特表 2024-521045 新規抗ＣＤ２７６抗体およびその使用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-28

(54)【発明の名称】新規抗ＣＤ２７６抗体およびその使用

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/13 20060101AFI20240521BHJP

   C07K 16/28 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 15/63 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240521BHJP

   C12P 21/08 20060101ALI20240521BHJP

   C07K 19/00 20060101ALI20240521BHJP

   C12N 15/62 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 39/395 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 35/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 37/02 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 37/06 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 29/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 31/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 35/02 20060101ALI20240521BHJP

   A61P 43/00 20060101ALI20240521BHJP

   A61K 47/68 20170101ALI20240521BHJP

   A61K 35/17 20150101ALN20240521BHJP

   A61K 35/15 20150101ALN20240521BHJP

【ＦＩ】

C12N15/13

C07K16/28 ZNA

C12N15/63 Z

C12N5/10

C12N1/21

C12N1/19

C12N1/15

C12P21/08

C07K19/00

C12N15/62 Z

A61K39/395 N

A61K39/395 T

A61K39/395 U

A61P35/00

A61P37/02

A61P37/06

A61P29/00

A61P31/00

A61P35/02

A61P43/00 121

A61K47/68

A61K35/17

A61K35/15

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023569782

(86)(22)【出願日】2022-05-11

(85)【翻訳文提出日】2023-12-27

(86)【国際出願番号】 CN2022092138

(87)【国際公開番号】W WO2022237820

(87)【国際公開日】2022-11-17

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/093157

(32)【優先日】2021-05-11

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2022/089645

(32)【優先日】2022-04-27

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】522497478

【氏名又は名称】アンテンジーン バイオロジクス リミテッド

(74)【代理人】

【識別番号】100149076

【弁理士】

【氏名又は名称】梅田 慎介

(74)【代理人】

【識別番号】100119183

【弁理士】

【氏名又は名称】松任谷 優子

(74)【代理人】

【識別番号】100173185

【弁理士】

【氏名又は名称】森田 裕

(74)【代理人】

【識別番号】100162503

【弁理士】

【氏名又は名称】今野 智介

(74)【代理人】

【識別番号】100144794

【弁理士】

【氏名又は名称】大木 信人

(74)【代理人】

【識別番号】100204582

【弁理士】

【氏名又は名称】大栗 由美

(72)【発明者】

【氏名】ユウェン，フイ

(72)【発明者】

【氏名】ホウ，ビン

(72)【発明者】

【氏名】リ，テンテン

(72)【発明者】

【氏名】チェン，ペン

(72)【発明者】

【氏名】デン，ミン

(72)【発明者】

【氏名】シャン，ボ

(72)【発明者】

【氏名】メイ，ジェイ

【テーマコード（参考）】

4B064

4B065

4C076

4C085

4C087

4H045

【Ｆターム（参考）】

4B064AG27

4B064CA19

4B064CC24

4B064DA01

4B065AA90X

4B065AA94X

4B065AB01

4B065AB04

4B065AC14

4B065BA02

4B065CA25

4B065CA44

4C076AA95

4C076BB01

4C076BB02

4C076BB13

4C076BB15

4C076BB16

4C076BB25

4C076CC04

4C076CC07

4C076CC27

4C076CC31

4C076EE41

4C076EE59

4C085AA14

4C085AA16

4C085AA21

4C085BB11

4C085BB36

4C085BB41

4C085BB43

4C085CC23

4C085DD62

4C085GG01

4C085GG02

4C085GG03

4C085GG04

4C085GG08

4C087AA01

4C087AA02

4C087BB65

4C087CA12

4C087MA52

4C087MA55

4C087MA59

4C087MA65

4C087MA66

4C087NA05

4C087ZB07

4C087ZB08

4C087ZB11

4C087ZB26

4C087ZB27

4C087ZB32

4C087ZC75

4H045AA10

4H045AA11

4H045AA20

4H045AA30

4H045BA09

4H045DA76

4H045EA20

4H045FA74

(57)【要約】

抗ＣＤ２７６抗体および抗ＣＤ２７６／ＰＤ－Ｌ１二重特異性抗体分子、それらをコードする単離されたポリヌクレオチド、それらを含む医薬組成物ならびにそれらの使用が提供される。
【選択図】なし

【特許請求の範囲】

【請求項1】

配列番号１～３、９～１１、１７～１９、２５～２７、３３～３５、４１～４３、４９～５１、５７～５９、６５～６７、７３～７５、８１～８３、８９～９１、９７～９９、１０５～１０７、１１３～１１５、１２１～１２３、１２９～１３１、１３７～１３９、１４５～１４７、１５３～１５５、１６１～１６３、１６９～１７１、１７７～１７９、１８５～１８７、１９３～１９５、２０１～２０３、２０９～２１１、２１７～２１９、２２５～２２７、２３３～２３５、２４１～２４３、２４９～２５１、２５７～２５９、２６５～２６７、２７３～２７５、２８１～２８３、２８９～２９１、２９７～２９９、３０５～３０７、３１３～３１５、３２１～３２３、３２９～３３１、３３７～３３９および３７４～３７５からなる群から選択される１、２もしくは３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ならびに／または配列番号４～６、１２～１４、２０～２２、２８～３０、３６～３８、４４～４６、５２～５４、６０～６２、６８～７０、７６～７８、８４～８６、９２～９４、１００～１０２、１０８～１１０、１１６～１１８、１２４～１２６、１３２～１３４、１４０～１４２、１４８～１５０、１５６～１５８、１６４～１６６、１７２～１７４、１８０～１８１、１８８～１９０、１９６～１９８、２０４～２０６、２１２～２１４、２２０～２２２、２２８～２３０、２３６～２３８、２４４～２４６、２５２～２５４、２６０～２６２、２６８～２７０、２７６～２７８、２８４～２８６、２９２～２９４、３００～３０２、３０８～３１０、３１６～３１８、３２４～３２６、３３２～３３４、３４０～３４２および３７６～３７７からなる群から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む、ＣＤ２７６と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片。

【請求項2】

ａ）配列番号１～３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂ）配列番号９～１１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃ）配列番号１７～１９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄ）配列番号２５～２７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅ）配列番号３３～３５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆ）配列番号４１～４３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇ）配列番号４９～５１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｈ）配列番号５７～５９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｉ）配列番号６５～６７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｊ）配列番号７３～７５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｋ）配列番号８１～８３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｌ）配列番号８９～９１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｍ）配列番号９７～９９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｎ）配列番号１０５～１０７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１３～１１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２１～１２３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｑ）配列番号１２９～１３１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｒ）配列番号１３７～１３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｓ）配列番号１４５～１４７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５３～１５５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６１～１６３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｖ）配列番号１６９～１７１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｗ）配列番号１７７～１７９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｘ）配列番号１８５～１８７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９３～１９５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０１～２０３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ａａ）配列番号２０９～２１１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２１７～２１９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２２５～２２７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３３～２３５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４１～２４３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２４９～２５１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２５７～２５９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２６５～２６７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７３～２７５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８１～２８３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２８９～２９１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号２９７～２９９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３０５～３０７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１３～３１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２１～３２３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３２９～３３１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３３７～３３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、および
ｒｒ）配列番号９、３７４および３７５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項3】

ａ）配列番号４～６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１２～１４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号２０～２２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号２８～３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３６～３８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号４４～４６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号５２～５４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号６０～６２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号６８～７０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号７６～７８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号８４～８６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９２～９４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１００～１０２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号１０８～１１０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１６～１１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２４～１２６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号１３２～１３４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号１４０～１４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号１４８～１５０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５６～１５８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６４～１６６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号１７２～１７４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号１８０～１８１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｘ）配列番号１８８～１９０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９６～１９８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０４～２０６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ａａ）配列番号２１２～２１４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２２０～２２２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２２８～２３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３６～２３８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４４～２４６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２５２～２５４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２６０～２６２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２６８～２７０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７６～２７８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８４～２８６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２９２～２９４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号３００～３０２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３０８～３１０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１６～３１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２４～３２６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３３２～３３４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３４０～３４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｒｒ）配列番号３７６、１３および１４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、ならびに
ｓｓ）配列番号３７７、４５および４６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域
からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項4】

ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号９、配列番号１０および配列番号１１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１２、配列番号１３および配列番号１４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３３、配列番号３４および配列番号３５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号５７、配列番号５８および配列番号５９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号６０、配列番号６１および配列番号６２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号６５、配列番号６６および配列番号６７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号６８、配列番号６９および配列番号７０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号７６、配列番号７７および配列番号７８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号８１、配列番号８２および配列番号８３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号８４、配列番号８５および配列番号８６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号８９、配列番号９０および配列番号９１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号９２、配列番号９３および配列番号９４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号９７、配列番号９８および配列番号９９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１００、配列番号１０１および配列番号１０２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号１０５、配列番号１０６および配列番号１０７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１０８、配列番号１０９および配列番号１１０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１３、配列番号１１４および配列番号１１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１１６、配列番号１１７および配列番号１１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号１２９、配列番号１３０および配列番号１３１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１３２、配列番号１３３および配列番号１３４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号１３７、配列番号１３８および配列番号１３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１４０、配列番号１４１および配列番号１４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号１４５、配列番号１４６および配列番号１４７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１４８、配列番号１４９および配列番号１５０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５３、配列番号１５４および配列番号１５５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１５６、配列番号１５７および配列番号１５８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６１、配列番号１６２および配列番号１６３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１６４、配列番号１６５および配列番号１６６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号１６９、配列番号１７０および配列番号１７１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１７２、配列番号１７３および配列番号１７４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号１７７、配列番号１７８および配列番号１７９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１８０、配列番号１８１および配列番号１８２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｘ）配列番号１８５、配列番号１８６および配列番号１８７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１８８、配列番号１８９および配列番号１９０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９３、配列番号１９４および配列番号１９５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１９６、配列番号１９７および配列番号１９８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０１、配列番号２０２および配列番号２０３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２０４、配列番号２０５および配列番号２０６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ａａ）配列番号２０９、配列番号２１０および配列番号２１１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２１２、配列番号２１３および配列番号２１４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２１７、配列番号２１８および配列番号２１９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２２０、配列番号２２１および配列番号２２２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２２５、配列番号２２６および配列番号２２７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２２８、配列番号２２９および配列番号２３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３３、配列番号２３４および配列番号２３５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２３６、配列番号２３７および配列番号２３８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４１、配列番号２４２および配列番号２４３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２４４、配列番号２４５および配列番号２４６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２４９、配列番号２５０および配列番号２５１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２５２、配列番号２５３および配列番号２５４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２５７、配列番号２５８および配列番号２５９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２６０、配列番号２６１および配列番号２６２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２６５、配列番号２６６および配列番号２６７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２６８、配列番号２６９および配列番号２７０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７３、配列番号２７４および配列番号２７５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２７６、配列番号２７７および配列番号２７８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８１、配列番号２８２および配列番号２８３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２８４、配列番号２８５および配列番号２８６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２８９、配列番号２９０および配列番号２９１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２９２、配列番号２９３および配列番号２９４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号２９７、配列番号２９８および配列番号２９９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３００、配列番号３０１および配列番号３０２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３０５、配列番号３０６および配列番号３０７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３０８、配列番号３０９および配列番号３１０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１３、配列番号３１４および配列番号３１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３１６、配列番号３１７および配列番号３１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２１、配列番号３２２および配列番号３２３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３２４、配列番号３２５および配列番号３２６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３２９、配列番号３３０および配列番号３３１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３３２、配列番号３３３および配列番号３３４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３３７、配列番号３３８および配列番号３３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３４０、配列番号３４１および配列番号３４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｒｒ）配列番号９、配列番号３７４および配列番号３７５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３７６、配列番号１３および配列番号１４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｓｓ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３７７、配列番号４５および配列番号４６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項5】

配列番号７、配列番号１５、配列番号２３、配列番号３１、配列番号３９、配列番号４７、配列番号５５、配列番号６３、配列番号７１、配列番号７９、配列番号８７、配列番号９５、配列番号１０３、配列番号１１１、配列番号１１９、配列番号１２７、配列番号１３５、配列番号１４３、配列番号１５１、配列番号１５９、配列番号１６７、配列番号１７５、配列番号１８３、配列番号１９１、配列番号１９９、配列番号２０７、配列番号２１５、配列番号２２３、配列番号２３１、配列番号２３９、配列番号２４７、配列番号２５５、配列番号２６３、配列番号２７１、配列番号２７９、配列番号２８７、配列番号２９５、配列番号３０３、配列番号３１１、配列番号３１９、配列番号３２７、配列番号３３５、配列番号３４３、配列番号３４７、および配列番号３４９、ならびにそれらの少なくとも８０％配列同一性のある相同配列からなる群から選択される重鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項6】

配列番号８、配列番号１６、配列番号２４、配列番号３２、配列番号４０、配列番号４８、配列番号５６、配列番号６４、配列番号７２、配列番号８０、配列番号８８、配列番号９６、配列番号１０４、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１２８、配列番号１３６、配列番号１４４、配列番号１５２、配列番号１６０、配列番号１６８、配列番号１７５６、配列番号１８４、配列番号１９２、配列番号２００、配列番号２０８、配列番号２１６、配列番号２２４、配列番号２３２、配列番号２４０、配列番号２４８、配列番号２５６、配列番号２６４、配列番号２７２、配列番号２８０、配列番号２８８、配列番号２９６、配列番号３０４、配列番号３１２、配列番号３２０、配列番号３２８、配列番号３３６、配列番号３４４、配列番号３４８、および配列番号３５０ならびにそれらの少なくとも８０％配列同一性のある相同配列からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項7】

ａ）配列番号７を含む重鎖可変領域および配列番号８を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１５を含む重鎖可変領域および配列番号１６を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号２３を含む重鎖可変領域および配列番号２４を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号３１を含む重鎖可変領域および配列番号３２を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３９を含む重鎖可変領域および配列番号４０を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号４７を含む重鎖可変領域および配列番号４８を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号５５を含む重鎖可変領域および配列番号５６を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号６３を含む重鎖可変領域および配列番号６４を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号７１を含む重鎖可変領域および配列番号７２を含む軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９５を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１０３を含む重鎖可変領域および配列番号１０４を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号１１１を含む重鎖可変領域および配列番号１１２を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１９を含む重鎖可変領域および配列番号１２０を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２７を含む重鎖可変領域および配列番号１２８を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号１３５を含む重鎖可変領域および配列番号１３６を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号１４３を含む重鎖可変領域および配列番号１４４を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号１５１を含む重鎖可変領域および配列番号１５２を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５９を含む重鎖可変領域および配列番号１６０を含む軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６７を含む重鎖可変領域および配列番号１６８を含む軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号１７５を含む重鎖可変領域および配列番号１７６を含む軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号１８３を含む重鎖可変領域および配列番号１８４を含む軽鎖可変領域、
ｘ）配列番号１９１を含む重鎖可変領域および配列番号１９２を含む軽鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９９を含む重鎖可変領域および配列番号２００を含む軽鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０７を含む重鎖可変領域および配列番号２０８を含む軽鎖可変領域、
ａａ）配列番号２１５を含む重鎖可変領域および配列番号２１６を含む軽鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２２３を含む重鎖可変領域および配列番号２２４を含む軽鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２３１を含む重鎖可変領域および配列番号２３２を含む軽鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３９を含む重鎖可変領域および配列番号２４０を含む軽鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４７を含む重鎖可変領域および配列番号２４８を含む軽鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２５５を含む重鎖可変領域および配列番号２５６を含む軽鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２６３を含む重鎖可変領域および配列番号２６４を含む軽鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２７１を含む重鎖可変領域および配列番号２７２を含む軽鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７９を含む重鎖可変領域および配列番号２８０を含む軽鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８７を含む重鎖可変領域および配列番号２８８を含む軽鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２９５を含む重鎖可変領域および配列番号２９６を含む軽鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号３０３を含む重鎖可変領域および配列番号３０４を含む軽鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３１１を含む重鎖可変領域および配列番号３１２を含む軽鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１９を含む重鎖可変領域および配列番号３２０を含む軽鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２７を含む重鎖可変領域および配列番号３２８を含む軽鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３３５を含む重鎖可変領域および配列番号３３６を含む軽鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３４３を含む重鎖可変領域および配列番号３４４を含む軽鎖可変領域、
ｒｒ）配列番号３４７を含む重鎖可変領域および配列番号３４８を含む軽鎖可変領域、または
ｓｓ）配列番号３４９を含む重鎖可変領域および配列番号３５０を含む軽鎖可変領域
を含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項8】

ヒト化されたものである、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項9】

配列番号３７８(EVQLVESGGGLXQPGXSLRLSCXTSGFTLSDYYMSWVRQXPGKGLEWVXFMRNKANXYTTEYSASVRGRFTISRDTSKSXIYLQMNSLXXEDTAVYYCVRDRXGRPFAYWGQGTLVTVSS)を含み、配列番号３７８のｉ位（ｉ＝１２、１６、２３、４０、４９、５７、８０、８９、９０および１０３）におけるＸが、Ｘ_Ｈｉと称され、Ｘ_Ｈ１２が、ＶまたはＩであり、ＸＨ_１６が、ＧまたはＲであり、Ｘ_Ｈ２３が、ＡまたはＴであり、Ｘ_Ｈ４０が、ＡまたはＰであり、Ｘ_Ｈ４９が、ＧまたはＳであり、Ｘ_Ｈ５７が、ＡまたはＧであり、Ｘ_Ｈ８０が、ＩまたはＴであり、Ｘ_Ｈ８９が、ＲまたはＫであり、Ｘ_Ｈ９０が、ＡまたはＴであり、Ｘ_Ｈ１０３が、ＤまたはＥである、重鎖可変領域、および配列番号３７９(DIXMTQSPXSLXXXXGXXXXIXCKSSQSLLNXINQKNFLTWYXQKPGXXPXLLIYWASTRESGVPXRFSGSGSGTDFTLXISXXXXEDLXXYYCQNDYTYPLTFGQGTKLEIK)を含み、配列番号３７９のｉ位（ｉ＝３、９、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２２、３２、４３、４８、４９、５１、６６、８０、８３、８４、８５、８６、９０および９１）におけるＸが、Ｘ_Ｌｉと称され、Ｘ_Ｌ３が、ＶまたはＱであり、Ｘ_Ｌ９が、Ｄ、ＬまたはＳであり、Ｘ_Ｌ１２が、Ａ、ＳまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１３が、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ１４が、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ１５が、Ｌ、ＶまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１７が、ＤまたはＥであり、Ｘ_Ｌ１８が、ＲまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１９が、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ２０が、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ２２が、Ｎ、ＴまたはＳであり、Ｘ_Ｌ３２が、ＡまたはＳであり、Ｘ_Ｌ４３が、ＱまたはＬであり、Ｘ_Ｌ４８が、ＱまたはＫであり、Ｘ_Ｌ４９が、Ａ、ＰまたはＳであり、Ｘ_Ｌ５１が、ＫまたはＱであり、Ｘ_Ｌ６６が、ＳまたはＤであり、Ｘ_Ｌ８０が、ＫまたはＴであり、Ｘ_Ｌ８３が、ＲまたはＳであり、Ｘ_Ｌ８４が、ＬまたはＶであり、Ｘ_Ｌ８５が、ＱまたはＥであり、Ｘ_Ｌ８６が、ＡまたはＰであり、Ｘ_Ｌ９０が、ＡまたはＧであり、Ｘ_Ｌ９１が、ＴまたはＶである、軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片。

【請求項10】

配列番号３８０(QVQLQESGPGLVKPSXTLSLTCXVXGYSITSDYAWNWIRQXPGKGLEWIGYISHSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSLGRRWYFDVWGQGTTVTVSS)を含み、配列番号３８０のｉ位（ｉ＝１６、２３、２５および４１）におけるＸが、Ｘ_Ｈｉと称され、Ｘ_Ｈ１６が、ＥまたはＱであり、Ｘ_Ｈ２３が、ＡまたはＴであり、Ｘ_Ｈ２５が、ＳまたはＹであり、Ｘ_Ｈ４１が、ＨまたはＰである、重鎖可変領域、および
配列番号３８１(DIXMTQSPXSLXXXXGXXXXIXCKSSQSLLXSSTQKNYLAWYXQKPGXXPXLLIYFASTRDSGVPXRFSGSGSGTDFTLXISXXXXEDLXXYFCQQHYIIPFTFGQGTKLEIK)を含み、配列番号３８１のｉ位（ｉ＝３、９、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２２、３１、４３、４８、４９、５１、６６、８０、８３、８４、８５、８６、９０および９１）におけるＸが、Ｘ_Ｌｉと称され、Ｘ_Ｌ３が、ＶまたはＱであり、Ｘ_Ｌ９が、Ｄ、ＬまたはＳであり、Ｘ_Ｌ１２が、Ａ、ＳまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１３が、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ１４が、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ１５が、Ｌ、ＶまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１７が、ＤまたはＥであり、Ｘ_Ｌ１８が、ＲまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１９が、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ２０が、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ２２が、Ｎ、ＴまたはＳであり、Ｘ_Ｌ３１が、ＮまたはＱであり、Ｘ_Ｌ４３が、ＱまたはＬであり、Ｘ_Ｌ４８が、ＱまたはＫであり、Ｘ_Ｌ４９が、Ａ、ＰまたはＳであり、Ｘ_Ｌ５１が、ＫまたはＱであり、Ｘ_Ｌ６６が、ＳまたはＤであり、Ｘ_Ｌ８０が、ＫまたはＴであり、Ｘ_Ｌ８３が、ＲまたはＳであり、Ｘ_Ｌ８４が、ＬまたはＶであり、Ｘ_Ｌ８５が、ＱまたはＥであり、Ｘ_Ｌ８６が、ＡまたはＰであり、Ｘ_Ｌ９０が、ＡまたはＧであり、Ｘ_Ｌ９１が、ＴまたはＶである、軽鎖可変領域を含む、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項11】

