ホーム > 特許ランキング > Ｎｋａｒｔａ， Ｉｎｃ．
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-10
(54)【発明の名称】がん免疫療法のための投薬レジメン
(51)【国際特許分類】
A61K 35/17 20150101AFI20240501BHJP
A61P 35/00 20060101ALI20240501BHJP
A61P 35/02 20060101ALI20240501BHJP
A61P 35/04 20060101ALI20240501BHJP
C12N 15/62 20060101ALN20240501BHJP
C12N 15/12 20060101ALN20240501BHJP
C12N 15/13 20060101ALN20240501BHJP
C12N 5/10 20060101ALN20240501BHJP
C12N 5/0783 20100101ALN20240501BHJP
C07K 14/54 20060101ALN20240501BHJP
C07K 19/00 20060101ALN20240501BHJP
C07K 16/28 20060101ALN20240501BHJP
C07K 14/725 20060101ALN20240501BHJP
C12N 15/24 20060101ALN20240501BHJP
【ＦＩ】
A61K35/17 ZNA
A61P35/00
A61P35/02
A61P35/04
C12N15/62 Z
C12N15/12
C12N15/13
C12N5/10
C12N5/0783
C07K14/54
C07K19/00
C07K16/28
C07K14/725
C12N15/24
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023569939
(86)(22)【出願日】2022-05-11
(85)【翻訳文提出日】2024-01-05
(86)【国際出願番号】 US2022028839
(87)【国際公開番号】W WO2022241036
(87)【国際公開日】2022-11-17
(31)【優先権主張番号】63/201,792
(32)【優先日】2021-05-13
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/269,316
(32)【優先日】2022-03-14
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】520438914
【氏名又は名称】ンカルタ・インコーポレイテッド
【氏名又は名称原語表記】Ｎｋａｒｔａ， Ｉｎｃ．
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100122301
【弁理士】
【氏名又は名称】冨田 憲史
(74)【代理人】
【識別番号】100157956
【弁理士】
【氏名又は名称】稲井 史生
(74)【代理人】
【識別番号】100170520
【弁理士】
【氏名又は名称】笹倉 真奈美
(74)【代理人】
【識別番号】100221545
【弁理士】
【氏名又は名称】白江 雄介
(72)【発明者】
【氏名】ラジャンガム，カンヤ ラクシュミ
(72)【発明者】
【氏名】ハイレマス，ミノティ ムルゲシュ
(72)【発明者】
【氏名】トレイガー，ジェイムズ バーナビー
(72)【発明者】
【氏名】ショック，ディビット リチャード
(72)【発明者】
【氏名】エンズリー，アーロン ノービン
【テーマコード（参考）】
4B065
4C087
4H045
【Ｆターム（参考）】
4B065AA94X
4B065AA94Y
4B065AB01
4B065AC14
4B065BA01
4B065CA24
4B065CA44
4C087AA01
4C087AA02
4C087BB65
4C087CA04
4C087MA65
4C087NA05
4C087NA20
4C087ZB26
4C087ZB27
4H045AA30
4H045BA41
4H045CA40
4H045DA03
4H045DA50
4H045DA76
4H045EA20
4H045FA74
(57)【要約】
本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、細胞傷害性キメラ受容体を発現するように操作された免疫細胞、およびこのような細胞を投与するための種々の投薬レジメンに関する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、腫瘍細胞上のＮＫＧ２Ｄのリガンドを標的とするキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、がんは、血液がん、例えば、急性骨髄性白血病（例えば、再発／難治性急性骨髄性白血病）または骨髄異形成症候群である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍、例えば、肝内胆管癌腫または他の肝腫瘍、例えば、大腸がんからの二次転移である。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンであって、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、
第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、
第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、
第３の用量は、第２の用量から５～１０日後に対象に投与され、
第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．０×１０９個のＮＫ細胞を含み、
操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するキメラ受容体を発現するように操作され、
第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、
第１の投薬サイクルは、１つ以上の追加の投薬サイクルが続いてもよい、投薬レジメン。
【請求項2】
第１、第２、および第３の用量が、各々、約１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項3】
投薬サイクルが、約１４日～約３５日である、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項4】
投薬サイクルが約２１日である、請求項３に記載の投薬レジメン。
【請求項5】
投薬サイクルが約２８日である、請求項３に記載の投薬レジメン。
【請求項6】
リンパ球枯渇プロセスが、少なくとも２用量のシクロホスファミドおよび少なくとも２用量のフルダラビンを含む、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項7】
リンパ球枯渇プロセスが、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の３日前に投与される、請求項６に記載の投薬レジメン。
【請求項8】
シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる、請求項７に記載の投薬レジメン。
【請求項9】
シクロホスファミドが約１００～６００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが約１０～６０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項６に記載の投薬レジメン。
【請求項10】
シクロホスファミドが約２００～４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが約２０～４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項９に記載の投薬レジメン。
【請求項11】
シクロホスファミドが約３００ｍｇ／ｍ２で投与され、フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ２で投与される、請求項１０に記載の投薬レジメン。
【請求項12】
リンパ球枯渇プロセスが、少なくとも２用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）および少なくとも２用量のフルダラビンを含む、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項13】
リンパ球枯渇プロセスが、Ａｒａ－Ｃの５日間の１日用量およびフルダラビンの５日間の１日用量を含み、第１の用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の７日前に投与される、請求項１２に記載の投薬レジメン。
【請求項14】
最終用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンと投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる、請求項１３に記載の投薬レジメン。
【請求項15】
Ａｒａ－Ｃが、約０．５～１０ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約１０～６０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項１２に記載の投薬レジメン。
【請求項16】
Ａｒａ－Ｃが、約１～５ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項１５に記載の投薬レジメン。
【請求項17】
Ａｒａ－Ｃが、約２ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約３０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項１６に記載の投薬レジメン。
【請求項18】
第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞は、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に対象に投与される、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項19】
がんが血液がんである、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項20】
がんが、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項１９に記載の投薬レジメン。
【請求項21】
対象がＲ／Ｒ ＡＭＬを有し、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗白血病治療を受けていた、請求項２０に記載の投薬レジメン。
【請求項22】
対象が、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有し、少なくとも１ラインであるが３ライン以下の以前の治療を受けていた、請求項２０に記載の投薬レジメン。
【請求項23】
対象が、中間、高、または超高リスクＭＤＳとして分類され、再発および／または難治性ＭＤＳを有する、請求項２０に記載の投薬レジメン。
【請求項24】
対象が、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた、請求項２３に記載の投薬レジメン。
【請求項25】
対象は、血液試料中の芽球が約５％未満である、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項26】
対象は、白血球数が２５×１０９個ＷＢＣ／Ｌ未満もしくはそれに等しい、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項27】
対象は、白血病性髄膜炎または既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示さず、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加を有しない、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項28】
がんが固形腫瘍である、請求項１に記載の投薬レジメン。
【請求項29】
がんが、肝内胆管癌腫、および大腸がんからの二次転移である肝腫瘍を含む肝腫瘍である、請求項２８に記載の投薬レジメン。
【請求項30】
第１、第２、および第３の用量の操作されたＮＫ細胞が、第１の時点から約２１日以内に対象に投与される、請求項１～２９のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項31】
第１、第２、および第３の用量の操作されたＮＫ細胞が、第１の時点から約１４日以内に対象に投与される、請求項１～３０のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項32】
操作されたＮＫ細胞が、配列番号３３と少なくとも９５％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるキメラ受容体を発現する、請求項１～３１のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項33】
操作されたＮＫ細胞が、配列番号３４と少なくとも９５％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する、請求項１～３２のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項34】
操作されたＮＫ細胞が、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように操作される、請求項１～３３のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項35】
ｍｂＩＬ１５が、配列番号３６および／または３８と少なくとも９５％の配列同一性を有する、請求項１～３４のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項36】
操作されたＮＫ細胞が、対象に対して同種である、前記請求項のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項37】
投薬レジメンが、芽球数の減少、血小板数の増加、および好中球数の増加のうちの１つ以上をもたらす、前記請求項のいずれか一項に記載の投薬レジメン。
【請求項38】
がんを処置するための方法であって、少なくとも２用量のフルダラビンを含むリンパ球枯渇レジメンを有する対象に投与するステップであって、
投与されるフルダラビンの用量は約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日の範囲であるステップと、
少なくとも第１、第２、および第３の遺伝子操作されたＮＫ細胞を対象に投与するステップであって、
第１の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞は、フルダラビンの最終用量後に対象に投与され、
第２の用量は第１の用量から６～８日後に対象に投与され、
第３の用量は第２の用量から６～８日後に対象に投与され、
第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．０×１０９個のＮＫ細胞を含み、
操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種であり、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するキメラ受容体を発現するように操作され、
第１の投薬サイクルは、１回以上の追加の投薬サイクルが続いてもよいステップと
を含む方法。
【請求項39】
第１、第２および第３の用量の各々が、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項40】
リンパ球枯渇レジメンが、少なくとも２用量のシクロホスファミドをさらに含む、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項41】
リンパ球枯渇レジメンが、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の３日前に投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項42】
シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる、請求項４０～４１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項43】
シクロホスファミドが、約１００～６００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが、約１０～６０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項４０～４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項44】
シクロホスファミドが、約２００～４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約２０～４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項４０～４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項45】
シクロホスファミドが、約３００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが、約３０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項４０～４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項46】
リンパ球枯渇レジメンが、少なくとも２用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）をさらに含む、請求項３８または３９に記載の方法。
【請求項47】
リンパ球枯渇プロセスが、Ａｒａ－Ｃの５日間の１日用量およびフルダラビンの５日間の１日用量を含み、第１の用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の７日前に投与される、請求項４６に記載の方法。
【請求項48】
最終用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンと投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項49】
Ａｒａ－Ｃが、約０．５～１０ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約１０～６０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項４６～４８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項50】
Ａｒａ－Ｃが、約１～５ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項４６～４９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項51】
Ａｒａ－Ｃが、約２ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約３０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項４６～５０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項52】
第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞が、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に対象に投与される、請求項３８～５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項53】
がんが、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含む、請求項３８～５２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項54】
Ｒ／Ｒ ＡＭＬもしくはＭＤＳの状態の進行または退行に関連する少なくとも１つの測定基準を評価して、追加の投薬サイクルを投与するかどうかを決定することをさらに含む、請求項５３に記載の方法。
【請求項55】
対象が、再発および／または難治性急性骨髄性白血病を有し、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗白血病治療を受けていた、５３または５４に記載の方法。
【請求項56】
対象が、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有し、少なくとも１ラインであるが３ライン以下の以前の治療を受けていた、請求項５３～５５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項57】
対象が、中間、高、または超高リスクＭＤＳとして分類され、再発および／または難治性ＭＤＳを有する、請求項５３または５４に記載の方法。
【請求項58】
対象が、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた、請求項５３～５４または５７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項59】
対象は、血液試料中の芽球が約５％未満である、請求項３８～５８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項60】
対象が、２５×１０９個のＷＢＣ／Ｌ未満またはそれに等しい白血球数を有する、請求項３８～５９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項61】
対象が、白血病性髄膜炎または既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示さず、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加を有しない、請求項３８～６０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項62】
投薬レジメンが、芽球数の減少、血小板数の増加、および／または好中球数の増加のうちの１つ以上をもたらす、請求項３８～６１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項63】
操作されたＮＫ細胞が、配列番号３４と少なくとも９５％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する、請求項３８～６２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項64】
少なくとも第１、第２、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞の投与によって、がんを処置するためのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを標的とするキメラ受容体を発現する操作されたＮＫ細胞集団の使用であって、第１の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞は、少なくとも２用量のフルダラビンを含むリンパ球枯渇プロセスの最終用量後に対象に投与され、
第２の用量は、第１の用量から６～８日後に対象に投与され、
第３の用量は、第２の用量から６～８日後に対象に投与され、
第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．０×１０９個の操作されたＮＫ細胞を含む、使用。
【請求項65】
第１、第２および第３の用量の各々が、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む、請求項６４に記載の使用。
【請求項66】
リンパ球枯渇レジメンが、少なくとも２用量のシクロホスファミドをさらに含む、請求項６４または６５に記載の使用。
【請求項67】
リンパ球枯渇レジメンが、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の３日前に投与される、請求項６６に記載の使用。
【請求項68】
シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる、請求項６６～６７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項69】
シクロホスファミドが、約１００～６００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが、約１０～６０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項６６～６８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項70】
シクロホスファミドが、約２００～４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが、約２０～４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、請求項６６～６９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項71】
シクロホスファミドが約３００ｍｇ／ｍ２で投与され、フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ２で投与される、請求項６６～７０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項72】
リンパ球枯渇レジメンが、少なくとも２用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）をさらに含む、請求項６４または６５に記載の使用。
【請求項73】
リンパ球枯渇プロセスが、Ａｒａ－Ｃの５日間の１日用量およびフルダラビンの５日間の１日用量を含み、第１の用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンが、投薬サイクルの開始の７日前に投与される、請求項７２に記載の使用。
【請求項74】
最終用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンと投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる、請求項７２または７３に記載の使用。
【請求項75】
Ａｒａ－Ｃが、約０．５～１０ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約１０～６０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項７２～７４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項76】
Ａｒａ－Ｃが、約１～５ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項７２～７５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項77】
Ａｒａ－Ｃが約２ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、請求項７２～７６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項78】
第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞が、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に対象に投与される、請求項６４～７７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項79】
がんが、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項６４～７８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項80】
Ｒ／Ｒ ＡＭＬもしくはＭＤＳの状態の進行または退行に関連する少なくとも１つの測定基準を評価して、追加の投薬サイクルを投与するかどうかを決定することをさらに含む、請求項７９に記載の使用。
【請求項81】
対象が、再発および／または難治性急性骨髄性白血病を有し、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗白血病治療を受けていた、請求項７９または８０に記載の使用。
【請求項82】
対象が、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有し、少なくとも１ラインであるが３ライン以下の以前の治療を受けていた、請求項７９～８１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項83】
対象が、中間、高、または非常に高リスクのＭＤＳとして分類され、再発および／または難治性のＭＤＳを有する、請求項７９または８０に記載の使用。
【請求項84】
対象が、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた、請求項７９～８０または８３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項85】
対象は、血液試料中の芽球が約５％未満である、請求項６４～８４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項86】
対象が、２５×１０９個のＷＢＣ／Ｌ未満またはそれに等しい白血球数を有する、請求項６４～８５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項87】
対象が、白血病性髄膜炎もしくは既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示さず、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加を有しない、請求項６４～８６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項88】
投薬レジメンが、芽球数の減少、血小板数の増加、および／または好中球数の増加のうちの１つ以上をもたらす、請求項６４～８７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項89】
操作されたＮＫ細胞が、配列番号３４と少なくとも９５％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する、請求項６４～８８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項90】
連続する少なくとも３用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を静脈内投与することによって、対象におけるがんを処置するためのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを標的とするキメラ受容体を発現する遺伝子操作されたＮＫ細胞集団の使用であって、第１の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞は、第１の時点で対象に投与され、少なくとも１．０×１０９個の操作されたＮＫ細胞を含み、
第２の用量は、第１の用量の６～８日後に対象に投与され、少なくとも１．０×１０９個の操作されたＮＫ細胞を含み、
第３の用量は、第２の用量の６～８日後に対象に投与され、少なくとも１．０×１０９個の操作されたＮＫ細胞を含み、
操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも９５％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する、使用。
