対象のがんを処置するための医薬の製造における、請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体の使用。

【請求項82】

対象のがんを処置する方法における、請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体を含む薬学的組成物の使用。

【請求項83】

抗腫瘍剤が、前記薬学的組成物と組み合わせて前記対象に投与される、請求項81または請求項82記載の使用。

【請求項84】

対象のがんを処置する方法における、抗腫瘍剤、ならびに請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体を含む薬学的組成物の使用。

【請求項85】

前記方法が、前記薬学的組成物を前記対象に投与する工程を含む、請求項82～84のいずれか一項記載の使用。

【請求項86】

前記方法が、前記抗腫瘍剤を前記対象に投与する工程を含む、請求項83～85のいずれか一項記載の使用。

【請求項87】

対象のがんを処置するための医薬の製造における、請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体と抗腫瘍剤との組み合わせの使用。

【請求項88】

前記抗腫瘍剤が、前記がんを処置するための剤である、請求項83～87のいずれか一項記載の使用。

【請求項89】

前記抗腫瘍剤が、前記がんに関連する抗原に対して指向されている、請求項83～88のいずれか一項記載の使用。

【請求項90】

前記抗腫瘍剤がモノクローナル抗体を含む、請求項83～89のいずれか一項記載の使用。

【請求項91】

前記抗腫瘍剤がチェックポイント阻害剤を含む、請求項83～90のいずれか一項記載の使用。

【請求項92】

前記抗腫瘍剤が細胞療法を含む、請求項83～91のいずれか一項記載の使用。

【請求項93】

前記細胞療法が、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む、請求項92記載の使用。

【請求項94】

前記細胞療法がT細胞療法である、請求項92または請求項93記載の使用。

【請求項95】

前記細胞療法がNK細胞療法である、請求項92または請求項93記載の使用。

【請求項96】

前記細胞療法が、キメラ抗原受容体（CAR）を発現している細胞を含む、請求項92～95のいずれか一項記載の使用。

【請求項97】

対象のがんを処置する方法において使用するための、請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体を含む薬学的組成物。

【請求項98】

抗腫瘍剤が、前記薬学的組成物と組み合わせて前記対象に投与される、請求項97記載の薬学的組成物。

【請求項99】

対象のがんを処置する方法において使用するための、請求項1～51および61のいずれか一項記載のキメラ改変抗体を含む薬学的組成物ならびに抗腫瘍剤を含む、併用療法。

【請求項100】

前記方法が、前記薬学的組成物を前記対象に投与する工程を含む、請求項97もしくは請求項98記載の薬学的組成物、または請求項99記載の併用療法。

【請求項101】

前記方法が、前記抗腫瘍剤を前記対象に投与する工程を含む、請求項98もしくは請求項100記載の薬学的組成物、または請求項99もしくは請求項100記載の併用療法。

【請求項102】

前記抗腫瘍剤が、前記がんを処置するための剤である、請求項98、100、および101のいずれか一項記載の薬学的組成物、または請求項99～101のいずれか一項記載の併用療法。

【請求項103】

前記抗腫瘍剤が、前記がんに関連する抗原に対して指向されている、請求項98および100～102のいずれか一項記載の薬学的組成物、または請求項99～102のいずれか一項記載の併用療法。

【請求項104】

前記抗腫瘍剤がモノクローナル抗体を含む、請求項98および100～103のいずれか一項記載の薬学的組成物、または請求項99～103のいずれか一項記載の併用療法。

【請求項105】

前記抗腫瘍剤がチェックポイント阻害剤を含む、請求項98および100～104のいずれか一項記載の薬学的組成物、または請求項99～104のいずれか一項記載の併用療法。

【請求項106】

前記抗腫瘍剤が細胞療法を含む、請求項98および100～105のいずれか一項記載の薬学的組成物、または請求項99～105のいずれか一項記載の併用療法。

【請求項107】

前記細胞療法が、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む、請求項106記載の薬学的組成物または請求項106記載の併用療法。

【請求項108】

前記細胞療法がT細胞療法である、請求項106もしくは請求項107記載の薬学的組成物、または請求項106もしくは請求項107記載の併用療法。

【請求項109】

前記細胞療法がNK細胞療法である、請求項106もしくは請求項107記載の薬学的組成物、または請求項106もしくは請求項107記載の併用療法。

【請求項110】

前記細胞療法が、キメラ抗原受容体（CAR）を発現している細胞を含む、請求項106～109のいずれか一項記載の薬学的組成物、または請求項106～109のいずれか一項記載の併用療法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、2021年4月28日に出願された米国仮出願第63/181,223号の優先権を主張し、その内容は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み入れられる。

【0002】

配列表の参照による組み入れ
本出願は、電子形式の配列表と共に出願されている。配列表は、サイズが152キロバイトである2022年4月23日に作成された166262000340SeqList.txtという名称のファイルとして提供される。配列表の電子形式の情報は、その全体が参照により組み入れられる。

【0003】

分野
本開示は、重鎖のCDR3の一部が異種配列、例えばインターロイキン（IL）-15またはIL-2の配列によって置き換えられている、例えばウシ（bovine）抗体配列またはそのヒト化配列などに基づく、超長CDR3を含有するキメラ抗体、および関連する抗体に関する。本開示の分子の中には、IL15Rα sushiドメインなどのIL15Rαの細胞外部分とさらに連結または複合体化されているキメラIL-15改変抗体分子がある。本開示はまた、キメラ抗体を作製および使用する方法を提供する。

【背景技術】

【0004】

背景
抗体は、主に感染に対する防御のために、脊椎動物の免疫系が異物（抗原）に応答して形成する天然タンパク質である。抗体は、標的抗原への結合を媒介する相補性決定領域（CDR）を含有する。いくつかのウシ（bovine）抗体は、他の脊椎動物と比較して異常に長い可変重（VH）CDR3配列を有する。最大70アミノ酸長であり得るこれらの長いCDR3は、抗体表面から突出する独特のドメインを形成することができ、それによって独特の抗体プラットフォームを可能にする。

【0005】

インターロイキン（IL）-15およびIL-2は、細胞傷害性Tリンパ球およびナチュラルキラー（NK）細胞の増殖および細胞傷害性を刺激するサイトカインであり、したがってがんの処置のための免疫療法候補である。しかしながら、そのようなサイトカインは、安定な可溶性タンパク質として発現することが困難であり得、インビトロおよびインビボで短い半減期を有することが多い。特にがんの処置に使用するための、IL-2またはIL-15治療薬などの改善されたサイトカイン治療薬が依然として必要とされている。

【発明の概要】

【0006】

概要
本明細書において、いくつかの態様では、（a）ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の改変可変重（VH）領域であって、改変VH領域が、改変超長CDR3を含み、ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3の少なくとも一部が、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分によって置き換えられている、改変可変重（VH）領域と、（b）野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域とを含む重鎖を含む、キメラ改変抗体が提供される。

【0007】

任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3領域のノブ領域と置き換わっている。

【0008】

任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、改変超長CDR3の上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にあり、改変超長CDR3の上行性ストークストランドは、ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3の上行性ストークストランドと比較して変異体である。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、改変超長CDR3の上行性ストークストランドおよび/または下行性ストークストランドに、柔軟なリンカー、任意でGGSまたはGSGリンカーを介して連結されている。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、改変超長CDR3の上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランドに、柔軟なリンカーを介して連結されている。任意の態様のいくつかでは、柔軟なリンカーは、GGSリンカーである。任意の態様のいくつかでは、リンカーは、GSGリンカーである。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、GGSリンカーを介して改変超長CDR3の上行性ストークストランドに、およびGSGリンカーを介して改変超長CDR3の下行性ストークストランドに連結されている。

【0009】

任意の態様のいくつかでは、上行性ストークストランドは、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含み、X₂およびX₅は、任意のアミノ酸である。

【0010】

本明細書において、いくつかの態様では、ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の改変可変重（VH）領域を含む重鎖を含むキメラ改変抗体であって、改変VH領域が、ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3領域の少なくとも一部が異種配列によって置き換えられている改変超長CDR3を含み、異種配列が、改変超長CDR3の上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にあり、改変超長CDR3の上行性ストークストランドが、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含み、X₂およびX₅は任意のアミノ酸である、キメラ改変抗体が提供される。

【0011】

任意の態様のいくつかでは、X₂は、Ser、Thr、Gly、Asn、Ala、またはProであり、かつX₅は、His、Gln、Arg、Lys、Gly、Thr、Tyr、Phe、Trp、Met、Ile、Val、またはLeuである。任意の態様のいくつかでは、X₂は、Ser、Ala、またはThrであり、かつX₅は、HisまたはTyrである。

【0012】

任意の態様のいくつかでは、改変超長CDR3の上行性ストークストランドは、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変超長CDR3の上行性ストークストランドの配列は、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される。

【0013】

任意の態様のいくつかでは、改変超長CDR3の上行性ストークストランドは、SEQ ID NO:185に示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変超長CDR3の上行性ストークストランドの配列は、SEQ ID NO:185に示されている。

【0014】

任意の態様のいくつかでは、異種配列は、ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3領域のノブ領域と置き換わっている。任意の態様のいくつかでは、異種配列は、改変超長CDR3の上行性ストークストランドおよび/または下行性ストークストランドに、柔軟なリンカー、任意でGGSまたはGSGリンカーを介して連結されている。任意の態様のいくつかでは、柔軟なリンカーは、GGSリンカーである。任意の態様のいくつかでは、リンカーは、GSGリンカーである。任意の態様のいくつかでは、異種配列は、改変超長CDR3の上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランドに、柔軟なリンカーを介して連結されている。任意の態様のいくつかでは、柔軟なリンカーは、GGSリンカーである。任意の態様のいくつかでは、リンカーは、GSGリンカーである。任意の態様のいくつかでは、異種配列は、GGSリンカーを介して改変超長CDR3の上行性ストークストランドに、およびGSGリンカーを介して改変超長CDR3の下行性ストークストランドに連結されている。

【0015】

任意の態様のいくつかでは、異種配列は、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む。

【0016】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、ヒトIgG重鎖定常領域をさらに含む。任意の態様のいくつかでは、ヒトIgG重鎖定常領域は、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域である。

【0017】

任意の態様のいくつかでは、ヒトIgGはヒトIgG1である。

【0018】

任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、FcR結合を低減するように改変されている。任意の態様のいくつかでは、低下したエフェクター活性は、低減された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）を含む。

【0019】

任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Asn297（N297）、Ser298（S298）、Asn325（N325）、Ala327（A327）およびPro329（P329）の1つまたは複数において変更されている。任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、Leu234Ala（L234A）、Leu235Ala（L235A）、Leu235Glu（L235E）、Asp265Asn（D265N）、Asp265Ala（D265A）、Asp270Asn（D270N）、Ser298Asn（S298N）、Asn325Glu（N325E）、Ala327Ser（A327S）、Pro329Ala（P329A）、およびPro239Gly（P329G）より選択される1つまたは複数の変異を含む。

【0020】

任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Asn297（N297）、Ser298（S298）、Asn325（N325）、Ala327（A327）、およびPro329（P329）のうち2つ以上において変更されている。任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異;Leu234ValおよびLeu235Ala（L234V/L235A）変異;Leu234Ala、Leu235AlaおよびAsn297Ala（L234A/L235A/N297A）変異;Leu234Ala、Leu235AlaおよびPro239Ala（L234A/L235A/P329A）変異;Asp265AlaおよびPro329Ala（D265A/P329A）変異;Asp265AlaおよびPro329Gly（D265A/P329G）変異;Leu234Ala、Leu235AlaおよびAsp265Ala（L234A/L235A/D265A）変異;Leu234Ala、Leu235AlaおよびPro329Gly（L234A/L235A/P329G）変異;またはLeu234Ala、Leu235Ala、Asp265AlaおよびPro329Gly（L234A/L235A/D265A/P329G）変異を含む。

【0021】

任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異を含む。

【0022】

任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、SEQ ID NO:187またはSEQ ID NO:188に示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、SEQ ID NO:187に示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、SEQ ID NO:188に示される配列を含む。

【0023】

任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、インターロイキン-15（IL-15）サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:1に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、または少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:1に示される配列を含む。

【0024】

任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、インターロイキン-12（IL-2）サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:165に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、または少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。任意の態様のいくつかでは、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:165に示されるアミノ酸の配列を含む。

【0025】

任意の態様のいくつかでは、ウシ（bovine）抗体または抗原結合断片は、ウシ（bovine）抗体BLV1H12またはその抗原結合断片である。

【0026】

任意の態様のいくつかでは、下行性ストークストランドは、SEQ ID NO:10に示される配列を含む。

【0027】

任意の態様のいくつかでは、上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:183に示される配列を含み、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含むか;上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:184に示される配列を含み、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含むか;または上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:185に示される配列を含み、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含む。

【0028】

任意の態様のいくつかでは、上行性ストークストランドは、SEQ ID NO:183に示される配列を含み、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、下行性ストークストランドは、SEQ ID NO:10に示される配列を含む。

【0029】

任意の態様のいくつかでは、上行性ストークストランドは、SEQ ID NO:184に示される配列を含み、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、下行性ストークストランドは、SEQ ID NO:10に示される配列を含む。

【0030】

任意の態様のいくつかでは、上行性ストークストランドは、SEQ ID NO:185に示される配列を含み、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、下行性ストークストランドは、SEQ ID NO:10に示される配列を含む。

【0031】

任意の態様のいくつかでは、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:206～208のいずれかに示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:208に示される配列を含む。

【0032】

任意の態様のいくつかでは、改変VH領域は、BLV1H12のVH領域の変異体である。

【0033】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:182に示される配列を含み;X領域は、改変超長CDR3を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、ヒトIgG重鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、ヒトIgG重鎖定常領域は、本明細書に記載の任意のものである。任意の態様のいくつかでは、ヒトIgG重鎖定常領域は、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域である。いくつかの態様では、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、本明細書に記載の任意のものである。

【0034】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:182に示される配列を含み;X領域は、改変超長CDR3を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む。

【0035】

任意の態様のいくつかでは、改変VH領域は、SEQ ID NO:200～202のいずれかに示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変VH領域は、SEQ ID NO:202に示される配列を含む。

【0036】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、SEQ ID NO:189～191のいずれかに示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、重鎖は、SEQ ID NO:191に示される配列を含む。

【0037】

任意の態様のいくつかでは、改変VH領域は、BLV1H12のVH領域のヒト化配列の変異体である。

【0038】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列、またはSEQ ID NO:197に対して少なくとも65％の配列同一性を示す配列を含み;X領域は、改変超長CDR3を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、ヒトIgG重鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、ヒトIgG重鎖定常領域は、本明細書に記載の任意のものである。任意の態様のいくつかでは、ヒトIgG重鎖定常領域は、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域である。いくつかの態様では、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、本明細書に記載の任意のものである。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列に対して少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、または少なくとも95％の配列同一性を有する。

【0039】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列、またはSEQ ID NO:197に対して少なくとも65％の配列同一性を示す配列を含み;X領域は、改変超長CDR3を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列に対して少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、または少なくとも95％の配列同一性を有する。

【0040】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列を含み;X領域は、改変超長CDR3を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、ヒトIgG重鎖定常領域を含む。いくつかの態様では、ヒトIgG重鎖定常領域は、本明細書に記載の任意のものである。任意の態様のいくつかでは、ヒトIgG重鎖定常領域は、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域である。いくつかの態様では、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、本明細書に記載の任意のものである。

【0041】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列を含み;X領域は、改変超長CDR3を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む。

【0042】

任意の態様のいくつかでは、改変VH領域は、SEQ ID NO:203～205のいずれかに示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、改変VH領域は、SEQ ID NO:205に示される配列を含む。

【0043】

任意の態様のいくつかでは、重鎖は、SEQ ID NO:192～194のいずれかに示される配列を含む。任意の態様のいくつかでは、重鎖は、SEQ ID NO:205に示される配列を含む。

【0044】

任意の態様のいくつかでは、キメラ改変抗体は、軽鎖をさらに含む。任意の態様のいくつかでは、キメラ改変抗体は、ヒト化軽鎖を含む。任意の態様のいくつかでは、ヒト化軽鎖は、SEQ ID NO:181に示される配列、またはSEQ ID NO:181に対して少なくとも85％の配列同一性を示す配列を含む。任意の態様のいくつかでは、ヒト化軽鎖は、SEQ ID NO:181に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒト化軽鎖は、SEQ ID NO:181に示される配列に対して少なくとも少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも95％の配列同一性を有する。

【0045】

任意の態様のいくつかでは、抗体は、完全長抗体またはインタクト抗体である。

【0046】

本明細書の態様のいずれかのいくつかでは、抗体は抗原結合断片である。さらなる態様では、抗原結合断片は、Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、または（Fab'）2断片である。いくつかの態様では、抗体はFabである。

【0047】

任意の態様のいくつかでは、キメラ改変抗体は、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインと複合体化されている。任意の態様のいくつかでは、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインは、IL-15配列と非共有結合的に会合している。任意の態様のいくつかでは、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインは、キメラ改変抗体の軽鎖に連結されており、任意でペプチドリンカーを介して連結されている。任意の態様のいくつかでは、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインは、ペプチドリンカーを介してキメラ改変抗体の軽鎖に連結されている。任意の態様のいくつかでは、上記IL15Rα sushiドメインを含む上記IL15Rαの上記細胞外ドメインは、SEQ ID NO:2に示される配列を含む。

【0048】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。

【0049】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体の重鎖またはその可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。

【0050】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体の軽鎖またはその可変領域をコードするポリヌクレオチドが提供される。

【0051】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。

【0052】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のポリヌクレオチドまたは発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。

【0053】

任意の態様のいくつかでは、宿主細胞は、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチドまたはベクターをさらに含む。任意の態様のいくつかでは、上記IL15Rα sushiドメインを含む上記IL15Rαの上記細胞外ドメインは、SEQ ID NO:2に示される配列を含む。

【0054】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様の宿主細胞を、宿主細胞によるキメラ改変抗体の発現のための条件下で培養する工程を含み、任意で、キメラ改変抗体を回収または精製する工程をさらに含む、キメラ改変抗体を産生する方法が提供される。いくつかの態様では、条件は、キメラ改変抗体、キメラ改変抗体の重鎖もしくはその可変領域、またはキメラ改変抗体の軽鎖もしくはその可変領域を宿主細胞によって発現させるためのものである。

【0055】

任意の態様のいくつかでは、方法は、キメラ改変抗体、重鎖もしくはその可変領域、または軽鎖もしくはその可変領域を回収または精製する工程をさらに含む。

【0056】

任意の態様のいくつかでは、方法は、キメラ改変抗体を回収または精製する工程をさらに含む。

【0057】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様の方法によって産生されるキメラ改変抗体が提供される。

【0058】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様の方法によって産生されるキメラ改変抗体の重鎖もしくはその可変領域または軽鎖もしくはその可変領域を含むキメラ改変抗体が提供される。

【0059】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体を含む薬学的組成物が提供される。

【0060】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体と免疫細胞の集団を接触させる工程であって、それによって免疫細胞の集団の細胞を刺激する、工程を含む、免疫細胞を刺激する方法が提供される。

【0061】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体と免疫細胞の集団を接触させる工程であって、それによって免疫細胞の集団の細胞増殖を促進する、工程を含む、免疫細胞を拡大させる方法が提供される。

【0062】

任意の態様のいくつかでは、免疫細胞の集団は、IL2/15Rβおよび/またはIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む。任意の態様のいくつかでは、免疫細胞の集団は、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む。

【0063】

任意の態様のいくつかでは、免疫細胞の集団はT細胞またはナチュラルキラー（NK）細胞を含む。任意の態様のいくつかでは、免疫細胞の集団はT細胞を含む。任意の態様のいくつかでは、免疫細胞の集団はNK細胞を含む。

【0064】

任意の態様のいくつかでは、方法はエクスビボまたはインビトロで実施される。任意の態様のいくつかでは、方法は、対象へのキメラ改変抗体の投与時にインビボで実施される。

【0065】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様のキメラ改変抗体の治療有効量を対象に投与する工程を含む、対象のがんを処置する方法が提供される。

【0066】

本明細書において、いくつかの態様では、任意の態様の薬学的組成物を対象に投与する工程を含む、対象のがんを処置する方法が提供される。

【0067】

任意の態様のいくつかでは、方法は、抗腫瘍剤を対象に投与する工程をさらに含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤はモノクローナル抗体を含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤はチェックポイント阻害剤を含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は細胞療法を含み、任意でT細胞療法またはNK細胞療法を含む。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はT細胞療法である。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はNK細胞療法である。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はキメラ抗原受容体（CAR）を発現している細胞を含む。

【0068】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、がんを処置するための剤である。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、がんに関連する抗原に対して指向されている。

【0069】

任意の態様のいくつかでは、細胞療法は、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む。

【0070】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置するための医薬の製造における、提供されるキメラ改変抗体のいずれかの使用が提供される。

【0071】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置する方法における、提供されるキメラ改変抗体のいずれかを含む薬学的組成物の使用が提供される。

【0072】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、薬学的組成物と組み合わせて対象に投与される。

【0073】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置する方法における、抗腫瘍剤、および提供されるキメラ改変抗体のいずれかを含む薬学的組成物の使用が提供される。

【0074】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置する方法における抗腫瘍剤の使用が提供され、抗腫瘍剤は、提供されるキメラ改変抗体のいずれかを含む薬学的組成物と組み合わせて投与される。

【0075】

任意の態様のいくつかでは、方法は、薬学的組成物を対象に投与する工程を含む。

【0076】

任意の態様のいくつかでは、方法は、抗腫瘍剤を対象に投与する工程を含む。

【0077】

任意の態様のいくつかでは、薬学的組成物および抗腫瘍剤は対象に別々に投与される。

【0078】

任意の態様のいくつかでは、方法は、本明細書に記載の任意のものである。

【0079】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置するための医薬の製造における、提供されるキメラ改変抗体のいずれかと抗腫瘍剤との組み合わせの使用が提供される。

【0080】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置するための医薬の製造における抗腫瘍剤の使用が提供され、抗腫瘍剤は、提供されるキメラ改変抗体のいずれかを含む薬学的組成物と組み合わせて投与される。

【0081】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、がんを処置するための剤である。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、がんに関連する抗原に対して指向されている。

【0082】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤はモノクローナル抗体を含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤はチェックポイント阻害剤を含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は細胞療法を含む。任意の態様のいくつかでは、細胞療法は、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はT細胞療法である。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はNK細胞療法である。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はキメラ抗原受容体（CAR）を発現している細胞を含む。

【0083】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置する方法において使用するための提供されるキメラ改変抗体のいずれかを含む薬学的組成物が提供される。

【0084】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、薬学的組成物と組み合わせて対象に投与される。

【0085】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置する方法において使用するための、提供されるキメラ改変抗体のいずれかを含む薬学的組成物と抗腫瘍剤とを含む併用療法が提供される。

【0086】

本明細書において、いくつかの態様では、対象のがんを処置する方法において使用するための抗腫瘍剤が提供され、抗腫瘍剤は、提供されるキメラ改変抗体のいずれかと組み合わせて投与される。

【0087】

任意の態様のいくつかでは、方法は、薬学的組成物を対象に投与する工程を含む。

【0088】

任意の態様のいくつかでは、方法は、抗腫瘍剤を対象に投与する工程を含む。

【0089】

任意の態様のいくつかでは、薬学的組成物および抗腫瘍剤は対象に別々に投与される。

【0090】

任意の態様のいくつかでは、方法は、本明細書に記載の任意のものである。

【0091】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、がんを処置するための剤である。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は、がんに関連する抗原に対して指向されている。

【0092】

任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤はモノクローナル抗体を含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤はチェックポイント阻害剤を含む。任意の態様のいくつかでは、抗腫瘍剤は細胞療法を含む。任意の態様のいくつかでは、細胞療法は、IL2/15RβおよびIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はT細胞療法である。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はNK細胞療法である。任意の態様のいくつかでは、細胞療法はキメラ抗原受容体（CAR）を発現している細胞を含む。

【図面の簡単な説明】

【0093】

【図1A】図1Aおよび図1Bは、生成された融合抗体構築物の概略図を示す。図1Aは、2本のβストランドストークがどのようにしてウシ（bovine）V_H免疫グロブリンドメインから突出し、異常な3つのジスルフィド連結ノブドメインで終結するかを示すBLV1H12の結晶構造（左）、およびノブ領域がIL-15サイトカイン配列で置き換えられ、構築物がIL15Rα sushiドメインをさらに含有する、BLV1H12-IL-15 Rαsushi（B15_Rαsushi）変異体の結晶構造（右）を示す。

【図1B】図1Aおよび図1Bは、生成された融合抗体構築物の概略図を示す。図1Bは、異なる融合抗体構築物BLV1H12-IL-15（B15）、BLV1H12-IL-15 Rαsushi（B15_Rαsushi）およびBLV1H12-IL-15 GS-Rαsushi（B15_GS_Rαsushi）を示す。

