特表 2024-519056 膵疾患及び肝疾患を治療するための方法及び組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-08

(54)【発明の名称】膵疾患及び肝疾患を治療するための方法及び組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 45/06 20060101AFI20240426BHJP

   A61P 1/18 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 3/06 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 1/16 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/7105 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/711 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/713 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 38/02 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/357 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/198 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/416 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/4196 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/26 20060101ALI20240426BHJP

   A61K 31/496 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 3/00 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 3/04 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 1/14 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 1/08 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 1/00 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 17/00 20060101ALI20240426BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20240426BHJP

【ＦＩ】

A61K45/06

A61P1/18

A61P3/06

A61P35/00

A61P1/16

A61K39/395 D

A61K31/7088

A61K31/7105

A61K31/711

A61K31/713

A61K38/02

A61P43/00 121

A61K31/357

A61K31/198

A61K31/416

A61K31/4196

A61K31/26

A61K31/496

A61P3/00

A61P3/04

A61P1/14

A61P29/00

A61P1/08

A61P1/00

A61P17/00

A61P7/04

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023571559

(86)(22)【出願日】2022-05-16

(85)【翻訳文提出日】2024-01-04

(86)【国際出願番号】 US2022029388

(87)【国際公開番号】W WO2022245698

(87)【国際公開日】2022-11-24

(31)【優先権主張番号】63/189,207

(32)【優先日】2021-05-16

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523432748

【氏名又は名称】メタノイア バイオ インコーポレイテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100114775

【弁理士】

【氏名又は名称】高岡 亮一

(74)【代理人】

【識別番号】100121511

【弁理士】

【氏名又は名称】小田 直

(74)【代理人】

【識別番号】100202751

【弁理士】

【氏名又は名称】岩堀 明代

(74)【代理人】

【識別番号】100208580

【弁理士】

【氏名又は名称】三好 玲奈

(74)【代理人】

【識別番号】100191086

【弁理士】

【氏名又は名称】高橋 香元

(72)【発明者】

【氏名】ツザロヴァ－トゥラジコヴスカ，スラヴィカ

(72)【発明者】

【氏名】グリーフ，オッペル

(72)【発明者】

【氏名】ヴァン ウィク，アブラハム

【テーマコード（参考）】

4C084

4C085

4C086

4C206

【Ｆターム（参考）】

4C084AA02

4C084AA20

4C084BA03

4C084BA44

4C084MA52

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA59

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA14

4C084ZA071

4C084ZA072

4C084ZA081

4C084ZA082

4C084ZA531

4C084ZA532

4C084ZA661

4C084ZA662

4C084ZA701

4C084ZA702

4C084ZA711

4C084ZA712

4C084ZA751

4C084ZA752

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC022

4C084ZC211

4C084ZC212

4C084ZC331

4C084ZC332

4C084ZC412

4C084ZC751

4C085AA13

4C085BB31

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC22

4C085EE03

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG05

4C085GG06

4C085GG08

4C085GG10

4C086AA01

4C086AA02

4C086BA15

4C086BC37

4C086BC60

4C086BC71

4C086EA16

4C086GA02

4C086GA07

4C086GA08

4C086GA09

4C086MA02

4C086MA04

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA56

4C086MA59

4C086MA65

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA14

4C086ZA07

4C086ZA08

4C086ZA53

4C086ZA66

4C086ZA70

4C086ZA71

4C086ZA75

4C086ZA89

4C086ZB26

4C086ZC02

4C086ZC21

4C086ZC33

4C086ZC41

4C086ZC75

4C206AA01

4C206AA02

4C206FA53

4C206JA70

4C206MA02

4C206MA05

4C206MA72

4C206MA75

4C206MA76

4C206MA79

4C206MA85

4C206MA86

4C206NA05

4C206NA14

4C206ZA07

4C206ZA08

4C206ZA53

4C206ZA66

4C206ZA70

4C206ZA71

4C206ZA75

4C206ZA89

4C206ZB26

4C206ZC02

4C206ZC21

4C206ZC33

4C206ZC41

4C206ZC75

(57)【要約】

本開示は、膵疾患及び肝疾患、例えば、膵脂肪症、膵癌、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝炎、及び肝癌を治療するための方法及び組成物を提供する。提供される方法は、膵疾患及び／または肝疾患を患っているかまたは患うリスクがある対象に、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与することを含む。提供される方法は、膵疾患及び／または肝疾患を患っているかまたは患うリスクがある対象に、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与することを含む。
【選択図】図１Ａ

【特許請求の範囲】

【請求項1】

膵脂肪症を治療することを必要とする対象おける前記膵脂肪症を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、を含み、
前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。

【請求項2】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、請求項１に記載の方法。

【請求項3】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、請求項１に記載の方法。

【請求項4】

前記対象は、有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、請求項１に記載の方法。

【請求項5】

請求項１（ａ）～１（ｃ）のいずれか１つに記載の方法は、前記膵脂肪症の予防的治療として投与される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項6】

前記対象は、前記膵脂肪症を患っているか、または前記膵脂肪症を患うリスクがある、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項7】

前記対象は、前記膵脂肪症を患っているか、または前記膵脂肪症を患っていると診断されている、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項8】

前記膵脂肪症は、前記膵臓の脂肪浸潤、膵臓炎症を伴う前記膵臓の脂肪浸潤、または膵臓線維症の発生を伴う前記膵臓の脂肪浸潤に関連している、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項9】

前記膵脂肪症は、前記膵臓の脂肪の浸潤に関連している、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項10】

前記膵脂肪症は、膵臓炎症を伴う前記膵臓の脂肪浸潤に関連している、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項11】

前記膵脂肪症は、膵臓線維症の発症を伴う前記膵臓の脂肪浸潤に関連している、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項12】

前記膵脂肪症は、膵臓炎症を伴い、膵臓線維症の発症を伴う前記膵臓の脂肪浸潤に関連している、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項13】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項14】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項15】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項16】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤はＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項１６に記載の方法。

【請求項18】

前記投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、請求項１６または１７に記載の方法。

【請求項19】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項22】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記対象に共投与される、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／または前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項24】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記膵脂肪症の１つ以上の症状の発症前に投与される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記膵脂肪症を治療することは、前記膵脂肪症の発症を遅延させることを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記膵脂肪症の１つ以上の症状の発症後に投与される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項27】

前記方法により、結果として、治療前の前記対象と比較して、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与された前記対象において前記膵脂肪症の１つ以上の症状が軽減される、請求項２６に記載の方法。

【請求項28】

前記膵脂肪症の１つ以上の症状の軽減は、前記膵臓の脂肪含有量の２５％未満への減少、腹痛の軽減、悪心の軽減、食欲増加、体重増加、黄疸の軽減、浮腫の軽減；及び疲労、精神錯乱または脱力感の軽減；膵臓の炎症の軽減、膵炎の軽減、前記膵臓の細胞の線維化の軽減、及び膵脂肪症バイオマーカーまたは炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ６、ＭＣＰ１、ＩＬ８、ＰＡＦ）のレベルの低下によって示される、請求項２７に記載の方法。

【請求項29】

前記軽減した症状の前記１つ以上は、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、前記対象における脂肪含量の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％の減少である、請求項２７または２８に記載の方法。

【請求項30】

少なくとも１、２、３、４または５つの膵脂肪症バイオマーカーの血清レベルは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも２０％減少する、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項31】

前記バイオマーカー：ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ６、ＭＣＰ１、ＩＬ８及び／またはＰＡＦの少なくとも１、２、３、４または５つの血清レベルは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも２０％減少する、請求項２７～２９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項32】

追加の治療剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項33】

膵癌を治療することを必要とする対象おける前記膵癌を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、を含み、
前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。

【請求項34】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、請求項３３に記載の方法。

【請求項35】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、請求項３３に記載の方法。

【請求項36】

前記対象は、有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、請求項３３に記載の方法。

【請求項37】

請求項３３（ａ）～３３（ｃ）のいずれか一項に記載の方法は、前記膵癌の予防的治療として投与される、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項38】

前記対象は、前記膵癌を患っているか、または前記膵癌を患うリスクがある、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項39】

前記対象は、前記膵癌を患っているか、または前記膵癌を患っていると診断されている、請求項３３～３６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項40】

前記膵癌は、外分泌膵癌または神経内分泌膵癌である、請求項３３～３９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項41】

前記膵癌は、外分泌膵癌（例えば、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、または膠様癌）である、請求項４０に記載の方法。

【請求項42】

前記膵癌は、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、請求項４０に記載の方法。

【請求項43】

前記膵癌は、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、または膠様癌である、請求項４０に記載の方法。

【請求項44】

前記膵癌は、神経内分泌膵癌である、請求項４０に記載の方法。

【請求項45】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、請求項３３～４４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項46】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、請求項３３～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項47】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、請求項３３～４５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項48】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤はＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項３３～４７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項49】

前記ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項４８に記載の方法。

【請求項50】

前記投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、請求項４８または４９に記載の方法。

【請求項51】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、請求項３３～５０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項52】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、請求項３３～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項53】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、請求項３３～５１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項54】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記対象に共投与される、請求項３３～５３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項55】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／または前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、請求項３３～５４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項56】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記膵癌の１つ以上の症状の発症前に投与される、請求項３３～５５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項57】

前記膵癌を治療することは、前記膵癌の発症を遅延させることを含む、請求項３３～５６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項58】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記膵癌の１つ以上の症状の発症後に投与される、請求項３３～５７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項59】

前記方法により、結果として、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される前と比較して、前記対象において前記膵癌の１つ以上の症状が軽減される、請求項３３～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

前記膵癌の前記１つ以上の症状の軽減は、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制もしくは低下、新たな腫瘍の形成なし、新たな腫瘍形成の減少、生存または無憎悪生存率の増加、転移なし、治療の選択肢の増加、手術から再発までの時間の遅延、黄疸の軽減、肝臓への浸潤の抑制、痛みの軽減、食欲の改善、消化の改善、胆嚢のサイズの減少、及び血栓の発生率の減少によって示される、請求項５９に記載の方法。

【請求項61】

前記膵癌の前記１つ以上の症状は、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、請求項５９または６０に記載の方法。

【請求項62】

前記バイオマーカーであるクレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリンのうちの少なくとも１つは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、減少する、請求項５９～６１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項63】

（ａ）前記対象の前記バイオマーカーであるクレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリンのうちの少なくとも１、２、３、４、５つ以上は、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％改善するか、または、
（ｂ）前記対象の腫瘍サイズは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、
請求項５９～６２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項64】

追加の治療薬を前記対象に投与することを更に含む、請求項３３～６３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項65】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療することを必要とする対象における、前記非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、を含み、
前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。

【請求項66】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、請求項６５に記載の方法。

【請求項67】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、請求項６５に記載の方法。

【請求項68】

前記対象は、有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、請求項６５に記載の方法。

【請求項69】

請求項６５（ａ）～６５（ｃ）のいずれか１つに記載の方法は、前記非アルコール性脂肪性疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）の予防的治療として投与される、請求項６５～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項70】

前記対象は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）を患っているかまたは患うリスクがある、請求項６５～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項71】

前記対象は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）を患っているかまたは患っていると診断されている、請求項６５～６８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項72】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、請求項６５～７１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項73】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、請求項６５～７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項74】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、請求項６５～７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項75】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤はＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項６５～７２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項76】

前記ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項７５に記載の方法。

【請求項77】

前記投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、請求項７５または７６に記載の方法。

【請求項78】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、請求項６５～７７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項79】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、請求項６５～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項80】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、請求項６５～７８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項81】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記対象に共投与される、請求項６５～８０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項82】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／または前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、請求項６５～８１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項83】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維化）の１つ以上の症状の発症前に投与される、請求項６５～８２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項84】

非アルコール性脂肪肝疾患を治療することは、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）の発症を遅延させることを含む、請求項６５～８３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項85】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維化）の１つ以上の症状の発症後に投与される、請求項６５～８４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項86】

前記方法により、結果として、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される前と比較して、前記対象において非アルコール性脂肪肝疾患の１つ以上の症状が軽減される、請求項６５～８５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項87】

前記非アルコール性脂肪肝疾患の１つ以上の症状の軽減は、
（ａ）右上腹部の疲労、痛みまたは不快感の軽減、脾肥大の軽減、黄疸の軽減、浮腫の軽減、食欲増加、及び減少、
（ｂ）ＮＡＳの軽減、または、
（ｃ）ＮＡＦＬＤバイオマーカー（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１、ｏｘＬＤＬ、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ、及びＴＩＭＰ１）のレベルの低下
によって示される、請求項８６に記載の方法。

【請求項88】

前記非アルコール性脂肪肝疾患の１つ以上の症状は、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、請求項８６または８７に記載の方法。

【請求項89】

（ａ）前記血漿ＮＡＦＬＤバイオマーカー（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１、ｏｘＬＤＬ、ＡＬＴ、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ、及びＴＩＭＰ１）の少なくとも１つは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、改善されるか、または、
（ｂ）前記対象のＮＡＳスコアは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、１、２、３以上減少するか、または、
（ｃ）治療した前記対象は、３ポイント未満のＮＡＳを有する、
請求項８６～８８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項90】

ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１、ｏｘＬＤＬ、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ、及びＴＩＭＰ１から選択される少なくとも１、２、３、４または５つのバイオマーカーは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、請求項８６～８９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項91】

追加の治療剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項６５～９０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項92】

肝細胞癌を治療することを必要とする対象における、前記肝細胞癌を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を前記対象に投与することであって、前記対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、前記対象に投与すること、を含み、
前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。

【請求項93】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、請求項９２に記載の方法。

【請求項94】

前記対象は、有効量の前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、請求項９２に記載の方法。

【請求項95】

前記対象は、有効量の前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、前記対象は、以前に前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、請求項９２に記載の方法。

【請求項96】

請求項９２（ａ）～９２（ｃ）のいずれか１つに記載の方法は、肝細胞癌の予防的治療として投与される、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項97】

前記対象は肝細胞癌を患っているか、または肝細胞癌を患うリスクがある、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項98】

前記対象は肝細胞癌を患っているか、または肝細胞癌を患っていると診断されている、請求項９２～９５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項99】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、請求項９２～９８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項100】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、請求項９２～９９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項101】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、請求項９２～９９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項102】

前記投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤はＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項９２～９９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項103】

前記ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、請求項１０２に記載の方法。

【請求項104】

前記投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、請求項１０２または１０３に記載の方法。

【請求項105】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、請求項９２～１０４のいずれか一項に記載の方法。

【請求項106】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、請求項９２～１０５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項107】

前記投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、請求項９２～１０５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項108】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、前記対象に共投与される、請求項９２～１０７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項109】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／または前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、請求項９２～１０８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項110】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症前に投与される、請求項９２～１０９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項111】

肝細胞癌を治療することは、肝細胞癌の発症を遅延させることを含む、請求項９２～１１０のいずれか一項に記載の方法。

【請求項112】

前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症後に投与される、請求項９２～１１１のいずれか一項に記載の方法。

【請求項113】

前記方法により、結果として、治療前の前記対象と比較して、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与された前記対象において肝細胞癌の１つ以上の症状が軽減される、請求項９２～１１２のいずれか一項に記載の方法。

【請求項114】

前記肝細胞癌の１つ以上の軽減された症状は、
（ａ）体重増加、食欲増加、発熱の減少、悪心の減少、疲労の減少、上腹部痛の減少、腹部及び下肢の腫脹の減少、皮膚の黄変（黄疸）の減少、または皮下出血の減少、
（ｂ）ＨＣＣを有する対象における典型的に上昇する少なくとも１つのバイオマーカーの減少（例えば、ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、及びＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ、及びＬＡＭＰ－２）、または
（ｃ）腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制もしくは低下、新たな腫瘍の形成なし、新たな腫瘍形成の減少、生存もしくは無憎悪生存率の増加、転移なし、治療の選択肢の増加、または手術から再発までの時間の遅延
によって示される、請求項１１３に記載の方法。

【請求項115】

以下の症状：体重減少、食欲不振、発熱、悪心、疲労感、上腹部痛、腹部及び下肢の腫脹、皮膚の黄変（黄疸）、皮下出血または出血が生じやすい、及び肝不全のうちの少なくとも１つは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前と比較して前記対象において改善される、請求項１１３または１１４に記載の方法。

【請求項116】

ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、及びＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ、及びＬＡＭＰ－２から選択される、少なくとも１、２、３、４または５つのバイオマーカーは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３による治療前の前記対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、請求項１１３～１１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項117】

前記対象の腫瘍サイズは、前記ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び前記ＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の前記対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、請求項１１３～１１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項118】

追加の治療剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項９２～１１７のいずれか一項に記載の方法。

【請求項119】

ＧＰＲ８１阻害剤を前記対象に投与することを更に含む、請求項１～１１８のいずれか一項に記載の方法。

【発明の詳細な説明】

【背景技術】

【0001】

本開示は、膵疾患及び肝疾患、例えば、膵脂肪症、膵癌、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝炎、及び肝癌を治療するための方法及び組成物を提供する。提供される方法は、膵疾患及び／または肝疾患を患っているか、またはそれを患うリスクがある対象に、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与することを含む。

【0002】

肥満及びメタボリックシンドローム（肥満、高血糖、脂質異常症、高血圧及びインスリン抵抗性を含む）は、脂肪細胞による脂質の誤った取り扱い、ならびに膵臓及び肝臓の脂肪浸潤につながる代謝異常をもたらす。血行中、ならびに膵臓及び肝臓の微小環境におけるアディポサイトカインの不均衡により、慢性的な低度の炎症が引き起こされ、膵臓及び肝臓の機能障害がもたらされる。更に、これらのアディポサイトカインは、細胞増殖、分化、ならびに血管新生及びリンパ管の拡張を調節する。

【0003】

膵脂肪症は、膵臓の脂肪浸潤から膵臓の炎症、及び膵線維症の発生に至るまでの疾患を指す。膵臓の脂肪細胞浸潤の結果は、膵臓の機能障害を引き起こし、発がんを引き起こすと考えられており、膵臓上皮内腫瘍及び膵管腺癌（ＰＤＡＣ）を引き起こす。

【0004】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、肝細胞におけるトリグリセリドの肝蓄積の存在を指し、西欧諸国における慢性肝疾患の最も一般的な原因である。その臨床的組織学的表現型は、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）から非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）まで及び、肝臓の炎症及び進行性線維化によって特徴付けられ、肝硬変及び末期肝疾患、ならびに肝細胞癌を引き起こす。ＮＡＳＨ関連の肝硬変は、米国における肝臓移植の主な指標となっている。

