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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-21
(54)【発明の名称】固体組成物、フリーズドライ方法およびガラスバイアル
(51)【国際特許分類】
A61K 39/125 20060101AFI20240514BHJP
A61K 39/39 20060101ALI20240514BHJP
A61K 9/19 20060101ALI20240514BHJP
A61K 47/26 20060101ALI20240514BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240514BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240514BHJP
C12N 7/04 20060101ALN20240514BHJP
C12N 15/40 20060101ALN20240514BHJP
【ＦＩ】
A61K39/125
A61K39/39
A61K9/19
A61K47/26
A61P31/14
A61P37/04
C12N7/04 ZNA
C12N15/40
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023571159
(86)(22)【出願日】2022-05-23
(85)【翻訳文提出日】2024-01-12
(86)【国際出願番号】 US2022030550
(87)【国際公開番号】W WO2022246323
(87)【国際公開日】2022-11-24
(31)【優先権主張番号】63/191,713
(32)【優先日】2021-05-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】507028479
【氏名又は名称】タケダ ワクチン，インコーポレイテッド
(74)【代理人】
【識別番号】100079108
【弁理士】
【氏名又は名称】稲葉 良幸
(74)【代理人】
【識別番号】100109346
【弁理士】
【氏名又は名称】大貫 敏史
(74)【代理人】
【識別番号】100117189
【弁理士】
【氏名又は名称】江口 昭彦
(74)【代理人】
【識別番号】100134120
【弁理士】
【氏名又は名称】内藤 和彦
(72)【発明者】
【氏名】ボウミク，トゥヒン
(72)【発明者】
【氏名】ゴン，ケ
(72)【発明者】
【氏名】ツイ，ヂァンロン
(72)【発明者】
【氏名】ウィリアムズ，サード，ロバート，オー．
(72)【発明者】
【氏名】シュー，ハイユエ
【テーマコード（参考）】
4B065
4C076
4C085
【Ｆターム（参考）】
4B065AA95X
4B065AA95Y
4B065BD11
4B065BD22
4B065BD36
4B065CA24
4B065CA45
4C076AA30
4C076BB11
4C076CC06
4C076DD22Z
4C076DD23Z
4C076DD51Z
4C076DD60Z
4C076DD67
4C076FF36
4C076FF61
4C076FF65
4C076GG08
4C085AA04
4C085AA38
4C085BA52
4C085CC08
4C085DD14
4C085DD15
4C085DD84
4C085DD86
4C085EE03
4C085FF02
4C085GG01
(57)【要約】
本発明は、アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む固体組成物を対象にする。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む固体組成物であって、ＶＬＰが、ノロウイルスＶＬＰである、固体組成物。
【請求項2】
抗原粒子が、レーザー回折によって決定された場合、Ｘ９０値が約３０μｍ未満である累積的なアンダーサイズ分布を有する、請求項１に記載の固体組成物。
【請求項3】
抗原粒子が、少なくとも５０％の相対効力を有し、前記相対効力が、参照水性懸濁液の効力に基づき、乾燥に供されていない組成物の前記参照水性懸濁液の抗原粒子中の抗原の効力および固体組成物の抗原粒子中の抗原の効力を測定することにより決定される、請求項１または２に記載の固体組成物。
【請求項4】
抗原粒子が、４週間にわたる４０℃および７５％相対湿度（ＲＨ）における貯蔵後に、少なくとも約５０％の相対効力を有し続ける、請求項３に記載の固体組成物。
【請求項5】
トレハロース、ラクトースおよびスクロースからなる群から選択される糖をさらに含む、または糖アルコールをさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の固体組成物。
【請求項6】
固体組成物における糖の質量に基づく抗原粒子および糖の間の質量比が、約４．２×１０－２以下である、および／または糖の乾燥含量が、少なくとも約６０．００ｗｔ．－％であり、乾燥含量が、水分不含固体組成物に基づき計算される、請求項５に記載の固体組成物。
【請求項7】
抗原粒子および糖の質量の間の質量比が、約２．６８×１０－２であり、抗原粒子およびスクロースの間の質量比が、約２．８×１０－２以下である、および／またはトレハロースおよびスクロースの乾燥組合せ含量が、約７５．７５ｗｔ．－％である、またはスクロースの乾燥含量が、少なくとも約７５．７５ｗｔ．－％である、請求項６に記載の固体組成物。
【請求項8】
２～４％ｗ／ｖトレハロースおよび／または２～５％ｗ／ｖスクロースを含む水性溶液から得られる、請求項５に記載の固体組成物。
【請求項9】
組成物が、アジュバントに吸着されたノロウイルスＶＬＰの１種または複数の異なるジェノグループを含み、前記ジェノグループが、ノロウイルスジェノグループ１（ＧＩ）ＶＬＰおよびノロウイルスジェノグループ２（ＧＩＩ）ＶＬＰからなる群から選択される、請求項１～８のいずれか一項に記載の固体組成物。
【請求項10】
ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰからなる、請求項９に記載の固体組成物。
【請求項11】
約１０μｇ～約１００μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約３０μｇ～約２００μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ、および約３００μｇ～約７００μｇのアジュバントを含有する、請求項１０に記載の固体組成物。
【請求項12】
ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰからなり、組成物が、約１５μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ、または約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび約１５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４ コンセンサスＶＬＰのいずれかを含有し、組成物が、アジュバントとしての水酸化アルミニウムとしての約５００μｇのアルミニウムをさらに含有する、請求項１０または１１に記載の固体組成物。
【請求項13】
アジュバントが、アルミニウム塩である、請求項１～１１のいずれか一項に記載の固体組成物。
【請求項14】
免疫原性組成物である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の固体組成物。
【請求項15】
免疫原性組成物が、ワクチン組成物である、請求項１４に記載の固体組成物。
【請求項16】
アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子の水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法によって得られる固体組成物であって、ＶＬＰが、ノロウイルスＶＬＰであり、方法が、ａ）任意選択により、約２℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ、
ｂ）少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度で、ステップ（ａ）の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ、
ｃ）液体窒素の温度に冷却された容器内に前記第１の凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ、
ｄ）前記第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、固体組成物を得るステップ
を含む、固体組成物。
【請求項17】
請求項１～１５のいずれか一項に記載の固体組成物等の固体形態のノロウイルスワクチンの単一用量を含有するガラスバイアルであって、水性懸濁液の形態の前記単一用量を、液体窒素の温度に冷却されたバイアルの壁にアプライし、懸濁液を凍結させ、バイアル内で懸濁液を乾燥させることによって入手可能な、ガラスバイアル。
【請求項18】
アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子の水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法であって、ＶＬＰが、ノロウイルスＶＬＰであり、方法が、ａ）任意選択により、約２℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ、
ｂ）少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度で、ステップ（ａ）の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ、
ｃ）液体窒素の温度に冷却された容器内に前記第１の凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ、
ｄ）前記第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、請求項１に記載の固体組成物を得るステップ
を含む、フリーズドライ方法。
【請求項19】
組成物が、ノロウイルスジェノグループ１（ＧＩ）ＶＬＰおよびノロウイルスジェノグループ２（ＧＩＩ）ＶＬＰからなる群から選択されるノロウイルスＶＬＰの１種または複数の異なるジェノグループを含む、請求項１８に記載のフリーズドライ方法。
【請求項20】
ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰからなる、請求項１９に記載のフリーズドライ方法。
【請求項21】
組成物が、約１０μｇ～約１００μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約３０μｇ～約２００μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ、および約３００μｇ～約７００μｇのアジュバントを含有する、請求項２０に記載のフリーズドライ方法。
【請求項22】
組成物が、約１５μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ、または約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび約１５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰのいずれかを含有し、組成物が、アジュバントとしての水酸化アルミニウムとしての約５００μｇのアルミニウムをさらに含有する、請求項２０または２１に記載のフリーズドライ方法。
【請求項23】
アジュバントが、アルミニウム塩である、請求項１８～２１のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項24】
水性懸濁液が、トレハロースおよびスクロースからなる群から選択される糖をさらに含む、請求項１８～２３のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項25】
水性懸濁液が、前記懸濁液の総容量に対して少なくとも２％（ｗ／ｖ）または２．４％（ｗ／ｖ）の糖含量を有する、請求項１８～２４のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項26】
水性懸濁液が、約４％（ｗ／ｖ）のトレハロースの含量および任意選択により０．４％（ｗ／ｖ）のスクロース、または少なくとも４％（ｗ／ｖ）もしくは少なくとも４．４％（ｗ／ｖ）のスクロースの含量を有する、請求項１８～２５のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項27】
ステップ（ｂ）における第１の凍結した懸濁液が、約５００μｍ未満の厚さを有するフィルムとして形成される、請求項１８～２６のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項28】
前記フィルムが、水性懸濁液を運動する低温の表面と接触させることにより形成される、請求項２７に記載のフリーズドライ方法。
【請求項29】
ステップ（ａ）における凍結速度が、約５０Ｋ／秒～約１１００Ｋ／秒の範囲に及ぶ、請求項１８～２８のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項30】
ステップ（ｄ）におけるさらなる乾燥条件が、約２０～１００時間の期間および約－５０℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度プロファイルにわたる、約５００ｍＴｏｒｒ未満の圧力での、第２の凍結した懸濁液のフリーズドライを含む、請求項１８～２９のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項31】
抗原粒子が、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイを使用して、組成物が乾燥される前および後の抗原粒子の効力を測定することにより、また、組成物が乾燥される前の効力に基づき決定される、少なくとも５０％の相対効力を有する、請求項１８～３０のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項32】
抗原粒子が、４週間にわたる４０℃および７５％相対湿度（ＲＨ）における貯蔵後に、少なくとも５０％の相対効力を有し続ける、請求項３１に記載のフリーズドライ方法。
【請求項33】
抗原粒子が、レーザー回折によって決定された場合、Ｘ９０値が約３０μｍ未満である累積的なアンダーサイズ分布を有する、請求項１８～３２のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項34】
抗原粒子が、少なくとも５０％の相対効力を有し、前記相対効力が、参照水性懸濁液の効力に基づき、乾燥に供されていない組成物の前記参照水性懸濁液の抗原粒子中の抗原の効力および固体組成物の抗原粒子中の抗原の効力を測定することにより決定される、請求項１８～３３のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法。
【請求項35】
請求項１８～３４のいずれか一項に記載のフリーズドライ方法によって入手可能な、固体組成物。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
関連出願の相互参照
[0001] 本出願は、２０２１年５月２１日に出願された米国特許仮出願第６３／１９１，７１３号に基づく優先権の利益を主張し、当該仮出願の開示は、これにより、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
[0001] 本出願は、２０２１年５月２１日に出願された米国特許仮出願第６３／１９１，７１３号に基づく優先権の利益を主張し、当該仮出願の開示は、これにより、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【0002】
電子的に提出されたテキストファイルの記載
[0002] 本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読フォーマットコピー（ファイル名：ＬＩＧＯ＿０２９＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日２０２１年５月２３日、ファイルサイズ１４，２５１バイト）。
