特表 2024-518825 疾病耐性に関する機能検査のための植物疾病耐性遺伝子のライブラリーを調製する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-07

(54)【発明の名称】疾病耐性に関する機能検査のための植物疾病耐性遺伝子のライブラリーを調製する方法

(51)【国際特許分類】

   C40B 40/08 20060101AFI20240425BHJP

   C12N 15/29 20060101ALI20240425BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240425BHJP

   C12Q 1/6869 20180101ALI20240425BHJP

   A01H 5/00 20180101ALI20240425BHJP

   A01H 5/10 20180101ALI20240425BHJP

   A01H 6/46 20180101ALN20240425BHJP

【ＦＩ】

C40B40/08

C12N15/29 ZNA

C12N15/63 Z

C12Q1/6869 Z

A01H5/00 A

A01H5/10

A01H6/46

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023570377

(86)(22)【出願日】2022-05-11

(85)【翻訳文提出日】2024-01-15

(86)【国際出願番号】 US2022028686

(87)【国際公開番号】W WO2022240931

(87)【国際公開日】2022-11-17

(31)【優先権主張番号】63/186,986

(32)【優先日】2021-05-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523429494

【氏名又は名称】トゥー・ブレーズ・ファウンデーション

【氏名又は名称原語表記】ＴＷＯ ＢＬＡＤＥＳ ＦＯＵＮＤＡＴＩＯＮ

(74)【代理人】

【識別番号】100099623

【弁理士】

【氏名又は名称】奥山 尚一

(74)【代理人】

【識別番号】100125380

【弁理士】

【氏名又は名称】中村 綾子

(74)【代理人】

【識別番号】100142996

【弁理士】

【氏名又は名称】森本 聡二

(74)【代理人】

【識別番号】100166268

【弁理士】

【氏名又は名称】田中 祐

(74)【代理人】

【識別番号】100180231

【弁理士】

【氏名又は名称】水島 亜希子

(72)【発明者】

【氏名】モスコウ，マシュー・ジェームス

(72)【発明者】

【氏名】ファン・エッセ，ヘンドリクス・ピーター

【テーマコード（参考）】

2B030

4B063

【Ｆターム（参考）】

2B030AA02

2B030AD05

2B030CA14

2B030CA17

2B030CB02

4B063QA01

4B063QQ04

4B063QQ42

4B063QQ52

4B063QR08

4B063QR62

4B063QX02

(57)【要約】

対象とする植物病原体に対する候補植物疾病耐性（Ｒ）遺伝子のライブラリーを調製する方法が提供される。上記方法は、候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成ために、対象とする１つまたは複数の植物それぞれから、高度に発現されるヌクレオチド結合性ロイシンリッチな反復遺伝子（ＮＬＲ）の亜集団を、前記１つまたは複数の植物の器官または他の部分において構成的に発現されるＮＬＲの集団の中から選択するステップを含む。さらに、候補Ｒ遺伝子のライブラリーおよび同定されたＲ遺伝子を含む組成物を使用して、対象とする植物病原体に対するＲ遺伝子を同定する関連方法が提供される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

対象とする少なくとも１つの植物病原体に対する候補植物疾病耐性（Ｒ）遺伝子のライブラリーを調製する方法であって、
候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成するために、対象とする１つまたは複数の植物それぞれから、高度に発現されるヌクレオチド結合性ロイシンリッチな反復遺伝子（ＮＬＲ）の亜集団を、前記１つまたは複数の植物の器官または他の部分において構成的に発現されるＮＬＲの集団の中から選択するステップを含み、
高度に発現されるＮＬＲが、前記構成的に発現されるＮＬＲの少なくとも６５％の前記植物の前記器官または他の部分における相対発現レベルを超える前記植物の前記器官または他の部分における相対発現レベルを含む、方法。

【請求項2】

構成的に発現されるＮＬＲの前記集団における前記ＮＬＲの１つまたは複数が、対象とする少なくとも１つの特徴をさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

高度に発現されるＮＬＲの亜集団を選択するステップが、対象とする少なくとも１つの特徴を含むＮＬＲを選択するステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

対象とする前記少なくとも１つの特徴が、
（ａ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種内変異の存在、
（ｂ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種内変異の非存在、
（ｃ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種間変異の存在、
（ｄ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種間変異の非存在、および
（ｅ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における実質的な種内対立遺伝子変異
からなる群から選択される、請求項２または３に記載の方法。

【請求項5】

前記ＮＬＲの前記発現レベルが、遺伝子の前記相対発現レベルを決定するのに使用されることが可能なトランスクリプトームプロファイリング法を使用して決定される、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項6】

前記トランスクリプトームプロファイリング法が、ＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡｓｅｑ）である、請求項５に記載の方法。

【請求項7】

高度に発現されるＮＬＲの前記亜集団を選択する前に、前記植物の前記器官または前記他の部分からＲＮＡを単離するステップをさらに含む、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項8】

対象とする前記植物（単数または複数）が、対象とする前記植物病原体（複数可）の生育またはライフサイクルの完了を支持しない、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。

【請求項9】

前記器官が、葉、根、および茎からなる群から選択される、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項10】

宿主植物を、候補Ｒ遺伝子の前記ライブラリー由来の候補ＮＬＲで形質転換するステップをさらに含み、前記宿主植物が、対象とする少なくとも１つの病原体にとって宿主である、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項11】

前記宿主植物が、コムギ、オオムギ、コメ、ライムギ、トウモロコシ、ソルガム、オーツムギ、ダイズ、ジャガイモ、トマト、サツマイモ、ワタ、サトウキビ、およびキャッサバからなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。

【請求項12】

対象とする前記植物が、前記宿主植物と同じ種である、請求項１１に記載の方法。

【請求項13】

対象とする前記植物が、前記宿主植物と同じ種ではない、請求項１１に記載の方法。

【請求項14】

対象とする前記植物が、前記宿主植物と同じ科、亜科、連、および／または属である、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記器官が葉である、請求項１３または１４に記載の方法。

【請求項16】

対象とする前記植物病原体が、コムギの葉面病原体である、請求項１５に記載の方法。

【請求項17】

対象とする前記植物病原体が、プッチニア属（Ｐｕｃｃｉｎｉａ）およびマグナポルテ属（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ）のコムギの病原体からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

対象とする前記植物病原体が、プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ．ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ）、プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ ｆ．ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ）、プッチニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ）、およびマグナポルテ・オリゼ トリチクム（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）からなる群から選択される、請求項１７に記載の方法。

【請求項19】

前記宿主植物がコムギである、請求項１５から１８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項20】

対象とする前記１つまたは複数の植物が、イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）の種である、請求項１９に記載の方法。

【請求項21】

前記イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）の種が、アクナテルム属（Ａｃｈｎａｔｈｅｒｕｍ）、エギロプス属（Ａｅｇｉｌｏｐｓ）、カモジグサ属（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ）、カラスムギ属（Ａｖｅｎａ）、ヤマカモジグサ属（Ｂｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍ）、ブリザ属（Ｂｒｉｚａ）、キノスルス属（Ｃｙｎｏｓｕｒｕｓ）、エキナリア属（Ｅｃｈｉｎａｒｉａ）、シラゲガヤ属（Ｈｏｌｃｕｓ）、オオムギ属（Ｈｏｒｄｅｕｍ）、ミノボロ属（Ｋｏｅｌｅｒｉａ）、ドクムギ属（Ｌｏｌｉｕｍ）、コメガヤ属（Ｍｅｌｉｃａ）、クサヨシ属（Ｐｈａｌａｒｉｓ）、およびイチゴツナギ属（Ｐｏａ）の種からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記イネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）の種が、アクナテルム・ヒメノイデス（Ａｃｈｎａｔｈｅｒｕｍ ｈｙｍｅｎｏｉｄｅｓ）、エギロプス・ビコルニス（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｂｉｃｏｒｎｉｓ）、エギロプス・ロンギッシマ（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍａ）、エギロプス・セアルシイ（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｓｅａｒｓｉｉ）、エギロプス・シャロネンシス（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｓｈａｒｏｎｅｎｓｉｓ）、アグロピロン・クリスタツム（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ ｃｒｉｓｔａｔｕｍ）、アベナ・アビッシニカ（Ａｖｅｎａ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａ）、ブラキポディウム・ディスタキオン（Ｂｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍ ｄｉｓｔａｃｈｙｏｎ）、ブリザ・メディア（Ｂｒｉｚａ ｍｅｄｉａ）、キノスルス・クリスタツス（Ｃｙｎｏｓｕｒｕｓ ｃｒｉｓｔａｔｕｓ）、エキナリア・カピタタ（Ｅｃｈｉｎａｒｉａ ｃａｐｉｔａｔａ）、ホルクス・ラナツス（Ｈｏｌｃｕｓ ｌａｎａｔｕｓ）、ホルデウム・ブルガレ（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）、コエレリア・マクランサ（Ｋｏｅｌｅｒｉａ ｍａｃｒａｎｔｈａ）、ロリウム・ペレンネ（Ｌｏｌｉｕｍ ｐｅｒｅｎｎｅ）、メリカ・シリアタ（Ｍｅｌｉｃａ ｃｉｌｉａｔａ）、ファラリス・コエルレスセンス（Ｐｈａｌａｒｉｓ ｃｏｅｒｕｌｅｓｃｅｎｓ）、およびポア・トリビアリス（Ｐｏａ ｔｒｉｖｉａｌｉｓ）からなる群から選択される、請求項２０または２１に記載の方法。

【請求項23】

請求項１から２２のいずれか１項に記載の方法に従って調製された候補Ｒ遺伝子のライブラリー。

【請求項24】

請求項２３に記載のライブラリー由来の候補Ｒ遺伝子を含むトランスジェニック植物。

【請求項25】

トランスジェニック植物の一群であって、前記トランスジェニック植物それぞれが、請求項２３に記載のライブラリー由来の候補Ｒ遺伝子で形質転換されている、一群。

【請求項26】

対象とする植物病原体に対する植物疾病耐性（Ｒ）遺伝子を同定する方法であって、
（ｉ）宿主植物を、請求項２３に記載のライブラリーから選択された候補Ｒ遺伝子で形質転換するステップによって、形質転換された植物を生産するステップであって、前記宿主植物が、対象とする前記植物病原体にとって宿主である、生産するステップと、
（ｉｉ）疾病の発症に適した環境条件下で、前記形質転換された植物を、対象とする前記植物病原体と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）前記形質転換された植物が、前記候補Ｒ遺伝子を欠如している対照植物と比較した場合、対象とする前記植物病原体に対する耐性の増強を示すかどうかを決定するステップであって、前記形質転換された植物が、対象とする前記植物病原体によって引き起こされる植物疾病症状に対する耐性の増強を示す場合に前記候補Ｒ遺伝子が、対象とする前記植物病原体に対するＲ遺伝子である、決定するステップ
とを含む方法。

【請求項27】

対象とする植物病原体に対する植物疾病耐性（Ｒ）遺伝子を同定する方法であって、
（ｉ）疾病症状の発症に適した環境条件下で、請求項２４に記載のトランスジェニック植物または請求項２５に記載のトランスジェニック植物の一群を、対象とする前記植物病原体と接触させるステップであって、前記候補Ｒ遺伝子を欠如している対照植物が、対象とする前記植物病原体にとって宿主であり、前記植物病原体が、前記宿主植物で植物疾病症状を引き起こすことが可能である、接触させるステップと、
（ｉｉ）前記トランスジェニック植物（複数可）に関する疾病症状を評価するステップであって、前記候補Ｒ遺伝子を欠如している対照植物と比較した場合、トランスジェニック植物が、対象とする前記植物病原体によって引き起こされる植物疾病に対する耐性の増強を示す場合に、前記トランスジェニック植物が、対象とする前記植物病原体に対するＲ遺伝子を含む、評価するステップ
とを含む方法。

【請求項28】

請求項２６または２７に記載の方法によって同定されたＲ遺伝子を含む耐性植物または植物細胞であって、Ｒ遺伝子が、前記植物に、対象とする前記植物病原体によって引き起こされる植物疾病に対する耐性を付与することが可能である、耐性植物または植物細胞。

【請求項29】

前記Ｒ遺伝子が、前記耐性植物の種ではない異なる種に由来している、請求項２８に記載の耐性植物または植物細胞。

【請求項30】

前記耐性植物または植物細胞のゲノムが、前記Ｒ遺伝子を含む異種ポリヌクレオチド構築物を含む、請求項２８または２９に記載の耐性植物または植物細胞。

【請求項31】

請求項２６または２７に記載の方法によって同定された単離Ｒ遺伝子。

【請求項32】

請求項３１に記載のＲ遺伝子で形質転換された宿主細胞。

【請求項33】

以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子：
（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、または１８７に記載されるヌクレオチド配列、
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、または１８８に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
（ｃ）前記核酸分子が、植物に、コムギ黒さび病、コムギ黄さび病、コムギ赤さび病、コムギいもち病、およびコムギうどん粉病からなる群から選択される植物疾病に対する耐性を付与することが可能である、（ａ）に記載される前記ヌクレオチド配列の少なくとも１つに対して少なくとも７５％配列同一性を有するヌクレオチド配列、および
（ｄ）前記核酸分子が、植物に、コムギ黒さび病、コムギ黄さび病、コムギ赤さび病、コムギいもち病、およびコムギうどん粉病からなる群から選択される植物疾病に対する耐性を付与することが可能である、（ｂ）に記載される完全長アミノ酸配列の少なくとも１つに対して少なくとも７５％アミノ酸配列同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列。

【請求項34】

前記植物がコムギである、請求項３３に記載の核酸分子。

【請求項35】

前記核酸分子が、天然に存在しない、請求項３３または３４に記載の核酸分子。

【請求項36】

請求項３３から３５のいずれか１項に記載の核酸分子と、作動可能に連結された異種プロモーターとを含む発現カセット。

【請求項37】

請求項３３から３５のいずれか１項に記載の核酸分子または請求項３６に記載の発現カセットを含むベクター。

【請求項38】

請求項３３から３５のいずれか１項に記載の核酸分子、請求項３６に記載の発現カセット、または請求項３７に記載のベクターで形質添加された宿主細胞。

【請求項39】

請求項３３から３５のいずれか１項に記載の核酸分子、請求項３６に記載の発現カセット、または請求項３７に記載のベクターで形質転換されたコムギ植物、コムギ種子、またはコムギ細胞。

【請求項40】

そのゲノム中に安定に組み込まれた、請求項３３の（ａ）～（ｄ）のヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド構築物を含むトランスジェニック植物または種子。

【請求項41】

植物疾病に対する耐性が増強された植物を生産する方法であって、前記方法が、ポリヌクレオチド構築物を、少なくとも１つの植物細胞に導入するステップを含み、前記ポリヌクレオチド構築物が、請求項３３の（ａ）～（ｄ）のヌクレオチド配列からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、方法。

【請求項42】

前記ポリヌクレオチド構築物が、前記植物細胞のゲノムに安定に組み込まれている、請求項４１に記載の方法。

【請求項43】

前記ポリヌクレオチド構築物が、植物における前記ヌクレオチド配列の発現のために作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項４１または４２に記載の方法。

【請求項44】

前記植物細胞が、そのゲノム中に前記ポリヌクレオチド構築物を含む植物へと再生される、請求項４１から４３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項45】

請求項４１から４４のいずれか１項に記載の方法によって生産された植物。

【請求項46】

前記種子が、前記ポリヌクレオチド構築物を含む、請求項４５に記載の植物の種子。

【請求項47】

農作物生産において植物疾病を制限する方法であって、植物を、請求項３９、４０、および４６のいずれか１項に記載の種子を植えるステップと、前記植物の生育および発達に好適な条件下で生育させるステップとを含む方法。

【請求項48】

農業における請求項３９、４０、４５、および４６のいずれか１項に記載の植物または種子の使用。

【請求項49】

請求項３９、４０、４５、および４６のいずれか１項に記載の植物または種子を使用して生産されたヒトまたは動物の食物。

【請求項50】

以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、または１８８に記載されるアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、または１８７に記載されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列、および
（ｄ）前記ポリペプチドが、植物に、コムギ黒さび病、コムギ黄さび病、コムギ赤さび病、コムギいもち病、およびコムギうどん粉病からなる群から選択される植物疾病に対する耐性を付与することが可能である、（ａ）に記載される完全長アミノ酸配列の少なくとも１つに対して少なくとも８５％配列同一性を有するアミノ酸配列。

【請求項51】

対象とする少なくとも１つの植物害虫に対する候補植物害虫耐性（Ｒ）遺伝子のライブラリーを調製する方法であって、
候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成するために、対象とする１つまたは複数の植物それぞれから、高度に発現されるヌクレオチド結合性ロイシンリッチな反復遺伝子（ＮＬＲ）の亜集団を、前記１つまたは複数の植物の器官または他の部分において構成的に発現されるＮＬＲの集団の中から選択するステップを含み、
高度に発現されるＮＬＲが、前記構成的に発現されるＮＬＲの少なくとも６５％の前記植物の前記器官または他の部分における相対発現レベルを超える前記植物の前記器官または他の部分における相対発現レベルを含む、方法。

【請求項52】

請求項５１に記載の方法に従って調製された候補Ｒ遺伝子のライブラリー。

【請求項53】

請求項５２に記載のライブラリー由来の候補Ｒ遺伝子を含むトランスジェニック植物。

【請求項54】

トランスジェニック植物の一群であって、前記トランスジェニック植物それぞれが、請求項５２に記載のライブラリー由来の少なくとも１つの候補Ｒ遺伝子で形質転換されている、一群。

【請求項55】

対象とする植物害虫に対する植物害虫耐性（Ｒ）遺伝子を同定する方法であって、
（ｉ）宿主植物を、請求項５２に記載のライブラリーから選択された候補Ｒ遺伝子で形質転換するステップによって、形質転換された植物を生産するステップであって、前記宿主植物が、対象とする前記植物害虫にとって宿主である、生産するステップと、
（ｉｉ）前記形質転換された植物に対する疾病症状の発症または他の損傷に適した環境条件下で、前記形質転換された植物を、対象とする前記植物害虫と接触させるステップと、
（ｉｉｉ）前記形質転換された植物が、前記候補Ｒ遺伝子を欠如している対照植物と比較した場合、対象とする前記植物害虫に対する耐性の増強を示すかどうかを決定するステップであって、前記形質転換された植物が、対象とする前記植物害虫によって引き起こされる植物疾病または他の損傷に対する耐性の増強を示す場合に前記候補Ｒ遺伝子が、対象とする前記植物害虫に対するＲ遺伝子である、決定するステップ
とを含む方法。

【請求項56】

対象とする植物害虫に対する植物害虫耐性（Ｒ）遺伝子を同定する方法であって、
（ｉ）疾病症状の発症または他の損傷に適した環境条件下で、請求項５３に記載のトランスジェニック植物または請求項５４に記載のトランスジェニック植物の一群を、対象とする前記植物害虫と接触させるステップであって、前記候補Ｒ遺伝子を欠如している対照植物が、対象とする前記植物害虫にとって宿主であり、前記植物害虫が、前記宿主植物に対する疾病症状または他の損傷を引き起こすことが可能である、接触させるステップと
（ｉｉ）前記トランスジェニック植物（複数可）に関する損傷を評価するステップであって、前記候補Ｒ遺伝子を欠如している対照植物と比較した場合、トランスジェニック植物が、対象とする前記植物害虫によって引き起こされる植物疾病または他の損傷に対する耐性の増強を示す場合に、前記トランスジェニック植物が、対象とする前記植物害虫に対するＲ遺伝子を含む、評価するステップ
とを含む方法。

【請求項57】

Ｒ遺伝子が、前記植物に、対象とする前記植物害虫によって引き起こされる植物疾病または他の損傷に対する耐性を付与することが可能である、請求項５５または５６に記載の方法によって同定されたＲ遺伝子を含む耐性植物または植物細胞。

【請求項58】

前記Ｒ遺伝子が、前記耐性植物の種ではない異なる種に由来している、請求項５７に記載の耐性植物または植物細胞。

【請求項59】

前記耐性植物または植物細胞のゲノムが、前記Ｒ遺伝子を含む異種ポリヌクレオチド構築物を含む、請求項５７または５８に記載の耐性植物または植物細胞。

【請求項60】

請求項５５または５６に記載の方法によって同定された単離Ｒ遺伝子。

【請求項61】

請求項６０に記載のＲ遺伝子で形質転換された宿主細胞。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０２１年５月１１日に出願された米国仮特許出願第６３／１８６，９８６号の利益を主張し、それはその全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0002】

テキストファイルとして提出された配列表に対する参照
配列表の公式な複写を、０７０２９４－０２０１ＳＥＱＬＳＴ．ＴＸＴと名前を付し、２０２２年５月９日に作成し、１．８８メガバイトのサイズを有するファイルをＡＳＣＩＩフォーマット済配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子提出し、明細書と同時に出願した。このＡＳＣＩＩフォーマット済文書に含まれる配列表は明細書の一部であり、その全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0003】

発明の分野
本発明は、植物疾病耐性および作物改良の分野、特に、対象とする作物における植物病原体に対する植物疾病耐性遺伝子の同定に有用な方法に関する。

【背景技術】

【0004】

植物疾病は、農業においてかなりの収量損失を引き起こす。糸状植物病原体は、最も深刻な損傷をもたらす疾病に含まれ、最も注目すべきは真菌および卵菌である。これらの害虫は、栽培者にとって重要な課題であり、かなりの管理コストの原因となる。これらの疾病を管理する最もコスト効率が高く、環境にやさしい方法は、多くの場合、作物の野生近縁種またはさらには未関連の植物種に見い出され得る耐性遺伝子の使用である。栽培植物化された作物の野生近縁種は、多くの有用な疾病耐性（Ｒ）遺伝子を含有している。この自然耐性の導入は、疾病を管理する的確な方法である。しかしながら、Ｒ遺伝子を導入する伝統的な方法は通常、「リンケージドラッグ」、即ち、Ｒ遺伝子と共に有害な形質を同時導入してしまうことを回避するために長い育種トラジェクタリーを必要とする。さらに、Ｒ遺伝子は、一度に１つずつ配置されると、数シーズンで病原体によって克服される傾向にある。

【0005】

病原体が、単一Ｒ遺伝子によって提供される耐性を迅速に克服するのを防ぐアプローチは、作物における病原体に対する多重Ｒ遺伝子を同時に配置することである。かかるアプローチは、伝統的な植物育種法によって遂行され得るが、多重Ｒ遺伝子は、対象とする植物のゲノムの全体にわたって散在して見い出される可能性が非常に高く、多重Ｒ遺伝子を単一の植物に組み合わせることに、極めて労力を要して時間消費させる。さらに、首尾よい収穫を保証するように多重病原体が防除されることが不可欠である場合、この作業課題はより困難となる。あるいは、単一の作物に多重Ｒ遺伝子を迅速に配置するためにトランスジェニックアプローチが使用され得る。多重Ｒ遺伝子は、日常的な遺伝子操作技法を介して、導入遺伝子として単一の作物に導入され得る。好ましくは、多重Ｒ遺伝子は、育種株および作物栽培品種への多重Ｒ遺伝子の迅速な移入を促進するように単一遺伝子座として分離している単一の多導入遺伝子カセットとして導入される。

【0006】

Ｒ遺伝子の伝統的なマップベースのクローニングは、シーケンシング技術および生物学的洞察における大きな一歩にもかかわらず依然として困難であり、大きな一連の植物ゲノムは、組換えの欠如に起因してマップベースの遺伝学では利用しにくい。ほとんどのＲ遺伝子が、ヌクレオチド結合性ロイシンリッチな反復（ＮＬＲ）タンパク質をコードする遺伝子の構造学的クラスに属する。ＮＬＲ（即ち、ＮＬＲタンパク質をコードする遺伝子）は、植物ゲノムにおいて複雑なクラスターの中に存在する傾向にあり、何百ものＮＬＲが、典型的な植物ゲノムにある。したがって、伝統的なマップベースのクローニング法を使用する科学者は、その結果、頻繁に、多重ＮＬＲを含有するマップ間隔を区切り、どれが、対象とする耐性を付与するかを見出さなくてはならない。近年、耐性遺伝子濃縮シーケンシング（ＲｅｎＳｅｑ）として知られる新たな方法が、植物内のＮＬＲ全ての迅速な精査を可能にすることが報告されている（Ｊｕｐｅ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｐｌａｎｔ Ｊ．７６（３）：５３０－４４）。ＲｅｎＳｅｑ法は、植物におけるＮＬＲ配列を迅速に同定するのに使用され得る一方で、ＲｅｎＳｅｑ法は、さらなる遺伝子アプローチの非存在下で対象とする植物疾病に特異的なＮＬＲ遺伝子の同定を可能にしない。

【0007】

さらに最近では、さらなるマップベースの遺伝学の非存在下で対象とする植物疾病に特異的であるＲ遺伝子の同定を可能にするためにＭｕｔＲｅｎＳｅｑが開発された（Ｓｔｅｕｅｒｎａｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１６５９：２１５－２２９）。ＭｕｔＲｅｎＳｅｑは、対象とする植物疾病に対する耐性を含む植物からのＮＬＲ遺伝子の同定に有用であることが証明されている一方で、上記方法は、対象とする疾病に対して耐性である植物を突然変異誘発することと、続いて感受性の高い植物において改変されたＮＬＲ遺伝子を同定するために、耐性植物由来のＮＬＲ遺伝子のヌクレオチド配列を、感受性の高い植物と比較することとによって、感受性の高い植物を生産することに依存している。しかしながら、かかる感受性の高い植物の生産は困難であり得るため、有望な候補Ｒ遺伝子の数を限定し、対象とする疾病に対するＲ遺伝子を保有する植物を突然変異誘発することによる感受性の高い植物の生産に依存しない、対象とする疾病に関するＲ遺伝子を同定する新たなアプローチ。

【発明の概要】

【0008】

本発明は、対象とする１つまたは複数の植物病原体に対する候補植物疾病耐性（Ｒ）遺伝子、特にヌクレオチド結合性ロイシンリッチな反復（ＮＬＲ）タンパク質をコードするＲ遺伝子のライブラリーを調製する方法を提供する。上記方法は、候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成するために、対象とする１つまたは複数の植物それぞれにから、高度に発現されるヌクレオチド結合性ロイシンリッチな反復遺伝子（ＮＬＲ）の亜集団を、前記１つまたは複数の植物の器官または他の部分において構成的に発現されるＮＬＲの集団の中から選択するステップを含む。高度に発現されるＮＬＲの亜集団は、植物の器官または他の部分において、その植物またはその任意の器官もしくは他の部分が、対象とする１つまたは複数の植物病原体と接触されていることも、または代わりにそれらに曝露されていることもなしに、構成的に、高度に発現されるＮＬＲを含む。かかる高度に発現されるＮＬＲは、植物の器官または他の部分において構成的に発現されるＮＬＲの集団におけるＮＬＲの少なくとも約６５％の植物の器官または他の部分における相対発現レベルを超える植物の器官または他の部分における相対発現レベルを含むＮＬＲである。

【0009】

本発明は、植物に、対象とする植物病原体に対する耐性を付与することが可能なＲ遺伝子を同定する方法をさらに提供する。かかる方法は、候補Ｒ遺伝子を含むトランスジェニック植物またはそれぞれが候補Ｒ遺伝子を含むトランスジェニック植物の一群を、対象とする植物病原体と接触させるステップを含む。候補Ｒ遺伝子は、上述のように産生された候補Ｒ遺伝子のライブラリー由来である。かかるトランスジェニック植物それぞれが、宿主植物を候補Ｒ遺伝子で形質転換するステップによって産生され得る。宿主植物は、対象とする植物病原体にとって宿主（即ち、感受性の高い植物）である。即ち、植物病原体は、適切な環境条件下で、宿主植物に植物疾病症状を引き起こすことが可能である。上記方法は、感受性の高い植物での疾病症状の発症に適した環境条件下で、トランスジェニック植物（複数可）を、対象とする植物病原体と接触させるステップ、または代わりにトランスジェニック植物（複数可）を、対象とする植物病原体に曝露するステップと、トランスジェニック植物が、候補ＮＬＲ遺伝子を含まない対照宿主植物と比較した場合、対象とする植物病原体に対する耐性の増強を示すかどうかを決定するステップをさらに含む。かかるトランスジェニック植物に、対象とする植物病原体によって引き起こされる植物疾病症状に対する耐性を付与する候補ＮＬＲ遺伝子は、機能性ＮＬＲ遺伝子であると同定される。

【0010】

さらに、候補ＮＬＲ遺伝子を含むライブラリー、候補ＮＬＲ遺伝子を含むトランスジェニック植物の一群、本発明の方法に従って同定された１つまたは複数のＮＬＲ遺伝子を含む核酸分子、ならびに１つまたは複数のかかるＮＬＲ遺伝子を含む植物、植物細胞、および他の宿主細胞が提供される。

【図面の簡単な説明】

【0011】

【図1】オオムギ（ホルデウム・ブルガレ（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ））系統Ｇｏｌｄｅｎ Ｐｒｏｍｉｓｅのデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ ｆ．ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ））に対する２つの機能性耐性遺伝子Ｒｐｓ６およびＲｐｓ７．ａ（Ｍｌａ８）の発現が示されている。

【図2】オオムギ（ホルデウム・ブルガレ）系統ＣＩ １６１４７のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｒｐｓ７．ｂ（Ｍｌａ７）の発現が示されている。

【図3】オオムギ（ホルデウム・ブルガレ）系統ＣＩ １６１５３のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｒｐｓ７．ｂ（Ｍｌａ７）の発現が示されている。

【図4】キマメ（ｐｉｇｅｏｎ ｐｅａ）（カジャヌス・カジャン（Ｃａｊａｎｕｓ ｃａｊａｎ））系統Ｇ１１９－９９のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。アジアダイズさび病（ファコプソラ・パシリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ））に対する機能性耐性遺伝子Ｒｐｐ１の発現が示されている。

【図5】シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ）系統Ｃｏｌ－０のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。べと病（ヒアロペロノスポラ・アラビドプシディス（Ｈｙａｌｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｄｉｓ））に対する機能性耐性遺伝子ＲＰＰ１、ＲＰＰ４、ＲＰＰ５、ＲＰＰ７、およびＲＰＰ８、白さび病（アルブゴ・カンディダ（Ａｌｂｕｇｏ ｃａｎｄｉｄａ））に対する機能性耐性遺伝子ＷＲＲ４、ならびにシュードモナス・シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ）に対する機能性耐性遺伝子ＺＡＲ１の発現が示されている。

【図6】タルホコムギ（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｔａｕｓｃｈｉｉ）系統ＫＵ２０２５のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ． ｓｐ． ｔｒｉｔｉｃｉ））に対する機能性耐性遺伝子Ｓｒ４６の発現が示されている。

【図7】タルホコムギ系統ＫＵ２０７５のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｓｒ４６の発現が示されている。

【図8】タルホコムギ系統ＫＵ２０７８のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｓｒ４６およびＳｒＴＡ１６６２の発現が示されている。

【図9】タルホコムギ系統ＫＵ２０９３のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｓｒ４６の発現が示されている。

【図10】タルホコムギ系統ＫＵ２１２４のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｓｒ４５の発現が示されている。

【図11】タルホコムギ系統ＰＩ ４９９２６２のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｓｒ４６の発現が示されている。

【図12】シロイヌナズナ系統Ｌｅｒ－０実生のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。葉枯れ病（ヒアロペロノスポラ・アラビドプシディス）に対する機能性耐性遺伝子ＲＰＰ１、ＲＰＰ５、ＲＰＰ７、およびＲＰＰ８、ならびに白さび病（アルブゴ・カンディダ）に対する機能性耐性遺伝子ＷＲＲ４、ＷＲＲ８、およびＷＲＲ９の発現が示されている。

【図13】シロイヌナズナ系統Ｓｆ－２実生のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。葉枯れ病（ヒアロペロノスポラ・アラビドプシディス）に対する機能性耐性遺伝子ＲＰＰ１、ＲＰＰ５、ＲＰＰ７、およびＲＰＰ８、白さび病（アルブゴ・カンディダ）に対する機能性耐性遺伝子ＷＲＲ８およびＷＲＲ９、ならびに灰色かび病（ボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ））、キャベツの黒斑病（アルタナリア・ブラッシシコラ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ））およびアブラナ科植物（ｃｒｕｃｉｆｅｒ）（アルタナリア・ブラッシカエ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ））の黒斑に対する機能性耐性遺伝子ＲＬＭ３の対立遺伝子の発現が示されている。

【図14】シロイヌナズナ系統Ｗｓ－０実生のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。葉枯れ病（ヒアロペロノスポラ・アラビドプシディス）に対する機能性耐性遺伝子ＲＰＰ１、ＲＰＰ５、ＲＰＰ７、およびＲＰＰ８、白さび病（アルブゴ・カンディダ）に対する機能性耐性遺伝子ＷＲＲ８およびＷＲＲ９、ならびに灰色かび病（ボトリチス・シネレア）、キャベツの黒斑病（アルタナリア・ブラッシシコラ）およびアブラナ科植物（アルタナリア・ブラッシカエ）の黒斑に対する機能性耐性遺伝子ＲＬＭ３の対立遺伝子の発現が示されている。

【図15】アメリカイヌホオズキ（Ｓｏｌａｎｕｍ ａｍｅｒｉｃａｎｕｍ）系統２２７３のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。葉枯れ病（フィトフトラ・インフェスタンス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓｔａｎｓ））に対する機能性耐性遺伝子Ｒｐｉ－ａｍｒ１ｅの発現が示されている。

【図16】ソラヌム・リコペルシクム（Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）栽培品種Ｍｏｔｅｌｌｅ葉組織のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。根こぶ線虫（ネコブ線虫ｓｐｐ．（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｓｐｐ．））、ジャガイモアフィド（ｐｏｔａｔｏ ａｐｈｉｄ）（マクロシフム・ユーフォルビアエ（Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｕｍ ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ））、およびサツマイモコナジラミ（ベミシア・タバシ（Ｂｅｍｉｓｉａ ｔａｂａｃｉ））に対する機能性耐性遺伝子Ｍｉ－１．２の発現が示されている。

【図17】ソラヌム・リコペルシクム栽培品種Ｍｏｔｅｌｌｅ根組織のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。根こぶ線虫（ネコブ線虫ｓｐｐ．）、ジャガイモアフィド（マクロシフム・ユーフォルビアエ）、およびサツマイモコナジラミ（ベミシア・タバシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｍｉ－１．２の発現が示されている。

【図18】ソラヌム・リコペルシクム栽培品種ＶＦＮＴ Ｃｈｅｒｒｙ葉組織のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。トマトモザイクウイルス（ＴｏＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）を含むトバモウイルスに対する機能性耐性遺伝子Ｔｍ－２ならびに根こぶ線虫（ネコブ線虫ｓｐｐ．）、ジャガイモアフィド（マクロシフム・ユーフォルビアエ）、およびサツマイモコナジラミ（ベミシア・タバシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｍｉ－１．２の発現が示されている。

【図19】ソラヌム・リコペルシクム栽培品種ＶＦＮＴ Ｃｈｅｒｒｙ根組織のデノボ構築されたトランスクリプトーム由来のＮＬＲの転写物存在量のグラフ表示である。転写物存在量は、１００万個当たりの転写物（ＴＰＭ）で測定したセルフアラインされたＲＮＡｓｅｑデータから推定された。トマトモザイクウイルス（ＴｏＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）を含むトバモウイルスに対する機能性耐性遺伝子Ｔｍ－２ならびに根こぶ線虫（ネコブ線虫ｓｐｐ．）、ジャガイモアフィド（マクロシフム・ユーフォルビアエ）、およびサツマイモコナジラミ（ベミシア・タバシ）に対する機能性耐性遺伝子Ｍｉ－１．２の発現が示されている。

【発明を実施するための形態】

【0012】

配列表
添付の配列表に列挙されるヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、ヌクレオチド塩基に関しては標準的な文字の略語を、またアミノ酸に関して三文字コードを使用して示されている。ヌクレオチド配列は、配列の５’末端に始まり、前方に（即ち、各線の左から右へ）３’末端へと進むという標準的な慣例に倣う。各ヌクレオチド配列の一方の鎖のみを示しているが、相補鎖は、表示される鎖に対する任意の参照によって含まれると理解される。アミノ酸配列は、配列のアミノ末端に始まり、前方に（即ち、各線の左から右へ）カルボキシ末端へと進むという標準的な慣例に倣う。

【0013】

配列番号１は、エギロプス・ロンギッシマ（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍａ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿４０のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号１を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0014】

配列番号２は、Ｄｋ＿０４＿４０（配列番号１）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0015】

配列番号３は、エギロプス・シャロネンシス（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｓｈａｒｏｎｅｎｓｉｓ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿０３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号３を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0016】

配列番号４は、Ｄｋ＿０１＿０３（配列番号３）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0017】

配列番号５は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿０４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号５を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0018】

配列番号６は、Ｄｋ＿０１＿０４（配列番号５）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0019】

配列番号７は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿０６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号７を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0020】

配列番号８は、Ｄｋ＿０１＿０６（配列番号７）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0021】

配列番号９は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿３１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号９を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0022】

配列番号１０は、Ｄｋ＿０１＿３１（配列番号９）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0023】

配列番号１１は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿３３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号１１を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0024】

配列番号１２は、Ｄｋ＿０１＿３３（配列番号１１）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0025】

配列番号１３は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿３４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号１３を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0026】

配列番号１４は、Ｄｋ＿０１＿３４（配列番号１３）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0027】

配列番号１５は、ホルクス・ラナツス（Ｈｏｌｃｕｓ ｌａｎａｔｕｓ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿９２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号１５を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0028】

配列番号１６は、Ｄｋ＿０１＿９２（配列番号１５）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0029】

配列番号１７は、コエレリア・マクランサ（Ｋｏｅｌｅｒｉａ ｍａｃｒａｎｔｈａ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿２７のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号１７を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0030】

配列番号１８は、Ｄｋ＿０２＿２７（配列番号１７）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0031】

配列番号１９は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿２８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号１９を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0032】

配列番号２０は、Ｄｋ＿０２＿２８（配列番号１９）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0033】

配列番号２１は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿４９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号２１を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0034】

配列番号２２は、Ｄｋ＿０２＿４９（配列番号２１）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0035】

配列番号２３は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿７６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号２３を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0036】

配列番号２４は、Ｄｋ＿０３＿７６（配列番号２３）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0037】

配列番号２５は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿１９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、配列番号２５を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0038】

配列番号２６は、Ｄｋ＿０１＿１９（配列番号２５）によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0039】

配列番号２７は、ＧａｔｅｗａｙアダプターａｔｔＢ１のヌクレオチド配列を明記している。

【0040】

配列番号２８は、ＧａｔｅｗａｙアダプターａｔｔＢ２のヌクレオチド配列を明記している。

【0041】

配列番号２９は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿３５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0042】

配列番号３０は、配列番号２９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0043】

配列番号３１は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿５５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0044】

配列番号３２は、配列番号３１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0045】

配列番号３３は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿５７のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0046】

配列番号３４は、配列番号３３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0047】

配列番号３５は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿５９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0048】

配列番号３６は、配列番号３５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0049】

配列番号３７は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿６０のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0050】

配列番号３８は、配列番号３７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0051】

配列番号３９は、キノスルス・クリスタツス（Ｃｙｎｏｓｕｒｕｓ ｃｒｉｓｔａｔｕｓ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿６１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0052】

配列番号４０は、配列番号３９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0053】

配列番号４１は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿６２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0054】

配列番号４２は、配列番号４１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0055】

配列番号４３は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿６４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0056】

配列番号４４は、配列番号４３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0057】

配列番号４５は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿６８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0058】

配列番号４６は、配列番号４５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0059】

配列番号４７は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿０２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0060】

配列番号４８は、配列番号４７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0061】

配列番号４９は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿０３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0062】

配列番号５０は、配列番号４９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0063】

配列番号５１は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿０６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0064】

配列番号５２は、配列番号５１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0065】

配列番号５３は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿０７のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0066】

配列番号５４は、配列番号５３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0067】

配列番号５５は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿０８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0068】

配列番号５６は、配列番号５５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0069】

配列番号５７は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿１１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0070】