【0005】

２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）は、膵臓腺癌（ＰＤＡＣ）の十分に確立された危険因子であり、ＢＭＩのような人体測定因子を相関させるために調整した後でも、悪性度のリスクが１．５～２倍に上昇する。ＢＭＩ一致の対照及び年齢一致の対照と比較した場合、Ｔ２Ｄを患う個体からの膵臓において、前腫瘍性膵臓上皮内病変（ＰａｎＩＮ）はより頻繁に発生し、膵管腺（ＰＤＧ）の複製は２倍に増加する。腺房から腺管への化生に加えて、ＰＤＧコンパートメントは、腫瘍発生の開始ニッチとしてＰＤＡＣに関与しており、膵臓微小環境（炎症及び代謝）の変化に対して、意図的には、例えば、膵炎中の損傷後に管上皮を再生する試みの増殖の増加によって応答する可能性がある。ＰＤＧの慢性的な活性化は、ＰＤＧにおける全体的な腫瘍促進、またはＰａｎＩＮの進行をもたらす可能性がある。更に、非糖尿病患者と比較して、Ｔ２Ｄを患う脳死ドナーに由来する膵臓では、膵島－ＰａｎＩＮ複合体が濃縮されており、このことは、Ｔ２Ｄの糖尿病膵島が、ＰａｎＩＮに解剖学的に近接していることから、ＰａｎＩＮに対して重大なパラクライン効果を及ぼし得ることを示している。

【0006】

膵疾患及び肝疾患、例えば、膵癌、肝癌、膵炎及び非アルコール性脂肪肝疾患の治療に利用できる治療法は限られており、欠点が付随する。膵疾患及び肝疾患を患う個体の数が増加し続け、それが世界的な規模で影響を及ぼしていることを考えると、膵疾患及び肝疾患を軽減または緩和する治療法が緊急に必要とされている。

【発明の概要】

【0007】

本開示は、膵疾患及び肝疾患、例えば膵脂肪症、膵癌、例えば膵管副腎癌、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝炎、及び肝癌、例えば肝細胞癌を治療するための方法及び組成物を提供する。提供される方法は、膵疾患及び／または肝疾患を患っているか、またはそれを患うリスクがある対象に、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与することを含む。

【0008】

Ｔ２Ｄでは、膵外分泌部は、外分泌不全、腺房線維化及び腺房炎症、ならびに糖尿病β細胞のＨＩＦ－１α／ＰＦＫＦＢ３シグナル伝達軸の活性化を含む様々な変化を受け、β細胞機能障害、炎症、膵島の代謝リモデリング、及び乳酸放出を引き起こす－これらは、微小環境に影響を及ぼすことができ、膵外分泌部における腫瘍促進の手がかりを提供することができる要因である。

【0009】

本発明者らは、驚くべきことに、ＨＩＦ１－α／ＰＦＫＦＢ３シグナル伝達軸のＨＩＦ１－α阻害剤とＰＦＫＦＢ３阻害剤の組み合わせが、膵臓癌及び肝癌の促進または進行に関連する事象を軽減することによって膵癌を治療できることを見出した。理論に束縛されるものではないが、開示された方法は、機能細胞の生存を促進する膵臓及び肝臓における細胞競合を活性化し、それにより、生存及び機能不全細胞を促進しかつ膵疾患及び肝疾患ならびに腫瘍増殖及び進行をもたらす、細胞の機能不全、炎症、代謝リモデリングならびに乳酸放出などの要因を軽減すると考えられる。

【0010】

また、本発明者らは、膵外分泌部の糖尿病膵島から分泌された乳酸が、近位の腺房細胞、膵管腺（ＰＤＧ）及び既存のＰａｎＩＮでＧＰＲ８１シグナル伝達を活性化することを見出した。乳酸の慢性的なＨＩＦ１－α－ＰＦＫＦＢ３依存性放出は、膵外分泌部に対して腫瘍促進効果を発揮し、それにより、腫瘍増殖及び進行を促進する。ＧＰＲ８１受容体は、ＰＤＡＣ患者由来の全細胞株の９８％で過剰発現している。ＧＰＲ８１の活性化は、脂肪分解の阻害、増殖の増加、移入、活性酸素種、及び（ＲＯＳ）の解毒の後の細胞内脂質の蓄積と関連しており、複数の事象により膵臓内の前腫瘍性病変の増殖がもたらされる。

【0011】

いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、慢性膵疾患及び／または肝疾患を治療する。いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、急性膵疾患及び／または肝疾患を治療する。

【0012】

いくつかの実施形態では、本開示は、以下を提供する。
［１］膵脂肪症を治療することを必要とする対象における膵脂肪症を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。
［２］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、［１］に記載の方法。
［３］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、［１］に記載の方法。
［４］対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、［１］に記載の方法。
［５］１（ａ）～１（ｃ）のいずれか１つに記載の方法は、膵脂肪症（例えば、膵臓の脂肪浸潤、膵臓炎症を伴う膵臓の脂肪浸潤、及び膵臓線維症の発生を伴う膵臓の脂肪浸潤）の予防的治療として投与される、［１］～［４］のいずれか１つに記載の方法。
［６］対象は、膵脂肪症（例えば、膵臓の脂肪浸潤、膵臓炎症を伴う膵臓の脂肪浸潤、及び膵臓線維症の発生を伴う膵臓の脂肪浸潤）を患うか、またはそれを患うリスクがある、［１］～［４］のいずれか１つに記載の方法。
［７］対象は、膵脂肪症を患っているか、またはそれを患っていると診断されている、［１］～［４］のいずれか１つに記載の方法。
［８］膵脂肪症は、膵臓の脂肪浸潤、膵臓炎症を伴う膵臓の脂肪浸潤、または膵臓線維症の発生を伴う膵臓の脂肪浸潤に関連している、［１］～［７］のいずれか１つに記載の方法。
［９］膵脂肪症は、膵臓の脂肪の浸潤を伴う、［１］～［８］のいずれか１つに記載の方法。
［１０］膵脂肪症は、膵臓炎症を伴う膵臓の脂肪浸潤に関連している、［１］～［８］のいずれか１つに記載の方法。
［１１］膵脂肪症は、膵臓線維症の発症を伴う膵臓の脂肪浸潤に関連している、［１］～［８］のいずれか１つに記載の方法。
［１２］膵脂肪症は、膵臓炎症を伴い、膵臓線維症の発症を伴う膵臓の脂肪浸潤に関連している、［１］～［８］のいずれか１つに記載の方法。
［１３］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、［１］～［１２］のいずれか１つに記載の方法。
［１４］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、［１］～［１３］のいずれか１つに記載の方法。
［１５］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、［１］～［１４］のいずれか１つに記載の方法。
［１６］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である、［１］～［１５］のいずれか１つに記載の方法。
［１７］ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、［１６］に記載の方法。
［１８］投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、［１６］または［１７］に記載の方法。
［１９］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、［１］～［１８］のいずれか１つに記載の方法。
［２０］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、［１］～［１９］のいずれか１つに記載の方法。
［２１］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、［１］～［２０］のいずれか１つに記載の方法。
［２２］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、対象に共投与される、［１］～［２１］のいずれか１つに記載の方法。
［２３］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、［１］～［２２］のいずれか１つに記載の方法。
［２４］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、膵脂肪症の１つ以上の症状の発症前に投与される、［１］～［２３］のいずれか１つに記載の方法。
［２５］膵脂肪症を治療することは、膵脂肪症の発症を遅延させることを含む、［１］～［２４］のいずれか１つに記載の方法。
［２６］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、膵脂肪症の１つ以上の症状の発症後に投与される、［１］～［２３］のいずれか１つに記載の方法。
［２７］本方法により、結果として、治療前の対象と比較して、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与された対象において膵脂肪症の１つ以上の症状が軽減される、［２６］に記載の方法。
［２８］膵脂肪症の１つ以上の症状の軽減は、膵臓の脂肪含有量の２５％未満への減少、腹痛の軽減、悪心の軽減、食欲増加、体重増加、黄疸の軽減、浮腫の軽減；及び疲労、精神錯乱または脱力感の軽減；膵臓の炎症の軽減、膵炎の軽減、膵臓の細胞の線維化の軽減、及び膵脂肪症バイオマーカーまたは炎症促進性サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ６、ＭＣＰ１、ＩＬ８、ＰＡＦ）のレベルの低下によって示される、［２７］に記載の方法。
［２９］軽減した症状の１つ以上は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、対象における脂肪含量の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％の減少である、［２７］または［２８］に記載の方法。
［３０］少なくとも１、２、３、４または５つの膵脂肪症バイオマーカーの血清レベルは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも２０％減少する、［２７］～［２９］のいずれか１つに記載の方法。
［３１］バイオマーカー：ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ６、ＭＣＰ１、ＩＬ８及び／またはＰＡＦの少なくとも１、２、３、４または５つの血清レベルは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも２０％減少する、［２７］～［３０］のいずれか１つに記載の方法。
［３２］追加の治療剤を対象に投与することを更に含む、［１］～［３１］のいずれか１つに記載の方法。
［３３］膵癌を治療することを必要とする対象における膵癌を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。
［３４］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、［３３］に記載の方法。
［３５］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、［３３］に記載の方法。
［３６］対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、［３３］に記載の方法。
［３７］１（ａ）～１（ｃ）のいずれか１つに記載の方法は、膵癌の予防的治療として投与される、［３３］～［３６］のいずれか１つに記載の方法。
［３８］対象は、膵癌を患っているか、またはそれを患うリスクがある、［３３］～［３６］のいずれか１つに記載の方法。
［３９］対象は、膵癌を患っているか、または膵癌を患っていると診断されている、［３３］～［３６］のいずれか１つに記載の方法。
［４０］膵癌は、外分泌膵癌または神経内分泌膵癌である、［３３］～［３９］のいずれか１つに記載の方法。
［４１］膵癌は、外分泌膵癌（例えば、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、または膠様癌）である、［４０］に記載の方法。
［４２］膵癌は、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である、［４０］に記載の方法。
［４３］膵癌は、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、または膠様癌である、［４０］に記載の方法。
［４４］膵癌は、神経内分泌膵癌である、［４０］に記載の方法。
［４５］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、［３３］～［４４］のいずれか１つに記載の方法。
［４６］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、［３３］～［４５］のいずれか１つに記載の方法。
［４７］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、［３３］～［４５］のいずれか１つに記載の方法。
［４８］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である、［３３］～［４７］のいずれか１つに記載の方法。
［４９］ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、［４８］に記載の方法。
［５０］投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、［４８］または［４９］に記載の方法。
［５１］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、［３３］～［５０］のいずれか１つに記載の方法。
［５２］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、［３３］～［５１］のいずれか１つに記載の方法。
［５３］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、［３３］～［５１］のいずれか１つに記載の方法。
［５４］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、対象に共投与される、［３３］～［５３］のいずれか１つに記載の方法。
［５５］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、［３３］～［５４］のいずれか１つに記載の方法。
［５６］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、膵癌の１つ以上の症状の発症前に投与される、［３３］～［５５］のいずれか１つに記載の方法。
［５７］膵癌を治療することは、膵癌の発症を遅延させることを含む、［３３］～［５６］のいずれか１つに記載の方法。
［５８］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、膵癌の１つ以上の症状の発症後に投与される、［３３］～［５７］のいずれか１つに記載の方法。
［５９］本方法により、結果として、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される前と比較して、対象において膵癌の１つ以上の症状が軽減される、［３３］～［５８］のいずれか１つに記載の方法。
［６０］膵癌の１つ以上の症状の軽減は、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制もしくは低下、新たな腫瘍の形成なし、新たな腫瘍形成の減少、生存または無憎悪生存率の増加、転移なし、治療の選択肢の増加、手術から再発までの時間の遅延、黄疸の軽減、肝臓への浸潤の抑制、痛みの軽減、食欲の改善、消化の改善、胆嚢のサイズの減少、及び血栓の発生率の減少によって示される、［５９］に記載の方法。
［６１］膵癌の１つ以上の症状は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される、［５９］または［６０］に記載の方法。
［６２］バイオマーカーであるクレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリンのうちの少なくとも１つは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、減少する、［５９］～［６１］のいずれか１つに記載の方法。
［６３］（ａ）対象のバイオマーカーであるクレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリンのうちの少なくとも１、２、３、４、５つ以上は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％改善するか、または、
（ｂ）対象の腫瘍サイズは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、
［５９］～［６２］のいずれか１つに記載の方法。
［６４］追加の治療剤を対象に投与することを更に含む、［３３］～［６３］のいずれか１つに記載の方法。
［６５］非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療することを必要とする対象における、非アルコール性脂肪性肝疾患を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。
［６６］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、［６５］に記載の方法。
［６７］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、［６５］に記載の方法。
［６８］対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、［６５］に記載の方法。
［６９］１（ａ）～１（ｃ）のいずれか１つに記載の方法は、非アルコール性脂肪性疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）の予防的治療として投与される、［６５］～［６８］のいずれか１つに記載の方法。
［７０］対象は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）を患っているか、またはそれを患うリスクがある、［６５］～［６８］のいずれか１つに記載の方法。
［７１］対象は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）を患っているか、またはそれを患っていると診断されている、［６５］～［６８］のいずれか１つに記載の方法。
［７２］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、［６５］～［７１］のいずれか１つに記載の方法。
［７３］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、［６５］～［７２］のいずれか１つに記載の方法。
［７４］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、［６５］～［７２］のいずれか１つに記載の方法。
［７５］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である、［６５］～［７２］のいずれか１つに記載の方法。
［７６］ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、［７５］に記載の方法。
［７７］投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、［７５］または［７６］に記載の方法。
［７８］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、［６５］～［７７］のいずれか１つに記載の方法。
［７９］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、［６５］～［７８］のいずれか１つに記載の方法。
［８０］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、［６５］～［７８］のいずれか１つに記載の方法。
［８１］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、対象に共投与される、［６５］～［８０］のいずれか１つに記載の方法。
［８２］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、［６５］～［８１］のいずれか１つに記載の方法。
［８３］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維化）の１つ以上の症状の発症前に投与される、［６５］～［８２］のいずれか１つに記載の方法。
［８４］非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療することは、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症）の発症を遅延させることを含む、［６５］～［８３］のいずれか１つに記載の方法。
［８５］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、非アルコール性脂肪肝疾患（例えば、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）、またはＮＡＦＬＤ関連肝線維化）の１つ以上の症状の発症後に投与される、［６５］～［８４］のいずれか１つに記載の方法。
［８６］本方法により、結果として、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される前と比較して、対象において非アルコール性脂肪肝疾患の１つ以上の症状が軽減される、［６５］～［８５］のいずれか１つに記載の方法。
［８７］非アルコール性脂肪肝疾患の１つ以上の症状の軽減は、
（ａ）右上腹部の疲労、痛みまたは不快感の軽減、脾肥大の軽減、黄疸の軽減、浮腫の軽減、食欲増加、及び減少、
（ｂ）ＮＡＳの軽減、または、
（ｃ）ＮＡＦＬＤバイオマーカー（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１、ｏｘＬＤＬ、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ、及びＴＩＭＰ１）のレベルの低下
によって示される、［８６］に記載の方法。
［８８］非アルコール性脂肪肝疾患の１つ以上の症状は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、［８６］または［８７］に記載の方法。
［８９］（ａ）血漿ＮＡＦＬＤバイオマーカー（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１、ｏｘＬＤＬ、ＡＬＴ、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ、及びＴＩＭＰ１）の少なくとも１つは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、改善されるか、または、
（ｂ）対象のＮＡＳスコアは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、１、２、３以上減少するか、または、
（ｃ）治療した対象は、３ポイント未満のＮＡＳを有する、
［８６］～［８８］のいずれか１つに記載の方法。
［９０］ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１、ｏｘＬＤＬ、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ、及びＴＩＭＰ１から選択される少なくとも１、２、３、４または５つのバイオマーカーは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、［８６］～［８９］のいずれか１つに記載の方法。
［９１］追加の治療剤を対象に投与することを更に含む、［６５］～［９０］のいずれか１つに記載の方法。
［９２］肝細胞癌を治療することを必要とする対象における、肝細胞癌を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法。
［９３］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される、［９２］に記載の方法。
［９４］対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、［９２］に記載の方法。
［９５］対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、［９２］に記載の方法。
［９６］［９２（ａ）～（ｃ）］のいずれか１つに記載の方法は、肝細胞癌の予防的治療として投与される、［９２］～［９５］のいずれか１つに記載の方法。
［９７］対象は肝細胞癌を患っているか、または肝細胞癌を患うリスクがある、［９２］～［９５］のいずれか１つに記載の方法。
［９８］対象は肝細胞癌を患っているか、または肝細胞癌を患っていると診断されている、［９２］～［９５］のいずれか１つに記載の方法。
［９９］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である、［９２］～［９８］のいずれか１つに記載の方法。
［１００］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である、［９２］～［９９］のいずれか１つに記載の方法。
［１０１］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である、［９２］～［９９］のいずれか１つに記載の方法。
［１０２］投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である、［９２］～［９９］のいずれか１つに記載の方法。
［１０３］ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である、［１０２］に記載の方法。
［１０４］投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである、［１０２］または［１０３］に記載の方法。
［１０５］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ＭｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である、［９２］～［１０４］のいずれか１つに記載の方法。
［１０６］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である、［９２］～［１０５］のいずれか１つに記載の方法。
［１０７］投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（ａ）ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、もしくはそれらの塩である、（ｂ）図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７、もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、もしくはそれらの塩の構造を有する、（ｃ）図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～式ＡＺ７０もしくは式ＡＺ７１、もしくはそれらの塩の構造を有する、または（ｄ）ＡＺ６７もしくはその塩である、［９２］～［１０５］のいずれか１つに記載の方法。
［１０８］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、対象に共投与される、［９２］～［１０７］のいずれか１つに記載の方法。
［１０９］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口、非経口、同所性、皮内、皮下、筋肉内、腹腔内、鼻腔内、腫瘍内、または静脈内である、［９２］～［１０８］のいずれか１つに記載の方法。
［１１０］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症前に投与される、［９２］～［１０９］のいずれか１つに記載の方法。
［１１１］肝細胞癌を治療することは、肝細胞癌の発症を遅延させることを含む、［９２］～［１１０］のいずれか１つに記載の方法。
［１１２］ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症後に投与される、［９２］～［１１１］のいずれか１つに記載の方法。
［１１３］本方法により、結果として、治療前の対象と比較して、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与された対象において肝細胞癌の１つ以上の症状が軽減される、［９２］～［１１２］のいずれか１つに記載の方法。
［１１４］肝細胞癌の１つ以上の軽減された症状は、
（ａ）体重増加、食欲増加、発熱の減少、悪心の減少、疲労の減少、上腹部痛の減少、腹部及び下肢の腫脹の減少、皮膚の黄変（黄疸）の減少、または皮下出血の減少、
（ｂ）ＨＣＣ（例えば、ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、及びＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ、及びＬＡＭＰ－２）を有する、対象における典型的に上昇する少なくとも１つのバイオマーカーの減少、または
（ｃ）腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制もしくは低下、新たな腫瘍の形成なし、新たな腫瘍形成の減少、生存もしくは無憎悪生存率の増加、転移なし、治療の選択肢の増加、または手術から再発までの時間の遅延
によって示される、［１１３］に記載の方法。
［１１５］以下の症状：体重減少、食欲不振、発熱、悪心、疲労感、上腹部痛、腹部及び下肢の腫脹、皮膚の黄変（黄疸）、皮下出血または出血が生じやすい、及び肝不全のうちの少なくとも１つは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前と比較して対象において、改善される、［１１３］または［１１４］に記載の方法。
［１１６］ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、及びＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ、及びＬＡＭＰ－２から選択される、少なくとも１、２、３、４または５つのバイオマーカーは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、［１１３］～［１１５］のいずれか１つに記載の方法。
［１１７］対象の腫瘍サイズは、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する、［１１３］～［１１６］のいずれか１つに記載の方法。
［１１８］追加の治療剤を対象に投与することを更に含む、［９２］～［１１７］のいずれか１つに記載の方法。
［１１９］ＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与することを更に含む、［１］～［１１８］のいずれか１つに記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【0013】

