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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-21
(54)【発明の名称】インビトロ溶出法
(51)【国際特許分類】
G01N 33/68 20060101AFI20240514BHJP
【ＦＩ】
G01N33/68
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023567916
(86)(22)【出願日】2022-05-05
(85)【翻訳文提出日】2023-12-26
(86)【国際出願番号】 US2022027910
(87)【国際公開番号】W WO2022235963
(87)【国際公開日】2022-11-10
(31)【優先権主張番号】63/184,629
(32)【優先日】2021-05-05
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＲＩＴＯＮ
２．ＰＬＵＲＯＮＩＣ
３．ＴＷＥＥＮ
(71)【出願人】
【識別番号】391015708
【氏名又は名称】ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ－ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ
(74)【代理人】
【識別番号】100145403
【弁理士】
【氏名又は名称】山尾 憲人
(74)【代理人】
【識別番号】100126778
【弁理士】
【氏名又は名称】品川 永敏
(74)【代理人】
【識別番号】100162695
【弁理士】
【氏名又は名称】釜平 双美
(74)【代理人】
【識別番号】100156155
【弁理士】
【氏名又は名称】水原 正弘
(74)【代理人】
【識別番号】100162684
【弁理士】
【氏名又は名称】呉 英燦
(72)【発明者】
【氏名】ルゥ，シュージン
(72)【発明者】
【氏名】ロ，リリ
【テーマコード（参考）】
2G045
【Ｆターム（参考）】
2G045AA40
2G045DA36
(57)【要約】
本開示は、可動式パドルを使用して容器に入れられた溶液を撹拌することを含む、溶質のインビトロ溶出法であって、溶液は、溶質、媒質、および複数のビーズを含み、パドルは、溶液中に沈められる、溶解法を提供する。いくつかの態様では、複数のビーズは溶質と可動式パドルの間に配置される。いくつかの態様では、溶質は複数のビーズによって挟まれ、溶質は、複数のビーズの上と下の両方に配置される。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
可動式パドルを使用して容器に入れられた溶液を撹拌することを含むインビトロ溶出法であって、溶液が、溶質、媒質、および複数のビーズを含み、複数のビーズが、溶質と可動式パドルとの間に配置され、可動式パドルが、溶液中に沈められる、インビトロ溶出法。
【請求項2】
撹拌の前に、（ｉ）容器の底部に溶質を添加することと、
（ｉｉ）容器の底部に複数のビーズを添加することであって、複数のビーズが溶質の上に添加されることと、
（ｉｉｉ）容器に、ある容量の媒質を添加することであって、媒質が溶質および複数のビーズの上に添加されることと
によって溶液を容器に入れることを含む、請求項１に記載のインビトロ溶出法。
【請求項3】
溶質または複数のビーズを撹拌することなく媒質を添加する、請求項２に記載のインビトロ溶出法。
【請求項4】
可動式パドルが静止位置にある間、可動式パドルが複数のビーズまたは溶質と接触しない、請求項１～３のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項5】
溶質が持続性注射剤を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項6】
溶質が持続性注射用ミクロスフェアを含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項7】
複数のビーズが、１つもしくは複数のガラスビーズ、１つもしくは複数のプラスチックビーズ、１つもしくは複数のケイ酸塩ビーズ、１つもしくは複数の金属ビーズ、またはそれらの任意の組合せを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項8】
複数のビーズが、直径が少なくとも約０．０１ｍｍ、少なくとも約０．０５ｍｍ、少なくとも約０．１ｍｍ、少なくとも約０．５ｍｍ、少なくとも約１．０ｍｍ、少なくとも約１．５ｍｍ、または少なくとも約２．０ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項9】
複数のビーズが、直径が約１．０ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項10】
容器内の溶液の容量が、可動式パドル、複数のビーズ、および溶質を沈めるのに十分である、請求項１～９のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項11】
容器内の溶液の容量が、少なくとも約５０ｍＬ、少なくとも約６０ｍＬ、少なくとも約７０ｍＬ、少なくとも約７５ｍＬ、少なくとも約８０ｍＬ、少なくとも約９０ｍＬ、または少なくとも約１００ｍＬである、請求項１～１０のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項12】
複数のビーズが、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３ｇのビーズ、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４ｇのビーズ、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約５ｇのビーズ、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約６ｇのビーズ、または約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約７ｇのビーズを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項13】
複数のビーズが、１００ｍＬの溶液あたり約４ｇのビーズを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項14】
複数のビーズが、１００ｍＬの溶液あたり約６ｇ未満のビーズを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項15】
溶質が、生物活性部分を担持した持続性注射用ミクロスフェアを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項16】
溶出中に容器にカバーをかけることをさらに含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項17】
カバーが、溶出中の蒸発した溶液の損失を低減または排除する、請求項１６に記載のインビトロ溶出法。
【請求項18】
溶液のｐＨを調整する、請求項１～１７のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項19】
複数のビーズの追加容量が溶質の下に添加される、請求項１～１８のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項20】
（ｉ）持続性注射用ミクロスフェアを含む溶質を、容器の底部に添加することと、（ｉｉ）１つまたは複数のガラスビーズを含む複数のビーズを、溶質の上に添加することと、
（ｉｉｉ）溶質および当該容量のビーズに媒質を添加することであって、媒質が、溶質または当該容量のビーズを撹拌することなく添加され、媒質が、可動式パドルを沈めるのに十分な容量で添加されることと、
（ｉｖ）可動式パドルを回転および／または振動させる力を加えて、溶液を撹拌することと
を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項21】
（ｉ）１つまたは複数のガラスビーズを含む第１の複数のビーズを、容器の底部に添加することと、（ｉｉ）持続性注射用ミクロスフェアを含む溶質を、複数のビーズの上に添加することと、
（ｉｉｉ）１つまたは複数のガラスビーズを含む第２の複数のビーズを、溶質の上に添加することと、
（ｉｖ）溶質および当該容量のビーズに媒質を添加することであって、媒質が、溶質または当該容量のビーズを撹拌することなく添加され、媒質が、可動式パドルを沈めるのに十分な容量で添加されることと、
（ｖ）可動式パドルを回転および／または振動させる力を加えて、溶液を撹拌することと
を含む、請求項１～１８のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項22】
溶質および／または複数のビーズに、ある容量の媒体溶液を添加することをさらに含み、当該容量の媒体溶液が、溶質および／または複数のビーズを湿らすには十分であるが、完全には沈めない、請求項１～２１のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項23】
媒質中の溶出した溶質の存在を検出することをさらに含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項24】
検出が、溶液中にプローブを入れること、溶液のサンプルを得ること、またはそれらの組合せを含む、請求項２３に記載のインビトロ溶出法。
【請求項25】
媒質中の溶出した溶質の存在が、可動式パドルの上方にある溶液をプローブで調べ、および／またはその一部からサンプルを得ることによって検出される、請求項２３または２４に記載のインビトロ溶出法。
【請求項26】
溶質が、生物活性部分を含む持続性注射剤を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項27】