（ｉｉｉ）配列番号９、配列番号１０もしくは３７４（ＭＲＮＫＡＮＡＹＴＴ）および配列番号１１もしくは３７５（ＶＲＤＲＥＧＲＰＦＡＹ）としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１２もしくは３７６（ＱＳＬＬＮＡＩＮＱＫＮＦ）、配列番号１３および配列番号１４としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
（ｉｖ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号４４もしくは３７７（ＱＳＬＬＱＳＳＴＱＫＮＹ）、配列番号４５および配列番号４６としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域を含む、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項12】

配列番号３５１、３５３、３５５、３５７、３５８、３６０、３６２、３６４、３６５、３６７および３７０から選択される配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３５２、３５４、３５６、３５９、３６１、３６３、３６６、３６８、３６９、３７１、３７２および３７３から選択される配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項８に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項13】

１つまたは複数のアミノ酸残基置換または修飾をさらに含むが、ヒトＣＤ２７６に対する特異的結合親和性を保持する、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項14】

置換が、１つもしくは複数のＣＤＲ配列中、および／またはＶＨもしくはＶＬ配列の１つもしくは複数にあるが、ＣＤＲ配列のいずれにもない、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項15】

免疫グロブリン定常領域、任意選択で、ヒトＩｇの定常領域、または任意選択で、ヒトＩｇＧの定常領域をさらに含む、先行する請求項のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項16】

定常領域が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の定常領域を含む、請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項17】

キメラである、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項18】

Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディー、ドメイン抗体および二価ドメイン抗体である、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項19】

抗体または抗原結合断片が、１つまたは複数のコンジュゲートと連結しており、任意選択で、コンジュゲートが、直接またはリンカーを介してのいずれかで共有結合によって結合している、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項20】

コンジュゲートが、クリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤または他の抗癌薬を含む、請求項１９に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項21】

ＣＤ２７６がヒトに由来し、任意選択で、ＣＤ２７６が、組換えＣＤ２７６または細胞表面上に発現されたＣＤ２７６である、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。

【請求項22】

同一エピトープについて、先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片。

【請求項23】

先行する請求項のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。

【請求項24】

第２の治療剤をさらに含み、任意選択で、第２の治療剤が、１つまたは複数の免疫抑制分子に対するアンタゴニストである、請求項２３に記載の医薬組成物。

【請求項25】

第２の治療剤がＰＤ－Ｌ１アンタゴニストであり、任意選択で、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片である、請求項２４に記載の医薬組成物。

【請求項26】

請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチド。

【請求項27】

請求項２６に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項28】

請求項２７に記載のベクターを含む宿主細胞。

【請求項29】

請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を発現させる方法であって、請求項２８に記載の宿主細胞を、請求項２７に記載のベクターが発現される条件下で培養することを含む、方法。

【請求項30】

ＣＤ２７６活性の調節から恩恵を受けるであろう対象における疾患または状態を処置する方法であって、対象に、請求項１から２２のいずれかに記載の抗体もしくはその抗原結合断片または請求項２４から２５のいずれか一項に記載の医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む、方法。

【請求項31】

疾患または状態が、ＣＤ２７６関連疾患または状態である、請求項３０に記載の方法。

【請求項32】

疾患または状態が、癌、適応免疫疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患である、請求項３０に記載の方法。

【請求項33】

癌が、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞巣状軟部肉腫、星状膠細胞腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素細胞性腎癌腫、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症、線維性骨異形成症、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、頭頸部癌、肝細胞癌腫、膵島腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌腫、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、希少血液障害、転移性腎癌、横紋筋肉腫様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌腫、胸腺腫、甲状腺転移性癌ならびに子宮癌であり、任意選択で、癌が、化学療法抵抗性である、請求項３２に記載の方法。

【請求項34】

疾患または状態が、Ｂ細胞リンパ腫、任意選択で、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、リヒター症候群、バーキットリンパ腫または濾胞性リンパ腫から選択される血液癌である、請求項３２に記載の方法。

【請求項35】

対象がヒトである、請求項３０に記載の方法。

【請求項36】

対象に１つまたは複数の治療剤の治療上有効な量を投与することを含む、請求項３０に記載の方法。

【請求項37】

前記治療剤が、化学療法剤、放射線療法剤、ホルモン療法剤、毒素または免疫療法剤である、請求項３０に記載の方法。

【請求項38】

第２の治療剤がＰＤ－Ｌ１アンタゴニストであり、任意選択で、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片である、請求項３７に記載の方法。

【請求項39】

投与が、経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下または筋肉内投与による、請求項３０から３８のいずれかに記載の方法。

【請求項40】

化学療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法および外科手術からなる群から選択される１つまたは複数の追加の癌治療の投与をさらに含む、請求項３０～３９のいずれかに記載の方法。

【請求項41】

ＣＤ２７６を発現する細胞においてＣＤ２７６活性を調節する方法であって、ＣＤ２７６を発現する細胞を、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む、方法。

【請求項42】

サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することとを含む、方法。

【請求項43】

対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）対象から得られたサンプルを、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ２７６の存在または量を、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態の存在または状況と相関させることとを含む、方法。

【請求項44】

対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、請求項１から２１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。

【請求項45】

医薬が、第２の治療剤をさらに含み、任意選択で、第２の治療剤が、１つまたは複数の免疫抑制分子に対するアンタゴニストである、請求項４４に記載の使用。

【請求項46】

第２の治療剤がＰＤ－Ｌ１アンタゴニストであり、任意選択で、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストが、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片である、請求項４５に記載の使用。

【請求項47】

ＣＤ２７６関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片の使用。

【請求項48】

ＣＤ２７６、任意選択で、組換えＣＤ２７６、細胞表面に発現されたＣＤ２７６またはＣＤ２７６を発現する細胞の検出において有用な、請求項１から２２のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合断片を含むキット。

【請求項49】

抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域およびＴＣＲシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、抗原結合ドメインが、ＣＤ２７６と特異的に結合し、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。

【請求項50】

抗原結合断片が、ＦａｂまたはｓｃＦｖである、請求項４９に記載のＣＡＲ。

【請求項51】

二重特異性である、請求項４９または５０に記載のＣＡＲ。

【請求項52】

ＣＡＲが、ＣＤ２７６以外の第２の抗原またはＣＤ２７６上の第２のエピトープとさらに特異的に結合可能である、請求項５１に記載のＣＡＲ。

【請求項53】

第２の抗原が腫瘍抗原である、請求項５２に記載のＣＡＲ。

【請求項54】

ＴＣＲシグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＦｃｃＲＩγ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＣＤ２７８、ＴＬＲまたはそれらの組合せの細胞内シグナル領域配列からなる群から選択される、請求項４９に記載のＣＡＲ。

【請求項55】

膜貫通領域が、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の膜貫通領域を含む、請求項４９に記載のＣＡＲ。

【請求項56】

請求項４９から５５のいずれか一項に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列。

【請求項57】

請求項５６に記載の核酸配列を含む細胞。

【請求項58】

請求項４９から５５のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞。

【請求項59】

細胞が免疫細胞であり、任意選択で、免疫細胞が、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたはＮＫＴリンパ球である、請求項５８に記載の細胞。

【請求項60】

請求項５６に記載の核酸配列を含むベクター。

【請求項61】

哺乳動物においてＣＤ２７６を発現する細胞または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激するための方法であって、哺乳動物に、請求項４９から５５のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞の有効量を投与することを含む、方法。

【請求項62】

ＣＤ２７６関連疾患または状態を有する哺乳動物を処置する方法であって、哺乳動物に請求項５７または５８に記載の細胞の有効量を投与し、それによって哺乳動物を処置することを含む、方法。

【請求項63】

細胞が自己Ｔ細胞である、請求項６２に記載の方法。

【請求項64】

ＣＤ２７６関連疾患または状態が、癌である、請求項６２に記載の方法。

【請求項65】

哺乳動物がヒト対象である、請求項６２に記載の方法。

【請求項66】

哺乳動物においてＣＤ２７６を発現する細胞または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激するための医薬の製造における、請求項４９～５５のいずれか一項に記載のＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞の使用。

【請求項67】

ＣＤ２７６関連疾患または状態を有する哺乳動物を処置するための医薬の製造における、請求項５７または５８に記載の細胞の使用。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

本開示は、概して、新規抗ＣＤ２７６抗体に関する。

【背景技術】

【0002】

Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６、ヒトアミノ酸配列についてのＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｑ５ＺＰＲ３およびマウスアミノ酸配列：Ｑ８ＶＥ９８）は、Ｂ７およびＣＤ２８ファミリーの新たに発見された重要な免疫チェックポイントメンバーであり、これは、細胞外ドメインによって決定される２つのアイソフォームに存在するＩ型膜貫通共刺激分子である。マウスでは、細胞外ドメインは単一の対の免疫グロブリン可変（ＩｇＶ）様ドメインおよび免疫グロブリン定常（ＩｇＣ）様ドメインから構成されるが、ヒトでは、それはエクソン重複に起因して一対（２Ｉｇ－Ｂ７－Ｈ３）または２つの同一の対（４Ｉｇ－Ｂ７－Ｈ３）から構成される。Ｂ７－Ｈ３ ｍＲＮＡはほとんどの組織において広く分布しており、対照的に、Ｂ７－Ｈ３タンパク質は、マイクロＲＮＡによる転写後制御のために、正常組織上で非常に制限された発現を有する。しかしながら、Ｂ７－Ｈ３タンパク質は、多くの異なる癌型（すべての癌の６０％）において高頻度で発現する（「Ｂ７－Ｈ３：ａｎ ａｔｔｒａｃｔｉｖｅ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｃｌｉｎｃａｎｒｅｓ．２５８４．２０２０）。

【0003】

Ｂ７－Ｈ３の機能については議論の余地がある。これは、腫瘍抗原特異的免疫応答を阻害するＴ細胞活性化のための共刺激分子、または遊走、腫瘍成長、浸潤、転移、悪性期、再発率、血管新生、化学抵抗性、上皮から間葉への移行の促進、および腫瘍細胞代謝への影響などの非免疫学的役割のいずれかとして分類された。Ｂ７－Ｈ３に対する受容体は、Ｂ７－Ｈ３に結合し、特にＣＤ８ Ｔ細胞の活性化を共刺激する骨髄細胞（ＴＲＥＭ）様転写物２（ＴＬＴ－２またはＴＲＥＭＬ２）上で発現するトリガー受容体であることが報告されている。Ｂ７－Ｈ３はまた、未知の受容体をライゲーションすることにより、ＮＫ細胞および骨芽細胞に対する阻害剤であることも報告されている。（Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ Ｂ７－Ｈ３，ＰＮＡＳ Ｊｕｌｙ ２９，２００８，１０５（３０）１０２７７－１０２７８）。Ｂ７－Ｈ３を遮断するモノクローナル抗体による処置は、癌処置のための主要な免疫療法戦略である。

【0004】

阻害性免疫チェックポイント遮断剤（ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１およびＰＤ－Ｌ１）の臨床的成功に基づくと、ＣＤ２７６に対するｍＡｂは開発に値する有望な治療戦略であるように見える。固形腫瘍上でのその選択的発現に起因して、いくつかのグループが、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）、オンブルタマブ、ＭＧＤ００９、ＭＧＣ０１８、ＤＳ－７３００ａおよびＣＡＲ Ｔ細胞などの抗ＣＤ２７６抗体を生成しており（「Ｂ７－Ｈ３：ａｎ ａｔｔｒａｃｔｉｖｅ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ」．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：ｃｌｉｎｃａｎｒｅｓ．２５８４．２０２０）、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍成長抑制を観察した。ＣＤ２７６はまた、血液腫瘍細胞において発現することが報告されており（Ｗｅｉ Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂ７ Ｆａｍｉｌｙ Ｍｅｍｂｅｒｓ ｉｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ：Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ Ｎｏｖｅｌ Ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ？ Ｆｒｏｎｔ．Ｏｎｃｏｌ．，３１ Ｍａｒｃｈ ２０２１を参照のこと）、ＣＤ２７６は、血液癌を処置するための潜在的標的でもあり得ることを示している。

【0005】

ＣＤ２７６を標的とする治療薬の開発にもかかわらず、新規抗ＣＤ２７６抗体が大いに必要である。

【発明の概要】

【0006】

本開示を通じて、冠詞「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、本明細書において、冠詞の文法的対象の１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ）を指すために使用される。例として、「１種の抗体」は、１種の抗体または１種より多い抗体を意味する。

【0007】

本開示は、新規抗ＣＤ２７６抗体分子、そのアミノ酸およびヌクレオチド配列ならびにその使用を提供する。

【0008】

一態様では、本開示は、配列番号１～３、９～１１、１７～１９、２５～２７、３３～３５、４１～４３、４９～５１、５７～５９、６５～６７、７３～７５、８１～８３、８９～９１、９７～９９、１０５～１０７、１１３～１１５、１２１～１２３、１２９～１３１、１３７～１３９、１４５～１４７、１５３～１５５、１６１～１６３、１６９～１７１、１７７～１７９、１８５～１８７、１９３～１９５、２０１～２０３、２０９～２１１、２１７～２１９、２２５～２２７、２３３～２３５、２４１～２４３、２４９～２５１、２５７～２５９、２６５～２６７、２７３～２７５、２８１～２８３、２８９～２９１、２９７～２９９、３０５～３０７、３１３～３１５、３２１～３２３、３２９～３３１、３３７～３３９および３７４～３７５からなる群から選択される１、２もしくは３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）配列ならびに／または配列番号４～６、１２～１４、２０～２２、２８～３０、３６～３８、４４～４６、５２～５４、６０～６２、６８～７０、７６～７８、８４～８６、９２～９４、１００～１０２、１０８～１１０、１１６～１１８、１２４～１２６、１３２～１３４、１４０～１４２、１４８～１５０、１５６～１５８、１６４～１６６、１７２～１７４、１８０～１８１、１８８～１９０、１９６～１９８、２０４～２０６、２１２～２１４、２２０～２２２、２２８～２３０、２３６～２３８、２４４～２４６、２５２～２５４、２６０～２６２、２６８～２７０、２７６～２７８、２８４～２８６、２９２～２９４、３００～３０２、３０８～３１０、３１６～３１８、３２４～３２６、３３２～３３４、３４０～３４２および３７６～３７７からなる群から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＣＤＲ配列を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0009】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１～３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂ）配列番号９～１１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃ）配列番号１７～１９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄ）配列番号２５～２７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅ）配列番号３３～３５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆ）配列番号４１～４３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇ）配列番号４９～５１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｈ）配列番号５７～５９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｉ）配列番号６５～６７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｊ）配列番号７３～７５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｋ）配列番号８１～８３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｌ）配列番号８９～９１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｍ）配列番号９７～９９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｎ）配列番号１０５～１０７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１３～１１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２１～１２３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｑ）配列番号１２９～１３１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｒ）配列番号１３７～１３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｓ）配列番号１４５～１４７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５３～１５５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６１～１６３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｖ）配列番号１６９～１７１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｗ）配列番号１７７～１７９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｘ）配列番号１８５～１８７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９３～１９５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０１～２０３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ａａ）配列番号２０９～２１１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２１７～２１９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２２５～２２７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３３～２３５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４１～２４３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２４９～２５１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２５７～２５９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２６５～２６７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７３～２７５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８１～２８３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２８９～２９１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号２９７～２９９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３０５～３０７から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１３～３１５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２１～３２３から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３２９～３３１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３３７～３３９から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに
ｒｒ）配列番号９、３７４および３７５から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域
からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号４～６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１２～１４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号２０～２２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号２８～３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３６～３８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号４４～４６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号５２～５４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号６０～６２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号６８～７０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号７６～７８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号８４～８６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９２～９４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１００～１０２、１０８～１１０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号１０８～１１０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１６～１１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２４～１２６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号１３２～１３４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号１４０～１４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号１４８～１５０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５６～１５８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６４～１６６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号１７２～１７４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号１８０～１８１から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｘ）配列番号１８８～１９０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９６～１９８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０４～２０６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ａａ）配列番号２１２～２１４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２２０～２２２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２２８～２３０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３６～２３８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４４～２４６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２５２～２５４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２６０～２６２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２６８～２７０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７６～２７８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８４～２８６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２９２～２９４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号３００～３０２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３０８～３１０から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１６～３１８から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２４～３２６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３３２～３３４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３４０～３４２から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｒｒ）配列番号３７６、１３および１４から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、ならびに
ｓｓ）配列番号３７７、４５および４６から選択される１、２または３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域
からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む。

【0011】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１、配列番号２および配列番号３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４、配列番号５および配列番号６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号９、配列番号１０および配列番号１１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１２、配列番号１３および配列番号１４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号１７、配列番号１８および配列番号１９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２８、配列番号２９および配列番号３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３３、配列番号３４および配列番号３５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３６、配列番号３７および配列番号３８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号４４、配列番号４５および配列番号４６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号４９、配列番号５０および配列番号５１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号５２、配列番号５３および配列番号５４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号５７、配列番号５８および配列番号５９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号６０、配列番号６１および配列番号６２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号６５、配列番号６６および配列番号６７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号６８、配列番号６９および配列番号７０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号７３、配列番号７４および配列番号７５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号７６、配列番号７７および配列番号７８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号８１、配列番号８２および配列番号８３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号８４、配列番号８５および配列番号８６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号８９、配列番号９０および配列番号９１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号９２、配列番号９３および配列番号９４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号９７、配列番号９８および配列番号９９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１００、配列番号１０１および配列番号１０２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号１０５、配列番号１０６および配列番号１０７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１０８、配列番号１０９および配列番号１１０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１３、配列番号１１４および配列番号１１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１１６、配列番号１１７および配列番号１１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２１、配列番号１２２および配列番号１２３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１２４、配列番号１２５および配列番号１２６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号１２９、配列番号１３０および配列番号１３１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１３２、配列番号１３３および配列番号１３４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号１３７、配列番号１３８および配列番号１３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１４０、配列番号１４１および配列番号１４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号１４５、配列番号１４６および配列番号１４７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１４８、配列番号１４９および配列番号１５０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５３、配列番号１５４および配列番号１５５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１５６、配列番号１５７および配列番号１５８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６１、配列番号１６２および配列番号１６３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１６４、配列番号１６５および配列番号１６６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号１６９、配列番号１７０および配列番号１７１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１７２、配列番号１７３および配列番号１７４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号１７７、配列番号１７８および配列番号１７９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１８０、配列番号１８１および配列番号１８２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｘ）配列番号１８５、配列番号１８６および配列番号１８７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１８８、配列番号１８９および配列番号１９０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９３、配列番号１９４および配列番号１９５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号１９６、配列番号１９７および配列番号１９８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０１、配列番号２０２および配列番号２０３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２０４、配列番号２０５および配列番号２０６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ａａ）配列番号２０９、配列番号２１０および配列番号２１１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２１２、配列番号２１３および配列番号２１４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２１７、配列番号２１８および配列番号２１９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２２０、配列番号２２１および配列番号２２２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２２５、配列番号２２６および配列番号２２７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２２８、配列番号２２９および配列番号２３０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３３、配列番号２３４および配列番号２３５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２３６、配列番号２３７および配列番号２３８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４１、配列番号２４２および配列番号２４３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２４４、配列番号２４５および配列番号２４６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２４９、配列番号２５０および配列番号２５１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２５２、配列番号２５３および配列番号２５４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２５７、配列番号２５８および配列番号２５９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２６０、配列番号２６１および配列番号２６２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２６５、配列番号２６６および配列番号２６７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２６８、配列番号２６９および配列番号２７０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７３、配列番号２７４および配列番号２７５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２７６、配列番号２７７および配列番号２７８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８１、配列番号２８２および配列番号２８３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２８４、配列番号２８５および配列番号２８６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２８９、配列番号２９０および配列番号２９１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号２９２、配列番号２９３および配列番号２９４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号２９７、配列番号２９８および配列番号２９９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３００、配列番号３０１および配列番号３０２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３０５、配列番号３０６および配列番号３０７から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３０８、配列番号３０９および配列番号３１０から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１３、配列番号３１４および配列番号３１５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３１６、配列番号３１７および配列番号３１８から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２１、配列番号３２２および配列番号３２３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３２４、配列番号３２５および配列番号３２６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３２９、配列番号３３０および配列番号３３１から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３３２、配列番号３３３および配列番号３３４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３３７、配列番号３３８および配列番号３３９から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３４０、配列番号３４１および配列番号３４２から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｒｒ）配列番号９、配列番号３７４および配列番号３７５から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３７６、配列番号１３および配列番号１４から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
ｓｓ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域ならびに配列番号３７７、配列番号４５および配列番号４６から選択される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域
を含む。

【0012】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、配列番号７、配列番号１５、配列番号２３、配列番号３１、配列番号３９、配列番号４７、配列番号５５、配列番号６３、配列番号７１、配列番号７９、配列番号８７、配列番号９５、配列番号１０３、配列番号１１１、配列番号１１９、配列番号１２７、配列番号１３５、配列番号１４３、配列番号１５１、配列番号１５９、配列番号１６７、配列番号１７５、配列番号１８３、配列番号１９１、配列番号１９９、配列番号２０７、配列番号２１５、配列番号２２３、配列番号２３１、配列番号２３９、配列番号２４７、配列番号２５５、配列番号２６３、配列番号２７１、配列番号２７９、配列番号２８７、配列番号２９５、配列番号３０３、配列番号３１１、配列番号３１９、配列番号３２７、配列番号３３５、配列番号３４３、配列番号３４７、および配列番号３４９、ならびにそれらの少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）配列同一性のある相同配列からなる群から選択される重鎖可変領域を含む。

【0013】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、配列番号８、配列番号１６、配列番号２４、配列番号３２、配列番号４０、配列番号４８、配列番号５６、配列番号６４、配列番号７２、配列番号８０、配列番号８８、配列番号９６、配列番号１０４、配列番号１１２、配列番号１２０、配列番号１２８、配列番号１３６、配列番号１４４、配列番号１５２、配列番号１６０、配列番号１６８、配列番号１７５６、配列番号１８４、配列番号１９２、配列番号２００、配列番号２０８、配列番号２１６、配列番号２２４、配列番号２３２、配列番号２４０、配列番号２４８、配列番号２５６、配列番号２６４、配列番号２７２、配列番号２８０、配列番号２８８、配列番号２９６、配列番号３０４、配列番号３１２、配列番号３２０、配列番号３２８、配列番号３３６、配列番号３４４、配列番号３４８、および配列番号３５０ならびにそれらの少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）配列同一性のある相同配列からなる群から選択される軽鎖可変領域を含む。

