特表 2024-518543 アゲラスタチンＡ誘導体および関連する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-01

(54)【発明の名称】アゲラスタチンＡ誘導体および関連する方法

(51)【国際特許分類】

   C07D 487/14 20060101AFI20240423BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240423BHJP

   A61P 15/14 20060101ALI20240423BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240423BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240423BHJP

   A61K 31/4985 20060101ALI20240423BHJP

【ＦＩ】

C07D487/14 CSP

A61P35/00

A61P15/14

A61P25/00

A61P43/00 111

A61K31/4985

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023570139

(86)(22)【出願日】2022-05-11

(85)【翻訳文提出日】2024-01-04

(86)【国際出願番号】 US2022028759

(87)【国際公開番号】W WO2022240982

(87)【国際公開日】2022-11-17

(31)【優先権主張番号】63/187,297

(32)【優先日】2021-05-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】514239372

【氏名又は名称】ベイラー ユニバーシティ

(74)【代理人】

【識別番号】110001195

【氏名又は名称】弁理士法人深見特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ロモ，ダニエル

(72)【発明者】

【氏名】シュフォード，ケビン

(72)【発明者】

【氏名】シュエ，ハオラン

(72)【発明者】

【氏名】カリステ，エムビア

(72)【発明者】

【氏名】ハル，ケネス

(72)【発明者】

【氏名】ジュアノー，モーガン

【テーマコード（参考）】

4C050

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C050AA01

4C050AA08

4C050BB05

4C050CC04

4C050DD02

4C050EE04

4C050FF01

4C050GG03

4C050GG04

4C050HH01

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086AA04

4C086CB05

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA17

4C086NA14

4C086ZA01

4C086ZA81

4C086ZB26

4C086ZC02

(57)【要約】

アゲラスタチン化合物、アゲラスタチン化合物を作製する方法、およびアゲラスタチン化合物を使用する方法。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式（Ｉ）：

【化1】

（式中、
Ｒ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_３は、Ｂｒ、ＣＦ_３、ＳＦ_５、ＳＯ_２ＣＦ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＣＮ、およびＮＯ_２からなる群から選択され；
Ｒ_４は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＣＮからなる群から選択され；かつ
Ｒ_５はＨである）
の化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩。

【請求項2】

Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、およびＲ_５がＨであり、Ｒ_３がＢｒである、請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｒ_１、Ｒ_２、およびＲ_５がＨであり、Ｒ_３およびＲ_４がＢｒである、請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_１～Ｒ_５が水素である、請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

Ｒ_１およびＲ_２が、水素およびハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモ）から独立して選択され、Ｒ_３～Ｒ_５が水素である、請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

式（Ｉ）の化合物を作製する方法であって、式（Ａ）の化合物を、式（Ｂ）の化合物を介して式（Ｉ）の化合物に変換することを含み：

【化2】

前記式（Ａ）の化合物を、

【化3】

と反応させて、アミド（ａ）：

【化4】

をもたらし；
アミド（ａ）を前記式（Ｂ）の化合物に変換し、続いて閉環して７－ヒドロキシ化合物（ｂ）：

【化5】

をもたらし；
７－ヒドロキシ化合物（ｂ）を、水性酸での処理によって、前記式（Ｉ）の化合物に変換する、
（式中、
Ｐは、アルコール保護基であり；
Ｒは、メチル基であり；
Ｒ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_３は、Ｂｒ、ＣＦ_３、ＳＦ_５、ＳＯ_２ＣＦ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＣＮ、およびＮＯ_２からなる群から選択され；
Ｒ_４は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＣＮからなる群から選択され；かつ
Ｒ_５はＨである）
方法。

【請求項7】

請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。

【請求項8】

がんを処置する方法であって、治療有効量の、請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。

【請求項9】

前記がんが、乳がん（トリプルネガティブ乳がんもしくはエストロゲン受容体陽性乳がん）または神経膠芽腫である、請求項８に記載の方法。

【請求項10】

対象におけるリボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心との相互作用を通して、タンパク質合成を阻害する方法であって、有効量の、請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を、リボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心との相互作用を通してタンパク質合成を阻害するのに有効な量で、対象に投与することを含む、方法。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年５月１１日に出願された米国出願第６３／１８７，２９７号の利益を主張し、その全容が参照により本明細書に明示的に組み込まれる。

【0002】

政府ライセンスの権利に関する申告
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）により授与された助成金番号Ｒ３７ ＧＭ０５２９６４およびＲ３５ ＧＭ１３４９１０の下で、政府援助を受けて行われた。政府は、本発明における一定の権利を有する。

【0003】

背景
アゲラスタチンＡ（ＡｇｌＡ、図１、１）は、その独特な構造および広範囲の生物活性により、海洋アルカロイドのピロール－２－アミノイミダゾール（Ｐ－２－ＡＩ）ファミリーの最も卓越したメンバーの１つであり、合成化学者および生物学者の両方から大きな関心を集めている。１９９３年にＰｉｅｔｒａによって単離されて、この四環系の海洋アルカロイドは、白血病、乳がん、肺がんおよび神経膠芽腫を含む多様ながんの処置における薬物指標としての治療的可能性を実証した。ある研究では、ＡｇｌＡは、その過剰発現が悪性形質転換、がんの進行、および多様ながんにおける転移に関連すると考えられているオステオポンチン（ＯＰＮ、ＳＰＰ１によってコードされる）の阻害を実証した。さらに、ＯＰＮはまた、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、および原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫などの原発性脳腫瘍によっても著しく発現されるため、ＡｇｌＡは、その優れた血液脳関門の透過性のために、脳腫瘍の処置に特に魅力的なものとなっている。加えて、ＡｇｌＡはまた、グリコーゲン合成酵素キナーゼ－３βの発現も阻害する。

【0004】

驚くべきことではないが、その発見以来、ＡｇｌＡの合成およびがん細胞株に向けての構造－活性－相関（ＳＡＲ）プロファイルの開発に、広範な研究が行われてきた。多くの明快な合成戦略を特色とする、多数の全合成または形式的合成が報告されてきた。これらの研究により、生理活性の構造的必要要件の広範な理解および改善された効力を有する数種の新規な誘導体の開発が導かれてきた。最近、ＡｇｌＡの細胞標的が報告され、その強力な抗がん効果を説明する作用機構が解明された。ＨｅＬａ細胞では、ＡｇｌＡは、リボソームのペプチジル転移中心（ＰＴＣ）と結合し、タンパク質合成阻害をもたらし、最終的にアポトーシスに至る。その上、ＡｇｌＡと酵母リボソームのＳ８０サブユニットとの複合体のＸ線構造により、ＡｇｌＡをベースとする新規な薬物指標を設計する可能性が開かれた。詳細には、Ｘ線構造により、多数の重要な水素結合およびｎ－ｎスタッキング相互作用およびまれなハロゲン－ｎ相互作用が明らかとなった。ＡｇｌＡの生物模倣型合成もまた説明されており、それは、この種類のアルカロイドへの簡潔な参入をもたらし、非環式前駆物質から提案された生合成を支持した。

【0005】

アゲラスタチン誘導体の合成における進歩にもかかわらず、アゲラスタチン誘導体を作製するための新しい合成法、および改善された治療的特性を有する新しいアゲラスタチン誘導体に対する必要性が存在する。本開示は、これらの必要性を満たすことを探究し、さらに関連する利点を提供する。

【0006】

概要
本開示は、アゲラスタチン化合物（例えば、アゲラスタチンＡ誘導体）および該化合物を作製し使用する方法を提供する。

【0007】

一態様では、本開示は、式（Ｉ）：

【0008】

【化1】

【0009】

（式中、
Ｒ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_３は、Ｂｒ、ＣＦ_３、ＳＦ_５、ＳＯ_２ＣＦ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＣＮ、およびＮＯ_２からなる群から選択され；
Ｒ_４は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＣＮからなる群から選択され；かつ
Ｒ_５はＨである）
を有する７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を提供する。

【0010】

別の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物を作製する方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、式（Ａ）の化合物を、式（Ｂ）の化合物を介して式（Ｉ）の化合物に変換することを含む。

【0011】

【化2】

【0012】

さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0013】

本開示の別の態様では、がんを処置する方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、治療有効量の、本明細書に記載の７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与することを含む。

【0014】

本開示のさらなる態様では、対象におけるリボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心との相互作用を通して、タンパク質合成を阻害する方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、有効量の、本明細書に記載の７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を、リボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心との相互作用を通してタンパク質合成を阻害するのに有効な量で、対象に投与することを含む。

【0015】

本発明の前述の態様および多くの付随する利点は、添付の図と合わせると、以下の詳細な説明を参照することによって、より容易に認識され、同様により良く理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【0016】

【図1】ビス－カルビノールアミン、ビス－ヒドロキシシクロペンタンコアの隠れた擬似Ｃ２対称性を明らかにしているアゲラスタチン（ＡｇｌＡ）Ａ～Ｅおよび非天然の誘導体、７－ヒドロキシＡｇｌＡ（７ａ）の構造を例示する図である。

【図2A】ＭＯＥを使用した、ＡｇｌＡ－酵母８０Ｓリボソーム複合体の、Ｘ線構造を用いた７－ヒドロキシＡｇｌＡ（７ａ）のドッキングを例示する。Ｃ７－ヒドロキシルとＵ２８７５の間の、可能であるが弱い（３．５２Å）水素結合を示す結合部位の全景（前景、ｒＲＮＡ；背景、タンパク質）。

【図2B】７－ヒドロキシＡｇｌＡ（７ａ）およびＵ２８７５のピリミジンジオンの分離図である。

【図3】ＭＯＥおよびＤＦＴ計算による、ＡｇｌＡおよび７－ＯＨ ＡｇｌＡのコンフォメーション探索を概略的に例示する図である。

【図4】Ｃ７－ヒドロキシルの付加時に、後期段階のピロール変異を可能にする、隠れたＣ２対称要素に基づいたＡｇｌＡ（１）の逆合成解析の概略図である。

【図5】ピロール由来のカルビノールアミン１８ａ～１８ｃの安定性研究の概略図である。

【図6-1】ジブロモ７－ヒドロキシＡｇｌＡ ２４（挿入図：ビス－カルビノールアミン２２のＸ線構造）の合成の概略図である。

【図6-2】ジブロモ７－ヒドロキシＡｇｌＡ ２４（挿入図：ビス－カルビノールアミン２２のＸ線構造）の合成の概略図である。

【図7】分子内光延反応を通して、ＡｇｌＡコア構造に到達する試行の概略図である。

【図8】塩基促進型アザ－マイケル閉環を介したＡｇｌＡの合成の概略図である。

【図9】１３－ニトロＡｇｌＡ（３７）の合成の概略図である。

【図10】さまざまながん細胞株に対する、ＡｇｌＡ誘導体の細胞毒性（ＥＣ５０、μＭ）を要約する表である。

【図11】ＭＯＥによる７－ＯＨ脱－ブロモＡｇｌＡ（２４）のコンフォメーション探索、および相対的エネルギーを決定するための後続のＤＦＴ計算を例示する図である。

【図12】代表的な置換基Ｒ_１およびＲ_２をアゲラスタチンＡ化合物に導入するための逆合成解析の概略図である。

【発明を実施するための形態】

【0017】

詳細な説明
本開示は、アゲラスタチン化合物（例えば、アゲラスタチンＡ誘導体）、および該化合物を作製し使用する方法を提供する。
一態様では、本開示は、式（Ｉ）：

【0018】

【化3】

【0019】

（式中、
Ｒ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_３は、Ｂｒ、ＣＦ_３、ＳＦ_５、ＳＯ_２ＣＦ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＣＮ、およびＮＯ_２からなる群から選択され；
Ｒ_４は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＣＮからなる群から選択され；かつ
Ｒ_５はＨである）
を有する７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を提供する。

【0020】

一実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、およびＲ_５はＨであり、Ｒ_３はＢｒである。

【0021】

別の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ_１、Ｒ_２、およびＲ_５はＨであり、Ｒ_３およびＲ_４はＢｒである。

【0022】

さらなる実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ_１～Ｒ_５は水素である。

【0023】

他の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）の化合物を提供し、式中、Ｒ_１およびＲ_２は、水素およびフルオロ、水素およびクロロ、または水素およびブロモから独立して選択され、Ｒ_３～Ｒ_５は水素である。これらのうちの特定の実施形態では、Ｒ_１は水素であり、Ｒ_２はフルオロであり、これらのうちの他の実施形態では、Ｒ_１はフルオロであり、Ｒ_２は水素である（すなわち、両者はジアステロオマーである）。

