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(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-05-23
(54)【発明の名称】ＰＳＤ－９５阻害剤及びその使用
(51)【国際特許分類】
A61K 47/60 20170101AFI20240516BHJP
C07K 1/04 20060101ALI20240516BHJP
A61K 38/16 20060101ALI20240516BHJP
A61K 38/10 20060101ALI20240516BHJP
A61P 9/00 20060101ALI20240516BHJP
C07K 5/113 20060101ALN20240516BHJP
C07K 5/10 20060101ALN20240516BHJP
【ＦＩ】
A61K47/60
C07K1/04
A61K38/16
A61K38/10
A61P9/00
C07K5/113 ZNA
C07K5/10
【審査請求】未請求
【予備審査請求】有
(21)【出願番号】P 2023569757
(86)(22)【出願日】2022-05-12
(85)【翻訳文提出日】2023-11-09
(86)【国際出願番号】 EP2022062893
(87)【国際公開番号】W WO2022238530
(87)【国際公開日】2022-11-17
(31)【優先権主張番号】21173587.3
(32)【優先日】2021-05-12
(33)【優先権主張国・地域又は機関】EP
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】508335820
【氏名又は名称】ユニバーシティ オブ コペンハーゲン
(74)【代理人】
【識別番号】100114775
【弁理士】
【氏名又は名称】高岡 亮一
(74)【代理人】
【識別番号】100121511
【弁理士】
【氏名又は名称】小田 直
(74)【代理人】
【識別番号】100202751
【弁理士】
【氏名又は名称】岩堀 明代
(74)【代理人】
【識別番号】100208580
【弁理士】
【氏名又は名称】三好 玲奈
(74)【代理人】
【識別番号】100191086
【弁理士】
【氏名又は名称】高橋 香元
(72)【発明者】
【氏名】セレイカイテ，ヴィタ
(72)【発明者】
【氏名】ベック－バートリング，クリスチャン レインハード オットー
(72)【発明者】
【氏名】ストロムガード，クリスチャン
【テーマコード（参考）】
4C076
4C084
4H045
【Ｆターム（参考）】
4C076AA95
4C076CC11
4C076CC41
4C076EE59
4C084AA02
4C084AA06
4C084AA07
4C084BA01
4C084BA18
4C084BA19
4C084BA31
4C084BA41
4C084CA59
4C084NA14
4C084ZA15
4C084ZA36
4H045AA30
4H045BA13
4H045BA14
4H045BA15
4H045BA40
4H045BA57
4H045EA20
4H045FA34
(57)【要約】
本発明は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺドメインに結合することができる化合物、及びＰＳＤ－９５によって媒介されるタンパク質間相互作用の阻害剤としてのそれらの医療的使用に関する。
【選択図】なし
【選択図】なし
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．下記からなる群から選択される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）：
ｉ．３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、
ｉｉ．ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）、
ｉｉｉ．ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）、
ｉｖ．ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、
ｖ．ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）、
ｖｉ．ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、
ｖｉｉ．ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）、
ｖｉｉｉ．ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、
ｉｘ．｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び
ｘ．｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）、
を含む、化合物であって、前記ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して前記リンカーにコンジュゲートされており、前記化合物が、式（Ｉ）：
【化1】
【請求項2】
Ｐ１が、配列Ｘ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなり、配列中、Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ２が、配列Ｘ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）を含むか、またはそれからなり、配列中、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
請求項１に記載の化合物。
【請求項3】
Ｐ１及び／またはＰ２が、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基からなる、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項4】
Ｘ３及びＸ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、及びＲからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項5】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含む、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項6】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらす、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項7】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらし、前記ＣＰＰが、アミド結合によって前記リンカーの前記窒素原子に連結されている、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項8】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらし、前記ＣＰＰが、アミド結合によって前記リンカーの前記窒素原子に連結されており、前記化合物が、式（ＩＩＩ）：【化2】
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項9】
Ｐ１が、Ｐ２と同一である、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項10】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＬＶ（配列番号２）からなる、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項11】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＴＶ（配列番号３）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項12】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＶＶ（配列番号４）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項13】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＲＶ（配列番号５）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項14】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＩＳＴＤＶ（配列番号６）からなる、請求項１～３または５～９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項15】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＶＥＴＶＶ（配列番号７）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項16】
前記ＣＰＰが、３～２０個のＬ－アルギニン残基、例えば３～１５個、例えば３～１２個、例えば３～１０個のＬ－アルギニン残基からなる、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項17】
前記化合物が、式（ＶＩ）：【化3】
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０であり、
ポリ－Ａｒｇが、３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチドである、
先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項18】
前記ポリ－Ａｒｇが、３～２０個のＬ－アルギニン残基、例えば３～１５個、例えば３～１２個、例えば３～１０個のＬ－アルギニン残基からなる、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項19】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号１２）である、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項20】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号５７）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項21】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号５８）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項22】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲ（配列番号５９）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項23】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲ（配列番号６０）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項24】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲ（配列番号６１）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項25】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲである、請求項１～１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項26】
前記ＣＰＰが、ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項27】
前記ＣＰＰが、ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項28】
前記ＣＰＰが、ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項29】
前記ＣＰＰが、ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項30】
前記ＣＰＰが、ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項31】
前記ＣＰＰが、ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項32】
前記ＣＰＰが、ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項33】
前記ＣＰＰが、｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項34】
前記ＣＰＰが、｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項35】
ｐが２であり、ｑが２である、請求項８または１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項36】
前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、アセチル化されているか、または前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、下記の構造を有するクロロアルカンタグ（ＣＡ）にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。【化4】
【請求項37】
前記化合物が、式（ＸＸＶＩＩＩ）：【化5】
【請求項38】
前記化合物が、下記の式（Ｘ）～（ＸＸＩＩＩ）からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。【化6】
【請求項39】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＩＥＴＤＶ（配列番号１）からなり、前記ＣＰＰが、ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）からなる群から選択される、請求項１～３、５～９、３５、または３６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項40】
前記化合物が、式（ＸＸＶＩＩＩ）：【化7】
【請求項41】
前記化合物が、ＰＳＤ－９５阻害剤である、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項42】
医薬として使用するための、先行請求項のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項43】
例えば急性虚血性脳卒中及びくも膜下出血から選択される脳卒中等の興奮毒性関連疾患を処置する、予防する、低減する、及び／またはその発症を遅延させる際に使用するための、請求項１～４１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項44】
請求項１～４１のいずれか１項に記載の化合物を製造するための方法であって、ａ．ペプチドＰ１／Ｐ２を合成する一般ステップと、
ｂ．ａ）の前記ペプチドをＯＰＥＧｎまたはＮＰＥＧｎリンカー（ここで、「ｎ」は、ＰＥＧ部分の数である）により二量体化する一般ステップと、
ｃ．例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、前記ＮＰＥＧリンカーの前記ＮにてＣＰＰタグを付着させる一般ステップと、
を含む、前記方法。
【請求項45】
請求項１～４１のいずれか１項に記載の化合物を製造するための方法であって、ａ．Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーを用意する一般ステップと、
ｂ．Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成法を使用してペプチドＰ１／Ｐ２を調製する一般ステップと、
ｃ．Ｆｍｏｃ脱保護ペプチドＰ１／Ｐ２を前記Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーにより二量体化して、リンカー－二量体コンジュゲートを形成させる一般ステップと、
ｄ．例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、前記リンカー－二量体コンジュゲートの前記ＮＰＥＧリンカーの前記ＮにＣＰＰを付着させる一般ステップと、
を含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺドメインに結合することができる化合物、及びＰＳＤ－９５によって媒介されるタンパク質間相互作用の阻害剤としてのそれらの医療的使用に関する。
【背景技術】
【0002】
ＰＳＤ－９５は、そのＰＳＤ－９５／Ｄｉｓｃｓ－ｌａｒｇｅ／ＺＯ－１（ＰＤＺ）ドメインを介してＮ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）受容体（Ｋｏｒｎａｕ ｅｔ ａｌ．１９９５）及び神経型一酸化窒素合成酵素（ｎＮＯＳ）と相互作用する、ニューロンのシナプスにおける足場タンパク質である。脳虚血時に、過剰なグルタミン酸の放出がＮＭＤＡ受容体の過剰な活性化ならびに細胞内Ｃａ２＋及びＮＯレベルの有害な上昇をもたらし、これが最終的に興奮毒性を誘導してニューロン死及び脳損傷をもたらす（Ａａｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００２、Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１、Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９４、Ｓａｔｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９）。ＰＳＤ－９５は、急性虚血性脳卒中（ＡＩＳ）及び脳の関連する虚血性病態における薬物標的として探求されている。
【0003】
２０量体ペプチドネリネチド（別名、Ｔａｔ－ＮＲ２Ｂ９ｃまたはＮＡ－１）は、アルテプラーゼ（組織プラスミノーゲン活性化因子、ｔＰＡ）等の標準治療に加えたネリネチドでの処置が、虚血性脳卒中を有する患者及び血管内血栓除去術を受けている患者に対して臨床転帰を改善するかどうかを評価する第３相臨床試験ＥＳＣＡＰＥ－ＮＡ１（Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０２０）において最近調査された（Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。総計１１０５名の患者がこの研究に組み入れられ、このうち６５９名の患者がｔＰＡ処置を受け、４４６名の患者はそれを受けなかった。ネリネチドはアルテプラーゼを受けている患者において有効でなかったが、アルテプラーゼを受けていない群においては、ネリネチドが改善された機能的転帰、死亡率の低減、及び梗塞体積の低減をもたらしたことが判明した（Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。ｔＰＡ処置群における効果の欠如は、ネリネチドとｔＰＡとの間の薬物間相互作用によって説明可能であることが最近実証された。具体的に述べると、ｔＰＡは、ネリネチドを切断するセリンプロテアーゼであるプラスミンを生成する（Ｍａｙｏｒ－Ｎｕｎｅｚ ｅｔ ａｌ．２０２１）。故に、薬物が、ＡＩＳの標準治療である血栓溶解剤の投与と適合性であることは非常に有利である。
【0004】
ネリネチドは、標的ＰＳＤ－９５に対する親和性が比較的低いという欠点を有し、これがＴａｔ－Ｎ－二量体及びＯ－二量体、それぞれ別名ＵＣＣＢ０１－１４４（ＡＢ１４４）及びＵＣＣＢ０１－１２５等の二量体化合物の設計のきっかけとなった（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２００９，２０１２、ＷＯ２０１０／００４００３、ＷＯ２０１２／１５６３０８、Ｋｕｃｈａｒｚ ｅｔ ａｌ．，２０１７）。インビトロ蛍光偏光（ＦＰ）アッセイにおいて、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２に対するネリネチドのＫｉ値は５～１０μＭであった（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。対照的に、ＡＢ１４４及びＵＣＣＢ０１－１２５は、それらの二量体構造及び二価の性質に起因して、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２に同時に結合して、単量体ネリネチドのそれと比べてＰＤＺ１～２に対して５００～１０００倍高い親和性（それぞれ４．６及び９．５ｎＭのＫｉ値）をもたらす（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。永久中大脳動脈閉塞（ｐＭＣＡＯ）を受けたマウスにおいて、虚血後３０分で与えたＡＢ１４４（３ｎｍｏｌ／ｇ）の単回静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラス注射は、食塩水の効果と比較して、それぞれ虚血後生存期間の６時間及び４８時間で梗塞体積を４０％及び３７％低減した（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。さらに、握力及びロータロッド能力等の機能的帰結が改善し、故に梗塞サイズの低減と相関があった。同じ実験条件及び用量（３ｎｍｏｌ／ｇ）の下で、ネリネチドは、有意な神経保護特性を示さなかった（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。同様に、Ｔａｔ部分を有しないＵＣＣＢ０１－１２５は脳に到達せず、神経保護特性を何ら示さなかった（Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。
【0005】
したがって、ＰＳＤ－９５は、くも膜下出血（ＳＡＨ）及びＡＩＳ等の急性病態の処置のための特定の有望な薬物標的とみなされる。重要な点として、ＰＳＤ－９５は細胞内に位置するため、ＰＳＤ－９５を標的とするいずれの薬物も、細胞膜を効率的に横断して、ＰＳＤ－９５に結合する必要がある。
【発明の概要】
【0006】
本発明者らは、ＰＳＤ－９５に対して高い親和性を有する一連の新規化合物を開発した。ネリネチドのような既知のＰＳＤ－９５阻害剤と比較して、本発明の化合物は、改善された細胞内取込み及びはるかにより高いプラスミン安定性を有する。故に、本発明の化合物は、ＡＩＳ及びＳＡＨ等の興奮毒性関連疾患の処置において有用であり、血栓溶解剤等の標準治療と適合性である。
【0007】
一態様では、本発明は、
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．下記からなる群から選択される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）：
