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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-21
(54)【発明の名称】抗ウイルス剤としての新規アザインドール誘導体
(51)【国際特許分類】
C07D 471/04 20060101AFI20240514BHJP
A61K 31/496 20060101ALI20240514BHJP
A61P 31/12 20060101ALI20240514BHJP
A61P 31/14 20060101ALI20240514BHJP
A61P 31/20 20060101ALI20240514BHJP
A61P 29/00 20060101ALI20240514BHJP
A61P 25/04 20060101ALI20240514BHJP
A61K 45/00 20060101ALI20240514BHJP
【ＦＩ】
C07D471/04 104Z
A61K31/496
A61P31/12
A61P31/14
A61P31/20
A61P29/00
A61P25/04
A61K45/00
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023572557
(86)(22)【出願日】2022-05-23
(85)【翻訳文提出日】2023-12-21
(86)【国際出願番号】 FR2022050979
(87)【国際公開番号】W WO2022243650
(87)【国際公開日】2022-11-24
(31)【優先権主張番号】2105359
(32)【優先日】2021-05-21
(33)【優先権主張国・地域又は機関】FR
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】504007888
【氏名又は名称】センター ナショナル デ ラ レシェルシェ サイエンティフィーク
(71)【出願人】
【識別番号】521240402
【氏名又は名称】ユニヴェルシテ ド モンペリエ
(74)【代理人】
【識別番号】110002860
【氏名又は名称】弁理士法人秀和特許事務所
(72)【発明者】
【氏名】ブリアン，ローレンス
(72)【発明者】
【氏名】ベルナール，エリック
(72)【発明者】
【氏名】クロップ，カミーユ
【テーマコード（参考）】
4C084
4C086
【Ｆターム（参考）】
4C084AA19
4C084NA05
4C084ZA082
4C084ZA212
4C084ZB072
4C084ZB082
4C084ZB092
4C084ZB112
4C084ZB332
4C086AA01
4C086AA02
4C086AA03
4C086CB05
4C086MA01
4C086MA02
4C086MA04
4C086NA05
4C086NA14
4C086ZA08
4C086ZA21
4C086ZB07
4C086ZB08
4C086ZB09
4C086ZB33
(57)【要約】
本発明は、ウイルス感染の予防及び／又は治療に使用するための、以下の式（Ｉ）の化合物に関する。
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ウイルス感染の予防及び／又は治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物、又は薬学的に許容されるその塩若しくはそれらの混合物：【化1】
（式中、
Ｘは、水素原子又はハロゲン原子を表し、
Ｙは、水素原子、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ＝ＮＯＨ、－ＣＯ２Ｈ基、任意に一置換又は多置換されたアリール、任意に一置換又は多置換されたヘテロアリール、及び－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗから選択され、
－Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＣＨ２Ｎ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝Ｎ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表し、
－ｐは、０～２の整数であり、
－Ｌが－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＣＨ２Ｎ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝Ｎ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表す場合、Ｗは、
●水素原子、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、好ましくはメチル、
●有利にはハロゲン原子、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６アルコキシルから独立して選択される１～３個の基によって任意に一置換又は多置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、及び
●Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールから選択され、前記ヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換され、有利には、
○ ハロゲン原子、
○ ヒドロキシル、
○ オキソ基、
○ Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、
○ １個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、及び
○ ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリールから独立して選択される１～４個の基で任意に置換され、
－Ｌが－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－を表す場合、Ｗは、
●任意に一置換又は多置換された、有利にはハロゲン原子、ヒドロキシル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６アルコキシル基で任意に置換されたフェニル、及び
●Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールから選択され、前記ヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換され、有利には、
○ ハロゲン原子、
○ ヒドロキシル、
○ オキソ基、
○ Ｃ１～Ｃ６アルコキシル基、
○ １個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、及び
○ ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリールから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換され、
Ｚは、－ＣＨ２Ｑ又は－Ｏ（ＣＨ２）ｍＴを表し、
－Ｑは、－ＯＨ、－ＳＯ２Ｒ１、－ＮＲ２Ｒ３、又は－Ｒ４を表し、
－Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキルを表し、
－Ｒ２及びＲ３は、それぞれＣ１～Ｃ６アルキルを独立して表し、
－Ｒ４は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～７員のヘテロシクロアルキルを表し、前記ヘテロシクロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）－アルキル、及びＣ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルから独立して選択される１～３個の置換基で任意に置換され、
－ｍは、１又は２に等しくなり、
－Ｔは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３又は－Ｒ５であり、
●ｎは、０又は１であり、
●Ｒ５は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～７員のヘテロシクロアルキルであり、前記ヘテロシクロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）－アルキル、及びＣ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルから独立して選択される１～３個の置換基で任意に置換される）。
【請求項2】
式（Ｉｄ）のものであり、【化2】
式中、Ｘ、Ｙ及びＺは、請求項１で定義したとおりである、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項3】
Ｚは、－ＣＨ２Ｒ４を表し、式中、Ｒ４がＣ１～Ｃ６アルキル、特にメチルで任意に置換されたピペラジン基を表すことを特徴とする、請求項１又は２に記載の使用のための化合物。
【請求項4】
Ｘは、ハロゲン、特にフッ素を表すことを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項5】
Ｙは、Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表し、Ｌは、ＣＨ２ＮＨ又は－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－を表し、ｐは、０～２の整数であり、Ｗは、－ヒドロキシル基又はＣ１～Ｃ６アルキル基で任意に置換されたフェニル、及び
－Ｎ、Ｏ、又はＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールから選択されることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項6】
Ｙは、Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表し、Ｌは、－ＣＨ２ＮＨ又は－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－を表し、ｐは、０～２の整数であり、Ｗは、
－ヒドロキシル基で任意に置換されたフェニル、及び
－イミダゾールから選択されることを特徴とする、請求項５に記載の使用のための化合物。
【請求項7】
Ｙは、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｗを表し、Ｗは、Ｎ、Ｏ又はＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリール基を表し、前記ヘテロアリールは、－オキソ基、
－１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル基、及び
－ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキル基で任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール基から独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換されることを特徴とする、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のための化合物。
【請求項8】
Ｗは、－メチル、及び
－フッ素原子で任意に置換されたフェニルから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換された２（１Ｈ）－ピリジノンであることを特徴とする、請求項７に記載の使用のための化合物。
【請求項9】
【化3】
【化4】
好ましくは、
【化5】
から選択される、請求項１に記載の使用のための化合物。
【請求項10】
有効成分としての、請求項１～９のいずれか一項に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、ウイルス感染症の予防及び／及び治療に使用するための医薬組成物。
【請求項11】
抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤又は免疫抑制剤、免疫不全障害の治療剤、及び疼痛治療剤から選択される追加の治療剤を更に含む、請求項１０に記載の使用のための医薬組成物。
【請求項12】
ここで、前記ウイルス感染は、フラビウイルス（デング熱ウイルス、ジカウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルスなど）、アルファウイルス（チクングニアウイルス、マヤロウイルス、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、東部馬脳炎ウイルス、西部馬脳炎ウイルス、ベネズエラ馬脳炎ウイルスなど）、フィロウイルス（エボラウイルス、マールブルグ熱ウイルスなど）、アレナウイルス（ラッサ熱ウイルス、ジュニンウイルス、アマパリウイルスなど）、ピコルナウイルス（水疱性口内炎ウイルスなど）、パラミクソウイルス（インフルエンザウイルスなど）、又はコロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２など）によるものである、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のための化合物、又は請求項１０若しくは１１に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ウイルス感染の治療に使用するためのＡＸＬキナーゼの阻害剤として有用な７－アザインドール由来の化合物に関する。本発明はまた、それらの調製方法にも関する。
【背景技術】
【0002】
ＡＸＬは、ＴＹＲＯ－３、ＡＸＬ、ＭＥＲからなるＴＡＭファミリーに属する受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）患者で最初に発見して実証された、デング熱、ジカウイルス、チクングニア熱、エボラ熱などのウイルス感染におけるＡＸＬ受容体の関与は文献に記載される（（Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１８，３，ｐｐ．３０２－３０９；Ｆｅｄｅｌｉ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１８，９２：ｅ０１６１３－１７；Ｈａｓｔｉｎｇｓ，Ａ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，ｉＳｃｉｅｎｃｅ，２０１９，１３ ｐｐ．３３９－３５０；Ｍｅｅｒｔｅｎｓ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０１７，１８，３，ｐｐ．３２４－３３３）。当該受容体は、Ｇａｓ６アダプタを介してウイルスエンベロープに存在するホスファチジルセリンと相互作用することにより、エンベロープに包まれたウイルスの細胞標的への付着を促進する。従って、ＡＸＬは、ウイルスのエンドサイトーシスを刺激する。この相互作用中のＡＸＬの関与は、ＡＸＬ細胞質内ドメインのリン酸化を刺激し、関連するシグナル伝達経路を活性化する。これらのシグナルは、インターフェロンの生成とそれに関連する抗ウイルス反応を中和し、これらのウイルスが宿主の免疫制御から逃れることを促進する。
【0003】
現在までに、ＡＸＬに対して活性なキナーゼ阻害剤がいくつかあるが（Ｍｙｅｒ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１５），５９（８）：３５９３－３６０８）、このキナーゼに対して実際に選択的又は特異的なものがない。ほとんどの場合、これらのＲＴＫ間の配列の類似性により、ＡＸＬでの活性はＭＥＴ又はＭＥＲでの望ましい主な活性に対して二次的である。これは、すでに市販されている多標的キナーゼ阻害剤又はＭＴＫＩであるボスチニブ若しくはカボザンチニブ、又はＢＭＳ７７７６０７（現在臨床第２相中）の場合に特に当てはまる。これは、ＡＸＬ／ＤＤＲ１／ＦＬＴ３／ＫＩＴ／ＭＥＫ／ＭＥＴ／ＲＯＳ１及びＴＩＥ１などのキナーゼの大きなパネルを阻害することにより、幅広い阻害プロファイルを有する７－アザインドール誘導体ＮＰＳ－１０３４の場合にも当てはまる。
ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２０１５），５９（８）：３５９３－３６０８）、このキナーゼに対して実際に選択的又は特異的なものがない。ほとんどの場合、これらのＲＴＫ間の配列の類似性により、ＡＸＬでの活性はＭＥＴ又はＭＥＲでの望ましい主な活性に対して二次的である。これは、すでに市販されている多標的キナーゼ阻害剤又はＭＴＫＩであるボスチニブ若しくはカボザンチニブ、又はＢＭＳ７７７６０７（現在臨床第２相中）の場合に特に当てはまる。これは、ＡＸＬ／ＤＤＲ１／ＦＬＴ３／ＫＩＴ／ＭＥＫ／ＭＥＴ／ＲＯＳ１及びＴＩＥ１などのキナーゼの大きなパネルを阻害することにより、幅広い阻害プロファイルを有する７－アザインドール誘導体ＮＰＳ－１０３４の場合にも当てはまる。