【0024】

別の態様では、本開示は、式（Ｉ）の化合物を作製する方法を提供する。本明細書に記載の方法は、アゲラスタチン足場への置換基Ｒ_１～Ｒ_５の導入を提供する。

【0025】

置換基Ｒ_１およびＲ_２は、フラン（例えば、１５）またはシクロペンタノン（例えば、１２～１４）中間体の同化によって、生成物アゲラスタチンに組み込まれ得る。図４～６および１２を参照されたい。Ｒ_１および／またはＲ_２におけるフルオロ原子の導入のための逆合成解析を、図１２に示す。

【0026】

Ｒ_１および／またはＲ_２における、フルオロ、クロロ、またはブロモを含むモノハロゲンまたはジハロゲンの導入は、セレクトフルオルのようなフッ素の求電子源、またはクロロもしくはブロモの場合には、Ｎ－ブロモスクシンイミド、Ｎ－クロロスクシンイミド、塩素（Ｃｌ_２）、臭素（Ｂｒ_２）、またはＣｌもしくはＢｒの他の求電子源を用いて、図１２に示されるように４－シクロペンテン－１，３－ジオンのハロゲン化、または本明細書に記載の合成に示されるように、さらに高度のシクロペンタノンのハロゲン化によって達成される。例えば、フッ素化誘導体に関して、ジオンを塩基（例えば、水素化ナトリウム、リチウムジイソプロピルアミド）で処理して、エノレートを形成し、次に、セレクトフルオルと反応させて、１個または２個のフルオロ基を導入する。

【0027】

本開示は、モノハロジアステレオマーを提供し：

【0028】

【化4】

【0029】

式中、
（１）Ｘ_１はＦであり、Ｘ_２はＨであり；
（２）Ｘ_１はＨであり、Ｘ_２はＦであり；
（３）Ｘ_１はＣｌであり、Ｘ_２はＨであり；
（４）Ｘ_１はＨであり、Ｘ_２はＣｌであり；
（５）Ｘ_１はＢｒであり、Ｘ_２はＨであり；かつ
（６）Ｘ_１はＨであり、Ｘ_２はＢｒであり；
Ｒ_３～Ｒ_５は、上に記載された通りである。

【0030】

置換基Ｒ_３、Ｒ_４およびＲ_５は、ピロール（例えば、１１、１６）中間体の同化によって、生成物アゲラスタチンに組み込まれ得る。図４～６、８および１２を参照されたい。

【0031】

合成図式の詳細は、図４～６、８、９、および１２に示され、以下の実験手順に記載される。

【0032】

特定の実施形態では、本方法は、式（Ａ）の化合物を、式（Ｂ）の化合物を介して式（Ｉ）の化合物に変換することを含む。

【0033】

【化5】

【0034】

本方法の特定の実施形態では、式（Ａ）の化合物を、

【0035】

【化6】

【0036】

と反応させて、アミド（ａ）：

【0037】

【化7】

【0038】

をもたらし；
アミド（ａ）を式（Ｂ）の化合物に変換し、続いて閉環して７－ヒドロキシ化合物（ｂ）：

【0039】

【化8】

【0040】

をもたらし；
７－ヒドロキシ化合物（ｂ）を、水性酸での処理によって式（Ｉ）の化合物に変換し、
式中、
Ｐは、アルコール保護基であり；
Ｒは、メチル基であり；
Ｒ_１は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_２は、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、およびＢｒからなる群から選択され；
Ｒ_３は、Ｂｒ、ＣＦ_３、ＳＦ_５、ＳＯ_２ＣＦ_３、ＳＯ_２ＣＨ_３、ＣＮ、およびＮＯ_２からなる群から選択され；
Ｒ_４は、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＣＮからなる群から選択され；かつ
Ｒ_５はＨである。

【0041】

さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載の７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0042】

本開示の別の態様では、がんを処置する方法が提供される。特定の実施形態では、本方法は、治療有効量の、本明細書に記載の７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を、それを必要とする対象に投与することを含む。特定の実施形態では、がんは、乳がん（トリプルネガティブ乳がんもしくはエストロゲン受容体陽性乳がん）または神経膠芽腫である。

【0043】

本開示のさらなる態様では、対象におけるリボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心との相互作用を通して、タンパク質合成を阻害する方法を提供する。特定の実施形態では、本方法は、有効量の、本明細書に記載の７－ヒドロキシアゲラスタチン化合物、もしくはその立体異性体、ラセミ体、または薬学的に許容される塩を、リボソームのペプチジルトランスフェラーゼ中心との相互作用を通してタンパク質合成を阻害するのに有効な量で、対象に投与することを含む。

【0044】

上記のように、本開示は、改善された溶解度を有するアゲラスタチンＡ（ＡｇｌＡ）誘導体、および本明細書に記載の戦略に基づき、隠れたＣ２－対称につながるｎ－ｎ相互作用をさらに精査するための、ピロール部分をより容易に変化させやすく、合成標的としての７－ヒドロキシＡｇｌＡ（７ａ）および関連誘導体の着想へとつながる合成戦略を提供する。

【0045】

構造的に、ＡｇｌＡは、中心Ｃ環に、シン－アンチ－シンの関係で結合する４個の窒素原子を持つ。Ｃ７－ヒドロキシル基の付加によって、ＡｇｌＡに擬似対称性が付与され、第２のカルビノールアミンをもたらし、ペンダントケトンへのピロール窒素の付加から誘導され、ヒドロキシル置換ジヒドロピラジノンに至る（図１、７ａ）ことが認識された。付加的なヒドロキシル基の付加によって、また、結合部位に付加的な水素結合をもたらす可能性もある一方、ＡｇｌＡに対してより大きい水溶解度（ｃｌｏｇＰ：７－ＯＨ ＡｇｌＡ（７ａ）、－２．１３；ＡｇｌＡ（１）、－１．２３）も付与されることが推測される。本出願人らは７－ＯＨ ＡｇｌＡをリボソーム－ＡｇｌＡ複合体のＸ線構造へとドッキングさせ（ＭｃＣｌａｒｙ，Ｂ．；Ｚｉｎｓｈｔｅｙｎ，Ｂ．；Ｍｅｙｅｒ，Ｍ．；Ｊｏｕａｎｎｅａｕ，Ｍ．；Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏ，Ｓ．；Ｙｕｓｕｐｏｖａ，Ｇ．；Ｓｃｈｕｌｌｅｒ，Ａ．；Ｒｅｙｅｓ，Ｊ．Ｃ．；Ｌｕ，Ｊ．；Ｇｕｏ，Ｚ．；Ｒｏｍｏ，Ｄ．；Ｙｕｓｕｐｏｖ，Ｍ．，Ｇｒｅｅｎ、Ｒ．；Ｌｉｕ，Ｊ．Ｏ．Ｃｅｌｌ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏ．２０１７、第２４巻、６０５～６１３）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｏｐｅｒａｔｉｎｇ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）ソフトウェアを使用して、ウラシル２８７５（Ｕ２８７５）のピリミジンジオンとＣ７－ＯＨの間に、ＡｇｌＡと類似する低エネルギーポーズで形成され得る、可能性のある弱い（拡張、３．５２Å）水素結合を見出した。

【0046】

本出願人らはまた、Ｃ７－ヒドロキシルの導入によって、ＡｇｌＡの全般的トポロジーに著しい影響が及ぼされることがないことを確認し、かつ７－ＯＨ ＡｇｌＡによって、ＡｇｌＡに対応する低エネルギーのコンフォメーションもまた達成可能であることを確認することを望んだ。分子動力学およびＭＯＥにおける最小化ならびに密度汎関数理論（ＤＦＴ）計算もまた、ＡｇｌＡと７－ＯＨ ＡｇｌＡの両方に関して、これらの他の場合では極めて剛性である分子のシクロペンタン環（Ｃ－環）によって取り入れられたエンベロープコンフォメーションによってのみ異なる、２つの同様の低エネルギーのコンフォマー（Ａ／ＢおよびＡ’／Ｂ’）を示した（図３を参照されたい）。ＡｇｌＡの場合には、２つの最低エネルギーのコンフォマーＡ／Ｂは、約４～５ｋｃａｌ／ｍｏｌの差があった。７－ＯＨ ＡｇｌＡの２つのコンフォマーＡ’／Ｂ’に関する、２５℃で約０．５ｋｃａｌ／ｍｏｌ（ＭＯＥ）のΔＧは、これらが両方とも、生理学的温度で容易に到達可能であり、１つのエンベロープコンフォメーションは、ＡｇｌＡのより低エネルギーのコンフォメーションに対応することを示唆している。

【0047】

これらの予備的コンピュータ研究は、分子のこの領域をより容易に変化させ、アゲラスタチンの公知のＳＡＲを拡張する、後期段階のピロール環化戦略を含む、本出願人らが記載した合成戦略を支持した。これは、７－ヒドロキシＡｇｌＡの合成を探索するための、この標的とした誘導体に見出される記載された隠れたＣ２－対称要素に基づき、さらなる起動力をもたらし、本出願人らの逆合成戦略の基礎を形成している（図４）。加えて、この戦略はＣ７－カルビノールアミン７ａ／７ｂの還元に続き、再び、ピロール環に変異を有する非－Ｃ７－ヒドロキシル化ＡｇｌＡ誘導体をもたらす可能性もある。Ｃ７－カルビノールアミンは、ケトン前駆物質９のピロールＮＨの分子内環化から誘導される。二環式尿素９は、次に、３つの小部分：ピロール１１、アジド１２およびＮ－イソシアン酸メチル（１０）から、イソシアネートを用いるアシル化、続いてケトン上の環化を通して合成され得る。アジド１２は、アジリジン１３の環開裂によって導入され得て、これは次に、公知のシクロペンテノンヨージド１４から誘導され、報告された手順（（ａ）Ｓａｉｔｍａｎ，Ａ．；Ｔｈｅｏｄｏｒａｋｉｓ，Ｅ．Ａ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１３、１５巻、２４１０～２４１３．（ｂ）Ｙａｎｇ Ｐ．；Ｙａｏ Ｍ．；Ｌｉ Ｊ．；Ｌｉ Ｙ．；Ｌｉ Ａ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１６、第５５巻、６９６４～６９６８．（ｃ）Ｔｒｕａｘ，Ｎ．Ｊ．；Ａｙｉｎｄｅ，Ｓ．；Ｖａｎ、Ｋ．；Ｌｉｕ，Ｊ．Ｏ．；Ｒｏｍｏ，Ｄ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１９、第２１巻、７３９４～７３９９）によって、フルフラールから容易に入手できる。

【0048】

カルビノールアミンは、理論的には可逆的に形成され、アルデヒドとアミンの成分の平衡状態で存在することができる。ピロロカルビノールアミンは、ピロールのアルデヒドまたはケトンへの求核的付加によって形成され、適度に安定であり、精製および単離が可能で、アルデヒド保護基として役立つが、塩基を用いる処理時に、そのカルボニルピロール前駆物質にまた戻り得る。ＡｇｌＡのＣ５－カルビノールアミンは、ヒドロキシイミダゾリジノンをもたらし、主に閉環状の形態で存在することが周知である。しかしながら、本出願人らはペンダントケトンへのピロール窒素付加の環化から誘導される、提案されたヒドロキシジヒドロピラジノン７に関する同じ平衡については確信がなかった。この疑問に取り組むために、本出願人らはジヒドロピラジノンをもたらす、そのようなケトピロール由来のカルビノールアミンの安定性を精査するために、最初にモデル研究を実施した。

【0049】

本出願人らはピロールカルボン酸アミド１７ａ～ｃを合成し、対応するカルビノールアミンとピロロケトンの間の平衡を研究した（図５）。２－アジドシクロペンタノンの還元およびピロール－１Ｈ－カルボン酸との縮合により、アミド１７ｂを得た。Ｅｔ_３Ｎを用いるケトン１７ｂの処理時に、環化により、対応するカルビノールアミン１８ｂを７３％収率で得た（＞１９：１ ｄｒ、６００ＭＨｚ ^１Ｈ ＮＭＲ）。カルビノールアミン１８ｂは、非常に安定であり、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製し得て、ＣＤ_３ＯＤ中で数日間安定であった。ＮＥｔ_３／ＣＨ_２Ｃｌ_２で周囲温度（２２℃）において１６時間再処理すると、少量のみの開環状態のケトピロール１７ｂが生成し、１１：１の平衡比（１８ｂ／１７ｂ）をもたらし、^１Ｈ ＮＭＲにより判断して、環化形態が優勢であった。同様に、４－ブロモピロール由来のカルビノールアミン１８ｃは、中性条件下で安定であるが（例えばＣＤ_３ＯＤ中）、ＮＥｔ_３／ＣＨ_２Ｃｌ_２中で２２℃において、１８ｃと１７ｃの混合物を８：１比でもたらし、再び環化形態が優勢であった。対照的に、５－ブロモピロール類似体１７ａは、標的とした７－ヒドロキシＡｇｌＡを最も厳密に模倣し、閉じた形態１８ａは優勢ではなかった。前駆物質ケトピロール１７ａは、１７ｂおよび１７ｃと同様の条件下で、１８ａに環化しなかっただけでなく、たとえ環式カルビノールアミン１８ａが、カルビノールアミン１８ｂの臭素化を通して標的とされたとしても、ブロム化された付加物１８ａは、ＣＤ_３ＯＤ中で迅速に開環し、１７ａ／１８ａの混合物を８．７：１の比で形成し、ケトピロール１７ａが優勢であった。全般に、これらの結果は、ピロール環のＣ５上に存在する置換基が、環式カルビノールアミンには不利であることを示唆しているため、本出願人らは最初に非臭素化Ｃ７－ＯＨ ＡｇｌＡ ７ｂを探求した。