生物活性部分が、低分子またはポリペプチドを含む、請求項２６に記載のインビトロ溶出法。
【請求項28】
ポリペプチドの分子量が、約１０ｋＤａ未満、約９ｋＤａ未満、約８ｋＤａ未満、約７ｋＤａ未満、約６ｋＤａ未満、約５ｋＤａ未満、または約４ｋＤａ未満である、請求項２７に記載のインビトロ溶出法。
【請求項29】
ポリペプチドの分子量が約４ｋＤａである、請求項２７または２８に記載のインビトロ溶出法。
【請求項30】
溶液が界面活性剤をさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項31】
界面活性剤が、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＴＲＩＴＯＮ Ｘ１００、ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｆ－６８、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項３０に記載のインビトロ溶出法。
【請求項32】
溶液が抗菌薬をさらに含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載のインビトロ溶出法。
【請求項33】
（ｉ）容器と、（ｉｉ）複数のビーズと、
（ｉｉｉ）媒質と、
（ｉｖ）可動式パドルであって、容器内に配置することができる可動式パドルと、
（ｖ）適宜のカバーと、
（ｖｉ）請求項１～３２のいずれか一項に記載の方法に従って溶質を溶出するための指示書と
を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２１年５月５日に出願された米国仮出願第ＵＳ６３／１８４，６２９号の優先権および利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０２１年５月５日に出願された米国仮出願第ＵＳ６３／１８４，６２９号の優先権および利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
本開示は、溶質、例えば持続性注射剤のインビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）溶出法を提供する。
【背景技術】
【0003】
持続性注射剤（ＬＡＩs）は、数日または数週間にわたる徐放性プロファイルを示す製剤である。ＬＡＩは、投与回数を減らし、患者のコンプライアンスを向上させるために、多くの開発候補品の治療価値を引き出すための重要かつしばしば現実的なアプローチを示している。ＬＡＩ製剤の開発中に、また、医薬品（ｄｒｕｇ ｐｒｏｄｕｃｔ）のバッチ間品質評価中に、インビトロ薬物放出試験および溶出試験は、規制当局および産業界の双方からの関心と期待が高まる中、重要な役割を担っている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0004】
現在、ＬＡＩのインビトロ溶出に最も使用されている方法は、（１）サンプル分離法、（２）透析法、および（３）フロースルー法である。これらの方法は、低分子のＬＡＩには一般的によく適用されているが、ペプチドなどの大きな分子に適用した場合、その成功は限定的であった。このように、当技術分野では、重要な品質属性に関して堅牢性および識別能力を示し、インビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）での性能を予測できる溶出法に対するニーズが残っている。
【課題を解決するための手段】
【0005】
本開示のいくつかの態様は、可動式パドルを使用して容器に入れられた溶液を撹拌することを含むインビトロ溶出法に関し、溶液は、溶質、媒質、および複数のビーズを含み、複数のビーズは、溶質と可動式パドルとの間に配置され、可動式パドルは、溶液中に沈められる。
【0006】
いくつかの態様では、本方法は、撹拌の前に、（ｉ）容器の底部に溶質を添加すること、（ｉｉ）容器の底部に複数のビーズを添加することであって、複数のビーズが溶質の上に添加されること、ならびに容器に、ある容量の媒質を添加することであって、媒質が溶質および複数のビーズの上に添加されることによって溶液を容器に入れることを含む。
【0007】
いくつかの態様では、媒質は、溶質または複数のビーズを撹拌することなく添加される。いくつかの態様では、可動式パドルが静止位置にある間、可動式パドルは複数のビーズまたは溶質と接触しない。
【0008】
いくつかの態様では、溶質は持続性注射剤を含む。いくつかの態様では、溶質は持続性注射用ミクロスフェアを含む。
【0009】
いくつかの態様では、複数のビーズは、１つもしくは複数のガラスビーズ、１つもしくは複数のプラスチックビーズ、１つもしくは複数のケイ酸塩ビーズ、１つもしくは複数の金属ビーズ、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が少なくとも約０．０１ｍｍ、少なくとも約０．０５ｍｍ、少なくとも約０．１ｍｍ、少なくとも約０．５ｍｍ、少なくとも約１．０ｍｍ、少なくとも約１．５ｍｍ、または少なくとも約２．０ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．０ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。
【0010】
いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は、可動式パドル、複数のビーズ、および溶質を沈めるのに十分である。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は、少なくとも約５０ｍＬ、少なくとも約６０ｍＬ、少なくとも約７０ｍＬ、少なくとも約７５ｍＬ、少なくとも約８０ｍＬ、少なくとも約９０ｍＬ、または少なくとも約１００ｍＬである。
【0011】
いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３ｇのビーズ、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４ｇのビーズ、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約５ｇのビーズ、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約６ｇのビーズ、または約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約７ｇのビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、１００ｍＬの溶液あたり約４ｇのビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、１００ｍＬの溶液あたり約６ｇ未満のビーズを含む。
【0012】
いくつかの態様では、溶質は、生物活性部分を担持した持続性注射用ミクロスフェアを含む。
【0013】
いくつかの態様では、本方法は、溶解中に容器にカバーをかけることをさらに含む。いくつかの態様では、カバーは、溶解中の蒸発した溶液の損失を低減または排除する。
【0014】
いくつかの態様では、溶液のｐＨを調整する。
【0015】
いくつかの態様では、複数のビーズの追加容量が溶質の下に添加される。
【0016】
いくつかの態様では、本方法は、（ｉ）容器の底部に溶質を添加することであって、溶質が持続性注射用ミクロスフェアを含むこと、（ｉｉ）溶質の上に複数のビーズを添加することであって、複数のビーズが１つまたは複数のガラスビーズを含むこと、（ｉｉｉ）溶質および当該容量のビーズに媒質を添加することであって、媒質が、溶質または当該容量のビーズを撹拌することなく添加され、媒質が、可動式パドルを沈めるのに十分な容量で添加されること、ならびに（ｉｖ）可動式パドルを回転および／または振動させる力を加え、溶液を撹拌することを含む。
【0017】
いくつかの態様では、本方法は、（ｉ）容器の底部に第１の複数のビーズを添加することであって、複数のビーズが１つまたは複数のガラスビーズを含むこと、（ｉｉ）複数のビーズの上に溶質を添加することであって、溶質が持続性注射用ミクロスフェアを含むこと、（ｉｉｉ）溶質の上に第２の複数のビーズを添加することであって、複数のビーズが１つまたは複数のガラスビーズを含むこと、（ｉｖ）溶質および当該容量のビーズに媒質を添加することであって、媒質が、溶質または当該容量のビーズを撹拌することなく添加され、媒質が、可動式パドルを沈めるのに十分な容量で添加されること、ならびに（ｖ）可動式パドルを回転および／または振動させる力を加え、溶液を撹拌することを含む。
【0018】
いくつかの態様では、本方法は、溶質および／または複数のビーズに、ある容量の媒体溶液を添加することをさらに含み、当該容量の媒体溶液は、溶質および／または複数のビーズを湿らすには十分であるが、完全には沈めない。
【0019】
いくつかの態様では、本方法は、媒質中の溶解した溶質の存在を検出することをさらに含む。いくつかの態様では、検出は、溶液中にプローブを入れること、溶液のサンプルを得ること、またはそれらの組合せを含む。いくつかの態様では、媒質中の溶解した溶質の存在は、可動式パドルの上方にある溶液をプローブで調べ、および／またはその一部からサンプルを得ることによって検出される。
【0020】
いくつかの態様では、溶質は、生物活性部分を含む持続性注射剤を含む。いくつかの態様では、生物活性部分は低分子またはポリペプチドを含む。いくつかの態様では、ポリペプチドの分子量は、約１０ｋＤａ未満、約９ｋＤａ未満、約８ｋＤａ未満、約７ｋＤａ未満、約６ｋＤａ未満、約５ｋＤａ未満、または約４ｋＤａ未満である。いくつかの態様では、ポリペプチドの分子量は約４ｋＤａである。
【0021】
いくつかの態様では、溶液は界面活性剤をさらに含む。いくつかの態様では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ＴＲＩＴＯＮ Ｘ１００、ＰＬＵＲＯＮＩＣ Ｆ－６８、およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される。いくつかの態様では、溶液は抗菌薬をさらに含む。
