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特表2024-518374トランスサイレチン（ＴＴＲ）媒介性アミロイドーシスを治療するための組成物および方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-01
(54)【発明の名称】トランスサイレチン（ＴＴＲ）媒介性アミロイドーシスを治療するための組成物および方法
(51)【国際特許分類】
A61K 31/713 20060101AFI20240423BHJP
A61K 31/573 20060101ALI20240423BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240423BHJP
A61P 25/02 20060101ALI20240423BHJP
A61P 43/00 20060101ALI20240423BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240423BHJP
A61K 31/167 20060101ALI20240423BHJP
A61K 31/135 20060101ALI20240423BHJP
A61K 31/341 20060101ALI20240423BHJP
A61K 31/07 20060101ALI20240423BHJP
A61K 31/603 20060101ALI20240423BHJP
A61K 31/423 20060101ALI20240423BHJP
A61K 48/00 20060101ALI20240423BHJP
C12N 15/113 20100101ALN20240423BHJP
【ＦＩ】
A61K31/713 ZNA
A61K31/573
A61P25/00
A61P25/02
A61P43/00 111
A61P43/00 121
A61P9/00
A61K31/167
A61K31/135
A61K31/341
A61K31/07
A61K31/603
A61K31/423
A61K48/00
C12N15/113 Z
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023567885
(86)(22)【出願日】2022-05-02
(85)【翻訳文提出日】2023-11-02
(86)【国際出願番号】 US2022027210
(87)【国際公開番号】W WO2022235537
(87)【国際公開日】2022-11-10
(31)【優先権主張番号】63/183,434
(32)【優先日】2021-05-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．テフロン
(71)【出願人】
【識別番号】505369158
【氏名又は名称】アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】ＡＬＮＹＬＡＭ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100157956
【弁理士】
【氏名又は名称】稲井 史生
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(72)【発明者】
【氏名】ベスト，ジョン
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
4C206
【Ｆターム（参考）】
4C084AA13
4C084MA66
4C084NA05
4C084NA14
4C084ZA021
4C084ZA022
4C084ZA201
4C084ZA202
4C084ZA221
4C084ZA222
4C084ZA361
4C084ZA362
4C086AA01
4C086AA02
4C086BA03
4C086DA10
4C086DA17
4C086EA16
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA03
4C086MA04
4C086MA66
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA02
4C086ZA20
4C086ZA22
4C086ZA36
4C086ZC75
4C206AA01
4C206AA02
4C206CA10
4C206FA05
4C206GA02
4C206GA31
4C206KA01
4C206MA02
4C206MA03
4C206MA04
4C206MA86
4C206NA05
4C206NA14
4C206ZA02
4C206ZA20
4C206ZA22
4C206ZA36
4C206ZC75
(57)【要約】
有効量のトランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行うための方法が本明細書に開示される。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載のパチシラン医薬品を前記患者に投与することを含み、前記方法は、心機能の改善または安定化をもたらす、方法。
【請求項2】
前記パチシラン医薬品が、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項3】
前記パチシラン医薬品が、３週間毎に一回静脈内投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項4】
前記方法が、左心室腔機能障害の進行を低減する、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
前記方法が、左心室静電容量の低減を防止する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
前記方法が、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの改善または安定化をもたらす、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
前記心エコーパラメータが等容性圧容積（ＰＶ）面積である、請求項６に記載の方法。
【請求項8】
前記等容性ＰＶ面積が、３０ｍｍＨｇの左心室（ＬＶ）拡張終期圧にインデックス付けされる（ＰＶＡｉｓｏ３０）、請求項７に記載の方法。
【請求項9】
前記パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較した前記等容性ＰＶ面積の変化が、プラセボの投与と比較して安定化される、請求項８に記載の方法。
【請求項10】
ＰＶＡｉｓｏ３０の前記ベースラインからの変化が、９ヶ月の治療後、１５００未満、１２００未満、１０００未満、８００未満、６００未満、５００未満、４００未満、３００未満、２００未満、１５０未満、または１００ｍｍＨｇ＊ｍＬ未満である、請求項９に記載の方法。
【請求項11】
ＰＶＡｉｓｏ３０の前記ベースラインからの変化が、１８ヶ月の治療後、２５００未満、２０００未満、１５００未満、１２００未満、１０００未満、９００未満、８００未満、７００未満、または６００ｍｍＨｇ＊ｍＬ未満である、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項12】
遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、ＦＡＰステージ、ＰＮＤスコア、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）または他のニューロパチー関連臨床評価項目、血清パーセントＴＴＲ濃度、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの安定化または改善をもたらす、方法。
【請求項13】
ポリニューロパチーを伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、前記ベースラインは、前記パチシラン医薬品投与前の前記患者の前記ｍＮＩＳ＋７スコアである、方法。
【請求項14】
心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、前記パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善をもたらす、方法。
【請求項15】
心筋症およびポリニューロパチーを伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、前記ベースラインは、前記パチシラン医薬品投与前の前記患者の前記ｍＮＩＳ＋７スコアであり、前記方法は、前記パチシラン医薬品の投与前に決定される前記ベースラインと比較して、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善をもたらす、方法。
【請求項16】
修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの低減を、それを必要とするヒト患者において行うための方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの、前記修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、前記ベースラインは、前記パチシラン医薬品投与前の前記患者の前記ｍＮＩＳ＋７スコアである、方法。
【請求項17】
生活の質、運動力、障害、歩行速度、栄養状態、および／または自律神経症状の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、前記パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、前記生活の質、前記運動力、前記障害、前記歩行速度、前記栄養状態、および／または前記自律神経症状のそれぞれの、安定化または改善をもたらす、方法。
【請求項18】
Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、ＮＩＳ－Ｗ、Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、１０メートル歩行試験（１０－ＭＷＴ）、修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、ＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアからなる群から選択される少なくとも一つのニューロパチー関連臨床評価項目の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、前記パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、前記少なくとも一つの臨床評価項目の安定化または改善をもたらす、方法。
【請求項19】
血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、前記パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、前記血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または前記左心室（ＬＶ）ストレインおよび／または前記ＬＶ壁厚の安定化または改善を、それぞれもたらす、方法。
【請求項20】
ＦＡＰステージおよび／またはＰＮＤスコアおよび／または血清パーセントＴＴＲ濃度の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法であって、前記方法は、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、前記患者に体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、前記パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、前記方法は、前記パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、前記ＦＡＰステージおよび／または前記ＰＮＤスコアおよび／または前記血清パーセントＴＴＲ濃度の安定化または改善を、それぞれもたらす、方法。
【請求項21】
前記ｍＮＩＳ＋７スコアの前記ベースラインからの変化が、－６．０点である、請求項１２、１３、１５、または１６に記載の方法。
【請求項22】
ｍＮＩＳ＋７スコアの前記ベースラインからの減少も、９ヶ月で決定される、請求項１２、１３、１５、または１６に記載の方法。
【請求項23】
前記方法が、ａ．Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、および
ｂ．ＮＩＳ－Ｗ、および
ｃ．Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、および
ｄ．１０メートル歩行試験（１０－ＭＷＴ）、および
ｅ．修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、および
ｆ．ＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコア、からなる群から選択される一つ以上のニューロパチー関連臨床評価項目における、前記ベースラインを上回る改善をもたらす、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項24】
前記方法が、前記ニューロパチー障害関連臨床評価項目のすべてにおいて改善をもたらす、請求項２３に記載の方法。
【請求項25】
前記方法が、Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）およびＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアおよび１０メートル歩行試験の改善をもたらす、請求項２３に記載の方法。
【請求項26】
前記方法が、前記パチシラン医薬品の投与前に決定される前記ベースラインと比較して、前記患者における血清パーセントＴＴＲ濃度の低減をもたらす、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項27】
前記方法が、前記パチシラン医薬品の投与前に決定される前記ベースラインと比較して、前記患者におけるＦＡＰステージの安定化または回帰をもたらす、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
前記方法が、前記パチシラン医薬品の投与前に決定される前記ベースラインと比較して、ＰＮＤスコアの安定化または回帰をもたらす、請求項１～２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
前記方法が、前記パチシラン医薬品の投与前に決定される前記ベースラインと比較して、皮膚生検における表皮内神経線維密度の減少をもたらす、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
前記患者が、少なくとも１２ヶ月間、１８ヶ月間、２４ヶ月間、３０ヶ月間、または３６ヶ月間、前記パチシラン医薬品を投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
前記患者が、心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を必要としており、前記方法が、前記パチシラン医薬品の投与前に決定される前記ベースラインと比較して、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの改善または安定化をもたらす、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
前記心臓マーカーは、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度であり、前記心エコーパラメータは、左心室（ＬＶ）ストレインまたはＬＶ壁厚である、請求項３１に記載の方法。
【請求項33】
前記患者に、以下：デキサメタゾン、経口パラセタモール／アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミン、およびラニチジン、の前投薬を投与することをさらに含む、請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項34】
前記患者に、以下：ａ．ＩＶデキサメタゾン１０ｍｇ、または同等物、および
ｂ．経口パラセタモール／アセトアミノフェン５００ｍｇ、または同等物、および
ｃ．ＩＶヒスタミンＨ１受容体拮抗薬（Ｈ１ブロッカー）：ジフェンヒドラミン５０ｍｇ、または同等の他のＩＶ Ｈ１ブロッカーもしくはヒドロキシジン２５ｍｇ、もしくはＰＯでフェキソフェナジン３０もしくは６０ｍｇ、もしくはＰＯでセチリジン１０ｍｇ、および
ｄ．ＩＶヒスタミンＨ２受容体拮抗薬（Ｈ２ブロッカー）：ラニチジン５０ｍｇもしくはファモチジン２０ｍｇ、または同等の他のＨ２ブロッカー用量、の前投薬を投与することをさらに含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項35】
前記前投薬が、各パチシラン医薬品投与の約一時間前に投与される、請求項３３または請求項３４に記載の方法。
【請求項36】
前記患者に、ビタミンＡのＵＳＤＡ推奨日当の経口一日用量を投与することをさらに含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項37】
四量体安定化剤を投与することをさらに含む、請求項１～３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項38】
前記四量体安定化剤が、タファミジスまたはジフルニサルである、請求項３７に記載の方法。
【請求項39】
前記患者が、ａ．白人であり、および／または
ｂ．北米に居住し、および／または
ｃ．６５歳以上であり、および／または
ｄ．男性であり、および／または
ｅ．ＦＡＰステージＩを有し、および／または
ｆ．ＦＡＰステージＩＩを有し、および／または
ｇ．８～１６５のベースラインｍＮＩＳ＋７スコアを有し、および／または
ｈ．Ｖａｌ３０ Ｍｅｔ ＴＴＲ変異を有し、および／または
ｉ．表Ｘに見られる一つ以上のＴＴＲ変異を有し、および／または
ｊ．心アミロイド関与の心エコーによる証拠を有し、および／または
ｋ．以前に長期のＴＴＲ四量体安定化剤を使用した履歴を有する、請求項１～３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項40】
前記患者が、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有する、請求項１６～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項41】
前記患者が、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有さない、請求項１６～３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項42】
前記患者が、ＴＴＲ関連障害を有する、請求項１６～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
前記ＴＴＲ関連障害が、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）、症候性ポリニューロパチー、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、および軟髄膜／ＣＮＳ（中枢神経系）アミロイドーシスからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
【請求項44】
少なくとも一つの薬物の投与が、前記患者によって実施される、請求項１～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
少なくとも一つの薬物の投与が、医療専門家によって実施される、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
投与が８０分にわたって実施される、請求項１～４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項47】
前記ベースラインが平均である、請求項１～４６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願
本出願は、２０２１年５月３日に出願された米国仮特許出願第６３／１８３，４３４号の優先権の利益を主張する。先述の出願の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年５月３日に出願された米国仮特許出願第６３／１８３，４３４号の優先権の利益を主張する。先述の出願の内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
配列表
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含んでおり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。先述のＡＳＣＩＩの写しは、２０２２年４月２９日に作成され、１２１３０１－２００２０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称で、サイズは１，６９２バイトである。
本願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含んでおり、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。先述のＡＳＣＩＩの写しは、２０２２年４月２９日に作成され、１２１３０１－２００２０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称で、サイズは１，６９２バイトである。
【背景技術】
【0003】
トランスサイレチン（ＴＴＲ）は、主に肝臓で産生される四量体タンパク質である。ＴＴＲ遺伝子の変異は、タンパク質四量体を不安定化し、単量体のミスフォールディングおよびＴＴＲアミロイド線維への凝集をもたらす（ＡＴＴＲ）。組織沈着は、全身性ＡＴＴＲアミロイドーシスをもたらす（Ｃｏｕｔｉｎｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｆｏｒｔｙ ｙｅａｒｓ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ Ｉ ａｍｙｌｏｉｄ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ４８３ ｃａｓｅｓ．Ｉｎ：Ｇｌｅｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｙｌｏｉｄ ａｎｄ Ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｘｃｅｒｐｔａ Ｍｅｄｉａ，１９８０ ｐｇ．８８－９３；Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ａｎｄ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄｏｔｉｃ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｒｅｃｅｎｔ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ＦＥＢＳ Ｊ ２００７，２７４：１６３７－１６５０；Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｆｉｂｒｉｌ ｉｎ ｓｅｎｉｌｅ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｎｏｒｍａｌ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １９９０，８７：２８４３－２８４５）。１００を超える報告されたＴＴＲ変異は、様々な疾患症状を示す。