【0004】
【化1】
【0005】
別のＡＸＬキナーゼ阻害剤は、現在臨床段階にあるベムセンチニブ（Ｒ４２８又はＢＧＢ３２４とも呼ばれる）である。現在市販されているキナーゼ阻害剤とは構造が大きく異なるこの化合物は、ＡＢＬ／ＫＩＴ／ＪＡＫ２－３／ＬＣＫ／ＰＤＧＦＲＢ／ＴＩＥ２などの他のキナーゼに対しても活性であることが判明している。
【0006】
【化2】
【0007】
従って、ウイルス感染に関してより選択的で効果的な新規ＡＸＬ阻害剤化合物が必要とされている。
【0008】
従って、本発明は、抗ウイルス剤として使用するための、ＡＸＬキナーゼを強力に阻害する新規７－アザインドール誘導体を提供する。
【0009】
この種類の構造に対する非常に特異的かつユニークな阻害プロファイルのため、これらの化合物は、ＡＸＬ受容体を使用して増殖するウイルスによって引き起こされる感染の治療に使用できる。ウイルス感染と闘うために、これらの化合物は、ＡＸＬのリン酸化を阻害することにより、細胞標的におけるエンベロープウイルスのエンドサイトーシスを遮断すること、及びインターフェロンの生成や宿主の抗ウイルス応答を阻害することが周知のＡＸＬによって制御される細胞内シグナルを中和することの両方で作用する。従って、本発明の阻害剤は、ＡＸＬが関与する疾患、特にウイルス感染、特に細胞へのウイルス入力の治療に使用することができる。
【発明の概要】
【0010】
したがって、本発明は、ウイルス感染の予防及び／又は治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物、又は薬学的に許容されるその塩若しくはそれらの混合物に関する：
【0011】
【化3】
（式中、
Ｘは、水素原子又はハロゲン原子を表し、
Ｙは、水素原子、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ＝ＮＯＨ、－ＣＯ２Ｈ基、任意に一置換又は多置換されたアリール、任意に一置換又は多置換されたヘテロアリール、及び－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗから選択され、
－Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＣＨ２Ｎ＝ＣＨ－
、－ＣＨ＝Ｎ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表し、
－ｐは、０～２の整数であり、
－Ｌが－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＣＨ２Ｎ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝Ｎ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表す場合、Ｗは、
●水素原子、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、好ましくはメチル、
●有利にはハロゲン原子、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６アルコキシルから独立して選択される１～３個の基によって任意に一置換又は多置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、及び
●Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールから選択され、当該ヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換され、有利には、
○ ハロゲン原子、
○ ヒドロキシル、
○ オキソ基
○ Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、
○ １個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、及び
○ ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリールから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換され、
－Ｌが－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－を表す場合、Ｗは、
●任意に一置換又は多置換された、有利にはハロゲン原子、ヒドロキシル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６アルコキシル基で任意に置換されたフェニル、及び
●Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールから選択され、当該ヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換され、有利には、
○ ハロゲン原子、
○ ヒドロキシル、
○ オキソ基、
○ Ｃ１～Ｃ６アルコキシル基、
○ １個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、及び
○ ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリールから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換され、
Ｚは、－ＣＨ２Ｑ又は－Ｏ（ＣＨ２）ｍＴを表し、
－Ｑは、－ＯＨ、－ＳＯ２Ｒ１、－ＮＲ２Ｒ３、又は－Ｒ４を表し、
●－Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキルを表し、
●－Ｒ２及びＲ３は、それぞれＣ１～Ｃ６アルキルを独立して表し、
●Ｒ４は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～７員のヘテロシクロアルキルを表し、当該ヘテロシクロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）－アルキル、及びＣ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルから独立して選択される１～３個の置換基で任意に置換され、
－ｍは、１又は２に等しくなり、
－Ｔは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３又は－Ｒ５であり、
●ｎは、０又は１であり、
●Ｒ５は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～７員のヘテロシクロアルキルであり、当該ヘテロシクロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）－アルキル、及びＣ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルから独立して選択される１～３個の置換基で任意に置換される）。
【0012】
本発明はまた、有効成分としての本発明による化合物又はその薬学的に許容される塩と、及び薬学的に許容される賦形剤とを含むウイルス感染の予防又は治療に使用するための医薬組成物に関する。
【0013】
詳細な説明
一般に、以下の用語と定義が使用される。
一般に、以下の用語と定義が使用される。
【0014】
本発明では、「ペプチドカップリング」とは、アミド－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－結合を形成する反応を指す。この反応で使用される技術は、ペプチド合成に共通であり、即ち、カルボン酸を活性化してアミンと反応させることによるものである。したがって、本発明で使用されるペプチドカップリング反応は、ペプチド合成に由来し、本発明の対象に直接適用できる。
【0015】
ペプチドカップリング反応は当業者に周知であり、特に、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ－メチルピロリジノン（ＮＭＰ）などの溶媒中に、好ましくは２０℃から１５０℃の間の温度で、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）又は１－エチル－３－（３’－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、又はＮ－ヒドロキシ－５－ノルボルネン－２，３－ジカルボジイミド）、又はベンゾトリアゾール（Ｏ－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム（ＴＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール－１－イル－オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（ＢＯＰ）、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－１，２，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＡＴＵ）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－１－イル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）、Ｏ－ベンゾトリアゾール－１－イル－テトラメチルテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）など）、又はＮ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）／ＥＤＣＩ混合物などのカップリング剤を使用して行うことができる。
【0016】
その代わりに、ペプチドカップリングは、最初にカルボン酸を塩化アシル（特に塩化チオニル若しくは塩化アセチルの存在下）又は対応する無水物（例えば、無水酢酸若しくはイソプロピルの存在下）に変換することによって活性化することによって起こり、次に、好ましくは、反応中に放出される酸を中和するための塩基（特に、塩化アシルの場合にはＨＣｌ）の存在下で、所望のアミンと反応させる。
【0017】
Ｃ（Ｏ）という用語は、「Ｃ＝Ｏ」と同等である。
【0018】
本発明における「アルキル」又は「アルキル基」という表現は、特に定義しない限り、１～６個の炭素原子を含む飽和の直鎖状又は分枝状の脂肪族基を意味する。本発明の対象によってカバーされたアルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソプロピル基である。
【0019】
いくつかの実施形態では、アルキル基の１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されることが明記される。この場合、好ましくは、影響を受ける水素原子の数は多くて１～３個である。例としては、ＣＨ２ＣＦ３基が挙げられる。
【0020】
本発明における「アリール基」又は「アリール」という表現は、６～１０個の炭素原子を含む（単環式又は多環式）環式芳香族基を意味する。本発明の対象によってカバーされたアリール基の例は、フェニル、ナフチル、好ましくは、フェニル基である。
【0021】
本発明における「ヘテロアリール基」又は「ヘテロアリール」という表現は、２～９個の炭素原子と、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１～３個のヘテロ原子とを含む、５～１０員の（単環式又は多環式）芳香族環式基を意味する。ヘテロアリール基の例としては、フラン、ピロール、チオフェン、チアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、オキサゾール、イソキサゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、キノリン、インドール、キノキサリン、ベンゾフラン、ジヒドロベンゾフラン、ベンゾジオキソール、ベンゾトリアゾール、ベンズイミダゾール基が挙げられ、好ましくは、ピロール、イミダゾール、チオフェン、インドール、ピリミジン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール及びベンズイミダゾールから選択される。
【0022】
本発明における「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロシクロアルキル基」という表現は、モルホリン、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、ホモピペラジン（１，４－ジアザシクロヘプタン）などの、窒素、酸素又は硫黄から独立して選択される１個以上（好ましくは１～２個）のヘテロ原子を含む５～７員の環状脂肪族基を表す。好ましくは、それは、モルホリン又はピペラジンである。
【0023】
本発明における「ハロゲン原子」とは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素原子を意味する。好ましくは、それは、塩素又はフッ素、特にフッ素である。
【0024】
本発明における「アルコキシル基」とは、酸素が結合したアルキル基を指す。アルコキシル基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシ基が挙げられる。好ましくは、それはメトキシ又はエトキシが挙げられる。
【0025】
本発明における「アリールオキシ基」とは、酸素原子に結合したアリール基を意味する。アリールオキシ基の例としては、フェニルオキシ基が挙げられる。
【0026】
本発明における「ヒドロキシル基」又は「ヒドロキシル」という表現は、ＯＨを指す。
【0027】
「オキソ基」という表現は、置換基＝Ｏを意味する。
【0028】
本発明における「任意に置換されたアリール基又はヘテロアリール基」という表現は、ハロゲン原子、ニトロ基－（ＮＯ２）、シアノ（ＣＮ）基、Ｃ１～Ｃ６アルコキシル基、Ｃ５～Ｃ１０アリールオキシ基、Ｃ１～Ｃ６アルキル基から独立して選択される１個以上（好ましくは１～３個、より好ましくは１～２個）の置換基によって任意に置換されたアリール又はヘテロアリールを指し、１個以上の水素原子は、フッ素原子、ヘテロアリール基、ヒドロキシル基、オキソ基、Ｃ１～Ｃ６の－ＣＯＮＨ－アルキル基、Ｃ１～Ｃ６の－ＮＨＣＯアルキル基、及びＮＲ２Ｒ３基で任意に置換され、Ｒ２及びＲ３はそれぞれ、Ｃ１～Ｃ６アルキル基、あるいはハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキル基で任意に置換されたＣ６～Ｃ１０のアリール基を表す。
【0029】
好ましくは、「任意に置換されたアリール基又はヘテロアリール基」という表現における置換基は、
ハロゲン原子、特にフッ素又は塩素、
ヒドロキシル、
オキソ基、
Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、特にメトキシ、
１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、好ましくはメチル基又はＣＨ２ＣＦ３、及び
ハロゲン原子（特にフッ素又は塩素）及び／又はＣ１～Ｃ６アルキル基で任意に置換さ
れたＣ６～Ｃ１０アリール基、例えば、フルオロフェニル（好ましくは４－フルオロフェニル）又はメチルフルオロフェニル（例えば、４－フルオロ－２－メチルフェニル）から独立して選択される。
ハロゲン原子、特にフッ素又は塩素、
ヒドロキシル、
オキソ基、
Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、特にメトキシ、
１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、好ましくはメチル基又はＣＨ２ＣＦ３、及び
ハロゲン原子（特にフッ素又は塩素）及び／又はＣ１～Ｃ６アルキル基で任意に置換さ
れたＣ６～Ｃ１０アリール基、例えば、フルオロフェニル（好ましくは４－フルオロフェニル）又はメチルフルオロフェニル（例えば、４－フルオロ－２－メチルフェニル）から独立して選択される。
【0030】
本発明における「７－アザインドール」という表現は、１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンを指す：
【0031】
【化4】
【0032】
本発明では、「薬学的に許容される」とは、一般に安全で、無毒であり、生物学的にもその他の点でも望ましくないものではなく、獣医学的使用及びヒトの薬学的使用に許容される医薬組成物の調製に有用なものを指す。
【0033】
