特表 2024-518644 イナボグリフロジンを含むイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-01

(54)【発明の名称】イナボグリフロジンを含むイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/351 20060101AFI20240423BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240423BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240423BHJP

   A61K 38/28 20060101ALI20240423BHJP

【ＦＩ】

A61K31/351

A61P3/10

A61P43/00 121

A61K38/28

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023572193

(86)(22)【出願日】2022-05-20

(85)【翻訳文提出日】2023-11-21

(86)【国際出願番号】 KR2022007206

(87)【国際公開番号】W WO2022245171

(87)【国際公開日】2022-11-24

(31)【優先権主張番号】10-2021-0065733

(32)【優先日】2021-05-21

(33)【優先権主張国・地域又は機関】KR

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】513074792

【氏名又は名称】デーウン ファーマシューティカル カンパニー リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100108453

【弁理士】

【氏名又は名称】村山 靖彦

(74)【代理人】

【識別番号】100110364

【弁理士】

【氏名又は名称】実広 信哉

(74)【代理人】

【識別番号】100133400

【弁理士】

【氏名又は名称】阿部 達彦

(72)【発明者】

【氏名】ワン・ホ

(72)【発明者】

【氏名】ヒョン・ウ・イム

(72)【発明者】

【氏名】ジ・ス・チェ

(72)【発明者】

【氏名】ジュ・ミ・ハン

(72)【発明者】

【氏名】ジュン・ソク・パク

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084BA01

4C084DB34

4C084NA14

4C084ZC35

4C084ZC61

4C084ZC75

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA07

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086NA14

4C086ZC35

4C086ZC61

4C086ZC75

(57)【要約】

本発明は、イナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物に関する。本発明のイナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の糖尿病の予防又は治療用薬学組成物は、優れた血糖調節効果を示すので、イヌ科動物の糖尿病治療に有用に用いられ得る。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

イナボグリフロジンを有効成分として含むことを特徴とする、イヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項2】

前記糖尿病は、第１型糖尿病であることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項3】

前記イナボグリフロジンは、１日１回０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇ用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項4】

前記イナボグリフロジンは、１日１回０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項5】

前記イナボグリフロジンは、３日１回０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇ用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項6】

前記イナボグリフロジンは、３日１回０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ用量で投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項7】

前記薬学組成物は、最小８週間投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項8】

前記薬学組成物は、最小６ヶ月間投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項9】

前記薬学組成物は、フルクトサミン、インスリン用量、空腹血糖及び収縮期血圧からなる群より選択される一つ以上の指標を減少させることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項10】

前記糖尿病は、第１型糖尿病であり、前記薬学組成物は、第１型糖尿病治療剤と併用投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項11】

前記薬学組成物は、経口又は非経口で投与されることを特徴とする、請求項１に記載のイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物。

【請求項12】

請求項１に記載の薬学組成物を治療が必要なイヌ科動物に投与することを特徴とする、イヌ科動物の糖尿病治療方法。

【請求項13】

前記イヌ科動物は、高血糖症、インスリン欠乏及び体重減少からなる群より選択される代謝障害を有していることを特徴とする、請求項１２に記載のイヌ科動物の糖尿病治療方法。

【請求項14】

前記方法は、イヌ科動物に請求項１に記載の薬学組成物とインスリンを併用投与することを特徴とする、請求項１２に記載のイヌ科動物の糖尿病治療方法。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、イナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物に関する。

【背景技術】

【0002】

糖尿病（ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ、ＤＭ）は、高血糖症、糖尿（ｇｌｙｃｏｓｕｒｉａ）及びインスリンの絶対的又は相対的欠乏による体重減少を特徴とする中年及び老年のイヌに影響を及ぼす一般的な代謝障害のうち一つである。

【0003】

伴侶犬を飼う人口が急増しながら伴侶犬の健康に関心を持つ家庭が増加している。伴侶犬は、皮膚疾患、湿疹などの発生が頻繁であるが、年を取るほど糖尿病、心臓疾患、腎臓疾患、癌が増加する。特に、伴侶犬が多飲、多尿症状を示して急激に体重が減ると、糖尿病を疑わなければならない。肥満と運動不足によりインスリン非依存性糖尿病（第２型糖尿病）が多いヒトとは異なり、糖尿犬は、ほとんど全てインスリン依存性糖尿病（第１型糖尿病）を患う。

