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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-08
(54)【発明の名称】改善された免疫グロブリンＩ
(51)【国際特許分類】
A61K 47/68 20170101AFI20240426BHJP
A61P 25/00 20060101ALI20240426BHJP
A61P 25/18 20060101ALI20240426BHJP
A61P 25/24 20060101ALI20240426BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240426BHJP
A61P 37/06 20060101ALI20240426BHJP
A61K 51/00 20060101ALI20240426BHJP
A61K 39/395 20060101ALI20240426BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240426BHJP
【ＦＩ】
A61K47/68
A61P25/00
A61P25/18
A61P25/24
A61P29/00
A61P37/06
A61K51/00 200
A61K39/395
C12N15/13 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023573093
(86)(22)【出願日】2022-05-25
(85)【翻訳文提出日】2024-01-23
(86)【国際出願番号】 AU2022050503
(87)【国際公開番号】W WO2022246510
(87)【国際公開日】2022-12-01
(31)【優先権主張番号】2021901567
(32)【優先日】2021-05-25
(33)【優先権主張国・地域又は機関】AU
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】523444855
【氏名又は名称】トランスマブ・ピーティーワイ・リミテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100108453
【弁理士】
【氏名又は名称】村山 靖彦
(74)【代理人】
【識別番号】100110364
【弁理士】
【氏名又は名称】実広 信哉
(74)【代理人】
【識別番号】100133400
【弁理士】
【氏名又は名称】阿部 達彦
(72)【発明者】
【氏名】ヴァレンティーナ・ドゥブリェヴィッチ
(72)【発明者】
【氏名】ジェームズ・キャンベル
【テーマコード（参考）】
4C076
4C085
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076CC41
4C076EE41
4C076EE59
4C085AA13
4C085EE01
4C085KA03
4C085KB92
4C085LL13
(57)【要約】
本開示は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体、及びこれらの抗体コンジュゲートを脳に送達する方法に関する。これらの抗体コンジュゲートを含む組成物は、疾患を検出及び治療するのに有用であり得る。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ペイロードをヒト対象の脳に送達する方法であって、前記方法が、前記対象に、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、前記抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、－配列番号１又は配列番号１２に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記対象が、がんを有しない、方法。
【請求項2】
ペイロードをヒト対象の脳に送達する方法であって、前記方法が、前記対象に、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、前記抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、－配列番号１又は配列番号１２に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、前記対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法。
【請求項3】
前記抗体が、（ｉ）配列番号７若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８若しくは配列番号１９に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び配列番号８若しくは配列番号１４若しくは配列番号１５若しくは配列番号１６に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬ、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項4】
前記抗体が、配列番号９に記載の配列を含む重鎖と、配列番号１０に記載の配列を含む軽鎖と、を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項5】
ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を含む薬学的組成物であって、前記抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、配列番号１又は配列番号１２に示されるＣＤＲ１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有するＶＬと、を含む、薬学的組成物。
【請求項6】
前記抗体が、（ｉ）配列番号７若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８若しくは配列番号１９に示される配列を含むＶＨ、及び配列番号８若しくは配列番号１４若しくは配列番号１５若しくは配列番号１６に示される配列を含むＶＬ、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される配列を含むＶＨ、及び配列番号８に示される配列を含むＶＬを含む、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項7】
前記抗体が、配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法、又は請求項５若しくは６に記載の組成物。
【請求項8】
前記抗体が、配列番号７に示される配列を含むＶＨと、配列番号８に示される配列を含むＶＬと、を含む、請求項７に記載の方法又は組成物。
【請求項9】
前記ペイロードが、治療ペイロードである、請求項１～４又は７若しくは８のいずれか一項に記載の方法、あるいは請求項５～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項10】
前記治療ペイロードが、前記対象の脳に影響する状態を治療する、請求項９に記載の方法又は組成物。
【請求項11】
前記状態が、神経障害、精神障害、又は神経変性障害である、請求項１０に記載の方法又は組成物。
【請求項12】
前記治療ペイロードが、核酸、抗精神病薬、抗うつ薬、抗炎症薬、抗神経変性疾患剤、気分安定剤、及び免疫抑制剤からなる群から選択される、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法又は組成物。
【請求項13】
前記ペイロードが、診断剤である、請求項１～４又は７若しくは８のいずれか一項に記載の方法、あるいは請求項５～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項14】
前記診断剤が、放射性医薬品、イメージング剤、及びナノ粒子からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法又は組成物。
【請求項15】
ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、前記方法が、前記対象に、請求項７～１２のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含み、前記対象が、がんを有しない、方法。
【請求項16】
対象の脳に影響する状態を治療するための医薬の製造における、請求項７～１２のいずれか一項に記載の組成物の使用であって、前記対象が、がんを有しない、使用。
【請求項17】
前記がんが、脳がんである、請求項１～４若しくは７～１２のいずれか一項に記載の方法、又は請求項１６に記載の使用。
【請求項18】
前記脳がんが、膠芽腫である、請求項１５に記載の方法又は使用。
【請求項19】
前記対象の血液脳関門が、無傷である、請求項１～４、７～１５、又は１７若しくは１８のいずれか一項に記載の方法、あるいは請求項１６～１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項20】
前記ペイロードが、核酸である、請求項１～４又は７若しくは８のいずれか一項に記載の方法、あるいは請求項５～８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項21】
前記抗体が、抗体－薬物コンジュゲートとして提供される、請求項１～４、７～１５、若しくは１７～２０のいずれか一項に記載の方法、請求項５～１４若しくは２０のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項１６～１８のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本開示は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性ＩｇＧ抗ＤＮＡ抗体、及びこれらの抗体コンジュゲートを脳に送達する方法に関する。本開示の抗体コンジュゲートを含む組成物は、ペイロードを脳に送達して、疾患を検出及び治療するのに有用であり得る。
【背景技術】
【0002】
中枢神経系（ＣＮＳ）を取り囲む保護内皮組織である血液脳関門（ＢＢＢ）は、ＣＮＳへの高分子量治療及び診断剤（例えば、抗体）の全身性送達に対する主要な障害物である。ＢＢＢは、脳疾患のための新しい治療又は新しい神経イメージング剤の開発を困難にする。したがって、ペイロードを脳に送達するための新しい組成物及び方法が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【0003】
驚くべきことに、本発明者らは、細胞透過性抗ＤＮＡ抗体にコンジュゲートしたペイロードが、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過することができ、ペイロードを脳に送達することができることを特定した。したがって、第１の態様では、本開示は、ペイロードをヒト対象の脳に送達する方法であって、方法が、対象に、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
－配列番号１又は配列番号１２に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、方法に関する。一例では、対象は、ヒトである。一例では、対象は、脳がんを有しない。一例では、対象は、膠芽腫を有しない。一例では、対象は、神経障害、精神障害、又は神経変性障害を有する。
－配列番号１又は配列番号１２に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、方法に関する。一例では、対象は、ヒトである。一例では、対象は、脳がんを有しない。一例では、対象は、膠芽腫を有しない。一例では、対象は、神経障害、精神障害、又は神経変性障害を有する。
【0004】
別の例では、対象は、無傷の血液脳関門を有する。したがって、別の例では、本開示は、ペイロードをヒト対象の脳に送達する方法であって、方法が、対象に、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
－配列番号１又は配列番号１２に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を包含する。
－配列番号１又は配列番号１２に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を包含する。
【0005】
一例では、抗体は、配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
【0006】
別の例では、抗体は、
（ｉ）配列番号７若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８若しくは配列番号１９に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び配列番号８若しくは配列番号１４若しくは配列番号１５若しくは配列番号１６に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬ、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含む。
（ｉ）配列番号７若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８若しくは配列番号１９に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び配列番号８若しくは配列番号１４若しくは配列番号１５若しくは配列番号１６に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬ、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨ、及び配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬを含む。
【0007】
別の例では、抗体は、配列番号９に記載の配列を含む重鎖と、配列番号１０に記載の配列を含む軽鎖と、を含む。
【0008】
本発明者らはまた、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性ＩｇＧ抗ＤＮＡ抗体を含む組成物を開発した。このような組成物は、ＢＢＢを通過することができ、ペイロードを脳に送達することができるため、特に有利である。したがって、別の例では、本開示は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体であって、抗体が、ＩｇＧであり、配列番号１又は配列番号１２に示されるＣＤＲ１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有するＶＬと、を含む、抗体に関する。一例では、抗体は、ヒト化されている。一例では、抗体は、薬学的組成物内で提供される。
【0009】
一例では、薬学的組成物は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を含み、抗体は、ＩｇＧであり、配列番号１に示されるＣＤＲ１、配列番号３又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号５に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有するＶＬと、を含む。一例では、抗体は、ヒト化されている。
【0010】
一例では、抗体は、
（ｉ）配列番号７若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８若しくは配列番号１９に示される配列を含むＶＨ、及び配列番号８若しくは配列番号１４若しくは配列番号１５若しくは配列番号１６に示される配列を含むＶＬ、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される配列を含むＶＨ、及び配列番号８に示される配列を含むＶＬを含む。したがって、別の例では、抗体抗体は、配列番号７に示される配列を含むＶＨと、配列番号８に示される配列を含むＶＬと、を含む。
