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▶ クラリス・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッドの特許一覧
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-04-25
(54)【発明の名称】眼疾患の治療のための増殖因子の組成物
(51)【国際特許分類】
A61K 38/18 20060101AFI20240418BHJP
A61K 9/08 20060101ALI20240418BHJP
A61P 27/02 20060101ALI20240418BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240418BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240418BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240418BHJP
A61K 47/22 20060101ALI20240418BHJP
A61K 47/12 20060101ALI20240418BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240418BHJP
C07K 14/50 20060101ALI20240418BHJP
C07K 14/475 20060101ALI20240418BHJP
【ＦＩ】
A61K38/18
A61K9/08
A61P27/02
A61K48/00
A61K45/00
A61K47/26
A61K47/22
A61K47/12
A61P43/00 111
C07K14/50 ZNA
C07K14/475
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023570358
(86)(22)【出願日】2022-05-13
(85)【翻訳文提出日】2023-12-05
(86)【国際出願番号】 US2022072302
(87)【国際公開番号】W WO2022241465
(87)【国際公開日】2022-11-17
(31)【優先権主張番号】63/188,816
(32)【優先日】2021-05-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523428730
【氏名又は名称】クラリス・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｃｌａｒｉｓ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100106518
【弁理士】
【氏名又は名称】松谷 道子
(74)【代理人】
【識別番号】100138911
【弁理士】
【氏名又は名称】櫻井 陽子
(72)【発明者】
【氏名】ブリラ，ピョートル
(72)【発明者】
【氏名】オー，スーザン シー
(72)【発明者】
【氏名】アットウェル，エイ クラーク
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA12
4C076BB11
4C076BB24
4C076CC10
4C076DD38Q
4C076DD43Z
4C076DD67Q
4C076EE23F
4C076FF04
4C076FF14
4C076FF36
4C076FF43
4C076FF61
4C084AA02
4C084AA03
4C084AA13
4C084AA19
4C084BA01
4C084BA08
4C084BA22
4C084BA23
4C084BA44
4C084CA18
4C084CA53
4C084DB62
4C084MA05
4C084MA17
4C084MA58
4C084MA66
4C084NA03
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA331
4C084ZA332
4C084ZC022
4H045AA10
4H045AA30
4H045BA10
4H045BA50
4H045CA40
4H045EA20
(57)【要約】
本開示は、増殖因子を含む薬学的組成物、ならびにその増殖因子及びその組成物を使用して眼疾患を治療または予防する方法に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
神経栄養性角膜炎の治療または予防を必要とする対象において神経栄養性角膜炎を治療または予防する方法であって、治療有効量の肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項2】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが精製されている、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが、角膜実質透過性賦形剤と組み合わせて投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが、液体薬学的組成物中に製剤化されている、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項5】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが眼に投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項6】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが眼に局所投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項7】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが、注射によって眼に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項8】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが、結膜下に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが前房内に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項10】
前記液体薬学的組成物が、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１．０％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項11】
前記液体薬学的組成物が、約０．０８％（ｗ／ｖ）～約０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項12】
前記液体薬学的組成物が、約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項13】
前記液体薬学的組成物が、約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項14】
前記ＨＧＦまたはＦＧＦが、さらなる治療剤と組み合わせて投与される、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項15】
前記さらなる治療剤が、さらなる増殖因子である、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記ＨＧＦが、配列番号１～２７のいずれか１つを有するポリペプチド配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項17】
前記ＨＧＦが、配列番号１に対して９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項18】
前記ＨＧＦが、配列番号１を有するポリペプチド配列を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項19】
薬学的組成物であって、約０．０１％～約１．０％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
前記組成物のｐＨを約５．８～約６．２に維持することができる緩衝液と、
約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、及びこれらの混合物から選択される安定剤と、
任意選択で、前記組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
任意選択で、界面活性剤とを含む、前記薬学的組成物。
【請求項20】
約０．０５％～約０．５％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項21】
約０．０８％～約０．２５％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項22】
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項23】
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項24】
前記組成物が、約６．０のｐＨを有する、請求項１９～２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項25】
約１５０～約２５０ｍＭの安定剤を含む、請求項１９～２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項26】
約２００ｍＭの安定剤を含む、請求項２５に記載の組成物。
【請求項27】
前記安定剤がトレハロースまたはプロリンである、請求項１９～２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項28】
前記安定剤がトレハロースである、請求項１９～２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項29】
前記安定剤がプロリンである、請求項１９～２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項30】
前記安定剤がソルビトールである、請求項１９～２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項31】
前記緩衝液がクエン酸緩衝液である、請求項１９～３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項32】
前記緩衝液がクエン酸ナトリウムである、請求項１９～３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項33】
約１０～約５０ｍＭの緩衝液を含む、請求項１９～３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項34】
前記組成物の前記オスモル濃度が、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項１９～３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項35】
等張化剤を含まない、請求項１９～３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項36】
アルカリ金属塩である等張化剤を含む、請求項１９～３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項37】
塩化ナトリウムである等張化剤を含む、請求項１９～３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項38】
界面活性剤を含む、請求項１９～３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項39】
前記界面活性剤が、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポラキソマー１８８、及びポラキソマー４０７から選択される、請求項３８に記載の組成物。
【請求項40】
前記界面活性剤が、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）である、請求項３８に記載の組成物。
【請求項41】
前記界面活性剤が、約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１９～４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項42】
前記界面活性剤が、約０．０２％～約０．８％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１９～４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項43】
前記界面活性剤が、約０．０５％（ｗ／ｖ）の量で存在する、請求項１９～４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項44】
水性薬学的組成物であって、約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトールと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、前記水性薬学的組成物。
【請求項45】
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのトレハロースと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項４４に記載の水性薬学的組成物。
【請求項46】
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのプロリンと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項４４に記載の水性薬学的組成物。
【請求項47】
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのソルビトールと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とを含み、
前記組成物のｐＨが、約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項４４に記載の水性薬学的組成物。
【請求項48】
水性薬学的組成物であって、約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトールと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、前記水性薬学的組成物。
【請求項49】
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのトレハロースと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項４８に記載の水性薬学的組成物。
【請求項50】
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのプロリンと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項４８に記載の水性薬学的組成物。
【請求項51】
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウムと、
約２００ｍＭのソルビトールと、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）とを含み、
前記組成物のｐＨが約６．０であり、前記組成物のオスモル濃度が約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである、請求項４９に記載の水性薬学的組成物。
【請求項52】
前記ＨＧＦが、配列番号１～２７のいずれか１つのポリペプチド配列を含む、請求項１９～５１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項53】
前記ＨＧＦが、配列番号１に対して９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む、請求項１９～５１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項54】
前記ＨＧＦが、配列番号１を有するポリペプチド配列を含む、請求項１９～５１のいずれか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項55】
眼疾患の治療または予防を必要とする対象において眼疾患を治療または予防する方法であって、治療有効量の請求項１９～５５のいずれか１項に記載の薬学的組成物を前記対象に投与することを含む、前記方法。
【請求項56】
前記眼疾患が、神経栄養性角膜炎、持続性角膜欠損症、角膜潰瘍、ドライアイ疾患、微生物性角膜炎、細菌性角膜炎、ウイルス性角膜炎、真菌性角膜炎、化学熱傷、熱傷、機械的外傷、角膜擦過傷、傷つけられた内皮、水疱性角膜症、フックス角膜ジストロフィー、角膜瘢痕、シェーグレン症候群、または術後合併症から選択される角膜疾患である、請求項５５に記載の方法。
【請求項57】
前記眼疾患が角膜混濁または瘢痕化である、請求項５５に記載の方法。
【請求項58】
前記眼疾患が神経栄養性角膜炎である、請求項５５に記載の方法。
【請求項59】
前記組成物が、角膜実質透過性賦形剤と組み合わせて投与される、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項60】
前記組成物が眼に投与される、請求項５５～５８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項61】
前記組成物が眼に局所投与される、請求項６０に記載の方法。
【請求項62】
前記組成物が、注射によって眼に投与される、請求項６０に記載の方法。
【請求項63】
前記組成物が結膜下に投与される、請求項６２に記載の方法。
【請求項64】
前記組成物が前房内に投与される、請求項６２に記載の方法。
【請求項65】
前記ＨＧＦが活性化されたＨＧＦである、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物または方法。
【請求項66】
前記活性化されたＨＧＦが、活性化されたｄＨＧＦである、請求項６５に記載の組成物または方法。
【請求項67】
前記ＨＧＦが、（ａ）配列番号２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号８のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１０のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｇ）配列番号１１のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１１のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｈ）配列番号１２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｉ）配列番号１３のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｊ）配列番号１４のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｋ）配列番号１５のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｏ）配列番号１９のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｐ）配列番号２０のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｑ）配列番号２１のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｒ）配列番号２２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｓ）配列番号２３のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｔ）配列番号２４のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または
（ｕ）配列番号２５のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｗ）配列番号２７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物または方法。
【請求項68】
前記ＨＧＦが、（ａ）配列番号２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号８のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１０のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｇ）配列番号１１のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１１のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｈ）配列番号１２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｉ）配列番号１３のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｊ）配列番号１４のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｋ）配列番号１５のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｏ）配列番号１９のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｐ）配列番号２０のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｑ）配列番号２１のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｒ）配列番号２２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｓ）配列番号２３のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｔ）配列番号２４のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｕ）配列番号２５のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｗ）配列番号２７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、前記第１のポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含む、先行請求項のいずれか１項に記載の組成物または方法。
【請求項69】
前記第１のポリペプチドが、配列番号３６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、前記第２のポリペプチドが、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項６６に記載の組成物または方法。
【請求項70】
前記第１のポリペプチドのＮ末端アミノ酸がピロリドンカルボン酸である、請求項６６または請求項６７に記載の組成物または方法。
【請求項71】
前記第１のポリペプチド及び前記第２のポリペプチドが、１つ以上のジスルフィド結合によって連結されている、請求項６５～６８のいずれか１項に記載の組成物または方法。
【請求項72】
前記ＨＧＦが、ｃ－ＭＥＴに結合すること、及び／または上皮細胞におけるＭＡＰＫ経路を活性化することが可能である、請求項６５～６９のいずれか１項に記載の組成物または方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
