特表 2024-519668 デンドリマー－グルタミンアンタゴニストコンジュゲートおよびそれを使用する方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-21

(54)【発明の名称】デンドリマー－グルタミンアンタゴニストコンジュゲートおよびそれを使用する方法

(51)【国際特許分類】

   A61K 31/655 20060101AFI20240514BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 9/50 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 47/59 20170101ALI20240514BHJP

   A61K 45/00 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 9/06 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 9/10 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 9/08 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 9/20 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 9/48 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 25/00 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 25/28 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 25/22 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 9/10 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 19/02 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 17/06 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 1/04 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 3/10 20060101ALI20240514BHJP

   A61P 5/14 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 35/17 20150101ALI20240514BHJP

   A61K 39/00 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 38/05 20060101ALI20240514BHJP

   A61K 38/06 20060101ALI20240514BHJP

   C07K 5/06 20060101ALI20240514BHJP

   C07F 9/24 20060101ALI20240514BHJP

【ＦＩ】

A61K31/655

A61K9/14

A61K9/50

A61K47/59

A61K45/00

A61P43/00 121

A61K9/06

A61K9/10

A61K9/08

A61K9/20

A61K9/48

A61P25/00

A61P35/00

A61P37/02

A61P43/00 111

A61P25/28

A61P25/22

A61P9/10

A61P29/00 101

A61P19/02

A61P17/06

A61P29/00

A61P1/04

A61P3/10

A61P5/14

A61K35/17

A61K39/00 H

A61K38/05

A61K38/06

C07K5/06

C07F9/24 Z

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023562806

(86)(22)【出願日】2022-04-14

(85)【翻訳文提出日】2023-12-06

(86)【国際出願番号】 US2022024752

(87)【国際公開番号】W WO2022221490

(87)【国際公開日】2022-10-20

(31)【優先権主張番号】63/174,878

(32)【優先日】2021-04-14

(33)【優先権主張国・地域又は機関】US

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】398076227

【氏名又は名称】ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー

(71)【出願人】

【識別番号】523384997

【氏名又は名称】インスティチュート オブ オーガニック ケミストリー アンド バイオケミストリー

(74)【代理人】

【識別番号】100078282

【弁理士】

【氏名又は名称】山本 秀策

(74)【代理人】

【識別番号】100113413

【弁理士】

【氏名又は名称】森下 夏樹

(74)【代理人】

【識別番号】100181674

【弁理士】

【氏名又は名称】飯田 貴敏

(74)【代理人】

【識別番号】100181641

【弁理士】

【氏名又は名称】石川 大輔

(74)【代理人】

【識別番号】230113332

【弁護士】

【氏名又は名称】山本 健策

(72)【発明者】

【氏名】ベル， ベンジャミン

(72)【発明者】

【氏名】ライス， ラナ

(72)【発明者】

【氏名】ランガラマヌジャム， カナン

(72)【発明者】

【氏名】シャルマ， アンジャリ

(72)【発明者】

【氏名】スラッシャー， バーバラ

(72)【発明者】

【氏名】塚本 尚

(72)【発明者】

【氏名】ガオ， ルン－ドゥオ

(72)【発明者】

【氏名】マイヤー， パヴェル

(72)【発明者】

【氏名】ノヴォトナ， カテリーナ

(72)【発明者】

【氏名】テノラ， ルーカス

(72)【発明者】

【氏名】ハジマ， マルティン

(72)【発明者】

【氏名】カイザー， マルティン

(72)【発明者】

【氏名】ティヒ， トマス

(72)【発明者】

【氏名】ジュー， シャオレイ

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C085

4C086

4C087

4H045

4H050

【Ｆターム（参考）】

4C076AA09

4C076AA11

4C076AA22

4C076AA30

4C076AA53

4C076AA64

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB13

4C076CC01

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC41

4C076EE26

4C076EE26A

4C076EE59

4C076EE59A

4C076FF01

4C076FF11

4C084AA02

4C084AA03

4C084AA07

4C084AA19

4C084BA01

4C084BA08

4C084BA14

4C084BA15

4C084BA23

4C084BA37

4C084CA59

4C084DC50

4C084NA05

4C084ZA011

4C084ZA012

4C084ZA021

4C084ZA022

4C084ZA051

4C084ZA052

4C084ZA151

4C084ZA152

4C084ZA161

4C084ZA162

4C084ZA361

4C084ZA362

4C084ZA681

4C084ZA682

4C084ZA891

4C084ZA892

4C084ZA961

4C084ZA962

4C084ZB071

4C084ZB072

4C084ZB111

4C084ZB112

4C084ZB151

4C084ZB152

4C084ZB261

4C084ZB262

4C084ZC061

4C084ZC062

4C084ZC201

4C084ZC202

4C084ZC351

4C084ZC352

4C084ZC751

4C085AA03

4C085BB01

4C085EE03

4C086AA01

4C086AA02

4C086AA03

4C086DA30

4C086GA16

4C086MA01

4C086MA02

4C086MA03

4C086MA04

4C086MA05

4C086MA17

4C086MA23

4C086MA28

4C086MA35

4C086MA37

4C086MA38

4C086MA43

4C086MA52

4C086MA55

4C086MA66

4C086NA05

4C086NA13

4C086ZA01

4C086ZA02

4C086ZA05

4C086ZA15

4C086ZA16

4C086ZA36

4C086ZA68

4C086ZA89

4C086ZA96

4C086ZB07

4C086ZB11

4C086ZB15

4C086ZB26

4C086ZC06

4C086ZC20

4C086ZC35

4C086ZC75

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB37

4C087BB64

4C087CA04

4C087MA02

4C087NA05

4C087ZA01

4C087ZA02

4C087ZA05

4C087ZA15

4C087ZA16

4C087ZA36

4C087ZA68

4C087ZA89

4C087ZA96

4C087ZB07

4C087ZB11

4C087ZB15

4C087ZB26

4C087ZC06

4C087ZC20

4C087ZC35

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA30

4H045BA11

4H045EA20

4H045FA33

4H050AA01

4H050AA03

4H050AB20

(57)【要約】

好ましくは活性化ミクログリアにおいて、グルタミン代謝を阻害する１つまたは複数のグルタミンアンタゴニストとコンジュゲートされているデンドリマーの組成物、および病原性または調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達と関連する１つまたは複数の神経学的、腫瘍学的、および／または免疫障害を処置、緩和、および／または予防するためにそれらを使用する方法が開発されている。１つまたは複数のグルタミンアンタゴニストとコンジュゲートされているデンドリマーは、全身毒性を一切伴わずにグルタミナーゼ活性を有効に阻害する。１つまたは複数のグルタミンアンタゴニストとコンジュゲートされているデンドリマーは、損傷したまたは罹患した細胞および組織と関連する活性化ミクログリアにおいて蓄積される。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

「ＡＡ」はアミノ酸を指す、以下：

【化16】

式中、Ｒ_１は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２－ＯＣ（ＣＨ_３）_３、－ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、および－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択され；
Ｒ_２は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（インドール－３－イル）、および－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝Ｎ≡Ｎから選択され；
Ｒ_３は、－ＮＨ_２および－ＯＨから選択され；
ｎは、１から３２の整数値である、式Ａ

【化17】

式中、Ｒ_１は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２－ＯＣ（ＣＨ_３）_３、－ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、および－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択され；
Ｒ_３は、－ＮＨ_２および－ＯＨから選択され；
ｎは、１から１６の整数値である、式Ｂ

【化18】

式中、Ｒ_２は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（インドール－３－イル）、または－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝Ｎ≡Ｎから選択され；
Ｒ_４は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、または－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２から選択され；
Ｒ_５は、－Ｈ、－Ａｃ、－Ｆｍｏｃ、ジメチルグリシン、Ａｃ－ＡＡ－Ｃ（＝Ｏ）－、ジメチルグリシン－ＮＨ－ＡＡ－Ｃ（＝Ｏ）－、ジメチルグリシン－ＮＨ－ＤＯＮ－Ｃ（＝Ｏ）－、またはＣ_８Ｈ_１７Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン－Ｃ（＝Ｏ）－から選択され；
ｎは、１から３２の整数値である、式Ｃ
の３つの一般化学式のうちの１つを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログと複合体化された、共有結合によりコンジュゲートされた、または分子内分散した、もしくはカプセル化されたデンドリマーを含む組成物。

【請求項2】

前記ＤＯＮアナログが、

【化19-1】

【化19-2】

【化19-3】

【化19-4】

からなる群より選択される構造を有する化合物である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記デンドリマーが、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代のデンドリマーである、請求項１または２に記載の組成物。

【請求項4】

前記デンドリマーが、ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーである、請求項１から３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項5】

前記デンドリマーが、ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項6】

前記デンドリマーが、第４世代、第５世代、または第６世代のヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである、請求項１から５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記デンドリマーが、必要に応じてリンカーまたはスペーサー部分を介して、１つまたは複数の前記ＤＯＮアナログに共有結合によりコンジュゲートされている、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記デンドリマーが、１つまたは複数の治療剤、予防剤、または診断剤とさらに複合体化またはコンジュゲートされている、請求項１から７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記デンドリマーが、１つまたは複数の神経保護剤、抗炎症剤、および／または化学療法剤とさらに複合体化またはコンジュゲートされている、請求項８に記載の組成物。

【請求項10】

請求項１から９のいずれか一項に記載の組成物、および１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。

【請求項11】

非経口投与または経口投与用に製剤化されている、請求項１０に記載の医薬組成物。

【請求項12】

ヒドロゲル、ナノ粒子またはマイクロ粒子、懸濁物、粉末、錠剤、カプセル剤、および溶液からなる群より選択される形態で製剤化されている、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。

【請求項13】

神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数を処置することを必要とする対象における神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数を処置するための方法であって、前記神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数と関連する１つまたは複数の症状を処置、緩和、および／または予防するために、有効量の請求項１から１２のいずれかに記載の組成物を前記対象に投与することを含む、方法。

【請求項14】

前記組成物が、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数の罹患または損傷した組織と関連する１つまたは複数の標的細胞において、グルタミナーゼ活性を低下させるおよび／またはグルタメート放出を減少させるために有効な量で投与される、請求項１３に記載の方法。

【請求項15】

前記組成物が、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数の罹患または損傷した組織と関連する活性化ミクログリアにおいて、グルタミナーゼ活性を低下させるおよび／またはグルタメート放出を減少させるために有効な量で投与される、請求項１３または１４に記載の方法。

【請求項16】

前記神経学的障害が、ストレス誘発性気分障害、認知欠損、虚血、神経炎症、アルツハイマー病、および多発性硬化症からなる群より選択される、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項17】

前記組成物が、神経炎症の減少、認知の改善、またはこれらの組合せに有効な量で投与される、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の方法。

【請求項18】

前記腫瘍学的障害が、乳がん、卵巣がん、子宮がん、前立腺がん、精巣胚細胞腫瘍、脳がん、胃がん、食道がん、肺がん、肝臓がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、および膵臓がんからなる群より選択される、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項19】

前記組成物が、腫瘍サイズを減少させるのに有効な量で投与される、請求項１３から１５または１８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項20】

免疫チェックポイントモジュレーター、化学療法剤、抗感染症剤、養子Ｔ細胞療法、がんワクチン、外科手術、および放射線療法からなる群より選択される１つまたは複数を前記対象に投与することをさらに含む、請求項１３から１５、１８、および１９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項21】

前記免疫チェックポイントモジュレーターが、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－１リガンドアンタゴニスト、およびＣＴＬＡ４アンタゴニストからなる群より選択される、請求項２０に記載の方法。

【請求項22】

前記免疫障害が、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病、炎症性腸疾患、および甲状腺疾患からなる群より選択される、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。

【請求項23】

対象の罹患または損傷した組織と関連する活性化ミクログリアにおいてグルタミナーゼ活性を阻害するための方法であって、有効量の請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物を前記対象に全身投与することを含む、方法。

【請求項24】

前記組成物が経口的にまたは非経口的に投与される、請求項１３から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項25】

前記組成物が静脈内投与される、請求項１３から２３のいずれか一項に記載の方法。

【請求項26】

以下：

【化20-1】

【化20-2】

【化20-3】

【化20-4】

からなる群より選択される構造を有する分子。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／１７４，８７８号の優先権および利益を主張し、この米国仮出願は、本明細書によってその全体が参照により本明細書に援用される。

【0002】

発明の分野
本発明は、一般的に、薬物送達の分野におけるものであり、特に、それを必要とする罹患し損傷した細胞および組織の部位または領域内への選択的な取り込みのための、デンドリマーを介して結合したグルタミンアンタゴニストである。

【背景技術】

【0003】

発明の背景
広範に活性なグルタミンアンタゴニストの６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）は、潜在的な抗がん治療薬として６０年間にわたって研究されてきた。研究では、ＤＯＮが、脳がんの処置を含む、堅固な抗がん潜在能を有することが示されている。ＤＯＮは、活性化ミクログリアからのグルタメート放出をブロックし、活性化免疫細胞におけるグルタメート産生を正常化し、神経炎症および興奮毒性が関与する神経学的、精神神経学的、および免疫障害における広範な治療的有用性を提供できることも実証されている。

【0004】

ＤＯＮの治療的潜在能にもかかわらず、大部分が消化管（ＧＩ）関連であるその全身毒性に起因して臨床開発は行われていない。標的組織へのＤＯＮの適切な治療濃度を得るために末梢投与用量は多くなければならず、耐えがたいＧＩ副作用が引き起こされる。したがって、ＤＯＮと類似の生物学的活性および治療的潜在能を有するが、全身毒性が減少されたかまたは最小限である新規のグルタミンアンタゴニストが必要とされている。

【0005】

したがって、本発明の目的は、調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達と関連する病理学的プロセスを減少させ予防するための組成物、ならびにそれを作製する方法および使用する方法を提供することである。

【0006】

本発明の目的はまた、調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達が病原性であると推定される、さまざまなＣＮＳ、腫瘍学的、および免疫障害を処置または予防するための組成物を提供することである。

【発明の概要】

【課題を解決するための手段】

【0007】

発明の要旨
６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログの組成物が開発されている。

【0008】

一部の他の例では、ＤＯＮアナログは、「ＡＡ」がアミノ酸を指す、以下：

【化1】

式中、Ｒ_１は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２－ＯＣ（ＣＨ_３）_３、－ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、および－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択され；
Ｒ_２は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（インドール－３－イル）、および－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝Ｎ≡Ｎから選択され；
Ｒ_３は、－ＮＨ_２および－ＯＨから選択され；
ｎは、１から３２の整数値である、式Ａ

【化2】

式中、Ｒ_１は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２－ＯＣ（ＣＨ_３）_３、－ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、および－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択され；
Ｒ_３は、－ＮＨ_２および－ＯＨから選択され；
ｎは、１から１６の整数値である、式Ｂ

【化3】

式中、Ｒ_２は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（インドール－３－イル）、または－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝Ｎ≡Ｎから選択され；
Ｒ_４は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、または－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２から選択され；
Ｒ_５は、－Ｈ、－Ａｃ、－Ｆｍｏｃ、ジメチルグリシン、Ａｃ－ＡＡ－Ｃ（＝Ｏ）－、ジメチルグリシン－ＮＨ－ＡＡ－Ｃ（＝Ｏ）－、ジメチルグリシン－ＮＨ－ＤＯＮ－Ｃ（＝Ｏ）－、またはＣ_８Ｈ_１７Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン－Ｃ（＝Ｏ）－から選択され；
ｎは、１から３２の整数値である、式Ｃ
の３つの一般化学式のうちの１つを有するものが使用される。

【0009】

ＤＯＮアナログとしては、構造Ｉ～Ｘのうちのいずれか１つの構造を有する分子が挙げられる：

【化4-1】

【化4-2】

【化4-3】

【化4-4】

【化4-5】

【0010】

１つまたは複数のＤＯＮアナログにコンジュゲートされているデンドリマーの組成物も記載する。構造Ｉ～Ｘまたは一般式Ａ～Ｃのうちのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログと複合体化された、共有結合によりコンジュゲートされた、または分子内分散した、もしくはカプセル化されたデンドリマーを含む組成物が提供される。

【0011】

例示的なデンドリマーは、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代のデンドリマーである。一部の実施形態では、デンドリマーは、ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、例えば、ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、デンドリマーは、第４世代、第５世代、または第６世代のヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである。

【0012】

一部の実施形態では、デンドリマーは、必要に応じてリンカーまたはスペーサー部分を介して、１つまたは複数のＤＯＮアナログに共有結合によりコンジュゲートされている。一部の実施形態では、デンドリマーは、１つまたは複数の治療剤、予防剤、または診断剤とさらに複合体化またはコンジュゲートされている。例示的な治療剤としては、神経保護剤、抗炎症剤、および／または化学療法剤が挙げられる。

【0013】

構造Ｉ～ＸＩＩまたは式Ａ～Ｃのうちのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログと複合体化された、共有結合によりコンジュゲートされた、または分子内分散した、もしくはカプセル化されたデンドリマーと、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物も提供される。

【0014】

医薬組成物は非経口投与または経口投与用に製剤化されており、例えば、ヒドロゲル、ナノ粒子またはマイクロ粒子、懸濁物、粉末、錠剤、カプセル剤、および溶液の形態で製剤化されている。

【0015】

神経学的、腫瘍学的、および／または免疫障害のうちの１つまたは複数を処置することを必要とする対象における神経学的、腫瘍学的、および／または免疫障害のうちの１つまたは複数を処置するための方法は、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数と関連する１つまたは複数の症状を処置、緩和、および／または予防するために、構造Ｉ～ＸＩＩまたは一般式Ａ～Ｃのうちのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログと複合体化された、共有結合によりコンジュゲートされた、または分子内分散した、もしくはカプセル化された有効量のデンドリマーを対象に投与することを含む。好ましくは、組成物は、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数の罹患または損傷した組織において、グルタミナーゼ活性を低下させるために有効な量で投与される。例えば、一部の実施形態では、組成物は、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数の罹患および／または損傷した組織と関連する活性化ミクログリアにおいて、グルタミナーゼ活性を低下させるために有効な量で投与される。これらのＤＯＮアナログで処置され得る例示的な神経学的障害としては、ストレス誘発性気分障害、認知欠損、虚血、神経炎症、アルツハイマー病、および多発性硬化症が挙げられる。一実施形態では、疾患または障害は、抑うつなどのストレス誘発性気分障害である。一部の実施形態では、組成物は、神経炎症の減少、認知の改善、またはこれらの組合せに有効な量で投与される。方法により処置され得る例示的な腫瘍学的障害としては、乳がん、卵巣がん、子宮がん、前立腺がん、精巣胚細胞腫瘍、脳がん、胃がん、食道がん、肺がん、肝臓がん、腎細胞がん、結腸直腸がん、および膵臓がんが挙げられる。一部の実施形態では、組成物は、腫瘍サイズを減少させるのに有効な量で投与される。方法により処置され得る例示的な免疫障害としては、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病、炎症性腸疾患、および甲状腺疾患が挙げられる。さらなる実施形態では、組成物は、免疫チェックポイントモジュレーター、化学療法剤、抗感染症剤、養子Ｔ細胞療法、がんワクチン、外科手術、および放射線療法の１つまたは複数と一緒に対象に投与される。例示的な免疫チェックポイントモジュレーターとして、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－１リガンドアンタゴニスト、およびＣＴＬＡ４アンタゴニストが挙げられる。

【0016】

構造Ｉ～Ｘまたは式Ａ～Ｃのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログを作製するための方法およびデンドリマーにコンジュゲートさせる方法も記載する。

【図面の簡単な説明】

【0017】

【図1】図１は、化合物Ｉの合成の概略図である。

【0018】

【図2】図２は、化合物ＩＩの合成の概略図である。

【0019】

【図3】図３は、化合物ＩＩＩの合成の概略図である。

【0020】

【図4】図４は、化合物ＩＶの合成の概略図である。

【0021】

【図5】図５は、化合物Ｖの合成の概略図である。

【0022】

【図6】図６は、化合物ＶＩの合成の概略図である。

【0023】

【図7】図７は、化合物ＶＩＩの合成の概略図である。

【0024】

【図8】図８は、化合物ＶＩＩＩの合成の概略図である。

【0025】

【図9】図９は、化合物ＩＸおよびＸの合成の概略図である。

【0026】

【図10】図１０は、化合物ＸＩの合成の概略図である。

【0027】

【図11】図１１は、化合物ＸＩＩに関する合成スキームを示すスキームである。

【0028】

【図12】図１２は、デンドリマー－グルタミンアンタゴニストコンジュゲートに関する一般的な合成経路の概略図である。

【0029】

【図13】図１３は、マウスを使用した実験設定を示す概略図である。マウスには、その右線条体中にＬＰＳ（２．５ｍｇ／ｋｇ）を頭蓋内注射した。３時間後、デンドリマー－ＴＴＭ０２０または空のデンドリマーを、ＤＯＮ当量で２ｍｇ／ｋｇの用量でＩ．Ｐ．投与した。２４および７２時間後、マウスを屠殺し、右半球を取り出し、グルタミナーゼ活性測定のために、ＣＤ１１ｂ細胞を抽出した。

【0030】

【図14】図１４は、ＴＴＭ０２０にコンジュゲートされているデンドリマーの化学構造を示す概略図である。

【0031】

【図15】図１５は、対照マウス、薬物処置してか２４時間および７２時間後の、それぞれ非コンジュゲートデンドリマー（Ｄ－ＥＭＰＴＹ）またはＤＯＮアナログＴＴＭ０２０コンジュゲートデンドリマー（Ｄ－ＤＯＮ）で処置されたマウスのそれぞれにおいて、ｆｍｏｌ／ｍｇ／時間で測定されたグルタミナーゼ活性を示す棒グラフである。

【0032】

【図16】図１６は、齧歯類腫瘍接種９Ｌ神経膠肉腫モデルにおける脳の対側、腫瘍周囲および腫瘍領域でのデンドリマー－Ｃｙ５（ＡＵＣ）の取り込みを示す棒グラフである。ｎ＝６。

【0033】

【図17】図１７は、リンカーを介してＤＯＮアナログにコンジュゲートされているデンドリマーの化学構造を示す概略図である。

【0034】

【図18】図１８Ａおよび図１８Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＧＢＭのＧＬ２６１ネズミモデルでの、非処置対照群、それぞれ非コンジュゲートＤＯＮ（遊離ＤＯＮ）で処置されたマウスおよびデンドリマーＫＭＮ－０４５コンジュゲート（Ｄ－０４５）で処置されたマウスそれぞれにおける、腫瘍質量（図１８Ａ）、および脳質量のパーセンテージとしての腫瘍負荷（図１８Ｂ）を示す棒グラフである。

【0035】

【図19】図１９は、脳ホモジネート中のデンドリマーＫＭＮ－０４５コンジュゲートのｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性に関する経時的なＤＯＮ放出％を示す棒グラフである。

【0036】

【図20A】図２０Ａは、６０分にわたる腫瘍ホモジネート中のＤＯＮ（μＭ）の放出を示す線グラフである。

【図20B】図２０Ｂは、Ｄ－ＤＯＮ（ＴＴＭ０２０）またはビヒクルで処置した場合の、同系ＥＬ４リンパ腫モデルにおける１４日にわたるｍｍ^３単位での腫瘍体積の抑制を示す線グラフである。

【図20C】図２０Ｃは、Ｄ－ＤＯＮ（ＴＴＭ０２０）またはビヒクルで処置した場合の、１４日間にわたる体重変化のパーセントを示す線グラフである。

【0037】

【図21】図２１は、ビヒクルで処置された対照マウス（Ｃｔｒ＋ビヒクル）、ビヒクルで処置されたＣＳＤＳマウス（ＣＳＤＳ＋ビヒクル）、およびＤ－ＴＴＭ０２０で処置されたＣＳＤＳマウス（ＣＳＤＳ＋Ｄ－ＴＴＭ０２０）を含む３つの実験群におけるグルタミナーゼ活性（ｆｍｏｌ／ｍｇ／時間）を示す棒グラフである。^＊＊ｐ＜０．０１、Ｃｔｒ＋ビヒクルとＣＳＤＳ＋ビヒクルとの間の比較。^＃＃ｐ＜０．０１、ＣＳＤＳ＋ビヒクルとＣＳＤＳ＋Ｄ－ＴＴＭ０２０との間の比較。一元配置ＡＮＯＶＡによって分析、Ｔｕｋｅｙの事後検定。条件あたりｎ＝５。

【発明を実施するための形態】

【0038】

発明の詳細な説明
Ｉ．定義
「活性剤」または「生物学的薬剤」という用語は、予防的、治療的または診断的であってもよい所望の薬理学的および／または生理学的効果を誘発する治療用、予防用または診断用の化学的または生物学的化合物を指す。これらは、核酸、核酸アナログ、２ｋＤ未満、より典型的には１ｋＤ未満の分子量を有する小分子、ペプチド模倣体、タンパク質もしくはペプチド、炭水化物もしくは糖、脂質、またはこれらの組合せであってもよい。これらの用語はまた、これらに限定されないが、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、およびアナログを含む薬剤の薬学的に許容され薬理学的に活性な誘導体を包含する。

【0039】

「治療剤」という用語は、疾患または障害の１つまたは複数の症状を処置するために投与することができる薬剤を指す。

【0040】

「診断用薬剤」という用語は、病理学的プロセスの局在を示し、特定し、明らかにするために投与することができる薬剤を一般的に指す。診断用薬剤は、標的細胞を標識することができ、これらの標識された標的細胞のその後の検出またはイメージングを可能にすることができる。一部の実施形態では、診断用薬剤は、デンドリマーまたは好適な送達ビヒクルを介して中枢神経系（ＣＮＳ）における活性化ミクログリアを標的とする／それと結合することができる。

【0041】

「予防用薬剤」という用語は、疾患またはその症状を予防するためにまたはある特定の状態を予防するために投与することができる薬剤、例えばワクチンを一般的に指す。

【0042】

「アナログ」という用語は、別の（参照化合物）のものと類似した構造を有するが、特定の構成成分、官能基、原子などに関してそれとは異なる化学化合物を指す。「６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログ」または「ＤＯＮアナログ」という用語は、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシンのものと類似しているが若干異なる構造を有する化学的化合物を指す。例示的なＤＯＮアナログとしては、構造Ｉ～Ｘまたは一般式Ａ～Ｃに包含される化合物のうちのいずれかが挙げられる。

【0043】

「誘導体」という用語は、１つまたは複数の化学反応によって親化合物から形成された化合物を指す。

【0044】

「アルキル」という用語は、本明細書で使用される場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０個の炭素原子を含む、１から１０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐の飽和炭化水素鎖を意味する。「低級アルキル」または「Ｃ_１～Ｃ_６－アルキル」という用語は、１、２、３、４、５、および６個の炭素原子を含む、１から６個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖炭化水素を意味する。「Ｃ_１～Ｃ_３－アルキル」という用語は、１、２、および３個の炭素原子を含む、１から３個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖の炭化水素を意味する。アルキルの代表的な例としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｓｅｃ－ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｎ－ヘキシル、３－メチルヘキシル、２，２－ジメチルペンチル、２，３－ジメチルペンチル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、およびｎ－デシルが挙げられる。

【0045】

「アルキレニル」という用語は、本明細書で使用される場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０個を含む、１から５０個の炭素原子、例えば、１、２、３、４、および５個の炭素原子を含む、１から５個の炭素原子の直鎖状または分岐鎖の炭化水素由来の二価の基を指す。アルキレニルの代表的な例としては、これらに限定されるものではないが、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－、および－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_２－が挙げられる。

