特表 2024-518180 腺筋症の非侵襲的診断のための血液バイオマーカーとしてのｓＦＲＰ４

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-04-25

(54)【発明の名称】腺筋症の非侵襲的診断のための血液バイオマーカーとしてのｓＦＲＰ４

(51)【国際特許分類】

   G01N 33/68 20060101AFI20240418BHJP

【ＦＩ】

G01N33/68

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023571511

(86)(22)【出願日】2022-05-16

(85)【翻訳文提出日】2024-01-16

(86)【国際出願番号】 EP2022063114

(87)【国際公開番号】W WO2022243210

(87)【国際公開日】2022-11-24

(31)【優先権主張番号】21174118.6

(32)【優先日】2021-05-17

(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】591003013

【氏名又は名称】エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー

【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ－ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ

(74)【代理人】

【識別番号】100118902

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 修

(74)【代理人】

【識別番号】100106208

【弁理士】

【氏名又は名称】宮前 徹

(74)【代理人】

【識別番号】100196508

【弁理士】

【氏名又は名称】松尾 淳一

(74)【代理人】

【識別番号】100187540

【弁理士】

【氏名又は名称】國枝 由紀子

(72)【発明者】

【氏名】ディートリッヒ，マヌエル

(72)【発明者】

【氏名】グリューネバルト，フェリックス

(72)【発明者】

【氏名】フント，マルティン

(72)【発明者】

【氏名】カストナー，ペーター

(72)【発明者】

【氏名】クラマー，マルティン

(72)【発明者】

【氏名】ラウベンダー，リュディガー

(72)【発明者】

【氏名】ベクマイヤー，ハイケ

(72)【発明者】

【氏名】ビーンヒューズ－テレン，ウルスラ－ヘンリケ

【テーマコード（参考）】

2G045

【Ｆターム（参考）】

2G045AA25

2G045CA25

2G045CA26

2G045DA36

2G045FB03

2G045FB05

2G045FB07

2G045FB12

2G045FB13

2G045FB15

(57)【要約】

本発明は、患者からの試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度を決定し、決定された量または濃度を基準と比較することによって、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価する方法、腺筋症の治療について患者を選択する方法、および腺筋症に罹患しているかまたは腺筋症の処置を受けている患者をモニタリングする方法に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価する方法であって、
前記患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、
前記決定された量または濃度を基準と比較することと
を含む、方法。

【請求項2】

腺筋症の治療について患者を選択する方法であって、
前記患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、
前記決定された量または濃度を基準と比較することと
を含む、方法。

【請求項3】

腺筋症の治療が、特に薬物ベースの治療、疼痛管理治療または外科的治療である、請求項２に記載の方法。

【請求項4】

腺筋症に罹患しているかまたは腺筋症の処置を受けている患者をモニタリングする方法であって、
前記患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、
前記決定された量または濃度を基準と比較することと
を含む、方法。

【請求項5】

前記患者からの前記試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度の上昇が、前記患者における腺筋症の存在を示す、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記試料が体液である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記試料が、血液、血清または血漿である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記対象が女性患者、特にヒトの女性患者である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価するコンピュータ実装方法であって、
ａ）処理ユニットにおいて、患者からの試料中のｓＦＲＰ４のレベルの値を受信することと、
ｂ）工程（ａ）において受信した前記値を前記処理ユニットで処理することであって、前記処理することが、ｓＦＲＰ４の前記レベルについて１つ以上の閾値をメモリから検索することと、工程（ａ）において受信した前記値を前記１つ以上の閾値と比較することとを含む、前記値を前記処理ユニットで処理することと、
ｃ）患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを、出力装置を介して評価することであって、前記評価が工程（ｂ）の結果に基づく、出力装置を介して評価することと
を含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、患者からの試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度を決定し、決定された量または濃度を基準と比較することによって、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価する方法、腺筋症の治療について患者を選択する方法、および腺筋症に罹患しているかまたは腺筋症の処置を受けている患者をモニタリングする方法に関する。

【背景技術】

【0002】

背景
腺筋症は、不均一な婦人科疾患である。腺筋症の患者は、様々な臨床症状を有し得る。腺筋症の最も一般的な症状は、異常な月経出血および月経困難症である。しかしながら、疼痛、悪心、または排尿の困難の異なる形態もあり得る。腺筋症の患者は無症候性であり得、不妊症の評価中に臨床医の注意を引くだけである。

【0003】

腺筋症はまた、不妊症に関連し、生殖補助医療（ＡＲＴ）を受けている不妊症女性の約２０％において診断される。（Ｐｕｅｎｔｅ ＪＭら、Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２０１６；１４：６０）。腺筋症を有する女性は、子宮内膜症または平滑筋腫などの他の関連する婦人科疾患を有することが多く、したがって診断および処置に対する応答の評価を困難にする。（Ｐｏｎｔｉｓ Ａら、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、２０１６；３２（９）：６９６－７００）。

【0004】

現在、標準的な画像診断基準はなく、患者に最適な処置を選択することは困難である。

【0005】

腺筋症は、子宮の外筋層である子宮筋層への良性子宮内膜腺および間質の浸潤として定義される。対照的に、子宮内膜症は、子宮内膜および子宮筋層の外側の子宮内膜様上皮および／または間質の存在を特徴とする疾患として定義される。形態および位置に応じて、内部腺筋症、外部腺筋症および腺筋腫の３つの異なる腺筋症型が存在する。内部腺筋症は、限局性、びまん性および表在性腺筋症にさらに分類することができる（Ｂａｚｏｔ Ｍら、Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ．２０１８；１０９：３８９－３９７）。腺筋症はまた、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）の所見に基づいて、子宮外層に位置するかまたは子宮内層に位置するかに応じて、４つのサブタイプＩ～ＩＶに分類することができる。腺筋症の一般的な徴候および症候には、月経中の重度の出血（月経過多）および月経期間の間の重度の出血（不正子宮出血）、月経困難症、慢性骨盤痛、性交疼痛症および不妊症が含まれ、これらは女性患者の生活の質に深刻な影響を及ぼす。さらに、腺筋症は、妊孕性および体外受精（ＩＶＦ）転帰に有意な影響を及ぼす（Ｃｈａｐｒｏｎ Ｃら、Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ Ｕｐｄａｔｅ．２０２０；２６：３９２－４１１）。

【0006】

腺筋症の有病率は大きく異なり、平均率は２０％～２５％である。腺筋症の症例の約２０％は生殖可能年齢（４０歳未満）の女性であり、残りの８０％は生殖可能年齢後期（４０～５０歳）の女性に生じる。（Ｐｏｎｔｉｓ Ａら、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、２０１６；３２（９）：６９６－７００）。

【0007】

出産を終えた厄介な症候を有する女性の場合、子宮の除去（子宮摘出術）が選択される処置法であり、腺筋症の唯一の決定的な治癒である。腺筋病変または嚢胞の子宮保存外科的切除は、限局性腺筋症または嚢胞性限局性腺筋症の患者においてまれに行われるが、標準的な処置法ではない。子宮動脈塞栓術（ＵＡＥ）は、特に従来の治療に抵抗性の患者および子宮の保存を望む患者における新しい処置アプローチである。しかしながら、腺筋症の徴候および症候の再発が患者の４０％超において観察されている（Ｊ．Ｚｈｏｕら、ＰＬＯＳ Ｏｎｅ、２０１６；１－１５）。

【0008】

腺筋症を処置するために現在利用可能な特定の薬物はなく、最良の管理のために従うべき特定のガイドラインはない。

【0009】

症候性腺筋症を処置する意図された結果は、副作用を最小限に抑えながら、徴候および症候の軽減、妊孕性の維持または改善である。

【0010】

いくつかの非ホルモン性（すなわち、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）およびホルモン処置（すなわち、プロゲスチン、経口避妊薬、ゴナドトロピン放出ホルモン［ＧｎＲＨ］類似体）が、疼痛症候および腺筋症における異常な子宮出血を制御するために使用される（Ｓ．Ｖａｎｎｕｃｃｉｎｉら、Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ（登録商標）、Ｖｏｌ．１０９、Ｎｏ．３、Ｍａｒｃｈ ２０１８；Ａ．Ｐｏｎｔｉｓら、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、２０１６；３５９０：１－５）。

【0011】

腺筋症の診断は現在、経膣超音波検査（ＴＶＵＳ）および磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）に基づいており、全体的な感度／特異度はそれぞれ８３．８％、６３．９％および７７．３％、８９．８％である。（Ｃｈａｐｒｏｎ Ｃら、Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ Ｕｐｄａｔｅ．２０２０；２６：３９２－４１１）。しかしながら、現在、標準的な画像診断基準はなく、患者に最適な処置を選択することは困難である。ＴＶＵＳおよび経腹部超音波検査の両方は、子宮筋層内小嚢胞、子宮筋層の前後非対称性および異常な子宮筋層エコー検査の明確に定義されていない病巣を同定することによって腺筋症を特徴付ける。ＭＲＩでの所見には、平滑筋腫のない大きな非対称子宮、接合部の肥厚または接合部と子宮筋層の厚さの異常な比が含まれる。接合部は、最も内側の子宮筋層である。

【0012】

子宮腺筋症の唯一の最終診断は、子宮摘出術後の子宮の病理評価に基づく組織学的診断である。

【0013】

非常に熟練した操作者のみが、経膣超音波（ＴＶＵＳ）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）を使用することによって腺筋症を診断することができる。これらの技術は高い経験および専門知識を必要とするため、日常的な診断に適用することは困難である。さらに、ＴＶＵＳの結果は操作者依存性である（Ｄｕｅｈｏｌｍ Ｍ Ｂｅｓｔｔ Ｐｒａｃｔｉｃｅ＆Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｙ ２００６；２０（４）：５６９－５８２）。経膣超音波による腺筋症の検出には、適切な超音波装置も必要であり、その結果は、医師による超音波画像の評価および主観的分析に使用される特定の超音波装置に依存し得る。

【0014】

様々な種類の腺筋症の中で、びまん性腺筋症はイメージング技術によって検出することがさらにより困難であり、経験豊富な超音波検査者を必要とする。また、イメージング機器へのアクセスは、特に主要なヘルスケア専門家の間で制限されており、訓練されたスタッフおよび専門のリソースを必要とする。

【0015】

したがって、非侵襲的な血液ベースの検査は、イメージング装置を必要とせずに腺筋症の医学的評価を可能にし、オペレータ間のばらつきを低減し、状態のより標準化された診断を可能にする。（Ｃｈａｐｒｏｎ Ｃら、Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ Ｕｐｄａｔｅ．２０２０；２６：３９２－４１１）。

【0016】

ＣＡ１２５は、子宮腺筋症および筋腫の鑑別診断において報告されているが、著者らは、診断精度が限られていることを見出した（Ｋｉｃｈｅｏｌ Ｋｉｌら、Ｅｕｒ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ Ｂｉｏｌ．２０１５ Ｆｅｂ；１８５：１３１－５）。

【0017】

ＣＡ１２５血清レベルは、介入外科的治療の前後で腺筋症の予後を予測するのに有用であることが見出された（Ｙ．Ｍｕら、Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２０１５；８（６）：９５４９－９５５４）。