【請求項91】
第１、第２および第３の用量の各々が、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む、請求項９０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願への相互参照
本出願は、２０２１年５月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／２０１，７９２号および２０２２年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／２６９，３１６号の優先権の利益を主張し、各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年５月１３日に出願された米国仮特許出願第６３／２０１，７９２号および２０２２年３月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／２６９，３１６号の優先権の利益を主張し、各々の全内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
分野
本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、がん免疫療法のために遺伝子操作された細胞を含む方法および組成物に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、がん免疫療法の成功を達成するために、細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作された細胞、および特定の投薬レジメンに従うこのような細胞の投与に関する。
本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、がん免疫療法のために遺伝子操作された細胞を含む方法および組成物に関する。いくつかの実施形態では、本開示は、がん免疫療法の成功を達成するために、細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作された細胞、および特定の投薬レジメンに従うこのような細胞の投与に関する。
【背景技術】
【0003】
種々のがんについて、およびがん性細胞を健常な細胞から特異的に区別するために用いることができるがん性細胞がどのような特性を有するかについてさらなる知識が得られるにつれて、がん性細胞の顕著な特徴を利用する治療薬が開発中である。操作された免疫細胞を用いる免疫療法は、がんを処置する１つのアプローチである。
【0004】
ＡＳＣＩＩテキストファイル中の情報の参照による組み込み
本出願は、同時に提出される次のＡＳＣＩＩテキストファイルに含まれる配列表を参照することにより組み込む：ファイル名：ＮＫＴ．０７８ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；２０２２年５月７日に作製され、サイズは２７，７６２バイトである。
本出願は、同時に提出される次のＡＳＣＩＩテキストファイルに含まれる配列表を参照することにより組み込む：ファイル名：ＮＫＴ．０７８ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；２０２２年５月７日に作製され、サイズは２７，７６２バイトである。
【発明の概要】
【0005】
免疫療法は、疾患の処置における新たな技術的進歩を提供し、免疫細胞は、疾患または損傷細胞を特異的に識別し反応する特定の標的化および／またはエフェクター分子を発現するように操作されている。これは、少なくとも部分的には、全ての細胞が影響を受ける化学療法などのより伝統的なアプローチとは対照的に、疾患または損傷細胞を特異的に標的化する可能性に起因する有望な進歩を示し、所望の転帰は、患者が生存するのに十分な健常な細胞が生存することである。１つの免疫療法アプローチは、目的の異常細胞の標的化された認識および破壊を達成するための免疫細胞におけるキメラ受容体の組換え発現である。
【0006】
いくつかの実施形態では、がん免疫療法のための、遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団であって、培養で拡大された複数のＮＫ細胞を含み、複数のＮＫ細胞は、ＮＫＧ２Ｄ、リガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含む細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される、遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞集団が本明細書に提供される。
【0007】
いくつかの実施形態では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量から５～１０日後に対象に投与され、第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．０×１０９個のＮＫ細胞を含み、操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するキメラ受容体を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、追加用量が、ある投薬サイクル、例えば、第４、第５またはそれより多い用量に加えられ得る。
【0008】
いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＮＫ細胞の少なくとも第１、第２、および第３の用量を対象に投与することを含む、がんを処置する方法が提供され、第２の用量は、第１の用量の６～８日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量の６～８日後に対象に投与され、第１の用量、第２の用量および第３の用量の各々は、少なくとも１．０×１０９個のＮＫ細胞を含み、操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種であり、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するキメラ受容体を発現するように操作される。
【0009】
いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＮＫ細胞の少なくとも第１、第２、および第３の用量の投与によって、がんを処置するためのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを標的とするキメラ受容体を発現する操作されたＮＫ細胞集団の使用が提供され、第２の用量は、第１の用量の６～８日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量の６～８日後に対象に投与され、第１、第２、および第３の用量は、少なくとも１．０×１０９個の操作されたＮＫ細胞を含む。
【0010】
いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の用量は、各々、約１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の用量は、各々、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の投薬は、各々、より大きな細胞数、例えば、２×１０９個のＮＫ細胞、３×１０９個のＮＫ細胞、４×１０９個のＮＫ細胞、５×１０９個のＮＫ細胞、またはそれ以上、例えば１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む。
【0011】
いくつかの実施形態では、投薬サイクルは、約１４日間から約３５日間、例えば、約２１日間または約２８日間である。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の用量の操作されたＮＫ細胞は、第１の時点から約２１日以内に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の用量の操作されたＮＫ細胞は、第１の時点から約１４日以内に対象に投与される。
【0012】
一部の実施形態によれば、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始される。実施形態に応じて、第１の投薬サイクルの後に、１回以上の追加の投薬サイクル、例えば、２、３、４回またはそれ以上の追加サイクルが続いてもよい。追加のサイクルは、対象におけるがんの状態に応じて、例えば、進行または追加のがんの発生の場合に投与することができる。いくつかの実施形態では、対象が完全奏効（例えば、がんがない）を示す場合、追加のサイクルは必要ない。
【0013】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンおよび関連する方法および使用は、少なくとも２用量のフルダラビンを含むリンパ球枯渇レジメンを、がんを有する対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、少なくとも２用量のシクロホスファミドおよび少なくとも２用量のフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の３日前に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約５０～約１０００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約５～約１００ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約１００～約６００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約１０～約６０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約２００～約４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約２０～約４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約３００ｍｇ／ｍ２（例えば、約２５０～３５０ｍｇ／ｍ２）の量で投与され、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２（例えば、約２５～２５ｍｇ／ｍ２）の量で投与される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、少なくとも２用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）および少なくとも２用量のフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、Ａｒａ－Ｃの５日間の１日用量およびフルダラビンの５日間の１日用量を含み、第１の用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の７日前に投与される。いくつかの実施形態では、最終用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンと投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約０．１～約２０ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンは、約５～約１００ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約０．５～約１０ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンは、約１０～約６０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約１～約５ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンは、約２０～約４０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約２ｇ／ｍ２／日（例えば、約１．５～２．５ｇ／ｍ２／日）の量で投与され、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２／日（例えば、約２５～３５ｍｇ／ｍ２／日）の量で投与される。
【0014】
いくつかの実施形態では、第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞は、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に対象に投与される。実施形態に応じて、シクロホスファミド、Ａｒａ－Ｃおよび／またはフルダラビンに加えて、またはその代わりに、例えば、ダウノルビシン（ダウノマイシン）もしくはイダルビシン、ミコフェノール酸モフェチル、および／またはベンダムスチンなどの他のリンパ球枯渇剤を使用することができる。
【0015】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンならびに関連する方法および使用は、がんが血液がんである対象を処置するように構成される。いくつかの実施形態では、がんは、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。いくつかの実施形態では、対象は、Ｒ／Ｒ ＡＭＬを有し、投薬レジメンの前に、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗白血病治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有し、投薬レジメンの前に、少なくとも１ラインであるが３ライン以下の以前の治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、中間、高、または非常に高リスクのＭＤＳとして分類され、再発および／または難治性ＭＤＳを有する。いくつかの実施形態では、対象は、投薬レジメンの前に、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、投薬レジメンの前に、血液試料中の芽球が約５～１０％未満、約５～８％未満、または約５％未満である。いくつかの実施形態では、対象は、投薬レジメンの前に、白血球数が３０×１０９個未満もしくはそれに等しいＷＢＣ／Ｌ、２８×１０９個未満もしくはそれに等しいＷＢＣ／Ｌ、または約２５×１０９個未満もしくはそれに等しいＷＢＣ／Ｌである。いくつかの実施形態では、対象は、白血病性髄膜炎または既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示さず、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加を有しない。
【0016】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンならびに関連する方法および使用は、がんが固形腫瘍である対象を処置するように構成される。いくつかの実施形態では、がんは、肝内胆管癌腫、および大腸がんからの二次転移である肝腫瘍を含む肝腫瘍である。
【0017】
いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞はまた、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号３６および／または３８と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種である。いくつかの実施形態では、投薬レジメン、関連する方法および／または使用は、芽球細胞数の減少、血小板数の増加、および好中球数の増加のうちの１つ以上をもたらす。
【0018】
いくつかの実施形態では、連続する少なくとも３用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を静脈内投与することによって、対象におけるがんを処置するためのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを標的とするキメラ受容体を発現する操作されたＮＫ細胞の集団の使用が提供され、第１の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞は、第１の時点で対象に投与され、少なくとも１．０×１０９個の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、第２の用量は、第１の用量から６～８日後に対象に投与され、少なくとも１．０×１０９個の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、第３の用量は、第２の用量から６～８日後に対象に投与され、少なくとも１．０×１０９個の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、第１の時点は、（ｉ）シクロホスファミドが約３００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ２の量で投与される、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビン、または（ｉｉ）Ａｒａ－Ｃが約２ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンが約３０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される、５日間の１日用量のＡｒａ－Ｃおよび５日間の１日用量のフルダラビンのいずれかを含むリンパ球枯渇プロセスの終了から約２日後であり、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも９５％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む。
【0019】
いくつかの実施形態では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量から５～１０日後に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞（または５０ｋｇ未満の対象については少なくとも３×１０７個／ｋｇ）を含み、操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含むキメラ受容体を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞傷害性シグナル伝達複合体は、ＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＮＫ細胞はまた、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現する。いくつかの実施形態では、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、１回以上の追加投薬サイクルが続いてもよい。
【0020】
また、本明細書では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、第１の用量は、第１の時点で対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量から５～１０日後に対象に投与され、第１、第２および第３の用量の各々は、１．５×１０９個のＮＫ細胞を含み、少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するドメインを含むキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、第１の投薬サイクルは、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、１つ以上の追加の投薬サイクルが続いてもよい。
【0021】
いくつかの実施形態では、投薬サイクルは、約１４日～約３５日である。いくつかの実施形態では、投薬サイクルは、約２１日または約２８日（２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８日を含む）である。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、少なくとも２用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）および少なくとも２用量のフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、Ａｒａ－Ｃの３、４、または５日間の１日用量、およびフルダラビンの３、４、または５日間の１日用量を含み、第１の用量のＡｒａ－Ｃおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の５～７日前に投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃおよびフルダラビンの最終用量と投薬サイクルの開始の間に、１日、２日、または３日を経過させることができる。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約０．２～２０ｇ／ｍ２／日（例えば、０．５～１０ｇ／ｍ２／日）の量で投与され、フルダラビンは、約５～７５ｍｇ／ｍ２／日（例えば、１０～６０ｍｇ／ｍ２／日）の量で投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約１～５ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンは、約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃは、約２ｇ／ｍ２／日の量で投与され、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２／日の量で投与される。
【0022】
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、少なくとも２用量のシクロホスファミドおよび少なくとも２用量のフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の３日前に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、１日、２日、または３日を経過させることができる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約１０～１０００ｍｇ／ｍ２（例えば、約１００～６００ｍｇ／ｍ２）の量で投与され、フルダラビンは、約５～１００ｍｇ／ｍ２（約１０～６０ｍｇ／ｍ３）の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約２００～４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約２０～４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約５００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。
【0023】
いくつかの実施形態では、第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞は、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量の操作されたＮＫ細胞は、第１の時点から約２１日以内に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量の操作されたＮＫ細胞は、第１の時点から約１４日以内に対象に投与される。
【0024】
さらに、少なくとも第１の投薬サイクルを含む投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、第１、第２、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞から構成され、操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含むキメラ受容体を発現するように操作され、第１の用量のサイクルは、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第３の用量は、第１の時点から１１～１６日後に対象に投与され、第１、第２、および第３の用量を組み合わせると、約４０億個の操作されたＮＫ細胞の投与をもたらす。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、各々、約１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む。
【0025】
本明細書に提供される投薬レジメンのいくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３と少なくとも約９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも約９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞によって発現されるｍｂＩＬ１５は、配列番号３６と少なくとも約９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する。別の実施形態は、配列番号３８と少なくとも９５％の配列同一性を有するｍｂＩＬ１５を利用する。
【0026】
いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、６～８日の間隔で投与され、第２および第３の用量は、６～８日の間隔で投与される。いくつかの実施形態では、各用量は、１．５×１０９個のＮＫ細胞を含み、第２の用量は、第１の用量の約７日後に投与され、第３の用量は、第２の用量の約７日後に投与される。
【0027】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される投薬レジメンは、血液がんなどのがんの処置用である。いくつかの実施形態では、がんは、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。いくつかの実施形態では、対象は、Ｒ／Ｒ ＡＭＬを有し、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗白血病治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有し、少なくとも１ラインであるが３ライン以下の以前の治療を受けていた。一部の実施形態では、対象は、中間、高、または非常に高リスクのＭＤＳとして分類されるのに適格であり、再発および／または難治性ＭＤＳを有する。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、血液試料中の芽球が約５％未満である。いくつかの実施形態では、対象は、２５×１０９個のＷＢＣ／Ｌ未満またはそれに等しい白血球数を有する。いくつかの実施形態では、対象は、白血病性髄膜炎または既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示さず、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加を有しない。
【0028】
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される投薬レジメンは、固形腫瘍などのがんの処置用である。いくつかの実施形態では、がんは、肝内胆管癌腫、および大腸がんからの二次転移である肝腫瘍を含む肝腫瘍である。
【0029】
本明細書に提供される投薬レジメンのいくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種である。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、芽球細胞数の減少、血小板数の増加、および好中球数の増加のうちの１つ以上をもたらす。
【0030】
いくつかの実施形態では、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄異形成症候群（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を処置するための投薬レジメンが提供され、少なくとも第１の投薬サイクルを含むか、それからなるか、または本質的にそれからなり、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を含み、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量から５～１０日後に対象に投与され、第１、第２、および第３の用量の各々は、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含み、操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種であり、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合し、配列番号３４と少なくとも約８０％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現するように操作され、第１の投薬サイクルは、対象が少なくとも３用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）および少なくとも３用量のフルダラビンを受けた後に開始され、第１の投薬サイクルは、１回以上の追加の投薬サイクルが続いてもよい。
【0031】
いくつかの実施形態では、再燃／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を処置するための方法が提供され、少なくとも３用量のシトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）および少なくとも３用量のフルダラビンを、Ｒ／Ｒ ＡＭＬまたはＭＤＳを有する対象に投与することを含み、投与されるＡｒａ－Ｃの量は約１～５ｇ／ｍ２／日の範囲であり、投与されるフルダラビンの量は約２０～４０ｍｇ／ｍ２／日の範囲であり、少なくとも第１、第２、および第３の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞を対象に投与することを含み、第１の用量は、Ａｒａ－Ｃおよびフルダラビンの最終用量後に対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から６～８日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の用量から６～８日後に対象に投与され、第１、第２および第３の用量の各々は、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含み、操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種であり、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合し、配列番号３４と少なくとも約８０％の配列同一性を有するキメラ受容体を発現するように操作され、第１の投薬サイクルは、１回以上の追加の投薬サイクルが続いてもよい。
【0032】
いくつかの実施形態では、本方法は、Ｒ／Ｒ ＡＭＬもしくはＭＤＳの状態の進行または退行に関連する少なくとも１つの測定基準を評価して、追加の投薬サイクルを投与するかどうかを決定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、対象は、再発および／または難治性急性骨髄性白血病を有し、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗白血病治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有し、少なくとも１ラインであるが３ライン以下の以前の治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、中間、高、または非常に高リスクのＭＤＳとして分類されるのに適格であり、再発および／または難治性ＭＤＳを有する。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも１ラインであるが２ライン以下の以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた。いくつかの実施形態では、対象は、血液試料中の芽球が約５％未満であり、２５×１０９個のＷＢＣ／Ｌ未満またはそれに等しい白血球数を有し、および／または白血病性髄膜炎もしくは既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示さず、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加を有しない。
