特表 2024-521537 血友病Ｂを処置するための組成物および方法

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-05-31

(54)【発明の名称】血友病Ｂを処置するための組成物および方法

(51)【国際特許分類】

   C12N 15/864 20060101AFI20240524BHJP

   C12N 1/15 20060101ALI20240524BHJP

   C12N 1/19 20060101ALI20240524BHJP

   C12N 1/21 20060101ALI20240524BHJP

   C12N 5/10 20060101ALI20240524BHJP

   C12N 7/01 20060101ALI20240524BHJP

   A61K 48/00 20060101ALI20240524BHJP

   A61P 7/04 20060101ALI20240524BHJP

   A61K 38/36 20060101ALI20240524BHJP

   C12N 15/57 20060101ALN20240524BHJP

【ＦＩ】

C12N15/864 Z ZNA

C12N15/864 100Z

C12N1/15

C12N1/19

C12N1/21

C12N5/10

C12N7/01

A61K48/00

A61P7/04

A61K38/36

C12N15/57

【審査請求】未請求

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023579436

(86)(22)【出願日】2022-06-22

(85)【翻訳文提出日】2024-02-22

(86)【国際出願番号】 CN2022100382

(87)【国際公開番号】W WO2022268110

(87)【国際公開日】2022-12-29

(31)【優先権主張番号】PCT/CN2021/101845

(32)【優先日】2021-06-23

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

(71)【出願人】

【識別番号】523411880

【氏名又は名称】フロンテーラ セラピューティクス，インク．

(74)【代理人】

【識別番号】110003797

【氏名又は名称】弁理士法人清原国際特許事務所

(72)【発明者】

【氏名】シー，ジョンドン

【テーマコード（参考）】

4B065

4C084

【Ｆターム（参考）】

4B065AA90Y

4B065AA95X

4B065AA95Y

4B065AB01

4B065AC14

4B065BA02

4B065BC01

4B065BD14

4B065CA44

4C084AA13

4C084DC16

4C084MA66

4C084NA14

4C084ZA531

4C084ZA532

(57)【要約】

組成物が提供される。本組成物は、（１）第１のプロモータに操作可能に連結される第１のパルボウイルスカプシド遺伝子の第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、および第２のプロモータに操作可能に連結される第２のパルボウイルスカプシド遺伝子の第２のオープンリーディングフレームを含む第１のポリヌクレオチド配列であって、第１のＯＲＦが、第２のプロモータを包含するイントロン配列を含む、第１のポリヌクレオチド配列と、（２）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質をコードする導入遺伝子配列を含む第２のポリヌクレオチド配列とを含む。
【選択図】図１

【特許請求の範囲】

【請求項1】

（１）第１のプロモータに操作可能に連結される第１のパルボウイルスカプシド遺伝子の第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、および第２のプロモータに操作可能に連結される第２のパルボウイルスカプシド遺伝子の第２のオープンリーディングフレームを含む第１のポリヌクレオチド配列であって、前記第１のＯＲＦが、前記第２のプロモータを包含するイントロン配列を含む、第１のポリヌクレオチド配列と、
（２）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質をコードする導入遺伝子配列を含む第２のポリヌクレオチド配列と
を含む、組成物。

【請求項2】

前記第１のプロモータおよび前記第２のプロモータが、昆虫細胞または哺乳動物細胞中での発現に好適である、請求項１に記載の組成物。

【請求項3】

前記第１のＯＲＦ、前記第１のプロモータ、前記第２のＯＲＦ、および前記第２のプロモータが、３’から５’まで、前記第１のプロモータ、前記第２のプロモータを含む前記第１のＯＲＦ、および前記第２のＯＲＦという順序にあり、このとき、前記第２のＯＲＦが、少なくとも１つの翻訳開始コドンを含み、かつ前記第１のＯＲＦの３’部分と重複する、請求項１に記載の組成物。

【請求項4】

前記昆虫細胞がＳｆ９細胞であり、前記哺乳動物細胞がＨＥＫ２９３細胞またはその誘導体である、請求項２に記載の組成物。

【請求項5】

前記誘導体がＨＥＫ２９３Ｔ細胞である、請求項４に記載の組成物。

【請求項6】

前記第１のプロモータまたは前記第２のプロモータが、Ｐｏｌｈプロモータである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項7】

前記第１のプロモータまたは前記第２のプロモータが、ｐ１０プロモータである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項8】

前記第１のポリヌクレオチド配列が、３’末端にポリＡ配列をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項9】

前記パルボウイルスが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項10】

前記第１のＯＲＦが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ｃａｐタンパク質をコードする、請求項９に記載の組成物。

【請求項11】

前記第２のＯＲＦが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ｒｅｐタンパク質をコードする、請求項９に記載の組成物。

【請求項12】

前記ＡＡＶ ｃａｐタンパク質が、好ましくはＡＡＶセロタイプ５タンパク質である、請求項９～１１のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項13】

前記ＡＡＶ ｃａｐタンパク質が、ＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３タンパク質である、請求項１２に記載の組成物。

【請求項14】

前記ＡＡＶ ｒｅｐタンパク質がＡＡＶセロタイプ２タンパク質である、請求項１０～１３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項15】

前記ＡＡＶ ｒｅｐタンパク質が、Ｒｅｐ７８および／またはＲｅｐ５２タンパク質である、請求項１４に記載の組成物。

【請求項16】

前記第２のポリヌクレオチド配列がプロモータを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項17】

前記第２のポリヌクレオチドのプロモータが肝臓特異的プロモータである、請求項１６に記載の組成物。

【請求項18】

前記プロモータがＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータである、請求項１６に記載の組成物。

【請求項19】

前記プロモータが、配列番号４に明記される配列を含む、請求項１８に記載の組成物。

【請求項20】

前記第２のポリヌクレオチド配列が第２のプロモータをさらに含む、請求項１６～１９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項21】

前記第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータが、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータである、請求項１８に記載の組成物。

【請求項22】

前記第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータが、配列番号５に明記される配列を含む、請求項２１に記載の組成物。

【請求項23】

前記第２のポリヌクレオチド配列がイントロンを含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の配列。

【請求項24】

前記イントロンが、ヒト第ＩＸ因子のＳＶ４０イントロンまたは修飾された第１のイントロンである、請求項２３に記載の組成物。

【請求項25】

前記ＳＶ４０イントロンが修飾ＳＶ４０イントロンである、請求項２４に記載の組成物。

【請求項26】

前記修飾ＳＶ４０イントロンが、配列番号６に明記される配列を含む、請求項２５に記載の組成物。

【請求項27】

前記ヒト第ＩＸ因子の前記修飾された第１のイントロンが、配列番号７に明記される配列を含む、請求項２４に記載の組成物。

【請求項28】

前記ヒト第ＩＸ因子をコードする前記導入遺伝子配列が、コドン最適化される、請求項１～２７のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項29】

前記導入遺伝子配列が、５未満のＣＧジヌクレオチドを含む、請求項２８に記載の組成物。

【請求項30】

前記ヒト第ＩＸ因子が、野生型ヒト第ＩＸ因子と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項31】

前記ヒト第ＩＸ因子が、配列番号１に明記される配列と比較してアミノ酸置換Ｒ３３８Ｘを含み、Ｘはアルギニン以外のいずれかのアミノ酸であり得る、請求項３０に記載の組成物。

【請求項32】

前記ヒト第ＩＸ因子が、配列番号１に明記される配列と比較して、アミノ酸置換Ｒ３３８Ｌ、Ｒ３３８Ｄ、またはＲ３３８Ｑを含む、請求項３１に記載の組成物。

【請求項33】

前記ヒト第ＩＸ因子が、配列番号１に明記される配列と比較して、アミノ酸置換Ｒ３３８Ｌを含む、請求項３２に記載の組成物。

【請求項34】

前記導入遺伝子配列が、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項35】

前記導入遺伝子配列が、配列番号３に明記される配列を含む、請求項３４に記載の組成物。

【請求項36】

前記第２のポリヌクレオチド配列が充填配列をさらに含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の組成物。

【請求項37】

請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物を含む細胞。

【請求項38】

昆虫細胞または哺乳動物細胞である、請求項３７に記載の細胞。

【請求項39】

前記昆虫細胞がＳｆ９細胞であり、前記哺乳動物細胞がＨＥＫ２９３細胞またはその誘導体である、請求項３８に記載の細胞。

【請求項40】

前記誘導体がＨＥＫ２９３Ｔ細胞である、請求項３９に記載の細胞。

【請求項41】

ヒト第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子配列を含むポリヌクレオチド配列であって、前記導入遺伝子配列が、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する、ポリヌクレオチド配列。

【請求項42】

前記導入遺伝子配列が、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、請求項４１に記載のポリヌクレオチド。

【請求項43】

前記導入遺伝子配列が、５未満のＣＧジヌクレオチドを含む、請求項４１または４２に記載のポリヌクレオチド。

【請求項44】

前記導入遺伝子配列がＣＧジヌクレオチドを含まない、請求項４３に記載のポリヌクレオチド。

【請求項45】

前記導入遺伝子配列が、配列番号３に明記される配列を含む、請求項４１～４４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項46】

プロモータをさらに含む、請求項４１～４５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。

【請求項47】

前記プロモータが肝臓特異的プロモータである、請求項４６に記載のポリヌクレオチド。

【請求項48】

前記プロモータがＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータである、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。

【請求項49】

前記プロモータが、配列番号４に明記される配列を含む、請求項４８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項50】

修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータをさらに含む、請求項４７または４８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項51】

前記修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータが、配列番号５に明記される配列を含む、請求項５０に記載のポリヌクレオチド。

【請求項52】

請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ビリオン。

【請求項53】

ＡＡＶセロタイプ５に由来する、請求項５２に記載のＡＡＶビリオン。

【請求項54】

請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項５２もしくは５３に記載のＡＡＶビリオンを含む、医薬組成物。

【請求項55】

薬学的に許容可能な担体または賦形剤をさらに含む、請求項５４に記載の医薬組成物。

【請求項56】

請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５２もしくは５３に記載のＡＡＶビリオン、または請求項５４～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物を、血友病Ｂの処置を必要とする対象に投与する工程であって、前記導入遺伝子配列が対象に発現され、それによって血友病Ｂを処置する、工程を含む、血友病Ｂを処置するための方法。

【請求項57】

前記対象がヒトである、請求項５６に記載の方法。

【請求項58】

前記導入遺伝子配列が前記対象の肝臓に発現される、請求項５６または５７に記載の方法。

【請求項59】

前記投与する工程が静脈内注射によって行われる、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。

【請求項60】

投与量が１０^１０ｖｇ／ｋｇ～１０^１５ｖｇ／ｋｇである、請求項５６～５９のいずれか一項に記載の方法。

【請求項61】

請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物、請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のＡＡＶビリオン、または請求項５４～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物と、指示書とを備える、血友病Ｂを処置するためのキット。

【請求項62】

前記指示書が、血友病Ｂを処置するために前記組成物、前記ポリヌクレオチド、前記ＡＡＶビリオン、または前記医薬組成物を投与する方法を表すために使用される、請求項６１に記載のキット。

【請求項63】

前記導入遺伝子配列が、少なくとも４週間、６週間、または８週間にわたり、ｉｎ ｖｉｖｏでＦＩＸタンパク質を安定して発現し、発現された前記ＦＩＸタンパク質が生体活性を呈する、請求項１～３３のいずれか一項に記載の組成物、請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のＡＡＶビリオン、請求項５４～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物、請求項５６～６０のいずれか一項に記載の方法、または請求項６１～６２のいずれか一項に記載のキット。

【請求項64】

前記導入遺伝子配列が、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５に明記される、請求項１～３３のいずれか一項に記載の組成物、請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のＡＡＶビリオン、請求項５４～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物、請求項５６～６０のいずれか一項に記載の方法、または請求項６１～６２のいずれか一項に記載のキット。

【請求項65】

前記導入遺伝子配列が配列番号１５に明記される、請求項１～３３のいずれか一項に記載の組成物、請求項４１～５１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５２～５３のいずれか一項に記載のＡＡＶビリオン、請求項５４～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物、請求項５６～６０のいずれか一項に記載の方法、または請求項６１～６２のいずれか一項に記載のキット。

【発明の詳細な説明】

【技術分野】

【0001】

優先権の情報
本出願は、中国国家知識産権局に２０２１年６月２３日に出願された特許出願ＰＣＴ／ＣＮ２０２１／１０１８４５に基づく優先権と利益を主張するものであり、この出願は全体を参照されることによって本明細書に援用される。