配列番号５８は、配列番号５７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0071】

配列番号５９は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿１３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0072】

配列番号６０は、配列番号５９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0073】

配列番号６１は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿１４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0074】

配列番号６２は、配列番号６１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0075】

配列番号６３は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿１９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0076】

配列番号６４は、配列番号６３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0077】

配列番号６５は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿２０のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0078】

配列番号６６は、配列番号６５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0079】

配列番号６７は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿２５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0080】

配列番号６８は、配列番号６７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0081】

配列番号６９は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿３４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0082】

配列番号７０は、配列番号６９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0083】

配列番号７１は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿３５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0084】

配列番号７２は、配列番号７１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0085】

配列番号７３は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿３６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0086】

配列番号７４は、配列番号７３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0087】

配列番号７５は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿３８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0088】

配列番号７６は、配列番号７５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0089】

配列番号７７は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿３９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0090】

配列番号７８は、配列番号７７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0091】

配列番号７９は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿４２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0092】

配列番号８０は、配列番号７９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0093】

配列番号８１は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿４４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0094】

配列番号８２は、配列番号８１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0095】

配列番号８３は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０２＿４６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0096】

配列番号８４は、配列番号８３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0097】

配列番号８５は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿１３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0098】

配列番号８６は、配列番号８５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0099】

配列番号８７は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿１６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0100】

配列番号８８は、配列番号８７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。
配列番号８９は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿１９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0101】

配列番号９０は、配列番号８９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0102】

配列番号９１は、ホルクス・ラナツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿４８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0103】

配列番号９２は、配列番号９１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0104】

配列番号９３は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿５８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0105】

配列番号９４は、配列番号９３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0106】

配列番号９５は、コエレリア・マクランサ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿６０のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0107】

配列番号９６は、配列番号９５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0108】

配列番号９７は、ホルデウム・ブルガレ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿３４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0109】

配列番号９８は、配列番号９７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0110】

配列番号９９は、エギロプス・ビコルニス（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｂｉｃｏｒｎｉｓ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿４４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0111】

配列番号１００は、配列番号９９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0112】

配列番号１０１は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿８５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0113】

配列番号１０２は、配列番号１０１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0114】

配列番号１０３は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿８８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0115】

配列番号１０４は、配列番号１０３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0116】

配列番号１０５は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿９２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0117】

配列番号１０６は、配列番号１０５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0118】

配列番号１０７は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿９５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0119】

配列番号１０８は、配列番号１０７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0120】

配列番号１０９は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿９６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0121】

配列番号１１０は、配列番号１０９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0122】

配列番号１１１は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿１１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0123】

配列番号１１２は、配列番号１１１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0124】

配列番号１１３は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿１４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0125】

配列番号１１４は、配列番号１１３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0126】

配列番号１１５は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿１５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0127】

配列番号１１６は、配列番号１１５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0128】

配列番号１１７は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿１６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0129】

配列番号１１８は、配列番号１１７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0130】

配列番号１１９は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿２４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0131】

配列番号１２０は、配列番号１１９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0132】

配列番号１２１は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿２９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0133】

配列番号１２２は、配列番号１２１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0134】

配列番号１２３は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿３０のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0135】

配列番号１２４は、配列番号１２３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0136】

配列番号１２５は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿３３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0137】

配列番号１２６は、配列番号１２５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0138】

配列番号１２７は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿３４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0139】

配列番号１２８は、配列番号１２７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0140】

配列番号１２９は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿３５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0141】

配列番号１３０は、配列番号１２９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0142】

配列番号１３１は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿３８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0143】

配列番号１３２は、配列番号１３１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0144】

配列番号１３３は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿４２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0145】

配列番号１３４は、配列番号１３３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0146】

配列番号１３５は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿４４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0147】

配列番号１３６は、配列番号１３５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0148】

配列番号１３７は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿４７のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0149】

配列番号１３８は、配列番号１３７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0150】

配列番号１３９は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿５３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0151】

配列番号１４０は、配列番号１３９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0152】

配列番号１４１は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿５６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0153】

配列番号１４２は、配列番号１４１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0154】

配列番号１４３は、ブラキポディウム・ディスタキオン（Ｂｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍ ｄｉｓｔａｃｈｙｏｎ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿０１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0155】

配列番号１４４は、配列番号１４３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0156】

配列番号１４５は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿０３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0157】

配列番号１４６は、配列番号１４５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0158】

配列番号１４７は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿０４のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0159】

配列番号１４８は、配列番号１４７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0160】

配列番号１４９は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿０５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0161】

配列番号１５０は、配列番号１４９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0162】

配列番号１５１は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿０６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0163】

配列番号１５２は、配列番号１５１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0164】

配列番号１５３は、エギロプス・セアルシイ（Ａｅｇｉｌｏｐｓ ｓｅａｒｓｉｉ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿５２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0165】

配列番号１５４は、配列番号１５３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0166】

配列番号１５５は、エギロプス・セアルシイ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿５３のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0167】

配列番号１５６は、配列番号１５５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0168】

配列番号１５７は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿２１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＡである。

【0169】

配列番号１５８は、配列番号１５７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0170】

配列番号１５９は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０１＿４８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0171】

配列番号１６０は、配列番号１５９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0172】

配列番号１６１は、キノスルス・クリスタツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿１５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0173】

配列番号１６２は、配列番号１６１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0174】

配列番号１６３は、ホルクス・ラナツス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿４９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0175】

配列番号１６４は、配列番号１６３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0176】

配列番号１６５は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０３＿６８のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0177】

配列番号１６６は、配列番号１６５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0178】

配列番号１６７は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿６７のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0179】

配列番号１６８は、配列番号１６７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0180】

配列番号１６９は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿７１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0181】

配列番号１７０は、配列番号１６９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0182】

配列番号１７１は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０４＿９１のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0183】

配列番号１７２は、配列番号１７１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0184】

配列番号１７３は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿７５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0185】

配列番号１７４は、配列番号１７３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0186】

配列番号１７５は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０５＿９２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0187】

配列番号１７６は、配列番号１７５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0188】

配列番号１７７は、エギロプス・ロンギッシマ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿０２のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0189】

配列番号１７８は、配列番号１７７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0190】

配列番号１７９は、エギロプス・ビコルニス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿１０のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0191】

配列番号１８０は、配列番号１７９によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0192】

配列番号１８１は、エギロプス・セアルシイ由来のＮＬＲであるＤｋ＿０６＿３６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0193】

配列番号１８２は、配列番号１８１によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0194】

配列番号１８３は、エギロプス・シャロネンシス由来のＮＬＲであるＤｋ＿０８＿１６のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0195】

配列番号１８４は、配列番号１８３によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0196】

配列番号１８５は、アベナ・アビッシニカ（Ａｖｅｎａ ａｂｙｓｓｉｎｉｃａ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０８＿７９のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＡＧである。

【0197】

配列番号１８６は、配列番号１８５によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0198】

配列番号１８７は、ブリザ・メディア（Ｂｒｉｚａ ｍｅｄｉａ）由来のＮＬＲであるＤｋ＿０９＿５５のｃＤＮＡのコード領域のヌクレオチド配列を明記している。望ましい場合、停止コドン（例えば、ＴＡＡ、ＴＡＧ、またはＴＧＡ）は、このＮＬＲ配列を含むか、またはそれからなる核酸分子の３’末端に作動可能に連結され得る。このｃＤＮＡのネイティブ停止コドンはＴＧＡである。

【0199】

配列番号１８８は、配列番号１８７によってコードされるＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を明記している。

【0200】

発明の詳細な説明
本発明はここで、以下で添付の図面を参照してより十分に記載され、ここで、本発明の一部が示されるが、本発明の実施形態の全てが示されるわけではない。実際に、これらの本発明は、多種多様な形態で具現化されてもよく、本明細書中に記載される実施形態に限定されると解釈されるべきではなく、正しく言うと、これらの実施形態は、本開示が適用可能な法的要件を満たすように提供される。同様の数字は、全体にわたって同様のエレメントを指す。

【0201】

先述の説明および付随する図面に提示される教示の利益を有する、本明細書中に記載される本発明の多くの修正および他の実施形態が、これらの発明が関連する技術分野の当業者に思い浮かぶであろう。したがって、本発明は、開示された特定実施形態に限定されるべきではなく、修正および他の実施形態は、併記の特許請求の範囲内に含まれることが意図されると理解される。特定用語が本明細書中で用いられるが、それらは、単に一般的かつ説明的な意味で使用され、限定の目的では使用されない。

【0202】

一態様では、本発明は、候補植物疾病耐性（ＮＬＲ）遺伝子のライブラリーを調製する方法に関する。候補ＮＬＲ遺伝子のかかるライブラリーは、感受性宿主植物に、対象とする植物病原体に対する耐性を付与することが可能である植物におけるＮＬＲ遺伝子の同定方法の効率を高めるのに利用される。植物ゲノムは通常、何百ものＮＬＲを含むため、対象とする植物病原体によって引き起こされる植物疾病に対する耐性を提供する植物におけるＮＬＲ遺伝子を同定することは、骨の折れる作業であり得る。本発明の方法は、特定の候補ＮＬＲ遺伝子が、感受性宿主植物に、対象とする植物病原体に対する耐性を付与することが可能であるかどうかを決定するために、感受性宿主植物において検査される必要のある新規シグネチャーを使用して候補ＮＬＲ遺伝子の数を低減する上で利用される。本発明の方法は、負荷されていない（ｕｎｃｈａｌｌｅｇｅｄ）植物組織において高発現のシグネチャーを示すＮＬＲを選択することを包含する。ＮＬＲは通常、収量の不利益を引き起こすことがあり得る低発現遺伝子であると考えられているため、このシグネチャーはこれまで見落とされてきた。Ｌａｉ ＆ Ｅｕｌｇｅｍ，２０１８，Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ．１９（５）：１２６７－１２８１；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ ４２３（６９３５）：７４－７７；Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ．，２００４，ＭＰＭＩ １７（２）：１４０－１５１；Ｃｈｅｒｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，ＭＰＭＩ １８（６）：５１１－５２０；Ｋａｒａｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ２９（４）：６６６－６８０；Ｊｏｎｅｓ ＆ Ｄａｎｇｌ，２００６，Ｎａｔｕｒｅ ４４４（７１１７）：３２３－３２９；Ｒｉｃｈａｒｄ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ．１９（１１）：２５１６－２５２３；およびＢａｇｇｓ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｃｕｒｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌ．３８：５９－６７を参照のこと。

【0203】

第２の態様では、本発明は、本発明の方法に従って調製された候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーを使用して、対象とする植物病原体に対するＮＬＲ遺伝子を同定する改善された方法に関する。上記方法は、作物に組み込まれ得る新たなＮＬＲ遺伝子の同定に利用されて、対象とする植物疾病に対する耐性を付与する。かかる新たなＮＬＲ遺伝子は、植物育種家によって望まれ、１つまたは複数の植物疾病に対する耐性が増強された新たな作物変種の開発に役立つ。

【0204】

本発明の方法は、これらに限定されないが真菌、細菌、卵菌、線虫、およびウイルス植物病原体を含む多種多様な病原体に対するＮＬＲ遺伝子を同定するのに利用される。対象とする植物病原体は、対象とする宿主植物、特に食物、繊維、または動物飼料用にヒトによって生育された作物または他の植物、より詳細には対象とする植物病原体によって引き起こされる植物疾病に起因して農学的収量の損失を被ることが知られている作物または他の植物で植物疾病症状を引き起こすことが可能である植物病原体である。

【0205】

本発明は、本発明者らによって成されたある特定の観察または発見に部分的に基づく。第１に、葉面病原体に対する特性化されたＮＬＲ遺伝子は全て、単子葉類および双子葉類における負荷されていない葉組織で発現されている。公開された例として、Ｐｍ３ｂ、Ｒｐｇ５、Ｓｒ３３、およびＣｃＲｐｐ１が挙げられる（Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１６ ３４（６）：６６１－６６５；米国特許第１０，８４２，０９７号）。第２に、葉トランスクリプトームにおいて発現されるＮＬＲの平均数は、これらに限定されないがコムギ、オオムギ、エギロプス・シャロネンシス、アクナテルム・ヒメノイデス（Ａｃｈｎａｔｈｅｒｕｍ ｈｙｍｅｎｏｉｄｅｓ）、エギロプス・ビコルニス、エギロプス・ロンギッシマ、エギロプス・セアルシイ、エギロプス・シャロネンシス、アグロピロン・クリスタツム（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ ｃｒｉｓｔａｔｕｍ）、アベナ・アビッシニカ、ブラキポディウム・ディスタキオン、ブリザ・メディア、キノスルス・クリスタツス、エキナリア・カピタタ（Ｅｃｈｉｎａｒｉａ ｃａｐｉｔａｔａ）、ホルクス・ラナツス、ホルデウム・ブルガレ、コエレリア・マクランサ、ロリウム・ペレンネ（Ｌｏｌｉｕｍ ｐｅｒｅｎｎｅ）、メリカ・シリアテ（Ｍｅｌｉｃａ ｃｉｌｉａｔｅ）、ファラリス・コエルレスセンス（Ｐｈａｌａｒｉｓ ｃｏｅｒｕｌｅｓｃｅｎｓ）、およびポア・トリビアリス（Ｐｏａ ｔｒｉｖｉａｌｉｓ）を含む多様な草種に関して１００～２００個である。これは、ゲノムにおけるＮＬＲの総数のほんの一部である。例えば、オオムギ／コムギゲノムでコードされるＮＬＲ全てのほんの約１０％が、葉組織で発現される（図１～３）。決定的には、葉トランスクリプトームで発現されるＮＬＲの群内で、高度に発現されるＮＬＲの亜群は、機能性Ｒ遺伝子に関して飽和されている（図１～１１）。この発見は、多くのＲ遺伝子がクローニングおよび特性化されているモデル種シロイヌナズナ、系統Ｃｏｌｕｍｂｉａ－０（Ｃｏｌ－０）内での発現レベルに関して実施されたバイオインフォマティクス解析に基づいている。この十分研究された種における観察は、耐性を有すると記載されている１０個のＮＬＲのうち、９個が、葉組織で発現されたＮＬＲの上位２５％に存在しているという本発明者らの初期の観察を裏付けている（図５）。より以前の刊行物によりＮＬＲは収量への負の影響を持つと示唆されていたため、このシグネチャーはこれまで見落とされており、この、タンパク質のクラス内の機能性ＮＬＲが低レベルで存在しなくてはならないという広く支持されている前提を招いている。最も高度に発現されるＮＬＲは、シロイヌナズナ（Ａ．Ｔｈａｌｉａｎａ）と共進化することが知られている病原体であるヒアロペロノスポラ・アラビドプシス（Ｈｙａｌｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）およびアルブゴ・カンディダに対して有効であるものである。公表されているデータ（Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１６ ３４（６）：６６１－６６５）を、マップベースのクローニングを介して同定されたＮＬＲ遺伝子（ＣｃＲｐｐ１）が上記判断基準を使用して同定することができるかどうかを決定するのに使用した。実際に、ＣｃＲｐｐ１は、高度に発現されるＮＬＲの上位１０％に存在すると決定された（図４）。

【0206】

本発明は、対象とする１つまたは複数の植物病原体（複数可）に対する候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーを調製する方法を提供する。上記方法は、候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成するために、対象とする１つまたは複数の植物それぞれから、高度に発現されるＮＬＲの亜集団を、１つまたは複数の植物の器官または他の部分において構成的に発現されるＮＬＲの集団の中から選択するステップを含む。高度に発現されるＮＬＲの亜集団は、植物の器官または他の部分において、その植物またはその任意の器官もしくは他の部分が、対象とする１つまたは複数の植物病原体と接触されていることも、または代わりにそれらに曝露されていることもなしに、構成的に、高度に発現されるＮＬＲを含む。かかる植物組織は、植物組織も、組織が由来するかもしくは由来した植物の任意の部分も、対象とする任意の植物病原体と意図的に接触されておらず、あるいは代わりに植物病原体で感染されていることが知られていないか、または例えば昆虫およびダニなどの任意の他の植物害虫に悩まされていることが知られていないため、本明細書中では「負荷されていない」植物組織と称される。

【0207】

かかる負荷されていない植物組織は、植物器官（例えば、葉、茎、または根）または対象とする病原体と接触されていないか、または代わりにそれらに曝露されていない植物の任意の他の部分であり得る。好ましくは、負荷されていない植物組織も植物の任意の他の部分も、対象とする植物病原体に曝露されておらず、植物は良好な健康状態であり、植物疾病のいかなる症状も、例えば昆虫などの他の植物害虫由来の損傷の兆候も示していない。

【0208】

植物（単数または複数）の植物器官または他の部分において発現されるＮＬＲの亜集団は、個々のＮＬＲのｍＲＮＡを検出することによって、好ましくは、植物（単数または複数）の植物器官または他の部分において発現される個々のＮＬＲ遺伝子を同定するだけでなく、様々な発現されるＮＬＲ遺伝子の相対発現レベルを評価するのに使用することができる例えばＲＮＡシーケンシング（ＲＮＡｓｅｑ）などのトランスクリプトームプロファイリング法によって決定することができる。したがって、ＲＮＡｓｅｑは、候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成するために、植物器官または他の植物組織における発現されるＮＬＲの亜集団および高度に発現される候補Ｒ遺伝子である発現されるＮＬＲの一部の両方を決定するのに用いられ得る。例えばａｆｆｙｍｅｔｒｉｘアレイおよびスポットｃＤＮＡアレイなどのマイクロアレイ技術を含む、高度に発現されるＮＬＲを同定する他の方法は、転写物における種々のレベルを定量化するために本発明の方法において使用することができる方法である。あるいは、高度に発現されるＮＬＲが、それら各々のＮＬＲによってコードされるＮＬＲタンパク質に関してより高い平均タンパク質レベルによって同定され得るため、これらに限定されないがＬＣ－ＭＳ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ、ＭａｓｓＳｐｅｃ、Ｑ－ＴＯＦ等を含むタンパク質定量化方法が用いられ得る。

【0209】

通常、高度に発現されるＮＬＲは、発現されるＮＬＲの少なくとも約６５％の植物の同じ器官または同じ部分における相対発現レベルを超える植物の器官または他の部分における相対発現レベルを含む。好ましくは、高度に発現されるＮＬＲは、発現されるＮＬＲの少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の植物の同じ器官または同じ部分における相対発現レベルを超える植物の器官または他の部分における発現レベルを含む。換言すると、対象とする植物の特定の器官または他の部分における高度に発現されるＮＬＲは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における全ての発現されるＮＬＲの発現レベルと比較した場合に、少なくとも上位約３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、または３％に発現レベルを有する発現されるＮＬＲである。好ましくは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における高度に発現されるＮＬＲは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における全ての発現されるＮＬＲの発現レベルと比較した場合に、少なくとも上位約２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、または３％に発現レベルを有する発現されるＮＬＲである。より好ましくは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における高度に発現されるＮＬＲは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における全ての発現されるＮＬＲの発現レベルと比較した場合に、少なくとも上位約２０％、１５％、１０％、５％、４％、または３％に発現レベルを有する発現されるＮＬＲである。最も好ましくは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における高度に発現されるＮＬＲは、対象とする植物の特定の器官または他の部分における全ての発現されるＮＬＲの発現レベルと比較した場合に、少なくとも上位約２０％、１５％、１０％、５％、４％、または３％に発現レベルを有する発現されるＮＬＲである。

【0210】

高度に発現されるＮＬＲを決定するための任意の適切な相対発現レベルの選択は、例えばｍＲＮＡ供給源として使用される植物の植物種、植物器官または他の部分、対象とする植物における発現されるＮＬＲ遺伝子の総数、植物器官または他の植物の一部において発現される植物のゲノムにおける総ＮＬＲの部分、およびｍＲＮＡが単離される植物の生育条件を含む任意数の要因に依存することが認識されている。

【0211】

ＲＮＡｓｅｑ、ＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ （ｖ４．１．０；ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ／ＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ／ｒｅｌｅａｓｅｓのワールドワイドウェブで利用可能）を含む本発明のある特定の実施形態では、ＬｏｎｇＯｒｆを使用して、デノボ構築されたトランスクリプトームにおける全てのオープンリーディングフレームを予測することができる。推定上のＮＬＲタンパク質をコードする転写物を同定するために、ＩｎｔｅｒＰｒｏＳｃａｎ（ｖ５．２７－６６．０）（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ３０（９）：１２３６－１２４０；ｄｏｉ：１０．１０９３／ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ／ｂｔｕ０３１）を使用して、例えば、ＣｏｉｌｓおよびＰｆａｍ、Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ、およびＰｒｏＳｉｔｅデータベースを使用してドメインをアノテートすることができる。ヌクレオチド結合性（ＮＢ）ドメインおよびロイシンリッチな反復（ＬＲＲ）ドメインの両方を含有するタンパク質をコードする任意のＮＬＲ遺伝子は、ＮＬＲタンパク質として同定されて、解析が進められ得る。ＦＡＴ－ＣＡＴから開発されたカスタムスクリプト（Ａｆｒａｓｉａｂｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．４１：Ｗ２４２－Ｗ２４８，ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｔ３９９）を使用して、ＮＬＲに由来するイネ、ブラキポディウム・ディスタキオン、およびオオムギのヌクレオチド結合性ドメインから開発された系統樹に基づくヌクレオチド結合性ドメインを分類することができる。ＮＬＲコード遺伝子は、例えば、下記要件に基づいて発展させることができる：転写物は、完全または５’部分的オープンリーディングフレームのいずれかを含有し；遺伝子は、植物器官または他の植物の一部において上位２５％で発現されるＮＬＲの中にあり；遺伝子は、さらなるＮＬＲを必要とすることが知られているＮＬＲファミリーに属さない（例えば、Ｂａｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．１９：２３を参照）。候補ＮＬＲの中でも、１００％同一性を要するＣＤ－ＨＩＴ（ｖ４．７）を使用して、冗長性が除去された（－ｃ １．０）。ＰＣＲプライマーは、それぞれ、コード配列の開始または終止の最初の２０個のヌクレオチドに融合されたＧａｔｅｗａｙアダプターａｔｔＢ１（配列番号２７）およびａｔｔＢ２（配列番号２８）を使用して開発された。Ｇａｔｅｗａｙクローニング技術の概説に関しては、Ｋａｔｚｅｎ．（２００７）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２（４）：５７１－５８９を参照のこと。

【0212】

本発明のこの実施形態では、同定されたＮＬＲタンパク質は、少なくとも１つのＮＢドメインと、少なくとも１つのＬＲＲドメインとを含む。かかる同定されたＮＬＲタンパク質は、１つまたは複数のさらなるドメイン、特に、これらに限定されないがコイルドコイル（ＣＣ）ドメイン、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン、さらなるＮＢドメイン、およびさらなるＬＲＲドメインを含むＮＬＲタンパク質に存在することが知られているドメインをさらに含み得る。本発明の同定されたＮＬＲタンパク質の例は、以下の実施例２でさらに記載される。

【0213】

Ｎ末端からＣ末端方向への既知のＮＬＲタンパク質のドメインに関する典型的な順序がＣＣ－ＮＢ－ＬＲＲ、ＴＩＲ－ＮＢ－ＬＲＲ、またはＮＢ－ＬＲＲであるが、本発明の方法は、特定の構造を有するＮＬＲタンパク質に依存せず、既知のＮＬＲタンパク質にとっては非典型的なドメイン構造を受け入れることができる。

【0214】

本発明のある特定の実施形態では、対象とする少なくとも１つの植物病原体に対する候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーを調製する方法は、対象とする少なくとも１つのさらなる特徴を含むＮＬＲに関するさらなる選択を含んでもよく、それにより、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーは、高度に発現されるＮＬＲを含み、対象とする１つまたは複数のさらなる特徴を含む。これまでの作業は、遺伝子ファミリーおよび迅速な進化などの植物免疫に寄与するＮＬＲの樹立された分子的および進化的シグネチャーを有する（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１８５７２－１８５７７）。対象とするかかる特徴は、これらに限定されないが、
（ｉ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種内変異の存在；
（ｉｉ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種内変異の非存在；
（ｉｉｉ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種間変異の存在；
（ｉｖ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種間変異の非存在；および
（ｖ）ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における実質的な種間対立遺伝子変異
を含む。

【0215】

別記しない限り、または使用の状況から明らかでない限り、本発明に関する「実質的な種内および種間変異」は、維持された配列多型、多様化選択、および集団内の個体間で維持される対立遺伝子中に存在する同義置換と比較した場合の非同義置換の過剰発現を意味することが意図される。実質的な種内対立遺伝子変異を有するＮＬＲの例として、オオムギにおけるＭｌａ対立遺伝子（Ｊｏｒｇｅｎｓｅｎ，１９９４，Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．１３：９７－１１９；Ｓｅｅｈｏｌｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＭＰＭＩ ２３：４９７－５０９）およびコムギにおけるＰｍ３対立遺伝子（Ｂｏｕｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４６：２６－３３；Ｂｏｕｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｂｏｕｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ２７：２９９１－３０１２）が挙げられる。

【0216】

本発明の方法は、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーを作成するために、対象とする植物（複数可）の器官または他の部分において高度に発現されるＮＬＲを選択するステップを含む。対象とする植物として、例えば、作物ならびに作物の栽培植物化および非栽培植物化近縁種の両方が挙げられる。かかる近縁種として、作物と同じ種由来である植物、または作物とは異なる種であるが、作物と同じファミリー、サブファミリー、および／または連由来である近縁種が挙げられる。本発明の一部の実施形態では、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーが由来する植物は、作物である宿主植物の非栽培植物化近縁種であり、候補ＮＬＲ遺伝子は、作物における使用を対象としている。好ましくは、宿主植物のかかる近縁種は、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーが由来する植物と同じファミリー、サブファミリー、連、および／または属に存在している。一部の他の実施形態では、宿主植物および候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーが由来する植物は、同じ種である。

【0217】

候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーが由来する対象とする植物（単数または複数）は、対象とする病原体の生育もしくはライフサイクルの完了を支持しない任意の植物系統、変種、または種であり得る。実際に、第１の種の対象とする植物に由来するＲ遺伝子は、対象とする植物病原体にとって宿主である第２の種の植物に移入させることができ、それにより、第２の種の耐性植物が生産される。１つの種に由来し、第２の種に移入されるＲ遺伝子の例は、これらに限定されないが、コショウ（カプシスム・アンヌウム（Ｃａｐｓｉｓｕｍ ａｎｎｕｕｍ））由来のＢｓ２（Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．，１９９９，ＰＮＡＳ ９６（２４）：１４１５３－１４１５８；トマト、即ち、ソラヌム・リコペルシクムに移入）およびキマメ（カジャヌス・カジャン）由来のＣｃＲｐｐ１（Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１６ ３４（６）：６６１－６６５；ダイズ、即ち、グリシン・マックス（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ）に移入）のＮＬＲを含む。本発明に関して好ましくは、第１および第２の種は、同じファミリーに存在する。ある特定の実施形態では、第１および第２の種は、同じファミリーに存在するが、異なるサブファミリー、連、および／または属に存在する。

【0218】

ある特定の好ましい実施形態では、対象とする１つまたは複数の病原体に対する１つまたは複数の有効なＮＬＲ耐性遺伝子を含むと予想される植物は、ＮＬＲ遺伝子のライブラリーが由来する植物として使用される。かかる植物は、植物が、対象とする１つまたは複数の植物病原体の生育を支持しないため、対象とする１つまたは複数の病原体に対する有効なＮＬＲ耐性遺伝子を含むと予想される。例えば、コムギの１つまたは複数の病原体に対する有効な耐性を有するようなパンコムギ（ｂｒｅａｄ ｗｈｅａｔ）（Ｔ．アエスチブム（Ｔ．ａｅｓｔｉｖｕｍ））の近縁種は、これらに限定されないがアクナテルム属（Ａｃｈｎａｔｈｅｒｕｍ）、エギロプス属（Ａｅｇｉｌｏｐｓ）、カモジグサ属（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ）、カラスムギ属（Ａｖｅｎａ）、ヤマカモジグサ属（Ｂｒａｃｈｙｐｏｄｉｕｍ）、ブリザ属（Ｂｒｉｚａ）、キノスルス属（Ｃｙｎｏｓｕｒｕｓ）、エキナリア属（Ｅｃｈｉｎａｒｉａ）、シラゲガヤ属（Ｈｏｌｃｕｓ）、オオムギ属（Ｈｏｒｄｅｕｍ）、ミノボロ属（Ｋｏｅｌｅｒｉａ）、ドクムギ属（Ｌｏｌｉｕｍ）、コメガヤ属（Ｍｅｌｉｃａ）、クサヨシ属（Ｐｈａｌａｒｉｓ）、およびイチゴツナギ属（Ｐｏａ）の種を含むイネ科（Ｐｏａｃｅａｅ）の種である。かかる種として、例えば、アクナテルム・ヒメノイデス、エギロプス・ビコルニス、エギロプス・ロンギッシマ、エギロプス・セアルシイ、エギロプス・シャロネンシス、アグロピロン・クリスタツム、アベナ・アビッシニカ、ブラキポディウム・ディスタキオン、ブリザ・メディア、キノスルス・クリスタツス、エキナリア・カピタタ、ホルクス・ラナツス、ホルデウム・ブルガレ、コエレリア・マクランサ、ロリウム・ペレンネ、メリカ・シリアタ（Ｍｅｌｉｃａ ｃｉｌｉａｔａ）、ファラリス・コエルレスセンス、およびポア・トリビアリスが挙げられる。

【0219】

本発明の候補Ｒ遺伝子のライブラリーは、対象とする１個または複数の植物を使用して作成することができ、ここで、植物はそれぞれ、互いに遺伝学的に別個である。例えば、候補Ｒ遺伝子のライブラリーが、同じ種由来の対象とする２個、３個、４個、またはそれよりも多い植物を使用して作成され得る場合、対象とするかかる２個、３個、４個、またはそれよりも多い植物は、同じ遺伝子型あるいは２個、３個、４個またはそれよりも多い異なる遺伝子型を有し得る。候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成するのに使用される対象とする植物の数は、例えば、宿主植物、対象とする病原体（単数または複数）、および１個または複数の植物病原体に対する有効なＮＬＲ遺伝子を含むと予想される対象とする遺伝的に別個の植物の利用可能性を含む多数の要因に応じて様々であり得ることが認識されている。したがって、本発明の方法を使用して、候補Ｒ遺伝子のライブラリーは、対象とする少なくとも１個、２個、３個、４個、５個、１０個、１５個、２０個、２５個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個、１００個、１２５個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、９００個、１０００個、１２５０個、１５００個、１７５０個、２０００個、またはそれよりも多い遺伝的に別個の植物を使用して作成され得る。

【0220】

本発明の方法は、特定の植物器官または植物の一部の使用に依存しない。植物器官または植物の一部が負荷されていない植物由来であることにかかわらず、任意の発達段階のおよび／または任意の環境条件下で生育された、任意の植物器官または植物の一部。植物器官は、これらに限定されないが、葉、茎、花、根、果実、さや、種子、子葉、胚軸、上胚軸、幼根等を含む。植物の一部として、例えば、葉の主脈、葉身、花弁、がく片、小花柄、花柄、および節間が挙げられる。以下で詳述される本発明のある特定の実施形態では、植物器官は葉である。

【0221】

本発明はさらに、上述の方法に従って作成された候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーを含む組成物を提供する。かかるライブラリーは、少なくとも２個の候補ＮＬＲ遺伝子を含むが、通常、少なくとも約１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、７５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、９００個、１０００個、１２５０個、１５００個、１７５０個、２０００個、またはそれよりも多い候補ＮＬＲ遺伝子を含む。かかる組成物は、対象とする植物病原体に対する植物疾病耐性（ＮＬＲ）遺伝子を同定する方法に利用される。

【0222】

トランスジェニック植物の一群を含む組成物がさらに提供され、ここで、トランスジェニック植物はそれぞれ、宿主細胞を、上述の方法に従って調製された候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリー由来の候補ＮＬＲ遺伝子で形質転換するステップによって生産される。かかる組成物はまた、対象とする植物病原体に対する植物疾病耐性（ＮＬＲ）遺伝子を同定する方法に利用される。本発明のトランスジェニック植物の一群は、少なくとも２個のトランスジェニック植物を含むが、通常、少なくとも約１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、７５個、１００個、１２５個、１５０個、１７５個、２００個、２２５個、２５０個、３００個、４００個、５００個、６００個、７００個、８００個、９００個、１０００個、１２５０個、１５００個、１７５０個、２０００個、またはそれよりも多い植物を含み、それぞれのトランスジェニック植物は、異なる候補Ｒ遺伝子を含む。好ましくは、トランスジェニック植物の一群は、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーにおけるＮＬＲ遺伝子の少なくとも約５０％、６０％、７０％、または８０％に相当するトランスジェニック植物を含む。より好ましくは、トランスジェニック植物の一群は、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーにおけるＮＬＲ遺伝子の少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％に相当するトランスジェニック植物を含む。例えば、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーが、９９個の異なるＮＬＲ遺伝子を含む場合、ライブラリーにおけるＮＬＲ遺伝子全てに相当するトランスジェニック植物の一群は、少なくとも９９個の植物を含み、９９個の植物はそれぞれ、異なるＮＬＲ遺伝子を含む。トランスジェニック植物の一群は、それぞれ異なるＮＬＲ遺伝子に関して２個またはそれよりも多いトランスジェニック植物を含み得ることが認識されている。同じＮＬＲ遺伝子を含む２個またはそれよりも多いトランスジェニック植物は、ＮＬＲ遺伝子がそれら各々のゲノムにおいて同じ位置に位置する同じトランスジェニック事象をそれら各々のゲノムにおいて含み得る。あるいは、同じＮＬＲ遺伝子を含む２個またはそれよりも多いトランスジェニック植物は、ＮＬＲ遺伝子がそれら各々のゲノムにおいて同じ位置に位置しない独立したトランスジェニック事象をそれら各々のゲノムにおいて含み得る。

【0223】

本発明はさらに、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーの使用を包含する、対象とする植物病原体に対するＮＬＲ遺伝子を同定するための組成物を提供する。かかる方法は、本発明の方法に従って調製されたＮＬＲ遺伝子のライブラリーから選択される候補ＮＬＲ遺伝子で形質転換された宿主植物を生産するステップを含む。宿主植物は、対象とする植物病原体にとって宿主であり、植物病原体は、疾病症状の発症に適した環境条件で、宿主植物で植物疾病症状を引き起こすことが可能である。上記方法は、疾病症状の発症に適した環境条件下で、形質転換された宿主植物を、対象とする植物病原体と接触させるステップ、または代わりに形質転換された宿主植物を、対象とする植物病原体に曝露するステップと、続いて、疾病症状の発症に十分な時間の後、候補ＮＬＲ遺伝子を含まない対照宿主植物と比較した場合、形質転換された宿主植物が、対象とする植物病原体に対する耐性の増強を示すかどうかを決定するステップとをさらに含み、ここで、候補ＮＬＲ遺伝子は、形質転換された宿主植物が、対象とする植物病原体によって引き起こされる植物疾病症状の対する耐性の増強を示す場合、対象とする植物病原体に対するＮＬＲ遺伝子である。

【0224】

疾病症状の発症に適したかかる環境条件は、宿主植物－植物病原体の組合せに依存し、当該技術分野で既知であるか、または当該技術分野で利用可能な日常的な方法を使用して決定され得ることが認識されている。さらに、疾病症状の発症に十分である接種後（即ち、宿主植物を病原体と接触させた後）の期間もまた、宿主植物－植物病原体の組合せに依存し、当該技術分野で既知であるか、または当該技術分野で利用可能な日常的な方法を使用して決定され得ることが認識されている。

【0225】

本発明はさらに、上述の方法に従って調製された候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリー由来の候補ＮＬＲ遺伝子を含むトランスジェニック植物またはかかるトランスジェニック植物の一群の使用を包含する対象とする植物病原体に対するＮＬＲ遺伝子を同定する方法を提供する。かかる方法は、疾病症状の発症に適した環境条件下で、トランスジェニック植物またはトランスジェニック植物の一群を、対象とする植物病原体と接触させるステップを含む。トランスジェニック植物は、対象とする植物病原体にとって宿主植物であり、植物病原体は、宿主植物で植物疾病症状を引き起こすことが可能である。上記方法は、成員を植物病原体と接触させた後の疾病症状の発症に十分な期間の後、トランスジェニック植物（単数または複数）で疾病症状を評価するステップをさらに含む。候補ＮＬＲ遺伝子を含まない対照植物と比較した場合、トランスジェニック植物が、対象とする植物病原体によって引き起こされる植物疾病に対する耐性の増強を示す場合に、対象とする植物病原体に対するＮＬＲ遺伝子を含むトランスジェニック植物が同定される。

【0226】

本発明のトランスジェニック植物の一群は、単一病原体を用いた使用に限定されない。実施例において以下で詳述するように、トランスジェニック植物の一群は、トランスジェニック植物の一群において示される候補ＮＬＲ遺伝子の中から機能性ＮＬＲ遺伝子を同定するために、宿主植物で植物疾病症状を引き起こすことが可能な対象とする１個、２個、３個、４個、５個、またはそれよりも多い植物病原体に対する耐性に関して個々にスクリーニングされ得る。かかる機能性ＮＬＲ遺伝子は、ＮＬＲ遺伝子を含む宿主植物に、対象とする病原体の１つまたは複数に対する耐性を付与することが可能なＮＬＲ遺伝子である。

【0227】

本発明はさらに、本発明の単離ＮＬＲ遺伝子と、かかるＮＬＲ遺伝子によってコードされるＮＬＲタンパク質をコードする他の核酸分子とを含む核酸分子組成物、および本発明のＮＬＲタンパク質を含むタンパク質組成物に関する。かかる組成物は、これらに限定されないが、かかるＮＬＲタンパク質の１つまたは複数および／または１つまたは複数の核酸分子、ならびにかかる核酸分子の１つまたは複数を含む発現カセットおよびベクターを含む、植物、植物細胞、および他の宿主細胞を含む。

【0228】

本発明は、本明細書中に開示されたか、あるいは添付の配列表および／または図面におけるＮＬＲタンパク質をコードするヌクレオチド配列の１つまたは複数を含む核酸分子を包含する。かかる核酸分子は、これらに限定されないが、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５、５７、５９、６１、６３、６５、６７、６９、７１、７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１１９、１２１、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、１３９、１４１、１４３、１４５、１４７、１４９、１５１、１５３、１５５、１５７、１５９、１６１、１６３、１６５、１６７、１６９、１７１、１７３、１７５、１７７、１７９、１８１、１８３、１８５、または１８７に記載されるヌクレオチド配列；配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６、４８、５０、５２、５４、５６、５８、６０、６２、６４、６６、６８、７０、７２、７４、７６、７８、８０、８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９６、９８、１００、１０２、１０４、１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、または１８８に記載されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；配列表に記載されるヌクレオチド配列；配列表に記載されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；およびそれらのバリアントからなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。好ましくは、かかる核酸分子は、植物、特にコムギ植物、オオムギ植物、ライコムギ植物、および／またはオーツムギ植物に、例えばコムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）、コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ）、コムギ赤さび病（プッチニア・トリチシナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｔｒｉｔｉｃｉｎａ））、コムギいもち病（マグナポルテ・オリゼ トリチクム（Ｍａｇｎａｐｏｒｔｈｅ ｏｒｙｚａｅ Ｔｒｉｔｉｃｕｍ））およびコムギコムギうどん粉病（ブルメリア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｂｌｕｍｅｒｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ．ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ））を含む対象とする１つまたは複数の植物病原体に対する耐性の増強を付与することが可能である。

【0229】

本発明は、かかる核酸分子の少なくとも１つを含む植物、植物細胞、宿主細胞、発現カセット、ポリヌクレオチド構築物およびベクター、ならびにかかる植物から生産された食品をさらに包含する。例えば、農作物生産における植物疾病を限定する方法などの本明細書中の他の箇所で開示されている方法におけるかかる核酸分子の少なくとも１つを含む植物の使用が、本発明によってさらに包含される。

