特表2024-519013 | 知財ポータル「IP Force」

知財求人 - 知財ポータルサイト「IP Force」

▶ ２ピーアイ－シグマコーポレーションの特許一覧

特表2024-519013標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体を使用したサンドイッチイムノアッセイデバイス

書誌要約請求の範囲詳細な説明課題実施例実施するための形態図面の説明

目に優しい文字サイズ小中大 PDF Top

< >

1A
1B
1C
1D
2
3A
3B
3C
3D
3E
3F
4A
4B
4C
4D
5A
5B
5C
5D
6A
6B
6C
6D
6E
6F
7A
7B
7C
7D
8A
8B
8C
8D
8E
8F
8G
8H
8I
9A
9B
9C
9D
9E
9F
9G
9H
9I

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-08

(54)【発明の名称】標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体を使用したサンドイッチイムノアッセイデバイス

(51)【国際特許分類】

G01N 33/543 20060101AFI20240426BHJP

G01N 33/53 20060101ALI20240426BHJP

G01N 33/574 20060101ALI20240426BHJP

【ＦＩ】

G01N33/543 521

G01N33/53 D

G01N33/574 A

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023571129

(86)(22)【出願日】2022-05-18

(85)【翻訳文提出日】2023-12-27

(86)【国際出願番号】 US2022029898

(87)【国際公開番号】W WO2022245990

(87)【国際公開日】2022-11-24

(31)【優先権主張番号】17/747,854

(32)【優先日】2022-05-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/189,682

(32)【優先日】2021-05-18

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523430906

【氏名又は名称】２ピーアイ－シグマコーポレーション

【氏名又は名称原語表記】２ＰＩ－ＳＩＧＭＡＣＯＲＰ．

(74)【代理人】

【識別番号】110000659

【氏名又は名称】弁理士法人広江アソシエイツ特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】ハタミアン，メディ

(57)【要約】

ラテラルフローアッセイデバイスは、一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつエキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出するための試験ストリップを備える。試験ストリップは、標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含むコンジュゲートパッドを含む。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されている。コンジュゲートパッドは、膜に流体的に接続されている。膜は、標的分析物に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含む。標的分析物に対する固定化された結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の標的分析物のタンパク質に結合するように構成されている。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

ラテラルフローアッセイデバイスであって、
一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつ前記エキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出するように構成された、試験ストリップを備え、
前記試験ストリップが、
コンジュゲートパッドであって、
前記コンジュゲートパッドが、標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含有するように構成されており、各タイプのテトラスパニン結合試薬が、対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されており、
前記コンジュゲートパッドが、試験の開始後に前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されている、コンジュゲートパッドと、
前記コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜であって、
前記膜が、毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されており、
前記膜が、前記標的分析物に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含み、前記標的分析物に対する前記固定化された結合試薬が、前記エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの前記表面上の前記標的分析物のタンパク質に結合するように構成されている、膜と、を備える、ラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項2】

前記試験ラインが、第１の試験ラインであり、前記膜が、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む第２の試験ラインを更に含み、前記第１のタイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記第１のタイプのタンパク質に対する前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体中の前記エキソソームの前記表面上の前記第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項3】

前記標的分析物に対する前記結合試薬が、前記標的分析物の抗体であり、各タイプのテトラスパニン結合試薬が、あるタイプのテトラスパニン抗体であり、前記第１のタイプのタンパク質に対する前記結合試薬が、前記第１のタイプのタンパク質に対する抗体である、請求項２に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項4】

前記試験ラインが、第１の試験ラインであり、前記膜が、前記第１の試験ライン以外の複数の試験ラインを更に含み、前記複数の試験ラインの各試験ラインが、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含み、前記複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記複数の試験ラインの各試験ライン上の前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体の前記エキソソームの前記表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項5】

前記試験ストリップが、第１の試験ストリップであり、前記ラテラルフローアッセイデバイスが、第２の試験ストリップを更に備え、前記第２の試験ストリップが、
コンジュゲートパッドであって、
前記第２の試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン抗体のセットを含有するように構成されており、
前記第２の試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記試験の前記開始後に前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されている、コンジュゲートパッドと、
前記第２の試験ストリップの前記コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜であって、
前記第２の試験ストリップの前記膜が、毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されており、
前記第２の試験ストリップの前記膜が、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含み、前記第１のタイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記第１のタイプのタンパク質に対する前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体中の前記エキソソームの前記表面上の前記第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている、膜と、を備える、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項6】

前記試験ストリップが、第１の試験ストリップであり、前記ラテラルフローアッセイデバイスが、前記第１の試験ストリップ以外の複数の試験ストリップを更に備え、前記複数の試験ストリップの各試験ストリップが、
コンジュゲートパッドであって、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン抗体のセットを含有するように構成されており、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記試験の前記開始後に前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されている、コンジュゲートパッドと、
対応する試験ストリップの前記コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜であって、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記膜が、毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されており、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記膜が、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含み、前記複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記試験ライン上の前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体中の前記エキソソームの前記表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている、膜と、を備える、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項7】

前記膜が、前記コンジュゲートパッドが含有する前記テトラスパニン結合試薬のクラスに対する固定化された結合試薬を含む対照ラインを含む、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項8】

前記標識が、コロイド金を含む金属ゾル、色素ゾル、着色ラテックス粒子、炭素、蛍光粒子、及びユウロピウム標識のうちの少なくとも１つを含む検出物質である、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項9】

ウィッキングパッドであって、前記膜から前記ウィッキングパッドへの毛細管流を維持するように構成された、ウィッキングパッドと、
試料パッドであって、前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって試料流体を前記コンジュゲートパッドに移送するように構成された、試料パッドと、を更に備える、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項10】

前記流体を受容し、前記流体を前記コンジュゲートパッド及び前記ラテラルフローアッセイデバイスの試料パッドのうちの１つに移送するように構成されたプラズマフィルターを更に備える、請求項１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項11】

ラテラルフローアッセイデバイスであって、
一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつ前記エキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出するように構成された、試験ストリップを備え、
前記試験ストリップが、
コンジュゲートパッドであって、
前記コンジュゲートパッドが、標識とコンジュゲートされた前記標的分析物に対する結合試薬を含有するように構成されており、前記標的分析物に対する前記結合試薬が、エキソソームの前記表面上の前記標的分析物のタンパク質に結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されており、
前記コンジュゲートパッドが、試験の開始後に前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されている、コンジュゲートパッドと、
前記コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜であって、
前記膜が、毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されており、
前記膜が、前記試験ライン上に固定化された１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含む試験ラインを含み、各タイプのテトラスパニン結合試薬が、前記エキソソームを含む免疫複合体中の対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合するように構成されている、膜と、を備える、ラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項12】

前記試験ラインが、第１の試験ラインであり、前記膜が、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む第２の試験ラインを更に含み、前記第１のタイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記第１のタイプのタンパク質に対する前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体中の前記エキソソームの前記表面上の前記第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項13】

前記標的分析物に対する前記結合試薬が、前記標的分析物の抗体であり、各タイプのテトラスパニン結合試薬が、あるタイプのテトラスパニン抗体であり、前記第１のタイプのタンパク質に対する前記結合試薬が、前記第１のタイプのタンパク質に対する抗体である、請求項１２に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項14】

前記試験ラインが、第１の試験ラインであり、前記膜が、前記第１の試験ライン以外の複数の試験ラインを更に含み、前記複数の試験ラインの各試験ラインが、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含み、前記複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記複数の試験ラインの各試験ライン上の前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体の前記エキソソームの前記表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項15】

前記試験ストリップが、第１の試験ストリップであり、前記ラテラルフローアッセイデバイスが、第２の試験ストリップを更に備え、前記第２の試験ストリップが、
コンジュゲートパッドであって、
前記第２の試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記標識とコンジュゲートされた前記標的分析物に対する前記結合試薬を含有するように構成されており、
前記第２の試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記試験の前記開始後に前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されている、コンジュゲートパッドと、
前記第２の試験ストリップの前記コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜であって、
前記第２の試験ストリップの前記膜が、毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されており、
前記第２の試験ストリップの前記膜が、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含み、前記第１のタイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記第１のタイプのタンパク質に対する前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体中の前記エキソソームの前記表面上の前記第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている、膜と、を備える、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項16】

前記試験ストリップが、第１の試験ストリップであり、前記ラテラルフローアッセイデバイスが、前記第１の試験ストリップ以外の複数の試験ストリップを更に備え、前記複数の試験ストリップの各試験ストリップが、
コンジュゲートパッドであって、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記標識とコンジュゲートされた前記標的分析物に対する前記結合試薬を含有するように構成されており、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記コンジュゲートパッドが、前記試験の前記開始後に前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されている、コンジュゲートパッドと、
対応する試験ストリップの前記コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜であって、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記膜が、毛細管作用によって前記流体を移動させるように構成されており、
前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記膜が、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含み、前記複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質が、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、前記複数の試験ストリップの各試験ストリップの前記試験ライン上の前記結合試薬が、エキソソームを含む前記免疫複合体中の前記エキソソームの前記表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている、膜と、を備える、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項17】

前記膜が、前記コンジュゲートパッドが含有する前記標的分析物に対する前記結合試薬のクラスに対する固定化された結合試薬を含む対照ラインを含む、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項18】

前記標識が、コロイド金を含む金属ゾル、色素ゾル、着色ラテックス粒子、炭素、蛍光粒子、及びユウロピウム標識のうちの少なくとも１つを含む検出物質である、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項19】

ウィッキングパッドであって、前記膜から前記ウィッキングパッドへの毛細管流を維持するように構成された、ウィッキングパッドと、
試料パッドであって、前記流体を受容し、かつ毛細管作用によって試料流体を前記コンジュゲートパッドに移送するように構成された、試料パッドと、を更に備える、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【請求項20】

前記流体を受容し、前記流体を前記コンジュゲートパッド及び前記ラテラルフローアッセイデバイスの試料パッドのうちの１つに移送するように構成されたプラズマフィルターを更に備える、請求項１１に記載のラテラルフローアッセイデバイス。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

先行出願に対する利益の請求
本出願は、２０２１年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６３／１８９，６８２号の利益を主張する。米国仮特許出願第６３／１８９，６８２号の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0002】

イムノアッセイデバイスは、試料流体中の標的分析物の存在（又は不在）を検出する試験を行うために使用されるデバイスである。イムノアッセイデバイスには、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）デバイス、ラテラルフローアッセイ（ＬＦＡ）デバイスなどが含まれる。イムノアッセイデバイスは、異なる形式を有し得る。サンドイッチ形式のイムノアッセイデバイスは、２セットの抗体を使用して、標的分析物を捕捉及び検出する。競合形式のイムノアッセイデバイスは、２つの抗体に同時に結合することができない分析物を検出するために使用され得る。

【0003】

サンドイッチ形式のＥＬＩＳＡデバイスは、ウェルのグループ、例えば、９６ウェル、３８４ウェル、１５３６ウェルなどを有するマイクロプレートを含む。捕捉抗体は、マイクロプレートのウェルの底部に結合し、標的分析物の１つのエピトープ（存在する場合）に結合する。次いで、検出抗体は、異なるエピトープで標的分析物に結合し、検出を可能にする酵素にコンジュゲートされる。検出抗体上の酵素は、基質と相互作用して色の変化を生じ得る。

【0004】

ＬＦＡ（ラテラルフローイムノクロマトアッセイ又はラテラルフローディップスティックイムノアッセイとも称される）デバイスは、典型的には、流体を輸送するための一連のキャピラリーパッドを含む。従来技術のサンドイッチ形式のＬＦＡデバイスは、少なくとも２つの異なる抗体に結合することができる分析物を検出するために使用される。従来技術のサンドイッチ形式のＬＦＡデバイスでは、試料パッドを使用して、標的分析物を含み得る一定量の流体（試料流体と称される）を受容することができる。次いで、試料流体は、毛細管作用によって隣接するコンジュゲートパッドに輸送される。コンジュゲートパッドは、コロイド状の金ナノ粒子などの検出物質（ｄｅｔｅｃｔｏｒ）で標識された可溶化抗体を含み得る。抗体は、試料流体における目的の標的分析物に特異的である。試料流体がコンジュゲートパッドを通って流れると、試料流体中の分析物（存在する場合）が、コンジュゲートパッド上の標識抗体と結合し、免疫複合体を形成する。

【0005】

次いで、免疫複合体は、コンジュゲートパッドから隣接する膜（又は膜パッド）に流れる。膜は、固定化された非標識抗体を含有する試験領域又は試験ラインを有する。免疫複合体が試験領域上を移動すると、免疫複合体は試験領域上で固定化された抗体と結合し、着色した試験ラインをもたらす。試料流体が標的分析物を含まない場合、免疫複合体は、コンジュゲートパッド上に形成されず、免疫複合体は、試験領域上の固定化された抗体と結合しない。その結果、試験ラインの色が変わることはない。

【0006】

ＬＦＡデバイスは、膜上に対照ラインを含んでいてもよい。サンドイッチアッセイ形式では、対照ラインは、標的分析物が試料中に存在していたかどうかにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ラインをもたらす検出物質で標識された遊離抗体に結合する固定化された抗体を含んでいてもよい。

【0007】

競合形式ＥＬＩＳＡデバイスでは、参照標的分析物は、マイクロプレートウェルの底部に結合される。次いで、試料及び抗体をウェルに添加し、試料中に標的分析物が存在する場合、それは、抗体への結合に対して参照標的分析物と競合する。次いで、結合していない材料が洗い流される。試料中の標的分析物が多いほど、参照標的分析物によってウェルの底部に結合される抗体が少なくなり、シグナルが低くなる。

【0008】

競合形式ＬＦＡデバイスの試料パッド及びコンジュゲートパッドは、サンドイッチ形式ＬＦＡデバイスの試料パッド及びコンジュゲートパッドに類似している。競合アッセイ形式では、試験ラインは、固定化された分析物分子を含有する。試料液体に分析物が含まれていない場合、標識抗体は、コンジュゲートパッドから試験ラインに流れ込み、試験ラインで分析物に結合し、試料液体中に標的分析物が欠如していることを示す着色した試験ラインをもたらす。一方、標的分析物が試料液体中に存在する場合、分析物は、コンジュゲートパッド上の標識抗体に結合し、標識抗体が試験ラインで分析物に結合するのを防止し、試験ライン上の色の欠如をもたらす。競合アッセイ形式では、対照ラインは、標的分析物が試料中に存在していたかどうかにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ラインをもたらす検出物質で標識された遊離抗体に結合する固定化された分析物を含んでいてもよい。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0009】

