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特表2024-517780細菌およびベータコロナウイルス感染症に対するワクチン接種
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-23
(54)【発明の名称】細菌およびベータコロナウイルス感染症に対するワクチン接種
(51)【国際特許分類】
A61K 39/215 20060101AFI20240416BHJP
A61K 39/02 20060101ALI20240416BHJP
A61K 39/095 20060101ALI20240416BHJP
A61K 39/08 20060101ALI20240416BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240416BHJP
A61K 31/7105 20060101ALI20240416BHJP
A61P 31/04 20060101ALI20240416BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240416BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240416BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240416BHJP
A61K 47/02 20060101ALI20240416BHJP
A61K 47/18 20170101ALI20240416BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20240416BHJP
A61K 39/108 20060101ALI20240416BHJP
C12N 15/50 20060101ALI20240416BHJP
C12N 15/31 20060101ALI20240416BHJP
C07K 14/195 20060101ALI20240416BHJP
C07K 14/22 20060101ALI20240416BHJP
C07K 14/33 20060101ALI20240416BHJP
C07K 14/245 20060101ALI20240416BHJP
C07K 19/00 20060101ALI20240416BHJP
C07K 14/165 20060101ALN20240416BHJP
【ＦＩ】
A61K39/215
A61K39/02
A61K39/095
A61K39/08
A61K48/00
A61K31/7105
A61P31/04
A61P31/14
A61P43/00 121
A61K47/26
A61K47/02
A61K47/18
A61K9/19
A61K39/108
C12N15/50 ZNA
C12N15/31
C07K14/195
C07K14/22
C07K14/33
C07K14/245
C07K19/00
C07K14/165
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023566969
(86)(22)【出願日】2022-04-28
(85)【翻訳文提出日】2023-12-01
(86)【国際出願番号】 IB2022053951
(87)【国際公開番号】W WO2022234405
(87)【国際公開日】2022-11-10
(31)【優先権主張番号】63/183,254
(32)【優先日】2021-05-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/183,630
(32)【優先日】2021-05-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/325,126
(32)【優先日】2022-03-29
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100133927
【弁理士】
【氏名又は名称】四本 能尚
(74)【代理人】
【識別番号】100147186
【弁理士】
【氏名又は名称】佐藤 眞紀
(74)【代理人】
【識別番号】100174447
【弁理士】
【氏名又は名称】龍田 美幸
(74)【代理人】
【識別番号】100185960
【弁理士】
【氏名又は名称】池田 理愛
(72)【発明者】
【氏名】アナリサ シビル アンダーソン
(72)【発明者】
【氏名】アレハンドロ デヴィッド ケイン
(72)【発明者】
【氏名】ウィリアム カール グルーバー
(72)【発明者】
【氏名】カトリン ウテ ジャンセン
(72)【発明者】
【氏名】ルイス パスカル ジョダー マルティン－モンタルヴォ
(72)【発明者】
【氏名】スティーブン ポール ロックハート
(72)【発明者】
【氏名】ダニエル アルフレッド スコット
(72)【発明者】
【氏名】ウェンディー ジョー ワトソン
(72)【発明者】
【氏名】カリ アン ヤチシン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4C085
4C086
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA29
4C076BB11
4C076CC06
4C076DD21
4C076DD22
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4C076DD51
4C076DD67
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4C084ZC75
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4C085CC08
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4C085GG01
4C086AA01
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4C086MA05
4C086MA66
4C086NA05
4C086ZB33
4C086ZB35
4C086ZC75
4H045AA10
4H045AA20
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA41
4H045CA11
4H045DA83
4H045DA86
4H045EA31
4H045FA71
4H045FA74
(57)【要約】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ヒト対象における感染性疾患を引き起こす細菌およびベータコロナウイルスに対する免疫応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、細菌に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに由来する抗原をコードするｍＲＮＡを含む免疫原性組成物とを、有効用量で同時投与するステップを含み、細菌が、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ではない、方法。
【請求項2】
第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量とを並行して投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量を付随的に投与する、請求項１から２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項4】
第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量とをそれぞれの各用量の２４時間以内に投与する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量とをそれぞれの各用量の４８時間以内に投与する、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
第１の免疫原性組成物の１回目の用量と第１の免疫原性組成物の２回目の用量の間に約２週間～約１２カ月の間隔をおく、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
ｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の１回目の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の２回目の用量の間に約２週間～約１２カ月の間隔をおく、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項１に記載の方法。
【請求項9】
細菌が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項10】
第１の組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項11】
ポリペプチドが、脂質付加されている、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項12】
ポリペプチドが、脂質付加されていない、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項13】
ポリペプチドが、免疫原性である、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項14】
第１の組成物が、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加されたポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加されたポリペプチドとを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項15】
第１の組成物が、ポリソルベート－８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項16】
第１の組成物が、ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）を含む、請求項９に記載の方法。
【請求項17】
第１の組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する多糖を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
第１の組成物が、ａ）（ｉ）配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加されたポリペプチド、および（ｉｉ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加されたポリペプチドおよびアルミニウムを含む液体組成物と、ｂ）ｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）とカルボジイミド化学によってコンジュゲートされたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡＡＨ－ＴＴコンジュゲート）、ｉｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）とカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたＡＤＨリンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣＡＨ－ＴＴコンジュゲート）、ｉｉｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）と、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ－ＴＴコンジュゲート）、およびｉｖ）破傷風トキソイド（ＴＴ）と、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ－ＴＴコンジュゲート）を含む凍結乾燥組成物とを含み、凍結乾燥組成物が、液体組成物を用いて復元される、請求項１から１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
細菌が、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項20】
第１の組成物が、トキソイドを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項21】
第１の組成物が、融合ポリペプチドを含む、請求項１９から２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項22】
第１の組成物が、凍結乾燥されたものである、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項23】
第１の組成物が、凍結保護物質を含む、請求項１９から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
第１の組成物が、ショ糖を含む、請求項１９から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項25】
第１の組成物が、トレハロースを含む、請求項１９から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項26】
第１の組成物が、ホルムアルデヒドをさらに含むものではない、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
第１の組成物が、野生型クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡのＣ末端ドメインを含むポリペプチドを含む、請求項１９から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
第１の組成物が、野生型クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＢのＣ末端ドメインを含むポリペプチドを含む、請求項１９から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
第１の組成物を５５歳以上のヒトに投与する、請求項１９から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
細菌が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項31】
ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））である、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、配列番号１の残基１～１０２および配列番号１の残基１０３～４２８４を有する配列を含み、配列番号１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の配列が、バリアント株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原で置き換えられている、請求項１から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原（例えば、Ｓタンパク質）をコードする連結ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域（例えば、５’ＵＴＲ）、第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域（例えば、３’ＵＴＲ）、少なくとも１つの５’キャップ領域、および３’安定化領域を含むｍＲＮＡを含む、請求項１から３３のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願との相互参照
本出願は、２０２１年５月３日出願の米国仮特許出願第６３／１８３，２５４号、２０２１年５月３日出願の米国仮特許出願第６３／１８３，６３０号、および２０２２年３月２９日出願の米国仮特許出願第６３／３２５，１２６号の利益を主張するものである。上述の出願の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年５月３日出願の米国仮特許出願第６３／１８３，２５４号、２０２１年５月３日出願の米国仮特許出願第６３／１８３，６３０号、および２０２２年３月２９日出願の米国仮特許出願第６３／３２５，１２６号の利益を主張するものである。上述の出願の内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、ヒト対象、特に、高齢、青年期、および乳児期の対象に対する、細菌ワクチンとｍＲＮＡワクチンの組合せを用いたワクチン接種に関する。特に、本発明は、細菌およびＣＯＶＩＤ－１９感染症に対するワクチン接種であって、好ましくは細菌感染症が、肺炎球菌によるものではない、ワクチン接種に関する。
【背景技術】
【0003】
ワクチンは、レシピエントにおいて抗原に特異的な中和抗体および／または細胞媒介性免疫応答（ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）が引き出されるように設計され、病原体由来のタンパク質および／または多糖抗原が長年使用されてきた。細胞媒介性免疫応答、特に、エフェクターＴ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞を含む）の生成は、ポリペプチドおよび／または多糖構成成分を有するワクチンによって引き出される免疫応答の望ましい構成要素であり得る。抗体もまた、病原体、特に細菌およびインフルエンザウイルスなどのある特定のウイルスに対する防御免疫応答の望ましい構成要素であり得る。
【0004】
核酸に基づくワクチンは、細胞媒介性免疫（ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ）（例えば、エフェクターＴ細胞、例えば、インターフェロンγを分泌する抗原特異的Ｔ細胞および抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞などに関与する）を引き出すことができる。核酸構成成分によってコードされ、発現される抗原に対する抗体の生成もまた、核酸に基づくワクチンによって引き出される免疫応答の望ましい構成要素であり得る。
【0005】
ポリペプチドおよび／または多糖構成成分を有する第１の免疫原性組成物と核酸構成成分を有する第２の免疫原性組成物とを同時投与した場合に観察されるそれぞれの抗原に対する免疫応答が、免疫原性組成物を同時投与しない場合のそれぞれの抗原に対する免疫応答と比較して劣らないまたは好ましくは増強されるように、免疫化レジメンを改善する必要がある。例えば、第１の免疫原性組成物に、ポリペプチド、トキソイド、多糖、および／または多糖コンジュゲートを含めることができる。組成物は、例えば、肺炎球菌などの感染症因子による感染症の可能性を低下させるために、免疫応答を生じさせるために有用なものであり得る。
【0006】
肺炎球菌によって引き起こされる感染症は、世界中の罹患率および死亡率の主要な原因である。侵襲性肺炎球菌疾患の最も一般的な顕在化は肺炎、熱性菌血症および髄膜炎であるが、他方で、気道内に細菌が拡散することにより、中耳感染症、副鼻腔炎または再発性気管支炎が生じることもある。侵襲性疾患と比較して、非侵襲性顕在化は、通常は重症度は低いが、はるかによく見られる。
【0007】
欧州および米国では、肺炎球菌性肺炎が最も一般的な市中感染性細菌性肺炎であり、毎年成人１００，０００人当たりおよそ１００人に影響を及ぼしているものと推定される。熱性菌血症および髄膜炎に対応する数字は、それぞれ１００，０００人当たり１５～１９人、および１００，０００人当たり１～２人である。これらの顕在化の１つまたは複数のリスクは、乳児および高齢者、ならびに年齢を問わず免疫が損なわれている人においてはるかに高い。経済的に発展した地域においてさえ、侵襲性肺炎球菌疾患による死亡率が高い。肺炎球菌性肺炎を有する成人の死亡率は平均１０％～２０％であるが、高リスク群では５０％を超える場合がある。肺炎は、世界的に、現時点で最もよく見られる肺炎球菌による死亡の原因である。
【0008】
肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）は、肺炎球菌（肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））によって引き起こされる疾患からの保護のために使用される肺炎球菌ワクチンである。現在、世界市場で３種のＰＣＶワクチン：ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ（登録商標））（７価ワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）（１０価ワクチン）およびＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ１３（登録商標））（１３価ワクチン）が利用可能である。
【0009】
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、ＣＯＶＩＤ－１９パンデミックの原因となった呼吸器疾患であるＣＯＶＩＤ－１９（新型コロナウイルス感染症（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ ２０１９））を引き起こすウイルスである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ポジティブセンス一本鎖ＲＮＡウイルスである。このウイルスは、人の間で、濃厚接触によって、および咳またはくしゃみで生じる呼吸器飛沫によって主に伝播する。このウイルスは主としてアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に結合することによってヒト細胞に侵入する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0010】
患者を細菌（例えば、肺炎球菌）感染症および／または細菌（例えば、肺炎球菌）疾患ならびにコロナウイルス疾患の両方から有効に保護する必要がある。
【0011】
本発明の投与スケジュールの目的は、細菌（例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ））およびＣＯＶＩＤ－１９からの適当な保護を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0012】
本発明は、概して、ヒト対象における感染性疾患を引き起こす細菌およびベータコロナウイルスに対する免疫応答を引き出すための方法および使用に関し、当該方法は、ヒト対象に、細菌に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに由来する抗原をコードするｍＲＮＡを含む免疫原性組成物とを、有効用量で同時投与することを含む。例えば、ＲＮＡ構成成分を含む第１の免疫原性組成物ならびにポリペプチドおよび／または多糖構成成分を含む第２の免疫原性組成物の投与が本明細書に開示される。第１のおよび第２の免疫原性組成物の投与により、それぞれの病原体に対する免疫応答を、ＲＮＡを単独で、またはポリペプチドおよび／もしくは多糖を単独で含む免疫原性組成物の投与と比較して増強することができる。一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物により、同じエピトープに対する免疫応答が個別に引き出される。一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物および第２の免疫原性組成物により、第１の組成物と第２の組成物とで同じではないエピトープに対する免疫応答が個別に引き出される。
【0013】
一態様では、本発明は、ヒト対象における感染性疾患を引き起こす細菌（例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の任意の１つから選択される）ならびにベータコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答（ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を引き出すための方法であって、ヒト対象に、ポリペプチド、トキソイド、多糖、および多糖コンジュゲートの任意の１つから選択される抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む第２の免疫原性組成物とを、有効用量で同時投与するステップを含む方法に関する。ある態様では、細菌に対する前記第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに対する前記第２の免疫原性組成物ｍＲＮＡワクチンとを、並行してまたは付随的に投与する。好ましい実施形態では、ポリペプチド、トキソイド、多糖、および多糖コンジュゲートの任意の１つから選択される抗原は、感染性疾患を引き起こす細菌に由来する。
【0014】
ある態様では、本発明は、ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、有効用量の肺炎球菌コンジュゲートワクチンと、有効用量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンとを同時投与するステップを含む方法を対象とする。ある態様では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンとを並行してまたは付随的に投与する。
【0015】
本発明は、さらに、ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法における使用のための、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンであって、前記方法が、ヒト対象に前記ワクチンを同時投与するステップを含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンに関する。
【0016】
本発明の別の態様は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用に関する。
【0017】
本発明は、さらに、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用のための同時投与、および肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための同時投与に関する。
【0018】
ある態様では、本発明は、ヒト対象における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびベータコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、有効用量の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、有効用量の、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンとを同時投与するステップを含む方法を対象とする。ある態様では、前記第１の免疫原性組成物および前記ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンを並行してまたは付随的に投与する。
【0019】
本発明は、さらに、ヒト対象における髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）およびベータコロナウイルスに対する免疫保護応答を引き出すための方法における使用のための、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンであって、前記方法が、ヒト対象に前記組成物を同時投与するステップを含む、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンに関する。
【0020】
本発明の別の態様は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用に関する。
【0021】
本発明は、さらに、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての同時投与、および髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための同時投与に関する。
【0022】
ある態様では、本発明は、ヒト対象におけるクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、現在はクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ））およびベータコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、有効用量のクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、有効用量の、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンとを同時投与するステップを含む方法を対象とする。ある態様では、前記第１の免疫原性組成物および前記ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンを並行してまたは付随的に投与する。
【0023】
本発明は、さらに、ヒト対象におけるクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）およびベータコロナウイルスに対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に前記組成物を同時投与するステップを含む方法における使用のための、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンに関する。
【0024】
本発明の別の態様は、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用に関する。
【0025】
本発明は、さらに、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用のための、同時投与、およびクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための、同時投与に関する。
【0026】
ある態様では、本発明は、ヒト対象における大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ））およびベータコロナウイルス（例えば、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、有効用量の、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、有効用量の、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンを同時投与するステップを含む方法を対象とする。ある態様では、前記第１の免疫原性組成物と前記ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンを並行してまたは付随的に投与する。
【0027】
本発明は、さらに、ヒト対象における大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）およびベータコロナウイルスに対する免疫保護応答を引き出すための方法における使用のための、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンであって、前記方法が、ヒト対象に前記組成物を同時投与するステップを含む、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンに関する。
【0028】
本発明の別の態様は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用に関する。
【0029】
本発明は、さらに、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用のための、同時投与、および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンの、ベータコロナウイルスに対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための、同時投与に関する。
【図面の簡単な説明】
【0030】
【図1】６５歳以上の成人に対する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を予防するためのｍＲＮＡワクチン（ＢＮＴ１６２ｂ２）と、同じ来院時に同時投与した場合の、２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（２０ｖＰｎＣ）の同時投与の安全性および免疫原性を、これらのワクチンをそれぞれ単独で与薬した場合と比較して記述するための試験の設計の略図である。
【図2】ワクチンＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標）；ＩＮＮ：トジナメラン）；説明：全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク糖タンパク質をコードするメッセンジャーＲＮＡのヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）配列に関する概略図および配列である。ＵＴＲ＝非翻訳領域、ｓｉｇ＝Ｓ糖タンパク質の延長されたシグナル配列、Ｓタンパク質＿ｍｕｔ＝Ｋ９８６Ｐ変異およびＶ９８７Ｐ変異を含有するＳ糖タンパク質配列、ポリ（Ａ）＝ポリアデニル化シグナル尾部。
【図3】ワクチンｍＲＮＡ－１２７３の推定上の配列（配列番号２）
【図4】群ごと、およびワクチン血清型ごとの、ワクチン接種の１カ月後のＯＰＡ ＧＭＴ（両側９５％ＣＩ）；ＧＭＴ＝幾何平均力価；ＯＰＡ＝オプソニン化貪食活性；ＰＣＶ２０＝２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン。
【図5】群ごとの、ＢＮＴ１６２ｂ２の前および１カ月後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧ ＧＭＣ（両側９５％ＣＩ）；ＧＭＣ＝幾何平均濃度。
【図6】ＰＣＶ２０の１カ月後の、モデルに基づくＯＰＡ ＧＭＲ（９５％ＣＩ）（評価可能な免疫原性集団）、ＢＬＱ＝定量限界未満、ＢＭＩ＝肥満度指数、ＧＭＲ＝幾何平均比、ＬＬＯＱ＝定量下限、ＬＳ＝最小二乗、ＯＰＡ＝オプソニン化貪食活性。この解析ではＬＬＯＱを下回るまたはＢＬＱと示されるアッセイ結果を０．５×ＬＬＯＱに設定した。ＰＣＶ２０の１カ月後とは、両群について、ＰＣＶ２０を用いたワクチン接種の１カ月後を指す。ＧＭＲ（ＰＣＶ２０＋生理食塩水に対するＰＣＶ２０＋ＢＮＴ１６２ｂ２）および両側ＣＩを、ワクチン群、性別、喫煙状況、ワクチン接種時の年齢、ベースラインの対数変換したＯＰＡ力価、以前の肺炎球菌ワクチン接種状況、およびＢＭＩ群で調整した回帰モデルに基づいて、ＯＰＡ力価のＬＳ平均値の差異および対応するＣＩの指数をとることによって算出した。
【発明を実施するための形態】
【0031】
本発明は、感染性疾患を引き起こす細菌に対する免疫原性組成物およびｍＲＮＡワクチンを用いたワクチン接種に関する。
【0032】
本発明では、ＰＣＶを用いたワクチン接種とｍＲＮＡワクチンを用いたワクチン接種とを組み合わせる。
【0033】
１．本発明のｍＲＮＡワクチン
本発明は、概して、ｍＲＮＡワクチンに関する。本発明者らの知る限りでは、感染性疾患を引き起こす細菌に対する免疫原性組成物（例えば、ＰＣＶ）とｍＲＮＡワクチンを組み合わせるのは本発明が最初である。
本発明は、概して、ｍＲＮＡワクチンに関する。本発明者らの知る限りでは、感染性疾患を引き起こす細菌に対する免疫原性組成物（例えば、ＰＣＶ）とｍＲＮＡワクチンを組み合わせるのは本発明が最初である。
【0034】
多数のｍＲＮＡワクチンプラットフォームが先行技術で利用可能である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写された（ＩＶＴ）ｍＲＮＡの基本構造は、「成熟」真核生物ｍＲＮＡとよく似ており、（ｉ）タンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、それに隣接する（ｉｉ）５’および３’非翻訳領域（ＵＴＲ）、ならびに末端側の（ｉｉｉ）７－メチルグアノシン５’キャップ構造および（ｉｖ）３’ポリ（Ａ）尾部からなる。非コード構造特色は、ｍＲＮＡの薬理作用に重要な役割を果たすものであり、それを個別に最適化して、ｍＲＮＡ安定性、翻訳効率（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）、および免疫原性をモジュレートすることができる。
【0035】
修飾ヌクレオシドを組み入れることにより、「ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ」と称される、免疫賦活活性が低減したｍＲＮＡ転写物を作製することができ、したがって、改善された安全性プロファイルを得ることができる。さらに、修飾ヌクレオシドは、ＩＦＮ型によって誘導され、侵入するｍＲＮＡを分解するおよび阻害するようにプログラムされている直接抗ウイルス経路を回避することができるので、安定性および翻訳能が強力に増強されたｍＲＮＡワクチンを設計することが可能になる。例えば、ＩＶＴ ｍＲＮＡにおけるウリジンをシュードウリジンで置き換えることにより、ＲＮａｓｅ ＬによるｍＲＮＡ切断を調節する２’－５’オリゴアデニル酸シンテターゼの活性が低下する。さらに、ｍＲＮＡ翻訳プロセスの阻害に関連する酵素プロテインキナーゼＲの活性の低下が測定される。
【0036】
修飾ヌクレオチドの組み入れに加えて、他の手法でも、ｍＲＮＡの翻訳能および安定性が増大することが検証されている。１つの例は、「配列が工学的に操作されたｍＲＮＡ」の開発である。その場合、ｍＲＮＡのＯＲＦおよびＵＴＲの配列最適化を、例えば、ＧＣ含量を富化させることによってまたは天然の長寿命ｍＲＮＡ分子のＵＴＲを選択することによって行うことにより、ｍＲＮＡ発現を強力に増大させることができる。別の手法は、「自己増幅性ｍＲＮＡ」構築物の設計である。これらは、大部分がアルファウイルスに由来するものであり、ウイルスレプリカーゼをコードする追加的なＯＲＦと共に目的の抗原によって置き換えられたＯＲＦを含有する。後者は、ｍＲＮＡの細胞内増幅を駆動するものであり、したがって、抗原発現能を有意に増大させることができる。
【0037】
また、ｍＲＮＡの末端構造におけるいくつかの修飾が行われている。アンチリバースキャップ（ＡＲＣＡ）修飾は、５’末端における正しいキャップ方向性を確実にすることができ、これにより、ｍＲＮＡのほぼ全ての画分がリボソームに効率的に結合することができるようになる。他のキャップ修飾、例えば、ホスホロチオエートキャップアナログにより、真核生物翻訳開始因子４Ｅに対する親和性をさらに改善し、ＲＮＡキャップ除去複合体に対する抵抗性を増大させることができる。
【0038】
逆に、ｍＲＮＡの構造を修飾することによって自然免疫応答を誘発するｍＲＮＡの効力をさらに改善することができるが、翻訳能を損ねることになる。ホスホロチオエート骨格を用いて、またはカチオン性タンパク質プロタミンを用いて沈降させることによってのいずれかでｍＲＮＡを安定化することにより、抗原発現は減弱される可能性があるが、より強力な免疫賦活能を得ることができる。
【0039】
本発明のｍＲＮＡワクチンは、感染性疾患を対象とするワクチン、好ましくはウイルス感染性疾患を対象とするワクチン、好ましくはコロナウイルス疾患を対象とするワクチン、好ましくはＣｏｖｉｄ－１９疾患を対象とするワクチンであることが好ましい。
【0040】
一態様では、本発明は、ヒト対象における細菌およびベータコロナウイルスに対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、ポリペプチド、トキソイド、多糖、および多糖コンジュゲートの任意の１つから選択される抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む第２の免疫原性組成物とを、有効用量で同時投与するステップを含む方法に関する。ある態様では、細菌に対する前記第１の免疫原性組成物とベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンを含む前記第２の免疫原性組成物とを並行してまたは付随的に投与する。本発明の特に好ましい一実施形態では、本発明のＰＣＶとｍＲＮＡワクチンＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））を組み合わせる。
【0041】
本発明の別の特に好ましい実施形態では、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む免疫原性組成物とｍＲＮＡワクチンＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））を組み合わせる。
【0042】
本発明の別の特に好ましい実施形態では、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む免疫原性組成物とｍＲＮＡワクチンＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））を組み合わせる。
【0043】
本発明の別の特に好ましい実施形態では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）に由来する抗原を含む免疫原性組成物とｍＲＮＡワクチンＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））を組み合わせる。
【0044】
別の実施形態では、ｍＲＮＡワクチンは、配列番号１の残基１～１０２（図２参照）および配列番号１の残基１０３～４２８４を有する配列を含み、ここで、配列番号１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の配列はバリアント株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原で置き換えられている。
【0045】
本発明の別の特に好ましい実施形態では、本発明のＰＣＶとｍＲＮＡワクチン「ｍＲＮＡ－１２７３」を組み合わせる。
【0046】
現在臨床試験が行われているＣｏｖｉｄ－１９疾患を対象とするさらなるｍＲＮＡワクチンとして、
１）ＭＲＴ５５００、ＳａｎｏｆｉおよびＴｒａｎｓｌａｔｅ Ｂｉｏ、前臨床
２）ＨＧＣ０１９、Ｇｅｎｎｏｖａ ＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよびＨＤＴ Ｂｉｏ、第Ｉ／ＩＩ相
３）ＡＲＣｏＶ、Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｕｚｈｏｕ Ａｂｏｇｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｗａｌｖａｘ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ相
４）ＣｈｕｌａＣｏＶ１９、Ｃｈｕｌａ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ、第Ｉ相
５）ＰＴＸ－ＣＯＶＩＤ１９－Ｂ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第Ｉ相
６）ＡＲＣＴ－０２１（ＬＵＮＡＲ－ＣＯＶ１９）、Ｄｕｋｅ－ＮＵＳ／Ａｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第ＩＩ相
７）ＣＶｎＣｏＶ ＣｕｒｅＶａｃ、第ＩＩＩ相
が挙げられる。
１）ＭＲＴ５５００、ＳａｎｏｆｉおよびＴｒａｎｓｌａｔｅ Ｂｉｏ、前臨床
２）ＨＧＣ０１９、Ｇｅｎｎｏｖａ ＢｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよびＨＤＴ Ｂｉｏ、第Ｉ／ＩＩ相
３）ＡＲＣｏＶ、Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｕｚｈｏｕ Ａｂｏｇｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｗａｌｖａｘ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ相
４）ＣｈｕｌａＣｏＶ１９、Ｃｈｕｌａ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ、第Ｉ相
５）ＰＴＸ－ＣＯＶＩＤ１９－Ｂ、Ｐｒｏｖｉｄｅｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第Ｉ相
６）ＡＲＣＴ－０２１（ＬＵＮＡＲ－ＣＯＶ１９）、Ｄｕｋｅ－ＮＵＳ／Ａｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第ＩＩ相
７）ＣＶｎＣｏＶ ＣｕｒｅＶａｃ、第ＩＩＩ相
が挙げられる。
【0047】
本発明のｍＲＮＡワクチンは、ｍＲＮＡおよび好ましくはヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む。
【0048】
本開示において有用なｍＲＮＡは、一般には、目的のポリペプチドをコードする、連結ヌクレオシドの第１の領域（例えば、コード領域）、第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域（例えば、５－ＵＴＲ）、第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域（例えば、３－ＵＴＲ）、少なくとも１つの５’キャップ領域、および３’安定化領域を含む。一部の実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、ポリＡ領域またはコザック配列（例えば、５’ＵＴＲ内）をさらに含む。一部の場合では、本発明のｍＲＮＡは、ポリヌクレオチドから削除することが可能な１つまたは複数のイントロンヌクレオチド配列を含有し得る。一部の実施形態では、本発明のｍＲＮＡは、５’キャップ構造、連鎖停止ヌクレオチド（ｃｈａｉｎ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）、ステムループ、ポリＡ配列、および／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。核酸の領域の任意の１つは、１つまたは複数の代替構成成分（例えば、代替ヌクレオシド）を含み得る。例えば、３’安定化領域が、Ｌ－ヌクレオシド、逆向きチミジン、もしくは２’－０－メチルヌクレオシドなどの代替ヌクレオシドを含み得る、ならびに／またはコード領域、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、もしくはキャップ領域が、５置換ウリジン（例えば、５－メトキシウリジン）、１置換シュードウリジン（例えば、１－メチル－シュードウリジン）、および／もしくは５置換シチジン（例えば、５－メチル－シチジン）などの代替ヌクレオシドを含み得る。
【0049】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、１つまたは複数のＲＮＡを含んでよく、１つまたは複数のＲＮＡ、脂質、およびその量は、特定のＮ：Ｐ比がもたらされるように選択することができる。組成物のＮ：Ｐ比は、１つまたは複数の脂質の窒素原子とＲＮＡのリン酸基の数のモル比を指す。一般に、低Ｎ：Ｐ比が好ましい。１つまたは複数のＲＮＡ、脂質、およびその量は、約２：１～約３０：１、例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１２：１、１４：１、１６：１、１８：１、２０：１、２２：１、２４：１、２６：１、２８：１、または３０：１のＮ：Ｐ比がもたらされるように選択することができる。ある特定の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約２：１から約８：１であり得る。他の実施形態では、Ｎ：Ｐ比は、約５：１から約８：１までである。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．０：１、約５．５：１、約５．６７：１、約６．０：１、約６．５：１、または約７．０：１であってよい。例えば、Ｎ：Ｐ比は、約５．６７：１であり得る。
【0050】
本発明のｍＲＮＡは、標準ヌクレオチドＡ（アデノシン）、Ｇ（グアノシン）、Ｃ（シトシン）、Ｕ（ウリジン）、またはＴ（チミジン）のいずれかを含めた天然に存在する構成成分を１つまたは複数含み得る。一実施形態では、（ａ）５’ＵＴＲ、（ｂ）オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、（ｃ）３’ＵＴＲ、（ｄ）ポリＡ尾部、および（上記のａ、ｂ、ｃ、またはｄ）の任意の組合せを含むヌクレオチドの全てまたは実質的に全てが、天然に存在する標準ヌクレオチドＡ（アデノシン）、Ｇ（グアノシン）、Ｃ（シトシン）、Ｕ（ウリジン）、またはＴ（チミジン）を含む。
【0051】
本発明のｍＲＮＡは、安定性の増大、および／またはポリヌクレオチドが導入される細胞の自然免疫応答の実質的な誘導の欠如を含めた有用な特性を付与する本明細書に記載の代替構成成分を１つまたは複数含み得る。例えば、ｍｏｄＲＮＡは、ｍｏｄＲＮＡが導入される細胞において、対応する変更されていないｍＲＮＡと比べて分解の低減を示し得る。これらの代替種は、タンパク質産生の効率、ポリヌクレオチドの細胞内保持、および／または接触した細胞の生存率を増強し得る、ならびに低減した免疫原性を有し得る。
【0052】
本発明のｍＲＮＡは、修飾された（例えば、変更されたまたは代替）核酸塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、またはこれらの組合せを１つまたは複数含み得る。ＬＮＰに有用なｍＲＮＡは、例えば、核酸塩基、糖、またはヌクレオシド間連結に対する（例えば、連結しているリン酸に対する／リン酸ジエステル連結に対する／リン酸ジエステル骨格に対する）任意の有用な修飾または変更を含み得る。ある特定の実施形態では、変更（例えば、１つまたは複数の変更）は、核酸塩基、糖、およびヌクレオシド間連結のそれぞれに存在する。本開示による変更は、リボ核酸（ＲＮＡ）の変更、例えば、リボフラノシル環の２’－ＯＨの２’－Ｈへの置換、トレオース核酸（ＴＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックド核酸（ＬＮＡ）、またはこれらのハイブリッドであってよい。追加的な変更が本明細書に記載されている。
【0053】
本発明のｍＲＮＡは、分子の全長に沿って均等に変更されていてもそうでなくてもよい。例えば、１つまたは複数または全ての型のヌクレオチド（例えば、プリンもしくはピリミジン、またはＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つもしくは複数もしくは全て）がｍＲＮＡにおいてまたはその所与の所定の配列領域において均等に変更されていてもそうでなくてもよい。一部の場合では、ｍＲＮＡ内（またはその所与の配列領域内）の全てのヌクレオチドＸが変更されており、ここで、Ｘは、ヌクレオチドＡ、Ｇ、Ｕ、Ｃのいずれか１つであってよい、またはＡ＋Ｇ、Ａ＋Ｕ、Ａ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ、Ｇ＋Ｃ、Ｕ＋Ｃ、Ａ＋Ｇ＋Ｕ、Ａ＋Ｇ＋Ｃ、Ｇ＋Ｕ＋ＣまたはＡ＋Ｇ＋Ｃの組合せのいずれか１つであってよい。
【0054】
種々の糖の変更および／またはヌクレオシド間連結（例えば、骨格構造）がポリヌクレオチド内の種々の位置に存在し得る。ヌクレオチドアナログまたは他の変更（複数可）は、ポリヌクレオチドの機能が実質的に低下しないポリヌクレオチドの任意の位置（複数可）に位置してよいことが当業者には理解されよう。変更は、５’末端または３’末端における変更であってもよい。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、３’末端における変更を含む。ポリヌクレオチドは、約１％から約１００％まで（全体的なヌクレオチド含有量との関連で、またはヌクレオチドの１つもしくは複数の型、すなわち、Ａ、Ｇ、ＵもしくはＣのいずれか１つもしくは複数との関連で）または間に入る任意のパーセンテージ（例えば、１％から２０％まで、１％から２５％まで、１％から５０％まで、１％から６０％まで、１％から７０％まで、１％から８０％まで、１％から９０％まで、１％から９５％まで、１０％から２０％まで、１０％から２５％まで、１０％から５０％まで、１０％から６０％まで、１０％から７０％まで、１０％から８０％まで、１０％から９０％まで、１０％から９５％まで、１０％から１００％まで、２０％から２５％まで、２０％から５０％まで、２０％から６０％まで、２０％から７０％まで、２０％から８０％まで、２０％から９０％まで、２０％から９５％まで、２０％から１００％まで、５０％から６０％まで、５０％から７０％まで、５０％から８０％まで、５０％から９０％まで、５０％から９５％まで、５０％から１００％まで、７０％から８０％まで、７０％から９０％まで、７０％から９５％まで、７０％から１００％まで、８０％から９０％まで、８０％から９５％まで、８０％から１００％まで、９０％から９５％まで、９０％から１００％まで、および９５％から１００％まで）の代替ヌクレオチドを含有し得る。標準ヌクレオチド（例えば、Ａ、Ｇ、Ｕ、またはＣ）の存在が任意の残りのパーセンテージを占めることが理解されよう。
【0055】
ポリヌクレオチドは、最低でゼロ、最大で１００％の代替ヌクレオチド、または間に入る任意のパーセンテージ、例えば、少なくとも５％の代替ヌクレオチド、少なくとも１０％の代替ヌクレオチド、少なくとも２５％の代替ヌクレオチド、少なくとも５０％の代替ヌクレオチド、少なくとも８０％の代替ヌクレオチド、または少なくとも９０％の代替ヌクレオチドを含有し得る。例えば、ポリヌクレオチドは、代替ウラシルまたはシトシンなどの代替ピリミジンを含有し得る。一部の実施形態では、ポリヌクレオチド内のウラシルの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％が代替ウラシル（例えば、５置換ウラシル）で置き換えられている。代替ウラシルを単一の独特の構造を有する化合物で置き換えることができる、または異なる構造（例えば、２つ、３つ、４つもしくはそれよりも多くの独特の構造）を有する複数の化合物で置き換えることができる。一部の場合では、ポリヌクレオチド内のシトシンの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または１００％が代替シトシン（例えば、５置換シトシン）で置き換えられている。代替シトシンを単一の独特の構造を有する化合物で置き換えることができる、または異なる構造（例えば、２つ、３つ、４つまたはそれよりも多くの独特の構造）を有する複数の化合物で置き換えることができる。
【0056】
一部の場合では、核酸は、ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）が導入される細胞の自然免疫応答を実質的に誘導しないものである。誘導される自然免疫応答の特色としては、１）炎症促進性サイトカイン発現の増大、２）細胞内ＰＲＲ（ＲＩＧ－Ｉ、ＭＤＡ５など）の活性化、および／または３）タンパク質翻訳の終止または低減が挙げられる。
【0057】
一部の実施形態では、ｍＲＮＡは、１つまたは複数の代替ヌクレオシドまたはヌクレオチドを含む。代替ヌクレオシドおよびヌクレオチドは、代替核酸塩基を含み得る。核酸の核酸塩基は、プリンまたはピリミジンまたはその誘導体などの有機塩基である。核酸塩基は、標準塩基（例えば、アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、およびシトシン）であってよい。これらの核酸塩基を変更するかまたは完全に置き換えて、特性が増強された、例えば、ヌクレアーゼに対する抵抗性などの安定性が増大したポリヌクレオチド分子をもたらすことができる。非標準または修飾塩基には、例えば、これだけに限定されないが、アルキル、アリール、ハロ、オキソ、ヒドロキシル、アルキルオキシ、および／もしくはチオ置換を含めた１つもしくは複数の置換もしくは修飾、１つもしくは複数の縮合環もしくは開環、酸化、ならびに／または還元が含まれ得る。
【0058】
