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特表2024-521847コンジュゲート化莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用
(19)【発行国】日本国特許庁(JP)
(12)【公報種別】公表特許公報(A)
(11)【公表番号】
(43)【公表日】2024-06-04
(54)【発明の名称】コンジュゲート化莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用
(51)【国際特許分類】
C08B 37/00 20060101AFI20240528BHJP
A61K 39/09 20060101ALI20240528BHJP
A61P 37/04 20060101ALI20240528BHJP
【ＦＩ】
C08B37/00 K
A61K39/09
A61P37/04 ZNA
【審査請求】未請求
【予備審査請求】未請求
(21)【出願番号】P 2023573347
(86)(22)【出願日】2022-05-25
(85)【翻訳文提出日】2024-01-25
(86)【国際出願番号】 IB2022054920
(87)【国際公開番号】W WO2022249107
(87)【国際公開日】2022-12-01
(31)【優先権主張番号】63/194,641
(32)【優先日】2021-05-28
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(31)【優先権主張番号】63/228,761
(32)【優先日】2021-08-03
(33)【優先権主張国・地域又は機関】US
(81)【指定国・地域】
(71)【出願人】
【識別番号】593141953
【氏名又は名称】ファイザー・インク
(74)【代理人】
【識別番号】100118902
【弁理士】
【氏名又は名称】山本 修
(74)【代理人】
【識別番号】100106208
【弁理士】
【氏名又は名称】宮前 徹
(74)【代理人】
【識別番号】100196508
【弁理士】
【氏名又は名称】松尾 淳一
(74)【代理人】
【識別番号】100135415
【弁理士】
【氏名又は名称】中濱 明子
(72)【発明者】
【氏名】アンダーソン，アナリーサ・シビル
(72)【発明者】
【氏名】ギャラガー，ケイトリン
(72)【発明者】
【氏名】グー，ジャンシン
(72)【発明者】
【氏名】ケーンブスキー，アイシス
(72)【発明者】
【氏名】キム，ジン－フワン
(72)【発明者】
【氏名】モーラン，ジャスティン・キース
(72)【発明者】
【氏名】シン，サッダム
(72)【発明者】
【氏名】スレンドラン，ナビーン
【テーマコード（参考）】
4C085
4C090
【Ｆターム（参考）】
4C085AA03
4C085BA14
4C085CC33
4C085EE01
4C090BA61
4C090BB20
4C090BB33
4C090BB35
4C090BB36
4C090BB53
4C090BC15
4C090CA34
4C090CA35
(57)【要約】
本発明は、新しいコンジュゲート化莢膜糖抗原（グリココンジュゲート）、前記グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物、およびこれらの使用に関する。
【選択図】図２
【選択図】図２
【特許請求の範囲】
【請求項1】
ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法であって、（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含み、単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされ、還元反応（ｃ）が、非プロトン性溶媒中で実行される、方法。
【請求項2】
酸化剤が、過ヨウ素酸塩または過ヨウ素酸である、請求項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項3】
活性化された血清型３多糖の酸化度が、１１から１９の間である、請求項１から２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項4】
活性化された血清型３多糖の酸化度が、約１５である、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項5】
活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）が、１．５：１から０．５：１の間である、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項6】
還元反応（ｃ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項7】
還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項8】
ステップｃ）の生成物を、１～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと１５分間～１５時間反応させる、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項9】
生成された後にグリココンジュゲートを精製するステップをさらに含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項10】
請求項１から９の方法のいずれか１つに従って生成されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲート。
【請求項11】
コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、請求項１０に記載のグリココンジュゲート。
【請求項12】
コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約１５０ｋＤａである、血清型３莢膜多糖を含む、請求項１０に記載のグリココンジュゲート。
【請求項13】
１，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、請求項１０から１２のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項14】
２，２５０ｋＤａから３，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、請求項１０から１３のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項15】
前記グリココンジュゲートのコンジュゲーション度が、２から１５の間である、請求項１０から１４のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項16】
糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が、０．９から１．１の間である、請求項１０から１５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項17】
前記担体タンパク質が、ＣＲＭ１９７である、請求項１０から１６のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項18】
前記担体タンパク質が、ＳＣＰである、請求項１０から１６のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項19】
前記担体タンパク質が、配列番号４１または配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、請求項１０から１６のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【請求項20】
請求項１０から１９のいずれか一項に記載のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物。
【請求項21】
Ｓ．ニューモニエの異なる血清型に由来する１～２５種のグリココンジュゲートを含む、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項22】
Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含み、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項23】
Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含み、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項24】
Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートをさらに含み、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、請求項２０に記載の免疫原性組成物。
【請求項25】
（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）または１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
【請求項26】
単離された多糖が、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、請求項２５に記載の方法。
【請求項27】
ステップａ）が、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩまたはＣＤＴと反応させることを含む、請求項２５から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項28】
活性化反応ａ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項29】
活性化反応ａ）が、０．１％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項30】
コンジュゲーション反応ｂ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項31】
コンジュゲーション反応ｂ）が、約０．１％～約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される、請求項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項32】
弱有機塩基が、活性化反応ａ）の後であるが、コンジュゲーション反応ｂ）の前に、反応混合物に添加される、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項33】
前記弱有機塩基が、アルカンアミン、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ヒスチジンおよびグアニジンから選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項34】
生成された後にグリココンジュゲートを精製するステップをさらに含む、請求項２５から３３のいずれか一項に記載の方法。【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【0001】
本発明は、新しいコンジュゲート化莢膜糖抗原（グリココンジュゲート）、前記グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物、およびこれらの使用に関する。本発明の免疫原性組成物は、典型的には、糖がストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する、グリココンジュゲートを含む。本発明はまた、前記グリココンジュゲートを用いた肺炎球菌感染に対する、ヒト対象、特に、乳児および高齢者のワクチン接種に関する。
【背景技術】
【0002】
肺炎球菌により引き起こされる感染は、全世界における罹患および死亡の主な原因である。肺炎、熱性菌血症および髄膜炎は、侵襲性肺炎球菌疾患の最もよく起こる兆候であるが、一方、気道内での細菌拡散は、中耳感染、副鼻腔炎または反復性気管支炎をもたらし得る。侵襲性疾患と比較して、非侵襲的兆候は、通常、重篤度がより低いが、大幅によりよく起こる。
【0003】
肺炎球菌疾患の病原体であるストレプトコッカス・ニューモニエ（肺炎球菌）は、多糖莢膜により取り囲まれたグラム陽性被包性球菌である。この莢膜の組成における差異により、約９１種の莢膜型間の血清学的鑑別が可能になり、そのうちのいくつかは肺炎球菌疾患と関連することが多いが、他のものはそうであることは稀である。侵襲性肺炎球菌感染としては、肺炎、髄膜炎および熱性菌血症が挙げられる；よく起こる非侵襲的兆候の中には、中耳炎、副鼻腔炎および気管支炎がある。
【0004】
肺炎球菌多糖、特に莢膜多糖は、細菌の表面に見出される重要な免疫原である。このことから、肺炎球菌多糖は、肺炎球菌ワクチンの設計における重要な成分になっている。肺炎球菌多糖は、特に担体タンパク質に連結された場合、免疫応答を誘発するのに有用であることが分かっている。
【0005】
一部の血清型、特にストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３は、大きな、粘着性の多糖鎖（例えば、３型では、２～３百万ダルトンのグルコース／グルクロン酸の鎖）を生成する。その粘着性のため、その取り扱いが困難になっている。
【0006】
さらに、血清型３多糖に関する免疫原性の増加は、得ることが困難になっている。例えば、１１価肺炎球菌プロテインＤコンジュゲートワクチン（１１－Ｐｎ－ＰＤ）の免疫原性および安全性の研究において、３用量のワクチンを受け、続いて、同じワクチンまたは肺炎球菌多糖ワクチンのいずれかのブースター用量を受けた乳児において、血清型３についてプライミング効果は観察されなかった（Ｎｕｒｋｋａら（２００４）Ｐｅｄ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．Ｊ．、２３：１００８～１０１４頁）。別の研究において、１１－Ｐｎ－ＰＤの用量を受けた乳児からのオプソニン食作用アッセイ（ＯＰＡ）結果は、他の試験された血清型に匹敵するレベルでの血清型３についての抗体応答を示さなかった（Ｇａｔｃｈａｌｉａｎら、１７ｔｈ ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｕｒ．Ｓｏｃ．Ｐａｅｄ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．（ＥＳＰＩＤ）、Ｐｏｓｔｅｒ Ｎｏ．４、ＰＩＡ Ｐｏｓｔｅｒ Ｓｅｓｓｉｏｎ １、Ｉｓｔａｎｂｕｌ Ｔｕｒｋｅｙ、２００１年３月２７日）。急性中耳炎の予防における１１－Ｐｎ－ＰＤの有効性を評価した、なおまた別の研究において、このワクチンは、血清型３により引き起こされるエピソードに対する防御を提供しなかった（Ｐｒｙｍｕｌａら Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ、３６７巻：７４０～７４８頁（２００６年３月４日））。
【発明の概要】
【0007】
したがって、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３に対してより頑強な免疫応答を生成することが可能な抗原に対する必要性がある。
本発明は、特に、改善された免疫原性を示すストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを提供する。本発明はまた、より少ない操作ステップで、よりよいコンジュゲーション収率を有する、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを生成する方法を提供する。
本発明は、特に、改善された免疫原性を示すストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを提供する。本発明はまた、より少ない操作ステップで、よりよいコンジュゲーション収率を有する、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを生成する方法を提供する。
【0008】
発明の概要
ある態様では、本発明は、
（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法であって、単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされ、還元反応（ｃ）が、非プロトン性溶媒中で実行される、方法に関する。
ある態様では、本発明は、
（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法であって、単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされ、還元反応（ｃ）が、非プロトン性溶媒中で実行される、方法に関する。
【0009】
ある態様では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩または過ヨウ素酸である。
ある態様では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１１から１９の間、または約１５である。
ある態様では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１１から１９の間、または約１５である。
【0010】
ある態様では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される。
本発明はさらに、これらの方法により生成されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートに関する。
本発明はさらに、これらの方法により生成されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートに関する。
【0011】
ある態様では、グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間または約１５０ｋＤａである、血清型３莢膜多糖を含む。
【0012】
ある態様では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７またはＳＣＰである。
本発明はさらに、前記ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
本発明はさらに、前記ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
【0013】
本発明はさらに、
（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）または１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法に関する。
（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）または１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法に関する。
【0014】
ある態様では、単離された多糖は、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
ある態様では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。
ある態様では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0015】
ある態様では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。
ある態様では、弱有機塩基は、活性化反応ａ）の後であるが、コンジュゲーション反応ｂ）の前に反応混合物に添加される。
ある態様では、弱有機塩基は、活性化反応ａ）の後であるが、コンジュゲーション反応ｂ）の前に反応混合物に添加される。
【図面の簡単な説明】
【0016】
【図1】Ｓ．ニューモニエ（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖の反復多糖構造を示す図である。
【図2】ＣＤＩまたはＣＤＴ化学を用いた本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートの調製についての一般的スキームを示す図である。Ｐｎ３多糖＝Ｓ．ニューモニエ血清型３莢膜多糖；ＣＰ＝担体タンパク質、ＣＤＩ＝１，１’－カルボニルジイミダゾール；ＣＤＴ＝１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）。
【図3】異なるサイズの多糖を含む、マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を示すグラフである。ＲＡＣ／水性またはＲＡＣ／ＤＭＳＯコンジュゲーションのいずれかを用いてＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、サイジングされた血清型３多糖（約２５、１５０、または２５０ｋＤａ）を使用して、マウスにワクチン接種した。
【図4】異なる活性化度（ＤｏＡ）を有する、マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を示すグラフである。ＲＡＣ／水性またはＲＡＣ／ＤＭＳＯコンジュゲーションのいずれかを用いてＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、サイジングされた血清型３多糖を使用して、マウスにワクチン接種した。
【図5】マウスにおけるＣＲＭ１９７、ＳＣＰ、または破傷風トキソイド（ＴＴ）への血清型３コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を示すグラフである。ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した。
【図6】マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を示すグラフである。異なる化学が使用されている（水性中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／Ａｑ．）、ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）、ｅＴＥＣ連結グリココンジュゲート（ｅＴＥＣ）またはＣＤＩ化学（ＣＤＩ Ｄｉｒｅｃｔ））。
【図7A】乳児アカゲザルにおけるＲＡＣ／ＤＭＳＯ担体に対する免疫応答（ＯＰＡおよびＩｇＧ）を示すグラフである。Ａ．ＲＡＣ／ＤＭＳＯ化学における異なる担体間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したオプソニン食作用力価。Ｂ．ＲＡＣ／ＤＭＳＯ化学における異なる担体間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したＩｇＧ力価。各点は、個々の動物を表し、データを、９５％信頼区間を用いて幾何平均力価として表す。統計的有意性（ｐ値）を、一元配置分散分析に基づいて決定した。ＰＤ－用量後、ＬＬＯＱ－定量下限。
【図7B】乳児アカゲザルにおけるＲＡＣ／ＤＭＳＯ担体に対する免疫応答（ＯＰＡおよびＩｇＧ）を示すグラフである。Ａ．ＲＡＣ／ＤＭＳＯ化学における異なる担体間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したオプソニン食作用力価。Ｂ．ＲＡＣ／ＤＭＳＯ化学における異なる担体間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したＩｇＧ力価。各点は、個々の動物を表し、データを、９５％信頼区間を用いて幾何平均力価として表す。統計的有意性（ｐ値）を、一元配置分散分析に基づいて決定した。ＰＤ－用量後、ＬＬＯＱ－定量下限。
【図8A】乳児アカゲザルにおけるＲＡＣ／水性担体に対する免疫応答（ＯＰＡおよびＩｇＧ）を示すグラフである。Ａ．ＲＡＣ／Ａｑ化学における異なる多糖サイズ間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したオプソニン食作用力価。Ｂ．ＲＡＣ／Ａｑ化学における異なる多糖サイズ間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したＩｇＧ力価。各点は、個々の動物を表し、データを、９５％信頼区間を用いて幾何平均力価として表す。統計的有意性（ｐ値）を、一元配置分散分析に基づいて決定した。ＰＤ－用量後、ＬＬＯＱ－定量下限。
【図8B】乳児アカゲザルにおけるＲＡＣ／水性担体に対する免疫応答（ＯＰＡおよびＩｇＧ）を示すグラフである。Ａ．ＲＡＣ／Ａｑ化学における異なる多糖サイズ間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したオプソニン食作用力価。Ｂ．ＲＡＣ／Ａｑ化学における異なる多糖サイズ間で各ワクチン接種時点から４週間後に収集した血清から測定したＩｇＧ力価。各点は、個々の動物を表し、データを、９５％信頼区間を用いて幾何平均力価として表す。統計的有意性（ｐ値）を、一元配置分散分析に基づいて決定した。ＰＤ－用量後、ＬＬＯＱ－定量下限。
【発明を実施するための形態】
【0017】
１．本発明のグリココンジュゲート
本発明は、部分的に、糖がＳ．ニューモニエの血清型、特に血清型３に由来するコンジュゲート化莢膜糖抗原（グリココンジュゲートとも称される）を対象とする。本発明の目的では、用語「グリココンジュゲート」は、担体タンパク質に共有結合的に連結された莢膜糖を示す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に直接連結される。第２の実施形態では、細菌糖は、スペーサー／リンカーを介してタンパク質に連結される。
本発明は、部分的に、糖がＳ．ニューモニエの血清型、特に血清型３に由来するコンジュゲート化莢膜糖抗原（グリココンジュゲートとも称される）を対象とする。本発明の目的では、用語「グリココンジュゲート」は、担体タンパク質に共有結合的に連結された莢膜糖を示す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に直接連結される。第２の実施形態では、細菌糖は、スペーサー／リンカーを介してタンパク質に連結される。
【0018】
１．１ Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来する肺炎球菌糖
図１で示されるように、血清型３の多糖反復単位は、１つのグルコピラノース（Ｇｌｃｐ）および１つのグルクロン酸（ＧｌｃｐＡ）を有する直鎖状二糖単位からなる（例えば、Ｇｅｎｏ Ｋら（２０１５）Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ ２８巻：３、８７１～８９９頁を参照されたい）。
図１で示されるように、血清型３の多糖反復単位は、１つのグルコピラノース（Ｇｌｃｐ）および１つのグルクロン酸（ＧｌｃｐＡ）を有する直鎖状二糖単位からなる（例えば、Ｇｅｎｏ Ｋら（２０１５）Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ ２８巻：３、８７１～８９９頁を参照されたい）。
【0019】
本発明による細菌多糖の供給源は、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３細菌細胞であり得る。ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３多糖の供給源として使用され得る細菌株は、確立された培養株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ ＵＳＡ）など）または臨床標本から得られ得る。
【0020】
血清型３多糖は、当業者に公知の単離手順を用いて細菌から直接得られてもよい（例えば、ＵＳ２００６／０２２８３８０、ＵＳ２００６／０２２８３８１、ＵＳ２００７／０１８４０７１、ＵＳ２００７／０１８４０７２、ＵＳ２００７／０２３１３４０、およびＵＳ２００８／０１０２４９８およびＷＯ２００８／１１８７５２に開示される方法を参照されたい）。血清型３多糖はまた、当業者に公知の合成プロトコールを用いて生成されてもよい。血清型３多糖はまた、購入されてもよい（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ ＵＳＡ）から（例えば、参照番号ＡＴＣＣ １７２－ＸまたはＡＴＣＣ ３３－Ｘ））。
【0021】
血清型３多糖が細菌から直接得られる場合、細菌細胞は、培地中で、好ましくはダイズに基づく培地中で増殖され得る。Ｓ．ニューモニエ血清型３莢膜多糖を生成する細菌細胞の発酵後、細菌細胞は、溶解されて、細胞溶解物を生成し得る。次いで、血清型３多糖は、当技術分野で公知の精製技術、例えば、遠心分離、深層濾過、沈降、限外濾過、活性炭を用いる処理、透析濾過および／またはカラムクロマトグラフィーを用いて細胞溶解物から単離されてもよい（例えば、ＵＳ２００６／０２２８３８０、ＵＳ２００６／０２２８３８１およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。次いで、精製された血清型３莢膜多糖は、免疫原性コンジュゲートの調製に使用され得る。
