特表 2024-519204 複数の標的を介して疼痛を処置するための治療組成物

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-09

(54)【発明の名称】複数の標的を介して疼痛を処置するための治療組成物

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/7088 20060101AFI20240430BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240430BHJP

   A61K 31/7115 20060101ALI20240430BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240430BHJP

   A61K 31/7125 20060101ALI20240430BHJP

   A61P 25/04 20060101ALI20240430BHJP

   C12N 15/113 20100101ALN20240430BHJP

【ＦＩ】

A61K31/7088

A61K48/00 ZNA

A61K31/7115

A61P43/00 111

A61K31/7125

A61P25/04

C12N15/113 140Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023566576

(86)(22)【出願日】2022-04-28

(85)【翻訳文提出日】2023-12-26

(86)【国際出願番号】 US2022026738

(87)【国際公開番号】W WO2022232395

(87)【国際公開日】2022-11-03

(31)【優先権主張番号】63/180,875

(32)【優先日】2021-04-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(31)【優先権主張番号】63/281,492

(32)【優先日】2021-11-19

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】516056971

【氏名又は名称】キュー－ステート バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド

【氏名又は名称原語表記】Ｑ－Ｓｔａｔｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ．

【住所又は居所原語表記】１７９ Ｓｉｄｎｅｙ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ０２１３９ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】デンプシー， グラハム ティー．

(72)【発明者】

【氏名】マクマナス， オーウェン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ホンカン

(72)【発明者】

【氏名】ガーバー， デイビッド

(72)【発明者】

【氏名】リウ， ピン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン， ダウェイ

(72)【発明者】

【氏名】ブラウン， ダンカン

(72)【発明者】

【氏名】アグラワル， スディール

(72)【発明者】

【氏名】リワーク， ケイトリン

【テーマコード（参考）】

4C084

4C086

【Ｆターム（参考）】

4C084AA13

4C084MA16

4C084MA56

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA08

4C084ZA21

4C084ZC02

4C086AA01

4C086AA02

4C086EA16

4C086MA16

4C086MA56

4C086MA66

4C086NA14

4C086ZA08

4C086ZA21

4C086ZC02

(57)【要約】

本発明は、ＮａＶチャネルｍＲＮＡ上の同定された標的に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む非オピオイド疼痛治療組成物を提供する。ＡＳＯは、その標的ＲＮＡにハイブリダイズし、ＲＮａｓｅ Ｈを動員してＲＮＡを分解する二重鎖を形成し、それによってＮａＶチャネル合成を下方制御し、これが疼痛の知覚に寄与するニューロンの能力を阻害する。ＡＳＯは、特定の同定された標的のうちの１つを標的とし、修飾ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマーとして提供され得る。組成物がインビトロで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに送達されると、ＤＲＧニューロンは、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８またはＮａＶ１．９の用量依存的ノックダウンを示す。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つに少なくとも約７５％相補的なＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質をコードするＲＮＡにハイブリダイズし、それにより前記ナトリウムチャネルタンパク質へ前記のＲＮＡの翻訳を防止するオリゴヌクレオチドを含む、
疼痛を処置するための組成物。

【請求項2】

前記オリゴヌクレオチドが、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９の１またはそれを超えるプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、かつその発現をノックダウンする、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記オリゴヌクレオチド中の塩基の配列が、配列番号１～１６４のうちの１つと少なくとも８０％の同一性を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記オリゴヌクレオチド中の塩基の配列が、配列番号１～１０１のうちの１つと少なくとも９０％同一であり、前記オリゴヌクレオチドが、ＮａＶ１．７プレ－ｍＲＮＡもしくはｍＲＮＡまたはＮａＶ１．８プレ－ｍＲＮＡもしくはｍＲＮＡのいずれかにハイブリダイズし、それらのＲＮａｓｅ切断を誘導することができる、請求項１に記載の組成物。

【請求項5】

前記組成物が、それぞれが配列番号１～１６４のうちの１つと少なくとも８０％同一の塩基配列を有する複数の治療用オリゴヌクレオチドを含み、前記治療用オリゴヌクレオチドのそれぞれが、修飾ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマー構造を有し、前記複数の治療用オリゴヌクレオチドが、髄腔内注射用に製剤化された溶液または担体中に提供される、請求項１に記載の組成物。

【請求項6】

前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１０個のＤＮＡ塩基の中央領域に隣接する２つのウィングを含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項7】

前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの末端が、修飾ＲＮＡ塩基を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項8】

各修飾ＲＮＡ塩基が、２’－Ｏ－メトキシエチルＲＮＡおよび２’－Ｏ－メチルＲＮＡからなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。

【請求項9】

前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも約１５塩基を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項10】

前記オリゴヌクレオチドが、約１５～約２５塩基を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項11】

前記オリゴヌクレオチドが、複数のホスホロチオエート結合を含む骨格を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項12】

前記オリゴヌクレオチドが、スクリーニングされ、ヒトにおける任意の非標的転写物についての閾値マッチを満たさないと決定された塩基配列を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項13】

前記オリゴヌクレオチドが、非ヒト霊長類ゲノム中の相同セグメントとのミスマッチが０であり、げっ歯類ゲノム中の相同セグメント中のミスマッチが約５以下である塩基配列を有する、請求項１に記載の組成物。

【請求項14】

前記組成物が、インビトロで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに送達される場合、前記ＤＲＧニューロンが、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８またはＮａＶ１．９の用量依存的ノックダウンを示す、請求項１に記載の組成物。

【請求項15】

前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート結合のみによって連結された塩基を有する、配列番号１～１４１のうちの１つと少なくとも９０％のマッチを有する塩基配列を有し、前記オリゴヌクレオチドが、５’ウィングおよび３’ウィングに隣接した中央の１０個のＤＮＡ塩基をさらに含み、前記５’ウィングおよび前記３’ウィングがそれぞれ、５個の連続する２’修飾ＲＮＡ塩基を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項16】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１～１４１のうちの１つとマッチする塩基配列を有し、大部分の塩基間結合がホスホロチオエート結合を含み、前記オリゴヌクレオチドが、５’ウィングおよび３’ウィングに隣接した中央の１０個のＤＮＡ塩基をさらに含み、前記５’ウィングおよび前記３’ウィングがそれぞれ、５個の連続する２’ ＭＯＥ ＲＮＡ塩基を含む、請求項１に記載の組成物。

【請求項17】

髄腔内投与用に製剤化された担体中に、先行する請求項のいずれか一項に記載の複数の異なる治療用ギャップマーの複数のコピーを含む組成物。

【請求項18】

前記オリゴヌクレオチドが、インビトロでＤＲＧニューロンを使用するアッセイにおいて、対照ギャップマーよりも少なくとも２５％良好なＮａｖノックダウンを示す、請求項１に記載の組成物。

【請求項19】

前記ＲＮＡ中の１またはそれを超える塩基がメチル化されている、請求項１に記載の組成物。

【請求項20】

前記メチル化塩基が、５－メチルシトシンおよび５－メチルウラシル（チミン）から選択される、請求項１９に記載の組成物。

【請求項21】

配列番号１４２～１６４のうちの１つに少なくとも約７５％相補的である各ＲＮＡのセグメントに沿った２つの異なるナトリウムチャネルタンパク質をコードする２つのＲＮＡ上の位置にハイブリダイズし、それによりそのそれぞれのナトリウムチャネルタンパク質の前記ＲＮＡの翻訳を防止するオリゴヌクレオチドを含む、
疼痛を処置するための組成物。

【請求項22】

前記オリゴヌクレオチドが、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、かつその発現をノックダウンする、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記オリゴヌクレオチド中の塩基の配列が、配列番号１４２～１６４のうちの１つと少なくとも８９％の同一性を有する、請求項２１に記載の組成物。

【請求項24】

前記オリゴヌクレオチド中の塩基の配列が、配列番号１４２～１６４のうちの１つと少なくとも９４％同一であり、前記オリゴヌクレオチドが、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、それらのＲＮａｓｅ切断を誘導することができる、請求項２１に記載の組成物。

【請求項25】

前記組成物が、それぞれが配列番号１４０～１６４のうちの１つと少なくとも９４％同一の塩基配列を有する複数の治療用オリゴヌクレオチドを含み、前記治療用オリゴヌクレオチドのそれぞれが、修飾ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマー構造を有する、請求項２１に記載の組成物。

【請求項26】

前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも９個のＤＮＡ塩基の中央領域に隣接する２つのウィングを含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項27】

前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの末端が、修飾ＲＮＡ塩基を含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項28】

各修飾ＲＮＡ塩基が、２’－Ｏ－メトキシエチルＲＮＡである、請求項２７に記載の組成物。

【請求項29】

前記オリゴヌクレオチドが、約１９塩基を含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項30】

前記オリゴヌクレオチドが、複数のホスホロチオエート結合を含む骨格を有する、請求項２１に記載の組成物。

【請求項31】

前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート（ＰＳ）とホスホジエステル（ＰＯ）との混合物を含む骨格を有し、最も外側の塩基間結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合がＰＳであり、各ウィングの他の３つのＲＮＡ間結合が２つまたは３つのＰＳ結合のいずれかを含み、残りがＰＯである、請求項２１に記載の組成物。

【請求項32】

前記オリゴヌクレオチドが、スクリーニングされ、ヒトにおける任意の非標的転写物についての閾値マッチを満たさないと決定された塩基配列を有する、請求項２１に記載の組成物。

【請求項33】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１４２～１５２または１５３～１６４のうちの１つの塩基配列を有する、請求項２１に記載の組成物。

【請求項34】

前記組成物が、インビトロで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに送達される場合、前記ＤＲＧニューロンが、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８の用量依存的ノックダウンを示す、請求項２１に記載の組成物。

【請求項35】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１４２～１６４のうちの１つと少なくとも９４％のマッチを有する塩基配列を有し、少なくとも最も外側の塩基間結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合がホスホロチオエートであり、前記オリゴヌクレオチドが、５’ＲＮＡウィングおよび３’ＲＮＡウィングに隣接した中央の９個のＤＮＡ塩基をさらに含み、前記５’ウィングおよび前記３’ウィングがそれぞれ、５個の連続する２’修飾ＲＮＡ塩基を含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項36】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１４２～１６４のうちの１つの配列を有し、両方のＲＮＡウィングが５個の２－メトキシエチル修飾ＲＮＡ塩基からなる、請求項３５に記載の組成物。

【請求項37】

配列番号１６６～３９０のうちの１つに少なくとも約７５％相補的である各ＲＮＡのセグメントに沿った２つの異なるナトリウムチャネルタンパク質をコードする２つのＲＮＡ上の位置にハイブリダイズし、それによりそのそれぞれのナトリウムチャネルタンパク質の前記ＲＮＡの翻訳を防止するオリゴヌクレオチドを含む、
疼痛を処置するための組成物。

【請求項38】

前記オリゴヌクレオチドが、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、かつその発現をノックダウンする、請求項３７に記載の組成物。

【請求項39】

前記オリゴヌクレオチド中の塩基の配列が、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８９％の同一性を有する、請求項３７に記載の組成物。