一部の実施形態では、核酸塩基は代替ウラシルである。代替ウラシルを有する例示的な核酸塩基およびヌクレオシドとしては、シュードウリジン（ψ）、ピリジン－４－オンリボヌクレオシド、５－アザ－ウラシル、６－アザ－ウラシル、２－チオ－５－アザ－ウラシル、２－チオ－ウラシル（ｓ２Ｕ）、４－チオ－ウラシル（ｓ４Ｕ）、４－チオ－シュードウリジン、２－チオ－シュードウリジン、５－ヒドロキシ－ウラシル（ｈｏ５Ｕ）、５－アミノアリル－ウラシル、５－ハロ－ウラシル（例えば、５－ヨード－ウラシルまたは５－ブロモ－ウラシル）、３－メチル－ウラシル（ｍＵ）、５－メトキシ－ウラシル（ｍｏ５Ｕ）、ウラシル５－オキシ酢酸（ｃｍｏ５Ｕ）、ウラシル５－オキシ酢酸メチルエステル（ｍｃｍｏ５Ｕ）、５－カルボキシメチル－ウラシル（ｃｍ５Ｕ）、１－カルボキシメチル－シュードウリジン、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウラシル（ｃｈｍ５Ｕ）、５－カルボキシヒドロキシメチル－ウラシルメチルエステル（ｍｃｈｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－ウラシル（ｍｃｍ５Ｕ）、５－メトキシカルボニルメチル－２－チオ－ウラシル（ｍｃｍ５ｓ２Ｕ）、５－アミノメチル－２－チオ－ウラシル（ｎｍＶｕ）、５－メチルアミノメチル－ウラシル（ｍｎｍ５Ｕ）、５－メチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル（ｍｎｍＶｕ）、５－メチルアミノメチル－２－セレノ－ウラシル（ｍｎｍ５ｓｅ２Ｕ）、５－カルバモイルメチル－ウラシル（ｎｃｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－ウラシル（ｃｍｎｍ５Ｕ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオ－ウラシル（ｃｍｎｍＶｕ）、５－プロピニル－ウラシル、１－プロピニル－シュードウラシル、５－タウリノメチル－ウラシル（ｘｍ５Ｕ）、１－タウリノメチル－シュードウリジン、５－タウリノメチル－２－チオ－ウラシル（ｘｍ５ｓ２Ｕ）、１－タウリノメチル－４－チオ－シュードウリジン、５－メチル－ウラシル（ｍ５Ｕ、すなわち、核酸塩基デオキシチミンを有する）、１－メチル－シュードウリジン（ｍＶ）、５－メチル－２－チオ－ウラシル（ｍ５ｓ２Ｕ）、１－メチル－４－チオ－シュードウリジン（ｍ ｘｊ／）、４－チオ－１－メチル－シュードウリジン、３－メチル－シュードウリジン（ｍ ＼｜／）、２－チオ－１－メチル－シュードウリジン、１－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、２－チオ－ｌ－メチル－１－デアザ－シュードウリジン、ジヒドロウラシル（Ｄ）、ジヒドロシュードウリジン、５，６－ジヒドロウラシル、５－メチル－ジヒドロウラシル（ｍ５Ｄ）、２－チオ－ジヒドロウラシル、２－チオ－ジヒドロシュードウリジン、２－メトキシ－ウラシル、２－メトキシ－４－チオ－ウラシル、４－メトキシ－シュードウリジン、４－メトキシ－２－チオ－シュードウリジン、Ｎ１－メチル－シュードウリジン、３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）ウラシル（ａｃｐ Ｕ）、１－メチル－３－（３－アミノ－３－カルボキシプロピル）シュードウリジン（ａｃｐ ψ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）ウラシル（ｉｎｍ５Ｕ）、５－（イソペンテニルアミノメチル）－２－チオ－ウラシル（ｉｎｍ５ｓ２Ｕ）、５，２’－０－ジメチル－ウリジン（ｍ５Ｕｍ）、２－チオ－２’－０＿メチル－ウリジン（ｓ２Ｕｍ）、５－メトキシカルボニルメチル－２’－０－メチル－ウリジン（ｍｅｍ Ｕｍ）、５－カルバモイルメチル－２’－０－メチル－ウリジン（ｎｃｍ５Ｕｍ）、５－カルボキシメチルアミノメチル－２’－０－メチル－ウリジン（ｃｍｎｍ５Ｕｍ）、３，２’－０－ジメチル－ウリジン（ｍ Ｕｍ）、および５－（イソペンテニルアミノメチル）－２’－０－メチル－ウリジン（ｉｎｍ５Ｕｍ）、１－チオ－ウラシル、デオキシチミジン、５－（２－カルボメトキシビニル）－ウラシル、５－（カルバモイルヒドロキシメチル）－ウラシル、５－カルバモイルメチル－２－チオ－ウラシル、５－カルボキシメチル－２－チオ－ウラシル、５－シアノメチル－ウラシル、５－メトキシ－２－チオ－ウラシル、および５－［３－（１－Ｅ－プロペニルアミノ）］ウラシルが挙げられる。
【0059】
一部の実施形態では、核酸塩基は、代替シトシンである。代替シトシンを有する例示的な核酸塩基およびヌクレオシドとしては、５－アザ－シトシン、６－アザ－シトシン、シュードイソシチジン、３－メチル－シトシン（ｍ３Ｃ）、Ｎ４－アセチル－シトシン（ａｃ４Ｃ）、５－ホルミル－シトシン（ｆ５Ｃ）、Ｎ４－メチル－シトシン（ｍ４Ｃ）、５－メチル－シトシン（ｍ５Ｃ）、５－ハロ－シトシン（例えば、５－ヨード－シトシン）、５－ヒドロキシメチル－シトシン（ｈｍ５Ｃ）、１－メチル－シュードイソシチジン、ピロロ－シトシン、ピロロ－シュードイソシチジン、２－チオ－シトシン（ｓ２Ｃ）、２－チオ－５－メチル－シトシン、４－チオ－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル１－シュードイソシチジン、４－チオ－１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、１－メチル－１－デアザ－シュードイソシチジン、ゼブラリン、５－アザ－ゼブラリン、５－メチル１－ゼブラリン、５－アザ－２－チオ－ゼブラリン、２－チオ－ゼブラリン、２－メトキシ－シトシン、２－メトキシ－５－メチル－シトシン、４－メトキシ－シュードイソシチジン、４－メトキシ－１－メチル－シュードイソシチジン、リシジン（ｋ２Ｃ）、５，２’－０－ジメチル－シチジン（ｍ５Ｃｍ）、Ｎ４－アセチル－２’－０－メチル－シチジン（ａｃ４Ｃｍ）、Ｎ４，２’－０－ジメチル－シチジン（ｍ４Ｃｍ）、５－ホルミル－２’－０－メチル－シチジン（ｆ５Ｃｍ）、Ｎ４，Ｎ４，２’－０－トリメチル－シチジン（ｍ４２Ｃｍ）、１－チオ－シトシン、５－ヒドロキシ－シトシン、５－（３－アジドプロピル）－シトシン、および５－（２－アジドエチル）－シトシンが挙げられる。
【0060】
一部の実施形態では、核酸塩基は代替アデニンである。代替アデニンを有する例示的な核酸塩基およびヌクレオシドとしては、２－アミノ－プリン、２，６－ジアミノプリン、２－アミノ－６－ハロ－プリン（例えば、２－アミノ－６－クロロ－プリン）、６－ハロ－プリン（例えば、６－クロロ－プリン）、２－アミノ－６－メチル－プリン、８－アジド－アデニン、７－デアザ－アデニン、７－デアザ－８－アザ－アデニン、７－デアザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－８－アザ－２－アミノ－プリン、７－デアザ－２，６－ジアミノプリン、７－デアザ－８－アザ－２，６－ジアミノプリン、１－メチル１－アデニン（ｍ１Ａ）、２－メチル－アデニン（ｍ２Ａ）、Ｎ６－メチル－アデニン（ｍ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－メチル－アデニン（ｍｓ２ｍ６Ａ）、Ｎ６－イソペンテニル－アデニン（ｉ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニル－アデニン（ｍｓ２ｉ６Ａ）、Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデニン（ｉｏ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－（シス－ヒドロキシイソペンテニル）アデニン（ｍｓ２ｉｏ６Ａ）、Ｎ６－グリシニルカルバモイル－アデニン（ｇ６Ａ）、Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデニン（ｔ６Ａ）、Ｎ６－メチル－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデニン（ｍ６ｔ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－トレオニルカルバモイル－アデニン（ｍｓ２ｇ６Ａ）、Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－アデニン（ｍ６２Ａ）、Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデニン（ｈｎ６Ａ）、２－メチルチオ－Ｎ６－ヒドロキシノルバリルカルバモイル－アデニン（ｍｓ２ｈｎ６Ａ）、Ｎ６－アセチル－アデニン（ａｃ６Ａ）、７－メチル－アデニン、２－メチルチオ－アデニン、２－メトキシ－アデニン、Ｎ６，２’－０－ジメチル－アデノシン（ｍ６Ａｍ）、Ｎ６，Ｎ６，２’－０－トリメチル－アデノシン（ｍ６２Ａｍ）、１，２’－０－ジメチル－アデノシン（ｍｌ Ａｍ）、２－アミノ－Ｎ６－メチル－プリン、１－チオ－アデニン、８－アジド－アデニン、Ｎ６－（１９－アミノ－ペンタオキサノナデシル）－アデニン、２，８－ジメチル－アデニン、Ｎ６－ホルミル－アデニン、およびＮ６－ヒドロキシメチル－アデニンが挙げられる。
【0061】
一部の実施形態では、核酸塩基は代替グアニンである。代替グアニンを有する例示的な核酸塩基およびヌクレオシドとしては、イノシン（Ｉ）、１－メチル－イノシン（ｍｉｌ）、ワイオシン（ｉｍＧ）、メチルワイオシン（ｍｉｍＧ）、４－デメチル－ワイオシン（ｉｍＧ－１４）、イソワイオシン（ｉｍＧ２）、ワイブトシン（ｙＷ）、ペルオキシワイブトシン（ｏ２ｙＷ）、ヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ）、低修飾（ｕｎｄｅｒｍｏｄｉｆｉｅｄ）ヒドロキシワイブトシン（ＯＨｙＷ＊）、７－デアザ－グアニン、キューオシン（Ｑ）、エポキシキューオシン（ｏＱ）、ガラクトシル－キューオシン（ｇａｌＱ）、マンノシル－キューオシン（ｍａｎＱ）、７－シアノ－７－デアザ－グアニン（ｐｒｅＱＯ）、７－アミノメチル－７－デアザ－グアニン（ｐｒｅＱｌ）、アルカエオシン（Ｇ＋）、７－デアザ－８－アザ－グアニン、６－チオ－グアニン、６－チオ－７－デアザ－グアニン、６－チオ－７－デアザ－８－アザ－グアニン、７－メチル－グアニン（ｍ７Ｇ）、６－チオ－７－メチル－グアニン、７－メチル－イノシン、６－メトキシ－グアニン、１－メチル－グアニン（ｍｌＧ）、Ｎ２－メチル－グアニン（ｍ２Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－グアニン（ｍ２２Ｇ）、Ｎ２，７－ジメチル－グアニン（ｍ２，７Ｇ）、Ｎ２，Ｎ２，７－ジメチル－グアニン（ｍ２，２，７Ｇ）、８－オキソ－グアニン、７－メチル－８－オキソ－グアニン、１－メチル－６－チオ－グアニン、Ｎ２－メチル－６－チオ－グアニン、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－６－チオ－グアニン、Ｎ２－メチル－２’－０－メチル－グアノシン（ｍ２Ｇｍ）、Ｎ２，Ｎ２－ジメチル－２’－０－メチル－グアノシン（ｍ２２Ｇｍ）、１－メチル－２’－０－メチル－グアノシン（ｍｌＧｍ）、Ｎ２，７－ジメチル－２’－０－メチル－グアノシン（ｍ２，７Ｇｍ）、２’－０－メチル－イノシン（Ｉｍ）、１，２’－０－ジメチル－イノシン（ｍｌｌｍ）、１－チオ－グアニン、およびＯ－６－メチル－グアニンが挙げられる。
【0062】
ヌクレオチドの代替核酸塩基は、独立に、プリン、ピリミジン、プリンまたはピリミジンアナログであってよい。例えば、核酸塩基は、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、またはヒポキサンチンの代替物であってよい。別の実施形態では、核酸塩基には、例えば、ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ（例えば、８－ブロモ）、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシおよび他の８置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、デアザグアニン、７－デアザグアニン、３－デアザグアニン、デアザアデニン、７－デアザアデニン、３－デアザアデニン、ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン、イミダゾ［１，５－ａ］１，３，５トリアジノン、９－デアザプリン、イミダゾ［４，５－ｄ］ピラジン、チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン、ピラジン－２－オン、１，２，４－トリアジン、ピリダジン；または１，３，５トリアジンを含めた、塩基の天然に存在するおよび合成の誘導体も含めることができる。ヌクレオチドが省略形Ａ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵを使用して示されている場合、各文字は、代表的な塩基および／またはその誘導体を指し、例えば、Ａは、アデニンまたはアデニンアナログ、例えば、７－デアザアデニンを含む。
【0063】
ｍＲＮＡに５’キャップ構造を含めることができる。ポリヌクレオチドの５’キャップ構造は、核外移行およびポリヌクレオチド安定性の増大に関与し、ｍＲＮＡのキャップ結合性タンパク質（ＣＢＰ）に結合し、それにより、ＣＢＰとポリＡ結合性タンパク質が会合して成熟環状ｍＲＮＡ種を形成することを通じて細胞におけるポリヌクレオチド安定性および翻訳コンピテンシーを担う。キャップは、さらに、ｍＲＮＡスプライシングの間の５’近位イントロンの除去を補助する。
【0064】
内因性ポリヌクレオチド分子に、５’末端キャップ付加し、それにより、ポリヌクレオチドの末端グアノシンキャップ残基と５’末端の転写されたセンスヌクレオチドとの間に５’ｐｐｐ－５’三リン酸連結を生成することができる。次いで、この５’グアニル酸キャップをメチル化して、Ｎ７－メチル－グアニル酸残基を生成することができる。ポリヌクレオチドの５’末端の末端および／または末端前（ａｎｔｅｔｅｒｍｉｎａｌ）の転写されたヌクレオチドのリボース糖を２’－０－メチル化することもできる。グアニル酸キャップ構造の加水分解および切断によって５’キャップを除去することにより、ｍＲＮＡ分子などのポリヌクレオチド分子を分解の標的とすることができる。
【0065】
ポリヌクレオチドに対する変更により、キャップ除去を防止し、したがってポリヌクレオチド半減期を増大させる非加水分解性キャップ構造を生成することができる。キャップ構造の加水分解には５’－ｐｐｐ－５’ホスホジエステル連結の切断が必要であるので、キャップ付加反応の間に代替ヌクレオチドを使用することができる。例えば、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ）のＶａｃｃｉｎｉａ Ｃａｐｐｉｎｇ Ｅｎｚｙｍｅを、ａ－チオ－グアノシンヌクレオチドと共に製造者の指示に従って使用して、５’－ｐｐｐ－５’キャップにホスホロチオエート連結を創出することができる。
【0066】
α－メチル－ホスホネートおよびセレノ－ホスフェートヌクレオチドなどの追加的な代替グアノシンヌクレオチドを使用することができる。追加的な変更として、これだけに限定されないが、ポリヌクレオチド（上記の通り）の５’末端および／または５’末端前ヌクレオチドのリボース糖の、糖の２’－ヒドロキシ基における２’－０－メチル化が挙げられる。ｍＲＮＡ分子の５’キャップを生成するために複数の別個の５’キャップ構造を使用することができる。
【0067】
キャップアナログは、本明細書では合成キャップアナログ、化学的キャップ、化学的キャップアナログ、または構造もしくは機能的キャップアナログとも称され、天然の（すなわち、内因性、野生型、または生理的）５’キャップとは化学構造が異なるが、一方でキャップ機能は保持する。キャップアナログは、化学的に（すなわち、非酵素的に）または酵素的に合成する、および／ポリヌクレオチドに連結することができる。例えば、アンチリバースキャップアナログ（Ａｎｔｉ－Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｃａｐ Ａｎａｌｏｇ）（ＡＲＣＡ）キャップは、５’－５’－三リン酸基によって連結した２つのグアノシンを含有し、ここで、一方のグアノシンはＮ７－メチル基ならびに３’－０－メチル基を含有する（すなわち、Ｎ７、３’－０－ジメチル－グアノシン－５’－三リン酸－５’－グアノシン、ｍ７Ｇ－３’ｍｐｐｐ－Ｇ、これは３’０－Ｍｅ－ｍ７Ｇ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｇと同等に示され得る）。他方の変更されていないグアノシンの３’－０原子は、キャップ付加されたポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の５’末端ヌクレオチドに連結するようになる。Ｎ７－および３’－０がメチル化されたグアノシンにより、キャップ付加されたポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡ）の末端部分がもたらされる。別の例示的なキャップはｍＣＡＰであり、これは、ＡＲＣＡと同様であるが、グアノシンに２’－０－メチル基を有する（すなわち、Ｎ７，２’－０－ジメチル－グアノシン－５’三リン酸－５’グアノシン、ｍ７Ｇｍ－ｐｐｐ－Ｇ）。
【0068】
キャップは、ジヌクレオチドキャップアナログであってよい。非限定的な例として、ジヌクレオチドキャップアナログは、異なるリン酸位置においてボラノホスフェート基またはホスホロセレノエート基で修飾されたもの、例えば、そのキャップ構造が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第８，５１９，１１０号に記載されているジヌクレオチドキャップアナログなどであってよい。
【0069】
あるいは、キャップアナログは、当技術分野で公知のおよび／または本明細書に記載のＮ７－（４－クロロフェノキシエチル）置換されたジヌクレオチドキャップアナログであってよい。Ｎ７－（４－クロロフェノキシエチル）置換されたジヌクレオチドキャップアナログの非限定的な例としては、Ｎ７－（４－クロロフェノキシエチル）－Ｇ（５）ｐｐｐ（５’）ＧおよびＮ７－（４－クロロフェノキシエチル）－ｍ３’－ＯＧ（５）ｐｐｐ（５’）Ｇキャップアナログが挙げられる（例えば、そのキャップ構造が参照により本明細書に組み込まれるＫｏｒｅら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１３ ２１：４５７０～４５７４に記載されている種々のキャップアナログおよびキャップアナログの合成方法を参照されたい）。他の場合では、本開示のポリヌクレオチドに有用なキャップアナログは、４－クロロ／ブロモフェノキシエチルアナログである。
【0070】
キャップアナログにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応において同時にポリヌクレオチドにキャップ付加することが可能になるが、転写物の２０％に至るまでがキャップ付加されないままになる。このこと、ならびにキャップアナログと内因性の細胞の転写機構によって産生されたポリヌクレオチドの内因性５’キャップ構造の構造的差異により、翻訳コンピテンシーの低下および細胞における安定性の低下が導かれる。
【0071】
より真正に近い５’キャップ構造を生成するために、代替ポリヌクレオチドに、転写後に酵素を使用してキャップ付加することもできる。本明細書で使用される場合、「より真正に近い」という句は、内因性または野生型特色を、構造的にまたは機能的にのいずれかで密接に反映するまたは模倣する特色を指す。すなわち、「より真正に近い」特色は、内因性、野生型、天然のもしくは生理的な細胞機能および／もしくは構造を、合成特色もしくは先行技術のアナログと比較してより良好に表す、または１つもしくは複数の観点で、対応する内因性、野生型、天然の、もしくは生理的な特色を凌ぐものである。本開示のポリヌクレオチドに有用なより真正に近い５’キャップ構造の非限定的な例は、とりわけ、当技術分野で公知の合成５’キャップ構造と比較して（または野生型、天然のもしくは生理的な５’キャップ構造と比較して）キャップ結合性タンパク質の結合性の増強、半減期の増大、５’エンドヌクレアーゼの影響の受けやすさの低減、および／または５’キャップ除去の低減を有するものである。例えば、組換えワクシニアウイルスキャッピング酵素および組換え２’－０－メチルトランスフェラーゼ酵素により、ポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドとグアノシンキャップヌクレオチドの間に標準５’－５’－三リン酸連結を創出することができ、ここで、キャップグアノシンはＮ７－メチル化を含有し、ポリヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドは２’－０－メチルを含有する。そのような構造はキャップ１構造と称される。このキャップにより、例えば、当技術分野で公知の他の５’キャップアナログ構造と比較して、高い翻訳コンピテンシー、細胞における安定性、および細胞における炎症促進性サイトカインの活性化の低下がもたらされる。他の例示的なキャップ構造としては、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）Ｎ，ｐＮ２ｐ（キャップ０）、７ｍＧ（５’）ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮｐ（キャップ１）、７ｍＧ（５’）－ｐｐｐ（５’）ＮｌｍｐＮ２ｍｐ（キャップ２）、およびｍ（７）Ｇｐｐｐｍ（３）（６，６，２’）Ａｐｍ（２’）Ａｐｍ（２’）Ｃｐｍ（２）（３，２’）Ｕｐ（キャップ４）が挙げられる。
【0072】
代替ポリヌクレオチドに転写後にキャップ付加することができ、このプロセスはより効率的であるので、ｍＲＮＡのほぼ１００％にキャップ付加することができる。これは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写反応の過程中にキャップアナログをポリヌクレオチドに連結すると－８０％になるのとは対照的である。５’末端キャップは、内因性キャップまたはキャップアナログを包含し得る。５’末端キャップは、グアノシンアナログを包含し得る。有用なグアノシンアナログとしては、イノシン、Ｎ１－メチル－グアノシン、２’－フルオロ－グアノシン、７－デアザ－グアノシン、８－オキソ－グアノシン、２－アミノ－グアノシン、ＬＮＡ－グアノシン、および２－アジド－グアノシンが挙げられる。一部の場合では、ポリヌクレオチドは、修飾された５’キャップを含有する。５’キャップに対する修飾により、ポリヌクレオチドの安定性を増大させることができ、ポリヌクレオチドの半減期を増大させることができ、ポリヌクレオチド翻訳効率（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）を上昇させることができる。修飾された５’キャップとしては、これだけに限定されないが、以下の修飾のうちの１つまたは複数を挙げることができる：キャップ付加されたグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）の２’および／または３’位における修飾、糖環酸素（炭素環式環を生じる）のメチレン部分（ＣＨ２）での置換え、キャップ構造の三リン酸橋部分における修飾、または核酸塩基（Ｇ）部分における修飾。
【0073】
５’ＵＴＲをｍＲＮＡに隣接領域として提供することができる。５’ＵＴＲは、ポリヌクレオチドに見いだされるコード領域と相同であっても異種であってもよい。複数の５’ＵＴＲを隣接領域に含めることができ、それらの配列は同じであっても異なってもよい。いずれの部分にも行わないことを含め、隣接領域の任意の部分をコドン最適化することができ、いずれの部分も、独立に、コドン最適化の前および／または後に１種または複数種の異なる構造的または化学的変質を含有してよい。
【0074】
ｍＲＮＡの１つまたは複数の特性を変更するために、ｍＲＮＡのコード領域に対して異種である５’ＵＴＲを工学的に作製することができる。次いで、ｍＲＮＡを細胞、組織または生物体に投与することができ、タンパク質レベル、局在、および／または半減期などのアウトカムを測定して、異種５’ＵＴＲによりｍＲＮＡに対してもたらされた可能性がある有益な影響を評価することができる。Ａ、Ｔ、ＣまたはＧを含めた１つまたは複数のヌクレオチドが末端に対して付加または除去された５’ＵＴＲのバリアントを利用することができる。５’ＵＴＲも本明細書に記載の任意の様式でコドン最適化または変更することができる。
【0075】
ｍＲＮＡは、例えば、これだけに限定されないが、ヒストンステムループなどのステムループを含み得る。ステムループは、約２５または約２６ヌクレオチドの長さのヌクレオチド配列であってよい。ヒストンステムループは、コード領域に対して３’側（例えば、コード領域の３’末端）に位置し得る。非限定的な例として、ステムループは、本明細書に記載のポリヌクレオチドの３’末端に位置し得る。一部の場合では、ｍＲＮＡは、１つよりも多くのステムループ（例えば、２つのステムループ）を含む。ステムループは、ポリヌクレオチドの第２の末端領域に位置し得る。非限定的な例として、ステムループは、第２の末端領域の非翻訳領域（例えば、３’ＵＴＲ）内に位置し得る。一部の場合では、ヒストンステムループを含むｍＲＮＡを、３’安定化領域（例えば、少なくとも１つの連鎖停止ヌクレオシド（ｃｈａｉｎ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）を含む３’安定化領域）を付加することによって安定化することができる。理論に制約されることを望むものではなく、少なくとも１つの連鎖停止ヌクレオシドの付加により、ポリヌクレオチドの分解を緩徐化することができ、したがって、ポリヌクレオチドの半減期を増大させることができる。他の場合では、ヒストンステムループを含むｍＲＮＡを、ポリヌクレオチドの３’領域に、オリゴ（Ｕ）の付加を防止および／または阻害することができる変更を加えることによって安定化することができる。さらに別の場合には、ヒストンステムループを含むｍＲＮＡを、３’－デオキシヌクレオシド、２’，３’－ジデオキシヌクレオシド、３’－０－メチルヌクレオシド、３－０－エチルヌクレオシド、３’－アラビノシド、および他の当技術分野で公知のおよび／または本明細書に記載の代替ヌクレオシドで終止するオリゴヌクレオチドを付加することによって安定化することができる。一部の場合では、本開示のｍＲＮＡは、ヒストンステムループ、ポリＡ領域、および／または５’キャップ構造を含み得る。ヒストンステムループは、ポリＡ領域の前および／または後にあってよい。ヒストンステムループおよびポリＡ領域配列を含むポリヌクレオチドは、本明細書に記載の連鎖終止ヌクレオシドを含み得る。他の場合では、本開示のポリヌクレオチドは、ヒストンステムループおよび５’キャップ構造を含み得る。５’キャップ構造としては、これだけに限定されないが、本明細書に記載のおよび／または当技術分野で公知のものを挙げることができる。一部の場合では、保存されたステムループ領域は、本明細書に記載のｍｉＲ配列を含み得る。非限定的な例として、ステムループ領域は、本明細書に記載のｍｉＲ配列のシード配列を含み得る。別の非限定的な例では、ステムループ領域は、ｍｉＲ－１２２シード配列を含み得る。
【0076】
ｍＲＮＡは、少なくとも１つのヒストンステムループおよびポリＡ領域またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ある特定の場合では、ヒストンステムループおよびポリＡ領域またはポリアデニル化シグナルをコードするポリヌクレオチドは、病原体抗原またはその断片をコードし得る。他の場合では、ヒストンステムループおよびポリＡ領域またはポリアデニル化シグナルをコードするポリヌクレオチドは、治療用タンパク質をコードし得る。一部の場合では、ヒストンステムループおよびポリＡ領域またはポリアデニル化シグナルをコードするポリヌクレオチドは、腫瘍抗原またはその断片をコードし得る。他の場合では、ヒストンステムループおよびポリＡ領域またはポリアデニル化シグナルをコードするポリヌクレオチドは、アレルゲン抗原または自己免疫性自己抗原をコードし得る。
【0077】
ｍＲＮＡは、ポリＡ配列および／またはポリアデニル化シグナルを含み得る。ポリＡ配列は、アデニンヌクレオチドまたはそのアナログもしくは誘導体の全体または大部分から構成され得る。ポリＡ配列は、核酸の３’非翻訳領域の隣に位置する尾部であり得る。ＲＮＡプロセシングの間に、アデノシンヌクレオチド（ポリＡ領域）の長鎖が通常はメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子に付加されて、分子の安定性が増大する。転写の直後に、転写物の３’末端が切断されて、３’－ヒドロキシが遊離する。次いで、ポリＡポリメラーゼによってアデノシンヌクレオチドの鎖がＲＮＡに付加される。ポリアデニル化と称されるこのプロセスでは、１００から２５０残基長の間のポリＡ領域が付加される。独特のポリＡ領域の長さにより、本開示の代替ポリヌクレオチドにある特定の利点をもたらすことができる。一般に、本開示のポリＡ領域の長さは、少なくとも３０ヌクレオチドの長さである。別の実施形態では、ポリＡ領域は、少なくとも３５ヌクレオチドの長さである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５５ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも７０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも９０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１２０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１４０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１６０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１８０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも４５０ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１１００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１２００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１３００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１４００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１６００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１７００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１８００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも１９００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも２５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、長さは、少なくとも３０００ヌクレオチドである。一部の場合では、ポリＡ領域は、本明細書に記載の代替ポリヌクレオチド分子上の８０ヌクレオチド、１２０ヌクレオチド、１６０ヌクレオチドの長さであってよい。他の場合では、ポリＡ領域は、本明細書に記載の代替ポリヌクレオチド分子上の２０、４０、８０、１００、１２０、１４０または１６０ヌクレオチドの長さであってよい。一部の場合では、ポリＡ領域は、代替ポリヌクレオチド全体の長さと相対させて設計される。この設計は、代替ポリヌクレオチドのコード領域の長さ、代替ポリヌクレオチド（例えば、ｍＲＮＡなど）の特定の特色もしくは領域の長さに基づき得る、または代替ポリヌクレオチドから発現される最終産物の長さに基づき得る。代替ポリヌクレオチドの任意の特色（例えば、ポリＡ領域を含むｍＲＮＡ部分以外）と相対させる場合、ポリＡ領域は、追加的な特色よりも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０または１００％長くてよい。ポリＡ領域を、それが属する代替ポリヌクレオチドに対する分率として設計することもできる。これに関連して、ポリＡ領域は、構築物の総長または構築物の総長からポリＡ領域を差し引いた長さの１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０％以上であり得る。
【0078】
ある特定の場合では、工学的に操作された結合性部位、および／またはポリＡ結合性タンパク質へのｍＲＮＡのコンジュゲーションを使用して、発現を増強することができる。工学的に操作された結合性部位は、ｍＲＮＡの局所的な微小環境のリガンドの結合性部位として作動し得るセンサー配列であってよい。非限定的な例として、ｍＲＮＡは、ポリＡ結合性タンパク質（ＰＡＢＰ）およびそのアナログの結合親和性を変更するために少なくとも１つの工学的に操作された結合性部位を含み得る。少なくとも１つの工学的に操作された結合性部位を組み入れることにより、ＰＡＢＰおよびそのアナログの結合親和性を増大させることができる。
【0079】
さらに、ポリＡ領域の３’末端に代替ヌクレオチドを使用し、３’末端を通じて、複数の別個のｍＲＮＡをＰＡＢＰ（ポリＡ結合性タンパク質）に連結することができる。トランスフェクション実験を関連性のある細胞株において行うことができ、トランスフェクション後１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、および７日目の時点でタンパク質産生をＥＬＩＳＡによってアッセイすることができる。非限定的な例として、トランスフェクション実験を使用して、少なくとも１つの工学的に操作された結合性部位の付加の結果として、ＰＡＢＰまたはそのアナログの結合親和性に対する効果を評価することができる。ある特定の場合では、ポリＡ領域を使用して、翻訳開始をモジュレートすることができる。理論に制約されることを望むものではないが、ポリＡ領域によりＰＡＢＰが動員され、それが今度は翻訳開始複合体と相互作用し得、したがって、ポリＡ領域はタンパク質合成のために必須であり得る。一部の場合では、本開示において、ポリＡ領域を３’－５’エキソヌクレアーゼ消化からの保護のために使用することもできる。一部の場合では、ｍＲＮＡは、ポリＡ－Ｇ四重鎖を含み得る。Ｇ四重鎖は、４本のグアノシンヌクレオチドが環状水素結合したアレイであり、ＤＮＡおよびＲＮＡの両方でＧリッチ配列によって形成され得る。この実施形態では、Ｇ四重鎖をポリＡ領域の最後に組み入れる。得られたｍＲＮＡを、安定性、タンパク質産生、および半減期を含めた他のパラメータについて様々な時点でアッセイすることができる。ポリＡ－Ｇ四重鎖により、１２０ヌクレオチドのポリＡ領域を単独で使用した場合に見られるタンパク質産生の少なくとも７５％と等価のタンパク質産生がもたらされることが発見されている。一部の場合では、ｍＲＮＡにポリＡ領域を含めることができ、また、３’安定化領域を付加することによって安定化することができる。ポリＡ領域を有するｍＲＮＡは、５’キャップ構造をさらに含み得る。他の場合では、ｍＲＮＡは、ポリＡ－Ｇ四重鎖を含み得る。ポリＡ－Ｇ四重鎖を有するｍＲＮＡは、５’キャップ構造をさらに含み得る。一部の場合では、ｍＲＮＡを安定化するために使用することができる３’安定化領域として、ポリＡ領域またはポリＡ－Ｇ四重鎖が挙げられる。他の場合では、本開示で使用することができる３’安定化領域として、連鎖停止ヌクレオシド（ｃｈａｉｎ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ）、例えば、３’－デオキシアデノシン（コルジセピン）、３’－デオキシウリジン、３’－デオキシシトシン、３’－デオキシグアノシン、３’－デオキシチミン、２’，３’－ジデオキシヌクレオシド、例えば、２’，３’－ジデオキシアデノシン、２’，３’－ジデオキシウリジン、２’，３’－ジデオキシシトシン、２’、３’－ジデオキシグアノシン、２’，３’－ジデオキシチミンなど、２’－デオキシヌクレオシド、またはＯ－メチルヌクレオシドなどが挙げられる。他の場合では、ポリＡ領域またはポリＡ－Ｇ四重鎖を含むｍＲＮＡを、ポリヌクレオチドの３’領域に対する、オリゴ（Ｕ）の付加を防止および／または阻害することができる変更によって安定化することができる。さらに他の場合では、ポリＡ領域またはポリＡ－Ｇ四重鎖を含むｍＲＮＡを、３’－デオキシヌクレオシド、２’，３’－ジデオキシヌクレオシド
３－Ｏ－メチルヌクレオシド、３’－Ｏ－エチルヌクレオシド、３’－アラビノシド、および他の当技術分野で公知のおよび／または本明細書に記載の代替ヌクレオシドで終止するオリゴヌクレオチドを付加することによって安定化することができる。
３－Ｏ－メチルヌクレオシド、３’－Ｏ－エチルヌクレオシド、３’－アラビノシド、および他の当技術分野で公知のおよび／または本明細書に記載の代替ヌクレオシドで終止するオリゴヌクレオチドを付加することによって安定化することができる。
【0080】
ある実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンは、脂質を含む。脂質とｍｏｄＲＮＡは、一緒になってナノ粒子を形成し得る。脂質にｍＲＮＡを封入して脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の形態にし、ＲＮＡ／脂質ナノ粒子の細胞への進入および安定性を補助することができる。
【0081】
脂質ナノ粒子は、脂質構成成分ならびに治療薬および／または予防薬などの１種または複数種の追加的な構成成分を含み得る。ＬＮＰを１つまたは複数の特定の適用または標的のために設計することができる。ＬＮＰの要素を、特定の適用もしくは標的に基づいて、および／または１つもしくは複数の要素の有効性、毒性、費用、使いやすさ、利用可能性、もしくは他の特色に基づいて選択することができる。同様に、特定の適用または標的のために、例えば、要素の特定の組合せの有効性および毒性に応じて、ＬＮＰの特定の製剤を選択することができる。ＬＮＰ製剤の有効性および忍容性は、製剤の安定性の影響を受ける可能性がある。
【0082】
脂質ナノ粒子を１つまたは複数の特定の適用または標的のために設計することができる。例えば、ＬＮＰを、ＲＮＡなどの治療薬および／または予防薬を哺乳動物の体内の特定の細胞、組織、器官、または系またはこれらの群に送達されるように設計することができる。
【0083】
特定の体の標的に対する選択性を増大させるために、脂質ナノ粒子の生理化学的特性を変更することができる。例えば、粒子サイズを異なる器官の開窓サイズに基づいて調整することができる。ＬＮＰに含まれる治療薬および／または予防薬はまた、所望の送達標的（１つまたは複数）に基づいて選択することもできる。例えば、治療薬および／または予防薬を、特定の適応症、状態、疾患、もしくは障害のために、および／または特定の細胞、組織、器官、もしくは系もしくはこれらの群への送達（例えば、限局的または特異的送達）のために選択することができる。ある特定の実施形態では、ＬＮＰは、細胞内で翻訳されて目的のポリペプチドを産生することが可能な、目的のポリペプチドをコードするｍＲＮＡを含み得る。そのような組成物を、特定の器官に特異的に送達されるように設計することができる。一部の実施形態では、組成物を、哺乳動物の肝臓に特異的に送達されるように設計することができる。一部の実施形態では、組成物を、リンパ節に特異的に送達されるように設計することができる。一部の実施形態では、組成物を、哺乳動物の脾臓に特異的に送達されるように設計することができる。
【0084】
ＬＮＰは、本明細書に記載の１種または複数種の構成成分を含み得る。一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ製剤は、少なくとも１種の脂質ナノ粒子構成成分を含む。脂質ナノ粒子は、脂質構成成分ならびに核酸などの治療薬および／または予防薬などの１種または複数種の追加的な構成成分を含み得る。ＬＮＰを１つまたは複数の特定の適用または標的のために設計することができる。ＬＮＰの要素を、特定の適用もしくは標的に基づいて、および／または１つもしくは複数の要素の有効性、毒性、費用、使いやすさ、利用可能性、もしくは他の特色に基づいて選択することができる。同様に、例えば、要素の特定の組合せの有効性および毒性に応じて、特定の適用または標的のために、ＬＮＰの特定の製剤を選択することができる。ＬＮＰ製剤の有効性および忍容性は、製剤の安定性の影響を受ける可能性がある。
【0085】
一部の実施形態では、ＬＮＰの封入または部分的な封入のために、例えば、ポリマーを含めるおよび／または使用することができる。ポリマーは、生分解性かつ／または生体適合性のものであってよい。ポリマーは、これだけに限定されないが、ポリアミン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリエステル、ポリカルバメート、ポリ尿素、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリイミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリアセチレン、ポリエチレン、ポリエチレンイミン、ポリイソシアネート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリロニトリル、およびポリアリレートから選択することができる。例えば、ポリマーとして、ポリ（カプロラクトン）（ＰＣＬ）、エチレン酢酸ビニルポリマー（ＥＶＡ）、ポリ（乳酸）（ＰＬＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸）（ＰＬＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリ（乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＧＡ）、ポリ（Ｌ－乳酸－ｃｏ－グリコール酸）（ＰＬＬＧＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド）（ＰＤＬＡ）、ポリ（Ｌ－ラクチド）（ＰＬＬＡ）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン－ｃｏ－グリコリド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ＰＥＯ－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－ＰＰＯ－ｃｏ－Ｄ，Ｌ－ラクチド）、ポリアルキルシアノアクリレート、ポリウレタン、ポリ－Ｌ－リシン（ＰＬＬ）、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）、ポリエチレングリコール、ポリ－Ｌ－グルタミン酸、ポリ（ヒドロキシ酸）、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリ（エステル
アミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンテレフタレート）などのポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリ（酢酸ビニル）などのポリビニルエステル、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）などのポリハロゲン化ビニル、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）およびそれらの共重合体および混合物などのアクリル酸のポリマー、ポリジオキサノンおよびその共重合体、ポリヒドロキシアルカン酸、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン）、炭酸トリメチレン、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、およびポリグリセリンを挙げることができる。
アミド）、ポリアミド、ポリ（エステルエーテル）、ポリカーボネート、ポリエチレンおよびポリプロピレンなどのポリアルキレン、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）などのポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンテレフタレート）などのポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルエーテル、ポリ（酢酸ビニル）などのポリビニルエステル、ポリ（塩化ビニル）（ＰＶＣ）などのポリハロゲン化ビニル、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリシロキサン、ポリスチレン、ポリウレタン、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステル、ニトロセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースなどのセルロース誘導体、ポリ（メチル（メタ）アクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリ（エチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソブチル（メタ）アクリレート）、ポリ（ヘキシル（メタ）アクリレート）、ポリ（イソデシル（メタ）アクリレート）、ポリ（ラウリル（メタ）アクリレート）、ポリ（フェニル（メタ）アクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）およびそれらの共重合体および混合物などのアクリル酸のポリマー、ポリジオキサノンおよびその共重合体、ポリヒドロキシアルカン酸、ポリプロピレンフマレート、ポリオキシメチレン、ポロキサマー、ポロキサミン、ポリ（オルト）エステル、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－カプロラクトン）、炭酸トリメチレン、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）（ＰＡｃＭ）、ポリ（２－メチル－２－オキサゾリン）（ＰＭＯＸ）、ポリ（２－エチル－２－オキサゾリン）（ＰＥＯＺ）、およびポリグリセリンを挙げることができる。
【0086】
表面改質剤としては、これだけに限定されないが、アニオン性タンパク質（例えば、ウシ血清アルブミン）、界面活性物質（例えば、ジメチルジオクタデシル－臭化アンモニウムなどのカチオン性界面活性物質）、糖または糖誘導体（例えば、シクロデキストリン）、核酸、ポリマー（例えば、ヘパリン、ポリエチレングリコール、およびポロキサマー）、粘液溶解剤（例えば、アセチルシステイン、ヨモギ、ブロメライン、パパイン、クサギ属（ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ）、ブロムヘキシン、カルボシステイン、エプラジノン、メスナ、アンブロキソール、ソブレロール、ドミオドール、レトステイン、ステプロニン、チオプロニン、ゲルゾリン、チモシンβ４、ドルナーゼアルファ、ネルテネキシン、およびエルドステイン）、ならびにＤＮＡ分解酵素（例えば、ｒｈＤＮａｓｅ）を挙げることができる。表面改質剤をナノ粒子内および／またはＬＮＰの表面上（例えば、コーティング、吸着、共有結合性の連結、または他のプロセスによって）に配置することができる。
【0087】
ＬＮＰは、１つまたは複数の官能化された脂質を含んでもよい。例えば、脂質を、適当な反応条件下でアジドに曝露すると、環化付加反応を受け得るアルキン基で官能化することができる。特に、脂質二重層を、膜透過、細胞認識、またはイメージングを容易にすることに関して有用な１種または複数種の基を使用し、この様式で官能化することができる。ＬＮＰの表面に１種または複数種の有用な抗体をコンジュゲートすることもできる。標的化細胞送達、イメージング、および膜透過に有用な官能基およびコンジュゲートは当技術分野で周知である。
【0088】
これらの構成成分に加えて、脂質ナノ粒子は、医薬組成物に有用な任意の物質を含み得る。例えば、脂質ナノ粒子は、例えば、これだけに限定されないが、１種または複数種の溶媒、分散媒、希釈剤、分散助剤、懸濁助剤、表面活性剤、緩衝剤、保存剤、および他の種などの１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤または副成分を含み得る。
【0089】
表面活性剤および／または乳化剤としては、これだけに限定されないが、天然の乳化剤（例えば、アラビアゴム、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、コレステロール、およびレシチン）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０］、ポリオキシエチレンソルビタン［ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０］、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート［ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０］、ソルビタンモノパルミタート［ＳＰＡＮ（登録商標）４０］、ソルビタンモノステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６０］、ソルビタントリステアレート［ＳＰＡＮ（登録商標）６５］、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート［ＳＰＡＮ（登録商標）８０］）、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート［ＭＹＲＪ（登録商標）４５］、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシル化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、およびＳＯＬＵＴＯＬ（登録商標））、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標））、ポリオキシエチレンエーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル［ＢＲＩＪ（登録商標）３０］）、ポリ（ビニル－ピロリドン）、モノラウリン酸ジエチレングリコール、オレイン酸トリエタノールアミン、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８、ＰＯＬＯＸＡＭＥＲ（登録商標）１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドキュセートナトリウム、および／またはこれらの組合せを挙げることができる。
【0090】
保存剤の例としては、これだけに限定されないが、抗酸化剤、キレート剤、遊離基スカベンジャー、抗菌性保存剤、抗真菌性保存剤、アルコール性保存剤、酸性保存剤、および／または他の保存剤を挙げることができる。抗酸化剤の例としては、これだけに限定されないが、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および／または亜硫酸ナトリウムが挙げられる。キレート剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸一水和物、エデト酸二ナトリウム、エデト酸二カリウム、エデト酸、フマル酸、リンゴ酸、リン酸、エデト酸ナトリウム、酒石酸、および／またはエデト酸三ナトリウムが挙げられる。抗菌性保存剤の例としては、これだけに限定されないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチルピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、および／またはチメロサールが挙げられる。抗真菌性保存剤の例としては、これだけに限定されないが、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、および／またはソルビン酸が挙げられる。アルコール性保存剤の例としては、これだけに限定されないが、エタノール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシ安息香酸、および／またはフェニルエチルアルコールが挙げられる。酸性保存剤の例としては、これだけに限定されないが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータカロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロアスコルビン酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、および／またはフィチン酸が挙げられる。他の保存剤としては、これだけに限定されないが、トコフェロール、酢酸トコフェロール、デテロキシムメシレート、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、ＧＬＹＤＡＮＴ ＰＬＵＳ（登録商標）、ＰＨＥＮＯＮＩＰ（登録商標）、メチルパラベン、ＧＥＲＭＡＬＬ（登録商標）１１５、ＧＥＲＭＡＢＥＮ（登録商標）ＩＩ、ＮＥＯＬＯＮＥ（商標）、ＫＡＴＨＯＮ（商標）、および／またはＥＵＸＹＬ（登録商標）が挙げられる。例示的なフリーラジカルスカベンジャーとしては、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴもしくはブチルヒドロキシトルエン）またはデフェロキサミンが挙げられる。
【0091】
緩衝剤の例としては、これだけに限定されないが、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルセプト酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、ｄ－グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、ラクトビオン酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、リン酸水酸化カルシウム、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、リン酸二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウムの混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウムの混合物、トロメタミン、アミノ－スルホン酸緩衝剤（例えば、ＨＥＰＥＳ）、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、パイロジェンフリー水、等張性生理食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、および／またはこれらの組合せが挙げられる。
【0092】
一部の実施形態では、ＬＮＰを含む製剤は、塩化物塩などの塩をさらに含み得る。一部の実施形態では、ＬＮＰを含む製剤は、二糖などの糖をさらに含み得る。一部の実施形態では、製剤は、糖をさらに含むが、塩化物塩などの塩は含まない。一部の実施形態では、ＬＮＰは、ビタミン（例えば、ビタミンＡもしくはビタミンＥ）またはステロールなどの１種または複数種の小さな疎水性分子をさらに含み得る。炭水化物は、単糖（例えば、グルコース）ならびに多糖（例えば、グリコーゲンおよび誘導体およびそのアナログ）を含み得る。
【0093】
ＬＮＰの特徴は、その構成成分に依存し得る。例えば、構造脂質としてコレステロールを含むＬＮＰは、異なる構造脂質を含むＬＮＰとは異なる特徴を有し得る。本明細書で使用される場合、「構造脂質」という用語は、ステロールを指し、ステロール部分を含有する脂質も指す。本明細書で定義される「ステロール」は、ステロイドアルコールからなるステロイドのサブグループである。一部の実施形態では、構造脂質はステロイドである。一部の実施形態では、構造脂質はコレステロールである。一部の実施形態では、構造脂質はコレステロールのアナログである。一部の実施形態では、構造脂質はアルファトコフェロールである。
【0094】
一部の実施形態では、ＬＮＰの特徴は、その構成成分の絶対量または相対量に依存し得る。例えば、リン脂質を高モル濃度分率で含むＬＮＰは、リン脂質を低モル濃度分率で含むＬＮＰとは異なる特徴を有し得る。特性はまた、脂質ナノ粒子を調製する方法および条件に応じても変動し得る。一般に、リン脂質は、リン脂質部分および１つまたは複数の脂肪酸部分を含む。
【0095】
リン脂質部分は、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、２－リゾホスファチジルコリン、およびスフィンゴミエリンからなる非限定的な群から選択することができる。脂肪酸部分は、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、アルファ－リノレン酸、エルカ酸、フィタン酸、アラキジン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ベヘン酸、ドコサペンタエン酸、およびドコサヘキサエン酸からなる非限定的な群から選択することができる。特定のリン脂質により、膜との融合を容易にすることができる。一部の実施形態では、カチオン性リン脂質を膜（例えば、細胞膜または細胞内膜）の１つまたは複数の負に荷電したリン脂質と相互作用させることができる。リン脂質の膜との融合により、脂質含有組成物（例えば、ＬＮＰ）の１つまたは複数の要素（例えば、治療剤）を膜透過によって通過させること、例えば、１つまたは複数の要素を標的組織に送達することが可能になる。分枝、酸化、環化、およびアルキンを含めた修飾および置換を有する天然の種を含めた非天然リン脂質種も意図されている。一部の実施形態では、リン脂質を、１種または複数種のアルキン（例えば、１つまたは複数の二重結合が三重結合で置き換えられたアルケニル基）で官能化するまたはそれと架橋させることができる。適当な反応条件下でアルキン基をアジドに曝露させると、銅により触媒される環化付加を受け得る。そのような反応は、膜透過もしくは細胞認識を容易にするためにナノ粒子組成物の脂質二重層を官能化することに関して、またはナノ粒子組成物を標的化もしくはイメージング部分（例えば、色素）などの有用な構成成分とコンジュゲートすることに関して有用であり得る。リン脂質としては、これだけに限定されないが、グリセロリン脂質、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジル－エタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、およびホスファチジン酸などが挙げられる。リン脂質として、スフィンゴミエリンなどのスフィンゴリン脂質も挙げられる。一部の実施形態では、本発明において有用なまたは潜在的に有用なリン脂質は、ＤＳＰＣのアナログまたはバリアントである。