【0022】
Ｓ．ニューモニエ溶解物からの血清型３多糖の精製および任意選択で精製された多糖のサイジングにより得られた、単離された血清型３莢膜多糖は、例えば重量平均分子量（Ｍｗ）を含む、様々なパラメータにより特徴付けられ得る。
【0023】
多糖の分子量は、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定され得る。
好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖（すなわち、さらなる処理前に精製された）は、５ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖（すなわち、さらなる処理前に精製された）は、５ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0024】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0025】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0026】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0027】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0028】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0029】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0030】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0031】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７５０ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７５０ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７５０ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７５０ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７５０ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0032】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１０００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１０００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１０００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１０００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１０００ｋＤａから１５００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0033】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５００ｋＤａから２０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0034】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２０００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２０００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２０００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0035】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５００ｋＤａから５０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５００ｋＤａから４０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５００ｋＤａから３０００ｋＤａの間の重量平均分子量を有する。
【0036】
上記範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
好ましくは、有利な濾過性特性、免疫原性および／または収率を有する血清型３コンジュゲートを生成するために、標的分子量範囲への多糖のサイジングが、担体タンパク質へのコンジュゲーション前に実施される。有利には、精製された血清型３多糖のサイズは、多糖の構造の重要な特徴を保持しながら、低下させる。機械的または化学的サイジングが用いられ得る。ある実施形態では、精製された血清型３多糖のサイズは、化学的加水分解により低下させる。化学的加水分解は、弱酸（例えば、酢酸、ギ酸またはプロパン酸）を用いて実行されてもよい。化学的加水分解はまた、希釈された強酸（例えば、希釈された塩酸、希釈された硫酸、希釈されたリン酸、希釈された硝酸または希釈された過塩素酸）を用いて実行されてもよい。好ましい実施形態では、化学的加水分解は、酢酸を用いて実行される。精製された血清型３多糖のサイズはまた、機械的均質化により低下させてもよい。ある実施形態では、精製された血清型３多糖のサイズは、高圧均質化により低下させる。高圧均質化は、十分に小さい寸法を有する流路を通してプロセス流をポンプすることにより高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きな適用される均質化圧力を用いることにより増加させ、曝露時間は、ホモジナイザーを通して供給流を再循環させることにより増加させ得る。
好ましくは、有利な濾過性特性、免疫原性および／または収率を有する血清型３コンジュゲートを生成するために、標的分子量範囲への多糖のサイジングが、担体タンパク質へのコンジュゲーション前に実施される。有利には、精製された血清型３多糖のサイズは、多糖の構造の重要な特徴を保持しながら、低下させる。機械的または化学的サイジングが用いられ得る。ある実施形態では、精製された血清型３多糖のサイズは、化学的加水分解により低下させる。化学的加水分解は、弱酸（例えば、酢酸、ギ酸またはプロパン酸）を用いて実行されてもよい。化学的加水分解はまた、希釈された強酸（例えば、希釈された塩酸、希釈された硫酸、希釈されたリン酸、希釈された硝酸または希釈された過塩素酸）を用いて実行されてもよい。好ましい実施形態では、化学的加水分解は、酢酸を用いて実行される。精製された血清型３多糖のサイズはまた、機械的均質化により低下させてもよい。ある実施形態では、精製された血清型３多糖のサイズは、高圧均質化により低下させる。高圧均質化は、十分に小さい寸法を有する流路を通してプロセス流をポンプすることにより高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きな適用される均質化圧力を用いることにより増加させ、曝露時間は、ホモジナイザーを通して供給流を再循環させることにより増加させ得る。
【0037】
高圧均質化プロセスは、多糖の構造的特徴を保持しながら、精製された血清型３多糖のサイズを低下させるのに特に適している。
好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから１００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５ｋＤａから５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0038】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が２５ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから２００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから１７５ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから１５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから１４０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから１３０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから１２０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２５ｋＤａから１１０ｋＤａの間である。
【0039】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから２５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１７５ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５０ｋＤａから１００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0040】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから２５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから１７５ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0041】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１１０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１２０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１１０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１３０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１２０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１２０ｋＤａから１４０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１２０ｋＤａから１３０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１３０ｋＤａから１５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１３０ｋＤａから１４０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0042】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから２５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１５０ｋＤａから１７５ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0043】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２００ｋＤａから２５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0044】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、２５０ｋＤａから３００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0045】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３００ｋＤａから３５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0046】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、３５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0047】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４００ｋＤａから４５０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0048】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４５０ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４５０ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４５０ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４５０ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４５０ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、４５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0049】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0050】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、５００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0051】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、６００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、６００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、６００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、６００ｋＤａから７００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0052】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、７００ｋＤａから８００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0053】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、８００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、８００ｋＤａから９００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
【0054】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、９００ｋＤａから１０００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。
好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。さらに好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。さらにより好ましくは、単離された血清型３莢膜多糖は、１４０ｋＤａから１６０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。
好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。さらに好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。さらにより好ましくは、単離された血清型３莢膜多糖は、１４０ｋＤａから１６０ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる。好ましい実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。
【0055】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約５ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。
【0056】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１１０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１２０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１３０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１４０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１６０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１７０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１８０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１９０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約２００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約２５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約３００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約３５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約４００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約４５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約５００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約５５０ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約６００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約７００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約８００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約９００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、約１０００ｋＤａの重量平均分子量にサイジングされる。
【0057】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、サイジングされない。
上記の単離された血清型３莢膜多糖は、本明細書にさらに記載されるように、活性化（例えば、化学的に活性化）されて、これにより、単離された血清型３莢膜多糖は（例えば、リンカーとまたは直接担体タンパク質と）反応することが可能になり、次いで、グリココンジュゲートに組み込まれ得る。
上記の単離された血清型３莢膜多糖は、本明細書にさらに記載されるように、活性化（例えば、化学的に活性化）されて、これにより、単離された血清型３莢膜多糖は（例えば、リンカーとまたは直接担体タンパク質と）反応することが可能になり、次いで、グリココンジュゲートに組み込まれ得る。
【0058】
本発明の目的では、用語「グリココンジュゲート」は、担体タンパク質に共有結合的に連結された糖を示す。一実施形態では、糖は、担体タンパク質に直接連結される。第２の実施形態では、糖は、スペーサー／リンカーを介して担体タンパク質に連結される。
【0059】
一般に、担体への糖の共有結合的コンジュゲーションは、糖をＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原に変換し、こうして、免疫記憶についてのプライミングを可能にするため、糖の免疫原性を増強する。コンジュゲーションは、小児ワクチンについて特に有用である。
【0060】
１．２ 本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲート
いくつかの実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１０ｋＤａから２，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１０ｋＤａから２，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。
【0061】
コンジュゲーション前の糖の重量平均分子量（Ｍｗ）は、多糖の活性化の前（すなわち、最終的サイジングステップの後であるが、多糖を活性化剤と反応させる前）のＭｗを指す。本発明の文脈では、多糖のＭｗは、活性化ステップにより実質的に改変されず、コンジュゲートに組み込まれた多糖のＭｗは、活性化前に測定された多糖のＭｗと同様である。
【0062】
ある実施形態では、多糖は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドに酸化する酸化剤で活性化される（以下のセクション１．３を参照されたい）。別の実施形態では、多糖は、ＣＤＩまたはＣＤＴで活性化される（以下のセクション１．４を参照されたい）。
【0063】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから２００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから１５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから１４０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから１３０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから１２０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａから１１０ｋＤａの間である。
【0064】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７５ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから２００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから１５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから１４０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから１３０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから１２０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａから１１０ｋＤａの間である。
【0065】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１７５ｋＤａの間である。好ましい実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１６０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１４０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１３０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１２０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａから１１０ｋＤａの間である。
【0066】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２５ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから２００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから１５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから１４０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａから１３０ｋＤａの間である。
【0067】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１３０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから２００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから１６０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから１５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから１４０ｋＤａの間である。
【0068】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから３００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａから２００ｋＤａの間である。
【0069】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が２００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａから４００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａから３００ｋＤａの間である。
【0070】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が３００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａから４００ｋＤａの間である。
【0071】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が４００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａから６００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａから５００ｋＤａの間である。
【0072】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５００ｋＤａから７００ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５００ｋＤａから６００ｋＤａの間である。
【0073】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が６００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、６００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、６００ｋＤａから７００ｋＤａの間である。
【0074】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７００ｋＤａから７５０ｋＤａの間である。
【0075】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。
【0076】
好ましい実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００ｋＤａから２００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間である。さらに好ましい実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａから１７０ｋＤａの間である。さらに好ましい実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１４０ｋＤａから１６０ｋＤａの間である。さらにより好ましくは、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１５０ｋＤａである。