【請求項40】

前記オリゴヌクレオチド中の塩基の配列が、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９４％同一であり、前記オリゴヌクレオチドが、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、それらのＲＮａｓｅ切断を誘導することができる、請求項３７に記載の組成物。

【請求項41】

前記組成物が、それぞれが配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９４％同一の塩基配列を有する複数の治療用オリゴヌクレオチドを含み、前記治療用オリゴヌクレオチドのそれぞれが、修飾ＲＮＡウィングに隣接する中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマー構造を有する、請求項３７に記載の組成物。

【請求項42】

前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも９個のＤＮＡ塩基の中央領域に隣接する２つのウィングを含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項43】

前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの末端が、修飾ＲＮＡ塩基を含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項44】

各修飾ＲＮＡ塩基が、２’－Ｏ－メトキシエチルＲＮＡである、請求項４３に記載の組成物。

【請求項45】

前記オリゴヌクレオチドが、約１９塩基を含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項46】

前記オリゴヌクレオチドが、複数のホスホロチオエート結合を含む骨格を有する、請求項３７に記載の組成物。

【請求項47】

前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート（ＰＳ）とホスホジエステル（ＰＯ）との混合物を含む骨格を有し、最も外側の塩基間結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合がＰＳであり、各ウィングの他の３つのＲＮＡ間結合が２つまたは３つのＰＳ結合のいずれかを含み、残りがＰＯである、請求項３７に記載の組成物。

【請求項48】

前記オリゴヌクレオチドが、スクリーニングされ、ヒトにおける任意の非標的転写物についての閾値マッチを満たさないと決定された塩基配列を有する、請求項３７に記載の組成物。

【請求項49】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１４２～１５２または１５３～１６４のうちの１つの塩基配列を有する、請求項３７に記載の組成物。

【請求項50】

前記組成物が、インビトロで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに送達される場合、前記ＤＲＧニューロンが、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８の用量依存的ノックダウンを示す、請求項３７に記載の組成物。

【請求項51】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９４％のマッチを有する塩基配列を有し、少なくとも最も外側の塩基間結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合がホスホロチオエートであり、前記オリゴヌクレオチドが、５’ＲＮＡウィングおよび３’ＲＮＡウィングに隣接した中央の９個のＤＮＡ塩基をさらに含み、前記５’ウィングおよび前記３’ウィングがそれぞれ、５個の連続する２’修飾ＲＮＡ塩基を含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項52】

前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１６６～３９０のうちの１つの配列を有し、両方のＲＮＡウィングが５個の２－メトキシエチル修飾ＲＮＡ塩基からなる、請求項５１に記載の組成物。

【請求項53】

前記ＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質をコードするＲＮＡにハイブリダイズする前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つに少なくとも約７５％相補的であり、それによって前記ＲＮＡの前記ナトリウムチャネルタンパク質への翻訳を防止する、請求項１に記載の組成物。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

技術分野
本開示は、疼痛を処置するための非オピオイド治療組成物に関する。

【0002】

配列表
本出願は、２０２２年４月２８日に作成され、サイズが７２ＫＢである、ＱＳＴＡ－０２９－０２ＷＯ－Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称の添付のＡＳＣＩＩテキストファイルにおけるコンピュータ可読形式の配列表とともに出願されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。

【背景技術】

【0003】

背景
米国では、疾病管理センターは、１億人もの人々が慢性疼痛に罹患していると推定している。疼痛の処置に対する１つの一般的なアプローチは、オピオイドの使用を含む。オピオイド薬は疼痛に対して非常に効果的な処置であるが、これらの依存性薬物の乱用は流行性の問題であると理解されている。それにもかかわらず、経験および生活するのに疼痛を伴う多くの一般的な医学的症状がある。

【0004】

重度の慢性疼痛を誘導することが多い一般的な医学的症状の１つは変形性関節症である。変形性関節症は、関節内の軟骨が破壊または摩耗すると起こり、最終的に関節表面に露出した骨が生じ、互いに擦れ合い、断片化または裂けが生じる可能性がある。変形性関節症に罹患している多くの人々は、この症状がもたらす永続的な疼痛に精通している。重度の慢性疼痛を引き起こし得る別の一般的な医学的症状は、癌である。米国癌学会は、癌疼痛を、単に癌に対する炎症反応だけでなく、癌自体に起因すると考える。研究は、癌細胞自体が感覚ニューロンの過敏性を駆動することを示している。したがって、癌は腫瘍として現れるか、または身体全体に広がる可能性があるだけでなく、癌自体が重度の疼痛の直接的な原因となり得る。

【0005】

疼痛を処置するための様々なアプローチがあるが、それぞれが特定の制限に関連する。市販の非ステロイド性抗炎症薬（ｎｏｎ－ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｄｒｕｇ、ＮＳＡＩＤ）は、特定の形態の疼痛を処置するのに必要な有効性を欠くことがある。さらに、一部の人々は、ＮＳＡＩＤに応答しなくなるか、または消化器系および腎機能に対する有害作用に耐えることができない。オピオイドは、疼痛を処置するのに有効であると理解されているが、ヒトおよび社会的に急勾配のコストがかかり、許容性の発達により効果を経時的に失う可能性がある。オピオイドは中毒性麻薬であり、乱用、転用、さらには不正行為および犯罪活動に関与しているとよく理解されている。ＮＳＡＩＤおよびオピオイド処置のさらに深刻な欠点には、高い死亡率が含まれる。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0006】

要旨
本発明は、オピオイドを必要としないまたは伴わない疼痛を処置するのに有用な治療組成物を提供する。組成物は、疼痛の知覚に関与するタンパク質の合成を防止する短い核酸またはオリゴヌクレオチドを含む。具体的には、特定のニューロンは、「疼痛感覚性」神経、または侵害受容器として機能する。これらの疼痛感覚性ニューロンは、電位依存性ナトリウムチャネルとして機能するタンパク質を有する。神経末端の刺激が閾値電圧（Ｖ）を超えると、侵害受容器ニューロンは細胞膜を横切ってナトリウムイオン（Ｎａ＋）を伝導し、これによりニューロンを再生的に脱分極させ、疼痛感覚の根底にある電気信号を伝播する「発火」をもたらすことができる。本発明の組成物は、疼痛感覚を可能にするナトリウムチャネルタンパク質の作製に使用されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）または前駆体ｍＲＮＡ（プレ－ｍＲＮＡ）に結合するオリゴヌクレオチドを含む。本発明は、それらのＲＮＡ内の多数の特定の検証された標的の同定を含む。オリゴヌクレオチドは、それらのタンパク質が作製されるのを防止し、それにより、それらの疼痛感覚性ニューロンの感受性または活性が低下する。疼痛感覚性ニューロンの活性が低下するため、患者ははるかに少ない疼痛を経験する。組成物は、オピオイドまたは他の麻薬を含む必要がなく、したがって、習慣性はない。組成物は、オピオイドの有効用量を減少させるためにオピオイドと組み合わせて使用され得る。したがって、組成物は、疼痛感覚性ニューロンのナトリウムチャネルを下方制御することによって長期疼痛緩和を提供する。

【0007】

ヒトには９つのファミリーの電位依存性ナトリウムチャネルがあり、ＮａＶｌ．ｌ～ＮａＶ１．９と呼ばれる。これら９つのタンパク質のうち、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９は、侵害受容器後根神経節（ｄｏｒｓａｌ ｒｏｏｔ ｇａｎｇｌｉｏｎ、ＤＲＧ）ニューロンにおいて発現され、疼痛の知覚に寄与する。

【0008】

本開示のオリゴヌクレオチドは、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９タンパク質の合成に使用されるＲＮＡ中の特定の標的に結合するように設計されている。オリゴヌクレオチドの結合は、タンパク質合成を防止し、対応するＮａＶチャネルの発現を下方制御する。具体的には、オリゴヌクレオチドは、ＮａＶチャネルのプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ上の同定された標的のうちの１つに実質的にまたは完全に相補的な配列を有する。すなわち、オリゴヌクレオチドは、同定された標的に対してアンチセンスである。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、その標的ＲＮＡにハイブリダイズすると、二本鎖二重鎖の一部を分解する酵素（ＲＮａｓｅ Ｈ）を動員する二本鎖ＡＳＯ：ＲＮＡ二重鎖を形成する。ＡＳＯ：ＲＮＡ二重鎖を分解すると、ＮａＶチャネルｍＲＮＡのニューロンが枯渇し、細胞によって合成されるＮａＶチャネルの量が減少する。ＮａＶチャネル発現の下方制御は、疼痛の感覚に寄与するニューロンの能力を妨げる。

【0009】

したがって、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８またはＮａＶ１．９のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ中の同定された標的に対してアンチセンスであるオリゴヌクレオチドを含む組成物を患者に投与すると、その患者は疼痛の経験が減少する。したがって、本開示の組成物は、オピオイドの使用を必要とせずに患者の疼痛を処置するのに有用であり、オピオイドの使用を最小限に抑えるか、または減少させることもできる。

【0010】

特定の態様では、本開示は、疼痛を処置するための組成物を提供する。組成物は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つに少なくとも約７５％相補的なＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、それによってＲＮＡのナトリウムチャネルタンパク質への翻訳を防止するオリゴヌクレオチドを含む。好ましい態様では、そのＲＮＡのセグメントに沿ったナトリウムチャネルタンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡは、配列番号１６６～３９０のうちの１つに少なくとも約７５％相補的である。さらにより好ましい態様では、そのＲＮＡのセグメントに沿ったナトリウムチャネルタンパク質をコードするプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡは、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つに少なくとも約７５％相補的である。

【0011】

オリゴヌクレオチドは、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９の１またはそれを超えるプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、その発現をノックダウンし得る。好ましくは、オリゴヌクレオチド中の塩基の配列は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８０％の同一性を有する。例えば、オリゴヌクレオチドの塩基配列は、配列番号１～１０１、１４２～１６４および２０１～３９０のうちの１つと少なくとも９０％または９５％同一であり得、オリゴヌクレオチドは、ＮａＶ １．７またはＮａＶ １．８のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡのいずれかにハイブリダイズし、それらのＲＮａｓｅ Ｈ切断を誘導し得る。組成物は、それぞれが配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８０、９０、９５または１００％同一の塩基配列を有する複数の治療用オリゴヌクレオチドを含み得る。

【0012】

本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、修飾ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマー構造を有し得る。そのような治療用オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ塩基の中央領域（例えば、約８～１０個のＤＮＡ塩基）に隣接する２つのウィングを含み得る。好ましくは、オリゴヌクレオチドの少なくとも１つの末端は、修飾ＲＮＡ塩基、例えば、２’－Ｏ－メトキシエチルＲＮＡ（「２’－ＭＯＥ」）および／または２’－Ｏ－メチルＲＮＡ（「２’Ｏ－Ｍｅ」）の任意の数または任意の組み合わせを含む。さらに、本発明の組成物は、細胞質ｍＲＮＡ対核ｍＲＮＡを異なって標的化するために、エクソン－エクソン接合部を標的化するように設計され得る。したがって、本発明のＡＳＯは、スプライシングの前または後にＲＮＡと相互作用し、組成物に特異性および汎用性を付加するように設計することができる。

