特表 2024-519612 抗ＣＤ４０抗体及びその用途

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-20

(54)【発明の名称】抗ＣＤ４０抗体及びその用途

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240513BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240513BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240513BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240513BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240513BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240513BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240513BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240513BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240513BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240513BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240513BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240513BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240513BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240513BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240513BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240513BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12P21/08

A61P43/00 111

A61K45/00

A61K47/68

A61K39/395 L

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K39/395 E

A61K39/395 D

A61K39/395 Y

A61P43/00 121

A61P35/00

A61P35/02

A61P31/00

A61P37/02

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023568232

(86)(22)【出願日】2022-05-26

(85)【翻訳文提出日】2023-11-01

(86)【国際出願番号】 CN2022095229

(87)【国際公開番号】W WO2022247905

(87)【国際公開日】2022-12-01

(31)【優先権主張番号】202110577432.9

(32)【優先日】2021-05-26

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523415316

【氏名又は名称】アンホイ バイオエックス－ビジョン バイオロジカル テクノロジー カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＡＮＨＵＩ ＢＩＯＸ－ＶＩＳＩＯＮ ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】５ｔｈ Ｆｌ．， Ｂｌｏｃｋ Ｃ， Ｈｕａｙｉ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐａｒｋ ７１ Ｔｉａｎｄａ Ｒｏａｄ Ｈｅｆｅｉ， Ａｎｈｕｉ ２３００８８ ＣＨＩＮＡ

(71)【出願人】

【識別番号】523415327

【氏名又は名称】サンヨウ バイオファーマシューティカルズ カンパニー リミテッド

【氏名又は名称原語表記】ＳＡＮＹＯＵ ＢＩＯＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＣＯ．， ＬＴＤ．

【住所又は居所原語表記】３ｒｄ Ｆｌｏｏｒ， Ｂ－Ｃ， Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ６ Ｎｏ． １８８ Ｘｉｎｊｕｎｈｕａｎ Ｒｏａｄ， Ｍｉｎｈａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１１１４ ＣＨＩＮＡ

(74)【代理人】

【識別番号】110001841

【氏名又は名称】弁理士法人ＡＴＥＮ

(72)【発明者】

【氏名】ラン グオジュン

(72)【発明者】

【氏名】ワン グオシン

(72)【発明者】

【氏名】ジャン ウェンハイ

(72)【発明者】

【氏名】イェン ルン

(72)【発明者】

【氏名】リウ ペイペイ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C084

4C085

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG26

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064CE12

4B064DA01

4B065AA01X

4B065AA57X

4B065AA83X

4B065AA87X

4B065AA90X

4B065AA90Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE41

4C076EE59

4C076FF31

4C076FF68

4C084AA19

4C084MA02

4C084MA55

4C084MA56

4C084MA65

4C084MA66

4C084NA05

4C084NA10

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZB271

4C084ZB272

4C084ZC751

4C085AA13

4C085AA14

4C085AA38

4C085BB31

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB42

4C085BB43

4C085CC22

4C085CC23

4C085DD62

4C085EE01

4C085EE03

4C085EE06

4C085FF24

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG06

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA30

4H045BA10

4H045CA40

4H045DA75

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

4H045GA26

(57)【要約】

本発明は、ヒト、カニクイザル及びマウスＣＤ４０分子を特異的に認識し、前記ＣＤ４０分子を弱く刺激する抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、並びに前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片を含む免疫コンジュゲート、薬物組成物及び組み合わせ製品に関する。本発明はさらに、前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸、及び前記核酸を含む宿主細胞、並びに前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片を製造する方法に関する。本発明はさらに、被験体の腫瘍又は感染性疾患の予防又は治療における前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片の用途に関する。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３である三つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３である三つの相補性決定領域を含む重鎖可変領域とを含む抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）ＬＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｂ）ＬＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｃ）ＬＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｄ）ＨＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｅ）ＨＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｆ）ＨＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
ここで、前記アミノ酸変化は、アミノ酸の付加、欠失又は置換である、抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項2】

（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項3】

アミノ酸配列ＲＳＳＱＧＩＲＳＳＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）のようなものを含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＧＸ_１ＳＳＬＸ_２Ｘ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５６）のようなものを含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＱＱＬＸ_４ＳＦＰＳＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５７）のようなものを含有するＬＣＤＲ３であって、Ｘ_１がＡ又はＧであり、Ｘ_２がＥ又はＬであり、Ｘ_３がＧ又はＶであり、Ｘ_４がＮ又はＡであるもの、及び
アミノ酸配列ＧＦＴＸ_５ＧＳＹＥＭＸ_６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５８）のようなものを含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＹＩＳＳＸ_７ＧＥＴＴＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９）のようなものを含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＤＶＦＦＦＸ_８Ｘ_９ＳＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３ＡＹＧＭＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６０）のようなものを含有するＨＣＤＲ３であって、Ｘ_５がＦ、Ａ又はＰであり、Ｘ_６がＮ又はＤであり、Ｘ_７がＳ又はＡであり、Ｘ_８がＤ又はＳであり、Ｘ_９がＳ又はＰであり、Ｘ_１０がＧ又はＲであり、Ｘ_１１がＤ、Ｐ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_１２がＰ、Ｎ又はＲであり、Ｘ_１３がＧ又はＨであるものを含み、
例えば、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は、
（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９を含有するＬＣＤＲ３、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３を含む、請求項１又は２に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項4】

軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで、
（ｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、又は
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有し、
例えば、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は、
（ｉ） アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１を含有する重鎖可変領域、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５を含有する重鎖可変領域、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含有する重鎖可変領域、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含有する重鎖可変領域、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１を含有する重鎖可変領域、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含有する重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は完全ヒト抗体である、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項5】

それはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４抗体であり、好ましくは、それはＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体であり、さらに好ましくは、それはヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４抗体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項6】

前記抗原結合断片はＦａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ、単鎖Ｆａｂ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）である、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項7】

（１）ＦｏｒｔｅＢｉｏ動力学結合アッセイによって測定するように、高親和性でＣＤ４０に結合し、それを活性化し、例えば、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ ＫｄでＣＤ４０、例えば、ヒトＣＤ４０、カニクイザルＣＤ４０及びマウスＣＤ４０に結合すること、
（２）ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を増強すること、
（３）抗原提示細胞上に発現するＣＤ４０に結合することによって、抗原提示細胞を活性化し、例えば、前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）と、Ｂ細胞と、単球と、マクロファージとを含むこと、
（４）ＣＤ４０を発現するＢ細胞によるＣＤ９５発現を誘導すること、
（５）Ｂ細胞媒介性免疫応答を増強すること、
（５）架橋効果が形成された時にＢ細胞媒介性免疫応答を著しく増強すること、
（６）架橋効果が形成されていない時に、Ｂ細胞媒介性免疫応答をほとんど増強しないか、又は弱く増強することのうちの一つ又は複数の特性を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項8】

免疫グロブリンＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化部位が除去され、例えば、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるＮ２９７残基を突然変異させて該グリコシル化部位を除去し、例えば、Ｎ２９７残基をＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕに変え、好ましくは、Ｎ２９７残基をＧｌｎに変える、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項9】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片をコードする、単離された核酸。

【請求項10】

請求項９に記載の核酸を含むベクターであって、好ましくは、前記ベクターは、発現ベクター、例えば、ｐｃＤＮＡ３．３ベクターである、ベクター。

【請求項11】

請求項９に記載の核酸又は請求項１０に記載のベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは、前記宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり、さらに好ましくは、大腸菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適した他の細胞から選択され、最も好ましくは、前記宿主細胞は２９３細胞又はＣＨＯ細胞である、宿主細胞。

【請求項12】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を製造する方法であって、前記方法は、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片をコードする核酸の発現に適した条件下で請求項１１に記載の宿主細胞を培養し、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を任意に単離させることを含み、任意選択的に、前記方法は、前記宿主細胞から前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を回収することをさらに含む、方法。

【請求項13】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片及び他の物質、例えば、細胞傷害性薬剤を含む、免疫コンジュゲート。

【請求項14】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲート、及び任意選択的な薬用アジュバントを含む、薬物組成物。

【請求項15】

薬物組成物であって、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲート、及び他の治療剤、並びに任意選択的な薬用アジュバントを含み、好ましくは、前記他の治療剤は、化学療法剤、他の抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、細胞傷害性薬剤から選択される、薬物組成物。

【請求項16】

請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲート、及び一つ又は複数の他の治療剤、例えば、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、好ましくは抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む、組み合わせ製品。

【請求項17】

被験体において腫瘍又は感染性疾患を予防又は治療する薬物を製造するための、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲートの用途。

【請求項18】

前記腫瘍は、癌、例えば、リンパ腫（例えば、びまん性大Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、乳癌（例えば、転移性乳癌）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、例えば、ステージＩＶ又は再発性非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ腺癌、又はＮＳＣＬＣ扁平上皮癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、ステージＩＩＩ又はステージＩＶ黒色腫）又はＭｅｒｋｅｌ細胞癌）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、脊髄異形成症候群、膀胱癌（例えば、移行上皮癌）、膵臓癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌、例えば、明細胞腎細胞癌、例えば、進行性又は転移性明細胞腎細胞癌）及び結腸癌（例えば、結腸腺癌）であり、特に、前記腫瘍は、リンパ腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸腺癌、乳癌であり、又は前記感染性疾患は、例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染又は原生動物感染であり、好ましくは、前記感染性疾患は慢性感染である、請求項１７に記載の用途。

【請求項19】

試料におけるＣＤ４０を検出するキットであって、前記キットは、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を含み、
（ａ）試料を請求項１～８のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片と接触させるステップ、及び
（ｂ）前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片とＣＤ４０との間の複合体の形成を検出するステップを実施するためのものであり、任意選択的に、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は、検出可能に標識される、キット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本発明は、抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片に関する。具体的には、本発明は、ヒト、カニクイザル及びマウスＣＤ４０分子を特異的に認識し、前記ＣＤ４０分子を弱く刺激する抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片、並びに前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片を含む免疫コンジュゲート、薬物組成物及び組み合わせ製品に関する。本発明はさらに、前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片をコードする核酸、及び前記核酸を含む宿主細胞、並びに前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片を製造する方法に関する。本発明はさらに、被験体の腫瘍又は感染性疾患の予防又は治療における前記抗ＣＤ４０抗体又はその抗原結合断片の用途に関する。

【背景技術】

【0002】

ＣＤ４０アゴニスト（例えば、ｓｅｌｉｃｒｅｌｕｍａｂ、ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ、ＡＰＸ００５Ｍなど）は、臨床試験により、様々な適応症で臨床活性を示すことが示されている（Ｈａｓｓａｎ ＳＢら， Ａｎｔｉ－ＣＤ４０－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ： ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｆ ｒｅｃｅｎｔ ａｎｄ ｏｎｇｏｉｎｇ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ． Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ ２０１４；３６：９６-１０４）。しかし、これらの研究は、前記ＣＤ４０アゴニストが、用量制限毒性（ｄｏｓｅ－ｌｉｍｉｔｉｎｇ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）をもたらす有害事象に関連することも示している。最も一般的な有害事象は、サイトカイン放出症候群（ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ、ＣＲＳ）及び肝毒性を含む。現在の臨床試験で一般的に使用されるのは、正常なＦｃ機能を持つＣＤ４０アゴニストであり、このようなアゴニストは、アゴニスト活性により二種類に分けられ得、ここで、いくつかのアゴニストは、免疫反応を非特異的で過剰に活性化することができるため、毒性が強く、治療薬剤としてあまり適していないが、別のいくつかのアゴニストは、免疫活性を有する抗ＣＤ４０モノクローナル抗体を形成するために、架橋効果（Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果）を必要とし、ＣＤ４０を発現する免疫細胞を限定的で制御可能に活性化することにより局所的な免疫増強応答を形成することによって、限られた範囲内で腫瘍細胞を殺傷する。

【0003】

近年、治療指数（ＴＩ）は、薬物の安全性を評価する重要な指標になっている。ＴＩは、治療効果を引き起こす薬物量と毒性を引き起こす薬物量を比較するものであり、患者に投与される薬物の用量において、薬物の薬効が高く毒性が低いほど、治療指数が高くなり安全性が高くなることを意味する。従来技術において、現在既知の抗ＣＤ４０抗体は、治療指数が低く、患者に実際に投与される用量において、抗体が病巣位置で形成した免疫細胞殺傷活性と、他の部位で引き起こした非特異的アゴニスト活性（例えば、肝毒性）との比が高くない。そのため、当分野では、十分な免疫刺激を提供するとともに、従来のＣＤ４０アゴニストによる有害事象を低減することができる新たなＣＤ４０アゴニストの開発が必要である。

【0004】

また、新たなＣＤ４０アゴニストの開発において、前臨床段階の動物モデル評価は、薬物の安全性及び治療効果を評価する重要な一環である。齧歯類動物（例えば、マウス）は、ヒト疾患の動物モデルの確立に広く用いられている。しかし、マウスＣＤ４０と交差反応性のない抗ＣＤ４０抗体（例えば、Ｒｏｃｈｅにより開発されたｓｅｌｉｃｒｅｌｕｍａｂ）は、その生体内での薬効及び安全性を反映するために、ヒトＣＤ４０トランスジェニックマウス腫瘍モデルで使用する必要がある。マウスモデルにおける抗ＣＤ４０二重特異性抗体の薬効試験においても、マウスＣＤ４０交差反応性を同時に有するアゴニスト性抗ＣＤ４０抗体の開発が急務となっている。

【発明の概要】

【0005】

本発明は、治療指数が高いアゴニスト性抗ＣＤ４０抗体を提供し、前記抗体は、被験体において十分な免疫刺激を提供するとともに、ＣＤ４０活性化による非特異的免疫活性化の悪影響を減弱することができ、それは、
（１）ＦｏｒｔｅＢｉｏ動力学結合アッセイによって測定するように、高親和性でＣＤ４０に結合し、それを活性化し、例えば、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１０ ＭでＣＤ４０、例えば、ヒトＣＤ４０、カニクイザルＣＤ４０及びマウスＣＤ４０に結合すること、
（２）ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を増強すること、
（３）抗原提示細胞上に発現するＣＤ４０に結合することによって、抗原提示細胞を活性化し、例えば、前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）と、Ｂ細胞と、単球と、マクロファージとを含むこと、
（４）ＣＤ４０を発現するＢ細胞によるＣＤ９５発現を誘導すること、
（５）架橋効果が形成された時にＢ細胞媒介性免疫応答を著しく増強すること、
（６）架橋効果が形成されていない時に、Ｂ細胞媒介性免疫応答をほとんど増強しないか、又は弱く増強することのうちの一つ又は複数の特性を有する。

【0006】

本発明の抗ＣＤ４０抗体は、完全なヒト配列を有し、ヒト抗体である。本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ヒト被験体に対して最小の免疫原性を有し、より少ない抗薬物抗体（ＡＤＡ）を誘導することによって、ＡＤＡに関連する、治療用抗ＣＤ４０抗体に対する除去率を最小限にし、ヒト被験体が該治療用抗ＣＤ４０抗体に対して良好な耐性を有することが期待される。

【0007】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、三つの相補性決定領域を含み、それぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３であり、前記重鎖可変領域は、三つの相補性決定領域を含み、それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３であり、ここで、
（ａ）ＬＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｂ）ＬＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｃ）ＬＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｄ）ＨＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｅ）ＨＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｆ）ＨＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
ここで、前記アミノ酸変化は、アミノ酸の付加、欠失又は置換である。

【0008】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、
（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３を含む。

【0009】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、
アミノ酸配列ＲＳＳＱＧＩＲＳＳＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）のようなものを含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＧＸ_１ＳＳＬＸ_２Ｘ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５６）のようなものを含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＱＱＬＸ_４ＳＦＰＳＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５７）のようなものを含有するＬＣＤＲ３であって、Ｘ_１がＡ又はＧであり、Ｘ_２がＥ又はＬであり、Ｘ_３がＧ又はＶであり、Ｘ_４がＮ又はＡであるもの、及び
アミノ酸配列ＧＦＴＸ_５ＧＳＹＥＭＸ_６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５８）のようなものを含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＹＩＳＳＸ_７ＧＥＴＴＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９）のようなものを含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＤＶＦＦＦＸ_８Ｘ_９ＳＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３ＡＹＧＭＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６０）のようなものを含有するＨＣＤＲ３であって、Ｘ_５がＦ、Ａ又はＰであり、Ｘ_６がＮ又はＤであり、Ｘ_７がＳ又はＡであり、Ｘ_８がＤ又はＳであり、Ｘ_９がＳ又はＰであり、Ｘ_１０がＧ又はＲであり、Ｘ_１１がＤ、Ｐ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_１２がＰ、Ｎ又はＲであり、Ｘ_１３がＧ又はＨであるものを含む。

【0010】

いくつかの具体的な実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、
（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９を含有するＬＣＤＲ３、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３を含む。

【0011】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで、
（ｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、又は
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する。

【0012】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、
（ｉ） アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１を含有する重鎖可変領域、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５を含有する重鎖可変領域、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含有する重鎖可変領域、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含有する重鎖可変領域、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１を含有する重鎖可変領域、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含有する重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は完全ヒト抗体である。

【0013】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４抗体であり、好ましくは、それはＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体であり、さらに好ましくは、それはヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４抗体である。

【0014】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、抗原結合断片であり、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ、単鎖Ｆａｂ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）を含むが、それらに限らない。

【0015】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、その免疫グロブリンＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化部位が除去され、例えば、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるＮ２９７残基を突然変異させて該グリコシル化部位を除去し、例えば、Ｎ２９７残基をＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕに変え、好ましくは、Ｎ２９７残基をＧｌｎに変える。

【0016】

第２の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体を製造する方法を提供し、前記方法は、本発明の抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、本発明の抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸又は前記核酸を含む発現ベクターが導入された宿主細胞を培養し、前記抗ＣＤ４０抗体を単離させることを含み、任意選択的に、前記方法は、前記宿主細胞から前記抗ＣＤ４０抗体を回収することをさらに含む。

【0017】

第３の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体及び他の物質、例えば、細胞傷害性薬剤を含む免疫コンジュゲートを提供した。

【0018】

第４の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体又は免疫コンジュゲート、及び任意選択的な薬用アジュバントを含む薬物組成物を提供した。