本発明では、「医薬組成物」という表現は、有効用量の少なくとも１つの本発明の化合物及び少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤からなる任意の組成物を指す。このような賦形剤は、医薬形態及び所望の投与方法に応じて、当業者に通常知られている賦形剤から選択される。
【0034】
化合物の「薬学的に許容される塩」とは、本明細書に定義されるように、薬学的に許容され、親化合物の所望の薬理活性を有する塩を指す。そのような塩は、以下を含む。
（１）水和物及び溶媒和物、
（２）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの薬学的に許容される無機酸で形成され、若しくは酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２－ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル－Ｌ－酒石酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、トリフルオロ酢酸などの薬学的に許容される有機酸で形成された薬学的に許容される酸付加塩、又は
（３）親化合物中に存在する酸プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン若しくはアルミニウムイオンのいずれかで置換され、若しくは薬学的に許容される有機塩基又は無機塩基と配位結合する場合に形成される薬学的に許容される塩基付加塩。許容される有機塩基としては、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ－メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどが挙げられる。許容される無機塩基としては、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、及び水酸化ナトリウムが挙げられる。
（１）水和物及び溶媒和物、
（２）塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの薬学的に許容される無機酸で形成され、若しくは酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、２－ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２－ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル－Ｌ－酒石酸、酒石酸、ｐ－トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、トリフルオロ酢酸などの薬学的に許容される有機酸で形成された薬学的に許容される酸付加塩、又は
（３）親化合物中に存在する酸プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン若しくはアルミニウムイオンのいずれかで置換され、若しくは薬学的に許容される有機塩基又は無機塩基と配位結合する場合に形成される薬学的に許容される塩基付加塩。許容される有機塩基としては、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ－メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどが挙げられる。許容される無機塩基としては、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、及び水酸化ナトリウムが挙げられる。
【0035】
本発明における「鏡像異性体混合物」という表現は、鏡像異性体の任意の混合物を指す。混合物は、各エナンチオマーの５０／５０重量（ｗ／ｗ）のラセミ、又は、例えば９５％以上、好ましくは９８％以上、より好ましくは９９％以上の鏡像異性体過剰率が得られるように、鏡像異性体の一方若しくは他方が富化される非ラセミであり得る。
【0036】
本発明における「ジアステレオマー混合物」という表現は、比率に関係なく、ジアステレオマーの任意の混合物を指す。
【0037】
「治療」という表現は、あらゆる種類の動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに適用される。ヒト以外の動物の治療の場合、この表現は、獣医学的治療を指す。
【0038】
本発明は、ウイルス感染の予防及び／又は治療に使用するための、式（Ｉ）の化合物、又は薬学的に許容されるその塩若しくはそれらの混合物に関する：
【0039】
【化5】
（式中、
Ｘは、水素原子又はハロゲン原子を表し、
Ｙは、水素原子、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ＝ＮＯＨ、－ＣＯ２Ｈ基、任意に一置換又は多置換されたアリール、任意に一置換又は多置換されたヘテロアリール、及び－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗから選択され、
－Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＣＨ２Ｎ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝Ｎ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表し、
－ｐは、０～２の整数であり、
－Ｌが－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＣＨ２Ｎ＝ＣＨ－、－ＣＨ＝Ｎ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表す場合、Ｗは、
●水素原子、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、好ましくはメチル、
●有利にはハロゲン原子、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６アルコキシルから独立して選択される１～３個の基によって任意に一置換又は多置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、及び
●Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～３個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールから選択され、当該ヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換され、有利には、
○ ハロゲン原子、
○ ヒドロキシル、
○ オキソ基
○ Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、
○ １個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、及び
○ ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリールから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換され、
－Ｌが－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－を表す場合、Ｗは、
●任意に一置換又は多置換された、有利にはハロゲン原子、ヒドロキシル基、Ｃ１～Ｃ６アルキル、又はＣ１～Ｃ６アルコキシル基で任意に置換されたフェニル、及び
●Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘ
テロアリールから選択され、当該ヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換され、有利には、
○ ハロゲン原子、
○ ヒドロキシル、
○ オキソ基、
○ Ｃ１～Ｃ６アルコキシル基、
○ １個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、及び
○ ハロゲン原子及び／又はＣ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリールから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換され、
Ｚは、－ＣＨ２Ｑ又は－Ｏ（ＣＨ２）ｍＴを表し、
－Ｑは、－ＯＨ、－ＳＯ２Ｒ１、－ＮＲ２Ｒ３、又は－Ｒ４を表し、
●－Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキルを表し、
●－Ｒ２及びＲ３は、それぞれＣ１～Ｃ６アルキルを独立して表し、
●Ｒ４は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～７員のヘテロシクロアルキルを表し、当該ヘテロシクロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）－アルキル、及びＣ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルから独立して選択される１～３個の置換基で任意に置換され、
－ｍは、１又は２に等しくなり、
－Ｔは、－Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３又は－Ｒ５であり、
●ｎは、０又は１であり、
●Ｒ５は、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～７員のヘテロシクロアルキルであり、当該ヘテロシクロアルキルは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）－アルキル、及びＣ１～Ｃ６のＣ（Ｏ）Ｏ－アルキルから独立して選択される１～３個の置換基で任意に置換される）。
【0040】
本発明による式（Ｉ）の化合物は、互変異性体、鏡像異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体又は立体異性体の混合物の形態であり得る。
【0041】
第１実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉａ）であり、
【0042】
【化6】
【0043】
第２実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉｂ）である
【0044】
【化7】
【0045】
第３実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉｃ）である
【0046】
【化8】
【0047】
第４実施形態では、本発明の化合物は、式（Ｉｄ）である
【0048】
【化9】
【0049】
式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）及び（Ｉｄ）では、置換基Ｘ、Ｙ及びＺは上記及び下記に定義されるとおりである。
【0050】
特定の実施形態では、本発明の化合物において、Ｚは、－ＣＨ２Ｒ４又は－Ｏ（ＣＨ２）ｍＲ５を表す。好ましくは、この実施形態では、Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキル又はＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１～Ｃ６）－アルキル基で任意に置換されたピペラジン、モルホリン又はホモピペラジン基を表す。この実施形態では、好ましくは、ｍは、２を表す。
【0051】
特定の実施形態では、Ｚは、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３、－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、－Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、
【0052】
【化10】
を表し
【0053】
好ましい実施形態では、Ｚは、－ＣＨ２Ｒ４を表し、式中、Ｒ４がＣ１～Ｃ６アルキル、特にメチルで任意に置換されたピペラジン基を表す。
【0054】
特定の実施形態では、Ｘは、ハロゲン、特にフッ素を表す。
【0055】
特定の実施形態では、Ｘは、水素を表す。
【0056】
特定の実施形態では、Ｙは、－Ｈ、－ＣＮ、－ＣＨ２ＯＨ、－ＣＨ＝ＮＯＨ、任意に一置換若しくは多置換されたアリール若しくはヘテロアリール、又は－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表す。
【0057】
有利な実施形態では、Ｙは、任意に一置換若しくは多置換されたアリール若しくはヘテロアリール、又は－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表す。
【0058】
この場合、Ｙは、任意に一置換又は多置換されたアリール又はヘテロアリールを表し、好ましくは任意に一置換又は多置換されたアリール、具体的には、特に非置換のフェニルである。
【0059】
より有利な実施形態では、Ｙは、Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表す。この場合、Ｙは、－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表し、好ましくは、ｐは、０、１又は２に等しくなる。
【0060】
有利には、ＹがＬ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表す場合、Ｌは、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－、好ましくは、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）－又は－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－を表す。
【0061】
この実施形態では、Ｙは、－Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表し、Ｗは有利には、Ｃ６～Ｃ１０アリール、又はＮ、Ｓ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子を含む５～１０員のヘテロアリールを表し、上記アリール又はヘテロアリールは、任意に一置換又は多置換される。
【0062】
好ましい実施形態では、Ｗは、Ｃ６～Ｃ１０アリール、特に非置換又は好ましくはヒドロキシルによって一置換されたフェニルを表す。
【0063】
別の好ましい実施形態では、Ｗは、Ｎ、Ｓ及びＯから独立して選択される１～２個のヘテロ原子、特にＮを含む５員又は６員のヘテロアリール、例えば、ピラゾール、ピリジン又はイミダゾールを表す。有利には、上記ヘテロアリールは、
●ハロゲン原子、特にフッ素、
●オキソ基、
●１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●ハロゲン原子（特にフッ素）及び／又はアルキルＣ１～Ｃ６で任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチル、フルオロフェニル（好ましくは４－フルオロフェニル）又はメチルフルオロフェニル（例えば、４－フルオロ－２－メチルフェニル）から独立して選択される１～４個、好ましくは１又は２個の基で任意に置換される。
●ハロゲン原子、特にフッ素、
●オキソ基、
●１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●ハロゲン原子（特にフッ素）及び／又はアルキルＣ１～Ｃ６で任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチル、フルオロフェニル（好ましくは４－フルオロフェニル）又はメチルフルオロフェニル（例えば、４－フルオロ－２－メチルフェニル）から独立して選択される１～４個、好ましくは１又は２個の基で任意に置換される。
【0064】
好ましくは、Ｗは、ピラゾール、３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール、ピリジン、２（１Ｈ）－ピリジノン、４（１Ｈ）－ピリジノン又はイミダゾール、特に、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●Ｃ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチルから独立して選択される１～４個、好ましくは１又は２個の基で任意に置換された２（１Ｈ）－ピリジノン又はイミダゾールを表す。
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●Ｃ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチルから独立して選択される１～４個、好ましくは１又は２個の基で任意に置換された２（１Ｈ）－ピリジノン又はイミダゾールを表す。