【0046】

「アルケニレニル」という用語は、本明細書で使用される場合、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０個の炭素原子を含み、少なくとも１つの炭素－炭素結合が二重結合である、２から５０個の炭素原子の直鎖状または分岐鎖の炭化水素由来の二価の基を指す。アルケニレニルの代表的な例としては、これらに限定されるものではないが、－ＣＨ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ_２－、および－ＣＨ_２ＣＨ_２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ_２－が挙げられる。

【0047】

「アルキニレニル」という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つの炭素－炭素結合が三重結合である、２から５０個の炭素原子、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、および５０個の炭素原子の直鎖状または分岐鎖の炭化水素由来の二価の基を指す。アルキニレニルの代表的な例としては、これらに限定されるものではないが、－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ_２－、－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ_２－ＣＨ_２－および－ＣＨ_２－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ_２－がある。

【0048】

「アルコキシル」または「アルコキシ」、「アロキシ」または「アリールオキシ」という用語は、一般的に、式－ＯＲ^ｖによって表される化合物を記載しており、式中、Ｒ^ｖとしては、これらに限定されるものではないが、置換または非置換アルキル、置換または非置換アルケニル、置換または非置換アルキニル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロシクリル、置換または非置換シクロアルケニル、置換または非置換ヘテロシクロアルケニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換ポリアリール、置換または非置換ポリヘテロアリール、置換または非置換アリールアルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換アルキルアリール、置換または非置換アルキルヘテロアリール、置換または非置換アラルキル、置換または非置換カルボニル、糖基、ホスホニウム、ホスファニル、ホスホニル、スルフィニル、シリル、チオール、アミド、およびアミノが挙げられる。例示的なアルコキシル基としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシなどが挙げられる。低級アルコキシ基は、１から６個の炭素原子を含有するアルコキシ基である。エーテルは、以下で定義されるような酸素によって共有結合された２つの官能基である。したがって、アルキルをエーテルにするアルキルの置換基は、アルコキシルであるかまたはそれと類似しており、例えば、－Ｏ－アルキル、－Ｏ－アルケニル、－Ｏ－アルキニル、－Ｏ－アリール、－Ｏ－ヘテロアリール、－Ｏ－ポリアリール、－Ｏ－ポリヘテロアリール、－Ｏ－ヘテロシクリル等のうちの１つで表すことができる。

【0049】

「カルボニル」という用語は、本明細書で使用される場合、一般式：

【化5】

によって表され、
式中、Ｘは結合であるか、または酸素もしくは硫黄を表し、Ｒは、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、置換もしくは非置換カルボニル、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、置換もしくは非置換アラルキル（例えば、置換または非置換アルキルアリール、置換または非置換アリールアルキル）、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換ポリアリール、置換もしくは非置換ポリヘテロアリール、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、ヒドロキシル、アルコキシ、ホスホニル、アミド、アミノ、または－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｒ”を表し；Ｅ”は存在しないか、またはＥ”は、置換または非置換アルキル、置換または非置換アルケニル、置換または非置換アルキニル、置換または非置換アラルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換ポリアリール、置換または非置換ポリヘテロアリール、置換または非置換ヘテロシクリルであり；Ｒ’は、水素、置換または非置換アルキル、置換もしくは非置換アルケニル、置換もしくは非置換アルキニル、置換もしくは非置換カルボニル、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、置換もしくは非置換アラルキル（例えば、置換または非置換アルキルアリール、置換または非置換アリールアルキル）、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換ポリアリール、置換もしくは非置換ポリヘテロアリール、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、ヒドロキシル、アルコキシ、ホスホニル、アミド、アミノ、または－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｒ”を表し；Ｒ”は、ヒドロキシル基、置換もしくは非置換カルボニル基、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルケニル、置換もしくは非置換ヘテロシクリル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換ポリアリール、置換もしくは非置換ポリヘテロアリール、アルコキシ、ホスホニル、アミド、またはアミノを表し；ｍは０または１から８の範囲の整数である。Ｘが酸素であり、Ｒが上記のように定義される場合、その部分はカルボキシル基とも称される。Ｘが酸素であり、Ｒが水素である場合、式は「カルボン酸」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ’が水素である場合、式は「ホルメート」を表す。Ｘが酸素であり、ＲまたはＲ’が水素ではない場合、式は「エステル」を表す。Ｘが結合であり、Ｒが水素ではない場合、上記の式は「ケトン」を表す。Ｘが結合であり、Ｒが水素である場合、上記の式は「アルデヒド」を表す。

【0050】

「ホスホリル」という用語は、本明細書で使用される場合、一般式：

【化6】

によって表され、
式中、Ｅは存在しないか、酸素、置換もしくは非置換アルコキシ、または置換もしくは非置換アロキシであり、Ｅとは独立して、Ｒ^ｖｉおよびＲ^ｖｉｉは独立して、上記で定義された、ヒドロキシル、置換もしくは非置換アルコキシ、または置換もしくは非置換アロキシである。Ｅ、Ｒ^ｖｉおよびＲ^ｖｉｉが置換されている場合、置換基としては、これらに限定されるものではないが、ハロゲン、アジド、アゾ、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、カルボニル（カルボキシル、アルコキシカルボニル、ホルミル、またはアシルなど）、シリル、エーテル、エステル、チオカルボニル（チオエステル、チオアセテート、またはチオホルメートなど）、アルコキシル、ホスホリル、アミノ（例えば四級化アミノ）、アミド、アミジン、イミン、シアノ、ニトロ、アジド、スルフヒドリル、アルキルチオ、スルホニル、ヘテロシクリル、アルキルアリール、ハロアルキル、－ＣＮ、アリール、ヘテロアリール、ポリアリール、ポリヘテロアリール、およびこれらの組合せが挙げられる。

【0051】

「置換された」は、本明細書で使用される場合、本明細書において記載される化合物または官能基の全ての許容される置換基を指す。最も広い意味で、許容される置換基としては、有機化合物の非環式および環式、分岐および非分岐、炭素環式および複素環式、芳香族および非芳香族の置換基が挙げられる。例示の置換基としては、これらに限定されるものではないが、ハロゲン、ヒドロキシル基、または任意の数の炭素原子、好ましくは１～１４個の炭素原子を含有し、１つまたは複数のヘテロ原子、例えば、直鎖状、分岐、または環式の構造形式の、酸素、硫黄、または窒素の集団（ｇｒｏｕｐｉｎｇ）を必要に応じて含む任意の他の有機集団が挙げられる。代表的な置換基としては、置換または非置換アルキル、置換または非置換アルケニル、置換または非置換アルキニル、置換または非置換ヘテロシクリル、置換または非置換フェニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換ポリアリール、置換または非置換ポリヘテロアリール、置換または非置換アラルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、フェノキシ、アロキシ、シリル、チオール、アルキルチオ、置換アルキルチオ、フェニルチオ、アリールチオ、シアノ、イソシアノ、ニトロ、置換または非置換カルボニル、カルボキシル、アミノ、アミド、アゾ、オキソ、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、ホスホニウム、ホスファニル、ホスホリル、ホスホニル、アミノ酸、ポリマー、ペプチド、および糖基が挙げられる。このような置換または非置換アルキル、置換または非置換アルケニル、置換または非置換アルキニル、置換または非置換ヘテロシクリル、置換または非置換フェニル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアリール、置換または非置換ポリアリール、置換または非置換ポリヘテロアリール、置換または非置換アラルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、フェノキシ、アロキシ、シリル、チオール、アルキルチオ、置換アルキルチオ、フェニルチオ、アリールチオ、シアノ、イソシアノ、ニトロ、置換または非置換カルボニル、カルボキシル、アミノ、アミド、オキソ、スルフィニル、スルホニル、スルホン酸、ホスホニウム、ホスファニル、ホスホリル、ホスホニル、アミノ酸、ポリマー、ペプチド、および糖基はさらに置換されていてもよい。

【0052】

「独立して選択される」という用語が使用される場合、言及される置換基（例えば、Ｒ基、例えば、Ｒ_１基、Ｒ_２基など、または変数、例えば、「ｍ」および「ｎ」）は、同一であっても異なっていてもよい。例えば、Ｒ_１とＲ_２の両方が置換アルキルであってもよく、またはＲ_１は水素であってもよく、Ｒ_２は置換アルキルであってもよい、および同類のものであってもよい。

【0053】

本開示の化合物の説明は、当業者であれば公知の化学結合の原理によって限定される。したがって、基が、いくつかの置換基のうちの１つまたは複数で置換され得る場合、このような置換は、周囲条件、例えば、水性、中性、およびいくつかの公知の生理学的条件下で不安定である可能性が高いため、化学結合の原理に従い、本質的に不安定ではなく、および／または当業者であれば公知であろう化合物が得られるように選択される。例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、当業者であれば公知の化学結合の原理に従って、環ヘテロ原子を介して分子の残りに結合され、それにより、本質的に不安定な化合物が回避される。

【0054】

「薬学的に許容される」または「生体適合性」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、ヒトおよび動物の組織との接触において使用するのに好適であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題もしくは合併症を伴うことなく、妥当な利益／リスク比率に見合った組成物、ポリマー、および他の材料ならびに／または投薬形態を指す。「薬学的に許容される担体」という句は、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクル、例えば、任意の対象組成物を、１つの臓器または身体の一部から別の臓器または身体の一部へ運ぶまたは輸送することに関与する液体または固体フィラー、希釈剤、溶媒、またはカプセル化材料を指す。各担体は、対象組成物の他の成分と適合性であり、患者に対して有害ではないという意味で「許容され」なければならない。

【0055】

「薬学的に許容される塩」という用語は当技術分野において認識されており、化合物の比較的非毒性の無機および有機酸付加塩を含む。薬学的に許容される塩の例としては、無機酸、例えば、塩酸および硫酸由来のもの、ならびに有機酸、例えば、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ－トルエンスルホン酸由来のものが挙げられる。塩を形成するのに好適な無機塩基の例としては、アンモニア、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム、および亜鉛の水酸化物、炭酸塩、および重炭酸塩がある。塩はまた、非毒性であり、このような塩を形成するのに十分強力なものを含む好適な有機塩基と形成してもよい。例示の目的で、このような有機塩基のクラスとしては、モノ－、ジ－、およびトリアルキルアミン、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、およびトリエチルアミン；モノ－、ジ－またはトリヒドロキシアルキルアミン、例えば、モノ－、ジ－、およびトリエタノールアミン；アミノ酸、例えば、アルギニンおよびリシン；グアニジン；Ｎ－メチルグルコサミン；Ｎ－メチルグルカミン；Ｌ－グルタミン；Ｎ－メチルピペラジン；モルホリン；エチレンジアミン；およびＮ－ベンジルフェネチルアミンがあり得る。

【0056】

「生分解性」という用語は、生理学的状態下で、対象により代謝、除去、または排泄することができるより小さな単位または化学種に分解または浸食されるであろう材料を一般的に指す。分解時間は、組成および形態の関数である。

【0057】

「治療有効量」という用語は、デンドリマー中および／またはその上に組み込まれた場合、任意の医療処置に適用可能な妥当な利益／リスク比率で何らかの所望の効果をもたらす治療剤の量を指す。有効量は、処置される疾患もしくは状態、投与される特定の標的構築物、対象のサイズ、または疾患もしくは状態の重症度のような因子によって変わる場合がある。当業者であれば、過度の実験を必要とすることなく特定の化合物の有効量を経験的に決定してもよい。一部の実施形態では、「有効量」という用語は、１つまたは複数の疾患または障害の症状を減少または低減させる、例えば、腫瘍サイズ（例えば、腫瘍体積）を減少させるか、または自己免疫疾患の１つもしくは複数の症状、例えば、関節リウマチなどを有する患者における手首および手足の小関節における疼痛および腫脹を減少させるもしくは小さくするための治療剤または予防剤の量を指す。がんまたは腫瘍の場合、有効量の薬物は、がん細胞の数を減少させる；腫瘍サイズを減少させる；末梢臓器へのがん細胞の浸潤を阻害する；腫瘍転移を阻害する；腫瘍成長を阻害する；および／または障害と関連する症状のうちの１つもしくは複数を軽減する効果を有していてもよい。有効量は、１回または複数回の投与で投与してもよい。

【0058】

阻害の文脈における「阻害する」または「低下させる」という用語は、活性および量における低下または減少を意味する。これは、活性または量における完全な阻害または低下、または部分的な阻害または低下であってもよい。阻害または低下は、対照または標準レベルと比較してもよい。阻害は、５、１０、２５、５０、７５、８０、８５、９０、９５、９９、または１００％であってもよい。例えば、１つまたは複数のＤＯＮアナログを含むデンドリマー組成物は、デンドリマー組成物を与えられなかったかまたはそれで処置されなかった対象の同等の組織における同じ細胞の活性および／または量から、グルタミナーゼと関連する活性化ミクログリアの活性および／または量を約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％または５０％より多く阻害するかまたは減少させることができる。一部の実施形態では、阻害および低下は、ｍＲＮＡ、タンパク質、細胞、組織および臓器レベルで比較される。例えば、非処置の対照対象と比較した場合の、神経の損失速度、脳重量の減少速度、または海馬体積の減少速度における阻害および低下である。

【0059】

疾患、障害および／または状態に罹りやすいが、疾患、障害または状態を有するとはまだ診断されていない動物において疾患、障害または状態が生じるのを「処置すること」または「予防すること」、疾患、障害または状態を阻害すること、例えば、その進行を妨げること、ならびに／または疾患、障害、または状態を軽減すること、例えば、疾患、障害および／または状態の退行をもたらすこと。疾患または状態を処置することには、例え基本的な病態生理に影響がなかったとしても、特定の疾患または状態の少なくとも１つの症状を回復させること、例えば鎮痛剤を投与することによってそのような薬剤が疼痛の原因を処置しなかったとしても、対象の疼痛を処置することが含まれる。処置の望ましい効果としては、疾患の進行速度を低下させること、疾患の状況を回復または緩和すること、および寛解することかまたは予後を改善することがある。例えば、これらに限定されるものではないが、ニューロン損失速度の低下、疾患に起因する症状の減少、疾患に罹患したもののクオリティーオブライフの向上、疾患の処置に必要とされる他の医薬の用量の減少、疾患の進行の遅延、および／または個体の生存の延長を含む、がんと関連する１つまたは複数の症状が軽減または除去された場合、個体は成功裏に「処置される」。

【0060】

「デンドリマー」という用語は、これらに限定されるものではないが、内部コアと、この開始のコアに規則的に結合している繰返し単位の内層（または「世代」）と、最外部の世代に結合している末端基の外表面とを伴う分子構造を含む。

【0061】

「官能化」という用語は、官能基または部位の結合をもたらす様式で、化合物または分子を修飾することを意味する。例えば、分子を強力な求核試薬または強力な求電子剤にする分子を導入することによって、分子を官能化してもよい。

【0062】

「標的化部分」という用語は、具体的な場所に局在するかまたはそこから離れて局在する部分を指す。その部分は、例えば、タンパク質、核酸、核酸アナログ、炭水化物、または小分子であってもよい。実体は、例えば治療化合物、例えば、小分子または診断用の実体、例えば検出可能な標識であってもよい。位置は、組織、特定の細胞タイプもしくはリガンド、または細胞内コンパートメントであってもよい。一実施形態では、標的化部分は、薬剤を局在させる。好ましい実施形態では、デンドリマー組成物は、追加の標的化部分の非存在下で活性化ミクログリアなどの１つまたは複数のタイプの免疫細胞を選択的に標的とする。

【0063】

「延長された滞留時間」という用語は、薬剤が患者の身体、またはその患者の臓器もしくは組織から消失するために必要とされる時間における増加を指す。ある特定の実施形態では、「延長された滞留時間」は、比較標準、例えば、デンドリマーなどの送達ビヒクルにコンジュゲートしていない比較薬剤よりも１０％、２０％、５０％または７５％長い半減期で消失する薬剤を指す。ある特定の実施形態では、「延長された滞留時間」は、比較標準、例えば、特定の細胞タイプを特異的に標的とするデンドリマーを含まない比較薬剤よりも２、５、１０、２０、５０、１００、２００、５００、１０００、２０００、５０００、または１００００倍長い半減期で消失する薬剤を指す。

【0064】

「組み込まれた」および「カプセル化された」という用語は、所望の適用において薬剤を放出、例えば持続放出するのを可能にする組成物中におよび／または組成物上に、このような薬剤を組み込むこと、製剤化すること、他の方法で含むことを指す。薬剤または他の材料を、デンドリマーの１つまたは複数の表面官能基に結合させることによって（共有結合、イオン結合、または他の結合相互作用によって）、物理的な混合によって、樹状構造内に薬剤を包むことによって、および／または樹状構造の内部に薬剤をカプセル化することによって、このようなデンドリマー中に組み込んでもよい。

【0065】

ＩＩ．組成物
グルタミンアンタゴニスト６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）のアナログが開発されている。全身投与されたヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーは、損傷した／活性化された標的細胞および／または組織に１つまたは複数のＤＯＮアナログを送達し、同時に末梢曝露を最小限にし、したがってＧＩ毒性を含む関連する全身毒性を最小限にできることが確立されている。したがって、対象における１つまたは複数の標的免疫細胞に送達するのに好適なデンドリマーナノ粒子にコンジュゲートされているＤＯＮアナログが記載される。

【0066】

構造Ｉ～Ｘまたは一般式Ａ～Ｃのうちのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログと複合体化された、共有結合によりコンジュゲートされた、または分子内分散した、もしくはカプセル化されたデンドリマーの組成物が提供される。例示的なデンドリマーとしては、第４世代、第５世代、第６世代、第７世代、または第８世代のデンドリマーが挙げられる。一部の実施形態では、デンドリマーは、ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマー、例えば、ヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、デンドリマーは、第４世代、第５世代、または第６世代のヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーである。一部の実施形態では、デンドリマーは、必要に応じてリンカーまたはスペーサー部分を介して、１つまたは複数のＤＯＮアナログに共有結合によりコンジュゲートされている。

【0067】

ある特定の実施形態において、ここで開示されるデンドリマー組成物は、式（Ｉ）の構造：

【化7】

を有する
（式中、Ｄは、デンドリマー、好ましくはＧ２からＧ１０ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり；
Ｌ^１およびＬ^２は、それぞれ独立して、存在しないか、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニレニル、または（－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）_ｑであり、ｑは１～１０であり；
Ｙ_１およびＹ_２は、それぞれ独立して、存在しないか、または第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カルボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基であり；
Ｚは、式（ＩＩＩａ）もしくは式（ＩＩＩｂ）のＤＯＮアナログであるか、または構造Ｉ～Ｘもしくは一般式Ａ～Ｃから選択され；
ｎは１から１００であり；ｍは１から４０００である）。

【0068】

一部の実施形態において、ここで開示されるデンドリマー組成物は、式（Ｉａ）の構造：

【化8】

を有する
（式中、Ｄは、デンドリマー、好ましくはＧ２からＧ１０ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり；
Ｌ^１は、存在しないか、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニレニル、または（－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）_ｑであり、ｑは１～１０であり；
Ｙ_１およびＹ_２は、それぞれ独立して、存在しないか、または第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カルボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基であり；
Ｚは、式（ＩＩＩａ）もしくは式（ＩＩＩｂ）のＤＯＮアナログであるか、または構造Ｉ～Ｘもしくは一般式Ａ～Ｃから選択され；
ｐは１から１０であり；ｎは１から１００であり；ｍは１から４０００である）。

【0069】

ある特定の実施形態において、ここで開示されるデンドリマー組成物は、式（ＩＩ）の構造：

【化9】

を有する
（式中、Ｄは、デンドリマー、好ましくはＧ２からＧ１０ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり；
Ｌ^１およびＬ^２は、それぞれ独立して、存在しないか、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニレニル、または（－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）_ｑであり、ｑは１～１０であり；
Ｙ_１およびＹ_２は、それぞれ独立して、存在しないか、または第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カルボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基であり；
Ｚは、式（ＩＩＩａ）もしくは式（ＩＩＩｂ）のＤＯＮアナログであるか、または構造Ｉ～Ｘもしくは一般式Ａ～Ｃから選択され；
ｎは１から１００であり；ｍは１から４０００である）。

【0070】

一部の実施形態において、ここで開示されるデンドリマー組成物は、式（ＩＩａ）の構造：

【化10】

を有する
（式中、Ｄは、デンドリマー、好ましくはＧ２からＧ１０ポリ（アミドアミン）（ＰＡＭＡＭ）デンドリマーであり；
Ｌ^１は、存在しないか、Ｃ_１～Ｃ_１２アルキレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルケニレニル、Ｃ_２～Ｃ_１２アルキニレニル、または（－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ－）_ｑであり、ｑは１～１０であり；
Ｙ_１およびＹ_２は、それぞれ独立して、存在しないか、または第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カルボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、およびエーテル（－Ｏ－）から選択されるリンカーであり、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基であり；
Ｚは、式（ＩＩＩａ）もしくは式（ＩＩＩｂ）のＤＯＮアナログであるか、または構造Ｉ～Ｘもしくは一般式Ａ～Ｃから選択され；
ｐは１から１０であり；ｎは１から１００であり；ｍは１から４０００である）。

【0071】

式（Ｉ）、（Ｉａ）、（ＩＩ）、および／または（ＩＩａ）のある特定の実施形態において、Ｚは、式（ＩＩＩａ）または式（ＩＩＩｂ）のＤＯＮアナログである：

【化11】

（式中、Ｘ’およびＹ’は、独立して、酸素またはＮＨであり；
Ｒ_１およびＲ_２は、独立して、存在しないか、置換または非置換アルキル、カルボニル、またはホスホリルである）。

【0072】

ＤＯＮアナログデンドリマーコンジュゲートは、調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達が病原性であると推定されるさまざまな神経学的、腫瘍学的、および免疫障害と関連する１つまたは複数の症状を処置または予防するのに特に適している。一般的に、１つまたは複数のＤＯＮアナログは、約０．０１重量％から約３０重量％、好ましくは約１重量％から約２０重量％、さらに好ましくは約５重量％から約２０重量％の濃度でデンドリマー複合体中にカプセル化、会合、および／またはコンジュゲートされている。好ましくは、ＤＯＮアナログは、１つまたは複数の連結、例えば、ジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カルバメート、カルボネート、ヒドラジン、およびアミド連結を介して、必要に応じて、１つまたは複数のスペーサーを介してデンドリマーに共有結合によりコンジュゲートされている。

【0073】

デンドリマーは、複数の治療用、予防用、および／または診断用薬剤を同じデンドリマーを用いて送達することができるという利点を有する。１つまたは複数のタイプの薬剤は、デンドリマーにカプセル化、複合体化、またはコンジュゲートしてもよい。一実施形態では、デンドリマーは、２つまたはそれを超える異なるクラスの薬剤と複合体化されるかまたはそれらにコンジュゲートされ、標的部位における異なるまたは独立した放出動態を伴う同時送達を提供する。別の実施形態では、デンドリマーは、少なくとも１つの検出可能な部分および少なくとも１つのクラスの薬剤に共有結合により連結される。さらなる実施形態では、異なるクラスの薬剤をそれぞれ運ぶデンドリマー複合体は、組合せ処置のために同時に投与される。送達されることになる粒子に含まれる追加の薬剤は、タンパク質もしくはペプチド、糖もしくは炭水化物、核酸もしくはオリゴヌクレオチド、脂質、小分子（例えば、分子量が２０００ダルトン未満、好ましくは１５００ダルトン未満、より好ましくは３００～７００ダルトン）、またはこれらの組合せであってもよい。核酸は、タンパク質、例えばＤＮＡ発現カセットまたはｍＲＮＡをコードするオリゴヌクレオチドであってもよい。代表的なオリゴヌクレオチドとしては、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ、ＤＮＡ、およびＲＮＡが挙げられる。一部の実施形態では、薬剤は治療的抗体である。

【0074】

例示的な追加の活性剤としては、抗炎症薬物、化学療法薬、抗けいれん剤、血管拡張薬、および抗感染症剤が挙げられる。

【0075】

追加の薬剤の存在は、粒子のゼータ電位または表面電荷に影響を与える場合がある。一実施形態では、デンドリマーのゼータ電位は、－１００ｍＶから１００ｍＶの間、－５０ｍＶから５０ｍＶの間、－２５ｍＶから２５ｍＶの間、－２０ｍＶから２０ｍＶの間、－１０ｍＶから１０ｍＶの間、－１０ｍＶから５ｍＶの間、－５ｍＶから５ｍＶの間、または－２ｍＶから２ｍＶの間である。好ましい実施形態では、表面電荷は中性または中性付近である。上記範囲は、－１００ｍＶから１００ｍＶまでの全ての値を包含する。

【0076】

Ａ．グルタミンアンタゴニスト
好ましくは活性化ミクログリアにおいてグルタミン代謝を阻害するグルタミンアンタゴニストは、調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達が病原性であるかまたは病原性に寄与していると推定される、神経学的、腫瘍学的、および／または免疫障害のうちの１つまたは複数の処置に有用である。

【0077】

全身投与されたヒドロキシル末端ＰＡＭＡＭデンドリマーは、損傷した／活性化された組織にグルタミンアンタゴニストを選択的に送達することができ、そこで少なくとも２週間保持されるが、末梢からは迅速に除去される（血漿ｔ１／２はおよそ６～２４時間である）ことが発見されている。したがって、活性化標的組織にグルタミンアンタゴニストを送達するのを強化し、同時に末梢曝露およびＧＩ毒性を最小限にするために、好ましくは、１つまたは複数のグルタミンアンタゴニストを、デンドリマー、好ましくはＰＡＭＡＭデンドリマーにコンジュゲートさせて、損傷した／活性化された組織に選択的に送達する。好ましい実施形態では、グルタミンアンタゴニストは、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシンのアナログである。

【0078】

１．６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）のアナログ
６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）のアナログは、グルタミン代謝を阻害することを必要とする対象におけるグルタミン代謝を阻害するためのグルタミンアンタゴニストとして開発されており、好ましくはＤＯＮよりも毒性は低い。

【0079】

多くの腫瘍は、増殖に必要な炭素および窒素構成要素を得るためのグルタミンに大きく依存するようになる。腫瘍のグルタミン依存は、選択的グルタミナーゼ阻害剤で標的化されており、一部は成功を収めている。ＢＰＴＥＳ（ビス－２－（５－フェニルアセトアミド－１，２，４－チアジアゾール－２－イル）エチルスルフィド）、化合物９６８、およびＣＢ－８３９（Ｃａｌｉｔｈｅｒａ）を含むいくつかのアロステリック阻害剤は、細胞培養実験において堅固な活性および有望な単一薬剤前臨床活性を示している（Ｅｌｇｏｇａｒｙ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ２０１６；１１３（３６）：Ｅ５３２８－３６１１；Ｗａｎｇ ＪＢ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ２０１０；１８（３）：２０７－１９；Ｇａｏ Ｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ２０１５；５９（２）：２９８－３０８）。ＣＢ－８３９は臨床研究に進行している。標的の係合が明らかに観察されたが（Ｈａｒｄｉｎｇ ＪＪ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１５；３３（１５＿ｓｕｐｐｌ）：２５１２）、単一薬剤の抗腫瘍活性は最小限であった。組合せ治験は現在進行中であり、有望な初期結果であった（Ｍｅｒｉｃ－Ｂｅｒｎｓｔａｍ Ｆ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１６；３４（１５＿ｓｕｐｐｌ）：４５６８；ＤｅＭｉｃｈｅｌｅ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０１６；３４（１５＿ｓｕｐｐｌ）：１０１１）。