【図1A】例示的なＰＦＫＦＢ３小分子阻害剤を示す。

【図1B】例示的なＰＦＫＦＢ３小分子阻害剤を示す。

【図1C】例示的なＰＦＫＦＢ３小分子阻害剤を示す。

【図1D】例示的なＰＦＫＦＢ３小分子阻害剤を示す。

【図1E】例示的なＰＦＫＦＢ３小分子阻害剤を示す。

【発明を実施するための形態】

【0014】

定義
特に定義されない限り、本明細書で用いるすべての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または同等の方法及び材料は、提供される組成物の実施または試験で使用することができるが、好適な方法及び材料が以下に記載される。本明細書で言及される各刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含めて本明細書が優先する。加えて、材料、方法、及び例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。

【0015】

開示された方法及び組成物の他の特徴ならびに利点は、以下の開示、図面、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【0016】

諸実施形態が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語を用いて本明細書で説明されている場合は常に、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」及び／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という観点から説明されている別の類似の実施形態も提供されるものと理解されたい。ただし、特許請求の範囲内で移行句として使用される場合、それぞれを個別に、適切な法的及び事実的文脈の中で解釈する必要がある（例えば、特許請求の範囲内では、移行句「含む」は、よりオープンエンドな表現とみなされ、「からなる」はより排他的であり、「から本質的になる」は中間に位置する）。

【0017】

本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、そのような意図がないことが明示的に述べられていない限り、または文脈から明確に明らかでない限り、複数形を含む。単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には、粒子集団内の粒子の統計的平均組成、特性、またはサイズ（例えば、平均ポリエチレングリコール分子量、平均リポソーム直径、平均リポソームゼータ電位）も含まれる。医薬組成物中のリポソームの平均粒径及びゼータ電位は、動的光散乱法などの当技術分野で公知の方法を使用して日常的に測定することができる。ナノ粒子組成物中の治療薬の平均量は、例えば、吸収分光法（例えば、紫外－可視分光法）を使用して日常的に測定され得る。

【0018】

本明細書で使用される場合、目的の１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記述される参照値と類似する値を指す。特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別途記載のない限り、または別途文脈から明らかでない限り（そのような数が可能な値の１００％を超え得る場合を除く）、述べられた基準値のいずれかの方向（上回るまたは下回る）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％以内に含まれる値の範囲を指す。例えば、ナノ粒子組成物の脂質成分中の所定の化合物の量との関連で使用される場合、「約」は、記載された値の＋／－１０％を意味し得る。例えば、所定の化合物を約４０％有する脂質成分を含むナノ粒子組成物は、その化合物を３０～５０％含むことができる。

【0019】

「及び／または」という用語は、本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの表現で使用される場合、Ａ及びＢの両方、ＡまたはＢ、Ａ（単独）、ならびにＢ（単独）を含むように意図されている。同様に、「及び／または」という用語は、「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」のような句で使用される場合、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含するように意図されている。

【0020】

本明細書の値の範囲の列挙は、本明細書で別様が示されない限り、単に、範囲内に収まるそれぞれの別個の値を個々に指す速記方法としての役割を果たすことが意図され、それぞれの別個の値は、本明細書に個々に列挙されるかのように、本明細書に組み込まれる。

【0021】

本開示の実施形態がマーカッシュ群またはその他の代替のグループに関して説明される場合、本開示の組成物または方法は、全体として挙げられたグループ全体を包含するだけでなく、グループの各メンバーも個別に包含し、メイングループのすべての可能なサブグループも包含し、更にグループメンバーの１つ以上不在のメイングループも包含する。また、本開示の方法及び組成物は、本開示の組成物または方法におけるグループメンバーのいずれかの１つ以上が明示的に除外されることも想定している。

【0022】

本明細書で使用される場合、「抗体」及び「抗原結合抗体断片」などの用語には、これらに限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、またはその抗原結合部分などの、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む任意のタンパク質またはペプチド含有分子が含まれる。

【0023】

「抗体」という用語にはまた、単鎖抗体、単一結合ドメイン抗体及び抗原結合抗体断片を含む、抗体またはその特定の断片もしくは一部分の構造及び／または機能を模倣する、抗体模倣物または抗体の一部分を含む、その断片、特定の部分及び変異体が含まれる。

【0024】

「抗体断片」という用語は、インタクトな抗体の一部分、一般にはインタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を指す。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖（ｓｃＦｖ）及びＦｖ断片、ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子；単一Ｆａｂアーム「ワンアーム」抗体、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体などが挙げられるが、これらに限定されない。抗体断片には、これらに限定されないが、重鎖もしくは軽鎖の少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）もしくはそのリガンド結合部分、重鎖もしくは軽鎖可変領域、重鎖もしくは軽鎖定常領域、フレームワーク領域もしくはその任意の部分、または抗原もしくは抗原受容体もしくは結合タンパク質の少なくとも一部などの免疫グロブリン分子の少なくとも一部を含む、任意のタンパク質またはペプチド含有分子が含まれ、これらは、本明細書で提供される抗体に組み込むことができる。

【0025】

抗体断片は、当技術分野で公知のように、酵素的切断、合成または組換え技術によって生成することができる。抗体は、１つ以上の終止コドンが天然の終止部位の上流に導入されている抗体遺伝子を使用して、様々な切断型で生成することもできる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２重鎖部分をコードする組み合わせ遺伝子は、重鎖のＣＨ１ドメイン及び／またはヒンジ領域をコードするＤＮＡ配列を含むように設計することができる。抗体の様々な部分は、従来の技術によって化学的に結合することも、遺伝子工学技術を使用して連続したタンパク質として調製することもできる。

【0026】

「核酸」または「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書では互換的に使用され、共有結合で一緒に結合した少なくとも２つのヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤は、治療用核酸である。いくつかの実施形態では、投与される核酸は、ＥＮＭＤ－１１９８、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質（例えば、ｄｓＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、アンチセンス分子、デコイ、もしくはアプタマー、またはＥＮＭＤ－１１９８、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、抗ｍｉＲＮＡ、アンチセンス分子、デコイ、もしくはアプタマーを発現させるプラスミドである。

【0027】

提供される方法に従って投与される核酸は、好ましくは一本鎖または二本鎖であり、一般にホスホジエステル結合を含むが、場合によっては、核酸／オリゴヌクレオチドアナログは、例えば、ホスホルアミド、ホスホロチオエート（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホロジチオエート、Ｏ－メチルホスホロアミダイト結合、ならびにペプチド核酸骨格及び結合を含む、代替骨格を有するものが含まれる。他のアナログ核酸／オリゴヌクレオチドには、ポジティブ骨格、非イオン性骨格、及び非リボース骨格を有するものが含まれる。１つ以上の炭素環状糖を含む核酸／オリゴヌクレオチドも、核酸及びオリゴヌクレオチドの定義に含まれる。リボース－ホスフェート骨格のこれらの修飾は、例えば、標識などの付加部分の付加を容易にするため、または生理学的環境におけるそのような分子の安定性及び半減期を増加させるために行うことができる。提供される方法に従って使用されるオリゴヌクレオチドの核酸／オリゴヌクレオチド骨格は、約５ヌクレオチド～約７５０ヌクレオチドの範囲であり得る。好ましい核酸／オリゴヌクレオチド骨格は、長さが約５ヌクレオチド～約５００ヌクレオチド、好ましくは約１０ヌクレオチド～約１００ヌクレオチドの範囲である。

【0028】

提供される方法に従って投与されるオリゴヌクレオチドは、核酸標的の少なくともある領域に特異的にハイブリダイズできるヌクレオシド及び／またはヌクレオチドモノマーのポリマー構造である。上記のように、提供される方法に従って使用される「核酸」及び「オリゴヌクレオチド」には、天然に存在する塩基、糖及び糖間（骨格）連結を含む化合物、天然に存在する対応物と同様に機能する、天然に存在しない修飾モノマー、またはその一部（例えば、オリゴヌクレオチド類似体もしくは模倣体）、及びこれらの天然に存在するモノマーと天然に存在しないモノマーの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「修飾された」または「修飾」という用語は、核酸などの出発または天然オリゴマー化合物からの任意の置換及び／または任意の変更を含む。核酸への修飾は、本明細書に記載のもの及び別様に当技術分野で公知のもののような、ヌクレオシド間連結、糖部分、または塩基部分への置換または変更を包含する。

【0029】

本明細書で使用される場合、「小分子」とは、従来の有機化学法（例えば、実験室における）によって合成されるか、または自然界で見出される有機化合物を指す。通常、小分子は、いくつかの炭素－炭素結合を含み、分子量が約１５００グラム／モル未満であることを特徴とする。特定の実施形態では、小分子は約１０００グラム／モル未満である。特定の実施形態では、小分子は約５５０グラム／モル未満である。特定の実施形態では、小分子は約２００～約５５０グラム／モルである。特定の実施形態では、小分子には、ペプチド（例えば、ペプチジル結合によって結合された２つ以上のアミノ酸を含む化合物）が含まれない。特定の実施形態では、小分子には、核酸が含まれない。

【0030】

「状態」及び「疾患」という用語は、本明細書では互換的に使用され、細胞、組織もしくは器官の正常な機能を損傷、妨害、もしくは調節不全にする、任意の状態または障害を指す。

【0031】

「線維症」は、通常は炎症または他の損傷の結果として、線維状結合組織がいずれかの臓器（例えば膵臓及び肝臓）に侵入する病理学的状態である。

【0032】

本明細書で使用される場合、「膵癌」という用語は、当技術分野で認識されている疾患を指し、膵臓を含む組織に由来するがんを含む。様々な実施形態では、膵癌は、外分泌膵癌、膵嚢胞腫瘍、または膵内分泌腫瘍である。「膵癌に罹患している」または「膵癌と診断された」対象は、資格を有する臨床医により臨床的にそのようながんと診断された対象、またはそのようながんの１つ以上の徴候もしくは症状（例えば、胃腸管洗浄液または糞便物質中の膵癌バイオマーカーのレベルの低下）を示し、その後、資格を有する医師により臨床的にがんと診断された対象である。

【0033】

本明細書で使用される場合、「肝細胞癌」という用語は、当技術分野で認識されている疾患を指し、肝臓を含む組織に由来するがんを含む。「肝細胞癌に罹患している」または「肝細胞癌と診断された」対象は、資格を有する臨床医により臨床的にそのようながんと診断された対象、またはそのようながんの１つ以上の徴候もしくは症状（例えば、肝細胞癌バイオマーカーのレベルの低下）を示し、その後、資格を有する医師により臨床的にがんと診断された対象である。

【0034】

本明細書で使用される場合、膵癌または肝癌「バイオマーカー」という用語は、膵癌または肝癌を患っていない対象と比較して、膵癌もしくは肝癌を患っている対象の生物学的試料（例えば、胃腸管洗浄液または糞便物質）中に差次的に存在する、タンパク質または非タンパク質性物質を指す。特定の実施形態では、膵癌または肝癌バイオマーカーは、それぞれ、膵臓または肝臓に由来するタンパク質である。他の実施形態では、膵癌または肝癌バイオマーカーは、それぞれ、非膵臓または非肝臓源（例えば、胃腸管、例えば、腸管）に由来するタンパク質である。

【0035】

本明細書で使用される場合、膵癌または肝癌バイオマーカーの「レベル」とは、タンパク質または非タンパク質性物質のレベルを測定するための方法を用いて決定される、血清、消化管洗浄液または糞便物質などの生体試料中の膵癌または肝癌バイオマーカーのレベルを指す。そのような方法としては、例えば、電気泳動、キャピラリー電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、超拡散クロマトグラフィー、流体またはゲル沈殿反応、吸収分光法、比色アッセイ、分光光度アッセイ、フローサイトメトリー、免疫拡散法（シングルまたはダブル）、液相アッセイ、免疫電気泳動法、ウエスタンブロッティング、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫蛍光測定法、及び電気化学発光免疫測定法などが挙げられる。好ましい実施形態では、レベルは、ＥＬＩＳＡ系アッセイを用いて決定される。

【0036】

本明細書で使用する場合、「試料」という用語は、対象から単離した類似の流体、細胞または組織、ならびに対象内に存在する流体、細胞または組織の集合体を指す。好ましい実施形態では、試料は、膵癌または肝癌バイオマーカーを含む生物学的流体である。生物学的液体の例としては、消化管洗浄液、糞便物質、血液、血清及び漿液、血漿、精液、膵液、胆汁、リンパ液、尿、脳脊髄液、唾液、眼液、嚢胞液、涙液、痰、分泌組織及び臓器の粘膜分泌物、腟分泌物、婦人科液、非固形腫瘍に関連する腹水；胸膜、心膜、腹膜、腹腔及び他の体腔の液体；気管支洗浄などで採取された液体が挙げられる。特定の実施形態では、生体試料は、血清、胃腸管洗浄液または糞便物質である。

【0037】

本明細書で使用される場合、「膵疾患の進行」または「肝疾患の進行」という用語は、時間と共に疾患が徐々に悪化し、それにより、症状及び神経化学的欠損は、ますます衰弱及び／または激しくなることを指す。

【0038】

本明細書で使用される場合、「膵疾患の進行を阻害する」または「肝疾患の進行を阻害する」という用語は、それぞれ、膵疾患または肝疾患の症状の進行を遅延及び／または停止させることを指す。

【0039】

本明細書で使用される場合、膵脂肪症もしくは膵癌などの膵疾患、または非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）もしくは肝癌などの肝疾患の「発症を遅延させる」とは、患者の疾患が進行する速度を低下させること（例えば、患者を急速に進行する疾患からより緩徐に進行する疾患に移行させるため）を含む、疾患の１つ以上の症状の発現を遅延させる、妨げる、遅くする、抑制する、安定化させる、及び／または延期することを意味する。この遅延は、治療されている個体の病歴及び／または既往歴に応じて異なる長さの期間であり得る。当業者に明らかであるように、十分なまたは有意な遅延は、事実上、個体が検出可能な疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。疾患の発症を「遅延」させる方法は、その方法を使用しないときと比較して、所与の時間枠内で疾患の程度を低減させる方法である。かかる比較は、典型的には、統計的に有意な数の対象を使用する臨床研究に基づくが、この知識は、事例証拠に基づくことができる。「発症の遅延」は、薬剤を投与しない場合と比較して、臨床症状の程度及び／または望ましくない臨床症状が軽減されること、及び／または進行の時間経過が遅くなるかもしくは延長されることを意味し得る。したがって、この用語はまた、検出可能であるか、または検出不能であるかに関わらず、症状の軽減、疾患の程度の縮小、疾患の病態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患進行の遅延または減速、及び（部分的かまたは完全かに関わらず）緩解を含むが、これらに限定されない。

【0040】

本明細書で使用される場合、「有効量」とは、膵疾患（例えば、膵脂肪症及び膵管副腎癌（ＰＤＡＣ）などの膵癌）、または肝疾患（例えば、ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ、及び肝細胞癌（ＨＣＣ）などの肝癌）に対する医学的に望ましい予防及び／または治療効果を提供するのに十分な薬剤の用量を指す。有効量は、所望の結果、治療される（または、予防される）特定の膵疾患または肝疾患、治療される対象の年齢及び身体状態、状態の重篤度、治療期間、同時治療または併用治療の性質（存在する場合）、特定の投与経路、ならびに医療従事者の知識と技能の範囲内の同様の要素によって異なる。「有効量」は、記載された目的に関連して、経験的にかつ日常的な方法で決定することができる。がんに関連する予防及び／または治療効果としては、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制もしくは低下、新たな腫瘍の形成なし、新たな腫瘍形成の減少、生存もしくは無憎悪生存率の増加、転移なし、治療の選択肢の増加、当該がんにおいて典型的に上昇するバイオマーカーの減少、及び手術から再発までの時間の遅延が挙げられるが、これらに限定されない。

【0041】

「対象」、「患者」、「個体」及び「動物」という用語は互換的に使用され、ヒト患者及び非ヒト霊長類などの哺乳動物、ならびにウサギ、ラット及びマウス及び他の実験動物などの実験用動物を指す。動物には、ニワトリ、両生類及び爬虫類などのすべての脊椎動物、例えば、哺乳動物及び非哺乳動物が含まれる。本明細書で使用される場合、「哺乳動物」とは、哺乳綱の任意のメンバーを指し、限定されないが、ヒト、及びチンパンジー及び他の類人猿及びサル種などの非ヒト霊長類；牛、羊、豚、ヤギ及び馬などの家畜；犬及び猫などの家畜哺乳動物；マウス、ラット及びモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物；ならびに当技術分野で公知の哺乳綱の他のメンバーが含まれる。特定の実施形態では、患者はヒトである。

【0042】

「治療すること」もしくは「治療」、「治療する」、または「療法」などの用語は、（ａ）病的状態の症状を治癒、減速、減弱、緩和する、及び／またはその進行を停止させる治療手段と、（ｂ）標的となる状態及び／またはその関連症状の発症を予防及び／または遅延させる予防的または防止的手段と、の両方を指す。