ここで、有利な特徴を強調することに重点を置いて、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体を使用する本サンドイッチイムノアッセイデバイスの様々な実施形態を詳細に説明する。これらの実施形態は、添付の図面に示される標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体を使用する新規かつ非自明なサンドイッチイムノアッセイデバイスを示しており、これは例示のみを目的としている。これらの図面は、以下の図を含み、これらの図において、同じ数字は同じ部品を示している。

【図面の簡単な説明】

【0010】

【図1A】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、標的分析物に特異的な抗体を捕捉抗体として使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図1B】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、標的分析物に特異的な抗体を捕捉抗体として使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図1C】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、標的分析物に特異的な抗体を捕捉抗体として使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図1D】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、標的分析物に特異的な抗体を捕捉抗体として使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図2】従来技術による特定の腫瘍に特異的であるエキソソームタンパク質の例を示す。

【図3A】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図3B】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図3C】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図3D】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図3E】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図3F】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図4A】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数のストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図4B】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数のストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図4C】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数のストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図4D】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数のストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図5A】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、標的分析物を捕捉抗体として含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図5B】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、標的分析物を捕捉抗体として含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図5C】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、標的分析物を捕捉抗体として含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図5D】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、標的分析物を捕捉抗体として含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を使用する、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図6A】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図6B】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図6C】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図6D】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図6E】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図6F】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図7A】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数の試験ストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図7B】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数の試験ストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図7C】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数の試験ストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図7D】本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数の試験ストリップを含む、ＬＦＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8A】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8B】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8C】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8D】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8E】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8F】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8G】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8H】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図8I】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9A】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9B】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9C】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9D】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9E】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9F】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9G】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9H】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【図9I】本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体及び標的分析物に特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス及び方法を例示する機能図である。

【発明を実施するための形態】

【0011】

本実施形態の一態様は、サンドイッチ形式イムノアッセイが、抗体が標的分析物にかなりの程度結合し、他の分子には結合しないように、標的分析物に特異的である２つの抗体を必要とするという認識を含む。さもなければ、他の分子も抗体に結合し、誤差の原因となり得る。ただし、いくつかの標的分析物については、１つの特異的抗体のみがあり得る。これらの標的分析物の存在（又は不在）を検出するための１つの技術は、競合形式アッセイデバイスを使用することである。しかしながら、競合形式アッセイデバイスは、サンドイッチ形式アッセイデバイスほど正確ではない。競合形式アッセイデバイスの別の欠点は、（ＥＬＩＳＡデバイスのための）プレートの底部で参照標的分析物としてそれを使用し、（ＬＦＡデバイスのための）試験ラインでそれを使用するために、物理的標的分析物材料自体が必要であることである。

【0012】

本実施形態のいくつかは、抗体を使用して試料液体中のエキソソームを捕捉することによって、前述の問題を解決する。エキソソームは、細胞から放出される細胞外小胞である。エキソソームは、宿主細胞に応じて異なるタンパク質を含有し得る。最も一般的なエキソソームマーカータンパク質には、エキソソームの表面に存在するＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、及びＣＤ８２などのテトラスパニンタンパク質が含まれる。エキソソームはまた、それらを放出する細胞からのマーカーを担持し得る。いくつかの標的分析物、例えば、限定されないが、がん細胞のタンパク質について、細胞によって放出されるエキソソームは、アッセイの標的であるタンパク質のマーカーを含み得る。

【0013】

本実施形態のいくつかは、一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつエキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出する方法及びイムノアッセイデバイスを提供する。イムノアッセイデバイスは、検出部位及び捕捉部位を含む。本方法及びイムノアッセイデバイスは、検出部位と捕捉部位との間の流体移送を行う。検出動作が行われる部位と捕捉動作が行われる部位との間の流体の移送機構は、毛細管作用（例えば、ＬＦＡデバイス若しくはマイクロ流体デバイス）、マイクロ流体チップ若しくは媒体、自動液体処理システム（例えば、自動ＥＬＩＳＡデバイスで使用される液体処理）、マイクロ流体デバイスと組み合わせた自動液体処理システム、又は標準ＥＬＩＳＡで使用されるピペッティング手順などの手動移送によって行われ得る。これらのイムノアッセイデバイスのうちのいくつかでは、検出動作及び捕捉動作は、デバイス上の異なる部位で行われる。例えば、ＬＦＡデバイスでは、検出動作は、コンジュゲートパッド上で行われ、捕捉動作は、１つ以上の試験ライン上で行われる。これらのイムノアッセイデバイスのいくつかでは、検出動作及び捕捉動作は、デバイスの同じ部位で行われ得る。例えば、ＥＬＩＳＡデバイスでは、検出動作及び捕捉動作は、ＥＬＩＳＡデバイスの同じウェルで行われ得る。

【0014】

本実施形態のいくつかのイムノアッセイデバイスは、試料液体中のエキソソームを検出するために、ＣＤ９タンパク質、ＣＤ６３タンパク質、ＣＤ８１タンパク質、ＣＤ８２タンパク質などのテトラスパニンに対する結合試薬（例えば、抗体）を使用することによって検出動作を行う。これらのイムノアッセイデバイスは、１つ以上のエキソソーム結合試薬を使用してもよい。異なるエキソソームは、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２などのタンパク質の１つ以上の結合試薬に結合し得る。これらのイムノアッセイデバイスは、標的分析物に特異的である第２の結合試薬（例えば、抗体）を使用することによって捕捉動作を行う。これは、標的分析物を担持するエキソソームを固定化及び捕捉するために使用される。

【0015】

本実施形態のいくつかのイムノアッセイデバイスは、標的分析物に特異的な結合試薬（例えば、抗体）を使用して、試料液体中の標的分析物を検出することによって、検出動作を行う。これらのイムノアッセイデバイスは、標的分析物を担持するエキソソームを固定化及び捕捉するために、ＣＤ９タンパク質、ＣＤ６３タンパク質、ＣＤ８１タンパク質、ＣＤ８２タンパク質などのテトラスパニンに対する１つ以上の結合試薬（例えば、抗体）を使用することによって捕捉動作を行う。異なるエキソソームは、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２などのタンパク質に対する１つ以上の抗体に結合し得る。

【0016】

これらの方法及びイムノアッセイデバイスのいくつかの非限定的な例は、ＬＦＡデバイスを参照してセクションＩに、及びＥＬＩＳＡデバイスを参照してセクションＩＩに記載されている。残りの詳細な説明は、図面を参照して本実施形態を説明する。図面において、参照番号は、本実施形態の要素を示す。これらの参照番号は、対応する図面の特徴の説明に関連して以下に再掲される。

【0017】

Ｉ．標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体を使用することによって標的分析物を捕捉するＬＦＡデバイス
図１Ａ～図１Ｄは、本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、標的分析物に特異的な抗体を捕捉抗体として使用する、ＬＦＡデバイス１００及び方法を示す、機能図である。ＬＦＡデバイス１００は、ポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であってもよく、これは、１つ以上の分析物（標的分析物と称される）の存在及び／又は量を決定するために試料流体１９０（マトリックスとも称される）を分析するために使用される。分析物という用語は、イムノアッセイデバイスによって検出された分子を指す。

【0018】

図１Ａ～図１Ｄを参照すると、ＬＦＡデバイス１００は、単回使用が意図され得る交換可能なカートリッジを含んでいてもよい。例えば、図１Ａ～図１Ｄに示される構成要素は、ＬＦＡデバイス１００の使い捨てカートリッジの一部であってもよい。ＬＦＡデバイス１００は、バッキングカード１４０を含み得、これは、試料パッド１５０、コンジュゲートパッド１１０、膜１１５、及び／又はウィッキングパッド１２０の異なる部分を組み立てるために使用され得る。

【0019】

バッキングカード１４０は、いくつかの実施形態では、パッド１５０、１１０、１１５、及び１２０の下に配置され得る連続したピースであり得る。他の実施形態では、各パッドは、別個のバッキングカードを有し得る。例えば、デバイスの製造中に、ロール又はシートのバッキング材料を使用することができ、ロール又はシートの幅が、ラテラルフローアッセイカートリッジの長さと同じ（すなわち、図示の方向で、試料パッド１５０の左端からウィッキングパッド１２０の右端まで）であるようにする（又はそれと同じになるように切断される）。次いで、パッド１１５、１１０、１５０、及び１２０は、（例えば、図１Ａ～図１Ｄに示されるように）適切なオーバーラップを有するバッキングカード上に配置される。パッドは、例えば、両面テープ又は接着剤でバッキングカードに接続され得る。次いで、パッド及び取り付けられたバッキングカードは、別個のストリップに切断することができ、各ストリップを使用して、異なるＬＦＡデバイスを作製することができる。

【0020】

あるいは、各パッドは、対応するバッキングカードに別個に接続され得る。次いで、対応するバッキングカードを有するパッドを、適切にオーバーラップさせて、互いに組み立てて、ＬＦＡデバイスを作製することができる。ＬＦＡデバイス１００は、ハウジングを含み得る。図１Ａ～図１Ｄでは、明確にするために、カートリッジベッド１７０を含むハウジングの一部分のみが示されている。

【0021】

ＬＦＡデバイス１００に適用される試料流体１９０は、例えば、限定されないが、血液、尿、血清、血漿、唾液、汗、乳、粘液、精液、膣分泌物又は尿道分泌物、脳脊髄液などのうちの１つ以上などの、ヒト又は動物の体液を含み得る。試料は、自然なままの液体であってもよく、水などの別の液体で希釈された液体であってもよく、又は元々が固体形態（例えば、組織試料）であってもよく、ＬＦＡデバイス１００に適用するために液体形態であるように処理され得る。本実施形態のいくつかでは、標的分析物は、例えば、限定されないが、タンパク質、ハプテン、酵素、ホルモン、感染症剤、免疫グロブリン、ポリヌクレオチド、ステロイド、薬物、核酸、遺伝子変異のマーカー、抗原、単純な有機分子などの物質であり得る。

【0022】

ＬＦＡデバイス１００は、試料パッド（試料ストリップ又は試料受容部材とも称される）１５０を含み得る。試料パッド１５０は、試料流体を受容し、かつ毛細管作用によって試料流体をコンジュゲートパッド１１０に向かって横方向に導くことができる、天然及び／又は合成の多孔質、ミクロ多孔質、メソ多孔質、又はマクロ多孔質の材料で作製され得る。試料パッド１５０は、例えば、限定されないが、セルロース、ニトロセルロース、紙、シリカ、綿、ガラス（例えば、ガラス繊維）、又は合成材料（例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリマー、レーヨン、ナイロンなど）などの材料で作製され得る。試料の種類（例えば、尿、唾液、血液、血清、血漿、汗、乳、粘液、精液、膣分泌物又は尿道分泌物、脳脊髄液など）に応じて、試料パッド１５０を緩衝液（例えば、トリス又はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどの有機化合物）で処理して、試料の変動（ｐＨ、タンパク質濃度、粘度、塩濃度など）を緩和することができる。試料パッド１５０の製造中に、緩衝液化合物は、コーティングされ、含浸され、又はそれ以外の場合、試料パッド１５０に適用又は堆積され、次いで乾燥され得る。試料流体が血液を含む実施形態は、血漿フィルター１９５を含んでいてもよい。

【0023】

ＬＦＡデバイス１００は、試料パッド１５０に流体的に接続されている（すなわち、毛細管作用によって流体を受容することができる）コンジュゲートパッド１１０を含んでいてもよい。図示される実施形態では、試料パッド１５０は、コンジュゲートパッド１１０と接触し、それを部分的に覆っている。他の実施形態では、試料パッド１５０は、より遅い又はより速い結合試薬及び／又はコンジュゲートの放出を提供するように、それぞれ、コンジュゲートパッド１１０とより多く又はより少なく接触させてもよい。試料パッド１５０に適用される試料流体は、毛細管作用によって試料パッド１５０からコンジュゲートパッド１１０に横方向に移送され得る。

【0024】

コンジュゲートパッド１１０は、試料パッド１５０から試料流体を受容することができる天然及び／又は合成の多孔質、ミクロ多孔質、メソ多孔質、又はマクロ多孔質の材料で作製され得る。コンジュゲートパッド１１０は、例えば、限定されないが、ガラス（例えば、ガラス繊維）、セルロース、ニトロセルロース、紙、シリカ、綿、又は合成材料（例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリマー、レーヨン、ナイロンなど）などの材料で作製され得る。

【0025】

図１Ａ～図１Ｄの例では、試料流体１９０は、例えば、限定されないが、血液、尿、血清、血漿、唾液、汗、乳、粘液、精液、膣分泌物又は尿道分泌物、脳脊髄液などの流体であり得る。図１Ａの拡大図１４１に示されるように、試料流体１９０は、他の構成要素の中でも、エキソソーム１３５を含み得る。試料流体１９０が血液を含む場合、他の構成要素１９８は、例えば、赤血球、白血球、血小板、血漿などを含み得る。

【0026】

エキソソーム１３５は、ほとんどの細胞によって産生される細胞外小胞である。エキソソームは、血液、尿、又は脳脊髄液中に見出され得る。エキソソームはまた、培養細胞によってその増殖培地にインビトロで放出され得る。エキソソームは、典型的には、３０～１５０ナノメートル（ｎｍ）の直径である。がんなどの悪性腫瘍において、がん性細胞によって放出されるエキソソームは、がんを診断するための標的分析物として使用され得るタンパク質を含み得る。

【0027】

図１Ａの拡大図１４２に示されるように、エキソソーム１３５は、宿主細胞に応じて膨大な数の異なるタンパク質を含有し得る。エキソソームの成分は、細胞状態（例えば、ストレス、活性化、又は特定の経路の阻害）によって更に調節される。最も一般的な正準エキソソームマーカータンパク質であるＣＤ９１５６、ＣＤ６３１５７、ＣＤ８１１５８、及びＣＤ８２（図示せず）などのテトラスパニン、並びに／又は他のタイプのテトラスパニンは、エキソソームの表面に存在し得る。哺乳動物には３４種類のテトラスパニンがあり、そのうち３３種類がヒトで特定されている。拡大図１４２に示されるテトラスパニン１５９は、哺乳動物における３４種類のテトラスパニンのうちのいずれかを指し、これには、ＣＤ９１５６、ＣＤ６３１５７、ＣＤ８１１５８、及びＣＤ８２が含まれるが、これらに限定されない。