【0033】
いくつかの実施形態では、本明細書では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、本明細書で提供される第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、および第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞から構成され、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第１および第２の用量の各々は、少なくとも１．５×１０８個のＮＫ細胞（または５０ｋｇ未満の対象については少なくとも３×１０６個／ｋｇ）を含み、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、第１の投薬サイクルは、第２またはそれより多い投薬サイクルが続いてもよい。
【0034】
さらなる実施形態は、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンを提供し、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞からなり、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第１の用量および第２の用量は、少なくとも１．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、第１の投薬サイクルは、第２またはそれより多い投薬サイクルが続いてもよい。
【0035】
いくつかの実施形態によれば、投薬サイクルは、約１４日から約３５日間、またはそれより長い間であり、対象は、適宜、投薬サイクルの終了時またはより遠い時点（例えば、継続的に）で、がんの少なくとも１つの測定基準に関して評価され、追加の投薬サイクルを開始すべきかどうかを決定する。いくつかの実施形態では、投薬サイクルは、約２１日である。いくつかの実施形態では、投薬サイクルは、約２８日である。
【0036】
いくつかの実施形態によれば、第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞は、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に対象に投与される。これは、有利には、操作されたＮＫ細胞の集団数をまだ回復しておらず、および希釈していない対象の天然免疫細胞数に基づいて、より大きなエフェクター：標的細胞比を可能にする。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞は、第１の時点から約１４～２１日以内に対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量の操作されたＮＫ細胞は、第１の時点から約１４日以内に対象に投与される。
【0037】
いくつかの実施形態では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞から構成され、第１の用量のサイクルは、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第１および第２の用量の各々は、少なくとも１．５×１０８個のＮＫ細胞、または５０ｋｇ未満の対象については少なくとも３×１０６個／ｋｇを含み、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、第１の投薬サイクルの第２の用量は、対象の天然免疫細胞集団がリンパ球枯渇プロセスから回復する前に投与される。
【0038】
また、本明細書では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンであって、第１の投薬サイクルは、第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞および第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞から構成され、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、組み合わせて、第１および第２の用量は、約３億～約３０億個の操作されたＮＫ細胞の投与をもたらし、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、第１の投薬サイクルの第２の用量は、第１の時点の約１４～２１日以内に投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、各々、約１．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の用量は、各々、約４．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、または第１および第２の用量は、各々、約１．５×１０９個のＮＫ細胞を含む。
【0039】
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、標準的な化学療法リンパ球枯渇プロセスである。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、少なくとも２用量のシクロホスファミドおよび少なくとも２用量のフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の３日前に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約１００～６００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約１０～６０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約２００～４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約２０～４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約３００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。
【0040】
本明細書で提供される実施形態によれば、操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含むキメラ受容体を発現するように操作される投薬レジメンが提供される。いくつかの実施形態では、細胞傷害性シグナル伝達複合体は、ＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＮＫ細胞はまた、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現する。
【0041】
いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号３６および／または３８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する。
【0042】
いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、少なくとも１．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の用量は、６～８日の間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、１．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の投薬は、約７日間の間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、少なくとも４．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の用量は、６～８日の間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、４．５×１０８個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の投薬は、約７日間の間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、少なくとも１．５×１０９個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の用量は、６～８日の間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１および第２の用量は、１．５×１０９個のＮＫ細胞を含み、第１および第２の用量は、約７日間の間隔で投与される。
【0043】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、血液がんを処置するために構成される。いくつかの実施形態では、血液がんは、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。
【0044】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、固形腫瘍を治療するために構成される。いくつかの実施形態では、がんは肝腫瘍である。いくつかの実施形態では、肝腫瘍は、肝内胆管癌腫である。いくつかの実施形態では、肝腫瘍は、大腸がんからの１つ以上の二次転移である。
【0045】
いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、対象に対して同種である。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、芽球細胞数の減少、血小板数の増加、および好中球数の増加のうちの１つ以上をもたらす。
【0046】
いくつかの実施形態では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、少なくとも１用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から構成され、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第１の用量は、少なくとも１×１０８個のＮＫ細胞、または５０ｋｇ未満の対象については２×１０６個／ｋｇを含み、操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含むキメラ受容体を発現するように操作され、細胞傷害性シグナル伝達複合体は、ＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含み、遺伝子操作されたＮＫ細胞はまた、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現し、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、第１の投薬サイクルは、その後の投薬サイクルが続いてもよい。
【0047】
また、本明細書では、少なくとも第１の投薬サイクルを含む、がん免疫療法のための投薬レジメンが提供され、第１の投薬サイクルは、少なくとも第１の用量の遺伝子操作されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞、および第２の用量の遺伝子操作されたＮＫ細胞から構成され、第１の用量は、第１の時点でがん免疫療法を必要とする対象に投与され、第２の用量は、第１の時点から５～１０日後に対象に投与され、第３の用量は、第２の時点から５～１０日後に対象に投与され、第１、第２、および第３の用量の各々は、少なくとも１×１０８個のＮＫ細胞、または５０ｋｇ未満の対象については少なくとも２×１０６個／ｋｇを含み、操作されたＮＫ細胞の少なくとも一部は、ナチュラルキラー細胞群２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）のリガンドと結合するドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含むキメラ受容体を発現するように操作され、細胞傷害性シグナル伝達複合体は、ＯＸ４０サブドメインおよびＣＤ３ゼータサブドメインを含み、遺伝子操作されたＮＫ細胞はまた、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現し、第１の投薬サイクルは、天然免疫細胞数を減少させるために、対象がリンパ球枯渇プロセスを経た後に開始され、第１の投薬サイクルは、第２またはそれより多い投薬サイクルが続いてもよい。
【0048】
いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、標準的な化学療法リンパ球枯渇プロセスである。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、少なくとも２用量のシクロホスファミドおよび少なくとも２用量のフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇プロセスは、３用量のシクロホスファミドおよび３用量のフルダラビンを含み、第１の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の５日前に投与され、第２の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の４日前に投与され、第３の用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンは、投薬サイクルの開始の３日前に投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドおよびフルダラビンの第３の用量と投薬サイクルの開始の間に、約２日間を経過させることができる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約１００～６００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約１０～６０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約２００～４００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約２０～４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、約３００ｍｇ／ｍ２の量で投与され、フルダラビンは、約３０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。
【0049】
いくつかの実施形態では、投薬サイクルは、約１４～約２８日の範囲であり、対象は、適宜、追加の投薬サイクルが正当化されるかどうかを決定するために、投薬サイクルの終了時または終了後に、がんの少なくとも１つの測定基準に関して評価される。
【0050】
いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされるキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するキメラ受容体を発現する。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号３６および／または３８と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する。
【0051】
いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、１．０×１０８個のＮＫ細胞であり、６～８日間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、約１．０×１０８個のＮＫ細胞であり、約７日間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、約３×１０８個のＮＫ細胞であり、６～８日間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、約３×１０８個のＮＫ細胞であり、約７日間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、約１×１０９個のＮＫ細胞であり、６～８日間隔で投与される。いくつかの実施形態では、第１、第２、および第３の用量は、約１×１０９個のＮＫ細胞であり、約７日間隔で投与される。
【0052】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、血液がんの処置用である。いくつかの実施形態では、血液がんは、再発／難治性（Ｒ／Ｒ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）または高リスク骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である。
【0053】
いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、固形腫瘍の処置用である。いくつかの実施形態では、がんは肝腫瘍である。いくつかの実施形態では、肝腫瘍は、肝内胆管癌腫である。いくつかの実施形態では、肝腫瘍は、大腸がんからの二次転移である。
【図面の簡単な説明】
【0054】
【図1】図１は、ＮＫＧ２Ｄのリガンドの結合部分、およびｍｂＩＬ１５をコードする（受容体Ｂ）またはｍｂＩＬ１５をコードしない（受容体Ａ）のいずれかを含む、細胞傷害性受容体コンストラクトをコードするポリヌクレオチドの非限定的な概略図を示す。
【図2】図２は、ＮＫＧ２Ｄ受容体ドメイン（例えば、断片）およびｍｂＩＬ１５をコードする（受容体Ｂ）またはｍｂＩＬ１５をコードしない（受容体Ａ）のいずれかを含む、細胞傷害性受容体コンストラクトをコードするポリヌクレオチドの非限定的な概略図を示す。
【発明を実施するための形態】
【0055】
本明細書に提供される方法および組成物の一部の実施形態は、免疫療法における使用のための操作された免疫細胞およびその組み合わせに関する。いくつかの実施形態では、操作された細胞は、例えば、細胞傷害性誘導性受容体複合体を発現するために、複数の方法で操作される。本明細書で使用される場合、用語「細胞傷害性受容体複合体」は、その通常の意味を与えられるものとし、（特に断らない限り）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、キメラ受容体（ＮＫＧ２Ｄキメラ受容体の場合、活性化キメラ受容体とも呼ばれる）に言及するものとする。いくつかの実施形態では、細胞は、さらに、非腫瘍組織および／または他の治療細胞に対する細胞の反応性の修飾を達成するように操作される。
【0056】
用語「抗がん効果」とは、限定されないが、腫瘍容量の低下、がん細胞数の低下、転移数の低下、平均寿命の増加、がん細胞増殖の低下、がん細胞生存の低下、および／またはがん性状態に関連する種々の生理学的症状の軽快を含む、種々の手段によって発現し得る生物学的効果を指す。
【0057】
細胞型
本明細書に提供される方法および組成物の一部の実施形態は、免疫細胞などの細胞を指す例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞などの免疫細胞は、ＮＫＧ２Ｄリガンド指向性キメラ受容体などのキメラ受容体を含むように操作され得るか、または本明細書に記載されるように、上記キメラ受容体をコードする核酸を含むように操作され得る。さらなる実施形態は、本明細書に開示されるＮＫＧ２Ｄキメラ受容体複合体などの別の細胞傷害性受容体複合体を発現させるために、第２のセットの細胞を操作することに関する。
本明細書に提供される方法および組成物の一部の実施形態は、免疫細胞などの細胞を指す例えば、ＮＫ細胞またはＴ細胞などの免疫細胞は、ＮＫＧ２Ｄリガンド指向性キメラ受容体などのキメラ受容体を含むように操作され得るか、または本明細書に記載されるように、上記キメラ受容体をコードする核酸を含むように操作され得る。さらなる実施形態は、本明細書に開示されるＮＫＧ２Ｄキメラ受容体複合体などの別の細胞傷害性受容体複合体を発現させるために、第２のセットの細胞を操作することに関する。
【0058】
伝統的な抗がん療法は、外科的アプローチ、放射線療法、化学療法、またはこれらの方法の組み合わせに依存していた。研究によってある種のがんのメカニズムの一部についての理解が深まるにつれて、この知見は標的化されたがん治療法の開発に利用された。標的療法は、がん細胞、またはがんの増殖を支持する細胞（血管細胞など）に見出される特定の遺伝子またはタンパク質を標的とする特定の薬物を用いて、がん細胞の増殖を抑制または阻止するがん処置である。より最近では、遺伝子工学によって、免疫系の特定の側面を利用してがんと戦うアプローチを開発することが可能になってきた。いくつか場合では、患者自身の免疫細胞を修飾して、その患者のがんタイプを特異的に根絶する。以下により詳細に記載されるように、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ細胞）、またはそれらの組み合わせなどの種々のタイプの免疫細胞を使用することができる。
【0059】
また、がん免疫療法を容易にするために、標的結合部分（例えば、がん細胞により発現されるリガンドの細胞外結合部）および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含むキメラ受容体をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチド、およびベクターが本明細書において提供される。例えば、一部の実施形態は、がんへの免疫細胞の標的化を促進し、がん細胞に細胞傷害効果を及ぼすために、とりわけ、腫瘍マーカー、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６に対する指向性を有するＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメインを含む活性化キメラ受容体をコードするポリヌクレオチド、ポリペプチド、またはベクターを含む。また、このようなキメラ受容体を発現する操作された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞）が提供される。また、本明細書には、いくつかの実施形態では、２つ以上のサブドメイン、例えば、第１および第２のリガンド結合受容体および細胞傷害性シグナル伝達複合体を含む細胞外ドメインを含むコンストラクトをコードするポリヌクレオチド、ポリペプチド、およびベクターが提供される。また、このような二重特異性コンストラクトを発現する操作された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞）（いくつかの実施形態では、第１および第２のリガンド結合ドメインは、同じリガンドを標的とする）が提供される。がんを処置する方法、およびがん免疫療法のためのこのような細胞の他の使用もまた、本明細書に提供される。
【0060】
免疫療法のための操作された細胞
いくつかの実施形態では、免疫系の細胞は、腫瘍細胞などの標的細胞に対して増大した細胞傷害効果を有するように操作される。例えば、免疫系の細胞は、本明細書に記載されるように、腫瘍指向性キメラ受容体および／または腫瘍指向性ＣＡＲを含むように操作され得る。いくつかの実施形態では、白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）または白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）は、それらの本来の機能は、異常な細胞の増殖および感染症に対して身体を防御することであるため使用される。ヒト免疫系において特定の役割を果たす種々のタイプの白血球が存在し、したがって、本明細書に開示される細胞の操作のための好ましい出発点である。白血球には、顆粒球および無顆粒球（それぞれ細胞質中の顆粒の存在または非存在）がある。顆粒球には、好塩基球、好酸球、好中球、および肥満細胞が含まれる。無顆粒球には、リンパ球および単球が含まれる。以下の細胞または他の、明細書に記載される細胞などの細胞は、キメラ抗原受容体、例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンド指向性キメラ受容体、またはキメラ受容体をコードする核酸を含むように操作することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを共発現するように操作されてもよい。以下により詳細に検討されるように、いくつかの実施形態では、治療細胞を、さらに、遺伝的に修飾して、細胞傷害性および／または細胞の持続性を増大させる。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾は、治療細胞の効力の減少または寿命の短縮を引き起こす腫瘍微小環境から発するシグナルに抵抗する細胞の能力を増大させる。
いくつかの実施形態では、免疫系の細胞は、腫瘍細胞などの標的細胞に対して増大した細胞傷害効果を有するように操作される。例えば、免疫系の細胞は、本明細書に記載されるように、腫瘍指向性キメラ受容体および／または腫瘍指向性ＣＡＲを含むように操作され得る。いくつかの実施形態では、白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）または白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）は、それらの本来の機能は、異常な細胞の増殖および感染症に対して身体を防御することであるため使用される。ヒト免疫系において特定の役割を果たす種々のタイプの白血球が存在し、したがって、本明細書に開示される細胞の操作のための好ましい出発点である。白血球には、顆粒球および無顆粒球（それぞれ細胞質中の顆粒の存在または非存在）がある。顆粒球には、好塩基球、好酸球、好中球、および肥満細胞が含まれる。無顆粒球には、リンパ球および単球が含まれる。以下の細胞または他の、明細書に記載される細胞などの細胞は、キメラ抗原受容体、例えば、ＮＫＧ２Ｄリガンド指向性キメラ受容体、またはキメラ受容体をコードする核酸を含むように操作することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを共発現するように操作されてもよい。以下により詳細に検討されるように、いくつかの実施形態では、治療細胞を、さらに、遺伝的に修飾して、細胞傷害性および／または細胞の持続性を増大させる。いくつかの実施形態では、遺伝子修飾は、治療細胞の効力の減少または寿命の短縮を引き起こす腫瘍微小環境から発するシグナルに抵抗する細胞の能力を増大させる。
【0061】
免疫療法のための単球
単球は白血球の亜型である。単球は、マクロファージおよび骨髄系樹状細胞に分化することができる。単球は適応免疫系と関連しており、食作用、抗原提示、サイトカイン産生の主要な機能を担っている。食作用とは、細胞物質、または細胞全体を取り込んだ後、取り込まれた細胞物質を消化して破壊するプロセスである。いくつかの実施形態では、単球は、本明細書に開示されるように、１つ以上のさらなる操作された細胞と関連して使用される。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンド、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを標的化する活性化キメラ受容体を発現するように操作された単球に関する。
単球は白血球の亜型である。単球は、マクロファージおよび骨髄系樹状細胞に分化することができる。単球は適応免疫系と関連しており、食作用、抗原提示、サイトカイン産生の主要な機能を担っている。食作用とは、細胞物質、または細胞全体を取り込んだ後、取り込まれた細胞物質を消化して破壊するプロセスである。いくつかの実施形態では、単球は、本明細書に開示されるように、１つ以上のさらなる操作された細胞と関連して使用される。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンド、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを標的化する活性化キメラ受容体を発現するように操作された単球に関する。
【0062】
免疫療法のためのリンパ球
リンパ球は、白血球の他の一次サブタイプであり、Ｔ細胞（細胞媒介性、細胞傷害性適応免疫）、ナチュラルキラー細胞（細胞媒介性、細胞傷害性先天性免疫）、およびＢ細胞（体液性、抗体駆動性適応免疫）を含む。Ｂ細胞は、本明細書に開示されるいくつかの実施形態に従って操作されるが、いくつかの実施形態はまた、操作されたＴ細胞または操作されたＮＫ細胞（Ｔ細胞とＮＫ細胞の混合物が、一部の実施形態では、同じドナー由来または異なるドナー由来のいずれかで使用される）に関連する。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンド、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを標的化する活性化キメラ受容体を発現するように操作されたリンパ球に関する。
リンパ球は、白血球の他の一次サブタイプであり、Ｔ細胞（細胞媒介性、細胞傷害性適応免疫）、ナチュラルキラー細胞（細胞媒介性、細胞傷害性先天性免疫）、およびＢ細胞（体液性、抗体駆動性適応免疫）を含む。Ｂ細胞は、本明細書に開示されるいくつかの実施形態に従って操作されるが、いくつかの実施形態はまた、操作されたＴ細胞または操作されたＮＫ細胞（Ｔ細胞とＮＫ細胞の混合物が、一部の実施形態では、同じドナー由来または異なるドナー由来のいずれかで使用される）に関連する。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンド、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを標的化する活性化キメラ受容体を発現するように操作されたリンパ球に関する。
【0063】
免疫療法のためのＴ細胞
Ｔ細胞は、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在に基づいて、他のリンパ球サブタイプ（例えば、Ｂ細胞またはＮＫ細胞）と区別することができる。Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連不変Ｔ細胞およびガンマデルタＴ細胞を含む種々のサブタイプに分けられる。一部の実施形態では、特異的サブタイプのＴ細胞を操作する。一部の実施形態では、Ｔ細胞サブタイプの混合プールを操作する。一部の実施形態では、本明細書に開示される細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作されるＴ細胞タイプの特異的選択は存在しない。いくつかの実施形態では、サイトカイン刺激の使用などの特異的技術を使用して、特異的マーカープロファイルを有するＴ細胞の拡大／収集を増大させる。例えば、いくつかの実施形態では、特定のヒトＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、刺激分子としてのＣＤ３および／またはＣＤ２８の使用によって達成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、細胞傷害性受容体複合体および／またはホーミング部分を発現するＴ細胞の治療上有効量を投与することを含む、がんまたは感染症を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は自己細胞であり、一方、一部の実施形態では、Ｔ細胞は同種異系細胞である。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的化する活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）共刺激ドメインを発現するように操作されたＴ細胞に関する。