【0004】

糖尿犬の主要治療方法は、相変らずインスリン療法であるが、毎日数回インスリン注射を打たなければならない不便さと低血糖症による制限用量のため糖尿病を厳格に統制することは難しい。結果的に、高血糖症と低血糖症という二つの問題を解決するためにインスリンと補助治療に対する満たされない需要が存在する。

【0005】

一方、ＳＧＬＴ２（Ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）抑制剤は、新しい部類の抗高血糖剤である。ＳＧＬＴ－２抑制剤は、近位ネフロンでブドウ糖の再吸収を減少させてインスリンと関係ないメカニズムを通じてブドウ糖の排泄を増加させ、第２型糖尿病の治療に対するＳＧＬＴ２抑制剤の安全性と効能が多くの研究から確認された。特に、アメリカ公開特許公報第２０１５／０１５２０７５号は、ＳＧＬＴ２に対する抑制活性を示すジフェニルメタン残基を有する化合物としてイナボグリフロジン（ｅｎａｖｏｇｌｉｆｌｏｚｉｎ）を開示しており、前記文献は、イナボグリフロジンがヒトＳＧＬＴ２活性に対する抑制効果に優れて糖尿病の治療に効果的であることを開示している。

【発明の概要】

【発明が解決しようとする課題】

【0006】

本発明者らは、糖尿犬の治療においてインスリン注射以外に適切な治療方法がない問題を解決するために、糖尿犬にイナボグリフロジンを投与した結果、イナボグリフロジンが血糖調節効果に優れていることを確認し、本発明を完成した。

【0007】

したがって、本発明の目的は、イナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物を提供することである。

【課題を解決するための手段】

【0008】

上述したように、イヌ科動物の糖尿病は、高血糖症、インスリン欠乏、体重減少などの代謝障害を特徴とする。これは、ヒトにおいて第１型糖尿病に該当し、主にインスリン注射を通じて治療して来た。

【0009】

糖尿病の臨床的症状は、多飲、多尿、多食である。イヌ科動物の正常的な飲水量が５０ｍｌ／ｋｇであることに比べ、糖尿病を患うイヌ科動物の場合、飲水量が１００ｍｌ／ｋｇ以上に増加し得る。糖尿を患うイヌ科動物の場合、糖尿性白内障やブドウ膜炎、ケトアシドーシスなどの合併症を伴うことがある。

【0010】

糖尿病の診断は、上のような臨床症状、血糖チェック、尿膜検出、フルクトサミン（ｆｒｕｃｔｏｓａｍｉｎｅ）数値検査などの結果を総合して判断することになる。

【0011】

下記実施例から確認したように、イナボグリフロジンは、糖尿を病んでいるイヌにおいて血糖を減少させ、フルクトサミン濃度を改善し、必要とする１日インスリンの用量を減らし、収縮期血圧を低める効果を示した。

【0012】

したがって、本発明は、イナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の糖尿病予防又は治療用薬学組成物を提供する。

【0013】

前記イヌ科動物の代表的な例は、イヌである。イヌ以外にも、キツネ、オオカミ、タヌキなどがイヌ科動物に含まれる。

【0014】

本明細書に用いられた用語「予防」は、本発明による薬学組成物の投与により糖尿の発病を抑制させるか遅延させる全ての行為を意味する。

【0015】

また、本明細書に用いられた用語「治療」は、本発明による薬学組成物の投与により糖尿が好転するかよく変更される全ての行為を意味する。より具体的には、血糖管理指標であるフルクトサミン濃度や空腹血糖、又は体脂肪を減少させるなどにより判断し得る。

【0016】

本発明の一具体例で、前記糖尿病は、インスリン依存性糖尿病、すなわち、第１型糖尿病であってもよい。第１型糖尿病は、膵臓でインスリンが生成されないので発病し、その原因は、膵臓ベータ細胞の破壊や消失である。インスリンを直接注射すること以外には今まで効果的な治療方法がない。一方、糖尿病は、上昇した血糖数値により合併症が発生しやすいので、前記イヌ科動物は、糖尿病以外にこれに制限されるものではないが、糖尿性白内障、ブドウ膜炎、ケトアシドーシスなどの合併症を伴うことがある。

