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特表2024-518725ホスホリルコリンコンジュゲートを含むペプチド及びその合成方法
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-02
(54)【発明の名称】ホスホリルコリンコンジュゲートを含むペプチド及びその合成方法
(51)【国際特許分類】
C07F 9/09 20060101AFI20240424BHJP
C07K 1/06 20060101ALI20240424BHJP
C07K 7/00 20060101ALI20240424BHJP
A61K 38/08 20190101ALI20240424BHJP
A61P 37/02 20060101ALI20240424BHJP
A61K 47/55 20170101ALI20240424BHJP
【ＦＩ】
C07F9/09 V CSP
C07K1/06
C07K7/00
A61K38/08
A61P37/02
A61K47/55
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023564463
(86)(22)【出願日】2022-04-21
(85)【翻訳文提出日】2023-12-15
(86)【国際出願番号】 IL2022050413
(87)【国際公開番号】W WO2022224259
(87)【国際公開日】2022-10-27
(31)【優先権主張番号】63/177,420
(32)【優先日】2021-04-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520150201
【氏名又は名称】ターシア ファーマ リミテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｔａｒｓｉｅｒ Ｐｈａｒｍａ Ｌｔｄ．
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】アイデルマン，ハイム
(72)【発明者】
【氏名】ファン マイヘレン，ピーター
(72)【発明者】
【氏名】ブラウ，リチャード ヘンドリック
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
4H050
【Ｆターム（参考）】
4C076CC07
4C076CC41
4C076DD63
4C076EE41
4C076FF70
4C084AA02
4C084AA06
4C084AA07
4C084BA17
4C084BA23
4C084BA33
4C084CA59
4C084NA14
4C084ZB07
4H045AA10
4H045AA20
4H045BA14
4H045BA50
4H045BA72
4H045EA20
4H045FA20
4H045FA57
4H045FA61
4H050AA01
4H050AB80
4H050AD17
4H050BB31
4H050BC10
(57)【要約】
本発明の一態様では、ホスホリルコリンで修飾されたＮ保護チロシンを含む化合物が存在する。さらに、ＳＰＰＳなどのための化合物の使用も提供される。
【選択図】図２Ａ
【選択図】図２Ａ
【特許請求の範囲】
【請求項1】
式１：【化1】
Ｘが、水素、フェノール保護基、または
【化2】
【請求項2】
前記アミン保護基が、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、Ａｌｌｏｃ、Ｄｄｅ、ｉｖ－Ｄｄｅ、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２－［ビフェニリル－（４）］－プロピル－２－オキシカルボニル、ジメチル－３，５ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２－（４－ニトロフェニルスルホニル）エトキシカルボニル、１，１－ジオキソベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イルメチルオキシカルボニル、２，７－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｆｍｏｃ、２－フルオロ－Ｆｍｏｃ、ニトロベンゼンスルホニル、ベンゾチアゾール－２－スルホニル、２，２，２－トリクロロエチルオキシカルボニル、ジチアサクシノイル、ｐ－ニトロベンジルオキシカルボニルのいずれか１つを含む、請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
前記カルボキシル保護基が、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、シリルエステル、２－（トリメチルシリルエチル）、（２－フェニル－２－トリメチルシリル）エチル、２－（トリメチルシリル）イソプロピル）、アリルエステル、２－クロロトリチル（２－Ｃｌ－Ｔｒｔ）、２，４－ジメトキシベンジル、２－フェニルイソプロピル、９－フルオレニルメチル、Ｄｍａｂ、カルバモイルメチル、フェナシル、ｐ－ニトロベンジル、４，５－ジメトキシ－２－ニトロベンジル、１，１－ジメチルアリルのいずれか１つを含む、請求項１～２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項4】
前記フェノール保護基が、トリイソプロピルシリルエーテル（ＴＩＰＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＤＭＳ）、メチルエーテル、ベンジルエーテル（Ｂｎ）、メトキシメチルアセタール（ＭＯＭ）、２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアセタール、ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、２－クロロトリチル、トリチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、Ｂｏｃのいずれか１つを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項5】
前記脱離基が、ハロ、ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシベンゾトリアゾール、ペンタフルオロフェノール、炭酸イミダゾール、Ｏ－アシルイソ尿素のいずれか１つを含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項6】
式２：【化3】
【請求項7】
Ｒ１が、ＦｍｏｃまたはＢｏｃである、請求項６に記載の化合物。
【請求項8】
式１：【化4】
Ｘが、水素、またはフェノール保護基であり、
Ｒ１が、アミン保護基を含み、
Ｒが、固相に結合したリンカー基である、
化合物またはその塩。
【請求項9】
前記アミン保護基が、Ｆｍｏｃであるか、またはＦｍｏｃを含む、請求項８に記載の化合物。
【請求項10】
ＸがＨである、請求項８または９に記載の化合物。
【請求項11】
その任意の塩を含む目的のペプチド配列を合成する方法であって、前記目的のペプチド配列が、式３：【化5】
（ｉ）前記化合物の前記アミン保護基を脱保護することと、
（ｉｉ）Ｎ保護アミノ酸部分を前記化合物にカップリングさせることと、
（ｉｉｉ）前記固相をアミン塩基と接触させ、それにより、前記固相に連結した前記目的のペプチド配列を得ることと
を含む、方法。
【請求項12】
前記アミン塩基が、Ｆｍｏｃ脱保護剤である、請求項１１に記載の方法。
【請求項13】
前記アミン塩基が、それらの任意の組み合わせを含む、一級アミン、二級アミン、グアニジン系化合物、およびアミジン系化合物から選択される、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項14】
任意選択で、ステップ（ｉｉｉ）を行う前に前記Ｎ保護アミノ酸部分を脱保護するステップ（ｉｖ）を行うことを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項15】
前記ステップ（ｉｉｉ）を行う前に、前記ステップ（ｉｉ）および前記ステップ（ｉｖ）を続いて繰り返すことをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項16】
前記ペプチド配列を前記固体担体から切断し、それにより、前記目的のペプチド配列を得ることをさらに含む、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項17】
前記ステップ（ｉｉ）が、前記固相を、１～５モル当量の前記Ｎ保護アミノ酸部分を含むカップリング組成物と接触させることを含む、請求項１１～１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項18】
前記Ｎ保護アミノ酸部分が、任意選択で、前記Ｎ保護アミノ酸部分の活性エステルを含む、請求項１１～１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項19】
前記カップリング組成物が、塩基を実質的に欠いている、請求項１８に記載の方法。
【請求項20】
前記ステップ（ｉｉ）が、前記固相を、１～５モル当量の前記Ｎ保護アミノ酸部分を含むカップリング組成物と接触させることを含む、請求項１１～１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項21】
前記目的のペプチド配列が、以下：【化6】
【請求項22】
本発明の方法によって合成されるペプチドであって、以下：【化7】
を含み、（ｉ）４６６．４ＤａのＭＷ、（ｉｉ）約０．７の相対保持時間（ＲＲＴ）、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方によって特徴づけられる微量の不純物をさらに含む、ペプチド。
【請求項23】
前記不純物が、以下：【化8】
【請求項24】
（ｉ）１２６３．５ＤａのＭＷ、（ｉｉ）約１．２７の相対保持時間（ＲＲＴ）、または（ｉ）および（ｉｉ）の両方によって特徴づけられる不純物を欠いている、請求項２２または２３のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項25】
前記不純物の前記ＲＲＴが、分析法Ａを介して決定される、請求項２２～２４のいずれか一項に記載のペプチド。
【請求項26】
式３Ａ：【化9】
（ｉ）化合物：
【化10】
（ｉｉ）前記固相をアミン塩基と接触させ、それにより、前記固相に連結した前記目的のペプチド配列を得ることと
を含む、方法。
【請求項27】
前記アミン塩基が、Ｆｍｏｃ脱保護剤である、請求項２６に記載の方法。
【請求項28】
前記アミン塩基が、それらの任意の組み合わせを含む、一級アミン、二級アミン、三級アミン、グアニジン系化合物、およびアミジン系化合物から選択される、請求項２６または２７に記載の方法。
【請求項29】
（ｉｉｉ）前記アミン保護基を脱保護して脱保護されたＮ末端アミンを得ることと、（ｉｖ）次のＮ保護アミノ酸を前記脱保護されたＮ末端アミンにカップリングさせることとをさらに含み、ステップ（ｉｉｉ）および（ｉｖ）が、ステップ（ｉｉ）を行う前に行われる、請求項２６～２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
ステップ（ｉｉｉ）および（ｉｖ）が、続いて行われ、任意選択で１回以上繰り返される、請求項２９に記載の方法。
【請求項31】
前記固相に連結した前記目的のペプチド配列の切断を行って、前記目的のペプチド配列を得ることをさらに含む、請求項２６～３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
Ｒ６が、以下：【化11】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本出願は、２０２１年４月２１日に出願された米国仮特許出願第６３／１７７，４２０号の優先権の利益を主張し、その内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本発明は、チロシン－ホスホリルコリンコンジュゲート、およびペプチド誘導体の合成などのためのその使用を対象とする。
【背景技術】
【0003】
眼炎症、眼の任意の部分の炎症は、最も一般的な眼疾患の１つである。眼炎症は、広範な眼の炎症性疾患を指し、その１つはぶどう膜炎である。これらの疾患は、全年齢層に広まっており、クローン病、ベーチェット病、若年性特発性関節炎および他の疾患などの全身性疾患と関連し得る。炎症は、ドライアイおよび乾性黄斑変性などの他の一般的な眼症状とも関連し得る。いくつかの薬物は、ぶどう膜炎および／またはドライアイを引き起こす既知の副作用を有する。眼炎症の最も一般的な処置は、ステロイド、特にコルチコステロイドである。しかしながら、これらの処置は、いくつかの既知の、しばしば重度の副作用を有する。
【0004】