優先権の主張
本出願は、２０２１年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／１８８，８１６号の利益を主張する。前述の全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年５月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／１８８，８１６号の利益を主張する。前述の全体の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本出願は、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名前のＡＳＣＩＩテキストファイルとして電子的に提出された配列表を含む。ＡＳＣＩＩテキストファイルは、２０２２年５月１０日に作成され、サイズは１７１キロバイトである。ＡＳＣＩＩテキストファイル内の材料は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名前のＡＳＣＩＩテキストファイルとして電子的に提出された配列表を含む。ＡＳＣＩＩテキストファイルは、２０２２年５月１０日に作成され、サイズは１７１キロバイトである。ＡＳＣＩＩテキストファイル内の材料は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0003】
本開示は、増殖因子を含む薬学的組成物、ならびにその増殖因子及びその組成物を使用して眼疾患を治療または予防する方法に関する。
【背景技術】
【0004】
肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、瘢痕化の角膜混濁の治療のために研究されている。米国特許第１０，４４９，２３４号を参照されたい。新しい治療法の恩恵を受ける可能性のある他の眼の損傷及び疾患が特定されている。例えば、神経栄養性角膜炎（神経栄養性角膜症（ＮＫ）または神経麻痺性角膜炎としても知られる）は、三叉神経またはその角膜への経路への損傷、または傷つけられた眼表面のいずれかから生じる角膜疾患であり、結果的に角膜感覚の低下または喪失をもたらす。ＮＫは、１８２４年にＭａｇｅｎｄｉｅによって最初に角膜障害として認識され（Ｏｋａｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｈｉｓｔｏｌ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ，２５：７７１－７８０）、その後、１９５４年にＳｉｇｅｌｍａｎ ａｎｄ Ｆｒｉｅｄｅｎｗａｌｄ（Ｓｉｇｅｌｍａｎ ａｎｄ Ｆｒｉｅｄｅｎｗａｌｄ，１９５４，Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，５３：４６－５７）によって、その分子的基礎が動物モデルにおいて確立された。角膜は、眼の透明な「窓」であり、強膜とともに、眼球の外殻を形成する。角膜は血管供給を欠いているため、栄養素及び酸素は主に涙液及び輪部血管を介して前方に、後方に房水を介してこの組織に供給される。角膜組織は、上皮、ボーマン膜、実質、デセメ膜、及び内皮の５つの層に層別化され、上皮は下側の角膜実質を保護する主なバリアとして機能する。角膜は、体内で最も敏感な組織であり、様々な層及び緻密な神経末端にわたる広範な神経線維ネットワークによって神経支配されている。角膜の感覚神経支配は、上皮の生存に不可欠な増殖因子を分泌する三叉神経の眼分岐に由来する。三叉神経は、涙液フィルムの安定性を維持し、上皮によって分泌される様々な生理学的に活性な物質（例えば、サイトカイン、プロテアーゼ及び神経ペプチド）とともに、角膜上皮及び実質の活力をさらに確保する。三叉神経または上皮の障害は、最も一般的には、感染症（例えば、単純ヘルペスまたは帯状疱疹感染症）、眼科手術（例えば、白内障手術、角膜移植、屈折手術）、糖尿病、ハンセン病、眼窩腫瘍及び炎症などの他の全身疾患、または化学熱傷及び熱傷を含む身体外傷、ならびにコンタクトレンズの使用によって引き起こされる。
【0005】
したがって、ＮＫなどの眼疾患に対する新しい治療法、ならびに眼に投与され得る新しい薬学的製剤に対する継続的なニーズが存在する。本明細書に記載の方法は、この目的に向けて開発されてきた。
【発明の概要】
【0006】
本発明は、神経栄養性角膜炎の治療または予防を必要とする対象において神経栄養性角膜炎を治療または予防する方法を提供し、本方法は、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）などの増殖因子を対象に投与することを含む。
【0007】
本発明はさらに、眼の疾患の治療のためのＨＧＦまたはＦＧＦを含む薬学的組成物を提供する。
【0008】
本明細書では、神経栄養性角膜炎の治療または予防を必要とする対象における神経栄養性角膜炎を治療または予防する方法が提供され、本方法は、例えば、本明細書に記載されるような、治療有効量の肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）を対象に投与することを含む。
【0009】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは精製されている。
【0010】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは、角膜実質透過性賦形剤と組み合わせて投与される。
【0011】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは液体薬学的組成物中に製剤化されている。
【0012】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは眼に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは眼に局所投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは注射によって眼に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは結膜下に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは、前房内に投与される。
【0013】
いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は、約０．０１％（ｗ／ｖ）～約１．０％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む。いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は、約０．０８％（ｗ／ｖ）～約０．２５％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む。いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は、約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む。いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦまたはＦＧＦを含む。
【0014】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦまたはＦＧＦは、さらなる治療剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、さらなる治療剤はさらなる増殖因子である。
【0015】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１～２７のいずれか１つを有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１に対して９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１を有するポリペプチド配列を含む。
【0016】
また、本明細書で提供される薬学的組成物は、約０．０１％～約１．０％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、組成物のｐＨを約５．８～約６．２に維持することができる緩衝液、約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、及びこれらの混合物から選択される安定剤、任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤、及び任意選択で、界面活性剤を含む。
【0017】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約０．０５％～約０．５％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約０．０８％～約０．２５％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦを含む。
【0018】
いくつかの実施形態において、組成物は約６．０のｐＨを有する。
【0019】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約１５０～約２５０ｍＭの安定剤を含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約２００ｍＭの安定剤を含む。いくつかの実施形態において、安定剤はトレハロースまたはプロリンである。いくつかの実施形態において、安定剤はトレハロースである。いくつかの実施形態において、安定剤はプロリンである。いくつかの実施形態において、安定剤はソルビトールである。
【0020】
いくつかの実施形態において、緩衝液はクエン酸緩衝液である。いくつかの実施形態において、緩衝液はクエン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は約１０～約５０ｍＭの緩衝液を含む。
【0021】
いくつかの実施形態において、組成物のオスモル濃度は、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0022】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は等張化剤を含まない。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、アルカリ金属塩である等張化剤を含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、塩化ナトリウムである等張化剤を含む。
【0023】
いくつかの実施形態において、薬学的組成物は界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポラキソマー１８８、及びポラキソマー４０７から選択される。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、約０．０１％～約０．１％（ｗ／ｖ）の量で存在する。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、約０．０２％～約０．８％（ｗ／ｖ）の量で存在する。いくつかの実施形態において、界面活性剤は約０．０５％（ｗ／ｖ）の量で存在する。
【0024】
また、約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含む水性薬学的組成物も本明細書に提供され、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0025】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのトレハロース、約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0026】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのプロリン、約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0027】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのソルビトール、約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0028】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0029】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのトレハロース、約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0030】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのプロリン、約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0031】
いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、約２００ｍＭのソルビトール、約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0032】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１～２７のいずれか１つのポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１に対して９５％の配列同一性を有するポリペプチド配列を含む。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは配列番号１を有するポリペプチド配列を含む。
【0033】
眼疾患の治療または予防を必要とする対象において眼疾患を治療または予防する方法もまた本明細書に提供され、本方法は、治療有効量の本明細書に記載の薬学的組成物を対象に投与することを含む。
【0034】
いくつかの実施形態において、眼疾患は、神経栄養性角膜炎、持続性角膜欠損症、角膜潰瘍、ドライアイ疾患、微生物性角膜炎、細菌性角膜炎、ウイルス性角膜炎、真菌性角膜炎、化学熱傷、熱傷、機械的外傷、角膜擦過傷、傷つけられた内皮、水疱性角膜症、フックス角膜ジストロフィー、角膜瘢痕、シェーグレン症候群、または術後合併症から選択される角膜疾患である。いくつかの実施形態において、眼疾患は角膜混濁または瘢痕化である。いくつかの実施形態において、眼疾患は神経栄養性角膜炎である。いくつかの実施形態において、組成物は、角膜実質透過性賦形剤と組み合わせて投与される。
【0035】
いくつかの実施形態において、組成物は眼に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は眼に局所投与される。いくつかの実施形態において、組成物は注射によって眼に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は結膜下に投与される。いくつかの実施形態において、組成物は前房内に投与される。
【0036】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、ＨＧＦは、活性化されたＨＧＦである。いくつかの実施形態において、活性化されたＨＧＦは、活性化されたｄＨＧＦである。
【0037】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、ＨＧＦは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号８のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１０のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｇ）配列番号１１のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１１のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｈ）配列番号１２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｉ）配列番号１３のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｊ）配列番号１４のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｋ）配列番号１５のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｏ）配列番号１９のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｐ）配列番号２０のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｑ）配列番号２１のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｒ）配列番号２２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｓ）配列番号２３のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、または、
（ｔ）配列番号２４のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｕ）配列番号２５のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｗ）配列番号２７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。
（ａ）配列番号２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号８のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１０のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｇ）配列番号１１のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１１のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｈ）配列番号１２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｉ）配列番号１３のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｊ）配列番号１４のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｋ）配列番号１５のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｏ）配列番号１９のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｐ）配列番号２０のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｑ）配列番号２１のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｒ）配列番号２２のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｓ）配列番号２３のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド、または、
（ｔ）配列番号２４のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｕ）配列番号２５のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｗ）配列番号２７のアミノ酸３２～４９４に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸４９５～７２８に対して少なくとも８０％、好ましくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。
【0038】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、ＨＧＦは、
（ａ）配列番号２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号８のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１０のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｇ）配列番号１１のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１１のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｈ）配列番号１２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｉ）配列番号１３のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｊ）配列番号１４のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｋ）配列番号１５のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｏ）配列番号１９のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｐ）配列番号２０のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｑ）配列番号２１のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｒ）配列番号２２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｓ）配列番号２３のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｔ）配列番号２４のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｕ）配列番号２５のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｗ）配列番号２７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含む。