【0230】

本発明のある特定の実施形態では、本発明の植物および植物細胞は、本発明の核酸を含む少なくとも１つの異種ポリヌクレオチド構築物を含む。かかる異種ポリヌクレオチドは、本明細書中の他の箇所で開示されているか、または代わりに当該技術分野で既知の安定なもしくは一過性の植物形質転換方法によって、植物またはその細胞に導入され得る。

【0231】

本発明はさらに、植物病原体に対する植物の、特に、植物病原体に対する部分的耐性を含む植物の耐性を増強する方法を提供する。本明細書中で使用する場合、十分または完全な耐性は、病原体が宿主植物遺伝子型内で伝播することができないことと定義される。十分な耐性を有する場合、局在化された細胞死が、病原体に接触されたのちに植物で観察されるが、病変の拡がりは見られない。対照的に、部分的耐性を有する場合、病原体は依然として宿主細胞に感染することが可能であり、病変の拡がりを招き得るが、病変の拡がりは、感受性細胞と比較した場合、制限または限定される。

【0232】

植物の耐性を増強するかかる方法は、ＮＬＲタンパク質を発現することが可能であるように植物細胞を改変するステップを含む。上記方法は、任意選択で、改変された植物細胞を、植物病原体に対する耐性の増強を含む改変された植物へと再生させるステップをさらも含む。

【0233】

一部の実施形態では、上記方法は、少なくとも１つの植物細胞に、本発明のＮＬＲ遺伝子をそのネイティブプロモーターとともに含むポリヌクレオチド構築物を導入するステップを含む。他の実施形態では、かかる方法は、本明細書中の他の箇所で記載されるか、または代わりに当該技術分野で既知の植物形質転換方法を使用して、少なくとも１つの植物細胞に、植物における発現を駆動するプロモーターと、ＮＬＲタンパク質をコードする作動可能に連結された核酸分子とを含むポリヌクレオチド構築物を導入するステップを含む。植物病原体に対する植物の耐性を増強するための好ましいプロモーターは、例えば、ＣａＭＶ ３５Ｓプロモーターおよびトウモロコシユビキチンプロモーターなどの高レベル遺伝子発現を駆動することが知られているプロモーターである。本発明の方法における使用に適したさらなるプロモーターは、以下で記載される。

【0234】

本発明の方法は、植物病原体によって引き起こされる植物疾病に対する耐性が増強された植物の生産における使用に利用される。通常、本発明の方法は、植物病原体の同じ株（単数または複数）に対する対照の耐性と比較した場合、植物病原体の１つの株に対するか、または植物病原体の２つまたはそれよりも多い株それぞれに対する対象植物の耐性を、少なくとも２５％、５０％、７５％、１００％、１５０％、２００％、２５０％、５００％、またはそれよりも多く増強あるいは増加する。別記しない限り、または使用の状況から明らかでない限り、本発明に関する対照植物は、本発明のポリヌクレオチド構築物を含まない植物である。好ましくは、対照がポリヌクレオチド構築物は含まないことを除いて、対照植物は、本発明のポリヌクレオチド構築物を含む植物と本質的に同一である（例えば、同一種、亜種、および変種）。一部の実施形態では、対照植物は、ポリヌクレオチド構築物を含むが、本発明の候補ＮＬＲ遺伝子もしくはＮＬＲ遺伝子またはかかる候補ＮＬＲ遺伝子もしくはＮＬＲ遺伝子によってコードされるタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含まない。他の実施形態では、対照植物は、ポリヌクレオチド構築物を含まない。

【0235】

本明細書中に開示されるＮＬＲ遺伝子を含む本発明の植物は、農作物生産における、特にかかる植物疾病が流行していて、農業的収量に負の影響を与えることが知られているか、または少なくとも負の影響を与える見込みを有する地域において、少なくとも１つの植物病原体によって引き起こされる植物疾病を限定する方法に利用される。本発明の方法は、本発明の植物（例えば、実生）、種子、または塊茎を植えるステップを含み、ここで、植物、種子、または塊茎は、本発明の少なくとも１つのＮＬＲ遺伝子を含む。上記方法は、植物の生育および発達に好適な環境条件下で、実生、種子、または塊茎から生じる植物を生育するステップと、任意選択で、少なくとも１つの果実、塊茎、葉、または種子を植物から収穫するステップとをさらに含む。かかる環境条件として、例えば、空気の温度、土壌の温度、土壌の含水量、光周期、光強度、土壌のｐＨ、および土壌の肥沃度が挙げられ得る。対象とする植物の生育および発達に好適な環境条件は、例えば、植物種、またはさらには特定の変種（例えば、栽培品種）または対象とする植物の遺伝子型に応じて変化することが認識されている。さらに、本発明の、対象とする植物の生育および発達に好適な環境条件は、当該技術分野で既知であることが認識されている。

【0236】

さらに、本発明は、本発明の方法によって生産され、および／または本発明のポリヌクレオチド構築物を含む植物、種子、および植物細胞を提供する。また、本発明のポリヌクレオチド構築物を含む子孫植物およびそれらの種子も提供される。本発明はまた、本発明の形質転換された植物および／または子孫植物によって生産された種子、栄養部分、および他の植物の一部、ならびにヒトおよびこれらに限定されないがペット（例えば、イヌおよびネコ）および家畜（例えば、ブタ、ウシ、ニワトリ、シチメンチョウ、およびアヒル）を含む他の動物によって、消費または使用されることが意図されるかかる植物の一部から生産された食品および他の農産物を提供する。

【0237】

本発明は、添付の配列表に記載される配列を含む、例えばポリヌクレオチドおよびタンパク質ならびにかかるポリヌクレオチドおよびタンパク質のバリアントおよび断片を含む、単離されたか、または実質的に精製されたポリヌクレオチド（本明細書中では「核酸分子」、「核酸」などとも称される）またはタンパク質（本明細書中では「ポリペプチド」とも称される）組成物を包含する。「単離された」もしくは「精製された」ポリヌクレオチドまたはタンパク質、またはそれらの生物学的に活性な部分は、その天然に存在する環境で見い出されるようなポリヌクレオチドまたはタンパク質に通常付随するか、あるいはそれらと相互作用する構成成分を実質的にあるいは本質的に含まない。したがって、単離されたか、もしくは精製されたポリヌクレオチドまたはタンパク質は、組換え技法によって産生される場合には他の細胞材料または培養培地を実質的に含まず、あるいは化学的に合成される場合には化学的前駆物質または他の化学物質を実質的に含まない。最適には、「単離された」ポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドが由来する生物のゲノムＤＮＡにおいてポリヌクレオチドに天然で隣接する（即ち、ポリヌクレオチドの５’末端および３’末端に位置する配列）配列（最適には、タンパク質コード配列）を含まない。例えば、様々な実施形態では、単離されたポリヌクレオチドは、約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂ、または０．１ｋｂ未満の、ポリヌクレオチドが由来する細胞のゲノムＤＮＡにおいてポリヌクレオチドに天然で隣接するヌクレオチド配列を含有し得る。細胞材料を実質的に含まないタンパク質は、約３０％、２０％、１０％、５％、または１％未満（乾燥重量で）の混入タンパク質を有するタンパク質の調製物を含む。本発明のタンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え的に産生される場合、最適には、培養培地は、約３０％、２０％、１０％、５％、または１％未満（乾燥重量で）の化学的前駆物質または対象とするタンパク質ではない化学物質に相当する。

【0238】

開示されるポリヌクレオチドの断片およびバリアント、ならびにそれらによってコードされるタンパク質もまた、本発明に包含される。「断片」とは、ポリヌクレオチドの一部またはアミノ酸配列の一部、およびしたがってそれらによってコードされるタンパク質が意図される。コード配列を含むポリヌクレオチドの断片は、完全長またはネイティブタンパク質の生物活性を保持するタンパク質断片をコードし得る。あるいは、ハイブリダイゼーションプローブとして有用なポリヌクレオチドの断片は概して、生物活性を保持するタンパク質をコードしないか、またはプロモーター活性を保持しない。したがって、ヌクレオチド配列の断片は、本発明の少なくとも約２０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約１００ヌクレオチドから、および完全長ヌクレオチドまで及び得る。

【0239】

「バリアント」は、実質的に類似した配列を意味することが意図される。ポリヌクレオチドに関して、バリアントは、５’および／または３’末端に欠失（即ち、切断）；ネイティブポリヌクレオチドにおける１つまたは複数の内部部位での１つまたは複数のヌクレオチドの欠失および／または付加；および／またはネイティブポリヌクレオチドにおける１つまたは複数の部位での１つまたは複数のヌクレオチドの置換を有するポリヌクレオチドを含む。本明細書中で使用する場合、「ネイティブ」ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、それぞれ、天然に存在するヌクレオチド配列またはアミノ酸配列を含む。ポリヌクレオチドに関して、保存的バリアントは、遺伝子コードの縮重のため、本発明のＮＬＲ遺伝子のタンパク質のアミノ酸配列をコードする配列を含む。バリアントポリヌクレオチドは、例えば部位特異的突然変異を使用することによって生成されるが、依然として本発明の機能性ＮＬＲタンパク質をコードするものなどの合成的に得られたポリヌクレオチドを含む。概して、本発明のポリヌクレオチドのバリアントは、本明細書中の他の箇所で記載されるような配列アラインメントプログラムおよびパラメーターによって決定される場合にそのポリヌクレオチドに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれよりも多い配列同一性を有する。

【0240】

本発明のポリヌクレオチド（即ち、参照ポリヌクレオチド）のバリアントはまた、バリアントポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと、参照ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドとの間のパーセント配列同一性の比較によって評価することができる。任意の２つのポリペプチド間または任意の２つのペプチドの相当する部分（例えば、ドメイン）間のパーセント配列同一性は、本明細書中の他の箇所で記載される配列アラインメントプログラムおよびパラメーターを使用して算出することができる。本発明のポリペプチドの任意に所与の対またはそれらの相当する部分が、それらがコードする２つのポリペプチドによって共有されるパーセント配列同一性の比較によって評価される場合、２つのコードされるポリペプチドの間のパーセント配列同一性は、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれより多い配列同一性である。

【0241】

「バリアント」タンパク質は、ネイティブタンパク質のＮ末端および／またはＣ末端での１つまたは複数のアミノ酸の欠失（いわゆる切断）；ネイティブタンパク質における１つまたは複数の内部部位での１つまたは複数のアミノ酸の欠失および／または付加；あるいはネイティブタンパク質における１つまたは複数の部位での１つまたは複数のアミノ酸の置換によってネイティブタンパク質から得られたタンパク質を意味することが意図される。本発明のタンパク質の生物学的に活性なバリアントは、当該タンパク質と、わずか１～１５アミノ酸残基、わずか１～１０、例えば６～１０、わずか５、わずか４、３、２、またはさらには１アミノ酸残基が異なり得る。本発明のＮＬＲタンパク質の生物学的に活性なバリアントは、本明細書中の他の箇所で記載される配列アラインメントプログラムおよびパラメーターによって決定される場合に、本発明のＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列に対して、少なくとも約８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれよりも多い配列同一性を有する。本発明のＮＬＲタンパク質の、またはそのドメインの生物学的に活性なバリアントは、当該タンパク質またはドメインと、わずか１～１５アミノ酸残基、わずか１～１０、例えば６～１０、わずか５、わずか４、３、２、またはさらには１アミノ酸残基が異なり得る。

【0242】

本発明のタンパク質は、アミノ酸置換、欠失、切断、および挿入を含む様々な方法で変更され得る。かかる操作の方法は一般に、当該技術分野で既知である。突然変異誘発およびポリヌクレオチド変更の方法は、当該技術分野で周知されている。例えば、Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４８８－４９２；Ｋｕｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７－３８２；米国特許第４，８７３，１９２号；Ｗａｌｋｅｒ ａｎｄ Ｇａａｓｔｒａ，ｅｄｓ．（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）およびそれらに引用される参照文献を参照のこと。対象とするタンパク質の生物活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、引用することにより本明細書の一部をなすものとする、Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９７８）Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）のモデルにおいて見出され得る。あるアミノ酸を、類似した特性を有する別のアミノ酸と交換することなどの保存的置換が最適であり得る。

【0243】

本明細書中に包含されるタンパク質配列の欠失、挿入、および置換は、タンパク質の特性において基の変化を生じると予想されない。しかしながら、それを行うより前に置換、欠失、または挿入の正確な影響を予測することが困難である場合、その影響は、日常的なスクリーニングアッセイによって評価されることが当業者に理解されよう。即ち、活性は、例えば、本明細書中の他の箇所で開示されているか、または代わりに当該技術分野で既知であるような、対象とする植物病原体に対する疾病耐性に関するアッセイによって評価することができる。

【0244】

例えば、対象とする植物病原体によって引き起こされる植物疾病に感受性である植物は、本発明のＮＬＲ遺伝子を含むポリヌクレオチド構築物で形質転換されて、ポリヌクレオチド構築物を含む形質転換された植物またはトランスジェニック植物に再生されて、当該技術分野で既知であるか、または本明細書中の他の箇所に記載されている標準的な疾病耐性アッセイを使用して耐性について検査され得る。

【0245】

バリアントポリヌクレオチドおよびタンパク質はまた、ＤＮＡシャッフリングなどの変異原性および組換え手順から得られた配列およびタンパク質を包含する。かかるＤＮＡシャッフリングのための戦略は、当該技術分野で既知である。例えば、Ｓｔｅｍｍｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：１０７４７－１０７５１；Ｓｔｅｍｍｅｒ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３７０：３８９－３９１；Ｃｒａｍｅｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：４３６－４３８；Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７２：３３６－３４７；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：４５０４－４５０９；Ｃｒａｍｅｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ ３９１：２８８－２９１；ならびに米国特許第５，６０５，７９３号および同第５，８３７，４５８号を参照のこと。

【0246】

好ましくは、本発明のＮＬＲ遺伝子およびそれらをコードするポリヌクレオチドは、かかるＮＬＲ遺伝子を含む植物に、少なくとも１つの植物病原体であるが、好ましくは、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれよりも多い植物病原体に対する耐性の増強を付与するか、または付与することが可能である。

【0247】

ＰＣＲ増幅は、本発明の方法のある特定の実施形態において使用され得る。ＰＣＲプライマーおよびＰＣＲ増幅を設計する方法は、一般的に当該技術分野で既知であり、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に開示されている。同様に、Ｉｎｎｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；Ｉｎｎｉｓ ａｎｄ Ｇｅｌｆａｎｄ，ｅｄｓ．（１９９５）ＰＣＲ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）；およびＩｎｎｉｓ ａｎｄ Ｇｅｌｆａｎｄ，ｅｄｓ．（１９９９）ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍａｎｕａｌ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）も参照のこと。ＰＣＲ増幅の既知の方法は、これらに限定されないが、ペアードプライマー、ネステッドプライマー、単一特異的プライマー、縮重プライマー、遺伝子特異的プライマー、ベクター特異的プライマー、部分的にミスマッチなプライマー等を使用する方法が挙げられる。

【0248】

本発明のＮＬＲ遺伝子の核酸分子は、本発明のＮＬＲ遺伝子のヌクレオチド配列に十分に同一であるバリアントヌクレオチド配列を含む核酸分子を包含することが認識されている。「十分に同一である」という用語は、第１および第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列が、共通の構造ドメイン（複数可）および／または共通の、例えば疾病耐性などの機能性活性を有するように、第２のアミノ酸またはヌクレオチド配列に対して同一のもしくは等価な（例えば、類似した側鎖を有する）アミノ酸残基またはヌクレオチドの十分数または最小数を含有する第１のアミノ酸またはヌクレオチド配列を指すのに本明細書中で使用される。例えば、少なくとも約４５％、５５％、または６５％同一性、好ましくは７５％同一性、より好ましくは８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する共通の構造ドメイン（複数可）および／または配列を含有するアミノ酸またはヌクレオチド配列は、十分に同一であり得る。

【0249】

２つのアミノ酸配列または２つの核酸のパーセント同一性を決定するために、配列は、最適な比較目的でアラインメントされる。２つの配列間のパーセント同一性は、配列によって共有される同一の位置の数の関数である（即ち、パーセント同一性＝同一の位置の数／位置（例えば、重複位置）の総数×１００）。一実施形態では、２つの配列は、同じ長さである。２つの配列間のパーセント同一性は、以下で記載する技法に類似した技法を使用して、ギャップを可能にして、またはギャップを可能にせずに決定され得る。パーセント同一性を算出する際、通常、正確なマッチが計数される。

【0250】

２つの配列間のパーセント同一性の決定は、数学アルゴリズムを使用して達成され得る。２つの配列の比較に利用される数学アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５８７７で見られるように修正されたＫａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索は、ＮＢＬＡＳＴプログラム、ｓｃｏｒｅ＝１００、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝１２で実施して、本発明のポリヌクレオチド分子に相同的なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、ｓｃｏｒｅ＝５０、ｗｏｒｄｌｅｎｇｔｈ＝３で実施して、本発明のタンパク質分子に相同的なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップドアラインメントを得るためには、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９に記載されるように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴが利用され得る。あるいは、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔは、分子間の距離関係を検出する反復検索を実施するのに使用され得る。上述のＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）を参照のこと。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ－Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、各々のプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ；ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖのワールドワイドウェブで利用可能）のデフォルトパラメーター。配列の比較に利用される数学アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（１９８８）ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基テーブル（ｗｅｉｇｈｔ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用することができる。アラインメントはまた、検査によって手動で実施され得る。

【0251】

別記しない限り、本明細書中で提供される配列同一性／類似性値は、本発明の完全長配列を使用して、およびデフォルトパラメーターを使用してソフトウェアパッケージＶｅｃｔｏｒ ＮＴＩ Ｓｕｉｔｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ ７（ＩｎｆｏｒＭａｘ，Ｉｎｃ．社、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＵＳＡ）に含まれるプログラムＡｌｉｇｎＸを使用したアルゴリズムＣｌｕｓｔａｌ Ｗ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２２（２２）：４６７３－４６８０，１９９４）を用いた多重アラインメント；またはそれらの任意の等価なプログラムを使用して得られた値を指す。「等価なプログラム」とは、問題となっている任意の２つの配列に関して、デフォルトパラメーターを使用してＣＬＵＳＴＡＬＷ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １．８３）（ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｃｌｕｓｔａｌｗ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌのワールドワイドウェブでＥｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅウェブサイトにて利用可能）によって生成された相当するアラインメントと比較した場合、同一のヌクレオチドまたはアミノ酸残基マッチおよび同一のパーセント配列同一性を有するアラインメントを生成する任意の配列比較プログラムが意図される。

【0252】

「ポリヌクレオチド」という用語の使用は、本発明を、ＤＮＡを含むポリヌクレオチドに限定することが意図されない。ポリヌクレオチドは、リボヌクレオチドならびにリボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドの組合せを含み得ることが、当業者に認識されている。かかるデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドは、天然に存在する分子および合成類似体の両方を含む。本発明のポリヌクレオチドはまた、これらに限定されないが単鎖形態、二重鎖形態、ヘアピン、ステムループ構造等を含む配列の全ての形態を包含する。

【0253】

ＮＬＲタンパク質コード領域を含むポリヌクレオチド構築物は、対象とする、植物もしくは他の生物における、または宿主細胞における発現用の発現カセットにおいて提供され得る。カセットは、タンパク質コード領域に作動可能に連結された５’および３’調節配列を含む。「作動可能に連結された」は、２つまたはそれよりも多いエレメント間の機能的連結を意味することが意図される。例えば、対象とするポリヌクレオチドまたは遺伝子と、調節配列（即ち、プロモーター）との間の作動可能な連結は、対象とするポリヌクレオチドの発現を可能にする機能的結合である。作動可能に連結されたエレメントは、近接または非近接であり得る。２つのタンパク質コード領域の結合を指すのに使用される場合、作動可能に連結されたとは、コード領域が同じリーディングフレーム中に存在することが意図される。カセットは、生物に同時形質転換されるべき少なくとも１つのさらなる遺伝子をさらに含有し得る。あるいは、さらなる遺伝子（複数可）は、多重発現カセット上に提供され得る。かかる発現カセットには、調節領域の転写調節下に存在するためにタンパク質コード領域の挿入のための複数の制限部位および／または組換え部位が提供されている。発現カセットは、選択可能マーカー遺伝子をさらに含有し得る。

【0254】

発現カセットは、転写の５’－３’方向で、植物もしくは他の生物または非ヒト宿主細胞において機能的な転写および翻訳開始領域（即ち、プロモーター）、本発明のＮＬＲタンパク質コード領域、ならびに転写および翻訳終結領域（即ち、終結領域）を含む。本発明の調節領域（即ち、プロモーター、転写調節領域、および翻訳終結領域）および／またはＮＬＲタンパク質コード領域は、宿主細胞にとって、または互いに、ネイティブであり得る／類似し得る。あるいは、本発明のＮＬＲ遺伝子、調節領域および／またはＮＬＲタンパク質コード領域は、宿主細胞にとって、または互いに、異種であり得る。

【0255】

本明細書中で使用する場合、「異種」は、対象とする種中に存在する核酸分子またはヌクレオチド配列に関連して、対象とする種とは異なる種に由来し、有性生殖を包含する遺伝子移入（ｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）もしくは他の方法によって導入されない核酸分子またはヌクレオチド配列、あるいは同種由来である場合、対象とする種中に存在する核酸分子またはヌクレオチド配列は、意図的なヒト介入による組成物および／またはゲノム遺伝子座においてそのネイティブ形態から改変される。例えば、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターは、ポリヌクレオチドが由来した種とは異なる種由来であるか、あるいは、同じ／類似した種由来である場合、一方または両方が、それらの元の形態および／またはゲノム遺伝子座から実質的に改変されるか、あるいはプロモーターは、作動可能に連結されたポリヌクレオチドにとってネイティブプロモーターではない。本明細書中で使用する場合、キメラ遺伝子またはキメラポリヌクレオチド構築物は、コード配列にとって異種である転写開始領域に作動可能に連結されたコード配列を含む。

【0256】

本発明は、本発明の核酸分子、発現カセット、およびベクターの少なくとも１つを含む宿主細胞を提供する。本発明の好ましい実施形態では、宿主細胞は植物細胞である。他の実施形態では、宿主細胞は、細菌、真菌細胞、および動物細胞からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、非ヒト動物細胞である。しかしながら、一部の他の実施形態では、宿主細胞は、ｉｎ－ｖｉｔｒｏで培養したヒト細胞である。

【0257】

終結領域は、転写開始領域とネイティブであってもよく、対象とする作動可能に連結されたＮＬＲタンパク質コード領域とネイティブであってもよく、植物宿主とネイティブであってもよく、あるいは別の供給源に由来（即ち、プロモーター、対象とするタンパク質、および／または植物宿主にとって外来または異種）してもよく、あるいはそれらの任意の組合せであってもよい。利便性のよい終結領域は、オクトピンシンターゼおよびノパリンシンターゼ終結領域などのＡ．ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のＴｉプラスミドから利用可能である。Ｇｕｅｒｉｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２６２：１４１－１４４；Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ（１９９１） Ｃｅｌｌ ６４：６７１－６７４；Ｓａｎｆａｃｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．５：１４１－１４９；Ｍｏｇｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ２：１２６１－１２７２；Ｍｕｎｒｏｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｇｅｎｅ ９１：１５１－１５８；Ｂａｌｌａｓ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：７８９１－７９０３；およびＪｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１５：９６２７－９６３９も参照のこと。

【0258】

適切である場合、ポリヌクレオチドは、形質転換された植物における発現の増加のために最適化され得る。即ち、ポリヌクレオチドは、改善された発現のために植物に好ましいコドンを使用して合成することができる。例えば、宿主に好ましいコドン使用の論述に関してＣａｍｐｂｅｌｌ ａｎｄ Ｇｏｗｒｉ（１９９０）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．９２：１－１１を参照のこと。植物に好ましい遺伝子を合成する方法は、当該技術分野で利用可能である。例えば、引用することにより本明細書の一部をなすものとする、米国特許第５，３８０，８３１号、および第５，４３６，３９１号、ならびにＭｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：４７７－４９８を参照のこと。

【0259】

細胞宿主において遺伝子発現を増強するためのさらなる配列改変が知られている。これらには、偽ポリアデニル化シグナル、エクソン－イントロンスプライス部位シグナル、トランスポゾン様反復をコードする配列、および遺伝子発現にとって有害である可能性のある他のかかる十分に特性化された配列の排除が含まれる。配列のＧ－Ｃ含有量は、宿主細胞において発現される既知の遺伝子に対する参照によって算出される場合、所与の細胞宿主に関して平均的なレベルに調節され得る。可能であれば、配列は、予測されるヘパリン二次ｍＲＮＡ構造を回避するよう改変される。

【0260】

さらに、ポリヌクレオチドは、ＮＬＲタンパク質の生物活性を改善するか、または少なくとも著しく低減しない一方で、ＮＬＲタンパク質のアミノ酸配列を変更するように、例えば、翻訳効率、タンパク質安定性および／または任意の他の所望の特性（単数または複数）を改善するように、および／または任意の１つまたは複数の望ましくない特性を低減するように改変され得る。例えば、ポリヌクレオチドは、それらによってコードされるタンパク質における潜在的なアレルギー領域を除去するように改変され得る。既知のアレルゲンおよび推定上のアレルゲンの包括的なリストに関してＡｌｌｅｒｇｅｎＯｎｌｉｎｅデータベースを参照されたい（Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｎｕｔｒ．Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ．６０（５）：１１８３－１１９８；ａｌｌｅｒｇｅｎｏｎｌｉｎｅ．ｏｒｇのワールドワイドウェブで利用可能）。

【0261】

発現カセットは、５’リーダー配列をさらに含有し得る。かかるリーダー配列は、翻訳を増強するように作用し得る。翻訳リーダーは、当該技術分野で既知であり、ピコルナウイルスリーダー、例えばＥＭＣＶリーダー（脳心筋炎５’非コード領域）（Ｅｌｒｏｙ－Ｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：６１２６－６１３０）；ポティウイルスリーダー、例えば、ＴＥＶリーダー（タバコエッチウイルス）（Ｇａｌｌｉｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｇｅｎｅ １６５（２）：２３３－２３８）、ＭＤＭＶリーダー（トウモロコシ萎縮モザイクウイルス（Ｍａｉｚｅ Ｄｗａｒｆ Ｍｏｓａｉｃ Ｖｉｒｕｓ））（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １５４：９－２０）、およびヒト免疫グロブリン重鎖結合性タンパク質（ＢｉＰ）（Ｍａｃｅｊａｋ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５３：９０－９４）；アルファルファモザイクウイルスのコートタンパク質ｍＲＮＡ由来の非翻訳リーダー（ＡＭＶ ＲＮＡ ４）（Ｊｏｂｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２５：６２２－６２５）；タバコモザイクウイルスリーダー（ＴＭＶ）（Ｇａｌｌｉｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ＲＮＡ，ｅｄ．Ｃｅｃｈ（Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２３７－２５６）；およびトウモロコシ退緑斑ウイルス（ｍａｉｚｅ ｃｈｌｏｒｏｔｉｃ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕｓ）リーダー（ＭＣＭＶ）（Ｌｏｍｍｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ８１：３８２－３８５）を含む。Ｄｅｌｌａ－Ｃｉｏｐｐａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．８４：９６５－９６８も参照のこと。

【0262】

発現カセットを調製する際、適正な配向で、および必要に応じて適正なリーディングフレームにおいてＤＮＡ配列を提供するように、様々なＤＮＡ断片が操作され得る。この目的に向けて、アダプター（「アダプタ」とも称される）またはリンカーを用いて、ＤＮＡ断片を結合し得るか、または利便性のよい制限部位、余分なＤＮＡの除去、制限部位の除去等を提供するように他の操作が包含され得る。この目的で、ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発、プライマー修復、制限、アニーリング、再置換、例えば、トランジションおよびトランスバージョンが包含され得る。

【0263】

多数のプロモーターが、本発明の実施において使用され得る。プロモーターは、所望の結末に基づいて選択され得る。核酸は、植物における発現用の構成的プロモーター、組織に好ましいプロモーター、または他のプロモーターと組み合わせることができる。かかる構成的プロモーターとして、例えば、コアＣａＭＶ ３５Ｓプロモーター（Ｏｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３：８１０－８１２）；イネアクチン（ＭｃＥｌｒｏｙ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ２：１６３－１７１）；ユビキチン（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２：６１９－６３２およびＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８：６７５－６８９）；ｐＥＭＵ（Ｌａｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．８１：５８１－５８８）；ＭＡＳ（Ｖｅｌｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８４）ＥＭＢＯ Ｊ．３：２７２３－２７３０）；ＡＬＳプロモーター（米国特許第５，６５９，０２６号）等が挙げられる。他の構成的プロモーターとして、例えば米国特許第５，６０８，１４９号；同第５，６０８，１４４号；同第５，６０４，１２１号；同第５，５６９，５９７号；同第５，４６６，７８５号；同第５，３９９，６８０号；同第５，２６８，４６３号；同第５，６０８，１４２号；および同第６，１７７，６１１号が挙げられる。

【0264】

組織に好ましいプロモーターは、特定の植物組織内のＲタンパク質コード配列の発現の増強を標的とするのに利用され得る。かかる組織に好ましいプロモーターは、これらに限定されないが、葉に好ましいプロモーター、根に好ましいプロモーター、種子に好ましいプロモーター、および茎に好ましいプロモーターを含む。組織に好ましいプロモーターとして、Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．（１９９７） Ｐｌａｎｔ Ｊ．１２（２）：２５５－２６５；Ｋａｗａｍａｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．３８（７）：７９２－８０３；Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｍｏｌ． Ｇｅｎ Ｇｅｎｅｔ．２５４（３）；３３７－３４３；Ｒｕｓｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ．６（２）：１５７－１６８；Ｒｉｎｅｈａｒｔ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１２（３）：１３３１－１３４１；Ｖａｎ Ｃａｍｐ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１２（２）：５２５－５３５；Ｃａｎｅｖａｓｃｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１１２（２）：５１３－５２４；Ｙａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．３５（５）：７７３－７７８；Ｌａｍ （１９９４）Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｐｒｏｂｌ．Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒ．２０：１８１－１９６；Ｏｒｏｚｃｏ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２３（６）：１１２９－１１３８：Ｍａｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（２０）：９５８６－９５９０；およびＧｕｅｖａｒａ－Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｊ．４（３）：４９５－５０５が挙げられる。かかるプロモーターは、必要であれば、弱い発現用に改変され得る。

【0265】

導入遺伝子は、例えば病原体誘導性プロモーターなどの誘導性プロモーターを使用して発現され得る。かかるプロモーターとして、病原体による感染後に誘導される病因関連タンパク質（ＰＲタンパク質）、例えば、ＰＲタンパク質、ＳＡＲタンパク質、ベータ－１，３－グルカナーゼ、キチナーゼ等由来のものが挙げられる。例えば、Ｒｅｄｏｌｆｉ ｅｔ ａｌ．（１９８３）Ｎｅｔｈ．Ｊ．Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌ．８９：２４５－２５４；Ｕｋｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ４：６４５－６５６；およびＶａｎ Ｌｏｏｎ （１９８５）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｖｉｒｏｌ．４：１１１－１１６を参照のこと。同様に、引用することにより本明細書の一部をなすものとする、ＷＯ９９／４３８１９も参照のこと。

【0266】

病原体感染の部位で、またはその付近で局所的に発現されるプロモーターは関心が持たれる。例えば、Ｍａｒｉｎｅａｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９：３３５－３４２；Ｍａｔｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ２：３２５－３３１；Ｓｏｍｓｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：２４２７－２４３０；Ｓｏｍｓｉｓｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２：９３－９８；およびＹａｎｇ（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１４９７２－１４９７７を参照のこと。同様に、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｌａｎｔ Ｊ．１０：９５５－９６６；Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２５０７－２５１１；Ｗａｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｊ．３：１９１－２０１；Ｓｉｅｂｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ １：９６１－９６８；米国特許第５，７５０，３８６号（線虫誘導性）；およびそれらの中で引用されている参照文献も参照のこと。発現が病原体フザリウム・モニリフォルメ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ）によって誘導されるトウモロコシＰＲｍｓ遺伝子用の誘導性プロモーターは特に関心が持たれる（例えば、Ｃｏｒｄｅｒｏ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈ．４１：１８９－２００を参照）。

【0267】

さらに、病原体が、創傷または虫害を通じて植物への侵入にたどり着くため、創傷誘導性プロモーターは、本発明の構築において使用され得る。かかる創傷誘導性プロモーターとして、ジャガイモプロテイナーゼ阻害剤（ｐｉｎＩＩ）遺伝子（Ｒｙａｎ（１９９０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈ．２８：４２５－４４９；Ｄｕａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：４９４－４９８）；ｗｕｎ１およびｗｕｎ２、米国特許第５，４２８，１４８号；ｗｉｎ１およびｗｉｎ２（Ｓｔａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２１５：２００－２０８）；システミン（ＭｃＧｕｒｌ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２５：１５７０－１５７３）；ＷＩＰ１（Ｒｏｈｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２：７８３－７９２；Ｅｃｋｅｌｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．（１９９３）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３２３：７３－７６）；ＭＰＩ遺伝子（Ｃｏｒｄｅｒｏｋ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ Ｊ．６（２）：１４１－１５０）等が挙げられる（引用することにより本明細書の一部をなすものとする）。

【0268】

化学物質調節プロモーターは、外因性化学的レギュレーターの適用を通じて、植物における遺伝子の発現を調整するのに使用することができる。目的に応じて、プロモーターは、化学物質の適用が遺伝子発現を誘導する場合には、化学物質誘導性プロモーター、または化学物質の適用が遺伝子発現を抑圧する場合には、化学物質抑圧性プロモーターであり得る。化学物質誘導性プロモーターは、当該技術分野で既知であり、これらに限定されないが、ベンゼンスルホンアミド除草剤セーフナーによって活性化されるトウモロコシＩｎ２－２プロモーター、発芽前除草剤として使用される疎水性求電子化合物によって活性化されるトウモロコシＧＳＴプロモーター、およびサリチル酸によって活性化されるタバコＰＲ－１ａプロモーターを含む。対象とする他の化学物質調節プロモーターとして、ステロイド応答性プロモーター（例えば、Ｓｃｈｅｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：１０４２１－１０４２５およびＭｃＮｅｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｌａｎｔ Ｊ．１４（２）：２４７－２５７におけるグルココルチコイド誘導性プロモーターを参照）ならびにテトラサイクリン誘導性およびテトラサイクリン抑圧性プロモーター（例えば、Ｇａｔｚ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２２７：２２９－２３７、および米国特許第５，８１４，６１８号および同第５，７８９，１５６号を参照）が挙げられる（引用することにより本明細書の一部をなすものとする）。

【0269】

発現カセットはまた、形質転換された細胞の選択のための選択可能マーカー遺伝子を含み得る。選択可能マーカー遺伝子は、形質転換された細胞または組織の選択に利用される。マーカー遺伝子として、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼＩＩ（ＮＥＯ）およびハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ（ＨＰＴ）をコードするものなどの抗生物質耐性をコードする遺伝子、ならびにグルホシネートアンモニウム、ブロモキシニル、イミダゾリノン、および２，４－ジクロロフェノキシアセテート（２，４－Ｄ）などの除草剤化合物に対する耐性を付与する遺伝子が挙げられる。さらなる選択マーカーとして、β－ガラクトシダーゼなどの表現型マーカーおよび緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（Ｓｕ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ８５：６１０－９およびＦｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ １６：２１５－２８）、シアン蛍光タンパク質（ＣＹＰ）（Ｂｏｌｔｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１７：９４３－５４およびＫａｔｏ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ １２９：９１３－４２）、および黄色蛍光タンパク質（Ｅｖｒｏｇｅｎ社のＰｈｉＹＦＰ（商標）、Ｂｏｌｔｅ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １１７：９４３－５４を参照）などの蛍光タンパク質が挙げられる。さらなる選択可能マーカーに関して、一般にＹａｒｒａｎｔｏｎ （１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．３：５０６－５１１；Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６３１４－６３１８；Ｙａｏ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ７１：６３－７２；Ｒｅｚｎｉｋｏｆｆ （１９９２）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６：２４１９－２４２２；Ｂａｒｋｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９８０）ｉｎ Ｔｈｅ Ｏｐｅｒｏｎ，ｐｐ．１７７－２２０；Ｈｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｃｅｌｌ ４８：５５５－５６６；Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｃｅｌｌ ４９：６０３－６１２；Ｆｉｇｇｅ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｃｅｌｌ ５２：７１３－７２２；Ｄｅｕｓｃｈｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ａｃｉ．ＵＳＡ ８６：５４００－５４０４；Ｆｕｅｒｓｔ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：２５４９－２５５３；Ｄｅｕｓｃｈｌｅ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４８：４８０－４８３；Ｇｏｓｓｅｎ（１９９３）Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ；Ｒｅｉｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１９１７－１９２１；Ｌａｂｏｗ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０：３３４３－３３５６；Ｚａｍｂｒｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：３９５２－３９５６；Ｂａｉｍ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：５０７２－５０７６；Ｗｙｂｏｒｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９：４６４７－４６５３；Ｈｉｌｌｅｎａｎｄ－Ｗｉｓｓｍａｎ（１９８９）Ｔｏｐｉｃｓ Ｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃ．Ｂｉｏｌ．１０：１４３－１６２；Ｄｅｇｅｎｋｏｌｂ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３５：１５９１－１５９５；Ｋｌｅｉｎｓｃｈｎｉｄｔ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７：１０９４－１１０４；Ｂｏｎｉｎ （１９９３）Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ；Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７－５５５１；Ｏｌｉｖａ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３６：９１３－９１９；Ｈｌａｖｋａ ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７８（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ）；Ｇｉｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：７２１－７２４を参照のこと。かかる開示は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0270】

選択可能マーカー遺伝子の上記リストは、限定的であることが意図されない。任意の選択可能マーカー遺伝子が本発明で使用され得る。

【0271】

多数の植物形質転換ベクターおよび植物を形質転換する方法が利用可能である。例えば、Ａｎ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｐｌａｎｔ Ｐｙｓｉｏｌ．，８１：３０１－３０５；Ｆｒｙ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．６：３２１－３２５；Ｂｌｏｃｋ，Ｍ．（１９８８）Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ Ｇｅｎｅｔ．７６：７６７－７７４；Ｈｉｎｃｈｅｅ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｓｔａｄｌｅｒ．Ｇｅｎｅｔ．Ｓｙｍｐ．２０３２１２．２０３－２１２；Ｃｏｕｓｉｎｓ， ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１８：４８１－４９４；Ｃｈｅｅ，Ｐ．Ｐ． ａｎｄ Ｓｌｉｇｈｔｏｍ，Ｊ．Ｌ．（１９９２）Ｇｅｎｅ．１１８：２５５－２６０；Ｃｈｒｉｓｔｏｕ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｔｒｅｎｄｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２３９－２４６；Ｄ’Ｈａｌｌｕｉｎ， ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：３０９－３１４；Ｄｈｉｒ，ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．９９：８１－８８；Ｃａｓａｓ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１１２１２－１１２１６；Ｃｈｒｉｓｔｏｕ，Ｐ．（１９９３）Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．－Ｐｌａｎｔ；２９Ｐ：１１９－１２４；Ｄａｖｉｅｓ， ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２：１８０－１８３；Ｄｏｎｇ，Ｊ．Ａ．ａｎｄ Ｍｃｈｕｇｈｅｎ，Ａ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．９１：１３９－１４８；Ｆｒａｎｋｌｉｎ，Ｃ．Ｉ．ａｎｄ Ｔｒｉｅｕ，Ｔ．Ｎ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０２：１６７：Ｇｏｌｏｖｋｉｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．９０：４１－５２；Ｇｕｏ Ｃｈｉｎ Ｓｃｉ．Ｂｕｌｌ．３８：２０７２－２０７８；Ａｓａｎｏ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１３；Ａｙｅｒｅｓ Ｎ．Ｍ．ａｎｄ Ｐａｒｋ，Ｗ．Ｄ．（１９９４）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ．Ｓｃｉ．１３：２１９－２３９；Ｂａｒｃｅｌｏ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ．Ｊ．５：５８３－５９２；Ｂｅｃｋｅｒ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ．Ｊ．５：２９９－３０７；Ｂｏｒｋｏｗｓｋａ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ａｃｔａ．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｌａｎｔ．１６：２２５－２３０；Ｃｈｒｉｓｔｏｕ，Ｐ．（１９９４）Ａｇｒｏ．Ｆｏｏｄ．Ｉｎｄ．Ｈｉ Ｔｅｃｈ．５：１７－２７；Ｅａｐｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１３：５８２－５８６；Ｈａｒｔｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｂｉｏ－Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：９１９９２３；Ｒｉｔａｌａ，ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３１７－３２５；およびＷａｎ，Ｙ．Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｍａｕｘ，Ｐ．Ｇ．（１９９４）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０４：３７４８を参照のこと。