【0022】
本開示のいくつかの態様は、容器；複数のビーズ；媒質；可動式パドルであって、容器内に配置することができる可動式パドル；適宜のカバー；および本明細書に開示される任意の方法に従って溶質を溶出するための指示書を含むキットに関する。
【図面の簡単な説明】
【0023】
【0024】
【0025】
【0026】
【0027】
【図5】図５Ａは、時間（ｘ軸）に対するＬＡＩミクロスフェアからの医薬品エキセナチドの溶出（ｙ軸）のグラフ表示であり、ＬＡＩは、３７℃で４ｇのガラスビーズ（直径１ｍｍ）の下に配置され、緩衝液は、３３ｍＭのＰＯ４および０．１％ＴＷＥＥＮ２０（菱形）または０．３％ＴＷＥＥＮ２０（正方形）を含む。図５Ｂは、時間（ｘ軸）に対するＬＡＩミクロスフェアからの医薬品エキセナチドの溶出（ｙ軸）のグラフ表示であり、ＬＡＩは、３７℃で４ｇのガラスビーズ（直径１ｍｍ）の下に配置され、緩衝液は、３３ｍＭのＰＯ４および０．１％ＴＷＥＥＮ２０（菱形）、０．１％ＴｒｉｔａｎＸ１００（正方形）、または０．１％Ｐｌｕｏｒｏｎｉｃ Ｆ－６８（三角形）を含む。
【0028】
【0029】
【0030】
【0031】
【図9A】図９Ａ～９Ｃは、２０μｍ未満（図９Ａおよび９Ｃ）、５０μｍ未満（図９Ｂ～９Ｃ）、および１００μｍ未満（図９Ａおよび９Ｃ）の粒径（ＰＳ）における脂肪酸－リラキシン（ＦＡ－ＲＬＸ）医薬品の溶出のグラフ表示であり、ＦＡ－ＲＬＸは、０．５ｍｍガラスビーズの下に配置され、パドルを使用した３５ｒｐｍでのかき混ぜ（ｓｔｉｒｒｉｎｇ）に供される。図９Ｃは、図９Ａおよび９Ｂに示されたデータのオーバーレイを示す。
【発明を実施するための形態】
【0032】
本開示は、可動式パドルを使用して容器に入れられた溶液を撹拌することを含むインビトロ溶出法を提供し、溶液は、溶質、媒質、および複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは溶質と可動式パドルの間に配置され、可動式パドルは溶液中に沈められる。いくつかの態様では、溶質は容器の底部に配置される。いくつかの態様では、複数のビーズの第１の部分は容器の底部に配置され、溶質は複数のビーズの第１の部分の上に配置され、複数のビーズの第２の部分は溶質の上に配置される。本明細書に開示される方法は、持続性注射剤（ＬＡＩ）、例えば、医薬品を担持したＬＡＩミクロスフェアを含むが、これらに限定されない、いかなる溶質の溶出にも使用することができる。
【0033】
Ｉ．用語
本開示をより容易に理解できるように、最初に特定の用語を定義する。本出願で使用される場合、本明細書に明示的に規定されている場合を除き、以下の各用語は、以下に定める意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願を通して記載されている。
本開示をより容易に理解できるように、最初に特定の用語を定義する。本出願で使用される場合、本明細書に明示的に規定されている場合を除き、以下の各用語は、以下に定める意味を有するものとする。さらなる定義は、本出願を通して記載されている。
【0034】
「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」実体という用語は、その実体の１つまたは複数を指し、例えば、「１つのヌクレオチド配列（ａ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）」は、１つまたは複数のヌクレオチド配列を表すと理解されることに留意されたい。そのため、本明細書では、「１つの（ａ）」（または「１つの（ａｎ）」）、「１つまたは複数の」、および「少なくとも１つの」という用語を互換的に使用することができる。
【0035】
さらに、本明細書において使用される「および／または」は、２つの指定された特徴または構成要素の各々について、他方の特徴または構成要素を有するかまたは有さない具体的な開示とみなされる。したがって、本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」（単独）、および「Ｂ」（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される「および／または」という用語は、以下の各態様であるＡ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を包含することを意図している。
【0036】
本明細書において「含む」という語で態様が記載されている場合にはいつでも、「からなる」および／または「から本質的になる」という用語で記載されている他の類似の態様も提供されることが理解される。
【0037】
特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本開示が関連する技術分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press；およびOxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Pressは、本開示で使用される多くの用語の一般的な辞書を当業者に提供する。
【0038】
単位、接頭語、および記号は、国際単位系（ＳＩ）で認められている形式で表記する。数値範囲は、その範囲を定義する数値を含む。別段の指示がない限り、ヌクレオチド配列は５’から３’の方向で左から右に書かれている。アミノ酸配列はアミノからカルボキシの方向で左から右に書かれている。本明細書で提供される見出しは、本開示の様々な態様を限定するものではなく、明細書全体を参照することによって有することができる。したがって、以下で直ちに定義される用語は、明細書全体を参照することによって、より完全に定義される。
【0039】
本明細書で使用される場合、「溶質」という用語は、溶媒に溶解可能なあらゆる物質を指す。いくつかの態様では、溶質は、例えば、本明細書に開示される方法を使用する溶出の前またはその間には、固体状態にある。いくつかの態様では、溶質は、例えば、本明細書に開示される方法を使用する溶出後には、溶解した状態にある。特定の態様では、溶質は持続性注射剤（ＬＡＩ）である。本明細書に開示される方法は、いずれのＬＡＩを溶出するために用いられ得る。いくつかの態様では、ＬＡＩはミクロスフェアである。いくつかの態様では、溶質は、生物活性部分を担持したＬＡＩミクロスフェアを含む。
【0040】
本明細書で使用される場合、「溶媒」という用語は、溶質を溶解することができる液体物質を指す。いくつかの態様では、溶媒は緩衝液を含む。いくつかの態様では、溶媒はカリウム緩衝液、例えばＰＢＳを含む。
【0041】
本明細書で使用される場合、「持続性注射剤」または「ＬＡＩ」という用語は、例えば、数日または数週間にわたって徐放性プロファイルを示す薬物製剤を指す。いくつかの態様では、ＬＡＩは、少なくとも約１２時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、少なくとも約９６時間、少なくとも約１０８時間、少なくとも約１２０時間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約８日間、少なくとも約９日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１１日間、少なくとも約１２日間、少なくとも約１３日間、少なくとも約１４日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約１６日間、少なくとも約１７日間、少なくとも約１８日間、少なくとも約１９日間、少なくとも約２０日間、または少なくとも約２１日間、少なくとも約２２日間の放出プロファイルを有する。いくつかの態様では、ＬＡＩは、少なくとも約１週間、少なくとも約１．５週間、少なくとも約２週間、少なくとも約２．５週間、少なくとも約３週間、少なくとも約３．５週間、少なくとも約４週間、少なくとも約５週間、少なくとも約６週間、少なくとも約７週間、または少なくとも約８の放出プロファイルを有する。いくつかの態様では、ＬＡＩは生物活性部分を含む。いくつかの態様では、ＬＡＩは生物活性部分および担体を含む。いくつかの態様では、担体は可溶性ミクロスフェアを含む。いくつかの態様では、ミクロスフェアはポリ－（Ｄ，Ｌ－ラクチド－Ｃｏ－グリコリド）（「ＰＬＧ」）ミクロスフェアである。ＰＬＧの式を式Ｉに示す。
いくつかの態様では、ＬＡＩはヒドロゲルを含む。いくつかの態様では、ＬＡＩは液晶を含む。いくつかの態様では、ＬＡＩはミクロスフェア、ヒドロゲル、および液晶の１つまたは複数の組合せを含む。いくつかの態様では、生物活性部分はＬＡＩ内、例えばＰＬＧミクロスフェア内にカプセル化される。
【化1】
いくつかの態様では、ＬＡＩはヒドロゲルを含む。いくつかの態様では、ＬＡＩは液晶を含む。いくつかの態様では、ＬＡＩはミクロスフェア、ヒドロゲル、および液晶の１つまたは複数の組合せを含む。いくつかの態様では、生物活性部分はＬＡＩ内、例えばＰＬＧミクロスフェア内にカプセル化される。
【0042】
