特表 2024-517884 ｐ５３におけるＣ１３５Ｙ、Ｒ１７５Ｈ又はＭ２３７Ｉ変異を認識するＴ細胞受容体

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-23

(54)【発明の名称】ｐ５３におけるＣ１３５Ｙ、Ｒ１７５Ｈ又はＭ２３７Ｉ変異を認識するＴ細胞受容体

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/12 20060101AFI20240416BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 15/86 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240416BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240416BHJP

   C07K 14/725 20060101ALI20240416BHJP

   C12Q 1/02 20060101ALI20240416BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240416BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 38/17 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 35/76 20150101ALI20240416BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240416BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240416BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALN20240416BHJP

【ＦＩ】

C12N15/12

C12N15/63 Z ZNA

C12N15/86 Z

C12N5/10

C12N1/21

C12N1/19

C12N1/15

C07K14/725

C12Q1/02

A61P35/00

A61P17/00

A61K38/17

A61K48/00

A61K35/76

A61K35/17

A61K39/395 E

A61K39/395 T

A61K31/7088

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023568469

(86)(22)【出願日】2022-05-06

(85)【翻訳文提出日】2023-12-29

(86)【国際出願番号】 US2022028066

(87)【国際公開番号】W WO2022236050

(87)【国際公開日】2022-11-10

(31)【優先権主張番号】63/185,805

(32)【優先日】2021-05-07

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】510002280

【氏名又は名称】アメリカ合衆国

(74)【代理人】

【識別番号】100136629

【弁理士】

【氏名又は名称】鎌田 光宜

(74)【代理人】

【識別番号】100080791

【弁理士】

【氏名又は名称】高島 一

(74)【代理人】

【識別番号】100125070

【弁理士】

【氏名又は名称】土井 京子

(74)【代理人】

【識別番号】100121212

【弁理士】

【氏名又は名称】田村 弥栄子

(74)【代理人】

【識別番号】100174296

【弁理士】

【氏名又は名称】當麻 博文

(74)【代理人】

【識別番号】100137729

【弁理士】

【氏名又は名称】赤井 厚子

(74)【代理人】

【識別番号】100152308

【弁理士】

【氏名又は名称】中 正道

(74)【代理人】

【識別番号】100201558

【弁理士】

【氏名又は名称】亀井 恵二郎

(72)【発明者】

【氏名】キム、サンヒョン

(72)【発明者】

【氏名】ザカラキス、ニコラオス

(72)【発明者】

【氏名】ローゼンバーグ、スティーヴン エー．

(72)【発明者】

【氏名】ロウリー、ザ サード、フランク ジェイ．

(72)【発明者】

【氏名】パークハースト、マリア アール．

【テーマコード（参考）】

4B063

4B065

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B063QA19

4B063QQ02

4B063QR80

4B063QS28

4B063QX01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA72X

4B065AA90X

4B065AA94X

4B065AB01

4B065BA02

4B065CA24

4B065CA44

4C084AA01

4C084AA02

4C084AA13

4C084BA01

4C084CA18

4C084DC50

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA13

4C084ZA89

4C084ZB26

4C085AA13

4C085AA14

4C085BB31

4C085BB41

4C085BB42

4C085BB43

4C085CC22

4C085DD62

4C085EE01

4C085GG02

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZA89

4C086ZB26

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB64

4C087BB65

4C087BC83

4C087CA12

4C087MA66

4C087NA05

4C087NA13

4C087ZA89

4C087ZB26

4H045AA10

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA10

4H045DA50

4H045EA20

4H045FA72

4H045FA74

(57)【要約】

ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}に対して抗原特異性を有する単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）が開示される。関連するポリペプチド及びタンパク質、並びに関連する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、及び医薬組成物も提供される。哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法、及び哺乳動物におけるがんを治療又は予防する方法も開示される。
【選択図】図１Ｃ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}のアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって、前記ＴＣＲが、
（１）配列番号２～４の全て；
（２）配列番号５～７の全て；
（３）配列番号２～７の全て；
（４）配列番号１７～１９の全て；
（５）配列番号２０～２２の全て；
（６）配列番号１７～２２の全て；
（７）配列番号３２～３４の全て；
（８）配列番号３５～３７の全て；
（９）配列番号３２～３７の全て；
（１０）配列番号４７～４９の全て；
（１１）配列番号５０～５２の全て；
（１２）配列番号４７～５２の全て；
（１３）配列番号６２～６４の全て；
（１４）配列番号６５～６７の全て；又は
（１５）配列番号６２～６７の全て
のアミノ酸配列を含むＴＣＲ。

【請求項2】

（１）配列番号８；
（２）配列番号９；
（３）配列番号８及び９の両方；
（４）配列番号１０；
（５）配列番号１１；
（６）配列番号１０及び１１の両方；
（７）配列番号２３；
（８）配列番号２４；
（９）配列番号２３及び２４の両方；
（１０）配列番号２５；
（１１）配列番号２６；
（１２）配列番号２５及び２６の両方；
（１３）配列番号３８；
（１４）配列番号３９；
（１５）配列番号３８及び３９の両方；
（１６）配列番号４０；
（１７）配列番号４１；
（１８）配列番号４０及び４１の両方；
（１９）配列番号５３；
（２０）配列番号５４；
（２１）配列番号５３及び５４の両方；
（２２）配列番号５５；
（２３）配列番号５６；
（２４）配列番号５５及び５６の両方；
（２５）配列番号６８；
（２６）配列番号６９；
（２７）配列番号６８及び６９の両方；
（２８）配列番号７０；
（２９）配列番号７１；又は
（３０）配列番号７０及び７１の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１のＴＣＲ。

【請求項3】

（１）配列番号１２；
（２）配列番号１３；
（３）配列番号１２及び１３の両方；
（４）配列番号１４；
（５）配列番号１５；
（６）配列番号１４及び１５の両方；
（７）配列番号２７；
（８）配列番号２８；
（９）配列番号２７及び２８の両方；
（１０）配列番号２９；
（１１）配列番号３０；
（１２）配列番号２９及び３０の両方；
（１３）配列番号４２；
（１４）配列番号４３；
（１５）配列番号４２及び４３の両方；
（１６）配列番号４４；
（１７）配列番号４５；
（１８）配列番号４４及び４５の両方；
（１９）配列番号５７；
（２０）配列番号５８；
（２１）配列番号５７及び５８の両方；
（２２）配列番号５９；
（２３）配列番号６０；
（２４）配列番号５９及び６０の両方；
（２５）配列番号７２；
（２６）配列番号７３；
（２７）配列番号７２及び７３の両方；
（２８）配列番号７４；
（２９）配列番号７５；又は
（３０）配列番号７４及び７５の両方
のアミノ酸配列を含む、請求項１又は２のＴＣＲ。

【請求項4】

前記ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}アミノ酸配列が、ＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＹＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号９０）である、請求項１～３のいずれか１項のＴＣＲ。

【請求項5】

ＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＣＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号８９）の野生型ヒトｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない、請求項１～４のいずれか１項のＴＣＲ。

【請求項6】

前記ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}アミノ酸配列が、ＨＭＴＥＶＶＲＨＣ（配列番号９２）である、請求項１～３のいずれか１項のＴＣＲ。

【請求項7】

ＨＭＴＥＶＶＲＲＣ（配列番号９１）の野生型ヒトｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない、請求項１～３及び６のいずれか１項のＴＣＲ。

【請求項8】

前記ヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}アミノ酸配列が、ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＩＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９４）である、請求項１～３のいずれか１項のＴＣＲ。

【請求項9】

ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＭＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９３）の野生型ヒトｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない、請求項１～３及び８のいずれか１項のＴＣＲ。

【請求項10】

請求項１～９のいずれか１項のＴＣＲの機能的部分を含む、単離又は精製されたポリペプチドであって、
（１）配列番号２～４の全て；
（２）配列番号５～７の全て；
（３）配列番号２～７の全て；
（４）配列番号１７～１９の全て；
（５）配列番号２０～２２の全て；
（６）配列番号１７～２２の全て；
（７）配列番号３２～３４の全て；
（８）配列番号３５～３７の全て；
（９）配列番号３２～３７の全て；
（１０）配列番号４７～４９の全て；
（１１）配列番号５０～５２の全て；
（１２）配列番号４７～５２の全て；
（１３）配列番号６２～６４の全て；
（１４）配列番号６５～６７の全て；又は
（１５）配列番号６２～６７の全て
のアミノ酸配列を含むポリペプチド。

【請求項11】

（１）配列番号８；
（２）配列番号９；
（３）配列番号８及び９の両方；
（４）配列番号１０；
（５）配列番号１１；
（６）配列番号１０及び１１の両方；
（７）配列番号２３；
（８）配列番号２４；
（９）配列番号２３及び２４の両方；
（１０）配列番号２５；
（１１）配列番号２６；
（１２）配列番号２５及び２６の両方；
（１３）配列番号３８；
（１４）配列番号３９；
（１５）配列番号３８及び３９の両方；
（１６）配列番号４０；
（１７）配列番号４１；
（１８）配列番号４０及び４１の両方；
（１９）配列番号５３；
（２０）配列番号５４；
（２１）配列番号５３及び５４の両方；
（２２）配列番号５５；
（２３）配列番号５６；
（２４）配列番号５５及び５６の両方；
（２５）配列番号６８；
（２６）配列番号６９；
（２７）配列番号６８及び６９の両方；
（２８）配列番号７０；
（２９）配列番号７１；又は
（３０）配列番号７０及び７１の両方。
のアミノ酸配列を含む、請求項１０のポリペプチド。

【請求項12】

（１）配列番号１２；
（２）配列番号１３；
（３）配列番号１２及び１３の両方；
（４）配列番号１４；
（５）配列番号１５；
（６）配列番号１４及び１５の両方；
（７）配列番号２７；
（８）配列番号２８；
（９）配列番号２７及び２８の両方；
（１０）配列番号２９；
（１１）配列番号３０；
（１２）配列番号２９及び３０の両方；
（１３）配列番号４２；
（１４）配列番号４３；
（１５）配列番号４２及び４３の両方；
（１６）配列番号４４；
（１７）配列番号４５；
（１８）配列番号４４及び４５の両方；
（１９）配列番号５７；
（２０）配列番号５８；
（２１）配列番号５７及び５８の両方；
（２２）配列番号５９；
（２３）配列番号６０；
（２４）配列番号５９及び６０の両方；
（２５）配列番号７２；
（２６）配列番号７３；
（２７）配列番号７２及び７３の両方；
（２８）配列番号７４；
（２９）配列番号７５；又は
（３０）配列番号７４及び７５の両方。
のアミノ酸配列を含む、請求項１０又は１１のポリペプチド。

【請求項13】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２～４の全てのアミノ酸配列を含む、
（２）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５～７の全てのアミノ酸配列を含む、
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２～４の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５～７の全てのアミノ酸配列を含む、
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７～１９の全てのアミノ酸配列を含む、
（５）第２のポリペプチド鎖が、配列番号２０～２２の全てのアミノ酸配列を含む、
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１７～１９の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２０～２２の全てのアミノ酸配列を含む、
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３２～３４の全てのアミノ酸配列を含む、
（８）第２のポリペプチド鎖が、配列番号３５～３７の全てのアミノ酸配列を含む、
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３２～３４の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３５～３７の全てのアミノ酸配列を含む、
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４７～４９の全てのアミノ酸配列を含む、
（１１）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５０～５２の全てのアミノ酸配列を含む、
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４７～４９の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５０～５２の全てのアミノ酸配列を含む、
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６２～６４の全てのアミノ酸配列を含む、
（１４）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６５～６７の全てのアミノ酸配列を含む、又は
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６２～６４の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６５～６７の全てのアミノ酸配列を含む、
第１及び第２のポリペプチド鎖を含む、単離又は精製されたタンパク質。

【請求項14】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含む、
（２）第２のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号９のアミノ酸配列を含む、
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、
（５）第２のポリペプチド鎖が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、
（８）第２のポリペプチド鎖が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、
（１１）第２のポリペプチド鎖が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、
（１４）第２のポリペプチド鎖が、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、
（１６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、
（１７）第２のポリペプチド鎖が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、
（１８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、
（１９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、
（２０）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、
（２１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、
（２２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、
（２３）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、
（２４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、
（２５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、
（２６）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、
（２７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、
（２８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、
（２９）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、又は
（３０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、
請求項１３のタンパク質。

【請求項15】

（１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、
（２）第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、
（３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、
（４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、
（５）第２のポリペプチド鎖が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、
（６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、
（７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、
（８）第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、
（９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、
（１０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、
（１１）第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、
（１２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、
（１３）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、
（１４）第２のポリペプチド鎖が、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
（１５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、
（１６）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４４のアミノ酸配列を含む、
（１７）第２のポリペプチド鎖が、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
（１８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、
（１９）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、
（２０）第２のポリペプチド鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、
（２１）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、
（２２）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、
（２３）第２のポリペプチド鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、
（２４）第１のポリペプチド鎖が、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、
（２５）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、
（２６）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、
（２７）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、
（２８）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、
（２９）第２のポリペプチド鎖が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、又は
（３０）第１のポリペプチド鎖が、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、
請求項１３又は１４のタンパク質。

【請求項16】

請求項１～９のいずれか１項のＴＣＲ、請求項１０～１２のいずれか１項のポリペプチド、又は請求項１３～１５のいずれか１項のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。

【請求項17】

５’から３’に向かって第１の核酸配列及び第２の核酸配列を含む単離又は精製された核酸であって、前記第１及び第２の核酸配列が、それぞれ、配列番号８及び９；９及び８；１０及び１１；１１及び１０；１２及び１３；１３及び１２；１４及び１５；１５及び１４；２３及び２４；２４及び２３；２５及び２６；２６及び２５；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３８及び３９；３９及び３８；４０及び４１；４１及び４０；４２及び４３；４３及び４２；４４及び４５；４５及び４４；５３及び５４；５４及び５３；５５及び５６；５６及び５５；５７及び５８；５８及び５７；５９及び６０；６０及び５９；６８及び６９；６９及び６８；７０及び７１；７１及び７０；７２及び７３；７３及び７２；７４及び７５；又は７５及び７４のアミノ酸配列をコードする核酸。

【請求項18】

第１のヌクレオチド配列と第２のヌクレオチド配列との間に挿入された第３のヌクレオチド酸配列を更に含み、前記第３のヌクレオチド配列が切断可能なリンカーペプチドをコードする、請求項１７の単離又は精製された核酸。

【請求項19】

切断可能なリンカーペプチドが、アミノ酸配列ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８０）を含む、請求項１8の単離又は精製された核酸。

【請求項20】

配列番号１６、３１、４６、６１、及び７６からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項１９の単離又は精製された核酸。

【請求項21】

請求項１６～２０のいずれか１項の核酸を含む、組み換え発現ベクター。

【請求項22】

トランスポゾンベクター又はレンチウイルスベクターである、請求項２１の組換え発現ベクター。

【請求項23】

請求項１６～２０のいずれか１項の核酸又は請求項２１若しくは２２のベクターによってコードされる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。

【請求項24】

細胞における請求項１６～２０のいずれか１項の核酸又は請求項２１若しくは２２のベクターの発現から生じる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質。

【請求項25】

ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}のアミノ酸配列に対して抗原特異性を有するＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法であって、請求項２１又は２２のベクターの細胞への導入を可能にする条件下で、インビトロにおいて前記細胞を前記ベクターと接触させることを含む方法。

【請求項26】

請求項１６～２０のいずれか１項の核酸、又は請求項２１若しくは２２の組み換え発現ベクターを含む、単離又は精製された宿主細胞。

【請求項27】

細胞がヒトリンパ球である、請求項２６の宿主細胞。

【請求項28】

細胞が、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、不変ナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される、請求項２６の宿主細胞。