【0272】

本発明で利用される植物形質転換ベクターとして、例えば、本明細書中の他の箇所で開示されているか、または代わりに当該技術分野で既知のアグロバクテリウム属（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）媒介性形質転換方法における使用に適したＴ－ＤＮＡベクターまたはプラスミドが挙げられる。

【0273】

本発明の方法は、ポリヌクレオチド構築物を植物に導入するステップを包含する。「導入するステップ」とは、構築物が植物の細胞の内側に接近するように植物にポリヌクレオチド構築物を提示することが意図される。本発明の方法は、ポリヌクレオチド構築物を植物に導入する特定の方法に依存せず、ポリヌクレオチド構築物が植物の少なくとも１つの細胞の内側に接近することのみに依存する。安定な形質転換方法、これらに限定されないが一過性の形質転換方法、およびウイルス媒介性方法を含むポリヌクレオチド構築物を植物に導入する方法が、当該技術分野で既知である。

【0274】

「安定な形質転換」とは、植物に導入されたポリヌクレオチド構築物が植物のゲノムに組み込み、それらの子孫に遺伝されることが可能であることが意図される。「一過性の形質転換」とは、植物に導入されたポリヌクレオチド構築物が植物のゲノムに組み込まないことと意図される。

【0275】

植物および植物細胞の形質転換に関して、本発明のヌクレオチド配列は、標準的な技法を使用して、植物または植物細胞におけるヌクレオチド配列の発現に適した当該技術分野で既知の任意のベクターに挿入される。ベクターの選択は、好ましい形質転換技法および形質転換されるべき標的植物種に依存する。

【0276】

植物発現カセットを構築して、外来核酸を植物に導入するための方法論は概して、当該技術分野で既知であり、上述されている。例えば、外来ＤＮＡは、腫瘍誘導性（Ｔｉ）プラスミドベクターを使用して、植物に導入され得る。外来ＤＮＡ送達に利用される他の方法は、ＰＥＧ媒介性プロトプラスト形質転換、エレクトロポレーション、マイクロインジェクションウィスカー、および直接的なＤＮＡ取込み用のバイロリスティックまたは微粒子銃の使用を包含する。かかる方法は当該技術分野で既知である（Ｖａｓｉｌ ｅｔ ａｌ．の米国特許第５，４０５，７６５号；Ｂｉｌａｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｇｅｎｅ １００：２４７－２５０；Ｓｃｈｅｉｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｍｏｌ．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．，２２８：１０４－１１２；Ｇｕｅｒｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ ５２：１１１－１１６；Ｎｅｕｈａｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ 遺伝子ｔ．７５：３０－３６；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２７：７０－７３；Ｈｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，（１９８０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０８：１２６５；Ｈｏｒｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２７：１２２９－１２３１；ＤｅＢｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ９１：６９４－７０１；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ ａｎｄ Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ， ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８８）およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓｃｈｕｌｅｒ ａｎｄ Ｚｉｅｌｉｎｓｋｉ，ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．（１９８９））。形質転換の方法は、形質転換されるべき植物細胞、使用されるベクターの安定性、遺伝子産物の発現レベルおよび他のパラメーターに依存する。

【0277】

ヌクレオチド配列を植物細胞に導入し、続く植物ゲノムへの挿入の他の適切な方法として、Ｃｒｏｓｓｗａｙ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：３２０－３３４のマイクロインジェクション、Ｒｉｇｇｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：５６０２－５６０６によって記載されるようなエレクトロポレーション、Ｔｏｗｎｓｅｎｄ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，５６３，０５５号、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，９８１，８４０号によって記載されるようなアグロバクテリウム属媒介性形質転換、Ｐａｓｚｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８４）ＥＭＢＯ Ｊ．３：２７１７－２７２２によって記載されるような直接的な遺伝子移入、および例えばＳａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，米国特許第４，９４５，０５０号；Ｔｏｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，８７９，９１８号；Ｔｏｍｅｓ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，８８６，２４４号；Ｂｉｄｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，９３２，７８２号；Ｔｏｍｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）“Ｄｉｒｅｃｔ ＤＮＡ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ Ｉｎｔａｃｔ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌｓ ｖｉａ Ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ，”ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ，ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｅｄ．Ｇａｍｂｏｒｇ ａｎｄ Ｐｈｉｌｌｉｐｓ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ社、ベルリン）；ＭｃＣａｂｅ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：９２３－９２６に記載されるようなぶりバリスティック粒子加速；およびＬｅｃ１形質転換（国際公開第００／２８０５８号）が挙げられる。同様に、Ｗｅｉｓｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．２２：４２１－４７７；Ｓａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５：２７－３７（タマネギ）；Ｃｈｒｉｓｔｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．８７：６７１－６７４（ダイズ）；ＭｃＣａｂｅ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：９２３－９２６（ダイズ）；Ｆｉｎｅｒ ａｎｄ ＭｃＭｕｌｌｅｎ（１９９１）Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２７Ｐ：１７５－１８２（ダイズ）；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．９６：３１９－３２４（ダイズ）；Ｄａｔｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：７３６－７４０（イネ）；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：４３０５－４３０９（トウモロコシ）；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：５５９－５６３（トウモロコシ）；Ｔｏｍｅｓ，米国特許第５，２４０，８５５号；Ｂｕｉｓｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，３２２，７８３号および同第５，３２４，６４６号；Ｔｏｍｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）“Ｄｉｒｅｃｔ ＤＮＡ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ Ｉｎｔａｃｔ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌｓ ｖｉａ Ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ Ｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ，”ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ，ａｎｄ Ｏｒｇａｎ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｅｄ．Ｇａｍｂｏｒｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ社、ベルリン）（トウモロコシ）；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．９１：４４０－４４４（トウモロコシ）；Ｆｒｏｍｍ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：８３３－８３９（トウモロコシ）；Ｈｏｏｙｋａａｓ－Ｖａｎ Ｓｌｏｇｔｅｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）３１１：７６３－７６４；Ｂｏｗｅｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，７３６，３６９号（穀類）；Ｂｙｔｅｂｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：５３４５－５３４９（ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ））；Ｄｅ Ｗｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９８５）ｉｎ Ｔｈｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｖｕｌｅ Ｔｉｓｓｕｅｓ，ｅｄ．Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．（Ｌｏｎｇｍａｎ社、ニューヨーク），ｐｐ．１９７－２０９（花粉）；Ｋａｅｐｐｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ９：４１５－４１８およびＫａｅｐｐｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．８４：５６０－５６６（ウィスカー媒介性形質転換）；Ｄ’Ｈａｌｌｕｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ ４：１４９５－１５０５（エレクトロポレーション）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ １２：２５０－２５５およびＣｈｒｉｓｔｏｕ ａｎｄ Ｆｏｒｄ（１９９５）Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙ ７５：４０７－４１３（イネ）；Ｏｓｊｏｄａ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：７４５－７５０（アグロバクテリウム・ツメファシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）を介したトウモロコシ）も参照のこと。それらは全て、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0278】

本発明のポリヌクレオチドは、植物をウイルスまたはウイルス核酸と接触させるステップによって植物に導入され得る。一般に、かかる方法は、本発明のポリヌクレオチド構築物を、ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ分子内に組み込むステップを包含する。さらに、本発明のプロモーターはまた、ウイルスＲＮＡポリメラーゼによる転写に利用されるプロモーターを包含することが認識されている。ウイルスＤＮＡまたはＲＮＡ分子を含む、ポリヌクレオチド構築物を植物に導入して、そこでコードされるタンパク質を発現する方法が当該技術分野で既知である。例えば、引用することにより本明細書の一部をなすものとする、米国特許第５，８８９，１９１号、同第５，８８９，１９０号、同第５，８６６，７８５号、同第５，５８９，３６７号および同第５，３１６，９３１号を参照のこと。

【0279】

望ましい場合、改変されたウイルスまたは改変されたウイルス核酸は、配合物中で調製され得る。かかる配合物は、例えば、土壌処置配合物用の溶媒および／または担体、望ましい場合、乳化剤、界面活性剤および分散剤、防腐剤、消泡剤、凍結防止剤などの農薬の配合物に適した補助剤、同様に任意選択で着色剤および／または結合剤および／またはゲル化剤を用いて活性化合物を拡げることによって、既知の様式で調製される（例えば、概説に関して米国特許第３，０６０，０８４号、欧州Ａ ７０７ ４４５号（液体濃縮物に関して）、Ｂｒｏｗｎｉｎｇ，“Ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎ”，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｃ．４，１９６７，１４７－４８，Ｐｅｒｒｙ’ｓ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，４ｔｈ Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６３，ｐａｇｅｓ ８－５７を参照、および以下を参照、国際公開第９１／１３５４６号、米国特許第４，１７２，７１４号、米国特許第４，１４４，０５０号、米国特許第３，９２０，４４２号、米国特許第５，１８０，５８７号、米国特許第５，２３２，７０１号、米国特許第５，２０８，０３０号、英国特許第２，０９５，５５８号、米国特許第３，２９９，５６６号、Ｋｌｉｎｇｍａｎ，Ｗｅｅｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｓ ａ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６１，Ｈａｎｃｅ ｅｔ ａｌ．Ｗｅｅｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９およびＭｏｌｌｅｔ，Ｈ．，Ｇｒｕｂｅｍａｎｎ，Ａ．，Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ ＶＣＨ Ｖｅｒｌａｇ ＧｍｂＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ（Ｇｅｒｍａｎｙ），２００１，２．Ｄ．Ａ．Ｋｎｏｗｌｅｓ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ａｇｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ，Ｋｌｕｗｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，１９９８（ＩＳＢＮ ０－７５１４－０４４３－８））。

【0280】

特定実施形態では、本発明のポリヌクレオチド構築物および発現カセットは、当該技術分野で既知の様々な一過性の形質転換法を使用して植物に供給され得る。かかる方法として、例えば、マイクロインジェクションまたは微粒子銃が挙げられる。例えば、Ｃｒｏｓｓｗａｙ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｍｏｌ Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．２０２：１７９－１８５；Ｎｏｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉ．４４：５３－５８；Ｈｅｐｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）ＰＮＡＳ Ｓｃｉ．９１：２１７６－２１８０およびＨｕｓｈ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ １０７：７７５－７８４を参照のこと。それらは全て、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。あるいは、ポリヌクレオチドは、当該技術分野で既知の技法を使用して、植物に一過的に形質転換され得る。かかる技法は、本明細書中の他の箇所に記載されるようなウイルスベクター系およびアグロバクテリウム・ツメファシエンス媒介性一過性発現を含む。

【0281】

形質転換された細胞は、従来の方法に従って植物へと生育され得る。例えば、ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ５：８１－８４を参照のこと。次に、これらの植物は生育されて、同じ形質転換された株または異なる株を用いて受粉され、所望の表現型特性の構成的発現を有する得られたハイブリッドが同定され得る。２世代またはそれよりも多い世代が生育されて、確実に所望の表現型特性の発現が安定に維持され、遺伝され、続いて、種子が収穫されて、確実に所望の表現型特性の発現が達成された。この様式で、本発明は、本発明のポリヌクレオチド構築物、例えば本発明の発現カセットがゲノムに安定に組み込まれた形質転換された種子（「トランスジェニック種子」とも称される）を提供する。

【0282】

ＤＮＡを植物のゲノムにおいて改変させる当該技術分野で既知のかかる方法として、例えば、標的突然変異誘発、部位特異的組み込み（ＳＤＩ）、および相同組換えを包含する方法などの、例えば突然変異育種およびゲノム編集技術が挙げられる。標的突然変異誘発または類似した技法は、米国特許第５，５６５，３５０号；同第５，７３１，１８１号；同第５，７５６，３２５号；同第５，７６０，０１２号；同第５，７９５，９７２号；同第５，８７１，９８４号；同第８，１０６，２５９号に開示されており、それらは全て、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする。相同組換えを含む遺伝子改変または遺伝子置換の方法は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＴＡＬ（転写活性化因子様）エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート／ＣＲＩＳＰＲ関連ヌクレアーゼ（ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼ）、または植物、他の生物、もしくは宿主細胞のゲノムにおける特異的な認識配列で二重鎖切断を作製するよう操作されたエンドヌクレアーゼであるホーミングエンドヌクレアーゼを使用してＤＮＡにおいて単鎖または二重鎖切断を誘導するステップを包含し得る。例えば、Ｄｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３３：５９７８－９０；Ｍａｎｉ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ ３３５：４４７－５７；米国特許第７，１６３，８２４号、同第７，００１，７６８号、および同第６，４５３，２４２号；Ａｒｎｏｕｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３５５：４４３－５８；Ａｓｈｗｏｒｔｈ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４１：６５６－９；Ｄｏｙｏｎ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２８：２４７７－８４；Ｒｏｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３４：４７９１－８００；およびＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３４：ｅ１４９；米国特許出願公開第２００９／０１３３１５２号；および米国特許出願公開第２００７／０１１７１２８号を参照のこと。それらは全て、それらの全体が引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0283】

ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、相同組換えを通じて遺伝子改変または遺伝子置換のための植物のゲノムにおける特異的な認識部位に二重鎖切断を作製するのに使用され得る。ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼは、植物または他の生物のゲノムにおいて特異的な標的配列で二重鎖切断を作製するのに使用され得る配列特異的なヌクレアーゼのクラスである。ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼは、ネイティブまたは操作された転写活性化因子様（ＴＡＬ）エフェクター、またはその機能性部分を、例えばＦｏｋＩなどのエンドヌクレアーゼの触媒ドメインに融合するステップによって創出される。特有のモジュラーＴＡＬエフェクターＤＮＡ結合性ドメインは、潜在的に任意の所与のＤＮＡ認識特異性を有するタンパク質の設計を可能にする。したがって、ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼのＤＮＡ結合性ドメインは、特異的なＤＮＡ標的部位を認識するよう操作されて、したがって、所望の標的配列で二重鎖切断を作製するのに使用され得る。国際公開第２０１０／０７９４３０号；Ｍｏｒｂｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１０）ＰＮＡＳ １０．１０７３／ｐｎａｓ．１０１３１３３１０７；Ｓｃｈｏｌｚｅ ａｎｄ Ｂｏｃｈ（２０１０）Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ １：４２８－４３２；Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（２０１０）１８６：７５７－７６１；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２０１０）ｄｏｉ：１０．１０９３／ｎａｒ／ｇｋｑ７０４；ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２９：１４３－１４８を参照のこと。それらは全て、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0284】

ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼシステムはまた、相同組換えを通じて、遺伝子改変または遺伝子置換のために植物のゲノムにおいて特異的な認識配列で単鎖または二重鎖切断を作製するのに使用され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓヌクレアーゼは、設計されたＲＮＡに相同的なＤＮＡセグメントにおいて配列特異的な二重鎖切断を実施するＲＮＡガイド（簡素なガイドＲＮＡ、要するにｓｇＲＮＡ）ＤＮＡエンドヌクレアーゼ系である。配列の特異性を設計することが可能である（Ｃｈｏ Ｓ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１：２３０－２３２，２０１３；Ｃｏｎｇ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８１９－８２３，２０１３；Ｍａｌｉ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９：８２３－８２６，２０１３； Ｆｅｎｇ Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：１－４，２０１３）。

【0285】

さらに、ＺＦＮは、相同組換えを通じて遺伝子改変または遺伝子置換のために植物のゲノムにおいて特異的認識配列で二重鎖切断を作製するのに使用され得る。ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）は、ＤＮＡ切断に関与するＦｏｋＩ制限エンドヌクレアーゼタンパク質の一部および特異的な設計されたゲノム配列を認識して、それらの配列で二重鎖ＤＮＡを切断し、それによって遊離ＤＮＡ末端を生じるジンクフィンガータンパク質を含む融合タンパク質である（Ｕｒｎｏｖ Ｆ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｇｅｎｅｔ．１１：６３６－４６，２０１０；Ｃａｒｒｏｌｌ Ｄ．，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．１８８：７７３－８２、２０１１）。

【0286】

例えば本明細書中で上述するものなどの部位特異的なヌクレアーゼを使用してＤＮＡを切断することにより、切断の領域における相同組換えの割合を高め得る。したがって、上述するようなエフェクターと、ヌクレアーゼとのカップリングは、付加、欠失および他の改変を含むゲノムにおける標的変化の生成を可能にする。

【0287】

明記されない限り、または使用の状況から明らかでない限り、本発明の方法および組成物は、例えば、単子葉類の植物（「単子葉植物」）、双子葉類の植物（「双子葉」）および針葉樹を含む任意の植物種とともに使用することができる。対象とする植物種の例は、これらに限定されないが、コーン（トウモロコシ（Ｚｅａ ｍａｙｓ））、ブラッシカｓｐ．（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐ．）（例えば、Ｂ．ナプス（Ｂ．ｎａｐｕｓ）、Ｂ．ラパ（Ｂ．ｒａｐａ）、Ｂ．ジュンセア（Ｂ．ｊｕｎｃｅａ））、特に、種油の供給源として有用なブラッシカ種、アルファルファ（メディカゴ・サチバ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ））、イネ（オリザ・サチバ（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ））、ライムギ（セカレ・セレアレ（Ｓｅｃａｌｅ ｃｅｒｅａｌｅ））、ライコムギ（×トリチコセカレ（Ｔｒｉｔｉｃｏｓｅｃａｌｅ）またはトリチクム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）×セカレ（Ｓｅｃａｌｅ））、ソルガム（ソルガム・ビコロル（Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ）、ソルガムブルガレ（Ｓｏｒｇｈｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ））、テフ（エラグロスチス・テフ（Ｅｒａｇｒｏｓｔｉｓ ｔｅｆ））、アワ（例えば、トウゾインビエ（ペンニセツム・グラウクム（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｇｌａｕｃｕｍ））、キビ（パニクム・ミリアセウム（Ｐａｎｉｃｕｍ ｍｉｌｉａｃｅｕｍ））、アワ（セタリア・イタリカ（Ｓｅｔａｒｉａ ｉｔａｌｉｃａ））、シコクビエ（エレウシネ・コラカナ（Ｅｌｅｕｓｉｎｅ ｃｏｒａｃａｎａ）））、スイッチグラス（パニクム・ビルガツム（Ｐａｎｉｃｕｍ ｖｉｒｇａｔｕｍ））、ひまわり（ヘリアンサス・アンヌス（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ））、ベニバナ（カルサムス・チンクトリウス（Ｃａｒｔｈａｍｕｓ ｔｉｎｃｔｏｒｉｕｓ））、コムギ（トリチクム・アエスチブム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ａｅｓｔｉｖｕｍ））、ダイズ（グリシン・マックス）、タバコ（ニコチアナ・タバクム（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ））、ジャガイモ（ソラヌム・ツベロスム（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ））、ピーナッツ（アラキス・ヒポガエア（Ａｒａｃｈｉｓ ｈｙｐｏｇａｅａ））、ワタ（ゴッシイピウム・バルバデンセ（ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｂａｒｂａｄｅｎｓｅ）、ゴッシイピウム・ヒルスツム（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ））、イチゴ（例えば、フラガリア属（Ｆｒａｇａｒｉａ）×アナナッサ（ａｎａｎａｓｓａ）、フラガリア属・ベスカ（Ｆｒａｇａｒｉａ ｖｅｓｃａ）、フラガリア・モスチャタ（Ｆｒａｇａｒｉａ ｍｏｓｃｈａｔａ）、フラガリア・ビルギニアナ（Ｆｒａｇａｒｉａ ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、フラガリア・キロエンシス（Ｆｒａｇａｒｉａ ｃｈｉｌｏｅｎｓｉｓ））、サツマイモ（イポモエア・バタツス（ｉｐｏｍｏｅａ ｂａｔａｔｕｓ））、ヤムイモ（ディオスコレアｓｐｐ．（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｓｐｐ．）、Ｄ．ロツンダタ（Ｄ．ｒｏｔｕｎｄａｔａ）、Ｄ．カイエネンシス（Ｄ．ｃａｙｅｎｅｎｓｉｓ）、Ｄ．アラタ（Ｄ．ａｌａｔａ）、Ｄ．ポリスタキア（Ｄ．ｐｏｌｙｓｔａｃｈｙａ）、Ｄ．ブルビフェラ（Ｄ．ｂｕｌｂｉｆｅｒａ）、Ｄ．エスクレンタ（Ｄ．ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）、Ｄ．デュメトルム（Ｄ．ｄｕｍｅｔｏｒｕｍ）、Ｄ．トリフィダ（Ｄ．ｔｒｉｆｉｄａ））、キャッサバ（マニホト・エスクレンタ（Ｍａｎｉｈｏｔ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ））、コーヒー（コッフェアｓｐｐ．（Ｃｏｆｆｅａ ｓｐｐ．））、ココナツ（ココス・ヌキフェラ（Ｃｏｃｏｓ ｎｕｃｉｆｅｒａ））、油やし（例えば、エラエイス・グイネエンシス（Ｅｌａｅｉｓ ｇｕｉｎｅｅｎｓｉｓ）、エラエイス・オレイフェラ（Ｅｌａｅｉｓ ｏｌｅｉｆｅｒａ））、パイナップル（アナナス・コモス（Ａｎａｎａｓ ｃｏｍｏｓｕｓ））、柑橘類の木（シトラスｓｐｐ．（Ｃｉｔｒｕｓ ｓｐｐ．））、ココア（テオブロマ・カカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ））、チャ（カメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ））、バナナ（ムサｓｐｐ．（Ｍｕｓａ ｓｐｐ．））、アボカド（ペルセア・アメリカナ（Ｐｅｒｓｅａ ａｍｅｒｉｃａｎａ））、イチジク（フィクス・カシカ（Ｆｉｃｕｓ ｃａｓｉｃａ））、グアバ（サイディウム・グアジャバ（Ｐｓｉｄｉｕｍ ｇｕａｊａｖａ））、マンゴー（マンギフェラ・インディカ（Ｍａｎｇｉｆｅｒａ ｉｎｄｉｃａ））、オリーブ（オレア・エウロパエア（Ｏｌｅａ ｅｕｒｏｐａｅａ））、パパイヤ（カリカ・パパイヤ（Ｃａｒｉｃａ ｐａｐａｙａ））、カシュー（アナカルディウム・オッシデンタレ（Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｅ））、マカダミア（マカダミア・インテグリフォリア（Ｍａｃａｄａｍｉａ ｉｎｔｅｇｒｉｆｏｌｉａ））、アーモンド（プルヌス・アミグダルス（Ｐｒｕｎｕｓ ａｍｙｇｄａｌｕｓ））、ナツメヤシ（フォエニクス・ダクチリフェラ（Ｐｈｏｅｎｉｘ ｄａｃｔｙｌｉｆｅｒａ））、ベータ・ブルガリス（Ｂｅｔａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）の栽培形態（サトウダイコン、レッドビート、フダンソウまたはスピナッチビート（ｓｐｉｎａｃｈ ｂｅｅｔ）、マンゲルワーゼル（ｍａｎｇｅｌｗｕｒｚｅｌ）または飼料ビート）、サトウキビ（サッカルムｓｐｐ．（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ ｓｐｐ．））、カラスムギ（アベナ・サチバ（Ａｖｅｎａ ｓａｔｉｖａ））、オオムギ（ホルデウム・ブルガレ）、カンナビス（カンナビス・サチバ（Ｃａｎｎａｂｉｓ ｓａｔｉｖａ）、Ｃ．インディカ（ｉｎｄｉｃａ）、Ｃ．ルデラリス（Ｃ．ｒｕｄｅｒａｌｉｓ））、ポプラ（ポプルスｓｐｐ．（Ｐｏｐｕｌｕｓ ｓｐｐ．））、ユーカリ（エウカリプツスｓｐｐ．（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｓｐｐ．））、シロイヌナズナ、アラビドプシス・リゾゲネス（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）、ニコチアナ・ベンタミアナ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｂｅｎｔｈａｍｉａｎａ）、ブラキポディウム・ディスタキオンの野菜、観葉植物、および針葉樹ならびに他の木を含む。特定実施形態では、本発明の植物は、作物（例えば、トウモロコシ、ソルガム、コムギ、アワ、イネ、オオムギ、オーツムギ、サトウキビ、アルファルファ、ダイズ、ピーナッツ、ヒマワリ、ワタ、ブラッシカｓｐ．、レタス、イチゴ、リンゴ、柑橘類等）である。

【0288】

野菜として、トマト（リコペルシコン・エスクレンツム（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ））、ナス（「ナスビ（ａｕｂｅｒｇｉｎｅ）または「ブリンジャル（ｂｒｉｎｊａｌ）」としても知られている）（ソラヌム・メロンゲナ（Ｓｏｌａｎｕｍ ｍｅｌｏｎｇｅｎａ））、コショウ（カプシクム・アンヌウム（Ｃａｐｓｉｃｕｍ ａｎｎｕｕｍ））レタス（例えば、ラクツカ・サチバ（Ｌａｃｔｕｃａ ｓａｔｉｖａ））、サヤインゲン（ファセオルス・ブルガリス（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ））、ライマメ（ファセオルス・リメンシス（Ｐｈａｓｅｏｌｕｓ ｌｉｍｅｎｓｉｓ））、エンドウ（ラチルスｓｐｐ．（Ｌａｔｈｙｒｕｓ ｓｐｐ．））、ヒヨコマメ（キセル・アリエチヌム（Ｃｉｃｅｒ ａｒｉｅｔｉｎｕｍ））、ならびにキュウリ（Ｃ．サチブス（Ｃ．ｓａｔｉｖｕｓ））、カンタロープ（Ｃ．カンタルペンシス（Ｃ．ｃａｎｔａｌｕｐｅｎｓｉｓ））、およびマスクメロン（Ｃ．メロ（Ｃ．ｍｅｌｏ））などのククミス属（Ｃｕｃｕｍｉｓ）の成員が挙げられる。観葉植物として、ツツジ（ロドデンドロンｓｐｐ．（Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｐｐ．））、アジサイ（マクロフィラ・ハイドランゲア（Ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ ｈｙｄｒａｎｇｅａ））、ハイビスカス（ハイビスカス・ロササネンシス（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ ｒｏｓａｓａｎｅｎｓｉｓ））、バラ（ロサｓｐｐ．（Ｒｏｓａ ｓｐｐ．））、チューリップ（ツリパｓｐｐ．（Ｔｕｌｉｐａ ｓｐｐ．））、ラッパスイセン（ナルシッススｓｐｐ．（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｓｐｐ．））、ペチュニア（ペツニア・ハイブリダ（Ｐｅｔｕｎｉａ ｈｙｂｒｉｄａ））、カーネーション（ディアンサス・カリオフィルス（Ｄｉａｎｔｈｕｓ ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ））、ポインセチア（ユーフォルビア・プルケリマ（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ ｐｕｌｃｈｅｒｒｉｍａ））、およびキクが挙げられる。果樹および関連植物として、例えば、リンゴ、セイヨウナシ、モモ、プラム、オレンジ、グレープフルーツ、ライム、ザボン、パーム、およびバナナが挙げられる。堅果の木および関連植物として、例えば、アーモンド、カシュー、クルミ、ピスタチオ、マカダミアナッツ、ハシバシ、ヘーゼルナッツ、およびペカンが挙げられる。

【0289】

特定実施形態では、本発明の植物は、例えば、トウモロコシ（コーン）、ダイズ、コムギ、イネ、ワタ、アルファルファ、ヒマワリ、セイヨウアブラナ（ブラッシカｓｐｐ．（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｓｐｐ．）、特にブラッシカ・ナプス（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｎａｐｕｓ）、ブラッシカ・ラパ（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｒａｐａ）、ブラッシカ・ジュンセア（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ））、ナタネ（ブラッシカ・ナプス）、ソルガム、アワ、オオムギ、ライコムギ、ベニバナ、ピーナッツ、サトウキビ、タバコ、ジャガイモ、トマト、およびコショウなどの作物である。

【0290】

一部の好ましい実施形態では、本発明の方法および組成物は、コムギの下記疾病：プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシによって引き起こされるコムギ黒さび病、プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシによって引き起こされるコムギ黄さび病、プッチニア・トリチシナによって引き起こされるコムギ赤さび病およびマグナポルテ・オリゼ トリチクムによって引き起こされるコムギいもち病の１つまたは複数に対して、作物、特に栽培植物化されたコムギ植物の耐性を増強するのに使用され得る。栽培植物化されたコムギ植物は、これらに限定されないが、食用コムギまたはパンコムギ（トリチクム・アエスチブム）、デュラムコムギ（トリチクム・デュラム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｄｕｒｕｍ）またはトリチクム・ツルギダムｓｕｂｓｐ．デュラム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｔｕｒｇｉｄｕｍ ｓｕｂｓｐ．ｄｕｒｕｍ））、ヒトツブコムギ（トリチクム・モノコックム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｍｏｎｏｃｏｃｃｕｍ））、スペルト（トリチクム・スペルタ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｓｐｅｌｔａ））、エンマーコムギ（トリチクム・ツルギダムｓｕｂｓｐ．ディコックム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｔｕｒｇｉｄｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ｄｉｃｏｃｃｕｍ）；トリチクム・ツルギダムｃｏｎｖ．デュラム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｔｕｒｇｉｄｕｍ ｃｏｎｖ． ｄｕｒｕｍ））、およびホラーサンコムギ（トリチクム・ツルギダムｓｓｐ．ツラニクム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｔｕｒｇｉｄｕｍ ｓｓｐ．Ｔｕｒａｎｉｃｕｍ）またはトリチクム・ツラニクム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｔｕｒａｎｉｃｕｍ））を含む。

【0291】

「植物」という用語は、文脈によって明らかに別の状況を示さない限り、成熟度または発達の任意の段階にある植物、ならびに任意のかかる植物から採取されたか、もしくはそれから得られた任意の細胞、組織または器官（植物の一部）を包含すると意図される。植物部分は、これらに限定されないが、果実、幹、塊茎、根、花、胚珠、雄しべ、花弁、葉、胚軸、上胚軸、子葉、胚、分裂組織領域、カルス組織、葯培養物、配偶体、胞子体、花粉、小胞子、プロトプラスト、種子等を含む。本発明の植物プロトプラストは、上述の植物の一部の任意の１つまたは複数から、発達および／または成熟度の任意の段階で調製することができることが認識されている。

【0292】

同様に、「植物細胞」という用語は、文脈によって明らかに別の状況を示さない限り、成熟度もしくは発達の任意の段階にある植物から得られたか、またはそれらにおける植物細胞を包含すると意図される。植物細胞は、これらに限定されないが果実、幹、塊茎、根、花、胚珠、雄しべ、葉、胚、分裂組織領域、カルス組織、葯培養物、配偶体、胞子体、花粉、小胞子、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養された組織、器官または細胞等を含む植物の一部由来であり得るか、またはそれらにおいて存在し得る。

【0293】

再生された植物の子孫、バリアント、および突然変異体もまた、本発明の範囲内に含まれるが、但し、これらの一部は、導入されたポリヌクレオチドを含む。本明細書中で使用する場合、「子孫」および「子孫植物」は、それが明らかに別記されない限り、または使用の状況から明らかでない限り、有性生殖および／または無性繁殖から生じようと、植物の任意の次世代を含む。

【0294】

「発現」という用語は、本明細書中で使用する場合、遺伝子産物の転写および／または翻訳を含む、遺伝子産物の生合成を指す。ＤＮＡ分子からのタンパク質もしくはポリペプチドの「発現」または「産生」は、タンパク質またはポリペプチドを産生するためのコード配列の転写および翻訳を指すのに対して、ＲＮＡ分子からのタンパク質またはポリペプチドの「発現」または「産生」は、タンパク質またはポリペプチドを産生するためのＲＮＡコード配列の翻訳を指す。好ましくは、本発明の方法に関して、別記されない限り、または使用の文脈から明らかでない限り、ＮＬＲのｍＲＮＡ（即ち、転写物）が植物、植物器官、または他の植物の一部において検出される場合、ＮＬＲは、植物、植物器官、または他の植物の一部における発現ＮＬＲである。

【0295】

本明細書中の「ＤＮＡ」または「ＲＮＡ」という用語の使用は、本発明を、ＤＮＡまたはＲＮＡを含むポリヌクレオチド分子に限定するものと意図されない。本発明の方法および組成物は、核酸分子、ポリヌクレオチド、ポリヌクレオチド構築物、発現カセット、ならびにデオキシリボヌクレオチド（即ち、ＤＮＡ）、リボヌクレオチド（即ち、ＲＮＡ）またはリボヌクレオチドおよびデオキシリボヌクレオチドの組合せから構成されるベクターを包含することが当業者に認識されている。かかるデオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドは、天然に存在する分子および、これらに限定されないがヌクレオチド類似体または修飾骨格残基もしくは結合を含む合成類似体の両方を含み、それらは、合成的であり、天然に存在し、あるいは天然に存在せず、それらは、参照核酸と類似した結合特性を有し、それらは、参照ヌクレオチドに類似した様式で代謝される。かかる類似体の例は、限定されずにホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル－メチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド－核酸（ＰＮＡ）を含む。本発明のポリヌクレオチド分子はまた、これらに限定されないが単鎖形態、二重鎖形態、ヘアピン、ステムループ構造等を含むポリヌクレオチドの全ての形態を包含する。さらに、本明細書中に開示されるヌクレオチド配列はまた、その例示されたヌクレオチド配列の相補体を包含することが当業者に理解されよう。

【0296】

本発明は、１つ、２つ、３つ、４つまたはそれよりも多い植物病原体によって引き起こされる植物疾病に対する耐性が増強された植物を生産するための組成物および方法を目指すものである。「植物疾病に対する耐性」または「疾病耐性」とは、植物が植物病原体相互作用の結末である疾病症状を回避すると意図される。即ち、１つまたは複数の病原体は、植物疾病（単数または複数）および関連する疾病症状を引き起こすのを防止されるか、あるいは、１つまたは複数の病原体によって引き起こされる疾病症状が、最小限に抑えられるか、または減じられる。

【0297】

候補Ｒ遺伝子のライブラリーを調製する方法およびＲ遺伝子を同定する方法は、対象とする植物に植物疾病を引き起こす植物病原体に対するＲ遺伝子に関して主に記載されているのに対して、本発明の方法は、これらに限定されないが植物病原体（例えば、真菌、卵菌、細菌、ウイルス、および線虫）ならびに植物に損傷を引き起こす昆虫およびコナダニを含む任意の植物害虫に対するＲ遺伝子に広く適用可能である。したがって、「植物病原体」という用語は、本明細書中で使用する場合、明示されない限り、または使用の状況から明らかでない限り、任意の植物害虫を包含する。同様に、「植物疾病」または「疾病」という用語は、本明細書中で使用する場合、明示されない限り、または使用の状況から明らかでない限り、植物害虫によって植物に引き起こされる任意の損傷を包含する。