【0080】

６－ジアゾ－５－オキソ－ノルロイシン（ＤＯＮ）は、最もよく研究されている広範に活性なグルタミンアンタゴニストであり、複数の根拠となる生化学的、前臨床的および臨床的評価を有している。ＤＯＮは元々、１９５０年代にストレプトマイセスの発酵ブロスから単離された。ＤＯＮは、グルタミナーゼを含むグルタミン利用酵素を低マイクロモル濃度レベルで阻害し、さらにデノボプリンおよびピリミジン合成、補酵素合成、アミノ酸合成、ならびにヘキソサミン産生に関与する複数のグルタミンアミドトランスフェラーゼを阻害する。低い１日用量を使用した１９５０年代のＤＯＮの臨床研究では抗腫瘍活性が示唆されたが、その後、高用量で間欠的に与えられたＤＯＮの第Ｉ相およびＩＩ相治験は、用量を制限する吐き気および嘔吐によって阻止された。ＤＯＮのさらなる臨床開発は中止された。

【0081】

グルタミンアンタゴニズムの膨大な治療的潜在能を考慮して、いくつかのＤＯＮアナログが合成されている。

【0082】

一部の他の例では、ＤＯＮアナログは、「ＡＡ」がアミノ酸を指す、以下：

【化12】

式中、Ｒ_１は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２－ＯＣ（ＣＨ_３）_３、－ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、および－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択され；
Ｒ_２は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（インドール－３－イル）、および－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝Ｎ≡Ｎから選択され；
Ｒ_３は、－ＮＨ_２および－ＯＨから選択され；
ｎは、１から３２の整数値である、式Ａ

【化13】

式中、Ｒ_１は、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３、－ＯＣＨ（ＣＨ_３）_２－ＯＣ（ＣＨ_３）_３、－ＮＨ_２、ＮＨＣＨ_３、－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣＨ（ＣＨ_３）_２、および－ＮＨ－ＡＡ－ＣＯＯＣ（ＣＨ_３）_３から選択され；
Ｒ_３は、－ＮＨ_２および－ＯＨから選択され；
ｎは、１から１６の整数値である、式Ｂ

【化14】

式中、Ｒ_２は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２、－ＣＨ_２（インドール－３－イル）、または－ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ＝Ｎ≡Ｎから選択され；
Ｒ_４は、－Ｈ、－ＣＨ_３、－ＣＨ_２フェニル、または－ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）_２から選択され；
Ｒ_５は、－Ｈ、－Ａｃ、－Ｆｍｏｃ、ジメチルグリシン、Ａｃ－ＡＡ－Ｃ（＝Ｏ）－、ジメチルグリシン－ＮＨ－ＡＡ－Ｃ（＝Ｏ）－、ジメチルグリシン－ＮＨ－ＤＯＮ－Ｃ（＝Ｏ）－、またはＣ_８Ｈ_１７Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン－Ｃ（＝Ｏ）－から選択され；
ｎは、１から３２の整数値である、式Ｃ
の３つの一般化学式のうちの１つを有するものが使用される。

【0083】

好ましいＤＯＮアナログは、以下の構造Ｉ～Ｘに示す通りである：

【化15-1】

【化15-2】

【化15-3】

【化15-4】

【化15-5】

【0084】

Ｂ．デンドリマー
デンドリマー－グルタミンアンタゴニストは、構造Ｉ～Ｘまたは一般式Ａ～Ｃのうちのいずれかの構造を有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログと複合体化された、共有結合によりコンジュゲートされた、または分子内分散した、もしくはカプセル化されたデンドリマーを含む。

【0085】

デンドリマーは、高密度の表面末端基を含む３次元ハイパー分岐単分散球状多価高分子である（Ｔｏｍａｌｉａ， Ｄ． Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ， ３５， ６１ （２００７）；およびＳｈａｒｍａ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， ＡＣＳ Ｍａｃｒｏ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ３， １０７９ （２０１４））。その特有の構造的かつ物理的特徴のために、デンドリマーは、標的を絞った薬物／遺伝子送達、イメージングおよび診断を含むさまざまな生物医学的用途のためのナノ担体として有用である（Ｓｈａｒｍａ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， ＲＳＣ Ａｄｖａｎｃｅｓ， ４， １９２４２ （２０１４）、Ｃａｍｉｎａｄｅ， Ａ．－Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂ， ２， ４０５５ （２０１４）、Ｅｓｆａｎｄ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ， ６， ４２７ （２００１）、およびＫａｎｎａｎ， Ｒ． Ｍ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２７６， ５７９ （２０１４））。

【0086】

デンドリマー表面基は、その生体内分布に顕著に影響を与える（Ｎａｎｃｅ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ， １０１， ９６ （２０１６））。任意の標的化リガンドを含まない、ヒドロキシル末端第４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー（およそ４ｎｍサイズ）が、脳性麻痺（ＣＰ）のウサギモデルにおいて全身投与した場合、健常対照と比較して、障害を受けたＢＢＢを顕著に多く（２０倍を超えて）通過し、活性化ミクログリアおよびアストロサイトを選択的に標的とする（Ｌｅｓｎｉａｋ， Ｗ． Ｇ．， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ， １０ （２０１３））。

【0087】

「デンドリマー」という用語は、これらに限定されるものではないが、内部コアと、この内部コアに付加され、そこから広がる反復単位の層（または「世代」）とを有する分子構成であって、各層が１つまたは複数の分岐点を有し、末端基の外部表面が最も外側の世代に付加されている、分子構成を含む。一部の実施形態では、デンドリマーは、標準デンドリマーまたは「星型バースト（ｓｔａｒｂｕｒｓｔ）」分子構造を有する。

【0088】

一般的に、デンドリマーは、約１ｎｍから約５０ｎｍの間、さらに好ましくは約１ｎｍから約２０ｎｍの間、約１ｎｍから約１０ｎｍの間、または約１ｎｍから約５ｎｍの間の直径を有する。コンジュゲートは、一般的に同じサイズ範囲内に入るが、大きなタンパク質、例えば抗体は、５～１５ｎｍサイズが大きくなる場合がある。一般的に、薬剤は、大きな世代のデンドリマー（すなわち、４またはより高次）に関しては、薬剤のデンドリマーに対する比率が１：１から４：１の間でカプセル化されている。好ましい実施形態では、デンドリマーは、脳組織を通過し、標的細胞に長時間保持されるのに有効な直径を有する。

【0089】

一部の実施形態では、デンドリマーは、約５００ダルトンから約１００，０００ダルトンの間、好ましくは約５００ダルトンから約５０，０００ダルトンの間、最も好ましくは約１，０００ダルトンから約２０，０００ダルトンの間の分子量を有する。

【0090】

使用してもよい好適なデンドリマー足場としては、ＰＡＭＡＭとしても知られるポリ（アミドアミン）、またはＳＴＡＲＢＵＲＳＴ（商標）デンドリマー、ポリプロピルアミン（ＰＯＰＡＭ）、ポリエチレンイミン、ポリリシン、ポリエステル、イプチセン、脂肪族ポリ（エーテル）、および／または芳香族ポリエーテルデンドリマーが挙げられる。デンドリマーは、カルボキシル、アミン、および／またはヒドロキシル末端を有していてもよい。好ましい実施形態では、デンドリマーはヒドロキシル末端を有する。デンドリマー複合体の各デンドリマーは、同じであっても、他のデンドリマーと類似のまたは異なる化学的性質のものであってもよい（例えば、第１のデンドリマーはＰＡＭＡＭデンドリマーを含んでいてもよく、一方で第２のデンドリマーは、ＰＯＰＡＭデンドリマーであってもよい）。

【0091】

「ＰＡＭＡＭデンドリマー」という用語は、異なるコアを含有していてもよく、アミドアミン構築ブロックを有し、これらに限定されないが、第１世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第２世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第３世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第４世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第５世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第６世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第７世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第８世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、第９世代ＰＡＭＡＭデンドリマー、または第１０世代ＰＡＭＡＭデンドリマーを含む任意の世代の、カルボキシル、アミン、およびヒドロキシル末端を有していてもよいポリ（アミドアミン）デンドリマーを意味する。好ましい実施形態では、デンドリマーは製剤中に溶解性であり、第４、５または６世代（「Ｇ」）デンドリマーである。デンドリマーは、その官能表面基に結合したヒドロキシル基を有していてもよい。

【0092】

デンドリマーを作製するための方法は当業者に公知であり、中心開始コア（例えば、エチレンジアミンコア）の周囲に樹状β－アラニン単位の同心性のシェル（世代）を生成する２ステップ反復反応順序を一般的に伴う。その後の各成長ステップは、前の世代より大きな分子直径、２倍の数の反応表面部位、およびおよそ２倍の分子量を有するポリマーの新規の「世代」を表す。使用に好適であるデンドリマー足場は、さまざまな世代として市販されている。好ましくは、デンドリマー組成物は、第０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０世代デンドリマー足場に基づいている。このような足場は、それぞれ、４、８、１６、３２、６４、１２８、２５６、５１２、１０２４、２０４８、および４０９６個の反応部位を有する。したがって、これらの足場に基づいたデンドリマー化合物は、合わせられた標的化部分、存在する場合、および薬剤の対応する数を最大として有していてもよい。

【0093】

一部の実施形態では、デンドリマーは、複数のヒドロキシル基を含む。一部の例示的な高密度ヒドロキシル基含有デンドリマーとしては、市販されているポリエステル樹状ポリマー、例えばハイパー分岐２，２－ビス（ヒドロキシル－メチル）プロピオン酸ポリエステルポリマー（例えば、ハイパー分岐ビス－ＭＰＡポリエステル－６４－ヒドロキシル、第４世代）、樹状ポリグリセロールが挙げられる。

【0094】

一部の実施形態では、高密度ヒドロキシル基含有デンドリマーは、オリゴエチレングリコール（ＯＥＧ）様デンドリマーである。例えば、第２世代ＯＥＧデンドリマー（Ｄ２－ＯＨ－６０）は、非常に効率的で、頑強で、原子経済的な化学反応、例えばＣｕ（Ｉ）触媒アルキン－アジドクリックおよび光触媒チオール－エンクリックケミストリーを使用して合成することができる。直交性ハイパーモノマー（ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｈｙｐｅｒｍｏｎｏｍｅｒ）およびハイパーコア戦略を使用することによって、非常に低い世代の高密度ポリオールデンドリマーは最小限の反応ステップで達成することができ、例えば、ＷＯ２０１９０９４９５２に記載される。一部の実施形態では、デンドリマー骨格は、非切断性ポリエーテル結合を構造全体にわたって有し、デンドリマーのｉｎ ｖｉｖｏでの崩壊を回避し、そのようなデンドリマーが単一の実体として身体から消失することを可能にする（非生分解性）。

【0095】

一部の実施形態では、デンドリマーは、特定の組織領域および／または細胞タイプ、好ましくは、ＣＮＳ中の活性化ミクログリアを特異的に標的とする。好ましい実施形態では、デンドリマーは、標的化部分を有さない特定の組織領域および／または細胞タイプを特異的に標的とする。

【0096】

好ましい実施形態では、デンドリマーは、デンドリマーの周辺に複数のヒドロキシル（－ＯＨ）基を有する。好ましいヒドロキシル（－ＯＨ）基表面密度は、少なくとも１ＯＨ基／ｎｍ^２（ヒドロキシル表面基の数／表面積ｎｍ^２）である。例えば、一部の実施形態では、ヒドロキシル基表面密度は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０を超え；好ましくは少なくとも１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０であるかまたは５０を超える。さらなる実施形態では、ヒドロキシル（－ＯＨ）基表面密度は、約１から約５０の間、好ましくは５～２０ＯＨ基／ｎｍ^２（ヒドロキシル表面基の数／表面積ｎｍ^２）であり、同時に約５００Ｄａから約１０ｋＤａの間の分子量を有する。

【0097】

一部の実施形態では、デンドリマーは、外表面上に露出しているヒドロキシル基のフラクションを、デンドリマーの内部コアにあるもう一方のフラクションとともに有していてもよい。好ましい実施形態では、デンドリマーは、少なくとも１ＯＨ基／ｎｍ^３（ヒドロキシル基の数／体積ｎｍ^３）のヒドロキシル（－ＯＨ）基体積密度を有する。例えば、一部の実施形態では、ヒドロキシル基体積密度は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０であるか、または１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、および５０を超える。一部の実施形態では、ヒドロキシル基体積密度は、約４～約５０基／ｎｍ^３、好ましくは約５～約３０基／ｎｍ^３、より好ましくは約１０～約２０基／ｎｍ^３である。

【0098】

Ｃ．カップリング剤およびスペーサー
デンドリマー複合体は、必要に応じて、デンドリマー、樹状ポリマーまたはハイパーブランチポリマー（ｈｙｐｅｒｂｒａｎｃｈｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒ）にコンジュゲートされたまたは付加された１つまたは複数の追加の治療剤または化合物とともにグルタミンアンタゴニストから形成してもよい。必要に応じて、薬剤は、異なる連結、例えばジスルフィド、エステル、カルボネート、カルバメート、チオエステル、ヒドラジン、ヒドラジド、およびアミド連結を介し、１つまたは複数のスペーサー／リンカーを介してデンドリマーにコンジュゲートしている。デンドリマーと薬剤との間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、デンドリマー－活性複合体のｉｎ ｖｉｖｏで放出可能なまたは放出不可能な形態を提供するように設計してもよい。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にエステル結合を提供する適切なスペーサーを介して生じる。一部の実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にアミド結合を提供する適切なスペーサーを介して生じる。好ましい実施形態では、デンドリマーと薬剤との間の１つまたは複数のスペーサー／リンカーは、所望のおよび有効な放出動態をｉｎ ｖｉｖｏで達成するように添加される。

【0099】

「スペーサー」という用語は、治療的薬剤をデンドリマーに連結するために使用する組成物を含む。スペーサーは、ポリマーと治療剤または造影剤とを架橋するために一緒に連結されている、単一の化学的実体または２つもしくはそれを超える化学的実体のいずれかとすることができる。スペーサーとしては、スルフヒドリル、チオピリジン、スクシンイミジル、マレイミド、ビニルスルホン、およびカルボネート末端を有する任意の小さな化学的実体、ペプチドまたはポリマーを挙げることができる。

【0100】

スペーサーは、スルフヒドリル、チオピリジン、スクシンイミジル、マレイミド、ビニルスルホンおよびカルボネート基が末端である化合物のクラスから選択され得る。スペーサーとしては、チオピリジン末端化合物、例えばジチオジピリジン、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）－プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサノエート ＬＣ－ＳＰＤＰまたはスルホ－ＬＣ－ＳＰＤＰがあり得る。スペーサーとしては、スルフヒドリル基、例えばグルタチオン、ホモシステイン、システインおよびその誘導体を実質的に有する直鎖状または環状のペプチド、ａｒｇ－ｇｌｙ－ａｓｐ－ｃｙｓ（ＲＧＤＣ）、シクロ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－ｄ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ）（ｃ（ＲＧＤｆＣ））、シクロ（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ）、シクロ（Ａｒｇ－Ａｌａ－Ａｓｐ－ｄ－Ｔｙｒ－Ｃｙｓ）を挙げることもできる。スペーサーは、メルカプト酸誘導体、例えば３メルカプトプロピオン酸、メルカプト酢酸、４メルカプト酪酸、チオラン－２－オン、６メルカプトヘキサン酸、５メルカプト吉草酸ならびに他のメルカプト誘導体、例えば２メルカプトエタノールおよび２メルカプトエチルアミンとすることができる。スペーサーは、チオサリチル酸およびその誘導体、（４－スクシンイミジルオキシカルボニル－メチル－アルファ－２－ピリジルチオ）トルエン、（３－［２－ピリジチオ］プロピオニルヒドラジドとすることができる。スペーサーは、マレイミド末端を有していてもよく、スペーサーとしては、ポリマーまたは小さな化学的実体、例えばビス－マレイミドジエチレングリコールおよびビス－マレイミドトリエチレングリコール、ビス－マレイミドエタン、ビスマレイミドヘキサンが挙げられる。スペーサーとしては、ビニルスルホン、例えば１，６－ヘキサン－ビス－ビニルスルホンを挙げることができる。スペーサーとしては、チオグリコシド、例えばチオグルコースを挙げることができる。スペーサーは、還元タンパク質、例えばウシ血清アルブミンおよびヒト血清アルブミン、ジスルフィド結合を形成することができる任意のチオール末端化合物とすることができる。スペーサーとしては、マレイミド、スクシンイミジルおよびチオール末端を有するポリエチレングリコールを挙げることができる。

【0101】

グルタミンアンタゴニストまたは追加の薬剤および／もしくは標的化部分は、共有結合されていても分子内分散またはカプセル化されていてもよい。デンドリマーは、好ましくは、カルボキシル、ヒドロキシル、またはアミン末端を有する最大第１０世代のＰＡＭＡＭデンドリマーである。好ましい実施形態では、デンドリマーは、ジスルフィド、エステルまたはアミド結合で終わるスペーサーを介して薬剤に連結されている。

【0102】

Ｄ．送達されることになる追加の薬剤
デンドリマー－ＤＯＮアナログ複合体は、１つまたは複数の追加の活性剤、特に、疾患または障害の１つまたは複数の症状を予防または処置するための１つまたは複数の薬剤を送達するために使用することができる。好適な治療剤、診断剤、および／または予防剤は、生体分子、例えば、ペプチド、タンパク質、炭水化物、ヌクレオチドもしくはオリゴヌクレオチド、または有機、無機、および有機金属薬剤を含む小分子薬剤（例えば、分子量２０００ａｍｕ未満、好ましくは１５００ａｍｕ未満）であってもよい。薬剤は、デンドリマー内にカプセル化されていても、デンドリマー内に分散されていても、および／またはデンドリマー表面と共有結合的にまたは非共有結合的に会合していてもよい。

【0103】

１．治療用および予防用薬剤
一部の実施形態では、デンドリマーは、デンドリマーと複合体化またはコンジュゲートされた１つまたは複数の治療用、予防用、または予後用薬剤を含む。代表的な治療剤としては、これらに限定されるものではないが、神経保護剤、抗炎症剤、抗酸化剤、抗感染剤、およびこれらの組合せがある。

【0104】

一実施形態では、追加の治療剤はステロイドである。好適なステロイドとしては、ビタミンＤ３およびＤ２の生物学的活性形態、例えば、米国特許第４，８９７，３８８号および同第５，９３９，４０７号に記載されているものが挙げられる。ステロイドは、神経原性の刺激もしくは誘導に、および／または神経損失の予防、特にアルツハイマー病の処置にさらに役立てるために同時投与してもよい。エストロゲンおよびエストロゲン関連分子、例えば、アロプレグナノロンは、Ｂｒｉｎｔｏｎ （２００１） Ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ Ｍｅｍｏｒｙ ８（３）： １２１－１３３に記載されているように、神経保護を強化するために神経強化剤と同時投与してもよい。

【0105】

他の神経活性ステロイド、例えば、米国特許第６，５５２，０１０号に記載されているようなデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）のさまざまな形態も、神経原性の刺激もしくは誘導および／または神経損失の予防にさらに役立てるために同時投与してもよい。神経の成長および神経ネットワークの伸長をもたらす他の薬剤、例えば神経成長因子（ＮＧＦ）および脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）は、ＴＨＰの投与と同時にまたはその前もしくは後に投与してもよい。さらに、神経アポトーシスの阻害剤、例えばカルパインおよびカスパーゼ、ならびに他の細胞死メカニズム、例えば壊死の阻害剤は、ある特定の神経学的疾患および神経学的欠損と関連する神経損失をさらに予防するために、神経強化剤と同時投与してもよい。

【0106】

代表的な小分子としては、メチルプレドニゾン、デキサメタゾンなどのステロイド、ＣＯＸ－２阻害剤を含む非ステロイド性抗炎症剤、コルチコステロイド性抗炎症剤、金化合物抗炎症剤、免疫抑制剤、抗炎症剤および抗血管新生剤、バルプロ酸、Ｄ－アミノホスホノバレレート（Ｄ－ａｍｉｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎｏｖａｌｅｒａｔｅ）、Ｄ－アミノホスホノヘプタノエート（Ｄ－ａｍｉｎｏｐｈｏｓｐｈｏｎｏｈｅｐｔａｎｏａｔｅ）などの抗興奮毒性剤、グルタメート形成／放出阻害剤、バクロフェン、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、サリチレート抗炎症剤、ラニビズマブ、アフリベルセプトを含む抗ＶＥＧＦ剤、ならびにラパマイシンが挙げられる。他の抗炎症薬としては、非ステロイド薬、例えばインドメタシン、アスピリン、アセトアミノフェン、ジクロフェナクナトリウムおよびイブプロフェンが挙げられる。コルチコステロイドは、フルオシノロンアセトニドおよびメチルプレドニゾロンであってもよい。

【0107】

代表的なオリゴヌクレオチドとしては、ｓｉＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ＤＮＡ、およびＲＮＡが挙げられる。

【0108】

２．診断用薬剤
一部の場合では、追加の薬剤は、診断用薬剤である。診断用薬剤の例としては、常磁性体分子、蛍光化合物、磁性分子、および放射性核種、Ｘ線造影剤、および造影媒体が挙げられる。他の好適な造影剤の例としては、放射線不透過性のガスまたはガス放出化合物が挙げられる。デンドリマーは、投与された組成物の位置を決定するのに有用な薬剤をさらに含んでいてもよい。この目的のための有用な薬剤としては、蛍光タグ、放射性核種、および造影剤がある。

【0109】

例示的な診断用薬剤としては、染料、蛍光染料、近赤外線染料、ＳＰＥＣＴ造影剤、ＰＥＴ造影剤、および放射性同位体が挙げられる。代表的な染料としては、カルボシアニン、インドカルボシアニン、オキサカルボシアニン、ツイカルボシアニン（ｔｈｕｅｉｃａｒｂｏｃｙａｎｉｎｅ）、およびメロシアニン、ポリメチン、クマリン、ローダミン、キサンテン、フルオレセイン、ホウ素－ジピロメタン（ＢＯＤＩＰＹ）、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、ＶｉｖｏＴａｇ－６８０、ＶｉｖｏＴａｇ－Ｓ６８０、ＶｉｖｏＴａｇ－Ｓ７５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７９０、Ｄｙ６７７、Ｄｙ６７６、Ｄｙ６８２、Ｄｙ７５２、Ｄｙ７８０、ＤｙＬｉｇｈｔ５４７、Ｄｙｌｉｇｈｔ６４７、ＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ６４７、ＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ６８０、ＨｉＬｙｔｅ Ｆｌｕｏｒ７５０、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、ＩＲＤｙｅ８００ＲＳ、ＩＲＤｙｅ７００ＤＸ、ＡＤＳ７８０ＷＳ、ＡＤＳ８３０ＷＳ、およびＡＤＳ８３２ＷＳが挙げられる。

【0110】

例示的なＳＰＥＣＴまたはＰＥＴ造影剤としては、キレート化剤、例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、ジアミンジチオール、活性化メルカプトアセチル－グリシル－グリシル－グリシン（ＭＡＧ３）、およびヒドラジドニコチンアミド（ＨＹＮＩＣ）が挙げられる。

【0111】

例示的同位体としては、Ｔｃ－９４ｍ、Ｔｃ－９９ｍ、Ｉｎ－１１１、Ｇａ－６７、Ｇａ－６８、Ｇｄ３＋、Ｙ－８６、Ｙ－９０、Ｌｕ－１７７、Ｒｅ－１８６、Ｒｅ－１８８、Ｃｕ－６４、Ｃｕ－６７、Ｃｏ－５５、Ｃｏ－５７、Ｆ－１８、Ｓｃ－４７、Ａｃ－２２５、Ｂｉ－２１３、Ｂｉ－２１２、Ｐｂ－２１２、Ｓｍ－１５３、Ｈｏ－１６６、およびＤｙ－１６６が挙げられる。

【0112】

好ましい実施形態では、デンドリマー複合体は、陽電子放出断層法（ＰＥＴ）イメージングに好適な１つまたは複数の放射性同位体を含む。例示的な陽電子放出放射性同位体としては、炭素－１１（^１１Ｃ）、銅－６４（^６４Ｃｕ）、窒素－１３（^１３Ｎ）、酸素－１５（^１５Ｏ）、ガリウム－６８（^６８Ｇａ）、およびフッ素－１８（^１８Ｆ）、例えば、２－デオキシ－２－^１８Ｆ－フルオロ－β－Ｄ－グルコース（^１８Ｆ－ＦＤＧ）が挙げられる。

【0113】

さらなる実施形態では、単一のデンドリマー複合体組成物は、身体における１つまたは複数の位置で疾患または状態を同時に処置および／または診断することができる。

【0114】

ＩＩＩ．医薬製剤
デンドリマーおよび１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログを含む医薬組成物が記載されている。デンドリマーおよびＤＯＮアナログを含む医薬組成物は、薬学的に使用することができる調製物への活性化合物の処理を促進する、賦形剤および助剤を含む１つまたは複数の生理学的に許容される担体を使用して従来の様式で製剤化してもよい。適切な製剤は、選択される投与経路に依存する。好ましい実施形態では、組成物は非経口送達用に製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、静脈内注射用に製剤化される。典型的には、組成物は、処置されることになる組織または細胞への注射用の無菌生理食塩水または緩衝溶液中で製剤化されることになる。組成物は、使用直前に再水和するための使い捨てバイアル中で凍結乾燥保存してもよい。再水和し、投与するための他の手段は当業者に公知である。

【0115】

一部の実施形態では、医薬製剤は、１つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせて、１つまたは複数のデンドリマー複合体を含有する。代表的な賦形剤としては、溶媒、希釈剤、ｐＨ改変剤、保存剤、抗酸化剤、懸濁化剤、湿潤剤、粘度改変剤、等張化剤、安定化剤、およびこれらの組合せが挙げられる。好適な薬学的に許容される賦形剤は、好ましくは、安全であると一般的に認められている（ＧＲＡＳ）材料から選択され、不所望の生物学的副作用または望ましくない相互作用をもたらすことなく個体に投与することができる。

【0116】

一般的に、薬学的に許容される塩は、水中または有機溶媒中またはこの２つの混合物中で、薬剤の遊離酸または遊離塩基の形態と化学量論量の適切な塩基または酸との反応によって調製してもよく；一般的に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。薬学的に許容される塩としては、無機酸、有機酸由来の薬剤の塩、アルカリ金属塩、およびアルカリ土類金属塩、ならびに薬物と好適な有機リガンドとの反応によって形成された塩（例えば、第四級アンモニウム塩）が挙げられる。好適な塩のリストは、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ２０ｔｈ ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ， Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ， ＭＤ， ２０００， ｐ． ７０４で見出される。薬学的に許容される塩の形態でときとして投与される眼科用薬物の例としては、マレイン酸チモロール、酒石酸ブリモニジン、およびジクロフェナクナトリウムが挙げられる。