Ｔ細胞は、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在に基づいて、他のリンパ球サブタイプ（例えば、Ｂ細胞またはＮＫ細胞）と区別することができる。Ｔ細胞は、エフェクターＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、記憶Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連不変Ｔ細胞およびガンマデルタＴ細胞を含む種々のサブタイプに分けられる。一部の実施形態では、特異的サブタイプのＴ細胞を操作する。一部の実施形態では、Ｔ細胞サブタイプの混合プールを操作する。一部の実施形態では、本明細書に開示される細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作されるＴ細胞タイプの特異的選択は存在しない。いくつかの実施形態では、サイトカイン刺激の使用などの特異的技術を使用して、特異的マーカープロファイルを有するＴ細胞の拡大／収集を増大させる。例えば、いくつかの実施形態では、特定のヒトＴ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、刺激分子としてのＣＤ３および／またはＣＤ２８の使用によって達成される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、細胞傷害性受容体複合体および／またはホーミング部分を発現するＴ細胞の治療上有効量を投与することを含む、がんまたは感染症を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＴ細胞は自己細胞であり、一方、一部の実施形態では、Ｔ細胞は同種異系細胞である。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的化する活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）共刺激ドメインを発現するように操作されたＴ細胞に関する。
【0064】
免疫療法のためのＮＫ細胞
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、細胞傷害性受容体複合体および／またはホーミング部分を発現する治療上有効量のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を投与することを含む、がんまたは感染症を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は自家細胞であり、一方、いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は同種異系細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞の天然の細胞傷害性ポテンシャルが比較的高いため、ＮＫ細胞が好ましい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される操作された細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害活性をさらに上方制御することができ、標的細胞（例えば、腫瘍または他の疾患細胞）に対してさらに効果的な活性をもたらすことが予想外に有益である。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的とする活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを発現するように操作されたＮＫ細胞に関する。いくつかの実施形態では、不死化ＮＫ細胞が使用され、本明細書に開示されるように、操作に供される。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、細胞株ＮＫ－９２に由来する。ＮＫ－９２細胞はＮＫ細胞に由来するが、活性化受容体の大部分を保持しながら、正常なＮＫ細胞によって示される主要な抑制性受容体を欠いている。インターフェロン－γ（ＩＦＮγ）、グランザイムＢ、および／またはパーフォリン産生の上方制御を可能にする、特定のさらなる阻害性受容体、例えば、ＳＭＡＤ３をサイレンシングするように操作されたＮＫ－９２細胞に関連して本明細書に記載されるＮＫ－９２細胞のいくつかの実施形態。ＮＫ－９２細胞株に関するさらなる情報は、国際公開第１９９８／４９２６８号および米国特許出願公開第２００２－００６８０４４号に開示され、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＮＫ－９２細胞は、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される他の細胞型のうちの１つ以上と組み合わせて使用される。例えば、一実施形態では、ＮＫ－９２細胞は、本明細書に開示されるＮＫ細胞と組み合わせて使用される。追加の実施形態では、ＮＫ－９２細胞は、本明細書に開示されるＴ細胞と組み合わせて使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、細胞傷害性受容体複合体および／またはホーミング部分を発現する治療上有効量のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を投与することを含む、がんまたは感染症を処置または予防する方法が提供される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は自家細胞であり、一方、いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は同種異系細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞の天然の細胞傷害性ポテンシャルが比較的高いため、ＮＫ細胞が好ましい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される操作された細胞が、ＮＫ細胞の細胞傷害活性をさらに上方制御することができ、標的細胞（例えば、腫瘍または他の疾患細胞）に対してさらに効果的な活性をもたらすことが予想外に有益である。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的とする活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および適宜膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを発現するように操作されたＮＫ細胞に関する。いくつかの実施形態では、不死化ＮＫ細胞が使用され、本明細書に開示されるように、操作に供される。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、細胞株ＮＫ－９２に由来する。ＮＫ－９２細胞はＮＫ細胞に由来するが、活性化受容体の大部分を保持しながら、正常なＮＫ細胞によって示される主要な抑制性受容体を欠いている。インターフェロン－γ（ＩＦＮγ）、グランザイムＢ、および／またはパーフォリン産生の上方制御を可能にする、特定のさらなる阻害性受容体、例えば、ＳＭＡＤ３をサイレンシングするように操作されたＮＫ－９２細胞に関連して本明細書に記載されるＮＫ－９２細胞のいくつかの実施形態。ＮＫ－９２細胞株に関するさらなる情報は、国際公開第１９９８／４９２６８号および米国特許出願公開第２００２－００６８０４４号に開示され、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。ＮＫ－９２細胞は、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される他の細胞型のうちの１つ以上と組み合わせて使用される。例えば、一実施形態では、ＮＫ－９２細胞は、本明細書に開示されるＮＫ細胞と組み合わせて使用される。追加の実施形態では、ＮＫ－９２細胞は、本明細書に開示されるＴ細胞と組み合わせて使用される。
【0065】
がん免疫療法のための造血幹細胞
一部の実施形態では、造血幹細胞（ＨＳＣ）は、本明細書に開示される免疫療法の方法において使用される。いくつかの実施形態では、細胞は、ホーミング部分および／または細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される。ＨＳＣは、いくつかの実施形態では、長期間の血球産生のために生着するそれらの能力を利用するために使用され、例えば、がんの寛解と戦うために、標的化された抗がんエフェクター細胞の持続的な供給源をもたらし得る。いくつかの実施形態では、この継続的な産生は、例えば、腫瘍微小環境による他の細胞型のアネルギーまたは消耗を相殺するのを助ける。いくつかの実施形態では、同種異系ＨＳＣが使用されるが、一方、いくつかの実施形態では、自家ＨＳＣが使用される。いくつかの実施形態では、ＨＳＣは、本明細書に開示される１つ以上のさらなる操作された細胞型と組み合わせて使用される。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的とする活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）を発現するように操作された造血幹細胞に関するものであり、場合により、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを含む。
一部の実施形態では、造血幹細胞（ＨＳＣ）は、本明細書に開示される免疫療法の方法において使用される。いくつかの実施形態では、細胞は、ホーミング部分および／または細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される。ＨＳＣは、いくつかの実施形態では、長期間の血球産生のために生着するそれらの能力を利用するために使用され、例えば、がんの寛解と戦うために、標的化された抗がんエフェクター細胞の持続的な供給源をもたらし得る。いくつかの実施形態では、この継続的な産生は、例えば、腫瘍微小環境による他の細胞型のアネルギーまたは消耗を相殺するのを助ける。いくつかの実施形態では、同種異系ＨＳＣが使用されるが、一方、いくつかの実施形態では、自家ＨＳＣが使用される。いくつかの実施形態では、ＨＳＣは、本明細書に開示される１つ以上のさらなる操作された細胞型と組み合わせて使用される。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的とする活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）を発現するように操作された造血幹細胞に関するものであり、場合により、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）ドメインを含む。
【0066】
誘導性多能性幹細胞
一部の実施形態では、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）は、本明細書に開示される免疫療法の方法において使用される。ｉＰＳＣを使用して、いくつかの実施形態では、限定されないが、同一の遺伝子修飾を選択された同一の部位に含むｉＰＳＣまたはより分化程度の低い細胞の分化を介して、１つまたはいくつかの遺伝子修飾を選択された部位に含む、ＣＤ３４細胞、造血内皮細胞、ＨＳＣ（造血幹細胞および造血前駆細胞）、造血性多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、およびＢ細胞を含む非万能性細胞に分化し、誘導するそれらの能力を利用する。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣは、ｉＰＳＣ由来のＮＫまたはＴ細胞を生成するために使用される。いくつかの実施形態では、細胞は、ホーミング部分および／または細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣは、本明細書に開示される１つ以上の追加の操作された細胞型と組み合わせて使用される。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的とする活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および場合により膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）共刺激ドメインを発現するように操作された人工多能性幹細胞に関する。
一部の実施形態では、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）は、本明細書に開示される免疫療法の方法において使用される。ｉＰＳＣを使用して、いくつかの実施形態では、限定されないが、同一の遺伝子修飾を選択された同一の部位に含むｉＰＳＣまたはより分化程度の低い細胞の分化を介して、１つまたはいくつかの遺伝子修飾を選択された部位に含む、ＣＤ３４細胞、造血内皮細胞、ＨＳＣ（造血幹細胞および造血前駆細胞）、造血性多能性前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞、Ｔ細胞、ＮＫＴ細胞、ＮＫ細胞、およびＢ細胞を含む非万能性細胞に分化し、誘導するそれらの能力を利用する。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣは、ｉＰＳＣ由来のＮＫまたはＴ細胞を生成するために使用される。いくつかの実施形態では、細胞は、ホーミング部分および／または細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、ｉＰＳＣは、本明細書に開示される１つ以上の追加の操作された細胞型と組み合わせて使用される。本明細書に開示される方法および組成物のいくつかの実施形態は、腫瘍細胞上のリガンドを標的とする活性化キメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）、および場合により膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）共刺激ドメインを発現するように操作された人工多能性幹細胞に関する。
【0067】
細胞外ドメイン（腫瘍結合因子）
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、本明細書に記載されるように、腫瘍結合ドメイン（抗原結合タンパク質または抗原結合ドメインとも呼ばれる）を含む細胞外ドメインを含むキメラ受容体に関する。本明細書に記載される組成物および方法のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるように、腫瘍細胞によって発現されるリガンドに結合するリガンド結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むキメラ受容体（活性化キメラ受容体とも呼ばれる）に関する。リガンド結合ドメインは、実施形態に依存して、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）を標的化する。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、本明細書に記載されるように、腫瘍結合ドメイン（抗原結合タンパク質または抗原結合ドメインとも呼ばれる）を含む細胞外ドメインを含むキメラ受容体に関する。本明細書に記載される組成物および方法のいくつかの実施形態は、本明細書に記載されるように、腫瘍細胞によって発現されるリガンドに結合するリガンド結合ドメインを含む細胞外ドメインを含むキメラ受容体（活性化キメラ受容体とも呼ばれる）に関する。リガンド結合ドメインは、実施形態に依存して、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６（とりわけ）を標的化する。
【0068】
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体断片、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ｖＨもしくはｖＬドメイン、ラクダＶＨＨドメイン、または非免疫グロブリン足場、例えば、ＤＡＲＰＩＮ、アフィボディ、アフィリン、アドネクチン、アフィチン、レペボディ、フィノマー、アルファボディ、アビマー、アトリマー、センチリン、プロネクチン、アンチカリン、クニッツドメイン、アルマジロリピートタンパク質、自己抗原、受容体またはリガンドの野生型もしくは非野生型配列に由来するかまたはそれを含む。一部の実施形態では、腫瘍結合ドメインは、１を超える抗原結合ドメインを含む。
【0069】
抗原結合タンパク質
いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質が提供される。本明細書で使用される場合、用語「抗原結合タンパク質」は、その通常の意味が与えられるものとし、また、抗原に結合する抗原結合断片、および、適宜、抗原結合断片が抗原への抗原結合タンパク質の結合を促進する立体構造をとることを可能にする足場またはフレームワーク部分を含むタンパク質をも指すものとする。一部の実施形態では、抗原は、がん抗原またはその断片である。一部の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の少なくとも１つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体の重鎖由来の、または抗原に結合する抗体の軽鎖由来の３つのすべてのＣＤＲを含む。さらに一部の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体（重鎖由来の３つおよび軽鎖由来の３つ）由来の６つのすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含み、いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、重鎖および／または軽鎖ＣＤＲの任意の組み合わせであり得る。一部の実施形態における抗原結合断片は、抗体断片である。
いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質が提供される。本明細書で使用される場合、用語「抗原結合タンパク質」は、その通常の意味が与えられるものとし、また、抗原に結合する抗原結合断片、および、適宜、抗原結合断片が抗原への抗原結合タンパク質の結合を促進する立体構造をとることを可能にする足場またはフレームワーク部分を含むタンパク質をも指すものとする。一部の実施形態では、抗原は、がん抗原またはその断片である。一部の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の少なくとも１つのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体の重鎖由来の、または抗原に結合する抗体の軽鎖由来の３つのすべてのＣＤＲを含む。さらに一部の実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体（重鎖由来の３つおよび軽鎖由来の３つ）由来の６つのすべてのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含み、いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、重鎖および／または軽鎖ＣＤＲの任意の組み合わせであり得る。一部の実施形態における抗原結合断片は、抗体断片である。
【0070】
抗原結合タンパク質の非限定的な例としては、抗体、抗体断片（例えば、抗体の抗原結合断片）、抗体誘導体、および抗体類似体が挙げられる。さらなる具体的な例としては、限定されないが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノボディ（例えば、ラクダ重鎖抗体のＶＨドメイン；ＶＨＨ断片）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、Ｆｄ断片、および相補性決定領域（ＣＤＲ）断片が挙げられる。これらの分子は、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、またはブタ、イヌ、またはラクダなどの任意の哺乳動物源に由来することができる。抗体断片は、無傷の（例えば、天然の）抗体と標的抗原の結合について競合し得、断片は、無傷の抗体の修飾（例えば、酵素的または化学的切断）または組換えＤＮＡ技術もしくはペプチド合成を用いてデノボ合成され得る。抗原結合タンパク質は、例えば、移植されたＣＤＲまたはＣＤＲ誘導体を有する代替のタンパク質骨格または人工足場を含むことができる。このような足場は、限定されないが、例えば、抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された突然変異を含む抗体由来足場、ならびに、例えば、生体適合性ポリマーを含む完全に合成された足場を含む。さらに、ペプチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）、ならびに足場としてフィブロネクチン成分を利用する抗体模倣物に基づく足場を使用することができる。
【0071】
一部の実施形態では、抗原結合タンパク質は、単一のポリペプチド鎖または複数のポリペプチド鎖に組み込まれた１つ以上の抗体断片を含む。例えば、抗原結合タンパク質は、限定されないが、ダイアボディ；細胞内抗体；ドメイン抗体（単一のＶＬもしくはＶＨドメイン、またはペプチドリンカーによって接続された２つ以上のＶＨドメイン）；マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）（Ｆｃ領域に融合した２つのｓｃＦｖ）；トリアボディ；テトラボディ；ミニボディ（ＣＨ３ドメインに融合したｓｃＦｖ）；ペプチボディ（Ｆｃ領域に結合した１つ以上のペプチド）；線状抗体（相補的な軽鎖ポリペプチドとともに１対の抗原結合領域を形成する１対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１））；小モジュラー免疫医薬；および免疫グロブリン融合タンパク質（例えば、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ＩｇＧ－Ｆａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、４ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＶＨ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－ＶＨ、およびＦａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ）を含むことができる。
【0072】
一部の実施形態では、抗原結合タンパク質は、免疫グロブリンの構造を有する。本明細書で使用される場合、用語「免疫グロブリン」は、その通常の意味が与えられ、また、四量体分子を指すものとし、各四量体は２つの同一のポリペプチド鎖対を含み、各対は１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に主に関与する約１００～１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主に関与する定常領域を画定する。
【0073】
軽鎖および重鎖内では、可変領域（Ｖ）および定常領域（Ｃ）は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖はまた、約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、無傷の免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように抗体結合部位を形成する。
【0074】
免疫グロブリン鎖は、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域によって接続された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般的構造を示す。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖と重鎖の両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を含む。
【0075】
ヒトの軽鎖はカッパ軽鎖およびラムダ軽鎖に分類される。抗体「軽鎖」とは、抗体分子中にそれらの天然に存在する立体構造で存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。カッパ（Ｋ）およびラムダ（λ）軽鎖は、２つの主要な抗体軽鎖アイソタイプを指す。軽鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端まで、単一免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）および単一免疫グロブリン軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含むポリペプチドを含み得る。
【0076】
重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）、およびイプシロン（ε）に分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥとして定義する。抗体「重鎖」とは、その天然に存在する立体構造で抗体分子に存在する２つのタイプのポリペプチド鎖のうち、より大きいものを指し、通常、抗体が属するクラスを決定する。重鎖は、アミノ末端からカルボキシル末端に、単一免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）、免疫グロブリンヒンジ領域、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン２（ＣＨ２）、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン３（ＣＨ３）、および、適宜免疫グロブリン重鎖定常ドメイン４（ＣＨ４）を含むポリペプチドを含み得る。
【0077】
ＩｇＧクラスは、サブクラス、すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４にさらに分けられる。ＩｇＡクラスは、サブクラス、すなわちＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分けられる。ＩｇＭは、限定されないが、ＩｇＭ１およびＩｇＭ２を含むサブクラスを有する。ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤ抗体の重鎖は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有し、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体の重鎖は、４つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４）を有する。免疫グロブリン重鎖定常ドメインは、サブタイプを含む任意の免疫グロブリンアイソタイプ由来であり得る。抗体鎖は、ＣＬドメインとＣＨ１ドメイン間（例えば、軽鎖と重鎖間）、および抗体重鎖のヒンジ領域間のポリペプチド間ジスルフィド結合を介して互いに連結される。
【0078】
一部の実施形態では、抗原結合タンパク質は抗体である。用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、モノクローナル、またはポリクローナル、多重または一本鎖、または無傷の免疫グロブリンであり得、天然供給源または組換え供給源に由来し得る。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。抗体は、「ヒト化」、「キメラ」または非ヒトであり得る。抗体は、任意のアイソタイプの無傷の免疫グロブリンを含み得、例えば、キメラ、ヒト化、ヒト、および二重特異性抗体を含む。無傷抗体は、一般的に、少なくとも２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含む。抗体配列は、単一の種からのみ誘導することができ、または「キメラ」であり得、すなわち、抗体の異なる部分は、以下にさらに記載するように、２つの異なる種に由来することができる。他に指示がない限り、用語「抗体」はまた、２つの実質的に全長の重鎖および２つの実質的に全長の軽鎖を含む抗体を含むが、ただし、抗体が２つの全長の軽鎖および重鎖で構成される抗体と同じかまたは類似した結合および／または機能を保持することを条件とする。例えば、重鎖および／または軽鎖のＮ末端および／またはＣ末端における１、２、３、４または５個のアミノ酸残基の置換、挿入または欠失を有する抗体は定義に含まれるが、抗体が２つの全長重鎖および２つの全長軽鎖を含む抗体と同じかまたは類似した結合および／または機能を保持することを条件とする。抗体の例としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、および合成抗体が挙げられる。一部の実施形態では、モノクローナルおよびポリクローナル抗体が提供される。本明細書で使用される場合、用語「ポリクローナル抗体」は、その通常の意味が与えられるものとし、また、組成および結合特異性において典型的に広く変化する抗体集団を指すものとする。本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」（「ｍＡｂ」）は、その通常の意味が与えられるものとし、また、同一の配列を有する抗体集団の１つ以上を指すものとする。モノクローナル抗体は、抗原上の特定のエピトープで抗原に結合する。
【0079】
いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、抗体の断片または抗原結合断片である。用語「抗体断片」は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布により）能力を保持する抗体の少なくとも１つの部分を指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨＩドメインからなるＦｄ断片、線状抗体、ｓｄＡｂ（ｖＬまたはｖＨのいずれか）などの一重ドメイン抗体、ラクダｖＨＨドメイン、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片などの抗体断片から形成される多重特異性抗体、および抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合断片が挙げられる。抗原結合断片はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびｂｉｓ－ｓｃＦｖ（例えば、Hollinger and Hudson, Nature Biotechnology 23: 1126-1136, 2005を参照されたい）に組み込むことができる。抗原結合断片はまた、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく足場に移植することもできる（例えば、フィブロネクチンポリペプチドミニボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号を参照されたい）。抗体断片は、がん抗原（例えば、ＣＤ１９）への特異的抗原結合を付与するのに十分な免疫グロブリンの少なくとも１つのＣＤＲを含むＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、および／またはＦｖ断片を含み得る。抗体断片は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷抗体の酵素的もしくは化学的切断によって生成され得る。
【0080】
いくつかの実施形態では、Ｆａｂ断片が提供される。Ｆａｂ断片は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片であり；Ｆ（ａｂ’）２断片は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価断片であり；Ｆｄ断片は、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し；Ｆｖ断片は、抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインを有し；ならびにｄＡｂ断片は、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する。いくつかの実施形態では、これらの抗体断片は、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、マキシボディ、ミニボディ、体内抗体、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲおよびビス－ｓｃＦｖに組み込むことができる。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載されるように、少なくとも１つのＣＤＲを含む。