【0013】

治療用オリゴヌクレオチドは、髄腔内注射用に製剤化された溶液または担体中に、好ましくは約３～４回／年で提供され得る。オリゴヌクレオチドは、任意の適切な長さ、例えば、少なくとも約１３塩基、好ましくは約１５～２５塩基であり得る。オリゴヌクレオチドは、骨格にホスホロチオエート結合を有していてもよい。好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチドは、スクリーニングされ、ヒトにおける任意の長い非コードＲＮＡまたは他のオフターゲット配列もしくは転写物について閾値マッチを満たさないと決定された塩基配列を有する。オリゴヌクレオチドは、非ヒト霊長類ゲノム中の相同セグメントとのミスマッチが０であり、げっ歯類ゲノム中の相同セグメント中のミスマッチが約５以下である塩基配列を有し得る。

【0014】

組成物がインビトロで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに送達されると、ＤＲＧニューロンは、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８またはＮａＶ１．９の用量依存的ノックダウンを示す。オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合によって連結された塩基を有する、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９０％のマッチを有する塩基配列を有するギャップマーであり得る。好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１６６～３９０のうちの１つと９０％マッチする塩基配列を有するギャップマーである。さらにより好ましい態様では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つと９０％のマッチを有する塩基配列を有するギャップマーである。結合は、全てホスホロチオエートであっても、ホスホロチオエートとホスホジエステル結合との混合物であってもよい。オリゴヌクレオチドは、５’ウィングおよび３’ウィングに隣接した中央の１０個のＤＮＡ塩基をさらに有し得、５’ウィングおよび３’ウィングはそれぞれ、５個の連続する２’修飾ＲＮＡ塩基を含む。好ましくは、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート結合によって連結された塩基を有する配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つとマッチする塩基配列、ならびに５’ウィングおよび３’ウィングに隣接した中央ＤＮＡ塩基を有する構造を有する。ウィング中のＲＮＡ塩基および中央セグメント中のＤＮＡ塩基の数は、５－１０－５または４－１２－４、または類似の適切なパターンであり得る。５’ウィングおよび３’ウィングはそれぞれ、いくつかの２’－ＭＯＥ ＲＮＡ塩基を含み得る。より好ましい態様では、そのようなオリゴヌクレオチドは、配列番号１６６～３９０、さらにより好ましくは、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つにマッチする塩基配列を有する。例えば、オリゴヌクレオチドは、各ウィング中に５個の連続する２’－ＭＯＥ ＲＮＡ塩基を有し得、中央の１０個のＤＮＡ塩基（「５－１０－５」構造）を有し、中央のＤＮＡセグメント全体にホスホロチオエート結合があり、ウィング中にホスホロチオエート結合とホスホジエステル結合の混合物がある。

【0015】

組み合わせ実施形態では、本発明は、各々が上記の記載による複数の異なる治療用ギャップマーの複数のコピーを適切な製剤または担体中に含む組成物を提供する。

【0016】

好ましくは、本開示のオリゴヌクレオチドは、対照ギャップマー（例えば、インビトロでＤＲＧニューロンを使用するアッセイでは、対照ギャップマーは、ホスホロチオエート結合のみによって連結されたＧＣＣＡＵＡＡＴＣＣＧＧＧＴＴＵＣＵＧＣ（配列番号１６５）からなり、５つの連続する２’－ＭＯＥ ＲＮＡ塩基の５’ウィングおよび５つの連続する２’－ＭＯＥ ＲＮＡ塩基の３’ウィングに隣接する中央の１０個のＤＮＡ塩基をさらに含む）よりも少なくとも２５％良好なＮａＶノックダウンを示す。

【0017】

本開示の態様は、患者の疼痛を処置するための医薬を製造するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の使用を提供する。当該使用において、ＡＳＯは、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、例えば９５％または１００％の同一性を有する。好ましい態様では、ＡＳＯは、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、例えば９５％または１００％の同一性を有する。さらにより好ましい実施形態では、ＡＳＯは、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性を有する。

【0018】

好ましい実施形態は、約１５～２５塩基長、好ましくは約１８～２２または約１９～２１（包括的）のＡＳＯを使用する。一般に、「ＡＳＯ」への言及は、実質的に同一の分子の多数のコピーを含む。したがって、「ＡＳＯ」は、示されたＡＳＯの任意の数、例えば数十万または数百万のコピーであり得る。好ましい実施形態では、ＡＳＯは、２０塩基長であり、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つの配列を有し、疼痛の処置のための医薬の製造に使用される。ＡＳＯは、任意の適切なフォーマットで提供されてもよく、例えば、微量遠心管または試験管などの管内または管内の溶液中で凍結乾燥されてもよい。使用の好ましい実施形態は、ＮａＶ１．７および／またはＮａＶ１．８を標的とする。１またはそれを超える（例えば、２、３、４、もしくは５またはそれを超える）ＡＳＯを医薬の製造に使用することができる。１またはそれを超えるＡＳＯは、ＮａＶ１．７またはＮａＶ１．８のプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ中の標的にハイブリダイズし得る。使用の特定の実施形態では、ＡＳＯ中の塩基の配列は、配列番号１～１０１、１４２～１６４、および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９０％同一である。実施形態では、ＡＳＯは、ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメント、例えば中央領域の両側に５個の修飾ＲＮＡ塩基を有する１０個のＤＮＡ塩基の中央領域を有するギャップマー構造を有し得る。各修飾ＲＮＡ塩基は、２’－ＭＯＥであり得る。好ましくは、ＡＳＯの骨格は、複数のホスホロチオエート結合を有し、例えば、使用実施形態では、糖結合の大部分またはすべてがホスホロチオエートであってもよい。対応する医薬は、髄腔内送達のために製剤化され得る。したがって、ＡＳＯは、注射またはポンプによる導入に適した製剤への混合に適した形態であり得る。例えば、ＡＳＯ（１つのＡＳＯの数千または数百万またはそれを超えるコピー）は、既知のモル濃度または濃度でチューブまたは溶液中で凍結乾燥され得る。ＡＳＯは、溶媒および／または賦形剤などの担体がＡＳＯを含む薬学的に許容され得る組成物に溶解または希釈されてもよく、ＩＶバッグ、シリンジ、またはポンプに装填されてもよい。医薬は、２またはそれを超えるＡＳＯ、例えば２、３、４、若しくは５、またはそれを超える任意の組み合わせを使用して作製され得る。本発明の組成物中の塩基は、本発明の組成物の幅および有効性を増加させるために修飾、またはゆらぎ塩基が使用されてもよい。一例では、本発明で使用するためのＡＳＯは、メチル化塩基（例えば、５－メチルシトシン、５－メチルウラシル（チミン）等）を含有し得る。

【0019】

本発明の組成物は、連続投与に対応するように製剤化され得る。例えば、製剤は、最適な治療ウィンドウを利用し、ＡＳＯ間の潜在的な競合を回避するために、２またはそれを超える別々の時間に、および必要に応じて２またはそれを超える異なるＡＳＯと共に投与される投与量を提供し得る。さらに、本発明の組成物は、連続的に投与されるか否かにかかわらず、関与するＡＳＯの組成に応じて、２またはそれを超える標的と相互作用し得る。例えば、ＡＳＯは、複数の標的（ｍＲＮＡおよびプレｍＲＮＡ種の内部および全体の両方）との相互作用を可能にし、したがって関連する処置が２またはそれを超えるチャネルに影響を及ぼすことを可能にする標的化ミスマッチを含み得る。

【図面の簡単な説明】

【0020】

【図1】図１は、疼痛を処置するための組成物を示す。

【図2】図２は、ギャップマー構造を有するオリゴヌクレオチドを示す。

【図3】図３は、２’－Ｏ－メトキシエチル（ＭＯＥ）修飾リボース糖を示す。

【図4】図４は、ＤＮＡのセグメント中のホスホロチオエート結合を示す。

【図5】図５は、１７の異なるＡＳＯによるＮａＶ１．７のノックダウンのためのｑＰＣＲアッセイの結果を示す。

【図6】図６は、対照と比較したＮａＶ１．７標的化ＡＳＯの効果を示す図である。

【図7】図７は、本開示のＡＳＯの標的選択性を示す。

【図8】図８は、ＡＳＯに対するリボース糖修飾の効果を比較する。

【図9】図９は、抗ＮａＶ１．７ ＡＳＯの効果を示す。

【図10】図１０は、抗ＮａＶ１．８ ＡＳＯの効果を示す。

【図11】図１１は、組み合わせ組成物による処置下での神経活性レベルを示す図である。

【図12】記載なし

【図13】記載なし

【図14】図１４は、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞におけるヒトＮａＶ１．７ ＡＳＯ試験の結果である

【図15】図１５は、ＩＣ５０結果を示す。

【図16】図１６は、発現に対する効果を示す。

【図17】図１７は、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ細胞におけるヒトＮａＶ１．８ ＡＳＯの結果である。

【図18】図１８は、ＡＳＯのＩＣ５０を示す。

【図19】図１９は、発現を示す。

【発明を実施するための形態】

【0021】

詳細な説明
図１は、疼痛を処置するための組成物１０１を示す。組成物１０１は、ｍＲＮＡ １１７またはプレ－ｍＲＮＡ中の標的セグメント１１５にハイブリダイズするオリゴヌクレオチド１０７を含む。ｍＲＮＡ １１７は、ナトリウムチャネルタンパク質をコードする。標的を含むｍＲＮＡ １１７のセグメント１１５は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つに少なくとも約７５％相補的である。ｍＲＮＡ １１７のセグメント１１５へのオリゴヌクレオチド１０７のハイブリダイゼーションは、ナトリウムチャネルタンパク質へのｍＲＮＡの翻訳を防止する。オリゴヌクレオチド１０７は、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９の１またはそれを超えるプレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、その発現をノックダウンし得る。好ましくは、オリゴヌクレオチド中の塩基の配列は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性を有する。特定の好ましい態様では、オリゴヌクレオチドの塩基の配列は、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性を有する。より好ましい態様では、オリゴヌクレオチドの塩基の配列は、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つと少なくとも８０％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性を有する。

【0022】

特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドの塩基配列は、配列番号１～１０１、１４２～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９０％同一であり、オリゴヌクレオチドは、ＮａＶ１．７ ｍＲＮＡまたはＮａＶ１．８ ｍＲＮＡのいずれかにハイブリダイズし、そのＲＮａｓｅ Ｈ切断を誘導することができる。

【0023】

オリゴヌクレオチド１０７がｍＲＮＡ １１７の標的セグメント１１５に対して実質的にまたは完全にアンチセンスであるので、オリゴヌクレオチド１０７はｍＲＮＡ １１７のセグメント１１５にハイブリダイズする。その意味で、組成物はアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を含む。組成物１０１は、ＡＳＯの化学構造および設計に基づいて、塩基対相補性で標的ＲＮＡに結合し、様々な効果を発揮するＡＳＯを含む。神経疾患の前臨床モデルおよびヒト臨床試験開発で一般的に使用される様々な機構を使用することができる。これらの機構には以下：ＲＮａｓｅ Ｈ酵素の動員によるＲＮＡ標的分解；エクソンを含むかまたは排除するための選択的スプライシング修飾、およびその標的へのｍｉＲＮＡ結合を阻害するためのｍｉＲＮＡ阻害が含まれる。