【図2】HEK-Blue IL2レポーター細胞におけるSTAT5誘導性アルカリホスファターゼ（SEAP）レポーター遺伝子の誘導および分泌を通して、キメラBLV1H12-IL-15（B15）融合抗体によるIL2/15Rβおよびγc受容体サブユニットの活性化ならびにSTAT5シグナル伝達を示す。

【図3A】図3A～3Cは、ラットにIL15Rα sushiドメインを有するキメラB15融合抗体およびIL15Rα sushiドメインを有しないキメラB15融合抗体の両方を投与したげっ歯類研究の結果を示す。図3A～3Cは、B15融合抗体の投与後のラットの体重（図3A）、ナチュラルキラー（NK）細胞百分率（図3B）、およびCD8 T細胞百分率（図3C）を示す。

【図3B】図3Aの説明を参照のこと。

【図3C】図3Aの説明を参照のこと。

【図4A】図4A～4Dは、サルにIL15Rα sushiドメインを有するヒト化キメラB15融合抗体およびIL15Rα sushiドメインを有しないヒト化キメラB15融合抗体の両方を投与した非ヒト霊長類研究の結果を示す。図4A～4Dは、ヒト化B15融合抗体の投与の前および後のサルの体重（図4A）、成熟T細胞および細胞傷害性T細胞のカウント（図4B）、NK細胞およびヘルパーT細胞のカウント（図4C）、ならびにB細胞および単球のカウント（図4D）を示す。

【図4B】図4Aの説明を参照のこと。

【図4C】図4Aの説明を参照のこと。

【図4D】図4Aの説明を参照のこと。

【発明を実施するための形態】

【0094】

詳細な説明
異種配列、例えばIL-15もしくはIL-2配列などのサイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、ウシ（bovine）（ウシ（cow））抗体またはそのヒト化配列の重鎖の超長CDR3領域の一部と置き換わっているキメラ融合抗体が、本明細書で提供される。いくつかの態様では、超長CDR3領域は、例えばウシ（bovine）抗体に存在する、上行性ストーク領域、ノブ領域、および下行性ストーク領域を含有し、ノブ領域の全部または一部がサイトカイン配列によって置き換えられている。いくつかの態様では、サイトカイン配列は、例えばSEQ ID NO:165に示される配列を有する、IL-2またはその生物学的に活性な部分のサイトカイン配列である。いくつかの態様では、サイトカイン配列は、例えばSEQ ID NO:1に示される配列を有する、IL-15またはその生物学的に活性な部分のサイトカイン配列である。いくつかの態様では、超長CDR3領域のさらなる部分、例えば上行性ストークストランドが、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の上行性ストークストランドに対して改変されている。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の重鎖定常領域は、提供されるキメラ抗体のエフェクター活性を低下させるために、例えば、野生型重鎖定常領域と比較して低下させて、改変、例えば、変異される。IL15Rαの細胞外部分、例えばIL15Rα sushiドメイン（例えば、SEQ ID NO:2に示される）と連結または複合体化されているそのような抗体を含む変異体キメラIL-15改変抗体も本明細書で提供される。

【0095】

IL-15およびIL-2は、自然免疫および適応免疫の両方において重要な役割を果たす多面的サイトカインである。元来、IL-15は、IL-2と同様に、T細胞成長因子として記載された。例えば、IL-15は、ナチュラルキラー（NK）細胞、NK-T細胞およびメモリーCD8 T細胞を含む複数のリンパ球サブセットの生成に関与している。IL-15はまた、T細胞にとって走化性であり、好中球に作用して形態学的細胞形状変化を誘導し、IL-8産生を刺激する。両サイトカインは4つのαヘリックスバンドルファミリーに属し、それらの膜受容体は、シグナル伝達を担う2つのサブユニット（IL-2R/IL-15R β鎖およびγ鎖）を共有する。IL-15は、高親和性結合α鎖（IL-15Rα）ならびに共通のIL-2R β鎖およびγ鎖から構成される3量体IL-15R複合体を介して機能する。IL-2Rβ/γ複合体は、大部分のNK細胞によって発現され、ナノモル濃度のIL-2またはIL-15によってインビトロで活性化され得る両方のサイトカインに対する中間親和性受容体である（Wei et al.J Immunol.2001,167（1）277-282;Mortier et al.J Biol Chem.2006,281（3）:1612-1619）。

【0096】

IL-15RαおよびIL-2Rαサブユニットは、補体または接着分子にも見られる、そのN末端にいわゆる「sushi」構造ドメイン（IL-15Rαに1つおよびIL-2Rαに2つ）である細胞外部分を含有するサイトカイン受容体のサブファミリーを形成する。IL-15Rα Sushiドメインは、タンパク質-タンパク質相互作用における一般的なモチーフである。Sushiドメインは、ショートコンセンサスリピートまたは1型糖タンパク質モチーフとしても知られている。それらは、補体成分C1r、C1s、H因子およびC2mならびに非免疫学的分子である第XIII因子およびβ₂-糖タンパク質を含むいくつかのタンパク質結合分子で同定されている。典型的なSushiドメインは、およそ60個のアミノ酸残基を有し、4つのシステインを含有する。第1のシステインは、第3のシステインとジスルフィド結合を形成し、第2のシステインは、第4のシステインとジスルフィド架橋を形成する。2つのジスルフィド結合は、タンパク質の三次構造を維持するために必須である（Kato et al.Biochemistry.1991,30:11687、Bottenus et al.Biochemistry 1990,29:11195、Ranganathan et al.Pac.Symp.Biocomput.2000,00:155）。高親和性受容体α（IL15Rα）は、受容体βおよびγサブユニット（IL2/15Rβおよびγc）へのIL-15媒介トランスシグナル伝達の増大に関与している。

【0097】

IL-2は、細胞傷害性Tリンパ球およびナチュラルキラー（NK）細胞の増殖、活性化、および場合によっては細胞傷害性を刺激し得る。IL-15は、細胞傷害性Tリンパ球およびナチュラルキラー（NK）細胞の増殖、活性化、および場合によっては細胞傷害性を刺激し得る。これらの活性により、IL-2およびIL-15は治療用途に望ましいが、IL-2およびIL-15は安定な可溶性タンパク質として発現することが困難であり、インビトロおよびインビボでの半減期が短い。

【0098】

提供される態様は、これらの問題に対処する。提供される態様の中には、IL-2もしくはIL-15サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化変異体のノブ領域の全部または一部と置き換わっているキメラ抗体がある。IL-15サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含有する提供される抗体は、IL15活性をさらに媒介するために、IL15Rα sushiドメインなどのIL15Rαの細胞外部分とさらに連結または複合体化され得る。IL15Rαの細胞外部分と複合体化または連結されているキメラIL-15抗体（例えば、B15）およびそれらの変異体を含む提供されるキメラ抗体は、典型的なヒト抗体と同様に発現および精製することができ、IL2/15Rβおよびγcサブユニットに対する効率的な結合および活性を示すことが本明細書において見出される。特に、提供される抗体は、インビトロシグナル伝達アッセイにおいて可溶性IL-15と同様に機能するが、哺乳動物細胞において容易に、向上した安定性で産生され得る。さらに、提供される抗体は、NK細胞およびT細胞などの免疫細胞の増殖を誘導することを含む、インビボで生物学的活性を示すことが本明細書において見出される。

【0099】

さらに、いくつかの態様では、提供される抗体は、低下したエフェクター活性を有し、例えば、低下したエフェクター活性を有するように改変または変異されている。いくつかの態様では、提供される抗体は、FcR結合を低減するように、および/または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）の媒介もしくは促進を低減するように改変されている。いくつかの局面では、提供される抗体を使用する方法またはその使用は、特定の利点、例えば提供される抗体が結合する細胞に対するADCCを低減または回避する能力を与える。例えば、IL-15配列またはその生物学的に活性な部分を含む提供される抗体の場合、提供される抗体の低下したエフェクター活性は、提供される抗体が結合することができるIL2/15Rβおよび/またはIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞、例えば免疫細胞に対するADCCを低減または防止することができる。

【0100】

そのような抗体は、炎症性疾患、障害または状態、自己免疫疾患、障害または状態、代謝性疾患、障害または状態、新生物性疾患、障害または状態、およびがんを含む様々な疾患、障害または状態の処置または予防に有用であり得る。本明細書において、いくつかの局面では、疾患または状態、例えば、がんの処置のために提供される抗体を使用する方法およびその使用が提供される。これらの方法は、提供される抗体と組み合わせて、併用剤、例えば抗腫瘍剤を投与することをさらに含み得る。併用剤は、細胞、例えば腫瘍細胞に対するADCCを促進または媒介するものであり得る。いくつかの局面では、提供される抗体はエフェクター機能が低下しており、併用剤のADCC関連効果と干渉しない。したがって、いくつかの局面では、提供される抗体は、腫瘍細胞に対するADCCを誘導または促進する併用剤の能力に影響を及ぼすことなく、併用療法で使用することができるという追加の利点を有する。

【0101】

本開示はまた、キメラIL-15改変抗体およびキメラIL-2改変抗体を含む提供されるキメラ抗体の調製のための方法および材料を提供する。

【0102】

本出願で言及される特許文献、科学論文およびデータベースを含むすべての刊行物は、あたかも各個々の刊行物が参照により個別に組み入れられたと同程度に、すべての目的のためにその全体が参照により組み入れられる。本明細書に記載の定義が、参照により本明細書に組み入れられる特許、出願、公開出願および他の刊行物に記載の定義に反するかまたは矛盾する場合、本明細書に記載の定義は、参照により本明細書に組み入れられる定義よりも優先する。

【0103】

本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のためだけであり、記載された主題を限定するものと解釈されるべきではない。

【0104】

I. 定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語、表記ならびに他の技術的および科学的用語または用法は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有することが意図される。場合によっては、一般に理解される意味を有する用語は、明確にするためおよび/または容易に参照するために本明細書で定義され、本明細書にそのような定義を含めることは、当技術分野で一般に理解されるものとの実質的な違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。

【0105】

本明細書で使用される場合、冠詞「1つの（a）」および「1つの（an）」は、冠詞の文法的対象の1つまたは2つ以上（すなわち、少なくとも1つ）を指す。例として、「要素」は、1つの要素または2つ以上の要素を意味する。

【0106】

本開示を通して、特許請求される主題の様々な局面は、範囲形式で提示される。範囲形式での説明は、単に便宜および簡潔さのためのものであり、特許請求される主題の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲ならびにその範囲内の個々の数値を具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間の各介在値、およびその記載された範囲内の任意の他の記載値または介在値は、特許請求される主題内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、より小さい範囲に独立して含まれてもよく、記載された範囲内の任意の具体的に除外された限界を条件として、特許請求される主題内に包含される。記載された範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値の一方または両方を除外した範囲も、特許請求される主題に含まれる。これは、範囲の幅に関係なく適用される。

【0107】

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、当業者によって理解され、それが使用される文脈上である程度変化する。本明細書で使用される場合、量、持続時間などの測定可能な値を指す場合の「約」は、指定された値から±20％または±10％、より好ましくは±5％、さらにより好ましくは±1％、さらにより好ましくは±0.1％の変動を包含することを意味し、そのような変動は開示された方法を実施するのに適している。

【0108】

本明細書で互換的に使用される「超長CDR3」または「超長CDR3配列」は、ヒト抗体配列に由来しないCDR3またはCDR3配列を含む。超長CDR3は、35アミノ酸長以上、例えば40アミノ酸長以上、45アミノ酸長以上、50アミノ酸長以上、55アミノ酸長以上、または60アミノ酸長以上であり得る。典型的には、超長CDR3は重鎖CDR3（CDR-H3またはCDRH3）である。超長CDR3H3は、反芻動物（例えば、ウシ（bovine））配列のCDRH3の特徴を示す。超長CDR3の構造は、上行性ストランドおよび下行性ストランド（例えば、各々、約12アミノ酸長）から構成される「ストーク」と、ストークの上に位置するジスルフィドに富む「ノブ」とを含む。超長CDR3の独特の「ストークおよびノブ」構造は、2つの逆平行βストランド（上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランド）をもたらし、抗体表面から突出してミニ抗原結合ドメインを形成するジスルフィド結合ノブを支持する。いくつかの態様では、超長CDR3抗体は、順に、上行性ストーク領域、ノブ領域および下行性ストーク領域を含む。超長CDR3の長さは、非抗体配列、例えばIL-15などのサイトカイン配列を含み得る。

【0109】

改変超長CDR3は、少なくとも一部が非抗体配列、例えばIL-15などのサイトカイン配列を含む超長CDR3を指す。場合によっては、超長CDR3のノブの少なくとも一部は、非抗体配列に置き換えられているか、または非抗体配列を含む。

【0110】

「実質的に同様」または「実質的に同じ」は、2つの数値の間の十分に高い類似度（一般に、一方は本明細書に開示される抗体に関連し、他方は参照/比較抗体に関連する）を指し、それにより、当業者は、2つの値の間の差が、前記値（例えば、Kd値）によって測定される生物学的特性の文脈内で生物学的および/または統計的有意性がほとんどまたは全くないと考えるであろう。前記2つの値の間の差は、参照/比較抗体の値の関数として、好ましくは約50％未満、好ましくは約40％未満、好ましくは約30％未満、好ましくは約20％未満、好ましくは約10％未満である。

【0111】

「結合親和性」は、一般に、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総和の強さを指す。別段示されない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の1:1相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子XのそのパートナーYに対する親和性は、一般に、解離定数によって表すことができる。低親和性抗体は一般に抗原にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があるのに対して、高親和性抗体は一般に抗原に速く結合し、より長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が当技術分野で公知であり、そのいずれも本開示の目的のために使用することができる。

【0112】

ペプチドまたはポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、最大パーセント配列同一性を達成するために配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、特定のペプチドまたはポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の割合を指す。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するための整列は、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGNまたはMegAlign（DNASTAR）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の技術の範囲内にある様々な方式で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、整列を測定するための適切なパラメータを決定することができる。

【0113】

「ポリペプチド」、「ペプチド」、「タンパク質」、および「タンパク質断片」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用され得る。この用語は、1つまたは複数のアミノ酸残基が対応する天然アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーに適用される。

【0114】

「アミノ酸」は、天然アミノ酸および合成アミノ酸、ならびに天然アミノ酸と同様に機能するアミノ酸類似物およびアミノ酸模倣物を指す。天然アミノ酸は、遺伝暗号によってコードされるアミノ酸、ならびに後に改変されるアミノ酸、例えばヒドロキシプロリン、ガンマ-カルボキシグルタメートおよびO-ホスホセリンである。アミノ酸類似物は、天然アミノ酸、例えば水素に結合したアルファ炭素、カルボキシル基、アミノ基、およびR基と同じ基本化学構造を有する化合物、例えばホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。そのような類似物は、改変されたR基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有することができるが、天然アミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸模倣物は、アミノ酸の一般的な化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を指す。

【0115】

「保存的に改変された変異体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用される。「アミノ酸変異体」は、アミノ酸配列を指す。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された変異体は、同一または本質的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一または関連する（例えば、天然に隣接している）配列を指す。遺伝暗号の縮重のために、多数の機能的に同一の核酸がほとんどのタンパク質をコードする。例えば、コドンGCA、GCC、GCGおよびGCUはすべて、アミノ酸アラニンをコードする。したがって、アラニンがコドンによって指定されるすべての位置で、コードされたポリペプチドを変更することなく、コドンを記載の対応するコドンの別のものに変更することができる。そのような核酸変異は、保存的に改変された変異の一種である「サイレント変異」である。ポリペプチドをコードする本明細書のすべての核酸配列は、核酸のサイレント変異も記載する。当業者は、ある特定の状況では、核酸（通常はメチオニンの唯一のコドンであるAUG、および通常はトリプトファンの唯一のコドンであるTGGを除く）中の各コドンを改変して、機能的に同一の分子を得ることができることを認識するであろう。したがって、ポリペプチドをコードする核酸のサイレント変異は、発現産物に関しては記載された配列に含まれるが、実際のプローブ配列に関しては含まれない。アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列中の単一のアミノ酸またはわずかな割合のアミノ酸を変更、付加または欠失する核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質配列への個々の置換、欠失または付加が、変更がアミノ酸の化学的に類似したアミノ酸による置換をもたらす場合を含む「保存的に改変された変異体」であることを認識するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換表は、当技術分野で周知である。そのような保存的に改変された変異体は、本明細書に開示される多型変異体、種間ホモログおよび対立遺伝子に加えられ、それらを排除しない。典型的には保存的置換には、1）アラニン（A）、グリシン（G）、2）アスパラギン酸（D）、グルタミン酸（E）、3）アスパラギン（N）、グルタミン（Q）、4）アルギニン（R）、リジン（K）、5）イソロイシン（I）、ロイシン（L）、メチオニン（M）、バリン（V）、6）フェニルアラニン（F）、チロシン（Y）、トリプトファン（W）、7）セリン（S）、トレオニン（T）、および8）システイン（C）、メチオニン（M）（例えば、Creighton,Proteins（1984）を参照のこと）が含まれる。

【0116】

非ヒト（例えば、ウシ（bovine））抗体の「ヒト化」または「ヒト操作」形態は、例えば最小配列が非ヒト免疫グロブリンに由来するものを含む、ヒト免疫グロブリン配列に表されるアミノ酸を含有するキメラ抗体である。例えば、ヒト化またはヒト操作抗体は、いくつかの残基がヒト抗体の類似部位からの残基で置換された（例えば、米国特許第5,766,886号明細書を参照のこと）非ヒト（例えば、ウシ（bovine））抗体であり得る。ヒト化抗体はまた、任意で、免疫グロブリン定常領域（Fc）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域（Fc）の少なくとも一部を含み得る。さらなる詳細については、Jones et al.,Nature 321:522-525（1986）、Riechmann et al.,Nature 332:323-329（1988）、およびPresta,Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596（1992）を参照されたい。以下の総説論文およびそこに引用されている参考文献、Vaswani and Hamilton,Ann. Allergy,Asthma＆Immunol. 1:105-115（1998）、Harris,Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038（1995）、Hurle and Gross,Curr. Op. Biotech. 5:428-433（1994）も参照されたい。

【0117】

抗体に関する「可変ドメイン」とは、異なる抗体間で相違するアミノ酸の配列を含有する抗体の重鎖または軽鎖の特異的Igドメインを指す。各軽鎖および各重鎖は、1つの可変領域ドメイン（VL、および、VH）を有する。可変ドメインは抗原特異性を提供し、したがって抗原認識を担う。各可変領域は、抗原結合部位ドメインおよびフレームワーク領域（FR）の一部であるCDRを含有する。

【0118】

「定常領域ドメイン」は、可変領域ドメインよりも抗体間で比較的保存されているアミノ酸の配列を含有する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。各軽鎖は、単一の軽鎖定常領域（CL）ドメインを有し、各重鎖は、CH1、CH2、CH3、および場合によってCH4を含む1つまたは複数の重鎖定常領域（CH）ドメインを含有する。全長IgA、IgDおよびIgGアイソタイプはCH1、CH2 CH3およびヒンジ領域を含有し、IgEおよびIgMはCH1、CH2 CH3およびCH4を含有する。CH1およびCLドメインは、抗体分子のFabアームを伸ばし、したがって抗原との相互作用および抗体アームの回転に寄与する。抗体定常領域は、限定されないが、例えば、様々な細胞、生体分子、および組織との相互作用を介して、抗体が特異的に結合する抗原、病原体、および毒素のクリアランスなどのエフェクター機能を果たすことができる。

【0119】

超長CDR3を含有する抗体は、超長CDR3を有する可変重（VH）鎖を含有する抗体である。抗体は、VH鎖と可変軽（VL）鎖との対合をさらに含み得る。いくつかの態様では、抗体または抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。したがって、抗体という用語は、完全長抗体および抗体断片を含むその一部を含み、それらは、重鎖もしくはその一部および/または軽鎖もしくはその一部を含有する。抗体は、2つの重鎖（HおよびH'と表記され得る）ならびに2つの軽鎖（LおよびL'と表記され得る）を含有し得、各L鎖は共有結合のジスルフィド結合によってH鎖に連結され、2つのH鎖はジスルフィド結合によって互いに連結されている。「完全長抗体」または「インタクト抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。完全長抗体は、典型的には、2つの完全長重鎖（例えば、VH-CH1-CH2-CH3またはVH-CH1-CH2-CH3-CH4）および2つの完全長軽鎖（VL-CL）およびヒンジ領域を有する抗体である。

【0120】

本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、断片抗原結合（Fab）断片、F（ab'）₂断片、Fab'断片、Fv断片、組換えIgG（rIgG）断片、特異的に結合することができる重鎖可変（V_H）領域、および単鎖可変断片（scFv）を含むインタクトな抗体および機能的な（抗原結合）抗体断片を含むポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。

【0121】

「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、インタクト抗体の抗原結合領域および/または可変領域を含む。抗体断片としては、限定されないが、Fab断片、Fab'断片、F（ab'）₂断片、Fv断片、ジスルフィド連結Fv（dsFv）、Fd断片、Fd'断片;単鎖Fv（scFv）または単鎖Fab（scFab）を含む単鎖抗体分子;抗体断片からの上記および多重特異性抗体のいずれかの抗原結合断片が挙げられる。

【0122】

「Fab断片」は、パパインによる完全長免疫グロブリンの消化から生じる抗体断片、または例えば組換え法によって合成的に産生される同じ構造を有する断片である。Fab断片は、軽鎖（V_LおよびC_Lを含有する）と、重鎖の可変ドメイン（V_H）および重鎖の1つの定常領域ドメイン（C_H1）を含有する別の鎖とを含有する。

【0123】

「scFv断片」は、任意の順序でポリペプチドリンカーによって共有結合的に接続された可変軽鎖（V_L）および可変重鎖（V_H）を含有する抗体断片を指す。リンカーは、2つの可変ドメインが実質的な干渉なしに架橋されるような長さである。例示的なリンカーは、溶解度を高めるようにいくつかのGluまたはLys残基が全体に分散された（Gly-Ser）_n残基である。

【0124】

キメラ抗体は、重鎖のCDR3のノブの少なくとも一部が、非抗体配列、例えばIL-15などのサイトカイン配列に置き換えられているか、または非抗体配列、例えばIL-15などのサイトカイン配列を含む、改変超長CDR3を含有する抗体を指す。

【0125】

タンパク質の位置に関して「～に対応する」という用語は、例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸位置が配列表に記載されているような開示された配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸位置「に対応する」という記載など、構造配列整列に基づいて、またはGAPアルゴリズムなどの標準的な整列アルゴリズムを使用して、開示された配列と整列したときに同定されるヌクレオチドまたはアミノ酸位置を指す。例えば、類似の配列（例えば、断片または種変異体）の対応する残基は、構造アラインメント法による参照配列への整列によって決定することができる。配列を整列させることによって、当業者は、例えば、保存された同一のアミノ酸残基をガイドとして使用して、対応する残基を同定することができる。

【0126】

本明細書で使用される場合の「有効量」または「治療有効量」という用語は、処置される症状および/または状態を有意かつ積極的に改変する（例えば、肯定的な臨床応答を提供する）のに十分な薬学的組成物の量を意味する。薬学的組成物に使用するための活性成分の有効量は、処置される特定の状態、状態の重症度、処置期間、併用療法の性質、使用される特定の活性成分、利用される特定の薬学的に許容される賦形剤および/または担体、ならびに主治医の知識および専門的技術に伴う同様の要因によって変化する。

【0127】

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、化合物の生物学的活性または特性を無効にせず、比較的非毒性である、担体または希釈液などの材料を指し、すなわち、材料は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、またはそれが含有される組成物の成分のいずれとも有害な様式で相互作用することなく個体に投与され得る。

【0128】

本明細書で使用される場合、組成物は、細胞を含む2つ以上の産物、物質、または化合物の任意の混合物を指す。それは、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性、非水性、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。

【0129】

本明細書で使用される場合、「薬学的組成物」という用語は、本発明の少なくとも1つの化合物と、担体、安定剤、希釈液、分散剤、懸濁剤、増粘剤、および/または賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。薬学的組成物は、生物への化合物の投与を容易にする。限定されないが、静脈内、経口、エアロゾル、非経口、眼、肺、および局所投与を含む、化合物を投与する複数の技術が当技術分野に存在する。

【0130】

本明細書で使用される場合、「疾患または障害」は、限定されないが、感染、後天性状態、遺伝的状態を含む原因または状態から生じ、同定可能な症状を特徴とする生物における病理学的状態を指す。

【0131】

本明細書で使用される場合、「処置する（treat）」、「処置する（treating）」または「処置（treatment）」という用語は、疾患または障害を改善すること、例えば、疾患または障害、例えば障害の根本原因またはその臨床症状の少なくとも1つの発症を遅延または停止または低減することを指す。