【0077】
上記範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約１，０００ｋＤａである、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約７５０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約７００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約６００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約５００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約４００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約３００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約２００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１５０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１４０ｋＤａである。好ましい実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１３０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１２０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１１０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１００ｋＤａである。
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約１，０００ｋＤａである、血清型３莢膜多糖を含む。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約７５０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約７００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約６００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約５００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約４００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約３００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約２００ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１５０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１４０ｋＤａである。好ましい実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１３０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１２０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１１０ｋＤａである。ある実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１００ｋＤａである。
【0078】
いくつかのそのような実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、還元的アミノ化化学を用いて調製される（セクション１．３を参照されたい）。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、ＣＤＩおよび／またはＣＤＴ化学を用いて調製される（セクション１．４を参照されたい）。
【0079】
いくつかの実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから１５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0080】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから３，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから２，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから１，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから７５０ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２５０ｋＤａから４００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0081】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから３，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから２，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから１，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから１，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから７５０ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５００ｋＤａから６００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0082】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから３，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから２，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから１，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７５０ｋＤａから１，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0083】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから３，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから２，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、１，０００ｋＤａから１，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0084】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから３，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，０００ｋＤａから３，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0085】
なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、２，２５０ｋＤａから３，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、３，０００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0086】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、４，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、４，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、４，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、４，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、４，０００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、４，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0087】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、５，０００ｋＤａから６，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0088】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、６，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、６，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、６，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、６，０００ｋＤａから７，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0089】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、７，０００ｋＤａから８，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0090】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、８，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、８，０００ｋＤａから９，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0091】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、９，０００ｋＤａから１０，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
上記範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
上記範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
【0092】
他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約３，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約３，２５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約２，２５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約１，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約７５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約６００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。なお他の実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、約４００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
【0093】
多糖の分子量は、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により測定され得る。
本発明の血清型３グリココンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リジンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けられ得る、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）中のリジン残基の数によるものである。多糖への共有結合的連結による、担体タンパク質のリジン修飾についての証拠は、当業者に公知の日常的方法を用いたアミノ酸分析により得られ得る。コンジュゲーションにより、コンジュゲート材料を生成するために使用された担体タンパク質出発材料と比較した、回収されるリジン残基の数の低下がもたらされる。好ましい実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から１３の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から１０の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から８の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から６の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から４の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から１３の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から１０の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から８の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から６の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から４の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、５から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、５から１０の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、８から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、８から１２の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、１０から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、１０から１２の間である。
本発明の血清型３グリココンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リジンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けられ得る、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）中のリジン残基の数によるものである。多糖への共有結合的連結による、担体タンパク質のリジン修飾についての証拠は、当業者に公知の日常的方法を用いたアミノ酸分析により得られ得る。コンジュゲーションにより、コンジュゲート材料を生成するために使用された担体タンパク質出発材料と比較した、回収されるリジン残基の数の低下がもたらされる。好ましい実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から１３の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から１０の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から８の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から６の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、２から４の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から１３の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から１０の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から８の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から６の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、３から４の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、５から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、５から１０の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、８から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、８から１２の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、１０から１５の間である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、１０から１２の間である。
【0094】
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２である。
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約３である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約４である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約５である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約６である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約７である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約８である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約９である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１０、約１１である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１３である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１４である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、４から７の間である。いくつかのそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＳＣＰである。
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約３である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約４である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約５である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約６である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約７である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約８である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約９である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１０、約１１である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１３である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１４である。ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートのコンジュゲーション度は、４から７の間である。いくつかのそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＳＣＰである。
【0095】
本発明の血清型３グリココンジュゲートはまた、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、グリココンジュゲート中の血清型３多糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から３．０の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から２．０の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から１．５の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８から１．２の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５から１．０の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、１．０から１．５の間である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、１．０から２．０の間である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８から１．２の間である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する比は、０．９から１．１の間である。ある実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．５である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．６である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．７である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．８である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約０．９である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．０である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．１である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．２である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．３である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．４である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．５である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．６である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．７である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．８である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約１．９である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．０である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．１である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．２である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．５である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約２．８である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、約３．０である。いくつかのそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＳＣＰである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＴＴである。
【0096】
本発明の血清型３グリココンジュゲートおよび免疫原性組成物は、担体タンパク質に共有結合的にコンジュゲートされていないが、それにもかかわらずグリココンジュゲート組成物中に存在する、遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、グリココンジュゲートに非共有結合的に会合してもよい（すなわち、グリココンジュゲートに非共有結合的に結合しても、吸着されても、またはグリココンジュゲート中にもしくはグリココンジュゲートと共に捕捉されてもよい）。
【0097】
好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、血清型３多糖の総量と比較して、約５０％未満の遊離血清型３多糖を含む。好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、血清型３多糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離血清型３多糖を含む。なおまた好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、血清型３多糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、血清型３多糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３多糖を含む。なおまた好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートは、血清型３多糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離血清型３多糖を含む。
【0098】
血清型３グリココンジュゲートはまた、その分子サイズ分布（Ｋｄ）により特徴付けられ得る。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）は、コンジュゲートの相対的分子サイズ分布を決定するために使用され得る。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布を測定するために重力供給カラムで使用される。媒体中の孔から排除された大きな分子は、小さな分子より速く溶出する。フラクションコレクターが、カラム溶出液を収集するために使用される。画分は、糖アッセイにより比色分析で試験される。Ｋｄの決定について、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を表す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するように、カラムが較正される。特定された試料属性に到達する画分（Ｖｅ）は、表現Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によりＫｄと関係している。
【0099】