【0043】

したがって、治療が必要な対象には、膵疾患及び／または肝疾患を既に患っている対象、膵疾患及び／または肝疾患を患うリスクがある対象、ならびに膵疾患及び／または肝疾患を予防したい対象が含まれる。対象は、当技術分野で公知の医学及び診断技術を使用して、膵疾患及び／または肝疾患、または本明細書で言及される別の状態を「有するか、または有するリスクがある」と日常的に特定され得る。特定の実施形態では、対象が、例えば、状態に関連する少なくとも１つの症状の全体的、部分的、または一過性の寛解または消失を示す場合、対象は、提供される方法に従って順調に「治療」されている。

【0044】

他の実施形態では、「治療する」もしくは「治療」、「治療すること」または「療法」という用語は、物理的に（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理的に（例えば、物理パラメーターの安定化）のいずれか、またはその両方で、膵疾患及び／または肝疾患の進行を阻害することを指す。他の実施形態では、「治療する」もしくは「治療」、「治療すること」または「療法」という用語は、症状の緩和の軽減、炎症の軽減、細胞機能の回復を指す。治療は、本明細書に開示されるＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤組成物を用いて、または１つ以上の追加の治療薬と更に組み合わせて行うことができる。

【0045】

「薬学的に許容される担体」という用語は、対象に対して非毒性である、活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、限定されないが、緩衝剤、担体、賦形剤、安定剤、希釈剤または保存剤が挙げられる。薬学的に許容される担体には、例えば、ヒトまたは他の対象への投与に適した１つ以上の適合性の固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、またはカプセル化物質が含まれ得る。

【0046】

開示された方法及び組成物に従って使用される「治療薬（複数可）」には、対象の状態を治療するための任意の薬剤が更に含まれ得る。「治療薬」はまた、上述の薬剤の塩、酸、及び遊離塩基形態も指す。

【0047】

ＰＦＫＦＢ３阻害剤
ＰＦＫＦＢ３（６－ホスホフルクト－２－キナーゼ－フルクトース－２，６－ビスホスファターゼ３）は、真核生物の解糖を制御する調節分子であるフルクトース－２，６－二リン酸の合成及び分解の両方に関与する、二機能性タンパク質であり、細胞周期の進行及びアポトーシスの予防に必要である。

【0048】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵疾患または肝疾患を治療することを必要とする対象における膵疾患または肝疾患を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法を提供する。

【0049】

提供される方法に従って使用することができるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、特に限定されない。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくはＰＦＫＦＢ３結合抗体（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３阻害性結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である。

【0050】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＦＫＦＢ３活性について、ＰＦＫＦＢ３活性／機能のＩＣ５０が１００μＭ以下の濃度である。いくつかの実施形態では、ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、少なくとももしくは最大もしくは約２００、１００、８０、５０、４０、２０、１０、５もしくは１μＭ、または少なくとももしくは最大もしくは約１００、１０もしくは１ｎＭ以下（または、そこから導出される任意の範囲もしくは値）のＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＦＫＦＢ３の発現を阻害する。化合物のＰＦＫＦＢ３活性を阻害する能力を決定するためのアッセイは、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ＰＦＫＦＢ３活性または発現の阻害は、対照レベルまたは試料と比較した場合の減少である。いくつかの実施形態では、ＭＴＴアッセイ、細胞増殖アッセイ、ＢＲＤＵもしくはＫｉ６７免疫蛍光アッセイ、アポトーシスアッセイまたは解糖アッセイなどの機能アッセイを使用し、ＰＦＫＦＢ３活性を阻害する組成物の能力をアッセイする。

【0051】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体またはＰＦＫＦＢ３結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）である。特定の実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ナノボディ（例えば、ＶＨＨ）である。

【0052】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Ａ阻害剤は、治療用核酸である。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡである。特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＥＺＮ－４１７８である。

【0053】

ヒトＰＦＫＦＢ３コード配列の代表的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００４５６６．３、ＮＭ＿００１１４５４４３．２、ＮＰ＿００１１３８９１５．１、ＮＭ＿００１２８２６３０．２、ＮＭ＿００１３１４０６３．１、ＮＭ＿００１３２３０１６．１、ＮＭ＿００１３２３０１７．１及びＮＭ＿００１３６３５４５．２で提供される。これらのＧｅｎｂａｎｋ受入番号のそれぞれに関連する配列は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＰＦＫＦＢ３活性を阻害する治療用核酸は、当技術分野で公知の方法を使用して、上記のヒトＰＦＫＦＢ３転写配列のそれぞれに基づいて日常的に設計及び調製することができる。

【0054】

提供される方法の特定の実施形態では、ＰＦＫＦＢ３阻害性核酸の投与、または当技術分野で公知のＰＦＫＦＢ３の遺伝子発現を阻害する任意の方法が企図される。阻害性核酸の例には、低分子干渉ＲＮＡ（ＳｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ、及び任意の他のアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス核酸が含まれるが、これらに限定されない。また、本明細書に記載の阻害剤のいずれかをコードするリボザイムまたは核酸も含まれる。阻害性核酸は、細胞におけるＰＦＫＦＢ３の転写を阻害するか、またはＰＦＫＦＢ３遺伝子転写物の翻訳を妨げ得る。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、長さが１６～１０００ヌクレオチドである。特定の実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、１８～１００ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、少なくとももしくは最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、５０、６０、７０、８０、９０ヌクレオチド、またはそこから導出される任意の範囲である。

【0055】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、ＰＦＫＦＢ３の発現を少なくとも１０％、２０％、３０％もしくは４０％、より具体的には少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、最も具体的には少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％以上、またはそれらの間の任意の範囲もしくは値で減少させることができる。

【0056】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、長さが１７～２５ヌクレオチドであり、成熟ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００４５６６．３、ＮＭ＿００１１４５４４３．２、ＮＭ＿００１２８２６３０．２、ＮＭ＿００１３１４０６３．１、ＮＭ＿００１３２３０１６．１、ＮＭ＿００１３２３０１７．１及びＮＭ＿００１３６３５４５．２のいずれか１つ以上に開示される配列）の５’～３’配列に対して少なくとも９０％相補的な５’～３’配列を含む。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、長さが１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは２５ヌクレオチド、またはそこから導出される任意の範囲である。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、成熟ＰＦＫＦＢ３ ｍＲＮＡ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００４５６６．３、ＮＭ＿００１１４５４４３．２、ＮＭ＿００１２８２６３０．２、ＮＭ＿００１３１４０６３．１、ＮＭ＿００１３２３０１６．１、ＮＭ＿００１３２３０１７．１及びＮＭ＿００１３６３５４５．２のいずれか１つ以上に開示される配列）の対応する５’～３’配列に対して、少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９もしくは１００％相補的であるか、またはそこから導出される任意の範囲である配列（５’～３’）を有する。当業者であれば、成熟ｍＲＮＡの配列に相補的なプローブ配列の一部を、ｍＲＮＡ阻害剤の配列として使用することができるであろう。更に、プローブ配列のその部分は、成熟ｍＲＮＡの配列に対して依然として９０％相補的であるように変更することができる。

【0057】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害性核酸は、ｍｉＲＮＡである。更なる実施形態では、投与されるｍｉＲＮＡは、ｈｓａ－ｍｉｒ－２６ｂ－５ｐ（ＭＩＲＴ０２８７７５）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３３０－３ｐ（ＭＩＲＴ０４３８４０）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６７７９－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７４７）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６７８０ａ－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７４８）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３６８９ｃ（ＭＩＲＴ４５４７４９）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３６８９ｂ－３ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５０）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３６８９ａ－３ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５１）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３０ｂ－３ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５２）、ｈｓａ－ｍｉｒ－１２７３ｈ－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５３）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６７７８－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５４）、ｈｓａ－ｍｉｒ－１２３３－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５５）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６７９９－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５６）、ｈｓａ－ｍｉｒ－７１０６－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５７）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６７７５－３ｐ（ＭＩＲＴ４５４７５８）、ｈｓａ－ｍｉｒ－１２９１（ＭＩＲＴ４５４７５９）、ｈｓａ－ｍｉｒ－７６５（ＭＩＲＴ４５４７６０）、ｈｓａ－ｍｉｒ－４２３－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７６１）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３１８４－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７６２）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６８５６－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７６３）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６７５８－５ｐ（ＭＩＲＴ４５４７６４）、ｈｓａ－ｍｉｒ－３１８５（ＭＩＲＴ５２７９７３）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６８９２－３ｐ（ＭＩＲＴ５２７９７４）、ｈｓａ－ｍｉｒ－６８４０－５ｐ（ＭＩＲＴ５２７９７５）、及びｈｓａ－ｍｉｒ－６８６５－３ｐ（ＭＩＲＴ５２７９７６）から選択されるメンバーである。

【0058】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、小分子である。投与される小分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＦＫＦＢ３の機能または活性を阻害すると決定された任意の小分子であり得る。このような小分子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの機能アッセイに基づいて決定することができる。

【0059】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤小分子は、米国特許公開第２０１３００５９８７９号、同第２０１２０１７７７４９号、同第２０１００２６７８１５号、同第２０１００２６７８１５号、及び同第２００９００７４８８４号に開示されている小分子ＰＦＫＦＢ３阻害分子であり、それぞれの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

【0060】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、（１Ｈ－ベンゾ［ｇ］インドール－２－イル）－フェニル－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－フェニル－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（４－メトキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－ピリジン－４－イル－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－ピリジン－４－イル－メタノンのＨＣｌ塩、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－メトキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－ピリジン－３－イル－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（２－メトキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（２－ヒドロキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（４－ヒドロキシ－フェニル）－メタノン、（５－メチル－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－フェニル－メタノン、フェニル－（７Ｈ－ピロロ［２，３－ｈ］キノリン－８－イル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－ヒドロキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（２－クロロ－ピリジン－４－イル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（１－オキシ－ピリジン－４－イル）－メタノン、フェニル－（６，７，８，９－テトラヒドロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（４－ヒドロキシ－３－メトキシルテニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（４－ベンジルオキシ－３－メトキシ－フェニル）－メタノン、４－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボニル）－安息香酸メチルエステル、４－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボニル）－安息香酸、（４－アミノ－フェニル）－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、５－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボニル）－２－ベンジルオキシ－安息香酸メチル、５－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボニル）－２－ベンジルオキシ－安息香酸メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（２－メトキシ－ピリジン－４－イル）－メタノン、（５－フルオロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－メトキシ－フェニル）－メタノン、（５－フルオロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－ピリジン－４－イル－メタノン、（４－ベンジルオキシ－３－メトキシ－フェニル）－（５－フルオロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（５－フルオロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（４－ヒドロキシ－３－メトキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－ヒドロキシメチル－フェニル）－メタノン、シクロヘキシル－（５－フルオロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（５－フルオロ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－フルオロ－４－ヒドロキシ－フェニル）－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－ｐ－トリル－メタノン、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－メトキシ－フェニル－メタノール、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－ピリジン－４－イル－メタノール、３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボン酸フェニルアミド、３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボン酸（３－メトキシ－フェニル）－アミド、（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（４－ジメチルアミノ－フェニル）－メタノン、（４－アミノ－３－メトキシ－フェニル）－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－３－メトキシ－フェニル）－（５－ヒドロキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－３－メトキシ－フェニル）－（５－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、Ｎ－［４－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボニル）－フェニル］－メタンスルホンアミド、３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－カルボン酸（４－アミノ－フェニル）－アミド、（４－アミノ－フェニル）－（５－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－２－フルオロ－フェニル）－（５－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－３－フルオロ－フェニル）－（５－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－２－メトキシ－フェニル）－（５－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－フェニル）－（９－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－３－メトキシ－フェニル）－（９－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－２－メトキシ－フェニル）－（９－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－３－フルオロ－フェニル）－（９－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－２－フルオロ－フェニル）－（９－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－３－フルオロ－フェニル）－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－２－フルオロ－フェニル）－（３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－フェニル）－（７－メトキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（４－アミノ－フェニル）－（５－ヒドロキシ－３－メチル－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、（７－アミノ－５－フルオロ－９－ヒドロキシ－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－（３－メチル－ピリジン－４－イル）－メタノン、（５－アミノ－３Ｈ－ピロロ［３，２－ｆ］イソキノリン－２－イル）－（３－メトキシ－ピリジン－４－イル）－メタノン、（４－アミノ－２－メチル－フェニル）－（９－ヒドロキシ－３Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］キノリン－２－イル）－メタノン、及び（４－アミノ－フェニル）－（７－メタンスルホニル－３Ｈ－ベンゾ［ｅ］インドール－２－イル）－メタノン、またはそれらの塩のうちの少なくとも１つである。

【0061】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、１－ピリジン－４－イル－３－キノリン－４－イル－プロペノン、１－ピリジン－４－イル－３－キノリン－３－イル－プロペノン、１－ピリジン－３－イル－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－ピリジン－３－イル－３－キノリン－４－イル－プロペノン、１－ピリジン－３－イル－３－キノリン－３－イル－プロペノン、１－ナフタレン－２－イル－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－ナフタレン－２－イル－３－キノリン－３－イル－プロペノン、１－ピリジン－４－イル－３－キノリン－３－イル－プロペノン、３－（４－ヒドロキシ－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、３－（８－ヒドロキシ－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－３－イル－プロペノン、３－キノリン－２－イル－１－ｐ－トリル－プロペノン、３－（８－ヒドロキシ－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、３－（８－ヒドロキシ－キノリン－２－イル）－１－ｐ－トリル－プロペノン、３－（４－ヒドロキシ－キノリン－２－イル）－１－ｐ－トリル－プロペノン、１－フェニル－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－ピリジン－２－イル－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－（２－ヒドロキシ－フェニル）－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－（４－ヒドロキシ－フェニル）－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－（２－アミノ－フェニル）－３－キノリン－２－イル－プロペノン、１－（４－アミノ－フェニル）－３－キノリン－２－イル－プロペノン、またはそれらの塩のうちの少なくとも１つである。

【0062】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、４－（３－キノリン－２－イル－アクリロイル）－ベンズアミド、４－（３－キノリン－２－イル－アクリロイル）－安息香酸、３－（８－メチル－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、１－（２－フルオロ－ピリジン－４－イル）－３－キノリン－２－イル－プロペノン、３－（８－フルオロ－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、３－（６－ヒドロキシ－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、３－（８－メチルアミノ－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、３－（７－メチル－キノリン－２－イル）－１－ピリジン－４－イル－プロペノン、及び１－メチル－４－［３－（８－メチル－キノリン－２－イル）－アクリロイル］－ピリジニウム、またはそれらの塩のうちの少なくとも１つである。

【0063】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、（２Ｓ）－Ｎ－［４－［［３－シアノ－１－（２－メチル－プロピル）－１Ｈ－インドール－５－イル］オキシ］フェニル］－２－ピロリジン－カルボキサミド３ＰＯ（３－（３－ピリジニル）－１－（４－ピリジニル）－２－プロペン－１－オン）、（２Ｓ）－Ｎ－［４－［［３－シアノ－１－［（３，５－ジメチル－４－イソオキサゾリル）メチル］－１Ｈ－インドール－５－イル］オキシ］フェニル］－２－ピロリジン－カルボキサミド、及びエチル７－ヒドロキシ－２－オキソ－２Ｈ－１－ベンゾピラン－３－カルボキシレート、またはそれらの塩のうちの少なくとも１つである。

【0064】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＦＫ１５またはその塩である。

【0065】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＦＫ１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはその塩である。

【0066】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、またはその塩である。

【0067】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＡＺ６７またはその塩である。

【0068】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ａ～図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、またはそれらの塩の構造を有する、少なくとも１つのＰＦＫＦＢ３阻害剤である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～ＡＺ７０もしくはＡＺ７１、またはそれらの塩の構造を有するＰＦＫＦＢ３阻害剤である。

【0069】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＫＡＮ０４３６１５１またはその塩である。

【0070】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＫＡＮ０４３６０６７またはその塩である。

【0071】

ＨＩＦ１－α経路阻害剤
低酸素誘導因子１－α（ＨＩＦ－１－α）は、低酸素に対する細胞及び発生応答のマスター転写制御因子であると考えられている、ヘテロ二量体転写因子低酸素誘導因子１（ＨＩＦ－１）のサブユニットである。

【0072】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵疾患及び／または肝疾患を治療することを必要とする対象における膵疾患または肝疾患を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤もしくはＨＩＦ１－α阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法を提供する。

【0073】

本明細書で使用される場合、「ＨＩＦ１－α経路－α阻害剤」という用語は、ＨＩＦ１－αを直接的に、もしくはＨＩＦ１－α経路の上流にあるＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の１つ以上の活性を阻害することを介して間接的に、阻害または低減する組成物を指す。「ＨＩＦ１－α阻害剤」という用語は、本明細書では、ＨＩＦ１－αを直接阻害または低減する組成物を指すために使用される。したがって、例えば、テムシロリムス、エベロリムス及びシロリムスなどのｍＴＯＲ経路阻害剤は、本明細書では「ＨＩＦ１－α経路－α阻害剤」とみなされ、「ＨＩＦ１－α阻害剤」とはみなされない。

【0074】

提供される方法に従って投与することができる「ＨＩＦ１－α経路－α阻害剤」は、特に限定されない。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくはＨＩＦ１－α結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ＥＮＭＤ－１１９８、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である。

【0075】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与される、投与されたＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α活性について、ＨＩＦ１－α活性／機能のＩＣ５０が１００μＭ以下の濃度である。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤は、少なくとももしくは最大もしくは約２００、１００、８０、５０、４０、２０、１０、５もしくは１μＭ、または少なくとももしくは最大もしくは約１００、１０もしくは１ｎＭ以下（または、そこから導出される任意の範囲もしくは値）のＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－αの発現を阻害する。ＨＩＦ１－α活性を阻害する化合物の能力を決定するためのアッセイは、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α活性または発現の阻害は、対照レベルまたは試料と比較した場合の減少である。いくつかの実施形態では、ＭＴＴアッセイ、細胞増殖アッセイ、ＢＲＤＵもしくはＫｉ６７免疫蛍光アッセイ、アポトーシスアッセイまたは解糖アッセイなどの機能アッセイを使用し、ＨＩＦ１－α活性を阻害する組成物の能力をアッセイする。