【背景技術】

【0002】

血友病Ｂは希少遺伝性出血性疾患であり、通常、個人の第ＩＸ因子（ＦＩＸタンパク質としても知られる）の遺伝子変化（変異）によって生じる。血友病Ｂはさらに、患者の第ＩＸ因子の活性レベルに基づき軽度、中等度、または重度に分けることができる。軽度の症例では、出血症状は手術、傷害、または歯科手術の後にのみ起こる。一部の中等度および最も重篤な症例では、出血症状は、軽度の傷害の後に起こるか、またはあらゆる外部要因によって誘発されることなく起こる場合もある。

【0003】

血液凝固因子は、血液凝固に必要なタンパク質のクラスである。第ＩＸ因子（クリスマス因子またはＦＩＸ因子）は血液凝固系のセリンプロテアーゼであり、ペプチダーゼファミリーＳ１に属する。第ＩＸ因子の遺伝子はＸ染色体（Ｘｑ２７．１－ｑ２７．２）上に位置するため、血友病Ｂは男性の方が頻繁に発生する。

【発明の概要】

【0004】

現在、血友病Ｂを効果的に治療するために使用できる薬物および方法を開発すること、特に、患者において第ＩＸ因子を高度に発現させて、患者に発現された第ＩＸ因子の高活性を維持するために使用できる薬物および方法を発見かつ開発することが、当該技術分野で必要とされている。本発明により提供される組成物と方法は、この必要性に対処する。

【0005】

第１の態様では、本発明は組成物を提供する。本組成物は、（１）第１のプロモータに操作可能に連結される第１のパルボウイルスカプシド遺伝子の第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、および第２のプロモータに操作可能に連結される第２のパルボウイルスカプシド遺伝子の第２のオープンリーディングフレームを含む第１のポリヌクレオチド配列であって、第１のＯＲＦが、第２のプロモータを包含するイントロン配列を含む、第１のポリヌクレオチド配列と、（２）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質をコードする導入遺伝子配列を含む第２のポリヌクレオチド配列とを含む。

【0006】

いくつかの実施形態では、第１のプロモータおよび第２のプロモータは、昆虫細胞または哺乳動物細胞中での発現に好適である。いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦ、第１のプロモータ、第２のＯＲＦ、および第２のプロモータは、３’から５’まで次の順序：第１のプロモータ、第２のプロモータを含む第１のＯＲＦ、および第２のＯＲＦにあり、このとき、第２のＯＲＦは、少なくとも１つの翻訳開始コドンを含み、かつ第１のＯＲＦの３’部分と重複する。

【0007】

いくつかの実施形態では、昆虫細胞はＳｆ９細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、誘導体はＨＥＫ２９３Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、第１のプロモータまたは第２のプロモータは、Ｐｏｌｈプロモータである。いくつかの実施形態では、第１のプロモータまたは第２のプロモータは、ｐ１０プロモータである。いくつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチド配列は、３’末端にポリＡ配列をさらに含む。

【0008】

いくつかの実施形態では、パルボウイルスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のｃａｐタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、第２のＯＲＦは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）のｒｅｐタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ ｃａｐタンパク質は、ＡＡＶセロタイプ５タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ ｃａｐタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐタンパク質は、ＡＡＶセロタイプ２タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ ｒｅｐタンパク質は、Ｒｅｐ７８および／またはＲｅｐ５２タンパク質である。

【0009】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド配列はプロモータを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、肝臓特異的プロモータである。いくつかの実施形態では、プロモータはＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータである。いくつかの実施形態では、プロモータは、配列番号４に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド配列は第２のプロモータをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータである。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド配列はイントロンを含む。いくつかの実施形態では、イントロンは、ヒト第ＩＸ因子のＳＶ４０イントロンまたは修飾された第１のイントロンである。いくつかの実施形態では、ＳＶ４０イントロンは、修飾ＳＶ４０イントロンである。いくつかの実施形態では、修飾ＳＶ４０イントロンは、配列番号６に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒト第ＩＸ因子の修飾された第１のイントロンは、配列番号７に明記される配列を含む。

【0010】

いくつかの実施形態では、ヒト第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子配列は、コドン最適化される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ヒト第ＩＸ因子は、野生型ヒト第ＩＸ因子と比較して１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、ヒト第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較してアミノ酸置換Ｒ３３８Ｘを含み、Ｘはアルギニン以外のいずれかのアミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、ヒト第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較して、アミノ酸置換Ｒ３３８Ｌ、Ｒ３３８Ｄ、またはＲ３３８Ｑを含む。いくつかの実施形態では、ヒト第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較してアミノ酸置換Ｒ３３８Ｌを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド配列は充填配列（ｆｉｌｌｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）をさらに含む。

【0011】

別の態様では、本発明は細胞を提供する。本細胞は、本発明の組成物を含む。いくつかの実施形態では、細胞は昆虫細胞である。いくつかの実施形態では、昆虫細胞はＳｆ９細胞である。別の態様では、本発明は哺乳動物細胞を提供する。本哺乳動物細胞は、本発明の組成物を含む。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞またはその誘導体である。いくつかの実施形態では、誘導体はＨＥＫ２９３Ｔ細胞である。

【0012】

別の態様では、本発明はポリヌクレオチド配列を提供する。本ポリヌクレオチド配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子配列を含み、この導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、または９５％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ＣＧジヌクレオチドを含まない。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列はプロモータを含む。いくつかの実施形態では、プロモータは肝臓特異的プロモータである。いくつかの実施形態では、プロモータはＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータである。いくつかの実施形態では、プロモータは、配列番号４に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド配列は、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータをさらに含む。いくつかの実施形態では、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＴＴプロモータは、配列番号５に明記される配列を含む。

【0013】

別の態様では、本発明はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ビリオンを提供する。本ビリオンは、本発明のポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンは、ＡＡＶセロタイプ５に由来する。

【0014】

別の態様では、本発明は医薬組成物を提供する。本医薬組成物は、本発明のポリヌクレオチドまたはＡＡＶビリオンを含む。いくつかの実施形態では、本医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体または賦形剤をさらに含む。

【0015】

別の態様では、本発明は、血友病Ｂを処置する方法を提供する。本方法は、本発明のポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物を、処置を必要とする対象に投与する工程であって、導入遺伝子配列が対象に発現され、それによって血友病Ｂを処置する、工程を含む。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。導入遺伝子配列は、対象の肝臓に発現される。投与する工程は、静脈内注射によって行われる。投与量は、１０１０ｖｇ／ｋｇ～１０１５ｖｇ／ｋｇである。

【0016】

別の態様では、本発明は、血友病Ｂを処置するためのキットを提供する。本キットは、本発明のポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物と、指示書とを備える。いくつかの実施形態では、指示書は、血友病Ｂを処置するために組成物、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物を投与する方法を表示するために使用される。

【0017】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、医薬組成物、方法、またはキットによれば、導入遺伝子配列は、ＦＩＸタンパク質をｉｎ ｖｉｖｏで少なくとも４週間、６週間、または８週間発現し、発現されたＦＩＸタンパク質は生体活性を呈する。いくつかの実施形態では、本発明の組成物、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、医薬組成物、方法、またはキットによれば、導入遺伝子配列は、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５に明記される。

【0018】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、医薬組成物、方法、またはキットによれば、導入遺伝子配列は配列番号１５に明記される。

【図面の簡単な説明】

【0019】

【図1】血友病Ｂを有するマウスモデルにおけるｒＡＡＶ５－ＦＩＸによるＦＩＸの発現を示す図である。ＦＩＸをコードする種々のポリヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１０～１５に明記される試験第２ポリヌクレオチド配列１～６）は、対照群の基本レベルよりも著しく高い、ＦＩＸの顕著な発現を呈する。様々なポリヌクレオチド配列が、様々な時点で様々な発現レベルおよび安定した発現を呈した。他の配列と比較して、試験第２ポリヌクレオチド配列６（配列番号１５）は、２９日目、４３日目、および５７日目に連続的かつ安定してＦＩＸを高度に発現した。本実験は、第２のポリヌクレオチド６（配列番号１５）が最適な発現ベクター設計であることを示す。

【図2】血友病Ｂを有するモデルマウスにおける、ｒＡＡＶ５－ＦＩＸによって発現されたＦＩＸの安定した活性を示す図である。活性は凝固方法によって検出される。他の配列と比較して、試験第２ポリヌクレオチド配列６（配列番号１５）は、４３日目と５７日目に、高活性を呈するＦＩＸを連続的に発現した。本実験は、第２のポリヌクレオチド６（配列番号１５）が最適な発現ベクター設計であることを示す。

【図3】血友病Ｂを有するモデルマウスにおける、ｒＡＡＶ５－ＦＩＸによって発現されたＦＩＸの活性を示す図である。ＦＩＸ活性は発色性活性分析方法（ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ）によって検出される。この方法により得たＦＩＸ活性は、凝固方法によって検出した活性と一致する。

【発明を実施するための形態】

【0020】

本開示の様々な実施形態が本明細書中で示され、かつ記述されているが、これらの実施形態はほんの一例として提供されることが当業者に明白である。本発明から逸脱することなく多数の変形、改変、および置換が、当業者により想到される場合がある。本明細書に記載される本発明の実施形態に対する種々の代案が利用される場合があることを理解されたい。

【0021】

別段の定めのない限り、本明細書に開示される一部の実施形態の実施には、免疫学、生化学、化学、分子生物学、微生物学、細胞生物学、ゲノミクス、および組換えＤＮＡといった従来テクノロジーが採用される。例えば、参考文献は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ ＧｒｅｅｎによるＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２０１２）、ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編）、ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、ＰＣＲ ２：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｍ．Ｊ．ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ、Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ、およびＧ．Ｒ．Ｔａｙｌｏｒ編（１９９５））、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ編（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ならびにＣｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，６ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（２０１０））である。

【0022】

定義
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈上特別な定めのない限り、複数形を含む。例えば、「ｒＡＡＶビリオン」という用語は、１つまたは複数のｒＡＡＶビリオンを含む。

【0023】

「約（ａｂｏｕｔ）」または「およそ（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）」という用語は、当業者によって決定される特定の値に対する許容可能な誤差範囲を意味しており、部分的には、その値がどのように測定または決定されるか、すなわち測定システムの制限に依存する。例えば、当該技術分野での実施によれば、「約」は、１または１より大きな範囲内の標準偏差を示す場合がある。代替的に、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、または最大１％の範囲を示す場合がある。代替的に、特に生物学的システムまたはプロセスにおいてこの用語は、好ましくは５の倍数以内、より好ましくは２の倍数以内にある数値の桁数を示す場合がある。特定の値が本出願および特許請求の範囲に記載される場合、「約」という用語は、別段の定めのない限り、その特定の値の許容誤差範囲を意味すると仮定されるべきである。

【0024】

本明細書中で使用される場合、「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、あらゆる長さのアミノ酸ポリマーを指すように本明細書中では互換的に使用される場合がある。このポリマーは線形、環状、または分枝状の場合があり、これらは修飾アミノ酸を含有し、かつ非アミノ酸によって阻止される場合がある。これらの用語はまた、修飾されたアミノ酸ポリマーも含み、修飾は、例えば硫酸化、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、ヨウ素化、メチル化、酸化、タンパク質分解処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレン化、タンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介型付加（アルギニル化など）、ユビキチン化、または標識成分（ｌａｂｅｌｅｄ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）との抱合といった他の操作などによって行われる。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、グリシンおよびＤまたはＬ光学異性体のほか、アミノ酸アナログおよびペプチド模倣体を含む、天然および／または非天然もしくは合成のアミノ酸を指す。特定のタンパク質に「由来する」ポリペプチドまたはアミノ酸配列は、ポリペプチドの起源を指す。好ましくはポリペプチドは、配列中でコードされたポリペプチドのアミノ酸配列またはその一部と基本的に同じアミノ酸配列を有しており、その一部は、少なくとも１０～２０個のアミノ酸、少なくとも２０～３０個のアミノ酸、もしくは少なくとも３０～５０個のアミノ酸からなるか、または、配列中でコードされたポリペプチドにより免疫学的に特定され得る。この用語はまた、特定の核酸配列から発現されるポリペプチドも含む。本明細書中で使用される場合、「ドメイン」という用語は、タンパク質またはペプチドの他の部分と物理的または機能的に区別される、タンパク質の一部を指す。物理的に画定されたドメインは、膜結合型または細胞質結合型の配列など、極度に疎水性または親水性のアミノ酸配列を含む。ドメインはまた、例えば遺伝子複製によって生じる内部相同性によって定められる場合もある。機能的に定められたドメインは、様々な生物学的機能を有する。例えば、抗原結合ドメインは、抗原結合ユニット、または抗原に結合する抗体の一部を指す。機能的に定められたドメインは、連続アミノ酸配列によってコードされる必要はなく、１つまたは複数の物理的に定められたドメインを含有し得る。