好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートの少なくとも３０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、グリココンジュゲートの少なくとも４０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートの少なくとも６０％は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートの５０％から８０％の間は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３グリココンジュゲートの６５％から８０％の間は、ＣＬ－４Ｂカラムにおいて０．３以下のＫｄを有する。
【0100】
１．３ 還元的アミノ化を用いて調製された本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲート
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、還元的アミノ化を用いて調製される。
ある実施形態では、本発明の血清型３グリココンジュゲートは、還元的アミノ化を用いて調製される。
【0101】
本発明はまた、本明細書に開示されるように、血清型３グリココンジュゲートを作製する方法に関する。
本発明によれば、還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）精製された糖の酸化（活性化）、（２）グリココンジュゲートを形成させるための、活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）の還元を含む（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、ＷＯ２００８／１４３７０９、ＷＯ２００８／０７９７３２、ＷＯ２０１１／１１０５３１、ＷＯ２０１２／１１９９７２、ＷＯ２０１５１１０９４１、ＷＯ２０１５１１０９４０、ＷＯ２０１８／１４４４３９、ＷＯ２０１８／１５６４９１を参照されたい）。
本発明によれば、還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）精製された糖の酸化（活性化）、（２）グリココンジュゲートを形成させるための、活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）の還元を含む（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、ＷＯ２００８／１４３７０９、ＷＯ２００８／０７９７３２、ＷＯ２０１１／１１０５３１、ＷＯ２０１２／１１９９７２、ＷＯ２０１５１１０９４１、ＷＯ２０１５１１０９４０、ＷＯ２０１８／１４４４３９、ＷＯ２０１８／１５６４９１を参照されたい）。
【0102】
上述のように、酸化前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングが、実施され得る。
したがって、ある実施形態では、単離された多糖は、酸化前にサイジングされる。
したがって、ある実施形態では、単離された多糖は、酸化前にサイジングされる。
【0103】
ある実施形態では、単離された多糖は、上に定義された標的分子量（ＭＷ）範囲のいずれかにサイジングされる。
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
【0104】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ａ’）クエンチング剤の添加により酸化反応をクエンチするステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）または（ａ’）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
（ａ）前記単離された多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ａ’）クエンチング剤の添加により酸化反応をクエンチするステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）または（ａ’）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
【0105】
酸化ステップ（ａ）の後、糖は、活性化されたと言われ、「活性化された多糖」と称される。
ある実施形態では、酸化剤は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドに酸化する任意の酸化剤である。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的では、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩および過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ４ －）およびオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ６ ５－）の両方、および過ヨウ素酸塩の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）を含む。
ある実施形態では、酸化剤は、末端ヒドロキシル基をアルデヒドに酸化する任意の酸化剤である。ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸塩である。本発明の目的では、用語「過ヨウ素酸塩」は、過ヨウ素酸塩および過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸塩（ＩＯ４ －）およびオルト過ヨウ素酸塩（ＩＯ６ ５－）の両方、および過ヨウ素酸塩の様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）を含む。
【0106】
ある実施形態では、酸化剤は、二価陽イオンの存在下における過ヨウ素酸塩である（ＷＯ２００８／１４３７０９を参照されたい）。
ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、二価陽イオンの存在下における過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、Ｍｇ２＋の存在下における過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、Ｃａ２＋の存在下における過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、オルト過ヨウ素酸塩である。
ある実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、二価陽イオンの存在下における過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、Ｍｇ２＋の存在下における過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、Ｃａ２＋の存在下における過ヨウ素酸である。ある実施形態では、酸化剤は、オルト過ヨウ素酸塩である。
【0107】
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。ある実施形態では、酸化に使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸塩である。ある実施形態では、酸化に使用される過ヨウ素酸塩は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
【0108】
多糖が過ヨウ素酸塩と反応する場合、過ヨウ素酸塩は、隣接ヒドロキシル基を酸化して、カルボニル基またはアルデヒド基を形成し、Ｃ－Ｃ結合の切断を引き起こす。この理由のため、用語「多糖を過ヨウ素酸塩と反応させる」は、過ヨウ素酸塩による隣接ヒドロキシル基の酸化を含む。
【0109】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0110】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0111】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0112】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0113】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0114】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0115】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0116】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0117】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0118】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0119】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～１．０モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0120】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～０．９モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0121】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～０．８モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0122】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．６～０．７モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0123】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．５～０．６モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0124】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～０．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．４～０．５モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0125】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．３～０．４モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0126】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．２～０．３モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0127】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．１～０．２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0128】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０１～０．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、０．０５～０．１モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む。
【0129】
一実施形態では、ステップａ’）のクエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
【0130】
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
【0131】
【化1】
【0132】
（式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
【0133】
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸は、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択され得る。
【0134】
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、例えば重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２つの隣接する炭素原子に共有結合的に連結された２つのヒドロキシル基を含む化合物である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２つの隣接する炭素原子に共有結合的に連結された２つのヒドロキシル基を含む化合物である。
【0135】
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
【0136】
【化2】
【0137】
（式中、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
の化合物である。
【0138】
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールもしくはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。さらに好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
【0139】
好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度（本文書では「活性化度」とも称される）は、２から３０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２から２５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２から２０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２から１５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２から１０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２から５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、５から３０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、５から２５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、５から２０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、５から１５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、５から１０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１０から３０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１０から２５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１０から２０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１０から１５の間である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１２から１６の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１５から３０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１５から２５の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１５から２０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２０から３０の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、２０から２５の間である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１０から２０の間である。さらに好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１１から１９の間である。
【0140】
好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、１５±４である。
ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約５である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約７である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１０である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１１である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１２である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１３である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１４である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１５である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１６である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１７である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１８である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１９である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約２０である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１５である。
ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約５である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約７である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１０である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１１である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１２である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１３である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１４である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１５である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１６である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１７である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１８である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１９である。ある実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約２０である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３多糖の酸化度は、約１５である。
【0141】
一実施形態では、活性化された多糖および担体タンパク質は、ステップｂ）の前に凍結乾燥される。好ましくは、凍結乾燥は、ステップａ）の後に生じる。一実施形態では、活性化された多糖は、ステップａ）の後に凍結乾燥され、担体タンパク質も凍結乾燥される。
【0142】
一実施形態では、活性化された多糖は、ステップａ）の後に凍結乾燥され、担体タンパク質も凍結乾燥され、活性化された多糖および担体タンパク質は、同じ溶液中で再構成され、これは、活性化された多糖および担体タンパク質を一緒に混合することとして作用する。
【0143】
ある実施形態では、活性化された多糖および担体タンパク質は、独立して凍結乾燥される（個別凍結乾燥）。ある実施形態では、活性化された多糖および担体タンパク質は、一緒に凍結乾燥される（同時凍結乾燥される）。
【0144】
一実施形態では、凍結乾燥は、非還元性糖の存在下で起こり、考えられる非還元性糖は、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットを含む。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロース、およびマンニトールからなる群から選択される。ある実施形態では、糖は、スクロース、トレハロースまたはマンニトールである。ある実施形態では、糖は、トレハロースである。ある実施形態では、糖は、スクロースである。
【0145】
ある実施形態では、ステップｂ）における活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、４：１から０．１：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、２：１から０．４：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、１．５：１から０．５：１の間である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、１．２：１から０．７：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約４である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約３である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約２である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．５である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．２である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．１である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．０である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．９である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．８である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．７である。
【0146】
ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、水性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、非プロトン性溶媒中で実行される。
ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実行される。
ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実行される。
【0147】
一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、還元反応（ｃ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0148】
ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応（ｃ）は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）溶媒中で実行される。
【0149】
ある実施形態では、還元剤は、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下のシアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素亜鉛、アミンボラン、例えば、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）である。ある実施形態では、還元剤は、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。ある実施形態では、還元剤は、ニッケルの存在下のシアノ水素化ホウ素ナトリウムである（ＷＯ２０１８１４４４３９を参照されたい）。
【0150】
一実施形態では、０．２モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から３モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から２モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から１．０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．２モル当量から０．８モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0151】
一実施形態では、０．５モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から３モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から２モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から１．０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、０．５モル当量から０．８モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0152】
一実施形態では、１．０モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．０モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．０モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．０モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．０モル当量から５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．０モル当量から３モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．０モル当量から２モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0153】
一実施形態では、１．５モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．５モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．５モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．５モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．５モル当量から５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．５モル当量から３モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１．５モル当量から２モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0154】