【0076】

提供される方法に従って投与することができるＨＩＦ１－α阻害剤は、特に限定されない。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦ－１α ｍＲＮＡ発現、ＨＩＦ－１αタンパク質の翻訳または分解、ＨＩＦ－１α／ＨＩＦ－１β二量体化、ＨＩＦ－１α－ＤＮＡ結合（例えば、ＨＩＦ－１α／ＨＲＥ）、及び／またはＨＩＦ－１α転写活性（例えば、ｐ３００のＣＨ－１／ＨＩＦ－１αのＣ－ＴＡＤ）のうちの１つ以上を調節する。

【0077】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、小分子である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、タンパク質またはポリペプチド（例えば、ＨＩＦ１に結合する抗ＨＩＦ１抗体または抗体断片）である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、治療用核酸（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）である。

【0078】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、Ａｋｔ経路阻害剤、及び／またはｍＴＯＲ阻害剤）；ＨＩＦ翻訳阻害剤（例えば、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管標的薬、強心配糖体、またはアンチセンスＨＩＦ－１ａ ｍＲＮＡ）；ＨＩＦの安定性、核局在化または二量体化の阻害剤（例えば、アクリフラビンまたはＨＤＡＣ阻害剤）；ＨＩＦトランス活性化の阻害剤（例えば、ＨＩＦ１コアクチベーター動員阻害剤またはＨＩＦ１ ＤＮＡ結合阻害剤）である。

【0079】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤（例えば、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤、ＭＡＰＫ経路阻害剤、Ａｋｔ経路阻害剤、及び／またはｍＴＯＲ阻害剤）である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＩ３Ｋ経路阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、Ｐ３１５５、ＬＹ２９、ＬＹ２９４００２、ワートマニン、またはＧＤＣ－０９４１である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、レスベラトロールである。別の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、グリセオリンである。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ラパマイシン、テムシロリムス（ＣＣ１－７７９）、エベロリムス、シロリムス、またはＰＰ２４２である。

【0080】

特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、シリビニンである。

【0081】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦ翻訳阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＸ－４７８（Ｓ－２－アミノ－３－［４’－Ｎ，Ｎ－ビス（クロロエチル）［アミノ］フェニルプロピオン酸Ｎ－オキシド二塩酸塩）、ＮＳＣ－６４４２１、カンプトテシン（ＣＰＴ）、ＳＮ３８、イリノテカン、トポテカン、ＮＳＣ－６４４２２１、シクロヘキシミド、もしくはアピゲニン、またはそれらの塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アミノフラボン、ＫＣ７Ｆ２（Ｎ，Ｎ’－（ジスルファンジイルビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（２，５－ジクロロベンゼンスルホンアミド）、２－メトキシエストラ－ジオール（２ＭＥ２）、またはそれらの類似体もしくは塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＥＮＭＤ－１１９８、ＥＮＭＤ－１２００、もしくはＥＮＭＤ－１２３７、またはそれらの塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＥＺＮ－２２０８またはその塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＥＺＮ－２９６８またはその塩である。

【0082】

特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＸ－４７８またはその塩である。

【0083】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、強心配糖体である。一実施形態では、投与される強心配糖体は、ジゴキシンまたはその塩である。別の実施形態では、投与される強心配糖体は、ウアバインもしくはプロスシラリジンＡ、またはそれらの塩である。

【0084】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、トポイソメラーゼ阻害剤である。一実施形態では、投与されるトポイソメラーゼ阻害剤は、カンプトテシン（ＣＰＴ）、ＳＮ３８、イリノテカン、もしくはトポテカン（例えば、ＰＥＧ－ＳＮ３８）、またはそれらの塩である。

【0085】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、微小管標的薬である。一実施形態では、投与される微小管標的薬は、２メトキシエストラジオール（２ＭＥ２）、ＥＮＭＤ－１１９８、ＥＮＭＤ－１２００、ＥＮＭＤ－１２３７、もしくはタキソテール、またはそれらの塩である。

【0086】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、治療用核酸である。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡである。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。

【0087】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害剤は、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＥＺＮ－２９６８である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＲＸ－００４７である。

【0088】

ヒトＨＩＦ１－Αコード配列の代表的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００４５６６．３、ＮＭ＿００１１４５４４３．２、ＮＰ＿００１１３８９１５．１、ＮＭ＿００１２８２６３０．２、ＮＭ＿００１３１４０６３．１、ＮＭ＿００１３２３０１６．１、ＮＭ＿００１３２３０１７．１及びＮＭ＿００１３６３５４５．２で提供される。これらのＧｅｎｂａｎｋ受入番号のそれぞれに関連する配列は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＨＩＦ１－Α活性を阻害する治療用核酸は、当技術分野で公知の方法を使用して、上記のヒトＨＩＦ１－Α転写配列のそれぞれに基づいて日常的に設計及び調製することができる。

【0089】

提供される方法の特定の実施形態では、ＨＩＦ１－Α阻害性核酸の投与、または当技術分野で公知のＨＩＦ１－Αの遺伝子発現を阻害する任意の方法が企図される。阻害性（治療用）核酸の例には、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ、及び任意の他のアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス核酸が含まれるが、これらに限定されない。また、本明細書に記載の阻害剤のいずれかをコードするリボザイムまたは核酸も含まれる。阻害性核酸は、細胞におけるＨＩＦ１－Αの転写を阻害するか、またはＨＩＦ１－Α遺伝子転写物の翻訳を妨げ得る。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、長さが１６～１０００ヌクレオチドである。特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、１８～１００ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、少なくとももしくは最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、５０、６０、７０、８０、９０ヌクレオチド、またはそこから導出される任意の範囲である。

【0090】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、ＨＩＦ１－Αの発現を少なくとも１０％、２０％、３０％もしくは４０％、より具体的には少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、最も具体的には少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％以上、またはそれらの間の任意の範囲もしくは値で減少させることができる。

【0091】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、長さが１７～２５ヌクレオチドであり、成熟ＨＩＦ１－Α ｍＲＮＡ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１５３０．４、ＮＭ＿１８１０５４．３及びＮＭ＿００１２４３０８４．２のいずれか１つ以上に開示される）の５’～３’配列に対して少なくとも９０％相補的な５’～３’配列を含む。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、長さが１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは２５ヌクレオチド、またはそこから導出される任意の範囲である。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、成熟ＨＩＦ１－Α ｍＲＮＡ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１５３０．４、ＮＭ＿１８１０５４．３及びＮＭ＿００１２４３０８４．２のいずれか１つ以上に開示される）の対応する５’～３’配列に対して、少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９もしくは１００％相補的であるか、またはそこから導出される任意の範囲である配列（５’～３’）を有する。当業者であれば、成熟ｍＲＮＡの配列に相補的なプローブ配列の一部を、ｍＲＮＡ阻害剤の配列として使用することができるであろう。更に、プローブ配列のその部分は、成熟ｍＲＮＡの配列に対して依然として９０％相補的であるように変更することができる。

【0092】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、ｍｉＲＮＡ模倣物である。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ｍｉＲ－４８３模倣物である。

【0093】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦの安定性、核局在化または二量体化の阻害剤である。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ＨＩＦを不安定化する。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣＩ）である。更なる実施形態では、投与されるＨＤＡＣＩは、ＬＷ６／ＣＡＹ１０５８５、ボリノスタット、ロミデプシン（ＦＫ２２８）、パノビノスタット、ベリノスタット、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、ＬＡＱ８２４、もしくはフェネチルイソチオシアネート、またはそれらの塩である。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ＰＸ－１２／プレウロチン、ＨＩＦ－１α阻害剤（ＣＡＳ番号９３４５９３－９０－５）、クリプトタンシノン、もしくはＢＡＹ８７－２２４３（１－シクロプロピル－４－［４－［［５－メチル－３－［３－［４－（トリフルオロメトキシ）フェニル］－１，２，４－オキサジアゾール－５－イル］－１Ｈ－ピラゾール－１－イル］メチル］－２－ピリジニル］－ピペラジン）、またはそれらの塩である。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ＩＤＦ－１１７７４、ビスフェノールＡ／ジメチルビスフェノールＡ、またはそれらの塩である。クリシン（５，７－ジヒドロキシ－フラボン）、もしくはＳＣＨ６６３３６、またはそれらの塩。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ゲルダナマイシンまたはその類似体、１７－ＡＡＧ（タネスピマイシン：アリルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン）、１７－ＤＭＡＧ（アルベスピマイシン）、１７ＡＧ、ラジシコール、ＫＦ５８３３３、ＥＮＭＤ－１１９８、ＥＮＭＤ－１２３７、もしくはガネテスピブ、またはそれらの塩である。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ＨＩＦ二量体化を妨げる。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、アクリフラビンまたはその塩である。一実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ＴＣ－Ｓ７００９、ＰＴ２３８５、もしくはＴＡＴ－シクロ－ＣＬＬＦＶＹ、またはそれらの塩である。

【0094】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ガネテスピブまたはその塩である。

【0095】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与される阻害剤は、ＢＡＹ８７－２２４３である。

【0096】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣＩ）である。一実施形態では、投与されるＨＤＡＣＩは、ＬＷ６／ＣＡＹ１０５８５（メチル３－（２－（４－（アダマンタン－１－イル）フェノキシ）アセトアミド）－４－ヒドロキシ－ベンゾエート）、ボリノスタット、ロミデプシン（ＦＫ２２８）、パノビノスタット、ベリノスタット、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、ＬＡＱ８２４、もしくはフェネチルイソチオシアネート、またはそれらの塩である。

【0097】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、熱ショックタンパク質阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＳＰ９０阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＳＰ９０阻害剤は、ゲルダナマイシンまたはその類似体、１７－ＡＡＧ（タネスピマイシン：アリルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン）、１７－ＤＭＡＧ（アルベスピマイシン）、１７ＡＧ、ラジシコール、ＫＦ５８３３３、ＥＮＭＤ－１１９８、ＥＮＭＤ－１２３７、もしくはガネテスピブ、またはそれらの塩である。特定の実施形態では、投与される熱ショックタンパク質阻害剤は、ガネテスピブまたはその塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＳＰ７０阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＳＰ７０阻害剤は、トリプトライドまたはその塩である。

【0098】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦトランス活性化阻害剤である。一実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦコアクチベーターの動員を阻害する。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ケトミン、ＹＣ－１もしくはＫＣＮ－１（３，４－ジメトキシ－Ｎ－［（２，２－ジメチル－２Ｈ－クロメン－６－イル）メチル］－Ｎ－フェニルベンゼンスルホンアミド）、またはその塩である。別の特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＮＳＣ６０７０９７またはその塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、プロテアソーム阻害剤である。更なる実施形態では、投与される阻害剤は、ボルテゾミブもしくはカルフィルゾミブ、またはそれらの塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、インデノピラゾール２１、ＦＭ１９Ｇ１１、フラボピリドール、アンホテリシンＢ、アクチノマイシン、ＡＪＭ２９０、もしくはＡＷ４６４、またはそれらの塩である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、トリプトライドまたはその塩である。

【0099】

特定の実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＹＣ－１またはその塩である。

【0100】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦ１－αに結合する抗体またはＨＩＦ１－α結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＡＧ１－５ ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）である。特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＶＨＨまたはナノボディである。一実施形態では、投与される抗体は、ＡＧＩ－５である。一実施形態では、投与される抗体は、ＡＨＰＣである。

【0101】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦ１ ＤＮＡ結合阻害剤である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、エキノマイシン（ＮＳＣ－１３５０２）または化合物ＤＪ１２．１６２である。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アントラサイクリンである。更なる実施形態では、投与される阻害剤は、ドキソルビシンまたはダウノルビシンである。一実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ポリアミドである。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、ＨＩＦ１－αに結合する抗体であるか、またはＶＨＨもしくはナノボディなどのＨＩＦ１－α結合抗体断片である。

【0102】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害剤は、治療用核酸である。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ＥＮＭＤ－１１９８、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡである。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、ＥＮＭＤ－１１９８またはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。

【0103】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害剤は、ｓｉＲＮＡまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害剤は、ＲＸ－００４７である。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害剤は、ＥＺＮ－２９６８である。

【0104】

ヒトＨＩＦ１－Αコード配列の代表的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００４５６６．３、ＮＭ＿００１１４５４４３．２、ＮＰ＿００１１３８９１５．１、ＮＭ＿００１２８２６３０．２、ＮＭ＿００１３１４０６３．１、ＮＭ＿００１３２３０１６．１、ＮＭ＿００１３２３０１７．１及びＮＭ＿００１３６３５４５．２で提供される。これらのＧｅｎｂａｎｋ受入番号のそれぞれに関連する配列は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＨＩＦ１－Α活性を阻害する治療用核酸は、当技術分野で公知の方法を使用して、上記のヒトＨＩＦ１－Α転写配列のそれぞれに基づいて日常的に設計及び調製することができる。

【0105】

提供される方法の特定の実施形態では、ＨＩＦ１－Α阻害性核酸の投与、または当技術分野で公知のＨＩＦ１－Αの遺伝子発現を阻害する任意の方法が企図される。阻害性核酸の例には、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ、及び任意の他のアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス核酸が含まれるが、これらに限定されない。また、本明細書に記載の阻害剤のいずれかをコードするリボザイムまたは核酸も含まれる。阻害性核酸は、細胞におけるＨＩＦ１－Αの転写を阻害するか、またはＨＩＦ１－Α遺伝子転写物の翻訳を妨げ得る。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、長さが１６～１０００ヌクレオチドである。特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、１８～１００ヌクレオチド長である。特定の実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、少なくとももしくは最大２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、４０、５０、６０、７０、８０、９０ヌクレオチド、またはそこから導出される任意の範囲である。

【0106】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、ＨＩＦ１－Αの発現を少なくとも１０％、２０％、３０％もしくは４０％、より具体的には少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、最も具体的には少なくとも７５％、８０％、９０％、９５％以上、またはそれらの間の任意の範囲もしくは値で減少させることができる。

【0107】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、長さが１７～２５ヌクレオチドであり、成熟ＨＩＦ１－Α ｍＲＮＡ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１５３０．４、ＮＭ＿１８１０５４．３及びＮＭ＿００１２４３０８４．２のいずれか１つ以上に開示される）の５’～３’配列に対して少なくとも９０％相補的な５’～３’配列を含む。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、長さが１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４もしくは２５ヌクレオチド、またはそこから導出される任意の範囲である。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、成熟ＨＩＦ１－Α ｍＲＮＡ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１５３０．４、ＮＭ＿１８１０５４．３及びＮＭ＿００１２４３０８４．２のいずれか１つ以上に開示される）の対応する５’～３’配列に対して、少なくとも９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４、９９．５、９９．６、９９．７、９９．８、９９．９もしくは１００％相補的であるか、またはそこから導出される任意の範囲である配列（５’～３’）を有する。当業者であれば、成熟ｍＲＮＡの配列に相補的なプローブ配列の一部を、ｍＲＮＡ阻害剤の配列として使用することができるであろう。更に、プローブ配列のその部分は、成熟ｍＲＮＡの配列に対して依然として９０％相補的であるように変更することができる。

【0108】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－Α阻害性核酸は、ｍｉＲＮＡ模倣物である。いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、ｍｉＲ－４８３模倣物である。

【0109】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、治療用核酸である。いくつかの実施形態では、治療用核酸は、ＥＮＭＤ－１１９８分子、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。

【0110】

ＧＰＲ８１阻害剤
乳酸受容体（Ｇタンパク質共役受容体８１、ＧＰＲ８１、ヒドロキシ－カルボン酸受容体１及びＨＣＡ１としても知られている）は、Ｇタンパク質共役受容体であり、異常な組織リモデリング、ならびに癌誘発血管新生、免疫回避及び化学療法抵抗性の促進において中心的役割を果たすことが報告されている。本開示の文脈では、膵臓内の異常細胞からの乳酸の慢性的なＨＩＦ１α－ＰＦＫＦＢ３依存性放出は、膵臓内の細胞の異常機能を促進し、膵臓癌の成長及び増殖を広める上で自己分泌の役割を果たす。

【0111】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵疾患及び／または肝疾患を治療することを必要とする対象における膵疾患及び／または肝疾患を治療する方法であって、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及び有効量のＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＰＦＫＦＢ３経路阻害剤、及び有効量のＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与すること、
（ｃ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤、及び有効量のＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与すること、
（ｄ）有効量のＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、
（ｅ）有効量のＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｆ）有効量のＧＰＲ８１阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤またはＨＩＦ１－α阻害剤、及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法を提供する。

【0112】

本明細書で使用される場合、「ＧＰＲ８１阻害剤」という用語は、ＧＰＲ８１を、直接的に、またはＧＰＲ８１シグナル伝達カスケードの１つ以上の活性を阻害することによって間接的に、阻害または低減する組成物を指す。

【0113】

提供される方法に従って投与することができる「ＧＰＲ８１阻害剤」は、特に限定されない。いくつかの実施形態では、投与されるＧＰＲ８１阻害剤は、抗体もしくはＧＰＲ８１結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ＥＮＭＤ－１１９８、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、または低分子である。

【0114】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＧＰＲ８１阻害剤は、ＧＰＲ８１活性について、ＧＰＲ８１活性／機能のＩＣ５０が１００μＭ以下の濃度である。いくつかの実施形態では、ＧＰＲ８１阻害剤は、少なくとももしくは最大もしくは約２００、１００、８０、５０、４０、２０、１０、５もしくは１μＭ、または少なくとももしくは最大もしくは約１００、１０もしくは１ｎＭ以下（または、そこから導出される任意の範囲もしくは値）のＩＣ５０を有する。いくつかの実施形態では、ＧＰＲ８１阻害剤は、ＧＰＲ８１の発現を阻害する。ＧＰＲ８１活性を阻害する化合物の能力を決定するためのアッセイは、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ＧＰＲ８１活性または発現の阻害は、対照レベルまたは試料と比較した場合の減少である。提供される方法に従って投与することができるＧＰＲ８１阻害剤は、特に限定されない。いくつかの実施形態では、ＧＰＲ８１阻害剤は、乳酸と結合するＧＰＲ８１、ＧＰＲ８１シグナル伝達、ＧＰＲ８１ ｍＲＮＡ発現、ＧＰＲ８１タンパク質の翻訳または分解のうちの１つ以上を調節する。

【0115】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＧＰＲ８１阻害剤は、小分子である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＧＰＲ８１阻害剤は、タンパク質またはポリペプチド（例えば、ＧＰＲ８１に結合する抗ＧＰＲ８１抗体または抗体断片）である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って投与されるＧＰＲ８１阻害剤は、治療用核酸（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ダイサー基質、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）である。