【0081】
本明細書には、いくつかの実施形態では、一本鎖可変断片も提供される。本明細書で使用される場合、用語「一本鎖可変断片」（「ｓｃＦｖ」）は、その通常の意味を与えられるものとし、また、リンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介してＶＬおよびＶＨ領域が接続されて連続タンパク質鎖を形成する融合タンパク質を指すものとし、リンカーは、タンパク質鎖がそれ自身で折り返し、一価抗原結合部位を形成するのに十分な長さである。明瞭にすることを目的として、他に指示がない限り、「一本鎖可変断片」は、本明細書中で定義される抗体または抗体断片ではない。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖を含む二価抗体であり、各ポリペプチド鎖は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を減少させるかまたは許容しないように構成されたリンカーによって接続されたＶＨおよびＶＬドメインを含み、したがって、各ドメインが別のポリペプチド鎖上の相補的ドメインと対合することを可能にする。いくつかの実施形態によれば、ダイアボディの２つのポリペプチド鎖が同一である場合、それらの対合から生じるダイアボディは、２つの同一の抗原結合部位を有する。異なる配列を有するポリペプチド鎖を用いて、２つの異なる抗原結合部位を有するダイアボディを作製することができる。同様に、トリボディおよびテトラボディは、それぞれ３つおよび４つのポリペプチド鎖を含む抗体であり、それぞれ、３つおよび４つの抗原結合部位を形成するが、これらは同じであるかまたは異なることができる。
【0082】
いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、１つ以上のＣＤＲを含む。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲ」は、その通常の意味を与えられるものとし、抗体可変配列内の相補性決定領域（「最小認識単位」または「超可変領域」とも呼ばれる）も指すものとする。ＣＤＲは、抗原結合タンパク質が目的の特定の抗原に特異的に結合することを可能にする。３つの重鎖可変領域ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２およびＣＤＲ－Ｈ３）および３つの軽鎖可変領域ＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２およびＣＤＲ－Ｌ３）がある。２つの鎖の各々におけるＣＤＲは、典型的には、フレームワーク領域によって整列され、標的タンパク質上の特定のエピトープまたはドメインに特異的に結合する構造を形成する。Ｎ末端からＣ末端に、天然に存在する軽鎖および重鎖可変領域はともに、典型的には、これらのエレメントの以下の順序：ＦＷ１、ＣＤＲ１、ＦＷ２、ＣＤＲ２、ＦＷ３、ＣＤＲ３、ＦＷ４に一致する。重鎖可変領域については、その順序は、典型的には、Ｎ末端からＣ末端にＦＷ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ１、ＦＷ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ２、ＦＷ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｈ３、およびＦＷ－Ｈ４である。軽鎖可変領域については、その順序は、典型的には、Ｎ末端からＣ末端にＦＷ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ１、ＦＷ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ２、ＦＷ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｌ３、ＦＷ－Ｌ４である。これらのドメインの各々において位置を占めるアミノ酸に番号を付ける番号付けシステムが考案されている。この番号付けシステムは、Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, MD)またはChothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342:878-883に定義される。所定の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）は、このシステムを用いて同定され得る。免疫グロブリン鎖中のアミノ酸の他の番号付けシステムには、ＩＭＧＴ（登録商標）（the international ImMunoGeneTics information system; Lefranc et al, Dev. Comp. Immunol. 29:185-203; 2005）、およびAHo (Honegger and Pluckthun, J. Mol. Biol. 309(3):657-670; 2001)が含まれる。本明細書に開示される結合ドメインは、これらのシステムのいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用することができる。１を超えるＣＤＲを含有する任意の所与の実施形態について、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ｅｘｔｅｎｄｅｄ、ＩＭＧＴ、Ｐａｒａｔｏｍｅ、ＡｂＭ、および／もしくは立体配座定義のいずれか、または上記のいずれかの組み合わせに従って定義することができる。任意のＣＤＲは、別々にまたは可変ドメインのコンテキスト内で、これらの番号付けシステムのいずれかの下で、適宜、当業者によって解釈され得る。１つ以上のＣＤＲを、共有結合的または非共有結合的に分子に組み込んで、それを抗原結合タンパク質とすることができる。
【0083】
いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗原結合タンパク質は、より大きなポリペプチド鎖の一部として１つ以上のＣＤＲ（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、１つ以上のＣＤＲ（複数可）を別のポリペプチド鎖に共有結合的に連結する。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質には、１つ以上のＣＤＲが非共有結合的に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、生体適合性フレームワーク構造に組み込まれた、本明細書に記載されるＣＤＲの少なくとも１つを含み得る。いくつかの実施形態では、生体適合性フレームワーク構造は、局在化表面領域において抗原（例えば、ＣＤＲ、可変領域など）に結合するアミノ酸の１つ以上の配列を提示することができる、立体構造的に安定な構造支持体、またはフレームワーク、または足場を形成するのに十分なポリペプチドまたはその一部を含む。このような構造は、天然に存在するポリペプチドもしくはポリペプチド「折り畳み」（構造モチーフ）であり得るか、または天然に存在するポリペプチドもしくは折り畳みに対して、アミノ酸の付加、欠失および／もしくは置換などの１つ以上の修飾を有し得る。実施形態に応じて、足場は、ヒト、非ヒト霊長類または他の哺乳動物、他の脊椎動物、無脊椎動物、植物、細菌もしくはウイルスなどの種々の異なる種（または１を超える種）のポリペプチドから誘導することができる。
【0084】
実施形態に応じて、生体適合性フレームワーク構造は、免疫グロブリンドメイン以外のタンパク質足場または骨格に基づく。一部のこのような実施形態では、これらのフレームワーク構造は、フィブロネクチン、アンキリン、リポカリン、ネオカルジノスタチン、チトクロームｂ、ＣＰ１ジンクフィンガー、ＰＳＴ１、コイルドコイル、ＬＡＣＩ－Ｄ１、Ｚドメインおよび／またはテンダミスタトドメインに基づく。
【0085】
いくつかの実施形態では、１を超える結合部位を有する抗原結合タンパク質もまた提供される。いくつかの実施形態では、結合部位は互いに同一であるが、いくつかの実施形態では、結合部位は互いに異なる。例えば、抗体は、典型的には、２つの同一の結合部位を有し、一方、「二重特異性」または「二機能的」抗体は、２つの異なる結合部位を有する。二重特異性抗原結合タンパク質または抗体の２つの結合部位は、同一または異なるタンパク質標的上に存在し得る２つの異なるエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、これは、二重特異性キメラ抗原受容体が、操作された細胞に、複数の腫瘍マーカーを標的化する能力を付与することができるため、特に有利である。例えば、とりわけ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６およびさらなる腫瘍マーカー、例えば、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１９、Ｈｅｒ２、メソテリン、クラウジン６、ＢＣＭＡ、ＥＧＦＲ、または本明細書に開示されるかもしくは腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原として当該技術分野において認識される任意の他のマーカーには、二重特異性抗体が結合し得る。
【0086】
腫瘍リガンドに結合するナチュラルキラーグループドメイン
いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞などの操作された免疫細胞は、腫瘍細胞を認識し、破壊するそれらの能力のために利用される。ＮＫ細胞は、細胞表面に抑制性受容体と活性化受容体の両方を発現する。抑制性受容体は、健常細胞の表面に発現する自己分子と結合し（したがって、「自己」細胞に対する免疫応答を妨げる）、一方、活性化受容体は、腫瘍細胞などの異常な細胞上に発現するリガンドと結合する。抑制性受容体活性化と活性化受容体活性化の間のバランスが活性化受容体に有利な場合、ＮＫ細胞活性化が起こり、標的（例えば、腫瘍）細胞が溶解する。
いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞などの操作された免疫細胞は、腫瘍細胞を認識し、破壊するそれらの能力のために利用される。ＮＫ細胞は、細胞表面に抑制性受容体と活性化受容体の両方を発現する。抑制性受容体は、健常細胞の表面に発現する自己分子と結合し（したがって、「自己」細胞に対する免疫応答を妨げる）、一方、活性化受容体は、腫瘍細胞などの異常な細胞上に発現するリガンドと結合する。抑制性受容体活性化と活性化受容体活性化の間のバランスが活性化受容体に有利な場合、ＮＫ細胞活性化が起こり、標的（例えば、腫瘍）細胞が溶解する。
【0087】
ナチュラルキラーグループ２メンバーＤ（ＮＫＧ２Ｄ）は、細胞上に発現される種々のリガンドを認識するＮＫ細胞活性化受容体である。種々のＮＫＧ２Ｄリガンドの表面発現は、一般的に健常細胞では低いが、例えば、悪性形質転換によって上方制御される。ＮＫＧ２Ｄによって認識されるリガンドの非限定的な例としては、限定されないが、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、およびＵＬＢＰ６、ならびにＮＫ細胞の細胞溶解または細胞傷害性機能を制御する標的細胞上に発現される他の分子が挙げられる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１つ以上の腫瘍リガンドに結合し、Ｔ細胞を活性化するために、細胞外ドメインを発現するように操作される。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、結合因子／活性化部分としてＮＫＧ２Ｄ受容体を発現するように操作される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される操作された細胞は、ＮＫＧ２ファミリーの別のメンバー、例えば、ＮＫＧ２Ａ、ＮＫＧ２Ｃ、および／またはＮＫＧ２Ｅを発現するように操作される。一部の実施形態では、このような受容体の組み合わせが操作される。さらに、いくつかの実施形態では、キラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）などの他の受容体が発現される。
【0088】
いくつかの実施形態では、細胞は、腫瘍細胞（例えば、肝細胞）の表面上のリガンドを認識するための細胞外成分としての全長ＮＫＧ２Ｄを含む細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される。一実施形態では、全長ＮＫＧ２Ｄは、配列番号２７の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、全長ＮＫＧ２Ｄ、またはその機能的断片は、ヒトＮＫＧ２Ｄである。本開示の方法および組成物において使用するためのキメラ受容体に関するさらなる情報は、ＰＣＴ特許公開第２０１８／１８３３８５号に記載され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0089】
いくつかの実施形態では、細胞は、腫瘍細胞または他の疾患細胞の表面上のリガンドを認識するための細胞外成分としてのＮＫＧ２Ｄの機能的断片を含む細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作される。一実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの機能的断片は、配列番号２５の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの断片は、完全長野生型ＮＫＧ２Ｄと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、断片は、配列番号２５からの１つ以上のさらなる突然変異を有することができるが、リガンド結合機能を保持するか、またはいくつかの実施形態では、増大したリガンド結合機能を有する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄの機能的断片は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ断片は、二量体、三量体、または他のコンカテマーフォーマットとして提供され、このような実施形態は、増大したリガンド結合活性を提供する。いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ断片をコードする配列は、完全または部分的に最適化されたコドンであってもよい。一実施形態では、コドンを最適化されたＮＫＧ２Ｄ断片をコードする配列は、配列番号２８の配列を含む。いくつかの実施形態によれば、有利には、機能的断片は、その天然の膜貫通ドメインまたは細胞内ドメインを欠いているが、ＮＫＧ２Ｄのリガンドに結合するその能力、ならびにリガンド結合時に活性化シグナルを伝達する能力を保持する。このような断片のさらなる利点は、ＮＫＧ２Ｄを細胞膜に局在化させるためにＤＡＰ１０を発現させる必要がないことである。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるポリペプチドよってコードされる細胞傷害性受容体複合体は、ＤＡＰ１０を含まない。いくつかの実施形態では、ＮＫまたはＴ細胞などの免疫細胞（例えば、本明細書に開示される実施形態に従って操作された非同種反応性Ｔ細胞）は、例えば、ＣＤ７０、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、Ｈｅｒ２、メソテリン、クラウジン６、ＢＣＭＡ、ＥＧＦＲ、およびＮＫＧ２Ｄリガンド、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、および／またはＵＬＢＰ６を標的化する１つ以上のキメラ受容体を発現するように操作される。このような細胞は、いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５も同時に発現する。
【0090】
いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体複合体は、二量体化するように構成される。二量体化は、実施形態に応じて、ホモ二量体またはヘテロ二量体を含み得る。いくつかの実施形態では、二量体化は、細胞傷害性受容体複合体（したがって、受容体を発現するＮＫ細胞）によるリガンド認識の改善をもたらし、有害な毒性効果の減少（または欠如）をもたらす。いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体複合体は、内部二量体、または１つ以上の成分サブユニットの反復を採用する。例えば、いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体複合体は、第２のＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメインに結合した第１のＮＫＧ２Ｄ細胞外ドメイン、および膜貫通／シグナル伝達領域（または別個のシグナル伝達領域とともに別個の膜貫通領域）を含み得てもよい。
【0091】
いくつかの実施形態では、種々のドメイン／サブドメインは、リンカー、例えば、使用されるＧＳ３リンカー（配列番号１５および１６、それぞれヌクレオチドおよびタンパク質）（またはＧＳｎリンカー）によって分離される。本明細書に開示される種々の実施形態に従って使用される他のリンカーは、限定されないが、配列番号１７、１９、２１または２３によってコードされるものを含む。いくつかの実施形態では、他のリンカーは、配列番号１８、２０、２２、２４のうちの１つのペプチド配列を含む。これは、受容体複合体の発現、安定性、および／または機能性を増大させることができるポリヌクレオチドに沿って、受容体複合体の種々の成分部分を分離する可能性を提供する。
【0092】
細胞傷害性シグナル伝達複合体
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、キメラ受容体、例えば、細胞傷害性シグナル伝達複合体を含む、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、および／またはＵＬＢＰ６などのＮＫＧ２Ｄリガンドに対する指向性を有するキメラ受容体に関する。本明細書に開示されるように、いくつかの実施形態によれば、提供される細胞傷害性受容体複合体は、標的細胞の表面上のリガンドに結合する細胞外ドメイン（複数可）上で細胞傷害性シグナル伝達カスケードを開始する１つ以上の膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインを含む。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、キメラ受容体、例えば、細胞傷害性シグナル伝達複合体を含む、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、および／またはＵＬＢＰ６などのＮＫＧ２Ｄリガンドに対する指向性を有するキメラ受容体に関する。本明細書に開示されるように、いくつかの実施形態によれば、提供される細胞傷害性受容体複合体は、標的細胞の表面上のリガンドに結合する細胞外ドメイン（複数可）上で細胞傷害性シグナル伝達カスケードを開始する１つ以上の膜貫通ドメインおよび／または細胞内ドメインを含む。
【0093】
いくつかの実施形態では、細胞傷害性シグナル伝達複合体は、少なくとも１つの膜貫通ドメイン、少なくとも１つの共刺激ドメイン、および／または少なくとも１つのシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、１を超える成分部分は、所定のドメインを構成する－例えば、共刺激ドメインは２つのサブドメインを含むことができる。さらに、一部の実施形態では、ドメインは、複数の機能を果たすことができ、例えば、膜貫通ドメインは、シグナル伝達機能を提供するのに役立つことができる。
【0094】
膜貫通ドメイン
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、膜貫通ドメインを含むキメラ受容体（例えば、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／またはリガンド指向性キメラ受容体）に関する。一部の実施形態は、ＮＫＧ２Ｄまたは別の膜貫通タンパク質からの膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインが採用されるいくつかの実施形態では、採用される膜貫通タンパク質の部分は、その正常な膜貫通ドメインの少なくとも一部を保持する。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、膜貫通ドメインを含むキメラ受容体（例えば、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／またはリガンド指向性キメラ受容体）に関する。一部の実施形態は、ＮＫＧ２Ｄまたは別の膜貫通タンパク質からの膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインが採用されるいくつかの実施形態では、採用される膜貫通タンパク質の部分は、その正常な膜貫通ドメインの少なくとも一部を保持する。
【0095】
しかしながら、いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、Ｔ細胞とＮＫ細胞の両方に通常発現される膜貫通糖タンパク質であるＣＤ８の少なくとも一部を含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８αを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、「ヒンジ」と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αの「ヒンジ」は、配列番号１の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジは切断または修飾され、配列番号１の配列を有するＣＤ８αと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αの「ヒンジ」は、配列番号２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αは、配列番号２の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断または修飾することができる。
【0096】
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインはＣＤ８α膜貫通領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号３の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジは切断されるかまたは修飾され、配列番号３の配列を有するＣＤ８αと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８α膜貫通ドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８αヒンジは切断されるかまたは修飾され、配列番号４の配列を有するＣＤ８αと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0097】
いくつかの実施形態では一緒になって、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体は、配列番号１３の核酸配列よってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体は切断されるかまたは修飾され、配列番号１３の配列を有するＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合ヒンジは切断されるかまたは修飾され、配列番号１４の配列を有するＣＤ８ヒンジ／膜貫通複合体と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0098】
一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインまたはその断片を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８膜貫通ドメイン複合体ヒンジは切断されるかまたは修飾され、配列番号３０の配列を有するＣＤ２８膜貫通ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0099】
共刺激ドメイン
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、共刺激ドメインを含むキメラ受容体（例えば、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／または腫瘍リガンド指向性キメラ受容体）に関する。さらに、いくつかの実施形態では、種々の膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメイン（および膜貫通／シグナル伝達ドメインの組み合わせ）、追加の共活性化分子を提供することができる。これらは、例えば、免疫細胞の活性をさらに増大させる特定の分子であり得る。サイトカインは、一部の実施形態において使用され得る。例えば、非限定的な例として、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５などの特定のインターロイキンが使用される。一部の実施形態では、治療のための免疫細胞は、分泌型のような分子を発現するように操作される。さらなる実施形態では、このような共刺激ドメインは、自己分泌刺激分子として（または隣接する細胞へのパラクリン刺激因子としてさえも）作用する膜結合性であるように操作される。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、共刺激ドメインを含むキメラ受容体（例えば、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／または腫瘍リガンド指向性キメラ受容体）に関する。さらに、いくつかの実施形態では、種々の膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメイン（および膜貫通／シグナル伝達ドメインの組み合わせ）、追加の共活性化分子を提供することができる。これらは、例えば、免疫細胞の活性をさらに増大させる特定の分子であり得る。サイトカインは、一部の実施形態において使用され得る。例えば、非限定的な例として、ＩＬ－２および／またはＩＬ－１５などの特定のインターロイキンが使用される。一部の実施形態では、治療のための免疫細胞は、分泌型のような分子を発現するように操作される。さらなる実施形態では、このような共刺激ドメインは、自己分泌刺激分子として（または隣接する細胞へのパラクリン刺激因子としてさえも）作用する膜結合性であるように操作される。
【0100】
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＮＫ細胞は、インターロイキン１５（ＩＬ１５、ＩＬ－１５）を発現するように操作される。一部の実施形態では、ＩＬ１５は、本明細書に開示されるＣＡＲのいずれか１つを含むコンストラクト上の別個のカセットから発現される。一部の実施形態では、ＩＬ１５は、本明細書に開示されるＣＡＲのいずれか１つと同じカセットで発現され、場合により、切断部位、例えば、タンパク質分解切断部位またはＴ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、もしくはＦ２Ａ自己切断ペプチド切断部位によって分離される。一部の実施形態では、ＩＬ１５は、膜結合ＩＬ１５（ｍｂＩＬ１５）である。一部の実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、ヒト天然ＩＬ１５配列などの天然ＩＬ１５配列、および少なくとも１つの膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、天然ＩＬ１５配列は、配列番号１１と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する配列によってコードされる。一部の実施形態では、天然ＩＬ１５配列は、配列番号１２と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、リーダー配列および／またはヒンジ配列などの追加の成分を含み得る。一部の実施形態では、リーダー配列はＣＤ８リーダー配列である。一部の実施形態では、ヒンジ配列はＣＤ８ヒンジ配列である。
【0101】
一部の実施形態では、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／または腫瘍リガンド指向性キメラ受容体は、１つ以上の細胞質プロテアーゼ切断部位をコードするポリヌクレオチドによってコードされる。このような部位は、細胞質プロテアーゼによって認識され、切断され、ポリヌクレオチドによってコードされる受容体の種々の成分部分の分離（および別々の発現）をもたらすことができる。一部の実施形態では、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／または腫瘍リガンド指向性キメラ受容体は、１つ以上の自己切断ペプチド、例えば、Ｔ２Ａ切断部位、Ｐ２Ａ切断部位、Ｅ２Ａ切断部位、および／またはＦ２Ａ切断部位をコードするポリヌクレオチドによってコードされる。結果として、実施形態に応じて、操作された細胞傷害性受容体複合体の種々の構成部分は、単一のベクターまたは複数のベクターによりＮＫ細胞またはＴ細胞にデリバリーされ得る。したがって、図に概略的に示されるように、コンストラクトは、単一のポリヌクレオチドよってコードされ得るが、切断部位も含み、そのため、コンストラクトの下流要素は、別個のタンパク質として細胞により発現される（ＩＬ－１５を有する一部の実施形態における場合のように）。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ切断部位が使用される。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ切断部位は、配列番号９の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ切断部位は、配列番号９の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断されるかまたは修飾され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ切断部位は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ２Ａ切断部位は切断されるかまたは修飾され、配列番号１０の配列を有するＴ２Ａ切断部位と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0102】
いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、膜結合インターロイキン１５（ｍｂＩＬ１５）を発現するように操作される。このような実施形態では、ＮＫ上のｍｂＩＬ１５発現は、ＮＫ細胞の増殖および／または寿命を増大させることによって、操作されたＮＫ細胞の細胞傷害効果を増大させる。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、ＣＡＲと同じポリヌクレオチドによってコードされる。一部の実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１１の配列を含むポリヌクレオチド、および膜貫通ドメインをコードする配列によってコードされる。一部の実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、膜貫通ドメインのアミノ酸配列に機能的に結合した配列番号１２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１１８８の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１１８８の配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように、切断または修飾することができる。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号１１８９のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は切断または修飾され、配列番号１１８９の配列を有するｍｂＩＬ１５と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。膜結合ＩＬ１５配列は、ＰＣＴ公開第２０１８／１８３３８５号および同第２０２０／０５６０４５号において探索され、それらの各々は、参照によりその全体が明示的に本明細書に組み込まれ、膜結合ＩＬ１５配列に関連する。