[0002] 本明細書と共に電子的に提出されたテキストファイルの内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：配列表のコンピュータ可読フォーマットコピー（ファイル名：ＬＩＧＯ＿０２９＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日２０２１年５月２３日、ファイルサイズ１４，２５１バイト）。
【0003】
[0003] 本発明は、固体組成物、特に、免疫原性組成物、および水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法、およびある量のノロウイルスワクチンを固体形態で含有するガラスバイアルに関する。
【背景技術】
【0004】
[0004] 世界保健機関（ＷＨＯ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）は、ヒトワクチンの大部分が、輸送および貯蔵中に２～８℃のコールドチェーン貯蔵において保たれることを推奨する（Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｖａｃｃｉｎｅｓ．Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ；２００６を参照）。Ｐｒｅｖｎａｒ－１３およびＧａｒｄａｓｉｌ－９等の多くのワクチンは、アジュバントとして不溶性アルミニウム塩を含有する。残念ながら、緩慢凍結は、不溶性アルミニウム塩微小粒子の不可逆的凝集を引き起こし、ワクチン効力および有効性の損失を生じるため（Ｚａｐａｔａ ＭＩら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ．１９８４；７３（１）：３～８；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１１；２９（４１）：７１２２～４；Ｄｉｍｉｎｓｋｙ Ｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ．１９９９；１８（１～２）：３～１７；およびＢｏｒｏｓ ＣＡら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００１；１９（２５～２６）：３５３７～４を参照）、アルミニウム塩をアジュバントとして入れたワクチンは、輸送または貯蔵中に凍結温度に曝露してはならない。従来のフリーズドライ技法は、相対的に緩慢な凍結速度が原因の不溶性アルミニウム塩微小粒子の不可逆的凝集を、したがって、ワクチン効力および有効性の損失を十分に防止している訳ではない。加えて、液体ワクチン中のタンパク質抗原は脆弱過ぎて、延長された期間にわたり室温以上に曝露されたときに安定ではない。
【0005】
[0005] コールドチェーン要件は、費用のかかる廃棄物をワクチン供給にもたらすため、世界的にワクチンの流通を著しく妨げ（Ｗｉｒｋａｓ Ｔら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２００７；２５（４）：６９１～７；およびＬｙｄｏｎ Ｐら、Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．２０１３；９２：８６～９２を参照）、凍結または熱へのワクチンの不用意な曝露は、その効力を損ない、効力または有効性が最適に満たないワクチンの意図しない投与を生じ得る可能性がある（Ｄｉｍｉｎｓｋｙ Ｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ．１９９９；１８（１－２）：３～１７；Ｎｙｇａａｒｄ ＵＣら、Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．２００４；８２（２）：５１５～２４；Ｄａｖａａｌｋｈａｍ Ｄら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ＆ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｈｅａｌｔｈ．２００７；６１（７）：５７８～８４；Ｍａｎｓｏｏｒ ＯおよびＰｉｌｌａｎｓ Ｐ、Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｊｏｕｒｎａｌ．１９９７；１１０（１０４８）：２７０～２；ならびにＭｅｎｏｎ Ｐら、Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｌ ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９７６；６４（１）：２５～３２を参照）。
【0006】
[0006] この課題に取り組むことには大きな関心があり、これを解決するための戦略は一般に、２つの要素からなる。第１の戦略は、ワクチン中に安定化試薬を添加して、凍結の際の凝集を防止することである。例えば、Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＰＡＴＨ）およびその研究協力者は、アルミニウム塩を含有するワクチンにグリセロール、ポリエチレングリコール３００またはプロピレングリコールを添加することが、ワクチンが－２０℃への複数回の曝露に供された後であっても、ワクチン凝集を防止し、ワクチン免疫原性を保存することを示した（Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１１；２９：７１２２～７１２４．）。Ｚａｐａｔａらも、水酸化アルミニウムにおけるポリマーまたは界面活性剤、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリソルベート８０の吸着が、凍結融解サイクル後の凝集を防止することを報告した（Ｚａｐａｔａ ＭＩら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９８４；７３：３～８．）。安定化剤が、粒子間に大きい立体的反発領域を生じさせ、粒子－粒子相互作用を妨げると考えられる（Ｚａｐａｔａ ＭＩら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９８４；７３：３～８．を参照）。しかし、ワクチンへの上述の賦形剤の添加は、より複雑な製剤をもたらし、ワクチンの用量当たりの費用を増加させ得る。
【0007】
[0007] 別の戦略は、凍結および／または乾燥技法を使用してワクチンを固体形態へと変換することである。しかし、固体形態への変換後に、ワクチンは復元されなければならず、これらの技法およびその後の復元プロセスは、粒子凝集を引き起こすおよび／またはワクチンの免疫原性を著しく変更することが示された。
【0008】
[0008] ノロウイルスは、いかなる年齢の対象においても急性胃腸炎の最も一般的な原因の１つとして指し示された（Ｈａｌｌ ＡＪら、Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓ；２０１６を参照）。ノロウイルスが、著しい罹患率でほぼ７億症例の疾病を引き起こし、世界中で社会的負担を生じる（すなわち、年間総計＄４２億が直接的な保健制度費用において、また、＄６０３億が社会的費用において推定される）ことが報告された（Ｈａｌｌ ＡＪら、Ｔａｙｌｏｒ＆Ｆｒａｎｃｉｓ；２０１６を参照）。年間２００，０００名を超える死亡が、主に開発途上国において、ノロウイルス疾病に起因すると推定され（Ｂａｒｔｓｃｈ ＳＭら、ＰｌｏＳ ｏｎｅ．２０１６；１１（４）：ｅ０１５１２１９）、これらの国々では、貯蔵および輸送のためにコールドチェーンを要求しないワクチンが、最も有益かつ必須となるであろう。２０１６年に、ＷＨＯは、ノロウイルスワクチンの開発が絶対優先であると述べた。液体ノロウイルスワクチン候補が、ヒトにおける疾病の大部分を引き起こす２種のジェノグループを網羅するように筋肉内注射のために開発された（Ｍａｓｕｄａ Ｔら、Ｏｐｅｎ Ｆｏｒｕｍ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ；２０１８：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；およびＢｅｒｎｓｔｅｉｎ ＤＩら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．２０１５；２１１（６）：８７０～８を参照）。具体的には、これは、二価ウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチンであり、懸濁液中の（オキシ）水酸化アルミニウムに吸着された２種のノロウイルス株由来の抗原からなる。第１／２相試験から得られたデータは、このワクチン候補が、一般に耐容性が良く、チャレンジ後にノロウイルス疾病の症状および重症度に臨床的に意義のある影響を有することを示した（Ｍａｓｕｄａ Ｔら、Ｏｐｅｎ Ｆｏｒｕｍ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ；２０１８：Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；およびＢｅｒｎｓｔｅｉｎ ＤＩら、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．２０１５；２１１（６）：８７０～８を参照）。しかし、その複雑な構造が原因で、ＶＬＰに基づくワクチンは、不安定である、すなわち、様々な凍結乾燥条件下でアジュバントありまたはなしで効力損失する傾向があることが予想される。よって、アジュバント入りワクチン、特に、アジュバント入りＶＬＰワクチンの粒子集塊および効力損失に関する上述の（ａｂｏｖｅ－ｍｅｎｉｔｏｎｅｄ）課題に取り組みつつ、貯蔵および輸送のためにコールドチェーンを要求しない形態でのノロウイルスＶＬＰワクチン等のアジュバント入りＶＬＰワクチンを提供することには、現在進行中のかつ満たされていない必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【0009】
[0009] 本発明の目的は、アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む組成物であって、抗原の効力を保存しつつ粒子凝集および抗原損失を十分に防止するために、２℃および８℃等の低温で貯蔵される必要がない組成物を提供することである。
【0010】
[0010] 本発明のさらに別の目的は、抗原の効力を保存しつつ、抗原損失または粒子凝集を引き起こすことなく、アジュバントに吸着されたウイルス様粒子を含む抗原粒子を含む水性懸濁液から、固体組成物を得ることである。
【0011】
[0011] 本発明のさらに別の目的は、アジュバントに吸着されたウイルス様粒子を含む抗原粒子を含む水性懸濁液から固体組成物を得ることであり、相対効力は、５０％～１５０％の、それらの間の全ての範囲および部分的範囲を含めた範囲内であり、相対効力は、水性懸濁液の抗原粒子の効力と比べた固体組成物の抗原粒子の効力によって決定され、効力は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力アッセイによって決定される。
【0012】
[0012] 本発明のさらに別の目的は、アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む組成物であって、組成物が、粒子凝集に関して安定しており、抗原の効力が、苛酷な条件下で、例えば、４週間等の延長された期間にわたり４０℃および７５％相対湿度に曝露された場合に保存される、組成物を提供することである。
【0013】
[0013] 本発明のさらに別の目的は、アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む組成物であって、低い水分含量、特に、前記固体組成物の総質量に基づき３％未満の水分含量を有する組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【0014】
[0014] 上述の目的は、本明細書に記載および請求される本発明の実施形態によって達成される。
【0015】
[0015] 第１の態様によれば、本発明は、したがって、アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む固体組成物を対象にする。
【0016】
[0016] 第２の態様によれば、本発明は、水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法であって、水性懸濁液が、
－ アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子を含む抗原粒子を含み、
－ 方法が、
－ ステップ１：任意選択により約２℃～約１５℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ；
－ ステップ２：少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度でステップ１の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ３：液体窒素の温度に冷却された容器内に凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ４：第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、前記第１の態様に係る固体組成物を得るステップ
を含む、フリーズドライ方法を対象にする。
－ アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子を含む抗原粒子を含み、
－ 方法が、
－ ステップ１：任意選択により約２℃～約１５℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ；
－ ステップ２：少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度でステップ１の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ３：液体窒素の温度に冷却された容器内に凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ４：第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、前記第１の態様に係る固体組成物を得るステップ
を含む、フリーズドライ方法を対象にする。
【0017】
[0017] 第３の態様によれば、本発明は、第２の態様に係るフリーズドライ方法によって入手可能な固体組成物を対象にする。
【0018】
[0018] 第４の態様によれば、本発明は、本発明の第１の態様に係る固体組成物等の固体形態のノロウイルスワクチンの単一用量を含有するガラスバイアルであって、水性懸濁液の形態の前記単一用量を、液体窒素の温度に冷却されたバイアルの壁にアプライし、懸濁液を凍結させ、バイアル内で懸濁液を乾燥させることによって入手可能な、ガラスバイアルを対象にする。
【図面の簡単な説明】
【0019】
【図1】[0019]ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイのための例示的な（Ｅｘｅｍｐｌａｒｉｌｙ）プレートレイアウト。
【図2A】[0020]様々な濃度のトレハロース（すなわち、０～５％、ｗ／ｖ）を使用して薄膜フリーズドライによって調製された粉末から復元されたノロウイルスワクチンの代表的な粒子径分布曲線。測定を３回反復して、同様の結果を得た。
【図2B】[0020]様々な濃度のスクロース（すなわち、０～５％、ｗ／ｖ）を使用して薄膜フリーズドライによって調製された粉末から復元されたノロウイルスワクチンの代表的な粒子径分布曲線。測定を３回反復して、同様の結果を得た。
【図3】[0021]復元後の例示的な製剤（すなわち、５％のスクロースまたは４％のスクロース）を用いた、バルクおよび単一バイアル薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチン粉末の代表的な粒子径分布曲線。２または３本のバイアルを用いて測定を反復して、同様の結果を得た。
【図4A】[0022]株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ抗原に対するＩＶＲＰアッセイによって測定された相対効力（４Ａ）。
【図4B】[0022]ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ抗原に対するＩＶＲＰアッセイによって測定された相対効力（４Ｂ）。