【0025】

本明細書中で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、ＤまたはＬ光学異性体のほか、アミノ酸アナログおよびペプチド模倣体を含むがこれらに限定されない、天然および／または非天然もしくは合成のアミノ酸を指す。アミノ酸を表すために、標準の１文字コードまたは３文字コードが使用される。本明細書中、アミノ酸は、通常、当該技術分野で公知の１文字の略語および３文字の略語によって表される。例えば、アラニンはＡまたはＡｌａで表される場合がある。

【0026】

本明細書で使用される場合、ポリペプチドの場合に「配列」は、アミノ末端からカルボキシル末端までの方向にあるポリペプチド中のアミノ酸の配列を指し、このとき、配列中で互いに隣接する残基は、ポリペプチドの一次構造で連続している。配列はまた、１つまたは２つの方向に追加の残基を含有すると知られるポリペプチドの一部である線形配列であり得る。

【0027】

本明細書で使用される場合、「同一性」、「相同性」、または「配列同一性」は、２つ以上のポリヌクレオチド配列間、もしくは２つ以上のポリペプチド配列間の配列類似性または互換性を指す。２つの異なるアミノ酸配列間の配列同一性、類似性、または相同性が、Ｅｍｂｏｓｓ ＮｅｅｄｌｅまたはＢｅｓｔＦｉｔなどのプログラムを用いて判定される場合、デフォルト設定が使用されるか、または、ｂｌｏｓｕｍ４５やｂｌｏｓｕｍ８０などの適切なスコアリングマトリクスが、同一性、類似性、または相動性のスコアを最適化するために選択され得る。好ましくは、相同性のポリヌクレオチドは、本明細書で定められる厳密な条件下でハイブリダイズされるポリヌクレオチドを指し、配列に対して少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは９５％、より好ましくは９７％、より好ましくは９８％、さらにより好ましくは９９％の配列同一性を有する。同等の長さを有する配列が最適なアライメントに供される場合、相同性のポリペプチドは、好ましくは少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。

【0028】

本明細書で特定される抗原結合ユニットに関して、「配列同一性率（％）」は、配列同一性の一部として保存的置換を考慮することなく最大の配列同一性率を得るのに必要な条件で配列アライメントを実施するとともにギャップを導入した後に、第２もしくは参照のポリペプチド配列またはその一部のアミノ酸残基と同じである、クエリ配列中のアミノ酸残基の割合として定められる。当該技術分野における種々の方法が使用され得る。例えば、アミノ酸配列同一性率を判定することを目的としたアラインメントを実現するために、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＮＥＥＤＬＥ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアが使用され得る。当業者は、比較された配列の全長で最大のアライメントを得るのに必要ないずれかのアルゴリズムを含め、アライメントを測定するための適切なパラメータを決定し得る。同一率は、定められたポリペプチド配列全体の長さで測定されてもよいか、またはより短い長さで測定されてもよい。例えば測定は、より大きな定義されたポリペプチド配列から得たフラグメントの長さで実施され、このフラグメントは、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも５０、少なくとも１００、または少なくとも２００の連続する残基を含有するフラグメントなどである。これらの長さは単なる例示であり、本明細書中の表、添付図面、または配列表に示される配列によって裏付けられるあらゆるフラグメント長は、同一性率が測定され得る長さを記述するために使用され得ることを理解されたい。

【0029】

本明細書に記載のタンパク質は、参照配列と比較して１つまたは複数の修飾を有してもよい。この修飾は、アミノ酸残基の欠失、挿入、もしくは付加、または置換もしくは交換であり得る。「欠失」は、１つまたは複数のアミノ酸残基の欠失によって生じるアミノ酸配列の変化を指す。「挿入」または「付加」は、参照配列と比較して１つまたは複数のアミノ酸残基の付加によって生じるアミノ酸配列の変化を指す。「置換」または「交換」は、１つまたは複数のアミノ酸が異なるアミノ酸で置換されることを意味する。本明細書中では、抗原結合ユニットと参照配列とを比較して、参照配列に対する抗原結合ユニットの変異を決定してもよい。比較された配列の最適なアライメントは、当該技術分野で公知のいずれかの方法によって実施されてもよい。

【0030】

本明細書で使用される場合、「単離された」という用語は、細胞成分および他の成分から単離されることを意味し、通常、ポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそれらのフラグメントが、正常な条件下で単離に関連する。自然に生じないポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそれらのフラグメントは、自然に生じるその対応物と区別されるように「単離」される必要がないことが、当業者に公知である。加えて、「濃縮」、「単離」、もしくは「希釈」されたポリヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、またはそれらのフラグメントは、単位体積あたりの分子の濃度または数が、自然に生じるそれらの対応物よりも多い（「濃縮される」）かまたは少ない（「単離される」）ことから、自然に生じるそれらの対応物と区別可能である。富化は、単位体積あたりの溶液の重量などの絶対量に基づき測定され得るか、または、ソースとなる混合物における第２の、もしくは妨害を行う可能性のある物質に対して測定され得る。

【0031】

「ポリヌクレオチド」、「核酸」、「ヌクレオチド」、および「オリゴヌクレオチド」という用語は、互換的に使用され得る。この用語は、あらゆる長さのヌクレオチド（デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのいずれか）またはそのアナログの重合形態を指す。ポリヌクレオチドは、あらゆる三次元構造を呈するとともに、あらゆる既知または未知の機能を達成し得る。ポリヌクレオチドの非限定的な例は、遺伝子もしくは遺伝子フラグメントのコーディング領域もしくは非コーディング領域、連鎖解析により特定される座位、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分枝状ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、あらゆる配列の単離ＤＮＡ、あらゆる配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ、プライマー、オリゴヌクレオチド、または合成ＤＮＡである、ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドやヌクレオチドアナログなどの修飾ヌクレオチドを含む場合がある。ヌクレオチド構造に対する修飾（もしあれば）は、ポリマーの組立ての前または後に行われてもよい。ヌクレオチド配列は、非ヌクレオチド成分によって妨害され得る。ポリヌクレオチドは、例えば標識成分との抱合によって、重合化の後にさらに修飾され得る。

【0032】

「組換え」は、ポリヌクレオチドに適用される場合、ポリヌクレオチドがクローニング、制限酵素消化、および／または連結の工程のほか、自然に見出されるポリヌクレオチドとは異なる構築物を産生する他の手順における、種々の組合せの産物である。

【0033】

「遺伝子」または「遺伝子フラグメント」という用語は、本明細書中で互換的に使用され得る。この用語は、少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有するポリヌクレオチドを指し、オープンリーディングフレームは、転写および翻訳後に特定のタンパク質をコードすることができる。遺伝子または遺伝子フラグメントは、ゲノム、ｃＤＮＡ、または合成のものであってもよいが、ポリヌクレオチドが、コード領域またはそのセグメント全体を覆うことが可能な少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含有することを前提とする。

【0034】

「操作可能に連結された」または「効果的に連結された」という用語は、記載される成分が、予想されるように効果を達成可能とされる関係にある並置を指す。例えば、プロモータ配列がコーディング配列の転写を促進する場合、プロモータ配列はコーディング配列に操作可能に連結される。

【0035】

本明細書で使用される場合、「発現」は、ポリヌクレオチドがｍＲＮＡに転写されるプロセス、および／または、転写されたｍＲＮＡ（「転写物」とも呼ぶ）が後にペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質に翻訳されるプロセスを指す。転写物およびコードされたポリペプチドは、総体的に遺伝子産物と称される。ポリヌクレオチドがゲノムＤＮＡ由来の場合、発現は、真核細胞（ｅｕｋａｒｙｏｃｙｔｅ）中でのｍＲＮＡのスプライシングを含む場合がある。

【0036】

本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、ポリヌクレオチドが挿入され得る核酸運搬体を指す。ベクターは、挿入されたポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質を発現可能である場合、発現ベクターと呼ばれる。ベクターは、ベクターによって運ばれる遺伝物質要素が宿主細胞中で発現されるように、形質転換、形質導入、またはトランスフェクションによって宿主細胞に導入され得る。プラスミド、ファージミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、バクテリア人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体、λファージまたはＭ１３ファージなどのファージ、および動物ウイルスなどを含むがこれらに限定されないベクターが、当業者に公知である。ベクターとして使用できる動物ウイルスには、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルスなど）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（ＳＶ４０など）が挙げられるが、これらに限定されない。ベクターは、プロモータ配列、転写開始配列、エンハンサ配列、選択要素、およびレポータ遺伝子を含むがこれらに限定されない、発現を制御する種々の要素を含み得る。加えてベクターは、複製起源も含有する場合がある。

【0037】

本明細書で使用される場合、「コドン最適化」という用語は、ヌクレオチド配列が遺伝子コードの冗長性によって変化される一方で、コードされるタンパク質配列が同じに維持されることを意味する。場合により、コドン最適化は、コードされたタンパク質の発現の増加または減少を促進することができ、これは、ヌクレオチド配列中のコドンを、細胞型中のｔＲＮＡの相対的存在量など、コドンに対する特定の細胞型の使用嗜好性に応じた嗜好性に適応させることによって実現される。場合により発現は、特異的な細胞型中のｔＲＮＡの公知かつ希少なコドンを選択することによっても減少され得る。場合により、コドン最適化はまた、配列複製の忠実度を改善するために使用することもでき、すなわち、ポリヌクレオチドのクローニングプロセスなどの複製サイクル中に生じる変異が少なくなる。

【0038】

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、ベクターを導入できる細胞を指し、限定されないが大腸菌や枯草菌などの原核細胞、酵母菌やアスペルギルス属などの真菌細胞、Ｓ２ショウジョウバエ細胞やＳｆ９などの昆虫細胞、または繊維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、もしくはヒト細胞などの動物細胞が挙げられる。

【0039】

本明細書で使用される場合、「有効量」は、少なくとも特定の疾患で測定可能な寛解または予防を達成するのに必要な最小量を意味する。本明細書で使用される有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別、体重、および他の因子に応じて変更してもよい。有効量はまた、処置の有益な効果が処置のあらゆる毒性作用または有害作用よりも高い用量である。癌または腫瘍の処置中、薬物の有効量は、癌細胞数の減少、腫瘍サイズの縮小、周辺器官への癌細胞浸潤の阻害、腫瘍転移の阻害、ある程度の腫瘍成長の阻害、および／またはある程度の疾患と関連付けられる１つもしくは複数の症状の緩和という効果を有し得る。有効量は、１つまたは複数の投与で投与され得る。

【0040】

本明細書で使用される場合、「受容者」、「個体」、「対象」、「宿主」、および「患者」という用語は、本明細書中で互換的に使用される場合があり、かつ、診断、処置、または治療が望まれるあらゆる哺乳動物対象、特にヒトを指す。

【0041】

本明細書で使用される場合、「治療」および「処置」という用語は、所望の薬理学的および／または生理学的効果を達成することを指す。効果は、疾患もしくはその症状を完全または部分的に予防することにおいて予防的であり、ならびに／あるいは、疾患および／もしくは疾患に起因する有害作用を部分的または完全に安定化または処置することにおいて治療的であり得る。本明細書で使用される場合、「治療」は、哺乳動物の疾患に対するあらゆる治療を包含し、哺乳動物としては例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、およびヒトや他の類人猿を含む霊長類、特にヒトが挙げられ、この用語は、（ａ）疾患または症状に罹患しやすい場合があるが依然として診断されていない対象における疾患または症状の発生を予防すること、（ｂ）疾患症状を阻害すること、（ｃ）疾患の進行を停止すること、（ｄ）疾患症状を緩和すること、（ｅ）疾患または症状の根絶を促進すること、あるいはそれらのあらゆる組合せを含む。本明細書で使用される場合、「キット」という用語は、一般的な使用、または市販での利用のために包装された組合せを指す。例えば、本開示のキットは、本開示の組成物、および組成物またはキットの使用説明書を備える場合がある。「指示書」という用語は、治療薬の市販のパッケージに通常包含される説明の添付文書を指すものであり、適応症、使用、投与量、投与、併用療法、禁忌、および／または治療薬の使用についての警告に関する情報が含まれる。