ホスホリルコリン（ＰＣ）は、蠕虫類が宿主中で生存するのを可能にする、蠕虫類によって分泌される双性イオン小分子であり、一部の細菌およびアポトーシス細胞の表面と同様に免疫寛容の状況を誘導する。タフトシン－ホスホリルコリン（ＴＲＳ）は、免疫調節活性を有する二重特異性小分子である。ＴＲＳ（Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒ－ＰＣ）は、免疫調節ペプチド誘導体である。
【0005】
現在、ＴＲＳは、ＰＣ部分をチロシンのフェノール環にカップリングさせるためにＴｈｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｔｙｒの合成後修飾によって合成されている。しかしながら、この合成手法は非常に低い収率をもたらし、したがって、ＴＲＳの合成を、有効でない、費用のかかるものにする。ＴＲＳを合成する新規の単純かつ効率的な方法が強く求められている。
【発明の概要】
【0006】
本発明の一態様では、化合物またはその塩が存在し、化合物は、式１：
によって表され、式中、Ｒ１は、水素またはアミン保護基であり、
Ｘは、水素、フェノール保護基、または
であり、Ｒ２は、天然または非天然アルファアミノ酸の側鎖であり、Ｒは、水素、カルボキシル保護基、脱離基、固相のリンカー基であるかまたは存在しない。
【化1】
Ｘは、水素、フェノール保護基、または
【化2】
【0007】
一実施形態では、化合物は、式２：
によって表され、式中、Ｒ１は、前記アミン保護基を含む。
【化3】
【0008】
別の態様では、式３：
によって表される目的の化合物を合成する方法が存在し、式中、各Ｒ４は、Ｈ、アミノ酸、ペプチド、ポリアミノ酸を含む群から独立して選択され、少なくとも１つのＲ４は、Ｈではなく、Ｒ５は、水素、または固相に結合したリンカー基であり、方法は、固相に連結した本発明の化合物を提供することと：
（ｉ）前記化合物の前記アミン保護基を脱保護することと、
（ｉｉ）Ｎ保護アミノ酸部分を前記化合物にカップリングさせることと、
（ｉｉｉ）前記固相を、環状アミン部分を含む組成物と接触させ、それにより、固相に連結した前記目的の化合物を得ることと
を含む。
【化4】
（ｉ）前記化合物の前記アミン保護基を脱保護することと、
（ｉｉ）Ｎ保護アミノ酸部分を前記化合物にカップリングさせることと、
（ｉｉｉ）前記固相を、環状アミン部分を含む組成物と接触させ、それにより、固相に連結した前記目的の化合物を得ることと
を含む。
【0009】
一実施形態では、方法は、任意選択で、ステップ（ｉｉｉ）を行う前に前記Ｎ保護アミノ酸部分を脱保護するステップ（ｉｖ）を行うことを含む。
【0010】
一実施形態では、方法は、前記ステップ（ｉｉｉ）を行う前に、前記ステップ（ｉｉ）および前記ステップ（ｉｖ）を続いて繰り返すことをさらに含む。
【0011】
一実施形態では、前記ステップ（ｉｉ）は、前記固相を、１～５モル当量の前記Ｎ保護アミノ酸部分を含むカップリング組成物と接触させることを含む。
【0012】
一実施形態では、化合物は、以下：
を含む。
【化5】
【0013】
別段の定義がない限り、本明細書で使用されるすべての技術および／または科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または均等な方法および材料が、本発明の実施形態の実施または試験に使用され得るが、例示的な方法および／または材料が、以下に記載される。矛盾がある場合、定義を含む特許明細書が優先する。さらに、材料、方法、および実施例は、例示にすぎず、必ずしも限定を意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【0014】
【発明を実施するための形態】
【0015】
本発明は、そのいくつかの実施形態において、アゾ結合を介してＰＰＣで修飾されたＮ保護チロシンを含む化合物を提供する。本発明は、そのいくつかの実施形態において、無保護チロシン側鎖を有する本発明の化合物をＴＲＳのＳＰＰＳ合成にうまく実装することができるという驚くべき発見に少なくとも部分的に基づく。発明者らは、驚くべきことに、本発明の化合物（チロシンの無保護フェノール基を有する）を実装することによって行われるＴＲＳのＳＰＰＳ合成が、合成収率の劇的な改善をもたらし、所望のＴＲＳを高純度で提供することを見出した。
【0016】
本発明の一態様では、式１：
によって表される化合物であって、Ｘは水素、フェノール保護基、または
である、化合物および／またはその塩が存在し、式中、各Ｒ１は、独立して水素もしくはアミン保護基であるかまたはそれらを含み、Ｒ２は、天然または非天然アルファアミノ酸（保護または無保護）の側鎖であり、Ｒは、水素、カルボキシル保護基、脱離基、固相のリンカー基であるかまたは存在しない。
【化6】
【化7】
【0017】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物の塩は、リン酸塩を含む。いくつかの実施形態では、本発明の化合物の塩は、本明細書に開示される化合物のいずれか１つのリン酸塩、例えば、脱プロトン化リン酸基を指す。いくつかの実施形態では、本発明の化合物の塩は、式Ｉ：
によって表される。
【化8】
【0018】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物の塩は、式１またはＩおよびその対イオン（例えば、対カチオンおよび／もしくは対アニオン）によって表される化合物を含む。
【0019】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式１によって表される化合物のリン酸塩を含む。Ｒ１がＨであるいくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式１によって表される化合物のリン酸塩および／またはアンモニウム塩を含む。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式１によって表される化合物および対イオンを含む。いくつかの実施形態では、対イオンは、一価カチオンを含む。いくつかの実施形態では、対イオンは、多価カチオン（例えば、二価および／または三価カチオン）を含む。いくつかの実施形態では、対イオンは、対アニオン（例えば、一価対アニオンおよび／または多価対アニオン）を含む。
【0020】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は水素である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、保護基であるか、または保護基を含む。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、アミン保護基であるか、またはアミン保護基を含む。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、ペプチド固相合成（ＳＰＰＳ）の条件下で切断可能（または除去可能）である。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、ＳＰＰＳで適用される脱保護条件のいずれかの下で切断可能である（例えば、脱保護または切断を受けて遊離の無保護アミンをもたらす）。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、酸に不安定なアミン保護基および塩基に不安定なアミン保護基から選択される。
【0021】
いくつかの実施形態では、アミン保護基は、ＳＰＰＳと適合性である。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、ＳＰＰＳと適合性である条件下で切断可能である。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、ＦｍｏｃまたはＢｏｃの脱保護に適した条件下で切断可能である。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、Ｆｍｏｃ脱保護に適した条件下で切断可能である。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、Ｂｏｃ脱保護に適した条件下で切断可能である。いくつかの実施形態では、ＦｍｏｃまたはＢｏｃ脱保護に適した条件は、固相ベースの合成（例えば、ＳＰＰＳ）で適用される条件を指す。
【0022】
いくつかの実施形態では、アミン保護基は、固相Ｆｍｏｃ脱保護に適した条件下で切断可能である。いくつかの実施形態では、アミン保護基は、固相Ｂｏｃ脱保護に適した条件下で切断可能である。ＦｍｏｃまたはＢｏｃの固相脱保護の条件は、当該技術分野で周知である。例えば、Ｆｍｏｃの固相脱保護の条件は、特に、有機溶媒中の２０％ピペリジン（またはＤＢＵ）溶液を含む。
【0023】
いくつかの実施形態では、アミン保護基は、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、Ａｌｌｏｃ、Ｄｄｅ、ｉｖ－Ｄｄｅ、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、２－［ビフェニリル－（４）］－プロピル－２－オキシカルボニル、ジメチル－３，５ジメトキシベンジルオキシカルボニル、２－（４－ニトロフェニルスルホニル）エトキシカルボニル、１，１－ジオキソベンゾ［ｂ］チオフェン－２－イルメチルオキシカルボニル、２，７－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－Ｆｍｏｃ、２－フルオロ－Ｆｍｏｃ、ニトロベンゼンスルホニル、ベンゾチアゾール－２－スルホニル、２，２，２－トリクロロエチルオキシカルボニル、ジチアサクシノイル、ｐ－ニトロベンジルオキシカルボニルのいずれか１つを含む。
【0024】
いくつかの実施形態では、アミン保護基は、ＢｏｃまたはＦｍｏｃである。
【0025】
いくつかの実施形態では、化合物は、本明細書に記載されたとおりであり、Ｒ１は、アセチル基を欠いている。いくつかの実施形態では、化合物は、本明細書に記載されたとおりであり、Ｒ１は、アシル基を欠いている。
【0026】
いくつかの実施形態では、カルボキシル保護基は、ＳＰＰＳと適合性である保護基を含む。
【0027】
いくつかの実施形態では、カルボキシル保護基は、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、シリルエステル（例えば、２－トリメチルシリルエチル）、（２－フェニル－２－トリメチルシリル）エチル、２－（トリメチルシリル）イソプロピル）、アリルエステル、２－クロロトリチル（２－Ｃｌ－Ｔｒｔ）、２，４－ジメトキシベンジル、２－フェニルイソプロピル、９－フルオレニルメチル、Ｄｍａｂ、カルバモイルメチル、フェナシル、ｐ－ニトロベンジル、４，５－ジメトキシ－２－ニトロベンジル、１，１－ジメチルアリルのいずれか１つを含む。他のカルボキシル保護基が、当該技術分野で周知である。
【0028】
いくつかの実施形態では、フェノール保護基は、ＳＰＰＳと適合性である保護基を含む。
【0029】
いくつかの実施形態では、Ｒは、固相に結合したリンカー基（本明細書では切断可能なリンカーとも呼ばれる）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、「固相」という用語および「固体担体」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。本明細書で使用される場合、「固相」という用語は、粒子の形態のポリマー樹脂（通常、１μｍ～１ｍｍの範囲の平均直径を有するポリマービーズ）を指す。いくつかの実施形態では、固相は、ＳＰＰＳプロセスと適合性である固相であるか、またはそれを含む（例えば、固相および本発明の化合物に共有結合したリンカー、またはそれを含む伸長するペプチド鎖は、ＳＰＰＳ中に適用される条件下で化学的および／または物理的に安定である）。
【0030】
固体担体の非限定的な例としては、ＰＡＭ、クロロトリチル、Ｒｉｎｋアミド、およびＷａｎｇが挙げられるが、これらに限定されない。固相合成（例えば、ペプチド合成）用の他の市販の樹脂が、当該技術分野で周知である。
【0031】
ＳＰＰＳプロセスと適合性である固相は切断可能なリンカーをさらに含むことを、当業者なら理解するであろう。化合物またはそれから誘導されるポリペプチドが固体担体から切断されることを可能にする化学部分（例えば、ＭＢＨＡリンカー）を含む様々な切断可能なリンカーが、当該技術分野で周知である
【0032】
いくつかの実施形態では、化合物または化合物から誘導されるポリペプチドは、切断可能なリンカーを介して固体担体に共有結合する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、固体担体および本発明の化合物またはそれから誘導されるポリペプチドに共有結合する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、カルボニル基またはアミノ基を介して本発明の化合物に共有結合する。いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーは、Ｒを介して本発明の化合物に共有結合し、Ｒは結合を表す。いくつかの実施形態では、Ｒは、固相への共有結合を表す。