【0019】

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体又は免疫コンジュゲート、及び他の治療剤、並びに任意選択的な薬用アジュバントを含む薬物組成物を提供し、好ましくは、前記他の治療剤は、化学療法剤、他の抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、細胞傷害性薬剤から選択される。

【0020】

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体又は免疫コンジュゲート、及び一つ又は複数の他の治療剤、例えば、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、好ましくは抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む組み合わせ製品を提供した。

【0021】

第５の態様では、本発明は、被験体において被験体又は個体の腫瘍又は感染性疾患を予防又は治療する方法を提供し、有効量の本発明の抗ＣＤ４０抗体、免疫コンジュゲート、薬物組成物、又は組み合わせ製品を被験体に投与することを含む。

【0022】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体、免疫コンジュゲート、薬物組成物、又は組み合わせ製品により予防又は治療される腫瘍は、癌、例えば、ＣＤ４０分子を発現する癌又はＣＤ４０分子を発現しない癌であり、又は本発明の抗ＣＤ４０抗体、免疫コンジュゲート、薬物組成物、又は組み合わせ製品により予防又は治療される感染性疾患は、例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染又は原生動物感染であり、好ましくは、前記感染性疾患は慢性感染であり、前記感染において被験体又は個体の免疫力が低下する。

【0023】

第６の態様では、本発明は、検出試料におけるＣＤ４０のキットを提供し、前記キットは、本発明の抗ＣＤ４０抗体を含み、
（ａ）試料を本発明の抗ＣＤ４０抗体と接触させるステップ、と、
（ｂ）前記抗ＣＤ４０抗体とＣＤ４０との間の複合体の形成を検出するステップを実施するためのものであり、任意選択的に、前記抗ＣＤ４０抗体は、検出可能に標識され、
これによって、被験体又は個体からの試料におけるＣＤ４０発現レベルを判断する。

【図面の簡単な説明】

【0024】

以下に詳細に説明される本発明の好ましい実施形態は、以下の図面と併せて読むとより良く理解されるであろう。本発明を説明する目的のために、現在の好ましい実施形態が図に示されている。しかしながら、本発明は、図に示される実施形態の正確な配置及び手段に限定されないことが理解されるべきである。

【図1】ＣＤ４０抗原Ｐ１７－Ｆｃと二つの対照抗体のダセツズマブ及びＢｌｅｓｌｕｍａｂマブのそれぞれとの結合を示した図である。アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体を陰性対照として用いた。図中の横座標は抗体濃度である。

【図2】ビオチン標識されていないＰ１７－Ｆｃ及びビオチン標識されたＰ１７－Ｆｃと二つの対照抗体のダセツズマブ及びＢｌｅｓｌｕｍａｂのそれぞれとの結合の比較を示した図である。図において、「Ｐ１７－Ｆｃ－ＣＤ４０－ｂｌｅ」は、「ビオチン標識されていないＰ１７－ＦｃとＢｌｅｓｌｕｍａｂマブとの結合（本明細書においてＣＤ４０－Ｂｌｅ又はＣＤ４０－ｂｌｅとも呼ばれる）」を表し、「Ｐ１７－Ｆｃ－ＣＤ４０－ｄａｃ」は、「ビオチン標識されていないＰ１７－Ｆｃとダセツズマブとの結合（本明細書においてＣＤ４０－Ｄａｃ又は ＣＤ４０－ｄａｃとも呼ばれる）」を表す。

【図3】ヒト天然抗体のファージディスプレイライブラリーに対する三ラウンドのパニングの後のファージライブラリーＥＬＩＳＡ結果を示した図である。図において、「ＶＣＳＭ１３」は、「ＶＣＳＭ１３ヘルパーファージ」を表し、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（米国）から入手した。

【図4】ヒト天然抗体のファージディスプレイライブラリーからスクリーニングして得たＣ８クローンＣＤ４０ Ｆａｂ分子とＣＤ４０との結合親和性を示した図であり、Ｂｌｅｓｌｕｍａｂマブを陽性対照として用い、アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体を陰性対照として用いた。図中の横座標は抗体濃度である。

【図5A】Ｃ８クローン抗ＣＤ４０ Ｆａｂ分子と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するヒトＣＤ４０との結合を示した図である。

【図5B】Ｃ８クローン抗ＣＤ４０ Ｆａｂ分子と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するカニクイザルＣＤ４０との交差反応性を示した図である。

【図6A】全長抗ＣＤ４０候補抗体と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するヒトＣＤ４０との親和性を示した図である。

【図6B】全長抗ＣＤ４０候補抗体と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するカニクイザルＣＤ４０との親和性を示した図である。

【図6C】全長抗ＣＤ４０候補抗体と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するマウスＣＤ４０との親和性を示した図である。アイソタイプヒトＩｇＧ１抗体は陰性対照として用いた。

【図7】ＣＤ４０発現ＣＨＯ細胞へのＣＤ４０Ｌの結合に対する全長抗ＣＤ４０抗体の影響を示した図である。

【図8A】及び

【図8B】ＥＬＩＳＡにより測定されたＩＬ－１２分泌量及びＦＡＣＳにより測定されたＣＤ８３発現によってディスプレイされる、抗ＣＤ４０抗体誘導性ｉＤＣ活性化試験を示した図である。

【図9】ＦＡＣＳにより測定された抗ＣＤ４０抗体がＲａｍｏｓ細胞上でのＣＤ９５発現を誘導することを示した図である。

【図10A】抗ＣＤ４０抗体を投与した後のＲａｍｏｓ細胞マウス腫瘍モデルの最終的腫瘍体積を示した図である。

【図10B】抗ＣＤ４０抗体を投与した後のＲａｍｏｓ細胞マウス腫瘍モデルの最終的腫瘍重量を示した図である。

【図10C】抗ＣＤ４０抗体を投与した後のＲａｍｏｓ細胞マウス腫瘍モデルの腫瘍体積の経時的変化を示した図である。図において、ＮＳは、有意差がないことを表し、ＰＢＳ群に比べて、＊はｐ＜０．０５を表し、＊＊はｐ＜０．０１を表し、＊＊＊はｐ＜０．００１を表す。

【図10D】ＭＣ－３８細胞腫瘍モデルにおいて、抗ＣＤ４０抗体を投与した後の最終的腫瘍重量を示した図である。

【図11A】ＣＨＯ－Ｋ細胞上での親和性変異体全長候補抗体の非特異的結合を示した図である。

【図11B】ＨＥＫ２９３細胞上での親和性変異体全長候補抗体の非特異的結合を示した図である。

【図12A】及び

【図12B】親和性変異体全長候補抗体と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するヒトＣＤ４０との親和性を示した図である。

【図12C】及び

【図12D】親和性成熟全長候補抗体と、ＣＨＯ細胞上で安定的に発現するマウスＣＤ４０との親和性を示した図である。

【図13A】及び

【図13B】ＦＡＣＳにより測定されたＣ８分子及びその親和性変異体全長候補抗体が、架橋剤の存在下で、Ｒａｍｏｓ細胞上でのＣＤ９５発現を誘導することを示した図である。

【図13C】及び

【図13D】ＦＡＣＳにより測定されたＣ８分子及びその親和性変異体全長候補抗体が、架橋剤なしでＲａｍｏｓ細胞上でのＣＤ９５発現を誘導することを示した図である。

【図14A】～

【図14D】Ｃ８分子及びその親和性変異体全長候補抗体が、架橋剤の存在下で、ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を誘導する能力を示した図である。

【図15A】～

【図15D】Ｃ８分子及びその親和性変異体全長候補抗体が、架橋剤なしでＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を誘導する能力を示した図である。

【発明を実施するための形態】

【0025】

特に限定しない限り、本明細書で使用される全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が一般的に理解するのと同じ意味を有する。本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。なお、本明細書に記載の材料、方法及び例は、単に例示的なものであり、限定することを意図していない。本発明の他の特徴、目的及び利点は、本明細書及び図面、並びに添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。

【0026】

Ｉ． 定義

【0027】

本明細書を説明するために、以下の定義が使用され、且つ適切であれば、単数形で使用される用語は複数も含み、その逆も同様である。本明細書で使用される用語は、単に具体的実施形態を説明するためのものであり、且つ限定することを意図していないことを理解されたい。

【0028】

「約」という用語は、数字や数値と併用される場合、指定された数字や数値よりも５％小さい下限から指定された数字や数値よりも５％大きい上限までの範囲内の数字や数値をカバーすることを意味する。

【0029】

本明細書で使用されるように、「及び／又は」という用語は、選択肢のうちのいずれか一つ又は選択肢のうちの二つ以上を意味する。

【0030】

本明細書において、「包含」又は「含む」という用語が使用される場合、特に明記しない限り、述べられた要素、整数又はステップからなる場合もカバーする。例えば、ある具体的な配列を「包含」する抗体可変領域を言及する場合、該具体的な配列からなる抗体可変領域をカバーすることも意図されている。

【0031】

「ＣＤ４０発現細胞」という用語は、ＣＤ４０分子を発現する任意の細胞を指し、樹状細胞（ＤＣ）と、Ｂ細胞と、マクロファージと、単球とを含む抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含むが、それに限らない。ＣＤ４０は、他のタイプの細胞、例えば、上皮細胞、内皮細胞及び血小板上にも発現する。ＣＤ４０発現は、すでにＢ細胞リンパ腫と腎臓癌細胞とを含めて、多くの腫瘍細胞上で確認された。一具体的な実施形態において、ＣＤ４０発現細胞は、ＣＤ４０を発現する細胞株、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、Ｒａｍｏｓ細胞及びＤａｕｄｉ細胞を含む。別の実施形態において、ＣＤ４０発現細胞は、腫瘍細胞又は癌細胞である。別の実施形態において、ＣＤ４０発現細胞は、腫瘍への浸潤が発見されるＢ細胞、ＮＫ細胞、Ｔ細胞を含み、腫瘍浸潤リンパ球とも呼ばれる。

【0032】

「抗原提示細胞」又は「ＡＰＣ」という用語は、ＭＨＣと複合体化された外来性抗原をその表面でディスプレイする細胞である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を用いて該複合体を認識する。ＡＰＣの例としては、樹状細胞（ＤＣ）、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球、Ｂリンパ芽球様細胞、及び単球に由来する樹状細胞（ＤＣ）を含むが、それらに限らない。

【0033】

「抗原提示」という用語は、ＡＰＣが抗原を捕捉し、Ｔ細胞による抗原の認識、例えば、抗原をプロセシングしてＭＨＣ－Ｉ及び／又はＭＨＣ－ＩＩコンジュゲートの成分とすることを可能にするプロセスを指す。

【0034】

「ＭＨＣ分子」は、ＭＨＣ クラスＩ及びＭＨＣ クラスＩＩの二つのタイプの分子を含む。ＭＨＣ クラスＩ分子は、抗原を特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞に提示し、ＭＨＣ クラスＩＩ分子は、抗原を特異的ＣＤ４＋ Ｔ細胞に提示する。ＡＰＣに外因的に送達される抗原は、主にＭＨＣ クラスＩＩに結合するためのものである。逆に、ＡＰＣに内因的に送達される抗原は、主にＭＨＣ クラスＩに結合するためのものである。

【0035】

「Ｔ細胞媒介性応答」という用語は、Ｔ細胞（エフェクターＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋細胞）とヘルパーＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞）とを含む）により媒介される任意の応答を指す。Ｔ細胞媒介性応答は、例えば、Ｔ細胞の細胞傷害性及び増殖を含む。

【0036】

「抗体」という用語は、本明細書において最も広い意味で使用され、抗原結合部位を含むタンパク質、様々な構造をカバーする天然抗体及び人工抗体を指し、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、単鎖抗体、完全抗体及び抗体断片を含むが、それらに限らない。

【0037】

「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、完全な抗体の一部を含み、完全な抗体が結合する抗原に結合する、完全な抗体と異なる分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆａｂ'－ＳＨ、Ｆ（ａｂ'）２、ダイアボディ、線状抗体、単鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、単一ドメイン抗体、二価もしくは二重特異性抗体又はそれらの断片、ラクダ科抗体（重鎖抗体）、及び抗体断片で形成された二重特異性抗体又は多重特異性抗体を含むが、それらに限らない。

【0038】

「交差反応」は、本発明の抗体が異なる種からのＣＤ４０に結合する能力を指す。例えば、ヒトＣＤ４０に結合する本発明の抗体は、別の種のＣＤ４０に結合することもできる。交差反応性は、結合アッセイ（例えば、ＳＰＲ、ＥＬＩＳＡ）において精製されたＣＤ４０抗原との特異的反応性を検出するか、又は生理学的ＣＤ４０発現細胞と結合するかもしくは他の方式で機能的に相互作用することによって測定される。交差反応性を確定する方法は、例えば、Ｏｃｔｅｔ^ＴＭ ＱＫｅ計器を用いるバイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又はＢｉａｃｏｒｅＴＭ ２０００ ＳＰＲ計器（Ｂｉａｃｏｒｅ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いるＢｉａｃｏｒｅ^ＴＭ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析もしくはフローサイトメトリー技術を含む。

【0039】

「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ領域」又は「ＣＤＲ」は、抗体可変ドメインにおいて、配列が高可変であり、且つ構造が確定されたループ（「超可変ループ」）が形成され、及び／又は抗原接触残基（「抗原接触点」）を含有する領域である。ＣＤＲは、主に抗原エピトープに結合することを担当する。重鎖のＣＤＲは、通常、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ－末端から順に番号が付けられる。所与の重鎖可変領域アミノ酸配列において、各ＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、いくつかの公知の抗体ＣＤＲ割り当てシステムのいずれか一つ又はその組み合わせで確定することができ、前記割り当てシステムは、例えば、抗体の三次元構造及びＣＤＲループのトポロジーに基づくＣｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａら． （１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２： ８７７－８８３、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら， “Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｎｏｎｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ２７３， ９２７－９４８ （１９９７））、抗体配列可変性に基づくＫａｂａｔ（Ｋａｂａｔら， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， 第４版， Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （１９８７））、ＡｂＭ （Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂａｔｈ）、Ｃｏｎｔａｃｔ （Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｌｏｎｄｏｎ）、国際ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ（ＩＭＧＴ）（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／）、及び多数の結晶構造を利用する近接伝播クラスタリング（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づくＮｏｒｔｈ ＣＤＲ定義を含む。

【0040】

特に断りのない限り、本発明において、「ＣＤＲ」又は「ＣＤＲ配列」という用語は、上記いずれか一つの方式で確定されたＣＤＲ配列をカバーする。

【0041】

ＣＤＲはまた、参照ＣＤＲ配列（例えば、本発明に例示されるＣＤＲのいずれか一つ）と同じＡｂＭ番号付け位置を有することに基づいて確定されてもよい。一実施形態において、本発明の抗体のＣＤＲは、ＡｂＭ番号付けプロトコルに基づいて位置が確定される。

【0042】

特に断りのない限り、本発明において、抗体可変領域及びＣＤＲにおける残基位置（重鎖可変領域残基を含む）が言及される場合、ＡｂＭ番号付けシステムに基づく番号付け位置を指す。

【0043】

異なる特異性（即ち、異なる抗原に対する異なる結合部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。しかしながら、ＣＤＲは抗体間で異なるが、ＣＤＲ内には限られた数のアミノ酸位置のみが抗原結合に直接関与している。Ｋａｂａｔ， Ｃｈｏｔｈｉａ， ＡｂＭ及びＣｏｎｔａｃｔ方法のうちの少なくとも二つを用いて、最小重複領域を確定することによって、抗原結合用の「最小結合単位」を提供することができる。最小結合単位はＣＤＲのサブパートであってもよい。当業者に明らかなように、抗体の構造とタンパク質の折りたたみによって、ＣＤＲ配列の他の部分の残基を確定することができる。そのため、本発明は、本明細書に提示される任意のＣＤＲの変異体も考慮する。例えば、一つのＣＤＲの変異体において、最小結合単位のアミノ酸残基は、そのままであってもよいが、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ又はＡｂＭに基づいて定義された他のＣＤＲ残基は、保存アミノ酸残基に置換されてもよい。

【0044】

「ヒト抗体」は、ヒト又はヒト細胞によって生成されるか又は非ヒト供給源に由来し、ヒト抗体ライブラリー又は他のヒト抗体コード配列を利用する抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体を指す。ヒト抗体という定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。

【0045】

「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において免疫グロブリン重鎖のＣ末端区域を定義するためのものであり、前記領域は少なくとも一部の定常領域を含む。該用語は、天然配列Ｆｃ領域と変異体Ｆｃ領域とを含む。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボニル基末端まで延びる。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても又は存在しなくてもよい。Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、別段の説明がない限り、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるように、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに基づいて行われる。

【0046】

「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、通常、類似した構造を有し、ここで、各ドメインは、四つの保存的フレームワーク領域（ＦＲ）及び三つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。（例えば、ＫｉｎｄｔらＫｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６^ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．ページ９１（２００７）を参照されたい）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を与えるには十分である。

【0047】

本明細書で使用されるように、「結合」又は「特異的結合」という用語は、結合作用が抗原に対して選択的であり、且つ望ましくないか又は非特異的相互作用と区別することができること意味する。抗体が特定の抗原に結合する能力は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ＳＰＲ又はバイオレイヤー干渉技術又は当分野で既知の他の一般的な結合アッセイによって測定され得る。

【0048】

「共刺激分子」という用語は、Ｔ細胞又はＢ細胞の完全な活性化のために共刺激シグナルを提供する細胞表面分子及びそのリガンドを指す。共刺激分子は、抗原受容体又はそのリガンド以外の、有効な免疫応答に役立つ細胞表面分子を指す。共刺激分子は、ＭＨＣ クラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＧＩＴＲ、４－１ＢＢ（即ちＣＤ１３７）、ＣＤ２７及びＣＤ２８などを含むが、それらに限らない。

【0049】

「サイトカイン」という用語は、一つの細胞群により放出され、細胞間媒体として別の細胞に作用するタンパク質の総称である。このようなサイトカインの例としては、ＩＬ－１、ＩＬ－１α、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５のようなリンフォカイン、モノカイン、インターロイキン（ＩＬ）、ＴＮＦ－α又はＴＮＦ－βのような腫瘍壊死因子、及びγ－インターフェロンを含む他のポリペプチド因子がある。