【0004】
ＴＴＲアミロイドーシスは、様々な形態で現れる。末梢神経系がより顕著に影響を受ける場合、疾患は家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）と呼ばれる。心臓が主に関与しているが神経系が関与していない場合、疾患は家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）と呼ばれる。ＴＴＲアミロイドーシスの第三の主要なタイプは、軟髄膜／ＣＮＳ（中枢神経系）アミロイドーシスと呼ばれる。
【0005】
家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）およびＡＴＴＲ関連心筋症に関連する最も一般的な変異は、それぞれＶａｌ３０Ｍｅｔである（Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｔａｆａｍｉｄｉｓ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２０１２，７９：７８５－７９２）およびＶａｌ１２２Ｉｌｅ（Ｃｏｎｎｏｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｄｉａｃ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｉｎ Ａｆｒｉｃａｎ Ａｍｅｒｉｃａｎｓ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ Ｖ１２２Ｉ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ ２００９，１５８：６０７－６１４）。
【0006】
ＦＡＰに対する現在の治療選択肢は、循環アミロイド形成タンパク質の量の安定化または減少に焦点を当てている。同所性肝移植は、変異ＴＴＲレベルを低減し（Ｈｏｌｍｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｗｏ Ｓｗｅｄｉｓｈ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄｏｔｉｃ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ（ＦＡＰ－ｍｅｔ３０）．Ｃｌｉｎ Ｇｅｎｅｔ １９９１，４０：２４２－２４６）、早期のＦＡＰ患者において生存率の改善が報告されているが、野生型ＴＴＲの沈着は継続し得る（Ｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｓ ｉｎｔｏ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ ｉｎ ＦＡＰ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｍ Ｊ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ２００７，７：２３５－２４２；Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｒａｐｉｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ａ ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ ｎａｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｓｔｕｄｙ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２０１５ Ａｕｇ ２５；８５（８）６７５－８２；Ｙａｍａｓｈｉｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｆｔｅｒ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２０１２，７８：６３７－６４３；Ｏｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄｏｔｉｃ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ｉｍｐａｃｔ ｏｎ Ｓｗｅｄｉｓｈ ｐａｔｉｅｎｔｓ’ｓｕｒｖｉｖａｌ．Ｌｉｖｅｒ Ｔｒａｎｓｐｌ ２００９，１５：１２２９－１２３５；Ｓｔａｎｇｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｃａｒｄｉａｃ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ａｍｙｌｏｉｄ ｆｉｂｒｉｌｌｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １９９８，６６：２２９－２３３；Ｆｏｓｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｖｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｎｏｒｄｉｃ ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ － Ａｎ ｉｎｔｅｎｔｉｏｎ ｔｏ ｔｒｅａｔ ａｎｄ ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｒｏｍ Ｔｈｅ Ｎｏｒｄｉｃ Ｌｉｖｅｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ １９８２－２０１３．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．２０１５ Ｊｕｎ；５０（６）：７９７－８０８．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｉｎ ｐｒｅｓｓ）。
【0007】
タファミジスおよびジフルニサルは循環ＴＴＲ四量体を安定化させ、疾患進行速度を遅らせることができる（Ｂｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ ｄｉｆｌｕｎｉｓａｌ ｆｏｒ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．ＪＡＭＡ ２０１３，３１０：２６５８－２６６７；Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔａｆａｍｉｄｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２０１３，２６０：２８０２－２８１４；Ｌｏｚｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｔａｆａｍｉｄｉｓ ｉｎ ｌａｔｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ Ｍｅｔ３０ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２０１３，２０：１５３９－１５４５）。しかしながら、症状は、大多数の患者において治療中も悪化し続け、ＦＡＰに対する新しい、疾患修飾治療選択肢の必要性を強調している。
【0008】
ＴＴＲを標的とするｄｓＲＮＡの説明は、例えば、国際特許出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１３８１（ＷＯ２０１０／０４８２２８）および国際特許出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５５３１１（ＷＯ２０１１／０５６８８３）に見出される。
【発明の概要】
【0009】
遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）（ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う、または伴わない）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法が本明細書に記載され、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡ用量で投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、ＦＡＰステージ、ＰＮＤスコア、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）または他のニューロパチー関連臨床評価項目、血清パーセントＴＴＲ濃度、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの安定化または改善をもたらす。
【0010】
有効量のトランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、ニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）または修正ＮＩＳ（ｍＮＩＳ＋７）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行うための方法も本明細書に記載され、有効量は、ヒト対象の血清中のＴＴＲタンパク質の濃度を５０μｇ／ｍｌ未満または少なくとも８０％低減する。増加するＮＩＳまたはＦＡＰを有する対象にＴＴＲ阻害組成物を投与し、増加するＮＩＳまたはＦＡＰを有する対象におけるＴＴＲタンパク質のレベルを決定することによって、増加するＮＩＳまたは家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）の治療のためのＴＴＲ阻害組成物の投与量を調節するための方法も、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、その後対象に投与されるＴＴＲ阻害組成物の量は、ＴＴＲタンパク質のレベルが５０μｇ／ｍｌ超である場合に増加され、その後対象に投与されるＴＴＲ阻害組成物の量は、ＴＴＲタンパク質のレベルが５０μｇ／ｍｌ未満である場合に減少される。本明細書において、ＴＴＲを阻害するｓｉＲＮＡの製剤化型も記載される。
【0011】
一態様では、本発明は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法を提供し、方法は、表１Ａ，１Ｂまたは１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を患者に投与することを含み、方法は、心機能の改善または安定化をもたらす。
【0012】
いくつかの実施形態では、パチシラン医薬品は、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与される。
【0013】
いくつかの実施形態では、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与される。
【0014】
いくつかの実施形態では、方法は、左心室腔機能障害の進行を低減する。
【0015】
いくつかの実施形態では、方法は、左心室静電容量の低減を防止する。
【0016】
いくつかの実施形態では、方法は、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの改善または安定化をもたらす。
【0017】
いくつかの実施形態では、心エコーパラメータは、等容性圧容積（ＰＶ）面積である。
【0018】
いくつかの実施形態では、等容性ＰＶ面積は、３０ｍｍＨｇの左心室（ＬＶ）拡張終期圧（ＰＶＡｉｓｏ３０）にインデックス付けされる。
【0019】
いくつかの実施形態では、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較した等容性ＰＶ面積の変化は、プラセボの投与と比較して安定化する。
【0020】
いくつかの実施形態では、ＰＶＡｉｓｏ３０のベースラインからの変化は、９ヶ月の治療後、１５００未満、１２００未満、１０００未満、８００未満、６００未満、５００未満、４００未満、３００未満、２００未満、１５０未満、または１００ｍｍＨｇ＊ｍＬ未満である。
【0021】
いくつかの実施形態では、ＰＶＡｉｓｏ３０のベースラインからの変化は、１８ヶ月の治療後、２５００未満、２０００未満、１５００未満、１２００未満、１０００未満、９００未満、８００未満、７００未満、または６００ｍｍＨｇ＊ｍＬ未満である。
【0022】
別の態様では、本発明は、遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、ＦＡＰステージ、ＰＮＤスコア、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）または他のニューロパチー関連臨床評価項目、血清パーセントＴＴＲ濃度、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの安定化または改善をもたらす。
【0023】
一態様では、本発明は、ポリニューロパチーを伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈投与され、方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、ベースラインは、パチシラン医薬品の投与前の患者のｍＮＩＳ＋７スコアである。
【0024】
一態様では、本発明は、心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善をもたらす。
【0025】
別の態様では、本発明は、心筋症およびポリニューロパチーを伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行うための方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、ベースラインは、パチシラン医薬品の投与前の患者のｍＮＩＳ＋７スコアであり、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善をもたらす。
【0026】
一態様では、本発明は、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの低減を、それを必要とするヒト患者において行うための方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、ベースラインは、パチシラン医薬品の投与前の患者のｍＮＩＳ＋７スコアである。
【0027】
別の態様では、本発明は、生活の質、運動力、障害、歩行速度、栄養状態、および／または自律神経症状の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、生活の質、運動力、障害、歩行速度、栄養状態、および／または自律神経症状のそれぞれの、安定化または改善をもたらす。
【0028】
一態様では、本発明は、Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、ＮＩＳ－Ｗ、Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、１０メートル歩行試験（１０－ＭＷＴ）、修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、およびＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアからなる群から選択される少なくとも一つのニューロパチー関連臨床評価項目の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、少なくとも一つの臨床評価項目の安定化または改善をもたらす。
【0029】
別の態様では、本発明は、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度および／または左心室（ＬＶ）ストレインおよび／またはＬＶ壁厚の安定化または改善を、それぞれもたらす。
【0030】
別の態様では、本発明は、ＦＡＰステージおよび／またはＰＮＤスコアおよび／または血清パーセントＴＴＲ濃度の安定化または改善を、それを必要とするヒト患者において行うための方法を提供し、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシラン医薬品は、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、ＦＡＰステージおよび／またはＰＮＤスコアおよび／または血清パーセントＴＴＲ濃度の安定化または改善を、それぞれもたらす。
【0031】
いくつかの実施形態では、ｍＮＩＳ＋７スコアのベースラインからの変化は、－６．０点である。
【0032】
いくつかの実施形態では、ｍＮＩＳ＋７スコアのベースラインからの減少も、９ヶ月で決定される。
【0033】
いくつかの実施形態では、方法は、
ａ．Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、および
ｂ．ＮＩＳ－Ｗ、および
ｃ．Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、および
ｄ．１０メートル歩行試験（１０－ＭＷＴ）、および
ｅ．修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、および
ｆ．ＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコア、からなる群から選択される一つ以上のニューロパチー関連臨床評価項目における、ベースラインを上回る改善をもたらす。
ａ．Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、および
ｂ．ＮＩＳ－Ｗ、および
ｃ．Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、および
ｄ．１０メートル歩行試験（１０－ＭＷＴ）、および
ｅ．修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、および
ｆ．ＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコア、からなる群から選択される一つ以上のニューロパチー関連臨床評価項目における、ベースラインを上回る改善をもたらす。
【0034】
いくつかの実施形態では、本方法は、ニューロパチー関連臨床評価項目のすべての改善をもたらす。
【0035】
いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）およびＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアおよび１０メートル歩行試験の改善をもたらす。
【0036】
いくつかの実施形態では、本方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、患者における血清パーセントＴＴＲ濃度の低減をもたらす。
【0037】
いくつかの実施形態では、本方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、患者におけるＦＡＰステージの安定化または回帰をもたらす。
【0038】
いくつかの実施形態では、本方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、ＰＮＤスコアの安定化または回帰をもたらす。
【0039】
いくつかの実施形態では、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、皮膚生検における表皮内神経線維密度の減少をもたらす。
【0040】
いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも１２ヶ月間、１８ヶ月間、２４ヶ月間、３０ヶ月間、または３６ヶ月間、パチシラン医薬品を投与される。
【0041】
いくつかの実施形態では、患者は、心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を必要としており、方法は、パチシラン医薬品の投与前に決定されるベースラインと比較して、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの改善または安定化をもたらす。
【0042】
いくつかの実施形態では、心臓マーカーは、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度であり、心エコーパラメータは、左心室（ＬＶ）ストレインまたはＬＶ壁厚である。
【0043】
いくつかの実施形態では、本方法は、患者に、以下の前投薬を投与することをさらに含む：デキサメタゾン、経口パラセタモール／アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミン、およびラニチジン。
【0044】
いくつかの実施形態では、本方法は、患者に、以下の前投薬を投与することをさらに含む：
ａ．ＩＶデキサメタゾン１０ｍｇ、または同等物、および
ｂ．経口パラセタモール／アセトアミノフェン５００ｍｇ、または同等物、および
ｃ．ＩＶヒスタミンＨ１受容体拮抗薬（Ｈ１ブロッカー）：ジフェンヒドラミン５０ｍｇ、または同等の他のＩＶ Ｈ１ブロッカーもしくはヒドロキシジン２５ｍｇ、もしくはＰＯでフェキソフェナジン３０もしくは６０ｍｇ、もしくはＰＯでセチリジン１０ｍｇ、および
ｄ．ＩＶヒスタミンＨ２受容体拮抗薬（Ｈ２ブロッカー）：ラニチジン５０ｍｇもしくはファモチジン２０ｍｇ、または同等の他のＨ２ブロッカー用量。
ａ．ＩＶデキサメタゾン１０ｍｇ、または同等物、および
ｂ．経口パラセタモール／アセトアミノフェン５００ｍｇ、または同等物、および
ｃ．ＩＶヒスタミンＨ１受容体拮抗薬（Ｈ１ブロッカー）：ジフェンヒドラミン５０ｍｇ、または同等の他のＩＶ Ｈ１ブロッカーもしくはヒドロキシジン２５ｍｇ、もしくはＰＯでフェキソフェナジン３０もしくは６０ｍｇ、もしくはＰＯでセチリジン１０ｍｇ、および
ｄ．ＩＶヒスタミンＨ２受容体拮抗薬（Ｈ２ブロッカー）：ラニチジン５０ｍｇもしくはファモチジン２０ｍｇ、または同等の他のＨ２ブロッカー用量。
【0045】
いくつかの実施形態では、前投薬は、各パチシラン医薬品投与の約一時間前に投与される。
【0046】
いくつかの実施形態では、本方法は、患者に、ビタミンＡのＵＳＤＡ推奨日当の経口一日用量を投与することをさらに含む。
【0047】
いくつかの実施形態では、本方法は、四量体安定化剤を投与することをさらに含む。
【0048】
いくつかの実施形態では、四量体安定化剤は、タファミジスまたはジフルニサルである。
【0049】
いくつかの実施形態では、患者は、
ａ．白人であり、および／または
ｂ．北米に居住し、および／または
ｃ．６５歳以上であり、および／または
ｄ．男性であり、および／または
ｅ．ＦＡＰステージＩを有し、および／または
ｆ．ＦＡＰステージＩＩを有し、および／または
ｇ．８～１６５のベースラインｍＮＩＳ＋７スコアを有し、および／または
ｈ．Ｖａｌ３０ Ｍｅｔ ＴＴＲ変異を有し、および／または
ｉ．表Ｘに見られる一つ以上のＴＴＲ変異を有し、および／または
ｊ．心アミロイド関与の心エコーによる証拠を有し、および／または
ｋ．以前に長期のＴＴＲ四量体安定化剤を使用した履歴を有する。
ａ．白人であり、および／または
ｂ．北米に居住し、および／または
ｃ．６５歳以上であり、および／または
ｄ．男性であり、および／または
ｅ．ＦＡＰステージＩを有し、および／または
ｆ．ＦＡＰステージＩＩを有し、および／または
ｇ．８～１６５のベースラインｍＮＩＳ＋７スコアを有し、および／または
ｈ．Ｖａｌ３０ Ｍｅｔ ＴＴＲ変異を有し、および／または
ｉ．表Ｘに見られる一つ以上のＴＴＲ変異を有し、および／または
ｊ．心アミロイド関与の心エコーによる証拠を有し、および／または
ｋ．以前に長期のＴＴＲ四量体安定化剤を使用した履歴を有する。
【0050】