【0132】

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、ヒトなどの哺乳動物を含む動物を指す。対象および患者という用語は、互換的に使用することができる。

【0133】

本明細書で使用される場合、「任意の（optional）」または「任意で（optionally）」は、続いて記載される事象または状況が発生するか、または発生しないことを意味し、その説明は、前記事象または状況が発生する場合と発生しない場合とを含む。例えば、任意で置換されている基は、その基が非置換であるかまたは置換されていることを意味する。

【0134】

II. キメラ抗体
異種配列、例えばサイトカイン配列、例えばIL-2配列もしくはその生物学的に活性な部分、またはIL-15配列もしくはその生物学的に活性な部分が、ウシ（bovine）（ウシ（cow））抗体またはそのヒト化配列の重鎖の超長CDR3領域の一部と置き換わっているキメラ抗体が本明細書で提供される。いくつかの態様では、IL-15配列は、完全長IL-15（例えば、ヒトIL-15）配列（例えば、SEQ ID NO:1に示される配列）またはIL-15の生物学的に活性な部分を含み得る。IL-15は、強力な免疫刺激性サイトカインであり、T細胞およびナチュラルキラー細胞にとって必須の生存因子である。IL2とIL15とを比較する前臨床研究では、IL-15はIL-2よりも毒性が低いことが示されている。IL-l 5配列はまた、IL-l 5受容体に対するその結合親和性を高めるように改変され得る。例えば、アスパラギンは、ILLSの位置72でアスパラギン酸によって置き換えられ得る（米国特許出願公開第20140134128号のSEQ ID NO.2;その内容は参照によりその全体が組み入れられる）。完全長または成熟IL-l 5の1つまたは複数の機能を保持するIL-15の任意の部分が本発明において有用であり得る。そのような機能には、NK細胞の生存の促進、NK細胞の制御、ならびにT細胞の活性化および増殖、ならびに造血幹細胞からのNK細胞発達の支援が含まれる。

【0135】

いくつかの態様では、超長CDR3領域のさらなる部分、例えば上行性ストークストランドが、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の上行性ストークストランドに対して改変されている。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の重鎖定常領域は、提供されるキメラ抗体のエフェクター活性を低下させるために、例えば、野生型重鎖定常領域と比較して低下させて、改変、例えば、変異される。提供されるキメラ抗体はまた、IL15Rαの細胞外部分、例えば、IL15Rα sushiドメイン（例えば、SEQ ID NO:2に示される）に連結または複合体化されているような抗体を含む。いくつかの態様では、IL-15サイトカインは、膜結合IL15ベータ/ガンマ受容体に結合してこれを活性化するIL15受容体（IL15Ra）のアルファサブユニットまたはその一部でフォーマット化される。IL-I5媒介活性化の独特の特徴は、IL-15が、膜結合IL15ベータ/ガンマ受容体に結合してこれを活性化するIL15受容体のアルファサブユニット（IL15Ra）との複合体として、同じ細胞上または異なる細胞上のいずれかで提示されるトランス提示の機構である。IL15/IL15Ra複合体は、IL-15自体よりもIL-15シグナル伝達の活性化に有効である。いくつかの態様では、完全長IL-15RaまたはIL15Raの一部は、IL-15サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分に複合体化または融合（例えば、連結）され得る。完全長または成熟IL15またはIL15Raの1つまたは複数の機能をそれぞれ保持するIL-15およびIL-15Raの任意の部分が、提供される態様において有用であり得る。そのような機能には、NK細胞の生存の促進、NK細胞の制御、ならびにT細胞の活性化および増殖、ならびに造血幹細胞からのNK細胞発達の支援が含まれる。IL15受容体アルファは、IL15への結合に必要な構造要素の大部分を含有するsushiドメインと呼ばれる細胞外ドメインを含む。したがって、いくつかの態様では、IL15Raの一部は、IL15Ra sushiドメインであるか、またはIL15Ra sushiドメインを含む。提供される態様において有用なIL15Raの一部は、ヒトIL15Raの31～205アミノ酸または31～95アミノ酸を含み得る（Uniprot ID:Q1326.1）。

【0136】

提供される抗体は、最大70アミノ酸長以上の超長CDR3配列を含有する独特の重鎖可変領域配列を有するウシ（bovine）またはウシ（cow）抗体の特徴を示す。ウシ（cattle）において同定されたCDR3配列には、BLV1H12（SEQ ID NO:25を参照）、BLV5B8（SEQ ID NO:30を参照）、BLV5D3（SEQ ID NO:31を参照）、およびBLV8C1 1（SEQ ID NO:32を参照）（例えば、Saini,et al.（1999）Eur. Immunol. 29:2420-2426、およびSaini and Kaushik（2002）Scand. J. Immunol. 55:140-148を参照）、BF4E9（SEQ ID NO:33を参照）およびBF1 H1（SEQ ID NO:34を参照）（例えば、Saini and Kaushik（2002）Scand. J. Immunol. 55:140-148を参照）、およびF18（SEQ ID NO:35を参照）（例えば、Berens,et al.（1997）Int. Immunol. 9:189-199を参照）と呼ばれるものが含まれる。ウシ（cattle）において同定された超長CDR3配列を含む例示的な抗体可変領域配列としては、BLV1H12が挙げられる。いくつかの態様では、BLV1H12超長CDR3配列は、SEQ ID NO:25によってコードされる。例示的なウシ（bovine）抗体としては、ウシ（bovine）抗体BLVH12（例えば、SEQ ID NO:26に示される重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:27に示される軽鎖可変領域）、ならびにウシ（bovine）抗体BLV5B8（例えば、SEQ ID NO:28に示される重鎖可変領域、およびSEQ ID NO:29に示される軽鎖可変領域）が挙げられる。

【0137】

ウシ（cow）抗体では、超長CDR3配列は、2つの12残基の逆平行βストランド（上行性ストランドおよび下行性ストランド）から構成される「ストーク」と、ストークの上に存在する39残基のジスルフィドに富む「ノブ」とから、標準的な抗体パラトープとは大幅に異なる異常なアーキテクチャを有するサブドメインが形成される、構造を形成する。長い逆平行βリボンは、ノブドメインを抗体の主要な骨格と連結するブリッジとして機能する。超長CDR3の独特の「ストークおよびノブ」構造は、2つの逆平行βストランド（上行性および下行性ストークストランド）をもたらし、抗体表面から突出してミニ抗原結合ドメインを形成するジスルフィド結合ノブを支持する。いくつかの態様では、超長CDR3抗体は、順に、上行性ストーク領域、ノブ領域、および下行性ストーク領域を含む。

【0138】

独特の「ストーク」およびノブの構造的特徴は、異なるウシ（bovine）またはウシ（cow）の超長CDR3配列にわたって保存されている。ストークの上行性ストランドは、主に疎水性側鎖と、上行性ストランドを開始させる比較的保存された「T（T/S）VHQ」モチーフおよびその変異体を基部に含む。この保存されたT（T/S）VHQモチーフおよびその変異体は、典型的には、様々なウシ（bovine）またはウシ（cow）配列の可変領域配列中の最初のシステイン残基の後に見出される。保存されたT（T/S）VHQモチーフは、可変数の残基によって、各ノブの基部でβターンを形成するモチーフ（BLV1H12のCPDG）に接続されている。ストークは可変長であり得、ストーク部の下行性ストランドは、長い溶媒露出した2本のストランドのβリボン（Wang et al. Cell. 2013,153（6）:1379-1393）の安定性に寄与し得る、スタッキング相互作用によってラダーを形成する交互の芳香族を含む。

【0139】

いくつかの態様では、本明細書で提供されるキメラ抗体は、ウシ（bovine）抗体配列またはそのヒト化配列に由来するかまたはそれに基づき得る抗体足場に基づくが、ウシ（bovine）抗体配列またはそのヒト化配列の重鎖の超長CDR3のノブドメインの一部に挿入されるかまたはそれと置き換わる、サイトカイン配列、例えばIL-2配列もしくはその生物学的に活性な部分またはIL-15配列もしくはその生物学的に活性な部分などの異種配列を含む。いくつかの態様では、本明細書で提供されるキメラ抗体の重鎖の超長CDR3配列は、異種配列を含有する領域によって一緒に結合された上行性ストランドおよび下行性ストランドを含有するストーク成分を含有する。いくつかの態様では、異種配列は、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の一部と置き換わり、例えば、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列のノブ領域と置き換わる。

【0140】

いくつかの態様では、異種配列は非抗体配列である。いくつかの態様では、異種配列はシグナル伝達分子配列である。いくつかの態様では、異種配列はホルモン配列である。いくつかの態様では、異種配列は神経伝達物質配列である。いくつかの態様では、異種配列は成長因子である。いくつかの態様では、異種配列はサイトカイン配列である。いくつかの態様では、異種配列はケモカイン配列である。いくつかの態様では、異種配列はインターフェロン配列である。いくつかの態様では、異種配列はインターロイキン配列である。いくつかの態様では、異種配列はリンホカイン配列である。いくつかの態様では、異種配列は腫瘍壊死因子配列である。

【0141】

いくつかの態様では、異種配列はサイトカイン配列である。したがって、提供されるキメラ抗体には、サイトカイン配列がウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列のノブ領域の全部または一部と置き換わっているキメラサイトカイン改変抗体が含まれる。いくつかの態様では、サイトカイン配列は、IL-2配列またはその生物学的に活性な部分である。いくつかの態様では、サイトカイン配列は、IL-15配列またはその生物学的に活性な部分である。

【0142】

いくつかの態様では、異種配列は、CDR3の一部（例えば、CDR3の1つまたは複数のアミノ酸）またはCDR3配列全体（例えば、CDR3のアミノ酸の全部または実質的に全部）を任意で除去することを含めて、抗体のCDR3配列のノブ領域に挿入される。いくつかの態様では、異種配列は、超長CDR3のノブドメインに挿入され得る。いくつかの態様では、異種配列は、上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間に含有される。

【0143】

いくつかの態様では、IL-15配列またはその生物学的に活性な部分は、CDR3の一部（例えば、CDR3の1つまたは複数のアミノ酸）またはCDR3配列全体（例えば、CDR3のアミノ酸の全部または実質的に全部）を任意で除去することを含めて、抗体のCDR3配列のノブ領域に挿入される。いくつかの態様では、IL-15またはその生物学的に活性な部分は、超長CDR3（図1Aおよび図1B）のノブドメインに挿入され得る。いくつかの態様では、IL-15またはその生物学的に活性な部分は、上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間に含有される。

【0144】

いくつかの態様では、IL-2配列またはその生物学的に活性な部分は、CDR3の一部（例えば、CDR3の1つまたは複数のアミノ酸）またはCDR3配列全体（例えば、CDR3のアミノ酸の全部または実質的に全部）を任意で除去することを含めて、抗体のCDR3配列のノブ領域に挿入される。いくつかの態様では、IL-2またはその生物学的に活性な部分は、超長CDR3のノブドメインに挿入され得る。いくつかの態様では、IL-2またはその生物学的に活性な部分は、上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間に含有される。

【0145】

いくつかの態様では、超長CDR3は、35アミノ酸長以上（例えば、40以上、45以上、50以上、55以上、60以上）であり得る。

【0146】

本明細書で提供される態様のいずれも、PCT/US2013/020910、PCT/US2014/047315、またはPCT/US2013/020903に記載されている特徴のいずれかを含有することができ、これらのすべては、参照によりその全体が組み入れられる。

【0147】

重鎖および軽鎖を含む抗体の例示的な特徴を以下のサブセクションに記載する。本明細書の態様のいずれかのいくつかでは、抗体は完全長抗体またはインタクト抗体である。本明細書の態様のいずれかのいくつかでは、抗体はその抗原結合断片である。さらなる態様では、その抗原結合断片は、Fab、Fab'-SH、Fv、scFvまたは（Fab'）2断片である。いくつかの態様では、抗体はFabである。

【0148】

A. 重鎖領域
提供される態様では、提供されるキメラ抗体の重鎖は、異種配列、例えばサイトカイン配列、例えばIL-2もしくはその生物学的に活性な部分またはIL-15もしくはその生物学的に活性な部分が、超長CDR3配列の少なくとも一部に挿入されるかまたはそれと置き換わる、超長CDR3を有するフレームワーク配列に基づくかまたは由来する。抗体フレームワークは、VH-VLなどのウシ（bovine）配列、ヒト生殖細胞系配列、または改変ヒト生殖細胞系配列に由来し得る。

【0149】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の重鎖は、異種配列、例えばサイトカイン配列、例えばIL-2配列もしくはその生物学的に活性な部分またはIL-15配列もしくはその生物学的に活性な部分が、ウシ（bovine）またはウシ（cow）配列の超長CDR3配列の少なくとも一部に挿入され得るかまたはそれと置き換わり得る、ウシ（bovine）またはウシ（cow）フレームワーク配列に基づくかまたは由来する。抗体は、異種配列、例えばサイトカイン配列を含有する超長CDR3融合物を含有するBLV1H12抗体の少なくとも一部を含み得る。代替的にまたは追加的に、提供されるキメラ抗体は、異種配列、例えばサイトカイン配列を含有する超長CDR3融合物を含有するBLV5D3、BLV8C11、BF1H1、BLV5B8および/またはF18抗体の少なくとも一部を含む。いくつかの態様では、異種配列、例えばサイトカイン配列、例えばIL-15配列またはその生物学的に活性な部分は、SEQ ID NO:26またはSEQ ID NO:28に示される配列の超長CDR3の少なくとも一部に挿入され得るかまたはそれと置き換わり得る。

【0150】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の重鎖は、ウシ（bovine）またはウシ（cow）配列と比較してヒト化されているヒト化重鎖フレームワーク配列に基づくかまたは由来する。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の重鎖は、ウシ（bovine）またはウシ（cow）配列に対する配列または構造類似性を示すヒト重鎖フレームワーク配列に基づくかまたは由来する。場合によっては、ヒト化は、上記のいずれかなどのウシ（bovine）超長CDR3に由来する超長CDR3配列をヒトフレームワークへと操作することを含み得る。ヒトフレームワークは、生殖細胞系起源のものであり得るか、または非生殖細胞系（例えば、変異または親和性成熟）配列に由来し得る。本明細書に開示されるものを含む、当業者に周知の遺伝子操作技術を使用して、ヒトフレームワークおよび非ヒト超長CDR3を含有するハイブリッドDNA配列を生成することができる。7つのファミリーのうちの1つに由来するV領域遺伝子によってコードされ得るヒト抗体とは異なり、超長CDR3配列を産生するウシ（bovine）抗体は、ヒトVH4ファミリーに最も相同であると考えられ得る単一のV領域ファミリーを利用するようである。特にウシ（cattle）由来の超長CDR3配列をヒト化して超長CDR3を含む抗体を産生する態様では、VH4ファミリー由来のヒトV領域配列をウシ（bovine）由来の超長CDR3配列に遺伝的に融合することができる。ヒト抗体遺伝子座における例示的なVH4生殖細胞系遺伝子配列としては、VH4-39、VH4-59＊03、VH4-34＊02、およびVH4-34＊09ヒト重鎖生殖細胞系配列が挙げられる。いくつかの態様では、ヒト重鎖生殖細胞系配列は、SEQ ID NO:68～71のいずれか1つに示される配列である。いくつかの態様では、ヒト重鎖生殖細胞系配列は、SEQ ID NO:169～172のいずれか1つに示される配列によってコードされる配列である。

【0151】

いくつかの態様では、IL-2配列もしくはその生物学的に活性な部分またはIL-15配列もしくはその生物学的に活性な部分などのサイトカイン配列などの異種配列は、SEQ ID NO:68～71に示される配列を含むヒト生殖細胞系配列の超長CDR3の少なくとも一部に挿入され得るかまたはそれと置き換わり得る。

【0152】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体は、ヒトVH4フレームワーク配列と、ウシ（bovine）由来の超長CDR3との融合物を含み、ノブの少なくとも一部が、異種配列、例えばIL-15もしくはIL-2配列またはその生物学的に活性な部分と置き換えられている。いくつかの局面では、そのような融合物は、以下の段階によって生成することができる。最初に、V領域遺伝子配列の第2のシステインが、第2のシステインをコードするヌクレオチド配列と共に同定される。一般に、第2のシステインは、CDR3の2残基上流（N末端）のフレームワークとCDR3との境界をマークする。第2に、同様にCDR3の2残基上流（N末端）をマークする、ウシ（bovine）由来V領域配列中の第2のシステインが同定される。第3に、ヒトV領域をコードする遺伝物質を、超長CDR3をコードする遺伝子配列と組み合わせる。このように、ヒトV領域配列のフレーム内に超長CDR3配列が配置される遺伝子融合を行うことができる。好ましくは、超長CDR3を含むヒト化抗体は、アミノ酸組成が可能な限りヒトに近い。任意で、J領域配列は、ウシ（bovine）由来配列からヒト配列に変異され得る。また、任意で、ヒト化重鎖をヒト軽鎖と対にしてもよい。

【0153】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の改変VH領域は、ウシ（bovine）抗体、例えば、BLV1H12のVH領域の変異体である。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の改変VH領域は、ウシ（bovine）抗体、例えば、BLV1H12のVH領域のヒト化配列の変異体である。

【0154】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体またはその結合断片は、式V1-X-V2の配列を含む重鎖可変領域を含み、式中、重鎖のV1領域は、2つのCDR領域（CDR1およびCDR2）を隔てている3つのフレームワーク領域（例えばFR-1、FR-2およびFR-3）を含有する重鎖配列部分を含み、X領域は、異種配列、例えばIL-2配列もしくはその生物学的に活性な部分またはIL-15配列もしくはその生物学的に活性な部分を含み得る改変超長CDR3配列を含み、V2領域は、FR-4を含む重鎖の一部を含む。

【0155】

いくつかの態様では、V1領域は、式FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3を含む。いくつかの態様では、V1領域は、（i）SEQ ID NO:26のアミノ酸（SEQ ID NO:5のヌクレオチドによってコードされる）を含むウシ（bovine）重鎖領域、または（i）SEQ ID NO:12～19を含むヒト生殖細胞系可変領域を含むヒト化重鎖領域からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:182またはSEQ ID NO:197に示される配列を含む。

【0156】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の改変VH領域は、ウシ（bovine）抗体、例えば、BLV1H12のVH領域の変異体である。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:182に示される配列を含む。

【0157】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の改変VH領域は、ウシ（bovine）抗体、例えば、BLV1H12のVH領域のヒト化配列の変異体である。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:197に示されるアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:197に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも65％もしくは少なくとも約65％、少なくとも70％もしくは少なくとも約70％、少なくとも75％もしくは少なくとも約75％、少なくとも80％もしくは少なくとも約80％、少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列を含む。

【0158】

いくつかの態様では、X領域は、異種配列、例えば、IL-15配列またはその生物学的に活性な部分（例えば、ヒトIL-15配列またはその生物学的に活性な部分）を含み得る改変超長CDR3配列を含む。いくつかの態様では、IL-15配列は、SEQ ID NO:1に示すアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:1に示すアミノ酸配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様では、IL-15配列は、SEQ ID NO:1に見出されるアミノ酸配列を含む。

【0159】

いくつかの態様では、IL-15配列は、インビトロアッセイまたはインビボなどで、細胞傷害性Tリンパ球およびナチュラルキラー（NK）細胞の増殖、活性化または細胞傷害性を刺激する活性を示す。いくつかの態様では、IL-15配列は、インビトロ結合アッセイなどにおいて、IL2/15Rβおよび/またはγcサブユニットへの結合を示す。いくつかの態様では、活性または結合は、組換えIL-15モノマーと類似しているか、または組換えIL-15モノマーと比較して保持されている。

【0160】

いくつかの態様では、異種配列、例えば、IL-15配列またはその生物学的に活性な部分は、上行性ストーク領域と下行性ストーク領域との間の、超長CDR3のノブの一部に挿入されるかまたはそれと置き換わる。異種配列、例えば、IL-15配列は、ストーク領域間に配置されてもよく、異種配列、例えば、IL-15配列は、ストーク領域の各々に直接的または間接的に連結されている。いくつかの態様では、ストーク配列の一方または両方への連結は、リンカーを介して間接的である。リンカーは、（GGGGS）のアミノ酸配列を含むことができ、式中、n＝1～5である。あるいは、リンカーは、（GSG）n、GGGSGGGGSまたはGGGGSGGGSのアミノ酸配列を含む。場合によっては、リンカーは、配列GGS（SEQ ID NO:151）またはGSG（SEQ ID NO:186）を有する。

【0161】

いくつかの態様では、X領域は、異種配列、例えば、IL-2配列またはその生物学的に活性な部分（例えば、ヒトIL-2配列またはその生物学的に活性な部分）を含み得る改変超長CDR3配列を含む。いくつかの態様では、IL-2配列は、SEQ ID NO:165に示すアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:165に示すアミノ酸配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様では、IL-2配列は、SEQ ID NO:165に見出されるアミノ酸配列を含む。

【0162】

いくつかの態様では、IL-2配列は、インビトロアッセイまたはインビボなどで、細胞傷害性Tリンパ球およびナチュラルキラー（NK）細胞の増殖、活性化または細胞傷害性を刺激する活性を示す。いくつかの態様では、IL-2配列は、インビトロ結合アッセイなどにおいて、IL2/15Rβおよび/またはγcサブユニットへの結合を示す。いくつかの態様では、前記活性または結合は、組換えIL-2モノマーと類似しているか、または組換えIL-2モノマーと比較して保持されている。

【0163】

いくつかの態様では、異種配列、例えば、IL-2配列またはその生物学的に活性な部分は、上行性ストーク領域と下行性ストーク領域との間の、超長CDR3のノブの一部に挿入されるかまたはそれと置き換わる。異種配列、例えば、IL-2配列は、ストーク領域間に配置されてもよく、異種配列、例えば、IL-2配列は、ストーク領域の各々に直接的または間接的に連結されている。いくつかの態様では、ストーク配列の一方または両方への連結は、リンカーを介して間接的である。リンカーは、（GGGGS）のアミノ酸配列を含むことができ、式中、n＝1～5である。あるいは、リンカーは、（GSG）n、GGGSGGGGSまたはGGGGSGGGSのアミノ酸配列を含む。場合によっては、リンカーは、配列GGS（SEQ ID NO:151）またはGSG（SEQ ID NO:186）を有する。

【0164】

超長CDR3は、CDR3のノブドメインの少なくとも一部、CDR3のストークドメインの少なくとも一部、またはそれらの組み合わせを含み得る。CDR3のノブドメインの一部は、超長CDR3のノブドメインに由来する1つまたは複数の保存されたモチーフを含み得る。CDR3のストークドメインは、超長CDR3のストークドメインに由来する1つまたは複数の保存されたモチーフを含み得る。

【0165】

上記または下記の態様の各々またはいずれかの局面では、超長CDR3は、35アミノ酸長以上、40アミノ酸長以上、45アミノ酸長以上、50アミノ酸長以上、55アミノ酸長以上、または60アミノ酸長以上である。上記または下記の態様の各々またはいずれかのいくつかの態様では、超長CDR3は、35アミノ酸長以上である。

【0166】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体のX領域は、上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランドを含む。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の異種配列、例えば、サイトカイン配列、例えば、IL-15配列は、上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にある。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体は、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランド、例えば、BLV1H12またはそのヒト化配列の上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランドを含む。いくつかの態様では、上行性ストークストランドおよび下行性ストークストランドの一方または両方が、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の上行性ストークストランドまたは下行性ストークストランドの変異体である。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の上行性ストークストランドは、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の上行性ストークストランドの変異体である。

【0167】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体のX領域は、モチーフX¹X²X³X⁴X⁵-［異種配列］-（X^aX^b）zモチーフを含む。いくつかの態様では、超長CDR3は、45アミノ酸長以上である。いくつかの態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸が、X¹X²X³X⁴X⁵モチーフと異種配列との間および/または（X^aX^b）zモチーフと異種配列との間に存在し得る。

【0168】

いくつかの態様では、X¹X²X³X⁴X⁵モチーフは、上行性ストークストランドの全部または一部である。いくつかの態様では、上行性ストークストランド上のX¹X²X³X⁴X⁵モチーフは、TTVHQ（SEQ ID NO:36）、TSVHQ（SEQ ID NO:37）またはSEQ ID NO:38～67のいずれか1つより選択される配列を含む。いくつかの態様では、上行性ストークストランドは、SEQ ID NO:72～75またはSEQ ID NO:158より選択される配列を含む。いくつかの態様では、超長CDR3は、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:81～121またはSEQ ID NO:157によってコードされる上行性ストーク領域を含む。いくつかの態様では、モチーフは、CX¹X²X³X⁴X⁵で示されるなどの、N末端システイン（CysまたはC）残基を含む。例えば、場合によっては、SEQ ID NO:36～67、72～75またはSEQ ID NO:158のいずれかによってコードされる上行性ストーク領域は、N末端Cys残基をさらに含有し得る。そのような例示的な上行性ストーク領域は、SEQ ID NO:159に示されている。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の上行性ストーク領域は、SEQ ID NO:159に示される配列を含む。いくつかの態様では、上行性ストークストランドは、配列ETKKYQTをさらに含む。いくつかの態様では、上行性ストークストランドは、配列ETKKYQSをさらに含む。