【0096】
脂質ナノ粒子は、種々の方法によって特徴付けることができる。例えば、顕微鏡（例えば、透過型電子顕微鏡または走査電子顕微鏡）を使用して、ＬＮＰの形態およびサイズ分布を調査することができる。動的光散乱または電位差測定（例えば、電位差滴定）を使用してゼータ電位を測定することができる。動的光散乱を利用して粒子サイズを決定することもできる。複数のＬＮＰの特徴、例えば、粒子サイズ、多分散指数、およびゼータ電位などを測定するためにＺｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、Ｍａｌｖｅｒｎ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ、ＵＫ）などの機器を使用することもできる。
【0097】
ＬＮＰの平均サイズは、例えば、動的光散乱（ＤＬＳ）によって測定して、数十ｎｍから数百ｎｍの間であり得る。例えば、平均サイズは、約４０ｎｍから約１５０ｎｍまで、例えば、約４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍであり得る。一部の実施形態では、ＬＮＰの平均サイズは、約５０ｎｍから約１００ｎｍまで、約５０ｎｍから約９０ｎｍまで、約５０ｎｍから約８０ｎｍまで、約５０ｎｍから約７０ｎｍまで、約５０ｎｍから約６０ｎｍまで、約６０ｎｍから約１００ｎｍまで、約６０ｎｍから約９０ｎｍまで、約６０ｎｍから約８０ｎｍまで、約６０ｎｍから約７０ｎｍまで、約７０ｎｍから約１００ｎｍまで、約７０ｎｍから約９０ｎｍまで、約７０ｎｍから約８０ｎｍまで、約８０ｎｍから約１００ｎｍまで、約８０ｎｍから約９０ｎｍまで、または約９０ｎｍから約１００ｎｍまでであり得る。ある特定の実施形態では、ＬＮＰの平均サイズは、約７０ｎｍから約１００ｎｍまでであり得る。特定の実施形態では、平均サイズは、約８０ｎｍであり得る。他の実施形態では、平均サイズは、約１００ｎｍであり得る。
【0098】
ＬＮＰは、比較的均一であり得る。多分散指数を使用して、ＬＮＰの均一性、例えば、脂質ナノ粒子の粒度分布を示すことができる。多分散指数が小さい（例えば、０．３未満である）ことにより、一般に、粒度分布が狭いことが示される。ＬＮＰの多分散指数は、約０から約０．２５まで、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１０、０．１１、０．１２、０．１３、０．１４、０．１５、０．１６、０．１７、０．１８、０．１９、０．２０、０．２１、０．２２、０．２３、０．２４、または０．２５などであり得る。一部の実施形態では、ＬＮＰの多分散指数は、約０．１０から約０．２０までであり得る。
【0099】
ＬＮＰのゼータ電位を使用して、組成物の界面動電位を示すことができる。例えば、ゼータ電位により、ＬＮＰの表面電荷を記述することができる。高度に荷電した種は体内の細胞、組織、および他の要素と望ましくなく相互作用する恐れがあるので、正または負の比較的低い電荷を有する脂質ナノ粒子が一般に望ましい。一部の実施形態では、ＬＮＰのゼータ電位は、約－１０ｍＶから約＋２０ｍＶまで、約－１０ｍＶから約＋１５ｍＶまで、約－１０ｍＶから約＋１０ｍＶまで、約－１０ｍＶから約＋５ｍＶまで、約－１０ｍＶから約０ｍＶまで、約－１０ｍＶから約－５ｍＶまで、約－５ｍＶから約＋２０ｍＶまで、約－５ｍＶから約＋１５ｍＶまで、約－５ｍＶから約＋１０ｍＶまで、約－５ｍＶから約＋５ｍＶまで、約－５ｍＶから約０ｍＶまで、約０ｍＶから約＋２０ｍＶまで、約０ｍＶから約＋１５ｍＶまで、約０ｍＶから約＋１０ｍＶまで、約０ｍＶから約＋５ｍＶまで、約＋５ｍＶから約＋２０ｍＶまで、約＋５ｍＶから約＋１５ｍＶまで、または約＋５ｍＶから約＋１０ｍＶまでであり得る。
【0100】
治療薬および／または予防薬の封入の効率により、調製後にＬＮＰに封入されているまたは他のやり方で付随している治療薬および／または予防薬の量が記述される。封入効率は高い（例えば、１００％に近い）ことが望ましい。封入効率は、例えば、脂質ナノ粒子を含有する溶液中の治療薬および／または予防薬の量を脂質ナノ粒子を１種または複数種の有機溶媒または界面活性剤を用いて崩壊させる前と崩壊させた後で比較することによって測定することができる。蛍光を使用して、溶液中の遊離の治療薬および／または予防薬（例えば、ＲＮＡ）を量することができる。本明細書に記載の脂質ナノ粒子に関しては、治療薬および／または予防薬の封入効率は、少なくとも５０％、例えば、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であり得る。一部の実施形態では、封入効率は、少なくとも８０％であり得る。ある特定の実施形態では、封入効率は、少なくとも９０％であり得る。
【0101】
ＬＮＰは、任意選択により１つまたは複数のコーティングを含んでもよい。例えば、ＬＮＰを、コーティングを伴うカプセル剤、フィルム剤、または錠剤に製剤化することができる。本明細書に記載の組成物を含むカプセル剤、フィルム剤、または錠剤は、任意の有用なサイズ、引っ張り強さ、硬度、または密度を有してよい。
【0102】
両親媒性ポリマーおよび脂質ナノ粒子を含む製剤を全体的にまたは部分的に医薬組成物として製剤化することができる。医薬組成物は、１種または複数種の両親媒性ポリマーおよび１種または複数種の脂質ナノ粒子を含み得る。例えば、医薬組成物は、１種または複数種の両親媒性ポリマーならびに１種または複数種の異なる治療薬および／または予防薬を含む１種または複数種の脂質ナノ粒子を含み得る。医薬組成物は、本明細書に記載のものなどの１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤または副成分をさらに含み得る。医薬組成物および薬剤の製剤および製造のための一般的なガイドラインは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２１版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ、ＭＤ、２００６において入手可能である。いずれかの従来の賦形剤または副成分が本開示の製剤中のＬＮＰの１種もしくは複数種の構成成分または１種もしくは複数種の両親媒性ポリマーと適合しない可能性がある場合を除く限りでは、従来の賦形剤および副成分を任意の医薬組成物に使用することができる。賦形剤または副成分と製剤のＬＮＰの構成成分または両親媒性ポリマーの組合せにより、何らかの望ましくない生物学的影響または他の有害作用がもたらされる恐れがある場合、その賦形剤または副成分は、製剤のＬＮＰの構成成分または両親媒性ポリマーと適合しない可能性がある。
【0103】
一部の実施形態では、１種または複数種の賦形剤または副成分は、ＬＮＰを含む医薬組成物の総質量または体積の５０％よりも多くを構成し得る。例えば、１種または複数種の賦形剤または副成分は、医薬組成物の５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれよりも多くを構成し得る。一部の実施形態では、薬学的に許容できる賦形剤は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％純粋である。一部の実施形態では、賦形剤は、ヒトにおける使用および動物への使用について承認されたものである。一部の実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局（Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されたものである。一部の実施形態では、賦形剤は、医薬品グレードのものである。一部の実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、および／または国際的薬局方の基準を満たすものである。本開示による医薬組成物中の１種または複数種の両親媒性ポリマー、１種または複数種の脂質ナノ粒子、１種または複数種の薬学的に許容できる賦形剤、および／または任意の追加的な成分の相対量は、治療を受ける対象の同一性、サイズ、および／または状態に応じて、また、組成物を投与する経路にさらに応じて、変動する。例として、医薬組成物は、０．１％から１００％（ｗｔ ｗｔ）の間の１種または複数種の脂質ナノ粒子を含み得る。別の例として、医薬組成物は、０．１％から１５％（ｗｔ／ｖｏｌ）の間の１種または複数種の両親媒性ポリマー（例えば、０．５％、１％、２．５％、５％、１０％、または１２．５％ｗ／ｖ）を含み得る。
【0104】
ある特定の実施形態では、本開示の脂質ナノ粒子および／または医薬組成物を貯蔵および／または輸送のために冷却または凍結させる（例えば、４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃から約０℃の間の温度または約－８０℃から約－２０℃の間の温度（例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃または－１５０℃で貯蔵する）。例えば、１種または複数種の両親媒性ポリマーおよび１種または複数種の脂質ナノ粒子を含む医薬組成物は、貯蔵および／または輸送のために、例えば、約－２０℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、または－８０℃に冷却される溶液または固体（例えば、凍結乾燥によるもの）である。ある特定の実施形態では、本開示は、有効量の両親媒性ポリマーを添加することによって、ならびに脂質ナノ粒子および／またはその医薬組成物を４℃以下の温度、例えば、約－１５０℃から約０℃の間の温度または約－８０℃から約－２０℃の間の温度、例えば、約－５℃、－１０℃、－１５℃、－２０℃、－２５℃、－３０℃、－４０℃、－５０℃、－６０℃、－７０℃、－８０℃、－９０℃、－１３０℃または－１５０℃）で貯蔵することによって、脂質ナノ粒子の安定性を増大させる方法にも関する。
【0105】
本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の化学的特性を種々の方法によって特徴付けることができる。一部の実施形態では、電気泳動（例えば、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、逆相液体クロマトグラフィー）を使用してｍＲＮＡ完全性を調査することができる。
【0106】
一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＬＮＰ完全性は、約２０％以上、約２５％以上、約３０％以上、約３５％以上、約４０％以上、約４５％以上、約５０％以上、約５５％以上、約６０％以上、約６５％以上、約７０％以上、約７５％以上、約８０％以上、約８５％以上、約９０％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、または約９９％以上である。
【0107】
一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＬＮＰ完全性は、同等の方法によって作製されたＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＬＮＰ完全性よりも、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上、約１０倍以上、約２０倍以上、約３０倍以上、約４０倍以上、約５０倍以上、約１００倍以上、約２００倍以上、約３００倍以上、約４００倍以上、約５００倍以上、約１０００倍以上、約２０００倍以上、約３０００倍以上、約４０００倍以上、約５０００倍以上、または約１００００倍以上高い。
【0108】
一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＴｘｏ％は、約１２カ月以上、約１５カ月以上、約１８カ月以上、約２１カ月以上、約２４カ月以上、約２７カ月以上、約３０カ月以上、約３３カ月以上、約３６カ月以上、約４８カ月以上、約６０カ月以上、約７２カ月以上、約８４カ月以上、約９６カ月以上、約１０８カ月以上、約１２０カ月以上である。
【0109】
一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＴｘｏ％は、同等の方法によって作製されたＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＴｘｏ％よりも、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上長い。
【0110】
一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＴ１／２は、約１２カ月以上、約１５カ月以上、約１８カ月以上、約２１カ月以上、約２４カ月以上、約２７カ月以上、約３０カ月以上、約３３カ月以上、約３６カ月以上、約４８カ月以上、約６０カ月以上、約７２カ月以上、約８４カ月以上、約９６カ月以上、約１０８カ月以上、約１２０カ月以上である。
【0111】
一部の実施形態では、本開示のＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＴ１／２は、同等の方法によって作製されたＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤のＴ１／２よりも、約５％以上、約１０％以上、約１５％以上、約２０％以上、約３０％以上、約４０％以上、約５０％以上、約６０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約１倍以上、約２倍以上、約３倍以上、約４倍以上、約５倍以上長い。
【0112】
本明細書で使用される場合、「Ｔｘ」は、ＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の核酸完全性（例えば、ｍＲＮＡ完全性）がＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の調製のために使用された核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の最初の完全性の約Ｘまで低下するまでに続いた時間の量を指す。例えば、「Ｔ８ｏ％」は、ＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の核酸完全性（例えば、ｍＲＮＡ完全性）がＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の調製のために使用された核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の最初の完全性の約８０％に低下するまでに続いた時間の量を指す。別の例として、「Ｔ１／２」は、ＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の核酸完全性（例えば、ｍＲＮＡ完全性）がＬＮＰ、ＬＮＰ懸濁液、凍結乾燥ＬＮＰ組成物、またはＬＮＰ製剤の調製のために使用された核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の最初の完全性の約１／２に低下するまでに続いた時間の量を指す。
【0113】
脂質ナノ粒子は、脂質構成成分ならびに核酸などの治療薬および／または予防薬などの１種または複数種の追加的な構成成分を含み得る。ＬＮＰを１つまたは複数の特定の適用または標的のために設計することができる。ＬＮＰの要素を、特定の適用もしくは標的に基づいて、および／または１つもしくは複数の要素の有効性、毒性、費用、使いやすさ、利用可能性、もしくは他の特色に基づいて選択することができる。同様に、例えば、要素の特定の組合せの有効性および毒性に応じて、特定の適用または標的のために、ＬＮＰの特定の製剤を選択することができる。ＬＮＰ製剤の有効性および忍容性は、製剤の安定性の影響を受ける可能性がある。
【0114】
ＬＮＰの脂質構成成分は、例えば、カチオン性脂質、リン脂質（例えば、不飽和脂質、例えば、ＤＯＰＥまたはＤＳＰＣなど）、ＰＥＧ脂質、および構造脂質を含み得る。脂質構成成分の要素を特定の分率で提供することができる。
【0115】
一部の実施形態では、ＬＮＰは、リン脂質、ＰＥＧ脂質、構造脂質、またはこれらの任意の組合せをさらに含む。本開示の方法に適したリン脂質、ＰＥＧ脂質、および構造脂質は本明細書にさらに開示される。
【0116】
一部の実施形態では、ＬＮＰの脂質構成成分は、カチオン性脂質、リン脂質、ＰＥＧ脂質、および構造脂質を含む。ある特定の実施形態では、脂質ナノ粒子の脂質構成成分は、ｍｏｌ％の総計が１００％を超えないという条件で、約３０ｍｏｌ％～約６０ｍｏｌ％のカチオン性脂質、約０ｍｏｌ％～約３０ｍｏｌ％のリン脂質、約１８．５ｍｏｌ％～約４８．５ｍｏｌ％の構造脂質、および約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の実施形態では、脂質ナノ粒子の脂質構成成分は、約３５ｍｏｌ％～約５５ｍｏｌ％のカチオン性脂質の化合物、約５ｍｏｌ％～約２５ｍｏｌ％のリン脂質、約３０ｍｏｌ％～約４０ｍｏｌ％の構造脂質、および約０ｍｏｌ％～約１０ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。特定の実施形態では、脂質構成成分は、約５０ｍｏｌ％の前記カチオン性脂質、約１０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質、および約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。別の特定の実施形態では、脂質構成成分は、約４０ｍｏｌ％の前記カチオン性脂質、約２０ｍｏｌ％のリン脂質、約３８．５ｍｏｌ％の構造脂質、および約１．５ｍｏｌ％のＰＥＧ脂質を含む。一部の実施形態では、リン脂質は、ＤＯＰＥまたはＤＳＰＣであってよい。他の実施形態では、ＰＥＧ脂質はＰＥＧ－ＤＭＧであってよく、かつ／または構造脂質はコレステロールであってよい。
【0117】
ＬＮＰ中の治療薬および／または予防薬の量は、脂質ナノ粒子のサイズ、組成物、所望の標的および／もしくは適用、または他の特性、ならびに治療薬および／または予防薬の特性に依存し得る。例えば、ＬＮＰに有用なＲＮＡの量は、ＲＮＡのサイズ、配列、および他の特徴に依存し得る。ＬＮＰ中の治療薬および／または予防薬（すなわち、医薬物質）および他の要素（例えば、脂質）の相対量も変動し得る。一部の実施形態では、ＬＮＰ中の脂質構成成分と治療薬および／または予防薬のｗｔ／ｗｔ比は、約５：１から約６０：１まで、例えば、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１１：１、１２：１、１３：１、１４：１、１５：１、１６：１、１７：１、１８：１、１９：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、および６０：１であり得る。例えば、脂質構成成分と治療薬および／または予防薬のｗｔ／ｗｔ比は、約１０：１から約４０：１までであり得る。ある特定の実施形態では、ｗｔ／ｗｔ比は、約２０：１である。ＬＮＰ中の治療薬および／または予防薬の量は、例えば、吸収分光分析（例えば、紫外線可視分光分析）を使用して測定することができる。
【0118】
一部の実施形態では、イオン化脂質は、式（ＩＬ－１）の化合物：
またはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、および－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、および－Ｒ＊ＯＲ”、またはＲ２およびＲ３からなる群から選択され、それらが付着している原子と一緒になって、複素環または炭素環式化合物を形成しており、Ｒ４は、水素、Ｃ３～６炭素環式化合物、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、および非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環式化合物、複素環、－ＯＲ、－０（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（０）０Ｒ、－０Ｃ（０）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（０）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（０）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒｅ、Ｎ（Ｒ）Ｓ（０）２Ｒ８、－０（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－０Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２Ｊ－Ｎ（Ｒ）Ｃ（０）０Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｃ（０）Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｓ（０）２Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｃ（０）０Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）０Ｒ、および－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（０）０Ｒから選択され、各ｎは、独立に、１、２、３、４、および５から選択され、各Ｒ５は、独立に、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、各Ｒ６は、独立に、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、ＭおよびＭ’は、独立に、－Ｃ（０）０－、－ＯＣ（Ｏ）－、－０Ｃ（０）－Ｍ”－Ｃ（０）０－、－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（０）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（０）（０Ｒ’）０－、－Ｓ（０）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、およびヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキルまたはＣ２～１３アルケニルであり、Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、Ｒ８は、Ｃ３～６炭素環式化合物および複素環からなる群から選択され、Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（０）２Ｒ、－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環式化合物および複素環からなる群から選択され、各Ｒは、独立に、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、各Ｒ’は、独立に、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、およびＨからなる群から選択され、各Ｒ”は、独立に、Ｃ３～１５アルキルおよびＣ３～１５アルケニルからなる群から選択され、各Ｒ＊は、独立に、Ｃ１～１２アルキルおよびＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、各Ｙは、独立に、Ｃ３～６炭素環式化合物；各Ｘは、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択され、ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、および１３から選択され、Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、または－ＣＱ（Ｒ）２の場合、（ｉ）ｎが１、２、３、４もしくは５の場合にはＱは－Ｎ（Ｒ）２ではない、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２の場合にはＱは５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではない。
またはそれらのＮ－オキシド、またはその塩もしくは異性体であり、式中、
Ｒ１は、Ｃ５～３０アルキル、Ｃ５～２０アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、および－Ｒ”Ｍ’Ｒ’からなる群から選択され、Ｒ２およびＲ３は、独立に、Ｈ、Ｃ１～１４アルキル、Ｃ２～１４アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、および－Ｒ＊ＯＲ”、またはＲ２およびＲ３からなる群から選択され、それらが付着している原子と一緒になって、複素環または炭素環式化合物を形成しており、Ｒ４は、水素、Ｃ３～６炭素環式化合物、－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、－ＣＱ（Ｒ）２、および非置換Ｃ１～６アルキルからなる群から選択され、ここで、Ｑは、炭素環式化合物、複素環、－ＯＲ、－０（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）２、－Ｃ（０）０Ｒ、－０Ｃ（０）Ｒ、－ＣＸ３、－ＣＸ２Ｈ、－ＣＸＨ２、－ＣＮ、－Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（０）Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｓ（０）２Ｒ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｒｅ、Ｎ（Ｒ）Ｓ（０）２Ｒ８、－０（ＣＨ２）ｎＯＲ、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（Ｒ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－０Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２Ｊ－Ｎ（Ｒ）Ｃ（０）０Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｃ（０）Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｓ（０）２Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｃ（０）０Ｒ、－Ｎ（０Ｒ）Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｎ（ＯＲ）Ｃ（＝ＣＨＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｎ（Ｒ）２、－Ｃ（＝ＮＲ９）Ｒ、－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ）０Ｒ、および－Ｃ（Ｒ）Ｎ（Ｒ）２Ｃ（０）０Ｒから選択され、各ｎは、独立に、１、２、３、４、および５から選択され、各Ｒ５は、独立に、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、各Ｒ６は、独立に、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、ＭおよびＭ’は、独立に、－Ｃ（０）０－、－ＯＣ（Ｏ）－、－０Ｃ（０）－Ｍ”－Ｃ（０）０－、－Ｃ（０）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（０）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（Ｓ）Ｓ－、－ＳＣ（Ｓ）－、－ＣＨ（ＯＨ）－、－Ｐ（０）（０Ｒ’）０－、－Ｓ（０）２－、－Ｓ－Ｓ－、アリール基、およびヘテロアリール基から選択され、ここで、Ｍ”は、結合、Ｃ１～１３アルキルまたはＣ２～１３アルケニルであり、Ｒ７は、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、Ｒ８は、Ｃ３～６炭素環式化合物および複素環からなる群から選択され、Ｒ９は、Ｈ、ＣＮ、ＮＯ２、Ｃ１～６アルキル、－ＯＲ、－Ｓ（０）２Ｒ、－Ｓ（０）２Ｎ（Ｒ）２、Ｃ２～６アルケニル、Ｃ３～６炭素環式化合物および複素環からなる群から選択され、各Ｒは、独立に、Ｃ１～３アルキル、Ｃ２～３アルケニル、およびＨからなる群から選択され、各Ｒ’は、独立に、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ２～１２アルケニル、－Ｒ＊ＹＲ”、－ＹＲ”、およびＨからなる群から選択され、各Ｒ”は、独立に、Ｃ３～１５アルキルおよびＣ３～１５アルケニルからなる群から選択され、各Ｒ＊は、独立に、Ｃ１～１２アルキルおよびＣ２～１２アルケニルからなる群から選択され、各Ｙは、独立に、Ｃ３～６炭素環式化合物；各Ｘは、独立に、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩからなる群から選択され、ｍは、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、および１３から選択され、Ｒ４が－（ＣＨ２）ｎＱ、－（ＣＨ２）ｎＣＨＱＲ、－ＣＨＱＲ、または－ＣＱ（Ｒ）２の場合、（ｉ）ｎが１、２、３、４もしくは５の場合にはＱは－Ｎ（Ｒ）２ではない、または（ｉｉ）ｎが１もしくは２の場合にはＱは５、６、もしくは７員ヘテロシクロアルキルではない。
【0119】
脂質ナノ粒子組成物の脂質構成成分は、ＰＥＧまたはＰＥＧ修飾脂質などのポリエチレングリコールを含む１つまたは複数の分子を含み得る。そのような種は、その代わりに、ＰＥＧ化脂質とも称され得る。ＰＥＧ脂質は、ポリエチレングリコールで修飾された脂質である。ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン、ＰＥＧ修飾ホスファチジン酸、ＰＥＧ修飾セラミド、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール、ＰＥＧ修飾ジアルキルグリセロール、およびそれらの混合物を含む非限定的な群から選択することができる。一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。本明細書で使用される場合、「ＰＥＧ脂質」という用語は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾脂質を指す。ＰＥＧ脂質の非限定的な例としては、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジン酸、ＰＥＧ－セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４またはＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミンおよびＰＥＧ修飾１，２－ジアシルオキシプロパン－３－アミンが挙げられる。そのような脂質は、ＰＥＧ化脂質とも称される。一部の実施形態では、ＰＥＧ脂質は、ＰＥＧ－ｃ－ＤＯＭＧ、ＰＥＧ－ＤＭＧ、ＰＥＧ－ＤＬＰＥ、ＰＥＧ－ＤＭＰＥ、ＰＥＧ－ＤＰＰＣ、またはＰＥＧ－ＤＳＰＥ脂質であり得る。一部の実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ ＤＭＧの修飾形態である。一部の実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、式（ＩＶ）：
【0120】
【化1】
を有するＰＥＧ脂質である。
【0121】
ワクチンＢＮＴ１６２ｂ２
ＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標）；ＩＮＮ：トジナメラン）ワクチンに関するＢｉｏＮＴｅｃｈの技術は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの表面に見いだされる全長スパイクタンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）を使用し、それにより、当該ウイルスタンパク質による感染に対する免疫応答を誘発することに基づくものである（Ｖｏｇｅｌ ＡＢら、（２０２１年４月）。Ｎａｔｕｒｅ．５９２（７８５３）：２８３－２８９）。図２の説明を参照されたい。
ＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標）；ＩＮＮ：トジナメラン）ワクチンに関するＢｉｏＮＴｅｃｈの技術は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの表面に見いだされる全長スパイクタンパク質をコードするヌクレオシド修飾ｍＲＮＡ（ｍｏｄＲＮＡ）を使用し、それにより、当該ウイルスタンパク質による感染に対する免疫応答を誘発することに基づくものである（Ｖｏｇｅｌ ＡＢら、（２０２１年４月）。Ｎａｔｕｒｅ．５９２（７８５３）：２８３－２８９）。図２の説明を参照されたい。
【0122】
【表1】
【0123】
ＢｉｏＮＴｅｃｈによって開発された同様の技術を用いた３種の他のワクチンの中で、ワクチン候補ＢＮＴ１６２ｂ２が最も有望なものとして選択された（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＭＪら、（２０２０年１０月）。Ｎａｔｕｒｅ．５８６（７８３０）：５８９～５９３、Ｖｏｇｅｌ ＡＢら（２０２１年４月）。Ｎａｔｕｒｅ．５９２（７８５３）：２８３～２８９）。ＢＮＴ１６２ｂ２を選択する前に、ＢｉｏＮＴｅｃｈおよびＰｆｉｚｅｒによりドイツおよび米国においてＢＮＴ１６２ｂ１に関する第Ｉ相試験が実施され、同時にＦｏｓｕｎにより中国における第Ｉ相試験が実施された。これらの第Ｉ相試験では、ＢＮＴ１６２ｂ２が他の３種のＢｉｏＮＴｅｃｈ候補よりも良好な安全性プロファイルを有することが示された（Ｇａｅｂｌｅｒ Ｃ、Ｎｕｓｓｅｎｚｗｅｉｇ ＭＣ（２０２０年１０月）．Ｎａｔｕｒｅ．５８６（７８３０）：５０１～２）。
【0124】
ＢＮＴ１６２ｂ２の配列
当該ワクチンのｍｏｄＲＮＡ配列は、４，２８４ヌクレオチド長である（図２参照）。当該配列は、５プライムキャップ；ヒトアルファグロビンの配列に由来する５プライム非翻訳領域；シグナルペプチド（塩基５５～１０２）、およびスパイクが融合前の安定化されたコンフォメーションをとるようにし、それにより膜融合能を低下させ、中和抗体の発現および刺激を増大させる２つのプロリン置換（Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ、「２Ｐ」と示される）（Ｗａｌｓｈ ＥＥら、（２０２０年１０月）。Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３８３（２５）：２４３９；Ｐａｌｌｅｓｅｎ Ｊら、（２０１７年８月）．ＰＮＡＳ．１１４（３５）：Ｅ７３４８～Ｅ７３５７）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の全長スパイクタンパク質のコドン最適化された遺伝子（塩基１０３～３８７９）；続いて、タンパク質発現およびｍＲＮＡ安定性を増大させるために選択されたＡＥＳとｍｔＲＮＲ１とから組み合わされた３プライム非翻訳領域（塩基３８８０～４１７４）、ならびに３０個のアデノシン残基、１０ヌクレオチドのリンカー配列、およびさらに７０個の他のアデノシン残基を含むポリ（Ａ）尾部（塩基４１７５～４２８４）、からなる。当該配列は、ウリジン残基を含有しない。ウリジン残基は１－メチル－３’－シュードウリジリルによって置き換えられている。スパイクタンパク質における２Ｐプロリン置換は、元々はＭＥＲＳワクチンのために、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ’ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓｃｒｉｐｐｓ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＪａｓｏｎ ＭｃＬｅｌｌａｎ’ｓ ｔｅａｍ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ ａｔ Ａｕｓｔｉｎ、ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ａｔ Ｄａｒｔｍｏｕｔｈ Ｃｏｌｌｅｇｅ）の研究者によって開発されたものである。
当該ワクチンのｍｏｄＲＮＡ配列は、４，２８４ヌクレオチド長である（図２参照）。当該配列は、５プライムキャップ；ヒトアルファグロビンの配列に由来する５プライム非翻訳領域；シグナルペプチド（塩基５５～１０２）、およびスパイクが融合前の安定化されたコンフォメーションをとるようにし、それにより膜融合能を低下させ、中和抗体の発現および刺激を増大させる２つのプロリン置換（Ｋ９８６ＰおよびＶ９８７Ｐ、「２Ｐ」と示される）（Ｗａｌｓｈ ＥＥら、（２０２０年１０月）。Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３８３（２５）：２４３９；Ｐａｌｌｅｓｅｎ Ｊら、（２０１７年８月）．ＰＮＡＳ．１１４（３５）：Ｅ７３４８～Ｅ７３５７）；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の全長スパイクタンパク質のコドン最適化された遺伝子（塩基１０３～３８７９）；続いて、タンパク質発現およびｍＲＮＡ安定性を増大させるために選択されたＡＥＳとｍｔＲＮＲ１とから組み合わされた３プライム非翻訳領域（塩基３８８０～４１７４）、ならびに３０個のアデノシン残基、１０ヌクレオチドのリンカー配列、およびさらに７０個の他のアデノシン残基を含むポリ（Ａ）尾部（塩基４１７５～４２８４）、からなる。当該配列は、ウリジン残基を含有しない。ウリジン残基は１－メチル－３’－シュードウリジリルによって置き換えられている。スパイクタンパク質における２Ｐプロリン置換は、元々はＭＥＲＳワクチンのために、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ’ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓｃｒｉｐｐｓ ＲｅｓｅａｒｃｈおよびＪａｓｏｎ ＭｃＬｅｌｌａｎ’ｓ ｔｅａｍ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ ａｔ Ａｕｓｔｉｎ、ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ ａｔ Ｄａｒｔｍｏｕｔｈ Ｃｏｌｌｅｇｅ）の研究者によって開発されたものである。
【0125】
ＢＮＴ１６２ｂ２の組成
当該ワクチンは、ｍＲＮＡ分子に加えて、以下の不活性成分（賦形剤）を含有する：
・ ＡＬＣ－０３１５、（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカン酸エステル）
・ ＡＬＣ－０１５９、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド
・ １，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）
・ コレステロール
・ リン酸水素ナトリウム二水和物
・ リン酸二水素カリウム
・ 塩化カリウム
・ 塩化ナトリウム
・ ショ糖
・ 注射用水
当該ワクチンは、ｍＲＮＡ分子に加えて、以下の不活性成分（賦形剤）を含有する：
・ ＡＬＣ－０３１５、（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカン酸エステル）
・ ＡＬＣ－０１５９、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド
・ １，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）
・ コレステロール
・ リン酸水素ナトリウム二水和物
・ リン酸二水素カリウム
・ 塩化カリウム
・ 塩化ナトリウム
・ ショ糖
・ 注射用水
【0126】
これらのうちの最初の４つは脂質である。脂質は、ｍＲＮＡを封入して脂質ナノ粒子の形態にして、ＲＮＡ／脂質ナノ粒子の細胞への進入および安定性を補助することを意図したものである。
【0127】
ＡＬＣ－０３１５は、当該薬剤製品の機能的なカチオン性脂質構成成分である。ＡＬＣ－０３１５は、脂質ナノ粒子に組み入れた場合、ＲＮＡのエンドソーム放出の調節に役立つ。薬剤製品製造の間、特定のｐＨのＡＬＣ－０３１５を含有するエタノール脂質混合物にＲＮＡ水溶液を導入することにより、負に荷電したＲＮＡ骨格と正に荷電したカチオン性脂質との間の静電相互作用が導かれる。この静電相互作用によりＲＮＡ原薬が封入され、その結果、粒子が形成される。
【0128】
ＰＥＧ化脂質ＡＬＣ－０１５９の主な機能は、貯蔵安定性に寄与し、タンパク質との非特異的結合を低減する、脂質ナノ粒子を立体的に安定化する親水性の保護層を形成することである。
【0129】
コレステロールは、脂質ナノ粒子の二重層構造を支持するため、および脂質ナノ粒子構造内の脂質構成成分の移動性をもたらすために、製剤に含められる。
【0130】
ＤＳＰＣは、安定な二重層形成構造をもたらしてカチオン性脂質の非二重層傾向を埋め合わせることが意図されたリン脂質構成成分である。ＤＳＰＣは、薬局方外賦形剤であり、十分な規格書が提示されている。
脂質とｍｏｄＲＮＡが一緒になってナノ粒子を形成している。
脂質とｍｏｄＲＮＡが一緒になってナノ粒子を形成している。
【0131】
一部の実施形態では、ＢＮＴ１６２ｂ２組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異型ウイルススパイク（Ｓ）糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ３０ｍｃｇを含む。各用量用のＢＮＴ１６２ｂ２組成物は、ｍｏｄＲＮＡおよび以下のものを含む：脂質（（４－ヒドロキシブチル）アザンジイル）ビス（ヘキサン－６，１－ジイル）ビス（２－ヘキシルデカン酸エステル）０．４３ｍｇ、２［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド０．０５ｍｇ、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン０．０９ｍｇ、およびコレステロール０．２ｍｇ）、塩化カリウム０．０１ｍｇ、リン酸二水素カリウム０．０１ｍｇ、塩化ナトリウム０．３６ｍｇ、リン酸水素ナトリウム二水和物０．０７ｍｇ、およびショ糖６ｍｇ。希釈剤（０．９％塩化ナトリウム注射液）により用量当たりさらに２．１６ｍｇの塩化ナトリウムがもたらされる。ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンの用量レジメンは、それぞれ０．３ｍＬの用量を２回、３週間の間隔をおいて行うことを含むものであり得る。ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンは、配列番号１に記載の配列を有するｍＲＮＡを含む（図２参照）。
【0132】
当該ワクチンは、「筋肉内注射用の白色～微黄白色、滅菌、保存剤を含まない、凍結懸濁液」として複数回用量用バイアルに入った状態で供給される。当該ワクチンは、投与前に室温まで解凍し、通常の生理食塩水で希釈しなければならない。
【0133】
ワクチンｍＲＮＡ－１２７３
ｍＲＮＡ－１２７３ワクチン組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異型ウイルススパイク（Ｓ）糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ１００ｍｃｇを含む（図３参照）。当該ワクチン組成物は、以下のものを含む：脂質（ＳＭ－１０２、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００［ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ］、コレステロール、および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン［ＤＳＰＣ］）、トロメタミン、トロメタミン塩酸塩、酢酸、酢酸ナトリウム、ならびにショ糖。ｍＲＮＡ－１２７３ワクチンの用量レジメンは、それぞれ０．５ｍＬの用量を２回、１カ月の間隔をおいて行うものであり得る。ｍＲＮＡ－１２７３ワクチンは、図３に示されている配列（配列番号２）を有するｍＲＮＡを含む。別の実施形態では、当該ｍＲＮＡワクチンは、図３に示されている配列（配列番号２）を含み、ここで、「スパイクコード領域」がバリアント株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ抗原に置き換えられている。
ｍＲＮＡ－１２７３ワクチン組成物は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異型ウイルススパイク（Ｓ）糖タンパク質をコードするヌクレオシド修飾メッセンジャーＲＮＡ１００ｍｃｇを含む（図３参照）。当該ワクチン組成物は、以下のものを含む：脂質（ＳＭ－１０２、１，２－ジミリストイル－ｒａｃ－グリセロ－３－メトキシポリエチレングリコール－２０００［ＰＥＧ２０００－ＤＭＧ］、コレステロール、および１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン［ＤＳＰＣ］）、トロメタミン、トロメタミン塩酸塩、酢酸、酢酸ナトリウム、ならびにショ糖。ｍＲＮＡ－１２７３ワクチンの用量レジメンは、それぞれ０．５ｍＬの用量を２回、１カ月の間隔をおいて行うものであり得る。ｍＲＮＡ－１２７３ワクチンは、図３に示されている配列（配列番号２）を有するｍＲＮＡを含む。別の実施形態では、当該ｍＲＮＡワクチンは、図３に示されている配列（配列番号２）を含み、ここで、「スパイクコード領域」がバリアント株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ抗原に置き換えられている。
【0134】
２．細菌に対する免疫原性組成物
２．１ 本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）
本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、一般には、コンジュゲートした莢膜糖（ｃａｐｓｕｌａｒ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）抗原（本明細書ではコンジュゲートまたは糖コンジュゲートとも名付けられる）を含み、ここで、糖は、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する。
２．１ 本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）
本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、一般には、コンジュゲートした莢膜糖（ｃａｐｓｕｌａｒ ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）抗原（本明細書ではコンジュゲートまたは糖コンジュゲートとも名付けられる）を含み、ここで、糖は、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する。
【0135】
好ましい実施形態では、糖は、タンパク質担体の異なる分子と個々にコンジュゲートしている（タンパク質担体の各分子には１つの型の糖のみがコンジュゲートしている）。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートしていると言える。
【0136】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖の数は、１３種の血清型（または「ｖ」、価）から２０種の異なる血清型（２５ｖ）までにわたり得ることが好ましい。一実施形態では、１２種の異なる血清型が存在する。一実施形態では、１３種の異なる血清型が存在する。一実施形態では、１４種の異なる血清型が存在する。一実施形態では、１５種の異なる血清型が存在する。一実施形態では、１６種の異なる血清型が存在する。ある実施形態では、１７種の異なる血清型が存在する。ある実施形態では、１８種の異なる血清型が存在する。ある実施形態では、１９種の異なる血清型が存在する。ある実施形態では、２０種の異なる血清型が存在する。本明細書において下記の通り、莢膜糖を担体タンパク質とコンジュゲートして糖コンジュゲートを形成する。
【0137】
組成物中の２種またはそれよりも多くの糖に対するタンパク質担体が同じものである場合、糖はタンパク質担体の同じ分子とコンジュゲートしていてよい（担体分子に２種またはそれよりも多くの異なる糖がコンジュゲートしている）［例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１を参照されたい］。
【0138】
しかし、好ましい実施形態では、糖はタンパク質担体の異なる分子と個々にコンジュゲートしている（タンパク質担体の各分子には１つの型の糖のみがコンジュゲートしている）。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートしていると言える。
【0139】
本発明の目的に関して、「糖コンジュゲート」または「コンジュゲート」という用語は、担体タンパク質と共有結合により連結した莢膜糖を指す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質と直接連結している。第２の実施形態では、細菌糖は、スペーサー／リンカーを通じてタンパク質と連結している。
【0140】
２．１．１ 本発明の莢膜糖
「糖」という用語は、本明細書全体を通して、多糖またはオリゴ糖を示し得、どちらも包含する。高頻度の実施形態では、糖は、多糖、特に、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖（ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）である。
「糖」という用語は、本明細書全体を通して、多糖またはオリゴ糖を示し得、どちらも包含する。高頻度の実施形態では、糖は、多糖、特に、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖（ｃａｐｓｕｌａｒ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）である。
【0141】
莢膜多糖は、当業者に公知の標準的な技法によって調製される。
【0142】
一般には、莢膜多糖は、各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を培地中（例えば、ダイズベースの培地中）で成長させることによって産生され、次いで、細菌培養物から多糖が調製される。本発明の糖コンジュゲートに使用されるそれぞれの多糖を作出するために使用される肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の細菌株は、樹立された微生物株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ））または臨床検体から入手することができる。
【0143】
生物体（各肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型）の集団は、多くの場合、播種バイアルから播種ボトルにスケールアップされ、生産規模の発酵体積に達するまで体積を増大させながら１つまたは複数の播種発酵槽で継代される。成長サイクルの最後に、細胞を溶解させ、次いで、溶解物ブロスを下流の（精製）処理のために回収する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／１１８７５２、および米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、同第２００６／０２２８３８１号、同第２００８／０１０２４９８号および同第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。
【0144】
個々の多糖は、一般には、遠心分離、沈殿、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーによって精製される（例えば、ＷＯ２００６／１１０３５２およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。
【0145】
精製された多糖を活性化（例えば、化学的に活性化）して、反応することが可能になるようにし（例えば、担体タンパク質と直接またはｅＴＥＣスペーサーなどのリンカーを介してのいずれかで）、次いで、本明細書においてさらに記載されている通り、本発明の糖コンジュゲートに組み入れ得る。
【0146】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖は、最大８つの糖残基を含有し得る反復オリゴ糖単位を含む。
【0147】
ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、１オリゴ糖単位、または反復オリゴ糖単位のネイティブな長さの糖鎖よりも短いものであり得る。ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、関連性のある血清型の１反復オリゴ糖単位である。
【0148】
ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、オリゴ糖であってよい。オリゴ糖は、少数の反復単位（一般には５～１５反復単位）を有し、一般には、合成によって、または多糖の加水分解によって導き出される。
【0149】
ある実施形態では、本発明の莢膜糖の全ておよび本発明の免疫原性組成物中の全てが多糖である。高分子量の莢膜多糖は、抗原性表面に存在するエピトープに起因して、ある特定の抗体免疫応答を誘導することができる。本発明のコンジュゲート、組成物および方法における使用のために、高分子量の莢膜多糖の単離および精製が意図されていることが好ましい。
【0150】
一部の実施形態では、コンジュゲーション前に精製された多糖の分子量は、５ｋＤａから４，０００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、多糖の分子量は、１０ｋＤａから４，０００ｋＤａの間；５０ｋＤａから４，０００ｋＤａの間；５０ｋＤａから３，０００ｋＤａの間；５０ｋＤａから２，０００ｋＤａの間；５０ｋＤａから１，５００ｋＤａの間；５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間；５０ｋＤａから７５０ｋＤａの間；５０ｋＤａから５００ｋＤａの間；１００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間；１００ｋＤａから３，０００ｋＤａの間；１００ｋＤａから２，０００ｋＤａの間；１００ｋＤａから１，５００ｋＤａの間；１００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間；１００ｋＤａから７５０ｋＤａの間；１００ｋＤａから５００ｋＤａの間；１００ｋＤａから４００ｋＤａの間；２００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間；２００ｋＤａから３，０００ｋＤａの間；２００ｋＤａから２，０００ｋＤａの間；２００ｋＤａから１，５００ｋＤａの間；２００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である。ある実施形態では、莢膜多糖の分子量は、２００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。別の実施形態では、莢膜多糖の分子量は、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。
【0151】
さらなる実施形態では、莢膜多糖の分子量は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間；７ｋＤａから１００ｋＤａの間；１０ｋＤａから１００ｋＤａの間；２０ｋＤａから１００ｋＤａの間；３０ｋＤａから１００ｋＤａの間；４０ｋＤａから１００ｋＤａの間；５０ｋＤａから１００ｋＤａの間；６０ｋＤａから１００ｋＤａの間；７０ｋＤａから１００ｋＤａの間；８０ｋＤａから１００ｋＤａの間；９０ｋＤａから１００ｋＤａの間；５ｋＤａから９０ＫＤａの間；５ｋＤａから８０ｋＤａの間；５ｋＤａから７０ｋＤａの間；５ｋＤａから６０ｋＤａの間；５ｋＤａから５０ｋＤａの間；５ｋＤａから４０ｋＤａの間；５ｋＤａから３０ｋＤａの間；５ｋＤａから２０ｋＤａの間または５ｋＤａから１０ｋＤａの間である。上記の範囲のいずれかに入る任意の正の整数が本開示の実施形態として意図されている。
【0152】
多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、多糖をコンジュゲーション前にサイズ分類技法に供することができる。機械的または化学的サイズ分類を使用することができる。
【0153】
好ましい実施形態では、精製された多糖は、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆまたは３３Ｆ由来の莢膜多糖であり、ここで、莢膜多糖の分子量は、本明細書において上記の分子量範囲のうちの１つに入る。
【0154】
本明細書で使用される場合、多糖または担体タンパク質－多糖コンジュゲートの「分子量」という用語は、重量平均分子量（Ｍｗ）を指し、これは、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）とマルチアングルレーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）の組合せによって測定することができる。
【0155】