ｉ．３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、
ｉｉ．ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）、
ｉｉｉ．ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）、
ｉｖ．ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、
ｖ．ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）、
ｖｉ．ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、
ｖｉｉ．ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）、
ｖｉｉｉ．ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、
ｉｘ．｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び
ｘ．｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）、
を含む、化合物であって、該ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して該リンカーにコンジュゲートされており、該化合物が、式（Ｉ）：
の一般構造を有する、該化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．下記からなる群から選択される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）：
ｉ．３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、
ｉｉ．ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）、
ｉｉｉ．ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）、
ｉｖ．ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、
ｖ．ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）、
ｖｉ．ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、
ｖｉｉ．ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）、
ｖｉｉｉ．ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、
ｉｘ．｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び
ｘ．｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）、
を含む、化合物であって、該ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して該リンカーにコンジュゲートされており、該化合物が、式（Ｉ）：
【化1】
【0008】
別の態様では、本発明は、医薬として使用するための、本明細書で定義される化合物に関する。
【0009】
別の態様では、本発明は、例えば急性虚血性脳卒中及びくも膜下出血から選択される脳卒中等の興奮毒性関連疾患を処置する、予防する、低減する、及び／またはその発症を遅延させる際に使用するための、本明細書で定義される化合物に関する。
【0010】
さらなる態様では、本発明は、疼痛の処置または予防において使用するための、本明細書で定義される化合物に関する。
【0011】
さらに、本発明は、本明細書で定義される化合物を製造するための方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【0012】
【図1】ＦＰによって決定した、Ｏ－ＰＥＧ４二量体（化合物１～７）のＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１～２に対する親和性。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図2】ＦＰによって決定した、Ａｃ－ＴＡＴ及びＡｃ－ポリＡｒｇに融合された二量体リガンドのＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１～２に対する親和性。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図3】ＦＰによって決定した、種々のＣＰＰタグ（配列番号８～２２）に融合されたＮ－ＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２のＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１～２に対する親和性。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図4】ＦＰによって決定した、ポリＡｒｇ ＣＰＰタグに融合されたＮＰＥＧ４－（ＫＥＴＬＶ）２二量体リガンドのＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１～２に対する親和性。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図5】インビトロプラスミン安定性アッセイにおいて決定した、Ａｃ－ＴＡＴ及びＡｃ－ポリＡｒｇに融合された二量体リガンドの半減期。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図6】インビトロプラスミン安定性アッセイにおいて決定した、種々のＣＰＰタグ（配列番号８～２２）に融合されたＮ－ＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２の半減期。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図7】ＣＡＰＡによって決定した、Ａｃ－ＴＡＴ及びＡｃ－ポリＡｒｇに融合された二量体リガンドの細胞内取込み。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図8】ＣＡＰＡによって決定した、種々のＣＰＰタグ（配列番号８～２２）に融合されたＮ－ＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２の細胞内取込み。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図9】ＣＡＰＡによって決定した、種々のポリＡｒｇ ＣＰＰタグに融合されたＮ－ＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２及びＮ－ＰＥＧ４（ＫＥＴＬＶ）２の細胞内取込み。データは平均値＋ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図10】ヒト血漿中安定性アッセイにおいて決定した、ポリＡｒｇ ＣＰＰタグに融合されたＮ－ＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２及びＮ－ＰＥＧ４（ＫＥＴＬＶ）２の半減期。データは平均値±ＳＥＭ、ｎ＝３として提示する。
【図11】ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合する化合物の一般構造。Ｒ１からＲ５は、本明細書に記載されるアミノ酸側鎖であり、Ｒ６は、本明細書に記載されるＣＰＰタグを表す。
【発明を実施するための形態】
【0013】
定義
アミド結合：本明細書で使用される「アミド結合」という用語は、カルボン酸とアミンとの間の反応によって形成される化学結合（及び同時に起こる水の離脱）である。反応が２つのアミノ酸残基間である場合、反応の結果として形成される結合は、ペプチド結合（ｐｅｐｔｉｄｅ ｌｉｎｋａｇｅ）（ペプチド結合（ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｏｎｄ））として知られる。
アミド結合：本明細書で使用される「アミド結合」という用語は、カルボン酸とアミンとの間の反応によって形成される化学結合（及び同時に起こる水の離脱）である。反応が２つのアミノ酸残基間である場合、反応の結果として形成される結合は、ペプチド結合（ｐｅｐｔｉｄｅ ｌｉｎｋａｇｅ）（ペプチド結合（ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｏｎｄ））として知られる。
【0014】
含む：本明細書で使用される「含む」という用語は、包括的な様態で理解されるべきである。よって、例として、化合物Ｘを含む組成物は、化合物Ｘ及び任意選択で追加の化合物を含んでもよい。
【0015】
二量体：本明細書で使用される二量体という用語は、化学的または物理的相互作用によって会合された２つの同一のまたは同一でない化学部分を指す。例として、二量体は、リンカーによって連結された２つの同一の化学部分等のホモ二量体であり得る。二量体はまた、リンカーによって連結された２つの異なる化学部分等のヘテロ二量体であってもよい。二量体の例は、リンカーの手段によって共有結合性で連結されている２つのペプチドを含む化合物である本発明のＰＳＤ－９５阻害剤であり、これらのペプチドが、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２ドメインに同時に結合するか、またはそれらと同時に相互作用することができる。
【0016】
ジペプチド：本明細書で使用される「ジペプチド」という用語は、ペプチド結合によって連結された２つの天然または非天然アミノ酸を指す。
【0017】
脂肪酸：本明細書で使用される脂肪酸（ＦＡと略称される）という用語は、典型的には、飽和または不飽和のいずれでもあり得る、長い脂肪族炭素鎖を有するカルボン酸を指す。脂肪酸は、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）、中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）、長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）、及び超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）から選択され得る。短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は、６個よりも少ない炭素の脂肪族尾部を有する脂肪酸（すなわち酪酸）である。中鎖脂肪酸（ＭＣＦＡ）は、中鎖トリグリセリドを形成し得る、６～１２個の炭素の脂肪族尾部を有する脂肪酸である。長鎖脂肪酸（ＬＣＦＡ）は、１３～２１個の炭素の脂肪族尾部を有する脂肪酸である。超長鎖脂肪酸（ＶＬＣＦＡ）は、２２個の炭素よりも長い脂肪族尾部を有する脂肪酸である。本発明の脂肪酸は、当業者に既知の任意の好適な脂肪酸または脂肪酸誘導体であり得る。
【0018】
タンパク質を構成しないアミノ酸：タンパク質を構成しないアミノ酸（別称、非コード、非標準、または非天然アミノ酸）は、遺伝コードによってコードされないアミノ酸である。タンパク質を構成しないアミノ酸の非網羅的リストには、γ－アミノ酪酸，Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン，Ｌ－２，３－ジアミノプロピオン酸、α－アミノ－ｎ－酪酸、ノルバリン、ノルロイシン、イソロイシン、アロイソロイシン、ｔｅｒｔ－ロイシン、α－アミノ－ｎ－ヘプタン酸、ピペコリン酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、オルニチン、アロトレオニン、ホモシステイン、ホモセリン、β－アラニン、β－アミノ－ｎ－酪酸、β－アミノイソ酪酸、α－アミノイソ酪酸、イソバリン、サルコシン、Ｎ－エチルグリシン、Ｎ－プロピルグリシン、Ｎ－イソプロピルグリシン、Ｎ－メチルアラニン、Ｎ－エチルアラニン、Ｎ－メチルβ－アラニン、Ｎ－エチルβ－アラニン、イソセリン、及びα－ヒドロキシ－γ－アミノ酪酸が含まれる。
【0019】
タンパク質を構成するアミノ酸：タンパク質を構成するアミノ酸（別称、天然アミノ酸）には、アラニン、システイン、セレノシステイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、ピロリジン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、及びチロシンが含まれる。大文字の略号は、Ｌ－アミノ酸を示し、一方で、小文字の略号は、Ｄ－アミノ酸を示す。
【0020】
ＰＤＺ：本明細書で使用される「ＰＤＺ」という用語は、シナプス後肥厚部（Ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｄｅｎｓｉｔｙ）タンパク質－９５（ＰＳＤ－９５）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ ｄｉｓｃｓ ｌａｒｇｅ腫瘍抑制因子（ＤｌｇＡ）、Ｚｏｎｕｌａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ－１タンパク質（ｚｏ－１）を指す。
【0021】
ＰＳＤ－９５：本明細書で使用される「ＰＳＤ－９５」という用語は、シナプス後肥厚部タンパク質－９５を指す。
【0022】
ＰＳＤ－９５阻害剤：本明細書で使用される「ＰＳＤ－９５阻害剤」という用語は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１、ＰＤＺ２、またはＰＤＺ１及びＰＤＺ２の両方に結合して、細胞内のこれらのＰＤＺドメインによって促進されるタンパク質間相互作用を阻害する化合物を指す。ＰＳＤ－９５阻害剤によって阻害される相互作用の例は、ｎＮＯＳ、ＰＳＤ－９５、及びＮＭＤＡ受容体の間の三元複合体形成である。
【0023】
化合物
一態様では、本発明は、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結された第１のペプチド（Ｐ１）を含む化合物に関する。一実施形態では、Ｐ１は、リンカーを介してＣＰＰに連結されている。一実施形態では、該化合物は、第２のペプチド（Ｐ２）をさらに含む。一実施形態では、ＣＰＰは、リンカーを介してＰ１及びＰ２に連結されている。故に、一実施形態では、ＣＰＰは、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２は、それらのＮ末端を介してリンカーにコンジュゲートされており、該化合物は、以下の式（Ｉ）の一般構造を有する。
一態様では、本発明は、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結された第１のペプチド（Ｐ１）を含む化合物に関する。一実施形態では、Ｐ１は、リンカーを介してＣＰＰに連結されている。一実施形態では、該化合物は、第２のペプチド（Ｐ２）をさらに含む。一実施形態では、ＣＰＰは、リンカーを介してＰ１及びＰ２に連結されている。故に、一実施形態では、ＣＰＰは、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２は、それらのＮ末端を介してリンカーにコンジュゲートされており、該化合物は、以下の式（Ｉ）の一般構造を有する。
【化2】
【0024】
故に、一実施形態では、本発明の化合物は、第１のペプチド（Ｐ１）及び第２のペプチド（Ｐ２）を含み、Ｐ１及びＰ２の両方が、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２ドメインに同時に結合することができ、すなわち該化合物は、二量体ＰＳＤ－９５阻害剤である。
【0025】
一態様では、本発明は、アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなるペプチド（Ｐ１）を含む化合物に関し、配列中、
ａ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ１が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結されている。
ａ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ１が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結されている。
【0026】
さらなる態様では、本発明は、リンカーを介して第２のペプチド（Ｐ２）に連結された第１のペプチド（Ｐ１）を含む化合物、例えば、式（ＸＸＩＶ）：
の一般構造を有する化合物に関し、式中、リンカー、Ｐ１、及びＰ２は、本明細書で定義される通りである。好ましくは、Ｐ１及びＰ２は、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）、またはＶＥＴＶＶ（配列番号７）を含むか、またはそれからなる。任意選択で、リンカーは、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）またはアルブミン結合部分にさらにコンジュゲートされており、それによって膜または血液脳関門を通るペプチドの通過を増加させる。アルブミン結合部分は、アルブミンに結合する任意の好適な化学基であり得る。好ましくは、アルブミン結合部分は、脂肪酸である。一実施形態では、リンカーは、ＣＰＰにさらにコンジュゲートされ、すなわち該化合物は、式（Ｉ）の一般構造を有する。
【化3】
【0027】
一態様では、本発明は、
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．下記からなる群から選択される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）：
ｉ．３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、
ｉｉ．ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）、
ｉｉｉ．ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）、
ｉｖ．ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、
ｖ．ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）、
ｖｉ．ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、
ｖｉｉ．ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）、
ｖｉｉｉ．ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、
ｉｘ．｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び
ｘ．｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）、
を含む、化合物であって、該ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して該リンカーにコンジュゲートされており、該化合物が、式（Ｉ）：
の一般構造を有する、該化合物、またはその薬学的に許容される塩に関する。
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．下記からなる群から選択される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）：
ｉ．３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、
ｉｉ．ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）、
ｉｉｉ．ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）、
ｉｖ．ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、
ｖ．ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）、
ｖｉ．ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、
ｖｉｉ．ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）、
ｖｉｉｉ．ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、
ｉｘ．｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び
ｘ．｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）、
を含む、化合物であって、該ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して該リンカーにコンジュゲートされており、該化合物が、式（Ｉ）：
【化4】
【0028】
結合ペプチドＰ１及びＰ２
ペプチドＰ１及びＰ２は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２ドメインに対して高い親和性を有する。一実施形態では、該化合物は、ＰＳＤ－９５阻害剤であり、すなわち該化合物は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺドメインのうちの１つまたは複数に結合することができる。
ペプチドＰ１及びＰ２は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２ドメインに対して高い親和性を有する。一実施形態では、該化合物は、ＰＳＤ－９５阻害剤であり、すなわち該化合物は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺドメインのうちの１つまたは複数に結合することができる。
【0029】
一実施形態では、該化合物は、アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）を含み、配列中、
ａ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
ａ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
【0030】
一実施形態では、Ｐ１は、配列Ｘ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなり、配列中、
ａ．Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
ａ．Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
【0031】