【0014】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号７を含む重鎖可変領域および配列番号８を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号１５を含む重鎖可変領域および配列番号１６を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号２３を含む重鎖可変領域および配列番号２４を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号３１を含む重鎖可変領域および配列番号３２を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３９を含む重鎖可変領域および配列番号４０を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号４７を含む重鎖可変領域および配列番号４８を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号５５を含む重鎖可変領域および配列番号５６を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号６３を含む重鎖可変領域および配列番号６４を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号７１を含む重鎖可変領域および配列番号７２を含む軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号７９を含む重鎖可変領域および配列番号８０を含む軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号８７を含む重鎖可変領域および配列番号８８を含む軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号９５を含む重鎖可変領域および配列番号９６を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号１０３を含む重鎖可変領域および配列番号１０４を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号１１１を含む重鎖可変領域および配列番号１１２を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号１１９を含む重鎖可変領域および配列番号１２０を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号１２７を含む重鎖可変領域および配列番号１２８を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号１３５を含む重鎖可変領域および配列番号１３６を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号１４３を含む重鎖可変領域および配列番号１４４を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号１５１を含む重鎖可変領域および配列番号１５２を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号１５９を含む重鎖可変領域および配列番号１６０を含む軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号１６７を含む重鎖可変領域および配列番号１６８を含む軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号１７５を含む重鎖可変領域および配列番号１７６を含む軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号１８３を含む重鎖可変領域および配列番号１８４を含む軽鎖可変領域、
ｘ）配列番号１９１を含む重鎖可変領域および配列番号１９２を含む軽鎖可変領域、
ｙ）配列番号１９９を含む重鎖可変領域および配列番号２００を含む軽鎖可変領域、
ｚ）配列番号２０７を含む重鎖可変領域および配列番号２０８を含む軽鎖可変領域、
ａａ）配列番号２１５を含む重鎖可変領域および配列番号２１６を含む軽鎖可変領域、
ｂｂ）配列番号２２３を含む重鎖可変領域および配列番号２２４を含む軽鎖可変領域、
ｃｃ）配列番号２３１を含む重鎖可変領域および配列番号２３２を含む軽鎖可変領域、
ｄｄ）配列番号２３９を含む重鎖可変領域および配列番号２４０を含む軽鎖可変領域、
ｅｅ）配列番号２４７を含む重鎖可変領域および配列番号２４８を含む軽鎖可変領域、
ｆｆ）配列番号２５５を含む重鎖可変領域および配列番号２５６を含む軽鎖可変領域、
ｇｇ）配列番号２６３を含む重鎖可変領域および配列番号２６４を含む軽鎖可変領域、
ｈｈ）配列番号２７１を含む重鎖可変領域および配列番号２７２を含む軽鎖可変領域、
ｉｉ）配列番号２７９を含む重鎖可変領域および配列番号２８０を含む軽鎖可変領域、
ｊｊ）配列番号２８７を含む重鎖可変領域および配列番号２８８を含む軽鎖可変領域、
ｋｋ）配列番号２９５を含む重鎖可変領域および配列番号２９６を含む軽鎖可変領域、
ｌｌ）配列番号３０３を含む重鎖可変領域および配列番号３０４を含む軽鎖可変領域、
ｍｍ）配列番号３１１を含む重鎖可変領域および配列番号３１２を含む軽鎖可変領域、
ｎｎ）配列番号３１９を含む重鎖可変領域および配列番号３２０を含む軽鎖可変領域、
ｏｏ）配列番号３２７を含む重鎖可変領域および配列番号３２８を含む軽鎖可変領域、
ｐｐ）配列番号３３５を含む重鎖可変領域および配列番号３３６を含む軽鎖可変領域、
ｑｑ）配列番号３４３を含む重鎖可変領域および配列番号３４４を含む軽鎖可変領域、
ｒｒ）配列番号３４７を含む重鎖可変領域および配列番号３４８を含む軽鎖可変領域、または
ｓｓ）配列番号３４９を含む重鎖可変領域および配列番号３５０を含む軽鎖可変領域
を含む。

【0015】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化されたものである。

【0016】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３７８(EVQLVESGGGLXQPGXSLRLSCXTSGFTLSDYYMSWVRQXPGKGLEWVXFMRNKANXYTTEYSASVRGRFTISRDTSKSXIYLQMNSLXXEDTAVYYCVRDRXGRPFAYWGQGTLVTVSS)を含み、配列番号３７８のｉ位（ｉ＝１２、１６、２３、４０、４９、５７、８０、８９、９０および１０３）におけるＸは、Ｘ_Ｈｉと称され、Ｘ_Ｈ１２は、ＶまたはＩであり、ＸＨ_１６は、ＧまたはＲであり、Ｘ_Ｈ２３は、ＡまたはＴであり、Ｘ_Ｈ４０は、ＡまたはＰであり、Ｘ_Ｈ４９は、ＧまたはＳであり、Ｘ_Ｈ５７は、ＡまたはＧであり、Ｘ_Ｈ８０は、ＩまたはＴであり、Ｘ_Ｈ８９は、ＲまたはＫであり、Ｘ_Ｈ９０は、ＡまたはＴであり、Ｘ_Ｈ１０３は、ＤまたはＥである、重鎖可変領域、および配列番号３７９(DIXMTQSPXSLXXXXGXXXXIXCKSSQSLLNXINQKNFLTWYXQKPGXXPXLLIYWASTRESGVPXRFSGSGSGTDFTLXISXXXXEDLXXYYCQNDYTYPLTFGQGTKLEIK)を含み、配列番号３７９のｉ位（ｉ＝３、９、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２２、３２、４３、４８、４９、５１、６６、８０、８３、８４、８５、８６、９０および９１）におけるＸは、Ｘ_Ｌｉと称され、Ｘ_Ｌ３は、ＶまたはＱであり、Ｘ_Ｌ９は、Ｄ、ＬまたはＳであり、Ｘ_Ｌ１２は、Ａ、ＳまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１３は、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ１４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ１５は、Ｌ、ＶまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１７は、ＤまたはＥであり、Ｘ_Ｌ１８は、ＲまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１９は、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ２０は、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ２２は、Ｎ、ＴまたはＳであり、Ｘ_Ｌ３２は、ＡまたはＳであり、Ｘ_Ｌ４３は、ＱまたはＬであり、Ｘ_Ｌ４８は、ＱまたはＫであり、Ｘ_Ｌ４９は、Ａ、ＰまたはＳであり、Ｘ_Ｌ５１は、ＫまたはＱであり、Ｘ_Ｌ６６は、ＳまたはＤであり、Ｘ_Ｌ８０は、ＫまたはＴであり、Ｘ_Ｌ８３は、ＲまたはＳであり、Ｘ_Ｌ８４は、ＬまたはＶであり、Ｘ_Ｌ８５は、ＱまたはＥであり、Ｘ_Ｌ８６は、ＡまたはＰであり、Ｘ_Ｌ９０は、ＡまたはＧであり、Ｘ_Ｌ９１は、ＴまたはＶである、軽鎖可変領域を含む。

【0017】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３８０(QVQLQESGPGLVKPSXTLSLTCXVXGYSITSDYAWNWIRQXPGKGLEWIGYISHSGSTSYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARSLGRRWYFDVWGQGTTVTVSS)を含み、配列番号３８０のｉ位（ｉ＝１６、２３、２５および４１）におけるＸは、Ｘ_Ｈｉと称され、Ｘ_Ｈ１６は、ＥまたはＱであり、Ｘ_Ｈ２３は、ＡまたはＴであり、Ｘ_Ｈ２５は、ＳまたはＹであり、Ｘ_Ｈ４１は、ＨまたはＰである、重鎖可変領域、および配列番号３８１(DIXMTQSPXSLXXXXGXXXXIXCKSSQSLLXSSTQKNYLAWYXQKPGXXPXLLIYFASTRDSGVPXRFSGSGSGTDFTLXISXXXXEDLXXYFCQQHYIIPFTFGQGTKLEIK)を含み、配列番号３８１のｉ位（ｉ＝３、９、１２、１３、１４、１５、１７、１８、１９、２０、２２、３１、４３、４８、４９、５１、６６、８０、８３、８４、８５、８６、９０および９１）におけるＸは、Ｘ_Ｌｉと称され、Ｘ_Ｌ３は、ＶまたはＱであり、Ｘ_Ｌ９は、Ｄ、ＬまたはＳであり、Ｘ_Ｌ１２は、Ａ、ＳまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１３は、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ１４は、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ１５は、Ｌ、ＶまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１７は、ＤまたはＥであり、Ｘ_Ｌ１８は、ＲまたはＰであり、Ｘ_Ｌ１９は、ＡまたはＶであり、Ｘ_Ｌ２０は、ＳまたはＴであり、Ｘ_Ｌ２２は、Ｎ、ＴまたはＳであり、Ｘ_Ｌ３１は、ＮまたはＱであり、Ｘ_Ｌ４３は、ＱまたはＬであり、Ｘ_Ｌ４８は、ＱまたはＫであり、Ｘ_Ｌ４９は、Ａ、ＰまたはＳであり、Ｘ_Ｌ５１は、ＫまたはＱであり、Ｘ_Ｌ６６は、ＳまたはＤであり、Ｘ_Ｌ８０は、ＫまたはＴであり、Ｘ_Ｌ８３は、ＲまたはＳであり、Ｘ_Ｌ８４は、ＬまたはＶであり、Ｘ_Ｌ８５は、ＱまたはＥであり、Ｘ_Ｌ８６は、ＡまたはＰであり、Ｘ_Ｌ９０は、ＡまたはＧであり、Ｘ_Ｌ９１は、ＴまたはＶである、軽鎖可変領域を含む。

【0018】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
（ｉ）配列番号９、配列番号１０もしくは３７４（ＭＲＮＫＡＮＡＹＴＴ）および配列番号１１もしくは３７５（ＶＲＤＲＥＧＲＰＦＡＹ）としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号１２もしくは３７６（ＱＳＬＬＮＡＩＮＱＫＮＦ）、配列番号１３および配列番号１４としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域、または
（ｉｉ）配列番号４１、配列番号４２および配列番号４３としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号４４もしくは３７７（ＱＳＬＬＱＳＳＴＱＫＮＹ）、配列番号４５および配列番号４６としてそれぞれ示される１、２もしくは３つのＣＤＲ配列を含むカッパ軽鎖可変領域を含む。

【0019】

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５１、３５３、３５５、３５７、３５８、３６０、３６２、３６４、３６５、３６７および３７０から選択される配列を含む重鎖可変領域、ならびに配列番号３５２、３５４、３５６、３５９、３６１、３６３、３６６、３６８、３６９、３７１、３７２および３７３から選択される配列を含む軽鎖可変領域を含む。

【0020】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号３５１を含む重鎖可変領域および配列番号３５２を含む軽鎖可変領域、
ｂ）配列番号３５３を含む重鎖可変領域および配列番号３５４を含む軽鎖可変領域、
ｃ）配列番号３５５を含む重鎖可変領域および配列番号３５２を含む軽鎖可変領域、
ｄ）配列番号３５５を含む重鎖可変領域および配列番号３５６を含む軽鎖可変領域、
ｅ）配列番号３５７を含む重鎖可変領域および配列番号３５２を含む軽鎖可変領域、
ｆ）配列番号３５７を含む重鎖可変領域および配列番号３５４を含む軽鎖可変領域、
ｇ）配列番号３５８を含む重鎖可変領域および配列番号３５９を含む軽鎖可変領域、
ｈ）配列番号３６０を含む重鎖可変領域および配列番号３６１を含む軽鎖可変領域、
ｉ）配列番号３６２を含む重鎖可変領域および配列番号３５９を含む軽鎖可変領域、
ｊ）配列番号３６２を含む重鎖可変領域および配列番号３６３を含む軽鎖可変領域、
ｋ）配列番号３６４を含む重鎖可変領域および配列番号３５９を含む軽鎖可変領域、
ｌ）配列番号３６４を含む重鎖可変領域および配列番号３６１を含む軽鎖可変領域、
ｍ）配列番号３６５を含む重鎖可変領域および配列番号３６６を含む軽鎖可変領域、
ｎ）配列番号３６７を含む重鎖可変領域および配列番号３６８を含む軽鎖可変領域、
ｏ）配列番号３６７を含む重鎖可変領域および配列番号３６９を含む軽鎖可変領域、
ｐ）配列番号３６７を含む重鎖可変領域および配列番号３６６を含む軽鎖可変領域、
ｑ）配列番号３７０を含む重鎖可変領域および配列番号３６９を含む軽鎖可変領域、
ｒ）配列番号３７０を含む重鎖可変領域および配列番号３６６を含む軽鎖可変領域、
ｓ）配列番号３６５を含む重鎖可変領域および配列番号３７１を含む軽鎖可変領域、
ｔ）配列番号３６７を含む重鎖可変領域および配列番号３７２を含む軽鎖可変領域、
ｕ）配列番号３６７を含む重鎖可変領域および配列番号３７３を含む軽鎖可変領域、
ｖ）配列番号３６７を含む重鎖可変領域および配列番号３７１を含む軽鎖可変領域、
ｗ）配列番号３７０を含む重鎖可変領域および配列番号３７３を含む軽鎖可変領域、または
ｘ）配列番号３７０を含む重鎖可変領域および配列番号３７１を含む軽鎖可変領域
を含む。

【0021】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数のアミノ酸残基置換または修飾をさらに含むが、ヒトＣＤ２７６に対する特異的結合親和性を保持する。

【0022】

いくつかの実施形態では、置換は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列中、および／またはＶＨもしくはＶＬ配列の１つもしくは複数にあるが、ＣＤＲ配列のいずれにもない。

【0023】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域、任意選択で、ヒトＩｇの定常領域、または任意選択で、ヒトＩｇＧの定常領域をさらに含む。

【0024】

いくつかの実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の定常領域を含む。

【0025】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、キメラまたはヒト化されたものである。

【0026】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディー、ドメイン抗体および二価ドメイン抗体である。

【0027】

いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、１つまたは複数のコンジュゲートと連結している。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、直接またはリンカーを介してのいずれかで共有結合によって結合している。

【0028】

いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、クリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤または他の抗癌薬を含む。

【0029】

いくつかの実施形態では、抗体または抗原結合断片は、ＣＤ２７６と特異的に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６は、ヒト由来する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６は、組換えＣＤ２７６または細胞表面上に発現されたＣＤ２７６である。

【0030】

一態様では、本開示は、同一エピトープについて本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と競合する抗体またはその抗原結合断片を提供する。

【0031】

一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。

【0032】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物は、第２の治療剤をさらに含む。

【0033】

いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、１つまたは複数の免疫抑制分子に対するアンタゴニストである。

【0034】

いくつかの実施形態では、第２の治療剤はＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。

【0035】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片である。

【0036】

一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。

【0037】

一態様では、本開示は、本明細書において提供される単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。

【0038】

一態様では、本開示は、本明細書において提供されるベクターを含む宿主細胞を提供する。

【0039】

一態様では、本開示は、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を発現させる方法であって、本明細書において提供される宿主細胞を、本明細書において提供されるベクターが発現される条件下で培養することを含む方法を提供する。

【0040】

一態様では、本開示は、ＣＤ２７６活性の調節から恩恵を受けるであろう対象における疾患または状態を処置する方法であって、対象に、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片または本明細書において提供される医薬組成物の治療上有効な量を投与することを含む方法を提供する。

【0041】

いくつかの実施形態では、疾患または状態は、ＣＤ２７６関連疾患または状態である。

【0042】

いくつかの実施形態では、疾患または状態は、癌、適応免疫疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患である。

【0043】

いくつかの実施形態では、癌は、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞巣状軟部肉腫、星状膠細胞腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素細胞性腎癌腫、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症〔fibrogenesis imperfecta ossium〕、線維性骨異形成症、胆嚢または胆管癌、胃癌〔gastric cancer〕、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、頭頸部癌、肝細胞癌腫、膵島腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌腫、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、希少血液障害、転移性腎癌、横紋筋肉腫様腫瘍、横紋筋肉腫〔rhabdomysarcoma〕、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌〔stomach cancer〕、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌腫、胸腺腫、甲状腺転移性癌ならびに子宮癌であり、任意選択で、癌は化学療法抵抗性である。

【0044】

いくつかの実施形態では、疾患または状態は、Ｂ細胞リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、リヒター症候群、バーキットリンパ腫または濾胞性リンパ腫から選択される血液癌である。

【0045】

いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

【0046】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される方法は、対象に１つまたは複数の治療剤の治療上有効な量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、前記治療剤は、化学療法剤、放射線療法剤、ホルモン治療剤、毒素または免疫療法剤である。

【0047】

いくつかの実施形態では、第２の治療剤はＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。

【0048】

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片である。

【0049】

いくつかの実施形態では、投与は、経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下または筋肉内投与による。

【0050】

いくつかの実施形態では、前記方法は、化学療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法および外科手術からなる群から選択される１つまたは複数の追加の癌治療の投与をさらに含む。

【0051】

一態様では、本開示は、ＣＤ２７６を発現する細胞においてＣＤ２７６活性を調節する方法であって、ＣＤ２７６を発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む方法を提供する。

【0052】

一態様では、本開示は、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することとを含む方法を提供する。

【0053】

一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）対象から得られたサンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ２７６の存在または量を、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態の存在または状況と相関させることとを含む方法を提供する。

【0054】

一態様では、本開示は、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。

【0055】

いくつかの実施形態では、医薬は第２の治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療剤は、化学療法剤、放射線療法剤、ホルモン療法剤、毒素または免疫療法剤である。

【0056】

いくつかの実施形態では、第２の治療剤はＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片である。

【0057】

一態様では、本開示は、ＣＤ２７６関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。

【0058】

一態様では、本開示は、ＣＤ２７６、任意選択で、組換えＣＤ２７６、細胞表面に発現されたＣＤ２７６またはＣＤ２７６を発現する細胞の検出において有用な、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を含むキットを提供する。

【0059】

一態様では、本開示は、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域およびＴＣＲシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、抗原結合ドメインが、ＣＤ２７６と特異的に結合し、本明細書において提供される抗原結合断片を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供する。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、ＦａｂまたはｓｃＦｖである。

【0060】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供されるＣＡＲは二重特異性である。

【0061】

いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２７６以外の第２の抗原またはＣＤ２７６上の第２のエピトープとさらに特異的に結合可能である。いくつかの実施形態では、第２の抗原は腫瘍抗原である。

【0062】

いくつかの実施形態では、ＴＣＲシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＦｃｃＲＩγ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＣＤ２７８、ＴＬＲまたはそれらの組合せの細胞内シグナル領域配列からなる群から選択される。

【0063】

いくつかの実施形態では、膜貫通領域は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の膜貫通領域を含む。

【0064】

一態様では、本開示は、本明細書において提供されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする核酸配列を提供する。一態様では、本開示は、本明細書において提供される核酸配列を含む細胞を提供する。

【0065】

一態様では、本開示は、本明細書において提供されるＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞を提供する。

【0066】

いくつかの実施形態では、細胞は免疫細胞であり、任意選択で、免疫細胞は、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたはＮＫＴリンパ球である。

【0067】

一態様では、本開示は、本明細書において提供される核酸配列を含むベクターを提供する。

【0068】

一態様では、本開示は、哺乳動物においてＣＤ２７６を発現する細胞または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激するための方法であって、哺乳動物に、本明細書において提供されるＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞の有効量を投与することを含む方法を提供する。

【0069】

一態様では、本開示は、ＣＤ２７６関連疾患または状態を有する哺乳動物を処置する方法であって、哺乳動物に、本明細書において提供される細胞の有効量を投与し、それによって哺乳動物を処置することを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は自己Ｔ細胞である。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６関連疾患または状態は、癌である。

【0071】

いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒト対象である。

【0072】

一態様では、本開示は、哺乳動物においてＣＤ２７６を発現する細胞または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激するための医薬の製造における、本明細書において提供されるＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞の使用を提供する。

【0073】

一態様では、本開示は、ＣＤ２７６関連疾患または状態を有する哺乳動物を処置するための医薬の製造における、本明細書において提供される細胞の使用を提供する。

【0074】

図面は例示のみを目的としており、限定を目的とするものではない。

【図面の簡単な説明】

【0075】

【図1】図１は、ＦＡＣ解析によって測定された、ＳＫＯＶ３細胞に対する本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体の結合親和性を示す。

【図2】図２Ａ～２Ｅは、ＦＡＣＳ解析によって測定された、Ｂ７Ｈ３を発現するいくつかの癌細胞株に対する６－Ｄ８－Ｅ７－Ａ１１の結合を示す。

【図3】図３Ａ～図３Ｃは、ＳＫＯＶ３細胞に対する本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体のＡＤＣＣ効果を示す。

【図4】図４Ａおよび図４Ｂは、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６細胞に対する本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体のＣＤＣ効果を示す。

【図5-1】図５Ａ～図５Ｃは、ＳＫＯＶ３細胞に対する本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体の間接的なＡＤＣ細胞傷害効果を示す。

【図5-2】図５Ｄおよび図５Ｅは、ＳＫＯＶ３細胞に対する本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体の間接的なＡＤＣ細胞傷害効果を示す。

【図6】図６は、ＭＣ－３８－ｈＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）腫瘍細胞を接種したマウスモデルにおける腫瘍成長を阻害する際の、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。

【図7】図７は、ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの皮下ｃａｌｕ－６モデルにおける腫瘍成長に対する効果を示す（平均±ｓｅｍ）。

【図8】図８は、ＭＬＲアッセイにおけるＴ細胞活性化によるＩＬ２放出を示す。

【図9】図９は、ＭＬＲアッセイにおけるＴ細胞活性化によるＩＦＮγ放出を示す。

【図10】図１０は、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４に由来するヒト化抗体のＳＫＯＶ３に対する結合親和性を示す。

【図11】図１１は、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２に由来するヒト化抗体のＳＫＯＶ３に対する結合親和性を示す。

【図12】図１２は、Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの皮下Ｃａｌｕ－６モデルにおける腫瘍成長に対する効果を示す（平均±ＳＥＭ）。