【0018】

分泌されたｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質４（ｓＦＲＰ４）は、Ｗｎｔリガンドのアンタゴニストとして作用する分泌タンパク質のファミリーに属する糖タンパク質である。これはまた、その同義語であるＦＲＰ－４、ｆｒｐＨＥ（ＦＲＰヒト子宮内膜）、ＦＲＰＨＥ、ＦＲＺＢ－２ ｓＦＲＰによっても知られており、Ｗｎｔ結合ドメインを包含し、Ｗｎｔシグナル伝達経路の可溶性調節因子である。ｓＦＲＰ４は、通常は細胞増殖を誘導し、アポトーシスを減少させる標準Ｗｎｔシグナル伝達経路を阻害する。

【0019】

ｓＦＲＰ４遺伝子は、通常、子宮内膜間質（月経周期の増殖期に高発現）、膵臓、胃、結腸、肺、骨格筋、精巣、卵巣、腎臓、心臓、脳、乳腺、子宮頸部、眼、骨、前立腺および肝臓を含む様々な組織で発現される。ｓＦＲＰ４の過剰発現は、骨、皮膚、腎臓、内分泌および癌を含む様々な病状に関連する（Ｐａｗａｒ Ｎら、Ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ４（ｓＦＲＰ４）更新：Ａ ｂｒｉｅｆ ｒｅｖｉｅｗ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ２０１８；４５：６３－７０；Ｓ．Ｐｏｈｌら、Ｔｕｍｏｒ Ｂｉｏｌ．２０１５；３６：１４３－１５２）。

【0020】

さらに、ｓＦＲＰ４は、２型糖尿病において過剰発現されることが広く報告されている。（例えば、Ｔ．Ｍａｈｄｉら、Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ、１６、６２５－６３３、Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ７、２０１２）。

【0021】

エストロゲンおよびプロゲステロンは、子宮内膜周期中にｓＦＲＰ４の発現を調節することが見出されている（月経周期の増殖期のより高い発現）。排卵中、ｓＦＲＰ４はアポトーシスを増加させてプロセスを促進する。

【0022】

子宮内膜の発生におけるｓＦＲＰ４の役割ならびに卵巣癌および子宮内膜癌での上方制御ならびに子宮内膜症を有する動物におけるｈＣＧによるｓＦＲＰ４の上方制御は、ヒヒモデルに記載されている。（Ｓｈｅｒｗｉｎ ＪＲＡら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、２０１０；１５１（１０）：４９８２－４９９３）。

【0023】

国際公開第２００１０３２９２０号は、罹患した子宮内膜における遺伝子発現のパターンを健康な子宮内膜における遺伝子発現のパターンと比較することによる、子宮内膜症に関連する遺伝子および遺伝子産物のスクリーニング方法を記載している。他の遺伝子産物の中でも、ｓＦＲＰ４の発現レベルは、健常対照群と比較して異なることが見出された。

【0024】

さらに、国際公開第２００７０９０８７２号は、分泌されたｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質４（ｓＦＲＰ４）に対する抗体、およびｓＦＲＰ４の検出のためのそれらの使用を記載している。

【0025】

Ｐａｗａｒらは、血清中の子宮内膜症を検出するためのタンパク質マーカーとしてｓＦＲＰ４を記載した。２１人の患者および２２人の健常対照を含む試験で、改訂米国生殖医学会（ｒＡＳＲＭ）に従って、対照群に対する子宮内膜症患者群のｓＦＲＰ４血清レベルの増加、および子宮内膜症グレード３および４のｓＦＲＰ４レベルの有意な増加を報告した。ｓＦＲＰ４をＥＬＩＳＡアッセイによって定量した（Ｐａｗａｒ Ｎ Ｍら、Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１６；３１（付記１）：Ｓ１－Ｓ１２９）。

【0026】

しかしながら、腺筋症の徴候および症候を示す患者の信頼できる早期の評価を可能にするバイオマーカーを使用することによる腺筋症の非侵襲的診断の必要性が高い。

【0027】

したがって、本発明は、これらの必要性に応じる手段および方法を提供する。

【発明の概要】

【0028】

第１の態様では、本発明は、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価する方法であって、患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、決定した量または濃度を基準と比較することとを含む、方法に関する。

【0029】

第２の態様では、本発明は、腺筋症の治療、特に薬物ベースの治療、疼痛管理治療または外科的治療について患者を選択する方法であって、患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、決定された量または濃度を基準と比較することとを含む、方法に関する。

【0030】

第３の態様では、本発明は、腺筋症に罹患しているかまたは腺筋症の処置を受けている患者をモニタリングする方法であって、患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、決定された量または濃度を基準と比較することとを含む、方法に関する。

【0031】

第４の態様では、本発明は、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価するコンピュータ実装方法であって、前記方法は、処理ユニットにおいて、患者からの試料中のｓＦＲＰ４のレベルの値を受信することと、工程（ａ）において受信した値を処理ユニットで処理することであって、前記処理することが、ｓＦＲＰ４のレベルについての１つ以上の閾値をメモリから検索することと、工程（ａ）において受信した値を１つ以上の閾値と比較することとを含む、受信した値を処理ユニットで処理することと、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを、出力装置を介して評価することであって、前記評価は工程（ｂ）の結果に基づく、装置を介して評価することとを含む、方法に関する。

【図面の簡単な説明】

【0032】

【図1a】腺筋症症例（Ｎ＝１２４）および対照（Ｎ＝１７７）におけるｓＦＲＰ４の箱ひげ図。

【図1b】バイオマーカーｓＦＲＰ４の受信者操作曲線（ＲＯＣ）分析。腺筋症を有さない対照に対する腺筋症のＲＯＣ分析のＡＵＣ値は、０．６２であった。ｘ軸＝特異度、ｙ軸＝感度。

【図2a】腺筋症症例（Ｎ＝１２４）および対照（Ｎ＝１７７）におけるＣＡ１２５の箱ひげ図。腺筋症を有さない対照に対する腺筋症のＲＯＣ分析のＡＵＣ値は、０．５１であった。ｘ軸＝特異度、ｙ軸＝感度。

【図2b】バイオマーカーＣＡ１２５の受信者操作曲線（ＲＯＣ）分析。

【発明を実施するための形態】

【0033】

発明の詳細な説明
本発明者らは、血液中で測定されたｓＦＲＰ４が、対照と比較して、腺筋症を有する女性において増加することを初めて示す。腺筋症の診断および評価のための非侵襲的血液検査に対する満たされていない医学的必要性がある。

【0034】

定義
単語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」のような変形は、記載された整数もしくは工程または整数もしくは工程のグループの包含を意味するが、いかなる他の整数もしくは工程または整数もしくは工程のグループの除外を意味しないことが理解されよう。

【0035】

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。

【0036】

濃度、量、および他の数値データは、本明細書では「範囲」の形式で表現または提示され得る。このような範囲の形式は、便宜上および簡潔にするために単に使用されているに過ぎないことが理解され、したがって、その範囲の境界として明示的に列挙されている数値を含むだけではなく、各数値および部分範囲があたかも明示的に列挙されているかのごとく、その範囲内に包含される個々の数値または部分範囲の全てを含むことを柔軟に解釈するべきである。例示として、「１５０ｍｇ～６００ｍｇ」の数値範囲は、１５０ｍｇ～６００ｍｇの明示的に列挙された値を含むだけでなく、示された範囲内の個々の値および部分範囲も含むと解釈されるべきである。したがって、この数値範囲には、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、・・・５８０、５９０、６００ｍｇなどの個々の値、および１５０～２００、１５０～２５０、２５０～３００、３５０～６００などの部分範囲が含まれる。この同じ原理は、１つの数値のみを列挙する範囲にも適用される。さらに、このような解釈は、その範囲の幅または記載されている特性にかかわらず、適用すべきである。

【0037】

「約」という用語は、数値に関連して使用される場合、示された数値よりも５％小さい下限値を有し、かつ示された数値よりも５％大きい上限値を有する範囲内の数値を包含することを意味する。

【0038】

本明細書で使用される場合、「インジケータ」という用語は、症状に対する徴候またはシグナルを指すか、または状態をモニタリングするために使用される。そのような「状態」は、細胞、組織もしくは器官の生物学的状態を指すか、または個体の健康および／もしくは疾患状態を指す。インジケータは、これらに限定されないが、ペプチド、タンパク質、および核酸を含む分子の存在または非存在であり得るか、細胞、または組織、器官もしくは個体におけるそのような分子の発現レベルまたはパターンの変化であり得る。インジケータは、個体における疾患の発生、発症もしくは存在に対する徴候であるか、またはそのような疾患の更なる進行に対する徴候であり得る。インジケータはまた、個体において疾患を発症するリスクに対する徴候であり得る。

【0039】

本発明の文脈において、「バイオマーカー」という用語は、生物系の生物学的状態のインジケータとして使用される前記系内の物質を指す。当技術分野では、「バイオマーカー」という用語は、前記内因性物質（例えば、抗体、核酸プローブなど、イメージングシステム）の検出手段にも適用されることがある。本発明の文脈において、「バイオマーカー」という用語は、検出手段ではなく物質にのみ適用されるものとする。したがって、バイオマーカーは、生体内に存在する任意の種類の分子、例えば核酸（ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｒＲＮＡなど）、タンパク質（細胞表面受容体、サイトゾルタンパク質など）、代謝産物もしくはホルモン（血糖、インスリン、エストロゲンなど）、別の分子の特定の修飾に特徴的な分子（例えば、タンパク質上の糖部分またはホスホリル残基、ゲノムＤＮＡ上のメチル残基）、または生物によって内在化された物質もしくはそのような物質の代謝産物であり得る。

【0040】

「ｓＦＲＰ４」、「分泌されたｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質４」という用語は、ＦＲＰ－４、ＦＲＰＨＥ、ｓＦＲＰ－４、分泌されたｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質とも呼ばれる。分泌されたｆｒｉｚｚｌｅｄ関連タンパク質（ｓＦＲＰ）は、Ｗｎｔ結合ドメインを含む哺乳動物の５つのタンパク質のファミリーを含む。それらは、胚発生中にＷｎｔ／β－カテニン経路のアンタゴニストとして最初に同定されたＷｎｔシグナル伝達経路の可溶性調節因子である（Ｋａｗａｎｏ，ＹおよびＫｒｙｐｔａ，Ｒ．、Ｓｅｃｒｅｔｅｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｐａｙ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．１１６、２６２７．２６３４、ｄｏｉ：１０．１０２４２／ｊｃｓ．００６２３（２００３）。

【0041】

ｓＦＲＰ４は、通常は細胞増殖を誘導し、アポトーシスを減少させる標準Ｗｎｔシグナル伝達経路を阻害する。さらに、ｓＦＲＰの高い血清レベルは、肥満、糖尿病および骨粗鬆症などの病理学的状態で実証されている（Ｂｅｌａｙａ，Ｚ．Ｅ．ら；Ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓ ２０１３；国際特許第２４：２１９１－２１９９号）。ポリペプチド、ペプチドおよびタンパク質という用語は、本明細書を通して互換的に使用される。