【請求項29】

請求項２６～２８のいずれか１項の宿主細胞を含む、単離又は精製された細胞集団。

【請求項30】

請求項１～９、２３、若しくは２４のいずれか１項のＴＣＲ、請求項１０～１２、２３、若しくは２４のいずれか１項のポリペプチド、又は請求項１３～１５、２３、若しくは２４のいずれか１項のタンパク質を製造する方法であって、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が製造されるように、請求項２６～２８のいずれか１項の宿主細胞、又は請求項２９の、宿主の細胞集団を培養することを含む、方法。

【請求項31】

（ａ）請求項１～９、２３、若しくは２４のいずれか１項のＴＣＲ、請求項１０～１２、２３、若しくは２４のいずれか１項のポリペプチド、請求項１３～１５、２３、若しくは２４のいずれか１項のタンパク質、請求項１６～２０のいずれか１項の核酸、請求項２１又は２２の組み換え発現ベクター、請求項２６～２８のいずれか１項の宿主細胞、又は請求項２９の宿主細胞集団と、（ｂ）薬学的に許容し得る担体とを含む、医薬組成物。

【請求項32】

哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法であって：
（ａ）がんの細胞を含む試料と、請求項１～９、２３、若しくは２４のいずれか１項のＴＣＲ、請求項１０～１２、２３若しくは２４のいずれか１項のポリペプチド、請求項１３～１５、２３若しくは２４のいずれか１項のタンパク質、請求項１６～２０のいずれか１項の核酸、請求項２１又は２２の組み換え発現ベクター、請求項２６～２８のいずれか１項の宿主細胞、請求項２９の宿主細胞集団、又は請求項３１の医薬組成物とを接触させ、それによって、複合体を形成させること；及び
（ｂ）前記複合体を検出すること、
を含み、
複合体の検出が、哺乳動物におけるがんの存在を示す、方法。

【請求項33】

哺乳動物におけるがんに対する免疫応答の誘導における使用のための、請求項１～９、２３、若しくは２４のいずれか１項のＴＣＲ、請求項１０～１２、２３、若しくは２４のいずれか１項のポリペプチド、請求項１３～１５、２３、若しくは２４のいずれか１項のタンパク質、請求項１６～２０のいずれか１項の核酸、請求項２１若しくは２２の組み換え発現ベクター、請求項２６～２８のいずれか１項の宿主細胞、請求項２９の宿主細胞の集団、又は請求項３１の医薬組成物。

【請求項34】

哺乳動物におけるがんの治療又は予防における使用のための、請求項１～９、２３、若しくは２４のいずれか１項のＴＣＲ、請求項１０～１２、２３、若しくは２４のいずれか１項のポリペプチド、請求項１３～１５、２３、若しくは２４のいずれか１項のタンパク質、請求項１６～２０のいずれか１項の核酸、請求項２１若しくは２２の組み換え発現ベクター、請求項２６～２８のいずれか１項の宿主細胞、請求項２９の宿主細胞の集団、又は請求項３１の医薬組成物。

【請求項35】

前記哺乳動物に対して自己である、請求項３３又は３４に記載の使用のための細胞の集団。

【請求項36】

前記哺乳動物に対して同種である、請求項３３又は３４に記載の使用のための細胞の集団。

【請求項37】

がんが上皮がんである、請求項３２の方法、又は請求項３３～３６のいずれか１項に記載の使用のための、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、若しくは医薬組成物。

【請求項38】

がんが胆管がん、黒色腫、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽細胞腫、子宮頸がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、又は膀胱がんである、請求項３２の方法、又は請求項３３～３６のいずれか１項に記載の使用のための、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、若しくは医薬組成物。

【請求項39】

前記がんが、ヒトｐ５３においてＣ１３５Ｙ、Ｒ１７５Ｈ、又はＭ２３７Ｉの変異を含むことが知られている、請求項３２に記載の方法、又は請求項３３～３８のいずれか１項に記載の使用のためのＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、若しくは医薬組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本特許出願は、２０２１年５月７日に出願された米国仮特許出願番号第６３／１８５，８０５号（参照によりその全体が本明細書に組込まれる）の利益を主張する。

【0002】

連邦政府支援の研究又は開発に関する陳述
本発明は、連邦政府の支援を受け、プロジェクト番号ＢＣ０１０９８５の下、米国国立衛生研究所、米国国立がん研究所によりなされた。本発明において、連邦政府は一定の権利を有する。

【0003】

電子的に提出された物件の参照による組込み
本明細書と同時に提出され、以下の通り識別される、コンピューターで読み取り可能なヌクレオチド／アミノ酸の配列表は、参照により、その全体が本明細書に組込まれる：２０２２年４月２１日付けの「７５９８７５＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名前の１３３，４５７バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル１件。

【背景技術】

【0004】

幾つかのがんは、特に該がんが転移性且つ切除不能になったとき、非常に限られた治療法の選択肢しか有しない場合がある。例えば、外科手術、化学療法、及び放射線療法等の治療法の進歩にもかかわらず、多くのがん、例えば、膵臓、結腸直腸、肺、子宮内膜、卵巣、及び前立腺のがんの予後は不良である場合がある。従って、がんの更なる治療法に対するアンメットニーズが存在する。

【発明の概要】

【0005】

発明の簡単な要旨
本発明の一態様は、ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}のアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する単離は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）であって：（１）配列番号２～４の全て；（２）配列番号５～７の全て；（３）配列番号２～７の全て；（４）配列番号１７～１９の全て；（５）配列番号２０～２２の全て；（６）配列番号１７～２２の全て；（７）配列番号３２～３４の全て；（８）配列番号３５～３７の全て；（９）配列番号３２～３７の全て；（１０）配列番号４７～４９の全て；（１１）配列番号５０～５２の全て；（１２）配列番号４７～５２の全て；（１３）配列番号６２～６４の全て；（１４）配列番号６５～６７の全て；又は（１５）配列番号６２～６７の全てのアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを提供する。

【0006】

本発明の更なる態様は、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、及び本発明のＴＣＲに関連する医薬組成物を提供する。

【0007】

本発明のなお更なる態様は、哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法、哺乳動物におけるがんに対する免疫応答を誘導する方法、及び哺乳動物におけるがんを治療又は予防する方法を提供する。

【0008】

本発明の追加の態様は、ＴＣＲを発現する宿主細胞を生成する方法、及びＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を生成する方法を提供する。

【図面の簡単な説明】

【0009】

図面の幾つかの観点の簡単な説明

【0010】

【図1A】図１Ａは、標的細胞を有する腫瘍断片番号Ｆ１～Ｆ２４からの患者４３１６のＴＩＬを共培養した後に測定したＩＦＮ－γスポットの数（２ｅ４細胞あたり）を示すグラフである。標的細胞は、（ｉ）ｐ５３ Ｃ１３５Ｙを含むペプチドプール（ＰＰ）をパルスした；（ｉｉ）ｐ５３ Ｃ１３５Ｙをコードしているタンデムミニ遺伝子（ＴＭＧ）ＲＮＡ若しくは関係性のないＴＭＧでトランスフェクションした；又は（ｉｉｉ）ＤＭＳＯ（コントロール）で処理した自己樹状細胞（ＤＣ）であった。ＰＭＳ／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。変異体ｐ５３反応性を有する断片２２を枠で囲む。

【図1B】図１Ｂは、フローサイトメトリーによって測定したときの、患者４３１６からのＴＩＬを、ＤＭＳＯ（ビヒクル）、関係性のないペプチドＫＩＡＡ１３２８ Ｋ３８６Ｒ、又は指定の変異体ｐ５３－Ｃ１３５Ｙペプチドをパルスした自己ＤＣと共培養した後の４－１ＢＢ及びＣＤ４を発現しているＴＩＬのパーセンテージを示す。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。

【図1C】図１Ｃは、４３１６－Ｄ ＴＣＲで形質導入したＰＢＬを、連続希釈した２５ｍｅｒペプチドｐ５３－Ｃ１３５Ｙ又はＷＴ ｐ５３－Ｃ１３５をパルスした自己未成熟ＤＣと共培養した後の、４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域発現Ｔ細胞（ｍＴＣＲ^＋）のパーセンテージを示すグラフである。

【図2】図２は、フローサイトメトリーによって測定したときの、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈに対する体外感作（ＩＶＳ）後（右列）又はＩＶＳなし（左列）の、患者４１４１からのＴＩＬを標的細胞と共培養した後のＯＸＯ４０及び４－１ＢＢを発現しているＴ細胞のパーセンテージを示す。標的細胞は、ＤＭＳＯ、変異体ｐ５３ Ｒ１７５Ｈペプチド、又は対応するＷＴ ｐ５３ Ｒ１７５ペプチドをパルスした自己ＤＣであった。Ｔ細胞活性化マーカー４－１ＢＢ及びＯＸ４０を上方制御した活性化Ｔ細胞を太字で示す。ＭＥ、最小エピトープ。

【図3A】図３Ａは、腫瘍断片番号Ｆ１～Ｆ２４からの患者４３０４のＴＩＬを標的細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γスポットの数（２ｅ４細胞あたり）を示すグラフである。標的細胞は、（ｉ）ｐ５３ Ｍ２３７Ｉを含むＰＰをパルスした；（ｉｉ）ｐ５３ Ｍ２３７ＩをコードしているＴＭＧ ＲＮＡ若しくは関係性のないＴＭＧでトランスフェクションした；又は（ｉｉｉ）ＤＭＳＯ（コントロール）で処理した自己ＤＣであった。ＰＭＳ／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。

【図3B】図３Ｂは、フローサイトメトリーによって測定したときの、患者４３０４の腫瘍消化物から選別されたＣＤ３９及びＣＤ１０３を発現しているＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージを示す。

【図3C】図３Ｃは、標的細胞をエフェクター細胞と共培養した後に測定したＩＦＮ－γスポットの数（２ｅ４細胞あたり）を示すグラフである。エフェクター細胞は、患者４３０４の腫瘍から選別されたＣＤ４^＋ＣＤ１０３^＋ＣＤ３９^＋（四角）、ＣＤ４^＋ＣＤ１０３^－ＣＤ３９^＋（三角）、又はＣＤ４^＋ＣＤ１０３^－ＣＤ３９^－（円）細胞であった。標的細胞は、（ｉ）ｐ５３ Ｍ２３７Ｉを含むＰＰをパルスした；（ｉｉ）ｐ５３ Ｍ２３７ＩをコードしているＴＭＧ ＲＮＡ若しくはコントロールＴＭＧでトランスフェクションした；又は（ｉｉｉ）ＤＭＳＯ（コントロール）で処理した自己ＤＣであった。単独で（ＴＩＬのみ）培養したＴＩＬをコントロールとした。

【図3D-3F】図３Ｄ～３Ｆは、エフェクター細胞を、連続希釈した２５ｍｅｒペプチドｐ５３－Ｍ２３７Ｉ又はＷＴ ｐ５３－Ｍ２３７をパルスした自己未成熟ＤＣと共培養した後の、４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域発現ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞（ｍＴＣＲ^＋）のパーセンテージを示すグラフである。エフェクター細胞は、４３０４ ＴＣＲ－２（図３Ｄ）、４３０４ ＴＣＲ－４（図３Ｅ）、又は４３０４ ＴＣＲ－Ｋ（図３Ｆ）をコードしている組み換え発現ベクターで独立して形質導入したＰＢＬであった。

【図4A-4B】図４Ａ～４Ｂは、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲ形質導入細胞を腫瘍細胞株ＳＫ－ＭＥＬ－５（４Ａ）、ＳＡＯＳ２（４Ａ）、ＳＡＯＳ２ Ｒ１７５Ｈ（４Ａ）、ＣＥＭ／Ｃ１（４Ｂ）、ＴＹＫ－ｎｕ（４Ｂ）、又はＫＬＥ（４Ｂ）と共培養した後の、４－１ＢＢ及びＯＸ４０を発現している４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲ形質導入細胞のパーセンテージを示す。細胞株は、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈ及びＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１の発現について陽性（＋）又は陰性（－）であることが示されている。

【図5A-5B】図５Ａ－５Ｂは、９のｐ５３スプライスバリアントのアミノ酸配列のアラインメントを示す。ＳＰ｜Ｐ０４６３７｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号１）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－２｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８１）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－３｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８２）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－４｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８３）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－５｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８４）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－６｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８５）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－７｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８６）；ＳＰ｜Ｐ０４６３７－８｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８７）；及びＳＰ｜Ｐ０４６３７－９｜Ｐ５３＿ＨＵＭＡＮ（配列番号８８）。アラインメントは図５Ａに示すＮ末端から始まり、図５Ｂに示すＣ末端まで続く。

【図6】図６は、フローサイトメトリーによって測定したときの、４３１６－Ｄ ＴＣＲ形質導入細胞を標的細胞と共培養した後の４－１ＢＢ及びＯＸ４０を発現している４３１６－Ｄ ＴＣＲ形質導入細胞のパーセンテージを示す。標的細胞は、ＩＦＮ－γの非存在下（上段）又はＩＦＮ－γの存在下（下段）においてＤＭＳＯ（左列）、ＷＴ ｐ５３（中列）、又は変異体ｐ５３ペプチド（右列）をパルスした４３１６自己患者由来異種移植片（ＰＤＸ）腫瘍細胞であった。

【図7A】図７Ａは、前臨床異種移植マウスの作製及び処理プロトコルを示す概略図である。免疫不全雌性ＮＳＧ（ＮＯＤ ｓｃｉｄ ｇａｍｍａ）マウスに、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈ変異及びＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を天然に発現する２００万のＴＹＫ－ｎｕ卵巣細胞を注射した。２週間後、これらマウスをビヒクル又は１０００万のＴ細胞で処理した。その後、次の３０日間にわたり腫瘍の成長を評価した。

【図7B-7C】図７Ｂ～７Ｃは、形質導入細胞の養子細胞移入（ＡＣＴ）後３０日間にわたって測定した担がんマウスの平均腫瘍サイズ（ｍｍ^２）を示すグラフである。２頭の健常ドナー（健常ドナー１（７Ｂ）及び健常ドナー２（７Ｃ））からのＰＢＬを、指定のＴＣＲで独立して形質導入した。マウスは３つの処理群：ＰＢＳビヒクル（丸）、ｐ５３ Ｙ２２０Ｃを標的とする関係性のないＴＣＲで形質導入したＴ細胞（三角）、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲで形質導入したＴ細胞（四角）に分けられ、ｎは５であった。これらを、４１４１－ＴＣＲ１ａ２で形質導入したＴ細胞（星）で処理したマウスと比較した。得られた結果は、両健常ドナーから得られた細胞と一致していた。

【発明を実施するための形態】

【0011】

腫瘍タンパク質Ｐ５３（「ＴＰ５３」又は「ｐ５３」とも称される）は、例えば、細胞分裂を制御することによって腫瘍抑制因子として作用する。ｐ５３タンパク質は、細胞の核内に位置し、そこでＤＮＡに直接結合する。ＤＮＡが損傷を受けると、ｐ５３タンパク質は、ＤＮＡを修復するか又は損傷を受けた細胞をアポトーシスさせるかの決定に関与する。ＤＮＡを修復することができる場合、ｐ５３は他の遺伝子を活性化させて損傷を修復する。ＤＮＡを修復することができない場合、ｐ５３タンパク質は、細胞が分裂するのを阻止し、該細胞にシグナルを伝達してアポトーシスさせる。変異したか又は損傷を受けたＤＮＡを有する細胞の分裂を停止させることによって、ｐ５３は腫瘍の発達を阻止するのに役立つ。ＷＴ（正常）全長ｐ５３は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。

【0012】

ｐ５３タンパク質における変異によって、ｐ５３タンパク質の腫瘍抑制因子機能が低下するか又は失われることがある。或いは又は更に、ｐ５３変異は、ドミナントネガティブ方式でＷＴｐ５３に干渉することによる機能獲得型変異であり得る。変異ｐ５３タンパク質は、様々なヒトがん、例えば、胆管がん、黒色腫、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽腫、子宮頸がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、又は膀胱がんのいずれかで発現し得る。