【0017】

イヌ科動物の糖尿病の予防又は治療のために用いられ得るイナボグリフロジンの用量は、特に制限されず、投与の対象であるイヌ科動物の疾患の重症度、体重、年齢、性別、その他合併症の有無などによって適切に調節され得る。

【0018】

これに制限されるものではないが、本発明の一具体例で、前記イナボグリフロジンは、１日１回０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．０１～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ用量で投与され得る。本発明の一具体例で、前記イナボグリフロジンは、１日１回０．０２～０．０３ｍｇ／ｋｇ用量で投与され得る。また、前記イナボグリフロジンは、３日１回０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．０１～０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０１～０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０２～０．０５ｍｇ／ｋｇ用量で投与され得る。例えば、イナボグリフロジンは、３日に１回０．０２～０．０３ｍｇ／ｋｇ用量で投与され得る。

【0019】

下記実施例で、本発明者らは、糖尿犬にインスリンとともにイナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回又は１日１回ずつ８週間投与した。その結果、イナボグリフロジンを３日に１回投与したときより１日１回投与したとき、糖尿犬の収縮期血圧がさらに減少し（図１の（ｂ））、フルクトサミン、空腹血糖及びインスリン用量も顕著に減少することを確認した（図２）。また、同じ用法及び用量で６ヶ月間投与した結果、１日１回投与時に空腹血糖及びインスリン用量が統計的に有意に減少することを確認した（図３）。この結果を通じて、本発明は、糖尿犬の治療においてイナボグリフロジンの投与回数、すなわち、１日１回の投与が最適の効果を導き出し、長期間イナボグリフロジンを投与しても安全であることを確認した。

【0020】

イナボグリフロジンの投与期間は、イナボグリフロジンの投与によるイヌ科動物の糖尿病の予防又は治療効果に根拠して臨床医が適切に調節可能である。これに制限されるものではないが、イナボグリフロジンを有効成分として含む薬学組成物は、イヌ科動物の糖尿病の予防又は治療のために最小８週間、最小６ヶ月間１日１回投与され得る。また、最小８週～６ヶ月間投与され得る。

【0021】

前記薬学組成物の投与は、フルクトサミン、空腹血糖及び収縮期血圧からなる群より選択される一つ以上の指標を減少させる効果を示す。

【0022】

一具体例で、前記糖尿病は、第１型糖尿病であり、本発明の薬学組成物は、第１型糖尿病治療剤と併用投与され得る。例えば、前記第１型糖尿病治療剤は、インスリンであってもよい。下記実施例で確認できるように、イナボグリフロジンを含む薬学組成物の投与は、糖尿病を患っているイヌ科動物でのインスリン投与量を顕著に減少させる効果を示すので、治療上大きい利点を提供する。

【0023】

一方、本発明によるイナボグリフロジンを含む薬学組成物の投与方法は、これに制限されるものではないが、目的とする方法によって経口又は非経口で投与され得る。経口投与のための製剤は、多様な形態、例えば、シロップ、錠剤、カプセル、クリーム及びロゼンジを選択することができる。シロップ製剤は、一般的に任意的に香味剤又は着色剤を含む、液体担体での化合物の懸濁液又は溶液、又はその塩、例えば、エタノール、ピーナッツオイル、オリーブオイル、グリセリン又は水を含有する。前記組成物が錠剤形態で存在する場合、固体製剤を製造するために一般的に用いられた薬学担体のうち任意の一つが用いられ得る。このような担体の例としては、マグネシウムステアレート、テラアルバ、滑石、ゼラチン、アカシア、ステアリン酸、澱粉、ラクトース及びスクロースを含む。前記組成物がカプセル形態で存在する場合、一般的カプセル化手続きのうち一つが用いられ得るが、例えば、硬質ゼラチンカプセルシェル（ｓｈｅｌｌ）内の前記言及された担体を用いる。前記組成物が軟質ゼラチンシェルカプセル形態で製造される場合、分散剤又は懸濁液に一般的に用いられる薬学組成物のうち任意の一つが水性ガム、セルロース、シリケート又はオイルを用いて製造され得る。筋肉内又は皮下投与のための製剤は、液体形態、例えば、水性溶媒、例えば、水、生理食塩水及びリンガー（Ｒｉｎｇｅｒ）溶液、又は親油性溶媒、例えば、脂肪油、ゴマ油、トウモロコシ油及び合成脂肪酸エステルを含む溶液、懸濁液及びエマルジョンを選択することができる。