一実施形態では、Ｐ１は、ＩＥＴＤＶ（配列番号１）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ１は、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ１は、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ１は、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ１は、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ１は、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ１は、ＶＥＴＶＶ（配列番号７）を含むか、またはそれからなる。
【0032】
一実施形態では、Ｐ１は、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基、例えば６個のアミノ酸残基からなる。配列番号５３または配列番号５４に与えられるアミノ酸残基を超過するアミノ酸残基は、タンパク質を構成するアミノ酸であっても、またはタンパク質を構成しないアミノ酸であってもよい。
【0033】
一実施形態では、該化合物は、アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）をさらに含み、配列中、
ａ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
ａ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
【0034】
一実施形態では、Ｐ２は、配列Ｘ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）を含むか、またはそれからなり、配列中、
ａ．Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
ａ．Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される。
【0035】
一実施形態では、Ｐ２は、ＩＥＴＤＶ（配列番号１）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ２は、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ２は、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ２は、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ２は、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ２は、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、Ｐ２は、ＶＥＴＶＶ（配列番号７）を含むか、またはそれからなる。
【0036】
一実施形態では、Ｐ２は、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基、例えば６個のアミノ酸残基からなる。配列番号５５または配列番号５６に与えられるアミノ酸残基を超過するアミノ酸残基は、タンパク質を構成するアミノ酸であっても、またはタンパク質を構成しないアミノ酸であってもよい。
【0037】
一実施形態では、Ｐ１及びＰ２は、同一である。
【0038】
一実施形態では、Ｘ２がＥである場合、Ｘ３はＤではない。一実施形態では、Ｘ５がＥである場合、Ｘ６はＤではない。一実施形態では、Ｐ１及び／またはＰ２は、ＩＥＴＤＶ（配列番号１）ではない。
【0039】
好ましい実施形態では、ペプチドＰ１及びＰ２は、それらのＮ末端を介してリンカーまたはＣＰＰにコンジュゲートされている。一実施形態では、アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）は、Ｐ１のＣ末端である。一実施形態では、アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）は、Ｐ２のＣ末端である。
【0040】
細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）
本発明の化合物は、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結されたペプチドＰ１を含む。ＣＰＰは、哺乳類細胞の血液脳関門（ＢＢＢ）及び／または形質膜を横断する能力を特徴とし、それによって、それが連結されているペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド等のカーゴ分子の細胞内送達を生じさせ得る。
本発明の化合物は、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結されたペプチドＰ１を含む。ＣＰＰは、哺乳類細胞の血液脳関門（ＢＢＢ）及び／または形質膜を横断する能力を特徴とし、それによって、それが連結されているペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド等のカーゴ分子の細胞内送達を生じさせ得る。
【0041】
一実施形態では、ＣＰＰは、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。一実施形態では、ポリ－Ａｒｇは、３～２０個のＬ－アルギニン残基からなる。一実施形態では、ポリ－Ａｒｇは、５～１０個のＬ－アルギニン残基、例えば７～１０個のＬ－アルギニン残基、例えば８個または９個のＬ－アルギニン残基からなる。一実施形態では、ポリ－Ａｒｇは、３～１０個のＬ－アルギニン残基からなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ９、配列番号１２）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ８、配列番号５７）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ７、配列番号５８）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ６、配列番号５９）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ５、配列番号６０）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ４、配列番号６１）を含むか、またはそれからなる。一実施形態では、ＣＰＰは、アミノ酸配列ＲＲＲ（Ｌ－Ａｒｇ３）を含むか、またはそれからなる。
【0042】
一実施形態では、ＣＰＰは、表１に与えられるＣＰＰから選択される。
【表1】
【0043】
一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－Ａｒｇ９、Ｄ－ＴＡＴ、Ｌ－Ｐｅｎ、Ｄ－Ｐｅｎ、Ｌ－ＤＰＶ３、Ｌ－ｐＶＥＣ、Ｌ－ＭＡＰ、Ｌ－ＴＰ２、ＭｉｎｉＡｐ４、及びＣＰＰ１２等のポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）からなる群から選択されるペプチドを含む。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－Ａｒｇ９、Ｄ－ＴＡＴ、Ｌ－Ｐｅｎ、Ｄ－Ｐｅｎ、Ｌ－ＤＰＶ３、Ｌ－ｐＶＥＣ、Ｌ－ＭＡＰ、Ｌ－ＴＰ２、ＭｉｎｉＡｐ４、及びＣＰＰ１２等のポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）からなる群から選択される。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｄ－ＴＡＴである。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－Ｐｅｎである。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｄ－Ｐｅｎである。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－ＤＰＶ３である。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－ｐＶＥＣである。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－ＭＡＰである。一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－ＴＰ２である。一実施形態では、ＣＰＰは、ＭｉｎｉＡｐ４である。一実施形態では、ＣＰＰは、ＣＰＰ１２である。
【0044】
一実施形態では、ＣＰＰは、２０個以下のアミノ酸残基、例えば１９個以下、例えば１８個以下、例えば１７個以下、例えば１６個以下、例えば１５個以下、例えば１４個以下、例えば１３個以下、例えば１２個以下、例えば１１個以下、例えば１０個以下、例えば９個以下、例えば８個以下、例えば７個以下のアミノ酸残基を含む。
【0045】
一部の実施形態では、ＣＰＰは、非ペプチド部分にコンジュゲートされている。例えば、ＣＰＰは、メチル化またはアセチル化されてもよい。一部の実施形態では、ペプチドが、特定のアミノ酸残基の配列からなるように本明細書で定義される場合、該ペプチドは、いずれの他のアミノ酸残基にもコンジュゲートされていないが、該ペプチドは、非ペプチド部分へのコンジュゲーションが別のアミノ酸配列をもたらさない限り、非ペプチド部分にコンジュゲートされていてもよい。一部の実施形態では、ＣＰＰのＮ末端は、非ペプチド部分にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、ＣＰＰのＣ末端は、非ペプチド部分にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、ＣＰＰのＮ末端は、アセチル化されており、すなわち化学構造ＣＨ３Ｃ（Ｏ）－に結合している。例えば、ＣＰＰは、Ｎ末端がアセチル化されている、９個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ａｒｇペプチドであってもよい。一部の実施形態では、ＣＰＰのＮ末端は、下記の構造を有するクロロアルカンタグ（ＣＡ）にコンジュゲートされている。
【化5】
【0046】
一実施形態では、ＣＰＰのＮ末端は、メチル化されている。別の実施形態では、ＣＰＰのＮ末端は、ホルミル化されている。
【0047】
リンカー
本明細書で使用される「リンカー」という用語は、１つの化学物質から別の化学物質への接続を形成する１個または複数の原子を指す。例として、本明細書で言及される「リンカー」は、２つのＰＤＺドメイン結合ペプチドＰ１及びＰ２を、それらのＮ末端の各々への連結を形成することによって接合し得る。種々のリンカーが当該技術分野で既知である。リンカーは、例えば、化学リンカーもしくはペプチドリンカー、またはそれらの組み合わせであってもよい。一実施形態では、リンカーは、求電子性官能基または求核性官能基等の活性な官能基を含み、これを使用してリンカーを各ペプチドに付着させることができる。
本明細書で使用される「リンカー」という用語は、１つの化学物質から別の化学物質への接続を形成する１個または複数の原子を指す。例として、本明細書で言及される「リンカー」は、２つのＰＤＺドメイン結合ペプチドＰ１及びＰ２を、それらのＮ末端の各々への連結を形成することによって接合し得る。種々のリンカーが当該技術分野で既知である。リンカーは、例えば、化学リンカーもしくはペプチドリンカー、またはそれらの組み合わせであってもよい。一実施形態では、リンカーは、求電子性官能基または求核性官能基等の活性な官能基を含み、これを使用してリンカーを各ペプチドに付着させることができる。
【0048】
一実施形態では、リンカーは、１つまたは複数のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位を含む。
【0049】
ＰＥＧは、化学式Ｃ２ｎＨ４ｎ＋２Ｏｎ＋１、及び下記の反復構造：
を有するエチレングリコールのポリマーであり、式中、ｎは、整数である。
【化6】
【0050】
故に、ＰＥＧ単位は、以下の構造を有する。
【化7】
【0051】
例えば、４つのＰＥＧ部分からなるポリマー、またはＰＥＧ４は、４つのエチレングリコール部分のポリマーに対応する（ｎ＝４）。
【0052】
「ＰＥＧ単位」及び「ＰＥＧ部分」という用語は、本明細書で互換的に使用される。
【0053】
一実施形態では、ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらす。本明細書で使用される「エチレングリコール部分」という用語は、ＰＥＧまたはＮＰＥＧリンカーを構成する構造単位を指す。
【0054】
一実施形態では、２つのＰＤＺドメイン結合ペプチドＰ１及びＰ２のＮ末端は、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含むリンカーを介して互いに連結されており、ＰＥＧ単位の少なくとも１個の酸素原子が、任意選択で窒素原子により置き換えられている。一実施形態では、Ｐ１及び／またはＰ２は、スペーサー基を介して、例えば短いアルカン鎖を介してＰＥＧ／ＮＰＥＧ単位に個々に結合している。
【0055】
一実施形態では、リンカーは、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらす。
【0056】
一実施形態では、リンカーは、ＮＰＥＧ単位を含み、ＣＰＰは、ＮＰＥＧリンカーの骨格における窒素原子への直接または間接的のいずれかの化学結合を介して、リンカーに連結されている。ＮＰＥＧリンカーの窒素へのＣＰＰの結合は、アミド結合、銅触媒によるアジド－アルキン環化付加等の１，３－双極性環化付加、マレイミドカップリング、ジスルフィド結合、またはＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、ｐ－ニトロフェニルエステル、炭酸スクシンイミジル、炭酸ｐ－ニトロフェニル、スクシンイミジルウレタン、イソシアネート、イソチオシアネート、アシルアジド、スルホニルクロリド、アルデヒド、カーボネート、イミジオエステル（ｉｍｉｄｉｏｅｓｔｅｒ）もしくは無水物の中から選択されるアミノ反応性求電子基；及びハロアセチル、ハロゲン化アルキル誘導体、アジリジン、アクリロイル誘導体アリール化剤の中から選択されるチオ反応性基を介して媒介されてもよい。一実施形態では、リンカーは、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらし、ＣＰＰが、アミド結合によってリンカーの窒素原子に連結されている。代替として、ＮＰＥＧ単位を含むリンカーの窒素へのＣＰＰの結合は、スペーサー基を介して媒介されてもよく、ここで、好適なスペーサー基は、例えば、任意のアミノ酸（複数可）、短いアルカン鎖または短いＰＥＧ／ＮＰＥＧ鎖であり得る。
【0057】
一実施形態では、リンカーは、ＮＰＥＧ単位を含み、ＣＰＰは、アミド結合によってリンカーの窒素原子に連結されている。例えば、一実施形態では、該化合物は、式（ＩＩＩ）：
の一般構造を有し、式中、
ＣＰＰ、Ｐ１及びＰ２が、本明細書で定義される通りであり、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【化8】
ＣＰＰ、Ｐ１及びＰ２が、本明細書で定義される通りであり、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【0058】
一実施形態では、ｐ＝ｑである。一実施形態では、ｐ＞ｑである。一実施形態では、ｐ＜ｑである。一実施形態では、ｐ及びｑの和は、１～２０の整数である。一実施形態では、ｐは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される整数である。一実施形態では、ｐは、０～４の整数である。一実施形態では、ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０から選択される整数である。一実施形態では、ｑは、０～４の整数である。一実施形態では、エチレングリコール部分の総数ｐ＋ｑは、２～１２、例えば２、例えば４、例えば６、例えば８、例えば１０、例えば１２である。一実施形態では、エチレングリコール部分の総数ｐ＋ｑは、４である。一実施形態では、ｐは２であり、ｑは２である。
【0059】
全体的な二量体構造
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶ）：
の一般構造を有し、式中、
Ｐ１及びＰ２が、本明細書で定義される通りであり、
Ｘａが、
からなる群から選択され、
ＣＰＰが、本明細書で定義される通りであり、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶ）：
【化9】
Ｐ１及びＰ２が、本明細書で定義される通りであり、
Ｘａが、
【化10】
ＣＰＰが、本明細書で定義される通りであり、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【0060】
一実施形態では、ｐ及びｑは２であり、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）の一般構造を有する。
【化11】
【0061】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）のものであり、式中、Ｘａは、－Ｏ－であり、Ｐ１及びＰ２は、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）であり、故に、化合物２、すなわちＯＰＥＧ４－（ＫＥＴＬＶ）２を形成する。
【0062】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）のものであり、式中、Ｘａは、－Ｏ－であり、Ｐ１及びＰ２は、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）であり、故に、化合物３、すなわちＯＰＥＧ４－（ＫＥＴＴＶ）２を形成する。
【0063】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）のものであり、式中、Ｘａは、－Ｏ－であり、Ｐ１及びＰ２は、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）であり、故に、化合物４、すなわちＯＰＥＧ４－（ＫＥＴＶＶ）２を形成する。
【0064】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）のものであり、式中、Ｘａは、－Ｏ－であり、Ｐ１及びＰ２は、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）であり、故に、化合物５、すなわちＯＰＥＧ４－（ＫＥＴＲＶ）２を形成する。
【0065】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）のものであり、式中、Ｘａは、－Ｏ－であり、Ｐ１及びＰ２は、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）であり、故に、化合物６、すなわちＯＰＥＧ４－（ＩＳＴＤＶ）２を形成する。
【0066】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩ）のものであり、式中、Ｘａは、－Ｏ－であり、Ｐ１及びＰ２は、ＶＥＴＶＶ（配列番号７）であり、故に、化合物７、すなわちＯＰＥＧ４－（ＶＥＴＶＶ）２を形成する。
【0067】
一実施形態では、該化合物は、式（Ｖ）：
の一般構造を有し、式中、
ＣＰＰが、本明細書で定義される通りであり、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【化12】
ＣＰＰが、本明細書で定義される通りであり、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【0068】
式（Ｖ）の化合物（式中、ｐ及びｑは、２である）は、図１１にさらに図示される。Ｒ１からＲ５は、ペプチドＸ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）及びＸ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）のアミノ酸側鎖であり、Ｒ６は、本明細書に記載されるＣＰＰタグを表す。
【0069】
ＣＰＰとしてのポリ－Ａｒｇ
一実施形態では、ＣＰＰは、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。故に、一実施形態では、該化合物は、以下の式（ＩＩ）：
の一般構造を有し、式中、ポリ－Ａｒｇ、リンカー、Ｐ１及びＰ２は、本明細書で定義される通りである。
一実施形態では、ＣＰＰは、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。故に、一実施形態では、該化合物は、以下の式（ＩＩ）：
【化13】
【0070】
一実施形態では、ＣＰＰは、３～２０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。一実施形態では、ＣＰＰは、３～１５個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。一実施形態では、ＣＰＰは、３～１２個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。一実施形態では、ＣＰＰは、３～１０個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である。一実施形態では、ポリ－ＡｒｇのＮ末端は、任意選択で修飾され、例えば任意選択でアセチル化されている。
【0071】
Ｌ－Ａｒｇ９（配列番号１２）等のポリ－Ａｒｇ ＣＰＰタグを有する本発明の化合物は、低いＣＰ５０値を有し（実施例４、図７～９）、すなわち細胞内取込みが非常に効率的であり、このことはより優れたＢＢＢ透過及び細胞内送達を示唆する。驚くべきことに、ＣＰＰ Ｌ－Ａｒｇ９（配列番号１２）を含有する化合物は、Ｄ－アミノ酸または大環状ＣＰＰを含有する化合物と同等のインビトロプラスミン半減期時間を示した（図５～６）。興味深いことに、Ｌ－Ａｒｇ９含有化合物の半減期は、Ｌ－ＴＡＴ（配列番号８）よりも有意に優れていた（図５）。
【0072】
一実施形態では、ＣＰＰは、ポリ－Ａｒｇであり、リンカーは、ＮＰＥＧ単位を含むＰＥＧリンカーであり、ＣＰＰは、アミド結合によってリンカーの窒素原子に連結されている。故に、一実施形態では、該化合物は、式（ＩＶ）：
の一般構造を有し、式中、
ポリ－Ａｒｇ、Ｐ１及びＰ２が、本明細書で定義される通りであり、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【化14】
ポリ－Ａｒｇ、Ｐ１及びＰ２が、本明細書で定義される通りであり、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【0073】
一実施形態では、ｐは２であり、ｑは２である。故に、一実施形態では、該化合物は、式（ＶＩＩ）：
の一般構造を有し、式中、ポリ－Ａｒｇ、Ｐ１及びＰ２は、本明細書で定義される通りである。
【化15】
【0074】
一実施形態では、該化合物は、式（ＶＩ）：
の一般構造を有し、式中、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【化16】
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である。
【0075】
一実施形態では、ｐは２であり、ｑは２である。故に、一実施形態では、該化合物は、式（ＶＩＩＩ）：
の一般構造を有し、式中、ポリ－Ａｒｇ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６は、本明細書で定義される通りである。