いくつかの実施形態では、患者は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有する。
【0051】
いくつかの実施形態では、患者は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有さない。
【0052】
いくつかの実施形態では、患者は、ＴＴＲ関連障害を有する。
【0053】
いくつかの実施形態では、ＴＴＲ関連障害は、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）、症候性ポリニューロパチー、家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）、および軟髄膜／ＣＮＳ（中枢神経系）アミロイドーシスからなる群から選択される。
【0054】
いくつかの実施形態では、少なくとも一つの薬剤の投与は、患者によって実施される。
【0055】
いくつかの実施形態では、少なくとも一つの薬剤の投与は、医療専門家によって実施される。
【0056】
いくつかの実施形態では、投与は、８０分にわたって実施される。
【0057】
いくつかの実施形態では、ベースラインは平均である。
【図面の簡単な説明】
【0058】
【0059】
【0060】
【0061】
【0062】
【0063】
【0064】
【0065】
【0066】
【0067】
【0068】
【0069】
【図12A】図１２Ａおよび１２Ｂは、ベースライン（実線）と比較され、治療群によって階層化された、９ヶ月（破線）での圧容積ループ（図１２Ａ）および等容性圧容積面積（図１２Ｂ）の変化についてのグラフを示す。
【図12B】同上。
【0070】
【図13A】図１３Ａおよび１３Ｂは、ベースライン（実線）と比較され、治療群によって階層化された、１８ヶ月（破線）での圧容積ループ（図１３Ａ）および等容性圧容積面積（図１３Ｂ）の変化についてのグラフを示す。
【図13B】同上。
【発明を実施するための形態】
【0071】
以下においてより詳細に記載されるように、遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）（ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う、または伴わない）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法が本明細書に開示され、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、ＦＡＰ段階、ＰＮＤスコア、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）または他のニューロパチー関連臨床評価項目、血清パーセントＴＴＲ濃度、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの安定化または改善をもたらす。有効量のトランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、ニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）または修正ＮＩＳ（ｍＮＩＳ＋７）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行うための方法も開示され、その結果、有効量は、血清中のＴＴＲタンパク質の濃度を５０μｇ／ｍｌ未満または少なくとも８０％低減する。
【0072】
一実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、パチシラン、例えば、パチシラン医薬品である。パチシランは、静脈内（ＩＶ）投与のために肝指向性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中で製剤化された、ＴＴＲに特異的な低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）である。
【0073】
ＴＴＲ阻害組成物
本明細書に記載の方法は、ＴＴＲ阻害組成物の投与を含む。ＴＴＲ阻害組成物は、ヒト対象の血清中のＴＴＲタンパク質の濃度を低減する任意の化合物であり得る。例としては、ＲＮＡｉ、例えば、ｓｉＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。ｓｉＲＮＡの例としては、ＴＴＲ遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ、例えば、以下のパチシリン（より詳細に説明される）およびレブシラン（ｒｅｖｕｓｉｒａｎ）が挙げられる。例としてはまた、アンチセンスＲＮＡが挙げられる。ＴＴＲ遺伝子を標的とするアンチセンスＲＮＡの例は、米国特許第８，６９７，８６０号に見出すことができる。
本明細書に記載の方法は、ＴＴＲ阻害組成物の投与を含む。ＴＴＲ阻害組成物は、ヒト対象の血清中のＴＴＲタンパク質の濃度を低減する任意の化合物であり得る。例としては、ＲＮＡｉ、例えば、ｓｉＲＮＡが挙げられるが、これらに限定されない。ｓｉＲＮＡの例としては、ＴＴＲ遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡ、例えば、以下のパチシリン（より詳細に説明される）およびレブシラン（ｒｅｖｕｓｉｒａｎ）が挙げられる。例としてはまた、アンチセンスＲＮＡが挙げられる。ＴＴＲ遺伝子を標的とするアンチセンスＲＮＡの例は、米国特許第８，６９７，８６０号に見出すことができる。
【0074】
ＴＴＲ阻害組成物は、ＴＴＲ遺伝子の発現を阻害する。本明細書で使用される場合、「トランスサイレチン」（「ＴＴＲ」）は、細胞中の遺伝子を指す。ＴＴＲは、ＡＴＴＲ、ＨｓＴ２６５１、ＰＡＬＢ、プレアルブミン、ＴＢＰＡ、およびトランスサイレチン（プレアルブミン、アミロイドーシスＩ型）としても知られている。ヒトＴＴＲ ｍＲＮＡ転写物の配列は、ＮＭ＿０００３７１に見出すことができる。マウスＴＴＲ ｍＲＮＡの配列は、ＮＭ＿０１３６９７．２に見出すことができ、ラットＴＴＲ ｍＲＮＡの配列は、ＮＭ＿０１２６８１．１に見出すことができる。
【0075】
「を沈黙化する」、「の発現を阻害する」、「の発現を下方制御する」、「の発現を抑制する」などの用語は、ＴＴＲ遺伝子を指す限りにおいて、本明細書では、ＴＴＲ遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制を指し、これは、ＴＴＲ遺伝子がそこで転写され、ＴＴＲ遺伝子の発現が阻害されるように処理された第一の細胞または細胞群から単離され得るｍＲＮＡの量の、第一の細胞または細胞群と実質的に同一であるが、そのように処理されていない第二の細胞または細胞群（対照細胞）と比較しての、減少によって示される。阻害の程度は、以下によって表すことができる：
【数1】
【0076】
－
【0077】
あるいは、阻害の程度は、例えば、細胞によって分泌されるＴＴＲ遺伝子によってコードされるタンパク質の量、またはアポトーシスなどの特定の表現型を示す細胞の数などの、ＴＴＲ遺伝子発現に機能的に連結されたパラメータの減少の観点から与えられ得る。原則として、ＴＴＲ遺伝子サイレンシングは、構成的にまたはゲノム工学によってのいずれか、および任意の適切なアッセイによって、標的を発現する任意の細胞で決定され得る。しかしながら、所与のｄｓＲＮＡがＴＴＲ遺伝子の発現をある程度阻害し、したがって本発明に包含されるかどうかを決定するために参照が必要な場合、以下の実施例に提供されるアッセイは、そのような参照として機能するものとする。
【0078】
ＲＮＡｉ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＴＴＲ遺伝子の発現を阻害するための、ＲＮＡｉ、例えば、ｓｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡであるＴＴＲ阻害組成物を使用する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＴＴＲ遺伝子を標的とするｄｓＲＮＡである。ｄｓＲＮＡは、ＴＴＲ遺伝子の発現の際に形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である相補的領域を有するアンチセンス鎖を含み、相補的領域は、長さは３０ヌクレオチド未満であり、概して長さは１９～２４ヌクレオチドである。本発明のｄｓＲＮＡは、一つ以上の一本鎖ヌクレオチドオーバーハングをさらに含み得る。ＴＴＲ阻害ｓｉＲＮＡは、両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１３８１（ＷＯ２０１０／０４８２２８）および国際特許出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５５３１１（ＷＯ２０１１／０５６８８３）に記載される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ＴＴＲ遺伝子の発現を阻害するための、ＲＮＡｉ、例えば、ｓｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡであるＴＴＲ阻害組成物を使用する。一実施形態では、ｓｉＲＮＡは、ＴＴＲ遺伝子を標的とするｄｓＲＮＡである。ｄｓＲＮＡは、ＴＴＲ遺伝子の発現の際に形成されるｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である相補的領域を有するアンチセンス鎖を含み、相補的領域は、長さは３０ヌクレオチド未満であり、概して長さは１９～２４ヌクレオチドである。本発明のｄｓＲＮＡは、一つ以上の一本鎖ヌクレオチドオーバーハングをさらに含み得る。ＴＴＲ阻害ｓｉＲＮＡは、両方とも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、国際特許出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１３８１（ＷＯ２０１０／０４８２２８）および国際特許出願番号 ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５５３１１（ＷＯ２０１１／０５６８８３）に記載される。
【0079】
一実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、以下により詳細に記載されるパチシランである。別の実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、三価ＧａｌＮＡｃ炭水化物クラスターにコンジュゲートされたＴＴＲに特異的なｓｉＲＮＡであるレブシラン（ｒｅｖｕｓｉｒａｎ）である。レブシラン（ｒｅｖｕｓｉｒａｎ）の完全な説明は、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６５６９１および米国特許公開ＵＳ２０１４０３１５８３５号に見出すことができ、その内容は参照によりその全体が組み込まれる。
【0080】
ｄｓＲＮＡは、ハイブリダイズして二本鎖構造を形成するのに十分に相補的である二本のＲＮＡ鎖を含む。ｄｓＲＮＡの一方の鎖（アンチセンス鎖）は、ＴＴＲ遺伝子の発現中に形成されるｍＲＮＡの配列に由来する標的配列と実質的に相補的であり、概して完全に相補的である相補的領域を含み、他方の鎖（センス鎖）は、好適な条件下で組み合わされたときに二本の鎖がハイブリダイズし、二本鎖構造を形成するように、アンチセンス鎖と相補的である領域を含む。用語「アンチセンス鎖」は、標的配列に対して実質的に相補的である領域を含むｄｓＲＮＡの鎖を指す。本明細書において使用する場合、用語「相補的領域」は、本明細書において定義される、配列、例えば標的配列に対して実質的に相補的であるアンチセンス鎖上の領域を指す。相補的領域が標的配列と完全に相補的ではない場合、ミスマッチは末端領域で最も許容され、存在する場合は、概して、例えば、５’末端および／または３’末端の６、５、４、３、または２ヌクレオチド以内の末端領域にある。用語「センス鎖」は、本明細書において使用する場合、アンチセンス鎖の領域に対して実質的に相補的である領域を含むｄｓＲＮＡの鎖を指す。概して、二本鎖構造は、１５～８０の間、または１５～６０または１５～３０または２５～３０の間、または１８～２５の間、または１９～２４、または１９～２１の間、または１９、２０、または２１塩基対の長さである。一実施形態では、二本鎖は、長さが１９塩基対である。別の実施形態では、二本鎖は、長さが２１塩基対である。
【0081】
ｄｓＲＮＡの各鎖は、概して、１５～８０の間または１５～６０または１５～３０、または１８～２５の間、または１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５のヌクレオチドの長さである。他の実施形態では、各鎖は、２５～３０ヌクレオチドの長さである。二本鎖の各鎖は、同じ長さであってもよく、または異なる長さであってもよい。二つの異なるｓｉＲＮＡを組み合わせて使用する場合、各ｓｉＲＮＡの各鎖の長さは同一であってもよく、または異なっていてもよい。
【0082】
ｄｓＲＮＡは、一つ以上のヌクレオチドの一つ以上の一本鎖オーバーハングを含み得る。一実施形態では、ｄｓＲＮＡの少なくとも一つの端は、１～４、概して１または２のヌクレオチドの一本鎖ヌクレオチドオーバーハングを有する。別の実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、センス鎖上の各３’末端および５’末端に１～１０のヌクレオチドのオーバーハングを有する。さらなる実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、アンチセンス鎖上の各３’末端および５’末端に１～１０のヌクレオチドのオーバーハングを有する。
【0083】
本明細書において使用する場合、特に別段に示さない限り、用語「相補的」は、第二のヌクレオチド配列との関連において第一のヌクレオチド配列を説明するために使用される場合には、当業者によって理解されることとなるとおり、第二のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドと特定の条件下においてハイブリダイズして二重鎖構造を形成する第一のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を指す。こうした条件は、例えば、厳しい条件であってもよく、厳しい条件は、４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、５０°Ｃまたは７０°Ｃで１２～１６時間、続いて洗浄することを含み得る。生物体内で遭遇し得るような生理学的に関連のある条件などの他の条件を適用することができる。当業者は、ハイブリダイズされたヌクレオチドの最終的な用途に応じて、二つの配列の相補性の試験に最も適切な条件の組を決定することができるであろう。
【0084】
これには、第一および第二のヌクレオチド配列の全長にわたる第二のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドに対する第一のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの塩基対形成が含まれる。このような配列は、本明細書において、互いに対して「完全に相補的」であると称され得る。しかしながら、本明細書において、第一の配列が第二の配列に対して「実質的に相補的」であるという場合、この二つの配列は、完全に相補的であり得るか、また、それらはハイブリダイゼーションの際に、それらの最終的な用途に最も関連した条件下でハイブリダイズする能力を維持しつつ、一つ以上であるが、概して４、３、または２以下であるミスマッチ塩基対を形成し得る。しかしながら、二つのオリゴヌクレオチドが、ハイブリダイゼーションの際に一つ以上の一本鎖のオーバーハングを形成するように設計される場合には、かかるオーバーハングは、相補性の判定に関してミスマッチとはみなさないものとする。例えば、長さが２１ヌクレオチドである一方のオリゴヌクレオチドと長さが２３ヌクレオチドであるもう一方のオリゴヌクレオチドとを含むｄｓＲＮＡであって、長い方のオリゴヌクレオチドが、短い方のオリゴヌクレオチドに対して完全に相補的である２１ヌクレオチドの配列を含むようなｄｓＲＮＡは、依然として、本明細書において記載する目的に関しては「完全に相補的」と称し得る。
【0085】
「相補的」配列は、本明細書において使用する場合、ハイブリダイズするそれらの能力に関する上記の要件を満たす限り、非ワトソン・クリック塩基対および／または非天然の修飾ヌクレオチドから形成された塩基対も含み得るか、または全体的にそれらから形成され得る。そのような非ワトソン・クリック塩基対としては、これらに限定されるわけではないが、Ｇ：Ｕのゆらぎまたはフーグスティーン型の塩基対が挙げられる。
【0086】
本明細書における用語「相補的」、「完全に相補的」および「実質的に相補的」は、それらの使用の文脈から理解されるであろうとおり、ｄｓＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはｄｓＲＮＡｉのアンチセンス鎖と標的配列との間における塩基マッチングに関連して使用され得る。
【0087】
本明細書において使用する場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）「の少なくとも一部に対して実質的に相補的」であるポリヌクレオチドは、オープン・リーディング・フレームである５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲを含む目的のｍＲＮＡ（例えば、ＴＴＲをコードするｍＲＮＡ）の連続する部分に対して実質的に相補的であるポリヌクレオチドを指す。例えば、ポリヌクレオチドは、配列が、ＴＴＲをコードするｍＲＮＡの中断されない部分に対して実質的に相補的である場合、ＴＴＲ ｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補的である。
【0088】
ｄｓＲＮＡは、例えば、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．などから市販されているような、例えば、自動ＤＮＡ合成機を用いて、以下でさらに論じるように、当技術分野で公知の標準的な方法によって合成することができる。
【0089】
修飾ｄｓＲＮＡ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｄｓＲＮＡは、安定性を高めるために化学的に修飾される。本発明において取り上げる核酸は、当技術分野で十分に確立された方法によって、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、“Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｒｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ、に記載されるものなどによって合成または修飾され得る。本発明に有用なｄｓＲＮＡ化合物の具体的な例には、修飾された骨格を含むか、または天然ヌクレオシド間結合を含まないｄｓＲＮＡが含まれる。本明細書で定義されるように、修飾された骨格を有するｄｓＲＮＡは、骨格内にリン原子を保持するｄｓＲＮＡ、および骨格内にリン原子を有しないｄｓＲＮＡを含む。本明細書の目的のため、また当技術分野で時に言及されるように、ヌクレオシド間骨格内にリン原子を有さない修飾ｄｓＲＮＡもまた、オリゴヌクレオシドであるとみなされ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法で使用されるｄｓＲＮＡは、安定性を高めるために化学的に修飾される。本発明において取り上げる核酸は、当技術分野で十分に確立された方法によって、例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、“Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，”Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｒｓ．），Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ、に記載されるものなどによって合成または修飾され得る。本発明に有用なｄｓＲＮＡ化合物の具体的な例には、修飾された骨格を含むか、または天然ヌクレオシド間結合を含まないｄｓＲＮＡが含まれる。本明細書で定義されるように、修飾された骨格を有するｄｓＲＮＡは、骨格内にリン原子を保持するｄｓＲＮＡ、および骨格内にリン原子を有しないｄｓＲＮＡを含む。本明細書の目的のため、また当技術分野で時に言及されるように、ヌクレオシド間骨格内にリン原子を有さない修飾ｄｓＲＮＡもまた、オリゴヌクレオシドであるとみなされ得る。
【0090】
修飾ｄｓＲＮＡ骨格としては、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、３’－アルキレンホスホネートおよびキラルホスホネートを含むメチルおよび他のアルキルのホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホロアミダートおよびアミノアルキルホスホロアミダートを含むホスホロアミダート、チオノホスホロアミダート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびに通常の３’－５’連結を有するボラノホスフェート、これらの２’－５’連結類似体、ならびに隣接するヌクレオシド単位の対が３’－５’から５’－３’または２’－５’から５’－２’で結合している反転した極性を有するもの）が挙げられる。種々の塩、混合塩および遊離酸の形態も挙げられる。
【0091】
上記のリン含有連結の調製を教示する代表的な米国特許としては、これに限定されないが、米国特許第３，６８７，８０８号、第４，４６９，８６３号、第４，４７６，３０１号、第５，０２３，２４３号、第５，１７７，１９５号、第５，１８８，８９７号、第５，２６４，４２３号、第５，２７６，０１９号、第５，２７８，３０２号、第５，２８６，７１７号、第５，３２１，１３１号、第５，３９９，６７６号、第５，４０５，９３９号、第５，４５３，４９６号、第５，４５５，２３３号、第５，４６６，６７７号、第５，４７６，９２５号、第５，５１９，１２６号、第５，５３６，８２１号、第５，５４１，３１６号、第５，５５０，１１１号、５，５６３，２５３号、第５，５７１，７９９号、第５，５８７，３６１号、および第５，６２５，０５０号が挙げられ、これらはそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる。
【0092】
骨格内にリン原子を含まない修飾ｄｓＲＮＡ骨格は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間連結、または一つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環のヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらとしては、モルフォリノ連結を有するもの（ヌクレオシドの糖部分から一部形成される）、シロキサン骨格、スルフィド、スルホキシドおよびスルホン骨格、ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格、スルホネートおよびスルホンアミド骨格、アミド骨格、ならびにＮ、Ｏ、ＳおよびＣＨ２の混合した構成要素部分を有する他のものが挙げられる。
【0093】
上記のオリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許としては、これに限定されないが、米国特許第５，０３４，５０６号、第５，１６６，３１５号、第５，１８５，４４４号、第５，２１４，１３４号、第５，２１６，１４１号、第５，２３５，０３３号、第５，６４，５６２号、第５，２６４，５６４号、第５，４０５，９３８号、第５，４３４，２５７号、第５，４６６，６７７号、第５，４７０，９６７号、第５，４８９，６７７号、第５，５４１，３０７号、第５，５６１，２２５号、第５，５９６，０８６号、第５，６０２，２４０号、第５，６０８，０４６号、第５，６１０，２８９号、第５，６１８，７０４号、第５，６２３，０７０号、第５，６６３，３１２号、第５，６３３，３６０号、第５，６７７，４３７号、および第５，６７７，４３９号が挙げられ、これらそれぞれが参照により本明細書に組み込まれる。