【発明を実施するための形態】

【0076】

本開示の以下の説明は、単に、本開示の種々の実施形態を例示するよう意図される。そのようなものとして、論じられる特定の改変は、本開示の範囲に対する制限と解釈されてはならない。本開示の範囲から逸脱することなく、種々の等価物、変法および改変が行われ得ることは当業者には明らかであり、また、このような同等な実施形態は、本明細書に含まれるべきであるということが理解される。刊行物、特許および特許出願を含む本明細書において引用されたすべての参考文献は、参照によりその全文で本明細書に組み込まれる。

【0077】

定義
用語「抗体」は、本明細書において、特異的抗原と結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価特異性または一価抗体を含む。天然の無傷の抗体は、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物重鎖は、α、δ、ε、γおよびμとして分類され、各重鎖は、可変領域（Ｖ_Ｈ）およびａ第１の、第２の、および第３の定常領域（それぞれ、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、Ｃ_Ｈ３）からなり、哺乳動物軽鎖は、λまたはκとして分類され、各軽鎖は、可変領域（Ｖ_Ｌ）および定常領域からなる。抗体は、「Ｙ」型を有し、Ｙのステムは、ジスルフィド結合を介して一緒に結合している２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなる。Ｙの各アームは、単一軽鎖の可変および定常領域と結合している単一重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合に関与している。両鎖中の可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度可変ループを含有する。本明細書において開示される抗体および抗原結合ドメインのＣＤＲ境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ、ＣｈｏｔｈｉａまたはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの慣習（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｎ．Ｒ．Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖ１３（１２），８１９－８２４（２０００）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７－８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７：５５－７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１（３），（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｃｈａｐｔｅｒ ２６，４８１－５１４，（２０１５））によって定義または同定され得る。３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりもより高度に保存され、超可変ループを支持するスキャフォールドを形成するフレームワーク領域（ＦＲ）として知られる、両端に位置するストレッチの間に挿入されている。重鎖および軽鎖の定常領域は、抗原結合に関与しないが、種々のエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５種の主要なクラスまたはアイソタイプとして、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらは、α、δ、ε、γおよびμ重鎖それぞれの存在を特徴とする。主要な抗体クラスのうちいくつかは、ＩｇＧ１（γ１重鎖）、ＩｇＧ２（γ２重鎖）、ＩｇＧ３（γ３重鎖）、ＩｇＧ４（γ４重鎖）、ＩｇＡ１（α１重鎖）またはＩｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分割される。

【0078】

用語「抗体分子」とは、本明細書において、少なくとも１つの抗体断片（ＣＤＲおよび／または可変領域配列など）を含む抗原結合タンパク質またはポリペプチドを指す。抗体分子として、例えば、モノクローナル抗体、抗体断片またはドメイン、抗体断片またはドメインを含む融合タンパク質、抗体断片またはドメインを含むポリペプチド複合体などが挙げられる。

【0079】

用語「抗原結合ドメイン」（例えば、ＣＤ２７６結合ドメイン）とは、本明細書において、１つもしくは複数のＣＤＲを含む抗体の一部から形成される抗体断片または抗原と結合するが無傷の天然抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を指す。抗原結合ドメインの例として、制限するものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）_２、一本鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディー、ドメイン抗体および二価ドメイン抗体が挙げられる。抗原結合ドメインは、親抗体が結合する同一抗原と結合可能である。特定の実施形態では、抗原結合ドメインは、１つまたは複数の異なるヒト抗体からのフレームワーク領域にグラフトされた特定のヒト抗体からの１つまたは複数のＣＤＲを含み得る。抗原結合ドメインのより詳細なフォーマットについては、Ｓｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ，２０１５およびＢｒｉｎｋｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ，９（２），ｐｐ．１８２－２１２（２０１７）に記載されており、これらは参照によりその全文で本明細書に組み込まれる。

【0080】

抗体に関して「Ｆａｂ」とは、ジスルフィド結合によって単一重鎖の可変領域および第１の定常領域と結合している単一軽鎖（可変および定常領域の両方）からなる抗体の部分を指す。

【0081】

「Ｆａｂ’」とは、ヒンジ領域の部分を含むＦａｂ断片を指す。

【0082】

「Ｆ（ａｂ’）_２」とは、Ｆａｂ’の二量体を指す。

【0083】

抗体に関して「断片ディフィカルト〔fragment difficult〕（Ｆｄ）」とは、軽鎖と結合してＦａｂを形成することができる重鎖断片のアミノ末端半分を指す。例えば、Ｆｄ断片はＶＨおよびＣＨ１ドメインからなり得る。

【0084】

抗体に関して「Ｆｖ」とは、完全な抗原結合部位を有する抗体の最小断片を指す。Ｆｖ断片は、単一重鎖の可変領域と結合している単一軽鎖の可変領域からなる。ｄｓＦｖを含む多数のＦｖ設計が提供されており、２つのドメイン間の会合が導入されたジスルフィド結合によって増強され、ｓｃＦｖは、単一ポリペプチドとして一緒に２つのドメインに結合するようにペプチドリンカーを使用して形成され得る。対応する免疫グロブリン重鎖または軽鎖の可変ドメインおよび定常ドメインに会合した免疫グロブリン重鎖または軽鎖の可変ドメインを含むＦｖ構築物も作製されている。

【0085】

「一本鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」とは、互いに直接またはペプチドリンカー配列を介して接続している軽鎖可変領域および重鎖可変領域からなる遺伝子操作された抗体を指す（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８５：５８７９（１９８８））。

【0086】

「ｄｓＦｖ」とは、単一軽鎖の可変領域と単一重鎖の可変領域との間の連結がジスルフィド結合である、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片を指す。いくつかの実施形態では、「（ｄｓＦｖ）_２」または「（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）」は、３つのペプチド鎖：ジスルフィド橋を介して、ペプチドリンカー（例えば、長い可動性リンカー）によって連結され、それぞれ２つのＶ_Ｌ部分と結合している２つのＶ_Ｈ部分を含む。いくつかの実施形態では、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’は、各ジスルフィド対形成された重鎖および軽鎖が、異なる抗原特異性を有する二重特異性である。

【0087】

抗体に関して「Ｆｃ」とは、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２および第３の定常領域と結合している、第１の重鎖の第２および第３の定常領域からなる抗体の部分を指す。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの種々のエフェクター機能に関与するが、抗原結合における機能に関与しない。

【0088】

「ラクダ化された単一ドメイン抗体」、「重鎖抗体」または「ＨＣＡｂ」とは、２つのＶ_Ｈドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ １０；２３１（１－２）：２５－３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７－３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体は、元々、ラクダ科〔Camelidae〕（ラクダ、ヒトコブラクダおよびラマ）に由来していた。ラクダ化抗体は、軽鎖を欠くが、信頼のおける抗原結合レパートリーを有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ ３；３６３（６４２８）：４４６－８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．“Ｈｅａｖｙ－ｃｈａｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｃａｍｅｌｉｄａｅ；ａ ｃａｓｅ ｏｆ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ，”Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９－４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３－１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生じた最小の既知抗原結合単位に相当する（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０－８．Ｅｐｕｂ ２００７ Ｊｕｎ １５ （２００７））。

【0089】

「ナノボディー」とは、重鎖抗体に由来するＶＨＨドメインおよび２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３からなる抗体断片を指す。

【0090】

「ドメイン抗体」とは、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含有する抗体断片を指す。特定の例では、２つまたはそれ以上のＶ_Ｈドメインは、ペプチドリンカーと共有結合によって結合されて、二価または多価ドメイン抗体を作製する。二価ドメイン抗体の２つのＶ_Ｈドメインは、同一または異なる抗原を標的とし得る。

【0091】

用語「キメラ」とは、本明細書において、ある種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部ならびに別の種に由来する重鎖および／または軽鎖の残りを有する抗体または抗原結合ドメインを意味する。例示的例では、キメラ抗体は、ヒトに由来する定常領域およびマウスなどの非ヒト種に由来する可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモットまたはハムスターである。

【0092】

用語「ヒト化」とは、本明細書において、抗体または抗原結合ドメインが、非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、適用可能な場合には、ヒトに由来する定常領域を含むことを意味する。

【0093】

用語「作動可能に連結している」または「作動可能に連結された」とは、スペーサーもしくはリンカーまたは介在配列の有無にかかわらず、２つ以上の目的の生物学的配列が意図した様式で機能することを可能にする関係にあるような２つ以上の目的の生物学的配列の並置を指す。ポリペプチドに関して使用される場合、連結された生成物が意図した生物学的機能を有することを可能にするようにポリペプチド配列が連結されていることを意味することを意図する。例えば、抗体可変領域は、抗原結合活性を有する安定な生成物を提供するために、定常領域に作動可能に連結され得る。別の例として、抗原結合ドメインは、それらの間に介在配列を介して別の抗原結合ドメインに作動可能に連結され得、そのような介在配列はスペーサーであってもよいか、または抗体の定常領域などの非常により長い配列を含んでもよい。この用語はまた、ポリヌクレオチドに関しても使用され得る。一例として、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、サイレンサー配列など）に作動可能に連結している場合、ポリヌクレオチドからのポリペプチドの調節された発現を可能にするようにポリヌクレオチド配列が連結していることを意味することを意図する。

【0094】

用語「融合」または「融合した」とは、アミノ酸配列（例えば、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質）に関して使用される場合、例えば、化学結合または組換え手段による、２つ以上のアミノ酸配列の、自然に存在しない単一アミノ酸への結合を指す。融合アミノ酸配列は、２つのコード化ポリヌクレオチド配列の遺伝子組換えによって生成することができ、組換えポリヌクレオチドを含む構築物を宿主細胞に導入する方法によって発現させることができる。

【0095】

「抗原」とは、本明細書において、細胞培養物または動物における抗体の産生またはＴ細胞応答を刺激することができる化合物、組成物、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質または物質を指し、細胞培養物（ハイブリドーマなど）に加えられるか、または動物に注射もしくは吸収される組成物（癌特異的タンパク質を含むものなど）を含む。抗原は、異種抗原によって誘導されるものを含む、特定の体液性免疫または細胞性免疫の生成物（抗体など）と反応する。

【0096】

用語「ＣＤ２７６タンパク質」または「Ｂ７－Ｈ３タンパク質」は、本明細書において、任意の形態のＣＤ２７６、例えば、１）天然の非プロセシングＣＤ２７６分子、「全長」ＣＤ２７６鎖または例えば、スプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体を含むＣＤ２７６の天然に存在する変異体、２）細胞におけるプロセシングに起因する任意の形態のＣＤ２７６または３）組換え法によって作製されたＣＤ２７６サブユニットの全長、断片（例えば、末端切断形態、細胞外／膜貫通型ドメイン）または修飾された形態（例えば、変異形態、グリコシル化／ＰＥＧ化、Ｈｉｓタグ／免疫蛍光融合された形態）を包含するものとする。

【0097】

用語「抗ＣＤ２７６抗体」、「抗ＣＤ２７６結合ドメイン」または「ＣＤ２７６結合ドメイン」とは、ＣＤ２７６（例えば、ヒト、サルまたはマウスＣＤ２７６）と特異的に結合可能である抗体または抗原結合ドメインを指す。

【0098】

用語「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、本明細書において、例えば、抗体および抗原の間などの２つの分子間の非ランダム結合反応を指す。

【0099】

組換えＣＤ２７６または細胞の表面上に発現されたＣＤ２７６への抗体の結合は、「半数最大有効濃度」（ＥＣ_５０）値によって表すこともでき、これは、その最大効果（例えば、結合または阻害など）の５０％が観察される抗体の濃度を指す。ＥＣ_５０値は、当技術分野で公知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡなどのサンドイッチアッセイ、ウエスタンブロット、フローサイトメトリーアッセイおよびその他の結合アッセイによって測定できる。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体およびその断片は、フローサイトメトリーによって０．０５ｎＭ以下、０．０６ｎＭ以下、０．０７ｎＭ以下、０．０８ｎＭ以下、０．０９ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、２．５ｎＭ以下、３．５ｎＭ以下、３ｎＭ以下、４ｎＭ以下、４．５ｎＭ以下、５ｎＭ以下、６ｎＭ以下、７ｎＭ以下、８ｎＭ以下、９ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のＥＣ_５０（すなわち、５０％結合濃度）で組換えヒトＣＤ２７６と特異的に結合する。

【0100】

「結合を遮断する」または「同一エピトープについて競合する」能力とは、本明細書において、抗体または抗原結合ドメインの、２つの分子（例えば、ヒトＣＤ２７６およびその結合リガンド、例えば、ＴＬＴ－２）の間の結合相互作用を、任意の検出可能な程度に阻害する能力を指す。特定の実施形態では、２つの分子間の結合を遮断する抗体または抗原結合ドメインは、２つの分子間の結合相互作用を少なくとも８５％または少なくとも９０％阻害する。特定の実施形態では、この阻害は、８５％超または９０％超であり得る。

【0101】

用語「エピトープ」は、本明細書において、抗体が結合する、抗原上の原子またはアミノ酸の特定の群を指す。エピトープは、連続アミノ酸（線状エピトープまたは連続エピトープとも呼ばれる）またはタンパク質の三次フォールディングによって並置された非連続アミノ酸（立体配置エピトープまたは立体構造エピトープとも呼ばれる）の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には、タンパク質上の一次アミノ酸残基に沿って線状に配置されており、連続アミノ酸の小さなセグメントは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と結合している抗原から消化され得るか、または変性溶媒に曝露されても保持され得るが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には、変性溶媒で処理すると喪失される。エピトープは、典型的には、少なくとも３個、より通常は少なくとも５個、約７個または約８～１０個のアミノ酸を独特の空間構造で含む。２種の抗体は、抗原について競合結合を示す場合には、抗原内の同一または密接に関連するエピトープと結合し得る。例えば、抗体または抗原結合ドメインが、参照抗体の抗原への結合を少なくとも８５％または少なくとも９０％または少なくとも９５％遮断する場合、抗体または抗原結合ドメインは、参照抗体と同じ／密接に関連したエピトープに結合すると考えられ得る。

【0102】

「保存的置換」とは、アミノ酸配列に関して、アミノ酸残基を、同様の生理化学的特性を有する側鎖を有する異なるアミノ酸残基と置換することを指す。例えば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（例えば、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ）の間で、中性親水性側鎖を有する残基（例えば、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＡｓｎおよびＧｌｎ）の間で、酸性側鎖を有する残基（例えば、Ａｓｐ、Ｇｌｕ）の間で、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＡｒｇ）の間で、または芳香族側鎖を有する残基（例えば、Ｔｒｐ、ＴｙｒおよびＰｈｅ）の間で行われ得る。当技術分野で公知であるように、保存的置換は、通常、タンパク質のコンホメーション構造において重大な変化を引き起こさず、したがって、タンパク質の生物活性を保持し得る。

【0103】

用語「相同体」および「相同な」とは、本明細書において、互換的であり、最適にアラインされた場合に別の配列に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（またはその相補鎖）またはアミノ酸配列を指す。

【0104】

「配列同一性パーセント（％）」とは、アミノ酸配列（または核酸配列）に関して、配列をアラインし、必要に応じて、ギャップを導入して、同一アミノ酸（または核酸）の最大数を達成した後に、参照配列中のアミノ酸（または核酸）残基に対して同一である、候補配列中のアミノ酸（または核酸）残基のパーセントとして定義される。アミノ酸残基の保存的置換は、同一残基と考えられる場合も、考えられない場合もある。アミノ酸（または核酸）配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイトで入手可能、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，Ｊ． Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９７）も参照のこと）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで入手可能、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３－４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７－８（２００７）も参照のこと）およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なツールを使用することによって達成できる。当業者は、ツールによって提供されたデフォルトパラメータを使用してもよく、またはアラインメントのために必要に応じて、例えば、適したアルゴリズムを選択することなどによって、パラメータをカスタマイズしてもよい。

【0105】

「エフェクター機能」とは、本明細書において、抗体のＦｃ領域の、そのエフェクター、例えばＣ１複合体、Ｆｃ受容体およびエフェクター細胞（例えば、マクロファージ）との結合に起因する生物学的活性を指す。例示的エフェクター機能として、抗体と、Ｃ１複合体上のＣ１ｑとの相互作用によって誘導される補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体のＦｃ領域の、エフェクター細胞上のＦｃ受容体との結合によって誘導される抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、および抗体のＦｃ領域の、食作用との結合によって誘導される抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）が挙げられる。Ｆｃ－ＣＨ２ドメイン内の保存された二分岐グリカンに関連する特定のグリカン構造が、ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰを媒介するＦｃｙＲとの相互作用ならびにＣＤＣをもたらす最初の結合事象であるＣｌｑ結合との相互作用に強い影響を与え得ることが十分に確立されている（Ｒｅｕｓｃｈ Ｄ，Ｔｅｊａｄａ ＭＬ．Ｆｃ ｇｌｙｃａｎｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｑｕａｌｉｔｙ ａｔｔｒｉｂｕｔｅｓ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０１５；２５：１３２５－３４を参照のこと）。

【0106】

状態の「処置すること」または「処置」とは、本明細書において、状態を予防することもしくは軽減すること、状態の発症もしくはその発生の速度を減速すること、状態の発生のリスクを低減すること、状態と関連する症状の発生を予防もしくは遅延すること、状態と関連する症状を低減もしくは終結させること、状態の完全または部分退縮をもたらすこと、状態を治癒することまたはそれらのいくつかの組合せを含む。

【0107】

用語「対象」または「個体」または「動物」または「患者」とは、本明細書において、疾患または障害の診断、予後、改善、予防および／または処置を必要とする、哺乳動物または霊長類を含むヒトまたは非ヒト動物を指す。哺乳動物対象として、ヒト、サル、飼育動物、家畜およびイヌ、ネコ、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ブタ、ウシ、クマなどの動物園、競技用またはペットの動物が挙げられる。

【0108】

用語「ベクター」とは、本明細書において、タンパク質をコードするポリヌクレオチドが、そのタンパク質の発現を引き起こすように作動可能に挿入され得る媒体を指す。ベクターは、宿主細胞内に運ぶ遺伝要素の発現を引き起こすように、宿主細胞を形質転換、形質導入またはトランスフェクトするために使用され得る。ベクターの例として、プラスミド、ファージミド、コスミド、および酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、λファージまたはＭ１３ファージなどのバクテリオファージおよび動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用される動物ウイルスのカテゴリーとして、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルスおよびパポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能要素およびリポーター遺伝子を含む、発現を制御するための種々のエレメントを含有し得る。さらに、ベクターは、複製起点を含有し得る。ベクターはまた、限定されるものではないが、ウイルス粒子、リポソームまたはタンパク質コーティングを含む、細胞へのその侵入を補助するための材料を含み得る。ベクターは、発現ベクターまたはクローニングベクターであり得る。

【0109】

語句「宿主細胞」とは、本明細書において、外因性ポリヌクレオチドおよび／またはベクターが導入されている細胞を指す。

【0110】

「ＣＤ２７６関連疾患または状態」とは、本明細書において、ＣＤ２７６の発現または活性の増大または減少によって引き起こされる、増悪される、そうでなければ、関連している任意の疾患または状態を指す。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６関連状態として、免疫関連障害、例えば、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患または感染性疾患などがある。

【0111】

「癌」とは、本明細書において、悪性細胞成長または新生物、異常な増殖、浸潤または転移を特徴とする任意の医学的状態を指し、固形腫瘍および非固形癌（血液悪性腫瘍）、例えば、白血病の両方を含む。本明細書において、「固形腫瘍」とは、新生物および／または悪性細胞の固体塊を指す。癌または腫瘍の例として、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞巣状軟部肉腫、星状膠細胞腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素細胞性腎癌腫、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症、線維性骨異形成症、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、頭頸部癌、肝細胞癌腫、膵島腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌腫、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、希少血液障害、転移性腎癌、横紋筋肉腫様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌腫、胸腺腫、甲状腺転移性癌ならびに子宮癌が挙げられる。

【0112】

特定の実施形態では、血液悪性腫瘍として、Ｂ細胞リンパ腫、任意選択で、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、リヒター症候群、バーキットリンパ腫または濾胞性リンパ腫が挙げられる。

【0113】

特定の実施形態では、癌は、胃癌、乳癌、頭頸部癌、膵臓癌および結腸癌から選択される。特定の実施形態では、癌は、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞リンパ腫から選択される。

【0114】

特定の実施形態では、癌は化学療法抵抗性である。用語「化学療法抵抗性癌」とは、本明細書において、化学療法の効果に反応しない癌の種類を指す。例えば、化学療法または異なる化学療法の組合せに反応していた癌が、突然成長し始めることを化学療法抵抗性癌と呼ぶことがある。

【0115】

用語「医薬上許容される」は、指定された担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤（複数可）および／または塩が、一般に、製剤を含むその他の成分と化学的におよび／または物理的に適合しており、そのレシピエントと生理学的に適合していることを示す。