【0116】

ヒトＧＰＲ８１コード配列の代表的な例は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０３２５５４で提供される。これらのＧｅｎｂａｎｋ受入番号のそれぞれに関連する配列は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＧＰＲ８１活性を阻害する治療用核酸は、当技術分野で公知の方法を使用して、上述のヒトＧＰＲ８１転写配列のそれぞれに基づいて日常的に設計及び調製することができる。

【0117】

活性剤の投与用キット
別の実施形態では、本開示は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤、及び／または他の治療剤及び送達剤を含む、キットを提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療法を調製及び／または投与するためのキットが提供され得る。キットは、医薬組成物、治療薬、及び／または他の治療薬及び送達剤のいずれかを含む１つ以上の密封バイアルを含んでもよい。いくつかの実施形態では、キットは、脂質送達系を含む。いくつかの実施形態では、脂質は１つのバイアル内にあり、治療薬は別のバイアル内にある。キットには、例えば、少なくとも１つのＰＦＫＦＢ３発現／活性の阻害剤、少なくとも１つのＨＩＦ１－α発現／活性の阻害剤、及び、本明細書に記載の成分を調製、製剤化及び／または投与するための、または本方法の１つ以上の工程を実施するための、１つ以上の試薬が含まれてもよい。いくつかの実施形態では、キットには、少なくとも１つのＰＦＫＦＢ３発現／活性の阻害剤、少なくとも１つのＨＩＦ１－α発現／活性の阻害剤、少なくとも１つのＧＰＲ８１発現／活性の阻害剤が含まれる。いくつかの実施形態では、キットはまた、エッペンドルフチューブ、アッセイプレート、シリンジ、ボトル、または管などのキットの構成要素と反応しない容器である、適切な容器手段を含んでもよい。容器は、プラスチックまたはガラスなどの滅菌可能な材料から作製され得る。

【0118】

キットは、本明細書に記載の方法の手順工程を概説する説明書を更に含んでもよく、本明細書に記載の手順または当業者に公知の手順と実質的に同じ手順に従う。指示情報は、コンピュータを使用して実行される場合に、薬学的に有効な量の治療薬を送達する実際の手順または仮想の手順を表示させる、機械可読指示を含むコンピュータ可読媒体中にあってもよい。

【0119】

いくつかの実施形態では、キットは、ＰＦＫＦＢ３及び／またはＨＩＦ－α、または関連分子の発現を評価するために提供され得る。このようなキットは、容易に入手可能な材料及び試薬から調製することができる。例えば、そのようなキットは、以下の物質：酵素、反応管、緩衝液、界面活性剤、プライマー及びプローブ、核酸増幅、及び／またはハイブリダイゼーション剤のいずれか１つ以上を含むことができる。特定の実施形態では、これらのキットにより、医師は、血液、涙、精液、唾液、尿、組織、血清、便、結腸、直腸、痰、脳脊髄液、及び細胞溶解物からの上清の試料を取得することができる。別の実施形態では、これらのキットには、ＲＮＡ抽出、ＲＴ－ＰＣＲ、及びゲル電気泳動を実行するために必要な装置が含まれる。アッセイを実施するための説明書も、キットに含めることができる。

【0120】

キットは、管、ボトル、バイアル、シリンジ、もしくは他の適切な容器手段などの容器に個別に包装、または配置され得る、成分を含み得る。成分には、プローブ、プライマー、抗体、アレイ、陰性及び／または陽性対照が含まれ得る。個々の成分を、濃縮した量でキットに提供することもできる。いくつかの実施形態では、成分は、他の成分と共に溶液中に含まれるのと同じ濃度で個別に提供される。成分の濃度は、１×、２×、５×、１０×、または２０×以上として提供され得る。

【0121】

キットは、試料中のＰＦＫＦＢ３及び／またはＨＩＦ－１αを標識するための試薬を更に含むことができる。キットはまた、アミン修飾ヌクレオチド、ポリ（Ａ）ポリメラーゼ、及びポリ（Ａ）ポリメラーゼ緩衝液のうちの少なくとも１つを含む、標識試薬を含んでもよい。標識試薬には、アミン反応性色素または当技術分野で公知の任意の色素が含まれ得る。

【0122】

キットの成分は、水性媒体または凍結乾燥形態のいずれかで包装され得る。キットの容器手段は一般に、成分を配置し、好ましくは適切に等量分割することができる少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジまたは他の容器手段を含む。キット内に複数の成分がある場合（標識試薬及びラベルは、一緒に包装されていてもよい）、キットは一般に、追加の成分を別々に配置できる第２、第３、または他の追加の容器も含む。しかしながら、成分の様々な組み合わせがバイアル内に含まれてもよい。キットには、核酸、抗体、または他の試薬容器を商業販売用に密封して収容する手段も含まれ得る。このような容器には、所望のバイアルが保持される射出成形またはブロー成形されたプラスチック容器が含まれ得る。

【0123】

キットの成分が１つ及び／または複数の溶液中に提供される場合、溶液は水溶液であり、滅菌水溶液が特に好ましい。あるいは、キットの成分は、乾燥粉末（複数可）として提供されてもよい。試薬及び／または成分が乾燥粉末として提供される場合、粉末は、適切な溶媒を添加することによって再構成され得る。溶媒は別の容器手段に提供されてもよいことが想定される。容器手段は一般に、核酸配合物を配置し、好ましくは適切に等量分割することができる少なくとも１つのバイアル、試験管、フラスコ、ボトル、シリンジ及び／または他の容器手段を含む。キットはまた、滅菌した薬学的に許容される緩衝液及び／または他の希釈剤を収容するための第２の容器手段を含んでもよい。

【0124】

キットは、例えば、所望のバイアルが保持される射出及び／またはブロー成形プラスチック容器などの商業販売用にバイアルを密封して収容する手段を含んでもよい。キットには、キットの成分を使用するための説明書、及びキットに含まれていない他の試薬の使用に関する説明書も含まれ得る。説明書には、実施可能なバリエーションが含まれ得る。

【0125】

投与方法
本明細書で提供される方法による投与レジメン（例えば、投与頻度と組み合わせた用量）は、一般に、所望の効果を提供する量及び頻度での投与、例えば、膵疾患及び／または肝疾患に関連する１つ以上の症状など対象における膵疾患及び／または肝疾患の１つ以上の症状の改善を提供するのに有効な量の投与を含む。各薬物の組み合わせ投与は、他の成分と組み合わせて患者の状態を緩和するか、または疾患または障害を効果的に治療するための薬物の濃度を高めることができる、任意の適切な手段によるものであり得る。可能な組成物には、経口、直腸、局所（経皮、経口及び舌下を含む）、または非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）投与に適したものが含まれる。

【0126】

本発明のいくつかの実施形態では、組成物は、単独で、または他の療法、医薬品、サプリメント及び／または特定の食事と組み合わせて、または賦形剤（複数可）もしくは他の薬学的に許容される担体と混合された医薬組成物として、患者に投与される。投与の目標（例えば、状態の重症度、治療期間など）に応じて、組成物（例えば、ＤＭＢなどの式Ｉの化合物を含む）を製剤化し、全身または局所に投与することができる。製剤化及び投与の技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ， Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．）の最新版で見出せ得る。適切な経路には、例えば、経口または経粘膜投与、及び筋肉内、皮下、髄内、くも膜下腔内、脳室内、静脈内、腹腔内、または鼻腔内投与を含む、非経口送達が含まれ得る。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物（例えば、ＤＭＢ）は、錠剤、カプセル剤、錠剤、散剤、坐剤、溶液、エリキシル剤、シロップ剤、懸濁剤、クリーム剤、ロゼンジ剤、ペースト剤及びスプレー剤など、所望の治療プロファイルを提供するように適切に製剤化された固形剤、半固形剤または液剤の形態で投与することができる。当業者であれば認識するように、選択された投与経路に応じて、組成物の形態が選択される。

【0127】

本明細書で使用される場合、「非経口投与」及び「非経口的に投与された」という語句は、経腸及び局所投与以外の投与様式を意味し、例えば、注射によるものであり、静脈内、筋肉内、胸膜内、血管内、心膜内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、及び胸骨内の注射ならびに注入が含まれるが、これらに限定されない。

【0128】

医薬組成物は、従来の製薬慣行に従って製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ ｅｄ．），Ｅｄ．ＡＲ Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００及びＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ ａｎｄ ＪＣ Ｂｏｙｌａｎ，１９８８－１９９９，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。

【0129】

経口投与に適した製剤は、それぞれが所定の量の活性成分を含むカプセル剤、カシェ剤、ロゼンジ剤もしくは錠剤などの分離した単位として；粉末もしくは顆粒として；水性液体もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液として；または水中油型乳剤もしくは油中水型乳剤として提示されてもよい。このような製剤は、活性化合物と適切な担体（上記のような１つ以上の副成分を含み得る）を組み合わせる工程を含む、任意の適切な調剤方法によって調製することができる。一般に、本発明の製剤は、活性化合物を液体担体または微粉化固体担体またはその両方と均一かつ完全に混合し、次いで、必要に応じて、得られた混合物を成形することによって調製される。例えば、錠剤は、活性剤を含有する粉末もしくは顆粒を、任意選択で１つ以上の副成分と共に、圧縮または成形することにより調製することができる。圧縮された錠剤は、好適な機械内で、任意選択で結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤及び／または表面活性剤／分散剤（複数可）と混合された、粉末または顆粒としての自由流動形態の化合物を圧縮することより調製され得る。成形された錠剤は、好適な機械において、不活性液結合剤で加湿された粉末化化合物を成形することによって作成され得る。

【0130】

頬側（舌下）投与に適した製剤には、通常スクロース及びアカシアまたはトラガカントなどの風味付けされた基剤中に活性剤を含むロゼンジ剤；ならびにゼラチン及びグリセリン、またはスクロース及びアカシアなどの不活性基剤中に活性剤を含むトローチ剤が含まれる。

【0131】

非経口投与用の製剤は、活性剤の滅菌水性製剤が好都合であり、この製剤は、好ましくは、対象となるレシピエントの血液と等張である。これらの製剤は、皮下、静脈内、筋肉内、または皮内注射によって投与することができる。このような製剤は、化合物を水またはグリシン緩衝液と混合し、得られた溶液を滅菌かつ血液と等張にすることによって都合よく調製することができる。

【0132】

局所適用（例えば、口腔、鼻咽頭、または中咽頭中の）に適した製剤は、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾール、またはオイルの形態をとる。使用できる担体としては、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、経皮促進剤、及びこれらの２つ以上の組み合わせが挙げられる。

【0133】

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書で提供される組成物が１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて投与される治療方法を提供する。提供される組成物と治療薬（複数可）との組み合わせは、任意の従来の剤形で投与または共投与（例えば、連続的に、同時に、異なる時点で）することができる。本明細書における共投与とは、改善された臨床転帰を達成するための調整された治療の過程で、対象に複数の治療薬を投与することを指す。このような共投与は、同じ範囲に及ぶこともあり得、つまり、重複する期間中に行われることもあり得る。例えば、第１の治療薬は、第２の活性薬剤の投与前、投与と同時に、投与の前後に、または投与後に患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療薬は単一の組成物中に組み合わされ／製剤化され、したがって同時に対象に投与される。

【0134】

治療及び使用方法
膵脂肪症
肥満及びメタボリックシンドローム（肥満、高血糖、脂質異常症、高血圧及びインスリン抵抗性を含む）は、脂肪細胞による脂質の誤った取り扱い、ならびに膵臓の脂肪浸潤につながる代謝異常をもたらす。血行中、ならびに膵臓の微小環境におけるアディポサイトカインの不均衡により、慢性的な低度の炎症が引き起こされ、その結果、β細胞及び腺房細胞のアポトーシスが起こり、膵内分泌及び膵外分泌の機能不全がもたらされる。更に、これらのアディポサイトカインは、細胞増殖、分化、ならびに血管新生及びリンパ管の拡張を調節する。

【0135】

膵脂肪症は、膵臓の脂肪浸潤から膵臓の炎症、及び膵線維症の発生に至るまでの疾患を指す。膵臓の脂肪細胞浸潤の結果は、発がんを引き起こすと考えられており、膵臓上皮内腫瘍及び膵管腺癌を引き起こす。

【0136】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵脂肪症（ＰＳ）を治療するための方法及び組成物を提供する。

【0137】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵脂肪症を治療することを必要とする対象において膵脂肪症を治療するための方法及び組成物を提供し、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法及び組成物を提供する。

【0138】

一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される。一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている。一実施形態では、対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている。

【0139】

「膵脂肪症」及び脂肪膵という用語は、膵臓への脂肪の蓄積を指すために互換的に使用される。

【0140】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って治療されるＰＳは、非アルコール性脂肪膵疾患である。治療される非アルコール性脂肪膵疾患としては、非アルコール性脂肪膵炎、膵臓脂肪腫症、膵肪脂症、膵脂肪腫性仮性肥大、膵脂肪置換、及び膵脂肪浸潤が挙げられるが、これらに限定されない。

【0141】

特定の実施形態では、提供される方法に従って治療されるＰＳは、非アルコール性脂肪膵疾患（ＮＡＳＰ）である。更なる実施形態では、治療されるＰＳは、肥満及びメタボリックシンドロームを含む、ＮＡＦＰＤ非アルコール性脂肪膵疾患である。メタボリックシンドロームは、心疾患、糖尿病、脳卒中、及び他の健康問題を引き起こす可能性のある５つの症候群である。メタボリックシンドロームの病態としては、インスリン抵抗性を伴う糖尿病、動脈性高血圧、肥満、及び脂質異常症（高トリグリセリド血症、ＨＤＬコレステロールの低下）が挙げられる。

【0142】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って治療されるＰＳは、アルコール性脂肪膵疾患である。治療されるアルコール性脂肪膵疾患としては、アルコール性脂肪膵炎及びアルコール性膵炎が挙げられるが、これらに限定されない。

【0143】

いくつかの実施形態では、対象は、ＰＳを患うリスクがある。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（例えば、上記（ａ）～（ｃ）のいずれか）は、ＰＳの予防的治療として行われる。

【0144】

いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、ＰＳを発症するリスクがある対象、例えば、ＰＳの発症に関連する１つ以上の危険因子を有する対象において、ＰＳを予防する。いくつかの実施形態では、対象は、以下から選択される１つ以上の危険因子を有する：肥満、メタボリックシンドローム、動脈性高血圧、高トリグリセリド血症、ＨＤＬコレステロールの変化、糖尿病（例えば、ＭＤ－Ｔ２）、肝脂肪症、ＮＡＦＬＤ、栄養障害；特定の薬剤、例えば、ロシグリタゾン、副腎皮質ステロイド、オクトレオチド及びゲムシタビンの服用；ヘモクロマトーシス、感染症（レオウイルスによるウイルス感染）、慢性Ｂ型肝炎感染；先天性疾患（シュワックマン－ダイアモンド症候群症候群、ヨハンソン－ブリザード症候群、嚢胞性線維症、ヘテロ接合性カルボキシルエステルリパーゼ変異症）の既往または家族歴；アルコール乱用（過度のアルコール消費量）、壊死性膵炎の既往、再発性急性膵炎の既往、慢性膵炎の家族歴。特定の実施形態では、危険因子は、肥満、またはメタボリックシンドロームの一部としての肥満である。

【0145】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＰＳの発症前、例えば、ＰＳの１つ以上の症状の発症前に、提供される組成物を対象に投与することによって、ＰＳの発症を予防、阻害、または遅延させる方法及び組成物を提供する。

【0146】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＳの１つ以上の症状の発症前に投与される。いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＰＳを予防する。いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＰＳの発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＰＳを発症するリスクがある対象に投与される。このような対象では、ＰＳの予防は、ＰＳの典型的な特徴の欠如によって監視され得る。例えば、有効量のＨＩＦ１－α阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤が予防的に投与された対象は、以下の症状：２５％を超える膵臓の脂肪含有量、腹痛（または、右上腹部の膨満感）、悪心、食欲不振または体重減少、黄疸（黄色がかった皮膚及び／または白眼）、浮腫（腹部及び／または下肢の膨張）、極度の疲労感または精神錯乱、ならびに脱力感のうちの１つ以上を経験しない可能性があるか、またはその発生率の低下を経験する可能性がある。

【0147】

いくつかの実施形態では、対象は、ＰＳを患っていると診断されている。ＰＳを日常的に診断及び監視するのに適した様々な方法は当技術分野で一般的に知られており、ＭＲＩプロトン密度脂肪分画、コンピュータ断層撮影、超音波内視鏡検査、超音波エラストグラフィー、及び膵柔組織エコー輝度と腎または肝エコー輝度とを比較する経腹腔超音波検査が含まれる。

【0148】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＳの１つ以上の症状の発症後に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、以下：２５％以上の膵臓の脂肪含有量、腹痛（または、右上腹部の膨満感）、悪心、食欲不振または体重減少、黄疸（黄色がかった皮膚及び／または白眼）、浮腫（腹部及び／または下肢の膨張）、極度の疲労感または精神錯乱、ならびに脱力感のうちの１つ以上を示す。いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、上記の症状の１つ以上の発生率、重症度、またはレベルを低下させることができる。

【0149】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である。

【0150】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である。

【0151】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である。

【0152】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を阻害しない。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である。

【0153】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである。

【0154】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である。

【0155】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である。

【0156】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、またはそれらの塩である。

【0157】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＡＺ６７、またはその塩である。

【0158】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、またはそれらの塩の構造を有する。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～ＡＺ７０もしくはＡＺ７１、またはそれらの塩の構造を有する。

【0159】

いくつかの実施形態では、ＰＳを治療するために本明細書に提供される方法は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に共投与することによって行われる。

【0160】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口投与される。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経粘膜投与、シロップ剤、局所投与、非経口投与、注射、皮下投与、直腸投与、頬側投与または経皮投与によって投与される。

【0161】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従ってＰＳを治療することは、対照の対象またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤で治療する前の対象と比較して、対象におけるＰＳの１つ以上の症状を軽減することを含む。

【0162】

いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、膵脂肪（例えば、脂肪症）の減少、例えば脂肪組織及び／または膵臓における線維増生の減少、脂肪細胞及び／または膵臓の機能の改善、脂肪組織及び／または膵臓における低酸素の減少、脂肪組織及び／または膵臓の炎症の減少、膵炎の減少、及び／または脂肪膵によって引き起こされる膵臓病変の減少がもたらされる。いくつかの実施形態では、提供される方法より、結果として、ＰＳバイオマーカー（例えば、アンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）１型受容体（ＡＴ１）シグナル伝達及び／または炎症促進性サイトカイン、例えば、ＩＬ－１βに関連する）の低下がもたらされる。いくつかの実施形態では、ＰＳの１つ以上の症状は、対照対象と比較して、またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0163】