【0298】

植物病原体として、例えば、細菌、真菌、卵菌、ウイルス、線虫等が挙げられる。主要な作物に対する具体的な病原体として、ダイズ：フィトフトラ・メガスペルマｆｓｐ．グリシネア（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｇａｓｐｅｒｍａ ｆｓｐ．ｇｌｙｃｉｎｅａ）、マクロホミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、リゾクトニア・ソラニ（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ）、スクレロチニア・スクレロチオルム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、フザリウム・オキシスポルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、ディアポルテ・ファセオロルムｖａｒ．ソジャエ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ ｖａｒ．ｓｏｊａｅ）（ホモプシス・ソジャエ（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｓｏｊａｅ））、ディアポルテ・ファセオロルムｖａｒ．カウリボラ（Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ｐｈａｓｅｏｌｏｒｕｍ ｖａｒ．ｃａｕｌｉｖｏｒａ）、スクレロチウム・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ）、セルコスポラ・キクチイ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｋｉｋｕｃｈｉｉ）、セルコスポラ・ソジナ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏｊｉｎａ）、ペロノスポラ・マンシュリカ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｍａｎｓｈｕｒｉｃａ）、コレトトリクム・デマチウム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｄｅｍａｔｉｕｍ）（コレトチクム・トルンカツム（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｉｃｈｕｍ ｔｒｕｎｃａｔｕｍ））、コリネスポラ・カッシイコラ（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｉｃｏｌａ）、セプトリア・グリシネス（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ）、フィロスチクタ・ソジコラ（Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ ｓｏｊｉｃｏｌａ）、アルタナリア・アルテルナタ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔａ）、シュードモナス・シリンガエｐ．ｖ．グリシネア（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐ．ｖ．ｇｌｙｃｉｎｅａ）、キサントモナス・カムペストリスｐ．ｖ．ファセオリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐ．ｖ．ｐｈａｓｅｏｌｉ）、ミクロスファエラ・ディッフサ（Ｍｉｃｒｏｓｐｈａｅｒａ ｄｉｆｆｕｓａ）、フザリウム・セミテクツム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ）、フィアロホラ・グレガタ（Ｐｈｉａｌｏｐｈｏｒａ ｇｒｅｇａｔａ）、ダイズモザイクウイルス、グロメレラ・グリシネス（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ）、タバコ輪点ウイルス、タバコ条斑ウイルス、ファコプソラ・パキリジ（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、フィチウム・アファニデルマツム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｐｈａｎｉｄｅｒｍａｔｕｍ）、フィチウム・ウルチムム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｕｌｔｉｍｕｍ）、フィチウム・デバリアヌム（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ）、トマト黄化壊疽ウイルス、ヘテロデラ・グリシネス（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｇｌｙｃｉｎｅｓ）、フザリウム・ソラニ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）；セイヨウアブラナ：アルブゴ・カンディダ、アルタナリア・ブラッシカエ、レプトスファリア・マクランス（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ ｍａｃｕｌａｎｓ）、リゾクトニア・ソラニ、スクレロチニア・スクレロチオルム、ミコスファエレラ・ブラッシシコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ）、フィチウム・ウルチムム、ペロノスポラ・パラシチカ（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）、フザリウム・ロセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｒｏｓｅｕｍ）、アルタナリア・アルテルナタ；アルファルファ：クラビバクテル・ミキガネセｓｕｂｓｐ．インシディオスム（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｓｅ ｓｕｂｓｐ．ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）、フィチウム・ウルチムム、フィチウム・イレグラレ（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｅ）、フィチウム・スプレンデンス（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｌｅｎｄｅｎｓ）、フィチウム・デバリアヌム、フィチウム・アファニデルマツム、フィトフトラ・メガスペルマ、ペロノスポラ・トリフォリオルム（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｔｒｉｆｏｌｉｏｒｕｍ）、ホマ・メディカギニスｖａｒ．メディカギニス（Ｐｈｏｍａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ ｖａｒ．ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ）、セルコスポラ・メディカギニス（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ）、シュードペジザ・メディカギニス（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｚｉｚａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ）、レプトトロキラ・メディカギニス（Ｌｅｐｔｏｔｒｏｃｈｉｌａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ）、フザリウム・オキシスポルム、バーティシリウム・アルボ・アトラム（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｌｂｏ－ａｔｒｕｍ）、キサントモナス・カムペストリスｐ．ｖ．アルファルファエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐ．ｖ．ａｌｆａｌｆａｅ）、アファノミセス・ユーテイチェス（Ａｐｈａｎｏｍｙｃｅｓ ｅｕｔｅｉｃｈｅｓ）、ステムフィリウム・ハーバルム（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｕｍ）、ステムフィリウム・アルファルファエ（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ ａｌｆａｌｆａｅ）、コレトトリクム・トリフォリ（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｔｒｉｆｏｌｉｉ）、レプトスファエルリナ・ブリオシアナ（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｕｌｉｎａ ｂｒｉｏｓｉａｎａ）、ウロミセス・ストリアツス（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ｓｔｒｉａｔｕｓ）、スクレロチニア・トリフォリオルム（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｔｒｉｆｏｌｉｏｒｕｍ）、スタゴノスポラ・メリロチ（Ｓｔａｇｏｎｏｓｐｏｒａ ｍｅｌｉｌｏｔｉ）、ステムフィリウム・ボトリオスム（Ｓｔｅｍｐｈｙｌｉｕｍ ｂｏｔｒｙｏｓｕｍ）、レプトトリキラ・メディカギニス（Ｌｅｐｔｏｔｒｉｃｈｉｌａ ｍｅｄｉｃａｇｉｎｉｓ）；コムギ：シュードモナス・シリンガエｐ．ｖ．アトロファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐ．ｖ．ａｔｒｏｆａｃｉｅｎｓ）、ウロシスチス・アグロピリ（Ｕｒｏｃｙｓｔｉｓ ａｇｒｏｐｙｒｉ）、キサントモナス・カムペストリスｐ．ｖ．トランスルセンス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐ．ｖ．ｔｒａｎｓｌｕｃｅｎｓ）、シュードモナス・シリンガエｐ．ｖ．シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐ．ｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、アルタナリア・アルテルナタ、クラドスポリウム・ハーバルム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｈｅｒｂａｒｕｍ）、フザリウム・グラミネアリム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）、フザリウム・アベナセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ａｖｅｎａｃｅｕｍ）、フザリウム・カルモルム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、ウスチラゴ・トリチシ（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｔｒｉｔｉｃｉ）、アスコキタ・トリチシ（Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、セファロスポリウム・グラミネウム（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅｕｍ）、コロテトリクム・グラミニコラ（Ｃｏｌｌｏｔｅｔｒｉｃｈｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、エリシフェ・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ．ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ）、プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ、プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．ホルデイ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ．ｓｐ．ｈｏｒｄｅｉ）、プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．アベナエ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ．ｓｐ． ａｖｅｎａｅ）、プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．セカリス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｆ．ｓｐ．ｓｅｃａｌｉｓ）、プッチニア・レコンディタｆ．ｓｐ．トリチシ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｒｅｃｏｎｄｉｔａ ｆ．ｓｐ． ｔｒｉｔｉｃｉ）、プッチニア・ストリイフォルミス（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｔｒｉｉｆｏｒｍｉｓ）、ピレノフォラ・トリチシ・レペンチス（Ｐｙｒｅｎｏｐｈｏｒａ ｔｒｉｔｉｃｉ－ｒｅｐｅｎｔｉｓ）、セプトリア・ノドルム（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｎｏｄｏｒｕｍ）、セプトリア・トリチシ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、セプトリア・アベナエ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ａｖｅｎａｅ）、シュードセルコスポレラ・ヘルポトリコイデス（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａ ｈｅｒｐｏｔｒｉｃｈｏｉｄｅｓ）、リゾクトニア・ソラニ、リゾクトニア・セレアリス（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｃｅｒｅａｌｉｓ）、ガエウマンノミセス・グラミニスｖａｒ．トリチシ（Ｇａｅｕｍａｎｎｏｍｙｃｅｓ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｖａｒ． ｔｒｉｔｉｃｉ）、フィチウム・アファニデルマツム、フィチウム・アレノマネス（Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｒｒｈｅｎｏｍａｎｅｓ）、フィチウム・ウルチムム、ビポラリス・シリキニアナ（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ ｓｏｒｏｋｉｎｉａｎａ）、オオムギ黄萎ウイルス、ブロモモザイクウイルス、土壌伝播性コムギモザイクウイルス、コムギ条斑モザイクウイルス、コムギ縞条斑ウイルス、アメリカコムギ線条体ウイルス、クラビセプス・プルプレア（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、チレチア・トリチシ（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、チレチア・ラエビス（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｌａｅｖｉｓ）、ウスチラゴ・トリチシ、チレチア・インディカ（Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｉｎｄｉｃａ）、リゾクトニア・ソラニ、フィチウム・アレノマネス（Ｐｙｔｈｉｕｍ ａｒｒｈｅｎｏｍａｎｎｅｓ）、フィチウム・グラミコラ（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｒａｍｉｃｏｌａ）、フィチウム・アファニデルマツム、ハイプレーンズウイルス、ヨーロッパコムギ線条体ウイルス；ヒマワリ：プラスモポラ・ハルステディイ（Ｐｌａｓｍｏｐｏｒａ ｈａｌｓｔｅｄｉｉ）、スクレロチニア・スクレロチオルム、アスターイエロー、セプトリア・ヘリアンチ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、ホモプシス・ヘリアンチ（Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、アルタナリア・ヘリアンチ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、アルタナリア・ジンニアエ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｚｉｎｎｉａｅ）、ボトリチス・シネレア、ホマ・マクドナルディイ（Ｐｈｏｍａ ｍａｃｄｏｎａｌｄｉｉ）、マクロホミナ・ファセオリナ（Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ）、エリシフェ・シコラケアルム（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｃｉｃｈｏｒａｃｅａｒｕｍ）、リゾプス・オリザエ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｏｒｙｚａｅ）、リゾプス・アリズス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ａｒｒｈｉｚｕｓ）、リゾプス・ストロニフェル（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ）、プッチニア・ヘリアンチ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｈｅｌｉａｎｔｈｉ）、バーティシリウム・ダフリアエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ）、エルウィニア・カロトボルムｐｖ．カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｐｖ．ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、セファロスポリウム・アクレモニウム（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ）、フィトフトラ・クリプトゲア（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃｒｙｐｔｏｇｅａ）、アルブゴ・トラゴポゴニス（Ａｌｂｕｇｏ ｔｒａｇｏｐｏｇｏｎｉｓ）；トウモロコシ：コレトトリクム・グラミニコラ（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、フザリウム・モニリフォルメｖａｒ．スブグルチナンス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ ｖａｒ．ｓｕｂｇｌｕｔｉｎａｎｓ）、エルウィニア・ステワルチイ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｓｔｅｗａｒｔｉｉ）、ギベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ）（フザリウム・グラミネアリム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ））、フザリウム・ベルチキロイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｏｉｄｅｓ）、ステノカルペラ・マイディ（Ｓｔｅｎｏｃａｒｐｅｌｌａ ｍａｙｄｉ）（ディプロディア・マイディス（Ｄｉｐｌｏｄｉａ ｍａｙｄｉｓ））、フィチウム・イレグラレ、フィチウム・デバリアヌム、フィチウム・グラミニコラ（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、フィチウム・スプレンデンス、フィチウム・ウルチムム、フィチウム・アファニデルマツム、アスペルギルス・フラブス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａ
ｖｕｓ）、ビポラリス・マイディス Ｏ，Ｔ（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ ｍａｙｄｉｓ Ｏ，Ｔ）（コクリオボルス・ヘテロストロフス（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｈｅｔｅｒｏｓｔｒｏｐｈｕｓ））、ヘルミントスポリウム・カルボヌムＩ，ＩＩ＆ＩＩＩ（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｂｏｎｕｍ Ｉ， ＩＩ ＆ ＩＩＩ）（コクリオドボルス・カルボヌム（Ｃｏｃｈｌｉｏｂｏｌｕｓ ｃａｒｂｏｎｕｍ））、エクセロヒルム・ツルシクムＩ，ＩＩ＆ＩＩＩ（Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ ｔｕｒｃｉｃｕｍ Ｉ， ＩＩ ＆ ＩＩＩ）、ヘルミントスポリウム・ペディセラツム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｐｅｄｉｃｅｌｌａｔｕｍ）、フィソデルマ・マイディス（Ｐｈｙｓｏｄｅｒｍａ ｍａｙｄｉｓ）、フィロスチクタ・マイディス（Ｐｈｙｌｌｏｓｔｉｃｔａ ｍａｙｄｉｓ）、カバチエラ・マイディス（Ｋａｂａｔｉｅｌｌａ ｍａｙｄｉｓ）、セルコスポラ・ソルギ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉ）、ウスチラゴ・マイディス（Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｍａｙｄｉｓ）、プッチニア・ソルギ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉ）、プッチニア・ポリソラ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｐｏｌｙｓｏｒａ）、マクロホミナ・ファセオリナ、ペニシリウム・オキサリクム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｏｘａｌｉｃｕｍ）、ニグロスポラ・オリザエ（Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａ ｏｒｙｚａｅ）、クラドスポリウム・ハーバルム、クルブラリア・ルナタ（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｌｕｎａｔａ）、クルブラリア・イナエクアリス（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）、クルブラリア・パレスセンス（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｐａｌｌｅｓｃｅｎｓ）、クラビバクター・ミキガネンセｓｕｂｓｐ．ネブラスケンセ（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ ｓｕｂｓｐ．ｎｅｂｒａｓｋｅｎｓｅ）、トリコデルマ・ビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ）、トウモロコシ萎縮モザイクウイルスＡ＆Ｂ（Ｄｗａｒｆ Ｍｏｓａｉｃ Ｖｉｒｕｓ Ａ＆Ｂ）、コムギ条斑モザイクウイルス、トウモロコシ退緑萎縮ウイルス（Ｃｈｌｏｒｏｔｉｃ Ｄｗａｒｆ Ｖｉｒｕｓ）、クラビセプス・ソルギ（Ｃｌａｖｉｃｅｐｓ ｓｏｒｇｈｉ）、シュードモナス・アベナエ（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｍａｓ ａｖｅｎａｅ）、エルウィニア・クリサンテミｐｖ．ゼア（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ ｐｖ．ｚｅａ）、エルウィニア・カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、トウモロコシ矮化スピロプラズマ（ｓｔｕｎｔ ｓｐｉｒｏｐｌａｓｍａ）、ディプロディア・マクロスポラ（Ｄｉｐｌｏｄｉａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、スクレロフトラ・マクロスポラ（Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、ペロノスクレオスポラ・ソルギ（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉ）、ペロノスクレオスポラ・フィリピネンシス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）、ペロノスクレオスポラ・マイディス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｍａｙｄｉｓ）、ペロノスクレオスポラ・サッカリ（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｓａｃｃｈａｒｉ）、スファセロテカ・レイリアナ（Ｓｐｈａｃｅｌｏｔｈｅｃａ ｒｅｉｌｉａｎａ）、フィソペラ・ゼアエ（Ｐｈｙｓｏｐｅｌｌａ ｚｅａｅ）、セファロスポリウム・マイディス（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍａｙｄｉｓ）、セファロスポリウム・アクレモニウム、トウモロコシ退緑斑ウイルス、ハイプレーンズウイルス、トウモロコシモザイクウイルス、トウモロコシラヤドフィノ（Ｒａｙａｄｏ Ｆｉｎｏ）ウイルス、トウモロコシ条斑ウイルス、トウモロコシ縞葉枯ウイルス、トウモロコシ粗萎縮（Ｒｏｕｇｈ Ｄｗａｒｆ）ウイルス；ソルガム：エクセロヒルム・ツルシクム（Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ ｔｕｒｃｉｃｕｍ）、Ｃ．スブリネオルム（Ｃ．ｓｕｂｌｉｎｅｏｌｕｍ）、セルコスポラ・ソルギ、グロエオセルコスポラ・ソルギ（Ｇｌｏｅｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉ）、アスコキタ・ソルギナ（Ａｓｃｏｃｈｙｔａ ｓｏｒｇｈｉｎａ）、シュードモナス・シリンガエｐ．ｖ．シリンガエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐ．ｖ．ｓｙｒｉｎｇａｅ）、キサントモナス・カムペストリスｐ．ｖ．ホルシコラ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐ．ｖ．ｈｏｌｃｉｃｏｌａ）、シュードモナス・アンドロポゴニス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｎｄｒｏｐｏｇｏｎｉｓ）、プッチニア・プルプレア（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｐｕｒｐｕｒｅａ）、マクロホミナ・ファセオリナ、ペルコニア・シルシナタ（Ｐｅｒｃｏｎｉａ ｃｉｒｃｉｎａｔａ）、フザリウム・モニリフォルメ、アルタナリア・アルテルナタ、ビポラリス・ソルギコラ（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ ｓｏｒｇｈｉｃｏｌａ）、ヘルミントスポリウム・ソルギコラ（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｏｒｇｈｉｃｏｌａ）、クルブラリア・ルナタ、ホマ・インシディオサ（Ｐｈｏｍａ ｉｎｓｉｄｉｏｓａ）、シュードモナス・アベナエ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｖｅｎａｅ）（シュードモナス・アルボプレシピタンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｌｂｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｎｓ））、ラムリスポラ・ソルギ（Ｒａｍｕｌｉｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉ）、ラムリスポラ・ソルギコラ（Ｒａｍｕｌｉｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉｃｏｌａ）、フィラカラ・サッカリ（Ｐｈｙｌｌａｃｈａｒａ ｓａｃｃｈａｒｉ）、スポリソリウム・レイリアヌム（Ｓｐｏｒｉｓｏｒｉｕｍ ｒｅｉｌｉａｎｕｍ）（スファセロテカ・レイリアナ）、スファセロテカ・クルエンタ（Ｓｐｈａｃｅｌｏｔｈｅｃａ ｃｒｕｅｎｔａ）、スポリソリウム・ソルギ（Ｓｐｏｒｉｓｏｒｉｕｍ ｓｏｒｇｈｉ）、サトウキビモザイクＨ、トウモロコシ萎縮モザイクウイルスＡ＆Ｂ、クラビセプス・ソルギ、リゾクトニア・ソラニ、アクレモニウム・ストリクツム（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｔｒｉｃｔｕｍ）、スクレロフトナ・マクロスポラ（Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｎａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、ペロノスクレオスポラ・ソルギ、ペロノスクレオスポラ・フィリピネンシス、スクレロスポラ・グラミニコラ（Ｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、フザリウム・グラミネアリム、フザリウム・ベルチシリオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｏｉｄｅｓ）、フザリウム・オキシスポルム、フィチウム・アレノマネス、フィチウム・グラミニコラ等；トマト：コリネバクテリウム・ミシガネンセｐ．ｖ．ミシガネンセ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ ｐｖ．ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｅ）、シュードモナス・シリンガエｐ．ｖ．トマト（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ．ｔｏｍａｔｏ）、ラルストニア・ソラナセアルム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、キサントモナス・ベシカトリア（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ）、キサントモナス・ペルフォランス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｐｅｒｆｏｒａｎｓ）、アルタナリア・ソラニ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ）、アルタナリア・ポッリ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐｏｒｒｉ）、コレクトリクムｓｐｐ．（Ｃｏｌｌｅｃｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｐ．）、フルビア・フルバ Ｓｙｎ．クラドスポリウム・フルブム（Ｆｕｌｖｉａ ｆｕｌｖａ Ｓｙｎ． Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｆｕｌｖｕｍ）、フザリウム・オキシスポルムｆ．リコペルシシ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ）、レベイルラ・タウリカ／オイディオプシス・タウリカ（Ｌｅｖｅｉｌｌｕｌａ ｔａｕｒｉｃａ／Ｏｉｄｉｏｐｓｉｓ ｔａｕｒｉｃａ）、フィトフトラ・インフェスタンス、他のフィトフトラｓｐｐ．（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｐｐ．）、シュードセルコスポラ・フリゲナＳｙｎ．セルコスポラ・フリゲナ（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｆｕｌｉｇｅｎａ Ｓｙｎ．Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｆｕｌｉｇｅｎａ）、スクレロチウム・ロルフシイ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｒｏｌｆｓｉｉ）、セプトリア・リコペルシシ（Ｓｅｐｔｏｒｉａ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｉ）、ネコブ線虫ｓｐｐ．；ジャガイモ：ラルストニア・ソラナセアルム（Ｒａｌｓｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、シュードモナス・ソラナセアルム（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）、エルウィニア・カロトボラｓｕｂｓｐ．アトロセプチカ・エルウィニア・カロトボラｓｕｂｓｐ．カロトボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ．Ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ．Ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）、ペクトバクテリウム・カロトボルムｓｕｂｓｐ．アトロセプチクム（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ ｓｕｂｓｐ．Ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、シュードモナス・フルオレスセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）、クラビバクター・ミキガネンシスｓｕｂｓｐ．セペドニクス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． Ｓｅｐｅｄｏｎｉｃｕｓ）、コリネバクテリウム・セペドニクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｅｐｅｄｏｎｉｃｕｍ）、ストレプトミセス・スカビエイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｃａｂｉｅｉ）、コレトトリクム・コッコデス（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｏｃｃｏｄｅｓ）、アルタナリア・アルテルナテ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｒｎａｔｅ）、ミコベロシエラ・コンコルス（Ｍｙｃｏｖｅｌｌｏｓｉｅｌｌａ ｃｏｎｃｏｒｓ）、セルコスポラ・ソラニ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｓｏｌａｎｉ）、マクロホミナ・ファセオリナ、スクレロチウム・バタチコラ（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｂａｔａｔｉｃｏｌａ）、コアネホラ・ククルビタルム（Ｃｈｏａｎｅｐｈｏｒａ ｃｕｃｕｒｂｉｔａｒｕｍ）、プッチニア・ピッチエリアナ（Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｐｉｔｔｉｅｒｉａｎａ）、アエシディウム・カンテンシス（Ａｅｃｉｄｉｕｍ ｃａｎｔｅｎｓｉｓ）、アルタナリア・ソラニ、フザリウムｓｐｐ．（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ．）、ホマ・ソラニコラｆ．フォベアタ（Ｐｈｏｍａ ｓｏｌａｎｉｃｏｌａ ｆ．ｆｏｖｅａｔａ）、ボトリチス・シネレア、ボトリオチニア・フケリアナ（Ｂｏｔｒｙｏｔｉｎｉａ ｆｕｃｋｅｌｉａｎａ）、フィトフトラ・インフェスタンス、フィチウムｓｐｐ．（Ｐｙｔｈｉｕｍ ｓｐｐ．）、ホマ・アンディゲナｖａｒ．アンディナ（Ｐｈｏｍａ ａｎｄｉｇｅｎａ ｖａｒ． ａｎｄｉｎａ）、プレオスポラ・ハーバルム（Ｐｌｅｏｓｐｏｒａ ｈｅｒｂａｒｕｍ）、ステムフィリウム・ハーバルム、エリシフェ・キコラケアルム、スポンゴスポラ・スブテラネアン（Ｓｐｏｎｇｏｓｐｏｒａ ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａｎ）、リゾクトニア・ソラニ、タナテホルス・ククメリス（Ｔｈａｎａｔｅｐｈｏｒｕｓ ｃｕｃｕｍｅｒｉｓ）、ロゼリニアｓｐ．（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｓｐ．）、デマトホラｓｐ．（Ｄｅｍａｔｏｐｈｏｒａ ｓｐ．）、セプトリア・リコペルシキ、ヘルミントスポリウム・ソラニ（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ）、ポリスキタルム・プスツランス（Ｐｏｌｙｓｃｙｔａｌｕｍ ｐｕｓｔｕｌａｎｓ）、スクレロチウム・ロルフシイ、アテリア・ロルフシイ（Ａｔｈｅｌｉａ ｒｏｌｆｓｉｉ）、アンギオソルス・ソラニ（Ａｎｇｉｏｓｏｒｕｓ ｓｏｌａｎｉ）、ウロクラディウム・アトルム（Ｕｌｏｃｌａｄｉｕｍ ａｔｒｕｍ）、バーティシリウム・アルボ・アトラム、Ｖ．ダフリア（Ｖ．ｄａｈｌｉａ）、シンキトリウム・エンドビオチクム（Ｓｙｎｃｈｙｔｒｉｕｍ ｅｎｄｏｂｉｏｔｉｃｕｍ）、スクレロチニア・スクレロチオルム、カンディダツス・リベリバクター・ソラナセアルム（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）；バナナ：フザリウム・オキシスポルムｆ．ｓｐ．クベンセ（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ）、コレトトリクム・ムサエ（Ｃｏｌｌｅｔｏ
ｔｒｉｃｈｕｍ ｍｕｓａｅ）、アルミラリア・メレア（Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ ｍｅｌｌｅａ）、アルミラリア・タベスセンス（Ａｒｍｉｌｌａｒｉａ ｔａｂｅｓｃｅｎｓ）、シュードモナス・ソラナセアルム、フィラコラ・ムシコラ（Ｐｈｙｌｌａｃｈｏｒａ ｍｕｓｉｃｏｌａ）、ミコスファエレラ・フィジエンシス（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｆｉｊｉｅｎｓｉｓ）、ロゼリニア・ブノデス（Ｒｏｓｅｌｌｉｎｉａ ｂｕｎｏｄｅｓ）、シュードモナスｓｐｐ．（Ｐｓｅｕｄｏｍａｓ ｓｐｐ．）、ペスタロチオプシス・レプロゲナ（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ ｌｅｐｒｏｇｅｎａ）、セルコスポラ・ハイ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｈａｙｉ）、シュードモナス・ソラナセアルム、セラトキスチス・パラドクサ（Ｃｅｒａｔｏｃｙｓｔｉｓ ｐａｒａｄｏｘａ）、バーティシリウム・テオブロマエ（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ）、トラキスファエラ・フルクチゲナ（Ｔｒａｃｈｙｓｐｈａｅｒａ ｆｒｕｃｔｉｇｅｎａ）、クラドスポリウム・ムサエ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｍｕｓａｅ）、ジュングーニア・ビンクタ（Ｊｕｎｇｈｕｈｎｉａ ｖｉｎｃｔａ）、コルダナ・ジョンストニイ（Ｃｏｒｄａｎａ ｊｏｈｎｓｔｏｎｉｉ）、コルダナ・ムサエ（Ｃｏｒｄａｎａ ｍｕｓａｅ）、フザリウム・パリドロセウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｐａｌｌｉｄｏｒｏｓｅｕｍ）、コレトトリクム・ムサエ、バーティシリウム・テオブロマエ、フザリウムｓｐｐ．、アクレモニウムｓｐｐ．（Ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ ｓｐｐ．）、シリンドロクラジウムｓｐｐ．（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｌａｄｉｕｍ ｓｐｐ．）、デイトニエラ・トルロサ（Ｄｅｉｇｈｔｏｎｉｅｌｌａ ｔｏｒｕｌｏｓａ）、ナットラシア・マンギフェラエ（Ｎａｔｔｒａｓｓｉａ ｍａｎｇｉｆｅｒａｅ）、ドレスクスレラ・ギガンテアン（Ｄｒｅｓｃｈｓｌｅｒａ ｇｉｇａｎｔｅａｎ）、グイグナルディア・ムサエ（Ｇｕｉｇｎａｒｄｉａ ｍｕｓａｅ）、ボトリオスファエリア・リビス（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｒｉｂｉｓ）、フザリウム・ソラニ、ネクトリア・ヘマトコッカ（Ｎｅｃｔｒｉａ ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃａ）、フザリウム・オキシスポラム、リゾクトニアｓｐｐ．（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ．）、コレトトリクム・ムサエ、ウレド・ムサエ（Ｕｒｅｄｏ ｍｕｓａｅ）、ウロミセス・ムサエ（Ｕｒｏｍｙｃｅｓ ｍｕｓａｅ）、アクロドンチウム・シンプレックス（Ａｃｒｏｄｏｎｔｉｕｍ ｓｉｍｐｌｅｘ）、クルブラリア・エラグロスチディス（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｅｒａｇｒｏｓｔｉｄｉｓ）、ドレクスレラ・ムサエ－サピエンツム（Ｄｒｅｃｈｓｌｅｒａ ｍｕｓａｅ－ｓａｐｉｅｎｔｕｍ）、レプトスファエリア・ムサルム（Ｌｅｐｔｏｓｐｈａｅｒｉａ ｍｕｓａｒｕｍ）、ペスタロチオプシス・ディスセミナテ（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅ）、セラトキスチス・パラドクサ、ハプロバシディオン・ムサエ（Ｈａｐｌｏｂａｓｉｄｉｏｎ ｍｕｓａｅ）、マラスミエルス・イノデルマ（Ｍａｒａｓｍｉｅｌｌｕｓ ｉｎｏｄｅｒｍａ）、シュードモナス・ソラナセアルム、ラドホルス・シミリス（Ｒａｄｏｐｈｏｌｕｓ ｓｉｍｉｌｉｓ）、ラシオディプロディア・テオブロマエ（Ｌａｓｉｏｄｉｐｌｏｄｉａ ｔｈｅｏｂｒｏｍａｅ）、フザリウム・パリドロセウム、バーティシリウム・テオブロマエ、ペスタロチオプシス・パルマルム（Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ ｐａｌｍａｒｕｍ）、ファエオセプトリア・ムサエ（Ｐｈａｅｏｓｅｐｔｏｒｉａ ｍｕｓａｅ）、ピリクラリア・グリセア（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｇｒｉｓｅａ）、フザリウム・モニリフォルメ、ジベレラ・フジクロイ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ）、エルウィニア・カロトボラ、エルウィニア・クリサンテミ（Ｅｒｗｉｎｉａ ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、シリンドロカルポン・ムサエ（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎ ｍｕｓａｅ）、メロイドギネ・アレナリア（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ａｒｅｎａｒｉａ）、メロイドギネ・インコグニタ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）、メロイドギネ・ジャワニカ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｊａｖａｎｉｃａ）、プラチレンクス・コフェアエ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｃｏｆｆｅａｅ）、プラチレンクス・ゴオデイ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｇｏｏｄｅｙｉ）、プラチレンクス・ブラキウルス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｂｒａｃｈｙｕｒｕｓ）、プラチレンクス・レニフォルミア、スクレロチニア・スクレロチオルム、ネクトリア・フォリコラ（Ｎｅｃｔｒｉａ ｆｏｌｉｉｃｏｌａ）、ミコスファエレラ・ムシコラ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｍｕｓｉｃｏｌａ）、シュードケルコスポラ・ムサエ（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｍｕｓａｅ）、リマシヌラ・テヌイス（Ｌｉｍａｃｉｎｕｌａ ｔｅｎｕｉｓ）、ミコスファエレラ・ムサエ（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ ｍｕｓａｅ）、ヘリコチレンクス・ムルチシンクツス（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｍｕｌｔｉｃｉｎｃｔｕｓ）、ヘリコチレンクス・ディヒステラ（Ｈｅｌｉｃｏｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｄｉｈｙｓｔｅｒａ）、ニグロスポラ・スファエリカ（Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａ ｓｐｈａｅｒｉｃａ）、トラキスファエラ・フルチゲナ（Ｔｒａｃｈｙｓｐｈａｅｒａ ｆｒｕｔｉｇｅｎａ）、ラミクロリディウム・ムサエ（Ｒａｍｉｃｈｌｏｒｉｄｉｕｍ ｍｕｓａｅ）、バーティシリウム・テオブロマエ、フィラフトラ・インフェスタンス、フィラフトラ・パラシチカ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）、フィラフトラ・ラモルム（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｒａｍｏｒｕｍ）、フィラフトラ・イポモエアエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｐｏｍｏｅａｅ）、フィラフトラ・ミラビリス（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ）、フィラフトラ・カプシシ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ）、フィラフトラ・ポッリ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｏｒｒｉ）、フィラフトラ・ソジャエ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｓｏｊａｅ）、フィラフトラ・パルミボラ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐａｌｍｉｖｏｒａ）、およびフィラフトラ・ファセオリ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｐｈａｓｅｏｌｉ）を含む。

【0299】

細菌病原体は、これらに限定されないが、アグロバクテリウム・ツメファシエンス、カンディダツス・リベリバクター・アシアチクス（Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ Ｌｉｂｅｒｉｂａｃｔｅｒ ａｓｉａｔｉｃｕｓ）、カンディダツス・リベリバクター・ソラナセアルム、クラビバクター・ミキガネンシス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｍｉｃｈｉｇａｎｅｎｓｉｓ）、クラビバクター・セペドニクス（Ｃｌａｖｉｂａｃｔｅｒ ｓｅｐｅｄｏｎｉｃｕｓ）、ディケヤ・ダダンチイ（Ｄｉｃｋｅｙａ ｄａｄａｎｔｉｉ）、ディケヤ・ソラニ（Ｄｉｃｋｅｙａ ｓｏｌａｎｉ）、エルウィニア・アミロボラ（Ｅｒｗｉｎｉａ ａｍｙｌｏｖｏｒａ）、ペクトバクテリウム・アトロセプチクム（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃｕｍ）、ペクトバクテリウム・カロトボルム（Ｐｅｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃａｒｏｔｏｖｏｒｕｍ）、シュードモナス・アンドロポゴニス、シュードモナス・アベナエ、シュードモナス・アルボプレシピタンス、シュードモナス・フルオレスセンス、シュードモナス・サバスタノイ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｖａｓｔａｎｏｉ）、シュードモナス・ソラナセアルム、シュードモナス・シリンガエ、ラルストニア・ソラナセアルム、キサントモナス・アクソノポディス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ａｘｏｎｏｐｏｄｉｓ）、キサントモナス・カムペストリス（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）、キサントモナス・シトリ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃｉｔｒｉ）、キサントモナス・ペルフォランス、キサントモナス・ベシカトリア、キサントモナス・オリザエ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ）、およびキシレラ・ファスチディオサ（Ｘｙｌｅｌｌａ ｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）を含む。

【0300】

卵菌病原体は、これらに限定されないが、フィトフトラ・インフェスタンス、フィラフトラ・イポモエアエ、フィラフトラ・ミラビリス、フィラフトラ・ファセオリ、フィトフトラ・メガスペルマｆｓｐ．グリシネア、フィトフトラ・メガスペルマ（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｍｅｇａｓｐｅｒｍａ）、フィトフトラ・クリプトゲア、ペロノスポラｓｐｐ．（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．）およびフィチウムｓｐｐ．を含む。

【0301】

線虫病原体は、これらに限定されないが、アングイナ・トリチシ（Ａｎｇｕｉｎａ ｔｒｉｔｉｃｉ）、アフェレンコイデス・ベッセイ（Ａｐｈｅｌｅｎｃｈｏｉｄｅｓ ｂｅｓｓｅｙｉ）、ブルサフェレンクス・キシロフィルス（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓ ｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）、ディチレンクス・ディプサシ（Ｄｉｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｄｉｐｓａｃｉ）、グロボデラｓｐｐ．（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）、グロボデラ・パリダ（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｐａｌｌｉｄａ）、グロボデラ・ロストキエンシス（Ｇｌｏｂｏｄｅｒａ ｒｏｓｔｏｃｈｉｅｎｓｉｓ）、ヘテロデラｓｐｐ．（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｓｐｐ．）、ヘテロデラ・アベナエ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ａｖｅｎａｅ）、ヘテロデラ・フィリプジェビ（Ｈｅｔｅｒｏｄｅｒａ ｆｉｌｉｐｊｅｖｉ）、ヘテロデラ・グリシネス、ネコブ線虫ｓｐｐ．、メロイドギネ・グラミニコラ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、メロイドギネ・ハプラ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｈａｐｌａ）、メロイドギネ・インコグニタ、メロイドギネ・エンテロロビイ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ ｅｎｔｅｒｏｌｏｂｉｉ）、メリニウスｓｐｐ．（Ｍｅｒｌｉｎｉｕｓ ｓｐｐ．）、ナコブス・アベルランス（Ｎａｃｏｂｂｕｓ ａｂｅｒｒａｎｓ）、パラチレンクスｓｐｐ．（Ｐａｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、プラチレンクス・コフェアエ、プラチレンクス・ネグレクツス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｎｅｇｌｅｃｔｕｓ）、プラチレンクス・ペネトランス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｐｅｎｅｔｒａｎｓ）、プラチレンクス・トルネイ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｔｈｏｒｎｅｉ）、プラチレンクス・ブルヌス（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｖｕｌｎｕｓ）、プラチレンクス・ゼアエ（Ｐｒａｔｙｌｅｎｃｈｕｓ ｚｅａｅ）、ラドホルス・シミリス、ロチレンクルス・レニフォルミス（Ｒｏｔｙｌｅｎｃｈｕｌｕｓ ｒｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、チレンコリンクスｓｐｐ．（Ｔｙｌｅｎｃｈｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｓｐｐ．）、およびキシフィネマ・インデクス（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａ ｉｎｄｅｘ）を含む。

【0302】

昆虫害虫として、これらに限定されないが、鞘翅目（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｄｉｐｔｅｒａ）、双翅目（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ）、鱗翅目（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）、ハジラミ目（Ｍａｌｌｏｐｈａｇａ）、同翅亜目（Ｈｏｍｏｐｔｅｒａ）、半翅目（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａ）、直翅目（Ｏｒｔｈｏｐｔｅｒａ）、革翅目（Ｄｅｒｍａｐｔｅｒａ）、等翅目（Ｉｓｏｐｔｅｒａ）、シラミ目（Ａｎｏｐｌｕｒａ）、ノミ目（Ｓｉｐｈｏｎａｐｔｅｒａ）、アザミウマ目（Ｔｈｙｓａｎｏｐｔｅｒａ）、毛翅目（Ｔｒｉｃｈｏｐｔｅｒａ）等、特に鞘翅目および鱗翅目から選択される昆虫を含む。