【0013】

本発明の一態様は、ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}のアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。以後、「ＴＣＲ」に対する言及は、特に規定のない限り、ＴＣＲの機能的部分及び機能的バリアントも指す。ｐ５３の変異は、本明細書では、全長ＷＴｐ５３（配列番号１）のアミノ酸配列を参照することによって定義される。ｐ５３の変異は、本明細書では、特定の位置に存在するアミノ酸残基、続いて、位置番号、続いて、検討中の特定の変異において該残基に置き換わったアミノ酸を参照することによって記載される。ｐ５３のアミノ酸配列（例、ｐ５３ペプチド）は、全長のＷＴ ｐ５３タンパク質の全てのアミノ酸残基よりも少ない場合がある。従って、位置番号は、本明細書においては、ｐ５３アミノ酸配列の特定の例における対応する残基の実際の位置は異なる場合があることを理解した上で、ＷＴ全長ｐ５３タンパク質（即ち、配列番号１）を参照することにより定義される。位置が配列番号１によって定義されるので、用語「Ｃ１３５Ｙ」は、配列番号１の１３５位に存在するシステインがチロシンによって置換されていることを示し、「Ｒ１７５Ｈ」は、配列番号１の１７５位に存在するアルギニンがヒスチジンで置換されていることを示し、「Ｍ２３７Ｉ」は、配列番号１の２３７位に存在するメチオニンがイソロイシンによって置換されていることを示す。例えば、ｐ５３アミノ酸配列の具体例が、例えばＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＣＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号８９）（配列番号１の連続アミノ酸残基１２３～１４７に対応する例示的なＷＴ ｐ５３ペプチド）である場合、「Ｃ１３５Ｙ」とは、たとえ配列番号８９における下線付きアルギニンの実際の位置が１３であろうと、配列番号８９における下線付きシステインのチロシンによる置換を指す。以下、Ｃ１３５Ｙ変異を有するヒトｐ５３アミノ酸配列を「Ｃ１３５Ｙ」又は「ｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}」と称する。以下、Ｒ１７５Ｈ変異を有するヒトｐ５３アミノ酸配列を「Ｒ１７５Ｈ」又は「ｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}」と称する。以下、Ｍ２３７Ｉ変異を有するヒトｐ５３アミノ酸配列を「Ｍ２３７Ｉ」又は「ｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}」と称する。本明細書で使用するとき、「変異型ｐ５３」は、ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}を指す。

【0014】

Ｐ５３には、９の既知のスプライスバリアントがある。本明細書に記載のｐ５３変異は、９のｐ５３スプライスバリアント全てに亘って保存されている。９のｐ５３スプライスバリアントのアラインメントを図５に示す。従って、本発明のＴＣＲは、９のｐ５３スプライスバリアントのいずれかによってコードされる、本明細書に記載の任意の変異ｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有し得る。位置は配列番号１によって定義される通りであるため、ｐ５３の特定のスプライスバリアントのアミノ酸配列の実際の位置は、配列番号１の対応する位置に相対的に定義され、及び配列番号１によって定義される位置は、特定のスプライスバリアント中における実際の位置とは異なり得る。従って、例えば、変異は、配列番号１の、３９３アミノ酸の配列の表示された位置に対応する、ｐ５３の特定のスプライスバリアントのアミノ酸配列中におけるアミノ酸残基の置換を指し、スプライスバリアント中における実際の位置は異なり得るとの理解である。

【0015】

本発明の一態様においては、ＴＣＲは、配列番号１によって定義される通り、１３５位に変異を有するヒトｐ５３に対して抗原特異性を有する。１３５位でのｐ５３変異は、ミスセンス変異であり得る。従って、１３５位での変異は、１３５位に存在する天然（ＷＴ）アルギニン残基の、アルギニン以外の任意のアミノ酸残基との置換であり得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}アミノ酸配列に対して抗原特異性を有する。例えば、ＴＣＲは、ＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＹＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号９０）のヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}アミノ酸配列に対して抗原特異性を有し得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＣＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号８９）の野生型ヒトｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない。

【0016】

本発明の一態様においては、ＴＣＲは、配列番号１によって定義される通り、１７５位に変異を有するヒトｐ５３に対して抗原特異性を有する。１７５位でのｐ５３変異は、ミスセンス変異であり得る。従って、１７５位での変異は、１７５位に存在する天然（ＷＴ）アルギニン残基の、アルギニン以外の任意のアミノ酸残基との置換であり得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}アミノ酸配列に対して抗原特異性を有する。例えば、ＴＣＲは、ＨＭＴＥＶＶＲＨＣ（配列番号９２）のヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}アミノ酸配列に対して抗原特異性を有し得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ＨＭＴＥＶＶＲＲＣ（配列番号９１）の野生型ヒトｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない。

【0017】

本発明の一態様においては、ＴＣＲは、配列番号１によって定義される通り、２３７位に変異を有するヒトｐ５３に対して抗原特異性を有する。２３７位でのｐ５３変異は、ミスセンス変異であり得る。従って、２３７位での変異は、２３７位に存在する天然（ＷＴ）メチオニン残基の、メチオニン以外の任意のアミノ酸残基との置換であり得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}アミノ酸配列に対する抗原特異性を有する。例えば、ＴＣＲは、ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＩＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９４）のヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}アミノ酸配列に対して抗原特異性を有し得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＭＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９３）の野生型ヒトｐ５３アミノ酸配列に対して抗原特異性を有しない。

【0018】

本発明の一態様においては、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ（ヒト白血球抗原）分子依存的に変異ｐ５３を認識することができ得る。「ＨＬＡ分子依存的に」とは、本明細書で用いるとき、ＴＣＲが、該ＴＣＲを単離した患者で発現するＨＬＡ分子の枠の中で、変異ｐ５３に結合したときに免疫応答を惹起することを意味する。本発明のＴＣＲは、適用可能なＨＬＡ分子によって提示された変異ｐ５３を認識することができ得、変異ｐ５３に加えてＨＬＡ分子にも結合し得る。

【0019】

本発明の一態様においては、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＣ１３５Ｙを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の関係でのＣ１３５Ｙへの結合に際して、免疫応答を誘発し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子により提示されるＣ１３５Ｙを認識することができ、Ｃ１３５Ｙに加えてＨＬＡクラスＩＩ分子に結合し得る。

【0020】

本発明の一態様においては、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＭ２３７Ｉを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子の関係でのＭ２３７Ｉへの結合に際して、免疫応答を誘発し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩＩ分子により提示されるＭ２３７Ｉを認識することができ、Ｍ２３７Ｉに加えてＨＬＡクラスＩＩ分子に結合し得る。

【0021】

本発明の一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体である。ＨＬＡ－ＤＲヘテロ二量体は、α鎖及びβ鎖を含む細胞表面受容体である。ＨＬＡ－ＤＲα鎖はＨＬＡ－ＤＲＡ遺伝子によりコードされる。ＨＬＡ－ＤＲβ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子、ＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子、又はＨＬＡ－ＤＲＢ５遺伝子によってコードされる。ＨＬＡ－ＤＲＢ１遺伝子によってコードされる分子の例としては、ＨＬＡ－ＤＲ１、ＨＬＡ－ＤＲ２、ＨＬＡ－ＤＲ３、ＨＬＡ－ＤＲ４、ＨＬＡ－ＤＲ５、ＨＬＡ－ＤＲ６、ＨＬＡ－ＤＲ７、ＨＬＡ－ＤＲ８、ＨＬＡ－ＤＲ９、ＨＬＡ－ＤＲ１０、ＨＬＡ－ＤＲ１１、ＨＬＡ－ＤＲ１２、ＨＬＡ－ＤＲ１３、ＨＬＡ－ＤＲ１４、ＨＬＡ－ＤＲ１５、ＨＬＡ－ＤＲ１６、及びＨＬＡ－ＤＲ１７が挙げられ得るが、これらに限定されない。ＨＬＡ－ＤＲＢ３遺伝子はＨＬＡ－ＤＲ５２をコードする。ＨＬＡ－ＤＲＢ４遺伝子はＨＬＡ－ＤＲ５３をコードする。ＨＬＡ－ＤＲＢ５遺伝子はＨＬＡ－ＤＲ５１をコードする。

【0022】

一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子のα鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：００対立遺伝子により発現する。一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子のβ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０７：０１：００対立遺伝子により発現する。本発明の一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ７：ＨＬＡ－ＤＲＡヘテロ二量体である。好ましい態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：００鎖及びＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０７：０１：００鎖のヘテロ二量体である。特に好ましい態様においては、変異型ｐ５３は、Ｃ１３５Ｙであり、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１鎖及びＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０７：０１鎖のヘテロ二量体である。

【0023】

一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子のα鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：００対立遺伝子により発現する。一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子のβ鎖は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０１：０１：００対立遺伝子により発現する。本発明の一態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＢ１：ＨＬＡ－ＤＲＡヘテロ二量体である。好ましい態様においては、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１：００鎖及びＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０１：０１：００鎖のヘテロ二量体である。特に好ましい態様においては、変異型ｐ５３は、Ｍ２３７Ｉであり、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１鎖及びＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０１：０１鎖のヘテロ二量体である。

【0024】

本発明の一態様においては、本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ分子によって提示されるＲ１７５Ｈを認識することができる。これに関して、ＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ分子の関係でのＲ１７５Ｈへの結合に際して、免疫応答を誘発し得る。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡクラスＩ分子により提示されるＲ１７５Ｈを認識することができ、Ｒ１７５Ｈに加えてＨＬＡクラスＩ分子に結合し得る。

【0025】

本発明の一実施形態においては、ＨＬＡクラスＩ分子はＨＬＡ－Ａ分子である。ＨＬＡ－Ａ分子は、α鎖及びβ２ミクログロブリンのヘテロ二量体である。ＨＬＡ－Ａα鎖はＨＬＡ－Ａ遺伝子によってコードされ得る。β２ミクログロブリンは、アルファ鎖のアルファ１、アルファ２及びアルファ３ドメインに非共有結合して、ＨＬＡ－Ａ複合体を構築する。ＨＬＡ－Ａ分子は任意のＨＬＡ－Ａ分子であり得る。本発明の一実施形態においては、ＨＬＡクラスＩ分子はＨＬＡ－Ａ２分子である。ＨＬＡ－Ａ２分子は、任意のＨＬＡ－Ａ２分子であり得る。ＨＬＡ－Ａ２分子の例としては、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３対立遺伝子、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７対立遺伝子、又はＨＬＡ－Ａ^＊０２：１１対立遺伝子によってコードされるものが挙げられ得るが、これらに限定されない。好ましくは、ＨＬＡクラスＩ分子は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１対立遺伝子によってコードされる。

【0026】

養子細胞移入に使用される細胞で発現した場合を含む、本発明のＴＣＲは、多くの利点のいずれか１以上を提供し得る。変異ｐ５３は、がん細胞で発現し、正常非がん細胞では発現しない。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、本発明のＴＣＲは、有利には、例えば毒性を最小化又は排除することによって、正常非がん細胞の破壊を最小化又は排除すると同時に、がん細胞の破壊を目的とし、それによって、低減すると考えられる。更に、本発明のＴＣＲは、有利には、例えば化学療法、外科手術、又は放射線照射等の他の種類の治療には応答しない変異ｐ５３陽性がんを成功裏に治療又は予防することができる。更に、本発明のＴＣＲは、変異ｐ５３を高い結合活性で（ｈｉｇｈｌｙ ａｖｉｄ）認識することができ、これによって、操作されていない腫瘍細胞（例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）－γで処理されていない、変異ｐ５３及び適用可能なＨＬＡ分子の一方又は両方をコードしているベクターをトランスフェクションしていない、ｐ５３変異を有するｐ５３ペプチドをパルスしていない、又はこれらの組み合わせの腫瘍細胞）を認識する能力が付与され得る。ｐ５３における変異は様々な腫瘍型に共通している。全ての腫瘍のおよそ半分はｐ５３に変異を有し、そのうちの約半分はミスセンス変異である。Ｒ１７５Ｈ変異は一般的であり、全固形がん患者の約５％が有している。Ｃ１３５Ｙ変異及びＭ２３７Ｉ変異も再発率が高く、それぞれ全がん患者の約０．４％が有している。従って、本発明のＴＣＲは、免疫療法による治療の適格性を有する可能性のある患者の数を増加させることができる。

【0027】

語句「抗原特異性」とは、本明細書で用いるとき、ＴＣＲが、高い結合活性で変異ｐ５３に特異的に結合し、免疫学的に認識できることを意味する。例えば、（ａ）変異ｐ５３ペプチド（例えば、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約１０，０００ｎｇ／ｍＬ、０．１ｎｇ／ｍＬ、０．５ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、１，０００ｎｇ／ｍＬ、５，０００ｎｇ／ｍＬ、１０，０００ｎｇ／ｍＬ、又は上記値のうちのいずれか２つによって規定される範囲）をパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異ｐ５３を発現するように変異ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列を導入した抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した際に、ＴＣＲを発現している約１×１０^４～約１×１０^５個のＴ細胞が少なくとも約２００ｐｇ／ｍＬ以上（例えば、２００ｐｇ／ｍＬ以上、３００ｐｇ／ｍＬ以上、４００ｐｇ／ｍＬ以上、５００ｐｇ／ｍＬ以上、６００ｐｇ／ｍＬ以上、７００ｐｇ／ｍＬ以上、１０００ｐｇ／ｍＬ以上、５，０００ｐｇ／ｍＬ以上、７，０００ｐｇ／ｍＬ以上、１０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、２０，０００ｐｇ／ｍＬ以上、又は上記値のうちのいずれか２つによって規定される範囲）のＩＦＮ－γを分泌した場合、該ＴＣＲが変異ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。本発明のＴＣＲを発現している細胞は、より高濃度の変異ｐ５３ペプチドをパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した際にもＩＦＮ－γを分泌することができる。

【0028】

或いは又は更に、ネガティブコントロールで発現するＩＦＮ－γの量と比較して、（ａ）変異ｐ５３ペプチドをパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異ｐ５３を発現するように変異ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列を導入した抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した際に、ＴＣＲを発現しているＴ細胞が少なくとも２倍のＩＦＮ－γを分泌した場合、該ＴＣＲが変異ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ネガティブコントロールは、例えば、（ｉ）（ａ）同濃度の関係性の無いペプチド（例えば、変異ｐ５３ペプチドとは異なる配列を有する幾つかの他のペプチド）をパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞若しくは（ｂ）標的細胞が関係性の無いペプチドを発現するように該関係性の無いペプチドをコードしているヌクレオチド配列を導入した抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した、該ＴＣＲを発現しているＴ細胞、又は（ｉｉ）（ａ）同濃度の変異ｐ５３ペプチドをパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞若しくは（ｂ）標的細胞が変異ｐ５３を発現するように変異ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列を導入した抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した、形質導入されていないＴ細胞（例えば、該ＴＣＲを発現しないＰＢＭＣ由来）であってよい。ＩＦＮ－γ分泌は、当技術分野において公知の方法、例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定することができる。パルスされたペプチドの濃度は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りであってよい。

【0029】

或いは又は更に、ＩＦＮ－γを分泌するネガティブコントロールＴ細胞の数と比較して、（ａ）変異ｐ５３ペプチドをパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異ｐ５３を発現するように変異ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列を導入した抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した際に、ＩＦＮ－γを分泌するＴＣＲを発現しているＴ細胞の数が少なくとも２倍であった場合、該ＴＣＲが変異ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ペプチドの濃度及びネガティブコントロールは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りであってよい。ＩＦＮ－γを分泌する細胞の数は、当技術分野において公知の方法、例えば、酵素免疫スポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイによって測定することができる。

【0030】

或いは又は更に、同じ標的細胞と共培養したネガティブコントロールＴ細胞についてＥＬＩＳＰＯＴによって検出されたスポット数と比較して、（ａ）変異ｐ５３ペプチドをパルスした抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞又は（ｂ）標的細胞が変異ｐ５３を発現するように変異ｐ５３をコードしているヌクレオチド配列を導入した抗原陰性適用可能なＨＬＡ分子陽性の標的細胞と共培養した際に、ＴＣＲを発現しているＴ細胞についてのＥＬＩＳＰＯＴによって少なくとも２倍のスポットが検出された場合、該ＴＣＲが変異ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。ペプチドの濃度及びネガティブコントロールは、本発明の他の態様に関して本明細書に記載の通りであってよい。