【0065】
特に、Ｗは、以下から選択される：
【0066】
【化11】
好ましくは、
【0067】
【化12】
【0068】
有利な実施形態では、Ｙは、アリール、ヘテロアリール又はＬ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表し、Ｌは、－ＣＨ２ＮＨ又は－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、特に－ＣＨ２ＮＨを表し、ｐは、０～２の整数であり、Ｗは、
ヒドロキシル基、又はＣ１～Ｃ６アルキル基、好ましくはヒドロキシルで任意に置換されたフェニル基、及び
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子、特にＮを含み、好ましくは、ピロール、イミダゾール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール及びベンゾイミダゾールからなる群から選択される５～１０員のヘテロアリール基から選択され、
ヒドロキシル基、又はＣ１～Ｃ６アルキル基、好ましくはヒドロキシルで任意に置換されたフェニル基、及び
Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子、特にＮを含み、好ましくは、ピロール、イミダゾール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール及びベンゾイミダゾールからなる群から選択される５～１０員のヘテロアリール基から選択され、
【0069】
好ましくは、Ｙは、Ｌ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗを表し、Ｌは、－ＣＨ２ＮＨ又は－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、特に－ＣＨ２ＮＨを表し、ｐは、０～２の整数であり、Ｗは、
ヒドロキシル基、又はＣ１～Ｃ６アルキル基、好ましくはヒドロキシルで任意に置換されたフェニル基、及び
ピロール、イミダゾール、３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール、チオフェン、ピリジン、２（１Ｈ）－ピリジノン、４（１Ｈ）－ピリジノン、ピリミジン、ピリミジン－２，４－ジオン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール及びベンズイミダゾール、より好ましくはイミダゾールから選択される。
ヒドロキシル基、又はＣ１～Ｃ６アルキル基、好ましくはヒドロキシルで任意に置換されたフェニル基、及び
ピロール、イミダゾール、３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール、チオフェン、ピリジン、２（１Ｈ）－ピリジノン、４（１Ｈ）－ピリジノン、ピリミジン、ピリミジン－２，４－ジオン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール及びベンズイミダゾール、より好ましくはイミダゾールから選択される。
【0070】
この実施形態では、Ｚは、好ましくは、－ＣＨ２Ｒ４又は－Ｏ（ＣＨ２）ｍＲ５を表し、また、好ましくは、－ＣＨ２Ｒ４を表す。好ましくは、この実施形態では、Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキル又はＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１～Ｃ６）－アルキル基で任意に置換されたピペラジン、又はモルホリン基を表す。好ましくは、Ｚは、－ＣＨ２Ｒ４を表し、ここで、Ｒ４がメチルで置換されたピペラジン基を表す。更に、この実施形態では、Ｘは、有利にはハロゲン、特にフッ素を表す。
【0071】
別の有利な実施形態では、Ｙは、－ＮＨＣ（Ｏ）－Ｗを表し、Ｗは、Ｎ、Ｏ及びＳから独立して選択される１～２個のヘテロ原子、特にＮを含む５～１０員のヘテロアリール基を表し、上記ヘテロアリールは、
●オキソ基、
●１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●ハロゲン原子（特にフッ素）及び／又はアルキルＣ１～Ｃ６で任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチル、フルオロフェニル（好ましくは４－フルオロフェニル）又はメチルフルオロフェニル（例えば、４－フルオロ－２－メチルフェニル）から独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換される。
●オキソ基、
●１個以上の水素原子がフッ素原子で任意に置換されたＣ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●ハロゲン原子（特にフッ素）及び／又はアルキルＣ１～Ｃ６で任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチル、フルオロフェニル（好ましくは４－フルオロフェニル）又はメチルフルオロフェニル（例えば、４－フルオロ－２－メチルフェニル）から独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換される。
【0072】
好ましくは、この実施形態では、ヘテロアリール基は、ピラゾール、ピロール、イミダゾール、チオフェン、ピリジン、ピリミジン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール及びベンゾイミダゾールからなる群から選択され、
●オキソ基、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●Ｃ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチルから独立して選択される１～４個の基で任意に置換される。
●オキソ基、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル、特にメチル、及び
●Ｃ１～Ｃ６アルキルで任意に置換されたＣ６～Ｃ１０アリール、例えば、メチルから独立して選択される１～４個の基で任意に置換される。
【0073】
より好ましくは、この実施形態では、Ｗはピラゾール、ピロール、イミダゾール、３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピラゾール、チオフェン、ピリジン、２（１Ｈ）－ピリジノン、４（１Ｈ）－ピリジノン、ピリミジン、ピリミジン－２，４－ジオン、ベンゾフラン、ベンゾジオキソール、インドール又はベンズイミダゾール、好ましくは２（１Ｈ
）－ピリジノンであり、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル基、特にメチル、及び
●Ｃ６～Ｃ１０アリール基、特にハロゲン原子、特にフッ素で任意に置換されたフェニルから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換される。
）－ピリジノンであり、
●Ｃ１～Ｃ６アルキル基、特にメチル、及び
●Ｃ６～Ｃ１０アリール基、特にハロゲン原子、特にフッ素で任意に置換されたフェニルから独立して選択される１～４個の置換基で任意に置換される。
【0074】
この実施形態では、Ｚは、好ましくは、－ＣＨ２Ｒ４又は－Ｏ（ＣＨ２）ｍＲ５を表し、好ましくは、－ＣＨ２Ｒ４を表す。好ましくは、この実施形態では、Ｒ４及びＲ５は独立して、Ｃ１～Ｃ６アルキル又はＣ（Ｏ）Ｏ（Ｃ１～Ｃ６）－アルキル基で任意に置換されたピペラジン、又はモルホリン基を表す。好ましくは、Ｚは、－ＣＨ２Ｒ４を表し、ここで、Ｒ４がメチルで置換されたピペラジン基を表す。
【0075】
好ましくは、本発明の化合物は、以下から選択される：
【0076】
【化13】
【0077】
【化14】
より好ましくは、
【0078】
【化15】
【0079】
組成物及び治療応用
本発明の化合物は、ＡＸＬ受容体を阻害する。ＡＸＬは多くの生物学的プロセスに関与しており、治療的に検証された標的であるため、本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩、又は以下に定義する本発明の組成物は、特にウイルス感染の治療において薬剤として有用であり、その感染サイクルはＡＸＬ及び関連するシグナル伝達に依存する。
本発明の化合物は、ＡＸＬ受容体を阻害する。ＡＸＬは多くの生物学的プロセスに関与しており、治療的に検証された標的であるため、本発明の化合物及びその薬学的に許容される塩、又は以下に定義する本発明の組成物は、特にウイルス感染の治療において薬剤として有用であり、その感染サイクルはＡＸＬ及び関連するシグナル伝達に依存する。
【0080】
本発明は、ウイルス感染の予防及び／又は治療に使用するための、上で定義した式（Ｉ）の化合物に関する。
【0081】
より具体的には、これらの化合物は、有効成分としての、少なくとも１つの上記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物を調製するために使用され得る。従って、本発明は、ウイルス感染の予防及び／又は治療に使用するための、有効成分としての本発明による式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物に関する。上記賦形剤は、当業者に知られている通常の賦形剤から所望の医薬形態及び投与様式に従って選択される。
【0082】
本発明による医薬組成物は、典型的には、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤又は免疫抑制剤、免疫不全障害の治療剤、及び疼痛治療剤から選択される追加の治療剤を更に含み得る。特に、それは、ウイルス感染に対する治療に有用な薬剤である。
【0083】
従って、本発明の１つの目的は、ウイルス感染の予防及び／又は治療における、上で定義した式（Ｉ）の化合物又は上で定義した医薬組成物の応用に関する。
【0084】
換言すれば、本発明は、ウイルス感染の予防及び／又は治療用の薬剤を調製するための、上で定義した式（Ｉ）の化合物又は上で定義した医薬組成物の応用に関する。
【0085】
本発明による式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又は本発明による医薬組成物は、フラビウイルス（デング熱ウイルス、ジカウイルス、西ナイルウイルス、クンジンウイルスを含む）、アルファウイルス（チクングニアウイルス、マヤロウイルス、セムリキ森林ウイルス、シンドビスウイルス、東部馬脳炎ウイルス、西部馬脳炎ウイルス、ベネズエラ馬脳炎ウイルスを含む）、フィロウイルス（エボラウイルス、マールブルグ熱ウイルスを含む）、アレナウイルス（ラッサ熱ウイルス、ジュニンウイルス、アマパリウイルスを含む）、ピコルナウイルス（水疱性口内炎ウイルスを含む）、パラミクソウイルス（インフルエンザウイルスを含む）、又はＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２などなどのコロナウイルスによるウイルス感染の予防及び／又は治療に特に有用である。
【0086】
特定の実施形態では、本発明は、コロナウイルス、特にＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２によるウイルス感染の予防及び／又は治療における、上で定義した式（Ｉ）の化合物又は上で定義した医薬組成物に関する。
【0087】
この実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、以下の化合物に優先的に対応する：
【0088】
【化16】
【0089】
本発明はまた、
ａ）有効成分としての本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む第１組成物と、
ｂ）典型的には抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤又は免疫抑制剤、免疫不全疾患治療剤及び疼痛治療剤、好ましくはウイルス感染に対する治療に有用な薬剤からから選択される、別個に、併用して、又は逐次的に使用するための組み合わせ製品としての追加の治療剤を含む第２組成物とを含むキットに関する。
ａ）有効成分としての本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される賦形剤を含む第１組成物と、
ｂ）典型的には抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤又は免疫抑制剤、免疫不全疾患治療剤及び疼痛治療剤、好ましくはウイルス感染に対する治療に有用な薬剤からから選択される、別個に、併用して、又は逐次的に使用するための組み合わせ製品としての追加の治療剤を含む第２組成物とを含むキットに関する。
【0090】
上記キットは、特にウイルス感染、特に上で定義したウイルス感染の予防及び／又は治療のために使用する薬剤として有用である。
【0091】
本発明による医薬組成物は、静脈内若しくは皮内経路などの非経口的に、又は局所的に、経口的に若しくは経鼻的に投与することができる。
【0092】
非経口的に投与できる形態は、薬理学的に適合する分散剤及び／又は湿潤剤を含み得る水性懸濁液、等張食塩水又は滅菌注射用溶液を含む。経口投与できる形態は、錠剤、ソフト又はハードゲルカプセル、粉末、顆粒、経口溶液及び懸濁液を含む。経鼻投与できる形態は、エアロゾルを含む。局所的に投与できる形態は、パッチ、ゲル、クリーム、軟膏、ローション、スプレー、及び点眼薬を含む。
【0093】
好ましくは、本発明の化合物又は組成物は、経口又は非経口（特に静脈内）で投与される。
【0094】
本発明の化合物の有効用量は、例えば、選択した投与経路、体重、年齢、性別、治療すべき病状の進行状態、及び治療すべき個体の感受性などの多数のパラメータの関数として変化する。
【0095】
本発明の別の態様によれば、本発明はまた、本発明による式（Ｉ）の化合物若しくはその薬学的に許容される塩又は本発明による組成物の有効用量、好ましくは胃腸外（特に静脈内）又は経口投与を必要とする患者に投与することを含む、上記病状の予防及び／又は治療のための方法に関する。
【0096】
本発明の化合物の調製方法
本発明はまた、上記化合物、特に５－ブロモ－３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンからの化合物の調製方法に関する。
本発明はまた、上記化合物、特に５－ブロモ－３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンからの化合物の調製方法に関する。
【0097】
第１実施形態によれば、本発明による方法は、図表１に示される。
【0098】
【化17】
【0099】
図表１
図表中、Ｘ及びＺは、上記と同義であり、Ｙは、水素原子、ＣＨＯ、ＣＮ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、ＮＨ２又はフェニル基を表す。
図表中、Ｘ及びＺは、上記と同義であり、Ｙは、水素原子、ＣＨＯ、ＣＮ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、ＮＨ２又はフェニル基を表す。
【0100】
方法は、少なくとも以下のステップを含む。
ａ）５－ブロモ－３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩ）を、例えば、水素化ナトリウムなどの塩基の存在下、塩化トルエン－４－スルホニルでトシル化し、中間体（ＩＩＩ）を得て、
ｂ）パラジウムジクロロ［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）などのパラジウム触媒の存在下での式（ＩＶ）の中間体と鈴木－宮浦型カップリング反応を行い、Ｕは、ボロン酸又はそのピナコールエステルを表し、式（Ｖ）の化合物を得て、
ｃ）パラジウムジクロロ［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）などのパラジウム触媒の存在下での式（ＶＩ）の中間体と鈴木－宮浦型カップリング反応を行い、Ｕは、ボロン酸又はそのピナコールエステルを表し、式（ＶＩＩ）の化合物を得て、及び
ｄ）塩基、好ましくは水酸化ナトリウム又は炭酸セシウムによるトシル基の加水分解により、式（Ｉ）の化合物を得る。
ａ）５－ブロモ－３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩ）を、例えば、水素化ナトリウムなどの塩基の存在下、塩化トルエン－４－スルホニルでトシル化し、中間体（ＩＩＩ）を得て、
ｂ）パラジウムジクロロ［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）などのパラジウム触媒の存在下での式（ＩＶ）の中間体と鈴木－宮浦型カップリング反応を行い、Ｕは、ボロン酸又はそのピナコールエステルを表し、式（Ｖ）の化合物を得て、