【発明を実施するための形態】
【0020】
定義
[0023] 用語「ＶＬＰ」は、本発明の目的のために、ウイルス様粒子を指すと定義される。ノロウイルスＶＬＰ等のウイルス様粒子は、ウイルスと構造的に同様であるが、感染性遺伝物質を欠如し、したがって、感染性ではない。ＶＬＰは通常、カプシドタンパク質の組換え発現および自発的自己集合によって調製される。
[0023] 用語「ＶＬＰ」は、本発明の目的のために、ウイルス様粒子を指すと定義される。ノロウイルスＶＬＰ等のウイルス様粒子は、ウイルスと構造的に同様であるが、感染性遺伝物質を欠如し、したがって、感染性ではない。ＶＬＰは通常、カプシドタンパク質の組換え発現および自発的自己集合によって調製される。
【0021】
[0024] 本明細書で使用される場合、用語「薄膜フリーズドライ」（ＴＦＦＤ）は、特異的なフリーズドライ方法であり、それによると、約５００μｍ未満の厚さを有する凍結したフィルムの形態の第１の凍結した液体を形成するために、フリーズドライされるべき液体、例えば、溶液または懸濁液は、運動する（例えば、回転する）低温の表面に滴下され、凍結される（典型的には、約１００Ｋ／秒～約１０００Ｋ／秒の範囲またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲に及ぶ凍結速度で）。一部の実施形態では、厚さは、約５０μｍ、６０μｍ、７０μｍ、８０μｍ、９０μｍ、１００μｍ、１５０μｍ、２００μｍ、２５０μｍ、３００μｍ、３５０μｍ、４００μｍ、４５０μｍ、５００μｍ、５５０μｍ、６００μｍ、６５０μｍ、７００μｍ、７５０μｍ、８００μｍ、８５０μｍ、９００μｍ、９５０μｍ、１ｍｍ未満であり、それらの間のいずれかの値を含む。「運動すること」は、本明細書で使用される場合、前記低温の表面およびノズルまたは他の種類のオリフィスの互いとの相対的な運動を指し、それを介して、フリーズドライされるべき液体は流動し、これにより、低温の表面およびオリフィスが互いとの関連で運動する限りにおいて、外部固定点を参照して、低温の表面、オリフィスまたはその両方のいずれかは、運動することができる。一部の実施形態では、運動することは、回転すること、振動すること、平行移動すること、傾けること、分離することまたはこれらのいずれかの組合せを含む。第２の凍結した液体を形成するために、前記凍結したフィルムは、ほとんど液体窒素の温度に冷却された容器内に収集される。この第２の凍結した液体は次いで、２０～１００時間の期間および約５００ｍＴｏｒｒ未満の圧力での約－５０℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度プロファイル等、従来の棚（ｓｈｅｌｆ）フリーズドライの条件と同様のさらなる乾燥条件に供される。用語「フリーズドライ」および「凍結乾燥」は、本明細書で互換的に使用される。
【0022】
[0025] 用語「固体組成物」は、乾燥組成物を指す。一部の実施形態では、用語「乾燥」は、組成物の総質量に基づき約５ｗｔ．－％未満の、より好ましくは、約３ｗｔ．－％未満の水分含量を有する組成物に関し、水分含量は、実施例セクションに示すＫａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定方法等のＫａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定方法を使用して決定される。例えば、固体乾燥組成物は、水性懸濁液に対してＴＦＦＤを実行することにより得ることができる。一部の実施形態では、固体組成物は、約５、４、３、２または１ｗｔ．－％未満の水分含量を有し、それらの間のいずれかの値を含む。
【0023】
[0026] 「Ｘ１０、Ｘ５０およびＸ９０」は、抗原粒子の累積的なアンダーサイズ分布の１０％、５０％および９０％に対応する値を表示する。換言すると、Ｘ１０、Ｘ５０およびＸ９０はそれぞれ、試料中の抗原粒子のそれぞれ１０％、５０％および９０％がより小さい、抗原粒子の寸法を表示する。その代わりに、Ｘ１０、Ｘ５０およびＸ９０は、当技術分野でＤ１０、Ｄ５０およびＤ９０とも称される。Ｘ１０、Ｘ５０およびＸ９０は、ほぼ１０％の不明瞭化（ｏｂｓｃｕｒａｔｉｏｎ）効果を達成するための任意選択による２倍希釈後に、レーザー回折方法を使用して決定される。一部の実施形態では、Ｘ１０、Ｘ５０およびＸ９０は、実施例セクションに記載されているレーザー回折方法によって決定することができる。
【0024】
[0027] 用語「水性懸濁液」は、本明細書に記載されている抗原粒子等の固体の分散について記載し、水性懸濁液は、懸濁液の総質量に対して少なくとも約５０ｗｔ．－％または少なくとも約６０ｗｔ．－％の水分含量を有し、水性懸濁液の総質量に対して分散された固体の５ｗｔ．－％未満、好ましくは、１ｗｔ．－％未満が溶解されている。一部の実施形態では、水分含量は、少なくとも約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０または９５ｗｔ．－％であり、それらの間のいずれかの値を含む。一部の実施形態では、水性溶液の総質量に対して、分散された固体の約５、４、３、２または１ｗｔ．－％未満が溶解されている。一部の実施形態では、水性懸濁液のｐＨは、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９もしくは７．０、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲である。一部の実施形態では、そのような水性懸濁液のｐＨは、約６～約７、好ましくは、約６．４～約６．６の範囲に及ぶ。
【0025】
[0028] 「ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力」（ＩＶＲＰ）アッセイ、例えば、本明細書の実施例セクションに記載されているＩＶＲＰアッセイは、抗原の相対効力を決定するために使用される。したがって、固体組成物と同じ量で同じ構成成分を含み、乾燥に供されていない参照水性懸濁液、例えば、参照ワクチン中の抗原粒子に含まれる抗原の効力と、復元（ｒｅｃｏｎｓｉｔｕｔｉｏｎ）前に乾燥に供された被験ワクチン（例えば、１００μｇ／ｍｌの濃度を有する抗原粒子の水性懸濁液を達成するように固体組成物を復元するために蒸留または滅菌水等の水と混合された固体組成物）の抗原粒子に含まれる抗原の効力とが決定される。その後、相対効力は、被験組成物の効力を参照ワクチンの効力で割ることにより決定される。特に、前記ＩＶＲＰアッセイによって決定される相対効力が、約５０％～約１５０％の範囲に及ぶ許容範囲内にある場合、被験組成物は、苛酷な条件下であっても「安定的」として定義される。
【0026】
[0029] 本明細書で使用される場合、「苛酷な」貯蔵条件は、４週間等の延長された期間にわたる、室温（すなわち、２０℃）または４０℃等、８℃を超える増加させた貯蔵温度および７５％等の相対湿度を含む、固体組成物の貯蔵条件である。一部の実施形態では、苛酷な貯蔵条件は、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９もしくは５０℃、またはそれらの間のいずれかの値を超える貯蔵温度を含む。一部の実施形態では、苛酷な貯蔵条件は、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２週間の期間にわたる非最適条件での貯蔵を含む。一部の実施形態では、苛酷な貯蔵条件は、少なくとも約６０、６５、７０、７５、８０、８５もしくは９０％、またはそれらの間のいずれかの値の湿度への曝露を含む。一部の実施形態では、苛酷な条件は、４週間の延長された期間にわたる４０℃の貯蔵温度および７５％の相対湿度を含む、加速された安定性試験条件に関する。
【0027】
[0030] 本明細書で使用される場合、相対効力を決定するために使用される「参照ワクチン」は、被験ワクチン（例えば、１００μｇ／ｍｌの濃度を有する抗原粒子の水性懸濁液を達成するように固体組成物を復元するために蒸留または滅菌水等の水と混合された固体組成物）と同じ絶対量の同じ構成成分（水以外）、すなわち、本明細書に記載されている抗原粒子が分散された水性懸濁液である。被験ワクチンとは対照的に、「参照水性懸濁液」または「参照ワクチン」は、その効力の測定に先立ち乾燥に供されていない。本明細書で解析される被験ワクチンの相対効力を決定するために、異なる被験ワクチン間の比較性を確実にするために、同じ参照ワクチンが使用される。参照ワクチンは、２℃～８℃の間の温度で連続的に貯蔵される。「参照ワクチン」および被験ワクチンは、互いに独立に調製することができる。
【0028】
[0031] 用語「抗原粒子」は、ＶＬＰを含む抗原が吸着されており、抗体応答を誘導することができる、アジュバント粒子を指す。
【0029】
[0032] 用語「粒子」は、本明細書で使用される場合、本質的に溶解することなく、水性溶液中に分散され得る固体を指す。一部の実施形態では、粒子は、水性溶液中に分散されたときに、少なくとも約０．１μｍ、０．２μｍ、０．３μｍ、０．４μｍ、０．５μｍ、０．６μｍ、０．７μｍ、０．８μｍ、０．９μｍもしくは１．０μｍ、またはそれらの間のいずれかの値の寸法を有する。一部の実施形態では、粒子は、水性溶液中に分散されたときに、少なくとも約０．５μｍの寸法を有する。
【0030】
[0033] 国際ウイルス分類委員会（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｔａｘｏｎｏｍｙ ｏｆ Ｖｉｒｕｓｅｓ）に従った用語「種」は、その特性が複数の基準によって他の種の特性から区別され得る、ウイルスの単系統群として定義される。ノロウイルスは、ウイルス種の一例である。
【0031】
[0034] 用語「遺伝子型」は、本発明の目的のために、ジェノグループＧＩ、ＧＩＩ、ＧＩＩＩおよびＧＩＶ内のノロウイルス遺伝子型等、生物の遺伝的構成を指すと定義される。
【0032】
[0035] 本明細書で使用される場合、「免疫原性組成物」は、抗原粒子を含み、その抗原粒子に基づいて対象における免疫応答を誘発することができる、組成物を指す。この文脈内で、対象は、動物またはヒトであり得る。
【0033】
[0036] 用語「ワクチン」または「ワクチン組成物」は、本発明の目的のために、哺乳類に投与され得る形態の本明細書に開示されるＶＬＰを含有し、哺乳類におけるウイルス感染に対する防御免疫を誘発する製剤を指すと定義される。
【0034】
[0037] 用語「アジュバント粒子」は、本発明の目的のために、例えば、哺乳類ワクチンとして使用される場合に、増強された免疫応答を生じるために水性組成物に添加される化合物を指すと定義される。アジュバント粒子は、例えば、アルミニウム塩であり得る。
【0035】
[0038] 用語「ノロウイルス」は、本発明の目的のために、カリシウイルス（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）科のノロウイルス種のメンバーを指すと定義される。一部の実施形態では、ノロウイルスは、ヒトまたは非ヒト哺乳類種に感染性であり得る、関連するポジティブセンス一本鎖ＲＮＡ、無エンベロープウイルスの群を含むことができる。一部の実施形態では、ノロウイルスは、ヒトにおいて急性胃腸炎を引き起こすことができる。１５種の遺伝的クラスターを含む核酸およびアミノ酸配列によって定義される少なくとも４種の遺伝子型（ＧＩ、ＧＩＩ、ＧＩＩＩ、ＧＩＶ）がノロウイルスの群内に含まれる。主要な遺伝子型は、ＧＩおよびＧＩＩである。ノロウイルスの非限定的な例は、ノーウォークウイルス（ＮＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｍ８７６６１、ＶＰ１配列ＮＰ＿０５６８２１）、サザンプトン（Ｓｏｕｔｈａｍｐｔｏｎ）ウイルス（ＳＨＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｌ０７４１８）、デザートシールド（Ｄｅｓｅｒｔ Ｓｈｉｅｌｄ）ウイルス（ＤＳＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ０４４６９）、ヘッセ（Ｈｅｓｓｅ）ウイルス（ＨＳＶ）、千葉（Ｃｈｉｂａ）ウイルス（ＣＨＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＢ０４２８０８）、ハワイ（Ｈａｗａｉｉ）ウイルス（ＨＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ０７６１１）、スノーマウンテン（Ｓｎｏｗ Ｍｏｕｎｔａｉｎ）ウイルス（ＳＭＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ７００５９）、トロント（Ｔｏｒｏｎｔｏ）ウイルス（ＴＶ、Ｌｅｉｔｅら、Ａｒｃｈ． Ｖｉｒｏｌ．１４１：８６５～８７５）、ブリストル（Ｂｒｉｓｔｏｌ）ウイルス（ＢＶ）、イエナ（Ｊｅｎａ）ウイルス（ＪＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＪ０１１０９９）、メリーランド（Ｍａｒｙｌａｎｄ）ウイルス（ＭＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ０３２６０５）、瀬戸（Ｓｅｔｏ）（愛知（Ａｉｃｈｉ））ウイルス（ＳＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＢ０３１０１３）、キャンバーウェル（Ｃａｍｂｅｒｗｅｌｌ）（ＣＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ１４５８９６）、ローズデール（Ｌｏｒｄｓｄａｌｅ）ウイルス（ＬＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｘ８６５５７）、グリムズビー（Ｇｒｉｍｓｂｙ）ウイルス（ＧｒＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＪ００４８６４）、メキシコ（Ｍｅｘｉｃｏ）ウイルス（ＭＸＶ、ＧｅｎＢａｎｋ Ｕ２２４９８）、ボクサー（Ｂｏｘｅｒ）（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ５３８６７９）、Ｃ５９（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ４３５８０７）、ＶＡ１１５（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ０３８５９８）、ＢＵＤＳ（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ６６０５６８）、ヒューストン（Ｈｏｕｓｔｏｎ）ウイルス（ＨｏＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＥＵ３１０９２７）、ＭＯＨ（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＦ３９７１５６）、パリスアイランド（Ｐａｒｉｓ Ｉｓｌａｎｄ）（ＰｉＶ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ６５２９７９）、ＶＡ３８７（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ０３８６００）、ＶＡ２０７（ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ０３８５９９）およびオペレーションイラクフリーダム（Ｏｐｅｒａｔｉｏｎ Ｉｒａｑｉ Ｆｒｅｅｄｏｍ）（ＯＩＦ、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＹ６７５５５４）を含む。ＧＩＩ．４株等の２種以上のノロウイルス株由来のコンセンサス配列を表す構築物である、ノロウイルスコンセンサスＶＬＰも含まれる。コンセンサス配列が、前記２種以上のノロウイルス株の配列のそれぞれと比較して少なくとも１個の異なるアミノ酸を含有するような、２種以上のノロウイルス株由来のコンセンサス配列に由来するノロウイルス複合ＶＬＰも含まれる。ノロウイルスコンセンサスＶＬＰの構築は、その全体が参照により本明細書に（ｈｅｒｅｗｉｔｈ）組み込まれる、ＷＯ２０１０／０１７５４２に開示されている。
【0036】
詳細な説明
ＶＬＰ種および産生
[0039] ウイルス様粒子（複数可）またはＶＬＰ（複数可）は、ウイルス、特に、無エンベロープウイルスのカプシドタンパク質コード配列から産生された、感染性ウイルスのものと同様の抗原性特徴（複数可）を含む、ウイルス様粒子（複数可）を指す。
ＶＬＰ種および産生