いくつかの実施形態では、対象の膵脂肪は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0164】

いくつかの実施形態では、脂肪組織の炎症及び／または膵臓の炎症は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0165】

いくつかの実施形態では、膵炎は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0166】

追加の実施形態では、提供される方法は、追加の治療薬を対象に更に投与することを含む。

【0167】

膵癌
いくつかの実施形態では、本開示は、対象における膵癌を治療するための方法及び組成物を提供する。膵癌は、主に膵管の細胞に発生する膵臓の悪性増殖である。この疾患は、がんの中で９番目に多い形態であるが、男性と女性のがんの死亡原因のそれぞれ４位と５位になっている。膵臓の癌はほとんど常に致命的であり、５年生存率は３％未満である。

【0168】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵癌を治療することを必要とする対象において膵癌を治療するための方法及び組成物を提供し、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法及び組成物を提供する。

【0169】

一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される。一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている。一実施形態では、対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている。

【0170】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って治療される膵癌は、外分泌膵癌または神経内分泌膵癌である。

【0171】

いくつかの実施形態では、膵癌は、外分泌膵癌である。いくつかの実施形態では、膵癌は、腺癌、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、及び膠様癌から選択される外分泌膵癌である。いくつかの実施形態では、膵癌は、扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、または膠様癌である。特定の実施形態では、膵癌は、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。

【0172】

いくつかの実施形態では、膵癌は、神経内分泌膵癌である。

【0173】

いくつかの実施形態では、対象は、膵癌（例えば、ＰＤＡＣ）を患うリスクがある。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（例えば、上記（ａ）～（ｃ）のいずれか）は、膵癌の予防的治療として行われる。

【0174】

いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、膵癌を発症するリスクがある対象、例えば、膵癌の発症に関連する１つ以上の危険因子を有する対象において、膵癌（例えば、ＰＤＡＣ）を予防する。いくつかの実施形態では、対象は、４０歳を超えている、喫煙、過度のアルコール消費量、糖尿病（例えば、２型糖尿病）の既往、高齢での糖尿病の発症、肥満、慢性膵炎の既往、脂肪膵の既往、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、男性；慢性膵炎、膵癌、またはＢＲＣＡ関連癌（例えば、乳癌）の家族歴；アフリカ系アメリカ人またはアシュケナジヤ系ユダヤ人、及びドライクリーニング業者及び金属加工業者が使用する化学物質に曝露されている；から選択される１つ以上の危険因子を有する。

【0175】

いくつかの実施形態では、本開示は、膵癌の発症前、例えば、膵癌の１つ以上の症状の発症前に、提供される組成物を対象に投与することによって、膵癌（例えば、ＰＤＡＣ）の発症を予防、阻害、または遅延させる方法及び組成物を提供する。

【0176】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、膵癌（例えば、ＰＤＡＣ）の１つ以上の症状の発症前に投与される。いくつかの実施形態では、提供される方法は、膵癌を予防する。いくつかの実施形態では、提供される方法は、膵癌（例えば、ＰＤＡＣ）の発症を遅延させる。

【0177】

いくつかの実施形態では、提供される方法は、膵癌を発症するリスクがある対象に投与される。このような対象では、膵癌の予防は、膵癌の典型的な特徴の欠如によって監視され得る。例えば、有効量のＨＩＦ１－α阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤が予防的に投与された対象は、以下の症状：膵炎、黄疸または眼及び皮膚の黄変、食欲不振、腹痛、便の変化、胆嚢の肥大、突然の原因不明の体重減少；皮膚、手のひらのかゆみ；糖尿病、及び味覚の変化のうちの１つ以上を経験しない可能性があるか、またはその発生率の低下を経験する可能性がある。

【0178】

いくつかの実施形態では、対象からの生体試料は、膵癌に一致する膵癌バイオマーカー（例えば、ＣＡ１９－９）のレベルを有していない。対象の血清の膵癌バイオマーカーのレベルは、１つ以上の膵癌バイオマーカー（例えば、クレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリン）のレベルが上昇していない。

【0179】

いくつかの実施形態では、対象は、膵癌を患っていると診断されている。膵癌を診断及び監視するための現在の方法には、一般に、臨床症状、心電図検査（ＥＣＧ）、及び末梢循環バイオマーカーの測定が含まれる。血管造影はまた、通常、不安定狭心症及び急性脂肪膵（ＡＰＳ）に伴う重度の胸痛にも使用される。膵癌患者は、首、顎、肩、または左腕もしくは両腕の内側に広がることが多い、締め付けられるような胸痛を感じることが多く、呼吸困難、発汗、動悸、思考の錯乱、吐き気の症状を伴う場合がある。心筋虚血は、Ｑ波及びＳＴ部分の変化など、診断用ＥＣＧに変化を引き起こす可能性がある。対象の心筋酵素の血漿濃度の上昇は、重度の不安定狭心症及び脂肪膵に関連する心臓組織壊死の程度を反映している。

【0180】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、膵癌の１つ以上の症状の発症後に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、以下：膵炎、黄疸または眼及び皮膚の黄変、食欲不振、腹痛、便の変化、胆嚢の肥大、突然の原因不明の体重減少；皮膚、手のひらのかゆみ；糖尿病、及び味覚の変化のうちの少なくとも１つを示す。いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、上記の症状の１つ以上の発生率、重症度、またはレベルを低下させることができる。

【0181】

一実施形態では、膵癌は、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶである。

【0182】

特定の実施形態では、膵癌は、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）、腺扁平上皮癌、扁平上皮癌、巨細胞癌、腺房細胞癌、及び小細胞癌からなる群から選択される外分泌膵癌である。

【0183】

特定の一実施形態では、膵癌は、管腺癌、例えば、膵臓の外分泌成分内に生じる切除可能な膵管腺癌（ＰＤＡＣ）である。本明細書で使用される場合、「腺癌」とは、腺を形成する細胞（空隙を取り囲む細胞の集団）から構成される良性（非癌性）腫瘍を指す「腺腫」とは対照的ながん腫瘍を指す。本明細書で使用される場合、「膵管腺癌細胞」とは、膵臓の管腔内膜を形成する能力を有するか、またはそれに由来するがん細胞を指す。膵管腺癌細胞は、腺を形成する膵臓内に見られ得るか、または転移細胞として任意の臓器内に見られ得るか、またはリンパ系の血流内に見られ得る。本明細書で使用される場合、膵臓に関連する「管細胞」とは、膵臓内及び膵臓から出る管の管腔内膜を形成するか、またはそれを形成する能力を有するか、またはそれに由来する任意の細胞を指す。

【0184】

別の実施形態では、膵癌は、膵島細胞腫瘍としても知られる膵内分泌腫瘍、膵島細胞から生じる膵内分泌腫瘍（ＰＥＴ）及び膵神経内分泌腫瘍（ＰＮＥＴ）である。特定の実施形態では、膵癌は、インスリノーマ（すなわち、インスリン産生細胞から生じる）、グルカゴノーマ（すなわち、グルカゴン産生細胞から生じる）、ソマトスタチノーマ（すなわち、ソマトスタチン産生細胞から生じる）、ガストリノーマ（すなわち、ガストリン産生細胞から生じる）、ＶｌＰｏｍａｓ（血管作動性腸管ペプチド産生細胞から生じる）及び膵臓の非分泌性膵島腫瘍からなる群から選択される内分泌膵癌である。

【0185】

一実施形態において、対象は、肝細胞癌、切除不能膵癌、局所進行膵癌、境界切除可能膵癌、局所進行膵管腺癌、境界切除可能膵管腺癌、転移性膵癌、化学療法抵抗性膵管癌、膵管腺癌、扁平上皮性膵癌、膵前駆細胞、免疫原性膵癌、異常分化内分泌外分泌（ＡＤＥＸ）腫瘍、外分泌膵癌、膵上皮内腫瘍、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腫瘍、粘液性膵癌、腺扁平上皮癌、印環細胞癌、肝様癌、膠様癌、未分化癌、破骨細胞様巨細胞を伴う未分化癌、膵嚢胞性腫瘍、膵島細胞腫瘍、膵内分泌腫瘍、または膵神経内分泌腫瘍のうちの１つ以上に罹患している。

【0186】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である。

【0187】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である。

【0188】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である。

【0189】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を阻害しない。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である。

【0190】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである。

【0191】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である。

【0192】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である。

【0193】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、またはそれらの塩である。

【0194】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＡＺ６７、またはその塩である。

【0195】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、またはそれらの塩の構造を有する。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～ＡＺ７０もしくはＡＺ７１、またはそれらの塩の構造を有する。

【0196】

いくつかの実施形態では、膵癌を治療するために本明細書に提供される方法は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に共投与することによって行われる。

【0197】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口投与される。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経粘膜投与、シロップ剤、局所投与、非経口投与、注射、皮下投与、直腸投与、頬側投与または経皮投与によって投与される。

【0198】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って膵癌を治療することは、対照の対象またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤で治療する前の対象と比較して、対象における膵癌の１つ以上の症状を軽減することを含む。いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の抑制もしくは低下、新たな腫瘍の形成なし、新たな腫瘍形成の減少、生存または無憎悪生存率の増加、転移なし、治療の選択肢の増加、手術から再発までの時間の遅延、黄疸の軽減、肝臓への浸潤の抑制、痛みの軽減、食欲の改善、消化の改善、胆嚢のサイズの減少、及び血栓の発生率の減少のうちの１つ以上がもたらされる。

【0199】

いくつかの実施形態では、提供された方法により、結果として、ＥＣＧの正常化（例えば、Ｑ波及びＳＴ部分の変化を正常に戻す）、または心筋酵素もしくは他のバイオマーカー（例えば、クレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリン）の血漿中濃度のレベルの低下がもたらされる。いくつかの実施形態では、膵癌の１つ以上の症状は、対照対象と比較して、またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0200】

いくつかの実施形態では、対象の生体試料中の少なくとも１、２、３、４または５つ以上の膵癌バイオマーカー（例えば、クレアチンキナーゼ（ＣＫ－ＭＢ）、トロポニン、Ｎ末端プロＢ型ナトリウム利尿ペプチド、α－１アンチトリプシン、Ｃ反応性タンパク質、アポリポタンパク質Ａ１、アポリポタンパク質Ｂ、クレアチニン、アルカリホスファターゼ、及びトランスフェリン）は、対照対象と比較して、またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する。

【0201】

一実施形態では、対象は、完全奏功を達成する。一実施形態では、対象は、部分奏効を達成する。一実施形態では、対象は、疾患の安定状態を達成する。一実施形態では、対象は、疾患の緩慢な進行性状態を達成する。

【0202】

追加の実施形態では、提供される方法は、追加の治療薬を対象に更に投与することを含む。

【0203】

非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）
脂肪肝疾患は、肝臓でのトリグリセリドの過剰な沈着によって特徴付けられる慢性疾患である。これは複数の原因に起因する可能性があり、主な２つの形態は、過度のアルコール消費量、または過度のアルコール摂取がない場合の代謝調節不全に関連する。後者は、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）と呼ばれる。

【0204】

ＮＡＦＬＤは、小葉内の炎症及び線維症を伴う肝細胞の脂肪化によって特徴付けられ、メタボリックシンドローム及びその個々の要素（肥満、２型糖尿病、脂質異常症及び高血圧）に一般的に関連している。

【0205】

ＮＡＦＬＤの領域は、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）とも呼ばれる孤立性脂肪肝から、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）までの範囲である。ＮＡＳＨは、一般的で、しばしば「無症候性」肝疾患である。３つの主な特徴がＮＡＳＨを特徴付け、代謝起源の他の肝疾患と区別するものである：肝臓における異常な脂肪蓄積または沈着（肝脂肪症）、肝臓の炎症、及び肝損傷または肝組織損傷（線維症）。ＮＡＳＨは、末期肝疾患、肝硬変及び肝細胞癌に進行するかなりのリスクを伴う、潜在的に深刻な疾患である。肝硬変を発症した一部の患者は、肝不全のリスクがあり、最終的には肝移植が必要になる場合がある。

【0206】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象における非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を治療するための方法及び組成物を提供する。

【0207】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＡＦＬＤを治療することを必要とする対象においてＮＡＦＬＤを治療するための方法及び組成物を提供し、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法及び組成物を提供する。

【0208】

一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される。一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている。一実施形態では、対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている。

【0209】

いくつかの実施形態では、提供される方法に従って治療されるＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪肝（ＮＡＦＬ）である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って治療されるＮＡＦＬＤは、非アルコール性脂肪肝炎（ＮＡＳＨ）である。いくつかの実施形態では、提供される方法に従って治療されるＮＡＦＬＤは、ＮＡＦＬＤ関連肝線維症である。

【0210】

いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを患うリスクがある。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（例えば、上記（ａ）～（ｃ）のいずれか）は、ＮＡＦＬＤの予防的治療として行われる。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＡＦＬＤを患うリスクがある。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（例えば、上記（ａ）～（ｃ）のいずれか）は、ＮＡＳＨの予防的治療として行われる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（例えば、上記（ａ）～（ｃ）のいずれか）は、ＮＡＦＬＤ関連肝線維症の予防的治療として行われる。

【0211】

いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、ＮＡＦＬＤを発症するリスクがある対象、例えば、ＮＡＦＬＤの発症に関連する１つ以上の危険因子を有する対象において、ＮＡＦＬＤを予防する。いくつかの実施形態では、対象は、肥満、メタボリックシンドローム、高トリグリセリド血症、２型糖尿病、睡眠時無呼吸、甲状腺機能低下症、下垂体機能低下症、多嚢胞性卵巣症候群から選択される１つ以上の危険因子を有する。ＮＡＳＨは、高齢者、糖尿病患者、及び腹部に体脂肪が集中している対象で発生する可能性が高い。

【0212】

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法に従って治療される対象はまた、ＩＩ型糖尿病、Ｉ型糖尿病、糖尿病前症、インスリン抵抗性、または肥満に罹患しており、肥満は、３０以上の肥満度指数を有する患者として定義される。

【0213】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ及び／またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症の発症前に、提供される組成物を対象に投与することによって、ＮＡＦＬ、ＮＡＳＨ及び／またはＮＡＦＬＤ関連肝線維症の発症を予防、阻害、または遅延させる方法及び組成物を提供する。

【0214】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＡＦＬの発症を予防、阻害、または遅延させる方法及び組成物を提供する。

【0215】

いくつかの実施形態では、本開示は、ＮＡＳＨの発症を予防、阻害、または遅延させる方法及び組成物を提供する。当技術分野におけるＮＡＳＨと炎症を伴う脂肪症とを区別するための好ましい手段は、現在、いわゆる「ＮＡＦＬＤ活性スコア」または「ＮＡＳ」（Ｋｌｅｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２００５，ｖｏｌ．４１，ｐｐ．１３１３－１３２１）を使用した肝生検の組織学的評価である。ＮＡＦＬＤ及びその構成要素の重篤度を診断するために他のスコアリングシステムを使用することもできる。ＮＡＳ。ＮＡＳは、（ｉ）脂肪症、（ｉｉ）小葉の炎症、及び（ｉｉｉ）肝細胞の肥大化についてのサブスコアの非加重合計として定義され、具体的には、短期的に可逆的であり得る活動性損傷の特徴を含む。各スコアは、以下の表に記載のように半定量的に等級付けされている。

【表1】

【0216】

ＮＲＡを用いて、少なくとも脂肪肝のスコア（「脂肪肝スコア」）が１である場合、対象は、本開示に従ってＮＡＦＬＤと診断されるか、ＮＡＦＬＤに罹患しているとみなされる。ＮＡＳＨは、肝細胞の空胞化の存在（「空胞化スコア」）により、ある程度の炎症の有無（「炎症スコア」）を問わず、ＮＡＦＬまたは単純な脂肪肝と区別できる。３未満のＮＡＳはＮＡＦＬＤに対応し、３～４は境界線ＮＡＳＨに対応し、５超はＮＡＳＨに対応する。この定義を表２に示した診断アルゴリズムに用いた。

【表2】

【0217】

ＮＡＳはＮＡＦＬ及びＮＡＳＨの程度を決定するが（より高いスコアは、疾患活動性がより高いことを意味する）、Ｋｌｅｉｎｅｒ線維化スコアは線維化の進行の程度を決定するのに使用することができる。表３に、Ｋｌｅｉｎｅｒ線維化スコアの定義を示す。

【表3】

【0218】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＮＡＦＬＤ（例えば、ＮＡＳＨ）の１つ以上の症状の発症前に投与される。いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＮＡＦＬＤを予防する。いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＮＡＦＬＤの発症を遅延させる。いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＮＡＦＬＤ（例えば、ＮＡＳＨ）を発症するリスクがある対象に投与される。このような対象では、ＮＡＦＬＤの予防は、ＮＡＦＬＤ（例えば、ＮＡＳＨ）の典型的な特徴の欠如によって監視され得る。例えば、有効量のＨＩＦ１－α阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤が予防的に投与された対象は、以下の症状（例えば、ＮＡＳＨ）のうちの１つ以上を経験しない可能性があるか、またはその発生率の低下を経験する可能性がある。

【0219】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＮＡＦＬＤの１つ以上の症状の発症後に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、以下：疲労、右上腹部の痛みまたは不快感、脾臓肥大、黄疸（黄色がかった皮膚及び／または白眼）、浮腫（腹部の膨張）、皮下出血または出血が生じやすい、食欲不振、及び悪心のうちの少なくとも１つを示す。いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、上記の症状の１つ以上の発生率、重症度、またはレベルを低下させることができる。

【0220】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である。

【0221】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である。

【0222】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である。

【0223】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を阻害しない。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である。

【0224】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである。

【0225】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である。

【0226】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である。

【0227】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、またはそれらの塩である。

【0228】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＡＺ６７、またはその塩である。

【0229】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、またはそれらの塩の構造を有する。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～ＡＺ７０もしくはＡＺ７１、またはそれらの塩の構造を有する。

【0230】

いくつかの実施形態では、ＮＡＦＬＤを治療するために本明細書に提供される方法は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に共投与することによって行われる。

【0231】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口投与される。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経粘膜投与、シロップ剤、局所投与、非経口投与、注射、皮下投与、直腸投与、頬側投与または経皮投与によって投与される。