【0042】

本明細書で使用される場合、「生体活性」または「活性」という用語は、通常は当業者によってタンパク質に起因するとされる、いずれかの活性を指す。例えば、第ＸＩ因子の活性は、当業者によって理解されるように、生物学的機能を担う天然または自然に生じる第ＸＩ因子タンパク質の活性を指す。活性は、凝固方法または発色性活性分析方法によって検出することができる。

【0043】

血友病Ｂ
血友病Ｂは、Ｂ型血友病またはクリスマス病としても知られており、血液凝固第ＩＸ因子の遺伝的変異によって生じる遺伝性疾患である。血友病Ｂは、１９５２年にＳｔｅｐｈｅｎ Ｃｈｒｉｓｔｍａｓという患者で初めて特定された。このため、血友病Ｂはクリスマス病としても知られる。

【0044】

血友病Ｂは、異なる個人で異なる症状および重症度を呈する場合がある。重症度には、軽度、中等度、および重度が含まれる。軽度血友病患者の第ＩＸ因子レベルは正常レベルの５％～４０％であり、中等度血友病患者の第ＩＸ因子レベルは正常レベルの１％～５％であり、重度血友病患者の第ＩＸ因子レベルは正常レベルの１％未満である。血友病Ｂの軽度の症例では、個体は、手術、歯科手術、傷害、または外傷後に打撲傷および出血を呈する場合がある。正常な個体は傷害または外傷後にある程度の出血も呈するが、血友病Ｂを有する個体は通常、長期間の出血事象を呈する。軽度の血友病Ｂを有する多くの個人は、手術または傷害を受けた後にのみ診断される場合がある。

【0045】

中等度の血友病Ｂの個人は、時折、関節や筋肉などの深部組織からの自然出血を呈する場合がある。これらの状態は、通常、一部の傷害により誘導される事象に関連する。中等度の血友病Ｂを有する個体には、手術または外傷後に長期間の出血のリスクがある。重度の血友病Ｂの場合、最もよく見られる症状は頻繁な自発的出血である。自発的出血は筋肉および関節の出血を含み、疼痛、腫れ、関節動作の制限に至る場合がある。適時処置されない場合、関節内膜の炎症（滑膜炎）および関節疾患（関節炎）、筋力低下および／または腫脹、罹患した関節の圧迫感および動作制限、ならびに恒久的な関節損傷を含む、長期の損傷が生じる場合がある。自発的な関節出血は、重度の血友病Ｂで最もよく見られる症状である。重度の血友病Ｂを有する個体に影響を与える他の症状には、頻繁かつ重度の挫傷、筋肉出血、ならびに胃腸管および中枢神経系の出血が挙げられる。

【0046】

中等度または重度の血友病を有する個体はまた、出血後に腎臓、胃、腸、および脳を含む他の器官に血液が浸潤する場合もある。腎臓または胃腸での出血は、尿中の血液（血尿と呼ばれる）および便中の血液（別々に下血または血便と呼ばれる）を引き起こす場合がある。脳出血は、頭痛、首こり、嘔吐、てんかん発作、ならびに過眠症および覚醒能を含む精神状態変化を引き起こす場合があり、適時処置されなければ死亡に至る場合もある。

【0047】

血友病Ｂを治療するためによく使用される方法は、代替の第ＩＸ因子を投与することで適切な血液凝固を達成し、かつ疾患に付随する合併症を予防する工程を含む。現在、組換え産物、またはヒトの血液もしくは血漿に由来する産物は、通常、十分なレベルを達成するように第ＩＸ因子の交換を実現するのに使用される。

【0048】

第ＩＸ因子
第ＩＸ因子（クリスマス因子またはＦＩＸ因子）は血液凝固系のセリンプロテアーゼの１つであり、ペプチダーゼファミリー Ｓ１に属する。タンパク質が不足すると血友病Ｂにつながる。第ＩＸ因子の遺伝子はＸ染色体（Ｘｑ２７．１－ｑ２７．２）上に位置するため、血友病Ｂは男性の方が頻繁に発生する。

【0049】

１００より多くの第ＩＸ因子変異が説明されており、その一部は症状に至らないが、多くが重度の出血性疾患に至る。現在、血友病Ｂを処置するための第ＩＸ因子の市販の組換え産物調製物として、ＢｅｎｅＦｉｘ、Ｉｄｅｌｖｉｏｎ、Ａｌｐｒｏｌｉｘ、およびＲｅｆｉｘｉａが挙げられる。

【0050】

組換えＡＡＶベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、パルボウイルス科に属し、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）ウイルスである。ＡＡＶゲノムは、ＤＮＡ鎖の２つの末端に末端逆位反復（Ｉｔｒ）、ならびにｒｅｐおよびｃａｐとして知られる２つのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む、全長約４．７キロベースを含む。

【0051】

「ＡＡＶ末端逆位反復（ＩＴＲ）」は、自然の一本鎖ＡＡＶゲノムの２つの末端における約１４５ヌクレオチドの配列である。ＩＴＲはアデノ随伴ウイルスゲノムにおける効率的な複製に使用される対称核酸配列であり、ウイルスＤＮＡ合成の複製起点として使用できるとともに、組換えＡＡＶベクターの必須構造成分である。

【0052】

「ｒｅｐ」は、ＡＡＶライフサイクルをコードするのに必要な、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０を含む４つのｒｅｐタンパク質のポリヌクレオチド配列を含む。「ｃａｐ」は、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含むＡＡＶ ｃａｐタンパク質をコードするためのポリヌクレオチド配列を含み、ＡＡＶ ｃａｐタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３は、二十四面体の対称ＡＡＶカプシドを形成するために互いに相互作用することができる。

【0053】

ＡＡＶは、分裂および非分裂ヒト細胞を有効に感染させることができ、そのゲノムは、宿主細胞ゲノム中の１つの染色体座位へと統合することができる。最も重要なことに、ＡＡＶは多くの個人に見られるが、現在では、研究によってＡＡＶはいずれの疾患にも関連しないと考えられている。高い安全性、低い免疫原性、広い宿主範囲、動物中での外来遺伝子の長期安定発現を媒介する能力といった特性に起因して、ＡＡＶは遺伝子治療において最も有望なベクター系となっている。

【0054】

これまで、様々なＡＡＶセロタイプ、または感染組織もしくは細胞に基づき、ＡＡＶ１～ＡＡＶ１３を含む１３個の異なるＡＡＶが特定されている。加えて、以下の表１に示されるように、特定の細胞型のトランスフェクションに好ましいベクター系として様々なＡＡＶが開発されている。多くのＡＡＶセロタイプの中でも、セロタイプ２（ＡＡＶ２）は、網膜上皮、光受容体細胞、骨格筋、中枢神経系、肝細胞などに感染することができる、最も広く研究かつ使用されているものであり、多くの臨床試験でベクターとして使用されている。

【0055】

【表1】

【0056】

本明細書で使用される場合、「組換えＡＡＶベクター（ｒＡＡＶベクター）」という用語は、２つのＡＡＶ末端逆位反復（ＩＴＲ）に隣接する１つまたは複数の異種配列（すなわち、非ＡＡＶ由来の核酸配列）を含有するポリヌクレオチドベクターを指す。ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐタンパク質を発現する宿主細胞に存在する場合、複製可能であるとともに、ＡＡＶビリオンにパッケージングされる。

【0057】

「組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）」または「ｒＡＡＶビリオン」は、ｒＡＡＶベクターを少なくとも１つのＡＡＶ ｃａｐタンパク質で包皮することによって形成されるＡＡＶビリオンを指す。ｒＡＡＶビリオンは、宿主細胞（ＨＥＫ２９３、ＳＦ９、Ｈｅｌａ、およびＡ５４９）またはＨＳＶ系によって産生することができる。現在、ｒＡＡＶビリオンを産生するためによく使用される宿主細胞は、ＨＥＫ２９３細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＫＢ細胞、および他の哺乳動物細胞株などの哺乳動物細胞に由来する。ｒＡＡＶビリオンは、ｒＡＡＶプラスミドを与えることによって哺乳動物細胞培養系中で産生することができる。しかし、哺乳動物細胞培養系の大半では、臨床試験および商業規模の生産の収量要求を満たすことが困難である。そのため、近年ではＳｆ９細胞などの昆虫細胞を用いたｒＡＡＶビリオン産生システムが開発されている。しかし、昆虫細胞中でＡＡＶを産生するには、ＡＡＶ ｃａｐタンパク質の正確な化学量論比を得るためのいくつかの改変が必要とされる。

【0058】

バキュロウイルス科に属するバキュロウイルスは、二本鎖環状ＤＮＡウイルスであり、９０ｋｂ～２３０ｋｂのサイズのゲノムを有する。バキュロウイルスは節足動物に住む特定の寄生虫であり、６００種以上の昆虫に感染すると知られている。１９８３年、ＳｍｉｔｈらによってＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｃａｐｓｉｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＡｃＭＮＰＶ）を用いてツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）の細胞株Ｓｆ９中でヒトβ－インターフェロンを発現させることに成功し、バキュロウイルス発現系が初めて開発された（Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１９８３，３：２１５６－２１６５）。以来、バキュロウイルス発現系は絶えず改良かつ発達されており、広く用いられている真核生物発現系となっている。２００２年、Ｕｒａｂｅらは、バキュロウイルスに感染したＳｆ９昆虫細胞がＡＡＶの複製を支持できたことを確認し、ＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子、Ｃａｐ遺伝子、およびＩＴＲコア発現要素をそれぞれ運ぶ３つの組換えバキュロウイルスを使用してＳｆ９細胞を同時感染させ、ｒＡＡＶビリオンを調製することに成功した。これに基づき、ｒＡＡＶビリオンの大規模調製に好適なシステムが、研究者らにより引き続き開発されている。

【0059】

現在、バキュロウイルス発現系を用いたｒＡＡＶビリオンの大規模調製には，パッケージング細胞株に依存する２つのＢａｃ系と１つのＢａｃ系という、２つの方法が主に使用される。２つのＢａｃシステムを用いてｒＡＡＶビリオンを調製する主なプロセスとして、ＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子とＣａｐ遺伝子を１つのバキュロウイルスゲノムに統合し、ＩＴＲコア発現要素と関心対象の標的遺伝子を別のバキュロウイルスゲノムに統合し、次いで２つの組換えバキュロウイルスと宿主細胞とを同時感染させて、標的遺伝子を運ぶｒＡＡＶビリオンを産生することが挙げられる。パッケージング細胞株に依存する１つのＢａｃシステムを用いてｒＡＡＶビリオンを調製する主なプロセスは、先ず、ｒｅｐ遺伝子およびＣａｐ遺伝子の発現要素を統合し、ｒｅｐ遺伝子およびＣａｐ遺伝子が後期バキュロウイルス遺伝子発現の強力なプロモータＰＨの調節下に置かれる、ｒｅｐ遺伝子およびＣａｐ遺伝子の誘導発現のためのパッケージング細胞株を確立すること、さらに、ＰＨプロモータの上流にｈｒ２エンハンサ配列およびＡＡＶ ｒｅｐタンパク質結合配列を添加することを含む。ＡＡＶ ＩＴＲおよび標的遺伝子を含有する組換えバキュロウイルスに感染させた後、パッケージング細胞株中のｒｅｐ遺伝子およびＣａｐ遺伝子は、標的遺伝子に統合されたｒＡＡＶビリオンを産生するように誘導発現に供される。

【0060】

いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶビリオン中の標的遺伝子を運ぶために使用されるｒＡＡＶベクターはまた、１つまたは複数の「発現調節要素」を含み得る。本明細書で使用される場合、「発現調節要素」という用語は、操作可能に連結されたポリヌクレオチドの発現に影響を及ぼす核酸配列を指し、異種ポリヌクレオチドの転写および翻訳を促進させるポリヌクレオチド配列が含まれる。本発明で使用され得る発現調節要素には、プロモータ、エンハンサ、イントロンスプライシングシグナル、ポリＡ、末端逆位反復（ＩＴＲ）などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0061】