【0117】

組成物は、好ましくは、投与を容易にし、投薬量を均一にするための投薬単位形態に製剤化される。「投薬単位形態」という句は、処置されることになる患者に適切なコンジュゲートの物理的に個別の単位を指す。しかし、組成物の総単回投与は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることになることは理解されるであろう。治療有効用量は、細胞培養アッセイにおいてまたは動物モデル、通常はマウス、ウサギ、イヌ、もしくはブタにおいて最初に推測してもよい。動物モデルを使用して、投与の望ましい濃度範囲および経路を達成してもよい。次に、このような情報は、ヒトにおける有用な用量および投与経路を決定するのに有用であるはずである。コンジュゲートの治療的有効性および毒性、例えば、ＥＤ５０（用量は、５０％の集団において治療的に有効である）およびＬＤ５０（用量は、５０％の集団に対して致死的である）は、細胞培養または実験動物において標準的な薬学的手順によって決定してもよい。毒性の治療効果に対する用量比は治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比率として示すことができる。大きな治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトに使用するためのさまざまな投薬量の製剤化において使用することができる。

【0118】

ある特定の実施形態では、組成物は、例えば、処置されることになる部位に直接注射することによって局所的に投与される。一部の実施形態では、組成物は、損傷、外科手術、または移植の部位のまたはその付近の血管組織上の血管系に注射されるか、局所的に適用されるか、または他の方法で直接投与される。例えば、一部の実施形態において、組成物は、外科手術中に露出された血管組織に局所的に適用される。典型的には、局所投与は、組成物の局所的な濃度の増加をもたらし、これは全身投与によって達成することができるものよりも高い。

【0119】

非経口（筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）または皮下注射）および経腸投与経路用に製剤化された医薬組成物を記載する。

【0120】

Ａ．非経口投与
一部の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログを含む医薬組成物は、非経口投与用に製剤化される。「非経口投与」および「非経口的に投与される」という句は、当技術分野において認識されている用語であり、経腸および局所投与以外の投与様式、例えば、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）、胸膜内、血管内、心膜内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内（ｉｎｔｒａｄｅｎｎａｌ）、腹腔内（ｉ．ｐ．）、経気管、皮下（ｓ．ｃ．）、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内および胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｍａｌ）注射および注入を介した注射を含む。デンドリマーは、硬膜下、静脈内、髄腔内、脳室内、動脈内、羊膜内、腹腔内、または皮下経路によって非経口で投与することができる。

【0121】

液体製剤に関しては、薬学的に許容される担体は、例えば、水性もしくは非水性溶液、懸濁液、エマルションまたは油であってもよい。非経口ビヒクル（皮下、静脈内、動脈内、または筋肉内注射用）としては、例えば、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲルおよび固定油がある。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、例えば、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール／水溶液、シクロデキストリン、エマルションまたは懸濁液が挙げられる。デンドリマーは、エマルション、例えば油中水型としても投与することができる。油の例は、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、落花生油、ダイズ油、鉱物油、オリーブ油、ヒマワリ油、魚肝油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ、および鉱物油である。非経口製剤として使用するのに好適な脂肪酸としては、例えば、オレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、好適な脂肪酸エステルの例である。

【0122】

非経口投与に好適な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、ならびに目的のレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質、ならびに懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、および防腐剤を含んでいてもよい水性および非水性滅菌懸濁液を含んでいてもよい。静脈内ビヒクルは、流体および栄養補給液、電解質補給液、例えばリンゲルデキストロースベースのものを含んでいてもよい。一般的に、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖溶液、ならびにグリコール、例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールは、特に注射用溶液に好ましい液体担体である。

【0123】

注射可能な組成物のための注射可能な医薬品担体は、当業者であれば周知である（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ， ＰＡ， Ｂａｎｋｅｒ ａｎｄ Ｃｈａｌｍｅｒｓ， ｅｄｓ．， ｐａｇｅｓ ２３８－２５０ （１９８２）、およびＡＳＨＰ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｎ Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ Ｄｒｕｇｓ， Ｔｒｉｓｓｅｌ， １５ｔｈ ｅｄ．， ｐａｇｅｓ ６２２－６３０ （２００９）を参照のこと）。

【0124】

Ｂ．経腸投与
一部の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログを含む医薬組成物は、経腸投与用に製剤化される。経腸で投与することができる組成物に有用な担体または希釈剤は、固体製剤用のカプセル剤または錠剤などの固体担体もしくは希釈剤、液体製剤用の液体担体もしくは希釈剤、またはこれらの混合物であってもよいし、食物混合物および液体給餌製剤を含んでもよい。

【0125】

液体製剤に関しては、薬学的に許容される担体は、例えば、水性もしくは非水性溶液、懸濁液、エマルションまたは油であってもよい。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、および注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルである。水性担体としては、例えば、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール／水溶液、シクロデキストリン、エマルションまたは懸濁液がある。

【0126】

油の例は、石油、動物、植物、または合成起源のもの、例えば、落花生油、ダイズ油、鉱物油、オリーブ油、ヒマワリ油、魚肝油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ、ペトロラタム、および鉱物である。非経口製剤として使用するのに好適な脂肪酸としては、例えば、オレイン酸、ステアリン酸、およびイソステアリン酸が挙げられる。オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルは、好適な脂肪酸エステルの例である。

【0127】

ビヒクルは、例えば、液体栄養補給液、電解質補給液、例えばリンゲルデキストロースベースのものを含んでいてもよい。一般的に、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連する糖溶液は、好ましい液体担体である。これらはまた、タンパク質、脂質、糖および人工栄養乳の他の構成成分とともに製剤化される場合もある。

【0128】

好ましい実施形態では、組成物は、経口投与用に製剤化される。経口製剤は、液剤または懸濁剤、チューインガム、ゲルストリップ（ｇｅｌ ｓｔｒｉｐｓ）、錠剤、カプセル剤またはトローチ剤の形態であってもよい。腸溶性コーティング経口製剤を調製するためのカプセル化物質としては、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、およびメタクリル酸エステルコポリマーが挙げられる。固体経口製剤、例えばカプセル剤または錠剤が好ましい。エリキシル剤およびシロップ剤も周知の経口製剤である。

【0129】

ＩＶ．デンドリマーおよびそのコンジュゲートまたは複合体を作製する方法
構造Ｉ～Ｘのうちのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログを作製し、これらのＤＯＮアナログのうちの１つまたは複数と複合体化されているデンドリマーを調製する方法が提供される。上記で検討したような一般式Ａ～Ｃによって包含される構造を有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログを作製し、これらのＤＯＮアナログのうちの１つまたは複数と複合体化されているデンドリマーを調製する方法は、以下で記載されるように、構造Ｉ～Ｘおよびこれらのデンドリマーを作製するために使用される同じまたは類似の合成法によって達成してもよく、この合成法は、当業者の技術の十分範囲内である。

【0130】

Ａ．６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシンのアナログを作製する方法
構造Ｉ～Ｘのうちのいずれかを有する１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログの例示的な合成法は実施例１に記載されている。

【0131】

一部の実施形態では、構造Ｉに関する合成スキームは、図１に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）Ｆｍｏｃ－Ｃｌ、ＮａＨＣＯ３、ジオキサン、０℃、２時間、６７％；（ｉｉ）イソプロピル（Ｓ）－２－アミノ－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート、ジクロロリン酸フェニル、２，４，６－トリメチルピリジン、ＴＨＦ、０℃から室温、５時間、４１％；（ｉｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、２．５時間、７３％を含む。

【0132】

一部の実施形態では、構造ＩＩに関する合成スキームは、図２に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＣＭ、０℃から室温、２０時間、７６％；（ｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、２時間、９３％；（ｉｉｉ）５－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－３－オキサペンタン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、７０％；（ｉｖ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、２時間、９３％を含む。

【0133】

一部の実施形態では、構造ＩＩＩに関する合成スキームは、図３に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）Ｆｍｏｃ－９－アミノ－４，７－ジオキサノナン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、６７％；（ｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、３時間、８９％を含む。

【0134】

一部の実施形態では、構造ＩＶに関する合成スキームは、図４に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＣＭ、０℃から室温、２０時間、９６％；（ｉｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、室温、１．５時間、８８％；（ｉｉｉ）Ｆｍｏｃ－９－アミノ－４，７－ジオキサノナン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、８６％；（ｉｖ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、１時間、８７％を含む。

【0135】

一部の実施形態では、構造Ｖに関する合成スキームは、図５に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）５－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－３－オキサペンタン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、８９％；（ｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、１時間、７４％を含む。

【0136】

一部の実施形態では、構造ＶＩに関する合成スキームは、図６に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）臭化アリル、Ｃｓ２ＣＯ３、ＭｅＣＮ、室温、１時間、９６％；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｉｉｉ）Ｂｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、３時間、８８％；（ｉｖ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｖ）ａ ＤＩＥＡ、ＤＣＭ；ｂ （Ｓ）－２－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ＤＣＭ、室温、２時間、７１％；（ｖｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、７５％；（ｖｉｉ）Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＩＥＡ、ＨＢＴＵ、ＤＣＭ、室温、２時間、４７％；（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ジメドン、ＴＨＦ、６３％を含む。

【0137】

一部の実施形態では、構造ＶＩＩに関する合成スキームは、図７に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）臭化アリル、Ｃｓ_２ＣＯ_３、ＭｅＣＮ、室温、１時間、９６％；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｉｉｉ）Ｂｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、３時間、８８％；（ｉｖ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｖ）ａ ＤＩＥＡ、ＤＣＭ；ｂ （Ｓ）－２－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ＤＣＭ、室温、２時間、７１％；（ｖｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、７５％；（ｖｉｉ）Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＩＥＡ、ＨＢＴＵ、ＤＣＭ、室温、２時間、４７％；（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ジメドン、ＴＨＦ、６３％を含む。

【0138】

一部の実施形態では、構造ＶＩＩＩに関する合成スキームは、図８に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｈ－Ｇｌｙ－ＯＡｌｌ＊ＨＣｌ、ＤＣＭ、０℃から室温、２．５時間、７７％；（ｉｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、室温、２．５時間；（ｉｉｉ）（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）（フェニル）メチルピバレート、ＤＭＦ、室温、４時間、２ステップにわたって５４％；（ｉｖ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、フェニルシラン、ＤＣＭ、室温、０．５時間；（ｖ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｈ_２Ｎ－ＰＥＧ５－ＣＯＯＡｌｌ＊ＴＦＡ塩、ＤＭＦ、０℃から室温、４時間；（ｖｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、フェニルシラン、ＤＣＭ、室温、０．５時間を含む。

【0139】

一部の実施形態では、構造ＩＸおよびＸに関する合成スキームは、図９に示す通りであり、例示的な反応条件は、（ｉ）ＬｉＨＭＤＳ、Ｆｍｏｃ－Ｃｌ、ＴＨＦ、－７８℃；（ｉｉ）ｎ－ＢｕＬｉ、ＴＭＳＣＨＮ_２、ＴＨＦ、－１１６から－７８℃；（ｉｉｉ）ピペリジン、ＤＭＦ、室温；（ｉｖ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、ＰｈＳｉＨ_３、ＤＣＭ、０℃；（ｖ）ＨＡＴＵ、ＤＣＭ、ＤＩＥＡ、０℃；（ｖｉ）ピペリジン、ＤＭＦ、室温；（ｖｉｉ）Ｃ_８Ｈ_１７ＯＨ、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、室温；（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ＰｈＳｉＨ_３、ＤＣＭ、室温；（ｉｘ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＣＭ、０℃；（ｘ）ピペリジン、ＤＭＦ、室温；（ｘｉ）ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＤＩＥＡ、ＴＨＦ、室温を含む。

【0140】

Ｂ．デンドリマーを作製する方法
１つまたは複数のＤＯＮアナログと複合体化されたデンドリマーは、さまざまな化学反応ステップを介して調製してもよい。デンドリマーは、構築の全ての段階においてその構造を制御するのを可能にする方法に従って通常合成される。樹状構造は、発散的なまたは収束的な２つの主要な異なるアプローチによって主に合成される。

【0141】

一部の実施形態では、デンドリマーは発散的な方法を使用して調製され、そこではデンドリマーが多官能性コアから組み立てられ、それが一連の反応、通常はマイケル反応によって外側へ延長される。戦略は、反応性基および保護基を有するモノマー分子と多官能性コア部分とのカップリングを伴い、これがコア周囲への世代の段階的な付加につながり、続いて保護基が除去される。例えば、ＰＡＭＡＭ－ＮＨ_２デンドリマーは、Ｎ－（２－アミノエチル）アクリルアミドモノマーをアンモニアコアへカップリングさせることによって最初に合成される。

【0142】

他の実施形態では、デンドリマーは、収束的な方法を使用して調製され、そこではデンドリマーが、最終的に球の表面に位置する小分子から構築され、反応は内側に進行し、内側に構築し、最終的にはコアに結合させる。

【0143】

デンドリマーを調製するための多くの他の合成経路、例えば、直交性アプローチ、加速アプローチ、２段階の収束的な方法もしくはハイパーコアアプローチ、ハイパーモノマー方法もしくは分岐モノマーアプローチ、二重指数法；直交性カップリング法または２ステップアプローチ、２モノマーアプローチ、ＡＢ_２－ＣＤ_２アプローチが存在する。

【0144】

一部の実施形態では、デンドリマーのコア、１つもしくは複数の分岐単位、１つもしくは複数のリンカー／スペーサー、および／または１つもしくは複数の表面基は、１つまたは複数の銅アシスト（Ｃｏｐｐｅｒ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ）アジド－アルキン環化付加（ＣｕＡＡＣ）、ディールスアルダー反応、チオール－エンおよびチオール－イン反応、ならびにアジド－アルキン反応を用いたクリックケミストリーを介してさらなる官能基（分岐単位、リンカー／スペーサー、表面基など）、モノマー、および／または薬剤にコンジュゲートするのを可能にするために修飾してもよい（Ａｒｓｅｎｅａｕｌｔ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ． ２０１５ Ｍａｙ ２０；２０（５）：９２６３－９４）。一部の実施形態では、既製のデンドロンを高密度ヒドロキシルポリマーにクリックする。「クリックケミストリー」は、例えば、第１の部分の表面のアルキン部分（またはそれと同等のもの）と、第２の部分上のアジド部分（例えば、トリアジン組成物もしくはそれと同等のもの上に存在する、または任意の活性末端基、例えば、第一級アミン末端基、ヒドロキシル末端基、カルボン酸末端基、チオール末端基など）との間の１，３－双極環化付加反応を介した２つの異なる部分（例えば、コア基および分岐単位；または分岐単位および表面基）のカップリングを伴う。

【0145】

一部の実施形態では、デンドリマー合成は、１つまたは複数の反応、例えばチオール－エンクリック反応、チオール－インクリック反応、ＣｕＡＡＣ、ディールス－アルダークリック反応、アジド－アルキンクリック反応、マイケル付加、エポキシ開環、エステル化、シラン化学、およびこれらの組合せに対して応答する。

【0146】

任意の現存する樹状プラットフォームは、高ヒドロキシル含有部分、例えば、１－チオ－グリセロールまたはペンタエリスリトールをコンジュゲートさせることによって、所望の官能性の、すなわち、高密度の表面ヒドロキシル基を有するデンドリマーを作製するために使用してもよい。例示的な樹状プラットフォーム、例えば、ポリアミドアミン（ＰＡＭＡＭ）、ポリ（プロピレンイミン）（ＰＰＩ）、ポリ－Ｌ－リシン、メラミン、ポリ（エーテルヒドロキシルアミン）（ＰＥＨＡＭ）、ポリ（エステルアミン）（ＰＥＡ）およびポリグリセロールを合成し、研究してもよい。

【0147】

デンドリマーはまた、２つまたはそれを超えるデンドロンを組み合わせることによって調製してもよい。デンドロンは、反応性焦点官能基を有する、デンドリマーのくさび形セクションである。多くのデンドロン足場は市販されている。それらは、２、４、８、１６、３２、および６４個の反応性基をそれぞれ有する、第１、２、３、４、５、および６世代として販売されている。ある特定の実施形態では、１つのタイプの薬剤が１つのタイプのデンドロンに連結され、異なるタイプの薬剤が別のタイプのデンドロンに連結される。次いで、２つのデンドロンが接続されてデンドリマーが形成される。２つのデンドロンは、クリックケミストリー、すなわち、一方のデンドロン上のアジド部分ともう一方のデンドロン上のアルキン部分との間の１，３－双極環化付加反応を介して連結させて、トリアゾールリンカーを形成してもよい。

【0148】

デンドリマーを作製する例示的な方法は、国際特許出願ＷＯ２００９／０４６４４６、ＷＯ２０１５１６８３４７、ＷＯ２０１６０２５７４５、ＷＯ２０１６０２５７４１、ＷＯ２０１９０９４９５２、および米国特許第８，８８９，１０１号に詳述されている。

【0149】

Ｃ．デンドリマー－ＤＯＮアナログ複合体
デンドリマー複合体は、デンドリマー、樹状ポリマーまたはハイパーブランチポリマーにコンジュゲートされたまたは複合体化されたＤＯＮアナログから形成してもよい。例示的なデンドリマー－ＤＯＮアナログ複合体を以下の表１に示す。

【0150】

複合体は、追加の治療剤、予防剤、または診断剤も含んでいてもよい。デンドリマーへの１つまたは複数の薬剤のコンジュゲーションは、当技術分野において公知であり、米国特許出願公開ＵＳ２０１１／００３４４２２号、ＵＳ２０１２／０００３１５５号、およびＵＳ２０１３／０１３６６９７号に詳細に記載されている。

【0151】

一部の実施形態では、１つまたは複数の薬剤は、デンドリマーに共有結合されている。一部の実施形態では、薬剤は、ｉｎ ｖｉｖｏで切断するように設計された連結部分を介してデンドリマーに結合される。連結部分は、加水分解的に、酵素的に、またはこれらの組合せで切断するように設計してもよく、その結果、薬剤のｉｎ ｖｉｖｏでの持続放出が提供される。連結部分の組成と薬剤へのその結合点の両方は、連結部分の切断が薬剤またはその好適なプロドラッグのいずれかを放出するように選択される。連結部分の組成はまた、薬剤の所望の放出速度を考慮して選択してもよい。

【0152】

一部の実施形態では、結合は、ジスルフィド、エステル、エーテル、チオエステル、カルバメート、カルボネート、ヒドラジン、またはアミド結合のうちの１つまたは複数を介して生じる。好ましい実施形態では、結合は、薬剤の所望の放出動態に応じて、薬剤とデンドリマーとの間にエステル結合またはアミド結合を提供する適切なスペーサーを介して生じる。一部の場合では、エステル結合は、薬物の放出可能な形態のために導入される。他の場合では、アミド結合は、薬剤の放出不能な形態のために導入される。

【0153】

連結部分は、一般的に１つまたは複数の有機官能基を含む。好適な有機官能基の例としては、第二級アミド（－ＣＯＮＨ－）、第三級アミド（－ＣＯＮＲ－）、スルホンアミド（－Ｓ（Ｏ）_２－ＮＲ－）、第二級カルバメート（－ＯＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＯ－）、第三級カルバメート（－ＯＣＯＮＲ－；－ＮＲＣＯＯ－）、カルボネート（－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－）、尿素（－ＮＨＣＯＮＨ－；－ＮＲＣＯＮＨ－；－ＮＨＣＯＮＲ－、－ＮＲＣＯＮＲ－）、カルビノール（－ＣＨＯＨ－、－ＣＲＯＨ－）、ジスルフィド基、ヒドラゾン、ヒドラジド、エーテル（－Ｏ－）、およびエステル（－ＣＯＯ－、－ＣＨ_２Ｏ_２Ｃ－、ＣＨＲＯ_２Ｃ－）が挙げられ、ここで、Ｒは、アルキル基、アリール基、または複素環式基である。一般的に、連結部分内の１つまたは複数の有機官能基のアイデンティティーは、薬剤の所望の放出速度を考慮して選択される。さらに、１つまたは複数の有機官能基は、薬剤のデンドリマーへの共有結合を促進するように選択してもよい。好ましい実施形態では、結合は、薬剤とデンドリマーとの間にジスルフィド架橋を提供する適切なスペーサーを介して生じる場合がある。デンドリマー複合体は、身体において認められる還元条件下、チオール交換反応によってｉｎ ｖｉｖｏで薬剤の迅速な放出が可能である。

【0154】

ある特定の実施形態では、連結部分は、スペーサー基と組み合わせて、上述の有機官能基のうちの１つまたは複数を含む。スペーサー基は、オリゴマーおよびポリマー鎖を含む原子の任意のアセンブリーから構成されていてもよいが、スペーサー基における原子の合計数は、好ましくは３から２００原子の間、より好ましくは３から１５０原子の間、より好ましくは３から１００原子の間、最も好ましくは３から５０原子の間である。好適なスペーサー基の例としては、アルキル基、ヘテロアルキル基、アルキルアリール基、オリゴ－およびポリエチレングリコール鎖、ならびにオリゴ－およびポリ（アミノ酸）鎖が挙げられる。スペーサー基の変形形態によって、ｉｎ ｖｉｖｏでの薬剤の放出はさらに制御される。連結部分がスペーサー基を含む実施形態では、１つまたは複数の有機官能基は、スペーサー基を抗炎症剤とデンドリマーの両方に接続するために一般的に使用することになる。

【0155】

薬剤をデンドリマーに共有結合により付加するのに有用である反応および戦略は、当技術分野において公知である。例えば、Ｍａｒｃｈ， “Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，” ５^ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ２００１， Ｗｉｌｅｙ－Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ， “Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，” １９９６， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｕ．Ｓ．Ａを参照されたい。所与の薬剤の共有結合的な付加に適切な方法は、所望の連結部分ならびに薬剤およびデンドリマーの構造を考慮して選択してもよく、総じて官能基の適合性、保護基の戦略、および不安定な結合の存在に関連する。

【0156】

最適な薬物担持は、薬物の選択、デンドリマーの構造およびサイズ、ならびに処置されることになる組織を含む多くの因子に必然的に依存することになる。一部の実施形態では、１つまたは複数の薬剤は、約０．０１重量％から約４５重量％、好ましくは約０．１重量％から約３０重量％、約０．１重量％から約２０重量％、約０．１重量％から約１０重量％、約１重量％から約１０重量％、約１重量％から約５重量％、約３重量％から約２０重量％、および約３重量％から約１０重量％の濃度で、デンドリマーにカプセル化、会合、および／またはコンジュゲートされている。しかし、任意の所与の薬物、デンドリマー、および標的部位に最適な薬物担持は、記載済みのものなどの常用の方法によって同定することができる。

【0157】

一部の実施形態では、薬剤および／またはリンカーのコンジュゲートは、１つまたは複数の表面および／または内部基を介して生じる。したがって、一部の実施形態では、薬剤／リンカーのコンジュゲートは、コンジュゲート前のデンドリマーの利用可能な全ての表面官能基、好ましくは、ヒドロキシル基の約１％、２％、３％、４％、または５％を介して生じる。他の実施形態では、薬剤／リンカーのコンジュゲートは、コンジュゲート化の前のデンドリマーの利用可能な全ての表面官能基の５％未満、１０％未満、１５％未満、２０％未満、２５％未満、３０％未満、３５％未満、４０％未満、４５％未満、５０％未満、５５％未満、６０％未満、６５％未満、７０％未満、７５％未満で生じる。好ましい実施形態では、デンドリマー複合体は、特異的な細胞タイプを標的とするための有効量の表面官能基を保持し、同時に疾患または障害を処置、予防および／またはイメージングするのに有効量の薬剤にコンジュゲートする。

【0158】

Ｖ．使用法
デンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体組成物を使用する方法が記載されている。一部の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体は、がんを処置するために使用される。他の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体は、ＣＮＳおよび免疫障害を処置するために使用される。方法は、典型的には、グルタミン代謝をモジュレートするために、例えば、抗腫瘍応答を高めるために、デンドリマーおよび１つまたは複数の活性剤を含む有効量の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。方法は、調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達と関連する１つまたは複数の状態および／または疾患を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、方法は、腫瘍成長を有効に減少させるために使用される。方法は、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）の１つまたは複数のアナログと複合体化された、コンジュゲートされた、またはカプセル化されたデンドリマーを含む有効量の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。好ましい実施形態では、方法は、構造Ｉ～ＸＩＩで示す１つもしくは複数のＤＯＮアナログもしくは一般式Ａ～Ｃのアナログ、またはこれらの薬学的に許容される塩と複合体化されたもしくはそれにコンジュゲートされたデンドリマーを含む有効量の組成物を対象に投与することを含む。

【0159】

Ａ．処置法
デンドリマーおよびＤＯＮアナログの組成物ならびにその製剤は、感染症、炎症、および／またはがんと関連する障害、特にＣＮＳにおける調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達と関連するものを処置するために投与してもよい。組成物は、増殖性疾患を含む他の疾患、障害および損傷を処置するため、ならびに神経が疾患または障害において役割を果たす他の組織を処置するためにも使用してもよい。組成物および方法は、予防的使用にも好適である。

【0160】

典型的には、デンドリマーと６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）の１つまたは複数のアナログとの組合せを含む有効量のデンドリマー複合体は、それを必要とする個体に投与される。デンドリマーは、標的化剤も含んでいてもよいが、実施例において実証されるように、これらは脳における損傷または罹患した組織への送達には必要とされない。

【0161】

対象に投与するデンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体の量は、対照、例えばデンドリマーを有さない活性剤で処置された対象と比較して、処置されることになる疾患または障害の１つまたは複数の臨床的または分子的症状を減少、予防、そうでなければ緩和するような有効量を送達するように選択する。

【0162】

一部の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体は、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数の罹患または損傷した組織と関連する１つまたは複数の標的細胞においてグルタミナーゼ活性を低下させおよび／またはグルタメート放出を減少させるために有効な量で対象に投与される。好ましい実施形態では、組成物は、活性化ミクログリア、特に、神経学的、腫瘍学的、および免疫障害のうちの１つまたは複数の罹患または損傷した組織と関連するものにおいてグルタミナーゼ活性を低下させおよび／またはグルタメート放出を減少させるために有効な量で投与される。

【0163】

Ｂ．処置されることになる状態
デンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体の組成物は、調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達が病原性であると推定される、神経学的、腫瘍学的、および／または免疫性の疾患、状態、および障害のうちの１つまたは複数の処置に好適である。好ましい実施形態では、神経学的、腫瘍学的、および免疫性の疾患、状態、および障害のうちの１つまたは複数は、ミクログリアおよびアストロサイトの病理学的活性化とさらに関連する。これらとしては、これらに限定されるものではないが、肺、結腸直腸、脳、および膵臓のがん、抑うつ、認知欠損、虚血、神経炎症、アルツハイマー病、多発性硬化症、結核、ループス、関節リウマチ、ならびにウイルス感染が挙げられる。

【0164】

ミクログリアは、脳および脊髄全体にわたって存在するある種の神経膠細胞（グリア細胞）である。ミクログリアは、脳内に認められる全細胞の１０～１５％を占めている。ミクログリアは、微生物に対する一次応答、神経炎症、ホメオスタシス、および組織再生に関与し、ならびに神経変性疾患の病態形成に寄与している。研究によって、ミクログリアの多様性、多機能性、およびそのグルタメートとの関連がこれらの疾患におけるその役割を決定するために重要であることが示されている。