【0024】

本開示の好ましい実施形態は、電位依存性ナトリウムチャネル（ＮａＶチャネル）プレ－ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡにハイブリダイズし、ＲＮａｓｅ Ｈ酵素を動員するＡＳＯを含む。ＲＮａｓｅ Ｈ酵素は、ＮａＶチャネルＲＮＡを切断し、ＮａＶチャネルタンパク質の発現を下方制御する。したがって、本開示のオリゴヌクレオチド１０７は、疼痛治療の標的としてＮａＶチャネルに対処する。本開示は、臨床データおよび前臨床データが疼痛治療のための小分子ＮａＶ遮断薬の使用を支持するという洞察に基づいている。例えば、ＩＶリドカインおよびリドカインパッチは疼痛緩和効果を示しており、リドカインの標的の合成を遮断することが類似の効果をもたらし得ることを示唆している。実際、三環系および選択的セロトニン再取り込み阻害剤などの神経障害性疼痛に使用される多くの薬剤は、複数の作用機序を有するが、ＮａＶチャネルを遮断する能力を共有する。ナトリウムチャネルＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９は疼痛に関与している。これらのタンパク質は、疼痛表現型との遺伝的リンクを提供する。例えば、ＮａＶ１．７機能喪失は、疼痛に対する先天性不感受性に関連している（マウスモデルで再現される）。さらに、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８の機能獲得は両方とも過剰な疼痛障害に関連している。さらに、ＮａＶ１．９機能獲得は、疼痛に対する無関心を伴う神経障害に関連している。遺伝的洞察は、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８およびＮａＶ１．９を選択的に標的とするための理論的根拠を提供する。抗ＮａＶ ＡＳＯを含む組成物を対象に投与して、疼痛を処置または軽減することができる。抗ＮａＶ ＡＳＯは状態非依存性およびサブタイプ選択性であり得るので、抗ＮａＶ ＡＳＯはリドカインなどの他のアプローチよりも利点を提供することが見出され得る。

【0025】

したがって、本開示は、患者の疼痛を処置するための医薬を製造するためのアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の使用を提供する。当該使用において、ＡＳＯは、配列番号１～１４１のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、例えば９５％またはそれを超える同一性を有する。より好ましい実施形態では、ＡＳＯは、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、例えば９５％またはそれを超える同一性を有する。さらにより好ましい実施形態では、ＡＳＯは、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、例えば９５％またはそれを超える同一性を有する。

【0026】

好ましい実施形態は、約１５～２５塩基長、好ましくは約１８～２２塩基長（両端を含む）のＡＳＯを使用する。一般に、「ＡＳＯ」への言及は、実質的に同一の分子の多数のコピーを含む。したがって、「ＡＳＯ」は、定義されたＡＳＯの数十万または数百万を超えるコピーであり得る。好ましい実施形態では、ＡＳＯは、２０塩基長であり、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つの配列を有し、疼痛の処置のための医薬の製造に使用される。より好ましい実施形態では、ＡＯは２０塩基長であり、配列番号１６６～３９０のうちの１つの配列を有し、さらにより好ましい実施形態では、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７および１６６～１７７のうちの１つの配列を有する。

【0027】

ＡＳＯは、任意の適切なフォーマットで提供されてもよく、例えば、微量遠心管または試験管などの管内または管内の溶液中で凍結乾燥されてもよい。使用の好ましい実施形態は、ＮａＶ１．７および／またはＮａＶ１．８を標的とする。１またはそれを超える（例えば、２、３、４、もしくは５またはそれを超える）ＡＳＯを医薬の製造に使用することができる。１またはそれを超えるＡＳＯは、ＮａＶ１．７またはＮａＶ１．８ ｍＲＮＡ中の標的にハイブリダイズし得る。使用の特定の実施形態では、ＡＳＯ中の塩基の配列は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９０％同一である。使用の好ましい実施形態では、ＡＳＯ中の塩基の配列は、配列番号１６６～３９０のうちの１つと、さらにより好ましい実施形態では、配列番号１１、２７、８２、８５、１４５、１５７、および１６６～１７７のうちの１つと少なくとも９０％同一である。

【0028】

使用の実施形態では、ＡＳＯは、ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメント、例えば中央領域の両側に５個の修飾ＲＮＡ塩基を有する１０個のＤＮＡ塩基の中央領域を有するギャップマー構造を有し得る。各修飾ＲＮＡ塩基は、２’－ＭＯＥ ＲＮＡ、２’－Ｏ－Ｍｅ ＲＮＡ、または他の適切な糖であり得る。好ましくは、ＡＳＯの骨格は、複数のホスホロチオエート結合を排他的に有するか、またはホスホジエステル結合も含み、例えば、使用実施形態では、糖結合の大部分またはすべてがホスホロチオエートであってもよい。医薬は、髄腔内（ＩＴ）送達のために製剤化され得る。したがって、ＡＳＯは、最初は髄腔内ポンプへの導入に適した製剤への混合に適した形態であり得る。例えば、ＡＳＯ（１つのＡＳＯの数千または数百万またはそれを超えるコピー）は、既知のモル濃度でチューブまたは溶液中で凍結乾燥され得る。ＡＳＯは、溶媒または賦形剤などの担体がＡＳＯを含む薬学的に許容され得る組成物に溶解または希釈されてもよく、ＩＶバッグ、シリンジ、または髄腔内ポンプに装填されてもよい。医薬は、２またはそれを超えるＡＳＯ、例えば２、３、４、若しくは５、またはそれを超える任意の組み合わせを使用して作製され得る。

【0029】

使用実施形態に記載された任意のＡＳＯは、本開示の組成物に含まれてもよい。本開示の組成物の好ましい実施形態は、それぞれが配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８０％同一の塩基配列を有する１つまたは複数の治療用オリゴヌクレオチドを含み、治療用オリゴヌクレオチドのそれぞれは、修飾ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマー構造を有し、複数の治療用オリゴヌクレオチドは、髄腔内注射用に製剤化された溶液または担体中に提供される。より好ましい実施形態では、配列は、配列番号１６６～３９０のうちの１つと少なくとも８０％同一である。

【0030】

図２は、ギャップマー構造を有するオリゴヌクレオチド２０７を示す。オリゴヌクレオチド２０７は、約１０個のＤＮＡ塩基の中央領域２２１に隣接する二つのウィング（第１のウィング２１５および第２のウィング２１６）を含む。好ましい実施形態では、ウィング２１５、２１６は、すべてまたは主にＲＮＡ塩基であり、中央領域２２１は、すべてまたは主にＤＮＡ塩基である。好ましくは、ウィングはすべてＲＮＡ塩基（修飾または非修飾）であり、中央領域はすべてＤＮＡ塩基である。いくつかの実施形態では、各ウィングは、５個のＲＮＡ塩基からなり、その全部または大部分は修飾ＲＮＡ塩基であり、例えば、各修飾ＲＮＡ塩基は、２’－Ｏ－メトキシエチルＲＮＡおよび２’－Ｏ－メチルＲＮＡからなる群から選択される。修飾ＲＮＡ塩基は、リボース糖のＴヒドロキシル基上の置換を含み得る。

【0031】

図３は、ＲＮＡ塩基に含まれ得る２’－Ｏ－メトキシエチル（「２’－ＭＯＥ」）修飾された糖を示す。

【0032】

オリゴヌクレオチド２０７は、好ましくは少なくとも約１５塩基を含み、約１５～約２５塩基を含み得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド２０７は、複数のホスホロチオエート結合を含む骨格を有する。

【0033】

図４は、オリゴヌクレオチド２０７の中央領域２２１などのＤＮＡのセグメントの骨格内のホスホロチオエート結合５０５を示す。オリゴヌクレオチド２０７は、１または任意の数のホスホロチオエート結合５０５を含み得る。例えば、オリゴヌクレオチド２０７内の全ての骨格結合は、ホスホロチオエートであってもよく、または大部分、または約半分であってもよい。

【0034】

組成物１０１は、送達のために製剤化され得る。したがって、オリゴヌクレオチド１０７は、最初は、シリンジ、バッグ、または注入ポンプへの導入に適した製剤への混合に適した形態であり得る。例えば、オリゴヌクレオチド１０７（１つのオリゴヌクレオチド１０７の数千または数百万またはそれを超えるコピー）は、既知のモル濃度でチューブまたは溶液中で凍結乾燥され得る。オリゴヌクレオチド１０７は、溶媒または賦形剤などの担体がオリゴヌクレオチド１０７を含む薬学的に許容され得る組成物に溶解または希釈されてもよく、ＩＶバッグ、シリンジ、または髄腔内ポンプに装填されてもよい。記載されるように、組成物１０１は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つとの比較によって定義される配列を有する少なくとも１つのオリゴヌクレオチド１０７を含む。より好ましい組成物は、配列番号１６６～３９０のうちの１つとの比較によって定義される配列を有する少なくとも１つのオリゴヌクレオチド１０７を含む。したがって、本開示の組成物は、同定された標的によって定義および例示される。

【0035】

具体的には、オリゴヌクレオチド１０７は、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つに少なくとも約７５％相補的なｍＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズし、それによってｍＲＮＡのナトリウムチャネルタンパク質への翻訳を防止する。これは、オリゴヌクレオチドが配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも約７５％の同一性、好ましくは少なくとも約９０％または９５％の同一性を有する場合に達成される。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つの配列を有するが、当業者は、相補的な標的に対して９０個または好ましくは９５％の同一性を有するオリゴヌクレオチドが依然として標的に配列特異的な様式でハイブリダイズする傾向があるだろうことを理解するであろう。二本鎖構造を形成することは、ワトソン－クリック型塩基対形成および塩基スタッキングによって十分にエネルギー的に有利であり、二本鎖構造は、およそ１０個ごとに約１個のミスマッチ塩基対を許容することができる。したがって、ＤＲＧニューロンにおける中程度にストリンジェントな生理学的条件下では、特にオリゴヌクレオチドを酵素分解から保護するためにオリゴヌクレオチドが少なくとも数個の修飾ＲＮＡ塩基またはホスホロチオエート骨格結合を有するギャップマー構造を有する場合、９５％の同一性が有効であるはずである。

【0036】

実際、本開示の組成物の特徴および利点は、ナトリウムチャネル転写物以外の分子中に補体が存在する配列を除外するために標的（配列番号１～１６４および１６６～３９０）がスクリーニングされていることである。例えば、長い非コードＲＮＡ（ＩｎｃＲＮＡ）を含むＲＮＡ転写物のデータベースに対して配列をスクリーニングし、非標的配列とマッチする初期配列を除外した。したがって、患者に投与した場合の配列番号１～１６４および１６６～３９０の配列を有するＡＳＯは、非標的配列にハイブリダイズする可能性を最小限に抑えるべきである。したがって、好ましい実施形態では、オリゴヌクレオチド１０７は、スクリーニングされ、ヒトにおける任意のオフターゲットコードまたは長い非コードＲＮＡについての閾値マッチを満たさないと決定された塩基配列を有する。上記の基準を満たす組成物または使用は、含まれる配列がＩｎｃＲＮＡのデータベースに対してスクリーニングされているので、インビボでＩｎｃＲＮＡなどのオフターゲット物質に結合すべきではない。本開示の配列は、標的特異性についてスクリーニングされている。好ましくは、オリゴヌクレオチド１０７は、ヒトまたは非ヒト霊長類ゲノム中の相同セグメントとのミスマッチがゼロであり、げっ歯類ゲノム中の相同セグメント中のミスマッチが約５以下である塩基配列を有する。