本明細書で使用される場合、「生物活性部分」とは、生体に関する生物学的システム、経路、分子、または相互作用の任意の物理的特性または生化学的特性に影響を及ぼすことができる任意の物質を指す。特に、本明細書で使用される場合、生物活性分子としては、ヒトもしくは他の動物における疾患もしくは状態、例えば線維症に関連する疾患もしくは状態を診断、治癒、緩和、治療、もしくは予防することを意図した任意の物質、またはさもなければヒトもしくは動物の身体的もしくは精神的な健康を増強することを意図した任意の物質が挙げられるが、これらに限定されない。生物活性部分は、ポリペプチド（例えば、タンパク質（例えば、酵素、増殖因子、サイトカイン、ケモカイン、リガンド、受容体、ホルモン、抗体、抗原、それらのフラグメント、またはそれらの任意の組合せ）、ヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ（例えば、ｓｓＤＮＡ、ｄｓＤＮＡ、プラスミド、それらのフラグメント、またはそれらの任意の組合せ）、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｄｓＲＮＡ、それらのフラグメント、またはそれらの任意の組合せ）、アンチセンスオリゴマー、そのフラグメント、またはそれらの任意の組合せ）、Ｃａｓ９ヌクレアーゼ、ＴＡＬＥＮヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ、低分子、またはそれらの任意の組合せを含むことができる。いくつかの態様では、生物活性部分は低分子を含む。いくつかの態様では、生物活性部分はポリペプチドを含む。いくつかの態様では、ポリペプチドの分子量の分子量は、約２０ｋＤａ未満、約１５ｋＤａ未満、約１４ｋＤａ未満、約１３ｋＤａ未満、約１２ｋＤａ未満、約１１ｋＤａ未満、約１０ｋＤａ未満、約９ｋＤａ未満、約８ｋＤａ未満、約７ｋＤａ未満、約６ｋＤａ未満、約５ｋＤａ未満、約４ｋＤａ未満である。いくつかの態様では、ポリペプチドの分子量は、約４ｋＤａ、約５ｋＤａ、約６ｋＤａ、約７ｋＤａ、約８ｋＤａ、約９ｋＤａ、または約１０ｋＤａである。
【0043】
薬物または治療剤の「治療有効量」または「治療有効投与量」とは、単独で、または別の治療剤と組み合わせて使用された場合に、対象を疾患の発症から保護するか、あるいは疾患症状の重症度の減少、疾患症状のない期間の頻度および期間の増加、または疾患の苦痛による欠陥もしくは障害の予防によって証明される疾患の退行を促進する、薬物の任意の量である。疾患の退行を促進する治療剤の能力は、臨床試験中のヒト対象、ヒトにおける有効性を予測する動物モデル系などにおいて、またはインビトロアッセイにおける薬剤の活性測定により、熟練医師に公知の様々な方法を使用して評価することができる。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法は、治療有効量のＬＡＩ医薬品の溶解度をインビトロで測定するために使用される。
【0044】
「対象」としては、任意のヒトまたは非ヒト動物が挙げられる。「非ヒト動物」という用語には、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ならびにマウス、ラット、およびモルモットなどのげっ歯類などの脊椎動物が含まれるが、これらに限定されない。好ましい態様では、対象はヒトである。本明細書では、「対象」と「患者」という用語は互換的に使用される。
【0045】
「約」または「から本質的になる」という用語は、当業者によって決定される特定の値または組成について許容可能な誤差範囲内にある値または組成を指し、これは、値または組成がどのように測定または決定されるか、すなわち測定システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」または「から本質的になる」は、当技術分野の慣行に従って、１標準偏差以内または１標準偏差を超えることを意味することができる。あるいは、「約」または「から本質的になる」は、１０％までの範囲を意味することもある。さらに、特に生物学的システムまたはプロセスに関しては、この用語は値の最大１桁、または最大５倍を意味することがある。本出願および特許請求の範囲に特定の値または組成が記載されている場合、特に断りのない限り、「約」または「から本質的になる」の意味は、その特定の値または組成について許容可能な誤差範囲内であると仮定すべきである。
【0046】
本明細書に記載の通り、あらゆる濃度範囲、パーセンテージ範囲、比率範囲または整数範囲は、別段の指示がない限り、記載された範囲内の任意の整数、および適切な場合にはその端数（例えば、整数の１０分の１および１００分の１）の値を含むと理解される。
【0047】
本開示の様々な態様を、以下の小項目においてさらに詳細に説明する。
【0048】
ＩＩ．本開示の方法
本開示の特定の態様は、可動式パドルを使用して容器に入れられた溶液を撹拌することを含むインビトロ溶出法に関し、溶液は、溶質、媒質、および複数のビーズを含み、パドルは、溶液中に沈められる。いくつかの態様では、複数のビーズは溶質と可動式パドルの間に配置される。
本開示の特定の態様は、可動式パドルを使用して容器に入れられた溶液を撹拌することを含むインビトロ溶出法に関し、溶液は、溶質、媒質、および複数のビーズを含み、パドルは、溶液中に沈められる。いくつかの態様では、複数のビーズは溶質と可動式パドルの間に配置される。
【0049】
本明細書に開示される方法は、既存の方法よりも改善された溶出および溶液品質を提供する。特にＬＡＩのインビトロ溶出において最も一般的な方法は、（１）サンプル分離法、（２）透析法、および（３）フロースルー法である。例えば、Seidlitz et al., J. Pharm. Pharmacol. 64:969-85 (2012)を参照されたい。これらの方法は低分子のＬＡＩにはうまく適用されているが、ペプチドなどの大きな分子を含む製剤の溶出にはあまり適しておらず、例えばペプチドの凝集または粒子の損失を引き起こしている。透析法は、透析膜の分子量カットオフ値の影響を受け、その値は、ＬＡＩ製剤から放出された後のバルクへのペプチド拡散に影響を及ぼす可能性がある。フロースルー法は、公定のＵＳＰ ａｐｐａｒａｔｕｓ ４（「ＵＳＰ ＩＶ」）を使用するが、ペプチドＬＡＩに使用する場合、滅菌効果が弱いという欠点があり、溶出試験中にペプチドの分解を引き起こす。
【0050】
本明細書に開示される方法は、容器内の溶質を複数のビーズ、例えばガラスビーズの下に配置し、溶質およびビーズを媒質中に沈め、可動式パドルを媒質中に沈めてビーズの上方に配置し、可動式パドルが静止位置にあるとき、可動式パドルがビーズと接触しないようにすることによって、従来の方法の限界を克服する。これらの方法は、従来の方法よりも一貫性、堅牢性、溶解性を短期間で高める。
【0051】
いくつかの態様では、本方法は、撹拌の前に、（ｉ）容器の底部に溶質を添加すること、（ｉｉ）容器の底部に複数のビーズを添加することであって、複数のビーズが溶質の上に添加されること、ならびに（ｉｉｉ）容器に、ある容量の媒質を添加することであって、媒質が溶質および複数のビーズの上に添加されることによって溶液を容器に入れることを含む。
【0052】
本明細書に開示される方法には、どのような容器も使用することができる。いくつかの態様では、容器は、少なくとも約１００ｍＬの溶液と可動式パドルを納めるのに十分な大きさのバイアル（ｖｉｌｅ）であり、可動式パドルは少なくとも約１００ｍＬの溶液中に沈められる。いくつかの態様では、容器は小容量容器である。いくつかの態様では、容器はＨＡＮＳＯＮ小容量容器である。いくつかの態様では、容器は溶出の間、溶解槽中に配置される。本明細書に開示される方法には、どのような溶解槽も使用することができる。いくつかの態様では、溶解槽は、少なくとも約３４℃、少なくとも約３５℃、少なくとも約３６℃、少なくとも約３７℃、少なくとも約３８℃、少なくとも約３９℃、少なくとも約４０℃、少なくとも約４１℃、少なくとも約４２℃、少なくとも約４３℃、少なくとも約４４℃、または少なくとも約４５℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約３７℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約３８℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約３９℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約４０℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約４１℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約４２℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約４３℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約４４℃の温度を維持する。いくつかの態様では、溶解槽は約４５℃の温度を維持する。
【0053】
いくつかの態様では、溶質は容器の底部に直接添加される。いくつかの態様では、第１の複数のビーズが容器の底部に添加され、次いで溶質が第１の複数のビーズの上に添加される。本明細書に開示される方法には、どのような容量の溶質も適用することができる。溶質の量を増やすことは、容器の大きさ、複数のビーズの量、および／または容器に添加する溶媒の容量を１倍以上増やすことで対応することができる。いくつかの態様では、溶質の量は、医薬品の単回単位用量、例えば治療有効用量に相当する。いくつかの態様では、溶質の量は医薬品の治療有効用量と一致するように意図されており、その結果、本方法を使用して医薬品のインビボ溶出を正確に予測することができる。
【0054】
いくつかの態様では、媒体溶液は溶質の上に添加され、例えば溶質を湿らせる。いくつかの態様では、媒体溶液は、溶質、例えば医薬品製剤の貯蔵に使用される溶液を含む。いくつかの態様では、媒体溶液の容量は、溶質および／または複数のビーズを湿らすには十分であるが、完全には沈めない。いくつかの態様では、約５ｍＬ未満、約４．５ｍＬ未満、約４ｍＬ未満、約３．５ｍＬ未満、約３ｍＬ未満、約２．５ｍＬ未満、約２ｍＬ未満、約１．５ｍＬ未満、約１ｍＬ未満、約０．５ｍＬ未満の媒体溶液を溶質の上に添加する。いくつかの態様では、約０．５ｍＬの媒体溶液を治療有効量のＬＡＩに添加する。
【0055】
いくつかの態様では、複数のビーズを容器内の溶質の上に添加する。本明細書に開示される方法には、どのようなビーズも使用することができる。いくつかの態様では、複数のビーズは、１つもしくは複数のガラスビーズ、１つもしくは複数のプラスチックビーズ、１つもしくは複数のケイ酸塩ビーズ、１つもしくは複数の金属ビーズ、またはそれらの任意の組合せを含む。いくつかの態様では、複数のビーズはガラスビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズはプラスチックビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズはケイ酸塩ビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは金属ビーズを含む。