【0094】
他の好適なｄｓＲＮＡ模倣体では、ヌクレオチド単位の糖およびヌクレオシド間連結の両方、すなわち骨格が新規基と置き換えられている。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。このようなオリゴマー化合物のひとつ、優れたハイブリダイゼーション特性を有すると示されたｄｓＲＮＡ模倣体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物においては、ｄｓＲＮＡの糖骨格は、アミド含有骨格で、特にアミノエチルグリシン骨格で置換されている。核酸塩基は、保持されて、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接的または間接的に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許としては、これに限定されないが、米国特許第５，５３９，０８２号、第５，７１４，３３１号、および第５，７１９，２６２号が挙げられ、それらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる。ＰＮＡ化合物のさらなる教示は、Ｎｉｅｌｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，２５４，１４９７－１５００に見出すことができる。
【0095】
本発明の他の実施形態には、ホスホロチオエート骨格をもつｄｓＲＮＡおよびヘテロ原子骨格をもつオリゴヌクレオシドが挙げられ、特に上記で参照した米国特許第５，４８９，６７７号の、－－ＣＨ２－－ＮＨ－－ＣＨ２－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｏ－－ＣＨ２－－［（メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られる］、－－ＣＨ２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－、および－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－ＣＨ２－－［天然のホスホジエステル骨格を－－Ｏ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨ２－－として表す］、および上記で参照した米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格、が挙げられる。また、上記で参照した米国特許第５，０３４，５０６号のモルフォリノ骨格構造を有するｄｓＲＮＡも好ましい。
【0096】
修飾ｄｓＲＮＡはまた、一つ以上の置換された糖部分を含み得る。好ましいｄｓＲＮＡは、２’位に以下の一つを含む：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－またはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－またはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－またはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキル、式中アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換のＣ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。特に好適ものは、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２であり、式中ｎおよびｍは、１から約１０である。他の好ましいｄｓＲＮＡは、２’位に以下の一つを含む：Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換された低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、ｄｓＲＮＡの薬物動態特性を改善するための基、またはｄｓＲＮＡの薬力学的特性を改善するための基、および同様の特性を有する他の置換基。好ましい修飾としては、２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても知られる）（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８：４８６－５０４）、すなわちアルコキシ－アルコキシ基が挙げられる。さらに例示的な修飾としては、本明細書において以下の実施例において記載される、２’－ＤＭＡＯＥとしても知られる、２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわち、Ｏ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、および本明細書において以下の実施例においてまた記載される、２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（当技術分野で２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとして知られる）、すなわち２’－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ２）２が挙げられる。
【0097】
他の好ましい修飾としては、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）および２’－フルオロ（２’－Ｆ）が挙げられる。同様の修飾はまた、ｄｓＲＮＡ上の他の位置、特に３’末端ヌクレオチド上または２’－５’連結ｄｓＲＮＡ中の糖の３’位および５’末端ヌクレオチドの５’位でも行うことができる。ＤｓＲＮＡｉはまた、糖模倣体を有し得、例えばペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などを有し得る。こうした修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許としては、これに限定されないが、米国特許第４，９８１，９５７号、第５，１１８，８００号、第５，３１９，０８０号、第５，３５９，０４４号、第５，３９３，８７８号、第５，４４６，１３７号、第５，４６６，７８６号、第５，５１４，７８５号、第５，５１９，１３４号、第５，５６７，８１１号、第５，５７６，４２７号、第５，５９１，７２２号、第５，５９７，９０９号、第５，６１０，３００号、第５，６２７，０５３号、第５，６３９，８７３号、第５，６４６，２６５号、第５，６５８，８７３号、第５，６７０，６３３号、および第５，７００，９２０号が挙げられ、それらのうちいくつかは、本出願と共同所有され、それらそれぞれが、参照により全体が本明細書に組み込まれる。
【0098】
ｄｓＲＮＡはまた、核酸塩基（当技術分野では単に「塩基」と称することも多い）の修飾または置換を含み得る。本明細書において使用する場合、「未修飾の」または「天然の」核酸塩基としては、プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）が挙げられる。修飾核酸塩基としては、他の合成核酸塩基および天然核酸塩基が挙げられ、例えば５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび他の８－置換のアデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換のウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－ダアザアデニン（ｄａａｚａａｄｅｎｉｎｅ）ならびに３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンなどである。さらなる核酸塩基としては、米国特許第３，６８７，８０８号にて開示されるもの、Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ ８５８－８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ，ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９０にて開示されるもの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３にて開示されるもの、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １５，ＤｓＲＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ ２８９－３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９３にて開示されるものが挙げられる。これら核酸塩基の一部は、本発明で取り上げるオリゴマー化合物の結合親和性を増大するのに特に有用である。これらには、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシルおよび５－プロピニルシトシンを含む、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびにＮ－２、Ｎ－６および０～６置換のプリンが挙げられる。５－メチルシトシン置換は、核酸の二重鎖安定性を０．６～１．２℃高めることが示されており（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄｓ．，ＤｓＲＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６－２７８）、そしてさらにより具体的には２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合には、例示的な塩基置換である。
【0099】
上述の修飾核酸塩基ならびに他の修飾核酸塩基の一部の調製を教示する代表的な米国特許としては、これに限定されるものではないが、上述の米国特許第３，６８７，８０８号、ならびに第４，８４５，２０５号、第５，１３０，３０号、第５，１３４，０６６号、第５，１７５，２７３号、第５，３６７，０６６号、第５，４３２，２７２号、第５，４５７，１８７号、第５，４５９，２５５号、第５，４８４，９０８号、第５，５０２，１７７号、第５，５２５，７１１号、第５，５５２，５４０号、第５，５８７，４６９号、第５，５９４，１２１号、第５，５９６，０９１号、第５，６１４，６１７号、および第５，６８１，９４１号が挙げられ、これらそれぞれが参照によって本明細書に組み込まれ、ならびに米国特許第５，７５０，６９２号が挙げられ、これもまた参照により本明細書に組み込まれる。
【0100】
パチシラン
一実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、パチシランである。パチシランは、静脈内（ＩＶ）投与のために肝指向性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中で製剤化された、ＴＴＲに特異的な低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）である（Ａｋｉｎｃ Ａ，Ｚｕｍｂｕｅｈｌ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｌｉｐｉｄ－ｌｉｋｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ＲＮＡｉ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；２６（５）：５６１－５６９）。このＴＴＲ ｓｉＲＮＡは、ＷＴ ＴＴＲならびに報告されたすべてのＴＴＲ変異との相同性を確保および確認するために、ＴＴＲ遺伝子の３’ＵＴＲ領域内に標的領域を有する。肝臓へのＬＮＰ媒介送達後、パチシランは、分解のためにＴＴＲ ｍＲＮＡを標的とし、ＲＮＡｉ機構を介した変異体およびＷＴ ＴＴＲタンパク質の強力かつ持続的な低減をもたらす。
一実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、パチシランである。パチシランは、静脈内（ＩＶ）投与のために肝指向性脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）中で製剤化された、ＴＴＲに特異的な低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）である（Ａｋｉｎｃ Ａ，Ｚｕｍｂｕｅｈｌ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｌｉｐｉｄ－ｌｉｋｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ＲＮＡｉ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００８；２６（５）：５６１－５６９）。このＴＴＲ ｓｉＲＮＡは、ＷＴ ＴＴＲならびに報告されたすべてのＴＴＲ変異との相同性を確保および確認するために、ＴＴＲ遺伝子の３’ＵＴＲ領域内に標的領域を有する。肝臓へのＬＮＰ媒介送達後、パチシランは、分解のためにＴＴＲ ｍＲＮＡを標的とし、ＲＮＡｉ機構を介した変異体およびＷＴ ＴＴＲタンパク質の強力かつ持続的な低減をもたらす。
【0101】
ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ（ＡＬＮ－１８３２８としても知られる）は、以下の配列を有するセンス鎖およびアンチセンス鎖からなり、小文字は、ヌクレオチドの２’－Ｏ－メチル型を示す。
パチシラン原薬
パチシラン原薬
【表1】
【0102】
典型的には、パチシラン原薬、すなわち、ｓｉＲＮＡは、薬学的に許容される塩の形態である。いくつかの実施形態では、パチシラン原薬は、パチシランナトリウムである。パチシランナトリウムの分子式は、Ｃ４１２Ｈ４８０Ｎ１４８Ｎａ４０Ｏ２９０Ｐ４０であり、分子量は１４３０４Ｄａである。センス鎖およびアンチセンス鎖の構造式は、図３に見出される。
【0103】
製造工程は、従来の固相オリゴヌクレオチド合成による、二本鎖の二つの一本鎖オリゴヌクレオチドの合成から成る。精製後、二つのオリゴヌクレオチドを二本鎖にアニールする。
【0104】
パチシラン医薬品は、等張性リン酸緩衝生理食塩液中の脂質賦形剤（ＤＬｉｎ－ＭＣ３－ＤＭＡ、ＤＳＰＣ、コレステロール、およびＰＥＧ２０００－Ｃ－ＤＭＧ）を含むＴＴＲ ｓｉＲＮＡ ＡＬＮ－１８３２８の滅菌製剤である。
【0105】
パチシラン医薬品の製剤を以下の表１Ａ，１Ｂ、または１Ｃに示す。いくつかの実施形態では、任意の一つの成分の濃度もしくは量は、＋／－０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、５．０、もしくは１０．０％、または表に見られる濃度もしくは量である。
表１Ａ：パチシラン医薬品の組成
表１Ｂ：パチシラン医薬品の組成、１ｍｌ当たり
表１Ｃ：パチシラン医薬品の組成、１ｍｌ当たり
表１Ａ：パチシラン医薬品の組成
【表2】
表１Ｂ：パチシラン医薬品の組成、１ｍｌ当たり
【表3】
表１Ｃ：パチシラン医薬品の組成、１ｍｌ当たり
【表4】
【0106】
いくつかの実施形態では、パチシラン医薬品は、バイアル当たり以下の量で、容器中に、例えば、ガラスバイアルに提供される。
表２：パチシラン医薬品の組成、バイラル当たりを含む
表２：パチシラン医薬品の組成、バイラル当たりを含む
【表5】
【0107】
注射用パチシラン溶液は、２ｍｇ／ｍＬのＴＴＲ ｓｉＲＮＡ原薬を含有する。いくつかの実施形態では、パチシラン医薬品は、５．５ｍＬの充填体積で１０ｍＬガラスバイアルに包装される。いくつかの実施形態では、パチシラン医薬品は、単回使用バイアルとして５ｍｌ中１０ｍｇで包装される。
【0108】
いくつかの実施形態では、容器栓システムは、米国薬局方／欧州薬局方（ＵＳＰ／ＥＰ）Ｉ型ホウケイ酸ガラスバイアル、テフロン面ブチルゴムストッパー、およびアルミニウムフリップオフキャップからなる。
【0109】
四量体安定化剤
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、四量体安定化剤と別のＴＴＲ阻害組成物との同時投与を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、四量体安定化剤と別のＴＴＲ阻害組成物との同時投与を含む。
【0110】
四量体安定化剤は、ＴＴＲタンパク質に結合し、ＴＴＲ四量体を安定化するように作用する化合物である。ＴＴＲ四量体を不安定化する変異は、誤って配置されたおよび凝集されたＴＴＲをもたらす。
【0111】
四量体安定剤の例としては、タファミジスおよびジフルニサルが挙げられる。タファミジスおよびジフルニサルの両方が、疾患進行速度を遅らせることができる（Ｂｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｐｕｒｐｏｓｉｎｇ ｄｉｆｌｕｎｉｓａｌ ｆｏｒ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ．ＪＡＭＡ ２０１３，３１０：２６５８－２６６７；Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔａｆａｍｉｄｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２０１３，２６０：２８０２－２８１４；Ｌｏｚｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｔａｆａｍｉｄｉｓ ｉｎ ｌａｔｅ ｏｎｓｅｔ ｏｆ Ｍｅｔ３０ ｔｒａｎｓｔｈｙｒｅｔｉｎ ｆａｍｉｌｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．Ｅｕｒ Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ ２０１３，２０：１５３９－１５４５）。
【0112】
対象および診断
遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法が本明細書に開示され、方法は、表１Ａ，１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で患者に投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与される。いくつかの実施形態では、方法は、心機能の安定化または改善をもたらす。いくつかの実施形態では、方法は、ＦＡＰステージ、ＰＮＤスコア、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）、または他のニューロパチー関連臨床評価項目、血清パーセントＴＴＲ濃度、心臓マーカー、および／または心エコーパラメータの安定化または改善をもたらす。いくつかの実施形態では、患者は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有さない。
遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を、それを必要とするヒト患者において行う方法が本明細書に開示され、方法は、表１Ａ，１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で患者に投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与される。いくつかの実施形態では、方法は、心機能の安定化または改善をもたらす。いくつかの実施形態では、方法は、ＦＡＰステージ、ＰＮＤスコア、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）、または他のニューロパチー関連臨床評価項目、血清パーセントＴＴＲ濃度、心臓マーカー、および／または心エコーパラメータの安定化または改善をもたらす。いくつかの実施形態では、患者は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有する。いくつかの実施形態では、患者は、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を有さない。
【0113】
本明細書で使用される場合、「ポリニューロパチー」という用語は、脳および脊髄の外側に位置する人の末梢神経または神経が損傷を受ける状態を指す。ポリニューロパチーは、通常、手および足に筋力低下、麻痺、および疼痛を引き起こすことが多い。それはまた、消化、排尿および循環を含む他の領域および身体機能にも影響を与えうる。ポリニューロパチーは、外傷性傷害、感染、代謝問題、遺伝性の原因、および毒素への曝露から生じ得る。ポリニューロパチーには、急性および慢性の二つの主要なカテゴリーがある。
【0114】
本明細書で使用される場合、「心筋症」という用語は、心筋（心筋）に影響を及ぼす状態を指す。心筋症は、心臓を硬化、拡大、または肥厚させ、瘢痕組織を引き起こす可能性がある。結果として、心臓は血液を身体の残りの部分に効果的に送り込むことができない。そのうち、心臓は衰弱し、心筋症は心不全につながり得る。心筋症の初期段階では兆候または症状はない可能性がある。しかし、状態が進行するにつれて、活動中の、または安静時においてもの息切れ、脚、足首および足の腫脹、体液の蓄積による腹部の膨満、横たわっている間の咳、横たわって睡眠をとることの困難、疲労、急な、激しい、または不安定と感じる心拍、胸部不快感または圧迫感、めまい、立ち眩みおよび失神を含む、徴候および症状が通常現れる。心筋症の最も一般的なタイプは、拡張型心筋症、肥大型心筋症、不整脈源性右室異形成症（ＡＲＶＤ）、拘束型心筋症、およびトランスサイレチンアミロイド心筋症（ＡＴＴＲ－ＣＭ）である。
【0115】
また、ニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）または修正ＮＩＳ（ｍＮＩＳ＋７）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行うための方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、ＴＴＲ関連障害を有する。いくつかの実施形態では、ＴＴＲ関連障害は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）遺伝子の変異によって引き起こされる疾患の一つである。一実施形態では、疾患は、家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）、トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ＡＴＴＲ）、および症候性ポリニューロパチーなどの様々な形態で現れるＴＴＲアミロイドーシスである。末梢神経系がより顕著に影響を受ける場合、疾患はＦＡＰと呼ばれる。心臓が主に関与しているが神経系が関与していない場合、疾患は家族性アミロイド心筋症（ＦＡＣ）と呼ばれる。ＴＴＲアミロイドーシスの第三の主要なタイプは、軟髄膜／ＣＮＳ（中枢神経系）アミロイドーシスと呼ばれる。ＡＴＴＲは、自律神経系に影響を及ぼす。
【0116】
いくつかの実施形態では、ＴＴＲ関連障害を有するヒト対象は、変異ＴＴＲ遺伝子を有する。１００を超える報告されたＴＴＲ変異は、様々な疾患症状を示す。ＦＡＰおよびＡＴＴＲ関連心筋症に関連する最も一般的な変異は、それぞれＶａｌ３０ＭｅｔおよびＶａｌ１２２Ｉｌｅである。ＴＴＲ変異は、タンパク質のミスフォールディングを引き起こし、ＴＴＲアミロイド形成のプロセスを加速し、臨床的に有意なＴＴＲアミロイドーシス（ＡＴＴＲ（アミロイドーシス－トランスサイレチン型）とも呼ばれる）の発症の最も重要なリスク因子である。８５個を超えるアミロイド形成性ＴＴＲバリアントが、全身家族性アミロイドーシスを引き起こすことが知られている。
【0117】