【0037】

組成物がインビトロで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに送達される場合、ＤＲＧは、ＮａＶ１．７、ＮａＶ１．８またはＮａＶ１．９の用量依存的ノックダウンを示す。

【0038】

図５は、本開示の実施形態に従って設計された１７の異なるＡＳＯ（それぞれ３つの濃度）によるラットにおけるＮａＶ１．７のノックダウンのためのｑＰＣＲアッセイの結果を示す（ＡＳＯを介した２’－Ｏ修飾ＲＮＡおよびホスホロチオエート結合を有するＲＮＡウィングに隣接する２０塩基、１０塩基のＤＮＡ中央領域）。図の下部に沿って、「開始位置」、すなわちラットＳＣＮ９Ａ ｍＲＮＡ内の位置が示されている。最も右側の３つのバーは、対照のみを投与した場合の発現レベルを示す。１７個全てのＡＳＯは、少なくとも最高濃度で、対照と比較してＮａＶ１．７発現を減少させた。位置１２９４から始まる２０塩基標的に特異的なＡＳＯについて、最も強いノックダウンが示された。グラフは、ＧＡＰＤＨに対して正規化された発現レベルで、ｇｙｍｎｏｔｉｃ送達を使用してＤＩＶ８に適用された１７個のＡＳＯ、３つの濃度の結果を示す。グラフは、本開示の組成物１０１がＮａＶ１．７の用量依存的ノックダウンを示すことを示す。

【0039】

核酸ハイブリダイゼーションは、ミスマッチに対するいくらかの許容性を有するので、オリゴヌクレオチド１０７は、ホスホロチオエート結合によってのみ連結された塩基を有し、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つと少なくとも９０％のマッチである塩基配列を有し、オリゴヌクレオチド１０７は、５’ウィングおよび３’ウィング（例えば、５’ウィングおよび３’ウィングがそれぞれ、１０個のＤＮＡ塩基に隣接する５個の連続した２’修飾ＲＮＡ塩基を含む５－１０－５構造、または４－１２－４構造、または類似のもの）に隣接するＤＮＡ塩基の中央セグメントを有するか、またはチャートに示されるパターンに従って用量依存的ノックダウンを示すことが見出され得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド１０７は、具体的には、配列番号１～１６４および１６６～３９０（より好ましくは、配列番号１６６～３９０のうちの１つ）のうちの１つとマッチする塩基配列を有し、ホスホロチオエート結合によって連結された塩基を有し（必要に応じてウィング中にいくつかのホスホジエステル結合を有し）、オリゴヌクレオチド１０７は、５’ウィングおよび３’ウィングに隣接した中央の１０個のＤＮＡ塩基を有し、５’ウィングおよび３’ウィングはそれぞれ、５個の連続する２’ＭＯＥ ＲＮＡ塩基を含む。

【0040】

図６は、対照と比較したラットＤＲＧニューロンにおけるＤＩＶ１４でのｍＲＮＡ発現に対するＮａＶ１．７標的化ＡＳＯの効果を示す。本開示の組成物１０１は、髄腔内投与のために製剤化された担体中に、先行する請求項のいずれか一項に記載の複数の異なる治療用ギャップマーの複数のコピーを含み得ることに留意されたい。好ましくは、いずれかの１またはそれを超えるオリゴヌクレオチド１０７は、インビトロでＤＲＧを使用するアッセイにおいて、対照ギャップマーよりも少なくとも２５％良好なＮａＶノックダウンを示し、候補オリゴヌクレオチドと対照は、大部分がまたはホスホロチオエート結合のみによって連結され、２’－ＭＯＥ ＲＮＡ塩基の５’ウィングおよび２’－ＭＯＥ ＲＮＡ塩基の３’ウィングに隣接するＤＮＡ塩基の中央セグメントを含む。

【0041】

これらの組成物はナトリウムチャネルの発現をノックダウンするのに有効であるので、本開示の組成物は、重度の難治性疼痛を経験する患者集団を処置するために使用され得る。本開示の方法は、それを必要とする患者に本開示の任意の組成物を投与し、それにより癌性疼痛（例えば、転移性骨癌に由来する）もしくは神経障害性疼痛（例えば、機能獲得型ＮａＶ変異に関連する小線維性神経障害）または他の集団を処置するかまたは緩和することを含む。本開示の方法は、任意のＮａＶチャネルを一次標的として標的化するために使用され得、二次標的のためのオリゴをさらに含み得る。例えば、一次標的はＮａＶ１．７（１またはそれを超える配列番号１～５３、１６６～１７１および１７８～１９１と実質的な同一性を有するオリゴを有する）であり得、二次標的はＮａＶ１．８および／またはＮａＶ１．９（それぞれ１またはそれを超える配列番号５４～１０１、１７２～１７７、および１９２～２００および／または配列番号１０２～１４１と実質的な同一性を有するオリゴを有する）であり得る。

【0042】

図７は、ラットＤＲＧでｑＰＣＲによって試験したラットＮａＶ標的ＡＳＯの選択性を示す。上のパネルは、ＮａＶ１．７に特異的なＡＳＯの送達のｍＲＮＡレベルに対する効果を示す。中央のパネルは、ＮａＶ１．８に特異的なＡＳＯを送達する効果を示す。底部パネルはＮａＶ１．９用である。全てのパネルにおいて、バーの４番目の三つ組は、４５０ｎＭカクテルＡＳＯ（１５０ｎＭ ＮａＶ１．７ ＡＳＯ＋１５０ｎＭ ＮａＶ１．８ ＡＳＯ＋１５０ｎＭ ＮａＶ１．９ ＡＳＯ）を送達するための結果を与える。各パネルにおいて、非標的ＮａＶチャネルはＡＳＯによってノックダウンされなかった（ＮａＶ１．７ ＡＳＯは、ＮａＶ１．８またはＮａＶ１．９などの発現をノックダウンせず、標的選択性を示した）。３つのオリゴヌクレオチド１０７のカクテルは、３つの標的すべてをノックダウンすることが示されている。

【0043】

図８は、本開示のオリゴヌクレオチド１０７内のリボース糖修飾の効果を比較する。ヒトＳＣＮ９Ａ遺伝子の位置１２９４から始まる２０塩基とマッチする２０塩基配列を有するオリゴヌクレオチド１０７（配列番号６）を、２’－Ｏ－メチル－（ＯＭｅ）リボース糖修飾を有する形態および２’－Ｏ－メトキシエチル－（ＭＯＥ）リボース糖修飾を有する形態で試験した。配列番号１６５の対照オリゴに対して類似の試験を行った。本開示のオリゴヌクレオチドは対照よりも優れており、また示されるように、ＭＯＥ修飾はＯＭｅ修飾よりも優れている（標的相対発現のより大きな阻害を示す）ことが見出された。したがって、本開示のオリゴヌクレオチドがＲＮＡリボース糖に１またはそれを超える２’－Ｏ－メトキシエチル（ＭＯＥ）修飾を含むことが好ましい場合がある。例えば、ＡＳＯは、それぞれ約５個のＲＮＡ塩基の５’および３’ウィングを有し得、それらのウィングでは、ほとんどまたはすべてのリボース糖がＴ ＭＯＥであり得る。

【0044】

ＮａＶ１．７とＮａＶ１．８のＡＳＯの組み合わせ効果をインビトロでラットＤＲＧニューロンで試験した。

【0045】

インビトロでのニューロンには、光刺激下で神経活性化を提供する光遺伝学的構築物（例えば、光に応答してニューロンを興奮させる改変藻類チャネルロドプシン）および神経活性の光学的レポーター（ニューロン膜電圧に比例して光を放出し、ニューロン活性のシグナルを生じる修飾されたアルケロドプシン）が含まれた。インビトロでのニューロンを蛍光顕微鏡装置でアッセイし、インビボでの疼痛の経験と類似の方法でＤＲＧニューロンを興奮させる刺激物質として働く疼痛メディエーター組成物（例えば、シミュレートされた「癌疼痛スープ」）で処理した。任意の適切な光遺伝学的構築物、光遺伝学的顕微鏡、または疼痛メディエーター組成物が使用され得る。例えば、適切な光遺伝学的構築物には、参照により組み込まれる、米国特許第９，５９４，０７５号に記載されているものが含まれる。適切な光遺伝学的顕微鏡には、参照により組み込まれる、米国特許第１０，２８８，８６３号に記載されているものが含まれる。適切な疼痛メディエーター組成物には、参照により組み込まれる、国際公開第２０１８／１６５５７７号に記載されているものが含まれる。

【0046】

インビトロでのＤＲＧアッセイは、増加する光刺激下で、光遺伝学的神経試料のみからの光を測定することを含む。これにより、神経興奮性のベースラインが得られる。次いで、神経試料を刺激物質、ここではサイトカイン、プロテアーゼ、ｐＨ、壊死因子、または有痛性腫瘍の部位でインビボで見られ得る他の因子の混合物を含む疼痛メディエーター組成物で刺激する。その刺激物質で処理している神経試料から光を測定する。最後に、神経試料を本開示の組成物で処理する。刺激物質が測定された興奮性を測定されたベースラインから遠ざける場合、オリゴヌクレオチド１０７は、測定された興奮性をベースラインに向かって回復させる傾向があると仮定される。ＮａＶ １．７およびＮａＶ １．８は、異なる（重複するが）神経活性条件下でそれらの効果を示すことがさらに予想される。結果は、抗ＮａＶ１．７および抗ＮａＶ１．８ ＡＳＯを組み合わせて、個々のＮａＶ １．７またはＮａＶ １．８ ＡＳＯと比較して、より多くの量およびより広い範囲の入力刺激レベルにわたって、有痛性刺激物質に対する神経応答を緩和することを示す。

【0047】

図９は、ベースライン、刺激物質による処置下、および刺激物質および抗ＮａＶ１．７ ＡＳＯによる処置下での青色光刺激の増加勾配に応答した神経活性の測定レベルを示す。予想されるように、ＮａＶ１．７ ＡＳＯは、刺激物質に応答して示される神経興奮性を減少させる。

【0048】

図１０は、ベースライン、刺激物質による処置下、および刺激物質および抗ＮａＶ１．８ ＡＳＯによる処置下での青色光刺激の増加勾配に応答した神経活性の測定レベルを示す。予想されるように、ＮａＶ１．８ ＡＳＯは、入力刺激力の異なる領域ではあるが、刺激物質に応答して示される神経興奮性を減少させる。

【0049】

図１１は、ベースライン、刺激物質での処置下、および刺激物質と抗ＮａＶ１．７ ＡＳＯおよび抗ＮａＶ１．８ ＡＳＯを含む組成物での処置下での青色光刺激の増加勾配に応答した神経活性の測定レベルを示す。オリゴの組み合わせの正味の疼痛軽減効果は、いずれかのオリゴ単独よりも良好である。ＤＲＧニューロンの活性レベルは、入力刺激の全範囲にわたって有意に低い。様々な有痛性症状を経験している生きている対象は、異なるＮａＶチャネルを標的とする異なるオリゴを含む組成物を投与することによって、鎮痛効果のより大きな範囲および効力によって利益を得ることが見出され得る。