[0039] ウイルス様粒子（複数可）またはＶＬＰ（複数可）は、ウイルス、特に、無エンベロープウイルスのカプシドタンパク質コード配列から産生された、感染性ウイルスのものと同様の抗原性特徴（複数可）を含む、ウイルス様粒子（複数可）を指す。
【0037】
[0040] 一部の実施形態では、ＶＬＰは、無エンベロープウイルスのカプシドタンパク質から産生される。一部の実施形態では、無エンベロープウイルスは、カリシウイルス（例えば、ノロウイルスまたはサポウイルス）、ピコルナウイルス、アストロウイルス、アデノウイルス、レオウイルス、ポリオーマウイルス、パピローマウイルス、パルボウイルスおよびＥ型肝炎ウイルスからなる群から選択される。
【0038】
[0041] 一部の実施形態では、ＶＬＰは、ウイルスの少なくとも１つの種またはウイルスの少なくとも２つの異なる種またはウイルスの少なくとも３つの異なる種またはウイルスの少なくとも４つの異なる種に由来する。
【0039】
[0042] 一部の実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルスＶＬＰ、ロタウイルスＶＬＰ、ＨＰＶ ＶＬＰ、インフルエンザウイルスＶＬＰ、コロナウイルスＶＬＰおよびＢ型肝炎ウイルスＶＬＰの種の群から選択される。一部の好まれる実施形態では、水性組成物は、ノロウイルスＶＬＰおよびロタウイルスＶＬＰの種の群から選択されるＶＬＰを含むことができる。
【0040】
[0043] 一部の実施形態では、ＶＬＰは、少なくとも１種の遺伝子型を含む、またはＶＬＰは、少なくとも２種の異なる遺伝子型を含む、またはＶＬＰは、少なくとも３種の異なる遺伝子型を含む、またはＶＬＰは、少なくとも４種の異なる遺伝子型を含む。一部の実施形態では、ＶＬＰは、個々の遺伝子型由来のカプシドタンパク質で個々に構成されたＶＬＰの混合物を含む。例えば、一部の実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ ＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４ ＶＬＰを含む。一部の実施形態では、ＶＬＰは、複数の遺伝子型を表すコンセンサスカプシドタンパク質配列で構成される。
【0041】
[0044] 一部の実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルスジェノグループＩ（ＧＩ）ＶＬＰ、ノロウイルスジェノグループＩＩ（ＧＩＩ）ＶＬＰ、ノロウイルスジェノグループＩＩＩ（ＧＩＩＩ）ＶＬＰおよびノロウイルスジェノグループＩＶ（ＧＩＶ）ＶＬＰからなる群から選択されるノロウイルスＶＬＰの１種または複数の異なる遺伝子型を含む。一部の好まれる実施形態では、ノロウイルスＶＬＰの遺伝子型は、ノロウイルスジェノグループＩ（ＧＩ）ＶＬＰおよびノロウイルスジェノグループＩＩ（ＧＩＩ）ＶＬＰの群から選択され得る。一部のより好まれる実施形態では、ノロウイルスＶＬＰの遺伝子型は、ノロウイルス遺伝子型Ｉ．１（ＧＩ．１）ＶＬＰ、ノロウイルス遺伝子型ＩＩ．２（ＧＩＩ．２）ＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＩＩ．４（ＧＩＩ．４）ＶＬＰ、例えば、ノーウォークＧＩ．１ウイルスＶＬＰ、およびいくつかのノロウイルスＧＩＩ．４株由来のコンセンサス配列または複合配列を表す構築物の群から選択され得る。さらに（Ｆｕｔｈｅｒｍｏｒｅ）、ＶＬＰが、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰからなることが好まれる。例えば、一部の実施形態では、コンセンサス配列または複合配列は、ヒューストン株、ミネルバ（Ｍｉｎｅｒｖａ）株およびローレンス（Ｌａｕｒｅｎｓ）株からなる群から選択されるノロウイルス株に由来する。一部の実施形態では、ノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰのコンセンサス配列は、配列番号１によって表される（ｒｅｓｐｒｅｓｅｎｔｅｄ）。一部の実施形態では、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰの配列は、配列番号２によって表される。一部の実施形態では、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰの配列は、配列番号３によって表される。一部の実施形態では、ノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰのコンセンサス配列は、配列番号１によって表され（ｒｅｓｐｒｅｓｅｎｔｅｄ）、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰの配列は、配列番号２または３によって表される。一部の実施形態では、配列は、配列番号１、２または３に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％同一性を有する。ノロウイルスＶＬＰは、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ２０１０／０１７５４２に開示される方法によって産生することができる。次の特許公開のそれぞれの内容もまた、それらの全体が、あらゆる目的のため参照により本明細書に組み込まれる：ＷＯ２００８／０４２７８９；ＷＯ２００８／１１３０１１；ＷＯ２００９／０３９２２９；ＷＯ２０１０／０１７５４２；ＷＯ２０１３／００９８４９；ＷＯ２０１３／１９２６０４；ＷＯ２０２０／０４１１９２；ＷＯ２０２０／１３２５１０；およびＷＯ２０１５／０５１２５５。
【0042】
[0045] 目的のＶＬＰの配列を下の表１に提示する。
【0043】
【表1】
【0044】
アジュバント粒子
[0046] ワクチンのためのアジュバント効果を達成する様々な方法は、知られており、本明細書に開示されるＶＬＰと併せて使用することができる。一般原則および方法は、「Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ」、１９９５、Ｄｕｎｃａｎ Ｅ．Ｓ．Ｓｔｅｗａｒｔ－Ｔｕｌｌ（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ、ＩＳＢＮ ０－４７１－９５１７０－６，およびまた、「Ｖａｃｃｉｎｅｓ： Ｎｅｗ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ」、１９９５、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ Ｇら（編）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＩＳＢＮ ０－３０６－４５２８３－９に詳述されており、それらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
[0046] ワクチンのためのアジュバント効果を達成する様々な方法は、知られており、本明細書に開示されるＶＬＰと併せて使用することができる。一般原則および方法は、「Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ」、１９９５、Ｄｕｎｃａｎ Ｅ．Ｓ．Ｓｔｅｗａｒｔ－Ｔｕｌｌ（編）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ Ｌｔｄ、ＩＳＢＮ ０－４７１－９５１７０－６，およびまた、「Ｖａｃｃｉｎｅｓ： Ｎｅｗ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ」、１９９５、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ Ｇら（編）、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＩＳＢＮ ０－３０６－４５２８３－９に詳述されており、それらの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0045】
[0047] 一部の実施形態では、例示的なアジュバント粒子は、アルミニウム塩、リン酸カルシウム・キトサン（ｃａｌｃｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅｃｈｉｔｏｓａｎ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）微小粒子、ポロクサマー粒子および微小粒子を含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、アジュバント粒子は、アルミニウム塩である。
【0046】
[0048] 一部の実施形態では、アジュバントは、アルミニウム塩（水酸化アルミニウム等）、リン酸アルミニウム、（オキシ）水酸化アルミニウム、水酸化アルミニウム、沈殿水酸化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウムおよびゲル状水酸化アルミニウム、例えば、アルハイドロゲル８５のうち少なくとも１種を含む。以降、薬学的に許容される形態の、特に、アジュバントとしての使用のための、水酸化酸化アルミニウム、水酸化アルミニウムならびに沈殿および／またはゲル状水酸化アルミニウムはまた、「水酸化アルミニウム」とまとめて称される。
【0047】
[0049] 一部の実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウムである。
【0048】
抗原粒子
[0050] 本発明に係る抗原粒子は、上に記載されているアジュバント粒子に吸着された上に記載されているウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む。そのような抗原は、溶媒、例えば、水性溶媒中でＶＬＰおよびアジュバント粒子を無菌的にブレンドすることにより入手可能であり得る。
[0050] 本発明に係る抗原粒子は、上に記載されているアジュバント粒子に吸着された上に記載されているウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子を含む。そのような抗原は、溶媒、例えば、水性溶媒中でＶＬＰおよびアジュバント粒子を無菌的にブレンドすることにより入手可能であり得る。
【0049】
[0051] いかなる理論に制約されることも望まないが、アルミニウム塩（例えば、水酸化アルミニウム等）に１種または複数のＶＬＰ抗原（複数可）（例えば、ノロウイルスＶＬＰ）を吸着することは、ＶＬＰ抗原の安定性を増強することができる。
【0050】
[0052] 一部の実施形態では、抗原粒子は、レーザー回折によって決定された場合、Ｘ９０値が約３０μｍ未満である累積的なアンダーサイズ分布を有する。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、約４０、３５、３０、２５、２０、１５もしくは１０μｍ、またはそれらの間のいずれかの値未満である。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、約２０μｍ未満または約１５μｍ未満である。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、これらの抗原粒子を含む固体組成物の復元（ｒｅｃｏｎｓｉｔｕｔｉｏｎ）後に測定され、前記固体組成物は、例えば、ＴＦＦＤ等のフリーズドライに供された新たに調製された水性懸濁液から得られる。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、同じ量で同じ抗原粒子を含む、本明細書に定義される参照水性懸濁液のＸ９０値に匹敵する。よって、一部の実施形態では、そのようなＸ９０値は、固体組成物の粒子が、フリーズドライ後に著しく集塊しなかったことの指標である。いかなる理論に制約されることも望まないが、そのような集塊防止が、抗原粒子におけるＶＬＰ抗原の効力も保存すると仮定される。例えば、集塊防止は、ＶＬＰ抗原の物理的特徴、ＶＬＰ抗原の分散、ＶＬＰ抗原の露出された表面積その他を保存することができる。
【0051】
[0053] 一部の実施形態では、抗原粒子は、レーザー回折によって決定された場合、Ｘ９０値が約５μｍ超～約３０μｍ未満である累積的なアンダーサイズ分布を有する。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、約１μｍ～３０μｍ、約５μｍ～３０μｍ、約５μｍ～２０μｍもしくは約５μｍ～１５μｍの範囲、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲内である。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、約５μｍ超～約２０μｍ未満である。一部の実施形態では、Ｘ９０値は、約５μｍ超～約１５μｍ未満である。
【0052】
[0054] 一部の実施形態では、上に開示されるＸ９０値に加えてまたはその代わりに、抗原粒子は、レーザー回折によって決定されたＸ５０値を有する。一部の実施形態では、Ｘ５０値は、約１０、９、８、７、６、５、４、３もしくは２μｍ、またはそれらの間のいずれかの値未満である。一部の実施形態では、抗原粒子は、約５μｍ未満のＸ５０値を有する。一部の実施形態では、抗原粒子は、約４．５μｍ未満のＸ５０値を有する。一部の実施形態では、Ｘ５０値は、０．５～２０μｍ、１～１５μｍ、１～１０μｍ、２～５μｍ、２．１～４．５μｍの範囲、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲内である。一部の実施形態では、前記Ｘ５０値は、約２μｍ超～約５μｍ未満または約２．１μｍ超～約４．５μｍ未満の範囲に及ぶ。
【0053】
[0055] 一部の実施形態では、上に開示されるＸ９０値および／またはＸ５０値に加えてまたはその代わりに、抗原粒子は、レーザー回折によって決定されたＸ１０値を有する。一部の実施形態では、Ｘ１０値は、約３、２、１．９、１．８、１．７、１．６、１．５、１．４、１．３、１．２、１．１、１、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２もしくは０．１μｍ、またはそれらの間のいずれかの値未満である。一部の実施形態では、Ｘ１０値は、約２μｍ未満または約１．９μｍ未満である。一部の実施形態では、前記Ｘ１０値は、約０．７μｍ超～約２μｍ未満または約０．８μｍ超～約１．９μｍ未満の範囲に及ぶ。
【0054】
固体組成物
[0056] 第１の態様によれば、本発明は、上に記載されているアジュバント粒子に吸着された、上に記載されているウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む上に記載されている抗原粒子を含む固体組成物を対象にする。一部の実施形態では、前記固体組成物は、同じ量で同じ構成成分を含む、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液を乾燥させることによって得られる。一部の実施形態では、前記固体組成物は、同じ量で同じ構成成分を含む、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液をフリーズドライすることによって得られる。一部の実施形態では、前記固体組成物は、新たに調製された水性懸濁液と同じ絶対量で同じ構成成分を含む、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液においてＴＦＦＤを実行することによって得られる。
[0056] 第１の態様によれば、本発明は、上に記載されているアジュバント粒子に吸着された、上に記載されているウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む上に記載されている抗原粒子を含む固体組成物を対象にする。一部の実施形態では、前記固体組成物は、同じ量で同じ構成成分を含む、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液を乾燥させることによって得られる。一部の実施形態では、前記固体組成物は、同じ量で同じ構成成分を含む、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液をフリーズドライすることによって得られる。一部の実施形態では、前記固体組成物は、新たに調製された水性懸濁液と同じ絶対量で同じ構成成分を含む、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液においてＴＦＦＤを実行することによって得られる。
【0055】