【0033】
いくつかの実施形態では、化合物または化合物から誘導されるポリペプチドは、切断可能な結合を介して固体担体に共有結合する。いくつかの実施形態では、切断可能な結合は、特定の切断条件下で分解するように構成される。切断可能な結合は、特定の切断溶液（通常、酸性溶液）に不安定であり、（通常、ＴＦＡベースの溶液などの酸性溶液を含む）切断溶液などの好適な切断条件下で、化合物またはそれから誘導されるポリペプチドを放出するように構成される。いくつかの実施形態では、切断可能な結合は、熱照射、ＵＶ照射、求核剤（例えば、水酸化物、アルコール、アミン、チオール、特に塩基性条件下でのヒドラジン）への曝露を含む、切断可能な結合の切断に適した任意の他の条件に不安定である。
【0034】
いくつかの実施形態では、固体担体に共有結合する本発明の化合物は、式１Ａ：
によって表され、式中、Ｒ１およびＸは、本明細書に記載されたとおりであり、Ｙは、ヘテロ原子を表し、
は、固体担体および／または固体担体に結合したリンカー（すなわち、切断可能なリンカー）を表す。いくつかの実施形態では、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、およびＳから選択される。
【化9】
【化10】
【0035】
いくつかの実施形態では、固体担体に共有結合する本発明の化合物は、式１Ａ１：
によって表され、式中、Ｒ１は、本明細書に記載されたとおりである。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式１Ａ１によって表され、式中、Ｒ１は、アミン保護基を表す。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式１Ａ１によって表され、式中、Ｒ１は、Ｈ、Ｂｏｃ、またはＦｍｏｃである。
【化11】
【0036】
いくつかの実施形態では、フェノール保護基は、トリイソプロピルシリルエーテル（ＴＩＰＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルエーテル（ＴＢＤＭＳ）、メチルエーテル、ベンジルエーテル（Ｂｎ）、メトキシメチルアセタール（ＭＯＭ）、２－（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアセタール、ｔｅｒｔ－ブチルエーテル、２－クロロトリチル、トリチル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、Ｂｏｃのいずれか１つを含む。
【0037】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、その活性エステルを含む。様々な活性エステルが、当該技術分野で公知であり、概して、いかなる触媒もなく求核剤と反応することが可能なカルボキシレートの安定な誘導体に関連する。
【0038】
いくつかの実施形態では、化合物の活性エステルは、式１によって表され、式中、Ｒは、脱離基であるか、または脱離基を含む。いくつかの実施形態では、脱離基は、本発明の化合物の遊離カルボキシ基をカップリング試薬と反応させることによって得られる活性エステルを含む。様々なカップリング試薬が、当該技術分野で周知であり、特に、ＨＡＴＵ、ＨＯＢｔ、ＰｙＢＯＰ、ＢＯＰ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、ＥＤＡＣなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、脱離基は、ハロ、ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシベンゾトリアゾール、ペンタフルオロフェノール、炭酸イミダゾール、Ｏ－アシルイソ尿素のいずれか１つを含む。
【0039】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、さらなる天然または非天然アミノ酸にさらに結合する。いくつかの実施形態では、結合は、ペプチド結合を介している。いくつかの実施形態では、結合は、化合物のアミノ基を介している。いくつかの実施形態では、アミノ酸に結合する本発明の化合物は、式１Ｂ：
によって表され、式中、Ｒ、Ｒ１、およびＸは、本明細書に記載されたとおりであり、Ｒ２は、天然または非天然アルファアミノ酸（保護または無保護）の側鎖である。
【化12】
【0040】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、本明細書に記載されたとおりであり、ＲおよびＸは水素である。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、本明細書に記載されたとおりであり、ＲおよびＸは水素であり、Ｒ１は水素またはアミン保護基である。
【0041】
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式２：
または式ＩＩ
によって表され、式中、Ｒ１は、上記のとおりである。
【化13】
【化14】
【0042】
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、Ｈまたはアミン保護基である。いくつかの実施形態では、Ｒ１は、ＦｍｏｃまたはＢｏｃである。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、式２によって表され、式中、Ｒ１は、ＦｍｏｃまたはＢｏｃである。本明細書に開示される化合物の１つの非限定的な例示的合成手順は、実施例の節で提供される。
【0043】
いくつかの実施形態では、ジアゾ化チロシンを含む目的のペプチド配列または化合物が提供され、本発明の方法によって合成され、ジアゾ化チロシンは、式３Ａ：
によって表され、式中、Ｒ６は、１つ以上の置換基を表し、波状の結合は、（ｉ）目的のペプチド配列、ならびに／または（ｉｉ）Ｒ１、Ｎ保護基、アシル、ＯＲ、Ｏ－、ＯＨ、およびＨのいずれか１つへの結合点を表す。いくつかの実施形態では、目的のペプチド配列は、式２Ａ：
によって表され、式中、各Ｚは、独立してペプチド、アミノ酸、ＮＨ、ＯＨ、もしくはＨであるかまたはそれらを含み、少なくとも１つのＺは、ペプチドである（例えば、Ｚはカルボキシ基に結合している）。
【化15】
【化16】
【0044】
いくつかの実施形態では、目的のペプチド配列は、微量の以下：
を含み、式中、Ｒ６は、本明細書に記載されたとおりである。いくつかの実施形態では、目的のペプチド配列は、以下
を欠き、式中、Ｒ６は、本明細書に記載されたとおりであり、波状の結合は、（ｉ）目的のペプチド配列、ならびに／または（ｉｉ）Ｒ１、Ｎ保護基、アシル、ＯＲ、Ｏ－、ＯＨ、およびＨのいずれか１つへの結合点を表す。
【化17】
【化18】
【0045】
いくつかの実施形態では、目的のペプチド配列は、本発明の方法によって合成されるＴＲＳであるかまたはそれを含み、ＴＲＳは、実施例の節に記載されるＨＰＬＣ不純物プロファイルの少なくとも１つの不純物を含み、不純物プロファイルは、本明細書に記載の分析法Ａを介して得られる。いくつかの実施形態では、不純物は、０．７の相対保持時間（ＲＲＴ）および／または４６６．４ＤａのＭＷによって特徴づけられる。いくつかの実施形態では、不純物（本明細書では０．７不純物とも呼ばれる）は、以下
であり、その任意の塩を含む。
【化19】
【0046】
いくつかの実施形態では、本発明の方法によって合成されるＴＲＳは、１．２７の相対保持時間（ＲＲＴ）および／または１２６３．５ＤａのＭＷによって特徴づけられる不純物（本明細書では１．２７不純物としても使用される）がなく、不純物プロファイルは、本明細書に記載の分析法Ａによって得られる。いくつかの実施形態では、本発明の方法によって合成されるＴＲＳは、１．２７不純物：
を欠いている。
【化20】
【0047】
【0048】
いくつかの実施形態では、本発明の方法によって合成される目的のペプチド配列は、分析用ＨＰＬＣにより決定した場合に、その間の任意の範囲を含む、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、少なくとも９９．５％の純度によって特徴づけられる。いくつかの実施形態では、本発明の方法によって合成される目的のペプチド配列は、実質的に純粋である。
【0049】
いくつかの実施形態では、「ペプチド配列」、「目的のペプチド配列」、および「目的のペプチド」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。
【0050】
本明細書で使用される場合、実質的に純粋とは、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および質量分析（ＭＳ）、ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ－ＭＳ）、ならびにそのような純度、またはさらなる精製が物質の酵素活性および生物活性などの物理的および化学的特性を検出可能に変更しないように十分に純粋であることを評価するために、当業者によって使用される類似の方法などの、標準的な分析方法により決定した場合に、容易に検出可能な不純物が十分に含まれていないことを意味する。実質的に化学的に純粋な化合物を生成する化合物の精製のための伝統的および現代的な方法の両方が、当業者に公知である。しかしながら、実質的に化学的に純粋な化合物は、立体異性体の混合物であり得る。
【0051】
いくつかの実施形態では、任意の医薬的に許容されるその塩を含む目的のペプチドを含む医薬組成物が提供され、目的のペプチドは、本発明の方法によって合成され、医薬品グレードの化合物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、任意の薬学的に許容されるその塩を含む目的のペプチドを、薬学的活性剤として含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、治療上有効量の目的のペプチドを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、任意の薬学的に許容されるその塩を含む目的のペプチドから本質的になる。
【0052】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、薬物として使用するため（例えば、それを必要とする対象における疾患および／または医学的状態を処置および／または防止するため）のものである。
【0053】
いくつかの実施形態では、「アミノ酸」という用語は、任意選択で１つ以上の保護基を含むＤおよび／またはＬ－アミノ酸を包含する。
【0054】
「アミノ酸」という用語は、本明細書で使用される場合、塩基性アミノ基および酸性カルボキシル基の両方を含有する有機化合物を意味する。天然に存在するアミノ酸、保護されたアミノ酸（例えば、アミノ酸のカルボキシル、アミン、および／または側鎖に１つ以上の保護基を含む）、異常な、天然に存在しないアミノ酸、ならびに遊離または結合形態で生物学的に生じることが知られているが、通常はタンパク質中に生じないアミノ酸が、この用語に含まれる。例えば、Roberts and Vellaccio (1983) The Peptides. 5: 342-429に開示されたものなどの、修飾および異常アミノ酸が、この用語に含まれる。修飾、異常、または天然に存在しないアミノ酸としては、Ｄ－アミノ酸、ヒドロキシリジン、４－ヒドロキシプロリン、Ｎ－Ｃｂｚ－保護アミノ吉草酸（Ｎｖａ）、オルニチン（Ｏ）、アミノオクタン酸（Ａｏｃ）、２，４－ジアミノ酪酸（Ａｂｕ）、ホモアルギニン、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、Ｎ－メチルアミノ酪酸（ＭｅＢ）、２－ナフチルアラニン（２Ｎｐ）、アミノヘプタン酸（Ａｈｐ）、フェニルグリシン、β－フェニルプロリン、ｔｅｒｔ－ロイシン、４－アミノシクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、Ｎ－メチル－ノルロイシン、３，４－デヒドロプロリン、Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノグリシン、Ｎ－メチルアミノグリシン、４－アミノピペチジン－４－カルボン酸（4-aminopipetdine-4-carboxylic acid）、６－アミノカプロン酸、トランス－４－（アミノメチル）－シクロヘキサンカルボン酸、２－、３－、および４－（アミノメチル）－安息香酸、１－アミノシクロペンタンカルボン酸、１－アミノシクロプロパンカルボン酸、シアノプロピオン酸、２－ベンジル－５－アミノペンタン酸、ノルバリン（Ｎｖａ）、４－Ｏ－メチル－トレオニン（ＴＭｅ）、５－Ｏ－メチル－ホモセリン（ｈＳＭ）、ｔｅｒｔ－ブチルアラニン（ｔＢｕ）、シクロペンチルアラニン（Ｃｐａ）、２－アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、Ｎ－メチルグリシン（ＭｅＧ）、Ｎ－メチルアラニン（ＭｅＡ）、Ｎ－メチルフェニルアラニン（ＭｅＦ）、２－チエニルアラニン（２Ｔｈ）、３－チエニルアラニン（３Ｔｈ）、Ｏ－メチルチロシン（ＹＭｅ）、３－ベンゾチエニルアラニン（Ｂｚｔ）、ならびにＤ－アラニン（ＤＡｌ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【0055】