【0031】

或いは又は更に、変異ｐ５３を発現している標的細胞で刺激した後に例えばフローサイトメトリーによって測定したとき、ＴＣＲを発現しているＴ細胞が４－１ＢＢ及びＯＸ４０の一方又は両方の発現を上方制御した場合、該ＴＣＲが変異ｐ５３に対して「抗原特異性」を有するとみなしてよい。

【0032】

本発明の一態様は、例えば、ＴＣＲのアルファ（α）鎖、ＴＣＲのベータ（β）鎖、ＴＣＲのガンマ（γ）鎖、ＴＣＲのデルタ（δ）鎖、又はこれらの組み合わせ等の２本のポリペプチド（即ち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲのポリペプチドは、ＴＣＲが変異ｐ５３に対して抗原特異性を有する限り、任意のアミノ酸配列を含んでいてよい。

【0033】

本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む可変領域をそれぞれ含む、２本のポリペプチド鎖を含む。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、α鎖のＣＤＲ１（ＣＤＲ１α）、α鎖のＣＤＲ２（ＣＤＲ２α）、及びα鎖のＣＤＲ３（ＣＤＲ３α）を含む第１のポリペプチド鎖と、β鎖のＣＤＲ１（ＣＤＲ１β）、β鎖のＣＤＲ２（ＣＤＲ２β）、及びβ鎖のＣＤＲ３（ＣＤＲ３β）を含む第２のポリペプチド鎖とを含む。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、（１）配列番号２～７の全て（４３１６－Ｄ ＴＣＲ）；（２）配列番号１７～２２の全て（４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲ）；（３）配列番号３２～３７の全て（４３０４ ＴＣＲ－２）；（４）配列番号４７～５２の全て（４３０４ ＴＣＲ－４）；又は（５）配列番号６２～６７の全て（４３０４ ＴＣＲ－Ｋ）のアミノ酸配列を含む。この段落における上述の９のアミノ酸配列のコレクションのそれぞれ１つは、変異ヒトｐ５３に対して抗原特異性を有する５の異なるＴＣＲのそれぞれの６のＣＤＲ領域を示す。各コレクションにおける６のアミノ酸配列は、それぞれ、ＣＤＲ１α、ＣＤＲ２α、ＣＤＲ３α、ＣＤＲ１β、ＣＤＲ２β、及びＣＤＲ３βに対応する。

【0034】

ＴＣＲは、配列番号２～７、１７～２２、３２～３７、４７～５２、及び６２～６７のうちのいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、ヒトｐ５３^{Ｃ１３５Ｙ}、ヒトｐ５３^{Ｒ１７５Ｈ}、又はヒトｐ５３^{Ｍ２３７Ｉ}のアミノ酸配列に対して抗原特異性を有する単離又は精製されたＴＣＲを含み、該ＴＣＲは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号２～４の全て；（２）配列番号５～７の全て；（３）配列番号２～７の全て；（４）配列番号１７～１９の全て；（５）配列番号２０～２２の全て；（６）配列番号１７～２２の全て；（７）配列番号３２～３４の全て；（８）配列番号３５～３７の全て；（９）配列番号３２～３７の全て；（１０）配列番号４７～４９の全て；（１１）配列番号５０～５２の全て；（１２）配列番号４７～５２の全て；（１３）配列番号６２～６４の全て；（１４）配列番号６５～６７の全て；又は（１５）配列番号６２～６７の全て。

【0035】

本発明の一態様においては、ＴＣＲは、合わせて上記ＣＤＲのコレクションのうちの１つを含む、α鎖可変領域のアミノ酸配列及びβ鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。これに関して、該ＴＣＲは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号８及び９の両方；（２）配列番号１０及び１１の両方；（３）配列番号２３及び２４の両方；（４）配列番号２５及び２６の両方；（５）配列番号３８及び３９の両方；（６）配列番号４０及び４１の両方；（７）配列番号５３及び５４の両方；（８）配列番号５５及び５６の両方；（９）配列番号６８及び６９の両方；又は（１０）配列番号７０及び７１の両方。この段落における上述のアミノ酸配列のコレクションのそれぞれ１つは、変異ヒトｐ５３に対して抗原特異性を有する５の異なるＴＣＲのそれぞれの２の可変領域を示す。各コレクションにおける２のアミノ酸配列は、それぞれ、ＴＣＲのα鎖の可変領域及びβ鎖の可変領域に対応する。

【0036】

ＴＣＲは、例えば、配列番号８、９、１０、１１、２３、２４、２５、２６、３８、３９、４０、４１、５３、５４、５５、５６、６８、６９、７０、及び７１のうちのいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、該ＴＣＲは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号８；（２）配列番号９；（３）配列番号８及び９の両方；（４）配列番号１０；（５）配列番号１１；（６）配列番号１０及び１１の両方；（７）配列番号２３；（８）配列番号２４；（９）配列番号２３及び２４の両方；（１０）配列番号２５；（１１）配列番号２６；（１２）配列番号２５及び２６の両方；（１３）配列番号３８；（１４）配列番号３９；（１５）配列番号３８及び３９の両方；（１６）配列番号４０；（１７）配列番号４１；（１８）配列番号４０及び４１の両方；（１９）配列番号５３；（２０）配列番号５４；（２１）配列番号５３及び５４の両方；（２２）配列番号５５；（２３）配列番号５６；（２４）配列番号５５及び５６の両方；（２５）配列番号６８；（２６）配列番号６９；（２７）配列番号６８及び６９の両方；（２８）配列番号７０；（２９）配列番号７１；又は（３０）配列番号７０及び７１の両方。

【0037】

本発明のＴＣＲは、定常領域を更に含み得る。定常領域は、例えばヒト又はマウス等の任意の好適な種に由来していてよい。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、マウスの定常領域を更に含む。本明細書で用いるとき、用語「マウス」又は「ヒト」は、本明細書に記載のＴＣＲ又はＴＣＲの任意の構成要素（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変領域、定常領域、アルファ鎖、及び／又はベータ鎖）に言及するとき、それぞれマウス又はヒト由来のＴＣＲ（又はその構成要素）、即ち、それぞれマウスＴ細胞又はヒトＴ細胞を起源とするか又は該細胞によってかつて発現されたＴＣＲ（又はその構成要素）を意味する。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、マウスα鎖定常領域及びマウスβ鎖定常領域を含み得る。マウスα鎖定常領域は、改変されていてもよく、改変されていなくてもよい。改変マウスα鎖定常領域は、例えば米国特許第１０，１７４，０９８号に記載の通り、例えば、システイン置換されていてもよく、ＬＶＬ改変されていてもよく、又はシステイン置換及びＬＶＬ改変の両方が行われていてもよい。マウスβ鎖定常領域は、改変されていてもよく、改変されていなくてもよい。改変マウスβ鎖定常領域は、例えば米国特許第１０，１７４，０９８号に記載の通り、例えば、システイン置換されていてよい。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、配列番号７７又は７８のアミノ酸配列を含むシステイン置換ＬＶＬ改変マウスα鎖定常領域を含む。本発明の一態様においては、ＴＣＲは、配列番号７９のアミノ酸配列を含むシステイン置換マウスβ鎖定常領域を含む。

【0038】

本発明の一態様においては、本発明のＴＣＲは、ＴＣＲのα鎖及びＴＣＲのβ鎖を含み得る。ＴＣＲのα鎖は、α鎖の可変領域及びα鎖の定常領域を含み得る。この種のα鎖は、ＴＣＲの任意のβ鎖と対合し得る。β鎖は、β鎖の可変領域及びβ鎖の定常領域を含み得る。

【0039】

幾つかの態様においては、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖のいずれかのアミノ酸配列は、Ｃ末端にアミノ酸配列ＲＡＫＲ（配列番号９５）を更に含む。

【0040】

本発明の一態様においては、ＴＣＲは以下のアミノ酸配列を含み得る：（１）配列番号１２及び１３の両方；（２）配列番号１４及び１５の両方；（３）配列番号２７及び２８の両方；（４）配列番号２９及び３０の両方；（５）配列番号４２及び４３の両方；（６）配列番号４４及び４５の両方；（７）配列番号５７及び５８の両方；（８）配列番号５９及び６０の両方；（９）配列番号７２及び７３の両方；又は（１０）配列番号７４及び７５の両方。この段落における上述のアミノ酸配列のコレクションのそれぞれ１つは、変異ヒトｐ５３に対して抗原特異性を有する、５の異なるＴＣＲのそれぞれのα鎖及びβ鎖を示す。各コレクションにおける２のアミノ酸配列は、それぞれ、ＴＣＲのα鎖及びβ鎖に対応する。

【0041】

ＴＣＲは、配列番号１２、１３、１４、１５、２７、２８、２９、３０、４２、４３、４４、４５、５７、５８、５９、６０、７２、７３、７４、及び７５のうちのいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、該ＴＣＲは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号１２；（２）配列番号１３；（３）配列番号１２及び１３の両方；（４）配列番号１４；（５）配列番号１５；（６）配列番号１４及び１５の両方；（７）配列番号２７；（８）配列番号２８；（９）配列番号２７及び２８の両方；（１０）配列番号２９；（１１）配列番号３０；（１２）配列番号２９及び３０の両方；（１３）配列番号４２；（１４）配列番号４３；（１５）配列番号４２及び４３の両方；（１６）配列番号４４；（１７）配列番号４５；（１８）配列番号４４及び４５の両方；（１９）配列番号５７；（２０）配列番号５８；（２１）配列番号５７及び５８の両方；（２２）配列番号５９；（２３）配列番号６０；（２４）配列番号５９及び６０の両方；（２５）配列番号７２；（２６）配列番号７３；（２７）配列番号７２及び７３の両方；（２８）配列番号７４；（２９）配列番号７５；又は（３０）配列番号７４及び７５の両方。

【0042】

本明細書に記載の本発明のＴＣＲの機能的バリアントは、本発明の範囲に含まれる。用語「機能的バリアント」とは、本明細書で用いるとき、親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対して実質的な又は著しい配列の同一性又は類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、該機能的バリアントは、該バリアントがそのバリアントであるＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を保持している。機能的バリアントは、例えば、親のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質と同様の程度、同一程度、又はより高程度、親ＴＣＲが抗原特異性を有するか又は親のポリペプチド若しくはタンパク質が特異的に結合する変異ｐ５３に特異的に結合する能力を保持している、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質（親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントを包含する。親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に関連して、機能的バリアントは、例えば、それぞれ親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質に対してアミノ酸配列が少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又はそれ以上同一であってよい。

【0043】

機能的バリアントは、例えば、少なくとも１の保存的アミノ酸置換を有する親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は、当技術分野において公知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有するあるアミノ酸が、同じ化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸に交換されるアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、酸性アミノ酸の別の酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）による置換、非極性側鎖を有するアミノ酸の、別の非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）による置換、塩基性アミノ酸の別の塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）による置換、極性側鎖を有するアミノ酸の、別の極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）による置換等であってよい。

【0044】

或いは又は更に、機能的バリアントは、少なくとも１の非保存的アミノ酸置換を有する親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が、機能的バリアントの生物活性に干渉もせず、阻害もしないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換は機能的バリアントの生物活性を増強し、その結果、機能的バリアントの生物活性が、親のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質と比べて増大する。

【0045】

ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、本明細書に記載の指定のアミノ酸配列（複数可）から本質的になっていてよく、その結果、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の他の構成要素、例えば、他のアミノ酸が、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を実質的に変化させることはない。

【0046】

また、本明細書に記載のＴＣＲのいずれかの機能的部分を含むポリペプチドが本発明によって提供される。用語「ポリペプチド」は、本明細書で用いるとき、オリゴペプチドを含み、そして、１以上のペプチド結合によって連結された一本鎖のアミノ酸を指す。

【0047】

本発明のポリペプチドに関して、機能的部分は、変異ｐ５３に特異的に結合する限り、該機能的部分がその一部であるＴＣＲの連続アミノ酸を含む任意の部分であってよい。用語「機能的部分」は、ＴＣＲに関連して使用されるとき、本発明のＴＣＲの任意の部分又は断片であって、該部分又は断片がその一部であるＴＣＲ（親ＴＣＲ）の生物活性を保持している部分又は断片を指す。機能的部分は、例えば、親ＴＣＲと同様の程度、同一程度、又はより高程度、（例えば、適用可能なＨＬＡ分子依存的に）変異ｐ５３に特異的に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防する能力を保持しているＴＣＲの部分を包含する。親ＴＣＲに関連して、機能的部分は、例えば、親ＴＣＲの約１０％、約２５％、約３０％、約５０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、又はそれ以上を構成し得る。

【0048】

機能的部分は、該部分のアミノ若しくはカルボキシ末端又は両末端に、親ＴＣＲのアミノ酸配列にはみられない追加のアミノ酸を含んでいてもよい。望ましくは、追加のアミノ酸は、例えば、変異ｐ５３に特異的に結合する、及び／又はがんを検出する、がんを治療若しくは予防する能力を有する等の機能的部分の生物学的機能に干渉しない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親ＴＣＲの生物活性と比較して生物活性を増強する。

【0049】

ポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のいずれか又は両方の機能的部分、例えば、本発明のＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖の可変領域（複数可）のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のうちの１以上を含む機能的部分を含み得る。本発明の一態様においては、該ポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含み得る：（１）配列番号２～７の全て；（２）配列番号１７～２２の全て；（３）配列番号３２～３７の全て；（４）配列番号４７～５２の全て；又は（５）配列番号６２～６７の全て。ポリペプチドは、配列番号２～７、１７～２２、３２～３７、４７～５２、及び６２～６７のうちのいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、該ポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号２～４の全て；（２）配列番号５～７の全て；（３）配列番号２～７の全て；（４）配列番号１７～１９の全て；（５）配列番号２０～２２の全て；（６）配列番号１７～２２の全て；（７）配列番号３２～３４の全て；（８）配列番号３５～３７の全て；（９）配列番号３２～３７の全て；（１０）配列番号４７～４９の全て；（１１）配列番号５０～５２の全て；（１２）配列番号４７～５２の全て；（１３）配列番号６２～６４の全て；（１４）配列番号６５～６７の全て；又は（１５）配列番号６２～６７の全て。

【0050】

本発明の一態様においては、本発明のポリペプチドは、例えば、上記ＣＤＲ領域の組み合わせを含む本発明のＴＣＲの可変領域を含み得る。これに関して、該ポリペプチドは、例えば、以下のアミノ酸配列を含み得る：（１）配列番号８及び９の両方；（２）配列番号１０及び１１の両方；（３）配列番号２３及び２４の両方；（４）配列番号２５及び２６の両方；（５）配列番号３８及び３９の両方；（６）配列番号４０及び４１の両方；（７）配列番号５３及び５４の両方；（８）配列番号５５及び５６の両方；（９）配列番号６８及び６９の両方；又は（１０）配列番号７０及び７１の両方。ポリペプチドは、例えば、配列番号８、９、１０、１１、２３、２４、２５、２６、３８、３９、４０、４１、５３、５４、５５、５６、６８、６９、７０、及び７１のうちのいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、該ポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号８；（２）配列番号９；（３）配列番号８及び９の両方；（４）配列番号１０；（５）配列番号１１；（６）配列番号１０及び１１の両方；（７）配列番号２３；（８）配列番号２４；（９）配列番号２３及び２４の両方；（１０）配列番号２５；（１１）配列番号２６；（１２）配列番号２５及び２６の両方；（１３）配列番号３８；（１４）配列番号３９；（１５）配列番号３８及び３９の両方；（１６）配列番号４０；（１７）配列番号４１；（１８）配列番号４０及び４１の両方；（１９）配列番号５３；（２０）配列番号５４；（２１）配列番号５３及び５４の両方；（２２）配列番号５５；（２３）配列番号５６；（２４）配列番号５５及び５６の両方；（２５）配列番号６８；（２６）配列番号６９；（２７）配列番号６８及び６９の両方；（２８）配列番号７０；（２９）配列番号７１；又は（３０）配列番号７０及び７１の両方。