[0057] 一部の実施形態では、抗原粒子は、少なくとも約５０％の相対効力を有し、前記相対効力は、参照水性懸濁液の効力に基づき、乾燥に供されていない本明細書に定義される組成物の前記参照水性懸濁液の抗原粒子中の抗原の効力および固体組成物の抗原粒子中の抗原の効力を測定することにより決定される。一部の実施形態では、相対効力は、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０もしくは２００％、またはそれらの間のいずれかの値である。一部の実施形態では、相対効力は、５０～１００％、７５～１５０％もしくは５０～１５０％の範囲、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲内である。一部の実施形態では、前記相対効力は、約５０％～約１５０％の範囲に及び、それらの間の全ての範囲および部分的範囲を含む。
【0056】
[0058] 一部の実施形態では、抗原粒子は、苛酷な貯蔵条件での貯蔵後に、少なくとも約５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０もしくは１５０％、またはそれらの間のいずれかの値の相対効力を有する。一部の実施形態では、相対効力は、５０～１００％、７５～１５０％もしくは５０～１５０％の範囲、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲内である。一部の実施形態では、苛酷な貯蔵条件は、少なくとも約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５もしくは６０℃、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲の温度における貯蔵を含む。一部の実施形態では、抗原粒子は、少なくとも約５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５または９０％の相対湿度で貯蔵される。一部の実施形態では、抗原粒子は、少なくとも１、２、３、４、５、６もしくは７日間または少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１もしくは１２週間、またはそれらの間のいずれかの値にわたり、苛酷な貯蔵条件で貯蔵される。一部の実施形態では、抗原粒子は、少なくとも４週間にわたる約４０℃および約７５％相対湿度（ＲＨ）における貯蔵後に、少なくとも約５０％の相対効力を有し続ける。一部の実施形態では、抗原粒子は、少なくとも４週間にわたる約４０℃および約７５％相対湿度（ＲＨ）における貯蔵後に、約５０％～約１５０％の範囲に及ぶ相対効力を有し続ける。一部の実施形態では、固体組成物の抗原粒子の効力は、加速された安定性試験において、著しく変化しないまたは著しく減少しない。このことは、固体組成物の使用が、コールドチェーン要件に取り組むのに実行可能なアプローチであること、すなわち、２℃～８℃の範囲に及ぶ温度下での抗原粒子の貯蔵が必要とされないことを指し示す。
【0057】
[0059] 一部の実施形態では、固体組成物は、乾燥組成物の総質量に基づき約１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１ｗｔ．－％未満の水分含量を有する乾燥組成物であり、前記水分含量は、Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定方法を使用して決定される。一部の実施形態では、これは、約５ｗｔ．－％未満、約３ ｗｔ．－％未満または約２ｗｔ．－％未満の水分含量を有する。一部の実施形態では、低い水分含量は、組成物の新たに調製された水性懸濁液等の組成物の水性懸濁液においてＴＦＦＤを実行することにより達成される。
【0058】
[0060] 一部の実施形態では、固体組成物は、糖または糖アルコールをさらに含む。一部の実施形態では、糖は、単糖、二糖、オリゴ糖または多糖である。一部の実施形態では、糖は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、スクロース、ラクトース、マルトースまたはトレハロースである。一部の実施形態では、糖は、トレハロース、ラクトースまたはスクロースである。一部の実施形態では、糖は、スクロースである。一部の実施形態では、糖アルコールは、エチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、トレイトール（ｔｈｒｅｉｔｏｌ）、アラビトール、キシリトール、リビトール、マンニトール、ソルビトール、ガラクチトール、フシトール（ｆｕｃｉｔｏｌ）、イジトール（ｉｄｉｔｏｌ）、イノシトール、ボレミトール（ｖｏｌｅｍｉｔｏｌ）、イソマルト、マルチトール、ラクチトール、マルトトリイトール（ｍａｌｔｏｔｒｉｉｔｏｌ）、マルトテトライトール（ｍａｌｔｏｔｅｔｒａｉｔｏｌ）またはポリグリシトール（ｐｏｌｙｇｌｙｃｉｔｏｌ）である。一部の実施形態では、糖アルコールは、マンニトールである。
【0059】
[0061] 一部の実施形態では、固体組成物における糖または糖アルコールの質量に基づく抗原粒子および糖または糖アルコールの間の質量比は、２×１０－２～７×１０－２の範囲内であり、それらの間のいずれかの範囲または部分的範囲を含む。一部の実施形態では、固体組成物における糖または糖アルコールの質量に基づく抗原粒子および糖または糖アルコールの間の質量比は、約７×１０－２、６×１０－２、５×１０－２、４×１０－２、３×１０－２または２×１０－２未満である。一部の実施形態では、固体組成物における糖または糖アルコールの質量に基づく抗原粒子および糖または糖アルコールの間の質量比は、約４．２×１０－２未満である。一部の実施形態では、糖または糖アルコールの乾燥含量は、少なくとも約５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４もしくは８５ｗｔ．－％、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲であり、乾燥含量は、水分不含固体組成物に基づき計算される。一部の実施形態では、糖または糖アルコールの乾燥含量は、少なくとも約６０ｗｔ．－％である。一部の実施形態では、抗原粒子および糖、例えば、スクロースと組み合わせたトレハロースの間の質量比は、少なくとも約２．６８×１０－２である。一部の実施形態では、抗原粒子およびスクロースの間の質量比は、約２．８×１０－２以下である。一部の実施形態では、質量比は、約２．８×１０－２～約２．０×１０－２の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、全ての糖および糖アルコールの乾燥組合せ含量は、少なくとも約６０ｗｔ．－％、６５ｗｔ．－％、７０ｗｔ．－％または７５ｗｔ．－％である。一部の実施形態では、トレハロースおよびスクロースの乾燥組合せ含量は、約７５．７５ｗｔ．－％であるか、またはスクロースの乾燥含量は、少なくとも約７５．７５ｗｔ．－％である。驚いたことに、抗原粒子の糖に対する質量比および／または糖の乾燥含量が、開示される範囲内であるか、またはそのような範囲の特定の値を包含する場合、粒子集塊がさらに防止され得ることが見出された。一部の実施形態では、水性溶液中の糖および／または糖アルコールの重量パーセントは、１～５％、２～５％もしくは２～４％、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲であり、水性溶液は、参照ワクチン内の濃度に匹敵する濃度で、または参照ワクチンの濃度の少なくとも約８０％～約１１０％で参照ワクチンの固体構成成分を含む。
【0060】
[0062] 一部の実施形態では、その水分（ｍｏｓｔｕｒｅ）不含形態（すなわち、固体組成物の総質量に基づく０．０ｗｔ．－％の水分含量）に基づき計算された固体組成物の総質量は、約１０ｍｇ～約６０ｍｇまたは約１５ｍｇ～約５０ｍｇの範囲に及ぶことができる。一部の実施形態では、総質量は、約３０ｍｇ～約５０ｍｇの範囲に及ぶことができる。より好ましくは、固体組成物の総質量は、約１５．６９ｍｇ、約２１．８ｍｇ、約２６．８ｍｇ、３１．８ｍｇ、３６．８ｍｇ、４１．８ｍｇまたは４６．８ｍｇであり得る。
【0061】
[0063] 一部の実施形態では、固体組成物は、約１０μｇ～約１００μｇのノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約３０μｇ～約２００μｇのノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ、および約３００μｇ～約７００μｇのアジュバントを含む。一部の実施形態では、組成物は、４００μｇ～約６００μｇまたは約５００μｇのアジュバントを含む。一部の実施形態では、前記組成物は、少なくとも約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０ｍｇの糖もしくは糖アルコール、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲を含む。一部の実施形態では、前記組成物は、少なくとも約２０ｍｇの糖または糖アルコールを含む。一部の実施形態では、固体組成物は、約２０ｍｇのトレハロースおよび任意選択により約６．１１ｍｇのスクロースを含む。一部の実施形態では、固体組成物は、少なくとも約２０ｍｇのスクロース～多くても約２５ｍｇもしくは約３０ｍｇのスクロース、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲を含む。
【0062】
[0064] 一部の実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰであり、組成物は、約１５μｇ～約５０μｇのノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約５０μｇ～約１５０μｇのノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰおよび約５００μｇのアジュバントを含み、アジュバントは、Ａｌ（ＯＨ）３の形態の水酸化アルミニウムである。好まれる実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰであり、組成物は、約１５μｇのノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約５０μｇのノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサス ＶＬＰおよび約５００μｇのアジュバントを含み、アジュバントは、Ａｌ（ＯＨ）３の形態の水酸化アルミニウムである。代わりに好まれる実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰであり、組成物は、約５０μｇのノロウイルス株ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約１５０μｇのノロウイルス株ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰおよび約５００μｇのアジュバントを含み、アジュバントは、Ａｌ（ＯＨ）３の形態の水酸化アルミニウムである。より好まれる実施形態では、組成物は、約２０ｍｇ、２５ｍｇ、約２６．１１ｍｇまたは約３１，１１ｍｇのスクロースをその上含む。別のより好まれる実施形態では、組成物は、約２０ｍｇのトレハロースおよび任意選択により約６．１１ｍｇのスクロースをその上含む。
【0063】
[0065] 一部の実施形態では、固体組成物は、免疫原性組成物である。一部の実施形態では、前記免疫原性組成物は、ワクチン組成物である。
【0064】
[0066] 一部の実施形態では、ワクチン組成物は、約６～約７の範囲に及ぶｐＨを有する。一部の実施形態では、ワクチン組成物は、約６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９もしくは７．０、またはそれらの間のいずれかの値のｐＨを有する。一部の実施形態では、ワクチンは、約０．５ｍｌの水またはバッファー溶液と混合した後に、約６．４～約６．６の範囲に及ぶｐＨを有する。
【0065】
[0067] 一部の実施形態では、ワクチン組成物は、約０．５ｍｌの水またはバッファー溶液と混合した後に、約２００～約６００の範囲に及ぶ重量オスモル濃度を有する。一部の実施形態では、ワクチン組成物は、約０．５ｍｌの水またはバッファー溶液と混合した後に、少なくとも約２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０もしくは６００、またはそれらの間のいずれかの値の重量オスモル濃度を有する。
【0066】
[0068] 一部の実施形態では、ワクチン組成物は、塩、バッファー、例えば、アミノ酸、界面活性物質および無機酸からなる群から選択される追加のワクチン構成成分を含む。一部の実施形態では、バッファーは、リン酸塩、例えば、リン酸カリウム、酢酸塩および／またはＴｒｉｓを含む。一部の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。一部の実施形態では、バッファーは、アミノ酸Ｌ－ヒスチジン、グリシン、リジン、アルブミン（ＨＳＡおよび／またはＢＳＡ）および／またはプロリンである。一部の実施形態では、無機酸は、塩酸である。一部の実施形態では、追加のワクチン構成成分は、塩化ナトリウム、Ｌ－ヒスチジンおよび塩酸からなる。一部の実施形態では、界面活性物質は、Ｔｗｅｅｎ－８０、ポロクサマー、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）および／または当業者に知られている他の安定剤である。一部の実施形態では、組成物は、約３～約５ｍｇの塩、約０．５～約３ｍｇのバッファーとしてのアミノ酸および約０．５～約２．５ｍｇの無機酸を含み、これらの範囲内のいずれかの範囲または部分的範囲を含む。
【0067】
[0069] 一部の実施形態では、固体組成物は、ワクチン組成物であり、ＶＬＰは、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰであり、組成物は、約１５μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰおよび約５００μｇのアジュバントを含み、アジュバントは、Ａｌ（ＯＨ）３の形態の水酸化アルミニウムであり、ワクチン組成物は、４．３８ｍｇの塩化ナトリウム、１．５５ｍｇのＬ－ヒスチジンおよび１．７３ｍｇのＨＣｌからなるさらに別のワクチン構成成分を含む。
【0068】
[0070] 一部の実施形態では、固体組成物は、ワクチン組成物であり、ＶＬＰは、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰであり、組成物は、約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約１５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰおよび約５００μｇのアジュバントを含み、アジュバントは、Ａｌ（ＯＨ）３の形態の水酸化アルミニウムであり、ワクチン組成物は、４．３８ｍｇの塩化ナトリウム、１．５５ｍｇのＬ－ヒスチジンおよび１．７３ｍｇのＨＣｌを含むさらに別のワクチン構成成分を含む。一部の実施形態では、ワクチン組成物は、６．１１ｍｇのスクロースおよび２０ｍｇのトレハロースをその上含む。代替の好まれる実施形態では、組成物は、少なくとも約２０ｍｇまたは約２６．１１ｍｇのスクロースかつ多くても約３０ｍｇまたは３６．１１ｍｇのスクロースを含む。
【0069】
フリーズドライ方法
[0071] 第２の態様によれば、本発明は、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法であって、
水性懸濁液が、
－ 本明細書に記載されているアジュバント粒子に吸着された本明細書に記載されているウイルス様粒子を含む本明細書に記載されている抗原粒子を含み、
方法が、
－ ステップ１：任意選択により、約２℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ；
－ ステップ２：少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度でステップ１の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ３：液体窒素の温度に冷却された容器内に凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ４：第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、本発明の第２の態様に係る固体組成物を得るステップ