【0116】

抗ＣＤ２７６抗体
本開示は、抗ＣＤ２７６抗体である９－Ｅ８－Ｆ９－Ｃ１０、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２、１８－Ｆ９－Ｄ８－Ｇ７、９－Ｇ２－Ｈ６－Ｅ４、２０－Ｆ８－Ｂ５－Ｇ２、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４、２３－Ｆ１０－Ｇ４－Ｆ１１、６－Ｈ１１－Ｇ５－Ｄ８、２７－Ｅ７－Ｄ８－Ｃ７、３０－Ｅ２－Ｇ７－Ｇ７、５－Ｄ１－Ｇ６－Ｄ９、３－Ｃ２－Ｃ３－Ｅ７、１１－Ｇ１０－Ｂ４－Ｂ１１、１６－Ｃ６－Ｆ７－Ｆ５、２２－Ｅ１１－Ｃ３－Ｆ２、２４－Ｃ１０－Ｆ９－Ｇ７、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５、４－Ｄ５－Ｂ９－Ｂ１１、１０－Ｂ９－Ｄ１０－Ａ１２、１５－Ｇ１－Ｄ１－Ｅ３、８－Ｂ４－Ｆ５－Ｅ１１、６－Ｆ３－Ｇ２－Ｇ１、９－Ｂ９－Ｈ１１－Ｇ７、９－Ｇ１２－Ｄ６－Ａ１１、１３－Ａ８－Ｃ４－Ｇ１、１５－Ｃ８－Ｂ５－Ｇ７、２８－Ｇ２－Ｅ６－Ｂ１０、３－Ｇ７－Ｄ８－Ｄ３、１４－Ｅ７－Ｇ９－Ｄ４、２０－Ｃ５－Ｄ７－Ｄ３、８－Ｃ３－Ｅ３－Ｆ３、２－Ａ７－Ｂ１０－Ａ３、２６－Ｄ２－Ｄ６－Ｂ１２、１１－Ｃ１２－Ｆ４－Ｆ６、１６－Ｇ３－Ｄ１０－Ｃ１０、２７－Ｆ８－Ｅ１０－Ｅ１１、７－Ｅ１－Ｆ８－Ｆ６、２５－Ｄ３－Ｇ４－Ｃ６、１３－Ｅ４－Ｇ９－Ａ４、２０－Ａ２－Ｄ１０－Ｇ８、３－Ｆ２－Ｅ７－Ｆ９、６－Ｄ８－Ｅ７－Ａ１１および２１－Ｂ３－Ｂ１－Ｈ５の１つまたは複数（例えば、１、２、３、４、５または６個）のＣＤＲ配列を含む抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片を提供する。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、ＣＤ２７６と特異的に結合可能である。任意選択で、ＣＤ２７６はヒト、サルまたはマウスに由来する。特定の実施形態では、ＣＤ２７６は、組換えＣＤ２７６または細胞表面上に発現されたＣＤ２７６である。

【0117】

本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片のすべては、マウスモノクローナル抗体である。表１は、ＩＭＧＴナンバリングシステムに従うこれらの４３個の抗ＣＤ２７６抗体のＣＤＲ配列を示す。重鎖および軽鎖可変領域配列もまた、以下に提供する。

【0118】

【表1-1】

【表1-2】

【表1-3】

【表1-4】

【0119】

９－Ｅ８－Ｆ９－Ｃ１０、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２、１８－Ｆ９－Ｄ８－Ｇ７、９－Ｇ２－Ｈ６－Ｅ４、２０－Ｆ８－Ｂ５－Ｇ２、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４、２３－Ｆ１０－Ｇ４－Ｆ１１、６－Ｈ１１－Ｇ５－Ｄ８、２７－Ｅ７－Ｄ８－Ｃ７、３０－Ｅ２－Ｇ７－Ｇ７、５－Ｄ１－Ｇ６－Ｄ９、３－Ｃ２－Ｃ３－Ｅ７、１１－Ｇ１０－Ｂ４－Ｂ１１、１６－Ｃ６－Ｆ７－Ｆ５、２２－Ｅ１１－Ｃ３－Ｆ２、２４－Ｃ１０－Ｆ９－Ｇ７、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５、４－Ｄ５－Ｂ９－Ｂ１１、１０－Ｂ９－Ｄ１０－Ａ１２、１５－Ｇ１－Ｄ１－Ｅ３、８－Ｂ４－Ｆ５－Ｅ１１、６－Ｆ３－Ｇ２－Ｇ１、９－Ｂ９－Ｈ１１－Ｇ７、９－Ｇ１２－Ｄ６－Ａ１１、１３－Ａ８－Ｃ４－Ｇ１、１５－Ｃ８－Ｂ５－Ｇ７、２８－Ｇ２－Ｅ６－Ｂ１０、３－Ｇ７－Ｄ８－Ｄ３、１４－Ｅ７－Ｇ９－Ｄ４、２０－Ｃ５－Ｄ７－Ｄ３、８－Ｃ３－Ｅ３－Ｆ３、２－Ａ７－Ｂ１０－Ａ３、２６－Ｄ２－Ｄ６－Ｂ１２、１１－Ｃ１２－Ｆ４－Ｆ６、１６－Ｇ３－Ｄ１０－Ｃ１０、２７－Ｆ８－Ｅ１０－Ｅ１１、７－Ｅ１－Ｆ８－Ｆ６、２５－Ｄ３－Ｇ４－Ｃ６、１３－Ｅ４－Ｇ９－Ａ４、２０－Ａ２－Ｄ１０－Ｇ８、３－Ｆ２－Ｅ７－Ｆ９、６－Ｄ８－Ｅ７－Ａ１１および２１－Ｂ３－Ｂ１－Ｈ５抗体の重鎖または軽鎖可変領域配列は、表２に提供される。

【0120】

【表2-1】

【表2-2】

【表2-3】

【表2-4】

【表2-5】

【表2-6】

【表2-7】

【0121】

ＣＤＲは、抗原結合と関与しているとわかっているが、６ＣＤＲのすべてが、不可欠である、または不変であるのではないということがわかっている。言い換えれば、抗ＣＤ２７６抗体９－Ｅ８－Ｆ９－Ｃ１０、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２、１８－Ｆ９－Ｄ８－Ｇ７、９－Ｇ２－Ｈ６－Ｅ４、２０－Ｆ８－Ｂ５－Ｇ２、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４、２３－Ｆ１０－Ｇ４－Ｆ１１、６－Ｈ１１－Ｇ５－Ｄ８、２７－Ｅ７－Ｄ８－Ｃ７、３０－Ｅ２－Ｇ７－Ｇ７、５－Ｄ１－Ｇ６－Ｄ９、３－Ｃ２－Ｃ３－Ｅ７、１１－Ｇ１０－Ｂ４－Ｂ１１、１６－Ｃ６－Ｆ７－Ｆ５、２２－Ｅ１１－Ｃ３－Ｆ２、２４－Ｃ１０－Ｆ９－Ｇ７、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５、４－Ｄ５－Ｂ９－Ｂ１１、１０－Ｂ９－Ｄ１０－Ａ１２、１５－Ｇ１－Ｄ１－Ｅ３、８－Ｂ４－Ｆ５－Ｅ１１、６－Ｆ３－Ｇ２－Ｇ１、９－Ｂ９－Ｈ１１－Ｇ７、９－Ｇ１２－Ｄ６－Ａ１１、１３－Ａ８－Ｃ４－Ｇ１、１５－Ｃ８－Ｂ５－Ｇ７、２８－Ｇ２－Ｅ６－Ｂ１０、３－Ｇ７－Ｄ８－Ｄ３、１４－Ｅ７－Ｇ９－Ｄ４、２０－Ｃ５－Ｄ７－Ｄ３、８－Ｃ３－Ｅ３－Ｆ３、２－Ａ７－Ｂ１０－Ａ３、２６－Ｄ２－Ｄ６－Ｂ１２、１１－Ｃ１２－Ｆ４－Ｆ６、１６－Ｇ３－Ｄ１０－Ｃ１０、２７－Ｆ８－Ｅ１０－Ｅ１１、７－Ｅ１－Ｆ８－Ｆ６、２５－Ｄ３－Ｇ４－Ｃ６、１３－Ｅ４－Ｇ９－Ａ４、２０－Ａ２－Ｄ１０－Ｇ８、３－Ｆ２－Ｅ７－Ｆ９、６－Ｄ８－Ｅ７－Ａ１１および２１－Ｂ３－Ｂ１－Ｈ５中の１つまたは複数のＣＤＲを置き換える、または変更する、または修飾するが、ＣＤ２７６に対する特異的結合親和性を実質的に保持することが可能である。

【0122】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体および抗原結合断片は、抗ＣＤ２７６抗体９－Ｅ８－Ｆ９－Ｃ１０、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２、１８－Ｆ９－Ｄ８－Ｇ７、９－Ｇ２－Ｈ６－Ｅ４、２０－Ｆ８－Ｂ５－Ｇ２、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４、２３－Ｆ１０－Ｇ４－Ｆ１１、６－Ｈ１１－Ｇ５－Ｄ８、２７－Ｅ７－Ｄ８－Ｃ７、３０－Ｅ２－Ｇ７－Ｇ７、５－Ｄ１－Ｇ６－Ｄ９、３－Ｃ２－Ｃ３－Ｅ７、１１－Ｇ１０－Ｂ４－Ｂ１１、１６－Ｃ６－Ｆ７－Ｆ５、２２－Ｅ１１－Ｃ３－Ｆ２、２４－Ｃ１０－Ｆ９－Ｇ７、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５、４－Ｄ５－Ｂ９－Ｂ１１、１０－Ｂ９－Ｄ１０－Ａ１２、１５－Ｇ１－Ｄ１－Ｅ３、８－Ｂ４－Ｆ５－Ｅ１１、６－Ｆ３－Ｇ２－Ｇ１、９－Ｂ９－Ｈ１１－Ｇ７、９－Ｇ１２－Ｄ６－Ａ１１、１３－Ａ８－Ｃ４－Ｇ１、１５－Ｃ８－Ｂ５－Ｇ７、２８－Ｇ２－Ｅ６－Ｂ１０、３－Ｇ７－Ｄ８－Ｄ３、１４－Ｅ７－Ｇ９－Ｄ４、２０－Ｃ５－Ｄ７－Ｄ３、８－Ｃ３－Ｅ３－Ｆ３、２－Ａ７－Ｂ１０－Ａ３、２６－Ｄ２－Ｄ６－Ｂ１２、１１－Ｃ１２－Ｆ４－Ｆ６、１６－Ｇ３－Ｄ１０－Ｃ１０、２７－Ｆ８－Ｅ１０－Ｅ１１、７－Ｅ１－Ｆ８－Ｆ６、２５－Ｄ３－Ｇ４－Ｃ６、１３－Ｅ４－Ｇ９－Ａ４、２０－Ａ２－Ｄ１０－Ｇ８、３－Ｆ２－Ｅ７－Ｆ９、６－Ｄ８－Ｅ７－Ａ１１および２１－Ｂ３－Ｂ１－Ｈ５のうちの１種の重鎖ＣＤＲ３配列を含む。特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体および抗原結合断片は、配列番号３、１１、１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、１１５、１２３、１３１、１３９、１４７、１５５、１６３、１７１、１７９、１８７、１９５、２０３、２１１、２１９、２２７、２３５、２４３、２５１、２５９、２６７、２７５、２８３、２９１、２９９、３０７、３１５、３２３、３３１および３３９からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を含む。重鎖ＣＤＲ３領域は、抗原結合部位の中心に位置し、したがって、抗原と最も接触し、抗体の抗原に対する親和性に最も自由なエネルギーを提供すると考えられる。また、重鎖ＣＤＲ３は、複数の多様化機序（Ｔｏｎｅｇａｗａ Ｓ．Ｎａｔｕｒｅ．３０２：５７５－８１）によって長さ、アミノ酸組成およびコンホメーションの点で、抗原結合部位のうち群を抜いて最も多様なＣＤＲであると考えられる。重鎖ＣＤＲ３の多様性は、ほとんどの抗体特異性（Ｘｕ ＪＬ，Ｄａｖｉｓ ＭＭ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１３：３７－４５）ならびに望ましい抗原結合親和性（Ｓｃｈｉｅｒ Ｒ，ｅｔｃ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２６３：５５１－６７）をもたらすのに十分である。

【0123】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体および／またはその抗原結合断片は、抗体および／またはその抗原結合断片が、ＣＤ２７６と特異的に結合できる限り、適したフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。表１に提供されるＣＤＲ配列は、マウス抗体から得られるが、それらは、当技術分野で公知の適した方法、例えば、組換え技術を使用して任意の適した種、例えば、中でもマウス、ヒト、ラット、ウサギの任意の適したＦＲ配列にグラフトできる。

【0124】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体および／またはその抗原結合断片は、ＰＴＭ最適化される。本明細書において使用される場合、ＰＴＭ最適化とは、潜在的な凝集、活性喪失または他のリスクを回避することを目的とした翻訳後修飾を指す。例示的なＰＴＭ最適化抗体および／またはその抗原結合断片として、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２および３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４にそれぞれ由来するｍＶＨ５－ｍＶＬ４－１０およびｍＶＨ－ｍＶＬ１－３０が挙げられる。ｍＶＨ５－ｍＶＬ４－１０およびｍＶＨ－ｍＶＬ１－３０の可変領域配列は表３に示され、すべてのＣＤＲ領域に下線が引かれている。

【0125】

【表3】

【0126】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体および／またはその抗原結合断片は、ヒト化されたものである。ヒト化抗体または抗原結合断片は、ヒトにおけるその低減された免疫原性において望ましい。ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列が、ヒトまたは実質的にヒトＦＲ配列にグラフトされるので、その可変領域においてキメラである。抗体または抗原結合断片のヒト化は、ヒト免疫グロブリン遺伝子において非ヒト（マウスなど）ＣＤＲ遺伝子を、対応するヒトＣＤＲ遺伝子と置換することによって本質的に実施できる（例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６を参照のこと）。

【0127】

当技術分野で公知の方法を使用して、適したヒト重鎖および軽鎖可変ドメインを選択して、この目的を達成できる。例示的例では、「ベストフィット」アプローチを使用でき、非ヒト（例えば、げっ歯類）抗体可変ドメイン配列を、既知ヒト可変ドメイン配列のデータベースに対してスクリーニングまたはＢＬＡＳＴし、非ヒトクエリー配列に対して最も近いヒト配列を同定し、非ヒトＣＤＲ配列をグラフトするためのヒトスキャフォールドとして使用する（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ、（１９９３）Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１を参照のこと）。あるいは、すべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワークを、非ヒトＣＤＲのグラフトのために使用してもよい（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照のこと）。特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的にすべてのヒト配列から構成されている。いくつかの実施形態では、可変領域ＦＲおよび存在する場合には定常領域は、完全に、または実質的に、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列、例えば、あるヒト抗体に由来するＦＲ配列および別のヒト抗体に由来する定常領域は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子に由来する場合もある。

【0128】

以下の表４は、ｈＶＨ２－ｈＶＬ１－１０、ｈＶＨ３－ｈＶＬ３－１０、ｈＶＨ４－ｈＶＬ１－１０、ｈＶＨ４－ｈＶＬ２－１０、ｈＶＨ５－ｈＶＬ１－１０、ｈＶＨ５－ｈＶＬ３－１０、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２＿ｈＶＨ２－ＶＬ１＿ＰＴＭ、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２＿ｈＶＨ３－ＶＬ３＿ＰＴＭ、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２＿ｈＶＨ４－ＶＬ１＿ＰＴＭ、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２＿ｈＶＨ４－ＶＬ２＿ＰＴＭ、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２＿ｈＶＨ５－ＶＬ１＿ＰＴＭ、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２＿ｈＶＨ５－ＶＬ３＿ＰＴＭ、ｈＶＨ１－ｈＶＬ５－３０、ｈＶＨ２－ｈＶＬ１－３０、ｈＶＨ３－ｈＶＬ２－３０、ｈＶＨ３－ｈＶＬ５－３０、ｈＶＨ４－ｈＶＬ２－３０、ｈＶＨ４－ｈＶＬ５－３０、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４＿ｈＶＨ１－ｈＶＬ５＿ＰＴＭ、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４＿ｈＶＨ２－ｈＶＬ１＿ＰＴＭ、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４＿ｈＶＨ３－ｈＶＬ２＿ＰＴＭ、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４＿ｈＶＨ３－ｈＶＬ５＿ＰＴＭ、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４＿ｈＶＨ４－ｈＶＬ２＿ＰＴＭおよび３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４＿ｈＶＨ４－ｈＶＬ５＿ＰＴＭと指定される、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２および３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４に対するヒト化抗体の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を示し、すべてのＣＤＲ領域に下線が引かれている。

【0129】

【表4-1】

【表4-2】

【表4-3】

【表4-4】

【0130】

特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体またはその抗原結合断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的にすべてのヒト配列から構成されている。いくつかの実施形態では、可変領域ＦＲ、および存在する場合には定常領域は、完全に、または実質的に、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列は、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子に由来してもよく、例えば、ＦＲ配列は、あるヒト抗体に由来してもよく、定常領域は別のヒト抗体に由来してもよい。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒト重鎖ＨＦＲ１～４および／または軽鎖ＬＦＲ１～４を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、それが由来するヒト免疫グロブリンと同じアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒトＦＲの１つまたは複数のアミノ酸残基は、親非ヒト抗体由来の対応する残基で置換される。これは、特定の実施形態では、結合特性を最適化する（例えば、結合親和性を増加させる）ために、ヒト化抗体または非ヒト親抗体構造にほぼ近似するその断片を作製することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＦＲ配列の各々において１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１つ以下のアミノ酸残基置換、または重鎖もしくは軽鎖可変ドメインのすべてのＦＲ配列において１０、９、８、７、６、５、４、３、２もしくは１つ以下のアミノ酸残基置換を含む。いくつかの実施形態では、このようなアミノ酸残基の変化は、重鎖ＦＲ領域のみ、軽鎖ＦＲ領域のみ、または両方の鎖に存在し得る。特定の実施形態では、ヒトＦＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸は、結合親和性を増加させるためにランダムに変異される。特定の実施形態では、ヒトＦＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸は、結合親和性を増加させるために親非ヒト抗体の対応するアミノ酸に復帰変異される。

【0132】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその断片は、免疫グロブリン定常領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、免疫グロブリン定常領域は、重鎖および／または軽鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ヒンジおよび／またはＣＨ２－ＣＨ３領域を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態では、軽鎖定常領域は、ＣκまたはＣλを含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、任意選択でヒトＩｇ、任意選択でヒトＩｇＧの定常領域を有する。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４の定常領域を含む。

【0134】

ヒトＩｇＧアイソタイプ（成熟ガンマグロブリンクラスＧ抗体のサブクラス；ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４）は、エフェクター機能を動員する異なる能力を示す。例えば、ＡＤＣＣはＩｇＧ１およびＩｇＧ３によって促進され、ＡＤＣＰはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４によって促進され、ＣＤＣはＩｇＧ１およびＩｇＧ３によって促進される。このようなエフェクター機能のアイソタイプに特異的な関与は、異なる免疫細胞上のＦｃ受容体に対する選択性およびＣ１ｑに結合し、それによって膜攻撃複合体（ＭＡＣ）の構築を活性化する能力に基づく。様々なアイソタイプの中でも、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ／ｂ／ｃおよびＦｃγＲＩＩＩａ／ｂを含む、Ｆｃγ受容体に対する相対親和性は、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３に対して高い。しかしながら、ＩｇＧ２に対するＦｃγの親和性は、ＦｃγＲＩＩａ Ｈ１３１多型を除いてかなり低く、ＩｇＧ４はＦｃγＲＩに対して測定可能な親和性のみ有する。

【0135】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣもしくはＡＤＣＰを誘導し得るヒトＩｇＧ１アイソタイプの定常領域またはエフェクター機能が減少もしくは枯渇したＩｇＧ４もしくはＩｇＧ２アイソタイプの定常領域を含む。ＡＤＣＣおよびＣＤＣなどのエフェクター機能は、ＣＤ２７６を発現する細胞に対して細胞毒性を引き起こし得る。エフェクター機能は、Ｆｃ受容体結合アッセイ、Ｃ１ｑ結合アッセイおよび細胞溶解アッセイなどの様々なアッセイを使用して評価され得る。

【0136】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、ＡＤＣＣ、ＣＤＣまたはＡＤＣＰを誘導し得るマウスＩｇＧ２アイソタイプの定常領域を含む。

【0137】

抗体変異体
本開示はまた、本明細書において提供される抗体および／またはその抗原結合断片の種々の変異体を包含する。特定の実施形態では、本開示は、本明細書において提供される例示的抗体、すなわち、配列番号３、１１、１９、２７、３５、４３、５１、５９、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、１１５、１２３、１３１、１３９、１４７、１５５、１６３、１７１、１７９、１８７、１９５、２０３、２１１、２１９、２２７、２３５、２４３、２５１、２５９、２６７、２７５、２８３、２９１、２９９、３０７、３１５、３２３、３３１、３３９、または３７５からなる群から選択される重鎖ＣＤＲ３配列を有する抗体の様々な種類の変異体を包含する。

【0138】

特定の実施形態では、抗体変異体は、表１に提供されるような１つまたは複数のＣＤＲ配列中の１つまたは複数の修飾または置換、１つまたは複数のＦＲ配列、表２において提供される重鎖または軽鎖可変領域配列および／または定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を含む。このような変異体は、その親抗体のＣＤ２７６に対する特異的結合親和性を保持するが、修飾（複数可）または置換（複数可）によって付与される１つまたは複数の望ましい特性を有する。例えば、抗体変異体は、改善された抗原結合親和性、改善されたグリコシル化パターン、低減されたグリコシル化のリスク、低減された脱アミノ化、低減されたまたは枯渇したエフェクター機能（複数可）、改善されたＦｃＲｎ受容体結合、増大された薬物動態半減期、ｐＨ感受性および／またはコンジュゲーション（例えば、１個または複数の導入されたシステイン残基）に対する適合性を有し得る。

【0139】

当技術分野で公知の方法、例えば、「アラニンスキャニング突然変異誘発」を使用して、親抗体配列を、スクリーニングして、修飾または置換される適したまたは好ましい残基を同定してもよい（例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１－１０８５を参照のこと）。手短には、標的残基（例えば、電荷を有する残基、例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、ＬｙｓおよびＧｌｕ）を同定し、中性または負電荷を有するアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えることができ、修飾された抗体を製造し、興味深い特性についてスクリーニングする。特定のアミノ酸位置の置換が、興味深い機能的変化を実証する場合には、その位置を修飾または置換にとって有望な残基と同定できる。同定された有望な残基を、異なる種類の残基（例えば、システイン残基、正電荷を有する残基等）と置換することによってさらに評価してもよい。

【0140】

親和性変異体
親和性変異体は、表１に提供されるような１つまたは複数のＣＤＲ配列中の修飾または置換、１つまたは複数のＦＲ配列または表２、３または４において提供される重鎖または軽鎖可変領域配列を含有し得る。親和性変異体は、その親抗体のＣＤ２７６に対する特異的結合親和性を保持する、または親抗体を上回る改善されたＣＤ２７６特異的結合親和性をさらに有する。特定の実施形態では、ＣＤＲ配列、ＦＲ配列または可変領域配列中の少なくとも１つの（またはすべて）の置換は、保存的置換を含む。