【0050】

「免疫コンジュゲート」は、一つ又は複数の他の物質（細胞傷害性薬剤又は標識を含むが、それらに限らない）にコンジュゲートされた抗体を指す。

【0051】

ＣＤＣ又はＡＤＣＣ誘導で使用される「誘導」及び「増加」という用語は、特定の直接細胞殺傷機構を刺激することを意味する。例えば、一実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０発現細胞の活性化によるＡＤＣＣによって、約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の腫瘍細胞又はウイルス、細菌などに感染した細胞の溶解をもたらす。

【0052】

「アゴニスト」という用語は、与えられる分子（例えば、共刺激分子）のいくつかのパラメータ（例えば、活性）を上昇させることを指す。例えば、この用語は、与えられる分子（例えば、ＣＤ４０）の活性を少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％又はそれ以上向上させる物質を含む。そのため、アゴニスト作用は、必ずしも１００％ではない。

【0053】

「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的「エフェクター機能」は、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御などを含む。このようなエフェクター機能は、一般的には、Ｆｃ領域が結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と会合することを必要とし、様々なアッセイ、例えば、本明細書に開示されるものを用いて評価され得る。

【0054】

「エフェクター機能」は、抗体Ｆｃ領域に起因し、抗体アイソタイプによって変化する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、貪食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化を含む。

【0055】

「Ｆｃ受容体」という用語は、免疫グロブリンＦｃ領域に結合した後、該受容体を担持する細胞にエフェクター機能を実行するように刺激するシグナル伝達事象を惹起するＦｃ受容体を指す。Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩＩＩａ （ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ （ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ （ＣＤ３２）及びＦｃαＲＩ （ＣＤ８９）を含む。

【0056】

「有効量」という用語は、単回又は複数回の用量で患者に投与された後、治療又は予防を必要とする患者に所期の効果をもたらす、本発明の抗ＣＤ４０抗体又はコンジュゲート又は組成物の量又は用量を指す。有効量は、当業者である主治医が、哺乳動物の種、体重、年齢及び一般的な健康状況、関連する具体的な疾患、疾患の程度又は重症度、個々の患者の応答、投与される具体的な抗体、投与モード、投与される製剤の生物学的利用能特性、選択される投与レジメン、及び任意の併用療法の使用などの様々な因子を考慮した上で、容易に決定することができる。

【0057】

「治療有効量」は、必要な用量で、かつ必要な期間にわたって、所望の治療結果を効果的に達成する量を指す。抗体もしくは抗体断片又はそれらのコンジュゲートもしくは組成物の治療有効量は、疾患状態、個体の年齢、性別及び体重並びに抗体又は抗体部分が個体において所望の応答を惹起する能力などの様々な要因に依存して変化し得る。治療有効量はまた、抗体もしくは抗体断片又はそれらのコンジュゲートもしくは組成物の任意の毒性又は有害作用が治療上の有益作用に及ばない量でもある。治療されていない対象に対して、「治療有効量」は、測定可能なパラメータ（例えば、腫瘍増殖率、腫瘍体積など）を、好ましくは少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約５０％、６０％又は７０％、なおさらに好ましくは少なくとも約８０％又は９０％抑制する。化合物が測定可能なパラメータ（例えば、癌）を抑制する能力は、ヒト腫瘍における有効性を予測する動物モデル系において評価され得る。

【0058】

「予防有効量」は、必要な用量で、かつ必要な期間にわたって、所望の予防結果を効果的に達成する量を指す。通常、予防用量は、対象において、疾患の早い段階よりも前又は疾患の早い段階に使用されるため、予防有効量は、治療有効量より小さい。

【0059】

「治療指数」（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｄｅｘ、ＴＩ）は、通常、半致死量（ＬＤ５０）と半有効量（ＥＤ５０）との比を指し、薬物の安全性指標である。

【0060】

「個体」又は「被験体」という用語は、交換可能に使用され、哺乳動物を含む。哺乳動物は、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類動物）、ウサギ及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含むが、これらに限定されない。特に、個体又は被験体は、ヒトである。

【0061】

「腫瘍」及び「癌」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、固形腫瘍及び液性腫瘍をカバーする。

【0062】

「癌」及び「癌性」という用語は、哺乳動物における、細胞増殖が制御できない生理学的疾患を指す。

【0063】

「腫瘍」という用語は、悪性又は良性を問わず、全ての腫瘍性（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）細胞成長及び増殖、並びに全ての前がん（ｐｒｅ－ｃａｎｃｅｒｏｕｓ）及び癌性細胞及び組織を指す。「癌」、「癌性」及び「腫瘍」という用語は、本明細書で言及される場合、互いに排他的というわけではない。

【0064】

「腫瘍免疫回避」は、腫瘍が免疫認識及び除去から逃れるプロセスを指す。このように、治療概念として、このような回避が弱まる場合に腫瘍免疫が「治療」され、且つ腫瘍が免疫系により認識され攻撃される。腫瘍認識の例としては、腫瘍結合、腫瘍縮小及び腫瘍除去を含む。

【0065】

「感染性疾患」という用語は、病原体により引き起こされる疾患を指し、例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染又は原生動物、例えば、寄生虫感染を含む。

【0066】

「慢性感染」という用語は、感染源（例えば、ウイルス、細菌、寄生虫のような原生動物、真菌などのような病原体）が、感染した宿主において免疫応答を誘導したが、急性感染の場合のように宿主から除去又は排除されていない感染を指す。慢性感染は、持続的、潜伏的、又は緩徐であり得る。

【0067】

本明細書で使用される「標識」という用語は、試薬（例えば、ポリヌクレオチドプローブ又は抗体）に直接又は間接的にコンジュゲート又は融合され、且つそれがコンジュゲート又は融合した試薬の検出を促進する化合物又は組成物を指す。標識自体は、検出可能なもの（例えば、放射性同位体標識又は蛍光標識）であってもよく、又は酵素的標識の場合に、検出可能な基質化合物又は組成物の化学変化を触媒することができる。用語は、検出可能な物質をプローブ又は抗体にカップリング（即ち、物理的接続）することによるプローブ又は抗体の直接標識、及び直接に標識される別の試薬と反応することによるプローブ又は抗体の間接的標識をカバーすることを意図している。間接的標識の例は、蛍光標識された第２の抗体を用いた第１の抗体の検出、及び蛍光標識されたストレプトアビジンで検出できるようにビオチンを有するＤＮＡプローブの末端標識を含む。

【0068】

「単離された」抗ＣＤ４０抗体は、既にその天然環境の成分から単離されたものを指す。いくつかの実施形態において、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって確定されたように、抗ＣＤ４０抗体を９５％又は９９％超の純度まで精製する。抗体純度を評価するための方法に関する概説は、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。

【0069】

「単離された」核酸は、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、該核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、該核酸分子は、染色体外又はその天然染色体位置と異なる染色体位置に存在する。「単離された、抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸」は、抗ＣＤ４０抗体の鎖又はその断片をコードする一つ又は複数の核酸分子を指し、単一ベクター又は個別のベクターにおけるこのような核酸分子、及び宿主細胞における一つ又は複数の位置に存在するこのような核酸分子を含む。

【0070】

配列間の配列同一性の計算は以下のように行われる。

【0071】

二つのアミノ酸配列又は二つの核酸配列の「同一性」の割合を確定するために、最適な比較を目的として前記配列をアラインメントする（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２のアミノ酸配列又は核酸配列の一方又は両方にギャップを導入するか又は比較するために非相同配列を棄却してもよい）。一好ましい実施形態において、比較するために、アラインメントされる参照配列の長さは、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、さらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％の参照配列長さである。その後に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置が、第２の配列中の対応する位置における同じアミノ酸残基又はヌクレオチドに占められている場合、前記分子はこの位置において同じである。

【0072】

二つの配列の間の配列比較及び同一性割合の計算は、数学的アルゴリズムを利用して実現され得る。一好ましい実施形態において、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａ及びＷｕｎｓｃｈ （（１９７０）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４４－４５３）アルゴリズム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍから入手可能）、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックス又はＰＡＭ２５０マトリックス並びにギャップ重み１６、１４、１２、１０、８、６又は４及び長さ重み１、２、３、４、５又は６を使用して、二つのアミノ酸配列の間の同一性割合を確定する。さらに別の好ましい実施形態において、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおけるＧＡＰプログラム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍから入手可能）、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス並びにギャップ重み４０、５０、６０、７０又は８０及び長さ重み１、２、３、４、５又は６を使用して、二つのヌクレオチド配列の間の同一性割合を確定する。特に好ましいパラメータセット（及び別段の説明がない限り使用されるべきパラメータセット）は、ギャップペナルティ１２、ギャップ延長ペナルティ４、フレームシフトギャップペナルティ５を用いるＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアマトリックスである。

【0073】

さらに、ＰＡＭ１２０重み付け余数表、ギャップ長さペナルティ１２、ギャップペナルティ４）を用い、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組込まれたＥ． Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ． Ｍｉｌｌｅｒアルゴリズムを利用して、（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ， ４：１１－１７）二つのアミノ酸配列又はヌクレオチド配列の間の同一性割合を確定することができる。

【0074】

追加的に又は代替的に、本明細書に記載の核酸配列及びタンパク質配列は、共通データベースに対して検索を実施して、例えば、他のファミリーメンバー配列又は関連する配列を同定するために、「照会配列」としてさらに使用されてもよい。

【0075】

「薬物組成物」という用語は、それに含まれる活性成分の生物学的活性が有効であることを許容する形態で存在し、且つ前記組成物が投与される被験体に対して許容されない毒性を有する他の成分を含まない組成物を指す。

【0076】

「薬用アジュバント」という用語は、活性物質と共に投与される希釈剤、アジュバント、ベクター、賦形剤又は安定剤などを指す。

【0077】

本明細書に用いられる場合、「治療」は、既に存在する症状、病態、状態又は疾患の進行又は重症度を減速、中断、阻止、寛解、停止、低下、又は逆転することを指す。所望の治療効果は、疾患の発生又は再発の防止、症状の軽減、疾患の、任意の直接的又は間接的な病理学的帰結の縮減、転移の予防、病状進行の速度の低下、疾患状態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善を含むが、それらに限らない。いくつかの実施形態において、本発明の抗体分子は、疾患の進行を遅延させるか、又は疾患の進行を減速させることに用いられる。

【0078】

本明細書に用いられる場合、「予防」は、疾患もしくは病態又は特定の疾患もしくは病態の症状の発生又は進行に対する抑制を含む。いくつかの実施形態において、がんの家族歴を有する被験体は予防的レジメンの候補である。通常、癌との関連で、「予防」という用語は、癌の徴候又は症状が発生する前、特に癌のリスクがある被験体に発生する前の薬物投与を指す。

【0079】

本明細書に記載の「治療剤」という用語は、腫瘍（例えば、癌）及び感染（例えば、慢性感染）の予防又は治療に有効な任意の物質をカバーし、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、抗感染活性剤、低分子薬物又は免疫調節剤を含む。

【0080】

「化学療法剤」は、癌の治療に効果的な化学化合物を含み、アルキル化剤を含む抗腫瘍剤、代謝拮抗剤、天然産物、抗生物質、酵素、ヘテロ試薬、ホルモン及びアンタゴニスト、抗エストロゲン剤、抗アンドロゲン剤、並びに非ステロイド系抗アンドロゲン剤等を含むが、それらに限らない。化学療法剤の例は、ＷＯ２０１５／１５３５１３又はＷＯ２０１６／０２８６７２又はＷＯ２０１５／１３８９２０に開示されるものを参照されたい。

【0081】

本明細書で使用される「免疫調節剤」は、免疫応答を抑制又は調節する天然の又は合成される活性剤又は薬物を指す。免疫応答は、体液性応答又は細胞応答であってもよい。免疫調節剤は、免疫チェックポイント分子抑制剤と、共刺激分子活性化剤とを含む。

【0082】

本明細書で使用されるように、「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を抑制又は阻止し、及び／又は細胞死又は細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害性薬剤の例は、ＷＯ２０１５／１５３５１３、ＷＯ２０１６／０２８６７２又はＷＯ２０１５／１３８９２０に開示されるものを参照されたい。

【0083】

「ベクター（ｖｅｃｔｏｒ）」という用語は、本明細書で使用される場合、それと連結される別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。当該用語は、自己複製核酸構造としてのベクター及びそれを導入した宿主細胞のゲノムに結合するベクターを含む。いくつかのベクターは、それに有効に連結される核酸の発現を導くことができる。このようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。

【0084】

「宿主細胞」という用語は、外因性ポリヌクレオチドがすでにそれに導入された細胞、及びこのような細胞の子孫を指す。宿主細胞は、継代数を考慮せず、一次形質転換された細胞及びそれに由来する子孫を含む「形質転換体」及び「形質転換された細胞」を含む。子孫は、核酸物質について親細胞と完全に同じではない場合があり、突然変異を含んでもよい。本明細書において、最初に形質転換された細胞からスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異体子孫を含む。宿主細胞は、本発明の抗体分子を産生することに用いられ得る任意のタイプの細胞系であり、真核細胞、例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞と、原核細胞、例えば、大腸菌細胞とを含む。宿主細胞は、培養された細胞を含み、トランスジェニック動物、トランスジェニック植物又は培養された植物組織もしくは動物組織内部の細胞も含む。

【0085】

「被験体／患者試料」は、患者又は被験体から得た細胞、組織又は体液の集合である。組織又は細胞試料の供給源は、固形組織であってもよく、例えば、新鮮で、凍結及び／又は保存された器官又は組織試料もしくは生検試料もしくは穿刺試料からのもの、血液又は任意の血液成分、脳脊髄液、羊膜液（羊水）、腹膜液（腹水）、又は間質液のような体液、被験体からの妊娠中又は任意の発育段階の細胞である。組織試料は、防腐剤、抗凝固剤、緩衝剤、固定剤、栄養素、抗生物質などのような自然界において組織と天然に混合しない化合物を含み得る。本明細書において、腫瘍試料の例としては、腫瘍生検、微細針吸引物、気管支洗浄液、胸膜液（胸水）、痰、尿、手術検体、循環中の腫瘍細胞、血清、血漿、循環中の血漿タンパク質、腹水、腫瘍に由来するか又は腫瘍様性質を示す初代細胞培養物又は細胞株、及びホルマリンで固定され、パラフィンに包埋される腫瘍試料又は凍結される腫瘍試料のような保存された腫瘍試料を含むが、それらに限らない。

【0086】

ＩＩ． 本発明の抗ＣＤ４０抗体

【0087】

本発明は、従来のＣＤ４０アゴニストによる有害事象を低減又は回避することができる次世代抗ヒトＣＤ４０抗体を提供した。

【0088】

本発明の抗ＣＤ４０抗体は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、三つの相補性決定領域を含み、それぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３であり、前記重鎖可変領域は、三つ相補性決定領域を含み、それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３であり、ここで、
（ａ）ＬＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｂ）ＬＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｃ）ＬＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｄ）ＨＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｅ）ＨＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｆ）ＨＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
ここで、前記アミノ酸変化は、アミノ酸の付加、欠失又は置換であり、例えば、前記アミノ酸変化は、保存的アミノ酸置換である。

【0089】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、
アミノ酸配列ＲＳＳＱＧＩＲＳＳＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）のようなものを含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＧＸ_１ＳＳＬＸ_２Ｘ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５６）のようなものを含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＱＱＬＸ_４ＳＦＰＳＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５７）のようなものを含有するＬＣＤＲ３であって、Ｘ_１がＡ又はＧであり、Ｘ_２がＥ又はＬであり、Ｘ_３がＧ又はＶであり、Ｘ_４がＮ又はＡであるもの、及び
アミノ酸配列ＧＦＴＸ_５ＧＳＹＥＭＸ_６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５８）のようなものを含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＹＩＳＳＸ_７ＧＥＴＴＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９）のようなものを含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＤＶＦＦＦＸ_８Ｘ_９ＳＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３ＡＹＧＭＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６０）のようなものを含有するＨＣＤＲ３であって、Ｘ_５がＦ、Ａ又はＰであり、Ｘ_６がＮ又はＤであり、Ｘ_７がＳ又はＡであり、Ｘ_８がＤ又はＳであり、Ｘ_９がＳ又はＰであり、Ｘ_１０がＧ又はＲであり、Ｘ_１１がＤ、Ｐ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_１２がＰ、Ｎ又はＲであり、Ｘ_１３がＧ又はＨであるものを含む。

【0090】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで、
（ｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、又は
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有する。

【0091】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、免疫グロブリンＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、そのＦａｂ断片のＣ末端が免疫グロブリンＦｃ領域に連結され、任意選択的に、アミノ酸リンカーを介して連結され、例えば、長さが１～２０個のアミノ酸であるアミノ酸リンカーを介して連結される。いくつかの実施形態において、前記アミノ酸リンカーのうちの少なくとも９０％は、グリシン及び／又はセリンアミノ酸である。いくつかの実施形態において、前記Ｆｃ領域は、ＩｇＧ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４からのものである。いくつかの実施形態において、前記Ｆｃ領域はＩｇＧ１からのものである。いくつかの実施形態において、前記Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１からのものである。

【0092】

本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に記載のアミノ酸変化は、アミノ酸の置換、付加又は欠失を含む。好ましくは、本明細書に記載のアミノ酸変化は、アミノ酸置換であり、より好ましくは保存的置換である。

【0093】

いくつかの実施形態において、本発明に記載のアミノ酸変化は、ＣＤＲの外の領域（例えば、ＦＲ）で起こる。いくつかの実施形態において、置換は保存的置換である。保存的置換は、一つのアミノ酸が同じクラス内の別のアミノ酸で置換され、例えば、一つの酸性アミノ酸が別の酸性アミノ酸で置換され、一つの塩基性アミノ酸が別の塩基性アミノ酸で置換され、又は一つの中性アミノ酸が別の中性アミノ酸で置換されることを指す。

【0094】

いくつかの実施形態において、本明細書による抗ＣＤ４０抗体は、改変することによってそのグリコシル化程度を増加又は低下させる。抗ＣＤ４０抗体のグリコシル化部位への付加又は欠失は、一つ又は複数のグリコシル化部位を産生又は除去するようにアミノ酸配列を改変することによって容易に実現することができる。抗ＣＤ４０抗体がＦｃ領域を含む場合、Ｆｃ領域のグリコシル化を改変することができる。いくつかの用途において、望ましくないグリコシル化部位修飾の除去は有用であり得、例えば、フコース修飾の除去は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を向上させることができる（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２）ＪＢＣ２７７：２６７３３を参照されたい）。他の用途において、ガラクトシル化修飾を行って補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を調節することができる。