ｃ）パラジウムジクロロ［１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］（Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２）などのパラジウム触媒の存在下での式（ＶＩ）の中間体と鈴木－宮浦型カップリング反応を行い、Ｕは、ボロン酸又はそのピナコールエステルを表し、式（ＶＩＩ）の化合物を得て、及び
ｄ）塩基、好ましくは水酸化ナトリウム又は炭酸セシウムによるトシル基の加水分解により、式（Ｉ）の化合物を得る。
【0101】
中間体アミン化合物（ＶＩＩＩ）（即ち、Ｘ及びＺが上で定義したとおりであり、Ｙが（ＣＨ２）ｎＮＨ２基を表し、ｎが１である式（Ｉ）の化合物）の合成を図表２に示す。
【0102】
【化18】
【0103】
図表２
図表中、Ｘ及びＺは、上で定義したとおりである。
図表中、Ｘ及びＺは、上で定義したとおりである。
【0104】
この実施形態では、式（ＶＩＩＩ）のアミノ中間体を調製する方法は、少なくとも以下のステップを含み得る。
ｅ）ヒドロキシルアミンを式（Ｉ）の化合物上で縮合させ、Ｙは、ＣＨＯであり、式（ＩＸ）のオキシムを形成し、
ｆ）オキシム（ＩＸ）を、特に亜鉛の存在下、超音波下で還元して、式（ＶＩＩＩ）のメチルアミン中間体を得る。
ｅ）ヒドロキシルアミンを式（Ｉ）の化合物上で縮合させ、Ｙは、ＣＨＯであり、式（ＩＸ）のオキシムを形成し、
ｆ）オキシム（ＩＸ）を、特に亜鉛の存在下、超音波下で還元して、式（ＶＩＩＩ）のメチルアミン中間体を得る。
【0105】
当業者であれば、これらの種類の化合物を合成するために、適切に記載され公知の他の合成技術を全て適用することは当然である。
【0106】
ＹがＬ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗ基を表し、Ｌがアミド基－ＮＨＣ（Ｏ）－又は－ＣＨ２ＮＨＣ（Ｏ）－を表す式（Ｉ）の化合物は、例えば、図表３に示されるアミノ－７－アザインドール誘導体からの合成方法によって得られる：
【0107】
【化19】
【0108】
図表３
図表中、Ｗ、Ｘ、Ｚ、及びｐは、上で定義したとおりであり、ｎは、０又は１に等しくなる。
図表中、Ｗ、Ｘ、Ｚ、及びｐは、上で定義したとおりであり、ｎは、０又は１に等しくなる。
【0109】
図表３の方法は、式Ｗ－（ＣＨ２）ｐ－Ｃ（Ｏ）ＯＨの酸と上で定義した式（ＶＩＩＩ）のアミノ中間体との間のペプチドカップリング反応の少なくとも１つのステップを含み、特に、２－（７－アザ－１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム（ＨＡＴＵ）などの少なくとも１つの活性化剤及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）などの塩基の存在下で行われる。
【0110】
当業者は、これらのアミド化合物を得るために、適切に記載され公知の他の全ての合成技術を利用するのは当然である。
【0111】
ＹがＬ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗ基を表し、ＬがＡ－ＣＯＮＨ－基を表す式（Ｉ）の化合物は
、例えば、特に２つの方法に従って、図表４に示される式（Ｘ）のカルボン酸７－アザインドール誘導体からの合成方法によって得られる：
、例えば、特に２つの方法に従って、図表４に示される式（Ｘ）のカルボン酸７－アザインドール誘導体からの合成方法によって得られる：
【0112】
【化20】
【0113】
図表４
図表中、Ｗ、Ｚ、及びｐは、上で定義したとおりである。
図表中、Ｗ、Ｚ、及びｐは、上で定義したとおりである。
【0114】
有利には、図表４の方法は、式（Ｘ）の酸と式Ｗ－（ＣＨ２）ｐ－ＮＨ２のアミンとの間の、カップリングによる、又は塩化チオニルの事前作用による塩化アシルのその場生成によるペプチドカップリング反応の少なくとも１つのステップを含む。
【0115】
本発明の尿素化合物、即ち、ＹがＬ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗ基を表し、Ｌが尿素－ＮＨＣＯＮＨ－基を表す式（Ｉ）の化合物は、例えば、図表５に示される方法に従って製造される：
【0116】
【化21】
【0117】
図表５
図表中、Ｗ、Ｘ及びＺは、上で定義したとおりである。
図表中、Ｗ、Ｘ及びＺは、上で定義したとおりである。
【0118】
有利には、図表５の方法は、ｎが０に等しい式（ＶＩＩＩ）の化合物と、式Ｗ－ＮＣＯ（Ｗは上で定義したとおりである）のイソシアネートとの少なくとも１回の反応を含む。上記イソシアネートは市販され、又は当業者に知られている合成方法に従って得られる。更に、当業者は、これらのアミド化合物を得るために、適切に記載され公知の他の全ての合成技術を利用するのは当然である。
【0119】
別の実施形態によれば、本発明の第二級アミン化合物、即ち、ＹがＬ－（ＣＨ２）ｐ－Ｗ基を表し、Ｌが－ＣＨ２ＮＨ－基を表す式（Ｉ）の化合物の合成方法に関しては、特に３つの方法が図表６に示される：
【0120】
【化22】
【0121】
図表６
図表中、Ｗ、Ｘ、Ｚ及びｐは、上で定義したとおりである。
図表中、Ｗ、Ｘ、Ｚ及びｐは、上で定義したとおりである。
【0122】
有利には、図表６の方法は、この方法は、ｎが１に等しい式（ＶＩＩＩ）の化合物と式Ｗ－ＣＨＯのアルデヒドとの間、又は式（ＸＩ）の７－アザリンドールアルデヒドと式Ｗ（ＣＨ２）ｐ－ＮＨ２のアミンとの間の還元的アミノ化の少なくとも１つのステップを含む。
【0123】
式Ｗ－ＣＨＯのアルデヒド及び式Ｗ－（ＣＨ２）ｐ－ＮＨ２のアミンは、特に市販され、又は当業者に知られている調製方法に従って容易に入手できる。
【0124】
当業者は、これらのアミド化合物を得るために、適切に記載され公知の他の全ての合成技術を利用するのは当然である。
【0125】
別の実施形態は、以下の図表７に従って、式（ＸＩＩＩ）の化合物を脱保護することによって得られる式（ＸＩＩ）の第二級アミン誘導体を合成するための方法に関する：
【0126】
【化23】
【0127】
図表７
図表中、Ｘ及びＹは、上で定義したとおりである。
図表中、Ｘ及びＹは、上で定義したとおりである。
【0128】
有利には、方法は、酸媒体中で式（ＸＩＩＩ）のカルバメート化合物を加水分解して式
（ＸＩＩ）の所望の第二級アミンを形成する少なくとも１つのステップを含む。
（ＸＩＩ）の所望の第二級アミンを形成する少なくとも１つのステップを含む。
【0129】
当業者は当然、他の公知の合成技術を全て適用して、期待される第２級アミンを脱保護することができる。
【図面の簡単な説明】
【0130】
【図1】Ｒ４２８／ベムセンチニブと比較した、化合物１、２及び３によるセルロにおけるＡｘｌのリン酸化の阻害である。Ａ５４９細胞を、Ａｘｌを標的とする２．５μＭの化合物とともに１時間プレインキュベートした。次に、１ｍＭ過バナジン酸塩で５分間刺激した。Ａｘｌキナーゼの細胞質内ドメインのＹ７７９残基のリン酸化の阻害の評価は、抗体Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＡＦ２２２８）を使用したイムノブロットとデンシトメトリ（画像Ｊ）（Ｐ－Ａｘｌ／Ａｘｌ比）によるシグナル強度の測定によって行われる。
【図2】キナーゼＡｘｌ及びキナーゼＦＬＴ３の阻害に関する化合物１、２及び３のＩＣ５０の測定である。段階希釈によって１０種類の濃度の化合物を調製した。化合物を最終濃度１％のＤＭＳＯ中でスクリーニングする。キナーゼをキナーゼ緩衝液中で２倍の濃縮濃度に希釈した。全てのＡＴＰ溶液を４倍濃縮の使用濃度（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、０．０１％ ＢＲＩＪ（登録商標）－３５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ）に希釈した。ＩＣ５０を計算するために、各化合物を１００ｎＭ～０．００４９５ｎＭの１０種類の濃度でインキュベートした。ＩＣ５０が示される。ａ）化合物１の結果、ｂ）化合物２の結果、ｃ）化合物３の結果。
【図3】Ｒ４２８／ベムセンチニブと比較した、化合物１、２、３、１０及び１１の抗ＺＩＫＶ活性である。細胞を、示された濃度の化合物とともに１時間プレインキュベートし、次に、ウイルス株に感染させた（ＭＯＩ＝０．１）。細胞を化合物の存在下で２４時間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、ウイルスゲノムＲＮＡのｑＲＴ－ＰＣＲによって定量化される。値は、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下での細胞のインキュベーションによって得られた対照条件で検出された感染の百分率として表される。Ａｘｌ Ｒ４２８の阻害剤／ベムセンチニンブも並行して評価される。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。ａ）２．５μＭの濃度での化合物１、２、３、１０及びＲ４２８の結果、ｂ）０．１５、０．３１、０．６２、１．２５、２．５及び５μの濃度での化合物１、２及びＲ４２８の結果、ｃ）０．１、０．２、０．４、０．５、１及び２．５μＭの濃度での化合物１０、並びに０．００１、０．１、０．４、０．５、及び１μＭの濃度での化合物１１の結果、ｄ）化合物１（左側）及び１０（右側）について得られた用量効果の対数効果。Ｒ４２８で得られた結果も並行して示す。
【図4】化合物１０、１１、及び１４の抗ＤＥＮＶ活性である。細胞を、示された濃度（０．０１、０．１、０．５、１及び２．５μＭ）の化合物とともに１時間プレインキュベートし、次に、ウイルス株ＤＥＮＶ２に感染させた（ＭＯＩ＝０．１）。細胞を化合物の存在下で３日間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、ＲＴ－ＰＣＲによる細胞内ウイルスＲＮＡの定量化によって測定され、値は、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下での細胞のインキュベーションによって得られた対照条件で検出された感染の百分率として表される。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。
【図5】化合物１０の抗ＫＵＮＶ活性である。細胞を、示された濃度（０．００１、０．１、０．５、１及び２．５μＭ）の化合物とともに１時間プレインキュベートし、次に、ウイルス株に感染させた（ＭＯＩ＝０．１）。細胞を化合物の存在下で２４時間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、細胞溶解物中のルシフェラーゼ活性の定量化によって測定され、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下での細胞のインキュベーションによって得られる対照条件で検出された感染の百分率として表される。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。
【図6】化合物１０の抗ＣＨＩＫＶ活性である。細胞を、示された濃度（０．００１、０．１、０．２５０．５、１及び１．５μＭ）の化合物とともに１時間プレインキュベートし、次に、ウイルス株ＬＲ－ＯＰＹ－１に感染させた（ＭＯＩ＝０．１）。細胞を化合物の存在下で２４時間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、細胞溶解物中のルシフェラーゼ活性の定量化によって測定され、ＤＭＳＯ（０）の存在下での細胞のインキュベーションによって得られる対照条件で検出された感染の百分率として表される。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。
【図7】ＶｅｒｏＥ６系統で測定された化合物１、２、３、１０、及び１４の抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２活性である。細胞を、１．２５μＭの濃度の化合物とともに１時間プレインキュベートし、その後、ウイルス株ＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０に感染させた（ＭＯＩ＝０．０１）。細胞を化合物の存在下で２４時間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、ｑＲＴ－ＰＣＲによる細胞培養中のウイルスＲＮＡの定量化によって測定される。対照条件は、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下で細胞をインキュベートすることによって得られる。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。
【図8】Ａ５４９－ＡＣＥ２細胞において測定された化合物１、２、３、１０及び１４の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２活性である。細胞を、１．２５μＭの濃度の化合物とともに１時間プレインキュベートし、その後、ウイルス株ＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０に感染させた（ＭＯＩ＝０．０１）。細胞を化合物の存在下で２４時間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、ｑＲＴ－ＰＣＲによる細胞培養中のウイルスＲＮＡの定量化によって測定される。対照条件は、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下で細胞をインキュベートすることによって得られる。Ａｘｌ Ｒ４２８の阻害剤／ベムセンチニンブも並行して評価される。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。
【図9】ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２に対する化合物１、２、及び３の比活性度の計算である。Ａ５４９－ＡＣＥ２細胞を、濃度を増加させながら１時間インキュベートし、その後、ウイルス株ＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０に感染させた（ＭＯＩ＝０．０１）。細胞を化合物の存在下で２４時間培養状態に保った。残留ウイルス複製は、ｑＲＴ－ＰＣＲによる細胞培養中のウイルスＲＮＡの定量化によって測定される。対照条件は、ＤＭＳＯの存在下で細胞をインキュベートすることによって得られる。値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。ＩＣ５０は、ソフトウェアＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して計算される。
【図10】初代ヒト気管支上皮モデルにおいて測定された化合物１の抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２活性である。細胞を、培養物の基底区画に加えた１．２５μＭの濃度で使用した化合物（ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）、Ｅｐｉｅｌｉｘ）とともに１時間プレインキュベートした。次に、細胞を、頂端区画に加えたウイルス株ＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ ０３７１／２０２０によって感染させた（ＭＯＩ＝０．１）。２時間後、接種材料を除去し、細胞を化合物の存在下で２４時間培養し続ける。残留ウイルス複製は、ｑＲＴ－ＰＣＲによる細胞培養中のウイルスＲＮＡの定量化によって測定される。対照条件は、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下で細胞をインキュベートすることによって得られる。ＮＩは、感染しない細胞に相当する状態を示す。個々の値、平均値、標準偏差が示される。
【図11】化合物１によるＡ５４９－ＡＣＥ２細胞感染の阻害メカニズムである。Ａ５４９－ＡＣＥ２（ａ）又はｖｅｒｏＥ６（ｂ）細胞をＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２（ＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０株）に感染させた（ＭＯＩ＝０．０１）。化合物１（１．２５μＭ）をウイルス攻撃の１時間前に細胞培養物に加え、実験全体を通じて維持した（図表１、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２の条件）；ウイルス攻撃の１時間前に加え、かつ感染の最初の４時間のみ（図表２、Ｐｒｅ－Ｔｔの条件）；ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２への曝露後４時間目から（図表３、Ｐｏｓｔ－Ｔｔの条件）のいずれか。細胞の感染は、特異的抗体（抗スパイクＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２、クローン１Ａ９、Ｇｅｎｅ Ｔｅｘ）を使用したＦＡＣＳによるスパイクタンパク質の細胞内検出によって決定される。個々の値、平均値、標準偏差が示され、希釈溶媒ＤＭＳＯ（０）の存在下で維持された細胞から実行された対照条件と比較される。