【0051】

本発明の一態様においては、本発明のポリペプチドは、上記本発明のＴＣＲの定常領域を更に含み得る。これに関して、該ポリペプチドは、例えば、（ｉ）配列番号７７～７９のうちの１又は（ｉｉ）配列番号７９及び配列番号７７及び７８のうちの１のアミノ酸配列を含み得る。

【0052】

本発明の一態様においては、本発明のポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖を含み得る。これに関して、該ポリペプチドは、例えば、以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号１２及び１３の両方；（２）配列番号１４及び１５の両方；（３）配列番号２７及び２８の両方；（４）配列番号２９及び３０の両方；（５）配列番号４２及び４３の両方；（６）配列番号４４及び４５の両方；（７）配列番号５７及び５８の両方；（８）配列番号５９及び６０の両方；（９）配列番号７２及び７３の両方；又は（１０）配列番号７４及び７５の両方。ポリペプチドは、配列番号１２、１３、１４、１５、２７、２８、２９、３０、４２、４３、４４、４５、５７、５８、５９、６０、７２、７３、７４、及び７５のうちのいずれか１以上のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、該ポリペプチドは以下のアミノ酸配列を含む：（１）配列番号１２；（２）配列番号１３；（３）配列番号１２及び１３の両方；（４）配列番号１４；（５）配列番号１５；（６）配列番号１４及び１５の両方；（７）配列番号２７；（８）配列番号２８；（９）配列番号２７及び２８の両方；（１０）配列番号２９；（１１）配列番号３０；（１２）配列番号２９及び３０の両方；（１３）配列番号４２；（１４）配列番号４３；（１５）配列番号４２及び４３の両方；（１６）配列番号４４；（１７）配列番号４５；（１８）配列番号４４及び４５の両方；（１９）配列番号５７；（２０）配列番号５８；（２１）配列番号５７及び５８の両方；（２２）配列番号５９；（２３）配列番号６０；（２４）配列番号５９及び６０の両方；（２５）配列番号７２；（２６）配列番号７３；（２７）配列番号７２及び７３の両方；（２８）配列番号７４；（２９）配列番号７５；又は（３０）配列番号７４及び７５の両方。

【0053】

本発明の一態様は、更に、本明細書に記載のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含むタンパク質を提供する。「タンパク質」とは、１本以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。一態様においては、本発明のタンパク質は以下の第１及び第２のポリペプチド鎖を含み得る：（１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２～４の全てのアミノ酸配列を含む、（２）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５～７の全てのアミノ酸配列を含む、（３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２～４の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５～７の全てのアミノ酸配列を含む、（４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７～１９の全てのアミノ酸配列を含む、（５）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２０～２２の全てのアミノ酸配列を含む、（６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１７～１９の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２０～２２の全てのアミノ酸配列を含む、（７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３２～３４の全てのアミノ酸配列を含む、（８）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３５～３７の全てのアミノ酸配列を含む、（９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３２～３４の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号３５～３７の全てのアミノ酸配列を含む、（１０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４７～４９の全てのアミノ酸配列を含み、（１１）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５０～５２の全てのアミノ酸配列を含む、（１２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４７～４９の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５０～５２の全てのアミノ酸配列を含む、（１３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６２～６４の全てのアミノ酸配列を含み、（１４）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６５～６７の全てのアミノ酸配列を含む、又は（１５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６２～６４の全てのアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号６５～６７の全てのアミノ酸配列を含む。

【0054】

本発明の一態様においては、タンパク質は以下の第１及び第２のポリペプチド鎖を含む：（１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含む、（２）第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列を含む、（３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号９のアミノ酸配列を含む、（４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、（５）第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、（６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、（７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、（８）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、（９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、（１０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、（１１）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、（１２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、（１３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、（１４）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、（１５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、（１６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、（１７）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、（１８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、（１９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、（２０）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、（２１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、（２２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、（２３）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、（２４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、（２５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、（２６）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、（２７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号６８のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、（２８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、（２９）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、又は（３０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７０のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。

【0055】

本発明の一態様においては、タンパク質は、以下の第１及び第２のポリペプチド鎖を含む：（１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、（２）第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、（３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、（４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、（５）第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、（６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、（７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、（８）第２のポリペプチド鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、（９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、（１０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、（１１）第２のポリペプチド鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、（１２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、（１３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、（１４）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、（１５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、（１６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４４のアミノ酸配列を含む、（１７）第２のポリペプチド鎖は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、（１８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号４４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、（１９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、（２０）第２のポリペプチド鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、（２１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、（２２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、（２３）第２のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、（２４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含む、（２５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、（２６）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、（２７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７２のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、（２８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、（２９）第２のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、又は（３０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号７４のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む。

【0056】

本発明のタンパク質は、ＴＣＲであってよい。或いは、該タンパク質の第１の及び／又は第２のポリペプチド鎖（複数可）が、他のアミノ酸配列、例えば免疫グロブリン又はその一部分をコードしているアミノ酸配列を更に含む場合、本発明のタンパク質は、融合タンパク質であってもよい。これに関して、本発明の一態様は、また、少なくとも１の他のポリペプチドと共に、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む融合タンパク質を提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の別々のタンパク質として存在してもよく、又は本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの１つとインフレームで（タンデムに）発現するポリペプチドとして存在してもよい。他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子、例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ等が挙げられるがこれらに限定されない、任意のペプチド性若しくはタンパク質性の分子、又はこれらの一部分をコードしていてよい。

【0057】

融合タンパク質は、１コピー以上の本発明のポリペプチド及び／又は１コピー以上の他のポリペプチドを含み得る。例えば、融合タンパク質は、１、２、３、４、５、又はそれ以上のコピーの本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドを含み得る。融合タンパク質を作製する好適な方法は、当技術分野において公知であり、例えば、組み換え法が挙げられる。

【0058】

本発明の幾つかの態様においては、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、α鎖及びβ鎖を連結するリンカーペプチドを含む単一のタンパク質として発現し得る。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、リンカーペプチドを更に含み得る。リンカーペプチドは、有利には、宿主細胞における組み換え体のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質の発現を促進し得る。リンカーペプチドは、任意の好適なアミノ酸配列を含み得る。例えば、リンカーペプチドは、ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含み得る。リンカーペプチドを含むコンストラクトが宿主細胞によって発現されたら、リンカーペプチドを切断してもよく、その結果、分離されたα鎖及びβ鎖が得られる。本発明の一態様においては、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、全長α鎖、全長β鎖、及びα鎖とβ鎖との間に位置するリンカーペプチドを含むアミノ酸配列を含み得る。

【0059】

幾つかの態様においては、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、シグナルペプチドを含む、本明細書に開示される通りのα鎖及び／又はβ鎖を含む。幾つかの態様においては、本明細書に開示されるα鎖及び／又はβ鎖のいずれかのシグナルペプチドの配列は、２位の野生型残基と置換されたロイシン、リジン、アラニン又はヒスチジン残基を含む。

【0060】

幾つかの態様においては、本明細書に開示されるＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、シグナルペプチドを欠く、本明細書に開示される通りのα鎖及び／又はβ鎖の成熟型を含む。

【0061】

本発明のタンパク質は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む、組み換え抗体又はその抗原結合部分であってよい。本明細書で用いるとき、「組み換え抗体」とは、本発明のポリペプチドのうちの少なくとも１つ、及び抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分を含む組み換え（例えば、遺伝的に操作された）タンパク質を指す。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、抗体の重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変領域若しくは定常領域、単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）、又はＦｃ、Ｆａｂ、若しくはＦ（ａｂ）_２’の断片であってよい。抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、組み換え抗体の別々のポリペプチドとして存在してよい。或いは、抗体のポリペプチド鎖又はその抗原結合部分は、本発明のポリペプチドとインフレームで（タンデムに）発現するポリペプチドとして存在してもよい。抗体のポリペプチド又はその抗原結合部分は、本明細書に記載の抗体及び抗体断片のいずれかを含む、任意の抗体又は任意の抗体断片のポリペプチドであってよい。

【0062】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、その生物活性、例えば、変異ｐ５３に特異的に結合する能力、哺乳動物におけるがんを検出する能力、又は哺乳動物におけるがんを治療若しくは予防する能力等を保持している限り、任意の長さであってよい、即ち、任意の数のアミノ酸を含み得る。例えば、ポリペプチドは、約５０～約５０００アミノ酸長の範囲、例えば、５０、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００又はそれ以上のアミノ酸長であってよい。これに関して、本発明のポリペプチドは、オリゴペプチドも含む。

【0063】

本発明の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、１以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含んでいてもよい。このような合成アミノ酸は、当技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リシン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リシン、６－ヒドロキシリシン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。

【0064】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質を、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ－アシル化、例えばジスルフィド架橋を介して環化、又は酸付加塩に変換、及び／又は任意で二量体化若しくは多量体化、又はコンジュゲートしてもよい。

【0065】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質は、当技術分野において公知の方法、例えば、デノボ合成によって得ることができる。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組み換え法を使用し、本明細書に記載の核酸を用いて組み換え的に生成することができる。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４^ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２０１２）を参照。或いは、さまざまな営利団体が、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質を商業的に合成することもできる。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成であってもよく、組み換え体であってもよく、単離されていてもよく、及び／又は精製されていてもよい。

【0066】

本発明の一態様は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。「核酸」は、本明細書で用いるとき、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、及び「核酸分子」を含み、一般的に、ＤＮＡ又はＲＮＡのポリマーを意味し、これらは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチドを含有していてもよく、そして、改変されていないオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間にみられるホスホジエステルの代わりに、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチド間結合、例えば、ホスホロアミデート結合又はホスホロチオエート結合を含有していてもよい。一態様においては、核酸は、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を含む。核酸は、任意の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含まないことが一般に好ましい。しかし、幾つかの例では、本明細書で論じた通り、核酸が１以上の挿入、欠失、逆位、及び／又は置換を含むことが好適である場合もある。

【0067】

本発明の態様は、５’から３’に向かって、第１の核酸配列及び第２の核酸配列を含む単離又は精製された核酸であって、該第１及び第２の核酸配列が、それぞれ、配列番号８及び９；９及び８；１０及び１１；１１及び１０；１２及び１３；１３及び１２；１４及び１５；１５及び１４；２３及び２４；２４及び２３；２５及び２６；２６及び２５；２７及び２８；２８及び２７；２９及び３０；３０及び２９；３８及び３９；３９及び３８；４０及び４１；４１及び４０；４２及び４３；４３及び４２；４４及び４５；４５及び４４；５３及び５４；５４及び５３；５５及び５６；５６及び５５；５７及び５８；５８及び５７；５９及び６０；６０及び５９；６８及び６９；６９及び６８；７０及び７１；７１及び７０；７２及び７３；７３及び７２；７４及び７５；又は７５及び７４のアミノ酸配列をコードする、核酸を提供する。

【0068】

本発明の一態様においては、核酸は、第１及び第２のヌクレオチド配列の間に介在する第３のヌクレオチド酸配列を更に含み、該第３のヌクレオチド配列は、切断可能なリンカーペプチドをコードする。例えば、切断可能なリンカーペプチドは、配列ＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含み得る。本発明の一態様においては、核酸は、配列番号１６、３１、４６、６１、及び７６からなる群から選択されるアミノ酸配列をコードする。

【0069】

好ましくは、本発明の核酸は、組み換え体である。本明細書で用いるとき、用語「組み換え体」とは、（ｉ）天然若しくは合成の核酸セグメントを生細胞で複製可能な核酸分子に連結させることによって生細胞の外部で構築される分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載されているものの複製によって得られる分子を指す。本明細書における目的のために、複製は、インビトロ複製であってもインビボ複製であってもよい。

【0070】

核酸は、当技術分野において公知の手順を用いて、化学合成及び／又は酵素ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、Ｇｒｅｅｎ及びＳａｍｂｒｏｏｋら、前記を参照。例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチド、又は分子の生物学的安定性を増大させるか若しくはハイブリダイゼーションの際に形成される二本鎖の物理的安定性を増大させるために設計された様々に修飾されたヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を用いて、化学的に合成することができる。核酸を作製するために用いることができる修飾ヌクレオチドの例としては、５－フルオロウラシル、５－ブロモウラシル、５－クロロウラシル、５－ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４－アセチルシトシン、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ－Ｄ－ガラクトシルキュェオシン、イノシン、Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、１－メチルグアニン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアニン、２－メチルアデニン、２－メチルグアニン、３－メチルシトシン、５－メチルシトシン、Ｎ^６－置換アデニン、７－メチルグアニン、５－メチルアミノメチルウラシル、５－メトキシアミノメチル－２－チオウラシル、ベータ－Ｄ－マンノシルキュェオシン、５’－メトキシカルボキシメチルウラシル、５－メトキシウラシル、２－メチルチオ－Ｎ^６－イソペンテニルアデニン、ウラシル－５－オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン、プソイドウラシル、キュエオシン、２－チオシトシン、５－メチル－２－チオウラシル、２－チオウラシル、４－チオウラシル、５－メチルウラシル、ウラシル－５－オキシ酢酸メチルエステル、３－（３－アミノ－３－Ｎ－２－カルボキシプロピル）ウラシル、及び２，６－ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。或いは、本発明の核酸のうちの１以上は、さまざまな営利団体によって合成されうる。

【0071】

本発明の一態様においては、核酸は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかをコードしている、コドン最適化されたヌクレオチド配列を含む。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ヌクレオチド配列のコドン最適化は、ｍＲＮＡ転写物の翻訳効率を増大させると考えられる。ヌクレオチド配列のコドン最適化は、ネイティブなコドンを、同じアミノ酸をコードしているが細胞内でより容易に利用可能なｔＲＮＡによって翻訳され得る別のコドンで置換し、それによって、翻訳効率を増大させることを伴い得る。また、ヌクレオチド配列の最適化は、翻訳に干渉するｍＲＮＡの二次構造を低減し、それによって、翻訳効率を増大させることもできる。

【0072】

また、本発明の一態様は、本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。

【0073】

ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に多い量で、標的配列（本明細書に記載の核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件は、正確な相補的配列を有するポリヌクレオチド又は幾つかの散在している不一致しか含有していないものを、該ヌクレオチド配列に一致している幾つかの小さな領域（例えば、３～１０塩基）を偶然有するランダム配列と識別する条件を含む。このような相補的な小さな領域は、１４～１７又はそれ以上の塩基の全長相補体よりも容易に融解するので、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーションによって容易に識別可能になる。比較的高ストリンジェンシー条件は、例えば、約０．０２～０．１Ｍ ＮａＣｌ又は等価物、約５０～７０℃の温度によって提供されるもの等の低塩及び／又は高温条件を含む。このような高ストリンジェンシー条件は、ヌクレオチド配列とテンプレート又は標的鎖との間の（もし存在するとしても）わずかな不一致しか許容せず、本発明のＴＣＲのいずれかの発現を検出するのに特に好適である。一般的に、漸増量のホルムアミドを添加することによって、条件をよりストリンジェントにすることができると理解される。

【0074】

また、本発明の一態様は、本明細書に記載の核酸のいずれかと少なくとも約７０％以上、例えば、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。これに関して、核酸は、本明細書に記載のヌクレオチド配列のいずれかから本質的になっていてよい。

【0075】

本発明の核酸は、組み換え発現ベクターに組み込むことができる。これに関して、本発明の一態様は、本発明の核酸のいずれかを含む組み換え発現ベクターを提供する。本発明の一態様においては、組み換え発現ベクターは、α鎖、β鎖、及びリンカーペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む。

【0076】

本明細書における目的のために、用語「組み換え発現ベクター」は、コンストラクトがｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含み、宿主細胞内で該ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させるのに十分な条件下でベクターを該細胞と接触させたときに、該細胞に該ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド、又はペプチドを発現させる、遺伝的に改変されたオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドのコンストラクトを意味する。本発明のベクターは、全体としては天然に存在しない。しかし、ベクターの一部が天然に存在していてもよい。本発明の組み換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡが挙げられるがこれらに限定されない任意の種類のヌクレオチドを含んでいてよく、該ＤＮＡ及びＲＮＡは、一本鎖であっても二本鎖であってもよく、合成されても天然源から部分的に入手されてもよく、天然の、非天然の、又は改変されたヌクレオチドを含有していてもよい。組み換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合、天然には存在しないヌクレオチド間結合、又は両方の種類の結合を含んでいてよい。好ましくは、天然には存在しないか又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写も複製も妨げない。