（ｉ）配列番号７若しくは配列番号１７若しくは配列番号１８若しくは配列番号１９に示される配列を含むＶＨ、及び配列番号８若しくは配列番号１４若しくは配列番号１５若しくは配列番号１６に示される配列を含むＶＬ、又は
（ｉｉ）配列番号７に示される配列を含むＶＨ、及び配列番号８に示される配列を含むＶＬを含む。したがって、別の例では、抗体抗体は、配列番号７に示される配列を含むＶＨと、配列番号８に示される配列を含むＶＬと、を含む。
【0011】
一例では、抗体は、配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
【0012】
一例では、ペイロードは、治療ペイロードである。一例では、ペイロードは、核酸である。
【0013】
一例では、治療ペイロードは、対象の脳に影響する状態を治療する。一例では、状態は、神経障害、精神障害、又は神経変性障害である。
【0014】
一例では、治療ペイロードは、抗体、核酸、抗精神病薬、抗うつ薬、抗炎症薬、抗神経変性疾患剤、気分安定剤、及び免疫抑制剤からなる群から選択される。一例では、抗体は、二重特異性抗体として提供される。
【0015】
一例では、ペイロードは、イメージング剤である。一例では、ペイロードは、診断剤である。一例では、ペイロードは、放射性標識されている。別の例では、ペイロードは、蛍光標識されている。
【0016】
一例では、診断剤は、放射性医薬品、イメージング剤、及びナノ粒子からなる群から選択される。
【0017】
本発明者の驚くべき知見に鑑みて、本開示は、一例では、対象の脳に影響する状態を治療する方法を包含する。したがって、一例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、方法が、対象に、本明細書に開示される抗体又は組成物を投与することを含む、方法に関する。一例では、対象は、がんを有しない。別の例では、対象は、無傷の血液脳関門を有する。一例では、対象は、脳がんを有しない。一例では、脳がんは、膠芽腫である。一例では、対象の血液脳関門は、無傷である。
【0018】
一例では、本開示の方法を実行するときに、抗体は、抗体－薬物コンジュゲートとして提供される。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【図1】１Ａは、二量体ｓｃＦｖの構造を示し、１Ｂは、インタクトな抗体の構造図を示す。
【図2】ＢＢＢを通過しペイロードを脳に送達する分子の能力（％ＩＤ／ｃｃ）を示す。関心領域（ＲＯＩ）は、脳の上に描画され、結果は、ＲＯＩの体積に正規化された。１２５Ｉ－対照ＩｇＧ（ｎ＝２）；１２５Ｉ－ＤＸ１（ｎ＝３）；１２５Ｉ－ＤＸ３（ｎ＝３）。統計：独立ｔ検定（７２及び９６時間の時点）又は二元配置ＡＮＯＶＡ（ダネット事後）、＊ｐ≦０．０５、＊＊ｐ≦０．０１。＊＊＊ｐ≦０．００１。＊＊＊＊ｐ≦０．０００１。データは、平均値＋ＳＥＭとして提示される。
【図3】脳、甲状腺、肺、腎臓、及び肝臓における分子の％ＩＤ／ｃｃを示すグラフ。関心領域（ＲＯＩ）は、腎臓、肝臓、肺、甲状腺、及び脳の上に描画された。結果は、ＲＯＩ体積に正規化され、特定の組織タイプにおける放射能濃度として考えられ得る。
【図4】注入線量の百分率（％ＩＤ）としての放射能取り込みを示すグラフ。関心領域（ＲＯＩ）は、腎臓、肝臓、肺、甲状腺、及び脳の上に描画された。結果は、放射能の注入線量のみに正規化される。異なる組織タイプは、ＲＯＩ体積が異なるため比較可能でない。
【図5】非腫瘍無胸腺ヌードマウス及びＵ８７ ＭＧ同所性腫瘍を保有する無胸腺ヌードマウスの脳からのエクスビボイメージングを示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【0020】
配列表の鍵
配列番号１－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ１
配列番号２－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ２
配列番号３－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ３
配列番号４－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ１
配列番号５－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ２
配列番号６－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ３
配列番号７－ＤＸ３の重鎖（ＶＨ）
配列番号８－ＤＸ３の軽鎖（ＶＬ）
配列番号９－ＤＸ３の完全重鎖
配列番号１０－ＤＸ３の完全軽鎖
配列番号１１－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ１バリアント
配列番号１２－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ１バリアント
配列番号１３－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ２バリアント
配列番号１４－ＤＸ３バリアント１の軽鎖（ＶＬ）
配列番号１５－ＤＸ３バリアント２の軽鎖（ＶＬ）
配列番号１６－ＤＸ３バリアント３の軽鎖（ＶＬ）
配列番号１７－ＤＸ３バリアント１の重鎖（ＶＨ）
配列番号１８－ＤＸ３バリアント２の重鎖（ＶＨ）
配列番号１９－ＤＸ３バリアント３の重鎖（ＶＨ）
配列番号２０－ヒンジ配列
配列番号２１－シグナル配列
配列番号１－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ１
配列番号２－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ２
配列番号３－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ３
配列番号４－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ１
配列番号５－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ２
配列番号６－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ３
配列番号７－ＤＸ３の重鎖（ＶＨ）
配列番号８－ＤＸ３の軽鎖（ＶＬ）
配列番号９－ＤＸ３の完全重鎖
配列番号１０－ＤＸ３の完全軽鎖
配列番号１１－ＤＸ３の軽鎖ＣＤＲ１バリアント
配列番号１２－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ１バリアント
配列番号１３－ＤＸ３の重鎖ＣＤＲ２バリアント
配列番号１４－ＤＸ３バリアント１の軽鎖（ＶＬ）
配列番号１５－ＤＸ３バリアント２の軽鎖（ＶＬ）
配列番号１６－ＤＸ３バリアント３の軽鎖（ＶＬ）
配列番号１７－ＤＸ３バリアント１の重鎖（ＶＨ）
配列番号１８－ＤＸ３バリアント２の重鎖（ＶＨ）
配列番号１９－ＤＸ３バリアント３の重鎖（ＶＨ）
配列番号２０－ヒンジ配列
配列番号２１－シグナル配列
【0021】
一般的な技法及び選択された定義
別途具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、当該技術分野（例えば、分子生物学、生化学、抗体、単鎖可変断片などの抗体断片、及び臨床研究）の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有すると解釈される。
別途具体的に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、当該技術分野（例えば、分子生物学、生化学、抗体、単鎖可変断片などの抗体断片、及び臨床研究）の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有すると解釈される。
【0022】
「細胞透過性」という用語は、本開示の文脈において、生存哺乳類細胞の核内に輸送され、ＤＮＡ（例えば、一本鎖及び／又は二本鎖ＤＮＡ）に結合する抗ＤＮＡ抗体を指すために使用される。一例では、本明細書に開示される細胞透過性抗体は、コンジュゲートしたペイロードを、ＢＢＢを通過して送達することが可能である限り、ペイロードにコンジュゲートした後に、必ずしもそれらの細胞透過性特性を維持する必要はない。
【0023】
「抗ＤＮＡ抗体」という用語は、本開示の文脈において、ＤＮＡに結合することが可能である抗体を指すために使用される。一例では、本明細書に開示される抗ＤＮＡ結合抗体は、コンジュゲートしたペイロードを、ＢＢＢを通過して送達することが可能である限り、ペイロードにコンジュゲートした後に、必ずしもそれらのＤＮＡ結合能力を維持する必要はない。
【0024】
「抗体」という用語は、本開示の文脈において、特定の抗原と免疫学的に反応性である免疫グロブリン分子を指すために使用され、ポリクローナル及びモノクローナル抗体の両方を含む。この用語はまた、遺伝子操作された形態、例えば、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）を含む。
【0025】
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、又は「全抗体」という用語は、互換的に使用されて、抗体の抗原結合断片とは対照的に、実質的にインタクトな形態の抗体を指す。具体的には、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものを含む。一例では、全抗体は、Ｆｃ領域を含む。定常ドメインは、野生型配列定常ドメイン（例えば、ヒト野生型配列定常ドメイン）又はそれらのアミノ酸配列バリアントであり得る。一例では、抗体は、ＩｇＧである。
【0026】
本明細書で使用される場合、「可変領域」とは、抗原に特異的に結合し、例えば、ＣＤＲのアミノ酸配列、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３のアミノ酸配列と、フレームワーク領域（ＦＲ）と、を含む、本明細書で定義される抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を指す。例えば、可変領域は、３つ又は４つのＦＲ（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及び任意選択で、ＦＲ４）を、３つのＣＤＲと一緒に含む。ＶＨとは、重鎖の可変領域を指す。ＶＬとは、軽鎖の可変領域を指す。
【0027】
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」（同義語ＣＤＲ、すなわち、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）という用語は、抗体可変領域のアミノ酸残基であって、それらの存在が、特異的抗原結合に主に寄与する、アミノ酸残基を指す。各可変領域は、典型的には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３として特定される３つのＣＤＲ領域を有する。一例では、ＣＤＲ及びＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、（「Ｋａｂａｔ番号付けシステム」又は「Ｋａｂａｔ」とも本明細書で称されるＫａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７及び１９９１に従って定義される。
【0028】
可変ドメインのための補正又は代替の番号付けシステムを含む他の慣行は、ＩＭＧＴ（Ｌｅｆｒａｎｃ，ｅｔ ａｌ．（２００３），Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７）、Ｃｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ，Ｌｅｓｋ ＡＭ（１９８７），Ｊ Ｍａｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．（１９８９），Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３）、及びＡＨｏ（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ Ａ，Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ（２００１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３０９：６５７－６７０）を含む。便宜上、本開示の結合タンパク質の例はまた、ＩＭＧＴに従って標識され得る。
【0029】
「フレームワーク領域」（同義語ＦＲ）は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【0030】
本明細書で使用される場合、「定常領域」という用語は、可変領域以外の抗体の重鎖又は軽鎖の一部分を指す。重鎖において、定常領域は、概して、複数の定常ドメインと、ヒンジ領域と、を含み、例えば、ＩｇＧ定常領域は、以下の連結された構成要素、定常重鎖ＣＨ１と、リンカーと、ＣＨ２と、ＣＨ３と、を含む。重鎖において、定常領域は、Ｆｃを含む。軽鎖において、定常領域は、概して、１つの定常ドメイン（ＣＬ１）を含む。例示的なヒンジ配列は、配列番号２０に示される。
【0031】
（本明細書で互換的に使用され得る）「結晶性断片」又は「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃ部分」という用語は、少なくとも１つの定常ドメインを含み、（必ずしもではないが）概して、グリコシル化されており、補体カスケードの１つ以上のＦｃ受容体及び／又は構成要素に結合することが可能である抗体の領域を指す。重鎖定常領域は、α、δ、ε、γ、又はμの５つのアイソタイプのうちのいずれかから選択され得る。例示的な重鎖定常領域は、ガンマ１（ＩｇＧ１）、ガンマ２（ＩｇＧ２）、及びガンマ３（ＩｇＧ３）、又はそれらのハイブリッドである。
【0032】
「定常ドメイン」は、抗体におけるドメインであって、その配列が、同じタイプの抗体／抗体、例えば、ＩｇＧ又はＩｇＭ又はＩｇＥにおいて高度に類似する、ドメインである。抗体の定常領域は、概して、複数の定常ドメインを含み、例えば、γ、α、又はδ重鎖の定常領域は、２つの定常ドメインを含む。
【0033】
「コンジュゲートした」という用語は、本開示の文脈において、別の化合物、例えば、治療化合物又は診断化合物にコンジュゲートした本開示の抗体を指すために使用される。したがって、一例では、本開示の抗体は、「コンジュゲートしている」。コンジュゲーションの性質は、本開示の抗体が、ＢＢＢを通過し、コンジュゲートしたペイロードを脳に送達するのに十分である限り、特に限定されない。
【0034】
参照ポリペプチド配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、候補配列におけるアミノ酸残基の百分率であって、候補配列におけるアミノ酸残基が、配列をアラインメントし、ギャップを導入して、必要な場合、最大パーセント配列同一性を達成した後に、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一であり、いずれの保存的置換も、配列同一性の一部として考慮されない、アミノ酸残基の百分率として定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的でのアラインメントは、当業者の技能の範囲内である様々な方式で達成され得、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成され得る。当業者は、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができ、これらのパラメータは、比較されている配列の完全長にわたる最大アラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む。
【0035】