【0095】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、その免疫グロブリンＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化部位が除去され、例えば、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるＮ２９７残基を突然変異させて該グリコシル化部位を除去し、例えば、Ｎ２９７残基をＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕに変え、好ましくは、Ｎ２９７残基をＧｌｎに変える。

【0096】

本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ動力学結合アッセイによって測定するように、高親和性でＣＤ４０に結合し、例えば、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１０ ＭでＣＤ４０、例えば、ヒトＣＤ４０、カニクイザルＣＤ４０及びマウスＣＤ４０に結合することができる。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、約０．５×１０^－８Ｍ～２×１０^－８Ｍの親和性でヒトＣＤ４０抗原に結合する。本発明の抗ＣＤ４０抗体は、カニクイザルＣＤ４０及びマウスＣＤ４０と交差反応性を有する。

【0097】

本発明の抗ＣＤ４０抗体は、抗原（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ））に対する免疫応答を増強し、例えば、Ｂ細胞媒介性免疫応答、Ｂ細胞活性化及び／又はサイトカイン産生を増強することによって、抗原（例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ））に対する免疫応答を増強する。

【0098】

一実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、抗原に対する免疫応答を増強し、ＣＤ４０発現細胞（例えば、ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞）に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。また、測定されたＣＤ９５による発現が増加する場合、本発明の抗ＣＤ４０抗体はアポトーシスを誘導する。

【0099】

別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又はＣＤ４０発現細胞の補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することなく、抗原に対する免疫応答を増強することができるため、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０を発現しない腫瘍細胞又は感染性疾患に対しても、抗原に対する免疫応答を増強し、例えば、Ｂ細胞媒介性免疫応答を増強することによって役割を果たすことができる。

【0100】

一実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、エフェクター機能のない定常領域を含むように修飾される。例えば、本発明の抗ＣＤ４０抗体がＦｃ領域を含む場合、Ｆｃ領域におけるグリコシル化部位Ｎ２９７残基をＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕなどに突然変異させることによって、本発明の抗ＣＤ４０抗体のエフェクター機能を減少又は除去することができる。また、本発明の抗ＣＤ４０抗体がＦｃ領域を含む場合、Ｆｃ領域によるエフェクター機能を減少又は除去するために、さらにＦｃ領域には、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）に対する本発明の抗ＣＤ４０抗体の結合親和性を減少する修飾が含まれ得る。一実施形態において、前記修飾は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメイン、例えば、重鎖の３２９番目の位置（ＥＵ番号）（例えば、Ｐ３２９Ｇ）にある。一実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、重鎖の２３４番目及び２３５番目の位置（ＥＵ番号）にあるアミノ酸置換を含む。一具体的な実施形態において、前記アミノ酸置換は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ （「ＬＡＬＡ突然変異」とも呼ばれる）である。

【0101】

一実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、抗体とＦｃ受容体との結合に依存することなく、免疫応答を増強することができる。例えば、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲを架橋することなく、有効なＣＤ４０アゴニスト特徴を示すことができる。これらのアゴニスト特徴は、例えば、Ｂ細胞活性の増加及び／又はＢ細胞活性化の増加を測定することによって確定されることを含む。

【0102】

別の実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０と、ＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）との結合を増強する。具体的な実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、可溶性ＣＤ４０ＬとＣＤ４０発現細胞との結合を少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％増強する。具体的な実施形態において、例えば、ＦＡＣＳ、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又はＢｉａｃｏｒｅにより測定するように、抗ＣＤ４０抗体は、可溶性ＣＤ４０ＬとＣＤ４０発現細胞との結合を少なくとも約５０％増強する。

【0103】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、Ｒａｍｏｓ細胞とともにインキュベートされる場合、ＣＤ９５の発現を誘導する。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＢ細胞とともにインキュベートされる場合、Ｂ細胞の増殖を増加させる。いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、樹状細胞とともにインキュベートされる場合、ＩＬ－１２の分泌及びＣＤ８３発現を増加させる。

【0104】

本発明の抗ＣＤ４０抗体は、被験体に投与された後、用量制限毒性、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びグルタミン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＬＤＨ）の濃度上昇に関連する肝毒性などの有害反応を引き起こさないか又は有害反応が弱いことが予想される。

【0105】

ＩＩＩ． 免疫コンジュゲート

【0106】

本発明はさらに、他の物質とコンジュゲートする本発明抗ＣＤ４０抗体（「免疫コンジュゲート」）に関する。いくつかの実施形態において、他の物質は、例えば、治療剤（例えば、細胞傷害性薬剤）である。細胞傷害性薬剤は、細胞に有害な任意の薬剤を含む。免疫コンジュゲートを形成することに適した細胞傷害性薬剤（例えば、化学療法剤）の例は、当分野において既知である。例えば、細胞傷害性薬剤は、放射性同位体、成長抑制剤、その断片及び／又は変異体を含む、低分子毒素又は細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的活性毒素のような毒素、及び既知の様々な抗腫瘍剤又は抗癌剤を含むが、それらに限らない。

【0107】

免疫コンジュゲートを形成することに適した細胞傷害性薬剤（例えば、化学療法剤）の例はさらに、例えば、ＷＯ２０１５／１５３５１３又はＷＯ２０１５／１３８９２０などを参照されたい。

【0108】

本発明の抗ＣＤ４０抗体はまた、固相支持体に連結されてもよく、前記支持体は、特に免疫測定法又は標的抗原の精製に用いられ得る。このような固相支持体は、玻璃、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンを含むが、それらに限らない。

【0109】

いくつかの実施形態において、前記免疫コンジュゲートは、腫瘍を予防又は治療するためのものである。いくつかの実施形態において、腫瘍は癌である。いくつかの実施形態において、前記免疫コンジュゲートは、感染、例えば、慢性感染、例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、原生動物感染などを予防又は治療するためのものである。

【0110】

ＩＶ． 本発明の核酸及びそれを含む宿主細胞

【0111】

一態様では、本発明は、以上の任意の抗ＣＤ４０抗体又はその断片又はそのいずれか一つの鎖をコードする核酸を提供した。一実施形態において、前記核酸を含むベクターが提供される。一実施形態において、ベクターは発現ベクターである。一実施形態において、前記核酸又は前記ベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態において、宿主細胞は真核細胞である。別の実施形態において、宿主細胞は、酵母細胞、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞又は２９３細胞）又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適した他の細胞から選択される。別の実施形態において、宿主細胞は原核細胞である。

【0112】

例えば、本発明の核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５から選択されるいずれか一つに示すアミノ酸配列をコードする核酸、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５から選択されるいずれか一つに示すアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸を含む。

【0113】

本発明はさらに、ストリンジェントな条件下で下記核酸とハイブリダイズする核酸、又は下記核酸に比べて一つ又は複数のアミノ酸置換（例えば、保存的置換）、欠失又は挿入を有するポリペプチド配列をコードする核酸をカバーする：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５から選択されるいずれか一つに示すアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２５、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５３、５５から選択されるいずれか一つに示すアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸。

【0114】

一実施形態において、前記核酸を含む一つ又は複数のベクターが提供される。一実施形態において、ベクターは、発現ベクター、例えば、真核発現ベクターである。ベクターは、ウイルス、プラスミド、コスミド、λファージ又は酵母人工染色体（ＹＡＣ）を含むが、それらに限らない。一実施形態において、ベクターはｐｃＤＮＡ３．３ベクターである。

【0115】

発現するための発現ベクター又はＤＮＡ配列が製造されると、発現ベクターを適切な宿主細胞にトランスフェクト又は導入してもよい。様々な技術、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、逆転写ウイルスの形質導入、ウイルストランスフェクト、遺伝子ガン、リポフェクション又は他の一般的な技術は、この目的の実現に用いられ得る。産生されたトランスフェクト細胞を培養し、産生された抗体分子を回収するための方法及び条件は、当業者に既知であり、且つ本明細書及び従来技術に既知の方法に基づいて、使用される特定の発現ベクター及び哺乳動物宿主細胞に応じて変更又は最適化され得る。

【0116】

また、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする一つ又は複数のマーカーを導入することによって、既にＤＮＡをその染色体に安定的に組み込んだ細胞を選定することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に原栄養株、殺生物耐性（例えば、抗生物質）又は重金属（例えば、銅）耐性などを提供することができる。選択可能な標識遺伝子は、発現されるＤＮＡ配列と直接連結されるか又は同時形質転換によって同じ細胞に導入され得る。ｍＲＮＡを最適に合成するために、追加のエレメントが必要になることもある。これらのエレメントは、スプライシングシグナル、転写プロモーター、エンハンサー及び終結シグナルを含んでもよい。

【0117】

一実施形態において、本発明のポリヌクレオチドを含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態において、本発明の発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態において、宿主細胞は、酵母細胞、哺乳動物細胞、又は抗体の製造に適した他の細胞から選択される。適切な宿主細胞は、大腸菌のような原核微生物を含む。宿主細胞はさらに、糸状菌もしくは酵母のような真核微生物、又は様々な真核細胞、例えば、昆虫細胞などであってもよい。また、脊椎動物細胞を宿主として用いてもよい。例えば、懸濁成長に適するように操作された哺乳動物細胞株を用いてもよい。有用な哺乳動物宿主細胞株の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）、ヒト胎児腎臓株（ＨＥＫ ２９３又は２９３Ｆ細胞）、２９３細胞、ベビーハムスター腎臓細胞胞（ＢＨＫ）、ザル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、ＣＨＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、Ｙ０、ＮＳ０、Ｐ３Ｘ６３及びＳｐ２／０などのような骨髄腫細胞株を含む。一好ましい実施形態において、前記宿主細胞はＣＨＯ細胞又は２９３細胞である。

【0118】

Ｖ． 本発明の抗ＣＤ４０抗体の生産及び精製

【0119】

一実施形態において、本発明は、抗ＣＤ４０抗体を製造する方法を提供し、ここで、前記方法は、前記抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸の発現に適した条件下で、前記抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸又は前記核酸の発現ベクターを含む宿主細胞を培養することと、前記抗ＣＤ４０抗体を任意に単離させることとを含む。ある実施形態において、前記方法は、前記宿主細胞（又は宿主細胞培地）から抗ＣＤ４０抗体を回収することをさらに含む。

【0120】

本発明の抗ＣＤ４０抗体を組換え生成するために、まず本発明の抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸を単離させ、宿主細胞においてさらにクローニング及び／又は発現を行うために、前記核酸をベクターに挿入する。このような核酸は、通常の規程で単離及び配列決定を行うことが容易であり、例えば、本発明の抗ＣＤ４０抗体をコードする核酸に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いて行われる。

【0121】

本明細書に記載されるように製造された本発明の抗ＣＤ４０抗体は、既知の従来技術、例えば、高速液体クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなどによって精製され得る。特定のタンパク質を精製するための実際の条件はまた、正味の電荷、疎水性、親水性などの要素に依存し、且つこれらは当業者にとって明らかである。本発明の抗ＣＤ４０抗体の純度は、複数の周知の分析方法のうちのいずれか一つの方法によって確定することができ、前記周知の分析方法は、サイズ排除クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィなどを含む。

【0122】

ＶＩ． 本発明の抗ＣＤ４０抗体の活性測定法

【0123】

本明細書による抗ＣＤ４０抗体は、当分野に既知の複数の測定法によって同定し、スクリーニングし、又はその物理的／化学的特性及び／又は生物学的活性を特徴づけることができる。一方、本発明の抗ＣＤ４０抗体に対してその抗原結合活性を試験し、例えば、ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎブロットなどの既知の方法によって行われる。ＣＤ４０への結合は、当分野に既知の方法によって測定することができ、本明細書には例示的な方法が開示された。いくつかの実施形態において、ＳＰＲ又はバイオレイヤー干渉を用いて、ＣＤ４０への本発明の抗ＣＤ４０抗体の結合を測定する。

【0124】

本発明は、生物学的活性を有する抗ＣＤ４０抗体を同定するための測定法をさらに提供した。生物学的活性は、例えば、細胞表面ＣＤ４０ （例えば、ヒトＣＤ４０、サルＣＤ４０、マウスＣＤ４０）への結合、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ結合の増強、抗原提示細胞に対する活性化、ＣＤ４０を発現する腫瘍細胞によるＣＤ９５発現の誘導、Ｂ細胞媒介性免疫応答の増強などを含んでもよい。

【0125】

任意の上記インビトロ測定法に用いられる細胞は、ＣＤ４０を天然に発現するか又はＣＤ４０を発現するように操作される細胞株を含む。前記の、ＣＤ４０を発現するように操作される細胞株は、正常にはＣＤ４０を発現せず、ＣＤ４０をコードするＤＮＡを細胞にトランスフェクトした後にＣＤ４０を発現する細胞株である。

【0126】

理解できるように、任意の上記測定法は、抗ＣＤ４０抗体の代わりに、本発明の免疫コンジュゲートを用いて行われ得る。

【0127】

ＶＩＩ． 薬物組成物及び薬物製剤

【0128】

いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載の任意の抗ＣＤ４０抗体又はその免疫コンジュゲートを含む組成物を提供し、好ましくは、組成物は薬物組成物である。一実施形態において、前記組成物は、薬用アジュバントをさらに含む。一実施形態において、組成物（例えば、薬物組成物）は、本発明の抗ＣＤ４０抗体又はその免疫コンジュゲート、及び一つ又は複数の他の治療剤（例えば、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、抗感染活性剤、低分子薬物又は免疫調節剤、好ましくは抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体）の組み合わせを含む。

【0129】

いくつかの実施形態において、前記組成物は、腫瘍を予防又は治療するためのものである。いくつかの実施形態において、腫瘍は癌である。いくつかの実施形態において、前記組成物は、感染、例えば、慢性感染、例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、原生動物感染などを予防又は治療するためのものである。

【0130】

本発明は、抗ＣＤ４０抗体又はその免疫コンジュゲートを含む組成物（薬物組成物又は薬物製剤を含む）、及び／又は抗ＣＤ４０抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物（薬物組成物又は薬物製剤を含む）をさらに含む。これらの組成物は、当分野に既知の薬用ベクター、緩衝剤を含む薬用賦形剤のような適切な薬用アジュバントをさらに含んでもよい。

【0131】

本明細書で使用されるように、「薬用ベクター」は、生理学的に適合性の任意の全ての溶媒、分散媒体、等張剤及び吸収遅延剤などを含む。本発明に適する薬用ベクターは、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などのような、石油、動物、植物又は合成供給源のものを含む油及び水のような無菌の液体であってもよい。薬物組成物が静脈内投与される場合、水は好適なベクターである。また、生理食塩水、水性デキストロース及びグリセリン溶液を液体ベクター、特に注射用溶液として用いてもよい。適切な賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、グリセリルモノステアレート、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、ジオール、水、エタノールなどを含む。賦形剤の使用及びその用途については、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ」， 第五版， Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ， Ｐ．Ｊ．Ｓｅｓｋｅｙ 及びＳ．Ｃ．Ｏｗｅｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｄｏｎ， Ｃｈｉｃａｇｏも参照されたい。所望であれば、前記組成物は、少量の湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤をさらに含有してもよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳剤、錠剤、丸薬、カプセル剤、粉末、持続放出製剤などの形態をとることができる。経口製剤は、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンのような標準的な薬用ベクター及び／又は賦形剤を含んでもよい。

【0132】

本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体を含む薬物製剤は、所望の純度を有する本発明の抗ＣＤ４０抗体を、一つ又は複数の任意選択的な薬用アジュバント（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１６ 版，Ｏｓｏｌ，Ａ． による編集（１９８０））と混合することによって、好ましくは、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で製造され得る。

【0133】

本発明の薬物組成物又は製剤は、治療される特定の適応症に必要とされる二つ以上の活性成分をさらに含んでもよく、好ましくは、互いに悪影響を及ぼしない、相補的活性を有するそれらの活性成分を有する。例えば、他の抗癌活性成分又は抗感染活性成分、例えば、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、抗感染活性剤、低分子薬物又は免疫調節剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体などをさらに提供することが望ましい。前記活性成分は、目的用途に有効な量で適切に組み合わせて存在する。

【0134】

持続放出製剤を製造することができる。持続放出製剤の好適な例としては、本発明の抗ＣＤ４０抗体の固体疎水性ポリマーを含有する半透過性マトリックスが挙げられ、前記マトリックスは、成形品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態を呈する。

【0135】

ＶＩＩＩ． 組み合わせ製品又はキット

【0136】

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片、又はその免疫コンジュゲート、及び一つ又は複数の他の治療剤（例えば、化学療法剤、他の抗体、細胞傷害性薬剤、抗感染活性剤、低分子薬物又は免疫調節剤など）を含む組み合わせ製品をさらに提供する。いくつかの実施形態において、他の抗体は、例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。

【0137】

いくつかの実施形態において、前記組み合わせ製品は、腫瘍を予防又は治療するためのものである。いくつかの実施形態において、腫瘍は癌などである。

【0138】

いくつかの形態において、前記組み合わせ製品のうちの二つ又は複数の成分は、被験体に順次、別々又は同時に併用投与され得る。

【0139】

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体、薬物組成物、免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品を含むキット、及び投与を指示する任意の包装インサートをさらに提供する。

【0140】

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の抗ＣＤ４０抗体、薬物組成物、免疫コンジュゲート、組み合わせ製品を含む薬物製品をさらに提供し、任意選択的に、前記薬物製品は、投与を指示する包装インサートをさらに含む。

【0141】

ＩＸ． 本発明の抗ＣＤ４０抗体の用途

【0142】

一態様では、本発明は、個体における免疫反応を調節する方法に関する。該方法は、有効量の本明細書に開示された抗ＣＤ４０抗体又は前記抗ＣＤ４０抗体を含む薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品を対象に投与することによって、対象における免疫反応を調節することを含む。一実施形態において、本明細書に開示された治療有効量の抗ＣＤ４０抗体又は薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品は、対象における免疫反応を回復、増強、刺激又は増加する。

【0143】

いくつかの実施形態において、本発明は、個体においてＣＤ４０の活性を向上させ、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を増強し、ＩＬ－１２などのサイトカインの分泌を誘導する方法に関し、該方法は、有効量の本明細書に開示された抗ＣＤ４０抗体又はそれを含む薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品を対象に投与することを含む。