を含む、フリーズドライ方法を対象にする。
[0071] 第２の態様によれば、本発明は、新たに調製された水性懸濁液等の水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法であって、
水性懸濁液が、
－ 本明細書に記載されているアジュバント粒子に吸着された本明細書に記載されているウイルス様粒子を含む本明細書に記載されている抗原粒子を含み、
方法が、
－ ステップ１：任意選択により、約２℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ；
－ ステップ２：少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度でステップ１の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ３：液体窒素の温度に冷却された容器内に凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ；
－ ステップ４：第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、本発明の第２の態様に係る固体組成物を得るステップ
を含む、フリーズドライ方法を対象にする。
【0070】
[0072] 一部の実施形態では、ステップ１において水性懸濁液が用意される温度は、約２℃～約３０℃または２℃～約２７℃または２℃～約２５℃の範囲に及ぶ。ある一部の実施形態では、温度は、約２℃～約８℃の範囲に及ぶ。
【0071】
[0073] 一部の実施形態では、ステップ１において水性懸濁液が用意される前に、水性懸濁液は、約２０℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度で、特に、約２２℃～約２７℃の範囲に及ぶ温度で、より好ましくは、約２５℃の温度で調製される。
【0072】
[0074] ある特定の実施形態では、ステップ２における第１の凍結した懸濁液は、約５００μｍ未満または約４５０μｍ未満の厚さを有するフィルムとして形成される。好ましくは、フィルムの厚さは、約５０μｍ～約５００μｍまたは約８０～約４５０μｍの範囲に及ぶ。好まれる実施形態では、前記フィルムは、水性懸濁液を、運動する低温の表面と接触させることにより形成される。そのような運動する低温の表面は、回転する環状体、例えば、シリンダー、例えば、ドラムまたはプレートの表面であり得る。好まれる実施形態では、回転体の直径は、約２ｃｍ～約２０ｃｍまたは約５～約１０ｃｍの範囲に及ぶ。より好ましくは、回転体の直径は、約１０ｃｍである。さらに、運動する低温の表面は、コンベヤーベルトの表面であり得る。回転する環状体、例えば、シリンダーまたはドラムの表面の場合、運動する表面の回転スピードは、約２ｒｐｍ～約２０ｒｐｍまたは約３ｒｐｍ～約１０ｒｐｍ、好ましくは、約５ｒｐｍ～約７ｒｐｍの範囲に及ぶことができる。そのような回転スピードは、特に、液滴の重なりを回避するために使用することができる。好まれる実施形態では、回転する環状体、例えば、シリンダーまたはドラムの軌道（ｔｒａｃｋ）速度は、約１．０５×１０－２ｍ／秒～約１．０５×１０－１ｍ／秒または約１．５７×１０－２～約５．２４×１０－２、好ましくは、約２．６２×１０－２ｍ／秒～３．６７×１０－２ｍ／秒の範囲に及ぶ。
【0073】
[0075] 一部の実施形態では、ステップ１における凍結速度は、約５０Ｋ／秒～約１５００Ｋ／秒の範囲に及ぶ。一部の実施形態では、凍結速度は、少なくとも約５０Ｋ／秒、１００Ｋ／秒、１５０Ｋ／秒、２００Ｋ／秒、２５０Ｋ／秒、３００Ｋ／秒、３５０Ｋ／秒、４００Ｋ／秒、４５０Ｋ／秒、５００Ｋ／秒、５５０Ｋ／秒、６００Ｋ／秒、６５０Ｋ／秒、７００Ｋ／秒、７５０Ｋ／秒、８００Ｋ／秒、８５０Ｋ／秒、９００Ｋ／秒、９５０Ｋ／秒、１０００Ｋ／秒、１１００Ｋ／秒、１２００Ｋ／秒、１３００Ｋ／秒、１４００Ｋ／秒もしくは１５００Ｋ／秒、またはそれらの間のいずれかの値である。一部の実施形態では、ステップ１における凍結速度は、約５０ｋ／秒～約１１００Ｋ／秒または約７０Ｋ／秒～約５００Ｋ／秒または約８０Ｋ／秒～約２００Ｋ／秒の範囲に及ぶ。例えば、一部の実施形態では、ステップ１における凍結速度は、約１００Ｋ／秒である。前記凍結速度は、例えば、Ｊ．Ｄ．Ｅｎｇｓｔｒｏｍら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８；２５（６）：１３３４～１３４６に開示されている方法に基づき計算することができる。驚いたことに、上に定義されている範囲内の凍結速度が、凍結による粒子凝集の抑制に寄与することが見出された。いかなる理論に制約されることも望まないが、例えば、従来の凍結乾燥プロセスにおける凍結の場合である、凍結速度が緩慢過ぎる場合、大きい氷晶が形成され、水分子を枯渇させることにより抗原粒子の水和殻を破壊し、抗原アンフォールディングおよび抗原粒子凝集をもたらすと仮定される。対照的に、本発明に係るプロセスの急速な凍結速度は、急速に多数の小さい有核氷晶を創出することを助け、凍結した氷晶の間に非常に細いチャネルを残す。細いチャネルは、抗原粒子の間の衝突の機会を限定し、よって、それらの凝集を低減させる。
【0074】
[0076] 一部の実施形態では、ステップ４におけるさらなる乾燥条件は、ある期間にわたるある温度範囲内かつ減圧下での、第２の凍結した懸濁液のフリーズドライを含む。一部の実施形態では、期間は、１０～１００時間、１０～５０時間、２０～４０時間、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲の間である。一部の実施形態では、温度範囲は、－５０℃～３０℃、またはそれらの間のいずれかの範囲もしくは部分的範囲である。一部の実施形態では、減圧は、大気圧未満である。一部の実施形態では、圧力は、約７００、６５０、６００、５５０、５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００もしくは５０ｍＴｏｒｒ、またはそれらの間のいずれかの値未満である。一部の実施形態では、さらなる乾燥条件は、２０～１００時間の期間および約－５０℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度プロファイルにわたる、約５００ｍＴｏｒｒ未満、特に、２００ｍＴｏｒｒ未満の圧力での、凍結した懸濁液のフリーズドライを含む。一部の実施形態では、ステップ４における負荷（ｌｏａｄｉｎｇ）温度は、約－５０℃～約－２０℃の範囲に及ぶことができる。加えて、ステップ４における初期（または「一次」）乾燥温度は、約－５０℃～約－２０℃の範囲に及ぶことができる。ステップ４における一次乾燥時間は、約１０時間～約３０時間の範囲に及ぶことができ、特に、２０時間であり得る。ステップ４におけるその後の（または「二次」）乾燥への勾配は、約１０時間～約３０時間の範囲に及ぶ持続時間を有することができる。ステップ４における二次乾燥のための温度は、約１５℃～約３０℃の範囲に及ぶことができ、特に、２５℃であり得る。ステップ４における二次乾燥のための持続時間は、約１０時間～約３０時間の範囲に及ぶことができ、特に、２０時間であり得る。
【0075】
[0077] 一部の実施形態では、抗原粒子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイを使用して、組成物が乾燥される前および後の抗原粒子の効力を測定することにより、また、組成物が乾燥される前の効力に基づき決定される、少なくとも約５０％の相対効力または少なくとも５０％～少なくとも１５０％の範囲に及ぶ相対効力を有する。一部の実施形態では、抗原粒子は、本明細書に記載されている相対効力を有する。一部の実施形態では、抗原粒子は、本明細書に記載されている苛酷な貯蔵条件での貯蔵に続く相対効力を有する。
【0076】
[0078] 一部の実施形態では、本発明の第２の態様に係るフリーズドライプロセスは、ＴＦＦＤである。一部の実施形態では、約５００μｍ未満の厚さを有する凍結したフィルムの形態の第１の凍結した液体を形成するために、フリーズドライされるべき新たに調製された（ｐｅｐａｒｅｄ）水性懸濁液等の水性懸濁液は、運動する（例えば、回転する）低温の表面上に滴下され、約１００Ｋ／秒～約１１００Ｋ／秒の範囲に及ぶ凍結速度で凍結される。この凍結したフィルムは、第２の凍結した液体を形成するために、液体窒素の温度に冷却された容器内に収集される。この第２の凍結した液体は次いで、２０～１００時間の期間および約５００ｍＴｏｒｒ未満の圧力での約－５０℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度プロファイル等、従来の棚フリーズドライの条件と同様のさらなる乾燥条件に供される。
【0077】
[0079] 一部の実施形態では、水性懸濁液は、前記懸濁液の総容量に対して少なくとも約２％（ｗ／ｖ）または少なくとも約２．４％（ｗ／ｖ）の糖または糖アルコール含量を有する。一部の実施形態では、水性懸濁液は、少なくとも約４％（ｗ／ｖ）のトレハロースの含量および任意選択により少なくとも約０．４％（ｗ／ｖ）のスクロース、または少なくとも約４％（ｗ／ｖ）もしくは少なくとも約４．４％（ｗ／ｖ）のスクロースの含量を有する。
【0078】
[0080] 本開示に関連する追加の特色は、真空発泡（ｖａｃｕｕｍ－ｆｏａｍ）乾燥（Ｐｉｓａｌ Ｓら、ＡＡＰＳ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈ．２００６；７：６０）、噴霧乾燥（Ｃｈｅｎ Ｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ．２０１０；２８：５０９３～５０９９．を参照）、噴霧フリーズドライ（Ｍａａ ＹＦら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２００３；９２：３１９～３３２．）、液体中への噴霧凍結（Ｙｕ Ｚら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２００６；２７：９～１８．を参照）およびワクチンとアルミニウム塩の噴霧フリーズドライ（Ｃｈｅｎ ＤおよびＫｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｄ、Ｒｅｖ．Ｖａｃｃｉｎｅｓ．２００９；８：５４７～５５７．；ならびにＯｖｅｒｈｏｆｆ ＫＡら、Ｊ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．２００９；１９：８９～９８を参照）から適応させることができる。前述の刊行物のそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0079】
[0081] 一態様では、本開示は、アジュバント粒子に吸着されたウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む抗原粒子の水性懸濁液から水を除去するためのフリーズドライ方法であって、ＶＬＰが、ノロウイルスＶＬＰであり、方法が、任意選択により、約２℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度の、水性懸濁液を用意するステップ；少なくとも５０Ｋ／秒の凍結速度で、ステップ（ａ）の温度を減少させて、第１の凍結した懸濁液を得るステップ；液体窒素の温度に冷却された容器内に前記第１の凍結した懸濁液を収集して、第２の凍結した懸濁液を得るステップ；前記第２の凍結した懸濁液を、減圧下でさらなる乾燥条件に供して、本明細書に開示される実施形態のいずれか１つに係る固体組成物を得るステップを含む、フリーズドライ方法を提供する。一部の実施形態では、組成物は、ノロウイルスジェノグループ１（ＧＩ）ＶＬＰおよびノロウイルスジェノグループ２（ＧＩＩ）ＶＬＰからなる群から選択されるノロウイルスＶＬＰの１種または複数の異なるジェノグループを含む。一部の実施形態では、ＶＬＰは、ノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよびノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰからなる。一部の実施形態では、組成物は、約１０μｇ～約１００μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ、約３０μｇ～約２００μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰおよび約３００μｇ～約７００μｇのアジュバントを含有する。一部の実施形態では、組成物は、約１５μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ、または約５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび約１５０μｇのノロウイルス遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰのいずれかを含有し、組成物は、アジュバントとしての水酸化アルミニウムとしての約５００μｇのアルミニウムをさらに含有する。一部の実施形態では、アジュバントは、アルミニウム塩である。一部の実施形態では、水性懸濁液は、トレハロースおよびスクロースからなる群から選択される糖をさらに含む。一部の実施形態では、水性懸濁液は、前記懸濁液の総容量に対して少なくとも２％（ｗ／ｖ）または２．４％（ｗ／ｖ）の糖含量を有する。一部の実施形態では、水性懸濁液は、約４％（ｗ／ｖ）のトレハロースの含量および任意選択により０．４％（ｗ／ｖ）のスクロース、または少なくとも４％（ｗ／ｖ）もしくは少なくとも４．４％（ｗ／ｖ）のスクロースの含量を有する。一部の実施形態では、ステップ２における第１の凍結した懸濁液は、約５００μｍ未満の厚さを有するフィルムとして形成される。一部の実施形態では、前記フィルムは、水性懸濁液を運動する低温の表面と接触させることにより形成される。一部の実施形態では、ステップ（ａ）における凍結速度は、約５０Ｋ／秒～約１１００Ｋ／秒の範囲である。一部の実施形態では、ステップ（ｄ）におけるさらなる乾燥条件は、約２０～１００時間の期間および約－５０℃～約３０℃の範囲に及ぶ温度プロファイルにわたる、約５００ｍＴｏｒｒ未満の圧力での、第２の凍結した懸濁液のフリーズドライを含む。一部の実施形態では、抗原粒子は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイを使用して、組成物が乾燥される前および後の抗原粒子の効力を測定することにより、また、組成物が乾燥される前の効力に基づき決定される、少なくとも５０％の相対効力を有する。一部の実施形態では、抗原粒子は、４週間にわたる４０℃および７５％相対湿度（ＲＨ）での貯蔵後に、少なくとも５０％の相対効力を有し続ける。一部の実施形態では、抗原粒子は、レーザー回折によって決定された場合、Ｘ９０値が約３０μｍ未満である累積的なアンダーサイズ分布を有する。一部の実施形態では、抗原粒子は、少なくとも５０％の相対効力を有し、前記相対効力は、参照水性懸濁液の効力に基づき、乾燥に供されていない組成物の前記参照水性懸濁液の抗原粒子中の抗原の効力および固体組成物の抗原粒子中の抗原の効力を測定することにより決定される。
【0080】
フリーズドライ方法によって入手可能な固体組成物
[0082] 第３の態様によれば、本発明は、本明細書に記載されている第２の態様に係るフリーズドライ方法によって入手可能な固体組成物を対象にする。
[0082] 第３の態様によれば、本発明は、本明細書に記載されている第２の態様に係るフリーズドライ方法によって入手可能な固体組成物を対象にする。
【0081】
ノロウイルスワクチンの固体形態を含有するガラスバイアル
[0083] 第４の態様によれば、本発明は、本発明の第１の態様に係る固体組成物等の固体形態のノロウイルスワクチンの用量を含有するガラスバイアルであって、水性懸濁液の形態の前記用量を、０℃を下回る温度、例えば、液体窒素の温度に冷却されたバイアルの壁にアプライし、懸濁液を凍結させ、バイアル内で懸濁液を乾燥させることにより入手可能な、ガラスバイアルを対象にする。特に、壁へのアプライに先立つ前記ワクチンおよび前記壁の温度の温度差は、少なくとも３０℃である。
[0083] 第４の態様によれば、本発明は、本発明の第１の態様に係る固体組成物等の固体形態のノロウイルスワクチンの用量を含有するガラスバイアルであって、水性懸濁液の形態の前記用量を、０℃を下回る温度、例えば、液体窒素の温度に冷却されたバイアルの壁にアプライし、懸濁液を凍結させ、バイアル内で懸濁液を乾燥させることにより入手可能な、ガラスバイアルを対象にする。特に、壁へのアプライに先立つ前記ワクチンおよび前記壁の温度の温度差は、少なくとも３０℃である。