【0050】

本開示の方法および組成物は、疼痛に罹患している患者のインビボで後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンに本明細書に記載の治療用オリゴヌクレオチド１０７を送達するために有益に使用され得る。例えば、全身送達（例えば、注射によって）または局所送達（例えば、皮下注射または徐放装置の埋め込みによって）を含む任意の適切な送達アプローチが使用され得る。いくつかの実施形態では、本開示の組成物１０１は、髄腔内注射によって送達される。本開示の方法は、約数ヶ月毎、例えば約３回または４回／年の髄腔内注射によって本開示の組成物を送達することを含み得る。

【0051】

髄腔内注射は、脳脊髄液（ＣＳＦ）に到達し、脊髄麻酔、化学療法、または疼痛管理用途に有用であるように、脊柱管内またはくも膜下腔内への注射を介した薬物の投与経路を指す。髄腔内送達は、組成物が血液脳関門によって停止されるのを回避する。好ましくは、組成物１０１は、標準的な注射用薬物調製物に時折見られる防腐剤または他の潜在的に有害な不活性成分を含有しないように、そのような製剤に配合される。組成物１０１は、髄腔内ポンプで提供されてもよく、または髄腔内ポンプを介した送達のための診療所での再構成に適した製剤で提供されてもよい。例えば、組成物１０１は、規定の濃度で溶液中（例えば、生理食塩水中）にあってもよい。技術者は、濃度を診療所で適切な希釈剤と混合して送達することができる。他の実施形態では、ＡＳＯは、凍結乾燥されるか、そうでなければ乾燥固体形態で保存され、再懸濁され、診療所で適切に希釈される。髄腔内送達は、ＰＫ、代謝、末梢オン／オフ標的効果に関する懸念を軽減する。髄腔内投与アプローチは、ジコヌクレオチドなどの他の薬物およびヌシネルセンなどのＡＳＯとの臨床使用について検証されている。そのような方法は、本開示の組成物１０１を神経系に直接送達するために使用され得る。

【0052】

組成物１０１中のギャップマー、ＡＳＯ、または治療用オリゴヌクレオチド１０７などの本開示のオリゴヌクレオチドは、表１に示される配列のうちの１つを参照して定義される配列を有し得る。例えば、本開示のオリゴヌクレオチドは、表１に示す配列番号１～１４１のうちの１つと少なくとも約７５％、８０％、９０％、９５％、または完全に同一の配列を有し得る。ＳＣＮ９Ａに対する最も好ましい実施形態には、以下のようにラベル付けされた表１の実施形態が含まれる。「４／１１」（配列番号１１）；「４／３４」（配列番号２７）；「４／７２」（配列番号１６６）；「４／７７」（配列番号１６７）；「４／８４」（配列番号１６８）；「４／８６」（配列番号１６９）；「４／９１」（配列番号１７０）；および「４／９５」（配列番号１７１）。ＳＣＮ９Ａに対するさらなる好ましい実施形態には、以下のようにラベル付けされた表１のものが含まれる。「４／６」（配列番号６）；および「４／１０」（配列番号１０）。好ましい候補は、用量依存的様式でＮａＶ１．７の強く有意なノックダウン活性（＞７５％）を示す。

【0053】

ＳＣＮ１０Ａに対する最も好ましい実施形態には、以下のようにラベル付けされた表１の実施形態が含まれる。「５／６２」（配列番号１７２）；「５／６５」（配列番号１７３）；「５／８１」（配列番号１７４）；「５／８４」（配列番号１７５）；「５／８８」（配列番号１７６）；および「５／１０８」（配列番号１７７）。ＳＣＮ１０Ａに対するさらなる好ましい実施形態には、以下のようにラベル付けされた表１のものが含まれる。「５／８」（配列番号６１）；「５／１８」（配列番号７１）；「５／２０」（配列番号７３）。これらの好ましい候補は、用量依存的様式でＮａＶ１．８の強く有意なノックダウン活性（＞６５％）を示す。

【0054】

ＳＣＮ１０ＡおよびＳＣＮ９Ａの両方に対する最も好ましい実施形態には、以下のようにラベル付けされた表１のものが含まれる。「４／６４」（配列番号１４５）および「５／５３」（配列番号１５７）。これらの好ましい実施形態は、Ｎａｖ１．７およびＮａｖ１．８の強いノックダウン活性を用量依存的様式で示す。

【0055】

ＳＣＮ１１Ａに対する最も好ましい実施形態には、以下のようにラベル付けされた表１のものが含まれる。「６／１」（配列番号１０２）；「６／３」（配列番号１０４）；および「６／６」（配列番号１０７）。これらの３つの候補は、用量依存的様式でＮａＶ１．９の強く有意なノックダウン活性（＞７０％）を示す。

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【表1-5】

【表1-6】

【表1-7】

【表1-8】

【表1-9】

【表1-10】

【表1-11】

【表1-12】

【表1-13】

【表1-14】

【0056】

上で論じられたように、ベースライン、刺激物質による処置下、および刺激物質ならびに抗ＮａＶ１．７ ＡＳＯおよび抗ＮａＶ１．８ ＡＳＯを含む組成物による処置下での神経活性の測定レベルは、オリゴの組み合わせがオリゴ単独よりも良好に機能することを示す。本明細書に開示されるように、ＳＣＮ９Ａ（別名ＮａＶ１．７）に対する最も好ましい実施形態は、配列番号１１、配列番号２７、および配列番号１６６～１７１のうちの１つを有するものを含む。ＳＣＮ９Ａに対する他の好ましい実施形態には、配列番号６および配列番号１０のうちの１つを有するものが含まれる。ＳＣＮ１０Ａ（別名ＮａＶ１．８）に対する最も好ましい実施形態は、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１７６、および配列番号１７７のうちの１つを有するものを含む。ＳＣＮ１０Ａに対する他の好ましい実施形態としては、配列番号６１、配列番号７１、および配列番号７３のうちの１つを有するものを含む。

【0057】

したがって、本開示の最も好ましい組み合わせの実施形態は、疼痛を処置するための組成物を含む。組成物は、配列番号６；および配列番号１０またはより好ましくは配列番号２７；および配列番号１６６～１７１のうちの１つに少なくとも約９０％相補的なｍＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズする第１のオリゴヌクレオチド、ならびに配列番号６１；配列番号７１；および配列番号７３またはより好ましくは、配列番号１７２；配列番号１７３；配列番号１７４；配列番号１７５；配列番号１７６；および配列番号１７７のうちの１つに少なくとも約９０％相補的なｍＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質をコードするｍＲＮＡにハイブリダイズする第２のオリゴヌクレオチドを含む。好ましい組み合わせの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドのそれぞれは、修飾ＲＮＡウィングに隣接した中央ＤＮＡセグメントを含むギャップマー構造を有し得る。

【0058】

ウィングのいずれかまたは両方は、修飾されたＲＮＡ塩基を含み得、例えば、両方のウィングは、２’－Ｏ－メトキシエチルリボース修飾を有する５個の連続したＲＮＡ塩基を含み得る。各オリゴヌクレオチドの全体は、当業者には明らかであるように、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合などを介して連結されていてもよい。好ましくは、複数の治療用オリゴヌクレオチドは、髄腔内注射のために診療所で希釈または再構成するために、凍結乾燥または溶液で提供される。すなわち、凍結乾燥されたまたは溶液中の１またはそれを超えるチューブに包装されたものは、少なくとも数千～数百万コピーの第１のオリゴヌクレオチドおよび少なくとも数千～数百万コピーの第２のオリゴヌクレオチドである。図１１によって実証されるような効果を示すように、組成物のこの好ましい組み合わせの実施形態は、疼痛の処置のための非オピオイド治療薬として予想外の利益を有することが証明され得る。

【0059】

他の特徴および実施形態は、本開示の範囲内である。本開示の実施形態は、ＮａＶ１．７および／またはＮａＶ１．８を発現している細胞においてＮａＶ１．７またはＮａＶ１．８の発現を阻害することができる、ＳＣＮ９ＡまたはＳＣＮ１０Ａを標的とするロックド核酸（ｌｏｃｋｅｄ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＬＮＡ）アンチセンスオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含む。本発明のオリゴヌクレオチドは、疼痛の防止または処置に使用され得る。本発明はさらに、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのヒトＮａＶ１．７のオリゴヌクレオチド阻害剤またはｓｉＲＮＡもしくはｓｈＲＮＡなどのＲＮＡｉ剤によって標的化され得るヒトＮａＶ１．７プレｍＲＮＡ上の有利な標的部位配列を提供する。

【0060】

本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、ヒトＮａＶ１．７標的核酸およびヒトＮａＶ１．８標的核酸に対して少なくとも９０％の相補性、例えば１００％の相補性を有し、細胞内のＮａＶ１．７またはＮａＶ１．８の両方の発現を阻害することができる、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。オリゴヌクレオチド１０７は、配列番号１～１０１、１４２～１６４および１６６～３９０のうちの１つと１００％同一であり得るか、または少なくとも９０％同一である。

【0061】

実施形態は、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチドの薬学的に許容され得る塩または本発明によるコンジュゲートを含む。

【0062】

本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートと、薬学的に許容され得る希釈剤、溶媒、担体、塩および／またはアジュバントと、を含む医薬組成物を提供する。

【0063】

本発明は、医薬に使用するための本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートまたは本発明の医薬の塩もしくは組成物を提供する。

【0064】

本発明は、疼痛の処置または防止または緩和に使用するための本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートまたは本発明の医薬の塩もしくは組成物を提供する。本発明は、疼痛を処置、防止または緩和するための医薬を調製するための、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは本発明のコンジュゲートまたは本発明の医薬の塩もしくは組成物の使用を提供する。

【0065】

いくつかの実施形態では、疼痛は、慢性疼痛、神経因性疼痛、炎症性疼痛、自発性疼痛、または侵害受容性疼痛である。

【0066】

オリゴヌクレオチドは、一般に、固相化学合成とそれに続く精製および単離によって実験室で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合、共有結合したヌクレオチドまたはヌクレオシドの核酸塩基部分またはその修飾の配列または順序が参照される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工のもの、すなわち化学的に合成されたものであってもよく、典型的には精製または単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、１またはそれを超える修飾ヌクレオシドまたはヌクレオチド、例えば２’糖修飾ヌクレオシドを含み得る。

【0067】

修飾ヌクレオチドは、独立して、デオキシ－ヌクレオチド、３’末端デオキシ－チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、ロック解除ヌクレオチド、配座制限ヌクレオチド、拘束エチルヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾ヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル修飾ヌクレオチド、２’－ヒドロキシル修飾ヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、ヌクレオチドを含む非天然塩基、１，５－アンヒドロヘキシトール修飾ヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾ヌクレオチド、ホスホロチオエート基を含むヌクレオチド、メチルホスホネート基を含むヌクレオチド、５’－ホスフェートを含むヌクレオチド、５’－ホスフェート模倣物を含むヌクレオチド、グリコール修飾ヌクレオチド、および２’－Ｏ－（Ｎ－メチルアセトアミド）修飾ヌクレオチド、ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択されてもよい。