【0169】

いくつかの態様では、上行性ストークストランドは、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含む。いくつかの態様では、X₂およびX₅は、任意のアミノ酸である。いくつかの態様では、X₂は、Ser、Thr、Gly、Asn、AlaまたはProである。いくつかの態様では、X₅は、His、Gln、Arg、Lys、Gly、Thr、Tyr、Phe、Trp、Met、Ile、ValまたはLeuである。いくつかの態様では、X₂は、Ser、Thr、Gly、Asn、AlaまたはProであり、X₅は、His、Gln、Arg、Lys、Gly、Thr、Tyr、Phe、Trp、Met、Ile、ValまたはLeuである。いくつかの態様では、X₂は、Ser、AlaまたはThrである。いくつかの態様では、X₅は、HisまたはTyrである。いくつかの態様では、X₂は、Ser、AlaまたはThrであり、X₅は、HisまたはTyrである。いくつかの態様では、X₂は、Serであり、X₅は、Hisである。いくつかの態様では、X₂は、Alaであり、X₅は、Hisである。いくつかの態様では、X₂は、Thrであり、X₅は、Tyrである。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の上行性ストーク領域は、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される配列を含む。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の上行性ストーク領域は、SEQ ID NO:183に示される配列を含む。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の上行性ストーク領域は、SEQ ID NO:184に示される配列を含む。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の上行性ストーク領域は、SEQ ID NO:185に示される配列を含む。

【0170】

いくつかの態様では、（X^aX^b）zモチーフは、下行性ストークストランドの一部であり、式中、X^aは任意のアミノ酸残基であり、X^bは、チロシン（Y）、フェニルアラニン（F）、トリプトファン（W）、およびヒスチジン（H）からなる群より選択される芳香族アミノ酸であり、zは1～4である。いくつかの態様では、下行性ストークストランドは、式YXYXYXを有する交互の芳香族を含み、式中、Xは任意のアミノ酸である。いくつかの態様では、下行性ストークストランドは、SEQ ID NO:76～80またはSEQ ID NO:161に含有される配列を含む。いくつかの態様では、超長CDR3は、SEQ ID NO:122～149またはSEQ ID NO:160によってコードされる下行性ストーク領域を含む。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の下行性ストーク領域は、SEQ ID NO:10に示される配列を含む。

【0171】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体は、改変超長CDR3を含む。

【0172】

いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:9によってコードされるアミノ酸配列を有する上行性ストーク領域、SEQ ID NO:1によって示されるIL15サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:10によってコードされるアミノ酸配列を有する下行性ストーク領域を順に含む。いくつかの態様では、超長CDR3は、SEQ ID NO:157によってコードされるアミノ酸配列を有する上行性ストーク領域、SEQ ID NO:1によって示されるIL15サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:160によってコードされるアミノ酸配列を有する下行性ストーク領域を順に含む。

【0173】

いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:9によってコードされるアミノ酸配列を有する上行性ストーク領域、SEQ ID NO:165によって示されるIL2サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:10によってコードされるアミノ酸配列を有する下行性ストーク領域を順に含む。いくつかの態様では、超長CDR3は、SEQ ID NO:157によってコードされるアミノ酸配列を有する上行性ストーク領域、SEQ ID NO:165によって示されるIL2サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:160によってコードされるアミノ酸配列を有する下行性ストーク領域を順に含む。

【0174】

いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:183によって示されるアミノ酸配列を有する上行性ストークストランド、SEQ ID NO:1によって示されるIL-15サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:10によって示されるアミノ酸配列を有する下行性ストークストランドを順に含む。いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:206に示される配列を含む。

【0175】

いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:184によって示されるアミノ酸配列を有する上行性ストークストランド、SEQ ID NO:1によって示されるIL-15サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:10によって示されるアミノ酸配列を有する下行性ストークストランドを順に含む。いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:207に示される配列を含む。

【0176】

いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:185によって示されるアミノ酸配列を有する上行性ストークストランド、SEQ ID NO:1によって示されるIL-15サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:10によって示されるアミノ酸配列を有する下行性ストークストランドを順に含む。いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:208に示される配列を含む。

【0177】

いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:159によって示されるアミノ酸配列を有する上行性ストークストランド、SEQ ID NO:1によって示されるIL-15サイトカイン配列、およびSEQ ID NO:10によって示されるアミノ酸配列を有する下行性ストークストランドを順に含む。いくつかの態様では、改変超長CDR3は、SEQ ID NO:209に示される配列を含む。

【0178】

いくつかの態様では、重鎖のV2領域は、

からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様では、重鎖のV2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含む。

【0179】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の改変VH領域は、ウシ（bovine）抗体、例えば、BLV1H12のVH領域の変異体である。

【0180】

いくつかの態様では、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:182に示される配列を含み;X領域は、改変超長CDR3配列を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、免疫グロブリン定常領域、例えば、記載されるような改変IgG（例えば、IgG1）定常領域を含む。いくつかの態様では、Xは、SEQ ID NO:206～208のいずれかに示される配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:200に示される配列、またはSEQ ID NO:200に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:200に示される配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:201に示される配列、またはSEQ ID NO:201に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:201に示される配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:202に示される配列、またはSEQ ID NO:202に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:202に示される配列を含む。

【0181】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の改変VH領域は、ウシ（bovine）抗体、例えば、BLV1H12のVH領域のヒト化配列の変異体である。いくつかの態様では、重鎖は、式V1-X-V2-Cを含み、式中、X領域は、改変超長CDR3配列を含み;V2領域は、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域は、免疫グロブリン定常領域、例えば、記載されるような改変IgG（例えば、IgG1）定常領域を含む。いくつかの態様では、重鎖のV1領域は、SEQ ID NO:197に示されるアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:197に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも65％もしくは少なくとも約65％、少なくとも70％もしくは少なくとも約70％、少なくとも75％もしくは少なくとも約75％、少なくとも80％もしくは少なくとも約80％、少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、V1領域は、SEQ ID NO:197に示される配列を含む。いくつかの態様では、Xは、SEQ ID NO:206～208のいずれかに示される配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:203に示される配列、またはSEQ ID NO:203に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:203に示される配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:204に示される配列、またはSEQ ID NO:204に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:204に示される配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:205に示される配列、またはSEQ ID NO:205に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:205に示される配列を含む。

【0182】

特定の態様では、本明細書で提供されるキメラIL-15改変抗体または抗原結合断片は、SEQ ID NO:7に示されるヌクレオチドの配列によってコードされる可変重鎖配列、またはSEQ ID NO:7に示されるヌクレトイド配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すヌクレオチドの配列を含有し、IL-15配列を含有する改変超長CDR3が含有される。いくつかの態様では、本明細書で提供されるキメラIL-15改変抗体または抗原結合断片は、SEQ ID NO:7に示されるヌクレオチドの配列によってコードされる可変重鎖配列を含む。いくつかの態様では、本明細書で提供されるキメラIL-15改変抗体または抗原結合断片は、SEQ ID NO:7に示されるヌクレオチドの配列によってコードされる可変重鎖配列からなるか、または可変重鎖配列から本質的になる。

【0183】

いくつかの態様では、重鎖は、ヒト定常領域に結合していると記載の可変重鎖を含む。いくつかの態様では、ヒト定常領域は、CH1-CH2-CH3定常ドメインを含む。いくつかの態様では、ヒト定常領域は、ヒトIgG1（例えば、SEQ ID NO:196に示される配列、またはその天然に存在する変異体、例えばK97R、D239E、もしくはL241M変異を有する）のものである。

【0184】

いくつかの態様では、ヒトIgGは、ヒトIgG1（例えば、SEQ ID NO:196に示される配列、またはその天然に存在する変異体、例えばK97R、D239E、もしくはL241M変異を有する）である。

【0185】

いくつかの態様では、重鎖定常領域は、変異または改変されており、すなわち、改変定常領域である。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、改変ヒトIgG重鎖定常領域である。場合によっては、変異は、重鎖定常領域のエフェクター活性を低下させるための1つまたは複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、抗体のエフェクター活性を低下させるように改変されている。いくつかの態様では、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、低下したエフェクター活性を有する。いくつかの態様では、エフェクター活性は、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下している。記載される態様のいずれかのいくつかでは、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、野生型ヒトIgG1の定常領域と比較して改変されている。いくつかの態様では、改変ヒトIgG重鎖定常領域は、SEQ ID NO:196（またはその天然に存在する変異体、例えばK97R、D239E、もしくはL241M変異を有する変異体）と比較して1つまたは複数のアミノ酸置換によって改変されており、SEQ ID NO:196またはその天然変異体に対して少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、または少なくとも98％の配列同一性を示し、例えば重鎖定常領域のエフェクター活性を低下させるために1つまたは複数のアミノ酸置換を含有する配列を有する。

【0186】

エフェクター機能を変更する、例えば、低下させるための重鎖定常領域に対する変異の様々な例が知られており、以下に記載される任意のものを含む。いくつかの態様では、重鎖定常領域におけるアミノ酸置換への言及は、特定のSEQ ID NO:を参照して記載されない限り、KabatによるEUナンバリング（Kabatナンバリングとも呼ばれる）によるものである。EUナンバリングは公知であり、Kabat,E.A.et al.Sequences of Proteins of Immunological interest.5th ed.US Department of Health and Human Services,NIH publication No.91-3242（1991）に報告されているように、最新のIMGT Scientific Chart（IMGT（登録商標）、国際ImMunoGeneTics情報システム（登録商標）、http://www.imgt.org/IMGTScientificChart/Numbering/Hu_IGHGnber.html（作成:2001年5月17日、最終更新:2013年1月10日）およびEUインデックスに従う。

【0187】

いくつかの態様では、低下したエフェクター機能を示す改変重鎖定常領域は、細胞表面標的へのキメラ抗体の結合、例えば、IL-15受容体サブユニットへのIL-15配列の結合が所望されるが、補体依存性細胞傷害（CDC）および抗体依存性細胞傷害（ADCC）などの特定のエフェクター機能が不要または有害である適用の場合の望ましい候補であり得る。インビトロおよび/またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、CDCおよび/またはADCC活性の低減/枯渇を確認することができる。例えば、提供されるキメラ抗体がFcγR結合を欠く（したがって、おそらくADCC活性を欠く）ことを確実にするために、Fc受容体（FcR）結合アッセイを行うことができる。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体は、FcγR結合を欠き、FcRn結合能を保持する。ADCCを媒介するための初代細胞であるNK細胞はFcγRIIIのみを発現し、単球はFcγRI、FcγRIIおよびFcγRIIIを発現する。関心対象の分子のADCC活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第5500362号（例えば、Hellstrom,I.et al.Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063（1986）を参照）およびHellstrom,I et al.,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502（1985）;米国特許第5821337号（Bruggemann,M.et al.,J.Exp.Med.166:1351-1361（1987）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリーのためのACTI（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（CellTechnology,Inc.Mountain View,Calif.;およびCytoTox 96（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Promega,Madison,Wis.）を参照。そのようなアッセイの有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球細胞（PBMC）およびナチュラルキラー（NK）細胞が挙げられる。代替的または追加的に、関心対象の分子のADCC活性を、インビボにおいて、例えば、Clynes et al.Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656（1998）に開示されているモデルのような動物モデルにおいて評価してもよい。C1q結合アッセイはまた、多重特異性ポリペプチド構築物またはその切断された成分がC1qに結合することができない、したがってCDC活性を欠くことを確認するために実行され得る。例えば、国際公開公報第2006/029879号および国際公開公報第2005/100402号のC1qおよびC3c結合ELISAを参照されたい。補体活性化を評価するために、CDCアッセイを実施してもよい（例えば、Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods 202:163（1996）;Cragg,M.S.et al.,Blood 101:1045-1052（2003）;およびCragg,M.S.and M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743（2004）を参照）。FcRn結合およびインビボでのクリアランス/半減期の決定もまた、当技術分野において公知の方法（例えば、Petkova,S.B.et al.,Int'l.Immunol.18（12）:1759-1769（2006）を参照）を使用して実施することができる。

【0188】

いくつかの態様では、重鎖定常領域は、抗体依存性細胞傷害（ADCC）および/または補体依存性細胞傷害（CDC）を変更するように改変され、例えば、アミノ酸の改変は、Natsume et al.,2008 Cancer Res,68（10）:3863-72;Idusogie et al.,2001 J Immunol,166（4）:2571-5;Moore et al.,2010 mAbs,2（2）:181-189;Lazar et al.,2006 PNAS,103（11）:4005-4010,Shields et al.,2001 JBC,276（9）:6591-6604;Stavenhagen et al.,2007 Cancer Res,67（18）:8882-8890;Stavenhagen et al.,2008 Advan.Enzyme Regul.,48:152-164;Alegre et al,1992 J Immunol,148:3461-3468;Reviewed in Kaneko and Niwa,2011 Biodrugs,25（1）:1-11に記載されている。

【0189】

いくつかの態様では、重鎖定常領域は、Fc受容体結合を低減するために以下の位置:Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Ser298（S298）、Asn297（N297）、Asn325（N325）、Ala327（A327）またはPro329（P329）の1つまたは複数で変更されている。例えば、Leu 234Ala（L234A）、Leu235Ala（L235A）、Leu235Glu（L235E）、Asp265Asn（D265N）、Asp265Ala（D265A）、Asp270Asn（D270N）、Ser298Asn（S298N）、Asn297Ala（N297A）、Pro329Ala（P329A）またはPro239Gly（P329G）、Asn325Glu（N325E）またはAla327Ser（A327S）である。いくつかの態様では、重鎖定常領域内の改変は、Fc受容体-ガンマ受容体への結合を低減するが、新生児Fc受容体（FcRn）への結合に対する影響は最小限である。

【0190】

いくつかの態様では、重鎖定常領域は、キメラ抗体のグリコシル化を防止するために、アミノ酸Asn297（Kabatナンバリング）、例えば、Asn297Ala（N297A）またはAsn297Asp（N297D）において改変されている。いくつかの態様では、重鎖定常領域は、Fc受容体相互作用を変更するために、アミノ酸Leu235（Kabatナンバリング）、例えばLeu235Glu（L235E）またはLeu235Ala（L235A）において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体相互作用を変更するために、アミノ酸Leu234（Kabatナンバリング）、例えばLeu234Ala（L234A）において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体相互作用を変更するために、アミノ酸Leu234（Kabatナンバリング）、例えばLeu235Glu（L235E）において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、アミノ酸234および235の両方、例えば、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）またはLeu234ValおよびLeu235Ala（L234V/L235A）において変更されている。いくつかの態様では、改変重鎖定常領域は、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異を含む。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、アミノ酸234、235、および297、例えば、Leu234Ala、Leu235Ala、Asn297Ala（L234A/L235A/N297A）において変更されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、234、235、および329のアミノ酸、例えば、Leu234Ala、Leu235Ala、Pro239Ala（L234A/L235A/P329A）において変更されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体相互作用を変更するために、アミノ酸Asp265（Kabatナンバリング）、例えばAsp265Ala（D265A）において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体相互作用を変更するために、アミノ酸Pro329（Kabatナンバリング）、例えばPro329Ala（P329A）またはPro329Gly（P329G）において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、アミノ酸265および329の両方、例えば、Asp265AlaおよびPro329Ala（D265A/P329A）またはAsp265AlaおよびPro329Gly（D265A/P329G）において変更されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、234、235、および265のアミノ酸、例えば、Leu234Ala、Leu235Ala、Asp265Ala（L234A/L235A/D265A）において変更されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、234、235、および329のアミノ酸、例えば、Leu234Ala、Leu235Ala、Pro329Gly（L234A/L235A/P329G）において変更されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、234、235、265、および329のアミノ酸、例えば、Leu234Ala、Leu235Ala、Asp265Ala、Pro329Gly（L234A/L235A/D265A/P329G）において変更されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体結合を低減するためにGly235において変更されている。例えば、この場合、Gly235は、キメラ抗体の重鎖定常領域から欠失している。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、CD32Aとの相互作用を増強するために、アミノ酸Gly236、例えば、Gly236Ala（G236A）において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Lys447（Kabat et al 1991 Sequences of Proteins of Immunological InterestのEUインデックス）を欠く。

【0191】

いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体結合を低減するために、以下の位置:Glu233（E233）、Leu234（L234）、またはLeu235（L235）のうちの1つまたは複数においてアミノ酸を欠いている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、Fc受容体結合を低減するために、以下の位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、またはLeu235（L235）のうちの1つまたは複数においてアミノ酸を欠き、Asp265（D265）、Asn297（N297）、またはPro329（P329）のうちの1つまたは複数において改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖定常領域は、IgG1 E233、L234、およびL235に対応する、下部ヒンジ内の3つのアミノ酸欠失を含む。いくつかの局面では、そのような重鎖定常領域はFcγRと係合せず、したがって、「エフェクターサイレント」または「エフェクターヌル」と呼ばれる。

【0192】

いくつかの態様では、改変重鎖定常領域は、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異を含む。いくつかの態様では、改変重鎖定常領域は、SEQ ID NO:187に示される配列、またはSEQ ID NO:187に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す、低下したエフェクター活性を有する配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:187に示される配列を含む。いくつかの態様では、改変重鎖定常領域は、SEQ ID NO:188に示される配列、またはSEQ ID NO:188に示される配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示す、低下したエフェクター活性を有する配列を含む。いくつかの態様では、改変VH領域は、SEQ ID NO:188に示される配列を含む。

【0193】

B. 軽鎖領域
いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体または抗原結合断片は、軽鎖可変領域をさらに含む。いくつかの態様では、キメラ抗体可変重鎖領域または重鎖は、ウシ（bovine）配列に基づき、ウシ（bovine）抗体の可変軽領域または軽鎖と対合する。いくつかの態様では、キメラ抗体可変重鎖領域または重鎖は、ヒト化配列に基づき、ウシ（bovine）抗体の可変軽領域または軽鎖と対合する。いくつかの態様では、キメラ抗体可変重鎖領域または重鎖は、ヒト化配列に基づき、ウシ（bovine）抗体のヒト化可変軽領域または軽鎖と対合する。いくつかの態様では、軽鎖は、ラムダ軽鎖である。

【0194】

いくつかの態様では、可変軽領域は、ウシ（bovine）抗体の可変軽領域、例えばBLVH12、BLV5D3、BLV8C11、BF1H1、BLV5B8および/またはF18の可変軽領域である。いくつかの態様では、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:27または29のポリペプチド配列に基づくかまたは由来する配列を含み得る。いくつかの態様では、軽鎖ポリペプチド配列は、SEQ ID NO:8のDNA配列に基づくかまたは由来するDNA配列によってコードされる。いくつかの態様では、軽鎖ポリペプチド配列は、SEQ ID NO:168のDNA配列に基づくかまたは由来するDNA配列によってコードされる。

【0195】

いくつかの態様では、軽鎖は、ヒトラムダ軽鎖定常領域（例えば、SEQ ID NO:155に示される）に結合しているウシ（bovine）抗体の可変軽領域を含む。いくつかの態様では、BLV1H12軽鎖可変領域の一部（例えば、SEQ ID NO:8またはSEQ ID NO:168に示される）は、ヒトラムダ軽鎖定常領域と結合される。

【0196】

いくつかの態様では、軽鎖は、ヒト化軽鎖であるか、またはヒト軽鎖である。態様では、本開示は、超長CDR3を含むヒト化重鎖とヒト軽鎖との対形成を提供する。いくつかの態様では、軽鎖は、ウシ（bovine）超長CDR3重鎖と対形成することが知られているウシ（bovine）軽鎖と相同である。ウシ（Bos Taurus）由来のラムダ領域に相同なVL1-47、VL1-40、VL1-51、およびVL2-18を含むいくつかのヒトVL配列を上記の配列と対にするために使用することができる。いくつかの態様では、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:156または173～176のいずれか1つに示される配列である。いくつかの態様では、軽鎖可変配列は、SEQ ID NO:177～180のいずれか1つに示される配列によってコードされる配列である。いくつかの態様では、軽鎖可変領域は、SEQ ID NO:156に示されるVL1-51生殖細胞系配列の可変領域を含む。

【0197】

いくつかの態様では、軽鎖可変領域は、1つまたは複数のアミノ酸改変を含有する、上記のいずれかなどのヒト生殖細胞系軽鎖配列である。そのような改変は、ヒト軽鎖中の特定のアミノ酸残基の、ウシ（bovine）軽鎖配列中の対応する位置の残基への置換を含み得る。改変軽鎖は、超長CDR3を含む抗体の収率を改善し、および/またはその結合特異性を増加させ得る。いくつかの態様では、改変は、Kabatナンバリングに基づくアミノ酸置換S2A、T5N、P8S、A12G、A13SおよびP14Lの1つまたは複数を含む。いくつかの態様では、改変は、Kabatナンバリングに基づくアミノ酸置換S2A、T5N、P8S、A12G、A13SおよびP14Lを含む。いくつかの態様では、改変はCDR1にあり、アミノ酸置換I29VおよびN32Gを含む。いくつかの態様では、改変はCDR2にあり、DNNのGDTへの置換を含む。いくつかの態様では、改変は、CDR2にあり、GDTSRAに対する置換DNNKRPを含む。いくつかの態様では、改変は、前述のいずれかの組み合わせを含む。例えば、ヒト生殖細胞系軽鎖配列の提供される改変は、Kabatナンバリングに基づくアミノ酸置換S2A、T5N、P8S、A12G、A13SおよびP14LならびにCDR2におけるDNNのGDTへの置換を含む。

【0198】

いくつかの態様では、軽鎖は、ヒトラムダ軽鎖定常領域（例えば、SEQ ID NO:155に示される）に結合している記載のヒト化可変軽鎖を含む。いくつかの態様では、改変ヒト生殖細胞系軽鎖などの軽鎖可変領域の一部は、ヒトラムダ軽鎖定常領域と結合される。

【0199】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体の軽鎖は、ヒト化軽鎖である。いくつかの態様では、軽鎖は、SEQ ID NO:181に示されるアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:181に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも86％もしくは少なくとも約86％、少なくとも87％もしくは少なくとも約87％、少なくとも88％もしくは少なくとも約88％、少なくとも89％もしくは少なくとも約89％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも91％もしくは少なくとも約91％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも93％もしくは少なくとも約93％、少なくとも94％もしくは少なくとも約94％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様では、軽鎖は、SEQ ID NO:181に示される配列を含む。いくつかの態様では、軽鎖の配列は、SEQ ID NO:181に示されている。

【0200】

C. IL-15RΑ SUSHIドメイン
いくつかの態様では、本明細書で提供されるIL-15配列またはその生物学的に活性な部分を含有するキメラサイトカイン抗体は、IL-15高親和性受容体α（IL15Rα）受容体サブユニットの全部または一部、例えばIL15Rαの細胞外ドメインを含有する部分とさらに連結または複合体化され得る。いくつかの態様では、IL15Rαの全部または一部は、受容体βおよびγサブユニット（IL2/15Rβおよびγc）受容体サブユニットへのトランスシグナル伝達を増大させるために、提供されるキメラ抗体に連結または複合体化される。

【0201】

いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体は、IL15Rαの細胞外ドメインの一部と連結または複合体化される。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体は、IL15Rα sushiドメインと連結または複合体化される。いくつかの態様では、IL15Rα sushiドメインは、SEQ ID NO:2に示される配列を含む。

【0202】

いくつかの態様では、IL15Rαの細胞外ドメイン、例えばIL15Rα sushiドメインと連結または複合体化されており、ウシ（bovine）抗体またはそのヒト化配列の超長CDR3のノブ領域の全部または一部と置き換わっているIL-15配列またはその生物学的に活性な部分（例えば、IL-15配列は、超長CDR3の上行性ストークと下行性ストークとの間に配置される）を重鎖またはその可変配列が含む、キメラIL-15改変抗体または抗原結合断片が本明細書で提供される。いくつかの態様では、キメラIL-15改変抗体または抗原結合断片は、SEQ ID NO:2に示されるIL15Rα sushiドメインと複合体化されている。

【0203】

いくつかの態様では、キメラ抗体は、IL15Rα細胞外ドメインの全部または一部、例えば、IL15Rα sushiドメイン、例えばSEQ ID NO:2に示されるものを、宿主細胞においてキメラ抗体の重鎖領域および軽鎖領域と共発現させることによって生成され得る。いくつかの態様では、IL15Rα sushiドメイン、例えばSEQ ID NO:2に示されるものは、宿主細胞においてキメラ抗体の重鎖領域および軽鎖領域と共発現される。