（ａ）配列番号２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｂ）配列番号７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｃ）配列番号８のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号８のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｄ）配列番号９のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号９のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｅ）配列番号１０のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１０のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｇ）配列番号１１のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１１のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｈ）配列番号１２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｉ）配列番号１３のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１３のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｊ）配列番号１４のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１４のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｋ）配列番号１５のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１５のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｌ）配列番号１６のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１６のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｍ）配列番号１７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｎ）配列番号１８のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１８のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１８のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｏ）配列番号１９のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号１９のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号１９のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｐ）配列番号２０のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２０のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２０のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｑ）配列番号２１のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２１のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２１のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｒ）配列番号２２のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２２のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２２のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｓ）配列番号２３のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２３のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２３のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｔ）配列番号２４のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２４のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２４のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｕ）配列番号２５のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２５のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２５のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｖ）配列番号２６のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２６のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２６のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含むか、または、
（ｗ）配列番号２７のアミノ酸３２～４９４に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第１のポリペプチドであって、任意選択で、配列番号２７のアミノ酸１６１～１６５に対応するアミノ酸の欠失を含む、第１のポリペプチド、及び配列番号２７のアミノ酸４９５～７２８に対応するアミノ酸配列を含むかもしくはそれからなる第２のポリペプチドを含む。
【0039】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、第１のポリペプチドは、配列番号３６のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなり、第２のポリペプチドは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる。
【0040】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、第１のポリペプチドのＮ末端アミノ酸は、ピロリドンカルボン酸である。
【0041】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、１つ以上のジスルフィド結合によって連結されている。
【0042】
本明細書に記載の方法または組成物のいくつかの実施形態において、ＨＧＦは、ｃ－ＭＥＴに結合すること、及び／または上皮細胞におけるＭＡＰＫ経路を活性化することができる。
【図面の簡単な説明】
【0043】
【図1】術後３日目の角膜神経支配を評価するためのマウス視神経の連続切片を含むスライドの蛍光顕微鏡画像。組織試料をＴＵＪ－１（ベータＩＩＩチューブリンとしても知られる、円形の領域）について染色して、角膜神経支配を評価した。対照（ＰＢＳ）で処置した動物は、０．１％ ｄＨＧＦ（配列番号１）を受けた眼と比較して、３日目に潜在的に低いＴＵＪ－１染色（円形の領域）を示した。ＤＡＰＩを、全ての核をハイライトするための対比染色として使用した。
【図2】マウス角膜機械的損傷モデルにおける第１相研究における、ＰＢＳ（ビヒクル対照）、０．１％または０．２％ ｄＨＧＦ、０．１％ ｍＮＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦによる、手術及び日常処置後の動物のフルオレセイン染色角膜表面の閉鎖分析までの時間。
【図3A】マウス角膜機械的損傷モデルにおける、術後７日目のＰＢＳ（対照）、０．１％ ｄＨＧＦまたは０．２％ ｄＨＧＦで処置した動物の角膜表面で測定された平均瘢痕面積（ピクセル単位）の明視野画像分析。
【図3B】マウス角膜機械的損傷モデルにおける、術後７日目のＰＢＳ（対照）、０．１％ ｍＮＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦで処置した動物の角膜表面で測定された瘢痕面積（ピクセル単位）の平均減少の明視野画像分析。
【図4】マウス角膜機械的損傷モデルにおける、ＰＢＳ（対照）、ｄＨＧＦ（０．１％及び０．２％）、ｍＨＧＦ及びｍＮＧＦで処置された動物についての、８日目から２１日目までの瘢痕減少の平均パーセント、測定の標準誤差（ＳＥＭ）及び統計的比較。
【図5】マウス角膜Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＰＳ誘発性角膜炎モデルにおける、ＰＢＳ（対照）、ｄＨＧＦ（０．１％及び０．２％）、またはｍＮＧＦで処置された動物についての、９日目の瘢痕サイズのパーセント変化。
【発明を実施するための形態】
【0044】
いくつかの実施形態において、本発明は、とりわけ、神経栄養性角膜炎（ＮＫ）の治療または予防を必要とする対象において神経栄養性角膜炎（ＮＫ）を治療または予防する方法であって、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）を対象に投与することを含む方法を提供する。
【0045】
神経栄養性角膜炎または代替的に、神経栄養性角膜症（ＮＫ）は、三叉神経またはその分岐、または傷つけられた眼表面への損傷から生じる角膜の変性状態であり、その結果、角膜感受性の低下または角膜感覚の完全な喪失をもたらす。本明細書で使用される場合、「疾患」、「状態」、または「障害」という用語は、互換的に使用され、罹患した組織または臓器の多数の病理学的状態のいずれかを指す。三叉神経またはその分岐の障害は、最も一般的には、感染症（例えば、単純ヘルペスまたは帯状疱疹感染症を含むウイルス感染症、細菌性潰瘍、後期アカントアメーバ潰瘍）、眼科手術（例えば、白内障手術、角膜移植、屈折手術、及び網膜手術）、糖尿病、ハンセン病、眼窩腫瘍及び炎症などの他の全身疾患、後方窩の三叉神経病変に起因する第５神経麻痺、動脈瘤、聴神経腫、髄膜腫、または化学熱傷及び熱傷による角膜層への他の物理的損傷によって引き起こされる。ＮＫの他の原因には、遺伝性疾患（例えば、家族性角膜感覚低下症、ゴールデンハー－ゴーリン症候群、遺伝性感覚及び自律神経障害ＩＩＩ型、ＩＶ型またはＶ型、角膜ジストロフィー及び多発性内分泌新生組織形成ＩＩｂ）、特定の薬物の使用（例えば、局所ベータ遮断薬、局所非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、局所麻酔薬）、及びコンタクトレンズの使用（総説については、Ｏｋａｄａ ｅｔ ａｌ．、前出）を参照されたい）が含まれる。
【0046】
ＮＫは、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）及び／または線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）の投与によって、本明細書に記載の方法に従って治療または予防することができる。
【0047】
ＨＧＦ（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｎｏ．Ｐ１４２１０）は、とりわけ、チロシンキナーゼシグナル伝達経路を介して様々な器官における上皮細胞増殖、運動、形態形成、及び血管新生を刺激し、胚性器官の発達及び成人器官の再生ならびに創傷治癒において主要な役割を果たす、ｃＭｅｔキナーゼアゴニストである。ＨＧＦは、２つのサブユニット：６９ｋＤａの見かけの分子量のαサブユニット及び単一のジスルフィド結合によって連結された３４ｋＤａの見かけの分子量のβサブユニットを含む、約８４ｋＤａのタンパク質である。
【0048】
ＨＧＦは、間葉系間質細胞（例えば、線維芽細胞及びマクロファージ）によって７２８アミノ酸のプロＨＧＦ分子として産生され、最初の１～３１アミノ酸残基は、分泌シグナル伝達配列に対応する（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ ａｎｄ Ｎａｋａｍｕｒａ，ｉｎ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２００４，４３６－４４２）。プロ－ＨＧＦの一次アミノ酸配列は、４つのクリングル（Ｋ）ドメインのドメイン構造に編成される（Ｓｉｇｕｒｄａｒｄｏｔｔｉｒ，ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，６：６１４７－６１５７）。本明細書で使用される場合、「クリングル」ドメインは、三重ループのジスルフィド架橋ドメインに折り畳まれたポリペプチド線形配列を指す（Ｓｉｍｏｎｎｅａｕ，ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，６：２１１０－２１２１）。クリングルドメインは、アポリポタンパク質Ａ、血液凝固第ＸＩＩ因子、プラスミノーゲン、及びＨＧＦを含む様々なポリペプチドに存在する。「クリングル」という名前は、これらの構造が似ているスカンジナビアのペストリーに由来している。クリングルドメインは、タンパク質、膜、及びリン脂質間の結合相互作用を媒介すると考えられている。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、少なくとも１つのクリングルドメインを含む。
【0049】
分泌シグナル伝達配列の切断時に、プロＨＧＦの第４のクリングルとＣ末端セリン－タンパク質酵素相同性（ＳＰＨ）ドメインとの間のトリプシン様部位（Ｒ４９４－Ｖ４９５）でのタンパク質分解切断は、成熟した活性化ＨＧＦをもたらす。トリプシン様切断部位は、正荷電アミノ酸（例えば、リシンまたはアルギニン）に続くペプチド結合である。活性化すると、ＨＧＦは、その受容体であるｃＭｅｔ（ＭＥＴチロシンキナーゼとしても知られる）に結合して活性化し、チロシンリン酸化をもたらし、様々な下流アダプタ分子の動員、及び侵襲的増殖プログラムとしてまとめて知られる様々な細胞内経路及び生物学的活性の調節にさらに影響を及ぼす（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．，１９９１，Ｐｒｏｇ．Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．，３：６７－８５、Ｂｏｔｔａｒｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：８０２－８０４）。ＨＧＦ及びその受容体ｃＭｅｔは両方とも、角膜上皮、実質細胞、内皮及び涙腺で発現されるが、ヒト涙液中のＨＧＦの量が約５００ｐｇ／ｍＬと推定される非常に低いレベルである（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，３４：２５４４－２５６１、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，３７：７２７－７３９）。
【0050】
ＨＧＦ ｍＲＮＡ遺伝子転写物の選択的スプライシングから生じる６つの天然に存在するＨＧＦのアイソフォームが文献中で知られており、そのうちの主要なアイソフォームは、アイソフォーム１（例えば、配列番号２）及び２（例えば、配列番号３）である（Ｂｏｔｔａｒｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：８０２－８０４、Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４：１３８２－１３８５、Ｌｏｋｋｅｒ ａｎｄ Ｇｏｄｏｗｓｋｉ，１９９２，ＥＭＢＯ Ｊ．，１１：２５０３－２５１０、Ｃｉｏｃｅ，ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１：１３１１０－１３１１５）。本明細書で使用される場合、「アイソフォーム」という用語は、ＨＧＦをコードするプレｍＲＮＡの選択的スプライシングから生じるタンパク質を指す。アイソフォーム１ ｍＲＮＡ転写物は、７２８アミノ酸残基を含む最長のＨＧＦ遺伝子配列をコードする。第２の主要なＨＧＦアイソフォームは、複数の３’エクソンを欠くが、アイソフォーム１の転写物に対して選択的３’エクソンを含むアイソフォーム２のｍＲＮＡ転写物によってコードされる。アイソフォーム２ ｍＲＮＡ転写物によってコードされるＨＧＦタンパク質は、２９０個のアミノ酸残基を含み、アイソフォーム１ ＨＧＦタンパク質と比較して、第２のクリングルドメインの後で切断される（Ｍｉｙａｚａｗａ，ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９７：１５－２２）。アイソフォーム３ ｍＲＮＡ転写物は、アイソフォーム１に存在するフレーム内コードセグメントを欠き、アイソフォーム１の第１のクリングルドメイン内の１６１～１６５位の配列「ＳＦＬＰＳ」を欠く７２３個のアミノ酸残基（例えば、配列番号１）を含むＨＧＦタンパク質をコードする（Ｒｕｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８８：４１５－４１９）。アイソフォーム４ ＨＧＦタンパク質（例えば、配列番号４）は、残基１～２９６を含むより小さい分子であり、そのアミノ酸配列は、第２のクリングルドメインを通してのみ伸長する（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５４：１３８２－１３８５）。アイソフォーム５ ＨＧＦタンパク質（例えば、配列番号５）は、アイソフォーム３ ＨＧＦと同様に、残基１６１～１６５（ＳＦＬＰＳ）の追加の欠失を伴うアイソフォーム２ ＨＧＦタンパク質に類似する（Ｒｕｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８８：４１５－４１９）。アイソフォーム６ ＨＧＦタンパク質（ＮＫ１としても知られる）（例えば、配列番号６）は、２１０個のアミノ酸のみを含む、全てのＨＧＦアイソフォームの中で最小である（Ｃｉｏｃｅ，ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．，２７１：１３１１０－１３１１５）。
【0051】
ＨＧＦの全長及び短縮型のアイソフォームの両方が、異なる効力及び細胞外マトリックスのヘパリン硫酸プロテオグリカンとの相互作用を有するにもかかわらず、ｃＭｅｔに結合することが示されており、これがインビボでのＨＧＦの循環半減期を延長するのに役立つ（Ｍａｓｕｍｏｔｏ ａｎｄ Ｙａｍａｍｏｔｏ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７４：９０－９５、Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．，９：３５５－３６５、Ｓａｋａｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：９４５７－９４６３、Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３２６：７６３－７７２）。アイソフォーム１及び３は、Ｒ４９４－Ｖ４９５でのタンパク質分解切断が生物学的に活性になることを必要とするが、短縮型アイソフォーム２、４、５、及び６は、Ｒ４９４－Ｖ４９５切断部位を有さず、したがって、この活性化ステップは、それらの生物学的活性のために必要ではない。しかしながら、切断型アイソフォーム２、４、５、及び６は、一般に、全長アイソフォーム１及び３の対応物よりも効力が低いことが知られている（Ｓｔａｈｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７、Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ，ｅｔ ａｌ．，１９９８、前出）。
【0052】
線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、発生を含む幅広い生物学的プロセスに関与する細胞シグナル伝達タンパク質のファミリーである。ヒトＦＧＦファミリーには、２２のメンバー、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３（ＩＮＴ２）、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ８（ＡＩＧＦ）、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１１、ＦＧＦ１２、ＦＧＦ１３、ＦＧＦ１４、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ１９、ＦＧＦ２０、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２２、及びＦＧＦ２３が含まれている。
【0053】
ＦＧＦは、線維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）を結合及び活性化することによって、その生物学的効果を発揮する。活性化ＦＧＦＲは、受容体の細胞質部分でリン酸化チロシンに結合する特定の分子を動員することによってシグナル伝達を媒介し、特定の細胞応答につながるいくつかのシグナル伝達経路を誘発する。ヒトＦＧＦＲファミリーには、以下の４つのメンバー、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及びＦＧＦＲ４が含まれている。
【0054】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（すなわち、配列番号１のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１～２７のいずれか１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（すなわち、配列番号１または配列番号２のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（すなわち、配列番号１のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（すなわち、配列番号２のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列の活性化型を含むポリペプチドである。「活性化型」という用語は、とりわけ、シグナル配列（例えば、配列番号１または配列番号２のアミノ酸１～３１）が切断され、配列番号１のＲ４８９とＶ４９０との間、または配列番号２のＲ４９４とＶ４９５との間で切断されて、ジスルフィド結合したＨＧＦのアルファ鎖及びベータ鎖を形成するＨＧＦポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、Ｎ末端アミノ酸（例えば、配列番号１または配列番号２のアミノ酸３２）は、例えば、シグナル配列の切断から生じるピロリドンカルボン酸である。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号１のＲ４８９とＶ４９０との間、または配列番号２のＲ４９４とＶ４９５との間のペプチド結合がインタクトであるＨＧＦ前駆体（プロ－ＨＧＦ）型で存在する。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号１のＲ４８９アミノ酸残基とＶ４９０アミノ酸残基との間、または配列番号２のＲ４９４アミノ酸残基とＶ４９５アミノ酸残基との間のプロ－ＨＧＦタンパク質のトリプシン様切断部位のインビボでのタンパク質分解切断によって、活性型に変換することができる。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、配列番号１のＲ４８９アミノ酸残基とＶ４９０アミノ酸残基との間、または配列番号２のＲ４９４アミノ酸残基とＶ４９５アミノ酸残基との間のプロ－ＨＧＦタンパク質のトリプシン様切断部位のインビトロでのタンパク質分解切断によって、活性型に変換することができる。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１のプロ－ＨＧＦタンパク質のアミノ酸３２～７２３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１の活性化タンパク質のアミノ酸３２～７２３のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号２のプロ－ＨＧＦタンパク質のアミノ酸３２～７２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号２の活性化タンパク質のアミノ酸３２～７２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【0055】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号３、４、５、または６のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号３、４、５、または６のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。