一部の実施形態では、本発明の血清型９Ｖ、１８Ｃ、１１Ａ、１５Ｂ、２２Ｆおよび／または３３Ｆ由来の肺炎球菌の糖をＯ－アセチル化する。一部の実施形態では、本発明の血清型９Ｖ、１１Ａ、１５Ｂ、２２Ｆおよび／または３３Ｆ由来の肺炎球菌の糖をＯ－アセチル化する。好ましい実施形態では、本発明の血清型１８Ｃの肺炎球菌の糖を脱Ｏ－アセチル化する。例えば、血清型１８Ｃの糖を、酸性処理によって脱Ｏ－アセチル化することができる（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、３７頁１～４行目を参照されたい）。
【0156】
多糖のＯ－アセチル化の程度は、当技術分野で公知の任意の方法によって、例えば、プロトンＮＭＲによって決定することができる（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら、（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６、Ｊｏｎｅｓら、（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７、ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）。別の一般に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。Ｏ－アセチル基の存在をイオン－ＨＰＬＣ分析によって決定することが好ましい。
【0157】
本明細書に記載の精製された多糖を化学的に活性化し、これにより糖は、担体タンパク質と反応することが可能になる。下記の通り、これらの肺炎球菌コンジュゲートを別々のプロセスによって調製し、単一用量製剤に製剤化する。
【0158】
２．１．２ 本発明の糖コンジュゲート
精製された糖を化学的に活性化し、これにより糖は、担体タンパク質と直接またはリンカーを介してのいずれかで反応することが可能になる（すなわち、活性化された糖）。活性化したら、各莢膜糖を担体タンパク質と別々にコンジュゲートして、糖コンジュゲートを形成する。一実施形態では、各莢膜糖を同じ担体タンパク質にコンジュゲートする。糖の化学的活性化およびその後の担体タンパク質とのコンジュゲーションを活性化およびコンジュゲーション方法によって実現することができる。
精製された糖を化学的に活性化し、これにより糖は、担体タンパク質と直接またはリンカーを介してのいずれかで反応することが可能になる（すなわち、活性化された糖）。活性化したら、各莢膜糖を担体タンパク質と別々にコンジュゲートして、糖コンジュゲートを形成する。一実施形態では、各莢膜糖を同じ担体タンパク質にコンジュゲートする。糖の化学的活性化およびその後の担体タンパク質とのコンジュゲーションを活性化およびコンジュゲーション方法によって実現することができる。
【0159】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の莢膜多糖を上に開示されている通り調製することができる。
【0160】
好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の莢膜多糖の少なくとも１つを担体タンパク質と還元的アミノ化によってコンジュゲートする（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、同第２００７／１８４０７２号、同第２００７／０２３１３４０号および同第２００７／０１８４０７１号、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、およびＷＯ２００８／１４３７０９に記載されている）。
【0161】
本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。
【0162】
本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ａ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型３を還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３、６Ａおよび１９Ａ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートをｅＴＥＣコンジュゲーションを使用して調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖コンジュゲートをＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ－還元的アミノ化を使用して調製する。
【0163】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。
【0164】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明のある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。本発明のある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲート血清型を還元的アミノ化によって調製する。本発明のある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲート血清型を還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１４および１８Ｃ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを非プロトン性溶媒中で還元的アミノ化によって調製する。本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１４および１８Ｃ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートをＤＭＳＯ中で還元的アミノ化によって調製する。別の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。
【0165】
別の実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。別の実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。好ましい実施形態では、ワクチンが１５価ワクチンの場合、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１４、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを非プロトン性溶媒中で還元的アミノ化によって調製する。好ましい実施形態では、ワクチンが１５価ワクチンの場合、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１４、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートをＤＭＳＯ中で還元的アミノ化によって調製する。
【0166】
別の実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。
【0167】
別の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ由来の糖コンジュゲートおよび２３Ｆを全て還元的アミノ化によって調製する。
【0168】
別の実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１２Ｆ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。
【0169】
別の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。
【0170】
別の実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを全て還元的アミノ化によって調製する。
【0171】
本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートをｅＴＥＣコンジュゲーションを使用して調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖コンジュゲートをＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ－還元的アミノ化を使用して調製する。
【0172】
本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１１Ａ、１４および１８Ｃ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、１０Ａ、１５Ｂ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートを非プロトン性溶媒中で還元的アミノ化によって調製する、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートをｅＴＥＣコンジュゲーションを使用して調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中でＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ－還元的アミノ化を使用して調製する。
【0173】
本発明の好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１１Ａ、１４および１８Ｃ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、１０Ａ、１５Ｂ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートをＤＭＳＯ中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ由来の糖コンジュゲートをｅＴＥＣコンジュゲーションを使用して調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中でＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ－還元的アミノ化を使用して調製する。
【0174】
還元的アミノ化には、２つのステップ、（１）多糖を酸化するステップ、（２）活性化された多糖および担体タンパク質を還元してコンジュゲートを形成するステップが伴う。酸化を行う前に、多糖を加水分解してもよい。機械的または化学的加水分解を使用することができる。化学的加水分解は酢酸を使用して行うことができる。
【0175】
酸化ステップには、過ヨウ素酸（ｐｅｒｉｏｄａｔｅ）との反応が伴い得る。本発明の目的に関して、「過ヨウ素酸（ｐｅｒｉｏｄａｔｅ）」という用語は、過ヨウ素酸アニオン（ｐｅｒｉｏｄａｔｅ）および過ヨウ素酸（ｐｅｒｉｏｄｉｃ ａｃｉｄ）の両方を包含する。この用語はまた、メタ過ヨウ素酸アニオン（ｍｅｔａｐｅｒｉｏｄａｔｅ）（ＩＯ４
－）およびオルト過ヨウ素酸アニオン（ｏｒｔｈｏｐｅｒｉｏｄａｔｅ）（ＩＯ６
５－）の両方を包含し、過ヨウ素酸（ｐｅｒｉｏｄａｔｅ）の種々の塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｐｅｒｉｏｄａｔｅ）および過ヨウ素酸カリウム（ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｐｅｒｉｏｄａｔｅ））を包含する。ある実施形態では、莢膜多糖をメタ過ヨウ素酸（ｍｅｔａｐｅｒｉｏｄａｔｅ）の存在下、好ましくは過ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ４）の存在下で酸化する。別の実施形態では、莢膜多糖をオルト過ヨウ素酸（ｏｒｔｈｏｐｅｒｉｏｄａｔｅ）の存在下、好ましくは過ヨウ素酸（ｐｅｒｉｏｄｉｃ ａｃｉｄ）の存在下で酸化する。
【0176】
ある実施形態では、酸化剤は、一級ヒドロキシルを選択的に酸化するためのオキシダントの存在下での安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物、例えば、ピペリジン－Ｎ－オキシまたはピロリジン－Ｎ－オキシ化合物などである（ＷＯ２０１４／０９７０９９に記載されている通り）。前記反応では、実際のオキシダントは、触媒サイクル内のＮ－オキソアンモニウム塩である。ある態様では、前記安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は、ピペリジン－Ｎ－オキシまたはピロリジン－Ｎ－オキシ化合物である。ある態様では、前記安定なニトロキシルまたはニトロキシドラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯ（２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ）またはＰＲＯＸＹＬ（２，２，５，５－テトラメチル－１－ピロリジニルオキシ）部分を有する。ある態様では、前記安定なニトロキシルラジカル化合物は、ＴＥＭＰＯまたはその誘導体である。ある態様では、前記オキシダントは、Ｎ－ハロ部分を有する分子である。ある態様では、前記オキシダントは、Ｎ－クロロスクシンイミド、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－ヨードスクシンイミド、ジクロロイソシアヌル酸、１，３，５－トリクロロ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジブロモイソシアヌル酸、１，３，５－トリブロモ－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオン、ジヨードイソシアヌル酸および１，３，５－トリヨード－１，３，５－トリアジナン－２，４，６－トリオンからなる群から選択される。前記オキシダントはＮ－クロロスクシンイミドであることが好ましい。
【0177】
好ましい実施形態では、血清型１２Ｆ肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の莢膜多糖を担体タンパク質と還元的アミノ化によってコンジュゲートし、ここで、酸化剤は、２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）フリーラジカル、および共酸化剤としてＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）である（ＷＯ２０１４／０９７０９９に記載されている通り）。
したがって、一態様では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ａ）１２Ｆ糖を２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）およびＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）と水性溶媒中で反応させて、活性化された糖を生じさせるステップと、ｂ）活性化された糖を、１つまたは複数のアミン基を含む担体タンパク質と反応させるステップとを含む方法によって入手可能である（前記方法は「ＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ－還元的アミノ化」と称される）。
したがって、一態様では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆ由来の糖コンジュゲートは、ａ）１２Ｆ糖を２，２，６，６－テトラメチル－１－ピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）およびＮ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）と水性溶媒中で反応させて、活性化された糖を生じさせるステップと、ｂ）活性化された糖を、１つまたは複数のアミン基を含む担体タンパク質と反応させるステップとを含む方法によって入手可能である（前記方法は「ＴＥＭＰＯ／ＮＣＳ－還元的アミノ化」と称される）。
【0178】
クエンチング剤を添加することによって酸化反応をクエンチしてもよい。クエンチング剤は、ビシナルジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸（例えば、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、アスコルビン酸など）から選択することができる。
【0179】
多糖の酸化ステップの後、多糖は活性化されたと言え、本明細書では、以下、「活性化された多糖」と称される。活性化された多糖と担体タンパク質を、独立して（別々に凍結乾燥）または共に（共凍結乾燥）のいずれかで凍結乾燥させる（フリーズドライする）ことができる。一実施形態では、活性化された多糖と担体タンパク質を共凍結乾燥させる。別の実施形態では、活性化された多糖と担体タンパク質を独立して凍結乾燥させる。
【0180】
一実施形態では、凍結乾燥を非還元糖の存在下で行い、可能性のある非還元糖として、ショ糖、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットが挙げられる。
【0181】
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用して活性化された多糖および担体タンパク質を還元して、コンジュゲートを形成することである（いわゆる還元的アミノ化）。適切な還元剤としては、シアノ水素化ホウ素（例えば、ブレンステッドまたはルイス酸の存在下でのシアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素ナトリウムもしくは水素化ホウ素亜鉛など）、アミンボラン、例えば、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）または水素化ホウ素交換樹脂が挙げられる。一実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
【0182】
ある実施形態では、還元反応を水性溶媒（例えば、ＰＢＳ、ＭＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ビス－トリス、ＡＤＡ、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＭＯＰＳ、ＤＩＰＳＯ、ＭＯＢＳ、ＨＥＰＰＳＯ、ＰＯＰＳＯ、ＴＥＡ、ＥＰＰＳ、ビシンまたはＨＥＰＢ、ｐＨ６．０から８．５の間、７．０から８．０の間、または７．０から７．５の間、から選択される）中で行い、別の実施形態では、反応を非プロトン性溶媒中で行う。ある実施形態では、還元反応をＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で行う。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された活性化された多糖および担体タンパク質を復元することができる。
【0183】
還元反応の最後に、未反応のアルデヒド基がコンジュゲート内に残っている場合があり、これらに、適切なキャップ付加剤を使用してキャップ付加することができる。一実施形態では、このキャップ付加剤は水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。コンジュゲーション（還元反応および場合によってキャップ付加）後、糖コンジュゲートを、当業者に公知の様々な技法によって精製する（多糖－タンパク質コンジュゲート量に関して富化する）ことができる。これらの技法としては、透析、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、接線流濾過沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。ある実施形態では、糖コンジュゲートをダイアフィルトレーションまたはイオン交換クロマトグラフィーまたはサイズ排除クロマトグラフィーによって精製する。
【0184】
一実施形態では、糖コンジュゲートを滅菌濾過する。
【0185】
ある実施形態では、ＷＯ２０１４／０２７３０２に記載されているものなどのｅＴＥＣコンジュゲーションを使用して本発明の糖コンジュゲートを調製する。前記糖コンジュゲートは、担体タンパク質と、１つまたは複数のｅＴＥＣスペーサーを通じて共有結合によってコンジュゲートした糖を含み、ここで、糖はｅＴＥＣスペーサーとカルバメート連結を通じて共有結合によってコンジュゲートしており、担体タンパク質はｅＴＥＣスペーサーとアミド連結を通じて共有結合によってコンジュゲートしている。ｅＴＥＣに連結した本発明の糖コンジュゲートは、一般式（Ｉ）：
によって表すことができ、ここで、ｅＴＥＣスペーサーを含む原子が中央の枠内に含まれている。
【化2】
【0186】
ｅＴＥＣスペーサーは、７個の原子を直鎖状に含み（すなわち、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）２ＳＣＨ２Ｃ（Ｏ）－）、糖と担体タンパク質との間に安定なチオエーテルおよびアミド結合をもたらす。ｅＴＥＣに連結した糖コンジュゲートの合成は、糖の活性化されたヒドロキシル基とチオアルキルアミン試薬、例えば、シスタミンまたはシステインアミンまたはその塩のアミノ基を反応させ、それにより、糖にカルバメート連結を形成して、チオール化糖をもたらすことを伴う。１つまたは複数の遊離スルフヒドリル基の生成は、還元剤と反応させて、活性化されたチオール化糖をもたらすことによって実現される。活性化されたチオール化糖の遊離スルフヒドリル基と、アミン含有残基に１つまたは複数のα－ハロアセトアミド基を有する活性化された担体タンパク質の反応により、チオエーテル結合が生成して、担体タンパク質がｅＴＥＣスペーサーにアミド結合を通じて付着したコンジュゲートが形成される。
【0187】
本発明の前記糖コンジュゲートにおいて、糖は、多糖またはオリゴ糖であってよい。担体タンパク質は、本明細書に記載のまたは当業者に公知の任意の適切な担体から選択することができる。高頻度の実施形態では、糖は多糖である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。一部のそのような実施形態では、ｅＴＥＣにより連結した糖コンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆ莢膜多糖を含む。
【0188】
特に好ましい実施形態では、ｅＴＥＣに連結した糖コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７とｅＴＥＣスペーサーを通じて共有結合によってコンジュゲートした肺炎球菌の血清型３３Ｆ（Ｐｎ３３Ｆ）莢膜多糖（血清型３３ＦのｅＴＥＣにより連結した糖コンジュゲート）を含む。
【0189】
一部の実施形態では、本発明の肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、７Ｆ、９Ｖおよび／または１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは、Ｏ－アセチル化されたものである。一部の実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型１、７Ｆおよび９ＶはＯ－アセチル化されたものであり、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃ由来の糖コンジュゲートは脱Ｏ－アセチルされたものである。
【0190】
一部の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、分子量が５ｋＤａから２，０００ｋＤａの間である糖を含む。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、７０ｋＤａから９００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、１００ｋＤａから８００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、２００ｋＤａから６００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、１００ｋＤａから４００ｋＤａの間である。他のそのような実施形態では、糖の分子量は、１５０ｋＤａから３００ｋＤａの間である。さらなる実施形態では、糖の分子量は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間；１０ｋＤａから１００ｋＤａの間；２０ｋＤａから１００ｋＤａの間；３０ｋＤａから１００ｋＤａの間；４０ｋＤａから１００ｋＤａの間；５０ｋＤａから１００ｋＤａの間；６０ｋＤａから１００ｋＤａの間；７０ｋＤａから１００ｋＤａの間；８０ｋＤａから１００ｋＤａの間；９０ｋＤａから１００ｋＤａの間；５ｋＤａから９０ＫＤａの間；５ｋＤａから８０ｋＤａの間；５ｋＤａから７０ｋＤａの間；５ｋＤａから６０ｋＤａの間；５ｋＤａから５０ｋＤａの間；５ｋＤａから４０ｋＤａの間；５ｋＤａから３０ｋＤａの間；５ｋＤａから２０ｋＤａの間または５ｋＤａから１０ｋＤａの間である。上記の範囲のいずれかの中に入る任意の正の整数が本開示の実施形態として意図されている。一部のそのような実施形態では、糖コンジュゲートを、還元的アミノ化を使用して調製する。
【0191】
一部の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの分子量は、１００ｋＤａから１５，０００ｋＤａの間である。一部の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの分子量は、５００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間である。一部の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの分子量は、２，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間である。一部の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの分子量は、３，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間である。一部の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの分子量は、３，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間である。他の実施形態では、糖コンジュゲートの分子量は、５００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間である。他の実施形態では、糖コンジュゲートの分子量は、１，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間である。さらに他の実施形態では、糖コンジュゲートの分子量は、２，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間または３，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間である。
【0192】
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中に入る任意の正の整数が本開示の実施形態として意図されている。
【0193】
本発明の糖コンジュゲートを特徴付けるための別のやり方は、コンジュゲートするリシンの範囲（コンジュゲーションの程度）として特徴付けることができる、糖とコンジュゲートするようになる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）内のリシン残基の数によるものである。多糖との共有結合による連結に起因する担体タンパク質のリシン修飾の証拠は、当業者に公知の常套的な方法を使用したアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションの結果、回収されるリシン残基の数が、コンジュゲート材料を生成するために使用した担体タンパク質出発材料と比較して減少する。好ましい実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２から１５の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２から１３の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２から１０の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２から８の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、２から６の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、３から１０の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、３から６の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、５から１０の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、８から１２の間である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約２である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約３である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約４である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約５である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約６である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約８である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約１０である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約１２である。ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、約１５である。好ましい実施形態では、本発明の糖コンジュゲートのコンジュゲーションの程度は、４から７の間である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
【0194】
本発明の糖コンジュゲートを糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から３の間である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．８である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．９である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．０である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．２である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．５である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．８である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．０である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．５である。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約３．０である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から２．０の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から１．５の間である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８から１．２の間である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９から１．１の間である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
【0195】
本発明の糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質と共有結合によってコンジュゲートしていないが、それにもかかわらず糖コンジュゲート組成物中に含まれる、遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有結合によって会合している（すなわち、糖コンジュゲートと非共有結合によって結合している、それに吸着している、またはその中にもしくはそれに付随して捕捉された）ものであり得る。
【0196】
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、多糖の総量と比較して約５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満または１５％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、多糖の総量と比較して約２５％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、多糖の総量と比較して約２０％未満の遊離多糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、多糖の総量と比較して約１５％未満の遊離多糖を含む。
【0197】
糖コンジュゲートをそれらの分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることができる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対的な分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を重力送りカラムで使用して、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングする。媒体中の細孔から排除される大きな分子は低分子よりも迅速に溶出される。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を糖アッセイによって比色定量で試験する。Ｋｄを決定するために、カラムを較正して、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を表す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立する。特定の試料の特質に達した画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連付ける。
【0198】
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラムで０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラムで０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラムで０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラムで０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの５０％から８０％の間が、ＣＬ－４Ｂカラムで０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの６５％から８０％の間が、ＣＬ－４Ｂカラムで０．３以下のＫｄを有する。
【0199】
本発明の糖コンジュゲートを特徴付けるための別のパラメータは、糖鎖の担体タンパク質のリシンへの付着の頻度である。例えば、一部の実施形態では、担体タンパク質と多糖の間の共有結合による連結が多糖の糖反復単位４個ごとに少なくとも１つ生じる。別の実施形態では、担体タンパク質と多糖の間の共有結合による連結が多糖の糖反復単位１０個ごとに少なくとも１回生じる。別の実施形態では、担体タンパク質と多糖の間の共有結合による連結が多糖の糖反復単位１５個ごとに少なくとも１回生じる。さらなる実施形態では、担体タンパク質と多糖の間の共有結合による連結が多糖の糖反復単位２５個ごとに少なくとも１回生じる。
【0200】
高頻度の実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７であり、ＣＲＭ１９７と多糖の間のｅＴＥＣスペーサーを介した共有結合による連結は、多糖の糖反復単位４個、１０個、１５個または２５個ごとに少なくとも１回生じる。
【0201】
他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位５～１０個ごとに少なくとも１つ含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位２～７個ごとに少なくとも１つ含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位７～１２個ごとに少なくとも１つ含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位１０～１５個ごとに少なくとも１つ含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位４～８個ごとに少なくとも１つ含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位１０～２０個ごとに少なくとも１つ含む。他の実施形態では、コンジュゲートは、担体タンパク質と糖の間の共有結合による連結を糖反復単位２～２５個ごとに少なくとも１つ含む。高頻度の実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
【0202】
別の実施形態では、担体タンパク質と糖の間の連結が、多糖の糖反復単位２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個または２５個ごとに少なくとも１つ生じる。ある実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。上記の範囲のいずれかの中に入る任意の正の整数が本開示の実施形態として意図されている。
【0203】
２．１．３ 本発明の担体タンパク質
本発明のコンジュゲートの１つの構成成分は、肺炎球菌の糖をコンジュゲートする担体タンパク質である。「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」という用語は、本明細書では互換的に使用され得る。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順が適用可能なものであるべきである。
本発明のコンジュゲートの１つの構成成分は、肺炎球菌の糖をコンジュゲートする担体タンパク質である。「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」という用語は、本明細書では互換的に使用され得る。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順が適用可能なものであるべきである。
【0204】
好ましい実施形態では、コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）もしくはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（無毒性であるがジフテリア毒素と抗原性が同一のバリアント）、他のＤＴ変異体（例えば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５など（Ｕｃｈｉｄａら、（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３もしくはＣＲＭ１０７；ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅによってＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ編：Ｆｒａｎｋｅｌ、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２）に記載されている他の変異；Ｇｌｕ－１４８の欠失もしくはＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒへの変異および／もしくはＡｌａ１５８の欠失もしくはＧｌｙへの変異、ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および同第４，９５０，７４０号に開示されている他の変異；Ｌｙｓ ５１６、Ｌｙｓ ５２６、Ｐｈｅ ５３０および／もしくはＬｙｓ ５３４のうちの少なくとも１つもしくは複数の残基の変異、ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および同第６，４５５，６７３号に開示されている他の変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示されている断片、いくつかの様式で無毒化されたｐｌｙを含めた肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら、（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３）、例えば、ｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）もしくはｄＰＬＹ－ｆｏｒｍｏｌ、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤもしくはＰｈｔＥの配列はＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）を含むＰｈｔＸおよびＰｈｔタンパク質の融合物、例えば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、Ｐｈｔ Ａ～Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、通常は髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０ Ｂを参照されたい）、もしくはこれらの免疫学的に機能的な等価物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンフォカイン、増殖因子もしくはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、種々の病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら、（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４）、例えばＮ１９タンパク質など（Ｂａｒａｌｄｏｉら、（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡもしくはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合性タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特に、その無毒性変異体（例えば、グルタミン酸５５３の置換を有する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら、（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１））からなる群の中で選択される。他のタンパク質、例えば、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリン精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）も担体タンパク質として使用することができる。他の適切な担体タンパク質としては、不活化された細菌毒素、例えば、コレラトキソイド（例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１に記載されている）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来の外毒素Ａが挙げられる。
【0205】
好ましい実施形態では、コンジュゲートの担体タンパク質は、独立に、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（例えば、ＣＲＭ１９７など）、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特に、ＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７に記載されているもの）、無毒化ニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ、およびＰｓａＡからなる群から選択される。
【0206】
ある実施形態では、本発明のコンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、本発明のコンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）である。
【0207】
別の実施形態では、本発明のコンジュゲートの担体タンパク質は、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄである。例えば、ＥＰ０５９４６１０ Ｂを参照されたい）。
【0208】
好ましい実施形態では、本発明の肺炎球菌莢膜糖をＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートする。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素の無毒性形態であるが、ジフテリア毒素と免疫学的には区別できない。ＣＲＭ１９７は、毒素産生性コリネファージベータのニトロソグアニジン変異誘発によって創出された非毒素産生性ファージβ１９７tox－を感染させたジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される（Ｕｃｈｉｄａら、（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２３３：８～１１）。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素と分子量は同じであるが、構造遺伝子の一塩基変化（グアニンからアデニンへの変化）によって異なる。この一塩基変化により、成熟タンパク質におけるアミノ酸置換（グルタミン酸によるグリシンの置換）が引き起こされ、ジフテリア毒素の毒性特性が排除される。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖に対する安全かつ有効なＴ細胞依存性担体である。ＣＲＭ１９７およびその産生に関するさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号において見いだすことができる。好ましい実施形態では、本発明の肺炎球菌莢膜糖を全て個別にＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートする。
【0209】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌莢膜糖をＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１参照）。ある実施形態では、本発明の肺炎球菌莢膜糖を、遺伝子組み換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現によって得たＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１参照）。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を全てＣＲＭ１９７とコンジュゲートする。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を全てＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートする。
【0210】
したがって、高頻度の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、担体タンパク質としてＣＲＭ１９７を含み、肺炎球菌莢膜多糖がＣＲＭ１９７と共有結合によって連結している。
【0211】
２．１．４ 本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）
ある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの異なる肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖血清型の数は、１３種の血清型（または「ｖ」、価）から２０種の異なる血清型まで（１３ｖから２０ｖまで）にわたり得る。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１３価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１４価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１５価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１６価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１７価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１８価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１９価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、２０価肺炎球菌ワクチンである。
ある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの異なる肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜糖血清型の数は、１３種の血清型（または「ｖ」、価）から２０種の異なる血清型まで（１３ｖから２０ｖまで）にわたり得る。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１３価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１４価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１５価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１６価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１７価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１８価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１９価肺炎球菌ワクチンである。一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、２０価肺炎球菌ワクチンである。
【0212】
莢膜糖を担体タンパク質とコンジュゲートして、本明細書において上記の糖コンジュゲートを形成する。
【0213】
上記の肺炎球菌コンジュゲートワクチンの全ての糖コンジュゲートが個別に担体タンパク質とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0214】
ある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートは全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである。
【0215】
一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の１３種の糖コンジュゲートを含む。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0216】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１３価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１３種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0217】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１４価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１４種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0218】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１４価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１４種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0219】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１５価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１５種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0220】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１６価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１６種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0221】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１７価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１７種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１１Ａ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0222】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１８価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１８種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0223】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、１９価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１９種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲート血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0224】
好ましい実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記２０種のコンジュゲートは、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。前記糖コンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものであることが好ましい。
【0225】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）（一部の国ではＰＲＥＶＥＮＡＲ１３（登録商標））である。ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）は、１３価ＰＣＶであり、１３種のコンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。糖コンジュゲートを還元的アミノ化によって調製する。
【0226】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、Ｍｅｒｃｋによって開発されたＶ１１４である。Ｖ１１４は、１５価ＰＣＶであり、１５種のコンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、９Ｖ、１４、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートを水性溶媒中で還元的アミノ化によって調製し、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートをＤＭＳＯ中で還元的アミノ化によって調製する。