【0165】

常在マクロファージ細胞として、これらは中枢神経系（ＣＮＳ）における活性免疫防御の第１の主要な形態として作用する。ミクログリアは、ＣＮＳ損傷後に重要な役割を果たし、傷害のタイミングおよびタイプに基づいて防御効果と有害効果の両方を有する場合がある（Ｋｒｅｕｔｚｂｅｒｇ， Ｇ． Ｗ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， １９， ３１２ （１９９６）；Ｗａｔａｎａｂｅ， Ｈ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ２８９， ５３ （２０００）；Ｐｏｌａｚｚｉ， Ｅ．， ｅｔ ａｌ．， Ｇｌｉａ， ３６， ２７１ （２００１）；Ｍａｌｌａｒｄ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ７５， ２３４ （２０１４）；Ｆａｕｓｔｉｎｏ， Ｊ． Ｖ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ： Ｔｈｅ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， ３１， １２９９２ （２０１１）；Ｔａｂａｓ， Ｉ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ３３９， １６６ （２０１３）；およびＡｇｕｚｚｉ， Ａ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ３３９， １５６ （２０１３））。ミクログリアの機能における変化は、正常なニューロン発達およびシナプス刈込みにも影響を与える（Ｌａｗｓｏｎ， Ｌ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， ３９， １５１ （１９９０）；Ｇｉｕｌｉａｎ， Ｄ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ： Ｔｈｅ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， １３， ２９ （１９９３）；Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ， Ｔ． Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ： Ｔｈｅ Ｏｆｆｉｃｉａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｆｏｒ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， １８， ７０４７ （１９９８）；Ｚｉｅｔｌｏｗ， Ｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， １１， １６５７ （１９９９）；およびＰａｏｌｉｃｅｌｌｉ， Ｒ． Ｃ．， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ３３３， １４５６ （２０１１））。ミクログリアは、枝状構造からアメーバ状構造へ形態が顕著に変化し、損傷後に増殖する。結果として生じた神経炎症が損傷部位で血液脳関門を破壊し、急性および慢性のニューロン細胞死および希突起膠細胞死をもたらす。したがって、炎症促進性のミクログリアを標的とすることは、強力で有効な治療戦略のはずである。神経炎症性疾患において損傷したＢＢＢは、薬物担持ナノ粒子を脳に輸送するために利用することができる。

【0166】

一部の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログ複合体組成物は、関連する毒性を一切伴わずに、病原性調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達を有する細胞／組織を処置するために有効な量で投与される。好ましい実施形態では、デンドリマー複合体組成物は、関連する毒性を一切伴わずに、ミクログリア介在性病理を処置することを必要とする対象におけるミクログリア介在性病理を処置するために有効な量で投与される。さらなる好ましい実施形態では、デンドリマー複合体組成物は、関連する毒性を一切伴わずに、活性化ミクログリアの細胞における病原性調節不全のグルタミン依存性経路および／またはグルタメート伝達を処置するために有効な量で投与される。

【0167】

一部の実施形態では、処置されることになる対象はヒトである。一部の実施形態では、処置されることになる対象は小児または乳児である。全ての方法は、処置を必要とする対象、または組成物の投与から利益を得るであろう対象を識別し、選択するステップを含んでいてもよい。

【0168】

１．がん
一部の実施形態では、デンドリマーおよびＤＯＮアナログの組成物ならびにその製剤は、それを必要とする対象におけるがんを処置するための方法において使用される。がんを処置することを必要とする対象におけるがんを処置するための方法であって、がんを処置するために、例えば、がんの１つまたは複数の症状を減少させるかまたは予防するために、治療有効量のデンドリマーおよびＤＯＮアナログを対象に投与することを含む方法。

【0169】

患者におけるがんとは、がんをもたらす細胞の典型的な特性、例えば、制御されない増殖、特化した機能の損失、不死性、顕著な転移能、抗アポトーシス活性における顕著な増加、急速な成長および増殖速度、ならびにある特定の特徴的な形態および細胞マーカーを有する細胞の存在を指す。一部の環境では、がん細胞は腫瘍の形態であることになり；このような細胞は、動物体内に局所的に存在する場合もあり、独立した細胞、例えば白血病細胞として血流内を循環する場合もある。腫瘍とは、悪性か良性かにかかわらず、全ての新生物細胞の成長および増殖、ならびに全ての前がん性およびがん性の細胞および組織を指す。固形腫瘍は一般的に、嚢胞または液体領域を含有しない組織の異常な塊である。固形腫瘍は、非限定的な例として、脳、結腸、乳房、前立腺、肝臓、腎臓、肺、食道、頭頸部、卵巣、子宮頚部、胃、結腸、直腸、膀胱、子宮、精巣、および膵臓に存在する場合がある。一部の実施形態では、固形腫瘍がここで開示される方法で処置された後、固形腫瘍は退縮するかまたはその成長が遅くなるかもしくは静止する。他の実施形態では、固形腫瘍は悪性である。一部の実施形態では、がんはステージ０のがんを含む。一部の実施形態では、がんはステージＩのがんを含む。一部の実施形態では、がんはステージＩＩのがんを含む。一部の実施形態では、がんはステージＩＩＩのがんを含む。一部の実施形態では、がんはステージＩＶのがんを含む。一部の実施形態では、がんは、難治性および／または転移性である。例えば、がんは、照射療法、化学療法を用いた処置または免疫療法を用いた単独療法に対して抵抗性であってもよい。がんとしては、限定するものではないが、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、進行性軟部組織肉腫、脳がん、転移性または侵襲性乳がん、乳癌、気管支原性癌、絨毛癌、慢性骨髄性白血病、結腸癌、結腸直腸癌、ユーイング肉腫、消化管癌、神経膠腫、多形神経膠芽腫、頭頸部扁平上皮細胞癌、肝細胞癌、ホジキン病、頭蓋内上衣芽腫、大腸がん、白血病、肝臓がん、肺癌、ルイス肺癌、リンパ腫、悪性線維性組織球腫、乳腺腫瘍、黒色腫、中皮腫、神経芽腫、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、橋腫瘍、閉経前乳がん、前立腺がん、横紋筋肉腫、細網細胞肉腫、肉腫、小細胞肺がん、固形腫瘍、胃がん、精巣がん、および子宮癌を含む新たに診断されたかまたは再発性のがんがある。一部の実施形態では、がんは急性白血病である。一部の実施形態では、がんは急性リンパ芽球性白血病である。一部の実施形態では、がんは急性骨髄性白血病である。一部の実施形態では、がんは進行性軟部組織肉腫である。一部の実施形態では、がんは脳がんである。一部の実施形態では、がんは乳がん（例えば、転移性または侵襲性乳がん）である。一部の実施形態では、がんは乳癌である。一部の実施形態では、がんは気管支原性癌である。一部の実施形態では、がんは絨毛癌である。一部の実施形態では、がんは慢性骨髄性白血病である。一部の実施形態では、がんは結腸癌（例えば、腺癌）である。一部の実施形態では、がんは結腸直腸がん（例えば、結腸直腸癌）である。一部の実施形態では、がんはユーイング肉腫である。一部の実施形態では、がんは消化管癌である。一部の実施形態では、がんは神経膠腫である。一部の実施形態では、がんは多形神経膠芽腫である。一部の実施形態では、がんは頭頸部扁平上皮細胞癌である。一部の実施形態では、がんは肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんはホジキン病である。一部の実施形態では、がんは頭蓋内上衣芽腫である。一部の実施形態では、がんは大腸がんである。一部の実施形態では、がんは白血病である。一部の実施形態では、がんは肝臓がんである。一部の実施形態では、がんは肺がん（例えば、肺癌）である。一部の実施形態では、がんはルイス肺癌である。一部の実施形態では、がんはリンパ腫である。一部の実施形態では、がんは悪性線維性組織球腫である。一部の実施形態では、がんとしては乳腺腫瘍が挙げられる。一部の実施形態では、がんは黒色腫である。一部の実施形態では、がんは中皮腫である。一部の実施形態では、がんは神経芽腫である。一部の実施形態では、がんは骨肉腫である。一部の実施形態では、がんは卵巣がんである。一部の実施形態では、がんは膵臓がんである。一部の実施形態では、がんとしては橋腫瘍が挙げられる。一部の実施形態では、がんは閉経前乳がんである。一部の実施形態では、がんは前立腺がんである。一部の実施形態では、がんは横紋筋肉腫である。一部の実施形態では、がんは細網細胞肉腫である。一部の実施形態では、がんは肉腫である。一部の実施形態では、がんは小細胞肺がんである。一部の実施形態では、がんとしては固形腫瘍が挙げられる。一部の実施形態では、がんは胃がんである。一部の実施形態では、がんは精巣がんである。一部の実施形態では、がんは子宮癌である。

【0170】

組成物によって予防する、処置する、他の点で減少させることができるがんとしては、粘液肉腫、骨形成肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、中皮腫、滑膜腫、血管芽細胞腫、上皮癌、嚢胞腺癌、気管支原性癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、および胃がんが挙げられる（このような障害の総説に関しては、Ｆｉｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９８５， Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ２ｄ Ｅｄ．， Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ａｎｄ Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｉｎｆｏｒｍｅｄ Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ： Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｂｏｏｋ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ， Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ， ａｎｄ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ， Ｖｉｋｉｎｇ Ｐｅｎｇｕｉｎ， Ｐｅｎｇｕｉｎ Ｂｏｏｋｓ Ｕ．Ｓ．Ａ．， Ｉｎｃ．， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａを参照のこと）。

【0171】

記載されているような方法および組成物は、予防的処置と治療的処置の両方に有用である。

【0172】

治療的処置は、がんと診断された後、記載されているような治療有効量の組成物またはこれらの薬学的に許容される塩を対象に投与することを伴う。

【0173】

さらなる実施形態では、組成物は、予防的使用、すなわち、発症における予防、遅延、発症後の徴候または症状の増悪における減少、根絶、または遅延、および再発の予防のために使用される。予防的使用に関しては、記載されているような治療有効量の化合物および組成物またはこれらの薬学的に許容される塩は、発症より前（例えば、がんの明らかな徴候の前）、初期の発症の間（例えば、がんの最初の徴候および症状の際）、またはがんの確立された発生後に対象に投与される。予防的投与は、症状が現れる前の数日から数年間行ってもよい。予防的投与は、例えば、前がん性の病変を示す対象、早期悪性疾患と診断されたもの、および特定のがんに対する感受性（例えば、家系的、人種的、および／または職業的なもの）を有するサブグループの化学的予防処置に使用してもよい。

【0174】

一部の実施形態では、処置されることになる対象は、１つまたは複数の固形腫瘍を有するものである。固形腫瘍は、嚢胞または液体領域を通常含有しない組織の異常な塊である。固形腫瘍は、良性（がんではない）であっても、悪性（がん）であってもよい。固形腫瘍の例は、肉腫、癌腫、およびリンパ腫である。好ましい実施形態では、組成物および方法は、皮膚、肺、肝臓、膵臓、脳、腎臓、乳房、前立腺、結腸および直腸、膀胱などのがんの１つまたは複数の症状の処置において有効である。さらなる実施形態では、腫瘍は、限局性リンパ腫または濾胞性リンパ腫である。

【0175】

２．神経学的および神経変性疾患
デンドリマー－ＤＯＮアナログ組成物およびその製剤は、１つまたは複数の神経学的および神経変性疾患を診断および／または処置するために使用することができる。組成物および方法は、スフィンゴミエリンを含むスフィンゴ脂質の欠損した代謝および機能と関連する１つまたは複数の神経学的または神経変性疾患の処置に特に適している。一部の実施形態では、疾患または障害は、これらに限定されないが、一部の精神障害（例えば、抑うつ、統合失調症（ＳＺ）、アルコール使用障害、およびモルヒネ抗侵害受容性の耐性）および神経学的障害（例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ））から選択される。一実施形態では、デンドリマー複合体は、アルツハイマー病（ＡＤ）または認知症を処置するために使用される。

【0176】

神経変性疾患は、神経および行動的機能に影響を与える神経系の慢性進行性障害であり、異なった組織病理学的および臨床的な症候群をもたらす生化学的変化を伴う（Ｈａｒｄｙ Ｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ． １９９８；２８２：１０７５－９）。細胞分解機序に対して耐性がある異常なタンパク質が細胞内に蓄積する。神経損失のパターンは、１つのグループが影響を受けているのに対し、他方のグループは無傷なままという意味で、選択的である。疾患に関する明らかな誘発事象は存在しないことが多い。神経変性として古典的に記載される疾患は、アルツハイマー病、ハンチントン病、およびパーキンソン病である。

【0177】

活性化ミクログリアおよびアストロサイトによって介在される神経炎症は、さまざまな神経障害の主要な特質であり、潜在的な治療標的となる（Ｈａｇｂｅｒｇ， Ｈ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２０１２， ７１， ４４４；Ｖａｒｇａｓ， ＤＬ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２００５， ５７， ６７；およびＰａｒｄｏ， ＣＡ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２００５， １７， ４８５）。複数の科学報告書では、これらの細胞を標的とすることによって初期段階で神経炎症を緩和すると、疾患の発症を遅延させることができ、ひいては処置に関して、より長期の治療域を提供できることが示唆されている（Ｄｏｍｍｅｒｇｕｅｓ， ＭＡ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００３， １２１， ６１９；Ｐｅｒｒｙ， ＶＨ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ ２０１０， ６， １９３；Ｋａｎｎａｎ， Ｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉ． Ｔｒａｎｓｌ． Ｍｅｄ． ２０１２， ４， １３０ｒａ４６；およびＢｌｏｃｋ， ＭＬ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２００７， ８， ５７）。血液脳関門を通過して治療薬を送達することは困難な課題である。神経炎症は、血液脳関門（ＢＢＢ）の破壊をもたらす。神経炎症性障害において損傷したＢＢＢは、薬物担持ナノ粒子を脳全体にわたって輸送するために利用することができる（Ｓｔｏｌｐ， ＨＢ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ２０１１， ２０１１， １０；およびＡｈｉｓｈａｌｉ， Ｂ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００５， １１５， １５１）。

【0178】

組成物および方法は、神経疾患もしくは障害または神経変性疾患もしくは障害、または中枢神経系障害を処置する活性剤を送達するためにも使用してもよい。好ましい実施形態では、組成物および方法は、神経疾患もしくは障害または神経変性疾患もしくは障害、または中枢神経系障害と関連する神経炎症の処置および／または緩和において有効である。方法は、典型的には、認知を高めるかまたは認知の低下を減少させる、認知機能を高めるかまたは認知機能低下を減少させる、記憶を高めるかまたは記憶の低下を減少させる、学習能力もしくは容量（ｃａｐａｃｉｔｙ）を高めるかまたは学習能力もしくは容量の低下を減少させる、あるいはこれらの組合せのために、有効量の組成物を対象に投与することを含む。

【0179】

神経変性とは、ニューロン死を含む、ニューロンの構造または機能の進行性の損失を指す。例えば、組成物および方法は、疾患または障害、例えば、パーキンソン病（ＰＤ）およびＰＤ関連疾患、ハンチントン病（ＨＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）および他の認知症、プリオン疾患、例えばクロイツフェルトヤコブ疾患、大脳皮質基底核変性症、前頭側頭型認知症、ＨＩＶ関連認知機能障害、軽度認知機能障害、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、脊髄小脳失調（ＳＣＡ）、脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）、フリードライヒ運動失調症、レビー小体疾患、アルパーズ病、バッテン病、脳－眼－顔面－骨格症候群、大脳皮質基底核変性症、ゲルストマン－シュトロイスラー－シャインカー疾患、クールー、リー病、単肢性筋萎縮症（Ｍｏｎｏｍｅｌｉｃ Ａｍｙｏｔｒｏｐｈｙ）、多系統萎縮症、起立性低血圧を伴う多系統萎縮症（シャイドレーガー症候群）、多発性硬化症（ＭＳ）、脳鉄蓄積を伴う神経変性症、眼球クローヌスミオクローヌス、後部皮質萎縮症（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ Ｃｏｒｔｉｃａｌ Ａｔｒｏｐｈｙ）、原発性進行型失語症、進行性核上性麻痺、血管性認知症、進行性多病巣性白質脳症、レビー小体型認知症（ＤＬＢ）、ラクナ症候群（Ｌａｃｕｎａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、水頭症、ウェルニッケコルサコフ症候群、脳炎後認知症、がんおよび化学療法関連認知機能障害および認知症、ならびに抑うつ誘発性認知症および仮性認知症を有する対象を処置するために使用してもよい。一実施形態では、神経疾患または障害は、ストレス誘発性気分障害、特に抑うつである。

【0180】

さらなる実施形態では、疾患または障害は、これらに限定されないが、注射局限性アミロイドーシス、脳アミロイド血管症、ミオパチー、ニューロパチー、脳外傷、前頭側頭型認知症、ピック病、多発性硬化症、プリオン障害、２型糖尿病、致死性家族性不眠症、心不整脈、孤立性心房アミロイドーシス（ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｔｒｉａｌ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチ、家族性アミロイド多発性ニューロパチー、遺伝性非ニューロパチー性全身性アミロイドーシス、フィンランド型アミロイドーシス（Ｆｉｎｎｉｓｈ ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ）、格子状角膜ジストロフィー、全身性ＡＬアミロイドーシス、およびダウン症候群から選択される。好ましい実施形態では、疾患または障害は、アルツハイマー病または認知症である。

【0181】

特定の神経学的因子における改善をアセスメントするための基準は、認知的技能、運動技能、記憶容量などを評価する方法、ならびに中枢神経系の選択された領域における物理的変化をアセスメントするための方法、例えば、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）およびコンピューター断層撮影スキャン（ＣＴ）または他のイメージング法を含む。このような評価法は、医学、神経学、心理学などの分野において周知されており、特定の神経機能障害の状態を診断するために適切に選択することができる。アルツハイマー病における変化または関連する神経学的変化をアセスメントするために、選択されたアセスメントまたは評価試験、または試験群は、デンドリマー組成物の投与を開始するより前に行われる。この最初のアセスメント後、デンドリマー組成物を投与するための処置法が開始され、さまざまな時間間隔にわたって継続される。神経学的欠陥機能障害の最初のアセスメントに続く選択された時間間隔で、選択された神経学的基準における変化または改善を再アセスメントするために、同じアセスメントまたは評価試験が再び使用される。

【0182】

３．免疫障害
一部の実施形態では、１つまたは複数のＤＯＮアナログとコンジュゲートまたは複合体化されているデンドリマーの組成物は、免疫障害を有する対象に投与される。例示的な免疫障害としては、自己免疫性または炎症性の疾患または障害が挙げられる。自己免疫疾患は、身体の天然の防御システムが身体自体の細胞と外来性の細胞との間を有効に区別することができず、身体が正常な細胞を誤って攻撃することになる場合に生じる。身体の広範囲な部分に影響を与える８０種を超えるタイプの自己免疫疾患が存在する。一般的な自己免疫疾患としては、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、１型糖尿病、炎症性腸疾患、および甲状腺疾患が挙げられる。

【0183】

一部の実施形態では、組成物は、自己免疫性または炎症性の疾患または障害、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患、自己免疫性リンパ球増殖性症候群（ａｌｐｓ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、心ミオパチー、セリアックスプルー－皮膚炎、慢性疲労症候群免疫欠乏症候群（ｃｈｒｏｎｉｃ ｆａｔｉｇｕｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ， ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパチー、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素疾患、クレスト症候群、クローン病、ドゴー病、皮膚筋炎、若年性皮膚筋炎、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、グレーブス病、ギランバレー、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、Ｉｇａネフロパシー、インスリン依存性糖尿病（Ｉ型）、若年性関節炎、メニエール病、混合性結合組織疾患、多発性硬化症、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、悪性貧血、結節性多発動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群（ｐｏｌｙｇｌａｎｃｕｌａｒ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、スティフマン症候群、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨細胞動脈炎、潰瘍性結腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、ならびにウェゲナー肉芽腫症を処置するためにも使用してもよい。

【0184】

一部の実施形態では、デンドリマー組成物は、それを必要とする対象において望ましい免疫学的転帰を誘発するのに有効な量および投薬レジメンで投与される。組成物の投与は、免疫学的障害を有する個体における免疫環境を改善することまたはバランスを再びとることにつながる。

【0185】

４．ウイルス感染
一部の実施形態では、デンドリマー組成物およびその製剤は、１つまたは複数のウイルス感染を処置するための方法において使用される。一部の実施形態では、デンドリマー組成物およびその製剤は、特に、ウイルスによって活性化ミクログリアおよびアストロサイトが標的とされた／感染した場合、ウイルス複製、ウイルス負荷、および／またはウイルス放出を減少させるかまたは阻害するために使用される。

【0186】

一部の実施形態では、デンドリマー－ＤＯＮアナログ組成物は、ウイルス特異的免疫応答がニューロン損傷のメディエーターとして関与するウイルス感染症に対する炎症応答を減少させることにおいて有効である。例えば、組成物は、流入領域リンパ節におけるリンパ球増殖の減少、ＣＮＳへの白血球浸潤の減少、炎症性サイトカインレベルの低下において有効であり、これは、上昇した炎症応答、例えばサイトカインストームと関連する１つまたは複数の症状を減少させる。

【0187】

Ｃ．投薬量および有効量
投薬量および投薬レジメンは、障害もしくは損傷の重症度および位置、ならびに／または投与方法に依存し、当業者に公知である。神経疾患の処置において使用される治療有効量のデンドリマー組成物は、典型的には、神経疾患の１つまたは複数の症状を減少させるかまたは緩和するのに十分である。好ましくは、薬剤は、罹患したまたは標的組織内に存在しないかもしくはそれらと関連していない健常細胞の活性もしくは量を標的としないかもしくはモジュレートしないか、またはＣＮＳにおける活性化ミクログリア細胞を含む標的細胞と比較して低いレベルで標的とするかもしくはモジュレートする。このようにして、組成物と関連する副生成物および他の副作用は減少される。組成物の投与は、神経疾患、神経損傷、または加齢関連のニューロンの低下または機能障害を有する個体における神経機能の改善または増強をもたらす。一部のｉｎ ｖｉｖｏでのアプローチでは、デンドリマー複合体は、新規のニューロンの生成につながる神経有糸分裂を刺激または誘発し、神経原性効果を提供するための治療有効量で対象に投与される。個体のニューロン、神経突起および神経ネットワークの悪化、機能障害、または死滅を予防し、減少させ、または終息させ、神経保護効果を提供するための有効量の組成物も提供される。

【0188】

がんの処置において使用される治療有効量のデンドリマー組成物は、典型的には、がんの１つまたは複数の症状を減少させるかまたは緩和するのに十分である。がんの症状は、物理的なもの、例えば腫瘍負荷、または生物学的なもの、例えばがん細胞の増殖であってもよい。したがって、デンドリマー複合体の量は、例えば、腫瘍細胞を殺滅するかまたは腫瘍細胞の増殖もしくは転移を阻害するのに有効なものであってもよい。好ましくは、１つまたは複数の活性剤、例えば、免疫モジュレート剤を含むデンドリマー組成物は、腫瘍組織の中および周囲の細胞、例えば、腫瘍組織と関連するがん性細胞または免疫細胞（例えば、Ｍ２マクロファージ）に優先的に送達される。好ましくは、活性剤は、がん組織内に存在しないかもしくはそれらと関連していない健常細胞の活性もしくは量を標的としないかもしくはモジュレートしないか、またはがんまたはがん関連細胞と比較して低いレベルで標的とするかもしくはモジュレートする。このようにして、組成物と関連する副産物および他の副作用は減少され、好ましくは、がん細胞死に直接的または間接的につながる。一部の実施形態では、活性剤は、がん細胞の遊走、血管新生、免疫回避、放射線抵抗性、またはこれらの組合せを直接的または間接的に減少させる。一部の実施形態では、活性剤は、がん細胞自体、またはがん細胞に対する免疫応答の抑制を減少させるかもしくは活性化を誘発するその微小環境における変化を直接的または間接的に誘発する。一部のｉｎ ｖｉｖｏでのアプローチでは、デンドリマー複合体は、腫瘍サイズを減少させるための治療有効量で対象に投与される。一部の実施形態では、有効量の組成物は、がんを寛解させるためおよび／またはがんの寛解を維持するために使用される。がん幹細胞の増殖を減少または停止させるための有効量の組成物も提供される。

【0189】

デンドリマー複合体の実際の有効量は、投与される特定の薬剤、製剤化される特定の組成物、投与様式、および処置される対象の年齢、体重、状態、ならびに投与経路、および疾患または障害を含む因子に従って変更してもよい。組成物の投薬量は、約０．０１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重；約０．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１０ｍｇ／ｋｇ体重；約０．５ｍｇ～約５ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。一般的に、静脈内注射または注入に関しては、投薬量は経口投与用のものより低くてもよい。

【0190】

一般的に、投与のタイミングおよび頻度は、所与の処置または診断スケジュールの有効性と所与の送達システムの副作用とのバランスをとるように調整されることになる。例示的な投薬頻度は、連続注入、単回および複数回投与、例えば１時間ごと、毎日、毎週、毎月または毎年の投薬を含む。

【0191】

組成物は、治療剤の血液レベルの治療上有効な増加を提供するような量で、毎日、週２回、週１回、２週間毎またはそれ未満の頻度で投与され得る。投与が経口経路以外によるものである場合、組成物は、２４時間以内に治療有効用量を生成するように、１時間を超えて、例えば３～１０時間にわたって送達してもよい。あるいは、組成物は、制御放出のために製剤化してもよく、組成物は、週１回、またはそれ未満の頻度のレジメンで繰り返される単回用量として投与される。

【0192】

投薬量は変更してもよく、１日または数日間、単回または複数回用量投与で毎日投与してもよい。ガイダンスは、所与のクラスの医薬品に関する適切な投薬量に関する文献で見出すことができる。最適な投薬スケジュールは、対象または患者の身体における薬物蓄積の測定値から計算することができる。当業者であれば、最適な投薬量、投薬方法論、および反復率（ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ）を容易に決定することができる。最適な投薬量は、個々の医薬組成物の相対的な効力に応じて変化する場合があり、一般的に、動物モデルにおいてｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで有効であることが認められたＥＣ_５０に基づいて推測することができる。

【0193】

一部の実施形態では、レジメンは、治療ラウンド、続いて休薬（例えば、薬物なし）の１つまたは複数のサイクルを含む。休薬は、１、２、３、４、５、６、もしくは７日、または１、２、３、４週、または１、２、３、４、５、もしくは６カ月であってもよい。

【0194】

Ｄ．組合せ治療法および手順
デンドリマーおよびＤＯＮアナログ組成物は、単独でまたは１つもしくは複数の従来の治療法と組み合わせて投与してもよい。好ましい追加の治療剤の例は、所望の疾患、障害または状態を処置するための当技術分野において公知の他の従来の治療法を含む。

【0195】

アルツハイマー病の文脈において、他の治療剤としては、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、タクリン、リバスチグミン、ガランタミンまたはドネペジル）、ベータセクレターゼ阻害剤、例えば、ＪＮＪ－５４８６１９１１、抗体、例えば、アデュカヌマブ、５－ＨＴ２Ａ受容体に関するアゴニスト、例えば、ピマバンセリン、サルグラモスチム、ＡＡＤｖａｃ１、ＣＡＤ１０６、ＣＮＰ５２０、ガンテネルマブ、ソラネズマブ、およびメマンチンのうちの１つまたは複数を挙げることができる。

【0196】

レビー小体型認知症の文脈において、他の治療剤としては、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、例えば、タクリン、リバスチグミン、ガランタミンもしくはドネペジル；Ｎ－メチルｄ－アスパルテート受容体アンタゴニストメマンチン；ドーパミン系治療薬、例えば、レボドパもしくはセレギリン；抗精神病薬、例えば、オランザピンもしくはクロザピン；ＲＥＭ障害治療薬、例えば、クロナゼパム、メラトニン、もしくはクエチアピン；抗抑うつおよび抗不安治療薬、例えば、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（シタロプラム、エスシタロプラム、セルトラリン、パロキセチンなど）、またはセロトニンおよびノルアドレナリン再取り込み阻害剤（ベンラファクシン、ミルタザピン、およびブプロピオン）のうちの１つまたは複数を挙げることができる（例えば、Ｍａｃｉｊａｕｓｋｉｅｎｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｄｉｃｉｎａ （Ｋａｕｎａｓ）， ４８（１）：１－８ （２０１２）を参照のこと）。