「プロモータ」は、標的産物をコードする異種ポリヌクレオチド配列に隣接して配置されるＤＮＡ配列であり、通常は異種ポリヌクレオチドなどの隣接する配列に操作可能に連結される。異種ポリヌクレオチドの発現量は、通常はプロモータによって、プロモータを含まないものと比較して増加する。

【0062】

「エンハンサ」は、プロモータの活性を増強するための配列である。プロモータとは異なり、エンハンサはプロモータの活性を有しておらず、通常は、プロモータに対する位置（プロモータの上流や下流など）に依存することなく作用することができる。本発明で使用され得るエンハンサ要素（またはその部分）の非限定的な例として、バキュロウィルスエンハンサ、および昆虫細胞に見られるエンハンサ要素が挙げられる。

【0063】

「充填配列」は、より大きな核酸分子（ベクターなど）に含まれるヌクレオチド配列を指し、通常、２つの核酸特徴間（プロモータ配列とコーディング配列との間など）に必要な間隔を作り出すか、または核酸分子を所望の長さに延ばすために使用される。充填配列は、タンパク質コーディング情報を包含しておらず、未知／合成の起源を有する場合があり、かつ／またはより大きな核酸分子中の他の核酸配列と関連していない。

【0064】

組成物
第１の態様では、本発明は組成物を提供する。本組成物は、（１）第１のプロモータに操作可能に連結される第１のパルボウイルスカプシド遺伝子の第１のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）、および第２のプロモータに操作可能に連結される第２のパルボウイルスカプシド遺伝子の第２のオープンリーディングフレームを含む第１のポリヌクレオチド配列であって、第１のＯＲＦが、第２のプロモータを含んだイントロン配列を含む、第１のポリヌクレオチド配列と、（２）ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質をコードするための導入遺伝子配列を含む第２のポリヌクレオチド配列とを含む。

【0065】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第１のＯＲＦ、第１のプロモータ、第２のＯＲＦ、および第２のプロモータは、それぞれ第１のＯＲＦおよび第２のＯＲＦによってコードされる遺伝子を発現するのに好適なあらゆる順序で配置され得る。いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦ、第１のプロモータ、第２のＯＲＦ、および第２のプロモータは、３’から５まで、第１のプロモータ、第２のプロモータを含む第１のＯＲＦ、および第２のＯＲＦという順序にある。いくつかの実施形態では、第２のＯＲＦは、少なくとも１つの翻訳開始コドンを含み、第１のＯＲＦの３’部分と重複している。いくつかの実施形態では、第２のＯＲＦは、少なくとも１つの翻訳開始コドンを含み、第１のＯＲＦの３’部分と重複していない。いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦ、第１のプロモータ、第２のＯＲＦ、および第２のプロモータは、３’から５’まで、第１のプロモータ、第２のプロモータを含む第１のＯＲＦ、および第２のＯＲＦという順序にあり、このとき、第２のＯＲＦは、少なくとも１つの翻訳開始コドンを含み、かつ第１のＯＲＦの３’部分と重複する。

【0066】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、パルボウイルスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第１のＯＲＦは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ｃａｐタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、当該技術分野で公知の機能性ＡＡＶカプシドを形成可能である（ＤＮＡをパッケージングし、標的細胞を感染させることが可能であるなど）。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３のすべてを含む必要はないが、機能性ＡＡＶカプシドが産生されることを前提とする。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ１およびＶＰ２を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ１およびＶＰ３を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ２およびＶＰ３を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ１を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ２を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＶＰ３を含む。

【0067】

ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３は、あらゆるＡＡＶセロタイプに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶセロタイプ１（ＡＡＶ１）、ＡＡＶセロタイプ２（ＡＡＶ２）、ＡＡＶセロタイプ３（セロタイプ３Ａおよび３Ｂを含むＡＡＶ３）、ＡＡＶセロタイプ４（ＡＡＶ４）、ＡＡＶセロタイプ５（ＡＡＶ５）、ＡＡＶセロタイプ６（ＡＡＶ６）、ＡＡＶセロタイプ７（ＡＡＶ７）、ＡＡＶセロタイプ８（ＡＡＶ８）、ＡＡＶセロタイプ９（ＡＡＶ９）、ＡＡＶセロタイプ１０（ＡＡＶ１０）、ＡＡＶセロタイプ１１（ＡＡＶ１１）、ＡＡＶセロタイプ１２（ＡＡＶ１２）、ＡＡＶセロタイプ１３（ＡＡＶ１３）、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、およびあらゆる他の公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶセロタイプ２（ＡＡＶ２）に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶセロタイプ５（ＡＡＶ５）に由来する。

【0068】

いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ＶＰ１に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ＶＰ１に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ＶＰ１と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ１は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ＶＰ１と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0069】

いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、および他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶセロタイプ２（ＡＡＶ２）に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶセロタイプ５（ＡＡＶ５）に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８に由来する野生型ＶＰ２に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ＶＰ１に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８に由来する野生型ＶＰ２と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ２は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ＶＰ１と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0070】

いくつかの実施形態では、ＶＰ３は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、および他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＶＰ３は、ＡＡＶセロタイプ２（ＡＡＶ２）に由来する。いくつかの実施形態では、ＶＰ３は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ＶＰ３に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ３は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ＶＰ１に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ３は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ＶＰ３と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ＶＰ３は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ＶＰ１と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0071】

いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、同じＡＡＶセロタイプに由来するＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３を含む。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＡＡＶ２に由来するＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３を含み得る。いくつかの実施形態では、ｃａｐタンパク質は、ＡＡＶ５に由来するＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３を含み得る。いくつかの実施形態では、ｃａｐは、異なるＡＡＶセロタイプに由来するＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３を含む。例えば、ｃａｐは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、およびＬＫ０３に由来するＶＰ１、ＶＰ２、および／またはＶＰ３を含み得る。

【0072】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第１のＯＲＦは、第１のプロモータに操作可能に連結される。第１のプロモータは、当該技術分野で公知のｃａｐの発現を誘導可能ないずれかの適切なプロモータであり得る。いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、組織特異的プロモータ、構成的プロモータ、または調節プロモータであり得る。いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、異なる供給源から選択され得る。例えば、第１のプロモータは、ウイルスプロモータ、植物プロモータ、および哺乳動物プロモータであり得る。

【0073】

第１のプロモータの例として、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期エンハンサ／プロモータ、ＳＶ４０初期エンハンサ／プロモータ、ＪＣポリオーマウイルスプロモータ、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）もしくはグリア繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモータ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－１）潜伏関連プロモータ（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモータ、ニューロン特異的プロモータ（ＮＳＥ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）プロモータ、ｈＳＹＮ、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）プロモータ、ＣＢＡ、マトリックスメタロプロテインプロモータ（ＭＰＰ）、ニワトリβ－アクチンプロモータ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、およびＥＦ１ａプロモータが挙げられるが、これらに限定されない。

【0074】

いくつかの実施形態では、第１のプロモータは、昆虫細胞での発現に適したプロモータである。いくつかの実施形態では、昆虫細胞での発現に好適なプロモータとして、ＰｏｌＨプロモータ、ｐ１０プロモータ、アルカリプロモータ、誘導性プロモータ、Ｅ１プロモータ、またはΔＥ１プロモータが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、第１のプロモータはＰｏｌＨプロモータである。いくつかの実施形態では、第１のプロモータはｐ１０プロモータである。

【0075】

いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦの３’末端は、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」の長さは、約１～５００ｂｐの範囲にあり得る。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」の長さは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、５０、１０、２００、または５００ヌクレオチドであり得るが、これらに限定されない。

【0076】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第２のＯＲＦはＡＡＶ ｒｅｐタンパク質をコードし、ｒｅｐタンパク質は、ｒＡＡＶビリオンを得るためにｒＡＡＶベクターの複製およびパッケージングに必要ないずれかの複製タンパク質であってもよい。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０を含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０のすべてを含む必要はないが、ｒＡＡＶビリオンを得るためのｒＡＡＶベクターの複製およびパッケージングが実施可能であることを前提とする。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０のうちいずれか３つを含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０のうちいずれか２つを含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０のうちいずれか１つを含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８およびｒｅｐ５２を含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ７８およびｒｅｐ４０を含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ６８およびｒｅｐ５２を含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質は、ｒｅｐ６８およびｒｅｐ４０を含む。

【0077】

ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０は、あらゆるＡＡＶセロタイプに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、および他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８に由来する野生型ｒｅｐ７８に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ７８に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、またはＡＡＶ－２ｉ８に由来する野生型ｒｅｐ７８と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ７８は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ７８と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0078】

いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、および他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ｒｅｐ６８に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ６８に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ｒｅｐ６８と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ６８は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ６８と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0079】

いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、および他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ｒｅｐ５２に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ５２に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ｒｅｐ５２と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ５２は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ５２と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0080】

いくつかの実施形態では、ｒｅｐ４０は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、および他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ４０は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来し得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ４０は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ｒｅｐ４０に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ４０は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ４０に対して、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれよりも高い同一性を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ４０は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３に由来する野生型ｒｅｐ４０と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。いくつかの実施形態では、ｒｅｐ４０は、ＡＡＶ２またはＡＡＶ５に由来する野生型ｒｅｐ４０と比較して、１つもしくは複数のアミノ酸の置換、欠失、および／または付加を有する。

【0081】

いくつかの実施形態では、ｒｅｐは、同じＡＡＶセロタイプに由来するｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、および／またはｒｅｐ４０を含む。いくつかの実施形態では、ｒｅｐは、ＡＡＶ２に由来するｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、および／またはｒｅｐ４０を含み得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐは、ＡＡＶ２に由来するｒｅｐ７８および／またはｒｅｐ５２を含み得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐは、ＡＡＶ５に由来するｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、および／またはｒｅｐ４０を含み得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐは、ＡＡＶ５に由来するｒｅｐ７８および／またはｒｅｐ５２を含み得る。いくつかの実施形態では、ｒｅｐは、異なるＡＡＶセロタイプに由来するｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、および／またはｒｅｐ４０を含む。例えば、ｒｅｐは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、またはＬＫ０３、ならびに他のあらゆる公知のＡＡＶの野生型のうちいずれか１つまたは複数に由来する、ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、および／またはｒｅｐ４０を含み得る。

【0082】

いくつかの実施形態では、ｒｅｐタンパク質をコードする第２のＯＲＦは、第２のプロモータに動作可能に連結される。第２のプロモータは、当該技術分野で公知のｃａｐの発現を誘導可能ないずれかの適切なプロモータであり得る。いくつかの実施形態では、第２のプロモータは、組織特異的プロモータ、構成的プロモータ、または調節プロモータであり得る。いくつかの実施形態では、第２のプロモータは、異なる供給源から選択され得る。例えば、第２のプロモータは、ウイルスプロモータ、植物プロモータ、および哺乳動物プロモータであり得る。

【0083】

第２のプロモータの例として、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期エンハンサ／プロモータ、ＳＶ４０初期エンハンサ／プロモータ、ＪＣポリオーマウイルスプロモータ、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）もしくはグリア繊維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモータ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ－１）潜伏関連プロモータ（ＬＡＰ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）長末端反復（ＬＴＲ）プロモータ、ニューロン特異的プロモータ（ＮＳＥ）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）プロモータ、ｈＳＹＮ、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）プロモータ、ＣＢＡ、マトリックスメタロプロテインプロモータ（ＭＰＰ）、ニワトリβ－アクチンプロモータ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、およびＥＦ１ａプロモータが挙げられるが、これらに限定されない。

【0084】

いくつかの実施形態では、第２のプロモータは、昆虫細胞での発現に適したプロモータである。いくつかの実施形態では、昆虫細胞での発現に好適なプロモータとして、ＰｏｌＨプロモータ、ｐ１０プロモータ、アルカリプロモータ、誘導性プロモータ、Ｅ１プロモータ、またはΔＥ１プロモータが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、第２のプロモータはＰｏｌＨプロモータである。いくつかの実施形態では、第２のプロモータはｐ１０プロモータである。

【0085】

いくつかの実施形態では、第２のＯＲＦの３’末端は、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」をさらに含む。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」の長さは、約１～５００ｂｐの範囲にあり得る。いくつかの実施形態では、ポリアデニル化配列または「ポリＡ配列」の長さは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、５０、１０、２００、または５００ヌクレオチドであり得るが、これらに限定されない。

【0086】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、ｃａｐおよびｒｅｐは、同じＡＡＶセロタイプに由来し得る。いくつかの実施形態では、ｃａｐおよびｒｅｐは、同じＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、または他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。