【0042】

ｓＦＲＰ４タンパク質は、３９．９ｋＤａの予測分子量および約５０～５５ｋＤａの実際の分子量を有する３４６個のアミノ酸から構成される。ｓＦＲＰ４タンパク質は、２つの独立したドメインに折り畳まれる。Ｎ末端は、分泌シグナルペプチドと、それに続く約１２０個のアミノ酸のシステインリッチドメイン（ＣＲＤ）とを含む。ＣＲＤは、ｆｒｉｚｚｌｅｄ（Ｆｚｄ）受容体の細胞外推定Ｗｎｔ結合ドメインと３０～５０％同一であり、保存された位置に１０個のシステイン残基が存在することを特徴とする。これらのシステインは、ジスルフィド架橋のパターンを形成する。

【0043】

本明細書で使用されるｓＦＲＰ４は、前述の特定のｓＦＲＰ４ポリペプチドのバリアントも包含する。そのようなバリアントは、特定のｓＦＲＰ４ポリペプチドと少なくとも同じ本質的な生物学的および免疫学的特性を有する。特に、それらが本明細書で言及される同じ特異的アッセイによって、例えば前記ｓＦＲＰ４ポリペプチドを特異的に認識するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を使用するＥＬＩＳＡアッセイによって検出可能である場合、それらは同じ本質的な生物学的および免疫学的特性を共有する。好ましいアッセイは、添付の実施例に記載されている。さらに、本発明に従って言及されるバリアントは、少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失および／または付加のために異なるアミノ酸配列を有するものとし、バリアントのアミノ酸配列は、依然として、好ましくは少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９２％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％、特定のｓＦＲＰ４ポリペプチドのアミノ酸配列、好ましくはヒトｓＦＲＰ４のアミノ酸配列、より好ましくは特定のｓＦＲＰ４、例えばヒトｓＦＲＰ４の全長にわたって同一であると理解されるべきである。２つのアミノ酸配列間の同一性の程度は、上記のように決定することができる。上記で言及したバリアントは、対立遺伝子バリアントまたは任意の他の種特異的ホモログ、パラログもしくはオルソログであり得る。さらに、本明細書で言及されるバリアントは、特定のｓＦＲＰ４ポリペプチドの断片、またはこれらの断片が上記で言及される本質的な免疫学的および生物学的特性を有する限り、上述の種類のバリアントを含む。そのような断片は、例えば、ｓＦＲＰ４ポリペプチドの分解産物であり得る。リン酸化またはミリスチル化などの翻訳後修飾のために異なるバリアントが更に含まれる。

【0044】

癌抗原１２５または腫瘍抗原１２５と呼ばれることもある炭水化物抗原１２５である「ＣＡ－１２５」は、ＭＵＣ１６遺伝子によって産生され、細胞膜に会合するムチン型糖タンパク質である。ＣＡ－１２５は、子宮内膜、卵管、卵巣および腹膜を含む体腔上皮に由来する上皮細胞卵巣癌のバイオマーカーである。ＣＡ－１２５の診断的使用は、中程度の感度の子宮内膜症ステージＩＩＩおよびＩＶ（中等度および重度の子宮内膜症）に限定される。

【0045】

疾患の「症候」は、そのような疾患を有する組織、器官または生物によって顕著な疾患の暗示であり、以下に限定されないが、組織、器官または個体の疼痛、脱力感、圧痛、緊張、硬直および痙攣を含む。疾患の「徴候」または「シグナル」には、以下に限定されないが、バイオマーカーもしくは分子マーカーなどの特定のインジケータの有無、増加もしくは上昇、減少もしくは低下などの変化（ｃｈａｎｇｅ）もしくは変化（ａｌｔｅｒａｔｉｏｎ）、または症候の発症、存在もしくは悪化が含まれる。疼痛の症候には、以下に限定されないが、持続性または様々な灼熱痛、拍動痛、かゆみまたは刺痛として感じられ得る不快な感覚が含まれる。

【0046】

「疾患」および「障害」という用語は、本明細書では互換的に使用され、異常な症状、特に組織、器官または個体がもはやその機能を効率的に果たすことができない病気または損傷などの異常な医学的症状を指す。必ずしもそうとは限らないが、典型的には、疾患は、そのような疾患の存在を示す特定の症候または徴候に関連する。したがって、そのような症候または徴候の存在は、疾患に罹患している組織、器官または個体を示し得る。これらの症候または徴候の変化は、そのような疾患の進行を示し得る。疾患の進行は、典型的には、疾患の「悪化」または「好転」を示し得る、そのような症候または徴候の増加または減少を特徴とする。疾患の「悪化」は、組織、器官または生物がその機能を効率的に果たす能力の減少を特徴とするのに対して、疾患の「好転」は、典型的には、組織、器官または個体がその機能を効率的に果たす能力の増加を特徴とする。疾患を「発症するリスク」にある組織、器官または個体は、健康な状態にあるが、疾患が顕在化する可能性を示す。典型的には、疾患を発症するリスクは、そのような疾患の早期または弱い徴候または症候に関連する。そのような場合、疾患の発症は依然として処置によって予防され得る。疾患の例には、炎症性疾患、感染性疾患、皮膚症状、内分泌疾患、腸疾患、神経障害、関節疾患、遺伝性障害、自己免疫疾患、外傷性疾患、および様々な種類の癌が含まれるが、これらに限定されない。

【0047】

子宮内膜症という用語は、子宮内膜および子宮筋の外側の子宮内膜様上皮および／または間質の存在を特徴とする疾患として定義され、通常、関連する炎症過程を伴う（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｗｏｒｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＡＡＧＬ ＥＳＧＥ ＥＳＨＲＥ ａｎｄ ＷＥＳら；ＥＳＨＲＥ ２０２２ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ Ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ）。

【0048】

対照的に、腺筋症という用語は、子宮筋内の異所性子宮内膜組織（子宮内膜間質および腺）の存在として定義される（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｗｏｒｋｉｎｇ ｇｒｏｕｐ ｏｆ ＡＡＧＬ ＥＳＧＥ ＥＳＨＲＥ ａｎｄ ＷＥＳら、２０２１）。腺筋症は子宮内膜症の形態またはサブタイプとは考えられておらず、したがってガイドライン（ＥＳＨＲＥ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ２０２２、８ページ）には含まれていない。

【0049】

腺筋症はさらに、「子宮内膜が子宮筋層（子宮の筋肉層）に浸潤し、顕微鏡的には異所性で非腫瘍性の子宮内膜腺と間質を呈し、肥大および過形成の子宮筋層に囲まれたびまん性に肥大した子宮」と定義される（Ｂｉｒｄ Ｃら、Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ １９７２；１１２：５８３ｅ５９３）。

【0050】

腺筋症サブタイプの異なる分類が示唆されている。２０１２年、Ｋｉｓｈｉらは、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）の所見に基づいて、子宮外層に位置するか子宮内層に位置するかに応じて、腺筋症を４つのサブタイプＩ～ＩＶに分類した（Ｙ Ｋｉｓｈｉら、Ａｍ Ｊ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ．２０１２；２０７：１１４．ｅ１－１１４．ｅ７）。

【0051】

２０１８年に、Ｂａｚｏｔらは、形態、子宮筋層浸潤の程度および位置に応じて、内部腺筋症、外部腺筋症および腺筋腫の３つの異なる腺筋症の型を示唆した。内部腺筋症は、限局性、びまん性および表在性腺筋症にさらに分類された（Ｂａｚｏｔ Ｍら、Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ．２０１８；１０９：３８９－３９７）。限局性腺筋症の女性は、通常は子宮筋内に埋め込まれている、肥大して歪んだ子宮内膜および子宮筋の限られた領域の病変を呈する。限局性腺筋症は、多かれ少なかれ明確な境界および主に固形の特徴を有する腺筋腫と、主に子宮筋内の単一の腺筋嚢胞の存在を特徴とする嚢胞性腺筋症（３０歳未満の女性における若年性嚢胞腺筋症としても知られる）とにさらに細分することができる。広範型の疾患としてのびまん性腺筋症は、子宮筋組織全体に散在する子宮内膜粘膜（腺および間質）の病巣を特徴とする。ポリープ状腺腫は、主に類内膜腺および主に平滑筋の間質成分から構成される子宮内膜腫瘤を表す。子宮頸部の腺筋腫性ポリープは、腺筋症のまれな形態を表す。これらの病変は、悪性腺腫と区別しなければならないため、重要である（Ｇ Ｇｒｉｍｂｉｚｉｓら、ＦＥＲＴＩＬＩＴＹ ＰＲＥＳＥＲＶＡＴＩＯＮ ２０１４；１０１（２）：４７２）。（１９）。

【0052】

腺筋症という用語は、内部腺筋症、外部腺筋症および腺筋腫を包含する。それはまた、びまん性、限局性および表在性の腺筋症、腺筋嚢胞、腺筋腫、嚢胞性腺筋症、典型的または非典型的なポリープ状腺筋症および腺筋腫性ポリープ、後腹膜腺腫、腺腫性結節としての腺筋症サブタイプを包含する（Ｂａｚｏｔ Ｍら、Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ．２０１８；１０９：３８９－３９７；Ｇ Ｇｒｉｍｂｉｚｉｓら、ＦＥＲＴＩＬＩＴＹ ＰＲＥＳＥＲＶＡＴＩＯＮ ２０１４；１０１（２）：４７２）。磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）の所見に基づいて分類される腺筋症サブタイプＩ～ＩＶ。

【0053】

腺筋症の患者は、様々な臨床症状を有し得る。腺筋症の最も一般的な症状は、異常な月経出血（月経過多）、有痛期間（月経困難症）および子宮の肥大である。これらの症候は、女性における多くの他の婦人科障害に共通している。疼痛は、鋭い、ナイフのような骨盤痛である可能性があり、月経中に重度の月経痛がある可能性がある。疼痛は、月経周期全体にわたって予測不能かつ断続的に起こり得るか、または持続的であり得る。しかしながら、異なる形態の疼痛も存在する可能性があり、疼痛も経時的に悪化する可能性があり、特性が変化する可能性がある。

【0054】

肥大した子宮は、膀胱および直腸に圧力をかける可能性があり、排尿を困難にする可能性がある。悪心は、腺筋症の女性によっても報告されている。あまり一般的に報告されていない症候は、性交疼痛症および慢性、不規則性または持続性の骨盤痛である。子宮内膜症の患者でも同様の症候が報告されており、両方の疾患に罹患している女性がいる。腺筋症はまた、不妊症に関連し、生殖補助医療（ＡＲＴ）を受けている不妊症女性の約２０％において診断される（Ｓ．Ｖａｎｎｕｃｃｉｎｉら、Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ（登録商標）、Ｖｏｌ．１０９、Ｎｏ．３、Ｍａｒｃｈ ２０１８）。腺筋症を有する患者は、子宮内膜症または平滑筋腫などの他の関連する婦人科疾患を有することが多く、したがって診断および処置に対する応答の評価を困難にする。