【0197】

例示的な神経保護剤も当技術分野において公知であり、例えば、グルタメートアンタゴニスト、抗酸化剤、およびＮＭＤＡ受容体刺激薬を含む。他の神経保護剤および処置としては、カスパーゼ阻害剤、栄養因子、抗タンパク質凝集剤、治療的低体温法、およびエリスロポエチンが挙げられる。

【0198】

神経機能不全を処置するための他の一般的な活性剤としては、運動症状を処置するためのアマンタジンおよび抗コリン作動薬、精神病を処置するためのクロザピン、認知症を処置するためのコリンエステラーゼ阻害剤、ならびに日中の眠気を処置するためのモダフィニルがある。

【0199】

１．がんの処置
一部の実施形態では、１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログとコンジュゲートまたは複合体化されているデンドリマーの組成物は、１つまたは複数の従来の治療法、例えば、従来のがん療法と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、従来の治療法は、１つまたは複数の追加の活性剤と組み合わせて、組成物のうちの１つまたは複数の投与を含む。組合せ療法は、同じ添加混合物中で一緒にまたは個別の添加混合物中で、活性剤を投与することを含んでいてもよい。したがって、一部の実施形態では、医薬組成物は、２つ、３つまたはより多くの活性剤を含む。このような製剤は、典型的には、腫瘍微小環境を標的とする有効量の免疫調節剤を含む。追加の活性剤（複数可）は、作用の同じまたは異なる機序を有していてもよい。一部の実施形態では、組合せは、がんの処置に対して相加効果をもたらす。一部の実施形態では、組合せは、疾患または障害の処置に対して相加効果を超える効果をもたらす。

【0200】

一部の実施形態では、製剤は、対象への静脈内、皮下、もしくは筋肉内投与用に、または経腸投与用に製剤化される。一部の実施形態では、製剤は、１つまたは複数の追加の治療法または手順を用いた処置より前に、それらとともに、それらより後に、またはそれらと交互に投与される。一部の実施形態では、追加の治療法は、薬物サイクルの間または休薬中に行われ、それは組成物の投薬レジメンの一部である。例えば、一部の実施形態では、追加の治療法または手順は、外科手術、放射線療法、または化学療法である。

【0201】

追加の治療剤としては、従来のがん治療薬、例えば、化学療法剤、サイトカイン、ケモカイン、および放射線療法がある。化学療法薬物の大部分は、アルキル化剤、代謝拮抗薬、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、および他の抗腫瘍剤に分けることができる。これらの薬物は、何らかの方法で細胞分裂またはＤＮＡ合成に影響を与え、機能する。追加の治療薬としては、モノクローナル抗体およびチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、メシル酸イマチニブ（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）またはＧＬＩＶＥＣ（登録商標））が挙げられ、これは、ある特定のタイプのがん（慢性骨髄性白血病、消化管間質腫瘍）における分子異常を直接標的とする。

【0202】

代表的な化学療法剤としては、これらに限定されるものではないが、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンタスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピポドフィロトキシン、エピルビシン、エトポシド、リン酸エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン（ｉｎｎｏｔｅｃａｎ）、ロイコボリン、リポソーム型ドキソルビシン、リポソーム型ダウノルビシン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テニポシド、テガフール－ウラシル、テモゾロマイド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ボリノスタット、タキソール、トリコスタチンＡおよびその誘導体、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））、セツキシマブ、およびリツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）またはＭＡＢＴＨＥＲＡ（登録商標））、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））、ならびにこれらの組合せが挙げられる。代表的なアポトーシス促進剤（ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ａｇｅｎｔ）としては、これらに限定されるものではないが、フルダラビンタウロスポリン、シクロヘキシミド、アクチノマイシンＤ、ラクトシルセラミド、１５ｄ－ＰＧＪ（２）５、およびこれらの組合せがある。

【0203】

一部の実施形態では、組成物および方法は、１つまたは複数の免疫チェックポイントモジュレーター（例えば、ＰＤ－１アンタゴニスト、ＰＤ－１リガンドアンタゴニスト、およびＣＴＬＡ４アンタゴニスト）、養子Ｔ細胞療法、および／またはがんワクチンを使用した、チェックポイントタンパク質、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１軸またはＣＤ２８－ＣＴＬＡ－４軸の構成要素を阻害するような免疫療法より前にまたはそれとともに使用される。免疫療法において使用される例示的な免疫チェックポイントモジュレーターとしては、ペンブロリズマブ（抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、デュルバルマブ（抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ）、ＰＤＲ００１（抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、アテゾリズマブ（抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ）、ニボルマブ（抗ＰＤ１ ｍＡｂ）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ４ ｍＡｂ）、アベルマブ（抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ）、およびＲＧ７８７６（ＣＤ４０アゴニストｍＡｂ）が挙げられる。

【0204】

養子Ｔ細胞療法の方法は当技術分野において公知であり、診療で使用されている。一般的に養子Ｔ細胞療法は、腫瘍特異的Ｔ細胞を単離し、ｅｘ ｖｉｖｏで拡大させて、ワクチン接種単独によって得ることができるものよりも多数のＴ細胞を得ることを伴う。次いで腫瘍特異的Ｔ細胞は、がんを攻撃し、殺滅できるＴ細胞を介して残存腫瘍を制圧する能力を免疫系に与えることを試みるために、がんを有する患者の体内に注入される。養子Ｔ細胞療法のいくつかの形態は、がんを処置するために使用することができ、これらに限定されないが、腫瘍浸潤性リンパ球またはＴＩＬを培養すること；１つの特定のＴ細胞またはクローンを単離し、拡大すること；および腫瘍を認識し、攻撃するように操作されたＴ細胞を使用することを含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、患者の血液から直接採取される。適応性Ｔ細胞がん療法に関するｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞をプライミングおよび活性化する方法は、当技術分野において公知である。例えば、Ｗａｎｇ， ｅｔ ａｌ， Ｂｌｏｏｄ， １０９（１１）：４８６５－４８７２ （２００７）およびＨｅｒｖａｓ－Ｓｔｕｂｂｓ， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １８９（７）：３２９９－３１０ （２０１２）を参照のこと。

【0205】

歴史的に、養子Ｔ細胞療法戦略は、大部分、腫瘍細胞を直接殺滅することができる腫瘍抗原特異的細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の注入に焦点を当ててきた。しかし、ＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｆｈ、Ｔｒｅｇ、およびＴｈ１７を使用することもできる。Ｔｈは、抗原特異的エフェクター細胞を活性化し、自然免疫系の細胞、例えば、マクロファージおよび樹状細胞を動員して、抗原提示（ＡＰＣ）を補助することができ、抗原刺激を受けたＴｈ細胞は、腫瘍抗原特異的ＣＴＬを直接活性化することができる。ＡＰＣを活性化した結果、抗原特異的Ｔｈ_１は、腫瘍における他の抗原に対する免疫を広げるエピトープまたは決定基拡散のイニシエータとして関与している。エピトープ拡散を誘発する能力によって、腫瘍における多くの潜在的な抗原に対する免疫応答が広がり、異種遺伝子型応答を開始する能力に起因してより効率的な腫瘍細胞の殺滅がもたらされ得る。このようにして、養子Ｔ細胞療法は、内因性免疫を刺激するために使用することができる。

【0206】

一部の実施形態では、Ｔ細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ、ＣＡＲ Ｔ細胞、またはＣＡＲＴ）を発現する。人工Ｔ細胞受容体は、特定の特異性を免疫エフェクター細胞にグラフトする操作された受容体である。典型的には、これらの受容体は、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞にグラフトするために使用され、任意の腫瘍関連抗原を事実上標的とするために操作される場合がある。第１世代のＣＡＲは典型的には、内因性ＴＣＲからのシグナルの主な伝達物質であるＣＤ３ζ－鎖からの細胞内ドメインを有していた。第２世代のＣＡＲは、さまざまな共刺激タンパク質受容体（例えば、ＣＤ２８、４１ＢＢ、ＩＣＯＳ）からの細胞内シグナル伝達ドメインをＣＡＲの細胞質尾部に加えて、Ｔ細胞に追加のシグナルを提供し、第３世代のＣＡＲは、複数のシグナル伝達ドメイン、例えば、ＣＤ３ｚ－ＣＤ２８－４１ＢＢまたはＣＤ３ｚ－ＣＤ２８－ＯＸ４０を合わせて有効性をさらに強化する。

【0207】

一部の実施形態では、組成物および方法は、がんワクチン、例えば、樹状細胞がんワクチンより前にまたはそれらとともに使用される。ワクチン接種は典型的には、治療用Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｖｏで誘発するために、抗原（例えば、がん抗原）をアジュバントとともに対象に投与することを含む。一部の実施形態では、がんワクチンは、樹状細胞によって送達された抗原が、がん抗原を提示するようにｅｘ ｖｉｖｏで抗原刺激を受けた樹状細胞がんワクチンである。例としては、前立腺がんを処置するための樹状細胞ベースのワクチンであるＰＲＯＶＥＮＧＥ（登録商標）（シプロイセル－Ｔ）が挙げられる（Ｌｅｄｆｏｒｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ５１９， １７－１８ （０５ Ｍａｒｃｈ ２０１５））。このようなワクチンならびに免疫療法のための他の組成物および方法は、Ｐａｌｕｃｋａ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ， １２， ２６５－２７７ （Ａｐｒｉｌ ２０１２）で総説されている。

【0208】

一部の実施形態では、組成物および方法は、例えば、原発性腫瘍転移の予防において腫瘍の外科的除去より前にまたはそれとともに使用される。一部の実施形態では、組成物および方法は、身体自体の抗腫瘍免疫機能を強化するために使用される。

【0209】

Ｅ．対照
１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログを含むデンドリマー複合体組成物の治療結果は、対照と比較してもよい。好適な対照は当技術分野において公知であり、例えば、非処置の対象、または非処置細胞を含む。典型的な対照は、標的化薬剤の投与の前後の対象の状態または症状の比較である。状態または症状は、生化学的、分子的、生理学的、または病理学的読出し情報であってもよい。例えば、特定の症状、薬理学的、または生理学的指標に対する組成物の効果は、非処置の対象、または処置前の対象の状態と比較してもよい。一部の実施形態では、症状、薬理学的、または生理学的指標は、対象において処置前に測定され、処置開始後１回または複数回再び測定される。一部の実施形態では、対照は、処置されることになる疾患または状態を有していない１つまたは複数の対象（例えば、健常対象）における症状、薬理学的、または生理学的指標の測定に基づいて決定された参照レベルまたは平均である。一部の実施形態では、処置の効果は、当技術分野で公知の従来の処置と比較される。

【0210】

ＶＩ．キット
組成物は、キットとして包装してもよい。キットは、デンドリマー中にカプセル化された、それと会合された、またはそれとコンジュゲートされた１つまたは複数の６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン（ＤＯＮ）アナログを含む組成物の単回用量または複数回用量と、組成物を投与するための取扱説明書とを含んでいてもよい。特に、取扱説明書は、有効量の組成物が、表示された特定の疾患、障害または不良を伴う個体に投与することを指示している。組成物は、特定の処置方法を参照しながら上述のように製剤化してもよく、任意の好都合な様式で包装してもよい。

【0211】

本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することによってさらに理解されるであろう。

【実施例】

【0212】

（実施例１）
グルタミンアンタゴニストに関する合成法
グルタミンアンタゴニストに関する合成法
図１は、化合物Ｉに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）Ｆｍｏｃ－Ｃｌ、ＮａＨＣＯ_３、ジオキサン、０℃、２時間、６７％；（ｉｉ）イソプロピル（Ｓ）－２－アミノ－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート、ジクロロリン酸フェニル、２，４，６－トリメチルピリジン、ＴＨＦ、０℃から室温、５時間、４１％；（ｉｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、２．５時間、７３％。

【0213】

図２は、化合物ＩＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＣＭ、０℃から室温、２０時間、７６％；（ｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、２時間、９３％；（ｉｉｉ）５－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－３－オキサペンタン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、７０％；（ｉｖ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、２時間、９３％。

【0214】

図３は、化合物ＩＩＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）Ｆｍｏｃ－９－アミノ－４，７－ジオキサノナン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、６７％；（ｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、３時間、８９％。

【0215】

図４は、化合物ＩＶに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＣＭ、０℃から室温、２０時間、９６％；（ｉｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、室温、１．５時間、８８％；（ｉｉｉ）Ｆｍｏｃ－９－アミノ－４，７－ジオキサノナン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、８６％；（ｉｖ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、１時間、８７％。

【0216】

図５は、化合物Ｖに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）５－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－３－オキサペンタン酸、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、０℃から室温、１時間、８９％；（ｉｉ）ピペリジン、ＤＣＭ、室温、１時間、７４％。

【0217】

図６は、化合物ＶＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）臭化アリル、Ｃｓ２ＣＯ３、ＭｅＣＮ、室温、１時間、９６％；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｉｉｉ）Ｂｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、３時間、８８％；（ｉｖ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｖ）ａ ＤＩＥＡ、ＤＣＭ；ｂ （Ｓ）－２－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ＤＣＭ、室温、２時間、７１％；（ｖｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、７５％；（ｖｉｉ）Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ、ＤＩＥＡ、ＨＢＴＵ、ＤＣＭ、室温、２時間、４７％；（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ジメドン、ＴＨＦ、６３％。

【0218】

図７は、化合物ＶＩＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）臭化アリル、Ｃｓ２ＣＯ３、ＭｅＣＮ、５０℃、１時間、９６％；（ｉｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｉｉｉ）Ｂｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、３時間、９５％；（ｉｖ）ＴＦＡ、ＤＣＭ；（ｖ）ａ ＤＩＥＡ、ＤＣＭ；ｂ （Ｓ）－２－（Ｆｍｏｃ－アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサン酸、ＥＤＣ、ＨＯＢｔ、ＤＣＭ、室温、２時間、６０％；（ｖｉ）ジエチルアミン、ＭｅＣＮ；（ｖｉｉ）Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＳｕ、ＭｅＣＮ、室温、３時間、４８％；（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ジメドン、ＴＨＦ、室温、１時間、７４％。

【0219】

図８は、化合物ＶＩＩＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｈ－Ｇｌｙ－ＯＡｌｌ＊ＨＣｌ、ＤＣＭ、０℃から室温、２．５時間、７７％；（ｉｉ）ジエチルアミン、ＤＣＭ、室温、２．５時間；（ｉｉｉ）（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）（フェニル）メチルピバレート、ＤＭＦ、室温、４時間、２ステップにわたって５４％；（ｉｖ）Ｐｄ（ＰＰｈ３）４、フェニルシラン、ＤＣＭ、室温、０．５時間；（ｖ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、Ｈ_２Ｎ－ＰＥＧ５－ＣＯＯＡｌｌ＊ＴＦＡ塩、ＤＭＦ、０℃から室温、４時間；（ｖｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、フェニルシラン、ＤＣＭ、室温、０．５時間。

【0220】

図９は、化合物ＩＸおよびＸに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）ＬｉＨＭＤＳ、Ｆｍｏｃ－Ｃｌ、ＴＨＦ、－７８℃から室温；（ｉｉ）ＴＭＳ－ジアゾメタン、ｎ－ＢｕＬｉ、ＴＨＦ、－７８℃；（ｉｉｉ）ピペリジン、ＤＭＦ、室温；（ｉｖ）ジメドン、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ＴＨＦ；（ｖ）ＨＡＴＵ、ＤＣＭ、ＤＩＥＡ、０℃；（ｖｉ）ピペリジン、ＤＭＦ、室温；（ｖｉｉ）Ｃ_８Ｈ_１７ＯＨ、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、室温；（ｖｉｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ＰｈＳｉＨ_３、ＤＣＭ、室温；（ｉｘ）ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＣＭ、０℃；（ｘ）ピペリジン、ＤＭＦ、室温；（ｘｉ）ＨＯ－ＰＥＧ４－ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ、ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＤＩＥＡ、ＴＨＦ、室温。

【0221】

図１０は、化合物ＸＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）２，２’－（（オキシビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）、ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、室温；（ｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ＰｈＳｉＨ_３、ＤＣＭ、０℃；（ｉｉｉ）化合物４０、ＨＡＴＵ、ＤＩＥＡ、ＤＣＭ、０℃。

【0222】

図１１は、化合物ＸＩＩに関する合成スキームを示すスキームである。（ｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、１時間；（ｉｉ）Ｆｍｏｃ－ＤＯＮ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、２時間、９８％；（ｉｉｉ）Ｅｔ_２ＮＨ、ＤＣＭ、室温、２時間；（ｉｖ）Ｆｍｏｃ－ＤＯＮ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、２時間、４２％；（ｖ）Ｅｔ_２ＮＨ、ＤＭＦ、室温、２時間；（ｖｉ）２，５－ジオキソピロリジン－１－イルジメチルグリシネート、ＤＭＦ、室温、２時間、５３％；（ｖｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ジメドン、ＴＨＦ、室温、１時間、３１％。反応条件：ｉ）ＴＦＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、１時間；ｉｉ）Ｆｍｏｃ－ＤＯＮ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、２時間、９８％；ｉｉｉ）Ｅｔ_２ＮＨ、ＤＣＭ、室温、２時間；ｉｖ）Ｆｍｏｃ－ＤＯＮ－ＯＨ、ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ、ＤＣＭ、０℃から室温、２時間、４２％；ｖ）Ｅｔ_２ＮＨ、ＤＭＦ、室温、２時間；ｖｉ）２，５－ジオキソピロリジン－１－イルジメチルグリシネート、ＤＭＦ、室温、２時間、５３％；ｖｉｉ）Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４、ジメドン、ＴＨＦ、室温、１時間、３１％。

【0223】

（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（４－ヒドロキシブチル）カルバメート（２）
図１で示すように、４－アミノブタノール（９６７ｍｇ、１．００ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ、１．０当量）を、ジオキサン（３０ｍＬ）中に溶解し、この溶液を０℃に冷却した。飽和ＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）を５分間滴加し、続いてＦｍｏｃ塩化物（３．０８ｇ、１１．９ｍｍｏｌ、１．１当量）および反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応を飽和ＮａＣｌ（５０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を蒸留水（４０ｍＬ）、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。有機溶媒を真空中で蒸発させた。残渣にシリカゲルでクロマトグラフ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）を行って、所望の生成物２（２．０５ｇ、６７％）を無色固形物として得た。

【0224】

イソプロピル（２Ｓ）－２－（（（４－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）ブトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（３）
図１で示すように、ジクロロリン酸フェニル（１．０５ｍＬ、７．０５ｍｍｏｌ、１．５当量）を、不活性雰囲気下、無水ＴＨＦ（８．５ｍＬ）中に溶解した。溶液を０℃に冷却し、２，４，６－トリメチルピリジン（９．２８ｍＬ、７０．３ｍｍｏｌ、１５当量）、続いて無水ＴＨＦ（８．５ｍＬ）中の２（１．４６ｇ、４．７０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を徐々に添加した。反応混合物を０℃で２０分間撹拌した。無水ＴＨＦ（３．５ｍＬ）中のイソプロピル（Ｓ）－２－アミノ－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（１．００ｇ、４．７０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加し、反応混合物を０℃で３０分間、室温で２時間撹拌した。溶媒を真空中で蒸発させ、粗製生成物にシリカゲルでクロマトグラフ（勾配ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ ３０：１→１５：１）を行って、生成物３（１．２６ｇ、４１％）を黄色非晶質固形物として得た。

【0225】

イソプロピル（２Ｓ）－２－（（（４－アミノブトキシ）（フェノキシ）ホスホリル）アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（構造Ｉ）
図１で示すように、化合物３（３４０ｍｇ、０．５１３ｍｍｏｌ、１．０当量）を、不活性雰囲気下、無水ＤＣＭ（７ｍＬ）中に溶解した。ピペリジン（１．００ｍＬ、１０．３ｍｍｏｌ、２０当量）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣にシリカゲルでクロマトグラフ（ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ １：１＋２％Ｅｔ_３Ｎ）を行って、所望の生成物Ｉ（１６５ｍｇ、７３％）を黄色がかった油状物として得た。調製した生成物Ｉは非常に不安定であり、－８０℃で保存する必要がある。

【0226】

ｔ－ブチル（１１Ｓ，１４Ｓ）－１４－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－１１－イソブチル－３，９，１２－トリオキソ－２，７－ジオキサ－４，１０，１３－トリアザペンタデカン－１５－オエート（７）
図２で示すように、ＦｍｏｃＨＮ－ＣＨ_２ＣＨ_２－ＯＣＨ_２ＣＯＯＨ（０．２４ｇ、０．７１ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＨＡＴＵ（０．２７ｇ、０．７１ｍｍｏｌ、１．１当量）を、不活性雰囲気下、ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、ＤＩＥＡ（０．３７ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。最後に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨ－Ｌｅｕ－ＤＯＮ－ＯｔＢｕ ６（０．２２ｇ、０．６５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加した。得られた混合物を０℃で１５分間、および室温で一晩撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を添加し、有機相を蒸留したＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）、１０％ＫＨＳＯ_４水溶液（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機相を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／アセトン ２：１、Ｒ_ｆ＝０．２８）で精製した。反応によって、生成物０．３０ｇ（７０％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0227】

ｔ－ブチル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（２－（２－アミノエトキシ）アセトアミド）－４－メチルペンタンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（構造ＩＩ）
図２で示すように、化合物７（０．２９ｇ、０．４４ｍｍｏｌ、１．０当量）を、不活性雰囲気下、ＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解した。次いで、ピペリジン（０．４３ｍＬ、４．４ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＮＨ_３ １００：２０：１、Ｒ_ｆ＝０．１６）で精製した。反応によって、生成物０．１８ｇ（９３％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0228】

ｔ－ブチル（１５Ｓ，１８Ｓ）－１８－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－１５－イソブチル－３，１３，１６－トリオキソ－２，７，１０－トリオキサ－４，１４，１７－トリアザノナデカン－１９－オエート（９）
図３で示すように、ＦｍｏｃＨＮ－（ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ（０．２９ｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＨＡＴＵ（０．２８ｇ、０．７３ｍｍｏｌ、１．１当量）を、不活性雰囲気下、ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、ＤＩＥＡ（０．３７ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。最後に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨ－Ｌｅｕ－ＤＯＮ－ＯｔＢｕ ６（０．２３ｇ、０．６６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加した。得られた混合物を０℃で１５分間、および室温で一晩撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を添加し、有機相を蒸留したＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）、１０％ＫＨＳＯ４水溶液（２×１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機相を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／アセトン ２：１、Ｒ_ｆ＝０．１９）で精製した。反応によって、生成物０．３２ｇ（６７％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0229】

ｔ－ブチル（２Ｓ，５Ｓ）－１５－アミノ－２－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－５－イソブチル－４，７－ジオキソ－１０，１３－ジオキサ－３，６－ジアザペンタデカノエート（構造ＩＩＩ）
図３で示すように、化合物９（６５ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、１．０当量）を、不活性雰囲気下、ＤＣＭ（１ｍＬ）中に溶解した。次いで、ピペリジン（９０μＬ、０．９ｍｍｏｌ、１０当量）を添加し、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ５：１、Ｒ_ｆ＝０．２５）で精製した。反応によって、生成物４０ｍｇ（８９％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0230】

イソプロピル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－４－メチルペンタンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（１１）
化合物１１を文献（Ｒａｉｓ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１６， ５９ （１８）， ８６２１－８６３３）に従って調製した。

【0231】

イソプロピル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－４－メチルペンタンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（１２）
化合物１２を文献（Ｒａｉｓ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ２０１６， ５９ （１８）， ８６２１－８６３３）に従って調製した。

【0232】

イソプロピル（１５Ｓ，１８Ｓ）－１８－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－１５－イソブチル－３，１３，１６－トリオキソ－２，７，１０－トリオキサ－４，１４，１７－トリアザノナデカン－１９－オエート（１３）
図４で示すように、ＦｍｏｃＨＮ－（ＣＨ_２ＣＨ_２－Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＯＯＨ（０．３４ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＨＡＴＵ（０．３２ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．１当量）を、不活性雰囲気下、無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、ＤＩＥＡ（０．４０ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。最後に、ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨ－Ｌｅｕ－ＤＯＮ－ＯｉＰｒ １２（０．２５ｇ、０．７７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加した。得られた混合物を０℃で１５分間、室温で１時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を添加し、有機相を、１０％ＫＨＳＯ４水溶液（２５ｍＬ）、蒸留したＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２５ｍＬ）、蒸留したＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）、およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機相を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４０：１、Ｒ_ｆ＝０．１８）で精製した。反応によって、生成物０．４７ｇ（８６％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0233】

イソプロピル（２Ｓ，５Ｓ）－１５－アミノ－２－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－５－イソブチル－４，７－ジオキソ－１０，１３－ジオキサ－３，６－ジアザペンタデカノエート（構造ＩＶ）
図４で示すように、化合物１３（０．４１ｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．０当量）を、不活性雰囲気下、無水ＤＣＭ（１ｍＬ）中に溶解した。次いで、ピペリジン（２８５μＬ、２．８９ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ５：１＋１％Ｅｔ_３Ｎ、Ｒ_ｆ＝０．４４）で精製した。反応によって、生成物２１８ｍｇ（７８％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0234】

イソプロピル（１１Ｓ，１４Ｓ）－１４－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－１１－イソブチル－３，９，１２－トリオキソ－２，７－ジオキサ－４，１０，１３－トリアザペンタデカン－１５－オエート（１４）
図５で示すように、ＦｍｏｃＨＮ－ＣＨ_２ＣＨ_２－ＯＣＨ_２ＣＯＯＨ（０．２９ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＨＡＴＵ（０．３２ｇ、０．８４ｍｍｏｌ、１．１当量）を、不活性雰囲気下、無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解した。反応混合物を０℃に冷却し、ＤＩＥＡ（０．４０ｍＬ、２．３０ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。最後に、無水ＤＭＦ（１ｍＬ）中のＨ－Ｌｅｕ－ＤＯＮ－ＯｉＰｒ（１２）（０．２５ｇ、０．７７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を添加した。得られた混合物を０℃で１０分間および室温で１時間撹拌した。次いで、溶媒を蒸発させ、ＤＣＭ（５０ｍＬ）を添加し、有機相を１０％ＫＨＳＯ_４水溶液（２５ｍＬ）、蒸留したＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２５ｍＬ）、蒸留したＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）およびブライン（２５ｍＬ）で洗浄した。次いで、有機相を無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ４０：１、Ｒ_ｆ＝０．４９）で精製した。反応によって、生成物０．４４ｇ（８９％）が黄色がかった固形物として得られた。

【0235】

イソプロピル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（２－（２－アミノエトキシ）アセトアミド）－４－メチルペンタンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（構造Ｖ）
図５で示すように、化合物１４（０．３９ｇ、０．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）を、不活性雰囲気下、無水ＤＣＭ（１ｍＬ）中に溶解した。次いで、ピペリジン（０．３０ｍＬ、３．１２ｍｍｏｌ、５当量）を添加し、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ５：１＋１％Ｅｔ_３Ｎ、Ｒ_ｆ＝０．４２）で精製した。反応によって、生成物０．１９ｇ（７４％）が黄色がかった非晶質固形物として得られた。