いくつかの実施形態では、ヒト対象は、生検で実証されたＡＴＴＲアミロイドーシスおよび軽度～中等度のニューロパチーを有する成人（≧１８歳）である場合、任意の形態のＴＴＲアミロイドーシスの治療を受けるように選択される。さらなる実施形態では、ヒト対象はまた、以下の一つ以上を有する：カルノフスキーパフォーマンス状態（ＫＰＳ）≧６０％；ボディ・マス指数（ＢＭＩ）１７～３３ｋｇ／ｍ２；適切な肝臓および腎機能（アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）≦２．５×正常上限（ＵＬＮ）、正常範囲内の総ビリルビン、アルブミン＞３ｇ／ｄＬ、ならびに国際標準化比（ＩＮＲ）≦１．２；血清クレアチニン≦１．５ＵＬＮ）、およびＢ型肝炎ウイルスおよびＣ型肝炎ウイルスに対する血清反応陰性。
【0118】
別の実施形態では、ヒト対象が、肝臓移植を行っていた場合；治療中に手術が計画された場合；ＨＩＶ陽性である場合；３０日以内にタファミジスまたはジフルニサル以外の治験薬を受けた場合；ニューヨーク心臓協会の心不全分類が＞２であった場合；妊娠しているまたは授乳中である場合；全身性細菌性、ウイルス性、寄生虫性、または真菌性感染症が判明しているか、または疑われる場合、不安定な狭心症、制御されていない臨床的に有意な心不整脈を有する場合；またはリポソーム産物に対する重度の反応が以前にあった場合、またはオリゴヌクレオチドに対する既知の過敏症を有していた場合、ヒト対象は治療から除外される。
【0119】
ニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）
本明細書に開示される方法は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、ニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行う。ＮＩＳは、特に末梢神経障害に関して、筋力低下、感覚、および反射を測定するスコアリングシステムを指す。ＮＩＳスコアは、筋力低下の標準群（１は２５％低下、２は５０％低下、３は７５％低下、３．２５は重力に抗する動き、３．５は重力を排除した状態での動き、３．７５は動きのない筋肉収縮、４は麻痺）、筋肉伸張反射の標準群（０は正常、１は減少、２は消失）、ならびに触圧覚、振動覚、関節位置覚および運動覚、ならびに痛覚（すべて人差し指および足の親指でグレード付け：０は正常、１は減少、２は消失）について評価する。評価は、年齢、性別、および体力について補正される。
本明細書に開示される方法は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、ニューロパチー障害スコア（ＮＩＳ）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行う。ＮＩＳは、特に末梢神経障害に関して、筋力低下、感覚、および反射を測定するスコアリングシステムを指す。ＮＩＳスコアは、筋力低下の標準群（１は２５％低下、２は５０％低下、３は７５％低下、３．２５は重力に抗する動き、３．５は重力を排除した状態での動き、３．７５は動きのない筋肉収縮、４は麻痺）、筋肉伸張反射の標準群（０は正常、１は減少、２は消失）、ならびに触圧覚、振動覚、関節位置覚および運動覚、ならびに痛覚（すべて人差し指および足の親指でグレード付け：０は正常、１は減少、２は消失）について評価する。評価は、年齢、性別、および体力について補正される。
【0120】
一実施形態では、ＮＩＳスコアを低減する方法は、少なくとも１０％のＮＩＳの低減をもたらす。他の実施形態では、方法スコアは、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、または少なくとも５０％のＮＩＳの低減をもたらす。他の実施形態では、方法は、ＮＩＳスコアの増加を停止し、例えば、ＮＩＳスコアの０％の増加をもたらす。
【0121】
ヒト対象におけるＮＩＳを決定するための方法は、当業者に周知であり、以下に見出すことができる：
【0122】
Ｄｙｃｋ，ＰＪ ｅｔ ａｌ．，Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｃｏｒｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｔｕｄｙ ｃｏｈｏｒｔ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ １９９７．４９（１）：ｐｇｓ．２２９－２３９）．
【0123】
Ｄｙｃｋ ＰＪ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｓｔａｇｉｎｇ ｏｆ ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ：ａｓｓｅｓｓｅｄ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃｓ．Ｍｕｓｃｌｅ Ｎｅｒｖｅ．１９８８ Ｊａｎ；１１（１）：２１－３２。
【0124】
修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行う。当業者に周知のように、ｍＮＩＳ＋７は、小神経線維機能および大神経線維機能の電気生理学的尺度と組み合わせた神経障害（ＮＩＳ）（ＮＣＳおよびＱＳＴ）の臨床試験ベースの評価、ならびに自律神経機能（姿勢血圧）の測定を指す。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、トランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物を投与することによって、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）の増加の低減または停止を、それを必要とするヒト対象において行う。当業者に周知のように、ｍＮＩＳ＋７は、小神経線維機能および大神経線維機能の電気生理学的尺度と組み合わせた神経障害（ＮＩＳ）（ＮＣＳおよびＱＳＴ）の臨床試験ベースの評価、ならびに自律神経機能（姿勢血圧）の測定を指す。
【0125】
ｍＮＩＳ＋７スコアは、ＮＩＳ＋７スコアの修正である（ＮＩＳ＋七つの試験を表す）。ＮＩＳ＋７は、筋力の低下および筋肉伸張反射を分析する。七つの検査のうち五つは、神経伝導の属性を含む。これらの特性は、腓骨神経複合筋活動電位振幅、運動神経伝導速度および運動神経遠位潜時（ＭＮＤＬ）、脛骨ＭＮＤＬ、ならびに腓腹感覚神経活動電位振幅である。これらの値は、年齢、性別、身長、および体重の変数に対して補正される。七つの試験のうちの残りの二つは、深呼吸による振動検出閾値および心拍数の減少を含む。
【0126】
ｍＮＩＳ＋７スコアは、スマートソマトトピック定量的感覚検査の使用、新しい自律神経評価、ならびに尺骨、腓骨、脛骨神経の複合筋活動電位振幅、尺骨および腓骨神経の感覚神経活動電位の使用を考慮に入れてＮＩＳ＋７を修正する（Ｓｕａｎｐｒａｓｅｒｔ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｔｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａ ＴＴＲ ＦＡＰ ｃｏｈｏｒｔ ｔｏ ｍｏｄｉｆｙ ＮＩＳ＋７ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔｒｉａｌｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，２０１４．３４４（１－２）：ｐｇｓ．１２１－１２８）。
【0127】
一実施形態では、ｍＮＩＳ＋７スコアを低減する方法は、ｍＮＩＳ＋７を少なくとも１０％低減させる。他の実施形態では、方法スコアは、ｍＮＩＳ＋７スコアの少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、４０、または少なくとも５０％の低減をもたらす。他の実施形態では、方法は、ｍＮＩＳ＋７の増加を停止し、例えば、方法は、ｍＮＩＳ＋７の０％の増加をもたらす。
【0128】
生活の質およびニューロパチー関連臨床評価項目
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、生活の質および／またはニューロパチー関連臨床評価項目を安定化または改善する。例えば本明細書に記載される方法は、生活の質、運動力、障害、歩行速度、栄養状態、および／または自律神経症状の改善または安定化を、それを必要とするヒト患者、例えば、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う、または伴わない遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）を有するヒト患者において行うことができ、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、生活の質および／またはニューロパチー関連臨床評価項目を安定化または改善する。例えば本明細書に記載される方法は、生活の質、運動力、障害、歩行速度、栄養状態、および／または自律神経症状の改善または安定化を、それを必要とするヒト患者、例えば、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う、または伴わない遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）を有するヒト患者において行うことができ、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与される。
【0129】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、ＮＩＳ－Ｗ、Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、１０メートル歩行試験（１０－ＭＷＴ）、修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、およびＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアからなる群から選択される少なくとも一つのニューロパチー関連臨床評価項目の改善または安定化を、それを必要とするヒト患者、例えば、ポリニューロパチーおよび／または心筋症を伴う、または伴わない遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）を有するヒト患者において行うことができ、方法は、患者に、表１Ａ、１Ｂ、または１Ｃに記載されるパチシラン医薬品を、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で投与することを含み、パチシランは、３週間毎に一回静脈内投与される。
【0130】
ＦＡＰステージおよびＰＮＤスコア
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のポリニューロパチー障害（ＰＮＤ）スコアおよび家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）ステージを安定化または改善する。ＰＮＤスコアは以下のように決定される：ＰＮＤ Ｉ：歩行の維持、感覚障害；ＰＮＤ ＩＩ：歩行障害はあるが、杖や松葉杖なしで歩行できる；ＰＮＤ ＩＩＩＡ：１本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＩＩＢ：２本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＶ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。ＦＡＰステージは以下のとおりである。ＦＡＰ Ｉ：歩行障害なし、ＦＡＰ ＩＩ：歩行の支援が必要、ＦＡＰ ＩＩＩ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のポリニューロパチー障害（ＰＮＤ）スコアおよび家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）ステージを安定化または改善する。ＰＮＤスコアは以下のように決定される：ＰＮＤ Ｉ：歩行の維持、感覚障害；ＰＮＤ ＩＩ：歩行障害はあるが、杖や松葉杖なしで歩行できる；ＰＮＤ ＩＩＩＡ：１本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＩＩＢ：２本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＶ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。ＦＡＰステージは以下のとおりである。ＦＡＰ Ｉ：歩行障害なし、ＦＡＰ ＩＩ：歩行の支援が必要、ＦＡＰ ＩＩＩ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。
【0131】
血清ＴＴＲタンパク質濃度
本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、有効量のトランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物、例えば、パチシランを投与することを含み、有効量は、ヒト対象の血清中のＴＴＲタンパク質の濃度を５０μｇ／ｍｌ未満または少なくとも８０％低減する。血清ＴＴＲタンパク質濃度は、当業者に公知の任意の方法、例えば、抗体ベースのアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して直接決定することができる。あるいは、血清ＴＴＲタンパク質濃度は、ＴＴＲ ｍＲＮＡの量を測定することによって決定され得る。さらなる実施形態では、血清ＴＴＲタンパク質濃度は、代替物、例えば、ビタミンＡまたはレチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）の濃度を測定することによって決定される。一実施形態では、血清ＴＴＲタンパク質濃度は、以下の実施例に記載されるＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定される。
本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、有効量のトランスサイレチン（ＴＴＲ）阻害組成物、例えば、パチシランを投与することを含み、有効量は、ヒト対象の血清中のＴＴＲタンパク質の濃度を５０μｇ／ｍｌ未満または少なくとも８０％低減する。血清ＴＴＲタンパク質濃度は、当業者に公知の任意の方法、例えば、抗体ベースのアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して直接決定することができる。あるいは、血清ＴＴＲタンパク質濃度は、ＴＴＲ ｍＲＮＡの量を測定することによって決定され得る。さらなる実施形態では、血清ＴＴＲタンパク質濃度は、代替物、例えば、ビタミンＡまたはレチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）の濃度を測定することによって決定される。一実施形態では、血清ＴＴＲタンパク質濃度は、以下の実施例に記載されるＥＬＩＳＡアッセイを使用して決定される。
【0132】
いくつかの実施形態では、血清ＴＴＲタンパク質の濃度は、５０μｇ／ｍｌ未満に、または４０μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ、もしくは１０μｇ／ｍｌ未満に低減される。いくつかの実施形態では、血清ＴＴＲタンパク質の濃度は、８０％、または８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、または９５％低減される。
【0133】
心臓マーカーおよび心エコーパラメータ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を必要とする患者を治療し、方法は、ベースラインと比較して、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの改善または安定化をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲアミロイドーシス）の治療を必要とする患者を治療し、方法は、ベースラインと比較して、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータの改善または安定化をもたらす。
【0134】
心臓マーカーの例は、血清ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度である。心エコーパラメータの例は、左心室（ＬＶ）ストレインまたはＬＶ壁厚である。
【0135】
ＡＵＣ
ＡＵＣは、薬剤、例えば、ＴＴＲ阻害組成物の用量が患者に投与された後の経時的な血流の血漿中の組成物、例えば、ＴＴＲの濃度の曲線下面積を指す。これは、組成物の患者の血漿への吸収速度および患者の血漿からの除去速度によって影響を受ける。当業者が知っているように、ＡＵＣは、薬剤が投与された後の血漿組成物濃度の積分を計算することによって決定し得る。別の態様では、ＡＵＣは、以下の式を使用して予測することができる：
ＡＵＣは、薬剤、例えば、ＴＴＲ阻害組成物の用量が患者に投与された後の経時的な血流の血漿中の組成物、例えば、ＴＴＲの濃度の曲線下面積を指す。これは、組成物の患者の血漿への吸収速度および患者の血漿からの除去速度によって影響を受ける。当業者が知っているように、ＡＵＣは、薬剤が投与された後の血漿組成物濃度の積分を計算することによって決定し得る。別の態様では、ＡＵＣは、以下の式を使用して予測することができる：
【0136】
予測ＡＵＣ＝（Ｄ×Ｆ）／ＣＬ
【0137】
式中、Ｄは用量濃度であり、Ｆは生物学的利用能の尺度であり、ＣＬは予測されるクリアランス速度である。当業者は、予測ＡＵＣの値が、±３～４倍の範囲の誤差を有することを理解する。
【0138】
いくつかの実施形態では、ＡＵＣを決定するためのデータは、薬剤の投与後の様々な時間間隔で患者から血液サンプルを採取することによって得られる。一態様では、ＴＴＲ阻害組成物の投与後の患者の血漿中の平均ＡＵＣは、約９０００～約１８０００の範囲内である。
【0139】
ＴＴＲの血漿濃度は、代謝および／または他の治療剤との起こり得る相互作用に関する変動性に起因して、対象間で有意に変化し得ることが理解される。本発明の一態様によれば、ＴＴＲの血漿濃度は、対象によって変化し得る。同様に、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）などの値または最大血漿濃度に達するまでの時間（Ｔｍａｘ）、または時間ゼロから最後の測定可能な濃度の時間までの曲線下面積（ＡＵＣｌａｓｔ）、または血漿濃度時間曲線下総面積（ＡＵＣ）などの値は、対象によって変化し得る。この変動性に起因して、ＴＴＲ阻害組成物などの化合物の「治療有効量」を構成するために必要な量は、対象によって変化し得る。
【0140】
医薬組成物
本明細書に記載される方法は、ＴＴＲ阻害組成物、例えば、ＴＴＲ遺伝子、例えば、パチシランを標的とするｓｉＲＮＡの投与を含む。いくつかの実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、医薬組成物である。
本明細書に記載される方法は、ＴＴＲ阻害組成物、例えば、ＴＴＲ遺伝子、例えば、パチシランを標的とするｓｉＲＮＡの投与を含む。いくつかの実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、医薬組成物である。
【0141】
本明細書で使用される場合、「医薬組成物」は、ＴＴＲ阻害組成物および薬学的に許容される担体を含む。「薬学的に許容される担体」という用語は、治療剤の投与のための担体を指す。こうした担体としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ブドウ糖、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、特に細胞培養培地を含まない。経口投与される薬剤については、薬学的に許容される担体には、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、着色剤、および保存剤などの薬学的に許容される賦形剤が含まれるが、これらに限定されない。適切な不活性希釈剤には、炭酸ナトリウムおよび炭酸カルシウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カルシウム、ならびにラクトースが含まれ、一方でトウモロコシデンプンおよびアルギン酸は適切な崩壊剤である。結合剤は、デンプンおよびゼラチンを含んでもよく、一方、潤滑剤は、存在する場合、概してステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクである。必要に応じて、錠剤は、消化管における吸収を遅延させるために、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルなどの材料でコーティングされてもよい。
【0142】
本発明の医薬組成物は、局所処置または全身処置のどちらが所望されるか、ならびに処置される面積に応じて、いくつかの方法で投与され得る。投与は、局所的、例えばネブライザーなどによる粉末またはエアロゾルの吸入または吹送による肺内、気管内、鼻腔内、表皮および経皮、経口または非経口であり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、または筋肉内への注射または注入、または例えば実質内、髄腔内、または脳室内などの脳内への投与を含む。
【0143】
組成物は、肝臓（例えば、肝臓の肝細胞）などの特定の組織を標的とする様式で送達され得る。医薬組成物は、脳への直接の注射により送達することができる。注射は、脳の特定の領域（例えば、黒質、皮質、海馬、線条体、または淡蒼球）への定位注射によってもよく、またはｄｓＲＮＡを中枢神経系の複数の領域（例えば、脳の複数の領域、および／または脊髄内に）に送達してもよい。ｄｓＲＮＡはまた、脳の拡散領域に送達され得る（例えば、脳皮質への拡散送達）。
【0144】
一実施形態では、ＴＴＲを標的とするｄｓＲＮＡは、組織、例えば、脳、例えば、脳の黒質、皮質、海馬、線条体、脳梁または淡蒼球に移植された一端を有するカニューレまたは他の送達デバイスによって送達され得る。カニューレは、ｄｓＲＮＡ組成物の貯蔵部に接続され得る。流れまたは送達は、ポンプ、例えば浸透圧ポンプまたはＡｌｚｅｔポンプ（Ｄｕｒｅｃｔ，Ｃｕｐｅｒｔｉｎｏ，ＣＡ）などのミニポンプによって媒介され得る。一実施形態では、ポンプおよび貯蔵部は、組織から離れた領域、例えば腹部に移植され、送達は、ポンプまたは貯蔵部から放出部位へと導く導管によって行われる。ｄｓＲＮＡ組成物の脳内への注入は、数時間または数日間、例えば、１、２、３、５、または７日以上であり得る。脳への送達のための装置は、例えば、米国特許第６，０９３，１８０号および第５，８１４，０１４号に記載されている。
【0145】
用量およびタイミング
当業者は、これらに限定されるものではないが、疾患または障害の重症度、過去の治療、対象の健康全般および／または年齢、および存在する他の疾患などの特定のファクターが、対象を効果的に治療するために必要な投薬量およびタイミングに影響を及ぼし得ることを理解するであろう。その上、治療有効量での組成物での対象の治療には、単回治療または一連の治療が含まれ得る。本発明に包含されるＴＴＲ阻害組成物の有効用量およびインビボ半減期の推定は、本明細書の他の箇所に記載されるように、従来の方法論を使用して、または適切な動物モデルを使用したインビボ試験に基づいて行うことができる。
当業者は、これらに限定されるものではないが、疾患または障害の重症度、過去の治療、対象の健康全般および／または年齢、および存在する他の疾患などの特定のファクターが、対象を効果的に治療するために必要な投薬量およびタイミングに影響を及ぼし得ることを理解するであろう。その上、治療有効量での組成物での対象の治療には、単回治療または一連の治療が含まれ得る。本発明に包含されるＴＴＲ阻害組成物の有効用量およびインビボ半減期の推定は、本明細書の他の箇所に記載されるように、従来の方法論を使用して、または適切な動物モデルを使用したインビボ試験に基づいて行うことができる。