【0055】

腺筋症の有病率は大きく異なり、平均率は２０％～２５％である。腺筋症の症例の約２０％は生殖可能年齢（４０歳未満）の女性であり、残りの８０％は生殖可能年齢後期（４０～５０歳）の女性に生じる。腺筋症に罹患した女性の１／３は無症候性である（Ｐｏｎｔｉｓ Ａら、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、２０１６；３２（９）：６９６－７００）。

【0056】

好ましくは、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価する方法に関連して使用される「治療」という用語は、疾患の悪化を完全に防止するために、または患者に対するその影響を有意に減少させるために、例えば、患者の下腹部痛および月経中の重度の出血の軽減、子宮の大きさの縮小および不妊処置前に腺筋症を有する不妊症女性の妊娠の可能性を改善するために、症候の増悪および悪化を包含する。

【0057】

薬物ベースの治療は、非ホルモン薬（すなわち、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ））、ホルモン処置（すなわち、プロゲスチン、すなわち、酢酸ノルエチンドロン、経口避妊薬、複合経口避妊薬（ＣＯＣＳ）、ゴナドトロピン放出ホルモン類似体（［ＧｎＲＨ］類似体）、レボノルゲストレル－ＩＵＳ（レボノルゲストレル放出子宮内システム）、選択的プロゲステロン受容体モジュレーター、アロマターゼ阻害剤、バルプロ酸、抗血小板治療（Ｓ．Ｖａｎｎｕｃｃｉｎｉら、Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ（登録商標）、Ｖｏｌ．１０９、Ｎｏ．３、Ｍａｒｃｈ ２０１８；Ａ．ＰｏｎｔｉｓらＧｙｎｅｃｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１６；３５９０：１－５）を包含する。

【0058】

外科的治療は、子宮の除去（子宮摘出術）および子宮保存手術、例えば、腺腫性病変または嚢胞の外科的切除（腺筋切除術、膀胱切除術）または子宮動脈塞栓術（ＵＡＥ）を包含する。

【0059】

視覚的アナログスケールである「ＶＡＳ」という用語は、疼痛の強度を評価するための道具である。ＶＡＳは、長さ１０ｃｍの水平線からなり、その端部は「疼痛なし」および「考えられる最大の疼痛」としてマークされている。各患者はライン上で自分の疼痛レベルをチェックし、一番左の「疼痛なし」からチェックしたマークまでの距離をセンチメートルで測定し、０～１０の疼痛スコアを得る。「疼痛なし」は疼痛スコア０に対応し、「考えられる最大の疼痛」は疼痛スコア１０に対応する。腺筋症、月経困難症を有する女性では、月経困難症は約６の平均ＶＡＳスコアで疼痛の最も高い知覚に関連付けられる（Ｃｏｚｚｏｌｉｎｏら、Ｒｅｖ Ｂｒａｓ Ｇｉｎｅｃｏｌ Ｏｂｓｔｅｔ．２０１９；４１（３）：１７０－１７５）。

【0060】

本明細書で使用される場合、「患者」は、本明細書に記載の診断、予後または処置から利益を得ることができる任意の哺乳動物を意味する。特に、「患者」は、実験動物（例えば、マウス、ラット、ウサギまたはゼブラフィッシュ）、家畜（例えば、モルモット、ウサギ、ウマ、ロバ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ニワトリ、ラクダ、ネコ、イヌ、タートル、カメ、ヘビ、トカゲまたは金魚を含む）、またはチンパンジー、ボノボ、ゴリラおよびヒトを含む霊長類からなる群から選択される。「患者」はヒトであることが特に好ましい。

【0061】

特に、本発明に適合する「患者」は、異常な子宮出血、例えば重度の月経出血、長期の月経出血、月経間の出血、月経困難症、重度の月経痛、腹圧および膨満感などの症候を有する女性である。女性（腺筋症の症候の有無にかかわらず）は、妊娠することができないことが多く、生殖補助医療（ＡＲＴ）を受けている不妊症の女性であることが多い。

【0062】

さらに、腺筋症に罹患している患者は、通常１４歳～５０歳の生殖可能年齢の女性、特に３０～５０歳の女性である。

【0063】

「試料」または「目的の試料」という用語は、本明細書において互換的に使用され、組織、器官もしくは個体の部分または片を指し、通常、組織、器官または個体の全体を表すことが意図されているこのような組織、器官または個体よりも小さい。分析に際して、試料は、組織の状態、または器官もしくは個体の健康もしくは疾患状態に関する情報をもたらす。試料の例は、限定されるものではないが、血液、血清、血漿、滑液、尿、唾液、およびリンパ液などの流体試料、または組織抽出物、軟骨、骨、滑膜、および結合組織などの固形試料を含む。試料の分析は、視覚的または化学的に達成され得る。視覚的分析には、試料の形態学的評価を可能にする組織、器官または個体の顕微鏡イメージングまたは放射線スキャニングが含まれるが、これらに限定されない。化学的分析には、特定のインジケータの有無またはそれらの量、濃度もしくはレベルの変化の検出が含まれるが、これらに限定されない。試料は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの試料であり、ｉｎ ｖｉｔｒｏで分析されることになり、体内に戻されることはない。

【0064】

「量」という用語は、本明細書で使用される場合、本明細書で言及されるバイオマーカーの絶対量、前記バイオマーカーの相対量または濃度、およびそれらと相関するまたはそれらから導き出され得る任意の値またはパラメータを包含する。このような値またはパラメータは、直接的な測定により前記ペプチドから得られる、全ての具体的な物理的または化学的特性に由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトルまたはＮＭＲスペクトルにおける強度値を含む。さらに、本明細書の別の箇所で明示される間接測定により得られる値またはパラメータ、例えば、ペプチドに応答して生物学的読み出しシステムにより測定される応答量、または特異的に結合したリガンドから得られる強度シグナルは全て包含される。上述の量またはパラメータと相関する値は、全ての標準的な数学的演算によっても得ることができるということを理解されたい。

【0065】

「比較する」という用語は、本明細書で使用される場合、対象からの試料におけるバイオマーカーの量を、本明細書の別の箇所で明示されるバイオマーカーの基準量と比較することを指す。本明細書で使用される場合の比較することは、通常、対応するパラメータまたは値の比較を指し、例えば、絶対量は基準の絶対量と比較されるのに対し、濃度は基準の濃度と比較され、または試料中のバイオマーカーから得られた強度シグナルは基準試料から得られた同じ種類の強度シグナルと比較されることを理解されたい。比較は、手作業またはコンピュータを利用して実施してもよい。したがって、比較は、コンピューティングデバイスによって実施することができる。対象からの試料におけるバイオマーカーの測定量または検出量、および基準量の値は、例えば、互いに比較することができ、また前記比較は、比較のためのアルゴリズムを実行するコンピュータプログラムにより自動的に実施され得る。前記評価を実施するコンピュータプログラムは、適切な出力形式で、所望の評定を提供する。コンピュータを利用した比較において、測定量の値は、コンピュータプログラムにより、データベースに保存されている好適な基準に相当する値と比較されてもよい。コンピュータプログラムは、比較の結果を更に評価してもよく、すなわち、適切な出力形式で所望の評定を自動的に提供してもよい。コンピュータを利用した比較において、測定量の値は、コンピュータプログラムにより、データベースに保存されている好適な基準に相当する値と比較されてもよい。コンピュータプログラムは、比較結果を更に評価してもよく、すなわち、好適な出力形式で所望の評定を自動的に提供してもよい。

【0066】

表現「決定された量または濃度を基準と比較すること」とは、いずれにせよ、当業者に明らかなことを更に説明するために使用されているに過ぎない。基準濃度は対照試料において確立される

【0067】

「基準試料」または「対照試料」という用語は、本明細書で使用される場合、目的の試料と実質的に同一の様式で分析され、その情報が目的の試料の情報と比較される試料を指す。これにより、基準試料により、目的の試料から入手された情報の評価を可能にする基準が提供される。対照試料は、健常なまたは正常な組織、器官、または個体に由来し、それにより、組織、器官、または個体の健康状態の基準が提供される。正常な基準試料の状態と目的の試料の状態との間の差は、疾患発症のリスクまたはそのような疾患もしくは障害の存在もしくは更なる進行を示し得る。対照試料は、異常なまたは疾患を有する組織、器官、または個体に由来し得、それにより、組織、器官、または個体の病的状態の基準が提供される。異常な基準試料の状態と目的の試料の状態との間の差は、疾患発症のリスクの低下またはそのような疾患もしくは障害の欠如もしくは改善を示し得る。基準試料はまた、目的の試料と同じ組織、器官、または個体に由来し得るが、より早い時点で採取されている。以前に採取された基準試料の状態と目的の試料の状態との間の差は、疾患の進行、すなわち経時的な疾患の改善または悪化を示し得る。

【0068】

対照試料は、内部または外部対照試料であり得る。内部の対照試料を使用して、すなわち、試験試料ならびに同じ対象から採取した１つ以上の他の試料で、マーカーレベルを評価して、前記マーカーのレベルに変化があるかどうかを決定する。外部の対照試料については、個体に由来する試料中のマーカーの存在または量を、所与の症状に罹患していることが知られている、もしくはそのリスクがあることが知られている個体；または所与の症状がないことが知られている個体（すなわち「正常な個体」）中のマーカーの存在または量と比較する。

【0069】

そのような外部の対照試料は、単一の個体から得られてもよく、または年齢が一致し、交絡疾患がない基準集団から得られてもよいことが当業者には理解されよう。典型的には、適切な基準集団からの十分に特徴付けられた１００名の個体からの試料を使用して、「基準値」を設定する。しかしながら、基準集団はまた、２０、３０、５０、２００、５００または１０００名の個体からなるように選択され得る。健康な個体は、対照値を設定するための好ましい基準集団を表す。

【0070】

例えば、患者試料中のマーカー濃度を、特定の疾患の特定の経過に関連することが知られている濃度と比較し得る。通常、試料のマーカー濃度は、診断と直接的または間接的に相関し、マーカー濃度は、例えば、個体が特定の疾患のリスクがあるかどうかを決定するために使用される。あるいは、試料のマーカー濃度は、例えば、特定の疾患における治療に対する応答、特定の疾患の診断、特定の疾患の重症度の評価、特定の疾患に対する適切な薬物を選択するためのガイダンス、疾患進行のリスクを判定する際、または患者のフォローアップにおいて関連することが知られているマーカー濃度と比較し得る。意図する診断用途に応じて、適切な対照試料が選択され、その中にマーカーについての対照値または基準値が設定される。当業者にも明らかなように、対照試料で設定された絶対マーカー値は、使用されるアッセイに依存する。

【0071】

インジケータの「低下した」または「減少した」レベルという用語は、基準または基準試料と比較して低下している試料中のそのようなインジケータのレベルを指す。

【0072】

インジケータの「上昇した」または「増加した」レベルという用語は、基準または基準試料と比較してより高い試料中のそのようなインジケータのレベルを指す。例えば、所与の疾患に罹患している１個体の流体試料中で、前記疾患に罹患していない個体の同じ流体試料中よりも高い量で検出可能なタンパク質は、上昇したレベルを有する。