【0303】

鱗翅目の昆虫として、これらに限定されないが、ヤガ科（Ｎｏｃｔｕｉｄａｅ）のアーミーワーム（ａｒｍｙｗｏｒｍｓ）、カットワーム（ｃｕｔｗｏｒｍｓ）、ルーパー（ｌｏｏｐｅｒｓ）、およびヘリオチン（ｈｅｌｉｏｔｈｉｎｅｓ）：アグロチス・イプシロン（Ａｇｒｏｔｉｓ ｉｐｓｉｌｏｎ）ハフナゲル（Ｈｕｆｎａｇｅｌ）（ブラックカットワーム（ｂｌａｃｋ ｃｕｔｗｏｒｍ））；Ａ．オルトゴニア（Ａ．ｏｒｔｈｏｇｏｎｉａ）モリソン（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）（ウェスタンカットワーム（ｗｅｓｔｅｒｎ ｃｕｔｗｏｒｍ））；Ａ．セゲツム（Ａ．ｓｅｇｅｔｕｍ）デニス＆シッファーミュラー（Ｄｅｎｉｓ＆Ｓｃｈｉｆｆｅｒｍｕｌｌｅｒ）（カブラヤガ（ｔｕｒｎｉｐ ｍｏｔｈ））；Ａ．スブテラネア（Ａ．ｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（グラニュレートカットワーム（ｇｒａｎｕｌａｔｅ ｃｕｔｗｏｒｍ））；アラバマ・アラギラセア（Ａｌａｂａｍａ ａｒｇｉｌｌａｃｅａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（コットンリーフワーム（ｃｏｔｔｏｎ ｌｅａｆ ｗｏｒｍ））；アンチカルシア・ゲムマタリス（Ａｎｔｉｃａｒｓｉａ ｇｅｍｍａｔａｌｉｓ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（ベルベットビーンキャタピラー（ｖｅｌｖｅｔｂｅａｎ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ））；アテチス・ミンダラ（Ａｔｈｅｔｉｓ ｍｉｎｄａｒａ）バーンズアンドマクドノー（Ｂａｒｎｅｓ ａｎｄ ＭｃＤｕｎｎｏｕｇｈ）（ラフスキンドカットワーム（ｒｏｕｇｈ ｓｋｉｎｎｅｄ ｃｕｔｗｏｒｍ））；エアリアス・インスラナ（Ｅａｒｉａｓ ｉｎｓｕｌａｎａ）ボワデュヴァル（Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ）（スピニーボールワーム（ｓｐｉｎｙ ｂｏｌｌｗｏｒｍ））；Ｅ．ビッテラ（Ｅ．ｖｉｔｔｅｌｌａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（スポッテドボールワーム（ｓｐｏｔｔｅｄ ｂｏｌｌｗｏｒｍ））；エギラ（キシロミゲス）・クリアリス（Ｅｇｉｒａ（Ｘｙｌｏｍｙｇｅｓ）ｃｕｒｉａｌｉｓ）グローテ（Ｇｒｏｔｅ）（シトラスカットワーム（ｃｉｔｒｕｓ ｃｕｔｗｏｒｍ））；エウクソア・メッソリア（Ｅｕｘｏａ ｍｅｓｓｏｒｉａ）ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）（ダークサイデットカットワーム（ｄａｒｋｓｉｄｅｄ ｃｕｔｗｏｒｍ））；ヘリコベルパ・アルミゲラ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｉｇｅｒａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（アメリカンボールワーム（Ａｍｅｒｉｃａｎ ｂｏｌｌｗｏｒｍ））；Ｈ．ゼア（Ｈ．ｚｅａ）ボッデイエ（Ｂｏｄｄｉｅ）（コーンイヤーワーム（ｃｏｒｎ ｅａｒｗｏｒｍ）またはコットンボールワーム（ｃｏｔｔｏｎ ｂｏｌｌｗｏｒｍ））；ヘリオチス・ビレセンス（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（タバコバドワーム（ｔｏｂａｃｃｏ ｂｕｄｗｏｒｍ））；ヒペナ・スカブラ（Ｈｙｐｅｎａ ｓｃａｂｒａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（グリーンクローバーワーム（ｇｒｅｅｎ ｃｌｏｖｅｒｗｏｒｍ））；ヒポネウマ・タルツラ（Ｈｙｐｏｎｅｕｍａ ｔａｌｔｕｌａ）シャウス（Ｓｃｈａｕｓ）；マメストラ・コンフィグラタ（Ｍａｍｅｓｔｒａ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔａ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（バーサアーミーワーム（ｂｅｒｔｈａ ａｒｍｙｗｏｒｍ））；Ｍ．ブラッシカエ（Ｍ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（キャベッジモス（ｃａｂｂａｇｅ ｍｏｔｈ））；メランクラ・ピクタ（Ｍｅｌａｎｃｈｒａ ｐｉｃｔａ）ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）（ゼブラキャタピラー（ｚｅｂｒａ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ））；モシス・ラチペス（Ｍｏｃｉｓ ｌａｔｉｐｅｓ）グエネエ（Ｇｕｅｎｅｅ）（スモールモシスモス（ｓｍａｌｌ ｍｏｃｉｓ ｍｏｔｈ））；シュードアレチア・ウニプンクタ（Ｐｓｅｕｄａｌｅｔｉａ ｕｎｉｐｕｎｃｔａ）ハワース（Ｈａｗｏｒｔｈ）（アーミーワーム）；シュードプルシア・インクルデンス（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｕｓｉａ ｉｎｃｌｕｄｅｎｓ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（ダイズルーパー（ｓｏｙｂｅａｎ ｌｏｏｐｅｒ））；リキア・アルビコスタ（Ｒｉｃｈｉａ ａｌｂｉｃｏｓｔａ）スミス（Ｓｍｉｔｈ）（ウェスタンビーンカットワーム（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｅａｎ ｃｕｔｗｏｒｍ））；スポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＪＥ スミス（ＪＥ Ｓｍｉｔｈ）（フォールアーミーワーム（ｆａｌｌ ａｒｍｙｗｏｒｍ））；Ｓ．エクシグア（Ｓ．ｅｘｉｇｕａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（ビートアーミーワーム（ｂｅｅｔ ａｒｍｙｗｏｒｍ））；Ｓ．リツラ（Ｓ．ｌｉｔｕｒａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（タバコカットワーム（ｔｏｂａｃｃｏ ｃｕｔｗｏｒｍ）、クラスターキャタピラー（ｃｌｕｓｔｅｒ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ））；トリコプルシア ニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（キャベッジルーパー（ｃａｂｂａｇｅ ｌｏｏｐｅｒ））；メイガ科（Ｐｙｒａｌｉｄａｅ）およびツトガ科（Ｃｒａｍｂｉｄａｅ）由来のボーラー（ｂｏｒｅｒｓ）、ケースベアラー（ｃａｓｅｂｅａｒｅｒｓ）、ウェブワーム（ｗｅｂｗｏｒｍｓ）、コーンワーム（ｃｏｎｅｗｏｒｍｓ）、およびスケルトナイザー（ｓｋｅｌｅｔｏｎｉｚｅｒｓ）、例えばアクロイア・グリセラ（Ａｃｈｒｏｉａ ｇｒｉｓｅｌｌａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（レッサーワックスモス（ｌｅｓｓｅｒ ｗａｘ ｍｏｔｈ））；アミエロイス・トランシテラ（Ａｍｙｅｌｏｉｓ ｔｒａｎｓｉｔｅｌｌａ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（ネーバルオレンジワーム（ｎａｖａｌ ｏｒａｎｇｅｗｏｒｍ））；アンガスタ・クエニエラ（Ａｎａｇａｓｔａ ｋｕｅｈｎｉｅｌｌａ）ツェラー（Ｚｅｌｌｅｒ）（シジコナマダラメイガ（Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ ｆｌｏｕｒ ｍｏｔｈ））；カドラ・カウテラ（Ｃａｄｒａ ｃａｕｔｅｌｌａ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（アーモンドモス（ａｌｍｏｎｄ ｍｏｔｈ））；キロ・パルテルス（Ｃｈｉｌｏ ｐａｒｔｅｌｌｕｓ）スウィンホー（Ｓｗｉｎｈｏｅ）（スポッテドストークボーラー（ｓｐｏｔｔｅｄ ｓｔａｌｋ ｂｏｒｅｒ））；Ｃ．スプレサリス（Ｃ．ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（ストライプドシュテム／ライスボーラー（ｓｔｒｉｐｅｄ ｓｔｅｍ／ｒｉｃｅ ｂｏｒｅｒ））；Ｃ．テレネルス（Ｃ．ｔｅｒｒｅｎｅｌｌｕｓ）パーゲンシュテッヘル（Ｐａｇｅｎｓｔｅｃｈｅｒ）（シュガーケインシュテンプボーラー（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｔｅｍｐ ｂｏｒｅｒ））；コルシヤ・セファロニカ（Ｃｏｒｃｙｒａ ｃｅｐｈａｌｏｎｉｃａ）ステイントン（Ｓｔａｉｎｔｏｎ）（ライスモス（ｒｉｃｅ ｍｏｔｈ））；クラムブス・カリギノセルス（Ｃｒａｍｂｕｓ ｃａｌｉｇｉｎｏｓｅｌｌｕｓ）クレメンス（Ｃｌｅｍｅｎｓ）（コーンルートウェブワーム（ｃｏｒｎ ｒｏｏｔ ｗｅｂｗｏｒｍ））；Ｃ．テテレルス（Ｃ．ｔｅｔｅｒｒｅｌｌｕｓ）ジンケン（Ｚｉｎｃｋｅｎ）（ブルーグラスウェブワーム（ｂｌｕｅｇｒａｓｓ ｗｅｂｗｏｒｍ））；クナファロクロシス・メディナリス（Ｃｎａｐｈａｌｏｃｒｏｃｉｓ ｍｅｄｉｎａｌｉｓ）ゲニー（Ｇｕｅｎｅｅ）（ライスリーフローラー（ｒｉｃｅ ｌｅａｆ ｒｏｌｌｅｒ））；デスミア・フネラリス（Ｄｅｓｍｉａ ｆｕｎｅｒａｌｉｓ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（グレープリーフフォルダー（ｇｒａｐｅ ｌｅａｆｆｏｌｄｅｒ））；ディアファニア・ヒアリナタ（Ｄｉａｐｈａｎｉａ ｈｙａｌｉｎａｔａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（メロンワーム（ｍｅｌｏｎ ｗｏｒｍ））；Ｄ．ニチダリス（Ｄ．ｎｉｔｉｄａｌｉｓ）ストール（Ｓｔｏｌｌ）（ピックルワーム（ｐｉｃｋｌｅｗｏｒｍ））；ディアトラエア・フラビペネラ（Ｄｉａｔｒａｅａ ｆｌａｖｉｐｅｎｎｅｌｌａ）ボックス（Ｂｏｘ）；Ｄ．グランディオセラ（Ｄ．ｇｒａｎｄｉｏｓｅｌｌａ）ダイアー（Ｄｙａｒ）（サウスウェスタンボーラー（ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ））；Ｄ．サッカリス（Ｄ．ｓａｃｃｈａｒａｌｉｓ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（シュガーケインボーラー（ｓｕｒｇａｒｃａｎｅ ｂｏｒｅｒ））；エラスモパルプス・リグノセルス（Ｅｌａｓｍｏｐａｌｐｕｓ ｌｉｇｎｏｓｅｌｌｕｓ）ツェラー（Ｚｅｌｌｅｒ）（レッサーコーンストークボーラー（ｌｅｓｓｅｒ ｃｏｒｎｓｔａｌｋ ｂｏｒｅｒ））；パパイペマ・ネブリス（Ｐａｐａｉｐｅｍａ ｎｅｂｒｉｓ）（ストークボーラー（ｓｔａｌｋ ｂｏｒｅｒ））；エオレウマ・ロフチニ（Ｅｏｒｅｕｍａ ｌｏｆｔｉｎｉ）ダイアー（Ｄｙａｒ）（メキシカンライスボーラー（Ｍｅｘｉｃａｎ ｒｉｃｅ ｂｏｒｅｒ））；エフェスチア・エルテラ（Ｅｐｈｅｓｔｉａ ｅｌｕｔｅｌｌａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（タバコ（カカオ）モス（ｔｏｂａｃｃｏ（ｃａｃａｏ）ｍｏｔｈ））ガレリア・メロネラ（Ｇａｌｌｅｒｉａ ｍｅｌｌｏｎｅｌｌａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（グレイターワックスモス（ｇｒｅａｔｅｒ ｗａｘ ｍｏｔｈ））；ヘディルレプタ・アクセプタ（Ｈｅｄｙｌｅｐｔａ ａｃｃｅｐｔａ）ブトラー（Ｂｕｔｌｅｒ）（シュガーケインリーフローラー（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｌｅａｆｒｏｌｌｅｒ））；ヘルペトグランマ・リカルシサリス（Ｈｅｒｐｅｔｏｇｒａｍｍａ ｌｉｃａｒｓｉｓａｌｉｓ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（ソドウェブワーム（ｓｏｄ ｗｅｂｗｏｒｍ））；ホモエオソマ・エレクテルム（Ｈｏｍｏｅｏｓｏｍａ ｅｌｅｃｔｅｌｌｕｍ）フルスト（Ｈｕｌｓｔ）（サンフラワーモス（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｍｏｔｈ））；ロクソステゲ・スチクチカリス（Ｌｏｘｏｓｔｅｇｅ ｓｔｉｃｔｉｃａｌｉｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ビートウェブアーム（ｂｅｅｔ ｗｅｂｗｏｒｍ））；マルカ・テスツラリス（Ｍａｒｕｃａ ｔｅｓｔｕｌａｌｉｓ）ガイヤー（Ｇｅｙｅｒ）（ビーンポッドボーラー（ｂｅａｎ ｐｏｄ ｂｏｒｅｒ））；オルタガ・チリサリス（Ｏｒｔｈａｇａ ｔｈｙｒｉｓａｌｉｓ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（ティーツリーウェブモス（ｔｅａ ｔｒｅｅ ｗｅｂ ｍｏｔｈ））；オストリニア・ヌビラリス（Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｎｕｂｉｌａｌｉｓ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（ヨーロピアンコーンボーラー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ）；）オストリニア・フルナカリス（Ｏｓｔｒｉｎｉａ ｆｕｒｎａｃａｌｉｓ）（アジアンコーンボーラー（Ａｓｉａｎ ｃｏｒｎ ｂｏｒｅｒ））；プロディア・インテルプンクテラ（Ｐｌｏｄｉａ ｉｎｔｅｒｐｕｎｃｔｅｌｌａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（インディアンミールモス（Ｉｎｄｉａｎ ｍｅａｌ ｍｏｔｈ））；シルポファガ・インセルツラス（Ｓｃｉｒｐｏｐｈａｇａ ｉｎｃｅｒｔｕｌａｓ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（イエローシュテムボーラー（ｙｅｌｌｏｗ ｓｔｅｍ ｂｏｒｅｒ））；ウデア・ルビガリス（Ｕｄｅａ ｒｕｂｉｇａｌｉｓ）ゲニー（Ｇｕｅｎｅｅ）（セルリーリーフチエル（ｃｅｌｅｒｙ ｌｅａｆｔｉｅｒ））；ならびにハマキガ科（Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ）のリーフローラー（ｌｅａｆｒｏｌｌｅｒｓ）、バドワーム（ｂｕｄｗｏｒｍｓ）、シードワーム（ｓｅｅｄ ｗｏｒｍｓ，）およびフルーツワーム（ｆｒｕｉｔ ｗｏｒｍｓ）：アクレリス・グロベラナ（Ａｃｌｅｒｉｓ ｇｌｏｖｅｒａｎａ）ウォルシンガム（Ｗａｌｓｉｎｇｈａｍ）（ウェスタンブラックヘッデドバドワーム（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌａｃｋｈｅａｄｅｄ ｂｕｄｗｏｒｍ））；Ａ．バリアナ（Ａ．ｖａｒｉａｎａ）ファーナルド（Ｆｅｒｎａｌｄ）（エースタンブラックヘッデドバドワーム（Ｅａｓｔｅｒｎ ｂｌａｃｋｈｅａｄｅｄ ｂｕｄｗｏｒｍ））；ヘルラ・フィディレアリス（Ｈｅｌｌｕｌａ ｐｈｉｄｉｌｅａｌｉｓ）（キャベッジバドワームモス（ｃａｂｂａｇｅ ｂｕｄｗｏｒｍ ｍｏｔｈ））；アドクソフィエス・オラナ（Ａｄｏｘｏｐｈｙｅｓ ｏｒａｎａ）フィッシャーフォンロッスラーシュタム（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｖｏｎ Ｒｏｓｓｌｅｒ
ｓｔａｍｍ）（サマーフ）ルーツトートリクスモス（ｓｕｍｍｅｒ ｆｒｕｉｔ ｔｏｒｔｒｉｘ ｍｏｔｈ）；Ａ．アルギロスピラ（Ａ．ａｒｇｙｒｏｓｐｉｌａ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（フルーツツリーリーフローラー（ｆｒｕｉｔ ｔｒｅｅ ｌｅａｆ ｒｏｌｌｅｒ））およびＡ．ロサナ（Ａ．ｒｏｓａｎａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ヨーロピアンリーフローラー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｌｅａｆ ｒｏｌｌｅｒ））を含むアルキプスｓｐｐ．（Ａｒｃｈｉｐｓ ｓｐｐ．）；アルギロタエニアｓｐｐ．（Ａｒｇｙｒｏｔａｅｎｉａ ｓｐｐ．）；ボナゴタ・サルブリコラ（Ｂｏｎａｇｏｔａ ｓａｌｕｂｒｉｃｏｌａ）メイリック（Ｍｅｙｒｉｃｋ）（ブラジリアンアップルリーフローラー（Ｂｒａｚｉｌｉａｎ ａｐｐｌｅ ｌｅａｆｒｏｌｌｅｒ））；コリストネウラｓｐｐ．（Ｃｈｏｒｉｓｔｏｎｅｕｒａ ｓｐｐ．）；コキリス・ホスペス（Ｃｏｃｈｙｌｉｓ ｈｏｓｐｅｓ）ウォルシンガム（Ｗａｌｓｉｎｇｈａｍ）（バンデッドサンフラワーモス（ｂａｎｄｅｄ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｍｏｔｈ））；シディア・ラチフェレアナ（Ｃｙｄｉａ ｌａｔｉｆｅｒｒｅａｎａ）ウォルシンガム（Ｗａｌｓｉｎｇｈａｍ）（フィルバートワーム（ｆｉｌｂｅｒｔｗｏｒｍ））；Ｃ．ポモネラ（Ｃ．ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（コドリングモス（ｃｏｄｌｉｎｇ ｍｏｔｈ））；エンドピザ・ビテアナ（Ｅｎｄｏｐｉｚａ ｖｉｔｅａｎａ）クレメンス（Ｃｌｅｍｅｎｓ）（グレープベリーモス（ｇｒａｐｅ ｂｅｒｒｙ ｍｏｔｈ））；ユポエシリア・アンビグエラ（Ｅｕｐｏｅｃｉｌｉａ ａｍｂｉｇｕｅｌｌａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（ヴァインモス（ｖｉｎｅ ｍｏｔｈ））；グラホリタ・モレスタ（Ｇｒａｐｈｏｌｉｔａ ｍｏｌｅｓｔａ）バスク（Ｂｕｓｃｋ）（オリエンタルフルーツモス（ｏｒｉｅｎｔａｌ ｆｒｕｉｔ ｍｏｔｈ））；ロベシア・ボトラナ（Ｌｏｂｅｓｉａ ｂｏｔｒａｎａ）デニス＆シッファーミュラー（Ｄｅｎｉｓ＆Ｓｃｈｉｆｆｅｒｍｕｌｌｅｒ）（ヨーロピアングレープヴァインモス（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｇｒａｐｅ ｖｉｎｅ ｍｏｔｈ））；プラチノタ・フラベダナ（Ｐｌａｔｙｎｏｔａ ｆｌａｖｅｄａｎａ）クレメンス（Ｃｌｅｍｅｎｓ）（バリエゲイテッドリーフローラー（ｖａｒｉｅｇａｔｅｄ ｌｅａｆｒｏｌｌｅｒ））；Ｐ．スツルタナ（Ｐ．ｓｔｕｌｔａｎａ）ウォルシンガム（Ｗａｌｓｉｎｇｈａｍ）（オムニボロウスリーフローラー（ｏｍｎｉｖｏｒｏｕｓ ｌｅａｆｒｏｌｌｅｒ））；スピロノタ・オセラナ（Ｓｐｉｌｏｎｏｔａ ｏｃｅｌｌａｎａ）デニス＆シッファーミュラー（Ｄｅｎｉｓ＆Ｓｃｈｉｆｆｅｒｍｕｌｌｅｒ）（アイスポッテドバドモス（ｅｙｅｓｐｏｔｔｅｄ ｂｕｄ ｍｏｔｈ））；およびスレイマ・ヘリアンタナ（Ｓｕｌｅｉｍａ ｈｅｌｉａｎｔｈａｎａ）ライリー（Ｒｉｌｅｙ）（サンフラワーバドモス（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｂｕｄ ｍｏｔｈ））を含む。

【0304】

鱗翅目における選択される他の農学的害虫は、これらに限定されないが、アルソフィラ・ポメタリア（Ａｌｓｏｐｈｉｌａ ｐｏｍｅｔａｒｉａ）ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）（フォールカンカーワーム（ｆａｌｌ ｃａｎｋｅｒｗｏｒｍ））；アナルシア・リネアテラ（Ａｎａｒｓｉａ ｌｉｎｅａｔｅｌｌａ）ツェラー（Ｚｅｌｌｅｒ）（ピーチトゥイグボーラー（ｐｅａｃｈ ｔｗｉｇ ｂｏｒｅｒ））；アニソタ・セナトリア（Ａｎｉｓｏｔａ ｓｅｎａｔｏｒｉａ）Ｊ．Ｅ．スミス（Ｊ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ）（オレンジストライプドオークワーム（ｏｒａｎｇｅ ｓｔｒｉｐｅｄ ｏａｋｗｏｒｍ））；アンテラエア・ペルニイ（Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｐｅｒｎｙｉ）ゲリン－マネビーレ（Ｇｕｅｒｉｎ－Ｍｅｎｅｖｉｌｌｅ）（チャイニーズオークシルクモス（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｏａｋ Ｓｉｌｋｍｏｔｈ））；ボムビクス・モリ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（シルクワーム（Ｓｉｌｋｗｏｒｍ））；ブクラトリクス・ツベリエラ（Ｂｕｃｃｕｌａｔｒｉｘ ｔｈｕｒｂｅｒｉｅｌｌａ）バスク（Ｂｕｓｃｋ）（コットンリーフパーフォレイター（ｃｏｔｔｏｎ ｌｅａｆ ｐｅｒｆｏｒａｔｏｒ））；コリアス・エウリーテメ（Ｃｏｌｉａｓ ｅｕｒｙｔｈｅｍｅ）ボワデュヴァル（Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ）（アルファルファキャタピラー（ａｌｆａｌｆａ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ））；ダタナ・インテゲリマ（Ｄａｔａｎａ ｉｎｔｅｇｅｒｒｉｍａ）グローテ＆ロビンソン（Ｇｒｏｔｅ ＆ Ｒｏｂｉｎｓｏｎ）ウォルナットキャタピラー（ｗａｌｎｕｔ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）；デンドリムス・シビリクス（Ｄｅｎｄｒｏｌｉｍｕｓ ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ）チェットワルリコフ（Ｔｓｃｈｅｔｗｅｒｉｋｏｖ）（シベリアンシルクモス（Ｓｉｂｅｒｉａｎ ｓｉｌｋ ｍｏｔｈ））、エンモノス・スブシゲナリア（Ｅｎｎｏｍｏｓ ｓｕｂｓｉｇｎａｒｉａ）ヒュブナー（Ｈｕｂｎｅｒ）（エルムスパンワーム（ｅｌｍ ｓｐａｎｗｏｒｍ））；エランニス・チリアリア（Ｅｒａｎｎｉｓ ｔｉｌｉａｒｉａ）ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）（リンデンルーパー（ｌｉｎｄｅｎ ｌｏｏｐｅｒ））；エレクトヒアス・フラビステリアタ（Ｅｒｅｃｈｔｈｉａｓ ｆｌａｖｉｓｔｒｉａｔａ）ウォルシンガム（Ｗａｌｓｉｎｇｈａｍ）（シュガーケインバドワーム（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｂｕｄ ｍｏｔｈ））；エウプロクチス・キリソルホエア（Ｅｕｐｒｏｃｔｉｓ ｃｈｒｙｓｏｒｒｈｏｅａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ブラウンテイルモス（ｂｒｏｗｎｔａｉｌ ｍｏｔｈ））；ハリシナ・アメリカナ（Ｈａｒｒｉｓｉｎａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）ゲリン－マネビーレ（Ｇｕｅｒｉｎ－Ｍｅｎｅｖｉｌｌｅ）（グレープリーフスケルトナイザー（ｇｒａｐｅｌｅａｆ ｓｋｅｌｅｔｏｎｉｚｅｒ））；ヘリオチス・スブフレクサ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ ｓｕｂｆｌｅｘａ）ゲニー（Ｇｕｅｎｅｅ）；ヘミレウカ・オリビアエ（Ｈｅｍｉｌｅｕｃａ ｏｌｉｖｉａｅ）コックレル（Ｃｏｃｋｒｅｌｌ）（レンジキャタピラー（ｒａｎｇｅ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ））；ハイファントリア・クネア（Ｈｙｐｈａｎｔｒｉａ ｃｕｎｅａ）ドルリー（Ｄｒｕｒｙ）（フォールウェブワーム（ｆａｌｌ ｗｅｂｗｏｒｍ））；ケイフェリア・リコペルシセラ（Ｋｅｉｆｅｒｉａ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｅｌｌａ）ウォルシンガム（Ｗａｌｓｉｎｇｈａｍ）（トマトピンワーム（ｔｏｍａｔｏ ｐｉｎｗｏｒｍ））；ラムブディナ・フィスセラリア・フィスセラリア（Ｌａｍｂｄｉｎａ ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ）フルスト（Ｈｕｌｓｔ）（イースタンヘムロックルーパー（Ｅａｓｔｅｒｎ ｈｅｍｌｏｃｋ ｌｏｏｐｅｒ））；Ｌ．フィスセラリア・ルグブロサ（Ｌ．ｆｉｓｃｅｌｌａｒｉａ ｌｕｇｕｂｒｏｓａ）フルスト（Ｈｕｌｓｔ）（ウェスタンヘムロックルーパー（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｈｅｍｌｏｃｋ ｌｏｏｐｅｒ））；レウコマ・サリシス（Ｌｅｕｃｏｍａ ｓａｌｉｃｉｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（サテンモス（ｓａｔｉｎ ｍｏｔｈ））；リマントリア・ディスパル（Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ジプシーモス（ｇｙｐｓｙ ｍｏｔｈ））；メラコソマｓｐｐ．（Ｍａｌａｃｏｓｏｍａ ｓｐｐ．）；マンデュカ・クインケルマクラタ（Ｍａｎｄｕｃａ ｑｕｉｎｑｕｅｍａｃｕｌａｔａ）ハワース（Ｈａｗｏｒｔｈ）（ファイブスポッテドホークモス（ｆｉｖｅ ｓｐｏｔｔｅｄ ｈａｗｋ ｍｏｔｈ）、トマトホーンワーム（ｔｏｍａｔｏ ｈｏｒｎｗｏｒｍ））；Ｍ．セクスタ（Ｍ．ｓｅｘｔａ）ハワース（Ｈａｗｏｒｔｈ）（トマトホーンワーム、タバコホーンワーム（ｔｏｂａｃｃｏ ｈｏｒｎｗｏｒｍ））；オペロフテラ・ブルマタ（Ｏｐｅｒｏｐｈｔｅｒａ ｂｒｕｍａｔａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ウィンターモス（ｗｉｎｔｅｒ ｍｏｔｈ））；オルギアｓｐｐ．（Ｏｒｇｙｉａ ｓｐｐ．）；パレアクリタ・ベルナタ（Ｐａｌｅａｃｒｉｔａ ｖｅｒｎａｔａ）ペック（Ｐｅｃｋ）（スプリングキャンカーワーム（ｓｐｒｉｎｇ ｃａｎｋｅｒｗｏｒｍ））；パピリオ・クレスホンテス（Ｐａｐｉｌｉｏ ｃｒｅｓｐｈｏｎｔｅｓ）クラマー（Ｃｒａｍｅｒ）（ジャイアントスワロウテイル（ｇｉａｎｔ ｓｗａｌｌｏｗｔａｉｌ）、オレンジドッグ（ｏｒａｎｇｅ ｄｏｇ））；フルガニディア・カルフォルニカ（Ｐｈｒｙｇａｎｉｄｉａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）パッカード（Ｐａｃｋａｒｄ）（カリフォルニアオークワーム（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ｏａｋｗｏｒｍ））；フィロクニスチス・シトレラ（Ｐｈｙｌｌｏｃｎｉｓｔｉｓ ｃｉｔｒｅｌｌａ）ステイントン（Ｓｔａｉｎｔｏｎ）（シトラスリーフマイナー（ｃｉｔｒｕｓ ｌｅａｆｍｉｎｅｒ））；フィロノリクテル・ブランカルデラ（Ｐｈｙｌｌｏｎｏｒｙｃｔｅｒ ｂｌａｎｃａｒｄｅｌｌａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（スポッテドテンチフォームリーフマイナー（ｓｐｏｔｔｅｄ ｔｅｎｔｉｆｏｒｍ ｌｅａｆｍｉｎｅｒ））；ピエリス・ブラッシカエ（Ｐｉｅｒｉｓ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ラージホワイトバタフライ（ｌａｒｇｅ ｗｈｉｔｅ ｂｕｔｔｅｒｆｌｙ））；Ｐ．ラパエ（Ｐ．ｒａｐａｅ）Ｌリンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（スモールホワイトバタフライ（ｓｍａｌｌ ｗｈｉｔｅ ｂｕｔｔｅｒｆｌｙ））；Ｐ．ナピ（Ｐ．ｎａｐｉ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（グリーンベインドホワイトバタフライ（ｇｒｅｅｎ ｖｅｉｎｅｄ ｗｈｉｔｅ ｂｕｔｔｅｒｆｌｙ））；プラチプチリア・カルデュイダクチラ（Ｐｌａｔｙｐｔｉｌｉａ ｃａｒｄｕｉｄａｃｔｙｌａ）ライリー（Ｒｉｌｅｙ）（アーチチョークプルームモス（ａｒｔｉｃｈｏｋｅ ｐｌｕｍｅ ｍｏｔｈ））；プルテラ・キシロステラ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ダイアモンドバックモス（ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ ｍｏｔｈ））；ペクチノホラ・ゴッシイピエラ（Ｐｅｃｔｉｎｏｐｈｏｒａ ｇｏｓｓｙｐｉｅｌｌａ）サウンダース（Ｓａｕｎｄｅｒｓ）（ピンクボールワーム（ｐｉｎｋ ｂｏｌｌｗｏｒｍ））；ポンチア・プロトディス（Ｐｏｎｔｉａ ｐｒｏｔｏｄｉｃｅ）ボワデュヴァル＆ルコント（Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ ＆ Ｌｅｃｏｎｔｅ）（サザンキャベッジワーム（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｃａｂｂａｇｅｗｏｒｍ））；サブロデス・アエグロタタ（Ｓａｂｕｌｏｄｅｓ ａｅｇｒｏｔａｔａ）ゲニー（Ｇｕｅｎｅｅ）（オムニボラスルーパー（ｏｍｎｉｖｏｒｏｕｓ ｌｏｏｐｅｒ））；スキズラ・コンシンナ（Ｓｃｈｉｚｕｒａ ｃｏｎｃｉｎｎａ）Ｊ．Ｅ．スミス（Ｊ．Ｅ．Ｓｍｉｔｈ）（レッドハムプトキャタピラー（ｒｅｄ ｈｕｍｐｅｄ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ））；シトトロガ・セレアレラ（Ｓｉｔｏｔｒｏｇａ ｃｅｒｅａｌｅｌｌａ）オリヴィエ（Ｏｌｉｖｉｅｒ）（アングモアグレインモス（Ａｎｇｏｕｍｏｉｓ ｇｒａｉｎ ｍｏｔｈ））；テルキン・リクス（Ｔｅｌｃｈｉｎ ｌｉｃｕｓ）ドルリー（Ｄｒｕｒｙ）（ジャイアントシュガーケインボーラー（ｇｉａｎｔ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｂｏｒｅｒ））；タウメトポエア・ピチオカムパ（Ｔｈａｕｍｅｔｏｐｏｅａ ｐｉｔｙｏｃａｍｐａ）シッファーミュラー（Ｓｃｈｉｆｆｅｒｍｕｌｌｅｒ）パインプロセッショナリーキャタピラー（ｐｉｎｅ ｐｒｏｃｅｓｓｉｏｎａｒｙ ｃａｔｅｒｐｉｌｌａｒ）；チネオラ・ビッセリエラ（Ｔｉｎｅｏｌａ ｂｉｓｓｅｌｌｉｅｌｌａ）フンメル（Ｈｕｍｍｅｌ）（ウェビングクロスモス（ｗｅｂｂｉｎｇ ｃｌｏｔｈｅｓｍｏｔｈ））；ツタ・アブソルタ（Ｔｕｔａ ａｂｓｏｌｕｔａ）メイリック（Ｍｅｙｒｉｃｋ）（トマトリーフマイナー（ｔｏｍａｔｏ ｌｅａｆｍｉｎｅｒ））およびイポノメウタ・パデラ（Ｙｐｏｎｏｍｅｕｔａ ｐａｄｅｌｌａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（アーミンモス（ｅｒｍｉｎｅ ｍｏｔｈ））を含む。

【0305】

ブルクス・ピソルム（Ｂｒｕｃｈｕｓ ｐｉｓｏｒｕｍ）（ピーウィーヴィル（ｐｅａ ｗｅｅｖｉｌ））、カロソブルクウス・マクラツス（Ｃａｌｌｏｓｏｂｒｕｃｈｕｓ ｍａｃｕｌａｔｕｓ）（カウピーウィーヴィル（ｃｏｗｐｅａ ｗｅｅｖｉｌ））、アントノムス・グランディス（Ａｎｔｈｏｎｏｍｕｓ ｇｒａｎｄｉｓ）ボヘマン（Ｂｏｈｅｍａｎ）（ボールウィーヴィル（ｂｏｌｌ ｗｅｅｖｉｌ））；シリンドロコプツルス・アドスペルスス（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｏｐｔｕｒｕｓ ａｄｓｐｅｒｓｕｓ）ルコント（ＬｅＣｏｎｔｅ）（サンフラワーシュテムウィーヴィル（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｓｔｅｍ ｗｅｅｖｉｌ））；ディアプレペス・アブレヴィアツス（Ｄｉａｐｒｅｐｅｓ ａｂｂｒｅｖｉａｔｕｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ディアプレペスルートウィーヴィル（Ｄｉａｐｒｅｐｅｓ ｒｏｏｔ ｗｅｅｖｉｌ））；ヒペラ・プンクタタ（Ｈｙｐｅｒａ ｐｕｎｃｔａｔａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（クロバーリーフウィーヴィル（ｃｌｏｖｅｒ ｌｅａｆ ｗｅｅｖｉｌ））；リソルホプトルス・オリゾフィルス（Ｌｉｓｓｏｒｈｏｐｔｒｕｓ ｏｒｙｚｏｐｈｉｌｕｓ）クシェル（Ｋｕｓｃｈｅｌ）（ライスウォーターウィーヴィル（ｒｉｃｅ ｗａｔｅｒ ｗｅｅｖｉｌ））；メタマシウス・ヘミプテルス・ヘミプテルス（Ｍｅｔａｍａｓｉｕｓ ｈｅｍｉｐｔｅｒｕｓ ｈｅｍｉｐｔｅｒｕｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ウエストインディアンケインウィーヴィル（Ｗｅｓｔ Ｉｎｄｉａｎ ｃａｎｅ ｗｅｅｖｉｌ））；Ｍ．ヘミプテルス・セリセウス（Ｍ．ｈｅｍｉｐｔｅｒｕｓ ｓｅｒｉｃｅｕｓ）オリヴィエ（Ｏｌｉｖｉｅｒ）（シルキーケインウィーヴィル（ｓｉｌｋｙ ｃａｎｅ ｗｅｅｖｉｌ））；シトフィルス・ゼアマイス（Ｓｉｔｏｐｈｉｌｕｓ ｚｅａｍａｉｓ）（トウモロコシウィーヴィル（ｍａｉｚｅ ｗｅｅｖｉｌ））；、シトフィルス・グラナリウス（Ｓｉｔｏｐｈｉｌｕｓ ｇｒａｎａｒｉｕｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（グラナリーウィーヴィル（ｇｒａｎａｒｙ ｗｅｅｖｉｌ））；Ｓ．オリザエ（Ｓ．ｏｒｙｚａｅ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ライスウィーヴィル（ｒｉｃｅ ｗｅｅｖｉｌ））；スミクロニクス・フルブス（Ｓｍｉｃｒｏｎｙｘ ｆｕｌｖｕｓ）ルコント（ＬｅＣｏｎｔｅ）（レッドサンフラワーシードウィーヴィル（ｒｅｄ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｓｅｅｄ ｗｅｅｖｉｌ））；Ｓ．ソロディデュス（Ｓ．ｓｏｒｄｉｄｕｓ）ルコント（ＬｅＣｏｎｔｅ）（グレーサンフラワーシードウィーヴィル（ｇｒａｙ ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｓｅｅｄ ｗｅｅｖｉｌ））；スフェノホルス・マイディス（Ｓｐｈｅｎｏｐｈｏｒｕｓ ｍａｉｄｉｓ）チテンデン（Ｃｈｉｔｔｅｎｄｅｎ）（トウモロコシビルバグ（ｍａｉｚｅ ｂｉｌｌｂｕｇ））；Ｓ．リヴィス（Ｓ．ｌｉｖｉｓ）ヴァウリー（Ｖａｕｒｉｅ）（シュガーケインウィーヴィル（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｗｅｅｖｉｌ））；ラブドスケルス・オブスクルス（Ｒｈａｂｄｏｓｃｅｌｕｓ ｏｂｓｃｕｒｕｓ）ボワデュヴァル（Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ）（ニューギニアシュガーケインウィーヴィル（Ｎｅｗ Ｇｕｉｎｅａ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｗｅｅｖｉｌ））を含むヒゲナガゾウムシ科（Ａｎｔｈｒｉｂｉｄａｅ）、ハムシ科（Ｃｈｒｙｓｏｍｅｌｉｄａｅ）、およびゾウムシ科（Ｃｕｒｃｕｌｉｏｎｉｄａｅ）由来のゾウムシ；これらに限定されないがセロトマ・トリフルカタ（Ｃｅｒｏｔｏｍａ ｔｒｉｆｕｒｃａｔａ）（ビーンリーフビートル（ｂｅａｎ ｌｅａｆ ｂｅｅｔｌｅ））；カエトクネマ・エクチパ（Ｃｈａｅｔｏｃｎｅｍａ ｅｃｔｙｐａ）ホルン（Ｈｏｒｎ）（デザートコーンフリービートル（ｄｅｓｅｒｔ ｃｏｒｎ ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅ））；Ｃ．プリカリア（Ｃ．ｐｕｌｉｃａｒｉａ）メルスハイマー（Ｍｅｌｓｈｅｉｍｅｒ）（コーンフリービートル（ｃｏｒｎ ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅ））；コラスピス・ブルンネア（Ｃｏｌａｓｐｉｓ ｂｒｕｎｎｅａ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（グレープコラスピス（ｇｒａｐｅ ｃｏｌａｓｐｉｓ））；ダイアブロチカ・バルベリ（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｂａｒｂｅｒｉ）スミス＆ローレンス（Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｌａｗｒｅｎｃｅ）（ノーザンコーンルートワーム（ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｃｏｒｎ ｒｏｏｔｗｏｒｍ））；Ｄ．ウンデシムプンクタタ・ホワルディ（Ｄ．ｕｎｄｅｃｉｍｐｕｎｃｔａｔａ ｈｏｗａｒｄｉ）バーバー（Ｂａｒｂｅｒ）（サザンコーンルートワーム（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｃｏｒｎ ｒｏｏｔｗｏｒｍ））；Ｄ．ビルギフェラ・ビルギフェラ（Ｄ．ｖｉｒｇｉｆｅｒａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ）；ルコント（ＬｅＣｏｎｔｅ）（ウェスタンコーンルートワーム（ｗｅｓｔｅｒｎ ｃｏｒｎ ｒｏｏｔｗｏｒｍ））；レプチノタルサ・デセムリネアタ（Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ ｄｅｃｅｍｌｉｎｅａｔａ）セイ（Ｓａｙ）（コロラドジャガイモビートル（Ｃｏｌｏｒａｄｏ ｐｏｔａｔｏ ｂｅｅｔｌｅ））；オウレメ・メラノプス（Ｏｕｌｅｍａ ｍｅｌａｎｏｐｕｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（シリアルリーフビートル（ｃｅｒｅａｌ ｌｅａｆ ｂｅｅｔｌｅ））；フィロトレタ・クルシフェラエ（Ｐｈｙｌｌｏｔｒｅｔａ ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ）ゲッツェ（Ｇｏｅｚｅ）（コーンフリービートル（ｃｏｒｎ ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅ））；ザイゴグラマ・エクスクラマチオニス（Ｚｙｇｏｇｒａｍｍａ ｅｘｃｌａｍａｔｉｏｎｉｓ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（サンフラワービートル（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｂｅｅｔｌｅ））を含むハムシ科（Ｃｈｒｙｓｏｍｅｌｉｄａｅ）のフリービートル（ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅｓ）、キューカムバービートル（ｃｕｃｕｍｂｅｒ ｂｅｅｔｌｅｓ）、ルートワーム（ｒｏｏｔｗｏｒｍｓ）、リーフビートル（ｌｅａｆ ｂｅｅｔｌｅｓ）、ジャガイモビートル（ｐｏｔａｔｏ ｂｅｅｔｌｅｓ）、およびリーフマイナー（ｌｅａｆｍｉｎｅｒｓ）；これらに限定されないがエピラクナ・バリベスチス（Ｅｐｉｌａｃｈｎａ ｖａｒｉｖｅｓｔｉｓ）ミュルサン（Ｍｕｌｓａｎｔ）（メキシカンビーンビートル（Ｍｅｘｉｃａｎ ｂｅａｎ ｂｅｅｔｌｅ））を含むテントウムシ科（Ｃｏｃｃｉｎｅｌｌｉｄａｅ）由来のビートル；これらに限定されないがアンチトログス・パルブルス（Ａｎｔｉｔｒｏｇｕｓ ｐａｒｖｕｌｕｓ）ブリットン（Ｂｒｉｔｔｏｎ）（チルダースケイングラブ（Ｃｈｉｌｄｅｒｓ ｃａｎｅ ｇｒｕｂ）；シクロセファラ・ボレアリス（Ｃｙｃｌｏｃｅｐｈａｌａ ｂｏｒｅａｌｉｓ）アロー（Ａｒｒｏｗ）（ノーザンマスクドチェイファー（ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｍａｓｋｅｄ ｃｈａｆｅｒ））、ホワイトグラブ（ｗｈｉｔｅ ｇｒｕｂ））；Ｃ．イムマクラタ（Ｃ．ｉｍｍａｃｕｌａｔａ）オリヴィエ（Ｏｌｉｖｉｅｒ）（サザンマスクドチェイファー（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｍａｓｋｅｄ ｃｈａｆｅｒ）、ホワイトグラブ）；デルモレピダ・アルボヒルツム（Ｄｅｒｍｏｌｅｐｉｄａ ａｌｂｏｈｉｒｔｕｍ）ウォーターハウス（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ）（グレイバックケインビートル（Ｇｒｅｙｂａｃｋ ｃａｎｅ ｂｅｅｔｌｅ））；エウテオラ・フミリス・ルギセプス（Ｅｕｅｔｈｅｏｌａ ｈｕｍｉｌｉｓ ｒｕｇｉｃｅｐｓ）ルコント（ＬｅＣｏｎｔｅ）（シュガーケインビートル（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｂｅｅｔｌｅ））；レプディオタ・フレンチ（Ｌｅｐｉｄｉｏｔａ ｆｒｅｎｃｈｉ）ブラックバーン（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ）（フレンチズケイングラブ（Ｆｒｅｎｃｈ’ｓ ｃａｎｅ ｇｒｕｂ））；トマルス・ギッボスス（Ｔｏｍａｒｕｓ ｇｉｂｂｏｓｕｓ）ドゥイェール（Ｄｅ Ｇｅｅｒ）（キャロットビートル（ｃａｒｒｏｔ ｂｅｅｔｌｅ））；Ｔ．スブトロピクス（Ｔ．ｓｕｂｔｒｏｐｉｃｕｓ）ブラッチリー（Ｂｌａｔｃｈｌｅｙ）（シュガーケイングラブ（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｇｒｕｂ））；フィロファガ・クリニタ（Ｐｈｙｌｌｏｐｈａｇａ ｃｒｉｎｉｔａ）ブルマイスター（Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ）（ホワイトグラブ）；Ｐ．ラチフロンス（Ｐ．ｌａｔｉｆｒｏｎｓ）ルコント（ＬｅＣｏｎｔｅ）（ジューンビートル（Ｊｕｎｅ ｂｅｅｔｌｅ））；ポピリア・ジャポニカ（Ｐｏｐｉｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）ニューマン（Ｎｅｗｍａｎ）（ジャパニーズビートル（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｂｅｅｔｌｅ））；リゾトログス・マジャリス（Ｒｈｉｚｏｔｒｏｇｕｓ ｍａｊａｌｉｓ）ラゾモウスキー（Ｒａｚｏｕｍｏｗｓｋｙ）（ヨーロピアンチェイファー（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｃｈａｆｅｒ））を含むコガネムシ科（Ｓｃａｒａｂａｅｉｄａｅ）由来のチェイファーおよび他のビートル；カツオブシムシ科（Ｄｅｒｍｅｓｔｉｄａｅ）由来のカーペットビートル（ｃａｒｐｅｔ ｂｅｅｔｌｅｓ）；コメツキムシ科（Ｅｌａｔｅｒｉｄａｅ）、エレオデスｓｐｐ．（Ｅｌｅｏｄｅｓ ｓｐｐ．）、Ｍ．コムムニス（Ｍ．ｃｏｍｍｕｎｉｓ）グレンホール（Ｇｙｌｌｅｎｈａｌ）（ワイヤワーム（ｗｉｒｅｗｏｒｍ））を含むメラノツスｓｐｐ．（Ｍｅｌａｎｏｔｕｓ ｓｐｐ．）由来のワイヤーワーム；コノデルスｓｐｐ．（Ｃｏｎｏｄｅｒｕｓ ｓｐｐ．）；リモニウスｓｐｐ．（Ｌｉｍｏｎｉｕｓ ｓｐｐ．）；アグリオテスｓｐｐ．（Ａｇｒｉｏｔｅｓ ｓｐｐ．）；クテニセラｓｐｐ．（Ｃｔｅｎｉｃｅｒａ ｓｐｐ．）；アエオルスｓｐｐ．（Ａｅｏｌｕｓ ｓｐｐ．）；キクイムシ科（Ｓｃｏｌｙｔｉｄａｅ）由来のバークビートル（ｂａｒｋ ｂｅｅｔｌｅｓ）；ゴミムシダマシ科（Ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｄａｅ）由来のビートル；これに限定されないがミグドルス・フリヤヌス（Ｍｉｇｄｏｌｕｓ ｆｒｙａｎｕｓ）ウェストウッド（Ｗｅｓｔｗｏｏｄ）（ロングホーンビートル（ｌｏｎｇｈｏｒｎ ｂｅｅｔｌｅ））などであるカミキリムシ科（Ｃｅｒａｍｂｙｃｉｄａｅ）由来のビートル；ならびにこれに限定されないがアファニスチクス・コチンチナエ・セミヌルム（Ａｐｈａｎｉｓｔｉｃｕｓ ｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎａｅ ｓｅｍｉｎｕｌｕｍ）オベンバーガー（Ｏｂｅｎｂｅｒｇｅｒ）（リーフ－マイニングビュープレスチドビートル（ｌｅａｆ－ｍｉｎｉｎｇ ｂｕｐｒｅｓｔｉｄ ｂｅｅｔｌｅ））を含むタマムシ科（Ｂｕｐｒｅｓｔｉｄａｅ）由来のビートルを含む鞘翅目の幼虫および成体は関心が持たれる。