【0077】

本発明の組み換え発現ベクターは、任意の好適な組み換え発現ベクターであってよく、任意の好適な宿主細胞を形質転換又はトランスフェクションするために用いることができる。好適なベクターとしては、プラスミド及びウイルス等、伝播及び増殖用、若しくは発現用、又は両方のために設計されたものが挙げられる。ベクターは、トランスポゾン／トランスポゼースシリーズ、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）、ｐＥＴシリーズ（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ｐＧＥＸシリーズ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、及びｐＥＸシリーズ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）からなる群から選択され得る。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、λＥＭＢＬ４、及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターを用いてもよい。植物発現ベクターの例としては、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１、及びｐＢＩＮ１９（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。動物発現ベクターの例としては、ｐＥＵＫ－Ｃｌ、ｐＭＡＭ、及びｐＭＡＭｎｅｏ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）が挙げられる。好ましくは、組み換え発現ベクターは、トランスポゾンベクター又はウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクター又はレトロウイルスベクターである。

【0078】

本発明の組み換え発現ベクターは、例えば、Ｇｒｅｅｎ及びＳａｍｂｒｏｏｋら、前記に記載されている標準的な組み換えＤＮＡ技術を用いて調製することができる。円形又は線形である発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含有するように調製することができる。複製系は、例えば、ＣｏｌＥｌ、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス等に由来していてよい。

【0079】

望ましくは、組み換え発現ベクターは、制御配列、例えば、必要に応じて、そして、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主細胞の種類（例えば、細菌、真菌、植物、又は動物）に特異的な転写及び翻訳の開始及び終止のコドンを含む。

【0080】

組み換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクションされた宿主細胞の選別を可能にする１以上のマーカー遺伝子を含んでいてよい。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性、例えば、抗生物質、重金属等に対する耐性、原栄養性を与えるための栄養要求性宿主における補完等を含む。本発明の発現ベクターに好適なマーカー遺伝子は、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子、及びアンピシリン耐性遺伝子を含む。

【0081】

組み換え発現ベクターは、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードしているヌクレオチド配列に、又はＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質をコードしているヌクレオチド配列に相補的であるか若しくはハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能に連結しているネイティブ又は非ネイティブのプロモータを含んでいてよい。例えば、強い、弱い、誘導性、組織特異的、及び発生段階特異的なプロモータの選択は、当業者の技能の範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列とプロモータとの組み合わせも当業者の技能の範囲内である。プロモータは、非ウイルスプロモータ、例えば、ヒト伸長因子－１αプロモータであってもよく、ウイルスプロモータ、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモータ、ＳＶ４０プロモータ、ＲＳＶプロモータ、及びマウス幹細胞ウイルスの末端反復配列にみられるプロモータであってもよい。

【0082】

本発明の組み換え発現ベクターは、一過的発現用、安定的発現用、又は両方のために設計することができる。また、組み換え発現ベクターは、構成的発現用又は誘導性発現用に作製することができる。

【0083】

更に、組み換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むように作製してもよい。本明細書で用いるとき、用語「自殺遺伝子」とは、自殺遺伝子を発現している細胞を死に至らしめる遺伝子を指す。自殺遺伝子は、該遺伝子が発現する細胞に対して剤、例えば薬物に対する感受性を付与し、そして、該細胞が該剤と接触したとき又は該剤に曝露されたときに該細胞を死に至らしめる遺伝子であってよい。自殺遺伝子は、当技術分野において公知であり、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ、及びニトロレダクターゼを含む。

【0084】

本発明の別の態様は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する核酸又はベクターのいずれかによってコードされる単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。

【0085】

本発明の更に別の態様は、本発明の他の態様に関して本明細書に記載する核酸又はベクターのいずれかが発現した結果得られる、単離又は精製されたＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を提供する。

【0086】

本発明の別の態様は、更に、本明細書に記載の核酸のいずれか又は組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を提供する。本明細書で用いるとき、用語「宿主細胞」とは、本発明の組み換え発現ベクターを含有し得る任意の種類の細胞を指す。宿主細胞は、真核細胞、例えば、植物、動物、真菌、又は藻類であってもよく、原核細胞、例えば、細菌又は原生動物であってもよい。宿主細胞は、培養細胞又は初代細胞、即ち、生物、例えばヒトから直接単離された細胞であってよい。宿主細胞は、接着細胞又は懸濁細胞、即ち、懸濁液中で成長する細胞であってよい。好適な宿主細胞は、当技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５α大腸菌細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞等が挙げられる。組み換え発現ベクターを増幅又は複製する目的の場合、宿主細胞は、好ましくは、原核細胞、例えばＤＨ５α細胞である。組み換え体のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を生成する目的の場合、宿主細胞は、好ましくは、哺乳動物細胞である。最も好ましくは、宿主細胞は、ヒト細胞である。例えば、宿主細胞は、ヒトリンパ球であってよい。本発明の一態様においては、宿主細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、インバリアントナチュラルキラーＴ（ｉＮＫＴ）細胞、及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からなる群から選択される。宿主細胞は、任意の細胞型であってよく、任意の種類の組織に由来していてよく、任意の発生段階であってよいが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、宿主細胞は、Ｔ細胞である。

【0087】

本明細書における目的のために、Ｔ細胞は、任意のＴ細胞、例えば、培養Ｔ細胞、例えば初代Ｔ細胞、又は培養Ｔ細胞株由来のＴ細胞、例えばＪｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１等、又は哺乳動物から得られたＴ細胞であってよい。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、又は他の組織若しくは流体を含むがこれらに限定されない多数の供給源から得ることができる。また、Ｔ細胞は、濃縮又は精製されていてもよい。好ましくは、Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である。Ｔ細胞は、任意の種類のＴ細胞であってよく、任意の発生段階であってよく、ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋二重陽性Ｔ細胞、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞、例えば、Ｔｈ１及びＴｈ２細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリーＴ細胞（例えば、セントラルメモリＴ細胞及びエフェクタメモリＴ細胞）、ナイーブＴ細胞等が挙げられるが、これらに限定されない。

【0088】

また、本明細書に記載の少なくとも１の宿主細胞を含む細胞の集団が本発明の一態様によって提供される。細胞の集団は、組み換え発現ベクターのいずれも含まない少なくとも１の他の細胞、例えば宿主細胞（例えば、Ｔ細胞）、又はＴ細胞以外の細胞、例えばＢ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋肉細胞、脳細胞等に加えて、記載される組み換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む不均質な集団であってよい。或いは、細胞の集団は、組み換え発現ベクターを含む（例えば、から本質的になる）宿主細胞を主に含む、実質的に均質な集団であってもよい。また、集団は、該集団の全ての細胞が、組み換え発現ベクターを含む１の宿主細胞のクローンであり、その結果、該集団の全ての細胞が組み換え発現ベクターを含む、細胞のクローン集団であってもよい。本発明の一態様においては、細胞の集団は、本明細書に記載の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。

【0089】

本発明の一態様においては、集団内の細胞数を、急速に増幅させることができる。Ｔ細胞数の増幅は、例えば、米国特許第８，０３４，３３４号、同第８，３８３，０９９号、米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３号、Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２－４２（２００３）、及びＲｉｄｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１２８：１８９－２０１（１９９０）に記載されている通り、当技術分野において公知の多数の方法のいずれかによって実現することができる。一態様においては、Ｔ細胞数の増幅は、該Ｔ細胞をＯＫＴ３抗体、ＩＬ－２、及びフィーダーＰＢＭＣ（例えば、放射線照射された同種ＰＢＭＣ）と共に培養することによって実行される。

【0090】

本発明の態様は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質のいずれかを生成する方法であって、該ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質が生成されるように、本明細書に記載の宿主細胞又は宿主細胞の集団のいずれかを培養することを含む方法を提供する。

【0091】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）は、単離及び／又は精製されてもよい。用語「単離された」は、本明細書で用いるとき、その天然環境から取り出されていることを意味する。用語「精製された」は、本明細書で用いるとき、純度が増大したことを意味し、「純度」は相対的な用語であり、必ずしも絶対純度と解釈される訳ではない。例えば、純度は、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％であってもよく、約１００％であってもよい。

【0092】

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）（以後、これらの全てをまとめて「本発明のＴＣＲ材料」と称する）は、医薬組成物等の組成物に製剤化してもよい。これに関して、本発明の一態様は、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、発現ベクター、及び宿主細胞（その集団を含む）のいずれかと、薬学的に許容し得る担体とを含む医薬組成物を提供する。本発明のＴＣＲ材料のいずれかを含有する本発明の医薬組成物は、１つを超える本発明のＴＣＲ材料、例えばポリペプチド及び核酸、又は２つ以上の異なるＴＣＲを含んでいてもよい。或いは、医薬組成物は、別の薬学的活性剤（複数可）又は薬物（複数可）、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチン等の化学療法剤と組み合わせて、本発明のＴＣＲ材料を含んでいてもよい。

【0093】

好ましくは、担体は、薬学的に許容し得る担体である。医薬組成物に関して、担体は、検討中の具体的な本発明のＴＣＲ材料に従来使用されているもののいずれかであってよい。投与可能な組成物を調製する方法は、当業者に公知であるか又は明らかであり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄ Ｅｄ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２０１２）により詳細に記載されている。薬学的に許容し得る担体は、使用条件下で有害な副作用も毒性も有しないものであることが好ましい。

【0094】

担体の選択は、具体的な本発明のＴＣＲ材料によって、並びに本発明のＴＣＲ材料を投与するために使用される具体的な方法によって部分的に決定される。従って、本発明の医薬組成物の様々な好適な製剤が存在する。好適な製剤は、非経口、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、腫瘍内、又は腹腔内に投与するためのもののいずれかを含み得る。１つを超える経路を用いて本発明のＴＣＲ材料を投与してよく、特定の例では、特定の経路が別の経路よりも即時且つより有効な応答を提供し得る。

【0095】

好ましくは、本発明のＴＣＲ材料は、例えば静脈内に注射することによって投与される。本発明のＴＣＲ材料が、本発明のＴＣＲを発現している宿主細胞であるとき、注射用の細胞のための薬学的に許容し得る担体としては、任意の等張担体、例えば、通常生理食塩水（水中約０．９０％ｗ／ｖ ＮａＣｌ、水中約３００ｍＯｓｍ／Ｌ ＮａＣｌ、又は水１リットルあたり約９．０ｇ ＮａＣｌ）、ＮＯＲＭＯＳＯＬ Ｒ電解質溶液（Ａｂｂｏｔｔ，Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）、ＰＬＡＳＭＡ－ＬＹＴＥ Ａ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、水中約５％デキストロース、又は乳酸リンゲル液を挙げることができる。一態様においては、薬学的に許容し得る担体にヒト血清アルブミンを補給する。

【0096】

投与される本発明のＴＣＲ材料の量又は用量（例えば、本発明のＴＣＲ材料が１以上の細胞である場合は細胞数）は、好適な時間枠にわたって被験体又は動物において効果、例えば治療的又は予防的応答をもたらすのに十分でなければならない。例えば、本発明のＴＣＲ材料の用量は、投与時点から約２時間以上、例えば、１２～２４時間又はそれ以上の期間、がん抗原（例えば、変異ｐ５３）に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防するのに十分でなければならない。特定の態様においては、期間は更に長くてもよい。用量は、具体的な本発明のＴＣＲ材料の有効性及び動物（例えば、ヒト）の状態、並びに治療される動物（例えば、ヒト）の体重によって決定される。

【0097】

投与される用量を決定するための多くのアッセイが、当技術分野において公知である。例えば、それぞれ異なる用量のＴ細胞を与えた哺乳動物のセット間で、所与の用量の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質を発現しているＴ細胞を哺乳動物に投与した際に標的細胞が溶解するか又はこのようなＴ細胞によってＩＦＮ－γが分泌される程度を比較することを含むアッセイを用いて、哺乳動物に投与する開始用量を決定することができる。特定の用量を投与した際に標的細胞が溶解する又はＩＦＮ－γが分泌される程度は、当技術分野において公知の方法によってアッセイすることができる。

【0098】

本発明のＴＣＲ材料の用量は、具体的な本発明のＴＣＲ材料の投与に付随する可能性のある任意の有害な副作用の存在、性質、及び程度によっても決定される。典型的には、主治医が、様々な要因、例えば、年齢、体重、全体的な健康状態、食生活、性別、投与される本発明のＴＣＲ材料、投与経路、及び治療されるがんの重篤度を考慮して、各個々の患者を治療するための本発明のＴＣＲ材料の投与量を決定する。本発明のＴＣＲ材料が細胞の集団である一態様においては、注入１回あたりに投与される細胞数は、例えば、約１×１０^６～約１×１０^１２細胞又はそれ以上で変動し得る。特定の態様においては、１×１０^６細胞未満を投与してもよい。

【0099】

当業者は、本発明のＴＣＲ材料を任意の数の方法で修飾してよく、その結果、該修飾を通して本発明のＴＣＲ材料の治療又は予防の有効性が増大することを容易に理解するであろう。例えば、本発明のＴＣＲ材料を、直接又は架橋を介して間接的に化学療法剤にコンジュゲートしてもよい。化合物の化学療法剤へのコンジュゲートの実施は、当技術分野において公知である。当業者は、架橋及び／又は化学療法剤が本発明のＴＣＲ材料に結合した時点で本発明のＴＣＲ材料の機能、即ち、変異ｐ５３に結合するか又はがんを検出、治療、若しくは予防する能力には干渉しない限り、本発明のＴＣＲ材料の機能に必須ではない本発明のＴＣＲ材料の部位が、架橋及び／又は化学療法剤を結合させるのに理想的な部位であることを認識する。

【0100】

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団は、がんを治療又は予防する方法において使用できることが企図される。特定の理論に縛られるものではないが、本発明のＴＣＲは変異ｐ５３に特異的に結合し、その結果、ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド若しくはタンパク質）は、細胞によって発現されたとき、変異ｐ５３を発現している標的細胞に対する免疫応答を媒介することができると考えられる。これに関して、本発明の一態様は、哺乳動物におけるがんを治療又は予防する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を、哺乳動物におけるがんを治療又は予防するのに有効な量、該哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。

【0101】

本発明の一様態は、哺乳動物におけるがんの治療又は予防において用いるための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードしているヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードしている組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を提供する。

【0102】

用語「治療する」及び「予防する」、並びにそれから派生する語は、本明細書で用いるとき、必ずしも１００％、即ち、完全な治療又は予防を意味するものではない。どちらかといえば、当業者が潜在的な利点又は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、哺乳動物における任意の量の任意のレベルのがんの治療又は予防を提供することができる。更に、本発明の方法によって提供される治療又は予防は、治療又は予防されるがんの１以上の病態又は症状の治療又は予防を含み得る。例えば、治療又は予防は、腫瘍の退縮を促進することを含み得る。また、本明細書における目的のために、「予防」は、がん又はその症状若しくは病態の発生を遅らせることを包含し得る。或いは又は更に、「予防」は、がん又はその症状若しくは病態の再発を防ぐ又は遅らせることを包含し得る。

【0103】

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団はまた、哺乳動物におけるがんに対する免疫応答を誘導する方法において使用できることが企図される。これに関して、本発明の態様は、哺乳動物におけるがんに対する免疫応答を誘導する方法であって、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードする組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を、該哺乳動物におけるがんに対する免疫応答を誘導するのに有効な量、該哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。

【0104】

本発明の態様は、哺乳動物におけるがんに対する免疫応答の誘導における使用のための、本明細書に記載の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む任意の核酸若しくは組み換え発現ベクター、又は本明細書に記載のＴＣＲ、ポリペプチド、若しくはタンパク質のいずれかをコードする組み換えベクターを含む任意の宿主細胞若しくは細胞の集団を提供する。