【0056】
本明細書に開示される方法には、任意の大きさのビーズを使用することができる。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が少なくとも約０．０１ｍｍ、少なくとも約０．０２ｍｍ、少なくとも約０．０３ｍｍ、少なくとも約０．０４ｍｍ、少なくとも約０．０５ｍｍ、少なくとも約０．０６ｍｍ、少なくとも約０．０７ｍｍ、少なくとも約０．０８ｍｍ、少なくとも約０．０９ｍｍ、少なくとも約０．１ｍｍ、少なくとも約０．２ｍｍ、少なくとも約０．３ｍｍ、少なくとも約０．４ｍｍ、少なくとも約０．５ｍｍ、少なくとも約０．６ｍｍ、少なくとも約０．７ｍｍ、少なくとも約０．８ｍｍ、少なくとも約０．９ｍｍ、少なくとも約１．０ｍｍ、少なくとも約１．１ｍｍ、少なくとも約１．２ｍｍ、少なくとも約１．３ｍｍ、少なくとも約１．４ｍｍ、少なくとも約１．５ｍｍ、少なくとも約１．６ｍｍ、少なくとも約１．７ｍｍ、少なくとも約１．８ｍｍ、少なくとも約１．９ｍｍ、または少なくとも約２．０ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約０．５ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約０．６ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約０．７ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約０．８ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約０．９ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．０ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．１ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．２ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．３ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．４ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、直径が約１．５ｍｍである１つまたは複数のビーズを含む。
【0057】
いくつかの態様では、複数のビーズは等しい大きさのビーズを含む。いくつかの態様では、複数のビーズは異なる大きさのビーズの混合物を含む。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約５０％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約６０％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約７０％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約７５％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約８０％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約８５％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約９０％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約９５％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約９６％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約９７％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約９８％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。いくつかの態様では、ビーズの少なくとも約９９％がほぼ同じ大きさ（例えば、約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍの範囲内）である。
【0058】
溶質に添加される複数のビーズの量は、溶質の量、容器の容量、容器の形状、溶液の容量、またはそれらの組合せに基づいて調整することができる。いくつかの態様では、複数のビーズ中のビーズの量は、溶質をビーズで覆うのに必要な量に相当する。いくつかの態様では、溶質はビーズの下に配置される。いくつかの態様では、溶質はビーズによって挟まれ、例えば、溶質は、溶質の上と下の両方にビーズがあるように配置される。いくつかの態様では、複数のビーズは２ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。例えば、複数のビーズがプラスチックビーズを含む態様では、プラスチックビーズの容量は、ガラスビーズに相当する容量よりも重量が小さく、すなわち、３ｇのガラスビーズに相当するの容量が２ｇのプラスチックビーズになる可能性がある。逆に、金属ビーズは同じ大きさのガラスビーズよりも単位質量が大きい場合がある。このように、複数のビーズが金属ビーズを含む態様では、３ｇのガラスビーズに相当するの容量は４ｇの金属ビーズになる可能性がある。いくつかの態様では、複数のビーズは２．５ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．１ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．２ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．３ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．４ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．５ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．６ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．７ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．８ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは３．９ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．０ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．１ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．２ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．３ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．４ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．５ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．６ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．７ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．８ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは４．９ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは５．０ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは５．５ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは６．０ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは６．５ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは７．０ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは７．５ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。いくつかの態様では、複数のビーズは８．０ｇのガラスビーズに相当する容量を含み、ガラスビーズの平均直径は約１．０ｍｍである。
【0059】
いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約２ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約２．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．１ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．２ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．３ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．４ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．６ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．７ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．８ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約３．９ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．１ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．２ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．３ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．４ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．６ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．７ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．８ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約４．９ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）、約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約６ｇのビーズ、または約１００ｍＬの溶液あたり少なくとも約７ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約３．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約３．６ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約３．７ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約３．８ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約３．９ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約４ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約４．１ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約４．２ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約４．３ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約４．４ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約４．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約５．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約６ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約６．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約７ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。いくつかの態様では、複数のビーズは、約１００ｍＬの溶液あたり約７．５ｇのビーズ（例えば、直径約１ｍｍのガラスビーズ）を含む。
【0060】
いくつかの態様では、複数のビーズの添加後、容器は媒質、例えば溶媒および／または緩衝液で満たされる。本明細書に開示される方法には、どのような媒質も使用することができる。いくつかの態様では、媒質は溶質に合わせて調整される。いくつかの態様では、媒質はリン酸緩衝液を含む。いくつかの態様では、媒質はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含む。いくつかの態様では、媒質は、少なくとも約２０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約２５ｍＭのＰＯ４、少なくとも約３０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約３３ｍＭのＰＯ４、少なくとも約３５ｍＭのＰＯ４、少なくとも約４０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約４５ｍＭのＰＯ４、少なくとも約５０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約５５ｍＭのＰＯ４、少なくとも約６０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約６５ｍＭのＰＯ４、少なくとも約７０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約７５ｍＭのＰＯ４、少なくとも約８０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約９０ｍＭのＰＯ４、少なくとも約９５ｍＭのＰＯ４、または少なくとも約１００ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約３３ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約４０ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約５０ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約６０ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約７０ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約８０ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約９０ｍＭのＰＯ４を含む。いくつかの態様では、媒質は少なくとも約１００ｍＭのＰＯ４を含む。
【0061】
いくつかの態様では、媒質は界面活性剤をさらに含む。いくつかの態様では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ２０）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ８０）、ＴｒｉｔｏｎＸ１００、ｐｌｕｏｒｏｎｉｃ Ｆ－６８、およびそれらの任意の組合せから選択される。いくつかの態様では、界面活性剤はポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ２０）を含む。いくつかの態様では、界面活性剤はポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ８０）を含む。いくつかの態様では、界面活性剤はＴｒｉｔｏｎＸ１００を含む。いくつかの態様では、界面活性剤はｐｌｕｏｒｏｎｉｃ Ｆ－６８を含む。いくつかの態様では、媒質は、少なくとも約０．０１％、少なくとも約０．０２％、少なくとも約０．０３％、少なくとも約０．０４％、少なくとも約０．０５％、少なくとも約０．０６％、少なくとも約０．０７％、少なくとも約０．０８％、少なくとも約０．０９％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．３％、少なくとも約０．４％、少なくとも約０．５％、少なくとも約０．６％、少なくとも約０．７％、少なくとも約０．８％、少なくとも約０．９％、少なくとも約１．０％の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．１％の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．２％の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．３％の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．４％の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．５％の界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０）を含む。
【0062】
いくつかの態様では、媒質は抗菌薬をさらに含む。本明細書に開示される方法には、どのような抗菌薬も使用することができる。いくつかの態様では、微生物薬剤はアジ化ナトリウムを含む。いくつかの態様では、媒質は、少なくとも約０．０１％、少なくとも約０．０２％、少なくとも約０．０３％、少なくとも約０．０４％、少なくとも約０．０５％、少なくとも約０．０６％、少なくとも約０．０７％、少なくとも約０．０８％、少なくとも約０．０９％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、少なくとも約０．３％、少なくとも約０．４％、少なくとも約０．５％、少なくとも約０．６％、少なくとも約０．７％、少なくとも約０．８％、少なくとも約０．９％、少なくとも約１．０％の抗菌薬（例えば、アジ化ナトリウム）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．１％の抗菌薬（例えば、アジ化ナトリウム）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．２％の抗菌薬（例えば、アジ化ナトリウム）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．３％の抗菌薬（例えば、アジ化ナトリウム）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．４％の抗菌薬（例えば、アジ化ナトリウム）を含む。いくつかの態様では、媒質は約０．５％の抗菌薬（例えば、アジ化ナトリウム）を含む。