【0028】

エキソソームの他の成分１３８は、異なる酵素、脂質、転写因子、細胞骨格などを含み得る。エキソソームが悪性腫瘍又は感染細胞によって放出される場合、エキソソームはまた、悪性腫瘍を特定するための一般的なマーカーとして使用され得るタンパク質１３７を含有し得る。悪性腫瘍又は感染細胞によって放出されたエキソソームはまた、特定の腫瘍を特定するために使用され得る腫瘍特異的タンパク質１９４を含有し得る。臓器によって放出されるエキソソームは、臓器を特定するために使用され得る臓器特異的タンパク質１９６を含有し得る。

【0029】

同じタイプの複数のテトラスパニン（例えば、複数のＣＤ９マーカータンパク質１５６、複数のＣＤ６３マーカータンパク質１５７、複数のＣＤ８１マーカータンパク質１５８、複数のＣＤ８２マーカータンパク質など）、異なるタイプの複数のテトラスパニン及び／又は複数の標的分析物タンパク質１３７が、単一のエキソソーム１３５上に存在してもよい。本明細書に記載されるように、本実施形態のイムノアッセイは、エキソソームを使用して、異なる悪性腫瘍に関連するタンパク質（又は他のマーカー）などの標的分析物１３７を捕捉及び特定することができる。

【0030】

図１Ａの拡大図１４３に示されるように、コンジュゲートパッド１１０は、試料流体１９０中のエキソソーム１３５の表面上の異なるタイプのテトラスパニン１５６～１５９に結合することができる１つ以上の異なるタイプの結合試薬１７６～１７９を含有し得る。結合試薬は、例えば、限定されないが、異なるタイプのテトラスパニン抗体であり得る。テトラスパニン抗体、標的分析物抗体、腫瘍特異的タンパク質抗体、及び臓器特異的タンパク質抗体のいくつかの例が本明細書で使用されるが、本実施形態のＬＦＡデバイスのうちのいくつかは、コンジュゲートパッド上、試験ライン上、抗体ではない対照ライン上／又は対照ライン上で結合試薬を使用することができることに留意されたい。

【0031】

３つのタイプのテトラスパニン１５６～１５８に対する抗体１７６～１７８に加えて又はその代わりに、コンジュゲートパッド１１０は、他のタイプのエキソソームテトラスパニンに対する抗体を含み得る。拡大図１４３に示されるテトラスパニン抗体１７９は、ＣＤ９抗体、ＣＤ６３抗体、ＣＤ８１抗体、ＣＤ８２抗体などを含むがこれらに限定されないテトラスパニンの抗体を指す。

【0032】

コンジュゲートパッド１１０は、１つ以上のタイプのテトラスパニンに対する抗体を含み得る。例えば、ＬＦＡ１００によって行われる試験のタイプに応じて、コンジュゲートパッド１１０は、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、又は他のタイプのテトラスパニンのうちの１つ以上に対する抗体を含み得る。したがって、本実施形態は、必ずしも全てのタイプのエキソソームのテトラスパニンに対する抗体を使用するわけではなく、行われる試験に応じて、単一の抗体又は任意の数のテトラスパニン抗体の組み合わせを使用してもよい。

【0033】

結合試薬１７６～１７９は、その自然の状態では、肉眼で又は光学フィルターを利用して、容易に見ることができる標識１８０（コンジュゲート、検出コンジュゲート、プローブ、検出ナノ粒子、又はタグとも称される）に結合され得る。標識１８０は、例えば、限定されないが、例えば、金属ゾル（例えば、コロイド金又は金ゾル）、染料ゾル、着色ラテックス粒子、炭素、蛍光粒子、ユウロピウム標識などの小粒子（例えば、ナノ粒子）で作製され得る。コンジュゲートパッド１１０の製造中に、標識結合試薬を、コーティング、含浸、又はそれ以外の場合、コンジュゲートパッド１１０に適用又は堆積させ、次いで乾燥させることができる。

【0034】

試料流体１９０が試料パッド１５０からコンジュゲートパッド１１０に流れ込んだ後、試料流体１９０は、標識結合試薬を可溶化することができる。試料流体がエキソソームを含有し、エキソソームが、コンジュゲートパッド１００が抗体を含むテトラスパニン１５９（例えば、図示しないテトラスパニン１５６～１５８又は他のテトラスパニン）のうちの少なくとも１つを含有している場合、エキソソームは、標識結合試薬（例えば、結合試薬１７６～１７９）と結合することができ、免疫複合体を形成することができる。エキソソームと結合しない標識結合試薬（例えば、試料流体が、コンジュゲートパッドが抗体を含むテトラスパニンを有するエキソソームを含まない場合、又は標識結合試薬が過剰である場合）は、毛細管作用によって膜１１５に向かって下流に流れる。試料流体及び流路内の任意の他の材料（例えば、結合していない標識結合試薬、洗浄流体など）は、本明細書では流体材料と称される。

【0035】

ＬＦＡデバイスによって行われる試験のタイプに応じて、デバイスは、別個の試料パッド及びコンジュゲートパッドを含まなくてもよく、いくつかの実施形態では、コンジュゲートパッド１１０のみを含み得る。試料パッド１５０は、コンジュゲートパッド１１０の上に配置されていることが示されているが、いくつかの実施形態では、コンジュゲートパッド１１０は、試料パッド１５０の上に配置されてもよい。

【0036】

ＬＦＡデバイス１００は、膜１１５及び膜に埋め込まれ得る１つ以上の試験ライン（簡略化のために１つの試験ライン１２５のみが示されている）を含み得る。ＬＦＡデバイス１００は、任意選択的に、膜１１５に埋め込まれ得る対照ライン１３０を含み得る。膜１１５は、例えば、限定されないが、セルロース、ニトロセルロース、紙、シリカ、綿、ガラス（例えば、ガラス繊維）、又は合成材料（例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリマー、レーヨン、ナイロンなど）などの材料で作られてもよく、これらは、毛細管作用によって、流体材料がコンジュゲートパッド１１０から膜１１５に下流に流れ、膜１１５からウィッキングパッド１２０に向かって流れることを可能にする。コンジュゲートパッド１１０は、膜１１５の上に配置されていることが示されているが、いくつかの実施形態では、膜１１５は、コンジュゲートパッド１１０の上に配置されてもよい。

【0037】

試験ライン１２５は、例えば、限定されないが、セルロース、ニトロセルロース、紙、シリカ、綿、ガラス（例えば、ガラス繊維）、又は合成材料（例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリマー、レーヨン、ナイロンなど）などの多孔質材料で作製され得る。試験ライン１２５は、サンドイッチアッセイ形式では、試験ライン１２５上に固定化され、試験ラインの多孔質材料が（例えば、流体材料によって）湿ったときに下流に流れない、未標識結合試薬を含有し得る。拡大図１４４に示されるように、試験ライン１２５上に固定化されている未標識結合試薬は、標的分析物の抗体１８５である。

【0038】

ＬＦＡデバイス１００は、任意選択的に、膜１１５に埋め込まれ得る対照ライン１３０を含み得る。対照ライン１３０は、例えば、限定されないが、セルロース、ニトロセルロース、紙、シリカ、綿、ガラス（例えば、ガラス繊維）、又は合成材料（例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリマー、レーヨン、ナイロンなど）などの多孔質材料で作製され得る。サンドイッチアッセイ形式では、対照ライン１３０は、標的分析物が試料中に存在しているかどうかにかかわらず、試験が正しく動作していることを確認する着色した対照ライン１３０をもたらす、遊離標識結合試薬（例えば、遊離標識テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合する固定化された抗体を含み得る。

【0039】

拡大図１４５に示されるように、対照ライン１３０上の固定化された抗体は、１つ以上のタイプのエキソソームのテトラスパニン（例えば、ＣＤ９１５６、Ｃ６３１５７、ＣＤ８１１５８、ＣＤ８２など）を含む免疫複合体であり得る。一般に、本実施形態のＬＦＡデバイスの対照ラインは、コンジュゲートパッド１１０に含まれる結合試薬（例えば、抗体）のクラスに対する固定化された結合試薬（例えば、固定化された抗体）を含み得る。例えば、コンジュゲートパッド上の抗体が免疫グロビンＧ（ＩｇＧ）クラスである場合、対照ラインは、固定化された抗ＩｇＧ抗体を含み得る。１つ以上のタイプのエキソソームのテトラスパニンを含む免疫複合体に加えて、又はその代わりに、対照ライン１３０は、コンジュゲートパッド１１０に含まれるテトラスパニンのクラスに対する抗体を含み得る。

【0040】

試験ライン１２５又は対照ライン１３０に結合しない流体材料は、膜１２５からウィッキングパッド１２０への毛細管流を維持しながら、膜１１５からウィッキングパッド１２０に流れ続けて、試験ライン１２５及び対照ライン１３０によって取り込まれていない流体材料を吸収することができる。ウィッキングパッド１２０は、例えば、限定されないが、セルロース、ニトロセルロース、紙、シリカ、綿、ガラス（例えば、ガラス繊維）、又は合成材料（例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリマー、レーヨン、ナイロンなど）などの多孔質材料で作製され得る。ＬＦＡデバイスによって行われる試験のタイプに応じて、デバイスは、ウィッキングパッド１２０を含まないことがある。ウィッキングパッド１２０は、膜１１５の上に配置されていることが示されているが、いくつかの実施形態では、膜１１５は、ウィッキングパッド１２０の上に配置されてもよい。

【0041】

図１Ａ～図１Ｄは、示されるように、４つのステージ１０１～１０４を含む。ステージ１０１（図１Ａ）では、試料流体１９０が試料パッド１５０に適用される。試料流体１９０が血液を含む場合、ＬＦＡ１００は、血漿フィルター１９５を有し得、試料流体１９０は、血漿フィルター１９５に適用され得る。試料パッド１５０を含まない実施形態では、試料流体１９０は、コンジュゲートパッド１１０に適用されてもよい（又は、試料流体が血液を含む場合、コンジュゲートパッド上に位置する血漿フィルターに適用され得る）。

【0042】

ステージ１０２（図１Ｂ）では、流体材料は、コンジュゲートパッド１１０に到達することができる。拡大図１４６に示されるように、流体材料中のエキソソーム１３５の表面上のテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）は、対応するテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）と結合することができる。ステージ１０２では、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図１４７に示されるように）は、その表面上に標的分析物１３７を含有していてもよく、一方、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図１４８に示されるように）は、標的分析物１３７を含有していなくてもよい。試料流体１９０（図１Ａ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体中に標的分析物１３７を有する任意のエキソソームが存在していてもよく、又は存在していなくてもよいことに留意されたい。

【0043】

対応するテトラスパニン抗体１７６～１７９と結合しているエキソソーム１３５は、免疫複合体を形成することができる。免疫複合体及び残りの流体材料１９８は、毛細管作用によって、コンジュゲートパッド１１０から膜１１５に移動し続けることができる。

【0044】

ステージ１０３（図１Ｃ）では、流体材料は、試験ライン１２５に到達することができる。拡大図１４９に示されるように、試験ライン上に固定化された標的分析物の抗体１８５は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の標的分析物１３７と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、第２の免疫複合体（拡大図１４９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン１２５を着色する。

【0045】

着色した試験ラインの強度は、試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の標的分析物１３７の密度と相関している。第２の免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは、（その表面上の標的分析物１３７を介して）固定化された標的分析物の抗体１８５と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が標的分析物を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン１２５上の固定化された抗体と結合しない。結果として、試験ライン１２５は色を変化させない。

【0046】

その表面上に標的分析物１３７を欠くエキソソームは、試験ライン１２５上の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９に結合せず、残りの流体材料とともに、対照ライン１３０及びウィッキングパッド１２０に向かって移動し続けることができる。

【0047】

ステージ１０４（図１Ｄ）では、流体材料は、対照ライン１３０に到達することができる。拡大図１５１に示されるように、流体材料中の遊離標識テトラスパニン抗体（例えば、１７６～１７９テトラスパニン抗体）は、固定化されたテトラスパニン（例えば、対応するテトラスパニン１５６～１５９）に結合することができる。この結合は、標的分析物が試料流体中に存在していたか否かにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ラインをもたらすことができる。

【0048】

ＬＦＡデバイスのいくつかの実施形態は、複数の試験ラインを含み得る。これらの実施形態のいくつかでは、試験ラインのいくつかは、特定の腫瘍に特異的である及び／又は特定の臓器に特異的であるエキソソームタンパク質を検出するために使用され得る。臓器特異的タンパク質は、１つ以上の特定のヒト臓器において発現が著しく上昇するタンパク質と定義される。臓器特異的タンパク質は、対応する臓器に関連するヒト疾患に関与し得る。腫瘍特異的タンパク質は、１つ以上の特異的腫瘍において発現が有意に上昇するタンパク質と定義される。

【0049】

図２は、従来技術による特定の腫瘍に特異的であるエキソソームタンパク質の例を示す。図２を参照すると、表２００のエキソソームタンパク質列２１１は、エキソソームタンパク質の名称を特定する。腫瘍列２１２は、列２１１のエキソソームタンパク質に対応する腫瘍のタイプを特定する。体液列は、エキソソームタンパク質が見出された体液を特定する。

【0050】

図２を参照すると、グリピカン１２２０などのエキソソームタンパク質２１１のいくつかは、２つ以上の臓器（この例では、乳房、膵臓、結腸、及び直腸）における腫瘍を示し得る。ＰＳＡ２３０などのエキソソームタンパク質２１１のいくつかは、健康な前立腺細胞から放出されるエキソソームに存在し得る臓器特異的タンパク質であってもよい。

【0051】

図３Ａ～図３Ｆは、本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス３００及び方法を例示する機能図である。ＬＦＡデバイス３００は、１つ以上の分析対象物、１つ以上の腫瘍特異的タンパク質、及び／又は１つ以上の臓器特異的タンパク質の存在及び／又は量を決定するために、試料流体１９０を分析するために使用されるポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であり得る。

【0052】

図３Ａ～図３Ｆを参照すると、ＬＦＡデバイス３００は、標的分析物１３７を検出するための試験ライン１２５を含み得る。いくつかの実施形態では、標的分析物１３７は、悪性腫瘍を特定する一般的なマーカーであるタンパク質であり得る。ＬＦＡデバイス３００の試験ライン１２５は、上述したＬＦＡデバイス１００の試験ライン１２５と同様であり得る。試験ライン１２５に加えて、ＬＦＡデバイス３００は、臓器特異的タンパク質及び／又は腫瘍特異的タンパク質を検出するためのｎ個（ｎは１以上の整数である）の試験ライン３２１～３２２を含み得る。試験ライン３２１～３２２は、ＬＦＡデバイス１００の試験ライン１２５を参照して、上述したように、多孔質材料で作製され得る。