【化17】
【0076】
一実施形態では、ＣＰＰは、Ｌ－Ａｒｇ９であり、ｐは２であり、ｑは２である。故に、一実施形態では、該化合物は、式（ＩＸ）：
の一般構造を有し、式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、及びＸ６は、本明細書で定義される通りである。
【化18】
【0077】
一実施形態では、化合物は、下記の式（Ｘ）～（ＸＶＩ）からなる群から選択される。
【化19】
【0078】
一実施形態では、ペプチドＰ１、Ｐ２、及び／またはＣＰＰのうちのいずれかが、さらに修飾されている。例えば、一実施形態では、ＣＰＰのＮ末端は、任意選択でアセチル化されている。故に、一実施形態では、該化合物は、下記の式（ＸＶＩＩ）～（ＸＸＩＩＩ）からなる群から選択される。
【化20】
【0079】
特定の化合物
一実施形態では、該化合物は、ＣＰＰ－ＮＰＥＧ４－（Ｐ１）（Ｐ２）の一般構造を有し、すなわち該化合物は、式（ＸＸＶＩＩＩ）：
のものであり、ＣＰＰ、Ｐ１及びＰ２は、表２で定義される通りである。一実施形態では、該化合物は、化合物９～６３からなる群から選択される。
一実施形態では、該化合物は、ＣＰＰ－ＮＰＥＧ４－（Ｐ１）（Ｐ２）の一般構造を有し、すなわち該化合物は、式（ＸＸＶＩＩＩ）：
【化21】
【表2】
【0080】
一実施形態では、該化合物は、式（ＸＸＶＩＩ）：
のものであり、Ｐ１及びＰ２は、表３で定義される通りである。一実施形態では、該化合物は、化合物２～７からなる群から選択される。
【化22】
【表3】
【0081】
一実施形態では、該化合物は、下記の式（ＸＸＩＸ）～（ＸＸＸＩＶ）からなる群から選択される。
【化23】
【0082】
一実施形態では、Ｐ１及びＰ２は、アミノ酸配列ＩＥＴＤＶ（配列番号１）からなり、ＣＰＰは、Ｄ－Ｐｅｎ（ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ、配列番号１５）、Ｌ－ｐＶＥＣ（ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ、配列番号１８）、Ｌ－ＴＰ２（ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ、配列番号１９）、ＭｉｎｉＡｐ４（｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜、配列番号２１）、及びＣＰＰ１２（｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ、配列番号２２）からなる群から選択される。
【0083】
塩及びプロドラッグ
本明細書で定義される化合物は、該化合物の薬学的に許容される塩またはプロドラッグの形態であり得る。本発明の一実施形態では、本明細書で定義される化合物は、該化合物の薬学的に許容される付加塩または水和物、例えば、限定されないがＫ＋、Ｎａ＋、ならびに非塩、例えば、Ｈ＋として製剤化され得る。
本明細書で定義される化合物は、該化合物の薬学的に許容される塩またはプロドラッグの形態であり得る。本発明の一実施形態では、本明細書で定義される化合物は、該化合物の薬学的に許容される付加塩または水和物、例えば、限定されないがＫ＋、Ｎａ＋、ならびに非塩、例えば、Ｈ＋として製剤化され得る。
【0084】
薬学的組成物
一態様では、本発明は、本明細書で定義される化合物を含む薬学的組成物に関する。本発明の化合物の薬学的組成物への製剤化は当該技術分野で周知されており、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），２０００，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）、及びＡｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓにさらに記載される。
一態様では、本発明は、本明細書で定義される化合物を含む薬学的組成物に関する。本発明の化合物の薬学的組成物への製剤化は当該技術分野で周知されており、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），２０００，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）、及びＡｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓにさらに記載される。
【0085】
膜透過性
ＰＳＤ－９５は細胞内に位置するため、ＰＳＤ－９５を標的とするいずれの薬物も、細胞膜を効率的に横断することが必須である。本明細書で定義される化合物の細胞透過性及びサイトゾルへの送達を評価するために、細胞クロロアルカン透過アッセイ（ＣＡＰＡ）が使用されてもよい（Ｐｅｒａｒｏ ｅｔ ａｌ．２０１８）。このアッセイは、クロロアルカン（ＣＡ）分子に共有結合するように設計された修飾ハロアルカン脱ハロゲン酵素を利用する。ＨａｌｏＴａｇ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及びミトコンドリア標的化ペプチドを含む融合タンパク質を発現するＨｅＬａ細胞株を使用して、サイトゾル送達が報告される。ＣＡＰＡの一般形式は、パルス・チェイスアッセイである（Ｄｅｐｒｅｙ ＆ Ｋｒｉｔｚｅｒ，２０２０）。ＨａｌｏＴａｇ酵素を発現する細胞が、ＣＡタグ融合ペプチドと共にインキュベートされる。これらのＣＡ－ペプチドが細胞膜を透過して、サイトゾルに到達するとき、それらはＨａｌｏＴａｇに結合して、それと反応することになる（パルスステップ）。洗浄ステップに次いで、細胞は、細胞膜を定量的に透過して、残存する未反応のＨａｌｏＴａｇ部位と反応するＣＡタグ融合色素と共にインキュベートされる（チェイスステップ）。フローサイトメトリーを使用して細胞の蛍光強度が測定され、測定された蛍光は、透過された細胞に到達するＣＡ－ペプチドの量と反比例するため、これを使用してサイトゾル送達を評価することができる。得られたデータは、一般的に、５０％の細胞透過が観察される濃度であるＣＰ５０値として表される。化合物のＣＰ５０値は、実施例４に記載されるように測定されてもよい。実施例４は、記載される化合物の細胞内取込みが、８６．１μＭ（化合物２２）～０．６８μＭ（化合物３０）の範囲のＣＰ５０値を測定して、用いられたＣＰＰに大きく依存することを示す（図７）。さらに、様々なＣＰＰタグ（配列番号８～２２）にコンジュゲートされたＮＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２の細胞内取込み効率は、予測不能な範囲のＣＰ５０値をもたらした（図８）。
ＰＳＤ－９５は細胞内に位置するため、ＰＳＤ－９５を標的とするいずれの薬物も、細胞膜を効率的に横断することが必須である。本明細書で定義される化合物の細胞透過性及びサイトゾルへの送達を評価するために、細胞クロロアルカン透過アッセイ（ＣＡＰＡ）が使用されてもよい（Ｐｅｒａｒｏ ｅｔ ａｌ．２０１８）。このアッセイは、クロロアルカン（ＣＡ）分子に共有結合するように設計された修飾ハロアルカン脱ハロゲン酵素を利用する。ＨａｌｏＴａｇ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及びミトコンドリア標的化ペプチドを含む融合タンパク質を発現するＨｅＬａ細胞株を使用して、サイトゾル送達が報告される。ＣＡＰＡの一般形式は、パルス・チェイスアッセイである（Ｄｅｐｒｅｙ ＆ Ｋｒｉｔｚｅｒ，２０２０）。ＨａｌｏＴａｇ酵素を発現する細胞が、ＣＡタグ融合ペプチドと共にインキュベートされる。これらのＣＡ－ペプチドが細胞膜を透過して、サイトゾルに到達するとき、それらはＨａｌｏＴａｇに結合して、それと反応することになる（パルスステップ）。洗浄ステップに次いで、細胞は、細胞膜を定量的に透過して、残存する未反応のＨａｌｏＴａｇ部位と反応するＣＡタグ融合色素と共にインキュベートされる（チェイスステップ）。フローサイトメトリーを使用して細胞の蛍光強度が測定され、測定された蛍光は、透過された細胞に到達するＣＡ－ペプチドの量と反比例するため、これを使用してサイトゾル送達を評価することができる。得られたデータは、一般的に、５０％の細胞透過が観察される濃度であるＣＰ５０値として表される。化合物のＣＰ５０値は、実施例４に記載されるように測定されてもよい。実施例４は、記載される化合物の細胞内取込みが、８６．１μＭ（化合物２２）～０．６８μＭ（化合物３０）の範囲のＣＰ５０値を測定して、用いられたＣＰＰに大きく依存することを示す（図７）。さらに、様々なＣＰＰタグ（配列番号８～２２）にコンジュゲートされたＮＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２の細胞内取込み効率は、予測不能な範囲のＣＰ５０値をもたらした（図８）。
【0086】
一実施形態では、該化合物は、２５０μＭ以下、例えば２００μＭ以下、例えば１５０μＭ以下、例えば１００μＭ以下、例えば８０μＭ以下、例えば７０μＭ以下、例えば６０μＭ以下、例えば５０μＭ以下、例えば４０μＭ以下、例えば３０μＭ以下、例えば２０μＭ以下、例えば１５μＭ以下、例えば１０μＭ以下、例えば５μＭ以下のＣＰ５０値を有する。好ましくは、該化合物は、６０μＭ以下のＣＰ５０値を有する。
【0087】
プラスミン安定性
虚血性脳卒中（別称、「脳（ｂｒａｉｎ）虚血」または「脳（ｃｅｒｅｂｒａｌ）虚血」）は通常、脳に血液を供給する動脈の閉塞によって引き起こされる。閉塞は、脳への血流及び酸素を低減して、脳細胞の損傷または死につながる。血管の閉塞は、様々な機械デバイスを使用して、または静脈内もしくは動脈内に送達される「血栓溶解剤（ｃｌｏｔ ｂｕｓｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」を使用して除去され得る。かかる血栓溶解剤の中には、プラスミノーゲンからプラスミンを生成する組織プラスミノーゲン因子（ｔＰＡ）がある。組換えｔＰＡの例は、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、及びテネクテプラーゼであり、血栓を分解する他の血栓溶解薬には、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、及びデスモテプラーゼ（ｄｅｓｍｏｔａｐｌａｓｅ）が含まれる。
虚血性脳卒中（別称、「脳（ｂｒａｉｎ）虚血」または「脳（ｃｅｒｅｂｒａｌ）虚血」）は通常、脳に血液を供給する動脈の閉塞によって引き起こされる。閉塞は、脳への血流及び酸素を低減して、脳細胞の損傷または死につながる。血管の閉塞は、様々な機械デバイスを使用して、または静脈内もしくは動脈内に送達される「血栓溶解剤（ｃｌｏｔ ｂｕｓｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」を使用して除去され得る。かかる血栓溶解剤の中には、プラスミノーゲンからプラスミンを生成する組織プラスミノーゲン因子（ｔＰＡ）がある。組換えｔＰＡの例は、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、及びテネクテプラーゼであり、血栓を分解する他の血栓溶解薬には、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、及びデスモテプラーゼ（ｄｅｓｍｏｔａｐｌａｓｅ）が含まれる。
【0088】
一実施形態では、本発明の化合物は、ＡＩＳに対する標準治療であるｔＰＡまたは組換えｔＰＡを受けている対象に投与される。故に、該化合物が、セリンプロテアーゼであるプラスミンの生成を含めて、ｔＰＡの投与と適合性であることは必須である。
【0089】
本発明の化合物のインビトロプラスミン安定性を実施例３で決定した。一実施形態では、該化合物は、実施例３に記載されるプラスミン安定性アッセイにおいて、プラスミンの存在下で少なくとも１０分間、例えば少なくとも３０分間、例えば少なくとも１時間、例えば少なくとも２時間、例えば少なくとも３時間、例えば少なくとも４時間、例えば少なくとも５時間、例えば少なくとも６時間、例えば少なくとも７時間、例えば少なくとも８時間、例えば少なくとも９時間、例えば少なくとも１０時間、例えば少なくとも１５時間、例えば少なくとも２０時間、例えば少なくとも３０時間の半減期を有する。
【0090】
ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する親和性
好ましくは、本発明の化合物は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対してナノモル濃度範囲の親和性を有することにより、効力の高い阻害剤となる。ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する親和性は、治療効果を達成するために必要とされる薬物の閾値濃度を低減する上で必要不可欠な要素であり、これは、薬物がその標的に到達するために血液脳関門（ＢＢＢ）を横断しなければならない場合、ＢＢＢが標的における薬物濃度の蓄積を制限する傾向があることから、特に重要である。
好ましくは、本発明の化合物は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対してナノモル濃度範囲の親和性を有することにより、効力の高い阻害剤となる。ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する親和性は、治療効果を達成するために必要とされる薬物の閾値濃度を低減する上で必要不可欠な要素であり、これは、薬物がその標的に到達するために血液脳関門（ＢＢＢ）を横断しなければならない場合、ＢＢＢが標的における薬物濃度の蓄積を制限する傾向があることから、特に重要である。
【0091】
一部の実施形態では、本発明の化合物は、ＰＤＺ１及びＰＤＺ２に同時に結合する二量体ＰＳＤ－９５阻害剤であり、これが、これらのドメインに対するそれらの高い親和性を説明し得る。
【0092】
実施例２に記載されるように、本発明の化合物についてのＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する得られた親和性は、低ナノモル濃度範囲にあり、Ｌ－ＴＡＴ－ＮＰＥＧ４（ＩＥＴＤＶ）２に類似する。
【0093】
一実施形態では、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する該化合物のＫｉ値は、１００ｎＭ以下、例えば８０ｎＭ以下、例えば７０ｎＭ以下、例えば６０ｎＭ以下、例えば５０ｎＭ以下、例えば４０ｎＭ以下、例えば３０ｎＭ以下、例えば２０ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ以下である。
【0094】
医療的使用
本発明の一態様では、本明細書で定義される化合物は、医薬として使用するためのものである。
本発明の一態様では、本明細書で定義される化合物は、医薬として使用するためのものである。
【0095】
ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１及びＰＤＺ２ドメインは、ＮＭＤＡ型のイオンチャネル型グルタミン酸受容体及び一酸化窒素（ＮＯ）産生酵素ｎＮＯＳの同時結合を含めて、いくつかのタンパク質と相互作用する。ＮＭＤＡ受容体は、神経変性疾患及び急性脳損傷に関係があるとされる興奮毒性、すなわちグルタミン酸媒介性神経毒性の主要なメディエーターである。ＰＳＤ－９５は、それぞれＰＤＺ１及びＰＤＺ２を介して、ＮＭＤＡ受容体、主としてＧｌｕＮ２Ａ及びＧｌｕＮ２Ｂサブユニット、ならびにｎＮＯＳに同時に結合する。ＮＭＤＡ受容体の活性化は、カルシウムイオンの流入を引き起こし、これがｎＮＯＳを活性化することによってＮＯ生成をもたらす。故に、ＰＳＤ－９５は、ＮＭＤＡ受容体活性化とＮＯ産生との間の特定の提携を媒介し、これは長期間持続する場合に細胞にとって有害であり得、グルタミン酸媒介性神経毒性の主要な促進因子である。ＰＳＤ－９５を標的とすることによるｎＮＯＳ／ＰＳＤ－９５／ＮＭＤＡ受容体の三元複合体の相互作用の阻害は、イオン流入及びＮＭＤＡ受容体の生存促進シグナル伝達経路等の生理機能を無傷のままにしながら、カルシウムイオン流入とＮＯ産生との間の機能的連結を損なうことによって、マウスにおいて虚血性脳損傷を予防することが知られている。興奮毒性の特異的阻害は、ＰＳＤ－９５阻害剤を使用して細胞内ｎＮＯＳ／ＰＳＤ－９５／ＮＭＤＡ受容体複合体を撹乱することによって得ることができる。
【0096】
本発明の化合物は、ＰＳＤ－９５阻害剤であり、故に興奮毒性を阻害することができる。よって、本発明の化合物は、様々な疾患、特に神経学的疾患、とりわけ興奮毒性によって部分的に媒介される疾患を処置する上で有用である。かかる疾患及び病態には、脳卒中、癲癇、低酸素症、外傷性脳損傷及び脊髄損傷等の脳卒中に関連しないＣＮＳへの外傷性損傷、他の脳虚血、アルツハイマー病、ならびにパーキンソン病が含まれる。
【0097】
一態様では、本発明は、興奮毒性関連疾患を予防する、処置する、低減する、及び／またはその発症を遅延させる際に使用するための、本明細書で定義される化合物に関する。一実施形態では、興奮毒性関連疾患は、脳卒中である。一実施形態では、興奮毒性関連疾患は、虚血性脳卒中である。一実施形態では、興奮毒性関連疾患は、脳虚血である。一実施形態では、興奮毒性関連疾患は、急性虚血性脳卒中である。一実施形態では、興奮毒性関連疾患は、くも膜下出血である。
【0098】
一態様では、本発明は、興奮毒性関連疾患を予防する、処置する、低減する、及び／またはその発症を遅延させるための医薬の製造のための、本明細書で定義される化合物の使用に関する。
【0099】
一態様では、本発明は、興奮毒性関連を予防する、処置する、低減する、及び／またはその発症を遅延させるための方法に関し、該方法は、治療上有効量の本明細書で定義される化合物を投与することを含む。
【0100】
一態様では、本発明は、興奮毒性の損傷影響を低減する及び／またはそれから保護する際に使用するための化合物に関する。一実施形態では、該化合物は、脳卒中の損傷影響を低減する際に使用するためのものである。一実施形態では、該化合物は、急性虚血性脳卒中の損傷影響を処置する際に使用するためのものである。一実施形態では、該化合物は、くも膜下出血の損傷影響を処置する際に使用するためのものである。
【0101】
一態様では、本発明は、対象における脳または脊髄への興奮毒性の損傷影響から保護する及び／またはそれを低減するための方法に関し、該方法は、損傷影響から保護する及び／またはそれを低減するために有効量の本明細書で定義される化合物を対象に投与するステップを含む。
【0102】
一態様では、本発明は、興奮毒性によって媒介される病態を処置する、低減する、またはその発症を遅延させる方法に関し、該方法は、該病態を有するかまたはその危険性があるヒト対象に、本明細書で定義される化合物を投与することを含む。
【0103】
一態様では、本発明は、対象における興奮毒性によって媒介される病態の少なくとも１つの徴候または症状を処置する、または阻害する、または遅延させる方法に関し、該方法は、該病態、または該病態に関連する危険因子を有する対象に、本明細書で定義される化合物を投与することを含む。一実施形態では、該病態は、脳卒中またはＣＮＳへの外傷性損傷である。一実施形態では、興奮毒性関連疾患は、ＣＮＳへの／それにおける／その虚血性損傷または外傷性損傷である。
【0104】
一態様では、本発明は、脳卒中を有する対象における脳卒中の損傷影響を低減する方法に関し、該方法は、脳卒中の損傷影響を低減するために対象に有効量の本明細書で定義される化合物を投与することを含む。
【0105】
本明細書で使用されるとき、「脳卒中」は、細胞死に至る、脳に供給する１つまたは複数の血管の閉塞または出血によって引き起こされる病態を指す一般用語である。本明細書で使用される「虚血性脳卒中」は、脳に供給する１つまたは複数の血管の閉塞によって引き起こされる脳卒中を指す。虚血性脳卒中の種類には、例えば、塞栓性脳卒中、心原性脳塞栓症（ｃａｒｄｉｏｅｍｂｏｌｉｃ ｓｔｒｏｋｅ）、血栓性脳卒中、大血管血栓症（ｌａｒｇｅ ｖｅｓｓｅｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、ラクナ梗塞、動脈間脳卒中（ａｒｔｅｒｙ－ａｒｔｅｒｙ ｓｔｒｏｋｅ）、及び潜因性脳卒中が含まれる。「脳虚血」は、動脈における閉塞が、酸素を豊富に含む血液の脳への送達を制限して、脳組織への損傷をもたらす病態である。脳虚血は、脳虚血または脳血管虚血と呼ばれることがある。
【0106】
本明細書で使用される「出血性脳卒中」は、脳に供給する１つまたは複数の血管の出血によって引き起こされる脳卒中を指す。出血性脳卒中の種類には、例えば、硬膜下脳卒中、実質内脳卒中、硬膜外脳卒中、及びくも膜下脳卒中が含まれる。
【0107】
一実施形態では、本発明の化合物によって処置可能な疾患は、ＣＮＳの虚血性損傷または外傷性損傷である。一態様では、本発明は、対象における脳または脊髄への外傷性損傷または虚血の損傷影響を低減する方法に関し、該方法は、該低減を達成するために本明細書で定義される化合物により該対象を処置することを含む。
【0108】
一態様では、本発明は、血管内手術に起因する脳虚血を阻害する方法に関し、該方法は、血管内手術を受けている対象に、脳虚血を阻害するために有効な計画において本明細書で定義される化合物を投与することを含む。
【0109】
一態様では、本発明は、動脈瘤を処置するための血管内手術、血管造影診断、または頸動脈ステント留置術による虚血性損傷を阻害する方法に関し、該方法は、有効な計画での本明細書で定義される化合物を、動脈瘤を処置するための血管内手術または血管造影診断を受けている対象に投与することを含む。
【0110】
一態様では、本発明は、脳神経外科手術による虚血性損傷を阻害する際に使用するための、本明細書で定義される化合物に関する。一実施形態では、該脳神経外科手術は、脳の血管造影診断または動脈瘤を処置するための血管内手術である。
【0111】
一部の実施形態では、該化合物は、再潅流療法と組み合わせて投与される。一実施形態では、該化合物及び該再潅流は、対象に同時に、順次に、または別個に投与される。
【0112】
本明細書で使用される「再潅流療法」という用語は、閉塞した動脈を通してまたはその周りでのいずれかで血流を取り戻すための医療処置を指す。再潅流療法は、医療剤及び機械的再潅流を含む。該医療剤は、血栓溶解と呼ばれるプロセスで使用される血栓溶解剤または線維素溶解剤であり得る。一部の実施形態では、再潅流療法は、プラスミノーゲン活性化因子、例えばｔＰＡ等の血栓溶解剤を投与することによって実施される。
【0113】
一実施形態では、該化合物は、化合物８（ＡＢ１４４）であり、該化合物は、プラスミノーゲン活性化因子、例えばｔＰＡと組み合わせて投与される。
【0114】
一部の実施形態では、再潅流療法は、外科手術を含む機械的再潅流である。実施される外科手術は、低侵襲血管内手術であり得る。
【0115】
機械的再潅流デバイスの中には、動脈内ケーター（ｃａｔｅｒ）、バルーン、ステント、及び種々の血栓回収デバイスがある。
【0116】
一実施形態では、該化合物は、血栓溶解剤と組み合わせて投与され、該化合物及び該血栓溶解剤は、対象に同時に、順次に、または別個に投与される。
【0117】
一態様では、本発明は、中枢神経系に対する虚血の損傷影響を処置する方法に関し、該方法は、
ａ）本明細書で定義される化合物を、虚血を有するかまたはその危険性がある対象に投与することと、
ｂ）対象に対して再潅流療法を実施することと、を含み、
該化合物及び該再潅流療法が、対象の中枢神経系に対する虚血の損傷影響を処置する。
ａ）本明細書で定義される化合物を、虚血を有するかまたはその危険性がある対象に投与することと、
ｂ）対象に対して再潅流療法を実施することと、を含み、
該化合物及び該再潅流療法が、対象の中枢神経系に対する虚血の損傷影響を処置する。