【0306】

リーフマイナーアグロミザ・パルビコルニス（Ａｇｒｏｍｙｚａ ｐａｒｖｉｃｏｒｎｉｓ）レーヴ（Ｌｏｅｗ）（コーンブロッチリーフマイナー（ｃｏｒｎ ｂｌｏｔｃｈ ｌｅａｆｍｉｎｅｒ））；これらに限定されないがコンタリニア・ソルギコラ（Ｃｏｎｔａｒｉｎｉａ ｓｏｒｇｈｉｃｏｌａ）コンクレット（Ｃｏｑｕｉｌｌｅｔｔ）（ソルガムミッジ（ｓｏｒｇｈｕｍ ｍｉｄｇｅ））；マイエチオラ・デストルクトル（Ｍａｙｅｔｉｏｌａ ｄｅｓｔｒｕｃｔｏｒ）セイ（Ｓａｙ）（ヘシアンフライ（Ｈｅｓｓｉａｎ ｆｌｙ））；ネオラシオプテラ・ムルトフェルドチアナ（Ｎｅｏｌａｓｉｏｐｔｅｒａ ｍｕｒｔｆｅｌｄｔｉａｎａ）フェルト（Ｆｅｌｔ）（サンフラワーシードミッジ（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ ｓｅｅｄ ｍｉｄｇｅ））；シトディプロシス・モセラナ（Ｓｉｔｏｄｉｐｌｏｓｉｓ ｍｏｓｅｌｌａｎａ）ゲイン（Ｇｅｈｉｎ）（コムギミッジ（ｗｈｅａｔ ｍｉｄｇｅ））を含む小昆虫；ミバエ（ｆｒｕｉｔ ｆｌｉｅｓ）（ミバエ科（Ｔｅｐｈｒｉｔｉｄａｅ））、バクトロセラ・オレアエ（Ｂａｃｔｒｏｃｅｒａ ｏｌｅａｅ）（オリーブミバエ（ｏｌｉｖｅ ｆｒｕｉｔ ｆｌｙ））、セラチチス・カピタタ（Ｃｅｒａｔｉｔｉｓ ｃａｐｉｔａｔａ）（チチュウカイミバエ（Ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅａｎ ｆｒｕｉｔ ｆｌｙ））、オスシネラ・フリト（Ｏｓｃｉｎｅｌｌａ ｆｒｉｔ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ミバエ）；これらに限定されないがデリア・プラツラ（Ｄｅｌｉａ ｐｌａｔｕｒａ）メイゲン（Ｍｅｉｇｅｎ）（シードコーンマゴット（ｓｅｅｄｃｏｒｎ ｍａｇｇｏｔ））を含むデリアｓｐｐ．（Ｄｅｌｉａ ｓｐｐ．）；Ｄ．コアルクタタ（Ｄ．ｃｏａｒｃｔａｔａ）フォールン（Ｆａｌｌｅｎ）（コムギバルブフライ（ｗｈｅａｔ ｂｕｌｂ ｆｌｙ））；ファンニア・カニクラリス（Ｆａｎｎｉａ ｃａｎｉｃｕｌａｒｉｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）；Ｆ．フェモラリス（Ｆ．ｆｅｍｏｒａｌｉｓ）シュタイン（Ｓｔｅｉｎ）（レッサーハウスフライ（ｌｅｓｓｅｒ ｈｏｕｓｅ ｆｌｉｅｓ））；メロミザ・アメリカナ（Ｍｅｒｏｍｙｚａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）フィッチ（Ｆｉｔｃｈ）（コムギシュテムマゴット（ｗｈｅａｔ ｓｔｅｍ ｍａｇｇｏｔ））；ムスカ・ドメスチカ（Ｍｕｓｃａ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ハウスフライ（ｈｏｕｓｅ ｆｌｉｅｓ））；ストモキシス・カルシトランス（Ｓｔｏｍｏｘｙｓ ｃａｌｃｉｔｒａｎｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ステーブルフライ（ｓｔａｂｌｅ ｆｌｉｅｓ））を含むマゴット；クリソミアｓｐｐ．（Ｃｈｒｙｓｏｍｙａ ｓｐｐ．）；ホルミアｓｐｐ．（Ｐｈｏｒｍｉａ ｓｐｐ．）のフェイスフライ（ｆａｃｅ ｆｌｉｅｓ）、ホーンフライ（ｈｏｒｎ ｆｌｉｅｓ）、ブロウフライ（ｂｌｏｗ ｆｌｉｅｓ）；および他のムスコイドフライ害虫（ｍｕｓｃｏｉｄ ｆｌｙ ｐｅｓｔｓ）；ホースフライ（ｈｏｒｓｅ ｆｌｉｅｓ）タバヌスｓｐｐ．（Ｔａｂａｎｕｓ ｓｐｐ．）；ボットフライ（ｂｏｔ ｆｌｉｅｓ）ガストロフィルスｓｐｐ．（Ｇａｓｔｒｏｐｈｉｌｕｓ ｓｐｐ．）；オエストルスｓｐｐ．（Ｏｅｓｔｒｕｓ ｓｐｐ．）；ウシバエ（ｃａｔｔｌｅ ｇｒｕｂｓ）ヒポデルマｓｐｐ．（Ｈｙｐｏｄｅｒｍａ ｓｐｐ．）；シカフライ（ｄｅｅｒ ｆｌｉｅｓ）メクアラブｓｐｐ．（Ｃｈｒｙｓｏｐｓ ｓｐｐ．）；メロファグス・オビヌス（Ｍｅｌｏｐｈａｇｕｓ ｏｖｉｎｕｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ヒツジシラミバエ（ｋｅｄｓ））；および他のブラキセラ属（Ｂｒａｃｈｙｃｅｒａ）、蚊アデスｓｐｐ．（Ａｅｄｅｓ ｓｐｐ．）；アノフェレスｓｐｐ．（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ ｓｐｐ．）；イエカｓｐｐ．（Ｃｕｌｅｘ ｓｐｐ．）；ブラックフライ（ｂｌａｃｋ ｆｌｉｅｓ）プロシムリウムｓｐｐ．（Ｐｒｏｓｉｍｕｌｉｕｍ ｓｐｐ．）；シムリウムｓｐｐ．（Ｓｉｍｕｌｉｕｍ ｓｐｐ．）；ヌカカ（ｂｉｔｉｎｇ ｍｉｄｇｅｓ）、サンドフライ（ｓａｎｄ ｆｌｉｅｓ）、シアリド（ｓｃｉａｒｉｄｓ）、ならびに他のネマトセラ（Ｎｅｍａｔｏｃｅｒａ）を含む、双翅目の成体および未熟体は関心が持たれる。

【0307】

半翅目由来の農学的に重要な成員は、これらに限定されないが、アクロステルヌム・ヒラレ（Ａｃｒｏｓｔｅｒｎｕｍ ｈｉｌａｒｅ）セイ（Ｓａｙ）（グリーンスティンクバグ（ｇｒｅｅｎ ｓｔｉｎｋ ｂｕｇ））；アシルチシホン・ピスム（Ａｃｙｒｔｈｉｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ）ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）（ピーアフィド（ｐｅａ ａｐｈｉｄ））；アデルゲスｓｐｐ．（Ａｄｅｌｇｅｓ ｓｐｐ．）（アデルギッド（ａｄｅｌｇｉｄｓ））；アデルホコリス・ラピヅス（Ａｄｅｌｐｈｏｃｏｒｉｓ ｒａｐｉｄｕｓ）セイ（Ｓａｙ）（ラピッドプラントバグ（ｒａｐｉｄ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；アサナ・トリスチス（Ａｎａｓａ ｔｒｉｓｔｉｓ）ドゥイェール（Ｄｅ Ｇｅｅｒ）（スカッシュバグ（ｓｑｕａｓｈ ｂｕｇ））；アフィス・クラッシボラ（Ａｐｈｉｓ ｃｒａｃｃｉｖｏｒａ）コッホ（Ｋｏｃｈ）（カウピーアフィド（ｃｏｗｐｅａ ａｐｈｉｄ））；Ａ．ファバエ（Ａ．ｆａｂａｅ）スコポリ（Ｓｃｏｐｏｌｉ）（ブラックビーンアフィド（ｂｌａｃｋ ｂｅａｎ ａｐｈｉｄ））；Ａ．ゴッシピイ（Ａ．ｇｏｓｓｙｐｉｉ）グローバー（Ｇｌｏｖｅｒ）（コットンアフィド（ｃｏｔｔｏｎ ａｐｈｉｄ）、メロンアフィド（ｍｅｌｏｎ ａｐｈｉｄ））；Ａ．マイディラディシス（Ａ．ｍａｉｄｉｒａｄｉｃｉｓ）フォーブス（Ｆｏｒｂｅｓ）（コーンルートアフィド（ｃｏｒｎ ｒｏｏｔ ａｐｈｉｄ））；Ａ．ポミ（Ａ．ｐｏｍｉ）ドゥイェール（Ｄｅ Ｇｅｅｒ）（アップルアフィド（ａｐｐｌｅ ａｐｈｉｄ））；Ａ．スピラエコラ（Ａ．ｓｐｉｒａｅｃｏｌａ）パッチ（Ｐａｔｃｈ）（スパイリーアアフィド（ｓｐｉｒｅａ ａｐｈｉｄ））；アウラカスピス・テガレンシス（Ａｕｌａｃａｓｐｉｓ ｔｅｇａｌｅｎｓｉｓ）ツェントナー（Ｚｅｈｎｔｎｅｒ）（シュガーケインスケール（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｃａｌｅ））；アウラコルツム・ソラニ（Ａｕｌａｃｏｒｔｈｕｍ ｓｏｌａｎｉ）カルテンバッハ（Ｋａｌｔｅｎｂａｃｈ）（フォックスグラブアフィド（ｆｏｘｇｌｏｖｅ ａｐｈｉｄ））；ベミシア・アルゲンチフォリイ（Ｂｅｍｉｓｉａ ａｒｇｅｎｔｉｆｏｌｉｉ）（シルバーリーフホワイトフライ（ｓｉｌｖｅｒｌｅａｆ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））；ベミシア・タバシゲンナディオス（Ｇｅｎｎａｄｉｕｓ）（タバコホワイトフライ（ｔｏｂａｃｃｏ ｗｈｉｔｅｆｌｙ）、サツマイモホワイトフライ（ｓｗｅｅｔｐｏｔａｔｏ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））；Ｂ．アルゲンチフォリイ（Ｂ．ａｒｇｅｎｔｉｆｏｌｉｉ）ベロウズ＆ペリング（Ｂｅｌｌｏｗｓ＆Ｐｅｒｒｉｎｇ）（シルバーリーフホワイトフライ（ｓｉｌｖｅｒｌｅａｆ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））；ブリスス・レウコプテルス・レウコプテルス（Ｂｌｉｓｓｕｓ ｌｅｕｃｏｐｔｅｒｕｓ ｌｅｕｃｏｐｔｅｒｕｓ）セイ（Ｓａｙ）（チンチバグ（ｃｈｉｎｃｈ ｂｕｇ））；ブロストマチダエｓｐｐ．（Ｂｌｏｓｔｏｍａｔｉｄａｅ ｓｐｐ．）；ブレビコリネ・ブラッシカエ（Ｂｒｅｖｉｃｏｒｙｎｅ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（キャベッジアフィド（ｃａｂｂａｇｅ ａｐｈｉｄ））；カコプシラ・ピリコラ（Ｃａｃｏｐｓｙｌｌａ ｐｙｒｉｃｏｌａ）フェルステル（Ｆｏｅｒｓｔｅｒ）（ペアプシラ（ｐｅａｒ ｐｓｙｌｌａ））；カロコリス・ノルベギクス（Ｃａｌｏｃｏｒｉｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）グメリン（Ｇｍｅｌｉｎ）（ジャガイモカプシドバグ（ｐｏｔａｔｏ ｃａｐｓｉｄ ｂｕｇ））；カエトシホン・フラガエフォリイ（Ｃｈａｅｔｏｓｉｐｈｏｎ ｆｒａｇａｅｆｏｌｉｉ）コッカレル（Ｃｏｃｋｅｒｅｌｌ）（ストロベリーアフィド（ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ａｐｈｉｄ））；シミシダエｓｐｐ．（Ｃｉｍｉｃｉｄａｅ ｓｐｐ．）；コレイダエｓｐｐ．（Ｃｏｒｅｉｄａｅ ｓｐｐ．）；コルツカ・ゴシッピイ（Ｃｏｒｙｔｈｕｃａ ｇｏｓｓｙｐｉｉ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（コットンレースバグ（ｃｏｔｔｏｎ ｌａｃｅ ｂｕｇ））；シルトペルチス・モデスタ（Ｃｙｒｔｏｐｅｌｔｉｓ ｍｏｄｅｓｔａ）ディスタント（Ｄｉｓｔａｎｔ）（トマトバグ（ｔｏｍａｔｏ ｂｕｇ））；Ｃ．ノタツス（Ｃ．ｎｏｔａｔｕｓ）ディスタント（Ｄｉｓｔａｎｔ）（サックフライ（ｓｕｃｋｆｌｙ））；デオイス・フラボピクタ（Ｄｅｏｉｓ ｆｌａｖｏｐｉｃｔａ）シュテル（Ｓｔａｌ）（スピタルバグ（ｓｐｉｔｔｌｅｂｕｇ））；ディアレウロデス・シトリ（Ｄｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ ｃｉｔｒｉ）アシュミード（Ａｓｈｍｅａｄ）（シトラスホワイトフライ（ｃｉｔｒｕｓ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））；ディアフノコリス・クロリオニス（Ｄｉａｐｈｎｏｃｏｒｉｓ ｃｈｌｏｒｉｏｎｉｓ）セイ（Ｓａｙ）（ハニーローカストプラントバグ（ｈｏｎｅｙｌｏｃｕｓｔ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；ディウラフィス・ノキシア（Ｄｉｕｒａｐｈｉｓ ｎｏｘｉａ）クルジュモフ／モルドヴィルコ（Ｋｕｒｄｊｕｍｏｖ／Ｍｏｒｄｖｉｌｋｏ）（ロシアンコムギアフィド（Ｒｕｓｓｉａｎ ｗｈｅａｔ ａｐｈｉｄ））；デュプラキオナスピス・ディベルゲンス（Ｄｕｐｌａｃｈｉｏｎａｓｐｉｓ ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）グリーン（Ｇｒｅｅｎ）（アーマードスケール（ａｒｍｏｒｅｄ ｓｃａｌｅ））；ディサフィス・プランタギネア（Ｄｙｓａｐｈｉｓ ｐｌａｎｔａｇｉｎｅａ）パセリーニ（Ｐａａｓｅｒｉｎｉ）（ロージーアップルアフィド（ｒｏｓｙ ａｐｐｌｅ ａｐｈｉｄ））；ディスデルクス・スツレルス（Ｄｙｓｄｅｒｃｕｓ ｓｕｔｕｒｅｌｌｕｓ）へリック－シェーファー（Ｈｅｒｒｉｃｈ－Ｓｃｈａｆｆｅｒ）（コットンステイナー（ｃｏｔｔｏｎ ｓｔａｉｎｅｒ））；ディスミコックス・ボニンシス（Ｄｙｓｍｉｃｏｃｃｕｓ ｂｏｎｉｎｓｉｓ）クワナ（Ｋｕｗａｎａ）（グレーシュガーケインミーリバグ（ｇｒａｙ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；エムポアスカ・ファバエ（Ｅｍｐｏａｓｃａ ｆａｂａｅ）ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）（ジャガイモリーフホッパー（ｐｏｔａｔｏ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；エリオソマ・ラニゲルム（Ｅｒｉｏｓｏｍａ ｌａｎｉｇｅｒｕｍ）ハウスマン（Ｈａｕｓｍａｎｎ）（ウーリイアップルアフィド（ｗｏｏｌｌｙ ａｐｐｌｅ ａｐｈｉｄ））；エリスロネオウラｓｐｐ．（Ｅｒｙｔｈｒｏｎｅｏｕｒａ ｓｐｐ．）（グレープリーフホッパー（ｇｒａｐｅ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒｓ））；エウメトピナ・フラビペス（Ｅｕｍｅｔｏｐｉｎａ ｆｌａｖｉｐｅｓ）ムーア（Ｍｕｉｒ）（アイランドシュガーケインプラントホッパー（Ｉｓｌａｎｄ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｐｌａｎｔｈｏｐｐｅｒ））；エウリガステルｓｐｐ．（Ｅｕｒｙｇａｓｔｅｒ ｓｐｐ．）；エウスキスツス・セルブス（Ｅｕｓｃｈｉｓｔｕｓ ｓｅｒｖｕｓ）セイ（Ｓａｙ）（ブラウンスティンクバグ（ｂｒｏｗｎ ｓｔｉｎｋ ｂｕｇ））；Ｅ．バリオラリウス（Ｅ．ｖａｒｉｏｌａｒｉｕｓ）パリソト ド ボーヴォワ（Ｐａｌｉｓｏｔ ｄｅ Ｂｅａｕｖｏｉｓ）（ワンスポッテドステキングバグ（ｏｎｅ－ｓｐｏｔｔｅｄ ｓｔｉｎｋ ｂｕｇ））；グラプトステツスｓｐｐ．（Ｇｒａｐｔｏｓｔｅｔｈｕｓ ｓｐｐ．）（シードバグ（ｓｅｅｄ ｂｕｇｓ）の複合体）；およびヒアロプテルス・プルニ（Ｈｙａｌｏｐｔｅｒｕｓ ｐｒｕｎｉ）ジョフロワ（Ｇｅｏｆｆｒｏｙ）（ミーリイプラムアフィド（ｍｅａｌｙ ｐｌｕｍ ａｐｈｉｄ））；イセリア・ブルカシ（Ｉｃｅｒｙａ ｐｕｒｃｈａｓｉ）マスケル（Ｍａｓｋｅｌｌ）（コトニークッションスケール（ｃｏｔｔｏｎｙ ｃｕｓｈｉｏｎ ｓｃａｌｅ））；ラボピディコラ・アリイ（Ｌａｂｏｐｉｄｉｃｏｌａ ａｌｌｉｉ）ナイト（Ｋｎｉｇｈｔ）（オニオンプラントバグ（ｏｎｉｏｎ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；ラオデルファクス・ストリアテルス（Ｌａｏｄｅｌｐｈａｘ ｓｔｒｉａｔｅｌｌｕｓ）フォールン（Ｆａｌｌｅｎ）（スモーラーブラウンプラントホッパー（ｓｍａｌｌｅｒ ｂｒｏｗｎ ｐｌａｎｔｈｏｐｐｅｒ））；レプトグロスス・コルクルス（Ｌｅｐｔｏｇｌｏｓｓｕｓ ｃｏｒｃｕｌｕｓ）セイ（Ｓａｙ）（リーフフッテドパインシードバグ（ｌｅａｆ－ｆｏｏｔｅｄ ｐｉｎｅ ｓｅｅｄ ｂｕｇ））；レプトディクチャ・タビダ（Ｌｅｐｔｏｄｉｃｔｙａ ｔａｂｉｄａ）へリック－シェーファー（Ｈｅｒｒｉｃｈ－Ｓｃｈａｆｆｅｒ）（シュガーケインレースバグ（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｌａｃｅ ｂｕｇ））；リパフィス・エリシミ（Ｌｉｐａｐｈｉｓ ｅｒｙｓｉｍｉ）カルテンバッハ（Ｋａｌｔｅｎｂａｃｈ）（ターニプアファイド（ｔｕｒｎｉｐ ａｐｈｉｄ））；リゴコリス・パブリヌス（Ｌｙｇｏｃｏｒｉｓ ｐａｂｕｌｉｎｕｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（コモングリーンカプシド（ｃｏｍｍｏｎ ｇｒｅｅｎ ｃａｐｓｉｄ））；リグス・リネオラリス（Ｌｙｇｕｓ ｌｉｎｅｏｌａｒｉｓ）パリソト ド ボーヴォワ（Ｐａｌｉｓｏｔ ｄｅ Ｂｅａｕｖｏｉｓ）（ターニシュドプラントバグ（ｔａｒｎｉｓｈｅｄ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；Ｌ．ヘスペルス（Ｌ．Ｈｅｓｐｅｒｕｓ）ナイト（Ｋｎｉｇｈｔ）（ウェスタンターニシュドプラントバグ（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｔａｒｎｉｓｈｅｄ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；Ｌ．プラテンシス（Ｌ．ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（コモンメドーバグ（ｃｏｍｍｏｎ ｍｅａｄｏｗ ｂｕｇ））；Ｌ．ルグリペンニス（Ｌ．ｒｕｇｕｌｉｐｅｎｎｉｓ）ポッピウス（Ｐｏｐｐｉｕｓ）（ヨーロピアンターニシュドプラントバグ（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｔａｒｎｉｓｈｅｄ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；マクロシフム・ユーフォルビアエトーマス（Ｔｈｏｍａｓ）（ジャガイモアフィド）；マクロステレス・グアドリリネアツス（Ｍａｃｒｏｓｔｅｌｅｓ ｑｕａｄｒｉｌｉｎｅａｔｕｓ）フォーブス（Ｆｏｒｂｅｓ）（アスターリーフホッパー（ａｓｔｅｒ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））； マギシカダ・セプテンデシム（Ｍａｇｉｃｉｃａｄａ ｓｅｐｔｅｎｄｅｃｉｍ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（ペリオディカルシケイダ（ｐｅｒｉｏｄｉｃａｌ ｃｉｃａｄａ））；マハナルバ・フィムブリオラタ（Ｍａｈａｎａｒｖａ ｆｉｍｂｒｉｏｌａｔａ）シュテル（Ｓｔａｌ）（シュガーケインスピタルバグ（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｐｉｔｔｌｅｂｕｇ））；Ｍ．ポスチカタ（Ｍ．ｐｏｓｔｉｃａｔａ）シュテル（Ｓｔａｌ）（シュガーケインのリトルシケイダ（ｌｉｔｔｌｅ ｃｉｃａｄａ ｏｆ ｓｕｇａｒｃａｎｅ））；メラナフィス・サッカリ（Ｍｅｌａｎａｐｈｉｓ ｓａｃｃｈａｒｉ）ツェントナー（Ｚｅｈｎｔｎｅｒ）（シュガーケインアフィド（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ａｐｈｉｄ））；メラナスピス・グロメラタ（Ｍｅｌａｎａｓｐｉｓ ｇｌｏｍｅｒａｔａ）グリーン（Ｇｒｅｅｎ）（ブラックスケール（ｂｌａｃｋ ｓｃａｌｅ））；メトポロフィウム・ディルホヅム（Ｍｅｔｏｐｏｌｏｐｈｉｕｍ ｄｉｒｈｏｄｕｍ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（ロージグレインアフィド（ｒｏｓｅ ｇｒａｉｎ ａｐｈｉｄ））；ミズス・ペルシカエ（Ｍｙｚｕｓ ｐｅｒｓｉｃａｅ）スルザー（Ｓｕｌｚｅｒ）（ピーチ－ジャガイモアフィド（ｐｅａｃｈ－ｐｏｔａｔｏ ａｐｈｉｄ）、グリーンピーチアフィド（ｇｒｅｅｎ ｐｅａｃｈ ａｐｈｉｄ））；ナソノビア・リビスニグリ（Ｎａｓｏｎｏｖｉａ ｒｉｂｉｓｎｉｇｒｉ）モズレ－（Ｍｏｓｌｅｙ）（レタスアフィド（ｌｅｔｔｕｃｅ ａｐｈｉｄ））；ネホテチックス・シンチセプス（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｔｉｘ ｃｉｎｔｉｃｅｐｓ）ウーラー（Ｕｈｌｅｒ）（グリーンリーフホッパー（ｇｒｅｅｎ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；Ｎ．ニグロピクツス（Ｎ．ｎｉｇｒｏｐｉｃｔｕｓ）シュテル（Ｓｔａｌ）（イネリーフホッパー（ｒｉｃｅ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；ネザラ・ビリデュラ（Ｎｅｚａｒａ ｖｉｒｉｄｕｌａ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（サザングリーンスティンクバグ（ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｇｒｅｅｎ ｓｔｉｎｋ ｂｕｇ））；ニラパルバタ・ルゲンス（Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ ｌｕｇｅｎｓ）シュテル（Ｓｔａｌ）（ブラウンプラントホッパー（ｂｒｏｗｎ ｐ


ｌａｎｔｈｏｐｐｅｒ））；ニシウス・エリカエ（Ｎｙｓｉｕｓ ｅｒｉｃａｅ）シリング（Ｓｃｈｉｌｌｉｎｇ）（フォルスチンチバグ（ｆａｌｓｅ ｃｈｉｎｃｈ ｂｕｇ））；ニシウス・ラファヌス（Ｎｙｓｉｕｓ ｒａｐｈａｎｕｓ）ハワード（Ｈｏｗａｒｄ）（フォルスチンチバグ（ｆａｌｓｅ ｃｈｉｎｃｈ ｂｕｇ））；オエバルス・プグナクス（Ｏｅｂａｌｕｓ ｐｕｇｎａｘ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（イネスティンクバグ（ｒｉｃｅ ｓｔｉｎｋ ｂｕｇ））；オンコペルツス・ファシアツス（Ｏｎｃｏｐｅｌｔｕｓ ｆａｓｃｉａｔｕｓ）ダラス（Ｄａｌｌａｓ）（ラージミルクウィードバグ（ｌａｒｇｅ ｍｉｌｋｗｅｅｄ ｂｕｇ））；オルトプス・カムペストリス（Ｏｒｔｈｏｐｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）；ペムフィグスｓｐｐ．（Ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｓｐｐ．）（ルートアフィド（ｒｏｏｔ ａｐｈｉｄｓ）およびゴルアフィド（ｇａｌｌ ａｐｈｉｄｓ））；ペレグリヌス・マイディス（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｕｓ ｍａｉｄｉｓ）アシュミード（Ａｓｈｍｅａｄ）（コーンプラントホッパー（ｃｏｒｎ ｐｌａｎｔｈｏｐｐｅｒ））；ペルキンシエラ・サッカリシダ（Ｐｅｒｋｉｎｓｉｅｌｌａ ｓａｃｃｈａｒｉｃｉｄａ）カーカルディ（Ｋｉｒｋａｌｄｙ）（シュガーケインデルファシド（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｄｅｌｐｈａｃｉｄ））；フィロキセラ・デバスタトリクス（Ｐｈｙｌｌｏｘｅｒａ ｄｅｖａｓｔａｔｒｉｘ）ペルガンデ（Ｐｅｒｇａｎｄｅ）（ペカン・フィロキセラ（ｐｅｃａｎ ｐｈｙｌｌｏｘｅｒａ））；プラノコックス・シトリ（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｃｉｔｒｉ）リッソ（Ｒｉｓｓｏ）（シトラスミーリイバグ（ｃｉｔｒｕｓ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；プレシオコリス・ルギコリス（Ｐｌｅｓｉｏｃｏｒｉｓ ｒｕｇｉｃｏｌｌｉｓ）フォールン（Ｆａｌｌｅｎ）（アップルカプシド（ａｐｐｌｅ ｃａｐｓｉｄ））；ポエシロカプスス・リネアツス（Ｐｏｅｃｉｌｏｃａｐｓｕｓ ｌｉｎｅａｔｕｓ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（フォーラインドプラントバグ（ｆｏｕｒ－ｌｉｎｅｄ ｐｌａｎｔ ｂｕｇ））；シューダトモスセリス・セリアツス（Ｐｓｅｕｄａｔｏｍｏｓｃｅｌｉｓ ｓｅｒｉａｔｕｓ）ロイター（Ｒｅｕｔｅｒ）（コットンフリーホッパー（ｃｏｔｔｏｎ ｆｌｅａｈｏｐｐｅｒ））；シュードコッカスｓｐｐ．（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．）（他のミーリイバグ複合体）；プルビナリア・エロンガタ（Ｐｕｌｖｉｎａｒｉａ ｅｌｏｎｇａｔａ）ニューステッド（Ｎｅｗｓｔｅａｄ）（コトニーグラススケール（ｃｏｔｔｏｎｙ ｇｒａｓｓ ｓｃａｌｅ））；ピリラ・ペルプシラ（Ｐｙｒｉｌｌａ ｐｅｒｐｕｓｉｌｌａ）ウォーカー（Ｗａｌｋｅｒ）（シュガーケインリーフホッパー（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；ピロコリダエｓｐｐ．（Ｐｙｒｒｈｏｃｏｒｉｄａｅ ｓｐｐ．）；クアドラスピディオツス・ペルニシオスス（Ｑｕａｄｒａｓｐｉｄｉｏｔｕｓ ｐｅｒｎｉｃｉｏｓｕｓ）コムストック（Ｃｏｍｓｔｏｃｋ）（サンノゼスケール（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ ｓｃａｌｅ））；レデュビイダエｓｐｐ．（Ｒｅｄｕｖｉｉｄａｅ ｓｐｐ．）；ロパロシフム・マイディス（Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍ ｍａｉｄｉｓ）フィッチ（Ｆｉｔｃｈ）（コーンリーフアフィド（ｃｏｒｎ ｌｅａｆ ａｐｈｉｄ））；Ｒ．パディ（Ｒ．ｐａｄｉ）リンネウス（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）（バード－チェリー－オーツアフィド（ｂｉｒｄ ｃｈｅｒｒｙ－ｏａｔ ａｐｈｉｄ））；サッカリコックス・サッカリ（Ｓａｃｃｈａｒｉｃｏｃｃｕｓ ｓａｃｃｈａｒｉ）コッカレル（Ｃｏｃｋｅｒｅｌｌ）（ピンクシュガーケインミーリイバグ（ｐｉｎｋ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；スカプタコリス・カスタネア（Ｓｃａｐｔａｃｏｒｉｓ ｃａｓｔａｎｅａ）ペリー（Ｐｅｒｔｙ）（ブラウンルートスティンクバグ（ｂｒｏｗｎ ｒｏｏｔ ｓｔｉｎｋ ｂｕｇ））；スキザフィス・グラミヌム（Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ ｇｒａｍｉｎｕｍ）ロンダニ（Ｒｏｎｄａｎｉ）（グリーンバグ（ｇｒｅｅｎｂｕｇ））；シファ・フラバ（Ｓｉｐｈａ ｆｌａｖａ）フォーブス（Ｆｏｒｂｅｓ）（イエローシュガーケインアフィド（ｙｅｌｌｏｗ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ａｐｈｉｄ））；シトビオン・アベナエ（Ｓｉｔｏｂｉｏｎ ａｖｅｎａｅ）ファブリチウス（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）（イングリッシュグレインアフィド（Ｅｎｇｌｉｓｈ ｇｒａｉｎ ａｐｈｉｄ））；ソガテラ・フルシフェラ（Ｓｏｇａｔｅｌｌａ ｆｕｒｃｉｆｅｒａ）ホルヴァート（Ｈｏｒｖａｔｈ）（ホワイトバックドプラントホッパー（ｗｈｉｔｅ－ｂａｃｋｅｄ ｐｌａｎｔｈｏｐｐｅｒ））；ソガトデス・オリジコラ（Ｓｏｇａｔｏｄｅｓ ｏｒｙｚｉｃｏｌａ）ムーア（Ｍｕｉｒ）（イネデルファシド（ｒｉｃｅ ｄｅｌｐｈａｃｉｄ））；スピナゴニクス・アルボファスシアツス（Ｓｐａｎａｇｏｎｉｃｕｓ ａｌｂｏｆａｓｃｉａｔｕｓ）ロイター（Ｒｅｕｔｅｒ）（ホワイマークドフリーホッパー（ｗｈｉｔｅｍａｒｋｅｄ ｆｌｅａｈｏｐｐｅｒ））；テリオアフィス・マクラタ（Ｔｈｅｒｉｏａｐｈｉｓ ｍａｃｕｌａｔａ）バックトン（Ｂｕｃｋｔｏｎ）（スポッテドアルファルファアフィド（ｓｐｏｔｔｅｄ ａｌｆａｌｆａ ａｐｈｉｄ））；チニダエｓｐｐ．（Ｔｉｎｉｄａｅ ｓｐｐ．）；トキソプテラ・アウランチイ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ ａｕｒａｎｔｉｉ）ボイヤー ド フォンスコロンベ（Ｂｏｙｅｒ ｄｅ Ｆｏｎｓｃｏｌｏｍｂｅ）（ブラックシトラスアフィド（ｂｌａｃｋ ｃｉｔｒｕｓ ａｐｈｉｄ））；およびＴ．シトリシダ（Ｔ．ｃｉｔｒｉｃｉｄａ）カーカルディ（Ｋｉｒｋａｌｄｙ）（ブラウンシトラスアフィド（ｂｒｏｗｎ ｃｉｔｒｕｓ ａｐｈｉｄ））；トリアレウロデス・バポラリオルム（Ｔｒｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ ｖａｐｏｒａｒｉｏｒｕｍ）（グリーンハウスホワイトフライ（ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））；トリアレウロイデス・アブチロネウス（Ｔｒｉａｌｅｕｒｏｄｅｓ ａｂｕｔｉｌｏｎｅｕｓ）（バンデッドウィングドホワイトフライ（ｂａｎｄｅｄｗｉｎｇｅｄ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））およびＴ．バポラリオルム（Ｔ．ｖａｐｏｒａｒｉｏｒｕｍ）ウェストウッド（Ｗｅｓｔｗｏｏｄ）（グリーンハウスホワイトフライ（ｇｒｅｅｎｈｏｕｓｅ ｗｈｉｔｅｆｌｙ））；トリオザ・ディオスピリ（Ｔｒｉｏｚａ ｄｉｏｓｐｙｒｉ）アシュミード（Ａｓｈｍｅａｄ）（パシモンスイラ（ｐｅｒｓｉｍｍｏｎ ｐｓｙｌｌａ））；チフロシバ・ポマリア（Ｔｙｐｈｌｏｃｙｂａ ｐｏｍａｒｉａ）マカティー（ＭｃＡｔｅｅ）（ホワイトアップルリーフホッパー（ｗｈｉｔｅ ａｐｐｌｅ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；ホマロディスカ・ビトリペンニス（Ｈｏｍａｌｏｄｉｓｃａ ｖｉｔｒｉｐｅｎｎｉｓ）（グラシイウィングドシャープシューター（ｇｌａｓｓｙ ｗｉｎｇｅｄ ｓｈａｒｐｓｈｏｏｔｅｒ））；シカデュリナ・ムビラ（Ｃｉｃａｄｕｌｉｎａ ｍｂｉｌａ）（トウモロコシリーフホッパー（ｍａｉｚｅ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；シルクリフェル・テネルス（Ｃｉｒｃｕｌｉｆｅｒ ｔｅｎｅｌｌｕｓ）（ビートリーフホッパー（ｂｅｅｔ ｌｅａｆｈｏｐｐｅｒ））；ダクツロスフアイラ・ビチフォリアエ（Ｄａｋｔｕｌｏｓｐｈａｉｒａ ｖｉｔｉｆｏｌｉａｅ）（グレープフィロキセラ（ｇｒａｐｅ ｐｈｙｌｌｏｘｅｒａ））；コックス・シュードマグノリルアルム（Ｃｏｃｃｕｓ ｐｓｅｕｄｏｍａｇｎｏｌｉａｒｕｍ）（シトリコラスケール（ｃｉｔｒｉｃｏｌａ ｓｃａｌｅ））；コックス・ヘスペリデュム（Ｃｏｃｃｕｓ ｈｅｓｐｅｒｉｄｕｍ）（ソフトブラウンスケール（ｓｏｆｔ ｂｒｏｗｎ ｓｃａｌｅ））；プルビナリア・レガリス（Ｐｕｌｖｉｎａｒｉａ ｒｅｇａｌｉｓ）（ホースチェスナトスケール（ｈｏｒｓｅ ｃｈｅｓｔｎｕｔ ｓｃａｌｅ））；プルビナリア・プシディイ（Ｐｕｌｖｉｎａｒｉａ ｐｓｉｄｉｉ）（グリーンシールドスケール（ｇｒｅｅｎ ｓｈｉｅｌｄ ｓｃａｌｅ））；アオニディエラ・アウランチイ（Ａｏｎｉｄｉｅｌｌａ ａｕｒａｎｔｉｉ）（カリフォルニアシトラススケール（Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ｃｉｔｒｕｓ ｓｃａｌｅ））；アオニディエラ・タクス（Ａｏｎｉｄｉｅｌｌａ ｔａｘｕｓ）（アジアチックレッドスケール（Ａｓｉａｔｉｃ ｒｅｄ ｓｃａｌｅ））；アスピディオツス・エクシスス（Ａｓｐｉｄｉｏｔｕｓ ｅｘｃｉｓｕｓ）（シアノチススケール（Ｃｙａｎｏｔｉｓ ｓｃａｌｅ））アスピディオツス・ネリイ（Ａｓｐｉｄｉｏｔｕｓ ｎｅｒｉｉ）（オレアンダースケール（ｏｌｅａｎｄｅｒ ｓｃａｌｅ））；アウラカスピス・ロザルム（Ａｕｌａｃａｓｐｉｓ ｒｏｓａｒｕｍ）（アジアチックローズスケール（Ａｓｉａｔｉｃ ｒｏｓｅ ｓｃａｌｅ））；アウラカスピス・ツベルクラリス（Ａｕｌａｃａｓｐｉｓ ｔｕｂｅｒｃｕｌａｒｉｓ）（ホワイトマンゴースケール（ｗｈｉｔｅ ｍａｎｇｏ ｓｃａｌｅ））；キオナスピス・レピネイイ（Ｃｈｉｏｎａｓｐｉｓ ｌｅｐｉｎｅｙｉ）（オークスカフィスケール（ｏａｋ ｓｃｕｒｆｙ ｓｃａｌｅ））；ヘミベルレシア・ラタニアエ（Ｈｅｍｉｂｅｒｌｅｓｉａ ｌａｔａｎｉａｅ）（ラタニアスケール（ｌａｔａｎｉａ ｓｃａｌｅ））；クワナスピス・シュードレウカスピス（Ｋｕｗａｎａｓｐｉｓ ｐｓｅｕｄｏｌｅｕｃａｓｐｉｓ）（バンブーディアスピディドスケール（ｂａｍｂｏｏ ｄｉａｓｐｉｄｉｄ ｓｃａｌｅ））；レピドサフェス・ピニ（Ｌｅｐｉｄｏｓａｐｈｅｓ ｐｉｎｉ）（パインオイスターシェルスケール（ｐｉｎｅ ｏｙｓｔｅｒｓｈｅｌｌ ｓｃａｌｅ））；ロホレウカスピス・ジャポニカ（Ｌｏｐｈｏｌｅｕｃａｓｐｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）（ジャパニーズメイプルスケール（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｍａｐｌｅ ｓｃａｌｅ））；オセアナスピディオツス・スピノスス（Ｏｃｅａｎａｓｐｉｄｉｏｔｕｓ ｓｐｉｎｏｓｕｓ）（スパインドスケールインセクト（ｓｐｉｎｅｄ ｓｃａｌｅ ｉｎｓｅｃｔ））；パルラトリア・ジジフィ（Ｐａｒｌａｔｏｒｉａ ｚｉｚｉｐｈｉ）（ブラックパーラトリアスケール（ｂｌａｃｋ ｐａｒｌａｔｏｒｉａ ｓｃａｌｅ））；シュードアオニディア・デュプレクス（Ｐｓｅｕｄａｏｎｉｄｉａ ｄｕｐｌｅｘ）（カンファ－スケール（ｃａｍｐｈｏｒ ｓｃａｌｅ））；ウナスピス・ヤノネンシス（Ｕｎａｓｐｉｓ ｙａｎｏｎｅｎｓｉｓ）（アローヘッドスケール（ａｒｒｏｗｈｅａｄ ｓｃａｌｅ））；フェナコックス・ソラニ（Ｐｈｅｎａｃｏｃｃｕｓ ｓｏｌａｎｉ）（ソレイナムミーリイバグ（Ｓｏｌａｎｕｍ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；プラノコックス・シトリ（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ ｃｉｔｒｉ）（シトラスミーリイバグ（ｃｉｔｒｕｓ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；プラノコックス（Ｐｌａｎｏｃｏｃｃｕｓ）（フィーカスヴァインミーリイバグ（ｆｉｃｕｓ ｖｉｎｅ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；シュードコックス・ロンギスピヌス（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ ｌｏｎｇｉｓｐｉｎｕｓ）（ロングテイルドミーリイバグ（ｌｏｎｇ－ｔａｉｌｅｄ ｍｅａｌｙｂｕｇ））シュードコックス・アフィニス（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ ａｆｆｉｎｉｓ）（グラスハウスミーリイバグ（ｇｌａｓｓｈｏｕｓｅ ｍｅａｌｙｂｕｇ））；ディアホリナ・シトリ（Ｄｉａｐｈｏｒｉｎａ ｃｉｔｒｉ）（アジアンシトラススイリド（Ａｓｉａｎ ｃｉｔｒｕｓ ｐｓｙｌｌｉｄ））；およびバクテリセラ・コクケレリ（Ｂａｃｔｅｒｉｃｅｒａ ｃｏｃｋｅｒｅｌｌｉ）（ジャガイモスイリド（ｐｏｔａｔｏ ｐｓｙｌｌｉｄ））を含む。