【0063】
いくつかの態様では、媒質は複数のビーズの上に添加され、複数のビーズは溶質の上に配置される。いくつかの態様では、媒質は、溶質および／または複数のビーズの撹拌を引き起こさない速度で添加される。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は、少なくとも約５０ｍＬ、少なくとも約６０ｍＬ、少なくとも約７０ｍＬ、少なくとも約７５ｍＬ、少なくとも約８０ｍＬ、少なくとも約９０ｍＬ、または少なくとも約１００ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約９０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１００ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１１０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１２０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１３０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１４０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１５０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１６０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１７０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１８０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約１９０ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約２００ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約３００ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約４００ｍＬである。いくつかの態様では、容器内の溶液の容量は約５００ｍＬである。媒質は、可動式パドルが静止位置にある間に添加される。溶液の総容量は、本明細書に開示される方法に供される溶質の総量に依存する。溶質の量が多ければ、溶液の総容量も多く必要となる。溶液の総容量は、溶質、複数のビーズ、および可動式パドルを沈めるのに十分でなければならない。
【0064】
本明細書に開示される方法には、どのような可動式パドルも使用することができる。いくつかの態様では、可動式パドルは容器に取り付けられ、可動式パドルが容器内で溶液表面の下方および複数のビーズの上方に配置されるようになっている。いくつかの態様では、可動式パドルは容器に直接取り付けられるのではなく、可動式パドルが容器内で溶液表面の下方および複数のビーズの上方に位置するように配置される。いくつかの態様では、パドルの大きさは、パドルが容器の壁に接触しないような大きさである。本開示の可動式パドルは、溶液を撹拌するように移動、例えば回転することができる。いくつかの態様では、溶質、複数のビーズ、および媒質が容器に添加された後、本方法は、可動式パドルに力を加えて可動式パドルを回転および／または振動させ、それによって溶液を撹拌することをさらに含む。いくつかの態様では、可動式パドルは、少なくとも約１０ｒｐｍ、少なくとも約１５ｒｐｍ、少なくとも約２０ｒｐｍ、少なくとも約２５ｒｐｍ、少なくとも約３０ｒｐｍ、少なくとも約３５ｒｐｍ、少なくとも約４０ｒｐｍ、少なくとも約４５ｒｐｍ、少なくとも約５０ｒｐｍ、少なくとも約５５ｒｐｍ、少なくとも約６０ｒｐｍ、少なくとも約６５ｒｐｍ、少なくとも約７０ｒｐｍ、少なくとも約７５ｒｐｍ、少なくとも約８０ｒｐｍ、少なくとも約８５ｒｐｍ、少なくとも約９０ｒｐｍ、少なくとも約９５ｒｐｍ、少なくとも約１００ｒｐｍ、少なくとも約１０５ｒｐｍ、少なくとも約１１０ｒｐｍ、少なくとも約１１５ｒｐｍ、少なくとも約１２０ｒｐｍ、少なくとも約１２５ｒｐｍ、少なくとも約１３０ｒｐｍ、少なくとも約１３５ｒｐｍ、少なくとも約１４０ｒｐｍ、少なくとも約１４５ｒｐｍ、少なくとも約１５０ｒｐｍ、少なくとも約１６０ｒｐｍ、少なくとも約１７０ｒｐｍ、少なくとも約１８０ｒｐｍ、少なくとも約１９０ｒｐｍ、または少なくとも約２００ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約２０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約２５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約３０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約３５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約４０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約４５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約５０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約５５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約６０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約６５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約７０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約７５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約８０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約８５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約９０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約９５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１００ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１０５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１１０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１１５ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１２０ｒｐｍの速度で回転する。いくつかの態様では、可動式パドルは少なくとも約１２５ｒｐｍの速度で回転する。
【0065】
本明細書に開示される溶出法の持続時間は、溶質に依存し得る。いくつかの態様では、溶出法は、溶質の少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または約１００％が媒質中に溶解するのに十分な時間、溶質に適用される。いくつかの態様では、溶出法は、溶質に少なくとも約６時間、少なくとも約１２時間、少なくとも約１８時間、少なくとも約２４時間、少なくとも約３０時間、少なくとも約３６時間、少なくとも約４２時間、少なくとも約４８時間、少なくとも約６０時間、少なくとも約７２時間、少なくとも約８４時間、または少なくとも約９６時間適用される。
【0066】
溶質の溶出は、任意の方法を使用して測定することができる。いくつかの態様では、溶液のレベルより低い位置でプローブが容器に入れられる。いくつかの態様では、プローブは可動式パドルの上方に配置される。いくつかの態様では、プローブはその場測定のためのＵＶ光ファイバーを含む。いくつかの態様では、溶出プロセス中に溶液からサンプルを取り出し、サンプル中の溶質の濃度を測定する。いくつかの態様では、サンプルは可動式パドルより上の位置で溶液から得られる。いくつかの態様では、サンプルが得られた後、溶液から取り出されたサンプルの容量に相当する容量の媒質を溶液に添加する。
【0067】
いくつかの態様では、容器は溶出プロセス中に覆われる。いくつかの態様では、容器は溶出プロセス中に覆われており、そのカバーはサンプル採取時のみ取り除かれる。
【0068】
いくつかの態様では、本方法は、（ｉ）持続性注射用ミクロスフェアを含む溶質を容器の底部に添加すること、（ｉｉ）１つまたは複数のガラスビーズを含む複数のビーズを溶質の上に添加すること、（ｉｉｉ）溶質および当該容量のビーズに媒質を添加することであって、媒質を、溶質または当該容量のビーズを撹拌することなく添加し、媒質を、可動式パドルを沈めるのに十分な容量で添加すること、ならびに可動式パドルを回転および／または振動させる力を加えて、溶液を撹拌することを含む。いくつかの態様では、撹拌は、溶質の少なくとも約８０％が溶液中に溶解するまで行われる。いくつかの態様では、撹拌は、溶質の約１００％が溶液中に溶解するまで行われる。
【0069】