【0144】

別の態様では、本発明は、被験体の腫瘍（例えば、癌）を予防又は治療する方法に関し、前記方法は、有効量の本明細書に開示された抗ＣＤ４０抗体又はそれを含む薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品を前記被験体に投与することを含む。いくつかの実施形態において、腫瘍は腫瘍免疫回避である。いくつかの実施形態において、前記腫瘍は癌である。

【0145】

別の態様では、本発明は、被験体において抗体依存性細胞により媒介される細胞傷害性を引き起こす方法に関し、前記方法は、有効量の本明細書に開示された抗ＣＤ４０抗体又はそれを含む薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品を前記被験体に投与することを含む。

【0146】

被験体は、哺乳動物、例えば、霊長類、好ましくは、高度な霊長類、例えば、ヒト（例えば、本明細書に記載の疾患に罹患しているか又は本明細書に記載の疾患に罹患するリスクのある患者）であり得る。一実施形態において、被験体は、本明細書に記載の疾患（例えば、本明細書に記載の腫瘍又は感染性疾患）に罹患しているか又は本明細書に記載の疾患に罹患するリスクがある。いくつかの実施形態において、被験体は、他の治療、例えば、化学療法治療及び／又は放射線療法を受けるか又は既に受けた。代替的に又は組み合わせ下で、被験体は、感染で免疫無防備状態になったか又は感染で免疫無防備状態になるリスクがある。

【0147】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の腫瘍、例えば、癌は、固形腫瘍、血液癌、軟部腫瘍及び転移病巣を含むが、それらに限らない。

【0148】

固形腫瘍の例としては、肝臓、肺、乳腺、リンパ、消化管（例えば、結腸）、膵臓、尿生殖路（例えば、腎、膀胱上皮細胞）、前立腺及び咽頭を侵すそれらの癌のような、悪性腫瘍、例えば、複数の器官系の肉腫及び癌（腺癌と扁平上皮癌とを含む）を含む。腺癌は、大部分の結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺癌における非小細胞肺癌、小腸癌及び食道癌のような悪性腫瘍を含む。扁平上皮癌は、肺、食道、皮膚、頭頸部、口腔、肛門、子宮頸におけるそれらの癌のような悪性腫瘍を含む。一実施形態において、癌は、黒色腫、例えば、進行性黒色腫である。一実施形態において、癌は、リンパ腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸腺癌、乳癌である。前述の癌の転移病巣も、本発明の方法及び組成物を用いて治療又は予防され得る。

【0149】

治療するための好ましい癌の非限定的例としては、リンパ腫（例えば、びまん性大Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、乳癌（例えば、転移性乳癌）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、例えば、ステージＩＶ又は再発性非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ腺癌、又はＮＳＣＬＣ扁平上皮癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、ステージＩＩＩ又はステージＩＶ黒色腫）又はＭｅｒｋｅｌ細胞癌）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、脊髄異形成症候群、膀胱癌（例えば、移行上皮癌）、腎臓癌（例えば、腎細胞癌、例えば、明細胞腎細胞癌、例えば、進行性又は転移性明細胞腎細胞癌）及び結腸癌を含む。また、難治性又は再発性悪性腫瘍（例えば、膵臓癌）は、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体又はそれを含む薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品を用いて治療され得る。

【0150】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞又は抗原提示細胞表面のＣＤ４０に結合して、カスケード効果を生じさせ、Ｔ細胞を活性化することによって、腫瘍を治療する。

【0151】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４０が表面に過剰発現している腫瘍に対して、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＡＤＣＣ、ＣＴＬ及び／又は腫瘍細胞アポトーシスを誘導することによって腫瘍を治療する。

【0152】

いくつかの実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体又はそれを含む免疫コンジュゲート又は組成物又は組み合わせ製品は、病態及び／又は病態に関連する症状の発作を遅延させる。

【0153】

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の予防又は治療方法は、本明細書に開示された抗ＣＤ４０抗体又は薬物組成物又は免疫コンジュゲート又は組み合わせ製品、及び一つ又は複数の他の療法、例えば、治療方式及び／又は他の治療剤を前記被験体又は個体に併用投与することをさらに含む。

【0154】

いくつかの実施形態において、治療方式は、外科手術（例えば、腫瘍切除術）、放射線療法（例えば、それに照射領域が設計される三次元原体放射線療法に関する外粒子線療法、）、局所照射（例えば、予め選択された標的又は器官に向けられた照射）又は集束照射）などを含む。集束照射は、定位的放射線手術、分割照射による定位的放射線手術及び強度変調放射線療法から選択され得る。集束照射は、ＷＯ ２０１２／１７７６２４において記述されているように、粒子線（プロトン）、コバルト－６０（光子）及び線形加速器（Ｘ線）から選択される放射線源を有し得る。

【0155】

放射線療法は、いくつかの方法のうちの一つ又は方法の組み合わせによって投与することができ、前記方法は、外粒子線療法、内部放射線療法、インプラント照射、定位的放射線手術、全身放射線療法、放射線療法及び永続的又は一時的間質近接放射線療法を含むが、それらに限らない。

【0156】

いくつかの実施形態において、治療剤は、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、抗感染活性剤、低分子薬物又は免疫調節剤（例えば、共刺激分子の活性化剤又は免疫チェックポイント分子の抑制剤）から選択される。

【0157】

例示的な他の抗体は、免疫チェックポイント分子の抑制剤（例えば、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、抗ＴＩＭ－３、抗ＣＥＡＣＡＭ又は抗ＬＡＧ－３）、免疫細胞を刺激する抗体（例えば、アゴニストＧＩＴＲ抗体又はＣＤ１３７抗体）などを含むが、それらに限らない。好ましくは、他の抗体は、抗ＰＤ－１抗体及び／又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される。さらに好ましくは、前記抗ＰＤ－１抗体は、ブリストル・マイヤーズスクイブ（ＢＭＳ）社のニボルマブ（Ｎｉｖｏｌｕｍａｂ）、メルク（Ｍｅｒｃｋ）社のペムブロリズマブ（Ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）であり、前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ロシュ（Ｒｏｃｈｅ）が開発したａｔｅｚｏｌｉｚｕｍａｂ、メルク（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ）及びファイザー（Ｐｆｉｚｅｒ）が共同開発したａｖｅｌｕｍａｂ、アストラゼネカが開発したｄｕｒｖａｌｕｍａｂである。

【0158】

いくつかの実施形態において、免疫調節剤は、共刺激分子の活性化剤又はアゴニストである。一実施形態において、共刺激分子のアゴニストは、以下の分子のアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体又はその抗原結合断片、又は可溶性融合物）から選択される：ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１ （ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ （ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ （ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７－Ｈ３又はＣＤ８３リガンド。

【0159】

本発明の併用療法は、併用投与（ここで、二つ又はそれ以上の治療剤が同一の製剤又は個別の製剤に含まれる）及び個別投与をカバーする。個別投与の場合に、本発明の抗ＣＤ４０抗体又は免疫コンジュゲートなどの投与は、他の療法の投与の前、同時及び／又は後に実施され得る。

【0160】

一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体の投与と他の療法（例えば、治療方式又は治療剤）の投与とは、互いに約一か月以内、又は約一、二もしくは三週間以内、又は約１、２、３、４、５、又は６日以内に実施する。

【0161】

本発明の抗ＣＤ４０抗体（及びそれを含む薬物組成物又は免疫コンジュゲート）は、任意の適切な方法で投与されてもよく、非経口投与、肺内投与及び鼻内投与を含み、且つ、局所治療が必要であれば、病巣内投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与を含む。投薬が短期的であるか長期的であるかにある程度応じて、任意の適切な経路、例えば、静脈内注射または皮下注射などの注射によって投薬を行うことができる。本明細書は、様々な投薬スケジュールをカバーし、単回投与又は複数の時点での複数回投与、ボーラス注入投与及びパルス注入を含むが、それらに限らない。

【0162】

疾患を予防又は治療するために、本発明の抗ＣＤ４０抗体の適切な用量（単独で又は一つ又は複数の他の治療剤と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患のタイプ、抗ＣＤ４０抗体のタイプ、疾患の重症度及び進行、前記抗ＣＤ４０抗体が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療、患者の臨床病歴及び前記抗ＣＤ４０抗体に対する応答、並びに主治医の判断力に依存する。前記抗ＣＤ４０抗体は、一回の治療又は一連の治療によって患者に適切に投与される。抗ＣＤ４０抗体の用量及び治療計画は、当業者によって確定され得る。

【0163】

理解できるように、任意の上記予防又は治療は、抗ＣＤ４０抗体の代わりに、本発明の免疫コンジュゲート又は組成物又は組み合わせ製品を用いて行われ得る。

【0164】

Ｘ． 診断及び検出のための方法及び組成物

【0165】

いくつかの実施形態において、本明細書による任意の抗ＣＤ４０抗体は、生物試料におけるＣＤ４０の存在の検出に用いることができる。「検出」という用語は、本明細書で使用される場合、定量又は定性検出を含み、例示的検出方法は、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー（例えば、ＦＡＣＳ）、抗体分子と複合体化された磁気ビーズ、ＥＬＩＳＡ測定法に関してもよい。いくつかの実施形態において、生物試料は、血、血清又は生物由来の他の体液試料である。いくつかの実施形態において、生物試料は、細胞又は組織を含む。いくつかの実施形態において、生物試料は、過剰増殖性又は癌性病巣からのものである。

【0166】

一実施形態において、診断又は検出方法に用いられるＣＤ４０抗体を提供した。別の態様では、ＣＤ４０の生物試料での存在を検出する方法を提供した。いくつかの実施形態において、方法は、ＣＤ４０タンパク質の生物試料での存在を検出することを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４０はヒトＣＤ４０である。いくつかの実施形態において、前記方法は、抗ＣＤ４０抗体とＣＤ４０との結合が許容される条件下で、生物試料を本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体と接触させ、抗ＣＤ４０抗体とＣＤ４０との間に複合体が形成されたか否かを検出することを含む。複合体の形成は、ＣＤ４０が存在することを表す。該方法は、インビトロ又はインビボ方法であってもよい。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、抗ＣＤ４０抗体による治療に適した被験体を選択することに用いられ、例えば、ここで、ＣＤ４０は、前記被験体を選択するための生物マーカーである。

【0167】

一実施形態において、本発明の抗ＣＤ４０抗体を用いて、癌又は腫瘍を診断することができ、例えば、対象における本明細書に記載の疾患（例えば、過剰増殖性又は癌性疾患）の治療又は進行、その診断及び／又はステージを評価（例えば、モニタリング）する。いくつかの実施形態において、標識された抗ＣＤ４０抗体が提供される。標識は、直接検出された標識又は部分（例えば、蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識及び放射性標識）、及び例えば、酵素的反応又は分子相互作用によって、間接的に検出された部分、例えば、酵素又はリガンドを含むが、それらに限らない。例示的標識は、放射性同位体^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈ及び^１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体のような蛍光団、ローダミン及びその誘導体、ダンシル（ｄａｎｓｙｌ）、ウンベリフェロン（ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｏｎｅ）、ルシフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅ）、例えば、蛍ルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、フルオレセイン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、溶解酵素、炭水化物オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース－６－リン酸脱水素酵素、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼのような複素環オキシダーゼ、並びにＨＲのような過酸化水素酸化染料前駆体を利用する酵素、ラクトパーオキシダーゼ、又はミクロペルオキシダーゼ（ｍｉｃｒｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）、ビオチン／アビジン、スピン標識、ファージ標識、安定ラジカルなどを含むが、それらに限らない。

【0168】

本明細書による任意の発明のいくつかの実施形態において、試料は、抗ＣＤ４０抗体による治療前に得られた。いくつかの実施形態において、試料は、癌が既に転移した後に得られた。いくつかの実施形態において、試料は、ホルマリンで固定され、パラフィン（ＦＦＰＥ）に包埋される。いくつかの実施形態において、試料は、生検（例えば、コア生検）、手術検体（例えば、手術切除からの検体）、又は微細針吸引物である。

【0169】

いくつかの実施形態において、ＣＤ４０は、治療前、例えば、治療開始前又は治療間隔後のある治療の前に検出される。

【0170】

いくつかの実施形態において、腫瘍又は感染を治療する方法を提供し、前記方法は、被験体（例えば、試料）（例えば、癌細胞を含む被験体試料）に対してＣＤ４０の存在を検査し、それによってＣＤ４０値を確定し、ＣＤ４０値を対照値（例えば、健康な個体の試料におけるＣＤ４０の値）と比較し、且つＣＤ４０値が対照値より小さい場合、一つ又は複数の他の療法と任意に組み合わせる抗ＣＤ４０抗体（例えば、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体）の治療有効量を被験体に投与し、それによって腫瘍又は感染を治療することを含む。

【0171】

理解できるように、本発明の各部分に記述されている各実施形態、例えば、疾患、治療剤、治療方式及び投与などは、本発明の他の部分の実施形態にも同様に適し、又は他の部分の実施形態と組み合わせることができる。本発明の各部分に記述されている、抗ＣＤ４０抗体に適した性質、用途及び方法などの実施形態は、抗ＣＤ４０抗体を含む組成物、コンジュゲート、組み合わせ製品及びキットなどにも同様に適する。

【0172】

ＸＩ． 本発明の例示的抗ＣＤ４０抗体の配列

【0173】

本発明の例示的抗ＣＤ４０抗体の配列は以下の表に示すとおりである。

【0174】

［表１］

【0175】

［表２］

【0176】

［表３－１］

［表３－２］

［表３－３］

【0177】

以下の実施例は、本発明の理解を助けるために記述される。実施例は、本発明の保護範囲を限定することを意図せず、如何なる方法でもそのように解釈されるべきではない。

【0178】

実施例

【0179】

実施例１：抗ＣＤ４０抗体の製造

【0180】

１．１． Ｐ１７－Ｆｃ抗原の製造

【0181】

ヒトＣＤ４０の細胞外ドメイン（ＣＤ４０ ＥＣＤ）（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ２５９４２の２１～１９３位）遺伝子断片をヒトＩｇＧ１ Ｆｃ断片のＤＮＡ配列Ｎ末端に融合させ、該ＣＤ４０ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を合成し、ｐｃＤＮＡ３．３ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターのポリクローナル部位にクローニングし、ＣＤ４０ ＥＣＤ－Ｆｃ融合タンパク質を発現する発現ベクターを得て、本明細書において、Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質発現ベクターとも呼ばれる。

【0182】

Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質発現ベクターをＣＨＯ－Ｋ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に導入して真核発現を行って（製造ステップの詳細は、書籍『Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｆｃ－Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ』（Ｓｔｅｖｅｎ Ｍ． Ｃｈａｍｏｗら，ページ４５～６２ 「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｆｃ－Ｆｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」の関連内容を参照）、Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質を得た。Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質と抗ＣＤ４０抗体ダセツズマブ（Ｄａｃｅｔｕｚｕｍａｂ）（ＥＰ１８８５３９９Ｂ１を参照されたく、以下、ＣＤ４０－Ｄａｃと略称することがある）及びＢｌｅｓｌｕｍａｂ（ＵＳ２０１００２３４５７８を参照されたく、以下、ＣＤ４０－Ｂｌｅと略称することがある）との結合状況を標準ＥＬＩＳＡ方法で測定することによって、製造されたＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質の免疫原性を検証した。図１に示すように、Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質は、ダセツズマブ及びＢｌｅｓｌｕｍａｂに対する親和性を示した。

【0183】

１．２． Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質のビオチン化

【0184】

メーカーの指示に従い、ＥＺ－Ｌｉｎｋ^ＴＭ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチン化キット（ＥＺ－Ｌｉｎｋ^ＴＭ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、品番： ２１４３５）を用いて、計算量のＥＺ－Ｌｉｎｋ Ｓｕｌｆｏ－ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチンをＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質上に標識した。ビオチン標識されたＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質（本明細書において「Ｐ１７－Ｆｃ－ビオチン」、「ビオチン化されたＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質」とも呼ばれる）の量をビオチン定量キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、２８００５）によって測定した。

【0185】

さらに、実施例１．１と同様の方法を用いて、ダセツズマブ及びＢｌｅｓｌｕｍａｂに対するＥＬＩＳＡ測定法によって、ビオチン化されたＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質のコンホメーションを検証した。

【0186】

図２に示すように、ビオチン化されていないＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質のダセツズマブ及びＢｌｅｓｌｕｍａｂへの結合に比べて、ビオチン化されたＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質は、この二つの抗ＣＤ４０抗体と似ている結合を示した。

【0187】

類似している方法で、ＩＬ－２３－Ｆｃ－ビオチン（ＩＬ－２３配列供給源はＵｎｉｐｒｏｔ：Ｑ９ＮＰＦ７である）を製造し、後続の抗体ライブラリースクリーニングにおいて、Ｆｃに結合するファージを除去することに用いられる。

【0188】

類似している方法でＰ１７－Ｈｉｓタンパク質（Ｐ１７の配列がＵｎｉｐｒｏｔ：Ｐ２５９４２の２１～１９３位と同様である）を製造し、そのＣ末端には６つのヒスチジンタグがある。

【0189】

１．３． 抗体ライブラリースクリーニング

【0190】

全ヒト抗体ライブラリーの構築及びスクリーニング方法は、特許出願ＣＮ２０２０１０２３６２５６．８を参照されたい。ヒトＣＤ４０に特異的に結合する、ファージ上にディスプレイされる抗ＣＤ４０ Ｆａｂ抗体断片を得るために、実施例１．１のビオチン化Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質を用いて、全ヒト抗体ファージディスプレイライブラリーをスクリーニングした。

【0191】

具体的なスクリーニング方法は以下のとおりである：磁気ビーズ法を用いて抗体ライブラリーのスクリーニングを行い、毎回実施例１．１のビオチン化Ｐ１７－Ｆｃ融合タンパク質を用いて全ヒト抗体ファージディスプレイライブラリーをパニングする前、該抗体ライブラリーを実施例１．１のＩＬ－２３－Ｆｃ－ビオチンでパニングすることによって、Ｆｃに結合するファージを除去し、そしてヒトＣＤ４０タンパク質に特異的に結合できるファージモノクローナルを、ビオチン標識されたＰ１７－Ｆｃ融合タンパク質でスクリーニングした。非特異的に吸着するファージを洗浄によって除去した後、得られたファージを収集し、大腸菌ＳＳ３２０細胞で増幅させた後に、続いて次のラウンドのパニングに用いられた。