【実施例】
【0082】
[0084] 次の実施例は、特許請求の範囲に記載されている本発明のある特定の態様および実施形態を実証するために含まれている。しかし、当業者であれば、次の記載が、単なる説明を目的としており、決して本発明の制限として解釈するべきではないことを認めるはずである。
【0083】
材料と方法
材料
[0085] 本明細書で使用されるノロウイルスワクチンは、二価ウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチンであり、２種の吸着された一価バルク原薬（ＡＭＢＤＳ）を生成するための原薬製造の一部として、（オキシ）水酸化アルミニウムに吸着されたノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ（対応するカプシドタンパク質の配列については、配列番号２を参照）および遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ（対応するカプシドタンパク質の配列については、配列番号１を参照）を含んだ。ワクチンの産生のため、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる（ｉｎｃｏｐｏｒａｔｅｄ）ＷＯ２０１０／０１７５４２も参照した。２種のＡＭＢＤＳ（すなわち、ＧＩ．１ ＡＭＢＤＳおよびＧＩＩ．４ ＡＭＢＤＳ）を、各ＶＬＰの標的濃度となるように追加の（オキシ）水酸化アルミニウムおよびＬ－ヒスチジンと無菌的にブレンドして、二価ワクチン製品を創出した。薬物製品の最終製剤組成は、０．５ｍＬ用量当たり５０／１５０／５００μｇのＧＩ．１／ＧＩＩ．４／（オキシ）水酸化アルミニウムであった。バルク薬物製品は、１．５５ｍｇのＬ－ヒスチジン、４．３８ｍｇのＮａＣｌ、１．７３ｍｇのＨＣｌおよび６．１１ｍｇのスクロース、ｐＨ６．６～７．０も含有した。スクロース（エンドトキシンが低く、賦形剤としての使用に適している、ＥＭＰＲＯＶＥ（登録商標）ｅｘｐ Ｐｈ Ｅｕｒ、ＢＰ、ＪＰ、ＮＦ）およびメタノール無水物は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から得た。トレハロース二水和物（ＵＳＰグレード）は、Ｐｆａｎｓｔｉｅｈｌ（Ｗａｕｋｅｇａｎ、ＩＬ）から得た。アルミニウムパウチは、ＩＭＰＡＫ（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）から得た。乾燥剤は、Ｗ．Ａ．Ｈａｍｍｏｎｄ Ｄｒｉｅｒｉｔｅ（Ｘｅｎｉａ、ＯＨ）から得た。シラン処理されたＲ２０ガラスバイアルは、Ｓｃｈｏｔｔ（Ｍａｉｎｚ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。
材料
[0085] 本明細書で使用されるノロウイルスワクチンは、二価ウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチンであり、２種の吸着された一価バルク原薬（ＡＭＢＤＳ）を生成するための原薬製造の一部として、（オキシ）水酸化アルミニウムに吸着されたノロウイルス遺伝子型ＧＩ．１ノーウォークＶＬＰ（対応するカプシドタンパク質の配列については、配列番号２を参照）および遺伝子型ＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ（対応するカプシドタンパク質の配列については、配列番号１を参照）を含んだ。ワクチンの産生のため、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる（ｉｎｃｏｐｏｒａｔｅｄ）ＷＯ２０１０／０１７５４２も参照した。２種のＡＭＢＤＳ（すなわち、ＧＩ．１ ＡＭＢＤＳおよびＧＩＩ．４ ＡＭＢＤＳ）を、各ＶＬＰの標的濃度となるように追加の（オキシ）水酸化アルミニウムおよびＬ－ヒスチジンと無菌的にブレンドして、二価ワクチン製品を創出した。薬物製品の最終製剤組成は、０．５ｍＬ用量当たり５０／１５０／５００μｇのＧＩ．１／ＧＩＩ．４／（オキシ）水酸化アルミニウムであった。バルク薬物製品は、１．５５ｍｇのＬ－ヒスチジン、４．３８ｍｇのＮａＣｌ、１．７３ｍｇのＨＣｌおよび６．１１ｍｇのスクロース、ｐＨ６．６～７．０も含有した。スクロース（エンドトキシンが低く、賦形剤としての使用に適している、ＥＭＰＲＯＶＥ（登録商標）ｅｘｐ Ｐｈ Ｅｕｒ、ＢＰ、ＪＰ、ＮＦ）およびメタノール無水物は、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）から得た。トレハロース二水和物（ＵＳＰグレード）は、Ｐｆａｎｓｔｉｅｈｌ（Ｗａｕｋｅｇａｎ、ＩＬ）から得た。アルミニウムパウチは、ＩＭＰＡＫ（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）から得た。乾燥剤は、Ｗ．Ａ．Ｈａｍｍｏｎｄ Ｄｒｉｅｒｉｔｅ（Ｘｅｎｉａ、ＯＨ）から得た。シラン処理されたＲ２０ガラスバイアルは、Ｓｃｈｏｔｔ（Ｍａｉｎｚ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。
【0084】
薄膜フリーズドライのためのワクチン製剤の調製
[0086] ノロウイルスワクチン候補を、０～５％（ｗ／ｖ）の最終スクロースまたはトレハロース濃度に達するように、水においてスクロースまたはトレハロースストック溶液（５０％ｗ／ｖ）と混合した。
[0086] ノロウイルスワクチン候補を、０～５％（ｗ／ｖ）の最終スクロースまたはトレハロース濃度に達するように、水においてスクロースまたはトレハロースストック溶液（５０％ｗ／ｖ）と混合した。
【0085】
[0087] ５０％のトレハロースストック溶液および５０％のスクロースストック溶液を調製して、最終懸濁液を生成する。最終懸濁液に含まれる含量を下の表２に示す。
【0086】
【表2】
【0087】
[0088] 単一バイアルＴＦＦＤのため、２５０μＬを液滴で、ガラスバイアル（Ｓｃｈｏｔｔ（Ｍａｉｎｚ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から得たシラン処理されたＲ２０ガラスバイアル）の底面表面にアプライした。
【0088】
薄膜凍結（ＴＦＦ）
[0089] スクロースまたはトレハロース（０～５％、ｗ／ｖ）を含有する懸濁液中のノロウイルスワクチンを、ＴＦＦに供した。手短に説明すると、１ｍＬの試料を、回転する低温に冷却されたステンレススチール表面に滴下して、約１００Ｋ／秒～約１０００Ｋ／秒の計算された凍結速度（計算は、Ｊ．Ｄ．Ｅｎｇｓｔｒｏｍら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８；２５（６）：１３３４～１３４６に基づく）で凍結した薄膜を形成した。液滴の重なりを回避するために、ワクチン懸濁液が滴下される１０ｃｍの直径を有するドラムの低温のスチール表面の回転スピードは、５～７ｒｐｍで制御された。凍結した薄膜をスチールブレードによって除去し、塩処理（ｓａｌｉｎｉｚｅｄ）ガラス内の液体窒素中に収集した。半開き状態でガラスバイアルにゴム栓で蓋をし（すなわち、バイアルは完全に蓋をされている訳ではなく、凍結乾燥ステップ後に水分子が脱出し、窒素分子がバイアルに進入するように、バイアルの口とゴム栓の脚部との間にスペースを残す）、次いで、再び蓋をする打栓機能を備えたＶｉｒＴｉｓ Ａｄｖａｎｔａｇｅ卓上トレー凍結乾燥器（Ｔｈｅ ＶｉｒＴｉｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｉｎｃ．Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）内に移した。
[0089] スクロースまたはトレハロース（０～５％、ｗ／ｖ）を含有する懸濁液中のノロウイルスワクチンを、ＴＦＦに供した。手短に説明すると、１ｍＬの試料を、回転する低温に冷却されたステンレススチール表面に滴下して、約１００Ｋ／秒～約１０００Ｋ／秒の計算された凍結速度（計算は、Ｊ．Ｄ．Ｅｎｇｓｔｒｏｍら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８；２５（６）：１３３４～１３４６に基づく）で凍結した薄膜を形成した。液滴の重なりを回避するために、ワクチン懸濁液が滴下される１０ｃｍの直径を有するドラムの低温のスチール表面の回転スピードは、５～７ｒｐｍで制御された。凍結した薄膜をスチールブレードによって除去し、塩処理（ｓａｌｉｎｉｚｅｄ）ガラス内の液体窒素中に収集した。半開き状態でガラスバイアルにゴム栓で蓋をし（すなわち、バイアルは完全に蓋をされている訳ではなく、凍結乾燥ステップ後に水分子が脱出し、窒素分子がバイアルに進入するように、バイアルの口とゴム栓の脚部との間にスペースを残す）、次いで、再び蓋をする打栓機能を備えたＶｉｒＴｉｓ Ａｄｖａｎｔａｇｅ卓上トレー凍結乾燥器（Ｔｈｅ ＶｉｒＴｉｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｉｎｃ．Ｇａｒｄｉｎｅｒ、ＮＹ）内に移した。
【0089】
[0090] 単一バイアルＴＦＦのため、Ｒ２０塩処理ガラスバイアルを液体窒素中に１０分間浸漬して、バイアルの内側底面に低温に冷却された表面を創出した。表面衝突後に液滴が急速に凍結して薄膜となるように、１８Ｇ１針を備えたシリンジを使用して、懸濁液中の２５０μＬのノロウイルスワクチン候補を、バイアルの底面に滴下して添加した。半開き状態でバイアルにゴム栓で蓋をし、次いで、凍結乾燥のために上で言及される凍結乾燥器に移した。
【0090】
凍結乾燥および包装
[0091] －４０℃から２５℃までへと棚温度に徐々に勾配をかけつつ、２００ｍＴｏｒｒ未満の圧力で６０時間にわたり凍結乾燥を行った。凍結乾燥サイクルを表３に示す。凍結乾燥後に、真空を解除し、凍結乾燥器に窒素ガスを充填した。凍結乾燥器における自動で再び蓋をする打栓機能を使用して、各ガラスバイアルにゴム栓で緊密に蓋をし、アルミニウム蓋で密封した。次に、バイアルを、内部の乾燥剤（Ｄｒｉｅｒｉｔｅ乾燥剤バッグまたは分子ふるい、１Ｑｚ）と共にアルミニウムパウチ内に個々に置いた。パウチを密封し、次いで、さらなる使用前に４℃で貯蔵した。
[0091] －４０℃から２５℃までへと棚温度に徐々に勾配をかけつつ、２００ｍＴｏｒｒ未満の圧力で６０時間にわたり凍結乾燥を行った。凍結乾燥サイクルを表３に示す。凍結乾燥後に、真空を解除し、凍結乾燥器に窒素ガスを充填した。凍結乾燥器における自動で再び蓋をする打栓機能を使用して、各ガラスバイアルにゴム栓で緊密に蓋をし、アルミニウム蓋で密封した。次に、バイアルを、内部の乾燥剤（Ｄｒｉｅｒｉｔｅ乾燥剤バッグまたは分子ふるい、１Ｑｚ）と共にアルミニウムパウチ内に個々に置いた。パウチを密封し、次いで、さらなる使用前に４℃で貯蔵した。
【0091】
【表3】
【0092】
薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチンの特徴評価
[0092] ＣＳＣ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｆａｉｒｆａｘ、ＶＡ）から得たＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｉｔｒａｔｏｒ Ａｑｕａｐａｌ ＩＩＩを使用して、乾燥粉末における水分含量を決定した。粒子径およびサイズ分布を決定するために、薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチン粉末の入ったバイアルをランダムに選択し、粉末を水（バルクＴＦＦＤについては１ｍＬ、単一バイアルＴＦＦＤについては２５０μＬ）で復元した。ほぼ１０％の不明瞭化効果を達成するための２倍希釈後に、復元されたノロウイルスワクチンにおける粒子径およびサイズ分布を、Ｒ３レンズを備えるＳｙｍｐａｔｅｃ ＨＥＬＯＳレーザー回折装置（Ｓｙｍｐａｔｅｃ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して決定した。Ｍｅｔｔｌｅｒ ＴｏｌｅｄｏのＳｅｖｅｎＣｏｍｐａｃｔ ｐＨメーターＳ２２０を使用して、復元されたノロウイルスワクチンのｐＨ値を測定した。脱離後の復元されたワクチンにおけるＧＩ．１ ＮＶ－ＶＬＰおよびＧ ＩＩ．４ Ｃ－ＶＬＰ抗原の濃度をＡｇｉｌｅｎｔ １２６０によるＲＰ－ＨＰＬＣによって決定した。使用したカラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＰｏｒｏＳｈｅｌｌ ３００ＳＢ－Ｃ８ ２．１×７５ｍｍ、５μｍであった。
[0092] ＣＳＣ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｆａｉｒｆａｘ、ＶＡ）から得たＫａｒｌ Ｆｉｓｈｅｒ Ｔｉｔｒａｔｏｒ Ａｑｕａｐａｌ ＩＩＩを使用して、乾燥粉末における水分含量を決定した。粒子径およびサイズ分布を決定するために、薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチン粉末の入ったバイアルをランダムに選択し、粉末を水（バルクＴＦＦＤについては１ｍＬ、単一バイアルＴＦＦＤについては２５０μＬ）で復元した。ほぼ１０％の不明瞭化効果を達成するための２倍希釈後に、復元されたノロウイルスワクチンにおける粒子径およびサイズ分布を、Ｒ３レンズを備えるＳｙｍｐａｔｅｃ ＨＥＬＯＳレーザー回折装置（Ｓｙｍｐａｔｅｃ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して決定した。Ｍｅｔｔｌｅｒ ＴｏｌｅｄｏのＳｅｖｅｎＣｏｍｐａｃｔ ｐＨメーターＳ２２０を使用して、復元されたノロウイルスワクチンのｐＨ値を測定した。脱離後の復元されたワクチンにおけるＧＩ．１ ＮＶ－ＶＬＰおよびＧ ＩＩ．４ Ｃ－ＶＬＰ抗原の濃度をＡｇｉｌｅｎｔ １２６０によるＲＰ－ＨＰＬＣによって決定した。使用したカラムは、Ａｇｉｌｅｎｔ ＰｏｒｏＳｈｅｌｌ ３００ＳＢ－Ｃ８ ２．１×７５ｍｍ、５μｍであった。
【0093】
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイ
[0093] ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイを使用して、ワクチンがＴＦＦＤに供される前および後の抗原の効力を決定した。ＩＶＲＰアッセイにおいて、コンセンサスＧＩＩ．４またはノーウォークＧＩ．１ ＶＬＰのいずれかに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、先ず、ｍＡｂをワクチン試料に結合させるために、ワクチン試料と共にインキュベートする。その後、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）セットアップにおいて、残っている（すなわち、非結合）ｍＡｂを決定する。残っている（すなわち、非結合）ｍＡｂは、対応するワクチン試料中のインタクトなエピトープ（すなわち、依然として対応するｍＡｂが結合し得るエピトープ）の量を、よって、試料の効力を指し示す。
[0093] ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイを使用して、ワクチンがＴＦＦＤに供される前および後の抗原の効力を決定した。ＩＶＲＰアッセイにおいて、コンセンサスＧＩＩ．４またはノーウォークＧＩ．１ ＶＬＰのいずれかに対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、先ず、ｍＡｂをワクチン試料に結合させるために、ワクチン試料と共にインキュベートする。その後、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）セットアップにおいて、残っている（すなわち、非結合）ｍＡｂを決定する。残っている（すなわち、非結合）ｍＡｂは、対応するワクチン試料中のインタクトなエピトープ（すなわち、依然として対応するｍＡｂが結合し得るエピトープ）の量を、よって、試料の効力を指し示す。
【0094】