本明細書で使用される場合、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、交換可能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。
【0056】
「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、天然ペプチド、ベータペプチドなどのペプチド誘導体、ペプチド模倣体（典型的には、非ペプチド結合または他の合成修飾を含む）、ならびにペプチド類似体であるペプトイドおよびセミペプトイド、またはそれらの任意の組み合わせを包含する。別の実施形態では、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」という用語は、少なくとも１つのアミノ酸残基が、対応する天然に存在するアミノ酸の人工的な化学的類似体であるアミノ酸ポリマーに適用される。
【0057】
「誘導体」または「化学誘導体」という用語は、ペプチド内の側鎖または任意の官能基上での反応によって化学的に誘導体化された１つ以上の残基を有するポリペプチドの任意の化学誘導体を含む。そのような誘導体化分子としては、例えば、１つ以上の保護基（例えば、側鎖保護基（単数もしくは複数）および／もしくはＮ末端保護基）を有するペプチド、ならびに／または遊離アミノ基が誘導体化されてアミン塩酸塩、p-トルエンスルホニル基、カルボベンゾキシ基、ｔ－ブチルオキシカルボニル基、アセチル基、もしくはホルミル基を形成しているペプチドが挙げられる。遊離カルボキシル基を誘導体化して、そのアミド、塩、メチルおよびエチルエステル、または他のタイプのエステル、またはヒドラジドを形成してもよい。遊離ヒドロキシル基を誘導体化して、Ｏ－アシルまたはＯ－アルキル誘導体を形成してもよい。ヒスチジンのイミダゾール窒素を誘導体化してＮ－イム－ベンジルヒスチジン（N-im-benzylhistidine）を形成してもよい。２０種の標準的なアミノ酸残基の１つ以上の天然に存在するアミノ酸誘導体を含有するペプチドも、化学誘導体として含まれる。例えば、４－ヒドロキシプロリンを、プロリンの代わりに置換してもよく、５－ヒドロキシリジンを、リジンの代わりに置換してもよく、３－メチルヒスチジンを、ヒスチジンの代わりに置換してもよく、ホモセリンを、セリンの代わりに置換してもよく、Ｄａｂ、Ｄａａ、および／またはオルニチン（Ｏ）を、リジンの代わりに置換してもよい。
【0058】
さらに、ペプチド誘導体は、末端ＮＨ２アシル化、アセチル化、またはチオグリコール酸アミド化が挙げられるがこれらに限定されない化学修飾により、ならびに例えばアンモニア、メチルアミンなどでの末端および／または側鎖カルボキシ基のアミド化により、本発明のペプチドの天然の配列とは異なり得る。ペプチドは、当該技術分野で公知の方法を使用して達成され得る任意の立体構造を有する直鎖状、環状、または分岐状などのいずれかであり得る。
【0059】
方法
別の態様では、目的の化合物および／またはその任意の塩を合成する方法が存在し、目的の化合物は、式３：
によって表され、式中、各Ｒ４は、Ｈ、アミノ酸、ペプチド、ポリアミノ酸を含む群から独立して選択され、少なくとも１つのＲ４は、Ｈではなく、Ｒ５は、水素、または固相に結合したリンカー基であり、方法は、本発明の化合物を提供すること：すなわち
（ｉ）本発明の化合物のアミン保護基を脱保護することと、
（ｉｉ）Ｎ保護アミノ酸部分を本発明の化合物にカップリングさせ、それにより、固相に結合したペプチド鎖の伸長を誘導することと、
（ｉｉｉ）伸長するペプチド鎖をアミン塩基と接触させ、それにより、固相に結合した目的の化合物を得ることと
を含み、本発明の化合物は、式１：
の化合物であるか、またはそれを含み、式中、Ｘは、水素、またはフェノール保護基であり、Ｒ１は、アミン保護基を含み、Ｒは、固相に結合したリンカー基を表す。いくつかの実施形態では、「固相」および「固体担体」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。いくつかの実施形態では、目的の化合物は、ペプチドを含み、ペプチドの配列は、本明細書に記載のジアゾ化チロシン（例えば、Ｔｙｒ－ＰＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、ジアゾ化チロシンは、Ｎ末端、Ｃ末端、および／またはペプチド配列内に位置する。
別の態様では、目的の化合物および／またはその任意の塩を合成する方法が存在し、目的の化合物は、式３：
【化21】
（ｉ）本発明の化合物のアミン保護基を脱保護することと、
（ｉｉ）Ｎ保護アミノ酸部分を本発明の化合物にカップリングさせ、それにより、固相に結合したペプチド鎖の伸長を誘導することと、
（ｉｉｉ）伸長するペプチド鎖をアミン塩基と接触させ、それにより、固相に結合した目的の化合物を得ることと
を含み、本発明の化合物は、式１：
【化22】
【0060】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、固相に結合した本発明の化合物を提供し、続いてステップｉ～ｉｉｉを行うことによって、目的の化合物を合成することを含み、固相に結合した本発明の化合物は、式１Ａによって表され、式中、Ｒ１は、アミン保護基（例えば、Ｆｍｏｃ）であるかまたはそれを含み、Ｘは、水素であり、Ｙは、本明細書に記載されたとおりである。いくつかの実施形態では、固相に結合した本発明の化合物は、式１Ａによって表され、式中、Ｒ１は、アミン保護基（例えば、Ｆｍｏｃ）であるかまたはそれを含み、Ｘは、水素であり、Ｙは、Ｏである。いくつかの実施形態では、ステップｉ～ｉｉｉは、順序どおりに行われる。
【0061】
別の態様では、本発明の方法は、固相に結合した本発明の化合物を提供し、続いて、
‐Ｎ保護アミノ酸部分を本発明の化合物のＮ末端にカップリングさせ、それにより、固相に結合したペプチド鎖の伸長を誘導するステップ、および
‐伸長するペプチド鎖（および／またはそれに結合した固相）を十分な量のアミン塩基と接触させ、それにより、固相に結合した目的の化合物を得るステップ
を行うことを含み、本発明の化合物は、式１：
の化合物であるか、またはそれを含み、式中、Ｘは、水素、またはフェノール保護基であり、Ｒ１は、Ｈであり、Ｒは、固相に結合したリンカー基を表す。いくつかの実施形態では、ＸはＨである。
‐Ｎ保護アミノ酸部分を本発明の化合物のＮ末端にカップリングさせ、それにより、固相に結合したペプチド鎖の伸長を誘導するステップ、および
‐伸長するペプチド鎖（および／またはそれに結合した固相）を十分な量のアミン塩基と接触させ、それにより、固相に結合した目的の化合物を得るステップ
を行うことを含み、本発明の化合物は、式１：
【化23】
【0062】
別の態様では、式Ａ－Ｘ－Ｂ－ＮＨ２によって表される目的のペプチド配列を合成する方法が提供され、式中、Ａは、第１のアミノ酸または第１のアミノ酸配列を表し、Ｂは、第２のアミノ酸または第２のアミノ酸配列を表し、Ｘは、以下：
を表し、波状の結合は、ペプチド配列への結合点を表し、方法は、
‐固相に結合した第１のアミノ酸または第１のアミノ酸配列を提供することと、
‐脱保護ステップを行って、脱保護された第１のアミノ酸または脱保護された第１のアミノ酸配列（例えば、脱保護されたＮ末端アミンを含む）を得ることと、
‐脱保護された第１のアミノ酸または脱保護された第１のアミノ酸配列を、その任意の塩を含む式ＩＩまたは２のいずれか１つの化合物にカップリングさせることであって、式中、Ｒ１がアミン保護基を含むことと、
‐アミン保護基を脱保護して脱保護されたＮ末端アミンを得ることと、
‐第２のアミノ酸をカップリングさせること、または第２のアミノ酸配列のＳＰＰＳを行うことと、
‐続いてステップｉｉｉを行い、それにより、固相に結合した目的のペプチド配列を得ることと
を含む。
【化24】
‐固相に結合した第１のアミノ酸または第１のアミノ酸配列を提供することと、
‐脱保護ステップを行って、脱保護された第１のアミノ酸または脱保護された第１のアミノ酸配列（例えば、脱保護されたＮ末端アミンを含む）を得ることと、
‐脱保護された第１のアミノ酸または脱保護された第１のアミノ酸配列を、その任意の塩を含む式ＩＩまたは２のいずれか１つの化合物にカップリングさせることであって、式中、Ｒ１がアミン保護基を含むことと、
‐アミン保護基を脱保護して脱保護されたＮ末端アミンを得ることと、
‐第２のアミノ酸をカップリングさせること、または第２のアミノ酸配列のＳＰＰＳを行うことと、
‐続いてステップｉｉｉを行い、それにより、固相に結合した目的のペプチド配列を得ることと
を含む。
【0063】
いくつかの実施形態では、方法は、ペプチド配列の切断を行って目的のペプチド配列を得ることをさらに含む。
【0064】
いくつかの実施形態では、方法のステップの各々（例えば、ステップｉ～ｉｉｉ）は、対応する試薬の溶液を適用することによって行われる。固相反応は、試薬と伸長する鎖または化合物との間の反応を誘導するように、伸長する鎖または化合物と接触している固体担体に試薬を含む溶液を適用することによって行われることを、当業者なら理解するであろう。さらに、固体担体上での反応は、樹脂に十分な膨潤を提供するように採用された溶媒を必要とし、それにより、反応を容易にするか、または各ステップの反応収率を改善することは明らかなはずである。さらに、溶媒は、樹脂と適合性でなければならず、例えば、溶媒は、樹脂の物理的または化学的分解を誘導することなく、樹脂に対して不活性でなければならない。ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＮＭＰなどの様々な溶媒を、固相反応に実装することができる。固相反応に好適であるかまたは適合性である他の溶媒が、当該技術分野で公知である。的確な溶媒は、樹脂の化学組成、樹脂膨潤、溶媒が試薬のいずれかを溶解する能力などに依存し、好ましくは、乾燥溶媒が、本発明の方法のステップのいずれか１つに使用される。特に、方法のステップｉｉに乾燥溶媒（含水量１％未満）を使用することが望ましい。
【0065】
いくつかの実施形態では、方法のステップの各々（例えば、ステップｉ～ｉｉｉ）は、顕著な変換、例えば、その間の任意の範囲を含む少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％の反応収率を誘導するために十分な条件下で行われる。いくつかの実施形態では、方法のステップの各々（例えば、ステップｉ～ｉｉｉ）は、空気雰囲気下、その間の任意の範囲を含む１０～５０℃の範囲の温度で行われる。いくつかの実施形態では、方法のステップの各々（例えば、ステップｉ～ｉｉｉ）は、溶媒の沸点未満の温度で行われる。
【0066】
いくつかの実施形態では、方法のステップの各々（例えば、ステップｉ～ｉｉｉ）は、１回行われる。いくつかの実施形態では、方法のステップのいずれか１つ（例えば、ステップｉ～ｉｉｉのいずれか１つ）は、繰り返される。いくつかの実施形態では、方法のステップのいずれか１つは、複数回（例えば、２～２０回、２～４回、４～６回、６～１０回、１０～２０回（間の任意の範囲を含む））行われる。いくつかの実施形態では、方法のステップのいずれか１つは、１回行われるか、または反応が完了するまで複数回行われる。当業者であれば、反応がいつ完了するかを決定することができるであろう。例えば、カップリング（ステップｉｉ）の変換効率を、ニンヒドリン試験（カイザー試験とも呼ばれる）を行うことによって決定することができる。脱保護ステップｉの効率を、脱保護溶液のＵＶ吸光度を測定すること、したがって、切断されたアミン保護基（例えば、Ｆｍｏｃ脱保護の）の濃度を決定することによって、決定することができる。さらに、本発明のステップのいずれかの持続時間を、本明細書に記載されるように各ステップの収率をモニターすることによって、最高効率を得るように調節することができる。
【0067】
いくつかの実施形態では、本発明の方法のステップｉは、固体担体に結合した化合物または伸長する鎖に、少なくとも１秒、少なくとも１分（ｍ）、少なくとも５ｍ、少なくとも１０ｍ、少なくとも２０ｍ（間の任意の範囲を含む）の期間、脱保護溶液を適用することを含む。いくつかの実施形態では、ステップｉは、アミンの脱保護またはアミン保護基の切断をもたらす。
【0068】
いくつかの実施形態では、脱保護溶液は、適切な量の脱保護剤（例えば、酸または塩基）を、アミン保護基の、その間の任意の範囲を含む少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、少なくとも９９．９％の脱保護に十分な量で含む。様々な脱保護溶液が、当該技術分野で周知である（Ｆｍｏｃ脱保護のための２０％ピペリジン溶液、またはＢｏｃ脱保護のための５０％ＴＦＡ溶液など）。
【0069】