【0105】

また、哺乳動物におけるがんの存在を検出する方法も本発明の一態様によって提供される。該方法は、（ｉ）本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、細胞の集団、又は医薬組成物のいずれかを、哺乳動物由来の１以上の細胞を含む試料と接触させ、それによって、複合体を形成させることと、（ｉｉ）該複合体を検出することとを含み、該複合体の検出が、該哺乳動物におけるがんの存在を示す。

【0106】

哺乳動物におけるがんを検出する本発明の方法に関して、細胞の試料は、全細胞、その溶解物、又は全細胞溶解物の画分、例えば、核若しくは細胞質の画分、全タンパク質画分、又は核酸画分を含む試料であってよい。

【0107】

本発明の検出方法の目的のために、接触は、哺乳動物に対してインビトロ又はインビボで行ってよい。好ましくは、インビトロで接触させる。

【0108】

また、複合体の検出は、当技術分野において公知の任意の数の方法を通して行うことができる。例えば、本明細書に記載の本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組み換え発現ベクター、宿主細胞、又は細胞の集団を、検出可能な標識、例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例えば、金粒子）等で標識してよい。

【0109】

宿主細胞又は細胞の集団が投与される本発明の方法の目的のために、細胞は、哺乳動物にとって同種又は自己である細胞であってよい。好ましくは、細胞は、哺乳動物にとって自己である。

【0110】

本発明の方法に関して、がんは、例えば、急性リンパ球性がん、急性骨髄性白血病、胞巣状横紋筋肉腫、骨がん、脳がん、乳がん、肛門、肛門管、又は肛門直腸のがん、眼のがん、肝内胆管のがん、関節のがん、頸部、胆嚢、又は胸膜のがん、鼻、鼻腔、又は中耳のがん、口腔のがん、膣のがん、外陰部のがん、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、子宮頸がん、消化管カルチノイド腫瘍、神経膠腫、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、腎臓がん、喉頭がん、肝臓がん、肺がん、悪性中皮腫、黒色腫、多発性骨髄腫、上咽頭がん、非ホジキンリンパ腫、中咽頭のがん、卵巣がん、陰茎のがん、膵臓がん、腹膜、網、及び腸間膜のがん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、腎がん、皮膚がん、小腸がん、軟組織がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮のがん、尿管がん、並びに膀胱がんのいずれかを含む任意のがんであってよい。好ましい一態様においては、がんは、変異ｐ５３を発現するがんである。がんは、配列番号１により定義される１３５位、１７５位、及び２３７位のうちの１以上に変異を有するｐ５３を発現し得る。がんは、以下のヒトｐ５３変異のうちの１以上を有するｐ５３を発現し得る：Ｃ１３５Ｙ、Ｒ１７５Ｈ、又はＭ２３７Ｉ。本発明の一態様においては、がんは、上皮がんである。本発明の一態様においては、がんは、胆管がん、黒色腫、結腸がん、直腸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、神経膠芽腫、子宮頸がん、頭頸部がん、乳がん、膵臓がん、又は膀胱がんである。がんは、ヒトｐ５３におけるＣ１３５Ｙ、Ｒ１７５Ｈ、又はＭ２３７Ｉの変異を含むことが知られている場合がある。

【0111】

本発明の方法において言及される哺乳動物は、任意の哺乳動物であってよい。本明細書で用いるとき、用語「哺乳動物」とは、げっ歯目の哺乳動物、例えばマウス及びハムスター、並びにウサギ目の哺乳動物、例えばウサギを含むがこれらに限定されない任意の哺乳動物を指す。哺乳動物は、ネコ及びイヌを含む食肉目の哺乳動物であることが好ましい。哺乳動物は、ウシ及びブタを含む偶蹄目、又はウマを含む奇蹄目の哺乳動物であることがより好ましい。哺乳動物は、霊長目、サル目（Ｃｅｂｏｉｄｓ又はＳｉｍｏｉｄｓ）（サル）、又は真猿亜目（ヒト及び類人猿）の哺乳動物であることが最も好ましい。特に好ましい哺乳動物は、ヒトである。

【実施例】

【0112】

以下の実施例は、本発明を更に説明するが、無論、いかなる方法でもその範囲を限定すると解釈されるべきではない。

【0113】

本実施例は、患者４３１６のＴＩＬにおける抗ｐ５３－Ｃ１３５Ｙ反応性の同定について示す。

【0114】

結腸直腸がん患者４３１６から切除した腫瘍を２４の断片に切断し、サイトカインＩＬ－２の存在下で培養して、エクスビボでＴＩＬを成長させた。ＴＩＬを標的細胞と共培養することによって、ｐ５３ Ｃ１３５Ｙを含む患者の腫瘍でみられる体細胞変異について断片（Ｆ１～Ｆ２４と付番）をスクリーニングした。標的細胞は、（ｉ）ｐ５３ Ｃ１３５Ｙを含むＰＰをパルスした；（ｉｉ）ｐ５３ Ｃ１３５ＹをコードするＴＭＧ ＲＮＡ若しくは関係性のないＴＭＧでトランスフェクションした；又は（ｉｉｉ）ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）（コントロール）で処理した自己ＤＣであった。ＰＭＡ（ホルボール１２－ミリステート１３－アセテート）／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。ＩＦＮ－γの生成をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。結果を図１Ａに示す。断片番号Ｆ２２がｐ５３－Ｃ１３５Ｙを認識するＴＩＬを含有すると同定された。

【0115】

断片２２からのＴＩＬを解析し、ｐ５３－Ｃ１３５Ｙに対する反応性について試験した。標的細胞は、表１に示すｐ５３－Ｃ１３５Ｙペプチドのうちの１つをパルスした自己ＤＣであった。ネガティブコントロールとして、関係性のないペプチドＫＩＡＡ１３２８ Ｋ３８６Ｒ又はＤＭＳＯ（ビヒクル）をパルスした標的細胞を含めた。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。共培養後、Ｔ細胞活性化マーカーである細胞表面４－１ＢＢ発現のフローサイトメトリー分析によって反応性を測定した。結果を図１Ｂに示す。図１Ｂに示すように、表１に示す３のｐ５３－Ｃ１３５ＹペプチドのいずれかとＴＩＬを共培養した後に反応性が観察された。

【0116】

【表1】

【0117】

実施例２
本実施例は、実施例１の反応性ＴＩＬからの抗ｐ５３－Ｃ１３５Ｙ ＴＣＲの単離について示す。

【0118】

反応性ＴＩＬを再刺激し、単一細胞Ｔ－細胞受容体（ＴＣＲ）シーケンシングのために４－１ＢＢの上方制御によって選別して９６ウェルプレートに入れた。ＴＣＲ、即ち、４３１６－Ｄ ＴＣＲが見出された。

【0119】

ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域の配列を、単一細胞ＴＣＲシーケンシングによって同定した。アルファ鎖及びベータ鎖の可変領域のアミノ酸配列を表２に示す。ＣＤＲを下線で示す。Ｎ末端シグナルペプチドを太字フォントで示す。

【0120】

【表2】

【0121】

実施例３
本実施例は、患者４１４１のＴＩＬにおける抗ｐ５３－Ｒ１７５Ｈ反応性の同定について示す。

【0122】

結腸直腸がん患者４１４１からのＴＩＬを、新抗原反応性Ｔ細胞を濃縮するために体外感作に供した後、ＤＭＳＯ、変異体ｐ５３ Ｒ１７５ＨペプチドＨＭＴＥＶＶＲＨＣ（配列番号９２）、又は対応するＷＴ ｐ５３ Ｒ１７５ペプチドＨＭＴＥＶＶＲＲＣ（配列番号９１）に対する試験を行った。Ｔ細胞活性化マーカーである４－１ＢＢ及びＯＸ４０を、フローサイトメトリーによって測定した。結果を図２に示す。

【0123】

実施例４
本実施例は、実施例３の反応性ＴＩＬからの抗ｐ５３－Ｒ１７５Ｈ ＴＣＲの単離について示す。

【0124】

反応性ＴＩＬを再刺激し、単一細胞ＴＣＲシーケンシングのために４－１ＢＢの上方制御によって選別して９６ウェルプレートに入れた。ＴＣＲ、即ち、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲが見出された。

【0125】

ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域の配列を、単一細胞ＴＣＲシーケンシングによって同定した。アルファ鎖及びベータ鎖の可変領域のアミノ酸配列を表３に示す。ＣＤＲを下線で示す。Ｎ末端シグナルペプチドを太字フォントで示す。

【0126】

【表3】

【0127】

実施例５
本実施例は、患者４３０４のＴＩＬにおける抗ｐ５３－Ｍ２３７Ｉ反応性の同定について示す。

【0128】

結腸直腸がん患者４３０４から切除した腫瘍を２４の断片に切断し、サイトカインＩＬ－２の存在下で培養して、エクスビボでＴＩＬを成長させた。ＴＩＬを標的細胞と共培養することによって、ｐ５３ Ｍ２３７Ｉを含む患者の腫瘍でみられる体細胞変異について断片（Ｆ１～Ｆ２４と付番）をスクリーニングした。標的細胞は、（ｉ）ｐ５３ Ｍ２３７Ｉを含むＰＰをパルスした；（ｉｉ）ｐ５３ Ｍ２３７ＩをコードするＴＭＧ ＲＮＡ若しくは関係性のないＴＭＧでトランスフェクションした；又は（ｉｉｉ）ＤＭＳＯ（コントロール）で処理した自己ＤＣであった。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。ＩＦＮ－γの生成をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した。結果を図３Ａに示す。断片番号Ｆ２４がｐ５３－Ｍ２３７Ｉを認識するＴＩＬを含有すると同定された。

【0129】

断片２４からのＴＩＬを解析し、ｐ５３－Ｍ２３７Ｉに対する反応性について試験した。標的細胞は、図３Ａのペプチドプールを構成する個々の変異体ペプチドを独立してパルスした自己ＤＣであった。ＰＭＡ／イオノマイシンで処理したＴＩＬをポジティブコントロールとした。培地のみ及びＤＭＳＯをパルスしたＤＣをコントロールとした。共培養後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによってＩＦＮ－γの発現を測定することにより反応性を試験した。ＩＦＮ－γ陽性スポットの数を表４に示す。表４に示すように、ＴＩＬを変異型ｐ５３ペプチド（ｐ５３－Ｍ２３７Ｉ）ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＩＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９４）と共培養した後に反応性が観察された。表４中、「ブランク」は、いかなるＴ細胞も標的細胞も含まないブランクウェルを意味する。

【0130】

【表4】

【0131】

フローサイトメトリーによって患者４３０４の腫瘍消化物からＣＤ４^＋ＣＤ１０３^＋ＣＤ３９^＋、ＣＤ４^＋ＣＤ１０３^－ＣＤ３９^＋、又はＣＤ４^＋ＣＤ１０３^－ＣＤ３９^－細胞を選別した。この選別に使用したゲーティングスキームを図３Ｂに示す。

【0132】

選別された細胞集団を標的細胞と独立して共培養することによって、選別された集団中の細胞数を増加させた。標的細胞は、（ｉ）ｐ５３ Ｍ２３７Ｉを含むＰＰをパルスした；（ｉｉ）ｐ５３ Ｍ２３７ＩをコードするＴＭＧ ＲＮＡ若しくはＴＭＧコントロールでトランスフェクションした；又は（ｉｉｉ）ＤＭＳＯ（コントロール）で処理した自己ＤＣであった。ＴＭＧコントロールは、患者４３０４と同じ変異を共有していない他の患者によって発現された関係性のない変異をコードしていた。単独で培養したＴＩＬをコントロールとした。共培養後、ＥＬＩＳＰＯＴによってＩＦＮ－γの分泌を測定することにより反応性を試験した。結果を図３Ｃに示す。選別されたＣＤ４^＋ＣＤ１０３^＋ＣＤ３９^＋又はＣＤ４^＋ＣＤ１０３^－ＣＤ３９^＋細胞を、ｐ５３ Ｍ２３７Ｉを含有するＰＰをパルスした標的細胞と共培養した後に、反応性が観察された。

【0133】

実施例６
本実施例は、実施例５の反応性ＴＩＬからの抗ｐ５３－Ｍ２３７Ｉ ＴＣＲの単離について示す。

【0134】

反応性ＴＩＬを再刺激し、単一細胞ＴＣＲシーケンシングのために４－１ＢＢの上方制御によって選別して９６ウェルプレートに入れた。３のＴＣＲ、即ち、４３０４ ＴＣＲ－２、４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋがみられた。

【0135】

ＴＣＲのアルファ鎖及びベータ鎖の可変領域の配列を、単一細胞ＴＣＲシーケンシングによって同定した。アルファ鎖及びベータ鎖の可変領域のアミノ酸配列を表５に示す。ＣＤＲを下線で示す。Ｎ末端シグナルペプチドを太字フォントで示す。

【0136】

【表5-1】

【0137】

【表5-2】

【0138】

実施例７
本実施例は、実施例２、４、及び６のそれぞれのＴＣＲをコードしているレトロウイルスベクターの構築について示す。

【0139】

表２、３、及び５のＴＣＲのα鎖及びβ鎖の可変領域をコードしているヌクレオチド配列を取得し、コドンを最適化した。ＴＣＲβＶＤＪ領域をマウスＴＣＲβ定常鎖に融合させた。ＴＣＲαＶＪ領域をマウスＴＣＲα定常鎖に融合させた。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、ヒトのＴＣＲα鎖及びＴＣＲβ鎖の定常領域を対応するマウス定常領域で置換すると、ＴＣＲの発現及び機能性が改善すると考えられる（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６６（１７）：８８７８－８６ （２００６））。

【0140】

さらに、マウスのＴＣＲα及びＴＣＲβの定常鎖をシステインで修飾した。マウスＴＣＲα定常鎖に膜貫通型疎水性変異を導入した。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、これら修飾は、導入されたＴＣＲ鎖を優先的に対合させ、ＴＣＲの表面発現及び機能性を高めると考えられる（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，６７（８）：３８９８－９０３（２００７）；Ｈａｇａ－Ｆｒｉｅｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕ．，１８８：５５３８-５５４６（２０１２））。

【0141】

ＭＳＧＶ１ベクターの５’ＮｃｏＩ部位へのＴＣＲ発現カセットのクローニングを促進し、コザック配列を導入するために、ＴＣＲＶα鎖のＮ末端シグナルペプチドにおける２番目のアミノ酸をヒスチジン（Ｈ）、ロイシン（Ｌ）、又はリジン（Ｋ）に変更し、ＴＣＲＶβ鎖のＮ末端シグナルペプチドにおける２番目のアミノ酸をアラニン（Ａ）に変更した。

【0142】

定常領域に対するこれら修飾を含む、５のＴＣＲのそれぞれの全長のα鎖及びβ鎖を表５に示す。表６中、ＣＤＲを下線で示し、定常領域をイタリック体で示し、定常領域の修飾アミノ酸残基を下線及び太字で示す。

【0143】

【表6-1】

【0144】

【表6-2】

【0145】

【表6-3】

【0146】

表６のＴＣＲのα鎖及びβ鎖をコードしているヌクレオチド配列を、以下の発現カセット構成を有するＭＳＧＶ１ベースのレトロウイルスベクターにクローニングした：５’ＮｃｏＩ－ＶＤＪβ－ｍＣβ－フリン／ＳｅｒＧｌｙ／Ｐ２Ａ－ＶＪα－ｍＣα－ＥｃｏＲＩ３’。

【0147】

ＴＣＲβ鎖及びＴＣＲα鎖は、フリンＳｅｒ／Ｇｌｙ Ｐ２ＡリンカーＲＡＫＲＳＧＳＧＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（配列番号８０）によって分離されていた。特定の理論又は機序に縛られるものではないが、リンカーは、２本の鎖の発現効率を同等にすると考えられる（Ｓｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２２（５）：５８９－９４（２００４））。