【0024】

また、本発明は、前記イナボグリフロジンを有効成分として含む薬学組成物を治療が必要なイヌ科動物に投与することを含むイヌ科動物の糖尿病治療方法を提供する。

【0025】

治療が必要なイヌ科動物は、これに制限されるものではないが、高血糖症、インスリン欠乏及び体重減少からなる群より選択される代謝障害を有していてもよい。

【0026】

本発明の一具体例で、前記治療方法は、糖尿病の予防又は治療用薬学的組成物をインスリンと併用投与することであってもよい。

【0027】

前記糖尿病の治療方法は、糖尿病の予防又は治療用薬学的組成物を用いるので、この二つの間で重複する内容は明細書の過度な記載を避けるために省略する。

【発明の効果】

【0028】

本発明のイナボグリフロジンを有効成分として含むイヌ科動物の糖尿病の予防又は治療用薬学組成物は、優れた血糖調節効果を示すので、イヌ科動物の糖尿病治療に有用に用いられ得る。

【図面の簡単な説明】

【0029】

【図1】図１の（ａ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後の疾病活性度指標を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図１の（ｂ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後の収縮期血圧を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図１の（ｃ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後の体重減少程度を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図１の（ｄ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後の体重減少程度を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。

【図2】図２の（ａ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後の空腹血糖を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図２の（ｂ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後のフルクトサミン濃度を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図２の（ｃ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを併用投与した後のインスリン投与量を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。

【図3】図３の（ａ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを６ヶ月の間併用投与した後の空腹血糖を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図３の（ｂ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを６ヶ月の間併用投与した後のフルクトサミン濃度を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。 図３の（ｃ）は、糖尿犬にインスリンとイナボグリフロジンを６ヶ月の間併用投与した後のインスリン投与量を確認した結果である：ＴＯＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で３日に１回投与した試験群、ＳＩＤは、イナボグリフロジンを０．０２５ｍｇ／ｋｇ用量で１日１回投与した試験群である。棒グラフは、各変数の平均を示し、誤差棒は、Ｓ．Ｄを示し、０．０５未満のｐ^－値を統計的に有意であるものと見做した。

【発明を実施するための形態】

【0030】

以下、一つ以上の具体例を実施例を通じてより詳しく説明する。しかし、これら実施例は、一つ以上の具体例を例示的に説明するためのものであって、本発明の範囲がこれら実施例によって限定されるものではない。

【0031】

＜実験方法＞
１．研究設計
本研究は、前向き、公開ラベル、非無作為、多機関、概念証明（Ｐｒｏｏｆ－ｏｆ ｃｏｎｃｅｐｔ）研究であって、インスリン依存性糖尿病（第１型糖尿病）のあるイヌにインスリン療法とともにイナボグリフロジンの安全性と効能を評価した。イナボグリフロジンの効能及び安全性は、治療期間の間あらかじめ指定された時間に評価した。

【0032】

２．薬物情報
イナボグリフロジンは、下記化学式１の構造を有し、現在ナトリウム－グルコース共輸送体２（ｓｏｄｉｕｍ－ｇｌｕｃｏｓｅ ｃｏｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ２）の選択的抑制を通じた糖尿病治療剤として開発中である。

【0033】

【化1】

【0034】

３．臨床参加イヌ
次の基準を満足する糖尿犬を臨床試験に参加させた：１５歳未満の小型イヌ（１０ｋｇ未満）、１３歳未満の中型イヌ（１１－２２ｋｇ）、スクリーニング訪問最小１ヶ月前に安定した基底用量のインスリン治療、インスリン投薬後の最低点（Ｎａｄｉｒ）血糖数値最小２００ｍｇ／ｄｌ、血中ケトン数値０．６ｍｍｏｌ／Ｌ未満。