【0146】
概して、ＴＴＲ阻害組成物の医薬組成物の好適な用量は、一日当たりレシピエントの体重１キログラム当たり０．０１～２００．０ミリグラムの範囲、概して一日当たり体重１キログラム当たり１～５０ｍｇの範囲であろう。
【0147】
例えば、ＴＴＲ阻害組成物はｓｉＲＮＡであってもよく、単回投与あたり、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．１ｍｇ／ｋｇ、１．２ｍｇ／ｋｇ、１．３ｍｇ／ｋｇ、１．４ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．６２８ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または５０ｍｇ／ｋｇで投与されてもよい。別の実施形態では、投与量は０．１５ｍｇ／ｋｇ～０．３ｍｇ／ｋｇである。例えば、ＴＴＲ阻害組成物は、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、または０．３ｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。一実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、０．３ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。
【0148】
医薬組成物（例えば、パチシラン）は、一日一回、または５、１０、１５、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、もしくは３０日に一回もしくは二回投与され得る。投与単位は、例えば、数日間にわたるＴＴＲ阻害組成物の徐放性を提供する従来の徐放性製剤を使用して、数日間にわたる送達のために配合され得る。徐放性製剤は当該技術分野で周知であり、本発明の薬剤と併用できるものなど、特定の部位での薬剤の送達に特に有用である。
【0149】
一実施形態では、ＴＴＲ阻害組成物は、パチシラン、例えば、パチシラン医薬品であり、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇであり、用量は、２１日または３週間毎に一回投与される。いくつかの実施形態では、用量、例えば、有効量は、約３週間毎にまたは約２１日毎に投与される。別の実施形態では、有効量は０．３ｍｇ／ｋｇであり、有効量は、１ｍＬ／分で１５分間、続いて３ｍＬ／分で５５分間の７０分間の注入を介して、２１日または３週間毎に一回投与される。別の実施形態では、有効量は０．３ｍｇ／ｋｇであり、有効量は、３．３ｍＬ／分の６０分間の注入を介して、または１．１ｍＬ／分で１５分間、続いて３．３ｍＬ／分で５５分間の７０分間の注入を介して、２１～２８日毎に二回投与される。
【0150】
いくつかの実施形態では、方法は、約８０分にわたって静脈内注入により３週間毎に一回投与される、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの投与量での、パチシラン、例えば、パチシラン医薬品の投与を含む。いくつかの実施形態では、方法は、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの投与量でパチシランを投与することを含み、６０分にわたって３．３ｍＬ／分で静脈内注入により投与され、または７０分にわたって、マイクロ投与レジメン（１．１ｍＬ／分で１５分間）を使用して、続いて残りの用量に対して３．３ｍＬ／分で投与される）。
【0151】
ＴＴＲ阻害組成物の投与量は、ＴＴＲ阻害組成物を投与し、対象におけるＴＴＲタンパク質のレベルを決定することによって、ＮＩＳまたはＦＡＰの増加を治療のために調整され得る。ＴＴＲタンパク質のレベルが５０μｇ／ｍｌ超である場合、その後対象に投与されるＴＴＲ阻害組成物の量は増加され、ＴＴＲタンパク質のレベルが５０μｇ／ｍｌ未満である場合、その後対象に投与されるＴＴＲ阻害組成物の量は、減少される。
【0152】
ＴＴＲ阻害組成物は、標的遺伝子発現によって媒介される病理学的プロセスの治療に有効な他の公知の薬剤と組み合わせて投与することができる。一実施形態では、パチシランは、タファミジスまたはジフルニサルなどの四量体安定化剤と共に投与される。いずれにしても、投与する医師は、当技術分野で公知であるかまたは本明細書において記載した、有効性の標準尺度を使用して観察された結果に基づいて、パチシランおよび／または四量体安定化剤投与の量およびタイミングを調節することができる。
実施例
実施例
【0153】
以下は、本発明を実施するための特定の実施形態の例である。実施例は、例示のみを目的として提供され、本発明の範囲をいかなる方法でも限定することを意図するものではない。使用する数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するために努力がなされてきたが、当然ながら、一部の実験誤差および偏差が許容されるべきである。
【0154】
本発明の実施は、別段の示唆がない限り、当該技術分野の技術範囲内のタンパク質化学、生化学、組換えＤＮＡ技術、および薬理学の従来の方法を採用する。こうした技術は、文献で完全に説明されている。例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）；Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．，ｃｕｒｒｅｎｔ ａｄｄｉｔｉｏｎ）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８９）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ａｎｄ Ｎ．Ｋａｐｌａｎ ｅｄｓ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｃａｒｅｙ ａｎｄ Ｓｕｎｄｂｅｒｇ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３ｒｄ Ｅｄ．（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）Ｖｏｌｓ Ａ ａｎｄ Ｂ（１９９２）を参照。
【0155】
「パチシラン」および「パチシラン医薬品」という用語は、実施例において互換的に使用され、表１Ａ，１Ｂおよび１Ｃに記載されるように製剤化されたｓｉＲＮＡを指す。
【実施例】
【0156】
実施例１．ＴＴＲアミロイドーシスに対するパチシランの安全性および有効性
第Ｉ相臨床試験では、パチシランは、２８日間にわたって患者のＴＴＲレベルを減少させることが見出された。この研究の結果は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３；３６９：８１９－２９．）で公開された。刊行物は、すべての目的のために参照により組み込まれる。研究デザインおよび結果の要約も以下のように通り提示する。
第Ｉ相臨床試験では、パチシランは、２８日間にわたって患者のＴＴＲレベルを減少させることが見出された。この研究の結果は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３；３６９：８１９－２９．）で公開された。刊行物は、すべての目的のために参照により組み込まれる。研究デザインおよび結果の要約も以下のように通り提示する。
【0157】
試験は、多施設、無作為化、単盲検、プラセボ対照、および用量範囲的であり、ＴＴＲアミロイドーシスを有する患者または健康な成人におけるパチシランの単回投与の安全性および有効性を評価した。１８～４５歳の男性および女性は、健康であり（病歴、身体検査、および１２誘導心電図に基づいて決定される）、１８．０～３１．５のＢＭＩを有し、適切な肝機能および血球数を有し、および妊娠可能性を有していなかった場合に、本試験に適格とした。
【0158】
一連の参加者（各シリーズに４人）を無作為に割り当て、パチシランを０．０１～０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、またはプラセボ（通常の生理食塩水）を３：１の比率で投与した。パチシランは、それぞれ１５分間および６０分間、静脈内投与された。試験では、注入関連反応のリスクを低減するために、患者は注入の前夜および当日に類似する前投薬を受けた。これらの薬剤には、デキサメタゾン、アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミンまたはセチリジン、およびラニチジンが含まれた。
【0159】
総ＴＴＲについて検証された酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、血清ＴＴＲレベルを反映して、パチシラン薬力学的活性を測定した（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ ＭＡ）。各患者についてのＴＴＲ、レチノール結合タンパク質、およびビタミンＡのベースラインレベルを、パチシランの投与前の四つの測定値の平均として定義した。有害事象は、薬剤投与の開始から２８日目までモニタリングされた。安全性モニタリングには、血液学的評価、血液化学分析、および甲状腺機能検査も含まれた。
【0160】
パチシランに含有されるＴＴＲ ｓｉＲＮＡの血漿薬物動態を、検証されたＥＬＩＳＡベースのハイブリダイゼーションアッセイによって評価した。ｓｉＲＮＡの検出および定量のために、ＡＴＴＯ－Ｐｒｏｂｅ－ＨＰＬＣアッセイ（定量下限、１．０ｎｇ／ミリリットル）（Ｔａｎｄｅｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ ＵＴ）を使用した。ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ ＮＪ）を使用して、薬物動態推定値を決定した。
【0161】
ＴＴＲ、ビタミンＡ、およびレチノール結合タンパク質のノックダウンを、ベースラインレベルと比較して測定した（データは示さず）。
【0162】
結果
パチシランの二つの最低用量では、ＴＴＲレベルの有意な変化は観察されなかった（プラセボと比較して）。しかしながら、０．１５～０．５ｍｇ／ｋｇの用量を投与されたすべての参加者において、実質的なＴＴＲノックダウンが観察された（データは示さず）。ＴＴＲノックダウンは、三つの用量レベルすべてにわたって迅速、強力、および耐久性があり、２８日目までプラセボと比較して、非常に有意な変化があった（Ｐ＜０．００１）。０．１５および０．３ｍｇ／ｋｇで見られた頑健な応答、および０．５ｍｇ／ｋｇでの応答における緩やかな漸増的改善を考慮して、一人の参加者のみが０．５ｍｇ／ｋｇの用量を受けた。
パチシランの二つの最低用量では、ＴＴＲレベルの有意な変化は観察されなかった（プラセボと比較して）。しかしながら、０．１５～０．５ｍｇ／ｋｇの用量を投与されたすべての参加者において、実質的なＴＴＲノックダウンが観察された（データは示さず）。ＴＴＲノックダウンは、三つの用量レベルすべてにわたって迅速、強力、および耐久性があり、２８日目までプラセボと比較して、非常に有意な変化があった（Ｐ＜０．００１）。０．１５および０．３ｍｇ／ｋｇで見られた頑健な応答、および０．５ｍｇ／ｋｇでの応答における緩やかな漸増的改善を考慮して、一人の参加者のみが０．５ｍｇ／ｋｇの用量を受けた。
【0163】
応答の動態（データは示さず）において、特に少なくとも０．３ｍｇ／ｋｇの用量では、参加者間で変動はほとんどなく、３日目までに５０％超低下し、およそ１０日目までに最低値レベルとなり、２８日目には５０％超の継続的な抑制が見られ、７０日目までに完全な回復が生じた。０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、および０．５ｍｇ／ｋｇを投与された参加者に対するＴＴＲノックダウンの最大値は、それぞれ８５．７％、８７．６％、および９３．８％であった。０．１５ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇの用量での平均最低値は、それぞれ８２．３％（９５％信頼区間（ＣＩ）、６７．７～９０．３）および８６．８％（９５％ＣＩ、８３．８～８９．３）であり、これらの最低値は、絶対ＴＴＲレベルまたはＴＴＲノックダウン率のいずれかとして分析された場合、参加者間でほとんど変動を示さず、プラセボと比較して高度に有意であった（Ｐ＜０．００１）（データは示さず）。
【0164】
ノックダウンの程度は、抑制期間を決定するようなものであり、０．１５ｍｇ／ｋｇおよび０．３ｍｇ／ｋｇを投与された参加者では、２８日目の平均減少はそれぞれ５６．６％（９５％ ＣＩ、１１．６～７８．７）および６７．１％（９５％ＣＩ、４５．５～８０．１）であり、０．５ｍｇ／ｋｇを投与された単一患者の２８日目の減少は７６．８％であった。０．３ｍｇ／ｋｇの用量でヒトで観察されたＴＴＲノックダウンは、同じ用量レベルで非ヒト霊長類で観察されたものと実質的に同一であった（データは示さず）。パチシランによるＴＴＲのこれらの低減は、レチノール結合タンパク質およびビタミンＡのレベルの変化と相関があった（データは示さず）。
【0165】
パチシランの使用は、血液学的、肝臓、または腎臓の測定値、または甲状腺機能に有意な変化をもたらさず、薬物関連の重篤な有害事象または有害事象に起因する治験薬投与中止もなかった（データは示さず）。
【0166】
パチシランの血漿薬物動態プロファイルは、試験された用量範囲にわたって、ＴＴＲ ｓｉＲＮＡのピーク血漿濃度および最終日までの曲線下面積の値がほぼ用量比例的に増加したことを示した（データは示さず）。
【0167】
パチシランの特異性
パチシランの効果の特異性をさらに実証するために、パチシランで使用される同じタイプの脂質ナノ粒子に製剤化されるＰＣＳＫ９（コレステロール低下の標的）を標的とするｓｉＲＮＡを含有するＡＬＮ－ＰＣＳの第１相試験において、健康なボランティアの群でＴＴＲも測定した。０．４ｍｇ／ｋｇのＡＬＮ－ＰＣＳ（いわゆる対照ｓｉＲＮＡ）の単回投与は、ＴＴＲに影響を及ぼさず（データは示さず）、これは、ＴＴＲに対するパチシランの効果が、脂質ナノ粒子の製剤の非特異的な効果ではなく、ｓｉＲＮＡによる特異的な標的化に起因することを示した。
パチシランの効果の特異性をさらに実証するために、パチシランで使用される同じタイプの脂質ナノ粒子に製剤化されるＰＣＳＫ９（コレステロール低下の標的）を標的とするｓｉＲＮＡを含有するＡＬＮ－ＰＣＳの第１相試験において、健康なボランティアの群でＴＴＲも測定した。０．４ｍｇ／ｋｇのＡＬＮ－ＰＣＳ（いわゆる対照ｓｉＲＮＡ）の単回投与は、ＴＴＲに影響を及ぼさず（データは示さず）、これは、ＴＴＲに対するパチシランの効果が、脂質ナノ粒子の製剤の非特異的な効果ではなく、ｓｉＲＮＡによる特異的な標的化に起因することを示した。
【0168】
パチシランの薬力学的効果の特異性および作用機序を裏付ける追加の証拠を、循環細胞外ＲＮＡ中の予測ＴＴＲ ｍＲＮＡ切断産物を検出するために、０．３ｍｇ／ｋｇの用量を投与された参加者から得られた血液サンプルに対する５’ＲＡＣＥ（相補的ＤＮＡ末端の急速増幅）アッセイを使用して得た。血液サンプルを採取するために、凝固した血液サンプル（対象からの投与前および投与後２４時間の）を１２００×ｇで２０分間遠心分離した後に血清を採取した。血清を１２００×ｇで１０分間、二度目に遠心分離して、浮遊細胞物質を除去し、次いで凍結した。解凍された血清を塩化リチウム（最終濃度１Ｍ）と混合し、４°Ｃで１時間インキュベートした。サンプルを、１２０，０００×ｇで２時間、４°Ｃで回転させて、ＲＮＡをペレット化し、総ＲＮＡを、トリゾール抽出（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ）およびイソプロパノール沈殿によってペレットから単離した。
【0169】
ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ媒介切断産物を検出するために、単離されたＲＮＡを、ＧｅｎｅＲａｃｅｒキット（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してライゲーション媒介性ＲＡＣＥ ＰＣＲに使用した。ＲＮＡをＧｅｎｅＲａｃｅｒアダプターにライゲートし、ＴＴＲ特異的リバースプライマー（５’－ａａｔｃａａｇｔｔａａａｇｔｇｇａａｔｇａａａａｇｔｇｃｃｔｔｔｃａｃａｇ－３’）（配列番号３）を使用して逆転写し、続いて、アダプターに相補的なＧｅｎｅ Ｒａｃｅｒ ＧＲ５’順方向プライマーおよびＴＴＲ特異的リバースプライマー（５’－ｇｃｃｔｔｔｃａｃａｇｇａａｔｇｔｔｔｔａｔｔｇｔｃｔｃｔｇ－３’））（配列番号４）を使用して、２ラウンドのＰＣＲを行った。ネステッドＰＣＲを、ＧＲ５’ネステッドプライマーおよびＴＴＲ特異的逆ネステッドプライマー（５’－ｃｔｃｔｇｃｃｔｇｇａｃｔｔｃｔａａｃａｔａｇｃａｔａｔｇａｇｇｔｇ－３’））（配列番号５）を用いて行った。ＰＣＲ産物を、ＴＯＰＯ－Ｂｌｕｎｔベクター（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してクローニングした。クローニングされた挿入物を、Ｍ１３フォワードおよびリバースプライマーを使用してコロニーＰＣＲによって増幅した。アンプリコンを、Ｍａｃｒｏｇｅｎシーケンシング施設にてＴ７プロモータープライマーで配列決定した。９６個のクローンからの配列を、ＣＬＣ ＷｏｒｋＢｅｎｃｈを使用してヒトＴＴＲに整列させた。
【0170】
ＴＴＲ ｍＲＮＡは、投与前サンプルおよび薬剤投与の２４時間後に取得されたサンプルの両方で検出された。ＲＮＡｉ機序と一致して、予測されるｍＲＮＡ切断産物は、投与前サンプル中に存在せず、三人の参加者全員の投与後サンプル中に存在した（データは示さず）。
【0171】
ヒト血清中の野生型および変異ＴＴＲの定量のためのＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイは、Ｔａｎｄｅｍ Ｌａｂによって認定され、実施された。血清サンプルを、キモトリプシンを使用して消化し、次いで、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる分析の前にタンパク質沈殿抽出によって処理した。野生型ＴＴＲを表すキモトリプシンペプチドＴＴＲＷ－１および変異体Ｖ３０Ｍを表すＶ３０Ｍ－１を、それらの固有の質量対電荷比遷移に従って監視した。安定同位体標識ペプチド（ＴＴＲＷ－１－Ｄ８およびＶ３０Ｍ－１－Ｄ８）を用いて得られた標準較正曲線データを使用して、ヒト血清サンプル中の内因性ペプチド断片（ＴＴＲＷ－１およびＶ３０Ｍ－１）を計算した。標準（すなわち、内部標準ＴＴＲＷ－Ｌ１－Ｄ１６に対するＴＴＲＷ－１－Ｄ８およびＶ３０Ｍ－Ｌ１－Ｄ１６に対するＶ３０Ｍ－１－Ｄ８）に対するピーク面積比を使用して、１／ｘ２加重最小二乗回帰分析を使用して線形較正曲線を作成した。適格なＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法は、５～２５００ｎｇ／ｍｌの範囲の標準曲線で、５ｎｇ／ｍｌの定量下限（ＬＬＯＱ）を達成した。
【0172】
実施例２．家族性アミロイドポリニューロパチーのためのパチシラン療法の安全性および有効性に関する多数回投与試験
この第ＩＩ相臨床試験では、ＴＴＲ媒介性ＦＡＰを有する患者にパチシランの複数回用量を投与し、これらの患者におけるパチシランの複数回漸増静脈内投与の安全性、忍容性、薬物動態、および薬力学を評価した。このデータは、２０１３年１１月に開催された家族性アミロイドポリニューロパチーに関する国際シンポジウム（ＩＳＦＡＰ）で提示された。
この第ＩＩ相臨床試験では、ＴＴＲ媒介性ＦＡＰを有する患者にパチシランの複数回用量を投与し、これらの患者におけるパチシランの複数回漸増静脈内投与の安全性、忍容性、薬物動態、および薬力学を評価した。このデータは、２０１３年１１月に開催された家族性アミロイドポリニューロパチーに関する国際シンポジウム（ＩＳＦＡＰ）で提示された。
【0173】
適格な患者は、生検で実証されたＡＴＴＲアミロイドーシスおよび軽度～中等度のニューロパチーを有する；カルノフスキーパフォーマンス状態（ＫＰＳ）≧６０％；ボディ・マス指数（ＢＭＩ）１７～３３ｋｇ／ｍ２；適切な肝臓および腎機能（アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）≦２．５×正常上限（ＵＬＮ）、正常範囲内の総ビリルビン、アルブミン＞３ｇ／ｄＬ、ならびに国際標準化比（ＩＮＲ）≦１．２；血清クレアチニン≦１．５ＵＬＮ）；およびＢ型肝炎ウイルスおよびＣ型肝炎ウイルスに対する血清反応陰性の成人（≧１８歳）である。肝臓移植を行っていた場合；試験中に手術が計画された場合；ＨＩＶ陽性である場合；３０日以内にタファミジスまたはジフルニサル以外の治験薬を受けた場合；ニューヨーク心臓協会の心不全分類が＞２であった場合；妊娠しているまたは授乳中である場合；全身性細菌性、ウイルス性、寄生虫性、または真菌性感染症が判明しているか、または疑われる場合、不安定な狭心症、制御されていない臨床的に有意な心不整脈を有する場合；またはリポソーム産物に対する重度の反応が以前にあった場合、またはオリゴヌクレオチドに対する既知の過敏症を有していた場合；患者は治療から除外される。
【0174】
これは、ＦＡＰの患者におけるパチシランの多施設、国際的、非盲検、複数回用量漸増第ＩＩ相試験であった。３名の患者のコホートは、パチシランの二回用量を投与され、各用量は静脈内（ＩＶ）注入として投与された。コホート１～３は、それぞれ、四週間毎（Ｑ４Ｗ）に、パチシラン０．０１、０．０５、および０．１５ｍｇ／ｋｇの二回投与を受け、コホート４および５は両方とも、Ｑ４Ｗにパチシラン０．３ｍｇ／ｋｇの二回投与を受けた。コホート６～９のすべての患者は、三週間毎（Ｑ３Ｗ）に、パチシラン０．３ｍｇ／ｋｇの二回投与を受けた。全ての患者は、デキサメタゾン、パラセタモール（アセトアミノフェン）、Ｈ２ブロッカー（例えば、ラニチジンまたはファモチジン）、およびＨ１ブロッカー（例えば、セチリジン、ヒドロキシジンまたはフェキソフェナジン）からなる各パチシラン注入前に前投薬を受け、注入関連反応のリスクを低減した。パチシランを、３．３ｍＬ／分で６０分にわたって、またはマイクロ投与レジメン（１．１ｍＬ／分で１５分間、続いて、残りの用量を３．３ｍＬ／分）を使用して７０分にわたってＩＶ投与した。
【0175】
酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、すべての患者について総ＴＴＲタンパク質の血清レベルを評価した。さらに、野生型および変異型ＴＴＲタンパク質を、専有の質量分析法（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）を使用して、Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を有する患者について血清中で個別的かつ特異的に測定した。血清サンプルを、スクリーニング時、および以下の日に採取した：追跡調査の０、１、２、７、１０、１４、２１、２２、２３（Ｑ３Ｗのみ）、２８、２９（Ｑ４Ｗのみ）、３０（Ｑ４Ｗのみ）、３１（Ｑ３Ｗのみ）、３５、３８（Ｑ４Ｗのみ）、および４２ ４９、５６、１１２、および２０８。
【0176】
０日目および以下の時点で採取された血液サンプルに基づいて、ＴＴＲ ｓｉＲＮＡの血漿濃度－時間プロファイルを作成した：投与前（予定投与開始の１時間以内）、注入終了時（ＥＯＩ）、５分、１０分および３０分、ならびに注入後１、２、４、６、２４、４８、１６８、３３６、５０４（２１日目、Ｑ３Ｗレジメンのみ）および６７２時間（２８日目、Ｑ４Ｗレジメンのみ）。Ｑ４Ｗレジメンについては８４日目および１８０日目に、Ｑ３Ｗレジメンについては３５日目、９１日目および１８７日目に追加のサンプルを採取した。コホート３～９については、ＥＯＩの０日目および注入後２時間の血液サンプルも、遊離および封入されたＴＴＲ ｓｉＲＮＡの両方について分析した。血清ＴＴＲ ｓｉＲＮＡを、検証済みのＡＴＴＯ－Ｐｒｏｂｅ高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）アッセイ（Ｔａｎｄｅｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ，Ｕｔａｈ，ＵＳＡ）を使用して分析した。ＰＫ分析を、ＴＴＲ ｓｉＲＮＡ血漿濃度－時間データの非区画的および／または区画的評価を使用して実施し、検証されたソフトウェアプログラムＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）を使用してＰＫパラメータ推定値を決定した。尿サンプルを、排泄されたＴＴＲ ｓｉＲＮＡのレベルについて分析し、投与後に腎クリアランス（ＣＬＲ）を測定した。