【0053】

図３Ａ～図３Ｆは、示されるように、６つのステージ３０１～３０７を含む。ステージ３０１（図３Ａ）では、試料流体１９０は、試料パッド１５０に適用され得る。試料流体１９０が血液を含む場合、ＬＦＡ３００は、血漿フィルター１９５を有し得、試料流体１９０は、血漿フィルター１９５に適用され得る。試料パッド１５０を含まない実施形態では、試料流体１９０は、コンジュゲートパッド１１０に適用されてもよい（又は、試料流体が血液を含む場合、コンジュゲートパッド上に位置する血漿フィルターに適用され得る）。図３Ａの拡大図１４１～拡大図１４５は、図１Ａの対応する拡大図と同様の項目を示す。

【0054】

各試験ライン３２１～３２２上に固定化されている未標識結合試薬は、臓器特異的タンパク質（例えば、臓器特異的タンパク質１９６）又は腫瘍特異的タンパク質（例えば、腫瘍特異的タンパク質１９４）に対する抗体３７１～３７２であり得る。上述したように、いくつかのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質の両方として動作してもよい。ＬＦＡデバイス３００は、固定化された抗体３７１～３７２に結合する臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質が、異なるタンパク質であるように構成されてもよい。

【0055】

図３Ａを参照すると、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７１が、（拡大図３３１に示されるように）試験ライン３２１上に固定化されてもよく、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７２が、（拡大図３３２に示されるように）試験ライン３２２上に固定化されてもよいなどである。腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための２つの試験ライン３２１～３２２が示されているが、ＬＦＡデバイス３００の異なる実施形態は、腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための試験ライン３２１～３２２と同様の任意の数の１つ以上の試験ラインを含むことができる。ＬＦＡデバイス３００の他の構成要素は、図１Ａ～図１Ｄを参照して上述したＬＦＡデバイス１００の対応する構成要素と同様であり得る。

【0056】

ステージ３０２（図３Ｂ）では、流体材料は、コンジュゲートパッド１１０に到達することができる。拡大図３３５に示されるように、流体材料中のエキソソーム１３５の表面上のテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）は、対応するテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）と結合することができる。ステージ３０２では、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３６及び拡大図３３７に示されるように）は、その表面上に標的分析物１３７を含有していてもよく、一方、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３８に示されるように）は、標的分析物１３７を含有していなくてもよい。更に、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３７及び拡大図３３８に示されるように）は、その表面上に１つ以上の腫瘍特異的タンパク質１９４及び／又は１つ以上の臓器特異的タンパク質１９６を含有していてもよく、一方、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３６に示されるように）は、それらの表面上に任意の腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を含有していなくてもよい。試料流体１９０（図１Ａ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体は、表面上に標的分析物１３７、腫瘍特異的タンパク質１９４、又は臓器特異的タンパク質１９６を有する任意のエキソソームを含んでいてもよく、又は含んでいなくてもよいことに留意されたい。

【0057】

ステージ３０２（図３Ｂ）では、対応するテトラスパニン抗体１７６～１７９と結合しているエキソソーム１３５は、免疫複合体を形成することができる。免疫複合体及び残りの流体材料１９８は、毛細管作用によって、コンジュゲートパッド１１０から膜１１５に移動し続けることができる。

【0058】

ステージ３０３（図３Ｃ）では、流体材料は、試験ライン３２１に到達することができる。拡大図３３９に示されるように、試験ライン３２１上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７１は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、第２の免疫複合体（拡大図３３９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２１を着色する。

【0059】

着色した試験ライン３２１の強度は、固定化された抗体３７１に対応する試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の腫瘍特異的又は臓器特異的タンパク質の密度と相関する。第２の免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは（その表面上の腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を介して）固定化された抗体３７１と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が固定化された抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン３２１上の固定化された抗体３７１と結合しない。結果として、試験ライン３２１は色を変化させない。

【0060】

その表面上の固定化された抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２１上の固定化された抗体３７１に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ライン３４２に向かって移動し続けることができる。ＬＦＡデバイス３００のいくつかの実施形態は、試験ライン３４１及び１２５のみを含み得ることに留意されたい。これらの実施形態は、ステージ３０４を含まない場合がある。これらの実施形態では、結合していない材料は、ステージ３０５を参照して以下に記載されるように、リストライン３２１から試験ライン１２５に向かって移動することができる。

【0061】

ステージ３０４（図３Ｄ）では、流体材料は、試験ライン３２２に到達することができる。拡大図３４０に示されるように、試験ライン３２２上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７２は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。試験ライン３２２上に固定化されている抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６は、試験ライン３２１上に固定化されている抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６とは異なることに留意されたい。試験ライン３４２上の結合は、第３の免疫複合体（拡大図３４０に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第３の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２２を着色する。

【0062】

着色した試験ライン３２２の強度は、固定化された抗体３７２に対応する試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の腫瘍特異的又は臓器特異的タンパク質の密度と相関する。第３の免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは（その表面上の腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を介して）固定化された抗体３７２と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が固定化された抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン３２２上の固定化された抗体３７２と結合しない。結果として、試験ライン３２２は色を変化させない。

【0063】

その表面上の固定化された抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２２上の固定化された抗体３７２に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ライン１２５に向かって移動し続けることができる。ＬＦＡデバイス３００のいくつかの実施形態は、腫瘍特異的タンパク質及び／又は臓器特異的タンパク質を捕捉するために、２つを超える（例えば、３つ以上）の試験ライン３４１～３４２を含んでいてもよいことに留意されたい。これらの実施形態は、３０４と同様の追加のステージを含んでいてもよい。

【0064】

ステージ３０５（図３Ｅ）では、流体材料は、試験ライン１２５に到達することができる。拡大図１４９に示されるように、試験ライン上に固定化された標的分析物の抗体１８５は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の標的分析物１３７と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、免疫複合体（拡大図１４９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン１２５を着色する。

【0065】

着色した試験ラインの強度は、試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の標的分析物１３７の密度と相関している。拡大図１４９の免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは、（その表面上の標的分析物１３７を介して）固定化された標的分析物の抗体１８５と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が標的分析物を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン１２５上の固定化された抗体と結合しない。結果として、試験ライン１２５は色を変化させない。

【0066】

【0067】

ステージ３０６（図３Ｆ）では、流体材料は、対照ライン１３０に到達することができる。拡大図１５１に示されるように、流体材料中の遊離標識テトラスパニン抗体（例えば、１７６～１７９テトラスパニン抗体）は、固定化されたテトラスパニン（例えば、対応するテトラスパニン１５６～１５９）に結合することができる。この結合は、標的分析物が試料流体中に存在していたか否かにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ラインをもたらすことができる。対照ライン１３０に結合しない流体材料は、膜１２５からウィッキングパッド１２０への毛細管流を維持しながら、膜１１５からウィッキングパッド１２０に流れ続けて、試験ライン１２５及び対照ライン１３０によって取り込まれていない流体材料が吸収され得る。

【0068】

図３Ａ～図３Ｆを参照すると、ＬＦＡデバイス３００上の試験の結果は、以下のように解釈され得る。試験の終了時に、試験ライン３２１～３２２及び１２５のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７も、腫瘍特異的タンパク質も、臓器特異的タンパク質も（その抗体が試験ライン３２１～３２２上で固定化されていた）、検出可能な量で試料流体１９０中に存在していなかったことになる。試験の終了時に、試験ライン１２５が着色しているが、試験ライン３２１～３２２のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７（例えば、限定されないが、がんなどの悪性腫瘍の一般的なマーカー）が試料流体中で検出されるが、悪性腫瘍は、任意の特定の腫瘍又は特定の臓器に起因するものではない場合がある。

【0069】

試験の終了時に、試験ライン１２５及び試験ライン３２１～３２２のうちの少なくとも１つが着色している場合、標的分析物１３７（例えば、限定されないが、がんなどの悪性腫瘍の一般的なマーカー）が試料流体中で検出される。更に、悪性腫瘍は、着色した試験ライン３２１～３２２でエキソソームタンパク質１９４／１９６が捕捉された特定の腫瘍又は特定の臓器に高い確率で起因し得る。

【0070】

試験の終了時に、試験ライン１２５が着色していないが、試験ライン３２１～３２２のうちの少なくとも１つが着色している場合、悪性腫瘍に起因する標的分析物１３７は検出されない。このシナリオでは、試験ライン３２１～３２２は、健康な臓器から放出されたエキソソームの表面上に臓器特異的タンパク質が存在すること、又は検出されたエキソソームタンパク質が一般的なマーカー（すなわち、標的分析物タンパク質）を有しない腫瘍によって放出されたことのいずれかに起因して着色していてもよい。

【0071】

図３Ａ～図３Ｆの実施形態では、複数の試験ライン３２１～３２２及び１２５を、試料パッド１５０、コンジュゲートパッド１１０、膜１１５、対照ライン１３０、及びウィッキングパッド１２０も含む同じ試験ストリップ上に配置した。いくつかの実施形態は、試験ライン３２１～３２２及び１２５の各々を別個の試験ストリップ上に配置することができ、各試験ストリップは、試料パッド１５０、コンジュゲートパッド１１０、膜１１５、対照ライン１３０、及びウィッキングパッド１２０を含み得る。複数のストリップを、同じ試験カートリッジの中に配置することができる。

【0072】

図４Ａ～図４Ｄは、本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数のストリップを含む、ＬＦＡデバイス４００及び方法を例示する機能図である。ＬＦＡデバイス４００は、１つ以上の分析対象物、１つ以上の腫瘍特異的タンパク質、及び／又は１つ以上の臓器特異的タンパク質の存在及び／又は量を決定するために、試料流体１９０を分析するために使用されるポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であり得る。

【0073】

図４Ａ～図４Ｄを参照すると、ＬＦＡデバイス４００は、いくつかの試験ストリップ４８１～４８３を含み得る。各々の２つの隣接する試験ストリップは、任意の流体が１つの試験ストリップから他の試験ストリップに流れることを防ぐことができるギャップ４７０によって分離され得る。明確にするために、ギャップ４７０は、ＬＦＡデバイス４００の他の構成要素よりも比例して広く示されている。

【0074】

複数の試験ストリップＬＦＡデバイス４００は、試験ストリップ４８１～４８３を包含するカートリッジ（明確にするためにカートリッジのベッド１７０のみが示されている）を含むことができる。試験ストリップ４８１～４８３の各々は、別個の試料パッド１５０、別個の膜１１５、別個の試験ライン３２１～３２２及び１２５、別個の対照ライン１３０、並びに別個のウィッキングパッド１２０を含み得る。

【0075】

試験ライン１２５は、ストリップ４８３上に位置し得、標的分析物１３７を検出するために使用され得る。いくつかの実施形態では、標的分析物１３７は、悪性腫瘍を特定する一般的なマーカーであるタンパク質であり得る。ＬＦＡデバイス４００の試験ライン１２５は、上述したＬＦＡデバイス１００及び３００の試験ライン１２５と同様であり得る。

【0076】

試験ストリップ４８３上に位置する試験ライン１２５に加えて、ＬＦＡデバイス４００は、臓器特異的タンパク質及び／又は腫瘍特異的タンパク質を検出するために、対応する試験ストリップ４８１～４８２上に位置するｎ個（ｎは１以上の整数である）の試験ライン３２１～３２２を含み得る。試験ライン３２１～３２２は、ＬＦＡデバイス１００及び３００の試験ライン１２５を参照して、上述したように、多孔質材料で作製され得る。

【0077】

図４Ａ～図４Ｄは、示されるように、４つのステージ４０１～４０４を含む。ステージ４０１（図４Ａ）では、試料流体１９０は、各試験ストリップ４８１～４８３の試料パッド１５０に適用され得る。試料流体１９０が血液を含む場合、ＬＦＡ４００は、各試験ストリップ４８１～４８３上に血漿フィルター１９５を有し得、試料流体１９０は、血漿フィルター１９５に適用され得る。試料パッド１５０を含まない実施形態では、試料流体１９０は、コンジュゲートパッド１１０に適用されてもよい（又は、試料流体が血液を含む場合、コンジュゲートパッド上に位置する血漿フィルターに適用され得る）。図４Ａの拡大図１４１～拡大図１４５は、図１Ａ及び図３Ａの対応する拡大図と同様の項目を示す。

【0078】

各試験ライン３２１～３２２上に固定化されている未標識結合試薬は、臓器特異的タンパク質（例えば、臓器特異的タンパク質１９６）又は腫瘍特異的タンパク質（例えば、腫瘍特異的タンパク質１９４）に対する抗体３７１～３７２であり得る。上述したように、いくつかのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質の両方として動作してもよい。ＬＦＡデバイス４００は、固定化された抗体３７１～３７２に結合する臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質が、異なるタンパク質であるように構成されてもよい。

【0079】

図４Ａを参照すると、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７１が、（拡大図３３１に示されるように）試験ストリップ４８１上に位置する試験ライン３２１上に固定化されてもよく、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７２が、（拡大図３３２に示されるように）試験ストリップ４８２上に位置する試験ライン３２２上に固定化されてもよいなどである。腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための２つの試験ストリップ４８１～４８２及び対応する試験ライン３２１～３２２が示されているが、ＬＦＡデバイス４００の異なる実施形態は、腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための試験ストリップ４８１～４８２及び試験ライン３２１～３２２と同様の任意の数の１つ以上の試験ストリップ及び対応する試験ラインを含むことができる。ＬＦＡデバイス４００の他の構成要素は、図１Ａ～図１Ｄ及び図３Ａ～図３Ｆを参照して上述したＬＦＡデバイス１００及び３００の対応する構成要素と同様であり得る。

【0080】

ステージ４０２（図４Ｂ）では、流体材料は、試験ストリップ４８１～４８３のコンジュゲートパッド１１０に到達することができる。拡大図３３５に示されるように、流体材料中のエキソソーム１３５の表面上のテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）は、対応するテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）と結合することができる。

【0081】

ステージ４０２では、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３６及び拡大図３３７に示されるように）は、その表面上に標的分析物１３７を含有していてもよく、一方、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３８に示されるように）は、標的分析物１３７を含有していなくてもよい。更に、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３７及び拡大図３３８に示されるように）は、その表面上に１つ以上の腫瘍特異的タンパク質１９４及び／又は１つ以上の臓器特異的タンパク質１９６を含有していてもよく、一方、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図３３６に示されるように）は、それらの表面上に任意の腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を含有していなくてもよい。試料流体１９０（図１Ａ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体は、表面上に標的分析物１３７、腫瘍特異的タンパク質１９４、又は臓器特異的タンパク質１９６を有する任意のエキソソームを含んでいてもよく、又は含んでいなくてもよいことに留意されたい。