【0141】

当業者ならば、表１に提供されるＣＤＲ配列およびＦＲ配列において、１個または複数のアミノ酸残基が置換されてもよいが、得られた抗体または抗原結合断片は、ＣＤ２７６との結合親和性を依然として保持する、または改善された結合親和性をさらに有するということは理解するであろう。当技術分野で公知の種々の方法を使用して、この目的を達成できる。例えば、ファージディスプレイ技術を用いて、抗体変異体（ＦａｂまたはｓｃＦｖ変異体など）のライブラリーを作製し、発現させ、次いで、ヒトＣＤ２７６との結合親和性についてスクリーニングできる。別の例のために、コンピュータソフトウェアを使用して、抗体のヒトＣＤ２７６との結合を実質的にシミュレートし、結合面を形成する抗体上のアミノ酸残基を同定できる。このような残基は、結合親和性の低減を防ぐために置換において避けられる場合もあり、より強い結合を提供するために置換の標的とされる場合もある。

【0142】

特定の実施形態では、本明細書において提供されるヒト化抗体または抗原結合断片は、１つもしくは複数のＣＤＲ配列および／または１つもしくは複数のＦＲ配列中に１つまたは複数のアミノ酸残基置換を含む。特定の実施形態では、親和性変異体は、ＣＤＲ配列および／またはＦＲ配列中に合計１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つ以下の置換を含む。

【0143】

特定の実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、表１に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１、２または３つのＣＤＲ配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ２７６に対する結合親和性を保持する。

【0144】

特定の実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、表１に列挙されるもの（単数または複数）に対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数の可変領域配列を含み、一方で、その親抗体と同様の、またはさらに高いレベルでＣＤ２７６に対する結合親和性を保持する。いくつかの実施形態では、表１に列挙されるもの（単数または複数）から選択される配列において、合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入または欠失されている。いくつかの実施形態では、置換、挿入または欠失は、ＣＤＲの外側の領域において（すなわち、ＦＲにおいて）生じる。

【0145】

グリコシル化変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体および抗原結合断片はまた、グリコシル化変異体を包含し、これは、抗体またはその抗原結合断片のグリコシル化の程度を増大または減少するために得ることができる。

【0146】

抗体またはその抗原結合断片は、炭水化物部分（例えば、オリゴ糖構造）が結合され得る側鎖を有する、１個または複数のアミノ酸残基を含み得る。抗体のグリコシル化は、通常、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型とは、炭水化物部分の、アスパラギン残基、例えば、アスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－トレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸である）などのトリペプチド配列中のアスパラギン残基の側鎖との結合を指す。Ｏ結合型グリコシル化とは、糖Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースのうち１種の、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的には、セリンまたはトレオニンとの結合を指す。天然グリコシル化部位の除去は、例えば、上記のトリペプチド配列のうち１種（Ｎ結合型グリコシル化部位について）または配列中に存在するセリンもしくはトレオニン残基（Ｏ結合型グリコシル化部位について）が置換されるようにアミノ酸配列を変更することによって好都合に達成できる。新規グリコシル化部位は、このようなトリペプチド配列またはセリンもしくはトレオニン残基を導入することによって同様の方法で作製できる。

【0147】

システインが遺伝子操作された変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体および抗原結合断片はまた、システインが遺伝子操作された変異体を包含し、これは、１個または複数の導入された遊離システインアミノ酸残基を含む。

【0148】

遊離システイン残基は、ジスルフィド橋の一部ではないものである。システインが遺伝子操作された変異体は、例えば、マレイミドまたはハロアセチルを介した、例えば、中でも、遺伝子操作されたシステインの部位での細胞傷害性および／またはイメージング化合物、標識または放射性同位体とのコンジュゲーションにとって有用である。遊離システイン残基を導入するために抗体または抗原結合断片を遺伝子操作する方法は、当技術分野で公知である、例えば、ＷＯ２００６／０３４４８８を参照のこと。

【0149】

Ｆｃ変異体
本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体および抗原結合断片はまた、そのＦｃ領域および／またはヒンジ領域に１個または複数のアミノ酸残基修飾または置換を含むＦｃ変異体を包含する。

【0150】

特定の実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体または抗原結合断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）とのｐＨ依存性結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。このような変異体は、リソソームにおける分解から逃れ、次いで、転座され、細胞の外に放出されることを可能にする酸性ｐＨでＦｃＲｎと結合するので、薬物動態半減期の拡大を有し得る。抗体およびその抗原結合断片を遺伝子操作して、ＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法は、当技術分野で周知である、例えば、Ｖａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３－７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ １，Ｃｈａｐｔｅｒ ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９－３２７７（２０１０）；ａｎｄ Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６－３５６（２００６）を参照のこと。

【0151】

特定の実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を変更する１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのある特定のアミノ酸残基を、置換して、増強されたＡＤＣＣ活性を提供できる。あるいはまたはさらに、抗体上の炭水化物構造を変更して、ＡＤＣＣ活性を増強できる。抗体エンジニアリングによってＡＤＣＣ活性を変更する方法は、当技術分野で記載されている、例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１－６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８－８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５－７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１－５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５－４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９－３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７－２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６－３４７３を参照のこと。

【0152】

特定の実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体または抗原結合断片は、例えば、Ｃ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善または減少することによって補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を変更する１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）を含む（例えば、ＷＯ９９／５１６４２；Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号を参照のこと）およびＦｃ領域変異体のその他の例に関するＷＯ９４／２９３５１。

【0153】

特定の実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体またはその抗原結合断片は、ヘテロ二量体化を容易にするおよび／または促進するためにＦｃ領域の界面における１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。これらの修飾は、第１のＦｃポリペプチドへの隆起および第２のＦｃポリペプチドへの空洞の導入を含み、ここでは、第１および第２のＦｃポリペプチドの相互作用を促進して、ヘテロ二量体または複合体を形成するために、隆起を空洞中に位置付けることができる。これらの修飾を有する抗体を作製する方法は、当技術分野で公知である、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号に記載されている。

【0154】

抗原結合断片
抗ＣＤ２７６抗原結合断片も本明細書において提供される。種々の種類の抗原結合断片が、当技術分野で公知であり、例えば、そのＣＤＲおよびＦＲ配列が表１に示されている例示的抗体、その種々の変異体（例えば、親和性変異体、グリコシル化変異体、Ｆｃ変異体、システインが遺伝子操作された変異体など）を含む、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗体をベースとして開発することができる。

【0155】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗ＣＤ２７６抗原結合断片は、ラクダ化された単一ドメイン抗体、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）_２、Ｆｖ断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、ナノボディー、ドメイン抗体、単一ドメイン抗体または二価ドメイン抗体である。

【0156】

このような抗原結合断片の製造のために種々の技術を使用できる。例示的方法として、無傷の抗体の酵素的消化（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）；ａｎｄ Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照のこと）、大腸菌〔E.Coli〕などの宿主細胞による組換え発現（例えば、Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片のため）、上記で論じられるようなファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（例えば、ＳｃＦｖのための）およびＦ（ａｂ’）_２断片を形成するための２つのＦａｂ’－ＳＨ断片の化学的カップリング（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））が挙げられる。抗体断片の製造のためのその他の技術は、当業者には明らかであろう。

【0157】

特定の実施形態では、抗原結合断片は、ｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの作製は、例えば、ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および同５，５８７，４５８号に記載されている。ｓｃＦｖを、アミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質と融合して、融合タンパク質を提供してもよい（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、ｅｄ．Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋを参照のこと）。

【0158】

コンジュゲート
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、１つまたは複数のコンジュゲートと連結しており、任意選択で、コンジュゲートが、直接またはリンカーを介してのいずれかで共有結合によって結合している。コンジュゲートは、抗体またはその抗原結合断片と結合することができる非タンパク質性部分である。種々のコンジュゲートを、本明細書において提供される抗体または抗原結合断片と連結してもよいということが考慮される（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照のこと）。これらのコンジュゲートを、その他の方法の中でも、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体形成、会合、ブレンドまたは付加によって抗体または抗原結合断片と連結してもよい。いくつかの実施形態では、コンジュゲートは、クリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリン結合剤または他の抗癌薬を含む。

【0159】

特定の実施形態では、本明細書において開示される抗体および抗原結合断片を、１つまたは複数のコンジュゲートとの結合に利用され得るエピトープ結合部分の外側に指定の部位を含有するように遺伝子操作してもよい。例えば、このような部位は、コンジュゲートとの共有結合を容易にするために、１つまたは複数の反応性アミノ酸残基、例えば、システインまたはヒスチジン残基などを含み得る。

【0160】

特定の実施形態では、抗体を、コンジュゲートと間接的に、または別のコンジュゲートを介して連結してもよい。例えば、抗体または抗原結合断片を、ビオチンにコンジュゲートしてもよく、次いで、アビジンにコンジュゲートされている第２のコンジュゲートに間接的にコンジュゲートしてもよい。コンジュゲートは、毒素（例えば、化学療法剤）、検出可能な標識（例えば、放射性同位元素、ランタニド、発光標識、蛍光標識または酵素－基質標識）であり得る。

【0161】

「毒素」は、細胞にとって有害である、または細胞に損傷を与え得る、もしくは死滅させ得る任意の薬剤であり得る。毒素の例として、制限するものではないが、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラセンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシンおよびその類似体、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６－メルカププリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣおよびシス－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前は、ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前は、アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびアントラマイシン（ＡＭＣ））および抗有糸分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられる。

【0162】

検出可能な標識の例として、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリトリンまたはテキサスレッド）、酵素基質標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼまたはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ）、放射性同位元素（例えば、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^３５Ｓ、^３Ｈ、^１１１Ｉｎ、^１１２Ｉｎ、^１４Ｃ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^８６Ｙ、^８８Ｙ、^９０Ｙ、^１７７Ｌｕ、^２１１Ａｔ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１５３Ｓｍ、^２１２Ｂｉおよび^３２Ｐ、その他のランタニド、発光標識）、発色団部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子または検出用金を挙げることができる。

【0163】

特定の実施形態では、コンジュゲートは、抗体の半減期を増大するのに役立つ薬物動態修飾部分であり得る。例示的例として、水溶性ポリマー、例えば、ＰＥＧ、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマーなどが挙げられる。ポリマーは、任意の分子量のものであってよく、分岐していても、非分岐であってもよい。抗体と結合しているポリマーの数は、変わることがあり、１つより多いポリマーが結合される場合には、同一分子である場合も、異なる分子である場合もある。

【0164】

特定の実施形態では、コンジュゲートは、磁性ビーズなどの精製部分であり得る。

【0165】

特定の実施形態では、本明細書において提供される抗体および／またはその抗原結合断片は、コンジュゲートの基材として使用される。

【0166】

ポリヌクレオチドおよび組換え法
本開示は、抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、シーケンシングされる。コードするＤＮＡはまた、合成法によって得ることもできる。

【0167】

抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片をコードする単離されたポリヌクレオチドは、当該技術分野で公知の組換え技術を使用して、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のためにベクターに挿入され得る。多数のベクターが入手可能である。ベクター構成成分は、一般に、それだけには限らないが、以下：シグナル配列、複製起点、１種または複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）および転写終結配列のうち１つまたは複数を含む。

【0168】

いくつかの実施形態では、ベクター系として、哺乳動物、細菌、酵母系などが挙げられ、それだけには限らないが、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ，ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ４２０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２などといったプラスミドならびにその他の実験室および市販のベクターを含む。適したベクターとして、プラスミドまたはウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）を挙げることができる。

【0169】

抗体または抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入できる。本明細書においてベクター中のＤＮＡをクローニングまたは発現させるための適した宿主細胞として、上記の原核生物、酵母またはより高度の真核生物細胞がある。この目的のために適した原核生物として、グラム陰性またはグラム陽性生物などの真正細菌、例えば、エシェリキア属〔Escherichia〕、例えば、大腸菌〔E.coli〕、エンテロバクター属〔Enterobacter〕、エルウィニア属〔Erwinia〕、クレブシエラ属〔Klebsiella〕、プロテウス属〔Proteus〕、サルモネラ属〔Salmonella〕、例えば、サルモネラ・チフィリウム〔Salmonella typhimurium〕、セラチア属〔Serratia〕、例えば、セラチア・マルセッセンス〔Serratia marcescans〕および赤痢菌属〔Shigella〕ならびにＢ．スブチリス〔subtilis〕およびＢ．リケニフォルミス〔licheniformis〕などのバチルス属〔Bacilli〕、Ｐ．エルジノーサ〔aeruginosa〕などのシュードモナス属〔Pseudomonas〕およびストレプトマイセス属〔Streptomyces〕などの腸内細菌科〔Enterobacteriaceae〕が挙げられる。

【0170】

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核細胞微生物は、抗ＣＤ２７６抗体をコードするベクターの適したクローニングまたは発現宿主である。サッカロミセス・セレビシエ〔Saccharomyces cerevisiae〕または一般的なパン酵母は、下等真核細胞宿主微生物の中で最もよく使用されている。しかし、シゾサッカロミセス・ポンベ〔Schizosaccharomyces pombe〕；例えば、Ｋ．ラクチス〔lactis〕、Ｋ．フラギリス〔fragilis〕（ＡＴＣＣ１２，４２４）、Ｋ．ブルガリクス〔bulgaricus〕（ＡＴＣＣ１６，０４５）、Ｋ．ウィッカーアミー〔wickeramii〕（ＡＴＣＣ２４，１７８）、Ｋ．ワルチー〔waltii〕（ＡＴＣＣ５６，５００）、Ｋ．ドロソフィラルム〔drosophilarum〕（ＡＴＣＣ３６，９０６）、Ｋ．サーモトレランス〔thermotolerans〕およびＫ．マーキシアヌス〔marxianus〕などのクリベロミセス属〔Kluyveromyces〕宿主；ヤロウイア属〔yarrowia〕（ＥＰ４０２，２２６）；ピキア・パストリス〔Pichia pastoris〕（ＥＰ１８３，０７０）；カンジダ属〔Candida〕；トリコデルマ・リーゼイ〔Trichoderma reesia〕（ＥＰ２４４，２３４）；アカパンカビ〔Neurospora crassa〕；シュワニオミセス・オクシデンタリス〔Schwanniomyces occidentalis〕などのシュワニオミセス属〔Schwanniomyces〕；および例えば、アカパンカビ属〔Neurospora〕、アオカビ属〔Penicillium〕、トリポクラジウム属〔Tolypocladium〕ならびにＡ．ニデュランス〔A.nidulans〕およびクロコウジカビ〔A.niger〕などのアスペルギルス属〔Aspergillus〕宿主などの糸状菌などの、いくつかのその他の属、種および株が一般に入手可能であり、本明細書において有用である。

【0171】

本明細書において提供されるグリコシル化抗体または抗原断片の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。脊椎動物細胞の例として、植物および昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株および変異体ならびにヨトウガ〔Spodoptera frugiperda〕（イモムシ）、ネッタイシマカ〔Aedes aegypti〕（蚊）、ヒトスジシマカ〔Aedes albopictus〕（蚊）、キイロショウジョウバエ〔Drosophila melanogaster〕（ショウジョウバエ〔fruiffly〕）およびカイコ〔Bombyx mori〕などの宿主に由来する対応する許容昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、例えば、オートグラファ・カリフォルニカ〔Autographa californica〕ＮＰＶのＬ－１変異体およびカイコ〔Bombyx mori〕ＮＰＶのＢｍ－５株が公的に入手可能であり、このようなウイルスは、本明細書において、本発明に従って、特に、ヨトウガ〔Spodoptera frugiperda〕細胞のトランスフェクションのためにウイルスとして使用され得る。ワタ、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマトおよびタバコの植物細胞培養物も宿主として使用され得る。

【0172】

しかし、関心は、脊椎動物細胞において最大であり、培養（組織培養）での脊椎動物細胞の増殖は、日常的な手順となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例として、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１）；ヒト胚性腎臓株（２９３または懸濁培養における成長のためにサブクローニングされた２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））；サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；およびヒト肝細胞腫株（Ｈｅｐ Ｇ２）がある。

【0173】

宿主細胞は、抗ＣＤ２７６抗体生成のために上記の発現またはクローニングベクターを用いて形質転換され、プロモーターを誘導し、形質転換体を選択するか、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために必要に応じて修飾された従来の栄養培地で培養される。別の実施形態では、抗体は、当技術分野で公知の相同組換えによって生成され得る。

【0174】

本明細書において提供される抗体または抗原結合断片を生成するために使用される宿主細胞は、種々の培地で培養され得る。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地は、宿主細胞を培養するのに適している。さらに、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．第５８巻：４４頁（１９７９年）、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号；同４，６５７，８６６号；同４，９２７，７６２号；同４，５６０，６５５号；または同５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または再発行米国特許第３０，９８５号に記載される培地のいずれも、宿主細胞のための培養培地として使用され得る。これらの培地のいずれも、必要に応じて、ホルモンおよび／またはその他の増殖因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸など）、バッファー（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジンなど）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬など）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）およびグルコースまたは同等のエネルギー供給源を用いて補給され得る。任意のその他の必要な栄養補助剤もまた、当業者に公知であろう適当な濃度で含まれ得る。温度、ｐＨなどといった培養状態は、発現のために選択された宿主細胞とともにこれまでに使用されたものであり、当業者には明らかとなろう。

【0175】

組換え技術を使用する場合には、抗体は、細胞膜周辺腔において細胞内で生成され得る、または培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で生成される場合には、第１のステップとして、微粒子状細片、宿主細胞または溶解した断片のいずれかが例えば、遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２）には、大腸菌〔E.coli〕の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離するための手順が記載されている。手短には、細胞ペーストが、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡおよびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下で約３０分かけて解凍される。細胞細片は、遠心分離によって除去され得る。抗体が培地中に分泌される場合には、このような発現系から得られた上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用してまず濃縮される。タンパク質分解を阻害するために、ＰＭＳＦなどのプロテアーゼ阻害剤が前記のステップのいずれにも含まれることがあり、外来性の混入物質の成長を防ぐために、抗生物質が含まれることがある。

【0176】

細胞から調製される抗ＣＤ２７６抗体およびその抗原結合断片は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥ－セルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿、塩析およびアフィニティークロマトグラフィーを使用して精製することができ、アフィニティークロマトグラフィーが好ましい精製技術である。

【0177】

特定の実施形態では、固層で固定化されたプロテインＡは、抗体およびその抗原結合断片の免疫親和性精製のために使用される。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに応じて変わる。プロテインＡは、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖をベースとする抗体を精製するために使用され得る（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３（１９８３））。プロテインＧは、すべてのマウスアイソタイプに対して、およびヒトγ３に対して推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７ １５７５（１９８６））。親和性リガンドが付着されるマトリックスは、最も多くはアガロースであるが、その他のマトリックスが利用可能である。コントロールドポアガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼンなどの機械的に安定なマトリックスは、アガロースを用いて達成され得るものよりも迅速な流速およびより短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合には、精製にはＢａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ．ＴＭ．樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、ニュージャージー州、フィリップスバーグ）が有用である。イオン交換カラムでの分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカでのクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）でのクロマトグラフィー、陰イオンまたは陽イオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラムなど）でのクロマトグラフィー、等電点電気泳動、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿などのタンパク質精製のためのその他の技術も、回収されるべき抗体に応じて利用可能である。

【0178】

任意の予備的精製ステップ（単数または複数）後に、対象の抗体および混入物質を含む混合物は、約２．５～４．５の間のｐＨの溶出バッファーを使用する、好ましくは、低塩濃度（例えば、約０～０．２５Ｍの塩）で実施される低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに付され得る。

【0179】

ＣＡＲ
別の態様では、本開示はまた、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域およびＴＣＲシグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）も提供し、抗原結合ドメインはＣＤ２７６と特異的に結合し、本明細書において提供されている抗原結合断片を含む。特定の実施形態では、抗原結合断片はＦａｂまたはｓｃＦｖである。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＣＡＲは二重特異性である。ＣＡＲは、ＣＤ２７６以外の第２の抗原またはＣＤ２７６上の第２のエピトープとさらに特異的に結合可能である。特定の実施形態では、第２の抗原は、上述のような腫瘍抗原、腫瘍関連抗原または免疫関連標的である。ＴＣＲシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＦｃｃＲＩγ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＣＤ２７８、ＴＬＲまたはそれらの組合せの細胞内シグナル領域配列からなる群から選択され得る。膜貫通領域は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の膜貫通領域を含み得る。特定の実施形態では、第２の抗原は、ＰＤ－Ｌ１、ＳＩＲＰα、ＣＤ４７またはＢ２Ｍなどの免疫抑制分子である。

【0180】

別の態様では、本開示はまた、上述のＣＡＲをコードする核酸配列およびそのような核酸配列を含む細胞もしくはベクターまたは本明細書において提供されるＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞も提供する。細胞は、免疫細胞であってもよく、任意選択で、免疫細胞は、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたはＮＫＴリンパ球である。

【0181】

医薬組成物
本開示は、抗ＣＤ２７６抗体またはその抗原結合断片および１種または複数の医薬上許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。

【0182】

本明細書において開示される医薬組成物において使用するための医薬上許容される担体として、例えば、医薬上許容される液体、ゲルまたは固体担体、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗菌剤、等張化剤、バッファー、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁剤／分配剤、封鎖剤またはキレート化剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤または非毒性補助物質、当技術分野で公知のその他の成分またはそれらの種々の組合せを挙げることができる。

【0183】

適した成分として、例えば、抗酸化剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、バッファー、保存料、滑沢剤、香味料、増粘剤、着色剤、乳化剤または糖およびシクロデキストリンなどの安定化剤を挙げることができる。適した抗酸化剤として、例えば、メチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンおよび／または没食子酸プロピルを挙げることができる。本明細書において開示されるように、本明細書において提供されるような抗体または抗原結合断片およびコンジュゲートを含む組成物中に、メチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤を含めることによって、抗体または抗原結合断片の酸化が減少される。この酸化の低減は、結合親和性の喪失を防ぐまたは低減し、それによって、抗体安定性を改善し、有効期間を最大化する。したがって、特定の実施形態では、本明細書において開示されるような１種または複数の抗体またはその抗原結合断片およびメチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤を含む組成物が提供される。抗体または抗原結合断片を、メチオニンなどの１種または複数の抗酸化剤と混合することによって、酸化を防ぐための、有効期間を延長するための、および／または本明細書において提供されるような抗体もしくは抗原結合断片の有効性を改善するための方法がさらに提供される。