いくつかの実施形態では、本発明の方法のステップｉｉは、固体担体に結合した化合物または伸長する鎖に、その間の任意の範囲を含む少なくとも１分（ｍ）、少なくとも５ｍ、少なくとも１０ｍ、少なくとも２０ｍ、少なくとも３０ｍ、少なくとも１時間、少なくとも１０ｈ、またはそれ以上の期間、カップリング溶液を適用することを含み、カップリング溶液は、十分な量のアミノ酸部分を含む。いくつかの実施形態では、本発明のステップｉｉは、アミノ基と次のアミノ酸との間のペプチド結合の形成をもたらす（または、次のアミノ酸のカップリングをもたらす）。いくつかの実施形態では、本発明の方法のステップｉｉは、アミノ酸部分（例えば、Ｎ保護アミノ酸部分）を本発明の化合物のアミノ基にカップリングさせ、それにより、固相上での鎖の伸長を誘導することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法のステップｉｉは、ペプチド鎖を伸長させるためである。いくつかの実施形態では、本発明の方法のステップｉｉは、固相に結合した伸長するペプチド鎖の伸長を誘導する。
【0070】
いくつかの実施形態では、アミノ酸部分は、Ｎ保護アミノ酸部分を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸部分は、アミノ酸の活性エステルを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸部分は、アミノ酸のＮ保護活性エステルを含む。活性エステルは、上記のとおりである。いくつかの実施形態では、アミノ酸部分は、アミノ酸を含む。
【0071】
いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、十分な量のＮ保護アミノ酸部分、および任意選択で、十分な量の有機塩基（ＤＩＰＥＡまたはコリジンなど）を含む。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、十分な量のＮ保護アミノ酸部分、および任意選択で、十分な量のカップリング剤を含む。
【0072】
いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、十分な量のＮ保護アミノ酸およびカップリング剤を含む。カップリング剤は、当該技術分野でよく知られており、例示的なカップリング剤は、上記のとおりである。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、１～２モル当量（化合物または伸長する鎖のアミンに対して）のＮ保護アミノ酸およびカップリング剤を含む。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、１～２モル当量のＮ保護アミノ酸およびカップリング剤を含み、塩基を欠いている。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、１～５モル当量（間の任意の範囲を含む）のＮ保護アミノ酸およびカップリング剤を含み、塩基を欠いている。
【0073】
いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、１～５モル当量（間の任意の範囲を含む）のＮ保護アミノ酸部分を含み、カップリング剤および塩基を欠いている。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、１～５、１～２、２～４モル当量（間の任意の範囲を含む）のアミノ酸のＮ保護活性エステル（例えば、ＮＨＳエステル）を含み、カップリング剤および塩基を欠いている。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、その間の任意の範囲を含む４モル当量未満、３モル当量未満、２モル当量未満、１．６モル当量未満の塩基を含む（例えば、三級アミンなどの有機アミン塩基）。
【0074】
いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、１～６、１～４、１～２、２～４モル当量のＮ保護アミノ酸部分を含む。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、Ｎ保護アミノ酸部分を、その間の任意の範囲を含む、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、少なくとも９９．９％のカップリング収率のために十分な量で含む。いくつかの実施形態では、カップリング溶液は、Ｎ保護アミノ酸部分を、伸長する鎖の遊離アミン基への選択的カップリングをもたらすために十分な量で含む。本明細書で使用される場合、カップリング選択性という用語は、アミノ基へのカップリングとチロシンのフェノール環のヒドロキシ基へのカップリングとの比率を指す。
【0075】
スキーム１に表されるように、カップリングは、アミノ基（伸長する鎖のＮ末端）およびチロシン側鎖のＯＨ基の両方で起こり得る。ＯＨ－カップリング副生成物を最小限にするために、カップリング選択性を最大限にすることが望ましい。
【化25】
【0076】
カップリング溶液の厳密な組成は、アミノ酸部分に依存し、任意選択で特定のカップリング剤に依存することを、当業者なら理解するであろう。さらに、カップリング溶液の厳密な組成は、カップリング段階の選択性および収率に基づいて調節することができる。非限定的な例示的カップリング溶液は、実施例の節に記載されるとおりである。
【0077】
いくつかの実施形態では、方法のステップ（例えば、ステップｉ～ｉｉｉ）は、順序どおりに行われる。
【0078】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、本発明の化合物を固相にロードし、それにより、固相に結合した本発明の化合物を得るステップを行うことを含む。ローディングは、周知の手順に従って行われる。
【0079】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ステップｉｉｉを行い、それにより、上記スキーム１に示されるような、チロシンの（例えば、フェノール環の）ヒドロキシ基にカップリングした伸長する鎖を含む副生成物を除去することを含む。実施例の節に記載されるように、本発明者らは、ジアゾ化チロシンを含むペプチド（例えば、ＴＲＳ）のＳＰＰＳの新規手法を行った。スキーム１に例証されるように、本明細書に記載のＳＰＰＳ経路を実装することによって、発明者らは、ジアゾ化チロシンの無保護フェノール環で起こる副反応による著しい副生成物の形成を観察した（例えば化合物１３、以下のスキーム２を参照）。したがって、所望の生成物を十分な収率で得るために、副生成物を切断しなければならない。
【0080】
この目的のために、本発明は、そのいくつかの実施形態において、副生成物の除去のための効率的で単純な手順（本明細書に記載される本発明のステップｉｉｉ）を提供し、したがって、ＴＲＳなどのジアゾ化チロシンを含むペプチドのＳＰＰＳ合成を容易にする。
【0081】
いくつかの実施形態では、ステップｉｉｉは、伸長するペプチド鎖を、アミン塩基、または十分な量のアミン塩基を含む溶液もしくは組成物と接触させることを含む。いくつかの実施形態では、ステップｉｉｉは、伸長するペプチド鎖を、適切な条件下で十分な量のアミン塩基を含む切断溶液と接触させることを含み、十分な量は、副生成物の実質的な（少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％の）切断または除去を誘導する量である。いくつかの実施形態では、十分な量は、その間の任意の範囲を含む、少なくとも１、少なくとも１０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも５００、１０～５００、１０～１００、５０～５００、５０～１００、１０～５０、１～１００、１～１０、１～５００モル当量のアミン塩基を含む。いくつかの実施形態では、適切な条件は、その間の任意の範囲を含む、１秒～１時間の範囲の接触時間、および／または５～９０、もしくは１５～４０，もしくは１５～３０℃の範囲の操作可能温度を含む。
【0082】
いくつかの実施形態では、アミン塩基は、Ｆｍｏｃ脱保護剤である。いくつかの実施形態では、アミン塩基は、Ｆｍｏｃを十分に脱保護することができる（例えば、固体担体上で少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％のＦｍｏｃ脱保護をもたらす）。いくつかの実施形態では、アミン塩基は、それらの任意の組み合わせを含む、一級アミン、二級アミン、グアニジン系化合物、およびアミジン系化合物から選択される。いくつかの実施形態では、アミン塩基は、直鎖アミンまたは環状アミンである。
【0083】
いくつかの実施形態では、アミン塩基は、ピペリジン、ＤＢＵ、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ピロリジン、モルホリン、４－メチルピペリジン、テトラメチルグアニジン、およびＤＢＮ、またはそれらの任意の組み合わせのいずれか１つを含む。
【0084】
いくつかの実施形態では、アミン塩基は、実質的に三級アミンを欠いている。いくつかの実施形態では、アミン塩基は、ＤＩＰＥＡ、ＴＥＡ、または両方を実質的に欠いている。
【0085】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、任意選択で、ステップ（ｉｉｉ）を行う前にＮ保護アミノ酸部分を脱保護するステップ（ｉｖ）を行うことを含む。いくつかの実施形態では、ステップｉｖは、樹脂に結合した伸長する鎖に脱保護溶液を適用し、それにより、アミン保護基を除去することを含み、脱保護溶液は、本明細書に記載されたとおりである。
【0086】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、前記ステップ（ｉｉｉ）を行う前に、ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｖ）を続いて繰り返すことをさらに含む。いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｖ）が行われ、続いて繰り返され、それにより、ペプチド鎖を伸長させる。いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｖ）は、所定の配列（例えば、所定のアミノ酸配列）を合成するために繰り返される。いくつかの実施形態では、ステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｖ）は、所定の配列を合成するために複数回繰り返され、複数回は、本明細書に記載されたとおりである。
【0087】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、合成された化合物（例えば、ペプチド）を固体担体から切断することをさらに含む。
【0088】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、式４：
によって表されるＴＲＳを合成するための方法であり、方法は、ステップｉ～ｉｉｉを含み、式４によって表されるペプチド配列を合成するために、ステップ（ｉｉｉ）を行う前にステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｖ）を繰り返すことをさらに含む。
【化26】
によって表されるＴＲＳを合成するための方法であり、方法は、ステップｉ～ｉｉｉを含み、式４によって表されるペプチド配列を合成するために、ステップ（ｉｉｉ）を行う前にステップ（ｉｉ）およびステップ（ｉｖ）を繰り返すことをさらに含む。
【0089】
いくつかの実施形態では、ＳＰＰＳを行い、それにより、固体担体上でペプチド鎖：
を合成することであって、式中、ＰＧは、保護基（例えば、Ｆｍｏｃ）であり、ペプチド鎖は、アミノ酸（複数可）の側鎖に１つ以上の保護基をさらに含むことと、（ｉｉ）続いて、ペプチド鎖の切断を行い（ＰＧおよびリジンの保護基を保持するのに十分な条件下で）、それにより、保護されたペプチド鎖：
を得ることであって、リジン、アルギニン、トレオニン、または両方の側鎖が、任意選択で保護基に結合していることと、（ｉｉｉ）保護されたペプチド鎖と化合物：
とのカップリングを行い、それにより、ＴＲＳを得ることとを含む、ＴＲＳを合成する方法が存在する。いくつかの実施形態では、カップリングは、保護されたペプチド鎖を十分な量のカップリング溶液と混合し、それにより活性エステルを得、続いて化合物：
を活性エステル溶液に加えることによって行われる。
【化27】
【化28】
【化29】
【化30】
【0090】
いくつかの実施形態では、化合物：
は、式２の化合物を提供することであって、式中、Ｒ１がＢｏｃ（例えば、実施例１に記載される化合物）であることと、本明細書に記載されるようにＢｏｃを脱保護することとによって合成される。
【化31】
【0091】
いくつかの実施形態では、保護されたペプチド鎖：
を提供することと、保護されたペプチド鎖と化合物：
とのカップリングを行い、それにより、ＴＲＳを得ることとを含む、ＴＲＳを合成する方法が存在する。
【化32】
【化33】
【0092】