【0118】
一態様では、本発明は、虚血を有するかまたはその危険性がある対象における中枢神経系に対する虚血の損傷影響を処置する際に使用するための、本明細書で定義される化合物に関し、再潅流療法が対象に対して実施され、該化合物及び該再潅流療法が、対象の中枢神経系に対する虚血の損傷影響を処置する。
【0119】
一実施形態では、該方法は、血栓溶解剤を対象に同時に、順次に、または別個に投与することをさらに含む。
【0120】
一態様では、本発明は、少なくとも２つの別個の単位剤形（Ａ）及び（Ｂ）を含むパーツのキットに関し、
（Ａ）が、本明細書で定義される化合物を含み、
（Ｂ）が、血栓溶解剤を含む。
（Ａ）が、本明細書で定義される化合物を含み、
（Ｂ）が、血栓溶解剤を含む。
【0121】
一態様では、本明細書で定義されるパーツのキットは、中枢神経系に対する虚血の損傷影響の処置において使用するためのものであり、（Ａ）及び（Ｂ）が、対象に同時に、順次に、または別個に投与される。
【0122】
一態様では、本発明は、くも膜下出血の損傷影響を処置する際に使用するための、本明細書で定義される化合物に関する。本明細書で使用される「くも膜下出血」という用語は、くも膜下腔における出血状態を指す。
【0123】
一態様では、本発明は、対象におけるくも膜下出血を処置する方法に関し、該方法は、本明細書で定義される化合物を、くも膜下出血を有する対象に投与することを含み、対象における神経認知欠損の発症が阻害される。
【0124】
一態様では、本発明は、対象におけるくも膜下出血の神経学的欠損または神経認知欠損の発症を阻害する方法に関し、該方法は、本明細書で定義される化合物を、くも膜下出血を有する対象に投与することを含み、対象における神経学的欠損または神経認知欠損の発症が阻害される。
【0125】
興奮毒性に関連することが知られていない、本発明の化合物によって処置可能な他の神経学的疾患には、不安症及び疼痛が含まれる。ＰＳＤ－９５を標的とする二量体リガンドは、慢性疼痛及び虚血性脳卒中に対する処置として前臨床／臨床評価が進行中である（Ａｎｄｒｅａｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１３，６７，１９３－２００、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ，２０１２，１０９，３３１７－３３２２）。一実施形態では、本明細書で定義される化合物は、疼痛の処置または予防において使用するためのものである。
【0126】
一実施形態では、本明細書で言及される対象は、ヒト等の哺乳動物である。
【0127】
合成
本明細書で定義される本発明の化合物は、
ａ）本明細書で定義されるペプチドＰ１／Ｐ２を合成する一般ステップと、
ｂ）ａ）のペプチドをＯＰＥＧｎまたはＮＰＥＧｎリンカー（ここで、「ｎ」は、ＰＥＧ部分の数である）により二量体化する一般ステップと、
ｃ）例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、ＮＰＥＧリンカーのＮにてＣＰＰタグを付着させる一般ステップと、
を含む方法によって製造されてもよい。
本明細書で定義される本発明の化合物は、
ａ）本明細書で定義されるペプチドＰ１／Ｐ２を合成する一般ステップと、
ｂ）ａ）のペプチドをＯＰＥＧｎまたはＮＰＥＧｎリンカー（ここで、「ｎ」は、ＰＥＧ部分の数である）により二量体化する一般ステップと、
ｃ）例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、ＮＰＥＧリンカーのＮにてＣＰＰタグを付着させる一般ステップと、
を含む方法によって製造されてもよい。
【0128】
一実施形態では、該化合物は、
ａ）Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーを用意する一般ステップと、
ｂ）Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成法を使用してペプチドＰ１／Ｐ２を調製する一般ステップと、
ｃ）Ｆｍｏｃ脱保護ペプチドＰ１／Ｐ２をＮｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーにより二量体化して、リンカー－二量体コンジュゲートを形成させる一般ステップと、
ｄ）例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、リンカー－二量体コンジュゲートのＮＰＥＧリンカーのＮにＣＰＰを付着させる一般ステップと、
を含む方法によって製造される。
ａ）Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーを用意する一般ステップと、
ｂ）Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成法を使用してペプチドＰ１／Ｐ２を調製する一般ステップと、
ｃ）Ｆｍｏｃ脱保護ペプチドＰ１／Ｐ２をＮｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーにより二量体化して、リンカー－二量体コンジュゲートを形成させる一般ステップと、
ｄ）例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、リンカー－二量体コンジュゲートのＮＰＥＧリンカーのＮにＣＰＰを付着させる一般ステップと、
を含む方法によって製造される。
【0129】
一実施形態では、本発明の化合物は、下記に記載されるように合成される。
【0130】
Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカー：
「Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカー」は、ＮＰＥＧリンカーがリンカー窒素上のオルト－ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｓ）保護基により窒素上で保護され、ＮＰＥＧリンカーの末端がカルボン酸を含む、構造である。この化学試薬または構成要素は、２つのペプチド部分であるＰ１及びＰ２を二量体化するために使用される。
「Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカー」は、ＮＰＥＧリンカーがリンカー窒素上のオルト－ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｓ）保護基により窒素上で保護され、ＮＰＥＧリンカーの末端がカルボン酸を含む、構造である。この化学試薬または構成要素は、２つのペプチド部分であるＰ１及びＰ２を二量体化するために使用される。
【0131】
オルト－ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｓ）保護ＮＰＥＧリンカーは、固相上または溶液中のいずれかで生産される。
【0132】
固相手順は、典型的には、特定の樹脂（例えば、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＡＣＮ、ＴＨＦ）及び塩基（例えば、ＤＩＰＥＡ、ＤＢＵ、コリジン、ＮＭＭ）に適切な有機溶媒を使用して、２－クロロトリチルクロリド樹脂等の固相ペプチド合成に有用な固体支持体に、Ｆｍｏｃ－ＮＨ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨを負荷することによって開始する。
【0133】
Ｆｍｏｃ基は、適切な溶媒（例えば、ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＡＣＮ、ＴＨＦ）中の塩基（例えば、ピペリジン、ジメチルアミン、モルホリン、ピペラジン、ジシクロヘキシルアミン、ＤＭＡＰ）によって除去することができる。
【0134】
オルト－ニトロベンゼンスルホニルクロリドを、塩基（例えば、ＤＩＰＥＡ、ＤＢＵ、コリジン、ＮＭＭ）及び適切な溶媒（例えば、ＴＨＦ、ＤＣＭ）を使用して遊離アミンにカップリングして、Ｎｓ－ＮＨ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯ－樹脂を得ることができる。
【0135】
リンカー生成物の第２の部分は、光延化学反応の使用によって樹脂結合リンカー部分に接続することができる。樹脂をトリフェニルホスフィン、ＨＯ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯｔＢｕ、溶媒、及びアゾジカルボン酸のエステル試薬またはアミド試薬（例えば、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、ＤＩＡＤ；アゾジカルボン酸ジエチル、ＤＥＡＤ；１，１’－（アゾジカルボニル）－ジピペリジン、ＡＤＤＰ）で処理する。
【0136】
樹脂をトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）等の酸で処置することによって、最終的なＮｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーが得られる。
【0137】
溶液相手順は、ＮＨ２－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯｔＢｕのアミン基のＮｓによる保護、続いてトリフェニルホスフィン及びＤＩＡＤ、ＤＥＡＤ、もしくはＡＤＤＰ、または類似の試薬、ＨＯ－ＰＥＧ－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯｔＢｕ、ならびに適切な溶媒（ＴＨＦ、ＤＣＭ）を使用した溶液中での光延化学反応によって実施することができる。次いで、ＴＦＡ等の酸での処置によって、最終的なＮｓ保護ＮＰＥＧ－リンカーが得られる。
【0138】
ペプチド合成：ペプチド配列は、２－クロロトリチルクロリド樹脂またはＷａｎｇ樹脂等の固体支持体、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸、塩基、カップリング試薬（例えば、ＨＢＴＵ［Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－Ｏ（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）ウロニウムヘキサフルオロホスファート］、Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート［ＨＡＴＵ］、ＰｙＢＯＢ、ＤＩＣ／ＨＯＢｔ）、及び溶媒を使用したＦｍｏｃベースの固相ペプチド合成法によって合成される。カップリング試薬の代替として、Ｆｍｏｃ保護アミノ酸の活性化エステル（例えば、ペンタフルオロフェニル、スクシンイミド）を使用することができる。
【0139】
二量体化：Ｆｍｏｃ脱保護樹脂結合ペプチドは、樹脂を準化学量論的な量（例えば、１／６）のＮｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカー、塩基、カップリング試薬、及び適切な溶媒（例えば、ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＴＨＦ）で繰り返し処理することによる樹脂上の二量体化プロセスによって、Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーにより二量体化される。カップリング試薬の代替として、Ｎｓ－ＮＰＥＧリンカーの活性化エステルを使用することができる。
【0140】
二量体化プロセスはまた、溶媒（例えば、ＡＣＮ、ＤＭＦ、ＤＣＭ、ＴＨＦ）中の１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）またはヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）のいずれかと一緒にしたＮｓ－ＮＰＥＧリンカーの活性化エステル（例えば、ペンタフルオロフェニル、スクシンイミド）、及び適切な側鎖保護ペプチド（例えば、ｔｅｒｔ－ブチル）を使用して、溶液中で形成することもできる。また、溶液中の二量体化は、Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカー、カップリング試薬（例えば、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ等）、塩基、及び溶媒を使用して実施することもできる。
【0141】
Ｎｓ基をメルカプトエタノール及び１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ）によって、またはナトリウムチオフェノラートによって除去する。
【0142】
リンカー－二量体コンジュゲートのＮＰＥＧリンカーのＮＨ部分へのＣＰＰの付着：最初に、アミノ酸をＮＰＥＧリンカーのＮＨ部分にカップリングし、その後、樹脂上の標準的な（手動／自動）Ｆｍｏｃ ＳＰＰＳに従ってＣＰＰを合成する。
【0143】
エステル保護基は、切断された生成物を塩基水溶液（例えば、ＮａＯＨ、ＬｉＯＨ）及びアセトニトリル中で撹拌し、続いてＴＦＡまたはＨＣｌで酸性化することによって除去することができる。
【0144】
凍結乾燥及びＨＰＬＣまたは類似のクロマトグラフ法による精製によって、本発明の最終的な化合物が得られる。
【0145】
さらなる実施形態では、本発明の化合物の合成は、実施例１に概説されるように実施される。
【0146】
条項
１．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）を含み、配列中、
ａ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ１が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結されている、化合物。
１．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）を含み、配列中、
ａ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ１が、細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）に連結されている、化合物。
【0147】
２．リンカーによって第２のペプチド（Ｐ２）に連結された第１のペプチド（Ｐ１）を含み、Ｐ１及びＰ２が、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）、及びＶＥＴＶＶ（配列番号７）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、化合物。
【0148】
３．Ｐ１及びＰ２が、前記リンカーを介して細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）またはアルブミン結合部分に連結されており、それによって膜または血液脳関門を通る前記ペプチドの通過を増加させる、条項２に記載の化合物。
【0149】
４．前記化合物が、２５０μＭ以下、例えば２００μＭ以下、例えば１５０μＭ以下、例えば１００μＭ以下、例えば８０μＭ以下、例えば７０μＭ以下、例えば６０μＭ以下、例えば５０μＭ以下、例えば４０μＭ以下、例えば３０μＭ以下、例えば２０μＭ以下、例えば１５μＭ以下、例えば１０μＭ以下、例えば５μＭ以下のＣＰ５０値を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0150】
５．前記化合物が、プラスミン安定性アッセイにおいて、少なくとも１０分間、例えば少なくとも３０分間、例えば少なくとも１時間、例えば少なくとも２時間、例えば少なくとも３時間、例えば少なくとも４時間、例えば少なくとも５時間、例えば少なくとも６時間、例えば少なくとも７時間、例えば少なくとも８時間、例えば少なくとも９時間、例えば少なくとも１０時間、例えば少なくとも１５時間、例えば少なくとも２０時間、例えば少なくとも３０時間の半減期を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0151】
６．前記ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する前記化合物のＫｉ値が、１００ｎＭ以下、例えば８０ｎＭ以下、例えば７０ｎＭ以下、例えば６０ｎＭ以下、例えば５０ｎＭ以下、例えば４０ｎＭ以下、例えば３０ｎＭ以下、例えば２０ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ以下である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0152】
７．ＣＰＰが、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0153】
８．前記ポリ－Ａｒｇが、５～１０個のＬ－アルギニン残基、例えば７～１０個のＬ－アルギニン残基、例えば８個または９個のＬ－アルギニン残基からなる、条項７に記載の化合物。
【0154】
９．前記ポリ－Ａｒｇが、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号１２）を含むか、またはそれからなる、条項７に記載の化合物。
【0155】
１０．前記ＣＰＰが、Ｌ－ＴＡＴ（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ、配列番号８）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0156】
１１．前記ＣＰＰが、Ｄ－ＴＡＴ（ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ、配列番号９）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0157】
１２．前記ＣＰＰが、ｍＴＡＴ（ｒＲｒＧｒＫｋＲｒ、配列番号１０）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0158】
１３．前記ＣＰＰが、ｒｉＴＡＴ（ｒｒｒｑｒｒｋｋｒ、配列番号１１）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0159】
１４．前記ＣＰＰが、Ｄ－Ａｒｇ９（ｒｒｒｒｒｒｒｒｒ、配列番号１３）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0160】
１５．前記ＣＰＰが、Ｌ－Ｐｅｎ（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ、配列番号１４）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0161】
１６．前記ＣＰＰが、Ｄ－Ｐｅｎ（ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ、配列番号１５）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0162】
１７．前記ＣＰＰが、Ｌ－ＤＰＶ３（ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ、配列番号１７）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0163】
１８．前記ＣＰＰが、Ｌ－ｐＶＥＣ（ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ、配列番号１８）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0164】
１９．前記ＣＰＰが、Ｌ－ＭＡＰ（ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ、配列番号１６）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0165】
２０．前記ＣＰＰが、Ｌ－ＴＰ２（ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ、配列番号１９）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0166】
２１．前記ＣＰＰが、Ｄ－ＴＰ２（ｐｌｉｙｌｒｌｌｒＧｑｆ、配列番号２０）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0167】
２２．前記ＣＰＰが、ＭｉｎｉＡｐ４（｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜、配列番号２１）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0168】
２３．前記ＣＰＰが、ＣＰＰ１２（｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ、配列番号２２）である、条項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
【0169】
２４．前記アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）が、Ｐ１のＣ末端である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0170】
２５．Ｐ１が、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基、例えば６個のアミノ酸残基からなる、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0171】
２６．Ｐ１が、
配列Ｘ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなり、配列中、
ａ．Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
配列Ｘ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなり、配列中、
ａ．Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0172】
２７．Ｐ１が、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）、ＶＥＴＶＶ（配列番号７）、及びＩＥＴＤＶ（配列番号１）を含むか、またはそれからなる、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0173】
２８．前記化合物が、アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）を含み、配列中、
ａ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
ａ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0174】
２９．前記アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）が、Ｐ２のＣ末端である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0175】
３０．Ｐ２が、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基、例えば６個のアミノ酸残基からなる、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0176】