【0103】
シグナル伝達ドメイン
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、シグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体（例えば、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／または腫瘍リガンド指向性キメラ受容体）に関する。例えば、本明細書に開示されるいくつかの実施形態に従って操作された免疫細胞は、ＣＤ３ Ｔ細胞受容体複合体（またはその断片）の少なくとも１つのサブユニットを含み得る。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータは、配列番号７の核酸配列よってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータは、配列番号７の配列を有するＣＤ３ゼータと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断されるかまたは修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータドメインは切断されるかまたは修飾され、配列番号８の配列を有するＣＤ３ゼータドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、シグナル伝達ドメインを含むキメラ受容体（例えば、腫瘍抗原指向性ＣＡＲおよび／または腫瘍リガンド指向性キメラ受容体）に関する。例えば、本明細書に開示されるいくつかの実施形態に従って操作された免疫細胞は、ＣＤ３ Ｔ細胞受容体複合体（またはその断片）の少なくとも１つのサブユニットを含み得る。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータは、配列番号７の核酸配列よってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータは、配列番号７の配列を有するＣＤ３ゼータと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断されるかまたは修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータドメインは、配列番号８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３ゼータドメインは切断されるかまたは修飾され、配列番号８の配列を有するＣＤ３ゼータドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。
【0104】
いくつかの実施形態では、予期せぬ増大したシグナル伝達は、その活性が相乗的に作用する複数のシグナル伝達ドメインの使用によって達成される。例えば、いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、ＯＸ４０ドメインをさらに含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号５の核酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号５の配列を有するＯＸ４０と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断されるかまたは修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインは切断されるかまたは修飾され、配列番号６の配列を有するＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０は、コンストラクトにおける唯一の膜貫通／シグナル伝達ドメインとして使用されるが、いくつかの実施形態では、ＯＸ４０は、１つ以上の他のドメインとともに使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＯＸ４０およびＣＤ３ゼータの組み合わせが使用される。さらなる例として、いくつかの実施形態では、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、および／またはＣＤゼータの組み合わせが使用される。
【0105】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢドメインを含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢドメインは、配列番号２９の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢドメインは、配列番号２９の配列を有する４－１－ＢＢドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断または修飾することができる。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインは、切断されるかまたは修飾され、配列番号３０の配列を有する４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢは、コンストラクトにおける唯一の膜貫通／シグナル伝達ドメインとして使用されるが、いくつかの実施形態では、４－１ＢＢは、１つ以上の他のドメインとともに使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、４－１ＢＢとＣＤ３ゼータとの組み合わせが使用される。さらなる例として、いくつかの実施形態では、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、および／またはＣＤ３ゼータの組み合わせが使用される。
【0106】
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインはＣＤ２８ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３１の核酸配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３２の配列を有するＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有するように切断または修飾することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインは、配列番号３２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインは切断または修飾され、配列番号３２の配列を有するＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメインと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％の配列同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８は、コンストラクトにおける唯一の膜貫通／シグナル伝達ドメインとして使用されるが、いくつかの実施形態では、ＣＤ２８は、１つ以上の他のドメインとともに使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＤ２８およびＣＤ３ゼータの組み合わせが使用される。さらなる例として、いくつかの実施形態では、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、および／またはＣＤ３ゼータの組み合わせが使用される。
【0107】
細胞傷害性受容体複合体コンストラクト
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、キメラ受容体、例えば、ＮＫＧ２Ｄのリガンドを標的化する活性化キメラ受容体（ＡＣＲ）に関する。遺伝子修飾された非同種反応性Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞などの免疫細胞におけるこれらの細胞傷害性受容体複合体の発現は、がん性細胞などの特定の標的細胞の標的化および破壊を可能にする。このような細胞傷害性受容体複合体の非限定的な例は、以下でより詳細に検討される。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、キメラ受容体、例えば、ＮＫＧ２Ｄのリガンドを標的化する活性化キメラ受容体（ＡＣＲ）に関する。遺伝子修飾された非同種反応性Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞などの免疫細胞におけるこれらの細胞傷害性受容体複合体の発現は、がん性細胞などの特定の標的細胞の標的化および破壊を可能にする。このような細胞傷害性受容体複合体の非限定的な例は、以下でより詳細に検討される。
【0108】
いくつかの実施形態では、腫瘍結合剤／ＣＤ８ヒンジ－ＣＤ８ＴＭ／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータキメラ受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される（図１、キメラ受容体Ａを参照されたい）。ポリヌクレオチドは、ＮＫＧ２Ｄリガンド結合部分、ＣＤ８ａヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、ＣＤ３ゼータドメインを含むかまたはそれらから構成される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、さらに、本明細書に記載されるように、２Ａ切断部位、およびｍｂＩＬ－１５ドメインをコードする（単一のポリヌクレオチドが受容体とｍｂＩＬ１５の両方をコードするポリヌクレオチド構造を表す、図１、キメラ受容体Ｂを参照されたい）。いくつかの実施形態では、この受容体複合体は、本明細書に開示される配列の組み合わせから得られた配列を含む核酸分子によってコードされるか、または本明細書に開示される配列の組み合わせから得られたアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コード核酸配列またはアミノ酸配列は、構成部分の例として本明細書に含まれるものなどの本明細書に記載される１つ以上の配列番号に従う配列を含む。いくつかの実施形態では、コード核酸配列またはアミノ酸配列は、本明細書に記載される１つ以上の配列番号の組み合わせから生じる配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の配列同一性、相同性、および／または機能的同等性を共有する配列を含む。開示された配列の特定の配列変化、伸長、および／または切断は、例えば、クローニング（例えば、制限部位の作製のための）の容易さまたは効率の結果として、配列を組み合わせる場合に生じ得ることが承認されるものである。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、本明細書に提供される配列番号のうちの１つ以上の配列、またはその部分（例えば、ｍｂＩＬ１５配列および／もしくは自己切断ペプチド配列を除く部分）と少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上、または前述のパーセンテージのいずれか２つによって定義される範囲の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
【0109】
いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ／ＣＤ８ａヒンジ／ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン／ＯＸ４０／ＣＤ３ゼータ活性化キメラ受容体複合体をコードするポリヌクレオチドが提供される（図２、ＮＫＧ２Ｄ ＡＣＲ Ａを参照されたい）。ポリヌクレオチドは、本明細書に記載されるように、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンド、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ８ａ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０ドメイン、およびＣＤ３ゼータドメインと結合することができるＮＫＧ２Ｄ受容体の断片を含むかまたはそれらから構成される。いくつかの実施形態では、この受容体複合体は、配列番号３３の核酸配列を含む核酸分子によってコードされる。さらに別の実施形態では、このキメラ受容体は、配列番号３４のアミノ酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、キメラ受容体の配列は、配列番号３２または３３と異なることができるが、実施形態に依存して、配列番号３３または３４と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一のままである。いくつかの実施形態では、キメラ受容体は、配列番号３３または３４と異なることができるが、キメラ受容体は、ＮＫ細胞活性化および／または細胞傷害性機能を保持するか、またはいくつかの実施形態ではそれらを増大させている。さらに、いくつかの実施形態では、このコンストラクトは、配列番号３５または３７によってコードされるｍｂＩＬ１５（図２、ＮＫＧ２Ｄ ＡＣＲ Ｂ、単一のポリヌクレオチドが受容体とｍｂＩＬ１５の両方をコードするポリヌクレオチド構造を表す）などのｍｂＩＬ１５と共発現されてもよい。いくつかの実施形態では、ｍｂＩＬ１５は、配列番号３６または３８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｍｂＩＬ１５の配列は、配列番号３６または３８と異なることができるが、実施形態に依存して、配列番号３６または３８と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％同一のままである。
【0110】
本開示の方法および組成物において使用するためのキメラ受容体に関するさらなる情報は、２０１８年３月２７日に出願されたＰＣＴ特許公開第２０１８／１８３３８５号に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0111】
処置方法
いくつかの実施形態は、本明細書に開示されているように、キメラ抗原受容体および／または活性化キメラ受容体を含む細胞または免疫細胞を用いて、がんを処置し、軽快させ、阻害し、または予防する方法に関する。一部の実施形態では、方法は、がんを処置または予防することを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載されるように、腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／または腫瘍指向性キメラ受容体を発現する、治療上有効量の免疫細胞を投与することを含む。このように処置され得るがんのタイプの例は、本明細書に記載される。
いくつかの実施形態は、本明細書に開示されているように、キメラ抗原受容体および／または活性化キメラ受容体を含む細胞または免疫細胞を用いて、がんを処置し、軽快させ、阻害し、または予防する方法に関する。一部の実施形態では、方法は、がんを処置または予防することを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載されるように、腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／または腫瘍指向性キメラ受容体を発現する、治療上有効量の免疫細胞を投与することを含む。このように処置され得るがんのタイプの例は、本明細書に記載される。
【0112】
対象におけるがんを処置する方法が、本明細書において開示される。一部の実施形態では、本方法は、本明細書に開示されるＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメインのいずれか１つ、本明細書に開示されるキメラ受容体のいずれか１つ、または本明細書に開示される細胞のいずれか１つ、またはそれらのいずれかの組み合わせを対象に投与することを含む。
【0113】
特定の実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞（複数可）を用いた対象の処置は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上を達成し、例えば、（ｉ）疾患またはそれに関連する症状の重症度の減少または軽快；（ｉｉ）疾患に関連する症状の持続期間の減少；（ｉｉｉ）疾患またはそれに関連する症状の進行に対する保護；（ｉｖ）疾患またはそれに関連する症状の退行；（ｖ）疾患に関連する症状の発生または発症に対する保護；（ｖｉ）疾患に関連する症状の再発に対する保護；（ｖｉｉ）対象の入院の減少；（ｖｉｉｉ）入院期間の減少；（ｉｘ）疾患を有する対象の生存の増加；（ｘ）疾患に関連する症状の数の減少；（ｘｉ）別の治療法の予防効果または治療効果の強化、改善、補足、補完、または増強が含まれる。有利には、本明細書に開示される非同種反応性の操作されたＴ細胞は、上記のうちの１つ以上をさらに増大させる。投与は、限定されないが、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、肝内、腹腔内、および／または患部組織への局所デリバリーなどの種々の経路によることができる。
【0114】
また、本明細書に開示されるＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメインのいずれか１つ、本明細書に開示されるキメラ受容体のいずれか１つ、本明細書に開示される細胞のいずれか１つ、またはがんの処置のためのそれらの任意の組み合わせの使用が本明細書に開示される。
【0115】
また、本明細書に開示されるＮＫＧ２Ｄリガンド結合ドメインのいずれか１つ、本明細書に開示されるキメラ受容体のいずれか１つ、本明細書に開示される細胞のいずれか１つ、またはがんの処置のための薬剤の製造におけるそれらの任意の組み合わせの使用が本明細書に開示される。
【0116】
投与および用量
本明細書では、がんを有する対象を処置する方法であって、本明細書に開示される細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞）を含む組成物を対象に投与することを含む方法がさらに提供される。例えば、本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、がん患者を処置するための、腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／もしくは腫瘍指向性キメラ受容体の使用、または腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／もしくは腫瘍指向性キメラ受容体を発現する細胞の使用に関する。がんを処置するためのこのような操作された免疫細胞の使用もまた提供される。
本明細書では、がんを有する対象を処置する方法であって、本明細書に開示される細胞傷害性受容体複合体を発現するように操作された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞）を含む組成物を対象に投与することを含む方法がさらに提供される。例えば、本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、がん患者を処置するための、腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／もしくは腫瘍指向性キメラ受容体の使用、または腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／もしくは腫瘍指向性キメラ受容体を発現する細胞の使用に関する。がんを処置するためのこのような操作された免疫細胞の使用もまた提供される。
【0117】
特定の実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞（複数可）を用いた対象の処置は、以下の効果のうちの１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれ以上を達成し、例えば、（ｉ）疾患またはそれに関連する症状の重症度の減少または軽快；（ｉｉ）疾患に関連する症状の持続期間の減少；（ｉｉｉ）疾患またはそれに関連する症状の進行に対する保護；（ｉｖ）疾患またはそれに関連する症状の退行；（ｖ）疾患に関連する症状の発生または発症に対する保護；（ｖｉ）疾患に関連する症状の再発に対する保護；（ｖｉｉ）対象の入院の減少；（ｖｉｉｉ）入院期間の減少；（ｉｘ）疾患を有する対象の生存の増加；（ｘ）疾患に関連する症状の数の減少；（ｘｉ）別の治療法の予防効果または治療効果の強化、改善、補足、補完、または増強が含まれる。これらの比較の各々は、例えば、本明細書に開示されるコンストラクトを発現しない細胞を用いた、疾患に対する細胞ベースの免疫療法を含む、疾患に対する異なる療法に対するものである。有利には、本明細書に開示される非同種反応性の操作されたＴ細胞は、上記のうちの１つ以上をさらに増大させる。
【0118】
投薬は、種々の経路、例えば、限定されないが、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、肝内、腹腔内、および／または患部組織への局所送達によって行うことができる。本明細書に記載されるキメラ受容体複合体を発現するように操作された細胞（特に、ＮＫ細胞および／またはＴ細胞）は、注射、例えば、ボーラス注射または注入によって非経口投薬のために製剤化することができる。
【0119】
ＮＫおよび／またはＴ細胞などの免疫細胞の用量は、所与の対象について、それらの体重、疾患タイプおよび状態、および処置の所望の攻撃性に基づいて容易に決定することができるが、実施形態に応じて、約１０５細胞／ｋｇ～約１０１２細胞／ｋｇ（例えば、１０５～１０７、１０７～１０１０、１０１０～１０１２、およびその中の重複範囲）の範囲である。一実施形態では、用量漸増レジメンが使用される。いくつかの実施形態では、ＮＫおよび／またはＴ細胞などの様々な免疫細胞が、例えば、約１×１０６細胞／ｋｇ～約１×１０８細胞／ｋｇの間で投与される。
【0120】
いくつかの実施形態では、１×１０８個のＮＫ細胞は、２８日サイクル全体で３回投与される（５０ｋｇ未満の対象に対して２×１０６個／ｋｇ）。いくつかの実施形態では、３×１０８個のＮＫ細胞は、２８日サイクル全体で３回投与される。いくつかの実施形態では、１×１０９個のＮＫ細胞は、２８日サイクル全体で３回投薬される。
【0121】
いくつかの実施形態では、１．５×１０８個のＮＫ細胞は、２８日サイクル全体で２回投与される（５０ｋｇ未満の対象に対して３×１０６個／ｋｇ）。いくつかの実施形態では、４．５×１０８個のＮＫ細胞は、２８日サイクル全体で２回投与される。いくつかの実施形態では、１．５×１０９個のＮＫ細胞が、２８日サイクル全体で２回投与される。
【0122】
いくつかの実施形態では、１．５×１０９個のＮＫ細胞が、２８日サイクル全体で３回投与される（５０ｋｇ未満の対象に対して３×１０７個／ｋｇ）。いくつかの実施形態では、３×１０９個のＮＫ細胞が、２８日サイクル全体で３回投与される。いくつかの実施形態では、１．５×１０１０個のＮＫ細胞が、２８日サイクル全体で３回投薬される。いくつかの実施形態では、少なくとも４．５×１０９個のＮＫ細胞が、サイクル全体で投薬される。
【0123】
いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞の投与は、１つ以上の予備的処置によって先行される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞の投与は、リンパ球枯渇によって先行される。いくつかの実施形態では、化学療法剤の組み合わせが、リンパ球枯渇のために使用される。いくつかの実施形態では、単一の化学療法剤がリンパ球枯渇のために使用される。いくつかの実施形態では、化学療法剤の組み合わせが使用される場合、異なるメカニズムを有する薬剤が使用されてもよい。いくつかの実施形態では、異なるクラスの薬剤が使用されてもよい。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤が使用される。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、細胞複製を阻害および／または予防する。いくつかの実施形態では、代謝拮抗剤は、ＤＮＡ複製を破壊する改変ヌクレオチドであり、急速に分裂する腫瘍細胞（ＡＭＬまたは骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）におけるものなど）を標的化するのに効果的である。いくつかの実施形態では、シトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）が使用される。いくつかの実施形態では、約０．２～約１０ｇ／ｍ２のＡｒａ－Ｃの用量が投与され、約０．２ｇ／ｍ２、約０．５ｇ／ｍ２、約１．０ｇ／ｍ２、約１．５ｇ／ｍ２、約２．０ｇ／ｍ２、約２．５ｇ／ｍ２、約３．０ｇ／ｍ２、約３．５ｇ／ｍ２、約４．０ｇ／ｍ２、約５．０ｇ／ｍ２、約６．０ｇ／ｍ２、約７．０ｇ／ｍ２、約８．０ｇ／ｍ２、約９．０ｇ／ｍ２、約１０．０ｇ／ｍ２、約１０．５ｇ／ｍ２、またはこれらの間の任意の用量が含まれる。いくつかの実施形態では、Ａｒａ－Ｃの用量は、少なくとも約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間、毎日与えられる。いくつかの実施形態では、必要であれば、用量を分割し、例えば、１日２回与えることができる。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、Ａｒａ－Ｃと組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、代謝拮抗剤でもある。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、ＤＮＡポリメラーゼアルファ、リボヌクレオチドレダクターゼおよび／またはＤＮＡプライマーゼのうちの１つ以上を阻害し、したがって、ＤＮＡ合成を阻害する。いくつかの実施形態では、追加の薬剤は、フルダラビンである。いくつかの実施形態では、約５．０ｍｇ／ｍ２～約２００ｍｇ／ｍ２のフルダラビンの用量が投与され、約５．０ｍｇ／ｍ２、約１０．０ｍｇ／ｍ２、約１５．０ｍｇ／ｍ２、約２０．０ｍｇ／ｍ２、約２５．０ｍｇ／ｍ２、約３０．０ｍｇ／ｍ２、約３５．０ｍｇ／ｍ２、約４０．０ｍｇ／ｍ２、約４５．０ｍｇ／ｍ２、約５０．０ｍｇ／ｍ２、約６０．０ｍｇ／ｍ２、約７０．０ｍｇ／ｍ２、約８０．０ｍｇ／ｍ２、約９０．０ｍｇ／ｍ２、約１００．０ｍｇ／ｍ２、約１２５．０ｍｇ／ｍ２、約１５０．０ｍｇ／ｍ２、約１７５．０ｍｇ／ｍ２、約２００．０ｍｇ／ｍ２の用量、またはこれらの間の任意の用量が含まれる。いくつかの実施形態では、フルダラビンの用量は、少なくとも約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、約６日間、または約７日間、毎日与えられる。いくつかの実施形態では、必要であれば、用量を分割し、例えば、１日２回与えることができる。いくつかの実施形態では、フルダラビンとＡｒａ－Ｃの組み合わせは、約２０ｍｇ／ｍ２～４０ｍｇ／ｍ２のフルダラビンの１日用量、および約１．５ｇ／ｍ２～２．５ｇ／ｍ２のＡｒａ－Ｃの１日用量とともに使用される。いくつかの実施形態では、フルダラビンとＡｒａ－Ｃ（または本明細書に開示される任意の他の薬剤または複数の薬剤）の組み合わせは、少なくとも約５日間投与され、投与は、操作されたＮＫ細胞の第１の投薬の約７日前（例えば、第－７日～－３日）に開始される。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、操作されたＮＫ細胞の投薬前の－５日目に開始される。いくつかの実施形態では、この組み合わせは、リンパ球枯渇レジメンとしてだけでなく、（操作されたＮＫ細胞に加えて）抗がん剤としても有利に機能する。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇レジメンは、操作されたＮＫ細胞と相乗的に作用して、がん性細胞の効果減少および／または除去を提供する。
【0124】
特定の実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞またはその組成物の用量は、毎日、隔日、２日ごと、数日ごと、３日ごと、週１回、週２回、週３回、または２週間ごとに１回、対象に投与される。他の実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞またはその組成物の２、３または４用量は、毎日、２日ごと、３日ごと、週１回、または２週間ごとに１回、対象に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞またはその組成物の用量は、２日間、３日間、５日間、７日間、１４日間、または２１日間投与される。特定の実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された細胞またはその組成物の用量は、１か月、１．５か月、２か月、２．５か月、３か月、４か月、５か月、６か月またはそれ以上投与される。
【0125】
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に開示されるように、遺伝子操作された細胞の投与前に、少なくとも１回リンパ球枯渇に供される。いくつかの実施形態では、１つ以上の追加の用量の操作された細胞が投与される前に、リンパ球枯渇が行われる。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇に続いて、本明細書に開示されるように、少なくとも２用量の操作された細胞を含む投薬サイクルが使用され、２用量を一定の時間間隔で分離する。いくつかの実施形態では、時間間隔は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１日、またはそれ以上である（最後の投与から正確な時間間隔をマークする時間を含む時間間隔、例えば、８４時間または３．５日を含む）。いくつかの実施形態では、投薬サイクル自体は、約１４、２１、２８、３５、４２日またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、３用量は、互いに約１週間の間隔を置いて投与される。いくつかの実施形態では、２用量は、互いに約１週間の間隔を置いて投与される。いくつかの実施形態では、対象は、サイクルの０日目に第１の用量を受け、サイクルの７日目に第２の用量を受け、サイクルの１４日目に第３の用量を受ける。いくつかのこのような実施形態では、２８日サイクルが、２８日目に評価された主要転帰尺度とともに使用される（例えば、図３Ａを参照されたい）。いくつかの実施形態では、対象は、サイクルの０日目に第１の用量を受け、サイクルの７日目に第２の用量を受ける。いくつかのこのような実施形態では、２８日サイクルが、２８日目に評価された主要転帰尺度とともに使用される（例えば、図３Ｂを参照されたい）。いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、その後の投薬サイクルが必要とされる場合（例えば、対象がさらなる処置を必要とする場合）、各投薬サイクルの開始前に行われる。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、リンパ球枯渇を経て、サイクルに従って複数の用量の操作された細胞を受け、サイクル時間の終わりに評価され、必要と思われる場合、第２のリンパ球枯渇を経て、続いて第２の投薬サイクルを受ける。いくつかの実施形態では、フルダラビン／シクロホスファミドは、リンパ球枯渇を達成するために使用される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）およびフルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２）を３日間、毎日投与する。実施形態に応じて、異なる濃度を使用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、５００ｍｇ／ｍ２のシクロホスファミドの用量がフルダラビンとともに使用される。複数の投薬サイクルが使用されるこのような実施形態では、第１および第２の投薬サイクルは同じである必要はない（例えば、第１のサイクルは２用量を有してもよく、第２のサイクルは３用量を使用する）。対象に応じて、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回、またはそれ以上の投薬サイクルが行われる。