【0050】

ラセミ体７－ヒドロキシ－１３－脱－ブロモＡｇｌＡ（２４）の合成は、公知のヨウ化物１４のアジリジン化から開始し、フルフリルアルコールから３工程で得ることができる（図６）（（ａ）Ｓａｉｔｍａｎ，Ａ．；Ｔｈｅｏｄｏｒａｋｉｓ，Ｅ．Ａ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１３、第１５巻、２４１０～２４１３．（ｂ）Ｙａｎｇ Ｐ．；Ｙａｏ Ｍ．；Ｌｉ Ｊ．；Ｌｉ Ｙ．；Ｌｉ Ａ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１６、第５５巻、６９６４～６９６８．（ｃ）Ｔｒｕａｘ，Ｎ．Ｊ．；Ａｙｉｎｄｅ，Ｓ．；Ｖａｎ，Ｋ．；Ｌｉｕ，Ｊ．Ｏ．；Ｒｏｍｏ，Ｄ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１９、第２１巻、７３９４～７３９９）。塩基性条件下でのｐ－トルエンスルホンアミドを用いるアジリジン化は、Ｍａｙｃｏｃｋの方法によって、アジリジン１３を組み入れた（Ｓｉｌｖａ，Ｓ．；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ，Ｐ．；Ｂｅｎｔｏ，Ｉ．；Ｍａｙｃｏｃｋ，Ｃ．Ｄ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１５、第８０巻、３０６７～３０７４）。次に、アジドアニオンを用いるアジリジン開裂を研究したが、アジリジンと派生アジドの両方の、酸性と塩基性の両方の条件に対する不安定性が観察された。広範な実験後に、トリメチルシリルアジドが、アジリジン開環に最適であることが見出された。これは、アジドシクロペンタノン１２を、ジアステレオマーの混合物（４３％、ｄｒ １．２：１）としてもたらし、中間体シリルエノールエーテルの非選択的なａ－プロトン化に起因すると思われた。所望の非－ジアステレオマー１２ｂは、カラムクロマトグラフィーによって単離され、一方、所望されないジアステレオマー１２ａは、アセトニトリル中で６日間、４Åモレキュラーシーブに付することによって再平衡化し、約１：１比となり得て、付加的な量の所望の非－ジアステレオマーの単離に至った。Ｎ－イソシアン酸メチル（１０）の存在下でのアジド１２ａの水素化により、二環式中間体２０は、単一工程で公知の環化を通して、環式尿素を与えた。ピロール部分を導入するために、Ｎ－トシル基を、ＳｍＩ_２／Ｈ_２Ｏ／ＮＥｔ_３を使用して開裂し（Ａｎｋｎｅｒ Ｔ．；Ｈｉｌｍｅｒｓｓｏｎ、Ｇ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２００９、１１、５０３～５０６）、一級アミン２１を提供した。ピロール２－カルボン酸とカルボン酸リチウムとの後続するアミドカップリングは、最初は問題が多く、アミドカップリング用の典型的な有機溶媒（例えば、ＣＨ_２Ｃｌ_２、ＤＭＦ）に、ほんの一部しか可溶しないことが判明した一級アミン２１の不溶性に起因して、完了まで進めることができなかった。最終的に、ＤＭＦ中のアミン２１の懸濁液が、約１００℃に加熱すると完全に溶解し、均質溶液を提供することが見出された。周囲温度に冷却した後、カップリングは支障なく進行し、所望のアミド２２を８２％収率でもたらした。

【0051】

ＴＢＳエーテルの脱保護を、ＭｅＯＨ中のＨＣｌを用いて達成し、これはメトキシアミナール２２としてヘミアミナールを遮蔽することにも役立つ。Ｓｗｅｒｎ酸化は中間体ケトンをもたらし、これは過剰のトリエチルアミンの存在下で環化し、カルビノールアミン２３を４６％収率で直接もたらした。これは、この平衡が、Ｃ７－カルビノールアミンの環状形態に優勢であることを示唆した本出願人らのモデル研究と一致し（図５、１８ｂを参照のこと）、これは、カルビノールアミン２３のＸ線結晶解析によってさらに確認された（挿入図、図６）。興味深いことに、固体状態におけるコンフォメーションは、コンフォメーション探索を通して見出されたより低エネルギーのコンフォメーション（上記を参照）に対応する。メトキシアミナール１５の加水分解を穏やかな条件下で達成して、標的とした７－ヒドロキシ－１３－脱－ブロモＡｇｌＡ（２４）をもたらし、ＣＤ_３ＯＤまたはＤＭＳＯ－ｄ_６中に周囲温度（２２℃）で７日間保存された場合、^１Ｈ ＮＭＲによって決定されたように非常に安定であることが見出された。

【0052】

モノ－カルビノールアミン２３を、ＡｇｌＡのコア構造に変換する取り組みにおいて、本出願人らはいくつかの直接的方法を探求したが；直接的還元は、多様なＬｅｗｉｓ酸／水素化物の添加条件下で好結果を生むことはなかった。代替的に、本出願人らはアミン２１から誘導されたアルコール２５ａおよび２５ｂを直接的分子内立体反転置き換えし（２５ａ、ｂを参照されたい）、光延反応を通してＢ環を形成することを考えた。しかしながら、環化は実際に起こったが、オキサゾリン２６ｂの場合にＸ線結晶解析によって確認されたように、求核原子として作用し、オキサゾリン２６ａおよび２６ｂをもたらしたのはアミド酸素原子であった（図７）。

【0053】

次に、本出願人らはＡｇｌＡに対する本出願人らのこれまでの生物模倣型戦略で利用して成功した、Ｂ環を形成するための代替的戦略（Ｒｅｙｅｓ，Ｊ．Ｃ．Ｐ．；Ｒｏｍｏ，Ｄ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１２、第５１巻、６８７０～６８７３）、すなわち、５－エキソ、アザ－マイケル閉環を考えた。Ｃ６～Ｃ７アルケンを直接組み入れるために試みたアルコール２５ａの脱水は、複数の副反応（示されず）に起因して、非常に低い収率であった。したがって、本出願人らは初期の中間体、シリルエーテル２０に戻って、メトキシカルビノールアミンの生成および脱シリル化後に、本出願人らはＧｒｉｅｃｏ脱離を通して、必要なＣ６～Ｃ７アルケンを導入し、シクロペンテン２８を２工程で４２％収率で得た（図８）。ＳｍＩ_２を用いるトシル基の開裂およびピロール酸クロリドを用いるアシル化によりアミド３０がもたらされ、これをカルビノールアミン３１に加水分解し、本出願人らのこれまでのＡｇｌＡの生物模倣型合成と同じ中間体を得た。カルビノールアミンにシリカゲルを用いて穏やかな加熱を施し、アザ－マイケル付加を開始させ、これは再びＡｇｌＡをもたらすことに成功した。しかしながら、容易に拡張できなかったため、本出願人らはこの転換のための代替の反応条件を探究した。本出願人らはカルビノールアミン３１の開環したＣ環エノンの濃縮を、穏やかな塩基性条件下で達成することができた場合、所望のアザ－マイケル反応を容易にすることを予期した。さまざまな塩基を用いるいくつかの実験後、本出願人らは化学量論量未満の量の塩基、すなわちＭｅＯＨ中の０．２５当量のＫ_２ＣＯ_３が、公知の３，４－ビス－ｅｐｉ－ＡｇｌＡ（３４）と共に、４３％収率で（２工程）ＡｇｌＡ（３３）を与えることを見出した。両方の生成物のスペクトルは、これまでに報告されたものと一致した。

【0054】

ＡｇｌＡのこれまでのＳＡＲ研究は、ピロール部分の電子吸引基が誘導体（例えば、Ｃｌ、ＣＦ_３）の効力に有益であることを示してきた（Ｓｔｏｕｔ，Ｅ．Ｐ．；Ｃｈｏｉ，Ｍ．Ｙ．；Ｃａｓｔｒｏ，Ｊ．Ｅ．；Ｍｏｌｉｎｓｋｉ，Ｔ．Ｆ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４、第５７巻、５０８５～５０９３。Ｊｏｕａｎｎｅａｕ，Ｍ．；ＭｃＣｌａｒｙ，Ｂ．；Ｒｅｙｅｓ，Ｊ．Ｃ．Ｐ．；Ｃｈｅｎ，Ｒ．；Ｃｈｅｎ，Ｙ．；Ｐｌｕｎｋｅｔｔ，Ｗ．；Ｃｈｅｎｇ，Ｘ．；Ｍｉｌｉｎｉｃｈｉｋ，Ａ．Ｚ．；Ａｌｂｏｎｅ，Ｅ．Ｆ．；Ｌｉｕ，Ｊｕｎ Ｏ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１６、第２６巻、２０９２～２０９７）。この観察は、リボソームペプチジル転移中心のＡ－部位に結合したＡｇｌＡのＸ線構造において、リボソームＲＮＡからのヌクレオチド塩基で観察されたｎ－ｎスタッキングと一致する。したがって、本出願人らは医薬化学的展望から、ニトロ基の潜在的障害にもかかわらず、この後期段階のピロール環化戦略の有用性を実証するために、電子吸引性ニトロ基を標的とした。重要なアザ－マイケル環化のための基体は、アミン２９から容易に調製され、ＡｇｌＡに関して上に記載されたものと同様の手法であるが、穏やかな酸性条件下でさえも容易に起きることが見出された、二環式イミダゾリジノン２９のＣ１、Ｃ５におけるビス－エピマー化（３４を参照のこと）を回避するために、ニトロ置換されたピロール３５のＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステルを使用した（図９）。同様の様式で、アザ－マイケル環化は支障なく進行して、１３－ニトロＡｇｌＡ（３７）を２工程にわたり４１％収率で与えた。興味深いことに、このＡｇｌＡ誘導体２７は、反応混合物から淡黄色固体として沈殿し、単純濾過およびメタノールでの洗浄により、ニトロＡｇｌＡ誘導体３７を純粋形態で得た。

【0055】

合成された新規なＡｇｌＡ誘導体の細胞毒性は、４つのがん細胞株に対して（－）－ＡｇｌＡおよび（±）－ＡｇｌＡの両方と比較して決定された（図１０）。ビス－カルビノールアミン２４は、Ｃ１３－ブロモ置換基を欠いており、ＭＣＦ７、Ｃａｃｏ２、およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞株に対する活性を２５０μＭまで示さなかった。これは、Ｘ線構造で観察された明らかなハロゲン－ｐ相互作用、およびＡｇｌＡと比較して、１３－脱－ブロモＡｇｌＡ ＨｅＬａ細胞の効力におけるこれまでに実証された約５００倍の低下に基づくと、驚くべきことではない。残念ながら、本出願人らのモデル研究によって示唆されたように（上記を参照、図５、１７ａ）、７－ＯＨ ＡｇｌＡ（２４）は、Ｃ５－ブロモ置換基を持ち、主に開環したケトピロール互変異性体として存在することが見出され、これが不安定性をもたらすため、アッセイできなかった。しかしながら、ビス－カルビノールアミン２４に関して、神経膠芽腫細胞株、Ｕ８７に対して、測定可能なＥＣ_５０値（１７１．０±８．０μＭ）を得ることができた。オキサゾリン２６ａは、研究したいずれの細胞株に対しても活性を示さなかった。

【0056】

７－ＯＨ ＡｇｌＡ（２４）の脱－ブロモ変異体の低減した生理活性に促されて、この誘導体のコンフォメーション解析を実施した（図１１）。特に興味深かったのは、ＡｇｌＡと比較したＣ－環シクロペンタンのコンフォメーション優位性の比較であった。実際、エンベロープ環コンフォマーＡ’’は、ＡｇｌＡの最低エネルギーのシクロペンチルコンフォマーＡより低いエネルギーであると決定され（ｉ１Ｅ＝３．４ｋｃａｌ／ｍｏｌ）（図３を参照のこと）、したがって、ＡｇｌＡ－様のエンベロープコンフォマーのより低い濃度が、低減した細胞毒性に寄与している可能性がある。