【0227】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、２０ｖＰｎＣである。２０ｖＰｎＣは、２０価ＰＣＶであり、２０種のコンジュゲートは、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる。
【0228】
２．２．髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する抗原を含む免疫原性組成物
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死亡を引き起こす可能性がある、グラム陰性の、莢膜を有する細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、化学的におよび抗原性に関して示差的な多糖莢膜に基づいて少なくとも１２種の血清群（血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ－１３５（現在は主にＷと称される）、Ｘ、ＹおよびＺを含む）に分類することができる。血清群のうちの５種（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５）を有する株が大多数の疾患の原因となる。
髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、敗血症、髄膜炎、および死亡を引き起こす可能性がある、グラム陰性の、莢膜を有する細菌である。髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）は、化学的におよび抗原性に関して示差的な多糖莢膜に基づいて少なくとも１２種の血清群（血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ－１３５（現在は主にＷと称される）、Ｘ、ＹおよびＺを含む）に分類することができる。血清群のうちの５種（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５）を有する株が大多数の疾患の原因となる。
【0229】
髄膜炎菌性髄膜炎は、抗生物質が利用可能であるにもかかわらず、小児および若年成人を数時間のうちに死亡させる恐れがある破壊的な疾患である。髄膜炎菌血清群Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ、およびＷ１３５ならびに／またはＸに対する改善された免疫原性組成物が必要とされている。現在、広範囲のＭｎＢおよび髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷならびに／またはＸ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物は未だ市販されていない。したがって、多様なＭｎＢおよび髄膜炎菌血清群Ａ、Ｃ、Ｙ、およびＷならびに／またはＸ分離株に対して有効な交差防御ワクチンまたは組成物が必要とされている。
【0230】
好ましい実施形態では、第１の免疫原性組成物は、配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、脂質付加されている。一部の実施形態では、ポリペプチドは、脂質付加されていない。一部の実施形態では、ポリペプチドは、免疫原性である。一部の実施形態では、ポリペプチドは、１位のシステインが欠失した、配列番号３に記載の配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、質量分析によって測定して、対応する脂質付加されていないポリペプチドと比較して約＋７０Ｄａの質量シフトを示さない。一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む。
【0231】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、ａ）配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加されたポリペプチド、およびｂ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加されたポリペプチドを含む。一部の実施形態では、組成物は、ポリソルベート－８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウム、またはこれらの組合せのうちのいずれか１つをさらに含む。
【0232】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、ａ）第１の配列番号３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、（ｂ）第２の配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチド、（ｃ）破傷風トキソイドとカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖、（ｄ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）破傷風トキソイドとカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたＡＤＨリンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした血清群Ｃ莢膜糖と、（ｅ）破傷風トキソイドと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ莢膜糖、および（ｆ）破傷風トキソイドと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖を含む。
【0233】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、ａ）（ｉ）配列番号３に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加されたポリペプチド、および（ｉｉ）配列番号４に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加されたポリペプチドおよびアルミニウムを含む液体組成物と、ｂ）ｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）とカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡＡＨ－ＴＴコンジュゲート）、ｉｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）とカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたＡＤＨリンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣＡＨ－ＴＴコンジュゲート）、ｉｉｉ）髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）破傷風トキソイド（ＴＴ）と、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ－ＴＴコンジュゲート）、およびｉｖ）破傷風トキソイド（ＴＴ）と、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ－ＴＴコンジュゲート）を含む凍結乾燥組成物とを含み、凍結乾燥組成物が液体組成物を用いて復元される。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムを含む。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、ポリソルベート－８０をさらに含む。一部の実施形態では、凍結乾燥組成物は、アルミニウムを含有しない。一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドはアルミニウムに結合している。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、塩化ナトリウム、ショ糖、ヒスチジン、ポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウムのいずれか１つをさらに含む。一部の実施形態では、免疫原性組成物は、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、塩化ナトリウム、ショ糖、ヒスチジン、ポリソルベート８０、およびリン酸アルミニウムをさらに含む。
【0234】
２．３．クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に由来する抗原を含む免疫原性組成物
クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、現在はクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、ヒトにおける胃腸疾患に関連するグラム陽性、嫌気性細菌である。クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の定着は、通常、結腸において天然の腸内細菌叢が抗生物質を用いた治療によって減少した場合に生じる。感染により、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の主な病原性因子である、グルコシル化毒素である毒素Ａおよび毒素Ｂ（それぞれ、およそ３０８ｋＤａおよび２７０ｋＤａ）の分泌を通じて、抗生物質に関連する下痢および時には偽膜性大腸炎が導かれる恐れがある。
クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、現在はクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｏｉｄｅｓ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）は、ヒトにおける胃腸疾患に関連するグラム陽性、嫌気性細菌である。クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の定着は、通常、結腸において天然の腸内細菌叢が抗生物質を用いた治療によって減少した場合に生じる。感染により、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の主な病原性因子である、グルコシル化毒素である毒素Ａおよび毒素Ｂ（それぞれ、およそ３０８ｋＤａおよび２７０ｋＤａ）の分泌を通じて、抗生物質に関連する下痢および時には偽膜性大腸炎が導かれる恐れがある。
【0235】
過去１０年で、病院、養護施設、および他の長期介護施設におけるクロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）大流行の数および重症度が劇的に増大した。この増大の重要な因子として、強毒性の病原株の出現、抗生物質使用の増加、検出方法の改善、および健康管理施設における浮遊胞子への曝露の増加が挙げられる。
【0236】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、配列番号５に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、ここで、ポリペプチドのリシン残基の側鎖は、ベータアラニン部分と架橋結合している。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドのアスパラギン酸残基の側鎖と、またはポリペプチドのグルタミン酸残基の側鎖と架橋結合したグリシン部分をさらに含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドの第２のリシン残基とポリペプチドのアスパラギン酸残基の側鎖の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドの第２のリシン残基とポリペプチドのグルタミン酸残基の側鎖の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、ポリペプチドのＥＣ５０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって測定して、少なくとも約１００μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ポリペプチドのＥＣ５０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって測定して、少なくとも約１０００μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、配列番号６に記載のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチドをさらに含み、ここで、第２のポリペプチドのリシン残基の側鎖は、ベータアラニン部分と架橋結合している。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のポリペプチドの第２のリシン残基の側鎖とアスパラギン酸残基の側鎖の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のポリペプチドの第２のリシン残基の側鎖とアスパラギン酸残基の側鎖の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のポリペプチドの第２のリシン残基の側鎖とグルタミン酸残基の側鎖の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のポリペプチドの第２のリシン残基の側鎖とグルタミン酸残基の側鎖の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のポリペプチドのアスパラギン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のポリペプチドのアスパラギン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、第１のポリペプチドのグルタミン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合をさらに含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、第２のポリペプチドのグルタミン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合を含む。一部の実施形態では、各ポリペプチドのＥＣ５０は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性アッセイによって測定して、少なくとも約１０００μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、アジュバントをさらに含む。
【0237】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、（ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドのリシン残基の側鎖が、ベータアラニン部分と架橋結合しており、第１のポリペプチドのアスパラギン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合、および第１のポリペプチドのグルタミン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合をさらに含む、第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、第２のポリペプチドのリシン残基の側鎖が、ベータアラニン部分と架橋結合しており、第２のポリペプチドのアスパラギン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合、および第２のポリペプチドのグルタミン酸残基の側鎖とグリシン部分の間の架橋結合をさらに含む、第２のポリペプチドとを含む。一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、（ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、第１のポリペプチドの第１のリシン残基の側鎖が、ベータアラニン部分と架橋結合しており、第１のポリペプチドの第２のリシン残基が、第１のポリペプチドのアスパラギン酸残基とまたはグルタミン酸残基と架橋結合している、第１のポリペプチドと、（ｂ）配列番号６に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、第２のポリペプチドのリシン残基の側鎖が、ベータアラニン部分と架橋結合しており、第２のポリペプチドの第２のリシン残基が、第２のポリペプチドのアスパラギン酸残基とまたはグルタミン酸残基と架橋結合している、第２のポリペプチドとを含む。
【0238】
一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、デヒドロアラニン部分をさらに含む。一部の実施形態では、組成物は、凍結乾燥されたものである。一部の実施形態では、組成物は、水酸化アルミニウムをさらに含む。一部の実施形態では、組成物は、凍結乾燥されたものである。一部の実施形態では、組成物は、トレハロースをさらに含む。一部の実施形態では、組成物は、ポリソルベート－８０をさらに含む。
【0239】
２．４．ＲＳＶに由来する抗原を含む免疫原性組成物
呼吸器合胞体ウイルス、またはＲＳＶは、肺および呼吸路に感染する呼吸器ウイルスである。ＲＳＶは、世界的に乳幼児の重篤なウイルス性下気道疾患の主な原因であり、また、高齢者の呼吸器疾患の重要な原因である。
呼吸器合胞体ウイルス、またはＲＳＶは、肺および呼吸路に感染する呼吸器ウイルスである。ＲＳＶは、世界的に乳幼児の重篤なウイルス性下気道疾患の主な原因であり、また、高齢者の呼吸器疾患の重要な原因である。
【0240】
ＲＳＶは、パラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）科のメンバーである。そのゲノムは、９種の構造タンパク質（３種の糖タンパク質および６種の内部タンパク質）ならびに２種の非構造タンパク質を含む１１種のタンパク質をコードする、一本鎖、マイナス鎖ＲＮＡ分子からなる。構造タンパク質には、３種の膜貫通表面糖タンパク質：付着タンパク質Ｇ、融合タンパク質Ｆ、および小さな疎水性ＳＨタンパク質が含まれる。ＲＳＶには２つの亜型、ＡおよびＢが存在する。これらは主にＧ糖タンパク質が異なり、一方、Ｆ糖タンパク質の配列は２つの亜型の間でより保存されている。
【0241】
成熟Ｆ糖タンパク質は、３つの一般的なドメイン：外部ドメイン（ＥＤ）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）、および細胞質尾部（ＣＴ）を有する。ＣＴは、単一のパルミトイル化システイン残基を含有する。
【0242】
ヒトＲＳＶのＦ糖タンパク質は、最初に、Ｎ末端にシグナルペプチド配列（アミノ酸１～２５）を含有する単一の５７４アミノ酸のポリペプチド前駆体（「Ｆ０」または「Ｆ０前駆体」と称される）としてｍＲＮＡから翻訳される。翻訳されると、シグナルペプチドが小胞体内のシグナルペプチダーゼによって除去される。Ｆ０前駆体の残りの部分（すなわち、残基２６～５７４）は、２つの多塩基部位（アミノ酸１０９／１１０および１３６／１３７）において細胞内プロテアーゼ（特に、フューリン）によってさらに切断され得、それにより、ｐｅｐ２７と称される、間に存在する２７アミノ酸の配列（アミノ酸１１０～１３６）が除去され、Ｆ１（Ｃ末端部分；アミノ酸１３７～５７４）およびＦ２（Ｎ末端部分；アミノ酸２６～１０９）と称される２つの連結した断片が生成される。Ｆ１は、Ｎ末端の疎水性融合ペプチド、および２つの７アミノ酸繰り返し領域（ＨＲＡおよびＨＲＢ）を含有する。ＨＲＡは融合ペプチドの付近にあり、ＨＲＢはＴＭドメインの付近にある。Ｆ１断片とＦ２断片は２つのジスルフィド結合によって連結している。シグナルペプチド配列を有さない切断されていないＦ０タンパク質、またはＦ１－Ｆ２ヘテロ二量体のいずれかがＲＳＶ Ｆプロトマーを形成し得る。そのようなプロトマー３つがアセンブルして、３つのプロトマーのホモ三量体である最終的なＲＳＶ Ｆタンパク質複合体を形成する。亜型ＡおよびＢのＦタンパク質は、アミノ酸配列が約９０パーセント同一である。Ｆ０前駆体ポリペプチドの配列の例は、Ａ亜型については配列番号７に提示され（Ａ２株；ＧｅｎＢａｎｋ ＧＩ：１３８２５１；Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ０３４２０）、Ｂ亜型については配列番号８に提示される（１８５３７株；ＧｅｎＢａｎｋ ＧＩ：１３８２５０；Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ１３８４３）。配列番号７および配列番号８はどちらも５７４アミノ酸配列である。Ｆタンパク質は、ＲＳＶサブユニットワクチンのために探究されている主な抗原のうちの１つである。ＲＳＶ Ｆタンパク質三量体は、ビリオン膜と宿主細胞膜の融合を媒介し、また、合胞体の形成を促進する。ＲＳＶが細胞に侵入する間に、Ｆタンパク質が融合前状態（本明細書では、「Ｆ前」と称され得る）から、中間の広がった構造を経て、融合後状態（「Ｆ後」）に再構成される。ウイルスの侵入を防ぐためには、Ｆ特異的中和抗体は、おそらく、ウイルスエンベロープが細胞膜と融合する前に、ビリオン上のＦの融合前コンフォメーションまたは潜在的に広がった中間体に結合しなければならない。したがって、融合前形態のＦタンパク質が、所望のワクチン抗原として好ましいコンフォメーションであると考えられる。
【0243】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，９５０，０５８号、および米国特許第１０，８２１，１７１号に記載されている野生型ＲＳＶ Ｆタンパク質の変異体を含む。
【0244】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、野生型ＲＳＶ Ｆタンパク質の変異体を含み、ここで、変異体は、Ｆ１ポリペプチドおよびＦ２ポリペプチドを含み、変異体は、野生型ＲＳＶ Ｆタンパク質アミノ酸配列と比べて少なくとも１つの導入されたアミノ酸変異を含み、導入されたアミノ酸変異は、（１）５５Ｃと１８８Ｃ；（２）１０３Ｃと１４８Ｃ；と（３）１４２Ｃと３７１Ｃ；と（４）１５５Ｃと２９０Ｃからなる群から選択されるシステイン変異の対であり、アミノ酸位は、配列番号７に従って番号を付したものである。この実施形態の一態様では、変異体は、少なくとも１つの空洞充填変異（ｃａｖｉｔｙ ｆｉｌｌｉｎｇ ｍｕｔａｔｉｏｎ）、および少なくとも１つの静電変異をさらに含み、空洞充填変異は、
（１）６２位、１５５位、１９０位、または２９０位のアミノ酸のＩ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、またはＭによる置換、
（２）５４位、５８位、１８９位、２１９位、または３９７位のアミノ酸のＩ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、またはＭによる置換、
（３）１５１位のアミノ酸のＡまたはＨによる置換、
（４）１４７位または２９８位のアミノ酸のＩ、Ｌ、Ｈ、またはＭによる置換、および
（５）１６４位、１８７位、１９２位、２０７位、２２０位、２９６位、３００位、または４９５位のアミノ酸のＩ、Ｙ、またはＨによる置換
からなる群から選択され、静電変異は、
（１）８２位、９２位、または４８７位のアミノ酸のＤ、Ｆ、Ｑ、Ｔ、Ｓ、Ｌ、またはＨによる置換；
（２）３１５位、３９４位、または３９９位のアミノ酸のＦ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｑ、またはＴによる置換；
（３）３９２位、４８６位、または４８９位のアミノ酸のＨ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、またはＰによる置換；および
（４）１０６位または３３９位のアミノ酸のＦ、Ｑ、Ｎ、またはＷによる置換
からなる群から選択される。
（１）６２位、１５５位、１９０位、または２９０位のアミノ酸のＩ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、またはＭによる置換、
（２）５４位、５８位、１８９位、２１９位、または３９７位のアミノ酸のＩ、Ｙ、Ｌ、Ｈ、またはＭによる置換、
（３）１５１位のアミノ酸のＡまたはＨによる置換、
（４）１４７位または２９８位のアミノ酸のＩ、Ｌ、Ｈ、またはＭによる置換、および
（５）１６４位、１８７位、１９２位、２０７位、２２０位、２９６位、３００位、または４９５位のアミノ酸のＩ、Ｙ、またはＨによる置換
からなる群から選択され、静電変異は、
（１）８２位、９２位、または４８７位のアミノ酸のＤ、Ｆ、Ｑ、Ｔ、Ｓ、Ｌ、またはＨによる置換；
（２）３１５位、３９４位、または３９９位のアミノ酸のＦ、Ｍ、Ｒ、Ｓ、Ｌ、Ｉ、Ｑ、またはＴによる置換；
（３）３９２位、４８６位、または４８９位のアミノ酸のＨ、Ｓ、Ｎ、Ｔ、またはＰによる置換；および
（４）１０６位または３３９位のアミノ酸のＦ、Ｑ、Ｎ、またはＷによる置換
からなる群から選択される。
【0245】
この実施形態の別の態様では、Ｆ１ポリペプチドのＣ末端は三量体形成ドメインと連結している。この実施形態の別の態様では、Ｆ２ポリペプチドは、ＲＳＶ Ｆアミノ酸２６～１０９位を含み、Ｆ１ポリペプチドは、ＲＳＶ Ｆアミノ酸１３７～５１３位を含む。この実施形態の別の態様では、野生型ＲＳＶは、亜型Ａ、亜型Ｂ、Ａ２株、オンタリオ株、またはブエノスアイレス株である。この実施形態の別の態様では、システイン変異の対は、（１）５５Ｃと１８８Ｃ；および（２）１０３Ｃと１４８Ｃからなる群から選択される。この実施形態の別の態様では、空洞充填変異は、
（１）１９０位のアミノ酸のＩ、Ｙ、またはＭによる置換、
（２）５４位のアミノ酸のＩまたはＨによる置換、および
（３）２９６位のアミノ酸のＩによる置換
からなる群から選択される。
（１）１９０位のアミノ酸のＩ、Ｙ、またはＭによる置換、
（２）５４位のアミノ酸のＩまたはＨによる置換、および
（３）２９６位のアミノ酸のＩによる置換
からなる群から選択される。
【0246】
この実施形態の別の態様では、静電変異は、
（１）４８７位のアミノ酸のＤ、Ｑ、またはＨによる置換、
（２）４８９位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＮによる置換、および
（３）４８６位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＴによる置換
からなる群から選択される。
（１）４８７位のアミノ酸のＤ、Ｑ、またはＨによる置換、
（２）４８９位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＮによる置換、および
（３）４８６位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＴによる置換
からなる群から選択される。
【0247】
この実施形態の別の態様では、
（ｉ）システイン変異の対は、（１）５５Ｃと１８８Ｃおよび（２）１０３Ｃと１４８Ｃからなる群から選択され、
（ｉｉ）空洞充填変異は、
（１）１９０位のアミノ酸のＩ、Ｙ、またはＭによる置換、
（２）５４位のアミノ酸のＩまたはＨによる置換、および
（３）２９６位のアミノ酸のＩによる置換
からなる群から選択され、
（ｉｉｉ）静電変異は、
（１）４８７位のアミノ酸のＤ、Ｑ、またはＨによる置換、
（２）４８６位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＴによる置換、および
（３）４８９位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＮによる置換
からなる群から選択される。
（ｉ）システイン変異の対は、（１）５５Ｃと１８８Ｃおよび（２）１０３Ｃと１４８Ｃからなる群から選択され、
（ｉｉ）空洞充填変異は、
（１）１９０位のアミノ酸のＩ、Ｙ、またはＭによる置換、
（２）５４位のアミノ酸のＩまたはＨによる置換、および
（３）２９６位のアミノ酸のＩによる置換
からなる群から選択され、
（ｉｉｉ）静電変異は、
（１）４８７位のアミノ酸のＤ、Ｑ、またはＨによる置換、
（２）４８６位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＴによる置換、および
（３）４８９位のアミノ酸のＨ、Ｓ、またはＮによる置換
からなる群から選択される。
【0248】
この実施形態の別の態様では、変異体は、
（１）１０３Ｃ、１４８Ｃ、１９０Ｉ、および４８６Ｓの組合せ、
（２）５４Ｈ、５５Ｃ、１８８Ｃ、および４８６Ｓの組合せ、
（３）５４Ｈ、１０３Ｃ、１４８Ｃ、１９０Ｉ、２９６Ｉ、および４８６Ｓの組合せ、
（４）５４Ｈ、５５Ｃ、１４２Ｃ、１８８Ｃ、２９６Ｉ、および３７１Ｃの組合せ、
（５）５５Ｃ、１８８Ｃ、および４８６Ｓの組合せ、
（６）５４Ｈ、５５Ｃ、１８８Ｃ、および１９０Ｉの組合せ、
（７）５５Ｃ、１８８Ｃ、１９０Ｉ、および４８６Ｓの組合せ、ならびに
（８）５４Ｈ、５５Ｃ、１８８Ｃ、１９０Ｉ、および４８６Ｓの組合せ
からなる群から選択される導入されたアミノ酸変異の組合せを含む。
（１）１０３Ｃ、１４８Ｃ、１９０Ｉ、および４８６Ｓの組合せ、
（２）５４Ｈ、５５Ｃ、１８８Ｃ、および４８６Ｓの組合せ、
（３）５４Ｈ、１０３Ｃ、１４８Ｃ、１９０Ｉ、２９６Ｉ、および４８６Ｓの組合せ、
（４）５４Ｈ、５５Ｃ、１４２Ｃ、１８８Ｃ、２９６Ｉ、および３７１Ｃの組合せ、
（５）５５Ｃ、１８８Ｃ、および４８６Ｓの組合せ、
（６）５４Ｈ、５５Ｃ、１８８Ｃ、および１９０Ｉの組合せ、
（７）５５Ｃ、１８８Ｃ、１９０Ｉ、および４８６Ｓの組合せ、ならびに
（８）５４Ｈ、５５Ｃ、１８８Ｃ、１９０Ｉ、および４８６Ｓの組合せ
からなる群から選択される導入されたアミノ酸変異の組合せを含む。
【0249】
この実施形態の別の態様では、変異体は、１０３位のシステイン（Ｃ）（１０３Ｃ）および１４８位のシステイン（Ｃ）（１４８Ｃ）、１９０位のイソロイシン（Ｉ）（１９０Ｉ）、ならびに４８６位のセリン（Ｓ）（４８６Ｓ）を含む。
【0250】
別の態様では、変異体は、５４位のヒスチジン（Ｈ）、１０３位および１４８位のシステイン（Ｃ）、１９０位および２９６位のイソロイシン（Ｉ）、ならびに４８６位のセリン（Ｓ）を含む。
【0251】
別の態様では、変異体は、５４位のヒスチジン（Ｈ）、５５位および１８８位のシステイン（Ｃ）、ならびに４８６位のセリン（Ｓ）を含む。
【0252】
別の態様では、変異体のＦ１ポリペプチドのＣ末端は三量体形成ドメインと連結している。
【0253】
別の態様では、三量体形成ドメインはファージＴ４フォールドン（ｆｏｌｄｏｎ）ドメインである。
【0254】
別の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、ＲＳＶ亜型ＡのＦタンパク質由来の変異体のＦ２ポリペプチドおよびＦ１ポリペプチドが、それぞれ配列番号９のアミノ酸配列および配列番号１０のアミノ酸配列を含み、ＲＳＶ亜型ＢのＦタンパク質由来の第２の変異体のＦ２ポリペプチドおよびＦ１ポリペプチドが、それぞれ配列番号１１のアミノ酸配列および配列番号１２のアミノ酸配列を含む、医薬組成物を含む。一態様では、変異体のＦ１ポリペプチドのＣ末端は三量体形成ドメインと連結している。別の態様では、三量体形成ドメインはファージＴ４フォールドンドメインである。
【0255】
配列番号７．ネイティブなＲＳＶ Ａ２の全長Ｆ０のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ ＧＩ：１３８２５１；Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ０３４２０）
＜２１２＞型：ＰＲＴ
＜２１３＞生物体：ヒト呼吸器合胞体ウイルス
＜２２３＞他の情報：ヒトＲＳＶ亜型Ａ２のＦタンパク質
ＭＥＬＬＩＬＫＡＮＡＩＴＴＩＬＴＡＶＴＦＣＦＡＳＧＱＮＩＴＥＥＦＹＱＳＴＣＳＡＶＳＫＧＹＬＳＡＬＲＴＧＷＹＴＳＶＩＴＩＥＬＳＮＩＫＥＮＫＣＮＧＴＤＡＫＶＫＬＩＫＱＥＬＤＫＹＫＮＡＶＴＥＬＱＬＬＭＱＳＴＰＰＴＮＮＲＡＲＲＥＬＰＲＦＭＮＹＴＬＮＮＡＫＫＴＮＶＴＬＳＫＫＲＫＲＲＦＬＧＦＬＬＧＶＧＳＡＩＡＳＧＶＡＶＳＫＶＬＨＬＥＧＥＶＮＫＩＫＳＡＬＬＳＴＮＫＡＶＶＳＬＳＮＧＶＳＶＬＴＳＫＶＬＤＬＫＮＹＩＤＫＱＬＬＰＩＶＮＫＱＳＣＳＩＳＮＩＥＴＶＩＥＦＱＱＫＮＮＲＬＬＥＩＴＲＥＦＳＶＮＡＧＶＴＴＰＶＳＴＹＭＬＴＮＳＥＬＬＳＬＩＮＤＭＰＩＴＮＤＱＫＫＬＭＳＮＮＶＱＩＶＲＱＱＳＹＳＩＭＳＩＩＫＥＥＶＬＡＹＶＶＱＬＰＬＹＧＶＩＤＴＰＣＷＫＬＨＴＳＰＬＣＴＴＮＴＫＥＧＳＮＩＣＬＴＲＴＤＲＧＷＹＣＤＮＡＧＳＶＳＦＦＰＱＡＥＴＣＫＶＱＳＮＲＶＦＣＤＴＭＮＳＬＴＬＰＳＥＩＮＬＣＮＶＤＩＦＮＰＫＹＤＣＫＩＭＴＳＫＴＤＶＳＳＳＶＩＴＳＬＧＡＩＶＳＣＹＧＫＴＫＣＴＡＳＮＫＮＲＧＩＩＫＴＦＳＮＧＣＤＹＶＳＮＫＧＭＤＴＶＳＶＧＮＴＬＹＹＶＮＫＱＥＧＫＳＬＹＶＫＧＥＰＩＩＮＦＹＤＰＬＶＦＰＳＤＥＦＤＡＳＩＳＱＶＮＥＫＩＮＱＳＬＡＦＩＲＫＳＤＥＬＬＨＮＶＮＡＧＫＳＴＴＮＩＭＩＴＴＩＩＩＶＩＩＶＩＬＬＳＬＩＡＶＧＬＬＬＹＣＫＡＲＳＴＰＶＴＬＳＫＤＱＬＳＧＩＮＮＩＡＦＳＮ
＜２１２＞型：ＰＲＴ
＜２１３＞生物体：ヒト呼吸器合胞体ウイルス
＜２２３＞他の情報：ヒトＲＳＶ亜型Ａ２のＦタンパク質
ＭＥＬＬＩＬＫＡＮＡＩＴＴＩＬＴＡＶＴＦＣＦＡＳＧＱＮＩＴＥＥＦＹＱＳＴＣＳＡＶＳＫＧＹＬＳＡＬＲＴＧＷＹＴＳＶＩＴＩＥＬＳＮＩＫＥＮＫＣＮＧＴＤＡＫＶＫＬＩＫＱＥＬＤＫＹＫＮＡＶＴＥＬＱＬＬＭＱＳＴＰＰＴＮＮＲＡＲＲＥＬＰＲＦＭＮＹＴＬＮＮＡＫＫＴＮＶＴＬＳＫＫＲＫＲＲＦＬＧＦＬＬＧＶＧＳＡＩＡＳＧＶＡＶＳＫＶＬＨＬＥＧＥＶＮＫＩＫＳＡＬＬＳＴＮＫＡＶＶＳＬＳＮＧＶＳＶＬＴＳＫＶＬＤＬＫＮＹＩＤＫＱＬＬＰＩＶＮＫＱＳＣＳＩＳＮＩＥＴＶＩＥＦＱＱＫＮＮＲＬＬＥＩＴＲＥＦＳＶＮＡＧＶＴＴＰＶＳＴＹＭＬＴＮＳＥＬＬＳＬＩＮＤＭＰＩＴＮＤＱＫＫＬＭＳＮＮＶＱＩＶＲＱＱＳＹＳＩＭＳＩＩＫＥＥＶＬＡＹＶＶＱＬＰＬＹＧＶＩＤＴＰＣＷＫＬＨＴＳＰＬＣＴＴＮＴＫＥＧＳＮＩＣＬＴＲＴＤＲＧＷＹＣＤＮＡＧＳＶＳＦＦＰＱＡＥＴＣＫＶＱＳＮＲＶＦＣＤＴＭＮＳＬＴＬＰＳＥＩＮＬＣＮＶＤＩＦＮＰＫＹＤＣＫＩＭＴＳＫＴＤＶＳＳＳＶＩＴＳＬＧＡＩＶＳＣＹＧＫＴＫＣＴＡＳＮＫＮＲＧＩＩＫＴＦＳＮＧＣＤＹＶＳＮＫＧＭＤＴＶＳＶＧＮＴＬＹＹＶＮＫＱＥＧＫＳＬＹＶＫＧＥＰＩＩＮＦＹＤＰＬＶＦＰＳＤＥＦＤＡＳＩＳＱＶＮＥＫＩＮＱＳＬＡＦＩＲＫＳＤＥＬＬＨＮＶＮＡＧＫＳＴＴＮＩＭＩＴＴＩＩＩＶＩＩＶＩＬＬＳＬＩＡＶＧＬＬＬＹＣＫＡＲＳＴＰＶＴＬＳＫＤＱＬＳＧＩＮＮＩＡＦＳＮ
【0256】
配列番号８．ネイティブなＲＳＶ Ｂの全長Ｆ０のアミノ酸配列（１８５３７株；ＧｅｎＢａｎｋ ＧＩ：１３８２５０；Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ Ｐ１３８４３）
＜２１２＞型：ＰＲＴ
＜２１３＞生物体：ヒト呼吸器合胞体ウイルス
＜２２３＞他の情報：ヒトＲＳＶ亜型ＢのＦタンパク質
ＭＥＬＬＩＨＲＳＳＡＩＦＬＴＬＡＶＮＡＬＹＬＴＳＳＱＮＩＴＥＥＦＹＱＳＴＣＳＡＶＳＲＧＹＦＳＡＬＲＴＧＷＹＴＳＶＩＴＩＥＬＳＮＩＫＥＴＫＣＮＧＴＤＴＫＶＫＬＩＫＱＥＬＤＫＹＫＮＡＶＴＥＬＱＬＬＭＱＮＴＰＡＡＮＮＲＡＲＲＥＡＰＱＹＭＮＹＴＩＮＴＴＫＮＬＮＶＳＩＳＫＫＲＫＲＲＦＬＧＦＬＬＧＶＧＳＡＩＡＳＧＩＡＶＳＫＶＬＨＬＥＧＥＶＮＫＩＫＮＡＬＬＳＴＮＫＡＶＶＳＬＳＮＧＶＳＶＬＴＳＫＶＬＤＬＫＮＹＩＮＮＲＬＬＰＩＶＮＱＱＳＣＲＩＳＮＩＥＴＶＩＥＦＱＱＭＮＳＲＬＬＥＩＴＲＥＦＳＶＮＡＧＶＴＴＰＬＳＴＹＭＬＴＮＳＥＬＬＳＬＩＮＤＭＰＩＴＮＤＱＫＫＬＭＳＳＮＶＱＩＶＲＱＱＳＹＳＩＭＳＩＩＫＥＥＶＬＡＹＶＶＱＬＰＩＹＧＶＩＤＴＰＣＷＫＬＨＴＳＰＬＣＴＴＮＩＫＥＧＳＮＩＣＬＴＲＴＤＲＧＷＹＣＤＮＡＧＳＶＳＦＦＰＱＡＤＴＣＫＶＱＳＮＲＶＦＣＤＴＭＮＳＬＴＬＰＳＥＶＳＬＣＮＴＤＩＦＮＳＫＹＤＣＫＩＭＴＳＫＴＤＩＳＳＳＶＩＴＳＬＧＡＩＶＳＣＹＧＫＴＫＣＴＡＳＮＫＮＲＧＩＩＫＴＦＳＮＧＣＤＹＶＳＮＫＧＶＤＴＶＳＶＧＮＴＬＹＹＶＮＫＬＥＧＫＮＬＹＶＫＧＥＰＩＩＮＹＹＤＰＬＶＦＰＳＤＥＦＤＡＳＩＳＱＶＮＥＫＩＮＱＳＬＡＦＩＲＲＳＤＥＬＬＨＮＶＮＴＧＫＳＴＴＮＩＭＩＴＴＩＩＩＶＩＩＶＶＬＬＳＬＩＡＩＧＬＬＬＹＣＫＡＫＮＴＰＶＴＬＳＫＤＱＬＳＧＩＮＮＩＡＦＳＫ
＜２１２＞型：ＰＲＴ
＜２１３＞生物体：ヒト呼吸器合胞体ウイルス
＜２２３＞他の情報：ヒトＲＳＶ亜型ＢのＦタンパク質
ＭＥＬＬＩＨＲＳＳＡＩＦＬＴＬＡＶＮＡＬＹＬＴＳＳＱＮＩＴＥＥＦＹＱＳＴＣＳＡＶＳＲＧＹＦＳＡＬＲＴＧＷＹＴＳＶＩＴＩＥＬＳＮＩＫＥＴＫＣＮＧＴＤＴＫＶＫＬＩＫＱＥＬＤＫＹＫＮＡＶＴＥＬＱＬＬＭＱＮＴＰＡＡＮＮＲＡＲＲＥＡＰＱＹＭＮＹＴＩＮＴＴＫＮＬＮＶＳＩＳＫＫＲＫＲＲＦＬＧＦＬＬＧＶＧＳＡＩＡＳＧＩＡＶＳＫＶＬＨＬＥＧＥＶＮＫＩＫＮＡＬＬＳＴＮＫＡＶＶＳＬＳＮＧＶＳＶＬＴＳＫＶＬＤＬＫＮＹＩＮＮＲＬＬＰＩＶＮＱＱＳＣＲＩＳＮＩＥＴＶＩＥＦＱＱＭＮＳＲＬＬＥＩＴＲＥＦＳＶＮＡＧＶＴＴＰＬＳＴＹＭＬＴＮＳＥＬＬＳＬＩＮＤＭＰＩＴＮＤＱＫＫＬＭＳＳＮＶＱＩＶＲＱＱＳＹＳＩＭＳＩＩＫＥＥＶＬＡＹＶＶＱＬＰＩＹＧＶＩＤＴＰＣＷＫＬＨＴＳＰＬＣＴＴＮＩＫＥＧＳＮＩＣＬＴＲＴＤＲＧＷＹＣＤＮＡＧＳＶＳＦＦＰＱＡＤＴＣＫＶＱＳＮＲＶＦＣＤＴＭＮＳＬＴＬＰＳＥＶＳＬＣＮＴＤＩＦＮＳＫＹＤＣＫＩＭＴＳＫＴＤＩＳＳＳＶＩＴＳＬＧＡＩＶＳＣＹＧＫＴＫＣＴＡＳＮＫＮＲＧＩＩＫＴＦＳＮＧＣＤＹＶＳＮＫＧＶＤＴＶＳＶＧＮＴＬＹＹＶＮＫＬＥＧＫＮＬＹＶＫＧＥＰＩＩＮＹＹＤＰＬＶＦＰＳＤＥＦＤＡＳＩＳＱＶＮＥＫＩＮＱＳＬＡＦＩＲＲＳＤＥＬＬＨＮＶＮＴＧＫＳＴＴＮＩＭＩＴＴＩＩＩＶＩＩＶＶＬＬＳＬＩＡＩＧＬＬＬＹＣＫＡＫＮＴＰＶＴＬＳＫＤＱＬＳＧＩＮＮＩＡＦＳＫ
【0257】
【表2】
【0258】
【表3】
【0259】
２．５．ＣＭＶに由来する抗原を含む免疫原性組成物
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は、β－ヘルペスウイルス科の二本鎖ＤＮＡウイルスである。ＨＣＭＶは、妊娠中の女性における感染または潜伏ウイルスの再活動性化後の垂直ウイルス伝播に起因する先天性および新生児難聴の主な原因である。さらに、ＨＣＭＶは、一般的な日和見病原体であり、実質臓器および幹細胞移植患者、ＡＩＤＳ患者などの免疫抑制されている患者に影響を及ぼす。
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は、β－ヘルペスウイルス科の二本鎖ＤＮＡウイルスである。ＨＣＭＶは、妊娠中の女性における感染または潜伏ウイルスの再活動性化後の垂直ウイルス伝播に起因する先天性および新生児難聴の主な原因である。さらに、ＨＣＭＶは、一般的な日和見病原体であり、実質臓器および幹細胞移植患者、ＡＩＤＳ患者などの免疫抑制されている患者に影響を及ぼす。
【0260】
ＨＣＭＶゲノムは、いくつかのエンベロープ糖タンパク質をコードし、そのうちの１つが糖タンパク質Ｂ（ｇＢ）である。糖タンパク質Ｂは、細胞へのウイルスの侵入に必要であり、感染に対する中和抗体（ｎＡｂ）応答の重要な標的である、フソゲンである。ｇＢサブユニット抗原を組み入れたＨＣＭＶワクチンが開発中である。臨床試験により、ｇＢサブユニットに基づくワクチン候補のいくつかが安全かつ免疫原性であることが示されているが、保護有効性および保護の耐久性が改善されることが望ましい。
【0261】
一部の実施形態では、第１の免疫原性組成物は、配列番号１３と比較して以下の変異
【0262】
【表4-1】
【0263】
【表4-2】
【0264】
【表4-3】
【0265】
【表4-4】
【0266】
【表4-5】
【0267】
３．肺炎球菌コンジュゲートワクチンの投薬量
３．１ 多糖の量
各用量の糖コンジュゲートの量は、典型的なワクチン接種を受けた人において著しい有害な副作用を伴わずに免疫保護応答を誘導する量として選択される。そのような量は、使用される特定の免疫原、および免疫原がどのように提示されるかに応じて変動する。
３．１ 多糖の量
各用量の糖コンジュゲートの量は、典型的なワクチン接種を受けた人において著しい有害な副作用を伴わずに免疫保護応答を誘導する量として選択される。そのような量は、使用される特定の免疫原、および免疫原がどのように提示されるかに応じて変動する。
【0268】
免疫原性組成物中の特定の糖コンジュゲートの量は、そのコンジュゲートについての多糖の総量（コンジュゲートしたものおよびコンジュゲートしていないもの）に基づいて算出することができる。例えば、２０％の遊離多糖を有する糖コンジュゲートは、多糖用量１００μｇ中、約８０μｇのコンジュゲートした多糖および約２０μｇのコンジュゲートしていない多糖を有することになる。糖コンジュゲートの量は、連鎖球菌の血清型に応じて変動し得る。糖濃度をウロン酸アッセイによって決定することができる。
【0269】
免疫原性組成物中の異なる多糖構成成分の「免疫原性量」は異なり得、それぞれが、任意の特定の多糖抗原を約１．０μｇ、約２．０μｇ、約３．０μｇ、約４．０μｇ、約５．０μｇ、約６．０μｇ、約７．０μｇ、約８．０μｇ、約９．０μｇ、約１０．０μｇ、約１５．０μｇ、約２０．０μｇ、約３０．０μｇ、約４０．０μｇ、約５０．０μｇ、約６０．０μｇ、約７０．０μｇ、約８０．０μｇ、約９０．０μｇ、または約１００．０μｇ含み得る。
【0270】
一般に、各用量には、所与の血清型について多糖０．１μｇ～１００μｇ、特に、０．５μｇ～２０μｇ、特に、１μｇ～１０μｇ、特に、２μｇ～５μｇが含まれる。上記の範囲のいずれかの中に入る任意の正の整数が本開示の実施形態として意図されている。
【0271】
ある実施形態では、各用量には、所与の血清型について多糖１μｇ、２μｇ、３μｇ、４μｇ、５μｇ、６μｇ、７μｇ、８μｇ、９μｇ、１０μｇ、１５μｇまたは２０μｇが含まれる。
【0272】
３．２ 担体の量
一般に、各用量には、担体タンパク質５μｇ～１５０μｇ、特には、担体タンパク質１０μｇ～１００μ、より特には、担体タンパク質１５μｇ～１００μｇ、より特には、担体タンパク質２５～７５μｇ、より特には、担体タンパク質３０μｇ～７０μｇ、より特には、担体タンパク質３０～６０μｇ、より特には、担体タンパク質３０μｇ～５０μｇ、なおより特には、担体タンパク質４０～６０μｇが含まれる。ある実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
一般に、各用量には、担体タンパク質５μｇ～１５０μｇ、特には、担体タンパク質１０μｇ～１００μ、より特には、担体タンパク質１５μｇ～１００μｇ、より特には、担体タンパク質２５～７５μｇ、より特には、担体タンパク質３０μｇ～７０μｇ、より特には、担体タンパク質３０～６０μｇ、より特には、担体タンパク質３０μｇ～５０μｇ、なおより特には、担体タンパク質４０～６０μｇが含まれる。ある実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
【0273】
ある実施形態では、各用量には、担体タンパク質約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇまたは約７５μｇが含まれる。ある実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
【0274】
４．肺炎球菌コンジュゲートワクチンのアジュバント（複数可）
一部の実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、少なくとも１種、２種または３種のアジュバントをさらに含み得る。「アジュバント」という用語は、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として作用し得る、主に免疫モジュレーターとして作用し得る、または両方の強力な特色を有する。適切なアジュバントには、ヒトを含めた哺乳動物に対する使用に適したものが含まれる。
一部の実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、少なくとも１種、２種または３種のアジュバントをさらに含み得る。「アジュバント」という用語は、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として作用し得る、主に免疫モジュレーターとして作用し得る、または両方の強力な特色を有する。適切なアジュバントには、ヒトを含めた哺乳動物に対する使用に適したものが含まれる。
【0275】
ヒトに対して使用することができる公知の適切な送達系型アジュバントの例としては、これだけに限定されないが、アラム（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油エマルション、例えば、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．５％ｗ／ｖポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、０．５％ｗ／ｖソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ ８５））など、油中水エマルション、例えばＭＯＮＴＡＮＩＤＥ（商標）など、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）微小粒子またはナノ粒子が挙げられる。
【0276】
ある実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、アジュバントとしてアルミニウム塩（アラム）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）を含む。好ましい実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、０．１ｍｇ／ｍＬから１ｍｇ／ｍＬまで、または０．２ｍｇ／ｍＬから０．３ｍｇ／ｍＬまでのアルミニウム元素をリン酸アルミニウムの形態で含む。ある実施形態では、本明細書に開示される肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、約０．２５ｍｇ／ｍＬのアルミニウム元素をリン酸アルミニウムの形態で含む。
【0277】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、アルミニウム塩（アラム）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）を含む。ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。
【0278】
５．肺炎球菌コンジュゲートワクチンの製剤
本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを液体の形態（すなわち、溶液または懸濁液）に製剤化することもでき、凍結乾燥形態に製剤化することもできる。液体製剤は、有利に、包装された形態から直接投与することができ、したがって、本発明の凍結乾燥組成物では必要になる水性媒体中での復元を必要としない注射に理想的である。
本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを液体の形態（すなわち、溶液または懸濁液）に製剤化することもでき、凍結乾燥形態に製剤化することもできる。液体製剤は、有利に、包装された形態から直接投与することができ、したがって、本発明の凍結乾燥組成物では必要になる水性媒体中での復元を必要としない注射に理想的である。
【0279】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、液体の形態、好ましくは水溶液の形態である。
【0280】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、緩衝剤を含む。ある実施形態では、前記緩衝剤のｐＫａは約３．５～約７．５である。一部の実施形態では、緩衝剤は、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジンまたはクエン酸塩である。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、最終濃度１ｍＭ～１０ｍＭのコハク酸塩である。特定の一実施形態では、コハク酸緩衝塩剤の最終濃度は約５ｍＭである。
【0281】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびこれらの組合せからなる群から選択される。特定の一実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。特定の一実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、塩化ナトリウムを１５０ｍＭで含む。
【0282】
ある実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、界面活性物質を含む。ある実施形態では、界面活性物質は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｎ－１ ０１、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ １５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、ダイズレシチンおよびポロキサマーからなる群から選択される。特定の一実施形態では、界面活性物質は、ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０３％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０５％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。
【0283】
特定の一実施形態では、界面活性物質は、ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、重量比（ｗ／ｗ）で少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート２０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０２％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０３％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０５％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。
【0284】
ある特定の実施形態では、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンは、ｐＨ５．５～７．５、より好ましくはｐＨ５．６～７．０、なおより好ましくはｐＨ５．８～６．０である。
【0285】
注射用の本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンの典型的な用量の体積は０．１ｍＬ～２ｍＬ、より好ましくは０．２ｍＬ～１ｍＬであり、なおより好ましくは体積は約０．５ｍＬである。
【0286】
６．免疫保護応答を引き出すための方法
ある実施形態では、本発明は、ヒトにおける感染性細菌抗原（例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の任意の１つから選択される）に対する、およびベータコロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２））に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒトに、感染性疾患を引き起こす細菌に由来するポリペプチド、トキソイド、多糖、および多糖コンジュゲートの任意の１つから選択される抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンとを有効用量で同時投与する（例えば、付随的にまたは並行して）ステップを含む方法に関する。ある実施形態では、感染性疾患を引き起こす細菌に対する前記第１の免疫原性組成物および前記ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンは、本明細書に開示される組成物のいずれかである。
ある実施形態では、本発明は、ヒトにおける感染性細菌抗原（例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の任意の１つから選択される）に対する、およびベータコロナウイルス（例えば、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２））に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒトに、感染性疾患を引き起こす細菌に由来するポリペプチド、トキソイド、多糖、および多糖コンジュゲートの任意の１つから選択される抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンとを有効用量で同時投与する（例えば、付随的にまたは並行して）ステップを含む方法に関する。ある実施形態では、感染性疾患を引き起こす細菌に対する前記第１の免疫原性組成物および前記ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡワクチンは、本明細書に開示される組成物のいずれかである。
【0287】
ある実施形態では、本発明は、ヒトにおける肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒトに、肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンを有効用量で同時投与する（例えば、付随的にまたは並行して）ステップを含む方法に関する。ある実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンは、本明細書に開示されるワクチンのいずれかである。
【0288】
好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答を、例えば、ＩｇＧレベル、ワクチン接種前からワクチン接種後までのＩｇＧレベルの上昇倍率、ＯＰＡ力価および／またはワクチン接種前からワクチン接種後までのＯＰＡ力価の上昇倍率（例えば、ＯＰＡ力価の少なくとも４倍の上昇）など、当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。
【0289】
肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の各血清型について、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）多糖に結合することが可能なＩｇＧ抗体のレベルを、ＥＬＩＳＡアッセイによって決定することができる。
【0290】
ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）法では、ワクチン接種を受けた対象の血清由来の抗体を、固体支持体に吸着させた多糖と一緒にインキュベートする。結合した抗体を、酵素とコンジュゲートした検出用二次抗体を使用して検出する。ある実施形態では、前記ＥＬＩＳＡアッセイは、ＷＨＯによって「Ｔｒａｉｎｉｎｇ Ｍａｎｕａｌ Ｆｏｒ Ｅｎｚｙｍｅ Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ｓｅｒｏｔｙｐｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＧ （Ｐｎ ＰＳ ＥＬＩＳＡ）．（００７ｓｐ Ｖｅｒｓｉｏｎ）」（例えば、２０２１年５月３日にアクセスされているｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｖａｃｃｉｎｅ．ｕａｂ．ｅｄｕ／ｕｐｌｏａｄｓ／ｍｄｏｃｓ／ＥＬＩＳＡＰｒｏｔｏｃｏｌ（００７ｓｐ）．ｐｄｆで入手可能）において定義されている標準化されたＥＬＩＳＡアッセイである。
【0291】
ＥＬＩＳＡにより、ヒト血清中に存在する型特異的ＩｇＧ抗肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖（ＰＳ）抗体を測定する。ヒト血清の希釈物を、型特異的莢膜ＰＳをコーティングしたマイクロタイタープレートに添加すると、その莢膜ＰＳに特異的な抗体がマイクロタイタープレートに結合する。プレートに結合した抗体を、アルカリホスファターゼ標識したヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体、続いて、ｐ－ニトロフェニルリン酸基質を使用して検出する。呈色した最終産物の光学濃度は血清中に存在する抗莢膜ＰＳ抗体の量に比例する。
【0292】
ある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答を、ＥＬＩＳＡアッセイ（例えば、ＷＨＯによって定義されている標準化されたＥＬＩＳＡアッセイなど）によって決定されるＩｇＧレベルによって測定することができ、対象は、所与の血清型についてのワクチン接種後の肺炎球菌ＩｇＧの濃度の予め規定されたレベルを実現する。ある実施形態では、前記レベルをワクチン接種の約１カ月後に測定する。ある実施形態では、ワクチン接種後のＩｇＧの濃度の予め規定されたレベルは、以下の通りである：血清型１、３、４、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、２３Ｆ、８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ｂ、２２Ｆ、３３Ｆについて：１ミリリットル当たり少なくとも０．３５マイクログラム、血清型５について：１ミリリットル当たり少なくとも０．２３マイクログラム、血清型６Ｂについて：１ミリリットル当たり少なくとも０．１０マイクログラム、および血清型１９Ａについて：１ミリリットル当たり少なくとも０．１２マイクログラム。