【0087】

いくつかの実施形態では、ｃａｐおよびｒｅｐは、異なるＡＡＶセロタイプに由来し得る。例えば、ｃａｐおよびｒｅｐは、別々に、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、または他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。例えばいくつかの実施形態では、ｃａｐはＡＡＶ２に由来し、一方でｒｅｐはＡＡＶ５に由来し得る。

【0088】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第１のプロモータおよび第２のプロモータは、同じプロモータであってもよい。例えば、第１のプロモータと第２のプロモータの両方は、ＰｏｌＨプロモータ、ｐ１０プロモータ、アルカリプロモータ、誘導性プロモータ、Ｅ１プロモータ、またはΔＥ１プロモータのうちいずれか１つから選択される。例えばいくつかの実施形態では、第１のプロモータおよび第２のプロモータの両方は、Ｐｏｌｈプロモータである。いくつかの実施形態では、第１のプロモータおよび第２のプロモータの両方は、ｐ１０プロモータである。

【0089】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第１のプロモータおよび第２のプロモータは、異なるプロモータであってもよい。例えば、第１のプロモータと第２のプロモータは、それぞれＰｏｌＨプロモータ、ｐ１０プロモータ、アルカリプロモータ、誘導性プロモータ、Ｅ１プロモータ、またはΔＥ１プロモータから選択される、いずれか２つのプロモータであってもよい。例えばいくつかの実施形態では、第１のプロモータはＰｏｌＨプロモータであり、一方で第２のプロモータはｐ１０プロモータである。いくつかの実施形態では、第１のプロモータはｐ１０プロモータであり、一方で第２のプロモータはＰｏｌＨプロモータである。

【0090】

本発明の組成物のいくつかの実施形態では、第２のＯＲＦは、少なくとも１つの翻訳開始コドンを含み、第１のＯＲＦの３’部分と重複している。いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦは、第２のプロモータを包含するイントロン配列を含む。いくつかの実施形態では、第１のＯＲＦは、リンカーをコードするための配列によって第２のＯＲＦに連結される。いくつかの実施形態では、リンカーは切断可能リンカーである。いくつかの実施形態では、切断可能リンカーは、２Ａペプチドを包含する配列である。いくつかの実施形態では、２Ａペプチドは、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、馬鼻炎Ａウイルス（ＥＲＡＶ）、Ｔｈｏｓｅａａｓｉｇｎａウイルス（Ｔａｖ）、またはブタテッショウウイルス（ＰＴＶ－１）の２Ａペプチドなど、アフトウイルスもしくはカルジオウイルスに由来する２Ａペプチドから選択され得る。

【0091】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物中の第２のポリヌクレオチドは、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモータ、または肝臓特異的プロモータに操作可能に連結された導入遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、肝特異的プロモータとして、最小ＴＴＲ（ＴＴＲｍ）プロモータ、ｈＡＡＴプロモータ、アルブミン（ＡＬＢ）プロモータ、アポリポタンパク質（ＡＰＯ）プロモータ、アポリポタンパク質Ａ（ＡＰＯＡ１）プロモータ、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）プロモータ、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）プロモータ、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）プロモータ、ヘモペキシン（ＨＰＸ）プロモータ、ニコチンアミド（ｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ）Ｎ－メチルトランスフェラーゼ（ＮＮＭＴ）プロモータまたは最小プロモータ、（肝臓）カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）プロモータ、タンパク質Ｃ（ＰＲＯＣ）プロモータ、マンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）プロモータ、エピシジン（ｅｐｃｉｄｉｎ）抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）プロモータ、あるいはそれらの修飾バリアントが挙げられる。

【0092】

いくつかの実施形態では、肝臓特異的プロモータは、他の調節配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、調節配列は、エンハンサ配列を含む。いくつかの実施形態では、エンハンサ配列は、肝臓特異的肝制御領域（ＨＣＲ）エンハンサを含む。

【0093】

いくつかの実施形態では、肝臓特異的プロモータは、Ａｐｏ－ｈＡＡＴ、ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＡ１－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＣ３－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、およびそれらの修飾バリアントから選択される。

【0094】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0095】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0096】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは第２のプロモータをさらに含む。第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、当該技術分野で公知の導入遺伝子またはその修飾バリアントの発現に好適な、いずれかのプロモータであり得る。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータには、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモータ、または肝臓特異的プロモータが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝特異的プロモータとして、最小ＴＴＲ（ＴＴＲｍ）プロモータ、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモータ、アルブミン（ＡＬＢ）プロモータ、アポリポタンパク質（ＡＰＯ）プロモータ、アポリポタンパク質Ａ（ＡＰＯＡ１）プロモータ、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）プロモータ、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）プロモータ、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）プロモータ、ヘモペキシン（ＨＰＸ）プロモータ、ニコチンアミド（ｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ）Ｎ－メチルトランスフェラーゼ（ＮＮＭＴ）プロモータまたは最小プロモータ、（肝臓）カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）プロモータ、タンパク質Ｃ（ＰＲＯＣ）プロモータ、マンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）プロモータ、エピシジン（ｅｐｃｉｄｉｎ）抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）プロモータ、あるいはそれらの修飾バリアントが挙げられる。

【0097】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝臓特異的プロモータは他の調節配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、調節配列は、エンハンサ配列を含む。いくつかの実施形態では、エンハンサ配列は、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）の肝臓特異的肝制御領域（ＨＣＲ）エンハンサを含む。

【0098】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝臓特異的プロモータは、Ａｐｏ－ｈＡＡＴ、ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＡ１－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＣ３－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、およびそれらの修飾バリアントから選択される。

【0099】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号４に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0100】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0101】

いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ヒト第ＩＸ因子（ＦＩＸ）タンパク質配列をコードする。本明細書に記載の第ＩＸ因子は、あらゆる哺乳動物に由来する第ＩＸ因子、およびそのバリアントであり得る。いくつかの実施形態では、哺乳動物には、霊長類（ヒトなど）、ウシ、イヌ、ネコ、およびげっ歯類（モルモット、ラット、またはマウスなど）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の第ＩＸ因子は、ヒトに由来する第ＩＸ因子、またはそのバリアントである。

【0102】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子と比較して、１つまたは複数のアミノ酸の変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0103】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸の変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0104】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換はＲ３３８Ｘを含み、この中でＸは、アルギニン以外のいずれかのアミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、Ｘは、Ｈ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｃ、Ｇ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｙ、またはＷから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘは、Ｌ、Ｄ、またはＱから選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ３３８Ｌ、Ｒ３３８Ｄ、またはＲ３３８Ｑを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換はＲ３３８Ｌである。

【0105】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、３００未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２５０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２００未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１５０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１００未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、５０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、ＣＧジヌクレオチドを含まない。

【0106】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号２に明記される配列と比較して、１つまたは複数のヌクレオチドの変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0107】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、コドン最適化される。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、配列番号３に明記される配列と比較して、１つまたは複数のヌクレオチドの変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0108】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドはイントロンをさらに含む。いくつかの実施形態では、イントロンは、ヒト第ＩＸ因子のＳＶ４０イントロンまたは修飾された第１のイントロンである。いくつかの実施形態では、ＳＶ４０イントロンは、修飾ＳＶ４０イントロンである。いくつかの実施形態では、修飾ＳＶ４０イントロンは、配列番号６に明記されるコーディング配列を含む。

【0109】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、他の調節配列をさらに含み、調節配列として、末端逆位反復（ＩＴＲ）、エンハンサ、スプライシングシグナル、ポリアデニル化シグナル、充填配列、ターミネータ、タンパク質分解シグナル、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）、２Ａ配列などが挙げられるが、これらに限定されない。

【0110】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、エンハンサ領域をさらに含む。いくつかの実施形態では、エンハンサ領域は、ＳＶ４０エンハンサ、最初期サイトメガロウイルスエンハンサ、ＩＲＢＰエンハンサ、免疫グロブリン遺伝子由来のエンハンサ、または肝臓特異的肝制御領域（ＨＣＲ）エンハンサを含む。いくつかの実施形態では、エンハンサ領域は、第２のポリヌクレオチドのプロモータの上流に位置する。いくつかの実施形態では、エンハンサ領域は、第２のポリヌクレオチドのプロモータの下流に位置する。いくつかの実施形態では、エンハンサ領域は、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータの上流に位置する。いくつかの実施形態では、エンハンサ領域は、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータの下流に位置する。

【0111】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、末端逆位反復（ＩＴＲ）をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、少なくとも１つの末端逆位反復（ＩＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、２つの末端逆位反復（ＩＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、２つのＩＴＲは互いに同一である。いくつかの実施形態では、２つのＩＴＲは互いに異なるものである。いくつかの実施形態では、末端逆位反復（ＩＴＲ）は、ＡＡＶ由来のＩＴＲである。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ならびに他のあらゆる公知のＡＡＶに由来するＩＴＲであり得る。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ならびに他のあらゆる公知のＡＡＶに由来する野生型ＩＴＲと比較して、１つまたは複数の塩基の変異、挿入、または欠失を有するが、標的遺伝子の複製、ならびにビリオンのパッケージングおよび／または統合など、所望の末端反復機能が保持されることを前提とする。

【0112】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、１つまたは複数の充填配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、充填配列は、第２のポリヌクレオチドのプロモータの上流に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、第２のポリヌクレオチドのプロモータの下流に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータの上流に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、第２のポリヌクレオチドの第２のプロモータの下流に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、５’ＩＴＲ配列の５’末端に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、５’ＩＴＲ配列の３’末端に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、５’ＩＴＲ配列の５’末端に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、３’ＩＴＲ配列の５’末端に位置する。いくつかの実施形態では、充填配列は、３’ＩＴＲ配列の３’末端に位置する。

【0113】

いくつかの実施形態では、充填配列の長さは、限定されないが０．１ｋｂ、０．２ｋｂ、０．３ｋｂ、０．４ｋｂ、０．５ｋｂ、０．６ｋｂ、０．７ｋｂ、０．８ｋｂ、０．９ｋｂ、１ｋｂ、１．１ｋｂ、１．２ｋｂ、１．３ｋｂ、１．４ｋｂ、１．５ｋｂ、１．６ｋｂ、１．７ｋｂ、１．８ｋｂ、１．９ｋｂ、２ｋｂ、２．１ｋｂ、２．２ｋｂ、２．３ｋｂ、２．４ｋｂ、２．５ｋｂ、２．６ｋｂ、２．７ｋｂ、２．８ｋｂ、２．９ｋｂ、３ｋｂ、３．１ｋｂ、３．２ｋｂ、３．３ｋｂ、３．４ｋｂ、３．５ｋｂ、３．６ｋｂ、３．７ｋｂ、３．８ｋｂ、３．９ｋｂ、４．０ｋｂ、４．１ｋｂ、４．２ｋｂ、４．３ｋｂ、４．４ｋｂ、４．５ｋｂ、４．６ｋｂ、４．７ｋｂ、４．８ｋｂ、４．９ｋｂ、または５．０ｋｂなど、約０．１ｋｂ～５ｋｂであり得る。

【0114】

別の態様では、本発明は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための導入遺伝子配列を含むポリヌクレオチド配列を提供し、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列と比較して、１つまたは複数のヌクレオチドの変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0115】

いくつかの実施形態では、コードされたヒト第ＩＸ因子のアミノ酸配列は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、ヒト第ＩＸ因子と比較して、１つまたは複数のアミノ酸の変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0116】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列からなる。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸の変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0117】

いくつかの実施形態では、第２のポリヌクレオチド中の導入遺伝子によってコードされる第ＩＸ因子は、配列番号１に明記される配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換はＲ３３８Ｘを含み、この中でＸは、アルギニン以外のいずれかのアミノ酸であり得る。いくつかの実施形態では、Ｘは、Ｈ、Ｋ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｃ、Ｇ、Ｐ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｙ、またはＷから選択される。いくつかの実施形態では、Ｘは、Ｌ、Ｄ、またはＱから選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ３３８Ｌ、Ｒ３３８Ｄ、またはＲ３３８Ｑを含む。いくつかの実施形態では、アミノ酸置換はＲ３３８Ｌである。

【0118】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列からなる。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号２に明記される配列と比較して、１つまたは複数のヌクレオチドの変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0119】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、コドン最適化される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも５５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも６５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列からなる。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、配列番号３に明記される配列と比較して、１つまたは複数のヌクレオチドの変異、置換、欠失、または付加を有する配列を含む。