【0073】

「測定」、「測定する」または「決定する」という用語は、好ましくは定性的、半定量的または定量的測定を含む。

【0074】

「免疫グロブリン（Ｉｇ）」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫グロブリンスーパーファミリーの糖タンパク質を付与する免疫を指す。「表面免疫グロブリン」は、それらの膜貫通領域によってエフェクター細胞の膜に付着しており、以下に限定されないが、Ｂ細胞受容体、Ｔ細胞受容体、クラスＩおよびＩＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ）タンパク質、ベータ２ミクログロブリン（約２Ｍ）、ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤＳ等の分子を包含する。

【0075】

典型的には、「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、膜貫通領域を欠き、したがって血流および体腔に放出され得る分泌型免疫グロブリンを指す。ヒト抗体は、それらが保有する重鎖に基づいて異なるアイソタイプに分類される。ギリシャ文字により示される５種類のヒトＩｇ重鎖：α、γ、δ、εおよびμが存在する。存在する重鎖の種類は、抗体のクラス（すなわち、これらの鎖は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ抗体にそれぞれ見られる）を定義し、それぞれ異なる役割を果たし、異なる種類の抗原に対する適切な免疫応答を指示する。異なる重鎖は、サイズおよび組成が異なり、約４５０個のアミノ酸を含み得る（Ｊａｎｅｗａｙら（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ）。ＩｇＡは、腸、気道および泌尿生殖路などの粘膜領域、ならびに唾液、涙および母乳中に見出され、病原体によるコロニー形成を防止する（ＵｎｄｅｒｄｏｗｎおよびＳｃｈｉｆｆ（１９８６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：３８９－４１７）。ＩｇＤは主に、抗原に曝露されていないＢ細胞上の抗原受容体として機能し、好塩基球および肥満細胞を活性化して抗微生物因子を産生することに関与している（Ｇｅｉｓｂｅｒｇｅｒら（２００６）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１８：４２９－４３７；Ｃｈｅｎら（２００９）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：８８９－８９８）。ＩｇＥは、肥満細胞および好塩基球からのヒスタミン放出を引き起こすアレルゲンへの結合を介してアレルギー反応に関与する。ＩｇＥは、寄生虫からの保護にも関与する（Ｐｉｅｒら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ）。ＩｇＧは、侵入病原体に対する抗体ベースの免疫の大部分を提供し、胎盤を通過して胎児に受動免疫を与え得る唯一の抗体アイソタイプである（Ｐｉｅｒら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ）。ヒトでは４つの異なるＩｇＧサブクラス（ＩｇＧｌ、２、３、および４）があり、血清中の存在量の順に命名され、ＩｇＧｌが最も多く（約６６％）、ＩｇＧ２（約２３％）、ＩｇＧ３（約７％）、およびＩｇＧ（約４％）がこれに続く。異なるＩｇＧクラスの生物学的プロファイルは、それぞれのヒンジ領域の構造によって決定される。ＩｇＭは、単量体形態、および非常に高いアビディティーを有する分泌型五量体形態でＢ細胞の表面に発現される。ＩｇＭは、十分なＩｇＧが産生される前のＢ細胞媒介（体液性）免疫の初期段階で病原体を排除することに関与する（Ｇｅｉｓｂｅｒｇｅｒら（２００６）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１８：４２９－４３７）。抗体は、単量体として見出されるだけでなく、２つのＩｇユニットの二量体（例えばＩｇＡ）、４つのＩｇユニットの四量体（例えば、硬骨魚のＩｇＭ）、または５つのＩｇユニットの五量体（例えば哺乳動物ＩｇＭ）を形成することもよく知られている。抗体は、典型的には、ジスルフィド結合を介して連結される、２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖を含む４つのポリペプチド鎖から作製され、「Ｙ」形状の巨大分子に類似する。鎖の各々は、いくつかの免疫グロブリンドメインを含み、そのうちのいくつかは定常ドメインであり、他のものは可変ドメインである。免疫グロブリンドメインは、２以上のシート状に配置された７～９本の逆平行から鎖の２層サンドイッチからなる。典型的には、抗体の重鎖は４つのＩｇドメインを含み、そのうちの３つは定常（ＣＨドメイン：ＣＨ１．ＣＨ２．ＣＨ３）ドメインであり、そのうちの１つは可変ドメイン（ＶＨ）である。軽鎖は、典型的には、１つの定常Ｉｇドメイン（ＣＬ）および１つの可変Ｉｇドメイン（ＶＬ）を含む。例示すると、ヒトＩｇＧ重鎖は、Ｎ末端からＣ末端にＶｗＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３の順序（ＶｗＣｙｌ－Ｃｙ２－Ｃｙ３とも称される）で連結された４つのＩｇドメインで構成されており、一方、ヒトＩｇＧ軽鎖は、Ｎ末端からＣ末端にＶＬ－ＣＬの順序で連結された２つの免疫グロブリンドメインで構成されており、カッパ型またはラムダ型のいずれか（ＶＫ－ＣＫまたはＶＡ－ＣＡ）である。例示すると、ヒトＩｇＧの定常鎖は４４７個のアミノ酸を含む。本明細書および特許請求の範囲全体を通じて、免疫グロブリンのアミノ酸位置のナンバリングは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．，Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｋ．Ｓ．，ａｎｄ Ｆｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈｅｄ．Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセズダにおけるような「ＥＵインデックス」のナンバリングである。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ ｌＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。したがって、ＩｇＧの文脈におけるＣＨドメインは以下の通りである：「ＣＨ１」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置１１８～２２０位を指し；「ＣＨ２」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置２３７～３４０位を指し；「ＣＨ３」は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスによるアミノ酸位置３４１～４４７位を指す。

【0076】

「全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、以下に定義の抗体断片ではない、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すために、本明細書で互換的に使用される。これらの用語は、具体的には、Ｆｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。

【0077】

抗体のパパイン消化により、各々単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ断片」（「Ｆａｂ部分」または「Ｆａｂ領域」とも称される）と、容易に結晶化するその能力を反映して命名された残りの「Ｆｃ断片」（「Ｆｃ部分」または「Ｆｃ領域」とも称される）と呼ばれる、２つの同一の抗原結合断片が産生される。ヒトＩｇＧ Ｆｅ領域の結晶構造は決定されている（Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｒ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０：２３６１－２３７０）。ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＤアイソタイプでは、Ｆｅ領域は、抗体の２つの重鎖のＣＨ２およびＣＨ３ドメインに由来する２つの同一のタンパク質断片から構成され、ＩｇＭおよびＩｇＥアイソタイプでは、Ｆｅ領域は、各ポリペプチド鎖に３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２～４）を含む。さらに、より小さい免疫グロブリン分子が天然に存在するか、または人工的に構築されている。「Ｆａｂ’断片」という用語は、Ｉｇ分子のヒンジ領域を追加で含むＦａｂ断片を指し、一方で「Ｆ（ａｂ’）２断片」は、化学的に連結されているかまたはジスルフィド結合を介して結合されている２つのＦａｂ’断片を含むと理解される。「単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）」、（Ｄｅｓｍｙｔｅｒら（１９９６）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｂｉｏｌ．３：８０３－８１１））および「ナノボディ」は単一のＶＨドメインのみを含むが、「一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」断片は、短いリンカーペプチドを介して軽鎖可変ドメインに連結された重鎖可変ドメインを含む（Ｈｕｓｔｏｎら．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５、５８７９－５８８３）。二価の一本鎖可変断片（ｄｉ－ｓｃＦｖ）は、２つのｓｃＦｖ（ｓｃＦｖＡ－ｓｃＦｖＢ）を連結することによって操作することができる。これは、２つのＶＨ領域および２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を生成することによって行われ得、「タンデムｓｃＦｖ」（ＶＨＡ－ＶＬＡ－ＶＨＢ－ＶＬＢ）を得る。別の可能性は、２つの可変領域が一緒に折り畳まれるには短すぎるリンカーを有するｓｃＦｖの作製であり、ｓｃＦｖを強制的に二量体化させる。通常、５残基の長さを有するリンカーが、これらの二量体を生成するために使用される。この種類は、「ダイアボディ」として公知である。ＶＨドメインとＶＬドメインとの間の更に短いリンカー（１個または２個のアミノ酸）は、単一特異性三量体、いわゆる「トリアボディ」または「トリボディ」の形成をもたらす。二重特異性ダイアボディは、それぞれ配列ＶＨＡ－ＶＬＢおよびＶＨＢ－ＶＬＡまたはＶＬＡ－ＶＨＢおよびＶＬＢ－ＶＨＡを有する鎖に発現させることによって形成される。一本鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）は、１２～２０個のアミノ酸、好ましくは１４個のアミノ酸のリンカーペプチド（Ｐ）によって連結されたＶＨＡ－ＶＬＢおよびＶＨＢ－ＶＬＡ断片（ＶＨＡ－ＶＬＢ－Ｐ－ＶＨＢ－ＶＬＡ）を含む。「二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）」は、異なる抗体の２つのｓｃＦｖからなる融合タンパク質であり、ｓｃＦｖの一方はＣＤ３受容体を介してＴ細胞に結合し、他方は腫瘍特異的分子を介して腫瘍細胞に結合する（Ｋｕｆｅｒら（２００４）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８－２４４）。二重親和性再標的化分子（「ＤＡＲＴ」分子）は、Ｃ末端ジスルフィド架橋によって更に安定化されたダイアボディである。

【0078】

したがって、「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の、好ましくはその抗原結合領域を含む部分を指す。抗体断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片；ダイアボディ；ｓｄＡｂ、ナノボディ、ｓｃＦｖ、ｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｓｃＦｖ、トリアボディ、ダイアボディ、ｓｃＤｂ、ＢｉＴＥ、およびＤＡＲＴが含まれるが、これらに限定されない。

【0079】

「結合親和性」という用語は、一般に、分子（例えば抗体）の単一の結合部位と、その結合パートナー（例えば抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。別段示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原との）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性のことを指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、限定されないが、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（例えば、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２００５／０１２３５９号に記載されているようなＢＩＡｃｏｒｅアッセイ）；酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）；および競合アッセイ（例えば、ＲＩＡ）を含む、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定し得る。低親和性抗体は、一般に、抗原とゆっくり結合し、容易に解離する傾向にあるが、高親和性抗体は、一般に、抗原と迅速に結合し、より長く結合したままの傾向にある。結合親和性の種々の測定方法が当技術分野で公知であり、これらのいずれも、本発明の目的に対して使用することができる。