いくつかの実施形態では、方法は、固体担体に結合したジアゾ化チロシンを提供することと、アミン保護基を脱保護し、それにより遊離アミン基を得ることと、遊離アミン基を次のアミノ酸またはポリペプチドにカップリングさせることとを含む。いくつかの実施形態では、方法は、既定の配列（例えば、既定のアミノ酸配列）を合成するために、脱保護ステップおよびカップリングステップを（例えば、本明細書に記載されるように複数回）繰り返すことをさらに含む。
【0093】
別の態様では、ジアゾ化チロシンを含む目的のペプチド配列（その任意の誘導体を含む）を合成する方法が存在し、ジアゾ化チロシンは、アゾ結合
を介してチロシンのフェノール環に結合した置換基を含む。いくつかの実施形態では、ジアゾ化チロシンは、式３Ａ：
によって表されるジアゾ化チロシンであるか、またはそれを含み、式中、Ｒ６は、１つ以上の置換基を含み、波状の結合は、目的のペプチド配列への結合点を表し、波状の結合の少なくとも１つは、ペプチド配列への結合点を表す。いくつかの実施形態では、波状の結合の１つは、ペプチド配列への結合点を表し、別の波状の結合は、（ｉ）Ｒ１、Ｎ保護基、アシル、ＯＲ、Ｏ－、ＯＨ、およびＨのいずれか１つ、（ｉｉ）目的のペプチド配列への結合点を表す。
【化34】
【化35】
【0094】
いくつかの実施形態では、方法は、化合物：
を固体担体上の伸長するペプチド鎖にカップリングさせることと、ステップｉｉｉを行い、それにより、固体担体に結合した目的のペプチド配列を得ることとを含み、式中、Ｒ１はアミン保護基を含み、Ｒ６は本明細書に記載されたとおりである。
【化36】
【0095】
いくつかの実施形態では、方法は、次のＮ保護アミノ酸をＮ末端にカップリングさせることと、アミン保護基を脱保護して脱保護されたＮ末端アミンを得ることとをさらに含み、カップリングステップおよび脱保護ステップは、ステップｉｉｉを行う前に行われる。いくつかの実施形態では、方法は、カップリングステップおよび脱保護ステップを繰り返し、それにより、固体担体に結合した目的のペプチド配列を得ることを含む。いくつかの実施形態では、方法は、ペプチド配列の切断を行って目的のペプチド配列を得ることをさらに含む。
【0096】
いくつかの実施形態では、目的のペプチド配列は、式Ａ－Ｘ－Ｂ－ＮＨ２によって表され、式中、Ａは、第１のアミノ酸配列を表し、Ｂは、第２のアミノ酸配列を表し、Ｘは、ジアゾ化チロシンを表し、方法は、
－固相に結合した第１のアミノ酸配列を提供することと、
－脱保護ステップを行って脱保護された第１のアミノ酸配列（例えば、脱保護されたＮ末端アミンを含む）を得ることと、
－脱保護された第１のアミノ酸配列を、化合物：
にカップリングさせることであって、式中、Ｒ１がアミン保護基を含み、Ｒ６が本明細書に記載されたとおりであることと、
－アミン保護基を脱保護して脱保護されたＮ末端アミンを得ることと、
－第２のアミノ酸配列のＳＰＰＳを行い、それにより、ペプチド鎖を伸長させることと、
－続いてステップｉｉｉを行い、それにより、固相に結合した目的のペプチド配列を得ることと
を含む。
－固相に結合した第１のアミノ酸配列を提供することと、
－脱保護ステップを行って脱保護された第１のアミノ酸配列（例えば、脱保護されたＮ末端アミンを含む）を得ることと、
－脱保護された第１のアミノ酸配列を、化合物：
【化37】
－アミン保護基を脱保護して脱保護されたＮ末端アミンを得ることと、
－第２のアミノ酸配列のＳＰＰＳを行い、それにより、ペプチド鎖を伸長させることと、
－続いてステップｉｉｉを行い、それにより、固相に結合した目的のペプチド配列を得ることと
を含む。
【0097】
いくつかの実施形態では、方法は、ペプチド配列の切断を行って目的のペプチド配列を得ることをさらに含む。
【0098】
いくつかの実施形態では、Ｒ６は、ホスホリルコリン、（Ｃ０～Ｃ６）アルキル－アリール、（Ｃ０～Ｃ６）アルキル－ヘテロアリール、（Ｃ０～Ｃ６）アルキル－（Ｃ３～Ｃ８）シクロアルキル、任意選択で置換されたＣ３～Ｃ８ヘテロシクリル、ハロゲン、－ＮＯ２、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＣＯＮＨ２、－ＣＯＮＲ２、－ＣＮＮＲ２、－ＣＳＮＲ２、－ＣＯＮＨ－ＯＨ、－ＣＯＮＨ－ＮＨ２、－ＮＨＣＯＲ、－ＮＨＣＳＲ、－ＮＨＣＮＲ、－ＮＣ（＝Ｏ）ＯＲ、－ＮＣ（＝Ｏ）ＮＲ、－ＮＣ（＝Ｓ）ＯＲ、－ＮＣ（＝Ｓ）ＮＲ、－ＳＯ２Ｒ、－ＳＯＲ、－ＳＲ、－ＳＯ２ＯＲ、－ＳＯ２Ｎ（Ｒ）２、－ＮＨＮＲ２、－ＮＮＲ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルキル、任意選択で置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、－ＮＨ２、－ＮＨ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－Ｎ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）２、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ１～Ｃ６ハロアルコキシ、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）、アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、アルコキシ（Ｃ１～Ｃ６アルコキシ）、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＮＲ２、Ｃ１～Ｃ６アルキル－ＳＲ、－ＣＯＮＨ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）、－ＣＯＮ（Ｃ１～Ｃ６アルキル）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＣＯ２Ｒ、－ＯＣＯＲ、－ＯＣＯＲ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲ、－ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ、－ＯＣ（＝Ｓ）ＯＲ、－ＯＣ（＝Ｓ）ＮＲ、ポリアミノ酸、ペプチド、またはそれらの組み合わせを含む置換基を表す。さらなる置換基が、当該技術分野で周知である。
【0099】
いくつかの実施形態では、方法は、ＳＰＰＳを行い、それによりペプチド鎖を合成することと、ジアゾ化チロシンをペプチド鎖（例えば、伸長するペプチド鎖のＮ末端）にカップリングさせることとを含む。いくつかの実施形態では、ジアゾ化チロシンは、式３Ｂ：
によって表され、式中、Ｒ６およびＲ４は、本明細書に記載されたとおりであり、Ｒ５は、Ｈ、または活性エステルであるか、または存在しない。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＲ４は、アミン保護基（例えば、Ｆｍｏｃ）であるか、またはそれを含む。
【化38】
【0100】
いくつかの実施形態では、方法は、（ｉ）ＳＰＰＳを行い、それによりペプチド鎖を合成することと、（ｉｉ）続いて、ペプチド鎖の切断を行い（Ｎ末端もしくはＣ末端のいずれかおよび／または側鎖の保護基を保持するのに十分な条件下で）、それにより、脱保護されたＮ末端または脱保護されたＣ末端を含むペプチド鎖を得ることと、（ｉｉｉ）脱保護されたＮ末端または脱保護されたＣ末端と、本明細書に記載されるジアゾ化チロシン（例えば、式３Ｂのジアゾ化チロシン）とのカップリングを行うこととを含み、ステップ（ｉｉｉ）は、溶液中で（例えば、反応物と適合性である有機溶媒を利用することによって）行われる。
【0101】
いくつかの実施形態では、固体担体に結合したジアゾ化チロシンは、式３Ｃ：
によって表され、式中、Ｒ６は、本明細書に記載されたとおりであり、少なくとも１つのＲ４は、アミン保護基を含む。
【化39】
【0102】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、本明細書に記載されたように、ステップｉｉｉを行うことによって副生成物を除去し、それにより、実質的に副生成物を欠いている既定の配列を得ることをさらに含む。
【0103】
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、その間の任意の範囲を含む、１０ｍｏｌ％未満、８ｍｏｌ％未満、５ｍｏｌ％未満、１ｍｏｌ％未満、０．５ｍｏｌ％未満、０．１ｍｏｌ％未満の副生成物の形成をもたらす。いくつかの実施形態では、副生成物の量は、ペプチド配列（例えば、固体担体に結合しているか、または切断後）の全量に対する生成物のモルパーセントに関係する。
【0104】
定義
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、直鎖および分岐鎖基を含む脂肪族炭化水素を表す。好ましくは、アルキル基は、２１～１００個の炭素原子、より好ましくは２１～５０個の炭素原子を有する。例えば「２１～１００」という数値範囲が本明細書で述べられるときは常に、基、この場合アルキル基が、２１個の炭素原子、２２個の炭素原子、２３個の炭素原子など、１００個以下の炭素原子を含有し得ることを暗示する。本発明の文脈では、「長鎖アルキル」は、その主鎖（連続した共有結合原子の最長経路）に少なくとも２０個の炭素原子を有するアルキルである。したがって、短鎖アルキルは、２０個以下の主鎖炭素を有する。アルキルは、本明細書で定義される場合、置換または非置換であり得る。
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、直鎖および分岐鎖基を含む脂肪族炭化水素を表す。好ましくは、アルキル基は、２１～１００個の炭素原子、より好ましくは２１～５０個の炭素原子を有する。例えば「２１～１００」という数値範囲が本明細書で述べられるときは常に、基、この場合アルキル基が、２１個の炭素原子、２２個の炭素原子、２３個の炭素原子など、１００個以下の炭素原子を含有し得ることを暗示する。本発明の文脈では、「長鎖アルキル」は、その主鎖（連続した共有結合原子の最長経路）に少なくとも２０個の炭素原子を有するアルキルである。したがって、短鎖アルキルは、２０個以下の主鎖炭素を有する。アルキルは、本明細書で定義される場合、置換または非置換であり得る。
【0105】
「アルキル」という用語はまた、本明細書で使用される場合、飽和または不飽和炭化水素を包含し、したがって、この用語は、アルケニルおよびアルキニルをさらに包含する。
【0106】
「アルケニル」という用語は、本明細書で定義される場合、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する不飽和アルキルを表す。アルケニルは、上記のように、１つ以上の置換基によって置換され得るか、または非置換であり得る。
【0107】
「アルキニル」という用語は、本明細書で定義される場合、少なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する不飽和アルキルである。アルキニルは、上記のように、１つ以上の置換基によって置換され得るか、または非置換であり得る。
【0108】
「シクロアルキル」という用語は、環の１つ以上が完全に共役したπ電子系を有さない、すべてが炭素の単環または縮合環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）の基を表す。シクロアルキル基は、本明細書で示されるように、置換または非置換であり得る。
【0109】
「アリール」という用語は、完全に共役したπ電子系を有する、すべてが炭素の単環または縮合多環（すなわち、隣接する炭素原子対を共有する環）の基を表す。アリール基は、本明細書で示されるように、置換または非置換であり得る。
【0110】
「アルコキシ」という用語は、本明細書で定義されるＯ－アルキルおよび－Ｏ－シクロアルキル基の両方を表す。
【0111】
「アリールオキシ」という用語は、本明細書で定義される－Ｏ－アリールを表す。
【0112】
本明細書の一般式におけるアルキル、シクロアルキル、およびアリール基の各々は、１つ以上の置換基によって置換され得、各置換基は、独立して、例えば、ハライド、アルキル、アルコキシ、シクロアルキル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシル、チオール、チオアルコキシ、カルボキシ、アミド、アリール、およびアリールオキシであり得、分子中の置換される基およびその位置に依存する。さらなる置換基も企図される。
【0113】
「ハライド」、「ハロゲン」、または「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を表す。
【0114】
「ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハライドによってさらに置換された、本明細書で定義されるアルキル基を表す。
【0115】
「ハロアルコキシ」という用語は、１つ以上のハライドによってさらに置換された、本明細書で定義されるアルコキシ基を表す。
【0116】
「ヒドロキシル」または「ヒドロキシ」という用語は、－ＯＨ基を表す。
【0117】