３１．Ｐ２が、配列Ｘ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）を含むか、またはそれからなり、配列中、
ａ．Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
ａ．Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
ｂ．Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
ｃ．Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0177】
３２．Ｐ２が、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）、ＶＥＴＶＶ（配列番号７）、及びＩＥＴＤＶ（配列番号１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むか、またはそれからなる、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0178】
３３．Ｐ１及びＰ２が、同一である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0179】
３４．Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介してリンカーにコンジュゲートされている、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0180】
３５．ポリ－Ａｒｇ等の前記ＣＰＰが、リンカーを介してＰ１に連結されている、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0181】
３６．ポリ－Ａｒｇ等の前記ＣＰＰが、リンカーを介してＰ１及びＰ２に連結されている、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0182】
３７．ポリ－Ａｒｇ等の前記ＣＰＰが、そのＣ末端を介して前記リンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介してリンカーにコンジュゲートされており、前記化合物が、以下の式（Ｉ）の一般構造を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0183】
【化24】
【0184】
３８．前記ＣＰＰが、ポリ－Ａｒｇであり、前記化合物が、以下の式（ＩＩ）の一般構造を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化25】
【0185】
３９．前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含む、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0186】
４０．前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置換されてＮＰＥＧをもたらす、条項３９に記載の化合物。
【0187】
４１．前記リンカーが、ＮＰＥＧ単位を含み、ポリ－Ａｒｇ等の前記ＣＰＰが、アミド結合によって前記リンカーの前記窒素原子に連結されている、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0188】
４２．前記化合物が、式（ＩＩＩ）：
の一般構造を有し、式中、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化26】
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0189】
４３．前記化合物が、式（ＩＶ）：
の一般構造を有し、式中、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化27】
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0190】
４４．前記化合物が、式（Ｖ）：
の一般構造を有し、式中、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化28】
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0191】
４５．前記化合物が、式（ＶＩ）：
の一般構造を有し、式中、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化29】
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0192】
４６．ｐ＝ｑである、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0193】
４７．ｐ＞ｑである、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0194】
４８．ｐ＜ｑである、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0195】
４９．前記ｐ及びｑの和が、１～２０の整数である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0196】
５０．エチレングリコール部分の数ｐが、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０個のエチレングリコール部分から選択される、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0197】
５１．エチレングリコール部分の数ｐが、０～４である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0198】
５２．エチレングリコール部分の数ｑが、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、及び１０個のエチレングリコール部分から選択される、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0199】
５３．エチレングリコール部分の数ｑが、０～４である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0200】
５４．前記エチレングリコール部分の総数ｐ＋ｑが、２～１２、例えば２、例えば４、例えば６、例えば８、例えば１０、例えば１２である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0201】
５５．前記エチレングリコール部分の総数ｐ＋ｑが、４である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0202】
５６．ｐが２であり、ｑが２である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0203】
５７．前記化合物が、式（ＶＩＩ）の一般構造を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化30】
【0204】
５８．前記化合物が、式（ＶＩＩＩ）の一般構造を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化31】
【0205】
５９．前記化合物が、式（ＩＸ）の一般構造を有する、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化32】
【0206】
６０．前記化合物が、下記の式（Ｘ）～（ＸＶＩ）からなる群から選択される、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【化33】
【0207】
６１．前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、アセチル化されている、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0208】
６２．前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、下記の構造を有するクロロアルカンタグ（ＣＡ）にコンジュゲートされている、条項１～６０のいずれか１項に記載の化合物。
【化34】
【0209】
６３．前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、メチル化されている、条項１～６０のいずれか１項に記載の化合物。
【0210】
６４．前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、ホルミル化されている、条項１～６０のいずれか１項に記載の化合物。
【0211】
６５．前記化合物の薬学的に許容される塩またはプロドラッグの形態である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0212】
６６．
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）、
を含む、化合物であって、前記ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して前記リンカーにコンジュゲートされており、前記化合物が、式（Ｉ）：
の一般構造を有し、前記化合物が、２０μＭ以下のＣＰ５０値を有する、前記化合物。
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）、
を含む、化合物であって、前記ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して前記リンカーにコンジュゲートされており、前記化合物が、式（Ｉ）：
【化35】
【0213】
６７．Ｐ１が、配列Ｘ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなり、配列中、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ２が、配列Ｘ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）を含むか、またはそれからなり、配列中、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
条項６６に記載の化合物。
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ２が、配列Ｘ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）を含むか、またはそれからなり、配列中、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
条項６６に記載の化合物。
【0214】
６８．Ｐ１及び／またはＰ２が、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基からなる、条項６６または６７のいずれか１項に記載の化合物。
【0215】
６９．Ｘ３及びＸ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、及びＲからなる群から選択される、条項６６～６８のいずれか１項に記載の化合物。
【0216】
７０．Ｐ１及びＰ２が、ＫＥＴＬＶ（配列番号２）、ＫＥＴＴＶ（配列番号３）、ＫＥＴＶＶ（配列番号４）、ＫＥＴＲＶ（配列番号５）、ＩＳＴＤＶ（配列番号６）、及びＶＥＴＶＶ（配列番号７）からなる群から選択されるアミノ酸配列からなる、条項６６～６８のいずれか１項に記載の化合物。
【0217】
７１．前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらし、前記ＣＰＰが、アミド結合によって前記リンカーの前記窒素原子に連結されており、前記化合物が、式（ＩＩＩ）：
の一般構造を有し、式中、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
条項６６～７０のいずれか１項に記載の化合物。
【化36】
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
条項６６～７０のいずれか１項に記載の化合物。
【0218】
７２．前記ＣＰＰが、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、Ｄ－ＴＡＴ（ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ、配列番号９）、Ｌ－Ｐｅｎ（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ、配列番号１４）、Ｄ－Ｐｅｎ（ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ、配列番号１５）、Ｌ－ＤＰＶ３（ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ、配列番号１７）、Ｌ－ｐＶＥＣ（ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ、配列番号１８）、Ｌ－ＭＡＰ（ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ、配列番号１６）、Ｌ－ＴＰ２（ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ、配列番号１９）、ＭｉｎｉＡｐ４（｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜、配列番号２１）、及びＣＰＰ１２（｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ、配列番号２２）からなる群から選択される、条項６６～７１のいずれか１項に記載の化合物。
【0219】
７３．前記ＣＰＰが、ポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、例えば５～１０個のＬ－アルギニン残基、例えば８個または９個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ａｒｇを含むか、またはそれからなり、例えば前記ポリ－Ａｒｇが、アミノ酸配列ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号１２）を含むか、またはそれからなる、条項６６～７２のいずれか１項に記載の化合物。
【0220】
７４．前記化合物が、式（ＶＩ）：
の一般構造を有し、式中、
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
条項６６～７３のいずれか１項に記載の化合物。
【化37】
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、
条項６６～７３のいずれか１項に記載の化合物。
【0221】
７５．ｐが２であり、ｑが２である、条項６６～７４のいずれか１項に記載の化合物。
【0222】
７６．前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、アセチル化されているか、または前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、下記の構造を有するクロロアルカンタグ（ＣＡ）にコンジュゲートされている、条項６６～７５のいずれか１項に記載の化合物。
【化38】
【0223】
７７．前記化合物が、ＰＳＤ－９５阻害剤である、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0224】
７８．先行条項のいずれか１項に記載の化合物を含む薬学的組成物。
【0225】
７９．医薬として使用するための、先行条項のいずれか１項に記載の化合物。
【0226】
８０．興奮毒性関連疾患を処置する、予防する、低減する、及び／またはその発症を遅延させる際に使用するための、条項１～７７のいずれか１項に記載の化合物。
【0227】
８１．前記興奮毒性関連疾患が、脳卒中である、条項８０に記載の使用に向けた化合物。
【0228】
８２．前記興奮毒性関連疾患が、虚血性脳卒中である、条項８０に記載の使用に向けた化合物。
【0229】
８３．前記興奮毒性関連疾患が、脳虚血である、条項８０に記載の使用に向けた化合物。
【0230】
８４．前記興奮毒性関連疾患が、急性虚血性脳卒中である、条項８０に記載の使用に向けた化合物。
【0231】
８５．前記興奮毒性関連疾患が、くも膜下出血である、条項８０に記載の使用に向けた化合物。
【0232】
８６．疼痛の処置または予防において使用するための、条項１～７７のいずれか１項に記載の化合物。
【0233】
８７．少なくとも２つの別個の単位剤形（Ａ）及び（Ｂ）を含むパーツのキットであって、
（Ａ）が、条項１～７７のいずれか１項に記載の化合物を含み、
（Ｂ）が、血栓溶解剤を含む、
前記パーツのキット。
（Ａ）が、条項１～７７のいずれか１項に記載の化合物を含み、
（Ｂ）が、血栓溶解剤を含む、
前記パーツのキット。
【0234】
８８．興奮毒性関連疾患及び／または疼痛を処置する、予防する、低減する、及び／またはその発症を遅延させる際に使用するためのものであり、（Ａ）及び（Ｂ）が、前記対象に同時に、順次に、または別個に投与される、条項８７に記載のパーツのキット。
【実施例】
【0235】
実施例１：合成
樹脂結合化合物２～７（ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＬＶ、ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＴＶ、ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＶＶ、ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＲＶ、ＯＰＥＧ４－ＩＳＴＤＶ及びＯＰＥＧ４－ＶＥＴＶＶ）を、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００９，４８，９６８５に以前に記載されたように合成した。
樹脂結合化合物２～７（ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＬＶ、ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＴＶ、ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＶＶ、ＯＰＥＧ４－ＫＥＴＲＶ、ＯＰＥＧ４－ＩＳＴＤＶ及びＯＰＥＧ４－ＶＥＴＶＶ）を、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．，２００９，４８，９６８５に以前に記載されたように合成した。
【0236】
樹脂結合ＮＰＥＧ４－ＩＥＴＤＶ、ＮＰＥＧ４－ＫＥＴＬＶ、ＮＰＥＧ４－ＫＥＴＴＶ、ＮＰＥＧ４－ＫＥＴＶＶ、ＮＰＥＧ４－ＫＥＴＲＶ、ＮＰＥＧ４－ＩＳＴＤＶ、及びＮＰＥＧ４－ＶＥＴＶＶを、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１２，１０９，３３１７によって以前に記載されたように合成した。線状ＣＰＰ（Ｌ－ＴＡＴ、ＤＴＡＴ、ｍＴＡＴ、ｒｉＴＡＴ、ポリＲ、Ｄ－ポリＲ、Ｌ－Ｐｅｎ、Ｄ－Ｐｅｎ、Ｌ－ｐＶＥＣ、Ｌ－ＭＡＰ、Ｌ－ＤＰＶ３、Ｌ－ＴＰ２、Ｄ－ＴＰ２、ＭｉｎｉＡｐ４、ＣＰＰ１２）の最初のＣ末端アミノ酸（Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ａｒｇ（Ｐｂｆ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ａｓｐ（ＯＡｌｌ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｌｙｓ（Ｎｓ）－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－ＯＨ、Ｆｍｏｃ－Ｌ－Ｓｅｒ（ｔＢｕ）－ＯＨ）を、カップリング試薬としてＯ－（１Ｈ－６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスファート（ＨＣＴＵ）を使用して、ＮＰＥＧ４リンカーの窒素に手動で３回カップリングした。その後、ＣＰＰの合成は、自動ペプチド合成装置（Ｐｒｅｌｕｄｅ Ｘ、Ｇｙｒｏｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳ）を使用して達成した。Ｐｒｅｌｕｄｅ Ｘを使用した合成のために、全ての試薬はＤＭＦ中の溶液として調製した：Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（０．２Ｍ）、ＨＣＴＵ（０．４Ｍ）、及びＤＩＰＥＡ（１．０Ｍ）。配列伸長は、以下のプロトコルを使用して達成した：脱保護（２×２分間、室温、３５０ｒｐｍでの振とう）及びカップリング（３×１０分間、５０℃、３５０ｒｐｍでの振とう）。樹脂負荷量に対して５倍過剰のＦｍｏｃ－アミノ酸／ＨＣＴＵ／ＤＩＰＥＡ（１：１：２．５）の混合物を使用して、アミノ酸を３重にカップリングした。環状ＣＰＰ（ＭｉｎｉＡｐ４及びＣＰＰ１２）含有ペプチドを、ジクロロメタン（ＤＣＭ）中２０当量のＰｈＳｉＨ３及び０．２当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４により窒素下で２×１５分間処理して、アリル保護基及びａｌｌｏｃ保護基を除去した。樹脂をＤＣＭ、続いてジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で洗浄した。Ａｓｐ／Ｄａｐの側鎖及びまたはＧｌｕのＣ末端とＰｈｅのＮ末端との間の環化反応を、ＤＭＦ中２当量の（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯＰ）及び２当量のＤＩＰＥＡによるペプチドの室温で１６時間の処理、続いてＤＭＦでの洗浄によって実施した。ＣＰＰタグ融合二量体ペプチドの合成が成功した後、樹脂を２つに分割した。樹脂結合ペプチドの一方の部分のＮ末端を、ＤＭＦ：無水酢酸：ＤＩＰＥＡ（８：１．５：０．５）の混合物を使用して２回、１０分間キャップ付加した。樹脂結合ペプチドの他方の部分のＮ末端をクロロアルカンタグ（ＣＡ）で官能基化した。ＣＡタグを、ＤＭＦ中のＣＡ：ＰｙＢＯＰ：ＤＩＰＥＡの混合物（３：３：１０）を使用してＣＰＰタグ融合ペプチドのＮ末端の窒素基に１６時間カップリングした。ＣＰＰ１２含有ペプチドの場合、ＣＡタグのカップリングの前に、ＤＭＦ（２ｍＬ）中の１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（ＤＢＵ、０．５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（２ｍＬ）中のメルカプトエタノール（０．５ｍｍｏｌ）を添加し、３０分間振とうすることによって、オルト－ニトロベンゼンスルホニル（Ｎｓ）基を除去した。ＤＭＦ中で流動洗浄した後、メルカプトエタノール／ＤＢＵ処理を４回繰り返した。ＤＭＦ中で最終的に流動洗浄した後、ＣＡタグをＬｙｓ残基の側鎖窒素にカップリングした。
【0237】
ペプチド化合物２～７５を、ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン／２，２’－（エチレンジオキシ）ジエタンチオール（ＤＯＤＴ）／Ｈ２Ｏ（９０／２．５／２．５）を２時間用いて、乾燥させた樹脂から切断し、続いて濾過し、蒸発させ、氷冷エーテルで沈殿させ、凍結乾燥させ、分取ＲＰ－ＨＰＬＣによって精製した。最終的なペプチドリガンドを、分子量決定のためにＬＣ－ＭＳ、及び純度（＞９５％）に関してＵＰＬＣ（２１４ｎｍ）によって特性評価した。