【0204】

いくつかの態様では、IL-15サイトカイン配列は、IL15Rα細胞外ドメインの全部または一部、例えば、IL15Rα sushiドメイン、例えばSEQ ID NO:2に示されるものに連結されている。いくつかの態様では、IL-15配列およびIL15Rα sushiドメイン配列は、超長CDR3の上行性ストークと下行性ストークとの間に配置される。

【0205】

いくつかの態様では、キメラ抗体の重鎖またはその可変配列は、IL15Rαの細胞外ドメイン、例えばIL15Rα sushiドメインに連結されている。いくつかの態様では、キメラ抗体の軽鎖またはその可変配列は、IL15Rαの細胞外ドメイン、例えばIL15Rα sushiドメインに連結されている。

【0206】

いくつかの態様では、IL-15配列が超長CDR3のノブの全部または一部と置き換わっている（例えば、超長CDR3の上行性ストークと下行性ストークとの間に配置される）重鎖またはその可変配列と、IL15Rαの細胞外ドメイン、例えばIL15Rα sushiドメインに連結されている軽鎖またはその可変配列とを含有する、キメラIL-15改変抗体または抗原結合断片が本明細書で提供される。いくつかの態様では、キメラIL-15改変抗体または抗原結合断片は、SEQ ID NO:2に示されるIL15Rα sushiドメインに連結されている。いくつかの態様では、軽鎖は、SEQ ID NO:168によってコードされる配列を含むか、またはその可変配列である。いくつかの態様では、軽鎖は、SEQ ID NO:181に示される配列を含むか、またはその可変配列である。IL15Rαの細胞外ドメイン（例えば、IL15Rα sushiドメイン、例えばSEQ ID NO:2に示されるもの）とその軽鎖または可変配列との間の連結は、ペプチドリンカーを介する。いくつかの態様では、リンカーは、グリシンリンカーまたはグリシン-セリン（GS）リンカーなどの柔軟なリンカーである。いくつかの態様では、ペプチドリンカーはGSリンカーである。例示的なGSリンカーとしては、限定されないが、SEQ ID NO:150～154に示される配列、またはSEQ ID NO:163もしくはSEQ ID NO:164に示されるヌクレオチド配列によってコードされる配列のいずれかが挙げられる。いくつかの態様では、リンカーはGSである。

【0207】

いくつかの態様では、本明細書で提供されるキメラIL-15改変抗体または抗原結合断片は、IL-15配列が超長CDR3のノブの全部または一部と置き換わっている（例えば、超長CDR3の上行性ストークと下行性ストークとの間に配置される）重鎖またはその可変配列と、SEQ ID NO:3によってコードされるアミノ酸の配列を含む軽鎖またはその可変配列とを含有する。

【0208】

D. ベクター、宿主細胞、および組換え方法
提供されるキメラ抗体または抗原結合断片は、任意の適切な方法、例えば、抗体もしくはその断片、またはその重鎖もしくは軽鎖をコードするポリヌクレオチドの使用を含む方法に従って産生され得る。一例として、ポリヌクレオチドは、提供されるキメラ抗体または抗原結合断片の最終的な発現、例えばベクターが導入された宿主細胞による発現に使用される複製可能なベクターに挿入され得る。そのようなポリヌクレオチド、ベクター、例えば発現ベクター、および宿主細胞も本明細書で提供され、本明細書に記載の任意のものを含む。

【0209】

本明細書に開示される抗体またはその断片の組換え産生のために、それをコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（DNAの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。抗体をコードするDNAは、従来の手順（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を用いて容易に単離され、配列決定される。例示的な態様では、超長CDR3を含む抗体、超長CDR3を含む可変領域、または超長CDR3をコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（DNAの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。多くのベクターが利用可能である。ベクターの選択は、使用される宿主細胞に部分的に依存する。一般に、好ましい宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般に哺乳動物）起源のものである。IgG、IgM、IgA、IgD、およびIgE定常領域を含む任意のアイソタイプの定常領域をこの目的のために使用することができ、そのような定常領域は任意のヒトまたは動物種から得ることができることが理解されよう。

【0210】

真核生物ウイルス由来の調節要素を含有する発現ベクターは、典型的には、真核生物発現ベクター、例えばSV40ベクター、パピローマウイルス（papilloma virus）ベクター、およびエプスタインバーウイルス（Epstein-Barr virus）由来のベクターにおいて使用される。他の例示的な真核生物ベクターとしては、pMSG、pAV009/A＋、pMTO10/A＋、pMAMneo-5、バキュロウイルス（baculovirus）pDSVE、およびCMVプロモーター、SV40初期プロモーター、SV40後期プロモーター、メタロチオネインプロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（murine mammary tumor virus）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（Rous sarcoma virus）プロモーター、ポリヘドリンプロモーター、または真核生物細胞での発現に有効であることが示されている他のプロモーターの指示下でタンパク質の発現を可能にする任意の他のベクターが挙げられる。

【0211】

いくつかの発現系は、チミジンキナーゼおよびジヒドロ葉酸レダクターゼなどの遺伝子増幅を提供するマーカーを有する。あるいは、遺伝子増幅を伴わない高収率発現系も適しており、例えば、昆虫細胞においてバキュロウイルスベクターを使用し、ポリヘドリンプロモーターまたは他の強力なバキュロウイルスプロモーターの指示下で部分的にヒト超長CDR3抗体鎖をコードする核酸配列を用いる。

【0212】

本明細書に開示される抗体のポリペプチド成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準的な組換え技術を使用して得ることができる。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成装置またはPCR技術を使用して合成することができる。得られたら、ポリペプチドをコードする配列を、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製および発現することができる組換えベクターに挿入する。本開示の目的のために、当技術分野において入手可能かつ公知の多くのベクターを使用することができる。適切なベクターの選択は、ベクターに挿入される核酸のサイズおよびベクターで形質転換される特定の宿主細胞に主に依存する。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現、またはその両方）およびそれが存在する特定の宿主細胞とのその適合性に応じて、様々な成分を含有する。ベクター成分には、一般に、限定されないが、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（RBS）、シグナル配列、異種核酸挿入物および転写終結配列が含まれる。さらに、超長CDR3を含むV領域を、任意でC領域に融合して、定常領域を含む抗体を産生することができる。

【0213】

一般に、宿主細胞に適合する種に由来するレプリコンおよび制御配列を含有するプラスミドベクターが、これらの宿主に関連して使用される。ベクターは、通常、複製部位、ならびに形質転換細胞において表現型選択を提供することができるマーキング配列を有する。例えば、大腸菌（E.coli）は、典型的には、大腸菌種に由来するプラスミドであるpBR322を使用して形質転換される。pBR322は、アンピシリン（Amp）およびテトラサイクリン（Tet）耐性をコードする遺伝子を含有し、したがって形質転換した細胞を同定するための容易な手段を提供する。pBR322、その誘導体、または他の微生物プラスミドもしくはバクテリオファージはまた、内因性タンパク質の発現のために微生物によって使用され得るプロモーターを含有し得るか、または含有するように改変され得る。特定の抗体の発現に使用されるpBR322誘導体の例が記載されている（例えば、米国特許第5,648,237号明細書を参照）。

【0214】

さらに、宿主微生物に適合するレプリコンおよび制御配列を含有するファージベクターを、これらの宿主に関連して形質転換ベクターとして使用することができる。例えば、λGEM（商標）-11などのバクテリオファージを、大腸菌LE392などの感受性宿主細胞を形質転換するために使用することができる組換えベクターの作製に利用することができる。

【0215】

本明細書に開示される発現ベクターは、ポリペプチド成分の各々をコードする2つ以上のプロモーター-シストロン対を含み得る。プロモーターは、その発現を変調するシストロンの上流（5’）に位置する非翻訳調節配列である。原核生物プロモーターは、典型的には、誘導性および構成性の2つのクラスに分類される。誘導性プロモーターは、培養条件の変化、例えば栄養素の有無または温度の変化に応答して、その制御下でシストロンの転写レベルの増加を開始するプロモーターである。

【0216】

様々な潜在的な宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが周知である。選択されたプロモーターは、制限酵素消化を介してソースDNAからプロモーターを除去し、単離されたプロモーター配列を本明細書に開示されるベクターに挿入することによって、軽鎖または重鎖をコードするシストロンDNAに機能的に連結され得る。天然プロモーター配列および多くの異種プロモーターの両方を、標的遺伝子の増幅および/または発現を指示するのに使用することができる。いくつかの態様では、天然の標的ポリペプチドプロモーターと比較して、発現された標的遺伝子のより大きな転写およびより高い収率を一般に可能にするので、異種プロモーターが利用される。

【0217】

原核生物宿主での使用に適したプロモーターとしては、ara Bプロモーター、PhoAプロモーター、β-ガラクタマーゼおよびラクトースプロモーター系、トリプトファン（trp）プロモーター系、ならびにtacまたはtrcプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが挙げられる。しかしながら、細菌において機能性である他のプロモーター（他の公知の細菌またはファージプロモーターなど）も同様に適している。それらのヌクレオチド配列は公開されており、それにより、当業者は、リンカーまたはアダプターを使用して標的軽鎖および重鎖をコードするシストロンにそれらを機能的にライゲーションして（例えば、Siebenlist et al.（1980）Cell 20:269）、任意の必要な制限部位を供給することが可能になる。

【0218】

適切な細菌プロモーターは当技術分野で周知であり、上記のSambrookおよびRussell、ならびに上記のAusubelらの科学文献に十分に記載されている。組換え触媒ポリペプチドの抗体鎖を発現させるための細菌発現系は、例えば、大腸菌、バチルス属（Bacillus）種、およびサルモネラ菌（Salmonella）（Palva et al.,Gene,22:229-235（1983）、Mosbach et al.,Nature,302:543-545（1983））において利用可能である。

【0219】

本明細書に開示される一局面では、組換えベクター内の各シストロンは、発現されたポリペプチドの、膜を横切る転座を指示する分泌シグナル配列成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの成分であってもよいし、ベクターに挿入された標的ポリペプチドDNAの一部であってもよい。シグナル配列は、宿主細胞によって認識および処理される（例えば、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものでなければならない。異種ポリペプチドにもともとあるシグナル配列を認識および処理しない原核生物宿主細胞の場合、シグナル配列は、例えばPelB、OmpA、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ipp、または熱安定性エンテロトキシンII（STII）リーダー、LamB、PhoE、およびMBPより選択される原核生物シグナル配列で置換される。本明細書に開示される一態様では、発現系の両方のシストロンで使用されるシグナル配列は、STIIシグナル配列またはその変異体である。

【0220】

別の局面では、本開示による免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質で起こり得、したがって、各シストロン内の分泌シグナル配列の存在を必要としない。その点に関して、免疫グロブリン軽鎖および重鎖は、発現され、折り畳まれ、組み立てられて、細胞質内に機能性免疫グロブリンを形成する。特定の宿主株（例えば、大腸菌trxB株）は、ジスルフィド結合形成に有利な細胞質条件を提供し、それによって、発現されたタンパク質サブユニットの適切な折畳みおよび組立てを可能にする（例えば、Proba and Pluckthun Gene,159:203（1995）を参照）。

【0221】

抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が含まれる。一態様では、宿主細胞は真核生物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（Chinese Hamster Ovary,CHO）細胞、ヒト胚性腎臓（Human Embryonic Kidney,HEK）細胞またはリンパ系細胞（例えば、YO、NSO、Sp20細胞）である。例えば、抗体は、特にグリコシル化およびFcエフェクター機能が必要でない場合、細菌において産生され得る。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第5,648,237号、第5,789,199号、および第5,840,523号明細書を参照されたい（大腸菌における抗体断片の発現について記載しているCharlton,Methods in Molecular Biology,Vol. 248（B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.J.,2003）,pp. 245-254も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離され得、さらに精製され得る。原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体をコードするベクターのための適切なクローニングまたは発現宿主であり、これは、グリコシル化経路が「ヒト化」された真菌および酵母株を含み、結果として、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす。Gemgross,Nat. Biotech. 22:1409-1414（2004）,and Li et al.,Nat .Biotech. 24:210-215（2006）を参照されたい。グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞の形質移入に関連して使用され得る多数のバキュロウイルス（baculoviral）株が同定されている。これらの例は、限定ではなく例示である。定義された遺伝子型を有する上記の細菌のいずれかの誘導体を構築する方法は当技術分野で公知であり、例えば、Bass et al.,Proteins,8:309-314（1990）に記載されている。一般に、細菌の細胞内でのレプリコンの複製性を考慮して適切な細菌を選択する必要がある。例えば、pBR322、pBR325、pACYC177またはpKN410などの周知のプラスミドを使用してレプリコンを供給する場合、大腸菌、セラチア（Serratia）またはサルモネラ種を宿主として好適に使用することができる。典型的には、宿主細胞は最小量のタンパク質分解酵素を分泌すべきであり、さらなるプロテアーゼ阻害剤が望ましくは細胞培養物に組み込まれ得る。

【0222】

植物細胞培養物を宿主として利用することもできる。例えば、米国特許第5,959,177号、第6,040,498号、第6,420,548号、第7,125,978号、および第6,417,429号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのPLANTIBODIES（商標）技術を記載）を参照されたい。脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁状態で成長するように適合された哺乳動物細胞系が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞系の他の例は、SV40（COS-7）によって形質転換されたサル腎臓CV1系、ヒト胚性腎臓系（例えば、Graham et al.,Gen VlI’0l. 36:59（1977）に記載の293または293細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（BHK）、マウスセルトリ細胞（例えば、Mather,Biol. Reprod. 23:243-251（1980）に記載のTM4細胞）、サル腎臓細胞（CV1）、アフリカミドリザル腎臓細胞（VERO-76）、ヒト子宮頸癌細胞（HELA）、イヌ腎臓細胞（MDCK、バッファローラット肝細胞（BRL 3A）、ヒト肺細胞（W138）、ヒト肝細胞（Hep G2）、マウス乳腺腫瘍（MMT 060562）、例えばMather et al.,Annals NI’. Acad. Sci. 383:44-68（1982）に記載のTR1細胞、MRC 5細胞、およびFS4細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞系としては、DHFR’CHO細胞（Urlaub et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216（1980））を含むチャイニーズハムスター卵巣（CHO）細胞、およびYO、NSOおよびSp2/0などの骨髄腫細胞系が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞系の総説については、例えば、Yazaki and Wu,Methods in Molecular Biology,Vol. 248（B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,N.］.）,pp. 255-268（2003）を参照されたい。

【0223】

そのような一態様では、宿主細胞は、（1）抗体のVLを含むアミノ酸配列および抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（2）抗体のVLを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第1のベクターおよび抗体のVHを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第2のベクターを含む（例えば、それで形質転換されている）。

【0224】

使用される宿主細胞に応じて、形質転換は、そのような細胞に適した標準的な技術を使用して行われる。塩化カルシウムを使用するカルシウム処理は、一般に、実質的な細胞壁バリアを含有する細菌細胞に使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール/DMSOを使用する。使用されるさらに別の技術はエレクトロポレーションである。

【0225】

本開示の発現されたポリペプチドは、宿主細胞のペリプラズムに分泌され、そこから回収されるか、または培地に輸送される。ペリプラズムからのタンパク質回収は、典型的には、一般に浸透圧ショック、超音波処理または溶解などの手段によって微生物を破壊することを含む。細胞が破壊されると、細胞残屑または細胞全体が遠心分離または濾過によって除去され得る。タンパク質は、例えば、アフィニティー樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製され得る。あるいは、培地中に輸送されるタンパク質は、その中で単離され得る。産生されたタンパク質のさらなる精製のために、細胞を培養物から除去し、培養上清を濾過し、濃縮することができる。発現されたポリペプチドは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（PAGE）およびウエスタンブロットアッセイなどの一般的に公知の方法を使用してさらに単離および同定することができる。

【0226】

抗体産生は、発酵工程によって大量に行われ得る。様々な大規模フェドバッチ発酵手順が組換えタンパク質の産生に利用可能である。大規模発酵は、少なくとも1000リットルの容量、好ましくは約1,000～100,000リットルの容量を有する。これらの発酵槽は、酸素および栄養素、特にグルコース（好ましい炭素/エネルギー源）を分散させるために撹拌インペラを使用する。小規模発酵は、一般に、容積が約100リットル以下であり、かつ約1リットル～約100リットルの範囲であり得る発酵槽における発酵を指す。

【0227】

発酵工程では、タンパク質発現の誘導は、典型的には、細胞が適切な条件下で、所望の密度、例えば約180～220のOD550まで成長した後に開始され、その段階で細胞は初期静止期にある。当技術分野で公知であり、上記で記載されるように、使用されるベクター構築物に従って、様々な誘導物質が使用され得る。細胞は、誘導前により短い期間成長させることができる。細胞は、通常、約12～50時間誘導されるが、より長いまたはより短い誘導時間を使用してもよい。

【0228】

本明細書に開示されるポリペプチドの産生収率および品質を改善するために、様々な発酵条件に修正することができる。例えば、分泌された抗体ポリペプチドの適切な組立ておよび折畳みを改善するために、Dsbタンパク質（DsbA、DsbB、DsbC、DsbD、および/またはDsbG）またはFkpA（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルcis,transイソメラーゼ）などのシャペロンタンパク質を過剰発現するさらなるベクターを使用して、宿主原核細胞を共形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞で産生された異種タンパク質の適切な折畳みおよび可溶性を促進することが実証されている（例えば、Chen et al.（1999）J Bio Chem 274:19601-19605、米国特許第6,083,715号明細書、米国特許第6,027,888号明細書、Bothmann and Pluckthun（2000）J. Biol. Chem. 275:17100-17105、Ramm and Pluckthun（2000）J. Biol. Chem. 275:17106-17113、Arie et al.（2001）Mol. Microbiol. 39:199-210を参照）。

【0229】

発現された異種タンパク質（特にタンパク質分解感受性のもの）のタンパク質分解を最小限に抑えるために、タンパク質分解酵素が欠損した特定の宿主株を本開示に使用することができる。例えば、宿主細胞株は、プロテアーゼIII、OmpT、DegP、Tsp、プロテアーゼI、プロテアーゼMi、プロテアーゼV、プロテアーゼVIおよびそれらの組み合わせなどの公知の細菌プロテアーゼをコードする遺伝子に遺伝子変異をもたらすように改変され得る。いくつかの大腸菌プロテアーゼ欠損株が入手可能である（例えば、Joly et al.（1998）、上記参照、米国特許第5,264,365号明細書、米国特許第5,508,192号明細書、Hara et al.,Microbial Drug Resistance,2:63-72（1996）を参照）。

【0230】

タンパク質分解酵素が欠損しており、1つまたは複数のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドで形質転換された大腸菌株は、本明細書に開示される発現系における宿主細胞として使用され得る。

【0231】

当技術分野で公知の標準的なタンパク質精製方法を使用することができる。以下の手順は、適切な精製手順の例である。免疫親和性またはイオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相HPLC、シリカまたはカチオン交換樹脂、例えばDEAEでのクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、SDS-PAGE、硫酸アンモニウム沈殿、および例えばSephadex G-75を使用したゲル濾過。

【0232】

一局面では、固相に固定されたプロテインAが、本明細書に開示される全長抗体産物の免疫親和性精製に使用される。プロテインAは、抗体のFc領域に高い親和性で結合する黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureas）由来の41 kD細胞壁タンパク質である（例えば、Lindmark et al（1983）J. Immunol. Meth. 62:1-13を参照）。プロテインAが固定される固相は、好ましくはガラスまたはシリカ表面を含むカラム、より好ましくは制御された細孔ガラスカラムまたはケイ酸カラムである。いくつかの用途では、カラムは、混入物質の非特異的付着を防止するためにグリセリンなどの試薬でコーティングされている。

【0233】

精製の最初の段階として、上記のような細胞培養物に由来する調製物をプロテインA固定化固相に適用して、関心対象の抗体をプロテインAに特異的に結合させる。次いで、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した混入物質を除去する。最後に、関心対象の抗体を溶出によって固相から回収する。

【0234】

III. 薬学的組成物
本明細書に開示される超長CDR3、核酸、またはベクターを含む抗体または抗原結合断片は、組成物、特に薬学的組成物に製剤化することができる。超長CDR3を含む抗体を有するそのような組成物は、本明細書に開示される超長CDR3、抗体断片、核酸、またはベクターを含む治療有効量または予防有効量の抗体を、適切な担体、例えば薬学的に許容される剤と混合して含む。典型的には、本明細書に開示される超長CDR3、抗体断片、核酸、またはベクターを含む抗体は、薬学的組成物に製剤化する前に、投与するために十分に精製される。そのような薬学的組成物は本明細書で提供され、本明細書に記載のいずれかを含む。

【0235】

本発明の薬学的組成物に使用するための薬学的に許容される剤としては、担体、賦形剤、希釈液、酸化防止剤、保存剤、着色剤、香味剤および希釈剤、乳化剤、懸濁剤、溶媒、充填剤、増量剤、緩衝液、送達ビヒクル、等張化剤、共溶媒、湿潤剤、錯化剤、緩衝剤、抗菌剤、および界面活性剤が挙げられる。

【0236】

血清アルブミンと混合された中性緩衝食塩水または生理食塩水は、例示的な適切な担体である。薬学的組成物としては、酸化防止剤、例えばアスコルビン酸;低分子量ポリペプチド;タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン;単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストリンを含む他の炭水化物;キレート剤、例えばEDTA;糖アルコール、例えばマンニトールまたはソルビトール;塩形成対イオン、例えばナトリウム;および/または非イオン性界面活性剤、例えば、Tween、プルロニクスまたはポリエチレングリコール（PEG）が挙げられる。また、例として、適切な等張化増強剤としては、アルカリ金属ハロゲン化物（好ましくは、塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。適切な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸などが挙げられる。過酸化水素も保存剤として使用され得る。適切な共溶媒としては、グリセリン、プロピレングリコール、およびPEGが挙げられる。適切な錯化剤としては、カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ-シクロデキストリンまたはヒドロキシ-プロピル-ベータ-シクロデキストリンが挙げられる。適切な界面活性剤または湿潤剤としては、ソルビタンエステル、ポリソルベート、例えばポリソルベート80、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパール（tyloxapal）などが挙げられる。緩衝液は、アセテート、ボレート、シトレート、ホスフェート、ビカルボネート、またはTris-HClなどの従来の緩衝液であってもよい。アセテート緩衝液は約pH4～5.5であり得、Tris緩衝液は約pH7～8.5であり得る。さらなる薬学的剤は、Remington’s Pharmaceutical Sciences,18th Edition,A.R. Gennaro,ed.,Mack Publishing Company,1990に記載されている。

【0237】

組成物は、液体形態または凍結乾燥もしくはフリーズドライ形態であってもよく、1つまたは複数の凍結保護剤、賦形剤、界面活性剤、高分子量構造添加剤および/または増量剤を含んでもよい（例えば、米国特許第6,685,940号、第6,566,329号、および第6,372,716号明細書を参照）。一態様では、スクロース、ラクトースまたはトレハロースなどの非還元糖である凍結保護剤が含まれる。一般に含まれる凍結保護剤の量は、再構成時に得られる製剤が等張になるような量であるが、高張性またはわずかに低張性の製剤も適切であり得る。さらに、凍結保護剤の量は、凍結乾燥時のタンパク質の許容できない量の分解および/または凝集を防止するのに十分であるべきである。予備凍結乾燥製剤中の糖（例えば、スクロース、ラクトース、トレハロース）に対する例示的な凍結保護剤濃度は、約10mM～約400mMである。別の態様では、界面活性剤、例えば非イオン性界面活性剤およびイオン性界面活性剤、例えばポリソルベート（例えば、ポリソルベート20、ポリソルベート80）;ポロキサマー（例えば、ポロキサマー188）;ポリ（エチレングリコール）フェニルエーテル（例えば、Triton）;ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）;ラウリル硫酸ナトリウム;オクチルグリコシドナトリウム;ラウリル-、ミリスチル-、リノレイル-、またはステアリル-スルホベタイン;ラウリル-、ミリスチル-、リノレイル-またはステアリル-サルコシン;リノレイル、ミリスチル-、またはセチル-ベタイン;ラウロアミドプロピル-、コカミドプロピル-、リノールアミドプロピル-、ミリスタミドプロピル-、パルミドプロピル-、またはイソステアラミドプロピル-ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）;ミリストアミドプロピル-、パルミドプロピル-、またはイソステアラミドプロピル-ジメチルアミン;ナトリウムメチルココイル-またはジナトリウムメチルオフェイル（ofeyl）-タウレート;およびMONAQUAT（商標）シリーズ（Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレンとプロピレングリコールのコポリマー（例えば、プルロニクス、PF68など）が含まれる。予備凍結乾燥製剤中に存在し得る界面活性剤の例示的な量は、約0.001～0.5％である。高分子量構造添加剤（例えば、充填剤、結合剤）としては、例えば、アラビアゴム、アルブミン、アルギン酸、リン酸カルシウム（二塩基性）、セルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶セルロース、デキストラン、デキストリン、デキストレート、スクロース、チロース、アルファ化デンプン、硫酸カルシウム、アミロース、グリシン、ベントナイト、マルトース、ソルビトール、エチルセルロース、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二ナトリウム、ピロ亜硫酸二ナトリウム、ポリビニルアルコール、ゼラチン、グルコース、グアーガム、液体グルコース、圧縮糖、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、マルトデキストリン、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラガント微結晶セルロース、デンプン、およびゼインが挙げられる。高分子量構造添加剤の例示的な濃度は、0.1重量％～10重量％である。他の態様では、増量剤（例えば、マンニトール、グリシン）が含まれてもよい。