【0057】

本開示は、ピロール部分の後期段階の変異を可能にする重要な特色を有するＡｇｌＡのビス－カルビノールアミン誘導体（例えば、Ｃ７－ヒドロキシジブロモＡｇｌＡ（２４））をもたらす、隠れた対称要素に基づいた新規な合成戦略を提供する。この設計は、ＡｇｌＡ－リボソーム複合体のＸ線構造および分子モデル化によって導かれた。標的とした７－ヒドロキシＡｇｌＡは、主に開環したケトピロール形態中に存在し、不安定であることが見出されたが、７－ヒドロキシ脱－ブロモＡｇｌＡは、合成および単離することができた。加えて、最終の６－エキソ－トリグ、アザ－マイケル閉環のための新しい条件のセットが開発され、これを利用して１３－ニトロＡｇｌＡ（３７）に到達した。新しいＡｇｌＡ誘導体の生物活性を、４つのがん細胞株に対して測定し、新規のＣ５－ニトロＡｇｌＡは、結腸がん株、Ｃａｃｏ－２以外の、研究された全ての細胞株に対して活性を示した（１．１６～３５．４μＭ）。しかしながら、７－ＯＨ脱－ブロモＡｇｌＡ（２４）は、決定的なＣ５－ブロモ置換基が欠落しているにもかかわらず、試験した神経膠芽腫細胞株に対して細胞毒性を示した（Ｕ８７、ＥＣ_５０＝１７１．０±８．０μＭ）。
以下の実施例は、例示的目的のために提供され、制限するものではない。

【実施例】

【0058】

実施例
一般情報
特に記載しない限り、全ての非－水性反応を、火炎乾燥ガラス器具中で、Ｎ_２雰囲気下で実行した。使用した全ての溶媒を、活性化モレキュラーシーブに基づく溶媒精製系を使用することで乾燥させた。トリエチルアミンを、使用前にＣａＨ_２上で蒸留した。全ての他の市販試薬はそのまま使用した。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルを、６００ＭＨｚ、５００ＭＨｚまたは４００ＭＨｚにおいて測定し、化学シフトを、ＣＤＣｌ_３（７．２６ｐｐｍ）またはＣＤ_３ＯＤ（３．３１ｐｐｍ）に対して、ｐｐｍにおける８つの値として報告する。結合定数（Ｊ）をヘルツ（Ｈｚ）で報告し、多重度は従来の方法に従う。略語ｂｒｓ（幅広の１重項）、ｓ、ｄ、ｔ、ｑ、ｐ、ｈｅｐｔおよびｍ（またはこれらの任意の組み合わせ）は、共鳴の多重度、幅広の１重項、１重項、２重項、３重項、４重項、５重項、６重項および多重項を表す。ａｐｐという表示は、観察されたが必ずしも予期されたものではない分裂に関する外見を表し、幅広は、付加的なより小さいカップリングに起因する可能性がある、識別することができないピークの幅の広がりを表す。重水素化溶媒（ＣＤＣｌ_３、７７．１６ｐｐｍ、ＣＤ_３ＯＤ、４９．００ｐｐｍ、またはＤＭＳＯ、３９．５２ｐｐｍ）を、^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル用の内部標準とした。フラッシュカラムクロマトグラフィーを、６０Åシリカゲル（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ、２３０～４００メッシュ）を固定相として使用し、勾配溶媒システムまたは自動フラッシュクロマトグラフィーシステムを使用して実施した。高分解能質量スペクトルを、質量分析センター（Ｂａｙｌｏｒ大学）で取得した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、予備コーティングされたガラスバックを有するＴＬＣプレート、Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ Ｆ_２５４（Ｓｉｌｉｃｙｃｌｅ、２５０μｍ厚）を使用して実施した。フーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）スペクトルを、ＮａＣｌプレート上の薄膜として記録した。Ｘ線構造を、Ｂａｙｌｏｒ大学におけるＸ線回折研究室で取得した。
略語リスト
（ＣＯＣｌ）_２ 塩化オキサリル
ＤＥＡＤ アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＭＡＰ ４－ジメチルアミノピリジン
ＤＭＦ Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアルデヒド
ＤＭＰ デス－マーチンペルヨージナン
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＨＢＴＵ ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム
ＮＢＳ Ｎ－ブロモスクシンイミド
ＮＥｔ_３ トリエチルアミン
２－ＮＯ_２ＰｈＳｅＣＮ ２－セレノシアン酸ニトロフェニル
ＰＢｕ_３ トリブチルホスフィン
ＰＰｈ_３ トリフェニルホスフィン
ＳｍＩ_２ 二ヨウ化サマリウム
ＴＢＡＦ フッ化テトラブチルアンモニウム
ＴＢＳＣｌ ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＭＳＮ_３ トリメチルシリルアジド
ＴｓＮＨ_２ ｐ－トルエンスルホンアミド

【0059】

実験手順
以下に、本明細書に記載の化合物の合成の説明を提供する。これらの合成の概略図を図４～９に例示する。

【0060】

【化9】

【0061】

メタノール（２．４ｍＬ）中のアジド１５（Ｄｅｄｅ，Ｄ． Ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ ｓａｌｉｃｙｌａｔｅｓ，ｉｓｏｔｅｔｒｏｎｉｃ ａｃｉｄｓ，ａｎｄ ａｌｋｙｌｉｄｅｎｅ－ｉｓｏｂｅｎｚｏｆｕｒａｎｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｏｎｅ－ｐｏｔ ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｏｌ ｅｔｈｅｒｓ；Ｒｏｓｔｏｃｋ、Ｇｅｒｍａｎｙ、２００８）（０．３０ｇ、２．４ｍｍｏｌ、１．０当量）に、１０％の炭素上パラジウム（１３３ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ、０．１２当量）を添加した。３方向アダプタを介してフラスコに取り付けたＨ_２バルーンを接続し、フラスコを順次、真空下に置き、Ｈ_２で充填した（３回）。ジエチルエーテル中の１Ｍの塩化水素（４．０８ｍＬ、４．０８ｍｍｏｌ、１．７当量）を添加し、反応物を２１時間撹拌した。炭素上パラジウムの第２部分（６６．５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、０．０６当量）およびメタノール（０．６ｍＬ）を添加し、新しい水素バルーンを用いて反応物をさらに１７時間撹拌した。ＴＬＣは出発物質の消失を示唆し、混合物を、綿栓を通して濾過し、メタノールで洗浄し、真空中で濃縮して、アミン塩化水素塩１５ａを黒色固体（０．３ｇ）として得て、これを次の工程で直接使用した。

【0062】

１０ｍＬ丸底フラスコに、ピロール－１Ｈ－２－カルボン酸（２１４．２ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ、１．５当量）およびＴＨＦ（６．０ｍＬ）を入れた。この透明溶液に、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ、７３１．２ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ、１．５当量）およびトリエチルアミン（０．５４ｍＬ、３．８７ｍｍｏｌ、２．０当量）を周囲温度（２２℃）で添加し、続いてＤＭＦ（１．５ｍＬ）を添加して、無色透明溶液を形成した。混合物を１時間撹拌し、次に０℃に冷却した。Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアルデヒド（３．３ｍＬ）中の、上記のように調製された１５ａの溶液（１７４．３ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、氷水浴を取り除くことで、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温しておいた。反応物をさらに６時間撹拌し、真空中で濃縮して溶媒を除去した。有機残留物をシリカでのＭＰＬＣ（酢酸エチル／ヘキサン、０～６０％）によって精製し、アミド１７ｂ（８９．０ｍｇ、３６％）を白色固体として得た。

【0063】

１７ｂ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９１ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．６，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．７９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，１．５ Ｈｚ，１Ｈ），６．１６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．７，２．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．３７ － ４．１３ （ｍ，１Ｈ），２．４５ － ２．３３ （ｍ，２Ｈ），２．３２ － ２．２２ （ｍ，１Ｈ），２．１４ － ２．０２ （ｍ，１Ｈ），２．００ － １．８０ （ｍ，２Ｈ），２つのＮＨプロトンが観察されなかった； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ２１７．６，１６３．５，１２６．４，１２３．１，１１２．０，１１０．２，５８．１，３６．７，３０．３２，１９．４１； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） １７３７，１６２６，１５５７，１５１９，１１２９； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１０Ｈ_１３Ｎ_２Ｏ_２ ^＋ ［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値１９３．０９７２，実測値１９３．０９７９．

【0064】

【化10】

【0065】

１０ｍＬ丸底フラスコに、５－ブロモピロール－１Ｈ－２－カルボン酸（１１８．８ｍｇ、０．６２５ｍｍｏｌ、１．５当量）およびヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ、２３７．０ｍｇ、０．６２５ｍｍｏｌ、１．５当量）を入れた。ＴＨＦ（２．０ｍＬ）を添加し、続いてトリエチルアミン（０．２３ｍＬ、１．６７ｍｍｏｌ、４．０当量）を周囲温度（２２℃）で添加した。ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を添加し、懸濁液は均質となった。混合物を１時間撹拌し、０℃まで冷却した。１７ｂに関して上に記載されたように調製された、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアルデヒド（１．１ｍＬ）中の１５ａ（５６．５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加し、氷水浴を取り除くことで、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温しておいた。反応物をさらに１．５時間撹拌し、真空中で濃縮して溶媒を除去した。有機残留物をシリカでのＭＰＬＣ（酢酸エチル／ヘキサン、０～６０％）によって精製し、アミド１７ａ（５３．０ｍｇ、４７％）を白色固体として得た。
１７ａ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．１３ （ｄ，Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．２５ （ｄｄ，Ｊ ＝ １１．３，８．７ Ｈｚ，１Ｈ），２．４２ － ２．３１ （ｍ，２Ｈ），２．３１ － ２．２０ （ｍ，１Ｈ），２．１３ － ２．０２ （ｍ，１Ｈ），１．９８ － １．８１ （ｍ，２Ｈ），２つのＮＨプロトンが観察されなかった； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ２１７．４，１６２．３，１２８．３，１１３．５，１１２．５，１０４．６，５８．１，３６．６，３０．３，１９．４； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３１８３，１７４４，１６２３，１５５５，１４５５，１３９４； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１０Ｈ_１１ ^７９ＢｒＮ_２ＮａＯ_２ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋ の計算値２９２．９８９６，実測値２９２．９９０１．

【0066】

【化11】

【0067】

１０ｍＬ丸底フラスコに、４－ブロモピロール－１Ｈ－２－カルボン酸（１３０．３ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、１．５当量）およびヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ、２６０．１ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、続いてＴＨＦ（２．０ｍＬ）およびトリエチルアミン（０．２６ｍＬ、１．８３ｍｍｏｌ、４．０当量）を２２℃で添加した。ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を添加し、懸濁液は透明溶液となった。混合物を１時間撹拌し、０℃まで冷却した。別の１．５ドラムバイアル中で、１５ａ（６２ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ、１．０当量）をＤＭＦ（１．１ｍＬ）に溶解し、この溶液をカニューレを介して反応容器に移し、次に、氷水浴を取り除くことで、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温しておいた。反応物をさらに１．５時間撹拌し、真空中で濃縮して溶媒を除去した。有機残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（酢酸エチル／ヘキサン、０～６０％）によって精製し、アミド１７ｃ（１７．０ｍｇ、１４％）を灰色がかった白色の固体として得た。
１７ｃ：灰色がかった白色の固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９２ （ｂｒ ｔ，Ｊ ＝ １．３ Ｈｚ，１Ｈ），６．７８ （ｄ，Ｊ ＝ １．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．２５ （ｄｄ，Ｊ ＝ １１．４，８．２ Ｈｚ，１Ｈ），２．４１ － ２．３４ （ｍ，２Ｈ），２．２７ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １９．７，１１．０，９．３ Ｈｚ，１Ｈ），２．１０ （ｍ，１Ｈ），２．００ －１．８４ （ｍ，２Ｈ），１つのＮＨプロトンが観察されなかった； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ２１７．３，１６２．３，１２７．１，１２３．０，１１３．５，９７．５，５８．１，３６．６，３０．２，１９．４； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３２１９，１７４６，１６３３，１５６３，１５２３； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１０Ｈ ^７９ＢｒＮ_２Ｏ_２ ［Ｍ－Ｈ］^－の計算値２６８．９９３１，実測値２６８．９９３５．

【0068】

【化12】

【0069】

ジクロロメタン（１．３ｍＬ）中のアミド１７ｂの撹拌した溶液（１３．０ｍｇ、０．０６８ｍｍｏｌ、１．０当量）に、トリエチルアミン（２８ｕｌ、０．２０ｍｍｏｌ、３．０当量）を周囲温度（２２℃）で添加した。混合物を２２時間撹拌し、反応物を濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（シリカ、メタノール／ジクロロメタン０～１５％）によって精製し、環式カルビノールアミン１８ｂ（９．５ｍｇ、７３％）を白色固体として得た。