【0293】
好ましい実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答を、肺炎球菌ＯＰＡ力価またはワクチン接種前からワクチン接種後（例えば、ワクチン接種の１カ月後）までのＯＰＡ力価の上昇倍率によって測定することができる。そのような実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答を、ワクチン接種前からワクチン接種後（例えば、ワクチン接種の１カ月後）までのＯＰＡ力価の少なくとも４倍の上昇によって測定することができる。
【0294】
肺炎球菌オプソニン化貪食アッセイ（ＯＰＡ）は、機能性抗体および補体の存在下での貪食エフェクター細胞による肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞の死滅を測定するものであり、肺炎球菌ワクチンの効果の評価の重要な代理になると考えられる。
【0295】
ｉｎ ｖｉｔｒｏオプソニン化貪食アッセイ（ＯＰＡ）を、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞、試験される熱失活ヒト血清、分化させたＨＬ－６０細胞（食細胞）および外因性補体供給源（例えば、子ウサギ補体）の混合物をインキュベートすることによって行うことができる。インキュベーション中にオプソニン化貪食が進行し、抗体および補体で覆われた細菌細胞がオプソニン化貪食されて死滅する。オプソニン化貪食から逃れた生存細菌コロニー形成単位（ｃｆｕ）を、アッセイ混合物をプレーティングすることによって決定する。ＯＰＡ力価は、試験血清を伴わない対照ウェルに対する細菌計数の５０％減少がもたらされる希釈度の逆数と定義される。ＯＰＡ力価を、この５０％死滅カットオフを包含する２つの希釈度から内挿する。
【0296】
エンドポイント力価１：８以上を、これらの死滅型ＯＰＡに関する陽性結果とみなす。したがって、ある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答血清型を肺炎球菌ＯＰＡ力価によって測定することができ、結果は、エンドポイント力価１：８以上が測定された場合、陽性とみなされる。
【0297】
一部の実施形態では、ヒト対象は、肺炎球菌ワクチン接種前に、例えば、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）への自然曝露（例えば、成体対象の場合）に起因して、血清型特異的ＯＰＡ力価を有する可能性がある。したがって、本発明の肺炎球菌コンジュゲートワクチンを用いた免疫化前と免疫化後の血清のＯＰＡ活性の比較を、ＯＰＡ力価の潜在的な増大を比較することによって行うことができる。
【0298】
ある実施形態では、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答血清型を、ワクチン接種前からワクチン接種後（例えば、ワクチン接種の１カ月後）までのＯＰＡ力価の上昇倍率によって測定することができ、ワクチン接種前からワクチン接種後までのＯＰＡ力価の少なくとも４倍の上昇が陽性とみなされる。
【0299】
好ましい実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答を、Ｓ結合性ＩｇＧおよび／またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和力価のワクチン誘導性抗体応答濃度などの当技術分野で公知の任意の方法によって測定することができる。
【0300】
好ましい実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答を、全長Ｓ結合性ＩｇＧレベル（抗原特異的抗体）によって、および／または産生された中和抗体力価によって測定することができる。好ましい実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答を全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルによって測定することができる。別の好ましい実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答を産生された中和抗体力価によって測定することができる。
【0301】
一部の実施形態では、中和抗体力価は、タンパク質ワクチンよりも大きい。他の実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンによって産生される中和抗体力価は、アジュバント添加タンパク質ワクチンよりも大きい。さらに他の実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンによって産生される中和抗体力価は、１，０００～１０，０００、１，２００～１０，０００、１，４００～１０，０００、１，５００～１０，０００、１，０００～５，０００、１，０００～４，０００、１，８００～１０，０００、２０００～１０，０００、２，０００～５，０００、２，０００～３，０００、２，０００～４，０００、３，０００～５，０００、３，０００～４，０００、または２，０００～２，５００である。中和力価は、一般には、プラーク数の５０％減少を実現するために必要な最も高い血清希釈度として表される。例えば、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ．２０２０ Ｄｅｃ ３１；３８３（２７）：２６０３～２６１５に記載されている、２０２０年に行われた臨床試験では、ＢＮＴ１６２ｂ２、３０μｇにより、高齢成人および若年成人において５０％中和をもたらす幾何平均力価が引き出され、ヒト回復期血清パネルに関して測定された幾何平均力価を超えた。
【0302】
例示的な実施形態では、抗体価（すなわち、対象において産生される抗原特異的抗体（Ｓ結合性）の量）を、依然として陽性結果がもたらされる最大希釈度（段階希釈で）の逆数として表す。例示的な実施形態では、抗体価を酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定または測定する。例示的な実施形態では、抗体価を中和アッセイによって、例えばマイクロ中和アッセイによって決定または測定する。ある特定の態様では、抗体価測定値を、例えば１：４０、１：１００など、比として表す。本発明の例示的な実施形態では、効果的なワクチンでは、１：４０を超える、１：１００を超える、１：４００を超える、１：１０００を超える、１：２０００を超える、１：３０００を超える、１：４０００を超える、１：５００を超える、１：６０００を超える、１：７５００を超える、１：１００００を超える抗体価が生じる。
【0303】
本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：４０を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：１００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：４００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：１０００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：２０００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：３０００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：４０００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：５００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：６０００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：７５００を超える抗体価が生じる。本発明のある実施形態では、効果的なワクチンでは、１：１００００を超える抗体価が生じる。例示的な実施形態では、ワクチン接種の１０日後までに、ワクチン接種の２０日後までに、ワクチン接種の３０日後までに、ワクチン接種の４０日後までに、またはワクチン接種の５０日後またはそれ以後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の１０日後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の２０日後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の３０日後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の４０日後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の５０日後またはそれ以後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の２１～３５日後までに当該抗体価が生じるまたはそれに達する。例示的な実施形態では、対象にワクチンの単回用量を投与後に当該力価が生じるまたはそれに達する。他の実施形態では、複数回用量後、例えば、１回目および２回目の用量（例えば、ブースター用量）後に当該力価が生じるまたはそれに達する。例示的な実施形態では、対象にワクチンの３回用量を投与後に当該力価が生じるまたはそれに達する。本発明の例示的な態様では、抗原特異的抗体をμｇ／ｍｌの単位で測定する、またはＩＵ／Ｌ（１リットル当たりの国際単位）もしくはｍＩＵ／ｍｌ（１ｍｌ当たりのミリ国際単位）の単位で測定する。本発明の例示的な実施形態では、効果的なワクチンでは、＞０．０５μｇ／ｍｌ、＞０．１μｇ／ｍｌ、＞０．２μｇ／ｍｌ、＞０．３５μｇ／ｍｌ、＞０．５μｇ／ｍｌ、＞１μｇ／ｍｌ、＞２μｇ／ｍｌ、＞５μｇ／ｍｌまたは＞１０μｇ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞０．０５μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞０．１μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞０．２μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞０．３５μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞０．５μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞１μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞２μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞５μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞１０μｇ／ｍｌの抗原特異的抗体が産生される。
【0304】
本発明の例示的な実施形態では、効果的なワクチンでは、＞１０ｍＩＵ／ｍｌ、＞２０ｍＩＵ／ｍｌ、＞５０ｍＩＵ／ｍｌ、＞１００ｍＩＵ／ｍｌ、＞２００ｍＩＵ／ｍｌ、＞５００ｍＩＵ／ｍｌまたは＞１０００ｍＩＵ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞１０ｍＩＵ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞２０ｍＩＵ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞５０ｍＩＵ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞１００ｍＩＵ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞２００ｍＩＵ／ｍｌが産生される。本発明の実施形態では、効果的なワクチンでは、＞５００ｍＩＵ／ｍｌまたは＞１０００ｍＩＵ／ｍｌが産生される。例示的な実施形態では、ワクチン接種の１０日後までに、ワクチン接種の２０日後までに、ワクチン接種の３０日後までに、ワクチン接種の４０日後までに、またはワクチン接種の５０日後またはそれ以後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の１０日後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の２０日後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の３０日後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の４０日後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の５０日後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。本発明のある実施形態では、ワクチン接種の２１～３５日後までに当該抗体レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。例示的な実施形態では、対象にワクチンの単回用量を投与後に当該レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。他の実施形態では、複数回用量後、例えば、１回目の用量および２回目の用量（例えば、ブースター用量）後に当該レベルまたは濃度が産生されるまたはそれに達する。例示的な実施形態では、対象にワクチンの３回用量を投与後に当該力価が産生されるまたはそれに達する。例示的な実施形態では、抗体レベルまたは濃度を酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定または測定する。例示的な実施形態では、抗体レベルまたは濃度を中和アッセイによって、例えばマイクロ中和アッセイによって決定または測定する。
【0305】
別の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質およびそのエピトープに対するＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞応答によって測定することができる。ｍＲＮＡ組成物によって誘導されたＳ特異的ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｔ細胞の機能性および分極化を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質全体の全長配列を表す重複するペプチドプールを用いて刺激した後に測定されるサイトカインＩＦＮγ、ＩＬ－２、およびＩＬ－４の細胞内蓄積によって評定することができる。
【0306】
例えば、２０２０年１２月１０日付けのＦＤＡ Ｂｒｉｅｆｉｎｇ Ｄｏｃｕｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｍｅｅｔｉｎｇに記載されている２０２０年に行われた臨床試験では、両方の用量のＢＮＴ１６２ｂ２を受けた参加者では大多数でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質特異的ＣＤ４＋（３９／３９、１００％）およびＣＤ８＋（３５／３９、８９．７％）Ｔ細胞応答の証拠が認められた。これらのＴ細胞応答は、ＲＢＤのエピトープを含めた、抗原の異なる部分に対するものであった。それにより、ＢＮＴ１６２ｂ２により多エピトープ応答が誘導されることが示される。Ｓ特異的ＢＮＴ１６２ｂ２誘導性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｔ細胞の機能性および分極化を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質全体の全長配列を表す重複するペプチドプールを用いて刺激した後に測定されるサイトカインＩＦＮγ、ＩＬ－２、およびＩＬ－４の細胞内蓄積によって評定した。ベンチマーキングのために、ウイルス学的に確認されたＣＯＶＩＤ－１９を有する回復期患者１５名からのＰＢＭＣ画分を使用した。Ｔヘルパー応答のＴｈ１分極化を、抗原特異的（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質ペプチドプール）再刺激の際のＩＦＮγおよびＩＬ－２の産生、ならびにほんの軽微なＩＬ－４の産生によって特徴付けた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和する幾何平均力価（ＧＭＴ）は、用量１（Ｄｏｓｅ１）後にベースラインを越えて増大し、用量２（Ｄｏｓｅ２）後にブースト効果が伴い、これは３０μｇの用量レベルで最も顕著であった。したがって、ＢＮＴ１６２－０１試験の免疫原性に関する結果から、１８～５５歳の健康な成人における抗体媒介性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２中和および細胞媒介性細胞免疫応答（ｃｅｌｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）におけるＴｈ１分極化の証拠が示され、それにより、最終的な用量選択およびＣ４５９１００１試験により多数の参加者を組み入れることの利益の見込みが支持される。
【0307】
好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンを同時投与すること（例えば、付随的にまたは並行して）で、本発明のＰＣＶ単独での投与と比較して、本発明のＰＣＶによって引き出される肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答は低減しない。
【0308】
したがって、驚いたことに、これらの実施形態では、ｍＲＮＡワクチンがＰＣＶ、好ましくはＰｒｅｖｎａｒ１３（登録商標）、Ｖ１１４または２０ｖＰｎＣ（Ｐｒｅｖｎａｒ２０（登録商標））ワクチンに対する患者の応答に免疫学的に干渉しないことが見いだされた。
【0309】
好ましい実施形態では、本発明のｍＲＮＡワクチンを同時投与すること（例えば、付随的にまたは並行して）で、本発明のＰＣＶ単独での投与と比較して、本発明のＰＣＶによって引き出される肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫保護応答が増大する。
【0310】
したがって、驚いたことに、これらの実施形態では、ｍＲＮＡワクチンにより、ＰＣＶ、好ましくはＰｒｅｖｎａｒ１３（登録商標）、Ｖ１１４または２０ｖＰｎＣ（Ｐｒｅｖｎａｒ２０（登録商標））ワクチンに対する患者の応答が免疫学的に増強されることが見いだされた。
【0311】
本発明の多価ＰＣＶ中の少なくとも１種のコンジュゲートに対してそのような増大が観察されることが好ましい。本発明の多価ＰＣＶ中の少なくとも２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種または１３種のコンジュゲートに対してそのような増大が観察されることが好ましい。一部のそのような実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも２種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも３種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも４種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも５種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも６種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも７種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも８種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも９種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１０種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１１種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも３種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１２種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１３種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１４種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１５種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１６種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１７種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１８種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの少なくとも１９種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。一部の実施形態では、本発明のＰＣＶの２０種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。
【0312】
それぞれの多価ＰＣＶの全てのコンジュゲートに対してそのような増大が観察されることが好ましい。例えば、１３価ＰＣＶ（例えば、Ｐｒｅｖｎａｒ１３（登録商標）など）の場合、ＰＣＶの１３種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。
【0313】
例えば、１５価ＰＣＶ（例えば、Ｖ１１４など）の場合、ＰＣＶの１５種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。
【0314】
例えば、２０価ＰＣＶ（例えば、２０ｖＰｎＣ（Ｐｒｅｖｎａｒ２０（登録商標））など）の場合、ＰＣＶの２０種のコンジュゲートに対して免疫保護応答が増大する。
【0315】
そのような増大は、少なくとも１．２倍であることが好ましい。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．３倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．４倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．５倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．６倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．７倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．８倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも１．９倍である。ある実施形態では、そのような増大は、少なくとも２倍である。
【0316】
ある実施形態では、前記増大は、ＩｇＧレベルの上昇である。
【0317】
ある実施形態では、前記増大は、ワクチン接種前からワクチン接種後までのＩｇＧレベルの上昇倍率の増大である。
【0318】
ある実施形態では、前記増大は、ＯＰＡ力価の増大である。
【0319】
ある実施形態では、前記増大は、ワクチン接種前からワクチン接種後（ワクチン接種の１カ月後）までのＯＰＡ力価の上昇倍率の増大である。
【0320】
本発明のそのような増大は、０．０５未満のｐ値で統計的に有意であることが好ましい。
【0321】
好ましい実施形態では、本発明のＰＣＶワクチンを同時投与すること（例えば、付随的にまたは並行して）で、本発明のｍＲＮＡワクチンの単独での投与と比較して。本発明のｍＲＮＡワクチンによって引き出されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答は低減しない。
【0322】
したがって、驚いたことに、これらの実施形態では、ＰＣＶが、ｍＲＮＡワクチン、好ましくはＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンに対する患者の応答に免疫学的に干渉しないことが見いだされた。
【0323】
好ましい実施形態では、本発明のＰＣＶワクチンを同時投与すること（例えば、付随的にまたは並行して）で、本発明のｍＲＮＡワクチンの単独での投与と比較して、本発明のｍＲＮＡワクチンによって引き出されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する免疫保護応答が増大する。
【0324】
したがって、驚いたことに、これらの実施形態では、ＰＣＶにより、ｍＲＮＡワクチン、好ましくはＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンに対する患者の応答が免疫学的に増強されることが見いだされた。
【0325】
そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍または２倍になることが好ましい。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．２倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．３倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．４倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．５倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．６倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．７倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．８倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．９倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも２倍になることである。
【0326】
そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．２倍である、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．９倍または２倍になることであることが好ましい。ある実施形態では、そのような増大は、中和抗体力価が少なくとも１．２倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．３倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．４倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．５倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．６倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．７倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．８倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも１．９倍になることである。ある実施形態では、そのような増大は、抗原特異的（Ｓ結合性）抗体価が少なくとも２倍になることである。
【0327】
本発明のそのような増大は０．０５未満のｐ値で統計的に有意であることが好ましい。
【0328】
ある実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンを並行して投与する。
【0329】
ある実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンを付随的に投与する。
【0330】
「並行投与」とは、治療有効用量の第１のおよび第２の免疫原性組成物を、同じ接種部位に、別々の単位剤形で、互いに短時間のうちに投与することを意味する。並行投与は、基本的に、２種の免疫原性組成物をほぼ同じ時間であるが別々の剤形で、同じ接種部位に投与するものである。第１のおよび第２の免疫原性組成物の並行投与は、多くの場合、同じ診察時に行われる。
【0331】
「付随的投与」とは、治療有効用量の第１のおよび第２の免疫原性組成物を、別々の単位剤形で、互いに短時間のうちに、異なる解剖学的部位に投与することを意味する。付随的投与は、基本的に、２種の免疫原性組成物をほぼ同じ時間であるが別々の剤形で、異なる解剖学的部位に投与するものである。第１のおよび第２の免疫原性組成物の付随的投与は、多くの場合、同じ診察時に行われる。
【0332】
一部の場合では、本発明によるワクチンのそれぞれの用量をわずか１回投与する。しかし、一部の場合では、２回目、３回目または４回目の用量を与えることができる、最初のワクチン接種後、対象は、十分な間隔をおいて１回または数回のブースター免疫化を受けることができる。
【0333】
本発明の方法のある実施形態では、少なくともＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、少なくともＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、少なくともＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量を投与する。
【0334】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量を投与する。前記実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量は、約２週間～約１２カ月の間隔をおくことができる。
【0335】
本発明の方法のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量を投与する。
【0336】
本発明の方法のある実施形態では、少なくとも肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、少なくとも肺炎球菌コンジュゲートワクチンの３回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、少なくとも肺炎球菌コンジュゲートワクチンの４回の用量を投与する。
【0337】
本発明の方法のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの３回の用量を投与する。本発明の方法のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの４回の用量を投与する。前記実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの前記用量を、約２週間～約１２カ月の間隔をおくことができる。
【0338】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量とを投与する。前記実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与することができる。別の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与することができる。別の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と付随的に投与することができる。さらに他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と付随的に投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与することができる。さらに別の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与することができる。
【0339】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量とを投与する。前記実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与することができる。さらに別の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と同時投与する。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と付随的に投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と付随的に投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と付随的に投与することができる。
【0340】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量とを投与する。前記実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と同時投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と同時投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と並行して投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と付随的に投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と付随的に投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と付随的に投与することができる。他の実施形態では、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と付随的に投与することができる。
【0341】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量とを投与する。
【0342】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量とを投与する。
【0343】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量とを投与する。
【0344】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を１回よりも多く投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約６カ月の間隔をおいて行うことができる。
【0345】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を１回よりも多く投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約２カ月の間隔をおくことができる。
【0346】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を１回よりも多く投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約６週間の間隔をおくことができる。
【0347】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を１回よりも多く投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約４カ月の間隔をおくことができる。
【0348】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を１回よりも多く投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約３週間の間隔をおくことができる。
【0349】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約６カ月の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔をおくことができる。
【0350】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約２カ月の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔をおくことができる。
【0351】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約６週間の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔をおくことができる。
【0352】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約４カ月の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔をおくことができる。
【0353】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約３週間の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔をおくことができる。
【0354】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約６カ月の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔をおくことができる。
【0355】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約２カ月の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔をおくことができる。
【0356】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約６週間の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔をおくことができる。
【0357】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約２週間～約４カ月の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔をおくことができる。
【0358】
本発明の方法のある実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの用量を３回投与する場合、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量を、約３週間の間隔をおくことができ、３回目の用量を、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔をおくことができる。
【0359】
本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている。
【0360】
本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量は、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている。ある実施形態では、前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている。前記実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている。ある実施形態では、前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている。ある実施形態では、前記ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている。ある実施形態では、前記ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている。ある実施形態では、前記ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている。
【0361】
本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている。ある実施形態では、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている。本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている。本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている。本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている。本発明の方法のある実施形態では、ヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けており、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後は、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている。
【0362】
本発明の方法のある実施形態では、前記同時投与は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量である。
【0363】
ある実施形態では、本発明は、ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法における使用のための、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンであって、前記方法が、ヒト対象に前記ワクチンを同時投与するステップを含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンに関する。
【0364】
ある実施形態では、本発明は、ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法における使用のための、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンであって、前記方法が、ヒト対象に前記ワクチンを同時投与するステップを含み、前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンが、付随的に投与される、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンに関する。
【0365】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用に関する。
【0366】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用に関する。
【0367】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストするための使用に関する。
【0368】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンをブーストするための使用に関する。
【0369】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量として使用するための使用に関する。
【0370】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量として使用するための使用に関する。
【0371】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための使用に関する。
【0372】
ある実施形態では、本発明は、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための使用に関する。
【0373】
前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンは、本明細書に開示される通りであり得る。
【0374】
ある実施形態では、本明細書に開示されるワクチンを筋肉内注射または皮下注射によって投与する。ある実施形態では、本明細書に開示されるワクチンを筋肉内注射によって投与する。ある実施形態では、本明細書に開示されるワクチンを皮下注射によって投与する。
【0375】
ある実施形態では、ワクチンを大腿または腕への筋肉内注射によって投与する。ある実施形態では、注射部位は、前外側大腿筋または三角筋である。ある実施形態では、ワクチンを筋肉内注射によって腕の三角筋に投与する。
【0376】
ある実施形態では、ワクチンを大腿または腕への皮下注射によって投与する。ある実施形態では、注射部位は、前外側大腿筋を覆う脂肪組織または三頭筋を覆う脂肪組織である。
【0377】
付随的投与の場合、第１の注射を一方の大腿に行い、第２の注射を他方の大腿に（好ましくは前外側大腿筋に）行うことができる。あるいは、第１の注射を一方の腕に行い、第２の注射を他方の腕に（好ましくは三角筋に）行うことができる。第１の注射を大腿に行い、第２の注射を腕に行うこと、または第１の注射を腕に行い、第２の注射を大腿に行うこともできる。付随的投与の場合、ワクチンを筋肉内注射によって各腕の三角筋に投与することが好ましい。
【0378】
７．本発明の方法を用いた治療を受ける対象
本明細書に開示される通り、本明細書に記載のワクチンを、ヒトにおける肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すために使用することができる。
本明細書に開示される通り、本明細書に記載のワクチンを、ヒトにおける肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すために使用することができる。
【0379】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受けるヒト対象は、５０歳以上のヒト成人である。ヒト対象は、６０歳以上のヒト成人であることがより好ましい。ヒト対象は、６５歳以上のヒト成人であることがなおより好ましい。ある実施形態では、ヒト対象は、７０歳以上、７５歳以上または８０歳以上である。
【0380】
ある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受けるヒト対象は、免疫無防備状態の個体である。免疫無防備状態の個体は、一般に、感染症因子による攻撃に対して正常な体液性または細胞性防御を開始する能力の衰えまたは低減を示す人と定義される。
【0381】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒトは、免疫系が損なわれ、その結果、肺炎球菌疾患からの保護またはその治療のためには不十分な抗体応答がもたらされるところの疾患または状態に罹患している。
【0382】
ある実施形態では、前記疾患は、原発性免疫不全障害である。前記原発性免疫不全障害は、Ｔ細胞・Ｂ細胞複合免疫不全症、抗体欠乏症、明確に定義された症候群、免疫調節不全疾患、食細胞障害、自然免疫不全症、自己炎症性障害、および補体欠損症からなる群から選択されることが好ましい。ある実施形態では、前記原発性免疫不全障害は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２４頁１１行目～２５頁１９行目に開示されているものから選択される。
【0383】
本発明の特定の実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象は、ＨＩＶ感染症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、がん、慢性心臓または肺障害、うっ血性心不全、糖尿病、慢性肝疾患、アルコール依存症、硬変症、脊髄液漏出、心筋症、慢性気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能障害（例えば、鎌状赤血球症など）、脾臓機能の欠如（無脾症）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群および喘息からなる群から選択される疾患に罹患している。
【0384】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象は、栄養失調症に罹患している。
【0385】
本発明の特定の実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象は、感染症に対する体の抵抗性が低下する薬物または治療を摂取しているまたは受けている。ある実施形態では、前記薬物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２６頁３３行目～２６頁４行目に開示されているものから選択される。
【0386】
本発明の特定の実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象は、喫煙者である。
【0387】
本発明の特定の実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象の白血球数（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）（白血球数（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｃｏｕｎｔ））は、１リットル当たり細胞５×１０９個未満、または１リットル当たり細胞４×１０９個未満、または１リットル当たり細胞３×１０９個未満、または１リットル当たり細胞２×１０９個未満、または１リットル当たり細胞１×１０９個未満、または１リットル当たり細胞０．５×１０９個未満、または１リットル当たり細胞０．３×１０９個未満、または１リットル当たり細胞０．１×１０９個未満である。
【0388】
白血球数（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）（白血球数（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｃｏｕｎｔ））：血液中の白血球の数（ＷＢＣ）。ＷＢＣは、通常、ＣＢＣ（全血球計算）の一部として測定される。白血球は、血液中の、感染と闘う細胞であり、赤血球として公知の赤色の（酸素を運搬する）血液細胞とは別個のものである。白血球には、好中球（多形核白血球；ＰＭＮ）、杆状核白血球（わずかに未成熟の好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球、および好塩基球を含めた種々の型が存在する。白血球の型の全てが白血球数（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）に反映される。白血球数（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）の正常範囲は、通常、血液１立方ミリメートル当たり細胞４，３００個から１０，８００個の間である。これは、白血球数（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｃｏｕｎｔ）と称されることもあり、国際単位で１リットル当たり細胞４．３～１０．８×１０９個と表すことができる。
【0389】
本発明の特定の実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象は、好中球減少症に罹患している。本発明の特定の実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受ける免疫無防備状態のヒト対象の好中球数は、１リットル当たり細胞２×１０９個未満、または１リットル当たり細胞１×１０９個未満、または１リットル当たり細胞０．５×１０９個未満、または１リットル当たり細胞０．１×１０９個未満、または１リットル当たり細胞０．０５×１０９個未満である。
【0390】
低白血球数（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔ）、または「好中球減少症」は、循環血液中の好中球のレベルが異常に低いことを特徴とする状態である。好中球は、感染を予防することおよび感染と闘うことに役立つ特別な種類の白血球である。がん患者に好中球減少症が生じる最も一般的な理由は、化学療法の副作用である。化学療法誘発性好中球減少症により、患者の感染リスクが高まり、がん治療が妨害される。
【0391】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種を受ける免疫無防備状態の対象は、５００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または３００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または２００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、１００個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、７５個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または５０個／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数を有する。
【0392】
ＣＤ４細胞試験は、通常、１ｍｍ３中の細胞の数として報告される。正常なＣＤ４数は５００個から１，６００個の間であり、ＣＤ８数は３７５個から１，１００個の間である。ＣＤ４数はＨＩＶを有する人では劇的に減少する。
【0393】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫無防備状態のヒト対象はいずれも、ヒト男性またはヒト女性である。
【0394】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受けるヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている。前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量は、ＢＮＴ１６２ｂ２の用量であることが好ましい。
【0395】
本発明のある実施形態では、肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与を受けるヒト対象は、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている。前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量は、それぞれ、ＢＮＴ１６２ｂ２の用量であることが好ましい。好ましい実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンと同時投与される前記ＰＣＶは、Ｐｒｅｖｎａｒ１３（登録商標）、Ｖ１１４または２０ｖＰｎＣ（Ｐｒｅｖｎａｒ２０（登録商標））ワクチンである。
【0396】
したがって、ＰＣＶの用量をＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンのブースター用量と同時投与することは本発明の好ましい実施形態である。好ましい実施形態では、前記ブースター用量と同時投与される前記ＰＣＶは、Ｐｒｅｖｎａｒ１３（登録商標）、Ｖ１１４または２０ｖＰｎＣ（Ｐｒｅｖｎａｒ２０（登録商標））ワクチンである。
【0397】
配列
【0398】
【表5-1】
【0399】
【表5-2】
【0400】
【表5-3】
【0401】
【表5-4】
【実施例】
【0402】
（実施例１）
２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（２０ｖＰｎＣ）の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を予防するためのｍＲＮＡワクチン（ＢＮＴ１６２ｂ２）と同時投与した場合の安全性および免疫原性試験
ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンを他のワクチンと同時投与した場合の安全性および免疫原性データが現在欠如していることから、現行のＵＳ Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ（ＡＣＩＰ）ガイダンスでは、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンは、任意の他のワクチンの投与前またはその後に最低１４日間の間隔をおいて単独で投与すべきとされている。
２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（２０ｖＰｎＣ）の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を予防するためのｍＲＮＡワクチン（ＢＮＴ１６２ｂ２）と同時投与した場合の安全性および免疫原性試験
ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンを他のワクチンと同時投与した場合の安全性および免疫原性データが現在欠如していることから、現行のＵＳ Ａｄｖｉｓｏｒｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ（ＡＣＩＰ）ガイダンスでは、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンは、任意の他のワクチンの投与前またはその後に最低１４日間の間隔をおいて単独で投与すべきとされている。
【0403】
図１に示されている通り、６５歳以上の成人に対する、２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（２０ｖＰｎＣ）とＢＮＴ１６２ｂ２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染症を予防するためのｍＲＮＡワクチン）のブースター用量を同じ来院時に一緒に投与した場合の安全性および免疫原性を、これらのワクチンをそれぞれ単独で与薬した場合と比較して記述するための臨床試験が設計された。
【0404】
目的：
主要目的：
・ ２０ｖＰｎＣとＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量の、同時投与した場合または単独で投与した場合の安全性プロファイルを記述すること。
主要目的：
・ ２０ｖＰｎＣとＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量の、同時投与した場合または単独で投与した場合の安全性プロファイルを記述すること。
【0405】
副次的目的：
・ ＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量と同時投与した場合または単独で投与した場合に２０ｖＰｎＣによって引き出される免疫応答を記述すること。
・ ２０ｖＰｎＣと同時投与した場合または単独で投与した場合にＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量によって引き出される免疫応答を記述すること。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量と同時投与した場合または単独で投与した場合に２０ｖＰｎＣによって引き出される免疫応答を記述すること。
・ ２０ｖＰｎＣと同時投与した場合または単独で投与した場合にＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量によって引き出される免疫応答を記述すること。
【0406】
評価項目：
主要（安全性）：
・ 各注射部位において引き起こされた局所反応（注射部位の発赤、腫脹、および疼痛）
・ 引き起こされた全身事象（発熱、頭痛、悪寒、疲労、筋肉痛、および関節痛）
・ 有害事象
・ 重篤な有害事象
主要（安全性）：
・ 各注射部位において引き起こされた局所反応（注射部位の発赤、腫脹、および疼痛）
・ 引き起こされた全身事象（発熱、頭痛、悪寒、疲労、筋肉痛、および関節痛）
・ 有害事象
・ 重篤な有害事象
【0407】
副次：
・ 肺炎球菌免疫原性：ワクチン接種のおよそ１カ月（例えば、約２１～３５日）後の肺炎球菌ＯＰＡ力価、ＯＰＡ ＧＭＴ
・ ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性：全長Ｓ結合性ＩｇＧレベル
・ 肺炎球菌免疫原性：ワクチン接種のおよそ１カ月（例えば、約２１～３５日）後の肺炎球菌ＯＰＡ力価、ＯＰＡ ＧＭＴ
・ ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性：全長Ｓ結合性ＩｇＧレベル
【0408】
エスティマンド：
主要（安全性）：
試験介入の用量を少なくとも１回受け、ワクチン接種後に安全性追跡調査がなされた参加者の中で、以下が報告された参加者のパーセンテージ；
・ ワクチン接種後最長１０日間で各注射部位において引き起こされた局所反応
・ ワクチン接種後最長７日間で引き起こされた全身事象
・ 来院１からワクチン接種のおよそ１カ月後までの、ワクチン接種によるＡＥ
・ 来院１からワクチン接種の６カ月後までの、ワクチン接種によるＳＡＥ
主要（安全性）：
試験介入の用量を少なくとも１回受け、ワクチン接種後に安全性追跡調査がなされた参加者の中で、以下が報告された参加者のパーセンテージ；
・ ワクチン接種後最長１０日間で各注射部位において引き起こされた局所反応
・ ワクチン接種後最長７日間で引き起こされた全身事象
・ 来院１からワクチン接種のおよそ１カ月後までの、ワクチン接種によるＡＥ
・ 来院１からワクチン接種の６カ月後までの、ワクチン接種によるＳＡＥ
【0409】
副次：
・ 肺炎球菌免疫原性：試験実施計画書の重要な基準を満たした参加者（評価可能な参加者）の中で：ワクチン接種のおよそ１カ月後のＯＰＡ ＧＭＴ（幾何平均力価）
・ ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性：評価可能な参加者の中で：ワクチン接種のおよそ１カ月後の全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルのＧＭＣ（幾何平均濃度）、ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までの全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルのＧＭＦＲ（幾何平均上昇倍率）
・ 肺炎球菌免疫原性：試験実施計画書の重要な基準を満たした参加者（評価可能な参加者）の中で：ワクチン接種のおよそ１カ月後のＯＰＡ ＧＭＴ（幾何平均力価）
・ ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性：評価可能な参加者の中で：ワクチン接種のおよそ１カ月後の全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルのＧＭＣ（幾何平均濃度）、ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までの全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルのＧＭＦＲ（幾何平均上昇倍率）
【0410】
三次／探索的：
・ 肺炎球菌免疫原性：評価可能な参加者の中で：ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までのＯＰＡ力価のＧＭＦＲ、ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後まででＯＰＡ力価の４倍以上の上昇、ワクチン接種前およびワクチン接種のおよそ１カ月後にＬＬＯＱ以上のＯＰＡ力価を有した参加者のパーセンテージ。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性：評価可能な参加者の中で：ワクチン接種のおよそ１カ月後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２参照株中和力価のＧＭＴ、ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２参照株中和力価のＧＭＦＲ
・ 肺炎球菌免疫原性：評価可能な参加者の中で：ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までのＯＰＡ力価のＧＭＦＲ、ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後まででＯＰＡ力価の４倍以上の上昇、ワクチン接種前およびワクチン接種のおよそ１カ月後にＬＬＯＱ以上のＯＰＡ力価を有した参加者のパーセンテージ。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性：評価可能な参加者の中で：ワクチン接種のおよそ１カ月後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２参照株中和力価のＧＭＴ、ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２参照株中和力価のＧＭＦＲ
【0411】
全体的な設計
本試験は、米国内の試験施設において実施された第３相、多施設、無作為化、二重盲検試験である。本試験の目的は、図１に示されている通り、６５歳以上の成人に対する、２０ｖＰｎＣとＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量とを同じ来院時に一緒に投与した場合の安全性および免疫原性を、これらのワクチンをそれぞれ単独で与薬した場合と比較して記述することである。
本試験は、米国内の試験施設において実施された第３相、多施設、無作為化、二重盲検試験である。本試験の目的は、図１に示されている通り、６５歳以上の成人に対する、２０ｖＰｎＣとＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量とを同じ来院時に一緒に投与した場合の安全性および免疫原性を、これらのワクチンをそれぞれ単独で与薬した場合と比較して記述することである。
【0412】
米国からの、６５歳以上であり、ＢＮＴ１６２ｂ２、３０μｇの用量を２回受けている参加者およそ６００名を、事前の肺炎球菌ワクチンに関する状態（以前に肺炎球菌ワクチンを受けたことがない［無感作］または肺炎球菌ワクチンの用量を少なくとも１回受けたことがある［経験済］）によって層別化し、３つのワクチン群のうちの１つに１：１：１の比で無作為割付けした。
【0413】
来院１（１日目）において、同時投与群（２０ｖＰｎＣ＋ＢＮＴ１６２ｂ２）は、２０ｖＰｎＣおよびＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量を受け、２０ｖＰｎＣ単独群（２０ｖＰｎＣ＋生理食塩水）は２０ｖＰｎＣおよび生理食塩水を受け、ＢＮＴ１６２ｂ２単独群（ＢＮＴ１６２ｂ２＋生理食塩水）はＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量および生理食塩水を受ける。
【0414】
全ての群の参加者が、来院１でワクチンを接種する前、およびワクチン接種のおよそ１カ月後の来院２で、以前のＣＯＶＩＤ－１９感染についての免疫原性の評定および血清学的検査のための採血を受ける。
【0415】
参加者の数
およそ６００名の参加者（群当たり２００名）を試験介入に無作為に割り当てる。
およそ６００名の参加者（群当たり２００名）を試験介入に無作為に割り当てる。
【0416】
介入群および持続時間
参加者を、３つのワクチン群のうちの１つに１：１：１の比で無作為割付けする。来院１（１日目）において、同時投与群は２０ｖＰｎＣおよびＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量を受け、２０ｖＰｎＣ単独群は２０ｖＰｎＣおよび生理食塩水を受け、ＢＮＴ１６２ｂ２単独群はＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量および生理食塩水を受ける。試験介入は、非盲検化投与者により、各腕の三角筋上部に筋肉内注射によって投与される。
参加者を、３つのワクチン群のうちの１つに１：１：１の比で無作為割付けする。来院１（１日目）において、同時投与群は２０ｖＰｎＣおよびＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量を受け、２０ｖＰｎＣ単独群は２０ｖＰｎＣおよび生理食塩水を受け、ＢＮＴ１６２ｂ２単独群はＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量および生理食塩水を受ける。試験介入は、非盲検化投与者により、各腕の三角筋上部に筋肉内注射によって投与される。
【0417】
各参加者について試験の持続時間はおよそ６カ月である。
【0418】
統計学的方法
安全性を、各ワクチン群についての各注射部位における局所反応、全身事象、ＡＥ、およびＳＡＥに関する記述要約統計（参加者の計数およびパーセンテージおよび関連する両側９５％ＣＩを含む）によって評価する。
安全性を、各ワクチン群についての各注射部位における局所反応、全身事象、ＡＥ、およびＳＡＥに関する記述要約統計（参加者の計数およびパーセンテージおよび関連する両側９５％ＣＩを含む）によって評価する。
【0419】
肺炎球菌免疫原性を、２０ｖＰｎＣのおよそ１カ月後のＯＰＡ ＧＭＴによって記述的に評価する。同時投与群および２０ｖＰｎＣ単独群からの評価可能な参加者に関して、それぞれ対応する９５％ＣＩを伴う、２０ｖＰｎＣの前からおよそ１カ月後までのＯＰＡ ＧＭＦＲ、２０ｖＰｎＣの前からおよそ１カ月後まででＯＰＡ力価が４倍以上増大した参加者のパーセンテージ、および２０ｖＰｎＣのおよそ１カ月後にＯＰＡ力価がＬＬＯＱ以上である参加者のパーセンテージを含めた免疫応答に関する他の評定も記述する。
【0420】
ＢＮＴ１６２ｂ２免疫原性を、同時投与群およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群からの評価可能な参加者に関して、それぞれ対応する両側９５％ＣＩを伴う、ＢＮＴ１６２ｂ２のおよそ１カ月後の全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルのＧＭＣ、およびＢＮＴ１６２ｂ２の前からおよそ１カ月後までのＧＭＦＲを使用して記述的に評価する。
【0421】
用量
２０ｖＰｎＣ候補は、ＣＲＭ１９７と個別にコンジュゲートした肺炎球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の莢膜多糖を含有する。ワクチン製剤は、０．５ｍＬの用量（筋肉内注射）当たり、各糖を２．２μｇ含有し、例外として６Ｂについては４．４μｇを含有する。成人では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの用量を１回投与することにより、免疫応答が誘導される。
２０ｖＰｎＣ候補は、ＣＲＭ１９７と個別にコンジュゲートした肺炎球菌の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆ由来の莢膜多糖を含有する。ワクチン製剤は、０．５ｍＬの用量（筋肉内注射）当たり、各糖を２．２μｇ含有し、例外として６Ｂについては４．４μｇを含有する。成人では、肺炎球菌コンジュゲートワクチンの用量を１回投与することにより、免疫応答が誘導される。
【0422】
ｍｏｄＲＮＡ ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチン候補の投与は、０．３ｍＬの用量（筋肉内注射）当たり３０μｇの用量で行う。これは、効果的であることが示され、条件付きまたは緊急使用が認められており、今後米国において認可されることが予測される用量である。
【0423】
これらの製品に関して、「用量」という用語は、ある１種のワクチンの１回の注射（ａｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｖａｃｃｉｎｅ）を指す。
【0424】
試験集団
選択基準
参加者は、以下の基準の全てに当てはまる場合にのみ、本試験への組み入れに適格である：
年齢および性別：
１．同意時に６５歳以上の男性または女性参加者。
参加者の型および疾患特性：
２．Ｃ４５９１００１試験に参加中であるまたは参加していた参加者で、ＢＮＴ１６２ｂ２、３０μｇの用量を２回受けており、２回目の用量が本試験における１回目のワクチン接種の６カ月以上前に行われており、かつ、ＢＮＴ１６２ｂ２の３回目の用量を受けていない参加者。
３．全ての予定された来院、処置計画、臨床検査、生活様式に関する配慮、および他の試験手順に応じる意思があり、応じることが可能な参加者。
４．病歴、身体検査（必要に応じて）、および試験担当医師の臨床的判断によって本試験への組み入れに適格であると判定された参加者。
５．本試験の持続時間にわたって求めに応じられることが予測され、試験参加中に電話連絡が可能な参加者。
６．子どもをもうけることが可能であり、許容される避妊方法を使用する意思がある男性参加者；または出産可能性のない女性参加者；または子どもをもうけることができない男性参加者。
７．これまでに肺炎球菌ワクチンを受けた履歴がない（すなわち、肺炎球菌ワクチン無感作）、または認可された肺炎球菌ワクチン接種を本試験における１回目のワクチン接種の１２カ月以上前に受けた成人。
選択基準
参加者は、以下の基準の全てに当てはまる場合にのみ、本試験への組み入れに適格である：
年齢および性別：
１．同意時に６５歳以上の男性または女性参加者。
参加者の型および疾患特性：
２．Ｃ４５９１００１試験に参加中であるまたは参加していた参加者で、ＢＮＴ１６２ｂ２、３０μｇの用量を２回受けており、２回目の用量が本試験における１回目のワクチン接種の６カ月以上前に行われており、かつ、ＢＮＴ１６２ｂ２の３回目の用量を受けていない参加者。
３．全ての予定された来院、処置計画、臨床検査、生活様式に関する配慮、および他の試験手順に応じる意思があり、応じることが可能な参加者。
４．病歴、身体検査（必要に応じて）、および試験担当医師の臨床的判断によって本試験への組み入れに適格であると判定された参加者。
５．本試験の持続時間にわたって求めに応じられることが予測され、試験参加中に電話連絡が可能な参加者。
６．子どもをもうけることが可能であり、許容される避妊方法を使用する意思がある男性参加者；または出産可能性のない女性参加者；または子どもをもうけることができない男性参加者。
７．これまでに肺炎球菌ワクチンを受けた履歴がない（すなわち、肺炎球菌ワクチン無感作）、または認可された肺炎球菌ワクチン接種を本試験における１回目のワクチン接種の１２カ月以上前に受けた成人。
【0425】
説明と同意：
８．同意書に署名することが可能な参加者。
除外基準
以下の基準のいずれかに当てはまる参加者を本試験から除外する：
医学的状態：
１．ワクチンに付随する重度の有害反応歴および／または試験介入もしくは任意の他のジフテリアトキソイド含有ワクチンのいずれかの構成成分に対する重度のアレルギー反応（例えば、アナフィラキシー）歴。
２．転移性悪性腫瘍、酸素補給を必要とする重症ＣＯＰＤ、透析を伴うもしくは伴わない末期腎疾患、肝硬変、臨床的に不安定な心疾患、または試験担当医師の見解で、参加者が本試験への登録に不適切になる任意の他の障害を含めた重篤な慢性障害。
３．微生物学的に証明された、肺炎球菌（Ｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって引き起こされる侵襲性疾患歴。
４．以前の臨床的または微生物学的なＣＯＶＩＤ－１９の診断。
５．分かっているまたはその疑いがある免疫不全（安定ＨＩＶ以外）、またはこれだけに限定されないが、免疫グロブリンクラス／サブクラス欠乏症、全身悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、もしくは臓器もしくは骨髄移植を含めた、免疫抑制に関連する他の状態。
６．試験担当医師の見解で、筋肉内注射が禁忌であると思われる出血性素因または持続的な出血に関連する状態。
７．先天性、機能性、または外科的無脾症。
８．現在の熱性疾病（体温が１００．４°Ｆ以上［３８．０℃以上］であること）または試験介入投与前４８時間以内の他の急性疾病。
９．試験参加のリスクが増大し得るまたは試験担当医師の判断で参加者が本試験に不適切になる、最近（過去１年以内）のまたは継続中の自殺念慮／挙動または検査値異常を含めた他の医学的または精神医学的状態。
以前の／付随的治療：
１０．任意の調査中の肺炎球菌ワクチンによるワクチン接種を以前に受けている、または試験参加中に任意の認可されたもしくは調査中の肺炎球菌ワクチンを受ける予定である。
１１．Ｃ４５９１００１試験において受けたもの以外の任意のコロナウイルスワクチンを用いたワクチン接種を以前に受けている。
１２．細胞傷害性薬剤または全身性コルチコステロイドを含めた免疫抑制療法を用いた治療を現在受けている、試験介入の投与前２８日以内に急性疾病治療のために短期（１４日間未満）の全身性コルチコステロイドを受けている、または最後の採血（来院２）まで受ける予定である。吸入／噴霧、関節内、滑液包内、または局部（皮膚、眼、または耳）コルチコステロイドは許容される。
１３．血液／血漿製品、免疫グロブリン、もしくはモノクローナル抗体を試験介入の投与の６０日前から受けている、またはＣＯＶＩＤ－１９に特異的な任意の受動的抗体療法を試験介入の投与の９０日前から受けている、または来院２まで受ける予定である。
１４．任意の不活化もしくは他のやり方で非生ワクチンにしたワクチンを試験介入の投与前１４日以内に受けている、または任意の生ワクチンを試験介入の投与前２８日以内に受けている。
以前の／並行した臨床試験の経験：
１５．試験登録前２８日以内、および／または試験参加中の、Ｃ４５９１００１試験以外の調査中の薬、調査中のワクチン、または調査中のデバイスを伴う他の試験への参加。純粋に観察に基づく試験への参加は許容される。
１６．ＬＮＰを含有する試験介入を伴うＣ４５９１００１以外の試験への以前の参加。
８．同意書に署名することが可能な参加者。
除外基準
以下の基準のいずれかに当てはまる参加者を本試験から除外する：
医学的状態：
１．ワクチンに付随する重度の有害反応歴および／または試験介入もしくは任意の他のジフテリアトキソイド含有ワクチンのいずれかの構成成分に対する重度のアレルギー反応（例えば、アナフィラキシー）歴。
２．転移性悪性腫瘍、酸素補給を必要とする重症ＣＯＰＤ、透析を伴うもしくは伴わない末期腎疾患、肝硬変、臨床的に不安定な心疾患、または試験担当医師の見解で、参加者が本試験への登録に不適切になる任意の他の障害を含めた重篤な慢性障害。
３．微生物学的に証明された、肺炎球菌（Ｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）によって引き起こされる侵襲性疾患歴。
４．以前の臨床的または微生物学的なＣＯＶＩＤ－１９の診断。
５．分かっているまたはその疑いがある免疫不全（安定ＨＩＶ以外）、またはこれだけに限定されないが、免疫グロブリンクラス／サブクラス欠乏症、全身悪性腫瘍、白血病、リンパ腫、もしくは臓器もしくは骨髄移植を含めた、免疫抑制に関連する他の状態。
６．試験担当医師の見解で、筋肉内注射が禁忌であると思われる出血性素因または持続的な出血に関連する状態。
７．先天性、機能性、または外科的無脾症。
８．現在の熱性疾病（体温が１００．４°Ｆ以上［３８．０℃以上］であること）または試験介入投与前４８時間以内の他の急性疾病。
９．試験参加のリスクが増大し得るまたは試験担当医師の判断で参加者が本試験に不適切になる、最近（過去１年以内）のまたは継続中の自殺念慮／挙動または検査値異常を含めた他の医学的または精神医学的状態。
以前の／付随的治療：
１０．任意の調査中の肺炎球菌ワクチンによるワクチン接種を以前に受けている、または試験参加中に任意の認可されたもしくは調査中の肺炎球菌ワクチンを受ける予定である。
１１．Ｃ４５９１００１試験において受けたもの以外の任意のコロナウイルスワクチンを用いたワクチン接種を以前に受けている。
１２．細胞傷害性薬剤または全身性コルチコステロイドを含めた免疫抑制療法を用いた治療を現在受けている、試験介入の投与前２８日以内に急性疾病治療のために短期（１４日間未満）の全身性コルチコステロイドを受けている、または最後の採血（来院２）まで受ける予定である。吸入／噴霧、関節内、滑液包内、または局部（皮膚、眼、または耳）コルチコステロイドは許容される。
１３．血液／血漿製品、免疫グロブリン、もしくはモノクローナル抗体を試験介入の投与の６０日前から受けている、またはＣＯＶＩＤ－１９に特異的な任意の受動的抗体療法を試験介入の投与の９０日前から受けている、または来院２まで受ける予定である。
１４．任意の不活化もしくは他のやり方で非生ワクチンにしたワクチンを試験介入の投与前１４日以内に受けている、または任意の生ワクチンを試験介入の投与前２８日以内に受けている。
以前の／並行した臨床試験の経験：
１５．試験登録前２８日以内、および／または試験参加中の、Ｃ４５９１００１試験以外の調査中の薬、調査中のワクチン、または調査中のデバイスを伴う他の試験への参加。純粋に観察に基づく試験への参加は許容される。
１６．ＬＮＰを含有する試験介入を伴うＣ４５９１００１以外の試験への以前の参加。
【0426】
投与
参加者は、来院１で試験介入を受ける。
参加者は、来院１で試験介入を受ける。
【0427】
来院１で、参加者は、２０ｖＰｎＣまたは生理食塩水のいずれかの０．５ｍＬの単回用量を右側三角筋への筋肉内注射で受け、ＢＮＴ１６２ｂ２または生理食塩水のいずれかの０．３ｍＬの単回用量を左側三角筋への筋肉内注射で受ける。
【0428】
免疫原性の評定
全ての参加者から来院１および２で血液試料を収集する。
全ての参加者から来院１および２で血液試料を収集する。
【0429】
肺炎球菌応答
同時投与群および２０ｖＰｎＣ単独群から来院１および２で収集した血清中の２０ｖＰｎＣ血清型についてのＯＰＡ力価を測定する。
同時投与群および２０ｖＰｎＣ単独群から来院１および２で収集した血清中の２０ｖＰｎＣ血清型についてのＯＰＡ力価を測定する。
【0430】
ＢＮＴ１６２ｂ２応答
同時投与群およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群から来院１および２で収集した血清中のＩｇＧレベルをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合アッセイで測定する。
同時投与群およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群から来院１および２で収集した血清中のＩｇＧレベルをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合アッセイで測定する。
【0431】
同時投与群およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群から来院１および２で収集した血清のサブセット中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２参照株中和力価を測定することができる。
【0432】
来院１および２で取得した血液試料についてＮ結合性抗体の測定も行う。
【0433】
（実施例２）
６５歳以上の成人に対する、ＢＮＴ１６２ｂ２ ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンのブースター用量を２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ２０）と同時投与した場合の安全性、忍容性、および免疫原性
緒言。６５歳以上の成人は、ＣＯＶＩＤ－１９および肺炎球菌疾患による罹患率および死亡率に関してリスクが高い。Ｃｏｖｉｄ－１９の予防におけるＢＮＴ１６２ｂ２ ｍＲＮＡ ＣＯＶＩＤ－１９ワクチン（コミナティ（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ））の２回用量（３０μｇ／用量、２１日の間隔をおいて投与）の有効性および安全性が、１６歳以上の個体に対する、世界的な無作為化、プラセボ対照第２／３相試験（Ｃ４５９１００１試験、ＮＣＴ０４３６８７２８）において確立され、６５歳以上の個体に対する有効性は９４．７％であった。２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ２０）は、米国および欧州において成人における侵襲性肺炎球菌疾患およびワクチン血清型に起因する肺炎に関して最近承認されたものであり、１３価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ１３）と、それに加えて、７種の追加的な血清型のコンジュゲートした多糖という構成成分とを含有する。ＰＣＶ１３は、６５歳以上の成人に対する無作為化対照試験において、非菌血性肺炎を含めた肺炎球菌性肺炎に対する有効性および安全性が実証されている。現在、多くの国において成人に対してＣＯＶＩＤ－１９ワクチンのブースター用量が推奨されている。したがって、ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンとＰＣＶ２０の標的集団は重複するので、ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンをＰＣＶ２０と同じ集団に使用することができる。
６５歳以上の成人に対する、ＢＮＴ１６２ｂ２ ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンのブースター用量を２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ２０）と同時投与した場合の安全性、忍容性、および免疫原性
緒言。６５歳以上の成人は、ＣＯＶＩＤ－１９および肺炎球菌疾患による罹患率および死亡率に関してリスクが高い。Ｃｏｖｉｄ－１９の予防におけるＢＮＴ１６２ｂ２ ｍＲＮＡ ＣＯＶＩＤ－１９ワクチン（コミナティ（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ））の２回用量（３０μｇ／用量、２１日の間隔をおいて投与）の有効性および安全性が、１６歳以上の個体に対する、世界的な無作為化、プラセボ対照第２／３相試験（Ｃ４５９１００１試験、ＮＣＴ０４３６８７２８）において確立され、６５歳以上の個体に対する有効性は９４．７％であった。２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ２０）は、米国および欧州において成人における侵襲性肺炎球菌疾患およびワクチン血清型に起因する肺炎に関して最近承認されたものであり、１３価肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ１３）と、それに加えて、７種の追加的な血清型のコンジュゲートした多糖という構成成分とを含有する。ＰＣＶ１３は、６５歳以上の成人に対する無作為化対照試験において、非菌血性肺炎を含めた肺炎球菌性肺炎に対する有効性および安全性が実証されている。現在、多くの国において成人に対してＣＯＶＩＤ－１９ワクチンのブースター用量が推奨されている。したがって、ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンとＰＣＶ２０の標的集団は重複するので、ＢＮＴ１６２ｂ２ワクチンをＰＣＶ２０と同じ集団に使用することができる。
【0434】
試験設計および参加者。
この第３相、多施設、無作為化、二重盲検試験（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖＮＣＴ０４８８７９４８）は、米国において２０２１年５月２０日から２０２１年１２月８日まで実施された。
・ 参加者は、中心的な有効性試験（Ｃ４５９１００１）においてＢＮＴ１６２ｂ２、３０μｇの用量を２回受け、２回目の用量を本試験におけるワクチン接種の６カ月以上前に受けており、かつ、いかなるＣＯＶＩＤ－１９ワクチンのブースター用量も受けていない６５歳以上の成人であった。
・ 参加者を、以下の通り、事前の肺炎球菌ワクチンに関する状態（無感作または経験済）によって層別化し、３つの群のうちの１つに１：１：１に無作為割付けした：同時投与群（同じ来院時に両方のワクチンを参加者の逆側の腕に投与する）、ＰＣＶ２０単独群、およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群。対照群に関しては、盲検化を維持するために、生理食塩水を参加者の逆側の腕に投与した。
この第３相、多施設、無作為化、二重盲検試験（ＣｌｉｎｉｃａｌＴｒｉａｌｓ．ｇｏｖＮＣＴ０４８８７９４８）は、米国において２０２１年５月２０日から２０２１年１２月８日まで実施された。
・ 参加者は、中心的な有効性試験（Ｃ４５９１００１）においてＢＮＴ１６２ｂ２、３０μｇの用量を２回受け、２回目の用量を本試験におけるワクチン接種の６カ月以上前に受けており、かつ、いかなるＣＯＶＩＤ－１９ワクチンのブースター用量も受けていない６５歳以上の成人であった。
・ 参加者を、以下の通り、事前の肺炎球菌ワクチンに関する状態（無感作または経験済）によって層別化し、３つの群のうちの１つに１：１：１に無作為割付けした：同時投与群（同じ来院時に両方のワクチンを参加者の逆側の腕に投与する）、ＰＣＶ２０単独群、およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群。対照群に関しては、盲検化を維持するために、生理食塩水を参加者の逆側の腕に投与した。
【0435】
本試験では３回の来院を実施した。
－ 来院１（１日目）において、参加者のスクリーニングおよび登録を行い、免疫原性試験用の血液を採取し、ワクチンを投与した。
－ 来院２（来院１の２１～３５日後）において、免疫原性試験用の血液を採取し、安全性データを収集した。
－ 来院３（来院１のおよそ６カ月後）において、安全性データを収集するために参加者に電話連絡した。
－ 来院１（１日目）において、参加者のスクリーニングおよび登録を行い、免疫原性試験用の血液を採取し、ワクチンを投与した。
－ 来院２（来院１の２１～３５日後）において、免疫原性試験用の血液を採取し、安全性データを収集した。
－ 来院３（来院１のおよそ６カ月後）において、安全性データを収集するために参加者に電話連絡した。
【0436】
安全性：
・ 各注射部位において引き起こされた局所反応（注射部位の発赤、腫脹、疼痛）および全身事象（発熱、疲労、頭痛、悪寒、筋肉痛、関節痛）を、ｅ－ダイアリー（ｅ－ｄｉａｒｙ）を使用し、ワクチン接種の１０日後および７日後にそれぞれ評定した。
・ 有害事象（ＡＥ）および重篤なＡＥ（ＳＡＥ）をワクチン接種の１カ月後および６カ月後にそれぞれ収集した。
・ 各注射部位において引き起こされた局所反応（注射部位の発赤、腫脹、疼痛）および全身事象（発熱、疲労、頭痛、悪寒、筋肉痛、関節痛）を、ｅ－ダイアリー（ｅ－ｄｉａｒｙ）を使用し、ワクチン接種の１０日後および７日後にそれぞれ評定した。
・ 有害事象（ＡＥ）および重篤なＡＥ（ＳＡＥ）をワクチン接種の１カ月後および６カ月後にそれぞれ収集した。
【0437】
免疫原性：
・ ＰＣＶ２０を受けた２群に関して、ＰＣＶ２０血清型についての血清型特異的オプソニン化貪食活性（ＯＰＡ）力価を、ワクチン接種前およびワクチン接種の１カ月後にＰｆｉｚｅｒ ＯＰＡアッセイで測定した。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２を受けた２群に関して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧの濃度をワクチン接種前およびワクチン接種の１カ月後に測定した。
・ ＰＣＶ２０を受けた２群に関して、ＰＣＶ２０血清型についての血清型特異的オプソニン化貪食活性（ＯＰＡ）力価を、ワクチン接種前およびワクチン接種の１カ月後にＰｆｉｚｅｒ ＯＰＡアッセイで測定した。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２を受けた２群に関して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧの濃度をワクチン接種前およびワクチン接種の１カ月後に測定した。
【0438】
統計解析：
・ 統計解析は記述的なものであり、仮説検定は伴わなかった。
・ 安全性に関する結果を安全性解析対象集団について記述的に要約した。安全性解析対象集団には任意の試験ワクチン接種を受け、安全性追跡調査がなされた全ての参加者が含まれた。
・ 免疫原性に関する結果を評価可能な免疫原性集団について記述的に要約した。評価可能な免疫原性集団には、無作為割付けでワクチン接種を受け、ワクチン接種の１カ月後に採取された血液試料から少なくとも１つのＯＰＡ力価またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧの濃度が得られ、かつ、臨床医によって決定される主要な試験実施計画書逸脱が認められなかった参加者が含まれた。さらに、ワクチン接種からＢＮＴ１６２ｂ２ワクチン接種の１カ月後の間にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染が生じたことが臨床的に実証された参加者は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ＩｇＧ解析から除外した。
・ 血清型特異的ＯＰＡ幾何平均力価（ＧＭＴ）およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧ幾何平均濃度（ＧＭＣ）ならびに対応する両側９５％ＣＩを、力価または濃度および対応する信頼区間（ＣＩ；スチューデントのｔ分布に基づく）の平均対数の指数をとることによって算出した。
・ ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までの全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルの幾何平均の上昇倍率（ＧＭＦＲ）（副次評価項目）を、対数変換したアッセイ結果の差異（接種後－接種前）の平均値として算出し、指数をとって元の単位に戻した。関連する両側９５％ＣＩを、自然対数目盛での平均差異についてスチューデントのｔ分布を使用してＣＩの指数をとることによってコンピュータ計算した。
・ 線形回帰モデルを使用した事後解析を実施して、同時投与群とＰＣＶ２０単独群におけるワクチン接種の１カ月後の血清型特異的ＯＰＡ力価を比較した。同様の事後解析により、同時投与群におけるワクチン接種の１カ月後の全長Ｓ結合性濃度をＢＮＴ１６２ｂ２単独群と比較して評価した。
・ 統計解析は記述的なものであり、仮説検定は伴わなかった。
・ 安全性に関する結果を安全性解析対象集団について記述的に要約した。安全性解析対象集団には任意の試験ワクチン接種を受け、安全性追跡調査がなされた全ての参加者が含まれた。
・ 免疫原性に関する結果を評価可能な免疫原性集団について記述的に要約した。評価可能な免疫原性集団には、無作為割付けでワクチン接種を受け、ワクチン接種の１カ月後に採取された血液試料から少なくとも１つのＯＰＡ力価またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧの濃度が得られ、かつ、臨床医によって決定される主要な試験実施計画書逸脱が認められなかった参加者が含まれた。さらに、ワクチン接種からＢＮＴ１６２ｂ２ワクチン接種の１カ月後の間にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染が生じたことが臨床的に実証された参加者は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ ＩｇＧ解析から除外した。
・ 血清型特異的ＯＰＡ幾何平均力価（ＧＭＴ）およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性ＩｇＧ幾何平均濃度（ＧＭＣ）ならびに対応する両側９５％ＣＩを、力価または濃度および対応する信頼区間（ＣＩ；スチューデントのｔ分布に基づく）の平均対数の指数をとることによって算出した。
・ ワクチン接種前からワクチン接種のおよそ１カ月後までの全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルの幾何平均の上昇倍率（ＧＭＦＲ）（副次評価項目）を、対数変換したアッセイ結果の差異（接種後－接種前）の平均値として算出し、指数をとって元の単位に戻した。関連する両側９５％ＣＩを、自然対数目盛での平均差異についてスチューデントのｔ分布を使用してＣＩの指数をとることによってコンピュータ計算した。
・ 線形回帰モデルを使用した事後解析を実施して、同時投与群とＰＣＶ２０単独群におけるワクチン接種の１カ月後の血清型特異的ＯＰＡ力価を比較した。同様の事後解析により、同時投与群におけるワクチン接種の１カ月後の全長Ｓ結合性濃度をＢＮＴ１６２ｂ２単独群と比較して評価した。
【0439】
試験集団：
・ 合計５７０名の参加者を無作為割付けした。
－ ５５９名の参加者が、ワクチン接種を受け、安全性解析対象集団を構成した（同時投与、ｎ＝１８７；ＰＣＶ２０単独、ｎ＝１８７；ＢＮＴ１６２ｂ２単独、ｎ＝１８５）。
・ 人口統計特徴はワクチン群の間で同様であった（表１）。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２の２回目の用量からの平均経過時間は８．１カ月であり、直近の肺炎球菌ワクチン接種からの平均経過時間は３．５年であった（表１）。
・ 合計５７０名の参加者を無作為割付けした。
－ ５５９名の参加者が、ワクチン接種を受け、安全性解析対象集団を構成した（同時投与、ｎ＝１８７；ＰＣＶ２０単独、ｎ＝１８７；ＢＮＴ１６２ｂ２単独、ｎ＝１８５）。
・ 人口統計特徴はワクチン群の間で同様であった（表１）。
・ ＢＮＴ１６２ｂ２の２回目の用量からの平均経過時間は８．１カ月であり、直近の肺炎球菌ワクチン接種からの平均経過時間は３．５年であった（表１）。
【0440】
【表6】
【0441】
安全性。ＰＣＶ２０およびＢＮＴ１６２ｂ２の注射部位のそれぞれにおいて１０日以内に局所反応が報告された参加者のパーセンテージは、ワクチンが一緒にもたらされたか単独でもたらされたかにかかわらず同様であり、反応の重症度は概して軽度または中等度であった。全身事象の率は同時投与群およびＢＮＴ１６２ｂ２単独群とで同様であり、概してＰＣＶ２０単独群よりも高かった；事象の重症度は概して軽度から中等度であった。
【0442】
－ 全てのワクチン群について最も頻繁に報告された全身事象は疲労であった。
【0443】
ワクチン接種後１カ月以内のＡＥ、およびワクチン接種の６カ月後までの重篤なＡＥ（ＳＡＥ）の率は低く、全ての群にわたって同様であった。
【0444】
ワクチンに関連すると考えられるＳＡＥはなく、また、試験中に１例の死亡が生じた（十二指腸穿孔、ワクチンに関連するとは考えられない）。
【0445】
ＰＣＶ２０により、２０種の血清型全てに対して頑強な免疫応答が引き出され、その応答は、ＰＣＶ２０をＢＮＴ１６２ｂ２と同時投与した場合と単独でもたらした場合で同様であった（図４）。
【0446】
ＢＮＴ１６２ｂ２の３回目の用量によってもＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性タンパク質に対する頑強な免疫ＩｇＧ応答が引き出され、その応答は、ＢＮＴ１６２ｂ２をＰＣＶ２０と同時投与したか単独でもたらしたかにかかわらず同様であった（図５）。
【0447】
－ ＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量前からＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量の１カ月後までで観察された全長Ｓ結合性ＩｇＧレベルのＧＭＦＲは、同時投与群とＢＮＴ１６２ｂ２単独群とで同様であった（それぞれ３５．５および３９．０）。
【0448】
事後解析に基づいて、ＰＣＶ２０の１カ月後における同時投与群のＰＣＶ２０単独群に対するＯＰＡ ＧＭＲは、０．７７（血清型８、１９Ｆ、および２３Ｆ）から１．１１（血清型１９Ａ；図６）までにわたった。
【0449】
ＢＮＴ１６２ｂ２のブースター用量の１カ月後における同時投与群のＢＮＴ１６２ｂ２単独群に対する全長Ｓ結合性ＩｇＧ ＧＭＲは１．０６（９５％ＣＩ、０．９１、１．２３）であった。
【0450】
応答は、統計学的に非劣性であると思われ、ＰＣＶ２０単独に対して、同時投与での肺炎球菌ＯＰＡ ＧＭＲの９５％ＣＩの下限は、各血清型について＞０．５であり、ＢＮＴ１６２ｂ２単独に対して、同時投与でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２全長Ｓ結合性タンパク質に対するＩｇＧ ＧＭＲについては＞０．６７であった。０．５および０．６７は、それぞれ、これらの評価項目についての標準的な２倍および１．５倍の非劣性基準に相当する。
【0451】
結論：
・ ＰＣＶ２０とＢＮＴ１６２ｂ２の同時投与は、忍容性が良好であり、全体的な安全性プロファイルはＢＮＴ１６２ｂ２単独で投与した場合と同様であった。
・ ＰＣＶ２０とＢＮＴ１６２ｂ２とを付随的に投与したか別々に投与したかにかかわらず頑強な免疫応答が観察された。
・ ＰＣＶ２０とＢＮＴ１６２ｂ２の同時投与は、忍容性が良好であり、全体的な安全性プロファイルはＢＮＴ１６２ｂ２単独で投与した場合と同様であった。
・ ＰＣＶ２０とＢＮＴ１６２ｂ２とを付随的に投与したか別々に投与したかにかかわらず頑強な免疫応答が観察された。
【0452】
本明細書において言及されている全ての刊行物および特許出願は、本発明が関係する技術分野の当業者の水準を示すものである。全ての刊行物および特許出願は、これによって、個々の刊行物または特許出願が具体的にかつ個別に参照により組み込まれることが示された場合と同じ程度に参照により組み込まれる。
【0453】
前述の発明は、明瞭な理解のために図解および実施例により一部の詳細について記載されているが、ある特定の変化および改変を添付の特許請求の範囲の範囲内で行うことができる。
【0454】
実施形態
１．ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、有効用量の肺炎球菌コンジュゲートワクチンと、有効用量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンとを同時投与するステップを含む方法。
１．ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、有効用量の肺炎球菌コンジュゲートワクチンと、有効用量のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンとを同時投与するステップを含む方法。
【0455】
２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンを並行してまたは付随的に投与する、実施形態１の方法。
【0456】
３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンを並行して投与する、実施形態１の方法。
【0457】
４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンを付随的に投与する、実施形態１の方法。
【0458】
５．ワクチンそれぞれ１回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0459】
６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの少なくとも２回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0460】
７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの少なくとも３回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0461】
８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの少なくとも４回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0462】
９．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの２回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0463】
１０．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの３回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0464】
１１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの４回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0465】
１２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの前記用量が、約２週間～約１２カ月の間隔で分けられている、実施形態６から１１のいずれか１つの方法。
【0466】
１３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0467】
１４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの少なくとも２回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0468】
１５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの少なくとも３回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0469】
１６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの少なくとも４回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0470】
１７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0471】
１８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの３回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0472】
１９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの４回の用量を投与する、実施形態１から１２のいずれか１つの方法。
【0473】
２０．肺炎球菌コンジュゲートワクチンの前記用量が、約２週間～約１２カ月の間隔で分けられている、実施形態１４から１９のいずれか１つの方法。
【0474】
２１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0475】
２２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与する、実施形態２１の方法。
【0476】
２３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与する、実施形態２１の方法。
【0477】
２４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量に付随的に投与する、実施形態２１の方法。
【0478】
２５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量に付随的に投与する、実施形態２１の方法。
【0479】
２６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与する、実施形態２１の方法。
【0480】
２７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与する、実施形態２１の方法。
【0481】
２８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0482】
２９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与する、実施形態２８の方法。
【0483】
３０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与する、実施形態２８の方法。
【0484】
３１．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と同時投与する、実施形態２８の方法。
【0485】
３２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与する、実施形態２８の方法。
【0486】
３３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与する、実施形態２８の方法。
【0487】
３４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と並行して投与する、実施形態２８の方法。
【0488】
３５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量に付随的に投与する、実施形態２８の方法。
【0489】
３６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量に付随的に投与する、実施形態２８の方法。
【0490】
３７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量に付随的に投与する、実施形態２８の方法。
【0491】
３８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0492】
３９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与する、実施形態３８の方法。
【0493】
４０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与する、実施形態３８の方法。
【0494】
４１．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と同時投与する、実施形態３８の方法。
【0495】
４２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と同時投与する、実施形態３８の方法。
【0496】
４３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与する、実施形態３８の方法。
【0497】
４４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与する、実施形態３８の方法。
【0498】
４５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と並行して投与する、実施形態３８の方法。
【0499】
４６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と並行して投与する、実施形態３８の方法。
【0500】
４７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量に付随的に投与する、実施形態３８の方法。
【0501】
４８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量に付随的に投与する、実施形態３８の方法。
【0502】
４９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量に付随的に投与する、実施形態３８の方法。
【0503】
５０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量に付随的に投与する、実施形態３８の方法。
【0504】
５１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0505】
５２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0506】
５３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0507】
５４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６カ月の間隔で分けられている、実施形態２１から５３のいずれか１つの方法。
【0508】
５５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約２カ月の間隔で分けられている、実施形態２１から５３のいずれか１つの方法。
【0509】
５６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６週間の間隔で分けられている、実施形態２１から５３のいずれか１つの方法。
【0510】
５７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約４カ月の間隔で分けられている、実施形態２１から５３のいずれか１つの方法。
【0511】
５８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約３週間の間隔で分けられている、実施形態２１から５３のいずれか１つの方法。
【0512】
５９．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0513】
６０．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約２カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0514】
６１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0515】
６２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約４カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0516】
６３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約３週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0517】
６４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0518】
６５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約２カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0519】