【0232】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従ってＮＡＦＬＤを治療することは、対照の対象またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤で治療する前の対象と比較して、対象におけるＮＡＦＬＤの１つ以上の症状を軽減することを含む。

【0233】

いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、肝脂肪（例えば、脂肪症）の減少、例えば脂肪組織及び／または肝臓における線維症の減少、脂肪細胞及び／または肝臓の機能の改善、脂肪組織及び／または肝臓における低酸素の減少、脂肪組織及び／または肝臓の炎症の減少、肝炎の減少、アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）及びインスリンレベルの減少、及び／または脂肪肝によって引き起こされる肝病変の減少がもたらされる。いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、ＮＡＦＬＤバイオマーカーの低下がもたらされる（例えば、ＮＡＦＬＤバイオマーカー－ＴＮＦα、ＩＬ－６、ＣＲＰ、ＩＬ－１ＲＡ、ＰＡＩ１、ＣＸＣＬ１０、ＣＫ１８、ＦＧＦ２１及びｏｘＬＤＬの増加、ならびにＡＤＰ及びレプチンの減少；ＮＡＳＨバイオマーカー－ＴＮＦα及びＩＬ－６の増加、ならびにＡＤＰ及びレプチンの減少；線維化バイオマーカー－ＡＤＰの減少、ならびにレプチン、ヒアルロン酸、ラミニン、プロコラーゲンＩＩ及びＴＩＭＰ１の増加）。いくつかの実施形態では、ＮＡＦＬＤの１つ以上の症状は、対照対象と比較して、またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0234】

いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、（ａ）肝組織における脂肪肝、トリグリセリド含量、炎症及び／またはアポトーシス、（ｂ）血清アミノトランスフェラーゼレベル、（ｃ）インスリン抵抗性の低下、及び任意選択で、対象における耐糖性の改善がもたらされる。

【0235】

いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、対象におけるＮＡＳスコアの１、２、３またはそれ以上のポイントの低減がもたらされる。いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、３未満のＮＡＳを有する対象がもたらされる。

【0236】

いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＮＡＳＨに罹患している対象を治療する。このような対象は、ＮＡＳＨを患っている可能性がある、ＮＡＳＨと診断され得る、またはＮＡＳＨの発症に遺伝的に素因を有し得る、または対象はメタボリックシンドローム、肥満、糖尿病または糖尿病前症に罹患しているためＮＡＳＨの発症に素因を有し得る。更に他の実施形態では、ＮＡＳＨに罹患している患者は、患者がＮＡＳＨの身体症状をまだ示さない場合でも、ＮＡＳＨに特徴的な臨床所見（肝臓への脂肪の異常蓄積、肝炎症及び肝線維症）を示すことが試験されかつ発見された患者である。場合によっては、ＮＡＳＨに罹患している患者は、まだ診断を下されていなくてもＮＡＳＨの症状を示す。

【0237】

いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、対象のＮＡＳＨから肝硬変への進行を遅らせるか、または停止させる。いくつかの実施形態では、治療により、結果として、ＮＡＳＨの少なくとも１つの測定可能な身体症状、例えば、体重減少、脱力感、または疲労の改善がもたらされる。他の実施形態では、治療により、結果として、少なくとも１つの臨床的パラメーターまたはＮＡＳＨの所見、例えば、異常な肝脂肪蓄積、生検により決定される肝線維化、肝炎症、異常なレベルの肝酵素（例えば、ＡＬＴ）、異常なレベルの炎症性サイトカインまたはＮＡＳスコアの寛解がもたらされる。他の実施形態では、治療により、結果として、物理的に、例えば、測定可能な症状もしくは症状のセット（例えば、疲労感、体重減少または脱力感）の安定化による、もしくは臨床的／生理学的に、例えば、測定可能なパラメーター、例えば、肝臓における異常な脂肪蓄積、異常なレベルの肝酵素、異常なレベルの肝炎症マーカー、肝生検における異常所見、ＮＡＳスコアの安定化による、のいずれかもしくは両方のＮＡＳＨの進行の軽減、抑制または減速がもたらされる。別の実施形態では、また、治療により、結果として、ＮＡＳＨの原因及び／または影響もしくは臨床症状、またはＮＡＳＨの結果として発症する症状の１つを、疾患または障害が完全に発現する前に防ぐことももたらされる。いくつかの実施形態では、治療により、結果として、ＮＡＳＨを患う患者の生存率または生存期間の増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、治療により、結果として、ＮＡＳＨを患う患者が肝移植を必要とする可能性の低下がもたらされる。他の実施形態では、治療により、結果として、ＮＡＳＨ患者の肝移植を受ける必要性がなくなる。他の実施形態では、結果として、ＮＡＳＨを患う患者が肝硬変を発症する可能性の低下がもたらされる。他の実施形態では、結果として、組織学によって決定されるように、肝硬変への進行の予防がもたらされる。

【0238】

いくつかの実施形態では、対象の肝脂肪は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0239】

いくつかの実施形態では、脂肪組織の炎症及び／または肝臓の炎症は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0240】

いくつかの実施形態では、膵炎は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0241】

追加の実施形態では、提供される方法は、追加の治療薬を対象に更に投与することを含む。

【0242】

肝細胞癌
いくつかの実施形態では、本開示は、対象における肝細胞癌（ＨＣＣ）を治療するための方法及び組成物を提供する。肝細胞癌は、慢性肝炎または肝硬変後の肝細胞の悪性化により発生する。

【0243】

いくつかの実施形態では、本開示は、肝細胞癌（ＨＣＣ）を治療することを必要とする対象において肝細胞癌（ＨＣＣ）を治療するための方法及び組成物を提供し、
（ａ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤、及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与すること、
（ｂ）有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている、対象に投与すること、または
（ｃ）有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に投与することであって、対象は以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている、対象に投与すること、を含み、
ＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路またはＨＩＦ１－αを阻害しない、前記方法及び組成物を提供する。

【0244】

一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤及び有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与される。一実施形態では、対象は、有効量のＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与され、対象は、以前にＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与されている。一実施形態では、対象は、有効量のＰＦＫＦＢ３阻害剤を投与され、対象は、以前にＨＩＦ１－α経路阻害剤を投与されている。

【0245】

いくつかの実施形態では、対象は、肝細胞癌を患うリスクがある。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法（例えば、上記（ａ）～（ｃ）のいずれか）は、肝細胞癌の予防的治療として行われる。

【0246】

いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、肝細胞癌を発症するリスクがある対象、例えば、肝細胞癌の発症に関連する１つ以上の危険因子を有する対象において、肝細胞癌を予防する。いくつかの実施形態では、対象は、男性、５５歳超、ウイルス性慢性肝炎（例えば、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎）、自己免疫性肝炎、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、脂肪膵、喫煙、過度のアルコール消費量、糖尿病（例えば、２型糖尿病）、肥満、慢性膵炎の既往、肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、ＨＣＣの家族歴、遺伝性代謝疾患、遺伝性ヘモクロマトーシス、α１－アンチトリプシン欠乏症、ウィルソン病、及びアフラトキシンなどの特定の環境因子への曝露から選択される１つ以上の危険因子を有する。

【0247】

いくつかの実施形態では、本開示は、肝細胞癌の発症前、例えば、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症前に、提供される組成物を対象に投与することによって、肝細胞癌の発症を予防、阻害、または遅延させる方法及び組成物を提供する。

【0248】

ＨＣＣの症状は、がんの初期では現れないことが多い。その後、症状としては、体重減少、食欲不振、発熱、悪心、疲労感、上腹部痛、腹部及び下肢の腫脹、皮膚の黄変（黄疸）、皮下出血または出血が生じやすい、ならびに肝不全が挙げられる。

【0249】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症前に投与される。いくつかの実施形態では、提供される方法は、肝細胞癌を予防する。いくつかの実施形態では、提供される方法は、肝細胞癌の発症を遅延させる。

【0250】

いくつかの実施形態では、提供される方法は、肝細胞癌を発症するリスクがある対象に投与される。このような対象では、肝細胞癌の予防は、肝細胞癌の典型的な特徴の欠如によって監視され得る。例えば、有効量のＨＩＦ１－α阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤が予防的に投与された対象は、以下の症状：体重減少、食欲不振、発熱、悪心、疲労感、上腹部痛、腹部及び下肢の腫脹、皮膚の黄変（黄疸）、皮下出血または出血が生じやすい、ならびに肝不全のうちの１つ以上を経験しない可能性があるか、またはその発生率の低下を経験する可能性がある。

【0251】

いくつかの実施形態では、対象からの生体試料は、肝細胞癌と一致する肝細胞癌バイオマーカー（例えば、ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、ならびにＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ及びＬＡＭＰ－２）のレベルを有しない。分析のための生体試料は、通常、患者からの血液、血漿、血清、粘膜、組織生検、腫瘍、腹水または脳脊髄液である。試料は、腫瘍の徴候について分析することができる。

【0252】

いくつかの実施形態では、対象は、肝細胞癌を患っていると診断されている。肝細胞癌を診断及び監視するための現在の方法には、一般に、臨床症状、コンピュータ断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）、腹部超音波、凝固検査、動脈造影、または生検が含まれる。肝細胞癌を患う患者は、体重減少、食欲不振、発熱、悪心、疲労感、上腹部痛、腹部及び下肢の腫脹、皮膚の黄変（黄疸）、皮下出血または出血が生じやすい、ならびに肝不全を有することが多い。

【0253】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤は、肝細胞癌の１つ以上の症状の発症後に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、以下：体重減少、食欲不振、発熱、悪心、疲労感、上腹部痛、腹部及び下肢の腫脹、皮膚の黄変（黄疸）、皮下出血または出血が生じやすい、ならびに肝不全のうちの少なくとも１つを示す。いくつかの実施形態では、提供される方法及び組成物は、上記の症状の１つ以上の発生率、重症度、またはレベルを低下させることができる。

【0254】

一部の実施形態では、対象は、遺伝的素因または他の理由で（例えば、危険因子を有する）、ＨＣＣを発症しやすい。

【0255】

一実施形態では、肝細胞癌は、早期ＨＣＣである。一実施形態では、肝細胞癌は、非転移性ＨＣＣまたは原発性ＨＣＣである。一実施形態では、肝細胞癌は、進行性ＨＣＣ、局所進行性ＨＣＣまたは転移性ＨＣＣである。一実施形態では、肝細胞癌は、寛解期のＨＣＣ、または再発性ＨＣＣである。いくつかの実施形態では、ＨＣＣは、切除可能な限局性である、切除不可能な限局性である、または切除不可能である（すなわち、腫瘍は肝臓の全葉を含む、及び／または広がって他の臓器（例えば、肺、リンパ節、骨）に及ぶ）。いくつかの実施形態では、ＨＣＣは、ＴＮＭ分類によると、ステージＩ腫瘍（血管侵入を伴わない単一腫瘍）、ステージＩＩ腫瘍（血管侵入を伴う単一腫瘍、または複数の腫瘍、５ｃｍ未満）、ステージＩＩＩ腫瘍（複数の腫瘍、５ｃｍ超、または門脈もしくは肝静脈の主要分枝に関与する腫瘍）、ステージＩＶ腫瘍（胆嚢以外の隣接臓器へ直接浸潤、または内臓側腹膜穿孔している腫瘍）、Ｎ１腫瘍（局所リンパ節転移）またはＭ１腫瘍（遠隔転移）である。いくつかの実施形態では、ＨＣＣは、ＡＪＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ）病期分類基準によると、ステージＴ１、Ｔ２、Ｔ３またはＴ４ ＨＣＣである。

【0256】

一実施形態では、対象は、肝細胞癌、ＨＣＣの線維層板型変異体、または混合型肝細胞胆管細胞癌に罹患している。

【0257】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α経路結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α経路阻害剤である。

【0258】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、シリビニン、ＰＸ－４７８もしくはＹＣ－１、またはそれらの塩である。

【0259】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ガネテスピブ（ＳＴ－９０９０）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ ｉｓｏｔｈｏｃｙａｎａｔｅ）もしくはＢＡＹ－８７－２２４３、またはそれらの塩である。

【0260】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＨＩＦ１－α経路阻害剤は、ＨＩＦ１－α阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路を阻害しない。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α阻害剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体（例えば、ＶＨＨ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＨＩＦ１－α結合ポリペプチド、または低分子ＨＩＦ１－α阻害剤である。

【0261】

いくつかの実施形態では、投与されるＨＩＦ１－α阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチドＥＺＮ－２９６８、またはナノボディＡＧ－１、ＡＧ－２、ＡＧ－３、ＡＧ－４、ＡＧ－５、ＶＨＨ２１２もしくはＡＨＰＣである。

【0262】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、抗体もしくは抗原結合抗体断片（例えば、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ、ｄＡｂ断片、または別の改変分子、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、及び最小認識単位）、核酸分子（例えば、アプタマー、アンチセンス分子、リボザイム、ｍｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡ）、ペプチボディ、ナノボディ、ＰＦＫＦＢ３結合ポリペプチド、または低分子ＰＦＫＦＢ３阻害剤である。

【0263】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＢｒＡｃＮＨＥｔＯＰ（Ｎ－ブロモアセチルエタノールアミンホスフェート）、ＰＦＫ１５（１－（４－ピリジニル）－３－（２－キノリニル）－２－プロペン－１－オン）、もしくはＰＦＫ－１５８（（Ｅ）－１－（４－ピリジニル）－３－［７－（トリフルオロメチル）－２－キノリニル］－２－プロペン－１－オン）、またはそれらの塩である。

【0264】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＫＡＮ０４３６１５１もしくはＫＡＮ０４３６０６７、またはそれらの塩である。

【0265】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、ＡＺ６７、またはその塩である。

【0266】

いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ａ～図１Ｃもしくは図１Ｄに示す、式１～式５３もしくは式５４、ＰＱＰ、Ｎ４Ａ、ＹＮ１、ＰＫ１５、ＰＦＫ－１５８、ＹＺ２９、化合物２６、ＫＡＮ０４３６１５１、ＫＡＮ０４３６０６７もしくはＢｒＡｃＮＨＥｒＯＰ、またはそれらの塩の構造を有する。いくつかの実施形態では、投与されるＰＦＫＦＢ３阻害剤は、図１Ｅに示す、式ＡＺ４４～ＡＺ７０もしくはＡＺ７１、またはそれらの塩の構造を有する。

【0267】

いくつかの実施形態では、肝細胞癌を治療するために本明細書に提供される方法は、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤を対象に共投与することによって行われる。

【0268】

いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経口投与される。いくつかの実施形態では、ＨＩＦ１－α経路阻害剤及び／またはＰＦＫＦＢ３阻害剤の投与は、経粘膜投与、シロップ剤、局所投与、非経口投与、注射、皮下投与、直腸投与、頬側投与または経皮投与によって投与される。

【0269】

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法に従って肝細胞癌を治療することは、対照の対象またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤で治療する前の対象と比較して、対象における肝細胞癌の１つ以上の症状を軽減することを含む。いくつかの実施形態では、提供される方法により、結果として、ＨＣＣ細胞数の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害または低下、新たな腫瘍形成なし、新たな腫瘍形成の減少；ＨＣＣ癌細胞の末梢器官への浸潤を阻害、遅延、ある程度の減速、及び好ましくは停止；転移なし、腫瘍増殖の阻害；腫瘍の発生及び／または再発の予防または遅延；ＨＣＣに関連する症状のうちの１つ以上のある程度の軽減；生存または無憎悪生存率の増加、及び／または治療の選択肢の増加、手術から再発までの時間の遅延、黄疸の軽減、肝臓への浸潤の抑制、痛みの軽減、食欲の改善、消化の改善、胆嚢のサイズの減少、及び血栓の発生率の減少がもたらされる。

【0270】

腫瘍またはがんの増殖または進行に関する「阻害」、「低減」、「減少」という用語は、当技術分野で公知の方法を用いて、腫瘍またはがんの増殖、広がり、転移を測定可能な量だけ阻害することを指す。腫瘍またはがんの増殖、進行または広がりは、腫瘍負荷が少なくとも約１０％、２０％、３０％、５０％、８０％または１００％減少している場合、阻害、低減、または減少される。

【0271】

いくつかの実施形態では、提供される方法は、ＨＣＣバイオマーカー（例えば、ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、及びＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ、及びＬＡＭＰ－２）をもたらす。いくつかの実施形態では、肝細胞癌の１つ以上の症状は、対照対象と比較して、またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％軽減される。

【0272】

いくつかの実施形態では、対象の生体試料中の１、２、３、４、５つ以上の肝細胞癌バイオマーカー（例えば、ＥｐＣａｍ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＦＬＴ１、テオフィリン、ＨＣＣ－２２－５、ＫＲＴ２３、ＡＨＳＧ、ＦＴＬ、Ｃ１６Ｃｅｒ、Ｃ１６ＤＨＣ、Ｃ１８ＤＨＣ、Ｓ１Ｐ、Ｃ２４ＤＨＣ、Ｃ２４：１ＤＨＣ、Ｃ１８Ｃｅｒ、Ｃ２０Ｃｅｒ、Ｃ２４Ｃｅｒ、Ｃ２４：１Ｃｅｒ、スフィンゴシン、及びＳＡ１Ｐ、ＣＴＳＤ、ＨＹＯＵ１、ＰＳＡＰ、及びＬＡＭＰ－２）のレベルは、対照対象と比較して、またはＨＩＦ１－α経路阻害剤及びＰＦＫＦＢ３阻害剤による治療前の対象と比較して、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％減少する。

【0273】

一実施形態では、対象は、完全奏功を達成する。一実施形態では、対象は、部分奏効を達成する。一実施形態では、対象は、疾患の安定状態を達成する。一実施形態では、対象は、疾患の緩慢な進行性状態を達成する。

【0274】

追加の実施形態では、提供される方法は、追加の治療薬を対象に更に投与することを含む。

【0275】

それぞれ２０２１年５月１６日出願の米国特許出願第６３／１８９，２０４号、同第６３／１８９，２０５号、同第６３／１８９，２０６号、及び同第６３／１８９，２０７号のそれぞれの開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に引用されるすべての参考文献、記事、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により援用される。しかし、本明細書で引用される任意の参考文献、記事、出版物、特許、特許公報、及び特許出願の言及は、世界の任意の国で、それらが有効な先行技術を構成し、または共通の一般知識の一部を形成する、承認または任意の形式の提案ではなく、かつそう解釈されるべきではない。

【図1A】

【図1B】

【図1C】

【図1D】

【図1E】

【国際調査報告】