【0184】

さらに例示するために、医薬上許容される担体として、例えば、塩化ナトリウム注射、リンゲル注射、等張性デキストロース注射、滅菌水注射またはデキストロースおよび乳酸リンゲル注射などの水性ビヒクル、植物起源の硬化油、ココナッツオイル、トウモロコシオイル、ゴマ油またはピーナッツオイルなどの非水性ビヒクル、静菌性または静真菌性濃度の抗菌剤、塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張性剤、リン酸またはクエン酸バッファーなどのバッファー、重硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤、塩酸プロカインなどの局所麻酔、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはポリビニルピロリドンなどの懸濁剤および分散剤、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ－８０）などの乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）またはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）などの封鎖剤またはキレート化剤、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸または乳酸を挙げることができる。担体として利用される抗菌剤を、複数回用量容器中の医薬組成物に添加してもよく、これとして、フェノールまたはクレゾール、水銀剤、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンズアルコニウムおよび塩化ベンゼトニウムが挙げられる。適した賦形剤として、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロールまたはエタノールを挙げることができる。適した非毒性補助物質として、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定化剤、溶解促進剤、または酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンもしくはシクロデキストリンなどの薬剤を挙げることができる。

【0185】

医薬組成物は、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、丸剤、カプセル剤、錠剤、持続放出製剤または散剤であり得る。経口製剤はとして、医薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどといった標準担体を挙げることができる。

【0186】

特定の実施形態では、医薬組成物は、注射用組成物に製剤化される。注射用医薬組成物は、例えば、液体溶液、懸濁液、エマルジョンまたは液体溶液、懸濁液またはエマルジョンを作製するのに適した固体形態などの任意の従来の形態で調製され得る。注射のための調製物として、注射用に準備された滅菌および／または非発熱性溶液、皮下錠剤を含む、使用直前に溶媒と組み合わされるべく準備された凍結乾燥散剤などの滅菌乾燥可溶性製剤、注射用に準備された滅菌懸濁液、使用直前にビヒクルと組み合わされるべく準備された滅菌乾燥不溶性製剤、ならびに滅菌および／または非発熱性エマルジョンを挙げることができる。溶液は、水性であっても、非水性であってもよい。

【0187】

特定の実施形態では、単位用量非経口調製物は、アンプル、バイアルまたはニードルを備えたシリンジ中にパッケージングされる。非経口投与用のすべての調製物は、当技術分野で公知であり、実施されるように滅菌および非発熱性でなくてはならない。

【0188】

特定の実施形態では、滅菌、凍結乾燥散剤は、適した溶媒中に本明細書において開示されるような抗体または抗原結合断片を溶解することによって調製される。溶媒は、散剤または散剤から調製された再構成された溶液の安定性またはその他の薬理学的成分を改善する賦形剤を含有し得る。使用され得る賦形剤として、それだけには限らないが、水、デキストロース、ソルビトール〔sorbital〕、フルクトース、コーンシロップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロースまたはその他の適した薬剤が挙げられる。溶媒は、クエン酸、リン酸ナトリウムまたはリン酸カリウムなどのバッファーまたは、一実施形態ではおよそ中性のｐＨの、当業者に公知のその他のこのようなバッファーを含有し得る。当業者に公知の溶液のその後の滅菌濾過と、それに続く標準状態下での凍結乾燥によって、望ましい製剤が提供される。一実施形態では、得られた溶液は、凍結乾燥のためにバイアル中に配分される。各バイアルは、抗ＣＤ２７６抗体またはその抗原結合断片またはその組成物の単一投与量または複数回投与量を含有し得る。バイアルに用量または用量のセットに必要なものを上回る少量（例えば、約１０％）を過剰充填することは、正確なサンプル引き出しおよび正確な投薬を促進するために許容される。凍結乾燥散剤は、約４℃～室温などの適当な状態下で保存され得る。

【0189】

注射水を用いる凍結乾燥散剤の再構成は、非経口投与において使用するための製剤を提供する。一実施形態では、再構成のために滅菌および／または非発熱性水またはその他の液体の適した担体が、凍結乾燥散剤に付加される。正確な量は、与えられている選択された療法に応じて変わり、経験的に決定され得る。

【0190】

使用方法
本開示はまた、本明細書において提供されるような抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を、それを必要とする対象に投与し、それによってＣＤ２７６関連疾患または状態を処置または予防することを含む治療方法も提供する。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６関連疾患または状態は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、適応免疫疾患または感染性疾患である。

【0191】

癌の例として、それだけには限らないが、非小細胞肺癌（扁平上皮／非扁平上皮）、小細胞肺癌、腎細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、卵巣癌、乳癌（基底乳癌腫、乳管癌腫および小葉乳癌腫を含む）、膵臓癌、胃癌腫、膀胱癌、食道癌、中皮腫、黒色腫、頭頸部癌、甲状腺癌、肉腫、前立腺癌、神経膠芽腫、子宮頸癌、胸腺癌腫、黒色腫、骨髄腫、菌状息肉腫〔mycoses fungoids〕、メルケル細胞癌、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫およびその他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、リンパ系腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌腫、甲状腺髄様癌腫、乳頭様甲状腺癌腫、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、セミノーマ、古典的ホジキンリンパ腫（ＣＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、Ｔ細胞／組織球に富むＢ細胞リンパ腫、急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、真性赤血球増加症、肥満細胞由来腫瘍、ＥＢＶ陽性および陰性ＰＴＬＤおよびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、形質芽球性リンパ腫、節外性ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫、上咽頭癌腫、ＨＨＶ８関連原発性滲出リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、重鎖病、骨髄異形成症候群、ヘアリー細胞白血病および脊髄形成異常症、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫〔craniopharyogioma〕、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、髄膜腫〔menangioma〕、黒色腫、神経芽細胞腫および網膜芽細胞腫が挙げられる。

【0192】

特定の実施形態では、癌は、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞巣状軟部肉腫、星状膠細胞腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頸動脈球腫瘍、子宮頸癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素細胞性腎癌腫、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、上衣腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液型軟骨肉腫、骨性線維形成不全症、線維性骨異形成症、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、胚細胞腫瘍、頭頸部癌、肝細胞癌腫、膵島腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫／良性脂肪腫性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪腫性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腫瘍症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽細胞腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌腫、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、希少血液障害、転移性腎癌、横紋筋肉腫様腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌腫、胸腺腫、甲状腺転移性癌ならびに子宮癌である。特定の実施形態では、癌は、化学療法抵抗性である。

【0193】

特定の実施形態では、疾患または状態は、Ｂ細胞リンパ腫から選択される血液癌である。Ｂ細胞リンパ腫の例として、限定されるものではないが、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＭＺＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、リヒター症候群、バーキットリンパ腫または濾胞性リンパ腫が挙げられる。

【0194】

自己免疫疾患として、それだけには限らないが、後天性免疫不全症候群（自己免疫成分を有するウイルス疾患であるＡＩＤＳ）、円形脱毛症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性アジソン病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（ＡＴＰ）、ベーチェット病、心筋症、セリアックスプルーヘルペス状皮膚炎；慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー（ＣＩＰＤ）、瘢痕性類天疱瘡、寒冷凝集素病、クレスト症候群、クローン病、デゴス病、皮膚筋炎－若年性、円板状ループス、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛症－線維筋炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本甲状腺炎、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＩｇＡ腎症、インスリン依存性糖尿病、若年性慢性関節炎（スチル病）、若年性関節リウマチ、メニエール病、混合型結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性〔pemacious〕貧血、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多腺性症候群、リウマチ性多発性筋痛、多発性筋炎および皮膚筋炎、原発性無γグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬の関節炎、レイノー現象、ライター症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症（進行性全身性硬化症（ＰＳＳ）、全身性硬化症（ＳＳ）としても知られる）、シェーグレン症候群、スティフ・マン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎／巨大細胞動脈炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑およびウェジナー肉芽腫症が挙げられる。

【0195】

炎症性障害として、例えば、慢性および急性炎症性障害が挙げられる。炎症性障害の例として、アルツハイマー病、喘息、アトピー性アレルギー、アレルギー、アテローム性動脈硬化症、気管支喘息、湿疹、糸球体腎炎、移植片対宿主病、溶血性貧血、変形性関節症、敗血症、卒中、組織および臓器の移植、脈管炎、糖尿病性網膜症および人工呼吸器誘発肺損傷が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２７６関連状態は、炎症性疾患、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、腸管粘膜炎症、大腸炎と関連する消耗性疾患、多発性硬化症、ウイルス感染、関節リウマチ、変形性関節症、クローン病〔Cohn's disease〕および炎症性腸疾患、乾癬、全身性強皮症、自己免疫性糖尿病などである。

【0196】

感染性疾患として、それだけには限らないが、真菌感染、寄生虫／原虫感染または慢性ウイルス感染、例えば、マラリア、コクシジオイオドマイコシスイミティス〔coccidioiodmycosis immitis〕、ヒストプラスマ症、爪真菌症、アスペルギルス症〔aspergilosis〕、ブラストミセス症、カンジジアシスアルビカンス〔candidiasis albicans〕、パラコクシジオイデス症〔paracoccidioiomycosis〕、微胞子虫症、アカントアメーバ角膜炎、アメーバ症、回虫症、バベシア症、バランチジウム症、バイリサスカリアシス〔Baylisascariasis〕、シャーガス病、肝吸虫症、コクリオミイヤ属〔Cochliomyia〕、クリプトスポリジウム症、裂頭条虫症、メジナ虫症、エキノコッカス症、象皮症、腸蟯虫症、肝蛭症、肥大吸虫症、フィラリア症、ジアルジア症、顎口虫症、膜様条虫症、イソスポーラ症、片山熱、リーシュマニア症、ライム病、横川吸虫症、ハエ幼虫症、オンコセルカ症、シラミ寄生症、疥癬、住血吸虫症、睡眠病、糞線中症、条虫症、トキソカラ症、トキソプラズマ症、旋毛虫症、鞭虫症、トリパノソーマ症、蠕虫感染、Ｂ型肝炎（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎（ＨＣＶ）、ヘルペスウイルス、エプスタイン－バーウイルス、ＨＩＶ、サイトメガロウイルス、Ｉ型単純ヘルペスウイルス、ＩＩ型単純ヘルペスウイルス、ヒトパピローマウイルス、アデノウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ、カポジウエスト肉腫関連ヘルペスウイルス伝染病、シンリングウイルス（トルクテノウイルス〔Torquetenovirus〕）、ヒトＴリンパ増殖性ウイルスＩ、ヒトＴリンパ増殖性ウイルスＩＩ、水痘帯状疱疹、ＪＣウイルスまたはＢＫウイルスの感染が挙げられる。

【0197】

特定の実施形態では、対象はヒトである。

【0198】

別の態様では、ＣＤ２７６活性の調節から恩恵を受けるであろう対象における疾患または状態を処置する方法であって、それを必要とする対象に、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量を投与することを含む方法が提供される。用語「疾患または状態」は、本明細書において、用語「ＣＤ２７６関連疾患または状態」と互換的に使用され得る。

【0199】

本明細書において提供されるような抗体またはその抗原結合断片の治療上有効な量は、当技術分野で公知の種々の因子、例えば、対象の体重、年齢、過去の病歴、現在の薬物適用、健康の状態および交差反応の可能性、アレルギー、感受性および有害な副作用、ならびに投与経路および疾患発達の程度などに応じて変わる。投与量は、これらおよびその他の状況または必要条件によって示されるように、当業者（例えば、医師または獣医師）によって比例的に低減または増大され得る。

【0200】

特定の実施形態では、本明細書において提供されるような抗体またはその抗原結合断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約５５ｍｇ／ｋｇ、約６０ｍｇ／ｋｇ、約６５ｍｇ／ｋｇ、約７０ｍｇ／ｋｇ、約７５ｍｇ／ｋｇ、約８０ｍｇ／ｋｇ、約８５ｍｇ／ｋｇ、約９０ｍｇ／ｋｇ、約９５ｍｇ／ｋｇまたは約１００ｍｇ／ｋｇ）の治療上有効な投与量で投与され得る。これらの実施形態のうち特定のものでは、抗体またはその抗原結合断片は、約５０ｍｇ／ｋｇ以下の投与量で投与され、これらの実施形態のうち特定のものでは、投与量は、１０ｍｇ／ｋｇ以下、５ｍｇ／ｋｇ以下、３ｍｇ／ｋｇ以下、１ｍｇ／ｋｇ以下、０．５ｍｇ／ｋｇ以下または０．１ｍｇ／ｋｇ以下である。特定の実施形態では、投薬量は、治療過程にわたって変化し得る。例えば、特定の実施形態では、初期投薬量は、その後の投薬量よりも高い場合がある。特定の実施形態では、投薬量は、対象の反応に応じて処置過程にわたって変わり得る。

【0201】

投与計画は、最適な望ましい応答（例えば、治療的応答）を提供するように調整され得る。例えば、単回用量が投与される場合も、または数回の分割用量が経時的に投与される場合もある。

【0202】

本明細書において開示される抗体およびその抗原結合断片は、例えば、非経口（例えば、皮下、腹腔内、静脈内注入を含む静脈内、筋肉内または皮内注射）または非経口ではない（例えば、経口、鼻腔内、眼球内、舌下、直腸内または局所）経路などの当技術分野で公知の任意の経路によって投与され得る。

【0203】

いくつかの実施形態では、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片は、単独で、または１種もしくは複数のさらなる治療手段または薬剤と組み合わせて投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片は、単独で、または第２の治療薬と組み合わせて投与され得る。例えば、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片は、第２の治療剤、例えば、化学療法剤または抗癌剤と組み合わせて投与され得る。特定の実施形態では、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片は、１つまたは複数の免疫抑制分子、例えば、ＣＤ２４、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、ＰＤ－Ｌ１または主要組織適合複合体クラスＩ（Ｂ２Ｍ）のベータ－２ミクログロブリンサブユニットのアンタゴニストと組み合わせて投与され得る。用語「アンタゴニスト」とは、本明細書において、免疫抑制シグナルの誘発を阻止するために、ＣＤ２４、ＣＤ４７、ＳＩＲＰα、ＰＤ－Ｌ１またはＢ２Ｍのそれらのそれぞれの結合パートナーへの結合を遮断または阻害する任意の小分子、低分子もしくはマイクロＲＮＡまたは抗体もしくはその抗原結合断片を指すことができる。特定の実施形態では、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片などのＰＤ－Ｌ１アンタゴニストと組み合わせて投与される。

【0204】

用語「抗ＰＤ－Ｌ１抗体」とは、限定されるものではないが、ＷＯ２０１９１９６３０９Ａ１に開示されているＹＮ０３５およびＷＯ２０１００７７６３４Ａ１に開示されているＭＰＤＬ３２８０Ａを含む、任意の既知の抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合断片を指すことができる。

【0205】

これらの実施形態の特定のものでは、１種または複数のさらなる治療薬と組み合わせて投与される本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片は、１種または複数のさらなる治療薬と同時に投与されてもよく、これらの実施形態の特定のものでは、抗体またはその抗原結合断片およびさらなる治療薬（複数可）は、同一医薬組成物の一部として投与されてもよい。しかし、別の治療薬と「組み合わせて」投与される抗体またはその抗原結合断片は、薬剤と同時に、または薬剤と同一組成物中で投与されなくてもよい。別の薬剤に先立って、またはその後に投与される抗体またはその抗原結合断片は、抗体またはその抗原結合断片および第２の薬剤が、異なる経路によって投与される場合でさえ、その語句が本明細書において使用される場合、その薬剤と「組み合わせて」投与されると考えられる。可能であれば、本明細書において開示される抗体またはその抗原結合断片と組み合わせて投与されるさらなる治療薬は、さらなる治療薬の添付文書に列挙されるスケジュールに従って、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３年（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７ｔｈ Ｅｄ；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２００２））もしくは当技術分野で周知のプロトコールに従って投与される。

【0206】

いくつかの実施形態では、本開示は、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することとを含む方法をさらに提供する。

【0207】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）対象から得られたサンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ２７６の存在を、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態と相関させることとを含む方法をさらに提供する。

【0208】

いくつかの実施形態では、本開示は、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、ＣＤ２７６関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用も提供する。

【0209】

別の態様では、本開示はまた、ＣＤ２７６を発現する細胞においてＣＤ２７６活性を調節する方法であって、ＣＤ２７６を発現する細胞を、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片に対して曝露することを含む方法も提供する。

【0210】

別の態様では、本開示はまた、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を検出する方法であって、サンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することとを含む方法も提供する。

【0211】

別の態様では、本開示はまた、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を診断する方法であって、ａ）対象からサンプルを得ることと、ｂ）対象から得られたサンプルを、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片と接触させることと、ｃ）サンプル中のＣＤ２７６の存在または量を決定することと、ｄ）ＣＤ２７６の存在または量を、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態の存在または状況と相関させることとを含む方法も提供する。

【0212】

別の態様では、本開示はまた、対象におけるＣＤ２７６関連疾患または状態を処置するための医薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用も提供する。医薬は第２の治療剤、例えば、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストをさらに含み、任意選択で、ＰＤ－Ｌ１アンタゴニストは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体もしくはその抗原結合断片である。

【0213】

別の態様では、本開示はまた、ＣＤ２７６関連疾患または状態を診断するための診断用試薬の製造における、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片の使用も提供する。

【0214】

別の態様では、本開示はまた、ＣＤ２７６、任意選択で、組換えＣＤ２７６、細胞表面に発現されたＣＤ２７６またはＣＤ２７６を発現する細胞の検出において有用な、本明細書において提供される抗体またはその抗原結合断片を含むキットも提供する。用語「組換え」とは、本明細書において、生体分子をその天然の状態以外のものにする１つまたは複数の分子生物学的技術を使用した、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド分子などの１つまたは複数の生体分子の人為的操作を指す。

【0215】

別の態様では、本開示はまた、哺乳動物においてＣＤ２７６を発現する細胞または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激するための方法であって、哺乳動物に、抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、共刺激シグナル伝達領域およびＴＣＲシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞の有効量を投与することを含み、抗原結合ドメインがＣＤ２７６と特異的に結合し、本明細書において提供される抗原結合断片を含む方法も提供する。特定の実施形態では、抗原結合断片はＦａｂまたはｓｃＦｖである。特定の実施形態では、本明細書において提供されるＣＡＲは二重特異性である。ＣＡＲは、ＣＤ２７６以外の第２の抗原またはＣＤ２７６上の第２のエピトープとさらに特異的に結合可能である。特定の実施形態では、第２の抗原は上述の腫瘍抗原である。ＴＣＲシグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＦｃｃＲＩγ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ１３４、ＭｙＤ８８、ＣＤ４０、ＣＤ２７８、ＴＬＲまたはそれらの組合せの細胞内シグナル領域配列からなる群から選択され得る。膜貫通領域は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８またはＣＤ２８の膜貫通領域を含み得る。特定の実施形態では、第２の抗原は、免疫抑制分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１、ＳＩＲＰα、ＣＤ２４、ＣＤ４７またはＢ２Ｍである。

【0216】

別の態様では、本開示はまた、ＣＤ２７６関連疾患または状態を有する哺乳動物を処置するための方法であって、哺乳動物に、本明細書において提供されるＣＡＲ（例えば、自己Ｔ細胞）を発現するように遺伝子改変された細胞の有効量を投与し、それによって哺乳動物を処置することを含む方法も提供する。特定の実施形態において、ＣＤ２７６関連疾患または状態は癌である。特定の実施形態において、哺乳動物はヒト対象である。

【0217】

以下の実施例は、特許請求された本発明をより良好に例示するために提供され、本発明の範囲を制限すると解釈されてはならない。以下に記載されるすべての特定の組成物、材料および方法は、全体で、または一部で本発明の範囲内に入る。これらの特定の組成物、材料および方法は、本発明を制限するものではなく、単に、本発明の範囲内に入る特定の実施形態を例示するものである。当業者は、発明の能力を行使することなく、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の組成物、材料および方法を開発し得る。本発明の範囲内にとどまりながら本明細書に記載される手順において多数の変法を行うことができるということが理解されよう。このような変法が本発明の範囲内に含まれることは本発明者らの意図である。

【実施例】

【0218】

［実施例１］
ハイブリドーマ開発
１．方法
１．１ 免疫化および血清力価測定
１．１．１ 免疫原および免疫化戦略
細胞免疫化
ヒトＣＤ２７６タンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｑ５ＺＰＲ３、すなわち、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６）またはマウスＣＤ２７６タンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ：Ｑ８ＶＥ９８、すなわち、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６）を過剰発現するＣＨＯ－Ｓ細胞を免疫原として使用した。

【0219】

タンパク質免疫化
組換えヒトＣＤ２７６タンパク質（配列番号３４６）：組換えヒトＣＤ２７６タンパク質を、ヒトＣＤ２７６タンパク質をエンテロキナーゼにより消化することによって調製し、ヒトＣＤ２７６の細胞外ドメインを、６×ＨｉｓタグおよびＤＤＤＤＫと融合した（配列番号３４５）。

【0220】

組換えヒトＣＤ２７６タンパク質（配列番号３４６）：
LEVQVPEDPVVALVGTDATLCCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDTKQLVHSFAE
GQDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFVSIRDFGSAA
VSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYQGYPEAEVFWQDGQGVP
LTGNVTTSQMANEQGLFDVHSILRVVLGANGTYSCLVRNPVLQQDAHSSVTI
TPQRSPTGAVEVQVPEDPVVALVGTDATLRCSFSPEPGFSLAQLNLIWQLTDT
KQLVHSFTEGRDQGSAYANRTALFPDLLAQGNASLRLQRVRVADEGSFTCFV
SIRDFGSAAVSLQVAAPYSKPSMTLEPNKDLRPGDTVTITCSSYRGYPEAEVF
WQDGQGVPLTGNVTTSQMANEQGLFDVHSVLRVVLGANGTYSCLVRNPVL
QQDAHGSVTITGQPMTFPPEAHHHHHHDDDDK