【0236】

アリル２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１，１４，１７－ペンタオキサ－５－アザイコサン－２０－オエート（１６）
図６で示すように、ＭｅＣＮ（２０ｍＬ）中の２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１，１４，１７－ペンタオキサ－５－アザイコサン－２０－酸１５（１．１０ｇ、３．０ｍｍｏｌ）およびＣｓ_２ＣＯ_３（１．４７ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を臭化アリル（０．３９ｍＬ、４．５ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で希釈し、沈殿した塩を濾過除去した。残渣にシリカゲルカラム、５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３でクロマトグラフを行った。収量１．１９ｇ（９８％）、シロップ状。分析データは米国特許出願公開ＵＳ２０１２／２２５０８９号に記載されている。

【0237】

アリル（Ｓ）－６－ベンジル－２，２－ジメチル－４，７－ジオキソ－３，１１，１４，１７，２０－ペンタオキサ－５，８－ジアザ－トリコサン－２３－オエート（１８）
図６で示すように、ＣＨ_２Ｃｌ_２（６ｍＬ）中の１６（１．２２ｇ、３．０１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃でＴＦＡ（３ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで蒸発させ、トルエン（１０ｍＬ）とともに共蒸留した。得られたシロップ状の１７のトリフルオロ酢酸塩を真空中で維持した。その間、無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＢｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ（８７８ｍｇ、３．３１ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．３７ｇ、３．６１ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でＤＩＰＥＡ（２．６２ｍＬ、１５．０４ｍｍｏｌ）で処理し、１０分間撹拌した。あらかじめ調製した１７のトリフルオロ酢酸塩を、無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、混合物に添加し、次いでそれを室温で３時間撹拌した。溶液を濃縮し、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（１００ｇのＨＰ Ｃ１８Ａｑカラム、５０ｍＬ／分、２５分で勾配０％～１００％アセトニトリル／水、検出２２０ｎｍ）を行った。収量１．４９ｇ（９０％）、シロップ状物。

【0238】

アリル（５Ｓ，８Ｓ）－８－ベンジル－５－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９－トリ－オキソ－２，１３，１６，１９，２２－ペンタオキサ－４，７，１０－トリアザペンタコサン－２５－オエート（２０）
図６で示すように、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）中の１８（３１５ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でＴＦＡ（０．５ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで蒸発させ、トルエン（１０ｍＬ）とともに共蒸留した。得られたシロップ状の１９のトリフルオロ酢酸塩を真空中で維持した。その間、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）中のＦｍｏｃ－ＤＯＮ（２６９ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１２３ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ．ＨＣｌ（１７５ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の混合物を、溶解が完了するまで０℃で撹拌した。
あらかじめ調製した１９のトリフルオロ酢酸塩を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（０．１１ｍＬ、０．６３ｍｍｏｌ）中に溶解し、混合物に添加し、次いでそれを室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（５０ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、３０ｍＬ／分、２０分で勾配２０％～１００％アセトニトリル／水、検出２６５ｎｍ）を行った。収量３３５ｍｇ（７１％）、凍結乾燥物。

【0239】

アリル（１８Ｓ，２１Ｓ）－２１－アミノ－１８－ベンジル－２５－ジアゾ－１７，２０，２４－トリオキソ－４，７，１０，１３－テトラオキサ－１６，１９－ジアザペンタコサノエート（２１）
図６で示すように、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）中の２０（３１５ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）の溶液をＥｔ_２ＮＨ（０．５ｍＬ）で処理し、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。揮発性物質を室温で蒸発させ、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（５０ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、３０ｍＬ／分、２０分で勾配０％～１００％アセトニトリル／水、検出２２０ｎｍ）を行った。収量１７２ｍｇ（７５％）、凍結乾燥物（淡黄色シロップ状物）。生成物の対応する質量をＵＰＬＣ－ＭＳによって証明した。生成物をただちに次のステップに使用した。

【0240】

アリル（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）－１１－ベンジル－８－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５－イソブチル－３，６，９，１２－テトラオキソ－２，１６，１９，２２，２５－ペンタオキサ－４，７，１０，１３－テトラアザオクタコサン－２８－オエート（２２）
図６で示すように、無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＨ（１１０ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）およびＨＢＴＵ（１２９ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でＤＩＰＥＡ（０．１５ｍＬ、０．８５ｍｍｏｌ）で処理し、１０分間撹拌した。次いでＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）中の２１（１７２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液を混合物に添加し、それを室温で２時間撹拌した。溶液を濃縮し、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（５０ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、３０ｍｌ／分、２０分で勾配２０％～１００％アセトニトリル／水、検出２６５ｎｍ）を行った。収量１２５ｍｇ（４７％）、凍結乾燥物。

【0241】

（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）－１１－ベンジル－８－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５－イソブチル－３，６，９，１２－テトラオキソ－２，１６，１９，２２，２５－ペンタオキサ－４，７，１０，１３－テトラアザオクタコサン－２８－酸（構造ＶＩ）
図６で示すように、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の２２（１０８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびジメドン（８０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）の混合物を、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（６．６ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで濃縮し、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（５０ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、３０ｍｌ／分、２５分で勾配０％～１００％アセトニトリル／水、検出２６５ｎｍ）を行った。収量６５ｍｇ（６３％）、凍結乾燥物。

【0242】

アリル２，２－ジメチル－４－オキソ－３，８，１１，１４－テトラオキサ－５－アザヘプタデカン－１７－オエート（２４）
図７で示すように、ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中の１－（ｔ－ブチルオキシカルボニル）アミノ－３，６，９－トリオキサドデカン－１２－酸２３（７０７ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）およびＣｓ_２ＣＯ_３（７８８ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）の混合物を臭化アリル（２０９ｍＬ、２．４２ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を５０℃に１時間加熱し、次いで冷却し、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で希釈し、沈殿した塩を濾過除去した。残渣にシリカゲルカラム、５％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３でクロマトグラフを行った。収量７７０ｍｇ（９７％）、シロップ状物。

【0243】

アリル（Ｓ）－６－ベンジル－２，２－ジメチル－４，７－ジオキソ－３，１１，１４，１７－テトラオキサ－５，８－ジアザイコサン－２０－オエート（２６）
図７で示すように、ＣＨ_２Ｃｌ_２（６ｍＬ）中の２４（６１０ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でＴＦＡ（３ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで蒸発させ、トルエン（１０ｍＬ）とともに共蒸留した。得られたシロップ状の２５のトリフルオロ酢酸塩を真空中で維持した。その間、無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中のＢｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ（４４７ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７０６ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でＤＩＰＥＡ（１．２ｍＬ、６．７５ｍｍｏｌ）で処理し、１０分間撹拌した。あらかじめ調製した２５のトリフルオロ酢酸塩を、無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、混合物に添加し、次いでそれを室温で３時間撹拌した。溶液を濃縮し、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（１００ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、６０ｍＬ／分、２５分で勾配０％～１００％アセトニトリル／水、検出２２０ｎｍ）を行った。収量８２０ｍｇ（９５％）、シロップ状物。

【0244】

アリル（５Ｓ，８Ｓ）－８－ベンジル－５－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９－トリオキソ－２，１３，１６，１９－テトラオキサ－４，７，１０－トリアザドコサン－２２－オエート（２８）
図７で示すように、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）中の２６（７９０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でＴＦＡ（５ｍＬ）で処理した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで蒸発させ、トルエン（１５ｍＬ）とともに共蒸留した。得られたシロップ状の２７のトリフルオロ酢酸塩を真空中で維持した。その間、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０ｍＬ）中のＦｍｏｃ－ＤＯＮ（７６４ｍｇ、１．９４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３９３ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ．ＨＣｌ（５５８ｍｇ、２．９１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（４ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の混合物を、溶解が完了するまで０℃で撹拌した。あらかじめ調製した２７のトリフルオロ酢酸塩を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５ｍＬ）およびＤＩＰＥＡ（５４０ｍＬ、３．１０ｍｍｏｌ）中に溶解し、混合物に添加し、次いでそれを室温で２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（１００ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、６０ｍＬ／分、２０分で勾配２０％～１００％アセトニトリル／水、検出２６５ｎｍ）を行った。収量７２７ｍｇ（６０％）、凍結乾燥物。

【0245】

アリル（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）－１１－ベンジル－８－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５－イソブチル－３，６，９，１２－テトラオキソ－２，１６，１９，２２－テトラオキサ－４，７，１０，１３－テトラアザペンタコサン－２５－オエート（３０）
図７で示すように、ＭｅＣＮ（５ｍＬ）中の２８（７１８ｍｇ、０．９１６ｍｍｏｌ）の懸濁物をＥｔ_２ＮＨ（５ｍＬ）で処理し、得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。溶媒を室温で蒸発させ、残渣（粗製物２９）をＭｅＣＮ（１０ｍＬ）とともに共蒸留し、真空中で短時間維持した。残渣を、ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中に溶解し、ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｌ－Ｌｅｕ－ＯＳｕ（３７１ｍｇ、０．８２４ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。混合物を室温で４時間撹拌した。反応を、水（１ｍＬ）中のＮＨ_２ＯＨ．ＨＣｌ（１４ｍｇ）およびＮａＨＣＯ_３（２０ｍｇ）の溶液を添加することによってクエンチした。混合物を室温で４０分間撹拌し、次いで濃縮し、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（１００ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、６０ｍＬ／分、２０分で勾配２０％～１００％アセトニトリル／水、検出２６５ｎｍ）を行った。収量３９８ｍｇ（４８％）、凍結乾燥物。

【0246】

（５Ｓ，８Ｓ，１１Ｓ）－１１－ベンジル－８－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５－イソブチル－３，６，９，１２－テトラオキソ－２，１６，１９，２２－テトラオキサ－４，７，１０，１３－テトラアザペンタコサン－２５－酸（構造ＶＩＩ）
図７で示すように、ＴＨＦ（６ｍＬ）中の３０（３５９ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）およびジメドン（１６８ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の混合物を、ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中のＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（１８ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。混合物を室温で１時間撹拌し、次いで濃縮し、残渣にＲＰフラッシュクロマトグラフィー（１００ｇのＨＰ Ｃ１８ Ａｑカラム、６０ｍＬ／分、２５分で勾配０％～１００％アセトニトリル／水、検出２６５ｎｍ）を行った。収量２５５ｍｇ（７４％）、凍結乾燥物。

【0247】

アリル－Ｌ－ピログルタメート（３１）
図９で示す化合物３１を文献（Ｇａｎｇ， Ｆａｎｇ－ｌｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２０１８， ｖｏｌ． ２６，１６， ｐ． ４６４４－４６４９）に従って調製した。

【0248】

１－（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル）２－アリル（Ｓ）－５－オキソピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３２）
図９で示すように、アリル－Ｌ－ピログルタメート３１（１１．６４ｇ、６８．７９ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（５００ｍＬ）中に溶解し、溶液を－７８℃に冷却した。ＬｉＨＭＤＳ（ＴＨＦ中１Ｍ、６６ｍＬ、６６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた混合物を－７８℃で１５分撹拌し、次いで、ＴＨＦ（３００ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｃｌ（５３．４ｇ、２０６．４ｍｍｏｌ）の溶液にカニューレを介して添加した。反応混合物を－７８℃で３時間撹拌し、次いで室温に到達させ、一晩放置した。反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（４００ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、水性部分をＥｔＯＡｃ（２×３００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、大部分の溶媒を蒸発させた。液体残渣をＥｔ_２Ｏ（３００ｍＬ）で希釈し、溶液を冷蔵庫内で一晩結晶化させた。結晶を濾過除去し、Ｅｔ_２Ｏで洗浄し、濾液を濃縮した。シロップ状の残渣にシリカゲルカラム、２５～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでクロマトグラフを行った。収量２６．２２ｇ（９７％）、シロップ状物。

【0249】

アリル（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（３３）
図９で示すように、ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のトリメチルシリルジアゾメタン（ヘキサン中２Ｍ溶液、４１．３ｍＬ、８２．６ｍｍｏｌ）の溶液を－７８℃に冷却し、ｎ－ＢｕＬｉ（ヘキサン中２．５Ｍ、３３．８ｍＬ、８４．６ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を－７８℃で３０分撹拌し、次いで、冷却した（－７８℃）ＴＨＦ（４５０ｍＬ）中の３２（２６．００ｇ、６６．０８ｍｍｏｌ）の溶液にカニューレを介して添加した。溶液を－７８℃でさらに３０分撹拌し、次いで飽和ＮＨ_４Ｃｌ（３００ｍＬ）の水溶液でクエンチした。混合物を室温に到達させ、水性層を分離し、ＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機部分を乾燥させ（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。残渣をシリカゲルカラム、４０～５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンで精製した。ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから結晶化を行い、２０．４８ｇ（７１％）を得た。

【0250】

（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサン酸（３４）
図９で示すように、ＴＨＦ（２３０ｍＬ）中のアリルエステル３３（２０．２０ｇ、４６．６０ｍｍｏｌ）およびジメドン（１９．６ｇ、１３９．８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＴＨＦ（７０ｍＬ）中のＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（２．１５ｇ、１．８６ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。混合物を９０分撹拌し、次いで濃縮し、残渣にシリカゲルカラム、１０～２０％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２でクロマトグラフを行い、１０．９５ｇ（６０％）を得た。

【0251】

１－（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル）２－オクチル（Ｓ）－５－オキソピロリジン－１，２－ジカルボキシレート（３６）
図９で示すように、無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の（Ｓ）－オクチル５－オキソピロリジン－２－カルボキシレート３５（１０ｇ、４１．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬｉＨＭＤＳ（３９．３７ｍＬ、３９．３７ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１Ｍ）を、不活性雰囲気下、－７８℃で滴加し、混合物を２０分間撹拌した。得られた黄色混合物を、－７８℃の乾燥ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｃｌ（１２．８６ｇ、４９．７３ｍｍｏｌ）の溶液にカニューレを介して移した。反応混合物を－７８℃で２時間撹拌し、一晩かけて徐々に室温まで加温した。反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣に、シリカゲル、２０～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでクロマトグラフを行って、化合物３６ １８．２３ｇ（収率９５％）を無色泡状物として得た。

【0252】

オクチル（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（３７）
図９で示すように、トリメチルシリルジアゾメタン（２３．６ｍＬ、４７．２ｍｍｏｌ、ジエチルエーテル中２Ｍ）の溶液を、無水ＴＨＦ（２１０ｍＬ）中にアルゴン下で溶解し、－９８℃に冷却した（ドライアイスアセトン浴および液体Ｎ_２）。ｎ－ＢｕＬｉ（１９．３５ｍＬ、４８．３８ｍｍｏｌ、ヘキサン中２．５Ｍ）の溶液を滴加し、溶液を－９８℃で３０分間撹拌した。得られた混合物を、－９８℃（ドライアイスアセトン浴および液体Ｎ_２）の乾燥ＴＨＦ（３６０ｍＬ）中の化合物３６（１８．２３ｇ、３９．３３ｍｍｏｌ）の溶液にカニューレを介して移した。反応混合物を－９８℃で３０分間撹拌し、次いで－７８℃まで徐々に加温し、飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２００ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲル、５％ＣＨＣｌ_３／アセトンでクロマトグラフを行って、化合物３７ １７．２ｇ（収率８６％）を淡黄色固形物として得た。

【0253】

オクチル（Ｓ）－２－アミノ－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（３８）
図９で示すように、無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物３７（５．０６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、ピペリジン（０．９４ｇ、１１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を２０分間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（８０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲル、０．５％Ｅｔ_３Ｎを含有する０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフを行って、化合物３８ ２．３３ｇ（収率８２％）を黄色固形物として得、これをその後のステップでただちに使用した。

【0254】

オクチル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（３９）
無水ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の化合物３４（２．７５ｇ、６．９９ｍｍｏｌ）および３８（２．３８ｇ、８．３９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、１．８１ｇ、１３．９８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、不活性雰囲気下、０℃に冷却した。ＨＡＴＵ（２．９３ｇ、７．６９ｍｍｏｌ）を一度に添加し、混合物を０℃で１時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（８０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲル、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフを行って、化合物３９ ４．０ｇ（収率８７％）を黄色固形物として得、これをその後のステップでただちに使用した。

【0255】

オクチル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－アミノ－６－ジアゾ－５－オキソヘキサンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（４０）
無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）中の化合物３９（４．０ｇ、６．０７ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、ピペリジン（０．５７ｇ、６．６８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応を慎重にモニターし、化合物３９が消失したら（およそ２０分）Ｈ_２Ｏ（６０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲル、０．５％Ｅｔ_３Ｎを含有する０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフを行って、化合物４０ １．８ｇ（収率６８％）を黄色固形物として得、これをその後のステップでただちに使用した。

【0256】

５－アリル１－オクチル（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）－Ｌ－グルタメート（４２）
無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の４１（３．８０ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、１－オクタノール（１．２１ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃で撹拌した。ＤＣＣ（１．９２ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）、続いて不活性雰囲気下、触媒量のＤＭＡＰを添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。沈殿したＤＣＵを濾過除去し、溶媒を減圧下で除去した。残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中に再溶解し、残ったＤＣＵの沈殿物を濾過除去した。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラム、１０～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでクロマトグラフを行って、化合物４２ ３．２９ｇ（収率６８％）を白色固形物として得た。

【0257】

（Ｓ）－４－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－５－（オクチルオキシ）－５－オキソペンタン酸（４３）
無水ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の４２（３．２９ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）およびＰｈＳｉＨ_３（１．３７ｍｇ、１２．６２ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（２１９ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、混合物を徐々に室温まで加温し、４０分間撹拌した。次いで数滴の水を添加し、揮発性物質を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラム、０．５％ＡｃＯＨ／ヘキサンを含有する１０～１００％ＥｔＯＡｃでクロマトグラフを行って、化合物４３ ２．４１ｇ（収率７７％）を白色固形物として得た。

【0258】

オクチル（５Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）－１０，１３－ビス（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５－（（オクチルオキシ）カルボニル）－３，８，１１－トリオキソ－２－オキサ－４，９，１２－トリアザテトラデカン－１４－オエート（４４）
無水ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の化合物４０（１．８０ｇ、４．１２ｍｍｏｌ）および４３（１．９９ｇ、４．１２ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、１．０７ｇ、８．２５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、不活性雰囲気下、０℃に冷却した。ＨＡＴＵ（１．７３ｇ、４．５４ｍｍｏｌ）を一度に添加し、混合物を０℃で４０分間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（８０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲル、０～１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフを行って、化合物４４ ３．２ｇ（収率８６％）を黄色固形物として得た。

【0259】

オクチル（Ｓ）－２－（（Ｓ）－２－（（Ｓ）－４－アミノ－５－（オクチルオキシ）－５－オキソペンタンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサンアミド）－６－ジアゾ－５－オキソヘキサノエート（構造ＩＸ）
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物４４（１．５ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、不活性雰囲気下、ピペリジン（０．１６ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を室温で添加した。混合物を４０分間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（６０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×８０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲル、０．５％Ｅｔ_３Ｎを含有する０～１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３でクロマトグラフを行って、化合物ＩＸ ０．８１ｇ（収率７２％）を淡黄色固形物として得た。

【0260】

オクチル（１６Ｓ，２１Ｓ，２４Ｓ）－２１，２４－ビス（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－ヒドロキシ－１６－（（オクチルオキシ）カルボニル）－１４，１９，２２－トリオキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１５，２０，２３－トリアザペンタコサン－２５－オエート（構造Ｘ）
ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物ＩＸ（３００ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）、ヒドロキシ－ＰＥＧ_４－ＣＨ_２ＣＯ_２Ｈ（１２２．８ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、２００ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）の溶液に、１－ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ・Ｈ_２Ｏ、１０２ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）およびＮ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ塩酸塩、１１９ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、室温で添加した。混合物を３時間撹拌し、飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（４０％アセトニトリル／６０％水、続いて６０分かけて１００％アセトニトリルまで増加させ、１００％アセトニトリルで１０分にわたって洗浄する；流速１５ｍＬ／分）を使用して精製して、化合物Ｘ １４２ｍｇ（収率３５％）を淡黄色粘着性固形物として得た。

【0261】

５－アリル１－（２－（２－（２－（２－ヒドロキシエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）－Ｌ－グルタメート（４５）
無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の４１（１．０ｇ、２．４４ｍｍｏｌ）の溶液に、２，２’－（（オキシビス（エタン－２，１－ジイル））ビス（オキシ））ビス（エタン－１－オール）（１．４２ｇ、７．３３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃で撹拌した。ＤＣＣ（５０４ｍｇ、２．４４ｍｍｏｌ）、続いて不活性雰囲気下、触媒量のＤＭＡＰ（３０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０℃で４時間撹拌した。沈殿したＤＣＵを濾過除去し、溶媒を減圧下で除去した。溶媒を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラム、２０～１００％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンでクロマトグラフを行って、化合物４５ ０．８ｇ（収率５６％）を無色油状物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ２．００－２．０７ （ｍ， １Ｈ）， ２．２２－２．２９ （ｍ， １Ｈ）， ２．３９－２．５１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５８－３．７１ （ｍ， １４Ｈ）， ４．２２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２８－４．３５ （ｍ， ２Ｈ）， ４．４０－４．４７ （ｍ， ３Ｈ）， ４．５８ （ｄ， Ｊ ＝ ６．０ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．２３ （ｄ， Ｊ ＝ １０．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．３３－５．２９ （ｍ， ２Ｈ）， ５．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ８．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．９５－５．８７ （ｍ， １Ｈ）， ７．３０－７．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３８－７．４１ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５９－７．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）． ＥＳＩ ＭＳ： ６０８．３ （［Ｍ＋Ｎａ］^＋）．

【0262】

（Ｓ）－１４－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）－１－ヒドロキシ－１３－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサヘプタデカン－１７－酸（４６）
無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の４５（０．８ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）およびＰｈＳｉＨ_３（２９６ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（４０ｍｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、０℃で添加し、混合物を徐々に室温まで加温し、４０分間撹拌した。次いで数滴の水を添加し、揮発性物質を減圧下で除去した。残渣にシリカゲルカラム、０．５％ＡｃＯＨを含有する１０～４０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭでクロマトグラフを行って、化合物４６ ０．４９ｇ（収率６６％）を白色固形物として得た。ＥＳＩ ＭＳ：５６８．３（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）。

【0263】

オクチル（５Ｓ，１０Ｓ，１３Ｓ）－１０，１３－ビス（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－５－（１３－ヒドロキシ－２，５，８，１１－テトラオキサトリデカノイル）－３，８，１１－トリオキソ－２－オキサ－４，９，１２－トリアザテトラデカン－１４－オエート（ＸＩ）
無水ＤＣＭ（１５ｍＬ）中の化合物４０（２００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および４６（２５０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、１１８ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、不活性雰囲気下、０℃に冷却した。ＨＡＴＵ（１９２ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を一度に添加し、混合物を０℃で２時間撹拌し、Ｈ_２Ｏ（８０ｍＬ）でクエンチした。水性相を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。溶媒を減圧下で除去した。残渣を逆相分取ＨＰＬＣ（２０％アセトニトリル／８０％水、続いて４０分かけて７０％アセトニトリルまで増加させ、１００％アセトニトリルで１０分にわたって洗浄する；流速１５ｍＬ／分）を使用して精製して、化合物ＸＩ １４５ｍｇ（収率３３％）を淡黄色固形物として得た。^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ０．８６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５ Ｈｚ， ３Ｈ）， １．２３－１．３２ （ｍ， １０Ｈ）， １．５８－１．６３ （ｍ， ２Ｈ）， １．９１－２．２４ （ｍ， ６Ｈ）， ２．３３－２．３９ （ｍ， ３Ｈ）， ２．４３－２．５１ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４３ （ｂｒｓ， １Ｈ）， ３，５５－３．７２ （ｍ， １４Ｈ）， ４．０５－４．１１ （ｍ， ２Ｈ）， ４．１９－４．２８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．３３－４．４３ （ｍ， ４Ｈ）， ４．４７－４．５１ （ｍ， １Ｈ）， ５．３５－５．３９ （ｍ， ２Ｈ）， ６．２４ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２９－７．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．３７－７．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．４５ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５９－７．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ７．７４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）． ^１３Ｃ ＮＭＲ （１２５ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ １４．０， ２２．５， ２５．７， ２６．７， ２７．７， ２７．９， ２８．４， ２９．０７， ２９．０９， ３１．７， ３６．２， ３６．４， ４７．１， ５１．９， ５２．５， ５３．４， ５４．８， ５５．１， ６１．４， ６４．２， ６５．７， ６６．８， ６８．７， ７０．１， ７０．３， ７０．４， ７２．５， １１９．９， １２５．１， １２７．０， １２７．６， １４１．２， １４３．７， １４３．９， １５６．２， １７１．３， １７１．６， １７１．９， １７２．３， １９３．８， １９４．８． ＥＳＩ ＭＳ： ９８６．４ （［Ｍ＋Ｎａ］^＋）．

【0264】

アリル（Ｓ）－５－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６－ジオキソ－２，１０，１３，１６－テトラオキサ－４，７－ジアザノナデカン－１９－オエート（４７）
Ｆｍｏｃ－ＤＯＮ－ＯＨ（６９４ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＨＡＴＵ（７０１ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ、１．１５当量）を無水ＤＣＭ（１０ｍＬ）中に懸濁し、０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（１．１２ｍＬ、６．４１ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加した。１０分撹拌後、無水ＤＣＭ（５ｍＬ）中の２５（４１９ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を滴加した。反応混合物を０℃で３０分間、室温で１．５時間撹拌した。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残渣をシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、２０：１）で精製した。所望の生成物４７（１．０ｇ、９８％）が黄色がかった油状物として観察された。^１Ｈ ＮＭＲ （４０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： １．９０ － ２．０３ （ｍ， １Ｈ）， ２．１０ － ２．１６ （ｍ， １Ｈ）， ２．３７ － ２．５６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．６１ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．１８ （ｑ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５８ － ３．６４ （ｍ， １０Ｈ）， ３．６６ － ３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．３１ － ４．４４ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５８ （ｄｔ， Ｊ ＝ ５．７， １．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１５ － ５．３７ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８０ － ５．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ６．８６ － ６．９４ （ｍ， １Ｈ）， ７．２７ － ７．４４ （ｍ， ５Ｈ）， ７．６０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．７６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）． ＵＰＬＣ ＭＳ： ［Ｍ ＋ Ｎａ］^＋ （Ｃ_３３Ｈ_４０Ｎ_４Ｏ_９Ｎａ）： ６５９．４４８．

【0265】

アリル（Ｓ）－１５－アミノ－１９－ジアゾ－１４，１８－ジオキソ－４，７，１０－トリオキサ－１３－アザノナデカノエート（４８）
化合物４７（１．０ｇ、１．５７ｍｍｏｌ、１．０当量）を無水ＤＣＭ（１６ｍＬ）中に溶解し、Ｅｔ_２ＮＨ（１．６３ｍＬ、１５．７ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加し、反応混合物を室温で２時間撹拌した。揮発性物質を蒸発させ、残渣４８を一切精製することなくさらなる反応に使用した。