【0070】

１８ｂ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．２１ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．７，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．８８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．２９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，２．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．８８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ７．２，５．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．３２ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １３．９，９．６，５．７ Ｈｚ，１Ｈ），２．２９ － ２．２２ （ｍ，１Ｈ），２．１９ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １３．８，９．５，６．５ Ｈｚ，１Ｈ），１．８７ （ｍ，１Ｈ），１．７８ （ｍ，１Ｈ），１．６７ （ｍ，１Ｈ）； ＯＨおよびＮＨプロトンが観察されず； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．８，１２３．４，１２２．３，１１５．３，１１１．５，９０．５，６２．７，３８．３，３２．１，２０．５； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３２７２，１６３３，１５５８，１４５８，１３３０； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１０Ｈ_１２Ｎ_２ＮａＯ_２ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値２１５．０７９１，実測値２１５．０８０１．

【0071】

【化13】

【0072】

ジクロロメタン（０．２ｍＬ）中のアミド１７ｃの撹拌した溶液（６．０ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１．０当量）に、トリエチルアミン（９ｍＬ、０．０６６ｍｍｏｌ、３．０当量）を周囲温度（２２℃）で添加した。混合物を２８時間撹拌し、反応物を濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（シリカ、メタノール／ジクロロメタン、０～１５％）によって精製し、環化生成物１８ｃ（４．０ｍｇ、６７％）を白色固体として単離した。

【0073】

１８ｃ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．２３ （ｄ，Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．８２ （ｄ，Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．８８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ７．２，６．０ Ｈｚ，１Ｈ），２．３１ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １３．７，９．５，５．６ Ｈｚ，１Ｈ），２．２８ － ２．２２ （ｍ，１Ｈ），２．１９ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １３．９，９．４，６．５ Ｈｚ，１Ｈ），１．９２ － １．８４ （ｍ，１Ｈ），１．８４ － １．７３ （ｍ，１Ｈ），１．６８ （ｍ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６０．４，１２４．５，１２１．９，１１６．４，９９．９，９０．９，６２．６，３８．２，３２．１，２０．５； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３２９５，１６３７，１５５３，１４７０； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１０Ｈ_１０ ^７９ＢｒＮ_２Ｏ_２ ［Ｍ－Ｈ］^－の計算値２６８．９９３１，実測値２６８．９９３５．

【0074】

【化14】

【0075】

ジクロロメタン（０．３２ｍＬ）中のカルビノールアミン１８ｂの撹拌した溶液（３．０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ、１．０当量）に、トリエチルアミン（６．６μｌ、０．０４７ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。^１Ｈ ＮＭＲによって監視しながら、反応物を周囲温度（２２℃）で１６時間撹拌し、ケトン１８ｂと環式カルビノールアミン１７ｂの混合物が、それぞれ１２：１の比で形成したことが示され、この比はこの期間にわたり変化しないままであった。

【0076】

【化15】

【0077】

カルビノールアミン１８ｃの撹拌した溶液（１．２ｍｇ、０．００４４ｍｍｏｌ、１．０当量）に、ジクロロメタン中のトリエチルアミンの溶液（０．１ｍＬ、該溶液は、１９μｌのトリエチルアミンと１．０ｍＬのジクロロメタンを混合することによって作製された）を添加した。^１Ｈ ＮＭＲによって監視しながら、反応物を１６時間撹拌し、ケトン１８ｃと環式カルビノールアミン１７ｃの混合物が、それぞれ８：１の比で形成したことが示され、この比はこの期間にわたり変化しないままであった。

【0078】

【化16】

【0079】

１．０ドラムバイアルに、１７ａ（２．７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ、１．０当量）およびジクロロメタン中のトリエチルアミンの溶液（０．２３ｍＬ、０．０３当量、３．０当量、該溶液は、１９μｌのトリエチルアミンと１．０ｍＬのジクロロメタンを混合することによって作製された）を入れた。反応物を２日間撹拌し、^１Ｈ ＮＭＲは、ケトン１７ａと環式カルビノールアミン１８ａの、それぞれ１：０．１１の比における混合物が形成したことが示され、この比はこの期間にわたり変化しないままであった。

【0080】

【化17】

【0081】

１．５ドラムバイアル中で、カルビノールアミン１８ｂ（２．６ｍｇ、０．０１４ｍｍｏｌ、１．０当量）を、ＴＨＦ（０．１４ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．１４ｍＬ）に溶解し、混合物を０℃まで冷却した。Ｎ－ブロモスクシンアミド（２．５ｍｇ、０．０１４２ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温しておいた。４時間撹拌した後、ＴＬＣは、出発物質がもう存在しないことを示し、シリカでのカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、０～２０％）によって、反応混合物を濃縮および精製して、１８ａ／１８ｃ／１７ａ（２．４ｍｇ、６５％）の１：０．６：０．４４の比における混合物を得た。この混合物を、ＣＤ_３ＯＤ中の５－ブロモ誘導体の安定性を精査するために、ＮＭＲによって監視した。６時間後、混合物は、１８ａ／１８ｃ／１７ａ＝０．１５：０．６：１．３０の比を与え、この比は、１６時間にわたり変化しないままであった。

【0082】

【化18】

【0083】

ヨウ化物１４を、以下に記載された手順（（ａ）Ｙａｎｇ，Ｐ．；Ｙａｏ，Ｍ．；Ｌｉ，Ｊ．；Ｌｉ，Ｙ．；Ｌｉ，Ａ．Ｔｏｔａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｒｕｂｒｉｆｌｏｒｄｉｌａｃｔｏｎｅ Ｂ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１６、第５５巻、６９６４～６９６８。（ｂ）Ｓａｉｔｍａｎ，Ａ．；Ｔｈｅｏｄｏｒａｋｉｓ，Ｅ．Ａ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａ Ｈｉｇｈｌｙ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｃｏｒｅ ｏｆ Ｖｅｒｒｉｌｌｉｎ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１３、第１５巻、２４１０～２４１３。（ｃ）Ｔｒｕａｘ，Ｎ．Ｊ．；Ａｙｉｎｄｅ，Ｓ．；Ｖａｎ，Ｋ．；Ｌｉｕ，Ｊ．Ｏ．；Ｒｏｍｏ，Ｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ－Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｒｅｔｒｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ Ｒａｍｅｓｗａｒａｌｉｄｅ：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｓｉｎｕｌａｒｉａ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｒｅｓ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１９、第２１巻、７３９４～７３９９）によって調製した。

【0084】

【化19】

【0085】

５０ｍＬの丸底フラスコ中の、ジクロロメタン（無水、２５ｍＬ）中のヨウ化物１４（１．０ｇ、２．９６ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌した溶液に、１，１０－フェナントロリン（５９８ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ、１．１２当量）およびｐ－トルエンスルホンアミド（１．０１ｇ、５．９１ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。次に、混合物を氷浴中で冷却し、炭酸セシウム（９８２ｍｇ、３．０２ｍｍｏｌ、１．０２当量）を、５バッチで２０分間にわたり添加し、淡黄色懸濁液を形成した。１０分間撹拌した後、氷浴を取り除き、反応物を周囲温度（２２℃）で５時間撹拌した。水（３０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）を添加することによって反応をクエンチし、ジクロロメタンで抽出した（３０ｍＬ×３）。有機相を合わせて、ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濃縮した。残留物を、シリカでの自動カラムクロマトグラフィー（湿式充填、アセトン／ヘキサン、０～４０％）によって精製し、アジリジン１３（０．６８ｇ、６０％、回収された出発物質に基づいて７０％）を灰色がかった白色固体として得て、ヨウ化物（０．１４ｇ）を回収した。

【0086】

ジクロロメタン（２００ｍＬ）中の８．８ｇのヨードエノン１４と共に１，１０－フェナントロリン（５．２４ｇ）、ｐ－トルエンスルホンアミド（８．８９ｇ）、および炭酸セシウム（８．６３ｇ）に反応を規模拡大した場合、これは、回収されたヨードエノン１４（１．３２ｇ）と共にアジリジン１３（５．０５ｇ、５１％、ＢＲＳＭ６０％）をもたらした。

【0087】

１３：灰色がかった白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ_３，４００ ＭＨｚ） δ ７．８０ （ｄ，Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ，２Ｈ），７．３６ （ｄ，Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．５５ （ｄ，Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．７１ （ｄ，Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．３０ （ｄ，Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．５０ （ｄｄ，Ｊ ＝ １８．３，５．６ Ｈｚ，１Ｈ），２．４５ （ｓ，３Ｈ），１．９３ （ｄ，Ｊ ＝ １８．３ Ｈｚ，１Ｈ），０．８７ （ｓ，９Ｈ），０．１１ （ｓ，３Ｈ），０．０７ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２０５．２，１４５．６，１３４．２，１３０．２ （２），１２８．１ （２），６８．５，４８．１，４４．９，４３．５，２５．８ （３），２１．９，１８．１，－４．６，－４．７； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３０６９，２９３０，２８５７，１７５７，１３３７，１１５９，１０８６； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１８Ｈ_２８Ｎ_７Ｏ_４ＳＳｉ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値４０４．１３２２，実測値４０４．１３２７．

【0088】

【化20】

【0089】

３５０ｍＬの圧力容器（密閉されたフラスコ）中のアジリジン１３（５．０５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ、１当量）の撹拌した溶液に、アセトニトリル（無水、１０４ｍＬ）、およびトリメチルシリルアジド（２．０８ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。フラスコを密閉し、３９℃で２４時間加熱した。次に、褐色混合物を、アセトン／ヘキサン（湿式充填、０～５０％）を使用したシリカでのＭＰＬＣによって濃縮および精製し、所望のジアステレオマー１２ｂ（１．５ｇ、２７％、ＢＲＳＭ４７％）を黄色固体として得て、回収された出発物質１３（２．２５ｇ、４６％）と共に、所望されないジアステレオマー１２ａ（０．８７ｇ、１６％、ＢＲＳＭ２７％）を黄色固体として得た。
１２ａ：黄色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．７５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．３５ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，２Ｈ），４．９５ （ｄ，Ｊ ＝ ３．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５ （見かけ上ｄｔ，Ｊ ＝ ５．５，１．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．２３ （ｄｄ，Ｊ ＝ ６．４，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．５７ － ３．４０ （ｍ，１Ｈ），２．６９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １９．１，５．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ），２．４２ （ｄ，Ｊ ＝ １９．２ Ｈｚ，１Ｈ），２．２２ （ｄ，Ｊ ＝ １９．２ Ｈｚ，１Ｈ），０．８４ （ｓ，９Ｈ），０．０９ （ｓ，３Ｈ），０．０７ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２１０．１，１４４．４，１３５． ７，１３０．１，１２７．４，７０．１，６２．８，５８． ９，４２．７，２５．７，２１．７，１７．９，－４．８，－５．０； ＩＲ （薄膜，ｃｍ－１）： ２１１３，１６９９，１１６２，８３３； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１８Ｈ_２８Ｎ_４ＮａＯ_４ＳＳｉ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値４４７．１４９３，実測値４４７．１４９６．

【0090】

１２ｂ：黄色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．８０ （ｄ，Ｊ＝ ８．３ Ｈｚ，２Ｈ），７．３３ （ｄ，Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ，２Ｈ），５．５３ （ｄ，Ｊ ＝ ６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．２５ （ｑ，Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ，１Ｈ），３．７６ （見かけ上ｄ，Ｊ ＝ ８．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．４３ （ｄｔ，Ｊ ＝ ９．１，６．８ Ｈｚ，１Ｈ），２．７７ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １８．８，７．２，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），２．４３ （ｓ，３Ｈ），２．２６ （ｄｄ，Ｊ ＝ １８．８，７．３ Ｈｚ，１Ｈ），０．８２ （ｓ，９Ｈ），０．０４ （ｓ，３Ｈ），０．０３ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ２０６．４，１４４．２，１３７．３，１３０．０ （２），１２７．３ （２），７０．５，６７．７，６３．７，４５．３，２５．７ （３），２１．７，１８．０，－４．７２，－４．７３； ＩＲ （薄膜，ｃｍ－１）： ３２３８，２１１０，１７５９，１３２８，１１５１； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１８Ｈ_２８Ｎ_４ＮａＯ_４ＳＳｉ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値４４７．１４９３，実測値４４７．１４９６．

【0091】

【化21】

【0092】

１００ｍＬの丸底フラスコに、アジド１２ａ（３．４５ｇ、８．１２ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（無水、６８ｍＬ）を添加し、続いて４Ａモレキュラーシーブ粉末（１０．３５ｇ）を周囲温度（２２℃）で添加し、混合物を６日間撹拌した。ＮＭＲは、２つのジアステレオマーの混合物が約１：１比で形成されたことを示す。混合物を濾過し、アセトニトリル（５０ｍ）で洗浄した。溶媒を真空中で濃縮し、アセトン／ヘキサン（湿式充填、０～５０％）を使用するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、所望のジアステレオマー１２ｂ（１．３５ｇ、３９％収率）を得て、１２ａ（１．１５ｇ、３３％回収）を回収した。