【0192】

毎ラウンドのパニングにおいて、インプットファージ（ｉｎｐｕｔ ｐｈａｇｅ）とアウトファージ（ｏｕｔｐｕｔ ｐｈａｇｅ）との比（ｒａｔｉｏ）を計算し、ＣＤ４０特異的ファージ濃縮の指標として用いた。

【0193】

ファージライブラリーＥＬＩＳＡによって、各ライブラリーによるＣＤ４０の濃縮も確認され、ここで、三ラウンドのパニング後、ＣＤ４０に結合するファージは、図３に示すように、高度に濃縮した。

【0194】

スクリーニングして得られたファージＦａｂとＰ１７－Ｆｃ－ビオチン及びＩＬ２３－Ｆｃ－ビオチンとの結合を試験した。Ｐ１７－Ｆｃ－ビオチンのみに対して特異的親和性を示すファージクローンを選択し、ＤＮＡを抽出し、配列決定を行った。

【0195】

独特のＦａｂ配列を含有する１つのファージクローンＣ８を得て、そのコードヌクレオチド、及びアミノ酸配列は以下に示すとおりである。

【0196】

［配列１］

【0197】

該ファージＣ８クローンの、重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列及び軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を、それぞれｐｃＤＮＡ３．３ベクターに連結し、ＣＨＯ－Ｋ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）においてＦａｂ断片として発現させ、精製した。ＥＬＩＳＡ法によって、Ｆａｂ候補分子に対して、Ｐ１７－Ｆｃに対する親和性検出を行い、結果は図４に示すとおりである。

【0198】

図４から分かるように、Ｃ８クローンＦａｂがＣＤ４０に結合するＥＣ５０値は約０．４７６４ μｇ／ｍＬであり、陽性対照ＢｌｅｓｌｕｍａｂマブがＣＤ４０に結合するＥＣ５０値は約０．０４７０１ μｇ／ｍＬである。

【0199】

さらに、細胞表面に発現するＣＤ４０に対する抗ＣＤ４０ Ｆａｂの親和性を試験するために、ヒトＣＤ４０（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ２５９４２）を細胞表面に発現するＣＨＯ－Ｋ細胞、及びカニクイザルＣＤ４０（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｇ７ＰＧ３８）を細胞表面に発現するＣＨＯ－Ｋ細胞を製造した。具体的には、ヒトＣＤ４０（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ２５９４２）のコード配列をｐｃＤＮＡ３．３ （Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ベクターのポリクローナル部位のクローニングし、ヒトＣＤ４０を発現する発現ベクターを得て、そしてヒトＣＤ４０を発現する該発現ベクターをＣＨＯ－Ｋ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に導入して真核発現を行い、細胞表面に発現するヒトＣＤ４０のＣＨＯ－Ｋ細胞（以下、「ＣＨＯ－Ｋ－ｈｕＣＤ４０細胞」とも呼ばれる）を得た。同様に、カニクイザルＣＤ４０を細胞表面に発現するＣＨＯ－Ｋ細胞（以下、「ＣＨＯ－Ｋ－ｃｙｎｏＣＤ４０細胞」とも呼ばれる）を得た。

【0200】

ＣＨＯ－Ｋ－ｈｕＣＤ４０細胞又はＣＨＯ－Ｋ－ｃｙｎｏＣＤ４０細胞を、１．０×１０^５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種し、希釈されたＣ８抗ＣＤ４０ Ｆａｂ候補分子を添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、１００ μＬのＡＰＣ標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ第２の抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ、品番：１０９－１３６－０９７、アロフィコシアニン標識された、Ｆ（ａｂ'）_２断片に特異的に結合するヤギ抗ヒトＩｇＧ第２の抗体Ｆ（ａｂ'）_２断片（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ（ＡＰＣ）ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ'）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ， Ｆ（ａｂ'）_２ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ））を添加し、４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、Ｃ８抗ＣＤ４０ Ｆａｂ候補分子と、細胞表面に発現するＣＤ４０分子との結合をフローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）によって検出した。

【0201】

図５Ａは、異なる濃度のＣ８クローン抗ＣＤ４０ Ｆａｂ分子が、ＣＨＯ－Ｋ－ｈｕＣＤ４０細胞に対して結合親和性を示し、３．２ μｇ／ｍＬ～８０ μｇ／ｍＬのＣ８ Ｆａｂ濃度範囲内で、該結合親和性がＣ８ Ｆａｂ濃度依存性として現れることを示した。

【0202】

図５Ｂは、Ｃ８クローン抗ＣＤ４０ Ｆａｂ分子がＣＨＯ－Ｋ－ｃｙｎｏＣＤ４０細胞に対しても結合親和性を示し、用いられるＣ８ Ｆａｂ濃度が８０ μｇ／ｍＬであることを示した。これにより、該Ｃ８クローンＦａｂ分子がカニクイザルＣＤ４０に対して交差反応性を有することが分かった。

【0203】

１．４． 全長抗体の発現、精製及び濃度測定

【0204】

実施例１．３のＣ８クローンＦａｂ候補分子に対して全長抗体構築を行い、ここで、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃの配列を該Ｆａｂ分子重鎖配列のＣ末端に連結した。

【0205】

具体的には、得られた、抗体重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列及び抗体軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列をそれぞれ、操作された、軽、重鎖定常領域断片を含有する真核発現ベクタープラスミドｐｃＤＮＡ３．３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に構築し、メーカーの指示に従って、ＥｘｐｉＣＨＯ一過性発現系（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、Ａ２９１３３）を用いて、ＣＨＯ－Ｋ細胞に抗体の全長重鎖及び軽鎖を共発現し、そしてタンパク質Ａアフィニティークロマトグラフィーによって精製し、Ｃ８クローン抗ＣＤ４０全長抗体を得た。

【0206】

精製された全長抗体に対して、Ａ２８０吸収値によって濃度測定を行い、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、示差走査型蛍光法（ＤＳＦ）及びサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって全長抗体の品質を検証した。品質検査に合格したら、分注して－８０℃で保存した。具体的な方法は、特許出願第ＣＮ ２０２０１０２３６２５６．８号の記載を参照されたい。

【0207】

［配列２］

【0208】

実施例２：抗ＣＤ４０抗体の細胞ベースの機能アッセイ

【0209】

２．１． 候補抗ＣＤ４０全長抗体のＣＤ４０結合特性及び種交差反応性

【0210】

本発明の実施例１．４で製造された全長抗ＣＤ４０抗体のＣＤ４０に対する結合活性及び交差反応性を確認するために、ＣＨＯ－Ｋ－ｈｕＣＤ４０細胞又はＣＨＯ－Ｋ－ｃｙｎｏＣＤ４０細胞を１．０×１０^５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種した。希釈された、実施例１．４で製造された抗ＣＤ４０候補抗体１００ μＬを９６ウェルプレートに添加した。４℃で３０分間インキュベーした後、細胞を洗浄し、１００ μＬのＡＰＣ標識された抗ヒトＩｇＧ第２の抗体（アロフィコシアニン標識された、Ｆｃγ断片に特異的に結合するヤギ抗ヒトＩｇＧ第２の抗体（Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ（ＡＰＣ）ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ， Ｆｃγ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ），Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ、品番：１０９－１３５－０９８）を添加し、さらに４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、全長抗ＣＤ４０抗体と、細胞に発現するＣＤ４０分子との結合をフローサイトメトリーによって検出した。結果は、図６Ａ及び図６Ｂに示すとおりである。

【0211】

図６Ａ及び図６Ｂから分かるように、Ｃ８クローンＦａｂ断片に対して全長抗体構築を行った後、Ｃ８クローン抗ＣＤ４０全長抗体は、Ｃ８クローンＦａｂ断片の、ヒトＣＤ４０に対する親和性及びカニクイザルＣＤ４０に対する交差反応性を依然として保持していた。

【0212】

実施例１．３と類似しているように、全長マウスＣＤ４０（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ２７５１２）を発現するＣＨＯ－Ｋ細胞（以下、「ＣＨＯ－Ｋ－ｍｏｕｓｅＣＤ４０細胞」とも呼ばれる）を製造した。ＣＨＯ－Ｋ－ｍｏｕｓｅＣＤ４０細胞を用いて、実施例１．４で製造された候補Ｃ８全長抗ＣＤ４０抗体とマウスＣＤ４０との交差反応性を試験した。ＣＨＯ－Ｋ－ｍｏｕｓｅＣＤ４０細胞を１．０×１０^５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種した。１００ μＬの希釈された抗ＣＤ４０候補抗体及び二つの対照抗体（ダセツズマブ、ＡＰＸ００５）をそれぞれ９６ウェルプレートに添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ標識された抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγ第２の抗体（Ｆｃγ断片と特異的に反応できるアフィニティー精製Ｆ（ａｂ'）_２断片化ヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ'）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ， Ｆｃγ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ），Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、品番：１０９－００６－０９８）を添加し、４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって試験した。結果は、図６Ｃに示すとおりである。

【0213】

図６Ｃから分かるように、Ｃ８クローン全長抗体分子はマウスＣＤ４０との顕著な結合活性を示しているが、対照抗体ダセツズマブ及びＡＰＸ００５はいずれもマウスＣＤ４０に対する交差反応活性を持っていなかった。

【0214】

２．２． ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合に対する候補抗ＣＤ４０抗体の影響

【0215】

ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合に対する実施例１．４で製造された全長抗ＣＤ４０抗体の影響を試験するために、ヒトＣＤ４０を発現するＣＨＯ－Ｋ細胞（即ち、ＣＨＯ－Ｋ－ｈｕＣＤ４０細胞）を１．０×１０^５細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種し、１００ μＬの希釈された抗ＣＤ４０全長抗体又はアイソタイプ対照（即ち、精製されたヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照組換え抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、品番４０３５０２））を９６ウェルプレートに添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄した。

【0216】

実施例１に記載の方式に従って、ＣＤ４０Ｌ（ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番ＣＤＬ－Ｈ５２４８）をビオチン化し、ビオチン化されたＣＤ４０Ｌタンパク質を２００ ｎｇ／ｍＬに希釈し、１００ μＬの希釈された、ビオチン化されたＣＤ４０Ｌ（本明細書において、ＣＤ４０Ｌ－ビオチンとも呼ばれる）を９６ウェルプレートに添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、そして１００ μＬのＰＥ標識されたストレプトアビジン（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ 品番１２－４３１７－８７）を添加し、さらに４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって試験した。

【0217】

図７に示すように、候補抗体Ｃ８クローンは、濃度が０．０１～２０ μｇ／ｍＬである場合に、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を増強する活性を示し、ＣＤ４０アゴニスト型になる可能性を有する抗ＣＤ４０抗体である。対照抗体Ｂｌｅｓｌｕｍａｂマブは、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を顕著に抑制し、ダセツズマブは、低い濃度下でＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合に影響を与えず、高い濃度下でＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を抑制した。

【0218】

２．３． 候補抗ＣＤ４０抗体媒介性未熟樹状細胞の活性化アッセイ

【0219】

未熟樹状細胞（ｉｍｍａｔｕｒｅ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ， ｉＤＣ）は、抗ＣＤ４０抗体により活性化された後に成熟ＤＣ細胞に形質転換され、本実施例において、成熟ＤＣ細胞が分泌したＩＬ－１２サイトカイン、ＣＤ８３マーカーの発現などを試験することによって候補抗体媒介性ｉＤＣの活性化活性を評価した。

【0220】

１０００ Ｕ／ｍＬ ｒｈＧＭ－ＣＳＦ（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ 品番：３００－０３－５０）及び５００ Ｕ／ｍＬ ｒｈＩＬ－４（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ品番：２００－０４－５０）が添加され、１０％ＦＣＳが補充されたＲＰＭＩ １６４０培地で、ヒト末梢血から製造された単球をｉＤＣ細胞に発達させ、そして５．０×１０^４個のｉＤＣ細胞／ウェルで６ウェルプレートに接種した。候補抗ＣＤ４０全長抗体及び各対照抗体、ＣＤ４０Ｌ（ＡＣＲＯ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、品番ＣＤＬ－Ｈ５２４８）の希釈液をｉＤＣ細胞に添加し三日間培養し、培養液及び細胞を収集した。

【0221】

収集された培養液については、ＥＬＩＳＡ又はフローサイトメトリーによりＩＬ－１２分泌を測定し、収集された細胞については、ＣＤ８３マーカーの発現を測定した。

【0222】

図８Ａ及び図８Ｂに示すように、Ｃ８クローン全長抗体は、顕著で用量依存的ｉＤＣ活性化活性を示した。この点では、ダセツズマブに類似しているように、Ｃ８クローン全長抗体は、ＣＤ４０の弱いアゴニストである。対照としてのＣＤ４０Ｌは、大量のＩＬ－１２分泌をもたらした。

【0223】

２．４． 候補抗ＣＤ４０抗体媒介性Ｒａｍｏｓ細胞におけるＣＤ９５誘導

【0224】

Ｒａｍｏｓ細胞は、ＣＤ４０分子が細胞表面に天然に発現しているヒトリンパ腫細胞である。抗ＣＤ４０抗体がＲａｍｏｓ細胞上のＣＤ４０と結合しＣＤ４０の下流シグナル伝達経路を活性化するか否かを試験するために、Ｒａｍｏｓ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．：ＣＲＬ－１５９６）を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が補充されたＲＰＭＩ １６４０培地（以下、「完全ＲＰＭＩ １６４０培地」とも呼ばれる）を含有するマイクロタイタープレートのウェルに１．０×１０^５個の細胞／ウェルで敷き詰めた。希釈された抗ＣＤ４０抗体又はＣＤ４０Ｌ（最初のウェルに１０ μｇ／ｍＬ、２倍階段希釈し、４つの濃度スポットがあり、濃度の詳細は図９に示す）をＲａｍｏｓ細胞に加え、３７℃で一晩インキュベートした。そして、Ｒａｍｏｓ細胞表面に誘導されたＣＤ９５発現をフローサイトメトリーにより測定した。

【0225】

図９に示すとおり、陰性対照としてのｈＩｇＧ１に比べて、Ｃ８クローン全長抗体は、用量依存的ＣＤ９５誘導活性を示し、弱いアゴニスト活性を有することを示した。

【0226】

実施例３：抗ＣＤ４０抗体のインビボ薬効試験

【0227】

３．１． 抗ＣＤ４０アゴニスト型抗体によるＲａｍｏｓ細胞のマウスＣＤＸモデルにおける腫瘍増殖抑制

【0228】

腫瘍細胞株異種移植（ＣＤＸ、ｃｅｌｌ ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ）モデルは、腫瘍細胞株をヌードマウス又はＮＳＧマウス体内に移植して構築した腫瘍モデルである。本実施例において、Ｒａｍｏｓ細胞をマウスの皮下に移植することによって、マウスＣＤＸモデルを構築し、該マウスＣＤＸモデルでの候補抗ＣＤ４０抗体の抗腫瘍効果を試験した。

【0229】

０日目（腫瘍細胞を接種した日から開始し、０日と定義し、翌日を１日と定義する）に、５００万個のヒトリンパ腫Ｒａｍｏｓ細胞を六週齢のメスヌードマウス（維通利華Ｂａｌｂ／ｃ Ｎｕｄｅ）に皮下注射した。平均腫瘍体積が２５０ ｍｍ^３に達した場合、１群あたり８匹の動物で、全てのマウスに０．２ ｍｇ／ｋｇ、１ ｍｇ／ｋｇ又は５ ｍｇ／ｋｇ （以下、ｍｇ／ｋｇはｍｐｋとも略される）のＣ８抗ＣＤ４０全長抗体を腹膜内注射によって投与した。週に三回投与（ＴＩＷ）し、二週間続いた。毎回注射する前に、腫瘍体積を測定し、最初の投与から二週間後に腫瘍の重量を測定した。最終の腫瘍体積及び腫瘍重量は、それぞれ図１０Ａ及び図１０Ｂに示され、腫瘍体積の変化は図１０Ｃに示された。

【0230】

対照抗体ＡＰＸ００５Ｍ（本明細書において、ＡＰＸ又はＡＰＸ００５とも呼ばれる）（ＵＳ２０１７０２４６２９７、Ａｐｅｘｉｇｅｎ社を参照されたい）に比べて、Ｃ８抗ＣＤ４０全長抗体は、似ている抗腫瘍効果を示した。

【0231】

各群の抗体のＴＧＩ（腫瘍増殖抑制率）は表４に示すとおりである。

【0232】

［表４］

【0233】

３．２． 抗ＣＤ４０アゴニスト型抗体によるＭＣ－３８細胞のマウスモデルにおける腫瘍増殖抑制

【0234】

ＭＣ３８は、マウスｐ５３タンパク質（ｍｐ５３）を高発現するマウス結腸腺癌細胞株であり、ＣＤ４０分子を発現しない。

【0235】

ＭＣ－３８細胞のマウス皮下移植モデルにおいて、候補抗ＣＤ４０抗体の抗腫瘍効果を試験した。

【0236】

１００万個のマウス結腸腺癌細胞（ＭＣ－３８細胞）（中国実験細胞資源共有プラットフォーム、品番３１１１Ｃ０００１ＣＣＣ０００５２３）を六週齢のメスマウス（維通利華Ｃ５７ＢＬ／６）の腋窩に皮下注射した。平均腫瘍体積が８０～１００ ｍｍ^３に達した場合、（各群８匹）マウスに１．５ ｍｇ／ｋｇ、５ ｍｇ／ｋｇ又は１５ ｍｇ／ｋｇ（以下、「ｍｇ／ｋｇ」は「ｍｐｋ」とも略される）のＣ８抗ＣＤ４０抗体を腹膜内注射によって投与した。週に三回投与（ＴＩＷ）し、三週間続いた。毎回注射する前に、腫瘍体積を測定し、最初の投与から三週間後に腫瘍の重量を測定した。最終の腫瘍重量は図１０Ｄに示される。

【0237】

図１０Ｄから分かるように、陰性対照ＰＢＳに比べて、抗ＣＤ４０アゴニスト型抗体Ｃ８分子は、濃度勾配の抗腫瘍効果を示した。

【0238】

実施例４． Ｃ８クローン抗ＣＤ４０抗体の親和性変異体

【0239】

Ｃ８クローンの全長抗体によるＣＤ４０抗原親和性に対する改変を得るために、本実施例は、Ｃ８クローンの全長抗体に対してさらなる親和性変異体設計及び機能アッセイを行った。