【0080】

「サンドイッチイムノアッセイ」は、目的の分析物の検出に広く使用されている。そのようなアッセイでは、分析物は、第１の抗体と第２の抗体との間に「サンドイッチされる」。典型的には、サンドイッチアッセイは、捕捉および検出抗体が目的の分析物上の重複しない異なるエピトープに結合することを必要とする。適切な手段によって、そのようなサンドイッチ複合体が測定され、それにより分析物が定量される。典型的なサンドイッチ型アッセイでは、固相に結合した、または固相に結合することができる第１の抗体、および検出可能に標識された第２の抗体は各々、重複しない異なるエピトープで分析物に結合する。第１の分析物に特異的な結合剤（例えば、抗体）は、固体表面に共有結合しているかまたは受動結合している（ｐａｓｓｉｖｅｌｙ ｂｏｕｎｄ）かのいずれかである。固体表面は、典型的にはガラスまたはポリマーであり、最も一般的に使用されるポリマーは、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、またはポリプロピレンである。固体支持体は、チューブ、ビーズ、マイクロプレートのディスク、またはイムノアッセイの実施に好適な任意の他の表面であっても良い。結合プロセスは、当技術分野でよく知られており、一般に、架橋共有結合、または物理的吸着からなり、ポリマー－抗体複合体は、試験試料の調製において洗浄される。次いで、試験される試料のアリコートを固相複合体に添加し、第１の抗体または捕捉抗体と対応する抗原との間の結合を可能にするのに十分な期間（例えば、２～４０分またはより好都合であれば一晩）および適切な条件下（例えば、室温～４０℃、例えば２５℃～３７℃（両端を含む））でインキュベートする。インキュベーション期間に続いて、第１の抗体または捕捉抗体、および抗体に結合した抗原を含む固相を洗浄し、抗原上の別のエピトープに結合する二次抗体または標識抗体と共にインキュベートすることができる。第２の抗体は、第１の抗体と目的の抗原との複合体に対する第２の抗体の結合を示すために使用するレポーター分子に結合される。

【0081】

非常に用途の広い代替サンドイッチアッセイ形式には、結合対の第１のパートナーでコーティングされた固相、例えば、常磁性ストレプトアビジンでコーティングした微粒子の使用が含まれる。このような微粒子を、結合対の第２のパートナー（例えば、ビオチン化抗体）に結合した分析物に特異的な結合剤、結合対の前記第２のパートナーが前記分析物に特異的な結合剤に結合している分析物を含むと疑われるまたは含んでいる試料、および検出可能に標識された第２の分析物に特異的な結合剤と共にインキュベートする。当業者には明らかなように、これらの成分は、適切な条件下で、分析物、結合対の第２のパートナー（に結合した）分析物に特異的な結合剤、および結合対の第１のパートナーを介して標識抗体を固相微粒子に結合させるのに十分な期間インキュベートされる。適宜、このようなアッセイは、１つ以上の洗浄工程を含んでもよい。

【0082】

「検出可能に標識した」という用語は、直接的または間接的に検出することができる標識を包含する。

【0083】

直接的に検出可能な標識が、検出可能なシグナルを提供するか、または標識が、第２の標識と相互作用するかのいずれかをして、第１または第２の標識によってもたらされる検出可能なシグナルを改変して、例えば、ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）を与える。蛍光色素および発光（化学発光および電気化学発光を含む）色素等の標識（Ｂｒｉｇｇｓら「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｔｏ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｔｒａｎｓ．１（１９９７）１０５１－１０５８）は、検出可能なシグナルを提供し、一般に、標識化に適用可能である。一実施形態では、検出可能に標識されたとは、検出可能なシグナル、すなわち蛍光標識、発光標識（例えば、化学発光標識または電気化学発光標識）、放射性標識または金属キレート系標識をそれぞれ提供するかまたは提供するように誘導可能な標識を指す。

【0084】

多数の標識（色素とも称する）が利用可能であり、これらは概して、以下の区分に分類することができ、区分は全てまとまっており、およびその各々が本開示による実施形態を表している。

【0085】

（ａ）蛍光色素
蛍光色素は、例えば、Ｂｒｉｇｇｓら「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｔｏ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ」、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｔｒａｎｓ．１（１９９７）１０５１－１０５８）によって記載されている。

【0086】

蛍光標識または蛍光体には、希土類キレート（ユーロピウムキレート）、フルオレセイン型標識（ＦＩＴＣ、５－カルボキシフルオロセイン、６－カルボキシフルオロセインを含む）、ローダミン型標識（ＴＡＭＲＡを含む）、ダンシル、リサミン、シアニン、フィコエリトリン、テキサスレッド、およびこれらの類似体が含まれる。蛍光標識は、本明細書に開示される技術を使用して、標的分子内に含まれるアルデヒド基に結合させることができる。蛍光色素および蛍光標識試薬には、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（米国オレゴン州ユージーン）およびＰｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（イリノイ州ロックフォード）から市販されるものが含まれる。

【0087】

（ｂ）発光色素
発光色素または標識は、化学発光色素および電気化学発光色素に更に下位分類することができる。

【0088】

化学発光標識の異なるクラスには、ルミノール、アクリジニウム化合物、セレンテラジンおよび類似体、ジオキセタン、ペルオキシシュウ酸およびペルオキシシュウ酸誘導体に基づく系が含まれる。免疫診断手順のためには、主にアクリジニウム系標識が使用される（詳細な概要は、Ｄｏｄｅｉｇｎｅ Ｃ．ら、Ｔａｌａｎｔａ５１（２０００）４１５－４３９において付与されている）。

【0089】

電気化学発光標識として使用される主な関連性のある標識は、それぞれルテニウムおよびイリジウム系の電気化学発光錯体である。電気化学発光（ＥＣＬ）は、高感度で選択的な方法として分析用途に非常に有用であることが証明された。ＥＣＬは、化学発光分析の分析上の利点（背景光シグナルの非存在）を、電極電位を適用することによる反応制御の容易さと組み合わせている。概して、ルテニウム錯体、特に液相または液固界面においてＴＰＡ（トリプロピルアミン）を用いて再生する［Ｒｕ（Ｂｐｙ）３］２＋（約６２０ｎｍで光子を放出）がＥＣＬ標識として使用される。

【0090】

電気化学発光（ＥＣＬ）アッセイは、目的の分析物の存在および濃度の高感度かつ正確な測定を提供する。このような技法は、適切な化学的環境において電気化学的に酸化または還元したときに発光するように誘導することができる標識または他の反応物を使用する。このような電気化学発光は、特定の時間に特定の様式で作用電極に印加される電圧によって引き起こされる。標識によって生成された光は、測定され、分析物の存在または量を示す。このようなＥＣＬ技法のより完全な説明については、米国特許第５，２２１，６０５号、米国特許第５，５９１，５８１号、米国特許第５，５９７，９１０号、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９０／０５２９６、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９２／１４１３９、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９０／０５３０１、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／２４６９０、ＰＣＴ出願公開ＵＳ９５／０３１９０、ＰＣＴ出願ＵＳ９７／１６９４２、ＰＣＴ出願公開ＵＳ９６／０６７６３、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９５／０８６４４、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／０６９４６、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／３３４１１、ＰＣＴ出願公開ＷＯ８７／０６７０６、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／３９５３４、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／４１１７５、ＰＣＴ出願公開ＷＯ９６／４０９７８、ＰＣＴ／ＵＳ９７／０３６５３および米国特許出願０８／４３７，３４８（米国特許第５，６７９，５１９号）が参照される。また、Ｋｎｉｇｈｔら（Ａｎａｌｙｓｔ、１９９４、１１９：８７９－８９０）によるＥＣＬの分析用途に関する１９９４年の総説および総説に引用されている参考文献も参照される。一実施形態では、本明細書による方法は、電気化学発光標識を使用して実施される。

【0091】

近年、イリジウム系ＥＣＬ標識も記載されている（ＷＯ２０１２１０７４１９）。

【0092】

（ｃ）放射性標識は、放射性同位体（放射性核種）、例えば、３Ｈ、１１Ｃ、１４Ｃ、１８Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、６４Ｃｕ、６８Ｇｎ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、９９ＴＣ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１３３Ｘｅ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、または１３１Ｂｉを採用する。

【0093】

（ｄ）イメージングおよび治療目的のための標識として適切な金属キレート錯体は当技術分野でよく知られている（米国特許出願公開第２０１０／０１１１８６１号；米国特許第５，３４２，６０６号；米国特許第５，４２８，１５５号；米国特許第５，３１６，７５７号；米国特許第５，４８０，９９０号；米国特許第５，４６２，７２５号；米国特許第５，４２８，１３９号；米国特許第５，３８５，８９３号；米国特許第５，７３９，２９４号；米国特許第５，７５０，６６０号；米国特許第５，８３４，４６１号；Ｈｎａｔｏｗｉｃｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ６５（１９８３）１４７－１５７；Ｍｅａｒｅｓら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１４２（１９８４）６８－７８；Ｍｉｒｚａｄｅｈら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１（１９９０）５９－６５；Ｍｅａｒｅｓら、Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ（１９９０）、Ｓｕｐｐｌ．１０：２１－２６；Ｉｚａｒｄら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３（１９９２）３４６－３５０；Ｎｉｋｕｌａら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２（１９９５）３８７－９０；Ｃａｍｅｒａら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０（１９９３）９５５－６２；Ｋｕｋｉｓら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３９（１９９８）２１０５－２１１０；Ｖｅｒｅｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４（２００３）１６６３－１６７０；Ｃａｍｅｒａら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２１（１９９４）６４０－６４６；Ｒｕｅｇｇら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）４２２１－４２２６；Ｖｅｒｅｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４（２００３）１６６３－１６７０；Ｌｅｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１（２００１）４４７４－４４８２；Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４（２００３）１１０５－１１１２；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１０（１９９９）１０３－１１１；Ｍｉｅｄｅｒｅｒら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４５（２００４）１２９－１３７；ＤｅＮａｒｄｏら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４（１９９８）２４８３－９０；Ｂｌｅｎｄら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ１８（２００３）３５５－３６３；Ｎｉｋｕｌａら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４０（１９９９）１６６－７６；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３９（１９９８）８２９－３６；Ｍａｒｄｉｒｏｓｓｉａｎら、Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０（１９９３）６５－７４；Ｒｏｓｅｌｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，１４（１９９９）２０９－２０）。

【0094】

実施形態
第１の態様では、本発明は、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価する方法であって、
ａ）患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定することと、
ｂ）決定された量を基準と比較することと
を含む、方法に関する。

【0095】

実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量の上昇は、患者における腺筋症の存在または発症のリスクを示す。特に、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量は、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量が基準または基準試料中のｓＦＲＰ４の量よりも高い場合、患者における腺筋症の存在または発症のリスクを示す。特に、ｓＦＲＰ４は、腺筋症に罹患していないまたは腺筋症を発症するリスクがない個体からの同じ流体試料中よりも、腺筋症の存在または発症のリスクについて評価された患者からの流体試料中でより多くの量で検出可能である。

【0096】

特に、ｓＦＲＰ４の量の５０％以上の上昇は、腺筋症が存在するか、腺筋症の発症のリスクが存在することを示す。特に、ｓＦＲＰ４の量の１００％以上の上昇は、腺筋症が存在するか、腺筋症の発症のリスクが存在することを示す。特に、ｓＦＲＰ４の量の１５０％以上の上昇は、腺筋症が存在するか、腺筋症の発症のリスクが存在することを示す。特に、ｓＦＲＰ４の量の２００％以上の上昇は、腺筋症が存在するか、腺筋症の発症のリスクが存在することを示す。