【0056】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、または配列番号６のポリペプチドバリアントである。本明細書で使用される場合、「バリアント」という用語は、ポリペプチドをコードする核酸の変異から生じる１つ以上のアミノ酸の置換、欠失、または挿入によって別のポリペプチドと異なるポリペプチドを示すことを意味する。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号１、配列番号２、または配列番号６のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１、配列番号２、または配列番号６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号１、配列番号２、または配列番号６のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１、配列番号２、または配列番号６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号１、配列番号２、または配列番号６のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１、配列番号２、または配列番号６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号１、配列番号２、または配列番号６のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号１、配列番号２、または配列番号６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦバリアントは、（１）ｃ－ＭＥＴに結合し、及び／または（２）上皮細胞（例えば、ヒト角膜上皮細胞）におけるＭＡＰＫ経路を活性化することができる。
【0057】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、６２位、６４位、７７位、９５位、１２５位、１２７位、１３０位、１３２位、１３７位、１４２位、１４８位、１５４位、１７０位、１７３位、及び１９３位のうちの１つ以上に、シグナル配列（例えば、配列番号２のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、野生型ＨＧＦアイソフォーム１のアミノ酸配列（例えば、配列番号２）の変異を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、野生型ＨＧＦアイソフォーム３における類似の位置（例えば、配列番号１）が変異している。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、以下の表１及び表２に示されるアミノ酸配列の変異を含むポリペプチドである。表１及び表２に示される変異の任意の組み合わせは、本明細書に開示されるＨＧＦポリペプチドに含まれてもよい。
【表1】
【表2】
【0058】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号７～２７のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号７～２７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、シグナル配列（例えば、配列番号７～２７のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず、配列番号７～２７からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるポリペプチドである。
【0059】
いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、配列番号２８のポリペプチドバリアントである。いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、配列番号２８に対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＦＧＦバリアントは野生型ＦＧＦ１と比較して増加したタンパク質分解安定性を示す。
【0060】
いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、２８位、４０位、４７位、９３位または１３１位のうちの１つ以上において、野生型ＦＧＦアイソフォーム１のアミノ酸配列（例えば、配列番号２８）の変異を含むポリペプチドである。２８位、４０位、４７位、９３位、及び１３１位の変異の任意の組み合わせは、本明細書に開示されるＦＧＦポリペプチドに含まれてもよい。
【0061】
いくつかの実施形態において、ＦＧＦ１バリアントは、Ｄ２８Ｎ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、Ｌ１３１Ｒ、及びＬ１３１Ｋからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、ＦＧＦ１バリアントはアミノ酸置換Ｌ１３１Ｒを含む。いくつかの実施形態において、ＦＧＦ１バリアントはアミノ酸置換Ｌ１３１Ｋを含む。いくつかの実施形態において、バリアントはアミノ酸置換Ｄ２８Ｎ及びＬ１３１Ｒ（例えば、配列番号２９）を含む。いくつかの実施形態において、バリアントはアミノ酸置換Ｄ２８Ｎ及びＬ１３１Ｋを含む。いくつかの実施形態において、バリアントは、アミノ酸置換Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、及びＨ９３Ｇ（例えば、配列番号３０）を含む。いくつかの実施形態において、バリアントは、アミノ酸置換Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、及びＬ１３１Ｒを含む。いくつかの実施形態において、バリアントは、アミノ酸置換Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、及びＬ１３１Ｋを含む。いくつかの実施形態において、バリアントは、アミノ酸置換Ｄ２８Ｎ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、及びＬ１３１Ｒ（例えば、配列番号３１）を含む。いくつかの実施形態において、バリアントは、アミノ酸置換Ｄ２８Ｎ、Ｑ４０Ｐ、Ｓ４７Ｉ、Ｈ９３Ｇ、及びＬ１３１Ｋを含む。いくつかの実施形態において、ＦＧＦ１バリアントはアミノ酸置換Ｌ１３１Ａを含まない。
【0062】
いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、配列番号２９～３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである。いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、配列番号２９～３３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
【0063】
本明細書に開示されるポリペプチド（例えば、ＨＧＦポリペプチド、ＦＧＦポリペプチド）は、単量体または二量体であり得る。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、配列番号１～２７のいずれか１つのポリペプチドまたはそのポリペプチドバリアントの共有結合型二量体である（シグナル配列（例えば、配列番号１～２７のアミノ酸１～３１に対応するアミノ酸）の有無にかかわらず）。いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、配列番号２９～３３のいずれか１つのポリペプチド、またはそのポリペプチドバリアントの共有結合型二量体である。ＨＧＦまたはＦＧＦポリペプチドの共有結合型二量体は、好適な発現系（例えば、酵母またはＥ．ｃｏｌｉ）において配列番号１～２７のＨＧＦポリペプチド配列のうちのいずれか１つ、またはそのバリアントを発現することによって得ることができるが、一方、単一のアミノ酸残基、特に、Ｎ末端アミノ酸残基は、システイン残基で置き換えられる。発現された、及び例えば、シグナル配列が切断された、ＨＧＦポリペプチド単量体、または発現されたＦＧＦポリペプチド単量体は、導入されたシステイン残基間のジスルフィド結合の形成を介して二量体化するように誘導され得る（例えば、Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，２０１４，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，５８８：４８３１－４８３７、Ｊｏｎｅｓ ＩＩ，ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１０８：１３０３５－１３０４０、及びＵＳＳＮ １５／３６５，５１４を参照されたい）。
【0064】
ある場合には、本明細書に記載のＨＧＦポリペプチドは、例えば、以下のうちの１つ以上を含む、１つ以上の翻訳後修飾を含む。
【0065】
本明細書に開示されるポリペプチド（例えば、ＨＧＦポリペプチド、ＦＧＦポリペプチド）は、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、ベータ－アラニン、シトルリン（Ｃｉｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、３－ニトロチロシン、ニトロアルギニン、及びピログルタミン酸（Ｐｙｒ）を含むがこれらに限定されない、天然に存在するアミノ酸または天然に存在しないアミノ酸との置換を含むことができる。ある場合には、ＨＧＦポリペプチドは、例えば、上の表に示されるように、翻訳後に修飾される。
【0066】
本明細書で使用される場合、「配列同一性」という用語は、２つのポリペプチドまたは核酸配列間の同一の残基の割合を指す。当業者は、例えば、ＨＧＦまたはＦＧＦのアミノ酸（または核酸）配列と、問題のポリペプチド（または核酸）とを入力することによって、ｈｔｔｐｓ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉにおいてオンラインで利用可能なＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）を使用することにより、ＨＧＦまたはＦＧＦのアミノ酸に対する配列同一性を容易に決定することができる。プログラムＢＬＡＳＴは、例えば、Ｔａｔｉａｎａ Ａ．Ｔａｔｕｓｏｖａ ａｎｄ Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ（１９９９）、「Ｂｌａｓｔ ２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ－ａ ｎｅｗ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．１７４：２４７－２５０によって記載されるように、２つの配列を整列させる（デフォルトパラメータで）ために使用することができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列の整列を得るために使用され得る様々な他のアルゴリズム及びソフトウェアは、当該技術分野で周知である。これらには、限定されないが、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ、ＢｅｓｔＦｉｔ、ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ、及びそれらのバリアントが含まれる。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、例えば、プログラムＢＬＡＳＴを使用して２つの配列を整列させること（デフォルトパラメータ）によって確認されるように、ＨＧＦと少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の相同性を有する。いくつかの場合において、配列は、比較される配列、例えば、（ｉ）ヌクレオチド配列のコード領域または（ｉｉ）アミノ酸配列の全長にわたって実質的に同一である。
【0067】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは、羊膜または羊水、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦを産生する細胞もしくは組織（例えば、間葉系間質細胞または肝細胞）、または涙液などの生物学的源から単離される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞、または昆虫細胞株（例えば、Ｓｆ９、Ｓｆ２１またはＳ２）などの好適な宿主タンパク質発現系において発現される組換えタンパク質である。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは精製されている。本明細書で使用される場合、「精製された」ＨＧＦは、他の望ましくない成分または汚染物質を除去するように処理されたポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、ＦＧＦは、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞、または昆虫細胞株（例えば、Ｓｆ９、Ｓｆ２１またはＳ２）などの好適な宿主タンパク質発現系において発現される組換えタンパク質である。いくつかの実施形態において、ＦＧＦは精製されている。本明細書で使用される場合、「精製された」ＦＧＦは、他の望ましくない成分または汚染物質を除去するように処理されたポリペプチドを指す。
【0068】
精製プロセス中に除去される望ましくない成分または汚染物質の例としては、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦに関連しない細胞、組織、核酸、ポリペプチド（例えば、使用される発現系からの宿主細胞タンパク質、または、それが例えばアルブミン及び免疫グロブリンから単離される生体源からの豊富なタンパク質）、５０％未満の配列相同性を有するＨＧＦ及び／またはＦＧＦの小断片、金属、ならびに他の無機塩が挙げられる。当業者によって使用される精製プロセスの例としては、沈殿、凝集、接線流濾過（ＴＦＦ）、限外濾過（ＵＦ）、ダイアフィルトレーション（ＤＦ）、透析、ゲル濾過クロマトグラフィー（ＧＦＣ）、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、及び電気泳動が挙げられる。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は、少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は、少なくとも約６０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は約７５％である。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は約８０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は約８５％である。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は約９０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＨＧＦの純度は約９５％である。好ましい実施形態では、精製されたＨＧＦの純度は約９７％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は、少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は、少なくとも約６０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は約７５％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は約８０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は約８５％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は約９０％である。いくつかの実施形態において、精製されたＦＧＦの純度は約９５％である。好ましい実施形態では、精製されたＦＧＦの純度は、約９７％である。
【0069】
ＨＧＦ及び／またはＦＧＦの純度及び含有量の決定は、例えば、逆相高速液体クロマトグラフ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）及びウェスタンブロットによって、従来の分析アッセイ及び方法を使用して当業者によって容易に達成することができる。
【0070】
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」または「タンパク質」は、例えば、２～約１０００以上のアミノ酸残基を有するアミノ酸のポリマーである。いくつかの実施形態において、「ポリペプチド」は、１０～約１３０アミノ酸、１０～約２２０アミノ酸、１０～約５００アミノ酸、または１０～約７３０アミノ酸を有する。任意の天然に存在するアミノ酸または合成アミノ酸は、ポリペプチドを形成することができる。ポリペプチドは、グリコシル化及び他の部分などの修飾も含むことができる。いくつかの実施形態において、本発明のポリペプチドは、例えば、標的のアミノ酸配列、例えば、Ｎ末端またはＣ末端のアミノ酸配列に基づいて、標的ポリペプチドに選択的に結合する能力を有する。
【0071】
本明細書で使用される場合、「約」という用語は、その領域の、大体の、おおよその、またはその周りを意味するために使用される。「約」という用語が数値範囲とともに使用されるとき、これは、記載される数値の上下にその境界を拡張させることによって、その範囲を修飾する。一般的に、「約」という用語は、本明細書において、１０％の変量で、明記される値を超え、及び下回る数値を修飾するために使用される。
【0072】
治療的及び予防的方法
本開示は、対象における眼疾患または眼障害を治療または予防する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、眼疾患または眼障害は角膜疾患である。角膜疾患の非限定的な例としては、神経栄養性角膜炎、持続性角膜欠損症、角膜潰瘍、ドライアイ疾患、微生物性角膜炎、細菌性角膜炎、ウイルス性角膜炎、真菌性角膜炎、化学熱傷、熱傷、機械的外傷、角膜擦過傷、傷つけられた内皮、水疱性角膜症、フックス角膜ジストロフィー、角膜瘢痕、シェーグレン症候群、及び術後合併症が挙げられる。いくつかの実施形態において、疾患または障害は、角膜混濁または瘢痕化を含む角膜損傷である。いくつかの実施形態において、疾患は神経因性角膜炎である。この方法は、治療有効量の本明細書に記載のＨＧＦ及び／またはＦＧＦポリペプチドを対象に投与することを含む。本明細書で使用される場合、交換可能に使用される「対象」または「患者」は、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、ブタ、及びヒツジ動物などの哺乳動物を含む。対象は、好ましくはヒトである。
本開示は、対象における眼疾患または眼障害を治療または予防する方法を特徴とする。いくつかの実施形態において、眼疾患または眼障害は角膜疾患である。角膜疾患の非限定的な例としては、神経栄養性角膜炎、持続性角膜欠損症、角膜潰瘍、ドライアイ疾患、微生物性角膜炎、細菌性角膜炎、ウイルス性角膜炎、真菌性角膜炎、化学熱傷、熱傷、機械的外傷、角膜擦過傷、傷つけられた内皮、水疱性角膜症、フックス角膜ジストロフィー、角膜瘢痕、シェーグレン症候群、及び術後合併症が挙げられる。いくつかの実施形態において、疾患または障害は、角膜混濁または瘢痕化を含む角膜損傷である。いくつかの実施形態において、疾患は神経因性角膜炎である。この方法は、治療有効量の本明細書に記載のＨＧＦ及び／またはＦＧＦポリペプチドを対象に投与することを含む。本明細書で使用される場合、交換可能に使用される「対象」または「患者」は、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、ブタ、及びヒツジ動物などの哺乳動物を含む。対象は、好ましくはヒトである。
【0073】
いくつかの実施形態において、対象は、三叉神経またはその分岐に障害があるＮＫを有する。ある特定の場合には、三叉神経またはその分岐への障害は、感染（例えば、細菌または単純ヘルペスまたは帯状疱疹感染などのウイルス感染）によって引き起こされる。ある特定の場合には、三叉神経またはその分岐への障害は、眼の手術（例えば、白内障手術、角膜移植、屈折手術）によって引き起こされる。ある特定の場合には、三叉神経またはその分岐への障害は、糖尿病、ハンセン病、眼窩腫瘍、及び炎症などの全身疾患によって引き起こされる。いくつかの場合には、三叉神経またはその分岐への障害は、化学熱傷及び熱傷を含む身体外傷によって引き起こされる。他の場合には、三叉神経またはその分岐への障害は、コンタクトレンズの使用によって引き起こされる。いくつかの実施形態において、対象は、三叉神経経路へのいかなる摂動にも関連しない上皮への損傷があるＮＫを有する。
【0074】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは、対象の眼に投与される。ＨＧＦ及び／またはＦＧＦの投与経路は、既知の方法に従って、例えば、点眼剤または包帯コンタクトレンズ、局所眼注射（例えば、結膜下、硝子体内、眼球後方、及び前房内）を介して局所的に、または以下に記載されるように徐放系によって行うことができる。いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは眼に局所投与される。「局所的に」という用語は、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦを眼の表面（すなわち、角膜）に直接適用することを指す。いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは注射によって眼に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは、結膜下に投与される。「結膜下」という用語は、眼球結膜（眼球上）の下または眼瞼の結膜ライニング（眼瞼下）の下のいずれかに注射することを指す（Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｒ．，２００８「Ｏｃｕｌａｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ」Ｓｍａｌｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ （２ｎｄ Ｅｄ．））。いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは、硝子体内に投与される。「硝子体内」という用語は、眼の硝子体腔に直接注射することを指す。いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦは、前房内に投与される。「前房内」という用語は、眼の前房に直接注射することを指す。注射用に意図される治療用ポリペプチド組成物は、一般に、適切なアクセスポート、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルを有する滅菌容器に配置される。局所投与の場合、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦを含む薬学的組成物は、絞り可能な点眼剤容器に配置することができる。いくつかの実施形態において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦを含む薬学的組成物は、眼科用絞りディスペンサー、例えばＡｐｔａｒ Ｐｈａｒｍａからのディスペンサーを使用して局所投与される。
【0075】