【0238】

組成物は、非経口投与に適し得る。例示的な組成物は、関節内、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、または病巣内経路などの、当業者が利用可能な任意の経路による動物への注射または注入に適している。非経口製剤は、典型的には、任意で薬学的に許容される保存剤を含有する、滅菌された、発熱物質を含まない、等張水溶液である。

【0239】

非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体としては、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール性/水溶液、エマルジョン、または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養補充剤、リンゲルデキストロースに基づくものなどの電解質補充剤などが挙げられる。保存剤および他の添加剤、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、不活性ガスなども存在し得る。概して、Remington’s Pharmaceutical Science,16th Ed.,Mack Eds.,1980を参照されたい。

【0240】

本明細書に記載の薬学的組成物は、産物の局所濃度（例えば、ボーラス、デポ効果）および/または特定の局所環境における安定性もしくは半減期の増加を提供する様式で、制御送達または持続送達のために製剤化され得る。組成物は、ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の微粒子調製物、ならびに、生分解性マトリックス、注射可能なミクロスフェア、マイクロカプセル粒子、マイクロカプセル、生体分解性粒子ビーズ、リポソーム、および活性作用物質の制御放出または持続放出を提供し、次いで、デポー注射として送達することができる埋め込み型送達デバイスなどの手段を有する、本明細書に開示される超長CDR3、抗体断片、核酸またはベクターを含む抗体の製剤を含むことができる。そのような持続送達または制御送達手段を製剤化するための技術は公知であり、薬物の制御放出および送達のために様々なポリマーが開発され、使用されている。そのようなポリマーは、典型的には生分解性および生体適合性である。鏡像体ポリマーまたはポリペプチドセグメントの複合体化によって形成されるものを含むポリマーヒドロゲル、および温度またはpH感受性特性を有するヒドロゲルは、生物活性タンパク質剤（例えば、超長CDR3を含む抗体）の捕捉に関与する穏やかで水性の条件のゆえに、薬物デポ効果を提供するために望ましい場合がある。例えば、国際公開第93/15722号における薬学的組成物の送達のための制御放出多孔質ポリマー微粒子の記載を参照されたい。

【0241】

この目的に適した材料としては、ポリラクチド（例えば、米国特許第3,773,919号明細書を参照）、ポリ-（a-ヒドロキシカルボン酸）のポリマー、例えばポリ-D-（-）-3-ヒドロキシ酪酸（欧州特許第133,988A号明細書）、L-グルタミン酸とガンマエチル-L-グルタメートとのコポリマー（Sidman et al.,Biopolymers,22:547-556（1983））、ポリ（2-ヒドロキシエチル-メタクリレート）（Langer et al.,J. Biomed. Mater. Res.,15:167-277（1981）、およびLanger,Chem. Tech.,12:98-105（1982））、エチレンビニルアセテート、またはポリ-D（-）-3-ヒドロキシ酪酸が挙げられる。他の生分解性ポリマーとしては、ポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエステル）、およびポリ（オルトカーボネート）が挙げられる。持続放出組成物はまた、当技術分野で公知のいくつかの方法（例えば、Eppstein et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,82:3688-92（1985）を参照）のいずれかによって調製され得るリポソームを含み得る。担体自体またはその分解産物は、標的組織において非毒性であるべきであり、状態をさらに悪化させるべきではない。これは、標的障害の動物モデルにおける、またはそのようなモデルが利用できない場合には正常動物における、日常的なスクリーニングによって決定することができる。

【0242】

持続放出のための組換えタンパク質のマイクロカプセル化は、ヒト成長ホルモン（rhGH）、インターフェロン-（rhIFN-）、インターロイキン-2およびMN rgp120を用いて首尾よく行われている。Johnson et al.,Nat. Med.,2:795-799（1996）;Yasuda,Biomed. Ther.,27:1221-1223（1993）;Hora et al.,Bio/Technology. 8:755-758（1990）;Cleland, "Design and Production of Single Immunization Vaccines Using Polylactide Polyglycolide Microsphere Systems", in Vaccine Design:The Subunit and Adjuvant Approach,Powell and Newman,eds,（Plenum Press:New York,1995）,pp. 439-462;国際公開第97/03692号、国際公開第96/40072号、国際公開第96/07399号;および米国特許第5,654,010号明細書。これらのタンパク質の持続放出製剤は、その生体適合性および広範囲の生分解性特性のゆえに、ポリ乳酸-コグリコール酸（poly-lactic-coglycolic acid,PLGA）ポリマーを使用して開発された。PLGA、乳酸およびグリコール酸の分解産物は、人体内で迅速にクリアランスされ得る。さらに、このポリマーの分解性は、その分子量および組成に依存し得る。Lewis, "Controlled release of bioactive agents from lactide/glycolide polymer", in:M. Chasin and R. Langer（Eds.）,Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems（Marcel Dekker:New York,1990）,pp. 1-41。持続放出組成物のさらなる例としては、例えば、欧州特許第58,481A号明細書、米国特許第3,887,699号明細書、欧州特許第158,277A号明細書、カナダ特許第1176565号明細書、U. Sidman et al.,Biopolymers 22,547［1983］、R. Langer et al.,Chem. Tech. 12,98［1982］、Sinha et al.,J. Control. Release 90,261［2003］、Zhu et al.,Nat. Biotechnol. 18,24［2000］、およびDai et al.,Colloids Surf B Biointerfaces 41,117［2005］が挙げられる。

【0243】

生体接着性ポリマーもまた、本開示の組成物において、または本開示の組成物と共に使用するために企図される。生体接着剤は、長期間にわたって生体基質に接着することができる合成および天然の材料である。例えば、カーボポール（Carbopol）およびポリカルボフィルは両方とも、ポリ（アクリル酸）の合成架橋誘導体である。天然の物質に基づく生体接着剤送達系としては、例えば、ヒアルロナンとしても知られるヒアルロン酸が挙げられる。ヒアルロン酸は、D-グルクロン酸およびN-アセチル-D-グルコサミンの残基からなる天然のムコ多糖である。ヒアルロン酸は、結合組織、滑液、ならびに眼の硝子体液および房水を含む、脊椎動物の細胞外組織マトリックス中に見出される。ヒアルロン酸のエステル化誘導体は、生体適合性および生分解性である送達に使用するためのミクロスフェアを製造するために使用されてきた（例えば、Cortivo et al.,Biomaterials（1991）12:727-730、欧州特許第517,565号明細書、国際公開第96/29998号、Illum et al.,J. Controlled Rel.（1994）29:133-141を参照）。本開示の例示的なヒアルロン酸含有組成物は、ヒアルロン酸エステルポリマーを、超長CDR3を含む抗体がヒアルロン酸ポリマーに対して約0.1％～約40％（w/w）の量で含む。

【0244】

生分解性および非生分解性ポリマーマトリックスの両方を、本開示の組成物を送達するために使用することができ、そのようなポリマーマトリックスは、天然または合成ポリマーを含み得る。生分解性マトリックスが好ましい。放出が起こる期間は、ポリマーの選択に基づく。典型的には、数時間から3～12ヶ月までの範囲の期間にわたる放出が最も望ましい。生分解性送達系を形成するために使用され得る例示的な合成ポリマーとしては、乳酸およびグリコール酸のポリマー、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリハロゲン化ビニル、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリ無水物、ポリウレタンおよびそれらのコポリマー、ポリ（ブチック酸（butic acid））、ポリ（吉草酸）、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、アクリル酸およびメタクリル酸エステルのポリマー、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシルエチルセルロース、三酢酸セルロース、硫酸セルロースナトリウム塩、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ酢酸ビニル、ポリ塩化ビニル、ポリスチレンおよびポリビニルピロリドンが挙げられる。例示的な天然ポリマーとしては、アルギネートならびにデキストランおよびセルロースを含む他の多糖類、コラーゲン、その化学誘導体（化学基、例えばアルキル、アルキレンの置換、付加、ヒドロキシル化、酸化、および当業者によって日常的に行われる他の改変）、アルブミンおよび他の親水性タンパク質、ゼインならびに他のプロラミンおよび疎水性タンパク質、コポリマーおよびそれらの混合物が挙げられる。一般に、これらの物質は、酵素加水分解またはインビボでの水への曝露、表面またはバルク浸食のいずれかによって分解する。ポリマーは、任意で、その重量の約90％までを水中に吸収することができ、さらに任意で多価イオンまたは他のポリマーと架橋されているヒドロゲル（例えば、国際公開第04/009664号、国際公開第05/087201号、Sawhney,et al.,Macromolecules,1993,26,581-587）の形態である。

【0245】

送達系としては、コレステロール、コレステロールエステルおよび脂肪酸などのステロール、またはモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドなどの中性脂肪を含む脂質である非ポリマー系;ヒドロゲル放出系;シラスティック系;ペプチドベース系;ワックスコーティング;従来の結合剤および賦形剤を使用した圧縮錠剤;部分的に融合した移植片なども挙げられる。具体例としては、限定されないが、（a）米国特許第4,452,775号、第4,675,189号および第5,736,152号明細書に記載されているようなマトリックス内の形態で産物が含有される浸食系、ならびに（b）米国特許第3,854,480号、第5,133,974号および第5,407,686号明細書に記載されているようなポリマーから制御された速度で産物が浸透する拡散系が挙げられる。産物を含有するリポソームは、公知の方法、例えば（独国特許第3,218,121号明細書;Epstein et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,82:3688-3692（1985）;Hwang et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA,77:4030-4034（1980）;欧州特許第52,322号明細書;欧州特許第36,676号明細書;欧州特許第88,046号明細書;欧州特許第143,949号明細書;欧州特許第142,641号明細書;JP 83-118008;米国特許第4,485,045号および第4,544,545号明細書;ならびに欧州特許第102,324号）などによって調製され得る。

【0246】

代替的にまたは追加的に、組成物は、本明細書に開示される超長CDR3、抗体断片、核酸またはベクターを含む抗体が吸収または封入されている膜、スポンジまたは他の適切な材料の患部への移植によって局所的に投与され得る。移植型デバイスが使用される場合、デバイスは、任意の適切な組織または器官に移植されればよく、本明細書に開示される超長CDR3抗体断片、核酸またはベクターを含む抗体の送達は、ボーラスを介して、または連続投与を介して、または連続注入を使用してカテーテルを介してデバイスを通して直接行うことができる。

【0247】

本明細書に開示される超長CDR3、抗体断片、核酸またはベクターを含む抗体を含む薬学的組成物は、吸入のために、例えば、乾燥粉末として製剤化され得る。吸入溶液もまた、エアロゾル送達のための液化推進剤に製剤化されてもよい。さらに別の製剤では、溶液を噴霧してもよい。肺投与のためのさらなる薬学的組成物としては、例えば、化学改変タンパク質の肺送達を開示する国際公開第94/20069号に記載されているものが挙げられる。肺送達の場合、粒径は遠位肺への送達に適しているべきである。例えば、粒径は、1μm～5μmであってもよい。しかしながら、例えば、各粒子がかなり多孔質である場合、より大きな粒子を使用してもよい。

【0248】

本明細書に開示される超長CDR3、抗体断片、核酸またはベクターを含む抗体を含有する特定の製剤は、経口投与されてもよい。この様式で投与される製剤は、錠剤およびカプセルなどの固体剤形の調合に通常使用される担体を用いてまたは用いずに製剤化され得る。例えば、カプセルは、生物学的利用能が最大であり全身前分解が最小である胃腸管内の時点で、製剤の活性部分を放出するように、設計することができる。選択的結合剤の吸収を促進するために、追加の剤を含めることができる。希釈液、香味剤、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、および結合剤も使用することができる。

【0249】

別の調製物は、錠剤の製造に適した非毒性賦形剤との混合物中に、本明細書に開示される超長鎖CDR3、抗体断片、核酸またはベクターを含む有効量の抗体を含み得る。錠剤を滅菌水または別の適切なビヒクルに溶解することによって、溶液を単位用量形態で調製することができる。適切な賦形剤としては、限定されないが、不活性希釈液、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムもしくは重炭酸ナトリウム、ラクトース、またはリン酸カルシウム;または結合剤、例えばデンプン、ゼラチンまたはアラビアゴム;または潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクが挙げられる。

【0250】

適切なおよび/または好ましい薬学的製剤は、意図される投与経路、送達形式、および所望の投与量に応じて、本開示および製剤技術の一般知識を考慮して決定され得る。投与様式にかかわらず、有効用量は、患者の体重、体表面積または器官サイズに従って計算され得る。本明細書に記載される製剤の各々を含む処置のための適切な投与量を決定するための計算のさらなる改良は、当技術分野で日常的に行われており、当技術分野で日常的に行われる作業の範囲内である。適切な用量は、適切な用量反応データの使用によって確認され得る。

【0251】

いくつかの態様では、超長CDR3またはその断片を含む抗体は、生物学的環境における抗体または断片の半減期、例えば血清半減期またはインビトロアッセイによって測定される半減期を増加させるように天然のFc領域が改変された、改変Fc領域を備える。IgGのFc領域の元の形態を変更させるための方法もまた、米国特許第6,998,253号明細書に記載されている。

【0252】

特定の態様では、血清半減期を増加させるために、抗体または断片を改変することが望ましい場合があり、例えば、PEGまたは多糖ポリマーを含む他の水溶性ポリマーなどの分子を抗体断片に付加して半減期を増加させる。これは、例えば、サルベージ受容体結合エピトープを抗体断片に（例えば、抗体断片中の適切な領域の変異によって、またはペプチドタグにエピトープを組み込み、その後、例えばDNAまたはペプチド合成によって末端または中間で抗体断片に融合されることによって）組み込むことによっても達成され得る（国際公開第96/32478号参照）。サルベージ受容体結合エピトープとは、IgG分子（例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4）のインビボ血清半減期の増加に関与するIgG分子のFc領域のエピトープを指す。

【0253】

サルベージ受容体結合エピトープは、Fcドメインの1つまたは2つのループからの任意の1つまたは複数のアミノ酸残基が抗体断片の類似の位置に転移される領域を含み得る。さらにより好ましくは、Fcドメインの1つまたは2つのループからの3つ以上の残基が転移される。さらにより好ましくは、エピトープは、（例えば、IgGの）Fc領域のCH2ドメインから取られ、抗体のCH1、CH3、もしくはVH領域、または1つより多いそのような領域に転移される。あるいは、エピトープは、Fc領域のCH2ドメインから取られ、抗体断片のCL領域もしくはVL領域、またはその両方に転移される。Fc変異体およびそれらのサルベージ受容体との相互作用を記載する国際公開第97/34631号および国際公開第96/32478号も参照されたい。

【0254】

IV. 使用方法
例えばT細胞およびNK細胞などの免疫細胞の調節に関連して、ならびに疾患または状態を処置するための方法において、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片を含有する組成物を使用する方法およびその使用が本明細書で提供される。

【0255】

いくつかの態様では、キメラ抗体を使用して細胞、例えば免疫細胞を刺激する方法が本明細書で提供される。いくつかの態様では、キメラ抗体を使用して細胞、例えば免疫細胞を拡大させる方法が本明細書で提供される。

【0256】

いくつかの態様では、細胞、例えば免疫細胞の集団をキメラ抗体と接触させ、それによって、細胞、例えば免疫細胞の集団の細胞を刺激する。いくつかの態様では、細胞、例えば免疫細胞の集団をキメラ抗体と接触させ、それによって、細胞、例えば免疫細胞の集団の細胞の増殖を促進する。

【0257】

いくつかの態様では、細胞、例えば免疫細胞の集団は、IL2/15Rβおよび/またはIL2/15Rβ γc受容体サブユニットなどのIL-15受容体サブユニットを発現している細胞を含む。いくつかの態様では、細胞、例えば免疫細胞の集団はT細胞を含む。いくつかの態様では、細胞、例えば免疫細胞の集団は、ナチュラルキラー（NK）細胞を含む。

【0258】

いくつかの態様では、提供される方法は、エクスビボまたはインビトロで実施される。いくつかの態様では、提供される方法は、インビボで実施される。いくつかの態様では、提供される方法は、対象、例えば、疾患または状態を有する対象へのキメラ抗体の投与時に実施される。

【0259】

疾患または状態を処置するための、サイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片を含有するキメラ抗体または組成物を使用するための方法およびその使用も、本明細書で提供される。特定の態様では、疾患または状態はサイトカインで処置可能なものであり、キメラ抗体はサイトカイン配列を含む。いくつかの態様では、疾患または状態は、IL-2もしくはIL-15単独で、または別の剤と組み合わせて処置可能である。いくつかの態様では、キメラ抗体は、IL-2もしくはIL-25配列またはその生物学的に活性な部分を含む。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体または抗原結合断片は、免疫療法としての使用に特に適している。特定の局面では、提供されるキメラ抗体もしくは抗原結合断片、またはそれらの組成物は、T細胞の活性化および/または増殖またはNK細胞の拡大を促進することによって、がんなどのいくつかの腫瘍学的用途に使用される。特定の局面では、提供されるキメラ抗体もしくは抗原結合断片、またはそれらの組成物は、低下したエフェクター活性を有するように、ならびにT細胞の活性化および/または増殖を依然として促進しながら、ADCCなどの特定の効果、例えば、キメラ抗体による刺激のために標的化された細胞に対するADCCの誘導を回避するように改変されている。いくつかの態様では、キメラ抗体は、キメラ抗体がIL-15配列またはその生物学的に活性な部分を含む場合、キメラ抗体が結合する細胞、例えば免疫細胞、例えばIL2/15Rβおよび/またはIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞に対してADCCを誘導しない。いくつかの態様では、提供されるキメラ抗体または抗原結合断片は、処置を必要とする対象においてがんを処置するために使用される。

【0260】

そのような方法および使用には、例えば、がんなどの疾患、状態または障害を有する対象に分子を投与して、疾患または障害の処置を行うことを含む治療方法および使用が含まれる。使用には、そのような方法および処置における組成物の使用、ならびにそのような治療方法を実施するための医薬の調製におけるそのような組成物の使用が含まれる。いくつかの態様では、方法および使用は、それによって、対象における疾患または状態または障害、例えば、腫瘍またはがんなどを処置する。

【0261】

いくつかの態様では、がんは、リンパ腫、白血病、または骨髄腫などの、血液のがんである。いくつかの態様では、がんは、固形腫瘍がんである。いくつかの態様では、がんは、頭頸部、乳房、肝臓、結腸、卵巣、前立腺、膵臓、脳、子宮頸部、骨、皮膚、肺、または血液のがんである。いくつかの態様では、がんは、異常なまたは制御されない細胞成長を特徴とする悪性腫瘍を含み得る。がんに関連し得る他の特徴としては、転移、隣接細胞の正常な機能への干渉、異常レベルでのサイトカインまたは他の分泌産物の放出、および炎症または免疫学的応答の抑制または悪化、周囲または離れた組織または器官、例えばリンパ節などの浸潤などが挙げられる。転移性疾患は、元の腫瘍部位を離れ、例えば血流またはリンパ系を介して身体の他の部分に移動したがん細胞を指し得る。

【0262】

いくつかの態様では、提供される方法は、がんなどの疾患または状態の改善およびまたは処置をもたらす。いくつかの局面では、提供される方法は、新生物細胞の数の減少、新生物細胞死の増加、新生物細胞生存の阻害、腫瘍成長の阻害（すなわち、ある程度の減速または停止）、患者生存率の上昇、および/または疾患もしくは状態に関連する1つまたは複数の症状からのいくらかの軽減など、疾患の1つまたは複数の改善をもたらす。

【0263】

提供される方法の局面において、応答は、疾患または状態に特異的な基準を使用して評価または判定することができる。いくつかの態様では、磁気共鳴画像（MRI）スキャン、X線画像、コンピュータ断層撮影（CT）スキャン、骨スキャン画像、内視鏡検査、ならびに骨髄吸引（BMA）および循環中の腫瘍細胞の計数を含む腫瘍生検サンプリングなどのスクリーニング技術を使用して、腫瘍形態の変化（すなわち、全体的な腫瘍量、腫瘍サイズ）について腫瘍応答を評価することができる。

【0264】

提供される方法は、治療有効量の本明細書で提供される組成物を、それを必要とする対象、例えばがん対象に投与することを含む。治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する医薬の能力などの要因に応じて変化し得る。治療有効量はまた、抗体または抗体部分の任意の毒または有害効果を、治療的に有益な効果が上回る量である。場合によっては、腫瘍またはがん療法の治療有効量はまた、疾患の進行を安定化させるその能力によって測定され得る。提供される抗体または抗原結合断片ががんを阻害する能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価され得る。

【0265】

あるいは、組成物のこの特性は、当業者に公知のインビトロアッセイによって、細胞成長を阻害するかまたはアポトーシスを誘導する抗体または抗原結合断片の能力を検査することによって評価され得る。治療有効量の治療化合物は、対象において腫瘍サイズを減少させるか、そうでなければ症状を改善し得る。当業者であれば、対象のサイズ、対象の症状の重症度、および選択された特定の組成物または投与経路などの因子に基づいてそのような量を決定することができるであろう。

【0266】

いくつかの態様では、提供される抗体または抗原結合断片は、所望の応答を得るために必要に応じて、単回用量で、または数回用量で投与することができる。いくつかの態様では、有効量は、適用される供給源、処置される対象、処置される状態の重症度および種類、ならびに投与様式に依存する。

【0267】

投与レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスを投与してもよく、いくつかの分割用量を経時的に投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に減少または増加させてもよい。非経口組成物は、投与の容易さおよび投与量の均一性のために投与単位形態で製剤化され得る。本明細書で使用される場合、投与単位形態は、処置される対象のための単位投与量として適した物理的に別個の単位を指す。各単位は、必要とされる薬学的担体に関連して所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性化合物を含有する。

【0268】

いくつかの態様では、治療有効量は、0.1mg/kg～100mg/kgまたは約0.1mg/kg～100mg/kg、すなわち前述のいずれかの間の任意の値である。

【0269】

いくつかの態様では、提供される方法および使用は、疾患または状態を処置するための別の療法などの別の療法と組み合わせて実行することができる。いくつかの態様では、疾患または状態は腫瘍またはがんであり、他の療法は抗腫瘍剤または抗腫瘍療法（本明細書では抗がん剤または抗がん療法とも呼ばれる）である。特に、提供される方法は、がん免疫療法に関連して使用され得る。がん免疫療法は、T細胞またはNK細胞などの腫瘍反応性免疫細胞の殺腫瘍機能を回復させることによってがん細胞を根絶することを目的とする。抗腫瘍免疫エフェクター細胞を増加させることができるチェックポイント遮断、養子細胞移入（ACT）およびがんワクチンを含むがん免疫療法の戦略は、いくつかの腫瘍において顕著な結果をもたらした。いくつかの態様では、抗腫瘍療法または抗がん療法は、モノクローナル抗体などの抗体治療薬である。

【0270】

いくつかの局面では、提供される方法および使用における使用に適した抗腫瘍剤には、腫瘍細胞に対するADCCを促進するものが含まれる。例えば、いくつかの局面では、キメラ抗体は、エフェクター機能を低下させるように改変され、例えば抗腫瘍剤と免疫細胞との係合を介して、例えばFcR結合を介して、抗腫瘍剤が腫瘍細胞に対するADCCを促進する能力と干渉または競合しない。いくつかの態様では、例えば抗腫瘍剤が細胞療法を含む場合、キメラ抗体は細胞療法によって発現されるFcRに結合しないか、またはFcRへの結合が低減されており、キメラ抗体は、キメラ抗体が結合する細胞に対する抗腫瘍剤のADCCを誘導しない。ADCCを促進しない抗腫瘍剤も、本明細書で提供される方法および使用における使用に適している。