【実施例】
【0131】
本発明は、以下の実施例を読めばよりよく理解されるであろうが、これらの実施例は単
に例示として示されており、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
に例示として示されており、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
【0132】
実施例１、合成
材料
合成及び解析は、以下の条件で行われた。
材料
合成及び解析は、以下の条件で行われた。
【0133】
核磁気共鳴１Ｈ及び１３Ｃ：
装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００（４００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ３００（３００ＭＨｚ）
使用条件：周囲温度、１００万分の１（ｐｐｍ）で表される化学シフト、小文字で示されるシグナルの多重度（一重項ｓ、二重項ｄ、三重項ｔ、四重項ｑ、多重項ｍ）、重水素化溶媒としてのジメチルスルホキシドｄ６、メタノールｄ４、クロロホルムｄ１。
装置：Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ４００（４００ＭＨｚ）、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ３００（３００ＭＨｚ）
使用条件：周囲温度、１００万分の１（ｐｐｍ）で表される化学シフト、小文字で示されるシグナルの多重度（一重項ｓ、二重項ｄ、三重項ｔ、四重項ｑ、多重項ｍ）、重水素化溶媒としてのジメチルスルホキシドｄ６、メタノールｄ４、クロロホルムｄ１。
【0134】
高圧液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）：
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ
使用条件：Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８カラム又はＥｃｌｉｐｓｅ ｐｌｕｓ（２．１×５０ｍｍ）、１．８μｍ。温度：３０℃、流量：方法Ｘ及びＹでは０．５ｍＬ／分、方法Ｚでは０．４ｍＬ／分、溶出勾配 水（Ａ）／アセトニトリル（Ｂ）／ギ酸０．１％（時間（分）／％Ｂ）：
方法Ｘ：０／１０、０．３／１０、５．７／１００、６．０／１００
方法Ｙ：０／１０、１／５０、６／１００、８／１００
方法Ｚ：０／１０、１１／１００、１５／１００
装置：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ
使用条件：Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ－Ｃ１８カラム又はＥｃｌｉｐｓｅ ｐｌｕｓ（２．１×５０ｍｍ）、１．８μｍ。温度：３０℃、流量：方法Ｘ及びＹでは０．５ｍＬ／分、方法Ｚでは０．４ｍＬ／分、溶出勾配 水（Ａ）／アセトニトリル（Ｂ）／ギ酸０．１％（時間（分）／％Ｂ）：
方法Ｘ：０／１０、０．３／１０、５．７／１００、６．０／１００
方法Ｙ：０／１０、１／５０、６／１００、８／１００
方法Ｚ：０／１０、１１／１００、１５／１００
【0135】
質量分析（ＭＳ）：
装置：Ｑｕａｄｒｉｐｏｌｅ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１２０
使用条件：ポジティブ及び／又はネガティブモードのエレクトロスプレー（ＥＳＩ）。
装置：Ｑｕａｄｒｉｐｏｌｅ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ６１２０
使用条件：ポジティブ及び／又はネガティブモードのエレクトロスプレー（ＥＳＩ）。
【0136】
秤量：
器具：Ｄｅｎｖｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＴＰ２１４（精度０．１ｍｇ）
使用条件：秤量はミリグラム単位で行われる。
器具：Ｄｅｎｖｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ ＴＰ２１４（精度０．１ｍｇ）
使用条件：秤量はミリグラム単位で行われる。
【0137】
圧力反応：
装置：オートクレーブ Ｐａｒｒ ３００ｍＬ。
使用条件：２０バールの水素下での水素化。
装置：オートクレーブ Ｐａｒｒ ３００ｍＬ。
使用条件：２０バールの水素下での水素化。
【0138】
マイクロ波照射下の反応：
器具：ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ ＳＰ（登録商標）
使用条件：出力２００ワット、平均撹拌速度
器具：ＣＥＭ Ｄｉｓｃｏｖｅｒ ＳＰ（登録商標）
使用条件：出力２００ワット、平均撹拌速度
【0139】
以下では、次の略語が使用される。
【0140】
【表1】
【0141】
３，５－ジアリール－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（Ｉ）中間体の一般的合成
ステップ１、５－ブロモ－３－ヨード－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピ
ロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩＩ）の合成
３Ｇの５－ブロモ－３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩ）をアルゴン下で６０ｍＬの無水ＴＨＦで希釈し、氷浴で冷却する。５５８ｍｇ（１．５当量）の水素化ナトリウム（６０％）をゆっくり加え、媒体を０℃で２０分間撹拌する。次に、塩化トシル（２．１１ｇ、１．２当量）を加え、媒体をＲＴで５時間撹拌する。溶媒を蒸発させる。得られた残留物を最小限の石油エーテルに懸濁し、濾過する。沈殿物を２Ｍ水酸化ナトリウム溶液で２回洗浄し、次に、真空下で一晩乾燥させる。
ステップ１、５－ブロモ－３－ヨード－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピ
ロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩＩ）の合成
３Ｇの５－ブロモ－３－ヨード－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩ）をアルゴン下で６０ｍＬの無水ＴＨＦで希釈し、氷浴で冷却する。５５８ｍｇ（１．５当量）の水素化ナトリウム（６０％）をゆっくり加え、媒体を０℃で２０分間撹拌する。次に、塩化トシル（２．１１ｇ、１．２当量）を加え、媒体をＲＴで５時間撹拌する。溶媒を蒸発させる。得られた残留物を最小限の石油エーテルに懸濁し、濾過する。沈殿物を２Ｍ水酸化ナトリウム溶液で２回洗浄し、次に、真空下で一晩乾燥させる。
【0142】
ＲＭＮ １Ｈ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）８．５２（ｄ、Ｊ＝１．９、１Ｈ）、８．２２（ｓ、１Ｈ）、８．０１（ｍ、３Ｈ）、７．４４（ｄ、Ｊ＝８．２、２Ｈ）、２．５１（ｓ、３Ｈ）．
【0143】
収率：９７％、ＨＰＬＣ：９９％、ＭＳ［Ｍ＋１］：４７６．９－４７８．９
【0144】
ステップ２、３－５－アリール－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（Ｉ）（Ｙ＝ＣＨＯ、ＮＨ２、又はフェニルで置換されたフェニル）の一般的合成
５－ブロモ－３－ヨード－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩＩ）（１００ｍｇ）、カップリングされた第１ボロン酸（ＩＶ）（１当量）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）を３／１ジオキサン／水混合物（３ｍＬ）に懸濁し、混合物をアルゴン下で２０分間脱気する。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２％）を加え、出発試薬が完全に消費されるまで、混合物をマイクロ波照射下、８０℃で２０分間、１～３回撹拌する。反応媒体をＮａＨＣＯ３で飽和した水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、シリカカラムで精製する。次に、化合物を、第２ボロン酸又はピナコール（ＶＩ）のエステル（１．２ｅｑ）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）の存在下で、ジオキサン／水（３／１、４ｍＬ）混合物に溶解する。媒体をアルゴン下で２０分間再度脱気し、次に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．０２５ｅｑ）を加え、混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で４５分間撹拌する。次に、５００μＬの１Ｍ水酸化ナトリウム（３ｅｑ）を反応媒体に加え、マイクロ波照射下、１００℃で４５分間撹拌する。次に、反応媒体をＮａＨＣＯ３で飽和した水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（ジクロロメタン／メタノール－アンモニア）で精製する。
５－ブロモ－３－ヨード－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（ＩＩＩ）（１００ｍｇ）、カップリングされた第１ボロン酸（ＩＶ）（１当量）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）を３／１ジオキサン／水混合物（３ｍＬ）に懸濁し、混合物をアルゴン下で２０分間脱気する。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（２％）を加え、出発試薬が完全に消費されるまで、混合物をマイクロ波照射下、８０℃で２０分間、１～３回撹拌する。反応媒体をＮａＨＣＯ３で飽和した水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、シリカカラムで精製する。次に、化合物を、第２ボロン酸又はピナコール（ＶＩ）のエステル（１．２ｅｑ）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）の存在下で、ジオキサン／水（３／１、４ｍＬ）混合物に溶解する。媒体をアルゴン下で２０分間再度脱気し、次に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（０．０２５ｅｑ）を加え、混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で４５分間撹拌する。次に、５００μＬの１Ｍ水酸化ナトリウム（３ｅｑ）を反応媒体に加え、マイクロ波照射下、１００℃で４５分間撹拌する。次に、反応媒体をＮａＨＣＯ３で飽和した水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（ジクロロメタン／メタノール－アンモニア）で精製する。
【0145】
【表2】
【0146】
アミンの合成
方法１、４－フルオロ－３－｛５－［３－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－フェニル］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－フェニルアミンの合成
方法１、４－フルオロ－３－｛５－［３－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－フェニル］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－フェニルアミンの合成
【0147】
【化24】
【0148】
ステップ１、５－ブロモ－３－（２－フルオロ－５－ニトロ－フェニル）－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジンの合成
５－ブロモ－３－ヨード－１－（トルエン－４－スルホニル）－ピロロ［２，３－ｂ］
ピリジン（４６０ｍｇ）、例えば、２－（２－フルオロ－５－ニトロ－フェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－［１，３，２］ジオキサボロラン（１ｅｑ）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）をジオキサン／水混合物（９／１、２０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン下で２０分間脱気する。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１８ｍｇ、０．０２５ｅｑ）を加え、混合物をマイクロ波照射下、５０℃で２０分間、ＬＣ／ＭＳによって測定される試薬の全消費量まで２～４回撹拌する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（石油エーテル／ジクロロメタン）で精製する。
５－ブロモ－３－ヨード－１－（トルエン－４－スルホニル）－ピロロ［２，３－ｂ］
ピリジン（４６０ｍｇ）、例えば、２－（２－フルオロ－５－ニトロ－フェニル）－４，４，５，５－テトラメチル－［１，３，２］ジオキサボロラン（１ｅｑ）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）をジオキサン／水混合物（９／１、２０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン下で２０分間脱気する。Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１８ｍｇ、０．０２５ｅｑ）を加え、混合物をマイクロ波照射下、５０℃で２０分間、ＬＣ／ＭＳによって測定される試薬の全消費量まで２～４回撹拌する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（石油エーテル／ジクロロメタン）で精製する。
【0149】
収率：６６％、ＨＰＬＣ：９０％、ＭＳ［Ｍ＋１］：４９０．０～４９２．０
【0150】
ステップ２、３－［５－ブロモ－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－４－フルオロ－フェニルアミンの合成
５－ブロモ－３－（２－フルオロ－５－ニトロ－フェニル）－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（１００ｍｇ）を、２３２ｍｇの塩化スズ二水和物（５ｅｑ）とともに３ｍＬの酢酸エチルに懸濁し、還流下で４時間撹拌する。反応媒体を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。沈殿物を濾別し、水、次に酢酸エチルで洗い流す。水相を酢酸エチルで抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（石油エーテル／酢酸エチル）で精製する。
５－ブロモ－３－（２－フルオロ－５－ニトロ－フェニル）－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン（１００ｍｇ）を、２３２ｍｇの塩化スズ二水和物（５ｅｑ）とともに３ｍＬの酢酸エチルに懸濁し、還流下で４時間撹拌する。反応媒体を酢酸エチルに溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗浄する。沈殿物を濾別し、水、次に酢酸エチルで洗い流す。水相を酢酸エチルで抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（石油エーテル／酢酸エチル）で精製する。
【0151】
収率：７６％、ＨＰＬＣ：９７％、ＭＳ［Ｍ＋１］：４６０．０～４６２．０
【0152】
ステップ３、４－フルオロ－３－｛５－［３－（４－メチル－ピペラジン－１－イルメチル）－フェニル］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル｝－フェニルアミンの合成