【0120】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、３００未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２５０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２００未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１５０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１００未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、５０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、２０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、１０未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、５未満のＣＧジヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子配列は、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列を含み、ヒト第ＩＸ因子をコードするための配列は、ＣＧジヌクレオチドを含まない。

【0121】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドはプロモータをさらに含む。ポリヌクレオチドのプロモータは、当該技術分野で公知の導入遺伝子またはその修飾バリアントの発現に好適な、いずれかのプロモータであり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータには、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモータ、または肝臓特異的プロモータが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝特異的プロモータとして、最小ＴＴＲ（ＴＴＲｍ）プロモータ、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモータ、アルブミン（ＡＬＢ）プロモータ、アポリポタンパク質（ＡＰＯ）プロモータ、アポリポタンパク質Ａ（ＡＰＯＡ１）プロモータ、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）プロモータ、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）プロモータ、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）プロモータ、ヘモペキシン（ＨＰＸ）プロモータ、ニコチンアミド（ｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ）Ｎ－メチルトランスフェラーゼ（ＮＮＭＴ）プロモータまたは最小プロモータ、（肝臓）カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）プロモータ、タンパク質Ｃ（ＰＲＯＣ）プロモータ、マンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）プロモータ、エピシジン（ｅｐｃｉｄｉｎ）抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）プロモータ、あるいはそれらの修飾バリアントが挙げられる。

【0122】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝臓特異的プロモータは他の調節配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、調節配列は、エンハンサ配列を含む。いくつかの実施形態では、エンハンサ配列は、肝臓特異的肝制御領域（ＨＣＲ）エンハンサを含む。

【0123】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝臓特異的プロモータは、Ａｐｏ－ｈＡＡＴ、ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＡ１－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＣ３－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、およびそれらの修飾バリアントから選択される。

【0124】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号４に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0125】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドのプロモータは、配列番号５に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0126】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは第２のプロモータをさらに含む。ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、当該技術分野で公知の導入遺伝子またはその修飾バリアントの発現に好適な、いずれかのプロモータであり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータには、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＭＮＤＵ３、ＰＧＫ、ＥＦ１ａプロモータ、または肝臓特異的プロモータが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝特異的プロモータとして、最小ＴＴＲ（ＴＴＲｍ）プロモータ、ヒトα１－アンチトリプシン（ｈＡＡＴ）プロモータ、アルブミン（ＡＬＢ）プロモータ、アポリポタンパク質（ＡＰＯ）プロモータ、アポリポタンパク質Ａ（ＡＰＯＡ１）プロモータ、アポリポタンパク質Ｃ３（ＡＰＯＣ３）プロモータ、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）プロモータ、ケトヘキソキナーゼ（ＫＨＫ）プロモータ、ヘモペキシン（ＨＰＸ）プロモータ、ニコチンアミド（ｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ）Ｎ－メチルトランスフェラーゼ（ＮＮＭＴ）プロモータまたは最小プロモータ、（肝臓）カルボキシルエステラーゼ１（ＣＥＳ１）プロモータ、タンパク質Ｃ（ＰＲＯＣ）プロモータ、マンナン結合レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）プロモータ、エピシジン（ｅｐｃｉｄｉｎ）抗菌ペプチド（ＨＡＭＰ）プロモータ、あるいはそれらの修飾バリアントが挙げられる。

【0127】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝臓特異的プロモータは他の調節配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、調節配列は、エンハンサ配列を含む。いくつかの実施形態では、エンハンサ配列は、肝臓特異的肝制御領域（ＨＣＲ）エンハンサを含む。

【0128】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは肝臓特異的プロモータであり、肝臓特異的プロモータは、Ａｐｏ－ｈＡＡＴ、ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＡ１－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、ＡＰＯＣ３－ＨＣＲ－ｈＡＡＴ、およびそれらの修飾バリアントから選択される。

【0129】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも７５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも８５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９６％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９８％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記される配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの第２のプロモータは、配列番号５に明記されるポリヌクレオチド配列を含む。

【0130】

ポリヌクレオチド配列のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、修飾ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。

【0131】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ＳＶ４０ポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＡＰＯ－ＨＣＲ－ｈＡＡＴプロモータ、修飾ＳＶ４０イントロン、ｂＧＨポリ（Ａ）、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。

【0132】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号６、および配列番号８を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号７、および配列番号９を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号６、配列番号８、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号６、配列番号８、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号６、配列番号８、および配列番号３を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号７、配列番号９、およびＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号７、配列番号９、および最適化されたＦＩＸコーディング遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号４、配列番号７、配列番号９、および配列番号３を含む。

【0133】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１０を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１１を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１２を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１３を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１４を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１５を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１０からなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１１からなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１２からなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１３からなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１４からなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは配列番号１５からなる。

【0134】

別の態様では、本発明は、本発明の組成物を含む細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は昆虫細胞である。いくつかの実施形態では、昆虫細胞はＳｆ９細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、哺乳動物細胞は、ＨＥＫ２９３細胞およびその誘導体である。ＨＥＫ２９３誘導体の例として、ＨＥＫ２９３Ａ、ＨＥＫ２９３ＡＡＶ、ＨＥＫ２９３Ｓ、ＨＥＫ２９３Ｆ、Ｅｘｐｉ２９３Ｆ、ＨＥＫ２９３ＳＧ、ＨＥＫ２９３ＳＧＧＤ、ＨＥＫ２９３ＦＴＭ、およびＨＥＫ２９３Ｔが挙げられる。これらの誘導体は、ＨＥＫ２９３のバリアントとも呼ばれる場合がある。いくつかの実施形態では、誘導体はＨＥＫ２９３Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、トランスフェクション後の本発明の組成物を含む。いくつかの実施形態では、トランスフェクションとして、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿法、およびリポソームトランスフェクションが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物は、細胞へと安定してトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、組成物は、細胞へと一過的にトランスフェクトされる。

【0135】

別の態様では、本発明はさらに、本発明の組成物を含む細胞集団を提供する。いくつかの実施形態では、細胞集団は、本明細書に記載される種々の細胞を含む。

【0136】

組換えＡＡＶビリオン
別の態様では、本発明は、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンを提供する。本ビリオンは、本発明の組成物を昆虫細胞にトランスフェクトすることによって調製される。いくつかの実施形態では、昆虫細胞はＳｆ９細胞である。

【0137】

いくつかの実施形態では、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンは、本出願のポリヌクレオチドを含む。組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンは、当該技術分野で公知の本発明に適用可能である好適なＡＡＶセロタイプに由来し得る。いくつかの実施形態では、ＡＡＶセロタイプとして、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶＨＳＣ１５、ＫＰ１、ＮＰ５９、およびＬＫ０３が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＡＡＶセロタイプはＡＡＶ２である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶセロタイプはＡＡＶ８である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶセロタイプはＡＡＶ５である。

【0138】

いくつかの実施形態では、ｃａｐおよびｒｅｐは、異なるＡＡＶセロタイプに由来し得る。例えば、ｃａｐおよびｒｅｐは、別々に、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（ＡＡＶ３Ａおよび３Ｂを含む）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶ－Ｒｈ１０、ＡＡＶ－Ｒｈ７４、ＡＡＶ－２ｉ８、ＡＡＶＨＳＣ、ＤＪ、ＫＰ１、ＮＰ５９、ＬＫ０３、または他のあらゆる公知のＡＡＶに由来し得る。例えばいくつかの実施形態では、ｃａｐはＡＡＶ２に由来し、一方でｒｅｐはＡＡＶ５に由来する。いくつかの実施形態では、ｃａｐはＡＡＶ５に由来し、一方でｒｅｐはＡＡＶ２に由来する。

【0139】

いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、当該技術分野で公知のあらゆる方法によって昆虫細胞へと送達することができる。いくつかの実施形態では、本方法として、電気穿孔法、リン酸カルシウム沈殿法、リポソームトランスフェクションが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、組成物は、昆虫細胞へと安定してトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、組成物は、昆虫細胞へと一過的にトランスフェクトされる。いくつかの実施形態では、昆虫細胞は、ｒＡＡＶビリオンを産生するために使用される。

【0140】

必要な場合、ｒＡＡＶビリオンは、当業者に公知である従来方法によって昆虫細胞から単離かつ精製することができる。例えばｒＡＡＶビリオンは、遠心分離、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、陰イオン交換クロマトグラフィー、陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、限外濾過、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、および／または他の精製技法によって精製することができる。

【0141】

本発明のｒＡＡＶビリオンは、例えば、第ＩＸ因子である血友病Ｂを有するモデルマウスにおいて高レベルで、ｉｎ ｖｉｖｏで発現することができる。第ＩＸ因子の発現レベルは、酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ）法によって検出することができる。例えば、ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄのＺＹＭＵＴＥＳＴ第ＩＸ因子キット（論文番号＃ＲＫ０３２Ａ）が使用され、データは、マルチモード・マイクロプレート・リーダＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５の解析ソフトウェアＳｐｅｃｔｒａＭａｘを用いて分析される。ＦＩＸ濃度（％）は、血漿中ＦＩＸキャリブレータの濃度によって判定される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約１０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約２０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約４０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約８０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約９０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約１００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約２００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約３００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約４００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約６００％を超える。

【0142】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５％～約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５％～約１５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約１０％～約１５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５％～約１０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約１００％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約２００％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約３００％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約４００％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約４５０％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５００％～約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、約６００％である。

【0143】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約２０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約４０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約６００％である。

【0144】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、６週間で約または少なくとも約５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、６週間で約または少なくとも約４０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、６週間で約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、６週間で約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、６週間で約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、６週間で約または少なくとも約６００％である。

【0145】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約４０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約４５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、８週間で約または少なくとも約５００％である。

【0146】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間、６週間、および８週間で約または少なくとも約５％になるように、安定して、かつ連続的に発現される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間、６週間、および８週間で約または少なくとも約６％になるように、安定して、かつ連続的に発現される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間、６週間、および８週間で約または少なくとも約２０％になるように、安定して、かつ連続的に発現される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間、６週間、および８週間で約または少なくとも約４０％になるように、安定して、かつ連続的に発現される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間、６週間、および８週間で約または少なくとも約４００％になるように、安定して、かつ連続的に発現される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間、６週間、および８週間で約または少なくとも約５００％になるように、安定して、かつ連続的に発現される。

【0147】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、４週間で約または少なくとも約６００％、６週間で約または少なくとも約５５０％、および８週間で約または少なくとも約４５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現される。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現される。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現される。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約４５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約４５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約４５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、約または少なくとも約４００％である。

【0148】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、最低で約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、最低で約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、最低で約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、最低で約または少なくとも約４５０％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、最低で約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、発現量は、連続的に約４００％～約６００％である。

【0149】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、第ＩＸ因子は生体活性を呈する。例えば、血友病Ｂを有するモデルマウスでの発現が実現される。第ＩＸ因子の活性は、凝固方法および発色性活性分析方法といった２つの方法によって検出され得る。ＦＩＸ活性が凝固方法によって検出される場合、ＣＡ－５３０血液凝固分析装置が分析および検出に使用される。ＦＩＸ活性が発色性活性分析方法によって検出される場合、ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄのＢＩＯＰＨＥＮＴＭ ＦＩＸキット（論文番号ＲＥＦ２２１８０１－ＲＵＯ）がＦＩＸ活性の検出に使用される。マルチモード・マイクロプレート・リーダＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５の解析ソフトウェアＳｐｅｃｔｒａＭａｘがデータ分析に使用される。

【0150】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、第ＩＸ因子は凝固方法によって検出される生体活性を呈する。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約８０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２０００％である。

【0151】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約５０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約７０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約８０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約２００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約２５０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約３００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約３５０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約４００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約５００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約５５０％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約７００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１０００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１５００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１７００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１８００％を超える。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約２０００％を超える。

【0152】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約５０％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約７０％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約８０％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約２００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約２５０％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約３００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約３５０％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約４００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約５００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約５５０％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約７００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１０００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１５００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１７００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約１８００％～約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約２０００％～約２５００％である。

【0153】

いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約８０％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３５０％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１５００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、６週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２０００％である。

【0154】

いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約８０％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３５０％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１５００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、８週間でｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２０００％である。

【0155】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約８０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも６週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２２００％である。

【0156】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持される。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に約または少なくとも約２２００％である。