一実施形態では、２モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、２モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、２モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、２モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、２モル当量から５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、２モル当量から３モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0155】
一実施形態では、３モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、３モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、３モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、３モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、３モル当量から５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0156】
一実施形態では、５モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、５モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、５モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、５モル当量から７モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0157】
一実施形態では、７モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、７モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、７モル当量から１０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0158】
一実施形態では、１０モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。一実施形態では、１０モル当量から１５モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
【0159】
一実施形態では、１５モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基が存在してもよく、これらは、好適なキャッピング剤を用いてキャッピングされてもよい。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基が存在してもよく、これらは、好適なキャッピング剤を用いてキャッピングされてもよい。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
【0160】
ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと１５分間～１５時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと２～１０時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと１５分間～１時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと約４時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと約６時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと約２時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと約１時間反応させてもよい。ある実施形態では、ステップｃ）の生成物は、水素化ホウ素ナトリウムと約３０分間反応させてもよい。
【0161】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～７モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～３モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１～２モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0162】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～７モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～３モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１．５～２モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0163】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、２～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、２～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、２～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、２～７モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、２～５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、２～３モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0164】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、３～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、３～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、３～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、３～７モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、３～５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0165】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、５～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、５～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、５～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、５～７モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0166】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、７～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、７～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、７～１０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0167】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１０～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１０～１５モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
【0168】
ある実施形態では、キャッピングは、ステップｃ）の生成物を、１５～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと混合することにより達成される。
担体タンパク質へのコンジュゲーションの後、グリココンジュゲートは、当業者に公知の様々な技術により精製（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化）され得る。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、タンジェンシャルフロー濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明のグリココンジュゲートを生成する方法は、それが生成された後、グリココンジュゲートを精製するステップを含む。
担体タンパク質へのコンジュゲーションの後、グリココンジュゲートは、当業者に公知の様々な技術により精製（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化）され得る。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、タンジェンシャルフロー濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明のグリココンジュゲートを生成する方法は、それが生成された後、グリココンジュゲートを精製するステップを含む。
【0169】
１．４ ＣＤＩおよび／またはＣＤＴ化学を用いて調製された本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲート
ある実施形態では、本発明のグリココンジュゲートは、ＣＤＩおよび／またはＣＤＴ化学を用いて調製される。
ある実施形態では、本発明のグリココンジュゲートは、ＣＤＩおよび／またはＣＤＴ化学を用いて調製される。
【0170】
本発明はまた、本明細書に開示されるように、血清型３グリココンジュゲートを作製する方法に関する。
ＣＤＩおよび／またはＣＤＴ化学は、２つのステップ、（１）単離された糖を、非プロトン性溶媒中でＣＤＩおよび／またはＣＤＴと反応させて、活性化された糖を生成するステップ（活性化）、（２）活性化された糖を、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７またはＳＣＰ）と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップを含む。
ＣＤＩおよび／またはＣＤＴ化学は、２つのステップ、（１）単離された糖を、非プロトン性溶媒中でＣＤＩおよび／またはＣＤＴと反応させて、活性化された糖を生成するステップ（活性化）、（２）活性化された糖を、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７またはＳＣＰ）と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップを含む。
【0171】
ある実施形態では、ステップ（１）の活性化剤は、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。ある実施形態では、ステップ（１）の活性化剤は、１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）である。
【0172】
上述のように、ＣＤＩおよび／またはＣＤＴによる活性化前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングが、実施され得る。
したがって、ある実施形態では、単離された多糖は、ＣＤＩによる活性化前にサイジングされる。ある実施形態では、単離された多糖は、ＣＤＴによる活性化前にサイジングされる。ある実施形態では、単離された多糖は、上に定義された標的分子量（ＭＷ）範囲のいずれかにサイジングされる。
したがって、ある実施形態では、単離された多糖は、ＣＤＩによる活性化前にサイジングされる。ある実施形態では、単離された多糖は、ＣＤＴによる活性化前にサイジングされる。ある実施形態では、単離された多糖は、上に定義された標的分子量（ＭＷ）範囲のいずれかにサイジングされる。
【0173】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、非プロトン性溶媒中でＣＤＩおよび／またはＣＤＴと反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
（ａ）前記単離された多糖を、非プロトン性溶媒中でＣＤＩおよび／またはＣＤＴと反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
【0174】
ステップ（ａ）の後、多糖は、活性化されたと言われ、「活性化された多糖」と称される。
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
【0175】
ステップ（ａ）の後、多糖は、活性化されたと言われ、「活性化された多糖」と称される。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0176】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0177】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0178】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0179】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0180】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して３モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して４モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して４モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0181】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して５モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して８モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して８モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0182】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から８モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0183】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0184】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から４モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0185】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0186】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0187】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0188】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0189】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．２モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0190】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．１モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0191】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．０５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0192】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から８モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0193】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0194】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から４モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0195】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0196】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0197】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0198】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から０．５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0199】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から０．２モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0200】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から０．１モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0201】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から８モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0202】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から４モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0203】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0204】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から０．５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0205】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0206】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0207】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0208】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０１モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０１モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0209】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０５モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．１モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．１モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0210】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．５モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0211】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約２モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約３モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約３モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0212】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約４モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約５モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約５モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0213】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約８モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１０モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１０モル当量の量のＣＤＩと反応させることを含む。
【0214】
ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドンまたはヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルアセトアミドの存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンの存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。
【0215】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0216】
ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルアセトアミドから本質的になる溶液中で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンから本質的になる溶液中で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0217】
驚くべきことに、約０．１％～１％の水分レベルで活性化反応を実行することにより、副反応を回避できることが見出された。したがって、一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．３％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．２％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0218】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．３％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0219】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0220】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．２％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．３％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．６％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．７％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．９％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0221】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．３％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．２％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0222】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．３％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0223】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0224】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．２％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．３％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．６％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．７％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．９％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0225】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、水の添加によりクエンチされる。水は、遊離ＣＤＩを不活性化することができる。
したがって、ある実施形態では、活性化反応ａ）の後に、水の添加が続く。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％から約１０％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％から約８％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約３％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約２．５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．４％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約３％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約７％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１０％（ｖ／ｖ）にするために添加される。
したがって、ある実施形態では、活性化反応ａ）の後に、水の添加が続く。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％から約１０％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％から約８％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約３％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約２．５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．４％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約３％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約７％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１０％（ｖ／ｖ）にするために添加される。