【0177】
ビタミンＡおよびレチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）の血清レベルを、それぞれＨＰＬＣおよびネフェロメトリーによって、総ＴＴＲについて指定されたのと同じ時点で測定した（Ｂｉｏｍｉｎｓ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）。
【0178】
ベースラインからのＴＴＲノックダウンの平均および分散を、ＰＰ集団について計算し、ベースラインをすべての投与前値の平均として定義した。分散分析（ＡＮＯＶＡ）および共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を使用して、ＰＤデータ（ベースラインに対する自然対数変換されたＴＴＲ）を分析し、個々の対毎の比較のテューキーの事後検定（用量レベル間）を行った。最低ＴＴＲレベルは、各用量投与後の２８日間（Ｑ３Ｗ群については２１日間）の間の患者当たりの最小レベルとして定義された（第一の用量、第二の用量期間：１～２８日、２９～５６日および１～２１日、２２～４２日、それぞれＱ４Ｗ群およびＱ３Ｗ群について）。ベースラインに対するＴＴＲとＲＢＰまたはビタミンＡとの関係、および野生型とＶ３０ＭのＴＴＲレベルとの関係を、線形回帰を介して調査した。ＰＫパラメータにおけるパチシラン成分の用量比例性を、パワーモデル解析を使用して評価した。ＡＥは、国際医薬用語集（ＭｅｄＤＲＡ）コードシステム、バージョン１５．０、ならびにＡＥ、臨床検査データ、バイタルサインデータ、およびＥＣＧ間隔データに対して提供される記述統計を使用してコードされた。すべての統計解析は、ＳＡＳソフトウェア、バージョン９．３以上を使用して実施された。有効性および薬力学：平均（ＳＤ）ベースライン血清ＴＴＲタンパク質レベルは、用量コホートにわたって類似していた：０．０１、０．０５、０．１５、０．３ Ｑ４Ｗおよび０．３ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ用量群について、それぞれ、２７２．９（９８．８６）、２２６．５（１２．６７）、２７６．１（７．６５）、２４２．６（３８．３０）、および２３５．５（４４．４５）μｇ／ｍＬ。
【0179】
０．０１ｍｇ／ｋｇの用量コホートと比較して、０．３ｍｇ／ｋｇのＱ４ＷおよびＱ３Ｗコホートにおいて、パチシランの第一および第二の投与後にＴＴＲの有意な減少（ＡＮＣＯＶＡ後の事後検定によりｐ＜０．００１）が観察された。（データは示さず）Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を有する患者では、野生型および変異ＴＴＲについて非常に類似したノックダウンの程度が観察された（データは示さず）。血清ＴＴＲノックダウンのレベルは、ＲＢＰ（ｒ２＝０．８９、ｐ＜１０－１５）およびビタミンＡ（ｒ２＝０．９０、ｐ＜１０－１５）の循環レベルの減少と高度に相関があった（データは示さず）。
【0180】
タファミジスまたはジフルニサルを服用している患者は、安定剤療法を受けていない患者と比較して血清ＴＴＲのベースラインレベルが有意に増加したが（ＡＮＯＶＡによるｐ＜０．００１）（データは示さず）、パチシラン投与は、これら二つの患者群において同様の程度のＴＴＲノックダウンをもたらした（データは示さず）。
【0181】
薬物動態：パチシランＴＴＲ ｓｉＲＮＡ成分の平均濃度は、ＥＯＩ後に減少し（データは示さず）、２１／２８日目の二回目の投与後、ｓｉＲＮＡの蓄積はなかった。各用量後のＴＴＲ ｓｉＲＮＡの封入濃度と非封入濃度の測定は、循環ＬＮＰ製剤の安定性を示した。第一および第二の用量の両方について、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）およびゼロから最後の測定可能な時点までの血漿濃度－時間曲線下面積（ＡＵＣ０－ｌａｓｔ）の平均値は、試験された用量範囲にわたって用量比例的に増加した。用量１および用量２後のＣｍａｘおよびＡＵＣ０－ｌａｓｔは同程度であり、蓄積はなかった。０日目および２１／２８日目のパチシランの終末相半減期の中央値は、用量＞０．０１ｍｇ／ｋｇで３９～５９時間であり、各用量コホートの用量１および用量２を比較したときには比較的変化しなかった。
【0182】
これらの第ＩＩ相データは、パチシランを用いたＦＡＰ患者の治療が、血清ＴＴＲタンパク質レベルの頑健で、用量依存的で、統計的に有意なノックダウンをもたらしたことを実証する。＞８０％のＴＴＲの平均持続的な低減は、３～４週間毎に投与されたパチシラン０．３ｍｇ／ｋｇの二回の連続投与で達成され、Ｑ３Ｗ群で９６％の最大ノックダウンが達成された。これらのノックダウン率は、パチシランの単回漸増用量、プラセボ対照第１相試験で観察された率と一致する（Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．２０１３ａ）。他の全身性アミロイド症の証拠は、疾患を引き起こすタンパク質のわずか５０％の低減が、臨床的疾患の改善または安定化をもたらし得ることを示す（Ｌａｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２００３；Ｌａｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．２００７）。パチシランによるＴＴＲノックダウンの程度は、タファミジスまたはジフルニサルを摂取している患者によって影響を受けず、これらのＴＴＲ安定剤薬剤がパチシランの薬理学的活性を妨げないことを示唆する。Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を有する患者では、パチシランは、変異型および野生型ＴＴＲの両方の産生を抑制し、後者は、肝臓移植後に遅発性ＦＡＰを有する患者においてアミロイド生成性のままである（Ｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ，２００３；Ｌｉｅｐｎｉｅｋｓ ｅｔ ａｌ，２０１０）。
【0183】
実施例３．パチシランの投与によるＮＩＳおよびｍＮＩＳ＋７によって測定される神経学的障害の低減
非盲検継続（ＯＬＥ）試験は、実施例２に記載される治験実施計画書を使用して、ＦＡＰ患者で実施されたおよびされる。パチシランの投与は、ＮＩＳおよびｍＮＩＳ＋７の両方の低減をもたらした。
非盲検継続（ＯＬＥ）試験は、実施例２に記載される治験実施計画書を使用して、ＦＡＰ患者で実施されたおよびされる。パチシランの投与は、ＮＩＳおよびｍＮＩＳ＋７の両方の低減をもたらした。
【0184】
過去に第２相試験で投与を受けたＦＡＰ患者は、第２相ＯＬＥ試験への移行が適格となる。０．３０ｍｇ／ｋｇを３週間毎、最長２年間投与されたおよびされ、６ヶ月毎に臨床評価項目を評価した。治験の目的は、神経障害（ｍＮＩＳ＋７およびＮＩＳ）、生活の質、ｍＢＭＩ、障害、可動性、握力、自律神経症状、皮膚生検内神経線維密度、心臓関連障害（心臓関連サブグループにおいて）、および血清ＴＴＲレベルに対する効果を含んだ。
【0185】
患者の人口統計を以下に示す。
【表6】
【0186】
ベースライン特性には以下が含まれる：
【表7】
【0187】
以下の表に示されるように、パチシランの投与は、血清ＴＴＲレベルの低下をもたらした。パチシランは、およそ８０％の持続的な血清ＴＴＲ低下を達成し、投与間で最大８８％のさらなる最低値を達成した。
【表8】
【0188】
以下の表に示されるように、パチシランの投与は、６ヶ月および１２ヶ月で測定されるように、ｍＮＩＳ＋７の変化をもたらした。
【表9】
【0189】
以下の表に示すように、パチシランの投与は、６ヶ月および１２ヶ月でＮＩＳの変化をもたらした。
【表10】
【0190】
ΔＮＩＳまたはΔｍＮＩＳ＋７における進行とＴＴＲ濃度との関係を、図１および図２に示すように線形回帰を用いて調査した。ＴＴＲおよび平均投与前トラフ（ｔｒｏｕｇｈ）［ＴＴＲ］は、６ヶ月でのｍＮＩＳ＋７の変化と相関があった。
【0191】
ＮＩＳおよびｍＮＩＳ＋７を、０、６、および１２ヶ月で測定した。０～６ヶ月および０～１２ヶ月のΔＮＩＳまたはΔｍＮＩＳ＋７を応答変数として使用した。予測変数には、ＴＴＲ濃度の二つの異なる尺度が含まれた：ＴＴＲタンパク質濃度曲線下面積（「ＡＵＣ」）、ならびに８４日目および１６８日目（０～６ヶ月の比較の場合）、８４日目、１６８日目、２７３日目、および３５７日目（０～１２ヶ月の比較の場合）のベースラインに対する平均ノックダウン率。
【0192】
両方のＴＴＲ測定値について、「ベースライン」は、すべての投与前値の平均として定義された。ＴＴＲ ＡＵＣは、未加工のＴＴＲ濃度（μｇ／ｍＬ）および台形の方法を使用して計算され、ベースライン値（０日目に挿入）から始まり、１８２日目（０～６ヶ月の比較の場合）または３５７日目（０～１２ヶ月の比較の場合）まで延長した。ベースラインに対するノックダウンの割合を、各予定された時点で計算した。線形回帰を行い、予測変数と応答変数との間に関連が存在しないという帰無仮説の検定に関連するＰ値を報告した。
【0193】
１２ヶ月で、それぞれ－２．５および０．４点のｍＮＩＳ＋７およびＮＩＳの平均変化があり、これは、類似のベースラインＮＩＳを有する患者集団における以前のＦＡＰ試験から１２ヶ月で推定されたｍＮＩＳ＋７およびＮＩＳの急速な増加（例えば、１０～１８点の増加）と比較して好ましい。ニューロパチー障害スコアの進行に対するパチシランの好ましい影響は、ＴＴＲ低下の程度と相関があった。これは、パチシランによる血清ＴＴＲ負荷の低減が、ＦＡＰ患者における臨床的利益につながることを示す。
【0194】
実施例４．ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスのる患者における、パチシランの単一の無作為化、二重盲検、プラセボ対照第３相試験。
試験デザイン
ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスの患者において、パチシランの有効性と安全性を、単一の無作為化、二重盲検、プラセボ対照第３相試験（ＡＰＯＬＬＯ）で評価した。主要有効性評価項目は、１８ヶ月目でのｍＮＩＳ＋７複合神経障害スコアのベースラインからの変化であった。副次的評価項目には、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮ生活の質スコア、ならびに運動力（ＮＩＳ－Ｗ）、障害（Ｒ－ＯＤＳ）、歩行速度（１０メートル歩行試験）、栄養状態（ｍＢＭＩ）、および自律神経症状（ＣＯＭＰＡＳＳ－３１）の尺度が含まれた。探索的評価項目には、ベースラインでの心臓関連障害の証拠を有する患者における心臓測定値、ならびに皮膚生検における皮膚アミロイド負荷および神経線維密度の測定値が含まれた。
試験デザイン
ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスの患者において、パチシランの有効性と安全性を、単一の無作為化、二重盲検、プラセボ対照第３相試験（ＡＰＯＬＬＯ）で評価した。主要有効性評価項目は、１８ヶ月目でのｍＮＩＳ＋７複合神経障害スコアのベースラインからの変化であった。副次的評価項目には、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮ生活の質スコア、ならびに運動力（ＮＩＳ－Ｗ）、障害（Ｒ－ＯＤＳ）、歩行速度（１０メートル歩行試験）、栄養状態（ｍＢＭＩ）、および自律神経症状（ＣＯＭＰＡＳＳ－３１）の尺度が含まれた。探索的評価項目には、ベースラインでの心臓関連障害の証拠を有する患者における心臓測定値、ならびに皮膚生検における皮膚アミロイド負荷および神経線維密度の測定値が含まれた。
【0195】
概要：
ＡＰＯＬＬＯは、その主要評価項目（ｍＮＩＳ＋７）を満たし、また、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮおよび全ての他の副次的評価項目に対して、高度に統計的に有意な効果を示し、ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスにおけるパチシランの臨床的利益を実証した。パチシランで治療された患者の５０％超が、ベースラインと比較して、１８ヶ月で神経障害の改善を有した。
ＡＰＯＬＬＯは、その主要評価項目（ｍＮＩＳ＋７）を満たし、また、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮおよび全ての他の副次的評価項目に対して、高度に統計的に有意な効果を示し、ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスにおけるパチシランの臨床的利益を実証した。パチシランで治療された患者の５０％超が、ベースラインと比較して、１８ヶ月で神経障害の改善を有した。
【0196】
治験実施計画書の概要：
患者は、上述のようにパチシランで治療された。簡潔に述べると、患者は、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量でパチシラン（表１を参照）の投与を受け、三週間毎（Ｑ３Ｗ）に静脈内投与された。パチシランを、例えば、３．３ｍＬ／分で６０分にわたって、またはマイクロ投与レジメン（１．１ｍＬ／分で１５分間、続いて、残りの用量を３．３ｍＬ／分）を使用して７０分にわたって静脈内投与した。
患者は、上述のようにパチシランで治療された。簡潔に述べると、患者は、体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量でパチシラン（表１を参照）の投与を受け、三週間毎（Ｑ３Ｗ）に静脈内投与された。パチシランを、例えば、３．３ｍＬ／分で６０分にわたって、またはマイクロ投与レジメン（１．１ｍＬ／分で１５分間、続いて、残りの用量を３．３ｍＬ／分）を使用して７０分にわたって静脈内投与した。
【0197】
いくつかの実施形態では、患者は、注入関連反応のリスクを低減するために、例えば、パチシラン注入の投与の前夜および／または当日、例えば、パチシラン注入の投与の一時間前に、前投薬を受けた。これらの薬剤には、デキサメタゾン、アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミンまたはセチリジン、およびラニチジンが含まれた。いくつかの実施形態では、以下の前投薬レジメンを使用することができる：ＩＶデキサメタゾン１０ｍｇ、もしくは同等物；および経口パラセタモール／アセトアミノフェン５００ｍｇ、もしくは同等物；およびＩＶヒスタミンＨ１受容体拮抗薬（Ｈ１ブロッカー）：ジフェンヒドラミン５０ｍｇ、もしくは同等の他のＩＶ Ｈ１ブロッカーまたはヒドロキシジン２５ｍｇまたはフェキソフェナジン３０もしくは６０ｍｇＰＯまたはセチリジン１０ｍｇＰＯ；およびＩＶヒスタミンＨ２受容体拮抗薬（Ｈ２ブロッカー）：ラニチジン５０ｍｇまたはファモチジン２０ｍｇ、もしくは同等の他のＨ２ブロッカー用量。
【0198】
ベースライン特性：
ＡＰＯＬＬＯは、２２５人の患者（パチシランに１４８人、プラセボに７７人）を登録した。患者は、２０１３年１２月から２０１６年１月にかけて、北米、欧州、アジア太平洋地域、および中央／南アメリカの１９カ国の４４の施設で登録された。患者の大部分は、白人（７２．４％）であり、７４．２％は男性であり、ほとんどは、６２歳中央値（２４～８３歳の範囲）の高齢の成人であった。ＦＡＰステージＩとＦＡＰステージＩＩの患者の割合は同様であり、平均ｍＮＩＳ＋７スコアは、パチシラン群およびプラセボ群でそれぞれ８０．９（範囲８～１６５）および７４．６（範囲１１～１５３．５）であった。Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異は、非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異の５７．３％と比較して、患者の４２．７％に存在した。心臓アミロイド関与の心エコー的証拠は、５６％に存在し、全患者の５２．９％は、ＴＴＲ四量体安定化剤の使用歴を有していた。治療群は、年齢、性別、疾患ステージ、ベースラインｍＮＩＳ＋７、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用について良好にバランスが取れていた。パチシラン群は、より多くの白人（７６．４％対６４．９％）を有し、非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を有する患者の割合が高く（６２．２％対４８．１％）、ベースラインでの心臓関連障害の心エコー的証拠を有し（心臓亜集団、６０．８％対４６．８％）、ならびに北米に登録されたより多くの患者（２５％対１３％）を有した。
ＡＰＯＬＬＯは、２２５人の患者（パチシランに１４８人、プラセボに７７人）を登録した。患者は、２０１３年１２月から２０１６年１月にかけて、北米、欧州、アジア太平洋地域、および中央／南アメリカの１９カ国の４４の施設で登録された。患者の大部分は、白人（７２．４％）であり、７４．２％は男性であり、ほとんどは、６２歳中央値（２４～８３歳の範囲）の高齢の成人であった。ＦＡＰステージＩとＦＡＰステージＩＩの患者の割合は同様であり、平均ｍＮＩＳ＋７スコアは、パチシラン群およびプラセボ群でそれぞれ８０．９（範囲８～１６５）および７４．６（範囲１１～１５３．５）であった。Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異は、非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異の５７．３％と比較して、患者の４２．７％に存在した。心臓アミロイド関与の心エコー的証拠は、５６％に存在し、全患者の５２．９％は、ＴＴＲ四量体安定化剤の使用歴を有していた。治療群は、年齢、性別、疾患ステージ、ベースラインｍＮＩＳ＋７、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用について良好にバランスが取れていた。パチシラン群は、より多くの白人（７６．４％対６４．９％）を有し、非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を有する患者の割合が高く（６２．２％対４８．１％）、ベースラインでの心臓関連障害の心エコー的証拠を有し（心臓亜集団、６０．８％対４６．８％）、ならびに北米に登録されたより多くの患者（２５％対１３％）を有した。
【0199】
ＴＴＲ遺伝子型
先述の通り、Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異は、非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異の５７．３％と比較して、患者の４２．７％に存在した。患者に見られる非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を以下に列挙する。
先述の通り、Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異は、非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異の５７．３％と比較して、患者の４２．７％に存在した。患者に見られる非Ｖａｌ３０Ｍｅｔ変異を以下に列挙する。
【表11】
【0200】
疾患ステージ
ＦＡＰのステージを以下の表に示す。
ＦＡＰのステージを以下の表に示す。
【0201】
【表12】
【0202】
傾向（Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ）：
計１８５名の患者が試験治療を完了し、パチシランでは完了者の割合が高かった（パチシラン群およびプラセボ群でそれぞれ９２．６％対６２．３％）。計１９３名の患者が試験を完了し、パチシランでは完了者の割合が高かった（パチシラン群およびプラセボ群でそれぞれ９３．２％対７１．４％）。
計１８５名の患者が試験治療を完了し、パチシランでは完了者の割合が高かった（パチシラン群およびプラセボ群でそれぞれ９２．６％対６２．３％）。計１９３名の患者が試験を完了し、パチシランでは完了者の割合が高かった（パチシラン群およびプラセボ群でそれぞれ９３．２％対７１．４％）。
【0203】
６名（７．８％）のプラセボ患者は、パチシラン群の１名（０．７％）と比較して、９ヶ月で急速な疾患進行（臨床判定委員会によって決定される、ＦＡＰステージ進行に沿った≧２４点のｍＮＩＳ＋７増加）を示した。
【0204】
プラセボ群では、試験治療中止の主な理由は、被験者の同意の撤回（１５．６％）、ならびに有害事象（９．１％）、進行性疾患（５．２％）、および死亡（５．２％）であり、試験参加中止の主な理由は、被験者の同意の撤回（１４．３％）、ならびに有害事象（７．８％）および死亡（５．２％）であった。
【0205】
パチシラン群において、試験治療中止の主な理由は、死亡（３．４％）および有害事象（２％）であり、試験参加中止の主な理由は、死亡（４．１％）および有害事象（１．４％）であった。
【0206】
ＡＰＯＬＬＯを完了し、かつ潜在的にグローバル非盲検継続試験に登録する資格がある１８９人の患者のうち、１８６人（９８．４％）が進行中のグローバル非盲検継続試験に登録された。
【0207】
有効性の概要
ｍＮＩＳ＋７および副次的評価項目の両方の結果の要約を以下の表に示す。
ｍＮＩＳ＋７および副次的評価項目の両方の結果の要約を以下の表に示す。
【表13】
【表14】
【表15】
【0208】
ｍＮＩＳ＋７
本試験は、その主要有効性評価項目を満たした。ｍＩＴＴ（修正治療意図）集団では、パチシラン群は、ベースラインと比較して、１８ヶ月で神経障害の改善（－６．０（１．７）点のｍＮＩＳ＋７ ＬＳ平均（ＳＥＭ）変化）を示したが、プラセボ群は、神経障害の悪化（＋２８．０（２．６）点のｍＮＩＳ＋７ ＬＳ平均（ＳＥＭ）変化）を示し、プラセボと比較して、パチシランを用いたニューロパチー進行の高度に有意な低減（－３４．０点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－３９．９、－２８．１、ｐ＝９．２６Ｅ－２４）を示した。同様の結果がＰＰ集団で観察された。パチシランの効果は、９か月に早くも観察され（－１６．０点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－２０．７、－１１．３）、パチシランを好ましくする一貫した効果は、ｍＮＩＳ＋７の全ての構成要素にわたって見られた。
本試験は、その主要有効性評価項目を満たした。ｍＩＴＴ（修正治療意図）集団では、パチシラン群は、ベースラインと比較して、１８ヶ月で神経障害の改善（－６．０（１．７）点のｍＮＩＳ＋７ ＬＳ平均（ＳＥＭ）変化）を示したが、プラセボ群は、神経障害の悪化（＋２８．０（２．６）点のｍＮＩＳ＋７ ＬＳ平均（ＳＥＭ）変化）を示し、プラセボと比較して、パチシランを用いたニューロパチー進行の高度に有意な低減（－３４．０点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－３９．９、－２８．１、ｐ＝９．２６Ｅ－２４）を示した。同様の結果がＰＰ集団で観察された。パチシランの効果は、９か月に早くも観察され（－１６．０点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－２０．７、－１１．３）、パチシランを好ましくする一貫した効果は、ｍＮＩＳ＋７の全ての構成要素にわたって見られた。
【0209】
図４に示されるように、１８ヶ月でのベースライン（＜０点のｍＮＩＳ＋７の変化）と比較した神経障害の改善は、プラセボ（４０．０のオッズ比、ｐ＝１．８２Ｅ－１５）でのわずか３．９％（９５％ＣＩ：０．０％、８．２％）と比較して、パチシランでは患者の５６．１％（９５％ＣＩ：４８．１％、６４．１％）で見られた。
【0210】