【0097】

実施形態では、患者の試料は体液試料である。特定の実施形態では、試料は、全血、血清または血漿試料である。実施形態では、試料はｉｎ ｖｉｔｒｏでの試料である、すなわち、それはｉｎ ｖｉｔｒｏで分析されることになり、体内に戻されることはない。

【0098】

特定の実施形態では、患者は実験動物、家畜または霊長類である。特定の実施形態では、患者はヒト患者である。特定の実施形態では、患者はヒトの女性患者である。

【0099】

特に、手術を行わずに評価を行う。特に、評価は、手術を使用して患者における腺筋症の存在または重症度を評価することなく行われる。

【0100】

実施形態では、本発明の方法はｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法である。

【0101】

実施形態では、ｓＦＲＰ４の量は、抗体を使用して、特にモノクローナル抗体を使用して決定される。実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定する工程ａ）は、イムノアッセイを行うことを含む。実施形態では、イムノアッセイは、直接的または間接的な形式のいずれかで行われる。実施形態では、そのようなイムノアッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または発光、蛍光、化学発光もしくは電気化学発光の検出に基づくイムノアッセイからなる群から選択される。

【0102】

特定の実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定する工程ａ）は、
ｉ）患者の試料を、ｓＦＲＰ４に特異的に結合する１つ以上の抗体とインキュベートし、それによって抗体とｓＦＲＰ４との複合体を生成する工程、および
ｉｉ）工程ｉ）で形成された複合体を定量し、それにより、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を定量する工程
を含む。

【0103】

特定の実施形態では、工程ｉ）において、試料は、ｓＦＲＰ４に特異的に結合する２つの抗体とインキュベートされる。当業者に明らかなように、試料は、第１の抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体複合体を形成するのに十分は時間および条件下で、いずれかの所望の順序で、すなわち、最初に第１の抗体、次いで第２の抗体と、または最初に第２の抗体、次いで第１の抗体と、または同時に第１の抗体および第２の抗体と接触させ得る。当業者であれば容易に理解するように、特異的抗ｓＦＲＰ４抗体とｓＦＲＰ４抗原／分析物（＝抗ｓＦＲＰ４複合体）との間の複合体の形成、または第１の抗ｓＦＲＰ４抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）および第２の抗ｓＦＲＰ４抗体（＝抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体複合体）を含む二次複合体もしくはサンドイッチ複合体の形成のいずれかのために適切または十分である時間および条件を確立することは、日常的な実験に過ぎない。

【0104】

抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４複合体の検出は、任意の適切な手段によって実施され得る。第１の抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体の複合体の検出は、任意の適切な手段によって実施され得る。当業者は、このような手段／方法に完全に精通している。

【0105】

特定の実施形態では、ｓＦＲＰ４に対する第１の抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）およびｓＦＲＰ４に対する第２の抗体を含むサンドイッチが形成され、第２の抗体は検出可能に標識されている。

【0106】

一実施形態では、ｓＦＲＰ４に対する第１の抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）およびｓＦＲＰ４に対する第２の抗体を含むサンドイッチが形成され、ここで、第２の抗体は検出可能に標識化され、第１の抗ｓＦＲＰ４抗体は固相に結合することができるか、または固相に結合されている。

【0107】

実施形態では、第２の抗体は、直接的または間接的に検出可能に標識されている。特定の実施形態では、第２の抗体は、発光色素、特に化学発光色素または電気化学発光色素で検出可能に標識されている。

【0108】

実施形態では、方法は、患者における月経困難症および／または下腹部痛の存在の評価を更に含む。実施形態では、月経困難症および／または下腹部痛の存在は、ＶＡＳスケールにより評価される。実施形態では、月経困難症ＶＡＳスコアが４以上であることは、中程度または重度の月経困難症を示した。

【0109】

第２の態様では、本発明は、腺筋症の治療について患者を選択する方法であって、
患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、
決定された量または濃度を基準と比較することと
を含む、方法に関する。

【0110】

本発明のさらなる実施形態では、治療は、特に薬物ベースの治療、疼痛管理治療または外科的治療である。

【0111】

実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量の上昇が決定された場合、患者は腺筋症の治療について選択される。特に、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量が基準または基準試料中のｓＦＲＰ４の量よりも多い場合、患者は腺筋症の治療について選択される。特に、ｓＦＲＰ４の量が、腺筋症に罹患していないもしくは腺筋症を発症するリスクがない、または腺筋症の療法について選択されていない個体からの流体試料中よりも、患者からの同じ流体試料中で多い場合、患者は腺筋症の治療について選択される。

【0112】

特に、ｓＦＲＰ４の量が５０％以上上昇する場合、患者は腺筋症の治療について選択される。特に、ｓＦＲＰ４の量が１００％以上上昇する場合、患者は腺筋症の治療について選択される。特に、ｓＦＲＰ４の量が１５０％以上上昇する場合、患者は腺筋症の治療について選択される。特に、ｓＦＲＰ４の量が２００％以上上昇する場合、患者は腺筋症の治療について選択される。

【0113】

実施形態では、患者は、薬物ベースの治療または外科的治療からなる群から選択される腺筋症の治療について選択される。

【0114】

実施形態では、腺筋症の薬物ベースの治療は、神経性炎症を阻害または標的化することおよび／または鎮痛薬および／またはホルモン治療（例えば、ホルモン避妊薬またはＧｎＲＨ類似体）である。

【0115】

いくつかの実施形態では、腺筋症の外科的治療は、とりわけ、子宮摘出術、子宮の除去；例えば腺腫性病変の外科的切除としての子宮保存手術；嚢胞（腺筋切除術、膀胱切除術）；子宮動脈塞栓術（ＵＡＥ）または神経温存手術を包含する。

【0116】

実施形態では、患者の試料は体液試料である。特定の実施形態では、試料は、全血、血清または血漿試料である。実施形態では、試料はｉｎ ｖｉｔｒｏでの試料である、すなわち、それはｉｎ ｖｉｔｒｏで分析され、体内に戻されない。

【0117】

特定の実施形態では、患者は実験動物、家畜または霊長類である。特定の実施形態では、患者はヒト患者である。特定の実施形態では、患者はヒトの女性患者である。

【0118】

実施形態では、本発明の方法はｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法である。

【0119】

実施形態では、ｓＦＲＰ４の量は、抗体を使用して、特にモノクローナル抗体を使用して決定される。実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定する工程ａ）は、イムノアッセイを行うことを含む。実施形態では、イムノアッセイは、直接的または間接的な形式のいずれかで行われる。実施形態では、そのようなイムノアッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または発光、蛍光、化学発光もしくは電気化学発光の検出に基づくイムノアッセイからなる群から選択される。

【0120】

特定の実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定する工程ａ）は、
ｉ）患者の試料を、ｓＦＲＰ４に特異的に結合する１つ以上の抗体とインキュベートし、それによって抗体とｓＦＲＰ４との複合体を生成する工程、および
ｉｉ）工程ｉ）で形成された複合体を定量し、それにより、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を定量する工程
を含む。

【0121】

特定の実施形態では、工程ｉ）において、試料は、ｓＦＲＰ４に特異的に結合する２つの抗体とインキュベートされる。当業者に明らかなように、試料は、第１の抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体複合体を形成するのに十分は時間および条件下で、いずれかの所望の順序で、すなわち、最初に第１の抗体、次いで第２の抗体と、または最初に第２の抗体、次いで第１の抗体と、または同時に第１の抗体および第２の抗体と接触させ得る。当業者であれば容易に理解するように、特異的抗ｓＦＲＰ４抗体とｓＦＲＰ４抗原／分析物（＝抗ｓＦＲＰ４複合体）との間の複合体の形成、または第１の抗ｓＦＲＰ４抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）および第２の抗ｓＦＲＰ４抗体（＝抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体複合体）を含む二次複合体もしくはサンドイッチ複合体の形成のいずれかのために適切または十分である時間および条件を確立することは、日常的な実験に過ぎない。

【0122】

抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４複合体の検出は、任意の適切な手段によって実施され得る。第１の抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体の複合体の検出は、任意の適切な手段によって実施され得る。当業者は、このような手段／方法に完全に精通している。

【0123】

特定の実施形態では、ｓＦＲＰ４に対する第１の抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）およびｓＦＲＰ４に対する第２の抗体を含むサンドイッチが形成され、第２の抗体は検出可能に標識されている。

【0124】

一実施形態では、ｓＦＲＰ４に対する第１の抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）およびｓＦＲＰ４に対する第２の抗体を含むサンドイッチが形成され、ここで、第２の抗体は検出可能に標識化され、第１の抗ｓＦＲＰ４抗体は固相に結合することができるか、または固相に結合されている。

【0125】

実施形態では、第２の抗体は、直接的または間接的に検出可能に標識されている。特定の実施形態では、第２の抗体は、発光色素、特に化学発光色素または電気化学発光色素で検出可能に標識されている。

【0126】

実施形態では、方法は、患者における月経困難症および／または下腹部痛の存在の評価を更に含む。実施形態では、月経困難症および／または下腹部痛の存在は、ＶＡＳスケールにより評価される。実施形態では、月経困難症ＶＡＳスコアが４以上であることは、中程度または重度の月経困難症を示した。実施形態では、３以下のスコアは、月経困難症がないことまたは軽度であることを示す。

【0127】

実施形態では、方法は、ｓＦＲＰ４の量もしくは濃度と月経困難症との比、ｓＦＲＰ４の量もしくは濃度とＶＡＳスケールに従う下腹部痛との比、またはｓＦＲＰ４の量もしくは濃度およびＣＡ－１２５の量もしくは濃度を計算することを含む。

【0128】

第３の態様では、本発明は、腺筋症に罹患しているかまたは腺筋症の処置を受けている患者をモニタリングする方法であって、
ａ）患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度を決定することと、
ｂ）決定された量または濃度を基準と比較することと
を含む、方法に関する。

【0129】

実施形態では、腺筋症に罹患している患者をモニタリングして、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度が経時的に変化しているかどうかを決定する。特に、腺筋症に罹患している患者をモニタリングして、ｓＦＲＰ４の量または濃度が経時的に増加しているか、減少しているか、または変化していないかを決定する。実施形態では、腺筋症に罹患している患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量の上昇が決定された場合、その患者をモニタリングする。

【0130】

実施形態では、腺筋症に対する処置を受けている患者をモニタリングして、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度が変化しているかどうかを決定する。特に、腺筋症に対する処置を受けている患者をモニタリングして、ｓＦＲＰ４の量または濃度が増加しているか、減少しているか、または変化していないかを決定する。特に、腺筋症に対する処置を受けている患者をモニタリングして、ｓＦＲＰ４の量または濃度が、適用された治療に起因して増加しているか、減少しているか、または変化していないかを決定する。実施形態では、腺筋症に対する処置を受けている患者におけるｓＦＲＰ４の量または濃度の減少は、治療が有効であることを示す。実施形態では、腺筋症に対する処置を受けている患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度の不変または増加は、治療が無効であることを示し、すなわち、腺筋症に対する処置を受けている患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量または濃度の不変または増加は、持続したまたは再発した腺筋症を示す。