【0271】

特定のがん免疫療法アプローチによる問題は、宿主抗腫瘍免疫ががん免疫療法の有効性を妨げ得ることである。例えば、場合によっては、免疫抑制性腫瘍微小環境の形成は、天然の腫瘍反応性免疫細胞または養子移入された免疫細胞ががん細胞を首尾よく根絶する能力に影響を及ぼし得る。特に、固形腫瘍では、免疫療法レジメンの治療有効性は、免疫抑制性腫瘍微小環境における有効な抗腫瘍応答の欠如のために不満足なままである。腫瘍細胞はしばしば免疫寛容または免疫抑制を誘導し、そのような寛容は、真に外来性の腫瘍抗原でさえも寛容されるようになるために獲得される。がんワクチンおよび予め活性化された免疫エフェクター細胞（例えば、T細胞）の養子移入は、腫瘍微小環境（TME）内の阻害因子による抑制を受けやすいため、このような寛容は同様に活性で支配的である。

【0272】

いくつかの態様では、キメラサイトカイン（例えばIL-15）改変抗体または抗原結合断片は、チェックポイント遮断剤（免疫チェックポイント阻害剤とも呼ばれる）と組み合わせて投与される。免疫チェックポイント阻害剤は、1つまたは複数のチェックポイントタンパク質を完全にまたは部分的に低減、阻害、干渉または調節する分子である。チェックポイントタンパク質は、T細胞の活性化または機能を制御する。これらのタンパク質は、T細胞応答の共刺激性または阻害性相互作用を担う。免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容ならびに生理学的免疫応答の持続時間および大きさを制御および維持する。

【0273】

免疫チェックポイント阻害剤には、免疫系の阻害経路を統計的に有意に遮断または阻害する任意の剤が含まれる。そのような阻害剤には、免疫チェックポイント受容体リガンドに結合し、それを遮断または阻害する小分子阻害剤が含まれ得るか、または抗体もしくはその抗原結合断片が含まれ得る。遮断または阻害の標的となり得る例示的な免疫チェックポイント分子としては、限定されないが、PD1（CD279）、PDL1（CD274、B7-H1）、PDL2（CD273、B7-DC）、CTLA-4、LAG3（CD223）、TIM3、4-1BB（CD137）、4-1BBL（CD137L）、GITR（TNFRSF18、AITR）、CD40、Ox40（CD134、TNFRSF4）、CXCR2、腫瘍関連抗原（TAA）、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4（CD2分子ファミリーに属し、すべてのNK、γδおよびメモリーCD8＋（αβ）T細胞上に発現される）、CD160（BY55とも呼ばれる）およびCGEN-15049が挙げられる。免疫チェックポイント阻害剤としては、PD1、PDL1、PDL2、CTLA-4、LAG3、TIM3、4-1BB、4-1BBL、GITR、CD40、Ox40、CXCR2、TAA、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4、CD160およびCGEN-15049の1つまたは複数に結合し、その活性を遮断または阻害する抗体もしくはその抗原結合断片、または他の結合タンパク質が挙げられる。例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（CTLA-4遮断抗体）、抗OX40、PD-L1モノクローナル抗体（抗B7-H1;MEDI4736）、MK-3475（PD-1遮断薬）、ニボルマブ（抗PD1抗体）、CT-011（抗PD1抗体）、BY55モノクローナル抗体、AMP224（抗PDL1抗体）、BMS-936559（抗PDL1抗体）、MPLDL3280A（抗PDL1抗体）、MSB0010718C（抗PDL1抗体）、およびYervoy/イピリムマブ（抗CTLA-4チェックポイント阻害剤）が挙げられる。

【0274】

いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、CD25、PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM-3、4-1BB、GITR、CD40、CD40L、OX40、OX40L、CXCR2、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、CD28、およびVISTAの中より選択される分子に特異的に結合する。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体または抗原結合断片、小分子またはポリペプチドである。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、ピジリズマブ、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A、イピリムマブ、トレメリムマブ、IMP31、BMS-986016、ウレルマブ、TRX518、ダセツズマブ、ルカツムマブ、SEQ-CD40、CP-870、CP-893、MED16469、MEDI4736、MOXR0916、AMP-224、およびMSB001078Cの中より選択されるか、またはその抗原結合断片である。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗PD-1または抗PD-L1抗体であり得る。PD-1またはPD-L1を標的とする抗体としては、限定されないが、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、またはアテゾリズマブが挙げられる。

【0275】

いくつかの態様では、抗腫瘍剤は、モノクローナル抗体を含む。いくつかの態様では、モノクローナル抗体は、Zahavi et al.（2020）,Antibodies（Basel）9（3）:34に記載の任意のものである。いくつかの態様では、モノクローナル抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、ベバシズマブ、セミプリマブ、セツキシマブ、ダラツムマブ、ジヌツキシマブ、デュルバルマブ、エロツズマブ、イピリムマブ、イサツキシマブ、モガムリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、オララツマブ、パニツムマブ、ペンブロリズマブ、ペルツズマブ、ラムシルマブ、リツキシマブ、またはトラスツズマブである。

【0276】

いくつかの態様では、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片は、養子細胞療法などの細胞療法と組み合わせて投与される。いくつかの態様では、提供されるキメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片のそのような養子細胞療法との組み合わせの投与は、TILの操作または制御において、操作されたNK細胞（例えば、CAR操作NK細胞）を含むNK細胞の拡大を増大させるために、TCR/CARの組み合わせなどにおけるT細胞を刺激するために使用され得る。いくつかの態様では、養子細胞療法は、自家細胞療法であり得るか、または同種細胞療法であり得る。いくつかの態様では、提供される組み合わせにおける養子細胞療法のための免疫細胞は、樹状細胞、T細胞、例えばCD8＋T細胞およびCD4＋T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、NK T細胞、細胞傷害性Tリンパ球（CTL）、腫瘍浸潤リンパ球（TIL）、リンホカイン活性化キラー（LAK）細胞、メモリーT細胞、制御性T細胞（Treg）、ヘルパーT細胞、サイトカイン誘導性キラー（CIK）細胞、ならびにそれらの任意の組み合わせであり得る。他の態様では、養子細胞療法のための免疫刺激細胞は、胚性幹細胞（ESC）および人工多能性幹細胞（iPSC）から生成され得る。いくつかの態様では、自家免疫細胞または同種免疫細胞が、養子細胞療法に使用される。

【0277】

いくつかの態様では、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片の投与は、単剤としてであろうと、または併用剤としてであろうと、免疫細胞の増殖をもたらす。いくつかの態様では、キメラサイトカイン改変抗体または抗原結合断片の投与は、免疫細胞の数において、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、2.2倍、2.4倍、2.6倍、2.8倍、3倍、4倍または5倍の増加をもたらす。いくつかの態様では、増殖する免疫細胞は、T細胞である。いくつかの態様では、増殖する免疫細胞は、NK細胞である。いくつかの態様では、増殖する免疫細胞は、T細胞およびNK細胞である。

【0278】

いくつかの態様では、増殖する免疫細胞は、本明細書に記載の細胞療法のいずれか、例えばキメラサイトカイン改変抗体または抗原結合断片と組み合わせて投与される細胞療法を含む細胞療法の一部として投与された免疫細胞である。いくつかの態様では、細胞療法は、T細胞療法である。いくつかの態様では、細胞療法は、NK細胞療法である。

【0279】

いくつかの態様では、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片は、がん、感染症疾患および他の免疫不全障害の処置に有効な他の剤、例えば抗がん剤と組み合わせて投与される。抗がん剤は、例えば、がん細胞を殺傷すること、がん細胞のアポトーシスを誘導すること、がん細胞の成長速度を低下させること、転移の発生率または数を低減すること、腫瘍サイズを低減すること、腫瘍成長を阻害すること、腫瘍またはがん細胞への血液供給を低減すること、がん細胞または腫瘍に対する免疫応答を促進すること、がんの進行を防止または阻害すること、またはがんを有する対象の寿命を延ばすことによって、対象のがんに悪影響を及ぼすことができる任意の剤であり得る。

【0280】

いくつかの態様では、抗がん剤または抗がん療法は、化学療法剤、または放射線療法、免疫療法剤、手術、またはキメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体もしくは抗原結合断片と組み合わせて処置の治療有効性を改善する任意の他の治療剤であり得る。

【0281】

一態様では、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片は、例えばその内容全体が参照により本明細書に組み入れられる国際公開公報第2016164580号に教示されている方法を使用して、Burkittチロシン受容体キナーゼ（BTK）阻害剤などのアミノピリミジン誘導体と組み合わせて使用され得る。

【0282】

いくつかの態様では、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片は、腫瘍細胞の表面上のいくつかの標的分子に特異的な抗体と組み合わせて使用され得る。

【0283】

例示的な抗がん剤としては、限定されることなく、アシビシン;アクラルビシン;塩酸アコダゾール;アクロニン;アドゼレシン;アルデスロイキン;アルトレタミン;アンボマイシン;酢酸アメタントロン;アムサクリン;アナストロゾール;アントラマイシン;アスパラギナーゼ;アスペリン、スリンダク、クルクミン、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、例えば、メクロル-エタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファランおよびクロラムブシル;ニトロソ尿素、例えば、カルムスチン（BC U）、ロムスチン（CCNU）、セムスチン（メチル-CC U）;チレンイミン（thylenimine）/メチルメラミン、例えば、トリエチレンメラミン（TEM）、トリエチレン、チオホスホラミド（thiophosphoramide）（チオテパ）、ヘキサメチルメラミン（HMM、アルトレタミン）;アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン;トリアジン、例えば、ダカルバジン（DTIC）;代謝拮抗剤、例えば、葉酸類似体、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、ピロリジン類似体、例えば、5-フルオロウラシル、フルオロデオキシウリジン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド（AraC、シタラビン）、5-アザシチジン、2,2'-ジフルオロデオキシシチジン、プリン類似体、例えば、6-メルカプトプリン、6～チオグアニン、アザチオプリン、2,'-デオキシコホルマイシン（ペントスタチン）、エリスロヒコキシノニルアデニン（erythrohyckoxynonyladenine）（EHNA）、リン酸フダラビン（ffudarabine phosphate）、および2-クロロデオキシアデノシン（クラドリビン、2-CdA）;天然産物、例えば、有糸分裂阻害薬、例えば、パクリタキセイ（paclitaxei）、ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン（VLB）、ビンクリスチン、およびビノレルビン、タキソテール、エストラムスチン、およびリン酸エストラムスチン;エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニポシド;抗生物質、例えば、アクチモマイシンD（actimomycin D）、ダウノマイシン（ルヒドマイシン（ruhidomycin））、ドキソルビシン、ミトキサントロン、イダルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンCおよびアクチノマイシン;酵素、例えば、-［.-アスパラギナーゼ、サイトカイン、例えば、インターフェロン（IFN）-ガンマ、腫瘍壊死因子（TNF）-アルファ、TNF-ベータおよびGM-CSF、抗血管新生因子、例えば、アンギオスタチンおよびエンドスタチン、FGFまたはVEGFの阻害剤、例えば、血管新生因子の可溶性形態の受容体、例えば、可溶性VGF/VEGF受容体、プラチナ配位錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン、アントラセンジオン、例えば、ミトキサントロン、置換尿素、例えば、ヒドロキシ尿素、メチルヒドラズム（methylhydrazme）誘導体、例えば、N-メチルヒドラズム（N-methylhydrazme）（MIFf）およびプロカルバジン、副腎皮質抑制剤、例えば、ミトタン（ο,ρ'-DDD）およびアミノグルテチミド;ホルモンおよび拮抗薬、例えば、副腎皮質ステロイド拮抗薬、例えば、プレドニゾンおよび同等物、デキサメタゾンおよびアミノグルテチミド;プロゲスチン、例えば、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロンおよび酢酸メゲストロール;エストロゲン、例えば、ジエチルスチルベストロールおよびエチニルエストラジオール同等物;抗エストロゲン、例えば、タモキシフェン;アンドロゲン、例えば、プロピオン酸テストステロンおよびフィウオキシメステロン（fiuoxymesterone）/同等物;抗アンドロゲン、例えばフルタミド、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体およびロイプロリド;非ステロイド性抗アンドロゲン、例えば、フルタミド;キナーゼ阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、メチル化阻害剤、プロテアソーム阻害剤、モノクローナル抗体、酸化剤、抗酸化剤、テロメラーゼ阻害剤、BH3模倣物、ユビキチンリガーゼ阻害剤、stat阻害剤および受容体チロシンキナーゼ阻害剤、例えばメシル酸イマチニブ（GleevacまたはGiivacとして市販されている）および現在Tarvecaとして市販されているエルロチニブ（EGF受容体阻害剤）;抗ウイルス薬、例えば、リン酸オセルタミビルが挙げられる。アムホテリシンBおよびパリビズマブ;Sdi 1模倣体;セムシイン（Semusiine）;老化由来阻害剤1;スパルホス酸:スピカマイシンD;スピロムスチン;スピエノペンチン（Spienopentin）:スポンジスタチン1:スクアイアミン（Squaiamine）:スチピアミド;ストロメリシン阻害剤;スルフィノシン;超活性血管作用性腸ペプチド拮抗薬;ベラレゾール;ベラミン;ベルジン;ベルテポルフィン;ビノレルビン;ブムクサルトゥム（Vmxaltme）;ビタキシン;ボロゾール;ザノテロン;ゼニプラチン;ジルアスコルブ（Zilascorb）;およびジノスタチンスティマラマー;ΡΟ β小分子阻害剤、GSK2636771;pan-PI3阻害剤（BKM120）;BRAF阻害剤。ベニウラフェニブ（Zeiboraf）およびダブラフェニブ（Tafmiar）;または上記の任意の類似体もしくは誘導体および変異体。

【0284】

いくつかの態様では、抗がん剤は、抗体またはその抗原結合抗体断片であり、その例としては、限定されないが、ダクリズマブ（Zenapax）、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））、バシリキシマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、MPDL3280A、ピジリズマブ（CT-011）、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A（アテゾリズマブ）、トレメリムマブ、IMP321、BMS-986016、LAG525、ウレルマブ、PF-05082566、TRX518、MK-4166、ダセツズマブ（SGN-40）、ルカツムマブ（HCD122）、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C（アベルマブ）、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、ウロクプルマブ、BKT140、バリルマブ（CDX-1127）、ARGX-110、MGA271、リリルマブ（BMS-986015、IPH2101）、IPH2201、ARGX-115、エマクツズマブ、CC-90002およびMNRP1685Aまたはそれらの抗体結合断片が挙げられる。

【0285】

他の剤を、キメラサイトカイン（例えばIL-15）改変抗体または抗原結合断片と組み合わせて使用してもよく、これらの例としては、限定されないが、Fas/Fasリガンド、DR4またはDR5/TRAILおよびGAP接合部などの細胞表面受容体およびそれらのリガンドの上方制御に影響を及ぼす剤、細胞増殖抑制剤および分化剤、焦点接着キナーゼ（FAK）阻害剤およびロバスタチンなどの細胞接着の阻害剤、または抗体C225などのアポトーシス誘導物質に対する過剰増殖性細胞の感受性を増進させる剤も挙げることができる。

【0286】

いくつかの態様では、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片は、がんワクチンと組み合わせて投与される。いくつかの態様では、がんワクチンは、腫瘍関連抗原（TAA）に由来するペプチドおよび/またはタンパク質を含み得る。そのような戦略は、いくつかの例では細胞傷害性Tリンパ球（CTL）応答であり得る免疫応答を対象において誘発するために利用され得る。がんワクチンに使用されるペプチドはまた、対象の変異プロファイルに適合するように改変され得る。例えば、療法を必要とする対象に見出される変異に一致する変異を有するEGFR由来ペプチドは、肺がん患者で首尾よく使用されている（Li F et al.（2016）Oncoimmunology.Oct 7;5（12）:el 238539、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる）。一態様では、がんワクチンは、TAAに由来するスーパーアゴニスト変更ペプチドリガンド（APL）を含む。これらは、天然のエピトープよりも効果的に特異的CTLクローンを活性化する1つまたは複数のアミノ酸によって天然のペプチド配列から逸脱した変異ペプチドリガンドである。これらの変更は、ペプチドが制限クラスI MHC分子により良好に結合すること、または所与の腫瘍特異的CTLサブセットのTCRとより好都合に相互作用することを可能にし得る。APLは、その内容全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第20160317633号に教示されている方法を使用して選択することができる。

【0287】

いくつかの態様では、組み合わせは、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片および他の剤を同時にまたは別々に投与することを含み得る。あるいは、キメラサイトカイン（例えば、IL-15）改変抗体または抗原結合断片は、数分、数日、数週間～数ヶ月の範囲の間隔で他の剤/療法に先行または後続し得る。

【0288】

V. 例示的態様
提供される態様には以下がある：
１.
（a）ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の改変可変重（VH）領域であって、前記改変VH領域が、改変超長CDR3を含み、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3の少なくとも一部が、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分によって置き換えられている、改変可変重（VH）領域と、
（b）野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域と
を含む重鎖を含む、キメラ改変抗体。
２.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の前記超長CDR3領域のノブ領域と置き換わっている、態様1のキメラ改変抗体。
３.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、前記改変超長CDR3の上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にあり、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドが、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の前記超長CDR3の上行性ストークストランドと比較して変異体である、態様1または態様2のキメラ改変抗体。
４.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドおよび/または前記下行性ストークストランドに、柔軟なリンカー、任意でGGSまたはGSGリンカーを介して連結されている、態様3のキメラ改変抗体。
５.
前記上行性ストークストランドが、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含み、X₂およびX₅が、任意のアミノ酸である、態様3または態様4のキメラ改変抗体。
６.
ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の改変可変重（VH）領域を含む重鎖を含む、キメラ改変抗体であって、
前記改変VH領域が、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の超長CDR3領域の少なくとも一部が異種配列によって置き換えられている改変超長CDR3を含み、前記異種配列が、前記改変超長CDR3の上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間にあり、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドが、配列CX₂TVX₅QETKKYQTを含み、X₂およびX₅が任意のアミノ酸である、
キメラ改変抗体。
７.
X₂が、Ser、Thr、Gly、Asn、Ala、またはProであり、かつX₅が、His、Gln、Arg、Lys、Gly、Thr、Tyr、Phe、Trp、Met、Ile、Val、またはLeuである、態様5または態様6のキメラ改変抗体。
８.
X₂が、Ser、Ala、またはThrであり、かつX₅が、HisまたはTyrである、態様5～7のいずれかのキメラ改変抗体。
９.
前記改変超長CDR3の上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される配列を含む、態様3～8のいずれかのキメラ改変抗体。
１０.
前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドの配列が、SEQ ID NO:183～185のいずれかに示される、態様3～8のいずれかのキメラ改変抗体。
１１.
前記異種配列が、前記ウシ（bovine）抗体もしくは抗原結合断片またはそのヒト化配列の前記超長CDR3領域のノブ領域と置き換わっている、態様6～10のいずれかのキメラ改変抗体。
１２.
前記異種配列が、前記改変超長CDR3の前記上行性ストークストランドおよび/または前記下行性ストークストランドに、柔軟なリンカー、任意でGGSまたはGSGリンカーを介して連結されている、態様6～11のいずれかのキメラ改変抗体。
１３.
前記異種配列が、サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む、態様6～12のいずれかのキメラ改変抗体。
１４.
前記重鎖が、ヒトIgG重鎖定常領域をさらに含む、態様6～13のいずれかのキメラ改変抗体。
１５.
前記ヒトIgG重鎖定常領域が、野生型ヒトIgG重鎖定常領域と比較して低下したエフェクター活性を有する改変ヒトIgG重鎖定常領域である、態様14のキメラ改変抗体。
１６.
前記ヒトIgGがヒトIgG1である、態様1～5および7～15のいずれかのキメラ改変抗体。
１７.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、FcR結合を低減するように改変されている、態様1～5および7～16のいずれかのキメラ改変抗体。
１８.
前記低下したエフェクター活性が、低減された抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ADCC）を含む、態様1～5および7～17のいずれかのキメラ改変抗体。
１９.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Asn297（N297）、Ser298（S298）、Asn325（N325）、Ala327（A327）、およびPro329（P329）のうち1つまたは複数において変更されている、態様1～5および7～18のいずれかのキメラ改変抗体。
２０.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、Leu234Ala（L234A）、Leu235Ala（L235A）、Leu235Glu（L235E）、Asp265Asn（D265N）、Asp265Ala（D265A）、Asp270Asn（D270N）、Ser298Asn（S298N）、Asn325Glu（N325E）、Ala327Ser（A327S）、Pro329Ala（P329A）、およびPro239Gly（P329G）より選択される1つまたは複数の変異を含む、態様1～5および7～19のいずれかのキメラ改変抗体。
２１.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、位置Glu233（E233）、Leu234（L234）、Leu235（L235）、Asp265（D265）、Asp270（D270）、Asn297（N297）、Ser298（S298）、Asn325（N325）、Ala327（A327）、およびPro329（P329）のうち2つ以上において変更されている、態様1～5および7～20のいずれかのキメラ改変抗体。
２２.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異;Leu234ValおよびLeu235Ala（L234V/L235A）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびAsn297Ala（L234A/L235A/N297A）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびPro239Ala（L234A/L235A/P329A）変異;Asp265AlaおよびPro329Ala（D265A/P329A）変異;Asp265AlaおよびPro329Gly（D265A/P329G）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびAsp265Ala（L234A/L235A/D265A）変異;Leu234Ala、Leu235Ala、およびPro329Gly（L234A/L235A/P329G）変異;またはLeu234Ala、Leu235Ala、Asp265Ala、およびPro329Gly（L234A/L235A/D265A/P329G）変異を含む、態様1～5および7～21のいずれかのキメラ改変抗体。
２３.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、Leu234AlaおよびLeu235Ala（L234A/L235A）変異を含む、態様1～5および7～22のいずれかのキメラ改変抗体。
２４.
前記改変ヒトIgG重鎖定常領域が、SEQ ID NO:187またはSEQ ID NO:188に示される配列を含む、態様1～5および7～23のキメラ改変抗体。
２５.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、インターロイキン-15（IL-15）サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む、態様1～5および7～24のいずれかのキメラ改変抗体。
２６.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、または少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、態様1～5および7～25のいずれかのキメラ改変抗体。
２７.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示される配列を含む、態様1～5および7～26のいずれかのキメラ改変抗体。
２８.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、インターロイキン-12（IL-2）サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分を含む、態様1～5および7～24のいずれかのキメラ改変抗体。
２９.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:165に対して少なくとも85％もしくは少なくとも約85％、少なくとも90％もしくは少なくとも約90％、少なくとも92％もしくは少なくとも約92％、少なくとも95％もしくは少なくとも約95％、少なくとも96％もしくは少なくとも約96％、少なくとも97％もしくは少なくとも約97％、少なくとも98％もしくは少なくとも約98％、または少なくとも99％もしくは少なくとも約99％の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む、態様1～5、7～24、および28のいずれかのキメラ改変抗体。
３０.
前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:165に示されるアミノ酸の配列を含む、態様1～5、7～24、28、および29のいずれかのキメラ改変抗体。
３１.
前記ウシ（bovine）抗体または抗原結合断片が、ウシ（bovine）抗体BLV1H12またはその抗原結合断片である、態様1～30のいずれかのキメラ改変抗体。
３２.
前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含む、態様3～31のいずれかのキメラ改変抗体。
３３.
前記上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:183に示される配列を含み、前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、かつ前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含むか;
前記上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:184に示される配列を含み、前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、かつ前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含むか;または
前記上行性ストークストランドが、SEQ ID NO:185に示される配列を含み、前記サイトカイン配列またはその生物学的に活性な部分が、SEQ ID NO:1に示されるアミノ酸の配列を含み、かつ前記下行性ストークストランドが、SEQ ID NO:10に示される配列を含む、
態様3～5、7～27、31、および32のいずれかのキメラ改変抗体。
３４.
前記改変超長CDR3が、SEQ ID NO:206～208のいずれかに示される配列を含む、態様1～27および31～33のいずれかのキメラ改変抗体。
３５.
前記改変VH領域が、BLV1H12のVH領域の変異体である、態様1～34のいずれかのキメラ改変抗体。
３６.
前記重鎖が、式V1-X-V2-Cを含み、式中、前記重鎖のV1領域が、SEQ ID NO:182に示される配列を含み;X領域が、前記改変超長CDR3を含み;V2領域が、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域が、前記改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む、態様1～35のいずれかのキメラ改変抗体。
３７.
前記改変VH領域が、SEQ ID NO:200～202のいずれかに示される配列を含む、態様1～27および31～36のいずれかのキメラ改変抗体。
３８.
前記重鎖が、SEQ ID NO:189～191のいずれかに示される配列を含む、態様1～27および31～37のいずれかのキメラ改変抗体。
３９.
前記改変VH領域が、BLV1H12のVH領域のヒト化配列の変異体である、態様1～34のいずれかのキメラ改変抗体。
４０.
前記重鎖が、式V1-X-V2-Cを含み、式中、前記重鎖のV1領域が、SEQ ID NO:197に示される配列、またはSEQ ID NO:197に対して少なくとも65％の配列同一性を示す配列を含み;X領域が、前記改変超長CDR3を含み;V2領域が、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域が、前記改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む、態様1～34および39のいずれかのキメラ改変抗体。
４１.
前記重鎖が、式V1-X-V2-Cを含み、式中、前記重鎖のV1領域が、SEQ ID NO:197に示される配列を含み;X領域が、前記改変超長CDR3を含み;V2領域が、SEQ ID NO:11に示される配列を含み;かつC領域が、前記改変ヒトIgG重鎖定常領域を含む、態様1～34、39、および40のいずれかのキメラ改変抗体。
４２.
前記改変VH領域が、SEQ ID NO:203～205のいずれかに示される配列を含む、態様1～27、31～34、および39～41のいずれかのキメラ改変抗体。
４３.
前記重鎖が、SEQ ID NO:192～194のいずれかに示される配列を含む、態様1～27、31～34、および39～42のいずれかのキメラ改変抗体。
４４.
軽鎖をさらに含む、態様1～43のいずれかのキメラ改変抗体。
４５.
ヒト化軽鎖を含む、態様1～44のいずれかのキメラ改変抗体。
４６.
前記ヒト化軽鎖が、SEQ ID NO:181に示される配列、またはSEQ ID NO:181に対して少なくとも85％の配列同一性を示す配列を含む、態様45のキメラ改変抗体。
４７.
前記ヒト化軽鎖が、SEQ ID NO:181に示される配列を含む、態様45のキメラ改変抗体。
４８.
前記キメラ改変抗体が、IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインと複合体化されている、態様1～27および31～47のいずれかのキメラ改変抗体。
４９.
IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、前記IL-15配列と非共有結合的に会合している、態様48のキメラ改変抗体。
５０.
IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、前記キメラ改変抗体の前記軽鎖に連結されており、任意でペプチドリンカーを介して連結されている、態様48のキメラ改変抗体。
５１.
IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、SEQ ID NO:2に示される配列を含む、態様48～50のいずれかのキメラ改変抗体。
５２.
態様1～51のいずれかのキメラ改変抗体をコードする、ポリヌクレオチド。
５３.
態様1～51のいずれかのキメラ改変抗体の重鎖またはその可変領域をコードする、ポリヌクレオチド。
５４.
態様1～51のいずれかのキメラ改変抗体の軽鎖またはその可変領域をコードする、ポリヌクレオチド。
５５.
態様52～54のいずれかのポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
５６.
態様52～54のいずれかのポリヌクレオチドまたは態様55の発現ベクターを含む、宿主細胞。
５７.
IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの細胞外ドメインをコードするポリヌクレオチドまたはベクターをさらに含む、態様56の宿主細胞。
５８.
IL15Rα sushiドメインを含むIL15Rαの前記細胞外ドメインが、SEQ ID NO:2に示される配列を含む、態様57の宿主細胞。
５９.
キメラ改変抗体を産生する方法であって、前記宿主細胞による前記キメラ改変抗体の発現のための条件下で、態様56～58のいずれかの宿主細胞を培養する工程を含み、任意で、前記キメラ改変抗体を回収または精製する工程をさらに含む、方法。
６０.
態様59の方法によって産生される、キメラ改変抗体。
６１.
態様1～51および60のいずれかのキメラ改変抗体を含む、薬学的組成物。
６２.
態様1～51および60のいずれかのキメラ改変抗体と免疫細胞の集団を接触させる工程であって、それによって前記免疫細胞の集団の細胞を刺激する、工程を含む、免疫細胞を刺激する方法。
６３.
態様1～51および60のいずれかのキメラ改変抗体と免疫細胞の集団を接触させる工程であって、それによって前記免疫細胞の集団の細胞の増殖を促進する、工程を含む、免疫細胞を拡大させる方法。
６４.
前記免疫細胞の集団が、IL2/15Rβおよび/またはIL2/15Rβ γc受容体サブユニットを発現している細胞を含む、態様62または態様63の方法。
６５.
前記免疫細胞の集団がT細胞またはナチュラルキラー（NK）細胞を含む、態様62～64のいずれかの方法。
６６.
エクスビボまたはインビトロで実施される、態様62～65のいずれかの方法。
６７.
対象への前記キメラ改変抗体の投与時にインビボで実施される、態様62～65のいずれかの方法。
６８.
態様1～51および60のいずれかのキメラ改変抗体の治療有効量を対象に投与する工程を含む、対象のがんを処置する方法。
６９.
態様61の薬学的組成物を対象に投与する工程を含む、対象のがんを処置する方法。
７０.
抗腫瘍剤を前記対象に投与する工程をさらに含む、態様67～69のいずれかの方法。
７１.
前記抗腫瘍剤がモノクローナル抗体を含む、態様70の方法。
７２.
前記抗腫瘍剤がチェックポイント阻害剤を含む、態様70または態様71の方法。
７３.
前記抗腫瘍剤が細胞療法、任意でT細胞療法またはNK細胞療法を含む、態様70～72のいずれかの方法。
７４.
前記細胞療法が、キメラ抗原受容体（CAR）を発現している細胞を含む、態様73の方法。