[0094] 第１のステップにおいて、被験ワクチン（すなわち、ＴＦＦＤに供されず、１００μｇ／ｍｌの濃度を達成するように水で復元されたワクチン組成物；ＴＦＦＤが実行された後の、例えば、加速された条件下で０週間目および４週間目における固体ワクチン組成物）と共に参照ワクチンを、ブロッキングバッファー（１×リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４（ＰＢＳ）＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ＃ＢＰ３３７）＋１０％ヤギ血清（滅菌濾過したヤギ血清、Ｅｑｕｉｔｅｃｈ－Ｂｉｏ、Ｃａｔ．＃ＳＧ３０））を使用して希釈プレート（Ｎｕｎｃ（商標）９６ウェルポリプロピレンストレージマイクロプレート、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ．＃２４９９４）において系列希釈して（８．３３３～０．００１μｇ／ｍＬのＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰ）、ウェル当たり１５０μＬの容量をもたらした。参照ワクチンは、０．５ｍＬ当たり５０μｇのＧＩ．１ノーウォークＶＬＰおよび１５０μｇのＧＩＩ．４コンセンサスＶＬＰを５００μｇ水酸化アルミニウムに吸着させたもの（５０／１５０／５００μｇ）を含んでおり、ＴＦＦＤに供されなかった。使用に先立ち参照ワクチンを２～８℃に保ち、ＩＶＲＰアッセイにおける適用に先立ち目視検査によって材料が均一になるまで（沈殿物を含まない）混合した。希釈後に、コンセンサスＧＩＩ．４ ＶＬＰに結合するｍＡｂ（ＢｉｏＧｅｎｅｓ；ＩｇＧクローン＃１－９－１；８．０ｍｇ／ｍＬストック濃度、ロット番号ＰＰ１２０５１４－００１）またはノーウォークＧＩ．１ ＶＬＰに結合するｍＡｂのいずれかを添加して、ｍＡｂをそれぞれ参照ワクチンまたは被験ワクチンに結合させた。したがって、ｍＡｂを、０．０８μｇ／ｍＬの最終濃度となるようにブロッキングバッファーにおいて希釈し、その後、５０μＬの希釈されたｍＡｂをウェル当たり添加して、ウェル当たり２００μＬの総容量をもたらした。加えて、単にウェル当たり２００μＬブロッキングバッファーを含むバッファーのみ対照の列、およびウェル当たり５０μＬ ｍＡｂと混合された１５０μＬブロッキングバッファーを含むｍＡｂのみ対照の列が含まれた。例示的な（Ｅｘｅｍｐｌａｒｉｌｙ）プレートレイアウトについては、図１を参照する。３回繰り返し、すなわち、３個の同一の希釈プレートを調製した。希釈プレートをアルミニウムプレートシーラーで密封し、３７℃±２℃で２２０±１０分間にわたり、加湿したインキュベーター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、≧８５％相対湿度、５％ＣＯ２）内に置いた。
【0095】
[0095] 希釈プレートのインキュベーション中に、アッセイプレートをコンセンサスＧＩＩ．４ ＶＬＰまたはノーウォークＧＩ．１参照ＶＬＰのいずれかでコーティングした。したがって、１×ＰＢＳにおける５μｇ／ｍＬへのＶＬＰの希釈により、ＶＬＰ毎にコーティング溶液を調製した。次に、ウェル当たり１００μＬの対応するコーティング溶液を平底９６ウェルプレートに添加した。アッセイプレートを密封し、室温で１３０±１０分間インキュベートした。インキュベーション後に、アッセイプレートを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＤｅｖｉｃｅｓのＡｑｕａＭａｘ ４０００を使用して、３５０μＬ／ウェルの洗浄バッファー（１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄し、その後、１５０μＬ／ウェルのブロッキングバッファーを添加することによりブロッキングした。プレートを密封し、室温で８０±２０分間インキュベートした。インキュベーション後に、アッセイプレートを再び、３５０μＬ／ウェルの洗浄バッファー（１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄した。
【0096】
[0096] インキュベーション後に、吸って吐いてピペッティングすることにより、希釈プレートの各ウェルの含量を混合し、その後、ウェル当たり１００μＬをアッセイプレートに移した。これにより、希釈プレートのプレートレイアウトは、アッセイプレートのために保持される（例えば、図１を参照）。アッセイプレートを密封し、室温で６０±５分間インキュベートした。インキュベーション後に、アッセイプレートを、３５０μＬ／ウェルの洗浄バッファー（１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄した。
【0097】
[0097] 次のステップにおいて、二次抗体溶液を調製した。したがって、ヤギ抗マウスＩｇＧ１西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）抗体（２～８℃で貯蔵；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｃａｔ．－Ｎｏ．１０７０－０５）を、０．２９２μｇ／ｍＬの最終濃度となるようにブロッキングバッファーにおいて希釈した。ウェル当たり１００μＬの調製された二次抗体溶液をアッセイプレートに添加した。その後、アッセイプレートを密封し、室温で３０±１０分間インキュベートした。インキュベーション後に、アッセイプレートを、３５０μＬ／ウェルの洗浄バッファー（１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄した。次に、１００μＬの２，２’－アジノ－ビス－３－エチルベンゾチアゾリン－６－スルホン酸（ＡＢＴＳ）ペルオキシダーゼ基質（ｓｕｂｔｒａｔｅ）溶液（１－Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（商標）ＡＢＴＳ基質溶液、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ．＃３７６１５）を各ウェルに添加した。プレートを２０±２分間インキュベートした。インキュベーション後に、１００μＬの停止溶液（Ｓｅｒａｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＡＢＴＳ ＨＲＰ停止溶液、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｃａｔ．＃５１５０００１７）を各ウェルに添加した。停止溶液の添加の１時間以内に、４０５ｎｍにおける吸光度をプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＤｅｖｉｃｅｓのＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘ）において読み取った。
【0098】
[0098] 被験ワクチンおよび参照ワクチンの吸光度値から、バッファーのみ対照の吸光度値の中央値を引き（ｓｕｂｓｔｒａｃｔｅｄ）、その後、ワクチン希釈に従いプロットした。独立４－パラメータ（Ｐａｒａｍｔｅｒ）ロジスティック（４－ＰＬ）フィットを使用して曲線をフィットさせ、最大吸光度シグナルの５０％を指す希釈を決定した（それぞれＥＣ５０値または屈曲点）。被験ワクチンの屈曲点を参照ワクチンの屈曲点で割ることにより、ＶＬＰ毎に被験ワクチンの相対効力をその後に決定した。３回繰り返しにわたる平均相対効力を計算した。許容基準として、とりわけ、独立４－パラメータロジスティックフィットから得た参照ワクチンの曲線フィット（Ｒ２－値）は、０．９８０よりも高くなくてはならず、ｍＡｂのみ対照ウェル（陽性対照；ＥＬＩＳＡにおけるｍＡｂ結合は、ワクチン試料とのプレインキュベーションにより低減されない）の４０５ｎｍにおける平均光学密度は、１．３よりも高くなければならない。
【0099】
加速された安定性試験
[0099] 薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチン粉末を有するランダムに選択されたバイアルを４０℃、７５％相対湿度（ＲＨ）で４週間貯蔵し、上で言及されるＩＶＲＰアッセイを使用して、復元後の抗原の効力を決定した。
[0099] 薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチン粉末を有するランダムに選択されたバイアルを４０℃、７５％相対湿度（ＲＨ）で４週間貯蔵し、上で言及されるＩＶＲＰアッセイを使用して、復元後の抗原の効力を決定した。
【0100】
統計解析
[0100] 分散解析（ＡＮＯＶＡ）と、それに続くＦｉｓｈｅｒの保護付き最小有意差手順を使用して統計解析を行った。≦０．０５（両側）のｐ－値が有意と考慮された。
[0100] 分散解析（ＡＮＯＶＡ）と、それに続くＦｉｓｈｅｒの保護付き最小有意差手順を使用して統計解析を行った。≦０．０５（両側）のｐ－値が有意と考慮された。
【0101】
実施例１：ＴＦＦＤおよび復元に供された後のノロウイルスワクチン候補の粒子径およびサイズ分布におけるトレハロースまたはスクロースの濃度の効果
[0101] ノロウイルスワクチンにおける粒子径およびサイズ分布を測定するときに、読み取り値における一貫性および再現性を確認するために、先ず、本来のノロウイルスワクチンが水において０倍から２０倍へと希釈された後に粒子径およびサイズ分布を決定することにより、粒子径データにおける不明瞭化値を試験した。ワクチンが、材料サイズ測定値の推奨される範囲（Ｋｕｌｋａｒｎｉ ＶＳ、Ｓｈａｗ Ｃ．Ｃｈａｐｔｅｒ ８ － Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ Ｃｏｍｍｏｎｌｙ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｉｎ： Ｋｕｌｋａｒｎｉ ＶＳ， Ｓｈａｗ Ｃ， ｅｄｉｔｏｒｓ． Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ Ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｓｅｍｉｓｏｌｉｄ ａｎｄ Ｌｉｑｕｉｄ Ｄｏｓａｇｅｓ． Ｂｏｓｔｏｎ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；２０１６． １３７～４４頁を参照）に基づき、１０～１５％以下の最適不明瞭化レベルを達成するために、２倍希釈されることを必要としたと結論付けられた。ノロウイルスワクチンがバルクＴＦＦＤおよび復元に供された後の、粒子径およびサイズ分布におけるトレハロースの濃度の効果が図２Ａに示され、一方、図２Ｂは、ノロウイルスワクチンがバルクＴＦＦＤおよび復元に供された後の、粒子径およびサイズ分布におけるスクロースの濃度の効果を示す。結果は、２～４％（ｗ／ｖ）のトレハロースまたは２～５％（ｗ／ｖ）のスクロースが、ＴＦＦＤに供された後のノロウイルスワクチンにおける粒子径およびサイズ分布の維持を助けるのに有利であったことを指し示したが、その理由として、これらの製剤が、復元後により少ない粒子凝集を示した。４％（ｗ／ｖ）トレハロースおよび４～５％（ｗ／ｖ）スクロースの結果が、最小の粒子凝集を示した。
[0101] ノロウイルスワクチンにおける粒子径およびサイズ分布を測定するときに、読み取り値における一貫性および再現性を確認するために、先ず、本来のノロウイルスワクチンが水において０倍から２０倍へと希釈された後に粒子径およびサイズ分布を決定することにより、粒子径データにおける不明瞭化値を試験した。ワクチンが、材料サイズ測定値の推奨される範囲（Ｋｕｌｋａｒｎｉ ＶＳ、Ｓｈａｗ Ｃ．Ｃｈａｐｔｅｒ ８ － Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ： Ａｎ Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ Ｃｏｍｍｏｎｌｙ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ． Ｉｎ： Ｋｕｌｋａｒｎｉ ＶＳ， Ｓｈａｗ Ｃ， ｅｄｉｔｏｒｓ． Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｆｏｒ Ｆｏｒｍｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ Ｓｅｍｉｓｏｌｉｄ ａｎｄ Ｌｉｑｕｉｄ Ｄｏｓａｇｅｓ． Ｂｏｓｔｏｎ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；２０１６． １３７～４４頁を参照）に基づき、１０～１５％以下の最適不明瞭化レベルを達成するために、２倍希釈されることを必要としたと結論付けられた。ノロウイルスワクチンがバルクＴＦＦＤおよび復元に供された後の、粒子径およびサイズ分布におけるトレハロースの濃度の効果が図２Ａに示され、一方、図２Ｂは、ノロウイルスワクチンがバルクＴＦＦＤおよび復元に供された後の、粒子径およびサイズ分布におけるスクロースの濃度の効果を示す。結果は、２～４％（ｗ／ｖ）のトレハロースまたは２～５％（ｗ／ｖ）のスクロースが、ＴＦＦＤに供された後のノロウイルスワクチンにおける粒子径およびサイズ分布の維持を助けるのに有利であったことを指し示したが、その理由として、これらの製剤が、復元後により少ない粒子凝集を示した。４％（ｗ／ｖ）トレハロースおよび４～５％（ｗ／ｖ）スクロースの結果が、最小の粒子凝集を示した。
【0102】
実施例２：ノロウイルスワクチンの粒子径およびサイズ分布におけるバルクＴＦＦＤ ｖｓ．単一バイアルＴＦＦＤの効果
[0102] ＴＦＦＤ後のノロウイルスワクチンの粒子径およびサイズ分布における単一バイアルＴＦＦプロセスと比較したバルクＴＦＦプロセスの効果を理解するために、４％トレハロースまたは５％スクロースに懸濁されたノロウイルスワクチンを、単一バイアルＴＦＦＤまたはバルクＴＦＦＤに供した。乾燥粉末が復元された後の代表的な粒子径およびサイズ分布が図３および表４に示される。
[0102] ＴＦＦＤ後のノロウイルスワクチンの粒子径およびサイズ分布における単一バイアルＴＦＦプロセスと比較したバルクＴＦＦプロセスの効果を理解するために、４％トレハロースまたは５％スクロースに懸濁されたノロウイルスワクチンを、単一バイアルＴＦＦＤまたはバルクＴＦＦＤに供した。乾燥粉末が復元された後の代表的な粒子径およびサイズ分布が図３および表４に示される。
【0103】
【表4】
【0104】
[0103] 薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチン粉末における残渣水分含量は、１．５～１．８％であり（表５）、通常示唆される３％限界をはるかに下回った。
【0105】
【表5】
【0106】
実施例３：復元後の薄膜フリーズドライされたノロウイルスワクチンの特徴評価
[0104] 単一バイアルＴＦＦＤまたはバルクＴＦＦＤのいずれかによって４％（ｗ／ｖ）のトレハロースまたは５％（ｗ／ｖ）のスクロースにより調製されたノロウイルスワクチン乾燥粉末の復元後に、本出願人らは、復元されたノロウイルスワクチン懸濁液におけるｐＨ、抗原濃度および抗原効力も測定した。ワクチンのｐＨ値は、６．４～６．５のままであった（表４を参照）。コンセンサス抗原の回収率は、ＲＰ－ＨＰＬＣによって決定される場合、ノーウォーク抗原について１０３±１６％、１０４±１５％であった。コンセンサス抗原に対するＩＶＲＰアッセイによって測定された相対効力は、ノーウォーク抗原について４９～７３％および８１～１５４％であり（図４Ａおよび図４Ｂ）、これは、５０～１５０％の許容される範囲を満たす。
[0104] 単一バイアルＴＦＦＤまたはバルクＴＦＦＤのいずれかによって４％（ｗ／ｖ）のトレハロースまたは５％（ｗ／ｖ）のスクロースにより調製されたノロウイルスワクチン乾燥粉末の復元後に、本出願人らは、復元されたノロウイルスワクチン懸濁液におけるｐＨ、抗原濃度および抗原効力も測定した。ワクチンのｐＨ値は、６．４～６．５のままであった（表４を参照）。コンセンサス抗原の回収率は、ＲＰ－ＨＰＬＣによって決定される場合、ノーウォーク抗原について１０３±１６％、１０４±１５％であった。コンセンサス抗原に対するＩＶＲＰアッセイによって測定された相対効力は、ノーウォーク抗原について４９～７３％および８１～１５４％であり（図４Ａおよび図４Ｂ）、これは、５０～１５０％の許容される範囲を満たす。
【0107】
実施例４：４０℃、７５％相対湿度における４週間の貯蔵後のノロウイルスワクチン粉末の効力
[0105] 加速された安定性試験において、ノロウイルスワクチン乾燥粉末を、４週間にわたり４０℃、７５％ＲＨで貯蔵し、次いで、ＩＶＲＰアッセイを使用して抗原効力を測定した。図４Ａおよび図４Ｂに示す通り、ＧＩＩ．４コンセンサスおよびＧＩ．１ノーウォーク抗原の両方の効力は、著しく変化しなかった。
[0105] 加速された安定性試験において、ノロウイルスワクチン乾燥粉末を、４週間にわたり４０℃、７５％ＲＨで貯蔵し、次いで、ＩＶＲＰアッセイを使用して抗原効力を測定した。図４Ａおよび図４Ｂに示す通り、ＧＩＩ．４コンセンサスおよびＧＩ．１ノーウォーク抗原の両方の効力は、著しく変化しなかった。
【図1】
【図2A】
【図2B】
【図3】
【図4】
【配列表】
【国際調査報告】