３－［５－ブロモ－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－４－フルオロフェニルアミン（４７５ｍｇ）、１－メチル－４－［３－（４，４，５，５－テトラメチル－［１，３，２］ジオキサボロラン－２－イル）－ベンジル］－ピペラジン（１．２ｅｑ）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）をジオキサン／水混合物（９／１、２０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン下で２０分間脱気する。次に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１９ｍｇ、０．０２５ｅｑ）を加え、混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で４５分間撹拌する。次に、３μＬの１Ｍ水酸化ナトリウム（３ｅｑ）を反応媒体に加え、マイクロ波照射下、１００℃で４５分間撹拌する。次に、反応媒体をＮａＨＣＯ３で飽和した水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（ジクロロメタン／メタノール－アンモニア）で精製する。
３－［５－ブロモ－１－（トルエン－４－スルホニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジン－３－イル］－４－フルオロフェニルアミン（４７５ｍｇ）、１－メチル－４－［３－（４，４，５，５－テトラメチル－［１，３，２］ジオキサボロラン－２－イル）－ベンジル］－ピペラジン（１．２ｅｑ）及び炭酸カリウム（３ｅｑ）をジオキサン／水混合物（９／１、２０ｍＬ）に懸濁し、アルゴン下で２０分間脱気する。次に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１９ｍｇ、０．０２５ｅｑ）を加え、混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で４５分間撹拌する。次に、３μＬの１Ｍ水酸化ナトリウム（３ｅｑ）を反応媒体に加え、マイクロ波照射下、１００℃で４５分間撹拌する。次に、反応媒体をＮａＨＣＯ３で飽和した水溶液で洗浄し、酢酸エチルで抽出し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固させ、次に、順相シリカカラム（ジクロロメタン／メタノール－アンモニア）で精製する。
【0153】
収率：９１％、ＨＰＬＣ：９８％、ＭＳ［Ｍ＋１］：４１６．３
【0154】
様々非営利的なカルボン酸の合成では、
［Ｔｒａｏｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１３），７０，７８９－８０１］記載の手順に従って、１－（４－フルオロフェニル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジン－３－カルボン酸（ＨＰＬＣ：９７％、ＭＳ［Ｍ＋１］：２４３．１）を得る。
［Ｆｌｙｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４），１８（４），５０１－５１０］記載の手順に従って、１－（４－フルオロフェニル）－６－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジン－３－カルボン酸（ＨＰＬＣ：９７％、ＭＳ［Ｍ＋１］：２４８．２）を得る。１－（４－フルオロフェニル）－４－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－ピリジン－３
－カルボン酸（ＨＰＬＣ：１００％、ＭＳ［Ｍ＋１］：２４８．２）は、上記１－（４－フルオロフェニル）－６－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－ピリジン－３－カルボン酸の合成中に副生成物として得られる。
［Ｔｒａｏｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１３），７０，７８９－８０１］記載の手順に従って、１－（４－フルオロフェニル）－２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジン－３－カルボン酸（ＨＰＬＣ：９７％、ＭＳ［Ｍ＋１］：２４３．１）を得る。
［Ｆｌｙｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１４），１８（４），５０１－５１０］記載の手順に従って、１－（４－フルオロフェニル）－６－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロピリジン－３－カルボン酸（ＨＰＬＣ：９７％、ＭＳ［Ｍ＋１］：２４８．２）を得る。１－（４－フルオロフェニル）－４－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－ピリジン－３
－カルボン酸（ＨＰＬＣ：１００％、ＭＳ［Ｍ＋１］：２４８．２）は、上記１－（４－フルオロフェニル）－６－メチル－２－オキソ－１，２－ジヒドロ－ピリジン－３－カルボン酸の合成中に副生成物として得られる。
【0155】
アミノ－７－アザインドールとカルボン酸化合物からのアミド化合物の一般的合成。
【0156】
【化25】
【0157】
カルボン酸（１ｅｑ）を無水ＤＭＦに溶解し、アルゴン雰囲気下で乾燥シュレンクに入れる。Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（１ｅｑ）、次に、誘導体アミノ－７－アザインドール（１ｅｑ）を加える。次に、媒体を７０℃で一晩撹拌する。溶媒を蒸発させる。次に、得られた残留物を酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４乾燥塩化ナトリウム飽和水溶液で１回洗浄した後、綿で濾過し、蒸発乾固させ、１％トリフルオロ酢酸で逆相シリカカラム（水／アセトニトリル）上で精製して所望のアミド誘導体を得る。
【0158】
【表3-1】
【表3-2】
【0159】
尿素の一般的合成
【0160】
【化26】
【0161】
アミノ誘導体（１ｅｑ）、フェニルイソシアネート（１．０５ｅｑ）及びトリエチルアミン（２ｅｑ）を無水ＴＨＦに溶解し、アルゴン下、室温で一晩撹拌する。反応媒体を飽和ＮａＨＣＯ３溶液でクエンチする。水相を酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。有機相を合わせ、蒸発乾固させ、順相シリカカラム（ジクロロメタン／メタノール－アンモニア）で精製して、所望の尿素誘導体を得る。
【0162】
【表4】
【0163】
ホルミルアザインドールからのアミン化合物の合成
【0164】
【化27】
【0165】
アルデヒド誘導体（１ｅｑ）及びアミン誘導体（１ｅｑ）をメタノール／酢酸混合物（９／１）に溶解する。混合物を室温で３時間撹拌し、次に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（２ｅｑ）を加え、媒体を室温で一晩撹拌する。溶媒を蒸発させて除去し、残留物を酢酸エチルに溶解し、ＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回、塩化ナトリウム飽和水溶液で１回洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、綿で濾過し、蒸発乾固させる。得られた残留物を、１００％ジクロロメタンから９０／１０のジクロロメタン／メタノール－アンモニアの勾配を用いてシリカカラム上で精製する。
【0166】
【表5】
【0167】
アミノ誘導体の脱保護。
【0168】
【化28】
【0169】
保護されたアミン誘導体（１ｅｑ）をジオキサン及び濃塩酸（４ｅｑ）に溶解する。混合物を室温で２時間撹拌する。溶媒を蒸発させて除去し、残留物を酢酸エチル／水混合物に溶解する。水相をＮａＨＣＯ３粉末を加えることによって中和する。沈殿物を濾別し、次に、水で洗浄し、乾燥させる。
【0170】
実施例２．生物学的検査
Ａ－キナーゼＡｘＬに対する本発明の化合物の選択性
本発明の化合物を、キナーゼＡｘｌに対する阻害活性について評価した。
Ａ－キナーゼＡｘＬに対する本発明の化合物の選択性
本発明の化合物を、キナーゼＡｘｌに対する阻害活性について評価した。
【0171】
１－セルロースにおけるキナーゼＡｘｌのリン酸化の阻害
Ａ５４９細胞を２．５μＭの化合物１、２、又は３とともに１時間プレインキュベートした。次に、リン酸化によってキナーゼＡｘｌを活性化することが知られている化合物である１ｍＭの過バナジン酸塩でそれらを５分間刺激した。
Ａ５４９細胞を２．５μＭの化合物１、２、又は３とともに１時間プレインキュベートした。次に、リン酸化によってキナーゼＡｘｌを活性化することが知られている化合物である１ｍＭの過バナジン酸塩でそれらを５分間刺激した。
【0172】
Ａｘｌの細胞質内ドメインのＹ７７９残基のリン酸化の阻害は、抗体Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＡＦ２２２８）を使用した免疫ブロットによって視覚化される。
【0173】
その結果は、図１に示される。これらは、化合物１、２及び３の存在下で、対照（ＤＭＳＯ）と比較して、ＡｘＬのＹ７７９残基の活性化がはるかに低く、又はゼロでさえあることを示す。
【0174】
２－キナーゼＡｘｌの選択的阻害
とりわけ、ＡＸＬ及びＦＬＴ３を含むキナーゼのパネルに対する化合物の阻害活性は、Ｚ’－ＬＹＴＥ（登録商標）及びＡｄａｐｔａ（登録商標）Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｃｒｅｅｎテクノロジーを使用してＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃによって評価された。
とりわけ、ＡＸＬ及びＦＬＴ３を含むキナーゼのパネルに対する化合物の阻害活性は、Ｚ’－ＬＹＴＥ（登録商標）及びＡｄａｐｔａ（登録商標）Ｓｅｌｅｃｔ Ｓｃｒｅｅｎテクノロジーを使用してＴｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃによって評価された。
【0175】
蛍光ベースの生化学検査は共役酵素を使用し、タンパク質分解性切断に対するリン酸化ペプチドと非リン酸化ペプチドの感受性の違いに基づいている。ペプチド基質は、２つの蛍光色素（各末端に１つずつ）で標識されており、蛍光転移（ＦＲＥＴ）が可能である。
【0176】
化合物１、２及び３は、１％ＤＭＳＯ中最終濃度１００ｎＭでウェル中で試験された。
【0177】
結果は以下の表に示される。
【0178】
【表6】
【0179】
本発明の化合物によるキナーゼの阻害率。列は左から右へ：試験したキナーゼ－化合物
１－化合物２－化合物３。
結果は、本発明の化合物のそれぞれが、他のキナーゼと比較した場合、キナーゼＡｘｌに対して優れた活性（９５％、９５％、及び９４％阻害）を示すことを示し、結果は化合物ごとに異なる。
１－化合物２－化合物３。
結果は、本発明の化合物のそれぞれが、他のキナーゼと比較した場合、キナーゼＡｘｌに対して優れた活性（９５％、９５％、及び９４％阻害）を示すことを示し、結果は化合物ごとに異なる。
【0180】
本発明の化合物によるＡｘｌ及びＦＬＴ３のＩＣ５０阻害を計算するために、出発濃度から１／３段階希釈することによって各化合物１、２及び３の１０濃度を調製した。Ａｘｌ又はＦＬＴ３キナーゼをキナーゼバッファで２倍の濃度に希釈した。全てのＡＴＰ溶液を４倍の使用濃度（５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．５、０．０１％ ＢＲＩＪ（登録商標）－３５、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＧＴＡ）に希釈する。
【0181】
ＩＣ５０を計算するために、各化合物を１００ｎＭ～０．００４９５ｎＭの１０種類の濃度でインキュベートする。
【0182】
結果は、図２に示され、以下の表にまとめられる。
【0183】
【表7】
【0184】
化合物１、２及び３は、２つのキナーゼＡｘｌ及びＦＬＴ３に対して優れた活性を示す。Ａｘｌは、ＦＬＴ３の活性化において重要な役割を果たすため、化合物３は、ＦＬＴ３と比較してＡｘｌに関して選択性さえ示す。
【0185】
Ｂ－抗ウイルス評価
本発明の化合物は、感染性完全ウイルスの複製に対する分子の阻害効果を試験することにより、インビトロでの抗ウイルス活性について評価された。選択される細胞系（ＨｅＬａ、Ａ５４９、Ａ５４９－ＡＣＥ２細胞）は、想定される感染モデルに関連しており、フローサイトメトリでＡｘｌ分子の発現が検証される。
本発明の化合物は、感染性完全ウイルスの複製に対する分子の阻害効果を試験することにより、インビトロでの抗ウイルス活性について評価された。選択される細胞系（ＨｅＬａ、Ａ５４９、Ａ５４９－ＡＣＥ２細胞）は、想定される感染モデルに関連しており、フローサイトメトリでＡｘｌ分子の発現が検証される。
【0186】
【表8】
【0187】
１－ジカウイルスに対する抗ウイルス活性
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（子宮頸癌、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の２．５×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら３７℃で１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、化合物の存在下でＺＩＫＶ ＢｅＨ８株（ＭＯＩ＝０．１）に１時間曝露する。
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（子宮頸癌、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の２．５×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら３７℃で１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、化合物の存在下でＺＩＫＶ ＢｅＨ８株（ＭＯＩ＝０．１）に１時間曝露する。
【0188】
次に、ウイルス接種材料を除去し、細胞を阻害剤の存在下で２４時間維持する。細胞の感染は、Ｌｕｎａ社の標準的な１－ステップＲＴ－ＰＣＲキットを使用したｑＲＴ－ＰＣＲ、及びＬｕｎａ社の標準的な１－ステップＲＴ－ＰＣＲキットを使用したプライマー５’－ＣＣＧＣＴＧＣＣＣＡＡＣＡＣＡＡＧと５’－ＣＣＡＣＴＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＧＣＡＧＡＣＡＴによって検出されたウイルスＲＮＡを定量化することによって決定される。値（ＤＣＴ）は、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡの定量化に対して正規化される。表される値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。
【0189】
対照条件は、試験した化合物の可溶化に使用される溶媒であるＤＭＳＯの存在下で細胞をインキュベートすることによって行われた。これらの条件下で使用されるＤＭＳＯの体積は、試験条件下で化合物によって提供される体積に対応する。
【0190】
同じ実験条件下で、
Ｂｅｒｇｅｎｂｉｏ社が開発した臨床試験段階のＡｘｌ阻害剤であるＲ４２８／Ｂｅｍｃｅｎｔｉｎｉｂを用いて並行治療を実施した。
Ｂｅｒｇｅｎｂｉｏ社が開発した臨床試験段階のＡｘｌ阻害剤であるＲ４２８／Ｂｅｍｃｅｎｔｉｎｉｂを用いて並行治療を実施した。
【0191】
化合物１、２、３、１０及び１１で得られた結果は図３に示される。化合物１、１０及びＲ４２８／ベムセイニブのＩＣ５０は、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍによって決定された。
【0192】
これらの実験条件下では、１５０ｎＭ以上の濃度で使用される化合物１、２、３、１０及び１１は、ＺＩＫＶ ＢｅＨ－８株によるＨｅＬａ細胞の感染を防止する。これらの化合物のインビトロ有効性は、１～３μＭの濃度でのＺＩＫＶウイルスに対する有効性について文献に記載されているＲ４２８／ベムセンチニブの有効性と少なくとも同等である。
【0193】
２－デング熱ウイルスに対する抗ウイルス活性
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（腺癌、ヒトの頸部、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の４×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、化合物の存在下で、キャプシドタンパク質をコードする配列の上流にナノルシフェラーゼ遺伝子を発現するＤＥＮＶサブタイプ２株（ＤＥＮＶ２）に１時間曝露する。次に、ウイルス接種材料を除去し、細胞を阻害剤の存在下で３日間維持する。