【0093】

【化22】

【0094】

２５０ｍＬの丸底フラスコに、１２ｂ（２．１９ｇ、５．１６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＴＨＦ（１０３ｍＬ）を入れ、続いて１０％の炭素上パラジウム（１．１９ｇ、２．５８ｍｍｏｌ、０．５当量）を周囲温度（２２℃）で入れた。Ｈ_２袋（バルブを装備）を接続し、フラスコを真空下に置き、Ｈ_２で３回充填した。イソシアン酸メチル（０．３５ｍＬ、５．６７ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、別のＨ_２バルーンを接続した。反応物を周囲温度で４８時間撹拌し、ＴＬＣは、出発物質がもう存在しないことを示した。混合物を綿栓を通して濾過し、ＴＨＦ（１０ｍＬ）で洗浄し、真空中で濃縮した。残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２ ０～５％）によって精製し、２０（１．７ｇ、７２％収率）を淡黄色固体として得た。

【0095】

２０：淡黄色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．７９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ，２Ｈ），７．３９ （ｄ，Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ，２Ｈ），４．２３ － ４．０１ （ｍ，１Ｈ），３．５９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．９，１．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．１３ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ ４．０，２．８，１．０ Ｈｚ，１Ｈ），２．７１ （ｓ，３Ｈ），２．４３ （ｓ，３Ｈ），２．１６ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．８，５．２ Ｈｚ，１Ｈ），１．９９ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １３．８，４．５，１．２ Ｈｚ，１Ｈ），０．７７ （ｓ，９Ｈ），－０．０５ （ｓ，３Ｈ），－０．１０ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６０．７，１４５．０，１３８．９，１３０．９ （２），１２８．３ （２），９６．４，７７．０，６９．３，６９．０，４２．８，２６．２ （３），２４．６，２１．５，１８．７，－４．９，－５．０； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３０９３，１６９０，１３２７，１１６０，１０８３； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_２０Ｈ_３３Ｎ_３ＮａＯ_５ＳＳｉ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値４７８．１８０２，実測値４７８．１８０７．

【0096】

【化23】

【0097】

５００ｍＬの丸底フラスコに、２０（０．８３ｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．０当量）を入れ、フラスコを真空下に置き、アルゴンで３回充填した。脱気したＤＩ水（凍結－ポンプ－融解法による、０．９８ｍＬ、５４．７ｍｍｏｌ、３０当量）およびヨウ化サマリウム溶液（ＴＨＦ中、０．０７８Ｍ、２３４ｍＬ、１８．２ｍｍｏｌ、１０当量）を、順次、周囲温度（２２℃）で添加した。トリエチルアミン（ＣａＨ_２上で新しく蒸留、５．１ｍＬ、３６．４ｍｍｏｌ、２０当量）を、１０分間にわたり滴下添加した。ＴＬＣは、出発物質が全て消費されたことを示した。反応混合物を濾過し、液相を収集し、一方、固体を６つの遠心分離管に移し（１０ｍＬ／管）、各管において１０ｍＬのＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０％、ｖ／ｖ）で抽出した。懸濁液を遠心分離にかけ、透明な上澄み液を収集し、一方、固体は再び抽出した。ＴＬＣで生成物がもう見られなくなるまで、このプロセスを６～１０回繰り返した。有機溶液を合わせて濃縮し、残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（ＥＬＳＤ検出器を備える、乾式充填法）によって、ＣＨ_３ＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（０～１０％）を用いて精製し、アミン２１（０．５ｇ、７３％）を白色粉末として得た。
２１：白色固体；^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ４．０２ （見かけ上ｑ，Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．３３ （ｄ，Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．８４ （見かけ上ｔ，Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．７５ （ｓ，３Ｈ），２．２７ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，６．０Ｈｚ ，１Ｈ），１．９１ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．３，７．２ Ｈｚ，１Ｈ），０．９０ （ｓ，９Ｈ），０．１１ （ｄｄ，Ｊ ＝ １１．０，１．４ Ｈｚ，６Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０，ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．０，９４．７，７７．２，６７．９１，６７．８５，４４．０，２６．３ （３），２４．５，１８．８，－４．６，－４．７； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ２９２０，１６６０，１４６７； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１３Ｈ_２８Ｎ_３Ｏ_３Ｓｉ^＋ ［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値３０２．１８９４，実測値３０２．１８９８．

【0098】

【化24】

【0099】

１００ｍＬの丸底フラスコに、ピロール－２－カルボン酸（１９１．６ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、２．０当量）、ＤＩ水（１７ｍＬ）を入れ、続いて水酸化リチウム一水和物（７４．５ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ、２．０６当量）を入れた。混合物を１５分間撹拌し、固体を溶解した。次に、溶液を高真空下で乾燥させ、ピロールカルボン酸リチウムを白色固体として得た。この固体に、ＤＭＦ（２０ｍＬ）およびヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ、６５４．０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加し、混合物を周囲温度（２２℃）で１時間撹拌した。別の１００ｍＬフラスコに、アミン（２６０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＤＭＦ（無水、６０ｍＬ）を順次添加し、混合物を約１００℃で加熱し、透明溶液となった。混合物を冷却して周囲温度（２２℃）に戻し、酸、ピロール－２－カルボン酸およびＨＢＴＵを含むフラスコに、カニューレを介して添加した。ＴＬＣ解析がアミン２１の完全消費を示すまで、混合物を１８時間撹拌した。反応物を高真空下に置いて溶媒を除去し、有機残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填）によって、酢酸エチル／ヘキサン（０～１００％）、続いてメタノール／ジクロロメタン（０～１０％）を使用して精製し、アミド２１ａ（２７８．８ｍｇ、８２％収率）を白色固体として得て、これは次工程に直接持ち込んだ。

【0100】

２１ａ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９２ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．５，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．８３ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．７，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．１７ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．７，２．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．７０ （ｓ，１Ｈ），４．３７ （ｄｔ，Ｊ ＝ ７．３，６．５ Ｈｚ，１Ｈ，１Ｈ），４．００ （ｄｄ，Ｊ ＝ ７．１，５．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．６４ （ｄ，Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．７８ （ｓ，３Ｈ），２．３１ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，６．３ Ｈｚ，１Ｈ），１．９９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，７．９ Ｈｚ，１Ｈ），０．８５ （ｓ，９Ｈ），０．０８ （ｓ，３Ｈ），０．０４ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６３．７，１６１．１，１２６．８，１２３．１，１１１．９，１１０．２，９４．０，７５．１，６６．８，６６．３，４４．３，２６．２，２４．４ （３），１８．８，－４．６，－４．８； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１）： ３３１８，１６７１，１６３７，１４０８，１０７０； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１８Ｈ_３０Ｎ_４ＮａＯ_４Ｓｉ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値４１７．１９２９，実測値４１７．１９３２．

【0101】

【化25】

【0102】

粗製の２１ａ（３９８ｍｇ、０．７５５ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌した溶液に、メタノール（１８．０ｍＬ）を添加し、続いて１Ｎの塩酸水溶液（０．７５ｍＬ、０．７５ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加した。濁った懸濁液となったが、反応が進行するにつれて透明となった。６時間撹拌した後、ＴＬＣは出発物質の完全消費を示し、反応物をｐＨ７の緩衝剤で中和した。次に、反応物を濃縮し、残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填、メタノール／ジクロロメタン（０～１０％））によって精製し、アルコール２２（１９３．４ｍｇ、８７％）を白色固体として得た。

【0103】

２２：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９２ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．６，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．８６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．１７ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．７，２．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．２２ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ ９．２，８．２，６．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．９１ （ｄｄ，Ｊ ＝ ８．３，６．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．７４ （ｄ，Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．０７ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｓ，３Ｈ），２．３６ （ｄｄｄ，Ｊ ＝ １３．３，６．８，０．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．００ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，９．２ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６４．３，１６１．７，１２６．６，１２３．１，１１２．１，１１０．２，９７．８，７２．９，６６．７，６１．５，４９．６，４３．５，２４．６； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１）： ３２９０，１６７９，１６２５，１４０５，１０６４； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１３Ｈ_１８Ｎ_４ＮａＯ_４ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３１７．１２２０，実測値３１７．１２２４．

【0104】

【化26】

【0105】

２．０ドラムバイアル中で、アルコール２２（３１．０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、１．０当量）をＴＨＦ（１．２ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（無水、０．１２ｍＬ）に溶解し、混合物を－７８℃に冷却した。別の１．０ドラムバイアル中で、塩化オキサリル（２１ｕＬ、０．２４ｍｍｏｌ、２．０当量）をジクロロメタン（０．６ｍＬ）に溶解し、混合物を－７８℃に冷却し、ＤＭＳＯ（２１ｕＬ、０．０３ｍｍｏｌ、２．８当量）を添加した。３０分間撹拌した後、この溶液を、２２を含む２．０ドラムバイアルに、カニューレを介して－７８℃において移した。反応物を１時間撹拌し、新しく蒸留したトリエチルアミン（０．１５ｍＬ、１．０７ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を－３０℃まで１時間内に加温した。トリエチルアミンの第２のバッチ（０．１５ｍＬ、１．０７ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温し、１８時間撹拌した。反応物を綿栓を通して濾過し、ＴＨＦ（１ｍＬ）で洗浄し、有機相を合わせて高真空下で濃縮し、ＤＭＳＯを除去した。残留物を、シリカでのカラムクロマトグラフィー（乾式充填）によって、メタノール／ジクロロメタン（０～１０％）を使用して精製し、カルビノールアミン２３（１４．２ｍｇ、４６％）を灰色がかった白色の固体として得た。

【0106】

２３：灰色がかった白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．２２ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．８，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．９３ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．３０ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，２．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．８０ （ｄ，Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．７４ （ｄ，Ｊ ＝ ４．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．９８ （ｓ，３Ｈ），２．７６ （ｓ，３Ｈ），２．７５ （ｄ，Ｊ ＝ １３．５ Ｈｚ，３Ｈ），２．６３ （ｄ，Ｊ ＝ １４．４ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．９，１６１．３，１２３．３，１２３．２，１１６．２，１１１．７，９８．０，８７．４，６９．１，６２．９，４９．８，４６．８，２４．８； ＩＲ （ｃｍ^－１，薄膜）： ３２５１，１６８７，１６４６，１５５７，１４５９，１３１５，１０７２； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： Ｃ_１３Ｈ_１６Ｎ_４ＮａＯ_４ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３１５．１０６４，実測値３１５．１０６６．

【0107】

【化27】

【0108】

１．５ドラムバイアルに、アミナール２３（６．８ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ、１．０当量）、ＴＨＦ（１．５ｍＬ）および０．５Ｎの塩酸水溶液（２３ｕＬ、０．０１２ｍｍｏｌ、０．５当量）を入れた。反応物を周囲温度（２２℃）で３時間撹拌した。次に、反応物を、ｐＨ７緩衝剤を用いてｐＨ７に調整し、真空中で濃縮した。残留物を、シリカでのカラムクロマトグラフィー（乾式充填）によって、メタノール／ジクロロメタン（０～１０％）を使用して精製し、ヘミアミナール２４（３．３ｍｇ、５１％、回収された出発物質に基づいて６５％）を白色固体として得て、２３（１．５ｍｇ、２２％）を回収した。

【0109】

２４：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．２２ （ｄｄ，Ｊ ＝ ２．７，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．９３ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．３１ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，２．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．７７ （見かけ上ｄ，Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．５９ （ｄ，Ｊ ＝ ４．４ Ｈｚ，１Ｈ），２．８０ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｄ，Ｊ ＝ １４．３ Ｈｚ，１Ｈ），２．６０ （ｄ，Ｊ ＝ １４．４ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．４，１６１．２，１２３．２３，１２３．１９，１１６．１，１１１．７，９３．７，８８．０，６９．２，６９．０，４７．４，２４．５； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１）： ３３０５，１６７９，１６４３，１５５７，１４６２； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： Ｃ_１２Ｈ_１４Ｎ_４ＮａＯ_４ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３０１．０９０７，実測値３０１．０９１０．

【0110】

【化28】

【0111】

アミド２２の合成に関する記載と同様の手順に従い、５－ブロモピロール－２－カルボン酸（１０９．９ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、３．８当量）、ＤＩ水（３ｍＬ）、水酸化リチウム一水和物（２５．０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、３．９２当量）、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ、２１９．４ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、３．８当量）、およびＤＭＦ（１６．６ｍＬ）を使用し、反応物を３６時間撹拌した。シリカでのカラムクロマトグラフィーによりメタノール／ジクロロメタン（０～１０％）を使用して、２２ａ（５７．７ｍｇ、８０％）を白色固体として得た。