本明細書で使用される場合、抗体及び抗原の相互作用に関して、「結合する」という用語は、相互作用が、抗原上の特定の構造（例えば、抗原決定基又はエピトープ）の存在に依存することを意味する。例えば、抗体は、一般的に抗原を認識しそれに結合するのではなく、特定の抗原構造を認識しそれに結合する。例えば、抗体が、エピトープ「Ａ」に結合する場合、標識された「Ａ」及び抗体を含有する反応におけるエピトープ「Ａ」（又は遊離の標識されていない「Ａ」）を含有する分子の存在は、抗体に結合した標識された「Ａ」の量を低減する。
【0036】
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」という用語は、抗体とＤＮＡとの間の結合相互作用が、抗体によるＤＮＡの検出に依存することを意味すると解釈される。したがって、抗体は、他の分子又は生物の混合物中に存在するときでも、ＤＮＡに優先的に結合するか、又はそれを認識する。
【0037】
一例では、抗体は、代替の抗原又は細胞と行うよりも、ＤＮＡと頻繁に、迅速に、大きい持続時間で、かつ／又は大きい親和性で反応又は会合する。また、例えば、ＤＮＡに特異的に結合する抗体は、第２の抗原に特異的に結合してもよく、又は特異的に結合しなくてもよいことが、この定義を読むことによって理解される。したがって、「特異的結合」は、別の抗原の排他的結合又は検出不能な結合を必ずしも必要としない。「特異的に結合する」という用語は、「選択的に結合する」と互換的に本明細書で使用され得る。概して、本明細書での結合への言及は、特異的結合を意味し、各用語は、他の用語への明示的な支持を提供すると理解される。特異的結合を決定するための方法は、当業者には明らかである。例えば、本開示の抗体は、ＤＮＡ又は代替の抗原と接触する。次いで、ＤＮＡ又は代替の抗原への抗体の結合が決定され、上記のように代替の抗原ではなくＤＮＡに結合する抗体は、ＤＮＡに特異的に結合すると考えられる。
【0038】
本開示による抗体及びそれを含む組成物は、対象に、様々な徴候を治療するために投与され得る。「対象」、「患者」、又は「個体」などの用語は、文脈において、本開示で互換的に使用され得る用語である。一例では、対象は、哺乳動物である。哺乳動物は、イヌ若しくはネコなどの伴侶動物、又はウマ若しくはウシなどの家畜動物であり得る。一例では、対象は、ヒトである。例えば、対象は、成人であることができる。別の例では、対象は、小児であることができる。別の例では、対象は、青年であることができる。一例では、対象は、対象の脳に影響する状態を有する。例えば、対象は、神経障害、精神障害、又は神経変性障害を有し得る。対象の脳に影響する状態の好適な例としては、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病及びレビー体病などの認知症、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、慢性外傷性脳症、うつ病、不安症、統合失調症、嗜癖行動、脳卒中、並びに感染性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。一例では、対象は、脳がんを有しない。一例では、脳がんは、膠芽腫である。別の例では、対象は、局在性脳組織損傷を有しない。別の例では、対象は、無傷の血液脳関門を有する。この例では、対象は、対象のＢＢＢが無傷である限り、がんを有し得る。別の例では、対象は、対象の脳に影響する状態を診断するために神経イメージングを必要とする対象である。
【0039】
「血液脳関門」又は「ＢＢＢ」とは、脳の実質内のシナプス結合を浸す、血液と間質液との間の主な界面を指す。ＢＢＢは、血液から脳内へのほとんどの薬物の侵入を防止する。ＢＢＢは、脳毛細血管内皮形質膜内の密着結合によって形成されており、非常に密着したバリアを作り、このバリアは、脳内への分子の輸送を制限し、尿素のような６０Ｄａの分子量の小さい分子の輸送でさえ制限する。ＢＢＢは、連続した２つの膜、すなわち、脳毛細血管内皮の管腔側及び反管腔側膜から構成されている。血行中の分子は、以下の２つの機構、（１）ＢＢＢを通過する脂質媒介性遊離拡散、又は（２）ＢＢＢを通過するキャリア又は受容体媒介性輸送のうちの１つを介して、脳の間質液にアクセスすることができる。
【0040】
本明細書で使用される場合、「無傷の血液脳関門」という用語は、完全性が損なわれていないＢＢＢ、又は「漏出性」でないＢＢＢを指す。したがって、「無傷の血液脳関門」とはまた、抗体が透過することを可能にしないＢＢＢを指すことができる。一例では、無傷の血液脳関門は、破壊されていない血液脳関門であって、通常、侵入から除外される分子が、血液から脳へ侵入することを可能にしない、血液脳関門である。したがって、無傷の血液脳関門は、選択的透過性を有する。一例では、「無傷の血液脳関門」とはまた、コンジュゲートしていない抗体が、ＢＢＢを通過して脳内に侵入することを可能にしないＢＢＢを指すことができる。
【0041】
対照的に、漏出性ＢＢＢは、損なわれているＢＢＢであって、通常、侵入から除外される分子が、上記の機構を介して侵入することを可能にする、ＢＢＢである。一例では、漏出性ＢＢＢは、脳毛細血管内皮形質膜内の密着結合における破壊によって特徴付けられる。ＢＢＢ透過性を決定する方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｃｓａｂａ ｅｔ ａｌ．，２０２１ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，４７，２９７－３１５は、ＢＢＢ透過性を決定する手段としてのＧＰＣＲインターナリゼーションを記載しており、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ，．２０１３ ＮｅｕｒｏＩｍａｇｅ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ，２，６５８－６６２は、ＢＢＢ透過性を、初回通過灌流データを使用して推定する方法を開発した。
【0042】
本明細書で使用される場合、「治療」という用語は、臨床病態の経過中に治療されている個体又は細胞の自然経過を改変するように設計された臨床介入を指す。治療の望ましい効果は、疾患進行の速度の減少、疾患状態の寛解又は緩和、及び緩解又は改善された予後を含む。例えば、疾患と関連する１つ以上の症状が軽減又は排除される場合、個体は、「治療」に成功している。
【0043】
本明細書で使用される場合、「防止」という用語は、個体における疾患の発生又は再発に対する予防を提供することを含む。個体は、疾患を発症又は再発する素因又はリスクがあり得るが、依然として疾患又は再発と診断されていない。
【0044】
「治療」という用語は、本明細書の文脈において、疾患、病態、又は障害を治癒させる、寛解させる、又は安定化する意図を有する患者の医学的管理を指すために使用される。「治療」という用語は、能動的治療、すなわち、疾患、病態、又は障害の改善に特異的に向けられた治療を含み、また、原因的治療、すなわち、関連する疾患、病態、又は障害の原因の除去に向けられた治療を含む。加えて、「治療」という用語は、緩和的治療、すなわち、疾患、病態、又は障害の治癒ではなく、症状の軽減のために設計された治療；予防的治療、すなわち、関連する疾患、病態、又は障害の発症を最小にするか、又は部分的に若しくは完全に阻害するように向けられた治療；及び支持的治療、すなわち、関連する疾患、病態、又は障害の改善に向けられた別の特定の療法を補足するために用いられる治療を含む。
【0045】
「有効量」とは、少なくとも、所望の治療的、予防的、診断的、又はそうでなければ情報的結果を達成するのに、必要な投与量及び期間で有効な量を指す。有効量は、１回以上の投与において提供され得る。本開示のいくつかの例では、「有効量」という用語は、以下に記載される疾患又は状態の治療を行うために必要な量を意味する。一例では、有効量は、対象の脳のイメージングに有効な量である。有効量は、治療される疾患又は状態に従って、また、体重、年齢、人種的背景、性別、健康、及び／又は身体状態、並びに治療されている対象に関連する他の要因に従って変動し得る。典型的には、有効量は、通例の治験及び実験を介して医師によって決定され得る比較的広い範囲（例えば、「投与量」範囲）内にある。有効量は、単回用量で、又は治療期間にわたって１回又は数回繰り返される用量で投与され得る。任意の特定の患者のための特定の用量レベルは、様々な要因に依存し、これらの要因は、用いられる特定の抗体の活性、年齢、体重、全般的な健康、性別、食事、投与時間、投与経路、及び排泄速度、薬物組み合わせ、並びに療法を受けている特定の疾患の重症度を含むことが理解される。
【0046】
「治療有効量」は、少なくとも、特定の障害（例えば、神経変性疾患又は神経障害）の測定可能な改善をもたらすために必要とされる最小濃度である。本明細書での治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力などの要因に従って変動し得る。治療有効量はまた、抗体の治療的に有益な効果が、その任意の毒性又は有害な効果よりもまさる量である。神経変性疾患の場合、治療有効量の抗体は、神経変性疾患及びニューロン死、疾患進行を阻害し得（すなわち、ある程度遅くし、いくつかの例では、停止する）、かつ／又は神経変性疾患と関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減し得る。神経変性療法については、インビボでの有効性は、例えば、生存期間、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）、応答率（ＲＲ）、応答期間、及び／又は生活の質を評価することによって測定され得る。
【0047】
細胞透過性抗ＤＮＡ抗体
本開示は、ペイロードにコンジュゲートした抗体であって、抗体コンジュゲートが、ＢＢＢを通過して、ペイロードを脳に送達することが可能である、抗体に関する。一例では、抗体は、ＤＮＡに結合する。別の例では、抗体は、細胞透過性である。一例では、抗体は、ＤＮＡに結合し、細胞透過性である。一例では、抗体は、自己免疫疾患を有する対象又は動物に由来する自己抗体である。一例では、自己抗体は、全身性紅斑性狼瘡を有する対象又はその動物モデルに由来する。本明細書で使用される場合、「由来する」という用語は、以下で考察される方法などの組換え技法をもたらす本開示の抗体の組換え形態を包含する。例えば、全身性紅斑性狼瘡を有する対象又はその動物モデルからの自己抗体をコードする核酸配列は、組換え系において提供されて、抗体の組換え形態を産生することができる。
本開示は、ペイロードにコンジュゲートした抗体であって、抗体コンジュゲートが、ＢＢＢを通過して、ペイロードを脳に送達することが可能である、抗体に関する。一例では、抗体は、ＤＮＡに結合する。別の例では、抗体は、細胞透過性である。一例では、抗体は、ＤＮＡに結合し、細胞透過性である。一例では、抗体は、自己免疫疾患を有する対象又は動物に由来する自己抗体である。一例では、自己抗体は、全身性紅斑性狼瘡を有する対象又はその動物モデルに由来する。本明細書で使用される場合、「由来する」という用語は、以下で考察される方法などの組換え技法をもたらす本開示の抗体の組換え形態を包含する。例えば、全身性紅斑性狼瘡を有する対象又はその動物モデルからの自己抗体をコードする核酸配列は、組換え系において提供されて、抗体の組換え形態を産生することができる。
【0048】
一例では、本開示による抗体は、配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。したがって、一例では、本開示は、配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、抗体であって、抗体が、ペイロードにコンジュゲートしている、抗体を包含する。このような抗体コンジュゲートは、ＢＢＢを通過することができ、それらのペイロードを対象の脳に送達することができることにおいて特に有用である。したがって、一例では、本開示は、配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む、抗体であって、抗体が、ペイロードにコンジュゲートしており、対象への投与後に、抗体が、血液脳関門を通過し、ペイロードを対象の脳に送達する、抗体を包含する。
【0049】
本発明者らはまた、上の参照例のＣＤＲバリアントを特定した。したがって、別の例では、抗体は、配列番号１又は配列番号１２に示されるＣＤＲ１、配列番号２又は配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４又は配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
【0050】
別の例では、抗体は、配列番号１に示されるＣＤＲ１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。
【0051】
別の例では、抗体は、配列番号１２に示されるＣＤＲ１、配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号１１に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。上の参照例では、ＣＤＲは、少なくとも１つのアミノ酸置換に供される。別の例では、ＣＤＲは、少なくとも２つのアミノ酸置換に供される。別の例では、ＣＤＲは、少なくとも３つのアミノ酸置換に供される。一例では、置換は、ＣＤＲ１内にある。別の例では、置換は、ＶＨのＣＤＲ１内にある。別の例では、置換は、ＶＬのＣＤＲ２内にある。別の例では、置換は、ＶＨのＣＤＲ２内にある。
【0052】
別の例では、抗体は、配列番号７に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＨを含む。
【0053】
別の例では、抗体は、配列番号１７に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＨを含む。
【0054】
別の例では、抗体は、配列番号１８に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＨを含む。
【0055】
別の例では、抗体は、配列番号１９に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＨを含む。
【0056】
別の例では、抗体は、配列番号７に示される配列を含むＶＨを含む。別の例では、抗体は、配列番号１７に示される配列を含むＶＨを含む。別の例では、抗体は、配列番号１８に示される配列を含むＶＨを含む。別の例では、抗体は、配列番号１９に示される配列を含むＶＨを含む。
【0057】
別の例では、抗体は、配列番号８に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＬを含む。
【0058】
別の例では、抗体は、配列番号１４に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＬを含む。
【0059】
別の例では、抗体は、配列番号１５に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＬを含む。
【0060】
別の例では、抗体は、配列番号１６に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含むＶＬを含む。
【0061】
別の例では、抗体は、配列番号８に示される配列を含むＶＬを含む。別の例では、抗体は、配列番号１４に示される配列を含むＶＬを含む。別の例では、抗体は、配列番号１５に示される配列を含むＶＬを含む。別の例では、抗体は、配列番号１６に示される配列を含むＶＬを含む。
【0062】
別の例では、抗体は、配列番号９に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含む重鎖を含む。
【0063】
別の例では、抗体は、配列番号１０に示される配列と少なくとも８０％、又は少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、又は少なくとも９５％、又は少なくとも９７％、又は少なくとも９８％、又は少なくとも９８．５％、又は少なくとも９９％、又は少なくとも９９．５％、又は少なくとも９９．６％、又は少なくとも９９．７％、又は少なくとも９９．８％、又は少なくとも９９．９％同一の配列を含む重鎖を含む。
【0064】