【0238】
また、上述したような合成を４０ｍｍｏｌでまたは最大１００ｍｍｏｌスケールで実施して、本明細書で報告されるペプチド化合物のマルチグラム調製物をもたらすこともできる。
【0239】
本明細書に記載のペプチド化合物は、２５ｍｇ／ｍＬ濃度以上に達する優れた溶解特性を示した。
【0240】
この実施例は、リガンドを合成し、精製し、純粋な形態で得ることができることを実証する。
【0241】
実施例２：ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する親和性の決定
ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する化合物１～７５の結合親和性を、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１２，１０９，３３１７によって記載されるようなインビトロ蛍光偏光（ＦＰ）アッセイを使用して測定した。最初に、蛍光二量体プローブとＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２との間の相互作用についてのＫＤ値を決定するために飽和結合曲線を得た。漸増濃度のＰＤＺ１～２（０．０１５～３０ｎＭ）を一定濃度のプローブ（０．５ｎＭ）に添加した。試料の蛍光偏光（ＦＰ）を６３５／６７０ｎｍの励起波長／発光波長で測定し、発生したＦＰ値を、ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して一部位結合モデルに適合させた。次いで、ＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１２に対する非標識ペプチドの親和性を、異種競合結合アッセイにおいて、飽和結合実験の場合と同じ条件を使用して試験ペプチドを漸増濃度（０．４～９６０ｎＭ、最終濃度）で、固定量のＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１２（４ｎＭ）及びプローブ（０．５ｎＭ）に添加することによって評価した。ＦＰ値をＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍで一部位競合（可変勾配）モデルに適合させた。得られたＩＣ５０値を、Ｎｉｋｏｌｏｖｓｋａ－Ｃｏｌｅｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００４，３３２，２６１によって以前に記載されたようにＫｉ値に変換した。
ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に対する化合物１～７５の結合親和性を、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１２，１０９，３３１７によって記載されるようなインビトロ蛍光偏光（ＦＰ）アッセイを使用して測定した。最初に、蛍光二量体プローブとＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２との間の相互作用についてのＫＤ値を決定するために飽和結合曲線を得た。漸増濃度のＰＤＺ１～２（０．０１５～３０ｎＭ）を一定濃度のプローブ（０．５ｎＭ）に添加した。試料の蛍光偏光（ＦＰ）を６３５／６７０ｎｍの励起波長／発光波長で測定し、発生したＦＰ値を、ソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して一部位結合モデルに適合させた。次いで、ＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１２に対する非標識ペプチドの親和性を、異種競合結合アッセイにおいて、飽和結合実験の場合と同じ条件を使用して試験ペプチドを漸増濃度（０．４～９６０ｎＭ、最終濃度）で、固定量のＰＳＤ－９５ ＰＤＺ１２（４ｎＭ）及びプローブ（０．５ｎＭ）に添加することによって評価した。ＦＰ値をＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍで一部位競合（可変勾配）モデルに適合させた。得られたＩＣ５０値を、Ｎｉｋｏｌｏｖｓｋａ－Ｃｏｌｅｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００４，３３２，２６１によって以前に記載されたようにＫｉ値に変換した。
【0242】
この実施例は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合するリガンドの親和性を決定する方法について記載する。結果を表４～７、及び図１～４に提示する。結論として、試験した化合物は、低ナノモル濃度範囲の親和性（Ｋｉ値）を示し、これは化合物１と同等である。
【表4】
【表5】
【表6】
【表7】
【0243】
実施例３：リガンドのインビトロプラスミン安定性
化合物８～６２のインビトロプラスミン安定性を、プラスミン（５ｕｇ／ｍＬ）を補充したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で１００μＭのリガンドを３７℃で０～１４４０分間インキュベートすることによって決定した。インキュベーション中の選択される時点で、８０μＬの５０％アセトニトリル（ＡＣＮ）での処理によってリガンドを８０μＬのアッセイマトリックスから抽出した。試料を濾過し、ＵＰＬＣによって分析して、残存するリガンドの量を決定した。ＬＣ－ＭＳ分析を実施して、リガンドの完全性を確認し、切断部位を特定した。
化合物８～６２のインビトロプラスミン安定性を、プラスミン（５ｕｇ／ｍＬ）を補充したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で１００μＭのリガンドを３７℃で０～１４４０分間インキュベートすることによって決定した。インキュベーション中の選択される時点で、８０μＬの５０％アセトニトリル（ＡＣＮ）での処理によってリガンドを８０μＬのアッセイマトリックスから抽出した。試料を濾過し、ＵＰＬＣによって分析して、残存するリガンドの量を決定した。ＬＣ－ＭＳ分析を実施して、リガンドの完全性を確認し、切断部位を特定した。
【0244】
この実施例は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合するリガンドのインビトロプラスミン安定性を決定する方法について記載する。結果を表８及び９、ならびに図５及び６に提示する。結論として、ＣＰＰ Ｌ－Ａｒｇ９（配列番号１２）を含有する試験した化合物は、Ｄ－アミノ酸または大環状ＣＰＰを含有する化合物と同等のインビトロプラスミン半減期時間を示す（図６）。予想外にも、Ｌ－Ａｒｇ９含有化合物の半減期は、Ｌ－ＴＡＴ（配列番号８）よりも有意に優れていた（図５及び６）。
【表8】
【表9】
【0245】
実施例４：リガンドの膜透過性及び細胞内取込みの決定
化合物１０～７５の膜透過性を、サイトゾルに排他的に位置するハロＧＦＰを安定に発現するＨｅＬａ細胞において決定した。実験の１日前に細胞を４０．０００細胞／ウェルの密度で播種した。増殖培地を吸引し、１００μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭにより置き換えた後、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ中の２５μＬのリガンドの調製された段階希釈物を細胞に加え（一定のＤＭＳＯ濃度）、プレートを３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。ウェルの内容物を吸引し、細胞を新鮮なＯｐｔｉ－ＭＥＭで１５分間洗浄した。洗浄物の吸引後、細胞をＴＡＭＲＡ－ＣＡ（５μＭ）と共に１５分間インキュベートした。チェイス溶液の吸引後、細胞をＯｐｔｉ－ＭＥＭで３０分間洗浄した。洗浄物の除去に次いで、細胞をトリプシン処理し、ＰＢＳ（２％ＦＢＳ）に再懸濁し、卓上フローサイトメーターを使用して分析した。リガンドなし及びＴＡＭＲＡ－ＣＡなしの対照ウェルを使用して、得られた蛍光強度データを正規化し、用量反応曲線としてプロットした。報告されるＣＰ５０値は、リガンドの細胞透過に反比例して挙動する赤色蛍光の最大半量を表す。
化合物１０～７５の膜透過性を、サイトゾルに排他的に位置するハロＧＦＰを安定に発現するＨｅＬａ細胞において決定した。実験の１日前に細胞を４０．０００細胞／ウェルの密度で播種した。増殖培地を吸引し、１００μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭにより置き換えた後、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ中の２５μＬのリガンドの調製された段階希釈物を細胞に加え（一定のＤＭＳＯ濃度）、プレートを３７℃及び５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。ウェルの内容物を吸引し、細胞を新鮮なＯｐｔｉ－ＭＥＭで１５分間洗浄した。洗浄物の吸引後、細胞をＴＡＭＲＡ－ＣＡ（５μＭ）と共に１５分間インキュベートした。チェイス溶液の吸引後、細胞をＯｐｔｉ－ＭＥＭで３０分間洗浄した。洗浄物の除去に次いで、細胞をトリプシン処理し、ＰＢＳ（２％ＦＢＳ）に再懸濁し、卓上フローサイトメーターを使用して分析した。リガンドなし及びＴＡＭＲＡ－ＣＡなしの対照ウェルを使用して、得られた蛍光強度データを正規化し、用量反応曲線としてプロットした。報告されるＣＰ５０値は、リガンドの細胞透過に反比例して挙動する赤色蛍光の最大半量を表す。
【0246】
この実施例は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合するＣＡタグ融合化合物の膜透過性及び細胞内取込みを決定する方法について記載する。結果を表１０～１２、及び図７～９に提示する。結論として、試験した化合物は、有意に異なる細胞内取込み効率を示し、これは用いられたＣＰＰに大きく依存する。驚くべきことに、ＣＰＰタグＬ－Ａｒｇ９（配列番号１２）及びＬ－ｐＶＥＣ（配列番号１８）は、最も低いＣＰ５０値をもたらす（図８）。二量体リガンドに依存して、Ｌ－Ａｒｇ９はさらに、ＣＰ５０値が１μＭを下回り（図７）、非常に効率的な細胞内取込みを促進し、このことはより優れたＢＢＢ透過及び細胞内送達を示唆する。さらに、Ｌ－Ａｒｇ９ＣＰＰタグは、その細胞透過特性を喪失することなく７、６、５、または４つのアルギニンまで切り詰めることが可能である（表１２を参照されたい）（図９）。
【表10】
【表11】
【表12】
【0247】
実施例５：インビトロ血漿中安定性の決定
化合物８、２３、３５、６７、６９、７１、及び７３のインビトロ血漿中安定性を、未希釈のプールされたヒト血漿中で１００μＭのリガンドを３７℃で１４４０分間インキュベートすることによって決定した。インキュベーション中の選択される時点で、アッセイマトリックスを６Ｍの尿素に添加し、続いてアセトン中２０％のＴＣＡを使用して沈殿させることによって、リガンドをアッセイマトリックスから抽出した。一晩のインキュベーション後、試料を濾過し、ＵＰＬＣによって分析して、残存するリガンドの量を決定した。ＬＣ－ＭＳ分析を実施して、リガンドの完全性を確認し、切断部位を特定した。
化合物８、２３、３５、６７、６９、７１、及び７３のインビトロ血漿中安定性を、未希釈のプールされたヒト血漿中で１００μＭのリガンドを３７℃で１４４０分間インキュベートすることによって決定した。インキュベーション中の選択される時点で、アッセイマトリックスを６Ｍの尿素に添加し、続いてアセトン中２０％のＴＣＡを使用して沈殿させることによって、リガンドをアッセイマトリックスから抽出した。一晩のインキュベーション後、試料を濾過し、ＵＰＬＣによって分析して、残存するリガンドの量を決定した。ＬＣ－ＭＳ分析を実施して、リガンドの完全性を確認し、切断部位を特定した。
【0248】
この実施例は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合するリガンドのインビトロ血漿中安定性を決定する方法について記載する。結果を表１３、及び図１０に提示する。結論として、Ｌ－Ａｒｇ９ＣＰＰタグは、ヒト血漿に対する安定性が有意に低下することなく、７、６、５、または４つのアルギニンまで切り詰めることが可能である（表１３を参照されたい）。
【表13】
【0249】
実施例６：静脈内注射後のインビボ脳内レベルの決定
雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス（３匹の動物からなる４つの群）に、ビヒクルとして等張食塩水を使用して１８ｎｍｏｌ／ｇ体重で目的の化合物を投与する。群１は、静脈内注射後の選択される時点での（注射後最大４時間）血中濃度プロファイルを得るために使用する。群２～４は、３つの異なる時点での血中濃度及び脳内濃度を決定するために使用する。したがって、動物は、静脈内注射後の選択される時点で殺処分され、関連する組織を収集し、適切な方法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して分析する。
雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス（３匹の動物からなる４つの群）に、ビヒクルとして等張食塩水を使用して１８ｎｍｏｌ／ｇ体重で目的の化合物を投与する。群１は、静脈内注射後の選択される時点での（注射後最大４時間）血中濃度プロファイルを得るために使用する。群２～４は、３つの異なる時点での血中濃度及び脳内濃度を決定するために使用する。したがって、動物は、静脈内注射後の選択される時点で殺処分され、関連する組織を収集し、適切な方法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を使用して分析する。
【0250】
この実施例は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合するリガンドのインビボ脳内レベルを決定する方法について記載する。さらに、化合物が血液脳関門を横断して脳内の標的に到達する能力についての情報を提供する、血液と脳の比率及び関連する組織標的化効率を決定する。
【0251】
実施例７：ｐＭＣＡＯマウスモデルを使用した脳卒中誘発性損傷に対するインビボ神経保護効果の決定
実験及び手術の詳細については、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１２，１０９，３３１７を参照されたい。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける永久中大脳動脈閉塞（ｐＭＣＡＯ）モデルを使用した無作為割付け二重盲検プラセボ対照試験において虚血性梗塞の程度が測定されている。麻酔及び動脈閉塞に次いで、動物に手術後３０分で投与を行う。手術後６時間を生き延びた動物を殺処分し、脳を注意深く取り出した。脳の固定化及び薄片化に次いで、梗塞体積分析を実施し、総梗塞体積を算出した。
実験及び手術の詳細については、Ｂａｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１２，１０９，３３１７を参照されたい。簡潔に述べると、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスにおける永久中大脳動脈閉塞（ｐＭＣＡＯ）モデルを使用した無作為割付け二重盲検プラセボ対照試験において虚血性梗塞の程度が測定されている。麻酔及び動脈閉塞に次いで、動物に手術後３０分で投与を行う。手術後６時間を生き延びた動物を殺処分し、脳を注意深く取り出した。脳の固定化及び薄片化に次いで、梗塞体積分析を実施し、総梗塞体積を算出した。
【0252】
この実施例は、ＰＳＤ－９５のＰＤＺ１～２に結合するリガンドのインビボ神経保護効果を決定する方法について記載する。読み出しパラメータは、化合物処置群対プラセボ対照群における梗塞体積である。
参考文献
Ａａｒｔｓ，Ｍ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｌ．，Ｂｅｓｓｈｏｈ，Ｓ．，Ａｒｕｎｄｉｎｅ，Ｍ．，Ｇｕｒｄ，Ｊ．Ｗ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｔ．，Ｓａｌｔｅｒ，Ｍ．Ｗ．，Ｔｙｍｉａｎｓｋｉ，Ｍ．，２００２．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ ｂｙ ｐｅｒｔｕｒｂｉｎｇ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ＰＳＤ－９５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９８，８４６－８５０．
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Ｄｅｐｒｅｙ，Ｋ．；Ｋｒｉｔｚｅｒ，Ｊ．Ａ．，２０２０．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈｌｏｒｏａｌｋａｎｅ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ．Ｍｅｔｈｏｄ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６４１，２７７－３０９．
Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．２０２０．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｎｅｒｉｎｅｔｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ（ＥＳＣＡＰＥ－ＮＡ１）：Ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．Ｌａｎｃｅｔ ３９５，８７８－８８７．
Ｈｕａｎｇ，Ｚ．，Ｈｕａｎｇ，Ｐ．Ｌ．，Ｐａｎａｈｉａｎ，Ｎ．，Ｄａｌｋａｒａ，Ｔ．，Ｆｉｓｈｍａｎ，Ｍ．Ｃ．，Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ，Ｍ．Ａ．，１９９４．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｍｉｃｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６５，１８８３－１８８５．
Ｋｏｒｎａｕ，Ｈ．Ｃ．，Ｓｃｈｅｎｋｅｒ，Ｌ．Ｔ．， Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｍ．Ｂ．，Ｓｅｅｂｕｒｇ，Ｐ．Ｈ．，１９９５．Ｄｏｍａｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｂｕｎｉｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｄｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ＰＳＤ－９５．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９，１７３７－１７４０．
Ｋｕｃｈａｒｚ，Ｋ．，Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，Ｉ．Ｓ．，Ｂａｃｈ，Ａ．，Ｓｔｒｏｍｇａａｒｄ，Ｋ．，Ｌａｕｒｉｔｚｅｎ，Ｍ．，ＰＳＤ－９５ ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｆｒｏｍ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｔａｔ－Ｎ－ｄｉｍｅｒ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．３７，１８２０－１８２８（２０１７）．
Ｍａｙｏｒ－Ｎｕｎｅｚ，Ｄ．，Ｊｉ，Ｚ．，Ｓｕｎ，Ｘ．，Ｔｅｖｅｓ，Ｌ．，Ｇａｒｍａｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｔｙｍｉａｎｓｋｉ，Ｍ．，２０２１．Ｐｌａｓｍｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＰＳＤ－９５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｒｅｓｏｌｖｅ ｅｆｆｅｃｔ－ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｄｒｕｇ－ｄｒｕｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｌｔｅｐｌａｓｅ ａｎｄ ｎｅｒｉｎｅｔｉｄｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｓｔｒｏｋｅ，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１３，ｅａｂｂ１４９８．
Ｐｅｒａｒｏ，Ｌ．；Ｄｅｐｒｅｙ，Ｋ．Ｌ．；Ｍｏｓｅｒ，Ｍ．Ｋ．；Ｚｏｕ，Ｚ．；Ｂａｌｌ，Ｈ．Ｌ．；Ｌｅｖｉｎｅ，Ｂ．；Ｋｒｉｔｚｅｒ，Ｊ．Ａ．，２０１８．Ｃｅｌｌ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｈｌｏｒｏａｌｋａｎｅ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１４０，１１３６０－１１３６９．
Ｓａｔｔｌｅｒ，Ｒ．，Ｘｉｏｎｇ，Ｚ．，Ｌｕ，Ｗ．Ｙ．，Ｈａｆｎｅｒ，Ｍ．，ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｊ．Ｆ．，Ｔｙｍｉａｎｓｋｉ，Ｍ．，１９９９．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｏ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｙ ＰＳＤ－９５ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４，１８４５－１８４８．
Ａａｒｔｓ，Ｍ．，Ｌｉｕ，Ｙ．，Ｌｉｕ，Ｌ．，Ｂｅｓｓｈｏｈ，Ｓ．，Ａｒｕｎｄｉｎｅ，Ｍ．，Ｇｕｒｄ，Ｊ．Ｗ．，Ｗａｎｇ，Ｙ．Ｔ．，Ｓａｌｔｅｒ，Ｍ．Ｗ．，Ｔｙｍｉａｎｓｋｉ，Ｍ．，２００２．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ ｂｙ ｐｅｒｔｕｒｂｉｎｇ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ＰＳＤ－９５ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９８，８４６－８５０．
Ｊ．Ｔ．Ａｎｄｒｅａｓｅｎ，Ａ．Ｂａｃｈ，Ｍ．Ｇｙｎｔｈｅｒ，Ａ．Ｎａｓｓｅｒ，Ｊ．Ｍｏｇｅｎｓｅｎ，Ｋ．Ｓｔｒｏｍｇａａｒｄ，Ｄ．Ｓ．Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ，ＵＣＣＢ０１－１２５，ａ ｄｉｍｅｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ＰＳＤ－９５，ｒｅｄｕｃｅｓ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｐａｉｎ ｗｉｔｈｏｕｔ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｏｒ ｍｏｔｏｒ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＭＫ－８０１，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，６７，１９３－２００（２０１３）．