【0068】

ＡＳＯの窒素塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチンおよびヒポキサンチンなどの天然に生じる核酸塩基、ならびに置換プリンまたは置換ピリミジンなどの非天然変異体、例えばイソシトシン、プソイドイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロシトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル、５－チアゾロウラシル、２－チオ－ウラシル、２’チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリンおよび２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基であり得る。

【0069】

核酸塩基部分は、各対応する核酸塩基、例えばＡ、Ｔ、Ｇ、ＣまたはＵの文字コードによって示され得、各文字は、同等の機能の修飾核酸塩基を必要に応じて含み得る。例えば、例示されるオリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃおよび５－メチルシトシンから選択される。必要に応じて、ＬＮＡギャップマーの場合、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドを使用してもよい。

【0070】

本開示のオリゴヌクレオチド１０７は、ナトリウムチャネル（ＮａＶ１．７、１．８または１．９）の発現を下方制御する（阻害する）ことができる。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的の発現を阻害または下方制御することによって、標的の発現を調節することができる。好ましくは、そのような調節は、標的の正常発現レベルと比較して少なくとも２０％の発現の阻害、より好ましくは標的の正常発現レベルと比較して少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％の阻害をもたらす。

【0071】

本開示のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）は、例えばプレ－ｍＲＮＡのスプライシングの調節を介して、標的核酸（例えば、ＲＮａｓｅ Ｈ切断を介して）のレベルを低下させ得るか、または標的核酸の機能性を低下させ得る（または機能性を変化させ得る。

【0072】

本開示のオリゴヌクレオチド１０７は、修飾された糖部分、すなわち、ＤＮＡおよびＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較した場合の糖部分の修飾を有する１またはそれを超えるヌクレオシドを含み得る。主に、親和性および／またはヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドの特定の特性を改善する目的で、リボース糖部分を修飾した多数のヌクレオシドが作製されている。そのような修飾には、リボース環構造が、例えば、リボース環（ＨＮＡ）、または典型的にはリボース環（ＬＮＡ）上のＣ２炭素とＣ４炭素との間に架橋を有する二環式環、または典型的にはＣ２炭素とＣ３炭素との間の結合を欠く非連結リボース環（例えば、ＵＮＡ）での置換によって修飾されるものが含まれる。修飾ヌクレオシドには、例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）またはモルホリノ核酸の場合、糖部分が非糖部分で置き換えられているヌクレオシドも含まれる。

【0073】

糖修飾には、リボース環上の置換基を水素以外の基、またはＤＮＡおよびＲＮＡヌクレオシドに天然に見られる２’－ＯＨ基に変更することによって行われる修飾も含まれる。置換基は、例えば、２’、３’、４’または５’位に導入され得る。

【0074】

オリゴヌクレオチドは、１またはそれを超えるロックド核酸（ＬＮＡ）塩基を含み得る。ＬＮＡは、リボース環の配座を制限またはロックする、前記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを連結するビラジカルを含む２’修飾ヌクレオシド「２’－４’ブリッジ」を含み得る。これらのヌクレオシドは、文献では架橋核酸または二環式核酸（ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ、ＢＮＡ）とも呼ばれる。ＬＮＡが相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ分子のためのオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、リボースの立体配座の固定は、ハイブリダイゼーションの増強された親和性（二重鎖安定化）に関連する。これは、オリゴヌクレオチド／補体二重鎖の融解温度を測定することによって日常的に決定することができる。非限定的で例示的なＬＮＡヌクレオシドは、国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開第００／６６６０４号、国際公開第９８／０３９３５２号、国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第００／０４７５９９号、国際公開第２００７／１３４１８１号、国際公開第２０１０／０７７５７８号、国際公開第２０１０／０３６６９８号、国際公開第２００７／０９００７１号、国際公開第２００９／００６４７８号、国際公開第２０１１／１５６２０２号、国際公開第２００８／１５４４０１号、国際公開第２００９／０６７６４７号および国際公開第２００８／１５０７２９号に開示されており、これらはすべて参照により組み込まれる。

【0075】

本開示のオリゴヌクレオチドの薬学的に許容され得る塩には、遊離塩基または遊離酸の生物学的有効性および特性を保持し、生物学的にまたは他の点で望ましくないものではない塩が含まれる。塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、特に塩酸などの無機酸、および酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、スルホン酸、またはサリチル酸などの有機酸で形成される。さらに、これらの塩は、遊離酸への無機塩基または有機塩基の添加から調製され得る。無機塩基から誘導される塩には、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩が含まれるが、これらに限定されない。有機塩基から誘導される塩としては、限定されないが、第一級、第二級および第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂の塩が挙げられる。

【0076】

オリゴヌクレオチド１０７は、ナトリウムチャネルプレｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ転写物のヌクレアーゼ媒介分解を媒介または促進し得る。ヌクレアーゼ媒介分解は、そのような配列と二重鎖を形成するときに相補的なヌクレオチド配列の分解を媒介することができるオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸のヌクレアーゼ媒介分解を介して機能することができ、本発明のオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼ、好ましくはＲＮａｓｅ Ｈなどのエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）を動員することができる。ヌクレアーゼ媒介機構を介して作用するオリゴヌクレオチド設計の例は、典型的には少なくとも５個または６個の連続するＤＮＡヌクレオシドの領域を含み、親和性増強ヌクレオシド、例えばギャップマーによって片側または両側に隣接するオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチド１０７のＲＮａｓｅ Ｈ活性とは、相補的ＲＮＡ分子との二重鎖にあるときにＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力を指す。

【0077】

本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド１０７またはその連続するヌクレオチド配列は、ギャップマーオリゴヌクレオチドまたはギャップマー設計とも呼ばれるギャップマーであり得る。アンチセンスギャップマーは、一般に、ＲＮａｓｅ Ｈ媒介分解を介して標的核酸を阻害するために使用される。ギャップマーオリゴヌクレオチドは、「５→３」配向の少なくとも３つの異なる構造領域、５’－フランク、ギャップおよび３’－フランク、Ｆ－Ｇ－Ｆを含む。「隙間」領域（Ｇ）は、オリゴヌクレオチドがＲＮａｓｅ Ｈを動員することを可能にする一続きの連続するＤＮＡヌクレオチドを含む。ギャップ領域は、１またはそれを超える糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む５’隣接領域（Ｆ）と、１またはそれを超える糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む３’隣接領域（Ｆ’）とに隣接している。領域ＦおよびＦ’における１またはそれを超える糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に対するオリゴヌクレオチドの親和性を高める（すなわち、親和性増強糖修飾ヌクレオシドである）。いくつかの実施形態では、領域ＦおよびＦ’における１またはそれを超える糖修飾ヌクレオシドは、２’糖修飾ヌクレオシド、例えば高親和性２’糖修飾、例えばＬＮＡおよび２’－ＭＯＥから独立して選択されるものである。

【0078】

混合ウィングギャップマーは、領域ＦおよびＦ’の一方または両方が２’置換ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ単位、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ単位、ＭＯＥ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位、２’－フルオロ－ＡＮＡ単位、またはそれらの組み合わせからなる群から独立して選択される２’置換ヌクレオシドを含むＬＮＡギャップマーである。領域ＦおよびＦ’の少なくとも１つ、または領域ＦおよびＦ’の両方が少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドを含むいくつかの実施形態では、領域ＦおよびＦ’の残りのヌクレオシドは、２’－ＭＯＥおよびＬＮＡからなる群から独立して選択される。領域ＦおよびＦ’の少なくとも１つ、または領域ＦおよびＦ’の両方が少なくとも２つのＬＮＡヌクレオシドを含むいくつかの実施形態では、領域ＦおよびＦ’の残りのヌクレオシドは、２’－ＭＯＥおよびＬＮＡからなる群から独立して選択される。いくつかの混合ウィング実施形態では、領域ＦおよびＦ’の１つまたは両方は、１またはそれを超えるＤＮＡヌクレオシドをさらに含み得る。ギャップマー設計は、いずれも参照により組み込まれる、国際公開第２００８／０４９０８５号および国際公開第２０１２／１０９３９５号に論じられている。

【0079】

オリゴヌクレオチド１０７の１またはそれを超える非ヌクレオチド部分へのコンジュゲーションは、例えば、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、細胞取り込みまたは安定性に影響を及ぼすことによって、オリゴヌクレオチドの薬理学を改善し得る。いくつかの実施形態では、コンジュゲート部分は、オリゴヌクレオチドの細胞分布、バイオアベイラビリティ、代謝、排泄、透過性および／または細胞取り込みを改善することによって、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改変または増強することができる。特に、コンジュゲートは、オリゴヌクレオチドを特定の器官、組織または細胞型に標的化し、それによってその器官、組織または細胞型におけるオリゴヌクレオチドの有効性を高め得る。コンジュゲートはまた、非標的細胞型、組織または器官におけるオリゴヌクレオチドの活性、例えば非標的細胞型、組織または器官におけるオフターゲット活性または活性を低下させるのに役立ち得る。

【0080】

一実施形態では、非ヌクレオチド部分（コンジュゲート部分）は、炭水化物、細胞表面受容体リガンド、原薬、ホルモン、親油性物質、ポリマー、タンパク質、ペプチド、毒素（例えば、細菌毒素）、ビタミン、ウイルスタンパク質（例えば、キャプシド）またはそれらの組み合わせからなる群から選択される。

【0081】

本開示のオリゴヌクレオチド１０７は、上述のオリゴヌクレオチドおよび／またはオリゴヌクレオチドコンジュゲートもしくはその塩、ならびに薬学的に許容され得る希釈剤、担体、塩および／またはアジュバントのいずれかを含む医薬組成物で提供され得る。薬学的に許容され得る希釈剤には、ＡＣＳＦ人工脳脊髄液が含まれ、薬学的に許容され得る塩には、ナトリウム塩およびカリウム塩が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、薬学的に許容され得る希釈剤は、滅菌リン酸緩衝生理食塩水または滅菌炭酸ナトリウム緩衝液である。いくつかの好ましい実施形態では、臨床用途のための希釈剤は、ＥｌｌｉｏｔｔのＢ溶液および／またはＡＣＳＦ人工脳脊髄液を含む。

【0082】

いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、薬学的に許容され得る希釈剤中の溶液、例えばＰＢＳまたは炭酸ナトリウム緩衝液に溶解した溶液の形態である。オリゴヌクレオチドは、溶液中に予め製剤化されてもよく、またはいくつかの実施形態では、投与前に薬学的に許容され得る希釈剤に溶解され得る乾燥粉末（例えば、凍結乾燥粉末）の形態であってもよい。適切には、例えば、オリゴヌクレオチドは、０．１～１００ｍｇ／ｍＬ、例えば１～１０ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解され得る。

【0083】

本開示の組成物は、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、自発性疼痛、または侵害受容性疼痛などの疼痛の防止または処置のために患者に投与され得る。本発明のオリゴヌクレオチド、または本発明のコンジュゲート、塩もしくは医薬組成物は、局所鎮痛薬として使用するためのものであり得る。