別の例では、本開示によるＩｇＧ抗ＤＮＡ抗体は、配列番号９に記載の配列を含む重鎖と、配列番号１０に記載の配列を含む軽鎖と、を含む。
【0065】
一例では、抗体は、ＩｇＧである。
【0066】
一例では、抗体は、モノクローナルである。モノクローナル抗体は、本開示によって企図される抗体の１つの例示的な形態である。「モノクローナル抗体」又は「ＭＡｂ」という用語は、同じ抗原、例えば、抗原内の同じエピトープに結合することが可能である均質な抗体集団を指す。この用語は、抗体の供給源又は抗体が作製される様式に関して限定されることは意図されていない。
【0067】
一例では、本開示によって包含される抗体は、「ヒト化」され得る。一例では、ＣＤＲは、ヒト化されている。「ヒト化抗体」は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有する免疫グロブリン分子である。ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含み、レシピエント抗体において、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、マウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されている。いくつかの事例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置換されている。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体及びインポートされたＣＤＲ又はフレームワーク配列において見出されない残基を含み得る。概して、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には、２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、これらの可変ドメインにおいて、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全て又は実質的に全ては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一例では、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンのものを含む（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２））。
【0068】
一例では、本開示の抗体は、ペイロードを対象の脳に送達するために使用される。
【0069】
一例では、本開示の抗体は、抗体－薬物コンジュゲートとして提供される。このような抗体は、ペイロードを、がん細胞などの標的細胞に送達するように特異的に設計され得る。標的細胞の他の例としては、脳がんを有しない対象の脳内に位置する細胞が挙げられる。したがって、一例では、標的細胞は、ニューロンである。一例では、標的細胞は、グリア細胞である。一例では、標的細胞は、マイクログリア細胞である。別の例では、標的細胞は、周皮細胞である。一例では、標的細胞は、脳上皮細胞である。
【0070】
抗体産生
組換え体発現
一例では、抗体は、組換え体である。
組換え体発現
一例では、抗体は、組換え体である。
【0071】
組換え抗体の場合、それをコードする核酸は、発現ベクター内にクローニングされ得、次いで、発現ベクターは、宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、酵母細胞、昆虫細胞、あるいは哺乳類細胞、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞、又はそうでなければ免疫グロブリン若しくは抗体タンパク質を産生しない骨髄腫細胞内にトランスフェクトされる。
【0072】
好適な分子クローニング技法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，（編集者），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂ．Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８、現在までの全ての更新を含む）、又はＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（１９８９）に記載されている。多種多様なクローニング及びインビトロ増幅方法が、組換え核酸の構築に好適である。組換え抗体を産生する方法はまた、当該技術分野で既知である。米国特許第４，８１６，５６７号又は米国特許第５，５３０，１０１号を参照されたい。
【0073】
単離後に、核酸は、更なるクローニング（ＤＮＡの増幅）のため、又は無細胞系若しくは細胞における発現のために、動作可能に挿入され、発現構築物又は発現ベクター内のプロモーターに連結される。したがって、本開示の別の例は、本開示の抗体をコードする単離された核酸と、１つ以上の追加のヌクレオチド配列と、を含む、発現構築物を提供する。好適には、発現構築物は、当該技術分野で理解されるプラスミド、バクテリオファージ、コスミド、酵母若しくは細菌人工染色体の形態であるか、又はそれらの遺伝的構成要素を含む。発現構築物は、細菌若しくは他の宿主細胞における単離された核酸の維持及び増殖、組換えＤＮＡ技術による操作、並びに／又は本開示の核酸若しくは抗体の発現に好適であり得る。
【0074】
細胞における発現のための多くのベクターが使用可能である。ベクター構成要素は、概して、シグナル配列（例えば、配列番号２１）、抗体をコードする配列（例えば、本明細書で提供されるアミノ酸配列情報に由来する）、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上を含むが、これらに限定されない。例示的なシグナル配列は、原核生物分泌シグナル（例えば、ｐｅｌＢ、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐ、又は熱安定性エンテロトキシンＩＩ）、酵母分泌シグナル（例えば、インベルターゼリーダー、α因子リーダー、又は酸ホスファターゼリーダー）、又は哺乳類分泌シグナル（例えば、単純ヘルペスｇＤシグナル）を含む。
【0075】
哺乳類細胞において活性な例示的なプロモーターは、サイトメガロウイルス最初期プロモーター（ＣＭＶ－ＩＥ）、ヒト伸長因子１－αプロモーター（ＥＦ１）、核内低分子ＲＮＡプロモーター（Ｕ１ａ及びＵ１ｂ）、αミオシン重鎖プロモーター、サルウイルス４０プロモーター（ＳＶ４０）、ラウス肉腫ウイルスプロモーター（ＲＳＶ）、アデノウイルス主要後期プロモーター、βアクチンプロモーター；ＣＭＶエンハンサー／βアクチンプロモーター、あるいは免疫グロブリン若しくは抗体プロモーター又はその活性断片を含むハイブリッド調節エレメントを含む。有用な哺乳類宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）；ヒト胎児腎臓株（懸濁培養における増殖のためにサブクローニングされた２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）；又はチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）である。
【0076】
酵母細胞、例えば、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、及びＳ．ｐｏｍｂｅを含む群から選択される酵母細胞における発現に好適な典型的なプロモーターは、ＡＤＨ１プロモーター、ＧＡＬ１プロモーター、ＧＡＬ４プロモーター、ＣＵＰ１プロモーター、ＰＨＯ５プロモーター、ｎｍｔプロモーター、ＲＰＲ１プロモーター、又はＴＥＦ１プロモーターを含むが、これらに限定されない。
【0077】
単離された核酸又はそれを含む発現構築物を、発現のための細胞内に導入するための手段は、当業者に既知である。所与の細胞のために使用される技法は、既知の成功した技法に依存する。組換えＤＮＡを細胞内に導入するための手段は、とりわけ、例えば、ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ，ＵＳＡ）及び／又はｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ（Ｇｉｂｃｏ、ＭＤ，ＵＳＡ）を使用することによる、マイクロインジェクション、ＤＥＡＥ－デキストランによって媒介されるトランスフェクション、リポソームによって媒介されるトランスフェクション、例えば、ＤＮＡコーティングタングステン又は金粒子（Ａｇｒａｃｅｔｕｓ Ｉｎｃ．、ＷＩ，ＵＳＡ）を使用することによる、ＰＥＧ媒介性ＤＮＡ取り込み、エレクトロポレーション、並びに微粒子銃を含む。
【0078】
抗体を産生するために使用される宿主細胞は、使用される細胞型に依存して、様々な培地中で培養され得る。ハムＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭｌ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、哺乳類細胞の培養に好適である。本明細書で考察される他の細胞型を培養するための培地は、当該技術分野で既知である。
【0079】
本開示はまた、本開示の抗体をコードする単離された核酸を提供することが、上記の説明から当業者には理解されよう。
【0080】
本開示はまた、発現構築物であって、プロモーターに動作可能に連結された、本開示の抗体の単離された核酸を含む、発現構築物を提供する。一例では、発現構築物は、発現ベクターである。
【0081】
一例では、本開示の発現構築物は、プロモーターに動作可能に連結された（例えば、ＶＨを含む）ポリペプチドをコードする核酸と、プロモーターに動作可能に連結された（例えば、ＶＬを含む）別のポリペプチドをコードする核酸と、を含む。
【0082】
本開示はまた、本開示による発現構築物を含む宿主細胞を提供する。
【0083】
本開示はまた、本開示の抗体を発現する単離された細胞、又は抗体を発現するように遺伝子改変された組換え細胞を提供する。
【0084】
本開示による抗体を精製するための方法は、当該技術分野で既知であり、かつ／又はＷＯ２０１９／０１８４２６に記載されている。
【0085】
ペイロード／コンジュゲート
本開示の抗体は、ペイロードにコンジュゲートしている。抗体は、ペイロードに直接又は間接的に結合することができる（例えば、間接的結合の場合、リンカーを含むことができる）。一例では、ペイロードは、化合物である。一例では、ペイロードは、小分子である。一例では、ペイロードは、治療である。一例では、ペイロードは、イメージング剤である。一例では、ペイロードは、薬物である。一例では、抗体は、抗体－薬物コンジュゲートとして提供される。
本開示の抗体は、ペイロードにコンジュゲートしている。抗体は、ペイロードに直接又は間接的に結合することができる（例えば、間接的結合の場合、リンカーを含むことができる）。一例では、ペイロードは、化合物である。一例では、ペイロードは、小分子である。一例では、ペイロードは、治療である。一例では、ペイロードは、イメージング剤である。一例では、ペイロードは、薬物である。一例では、抗体は、抗体－薬物コンジュゲートとして提供される。
【0086】
好適なペイロードの例としては、放射性同位体（例えば、ヨウ素１２５、ヨウ素１３１、イットリウム９０、又はインジウム１１１）、検出可能な標識（例えば、フルオロフォア、又は蛍光ナノ結晶若しくは量子ドット）、治療化合物、コロイド（例えば、金）、毒素（例えば、リシン又は破傷風トキソイド）、核酸、ペプチド（例えば、血清アルブミン結合ペプチド）、タンパク質（例えば、抗体又は血清アルブミンの抗原結合ドメインを含むタンパク質）、対象における化合物の半減期を増加させる薬剤（例えば、この活性を有するポリエチレングリコール又は他の水溶性ポリマー）、及びそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【0087】
一例では、ペイロードは、核酸である。例示的な核酸は、ＤＮＡ（例えば、相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ））、ＲＮＡ（例えば、メッセージＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、低分子阻害ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、ｔＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＤＮＡ又はＲＮＡ類似体（例えば、塩基類似体、糖類似体、及び／又は非天然骨格などを含有するもの）、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッド、及びポリアミド核酸（ＰＮＡ）を含み、それらの全ては、一本鎖又は二本鎖形態であることができる。一例では、核酸は、単離されている。本明細書で使用される場合、「単離された核酸」という用語は、ヒトの介入を介して自然状態から改変又は除去された核酸を意味する。別の例示的な核酸は、オリゴヌクレオチドである。本明細書で使用される場合、「オリゴヌクレオチド」という用語は、低ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を意味する。オリゴヌクレオチドは、配列特異的な様式で、それらのそれぞれの相補的オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、又はＲＮＡに容易に結合して、二重鎖を形成する。一例では、オリゴヌクレオチドは、阻害オリゴヌクレオチドである。一例では、「阻害オリゴヌクレオチド」という用語は、１つ以上のタンパク質の産生、発現又は生物学的活性を低減する任意のオリゴヌクレオチドを指す。例えば、阻害オリゴヌクレオチドは、リボソームにおけるタンパク質へのｍＲＮＡの翻訳に干渉することができる。別の例では、阻害オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子又はｍＲＮＡに結合する（それとハイブリダイズする）のに、１つ以上のタンパク質をコードする遺伝子又はｍＲＮＡのいずれかに十分に相補的であることができ、それによって、標的タンパク質の発現又は生物学的活性を低減する。別の例では、阻害オリゴヌクレオチドは、タンパク質をコードしない細胞内核酸の生物学的活性を阻害する。例えば、阻害オリゴヌクレオチドは、非コードＲＮＡの生物学的活性を阻害することができる。例示的な阻害オリゴヌクレオチドは、単離された又は合成のアンチセンスＲＮＡ又はＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はｓｉＤＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ模倣物、ｓｈＲＮＡ又はＤＮＡ、及びキメラアンチセンスＤＮＡ又はＲＮＡを含む。
【0088】
一例では、ペイロードは、別の抗体である。
【0089】
一例では、ペイロードは、治療ペイロードである。提供される組成物及び方法における使用、例えば、提供される抗体へのコンジュゲーションのための使用に好適な治療剤は、鎮痛薬、麻酔薬、興奮薬、コルチコステロイド、抗コリン剤、抗コリンエステラーゼ、抗けいれん薬、抗腫瘍剤、アロステリック阻害剤、タンパク同化ステロイド、抗リウマチ剤、心理療法剤、神経遮断剤、抗炎症剤、駆虫薬、抗生物質、抗凝固薬、抗真菌薬、抗ヒスタミン薬、抗ムスカリン剤、抗マイコバクテリア剤、抗原虫剤、抗ウイルス剤、ドーパミン作用薬、血液作用剤、免疫剤、ムスカリン作用薬、プロテアーゼ阻害剤、ビタミン、増殖因子、核酸、抗体、及びホルモンからなる群から選択される治療剤を含むが、これらに限定されない。一例では、治療剤は、抗体、核酸、抗精神病薬、抗うつ薬、抗炎症薬、抗神経変性疾患剤、気分安定剤、及び免疫抑制剤からなる群から選択される。一例では、治療剤は、抗体である。一例では、抗体は、二重特異性抗体として提供され得る。一例では、治療剤は、核酸である。薬剤及び投与量の選択は、治療されている所与の疾患に基づいて、当業者によって容易に決定され得る。一例では、治療ペイロードは、対象の脳に影響する状態を治療する。
【0090】