【0035】

ただし、次の基準に該当する糖尿犬は除外した；慢性腎臓疾患があるイヌ（ＣＫＤ ＩＲＩＳ段階＞２）、低血圧評価、利尿剤又は関連薬物投与、妊娠確実、検査開始前１４日以内に検査に影響を及ぼす薬物服用。

【0036】

４．研究過程
研究は、８週間進行し、イナボグリフロジンの投与用量によって臨床参加イヌをＴＯＤ試験群とＳＩＤ試験群の二つのグループに分けた。ＴＯＤ試験群は、３日に１回０．０２５ｍｇ／ｋｇを投与し、ＳＩＤ試験群は、１日に１回０．０２５ｍｇ／ｋｇを投与した。適切な評価のためにイヌに朝食とともに薬物を投与し、投与が完了した後のイヌは、血圧、血液検査及び尿の検査のような身体検査を行った。その後、研究者は、モニタリング中に目標血糖レベルを満たすためにインスリン用量を調整した（Ｎａｄｉｒブドウ糖レベル、８０－１５０ｍｇ／ｄｌ）。

【0037】

１次評価変数は、無作為にグループを分けた後、深刻な低血糖症や糖尿病性ケトアシドーシス（ｄｉａｂｅｔｉｃ ｋｅｔｏａｃｉｄｏｓｉｓ、ＤＫＡ）が発生せず、血中フルクトサミン数値が減少するか否かを評価した。２次評価変数は、基準日から８週まで空腹血糖レベル、体重及びインスリンの平均１日１回（ｂｏｌｕｓ）用量の変化であった。重症低血糖症は、イヌのブドウ糖レベルに関係なく、助けが必要であるか意識を失うか発作を起こす低血糖状態であると定義した。糖尿病性ケトアシドーシスの診断は、他の原因なく過度なケトン生成と係わるアニオンギャップ性の代謝性アシドーシス（ａｎｉｏｎ－ｇａｐ ｍｅｔａｂｏｌｉｃ ａｃｉｄｏｓｉｓ）の存在を基盤として評価した。臨床及び実験値と副作用に対するデータを含む安全性情報は、各試験訪問時に収集した。

【0038】

また、臨床試験に参加した伴侶犬を対象として同じ用法及び用量（ＳＩＤ又はＴＯＤ）で６ヶ月まで追加に投薬して長期的な有効性を確認した。

【0039】

５．統計分析
グループ内の薬物投与前後の差は、Ｓｔｕｄｅｎｔ ｐａｉｒｅｄ ｔ－ｔｅｓｔ又はＷｉｌｃｏｘｏｎ ｒａｎｋ ｔｅｓｔを用いて比較した。また、混合ＡＮＯＶＡテストを通じて薬物投与後のグループ間の差を確認した。統計分析は、Ｒプログラミング言語（ｈｔｔｐｓ：／／ｃｒａｎ．ｒ－ｐｒｏｊｅｃｔ．ｏｒｇ／）及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン７（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｉｎｃ．、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）で行った。ｐ^－値が０．０５未満であると、統計的に有意であるものと見做した。

【0040】

＜実験結果＞
１．臨床参加イヌの特性
臨床参加イヌ１８匹をイナボグリフロジンの投与用量によって二つの試験群（ＴＯＤ及びＳＩＤ試験群）に分け、各グループに対する参加イヌの性別、年齢、ＢＣＳ（身体状態点数；ｂｏｄｙ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ）、収縮期血圧分布は、表１に記載した。表１で、年齢とＢＣＳは、範囲とともに中央値で表示し、収縮期血圧及びインスリン用量値は、平均±ＳＤで記載した。

【0041】

【表1】

【0042】

２．イナボグリフロジン投与後の副作用の評価
イナボグリフロジンの投与後、食欲、活動及び大便状態を確認して副作用がないかを確認した。表２の疾病活性度指標（ｄｉｓｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｄｅｘ）を確認した結果、各試験群で投与前と後に差がないことを確認した。