いくつかの態様では、本方法は、（ｉ）１つまたは複数のガラスビーズを含む、第１の複数のビーズを容器の底部に添加すること、（ｉｉ）持続性注射用ミクロスフェアを含む溶質を複数のビーズの上に添加すること、（ｉｉｉ）１つまたは複数のガラスビーズを含む、第２の複数のビーズを溶質の上に添加すること、（ｉｖ）溶質および当該容量のビーズに媒質を添加することであって、媒質を、溶質または当該容量のビーズを撹拌することなく添加し、媒質を、可動式パドルを沈めるのに十分な容量で添加すること、ならびに（ｖ）可動式パドルを回転および／または振動させる力を加えて、溶液を撹拌することを含む。いくつかの態様では、撹拌は、溶質の少なくとも約８０％が溶液中に溶解するまで行われる。いくつかの態様では、撹拌は、溶質の約１００％が溶液中に溶解するまで行われる。
【0070】
本開示の特定の態様は、（ｉ）容器、（ｉｉ）複数のビーズ、（ｉｉｉ）媒質、（ｉｖ）可動式パドルであって、容器内に配置することができる可動式パドル、および（ｖ）本明細書に開示される任意の方法に従って溶質を溶出するための指示書を含むキットに関する。本開示の特定の態様は、（ｉ）容器、（ｉｉ）複数のビーズ、（ｉｉｉ）媒質、（ｉｖ）可動式パドルであって、容器内に配置することができる可動式パドル、（ｖ）容器のカバー、および（ｖｉ）本明細書に開示される任意の方法に従って溶質を溶出するための指示書を含むキットに関する。
【0071】
上記で引用したすべての参考文献、および本明細書で引用したすべての参考文献は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【0072】
以下の例は例示であり、限定するものではない。
【実施例】
【0073】
実施例１
ＬＡＩサンプルを容器の底部でガラスビーズを用いて挟み、ガラスビーズの上に撹拌のためにパドルを配置する、ＬＡＩの溶解のための新しいセッティングを開発した（図１）。本実施例では、ペプチド薬物を含むＬＡＩ（ＰＬＧＡミクロスフェア製剤およびヒドロゲル製剤）への本方法の適用を示す。本実施例で使用したペプチドの分子量は約４ｋＤａである。ミクロスフェアの薬物負荷量は、２ｍｇＡＰＩ／用量に対して５重量％であり、週１回の注射用に設計されている。
ＬＡＩサンプルを容器の底部でガラスビーズを用いて挟み、ガラスビーズの上に撹拌のためにパドルを配置する、ＬＡＩの溶解のための新しいセッティングを開発した（図１）。本実施例では、ペプチド薬物を含むＬＡＩ（ＰＬＧＡミクロスフェア製剤およびヒドロゲル製剤）への本方法の適用を示す。本実施例で使用したペプチドの分子量は約４ｋＤａである。ミクロスフェアの薬物負荷量は、２ｍｇＡＰＩ／用量に対して５重量％であり、週１回の注射用に設計されている。
【0074】
Ｄｉｓｔｅｋ２５００溶解槽上の小容量容器（Ｈａｎｓｏｎ）を使用し、各容器に１００ｍＬの媒質を入れて３７℃に保持した。ミニパドルを１００ｒｐｍで使用した。ミクロスフェア製剤の単回投与相当量をまず容器に入れ、続いて０．５ｍＬの媒体を添加してミクロスフェアを湿潤させた。ガラスビーズ（直径１ｍｍ）をサンプルの上に添加し、その後、ガラスビーズを乱さないように慎重に１００ｍＬの媒質を添加した。
【0075】
以下の方法パラメータ、（１）ガラスビーズの量（３ｇ、４ｇ、６ｇ、および９ｇ）、（２）リン酸緩衝液のｐＨ（７．４、９．８、１１、および１２）、（３）緩衝液の濃度（２０、３３、４０、５０、６０、７０、および９０ｍＭ）、（４）界面活性剤（ＴＷＥＥＮ２０、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００、およびＰｌｕｏｒｏｎｉｃ Ｆ－６８）、（５）界面活性剤の濃度（０．１％、０．２％、および０．３％）、（６）媒質の温度（３７℃、および４５℃）、（７）抗菌薬（あり、なし）、および（８）蒸発の制御（あり、なし）を評価した。
【0076】
薬物放出は、所定の時点（１、２、４、８、１２、２４、４８時間など）で、バルクから１ｍＬの一定分量を抜き取り、同量の新鮮な媒質を補充し、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を行って試験した。
【0077】
結果
【0078】
この溶出法は、ペプチドＰＬＧＡミクロスフェアＬＡＩ製剤の溶出試験において良好な許容性を示した。データによると、４ｇのガラスビーズが最も迅速に医薬品を溶出し（図２）、６回の別々の試行にわたって再現性のある結果が得られた（図３）。ｐＨ７．４のリン酸緩衝液は生体関連であったが、開発中に溶出試験の加速と所要時間の短縮が求められた場合には、ｐＨ１２を使用した（図４）。しかしながら、ｐＨは溶質に依存する可能性が高い。界面活性剤の特定の種類と量は溶出に大きな影響を与えず（図５Ａ～５Ｂ）、緩衝液の濃度は溶出に大きな影響を与えず（図６）、媒質の温度は溶出速度に大きな影響を与えないようであった（図８）。０．０２％のアジ化ナトリウムを媒質に添加した場合、放出されたペプチドの分解は観察されなかった（図７）。媒質の蒸発量は、約１ｍＬ／日／１００ｍＬと測定された（データは示していない）。これらの結果に基づき、０．２％ＴＷＥＥＮ２０を添加した３３ｍＭのリン酸緩衝液を選択した。
【0079】
実施例２
本明細書に開示される新規の方法を、従来のＵＳＰ２法およびＵＳＰ４法と比較した。ＬＡＩミクロスフェア製剤の溶出にＵＳＰ２法を使用した場合、サンプルの導入に湿潤剤を使用したにもかかわらず、ミクロスフェアが溶出媒質の表面に浮いているのが観察された。また、ミクロスフェアは凝集しやすく、シャフトの周囲に浮遊し、サンプリングおよび検出に影響を与えた。ＵＳＰ２法をヒドロゲル製剤および液晶製剤に適用した場合、サンプルは容器壁の底部に積み重なり、媒質への曝露が減少するために薬物放出が遅くなった。
本明細書に開示される新規の方法を、従来のＵＳＰ２法およびＵＳＰ４法と比較した。ＬＡＩミクロスフェア製剤の溶出にＵＳＰ２法を使用した場合、サンプルの導入に湿潤剤を使用したにもかかわらず、ミクロスフェアが溶出媒質の表面に浮いているのが観察された。また、ミクロスフェアは凝集しやすく、シャフトの周囲に浮遊し、サンプリングおよび検出に影響を与えた。ＵＳＰ２法をヒドロゲル製剤および液晶製剤に適用した場合、サンプルは容器壁の底部に積み重なり、媒質への曝露が減少するために薬物放出が遅くなった。
【0080】
ＵＳＰ４を使用して同じ製剤を試験した場合、媒質にアジ化ナトリウムを添加したにもかかわらず、容器内で微生物が増殖した。この増殖を克服する適切な方法は見つかっていない。微生物の増殖により、溶出試験および薬物放出試験中にＬＡＩ製剤中のペプチドが切断され、クロマトグラムに非特異的なピークが生じた。
【0081】
ガラスビーズを用いてミクロスフェア、ヒドロゲル、または液晶のＬＡＩサンプルを挟むことで、パドルを使用する比較的低いかき混ぜスピードで薬物放出試験を円滑に行うことができる。また、これにより、ＵＶ光ファイバーを使用して、サンプリングなしで溶出中のその場測定を行うことが可能になり、試験の簡便性と生産性が向上し、ばらつきが減少する。
【0082】
実施例３
本明細書に開示される溶出法は、脂肪酸－リラキシン（ＦＡ－ＲＬＸ）持続性注射製剤の溶出に使用した。ＦＡ－ＲＬＸの懸濁液は持続性注射製剤として設計されている。ＦＡ－ＲＬＸの２０μｍ未満、５０μｍ未満、および１００μｍ未満のＦＡ－ＲＬＸの粒径（ＰＳ）を試験した。表示された粒径のＦＡ－ＲＬＸを１７．５ｍｇ／ｍＬの濃度でＭｉｇｌｙｏｌ ８１２Ｎに懸濁した。次いで、０．５ｍＬのそれぞれの懸濁液を、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の４％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン５０ｍＬで満たした２００ｍＬ容器中の０．５ｍｍガラスビーズの下に配置した。ガラスビーズの上方にパドルを置き、３４℃、３５ｒｐｍのかき混ぜ速度で溶出させた。溶出したＦＡ－ＲＬＸの割合は、２９３～３２３ｎｍ（プローブ経路長２ｍｍ）での二階導関数により、２４時間にわたって５分ごとに、合計２８８回測定した。
本明細書に開示される溶出法は、脂肪酸－リラキシン（ＦＡ－ＲＬＸ）持続性注射製剤の溶出に使用した。ＦＡ－ＲＬＸの懸濁液は持続性注射製剤として設計されている。ＦＡ－ＲＬＸの２０μｍ未満、５０μｍ未満、および１００μｍ未満のＦＡ－ＲＬＸの粒径（ＰＳ）を試験した。表示された粒径のＦＡ－ＲＬＸを１７．５ｍｇ／ｍＬの濃度でＭｉｇｌｙｏｌ ８１２Ｎに懸濁した。次いで、０．５ｍＬのそれぞれの懸濁液を、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の４％ヒドロキシプロピル－β－シクロデキストリン５０ｍＬで満たした２００ｍＬ容器中の０．５ｍｍガラスビーズの下に配置した。ガラスビーズの上方にパドルを置き、３４℃、３５ｒｐｍのかき混ぜ速度で溶出させた。溶出したＦＡ－ＲＬＸの割合は、２９３～３２３ｎｍ（プローブ経路長２ｍｍ）での二階導関数により、２４時間にわたって５分ごとに、合計２８８回測定した。
【0083】
パドル下のガラスビーズ法は、ＰＳ２０μｍ未満およびＰＳ１００μｍ未満のＦＡ－ＲＬＸ製剤を用いた懸濁液で再現性を示した（図９Ａ）。ＰＳ２０μｍ未満の懸濁液の溶出プロファイルでは、より速い放出を観察することができる。ＰＳ２０μｍ未満の懸濁液では、６０分後に約９０％の放出が観察された。ＰＳ１００μｍ未満の溶出プロファイルでは、より遅い放出を観察することができる。ＰＳ１００μｍ未満の溶出では、６０分後に約５５％の放出が観察された。ＰＳ２０μｍ未満の懸濁液の溶出プロファイルと他の溶出プロファイルとの間に差を観察することができる。しかしながら、ＰＳ１００μｍ未満の懸濁液の溶出プロファイルは、ＰＳ５０μｍ未満の懸濁液の溶出プロファイルに大きなばらつきがあるため、ＰＳ５０μｍ未満の懸濁液と区別できなかった（図９Ｃ）。
【0084】
本明細書に開示されたすべての刊行物、特許、および特許出願は、個々の刊行物、特許、または特許出願が、参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されている場合と同じ程度まで、参照により組み込まれる。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9A】
【図9B】
【図9C】
【国際調査報告】