持続放出製剤の好適な例としては、成形品の形態の半透過性ポリマーマトリックス、例えば、フィルム、インプラント、またはマイクロカプセルが挙げられる。持続放出マトリックスとしては、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号及びＥＰ５８，４８１）、Ｌ－グルタミン酸及びガンマエチル－Ｌ－グルタメートのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７－５５６）、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：２６７－２７７及びＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８－１０５）、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，前出）またはポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が挙げられる。持続放出組成物はまた、リポソームに捕捉されたＨＧＦ、ＦＧＦ、またはＨＧＦ及びＦＧＦの両方も含む。ＨＧＦ、ＦＧＦ、またはＨＧＦ及びＦＧＦの両方を含むリポソームは、それ自体既知の方法、ＤＥ３，２１８，１２１、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２：３６８８－３６９２、Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７７：４０３０－４０３４、ＥＰ５２，３２２、ＥＰ３６，６７６、ＥＰ８８，０４６、ＥＰ１４３，９４９、ＥＰ１４２，６４１、米国特許第４，４８５，０４５号及び同第４，５４４，５４５号、ならびにＥＰ１０２，３２４によって調製することができる。通常、リポソームは、脂質含有量が約３０モルパーセントのコレステロールよりも高い、小さな（約２００～８００オングストローム）単層型であり、選択された割合は、最も有効な療法のために調整される。
【0076】
治療的に用いられるＨＧＦもしくはＨＧＦ含有組成物及び／またはＦＧＦもしくはＦＧＦ含有組成物の「有効量」は、例えば、対象の治療目的、投与経路、及び状態に依存する。したがって、セラピストは、最適な治療効果を得るために、必要に応じて、投薬量を滴定し、投与経路を修正することが必要であり得る。典型的には、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量に達するまでＨＧＦ及び／またはＦＧＦを投与する。この療法の進行は、従来のアッセイ及び方法によって容易にモニターされる。
【0077】
角膜混濁または瘢痕化、ならびにＮＫなどの眼疾患及び眼障害の治療及び予防において、ＨＧＦ及び／またはＦＧＦを含む薬学的組成物は、良好な医療実務と一致する方法で製剤化、投薬、及び投与することができる。この文脈で考慮すべき要因としては、治療される特定の哺乳動物、個々の対象の臨床状態、障害の原因、投与の方法、投与のスケジュール、及び医師に既知である他の要因が挙げられる。投与されるＨＧＦ及び／またはＦＧＦの「治療有効量」は、そのような考慮事項によって制御され得、眼疾患の症状を予防、改善、または治療するために必要な最小量である。そのような量は、好ましくは、毒性であるか、または宿主に著しい有害作用をもたらす量未満である。
【0078】
一般的な提案として、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、重量対体積（ｗ／ｖ）ベースで、約０．０１％～約１．０％、約０．０５％～約０．５％、約０．０５％～約０．４％、約０．０５％～約０．３％、または約０．０８％～約０．２５％の範囲の初期濃度でＨＧＦ及び／またはＦＧＦを含む。いくつかの実施形態において、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦを含む。いくつかの実施形態において、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度のＨＧＦを含む。いくつかの実施形態において、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度のＦＧＦを含む。いくつかの実施形態において、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度のＦＧＦを含む。いくつかの実施形態において、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、ＨＧＦ及びＦＧＦの両方をそれぞれ約０．１％（ｗ／ｖ）の濃度で含む。いくつかの実施形態において、対象の眼に局所投与される薬学的組成物は、ＨＧＦ及びＦＧＦの両方をそれぞれ約０．２％（ｗ／ｖ）の濃度で含む。いくつかの実施形態において、薬学的組成物はＨＧＦを含み、ＦＧＦを実質的に含まない。いくつかの実施形態において、薬学的組成物はＦＧＦを含み、ＨＧＦを実質的に含まない。
【0079】
本開示はまた、併用療法を特徴とする。例えば、対象（例えば、ヒト）は、本明細書に記載のＨＧＦを第２の治療剤と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、対象は、第２の治療剤と同時にＨＧＦポリペプチドを投与される。本明細書で使用される場合、「同時」という用語は、「同じ期間中に存在すること」を意味する。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、同じ製剤中で製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、別々の製剤で製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、順次投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチドは、第２の治療剤が投与される前に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチドは、第２の治療剤が投与された後に投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、１～６０分間隔、５～３０分間隔、または１０～２０分間隔で投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、５分間隔で投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、１０分間隔で投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、１５分間隔で投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、３０分間隔で投与される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦポリペプチド及び第２の治療剤は、１時間間隔で投与される。いくつかの実施形態において、ＦＧＦポリペプチドが第２の治療剤である。
【0080】
いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＨＧＦと同じ生物学的及び生理学的効果、例えば、同様の細胞内経路の活性化を誘発し得る。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＨＧＦとして異なる生物学的及び生理学的効果を誘発し得る。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＨＧＦによって引き起こされる生物学的及び生理学的効果を増強する。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、ＨＧＦと同じクラスの分子である（すなわち、両方ともポリペプチドである）。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は、異なるクラスの分子（例えば、小分子または核酸）である。第２の治療剤の非限定的な例としては、小分子、ペプチド、タンパク質、抗体及び抗原結合断片、核酸、細胞及び組織抽出物、ならびに羊水及び他の体液が挙げられる。第２の治療剤は、天然源からの単離を介して得られるか、合成的に産生されるか、または細胞培養によって得られ得る。本明細書で使用される場合、「小分子」という用語は、９００ダルトン未満の低分子量有機化合物を指す。本明細書で使用される場合、「ペプチド」という用語は、２～約５０サブユニットのアミノ酸、アミノ酸アナログ、またはペプチド模倣物の化合物を指す。サブユニットは、ペプチド結合によって連結することができる。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシンならびにＤもしくはＬ光学異性体と、アミノ酸アナログ及びペプチド模倣体との両方を含む、天然及び／または非天然もしくは合成アミノ酸のいずれかを指す。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体ならびにその断片を含む。抗体には、マウス、ラット、ウサギ、ヒト、またはキメラ抗体などが含まれるが、これらに限定されない。「抗体」という用語はまた、全てのアイソタイプの抗体を含む。本明細書で使用される場合、「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、任意の長さのヌクレオチドまたはそのアナログのポリマー型を指す。ポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び／またはそれらのアナログを含有することができる。ヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し得、既知または未知の任意の機能を実行し得る。核酸分子は、さらに、アンチセンス分子、プローブ、プライマーなどのオリゴヌクレオチドを含む。オリゴヌクレオチドは、典型的には、約２～約１００個、８～約３０個、または１０～約２８個のヌクレオチドもしくはそのアナログを有する。
【0081】
いくつかの実施形態において、第２の治療剤は抗生物質である。抗生物質の非限定的な例としては、トリメトプリム、ポリミキシンＢ、アジスロマイシン、ゲンタマイシン、ベシフロキサシン、ガチフロキサシン、モキシフロキサシン、レボフロキサシン、シプロフロキサシン、オフロキサシン及びトブラマイシンが挙げられる。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）である。ＮＳＡＩＤの非限定的な例としては、アスピリン、サルサラート、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダク、及びトルメチンが挙げられる。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は眼科用ステロイドである。眼科用ステロイドの非限定的な例としては、デキサメタゾン眼科用（Ｍａｘｉｄｅｘ（登録商標））、ジフルプレドナート眼科用（Ｄｕｒｅｚｏｌ（登録商標））、フルオロメトロン眼科用（Ｆｌａｒｅｘ（登録商標）、ＦＭＬ（登録商標）、ＦＭＬ Ｌｉｑｕｉｆｉｌｍ（登録商標）、ＦＭＬ Ｆｏｒｔｅ（登録商標））、Ｌｏｔｅｐｒｅｄｎｏｌ エタボネート眼科用（Ａｌｒｅｘ（登録商標）、Ｌｏｔｅｍａｘ（登録商標））、酢酸プレドニゾロン眼科用（Ｏｍｎｉｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｒｅｄ Ｆｏｒｔｅ（登録商標）、Ｐｒｅｄ Ｍｉｌｄ（登録商標））、プレドニソロンリン酸エステルナトリウム眼科用、及びリメキソロン眼科用（Ｖｅｘｏｌ（登録商標））が挙げられる。いくつかの実施形態において、第２の治療剤は局所麻酔薬である。局所麻酔薬の非限定的な例としては、プリロカイン、エピネフリン、リドカイン、ブピバカイン、ロントカイン、ノボカイン、ロピバカイン、プロカイン、アメトカイン、シンコカイン、メピバカイン、及びエチドカインが挙げられる。いくつかの実施形態において、第２の治療剤はさらなる増殖因子である。増殖因子の非限定的な例としては、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ－１）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、形質転換増殖因子（ＴＧＦ）、血管内皮増殖因子及び顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、ニューロトロフィン及び神経増殖因子（ＮＧＦ）、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－α）、ならびにインターロイキンが挙げられる。
【0082】
薬学的組成物及び製剤
熱ストレスに対するポリペプチドの安定性を維持し、可視粒子及び可溶性凝集体の形成を最小限に抑えることは、ポリペプチド、特に、長期保存を必要とする本質的に水溶性の溶液を含む薬学的組成物の開発における重要な焦点である。ＨＧＦ及び関連タンパク質が様々な安定化剤とともに製剤化される以下の参考文献を参照されたい。ＷＯ９０／１０６５１ ＷＯ００／７２８７３（ＥＰ特許第１１８０３６８号）、ＪＰ－Ａ９－２５２４１（米国特許第７，１７３，００８号）、ＷＯ２００８／１０２８４９（米国特許第８４６１１１２号）、及び米国特許第１０２１３４８５号。タンパク質凝集及び熱安定性の問題は、従来技術に記載されているような凍結乾燥ＨＧＦ製剤を使用してある程度回避することができるが、これは、ＨＧＦを含む薬学的組成物の製造における凍結乾燥単位操作を必要とし、プロセスにおいてさらなる製造コスト及び複雑さを招く。さらに、凍結乾燥ＨＧＦ製剤は、投薬及び投与前に再構成を必要とする。したがって、安定した溶液が有利である。
熱ストレスに対するポリペプチドの安定性を維持し、可視粒子及び可溶性凝集体の形成を最小限に抑えることは、ポリペプチド、特に、長期保存を必要とする本質的に水溶性の溶液を含む薬学的組成物の開発における重要な焦点である。ＨＧＦ及び関連タンパク質が様々な安定化剤とともに製剤化される以下の参考文献を参照されたい。ＷＯ９０／１０６５１ ＷＯ００／７２８７３（ＥＰ特許第１１８０３６８号）、ＪＰ－Ａ９－２５２４１（米国特許第７，１７３，００８号）、ＷＯ２００８／１０２８４９（米国特許第８４６１１１２号）、及び米国特許第１０２１３４８５号。タンパク質凝集及び熱安定性の問題は、従来技術に記載されているような凍結乾燥ＨＧＦ製剤を使用してある程度回避することができるが、これは、ＨＧＦを含む薬学的組成物の製造における凍結乾燥単位操作を必要とし、プロセスにおいてさらなる製造コスト及び複雑さを招く。さらに、凍結乾燥ＨＧＦ製剤は、投薬及び投与前に再構成を必要とする。したがって、安定した溶液が有利である。
【0083】
本発明のいくつかの実施形態において、ＨＧＦ（及び／またはＦＧＦ）は、液体薬学的組成物中に製剤化される。いくつかの実施形態において、薬学的組成物は水性薬学的組成物である。本明細書で使用される場合、「水性薬学的製剤」は、水系液体を指す。いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は蒸留水を含む。いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は脱イオン水を含む。いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は滅菌水を含む。いくつかの実施形態において、水性薬学的組成物は注射用水（ＷＦＩ）を含む。いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は点眼剤として製剤化される。いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は溶液として製剤化される。いくつかの実施形態において、液体薬学的組成物は懸濁液として製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、液体薬学的組成物中のさらなる治療剤とともに製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦはさらなる治療剤とともに点眼剤として製剤化される。いくつかの実施形態において、ＨＧＦは溶液としてさらなる治療剤とともに製剤化される。
【0084】
本発明のポリペプチドまたはその誘導体の薬学的製剤は、所望の純度を有するポリペプチドまたはその誘導体を、凍結乾燥ケーキまたは水溶液の形態で、任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤、等張化剤または安定剤と混合することによって、保管のために調製することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ４３，１４ｔｈ Ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．１８０４２，ＵＳＡを参照されたい）。許容される担体、賦形剤、等張化剤、または安定剤は、用いる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液を含み、「緩衝液」という用語は、溶液のｐＨをほぼ一定に維持するために使用される弱酸及びその共益塩基物もしくはその逆、アスコルビン酸を含む抗酸化剤、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、ヒスチジン、プロリン、もしくはリシンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース、スクロース、トレハロース、もしくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール、ナトリウムもしくはカリウムなどの塩形成対イオン、及び／または非イオン性界面活性剤もしくはポリソルベート及びポロキサマーなどの共溶媒、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、ブドウ糖、グリセリン及び塩化マグネシウムなどの等張化剤の混合物を指す。
【0085】
いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、等張化剤を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、本発明の製剤は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、及び塩化マグネシウムなどの塩化物塩を実質的に含まない。
【0086】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦ（及び／またはＦＧＦ）を含む薬学的製剤のｐＨは、約５．５～約７．５である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは、約５．５～約６．０である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは、約５．８～約６．２である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは、約６．０～約６．５である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは、約６．５～約７．０である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは、約７．０～約７．５である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは約６．０である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは約６．５である。いくつかの実施形態において、薬学的製剤のｐＨは約７．０である。
【0087】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的製剤は緩衝液をさらに含む。いくつかの実施形態において、緩衝液は、酢酸塩、クエン酸塩、グルタミン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、酒石酸塩、及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）から選択される。いくつかの実施形態において、緩衝液は、クエン酸ナトリウム（例えば、クエン酸ナトリウム二水和物）などのクエン酸緩衝液である。いくつかの実施形態において、緩衝液は酢酸塩緩衝液である。いくつかの実施形態において、緩衝液はコハク酸塩緩衝液である。いくつかの実施形態において、緩衝液は酒石酸塩緩衝液である。いくつかの実施形態において、緩衝液はグルタミン酸塩緩衝液である。いくつかの実施形態において、緩衝液はＴｒｉｓである。いくつかの実施形態において、緩衝液は約１０ｍＭ～約１００ｍＭで存在する。いくつかの実施形態において、緩衝液は約２０ｍＭ～約５０ｍＭで存在する。いくつかの実施形態において、緩衝液は約２０ｍＭで存在する。
【0088】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的製剤は、任意選択で、等張化剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、薬学的製剤は等張化剤を実質的に含まない。いくつかの実施形態において、等張化剤は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）または塩化カリウム（ＫＣｌ）などのアルカリ金属塩である。いくつかの実施形態において、等張化剤は塩化カルシウム（ＣａＣｌ２）である。いくつかの実施形態において、等張化剤はマンニトールである。いくつかの実施形態において、等張化剤はトレハロース（例えば、トレハロース二水和物）である。いくつかの実施形態において、等張化剤は、約０．１～約１．０Ｍ、約０．２～約０．８Ｍ、約０．３Ｍ、約０．４Ｍ、約０．５Ｍ、約０．６Ｍ、約０．７Ｍ、または約０．７５Ｍで存在する。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約２００～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ、約２００～約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ、約２５０～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ、約３５０～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ、約４００～約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ、または約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約３００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約４２５ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約４７５ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。いくつかの実施形態において、製剤のオスモル濃度は、約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0089】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的製剤は、１つ以上の安定剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、ソルビトール、トレハロース、スクロース、アラニン、グリシン、プロリン、グルタミン酸、及びアルギニンから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、ソルビタール、プロリン、及びトレハロースから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、プロリン、アルギニン、及びトレハロースから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、グルタミン酸、プロリン、及びトレハロースから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、アルギニン、グルタミン酸、及びトレハロースから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、アルギニン、プロリン、及びソルビトールから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、グルタミン酸、プロリン、及びソルビトールから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、アルギニン、グルタミン酸、及びソルビトールから選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、アルギニン及びトレハロースである。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、ソルビタール及びトレハロースである。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、プロリン及びトレハロースである。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、アルギニン及びソルビトールである。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、グルタミン酸及びソルビトールである。いくつかの実施形態において、１つ以上の安定剤は、プロリン及びソルビトールである。いくつかの実施形態において、安定剤はトレハロースである。いくつかの実施形態において、安定剤はプロリンである。いくつかの実施形態において、安定剤はアルギニンである。いくつかの実施形態において、安定剤はソルビトールである。