【0082】

ステージ４０２（図４Ｂ）では、対応するテトラスパニン抗体１７６～１７９に結合しているエキソソーム１３５は、免疫複合体を形成することができる。免疫複合体及び残りの流体材料１９８は、毛細管作用によって、各試験ストリップのコンジュゲートパッド１１０から試験ストリップの膜１１５に移動し続けることができる。

【0083】

ステージ４０３（図４Ｃ）では、流体材料は、試験ライン３２１～３２２及び１２５に到達することができる。拡大図３３９に示されるように、試験ライン３２１上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７１は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、免疫複合体（拡大図３３９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２１を着色する。

【0084】

着色した試験ライン３２１の強度は、固定化された抗体３７１に対応する試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の腫瘍特異的又は臓器特異的タンパク質の密度と相関する。拡大図３３９に示される免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは（その表面上の腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を介して）固定化された抗体３７１と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が固定化された抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン３２１上の固定化された抗体３７１と結合しない。結果として、試験ライン３２１は色を変化させない。

【0085】

拡大図３４０に示されるように、試験ライン３２２上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７２は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。試験ライン３２２上に固定化されている抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６は、試験ライン３２１上に固定化されている抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６とは異なることに留意されたい。試験ライン３４２上の結合は、免疫複合体（拡大図３４０に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２２を着色する。

【0086】

着色した試験ライン３２２の強度は、固定化された抗体３７２に対応する試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の腫瘍特異的又は臓器特異的タンパク質の密度と相関する。拡大図３４０に示される免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは（その表面上の腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を介して）固定化された抗体３７２と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が固定化された抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン３２２上の固定化された抗体３７２と結合しない。結果として、試験ライン３２２は色を変化させない。

【0087】

拡大図１４９に示されるように、試験ライン上に固定化された標的分析物の抗体１８５は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の標的分析物１３７と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、免疫複合体（拡大図１４９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン１２５を着色する。

【0088】

着色した試験ライン１２５の強度は、試料流体中のエキソソーム１３５の表面上の標的分析物１３７の密度と相関している。拡大図１４９に示される免疫複合体は、エキソソーム１３５を含み、これは、（その表面上の標的分析物１３７を介して）固定化された標的分析物の抗体１８５と結合し、（その表面上のテトラスパニン１５６～１５９のうちの１つを介して）標識テトラスパニン抗体１７６～１７９のうちの１つと結合している。試料流体が標的分析物１３７を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン１２５上の固定化された抗体と結合しない。結果として、試験ライン１２５は色を変化させない。

【0089】

その表面上の固定化された抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２１上の固定化された抗体３７１に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ストリップ４８１上の対照ライン１３０に向かって移動し続けることができる。

【0090】

その表面上の固定化された抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２２上の固定化された抗体３７２に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ストリップ４８２上の対照ライン１３０に向かって移動し続けることができる。ＬＦＡデバイス４００のいくつかの実施形態は、腫瘍特異的タンパク質及び／又は臓器特異的タンパク質を捕捉するために、２つを超える試験ライン３４１～３４２を含んでいてもよいことに留意されたい。これらの実施形態は、試験ストリップ４８１～４８２と同様の追加の試験ストリップを含んでいてもよい。ＬＦＡデバイス４００のいくつかの実施形態は、腫瘍特異的タンパク質及び／又は臓器特異的タンパク質を捕捉するために、１つの試験ライン３４１を含んでいてもよい。これらの実施形態は、試験ストリップ４８２を含まない場合がある。

【0091】

ステージ４０４（図４Ｄ）では、流体材料は、試験ストリップ４８１～４８３の対照ライン１３０に到達することができる。拡大図１５１に示されるように、流体材料中の遊離標識テトラスパニン抗体（例えば、１７６～１７９テトラスパニン抗体）は、固定化されたテトラスパニン（例えば、対応するテトラスパニン１５６～１５９）に結合することができる。この結合は、標的分析物が試料流体中に存在していたか否かにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ライン１３０をもたらすことができる。対照ライン１３０に結合しない流体材料は、膜１２５からウィッキングパッド１２０への毛細管流を維持しながら、試験ストリップ４８１～４８３の膜１１５から試験ストリップ４８１～４８３のウィッキングパッド１２０に流れ続けて、試験ライン１２５及び対照ライン１３０によって取り込まれていない流体材料が吸収され得る。

【0092】

図４Ａ～図４Ｄを参照すると、ＬＦＡデバイス４００上の試験の結果は、以下のように解釈され得る。試験の終了時に、試験ライン３２１～３２２及び１２５のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７も、腫瘍特異的タンパク質も、臓器特異的タンパク質も（その抗体が試験ライン３２１～３２２上で固定化されていた）、検出可能な量で試料流体１９０中に存在していなかったことになる。試験の終了時に、試験ライン１２５が着色しているが、試験ライン３２１～３２２のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７（例えば、限定されないが、がんなどの悪性腫瘍の一般的なマーカー）が試料流体中で検出されるが、悪性腫瘍は、任意の特定の腫瘍又は特定の臓器に起因するものではない場合がある。

【0093】

試験ライン１２５及び試験ライン３２１～３２２のうちの少なくとも１つが試験終了時に着色している場合、標的分析物１３７（例えば、限定されないが、がんなどの悪性腫瘍の一般的なマーカー）が試料流体中で検出される。更に、悪性腫瘍は、着色した試験ライン３２１～３２２でエキソソームタンパク質１９４／１９６が捕捉された特定の腫瘍又は特定の臓器に高い確率で起因し得る。

【0094】

【0095】

図１Ａ～図１Ｄの実施形態では、コンジュゲートパッド１１０は、検出抗体として動作する標識抗体（例えば、標識抗体１７６～１７９）を含有し、試験ライン１３０は、捕捉抗体として動作する固定化された標的分析物の抗体１８５を含有する。図５Ａ～図５Ｄを参照して以下に記載される実施形態などの他の実施形態では、捕捉抗体及び検出抗体の役割を切り替えてもよい。

【0096】

図５Ａ～図５Ｄは、本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、標的分析物を捕捉抗体として含有するエキソソームに特異的な１つ以上の抗体を使用する、ＬＦＡデバイス５００及び方法を例示する機能図である。ＬＦＡデバイス５００は、ポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であってもよく、これは、１つ以上の標的分析物の存在及び／又は量を決定するために試料流体１９０を分析するために使用される。

【0097】

図５Ａ～図５ＤのＬＦＡデバイス５００は、ＬＦＡデバイス５００のコンジュゲートパッド１１０、試験ライン１２５、及び対照ライン１３０がＬＦＡデバイス１００とは異なる抗体を含むことを除いて、図１Ａ～図１ＤのＬＦＡデバイス１００と同様の構成要素及び構成を含み得る。

【0098】

図５Ａを参照すると、試料流体１９０は、図１Ａ～図１Ｄを参照して上述した試料流体１９０と同様であり得、エキソソーム１３５は、図１Ａ～図１Ｄを参照して上述したエキソソーム１３５と同様であり得、標的分析物は、図１Ａ～図１Ｄを参照して上述した標的分析物１３７と同様であり得る。図５Ａの拡大図５４３に示されるように、コンジュゲートパッド１１０は、結合試薬として標的分析物の抗体１８５を含有し得る。標的分析物の抗体１８５は、標識１８０に結合されてもよく、標識１８０は、その自然の状態では、肉眼で又は光学フィルターを利用して、容易に見ることができる。標識１８０は、限定されないが、例えば、金属ゾル（例えば、コロイド金又は金ゾル）、染料ゾル、着色ラテックス粒子、炭素、蛍光粒子、ユウロピウム標識などの小粒子（例えば、ナノ粒子）で作製され得る。コンジュゲートパッド１１０の製造中に、標識結合試薬を、コーティング、含浸、又はそれ以外の場合、コンジュゲートパッド１１０に適用又は堆積させ、次いで乾燥させることができる。

【0099】

試料流体１９０が試料パッド１５０からコンジュゲートパッド１１０に流れ込んだ後、試料流体１９０は、標識標的分析物の抗体１８５を可溶化することができる。試料流体がエキソソーム１３５を含有し、エキソソーム１３５が図５Ａの拡大図１４２に示されるように標的分析物１３７を含有している場合、標的分析物１３７は、標識標的分析物の抗体１８５に結合することができる。

【0100】

拡大図５４４に示されるように、試験ライン１２５は、１つ以上の対応するテトラスパニン（例えば、ＣＤ９テトラスパニン０１５６、ＣＤ６３テトラスパニン１５７、ＣＤ８１テトラスパニン１５８など）に対する固定化された抗体（例えば、抗体１７６～１７９など）を含有していてもよい。試験ラインは、他のタイプのテトラスパニンに対する固定化された抗体（明確にするために示されていない）を含んでいてもよい。拡大図１４２に示されるテトラスパニン１５９は、哺乳動物における３４種類のテトラスパニンのうちのいずれかを指し、これには、ＣＤ９１５６、ＣＤ６３１５７、ＣＤ８１１５８、及びＣＤ８２が含まれるが、これらに限定されない。拡大図１４３に示されるテトラスパニン抗体１７９は、ＣＤ９抗体、ＣＤ６３抗体、ＣＤ８１抗体、ＣＤ８２抗体などを含むがこれらに限定されないテトラスパニンの抗体を指す。

【0101】

拡大図５４５に示されるように、対照ラインは、遊離した標識標的分析物の抗体に結合するために、固定化された標的分析物１３７を含んでいてもよい。一般に、本実施形態のＬＦＡデバイスの対照ラインは、コンジュゲートパッド１１０に含まれる抗体のクラスに対する固定化された抗体を含み得る。例えば、標的分析物に対する抗体がＩｇＧクラスである場合、の対照ライン１３０は、固定化された抗ＩｇＧ抗体を含み得る。ＬＦＡデバイス５００の例では、固定化された標的分析物に加えて、又はその代わりに、ＬＦＡデバイス５００の対照ライン１３０は、ＩｇＧクラスの抗体に対する抗体を含み得る。

【0102】

図５Ａ～図５Ｄは、示されるように、４つのステージ５０１～５０４を含む。ステージ５０１（図２Ａ）では、試料流体１９０が試料パッド１５０に適用される。試料流体１９０が血液を含む場合、ＬＦＡ５００は、血漿フィルター１９５を有し得、試料流体１９０は、血漿フィルター１９５に適用され得る。試料パッド１５０を含まない実施形態では、試料流体１９０は、コンジュゲートパッド１１０に適用されてもよい（又は、試料流体が血液を含む場合、コンジュゲートパッド上に位置する血漿フィルターに適用され得る）。

【0103】

ステージ５０２（図５Ｂ）では、流体材料は、コンジュゲートパッド１１０に到達することができる。拡大図５４６及び５４７に示されるように、流体材料中のエキソソーム１３５の表面上の標的分析物１３７は、標的分析物の抗体１８５と結合することができる。試料流体１９０（図５Ａ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体中に標的分析物１３７を有する任意のエキソソームが存在していてもよく、又は存在していなくてもよいことに留意されたい。

【0104】

標的分析物の抗体１８５と結合している標的分析物１３７の表面上にあるエキソソーム１３５は、免疫複合体を形成することができる。免疫複合体及び残りの流体材料１９８は、毛細管作用によって、コンジュゲートパッド１１０から膜１１５に移動し続けることができる。

【0105】

ステージ５０３（図５Ｃ）では、流体材料は、試験ライン１２５に到達することができる。拡大図５４９に示されるように、試験ライン１２５上に固定化されているテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）は、標的分析物の抗体１８５に結合しているエキソソーム１３５上のテトラスパニン１５６～１５９と結合することができる。

【0106】

結合は、第２の免疫複合体（拡大図５４９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン１２５を着色する。テトラスパニンの抗体１７６～１７９は試験ライン１２５に固定化されているため、標的分析物１３７を有せず、標識標的分析物の抗体に結合していないエキソソームもまた、テトラスパニンの抗体１７６～１７９に結合し、試験ライン１２５に固定化され得る。したがって、試験ラインは、標識を有しないいくつかの粒子を固定化することができる。これらの未標識粒子は、試験ライン１２５上の一部の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９に結合し、消費する。

【0107】

したがって、本実施形態のＬＦＡデバイス５００の試験ライン１２５は、十分なテトラスパニン抗体１７６～１７９が試験ライン１２５上に固定化されているため、一部の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９が標識を担持していないエキソソームによって消費されても、試料流体に標的分析物が含まれている場合、試験ラインが依然として色を変化させるように設計される。いくつかの実施形態では、試験ライン上の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９の量は、標的分析物が試料流体中に存在している場合に試験ラインが色を変化させることを確実にするために、一連の実験的試験によって決定され得る。標的分析物１３７に結合しない標識標的分析物の抗体１８５は、残りの流体材料とともに、対照ライン１３０及びウィッキングパッド１２０に向かって移動し続けることができる。

【0108】

ステージ５０４（図５Ｄ）では、流体材料は、対照ライン１３０に到達することができる。拡大図５５１に示されるように、流体材料中の遊離した標識標的分析物の抗体１８５は、対照ライン１３０上の固定化された標的分析物１３７に結合することができる。この結合は、標的分析物が試料流体中に存在していたか否かにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ライン１３０をもたらすことができる。

【0109】

上述したように、ＬＦＡデバイスのいくつかの実施形態は、複数の試験ラインを含み得る。これらの実施形態のいくつかでは、試験ラインのいくつかは、特定の腫瘍に特異的である及び／又は特定の臓器に特異的であるエキソソームタンパク質を検出するために使用され得る。図６Ａ～図６Ｆは、本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための複数の試験ラインを含む、ＬＦＡデバイス６００及び方法を例示する機能図である。ＬＦＡデバイス６００は、１つ以上の分析対象物、１つ以上の腫瘍特異的タンパク質、及び／又は１つ以上の臓器特異的タンパク質の存在及び／又は量を決定するために、試料流体１９０を分析するために使用されるポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であり得る。

【0110】

図６Ａ～図６Ｆを参照すると、ＬＦＡデバイス６００は、標的分析物１３７を検出するための試験ライン１２５を含み得る。いくつかの実施形態では、標的分析物１３７は、悪性腫瘍を特定する一般的なマーカーであるタンパク質であり得る。ＬＦＡデバイス６００の試験ライン１２５は、上述したＬＦＡデバイス１００、３００、及び５００の試験ライン１２５、と同様であり得る。試験ライン１２５に加えて、ＬＦＡデバイス６００は、臓器特異的タンパク質及び／又は腫瘍特異的タンパク質を検出するためのｎ個（ｎは１以上の整数である）の試験ライン３２１～３２２を含み得る。ＬＦＡデバイス６００の試験ライン３２１～３２２は、図３Ａ～図３ＦのＬＦＡデバイス３００の試験ライン３２１～３２２と同様であり得る。