一例では、本開示の抗体は、抗体－薬物コンジュゲートとして提供される。抗体－薬物コンジュゲートは、脳細胞又はがん細胞などの標的細胞に標的され得る。一例では、薬物は、細胞傷害性薬剤である。細胞傷害性薬剤は、化学療法剤、放射線療法剤、及び免疫毒素剤を含むが、これらに限定されない。一例では、薬物は、治療剤である。治療剤の例は、上記のものである。
【0091】
治療ペイロードの性質は、治療されている徴候によって影響されることが、当業者には理解されよう。例示的な徴候は、以下で考察される。
【0092】
別の例では、ペイロードは、診断剤である。一例では、診断剤は、放射性医薬品、イメージング剤、及びナノ粒子からなる群から選択される。一例では、診断剤は、イメージング剤である。イメージング剤及びそれらの使用は既知である。任意選択で、イメージング剤は、「検出可能な部分」であり、検出可能な部分は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的、又は他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、有用な標識は、３２Ｐ、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて一般に使用されるもの）、ビオチン、ジゴキシゲニン、又はハプテン、及び、例えば、放射性標識を、標的ペプチドと特異的に反応性であるペプチド又は抗体内に組み込むことによって検出可能にされ得るタンパク質又は他の実体を含む。抗体を標識にコンジュゲートさせるための当該技術分野で既知の任意の方法が、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏに記載されている方法を使用して、用いられ得る。検出可能な部分は、ガンマエミッター、ベータエミッター、及びアルファエミッター、ガンマエミッター、陽電子エミッター、Ｘ線エミッター、並びに蛍光エミッターからなる群から選択され得る。好適な蛍光化合物は、フルオレセインナトリウム、フルオレセインイソチオシアネート、フィコエリトリン、及びＴｅｘａｓ Ｒｅｄスルホニルクロリド、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）、Ｃｙ５－ＰＥ、ＣＹ７－ＡＰＣ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ、及びＣａｓｃａｄｅ ｙｅｌｌｏｗを含む。一例では、イメージング剤は、放射性標識されたペイロードである。別の例では、イメージング剤は、蛍光ペイロードである。また、診断／イメージングペイロードの性質は、用途によって影響されることが、当業者には理解されよう。
【0093】
検出可能な部分は、組織化学的技法、ＥＬＩＳＡ様アッセイ、共焦点顕微鏡法、蛍光検出、細胞選別方法、核磁気共鳴、放射免疫シンチグラフィ、Ｘ線撮影法、陽電子放出断層撮影法、コンピュータ体軸断層撮影法、磁気共鳴イメージング、及び超音波法を使用して視覚化され得る。
【0094】
薬剤又は他の小分子医薬品を抗体に結合させるための方法は、周知であり、二官能性化学リンカー、例えば、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）－アミノベンゾエート；スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）－アミノベンゾエート；４－スクシンイミジル－オキシカルボニル－－（２－ピリジルジチオ）トルエン；スルホスクシンイミジル－６－［α－メチル－∀－（ピリジルジチオール）－トルアミド］ヘキサノエート；Ｎ－スクシンイミジル－３－（－２－ピリジルジチオ）－プロピオネート；スクシンイミジル－６－［３（－（－２－ピリジルジチオ）－プロプリオンアミド］ヘキサノエート；スルホスクシンイミジル－６－［３（－（－２－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ヘキサノエート；３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオニルヒドラジド、エルマン試薬、ジクロロトリアジン酸、及びＳ－（２－チオピリジル）－Ｌ－システインなどの使用を含むことができる。更なる二官能性連結分子は、例えば、米国特許第５，３４９，０６６号、同第５，６１８，５２８号、同第４，５６９，７８９号、同第４，９５２，３９４号、及び同第５，１３７，８７７号で考察されている。
【0095】
抗体配列は、当該技術分野で既知の方法を使用して、活性剤又は担体に結合させることができ、これらの方法は、化学コンジュゲーション、酵素コンジュゲーション、カルボジイミドコンジュゲーション、エステル化、過ヨウ素酸ナトリウム酸化、続いて、還元アルキル化、及びグルタルアルデヒド架橋を含むが、これらに限定されない（Ｇｏｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：１４４７－１４５１、Ｃｈｅｎｇ（１９９６）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：２７５－２８２、Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：１２７１－１２７５、Ｎａｂｅｌ（１９９７）Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．Ｉｎ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：３９９－４３５、Ｐａｓｑｕａｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：５４２－５４６、Ｂａｕｍｉｎｇｅｒ＆Ｗｉｌｃｈｅｋ（１９８０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０：１５１－１５９、米国特許第６，０７１，８９０号、及び欧州特許第０４３９０９５号）。コンジュゲーションは、化学的手段又は酵素的手段を介し得る。
【0096】
ペイロードは、アミノ酸残基、二重スルフィド結合、グリカンにコンジュゲートし得る。例えば、ペイロードは、リジン残基、アミン基、システイン残基、又は新しい操作されたアミノ酸にコンジュゲートし得る。一例では、ペイロードは、チロシンにコンジュゲートしている。一例では、ペイロードは、リジンにコンジュゲートしている。一例では、ペイロードは、リジンにコンジュゲートしており、ＤＮＡへの抗体親和性は、コンジュゲーション後に低減する。一例では、ペイロードは、リジンにコンジュゲートしており、抗体は、コンジュゲーション後にＤＮＡに実質的に結合しない。
【0097】
リンカーは、切断可能であってもよく、又は切断不可能であってもよい。高度に安定したリンカーは、血行中に残るペイロードの量を低減することができ、したがって、安全性プロファイルを改善し、ペイロードのうちのより多くが標的細胞に到達することを確実にする。リンカーは、ジスルフィド、ヒドラゾン、若しくはペプチド（切断可能）、又はチオエーテル（切断不可能）を含む化学モチーフに基づくことができ、標的細胞への活性剤の分布及び送達を制御することができる。切断可能及び切断不可能なタイプのリンカーは、前臨床及び臨床治験において安全であることが証明されている（例えば、カテプシンによって切断可能な酵素感受性リンカーを含むブレンツキシマブベドチン、及び安定した切断不可能なリンカーを含むトラスツズマブエムタンシンを参照されたい）。特定の実施形態では、リンカーは、エドマン分解によって切断可能なペプチドリンカーである（Ｂａｃｈｏｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，１７（３）：６０５－１１（２０１３））。
【0098】
切断不可能なリンカーは、活性剤を、細胞又は標的微小環境内に保持することができる。結果として、抗体、リンカー、及び活性剤全体は、標的細胞に侵入し、標的細胞において、抗体は、アミノ酸のレベルに分解される。抗体のアミノ酸と、リンカーと、活性剤との得られた複合体は、活性薬物となる。対照的に、切断可能なリンカーは、標的細胞又は微小環境において、酵素によって触媒され、活性剤を放出する。切断された後に、ペイロードは、標的細胞から脱出することができ、隣接する細胞を攻撃することができる（「バイスタンダー死滅」とも称される）。開示される結合タンパク質の場合、リンカーの切断は、抗体自体及びそのペイロードの２つの活性剤をもたらすことができ、これらの活性剤は、標的細胞又は微小環境において異なる作用機構を有することができる。
【0099】
いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の分子が、活性剤と切断部位との間にある。他の考慮事項は、部位特異的コンジュゲーション（ＴＤＣ）（Ａｘｕｐ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１０９（４０）：１６１０１－６（２０１２）、並びにコンジュゲーション技法、例えば、安定性及び治療指数を改善することができる、Ｌｙｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，３２（１０）：１０５９－１０６２（２０１４）、及びＫｏｌｏｄｙｃｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２６（２）：１９７－２００（２０１５）に記載されているもの、並びにα放出イムノコンジュゲート（Ｗｕｌｂｒａｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｕｌｔｈｏｆｆ，Ｇａｂｒｉｅｌｅ，ｅｄ．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ．８（５）：ｅ６４７３０（２０１３））を含む。
【0100】
一例では、抗体は、ナノ粒子又は微粒子にコンジュゲートしている（例えば、Ｋｏｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ（Ｌｏｎｄ）．２：２８７－３０６，２００７で概観されるように）。ナノ粒子は、金属ナノ粒子であり得る。粒子は、ポリマー粒子、リポソーム、ミセル、マイクロバブル、並びに当該技術分野で既知の他の担体及び送達ビヒクルであることができる。
【0101】
送達ビヒクルがポリマー粒子である場合、結合タンパク質は、粒子に直接結合してもよく、又はポリマー内に組み込まれている脂肪酸などのアダプター要素に直接結合してもよい。リガンドは、粒子の表面上にかつ結合するリガンド上に存在する官能性化学基（カルボン酸、アルデヒド、アミン、スルフヒドリル、及びヒドロキシル）を介して、ポリマー粒子の表面に結合し得る。官能性は、粒子及びリガンドをホモ又はヘテロ二官能性架橋剤で架橋することによって、粒子調製後に導入され得る。この手順は、好適な化学及びあるクラスの架橋剤（以下で更に詳細に考察されるＣＤＴ、ＥＤＡＣ、グルタルアルデヒドなど）、又はリガンドを調製後の粒子表面の化学修飾を介して粒子表面に結合する任意の他の架橋剤を使用してもよい。
【0102】
抗体はまた、ポリマー粒子と相互作用するアダプター要素を介して、ポリマー粒子に間接的に結合し得る。アダプター要素は、少なくとも２つの方式で、ポリマー粒子に結合し得る。第１の方式は、マイクロ及びナノ粒子の調製中であり、例えば、マイクロ粒子のエマルション調製中に、官能性化学基を有する安定剤を組み込むことによるものである。例えば、脂肪酸、疎水性又は両親媒性ペプチド及びポリペプチドなどのアダプター要素は、エマルション調製中に粒子内に挿入され得る。第２の実施形態では、アダプター要素は、脂肪酸又は脂質などの両親媒性分子であり得、両親媒性分子は、粒子表面に受動的に吸着及び接着し得、それによって、結合タンパク質への接続のための官能性末端基を導入する。アダプター要素は、様々な相互作用を介して、マイクロ及びナノ粒子と会合し得、これらの相互作用は、疎水性相互作用、静電相互作用、及び共有結合を含むが、これらに限定されない。
【0103】
好適なポリマーは、エチルセルロース、及び他の自然又は合成セルロース誘導体を含む。また、ヒドロキシプロピルメチルセルロース又はポリエチレンオキシドなどの水性環境においてゆっくり溶解しゲルを形成するポリマーが、粒子のための材料として好適であり得る。他のポリマーは、ポリ無水物、ポリ（エステル無水物）、ポリヒドロキシ酸、例えば、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリグリコリド（ＰＧＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ－３－ヒドロキシブトレート（ＰＨＢ）及びそれらのコポリマー、ポリ－４－ヒドロキシブチレート（Ｐ４ＨＢ）及びそれらのコポリマー、ポリカプロラクトン及びそれらのコポリマー、並びにそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。
【0104】
本開示の抗体にコンジュゲートすることができるいくつかの例示的な化合物は、表１に列挙される。
【表1】
【0105】
上記の例の一態様では、抗体コンジュゲートは、コンジュゲートしたペイロードを脳に送達するために使用され得る。
【0106】
一例では、本開示の抗体は、ナノ粒子にコンジュゲートしていない。
【0107】
ペイロードを送達する方法
本開示の方法は、ペイロードを、ヒト対象などの対象の脳に送達することを包含する。本明細書で使用される場合、「送達」という用語は、血液から脳へのＢＢＢの密着結合を通過するペイロードの移送を指す。移送されるペイロードの量は、投与された用量の百分率／脳の体積（％ＩＤ／ｃｃ）として、又は投与された用量の百分率として測定され得る。したがって、一例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％である。したがって、一例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．４％である。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．５％である。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の０．３％～０．６％である。別の例では、送達されるペイロードの量は、約０．２％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．３％ＩＤ／ｃｃ、約又は０．４％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．５％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．６％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．７％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．８％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．９％ＩＤ／ｃｃ、又は約１％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．２％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．３％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．４％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．５％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．６％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．７％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．８％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．９％ＩＤ／ｃｃ、又は約２％ＩＤ／ｃｃである。したがって、一例では、送達されるペイロードの量は、約０．３％ＩＤ／ｃｃである。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．５％ＩＤ／ｃｃである。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の０．２％～０．６％ＩＤ／ｃｃである。