「メルカプト」または「チオール」という用語は、－ＳＨ基を表す。
【0118】
「チオアルコキシ」という用語は、本明細書で定義される－Ｓ－アルキル基および－Ｓ－シクロアルキル基の両方を表す。
【0119】
「チオアリールオキシ」という用語は、本明細書で定義される－Ｓ－アリールおよび－Ｓ－ヘテロアリール基の両方を表す。
【0120】
「アミノ」という用語は、本明細書に記載されるＲ’およびＲ’’を有する－ＮＲ’Ｒ’’基を表す。
【0121】
「ヘテロシクリル」という用語は、環（単数もしくは複数）内に窒素、酸素、および硫黄などの１つ以上の原子を有する単環または縮合環基を表す。環は、１つ以上の二重結合も有し得る。しかしながら、環は、完全に共役したπ電子系を有さない。代表的な例は、ピペリジン、ピペラジン、テトラヒドロフラン、テトラヒドロピラン、モルホリノなどである。
【0122】
「カルボキシ」または「カルボキシレート」という用語は、－Ｃ（Ｏ）ＯＲ’基を表し、式中、Ｒ’は、本明細書で定義される、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール（環炭素を通して結合する）、またはヘテロシクリル（環炭素を通して結合する）である。
【0123】
「カルボニル」という用語は、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’基を表し、式中、Ｒ’は、上で定義されるとおりである。
【0124】
上記用語は、それらのチオ誘導体（チオカルボキシおよびチオカルボニル）も包含する。
【0125】
「チオカルボニル」という用語は、-Ｃ（Ｓ）Ｒ’基を表し、式中、Ｒ’は、上で定義されるとおりである。
【0126】
「チオカルボキシ」基は、－Ｃ（Ｓ）ＯＲ’基を表し、式中、Ｒ’は、本明細書で定義されるとおりである。
【0127】
「スルフィニル」基は、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’基を表し、式中、Ｒ’は、本明細書で定義されるとおりである。
【0128】
「スルホニル」または「スルホネート」基は、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’基を表し、式中、Ｒ’は、本明細書で定義されるとおりである。
【0129】
「カルバミル」または「カルバメート」基は、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’基を表し、式中、Ｒ’は、本明細書で定義されるとおりであり、Ｒ’’は、Ｒ’について定義されるとおりである。
【0130】
「ニトロ」基は、－ＮＯ２基を指す。
【0131】
「アミド」という用語は、本明細書で使用される場合、Ｃ－アミドおよびＮ－アミドを包含する。
【0132】
「Ｃ－アミド」という用語は、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’末端基または－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’－連結基を表し、これらの語句は上で定義されており、式中、Ｒ’およびＲ’’は、本明細書で定義されるとおりである。
【0133】
「Ｎ－アミド」という用語は、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’末端基または－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）－連結基を表し、これらの語句は上で定義されており、式中、Ｒ’およびＲ’’は、本明細書で定義されるとおりである。
【0134】
「カルボン酸誘導体」という用語は、本明細書で使用される場合、カルボキシ、アミド、カルボニル、無水物、炭酸エステル、およびカルバメートを包含する。
【0135】
「シアノ」または「ニトリル」基は、－ＣＮ基を指す。
【0136】
「アゾ」または「ジアソ」という用語は、－Ｎ＝ＮＲ’末端基または－Ｎ＝Ｎ－連結基を表し、これらの語句は上で定義されており、上で定義されるＲ’を有する。
【0137】
「グアニジン」という用語は、－Ｒ’ＮＣ（Ｎ）ＮＲ’’Ｒ’’’末端基または－Ｒ’ＮＣ（Ｎ）ＮＲ’’－連結基を表し、これらの語句は上で定義されており、式中、Ｒ’、Ｒ’’、およびＲ’’’は、本明細書で定義されるとおりである。
【0138】
本明細書で使用される場合、「アジド」という用語は、－Ｎ３基を指す。
【0139】
「スルホンアミド」という用語は、本明細書で定義されるＲ’およびＲ’’を有する－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ’’基を指す。
【0140】
「ホスホニル」または「ホスホネート」という用語は、上で定義されるＲ’を有する－ＯＰ（Ｏ）－（ＯＲ’）２基を表す。
【0141】
「ホスフィニル」という用語は、上で定義されるＲ’およびＲ’’を有する－ＰＲ’Ｒ’’基を表す。
【0142】
「アルキルアリール」という用語は、本明細書に記載されるアリールによって置換された、本明細書で定義されるアルキルを表す。例示的なアルキルアリールは、ベンジルである。
【0143】
「ヘテロアリール」という用語は、環（単数もしくは複数）内に例えば窒素、酸素、および硫黄などの１つ以上の原子を有し、さらに、完全に共役したπ電子系を有する、単環（例えば、Ｃ５～Ｃ６ヘテロアリール環）または縮合環（すなわち、隣接する原子対を共有する環）の基を表す。いくつかの実施形態では、「ヘテロアリール」および「Ｃ５～Ｃ６ヘテロアリール」という用語は、本明細書では交換可能に使用される。ヘテロアリール基の非限定的な例としては、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、およびプリンが挙げられる。ヘテロアリール基は、上記のように、１つ以上の置換基によって置換され得るか、または非置換であり得る。代表的な例は、チアジアゾール、ピリジン、ピロール、オキサゾール、インドール、プリンなどである。
【0144】
本明細書で使用される場合、本明細書では交換可能とされる「ハロ」および「ハライド」という用語は、ハロゲンの原子、すなわち、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を表し、本明細書ではフッ化物、塩化物、臭化物、およびヨウ化物とも呼ばれる。
【0145】
「ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハライドによってさらに置換された、上で定義されるアルキル基を表す。
【0146】
本発明のさらなる目的、利点、および新規特徴は、限定を意図するものではない以下の実施例を検討すると、当業者に明らかになるであろう。さらに、上で描写され、以下の特許請求の範囲で請求される、本発明の様々な実施形態および態様の各々は、以下の実施例において実験的支持を見出す。
【0147】
明確にするために別々の実施形態に関連して記載された本発明の特定の特徴をまた、組み合わせて単一の実施形態に提供してもよいことが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態に関連して記載された本発明の様々な特徴はまた、別々に、または任意の好適な部分組み合わせで、または本発明の任意の他の記載された実施形態において好適であるように、提供され得る。様々な実施形態に関連して記載された特定の特徴は、実施形態がそれらの要素がないと動作不能である場合を除き、それらの実施形態の必須の特徴と見なされるべきではない。
【0148】
本発明は、その特定の実施形態に関連して記載されてきたが、多くの代替、修正、および変形が当業者に明らかであることは明白である。したがって、添付の特許請求の範囲の趣旨および広い範囲内にあるすべてのそのような代替、修正、および変形を包含することが意図されている。
【0149】
本明細書で言及されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、明細書への参照によりその全体が、個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的かつ個々に示されて参照により本明細書に組み込まれるのと同じ程度に、本明細書に組み込まれる。さらに、本出願における任意の参考文献の引用または特定は、そのような参考文献が本発明の先行技術として利用可能であることの承認と解釈されるものではない。節の見出しが使用される限りにおいて、それらは、必ずしも限定と解釈されるべきではない。
【0150】
実施例、
実施例１
ＢＯＣ－ＴＹＲへのホスホリルコリンのコンジュゲーション
１）ジアゾニウム塩の調製
４－アミノフェニル（２－（トリメチルアンモニオ）エチル）ホスフェート（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、１Ｍ水性ＨＣｌ（１ｍＬ）に溶解し、氷水浴中で冷却し、亜硝酸ナトリウム（１２．６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、単一バッチで加えた。得られた溶液を、０℃で３０分間撹拌した。
実施例１
ＢＯＣ－ＴＹＲへのホスホリルコリンのコンジュゲーション
１）ジアゾニウム塩の調製
４－アミノフェニル（２－（トリメチルアンモニオ）エチル）ホスフェート（５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、１Ｍ水性ＨＣｌ（１ｍＬ）に溶解し、氷水浴中で冷却し、亜硝酸ナトリウム（１２．６ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を、単一バッチで加えた。得られた溶液を、０℃で３０分間撹拌した。
【0151】
２）アゾカップリング
ＮａＨＣＯ３（１Ｍ）＋ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０）（３．３ｍＬ）＋アセトニトリル（１．２ｍＬ）中のＢＯＣ－Ｌ－チロシン（１０７ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を含む新規混合物を調製した。混合物を氷水浴中で冷却した。ジアゾニウム塩混合物を滴下した。赤色溶液が形成された。これの混合を、０℃で６分間続けた。反応混合物を、１Ｎ水性ＨＣｌでｐＨ＝～３に酸性化した。
ＮａＨＣＯ３（１Ｍ）＋ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ１０）（３．３ｍＬ）＋アセトニトリル（１．２ｍＬ）中のＢＯＣ－Ｌ－チロシン（１０７ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を含む新規混合物を調製した。混合物を氷水浴中で冷却した。ジアゾニウム塩混合物を滴下した。赤色溶液が形成された。これの混合を、０℃で６分間続けた。反応混合物を、１Ｎ水性ＨＣｌでｐＨ＝～３に酸性化した。
【0152】
得られた溶液を、終夜凍結乾燥し、続いて、（例えば、分取ＭＰＬＣによって）精製して、化合物：
（式中、ＲはＢｏｃである）を得た。
【化40】
【0153】
実施例２
本発明の例示的化合物の調製
ジアゾニウム塩の調製：
４－アミノフェニル（２－（トリメチルアンモニオ）エチル）ホスフェート（２５０ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）を、１Ｍ水性ＨＣｌ（５ｍＬ）に溶解し、氷水浴中で冷却し、亜硝酸ナトリウム（６２．９ｍｇ、０．９１２ｍｍｏｌ）を、単一バッチで加えた。得られた溶液を、０℃で３０分間撹拌した。アゾカップリング、飽和ＮａＨＣＯ３（１７ｍＬ）＋アセトニトリル（１２．５ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｔｙｒ－ＯＨ（７３９ｍｇ、１．８３２ｍｍｏｌ）を含む新規混合物を調製した。得られた懸濁液／溶液を氷水浴中で冷却した。ジアゾニウム塩混合物を滴加した。０℃で混合した。反応混合物は、徐々に黄色になった。５．５ｈ後、ＬＣＭＳは、完全な変換を示した。反応混合物を、１Ｎ ＨＣｌでｐＨ～６に酸性化し、黄色がかった懸濁液は、透明な橙色溶液に変化し、これを凍結乾燥した。これは、２．１０ｇを提供した。ＤＭＳＯ／Ｈ２Ｏ／ＭｅＣＮ（～１：１：１）の混合物中に溶解し、酸性分取ＭＰＬＣによる５回の実行で精製した。画分を組み合わせ、終夜凍結乾燥して、所望の生成物（化合物１０）を得た。
本発明の例示的化合物の調製
ジアゾニウム塩の調製：
【化41】
【0154】
実施例３
ＴＲＳのＳＰＰＳ合成
化合物１０のヒドロキシ基の保護の困難に直面したため、発明者らは、ＴＲＳのＳＰＰＳ合成のための新規戦略を探索した。
ＴＲＳのＳＰＰＳ合成
化合物１０のヒドロキシ基の保護の困難に直面したため、発明者らは、ＴＲＳのＳＰＰＳ合成のための新規戦略を探索した。
【0155】
発明者らは、