【0090】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的製剤は、スクロース、アラニン、及びグリシンを実質的に含まない。いくつかの実施形態において、薬学的製剤はスクロースを実質的に含まない。いくつかの実施形態において、薬学的製剤はアラニンを実質的に含まない。いくつかの実施形態において、薬学的製剤はグリシンを実質的に含まない。
【0091】
いくつかの実施形態において、安定剤は、製剤中に約１００ｍＭ～約５００ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、安定剤は、約１５０ｍＭ～約２５０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの実施形態において、安定剤は、約２００ｍＭの濃度で存在する。
【0092】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的製剤は、任意選択で界面活性剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、ポリソルベート２０（ＰＳ２０）、ポラキサマー１８８（Ｐ１８８）、及びポラキサマー４０７（Ｐ４０７）から選択される。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。いくつかの実施形態において、界面活性剤は約０．０２％～約０．０７％（ｗ／ｖ）で存在する。いくつかの実施形態において、界面活性剤は約０．０４％～約０．０６％（ｗ／ｖ）で存在する。いくつかの実施形態において、界面活性剤は約０．０５％（ｗ／ｖ）で存在する。
【0093】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
（ｉ）約０．１％（ｗ／ｖ）～約１．０％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）組成物のｐＨを約５．８～約６．２に維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
（ｉ）約０．１％（ｗ／ｖ）～約１．０％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）組成物のｐＨを約５．８～約６．２に維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
【0094】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
（ｉ）約０．１％～約０．５％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）約５．８～約６．２の組成物のｐＨを維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
（ｉ）約０．１％～約０．５％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）約５．８～約６．２の組成物のｐＨを維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
【0095】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
（ｉ）約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）約５．８～約６．２の組成物のｐＨを維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
（ｉ）約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）約５．８～約６．２の組成物のｐＨを維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
【0096】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
（ｉ）約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）約５．８～約６．２の組成物のｐＨを維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
（ｉ）約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦと、
（ｉｉ）約５．８～約６．２の組成物のｐＨを維持することができる緩衝液と、
（ｉｉｉ）約１００～約３００ｍＭのトレハロース、プロリン、ソルビトール、またはそれらの混合物と、
（ｉｖ）任意選択で、組成物のオスモル濃度を約２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏにすることができる等張化剤と、
（ｖ）任意選択で、界面活性剤とを含む。
【0097】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0098】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0099】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0100】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0101】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0102】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0103】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0104】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０である。
【0105】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0106】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0107】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0108】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．１％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0109】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、プロリン、またはソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）の界面活性剤を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0110】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのトレハロース、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0111】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのプロリン、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0112】
いくつかの実施形態において、本発明の薬学的組成物は、
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
約０．２％（ｗ／ｖ）のＨＧＦ、
約２０ｍＭのクエン酸ナトリウム、
約２００ｍＭのソルビトール、
約０．０５％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含み、
組成物のｐＨは約６．０であり、組成物のオスモル濃度は約４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ Ｈ２Ｏである。
【0113】
いくつかの実施形態において、ＨＧＦは、角膜実質透過性賦形剤と組み合わせて投与される。実質透過性賦形剤は、主に上皮を含む角膜層にわたる治療剤の送達を強化することができる化合物である（Ｍｏｉｓｅｅｖ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，１１：３２１－３５４）。これらの化合物は、薬学的組成物に含まれ、眼に局所投与されると、涙液フィルム、粘液層または眼膜を修飾することができ、それによって治療剤の角膜透過性を増加させる。実質透過性賦形剤の非限定的な例としては、α－、β－及びγ－ＣＤを含むシクロデキストリン（ＣＤ）、エチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレングリコール－ビス（ベータ－アミノエチル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＥＧＴＡ）、１，２－ビス（ｏ－アミノフェノキシ）エタン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－四酢酸（ＢＡＰＴＡ）及びエチレンジアミン－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－ジスクシン酸（ＥＤＤＳ）などのキレート剤、クラウンエーテル、界面活性剤、胆汁酸及び胆汁塩、ならびに細胞透過性ペプチドが挙げられる。インビボ投与のためのＨＧＦは無菌であることが好ましい。これは、滅菌濾過膜を介したＨＧＦの水溶液の濾過によって容易に達成することができる。ＨＧＦまたはそのバリアントは、通常、凍結乾燥形態または溶液中で保存される。
【0114】
明確にするために、別個の実施形態の文脈において説明される本発明の特定の特徴もまた、単一の実施形態において組み合わせて提供され得ることが理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈において説明される本発明の様々な特徴はまた、別個に、または任意の適切な下位の組み合わせで提供され得る。
【実施例】
【0115】
実施例１：ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ（ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１４２１０）で入手可能なヒトＨＧＦアイソフォームのアミノ酸配列
配列番号１．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム３のアミノ酸配列；（識別子：Ｐ１４２１０－３、アクセッション番号ＮＰ＿００１０１０９３２．１）（ｄＨＧＦ）
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＴＣＡＤＮＴＭＮＤＴＤＶＰＬＥＴＴＥＣＩＱＧＱＧＥＧＹＲＧＴＶＮＴＩＷＮＧＩＰＣＱＲＷＤＳＱＹＰＨＥＨＤＭＴＰＥＮＦＫＣＫＤＬＲＥＮＹＣＲＮＰＤＧＳＥＳＰＷＣＦＴＴＤＰＮＩＲＶＧＹＣＳＱＩＰＮＣＤＭＳＨＧＱＤＣＹＲＧＮＧＫＮＹＭＧＮＬＳＱＴＲＳＧＬＴＣＳＭＷＤＫＮＭＥＤＬＨＲＨＩＦＷＥＰＤＡＳＫＬＮＥＮＹＣＲＮＰＤＤＤＡＨＧＰＷＣＹＴＧＮＰＬＩＰＷＤＹＣＰＩＳＲＣＥＧＤＴＴＰＴＩＶＮＬＤＨＰＶＩＳＣＡＫＴＫＱＬＲＶＶＮＧＩＰＴＲＴＮＩＧＷＭＶＳＬＲＹＲＮＫＨＩＣＧＧＳＬＩＫＥＳＷＶＬＴＡＲＱＣＦＰＳＲＤＬＫＤＹＥＡＷＬＧＩＨＤＶＨＧＲＧＤＥＫＣＫＱＶＬＮＶＳＱＬＶＹＧＰＥＧＳＤＬＶＬＭＫＬＡＲＰＡＶＬＤＤＦＶＳＴＩＤＬＰＮＹＧＣＴＩＰＥＫＴＳＣＳＶＹＧＷＧＹＴＧＬＩＮＹＤＧＬＬＲＶＡＨＬＹＩＭＧＮＥＫＣＳＱＨＨＲＧＫＶＴＬＮＥＳＥＩＣＡＧＡＥＫＩＧＳＧＰＣＥＧＤＹＧＧＰＬＶＣＥＱＨＫＭＲＭＶＬＧＶＩＶＰＧＲＧＣＡＩＰＮＲＰＧＩＦＶＲＶＡＹＹＡＫＷＩＨＫＩＩＬＴＹＫＶＰＱＳ
配列番号１．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム３のアミノ酸配列；（識別子：Ｐ１４２１０－３、アクセッション番号ＮＰ＿００１０１０９３２．１）（ｄＨＧＦ）
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＴＣＡＤＮＴＭＮＤＴＤＶＰＬＥＴＴＥＣＩＱＧＱＧＥＧＹＲＧＴＶＮＴＩＷＮＧＩＰＣＱＲＷＤＳＱＹＰＨＥＨＤＭＴＰＥＮＦＫＣＫＤＬＲＥＮＹＣＲＮＰＤＧＳＥＳＰＷＣＦＴＴＤＰＮＩＲＶＧＹＣＳＱＩＰＮＣＤＭＳＨＧＱＤＣＹＲＧＮＧＫＮＹＭＧＮＬＳＱＴＲＳＧＬＴＣＳＭＷＤＫＮＭＥＤＬＨＲＨＩＦＷＥＰＤＡＳＫＬＮＥＮＹＣＲＮＰＤＤＤＡＨＧＰＷＣＹＴＧＮＰＬＩＰＷＤＹＣＰＩＳＲＣＥＧＤＴＴＰＴＩＶＮＬＤＨＰＶＩＳＣＡＫＴＫＱＬＲＶＶＮＧＩＰＴＲＴＮＩＧＷＭＶＳＬＲＹＲＮＫＨＩＣＧＧＳＬＩＫＥＳＷＶＬＴＡＲＱＣＦＰＳＲＤＬＫＤＹＥＡＷＬＧＩＨＤＶＨＧＲＧＤＥＫＣＫＱＶＬＮＶＳＱＬＶＹＧＰＥＧＳＤＬＶＬＭＫＬＡＲＰＡＶＬＤＤＦＶＳＴＩＤＬＰＮＹＧＣＴＩＰＥＫＴＳＣＳＶＹＧＷＧＹＴＧＬＩＮＹＤＧＬＬＲＶＡＨＬＹＩＭＧＮＥＫＣＳＱＨＨＲＧＫＶＴＬＮＥＳＥＩＣＡＧＡＥＫＩＧＳＧＰＣＥＧＤＹＧＧＰＬＶＣＥＱＨＫＭＲＭＶＬＧＶＩＶＰＧＲＧＣＡＩＰＮＲＰＧＩＦＶＲＶＡＹＹＡＫＷＩＨＫＩＩＬＴＹＫＶＰＱＳ
【0116】
配列番号２．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム１のアミノ酸配列；（識別子：Ｐ１４２１０－１、アクセッション番号：ＮＰ＿０００５９２．３）
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＦＬＰＳＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＴＣＡＤＮＴＭＮＤＴＤＶＰＬＥＴＴＥＣＩＱＧＱＧＥＧＹＲＧＴＶＮＴＩＷＮＧＩＰＣＱＲＷＤＳＱＹＰＨＥＨＤＭＴＰＥＮＦＫＣＫＤＬＲＥＮＹＣＲＮＰＤＧＳＥＳＰＷＣＦＴＴＤＰＮＩＲＶＧＹＣＳＱＩＰＮＣＤＭＳＨＧＱＤＣＹＲＧＮＧＫＮＹＭＧＮＬＳＱＴＲＳＧＬＴＣＳＭＷＤＫＮＭＥＤＬＨＲＨＩＦＷＥＰＤＡＳＫＬＮＥＮＹＣＲＮＰＤＤＤＡＨＧＰＷＣＹＴＧＮＰＬＩＰＷＤＹＣＰＩＳＲＣＥＧＤＴＴＰＴＩＶＮＬＤＨＰＶＩＳＣＡＫＴＫＱＬＲＶＶＮＧＩＰＴＲＴＮＩＧＷＭＶＳＬＲＹＲＮＫＨＩＣＧＧＳＬＩＫＥＳＷＶＬＴＡＲＱＣＦＰＳＲＤＬＫＤＹＥＡＷＬＧＩＨＤＶＨＧＲＧＤＥＫＣＫＱＶＬＮＶＳＱＬＶＹＧＰＥＧＳＤＬＶＬＭＫＬＡＲＰＡＶＬＤＤＦＶＳＴＩＤＬＰＮＹＧＣＴＩＰＥＫＴＳＣＳＶＹＧＷＧＹＴＧＬＩＮＹＤＧＬＬＲＶＡＨＬＹＩＭＧＮＥＫＣＳＱＨＨＲＧＫＶＴＬＮＥＳＥＩＣＡＧＡＥＫＩＧＳＧＰＣＥＧＤＹＧＧＰＬＶＣＥＱＨＫＭＲＭＶＬＧＶＩＶＰＧＲＧＣＡＩＰＮＲＰＧＩＦＶＲＶＡＹＹＡＫＷＩＨＫＩＩＬＴＹＫＶＰＱＳ
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＦＬＰＳＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＴＣＡＤＮＴＭＮＤＴＤＶＰＬＥＴＴＥＣＩＱＧＱＧＥＧＹＲＧＴＶＮＴＩＷＮＧＩＰＣＱＲＷＤＳＱＹＰＨＥＨＤＭＴＰＥＮＦＫＣＫＤＬＲＥＮＹＣＲＮＰＤＧＳＥＳＰＷＣＦＴＴＤＰＮＩＲＶＧＹＣＳＱＩＰＮＣＤＭＳＨＧＱＤＣＹＲＧＮＧＫＮＹＭＧＮＬＳＱＴＲＳＧＬＴＣＳＭＷＤＫＮＭＥＤＬＨＲＨＩＦＷＥＰＤＡＳＫＬＮＥＮＹＣＲＮＰＤＤＤＡＨＧＰＷＣＹＴＧＮＰＬＩＰＷＤＹＣＰＩＳＲＣＥＧＤＴＴＰＴＩＶＮＬＤＨＰＶＩＳＣＡＫＴＫＱＬＲＶＶＮＧＩＰＴＲＴＮＩＧＷＭＶＳＬＲＹＲＮＫＨＩＣＧＧＳＬＩＫＥＳＷＶＬＴＡＲＱＣＦＰＳＲＤＬＫＤＹＥＡＷＬＧＩＨＤＶＨＧＲＧＤＥＫＣＫＱＶＬＮＶＳＱＬＶＹＧＰＥＧＳＤＬＶＬＭＫＬＡＲＰＡＶＬＤＤＦＶＳＴＩＤＬＰＮＹＧＣＴＩＰＥＫＴＳＣＳＶＹＧＷＧＹＴＧＬＩＮＹＤＧＬＬＲＶＡＨＬＹＩＭＧＮＥＫＣＳＱＨＨＲＧＫＶＴＬＮＥＳＥＩＣＡＧＡＥＫＩＧＳＧＰＣＥＧＤＹＧＧＰＬＶＣＥＱＨＫＭＲＭＶＬＧＶＩＶＰＧＲＧＣＡＩＰＮＲＰＧＩＦＶＲＶＡＹＹＡＫＷＩＨＫＩＩＬＴＹＫＶＰＱＳ
【0117】
配列番号３．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム２のアミノ酸配列（識別子：Ｐ１４２１０－２、アクセッション番号：ＮＰ＿００１０１０９３１．１）：
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＦＬＰＳＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＴＣＥＴ
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＦＬＰＳＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＴＣＥＴ
【0118】
配列番号４．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム４のアミノ酸配列（識別子：Ｐ１４２１０－４）：
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＦＬＰＳＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＮＭＲＤＩＴＷＡＬＮ
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫＴＫＫＶＮＴＡＤＱＣＡＮＲＣＴＲＮＫＧＬＰＦＴＣＫＡＦＶＦＤＫＡＲＫＱＣＬＷＦＰＦＮＳＭＳＳＧＶＫＫＥＦＧＨＥＦＤＬＹＥＮＫＤＹＩＲＮＣＩＩＧＫＧＲＳＹＫＧＴＶＳＩＴＫＳＧＩＫＣＱＰＷＳＳＭＩＰＨＥＨＳＦＬＰＳＳＹＲＧＫＤＬＱＥＮＹＣＲＮＰＲＧＥＥＧＧＰＷＣＦＴＳＮＰＥＶＲＹＥＶＣＤＩＰＱＣＳＥＶＥＣＭＴＣＮＧＥＳＹＲＧＬＭＤＨＴＥＳＧＫＩＣＱＲＷＤＨＱＴＰＨＲＨＫＦＬＰＥＲＹＰＤＫＧＦＤＤＮＹＣＲＮＰＤＧＱＰＲＰＷＣＹＴＬＤＰＨＴＲＷＥＹＣＡＩＫＮＭＲＤＩＴＷＡＬＮ
【0119】
配列番号５．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム５のアミノ酸配列（識別子：Ｐ１４２１０－５、ＮＰ＿００１０１０９３３．１）：
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【0120】
配列番号６．Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ ＨＧＦアイソフォーム６のアミノ酸配列（識別子：Ｐ１４２１０－６、ＮＰ＿００１０１０９３４．１）：
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【0121】
配列番号７．ＨＧＦバリアント：
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【0122】
配列番号８．ＨＧＦバリアント：
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＥＧＱＲＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫ
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【0123】
配列番号９．ＨＧＦバリアント：
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【0124】
配列番号１０．ＨＧＦバリアント：
ＭＷＶＴＫＬＬＰＡＬＬＬＱＨＶＬＬＨＬＬＬＬＰＩＡＩＰＹＡＫＧＱＧＫＲＲＮＴＩＨＥＦＫＫＳＡＫＴＴＬＩＫＩＤＰＡＬＫＩＫ
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【0125】
配列番号１１．ＨＧＦバリアント：
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【0126】
配列番号１２．ＨＧＦバリアント：
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【0127】
配列番号１３．ＨＧＦバリアント：
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【0128】
配列番号１４．ＨＧＦバリアント：
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【0129】
配列番号１５．ＨＧＦバリアント：
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配列番号１６．ＨＧＦバリアント：
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【0131】
配列番号１７．ＨＧＦバリアント：
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【0132】
配列番号１８．ＨＧＦバリアント：
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配列番号１９．ＨＧＦバリアント：
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配列番号２０．ＨＧＦバリアント：
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配列番号２１．ＨＧＦバリアント：
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【0136】
配列番号２２．ＨＧＦバリアント：
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【0137】
配列番号２３．ＨＧＦバリアント：
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【0138】
配列番号２４．ＨＧＦバリアント：
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【0139】
配列番号２５．ＨＧＦバリアント：
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配列番号２６．ＨＧＦバリアント：
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【0141】
配列番号２７．ＨＧＦバリアント：
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【0142】
配列番号２８．ＦＧＦ１野生型：
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【0143】
配列番号２９．ＦＧＦ１バリアント：
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【0144】
配列番号３０．ＦＧＦ１バリアント：
ＦＮＬＰＰＧＮＹＫＫＰＫＬＬＹＣＳＮＧＧＨＦＬＲＩＬＰＤＧＴＶＤＧＴＲＤＲＳＤＰＨＩＱＬＱＬＩＡＥＳＶＧＥＶＹＩＫＳＴＥ
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【0145】
配列番号３１．ＦＧＦ１バリアント：
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【0146】
配列番号３２．ＦＧＦ１バリアント：
ＦＮＬＰＰＧＮＹＫＫＰＫＬＬＹＣＳＮＧＧＨＦＬＲＩＬＰＤＧＴＶＤＧＴＲＤＲＳＤＱＨＩＱＬＱＬＳＡＥＳＶＧＥＶＹＩＫＳＴＥ
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ＴＧＱＹＬＡＭＤＴＤＧＬＬＹＧＳＱＴＰＮＥＥＣＬＦＬＥＲＬＥＥＮＨＹＮＴＹＩＳＫＫＨＡＥＫＮＷＦＶＧＬＫＫＮＧＳＣＫＲＧ