【0111】

図６Ａ～図６Ｆは、示されるように、６つのステージ６０１～６０７を含む。ステージ６０１（図６Ａ）では、試料流体１９０は、試料パッド１５０に適用され得る。試料流体１９０が血液を含む場合、ＬＦＡデバイス６００は、血漿フィルター１９５を有し得、試料流体１９０は、血漿フィルター１９５に適用され得る。試料パッド１５０を含まない実施形態では、試料流体１９０は、コンジュゲートパッド１１０に適用されてもよい（又は、試料流体が血液を含む場合、コンジュゲートパッド上に位置する血漿フィルターに適用され得る）。図６Ａの拡大図１４１～拡大図１４５は、図１Ａ、図３Ａ、及び図５Ａの対応する拡大図と同様の項目を示す。

【0112】

各試験ライン３２１～３２２上に固定化されている未標識結合試薬は、臓器特異的タンパク質（例えば、臓器特異的タンパク質１９６）又は腫瘍特異的タンパク質（例えば、腫瘍特異的タンパク質１９４）に対する抗体３７１～３７２であり得る。上述したように、いくつかのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質の両方として動作してもよい。ＬＦＡデバイス６００は、固定化された抗体３７１～３７２に結合する臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質が、異なるタンパク質であるように構成されてもよい。

【0113】

図６Ａを参照すると、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７１が、（拡大図３３１に示されるように）試験ライン３２１上に固定化されてもよく、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７２が、（拡大図３３２に示されるように）試験ライン３２２上に固定化されてもよいなどである。腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための２つの試験ライン３２１～３２２が示されているが、ＬＦＡデバイス６００の異なる実施形態は、腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための試験ライン３２１～３２２と同様の任意の数の１つ以上の試験ラインを含むことができる。ＬＦＡデバイス６００の他の構成要素は、上述したＬＦＡデバイス１００、３００、及び５００の対応する構成要素と同様であり得る。

【0114】

ステージ６０２（図６Ｂ）では、流体材料は、コンジュゲートパッド１１０に到達することができる。拡大図５４６及び拡大図５４７に示されるように、流体材料中のエキソソーム１３５の表面上の標的分析物１３７は、標的分析物の抗体１８５と結合することができる。試料流体１９０（図５Ａ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体中に標的分析物１３７を有する任意のエキソソームが存在していてもよく、又は存在していなくてもよいことに留意されたい。

【0115】

【0116】

ステージ６０３（図６Ｃ）では、流体材料は、試験ライン３２１に到達することができる。拡大図３３９に示されるように、試験ライン３２１上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７１は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、第２の免疫複合体（拡大図３３９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２１を着色する。

【0117】

【0118】

その表面上の固定化された抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２１上の固定化された抗体３７１に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ライン３４２に向かって移動し続けることができる。ＬＦＡデバイス６００のいくつかの実施形態は、試験ライン３４１及び１２５のみを含み得ることに留意されたい。これらの実施形態は、ステージ６０４を含まない場合がある。これらの実施形態では、結合していない材料は、ステージ３０５を参照して以下に記載されるように、リストライン３２１から試験ライン１２５に向かって移動することができる。

【0119】

ステージ６０４（図６Ｄ）では、流体材料は、試験ライン３２２に到達することができる。拡大図３４０に示されるように、試験ライン３２２上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７２は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。試験ライン３２２上に固定化されている抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６は、試験ライン３２１上に固定化されている抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６とは異なることに留意されたい。試験ライン３４２上の結合は、第３の免疫複合体（拡大図３４０に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第３の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２２を着色する。

【0120】

【0121】

その表面上の固定化された抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２２上の固定化された抗体３７２に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ライン３４３に向かって移動し続けることができる。ＬＦＡデバイス６００のいくつかの実施形態は、腫瘍特異的タンパク質及び／又は臓器特異的タンパク質を捕捉するために、２つを超える試験ライン３４１～３４２を含んでいてもよいことに留意されたい。これらの実施形態は、３０４と同様の追加のステージを含んでいてもよい。

【0122】

ステージ６０５（図６Ｅ）では、流体材料は、試験ライン１２５に到達することができる。拡大図５４９に示されるように、試験ライン１２５上に固定化されているテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）は、標的分析物の抗体１８５に結合しているエキソソーム１３５上のテトラスパニン１５６～１５９と結合することができる。結合は、免疫複合体（拡大図５４９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン１２５を着色する。

【0123】

テトラスパニンの抗体１７６～１７９は試験ライン１２５に固定化されているため、標的分析物１３７を有せず、標識標的分析物の抗体に結合していないエキソソームもまた、テトラスパニンの抗体１７６～１７９に結合し、試験ライン１２５に固定化され得る。したがって、試験ラインは、標識を有しないいくつかの粒子を固定化することができる。これらの未標識粒子は、試験ライン１２５上の一部の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９に結合し、消費する。

【0124】

したがって、本実施形態のＬＦＡデバイス６００の試験ライン１２５は、十分なテトラスパニン抗体１７６～１７９が試験ライン１２５上に固定化されているため、一部の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９が標識を担持していないエキソソームによって消費されても、試料流体に標的分析物が含まれている場合、試験ラインが依然として色を変化させるように設計される。いくつかの実施形態では、試験ライン上の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９の量は、標的分析物が試料流体中に存在している場合に試験ラインが色を変化させることを確実にするために、一連の実験的試験によって決定され得る。

【0125】

試料流体が標的分析物を含まない場合、免疫複合体は、試験ライン１２５上の固定化された抗体と結合しない。結果として、試験ライン１２５は色を変化させない。標的分析物１３７に結合しない標識標的分析物の抗体１８５は、残りの流体材料とともに、対照ライン１３０及びウィッキングパッド１２０に向かって移動し続けることができる。

【0126】

ステージ６０６（図６Ｆ）では、流体材料は、対照ライン１３０に到達することができる。拡大図５５１に示されるように、流体材料中の遊離した標識標的分析物の抗体１８５は、対照ライン１３０上の固定化された標的分析物１３７に結合することができる。この結合は、標的分析物が試料流体中に存在していたか否かにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ライン１３０をもたらすことができる。対照ライン１３０に結合しない流体材料は、膜１２５からウィッキングパッド１２０への毛細管流を維持しながら、膜１１５からウィッキングパッド１２０に流れ続けて、試験ライン１２５及び対照ライン１３０によって取り込まれていない流体材料が吸収され得る。

【0127】

図６Ａ～図６Ｄを参照すると、ＬＦＡデバイス６００上の試験の結果は、以下のように解釈され得る。試験の終了時に、試験ライン３２１～３２２及び１２５のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７も、腫瘍特異的タンパク質も、臓器特異的タンパク質も（その抗体が試験ライン３２１～３２２上で固定化されていた）、検出可能な量で試料流体１９０中に存在していなかったことになる。試験の終了時に、試験ライン１２５が着色しているが、試験ライン３２１～３２２のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７（例えば、限定されないが、がんなどの悪性腫瘍の一般的なマーカー）が試料流体中で検出されるが、悪性腫瘍は、任意の特定の腫瘍又は特定の臓器に起因するものではない場合がある。

【0128】

【0129】

試験の終了時に、試験ライン１２５が着色していないが、少なくとも、試験ライン３２１～３２２のうちの１つが着色している場合、悪性腫瘍に起因する標的分析物１３７は検出されない。このシナリオでは、試験ライン３２１～３２２は、健康な臓器から放出されたエキソソームの表面上に臓器特異的タンパク質が存在すること、又は検出されたエキソソームタンパク質が一般的なマーカー（すなわち、標的分析物タンパク質）を有しない腫瘍によって放出されたことのいずれかに起因して着色していてもよい。

【0130】

図６Ａ～図６Ｆの実施形態では、複数の試験ライン３２１～３２２及び１２５を、試料パッド１５０、コンジュゲートパッド１１０、膜１１５、対照ライン１３０、及びウィッキングパッド１２０も含む同じ試験ストリップ上に配置した。いくつかの実施形態は、各試験ライン３２１～３２２及び１２５を別個のストリップ上に配置することができ、各ストリップは、試料パッド１５０、コンジュゲートパッド１１０、膜１１５、対照ライン１３０、及びウィッキングパッド１２０を含み得る。複数のストリップを、同じ試験カートリッジの中に配置することができる。

【0131】

図７Ａ～図７Ｄは、本開示の様々な態様による、標的分析物に特異的な抗体を検出抗体として使用し、１つ以上の臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質のセット及び標的分析物を捕捉するための試験ラインを有する複数の試験ストリップを含む、ＬＦＡデバイス７００及び方法を例示する機能図である。ＬＦＡデバイス７００は、１つ以上の分析対象物、１つ以上の腫瘍特異的タンパク質、及び／又は１つ以上の臓器特異的タンパク質の存在及び／又は量を決定するために、試料流体１９０を分析するために使用されるポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であり得る。

【0132】

図７Ａ～図７Ｄを参照すると、ＬＦＡデバイス７００は、いくつかの試験ストリップ７８１～７８３を含み得る。各々の２つの隣接する試験ストリップは、任意の流体が１つの試験ストリップから他の試験ストリップに流れることを防ぐことができるギャップ７７０によって分離され得る。複数のストリップＬＦＡデバイス７００は、試験ストリップ７８１～７８３の両方を包含するカートリッジ（明確にするためにカートリッジのベッド１７０のみが示されている）を含むことができる。試験ストリップ７８１～７８３の各々は、別個の試料パッド１５０、別個の膜１１５、別個の試験ライン３２１～３２２及び１２５、別個の対照ライン１３０、並びに別個のウィッキングパッド１２０を含み得る。

【0133】

試験ライン１２５は、ストリップ７８３上に位置し得、標的分析物１３７を検出するために使用され得る。いくつかの実施形態では、標的分析物１３７は、悪性腫瘍を特定する一般的なマーカーであるタンパク質であり得る。ＬＦＡデバイス７００の試験ライン１２５は、上述したＬＦＡデバイス１００及び３００の試験ライン１２５と同様であり得る。

【0134】

試験ストリップ７８３上に位置する試験ライン１２５に加えて、ＬＦＡデバイス７００は、臓器特異的タンパク質及び／又は腫瘍特異的タンパク質を検出するために、対応する試験ストリップ７８１～７８２上に位置するｎ個（ｎは１以上の整数である）の試験ライン３２１～３２２を含み得る。ＬＦＡデバイス１００、３００、４００、及び５００の試験ライン１２５を参照して、試験ライン３２１～３２２は、上述したように、多孔質材料で作製され得る。

【0135】

図７Ａ～図７Ｄは、示されるように、４つのステージ７０１～７０４を含む。ステージ７０１（図７Ａ）では、試料流体１９０は、各試験ストリップ７８１～７８３の試料パッド１５０に適用され得る。試料流体１９０が血液を含む場合、ＬＦＡ７００は、各試験ストリップ７８１～７８３上に血漿フィルター１９５を有し得、試料流体１９０は、血漿フィルター１９５に適用され得る。試料パッド１５０を含まない実施形態では、試料流体１９０は、コンジュゲートパッド１１０に適用されてもよい（又は、試料流体が血液を含む場合、コンジュゲートパッド上に位置する血漿フィルターに適用され得る）。図７Ａの拡大図１４１～拡大図１４５は、図１Ａ、図３Ａ、図５Ａ、及び図６Ａの対応する拡大図と同様の項目を示す。

【0136】

各試験ライン３２１～３２３上に固定化されている未標識結合試薬は、臓器特異的タンパク質（例えば、臓器特異的タンパク質１９６）又は腫瘍特異的タンパク質（例えば、腫瘍特異的タンパク質１９４）に対する抗体３７１～３７２であり得る。上述したように、いくつかのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質の両方として動作してもよい。ＬＦＡデバイス７００は、固定化された抗体３７１～３７２に結合する臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質が、異なるタンパク質であるように構成されてもよい。

【0137】

図７Ａを参照すると、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７１が、（拡大図３３１に示されるように）試験ストリップ７８１上に位置する試験ライン３２１上に固定化されてもよく、臓器特異的タンパク質又は腫瘍特異的タンパク質に対する一定量の抗体３７２が、（拡大図３３２に示されるように）試験ストリップ７８２上に位置する試験ライン３２２上に固定化されてもよいなどである。腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための２つの試験ストリップ７８１～７８２及び対応する試験ライン３２１～３２２が示されているが、ＬＦＡデバイス７００の異なる実施形態は、腫瘍特異的タンパク質又は臓器特異的タンパク質を捕捉するための試験ストリップ７８１～７８２及び試験ライン３２１～３２２と同様の任意の数の１つ以上の試験ストリップ及び対応する試験ラインを含むことができる。ＬＦＡデバイス７００の他の構成要素は、図１Ａ～図１Ｄ及び図３Ａ～図３Ｆを参照して上述したＬＦＡデバイス１００、３００、５００、及び６００の対応する構成要素と同様であり得る。

【0138】

ステージ７０２（図７Ｂ）では、流体材料は、試験ストリップ７８１～７８３のコンジュゲートパッド１１０に到達することができる。拡大図５４６及び拡大図５４７に示されるように、流体材料中のエキソソーム１３５の表面上の標的分析物１３７は、標的分析物の抗体１８５と結合することができる。試料流体１９０（図５Ａ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体中に標的分析物１３７を有する任意のエキソソームが存在していてもよく、又は存在していなくてもよいことに留意されたい。

【0139】

【0140】

ステージ７０３（図７Ｃ）では、流体材料は、試験ライン３２１～３２２及び１２５に到達することができる。拡大図３３９に示されるように、試験ライン３２１上に固定化された腫瘍特異的又は臓器特異的抗体３７１は、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）に結合したエキソソーム１３５上の対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６と、それらのテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）のうちの１つを介して結合することができる。結合は、免疫複合体（拡大図３３９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された第２の免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン３２１を着色する。

【0141】

【0142】

【0143】

【0144】

拡大図５４９に示されるように、試験ライン１２５上に固定化されているテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７６～１７９）は、標的分析物の抗体１８５に結合しているエキソソーム１３５上のテトラスパニン１５６～１５９と結合することができる。結合は、免疫複合体（拡大図５４９に示される免疫複合体）をもたらす。固定化された免疫複合体上の標識１８０は、試験ライン１２５を着色する。