本開示の方法は、ペイロードを、ヒト対象などの対象の脳に送達することを包含する。本明細書で使用される場合、「送達」という用語は、血液から脳へのＢＢＢの密着結合を通過するペイロードの移送を指す。移送されるペイロードの量は、投与された用量の百分率／脳の体積（％ＩＤ／ｃｃ）として、又は投与された用量の百分率として測定され得る。したがって、一例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．２％、又は約０．３％、又は約０．４％、又は約０．５％、又は約０．６％、又は約０．７％、又は約０．８％、又は約０．９％、又は約１％である。したがって、一例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．４％である。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．５％である。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の０．３％～０．６％である。別の例では、送達されるペイロードの量は、約０．２％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．３％ＩＤ／ｃｃ、約又は０．４％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．５％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．６％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．７％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．８％ＩＤ／ｃｃ、又は約０．９％ＩＤ／ｃｃ、又は約１％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．２％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．３％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．４％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．５％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．６％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．７％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．８％ＩＤ／ｃｃ、又は約１．９％ＩＤ／ｃｃ、又は約２％ＩＤ／ｃｃである。したがって、一例では、送達されるペイロードの量は、約０．３％ＩＤ／ｃｃである。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の約０．５％ＩＤ／ｃｃである。別の例では、送達されるペイロードの量は、対象に投与された用量の０．２％～０．６％ＩＤ／ｃｃである。
【0108】
ペイロードは、投与後に脳内に保持され得る。保持されるペイロードの量は、投与の数時間後の投与された用量の百分率／脳の体積（％ＩＤ／ｃｃ）として、又は投与の数時間後の投与された用量の百分率として測定され得る。一例では、ペイロードは、脳内に、投与後最大約１時間、又は約２時間、又は約３時間、又は約６時間、又は約９時間、又は約１２時間、又は約１５時間、又は約１８時間、又は約２１時間、又は約２４時間、又は約３０時間、又は約３６時間、又は約４２時間、又は約４８時間、又は約６０時間、又は約７２時間、又は約９６時間、又は約１２０時間保持され得る。別の例では、ペイロードは、脳内に、投与後最大約１日間、又は約２日間、又は約３日間、又は約４日間、又は約５日間保持され得る。したがって、一例では、ペイロードは、最大９６時間保持され得る。別の例では、ペイロードは、最大２４時間保持され得る。別の例では、ペイロードは、最大６時間保持され得る。別の例では、ペイロードは、最大２時間保持され得る。
【0109】
本開示の送達方法は、本明細書に開示される抗体を投与することによって、ペイロードをヒト対象の脳に送達することを包含する。例えば、本開示の方法は、対象に、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含むことができ、抗体は、
－配列番号１（ＧＦＴＦＳＮＹＧＭＨ）に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２（ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３（ＡＲＲＧＬＬＬＤＹ）に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４（ＲＡＳＫＴＶＳＴＳＳＹＳＹＭＨ）に示されるＣＤＲ１、配列番号５（ＹＡＳＹＬＥＳ）に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６（ＱＨＳＲＥＦＰＷＴ）に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。別の例では、対象は、無傷の血液脳関門を有する。一例では、抗体は、ヒト化されている。一例では、抗体は、ＩｇＧである。一例では、対象のＢＢＢにおける密着結合は、無傷である。一例では、本開示の抗体が、対照分子（例えば、典型的には、ＢＢＢを通過することから遮断される分子）に対して、ＢＢＢをより効率的に（例えば、より多くの量で）通過するときに、対象のＢＢＢは、無傷である。一例では、対象は、がんを有しない。一例では、対象は、脳がんを有しない。これらの例では、対象は、ヒトであることができる。一例では、対象のＢＢＢの完全性は、本開示の抗体又は組成物を投与する前に評価される。
－配列番号１（ＧＦＴＦＳＮＹＧＭＨ）に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２（ＹＩＳＳＧＳＳＴＩＹＹＡＤＳＶＫＧ）に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３（ＡＲＲＧＬＬＬＤＹ）に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４（ＲＡＳＫＴＶＳＴＳＳＹＳＹＭＨ）に示されるＣＤＲ１、配列番号５（ＹＡＳＹＬＥＳ）に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６（ＱＨＳＲＥＦＰＷＴ）に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む。別の例では、対象は、無傷の血液脳関門を有する。一例では、抗体は、ヒト化されている。一例では、抗体は、ＩｇＧである。一例では、対象のＢＢＢにおける密着結合は、無傷である。一例では、本開示の抗体が、対照分子（例えば、典型的には、ＢＢＢを通過することから遮断される分子）に対して、ＢＢＢをより効率的に（例えば、より多くの量で）通過するときに、対象のＢＢＢは、無傷である。一例では、対象は、がんを有しない。一例では、対象は、脳がんを有しない。これらの例では、対象は、ヒトであることができる。一例では、対象のＢＢＢの完全性は、本開示の抗体又は組成物を投与する前に評価される。
【0110】
組成物
本開示は、ペイロードにコンジュゲートした本開示の抗体を含む薬学的組成物を提供する。様々な抗体及びペイロードは、上で考察されるものである。例えば、組成物は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を含むことができ、抗体は、ヒト化ＩｇＧであり、配列番号１に示されるＣＤＲ１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有するＶＬと、を含む。
本開示は、ペイロードにコンジュゲートした本開示の抗体を含む薬学的組成物を提供する。様々な抗体及びペイロードは、上で考察されるものである。例えば、組成物は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を含むことができ、抗体は、ヒト化ＩｇＧであり、配列番号１に示されるＣＤＲ１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有するＶＨと、配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有するＶＬと、を含む。
【0111】
別の例では、本開示は、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を含む薬学的組成物であって、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
（ｉ）配列番号７に示される配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号８に示される配列を含むＶＬと、を含む、薬学的組成物を提供する。
（ｉ）配列番号７に示される配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号８に示される配列を含むＶＬと、を含む、薬学的組成物を提供する。
【0112】
組成物はまた、抗体の投与のための薬学的に許容される担体又はアジュバントを含有することができる。いくつかの実施形態では、担体は、ヒトにおける使用のために薬学的に許容される。担体又はアジュバントは、それ自体が、組成物を受容する個体に有害な抗体の産生を誘導すべきなく、毒性であるべきでない。好適な担体は、大きいゆっくり代謝される巨大分子、例えば、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリマーアミノ酸、アムモ酸コポリマー、及び不活性ウイルス粒子であることができる。
【0113】
薬学的に許容される塩、例えば、鉱酸塩、例えば、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ホスフェート、及びサルフェート、又は有機酸の塩、例えば、アセテート、プロピオネート、マロネート、及びベンゾエートが使用され得る。
【0114】
治療組成物内の薬学的に許容される担体は、液体、例えば、水、生理食塩水、グリセロール、及びエタノールを追加で含有することができる。加えて、補助物質、例えば、湿潤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝物質が、このような組成物内に存在し得る。
【0115】
本開示の主題の組成物は、組成物の調製及び投与を容易にするための担体を更に含むことができる。任意の好適な送達ビヒクル又は担体が、使用され得、マイクロカプセル、例えば、マイクロスフェア又はナノスフェア（Ｍａｎｏｍｅ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５４：５４０８－５４１３、Ｓａｌｔｚｍａｎ＆Ｆｕｎｇ（１９９７）Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ ２６：２０９－２３０）、グリコサミノグリカン（米国特許第６，１０６，８６６号）、脂肪酸（米国特許第５，９９４，３９２号）、脂肪エマルション（米国特許第５，６５１，９９１号）、脂質又は脂質誘導体（米国特許第５，７８６，３８７号）、コラーゲン（米国特許第５，９２２，３５６号）、多糖又はその誘導体（米国特許第５，６８８，９３１号）、ナノ懸濁液（米国特許第５，８５８，４１０号）、ポリマーミセル又はコンジュゲート（Ｇｏｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５７：１４４７－１４５１、並びに米国特許第４，５５１，４８２号、同第５，７１４，１６６号、同第５，５１０，１０３号、同第５，４９０，８４０号、及び同第５，８５５，９００号）、及びポリソーム（米国特許第５，９２２，５４５）を含むが、これらに限定されない。
【0116】
本発明の組成物は、薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を含み得る。好適な製剤は、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、殺菌抗生物質、及び製剤を意図されたレシピエントの体液と等張にする溶質を含有することができる水性及び非水性滅菌注射溶液、並びに懸濁剤及び増粘剤を含むことができる水性及び非水性滅菌懸濁液を含む。製剤は、単位用量又は複数回用量容器、例えば、密封アンプル及びバイアルにおいて提示され得、滅菌液体担体、例えば、注射用水を使用直前に添加することのみを必要とする凍結又はフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵され得る。いくつかの例示的な成分は、０．１～１０ｍｇ／ｍｌ、約２．０ｍｇ／ｍｌの範囲のＳＤＳ、及び／又は１０～１００ｍｇ／ｍｌ、いくつかの実施形態では、約３０ｍｇ／ｍｌの範囲のマンニトール若しくは別の糖、及び／又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である。当該技術分野で従来の任意の他の薬剤が、目的の製剤のタイプを考慮して使用され得る。いくつかの例では、担体は、薬学的に許容される。いくつかの例では、担体は、ヒトにおける使用のために薬学的に許容される。
【0117】
本開示の組成物は、５．５～８．５、好ましくは、６～８、より好ましくは、約７のｐＨを有することができる。ｐＨは、緩衝液の使用によって維持され得る。組成物は、滅菌及び／又はパイロジェンフリーであることができる。組成物は、ヒトに対して等張であることができる。本開示の主題の組成物は、密封容器において供給され得る。
【0118】
組成物は、有効量の本明細書に記載される１つ以上の抗体を含むことができる。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、所望の疾患若しくは状態を治療する、寛解させる、若しくは防止するか、又は検出可能な治療効果を示すのに十分である量を含んでもよい。治療効果はまた、身体的症状における低減を含む。任意の特定の対象のための正確な有効量は、対象のサイズ及び健康、状態の性質及び程度、並びに投与のために選択される治療薬又は治療薬の組み合わせに依存する。所与の状況のための有効量は、当業者によって実施される通例の実験によって決定される。
【0119】
本発明の組成物は、投与方法に依存して、様々な単位剤形で投与され得る。典型的な抗体薬学的組成物についての投与量は、当業者に周知である。このような投与量は、典型的には、本質的に助言的であり、特定の治療状況又は患者の許容度に依存して調整される。これを達成するのに適切な抗体量は、「治療有効用量」として定義される。この使用に有効な投与計画及び量、すなわち、「投薬レジメン」は、様々な要因に依存し、これらの要因は、疾患又は状態の段階、疾患又は状態の重症度、患者の健康の全般的な状態、患者の身体状態、年齢、薬学的製剤、及び活性剤の濃度などを含む。患者のための投与レジメンの計算において、投与様式もまた考慮される。投与レジメンはまた、薬物動態、すなわち、薬学的組成物の吸収速度、バイオアベイラビリティ、代謝、及びクリアランスなどが考慮されなければならない。例えば、最新のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ、Ｅｇｌｅｔｏｎ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １８：１４３１－１４３９，１９９７、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３，１９９０を参照されたい。
【0120】
投与経路は、注射、皮下、筋肉内、静脈内、動脈内を含むが、これらに限定されない。一例では、抗体は、静脈内投与を介して送達される。別の例では、抗体は、皮下投与を介して送達される。別の例では、抗体は、注射を介して送達される。別の例では、抗体は、注入を介して送達される。