【0157】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約８０％、８週間で約または少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約３００％、８週間で約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約２５０％、８週間で約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約７００％、８週間で約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約３５０％、８週間で約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約１７００％、８週間で約または少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に、６週間で約または少なくとも約２０００％、８週間で約または少なくとも約１８００％である。

【0158】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約３５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約４００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約１０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約１５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、凝固方法による検出時に最低で約または少なくとも約２０００％である。

【0159】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって連続的かつ安定して発現され、第ＩＸ因子は発色性活性分析方法によって検出される生体活性を呈する。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１２５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約７５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約９００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１２００％である。

【0160】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約１０％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約１５％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約５０％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約１００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約１２５％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約２００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約２５０％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約３００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約７００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約７５０％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約８００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約９００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約１０００％～約１２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の生体活性は、発色性活性分析方法による検出時に約１１００％～約１２００％である。

【0161】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１２５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に約または少なくとも約１２００％である。

【0162】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１２５％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約２５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約３００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１０００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１１００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンによって発現される第ＩＸ因子の活性は、少なくとも８週間、連続的かつ安定して維持され、活性は、発色性活性分析方法による検出時に８週間で約または少なくとも約１２００％である。

【0163】

いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約６％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約７０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約２０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約８０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約５５０％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約３０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約３００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１５００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１６００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１７００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンの第ＩＸ因子の発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。

【0164】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約６００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約６００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約６００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも４週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約６００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。

【0165】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも６週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約５５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。

【0166】

いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４００％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１８００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約１９００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２０００％である。いくつかの実施形態では、第ＩＸ因子は、少なくとも８週間にわたりｉｎ ｖｉｖｏでのｒＡＡＶビリオンにより連続的かつ安定して発現され、発現量は、ＥＬＩＳＡ法による検出時に少なくとも約４５０％であり、活性は、凝固方法による検出時に少なくとも約２１００％である。

【0167】

医薬組成物
別の態様では、本発明は、血友病Ｂの処置を必要とする対象の血友病Ｂを処置するための医薬組成物を提供する。本医薬組成物は、本発明のポリヌクレオチドまたはｒＡＡＶビリオン、および薬学的に許容可能な担体または賦形剤を含む。

【0168】

本明細書で使用される場合、「薬学的または治療上許容可能な担体または賦形剤」は、活性成分の生体活性の有効性を妨げず、宿主または患者に対し無毒である担体媒体を指す。医薬製剤に使用される担体の種類は、治療用化合物を投与する方法に左右される。複数の投与経路を有する医薬組成物を調製するための多くの方法が、当該技術分野で公知である。

【0169】

本発明の医薬組成物のいくつかの実施形態では、本医薬組成物は、本発明のポリヌクレオチドまたはｒＡＡＶビリオンを適切な溶媒に溶解することによって調製される。適切な溶媒として、水、塩溶液（ＮａＣｌなど）、緩衝液（リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）など）、または他の溶媒が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、溶媒は無菌である。

【0170】

本発明の医薬組成物は、無菌操作によって調製されてもよく、または代替的に、好適な調製段階で滅菌されてもよい。例えば、滅菌医薬組成物は、滅菌成分を無菌混合することによって調製され得る。代替的に滅菌医薬組成物は、先ず成分を混合し、次いで最終調製物を滅菌することによって調製されてもよい。滅菌方法には、加熱滅菌、放射線、および濾過が挙げられ得るが、これらに限定されない。

【0171】

方法
別の態様では、本出願は、血友病Ｂを処置する方法を提供する。本方法は、本発明のポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物を、処置を必要とする対象に治療有効量で投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物が投与された後、本発明の第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子配列が、血友病Ｂを処置するように対象に発現される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物が投与された後、本発明の第ＩＸ因子をコードする導入遺伝子配列が、血友病Ｂを処置するように対象の肝臓に発現される。

【0172】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物は、当該技術分野で公知のあらゆる適切な方法によって対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、投与は局所投与または全身投与を含む。いくつかの実施形態では、投与は、経口投与、経鼻投与、吸入投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、皮内投与、局所投与、または直腸経路の投与を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物は、静脈内注射によって投与される。

【0173】

いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物は、治療有効量で投与され、治療有効量は医学的に許容可能な毒性レベルで所望の生体効果を達成する。この量は、投与経路および疾患の重症度に応じで変動し得る。量はまた、処置される各患者の体重、年齢、性別、および／または症状の重症度に応じて調整され得る。正確な用量および投与経路は、最終的に主治医または獣医師によって決定される。量は、処置される患者の年齢、体重、および疾病の重症度に応じて慣例的に変化し得ることが理解される。

【0174】

本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１０ｖｇ／ｋｇ～１０^１５ｖｇ／ｋｇである。本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１０ｖｇ／ｋｇ～１０^１３ｖｇ／ｋｇである。本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１１ｖｇ／ｋｇ～１０^１５ｖｇ／ｋｇである。本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１１ｖｇ／ｋｇ～１０^１３ｖｇ／ｋｇである。本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１２ｖｇ／ｋｇ～１０^１５ｖｇ／ｋｇである。本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１１ｖｇ／ｋｇ～１０^１２ｖｇ／ｋｇである。本方法のいくつかの実施形態では、ＡＡＶビリオンの投与量は、１０^１０ｖｇ／ｋｇ～１０^１２ｖｇ／ｋｇである。

【0175】

本方法のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物の送達容量は、約０．０１ｍＬ～１ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．０５ｍＬ～１ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．１ｍＬ～１ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．５ｍＬ～１ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．１ｍＬ～０．５ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．０１ｍＬ～０．５ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．０５ｍＬ～０．５ｍＬである。いくつかの実施形態では、組成物の送達容量は、約０．０５ｍＬ～１ｍＬである。

【0176】

本方法のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物の投与頻度は、１日２回、３回、４回、または５回を含む、少なくとも１日１回の投与であってもよい。いくつかの実施形態では、処置は、１日、２日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２２日、２３日、２４日、２５日、２６日、２７日、２８日、２９日、３０日、３１日、３２日、３３日、３４日、３５日、３６日、３７日、３８日、３９日、４０日、４１日、４２日、４３日、４４日、４５日、４６日、４７日、４８日、４９日、５０日、６０日、７０日、８０日、９０日、１００日、１５０日、２００日、２５０日、３００日、４００日、５００日、７５０日、１０００日、または１０００日よりも長い間持続し得る。

【0177】

キット
別の態様では、本発明は、血友病Ｂを処置するためのキットを提供する。このキットは、本発明のポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物と、指示書とを備える。いくつかの実施形態では、指示書は、血友病Ｂを処置するためにポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物を投与する方法を表示するために使用される。

【0178】

いくつかの実施形態では、キットは容器をさらに備える。いくつかの実施形態では、容器は、本明細書に記載のポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物を送達するように構成される。いくつかの実施形態では、容器は、バイアル、点滴器、ボトル、チューブ、およびシリンジを含む。いくつかの実施形態では、容器は、ポリヌクレオチド、ＡＡＶビリオン、または医薬組成物を投与するために使用されるシリンジである。

【0179】

本発明のいくつかの実施形態は後述の実施例を通じてさらに例示され、本実施例は限定するものとして解釈されるべきではない。当業者であれば、後述の実施例に開示される技術は、本発明者らによって見出されるとともに、本明細書に記載される本発明の実施形態の実施において良好に機能する技術を表しており、そのため、実施形態を実施するために好ましい方法を構成するものと考慮され得ることが理解される。しかし、本開示の内容に基づき、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示される特定の実施形態に対して種々の変更が行われてもよく、同一または類似の結果が常に得られ得ることが、当業者によって理解される。

【実施例】

【0180】

本発明は、以下の実施例によってさらに例示される。これら実施例は、本発明を例示することのみを意図しており、本発明を限定するものと解釈されるべきでない。

【0181】

実施例１ 組換えＡＡＶベクターの設計とクローニング
ＡＡＶ２に由来するｒｅｐコード配列、およびＡＡＶ５に由来するｃａｐコード配列のほか、対応するプロモータを、別々にバキュロウイルスプラスミドベクターにクローニングすることで、本出願中のｃａｐタンパク質コード配列およびｒｅｐタンパク質コード配列を含有する第１のポリヌクレオチドを得た。

【0182】

配列番号２または配列番号３に明記される第ＩＸ因子をコードするヌクレオチド配列、肝臓特異的プロモータ（配列番号４または５）、イントロン（配列番号６または７）、ポリ（Ａ）シグナル（配列番号８または９）、および他の連結配列を組み合わせることで第２のポリヌクレオチドを得て、第２のポリヌクレオチドをバキュロウイルスプラスミドベクターにクローニングした。この実験では、第ＩＸ因子を発現する６つの異なる第２のポリヌクレオチド、すなわち試験第２ポリヌクレオチド配列１～６を試験した。配列は配列番号１０～１５に明記する。

【0183】

実施例２ 組換えＡＡＶビリオンの調製
実施例１で得た第１のポリヌクレオチドバキュロウイルスプラスミドおよび第２のポリヌクレオチドバキュロウイルスプラスミドをそれぞれＳｆ９細胞にトランスフェクトすることで、バキュロウイルスビリオンを得た。次に、組換えＡＡＶを産生するようにバキュロウイルスビリオンを組み合わせてＳｆ９細胞に感染させた。最後に、組換えＡＡＶ５／第ＩＸ因子ビリオンを単離し、Ｓｆ９細胞から精製した。

【0184】

実施例３ 血友病Ｂを有するモデルマウスにおける第ＩＸ因子の発現と活性
本実施例では、第ＩＸ因子をノックアウト（Ｆ９－ＫＯ）した血友病Ｂモデルのマウスを実験群と対照群に分け、実施例２で得た精製済みのｒＡＡＶ５／第ＩＸ因子（用量：２×１０＾１３ｖｇ／ｋｇ）およびＰＢＳをそれぞれ実験群と対照群のマウスに静脈内注射した。一定期間後、血漿を抽出するべく種々の時点で血液を採取し、血漿中の第ＩＸ因子（ＦＩＸ）の濃度と活性を検出した。ＦＩＸ濃度はＥＬＩＳＡ法により検出した。ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏｍｅｄのＺＹＭＵＴＥＳＴ第ＩＸ因子キット（論文番号＃ＲＫ０３２Ａ）を使用し、マルチモード・マイクロプレート・リーダＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５の解析ソフトウェアＳｐｅｃｔｒａＭａｘを用いてデータを解析した。ＦＩＸ濃度（％）は、血漿中ＦＩＸキャリブレータの濃度によって判定した。ＦＩＸ活性が凝固方法によって検出された場合、ＣＡ－５３０血液凝固分析装置を分析および検出に使用した。ＦＩＸ活性が発色性活性分析方法によって検出された場合、ＨＹＰＨＥＮ ＢｉｏＭｅｄのＢＩＯＰＨＥＮＴＭ ＦＩＸキット（論文番号ＲＥＦ２２１８０１－ＲＵＯ）をＦＩＸ活性の検出に使用した。マルチモード・マイクロプレート・リーダＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｍ５の解析ソフトウェアＳｐｅｃｔｒａＭａｘをデータ分析に使用した。結果より、送達されたＡＡＶは、対照群と比較してマウスにおいて第ＩＸ因子を有意に発現でき（図１および表１）、発現された第ＩＸ因子は活性を呈する（図２～３および表２～３）ことが認められる。加えて、様々な発現の組合せが様々な発現レベルを呈し、ＦＩＸの発現と活性は、種々の検出時点で連続的に安定する。

【0185】

【表2】

【0186】

【表3】

【0187】

【表4】

【0188】

実施例４ 本出願の組成物のｉｎ ｖｉｖｏでの有効性
対照、およびｒＡＡＶ５／第ＩＸ因子ビリオンを含有する医薬組成物を使用して臨床実験を実施し、本出願の医薬組成物の有効性を検証する。

【0189】

【表5-1】

【0190】

【表5-2】

【0191】

【表5-3】

【0192】

【表5-4】

【0193】

【表5-5】

【0194】

【表5-6】

【0195】

【表5-7】

【0196】

【表5-8】

【0197】

【表5-9】

【0198】

【表5-10】

【0199】

【表5-11】

【0200】

【表5-12】

【0201】

【表5-13】

【0202】

【表5-14】

【0203】

【表5-15】

【図1】

【図2】

【図3】

【配列表】

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【国際調査報告】