【0240】

４．１． 親和性変異体ファージディスプレイライブラリーの構築

【0241】

まず、実施例１．３で得られたＣ８－ＷＴ－ＶＬ及びＣ８－ＷＴ－ＶＨに対して、ＡｂＭ番号の方式を用いてＣＤＲ及びフレームワーク領域を定義し、そして一連のプライマーを設計して、それぞれのＣＤＲに対して単一点又は連続した三点突然変異を行って、親和性変異体ファージディスプレイライブラリーの構築を行った。

【0242】

４．２親和性変異体ファージディスプレイライブラリーのスクリーニング

【0243】

親和性変異体ファージディスプレイライブラリーのスクリーニングは、免疫チューブスクリーニング（即ち固相スクリーニング）を用い、抗原タンパク質Ｐ１７－Ｈｉｓ（実施例１における類似している方法を用いて製造される）で免疫チューブをコーティングし、抗原に結合する免疫チューブ及び親和性変異体ファージディスプレイライブラリーをインキュベートし、洗浄し溶出させるパニング過程によって、２～３ラウンドのパニングを経て、抗原に対する特異性モノクローナル抗体を大量に濃縮させることができる。該ファージディスプレイライブラリーからＣ８親和性変異体をスクリーニングする具体的な実施方法は、特許出願第２０２０１０２３６２５６．８号における免疫チューブスクリーニング方法を参照されたい。

【0244】

親和性変異体ファージディスプレイライブラリーからＣ８親和性変異体をスクリーニングした後、ＥＬＩＳＡレベルで、Ｐ１７－Ｈｉｓ抗原に高い特異性で結合できる多くの候補抗体を得た。Ｆａｂ分子の結合親和性に応じて、結合親和性が最も高い最初の１１個の候補分子をその中から選択して全長抗体構築を行い、ここで、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ ｓｉｌｅｎｔ（Ｎ２９７Ｑ 突然変異）の配列（即ち、ｈｕＩｇＧ１（Ｎ２９７Ｑ））をＦａｂ分子の重鎖配列に連結して、軽鎖がいずれもκ型である全ヒトＩｇＧ１（Ｎ２９７Ｑ）抗体を得た。

【0245】

４．３． 親和性変異体候補クローンの全長抗体製造

【0246】

具体的な方法は、実施例１．４の「全長抗体の発現、精製及び濃度測定」を参照されたい。Ｃ８－１抗体、Ｃ８－２抗体、Ｃ８－３抗体、Ｃ８－４抗体、Ｃ８－５抗体、Ｃ８－６抗体、Ｃ８－７抗体、Ｃ８－８抗体、Ｃ８－９抗体、Ｃ８－１０抗体、Ｃ８－１１抗体を得た。Ｃ８親抗体及び各変異体抗体の可変領域ヌクレオチド及びアミノ酸配列は表３に示すとおりである。

【0247】

４．４． 親和性変異体候補抗体の非特異的結合アッセイ

【0248】

得られた親和性変異体候補抗体の異なる細胞に対する非特異的結合と、使用される抗体濃度との間の関係を最初に検出した。ＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ－Ｋ細胞が、いずれもＣＤ４０分子を細胞表面に天然に発現させない細胞であるため、ＣＤ４０に特異的に結合する抗体は、ＨＥＫ２９３細胞及びＣＨＯ－Ｋ細胞に特異的に結合しない。本実験で使用される陽性対照は、特許ＣＮ２０２０１０８２５３７９．５に記述されているＦ４ＡＭ４抗体であり、Ｆ４ＡＭ４抗体は全ヒト抗体であり、その抗体軽重鎖配列がそれぞれ表５におけるＦ４ＡＭ４－ＬＣ及びＦ４ＡＭ４－ＨＣに示すとおりである。

【0249】

実験では、ＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ： ＣＲＬ－３２１６）及びＣＨＯ－Ｋ（ＡＴＣＣ： ＣＣＬ－６１）細胞を１．０×１０^５個の細胞／ウェルでそれぞれ９６ウェルプレートに接種した。１００ μＬの階段希釈された、実施例４．３で製造された抗ＣＤ４０候補抗体を９６ウェルプレートに添加した。４℃で６０分間インキュベートした後、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋５％ＦＢＳ＋２％ＢＳＡ）で細胞を５回洗浄し、１００ μＬのＰＥ標識された抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ第２の抗体（Ｇｏａｔ Ｆ（ａｂ'）２ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ－Ｆｃ（ＰＥ）、ｐｒｅ－ａｄｓｏｒｂｅｄ、Ａｂｃａｍ、品番： ａｂ９８５９６）を添加し、さらに４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって試験した。

【0250】

図１１Ａ及び１１Ｂに示すように、濃度の高いＣ８－８クローンは、ＨＥＫ２９３及びＣＨＯ－Ｋ細胞上でいずれも非特異的結合を示しており、Ｃ８－６は高濃度（１００ μｇ／ｍＬ）でＨＥＫ２９３にある程度で非特異的に結合したが、他の候補クローン及びＩｇＧ１は、いずれもこの二つの細胞株に非特異的に結合しなかった。そのため、後続の実験において、非特異的に結合していない候補分子を用いて、次の試験を行った。

【0251】

［表５］

【0252】

４．５． 親和性変異体候補抗体の細胞ベースの機能アッセイ

【0253】

４．５．１． 親和性変異体候補抗体のＣＤ４０結合及び交差反応性

【0254】

実施例４．３の親和性変異体抗体の結合活性及び交差反応性を確認するために、人工的に構築された、全長ヒトＣＤ４０を発現するＣＨＯ－Ｋ細胞（ＣＨＯ－Ｋ－ｈｕＣＤ４０細胞）を１．０×１０^５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種した。希釈された、実施例４．３で製造された抗ＣＤ４０候補抗体１００ μＬを９６ウェルプレートに添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、ＦＡＣＳ 緩衝液（ＰＢＳ＋５％ＦＢＳ＋２％ＢＳＡ）で細胞を５回洗浄し、１００ μＬのＡＰＣ標識された抗ヒトＩｇＧ第２の抗体を添加し、さらに４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって試験した。

【0255】

図１２Ａ及び図１２Ｂに示すように、親和性変異体Ｆａｂに対して全長抗体構築を行った後、全ての候補抗体は、いずれもヒトＣＤ４０に対する親和性を示し、対照抗体ＡＰＸ００５と同等である（ＡＰＸ００５が臨床ステージＩＩ期の結果において、膵臓癌に対する良好な治療効果を示したため、Ｃ８抗体親和性変異体に関連する実験では、対照抗体をＡＰＸ００５に設定し、ＡＰＸ００５配列供給源がＡｐｅｘｉｇｅｎ Ｉｎｃ． ＵＳ２０１２０３０１４８８であり、三優生物により製造される）。

【0256】

人工的に構築された、全長マウスＣＤ４０（Ｕｎｉｐｒｏｔ＃Ｐ２７５１２）を発現するＣＨＯ－Ｋ細胞（ＣＨＯ－Ｋ－ｍｏｕｓｅＣＤ４０細胞）を用い、実施例４．３で製造された親和性変異体候補抗体とマウスＣＤ４０との交差反応性を試験した。マウスＣＤ４０を発現するＣＨＯ－Ｋ細胞を１．０×１０^５個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに接種した。１００ μＬの希釈された親和性変異体候補抗体及び対照抗体（ＡＰＸ００５）をそれぞれ９６ウェルプレートに添加した。４℃で３０分間インキュベートした後、細胞を洗浄し、ＦＩＴＣ標識された抗ヒトＩｇＧＦｃγ（Ｆｃγ断片と特異的に反応できるアフィニティー精製Ｆ（ａｂ'）_２断片化ヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ'）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ， Ｆｃγ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、品番：１０９－００６－０９８）を添加し、４℃で３０分間インキュベートした。そして、細胞を洗浄し、フローサイトメトリーによって試験した。

【0257】

図１２Ｃ及び図１２Ｄに示すように、Ｃ８－６は、親Ｃ８－ＷＴよりも良好なマウスＣＤ４０抗原結合活性を有することを示した。Ｃ８－１、Ｃ８－２、Ｃ８－７、Ｃ８－８、Ｃ８－９、Ｃ８－１０、Ｃ８－１１は、いずれもマウスＣＤ４０抗原との結合活性を示した。

【0258】

４．５．２． 親和性変異体候補抗体により媒介されるＲａｍｏｓ細胞におけるＣＤ９５誘導（架橋剤があり、即ちＣｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果が存在する）

【0259】

架橋剤がある場合に、親和性変異体候補抗体がＲａｍｏｓ細胞上のＣＤ４０と結合しＣＤ４０の下流シグナル伝達経路を活性化するか否かを試験するために、Ｒａｍｏｓ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．：ＣＲＬ－１５９６）を１．０×１０^５個の細胞／ウェルで完全ＲＰＭＩ １６４０培地に敷き詰めた。希釈された親和性変異体候補抗体、対照抗体ＡＰＸ００５及びＣＤ４０Ｌ（最初のウェルに２０ μｇ／ｍＬ、３倍階段希釈し、８つの濃度スポットがある）をＲａｍｏｓ細胞に加えるとともに、架橋剤（Ｆｃγ断片と特異的に反応できるアフィニティー精製Ｆ（ａｂ'）_２断片化ヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ'）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ， Ｆｃγ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、品番：１０９－００６－０９８）を加え、架橋剤濃度が２０ μｇ／ｍＬであり、３７℃で一晩インキュベートした。そして、フローサイトメトリーによってＣＤ９５発現を測定した。

【0260】

図１３Ａ及び図１３Ｂに示すように、全ての親和性変異体抗体は、いずれもＡＰＸ００５と同等なＣＤ９５誘導活性を示し、有意差がなかった。

【0261】

４．５．３． 親和性変異体候補抗体により媒介されるＲａｍｏｓ細胞におけるＣＤ９５誘導（架橋剤がなく、即ちＣｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果が存在しない）

【0262】

架橋剤がない場合に、親和性変異体候補抗体がＲａｍｏｓ細胞上のＣＤ４０と結合しＣＤ４０の下流シグナル伝達経路を活性化するか否かを試験するために、Ｒａｍｏｓ細胞 （ＡＴＣＣ Ｎｏ．：ＣＲＬ－１５９６）を１．０×１０^５個の細胞／ウェルで完全ＲＰＭＩ １６４０培地に敷き詰めた。希釈された親和性変異体候補抗体、対照抗体ＡＰＸ００５及びＣＤ４０Ｌ（最初のウェルに２０ μｇ／ｍＬ、３倍階段希釈し、８つの濃度スポットがある）をＲａｍｏｓ細胞に加え、３７℃で一晩インキュベートした。そして、フローサイトメトリーによってＣＤ９５発現を測定した。

【0263】

図１３Ｃ及び図１３Ｄに示すように、全ての親和性変異体抗体は、いずれもＡＰＸ００５及びＣＤ４０Ｌよりも弱いＣＤ９５誘導活性を示し、ここで、Ｃ８－２、Ｃ８－６、Ｃ８－９、Ｃ８－１０、Ｃ８－１１は、ＡＰＸ００５よりも１０倍程度弱いＣＤ９５誘導活性を示した。これにより、架橋剤がない場合に、本発明の候補分子は、ＡＰＸ００５に比べて、著しく低いＣＤ４０分子活性化能力を示し、ＣＤ４０分子を弱くアゴニストするとともに、ＡＰＸ００５よりも著しく小さい毒性の副作用を有することが予想され得ることが示されている。現在臨床試験が行われている抗ＣＤ４０アゴニスト型抗体の主な有害事象は、肝毒性であり、肝臓細胞表面にＦｃＲ受容体が大量に発現しており、一方、臨床試験で使用されるアゴニスト型抗体（例えば、ＡＰＸ００５）が、通常正常なＦｃ機能を有し、肝細胞表面のＦｃＲ受容体と架橋効果（Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果）を形成して、肝細胞表面において、ＣＤ４０を発現する免疫細胞を非特異的に活性化することができるため、肝毒性を引き起こし、その治療指数が低い。架橋効果の発生機構を分析することにより、肝毒性を引き起こす架橋効果が、Ｆｃ受容体の結合で発生し、Ｆｃ受容体による架橋効果を制御し病巣位置での活性化効果著しく増強することができれば、肝毒性を制御し治療指数を向上させることができることが分かり、架橋効果の有無での抗体薬物分子のアゴニスト活性の差に対してより高い要求が出されている。

【0264】

殺傷薬効と毒性との比の最大化を実現するために、本発明は、Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果の存在及び不存在下で、アゴニスト効果の最大差の程度を拡大し、即ち架橋効果が形成された時に、免疫活性化反応を著しく発生させ、架橋効果がない場合に、免疫活性化効果を発生させないか又はわずかにしか発生させないことによって治療指数を向上させることが望まれる。本実施例から分かるように、ＡＰＸ００５分子は、架橋剤の有無での免疫細胞アゴニスト活性の差が小さく、つまり最終投与後の薬効と毒性との比が小さく、一方、本発明の候補抗体は、架橋剤の有無で、薬効と毒性との比の最大化を実現し、腫瘍微小環境における免疫細胞の殺傷作用の活性化を最大限に実現することができ、非腫瘍位置での免疫細胞の非特異的活性化による肝毒性などの毒性の副作用を回避した。本発明の候補抗体で二重抗体を構築すれば、この特徴を利用して、病巣位置での免疫細胞の特異的で高強度な活性化を実現し、架橋効果を形成できない肝細胞などの位置で低いアゴニスト活性を実現することによって、肝毒性などの有害事象を引き起こすことなく腫瘍細胞を特異的に殺傷するという目的を達成し、治療指数を有効に向上させ、安全性を向上させることができる。

【0265】

４．５．４． Ｊｕｒｋａｔ ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の安定的トランスフェクト細胞株の製造

【0266】

まず、エレクトロポレーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＮｅｏｎＴＭ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、ＭＰ９２２９４７）により、ベクターｐＧＬ４．３２［Ｌｕｃ２ｐ／ＮＦ－κＢ－ＲＥ／Ｈｙｇｒｏ］プラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ、品番Ｅ８４９１）をＪｕｒｋａｔ 細胞（ＡＴＣＣ(R) ＴＩＢ－１５２^ＴＭ）にエレクトロポレーションした。エレクトロポレーション後、得られた細胞をそれぞれ、体積百分率が１０％であるＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、１５１４０－１４１）を含有するが、抗生物質を含まないＲＰＭＩ １６４０培地（Ｈｙｃｌｏｎｅ、ＳＨ３０２４３．０１）に移し、そして細胞を６ウェルプレートの細胞培養皿に接種して４８時間培養し、次に平均１５００個の細胞／ウェルの密度で細胞を９６ウェルの細胞培養プレートに分注し、最終濃度が５００ μｇ／ｍＬであるハイグロマイシン Ｂ（源培、Ｓ１６０Ｊ７）を加えてスクリーニングし、２～３週間程度で細胞株クローンの成長状況を観察し、クローンを形成した細胞株を選択して２４ウェルプレートに移し、細胞培養が拡大した後、一部のクローンを取って９６ウェルのホワイト底板（Ｃｏｒｎｉｎｇ、３６１０）に移し、ホルボールエステル（使用濃度１０ ｎｇ／ｍｌ）及びイオノマイシン（使用濃度１ ｎＭ）刺激を行い、３７℃で、５％ＣＯ_２インキュベータで６ ｈ培養した後にＢｒｉｇｈｔ－Ｌｉｔｅ基質（Ｖａｚｙｍｅ， ＤＤ１２０４－０３）を加え、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ：Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ ｉ３ｘ）によりシグナル値を読み取った後に異なるクローンＮＦ－κＢの発現レベルを評価して、ＮＦ－κＢ遺伝子を高発現するＪｕｒｋａｔ細胞株を得た。ＮＦ－κＢの発現レベルが高いＪｕｒｋａｔ ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の安定的トランスフェクト細胞クローンを凍結保存した。

【0267】

４．５．５． Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株の構築

【0268】

本実施例では、構築されたＪｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株は、ＣＤ４０下流シグナル活性を活性化できる候補抗体分子をスクリーニングするためのものである。実施例４．５．４で製造されたＪｕｒｋａｔ ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の安定的トランスフェクト細胞株を用いて、これに加えて、ＣＤ４０の全長発現遺伝子配列（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｇｅｎｅ ＩＤ： Ｐ２５９４２）を安定的にトランスフェクトし、モノクローナル細胞株をスクリーニングした。この細胞株培養系にＣＤ４０Ｌ組換えタンパク質を加え、ＣＤ４０に結合することによって、細胞内ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の転写及び発現を活性化し、ルシフェラーゼの触媒基質を加えて蛍光シグナルを産生した。Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株の製造過程は以下のとおりである：
全長ヒトＣＤ４０（Ｍｅｔ１－Ｇｌｎ２７７）を発現するプラスミドの構築：遺伝子合成技術によってヒトＣＤ４０タンパク質を含有するＤＮＡ断片を合成し、それをｐＬＶＸ－Ｐｕｒｏ発現ベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ， ６３２１６４）にクローニングした。形質転換の方法によって大腸菌を導入した。大腸菌モノクローナルを選択して配列決定して正確なプラスミドクローンを得て、プラスミドを抽出し、再び配列決定を行って確認した。エレクトロポレーション：Ｇｉｂｃｏ のＲＰＭＩ １６４０無血清培地（品番：１１８７５０８５）を用いて実施例４．５．４で製造されたＪｕｒｋａｔ細胞を培養した。エレクトロポレーション前日に、細胞を２×１０^５／ｍＬに継代し、翌日、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎのエレクトロポレーションキット（品番：ＭＰＫ１００９６）及びエレクトロポレーター（品番：ＭＰ９２２９４７）を用いて、構築されたプラスミドをＪｕｒｋａｔ ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の安定的トランスフェクト細胞株細胞に形質転換した。エレクトロポレーション後の細胞をＲＰＭＩ １６４０培地に移し、３７℃の細胞インキュベータに入れて４８ ｈ培養した。エレクトロポレーションされた細胞の播種：エレクトロポレーションされたＪｕｒｋａｔ細胞を１０００個の細胞／ウェルで９６ウェルプレートに播き、最終濃度が２ μｇ／ｍＬであるピューロマイシンを加え、３７℃の二酸化炭素インキュベータに入れて培養し、１４日後に２ μｇ／ｍＬのピューロマイシンが加えられたＲＰＭＩ １６４０培地を補充した。クローン選択、細胞拡大培養及びＦＡＣＳ同定：９６ウェルプレートで成長した単一細胞クローンを採取し、２４ウェルの培養プレートに移して拡大培養し続け、その後、ヒトＣＤ４０安定的トランスフェクトに成功した細胞株をＦＡＣＳによって同定した。