【0126】
実施形態に依存して、種々のタイプのがんを処置することができる。いくつかの実施形態では、処置されるがんは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。いくつかの実施形態では、処置されるがんは、骨髄異形成症候群である。いくつかの実施形態では、肝細胞癌腫が処置される。いくつかの実施形態では、肝内胆管癌腫または他の肝腫瘍、例えば、大腸がんからの二次転移が、処置される。本明細書において提供されるさらなる実施形態は、がんの以下の非制限的な例の処置または予防を含み、限定されないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）副腎皮質がん腫、カポジ肉腫、リンパ腫、胃腸がん、虫垂がん、中枢神経系がん、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍（限定されないが、例えば、星状細胞腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、神経膠芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣芽腫、上衣腫、髄芽腫、髄芽腫）、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、頸部がん、結腸がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性疾患、乳管がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、腎細胞がん、白血病、口腔がん、鼻咽頭がん、肝臓がん、肺がん（限定されないが、例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺がん）、膵臓がん、腸がん、リンパ腫、黒色腫、眼がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、下垂体がん、子宮がん、および膣がんが含まれる。
【0127】
一部の実施形態では、本明細書には、配列番号１～３８（または配列番号１～３８のうちの２つ以上の組み合わせ）のそれぞれの核酸またはアミノ酸配列と比較して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％（およびその範囲）の配列同一性および／または相同性を有し、それぞれの配列番号１～３８（または配列番号１～３８のうちの２つ以上の組み合わせ）と比較して、限定されないが、（ｉ）増大した増殖、（ｉｉ）増大した活性化、（ｉｉｉ）核酸およびアミノ酸配列よってコードされる受容体を有するＮＫ細胞が結合するリガンドを提示する細胞に対する増大した細胞傷害活性、（ｉｖ）増大した腫瘍または感染部位へのホーミング、（ｖ）減少した標的外の細胞傷害効果、（ｖｉ）増大した免疫刺激性サイトカインおよびケモカイン（限定されないが、ＩＦＮｇ、ＴＮＦａ、ＩＬ－２２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、およびＣＣＬ５を含む）の増大した分泌、（ｖｉｉ）さらなる先天性および適応性免疫応答を刺激する増大した能力、および（ｖｉｉ）それらの組み合わせを含む機能のうちの１つ以上も示す核酸およびアミノ酸配列もまた提供される。
【0128】
さらに、いくつかの実施形態では、核酸コードの縮重を主要因としながら、本明細書に開示される核酸のいずれかに対応するアミノ酸配列が提供される。さらに、本明細書に明示的に開示されたものとは異なるが、機能的類似性または同等性を有する配列（核酸またはアミノ酸のいずれか）もまた、本開示の範囲内で企図される。上記には、突然変異、切断、置換、または他のタイプの修飾が含まれる。
【0129】
いくつかの実施形態では、開示された細胞傷害性受容体複合体をコードするポリヌクレオチドはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、細胞傷害性受容体複合体の発現のために少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結される。
【0130】
さらに、いくつかの実施形態によれば、本明細書において提供されるポリヌクレオチドのいずれかをコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供され、細胞傷害性受容体複合体の発現のために、ポリヌクレオチドが少なくとも１つの調節エレメントに作動可能に連結されてもよいベクターが提供される。いくつかの実施形態では、ベクターはレトロウイルスである。
【0131】
さらに、本明細書では、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、または細胞傷害性受容体複合体を含む、操作された免疫細胞（例えば、ＮＫおよび／またはＴ細胞）が提供される。さらに、本明細書では、操作された免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞および／または操作されたＴ細胞）の混合物を含む組成物が提供され、各集団は、本明細書に開示されるポリヌクレオチド、ベクター、または細胞傷害性受容体複合体を含む。
【0132】
がんの種類
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／または腫瘍指向性キメラ受容体を含む免疫細胞を、がんを有する患者に投与することに関する。本明細書において提供される種々の実施形態は、以下のがんの非限定的な例の処置または予防を含む。がんの例としては、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、副腎皮質がん腫、カポジ肉腫、リンパ腫、胃腸がん、虫垂がん、中枢神経系がん、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍（限定されないが、例えば、星状細胞腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣芽腫、上衣腫、髄芽腫、髄芽腫）、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、頸部がん、結腸がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性疾患、乳管がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、腎細胞がん、白血病、口腔がん、鼻咽頭がん、肝臓がん、肺がん（限定されないが、例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺がん）、膵臓がん、腸がん、リンパ腫、黒色腫、眼がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、下垂体がん、子宮がん、および膣がんが挙げられる。
本明細書に記載される組成物および方法の一部の実施形態は、腫瘍指向性キメラ抗原受容体および／または腫瘍指向性キメラ受容体を含む免疫細胞を、がんを有する患者に投与することに関する。本明細書において提供される種々の実施形態は、以下のがんの非限定的な例の処置または予防を含む。がんの例としては、限定されないが、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、副腎皮質がん腫、カポジ肉腫、リンパ腫、胃腸がん、虫垂がん、中枢神経系がん、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍（限定されないが、例えば、星状細胞腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣芽腫、上衣腫、髄芽腫、髄芽腫）、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、頸部がん、結腸がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性疾患、乳管がん、子宮内膜がん、食道がん、胃がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、腎細胞がん、白血病、口腔がん、鼻咽頭がん、肝臓がん、肺がん（限定されないが、例えば、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）および小細胞肺がん）、膵臓がん、腸がん、リンパ腫、黒色腫、眼がん、卵巣がん、膵臓がん、前立腺がん、下垂体がん、子宮がん、および膣がんが挙げられる。
【0133】
がん標的
本明細書に記載される組成物および方法のいくつかの実施形態は、がん抗原を標的化するキメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、および／またはＵＬＢＰ６を含む免疫細胞に関する。標的抗原のさらなる非限定的な例には、ＣＤ７０、ＣＤ５、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも呼ばれる）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；ＣＤ３８；ＤＬＬ３；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）ＣＤ１３８；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）のようなＦｍｓ；ＫＲＥＭＥＮ２（クリングル含有膜貫通タンパク質２）、ＡＬＰＰＬ２、クラウジン４、クラウジン６、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮細胞増殖因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）；）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）または（ＧａｌＮＡｃａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）のようなＦｍｓ；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；造血前駆細胞ではなく急性白血病またはリンパ腫で発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血がんで発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ－ＩＩＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスチシンまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）；ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシンプロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；ブレークポイントクラスター領域（ＢＣＲ）とアベルソンマウス白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ－ａｂｌ）からなるオンコジーン融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クラウジン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミド（ＧｌｏｂｏＨ）の六糖部分；乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；がん／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳ０－１）；がん／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）；染色体１２ｐに位置するＥＴＳ転座変異体遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；メラノーマがん精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；メラノーマがん精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴ Ａ－ｌまたはガレクチン８）、Ｔ細胞１によって認識されるメラノーマ抗原（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ；逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニル－トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫ウイルス性オンコジーン神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）；シトクロムＰ４５０ ＩＢ１（ＣＹＰＩＢ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはＢｒｏｔｈｅｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆｌｍｐｒｉｎｔｅｄ Ｓｉｔｅｓ）、Ｔ細胞３によって認識される扁平上皮がん抗原（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；キナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ－１）；腎ユビキタス１（ＲＵ１）；腎ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶＥ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０－２突然変異（ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ－ＭＹＣエピトープＴａｇ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１、ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル－ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１－ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬｌ ｌＲａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ－ＩＧＬｌｌ、ＴＣＲガンマ－デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ ａｇ、Ｔｉｍ１－／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ－ＣＳＦＲ－アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ Ａｇ、ＴＣＲ－ベータ鎖、ＴＣＲ－ベータ２鎖、ＴＣＲ－ガンマ鎖、ＴＣＲ－デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１－Ｔａｘ、ＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ Ｋ８．１、ＫＳＨＶ－ｇＨ、インフルエンザＡヘマグルチニン（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３（Ｄｓｇ３）に対する自己抗体、デスモグレイン１（Ｄｓｇｌ）に対する自己抗体、ＨＬＡ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、クラウジン８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ－糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン－４、Ｃｒｉｐｔｏ、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原が含まれる。
本明細書に記載される組成物および方法のいくつかの実施形態は、がん抗原を標的化するキメラ受容体、例えば、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＵＬＢＰ１、ＵＬＢＰ２、ＵＬＢＰ３、ＵＬＢＰ４、ＵＬＢＰ５、および／またはＵＬＢＰ６を含む免疫細胞に関する。標的抗原のさらなる非限定的な例には、ＣＤ７０、ＣＤ５、ＣＤ１９；ＣＤ１２３；ＣＤ２２；ＣＤ３０；ＣＤ１７１；ＣＳ１（ＣＤ２サブセット１、ＣＲＡＣＣ、ＳＬＡＭＦ７、ＣＤ３１９、および１９Ａ２４とも呼ばれる）；ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーＢ細胞成熟（ＢＣＭＡ）；ＣＤ３８；ＤＬＬ３；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）ＣＤ１３８；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）のようなＦｍｓ；ＫＲＥＭＥＮ２（クリングル含有膜貫通タンパク質２）、ＡＬＰＰＬ２、クラウジン４、クラウジン６、Ｃ型レクチン様分子－１（ＣＬＬ－１またはＣＬＥＣＬ１）；ＣＤ３３；上皮細胞増殖因子受容体変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖｉｉｉ）；ガングリオシドＧ２（ＧＤ２）；ガングリオシドＧＤ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－８）ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＧａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）；）；Ｔｎ抗原（（ＴｎＡｇ）または（ＧａｌＮＡｃａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ））；前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）；受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）のようなＦｍｓ；腫瘍関連糖タンパク質７２（ＴＡＧ７２）；ＣＤ３８；ＣＤ４４ｖ６；造血前駆細胞ではなく急性白血病またはリンパ腫で発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、非造血がんで発現するグリコシル化ＣＤ４３エピトープ、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）；上皮細胞接着分子（ＥＰＣＡＭ）；Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）；ＫＩＴ（ＣＤ１１７）；インターロイキン－１３受容体サブユニットアルファ－２（ＩＬ－１３Ｒａ２またはＣＤ２１３Ａ２）；メソテリン；インターロイキン１１受容体アルファ（ＩＬ－ＩＩＲａ）；前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）；プロテアーゼセリン２１（テスチシンまたはＰＲＳＳ２１）；血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）；ルイス（Ｙ）抗原；ＣＤ２４；血小板由来増殖因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）；ステージ特異的胎児抗原－４（ＳＳＥＡ－４）；ＣＤ２０；葉酸受容体アルファ（ＦＲａまたはＦＲ１）；葉酸受容体ベータ（ＦＲｂ）；受容体チロシンプロテインキナーゼＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）；ムチン１、細胞表面関連（ＭＵＣ１）；上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）；神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）；プロスターゼ；前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）；伸長因子２突然変異（ＥＬＦ２Ｍ）；エフリンＢ２；線維芽細胞活性化タンパク質アルファ（ＦＡＰ）；インスリン様増殖因子１受容体（ＩＧＦ－Ｉ受容体）、炭酸脱水酵素ＩＸ（ＣＡＩＸ）；プロテアソーム（プロソーム、マクロパイン）サブユニット、ベータ型、９（ＬＭＰ２）；糖タンパク質１００（ｇｐ１００）；ブレークポイントクラスター領域（ＢＣＲ）とアベルソンマウス白血病ウイルスがん遺伝子ホモログ１（Ａｂｌ）（ｂｃｒ－ａｂｌ）からなるオンコジーン融合タンパク質；チロシナーゼ；エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）；シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）；ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２－３）ｂＤＣｌａｌｐ（ｌ－４）ｂＤＧｌｃｐ（ｌ－ｌ）Ｃｅｒ）；トランスグルタミナーゼ５（ＴＧＳ５）；高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）；ｏ－アセチル－ＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）；腫瘍内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）；腫瘍内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）；クラウジン６（ＣＬＤＮ６）；甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）；Ｇタンパク質共役受容体クラスＣグループ５、メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）；染色体Ｘオープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）；ＣＤ９７；ＣＤ１７９ａ；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）；ポリシアル酸；胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）；ｇｌｏｂｏＨグリコセラミド（ＧｌｏｂｏＨ）の六糖部分；乳腺分化抗原（ＮＹ－ＢＲ－１）；ウロプラキン２（ＵＰＫ２）；Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）；アドレナリン受容体ベータ３（ＡＤＲＢ３）；パネキシン３（ＰＡＮＸ３）；Ｇタンパク質共役受容体２０（ＧＰＲ２０）；リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）；嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）；ＴＣＲガンマ代替リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）；ウィルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）；がん／精巣抗原１（ＮＹ－ＥＳ０－１）；がん／精巣抗原２（ＬＡＧＥ－１ａ）；黒色腫関連抗原１（ＭＡＧＥ－Ａ１）；染色体１２ｐに位置するＥＴＳ転座変異体遺伝子６（ＥＴＶ６－ＡＭＬ）；精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）；Ｘ抗原ファミリー、メンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）；アンジオポエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）；メラノーマがん精巣抗原－１（ＭＡＤ－ＣＴ－１）；メラノーマがん精巣抗原－２（ＭＡＤ－ＣＴ－２）；Ｆｏｓ関連抗原１；腫瘍タンパク質ｐ５３（ｐ５３）；ｐ５３突然変異体；プロステイン；スルビビン；テロメラーゼ；前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴ Ａ－ｌまたはガレクチン８）、Ｔ細胞１によって認識されるメラノーマ抗原（ＭｅｌａｎＡまたはＭＡＲＴＩ）；ラット肉腫（Ｒａｓ）突然変異体；ヒトテロメラーゼ；逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）；肉腫転座ブレークポイント；アポトーシスのメラノーマ阻害剤（ＭＬ－ＩＡＰ）；ＥＲＧ（膜貫通型プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）；Ｎ－アセチルグルコサミニル－トランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－３（ＰＡＸ３）；アンドロゲン受容体；サイクリンＢ１；ｖ－ｍｙｃトリ骨髄細胞腫ウイルス性オンコジーン神経芽細胞腫由来ホモログ（ＭＹＣＮ）；ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）；チロシナーゼ関連タンパク質２（ＴＲＰ－２）；シトクロムＰ４５０ ＩＢ１（ＣＹＰＩＢ１）；ＣＣＣＴＣ結合因子（ジンクフィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳまたはＢｒｏｔｈｅｒ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｆｌｍｐｒｉｎｔｅｄ Ｓｉｔｅｓ）、Ｔ細胞３によって認識される扁平上皮がん抗原（ＳＡＲＴ３）；ペアードボックスタンパク質Ｐａｘ－５（ＰＡＸ５）；プロアクロシン結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹ－ＴＥＳ１）；リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）；キナーゼアンカータンパク質４（ＡＫＡＰ－４）；滑膜肉腫、Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）；終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ－１）；腎ユビキタス１（ＲＵ１）；腎ユビキタス２（ＲＵ２）；レグマイン；ヒトパピローマウイルスＥ６（ＨＰＶＥ６）；ヒトパピローマウイルスＥ７（ＨＰＶ Ｅ７）；腸カルボキシルエステラーゼ；熱ショックタンパク質７０－２突然変異（ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２）；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤ７２；白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）；ＩｇＡ受容体のＦｃ断片（ＦＣＡＲまたはＣＤ８９）；白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＡメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）；ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）；Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）；骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）；ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）；リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）；グリピカン－３（ＧＰＣ３）；Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）；免疫グロブリンラムダ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬｌ）、ＭＰＬ、ビオチン、ｃ－ＭＹＣエピトープＴａｇ、ＣＤ３４、ＬＡＭＰ１、ＴＲＯＰ２、ＧＦＲアルファ４、ＣＤＨ１７、ＣＤＨ６、ＮＹＢＲ１、ＣＤＨ１９、ＣＤ２００Ｒ、Ｓｌｅａ（ＣＡ１９．９；シアリルルイス抗原）；フコシル－ＧＭ１、ＰＴＫ７、ｇｐＮＭＢ、ＣＤＨ１－ＣＤ３２４、ＤＬＬ３、ＣＤ２７６／Ｂ７Ｈ３、ＩＬｌ ｌＲａ、ＩＬ１３Ｒａ２、ＣＤ１７９ｂ－ＩＧＬｌｌ、ＴＣＲガンマ－デルタ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ３２（ＦＣＧＲ２Ａ）、Ｔｎ ａｇ、Ｔｉｍ１－／ＨＶＣＲ１、ＣＳＦ２ＲＡ（ＧＭ－ＣＳＦＲ－アルファ）、ＴＧＦベータＲ２、Ｌｅｗｓ Ａｇ、ＴＣＲ－ベータ鎖、ＴＣＲ－ベータ２鎖、ＴＣＲ－ガンマ鎖、ＴＣＲ－デルタ鎖、ＦＩＴＣ、黄体形成ホルモン受容体（ＬＨＲ）、卵胞刺激ホルモン受容体（ＦＳＨＲ）、ゴナドトロピンホルモン受容体（ＣＧＨＲまたはＧＲ）、ＣＣＲ４、ＧＤ３、ＳＬＡＭＦ６、ＳＬＡＭＦ４、ＨＩＶ１エンベロープ糖タンパク質、ＨＴＬＶ１－Ｔａｘ、ＣＭＶ ｐｐ６５、ＥＢＶ－ＥＢＮＡ３ｃ、ＫＳＨＶ Ｋ８．１、ＫＳＨＶ－ｇＨ、インフルエンザＡヘマグルチニン（ＨＡ）、ＧＡＤ、ＰＤＬ１、グアニル酸シクラーゼＣ（ＧＣＣ）、デスモグレイン３（Ｄｓｇ３）に対する自己抗体、デスモグレイン１（Ｄｓｇｌ）に対する自己抗体、ＨＬＡ、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＭ、ＨＬＡ－ＤＯＡ、ＨＬＡ－ＤＯＢ、ＨＬＡ－ＤＱ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＬＡ－Ｇ、ＩｇＥ、ＣＤ９９、Ｒａｓ Ｇ１２Ｖ、組織因子１（ＴＦ１）、ＡＦＰ、ＧＰＲＣ５Ｄ、クラウジン８．２（ＣＬＤ１８Ａ２またはＣＬＤＮ１８Ａ．２））、Ｐ－糖タンパク質、ＳＴＥＡＰ１、Ｌｉｖ１、ネクチン－４、Ｃｒｉｐｔｏ、ｇｐＡ３３、ＢＳＴ１／ＣＤ１５７、低コンダクタンスクロライドチャネル、およびＴＮＴ抗体によって認識される抗原が含まれる。
【実施例】
【0134】
以下は、下記に開示される実施例において使用される実験方法および材料の非限定的な記載である。
[実施例１]
[実施例１]
【0135】
ＮＫ細胞免疫療法のための初回投薬レジメン
本明細書においてより詳細に検討されるように、特定のがんタイプは、上昇した様式で選択されたマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体コンストラクトは、所与のがんを特異的に標的化するために、本明細書に開示される配列に従って生成される。例えば、多くのがんは、上昇したレベルのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを発現する。したがって、上記で詳細に検討したように、いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド指向性の細胞傷害性受容体コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、これらのコンストラクトをコードするポリヌクレオチドは、ｍｂＩＬ１５をバイシストロン性に発現するように操作される。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、このようなコンストラクトを発現する細胞の有効性を評価するために試験される。いくつかの実施形態では、コンストラクトを発現するように操作された細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、既製の（非血縁ドナーに由来する）同種の操作されたＮＫ細胞であり、ハプロ適合血縁ドナー由来の操作されたＮＫ細胞の適合用量と比較される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３（配列番号３３の縮重またはコドン最適化バージョンを含む）によってコードされる細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む細胞傷害性受容体、および配列番号３６または３８のアミノ酸配列を含むｍｂＩＬ１５を発現する。