【0043】

【表2】

【0044】

実験開始時に、ＴＩＤ試験群から２匹、ＳＩＤ試験群から１匹が細菌性膀胱炎を患っていることを確認したが、イナボグリフロジンの投与後、ＴＯＤ試験群の２匹のうち１匹が膀胱炎が完治し、ＳＩＤ試験群の１匹は、臨床試験終了後にも膀胱炎が好転しなかった。しかし、全ての試験群から細菌性膀胱炎が新規に発病する事例はなかった。

【0045】

全ての試験群から意識喪失又は発作を誘発する深刻な低血糖症は発生しなかった。

【0046】

３．イナボグリフロジン投与後の体重及び血圧の評価
イナボグリフロジンの投与後に体重と血圧の変化も確認した。体重の場合、二つのグループで全て減少する傾向があり、ＢＣＳには差がなかった。血圧は、ＳＩＤ試験群で有意に減少した（ｐ＝０．０３３）（図１Ｂ）。

【0047】

４．イナボグリフロジンの投与後の腎臓機能の評価
血液検査と尿の検査を通じてイナボグリフロジンの投与前後の腎臓機能の変化を確認した。血液検査項目は、血液要素窒素（ｂｌｏｏｄ ｕｒｅａ ｎｉｔｒｏｇｅｎ、ＢＵＮ）、クレアチニン（Ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ）、対称性ジメチルアルギニン（ｓｙｍｍｅｔｒｉｃ ｄｉ－ｍｅｔｈｙｌ－ａｒｇｉｎｉｎｅ、ＳＤＭＡ）、シスタチン－Ｃ（Ｃｙｓｔａｔｉｎ－Ｃ）、ベータ－２－マイクログロブリン（ｂｅｔａ－２－ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ、Ｂ２Ｍ）及びＮＡＧ（Ｎ－ａｃｅｔｙｌ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ）である。尿の検査項目は、ＵＳＧ（ｕｒｉｎｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｒａｖｉｔｙ、尿比重）及びＵＰＣ（ｕｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｏ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ、小便タンパク質／クレアチン比））である。

【0048】

ＴＯＤ試験群で、イナボグリフロジンの投与前後でＢＵＮ（２１．３±１１．７～２２．５±１１．７、ｐ＝０．７２３）、クレアチニン（０．９±０．２～０．９±０．２、ｐ＝０．７３３）、ＳＤＭＡ（８．８±２．９～９．２±５．５、ｐ＝０．９４３）、シスタチン－Ｃ（０．６±０．３～０．５±０．２、ｐ＝０．０８２）、ＮＡＧ（７．０±８．３～７．６±５．８、ｐ＝０．２９３）、ＵＳＧ（１．０３２±０．０１６～１．０３４±０．０１１、ｐ＝１）及びＵＰＣ（１．９±３．０～１．１±１．８、ｐ＝０．１８５）の有意味な変化はなかった。

【0049】

ＳＩＤ試験群では、イナボグリフロジンの投与前後でクレアチニン（０．６±０．１～０．６±０．１、ｐ＝０．３１６）、ＳＤＭＡ（８．９±２．６～７．８±１．４、ｐ＝０．１２４）、シスタチン－Ｃ（０．５±０．１～０．５±０．１、ｐ＝０．３３５）、ＮＡＧ（１１．０±７．３～９．０±４．３、ｐ＝０．２９３）、ＵＳＧ（１．０３５±０．０１６～１．０４３±０．００８、ｐ＝０．１６）及びＵＰＣ（１．２±２．２～１．１±１．６、ｐ＝０．７７９）の有意味な変化がなかった。しかし、ＢＵＮの場合、投与後に有意に増加することを確認することができた（１５．２±４．９～２１．９±６．８、ｐ＝０．００３）。ベータ－２－マイクログロブリン（Ｂ２Ｍ）濃度は、二つの試験群の両方で投与前後に０．１６未満であった（表３）。表３で全ての値は、平均±Ｓ．Ｄで表示し、ｐ^－値が０．０５未満であると、統計的に有意であるものと見做した。