【0148】

レトロウイルスベクターのＴＣＲ発現カセットは、５’から３’に向かって、リンカーによって分離されたＴＣＲβ鎖及びＴＣＲα鎖をコードしていた。それぞれの各ＴＣＲ発現カセットがコードするアミノ酸配列を表７に示す。表７中、ＣＤＲを下線で示し、定常領域をイタリック体で示し、リンカーを太字で示す。

【0149】

【表7-1】

【0150】

【表7-2】

【0151】

実施例８
本実施例は、実施例７のレトロウイルスベクターによってコードされている４３１６－Ｄ ＴＣＲの結合活性について示す。

【0152】

健常ドナーの末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を実施例７の４３１６－Ｄ ＴＣＲレトロウイルスベクターで形質導入した（エフェクター細胞）。標的細胞は、連続希釈した２５ｍｅｒペプチドｐ５３－Ｃ１３５Ｙ ＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＹＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号９０）又はＷＴ ｐ５３－Ｃ１３５ ＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＣＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶＵ（配列番号８９）をパルスした自己未成熟ＤＣであった。

【0153】

エフェクター細胞を標的細胞と共培養することによって、ＣＤ４ ４３１６－Ｄ ＴＣＲの結合活性を測定した。４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域発現Ｔ細胞のパーセンテージを測定することによって、反応性を測定した。結果を図１Ｃに示す。形質導入細胞はｐ５３－Ｃ１３５Ｙを認識した。

【0154】

実施例９
本実施例は、実施例７のレトロウイルスベクターによってコードされる４３１６－Ｄ ＴＣＲが、ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０７：０１／ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１ヘテロ二量体によって提示されるｐ５３－Ｃ１３５Ｙを認識することを実証する。

【0155】

エクソーム及びｍＲＮＡシーケンシングを用いて、患者４３１６が発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を決定した。発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を表８に示す。

【0156】

【表8】

【0157】

エフェクター細胞は、実施例７の４３１６－Ｄ ＴＣＲレトロウイルスベクターで形質導入した同種ＰＢＬであった。標的細胞は、表８に示すＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体のうちの１で独立してトランスフェクションし、ＤＭＳＯ、野生型ｐ５３－Ｃ１３５ ２５－ｍｅｒペプチドＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＣＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号８９）（１μｇ／ｍＬ）、又はｐ５３－Ｃ１３５Ｙ ２５－ｍｅｒペプチドＴＣＴＹＳＰＡＬＮＫＭＦＹＱＬＡＫＴＣＰＶＱＬＷＶ（配列番号９０）（１μｇ／ｍＬ）をパルスした３０，０００のＣＯＳ７細胞であった。

【0158】

２０，０００のエフェクター細胞を標的細胞と１８時間共培養した後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによってＩＦＮ－γの発現を測定することにより反応性を試験した。４３１６－Ｄ ＴＣＲ形質導入細胞を、ＨＬＡ－ＤＲＡ^＊０１：０１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０７：０１ヘテロ二量体をコードするヌクレオチド配列で形質導入したｐ５３－Ｃ１３５Ｙ ２５ｍｅｒ負荷標的細胞と共培養したときにのみ、反応性が観察された。これらデータは、４３１６－Ｄ ＴＣＲがＤＲＢ１^＊０７：０１によって制限されていることを示す。

【0159】

実施例１０
本実施例は、実施例７のレトロウイルスベクターによってコードされる４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲの結合活性及び特異性について示す。

【0160】

エフェクター細胞は、実施例７の４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲレトロウイルスベクターで形質導入した健常ドナーＰＢＬであった。標的細胞は、表９に示す濃度の連続希釈されたＭＥ ｐ５３－Ｒ１７５ＨペプチドＨＭＴＥＶＶＲＨＣ（配列番号９２）又はＷＴ ｐ５３－Ｒ１７５ペプチドＨＭＴＥＶＶＲＲＣ（配列番号９１）をパルスしたＨＬＡ－Ａ^＊０２^＋Ｔ２白血病細胞であった。

【0161】

【表9】

【0162】

２０，０００のエフェクター細胞を１００，０００の標的細胞と１８時間共培養することによって、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲの結合活性及び特異性を判定した。ＩＦＮ－γの生成をＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって測定した（Ｎ＝３）。結果は４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲで形質導入した細胞が、１００ｐｇ／ｍＬ以上の濃度でパルスされたＭＥ ｐ５３－Ｒ１７５Ｈペプチドを認識したことを示す。４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲで形質導入した細胞は、ＷＴ ｐ５３－Ｒ１７５ペプチドを認識しなかった。これらデータは、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲが変異体ｐ５３ Ｒ１７５Ｈに高度に特異的であることを示す。

【0163】

実施例１１
本実施例は、実施例７のレトロウイルスベクターによってコードされる４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１によって提示されるｐ５３－Ｒ１７５Ｈを認識することを実証する。

【0164】

エクソーム及びｍＲＮＡシーケンシングを用いて、患者４１４１が発現したＭＨＣクラスＩ分子を決定した。発現したＭＨＣクラスＩ分子を表１０に示す。

【0165】

【表10】

【0166】

エフェクター細胞は、実施例７の４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲレトロウイルスベクターで形質導入した健常ドナーＰＢＬであった。標的細胞は、表１０に示すＨＬＡクラスＩ分子のうちの１つで独立してトランスフェクションし、ＤＭＳＯ、ＭＥ ｐ５３－Ｒ１７５ＨペプチドＨＭＴＥＶＶＲＨＣ（配列番号９２）（１μｇ／ｍＬ）、又はＷＴ ｐ５３－Ｒ１７５ペプチドＨＭＴＥＶＶＲＲＣ（配列番号９１）（１μｇ／ｍＬ）をパルスした３０，０００のＣＯＳ７細胞であった。表１０中のＨＬＡ－ＡＬＬとは、表１０に示す６のＨＬＡクラスＩ分子を全て発現している標的細胞を指し、これをポジティブコントロールとした。

【0167】

２０，０００のエフェクター細胞を標的細胞と１８時間共培養した後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによってＩＦＮ－γの発現を測定することにより反応性を試験した。４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲ形質導入細胞を、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１をコードしているヌクレオチド配列で形質導入したｐ５３－Ｒ１７５Ｈ ９ｍｅｒ負荷標的細胞と共培養したときにのみ、反応性が観察された。これらデータは、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲがＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１によって制限されていることを示す。

【0168】

実施例１２
本実施例は、実施例７のそれぞれのレトロウイルスベクターによってコードされる４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋ、又は４３０４ ＴＣＲ－２の結合活性について示す。

【0169】

健常ドナーＰＢＬを、実施例７の４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋ、又は４３０４ ＴＣＲ－２レトロウイルスベクターで独立して形質導入した（エフェクター細胞）。標的細胞は、連続希釈した２５ｍｅｒペプチドｐ５３－Ｍ２３７Ｉ ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＩＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９４）又はＷＴ ｐ５３－Ｍ２３７ ＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＭＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９３）をパルスした自己未成熟ＤＣであった。

【0170】

エフェクター細胞を標的細胞と共培養することによって、ＴＣＲの結合活性を測定した。４－１ＢＢを発現しているマウスＴＣＲ定常領域発現ＣＤ３^＋ＣＤ４^＋Ｔ細胞のパーセンテージを測定することによって、反応性を測定した。結果を図３Ｄ～Ｆに示す。形質導入された細胞はｐ５３－Ｍ２３７Ｉを認識した。

【0171】

実施例１３
本実施例は、実施例７のそれぞれのレトロウイルスベクターによってコードされている４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋ、又は４３０４ ＴＣＲ－２が、ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０１：０１／ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１ヘテロ二量体によって提示されるｐ５３－Ｍ２３７Ｉを認識することを実証する。

【0172】

エクソーム及びｍＲＮＡシーケンシングを用いて、患者４３０４が発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を決定した。発現したＭＨＣクラスＩＩ分子を表１１に示す。

【0173】

【表11】

【0174】

エフェクター細胞は、実施例７のそれぞれのレトロウイルスベクターによってコードされている４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋ、又は４３０４ ＴＣＲ－２が形質導入された健常ドナーＰＢＬであった。標的細胞は、表１１に示すＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体のうちの１つで独立してトランスフェクションし、ＤＭＳＯ、ＭＥ ｐ５３－Ｍ２３７ＩペプチドＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＩＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９４）（１μｇ／ｍＬ）、又はＷＴ ｐ５３－Ｍ２３７ペプチドＶＧＳＤＣＴＴＩＨＹＮＹＭＣＮＳＳＣＭＧＧＭＮＲＲ（配列番号９３）（１μｇ／ｍＬ）をパルスした３０，０００のＣＯＳ７細胞であった。単独で培養したエフェクター細胞及びＰＭＡ／イオノマイシンで処理したエフェクター細胞をコントロールとした。ＤＭＳＯで処理し、表１１に示したＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体全てでトランスフェクションした標的細胞をコントロールとした。標的細胞はまた、コントロールとして、表１１に示したＨＬＡクラスＩＩヘテロ二量体全てでトランスフェクションし、ＷＴ ｐ５３－Ｍ２３７ペプチドをパルスした。

【0175】

２０，０００のエフェクター細胞を標的細胞と１８時間共培養した後、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイによってＩＦＮ－γの発現を測定することにより反応性を試験した。４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋ、又は４３０４ ＴＣＲ－２で形質導入した細胞を、ＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０１：０１ヘテロ二量体をコードするヌクレオチド配列で形質導入したｐ５３－Ｍ２３７Ｉ ２５ｍｅｒ負荷標的細胞と共培養したときにのみ、反応性が観察された。これらデータは、４３０４ ＴＣＲ－４、４３０４ ＴＣＲ－Ｋ、及び４３０４ ＴＣＲ－２がＨＬＡ－ＤＲＡ１^＊０１：０１／ＨＬＡ－ＤＲＢ１^＊０１：０１ヘテロ二量体によって制限されていることを示す。

【0176】

実施例１４
本実施例は、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲが、ＨＬＡ及びｐ５３変異特異的に腫瘍細胞を認識することを示す。

【0177】

実施例７の４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲレトロウイルスベクターで形質導入した健常ドナーＴ細胞を、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈ若しくはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１又はその両方について陽性である腫瘍細胞株のパネルと共培養した。フローサイトメトリーによって４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲ^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞においてＴ細胞活性化マーカーである４－１ＢＢ及びＯＸ４０を測定した。結果を図４Ａ～４Ｂに示す。結果は、ＴＣＲ形質導入細胞は、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈ及びＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１の両方について陽性である腫瘍細胞株を認識したことを示した。ＴＣＲ形質導入細胞は、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈ又はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１のいずれかについて陰性である腫瘍細胞株を認識しなかった。

【0178】

実施例１５
本実施例は、ｐ５３ Ｃ１３５Ｙ反応性４３１６－Ｄ ＴＣＲによる自己腫瘍細胞認識について示す。

【0179】

健常ドナーの末梢血リンパ球に実施例７の４３１６－Ｄ ＴＣＲレトロウイルスベクターをレトロウイルスによって形質導入した。形質導入細胞を標的細胞と１６時間共培養することによって、形質導入細胞が自己腫瘍細胞を認識する能力を試験した。標的細胞は、ＩＦＮ－γの非存在下又はＩＦＮ－γの存在下において、ＤＭＳＯ、実施例８のＷＴ ｐ５３、又は実施例８の変異体ｐ５３ペプチドをパルスした患者４３１６からの自己ＰＤＸ腫瘍細胞であった。Ｔ細胞活性化マーカーである４－１ＢＢ及びＯＸ４０を用いてフローサイトメトリーによってＴ細胞の活性化を測定した。結果を図６に示す。結果は、形質導入Ｔ細胞が、ＩＦＮ－γ及び変異体ｐ５３ペプチドの両方で処理された標的細胞と共培養したときに４－１ＢＢ及びＯＸ４０の発現を上方制御したことを示す。

【0180】

実施例１６
本実施例は、４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲが前臨床異種移植マウスモデルにおいて抗腫瘍活性を発揮することを示す。

【0181】

２頭の健常ドナー（健常ドナー１及び健常ドナー２）からのＰＢＬを、実施例７の４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲレトロウイルスベクターで独立して形質導入した。前臨床マウスモデルを用いて、形質導入細胞の抗腫瘍活性を４１４１－ＴＣＲ１ａ２（米国特許出願第１７／６２０，９４２号に開示）で形質導入したＰＢＬと比較した。雌性ＮＳＧマウスに、ｐ５３ Ｒ１７５Ｈ変異及びＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を天然で発現するＴＹＫ－ｎｕ卵巣がん細胞を２００万移植した。２週間後、移植した腫瘍の大きさが約３０ｍｍ^２に達した時点で、マウスを無作為化し、ビヒクル（ＰＢＳ）、ｐ５３ Ｙ２２０Ｃを標的とする関係性のないＴＣＲで形質導入したＴ細胞１，０００万、又は４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲで形質導入したＴ細胞１，０００万で処理した（Ｎ＝５）。ＡＣＴ処理後、これらマウスにヒト組換えインターロイキン２（ＩＬ－２）（１８０，０００ＩＵ）を１日３回静脈内注射した。このプロセスを図７Ａに示す。ＡＣＴ後３０日間にわたり、マウスの平均腫瘍サイズを評価し、４１４１－ＴＣＲ１ａ２で形質導入した細胞で処理したマウスの平均腫瘍サイズと比較した。この実験は、２頭の健常ドナー（健常ドナー１及び健常ドナー２）からの形質導入ＰＢＬを用いて２回行った。これら実験の結果を図７Ｂ～７Ｃに示す。４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲ発現Ｔ細胞で処理したマウスは、健常ドナー１及び健常ドナー２の両実験において、ＰＢＳ又は関係性のないＴＣＲで処理したマウスに比べて腫瘍成長の著しい遅延を示した。４１４１ ＩＶＳ ＴＣＲによる処理の結果、４１４１－ＴＣＲ１ａ２による処理と比較して優れた抗腫瘍活性が得られた。

【0182】

刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書に引用した全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組込まれることが個々に且つ具体的に示されているのと同程度及びその全体が本明細書に記載されているのと同程度まで、参照によって本明細書に組込まれる。

【0183】

本発明の説明に関して（特に、以下の特許請求の範囲に関して）、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書に特記しないか文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈すべきである。１以上の事項の列挙の後での用語「少なくとも１」の使用（例えば、「Ａ及びＢのうち少なくとも１」）は、本明細書に特記しないか又は文脈と明らかに矛盾しない限り、列挙した事項から選択された１の事項（Ａ若しくはＢ）又は列挙した事項のうち２以上の任意の組合せ（Ａ及びＢ）を意味すると解釈すべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特記しない限り、オープンエンドの用語（即ち、「～を含むがそれらに限定されない」を意味する）と解釈すべきである。本明細書の値の範囲の記述は、本明細書に特記しない限り、その範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略方法として働くことのみを意図しており、各個別の値は、それが本明細書に個々に記述されているかのように本明細書に組込まれる。本明細書に記載の全ての方法は、本明細書に特記しないか又は文脈と特に明らかに矛盾しない限り、任意の好適な順序で実施できる。本明細書に提供される任意の及び全ての例又は例示的語句（例、「等（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、本発明をよりよく説明することのみを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書の全ての語句は、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須のものとして示していると解釈すべきではない。

【0184】

発明を実施するための、発明者が知る最良の形態を含む、本発明の好ましい態様が本明細書に記載される。これらの好ましい態様のバリエーションは、上述の説明を読めば当業者に明らかとなり得る。本発明者らは、当業者がかかるバリエーションを適宜用いることを予期しており、本発明者らは、本明細書に具体的に記載されたのとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって許容されるとおり、本明細書に添付した特許請求の範囲に記載の主題の全ての改変及び均等物を含む。更に、その全ての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組合せが、本明細書に特記しないか又は文脈と特に明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図2】

【図3A】

【図3B】

【図3C】

【図3D】

【図3E】

【図3F】

【図4A】

【図4B】

【図5A】

【図5B】

【図6】

【図7A】

【図7B】

【図7C】

【配列表】

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【国際調査報告】