【0084】

本発明のオリゴヌクレオチド、または本発明のコンジュゲート、塩もしくは医薬組成物によって処置され得る疼痛は、疼痛シグナルが末梢神経系にある疼痛であり得る。有意な末梢成分による疼痛に関連する適応症には、例えば、糖尿病性神経障害、癌、頭蓋神経痛、帯状疱疹後神経痛および術後神経痛が含まれる。

【0085】

本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲート、組成物または塩を使用して防止、処置または改善され得る疼痛は、例えば、遺伝性先端紅痛症（ＩＥＭ）、発作性激痛症（ＰＥＰＤ）、三叉神経痛、神経因性疼痛、慢性疼痛に関連する疼痛からなる群から選択され得るが、侵害受容性（例えば、神経の圧迫）、神経因性疼痛（例えば、糖尿病性神経障害）、内臓痛、癌性疼痛または混合疼痛の一般的な処置からも選択され得る。本発明は、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、自発性疼痛、癌性疼痛、または侵害受容性疼痛などの疼痛の防止または処置に使用するための本発明のオリゴヌクレオチド、コンジュゲート、組成物または塩を提供する。

【0086】

本開示は、疼痛を患っているか、または疼痛を患っている可能性があるヒトなどの対象における疼痛を処置または防止する方法であって、治療上または予防上有効量の本発明のオリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオチドコンジュゲートまたは医薬組成物を、癌性疼痛、変形性関節症性疼痛、慢性疼痛、神経障害性疼痛、炎症性疼痛、自発性疼痛、または侵害受容性疼痛などの疼痛を患っているか、または疼痛を患っている可能性がある対象に投与することを含み、オリゴヌクレオチドが、配列番号１～１６４および１６６～３９０のうちの１つに相補的な配列を標的とする、方法を提供する。

【0087】

二重ノックダウン実施形態
本開示の実施形態は、複数の標的を介して疼痛を処置するための治療組成物に関する。組成物は、配列番号１４２～１６４のうちの１つに少なくとも約７５％相補的なＲＮＡのセグメントに沿ってナトリウムチャネルタンパク質の２またはそれを超える遺伝子（例えば、ヒトＮａＶ１．７／ＮａＶ１．８）からのＲＮＡにハイブリダイズし、それによってＲＮＡのナトリウムチャネルタンパク質への翻訳を防止するオリゴヌクレオチドを含む。注意：ＳＣＮ９ＡはＮａＶ１．７であり、ＳＣＮ１０ＡはＮａＶ１．８であり、ＳＣＮ１１ＡはＮａＶ１．９である。

【0088】

オリゴヌクレオチドは、配列番号１４２～１６４（「ギャップマー」構造ではあるが、ＤＮＡコアおよびＲＮＡウィングを有する）のうちの１つと少なくとも８０％類似する配列を有し得る。オリゴヌクレオチドの外側ウィングは、例えば、大部分または全体が２－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）ＲＮＡ塩基で作られているなどの修飾ＲＮＡ化学を含み得る。好ましい実施形態は、ウィング内にいくつかの（例えば、２～４）ホスホジエステル結合を含み、他のすべての塩基間結合はホスホロチオエートである。例えば、第２、第３、第４、第１５および第１７の結合（配列に記載された方向）は、ホスホジエステルであり得、他は全てホスホロチオエートである。特に、そのような実施形態では、最も外側の結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合は、好ましくはホスホロチオエートであり、３つのＲＮＡ間結合が２つまたは３つのホスホジエステル結合のいずれかを含むように残る（残りはホスホロチオエートである）。好ましい実施形態では、組成物は、それぞれが配列番号１４２～１６４のうちの１つによって与えられる配列を有し、５－９－５（ＲＮＡ－ＤＮＡ－ＲＮＡ）ギャップマー設計を有する１またはそれを超えるオリゴヌクレオチドのコピーを含み、最も外側の塩基間結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合はホスホロチオエートであり、各ウィングの他の３つのＲＮＡ間結合は２つまたは３つのホスホジエステル結合のいずれかを含む（残りはホスホロチオエートである）。

【0089】

配列番号１４２～１６４によって例示されるヒトＮａｖ１．７／Ｎａｖ１．８二重ノックダウン配列はそれぞれ、好ましくは、５’および３’のＲＮＡ様ウィングを有する９塩基のＤＮＡコアを有する５×９×５の立体配置の後の１９－ｍｅｒのＡＳＯギャップマー設計として提供される。好ましくは、５’および３’ウィングは、少なくとも実質的に２－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）化学の後に続き、骨格結合は、ホスホロチオエート（ＰＳ）およびホスホジエステル（ＰＯ）（例えば、最も外側の塩基間結合およびＤＮＡ塩基を含むすべての結合はＰＳであり、各ウィングの他の３つのＲＮＡ間結合は２つまたは３つのＰＳ結合のいずれかを含み、残りはＰＯである）の混合物を含む。一定の実施形態では、ヒトＮａＶ１．７／ＮａＶ１．８二重ノックダウンが、配列番号１４２～１６４のうちの１つによって示される配列を有するオリゴヌクレオチドおよび上記のギャップマー組成物を含む。

【0090】

二重ノックダウン配列のうち、群１と呼ばれる第１の好ましい実施形態が、配列番号１４２～１５２によって示され、参照番号（標的コード／番号）４／６１－４／７１とも記載される。群１の二重ノックダウンＡＳＯはすべて、ヒトＳＣＮ９Ａ転写物と１００％のマッチを有し、ヒトＳＣＮ１０Ａと１ヌクレオチドのミスマッチしか有さない。群１の示された二重ノックダウンＡＳＯオリゴヌクレオチドは、９塩基のＤＮＡコアならびに５’および３’のＲＮＡ様ウィングを有する５－９－５ギャップマー設計を有する。５’および３’ウィングは、２－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）化学を含む。骨格は、ホスホロチオエート（ＰＳ）およびホスホジエステル（ＰＯ）の混合物を含み、例えば、第２、第３、第４、第１５および第１７の結合（配列に記載された方向）は、ＰＯであってもよく、他は全てＰＳである。好ましくは、配列番号１４２～１５２のいずれかは、その骨格化学を有する。この群１の各配列は、ヒトＳＣＮ９ＡプレＲＮＡまたはｍＲＮＡの標的配列に対して０のミスマッチおよびヒトＳＣＮ１０ＡプレＲＮＡまたはｍＲＮＡの標的配列に対して１のミスマッチを有する。

【0091】

二重ノックダウン配列のうち、群２と呼ばれる第２の好ましい実施形態は、配列番号１５３～１６４によって示され参照番号（標的コード／番号）５／４９－５／６０とも記載される。群２の二重ノックダウンＡＳＯはすべて、ヒトＳＣＮ１０Ａ転写物と１００％のマッチを有し、ヒトＳＣＮ９Ａと１ヌクレオチドのミスマッチしか有さない。示されている２群の二重ノックダウンＡＳＯオリゴヌクレオチドは、５’および３’のＲＮＡ様ウィングを有する９塩基のＤＮＡコアを有する５－９－５ギャップマー設計を有する。５’および３’ウィングは、２－メトキシエチル（２’－ＭＯＥ）化学を含む。骨格は、ホスホロチオエート（ＰＳ）とホスホジエステル（ＰＯ）との混合物を含み、例えば、第２、第３、第４、第１５、および第１７の結合（配列に記載された方向）はＰＯであってもよく、他は全てＰＳである。好ましくは、配列番号１５３～１６４のいずれかは、その骨格化学を有する。この群２の各配列は、ヒトＳＣＮ９ＡプレＲＮＡまたはｍＲＮＡの標的配列に対して１つのミスマッチを有し、ヒトＳＣＮ１０ＡプレＲＮＡまたはｍＲＮＡの標的配列に対して０つのミスマッチを有する。

【0092】

特定の二重ノックダウン実施形態では、本発明は、１０～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドを提供し、オリゴヌクレオチドは、ヒトＮａＶ１．７標的核酸およびヒトＮａＶ１．８標的核酸に対して少なくとも９０％の相補性、例えば１００％の相補性を有し、細胞内のＮａＶ１．７またはＮａＶ１．８の両方の発現を阻害することができる、１０～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む。

【0093】

図１２は、本開示のＡＳＯが複数のＮａｖ標的の強力かつ選択的なノックダウンを提供することを示す。図において、上のグラフは、２つの濃度で４つの異なるＡＳＯ（標識ＡＳＯ１、ＡＳＯ２、ＡＳＯ３、およびＡＳＯ４）で処理した場合の、ＮａＶ１．５およびＮａＶ１．２の他のＮａＶ１．７の比較発現レベルを示す。下のグラフは、２つの濃度でそれらの同じ４つの異なるＡＳＯ（再び、ＡＳＯ１、ＡＳＯ２、ＡＳＯ３、およびＡＳＯ４）で処理した場合のＮａＶ１．５およびＮａＶ１．２以外のＮａＶ１．８の比較発現レベルを示す。

【0094】

上のパネルにおける６つのバーからなる第１の群は、５ｎＭまたは１５ｎＭのどちらかの濃度のＡＳＯ１において、ＮａＶ１．７の発現が、ＮａＶ１．５およびＮａＶ１．２の発現と比較して有意にノックダウンされたことを示す。予想外にも、下のパネルの６つのバーからなる第１の群は、５ｎＭまたは１５ｎＭのいずれかの濃度のＡＳＯ１において、ＮａＶ１．５およびＮａＶ１．２の発現と比較して、ＮａＶ１．８の発現が有意にノックダウンされたことを示す。すなわち、上パネルおよび下パネルの６つのバーの左端の群は、ＡＳＯ１が、ＮａＶ１．５およびＮａＶ１．２と比較して、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８の両方の発現を特異的にノックダウンすることを示している。上部パネルおよび下部パネルを一緒に見ると、部分の第２の群は、ＡＳＯ２について同じことを示し、バーの第３の群は、ＡＳＯ３について同じ結果を示し、６つのバーからなる第４の群は、ＡＳＯ４について同じ結果を示す。これらのデータは、本開示のＡＳＯがＮａＶ１．７またはＮａＶ１．８の両方の発現を阻害することができることを強く示している。

【0095】

異なるＮａｖチャネルは、異なる生物物理学的特性および興奮性における役割を有する。

【0096】

図１３は、どのＮａｖチャネルが神経活性の閾値、閾値未満および閾値を超える興奮性に実質的または主に関与しているかを示す。データは、青色光およびＯｐｔｏｐａｔｃｈ構築物を使用してニューロンを刺激し、ナトリウム（Ｎａ）伝導率を測定することによって得られる。青色光刺激プロトコルを使用して、侵害受容器発火における各Ｎａｖの役割を特徴付けた。データは、ＮａＶ１．７およびＮａＶ１．８が閾値以上の活性の主な駆動因子であり、したがって、これらの標的が疼痛を処置するための治療組成物の貴重な標的であることを示す。ここで、本開示は、検証された標的Ｎａｖ１．７およびＮａｖ１．８に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドに基づく治療薬を提供する。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【配列表】

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【国際調査報告】