【0145】

【0146】

したがって、本実施形態のＬＦＡデバイス７００の試験ライン１２５は、十分なテトラスパニン抗体１７６～１７９が試験ライン１２５上に固定化されているため、一部の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９が標識を担持していないエキソソームによって消費されても、試料流体に標的分析物が含まれている場合、試験ラインが依然として色を変化させるように設計される。いくつかの実施形態では、試験ライン上の固定化されたテトラスパニン抗体１７６～１７９の量は、標的分析物が試料流体中に存在している場合に試験ラインが色を変化させることを確実にするために、一連の実験的試験によって決定され得る。

【0147】

【0148】

その表面上の固定化された抗体３７１に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２１上の固定化された抗体３７１に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ストリップ７８１上の対照ライン１３０に向かって移動し続けることができる。

【0149】

その表面上の固定化された抗体３７２に対応する腫瘍特異的タンパク質１９４又は臓器特異的タンパク質１９６を欠くエキソソームは、試験ライン３２２上の固定化された抗体３７２に結合せず、残りの流体材料とともに、試験ストリップ７８２上の対照ライン１３０に向かって移動し続けることができる。ＬＦＡデバイス７００のいくつかの実施形態は、腫瘍特異的タンパク質及び／又は臓器特異的タンパク質を捕捉するために、２つを超える試験ライン３４１～３４２を含んでいてもよいことに留意されたい。これらの実施形態は、試験ストリップ７８１～７８２と同様の追加の試験ストリップを含んでいてもよい。ＬＦＡデバイス７００のいくつかの実施形態は、腫瘍特異的タンパク質及び／又は臓器特異的タンパク質を捕捉するために、１つの試験ライン３４１を含んでいてもよい。これらの実施形態は、試験ストリップ７８２を含まない場合がある。

【0150】

ステージ７０４（図７Ｄ）では、流体材料は、試験ストリップ７８１～７８３の対照ライン１３０に到達することができる。拡大図５５１に示されるように、流体材料中の遊離した標識標的分析物の抗体１８５は、対照ライン１３０上の固定化された標的分析物１３７に結合することができる。この結合は、標的分析物が試料流体中に存在していたか否かにかかわらず、試験が正しく動作したことを確認する着色した対照ライン１３０をもたらすことができる。

【0151】

対照ライン１３０に結合しない流体材料は、膜１２５からウィッキングパッド１２０への毛細管流を維持しながら、試験ストリップ７８１～７８３の膜１１５から試験ストリップ７８１～７８３のウィッキングパッド１２０に流れ続けて、試験ライン１２５及び対照ライン１３０によって取り込まれていない流体材料が吸収され得る。

【0152】

図７Ａ～図７Ｄを参照すると、ＬＦＡデバイス７００上の試験の結果は、以下のように解釈され得る。試験の終了時に、試験ライン３２１～３２２及び１２５のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７も、腫瘍特異的タンパク質も、臓器特異的タンパク質も（その抗体が試験ライン３２１～３２２上で固定化されていた）、検出可能な量で試料流体１９０中に存在していなかったことになる。試験の終了時に、試験ライン１２５が着色しているが、試験ライン３２１～３２２のいずれも着色していない場合、標的分析物１３７（例えば、限定されないが、がんなどの悪性腫瘍の一般的なマーカー）が試料流体中で検出されるが、悪性腫瘍は、任意の特定の腫瘍又は特定の臓器に起因するものではない場合がある。

【0153】

【0154】

【0155】

ＩＩ．標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体を使用することによって標的分析物を検出し、捕捉するＥＬＩＳＡデバイス
図８Ａ～図８Ｉは、本開示の様々な態様による、標的分析物を含有するエキソソームに特異的な抗体及び標的分析物に特異的な固定化された抗体を使用することによって標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス８００及び方法を例示する機能図である。ＥＬＩＳＡデバイス８００は、ポータブルデバイス（例えば、ハンドヘルドデバイス又はベンチトップデバイス）であってもよく、これは、典型的には研究室環境で、１つ以上の標的分析物の存在及び／又は量を決定するための試料流体を分析するために使用される。

【0156】

ＥＬＩＳＡデバイス８００は、マイクロプレート８１０を含み得る。マイクロプレート８１０は、異なる数のウェル（又はキャビティ）８２０を含み得る。例えば、サンドイッチ形式のＥＬＩＳＡデバイスのマイクロプレートは、９６ウェル、３８４ウェル、１５３６ウェルなどを含み得る。図８Ａ～図８Ｉの例では、ＥＬＩＳＡデバイス８００は、８行１２列に配置された９６ウェルを含む。

【0157】

マイクロプレート８１０は、例えば、限定されないが、ポリスチレン、ポリスチレンの誘導体、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）などのプラスチック材料で作製することができる。異なるウェル８２０は、同じ又は異なる対象からの試料を含み得る。例えば、２つ以上のウェルは、異なる時間に同じヒトから採取された試料流体を含むように使用され得、かつ／又は同じヒトから採取された異なる濃度の試料を含み得る。２つ以上のウェルは、異なるヒトからの試料流体を含み得る。同じ試験を、全てのウェル８２０の試料に対して並行して行うことができる。

【0158】

図８Ａ～図８Ｉは、示されるように、９つのステージ８０１～８０９を含む。ステージ８０１（図８Ａ）の拡大図８４１に示されるように、標的分析物の抗体１８５は、ウェル８２０のうちの１つ以上の底部に固定化され得る。標的分析物の抗体１８５は、ステージ８０１で好適に希釈されたコーティング緩衝液として、試験に使用され得る１つ以上のウェル８２０に適用され得る。コーティング緩衝液は、ウェル８２０の表面に吸着されるまでインキュベートすることができる。吸着は、抗体１８５上のアミノ酸側鎖とウェル８２０のプラスチック表面との間の疎水性相互作用の結果として受動的に生じ得る。吸着は、時間、温度、及びコーティング緩衝液のｐＨ、並びに抗体１８５の濃度に依存し得る。

【0159】

ステージ８０２（図８Ｂ）では、試料流体１９０は、試験で使用されるウェル８２０に添加され得る。拡大図８４２に示されるように、試料流体は、図１Ａの試料流体と同様の組成を有し得る。拡大図８４３に示されるように、エキソソーム１３５は、図１Ａを参照して上述したエキソソームと同様の組成を有し得る。

【0160】

ステージ８０３（図８Ｃ）では、その表面上に標的分析物１３７を含む流体試料中のエキソソームは、ウェル８２０内の固定化された標的分析物の抗体１８５と結合することができる。拡大図８４４に示されるように、標的分析物を表面上に含まないエキソソーム８３５などのエキソソームは、固定化された標的分析物の抗体１８５と結合しない場合がある。流体試料は、標的分析物１３７が固定化された標的分析物の抗体１８５と結合するために、ウェル８２０内に好適な時間放置することができる。

【0161】

ステージ８０４（図８Ｄ）では、結合していない材料１９８及び８３５（図８Ｃ）を洗い流してもよい。いくつかの実施形態では、洗浄は、洗浄緩衝液を適用することによって１回以上行って、結合していない材料を完全に除去することができる。拡大図８４５に示されるように、固定化された標的分析物の抗体１８５に結合した標的分析物１３７を有するエキソソーム１３５のみが、ステージ８０４の終了時にウェル８２０内に残され得る。

【0162】

ステージ８０５（図８Ｅ）では、テトラスパニン抗体を含有する一定量の流体８６０が、ウェル８２０に添加され得る。拡大図８４６に示されるように、テトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体８７６～８７９）は、ステージ８０４（図８Ｄ）のウェル８２０に固定化され得るエキソソームの表面上の対応するテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）に結合する抗体を含み得る。テトラスパニン抗体８７６～８７９は、酵素を含み得、これは、試験の後のステージでウェルに添加され得る基質材料と相互作用した後、色が変化し得る。

【0163】

ステージ８０６（図８Ｆ）では、テトラスパニン抗体は、固定化されたエキソソームの表面上にある対応するテトラスパニンと結合することができる。拡大図８４７に示されるように、テトラスパニン抗体８７６～８７９は、固定化されたエキソソーム１３５の表面上にある対応するテトラスパニン１５６～１５９と結合することができる。一部のテトラスパニン抗体８７０は、テトラスパニン抗体を含有する流体８６０（図８Ｅ）中に過剰なテトラスパニン抗体が存在する可能性があるか、又はエキソソーム１３５の表面上に一致するテトラスパニンが存在しない可能性があるため、いずれのエキソソームとも結合しない場合がある。

【0164】

ステージ８０７（図８Ｇ）では、結合していないテトラスパニン抗体８７０（図８Ｆ）を洗い流してもよい。いくつかの実施形態では、洗浄は、洗浄緩衝液を適用することによって１回以上行って、結合していない材料を完全に除去することができる。拡大図８４８に示されるように、固定化されたエキソソーム１３５の表面上にある対応するテトラスパニン１５６～１５９と結合するテトラスパニン抗体８７６～８７９のみが、ステージ８０７の終了時にウェル８２０内に残され得る。

【0165】

ステージ８０８（図８Ｈ）では、一定量の基質８８５を含有する液体８８０が、ウェル８２０に添加され得る。拡大図８４９に示される基質８８５は、テトラスパニン抗体８７６～８７９上の酵素によって変換され得る。

【0166】

ステージ８０９（図８Ｉ）の拡大図８５１に示されるように、基質８８５は、テトラスパニン抗体８７６～８７８上の酵素によって変換されて、存在する標的分析物１３７の量に比例する強度で、色の変化８９５を生成することができる。使用される酵素及び基質に応じて、読み出しは蛍光又は発光であり得る。着色した最終生成物は、分析物の濃度を表す吸光度値として分光光度計で読み取ることができる。試料流体が標的分析物を有するエキソソームを含有していなかった場合、最終生成物の色は変化せず、試料流体中に標的分析物が欠如していることを示し得る。

【0167】

図８Ａ～図８Ｉの実施形態では、標的分析物の抗体１８５は、ＥＬＩＳＡデバイスウェル８２０に固定化される。図９Ａ～９Ｉを参照して以下に記載される実施形態などの他の実施形態では、テトラスパニン抗体は、ＥＬＩＳＡデバイスのウェル８２０に固定化され得る。

【0168】

図９Ａ～図９Ｉは、本開示の様々な態様による、標的分析物及び標的分析物に特異的な抗体を含有するエキソソームに特異的な固定化された抗体を使用することによって、標的分析物を検出及び捕捉する、ＥＬＩＳＡデバイス９００及び方法を示す機能図である。ＥＬＩＳＡデバイス９００の構造は、図８Ａ～図８ＩのＥＬＩＳＡデバイス８００の構造と同様であり得る。

【0169】

図９Ａ～図９Ｉは、示されるように、９つのステージ９０１～９０９を含む。ステージ９０１（図９Ａ）の拡大図９４１に示されるように、１つ以上のタイプのテトラスパニンタンパク質の抗体１７９は、ウェル８２０のうちの１つ以上の底部に固定化され得る。抗体１７９は、エキソソームの表面上に存在するテトラスパニンタンパク質１５９（例えば、限定されないが、ＣＤ９テトラスパニンタンパク質、ＣＤ６３テトラスパニンタンパク質、ＣＤ８１テトラスパニンタンパク質、及びＣＤ８２テトラスパニンタンパク質などのうちの１つ以上）に対する抗体（図１Ａ）であり得る。

【0170】

テトラスパニン抗体１７９は、ステージ９０１で、試験に使用され得る１つ以上のウェル８２０に、好適に希釈されたコーティング緩衝液として適用され得る。コーティング緩衝液は、ウェル８２０の表面に吸着されるまでインキュベートすることができる。吸着は、抗体１７９上のアミノ酸側鎖とウェル８２０のプラスチック表面との間の疎水性相互作用の結果として受動的に生じ得る。吸着は、時間、温度、及びコーティング緩衝液のｐＨ、並びに抗体１７９の濃度に依存し得る。

【0171】

ステージ９０２（図９Ｂ）では、試料流体１９０は、試験で使用されるウェル８２０に添加され得る。拡大図８４２に示されるように、試料流体は、図１Ａ及び図８Ｂの試料流体と同様の組成を有し得る。拡大図８４３に示されるように、エキソソーム１３５は、図１Ａを参照して上述したエキソソームと同様の組成を有し得る。

【0172】

ステージ９０３（図９Ｃ）では、エキソソーム１３５の表面上のテトラスパニンは、ウェル８２０内の固定化されたテトラスパニン抗体１７９と結合することができる。

【0173】

拡大図９４４に示されるように、試料流体材料中のエキソソーム１３５の表面上のテトラスパニン（例えば、テトラスパニン１５６～１５９）は、対応するテトラスパニン抗体（例えば、テトラスパニン抗体１７９）と結合することができる。ステージ９０３では、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図９４５に示されるように）は、その表面上に標的分析物１３７を含有していてもよく、一方、一部のエキソソーム１３５（例えば、拡大図９４６に示されるように）は、標的分析物１３７を含有していなくてもよい。試料流体１９０（図９Ｃ）が採取される対象（例えば、ヒト又は動物）の状態に応じて、試料流体中に標的分析物１３７を有する任意のエキソソームが存在していてもよく、又は存在していなくてもよいことに留意されたい。

【0174】

対応するテトラスパニン抗体１７９に結合しているエキソソーム１３５は、免疫複合体を形成することができる。流体試料は、エキソソーム１３５の表面上のテトラスパニンが固定化された対応するテトラスパニン抗体１７９と結合するために、ウェル８２０内に好適な時間放置することができる。

【0175】

ステージ９０４（図９Ｄ）では、結合していない材料１９８及び８３５（図９Ｃ）を洗い流してもよい。いくつかの実施形態では、洗浄は、洗浄緩衝液を適用することによって１回以上行って、結合していない材料を完全に除去することができる。拡大図９４７に示されるように、固定化されたテトラスパニン抗体１７９に結合したテトラスパニンを有するエキソソーム１３５のみが、ステージ９０４の終了時にウェル８２０内に残され得る。

【0176】

ステージ９０５（図９Ｅ）では、（拡大図９４８に示されるように）標的分析物の抗体１８５を含有する一定量の流体９６０が、ウェル８２０に添加され得る。標的分析物の抗体１８５は、酵素を含み得、これは、試験の後のステージでウェルに添加され得る基質材料と相互作用した後、色が変化し得る。