【0269】

４．５．６． 親和性変異体の候補抗体の、ＣＤ４０下流ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子シグナルを活性化する活性（架橋剤があり、即ちＣｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果が存在する）

【0270】

本実施例では、親和性変異体候補抗体が、架橋剤のある場合に、ＣＤ４０シグナル経路を活性化する機能を有するか否かを試験するために、実施例４．５．５で製造されたＪｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を材料として用い、候補分子がＣＤ４０に結合することによって下流ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を活性化する能力を検出した。具体的な実施形態は以下のとおりである：
親Ｃ８分子及び親和性変異体候補抗体、対照抗体ＡＰＸ００５（最初のウェルに１０ μｇ／ｍＬ、３倍階段希釈し、８つの濃度スポットがある）をＲＰＭＩ １６４０培地で階段希釈し、１０ μｇ／ｍＬの架橋剤（Ｆｃγ断片と特異的に反応できるアフィニティー精製Ｆ（ａｂ'）_２断片化ヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ'）_２ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｇｏａｔ Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ， Ｆｃγ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、品番：１０９－００６－０９８）を加えて予備混合を行い、抗体及び架橋剤の予備混合液を１ウェルあたり５０ μＬで９６ウェルプレートに加え、Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を蘇生させ、２～４回継代され成長状態が良好な細胞を実験に用い、ＲＰＭＩ １６４０培地で細胞を洗浄し再懸濁させ、計数後に、細胞密度を２×１０^６個の細胞／ｍＬに調整し、抗体及び架橋剤の予備混合液のある９６ウェルの細胞培養プレートに１ウェルあたり５０ μＬで加え、３７℃の細胞インキュベータに入れて６ｈインキュベートした。培養が終了した後、各ウェルに３０ μＬのルシフェラーゼ基質Ｂｒｉｇｈｔ－Ｌｉｔｅ（Ｖａｚｙｍｅ， ＤＤ１２０４－０３）を加え、５ ｍｉｎ振とうした後に９６ウェルプレートの蛍光値を検出した。

【0271】

図１４Ａ、図１４Ｂ、図１４Ｃ及び図１４Ｄに示すように、架橋剤がある場合に、親Ｃ８分子及び全ての親和性変異体抗体は、いずれもＡＰＸ００５と同等な、ＣＤ４０下流ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子シグナルを活性化する活性を示し、有意差がなかった。

【0272】

４．５．７． 親和性変異体の候補抗体の、ＣＤ４０下流ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子シグナルを活性化する活性（架橋剤がなく、即ちＣｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果が存在しない）

【0273】

実施例では、親和性変異体候補抗体が、架橋剤のない場合に、ＣＤ４０シグナル経路を活性化する機能を有するか否かを試験するために、Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を材料として用い、候補分子がＣＤ４０に結合することによって下流ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を活性化する能力を検出した。具体的な実施形態は以下のとおりである。

【0274】

親Ｃ８分子及び各親和性変異体候補抗体、対照抗体ＡＰＸ００５（最初のウェルに１０ μｇ／ｍＬ、３倍階段希釈し、８つの濃度スポットがある）をＲＰＭＩ １６４０培地で階段希釈し、希釈された候補抗体及び対照抗体を１ウェルあたり５０ μＬで９６ウェルプレートに加え、Ｊｕｒｋａｔ ＣＤ４０／ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子細胞株を蘇生させ、２～４回継代され成長状態が良好な細胞を実験に用い、ＲＰＭＩ １６４０培地で細胞を洗浄し再懸濁させ、計数後に、細胞密度を２×１０^６個の細胞／ｍＬに調整し、抗体のある９６ウェルの細胞培養プレートに１ウェルあたり５０ μＬで加え、３７℃の細胞インキュベータに入れて６ｈインキュベートした。培養が終了した後、各ウェルに３０ μＬのルシフェラーゼ基質Ｂｒｉｇｈｔ－Ｌｉｔｅ（Ｖａｚｙｍｅ， ＤＤ１２０４－０３）を加え、５ ｍｉｎ振とうした後に９６ウェルプレートの蛍光値を検出した。

【0275】

図１５Ａ、図１５Ｂ、図１５Ｃ及び図１５Ｄに示すように、架橋剤がない場合に、ＡＰＸ００５は、ＣＤ４０下流ＮＦ－κＢルシフェラーゼレポーター遺伝子シグナルを活性化する高い活性を示したが、親和性突変異体候補抗体は、Ｃ８－７及びＣ８－９がある程度の活性化能力を有する以外、他の候補抗体がいずれも活性化能力を持たず、これらの分子は、ＣＤ４０分子を弱くアゴニストするとともに、ＡＰＸ００５よりも著しく小さい毒性の副作用を有することが予想され得る。図１４Ａ～図１４Ｄ及び図１５Ａ～図１５Ｄにおける、各候補分子によるＣＤ４０シグナル経路の活性化状況を比較すると、Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ効果がある又はない場合に、親Ｃ８分子及び各親和性変異体候補分子がＣＤ４０シグナル経路を活性化する状況は、図１３Ａ～図１３ＤにおけるＢ細胞活性化状況と実質的に一致し、これはまた、分子機構から、Ｂ細胞（Ｒａｍｏｓ細胞）活性化試験の結果を検証した。試験結果から、本発明における抗ＣＤ４０抗体によるＢ細胞活性化は、ＣＤ４０シグナル経路の活性化により形成されることが分かった。

【0276】

４．６． 親和性変異体の候補抗体アフィニティーの動態学的検出

【0277】

本実施例では、Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６計器を用いて、Ｃ８親抗体（Ｃ８－ＷＴ）及び親和性変異体抗体とヒトＣＤ４０抗原（Ｐ１７－Ｈｉｓ）との親和性を検出した。

【0278】

材料の準備：１ ｇのＢＳＡを秤取し、５００ μＬのＴｗｅｅｎ ２０を量り取り、１０００ ｍＬ の１×ＰＢＳに加え、均一に混合した。濾過した後に分注して保存する。０．１ ｍＬの０．１Ｍ ｐＨ ２．０のグリシン溶液を吸引し、０．９ ｍＬの超純水を加え、均一に混合した。ＫＢ緩衝液で抗体を１０ μｇ／ｍＬに希釈し、ＫＢ緩衝液で抗原を、順に４０ ｎＭ、２０ ｎＭ、１０ ｎＭ、５ ｎＭ、０ ｎＭである一連の濃度階段に希釈した。

【0279】

実験の流れ：センサ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ ｓｅｎｓｏｒ）を少なくとも１０ ｍｉｎ遮光してプリウェットした後、試料プレート（ＧｒｅｉｎｉｅｒＢｉｏ、ＰＮ６５５２０９）に対する試験を開始し、試験してエラーがなければ予め設定された手順に従って実施した。ここで、試料プレート１の１、１０及び１２列目に２００ μＬ／ウェルの ＫＢ緩衝液を加え、１１列目に０．０１Ｍ ｐＨ２．０のグリシン溶液を加え、２～８列目に製造された試料溶液を加え（一つの試料を５つのウェルに加え）、九列目にＰ１７－Ｈｉｓを濃度の高い順に加えた。データ結果の詳細を表６に示す。

【0280】

［表６］

【0281】

表６から分かるように、Ｃ８親抗体（Ｃ８－ＷＴ）及び親和性変異体抗体は、約０．５×１０^－８Ｍ～２×１０^－８Ｍの親和性でヒトＣＤ４０抗原に結合し、ここで、全ての親和性変異体抗体は、Ｃ８親抗体（Ｃ８－ＷＴ）の親和性に比べて親和性が改善され、親和性成熟抗体である。

【配列表フリーテキスト】

【0282】

配列番号１～５５：抗体配列
配列番号５６：(2)..(2) Xaaは、Ala又はGly であってもよい
配列番号５６：(6)..(6) Xaaは、Glu又はLeu であってもよい
配列番号５６：(7)..(7) Xaaは、Gly又はValであってもよい
配列番号５７：(4)..(4) Xaaは、Asn又はAla であってもよい
配列番号５８：(4)..(4) Xaaは、Phe、Ala又はProであってもよい
配列番号５８：(10)..(10) Xaaは、Asn又はAspであってもよい
配列番号５９：(5)..(5) Xaaは、Ser又はAlaであってもよい
配列番号６０：(6)..(6) Xaaは、Asp又はSerであってもよい
配列番号６０：(7)..(7) Xaaは、Ser又はProであってもよい
配列番号６０：(9)..(9) Xaaは、Gly又はArgであってもよい
配列番号６０：(10)..(10) Xaaは、Asp、Pro、Ser又はPheであってもよい
配列番号６０：(11)..(11) Xaaは、 Pro、Asn又はArgであってもよい
配列番号６０：(12)..(12) Xaaは、Gly又はHisであってもよい
配列番号６１、６２：抗体配列

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5A】

【図5B】

【図6A】

【図6B】

【図6C】

【図7】

【図8A】

【図8B】

【図9】

【図10A】

【図10B】

【図10C】

【図10D】

【図11A】

【図11B】

【図12A】

【図12B】

【図12C】

【図12D】

【図13A】

【図13B】

【図13C】

【図13D】

【図14A】

【図14B】

【図14C】

【図14D】

【図15A】

【図15B】

【図15C】

【図15D】

【配列表】

2024519612000001.app

【手続補正書】

【提出日】2023-11-01

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

それぞれＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３である三つの相補性決定領域を含む軽鎖可変領域と、それぞれＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３である三つの相補性決定領域を含む重鎖可変領域とを含む抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片であって、
（ａ）ＬＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １に示すアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｂ）ＬＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２、５、６、７のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｃ）ＬＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３、４のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｄ）ＨＣＤＲ１は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８、１２、１４、２０のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｅ）ＨＣＤＲ２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９、２１のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
（ｆ）ＨＣＤＲ３は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９から選択されるいずれか一つのアミノ酸配列、又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０、１１、１３、１５、１６、１７、１８、１９のうちのいずれか一つのアミノ酸配列の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化の変異体を含み、
ここで、前記アミノ酸変化は、アミノ酸の付加、欠失又は置換である、抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項2】

（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ４の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １１の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １５の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １６の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １７の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １９の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０又はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １０の２つ以下もしくは１つ以下のアミノ酸変化を含有するＬＣＤＲ３を含む、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項3】

アミノ酸配列ＲＳＳＱＧＩＲＳＳＬＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １）のようなものを含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＧＸ_１ＳＳＬＸ_２Ｘ_３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５６）のようなものを含有するＬＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＱＱＬＸ_４ＳＦＰＳＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５７）のようなものを含有するＬＣＤＲ３であって、Ｘ_１がＡ又はＧであり、Ｘ_２がＥ又はＬであり、Ｘ_３がＧ又はＶであり、Ｘ_４がＮ又はＡであるもの、及び
アミノ酸配列ＧＦＴＸ_５ＧＳＹＥＭＸ_６（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５８）のようなものを含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＹＩＳＳＸ_７ＧＥＴＴＤ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５９）のようなものを含有するＨＣＤＲ２、及びアミノ酸配列 ＤＶＦＦＦＸ_８Ｘ_９ＳＸ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３ＡＹＧＭＤＶ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６０）のようなものを含有するＨＣＤＲ３であって、Ｘ_５がＦ、Ａ又はＰであり、Ｘ_６がＮ又はＤであり、Ｘ_７がＳ又はＡであり、Ｘ_８がＤ又はＳであり、Ｘ_９がＳ又はＰであり、Ｘ_１０がＧ又はＲであり、Ｘ_１１がＤ、Ｐ、Ｓ又はＦであり、Ｘ_１２がＰ、Ｎ又はＲであり、Ｘ_１３がＧ又はＨであるものを含み、
例えば、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は、
（ｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １２を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ６を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １４を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５を含有するＬＣＤＲ３、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６を含有するＬＣＤＲ３、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８を含有するＬＣＤＲ３、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ９を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９を含有するＬＣＤＲ３、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： １を含有するＬＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ７を含有するＬＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３を含有するＬＣＤＲ３、並びにアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２０を含有するＨＣＤＲ１、アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ２１を含有するＨＣＤＲ２及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０を含有するＬＣＤＲ３を含む、請求項１又は２に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項4】

軽鎖可変領域と重鎖可変領域とを含み、ここで、
（ｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列を含有し、又は
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２９、３３、３９、５３のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有し、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、３１、３５、３７、４１、４３、４５、４７、４９、５１、５５のうちのいずれか一つのアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含有し、
例えば、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は、
（ｉ） アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１を含有する重鎖可変領域、
（ｉｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５を含有する重鎖可変領域、
（ｖ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３を含有する重鎖可変領域、
（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５を含有する重鎖可変領域、
（ｉｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７を含有する重鎖可変領域、
（ｘ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９を含有する重鎖可変領域、
（ｘｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１を含有する重鎖可変領域、又は、
（ｘｉｉ）アミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３を含有する軽鎖可変領域、及びアミノ酸配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５を含有する重鎖可変領域を含み、
好ましくは、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は完全ヒト抗体である、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項5】

それはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４抗体であり、好ましくは、それはＩｇＧ１又はＩｇＧ４抗体であり、さらに好ましくは、それはヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ４抗体である、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項6】

前記抗原結合断片はＦａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ（ａｂ'）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ、単鎖Ｆａｂ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）である、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項7】

（１）ＦｏｒｔｅＢｉｏ動力学結合アッセイによって測定するように、高親和性でＣＤ４０に結合し、それを活性化し、例えば、約１０^－７ Ｍ～約１０^－１０ Ｍ ＫｄでＣＤ４０、例えば、ヒトＣＤ４０、カニクイザルＣＤ４０及びマウスＣＤ４０に結合すること、
（２）ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌとの結合を増強すること、
（３）抗原提示細胞上に発現するＣＤ４０に結合することによって、抗原提示細胞を活性化し、例えば、前記抗原提示細胞が、樹状細胞（ＤＣ）と、Ｂ細胞と、単球と、マクロファージとを含むこと、
（４）ＣＤ４０を発現するＢ細胞によるＣＤ９５発現を誘導すること、
（５）Ｂ細胞媒介性免疫応答を増強すること、
（５）架橋効果が形成された時にＢ細胞媒介性免疫応答を著しく増強すること、
（６）架橋効果が形成されていない時に、Ｂ細胞媒介性免疫応答をほとんど増強しないか、又は弱く増強することのうちの一つ又は複数の特性を有する、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項8】

免疫グロブリンＦｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化部位が除去され、例えば、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインにおけるＮ２９７残基を突然変異させて該グリコシル化部位を除去し、例えば、Ｎ２９７残基をＧｌｙ、Ａｌａ、Ｇｌｎ、Ａｓｐ又はＧｌｕに変え、好ましくは、Ｎ２９７残基をＧｌｎに変える、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片。

【請求項9】

請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片をコードする、単離された核酸。

【請求項10】

請求項９に記載の核酸を含むベクターであって、好ましくは、前記ベクターは、発現ベクター、例えば、ｐｃＤＮＡ３．３ベクターである、ベクター。

【請求項11】

請求項９に記載の核酸又は請求項１０に記載のベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは、前記宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり、さらに好ましくは、大腸菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、又は抗体もしくはその抗原結合断片の製造に適した他の細胞から選択され、最も好ましくは、前記宿主細胞は２９３細胞又はＣＨＯ細胞である、宿主細胞。

【請求項12】

請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を製造する方法であって、前記方法は、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片をコードする核酸の発現に適した条件下で請求項１１に記載の宿主細胞を培養し、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を任意に単離させることを含み、任意選択的に、前記方法は、前記宿主細胞から前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を回収することをさらに含む、方法。

【請求項13】

請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片及び他の物質、例えば、細胞傷害性薬剤を含む、免疫コンジュゲート。

【請求項14】

請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲート、及び任意選択的な薬用アジュバントを含む、薬物組成物。

【請求項15】

薬物組成物であって、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲート、及び他の治療剤、並びに任意選択的な薬用アジュバントを含み、好ましくは、前記他の治療剤は、化学療法剤、他の抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、細胞傷害性薬剤から選択される、薬物組成物。

【請求項16】

請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲート、及び一つ又は複数の他の治療剤、例えば、化学療法剤、細胞傷害性薬剤、他の抗体、好ましくは抗ＰＤ－１抗体又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体を含む、組み合わせ製品。

【請求項17】

被験体において腫瘍又は感染性疾患を予防又は治療する薬物を製造するための、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片又は請求項１３に記載の免疫コンジュゲートの用途。

【請求項18】

前記腫瘍は、癌、例えば、リンパ腫（例えば、びまん性大Ｂ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫）、乳癌（例えば、転移性乳癌）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ））、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、例えば、ステージＩＶ又は再発性非小細胞肺癌、ＮＳＣＬＣ腺癌、又はＮＳＣＬＣ扁平上皮癌）、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病）、皮膚癌（例えば、黒色腫（例えば、ステージＩＩＩ又はステージＩＶ黒色腫）又はＭｅｒｋｅｌ細胞癌）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ））、脊髄異形成症候群、膀胱癌（例えば、移行上皮癌）、膵臓癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌、例えば、明細胞腎細胞癌、例えば、進行性又は転移性明細胞腎細胞癌）及び結腸癌（例えば、結腸腺癌）であり、特に、前記腫瘍は、リンパ腫、腎細胞癌、非小細胞肺癌、肝臓癌、膵臓癌、結腸腺癌、乳癌であり、又は前記感染性疾患は、例えば、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染又は原生動物感染であり、好ましくは、前記感染性疾患は慢性感染である、請求項１７に記載の用途。

【請求項19】

試料におけるＣＤ４０を検出するキットであって、前記キットは、請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片を含み、
（ａ）試料を請求項１に記載の抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片と接触させるステップ、及び
（ｂ）前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片とＣＤ４０との間の複合体の形成を検出するステップを実施するためのものであり、任意選択的に、前記抗ＣＤ４０抗体又は抗原結合断片は、検出可能に標識される、キット。

【国際調査報告】