【0131】

特定の実施形態では、腺筋症に対する処置を受けている患者の試料中のｓＦＲＰ４の量または濃度が変化しないかまたは増加することが決定された場合に、治療が適用される。

【0132】

実施形態では、患者は、異なる時点で数回モニタリングされる。実施形態では、患者は、数週間、数ヶ月または数年の時間フレーム内で数回モニタリングされる。特定の実施形態では、患者は、月に１回または年に１回モニタリングされる。実施形態では、腺筋症に罹患している患者は、腺筋症の診断後、月に１回または年に１回モニタリングされる。実施形態では、腺筋症に対する処置を受けている患者は、治療後に１回、特に外科的治療後に１回モニタリングされる。特に、腺筋症に対する処置を受けている患者は、処置の有効性および／または腺筋症の再発を決定するために、月に１回または年に１回モニタリングされる。

【0133】

実施形態では、腺筋症の治療は、薬物ベースの治療または外科的治療からなる群から選択される。実施形態では、腺筋症の薬物ベースの治療は、神経性炎症を阻害または標的化することおよび／または鎮痛薬および／またはホルモン治療（例えば、ホルモン避妊薬またはＧｎＲＨ類似体）である。いくつかの実施形態では、腺筋症の外科的治療は、とりわけ、子宮摘出術、子宮の除去、例えば腺腫性病変、嚢胞の外科的切除としての子宮保存手術、または子宮動脈塞栓術（ＵＡＥ）もしくは神経温存手術を包含する。

【0134】

実施形態では、患者の試料は体液試料である。特定の実施形態では、試料は、全血、血清または血漿試料である。実施形態では、試料はｉｎ ｖｉｔｒｏでの試料である、すなわち、それはｉｎ ｖｉｔｒｏで分析され、体内に戻されない。

【0135】

特定の実施形態では、患者は実験動物、家畜または霊長類である。特定の実施形態では、患者はヒト患者である。特定の実施形態では、患者はヒトの女性患者である。

【0136】

実施形態では、本発明の方法はｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法である。

【0137】

実施形態では、ｓＦＲＰ４の量は、抗体を使用して、特にモノクローナル抗体を使用して決定される。実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定する工程ａ）は、イムノアッセイを行うことを含む。実施形態では、イムノアッセイは、直接的または間接的な形式のいずれかで行われる。実施形態では、そのようなイムノアッセイは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、または発光、蛍光、化学発光もしくは電気化学発光の検出に基づくイムノアッセイからなる群から選択される。

【0138】

特定の実施形態では、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を決定する工程ａ）は、
ｉ）患者の試料を、ｓＦＲＰ４に特異的に結合する１つ以上の抗体とインキュベートし、それによって抗体とｓＦＲＰ４との複合体を生成する工程、および
ｉｉ）工程ｉ）で形成された複合体を定量し、それにより、患者の試料におけるｓＦＲＰ４の量を定量する工程
を含む。

【0139】

特定の実施形態では、工程ｉ）において、試料は、ｓＦＲＰ４に特異的に結合する２つの抗体とインキュベートされる。当業者に明らかなように、試料は、第１の抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体複合体を形成するのに十分は時間および条件下で、いずれかの所望の順序で、すなわち、最初に第１の抗体、次いで第２の抗体と、または最初に第２の抗体、次いで第１の抗体と、または同時に第１の抗体および第２の抗体と接触させ得る。当業者であれば容易に理解するように、特異的抗ｓＦＲＰ４抗体とｓＦＲＰ４抗原／分析物（＝抗ｓＦＲＰ４複合体）との間の複合体の形成、または第１の抗ｓＦＲＰ４抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）および第２の抗ｓＦＲＰ４抗体（＝抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体複合体）を含む二次複合体もしくはサンドイッチ複合体の形成のいずれかのために適切または十分である時間および条件を確立することは、日常的な実験に過ぎない。

【0140】

抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４複合体の検出は、任意の適切な手段によって実施され得る。第１の抗ｓＦＲＰ４抗体／ｓＦＲＰ４／第２の抗ｓＦＲＰ４抗体の複合体の検出は、任意の適切な手段によって実施され得る。当業者は、このような手段／方法に完全に精通している。

【0141】

特定の実施形態では、ｓＦＲＰ４に対する第１の抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）およびｓＦＲＰ４に対する第２の抗体を含むサンドイッチが形成され、第２の抗体は検出可能に標識されている。

【0142】

一実施形態では、ｓＦＲＰ４に対する第１の抗体、ｓＦＲＰ４（分析物）およびｓＦＲＰ４に対する第２の抗体を含むサンドイッチが形成され、ここで、第２の抗体は検出可能に標識化され、第１の抗ｓＦＲＰ４抗体は固相に結合することができるか、または固相に結合されている。

【0143】

実施形態では、第２の抗体は、直接的または間接的に検出可能に標識されている。特定の実施形態では、第２の抗体は、発光色素、特に化学発光色素または電気化学発光色素で検出可能に標識されている。

【0144】

第４の態様では、本発明は、患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを評価するためのコンピュータ実装方法であって、
ａ）処理ユニットにおいて、患者からの試料中のｓＦＲＰ４のレベルの値を受信することと、
ｂ）工程（ａ）において受信した値を処理ユニットで処理することであって、処理することが、ｓＦＲＰ４のレベルについて１つ以上の閾値をメモリから検索することと、工程（ａ）において受信した値を１つ以上の閾値と比較することとを含む、値を処理ユニットで処理することと、
ｃ）患者が腺筋症を有するかまたは腺筋症を発症するリスクがあるかどうかを、出力装置を介して評価することであって、評価が工程（ｂ）の結果に基づく、出力装置を介して評価することと
を含む、方法に関する。

【0145】

上記の方法は、コンピュータ実装方法である。好ましくは、コンピュータ実装方法の全ての工程は、コンピュータ（またはコンピュータネットワーク）の１つ以上の処理ユニットによって実行される。したがって、工程（ｃ）の評価は、処理ユニットによって実行される。好ましくは、前記評価は、工程（ｂ）の結果に基づく。

【0146】

工程（ａ）で受信した値（複数の場合がある）は、本書の他の場所で説明されているように、腺筋症に罹患している患者からのバイオマーカーのレベルの決定から導き出されるものとする。好ましくは、値は、バイオマーカーの濃度の値である。値は通常、値を処理ユニットにアップロードまたは送信することによって処理ユニットによって受信される。あるいは、ユーザーインターフェースを介して値を入力することにより、処理ユニットが値を受け取ることができる。

【0147】

前述の方法の一実施形態では、工程（ｂ）に示される基準（複数の場合がある）は、メモリから確立される。好ましくは、基準値はメモリから確立される。

【0148】

本発明の前述のコンピュータ実装方法の一実施形態では、工程ｃ）で行われる評定の結果は、結果を提示するように構成されたディスプレイを介して提供される。

【0149】

本発明の前述のコンピュータ実装方法の一実施形態では、この方法は、電子医療記録を使用することによって、工程ｃ）で行われた評価に関する情報を腺筋症に罹患している患者に転送する更なる工程を含み得る。

【0150】

以下の実施例および図は、本発明の理解を助けるために提供されており、本発明の真の範囲は、添付の特許請求の範囲に示されている。本発明の趣旨から逸脱することなく、記載されている手順に改変が加えられ得ることが理解される。

【0151】

実施例
実施例１：多施設研究からの試料における腺筋症を有する女性および対照における、バイオマーカーｓＦＲＰ４およびバイオマーカーＣＡ－１２５の診断性能。

【0152】

症例群は、超音波または腹腔鏡可視化によって腺筋症と診断された患者で構成される。対照群には、腺筋症および子宮内膜症のない女性が含まれる。症例群および対照群の選択基準は、腹腔鏡検査または腹腔切開術を予定した骨盤痛／不妊症の存在および１８～４５歳の年齢であった。症例群の除外基準は、妊娠／授乳、悪性腫瘍、再発性腺筋症および子宮内膜症ならびに別の理由による腹腔鏡検査／開腹術（６ヶ月以下）であった。

【0153】

ｓＦＲＰ４は、ｃｏｂａｓ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ＥＣＬＩＡプラットフォーム（ドイツのＲｏｃｈｅ ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓからのＥＣＬＩＡアッセイ）用に開発されたサンドイッチイムノアッセイである、市販前のｓＦＲＰ４用ＥＣＬＩＡアッセイで測定した。アッセイは、ｓＦＲＰ４に特異的に結合するビオチン化およびルテニウム化モノクローナル抗体を含む。各血清試料から４９μＬを使用し、ｃｏｂａｓ ｅ ６０１分析装置（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ドイツ）で希釈せずに測定した。ＣＡ １２５ ＩＩの決定のためのＥｌｅｃｓｙｓ（登録商標）電気化学発光（ＥＣＬ）技術およびアッセイ方法を以下に簡単に説明する。

【0154】

ＣＡ－１２５の濃度は、ｃｏｂａｓ ｅ ６０１分析装置によって決定した。ｃｏｂａｓ ｅ ６０１分析装置を用いたＣＡ １２５ ＩＩの検出は、Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）電気化学発光（ＥＣＬ）技術に基づく。簡単に説明すると、ビオチン標識およびルテニウム標識抗体をそれぞれの量の未希釈試料と合わせ、分析装置でインキュベートする。次いで、ビオチン標識免疫複合体の結合を促進するために、ストレプトアビジン被覆磁性微粒子を加え、装置上でインキュベートする。このインキュベーション工程の後、反応混合物を測定セルに移し、そこでビーズを電極の表面に磁気的に捕捉する。次いで、結合したイムノアッセイ複合体を遊離の残りの粒子から分離するために、その後のＥＣＬ反応のためのトリプロピルアミン（ＴＰＡ）を含有するＰｒｏＣｅｌｌ Ｍ緩衝液を測定セルに導入する。次いで、作用電極と対電極との間の電圧の誘導は、ルテニウム錯体およびＴＰＡによる光子の放出をもたらす反応を開始させる。得られた電気化学発光シグナルは、光電子増倍管によって記録され、それぞれの分析物の濃度レベルを示す数値に変換される。

【0155】

受信者操作特性（ＲＯＣ）曲線を作成した（ｓＦＲＰ４については図１を、Ｃａ－１２５については図２を参照されたい）。モデル性能は、曲線下面積（ＡＵＣ）を検討することによって決定される。可能な最良のＡＵＣは１であり、可能な最低のＡＵＣは０．５である。最適なカットオフを、ヨーデン指数（感度＋特異度の最大和－１）を使用して選択した。

【表1】

【0156】

腺筋症の症例を対照と区別するためのｓＦＲＰ４の診断性能は、バイオマーカーＣＡ－１２５の診断性能と比較してより高い。

【図1a】

【図1b】

【図2a】

【図2b】

【国際調査報告】