【0177】

ステージ９０６（図９Ｆ）では、標的分析物の抗体１８５は、（拡大図９４９に示されるように）固定化されたテトラスパニン抗体１７９に結合しているエキソソームの表面上にある標的分析物１３７と結合することができる。一部の標的分析物の抗体１８５は、例えば、標的分析物の抗体１８５を含有する流体８６０（図９Ｅ）中に過剰な標的分析物の抗体１８５が存在する可能性があるため、いずれの標的分析物１３７とも結合しない場合がある。

【0178】

ステージ９０７（図９Ｇ）では、結合していない標的分析物の抗体１８５（図９Ｆ）を洗い流してもよい。いくつかの実施形態では、洗浄は、洗浄緩衝液を適用することによって１回以上行って、結合していない材料を完全に除去することができる。拡大図９５０に示されるように、固定化されたエキソソーム１３５の表面上にある標的分析物１３７と結合する標的分析物の抗体１８５のみが、ステージ９０７の終了時にウェル８２０内に残され得る。

【0179】

ステージ９０８（図９Ｈ）では、一定量の基質８８５を含有する液体８８０が、ウェル８２０に添加され得る。拡大図９５１に示される基質８８５は、テトラスパニン抗体８７６～８７８上の酵素によって変換され得る。

【0180】

ステージ９０９（図９Ｉ）の拡大図９５２に示されるように、基質８８５は、標的分析物の抗体１８５上の酵素によって変換されて、存在する標的分析物１３７の量に比例する強度で、色の変化８９５を生成することができる。使用される酵素及び基質に応じて、読み出しは蛍光又は発光であり得る。着色した最終生成物は、分析物の濃度を表す吸光度値として分光光度計で読み取ることができる。試料流体が標的分析物を有するエキソソームを含有していなかった場合、最終生成物の色は変化せず、試料流体中に標的分析物が欠如していることを示し得る。

【0181】

第１の態様では、ラテラルフローアッセイデバイスが提供される。ラテラルフローアッセイデバイスは、試験ストリップを備え、これは、一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつエキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出するように構成されている。試験ストリップは、コンジュゲートパッドを含む。コンジュゲートパッドは、標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含有するように構成されている。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されている。コンジュゲートパッドは、試験の開始後に流体を受容し、かつ毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。試験ストリップは、コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜を含む。膜は、毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。膜は、標的分析物に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含む。標的分析物に対する固定化された結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の標的分析物のタンパク質に結合するように構成されている。

【0182】

試験ラインが第１の試験ラインである第１の態様の実施形態では、膜は、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む第２の試験ラインを更に含む。第１のタイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。第１のタイプのタンパク質に対する結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0183】

第１の態様の別の実施形態では、標的分析物に対する結合試薬は、標的分析物の抗体である。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、あるタイプのテトラスパニン抗体である。第１のタイプのタンパク質に対する結合試薬は、第１のタイプのタンパク質に対する抗体である。

【0184】

試験ラインが第１の試験ラインである第１の態様の別の実施形態では、膜は、第１の試験ライン以外の複数の試験ラインを更に含み、複数の試験ラインの各試験ラインは、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含み、複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つであり、複数の試験ラインの各試験ライン上の結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0185】

試験ストリップが第１の試験ストリップである第１の態様の別の実施形態では、ラテラルフローアッセイデバイスは、第２の試験ストリップを更に含む。第２の試験ストリップは、コンジュゲートパッドを含む。第２の試験ストリップのコンジュゲートパッドは、標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン抗体のセットを含有するように構成されている。第２の試験ストリップのコンジュゲートパッドは、試験の開始後に流体を受容し、かつ毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。第２の試験ストリップは、第２の試験ストリップのコンジュゲートパッドに流体的に接続された膜を含む。第２の試験ストリップの膜は、毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。第２の試験ストリップの膜は、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含む。第１のタイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。第１のタイプのタンパク質に対する結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0186】

試験ストリップが第１の試験ストリップである第１の態様の別の実施形態では、ラテラルフローアッセイデバイスは、第１の試験ストリップ以外の複数の試験ストリップを更に含む。複数の試験ストリップの各試験ストリップは、コンジュゲートパッドを含む。複数の試験ストリップの各試験ストリップのコンジュゲートパッドは、標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン抗体のセットを含有するように構成されている。複数の試験ストリップの各試験ストリップのコンジュゲートパッドは、試験の開始後に流体を受容し、かつ毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。複数の試験ストリップの各試験ストリップは、対応する試験ストリップのコンジュゲートパッドに流体的に接続された膜を含む。複数の試験ストリップの各試験ストリップの膜は、毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。複数の試験ストリップの各試験ストリップの膜は、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含む。複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。複数の試験ストリップの各試験ストリップの試験ストリップ上の結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0187】

第１の態様の別の実施形態では、膜は、コンジュゲートパッドが含有するテトラスパニン結合試薬のクラスに対する固定化された結合試薬を含む対照ラインを含む。

【0188】

第１の態様の別の実施形態では、標識は、コロイド金を含む金属ゾル、色素ゾル、着色ラテックス粒子、炭素、蛍光粒子、ユウロピウム標識などのうちの少なくとも１つを含む検出物質である。

【0189】

第１の態様の実施形態は、膜からウィッキングパッドへの毛細管流を維持するように構成されたウィッキングパッドと、流体を受容し、かつ毛細管作用によって試料流体をコンジュゲートパッドに移送するように構成された試料パッドと、を更に含む。

【0190】

第１の態様の実施形態は、流体を受容し、流体をコンジュゲートパッド及びラテラルフローアッセイデバイスの試料パッドのうちの１つに移送するように構成されたプラズマフィルターを更に含む。

【0191】

第２の態様では、ラテラルフローアッセイデバイスが提供される。ラテラルフローアッセイデバイスは、一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつエキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出するように構成された試験ストリップを備える。試験ストリップは、コンジュゲートパッドを含む。コンジュゲートパッドは、標識とコンジュゲートされた標的分析物に対する結合試薬を含むように構成されている。標的分析物に対する結合試薬は、エキソソームの表面上の標的分析物のタンパク質に結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されている。コンジュゲートパッドは、試験の開始後に流体を受容し、かつ毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。試験ストリップは、コンジュゲートパッドに流体的に接続された膜を含む。膜は、毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。膜は、試験ライン上に固定化された１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含む試験ラインを含む。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中の対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合するように構成されている。

【0192】

試験ラインが第１の試験ラインである第２の態様の実施形態では、膜は、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む第２の試験ラインを更に含む。第１のタイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。第１のタイプのタンパク質に対する結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0193】

第２の態様の別の実施形態では、標的分析物に対する結合試薬は、標的分析物の抗体である。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、あるタイプのテトラスパニン抗体である。第１のタイプのタンパク質に対する結合試薬は、第１のタイプのタンパク質に対する抗体である。

【0194】

試験ラインが第１の試験ラインである第２の態様の別の実施形態では、膜は、第１の試験ライン以外の複数の試験ラインを更に含む。複数の試験ラインの各試験ラインは、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含む。複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。複数の試験ラインの各試験ライン上の結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0195】

試験ストリップが第１の試験ストリップである第２の態様の別の実施形態では、ラテラルフローアッセイデバイスは、第２の試験ストリップを更に含む。第２の試験ストリップは、コンジュゲートパッドを含む。第２の試験ストリップのコンジュゲートパッドは、標識とコンジュゲートされた標的分析物に対する結合試薬を含有するように構成されている。第２の試験ストリップのコンジュゲートパッドは、試験の開始後に流体を受容し、かつ毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。第２の試験ストリップは、第２の試験ストリップのコンジュゲートパッドに流体的に接続された膜を含む。第２の試験ストリップの膜は、毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。第２の試験ストリップの膜は、第１のタイプのタンパク質に対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含む。第１のタイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。第１のタイプのタンパク質に対する結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の第１のタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0196】

試験ストリップが第１の試験ストリップである第２の態様の別の実施形態では、ラテラルフローアッセイデバイスは、第１の試験ストリップ以外の複数の試験ストリップを更に含む。複数の試験ストリップの各試験ストリップは、コンジュゲートパッドを含む。複数の試験ストリップの各試験ストリップのコンジュゲートパッドは、標識とコンジュゲートされた標的分析物に対する結合試薬を含有するように構成されている。複数の試験ストリップの各試験ストリップのコンジュゲートパッドは、試験の開始後に流体を受容し、かつ毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。複数の試験ストリップの各試験ストリップは、対応する試験ストリップのコンジュゲートパッドに流体的に接続された膜を含む。複数の試験ストリップの各試験ストリップの膜は、毛細管作用によって流体を移動させるように構成されている。複数の試験ストリップの各試験ストリップの膜は、対応する複数のタイプのタンパク質のうちの１つに対する固定化された結合試薬を含む試験ラインを含む。複数のタイプのタンパク質の各タイプのタンパク質は、腫瘍特異的タンパク質及び臓器特異的タンパク質のうちの１つである。複数の試験ストリップの各試験ストリップの試験ストリップ上の結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の対応するタイプのタンパク質に結合するように構成されている。

【0197】

第２の態様の別の実施形態では、膜は、コンジュゲートパッドが含有する標的分析物に対する結合試薬のクラスに対する固定化された結合試薬を含む対照ラインを含む。

【0198】

第２の態様の別の実施形態では、標識は、コロイド金を含む金属ゾル、色素ゾル、着色ラテックス粒子、炭素、蛍光粒子、ユウロピウム標識などのうちの少なくとも１つを含む検出物質である。

【0199】

第２の態様の実施形態は、膜からウィッキングパッドへの毛細管流を維持するように構成されたウィッキングパッドと、流体を受容し、かつ毛細管作用によって試料流体をコンジュゲートパッドに移送するように構成された試料パッドと、を更に含む。

【0200】

第２の態様の別の実施形態は、流体を受容し、流体をコンジュゲートパッド及びラテラルフローアッセイデバイスの試料パッドのうちの１つに移送するように構成されたプラズマフィルターを更に含む。

【0201】

第３の態様では、一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつエキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出する、方法及びイムノアッセイデバイスが提供される。イムノアッセイデバイスは、検出部位及び捕捉部位を含む。方法及びイムノアッセイデバイスは、検出部位と捕捉部位との間の流体移送を行う。検出部位は、標識とコンジュゲートされた１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含むように構成されている。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されている。捕捉部位は、標的分析物に対する固定化された結合試薬を含む。標的分析物に対する固定化された結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中のエキソソームの表面上の標的分析物のタンパク質に結合するように構成されている。

【0202】

第３の態様の実施形態では、検出部位及び捕捉部位は、イムノアッセイデバイスの異なる領域である。

【0203】

検出部位及び捕捉部位がイムノアッセイデバイスの異なる領域である第３の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ラテラルフローアッセイデバイスである。

【0204】

第３の態様の実施形態では、検出部位及び捕捉部位は、イムノアッセイデバイスの同じ領域である。

【0205】

検出部位及び捕捉部位がイムノアッセイデバイスの同じ領域である第３の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ＥＬＩＳＡデバイスである。

【0206】

第３の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、毛細管作用によって行われる。

【0207】

検出部位と捕捉部位との間の流体移送が毛細管作用によって行われる第３の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ＬＦＡデバイス及びマイクロ流体デバイスのうちの１つである。

【0208】

第３の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、マイクロ流体チップ又は媒体によって行われる。

【0209】

第３の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、自動液体処理システムによって行われる。

【0210】

検出部位と捕捉部位との間の流体移送が自動液体処理システムによって行われる第３の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスはＥＬＩＳＡデバイスである。

【0211】

第３の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、マイクロ流体デバイスと組み合わせて、自動液体処理システムによって行われる。

【0212】

第３の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、手動移送によって行われる。

【0213】

第３の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、手動移送によって行われ、イムノアッセイデバイスは、ＥＬＩＳＡデバイスである。

【0214】

第４の態様では、一定量のエキソソームを含む一定量の流体を受容し、かつエキソソームの表面上の標的分析物の存在を検出する、方法及びイムノアッセイデバイスが提供される。イムノアッセイデバイスは、検出部位及び捕捉部位を含む。方法及びイムノアッセイデバイスは、検出部位と捕捉部位との間の流体移送を行う。検出部位は、標識とコンジュゲートされた標的分析物に対する結合試薬を含有するように構成されている。標的分析物に対する結合試薬は、エキソソームの表面上の標的分析物のタンパク質に結合し、かつエキソソームを含む免疫複合体を形成するように構成されている。捕捉部位は、捕捉部位上に固定化された１つ以上のタイプのテトラスパニン結合試薬のセットを含む。各タイプのテトラスパニン結合試薬は、エキソソームを含む免疫複合体中の対応するタイプのエキソソームテトラスパニンと結合するように構成されている。

【0215】

第４の態様の実施形態では、検出部位及び捕捉部位は、イムノアッセイデバイスの異なる領域である。

【0216】

検出部位及び捕捉部位がイムノアッセイデバイスの異なる領域である第４の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ラテラルフローアッセイデバイスである。

【0217】

第４の態様の実施形態では、検出部位及び捕捉部位は、イムノアッセイデバイスの同じ領域である。

【0218】

検出部位及び捕捉部位がイムノアッセイデバイスの同じ領域である第４の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ＥＬＩＳＡデバイスである。

【0219】

第４の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、毛細管作用によって行われる。

【0220】

検出部位と捕捉部位との間の流体移送が毛細管作用によって行われる第４の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ＬＦＡデバイス及びマイクロ流体デバイスのうちの１つである。

【0221】

第４の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、マイクロ流体チップ又は媒体によって行われる。

【0222】

第４の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、自動液体処理システムによって行われる。

【0223】

検出部位と捕捉部位との間の流体移送が自動液体処理システムによって行われる第４の態様の実施形態では、イムノアッセイデバイスは、ＥＬＩＳＡデバイスである。

【0224】

第４の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、マイクロ流体デバイスと組み合わせて、自動液体処理システムによって行われる。

【0225】

第４の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、手動移送によって行われる。

【0226】

第４の態様の実施形態では、検出部位と捕捉部位との間の流体移送は、手動移送によって行われ、イムノアッセイデバイスは、ＥＬＩＳＡデバイスである。

【0227】

上記の説明は、それらが関連する当業者がこれらの実施形態を実施することを可能にするような完全、明確、簡潔、かつ正確な用語で、本実施形態を実施するための、かつそれらを実施する様式及びプロセスの考えられる最良のモードを示す。しかしながら、本実施形態は、上で論じたものからの修正及び代替構成が可能であり、それらは完全に同等である。したがって、本発明は、開示される特定の実施形態に限定されない。対照的に、本発明は、本開示の趣旨及び範囲内にある全ての修正物及び代替構成を包含する。

【図1A】