６６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0520】
６７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約４カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0521】
６８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約３週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態２８から５３のいずれか１つの方法。
【0522】
６９．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0523】
７０．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態６９の方法。
【0524】
７１．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態６９の方法。
【0525】
７２．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態６９の方法。
【0526】
７３．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態６９の方法。
【0527】
７４．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態６９の方法。
【0528】
７５．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0529】
７６．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態７５の方法。
【0530】
７７．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態７５の方法。
【0531】
７８．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態７５の方法。
【0532】
７９．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態７５の方法。
【0533】
８０．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態７５の方法。
【0534】
８１．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0535】
８２．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態８１の方法。
【0536】
８３．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態８１の方法。
【0537】
８４．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態８１の方法。
【0538】
８５．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態８１の方法。
【0539】
８６．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態８１の方法。
【0540】
８７．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0541】
８８．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態８７の方法。
【0542】
８９．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態８７の方法。
【0543】
９０．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態８７の方法。
【0544】
９１．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態８７の方法。
【0545】
９２．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態８７の方法。
【0546】
９３．前記同時投与が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量である、実施形態１から４のいずれか１つの方法。
【0547】
９４．ヒト対象における肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）に対する免疫保護応答を引き出すための方法における使用のための、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンであって、前記方法が、ヒト対象に前記ワクチンを同時投与するステップを含む、肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0548】
９５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンを並行してまたは付随的に投与する、実施形態９４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0549】
９６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンとを並行して投与する、実施形態９４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0550】
９７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンとを付随的に投与する、実施形態９４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0551】
９８．ワクチンそれぞれ１回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0552】
９９．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの少なくとも２回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0553】
１００．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの少なくとも３回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0554】
１０１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの少なくとも４回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0555】
１０２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの２回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0556】
１０３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの３回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0557】
１０４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンの４回の用量を投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0558】
１０５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの前記用量を、約２週間～約１２カ月の間隔をおいて行う、実施形態９９から１０４のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0559】
１０６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0560】
１０７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの少なくとも２回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0561】
１０８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの少なくとも３回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0562】
１０９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの少なくとも４回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0563】
１１０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0564】
１１１．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの３回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0565】
１１２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンの４回の用量を投与する、実施形態９４から１０５のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0566】
１１３．肺炎球菌コンジュゲートワクチンの前記用量を、約２週間～約１２カ月の間隔をおいて行う、実施形態１０７から１１２のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0567】
１１４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量とを投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0568】
１１５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与する、実施形態１１４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0569】
１１６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与する、実施形態１１４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0570】
１１７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量に付随的に投与する、実施形態１１４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0571】
１１８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量に付随的に投与する、実施形態１１４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0572】
１１９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与する、実施形態１１４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0573】
１２０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与する、実施形態１１４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0574】
１２１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量とを投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0575】
１２２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0576】
１２３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0577】
１２４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と同時投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0578】
１２５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0579】
１２６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0580】
１２７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と並行して投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0581】
１２８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量に付随的に投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0582】
１２９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量に付随的に投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0583】
１３０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量に付随的に投与する、実施形態１２１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0584】
１３１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの１回の用量とを投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0585】
１３２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と同時投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0586】
１３３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と同時投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0587】
１３４．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と同時投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0588】
１３５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と同時投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0589】
１３６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量と並行して投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0590】
１３７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量と並行して投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0591】
１３８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量と並行して投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0592】
１３９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量と並行して投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0593】
１４０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの１回目の用量に付随的に投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0594】
１４１．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回目の用量に付随的に投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0595】
１４２．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回目の用量に付随的に投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0596】
１４３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回目の用量に付随的に投与する、実施形態１３１に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0597】
１４４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの２回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量とを投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0598】
１４５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの３回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量とを投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0599】
１４６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの４回の用量と肺炎球菌コンジュゲートワクチンの２回の用量とを投与する、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0600】
１４７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６カ月の間隔で分けられている、実施形態１１４から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0601】
１４８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約２カ月の間隔で分けられている、実施形態１１４から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0602】
１４９．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６週間の間隔で分けられている、実施形態１１４から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0603】
１５０．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約４カ月の間隔で分けられている、実施形態１１４から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0604】
１５１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約３週間の間隔で分けられている、実施形態１１４から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0605】
１５２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0606】
１５３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約２カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0607】
１５４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0608】
１５５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約４カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0609】
１５６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約３週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約６カ月の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0610】
１５７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0611】
１５８．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約２カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0612】
１５９．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約６週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0613】
１６０．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約２週間～約４カ月の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0614】
１６１．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの最初の２回の用量が、約３週間の間隔で分けられ、３回目の用量が、２回目の用量から少なくとも約１年の間隔で分けられている、実施形態１２１から１４６のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0615】
１６２．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0616】
１６３．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態１６２に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0617】
１６４．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態１６２に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0618】
１６５．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態１６２に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0619】
１６６．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態１６２に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0620】
１６７．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態１６２に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0621】
１６８．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0622】
１６９．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態１６８に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0623】
１７０．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態１６８に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0624】
１７１．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態１６８に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0625】
１７２．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態１６８に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0626】
１７３．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する１回のｍＲＮＡワクチン用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態１６８に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0627】
１７４．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0628】
１７５．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態１７４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0629】
１７６．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態１７４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0630】
１７７．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態１７４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0631】
１７８．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態１７４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0632】
１７９．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する少なくとも２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態１７４に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0633】
１８０．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量をすでに受けている、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0634】
１８１．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、実施形態１８０に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0635】
１８２．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、実施形態１８０に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0636】
１８３．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、実施形態１８０に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0637】
１８４．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、実施形態１８０に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0638】
１８５．前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する２回のｍＲＮＡワクチン用量の最後が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、実施形態１８０に記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0639】
１８６．前記同時投与が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量である、実施形態９４から９７のいずれか１つに記載の使用のための肺炎球菌コンジュゲートワクチンおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチン。
【0640】
１８７．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用。
【0641】
１８８．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量としての使用。
【0642】
１８９．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストするための使用。
【0643】
１９０．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの同時投与の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンをブーストするための使用。
【0644】
１９１．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンのブースター用量として使用するための、同時投与。
【0645】
１９２．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンのブースター用量として使用するための、同時投与。
【0646】
１９３．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する任意のｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための、同時投与。
【0647】
１９４．肺炎球菌コンジュゲートワクチンとＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対するｍＲＮＡワクチンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンをブーストする方法における使用のための、同時投与。
【0648】
１９５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、１３価肺炎球菌ワクチンである、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0649】
１９６．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、１４価肺炎球菌ワクチンである、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0650】
１９７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、１５価肺炎球菌ワクチンである、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0651】
１９８．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、１６価肺炎球菌ワクチンである、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0652】
１９９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、２０価肺炎球菌ワクチンである、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0653】
２００．肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、実施形態１から１９９のいずれか１つの方法。
【0654】
２０１．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の１３種の糖コンジュゲートを含む、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0655】
２０２．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、実施形態２０１の方法。
【0656】
２０３．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、１３価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１３種のコンジュゲートが、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0657】
２０４．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、実施形態２０３の方法。
【0658】
２０５．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、１５価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１５種のコンジュゲートが、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0659】
２０６．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、実施形態２０５の方法。
【0660】
２０７．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記２０種のコンジュゲートが、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0661】
２０８．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、実施形態２０７の方法。
２０９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）である、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
２０９．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）である、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0662】
２１０．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、Ｖ１１４である、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0663】
２１１．前記肺炎球菌コンジュゲートワクチンが、２０ｖＰｎＣである、実施形態１から１９４のいずれか１つの方法。
【0664】
２１２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンが、ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む、実施形態１から２１１のいずれか１つの方法。
【0665】
２１３．前記ｍＲＮＡワクチンが、ＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））である、実施形態１から２１１のいずれか１つの方法。
【0666】
２１４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンが、配列番号１の残基１～１０２および配列番号１の残基１０３～４２８４を有する配列を含み、配列番号１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の配列が、バリアント株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原で置き換えられている、実施形態１から２１２のいずれか１つの方法。
【0667】
２１５．前記ｍＲＮＡワクチンが、ワクチン「ｍＲＮＡ－１２７３」である、実施形態１から２１２のいずれか１つの方法。
【0668】
２１６．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原（例えば、Ｓタンパク質）をコードする連結ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域（例えば、５’ＵＴＲ）、第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域（例えば、３’ＵＴＲ）、少なくとも１つの５’キャップ領域、および３’安定化領域を含むｍＲＮＡを含む、実施形態１から２１２のいずれか１つの方法。
【0669】
２１７．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する前記ｍＲＮＡワクチンが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異型ウイルススパイク（Ｓ）糖タンパク質をコードする連結ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域（例えば、５’ＵＴＲ）、第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域（例えば、３’ＵＴＲ）、少なくとも１つの５’キャップ領域、および３’安定化領域を含むｍＲＮＡを含む、実施形態１から２１２のいずれか１つの方法。
【0670】
実施形態の続き
１．ヒト対象における感染性疾患を引き起こす細菌およびベータコロナウイルスに対する免疫応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、細菌に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに由来する抗原をコードするｍＲＮＡを含む免疫原性組成物とを、有効用量で同時投与するステップを含む方法。
１．ヒト対象における感染性疾患を引き起こす細菌およびベータコロナウイルスに対する免疫応答を引き出すための方法であって、ヒト対象に、細菌に由来する抗原を含む第１の免疫原性組成物と、ベータコロナウイルスに由来する抗原をコードするｍＲＮＡを含む免疫原性組成物とを、有効用量で同時投与するステップを含む方法。
【0671】
２．第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量を並行して投与する、項目１による方法。
【0672】
３．第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量を付随的に投与する、項目１～２のいずれか一項による方法。
【0673】
４．第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量をそれぞれの各用量の２４時間以内に投与する、項目１～３のいずれか一項による方法。
【0674】
５．第１の免疫原性組成物の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の用量をそれぞれの各用量の４８時間以内に投与する、項目１～４のいずれか一項による方法。
【0675】
６．第１の免疫原性組成物の１回目の用量と第１の免疫原性組成物の２回目の用量の間に約２週間～約１２カ月の間隔をおく、項目１～５のいずれか一項による方法。
【0676】
７．ｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の１回目の用量とｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の２回目の用量の間に約２週間～約１２カ月の間隔をおく、項目１～６のいずれか一項による方法。
【0677】
８．細菌が、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）である、項目１による方法。
【0678】
９．細菌が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）である、項目１による方法。
【0679】
１０．細菌が、クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）である、項目１による方法。
【0680】
１１．細菌が、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である、項目１による方法。
【0681】
１２．ベータコロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、項目１による方法。
【0682】
１３．ヒト対象が、前記同時投与の前に、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の少なくとも１回の用量をすでに受けている、項目１～１２のいずれか一項による方法。
【0683】
１４．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも１回の用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、項目１～１３のいずれか一項による方法。
【0684】
１５．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも１回の用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、項目１～１３のいずれか一項による方法。
【0685】
１６．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも１回の用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、項目１～１３のいずれか一項による方法。
【0686】
１７．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも１回の用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、項目１～１３のいずれか一項による方法。
【0687】
１８．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも１回の用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、項目１～１３のいずれか一項による方法。
【0688】
１９．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の少なくとも２回の用量をすでに受けている。項目１～１８のいずれか一項による方法。
【0689】
２０．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも２回の用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約３週間前に投与されている、項目１～１９のいずれか一項による方法。
【0690】
２１．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも２回の用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約２カ月前に投与されている、項目１～２０のいずれか一項による方法。
【0691】
２２．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも２回の用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約６カ月前に投与されている、項目１～２１のいずれか一項による方法。
【0692】
２３．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも２回の用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約１年前に投与されている、項目１～２２のいずれか一項による方法。
【0693】
２４．ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の前記少なくとも２回の用量の最後の用量が、前記同時投与の少なくとも約２年前に投与されている、項目１～２３のいずれか一項による方法。
【0694】
２５．前記ヒト対象が、前記同時投与の前に、ベータコロナウイルスに対するｍＲＮＡを含む免疫原性組成物の２回の用量をすでに受けている、項目１～２４のいずれか一項による方法。
【0695】
２６．第１の組成物が、１３価肺炎球菌ワクチンである、項目８による方法。
【0696】
２７．第１の組成物が、１４価肺炎球菌ワクチンである、項目８による方法。
【0697】
２８．第１の組成物が、１５価肺炎球菌ワクチンである、項目８による方法。
【0698】
２９．第１の組成物が、１６価肺炎球菌ワクチンである、項目８による方法。
【0699】
３０．第１の組成物が、２０価肺炎球菌ワクチンである、項目８による方法。
【0700】
３１．第１の組成物が、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）由来の糖コンジュゲートを含み、前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、項目８による方法。
【0701】
３２．第１の組成物が、血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆからなる群から選択される肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型由来の１３種の糖コンジュゲートを含む、項目８による方法。
【0702】
３３．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、項目３２による方法。
【0703】
３４．第１の組成物が、１３価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１３種のコンジュゲートが、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、項目８による方法。
【0704】
３５．項目３４による方法、前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、項目３４による方法。
【0705】
３６．第１の組成物が、１５価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記１５種のコンジュゲートが、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、項目８による方法。
【0706】
３７．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、項目３６による方法。
【0707】
３８．第１の組成物が、２０価肺炎球菌コンジュゲートワクチンであり、前記２０種のコンジュゲートが、肺炎球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２３Ｆ、２２Ｆおよび３３Ｆ由来の糖コンジュゲートからなる、項目８による方法。
【0708】
３９．前記糖コンジュゲートが、全て個別にＣＲＭ１９７とコンジュゲートしたものである、項目３８による方法。
４０．第１の組成物が、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）である、項目８による方法。
４０．第１の組成物が、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）である、項目８による方法。
【0709】
４１．第１の組成物が、Ｖ１１４である、項目８による方法。
【0710】
４２．第１の組成物が、２０ｖＰｎＣである、項目８による方法。
【0711】
４３．第１の組成物が、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む、項目９による方法。
【0712】
４４．ポリペプチドが、脂質付加されている、項目４３による方法。
【0713】
４５．ポリペプチドが、脂質付加されていない、項目４３による方法。
【0714】
４６．ポリペプチドが、免疫原性である、項目４３による方法。
【0715】
４７．第１の組成物が、アジュバントをさらに含む、項目４３による方法。
【0716】
４８．第１の組成物が、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加されたポリペプチドと、ｂ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加されたポリペプチドとを含む、項目９による方法。
【0717】
４９．第１の組成物が、ポリソルベート－８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む、項目４３による方法。
【0718】
５０．第１の組成物が、ポリソルベート－８０、アルミニウム、ヒスチジン、および塩化ナトリウムをさらに含む、項目４８による方法。
【0719】
５１．第１の組成物が、ＴＲＵＭＥＮＢＡ（登録商標）を含む、項目９による方法。
【0720】
５２．第１の組成物が、ｆＨＢＰ抗原を含む、項目９による方法。
【0721】
５３．第１の組成物が、髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）に由来する多糖を含む、項目９による方法。
【0722】
５４．第１の組成物が、ａ）（ｉ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む第１の脂質付加されたポリペプチド、および（ｉｉ）配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む第２の脂質付加されたポリペプチドおよびアルミニウムを含む液体組成物と、ｂ）ｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）とカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）リンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ（ＭｅｎＡ）莢膜糖（ＭｅｎＡＡＨ－ＴＴコンジュゲート）、ｉｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）とカルボジイミド化学によってコンジュゲートしたＡＤＨリンカーと、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ（ＭｅｎＣ）莢膜糖（ＭｅｎＣＡＨ－ＴＴコンジュゲート）、ｉｉｉ）破傷風トキソイド（ＴＴ）と、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５（ＭｅｎＷ）莢膜糖（ＭｅｎＷ－ＴＴコンジュゲート）、およびｉｖ）破傷風トキソイド（ＴＴ）と、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロボレートによってリンカーの非存在下で直接コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ（ＭｅｎＹ）莢膜糖（ＭｅｎＹ－ＴＴコンジュゲート）を含む凍結乾燥組成物とを含み、凍結乾燥組成物が、液体組成物を用いて復元される、項目９による方法。
【0723】
５５．アルミニウムが、リン酸アルミニウムを含む、項目５４による方法。
【0724】
５６．第１の組成物が、ポリソルベート－８０をさらに含む、項目５４による方法。
【0725】
５７．第１の組成物が、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ；塩化ナトリウム；ショ糖；ヒスチジン；ポリソルベート８０；およびリン酸アルミニウムをさらに含む、項目５４による方法。
【0726】
５８．第１の組成物を、１０～２５歳のヒトに投与する、項目９による方法。
【0727】
５９．第１の組成物を、１０～２６歳のヒトに投与する、項目９による方法。
【0728】
６０．第１の組成物が、トキソイドを含む、項目１０による方法。
【0729】
６１．第１の組成物が、融合ポリペプチドを含む、項目１０による方法。
【0730】
６２．第１の組成物が、凍結乾燥されたものである、項目１０による方法。
【0731】
６３．第１の組成物が、凍結保護物質を含む、項目１０による方法。
【0732】
６４．第１の組成物が、ショ糖を含む、項目１０による方法。
【0733】
６５．第１の組成物が、トレハロースを含む、項目１０による方法。
【0734】
６６．第１の組成物が、ホルムアルデヒドをさらに含むものではない、項目１０による方法。
【0735】
６７．第１の組成物が、野生型クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＡのＣ末端ドメインを含むポリペプチドを含む、項目１０による方法。
【0736】
６８．第１の組成物が、野生型クロストリディオイデス・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素ＢのＣ末端ドメインを含むポリペプチドを含む、項目１０による方法。
【0737】
６９．第１の組成物が、配列番号４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、ポリペプチドのリシン残基の側鎖が、ベータアラニン部分と架橋結合している、項目１０による方法。
【0738】
７０．第１の組成物が、配列番号６に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含み、ポリペプチドのリシン残基の側鎖が、ベータアラニン部分と架橋結合している、項目１０による方法。
【0739】
７１．第１の組成物を、５５歳以上のヒトに投与する、項目１０による方法。
【0740】
７２．ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ヌクレオシド修飾ｍＲＮＡを含む、項目１２による方法。
【0741】
７３．ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ＢＮＴ１６２ｂ２（Ｃｏｍｉｒｎａｔｙ（登録商標））である、項目１２による方法。
【0742】
７４．ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、配列番号１の残基１～１０２および配列番号１の残基１０３～４２８４を有する配列を含み、配列番号１のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の配列が、バリアント株のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原で置き換えられている、項目７３による方法。
【0743】
７５．ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ワクチン「ｍＲＮＡ－１２７３」である、項目１２による方法。
【0744】
７６．ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原（例えば、Ｓタンパク質）をコードする連結ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域（例えば、５’ＵＴＲ）、第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域（例えば、３’ＵＴＲ）、少なくとも１つの５’キャップ領域、および３’安定化領域を含むｍＲＮＡを含む、項目７４による方法。
【0745】
７７．ｍＲＮＡを含む前記免疫原性組成物が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の変異型ウイルススパイク（Ｓ）糖タンパク質をコードする連結ヌクレオシドの第１の領域、第１の領域の５’末端に位置する第１の隣接領域（例えば、５’ＵＴＲ）、第１の領域の３’末端に位置する第２の隣接領域（例えば、３’ＵＴＲ）、少なくとも１つの５’キャップ領域、および３’安定化領域を含むｍＲＮＡを含む、項目７４による方法。
【図1】
【図2-1】
【図2-2】
【図2-3】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5】
【図6】
【配列表】
【国際調査報告】