ＰＲＴＨＹＧＱＫＡＩＲＦＬＰＬＰＶＳＳＤ
【0147】
配列番号３３．ＦＧＦ１バリアント：
ＦＮＬＰＰＧＮＹＫＫＰＫＬＬＹＣＳＮＧＧＨＦＬＲＩＬＰＤＧＴＶＤＧＴＲＤＲＳＤＱＨＩＱＬＱＬＳＡＥＳＶＧＥＶＹＩＫＳＴＥ
ＴＧＱＹＬＡＭＤＴＤＧＬＬＹＧＳＱＴＰＮＥＥＣＬＦＬＥＲＬＥＥＮＨＹＮＴＹＩＳＫＫＨＡＥＫＮＷＦＶＧＬＫＫＮＧＳＣＫＲＧ
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【0148】
配列番号３４ 配列番号１のシグナルペプチド
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【0149】
配列番号３５ 配列番号１の非切断アルファ及びベータ鎖ペプチド
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【0150】
配列番号３６ 配列番号１のアルファ鎖ペプチド
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【0151】
配列番号３７ 配列番号１のベータ鎖ペプチド
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【0152】
実施例２：製剤
実験設計（ＤｏＥ）研究を実施して、溶液製剤中のＨＧＦの凝集を防止し、最高の物理化学的安定性を維持することができる最適なｐＨ、緩衝液及び安定剤を特定した。ＨＧＦタンパク質（配列番号１からの活性化ｄＨＧＦ）を、１０ｍＭのクエン酸塩、１Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５％ ＰＳ８０、ｐＨ６．０中、３４．６７ｍｇ／ｍＬで製剤化し、アミコン－１５濃縮器ユニット（１０ｋＤａのＭＷＣＯ）を使用して、１ｍｇ／ｍＬの濃度まで表３に列挙される製剤に緩衝液交換した。３４０μＬの体積の３４．６７ｍｇ／ｍＬの溶液を（適切な緩衝液を用いて）予め洗い流した濃縮器に加え、（界面活性剤を含まない）適切な製剤緩衝液中で１５ｍＬに希釈した。試料を、約５ｍＬの体積が達成されるまで３２００ｒｃｆで遠心分離し、次いで、適切な製剤緩衝液で約１５ｍＬの総体積まで再度希釈した。この緩衝液交換プロセスを約３６１０倍の総希釈で５サイクル繰り返した。最終遠心分離サイクルで試料量を約７ｍＬまで減らした。最悪の場合の回収率を約６０％と仮定すると、各試料の最終タンパク質濃度は約１ｍｇ／ｍＬであり、ＰＳ８０の推定残留濃度は約０．００４％であった。
実験設計（ＤｏＥ）研究を実施して、溶液製剤中のＨＧＦの凝集を防止し、最高の物理化学的安定性を維持することができる最適なｐＨ、緩衝液及び安定剤を特定した。ＨＧＦタンパク質（配列番号１からの活性化ｄＨＧＦ）を、１０ｍＭのクエン酸塩、１Ｍ ＮａＣｌ、０．０７５％ ＰＳ８０、ｐＨ６．０中、３４．６７ｍｇ／ｍＬで製剤化し、アミコン－１５濃縮器ユニット（１０ｋＤａのＭＷＣＯ）を使用して、１ｍｇ／ｍＬの濃度まで表３に列挙される製剤に緩衝液交換した。３４０μＬの体積の３４．６７ｍｇ／ｍＬの溶液を（適切な緩衝液を用いて）予め洗い流した濃縮器に加え、（界面活性剤を含まない）適切な製剤緩衝液中で１５ｍＬに希釈した。試料を、約５ｍＬの体積が達成されるまで３２００ｒｃｆで遠心分離し、次いで、適切な製剤緩衝液で約１５ｍＬの総体積まで再度希釈した。この緩衝液交換プロセスを約３６１０倍の総希釈で５サイクル繰り返した。最終遠心分離サイクルで試料量を約７ｍＬまで減らした。最悪の場合の回収率を約６０％と仮定すると、各試料の最終タンパク質濃度は約１ｍｇ／ｍＬであり、ＰＳ８０の推定残留濃度は約０．００４％であった。
【0153】
消光係数１．８９０ｍＬ ｍｇ－１ｃｍ－１を使用して、緩衝液交換した試料をＵＶ可視分光法によってタンパク質含有量について分析した。試料を、必要に応じて適切な製剤緩衝液を使用して標的１ｍｇ／ｍＬに正規化し、ＨＧＦ製剤中の１０％ ＰＳ８０（ｗ／ｖ、ＵＳＰグレードＰＳ８０、カタログ番号４１１７－０４ Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒまたは同等物から調製した）を０．０５％ ＰＳ８０の標的濃度まで添加した。ＰＳ８０の残留レベルは、スパイクＰＳ８０の量と比較して最小であったため、緩衝液交換プロセスの終了時の理論的残留ＰＳ８０レベル（約０．００４％）は考慮しなかった。
【0154】
タンパク質含有量及び界面活性剤濃度の正規化後、製剤を０．２２μｍの滅菌濃縮器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｕｌｔｒａｆｒｅｅ－ＣＬ ＧＶ、Ｐ／Ｎ ＵＦＣ４０ＧＶ０Ｓ）を使用して滅菌濾過した。各製剤を、６つの滅菌されたタイプ１のホウケイ酸ガラスバイアル（２ｍＬ、１３ｍｍ、カタログ番号ＲＴＦ８４１８、Ａｆｔｏｎ）に、バイアルあたり１．０ｍＬで滅菌濾過した。残りの試料量を１ｍＬのＬＤＰＥチューブ（カタログ番号０３－４３９－６１Ｗ Ｆｉｓｈｅｒ）に移し、分析試験のための初期時点対照（Ｔ０）として使用した。中心点製剤については、Ｔ０試験バイアルから２００μＬを１ｍＬのＬＤＰＥチューブ（カタログ番号０３－４３９－６１Ｗ Ｆｉｓｈｅｒ）に移し、以下に記載するように吸着研究のために使用した。試料移送手順及び滅菌濾過手順は、無菌技術を使用して滅菌されたバイオセーフティキャビネット内で行った。バイアルは、滅菌したＦｌｕｏｒｏｔｅｃストッパーでふさぎ、ボタン付きの１３ＦＯアルミニウムキャップでキャップした。各製剤タイプの２つのバイアルを以下の保管条件、２～８℃で４週間、４０℃で４週間にて保管した。試料の外観は、目視検査によって色、透明度、及び粒子について評価した。タンパク質の熱安定性をＤＳＦ／ＳＬＳによって評価した。さらに、３４０ｎｍ波長での吸収を測定することにより、ＵＶ可視分光法を使用して濁度測定を実施した。タンパク質のコンフォメーション安定性及び凝集安定性を、ＤＬＳ及びＳＥＣ－ＨＰＬＣによって、それぞれ決定した。試料を、還元及び非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ－ＳＤＳ）及び等電点（ｉｃＩＥＦ）ゲル電気泳動を使用してさらに分析した。粒子状物質の存在を、試料中の＞２μｍ、≧５μｍ、≧１０μｍ、及び≧２５μｍの平均粒子数を報告したＨＩＡＣ粒子カウンタを使用して評価した。全てのＤｏＥ分析を無作為化された順序で行った。全てのＤｏＥ製剤のＴ０及び安定性時点からのデータを、Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘｐｅｒｔ Ｓｔａｔ Ｅａｓｅ（登録商標）ソフトウェアを使用して評価して、統計的に有意な傾向を導出した。
【0155】
非特異的ＨＧＦタンパク質のＬＤＰＥ容器表面への吸収を評価するための吸着研究
ＬＤＰＥチューブ中の試料を２～８℃で少なくとも５日間保管した。２８０ｎｍでのＵＶ吸光度（Ａ２８０）によって決定されるようなタンパク質含有量を、これらの試料について５日間の保管後に測定し、値をＴ０での対応する結果と比較して、タンパク質のＬＤＰＥ容器材料への吸着があったかどうかを決定した。ＬＤＰＥ容器に保管するときに最小限のタンパク質吸着が観察され、５日後に測定されたＨＧＦ濃度の％差は、ＨＧＦタンパク質濃度の８％低下が観察されたスクロース及びアラニンを含む製剤を除き、試験した製剤の大部分において４％未満である（表３）。この研究からの結果は、ＨＧＦ製剤のための実行可能な容器としてのＬＤＰＥチューブの使用を支持する。
ＬＤＰＥチューブ中の試料を２～８℃で少なくとも５日間保管した。２８０ｎｍでのＵＶ吸光度（Ａ２８０）によって決定されるようなタンパク質含有量を、これらの試料について５日間の保管後に測定し、値をＴ０での対応する結果と比較して、タンパク質のＬＤＰＥ容器材料への吸着があったかどうかを決定した。ＬＤＰＥ容器に保管するときに最小限のタンパク質吸着が観察され、５日後に測定されたＨＧＦ濃度の％差は、ＨＧＦタンパク質濃度の８％低下が観察されたスクロース及びアラニンを含む製剤を除き、試験した製剤の大部分において４％未満である（表３）。この研究からの結果は、ＨＧＦ製剤のための実行可能な容器としてのＬＤＰＥチューブの使用を支持する。
【表3】
【0156】
結果
一般に、４０℃または５℃で１ヶ月間保管すると、６．０～６．５のより高いｐＨ範囲で製剤においてより低い濁度が観察された（表４）。２００ｍＭ トレハロースを含む製剤は、５．０～６．５のｐＨ範囲にわたって低い濁度（０．０１未満）を示し、ｐＨ６．０で２００ｍＭ トレハロースを含む製剤は、４０℃で１ヶ月間保管すると最低の濁度を示した。
一般に、４０℃または５℃で１ヶ月間保管すると、６．０～６．５のより高いｐＨ範囲で製剤においてより低い濁度が観察された（表４）。２００ｍＭ トレハロースを含む製剤は、５．０～６．５のｐＨ範囲にわたって低い濁度（０．０１未満）を示し、ｐＨ６．０で２００ｍＭ トレハロースを含む製剤は、４０℃で１ヶ月間保管すると最低の濁度を示した。
【表4】
【0157】
ＨＩＡＣを使用して検出されたように、５℃または４０℃で１ヶ月間保管する際の粒子状物質の存在を、いくつかの製剤で観察した（表５）。ｐＨ５．０で２００ｍＭ ソルビトール、２００ｍＭ プロリンまたは２００ｍＭ トレハロース、またはｐＨ６．０で２００ｍＭ トレハロースまたは０．０８％ グリシンを含む製剤は、最も低い粒子計数を示した。しかしながら、表４に示される濁度データを含む他の分析データは、ｐＨ６．０でのＨＧＦタンパク質の全体的な安定性の向上を指摘し、２００ｍＭ トレハロース及び０．０８％ グリシン製剤のみが保管時に低い粒子計数を示した。
【表5】
【0158】
還元キャピラリーゲル電気泳動（Ｒ－ＣＥ－ＳＤＳ）を使用して、異なる製剤におけるＨＧＦタンパク質の化学的安定性をさらに評価した。ＨＧＦは、ジスルフィド結合を介して連結されるα及びβ鎖を含むヘテロ二量体である。還元条件下では、２つのピークが電気泳動図に存在し（表６の％メインピーク１及び％メインピーク２）、「％その他」で標識されたカラムは、ＨＧＦタンパク質の潜在的な分解産物を表す。表６に示すように、ｐＨ６．０のＨＧＦ製剤は、一般に、４０℃及び５℃の両方で長期保管中により良好な化学的安定性を示し、ｐＨ６．０で２００ｍＭ トレハロースまたは２００ｍＭ プロリンを含む製剤で最も高い％の総メインピークが観察された。粒子計数及び濁度に関して良好な安定性を示した０．０８％グリシンを含むＨＧＦ製剤は、Ｒ－ＣＥ－ＳＤＳによって明らかにされたように、貧弱な化学的安定性を有することが判明した。
【表6】
【0159】
実施例３：相対効力を決定するためのバイオアッセイ
実施例２に記載の製剤開発実験で同定されたように最良の全体的な属性を示した製剤を、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）の存在下で、Ｍｖ．１．Ｌｕ細胞（アメリカミンク肺細胞株）を用いた細胞増殖促進活性効力アッセイを使用して相対効力についてさらに評価した。ＴＧＦ－βは、Ｍｖ．１．Ｌｕ細胞における細胞増殖を阻害し、本明細書に記載のＨＧＦ製剤は、この増殖阻害を逆転させることができる。Ｍｖ．１．Ｌｕ細胞を解凍し、細胞ストックの生存能をトリパンブルー染色によって評価した。生存細胞密度の決定後、初回培養のために適切な数の細胞をフラスコに移した。細胞を連続的に増殖させ、試料分析のためにプレートする前に組織培養フラスコ中で拡大させた。
実施例２に記載の製剤開発実験で同定されたように最良の全体的な属性を示した製剤を、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）の存在下で、Ｍｖ．１．Ｌｕ細胞（アメリカミンク肺細胞株）を用いた細胞増殖促進活性効力アッセイを使用して相対効力についてさらに評価した。ＴＧＦ－βは、Ｍｖ．１．Ｌｕ細胞における細胞増殖を阻害し、本明細書に記載のＨＧＦ製剤は、この増殖阻害を逆転させることができる。Ｍｖ．１．Ｌｕ細胞を解凍し、細胞ストックの生存能をトリパンブルー染色によって評価した。生存細胞密度の決定後、初回培養のために適切な数の細胞をフラスコに移した。細胞を連続的に増殖させ、試料分析のためにプレートする前に組織培養フラスコ中で拡大させた。
【0160】
各参照標準及び各試験試料をアッセイ培地で希釈し、８点希釈曲線を生成した。各試験試料の効力は、試験試料によって生成された希釈曲線の参照標準との比較によって決定した。
組織培養フラスコから培養した細胞をトリプシン処理し、アッセイ培地（２５０ｐｇ／ｍＬのＴＧＦ－βを含有）中で約０．１×１０６細胞／ｍＬに再懸濁した。５０マイクロリットルの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルにプレートした。培養細胞を含有する９６ウェルプレートを３７℃／５％ ＣＯ２で１～４時間インキュベートした後、参照標準及び試験試料を添加した。試験試料及び参照標準を３連で別個のウェルに添加し、細胞を７２時間インキュベートした。
組織培養フラスコから培養した細胞をトリプシン処理し、アッセイ培地（２５０ｐｇ／ｍＬのＴＧＦ－βを含有）中で約０．１×１０６細胞／ｍＬに再懸濁した。５０マイクロリットルの細胞懸濁液を９６ウェルプレートの各ウェルにプレートした。培養細胞を含有する９６ウェルプレートを３７℃／５％ ＣＯ２で１～４時間インキュベートした後、参照標準及び試験試料を添加した。試験試料及び参照標準を３連で別個のウェルに添加し、細胞を７２時間インキュベートした。
【0161】
インキュベーション後、ＭＴＳ増殖試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，カタログ番号Ｇ３５８２）または同等物を各ウェルに添加し、９６ウェルプレートを３７℃／５％ ＣＯ２で４時間インキュベートした。このインキュベーション後、プレートをＵＶ－Ｖｉｓプレートリーダーに配置し、吸光度を４９０ｎｍで測定した。各参照標準及び試験試料を３連で分析し、効力を平行線評価によって決定した。各試料を、４パラメータの制約適合によって参照標準と比較して、相対効力を決定した。
【0162】
試験試料（ＴＳ）合格基準：
１．ＴＳ独立４パラメータ曲線適合は、平均応答対ｌｏｇタンパク質濃度をプロットするときに用量依存関係を示さなければならない。
２．ＴＳ独立４パラメータ適合のＲ２値は≧０．９７でなければならない。
３．ＴＳの全ての％ＣＶ値は≦２０％でなければならない。
４．システム適合性試料の効力は、グローバルフィットモデルを使用して決定され、各ＴＳのＦ確率は≧０．０１でなければならない
５．上記の判断基準の全てに合格しない試験試料は、同じ条件下で再試験される。
６．上記の判断基準のいずれにも合格しないアッセイプレートは、同じ条件で１回再テストしなければならない。
７．標準試料（ＳＳ）の％ＲＰは、５０％～２００％の範囲内でなければならない。
１．ＴＳ独立４パラメータ曲線適合は、平均応答対ｌｏｇタンパク質濃度をプロットするときに用量依存関係を示さなければならない。
２．ＴＳ独立４パラメータ適合のＲ２値は≧０．９７でなければならない。
３．ＴＳの全ての％ＣＶ値は≦２０％でなければならない。
４．システム適合性試料の効力は、グローバルフィットモデルを使用して決定され、各ＴＳのＦ確率は≧０．０１でなければならない
５．上記の判断基準の全てに合格しない試験試料は、同じ条件下で再試験される。
６．上記の判断基準のいずれにも合格しないアッセイプレートは、同じ条件で１回再テストしなければならない。
７．標準試料（ＳＳ）の％ＲＰは、５０％～２００％の範囲内でなければならない。
【0163】
選択された製剤のインビトロ相対効力バイオアッセイからの結果が、表７に要約される。ｐＨ６．０で２００ｍＭ トレハロースを含むＨＧＦ溶液製剤は、ＨＧＦタンパク質に対しても優れた効力を維持すること（９９％）が確認された。
【表7】
【0164】
実施例４：マウス角膜機械的損傷モデルにおける局所製剤の有効性
ＮＫの治療における使用のためのＨＧＦの局所製剤の有効性を、マウス角膜損傷モデルで試験した。有効性試験を、雄のＣ５７ＢＬ／６マウスを使用して２相で実施した。第Ｉ相では、ピペットを介して３．５μＬの体積の試験試料を使用して、７５匹の動物のそれぞれにつき１つの眼に１日４回（ＱＩＤ）、０日目（損傷）の用量の間に２時間、及び研究の残りの用量（８日目）の間に３時間投与した。損傷に応答しなかった（すなわち、３日目に角膜混濁／不透明感がなかった）動物（約１０～２０％）を研究から除外した。第１相研究の実験設計を以下の表８に要約する。
ＮＫの治療における使用のためのＨＧＦの局所製剤の有効性を、マウス角膜損傷モデルで試験した。有効性試験を、雄のＣ５７ＢＬ／６マウスを使用して２相で実施した。第Ｉ相では、ピペットを介して３．５μＬの体積の試験試料を使用して、７５匹の動物のそれぞれにつき１つの眼に１日４回（ＱＩＤ）、０日目（損傷）の用量の間に２時間、及び研究の残りの用量（８日目）の間に３時間投与した。損傷に応答しなかった（すなわち、３日目に角膜混濁／不透明感がなかった）動物（約１０～２０％）を研究から除外した。第１相研究の実験設計を以下の表８に要約する。
【表8】
【表9】
【0165】
有効性研究の第２相では、８５匹の動物を、１日４回（ＱＩＤ）、１１日目（損傷）の用量の間に２時間、及び試験の残りの用量（２０日目）の間に３時間、被験試料の３．５μＬ体積で、損傷した角膜に投与した。最初の処置適用時（１１日目）に、角膜の不透明領域（１ｍｍ穿孔器でマークされている）にＡｌｇｅｒｂｒｕｓｈの先端を穏やかに適用することによって、角膜上皮を除去した。角膜上皮を１６日目で２回目に除去した。第２相の研究設計を以下の表１０に要約する。
【表10】
【0166】
角膜損傷（第１相及び第２相）：
モデル導入の前に、試験対象に、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。動物にはまた、トロピカミド（１．０％）及びフェニレフリン（２．５％）のカクテルを局所的に投与して、眼を拡張及び突出化した。次いで、動物をケタミン／キシラジンカクテル、及び１滴の０．５％プロパラカインＨＣｌで外科的処置のために鎮静化した。動物の眼を突出化させるために鉗子（例えば、Ｄｕｍｏｎｔ＃４）を使用し、軽度の圧力を用いて、２ｍｍの穿孔器を中心角膜の上に配置した。穿孔器を、穏やかな圧力で丸々３時間回転させて、欠陥領域を画定した。０．５ｍｍバリを有するＡｌｇｅｒｂｒｕｓｈ ＩＩ（Ａｌｇｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ．，Ｌａｇｏ Ｖｉｓｔａ，ＴＸ）を使用して、穿孔器領域内の角膜上皮及び前部実質を除去した。損傷した実質は、実質破片の出現によって特徴付けられた。平衡塩生理食塩水（ＢＳＳ）で洗浄することによって、実質破片を除去した。動物を、光学コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）によって走査し、損傷した眼に第１の用量の処置を適用する前にフルオレセイン染色した。局所抗生物質（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）を１５分後に適用し、動物を手術から正常に回復させた。動物は、術後約６～８時間皮下投与で０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンの２回目の用量を受け、術後２日間、６～８時間毎に１日２回投与した。
モデル導入の前に、試験対象に、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。動物にはまた、トロピカミド（１．０％）及びフェニレフリン（２．５％）のカクテルを局所的に投与して、眼を拡張及び突出化した。次いで、動物をケタミン／キシラジンカクテル、及び１滴の０．５％プロパラカインＨＣｌで外科的処置のために鎮静化した。動物の眼を突出化させるために鉗子（例えば、Ｄｕｍｏｎｔ＃４）を使用し、軽度の圧力を用いて、２ｍｍの穿孔器を中心角膜の上に配置した。穿孔器を、穏やかな圧力で丸々３時間回転させて、欠陥領域を画定した。０．５ｍｍバリを有するＡｌｇｅｒｂｒｕｓｈ ＩＩ（Ａｌｇｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ．，Ｌａｇｏ Ｖｉｓｔａ，ＴＸ）を使用して、穿孔器領域内の角膜上皮及び前部実質を除去した。損傷した実質は、実質破片の出現によって特徴付けられた。平衡塩生理食塩水（ＢＳＳ）で洗浄することによって、実質破片を除去した。動物を、光学コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）によって走査し、損傷した眼に第１の用量の処置を適用する前にフルオレセイン染色した。局所抗生物質（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）を１５分後に適用し、動物を手術から正常に回復させた。動物は、術後約６～８時間皮下投与で０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンの２回目の用量を受け、術後２日間、６～８時間毎に１日２回投与した。
【0167】
角膜損傷（上皮除去、第２相のみ）：
第２相の開始前に、第１相について上述したように、初期損傷後の上皮擦過の最適な回数を決定するためにパイロット研究を行った。所望のモデル導入には、２回の擦過で十分であった。第２相の開始時に、動物に、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。動物にはまた、トロピカミド（１．０％）及びフェニルフェリン（２．５％）のカクテルを局所的に投与して、眼を拡張及び突出化した。次いで、動物をケタミン／キシラジンカクテルで外科的処置のために鎮静化し、１滴の０．５％プロパラカインＨＣｌを適用した。０日目に、動物は、第１相のための上記のような外科的処置を受けた。最初の損傷及び瘢痕形成の後の１１日目及び１６日目に、鉗子（例えば、Ｄｕｍｏｎｔ＃４）を使用して動物の眼を突出化させ、軽度の圧力を用いて、１ｍｍの穿孔器を角膜の瘢痕領域の上に配置した。穿孔器を、穏やかな圧力で丸々３時間回転させて、欠陥領域を画定した。０．５ｍｍバリを有するＡｌｇｅｒｂｒｕｓｈ ＩＩ（Ａｌｇｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ．，Ｌａｇｏ Ｖｉｓｔａ，ＴＸ）を使用して、穿孔器領域内の角膜上皮を除去した。次いで、眼表面をＢＳＳで洗浄した。動物を、損傷した眼に第１の用量の処置を適用する前に、光学コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）、フルオレセイン染色、及び写真撮影によって走査した。１５分後に局所抗生物質（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）を塗布し、動物を手術から正常に回復させた。動物は、術後約６～８時間皮下投与で０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを２用量投与し、術後２日間、６～８時間毎に１日２回（ＢＩＤ）投与した。
第２相の開始前に、第１相について上述したように、初期損傷後の上皮擦過の最適な回数を決定するためにパイロット研究を行った。所望のモデル導入には、２回の擦過で十分であった。第２相の開始時に、動物に、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。動物にはまた、トロピカミド（１．０％）及びフェニルフェリン（２．５％）のカクテルを局所的に投与して、眼を拡張及び突出化した。次いで、動物をケタミン／キシラジンカクテルで外科的処置のために鎮静化し、１滴の０．５％プロパラカインＨＣｌを適用した。０日目に、動物は、第１相のための上記のような外科的処置を受けた。最初の損傷及び瘢痕形成の後の１１日目及び１６日目に、鉗子（例えば、Ｄｕｍｏｎｔ＃４）を使用して動物の眼を突出化させ、軽度の圧力を用いて、１ｍｍの穿孔器を角膜の瘢痕領域の上に配置した。穿孔器を、穏やかな圧力で丸々３時間回転させて、欠陥領域を画定した。０．５ｍｍバリを有するＡｌｇｅｒｂｒｕｓｈ ＩＩ（Ａｌｇｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ．，Ｌａｇｏ Ｖｉｓｔａ，ＴＸ）を使用して、穿孔器領域内の角膜上皮を除去した。次いで、眼表面をＢＳＳで洗浄した。動物を、損傷した眼に第１の用量の処置を適用する前に、光学コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）、フルオレセイン染色、及び写真撮影によって走査した。１５分後に局所抗生物質（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）を塗布し、動物を手術から正常に回復させた。動物は、術後約６～８時間皮下投与で０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを２用量投与し、術後２日間、６～８時間毎に１日２回（ＢＩＤ）投与した。