本明細書においてより詳細に検討されるように、特定のがんタイプは、上昇した様式で選択されたマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体コンストラクトは、所与のがんを特異的に標的化するために、本明細書に開示される配列に従って生成される。例えば、多くのがんは、上昇したレベルのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを発現する。したがって、上記で詳細に検討したように、いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド指向性の細胞傷害性受容体コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、これらのコンストラクトをコードするポリヌクレオチドは、ｍｂＩＬ１５をバイシストロン性に発現するように操作される。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、このようなコンストラクトを発現する細胞の有効性を評価するために試験される。いくつかの実施形態では、コンストラクトを発現するように操作された細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、既製の（非血縁ドナーに由来する）同種の操作されたＮＫ細胞であり、ハプロ適合血縁ドナー由来の操作されたＮＫ細胞の適合用量と比較される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３（配列番号３３の縮重またはコドン最適化バージョンを含む）によってコードされる細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む細胞傷害性受容体、および配列番号３６または３８のアミノ酸配列を含むｍｂＩＬ１５を発現する。
【0136】
投薬レジメンは、２８日間の投薬サイクルにおいて３回投与される３用量の操作されたＮＫ細胞を評価するように設計される。投薬サイクルの前に、対象がリンパ球枯渇（シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）およびフルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２）を－５日目、－４日目、および－３日目を用いる）を経てコンディショニング段階が行われる。０日目に、対象は、第１の、異なる３用量：１×１０８個のＮＫ細胞（５０ｋｇ未満の対象では２×１０６個／ｋｇ）、３×１０８個ＮＫ細胞、または１×１０９個のＮＫ細胞のうちの１つを受ける。用量２は７日目に投与され、用量３は１４日目に投与される。２８日目に、転帰尺度を評価する。
【0137】
主要評価項目には、以下が含まれる：（１）処置に関連する有害事象の発現率、性質、および重症度が評価される。有害事象は、臨床的に重要な臨床検査値の異常、症状または疾患を含むあらゆる好ましくない意図しない徴候である。これは、ＮＫ細胞の最終用量から３０日後に測定されるべきであり、および（２）ＮＫ細胞の用量制限毒性（ＤＬＴ）を経験した対象の比率。ＤＬＴはサイクル１中に発現し、治験実施計画書に規定された基準を満たす処置に起因する有害事象として定義する。これは、第１の用量のＮＫ細胞から２８日後に測定するべきである。
【0138】
副次転帰尺度には、以下が含まれる：（１）循環する操作されたＮＫ細胞の最大量から５０％減少に要する時間として測定されたＮＫ細胞半減期の評価。これは、第１の用量のＮＫ細胞から２８日後に測定されるべきである。（２）投薬後、３か月ごとに末梢血中の操作されたＮＫ細胞の量を測定して、持続性を決定することによる、ＮＫ細胞の持続時間。これは、ＮＫ細胞の最終用量後の最大２年間測定される；（３）操作されたＮＫ細胞に対する抗体について測定される血清試料を介した、操作されたＮＫ細胞に対する宿主免疫応答の評価。これは、最終用量のＮＫ細胞から最大２年間測定される；（４）完全および部分奏効が得られた対象のパーセンテージを測定することによる、操作されたＮＫ細胞に対する客観的な奏効率。ＡＭＬ対象は、最新のＥＬＮ基準（Ｄｏｅｈｎｅｒ ２０１７）に基づいて、操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍活性について評価される。ＭＤＳ患者は、ＭＤＳを伴うＩＷＧ基準（Ｃｈｅｓｏｎ ２００６）に基づいて、操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍活性について評価される。これは、第１の用量の操作されたＮＫ細胞から２８日後に測定され、最終用量から最大２年後まで追跡される。
【0139】
研究は最低用量から開始し、３３％未満の毒性で用量がレジメンをクリアした場合は、次に高い用量を研究する。
【0140】
ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する３用量の操作されたＮＫ細胞の投与は、好ましい忍容性を示し、限定された有害事象を示すと考えられる。ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する３用量の操作されたＮＫ細胞の投薬はまた、限定されたＤＬＴをもたらすと考えられる。ＮＫ細胞は、延長された半減期および持続期間の延長を示すと考えられる。ＮＫ細胞は、限定された宿主免疫応答および臨床的に意味のある客観的な奏効率（例えば、腫瘍負荷の低下）を誘導すると考えられる。
[実施例２]
[実施例２]
【0141】
ＮＫ細胞免疫療法のための第２の投薬レジメン
本明細書においてより詳細に検討されるように、特定のがんタイプは、上昇した様式で選択されたマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体コンストラクトは、所与のがんを特異的に標的化するために、本明細書に開示される配列に従って生成される。例えば、多くのがんは、上昇したレベルのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを発現する。したがって、上記で詳細に検討したように、いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド指向性の細胞傷害性受容体コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、これらのコンストラクトをコードするポリヌクレオチドは、ｍｂＩＬ１５をバイシストロン性に発現するように操作される。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、このようなコンストラクトを発現する細胞の有効性を評価するために試験される。いくつかの実施形態では、コンストラクトを発現するように操作された細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、既製の（非血縁ドナーに由来する）同種の操作されたＮＫ細胞であり、ハプロ適合血縁ドナー由来の操作されたＮＫ細胞の適合用量と比較される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３（配列番号３３の縮重またはコドン最適化バージョンを含む）によってコードされる細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む細胞傷害性受容体、および配列番号３６または３８のアミノ酸配列を含むｍｂＩＬ１５を発現する。
本明細書においてより詳細に検討されるように、特定のがんタイプは、上昇した様式で選択されたマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、細胞傷害性受容体コンストラクトは、所与のがんを特異的に標的化するために、本明細書に開示される配列に従って生成される。例えば、多くのがんは、上昇したレベルのＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドを発現する。したがって、上記で詳細に検討したように、いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド指向性の細胞傷害性受容体コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、これらのコンストラクトをコードするポリヌクレオチドは、ｍｂＩＬ１５をバイシストロン性に発現するように操作される。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、このようなコンストラクトを発現する細胞の有効性を評価するために試験される。いくつかの実施形態では、コンストラクトを発現するように操作された細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、既製の（非血縁ドナーに由来する）同種の操作されたＮＫ細胞であり、ハプロ適合血縁ドナー由来の操作されたＮＫ細胞の適合用量と比較される。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３（配列番号３３の縮重またはコドン最適化バージョンを含む）によってコードされる細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４のアミノ酸配列を含む細胞傷害性受容体、および配列番号３６または３８のアミノ酸配列を含むｍｂＩＬ１５を発現する。
【0142】
投薬レジメンは、２８日間の投薬サイクルにおいて２回投与される、異なる３用量の操作されたＮＫ細胞を評価するように設計される。投薬サイクルの前に、対象がリンパ球枯渇（シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）およびフルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２）を－５日目、－４日目、および－３日目を用いる）を経てコンディショニング段階が行われる。０日目に、対象は、第１の、異なる３用量：１．５×１０８個のＮＫ細胞（５０ｋｇ未満の対象では３×１０６個／ｋｇ）、４．５×１０８個ＮＫ細胞、または１．５×１０９個のＮＫ細胞のうちの１つを受ける。用量２は７日目に投与される。２８日目に転帰尺度を評価する。
【0143】
主要評価項目には、以下が含まれる：（１）処置に関連する有害事象の発現率、性質、および重症度が評価される。有害事象は、臨床的に重要な臨床検査値の異常、症状または疾患を含むあらゆる好ましくない意図しない徴候である。これは、ＮＫ細胞の最終用量から３０日後に測定されるべきであり、および（２）ＮＫ細胞の用量制限毒性（ＤＬＴ）を経験した対象の比率。ＤＬＴはサイクル１中に発現し、治験実施計画書に規定された基準を満たす処置に起因する有害事象として定義する。これは、第１の用量のＮＫ細胞から２８日後に測定するべきである。
【0144】
副次転帰尺度には、以下が含まれる：（１）循環する操作されたＮＫ細胞の最大量から５０％減少に要する時間として測定されたＮＫ細胞半減期の評価。これは、第１の用量のＮＫ細胞から２８日後に測定されるべきである。（２）投薬後、３か月ごとに末梢血中の操作されたＮＫ細胞の量を測定して、持続性を決定することによる、ＮＫ細胞の持続時間。これは、ＮＫ細胞の最終用量後の最大２年間測定される；（３）操作されたＮＫ細胞に対する抗体について測定される血清試料を介した、操作されたＮＫ細胞に対する宿主免疫応答の評価。これは、最終用量のＮＫ細胞から最大２年間測定される；（４）完全および部分奏効が得られた対象のパーセンテージを測定することによる、操作されたＮＫ細胞に対する客観的な奏効率。ＡＭＬ対象は、最新のＥＬＮ基準（Ｄｏｅｈｎｅｒ ２０１７）に基づいて、操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍活性について評価される。ＭＤＳ患者は、ＭＤＳを伴うＩＷＧ基準（Ｃｈｅｓｏｎ ２００６）に基づいて、操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍活性について評価される。これは、第１の用量の操作されたＮＫ細胞から２８日後に測定され、最終用量から最大２年後まで追跡される。
【0145】
研究は最低用量から開始し、３３％未満の毒性で用量がレジメンをクリアした場合は、次に高い用量を研究する。
【0146】
ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する３用量の操作されたＮＫ細胞の投薬は、好ましい忍容性を示し、限定された有害事象を示すと考えられる。ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する３用量の操作されたＮＫ細胞の投薬はまた、限定されたＤＬＴをもたらすと考えられる。ＮＫ細胞は、延長された半減期および持続期間の延長を示すと考えられる。ＮＫ細胞は、限定された宿主免疫応答および臨床的に意味のある客観的奏効率（例えば、腫瘍負荷の低下）を誘導すると考えられる。
【0147】
また、２回用量サイクルは３回用量サイクルと比較して転帰を改善すると考えられる。理論に拘束されることなく、２用量サイクルにおける操作されたＮＫ細胞のより大きな初期負荷は、より大きなエフェクター：標的細胞比を可能にする。研究は、宿主ＮＫ細胞集団が、Ｆｌｕ／Ｃｙリンパ球枯渇の約１４～２１日後に回復し始めることを実証している。これは、注入された同種細胞が同時に除去される可能性がある。これにより、注入された同種細胞の除去の同時クリアリングをもたらす。したがって、２用量サイクルは、リンパ球枯渇後ウィンドウにおいて投与される最大数の操作された細胞の送達を可能にし、増強された治療結果をもたらす。
[実施例３]
[実施例３]
【0148】
ＮＫ細胞免疫療法のための第３の投薬レジメン
本明細書においてより詳細に検討されるように、特定のがんタイプは、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドなどの上昇した様式で選択されたマーカーを発現する。したがって、上記で詳細に検討したように、いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド指向性の細胞傷害性受容体コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、このようなコンストラクトを発現する細胞の有効性を評価するために試験される。いくつかの実施形態では、コンストラクトを発現するように操作された細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、既製の（非血縁ドナーに由来する）同種の操作されたＮＫ細胞であり、ハプロ適合血縁ドナー由来の操作されたＮＫ細胞の適合用量と比較されてもよい。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３（配列番号３３の縮重またはコドンを最適化されたバージョンを含む）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）はまた、配列番号３６または３８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｍｂＩＬ１５を発現するように操作される。
本明細書においてより詳細に検討されるように、特定のがんタイプは、ＮＫＧ２Ｄ受容体のリガンドなどの上昇した様式で選択されたマーカーを発現する。したがって、上記で詳細に検討したように、いくつかの実施形態では、ＮＫＧ２Ｄ－リガンド指向性の細胞傷害性受容体コンストラクトが提供される。いくつかの実施形態では、投薬レジメンは、このようなコンストラクトを発現する細胞の有効性を評価するために試験される。いくつかの実施形態では、コンストラクトを発現するように操作された細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、既製の（非血縁ドナーに由来する）同種の操作されたＮＫ細胞であり、ハプロ適合血縁ドナー由来の操作されたＮＫ細胞の適合用量と比較されてもよい。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３３（配列番号３３の縮重またはコドンを最適化されたバージョンを含む）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するポリヌクレオチドによってコードされる細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、操作されたＮＫ細胞は、配列番号３４と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む細胞傷害性受容体を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞）はまた、配列番号３６または３８と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むｍｂＩＬ１５を発現するように操作される。
【0149】
いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫療法レジメンを受ける患者は、再発および／または難治性急性骨髄性白血病（標準ヨーロッパ白血病ネット（ＥＬＮ）基準に従う）を有する。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも１であるがせいぜい３、好ましくはせいぜい２ラインの従来の標準的な抗白血病治療を受けていた。いくつかの実施形態では、微小残存疾患（例えば、芽球が約５％未満）を伴う完全寛解の対象は、ＮＫ細胞免疫療法レジメンを受けることができる。いくつかの実施形態では、患者は、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）－突然変異型および／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）１／２－突然変異型疾患を有していることができ、少なくとも１つの以前のそれぞれの標的療法を受けていたが、せいぜい最大４、好ましくはせいぜい３ラインの以前の治療を受けていることができる。いくつかの実施形態では、患者は、白血球数が２５×１０９個のＷＢＣ／Ｌ以下である。いくつかの実施形態では、患者は、白血病性髄膜炎または既知の活動性中枢神経系疾患の証拠を示し、および／または芽球が２０，０００個／μＬを超えるかまたはそれに等しい末梢白血球増加（または患者が少なくとも１サイクルの処置を完了することを妨げる急速進行性疾患の他の証拠）を有する場合、ＮＫ細胞免疫療法レジメンを受けない。
【0150】
いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞免疫療法レジメンを受ける患者は、世界保健機関分類および改訂国際予後スコアリングシステムに従って、中間、高、または非常に高リスクのＭＤＳとして分類され、再発および／または難治性のＭＤＳを有する。いくつかの実施形態では、患者は、少なくとも１つであるが、せいぜい３つ、好ましくはせいぜい２つの以前の標準的な抗ＭＤＳ治療を受けていた。
【0151】
投薬レジメンは、２８日間の投薬サイクル内に投与される３用量の操作されたＮＫ細胞を含むように設計される。投薬サイクルの前に、対象がリンパ球枯渇（シトシンアラビノシド（Ａｒａ－Ｃ）（２．０ｇ／ｍ２／日）およびフルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２／日）を－７日目、－６日目、－５日目、－４日目、および－３日目に用いる）を経てコンディショニング段階が行われる。０日目に、ＮＫＧ２Ｄ、さらにｍｂＩＬ１５のキメラ受容体標的化リガンドを発現するように操作されたＮＫ細胞の第１の３用量を対象に投薬する。各用量は１．５×１０９個のＮＫ細胞である。用量２は７日目に投与され、用量３は１４日目に投与される。２８日目に転帰尺度を評価する。
【0152】
主要評価項目には、以下が含まれる：（１）処置に関連する有害事象の発現率、性質、および重症度が評価される。有害事象は、臨床的に重要な臨床検査値の異常、症状または疾患を含むあらゆる好ましくない意図しない徴候である。これは、ＮＫ細胞の最終用量から３０日後に測定されるべきであり、および（２）ＮＫ細胞の用量制限毒性（ＤＬＴ）を経験した対象の比率。ＤＬＴはサイクル１中に発現し、治験実施計画書に規定された基準を満たす処置に起因する有害事象として定義する。これは、第１の用量のＮＫ細胞から２８日後に測定するべきである。
【0153】
副次転帰尺度には、以下が含まれる：（１）循環する操作されたＮＫ細胞の最大量から５０％減少に要する時間として測定されたＮＫ細胞半減期の評価。これは、第１の用量のＮＫ細胞から２８日後に測定されるべきである。（２）投薬後、３か月ごとに末梢血中の操作されたＮＫ細胞の量を測定して、持続性を決定することによる、ＮＫ細胞の持続時間。これは、ＮＫ細胞の最終用量後の最大２年間測定される；（３）操作されたＮＫ細胞に対する抗体について測定される血清試料を介した、操作されたＮＫ細胞に対する宿主免疫応答の評価。これは、最終用量のＮＫ細胞から最大２年間測定される；（４）完全および部分奏効が得られた対象のパーセンテージを測定することによる、操作されたＮＫ細胞に対する客観的な奏効率。ＡＭＬ対象は、最新のＥＬＮ基準（Ｄｏｅｈｎｅｒ ２０１７）に基づいて、操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍活性について評価される。ＭＤＳ患者は、ＭＤＳを伴うＩＷＧ基準（Ｃｈｅｓｏｎ ２００６）に基づいて、操作されたＮＫ細胞の抗腫瘍活性について評価される。これは、第１の用量の操作されたＮＫ細胞から２８日後に測定され、最終用量から最大２年後まで追跡される。
【0154】
ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する、３用量の操作されたＮＫ細胞の投与は、好ましい忍容性を示し、限定された有害事象を示すと考えられる。また、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する３用量の操作されたＮＫ細胞の投薬は、限定されたＤＬＴをもたらすと考えられる。ＮＫ細胞は、延長された半減期および持続期間の延長を示すと考えられる。ＮＫ細胞は、限定された宿主免疫応答および臨床的に意味のある客観的な奏効率（例えば、腫瘍負荷の低下）を誘導すると考えられる。Ａｒａ－Ｃとフルダラビンを用いたリンパ球枯渇の組み合わせは、リンパ球枯渇と抗腫瘍効果の組み合わせ効果により、操作されたＮＫ細胞の抗がん効果をさらに増強すると考えられる。
[実施例４]
[実施例４]
【0155】
３用量の投薬レジメンからの予備的転帰
対象は、上記で検討したように実施例１または実施例３のいずれかに従って処置された。さらなる対象は、０日目、７日目、および１４日目の各々において、１億個または３億個のいずれかの操作されたＮＫ細胞の３用量を受けた（この投薬サイクルは、実施例１または３で開示されている）。実施形態に応じて、代替の投薬／タイミングを使用することができる。対象の年齢中央値は６０歳であり、ＡＭＬと診断された対象は１７例、ＭＤＳと診断された対象は４例であった。診断からの期間の中央値は１３か月であった。ベースラインの芽球パーセンテージの中央値は２７％であり、１５例の対象の好中球数（ＡＮＣ）は１×１０９細胞／Ｌ未満であった。実施例１または実施例３のいずれかに従って処置された対象の多くは、１つ以上の異なる治療で前処置されていて、および／またはＡＭＬもしくはＭＤＳのいずれかの再発が多発していた。処置を受けた対象のうち、受けた前治療の回数の中央値は３回の前治療であった。ＡＭＬ患者のうち、各患者はＢＣＬ－２阻害剤化合物で以前に処置されていた。４人の患者（ＡＭＬであっても、またはＭＤＳであっても）が以前に同種細胞移植を受けていた。
対象は、上記で検討したように実施例１または実施例３のいずれかに従って処置された。さらなる対象は、０日目、７日目、および１４日目の各々において、１億個または３億個のいずれかの操作されたＮＫ細胞の３用量を受けた（この投薬サイクルは、実施例１または３で開示されている）。実施形態に応じて、代替の投薬／タイミングを使用することができる。対象の年齢中央値は６０歳であり、ＡＭＬと診断された対象は１７例、ＭＤＳと診断された対象は４例であった。診断からの期間の中央値は１３か月であった。ベースラインの芽球パーセンテージの中央値は２７％であり、１５例の対象の好中球数（ＡＮＣ）は１×１０９細胞／Ｌ未満であった。実施例１または実施例３のいずれかに従って処置された対象の多くは、１つ以上の異なる治療で前処置されていて、および／またはＡＭＬもしくはＭＤＳのいずれかの再発が多発していた。処置を受けた対象のうち、受けた前治療の回数の中央値は３回の前治療であった。ＡＭＬ患者のうち、各患者はＢＣＬ－２阻害剤化合物で以前に処置されていた。４人の患者（ＡＭＬであっても、またはＭＤＳであっても）が以前に同種細胞移植を受けていた。
【0156】
検討したように、対象は、リンパ球枯渇（シクロホスファミド（３００ｍｇ／ｍ２）およびフルダラビン（３０ｍｇ／ｍ２）を用いる；－５日目、－４日目、－３日目）に供された。対象は、ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する、３用量の操作されたＮＫ細胞を受けた。転帰を２８日目に測定した。ＮＫＧ２Ｄリガンドを標的とし、またｍｂＩＬ１５を発現するキメラ受容体コンストラクトを発現する、３用量の操作されたＮＫ細胞は、投薬された対象全体で、試験された各用量レベルで良好な忍容性を示した。用量制限毒性は観察されなかった。リンパ球枯渇および基礎疾患と一致する骨髄抑制および感染が検出され、最も一般的な高グレードの反応を示した。有利には、いずれの用量でもＣＡＲ Ｔ様毒性は観察されなかった。サイトカイン放出症候群、免疫エフェクター細胞関連神経毒性症候群（ＩＣＡＮＳ）もしくは他の神経毒性、または移植片対宿主病を経験した対象はいなかった。４用量のいずれのＮＫ細胞も受けた対象の全奏効率は６０％を超えた。３用量の各々で１億個または３億個の細胞を受けた患者は、ほぼ７０％の全奏効率（完全奏効；血液学的回復不良を伴う完全奏効；形態学的無白血病状態；または部分奏効）を示した。各投薬時点で１×１０９個または１．５×１０９個の細胞のいずれかを３用量受けた患者では、６０％が完全奏効を示し、完全奏効例３例中２例では微小残存腫瘍陰性（例えば、治療後に疾患は検出されなかった）であった。図４Ａは、ベースライン（第１の用量前の対象からの直近の芽球数）からの芽球数の変化を示す。明らかなように、用量にかかわらず、芽球数が減少する顕著な傾向がある。上述のように、１．０／１．５×１０９個の細胞を受けた対象のうち３例に完全奏効が認められ、そのうちの１例は微小残存腫瘍陽性であることが観察され、２例は微小残存腫瘍陰性であることが観察された。ＡＭＬ（ＩＤＨ１突然変異）と診断された１例の対象（６８歳男性）は、ベースライン時に芽球が８％（形態別）であり、芽球が２５％（ＦＩＳＨによる）であった４ラインの以前の治療に抵抗性を示した。投薬サイクルの後（非限定的な例として、０日目、７日目および１４日目に１．０×１０９個の操作されたＮＫ細胞であった）。図４Ｂは、この対象についての、操作されたＮＫ細胞（操作されたＮＫ細胞ＤＮＡの測定による）の経時的な検出のグラフを示す。３用量（点線）の各投薬後、操作されたＮＫ細胞が血液中に検出された。投与された細胞は、２０日目までに予想されるＮＫ細胞様の薬物動態プロファイルおよびクリアランスを示した。第１のサイクル後、対象は完全奏効を示し、微小残存腫瘍陰性であることが観察された。該対象の骨髄の観察は正常細胞表現型を示した。操作されたＮＫ細胞は、軽微な血液学的影響として貧血、好中球減少および血小板数減少を伴うが、忍容性が良好であった。６か月の追跡調査時に、対象は、統合的な造血細胞移植を経て、完全奏効を維持した。これらの初期データは、ＮＫＧ２Ｄ標的キメラ受容体を発現し、ｍｂＩＬ１５を発現する操作されたＮＫ細胞が、特に本明細書の実施形態で提供されるような３用量のレジメンで患者に投薬された場合、安全であり、有効ながん免疫療法剤であることを実証する。
【0157】
上記に開示された実施形態の特定の特徴および態様の種々の組み合わせまたはサブ組み合わせを作製することができ、さらに、１つ以上の発明の範囲内に入ることができると企図される。さらに、実施形態に関連する任意の特定の特徴、態様、方法、性質、特性、品質、属性、要素などの本明細書における開示は、本明細書に記載する他の全ての実施形態において使用することができる。したがって、開示された実施形態の種々の特徴および態様は、開示された発明の種々のモードを形成するために、互いに組み合わせることができるかまたは互いに置き換えることができることを理解するべきである。したがって、本明細書に開示される本発明の範囲は、上記された特定の開示された実施形態によって制限されるべきではないことが意図される。さらに、本発明は種々の修飾、および代替形態に感受性が高いが、その具体例を図面に示し、本明細書において詳細に説明する。しかしながら、本発明は、開示された特定の形態または方法に限定されるものではなく、逆に、本発明は、記載された種々の実施形態および添付の請求の範囲の精神および範囲内に入る全ての修飾、均等物および代替物をカバーするものであることが理解されるべきである。本明細書に開示される任意の方法は、示される順序で行われる必要はない。本明細書に開示される方法は、実施者によって取られる特定の行為を含むが、しかしながら、それらは、明示的にまたは黙示的に、それらの行為の第三者の指示を含むこともできる。さらに、本開示の特徴または態様がマーカッシュ群に関して記載される場合、当業者は、本開示がまたそれによってマーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループに関しても記載されていることを認識する。
【0158】
本明細書に開示される範囲はまた、任意のおよび全ての重複、サブ範囲、およびそれらの組み合わせを包含する。「最大（ｕｐ ｔｏ）」、「少なくとも」、「より大きい」、「より少ない」、「間」などの用語は、示された数字を含む。「約」または「ほぼ」などの用語の前にある数字は、示された数字を含む。例えば、「約９０％」は、「９０％」を含む。一部の実施形態では、少なくとも９５％の配列同一性または相同性は、参照配列に対する９６％、９７％、９８％、９９％、および１００％の配列同一性または相同性を含む。さらに、配列がヌクレオチドまたはアミノ酸配列を「含む」として開示される場合、このような参照文献はまた、他に指示がない限り、配列が、示された配列「を含む」、「からなる」、または「から本質的になる」ことを含むものとする。本明細書で使用される任意のタイトルまたは小見出しは、組織目的であり、本明細書に開示される実施形態の範囲を制限するために使用されるべきではない。
【0159】
配列
いくつかの実施形態では、核酸コードの縮重を主要因としながら、本明細書に開示される核酸のいずれかに対応するアミノ酸配列（および／または添付の配列表に含まれる）が提供される。さらに、本明細書に明示的に開示される配列（および／または添付の配列リストに含まれる）とは異なるが、機能的類似性または同等性を有する配列（核酸またはアミノ酸のいずれか）もまた本開示の範囲内で企図される。上記には、突然変異体、切断、置換、コドン最適化、または他のタイプの修飾が含まれる。
いくつかの実施形態では、核酸コードの縮重を主要因としながら、本明細書に開示される核酸のいずれかに対応するアミノ酸配列（および／または添付の配列表に含まれる）が提供される。さらに、本明細書に明示的に開示される配列（および／または添付の配列リストに含まれる）とは異なるが、機能的類似性または同等性を有する配列（核酸またはアミノ酸のいずれか）もまた本開示の範囲内で企図される。上記には、突然変異体、切断、置換、コドン最適化、または他のタイプの修飾が含まれる。
【0160】
本明細書に記載されるいくつかの実施形態に従って、配列のいずれかを使用することができるか、または本明細書に開示される配列（および／または添付の配列表に含まれる）のいずれかの切断または突然変異形態を使用することができ、任意の組み合わせで使用することができる。
【0161】
電子フォーマットによる配列表を本明細書に添付して提出することができる。配列表に提供される配列のいくつかは、天然に存在しない断片または天然に存在する配列を含む他の配列の一部であることにより、人工配列として指定することができる。配列表に提供される配列のいくつかは、ヒト化抗体配列などの異なる起源由来の配列の組み合わせであることにより、人工配列として指定することができる。
【図1】
【図2】
【図3A-3B】
【図4A】
【図4B】
【配列表】
【国際調査報告】