【0112】

２２ａ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．７７ （見かけ上ｄ，Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．１４ （見かけ上ｄ，Ｊ ＝ ３．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．２９ （ｑ，Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．９７ （ｔ，Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．８０ （ｄ，Ｊ ＝ ５．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．０８ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｓ，３Ｈ），２．２９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．６，６．２ Ｈｚ，１Ｈ），２．０３ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．６，７．３ Ｈｚ，１Ｈ），０．８５ （ｄ，Ｊ ＝ １．４ Ｈｚ，９Ｈ），０．０７ （ｓ，３Ｈ），０．０５ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６２．５，１６１．７，１２８．６，１１３．４，１１２．５，１０４．６，９８．６，７４．８，６６．４，６０．７，４９．７，４３．７，２６．２ （３），２４．７，１８．８，－４．６，－４．８； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３２７１，１６８７，１６３２，１３９６，１１０２，１０８２； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ）： Ｃ_１９Ｈ_３０ ^７９ＢｒＮ_４Ｏ_４Ｓｉ－ ［Ｍ－Ｈ］^－の計算値４８５．１２２５，実測値４８５．１２４６．

【0113】

【化29】

【0114】

メタノール（０．２５ｍＬ）中の２２ａ（１２．５ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ、１．０当量）の撹拌した溶液に、塩酸（１Ｎ水溶液、３１ｕｌ、０．０３１ｍｍｏｌ、１．２当量）を周囲温度で添加した。反応物を３．５時間撹拌し、ＴＬＣによって示されるように出発物質はもう存在しなかった。反応物をｐＨ７緩衝剤によってｐＨ７に中和し、溶液を高真空下で濃縮した。残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２ ０～１５％）によって精製し、アルコール２５ａ（７．３ｍｇ、７６％収率）を白色固体として得た。

【0115】

２５ａ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．８１ （ｄ，Ｊ ＝ ３．９ Ｈｚ，１Ｈ），６．１４ （ｄ，Ｊ ＝ ３．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．２０ （ｔｄ，Ｊ ＝ ８．９，７．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．８９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ８．３，６．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．７２ （ｄ，Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．０７ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｓ，３Ｈ），２．３６ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，６．７ Ｈｚ，１Ｈ），１．９９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，９．３ Ｈｚ，１Ｈ）； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３３１１，１６７０，１６３８，１５２９，１０６６； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１３Ｈ_１７ ^７９ＢｒＮ_４ＮａＯ_４ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３９５．０３２５，実測値３９５．０３２７．

【0116】

【化30】

【0117】

１．５ドラムバイアルに、２５ａ（７．０ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリフェニルホスフィン（２０．０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、４．０当量）およびＴＨＦ（０．５ｍＬ）を入れた。混合物を５分間撹拌し、０℃に冷却した。ＴＨＦ（０．０３ｍＬ）中のアゾジカルボン酸ジエチル（９ｕＬ、０．０５７ｍｍｏｌ、３．０当量）の溶液を添加した。１時間撹拌した後、出発物質２５ａは、ＴＬＣで示されるように全て消費された。反応混合物を真空中で濃縮し、有機残留物を、シリカでのカラムクロマトグラフィー（乾式充填、メタノール／ジクロロメタン、０～１０％）によって精製し、オキサゾリン２６ａ（４．０ｍｇ、６０％）を白色固体として得た。

【0118】

２６ａ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．７４ （ｄ，Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．１８ （ｄ，Ｊ ＝ ３．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．１３ （ｔｄ，Ｊ ＝ ７．８，５．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．３９ （ｄ，Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．９９ （ｄ，Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ，１Ｈ），３．１２ （ｓ，３Ｈ），２．８６ － ２．４９ （ｍ，４Ｈ），２．１９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １５．１，５．５ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．９，１５９．４，１２１．８，１１６．２，１１３．１，１０５．１，１０２．１，８３．１，７９．９，６３．４，５１．１，４２．４，２４．７； ＩＲ （薄膜，ｃｍ－１） １６８３，１６４８，１４３４，１３９３，１０７５，１０１９； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１３Ｈ_１６ ^７９ＢｒＮ_５Ｏ_３ ^＋ ［Ｍ＋Ｈ］^＋の計算値３５５．０４００，実測値３５５．０４１０．

【0119】

【化31】

【0120】

２２を作製する手順に従い、４－ブロモピロール－２－カルボン酸（１６．６ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、３．６当量）、ＤＩ水（０．４ｍＬ）、水酸化リチウム一水和物（３．７ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、３．６当量）、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ、３４ｍｇ、０．０８７ｍｍｏｌ、３．６当量）、アミン２１（７．３ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１．０当量）およびＤＭＦ（０．７ｍＬ）を使用し、反応物を１８時間撹拌した。ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＭｅＯＨ（０～１０％）を使用するシリカでのカラムクロマトグラフィーによって、２２ｂ（５．０ｍｇ、４２％収率）を白色固体として得た。

【0121】

２２ｂ：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９２ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．８３ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．５９ （ｓ，１Ｈ），４．３６ （ｑ，Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．０２ － ３．９３ （ｍ，１Ｈ），３．６３ （ｄ，Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．７７ （ｓ，３Ｈ），２．３０ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．３，６．３ Ｈｚ，１Ｈ），１．９８ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，８．０ Ｈｚ，１Ｈ），０．８５ （ｓ，９Ｈ），０．０６ （ｄ，Ｊ ＝ １１．２ Ｈｚ，６Ｈ）．

【0122】

【化32】

【0123】

ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中の２２ｂ（２８ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）の撹拌した溶液に、ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液、０．１１ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ、２．０当量）を周囲温度（２２℃）で添加した。混合物を１２時間撹拌し、ＴＬＣによって示されるように出発物質は全て消費された。混合物を減圧下で濃縮し、残留物を、シリカでのカラムクロマトグラフィーによってＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２（０～１０％）を使用して精製し、２５ｂ（１５．０ｍｇ、７０％収率）を無色油状物として得た。

【0124】

２５ｂ：無色油状物。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９３ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．８７ （ｄ，Ｊ ＝ １．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．２０ （ｔｄ，Ｊ ＝ ９．０，６．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．８９ （ｄｄ，Ｊ ＝ ８．４，６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．０７ （ｓ，３Ｈ），２．７３ （ｓ，３Ｈ），２．３６ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，６．８ Ｈｚ，１Ｈ），１．９９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．４，９．３ Ｈｚ，１Ｈ）．

【0125】

【化33】

【0126】

１．０ドラムバイアルに、アルコール２５ｂ（２．８ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ、１．０当量）、トリフェニルホスフィン（５．９ｍｇ、０．０２２５ｍｍｏｌ、３．０当量）、およびＴＨＦ（０．２ｍＬ）を入れた。混合物を０℃に冷却し、アゾジカルボン酸ジエチルの保存溶液（ＤＥＡＤ、１０ｕｌ、０．０２２５ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した（ＤＥＡＤの保存溶液は、３５ｕｌのＤＥＡＤを０．１ｍＬのＴＨＦに溶解することによって作製）。さらに２バッチのＤＥＡＤ溶液（１０ｕｌ）をその後１時間毎に添加し、２５ｂは、ＴＬＣによって示されるように全て消費された。反応物を濃縮し、残留物を、シリカでのカラムクロマトグラフィー（乾式充填、メタノール／ジクロロメタン０～１０％）によって精製した。生成物を、半分取ＨＰＬＣによってさらに精製し、オキサゾリン２６ｂ（１．１ｍｇ、４１％）を、特徴付け用に無色油状物として得た。

【0127】

２６ｂ：無色油状物。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９６ （ｄ，Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ，１Ｈ），６．７６ （ｄ，Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．１５ （ｔｄ，Ｊ ＝ ７．８，５．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．４１ （ｄｄ，Ｊ ＝ ８．３，１．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．９９ （ｄ，Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．１２ （ｓ，３Ｈ），２．７５ （ｄｄ，Ｊ ＝ １５．１，７．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．７０ （ｓ，３Ｈ），２．１９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １５．１，５．４ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．９，１５９．３，１２３．７，１２１．１，１１６．１，１０２．１，９８．０，８３．３，７９．９，６３．４，５１．１，４２．４，２４．７．

【0128】

【化34】

【0129】

１００ｍＬの丸底フラスコに、シリルエーテル２０（１．４０ｇ、３．０７ｍｍｏｌ、１．０当量）およびメタノール（６１ｍＬ）を入れた。混合物を０℃に冷却し、ジエチルエーテル中の１Ｍの塩酸溶液（０．３１ｍＬ、０．３１ｍｍｏｌ、０．１当量）を滴下添加した。溶液を周囲温度（２２℃）に１時間加温し、白色固体が形成した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）を添加し、固体を溶解した。０．５時間撹拌した後、ＴＬＣによって示されるように出発物質は全て反応し、反応物を真空中で濃縮して全ての溶媒を除去した。得られた固体をＴＨＦ（６１ｍＬ）に再溶解し、この溶液を－２０℃に冷却し、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）溶液（ＴＨＦ中の１Ｍ、３．３８ｍＬ、３．３８ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加し、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温し、２１時間撹拌した。ＴＬＣによって示されるように、反応が完了し、真空中で濃縮した。残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（湿式充填、メタノール／ジクロロメタン０～１０％）によって精製して、アルコール２７（１．０ｇ、９２％）を白色固体として得た。

【0130】

２７：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ７．８１ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．３８ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．９８ （ｑ，Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．７０ （ｄ，Ｊ ＝ ５．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．１４ － ２．９２ （ｍ，４Ｈ），２．６６ （ｓ，３Ｈ），２．４３ （ｓ，３Ｈ），２．２２ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．６，６．３ Ｈｚ，１Ｈ），１．８９ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．６，７．８ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） １６１．５，１４４．９，１３８．７，１３０．８ （２），１２８．４ （２），９８．８，７３．８，６９．０，６２．４，４９．７０，４２．６，２４．７，２１．５．； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３３９３，３１４７，１７０３，１１５９； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１５Ｈ_２１Ｎ_３ＮａＯ_５Ｓ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３７８．１０９４，実測値３７８．１０９９．

【0131】

【化35】

【0132】

２５ｍＬの丸底フラスコ中で、アルコール２７（２１０ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ、１．０当量）を、無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアルデヒド（５．９ｍＬ）に溶解した。反応フラスコを水浴中で周囲温度に保持し、セレノシアン酸２－ニトロフェニル（５３６．７ｍｇ、２．３６ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加し、混合物は透明赤色溶液になった。この溶液に、トリブチルホスフィン（０．５９ｍＬ、２．３６ｍｍｏｌ、４．０当量）を滴下添加し、混合物を１時間保持し、ＴＬＣによって示されるように、２７は全て消費された。次に、混合物を０℃に冷却し、メタノール（１１．８ｍＬ）を添加した。周囲温度（２２℃）で１０分間撹拌した後、混合物を高真空下で濃縮して溶媒を除去し、残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填、ＣＨ_３ＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、０～５％）によって精製し、セレニド中間体とトリブチルホスフィンオキシドの混合物（０．８８ｇ）を得た。この中間体を、続いてＴＨＦ（４．６２ｍＬ）に０℃で溶解し、過酸化水素（３５％、０．１２ｍＬ、１．５８ｍｍｏｌ）を滴下添加した。周囲温度（２２℃）まで１時間にわたり加温した後、混合物をさらに６時間撹拌した。亜硫酸ナトリウム（１．０ｇ）の固体を添加し、反応物を５分間撹拌し、真空中で濃縮した。残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填、ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、０～１０％）によって精製して、アルケン２８とＰＯＢｕ_３の混合物（２８４ｍｇ）を得た（約８３．８ｍｇの所望の生成物を含有、２工程にわたり４２％）。生成物を、ＭＰＬＣ（乾式充填、アセトン／ジクロロメタン、０～５０％）によって再精製して、特徴付け目的に、純粋２８を淡黄色油状物として得た。

【0133】

２８：淡黄色油状物。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ ７．７７ （ｄ，Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．３４ （ｄ，Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ，２Ｈ），６．０４ （ｄｄ，Ｊ ＝ ５．９，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），５．６６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ５．９，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），５．１４ （ｓ，１Ｈ），５．０３ （ｄ，Ｊ ＝ ８．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．０３ （ｄｑ，Ｊ ＝ ８．５，２．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．８８ （ｑ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．１５ （ｓ，３Ｈ），２．７２ （ｓ，３Ｈ），２．４４ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ １５８．６，１４４．４，１３６．９，１３３．３，１３３．０，１３０．２ （２），１２７．３ （２），１０２．８，６６．７，６３．９，５０．１，２５．２，２１．７； ＩＲ （薄膜，ｃｍ－１） ３３７４，１６９４，１４４７，１３３１，１１６０； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１５Ｈ_１９Ｎ_３ＮａＯ_４Ｓ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３６０．０９８８，実測値３６０．０９９１．