【0050】

【表3】

【0051】

５．イナボグリフロジンの投与後の代謝性アシドーシスの評価
イナボグリフロジンの投与８週後に血中ケトンの変化が確認され、ＳＩＤ試験群で増加する傾向が観察されたが、有意に増加しなかった。また、乳酸脱水素酵素（ｌａｃｔａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ＬＤＨ）を測定したとき、投与前と比較して二つの試験群の両方で有意な変化がなかった。静脈血ガス検査を通じて血中ｐＨ、重炭酸塩（ＨＣＯ_３）、陰イオン差を確認した結果、投与前後に有意な差はなかった（表４）。その結果、糖尿病性ケトアシドーシスが発生しなかったことを確認した。表４で全ての値は、平均±Ｓ．Ｄで表示し、ｐ^－値が０．０５未満であると、統計的に有意であるものと見做した。

【0052】

【表4】

【0053】

６．イナボグリフロジンの投与後の脂質代謝の評価
血中コレステロールを測定してイナボグリフロジンが脂質代謝に及ぼす影響を確認した。トリグリセライドと総コレステロール（ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ、Ｔ－Ｃｈｏｌ）の変化は、統計的に有意ではなかった。リパーゼも投与前後に有意な差がなかった（表５）。表５で全ての値は、平均±Ｓ．Ｄで表示し、ｐ^－値が０．０５未満であると、統計的に有意であるものと見做した。

【0054】

【表5】

【0055】

７．イナボグリフロジンの投与後の血糖調節の評価
血液検査（フルクトサミン及び空腹ブドウ糖）とインスリンの１日投与量を通じて投与前後の血糖調節を確認した。ＴＯＤ試験群では、空腹血糖、１日インスリン投与量は減少したが、統計的に有意な差はなかった。しかし、フルクトサミン濃度は、改善された（ｐ＝０．０４１）。一方、ＳＩＤ試験群で、フルクトサミン数値は、４７５．３±１０７．６から３９３．１±１２２．９、μｍｏｌ／Ｌ（ｐ＝０．０３４）、空腹血糖は、３３０．８±１１８．０から２１５．５±１２６．２ｍｇ／ｄＬ（ｐ＝０．００７８）、１日インスリン投与量は、２．０±０．８から１．５±０．５ｕｎｉｔｓ／ｋｇ／ｄａｙ（ｐ＝０．０２９）であって、全ての指標が統計的に有意に改善された。また、８週次に試験群間の差を比較した結果、空腹血糖、フルクトサミン、インスリンの減少率に有意な差がなかった。しかし、イナボグリフロジンを３日に１回服用するＴＯＤ試験群と比較して１日１回服用するＳＩＤ試験群で減少する傾向があった（図２の（ａ）～図２の（ｃ））。

【0056】

また、同じ用法及び用量で６ヶ月まで投薬して長期的な有効性を確認した結果、ＳＩＤ／ＴＯＤ試験群で全て空腹血糖、フルクトサミン及びインスリン減少率が改善された。具体的に、ＳＩＤ投与群は、統計的に有意な空腹血糖減少（ｐ＜０．０２３４）及びインスリン減少率（ｐ＜０．０２３４）を示し（図３の（ａ）及び図３の（ｃ））、ＴＯＤ試験群は、統計的に有意なフルクトサミン減少を示した（ｐ＜０．０３１３）（図３の（ｂ））。

【0057】

＜結論＞
本発明で８週間のイナボグリフロジンとインスリン併用投与は、１型糖尿犬でフルクトサミン濃度を改善し、インスリン用量を減らした。また、イナボグリフロジンを１日１回糖尿犬に投与すれば、収縮期血圧を低める效果があった。６ヶ月間のイナボグリフロジンとインスリン併用投与は、１型糖尿犬で空腹血糖及びインスリン用量を有意に減少させた。

【0058】

前記結果は、ＳＧＬＴ２抑制剤イナボグリフロジンとインスリンの併用療法が糖尿犬においてインスリン単独治療より血糖調節の側面でより効果的であることを示唆する。また、イナボグリフロジンを１日１回服用することが３日に１回服用することよりフルクトサミンとインスリン用量を顕著に減少させることを確認した。

【図1a】

【図1b】

【図1c】

【図1d】

【図2a】

【図2b】

【図2c】

【図3a】

【図3b】

【図3c】

【国際調査報告】