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（腺癌、ヒトの頸部、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の４×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、化合物の存在下で、キャプシドタンパク質をコードする配列の上流にナノルシフェラーゼ遺伝子を発現するＤＥＮＶサブタイプ２株（ＤＥＮＶ２）に１時間曝露する。次に、ウイルス接種材料を除去し、細胞を阻害剤の存在下で３日間維持する。
【0194】
細胞を受動的溶解バッファ（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬によって溶解する。ウイルス感染は、試薬Ｇｅｎｏｆａｘ Ａ（Ｙｅｌｅｎ）の存在下、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｆ２００ＰＲＯ（Ｔｅｃａｎ）蛍光光度計を使用して細胞溶解物中のナノルシフェラーゼ活性を定量することによって検出される。値は、細胞溶解物に含まれる総タンパク質の量に対して正規化され、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して５６２ｎｍでの吸光度を測定することによって決定される。表される値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。対照条件は、上記と同様である。
【0195】
化合物１０、１１及び１４について得られた結果は、図４に示される。
【0196】
これらの実験条件下では、５００ｎＭ以上の濃度で使用される化合物１０、１１及び１４は、サブタイプＤＥＮＶ２によるＨｅＬａ細胞の感染を防止する。
【0197】
３－ＷＮＶウイルスのクンジン株に対する抗ウイルス活性
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の４×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、化合物の存在下で、キャプシドタンパク質をコードする配列の上流にナノルシフェラーゼ遺伝子を発現するＷＮＶウイルスのクンジン株に１時間曝露する。次に、ウイルス接種材料を除去し、細胞を阻害剤の存在下で２４時間維持する。
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の４×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、化合物の存在下で、キャプシドタンパク質をコードする配列の上流にナノルシフェラーゼ遺伝子を発現するＷＮＶウイルスのクンジン株に１時間曝露する。次に、ウイルス接種材料を除去し、細胞を阻害剤の存在下で２４時間維持する。
【0198】
細胞を受動的溶解バッファ（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬によって溶解する。ウイルス感染は、試薬Ｇｅｎｏｆａｘ Ａ（Ｙｅｌｅｎ）の存在下、Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｆ２００ＰＲＯ（Ｔｅｃａｎ）蛍光光度計を使用して細胞溶解物中のナノルシフェラーゼ活性を定量することによって検出される。値は、細胞溶解物に含まれる総タンパク質の量に対して正規化され、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して５６２ｎｍでの吸光度を測定することによって決定される。表される値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。対照条件は、上記と同様である。
【0199】
化合物１０について得られた結果は、図５に示される。
【0200】
これらの実験条件下では、５００ｎＭ以上の濃度で使用される化合物１０は、ＷＮＶのクンジン株によるＨｅＬａ細胞の感染を防止する。
【0201】
４－チクングニアウイルスに対する抗ウイルス活性
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の４×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、ルシフェラーゼ遺伝子、又はｎｓＰ３タンパク質をコードする配列の上流にあるＧＦＰをコードする配列のいずれかを発現するＣＨＩＫＶウイルスのＬＲ－ＯＰＹ１株に曝露する。細胞を化合物の存在下で１時間インキュベートする。
試験は、９６ウェルプレートで培養したＨｅＬａ株（ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－２）の４×１０４細胞を、化合物の濃度を増加させながら１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、１０％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、細胞を、ルシフェラーゼ遺伝子、又はｎｓＰ３タンパク質をコードする配列の上流にあるＧＦＰをコードする配列のいずれかを発現するＣＨＩＫＶウイルスのＬＲ－ＯＰＹ１株に曝露する。細胞を化合物の存在下で１時間インキュベートする。
【0202】
次に、ウイルス接種材料を除去し、細胞を阻害剤の存在下で２４時間維持する。ウイルス感染は、受動的溶解バッファ（Ｐｒｏｍｅｇａ）試薬を使用した細胞溶解後に、ＧＦＰの蛍光を直接定量するか、Ｇｅｎｏｆａｘ Ａ（Ｙｅｌｅｎ）試薬の存在下でＩｎｆｉｎｉｔｅ Ｆ２００ＰＲＯ（Ｔｅｃａｎ）蛍光光度計を使用して行われる細胞溶解物中のファイアフェラーゼ活性の定量化によって測定される。値は、細胞溶解物に含まれる総タンパク質の量に対して正規化され、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）を使用して５６２ｎｍでの吸光度を測定することによって決定される。どちらのプロトコールでも、値は、細胞溶解物に含まれる総タンパク質の量に対して正規化され、ＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｐｉｅｒｃｅ）によって測定される。表される値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。対照条件は、上記と同様である。
【0203】
化合物１０について得られた結果は、図６に示される。
【0204】
これらの実験条件下では、１００ｎＭ以上の濃度で使用される化合物１０は、チクングニアウイルスによるＨｅＬａ細胞の感染を防止する。
【0205】
試験した各感染モデルについて、ＩＣ５０活性化合物は、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍによって決定された。
【0206】
【表9】
【0207】
これらの評価は、いくつかの化合物のＥＣ５０が１μＭ未満であることを示す。
【0208】
５－コロナウイルスＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対する抗ウイルス活性
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染に対する本発明の化合物の阻害活性を、この病原体の研究のための３つの関連系統の感染によってインビトロで評価した。それらの系統は、ミドリザル系統ＶｅｒｏＥ６（不死化腎臓上皮、ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－１５８６）、Ａ５４９系統（肺上皮癌、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－１８５）におけるＡＣＥ２受容体のトランスフェクションによって産生されるＡ５４９－ＡＣＥ２系統、市販の初代気管支上皮細胞（Ｍｕｃｉｌａｉｒ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘ）である。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染に対する本発明の化合物の阻害活性を、この病原体の研究のための３つの関連系統の感染によってインビトロで評価した。それらの系統は、ミドリザル系統ＶｅｒｏＥ６（不死化腎臓上皮、ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－１５８６）、Ａ５４９系統（肺上皮癌、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－１８５）におけるＡＣＥ２受容体のトランスフェクションによって産生されるＡ５４９－ＡＣＥ２系統、市販の初代気管支上皮細胞（Ｍｕｃｉｌａｉｒ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘ）である。
【0209】
ａ－ＶｅｒｏＥ６細胞及びＡ５４９－ＡＣＥ２細胞における抗ウイルス活性の評価
感染試験は、９６ウェルプレートで培養した４×１０４個のＶｅｒｏＥ６又はＡ５４９－ＡＣＥ２細胞を、示された濃度の化合物とともに１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、２％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、化合物の存在下で２時間、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０（ＭＯＩ＝０．０１）に細胞を曝露し、次に、化合物の存在下で、接種源を除去し、洗浄し、細胞を培養する。ウイルス攻撃の２４時間後、Ｌｕｎａ社の標準的な１－ステップＲＴ－ＰＣＲキットを使用したｑＲＴ－ＰＣＲによるウイルスＲＮＡの増幅によって感染を定量化する。値（ＤＣＴ）は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡによって正規化される。表される値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。対照条件は、試験した化合物の可溶化に使用される溶媒であるＤＭＳＯの存在下で細胞をインキュベートすることによって行われた。これらの条件下で使用されるＤＭＳＯの体積は、試験条件下で化合物によって提供される体積に対応する。
感染試験は、９６ウェルプレートで培養した４×１０４個のＶｅｒｏＥ６又はＡ５４９－ＡＣＥ２細胞を、示された濃度の化合物とともに１時間プレインキュベートすることによって行われる。細胞を、２％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、５％のＣＯ２雰囲気下で培養する。次に、化合物の存在下で２時間、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０（ＭＯＩ＝０．０１）に細胞を曝露し、次に、化合物の存在下で、接種源を除去し、洗浄し、細胞を培養する。ウイルス攻撃の２４時間後、Ｌｕｎａ社の標準的な１－ステップＲＴ－ＰＣＲキットを使用したｑＲＴ－ＰＣＲによるウイルスＲＮＡの増幅によって感染を定量化する。値（ＤＣＴ）は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡによって正規化される。表される値は、３つの反復の平均＋標準偏差である。対照条件は、試験した化合物の可溶化に使用される溶媒であるＤＭＳＯの存在下で細胞をインキュベートすることによって行われた。これらの条件下で使用されるＤＭＳＯの体積は、試験条件下で化合物によって提供される体積に対応する。
【0210】
同じ実験条件下で、
Ｂｅｒｇｅｎｂｉｏ社が開発した臨床試験段階のＡｘｌ阻害剤であるＲ４２８／Ｂｅｍｃｅｎｔｉｎｉｂを用いて並行治療を実施した。
Ｂｅｒｇｅｎｂｉｏ社が開発した臨床試験段階のＡｘｌ阻害剤であるＲ４２８／Ｂｅｍｃｅｎｔｉｎｉｂを用いて並行治療を実施した。
【0211】
化合物１、２、３、１０及び１４について得られた結果は、図７（ＶｅｒｏＥ６系統）及び８（Ａ５４９－ＡＣＥ２系統）に示される。
【0212】
これらの実験条件下では、化合物１、２、３、１０及び１４は、ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２ウイルスによるＶｅｒｏＥ６細胞及びＡ５４９－ＡＣＥ２細胞の感染を防止する。
【0213】
化合物１、２及び３のＩＣ５０は、ソフトウェアＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してＶｅｒｏＥ６及びＡ５４９－ＡＣＥ２細胞で決定された。
【0214】
得られた結果は、図９及び以下の表に示される。
【0215】
【表10】
【0216】
化合物１、２、３、１０及び１４は、インビトロで抗ＳＡＲＳ－ＣＯＶ－２活性を示す。
ｂ－ヒト上皮モデル抗ウイルス薬における抗ウイルス活性の評価
原発性気管支上皮の感染試験はモデルから行われた。
ｂ－ヒト上皮モデル抗ウイルス薬における抗ウイルス活性の評価
原発性気管支上皮の感染試験はモデルから行われた。
【0217】
ＭｕｃｉｌＡｉｒ（商標）適切な培地（ＨＡＥ培地、Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘ）で培養されたヒト気道上皮細胞（Ｅｐｉｔｈｅｌｉｘ）。化合物を培養物の基底区画に加え、３７℃で１時間プレインキュベートする。次に、ウイルス接種源（ＭＯＩ＝０．０１）を化合物と同時に頂端区画に加える。３７℃で２時間後、ウイルス接種源を除去し、試験化合物を含む培地に交換し、培養物を３７℃で２４時間維持する。細胞の感染は、Ｌｕｎａ社の標準的な１－ステップＲＴ－ＰＣＲキットを使用したｑＲＴ－ＰＣＲによって検出されるウイルスＲＮＡの定量化によって決定される。値（ＤＣＴ）は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡに関して正規化される。
【0218】
化合物１について得られた結果は、図１０に示される。
【0219】
これらの評価は、化合物１がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２．７による原発性気管支上皮の感染を阻害することを示す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルスに対する化合物＃１の予防及び治療活性
【0220】
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染に対する化合物１の阻害活性は、Ａ５４９系統におけるＡＣＥ２受容体のトランスフェクションによって生成されたＡ５４９－ＡＣＥ２系統（肺上皮癌、ＡＴＣＣ＃ＣＣＬ－１８５）ａ）及びミドリザル系統ＶｅｒｏＥ６（不死化腎臓上皮、ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ－１５８６）の予防的治療（Ｐｒｅ－Ｔｔ）又は治癒的治療（Ｐｏｓｔ－Ｔｔ）との関連でインビトロで評価される。
【0221】
感染試験は、９６ウェルプレートで５％のＣＯ２雰囲気下、２％子ウシ血清及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養した４×１０４細胞に対して行われる。細胞を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス、ＢｅｔａＣｏＶ／Ｆｒａｎｃｅ／ＩＤＦ０３７１／２０２０（ＭＯＩ＝０．０１）に曝露する。化合物を、感染の１時間前に細胞に加え、２４時間維持し、又は感染の１時間前に細胞に加え、ウイルス攻撃の４時間後に洗浄して除去し、ウイルスに曝露してから４時間後に細胞に加え、２４時間維持する（Ｐｏｓｔ－Ｔｔ）。Ｌｕｎａ社の標準的な１－ステップＲＴ－ＰＣＲキットを使用したｑＲＴ－ＰＣＲによるウイルスＲＮＡの増幅によって残留感染を定量化する。値（ＤＣＴ）は、ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡに関して正規化される。
【0222】
対照条件は、試験した化合物の可溶化に使用される溶媒であるＤＭＳＯ（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）の存在下で細胞をインキュベートすることによって行われた。これらの条件下で使用されるＤＭＳＯの体積は、試験条件下で化合物によって提供される体積に対応する。
【0223】
得られた結果は、図１１に示される。
【0224】
これらの評価は、化合物の予防的使用がヒトＡ５４９－ＡＣＥ２細胞及びＶｅｒｏＥ６サル細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による感染を阻害することを示す。ウイルス攻撃後の化合物の投与は、Ａ５４９－ＡＣＥ２細胞におけるウイルス増殖を減少させるが、Ｉ型インターフェロン産生の欠陥を特徴とするＶｅｒｏＥ６系統では減少しない。
【0225】
結論として、試験した様々な感染モデルに対する活性化合物は、以下のとおりである。
【0226】
【表11】
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【国際調査報告】