【0221】

Ｂａｌｂ／ｃおよびＳＪＬマウスを以下に示すように免疫化した。一次免疫に続いて、動物がハイブリドーマ開発に適した十分な抗血清力価を発生するまで数回のブーストを行った。

【0222】

【表A】

【0223】

１．１．２ 免疫化スケジュール
免疫化スケジュール（１群）

【0224】

【表B】

【0225】

免疫化スケジュール（２群）

【0226】

【表C】

【0227】

免疫化スケジュール（３群）

【0228】

【表D】

【0229】

免疫化スケジュール（４群）

【0230】

【表E】

【0231】

免疫化スケジュール（５群）

【0232】

【表F】

【0233】

１．１．３ 試験ブリード抗血清解析
スクリーニング－試験ブリードを実施し、ヒトおよび／またはマウスＣＤ２７６を安定して過剰発現するＣＨＯ－Ｓ細胞株（ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６および／またはＣＨＯ－Ｓ－ｍＣＤ２７６）に対してＦＡＣＳを使用して試験することによって評価した。

【0234】

スクリーニング－試験ブリードを実施し、組換えヒトＣＤ２７６タンパク質の細胞外ドメインによるＥｌｉｓａを使用して試験することによって評価した。

【0235】

１．２ ハイブリドーマの作製およびスクリーニング
１．２．１ 細胞融合およびスクリーニング
融合－試験ブリードＦＡＣＳによって決定されるように、免疫化に最もよく応答したマウスに対して脾細胞融合を実施した。脾臓およびリンパ節からのリンパ球を、最適化した電気融合プロトコールを使用してＳｐ２／０細胞株に融合した。細胞融合の成功を確実にするために、複数の融合を実施した。

【0236】

スクリーニングおよび拡大－融合体を９６ウェルプレートのスタックにプレーティングした（ウェル当たり２×１０^４～１０^５個）。プレートを成長についてモニタリングし、毎週給餌した。細胞成長のあるウェルを、ＦＡＣＳおよび／またはＥｌｉｓａなどの他の実行可能なアッセイを用いて１０～１４日の一次スクリーニングアッセイによってスクリーニングした。各標的化抗原について複数の融合を実施し、スクリーニングした。一次スクリーニングからＣＨＯ－Ｓ－ＣＤ２７６との陽性結合および陽性Ｅｌｉｓａシグナルを示した陽性親クローンを、二次スクリーニングのために２４ウェルプレートに拡大させた。

【0237】

追加の抗体スクリーニング－一次スクリーニングに続いて、２４ウェルプレートに拡大させた陽性親クローンを、以下のハイブリドーマスクリーニングファンネルに記載されるアッセイによって再度スクリーニングした。

【0238】

サブクローニングに進むために、目的のハイブリドーマを選択した。

【0239】

１．２．２ ハイブリドーマのサブクローニング、スクリーニングおよび凍結保存
サブクローニング－次いで、上記のスクリーニングファンネルからの所望の反応性およびアイソタイプを有する親ハイブリドーマを、モノクローンが得られるまで複数回の限界希釈または単一細胞選別によってサブクローニングした。

【0240】

スクリーニングおよび拡大－サブクローニングプレートを、タンパク質または細胞ベースのＥｌｉｓａによってスクリーニングし、良好な結合能力を有するサブクローンを、確認試験のために２４ウェルに拡大させた。これらのサブクローンの特異性および交差反応性をＦＡＣＳ解析によって確認した。簡潔に述べると、カニクイザル〔Macaca_fascicularis〕ＣＤ２７６を安定して過剰発現する親ＣＨＯ－Ｓ細胞、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６、ＣＨＯ－Ｓ細胞株、マウスＣＤ２７６を安定して過剰発現するＣＨＯ－Ｋ１ Ｓ細部株を、それぞれ各サブクローンによって産生された抗体とインキュベートした。蛍光色素がコンジュゲートした二次抗体を使用して、一次抗体の細胞との結合を検出した。蛍光強度中央値を、ＦＡＣ分析によって測定した。

【0241】

凍結保存－所望のサブクローン細胞株を配列決定し、凍結保存のために培養フラスコ内でさらに拡大させた。０．５～１３．０×１０^６個の細胞／バイアルで細胞株当たり４～６個のバイアルを最初に凍結保存した。必要に応じて、選択された最も価値のある細胞株に対してマスターセルバンクおよびワーキングセルバンクを確立した。

【0242】

２．結果
本発明者らは、ヒトＣＤ２７６タンパク質を安定して過剰発現するＣＨＯ－Ｓ細胞（ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６）との陽性結合を示すが、親ＣＨＯ－Ｓ細胞との結合を示さない、特有の配列を有する４３個の抗体を発見し、これらの抗体がヒトＣＤ２７６を認識する抗体であることを示唆した。これらのうちの４２個の抗体はカニクイザル〔cynomolgus monkey〕ＣＤ２７６と結合でき、１１個の抗体はマウスＣＤ２７６タンパク質と結合できた。ＦＡＣＳによって検出された、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６、ＣＨＯ－Ｓ－ｍＣＤ２７６、ＣＨＯ－Ｓ－カニクイザルＣＤ２７６（ＣＨＯ－Ｓ－ｃｙｎｏＣＤ２７６）を染色するマウス抗体のＭＦＩを以下の表にまとめた（表５）。

【0243】

【表5】

【0244】

［実施例２］
抗体の特性評価：親和性
１．方法
１．１ ＳＫＯＶ３癌細胞株に対する細胞ベースの結合親和性
表５から３１個のマウス抗体の配列を選択して、ヒトＩｇＧ１キメラ抗体を作製および産生した。これらの抗体ならびにベンチマーク抗体であるエノブリツズマブ（米国特許第８８０２０９１号、特にｈＢＲＣＡ８４Ｄ－２と指定された構築物を有するＭＧＡ２７１を参照のこと）およびＭＧＣ０１８（ｍＡｂ ＭＧＡ０１７（ヒトＩｇＧ１）が、分裂細胞および非分裂細胞の両方においてＤＮＡを損傷させ、それによって細胞死を引き起こし得るアルキル化剤である、プロドラッグｓｅｃｏ－ＤＵｏｃａｒｍｙｃｉｎヒドロキシベンズアミドアザインドール（ＤＵＢＡ）と切断可能なリンカーを介してコンジュゲートしている抗体－薬物－コンジュゲート）と、ヒト患者由来の卵巣癌細胞株であるＳＫＯＶ３との結合親和性を、ＦＡＣＳ解析によって決定した。

【0245】

ＦＡＣ解析のプロトコールは以下のように説明される。

【0246】

１．Ｔｒｙｐｓｉｎ（１×）を使用して細胞を消化した。回収した細胞を３００ｇで３分間遠心分離し、上清を捨てた。

【0247】

２．３００ｇで３分間遠心分離し、上清を捨てることにより、ＦＡＣＳバッファーで細胞を２回洗浄した。

【0248】

３．細胞を再懸濁し、２＊１０^５個の細胞／ウェルを５０ｕｌのＦＡＣＳバッファー中のアッセイプレートに播種し、次いで５０μｌの一次抗体を添加した（一次抗体最終濃度：５．００、１．６７、０．５６、０．１９、０．０６、０．０２、０．０１、０．００μｇ／ｍｌ、または２０．００、６．６７、２．２２、０．７４、０．２５、０．０８、０．０３、０．００μｇ／ｍｌ）。４℃で１時間インキュベートした。

【0249】

４．ステップ２の条件を使用することによって細胞を２回洗浄した。細胞を１００μｌ／ウェルで希釈した二次抗体で再懸濁し、暗所において４℃で１時間インキュベートした。

【0250】

５．ステップ２の条件を使用することによって細胞を２回洗浄した。細胞を１００μｌ／ウェルのＦＡＣＳバッファーで再懸濁した。ＦＡＣＳ解析のために細胞を暗所に維持した。

【0251】

ＳＫＯＶ３に対する選択された抗体の結合親和性は、ベンチマーク抗体であるエノブリツズマブよりも高いか、低いか、または同等である（表６および図１を参照のこと）。

【0252】

【表6】

【0253】

２．Ｂｉａｃｏｒｅ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ）によるタンパク質ベースの親和性試験
試験条件：
分析物：Ｂ７Ｈ３
ランニングバッファー：ＨＢＳ－ＥＰ^＋
流速：３０μＬ／分
捕捉：Ａｂ、６０秒間１０μＬ／分
段階希釈したＢ７Ｈ３の注入
接触時間：１８０秒
解離時間：４００秒
再生：ｐＨ１．５ Ｇｌｙ、３０秒間３０μＬ／分
方法：捕捉を使用した複数サイクルの動態／親和性
機械モデル：Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ）
解析温度：２５℃

【0254】

【表7】

【0255】

３．いくつかの癌細胞株上でのＢ７Ｈ３の発現パターン
Ｂ７Ｈ３発現を、６－Ｄ８－Ｅ７－Ａ１１を用いたＦＡＣＳによって検出した。ＢｘＰＣ３（膵臓）、ＭＣＦ７（乳房）、Ｄｅｎｔｒｏｉｔ５６２（頭頸部）、ＲＫＯ（結腸）およびＳＵＮ６２０（胃）などのいくつかの癌細胞株上での高発現レベルのＢ７Ｈ３を見出した（図２を参照のこと）。

【0256】

［実施例３］
抗体の特性評価：ＡＤＣＣ
１．方法
抗ＣＤ２７６抗体のＡＤＣＣを決定するために、１×１０^５／ウェルのＳＫＯＶ３を９６ウェル平底滅菌プレートに播種し、次いで２×１０^４のＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ－ＣＤ１６をエフェクター細胞として添加した。その後、段階希釈した抗体を各ウェルに添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で１８時間インキュベートした。最後に、ルシフェラーゼ活性を検出して抗体のＡＤＣＣ活性を評価した。

【0257】

２．結果
すべての本発明者らの抗体は、ＳＫＯＶ３細胞（ヒト卵巣癌細胞株）に対して強力なＡＤＣＣ効果を示した。抗体の一部は、ベンチマーク抗体であるエノブリツズマブと比較して、より低いか、または同等のＥＣ_５０を示し（表８および図３）、エノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）よりもＳＫＯＶ３細胞に対するＡＤＣＣ効果の媒介において強力であることを示した。

【0258】

【表8】

【0259】

［実施例４］
抗体の特性評価：ＣＤＣ
１．方法
抗ＣＤ２７６抗体のＣＤＣを決定するために、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６細胞を４Ｅ５細胞／ｍＬで細胞培養培地に再懸濁し、次いで９６ウェル不透明壁プレートに５０μＬ／ウェルで添加した。抗ＣＤ２７６抗体を完全Ｆ－１２Ｋ培地で希釈し、９６ウェル不透明壁プレートに５０μＬ／ウェルで添加した。ヒト血清補体を細胞培養培地で希釈し、同じプレートに５０μＬ／ウェルで添加した。混合物を３７℃にてＣＯ_２インキュベーター内で２時間インキュベートした。細胞傷害性を決定するためのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を５０μＬ／ウェルで添加し、混合物を室温で１０分間インキュベートした。マイクロプレートリーダー上の生細胞の発光シグナルを記録した。

【0260】

２．結果
すべての抗ＣＤ２７６抗体は、ＣＨＯ－Ｓ－ｈＣＤ２７６細胞に対して強力なＣＤＣ効果を示し、ベンチマーク抗体であるエノブリツズマブ（ＭＧＡ２７１）と比較して低いＥＣ_５０を示した（表９および図４を参照のこと）。

【0261】

【表9】

【0262】

［実施例５］
抗体の特性評価：間接的ＡＤＣ細胞傷害性
１．方法
Ｆａｂ－ＺＡＰは、ヤギ抗ヒト一価抗体（二次抗体）およびリボソーム不活化タンパク質であるサポリンの化学的コンジュゲートである。Ｆａｂ－ＺＡＰは、抗体の内部移行能力を決定するために使用される。このアッセイでは、８０μＬのＳＫＯＶ－３細胞を９６ウェルプレートに２０００細胞／ウェルでプレーティングし、３７℃で一晩インキュベートした。次いで抗ＣＤ２７６抗体を４０μＬ／ウェルで添加した。Ｆａｂ－ＺＡＰヒト希釈液を４０μＬ／ウェルで添加し、３７℃にてＣＯ_２インキュベーター内で９６時間インキュベートした。細胞の細胞傷害性を決定するためのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ試薬を１００μＬ／ウェルで添加し、室温で１０分間インキュベートした。マイクロプレートリーダー上の生細胞の発光シグナルを記録した。

【0263】

２．結果
すべての抗ＣＤ２７６抗体は、ベンチマーク抗体であるＭＧＣ０１８と比較して低いか、または同等のＩＣ_５０で、ＳＫＯＶ３細胞に対する強力な間接的ＡＤＣ効果を示し（表１０、図５）、これらがＡＤＣを作製するための潜在的な候補であることを示した。

【0264】

【表10】

【0265】

［実施例６］
雌のＣ５７ＢＬ／６マウスにおける皮下ＭＣ－３８－ｈＣＤ２７６マウス結腸癌腫の処置における抗体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
１．研究設計および方法
マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃを有するいくつかのモノクローナル抗体を構築し、ｉｎ ｖｉｖｏ有効性研究のために発現させた。

【0266】

１．ＭＣ－３８－ｈＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）腫瘍細胞を、３７℃、空気中５％ＣＯ_２の雰囲気下で１０％ウシ胎仔血清を補充したＤＭＥＭ培地を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで維持した。対数増殖期の細胞を採取し、腫瘍接種前にセルカウンターにより定量した。

【0267】

２．各マウスの右後部脇腹領域に、腫瘍発生のために、０．１ｍｌのＰＢＳ中のＭＣ－３８－ｈＣＤ２７６（Ｂ７Ｈ３）腫瘍細胞（１×１０＾６）を皮下接種した。ランダム化の日付を０日目として示し、投与を０日目から開始する。

【0268】

３．平均腫瘍サイズが約５０～６０ｍｍ^３に達すると、ランダム化を開始する。６０匹のマウスをこの研究に登録した。すべての動物をランダムに７つの研究群に割り当てた。ランダム化は、ランダム化ブロック設計に基づいて実施した。

【0269】

４．腫瘍体積を、ノギスを使用して２次元で１週間に２回測定し、体積は、式：Ｖ＝（Ｌ×Ｗ×Ｗ）／２を使用してｍｍ^３で表し、式中、Ｖは腫瘍体積であり、Ｌは腫瘍の長さ（最長の腫瘍寸法）であり、Ｗは腫瘍幅（Ｌに垂直な最長の腫瘍寸法）である。投与ならびに腫瘍サイズおよび体重の測定は、層流キャビネット内で行った（表１１、図６を参照のこと）。

【0270】

５．アテゾリズマブ（ＴｅｃｅｎｔｒｉｑまたはＭＰＤＬ３２８０Ａとも呼ばれる抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ＷＯ２０１００７７６３４Ａ１を参照のこと）およびＡｎｔｅｎｇｅｎｅ－０８４Ｍ（マウスＩｇＧ２ａで構築されたＭＧＡ２７１のＦａｂ配列（米国特許第８８０２０９１Ｂを参照のこと））を対照として使用した。

【0271】

【表11】

【0272】

２．結果
図６に示すように、抗ＣＤ２７６抗体の一部は強力なｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示した。特に、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５マウスＩｇＧ２ａは、Ａｎｔｅｎｇｅｎｅ－０８４ＭマウスＩｇＧ２ａよりも高い腫瘍阻害を示した。

【0273】

［実施例７］
抗体のＡＤＣｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験
１．研究設計および方法
抗体のＡＤＣ潜在能力を評価するために、ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒにおいてＶＣ－ＭＭＡＥとの抗体コンジュゲーションを実施した。一連のＶＣ－ＭＭＡＥコンジュゲート抗体を得た。詳細を表１２に示す。

【0274】

【表12】

【0275】

Ｃａｌｕ－６研究のための各Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの右前部脇腹領域に、腫瘍発生のために、０．１ｍｌのＰＢＳ中のＣａｌｕ－６腫瘍細胞（５×１０^６）を皮下接種した。平均腫瘍サイズが約１２２ｍｍ^３に達すると、ランダム化を開始する。６０匹のマウスをこの研究に登録した。ランダム化の日付を０日目として示し、投与は０日目から開始する。

【0276】

２．結果
Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの皮下ヒト肺癌Ｃａｌｕ－６の処置における試験物質の治療効果をこの研究において調査した。明らかな体重減少、死亡率または毒性反応は、有効性研究の間、設計された投与レジメンでは観察されなかった。２４日目に、単剤としての３ｍｇ／ｋｇでのＭＧＣ０１８、１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２、１６－Ｃ６－Ｆ７－Ｆ５、１５－Ｃ８－Ｂ５－Ｇ７および１８－Ｆ９－Ｄ８－Ｇ７は、それぞれＢａｌｂ／ｃヌードマウスのＣａｌｕ－６モデルに対して有意な抗腫瘍効果を示す。結果を図７および表１３に示す。

【0277】

【表13】

【0278】

［実施例８］
抗体のＴ細胞活性化（ＭＬＲアッセイ）試験
１．研究設計および方法
ＤＣ誘導
単球細胞を、２Ｕ／ｍｌの樹状細胞培養因子を補充した３ｍｌの完全培地中で５×１０^６で再懸濁し、次いで６ウェルプレートで細胞を培養する。２日目に、２Ｕ／ｍｌの樹状細胞培養因子を補充した２ｍｌ／ウェルの新鮮な完全培地を、さらに３日間の培養のために添加した。その後、単球は未成熟樹状細胞（ｉＤＣ）に分化した。２Ｕ／ｍｌの樹状細胞成熟因子で４８時間刺激した後、ｉＤＣは成熟樹状細胞に分化する。

【0279】

抗体消化
２５μｇのｈＩｇＧ１および３μＬの１０×Ｇｌｙｃｏバッファーを混合し、次いでＰＢＳを添加して３０μｌの総反応体積を作製した。１μｌのＩｄｅＺプロテアーゼを添加し、次いで３７℃で３０分間インキュベートした。１０μｌのプロテインＡ／Ｇビーズを１ｍＬのＰＢＳ中に添加し、２回洗浄した。ビーズを上記のステップからの反応溶液で再懸濁した。

【0280】

チューブを室温で１分間磁石上に置き、Ｆ（ａｂ）_２は上清中にあり、Ｆｃをビーズによって捕捉した。

【0281】

ＭＬＲアッセイ
２０万細胞／ウェルのＴ細胞および２万細胞／ウェルのｍＤＣを播種した。

【0282】

細胞を、ＰＢＳ、ＩｇＧ１、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４、ＢＭＫ（ＭＧＡ２７１）またはそれらのＦａｂ（最終濃度５μｇ／ｍｌ）で処理した。２４時間後、上清を収集し、Ｅｌｉｓａを用いてヒトＩＬ－２およびＩＦＮγを試験した。

【0283】

２．結果
図８および９に示すように、３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４は、Ｔ細胞活性化を活性化できるが、２５－Ｃ８－Ｄ７－Ｃ５およびＢＭＫ（ＭＧＡ２７１）は活性化できない。

【0284】

［実施例９］
抗体のヒト化およびＰＴＭ最適化
９．１ ＦＡＣＳによるヒト化抗体の細胞ベースの親和性試験
１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２および３０－Ｃ７－Ｃ１１－Ｄ４を選択して、ヒト化およびＰＴＭ最適化を実施した。ヒト化候補および最適化されたＰＴＭ配列の親和性をＦＡＣＳによって評価した。

【0285】

結果を図１０および１１に示す。すべての配列は、親抗体と同等の親和性を示した。

【0286】

９．２ Ｂｉａｃｏｒｅ（ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒ）によるタンパク質ベースの親和性試験
試験条件：
分析物：Ｂ７Ｈ３。ランニングバッファー：ＨＢＳ－ＥＰ＋。流速：３０μＬ／分。補足：Ａｂ、６０秒間１０μＬ／分。段階希釈したＢ７Ｈ３の注入。接触時間１８０秒、解離時間４００秒。再生：ｐＨ１．５ Ｇｌｙ、３０秒間３０μＬ／分。方法：捕捉を使用した複数サイクルの動態／親和性。機械モデル：Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ）。解析温度：２５℃。

【0287】

結果を表１４に示す。

【0288】

【表14】

【0289】

９．３ ｉｎ ｖｉｖｏでのヒト化１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２抗体のＡＤＣ治療能力試験
ヒト化１０－Ｇ６－Ｃ４－Ｂ２抗体のｉｎ ｖｉｖｏでのＡＤＣ治療能力を評価した。ＣｈｅｍＰａｒｔｎｅｒにおいてＶＣ－ＭＭＡＥとの抗体コンジュゲーションを構築した。一連のＶＣ－ＭＭＡＥコンジュゲート抗体を得、その詳細を表１５に示す。

【0290】

【表15】

【0291】

Ｃａｌｕ－６研究のための各Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの右前部脇腹領域に、腫瘍発生のために、０．１ｍｌのＰＢＳ中のＣａｌｕ－６腫瘍細胞（５×１０^６）を皮下接種した。平均腫瘍サイズが約１２２ｍｍ^３に達すると、ランダム化を開始する。６０匹のマウスをこの研究に登録した。ランダム化の日付を０日目として示し、投与は０日目から開始する。

【0292】

Ｂａｌｂ／ｃヌードマウスの皮下ヒト肺癌Ｃａｌｕ－６の処置における試験物質の治療効果をこの研究において調査した。明らかな体重減少、死亡率または毒性反応は、有効性研究の間、設計された投与レジメンでは観察されなかった。

【0293】

結果を図１２および表１６に示す。２６日目に、単剤としての３ｍｇ／ｋｇでの試験物質のほぼすべてが、それぞれＢａｌｂ／ｃヌードマウスのＣａｌｕ－６モデルに対して顕著な抗腫瘍効果を示す。

【0294】

【表16】

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5-1】

【図5-2】

【図6】

【図7】

【図8】

【図9】

【図10】

【図11】

【図12】

【配列表】

2024521045000001.app

【国際調査報告】