【0266】

アリル（５Ｓ，８Ｓ）－５，８－ビス（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１－（９Ｈ－フルオレン－９－イル）－３，６，９－トリオキソ－２，１３，１６，１９－テトラオキサ－４，７，１０－トリアザドコサン－２２－オエート（４９）
Ｆｍｏｃ－ＤＯＮ－ＯＨ（６８０ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ、１．１当量）およびＨＡＴＵ（６８７ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ、１．１５当量）を無水ＤＭ（１５ｍＬ）中に懸濁し、０℃に冷却し、ＤＩＰＥＡ（１．０９ｍＬ、６．２９ｍｍｏｌ、４．０当量）を添加した。１０分撹拌後、無水ＤＣＭ（７ｍＬ）中の４８（６５１ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を滴加し、反応混合物を０℃で３０分間、室温で１．５時間撹拌した。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｈ_２Ｏ中の５％から１００％アセトニトリルの勾配、２５分）で精製した。所望の生成物４９（５２５ｍｇ、４２％）が黄色がかった固形物として観察された。^１Ｈ ＮＭＲ （４０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）： １．６８ － １．９３ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２３ － ２．４０ （ｍ， ４Ｈ）， ２．５７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３９ （ｔ， Ｊ ＝ ５．９ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．４３ － ３．５２ （ｍ， １０Ｈ）， ３．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．２ Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．９５ － ４．０３ （ｍ， １Ｈ）， ４．１６ － ４．３６ （ｍ， ４Ｈ）， ４．５５ （ｄｔ， Ｊ ＝ ５．４， １．６ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１６ － ５．３２ （ｍ， ２Ｈ）， ５．８３ － ６．０７ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２９ － ７．４６ （ｍ， ４Ｈ）， ７．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６８ － ７．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８９ （ｄ， Ｊ ＝ ７．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．９２ － ８．０２ （ｍ， ２Ｈ）． ＵＰＬＣ ＭＳ： ［Ｍ ＋ Ｎａ］^＋ （Ｃ_３９Ｈ_４７Ｎ_７Ｏ_１１Ｎａ）： ８１２．９１６．

【0267】

アリル（１５Ｓ，１８Ｓ）－１８－アミノ－２２－ジアゾ－１５－（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－１４，１７，２１－トリオキソ－４，７，１０－トリオキサ－１３，１６－ジアザドコサノエート（５０）
化合物４９（５２５ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ、１．０当量）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中に溶解し、Ｅｔ_２ＮＨ（６８８μＬ、６．６５ｍｍｏｌ、１０．０当量）を添加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残渣５０を一切精製することなくさらなる反応に使用した。

【0268】

アリル（６Ｓ，９Ｓ）－６，９－ビス（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－２－メチル－４，７，１０－トリオキソ－１４，１７，２０－トリオキサ－２，５，８，１１－テトラアザトリコサン－２３－オエート（５１）
化合物５０（３７７ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ、１．０当量）および２，５－ジオキソピロリジン－１－イルジメチルグリシネート（２６６ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ、２．０当量）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）中で懸濁し、懸濁物を室温で２時間撹拌した。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残渣をシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１０：１）で精製した。所望の生成物５１（２２８ｍｇ、５３％）が黄色がかった油状物として観察された。^１Ｈ ＮＭＲ （４０１ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： １．９５ － ２．２１ （ｍ， ４Ｈ）， ２．３２ （ｓ， ６Ｈ）， ２．３５ － ２．５８ （ｍ， ４Ｈ）， ２．９１ － ３．０９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３９ － ３．４７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５２ － ３．５８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．５８ － ３．６６ （ｍ， １０Ｈ）， ３．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．３０ － ４．４２ （ｍ， ２Ｈ）， ４．５９ （ｄｔ， Ｊ ＝ ５．６， １．５ Ｈｚ， ２Ｈ）， ５．１７ － ５．４４ （ｍ， ４Ｈ）， ５．９１ （ｄｄｔ， Ｊ ＝ １７．２， １０．４， ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８５ － ６．９２ （ｍ， １Ｈ）， ７．４８ － ７．５９ （ｍ， １Ｈ）， ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．２ Ｈｚ， １Ｈ）． ＵＰＬＣ ＭＳ： ［Ｍ ＋ Ｈ］^＋ （Ｃ_２８Ｈ_４５Ｎ_８Ｏ_１０）： ６５３．１５５．

【0269】

（６Ｓ，９Ｓ）－６，９－ビス（４－ジアゾ－３－オキソブチル）－２－メチル－４，７，１０－トリオキソ－１４，１７，２０－トリオキサ－２，５，８，１１－テトラアザトリコサノン－２３－酸（ＸＩＩ）（ＫＮＭ４７２）
化合物５１（１７６ｍｇ、０．２６９ｍｍｏｌ、１．０当量）およびジメドン（１１３ｍｇ、０．８０９ｍｇ、３．０当量）を無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中に溶解し、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、０．０４当量）を添加し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。揮発性物質を真空中で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（Ｈ_２Ｏ中のアセトニトリルの５％から１００％の勾配、２５分）およびシリカゲル（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、１０：１＋１％Ｅｔ_３Ｎ）で精製した。所望の生成物ＸＩＩ（５１ｍｇ、３１％）が黄色がかった油状物として観察された。^１Ｈ ＮＭＲ （４０１ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ_６）： １．６８ － １．９９ （ｍ， ４Ｈ）， ２．２１ （ｓ， ６Ｈ）， ２．２５ － ２．３５ （ｍ， ４Ｈ）， ２．５２ － ２．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８１ － ２．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３３ － ３．４５ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４５ － ３．５３ （ｍ， １０Ｈ）， ３．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１５ － ４．２３ （ｍ， １Ｈ）， ４．２６ － ４．３５ （ｍ， １Ｈ）， ６．０２ （ｂｓ， ２Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１４ （ｄ， Ｊ ＝ ７．９ Ｈｚ， １Ｈ）． ＵＰＬＣ ＭＳ： ［Ｍ ＋ Ｈ］^＋ （Ｃ_２５Ｈ_４１Ｎ_８Ｏ_１０）： ６１３．０４８．

【0270】

肝臓ホモジネート研究
肝臓またはＥＬ４リンパ腫腫瘍組織を洗浄し、０．１Ｍリン酸カリウム緩衝液中で１０倍希釈し、プローブ超音波処理器を使用してホモジネートした。アナログの安定性を評価するために、アリコート１ｍＬを各マトリックスから作製し、アナログをスパイク添加して最終アッセイ濃度を２０μｍとした。スパイク添加された試料をオービタルシェーカー中、３７℃で１時間インキュベートし、その後反応を、内部標準（ＩＳ；ロサルタン：０．５μｍ）を含有する３体積のアセトニトリルにより三連でクエンチした。試料をボルテックスで３０秒間混合し、１００００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。上清５０マイクロリットルを水５０μＬで希釈し、テフロン（登録商標）キャップで密封された２５０μＬのポリプロピレンバイアルに移した。化合物の消失を、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して経時的にモニターした。

【0271】

ＤＯＮ放出アッセイ
ＤＯＮ放出を、以前に記載した方法を使用して肝臓ホモジネートまたは腫瘍ホモジネートにおいて評価した。簡潔には、上清を、真空下、４５℃で１時間乾燥させた。各管に、０．２Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．０）５０μＬおよび１０ｍＭダブシルクロリド１００μＬを添加した。ボルテックスで混合した後、試料を６０℃で１５分間インキュベートして誘導体化し、続いて１６０００ｇ、４℃で５分間遠心分離した。上清１００マイクロリットルを９６ウェルプレートに移し、水４００μＬで希釈し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳに注入した。ＤＯＮを、Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｆｏｃｕｓオービトラップ質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）と連結したＤｉｏｎｅｘ超高性能ＬＣシステムで分析した。分離を、１．８μｍ Ｃ１８固定相を充てんしたＡｇｉｌｅｎｔ Ｅｃｌｉｐｓｅ Ｐｌｕｓカラム（１００×２．１ｍｍ２、ｉ．ｄ．）を使用して３５℃で達成した。移動相は、水中の０．１％ギ酸およびアセトニトリル中の０．１％ギ酸を含んでいた。ポンプは、勾配溶出を使用して０．３ｍＬ／分の流速で３．５分間作動させた。Ｘｃａｌｉｂｕｒソフトウェア４．０．２７．１３（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で制御された質量分析計を、ポジティブイオン化モードの加熱ＥＳＩイオン源で作動させた。定量化を並行反応モニタリングモードで行った。
結果

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【0272】

（実施例２）
さまざまなリンカーを有するグルタミン－アンタゴニストデンドリマーコンジュゲートの合成
グルタミンアンタゴニストの全てを、デンドリマー表面上でのコンジュゲーション化学に適したリンカーを用いて合成した。

【0273】

コンジュゲーションのために、デンドリマー表面上のヒドロキシル基を部分的に修飾して、アンタゴニスト－リンカーの基に相補的な反応性官能基を有するリンカーを付加した（図９）。アンタゴニストを、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）およびＮ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）の存在下で活性化酸－アミンカップリング反応を使用して、修飾されたデンドリマーの表面上にコンジュゲートした。最終的なコンジュゲートを透析で精製して、溶媒および小分子量不純物を除去した。中間体および最終的なデンドリマーコンジュゲートを、^１Ｈ－ＮＭＲ、^１３Ｃ－ＮＭＲ、ＨＰＬＣ、およびＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＭＳ分析を使用して特徴付けた。コンジュゲートを高純度（９５％超）で合成した。コンジュゲートの薬物負荷を、薬物プロトン対デンドリマーの内部アミドプロトンの積分を比較することによるプロトン積分法を使用して^１Ｈ－ＮＭＲによって計算した。コンジュゲートの薬物負荷は約５％ｗ／ｗであった。デンドリマー－薬物コンジュゲートは水溶性であり、溶解度は５０～１００ｍｇ／ｍＬの範囲であった。
以下は、図９に示されるデンドリマー－グルタミンアンタゴニストコンジュゲートに関する詳細な合成プロトコールである：

【0274】

デンドリマー－酸の合成：ＤＭＦ（２０ｍＬ）中のＤ－ＯＨ（１ｇ、０．０７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｎ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ；０．５ｍＬ）を添加し、続いて無水グルタル酸（９５．８ｍｇ、０．８４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温（ＲＴ、およそ２５℃）で２４時間撹拌した。次いで反応混合物をＤＭＦで希釈し、１ｋＤａ透析膜を使用して、ＤＭＦに対して１２時間透析し、続いてさらに１２時間水で透析を行った。透析プロセス中、溶媒を３～４時間ごとに交換した。水溶液を凍結乾燥させて、Ｄ－酸を白色吸湿性固形物として得た。収率：８８％

【0275】

^１Ｈ ＮＭＲ： （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．２７ － ７．７３ （ｍ， Ｄ－内部アミド Ｈ）， ４．０７ （ｔ， Ｄ－エステル －ＣＨ_２）， ３．５４ － ３．２６ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２）， ３．２５ － ３．００ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２）， ２．９０ － ２．６０ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２およびリンカー ＣＨ_２）， ２．５３ － ２．３１ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２およびリンカー ＣＨ_２）， ２．２６ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２），および１．８５ － １．７２ （ｍ， リンカー －ＣＨ_２）．

【0276】

デンドリマー－グルタミンアンタゴニストコンジュゲートの合成：ＤＭＦ（５ｍＬ）中のＤ－酸（２００ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．１ｍＬ）を添加し、続いてＮＨＳ（２２ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３７．２ｍｇ、０．１９５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。続いてこれにグルタミン－アンタゴニスト（７１．５ｍｇ、０．１５６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。次いで反応混合物をＤＭＦで希釈し、１ｋＤａ透析膜を使用して、ＤＭＦに対して１２時間透析し、続いてさらに１２時間水で透析を行った。透析プロセス中、溶媒を３～４時間ごとに交換した。水溶液を凍結乾燥させて、デンドリマーコンジュゲートを白色吸湿性固形物として得た。収率：７２％

【0277】

^１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．２９ （ｄ， 薬物－Ｈ）， ８．１６ － ７．６９ （ｍ， 薬物－ＨおよびＤ－内部アミドＨ）， ６．０４ （薬物－Ｈ）， ４．８７ （ｍ， 薬物－Ｈ）， ４．３４ （ｍ， 薬物－Ｈ）， ４．１５ （ｍ， 薬物－Ｈ）， ４．０１ （ｔ， Ｄ－エステル －ＣＨ_２）， ３．５９ （ｍ， 薬物 Ｈ）， ３．５２ － ２．９９ （Ｄ－ＣＨ_２および薬物 Ｈ）， ２．６６ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２および薬物 Ｈ）， ２．４６ － ２．０４ （ｍ， Ｄ－ＣＨ_２および薬物 Ｈ）， ２．０１ － １．２３ （ｍ， 薬物 Ｈおよびリンカー－ＣＨ_２）， １．１７ （ｄ， 薬物 Ｈ），および０．８７ （ｄｄ， 薬物 Ｈ）．
ＨＰＬＣ：保持時間：保持時間：１１．０２８分；純度：９９％。

【0278】

結果
一部の例示的なデンドリマーおよびグルタミンアンタゴニストコンジュゲートを以下の表２に示す。

【表2】

【0279】

（実施例３）
グルタミンアンタゴニストデンドリマーコンジュゲートＴＴＭ０２０（構造ＶＩＩ）は、神経炎症のネズミモデルにおける脳標的係合を示す
方法
動物および薬物投与
マウスの右線条体中にＬＰＳ（２．５ｍｇ／ｋｇ）を頭蓋内注射した。１時間後、デンドリマー－ＴＴＭ０２０または空のデンドリマーを、ＤＯＮ当量で２ｍｇ／ｋｇの用量でＩＰ投与した。１２および７２時間後、マウスを屠殺し、右半球を取り出し、以下で記載されるようにＣＤ１１ｂ細胞を抽出した。以下で記載されるようにグルタミナーゼ活性アセスメントを行った。

【0280】

脳ＣＤ１１ｂ＋細胞の単離
断頭術によってマウスを屠殺し、右線条体をただちに取り出した。ＣＤ１１ｂ＋細胞を単離した。簡単に述べると、脳組織をＨＢＳＳ（カタログ番号５５０２１Ｃ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）中で刻み、製造業者の取扱説明書に従って、神経組織解離キット（Ｐ）（カタログ番号１３０－０９２－６２８、ＭＡＣＳ Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）で解離した。７０μｍセルストレーナーに通過させた後、得られたホモジネートを３００×ｇで１０分間遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを再懸濁し、ミエリンを、製造業者の取扱説明書に従って、Ｍｙｅｌｉｎ Ｒｅｍｏｖａｌ Ｂｅａｄｓ ＩＩ（カタログ番号１３０－０９６－７３３、ＭＡＣＳ Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）によって除去した。ミエリンを除去した細胞ペレットを再懸濁し、ＣＤ１１ｂ ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（カタログ番号１３０－０９３－６３４、ＭＡＣＳ Ｍｉｌｉｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ａｕｂｕｒｎ、ＣＡ）と１５分間インキュベートし、ＬＳカラムにロードし、ｑｕａｄｒｏＭＡＣＳマグネットで分離した。ＣＤ１１ｂ＋細胞をＬＳカラムから洗い流し、次いで洗浄し、無菌ＨＢＳＳ（カタログ番号５５０３７Ｃ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）中に再懸濁した。生存細胞の数を血球計および０．１％トリパンブルー染色を使用して決定した。各脳抽出から５×１０^５個の生存可能なＣＤ１１ｂ＋細胞が得られた。この抗体結合マイクロビーズ法によって脳ホモジネートから単離されたＣＤ１１ｂ＋細胞は、ミクログリアが豊富な集団（単離された細胞の９５％超）であることが実証されている。

【0281】

グルタミナーゼ活性
次に、ＣＤ１１ｂ＋細胞におけるグルタミナーゼ活性測定を行った。簡潔には、細胞を、プロテアーゼ阻害剤（カタログ番号０４６９３１１６００１、Ｒｏｃｈｅ）を含有する氷冷リン酸カリウム緩衝液（４５ｍＭ、ｐＨ８．２）中で超音波処理することによって溶解した。前頭前皮質、海馬、および小脳から単離されたＣＤ１１ｂ＋および非ＣＤ１１ｂ＋細胞に関しては、溶解物を［^３Ｈ］－グルタミン（０．０９μＭ、２．７３μＣｉ）と室温で１８０分間インキュベートし、反応を、９６ウェルマイクロプレート中、５０μｌの反応体積で行った。次いで、反応を、イミダゾール緩衝液（２０ｍＭ、ｐＨ７）を添加することによって終了させた。強アニオンイオン交換樹脂（カタログ番号１４０－１２５１、Ｂｉｏ－Ｒａｄ、ＡＧ（登録商標）１－Ｘ２樹脂、２００～４００メッシュ、塩化物型）を充てんした９６ウェルスピンカラムを使用して、［３Ｈ］－グルタメートから未反応の［^３Ｈ］－グルタミンを分離した。［^３Ｈ］－グルタメートを、０．１Ｎ ＨＣｌを用いてカラムから溶出し、その９６ウェルＬｕｍａＰｌａｔｅｓ（カタログ番号６００５１７３）と組み合わせたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ’ｓ ＴｏｐＣｏｕｎｔ機器を使用して放射能に関して分析した。総タンパク質の測定を、製造業者の取扱説明書に従って、ＢｉｏＲａｄ’ｓ Ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ Ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅタンパク質アッセイキットを使用して行った。１分あたりのカウントをｆｍｏｌに変換し、総タンパク質含有量に対して正規化した。データはｆｍｏｌ／ｍｇ／時間として表示される。

【0282】

結果
実験設定を図１２に示す。デンドリマー－ＴＴＭ０２０（図１３）は、薬物投与後２４時間と７２時間の両方で非コンジュゲートデンドリマーと比較して、グルタミナーゼ活性を有効に阻害した（図１４）。デンドリマーコンジュゲートＤＯＮアナログであるＴＴＭ０２０は、これらのマウスの脳において持続したグルタミナーゼ阻害を提供した。

【0283】

（実施例４）
デンドリマー－ＣＹ５は全身投与後脳腫瘍に選択的に位置する
方法
腫瘍接種および処置投与
６～８週齢の雄および雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、ＤＴＰ／ＤＣＴＤ／ＮＣＩ腫瘍リポジトリ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＡ）から取得したＧＬ２６１ネズミ膠芽腫細胞を頭蓋内接種した。ＧＬ２６１細胞を、１０％ＦＢＳ、１％Ｐ／Ｓ、および１％Ｌ－グルタミンを含むＲＰＭＩ中、３７℃および５％ＣＯ_２雰囲気で維持した。マウスを、ケタミン（Ｖｅｄｃｏ、Ｓｔ．Ｊｏｓｅｐｈ、ＭＯ）およびキシラジン（Ａｋｏｒｎ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ、Ｌａｋｅ Ｆｏｒｅｓｔ、ＩＬ）カクテルで麻酔した。正中線で頭皮の切開を行い、ブレグマの後方１ｍｍおよび正中線の側方２ｍｍに穿頭孔を開けた。２μＬのＨａｍｉｌｔｏｎシリンジ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｒｅｎｏ、ＮＶ）を深さ２．５ｍｍまで下げて、定位フレームおよび自動シリンジポンプ（ＳｔｏｅｌｔｉｎｇＣｏ．、Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ、ＩＬ）を使用して、１００，０００個の細胞を含有するＧＬ２６１細胞溶液２μＬを１０分にわたって注入した。シリンジを０．５ｍｍ／分で引き抜き、切開部を縫合した（Ｅｔｈｉｃｏｎ Ｉｎｃ．、Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ、ＮＪ）。

【0284】

処置の影響をアセスメントするために、ＧＬ２６１脳腫瘍担持マウスを、腫瘍接種後１０日目から開始し、４日ごとに２ｍｇ／ｋｇの用量（遊離薬物およびデンドリマー－コンジュゲートと同等の薬物用量）で腹腔内投与されるデンドリマー－ＫＭＮ０４５（図１６）または遊離ＤＯＮによって処置した。接種後２０日目に（またはマウスが２０日目より前に安楽死基準を満たした場合は罹患時に）脳を採取した。腫瘍を切除し、まとめ、腫瘍負荷を総脳質量のうちの腫瘍質量パーセントとして計算した。

【0285】

結果
共焦点顕微鏡および齧歯類腫瘍接種９Ｌ神経膠肉腫モデルを使用すると、Ｄ－Ｃｙ５（２４時間）の全身投与によって選択的な脳腫瘍取り込みが生じることが実証された（図１５）。さらに、全脳におけるＤ－Ｃｙ５の定量化によって、腫瘍周囲および対側脳領域と比べて、腫瘍において顕著な蓄積が示された。Ｄ－Ｃｙ５濃度を、０時間から４８時間までの曲線下面積（ＡＵＣ０－４８ｈ）を計算することによって定量化した（ｐ＜０．０５）。ＴＡＭへの類似の選択的局在化がＧＬ２６１マウスモデルにおいて示された（Ｚｈａｎｇ Ｆ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ． ２０１５；５２およびＬｉａｗ Ｋ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＆ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ． ２０２０）。

【0286】

グルタミンアンタゴニストデンドリマーコンジュゲートであるＤ－０４５は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるＧＢＭのＧＬ２６１ネズミモデルで直接試験した場合、遊離ＤＯＮと比べて優れた有効性を示した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。コンジュゲートは２０％未満の活性薬物を放出した（図１８）。これらのデータは概念実証を提供した。

【0287】

（実施例５）
デンドリマー－ＤＯＮ（ＴＴＭ０２０）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで腫瘍ホモジネートにおいてＤＯＮ放出を示し、ｉｎ ｖｉｖｏで体重に明らかな副作用を一切示さずに腫瘍成長の完全な退縮を示す。
方法
Ｃ５７ＢＬ／６／ＥＬ４腫瘍担持マウスを使用して、ｉ．ｐ．経路でＤ－ＤＯＮを投与した後に有効性研究を行った。簡潔には、ＥＬ４細胞をｓ．ｃ．注射し（０．３×１０^６個）、腫瘍成長をモニターした。処置に関しては、およそ４００ｍｍ^３の平均腫瘍体積を有する動物を２群－ビヒクルおよびＤ－ＤＯＮ（ＤＯＮ等価用量で２ｍｇ／ｋｇ；ｎ＝７／群）に無作為化した。動物には、２週間にわたり３日／週で投薬し、同時にＶｅｒｎｉｅｒキャリパー（ＶＷＲ、ＵＳＡ）を使用して腫瘍体積、体重、および死亡を記録した。研究は、腫瘍の完全な退縮まで継続した。

【0288】

結果
腫瘍ホモジネート中でインキュベートしたデンドリマー－ＤＯＮ（ＴＴＭ０２０）は、ＤＯＮの時間依存的放出を示した（図１９Ａ）。ＤＤＯＮ処置は、腫瘍の成長抑制だけではなく腫瘍の完全な退縮も示した（図１９Ｂ）。処置の際、体重への影響は観察されず、デンドリマー－ＤＯＮは十分な忍容性を示したことが示唆された（図１９Ｃ）。

【0289】

デンドリマー－グルタミンアンタゴニストコンジュゲートの全身投与は、活性化免疫細胞において持続的なグルタミンアンタゴニストの薬物レベルを提供し、顕著な用量減少を可能にし、治療指数における実質的な改善をもたらし、この治療戦略を臨床開発にするのを実行可能にすることが確立された。

【0290】

（実施例６）
デンドリマー－Ｃｙ５は、慢性社会的敗北ストレス（ｃｈｒｏｎｉｃ ｓｏｃｉａｌ ｄｅｆｅａｔ ｓｔｒｅｓｓ）（ＣＳＤＳ）後のマウスにおいて活性化ミクログリアによって貪食される
方法
ＣＳＤＳから１０日後（またはＣＳＤＳなし）のＣ５７ＢＬ／６マウスに５０ｍｇ／ｋｇのＤ－Ｃｙ５を注射し、２４時間後にＰＢＳの経心的灌流を介して屠殺した。脳を４％パラホルムアルデヒドで２４時間、後固定し、－８０℃で凍結後、厚さ３０μｍの薄片にし、ミクログリア（Ｉｂａ１）、アストロサイト（Ａｌｄｈ１ｌ１）、および核（ＤＡＰＩ）に関して染色した。

【0291】

結果
Ｃｙ５を使用して、蛍光標識ＰＡＭＡＭデンドリマー（Ｄ－Ｃｙ５）を合成し、以前に記載されているように特徴付け（Ｉｅｚｚｉ， Ｒ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ． ２０１２， ３３ （３）， ９７９－９８８；Ｌｅｓｎｉａｋ， Ｗ． Ｇ． ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ． ２０１３， １０ （１２）， ４５６０－４５７１）、ＣＳＤＳ後のマウスにおけるその脳浸透を試験した。ＣＳＤＳ後のマウスにおける活性化ミクログリアは、デンドリマーを選択的に貪食することが観察された。陽性Ｄ－Ｃｙ５シグナルが、ＣＳＤＳ後にマウスの海馬の歯状回付近で観察され、Ｉｂａ１染色とオーバーラップし、ミクログリア取り込みを示した。Ｄ－Ｃｙ５シグナルはアストロサイト（Ａｌｄｈ１ｌ１）において観察されなかった。非ＣＳＤＳマウスからの脳では陽性シグナルは一切認められなかった。

【0292】

（実施例７）
デンドリマー－ＴＴＭ０２０は、ＣＳＤＳに供されたマウスにおいてミクログリアのグルタミナーゼ活性を阻害する
方法
ＣＳＤＳを確立後、マウスにＤ－ＴＴＭ０２０（２０ｍｇ／ｋｇ）を経口的に処置し、ミクログリアが豊富なＣＤ１１ｂ＋細胞を投与してから２４時間後に海馬から単離した。次いで、タンパク質をこれらの細胞から抽出し、グルタミナーゼ活性を測定した。

【0293】

結果
以前の本発明者らの報告（Ｚｈｕ， Ｘ． ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． ２０１９， ４４ （４）， ６８３－６９４）と一致して、ＣＳＤＳに曝露されたマウスは、グルタミナーゼ活性の有意な増加を示した。Ｄ－ＴＴＭ０２０は、ＣＳＤＳマウスからのミクログリアが豊富なＣＤ１１ｂ＋細胞における上方調節されたグルタミナーゼ活性を減弱させ（図２０）、機能的な標的係合が成功したことを示した。

【0294】

以前の報告では、グルタミンアンタゴニズムは、ミクログリアのグルタミナーゼ活性におけるストレス誘発性の増加、炎症性サイトカイン産生を阻害し、抑うつを含むストレス誘発性精神障害を研究するために使用される十分に確立された齧歯類モデルである慢性社会的敗北ストレス（ＣＳＤＳ）によって誘発された社会的回避および快感消失を正常化することが示されている（Ｚｈｕ， Ｘ． ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． ２０１９， ４４ （４）， ６８３－６９４）。グルタミンアンタゴニズムは堅固な治療有効性を示すが、その慢性的な投薬は、消化管毒性をもたらすことが公知であり、そのトランスレーショナルな適用は限定されている。その顕著な臨床的潜在能を考慮し、ヒドロキシル－デンドリマーナノ粒子送達システムを使用して、炎症を有する脳にグルタミンアンタゴニストを直接標的化することによってこの限定に取り組んだ。デンドリマー－ＴＴＭ０２０（Ｄ－ＴＴＭ０２０）の全身投与は、持続的な脳薬物レベルを提供し、同時に末梢からは迅速に消失し、その忍容性に実質的な改善をもたらし、そのストレス関連心理社会的行動欠損において堅固な有効性を維持する。

【0295】

別段の定義がない限り、本明細書において使用される全ての技術および科学用語は、開示される発明が属する当業者に通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書において引用される刊行物およびそこで引用される材料は、参照により具体的に組み込まれるものとする。

【0296】

当業者であれば、日常的な実験だけを使用して、本明細書において記載される本発明の具体的な実施形態に対する多くの均等物を認識または確認することができるであろう。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【図13】

【図14】

【図15】

【図16】

【図17】

【図18】

【図19】

【図20A】

【図20B】

【図20C】

【図21】

【国際調査報告】