【0121】
組成物は、単回用量治療又は複数回用量治療において、対象の年齢、体重、及び状態、使用される特定の抗体製剤、並びに投与経路に適切なスケジュール及び期間にわたって投与され得る。
【0122】
治療、診断、又は監視される状態
本開示の方法は、治療、予防、イメージング及び診断、又は様々な状態を包含する。一例では、状態は、神経障害である。神経障害の例としては、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病及びレビー体病などの認知症、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、慢性外傷性脳症、うつ病、不安症、統合失調症、嗜癖行動、脳卒中、並びに感染性疾患が挙げられる。一例では、神経障害は、認知症である。一例では、神経障害は、アルツハイマー病である。
本開示の方法は、治療、予防、イメージング及び診断、又は様々な状態を包含する。一例では、状態は、神経障害である。神経障害の例としては、運動ニューロン疾患、アルツハイマー病及びレビー体病などの認知症、パーキンソン病、ハンチントン病、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、バッテン病、慢性外傷性脳症、うつ病、不安症、統合失調症、嗜癖行動、脳卒中、並びに感染性疾患が挙げられる。一例では、神経障害は、認知症である。一例では、神経障害は、アルツハイマー病である。
【0123】
治療の方法及び予防の方法
本開示の抗体が、ＢＢＢを通過することができ、ペイロードを脳に送達することができることを示す本発明者らによる知見に鑑みて、様々な治療及び予防用途が企図される。一例では、本開示は、治療又は予防の方法であって、それを必要としている対象に、本明細書に記載される抗体又は組成物を投与することを含む、方法を包含する。一例では、対象は、神経障害を有する。
本開示の抗体が、ＢＢＢを通過することができ、ペイロードを脳に送達することができることを示す本発明者らによる知見に鑑みて、様々な治療及び予防用途が企図される。一例では、本開示は、治療又は予防の方法であって、それを必要としている対象に、本明細書に記載される抗体又は組成物を投与することを含む、方法を包含する。一例では、対象は、神経障害を有する。
【0124】
したがって、一例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、方法が、対象に、本明細書に開示される抗体又は組成物を投与することを含み、対象が、がんを有しない、方法を提供する。
【0125】
別の例では、本開示は、対象の脳に影響する状態を治療するための医薬の製造における、本明細書に開示される抗体又は組成物の使用であって、対象が、がんを有しない、使用を提供する。
【0126】
別の例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、方法が、対象に、本明細書に開示される抗体又は組成物を投与することを含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を提供する。
【0127】
別の例では、本開示は、対象の脳に影響する状態を治療するための医薬の製造における、本明細書に開示される抗体又は組成物の使用であって、対象が、無傷の血液脳関門を有する、使用を提供する。
【0128】
一例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
－配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、対象が、がんを有しない、方法を提供する。
－配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、対象が、がんを有しない、方法を提供する。
【0129】
別の例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性ＩｇＧ抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
－配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を提供する。
－配列番号１に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２に示されるＣＤＲ２、及び配列番号３に示されるＣＤＲ３を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、
－配列番号４に示されるＣＤＲ１、配列番号５に示されるＣＤＲ２、及び配列番号６に示されるＣＤＲ３を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を提供する。
【0130】
一例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
（ｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬと、を含み、対象が、がんを有しない、方法を提供する。
（ｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬと、を含み、対象が、がんを有しない、方法を提供する。
【0131】
別の例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、
（ｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬと、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を提供する。
（ｉ）配列番号７に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＨと、
（ｉｉ）配列番号８に示される配列と少なくとも９０％同一の配列を含むＶＬと、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を提供する。
【0132】
別の例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、配列番号９に記載の配列を含む重鎖と、配列番号１０に記載の配列を含む軽鎖と、を含み、対象が、がんを有しない、方法を提供する。
【0133】
別の例では、本開示は、ヒト対象の脳に影響する状態を治療する方法であって、ペイロードにコンジュゲートした細胞透過性抗ＤＮＡ抗体を投与することを含み、抗体が、ヒト化ＩｇＧであり、配列番号９に記載の配列を含む重鎖と、配列番号１０に記載の配列を含む軽鎖と、を含み、対象が、無傷の血液脳関門を有する、方法を提供する。
【0134】
様々な例では、本明細書に開示される抗体及び組成物は、対象の脳に影響する状態を治療するための医薬の製造において使用され得、対象は、がんを有しない。
【0135】
イメージング及び診断
一例では、本開示の抗体は、神経変性疾患、組織損傷、傷害、感染、又は虚血の１つ以上の部位を検出するために利用される。典型的には、このような方法を必要としている対象に、診断イメージング又は核医学技法を使用して検出可能である薬剤などのペイロードにコンジュゲートした本明細書に開示される有効量抗体を投与することと、薬剤を検出することと、を含む、このような方法。診断イメージング又は核医学技法は、例えば、ＰＥＴ－ＣＴ、骨スキャン、ＭＲＩ、ＣＴ、心エコー法、超音波、及びＸ線であることができる。一例では、イメージングは、本明細書に開示される神経状態における診断及び／又は監視について情報的である。
一例では、本開示の抗体は、神経変性疾患、組織損傷、傷害、感染、又は虚血の１つ以上の部位を検出するために利用される。典型的には、このような方法を必要としている対象に、診断イメージング又は核医学技法を使用して検出可能である薬剤などのペイロードにコンジュゲートした本明細書に開示される有効量抗体を投与することと、薬剤を検出することと、を含む、このような方法。診断イメージング又は核医学技法は、例えば、ＰＥＴ－ＣＴ、骨スキャン、ＭＲＩ、ＣＴ、心エコー法、超音波、及びＸ線であることができる。一例では、イメージングは、本明細書に開示される神経状態における診断及び／又は監視について情報的である。
【実施例】
【0136】
実施例１－抗ＤＮＡ結合タンパク質
ＤＸ１及びＤＸ３は、３Ｅ１０に由来し、ヒト化されている抗ＤＮＡ結合タンパク質である。ＤＸ１及びＤＸ３は、配列番号９に示されるＣＤＲ１、配列番号１０示されるＣＤＲ２、及び配列番号１１に示されるＣＤＲ３を有するＶＨ配列と、配列番号１２に示されるＣＤＲ１、配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号１４に示されるＣＤＲ３を有する配列ＶＬと、を含む。
ＤＸ１及びＤＸ３は、３Ｅ１０に由来し、ヒト化されている抗ＤＮＡ結合タンパク質である。ＤＸ１及びＤＸ３は、配列番号９に示されるＣＤＲ１、配列番号１０示されるＣＤＲ２、及び配列番号１１に示されるＣＤＲ３を有するＶＨ配列と、配列番号１２に示されるＣＤＲ１、配列番号１３に示されるＣＤＲ２、及び配列番号１４に示されるＣＤＲ３を有する配列ＶＬと、を含む。
【0137】
ＤＸ１（図１Ａ）は、２つのユニットから構成された（ｓｃ－ＦＶ）２分子であり、２つのユニットは各々、リンカーを介してＶＨドメインに連結されたＶＬドメインを含む。ＤＸ３は、完全長ＩｇＧ分子である（図１Ｂ）。
【0138】
実施例２－放射性標識
ＤＸ１、ＤＸ３、及び対照ＩｇＧを、Ｐｉｅｒｃｅプレコーティングされたヨウ素化チューブ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、製造業者の説明書（“Ｄｉｒｅｃｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ”、ＭＡＮ００１６３７９ Ｒｅｖ．Ａ．０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って、チロシン残基にコンジュゲートさせることによって、ヨウ素１２５ペイロードで放射性標識した。
ＤＸ１、ＤＸ３、及び対照ＩｇＧを、Ｐｉｅｒｃｅプレコーティングされたヨウ素化チューブ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、製造業者の説明書（“Ｄｉｒｅｃｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ”、ＭＡＮ００１６３７９ Ｒｅｖ．Ａ．０、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って、チロシン残基にコンジュゲートさせることによって、ヨウ素１２５ペイロードで放射性標識した。
【0139】
簡潔には、必要とされる放射能及び抗体（例えば、５００ｍＣｉ（１８．５ＭＢｑ）／１００μｇのタンパク質、最小１ｍｇ／ｍｌ）を、中性緩衝液中でヨウ素化チューブに添加し、時折穏やかに混合しながら１５分間反応させた。１００～１５０μｌの体積を、最適な標識のために使用した。反応を、混合物をヨウ素化チューブから除去することによって停止させた。過剰なヨウ素を、遠心濾過Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ－４，１０ｋＤａカットオフ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｒｉｃｈ）で除去し、続いて、ＰＢＳで洗浄した。
【0140】
収率に依存して、最終体積を、約１００ＭＢｑ／ｍｌに調整した。放射化学純度を、インスタント薄層クロマトグラフィーで、８５％のＭｅＯＨを移動相として使用して決定した。放射性標識されたタンパク質は、Ｒｆ＝０を有する。加えて、ヨウ素化抗体の試料もまた、ラジオＨＰＬＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩ，１２６０）、並びにＵＶ検出器（２８０ｎｍ）及びＰｏｓｉｒａｍラジオディテクタ（Ｌａｂｌｏｇｉｃ）で分析した。サイズ排除カラムＳＥＣ－２０００（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）を、３０℃に設定し、移動相は、０．１Ｍのリン酸ナトリウムｐＨ６．８であった。標識された抗体を、放射線化学純度、及び凝集又は分解について分析した。
【0141】
標識収率
－ＤＸ１は、９８．４％であり、精製からの回収率は、９４．５％であった。標識後の計算された比活性は、４５５．０ＭＢｑ／ｍｇであった。
－ＤＸ３は、９６．３％であり、精製からの回収率は、７９．６％であった。計算された比活性は、４４５．２ＭＢｑ／ｍｇであった。
－ＩｇＧ対照は、９８．８％であり、精製からの回収率は、２８．８％であった。計算された比活性は、４４３．４ＭＢｑ／ｍｇであった。
－ＤＸ１は、９８．４％であり、精製からの回収率は、９４．５％であった。標識後の計算された比活性は、４５５．０ＭＢｑ／ｍｇであった。
－ＤＸ３は、９６．３％であり、精製からの回収率は、７９．６％であった。計算された比活性は、４４５．２ＭＢｑ／ｍｇであった。
－ＩｇＧ対照は、９８．８％であり、精製からの回収率は、２８．８％であった。計算された比活性は、４４３．４ＭＢｑ／ｍｇであった。
【0142】
実施例３－脳へのペイロード送達の評価
ＤＸ１、ＤＸ３、及びＩｇＧ対照を、無傷の血液脳関門を有する健常マウスに静脈内投与し、脳へのペイロード送達を、各事例において評価した（図２）。脳へのペイロード送達を、放射能を投与の２時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、及び９６時間後に監視することによって測定した。また、甲状腺、左右の肺、左右の腎臓、及び肝臓へのペイロード送達を、これらの時点で評価した（図３及び４）。
ＤＸ１、ＤＸ３、及びＩｇＧ対照を、無傷の血液脳関門を有する健常マウスに静脈内投与し、脳へのペイロード送達を、各事例において評価した（図２）。脳へのペイロード送達を、放射能を投与の２時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、及び９６時間後に監視することによって測定した。また、甲状腺、左右の肺、左右の腎臓、及び肝臓へのペイロード送達を、これらの時点で評価した（図３及び４）。
【0143】
放射能取り込みを、動物をイソフルラン（４～５％の誘導、１．５～２％の維持）及びキャリアガスとしての酸素富化空気（３～６００ｍＬ／分）で麻酔することによって測定した。動物を、ＳＰＥＣＴ／ＣＴスキャナ（ＮａｎｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ Ｐｌｕｓ、Ｍｅｄｉｓｏ）に移送した。３匹のマウスのイメージングを同時に行い、３ＤヘリカルＳＰＥＣＴイメージングを、体全体について６０分間にわたって実行した。
【0144】
ＳＰＥＣＴスキャン後に、解剖学的参照についての同じ座標からのヘリカルＣＴ（１８０回の投射、５５ｋＶｐ、７５０ｍｓの曝露時間）を実行した。動物の温度及び呼吸を、監視し（ＳＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、ＮＹ，ＵＳＡ）、イメージングプロセス中に、それぞれ、＋３７℃及び７０～１００ｂｐｍで維持した。
【0145】
１立方センチメートル当たりの注入線量の百分率（％ＩＤ／ｃｃ）としての脳内の放射能取り込みを、ＰＭＯＤソフトウェアｖ３．７（ＰＭＯＤ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して定量化した。関心領域（ＲＯＩ）を、腎臓、肝臓、肺、及び任意選択で他の予期されないホットスポットの上に描画した。
【0146】
結果
図２に示されるように、ＤＸ１（２時間＝１％ＩＤ／ｃｃ）及びＤＸ３（２時間＝１．６％ＩＤ／ｃｃ）の両方は、対照ＩｇＧ（２時間＝０．５％ＩＤ／ｃｃ）よりも、脳への放射性標識されたペイロードの送達において有意に有効であった。驚くべきことに、ＤＸ３は、そのより大きいサイズにもかかわらず、２時間の時点で、ＤＸ１よりも、血液脳関門を通過し、放射性標識されたペイロードを脳に送達することにおいて有意に有効であった。図２に示されるように、ＤＸ３は、ＤＸ１よりも１．５倍多くのペイロードを送達し、これは、ＤＸ３のＩｇＧ構造が、ＤＸ１のより小さいＦｖ構造と比較して、脳へのペイロード送達を有意に増強することを示唆した。ＤＸ３の改善されたペイロード送達能力は、２４時間の時点で更により顕著であり、ＤＸ１又はＩｇＧ対照のいずれかよりも１０倍多くのＤＸ３が、脳内で保持された。