【0134】

【化36】

【0135】

１００ｍＬの丸底フラスコに、２８（０．２４ｇのＰＯＢｕを含有する０．８ｇの混合物、０．５６ｇ、１．６６ｍｍｏｌ、１．０当量）を入れ、フラスコを真空下に置き、アルゴンで３回充填した。脱気した水（凍結－ポンプ－融解法による、０．６ｍＬ、３３．２ｍｍｏｌ、２０当量）およびヨウ化サマリウム溶液（ＴＨＦ中、０．１Ｍ、１６６ｍＬ、１６．６ｍｍｏｌ、１０当量）を、順次、周囲温度（２２℃）で添加した。トリエチルアミン（ＣａＨ_２上で新しく蒸留、６．９ｍＬ、４９．８ｍｍｏｌ、３０当量）を、１０分間にわたり滴下添加した。ＴＬＣは、出発物質が全て消費されたことを示した。反応物を濾過し、母液を収集し、一方、固体を収集し、６つの１０ｍＬ遠心分離管に移し、各管において１０ｍＬのＣＨ_３ＯＨ－ＣＨ_２Ｃｌ_２（２０％、ｖ／ｖ、１％のＮＥｔ_３を含有）で抽出した。ＴＬＣで生成物がもう見られなくなるまで、このプロセスを６～１０回繰り返した。液体を収集し、濃縮して、残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（ＥＬＳＤ検出器を装備、乾式充填、１％のＮＥｔ_３を含有する０～１０％ＣＨ_３ＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製して、アミン２９（２１４．４ｍｇ、７１％）を無色油状物として得た。

【0136】

２９：無色油状物。^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．０４ （ｄｄ，Ｊ ＝ ６．４，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），６．００ （ｄｄ，Ｊ ＝ ６．０，２．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．７３ （ｄ，Ｊ ＝ ２．１ Ｈｚ，１Ｈ），３．６８ （ｄ，Ｊ ＝ ２．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．１８ （ｓ，３Ｈ），２．７２ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．４，１３８．９，１３１．３，１０５．２，６６．３，６４．９，５０．２，２５．３； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３２８０，２３６０，２３４１，１６９８； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_８Ｈ_１３Ｎ_３ＮａＯ_２ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値２０６．０９００，実測値２０６．０９００．

【0137】

【化37】

【0138】

１．０ドラムバイアル中で、アミン２９（２４．２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ、１．０当量）を、ジクロロメタン（０．６ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（５５ｕｌ、０．４ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加し、混合物を－２０℃に冷却した。別の１．０ドラムバイアル中で、２－ブロモ－１Ｈ－ピロール（３７．６ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、１．５当量）を、ジクロロメタン（０．７ｍＬ）に１５℃で溶解し、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアルデヒド（０．５滴）を添加し、続いて塩化オキサリル（２５μｌ、０．３０ｍｍｏｌ、２．２５当量）を添加した。混合物を３０分間撹拌し、基体２９およびトリエチルアミンを含む他のバイアルに、－２０℃でカニューレにより移した。混合物は、濁った淡黄色溶液になった。１５分間撹拌した後、反応物を周囲温度まで加温した。メタノール（１．０ｍＬ）を添加し、２０分間撹拌した。反応物を真空中で濃縮し、残留物を、シリカでのＭＰＬＣ（乾式充填）によって、メタノール／ジクロロメタンを０～５％使用して精製し、アミド３０を白色固体として得た（２７ｍｇ、５８％）。

【0139】

３０：白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＳＯ_２ＣＤ_３） δ １２．２３ （ｓ，１Ｈ），８．３４ （ｄ，Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．１９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．８４ （ｄｄ，Ｊ ＝ ３．８，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），６．２２ － ６．０８ （ｍ，２Ｈ），５．９５ （ｄｄ，Ｊ ＝ ５．９，２．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．６１ （ｔｔ，Ｊ ＝ ４．６，２．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．７８ （ｔ，Ｊ ＝ ２．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．０６ （ｓ，３Ｈ），２．６２ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＳＯ_２ＣＤ_３） δ １５９．１，１５８．４，１３５．２，１３１．３，１２７．６，１１２．４，１１０．９，１０２．６，１０２．３，６２．６，６１．８，４９．１，２４．７ ； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３３２５，２２５８，１６９１，１６２８，１４４０，１０５６； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ１３Ｈ１５ＢｒＮ４ＮａＯ３ ＋ ［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値３７７．０２２０，実測値３７７．０２２２．

【0140】

【化38】

【0141】

１０ｍＬの丸底フラスコ中で、ＴＨＦ（４．１ｍＬ）中の３０の撹拌した溶液（１４．７ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ、１．０当量）に、０℃で、塩酸塩水溶液（ａｑｕｅｏｕｓ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（０．１Ｍ、０．２ｍＬ、０．０２ｍｍｏｌ、０．５当量）を添加した。反応物を１０分間撹拌し、周囲温度（２２℃）まで３０分間加温した。２時間撹拌した後、反応物を冷却して０℃に戻し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加してｐＨを７に調整し、溶媒を高真空下で除去して、粗製の中間体３１を淡黄色固体として得た。

【0142】

粗製の３１を無水メタノール（１．３ｍＬ）に溶解し、混合物を０℃に冷却した。飽和Ｋ_２ＣＯ_３／ＭｅＯＨ溶液（４５ｕＬ、０．０１ｍｍｏｌ、０．２５当量）を添加し、反応物を周囲温度（２２℃）まで１時間加温した。次に、固体を濾過し、メタノールで洗浄した（０．５ｍＬ×２）。母液を合わせて濃縮し、残留物を、シリカでのカラムクロマトグラフィー（乾式充填、０～１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、アゲラスタチンＡを灰色がかった白色の固体として得た（１．７ｍｇ）。反応物からの固体ケーキを乾燥させ、ＤＭＳＯ（１．０ｍＬ）に再溶解し、綿栓を通して濾過した。ＤＭＳＯを高真空下で除去して、アゲラスタチンＡ（４．３ｍｇ）を灰色がかった白色の固体として純粋形態で得た（合わせた収率：４３％）。

【0143】

３３：灰色がかった白色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ ６．９１ （ｄ，Ｊ ＝ ４．１ Ｈｚ，１Ｈ），６．３３ （ｄ，Ｊ ＝ ４．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．６０ （見かけ上ｄｔ，Ｊ ＝ １２．１，６．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．０９ （ｄ，Ｊ ＝ ５．５ Ｈｚ，１Ｈ），３．８８ （ｓ，１Ｈ），２．８１ （ｓ，３Ｈ），２．６５ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．１，６．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．１０ （ｔ，Ｊ ＝ １２．６ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ） δ １６１．４，１６１．１，１２４．１，１１６．０，１１３．８，１０７．２，９５．７，６７．４，６２．２，５７．５，５４．４，４０．０，２４．２．データは、既報告のものと一致した。

【0144】

【化39】

【0145】

１０ｍＬ丸底フラスコに、アミン２９（５３．０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ、１当量）およびＤＭＦ（無水、２．９ｍＬ）を入れた。この溶液を０℃に冷却し、トリエチルアミン（無水、０．２０ｍＬ、１．４３ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。３５の固体（８７．９ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、１．２当量）を１バッチで添加し、混合物を、周囲温度（２２℃）まで１時間加温しておいた。さらに５時間撹拌した後、ＴＬＣによって示されるように、出発物質は全て消費された。反応混合物に、ＣＨ_３ＯＨ（１．０ｍＬ）を添加し、固体が沈殿した。固体を濾取し、ＣＨ_３ＯＨ（０．２ｍＬ）で洗浄して、生成物３６を淡黄色固体として得た（６２．０ｍｇ、６７％）。生成物は、次工程用に十分に純粋である。

【0146】

３６：淡黄色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＳＯＣＤ_３） δ １２．７７ （ｓ，１Ｈ），８．７６ （ｄ，Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．９２ （ｄ，Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．５５ （ｄ，Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．２３ （ｄ，Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ，１Ｈ），６．１８ （ｄｄ，Ｊ ＝ ５．９，２．０ Ｈｚ，１Ｈ），５．９６ （ｄｄ，Ｊ ＝ ５．９，２．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．６３ （ｄｑ，Ｊ ＝ ７．１，２．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．８２ （ｔ，Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．０７ （ｓ，３Ｈ），２．６２ （ｓ，３Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＳＯＣＤ_３） δ １５８．９，１５８．４，１３６．３，１３４．８，１３１．６，１２６．５，１２２．９，１０５．８，１０２．４，６２．７，６１．５，４９．１，２４．７； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） １６７７，１６３８，１３３１，１０４５； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１３Ｈ_１５Ｎ_５ＮａＯ_５ ^＋ ［Ｍ＋Ｎａ］^＋の計算値３４４．０９６５，実測値３４４．０９６６．

【0147】

【化40】

【0148】

ＴＨＦ（１．５ｍＬ）および１，３－ジオキサン（１．８ｍＬ）中の、３６の撹拌した懸濁液（１０．６ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ、１．０当量）に、０℃で、ＨＣｌ水溶液（０．１Ｍ、０．１７ｍＬ、０．０１７ｍｍｏｌ、０．５当量）を添加した。反応物を１０分間撹拌し、周囲温度（２２℃）まで加温した。さらに１時間撹拌した後、反応が完了し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加してｐＨを８に調整し、溶媒を高真空下で除去して、固体を粗製の中間体として得た。

【0149】

粗製の中間体を、メタノール（１．７ｍＬ）およびＮ，Ｎ－ジメチルホルムアルデヒド（０．２ｍＬ）に溶解し、混合物を０℃に冷却した。飽和Ｋ_２ＣＯ_３／ＭｅＯＨ溶液（Ｋ_２ＣＯ_３をＭｅＯＨ中で一晩撹拌することによって新しく調製、３７ｕＬ、０．００８３ｍｍｏｌ、０．２５当量）。３０分後、別のバッチのＫ_２ＣＯ_３／ＭｅＯＨ溶液（１４４ｕＬ、約０．０３３ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、反応物を周囲温度（２２℃）まで加温し、２０時間撹拌して、淡黄色固体が沈殿した。固体を濾過し、メタノールで洗浄した（１．０ｍＬ×３）。固体ケーキを乾燥させ、ＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）に再溶解し、綿栓を通して濾過した。液体を収集し、高真空下で乾燥させて、所望の３７を淡黄色固体として高純度で得た（４．４ｍｇ、２工程にわたり４１％）。

【0150】

３７：淡黄色固体。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＳＯＣＤ_３） δ ８．４３ （ｓ，１Ｈ），８．２２ （ｄ，Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．１５ （ｄ，Ｊ ＝ １．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．０９ （ｄ，Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．６９ （ｄｔ，Ｊ ＝ １１．３，５．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．９３ （ｄ，Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．７０ （ｓ，１Ｈ），２．６４ （ｓ，３Ｈ），２．５８ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．０，６．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．１５ （ｄｄ，Ｊ ＝ １３．０，１０．８ Ｈｚ，１Ｈ）； ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ，ＣＤ_３ＳＯＣＤ_３） δ １５８．４，１５７．１，１３６．１，１２４．２，１２３．２，１０７．１，９３．４，６５．６，６０．４，５４．２，３９．９，２３．７； ＩＲ （薄膜，ｃｍ^－１） ３１８４，１６５４，１４９４，１３７３，１３０７； ＨＲＭＳ （ＥＳＩ） Ｃ_１２Ｈ_１２Ｎ_５Ｏ_５ ^－ ［Ｍ－Ｈ］^－の計算値３０６．０８４４，実測値３０８．０８４６．

【0151】

がん細胞株細胞毒性アッセイ
がん細胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＣＦ７、Ｃａｃｏ２、またはＵ８７）を、９６－ウェルプレートに、１ウェル当たり２，０００細胞でプレーティングし、３７℃で２４時間、５％のＣＯ_２においてインキュベートした。ＡｇｌＡおよび誘導体をＤＭＳＯに溶解し、適切な濃度に希釈し、化合物溶液または当量濃度の溶媒（ビヒクル）をプレートに添加し、３７℃で７２時間、５％のＣＯ_２においてインキュベートした。製造業者のプロトコルに従い、２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ（ＭＴＳ、Ｐｒｏｍｅｇａ）、またはＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｂｌｕｅ（登録商標）Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（ｒｅｓａｚｕｒｉｎ、Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。プレートを、３７℃で１～４時間、５％のＣＯ_２において発色させ、ＡｃｃｕＳｋａｎ Ｇｏ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で４９０ｎｍにおいて、またはＶａｒｉｏＳｋａｎ Ｌｕｘ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で５６０ｎｍ励起および５９０ｎｍ発光において評価した。

【0152】

例示的な実施形態を例示および説明してきたが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、さまざまな変更を行うことができることが理解されよう。

【図1】

【図2A】

【図2B】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6-1】

【図6-2】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【国際調査報告】