【実施例】

【0289】

VI. 実施例
以下の実施例は、例示のみを目的として含まれ、本発明の範囲を限定することを意図しない。

【0290】

実施例1 キメラインターロイキン（IL）-15融合抗体の生成
IL-15配列を含む例示的なキメラBLV1H12-IL-15（B15）融合抗体を、ウシ（bovine）抗体BLV1H12またはそのヒト化変異体の超長CDR3を改変することによって生成した。

【0291】

BLV1H12の重鎖は、式V1-X-V2-Cを有する配列を含み、式中、重鎖のV1領域は、2つのCDR領域（CDR1およびCDR2）を隔てている3つのフレームワーク領域（例えば、FR-1、FR-2、およびFR-3）を含有する重鎖配列部分を含み、X領域は、上行性ストークストランドと下行性ストークストランドとの間のノブ領域を含む、超長CDR3配列を含み、V2領域は、FR-4を含む重鎖の一部を含み、かつC領域は、定常重鎖領域である。超長CDR3のノブ領域（SEQ ID NO:195）をN末端GGSリンカー（SEQ ID NO:151）、IL-15配列（SEQ ID NO:1）、およびC末端GSGリンカー（SEQ ID NO:186）で置換することによって、B15抗体のVH領域を操作した。超長CDR3（SEQ ID NO:9に示される非改変配列）の上行性ストークストランドを改変することによって、VH領域をさらに操作した。操作されたVH領域に加えて、B15抗体の重鎖はまた、ヒトIgG1（SEQ ID NO:196に示される非改変配列）の非改変または改変重鎖定常領域も含み、改変定常領域は、Leu234AlaおよびLeu235Ala変異（LALA二重変異）を含んでいた。

【0292】

表E1は、B15重鎖のアミノ酸配列の配列識別子（SEQ ID NO）を含む。B15変異体1～3および7の重鎖は、BLV1H12 VH領域に基づいて生成し、B15変異体4～6および8の重鎖は、BLV1H12 VH領域のヒト化変異体に基づいて生成した。B15変異体1～6および8の軽鎖は、SEQ ID NO:181に示されるヒト化軽鎖配列を含んでいたが、B15変異体7の軽鎖は、SEQ ID NO:168によってコードされるウシ（bovine）軽鎖配列を含んでいた。

【0293】

（表Ｅ１）例示的B15重鎖の配列識別子（SEQ ID NO）

【0294】

B15抗体を産生するために、シグナル配列およびB15重鎖をコードする配列を5'EcoRI部位と化学的に合成し、EcoRIおよびNheI制限酵素を使用してGenScript,Inc.によるpUC57ベクターにクローニングした。3'末端NheI部位は、合成された配列に既に存在していた。次いで、重鎖をコードする発現ベクターを、ヒト化またはウシ（bovine）軽鎖をコードするpFUSE発現ベクターと並行して、フリースタイルHEK 293細胞（ThermoScientific）に共形質移入した。細胞を37℃、8％ CO₂で成長させ、分泌されたB15抗体を形質移入の96時間後に回収した。B15抗体を、CaptureSelect CH1-XL親和性マトリックス（ThermoScientific）によって精製し、次いで、濃縮し、Amicon Ultra-4遠心フィルター（MWカットオフ＝10,000kDa、Millipore Sigma）を使用してリン酸緩衝生理食塩水（PBS）に緩衝液交換した。回収したB15抗体を、分子量および吸光係数に基づいてNanodropを使用して定量した。

【0295】

図1Aの左パネルは、BLV1H12の結晶構造を示す。図1Bの左パネルは、生成されたB15抗体の概略図を示す。

【0296】

実施例2 キメラIL-15融合抗体誘導性の受容体活性化およびシグナル伝達
実施例1に記載のように生成したキメラB15融合抗体によるIL2/15Rβおよびγc受容体サブユニットの活性化ならびにSTAT5シグナル伝達を、HEK-Blue IL2レポーター細胞（InvivoGen）を使用して試験し、STAT5誘導性アルカリホスファターゼ（SEAP）レポーター遺伝子の誘導および分泌を通して分析した。

【0297】

HEK-Blue IL2レポーター細胞を、予熱したリン酸緩衝生理食塩水（PBS）で細胞を2回穏やかにすすぎ、細胞スクレーパーを使用してPBSの存在下で細胞を剥離し、新鮮な予熱した試験培地（高グルコースおよび10％熱不活性化FBSを含むDMEM）に細胞を1mLあたり約280,000個になるまで再懸濁することによって、懸濁状態に置いた。B15変異体1～3、7および8をPBS中で64nM～0.25nM（Fab断片のモル濃度に基づく）に4倍段階希釈し、各サイトカイン希釈物20μLを96ウェル組織培養処理プレートに、希釈ごとに3回反復して添加した。次いで、50,000個の細胞を各ウェルに添加し、37℃、5％ CO₂で20時間培養した。分泌されたSEAPを含有する各ウェル由来の細胞培養上清20μLを、Quanti-Blue基質溶液180μLと37℃で30分間混合し、色の変化（分泌されたSEAPの量に対応する）をMolecular Devicesプレートリーダーを使用して590nmで測定した。

【0298】

図2に示すように、B15変異体1～3、7、および8は、用量依存的にSTAT5シグナル伝達を誘導した。表E2は、試験したB15抗体についての計算されたEC50値を示す。これらの結果は、生成された構築物がIL-15媒介シグナル伝達活性を誘導することができることを実証している。

【0299】

（表Ｅ２）IL2/15RβおよびγcサブユニットへのB15抗体結合のEC50値

N/A:EC50を結合曲線から決定することができなかった

【0300】

実施例3 IL15Rα sushiドメインを有するキメラIL-15融合抗体の生成
IL15Rα（SEQ ID NO:2）の細胞外sushiドメインを含む例示的なキメラB15融合抗体を生成した。IL15Rα sushiドメインを例示的なB15抗体（実施例1に記載のB15変異体3および6）と共発現させて、B15Rαsushi抗体を産生することによって、B15 Rαsushi抗体を生成した。これらの配列ならびにシグナル配列をコードする発現ベクターを、フリースタイルHEK 293細胞に共形質移入し、次いで、37℃、8％ CO₂で成長させた。発現されたB15 Rαsushi抗体を分泌させ、形質移入の96時間後に回収した。B15 Rαsushi抗体を、CaptureSelect CH1-XL親和性マトリックス（ThermoScientific）によって精製し、次いで、濃縮し、Amicon Ultra-4遠心フィルター（MWカットオフ＝10,000kDa、Millipore Sigma）を使用してリン酸緩衝生理食塩水（PBS）に緩衝液交換した。回収した抗体を、分子量および吸光係数に基づいてNanodropを使用して定量した。

【0301】

図1Aの右パネルならびに図1Bの中央および右パネルは、生成されたB15 Rαsushi抗体の概略図を示す。

【0302】

実施例4 キメラIL-15 Rαsushi融合抗体による受容体活性化およびシグナル伝達
実施例3に記載のように生成したキメラB15 Rαsushi融合抗体によるIL2/15Rβおよびγc受容体サブユニットの活性化ならびにSTAT5シグナル伝達を、HEK-Blue IL2レポーター細胞（InvivoGen）を使用して試験し、STAT5誘導性アルカリホスファターゼ（SEAP）レポーター遺伝子の誘導および分泌を通して分析する。

【0303】

HEK-Blue IL2レポーター細胞を実施例2に記載のように調製し、4倍段階希釈した（Fab濃度に基づいて64nM～0.25nM）B15 Rαsushi抗体と37℃、5％ CO₂で20時間共培養する。分泌されたSEAPを含有する各ウェル由来の細胞培養上清20μLを、Quanti-Blue基質溶液180μLと37℃で30分間混合し、色の変化（分泌されたSEAPの量に対応する）をTecanプレートリーダーを使用して590nmで測定する。

【0304】

実施例5 キメラIL-15融合抗体によって誘導されるNK-92細胞の拡大
実施例1に記載のように生成したキメラB15融合抗体および実施例3に記載のように生成したキメラB15 Rαsushi融合抗体の活性を、NK-92ナチュラルキラー（NK）細胞を拡大させる能力について評価する。NK-92細胞は、IL2Rα、IL15Rα、IL2/15Rβおよびγcサブユニットを発現し、それらの成長および増殖は、IL2またはIL15の受容体に結合して活性化するためのIL2またはIL15の外因性添加に依存する。

【0305】

NK-92細胞を、200U/mLのIL-2を供給した成長培地中で維持する。拡大アッセイの前に、NK-92細胞をIL-2を含まない成長培地で2回洗浄して、残存する細胞結合IL-2を除去し、組織培養処理した96ウェルプレートにウェルあたり10,000個の細胞を播種する。これらの細胞を、2倍段階希釈した（1.33nM～0.005nM）IL-2モノマー、IL-15モノマー、B15抗体、またはB15 Rαsushi抗体と37℃、5％ CO₂で48時間インキュベートする。半モル濃度のB15またはB15 Rαsushi抗体とのインキュベーションを、IL-2およびIL-15モノマーと比較する。代謝的に活性なオキシドレダクターゼ酵素の存在によるテトラゾリウム色素MTTのその不溶性ホルマザンへの還元によって、ウェルあたりの最終NK92細胞数を評価する（MTTアッセイキット、Promega）。

【0306】

実施例6 ヒトPBMCにおけるキメラIL-15融合抗体のインビトロ活性の評価
実施例1に記載のように生成したキメラB15融合抗体および実施例3に記載のように生成したキメラB15 Rαsushi融合抗体の活性を、インビトロでヒト末梢血単核球細胞（PBMC）中のNK細胞およびT細胞を刺激する能力について評価する。NK細胞およびT細胞の両方は、IL15RαおよびIL2/15Rβおよびγcサブユニットを発現し、それらの成長および増殖は、受容体に結合して活性化するための内因性または外因性IL15に依存する。

【0307】

ヒトPBMCをPBSで2回洗浄し、血球計を使用して計数し、10％ FBSを含むRPMI1640培地に再懸濁する。組織培養処理した96ウェル平底またはU底（細胞接触を促進する）プレートに、100μL中100,000個の細胞を各ウェルに播種する。B15抗体およびB15 Rαsushi抗体を同じ培地で500nM～0.032nMに5倍段階希釈し、各希釈物100μLを対応する細胞に添加して、250nM～0.016nMの最終濃度を達成する。融合抗体を添加しない対照もセットアップする。これらの細胞を37℃、5％ CO₂で96時間インキュベートする。処置後、PBMCを抗CD3-FITC（SK7）、抗CD4-PE（OKT4）、抗CD8a-eFluor 450（SK1）、および抗CD56-APC（AF12-7H3）で染色して、以下の細胞型、CD3＋CD4＋T細胞、CD3＋CD8＋T細胞、およびNK細胞（CD3-CD56＋）をゲーティングする。細胞増殖マーカーとしての細胞内Ki67を、抗Ki67-PE-Cy7（20Raj1）およびFoxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set（Thermo Fisher Scientific）を製造者のプロトコルに従って使用して染色する。続いて、染色された試料を、Novocyte Advanteon Flow Cytometer（Agilent,Santa Clara,CA）を使用して分析する。

【0308】

実施例7 げっ歯類におけるキメラIL-15融合抗体のインビボ活性
げっ歯類のNK細胞およびT細胞に対するキメラB15融合抗体のインビボ効果を調べるために、18匹の雌の7～9週齢のFischer344ラットを、0日目の体重に基づいて各々が3匹のラットの6つの群に無作為に分けた。1日目および4日目に、ラットに、生理食塩水ビヒクル（ビヒクル、群1）、「ノブなし」の対照抗体（NK-CTRL、SEQ ID NO:210に示される重鎖、群2）、ウシ（bovine）VH足場のCDR H3内の操作されたIL-15（SEQ ID NO:191に示される、B15変異体3の重鎖、群3）、IL-15Rα sushiドメインと複合体化したウシ（bovine）足場のCDR H3内の操作されたIL-15（Rαを有するB15変異体3、群4）、ヒト化足場のCDR H3内の操作されたIL-15（SEQ ID NO:194に示される、B15変異体6の重鎖、群5）、またはIL-15Rα sushiドメインと複合体化したヒト化足場のCDR H3内の操作されたIL-15（Rαを有するB15変異体6、群6）のいずれかを投与した。IL-15Rα sushiドメインの配列をSEQ ID NO:2に示す。群3～4および群5～6の融合抗体は、それぞれ、ウシ（bovine）V-ラムダ（SEQ ID NO:168に示される配列によってコードされる）またはヒト化V-ラムダ（SEQ ID NO:181）に由来する軽鎖を含有していた。群2、操作されたIL-15を含まない「ノブなし」陰性対照は、ウシ（bovine）VHおよびVL領域を含有していた。各抗体の定常領域は、LALA変異を有するヒトIgG1（SEQ ID NO:188）に由来した。各用量は、およそ3mLの体積で、1日目および4日目に腹腔内に0.1mg/kgであった。ビヒクルを3mLの体積で投与した。この研究のラット群を表E3に示す。

【0309】

（表Ｅ３）キメラB15融合抗体のげっ歯類研究

ビヒクル＝生理食塩水、NK-Ctrl＝ノブなし陰性対照、ip＝腹腔内

【0310】

体重を毎日モニタリングし、2回目の融合抗体投与後の異なる時点で舌下で血液を採取し、5日目に心臓穿刺による最終血液採取を実施した。10x体積の室温の塩化アンモニウムカリウム（ACK）緩衝液を添加して赤血球を5分間溶解し、続いて10x体積の冷PBSを添加して溶解反応を停止することによって、血液（最大250μL）を処理した。試料を400×gで5分間遠心分離し、PBSで洗浄した。T細胞についてはラットCD4（FITC標識、クローンW3/25、BioLegend）およびCD8（PE標識、クローンOX-8、BioLegend）、NK細胞についてはCD161（APC標識、クローン3.3.3、BioLegend）を標的とする蛍光抗体で、T細胞およびNK細胞を染色し、生細胞をLive/Dead Aqua（Life Technologies）で染色することによって同定した。

【0311】

結果は、操作された融合抗体のいずれもラットの体重に有意な影響を及ぼさないことを示した（表E4および図3A）。最後の投与の15分後に、NK細胞の有意な増加が群3～群6で観察され、IL-15Rα鎖を有する融合抗体を受けた群（群4および群6）のNK細胞数は有意に高かった（図3B）。最後の投与の24時間後に、CD8 T細胞の増加が群3～群6について観察され、この増加は、IL-15Rα鎖を受けた群と受けない群との間で同程度であった（図3C）。結果は、ウシ（bovine）およびヒト化融合抗体について同程度であった。

【0312】

（表Ｅ４）キメラB15融合抗体投与後の体重変化および死亡事象

ビヒクル＝生理食塩水、研究期間＝5日、平均BW最下点＝1日目からの変化％としての最低群平均体重

【0313】

したがって、操作されたキメラB15融合抗体は、げっ歯類においてインビボで生物学的活性を有し、IL-15Rα sushiドメインを含有するB15融合抗体は、NK細胞において増強された活性を有する。

【0314】

実施例8 非ヒト霊長類におけるキメラB15融合抗体のインビボ活性
非ヒト霊長類におけるNK細胞およびT細胞に対するB15融合抗体のインビボ効果を調べるために、9匹の雄ナイーブカニクイザルを、0日目の体重（2.7～4.7kg）に基づいて各々が3匹のサルの3つの群に無作為に分けた。1日目に、ヒト化足場のCDR H3内の操作されたIL-15（B15変異体6の重鎖、SEQ ID NO:194、群1）、IL-15Rα sushiドメインと複合体化したヒト化足場のCDR H3内の操作されたIL-15（群2）、または「ノブなし」のヒト化対照抗体（SEQ ID NO:211、群3）のいずれかの単回用量を、サルに投与した。IL-15Rα sushiドメインの配列をSEQ ID NO:2に示す。すべての群に対する融合抗体は、ヒト化V-ラムダ（SEQ ID NO:181）に由来する軽鎖を含有していた。各抗体の定常領域は、「LALA変異」を有するヒトIgG1（SEQ ID NO:188）に由来した。用量は、体重に応じて1.4～2.4mLの範囲の体積で、1日目に0.1mg/kgを静脈内に投与した。この研究のサル群を表E5に示す。

【0315】

（表Ｅ５）キメラB15融合抗体の非ヒト霊長類研究

NK-Ctrl＝ノブなし陰性対照、iv＝静脈内

【0316】

投与前日および実験の最終日に体重を測定した。融合抗体投与の前および後の異なる時点で（-3、1、2、3、4、5、6、7、10、15、および22日目）、大腿静脈から血液試料（0.5mL）を採取した。フローサイトメトリーによる白血球表現型の評価のために試料を採取した。試料は、採取した日に登録し、処理した。各試料について、表現型ごとに絶対細胞カウントおよび細胞百分率値を計算した。デュアルプラットフォーム法を使用して絶対カウントを決定した。このデュアルアプローチでは、フローサイトメトリーによって得られた細胞百分率値をそれぞれ、血液学分析装置によって決定された絶対白血球分化細胞カウント（すなわち、リンパ球または単球）と併せて使用して、各個々の試料について全血1μLあたりの各細胞型の絶対数を得た。絶対白血球カウントの決定に加えて、試験のパネルは、表E6の細胞型を同定するモノクローナル抗体を含有していた。各表現型マーカーに特異的な、予め試験されかつ力価付けされたモノクローナル抗体の所定の体積で、全血標本のアリコートを染色した。染色後、各チューブ内で赤血球を溶解した。調製した試料をBD FACSDiva v8.0.2で分析した。薬力学的分析のために、処置されたサルの値を処置前の値と比較した。処置群の平均値または個々の値をそれぞれの処置前（-3日目）群の平均値または個々の値と比較することによって、末梢血白血球カウントの倍率変化（x）を決定した。

【0317】

（表Ｅ６）白血球表現型のパネル

【0318】

結果は、操作された抗体のいずれもサルの体重に有意な影響を及ぼさないことを示した（図4A）。2日目に、免疫表現型検査によって評価されたすべてのリンパ球サブタイプの絶対カウントで最小から中程度の減少があり（すなわち、成熟T細胞［0.21xの低さ］、ヘルパーT細胞［0.24xの低さ］、細胞傷害性T細胞［0.17xの低さ］、NK細胞［0.09xの低さ］、およびB細胞［0.23xの低さ］）、これは、3日目までに解消された（図4B～図4D）。融合抗体を受けた動物（群1および2）では、4または5日目から6または7日目までに、評価されたすべてのリンパ球サブタイプの絶対カウントで増加があり（すなわち、成熟T細胞［最大1.67x］、ヘルパーT細胞［最大1.48x］、細胞傷害性T細胞［最大2.01x］、NK細胞［最大2.58x］、およびB細胞［最大1.83x］）、これは、7日目または10日目までに解消したが、群3のサル（対照）ではリンパ球カウントの増加はなかった（図4B～図4D）。群2（IL-15Rα sushiドメインを有するヒト化B15）のサルにおけるリンパ球数の増加は、群1（IL-15Rα sushiドメインを有しないヒト化B15）のサルよりも1日遅れて起こり、かつまた1日遅れて解消した（図4B～図4D）。融合抗体は、対照と比較して、処置されたサルの単球に顕著な効果を及ぼさなかった（図4D）。

【0319】

したがって、IL-15Rα sushiドメインを有するB15融合抗体およびIL-15Rα sushiドメインを有しないB15融合抗体の両方が、非ヒト霊長類においてNK細胞数およびT細胞数を増強した。

【0320】

本発明は、例えば本発明の様々な局面を説明するために提供される特定の開示された態様に範囲が限定されることを意図しない。記載される組成物および方法に対する様々な改変は、本明細書の記載および教示から明らかになるであろう。そのような変形は、本開示の真の範囲および精神から逸脱することなく実施することができ、本開示の範囲内に入ることが意図される。

【0321】

配列

【図1A】

【図1B】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図4A】

【図4B】

【図4C】

【図4D】

【配列表】

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【国際調査報告】