図５に示すように、ｍＮＩＳ＋７に対するパチシランの効果は、年齢、性別、民族、地理的領域、ＴＴＲ遺伝子型、ニューロパチーの重症度、疾患ステージ、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用によって定義されるすべての患者サブグループにわたって観察された。
【0211】
パチシランの有効性の維持は、ｍＮＩＳ＋７スコアの測定によって、３０ヶ月および３６ヶ月の治療レジメンにわたって患者において観察された。
【0212】
副次評価項目：
六つの副次的評価項目も、階層的試験ごとに統計学的有意性も満たした。
六つの副次的評価項目も、階層的試験ごとに統計学的有意性も満たした。
【0213】
図６に示すように、ｍＩＴＴ集団では、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮについての１８ヶ月時点でのベースラインからのＬＳ平均（ＳＥＭ）変化は、パチシランでは－６．７（１．８）点であり、生活の質の悪化を示すプラセボの＋１４．４（２．７）点と比較して、生活の質の改善を表した。治療群間のＬＳ平均差は、－２１．１点（９５％ＣＩ：－２７．２、－１５．０、ｐ＝１．１０Ｅ－１０）であり、プラセボと比較してパチシランを用いた場合の生活の質の有意な改善を示した。同様の結果がＰＰ集団で観察された。
【0214】
ｍＮＩＳ＋７と同様に、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮに対するパチシランの効果は、９か月という早さで見られた（－１５．０点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－１９．８、－１０．２）。Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱＯＬ－ＤＮに対するパチシランの効果は、年齢、性別、民族、地理的領域、ＴＴＲ遺伝子型、ニューロパチーの重症度、疾患ステージ、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用によって定義されるすべての患者サブグループにわたって観察された。
【0215】
パチシラン治療はまた、以下を含む複数の追加の副次的評価項目においても、１８ヶ月でプラセボと比較してベースラインよりも有意な改善をもたらした：ＮＩＳ－Ｗ（－１７．９点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－２２．３、－１３．４、ｐ＝１．４０Ｅ－１３）、Ｒ－ＯＤＳ（＋９．０点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：７．０、１０．９、ｐ＝４．０７Ｅ－１６）、１０メートル歩行試験（＋０．３１１ｍ／秒のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：０．２３、０．３９、ｐ＝１．８８Ｅ－１２）、ＢＭＩ（＋１１５．７ｋｇ／ｍ２×ｇ／ＬのＬＳ平均差、９５％ＣＩ：８２．４、１４９．０、ｐ＝８．８３Ｅ－１１）；およびＣＯＭＰＡＳＳ－３１（－７．５点のＬＳ平均差、９５％ＣＩ：－１１．９、－３．２、ｐ＝０．０００８））。改善は、年齢、性別、民族、地理的領域、ＴＴＲ遺伝子型、ニューロパチーの重症度、疾患ステージ、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用によって定義されるすべての患者サブグループにわたって観察された。
【0216】
以下の表に示すように、すべての副次的評価項目は、１８ヶ月で統計的有意性を達成した。ＣＯＭＰＡＳＳ－３１を除くすべての副次的評価項目について、９ヶ月時点で分離が見られた。基準範囲は以下の通りである：ＮＩＳ－Ｗ：０（より良好）～１９２（より不良）、Ｒ－ＯＤＳ：０（より不良）～４８（より良好）、ＣＯＭＰＡＳＳ ３１：０（より良好）～１００（より不良）。
【表16】
【0217】
血清ＴＴＲ減少率
血清ＴＴＲ濃度を、研究参加者で測定した。血清ＴＴＲの平均減少率は、プラセボのわずか５．８％（最小－５７％、最大４３）の低減と比較して、パチシランを受けている患者において７７．７％（最小－３８％、最大９５％）であった。血清ＴＴＲに対するパチシランの効果は、年齢、性別、遺伝子型、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用によって定義される患者サブグループにわたって観察された。より大きなＴＴＲ低減はまた、Ｒ値が０．５２（９５％ＣＩ：－０．６２、－０．４１）であるｍＮＩＳ＋７スコアとＲ値が－０．４０（９５％ＣＩ：－０．５１、－０．２７）であるＮｏｒｆｏｌｋ ＱｏＬ－ＤＮスコアとの両方の改善された変化と相関があった。データは、図７に示される。
血清ＴＴＲ濃度を、研究参加者で測定した。血清ＴＴＲの平均減少率は、プラセボのわずか５．８％（最小－５７％、最大４３）の低減と比較して、パチシランを受けている患者において７７．７％（最小－３８％、最大９５％）であった。血清ＴＴＲに対するパチシランの効果は、年齢、性別、遺伝子型、および以前のＴＴＲ四量体安定化剤の使用によって定義される患者サブグループにわたって観察された。より大きなＴＴＲ低減はまた、Ｒ値が０．５２（９５％ＣＩ：－０．６２、－０．４１）であるｍＮＩＳ＋７スコアとＲ値が－０．４０（９５％ＣＩ：－０．５１、－０．２７）であるＮｏｒｆｏｌｋ ＱｏＬ－ＤＮスコアとの両方の改善された変化と相関があった。データは、図７に示される。
【0218】
より大きなＴＴＲ低減は、ｍＮＩＳ＋７の改善された変化と相関した（Ｒ値０．５２［９５％ ＣＩ：－０．６２、－０．４１］）。より大きなＴＴＲ低減は、Ｎｏｒｆｏｌｋ ＱｏＬ－ＤＮの改善された変化と相関した（Ｒ値－０．４０［９５％ＣＩ：－０．５１、－０．２７］。図８のグラフは、１８ヶ月での血清ＴＴＲの減少とｍＮＩＳ＋７スコアとの関係を示す。
【0219】
ＰＮＤスコアおよびＦＡＰステージ
患者は、本明細書に記載されるように、ポリニューロパチー障害（ＰＮＤ）スコアおよび家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）ステージについて評価された。ＰＮＤスコアは以下のように決定される：ＰＮＤ Ｉ：歩行の維持、感覚障害；ＰＮＤ ＩＩ：歩行障害はあるが、杖や松葉杖なしで歩行できる；ＰＮＤ ＩＩＩＡ：１本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＩＩＢ：２本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＶ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。ＦＡＰステージは以下のとおりである。ＦＡＰ Ｉ：歩行障害なし、ＦＡＰ ＩＩ：歩行の支援が必要、ＦＡＰ ＩＩＩ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。
患者は、本明細書に記載されるように、ポリニューロパチー障害（ＰＮＤ）スコアおよび家族性アミロイドポリニューロパチー（ＦＡＰ）ステージについて評価された。ＰＮＤスコアは以下のように決定される：ＰＮＤ Ｉ：歩行の維持、感覚障害；ＰＮＤ ＩＩ：歩行障害はあるが、杖や松葉杖なしで歩行できる；ＰＮＤ ＩＩＩＡ：１本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＩＩＢ：２本の杖や松葉杖で歩く；ＰＮＤ ＩＶ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。ＦＡＰステージは以下のとおりである。ＦＡＰ Ｉ：歩行障害なし、ＦＡＰ ＩＩ：歩行の支援が必要、ＦＡＰ ＩＩＩ：車椅子やベッドで寝たきりの状態。
【0220】
図９に示すように、１８ヶ月時点で、ＰＮＤスコアおよびＦＡＰ状態の両方にシフトがあった。パチシランを用いた治療は、安定化または改善されたいずれかのＰＮＤスコアおよびＦＡＰステージをもたらした。
【0221】
皮膚生検：神経線維密度および皮膚アミロイド含量
自発的な皮膚生検を、試験参加者に対して行った。神経線維密度および皮膚アミロイド含量を決定した。ベースライン皮膚生検を受けたプラセボ患者の約５０％は、脱落により１８ヶ月の追跡サンプルを有していなかった。これは、大幅な変動性も加わり、結果の解釈を限定した。しかしながら、結果は、プラセボと比較して、パチシラン治療による表皮内神経線維密度（ＩＥＮＦＤ）の減弱した減少を示し（名目上のｐ値有意）、プラセボと比較して、パチシラン治療での汗腺神経線維密度（ＳＧＮＦＤ）または皮膚アミロイド含量の有意な変化を示さなかった。（データは非表示）。
自発的な皮膚生検を、試験参加者に対して行った。神経線維密度および皮膚アミロイド含量を決定した。ベースライン皮膚生検を受けたプラセボ患者の約５０％は、脱落により１８ヶ月の追跡サンプルを有していなかった。これは、大幅な変動性も加わり、結果の解釈を限定した。しかしながら、結果は、プラセボと比較して、パチシラン治療による表皮内神経線維密度（ＩＥＮＦＤ）の減弱した減少を示し（名目上のｐ値有意）、プラセボと比較して、パチシラン治療での汗腺神経線維密度（ＳＧＮＦＤ）または皮膚アミロイド含量の有意な変化を示さなかった。（データは非表示）。
【0222】
パチシランの有効性の維持
１８ヶ月間の二重盲検試験の試験参加者は、パチシランで１２ヶ月間治療された。結果を図１０のグラフに示し、３０ヶ月にわたるｍＮＩＳ＋７に対するパチシラン効果の維持、およびプラセボを以前に受けた患者における有効性の証拠を示す。
１８ヶ月間の二重盲検試験の試験参加者は、パチシランで１２ヶ月間治療された。結果を図１０のグラフに示し、３０ヶ月にわたるｍＮＩＳ＋７に対するパチシラン効果の維持、およびプラセボを以前に受けた患者における有効性の証拠を示す。
【0223】
２４ヶ月間の試験における試験参加者は、パチシランで１２ヶ月間治療された。結果を図１１のグラフに示し、３６ヶ月にわたるｍＮＩＳ＋７に対するパチシラン効果の維持を示す。
【0224】
心臓サブグループ解析
心臓亜集団、例えば、心筋症を有する患者については、先述された。概して、これらは、１３ｍｍ以上の心臓の全厚を有し、高血圧または心臓弁疾患の証拠がない患者であった。心臓亜集団は、プラセボ亜集団の３６名（４６．８％）の患者、およびパチシラン集団の９０名（６０．８％）の患者から構成された。心臓亜集団における患者の総数は、１２６人、または本試験における患者の５６％であった。
心臓亜集団、例えば、心筋症を有する患者については、先述された。概して、これらは、１３ｍｍ以上の心臓の全厚を有し、高血圧または心臓弁疾患の証拠がない患者であった。心臓亜集団は、プラセボ亜集団の３６名（４６．８％）の患者、およびパチシラン集団の９０名（６０．８％）の患者から構成された。心臓亜集団における患者の総数は、１２６人、または本試験における患者の５６％であった。
【0225】
探索的心臓関連評価項目、例えば、心臓マーカーおよび／または心エコーパラメータを、集団全体にわたって評価した。結果を以下の表に示す。
心臓探索的評価項目
心臓探索的評価項目
【表17】
【0226】
パチシランを投与された患者は、プラセボ患者と比較して、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの安定化を示した（パチシラン：１２．５ｐｍｏｌ／Ｌ増加、プラセボ：２２７．２ｐｍｏｌ／Ｌ増加）。パチシラン治療患者とプラセボ患者とのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの差は、－２１４．６ｐｍｏｌ／Ｌ（ｐ＝０．００２４）であった。
心臓サブグループにおけるＮＴ－ｐｒｏＢＮＰマーカー
＊１８ヶ月で非消失（ｎｏｎ－ｍｉｓｓｉｎｇ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを有する患者のみを含む
‡１８ヶ月でベースラインＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ≧６５０ｎｇ／Ｌおよび非消失（ｎｏｎ－ｍｉｓｓｉｎｇ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを有する患者のみを含む
心臓サブグループにおけるＮＴ－ｐｒｏＢＮＰマーカー
【表18】
＊１８ヶ月で非消失（ｎｏｎ－ｍｉｓｓｉｎｇ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを有する患者のみを含む
‡１８ヶ月でベースラインＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ≧６５０ｎｇ／Ｌおよび非消失（ｎｏｎ－ｍｉｓｓｉｎｇ）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを有する患者のみを含む
【0227】
改善は、パチシランを受けている患者のＬＶ（左心室）壁厚および長軸方向ストレインでも見られた。ＬＶ壁厚は、プラセボ患者におけるわずか０．００７ｃｍと比較して、パチシラン治療患者にいてベースラインと比較して０．１ｃｍ減少した（ｐ＝０．０１７３）。ＬＶ長軸方向ストレインはまた、パチシラン患者において安定化し、プラセボ患者における１．４６％と比較して、わずか０．０８％増加した（ｐ＝０．０１５４）。
【0228】
実施例５．概要
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、心筋症およびポリニューロパチーを伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）の治療を、それを必要とするヒト患者において行うために、表１に記載の組成のパチシランを体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で、患者に投与することによって使用され、パチシランは、２１日または３週間毎に一回静脈内投与される。方法は、パチシランの投与前の対象のベースラインスコアからの修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、心筋症およびポリニューロパチーを伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）の治療を、それを必要とするヒト患者において行うために、表１に記載の組成のパチシランを体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で、患者に投与することによって使用され、パチシランは、２１日または３週間毎に一回静脈内投与される。方法は、パチシランの投与前の対象のベースラインスコアからの修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらす。
【0229】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、心筋症を伴う遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）の治療を、それを必要とするヒト患者において行うために使用され、方法は、表１に記載の組成のパチシランを体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で、患者に投与することを含み、パチシランは、２１日または３週間毎に一回静脈内投与される。
【0230】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法は、心筋症およびポリニューロパチーを有する遺伝性トランスサイレチン媒介性アミロイドーシス（ｈＡＴＴＲ）を有し治療するヒト患者において、修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアを低減するために使用され、方法は、表１に記載の組成のパチシランを体重１ｋｇ当たり０．３ｍｇのｓｉＲＮＡの用量で、患者に投与することを含み、パチシランは、２１日または３週間毎に一回静脈内投与され、方法は、１８ヶ月で決定されるベースラインからの修正ニューロパチー障害スコア（ｍＮＩＳ＋７）複合神経障害スコアの減少をもたらし、ベースラインは、パチシラン投与前の患者のｍＮＩＳ＋７スコアである。
【0231】
いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）、ＮＩＳ－Ｗ、Ｒａｓｃｈ－ｂｕｉｌｔ全般身体障害スコア（Ｒ－ＯＤＳ）、１０メートル歩行試験、修正ボディ・マス指数（ｍＢＭＩ）、ＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアからなる群から選択される一つ以上の評価項目におけるベースラインからの改善をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、全ての評価項目の改善をもたらす。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｎｏｒｆｏｌｋ生活の質質問票－糖尿病神経障害（ＱＯＬ－ＤＮ）およびＣＯＭＰＡＳＳ－３１スコアおよび１０メートル歩行試験の改善をもたらす。
【0232】
いくつかの実施形態では、患者は、デキサメタゾン、経口パラセタモール／アセトアミノフェン、ジフェンヒドラミン、ヒドロキシジン、フェキソフェナジン、セチリジン、ラニチジン、ファモチジン、または他のＩＶヒスタミンＨ１またはＨ２受容体拮抗薬などの前投薬を投与される。いくつかの実施形態では、前投薬は、パチシランの約一時間前に投与される。いくつかの実施形態では、患者は、ビタミンＡのＵＳＤＡ推奨日当の経口一日用量をさらに投与される。いくつかの実施形態では、患者は、タファミジスまたはジフルニサルなどの四量体安定化剤も投与される。
【0233】
いくつかの実施形態では、開示された方法で治療される患者は、白人であってもよく、北米に住んでいてもよく、６５歳以上であってもよく、男性であってもよく、ＦＡＰステージＩを有してもよく、ＦＡＰステージＩＩを有してもよく、８～１６５のベースラインｍＮＩＳ＋７スコアを有してもよく、Ｖａｌ３０ Ｍｅｔ ＴＴＲ変異を有してもよく、表Ｘに見られる一つ以上のＴＴＲ変異を有してもよく、心臓アミロイド関与の心エコー的証拠を有してもよく、および／または以前の長期ＴＴＲ四量体安定化剤使用の履歴を有してもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも一つの薬剤の投与は、患者によって実施される。他の実施形態では、少なくとも一つの薬剤の投与は、医療専門家によって実施される。
【0234】
実施例６．パチシラン投与による非侵襲的な圧容積分析を使用して測定される安定した心臓機能
背景
トランスサイレチン（ＴＴＲ）タンパク質の不安定化によって引き起こされるトランスサイレチン媒介性（ＡＴＴＲ）アミロイドーシスは、心臓、神経、および他の器官におけるアミロイド線維の沈着をもたらす。
背景
トランスサイレチン（ＴＴＲ）タンパク質の不安定化によって引き起こされるトランスサイレチン媒介性（ＡＴＴＲ）アミロイドーシスは、心臓、神経、および他の器官におけるアミロイド線維の沈着をもたらす。
【0235】
ＴＴＲの肝合成を阻害するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）治療薬であるパチシランは、第ＩＩＩ相ＡＰＯＬＬＯ試験に基づいて、遺伝性トランスサイレチン媒介性（ｈＡＴＴＲ）アミロイドーシスのポリニューロパチーの治療に対して承認された。
【0236】
この事後解析では、非侵襲的圧容積（ＰＶ）技術を使用して、ＡＰＯＬＬＯ試験における左心室（ＬＶ）機構に対するパチシランの効果をさらに詳述する。
【0237】
方法
ＡＰＯＬＬＯ試験に登録されたすべての患者は、ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスとの診断を受けた。ＬＶ容積、ＬＶ圧力および血圧のドップラー推定値を使用して、ＡＰＯＬＬＯ試験から利用可能なコアラボ心エコーを有する患者に対して非侵襲的ＰＶループを構築した。
ＡＰＯＬＬＯ試験に登録されたすべての患者は、ポリニューロパチーを伴うｈＡＴＴＲアミロイドーシスとの診断を受けた。ＬＶ容積、ＬＶ圧力および血圧のドップラー推定値を使用して、ＡＰＯＬＬＯ試験から利用可能なコアラボ心エコーを有する患者に対して非侵襲的ＰＶループを構築した。
【0238】
収縮終期ＰＶ関係（ＥＳＰＶＲ）および拡張終期ＰＶ関係（ＥＤＰＶＲ）が、各対象に対してこれまでに検証された技術から導出された。ＥＳＰＶＲとＥＤＰＶＲとの間の面積、３０ｍｍＨｇのＬＶ拡張終期圧（ＰＶＡｉｓｏ３０）にインデックス付けされた等容性ＰＶ面積を、ＬＶ機能の一次尺度として使用し、経時的に追跡した。ＡＮＣＯＶＡを使用して、９ヶ月および１８ヶ月でのＰＶＡｉｓｏ３０のベースラインからの最小二乗（ＬＳ）平均変化における治療群間の差異の有意性を評価した。
【0239】
結果
修正治療意図（ｍＩＴＴ）試験集団の２２５人の患者が含まれた。ベースラインでは、平均ＰＶＡｉｓｏ３０は１３，３１９ｍｍＨｇ＊ｍＬであった（正常から約２５％減少した）。
修正治療意図（ｍＩＴＴ）試験集団の２２５人の患者が含まれた。ベースラインでは、平均ＰＶＡｉｓｏ３０は１３，３１９ｍｍＨｇ＊ｍＬであった（正常から約２５％減少した）。
【0240】
９ヶ月時点で、ＰＶＡｉｓｏ３０のＬＳ平均変化は、パチシランで－７７ｍｍＨｇ＊ｍＬ、プラセボで－２００３ｍｍＨｇ＊ｍＬであった（ｐ＜０．００１）。１８ヶ月時点で、ＰＶＡｉｓｏ３０のＬＳ平均変化は、パチシランで－５６５ｍｍＨｇ＊ｍＬ、プラセボで－２８１０ｍｍＨｇ＊ｍＬであった（ｐ＜０．００１）。ＰＶＡｉｓｏ３０の低下は、両方の時点でのＬＶ静電容量の減少によって引き起こされた。
【0241】
ベースラインおよび利用可能な心エコーデータを有するｍＩＴＴ試験集団における患者の心エコーおよび圧容積パラメータの変化を表４に示す。図１２Ａおよび１２Ｂは、ベースライン（実線）と比較され、治療群によって階層化された、９ヶ月（破線）での圧容積ループ（図１２Ａ）および等容性圧容積面積（図１２Ｂ）の変化についてのグラフを示す。図１３Ａおよび１３Ｂは、ベースライン（実線）と比較され、治療群によって階層化された、１８ヶ月（破線）での圧容積ループ（図１３Ａ）および等容性圧容積面積（図１３Ｂ）の変化についてのグラフを示す。
【0242】
これらの結果は、パチシランが、ＬＶ静電容量の減少を防止することによって、１８ヶ月間の治療にわたってＬＶチャンバー機能不全の進行を遅延させることを示す。パトリシランを用いた治療は、非侵襲的圧容積分析を使用して評価された遺伝性トランスサイレチンアミロイドーシスを有する患者において、安定した心機能をもたらす。
【表19】
【表20】
【0243】
表４：ＩＶＳ、心室中壁；ＰＷ、後壁；ＬＶＭｉ、体表面積に対してインデックス付けされ左心室質量；ＲＷＴ、相対壁厚；ＬＶＥＤＶ、左心室拡張末期容積；ＬＶＥＳＶ、左心室収縮末期容積；ＳＶｉ、体表面積に対してインデックス付けされたストローク体積；ＬＶＥＦ、左心室駆出分画率；ＭＣＦ、心筋収縮率；ＧＬＳ、長軸方向グローバルストレイン；ＬＶＥＤＰ、推定左心室拡張末期圧；ＬＶＥＳＰ、推定左心室収縮末期圧；Ｅｅｓ、収縮末期弾性、Ｅａ；動脈弾性、Ｖｏ；０ｍｍＨｇの圧力での推定心室容積、Ｖ１２０；１２０ｍｍＨｇの圧力での推定左心室容積、Ｖ３０；３０ｍｍＨｇの圧力での推定左心室容積、ＰＶＡｉｓｏ３０、左心室拡張末期圧力３０ｍｍＨｇに対してインデックス付けされた等容性圧容積面積；＊ベースラインからの変化を転帰変数として、ならびに対応するベースライン値および治療群を共変量として、ＡＮＣＯＶＡを用いて比較した。
【0244】
本発明は、好ましい実施形態および様々な代替的な実施形態を参照して特に示され、説明されてきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、形態および詳細の様々な変更をその中に行うことができることは、当業者によって理解されるであろう。
【0245】
本明細書の本文内で引用されるすべての参考文献、発行された特許、および特許出願は、すべての目的のために、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3-1】
【図3-2】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9-1】
【図9-2】
【図10】
【図11】
【図12A】
【図12B】
【図13A】
【図13B】
【配列表】
【国際調査報告】