【0308】

アザミウマ目の昆虫は、これらに限定されないが、トリプス・タバシ（Ｔｈｒｉｐｓ ｔａｂａｃｉ）（ジャガイモアザミウマ（ｔｈｒｉｐｓ））およびフランクリニエラ・オシデンタリス（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）（ミカンキイロアザミウマ（ｗｅｓｔｅｒｎ ｆｌｏｗｅｒ ｔｈｒｉｐｓ））を含む。

【0309】

対象とする他の昆虫は、これらに限定されないが、バッタ種（例えば、アメリカトビバッタ（Ｓｃｈｉｓｔｏｃｅｒｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ））およびコオロギ（例えば、タイワンエンマコオロギ（Ｔｅｌｅｏｇｒｙｌｌｕｓ ｔａｉｗａｎｅｍｍａ）、エンマコオロギ（Ｔｅｌｅｏｇｒｙｌｌｕｓ ｅｍｍａ））を含む。

【0310】

コナダニはクモ類（クモ綱（Ａｒａｃｈｎｉｄａ））であり、コダニおよびダニを含むアルシ（Ａｒｃｉ）亜綱の成員である。コナダニは、真の昆虫ではないが、コナダニおよび昆虫はともに節足動物門（Ａｒｔｈｒｏｐｏｄａ）の成員であるため、コナダニは、植物の昆虫害虫とともに分類される場合が多い。本明細書中で使用する場合、「昆虫」という用語は、別記されない限り、または使用の文脈から明らかでない限り、真の昆虫およびコナダニの両方を包含する。対象とするコナダニは、これらに限定されないが、ハダニ科（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｉｄａｅ）のアセリア・トシケラ（Ａｃｅｒｉａ ｔｏｓｉｃｈｅｌｌａ）キーファー（Ｋｅｉｆｅｒ）（コムギカールマイト（ｗｈｅａｔ ｃｕｒｌ ｍｉｔｅ））；パノニクス・ウルミ（Ｐａｎｏｎｙｃｈｕｓ ｕｌｍｉ）コッホ（Ｋｏｃｈ）（ヨーロピアンレッドマイト（Ｅｕｒｏｐｅａｎ ｒｅｄ ｍｉｔｅ））；ペトロビア・ラテンス（Ｐｅｔｒｏｂｉａ ｌａｔｅｎｓ）ミュラー（Ｍｕｌｌｅｒ）（ブラウンコムギマイト（ｂｒｏｗｎ ｗｈｅａｔ ｍｉｔｅ））；ステネオタルソネムス・バンクロフチ（Ｓｔｅｎｅｏｔａｒｓｏｎｅｍｕｓ ｂａｎｃｒｏｆｔｉ）マイケル（Ｍｉｃｈａｅｌ）（シュガーケインストークマイト（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｔａｌｋ ｍｉｔｅ））のハダニ（ｓｐｉｄｅｒ ｍｉｔｅ）およびアカダニ（ｒｅｄ ｍｉｔｅｓ）、オリゴニクス・グリプス（Ｏｌｉｇｏｎｙｃｈｕｓ ｇｒｙｐｕｓ）ベイカー＆プリッチャード（Ｂａｋｅｒ ＆ Ｐｒｉｔｃｈａｒｄ）、Ｏ．インディクス（Ｏ．ｉｎｄｉｃｕｓ）ハースト（Ｈｉｒｓｔ）（シュガーケインリーフマイト（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｌｅａｆ ｍｉｔｅ））、Ｏ．プラテンシス（Ｏ．ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）バンクス（Ｂａｎｋｓ）（バンクスグラスマイト（Ｂａｎｋｓ ｇｒａｓｓ ｍｉｔｅ））、Ｏ．スチックネイイ（Ｏ．ｓｔｉｃｋｎｅｙｉ）マクレガー（ＭｃＧｒｅｇｏｒ）（シュガーケインスパイダーマイト（ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｐｉｄｅｒ ｍｉｔｅ））；テトラニイクス・ウルチカエ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ ｕｒｔｉｃａｅ）コッホ（Ｋｏｃｈ）（トゥースポッテドスパイダーマイト（ｔｗｏ ｓｐｏｔｔｅｄ ｓｐｉｄｅｒ ｍｉｔｅ））；Ｔ．マクダニエリ（Ｔ．ｍｃｄａｎｉｅｌｉ）マクレガー（ＭｃＧｒｅｇｏｒ）（マクダニエルマイト（ＭｃＤａｎｉｅｌ ｍｉｔｅ））；Ｔ．シンナバリヌス（Ｔ．ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ）ボワデュヴァル（Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ）（カーミンスパイダーマイト（ｃａｒｍｉｎｅ ｓｐｉｄｅｒ ｍｉｔｅ））；Ｔ．ツルケスタニ（Ｔ．ｔｕｒｋｅｓｔａｎｉ）ウガロフ＆ニコルスキー（Ｕｇａｒｏｖ ＆ Ｎｉｋｏｌｓｋｉ）（ストロベリースパイダーマイト（ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｓｐｉｄｅｒ ｍｉｔｅ））；ヒメハダニ科（Ｔｅｎｕｉｐａｌｐｉｄａｅ）のフラットマイト（ｆｌａｔ ｍｉｔｅｓ）、ブレビパルプス・レウィシ（Ｂｒｅｖｉｐａｌｐｕｓ ｌｅｗｉｓｉ）マクレガー（ＭｃＧｒｅｇｏｒ）（シトラスフラットマイト（ｃｉｔｒｕｓ ｆｌａｔ ｍｉｔｅ））；フシダニ科（Ｅｒｉｏｐｈｙｉｄａｅ）のラストマイト（ｒｕｓｔ ｍｉｔｅｓ）およびバドマイト（ｂｕｄ ｍｉｔｅｓ）を含む。

【0311】

本発明の方法および組成物のさらなる実施形態は、本明細書中の他の箇所に記載されている。

【0312】

下記の実施例は、説明の目的で提供されるものであり、限定の目的で提供されるものではない。

【実施例】

【0313】

［実施例１］
候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーの調製
単子葉植物および双子葉植物の両方における葉面病原体に対する特性化されたＮＬＲ耐性遺伝子全てが、負荷されていない葉組織において発現されるという本発明者らの観察に基づいて、本発明者らは、対象とする植物病原体に対するＲ遺伝子を同定する目的で、草種の一群由来の負荷されていない葉組織から候補ＮＬＲ耐性遺伝子のライブラリーを調製しようと試みた。負荷されていない葉組織において発現されるかかるＮＬＲ遺伝子の公開された例として、例えば、ＣｃＲｐｐ１、Ｐｍ３ｂ、Ｒｐｇ１、Ｒｐｇ５およびＳｒ３３（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＰＮＡＳ ９９（１４）９３２８－９３３３，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．１４２２８４９９９；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００８）ＰＮＡＳ １０５（３９）：１４９７０－５，ｄｏｉ：１０．１０７３／ｐｎａｓ．０８０７２７０１０５；Ｋａｗａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２０１６ ３４（６）：６６１－６６５；米国特許第１０，８４２，０９７号；Ｙａｈｉａｏｕｉ ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｐｌａｎｔ Ｊ．３７：５２８－５３８，ｄｏｉ：１０．１０４６／ｊ．１３６５－３１３Ｘ．２００３．０１９７７．ｘ）が挙げられる。かかるＮＬＲ遺伝子の未公開の例として、ｒｐｓ２、Ｒｐｓ６、Ｒｐｓ８、Ｙｒｒ１、Ｙｒｒ２、およびＹｒｒ３に関する候補ＮＬＲ遺伝子が挙げられる。興味深いことに、本発明者らは、葉のトランスクリプトームにおいて発現されたＮＬＲの平均数は比較的低く（およそ１２５個）、有効なＮＬＲをコードするこれまでに同定されたＮＬＲ遺伝子が、負荷されていない葉組織において発現されることを発見した。さらに、葉組織において発現されるＮＬＲの上位２５％が、有効なＮＬＲに関して非常に富化されているようである。本発明者らは、この重要な明察を、遺伝子をコムギに迅速に形質転換する能力と組み合わせて、コムギにおいて１，０００種を超える多様な草ＮＬＲから構築された安定に形質転換されるライブラリーを作成した。

【0314】

これまでの研究により、遺伝子ファミリーおよび迅速な進化などの植物免疫性に寄与するＮＬＲの分子的および進化的シグネチャーが確立されている（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１３，ＰＮＡＳ １１０：１８５７２－１８５７７）。対象とするかかる特徴は、これらに限定されないが、
・ ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種内変異の存在；
・ ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種内変異の非存在；
・ ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種間変異の存在；
・ ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における種間変異の非存在；および
・ ＮＬＲによってコードされるアミノ酸配列における実質的な種内対立遺伝子変異
を含む。

【0315】

本明細書中の実施例において使用する場合、「構築物」は、エントリーベクターまたはデスティネーションベクターのいずれかにクローニングされた特異的ＮＬＲである：Ｔ１ファミリーは、単一のＴ０植物に由来する種子であり、Ｔ２ファミリーは、単一のＴ１植物に由来される種子である。

【0316】

材料および方法
植物材料および生育条件
下記草種の種子を、候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーの調製に使用した：アクナテルム・ヒメノイデス、エギロプス・ビコルニス、エギロプス・ロンギッシマ、エギロプス・セアルシイ、エギロプス・シャロネンシス、アグロピロン・クリスタツム、アベナ・アビッシニカ、ブラキポディウム・ディスタキオン、ブリザ・メディア、キノスルス・クリスタツス、エキナリア・カピタタ、ホルクス・ラナツス、ホルデウム・ブルガレ、コエレリア・マクランサ、ロリウム・ペレンネ、メリカ・シリアタ、ファラリス・コエルレスセンス、およびポア・トリビアリス。

【0317】

種子をペトリ皿上の湿った濾紙上で発芽させて、４℃で６～７日間置いて、種子の休眠を打破した。発芽した種子を、ピート＆砂：穀類ミックスの１：１混合物に移した。実生を、２０℃での明１６時間／１６℃での暗８時間下で清潔な制御環境チャンバー中で生育させた。使用した制御環境チャンバーは、害虫および疾病のない清潔な発芽室である。葉の大きさに応じて種１つ当たりの植物１つにつき第１および第２の葉を収穫し、種に応じて発芽の１２から３５日後にＲＮＡ単離に使用した。

【0318】

ＲＮＡ単離
製造業者のプロトコルに従ってトリゾール－フェノールベースのプロトコルを使用して（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ社；Ｔ９４２４）、総ＲＮＡを葉から抽出した。

【0319】

ＲＮＡｓｅｑ
Ｒａｐｉｄ Ｒｕｎモードで実行されたシングルＨｉＳｅｑ ２５００レーンのレーン１つ当たり４つの試料を用いて、Ｂａｒｃｏｄｅｄ Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＴｒｕＳｅｑ ＲＮＡ ＨＴライブラリーを構築し、プールした。１５０ｂｐペアエンドリードを使用して、シーケンシングを実施した。ペアエンドリードを、ＦａｓｔＱＣを使用して品質に関して評価し、トリミングした後、ＩＬＬＵＭＩＮＡＣＬＩＰ：２：３０：１０、ＬＥＡＤＩＮＧ：５、ＴＲＡＩＬＩＮＧ：５、ＳＬＩＤＩＮＧＷＩＮＤＯＷ：４：１５、およびＭＩＮＬＥＮ：３６で設定されたパラメーターを用いて、Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ（ｖ０．３６）を使用して構築した。これらのパラメーターを使用して、アダプター配列、不明瞭な塩基、またはリード品質の実質な低減を伴うリードを全て除去した。デフォルトパラメーターを用いてＴｒｉｎｉｔｙを使用して（バージョン２０１３－１１－１０）、デノボトランスクリプトームアセンブリーを作成した。Ｋａｌｌｉｓｔｏ（ｖ０．４３．１）を使用して、デフォルトパラメーターおよび１００個のブーストラップを使用して転写物全てに関して発現レベルを推定した。

【0320】

高度に発現されたＮＬＲの同定
ＴｒａｎｓＤｅｃｏｄｅｒ（ｖ４．１．０）ＬｏｎｇＯｒｆｓを使用して、デノボ構築されたトランスクリプトームにおいてオープンリーディングフレームを全て予測した。ＩｎｔｅｒＰｒｏＳｃａｎ（ｖ５．２７－６６．０）を使用して、ＣｏｉｌｓおよびＰｆａｍ、Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ、およびＰｒｏＳｉｔｅデータベースを使用してドメインをアノテートした。ヌクレオチド結合性ドメインおよびロイシンリッチな反復ドメインの両方を含有する任意のタンパク質を分析に進めた。ＦＡＴ－ＣＡＴから開発されたカスタムスクリプトを使用して、ＮＬＲに由来するるイネ、ブラキポディウム・ディスタキオン、およびオオムギのヌクレオチド結合性ドメインから開発した系統樹に基づいてヌクレオチド結合性ドメインを分類した。ＮＬＲコード遺伝子は、下記の要件に基づいて進めた：転写物は、完全または５’部分的オープンリーディングフレームのいずれかを含有しなくてはならない；遺伝子は、上位２５％で発現されたＮＬＲの１つでなくてはならない；遺伝子は、さらなるＮＬＲを要することが知られているＮＬＲファミリーに属さない（Ｂａｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｇｅｎｏｍｅ Ｂｉｏｌ．１９：２３，ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１８６／ｓ１３０５９－０１８－１３９２－６）。

【0321】

候補ＮＬＲの中で、冗長性は、１００％同一性を要するＣＤ－ＨＩＴ（ｖ４．７）を使用して除去した（－ｃ １．０）。それぞれ、コード配列の開始または終わりの最初の２０個のヌクレオチドに融合されたＧａｔｅｗａｙアダプターａｔｔＢ１（配列番号２７）およびａｔｔＢ２（配列番号２８）を使用して、ＰＣＲプライマーを開発した。

【0322】

［実施例２］
トランスジェニック植物における候補ＮＬＲ遺伝子の検査
ＮＬＲ同定および分子クローニング
シーケンシング、デノボＲＮＡｓｅｑアセンブリー、ＮＬＲ同定、およびＰＣＲプライマー開発は、１８個の草種由来の植物８１個の系統に関して完了させた。シーケンシングした８１個の系統のうち、アクナテルム属、エギロプス属、カモジグサ属、カラスムギ属、ヤマカモジグサ属、ブリザ属、キノスルス属、エキナリア属、シラゲガヤ属、オオムギ属、ミノボロ属、ドクムギ属、コメガヤ属、クサヨシ属、およびイチゴツナギ属における種を含む６９個の耐性系統を分子クローニングに進めた。

【0323】

クローニングされたＮＬＲの比率は、種に従って可変的であり、種それぞれにおける系統の利用可能な多様性および標的病原体に対する耐性の普及によって導かれる。ＰＣＲプライマーは、総計１，９０９個のＮＬＲに関して開発された。合計で、１，０１９個のＮＬＲをＧａｔｅｗａｙ ｐＤＯＮＲエントリーベクターにクローニングした。このセットには、対照遺伝子Ｍｌａ３（コムギいもち病）、Ｍｌａ７（コムギ黄さび病）、Ｍｌａ８（コムギ黄さび病）、およびＲｐｓ６（コムギ黄さび病）が含まれる。さらなる対照を同定および合成した：Ｓｒ３３（コムギ黒さび病）、Ｓｒ５０（コムギ黒さび病）、Ｓｒ３５（コムギ黒さび病）、Ｐｍ３（コムギうどん粉病）、Ｌｒ２１（コムギ赤さび病）、およびＹｒ１０（コムギ黄さび病）。

【0324】

エントリークローンにおけるＮＬＲは、Ｇａｔｅｗａｙ（登録商標）系のＬＲ反応によって、バイナリーベクターであるデスティネーションベクターｐＤＥＳＴ２ＢＬに移入した。得られた形質転換ベクターを、エレクトロポレーションによってアグロバクテリウム・ツメファシエンス株ＥＨＡ１０５に導入した。形質転換ベクターを保有するアグロバクテリウム属の株を使用して、第２の選択培地に移入される場合、未熟胚を３つの小片に切断するという変更を加えて、公開されている方法（Ｉｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２２３：１８９－１９８）に従って、コムギ変種Ｆｉｅｌｄｅｒを形質転換した。

【0325】

病原体アッセイ
候補ＮＬＲ遺伝子のライブラリーを、コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）、コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ）、コムギ赤さび病（プッチニア・トリチシナ）、コムギいもち病（マグナポルテ・オリゼ トリチクム）およびコムギうどん粉病（ブルメリア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）を含むコムギの多重病原体に対して検査した。実生病原体アッセイに関する実験設計は、ＮＬＲ１つにつき、少なくとも４つの異なるＴ１ファミリー由来の３つの種子を播種することを包含した。耐性の表現型を示すファミリーは、種子で保存し、Ｔ２段階で再度表現型を決定し、８つの種子を生育して、Ｔ２段階で表現型を決定した。

【0326】

スクリーニングしたＮＬＲの状態の定義は下記の通りである：確認されたＮＬＲは、耐性Ｔ１ファミリーに由来するＴ２ファミリーもしくは個体に関して、一貫した耐性または中間の表現型スコアを有する。候補ＮＬＲは、Ｔ２ファミリーにおいて表示された境界中間の表現型スコアおよび／または結論を下すには不十分なデータを有する。再スクリーニング用のＮＬＲは、これまで耐性または中間のＴ１ファミリー由来のものを含む、Ｔ２ファミリー間で示される感受性表現型を有する。これらのＴ２ファミリーは、中間の耐性を付与するＮＬＲまたは現在のプロモーター下では不十分な発現を有するＮＬＲを表し得る。

【0327】

コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）
さび病接種物は、ＵＳＤＡ－ＡＲＳ Ｃｅｒｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａで使用される標準的なプロトコールに従って作製した（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓ．１０２（６）：１１２４－１１３５，ｄｏｉ：１０．１０９４／ＰＤＩＳ－０６－１７－０８８０－ＲＥ）。接種の前日に、さび病原体の夏胞子（ｕｒｅｄｉｎｉｏｓｐｏｒｅ）を－８０℃の冷凍庫から取り出して、４５℃の水浴中で１５分間熱ショックを与えた後、８０％相対湿度チャンバー中で一晩再水和した。発芽速度を評価した（Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．２０１４）後、夏胞子１０ｍｇを個々のゼラチンカプセル（サイズ００）に入れて、そこに、油担体７００ｍｌを添加した。２５から３０ｋＰａに設定したポンプによって加圧された通例の噴霧器（Ｔａｌｌｇｒａｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．社、マンハッタン、ＫＳ）を使用して、接種材料懸濁液を１２日齢の植物（第２の葉が完全に拡がっている）に塗布した。植物１つにつき、夏胞子およそ０．１５ｍｇを塗布した。接種の直後、植物を、小さな扇風機の前に３から５分間置いて、葉の表面から油担体の蒸発を早めた。植物をさらに９０分間ガス抜した後、それらをミストチャンバーの内側に入れた。ミストチャンバーの内側で、超音波加湿器（ＶｉｃｋモデルＶ５１００ＮＳＪＵＶ；Ｐｒｏｃｔｏｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏ．社、シンシナティ，ＯＨ）を３０分間、連続的に実行して、夏胞子の発芽に十分な、植物に対する初期水分を供給した。次の１６から２０時間、植物を暗所に保持して、加湿器を、１５分毎に２分間実行させて、植物の水分を維持した。黒さび病病原体を用いた実験に関して、光（１秒当たり３００ｍｍｏｌ／ｍ^２個の光子を放出する４００Ｗ高圧ナトリウムランプ）を、暗所期間後２から４時間供給した。続いて、チャンバーのドアを不完全に開いて、葉の表面を完全に乾燥させた後、上述の同じ条件下で植物を温室に戻した（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓ．１０２（６）：１１２４－１１３５，ｄｏｉ：１０．１０９４／ＰＤＩＳ－０６－１７－０８８０－ＲＥ）。

【0328】

さび病の表現型決定実験は全て、完全に無作為化された設計で行われ、経時的に少なくとも１回繰り返した。実験間で可変的な反応を示す系統は、十分な種子が利用可能であった場合にはさらなる実験で繰り返した。系統に対する黒さび病ＩＴを、０から４スケールを使用して接種の１２日後にスコア付けした（Ｒｏｅｌｆｓ ａｎｄ Ｍａｒｔｅｎｓ （１９９８）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．７８：５２６－５３３；Ｓｔａｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９６２）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒａｃｅｓ ｏｆ Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｖａｒ．ｔｒｉｔｉｃｉ，”Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｅ６１７．ＵＳＤＡ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，１９６２）。

【0329】

ＮＬＲ Ｄｋ＿０４＿４０は、Ｔ１で明確な耐性応答を示し、２つの異なるＴ１ファミリー由来の個体は全て、スタックマンスケールで０を示した。

【0330】

【表1】

【0331】

コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ）
コムギ植物を、１６時間の日長１８／１１Ｃにて生育させた。接種に関して、回転式接種器を使用して胞子およびタルクミックス１：１６の比で、第１の葉段階でコムギ植物に接種した。ＭｃＮｅａｌ表現型スケールを使用して、接種の１０日後に、植物を表現型決定した（Ｒｏｅｌｆｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２）。耐性個体は、ＭｃＮｅａｌスコア４またはそれ未満で分類された。中間個体は、ＭｃＮｅａｌスコア５から７で分類されたか、または葉上に感受性対照と明らかに識別される葉の胞子形成の低減または耐性のセクターのいずれかを含んでいた（メソテティック（ｍｅｓｏｔｈｅｔｉｃ）応答）。表現型決定をしやすくするために、数回のＴ２スクリーニングを、耐性（Ｒ）、中間（Ｉ）、または感受性（Ｓ）の全体的なスコアを用いて表現型決定し、上記ＭｃＮｅａｌスコアを示した。

【0332】

確認されたＮＬＲは、３種由来の６個の系統から得られ、ネイティブ発現は、０．６６から５．２４の１００個当たりの転写物（ｔｐｍ）の範囲である。確認されたＮＬＲは、Ｄｋ＿０１＿０３、Ｄｋ＿０１＿０４、Ｄｋ＿０１＿０６、Ｄｋ＿０１＿３１、Ｄｋ＿０１＿３３、Ｄｋ＿０１＿３４、Ｄｋ＿０１＿９２、Ｄｋ＿０２＿２７、Ｄｋ＿０２＿２８、Ｄｋ＿０２＿４９、Ｄｋ＿０３＿７６である。

【0333】

【表2】

【0334】

【表3】

【0335】

コムギ赤さび病（プッチニア・トリチシナ）
コムギ植物を、１６時間の日長１８／１１Ｃにて生育させた。接種に関して、回転式接種器を使用して胞子およびタルクミックス１：１６の比で、第１の葉段階でコムギ植物に接種した。単離株は全て、液体窒素中で－８０℃にて、または４℃にて真空チューブ中で夏胞子として保管された。植物はコムギ赤さび病（プッチニア・トリチシナ）単離株１３／３４を用いてスクリーニングし、赤さび病に使用される標準的な表現型スケールでスコア付けし、ここで、０は、夏胞子堆が存在しない免疫またはほぼ免疫表現型を示す。１から２の表現型スコアは耐性を示し、Ｘ、Ｙ、およびＺは、様々な異種応答を示し、３から４は、感受性応答を示す（Ｒｏｅｌｆｓ，１９８４，“Ｒａｃｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｓｔｕｄｙ，”ＡＰ．Ｒｏｅｌｆｓ ａｎｄ Ｗ．Ｒ．Ｂｕｓｈｎｅｌｌ，ｅｄｓ． Ｔｈｅ Ｃｅｒｅａｌ Ｒｕｓｔｓ Ｖｏｌ． Ｉ；Ｏｒｉｇｉｎｓ，Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ｐｐ．１３１－１６４）。

【0336】

ＮＬＲ Ｄｋ＿０１＿１９は、Ｔ１で明らかな耐性応答を示し、導入遺伝子は、コムギ赤さび病にに対して機能的であることを示した。４つのＴ１ファミリー由来の個体は全て、しわの寄った先端を有する制御された細胞死の耐性応答を示し、壊死に取り囲まれた小さな夏胞子堆を示した。

【0337】

【表4】

【0338】

［実施例３］
双子葉植物由来の高度に発現されたＮＬＲの亜集団における卵菌、ネクロトロフ植物病原体、線虫、昆虫、およびウイルスに対する耐性を付与する既知のＮＬＲ遺伝子の同定
高度に発現されたＮＬＲの亜群は、双子葉植物の実生トランスクリプトームにおいて発現されるＮＬＲの群内で機能性Ｒ遺伝子に関して飽和状態にされている（図１２～図１４）。シロイヌナズナ系統コロンビア－０（Ｃｏｌ－０）における観察を拡げるために、葉枯れ病（ヒアロペロノスポラ・アラビドプシディス）に対する既知の耐性遺伝子ＲＰＰ１、ＲＰＰ５、ＲＰＰ７、およびＲＰＰ８、ならびに白さび病（アルブゴ・カンディダ）に対するＷＲＲ４、ＷＲＲ８、およびＷＲＲ９の対立遺伝子もまた、さらなる系統ランドスベルグ・エレクタ（Ｌａｎｄｓｂｅｒｇ ｅｒｅｃｔａ）（Ｌｅｒ－０）、サン・フェリウ（Ｓａｎ Ｆｅｌｉｕ）（Ｓｆ－２）、およびワッシレウスキジャ（Ｗａｓｓｉｌｅｗｓｋｉｊａ）（Ｗｓ－０）の実生で発現されるＮＬＲの上位２５％に存在する。系統Ｓｆ－２およびＷｓ－０において最も高度に発現されたＮＬＲは、ネクロトロフ病原体灰色かび病（ボトリチス・シネレア）、キャベツの黒斑病（ｄａｒｋ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ）（アルタナリア・ブラッシシコラ）およびアブラナ科植物の黒斑（ｄａｒｋ ｓｐｏｔ）（アルタナリア・ブラッシカエ）に対して耐性を付与するＲＬＭ３の対立遺伝子である。アソシエーションゲノミクスおよびロングリードシーケンシングを介して同定された特性化されたＮＬＲが、栽培された植物種の野生近縁種から上記判断基準を使用して同定され得ることをさらに決定するために、本発明者らは、アメリカイヌホオズキ由来のＲｐｉ－ａｍｒ１ｅを研究した（Ｗｉｔｅｋ ｅｔ ａｌ．，２０２１，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｌａｎｔｓ ２０２１ ７：１９８－２０８）。実際に、Ｒｐｉ－ａｍｒ１ｅは、高度に発現されたＮＬＲの上位２５％に存在することが決定された（図１５）。組織型間で機能性ＮＬＲの高い発現を確認するために、本発明者らは、根こぶ線虫（ネコブ線虫ｓｐｐ．）、ジャガイモアフィド（マクロシフム・ユーフォルビアエ）、およびサツマイモコナジラミ（ベミシア・タバシ）に耐性を付与するソラヌム・リコペルシクム由来のＭｉ－１．２を研究した。Ｍｉ－１．２は、葉において高度に発現されたＮＬＲの上位１０％に（図１６および図１８）、また根において高度に発現されたＮＬＲの上位１２％に（図１７および図１９）存在する。さらに、トマトモザイクウイルスおよびタバコモザイクウイルスを含むトバモウイルスに対するＴｍ－２耐性遺伝子は、Ｓ．リコペルシクム（Ｓ．ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）栽培品種ＶＦＮＴ Ｃｈｅｒｒｙの葉において発現されたＮＬＲの上位１７％に、および根組織において発現されたＮＬＲの上位１０％に存在する（図１８および図１９）。これらの結果により、候補耐性（Ｒ）遺伝子のライブラリーを調製する本発明の方法を用いて、例えば真菌、細菌、卵菌、線虫、ウイルス、昆虫、およびダニなどの多種多様な植物害虫に対する、有効なＲ遺伝子、特にＮＬＲに関して高度に富化されている候補Ｒ遺伝子のライブラリーを作成することができ、かかるライブラリーは、葉だけでなく、例えば根を含む他の植物器官または植物の一部からも調製することができることが実証される。

【0339】

［実施例４］
トランスジェニック植物における候補ＮＬＲ遺伝子の検査
コムギ黒さび病（プッチニア・グラミニスｆ．ｓｐ．トリチシ）
さび病接種物は、ＵＳＤＡ－ＡＲＳ Ｃｅｒｅａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｎｎｅｓｏｔａで使用される標準的なプロトコールに従って作製した（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓ．１０２（６）：１１２４－１１３５，ｄｏｉ：１０．１０９４／ＰＤＩＳ－０６－１７－０８８０－ＲＥ）。接種の前日に、さび病原体の夏胞子を－８０℃の冷凍庫から取り出して、４５℃の水浴中で１５分間熱ショックを与えた後、８０％相対湿度チャンバー中で一晩再水和した。発芽速度を評価した（Ｓｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．２０１４）後、夏胞子１０ｍｇを個々のゼラチンカプセル（サイズ００）に入れて、そこに、油担体７００ｍｌを添加した。２５から３０ｋＰａに設定したポンプによって加圧された通例の噴霧器（Ｔａｌｌｇｒａｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．社、マンハッタン、ＫＳ）を使用して、接種材料懸濁液を１２日齢の植物（第２の葉が完全に拡がっている）に塗布した。植物１つにつき、夏胞子およそ０．１５ｍｇを塗布した。接種の直後、植物を、小さな扇風機の前に３から５分間置いて、葉の表面から油担体の蒸発を早めた。植物をさらに９０分間ガス抜きした後、それらをミストチャンバーの内側に入れた。ミストチャンバーの内側で、超音波加湿器（ＶｉｃｋモデルＶ５１００ＮＳＪＵＶ；Ｐｒｏｃｔｏｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ Ｃｏ．社、シンシナティ，ＯＨ）を３０分間、連続的に実行して、夏胞子の発芽に十分な、植物に対する初期水分を供給した。次の１６から２０時間、植物を暗所に保持して、加湿器を、１５分毎に２分間実行させて、植物の水分を維持した。黒さび病病原体を用いた実験に関して、光（１秒当たり３００ｍｍｏｌ／ｍ^２個の光子を放出する４００Ｗ高圧ナトリウムランプ）を、暗所期間後２から４時間供給した。続いて、チャンバーのドアを不完全に開いて、葉の表面を完全に乾燥させた後、上述の同じ条件下で植物を温室に戻した（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓ．１０２（６）：１１２４－１１３５，ｄｏｉ：１０．１０９４／ＰＤＩＳ－０６－１７－０８８０－ＲＥ）。

【0340】

さび病の表現型決定実験は全て、完全に無作為化された設計で行われた。実験間で可変的な反応を示す系統は、十分な種子が利用可能であった場合にはさらなる実験で繰り返した。系統に対する黒さび病ＩＴを、０から４スケールを使用して接種の１２日後にスコア付けした（Ｒｏｅｌｆｓ ａｎｄ Ｍａｒｔｅｎｓ （１９９８）Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌ．７８：５２６－５３３；Ｓｔａｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９６２）“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒａｃｅｓ ｏｆ Ｐｕｃｃｉｎｉａ ｇｒａｍｉｎｉｓ ｖａｒ．ｔｒｉｔｉｃｉ，”Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｅ６１７．ＵＳＤＡ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，１９６２）。ＩＴは、耐性（Ｒ）、感受性（Ｓ）、または耐性がＴ１ファミリー内で分離している分離型（ｓｅｇ）と称した表現型としてまとめられる。分離型ファミリーの表現型は、個々の植物の表現型として示された。植物は、品種ＱＴＨＪＣを用いて表現型決定し、耐性構築物は、品種ＴＴＫＳＫを用いてさらに表現型決定した。ＴＴＫＳＫを接種してなかったＴ１ファミリーは、「－」で示した。

【0341】

確認されたＮＬＲは、８種由来の１４個の系統から得られる。確認されたＮＬＲは、Ｄｋ＿０１＿２１、Ｄｋ＿０１＿４８、Ｄｋ＿０３＿１５、Ｄｋ＿０３＿４９、Ｄｋ＿０３＿６８、Ｄｋ＿０４＿４０、Ｄｋ＿０４＿６７、Ｄｋ＿０４＿７１、Ｄｋ＿０４＿９１、Ｄｋ＿０５＿７５、Ｄｋ＿０５＿９２、Ｄｋ＿０６＿０２、Ｄｋ＿０６＿０３、Ｄｋ＿０６＿１０、Ｄｋ＿０６＿３６、Ｄｋ＿０６＿５２、Ｄｋ＿０８＿１６、Ｄｋ＿０８＿７９、Ｄｋ＿０９＿５５である。

【0342】

【表5】

【0343】

【表6】

【0344】

コムギ黄さび病（プッチニア・ストリイフォルミスｆ．ｓｐ．トリチシ）
コムギ植物を、１６時間の日長１８／１１Ｃにて生育させた。接種に関して、回転式接種器を使用して胞子およびタルクミックス１：１６の比で、第１の葉段階でコムギ植物に接種した。ＭｃＮｅａｌ表現型スケールを使用して、接種の１０日後に、植物を表現型決定した（Ｒｏｅｌｆｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２）。耐性個体は、ＭｃＮｅａｌスコア４またはそれ未満で分類した。中間個体は、ＭｃＮｅａｌスコア５から７で分類されたか、または葉上に感受性対照と明らかに識別される葉の胞子形成の低減または耐性のセクターのいずれかを含んでいた（メソテティック応答）。表現型決定をしやすくするために、数回のＴ２スクリーニングを、耐性（Ｒ）、中間（Ｉ）、または感受性（Ｓ）の全体的なスコアを用いて表現型決定し、上記ＭｃＮｅａｌスコアを示した。各エントリーは、次の世代のＴ２ファミリーとしてスコア付けられたＴ１ファミリーに由来する個々の植物を示す。一部のＴ１ファミリーは、Ｔ１ファミリーに関してプールされた表現型としてスコア付けされ、分離型表現型として示された。各植物に関する個々のＭｃＮｅａｌスコアが保存されなかった場合、これは、「－」で示される。

【0345】

確認されたＮＬＲは、９種由来の１８個の系統から得られる。確認されたＮＬＲは、Ｄｋ＿０１＿３５、Ｄｋ＿０１＿５５、Ｄｋ＿０１＿５７、Ｄｋ＿０１＿５９、Ｄｋ＿０１＿６０、Ｄｋ＿０１＿６１、Ｄｋ＿０１＿６２、Ｄｋ＿０１＿６４、Ｄｋ＿０１＿６８、Ｄｋ＿０２＿０２、Ｄｋ＿０２＿０３、Ｄｋ＿０２＿０６、Ｄｋ＿０２＿０７、Ｄｋ＿０２＿０８、Ｄｋ＿０２＿１１、Ｄｋ＿０２＿１３、Ｄｋ＿０２＿１４、Ｄｋ＿０２＿１９、Ｄｋ＿０２＿２０、Ｄｋ＿０２＿２５、Ｄｋ＿０２＿３４、Ｄｋ＿０２＿３５、Ｄｋ＿０２＿３６、Ｄｋ＿０２＿３８、Ｄｋ＿０２＿３９、Ｄｋ＿０２＿４２、Ｄｋ＿０２＿４４、Ｄｋ＿０２＿４６、Ｄｋ＿０３＿１３、Ｄｋ＿０３＿１６、Ｄｋ＿０３＿１９、Ｄｋ＿０３＿４８、Ｄｋ＿０３＿５８、Ｄｋ＿０３＿６０、Ｄｋ＿０４＿３４、Ｄｋ＿０４＿４４、Ｄｋ＿０４＿８５、Ｄｋ＿０４＿８８、Ｄｋ＿０４＿９２、Ｄｋ＿０４＿９５、Ｄｋ＿０４＿９６、Ｄｋ＿０５＿１１、Ｄｋ＿０５＿１４、Ｄｋ＿０５＿１５、Ｄｋ＿０５＿１６、Ｄｋ＿０５＿２４、Ｄｋ＿０５＿２９、Ｄｋ＿０５＿３０、Ｄｋ＿０５＿３３、Ｄｋ＿０５＿３４、Ｄｋ＿０５＿３５、Ｄｋ＿０５＿３８、Ｄｋ＿０５＿４２、Ｄｋ＿０５＿４４、Ｄｋ＿０５＿４７、Ｄｋ＿０５＿５３、Ｄｋ＿０５＿５６、Ｄｋ＿０６＿０１、Ｄｋ＿０６＿０３、Ｄｋ＿０６＿０４、Ｄｋ＿０６＿０５、Ｄｋ＿０６＿０６、Ｄｋ＿０６＿５２、Ｄｋ＿０６＿５３である。

【0346】

【表7】

【0347】

【表8】

【0348】

冠詞「ａ」および「ａｎ」は、冠詞の文法上の対象格の１つまたは１つよりも多いこと（即ち、少なくとも１つ）を指すのに本明細書中で使用される。例として、「エレメント」は、１つまたは複数のエレメントを意味する。

【0349】

明細書全体にわたって、「を含む」という語句または「を含む（単数）」もしくは「を含んでいる」などの変化形は、明記されるエレメント、整数もしくは工程、またはエレメント、整数もしくは工程の群を包含することを含蓄するが、任意の他のエレメント、整数もしくは工程、またはエレメント、整数もしくは工程の群の排除を含蓄しないと理解されよう。

【0350】

明細書中で言及される刊行物および特許出願は全て、本発明が関連する当業者の水準を示している。刊行物および特許出願は全て、各々の刊行物または特許出願が、具体的にかつ個別に引用することにより本明細書の一部をなすものとするのと同程度に、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。

【0351】

理解を明瞭にする目的で、説明および実施例を用いて、上述の本発明を幾らか詳細に記載してきたが、ある特定の変更および修正が併記の特許請求の範囲内で実施されてもよいことは明白である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

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【国際調査報告】