【0168】
モニタリングされたパラメータ：
（ｉ）検査及び体重：
死亡率及び罹患率は、ケージ側の観察とともに１日２回観察し、両眼に特に注意を払った。投与及びイメージングのための本研究の第１相中のかなりの量の取り扱いのために、ｎ＝１８匹の動物が死亡したか（群１：４匹のマウス、群２：３匹のマウス、群３：３匹のマウス、群４：３匹のマウス、群５：５匹のマウス）、または研究終了前に安楽死させられた。第２相のパイロット期間中、死亡したマウスはいなかった。第２相では、イメージングセッションの数が減少し、ｎ＝３匹のマウスのみが死亡した（グループ１：１マウス、グループ２：１マウス、グループ４：１マウス）。モデル導入前及び剖検時に体重を測定した。
（ｉ）検査及び体重：
死亡率及び罹患率は、ケージ側の観察とともに１日２回観察し、両眼に特に注意を払った。投与及びイメージングのための本研究の第１相中のかなりの量の取り扱いのために、ｎ＝１８匹の動物が死亡したか（群１：４匹のマウス、群２：３匹のマウス、群３：３匹のマウス、群４：３匹のマウス、群５：５匹のマウス）、または研究終了前に安楽死させられた。第２相のパイロット期間中、死亡したマウスはいなかった。第２相では、イメージングセッションの数が減少し、ｎ＝３匹のマウスのみが死亡した（グループ１：１マウス、グループ２：１マウス、グループ４：１マウス）。モデル導入前及び剖検時に体重を測定した。
【0169】
（ｉｉ）眼の検査及び明視野画像：
ベースライン眼表面形態は、登録前に、スリットランプ生体顕微鏡下で獣医眼科医によって評価された。研究設計に示されているように、ベースラインにおいて、及び日々の画像Ｊソフトウェアを使用して角膜不透明度の分析のために明視野画像を取得した。
ベースライン眼表面形態は、登録前に、スリットランプ生体顕微鏡下で獣医眼科医によって評価された。研究設計に示されているように、ベースラインにおいて、及び日々の画像Ｊソフトウェアを使用して角膜不透明度の分析のために明視野画像を取得した。
【0170】
（ｉｉｉ）フルオレセイン染色：
実験設計表に示される時点で、動物はフルオレセイン眼表面染色を受けた。約１．５μｌの２．５％フルオレセインナトリウムを角膜表面に３０秒間塗布し、続いて１ｍｌのシリンジを使用して１×ＰＢＳですすいだ。角膜染色は、三脚に取り付けられたニコンデジタルＳＬＲカメラを使用して、コバルトブルー光の下で撮影された。カメラレンズを手動モードに配置し、レンズを１フィート離して設置した。動物の眼を表示窓の中央にフォーカスさせ、カメラレンズと動物の眼との間の一貫した距離を維持するために画像を収集した。各時点における各眼のフルオレセイン染色の面積（ピクセル単位）を、Ｉｍａｇｅ Ｊ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＩＨ）を使用して決定した。
実験設計表に示される時点で、動物はフルオレセイン眼表面染色を受けた。約１．５μｌの２．５％フルオレセインナトリウムを角膜表面に３０秒間塗布し、続いて１ｍｌのシリンジを使用して１×ＰＢＳですすいだ。角膜染色は、三脚に取り付けられたニコンデジタルＳＬＲカメラを使用して、コバルトブルー光の下で撮影された。カメラレンズを手動モードに配置し、レンズを１フィート離して設置した。動物の眼を表示窓の中央にフォーカスさせ、カメラレンズと動物の眼との間の一貫した距離を維持するために画像を収集した。各時点における各眼のフルオレセイン染色の面積（ピクセル単位）を、Ｉｍａｇｅ Ｊ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＩＨ）を使用して決定した。
【0171】
（ｉｖ）光学コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）：
実験設計表によって示される日に、全ての動物は、眼の前部のＯＣＴイメージング手順を受けた。動物を麻酔し、角膜をＯＣＴ検査の前にＰＢＳで洗浄した。
実験設計表によって示される日に、全ての動物は、眼の前部のＯＣＴイメージング手順を受けた。動物を麻酔し、角膜をＯＣＴ検査の前にＰＢＳで洗浄した。
【0172】
（ｖ）組織学（第１相のみ）：
３日目に、最終的な生存中の測定に続いて、動物のサブセットを、二酸化炭素窒息、続いて胸部切開によって人道的に安楽死させた。動物の外科的眼を１０％中性緩衝ホルマリンに採取した。翌日、眼を７０％エタノール中に配置し、パラフィンワックス中に包埋し、矢状に切断した。視神経を含む連続切片を含む３つのスライドを、形態分析のためにヘモトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。さらに、Ｈ＆Ｅ後に残ったブロックをさらに切片化し、ＴＵＪ－１染色（ベータＩＩＩチューブリンとしても知られる）のための免疫組織化学を行い、角膜神経支配を評価した。ＤＡＰＩ（青色）を対比染色として使用して、全ての核をハイライトした。スライドを獣医眼科医によって分析した。
３日目に、最終的な生存中の測定に続いて、動物のサブセットを、二酸化炭素窒息、続いて胸部切開によって人道的に安楽死させた。動物の外科的眼を１０％中性緩衝ホルマリンに採取した。翌日、眼を７０％エタノール中に配置し、パラフィンワックス中に包埋し、矢状に切断した。視神経を含む連続切片を含む３つのスライドを、形態分析のためにヘモトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。さらに、Ｈ＆Ｅ後に残ったブロックをさらに切片化し、ＴＵＪ－１染色（ベータＩＩＩチューブリンとしても知られる）のための免疫組織化学を行い、角膜神経支配を評価した。ＤＡＰＩ（青色）を対比染色として使用して、全ての核をハイライトした。スライドを獣医眼科医によって分析した。
【0173】
（ｖｉｉ）結果：
１）加速治癒（フルオレセイン染色）
０．１％ ｄＨＧＦで処置した動物からの術後３日目の組織試料において、ＰＢＳビヒクルで処置した動物と比較して、より多くのＴＵＪ０１染色が観察され（図１）、これは、０．１％ ｄＨＧＦで処置した動物における角膜神経支配を示す。上皮治癒時間は、ＰＢＳ対照及び０．１％ ｍＮＧＦと比較して、０．１％ ｄＨＧＦ（ｐ＝０．０４１）及び０．２％ ｄＨＧＦでより速かった（図２）。５０％の眼が完全に治癒するまでの時間は、０．１％ ｄＨＧＦ群では３日間であり、これはＰＢＳ群（６日、ｐ＝０．４１）の半分の時間であった。０．２％ ｄＨＧＦ群及び０．１％ ｍＨＧＦ群の両方が、ＰＢＳ群の３分の２の速度で治癒した（４日間対６日間）。さらに、０．１％ ｍＨＧＦは、ｍＮＧＦ（ｐ＝０．０５３）及びＰＢＳ（ｐ＝０．００１８）よりも有意に速かった。０．１％ ｄＨＧＦを受容した動物は、より早く閉鎖を開始し、＞７５％が処置後４日目までに閉鎖に達し、０．１％ ｍＨＧＦについても同様の効果が見られた（図２）。これと比較して、ＰＢＳ処置動物の５０％のみが完全な創傷閉鎖に到達し、６日目まで到達しなかった。
１）加速治癒（フルオレセイン染色）
０．１％ ｄＨＧＦで処置した動物からの術後３日目の組織試料において、ＰＢＳビヒクルで処置した動物と比較して、より多くのＴＵＪ０１染色が観察され（図１）、これは、０．１％ ｄＨＧＦで処置した動物における角膜神経支配を示す。上皮治癒時間は、ＰＢＳ対照及び０．１％ ｍＮＧＦと比較して、０．１％ ｄＨＧＦ（ｐ＝０．０４１）及び０．２％ ｄＨＧＦでより速かった（図２）。５０％の眼が完全に治癒するまでの時間は、０．１％ ｄＨＧＦ群では３日間であり、これはＰＢＳ群（６日、ｐ＝０．４１）の半分の時間であった。０．２％ ｄＨＧＦ群及び０．１％ ｍＨＧＦ群の両方が、ＰＢＳ群の３分の２の速度で治癒した（４日間対６日間）。さらに、０．１％ ｍＨＧＦは、ｍＮＧＦ（ｐ＝０．０５３）及びＰＢＳ（ｐ＝０．００１８）よりも有意に速かった。０．１％ ｄＨＧＦを受容した動物は、より早く閉鎖を開始し、＞７５％が処置後４日目までに閉鎖に達し、０．１％ ｍＨＧＦについても同様の効果が見られた（図２）。これと比較して、ＰＢＳ処置動物の５０％のみが完全な創傷閉鎖に到達し、６日目まで到達しなかった。
【0174】
２）瘢痕予防（明視野画像分析）
手術、及びＰＢＳ（対照）、０．１％または０．２％ ｄＨＧＦ、０．１％ ｍＮＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦによる日々の処置後、ＰＢＳ対照を除く全ての被験試料は、７日目までに平均瘢痕サイズを効果的に減少させた（図３）。瘢痕形成に対する被験試料の効果の定量化は、０．１％ ｍＨＧＦが最大の効果を有し、０．１％ ｄＨＧＦが続いたことを明らかにした。ｄＨＧＦ群では、ＰＢＳ対照よりも瘢痕が有意に小さかったが（それぞれ、０．１％群ではｐ＝０．０４３９、０．２％群ではｐ＝０．０１２６）、互いに有意差はなかった（ｐ＝０．７４０６）。０．１％ ｍＨＧＦ群の瘢痕の平均面積は、対照群（ｐ＝０．０００１）及び０．１％ ｍＮＧＦ（ｐ＝０．００２９）よりも７日目で有意に小さかった。対照群及び０．１％ ｍＮＧＦ群における瘢痕の平均サイズは、互いに有意差はなかった（ｐ＝０．２４８１）。
手術、及びＰＢＳ（対照）、０．１％または０．２％ ｄＨＧＦ、０．１％ ｍＮＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦによる日々の処置後、ＰＢＳ対照を除く全ての被験試料は、７日目までに平均瘢痕サイズを効果的に減少させた（図３）。瘢痕形成に対する被験試料の効果の定量化は、０．１％ ｍＨＧＦが最大の効果を有し、０．１％ ｄＨＧＦが続いたことを明らかにした。ｄＨＧＦ群では、ＰＢＳ対照よりも瘢痕が有意に小さかったが（それぞれ、０．１％群ではｐ＝０．０４３９、０．２％群ではｐ＝０．０１２６）、互いに有意差はなかった（ｐ＝０．７４０６）。０．１％ ｍＨＧＦ群の瘢痕の平均面積は、対照群（ｐ＝０．０００１）及び０．１％ ｍＮＧＦ（ｐ＝０．００２９）よりも７日目で有意に小さかった。対照群及び０．１％ ｍＮＧＦ群における瘢痕の平均サイズは、互いに有意差はなかった（ｐ＝０．２４８１）。
【0175】
ＨＧＦによって駆動される効果サイズは、閉鎖までの時間分析に反映される（セクションｖｉｉ．１を参照されたい）。０．１％ ｍＨＧＦによる瘢痕形成の減少は、対照群で観察されたものより約９倍大きかったが、０．１％及び０．２％ ｄＨＧＦによるパーセント減少は、対照より５倍以上大きかった。０．１％ ｍＮＧＦによるパーセント減少は、ｄＨＧＦ群の約半分であり、ＰＢＳ対照群よりも数値的には瘢痕サイズの低下が大きかったが、統計的に有意ではなかった。
【0176】
３）傷跡反転（明視野画像分析）
角膜上皮及び前部実質を除去するための手術、ならびに上皮のみを除去するための２回の反復擦過の後、ＰＢＳ処置動物は、０．１％ ｄＨＧＦ、０．２％ ｄＨＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦを受けた動物は、角膜瘢痕サイズが減少したが、瘢痕サイズにほとんど変化がなかった。ＰＢＳ対照群では、平均瘢痕サイズは、ベースライン（８日目）から２１日目まで２０％を超えて増加し続けた。対照的に、３つのＨＧＦ群の瘢痕のサイズは、ベースラインから２１日目までに３５％以上減少し、ＰＢＳ群と比較して平均サイズの全体的な差は５５％であった。図４に示されるように、ＰＢＳ対照と比較して、０．１％ ｄＨＧＦと０．２％ ｄＨＧＦとの間の差異は、統計的に有意であった（それぞれ、ｐ＝０．００５４及びｐ＝０．００１５）。０．１％ ｍＮＧＦ群の平均瘢痕サイズは、８日目から２１日目まで減少したが、ＰＢＳ対照と有意差はなかった（ｐ＝０．０８５９）。０．１％または０．２％ ｄＨＧＦのいずれかを使用した処置からの結果は、有意差はなかった（ｐ＝０．７５５８）。
角膜上皮及び前部実質を除去するための手術、ならびに上皮のみを除去するための２回の反復擦過の後、ＰＢＳ処置動物は、０．１％ ｄＨＧＦ、０．２％ ｄＨＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦを受けた動物は、角膜瘢痕サイズが減少したが、瘢痕サイズにほとんど変化がなかった。ＰＢＳ対照群では、平均瘢痕サイズは、ベースライン（８日目）から２１日目まで２０％を超えて増加し続けた。対照的に、３つのＨＧＦ群の瘢痕のサイズは、ベースラインから２１日目までに３５％以上減少し、ＰＢＳ群と比較して平均サイズの全体的な差は５５％であった。図４に示されるように、ＰＢＳ対照と比較して、０．１％ ｄＨＧＦと０．２％ ｄＨＧＦとの間の差異は、統計的に有意であった（それぞれ、ｐ＝０．００５４及びｐ＝０．００１５）。０．１％ ｍＮＧＦ群の平均瘢痕サイズは、８日目から２１日目まで減少したが、ＰＢＳ対照と有意差はなかった（ｐ＝０．０８５９）。０．１％または０．２％ ｄＨＧＦのいずれかを使用した処置からの結果は、有意差はなかった（ｐ＝０．７５５８）。
【0177】
この研究の結果に基づいて、単一の上皮及び前部実質除去（第１相）または複数の上皮擦過（第２相）に続く０．１％ ｄＨＧＦ処置は、最初の外科的手順の日付（第１相）または１１日目（第２相）から開始して１日に４回投与すると、より早い創傷閉鎖（第１相）及び瘢痕サイズのより大きな減少（第２相）をもたらした。
【0178】
第１相では、全ての動物は、２ｍｍの領域内で角膜上皮及び前部実質を除去するために単一の外科的処置を受けた。全ての動物は、処置後に１日４回投与を受けた。ＰＢＳ処置した動物（ビヒクル対照）の約５０％は、術後７日目までに治癒したが、０．１％ ｄＨＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦを受けた動物の＞７５％は、７日目までに治癒した（図２及び図３）。さらに、より大きな割合のこれらの動物の角膜が、ＰＢＳ処置した場合と比較して、術後３日目までに完全に治癒した（それぞれ＞６０％対３０％）。免疫蛍光による３日目の角膜神経支配の分析は、０．１％ ｄＨＧＦ処置動物におけるＴＵＪ－１染色の増加を明らかにした（図１）。
【0179】
第２相では、動物は、第１相と同じ外科的手順を受けたが、その後、上皮のみを除去する２つの追加手順を受けた。この実験では、動物は、最初の上皮擦傷後に処置を受け始めた。これらの条件下で、ＨＧＦ（０．１％ ｄＨＧＦ、０．２％ ｄＨＧＦまたは０．１％ ｍＨＧＦ）を受けた動物は、ＰＢＳ処置眼と比較して瘢痕サイズの実質的な減少を示し、瘢痕サイズは、全てのＨＧＦ処置眼で＞３５％減少した（図４）。
【0180】
この研究からの結果は、角膜上皮損傷後のＨＧＦの局所投与が、単一または複数の損傷モデルにおいてより速い治癒速度及び瘢痕サイズの減少をもたらしたことを示す。
【0181】
実施例５：マウス角膜細菌性ＬＰＳ誘発角膜炎モデルにおける局所製剤の有効性
ＮＫの治療における使用のためのＨＧＦの局所製剤の有効性を、マウス角膜細菌性ＬＰＳ誘発性角膜炎モデルにおいて試験した。有効性試験を、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスで実行した。ピペットを介して３．５μＬ体積の試験物品を使用して、４０匹の動物のそれぞれにつき１つの眼に、傷傷後４～９日目の投与の間に３時間、１日４回（ＱＩＤ）投与した。損傷した眼は、実験設計に示されるように被験試料または対照を受けた（表１１）。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１：Ｂ４（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）からのリポ多糖（ＬＰＳ）のストック溶液を、製造業者のプロトコルに従って、１ｍＬの滅菌水で希釈し、アリコートし、保管した。投与の当日、希釈したＬＰＳ溶液をさらにＰＢＳで１：１（ｖ／ｖ）希釈し、約５μｇのＬＰＳ材料を２．０μＬの注射で送達した。
ＮＫの治療における使用のためのＨＧＦの局所製剤の有効性を、マウス角膜細菌性ＬＰＳ誘発性角膜炎モデルにおいて試験した。有効性試験を、雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスで実行した。ピペットを介して３．５μＬ体積の試験物品を使用して、４０匹の動物のそれぞれにつき１つの眼に、傷傷後４～９日目の投与の間に３時間、１日４回（ＱＩＤ）投与した。損傷した眼は、実験設計に示されるように被験試料または対照を受けた（表１１）。Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１：Ｂ４（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）からのリポ多糖（ＬＰＳ）のストック溶液を、製造業者のプロトコルに従って、１ｍＬの滅菌水で希釈し、アリコートし、保管した。投与の当日、希釈したＬＰＳ溶液をさらにＰＢＳで１：１（ｖ／ｖ）希釈し、約５μｇのＬＰＳ材料を２．０μＬの注射で送達した。
【表11】
【0182】
Ｅ．ｃｏｌｉ由来のＬＰＳを使用した角膜損傷Ｏ１１１：Ｂ４
モデル導入の前に、試験対象に、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。動物にはまた、トロピカミド（１．０％）及びフェニレフリン（２．５％）のカクテルを局所的に投与して、眼を拡張及び突出化した。次いで、動物をケタミン／キシラジンカクテル、及び１滴の０．５％プロパラカインＨＣｌで外科的処置のために鎮静化した。動物の眼を突出化するために鉗子（例えば、Ｄｕｍｏｎｔ＃４）を使用し、２．５μＬのシリンジに取り付けられた３４Ｇの針を使用して、約５μｇのＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１：Ｂ４）を２．０μＬの体積で注入した。ＬＰＳ注射を０日目及び４日目に行った。治療の第１の用量を、ＬＰＳの４日目の注射の後に傷ついた眼に適用した。局所抗生物質（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）を１５分後に適用し、動物を手術から正常に回復させた。動物は、術後約６～８時間皮下投与で０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンの２回目の投与を受け、術後２日間、６～８時間毎に１日２回投与した。
モデル導入の前に、試験対象に、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンを皮下投与した。動物にはまた、トロピカミド（１．０％）及びフェニレフリン（２．５％）のカクテルを局所的に投与して、眼を拡張及び突出化した。次いで、動物をケタミン／キシラジンカクテル、及び１滴の０．５％プロパラカインＨＣｌで外科的処置のために鎮静化した。動物の眼を突出化するために鉗子（例えば、Ｄｕｍｏｎｔ＃４）を使用し、２．５μＬのシリンジに取り付けられた３４Ｇの針を使用して、約５μｇのＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ Ｏ１１１：Ｂ４）を２．０μＬの体積で注入した。ＬＰＳ注射を０日目及び４日目に行った。治療の第１の用量を、ＬＰＳの４日目の注射の後に傷ついた眼に適用した。局所抗生物質（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）を１５分後に適用し、動物を手術から正常に回復させた。動物は、術後約６～８時間皮下投与で０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィンの２回目の投与を受け、術後２日間、６～８時間毎に１日２回投与した。
【0183】
モニタリングされたパラメータ
（ｉ）検査及び体重：
死亡率及び罹患率は、ケージ側の観察とともに１日２回観察した。モデル導入前及び剖検時に体重を測定した。
（ｉ）検査及び体重：
死亡率及び罹患率は、ケージ側の観察とともに１日２回観察した。モデル導入前及び剖検時に体重を測定した。
【0184】
（ｉｉ）眼の検査及び明視野画像：
登録前に、眼表面形態は、スリットランプ生体顕微鏡下で獣医眼科医によって評価された。ベースラインにおいて、及び研究設計に示されている日に、Ｉｍａｇｅ Ｊ ソフトウェアを使用して、角膜不透明度の分析のために明視野画像を取得した。
登録前に、眼表面形態は、スリットランプ生体顕微鏡下で獣医眼科医によって評価された。ベースラインにおいて、及び研究設計に示されている日に、Ｉｍａｇｅ Ｊ ソフトウェアを使用して、角膜不透明度の分析のために明視野画像を取得した。
【0185】
（ｉｉｉ）フルオレセイン染色：
実験設計表に示される時点で、動物はフルオレセイン眼表面染色を受けた。約１．５μｌの２．５％フルオレセインナトリウムを角膜表面に３０秒間塗布し、続いて１ｍｌのシリンジを使用して１×ＰＢＳですすいだ。角膜染色は、三脚に取り付けられたニコンデジタルＳＬＲカメラを使用して、コバルトブルー光の下で撮影された。カメラレンズを手動モードにし、レンズを１フィート離して設定した。動物の眼を表示窓の中央にフォーカスさせ、カメラレンズと動物の眼との間の一貫した距離を維持するように画像を収集した。各時点における各眼のフルオレセイン染色の面積（ピクセル単位）を、Ｉｍａｇｅ Ｊ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＩＨ）を使用して決定した。
実験設計表に示される時点で、動物はフルオレセイン眼表面染色を受けた。約１．５μｌの２．５％フルオレセインナトリウムを角膜表面に３０秒間塗布し、続いて１ｍｌのシリンジを使用して１×ＰＢＳですすいだ。角膜染色は、三脚に取り付けられたニコンデジタルＳＬＲカメラを使用して、コバルトブルー光の下で撮影された。カメラレンズを手動モードにし、レンズを１フィート離して設定した。動物の眼を表示窓の中央にフォーカスさせ、カメラレンズと動物の眼との間の一貫した距離を維持するように画像を収集した。各時点における各眼のフルオレセイン染色の面積（ピクセル単位）を、Ｉｍａｇｅ Ｊ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＮＩＨ）を使用して決定した。
【0186】
（ｉｖ）光学コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）：
実験設計表に示される日に、全ての動物は、眼の前部のＯＣＴイメージング手順を受けた。動物を麻酔し、角膜をＯＣＴ検査の前にＰＢＳで洗浄した。
実験設計表に示される日に、全ての動物は、眼の前部のＯＣＴイメージング手順を受けた。動物を麻酔し、角膜をＯＣＴ検査の前にＰＢＳで洗浄した。
【0187】
（ｖ）結果：
モデルの誘導、及びＰＢＳ（対照）、０．１％または０．２％ ｄＨＧＦ、または０．１％ ｍＮＧＦによる１日４回の治療後に、群２及び３（それぞれ０．１％及び０．２％ ｄＨＧＦ）は、９日目までに瘢痕サイズの最大の減少を示した。群１に正規化すると、群２及び３は、瘢痕サイズをほぼ６０％減少させたが、群４の試験試料は、瘢痕サイズを約２５％減少させた（図５）。平均瘢痕面積は、ＰＢＳ対照と比較して、０．１％ ｄＨＧＦ（ｐ＝０．０１１０）及び０．２％ ｄＨＧＦ（ｐ＝０．００２８）で有意に小さかった。瘢痕は、ＰＢＳ対照では、０．１％及び０．２％ ＨＧＦ群と比較して約５倍大きく、ＰＢＳでは、０．１％ ｍＮＧＦ群よりも約２．５倍大きかった（ｐ＝０．０４１７）。得られた２つのｄＨＧＦ群における平均瘢痕サイズは、互いに有意差はなかった（ｐ＝０．６１７６）（図５）。
モデルの誘導、及びＰＢＳ（対照）、０．１％または０．２％ ｄＨＧＦ、または０．１％ ｍＮＧＦによる１日４回の治療後に、群２及び３（それぞれ０．１％及び０．２％ ｄＨＧＦ）は、９日目までに瘢痕サイズの最大の減少を示した。群１に正規化すると、群２及び３は、瘢痕サイズをほぼ６０％減少させたが、群４の試験試料は、瘢痕サイズを約２５％減少させた（図５）。平均瘢痕面積は、ＰＢＳ対照と比較して、０．１％ ｄＨＧＦ（ｐ＝０．０１１０）及び０．２％ ｄＨＧＦ（ｐ＝０．００２８）で有意に小さかった。瘢痕は、ＰＢＳ対照では、０．１％及び０．２％ ＨＧＦ群と比較して約５倍大きく、ＰＢＳでは、０．１％ ｍＮＧＦ群よりも約２．５倍大きかった（ｐ＝０．０４１７）。得られた２つのｄＨＧＦ群における平均瘢痕サイズは、互いに有意差はなかった（ｐ＝０．６１７６）（図５）。
【0188】
要約すると、この研究からの結果は、Ｅ．ｃｏｌｉ ＬＰＳの実質投与によって誘発される角膜上皮損傷後のＨＧＦによる損傷した眼の治療が、治癒率の改善につながったことを示唆している。
【0189】
本明細書に説明されるものに加え、本発明の種々の改変が、前述の説明から当業者に明らかとなるであろう。このような改変は、添付の特許請求の範囲内にあることも意図される。本出願において引用された、全ての特許、特許出願及び出版物を含む参照文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3A】
【図3B】
【図4】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】