【0226】
ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドンまたはヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。
【0227】
ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルアセトアミドの存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンの存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。
【0228】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0229】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルアセトアミドから本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンから本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0230】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約８％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約２％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約１％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１．５％～約２．５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１．５％～約３％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約２％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約３％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約４％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約６％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約８％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0231】
ある実施形態では、ステップｂ）における活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、４：１から０．１：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、２：１から０．４：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、１．５：１から０．５：１の間である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、１．２：１から０．７：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約４である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約３である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約２である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．５である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．２である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．１である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．０である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．９である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．８である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．７である。
【0232】
一実施形態では、弱有機塩基は、活性化反応ａ）の後であるが、コンジュゲーション反応ｂ）の前に、反応混合物に添加され得る。弱有機塩基は、担体タンパク質が反応混合物に導入される前または後に添加され得る。したがって、一実施形態では、弱有機塩基は、担体タンパク質が導入される前に反応混合物に添加される。別の実施形態では、弱有機塩基は、担体タンパク質が導入された後に反応混合物に添加される。弱有機塩基は、アルカンアミン、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ヒスチジンおよびグアニジンから選択され得る。アルカンアミンとしては、アルキル第一級アミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン；アルキル第二級アミン、例えばジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン；アルキル第三級アミン、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリ－イソプロピルアミン、ジ－Ｎ，Ｎ’－イソプロピルエチルアミンなどが挙げられる。ある実施形態では、弱有機塩基は、アルカンアミンである。ある実施形態では、弱有機塩基は、イミダゾールである。ある実施形態では、弱有機塩基は、トリアゾールである。ある実施形態では、弱有機塩基は、ピリジンである。ある実施形態では、弱有機塩基は、ヒスチジンである。ある実施形態では、弱有機塩基は、グアニジンである。
【0233】
一実施形態では、有機塩基は、活性化されるべき多糖の量の０．１倍から２５倍（重量／重量）の間の量で添加される。一実施形態では、比は、０．５～２０倍（重量／重量）であってよく、一実施形態では、比は、１～１０倍（重量／重量）であってよく、別の実施形態では、比は、１～５倍（重量／重量）であってもよい。
【0234】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）の後、活性化された多糖のコンジュゲートされていない反応部位は、加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約３．０から約１０．０の間への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約７．０から約１０．０の間への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約３．０から約７．０の間への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約４．０への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約９．０への調整により加水分解される。
【0235】
担体タンパク質へのコンジュゲーションの後、グリココンジュゲートは、当業者に公知の様々な技術により精製（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化）され得る。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、タンジェンシャルフロー濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明のグリココンジュゲートを生成する方法は、それが生成された後、グリココンジュゲートを精製するステップを含む。
【0236】
ある実施形態では、単離された血清型３莢膜多糖は、
（ａ）前記単離された多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
（ａ）前記単離された多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む方法により、担体タンパク質にコンジュゲートされる。
【0237】
ステップ（ａ）の後、多糖は、活性化されたと言われ、「活性化された多糖」と称される。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0238】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0239】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0240】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0241】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0242】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して３モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して４モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して４モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0243】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して５モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して８モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して８モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0244】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から８モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0245】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0246】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から４モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0247】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0248】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0249】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0250】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0251】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．２モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0252】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．１モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0253】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から０．０５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0254】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から８モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0255】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0256】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から４モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0257】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0258】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0259】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0260】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から０．５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0261】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から０．２モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0262】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５モル当量から０．１モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0263】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から８モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0264】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から４モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0265】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から１モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0266】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から０．５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0267】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0268】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２モル当量から５モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0269】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から３モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0270】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１モル当量から２モル当量の間の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０１モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０１モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0271】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０５モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．１モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．１モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0272】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．５モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0273】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約２モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約３モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約３モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0274】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約４モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約５モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約５モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0275】
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約８モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１０モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１０モル当量の量のＣＤＴと反応させることを含む。
【0276】
ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドンまたはヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルアセトアミドの存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンの存在下で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。
【0277】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0278】
ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ジメチルアセトアミドから本質的になる溶液中で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンから本質的になる溶液中で実行される。ある実施形態では、活性化反応ａ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0279】
驚くべきことに、約０．１％～１％の水分レベルで活性化反応を実行することにより、副反応を回避できることが見出された。したがって、一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．３％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．２％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0280】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．３％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0281】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0282】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．２％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．３％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．４％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．５％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．６％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．７％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．８％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．９％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される。
【0283】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．３％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．１％～０．２％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0284】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．２％～０．３％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0285】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、０．３％～０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0286】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．２％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．３％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．４％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．５％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．６％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．７％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．８％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、活性化反応ａ）は、約０．９％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0287】
一実施形態では、活性化反応ａ）は、水の添加によりクエンチされる。水は、遊離ＣＤＴを不活性化することができる。
したがって、ある実施形態では、活性化反応ａ）の後に、水の添加が続く。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％から約１０％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％から約８％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約３％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約２．５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．４％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約３％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約７％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１０％（ｖ／ｖ）にするために添加される。
したがって、ある実施形態では、活性化反応ａ）の後に、水の添加が続く。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％から約１０％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％から約８％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約３％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％から約２．５％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．４％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約２．５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約３％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約５％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約７％（ｖ／ｖ）にするために添加される。ある実施形態では、水は、混合物中の総水分量を約１０％（ｖ／ｖ）にするために添加される。
【0288】
ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチル－２－ピロリドンまたはヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。
【0289】
ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルアセトアミドの存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンの存在下で実行される。ある実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）の存在下で実行される。
【0290】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0291】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ジメチルアセトアミドから本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンから本質的になる溶液中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）から本質的になる溶液中で実行される。
【0292】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約８％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約２％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％～約１％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１．５％～約２．５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１．５％～約３％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．１％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約０．５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約２％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約３％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約４％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約５％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約６％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約８％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）は、約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される。
【0293】