図２に示されるように、ＤＸ１（２時間＝１％ＩＤ／ｃｃ）及びＤＸ３（２時間＝１．６％ＩＤ／ｃｃ）の両方は、対照ＩｇＧ（２時間＝０．５％ＩＤ／ｃｃ）よりも、脳への放射性標識されたペイロードの送達において有意に有効であった。驚くべきことに、ＤＸ３は、そのより大きいサイズにもかかわらず、２時間の時点で、ＤＸ１よりも、血液脳関門を通過し、放射性標識されたペイロードを脳に送達することにおいて有意に有効であった。図２に示されるように、ＤＸ３は、ＤＸ１よりも１．５倍多くのペイロードを送達し、これは、ＤＸ３のＩｇＧ構造が、ＤＸ１のより小さいＦｖ構造と比較して、脳へのペイロード送達を有意に増強することを示唆した。ＤＸ３の改善されたペイロード送達能力は、２４時間の時点で更により顕著であり、ＤＸ１又はＩｇＧ対照のいずれかよりも１０倍多くのＤＸ３が、脳内で保持された。
【0147】
予期せずに、本発明者らはまた、ＤＸ３ペイロードが、脳内で、ＤＸ１及びＩｇＧ対照ペイロードの両方よりもはるかに長く持続し、ＤＸ３についての増加した放射能が、投与の最大９６時間後まで観察されることを特定した（図２）。対照的に、最小放射能が、脳内で、ＤＸ１又はＩｇＧ対照の投与の４８時間後に検出された（図２）。これは、血液脳関門を通過するＤＸ３の改善された能力がまた、脳内のペイロードの長期のバイオアバラビリティと関連することを示唆するため、特に有利な知見である。
【0148】
興味深いことに、ＩｇＧ対照に対してＤＸ１及びＤＸ３の両方の改善されたペイロード送達能力は、脳に制限されるように現れ、送達における有意な改善は、評価された他の臓器において認められなかった（図４及び５）。これらのデータは、ＤＸ１及びＤＸ３が、血液脳関門を通過し脳を標的とすることを明らかに優先し、この特徴が、典型的には、抗体と関連しないことに鑑みて、これらを使用してペイロードをこの臓器に送達することにおける潜在的な有用性を更に強調する。
【0149】
実施例４－脳へのペイロード送達の評価（ＩＩ）
無胸腺ヌードマウス及び同所性膠芽腫腫瘍モードを保有する無胸腺ヌードマウスの血液脳関門を通過する、Ａｌｅｘａ６４７で標識されたＤＸ１及びＡｌｅｘａ６４７で標識されたＤＸ３の能力を評価した。
無胸腺ヌードマウス及び同所性膠芽腫腫瘍モードを保有する無胸腺ヌードマウスの血液脳関門を通過する、Ａｌｅｘａ６４７で標識されたＤＸ１及びＡｌｅｘａ６４７で標識されたＤＸ３の能力を評価した。
【0150】
腫瘍細胞の調製
細胞株Ｕ８７ ＭＧを、Ｓｙｎｇｅｎｅインビトロ細胞バンク（一次供給源－ＡＴＣＣ－Ｕ８７ ＭＧ－ＨＴＢ－１４）から回収し、増殖させ、細胞注射のために以下の詳細で使用した。
細胞株Ｕ８７ ＭＧを、Ｓｙｎｇｅｎｅインビトロ細胞バンク（一次供給源－ＡＴＣＣ－Ｕ８７ ＭＧ－ＨＴＢ－１４）から回収し、増殖させ、細胞注射のために以下の詳細で使用した。
【表2】
【0151】
９０％以上の生存率を有するＵ８７ ＭＧ（ヒト膠芽腫）細胞を、研究のために選択した。７μＬのＰＢＳ中に懸濁させた約２×１０６個の細胞を、細胞注射のために１マウス当たり使用した。無胸腺ヌードマウスに、Ｕ８７ ＭＧ細胞（１マウス当たり約２×１０６個の細胞）を頭蓋内に注射した。
【0152】
細胞の頭蓋内注射
個別換気ケージ（ＩＶＣ）内に収納された雌性無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウスを、研究のために使用した。Ｕ８７ ＭＧ細胞株を、細胞を動物の線条体（脳）内に頭蓋内に注射することによって、動物内で増殖させた。脳内直交性膠芽腫注射を、脳定位固定装置を使用して実行した。無胸腺ヌードマウスを、塩酸ケタミン及びキシラジン（１００ｍｇ／ｋｇ＋１０ｍｇ／ｋｇ；腹腔内）を使用して麻酔した。麻酔の深度を、足指をつまむことによって確認し、動物を、脳定位固定フレーム内に配置した。手術領域を、ポビドンヨード及びｓｔｅｒｉｌｉｕｍで殺菌し、１～１．５ｃｍの切開を作って、頭蓋骨を露出させた。頭蓋骨の表面を清浄化し、次いで、その表面に、過酸化水素の希釈溶液を塗布した。小さい穿頭孔を、吻側からブレグマまで１ｍｍ（前側から後側）及び右側まで２ｍｍ（中央から側）、マイクロドリルを使用して作った。７μＬのＰＢＳ中のＵ８７ ＭＧ細胞を収容するＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを、穿頭孔内に、必要とされる深さ（背腹側３ｍｍ）までゆっくり下げた。細胞を、脳定位固定インジェクタを使用して、１μＬ／分の速度で注射し、シリンジを、更に４分間適所に放置した。注射の完了後に、部位を、穏やか清浄化し、乾燥させ、ボーンワックスを、頭蓋骨に適用して、穿頭孔を閉じた。皮膚を（縫合糸－５メートル－ＶＩＣＲＹＬ ＳＵＴＵＲＥ（ポリグラチン９１０）、サイズ５－０）で縫合し、ポビドンヨード軟膏の薄層を、皮膚上に適用した。動物を、回復ケージに移し、加熱パッド上で覚醒させた。動物を、更に３０分間監視し、その後、動物のホームケージに移送した。合計で、２６匹のマウスを、４つのバッチにおいて細胞注射のために使用した。
個別換気ケージ（ＩＶＣ）内に収納された雌性無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ｎｕマウスを、研究のために使用した。Ｕ８７ ＭＧ細胞株を、細胞を動物の線条体（脳）内に頭蓋内に注射することによって、動物内で増殖させた。脳内直交性膠芽腫注射を、脳定位固定装置を使用して実行した。無胸腺ヌードマウスを、塩酸ケタミン及びキシラジン（１００ｍｇ／ｋｇ＋１０ｍｇ／ｋｇ；腹腔内）を使用して麻酔した。麻酔の深度を、足指をつまむことによって確認し、動物を、脳定位固定フレーム内に配置した。手術領域を、ポビドンヨード及びｓｔｅｒｉｌｉｕｍで殺菌し、１～１．５ｃｍの切開を作って、頭蓋骨を露出させた。頭蓋骨の表面を清浄化し、次いで、その表面に、過酸化水素の希釈溶液を塗布した。小さい穿頭孔を、吻側からブレグマまで１ｍｍ（前側から後側）及び右側まで２ｍｍ（中央から側）、マイクロドリルを使用して作った。７μＬのＰＢＳ中のＵ８７ ＭＧ細胞を収容するＨａｍｉｌｔｏｎシリンジを、穿頭孔内に、必要とされる深さ（背腹側３ｍｍ）までゆっくり下げた。細胞を、脳定位固定インジェクタを使用して、１μＬ／分の速度で注射し、シリンジを、更に４分間適所に放置した。注射の完了後に、部位を、穏やか清浄化し、乾燥させ、ボーンワックスを、頭蓋骨に適用して、穿頭孔を閉じた。皮膚を（縫合糸－５メートル－ＶＩＣＲＹＬ ＳＵＴＵＲＥ（ポリグラチン９１０）、サイズ５－０）で縫合し、ポビドンヨード軟膏の薄層を、皮膚上に適用した。動物を、回復ケージに移し、加熱パッド上で覚醒させた。動物を、更に３０分間監視し、その後、動物のホームケージに移送した。合計で、２６匹のマウスを、４つのバッチにおいて細胞注射のために使用した。
【0153】
ランダム化
非腫瘍保有健常活動性マウスを、群Ｉ及びＩＩのために選択した。動物を、体重（平均体重
２４ｇ）に基づく１群当たり７匹のマウス（３＋２＋２）を考慮して、別個にランダム化した。類似して、Ｕ８７ ＭＧ細胞注射マウス（ｎ＝２６）を、群ＩＩＩ及びＩＶへのランダム化のために使用した。細胞注射の１４～１９日後に、１４匹のマウスを、神経学的スコアリングに基づいて選択し、同所性膠芽腫保有処置群（群ＩＩＩ及びＩＶ）としての２つの群にランダム化し、体重（平均体重
２４ｇ）に基づく１群当たり７匹のマウス（３＋２＋２）を維持した。ランダム化後に、投薬を、体重に基づいて、１０ｍＬ／ｋｇの用量体積として開始した。
非腫瘍保有健常活動性マウスを、群Ｉ及びＩＩのために選択した。動物を、体重（平均体重
【数1】
【数2】
【0154】
用量製剤及び投与経路
以下の用量製剤を、投薬日に使用した。
以下の用量製剤を、投薬日に使用した。
【表3】
【0155】
イメージング
投薬後に、Ｉｎ－ｖｉｖｏ Ｘｔｒｅｍｅ（Ｂｒｕｋｅｒ）を使用するインビボイメージングを、０、１、４、１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点で実施した。４時間（ｎ＝２）、２４時間（ｎ＝２）、及び９６時間（ｎ＝３）での実験期間の終了時に、選択された動物からの採血を実施し、動物を安楽死させた。脳、肝臓、腎臓、肺及び脾臓、骨格筋（例えば、腓腹筋、脛骨、ヒラメ筋正常）組織を、エクスビボイメージングのために収集し、シグナル強度を測定した。
投薬後に、Ｉｎ－ｖｉｖｏ Ｘｔｒｅｍｅ（Ｂｒｕｋｅｒ）を使用するインビボイメージングを、０、１、４、１２、２４、４８、７２、及び９６時間の時点で実施した。４時間（ｎ＝２）、２４時間（ｎ＝２）、及び９６時間（ｎ＝３）での実験期間の終了時に、選択された動物からの採血を実施し、動物を安楽死させた。脳、肝臓、腎臓、肺及び脾臓、骨格筋（例えば、腓腹筋、脛骨、ヒラメ筋正常）組織を、エクスビボイメージングのために収集し、シグナル強度を測定した。
【0156】
血液及び脳（ＰＫプロファイリング）
４時間（ｎ＝２）、２４時間（ｎ＝２）、及び９６時間（ｎ＝３）での実験期間の終了時に、選択された動物からの採血を実施した。４０μＬの血液試料を、１６０μＬのＨＢＳＥ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．４）溶液と混合し、４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清を、ＰＫプロファイリングのために処理した。脳を、採取し、瞬間凍結させた。更なるＰＫ分析を、血漿及び脳（瞬間凍結）試料において実行した。
４時間（ｎ＝２）、２４時間（ｎ＝２）、及び９６時間（ｎ＝３）での実験期間の終了時に、選択された動物からの採血を実施した。４０μＬの血液試料を、１６０μＬのＨＢＳＥ（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ ｐＨ７．４）溶液と混合し、４０００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清を、ＰＫプロファイリングのために処理した。脳を、採取し、瞬間凍結させた。更なるＰＫ分析を、血漿及び脳（瞬間凍結）試料において実行した。
【0157】
結果
このイメージング研究において、静脈内投与された、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７で標識された２０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物ＤＸ１（Ｓ１）及び５０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物ＤＸ３（Ｓ９）を、正常な無胸腺ヌードマウス（非腫瘍保有）及びＵ８７ ＭＧ（ヒト膠芽腫）腫瘍を保有する無胸腺ヌードマウスの両方における薬物生体内分布及び血液脳関門（ＢＢＢ）の通過について評価した。Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７は、リジン残基を介してＤＸ１及びＤＸ３にコンジュゲートしていた。非腫瘍保有動物を、体重に基づいて、各群において７匹のマウス（３＋２＋２）として、群Ｉ及び群ＩＩの２つの群に別個にランダム化した。類似して、Ｕ８７ ＭＧ同所性腫瘍保有動物を、神経学的スコアリング（歩行、整合、探索行動、四肢力、体位、反射、及びグルーミング）に基づいて選択し、体重（１群当たり平均体重
２４ｇ）に基づいて、各群において７匹のマウス（３＋２＋２）として、群ＩＩＩ及びＩＶの２つの群に別個にランダム化した。
このイメージング研究において、静脈内投与された、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７で標識された２０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物ＤＸ１（Ｓ１）及び５０ｍｇ／ｋｇの用量の試験化合物ＤＸ３（Ｓ９）を、正常な無胸腺ヌードマウス（非腫瘍保有）及びＵ８７ ＭＧ（ヒト膠芽腫）腫瘍を保有する無胸腺ヌードマウスの両方における薬物生体内分布及び血液脳関門（ＢＢＢ）の通過について評価した。Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７は、リジン残基を介してＤＸ１及びＤＸ３にコンジュゲートしていた。非腫瘍保有動物を、体重に基づいて、各群において７匹のマウス（３＋２＋２）として、群Ｉ及び群ＩＩの２つの群に別個にランダム化した。類似して、Ｕ８７ ＭＧ同所性腫瘍保有動物を、神経学的スコアリング（歩行、整合、探索行動、四肢力、体位、反射、及びグルーミング）に基づいて選択し、体重（１群当たり平均体重
【数3】
【0158】
Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７で標識された単回用量のＤＸ１（Ｓ１）（２０ｍｇ／ｋｇ）を、群Ｉ（非腫瘍保有無胸腺ヌードマウス－ＤＸ１）及び群ＩＩＩ（同所性膠芽腫保有ヌードマウス－ＤＸ１）に静脈内投与した。類似して、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７で標識された５０ｍｇ／ｋｇの用量のＤＸ３（Ｓ９）を、群ＩＩ（非腫瘍保有無胸腺ヌードマウス－ＤＸ３）及びＩＶ（同所性膠芽腫保有ヌードマウス－ＤＸ３）に静脈内投与した。
【0159】
イメージング最適化を、空のバイアル、並びにＡｌｅｘａ ｆｌｕｏｒで標識されたＤＸ１（Ｓ１）及びＤＸ３（Ｓ９）を収容するバイアルで実行した。正常なマウス及び神経膠腫を保有するマウスを、最適化のために使用した。バックグラウンドシグナル強度は、６５０ｎｍの励起、７００ｎｍの発光、１０秒の露光において観察されなかった。同じパラメータを、好適であると考え、インビボ及びエクスビボイメージングのために使用した。全ての動物を、各時点での背側及び腹側の両方からのインビボイメージングのために使用した。４時間（ｎ＝２）、２４時間（ｎ＝２）、及び９６時間（ｎ＝３）の特定の時点でのインビボイメージング後に、動物を人道的に安楽死させ、エクスビボイメージングを、脳、腎臓、肝臓、肺、骨格筋、及び脾臓などの臓器について実行した。
【0160】
静脈内投与された、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６４７で標識された２０ｍｇ／ｋｇのＤＸ１（Ｓ１）及び５０ｍｇ／ｋｇのＤＸ３（Ｓ９）の試験化合物の両方は、非腫瘍保有無胸腺ヌードマウス及び同所性Ｕ８７ ＭＧ保有無胸腺ヌードマウスにおける生体内分布及びＢＢＢの通過について評価されたときに十分に許容された。
【0161】
エクスビボイメージング（図５）は、Ａｌｅｘａ ｆｌｕｏｒ ６７４で標識されたＤＸ３が、非腫瘍保有無胸腺ヌードマウス及び同所性Ｕ８７ ＭＧ保有無胸腺ヌードマウスの脳内で検出され得ることを示す。これは、ＤＸ３が無傷の血液脳関門を通過することができることを示唆するため、特に有利な知見である。上記の知見をまとめると、本実施例は、ＢＢＢを通過する様々なペイロードの細胞透過性抗ＤＮＡ抗体媒介性輸送についての一般的な概念を支持する。
【0162】
多数の変形及び／又は修正が、広範に記載される本開示の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の実施形態に示される本開示になされ得ることが、当業者には理解されよう。したがって、本実施形態は、全ての点において例示であり限定ではないと考えられるべきである。
【0163】
上で考察される全ての刊行物は、それらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書に含まれている文書、行為、材料、デバイス、又は物品などの任意の考察は、本開示についての文脈を提供する目的のためのみである。これらの事項のうちのいずれか又は全てが、従来技術の基礎の一部を形成すること、又は本出願の各請求項の優先日の前に存在するように本開示に関連する分野における技術常識であったことを認めるものとして解釈されるべきでない。
【0164】
本出願は、２０２１年５月２５日に出願されたＡＵ２０２１９０１５６７の優先権を主張し、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【配列表】
【国際調査報告】