Ｂａｃｈ，Ａ．，Ｃｈｉ，Ｃ．Ｎ．，Ｐａｎｇ，Ｇ．Ｆ．，Ｏｌｓｅｎ，Ｌ．，Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ａ．Ｓ．，Ｊｅｍｔｈ，Ｐ．，Ｓｔｒｏｍｇａａｒｄ，Ｋ．，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｐｌａｓｍａ－ｓｔａｂｌｅ ｄｉｍｅｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＰＳＤ－９５－ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４８，９６８５－９６８９（２００９）．
Ｂａｃｈ，Ａ．，Ｃｌａｕｓｅｎ，Ｂ．Ｈ．，Ｍｏｌｌｅｒ，Ｍ．，Ｖｅｓｔｅｒｇａａｒｄ，Ｂ．，Ｃｈｉ，Ｃ．Ｎ．，Ｒｏｕｎｄ，Ａ．，Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｐ．Ｌ．，Ｎｉｓｓｅｎ，Ｋ．Ｂ．，Ｋａｓｔｒｕｐ，Ｊ．Ｓ．，Ｇａｊｈｅｄｅ，Ｍ．，Ｊｅｍｔｈ，Ｐ．，Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ａ．Ｓ．，Ｌｕｎｄｓｔｒｏｍ，Ｐ．，Ｌａｍｂｅｒｔｓｅｎ，Ｋ．Ｌ．，Ｓｔｒｏｍｇａａｒｄ，Ｋ．，Ａ ｈｉｇｈ－ａｆｆｉｎｉｔｙ，ｄｉｍｅｒｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ＰＳＤ－９５ ｂｉｖａｌｅｎｔｌｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ＰＤＺ１－２ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｄａｍａｇｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０９，３３１７－３３２２（２０１２）．
Ｄａｗｓｏｎ，Ｖ．Ｌ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｔ．Ｍ．，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅ．Ｄ．，Ｂｒｅｄｔ，Ｄ．Ｓ．，Ｓｎｙｄｅｒ，Ｓ．Ｈ．，１９９１．Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｃｕｌｔｕｒｅｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ ８８，６３６８－６３７１．
Ｄｅｐｒｅｙ，Ｋ．；Ｋｒｉｔｚｅｒ，Ｊ．Ａ．，２０２０．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃｈｌｏｒｏａｌｋａｎｅ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ．Ｍｅｔｈｏｄ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６４１，２７７－３０９．
Ｈｉｌｌ ｅｔ ａｌ．２０２０．Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｎｅｒｉｎｅｔｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ（ＥＳＣＡＰＥ－ＮＡ１）：Ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ，ｄｏｕｂｌｅ－ｂｌｉｎｄ，ｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ．Ｌａｎｃｅｔ ３９５，８７８－８８７．
Ｈｕａｎｇ，Ｚ．，Ｈｕａｎｇ，Ｐ．Ｌ．，Ｐａｎａｈｉａｎ，Ｎ．，Ｄａｌｋａｒａ，Ｔ．，Ｆｉｓｈｍａｎ，Ｍ．Ｃ．，Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ，Ｍ．Ａ．，１９９４．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｍｉｃｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６５，１８８３－１８８５．
Ｋｏｒｎａｕ，Ｈ．Ｃ．，Ｓｃｈｅｎｋｅｒ，Ｌ．Ｔ．， Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｍ．Ｂ．，Ｓｅｅｂｕｒｇ，Ｐ．Ｈ．，１９９５．Ｄｏｍａｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｕｂｕｎｉｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｔｓｙｎａｐｔｉｃ ｄｅｎｓｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ＰＳＤ－９５．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９，１７３７－１７４０．
Ｋｕｃｈａｒｚ，Ｋ．，Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ，Ｉ．Ｓ．，Ｂａｃｈ，Ａ．，Ｓｔｒｏｍｇａａｒｄ，Ｋ．，Ｌａｕｒｉｔｚｅｎ，Ｍ．，ＰＳＤ－９５ ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｆｒｏｍ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｔａｔ－Ｎ－ｄｉｍｅｒ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｃｏｒｔｉｃａｌ ｓｐｒｅａｄｉｎｇ ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．３７，１８２０－１８２８（２０１７）．
Ｍａｙｏｒ－Ｎｕｎｅｚ，Ｄ．，Ｊｉ，Ｚ．，Ｓｕｎ，Ｘ．，Ｔｅｖｅｓ，Ｌ．，Ｇａｒｍａｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｔｙｍｉａｎｓｋｉ，Ｍ．，２０２１．Ｐｌａｓｍｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＰＳＤ－９５ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｒｅｓｏｌｖｅ ｅｆｆｅｃｔ－ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｄｒｕｇ－ｄｒｕｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｌｔｅｐｌａｓｅ ａｎｄ ｎｅｒｉｎｅｔｉｄｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｓｔｒｏｋｅ，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１３，ｅａｂｂ１４９８．
Ｐｅｒａｒｏ，Ｌ．；Ｄｅｐｒｅｙ，Ｋ．Ｌ．；Ｍｏｓｅｒ，Ｍ．Ｋ．；Ｚｏｕ，Ｚ．；Ｂａｌｌ，Ｈ．Ｌ．；Ｌｅｖｉｎｅ，Ｂ．；Ｋｒｉｔｚｅｒ，Ｊ．Ａ．，２０１８．Ｃｅｌｌ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｈｌｏｒｏａｌｋａｎｅ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１４０，１１３６０－１１３６９．
Ｓａｔｔｌｅｒ，Ｒ．，Ｘｉｏｎｇ，Ｚ．，Ｌｕ，Ｗ．Ｙ．，Ｈａｆｎｅｒ，Ｍ．，ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｊ．Ｆ．，Ｔｙｍｉａｎｓｋｉ，Ｍ．，１９９９．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ＮＭＤＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｔｏ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｙ ＰＳＤ－９５ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４，１８４５－１８４８．
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7】
【図8】
【図9】
【図10】
【図11】
【手続補正書】
【提出日】2023-03-02
【手続補正1】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ａ．アミノ酸配列Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５３）を含むか、またはそれからなる第１のペプチド（Ｐ１）（配列中、Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、
ｂ．アミノ酸配列Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５５）を含むか、またはそれからなる第２のペプチド（Ｐ２）（配列中、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される）、ならびに
ｃ．下記からなる群から選択される細胞膜透過ペプチド（ＣＰＰ）：
ｉ．３～９個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチド（ポリ－Ａｒｇ）、
ｉｉ．ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）、
ｉｉｉ．ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）、
ｉｖ．ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、
ｖ．ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）、
ｖｉ．ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、
ｖｉｉ．ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）、
ｖｉｉｉ．ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、
ｉｘ．｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び
ｘ．｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）、
を含む、ＰＳＤ－９５阻害剤であって、前記ＣＰＰが、そのＣ末端を介してリンカーに連結されており、Ｐ１及びＰ２が、それらのＮ末端を介して前記リンカーにコンジュゲートされており、前記ＰＳＤ－９５阻害剤が、式（Ｉ）：
【化1】
【請求項2】
Ｐ１が、配列Ｘ１Ｘ２ＴＸ３Ｖ（配列番号５４）を含むか、またはそれからなり、配列中、Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｐ２が、配列Ｘ４Ｘ５ＴＸ６Ｖ（配列番号５６）を含むか、またはそれからなり、配列中、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択される、
請求項１に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項3】
Ｐ１及び／またはＰ２が、４～１０個のアミノ酸残基、例えば５個のアミノ酸残基からなる、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項4】
Ｘ３及びＸ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、及びＲからなる群から選択される、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項5】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含む、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項6】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらす、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項7】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらし、前記ＣＰＰが、アミド結合によって前記リンカーの前記窒素原子に連結されている、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項8】
前記リンカーが、１つまたは複数のＰＥＧ単位を含み、前記ＰＥＧ単位のうちの１つの少なくとも１個の酸素原子が、窒素原子で置き換えられてＮＰＥＧをもたらし、前記ＣＰＰが、アミド結合によって前記リンカーの前記窒素原子に連結されており、前記ＰＳＤ－９５阻害剤が、式（ＩＩＩ）：【化2】
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０である、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項9】
Ｐ１が、Ｐ２と同一である、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項10】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＬＶ（配列番号２）からなる、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項11】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＴＶ（配列番号３）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項12】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＶＶ（配列番号４）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項13】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＫＥＴＲＶ（配列番号５）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項14】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＩＳＴＤＶ（配列番号６）からなる、請求項１～３または５～９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項15】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＶＥＴＶＶ（配列番号７）からなる、請求項１～９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項16】
前記ＰＳＤ－９５阻害剤が、式（ＶＩ）：【化3】
Ｘ１が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ２が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ３が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
Ｘ４が、Ｋ、Ｖ、及びＩからなる群から選択され、
Ｘ５が、Ｅ及びＳからなる群から選択され、
Ｘ６が、Ｌ、Ｔ、Ｖ、Ｒ、及びＤからなる群から選択され、
ｐが、整数０～１０であり、
ｑが、整数０～１０であり、
ポリ－Ａｒｇが、３～９個のＬ－アルギニン残基からなるポリ－Ｌ－アルギニンペプチドである、
先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項17】
前記ポリ－Ａｒｇが、３～９個のＬ－アルギニン残基からなる、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項18】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号１２）である、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項19】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号５７）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項20】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲＲ（配列番号５８）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項21】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲＲ（配列番号５９）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項22】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲＲ（配列番号６０）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項23】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲＲ（配列番号６１）である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項24】
前記ＣＰＰが、ＲＲＲである、請求項１～１８のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項25】
前記ＣＰＰが、ｙＧｒｋｋｒｒｑｒｒｒ（配列番号９、Ｄ－ＴＡＴ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項26】
前記ＣＰＰが、ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１４、Ｌ－Ｐｅｎ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項27】
前記ＣＰＰが、ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項28】
前記ＣＰＰが、ＲＫＫＲＲＲＥＳＲＫＫＲＲＲＥＳ（配列番号１７、Ｌ－ＤＰＶ３）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項29】
前記ＣＰＰが、ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項30】
前記ＣＰＰが、ＫＬＡＬＫＬＡＬＫＡＬＫＡＡＬＫＬＡ（配列番号１６、Ｌ－ＭＡＰ）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項31】
前記ＣＰＰが、ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項32】
前記ＣＰＰが、｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項33】
前記ＣＰＰが、｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項34】
ｐが２であり、ｑが２である、請求項８または１７のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項35】
前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、アセチル化されているか、または前記ＣＰＰの前記Ｎ末端が、下記の構造を有するクロロアルカンタグ（ＣＡ）にコンジュゲートされている、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。【化4】
【請求項36】
前記ＰＳＤ－９５阻害剤が、式（ＸＸＶＩＩＩ）：【化5】
【請求項37】
前記ＰＳＤ－９５阻害剤が、下記の式（Ｘ）～（ＸＸＩＩＩ）からなる群から選択される、請求項１に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。【化6】
【請求項38】
Ｐ１及びＰ２が、アミノ酸配列ＩＥＴＤＶ（配列番号１）からなり、前記ＣＰＰが、ｒｑｉｋｉｗｆｑｎｒｒｍｋｗｋｋ（配列番号１５、Ｄ－Ｐｅｎ）、ＬＬＩＩＬＲＲＲＩＲＫＱＡＨＡＨＳＫ（配列番号１８、Ｌ－ｐＶＥＣ）、ＰＬＩＹＬＲＬＬＲＧＱＦ（配列番号１９、Ｌ－ＴＰ２）、｜（Ｄａｐ）ＫＡＰＥＴＡＬＤ｜（配列番号２１、ＭｉｎｉＡｐ４）、及び｜Ｆｆ（Ｎａｌ２）ＲｒＲｒＱ｜ＧＡＢＡ－Ｋ（配列番号２２、ＣＰＰ１２）からなる群から選択される、請求項１～３、５～９、３５、または３６のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項39】
前記ＰＳＤ－９５阻害剤が、式（ＸＸＶＩＩＩ）：【化7】
【請求項40】
医薬として使用するための、先行請求項のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項41】
例えば急性虚血性脳卒中及びくも膜下出血から選択される脳卒中等の興奮毒性関連疾患を処置する、予防する、低減する、及び／またはその発症を遅延させる際に使用するための、請求項１～３９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤。
【請求項42】
請求項１～３９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤を製造するための方法であって、ａ．ペプチドＰ１／Ｐ２を合成する一般ステップと、
ｂ．ａ）の前記ペプチドをＯＰＥＧｎまたはＮＰＥＧｎリンカー（ここで、「ｎ」は、ＰＥＧ部分の数である）により二量体化する一般ステップと、
ｃ．例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、前記ＮＰＥＧリンカーの前記ＮにてＣＰＰタグを付着させる一般ステップと、
を含む、前記方法。
【請求項43】
請求項１～３９のいずれか１項に記載のＰＳＤ－９５阻害剤を製造するための方法であって、ａ．Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーを用意する一般ステップと、
ｂ．Ｆｍｏｃベースの固相ペプチド合成法を使用してペプチドＰ１／Ｐ２を調製する一般ステップと、
ｃ．Ｆｍｏｃ脱保護ペプチドＰ１／Ｐ２を前記Ｎｓ－ＮＰＥＧ二酸リンカーにより二量体化して、リンカー－二量体コンジュゲートを形成させる一般ステップと、
ｄ．例えば自動ペプチド合成装置を使用することによって、前記リンカー－二量体コンジュゲートの前記ＮＰＥＧリンカーの前記ＮにＣＰＰを付着させる一般ステップと、
を含む、前記方法。
【手続補正書】
【提出日】2024-04-01
【手続補正1】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
【国際調査報告】