Ｎ保護（Ｆｍｏｃ）ホスホリルコリン修飾チロシン（例えば、化合物１０）を実装することによってＳＰＰＳ合成を開始し、２００ｍｇの化合物１０を、ＣＴＣ樹脂にロードした。手短に述べると、２－クロロトリチルクロリド樹脂（１．０～１．２ｍｍｏｌ／ｇ、２００～４００ｍｅｓｈ）（４５０ｍｇ、１．４４１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１２ｍＬ）中で３０分間揺動することによって膨潤させた。溶媒を除去し、ＤＩＰＥＡ（０．１７７ｍＬ、１．０１６ｍｍｏｌ）を含有する（Ｓ，Ｅ）－４－（（５－（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－２－カルボキシエチル）－２－ヒドロキシフェニル）ジアゼニル）フェニル（２－（トリメチルアンモニオ）－エチル）ホスフェート（２００ｍｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１２ｍＬ）溶液を加えた（基質はＤＣＭに溶解せず、ＤＩＰＥＡを加えた後に溶液が得られた）。
Ｎ保護（Ｆｍｏｃ）ホスホリルコリン修飾チロシン（例えば、化合物１０）を実装することによってＳＰＰＳ合成を開始し、２００ｍｇの化合物１０を、ＣＴＣ樹脂にロードした。手短に述べると、２－クロロトリチルクロリド樹脂（１．０～１．２ｍｍｏｌ／ｇ、２００～４００ｍｅｓｈ）（４５０ｍｇ、１．４４１ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（１２ｍＬ）中で３０分間揺動することによって膨潤させた。溶媒を除去し、ＤＩＰＥＡ（０．１７７ｍＬ、１．０１６ｍｍｏｌ）を含有する（Ｓ，Ｅ）－４－（（５－（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－２－カルボキシエチル）－２－ヒドロキシフェニル）ジアゼニル）フェニル（２－（トリメチルアンモニオ）－エチル）ホスフェート（２００ｍｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１２ｍＬ）溶液を加えた（基質はＤＣＭに溶解せず、ＤＩＰＥＡを加えた後に溶液が得られた）。
【0156】
１７ｈ後、溶液を除去し、樹脂をジクロロメタンで洗浄した（３×１０ｍＬ、各洗浄ステップ＞２分）。キャッピング溶液（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＤＩＰＥＡ ９：１：０．５）を加え（１０．５ｍＬ）、樹脂を１時間揺動した。次いで、樹脂をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で洗浄し、真空中で乾燥した。
【0157】
次いで、化合物１３の単離（スキーム２参照）で見られるような、先に発見されたチロシンＯ－アシル化の形成の防止を目的として、後続の化学のいくつかの条件を並行して検討するために、この樹脂を均等に分割した。異なる反応条件を、表１に概説した（以下を参照）。
【化42】
【表1】
【0158】
表１に示すように、様々なカップリング条件を試験した。エントリａ～ｃは、実質的な量の副生成物（１３）の形成をもたらした。ＤＭＦ中のＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＳｕ（エントリｄ）を使用することによって、改善が得られた。この場合、副生成物（１３）の形成は、所望の化合物１２に対してわずか３％に減少した。それにもかかわらず、これらの方法のどれも、１３の形成を完全に抑制することはできず、これは副生成物（化合物１３）の蓄積をもたらし得るので、依然としてさらなるペプチド合成にとってリスクとなる。
【0159】
驚くべきことに、発明者らは、副生成物（またはスキーム３の化合物１３によって表されるフェノールエステル副生成物）を、ＤＭＦ中でピペリジンまたはＤＢＵを用いて標準的なＦｍｏｃ脱保護条件下で切断することができ、以下に示すように、化合物１５をきれいに提供することを見出した。
【化43】
【0160】
発明者らはさらに、副生成物の切断のための（ピペリジンおよびＤＢＵ以外の）さらなるアミン塩基を実装することに成功した。一級および二級アミン、グアニジン系化合物、ならびにアミジン系化合物を含む多数のアミン塩基を、副生成物の切断のために実装することに成功した。さらに、発明者らは、三級アミンも副生成物の切断のために実装することができるが、三級アミンはしばしば、より長い反応時間および／または副生成物切断ステップのその後の繰り返しを必要とすることを観察した。この目的のために、発明者らは、一級および二級アミン、グアニジン系化合物、ならびにアミジン系化合物が、改善された反応性によって特徴づけられ、したがって、同様の反応条件下の三級アミンと比較して、より効率的な副生成物の切断をもたらす（例えば、目的の化合物の改善された収率および／または純度をもたらす）ことを見出した。
【0161】
発明者らが試験することに成功したアミン塩基（少なくとも約９５％の副生成物の切断）は、以下のとおりである：ピペリジン、ＤＢＵ、シクロヘキシルアミン、エタノールアミン、ピロリジン、モルホリン、４－メチルピペリジン、テトラメチルグアニジン、およびＤＢＮ。アミン塩基は、ＤＭＦ中の５～２０％溶液の形態で実装されている（約３０分のインキュベーション時間）。発明者らはさらに、ピロリジン、ピペリジン、ＤＢＵ、シクロヘキシルアミン、およびエタノールアミンが、副生成物の切断について優れた効率（ほぼ１００％の収率）を有することを観察した。さらに、一級および二級アミン、グアニジン系化合物、ならびにアミジン系化合物（特に、ピロリジン、ピペリジン、ＤＢＵ、シクロヘキシルアミン、およびエタノールアミン）は、ほぼ完全なＦｍｏｃ脱保護をもたらし、その結果、化合物１５が９９～１００％の収率で得られたことが見出された。
【0162】
化合物１１を得るために化合物１０を樹脂にロードした後（スキーム２参照）、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨとのペプチドカップリングを、標準的な条件下で、固相上で繰り返し、その後、Ｆｍｏｃ脱保護を行った。次に、Ｂｏｃ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨとの別のペプチドカップリングステップを行った（スキーム４、ステップ１～４）。次いで、樹脂を２つの部分に分割した。第１の部分を、樹脂切断（ステップ５ａ）のためにＨＦＩＰで直接処理し、これは、化合物１６および１７の混合物を提供した。第２のバッチを、フェノールエステルを切断するために、まずＤＭＦ中のピペリジンで処理した（ステップ５ｂ）。次いで、樹脂切断ステップを行い（ステップ６）、これは、所望のトリペプチド１６を、微量のジカップリング化合物１７を含まずに、非常に高い純度で提供した。
【化44】
【0163】
これらの結果は、標準的なＳＰＰＳ条件下でのより長いペプチドの固相合成のための道を開き、遊離チロシンＯＨのＯ－アシル化の問題は、ＤＭＦ中のピペリジンでのＦｍｏｃ脱保護ステップ中のフェノールエステル副生成物の切断によって、効率的に克服される。
【0164】
ＴＲＳのＳＰＰＳ合成の標準的な非限定的手順を、以下に記載する：
【化45】
【0165】
化合物１０（スキーム２）を、上記のように固体担体にロードし、それにより、化合物１１の形成をもたらした。
【0166】
Ｆｍｏｃ脱保護：化合物１０（化合物１１）に結合した樹脂を、ペプチドグレードＤＭＦ（２ｍＬ、４．０５ｍｍｏｌ）中のピペリジン２０％（ｗ／ｗ）中で３０分間揺動した。ピペリジン溶液を除去し、樹脂をＤＭＦ（５ｍＬ、ペプチドグレード）で洗浄した。この手順を２回繰り返した。
【0167】
ＢｏｃベースのＳＰＰＳ合成の場合、化合物１０のＢｏｃ保護代替物を使用することができる。ＳＰＰＳ合成は、ＦｍｏｃベースのＳＰＰＳ合成とほとんど同一であるが、Ｂｏｃ切断は、通常ＤＣＭ中に５０％ＴＦＡを含む酸性条件下で行われる。Ｂｏｃ切断の厳密な条件は、当該技術分野で周知である。ＢｏｃベースのＳＰＰＳは、それと適合性である固体担体を必要とすることが理解される。ＢｏｃベースのＳＰＰＳのための固体担体は、当該技術分野で周知である。
【0168】
樹脂に結合したＦｍｏｃ－チロシン－ＰＰＣ（１１）を、次いで、ＴＲＳへのペプチド固相合成手順に使用した（スキーム１０）。各アミノ酸を、ＤＭＦ中でＤＩＰＥＡとともにＨＢＴＵおよびＨＯＢｔを使用して、標準的な条件下でカップリングさせた。いくつかの実施形態では、各カップリングステップを、複数回（例えば、２回）行った。
【0169】
フェノールエステル副生成物の除去およびペプチドの切断：
樹脂を、ペプチドグレードＤＭＦ（２ｍＬ、４．０５ｍｍｏｌ）中のピペリジン２０％（ｗ／ｗ）中で３０分間揺動し、次いで、ＤＭＦ（２×３ｍＬ）で洗浄した。この手順を２回繰り返し、副生成物のほぼ完全な除去をもたらした（分析研究によって確認された）。あるいは、ＤＭＦ中のＤＢＵ溶液が、副生成物の除去のためにうまく実装された。
樹脂を、ペプチドグレードＤＭＦ（２ｍＬ、４．０５ｍｍｏｌ）中のピペリジン２０％（ｗ／ｗ）中で３０分間揺動し、次いで、ＤＭＦ（２×３ｍＬ）で洗浄した。この手順を２回繰り返し、副生成物のほぼ完全な除去をもたらした（分析研究によって確認された）。あるいは、ＤＭＦ中のＤＢＵ溶液が、副生成物の除去のためにうまく実装された。
【0170】
最後に、ペプチドを、ＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ２Ｏ（１８：１：１）を使用して樹脂から切断し、同時にすべての酸に不安定な保護基を除去した。粗ペプチドを、水に溶解し、その後、Ｐｂｆ残渣を、ＥｔＯＡｃおよびＥｔ２Ｏでの抽出によって容易に除去することができた。凍結乾燥後、粗ＴＲＳ（ＴＦＡ塩）を、収率６３％、純度８８％で得た。分取ＨＰＬＣによる精製は、２４０ｍｇ（１０から５１％）の所望の化合物を高純度で提供した。あるいは、粗ペプチド（例えば、ＴＲＳ、および以下に開示されるさらなるペプチドのいずれか１つ）は、分取逆相ＭＰＬＣによって精製されており、目的のペプチドを高純度で得た。
【0171】
いくつかの実施形態では、副生成物の除去およびＮ末端保護基の脱保護は、同時に行われる（例えば、アミン塩基切断溶液を固体担体に結合したペプチド鎖に適用することによって、Ｎ末端保護基および副生成物の両方を同時に除去する）。
【0172】
さらに、本明細書に記載されるように合成されたＴＲＳを、ＨＰＬＣおよびＬＣ／ＭＳによってさらに分析して、その不純物プロファイルを得た。不純物プロファイルを、ＰＣ部分をチロシンのフェノール環にカップリングさせるために、Ｔｈｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－ＴｙｒのＳＰＰＳ後修飾（ジアゾ化）によって合成されたＴＲＳの不純物プロファイルとさらに比較した。驚くべきことに、発明者らは、本明細書に記載されるように合成されたＴＲＳが、図１Ａおよび２Ａに示されるような異なる不純物プロファイルによって特徴づけられることを確認した。発明者らは、ＳＰＰＳ後修飾によって合成されたＴＲＳが１．２７不純物によって特徴づけられる一方で、本明細書に記載されるように合成されたＴＲＳがそのような不純物を欠いていることを観察した。１．２７不純物の提唱される構造に基づくと、そのような不純物がＳＰＰＳ後修飾（ジアゾ化）に特有であることは明らかなはずである。
【0173】
さらに、本明細書に記載されるように合成されたＴＲＳは、保護基（単数または複数）を欠く本発明の化合物に対応する、プロセスに特有の不純物（上に開示された０．７不純物）によって特徴づけられた。したがって、本明細書に記載されるように合成されたＴＲＳ(またはジアゾ化チロシン部分を有する任意のペプチド)は、上に記載された０．７不純物などの、プロセスに特有の不純物（単数または複数）に基づいて区別され得ると仮定される。したがって、ジアゾ化チロシン部分（例えば、
）および／またはその誘導体を含む不純物の存在は、本発明の方法によって合成されたペプチドであることを示す。
【化46】
【0174】
この目的のために、発明者らは、本明細書に記載された方法に基づいて、本発明の化合物（Ｆｍｏｃ－チロシン－ＰＰＣ）を利用することによって、チロシン－ＰＰＣを有する様々なペプチドを合成することに成功した。例示的なペプチドは、以下のとおりである：Ｈ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｏｒｎ－Ｇｌｙ－ＴｙｒＰＰＣ－ＯＨ；Ｈ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－ＴｙｒＰＰＣ－Ｏｒｎ－Ｇｌｙ－ＯＨ；およびＨ－ＴｙｒＰＰＣ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｏｒｎ－Ｇｌｙ－ＯＨ。
【0175】
ジアゾ化チロシン部分を有する任意のペプチド配列を本明細書に開示された方法のいずれか１つに従って合成することができることを、当業者なら理解するであろう。
【0176】
本発明の特定の特徴を本明細書に説明および記載してきたが、多くの修正、置換、変化、および均等物が当業者に想起されるであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨に含まれるすべてのそのような修正および変更を含むと意図されていることが理解されるべきである。
【図1A】
【図1B】
【図2A】
【図2B】
【国際調査報告】