ある実施形態では、ステップｂ）における活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、４：１から０．１：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、２：１から０．４：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、１．５：１から０．５：１の間である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、１．２：１から０．７：１の間である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約４である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約３である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約２である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．５である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．２である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．１である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約１．０である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．９である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．８である。ある実施形態では、活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）は、約０．７である。
【0294】
一実施形態では、弱有機塩基は、活性化反応ａ）の後であるが、コンジュゲーション反応ｂ）の前に、反応混合物に添加され得る。弱有機塩基は、担体タンパク質が反応混合物に導入される前または後に添加され得る。したがって、一実施形態では、弱有機塩基は、担体タンパク質が導入される前に反応混合物に添加される。別の実施形態では、弱有機塩基は、担体タンパク質が導入された後に反応混合物に添加される。弱有機塩基は、アルカンアミン、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ヒスチジンおよびグアニジンから選択され得る。アルカンアミンとしては、アルキル第一級アミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、プロピルアミン、イソプロピルアミン；アルキル第二級アミン、例えばジメチルアミン、ジエチルアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン；アルキル第三級アミン、例えばトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリ－イソプロピルアミン、ジ－Ｎ，Ｎ’－イソプロピルエチルアミンなどが挙げられる。ある実施形態では、弱有機塩基は、アルカンアミンである。ある実施形態では、弱有機塩基は、イミダゾールである。ある実施形態では、弱有機塩基は、トリアゾールである。ある実施形態では、弱有機塩基は、ピリジンである。ある実施形態では、弱有機塩基は、ヒスチジンである。ある実施形態では、弱有機塩基は、グアニジンである。
【0295】
一実施形態では、有機塩基は、活性化されるべき多糖の量の０．１倍から２５倍（重量／重量）の間の量で添加される。一実施形態では、比は、０．５～２０倍（重量／重量）であってよく、一実施形態では、比は、１～１０倍（重量／重量）であってよく、別の実施形態では、比は、１～５倍（重量／重量）であってもよい。
【0296】
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｂ）の後、活性化された多糖のコンジュゲートされていない反応部位は、加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約３．０から約１０．０の間への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約７．０から約１０．０の間への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約３．０から約７．０の間への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約４．０への調整により加水分解される。一実施形態では、コンジュゲートされていない反応部位は、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加およびｐＨの約９．０への調整により加水分解される。
【0297】
担体タンパク質へのコンジュゲーションの後、グリココンジュゲートは、当業者に公知の様々な技術により精製（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化）され得る。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、タンジェンシャルフロー濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明のグリココンジュゲートを生成する方法は、それが生成された後、グリココンジュゲートを精製するステップを含む。
【0298】
１．５ 本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートの担体タンパク質
グリココンジュゲートの成分は、精製された多糖がコンジュゲートされる担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書では互換的に使用され得る。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順に従うべきである。
グリココンジュゲートの成分は、精製された多糖がコンジュゲートされる担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書では互換的に使用され得る。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順に従うべきである。
【0299】
好ましい実施形態では、血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、以下からなる群において選択される：ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＴＴ（破傷風トキソイド）またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性的であるが、抗原的に同一であるバリアント）、他のＤＴ変異体（例えば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４頁）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３またはＣＲＭ１０７；およびＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ（編）、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２）により記載された他の変異；Ｇｌｕ－１４８からＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒおよび／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または変異ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および同第４，９５０，７４０号に開示された他の変異；少なくとも１つまたは複数の残基Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／またはＬｙｓ５３４のうちの変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および同第６，４５５，６７３号に開示された他の変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片、肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３頁）、例えば、いくつかの様式で解毒されたｐｌｙ、例えば、ｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）またはｄＰＬＹ－ｆｏｒｍｏｌ、ＰｈｔＸ、例えば、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤまたはＰｈｔＥの配列は、ＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）およびＰｈｔタンパク質の融合物、例えば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、Ｐｈｔ Ａ－Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）、通常、ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（Ｎ．メニンギティディス（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）プロテインＤ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）、または免疫学的に機能的なその等価物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、様々な病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４頁）、例えば、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７頁）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換えシュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特に、その非毒性変異体（グルタミン酸５５３に置換を担持する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１６９（１１）：４９６７～４９７１頁））。他のタンパク質、例えば、オボアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）も、担体タンパク質として使用され得る。他の好適な担体タンパク質としては、不活性化細菌毒素、例えば、コレラトキソイド（例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１に記載される）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、およびＰ．エルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に由来する外毒素Ａが挙げられる。別の好適な担体タンパク質は、ストレプトコッカスに由来するＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である。
【0300】
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（例えば、ＣＲＭ１９７）、およびストレプトコッカスに由来するＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）からなる群から選択される。
【0301】
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（例えば、ＣＲＭ１９７）またはストレプトコッカスに由来するＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である。
【0302】
ある実施形態では、血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）である。
【0303】
別の実施形態では、血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＰＤ（Ｈ．インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）プロテインＤ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）である。
【0304】
好ましい実施形態では、血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７またはストレプトコッカスに由来するＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である。
【0305】
好ましい実施形態では、血清型３莢膜多糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質にコンジュゲートされる。ＣＲＭ１９７タンパク質は、非毒性形態のジフテリア毒素であるが、ジフテリア毒素とは免疫学的に区別がつかない。ＣＲＭ１９７は、毒素原性コリネファージベータのニトロソグアニジン突然変異誘発により作出された非毒素原性ファージβ１９７ｔｏｘ－により感染したコリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）により生成される（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２３３：８～１１頁）。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、構造遺伝子中の単一塩基変化（グアニンからアデニンへの）によりそれとは異なる。この単一塩基変化は、成熟タンパク質中のアミノ酸置換（グリシンの代わりのグルタミン酸）を引き起こし、ジフテリア毒素の毒性を除去する。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖のための安全かつ有効なＴ細胞依存的担体である。ＣＲＭ１９７およびその生成に関するさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号に見出され得る。
【0306】
ある実施形態では、血清型３莢膜多糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートされる（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。ある実施形態では、血清型３莢膜多糖は、遺伝子組換え体大腸菌による発現を介して得られたＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートされる（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。
【0307】
他の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰ（連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ）である。
咽頭炎および膿痂疹の軽度症例から壊死性筋膜炎（ＧＡＳ）および新生児敗血症（ＧＢＳ）などの重篤な侵襲性疾患までに及ぶ様々な重篤なヒト感染を引き起こす、β－溶血性連鎖球菌の２つの重要な種であるストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群ストレプトコッカス、ＧＡＳ）およびストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群ストレプトコッカス、ＧＢＳ）は、この免疫応答を打ち破る方法を発達させている。ＧＡＳおよびＧＢＳを含むβ－溶血性連鎖球菌のすべてのヒト単離菌は、Ｃ５ａを特異的に不活性化する高度に保存された細胞壁タンパク質ＳＣＰ（連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ）を生成する。ＧＡＳおよびＧＢＳに由来するｓｃｐ遺伝子は、１，１３４個から１，１８１個の間のアミノ酸を含有するポリペプチドをコードする（Ｂｒｏｗｎら、ＰＮＡＳ、２００５、１０２巻、５１号１８３９１～１８３９６頁）。最初の３１残基は、搬出シグナルプレ配列であり、細胞膜を通過する際に除去される。次の６８残基は、プロ配列として機能し、活性なＳＣＰを生成するために除去されなければならない。次の１０残基は、プロテアーゼ活性を喪失せずに除去され得る。もう一方の末端では、Ｌｙｓ－１０３４で始まり、４個の連続した１７残基モチーフ、それに続く細胞選別および細胞壁付着シグナルがある。この組み合わせたシグナルは、ＬＰＴＴＮＤ配列を含有する２０残基の親水性配列、１７残基の疎水性配列、および短い塩基性カルボキシル末端で構成される。
咽頭炎および膿痂疹の軽度症例から壊死性筋膜炎（ＧＡＳ）および新生児敗血症（ＧＢＳ）などの重篤な侵襲性疾患までに及ぶ様々な重篤なヒト感染を引き起こす、β－溶血性連鎖球菌の２つの重要な種であるストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群ストレプトコッカス、ＧＡＳ）およびストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群ストレプトコッカス、ＧＢＳ）は、この免疫応答を打ち破る方法を発達させている。ＧＡＳおよびＧＢＳを含むβ－溶血性連鎖球菌のすべてのヒト単離菌は、Ｃ５ａを特異的に不活性化する高度に保存された細胞壁タンパク質ＳＣＰ（連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ）を生成する。ＧＡＳおよびＧＢＳに由来するｓｃｐ遺伝子は、１，１３４個から１，１８１個の間のアミノ酸を含有するポリペプチドをコードする（Ｂｒｏｗｎら、ＰＮＡＳ、２００５、１０２巻、５１号１８３９１～１８３９６頁）。最初の３１残基は、搬出シグナルプレ配列であり、細胞膜を通過する際に除去される。次の６８残基は、プロ配列として機能し、活性なＳＣＰを生成するために除去されなければならない。次の１０残基は、プロテアーゼ活性を喪失せずに除去され得る。もう一方の末端では、Ｌｙｓ－１０３４で始まり、４個の連続した１７残基モチーフ、それに続く細胞選別および細胞壁付着シグナルがある。この組み合わせたシグナルは、ＬＰＴＴＮＤ配列を含有する２０残基の親水性配列、１７残基の疎水性配列、および短い塩基性カルボキシル末端で構成される。
【0308】
ＳＣＰは、ドメインに分けられ得る（Ｂｒｏｗｎら、ＰＮＡＳ、２００５、１０２巻、５１号１８３９１～１８３９６頁の図１Ｂを参照されたい）。これらのドメインは、Ｐｒｅ／Ｐｒｏドメイン（搬出シグナルプレ配列（通常最初の３１残基）およびプロ配列（通常次の６８残基）を含む）、プロテアーゼドメイン（２つの部分（通常残基８９～３３３／３３４のプロテアーゼ部分１および通常残基４６７／４６８～５８３／５８４のプロテアーゼドメイン部分２）に分割される）、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）（通常残基３３３／３３４～４６７／４６８）、３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメイン（通常残基５８３／５８４～７１２／７１３のＦｎ１、通常残基７１２／７１３～９２８／９２９／９３０のＦｎ２、通常残基９２９／９３０～１０２９／１０３０／１０３１のＦｎ３）および細胞壁アンカードメイン（通常残基１０２９／１０３０／１０３１からＣ末端まで）である。
【0309】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＧＢＳに由来するＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である。ＳＣＰＢの例は、ＷＯ９７／２６００８の配列番号３で提供される。ＷＯ００／３４４８７の配列番号３も参照されたい。
【0310】
別の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＧＡＳに由来するＳＣＰ（ＳＣＰＡ）である。
ＳＣＰＡの例は、ＷＯ９７／２６００８の配列番号１および配列番号２で見出され得る。ＷＯ００／３４４８７の配列番号１、２および２３も参照されたい。
ＳＣＰＡの例は、ＷＯ９７／２６００８の配列番号１および配列番号２で見出され得る。ＷＯ００／３４４８７の配列番号１、２および２３も参照されたい。
【0311】
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰである。
他の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＧＢＳに由来する酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である。
他の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＧＢＳに由来する酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である。
【0312】
別の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＧＡＳに由来する酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＡ）である。
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの断片である。ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰＡの断片である。好ましくは、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰＢの断片である。
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの断片である。ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰＡの断片である。好ましくは、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰＢの断片である。
【0313】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である。
【0314】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である。
【0315】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインのうちの２個を含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0316】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。ある実施形態では、ＳＣＰの前記酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない。
【0317】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片である。ある実施形態では、ＳＣＰＡの前記酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない。
【0318】
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片である。好ましくは、ＳＣＰＢの前記酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない。
【0319】
ある実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより不活性化される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。数字は、ＷＯ００／３４４８７の配列番号１の番号付けに従うペプチダーゼ中のアミノ酸残基位置を示す。
【0320】
したがって、ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0321】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0322】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0323】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0324】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0325】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0326】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記置換は、Ｄ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｈ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換は、Ｎ２９５Ａである。なおまた別の実施形態では、前記置換は、Ｓ５１２Ａである。
【0327】
ある実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより不活性化される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0328】
したがって、ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0329】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0330】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0331】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0332】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0333】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0334】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも２個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも２個のアミノ酸置換は、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0335】
ある実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより不活性化される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0336】
したがって、ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0337】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0338】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0339】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0340】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0341】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0342】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも３個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択される。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。ある実施形態では、前記少なくとも３個のアミノ酸置換は、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0343】
ある実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより不活性化される。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0344】
したがって、ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0345】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0346】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0347】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0348】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0349】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも１つのアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0350】
ある実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４個のアミノ酸を置換することにより達成される。好ましくは、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインにおけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分１におけるものである。ある実施形態では、少なくとも４個のアミノ酸の前記置換は、プロテアーゼドメインの部分２におけるものである。ある実施形態では、前記少なくとも４個のアミノ酸置換は、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
【0351】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
配列番号４１：
ＭＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
配列番号４１は、９５０アミノ酸長である。
配列番号４２：
ＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
配列番号４２は、９４９アミノ酸長である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
配列番号４１：
ＭＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
配列番号４１は、９５０アミノ酸長である。
配列番号４２：
ＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
配列番号４２は、９４９アミノ酸長である。
【0352】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0353】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0354】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0355】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９．５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0356】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９．８％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0357】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９．８５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0358】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0359】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0360】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0361】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９．５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0362】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９．８％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0363】
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖グリココンジュゲートの担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９．８５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
【0364】
２ 免疫原性組成物
２．１ 本発明のグリココンジュゲートの組合せ
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
２．１ 本発明のグリココンジュゲートの組合せ
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
【0365】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつ１～２５種の異なるグリココンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。
【0366】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエの異なる血清型に由来する１～２５種のグリココンジュゲート（１～２５種の肺炎球菌コンジュゲート）を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、Ｓ．ニューモニエの７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５種の異なる血清型に由来するグリココンジュゲートを含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエの１６または２０種の異なる血清型に由来するグリココンジュゲートを含む。ある実施形態では、免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１４、１５、１６、１７、１８または１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１６価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１９価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0367】
ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１、２２、２３、２４または２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0368】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。
【0369】
ある実施形態では、前記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、５および７Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型６Ａおよび１９Ａに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型６Ａおよび１９Ａに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
【0370】
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型２２Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆおよび１５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆおよび１５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
【0371】
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型２に由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型９Ｎに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型９Ｎに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
【0372】
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型１７Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型２０に由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
ある実施形態では、任意の上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエ血清型２０に由来するグリココンジュゲートをさらに含む。
【0373】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、８価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0374】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0375】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0376】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0377】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0378】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0379】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0380】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0381】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0382】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0383】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0384】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0385】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0386】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0387】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0388】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0389】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0390】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0391】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0392】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0393】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0394】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0395】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0396】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0397】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0398】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0399】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0400】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0401】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0402】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0403】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0404】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0405】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0406】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0407】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0408】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0409】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0410】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0411】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0412】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0413】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0414】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１種のグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。
【0415】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートからなる群から選択される２０種のグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0416】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートからなる群から選択される２１種のグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0417】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１種のグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。
【0418】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートからなる群から選択される２２種のグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0419】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートからなる群から選択される２３種のグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0420】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、９Ｎ、１５Ａ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0421】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、９Ｎ、１５Ａ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、１２価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0422】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0423】
ある実施形態では、本発明は、本発明のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含み、かつＳ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートをさらに含む免疫原性組成物に関する。ある実施形態では、免疫原性組成物は、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
【0424】
好ましい実施形態では、糖は、タンパク質担体の異なる分子（それにコンジュゲートされた１つの種類の糖のみを有するタンパク質担体のそれぞれの分子）にそれぞれ個別にコンジュゲートされる。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされていると言われる。好ましくは、上記免疫原性組成物のすべてのグリココンジュゲートは、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされる。
【0425】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされる。
【0426】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型２２Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３３Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型１５Ｂに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型１２Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型１０Ａに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型１１Ａに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型８に由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型１、５および７Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型６Ａおよび１９Ａに由来するグリココンジュゲートは、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされる。
【0427】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかのグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0428】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかのＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされる。
【0429】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかのＳ．ニューモニエ血清型１８Ｃに由来するグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされる。
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかのＳ．ニューモニエ血清型１９Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされる。
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかのＳ．ニューモニエ血清型１９Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされる。
【0430】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物のいずれかのＳ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＰＤに個別にコンジュゲートされ、Ｓ．ニューモニエ血清型１８Ｃに由来するグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、Ｓ．ニューモニエ血清型１９Ｆに由来するグリココンジュゲートは、ＤＴにコンジュゲートされる。
【0431】
ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、Ｓ．ニューモニエの８～２０種の異なる血清型を含む。
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも１種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも１種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0432】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、１種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0433】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも２種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0434】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、２種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0435】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも３種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0436】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、３種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0437】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも４種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0438】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、４種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0439】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも５種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0440】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、５種の他のグリココンジュゲートは、ＴＴにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0441】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも１種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0442】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、１種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0443】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも２種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0444】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、２種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0445】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも３種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0446】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、３種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0447】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも４種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0448】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、４種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0449】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、少なくとも５種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0450】
上記免疫原性組成物のいずれかのある実施形態では、Ｓ．ニューモニエ血清型３に由来するグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、５種の他のグリココンジュゲートは、ＳＣＰにコンジュゲートされ、その他のグリココンジュゲートはすべて、ＣＲＭ１９７に個別にコンジュゲートされる。
【0451】
本発明の組成物は、少量の遊離担体を含んでもよい。所与の担体タンパク質が、本発明の組成物中に遊離形態およびコンジュゲートされた形態の両方で存在する場合、コンジュゲートされていない形態は、好ましくは、全体として組成物中で担体タンパク質の総量の５％以下であり、より好ましくは、２重量％未満で存在する。
【0452】
２．２ 本発明の免疫原性組成物の投薬量
各用量中のグリココンジュゲートの量は、典型的なワクチン被接種者において著しい有害な副作用なく、免疫防御応答を誘導する量として選択される。そのような量は、どの具体的な免疫原が用いられるか、およびどのようにそれが提示されるかに応じて変動する。
各用量中のグリココンジュゲートの量は、典型的なワクチン被接種者において著しい有害な副作用なく、免疫防御応答を誘導する量として選択される。そのような量は、どの具体的な免疫原が用いられるか、およびどのようにそれが提示されるかに応じて変動する。
【0453】
免疫原性組成物中の特定のグリココンジュゲートの量は、そのコンジュゲートについての総多糖（コンジュゲート化および非コンジュゲート化）に基づいて算出され得る。例えば、２０％遊離多糖を有するグリココンジュゲートは、１００μｇの多糖用量中に、約８０μｇのコンジュゲート化多糖および約２０μｇの非コンジュゲート化多糖を有する。グリココンジュゲートの量は、肺炎球菌血清型に応じて変動し得る。糖濃度は、ウロン酸アッセイにより決定され得る。
【0454】
免疫原性組成物中の異なる多糖成分の「免疫原性量」は、異なってもよく、それぞれは、約０．５μｇ、約０．７５μｇ、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、または約１００μｇの任意の特定の多糖抗原を含んでもよい。
【0455】
一般に、各用量は、０．１μｇ～１００μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、０．１μｇ～１００μｇの血清型３多糖を含む。好ましい実施形態では、各用量は、０．５μｇ～２０μｇを含む。好ましい実施形態では、各用量は、１．０μｇ～１０μｇを含む。さらに好ましい実施形態では、各用量は、２．０μｇ～５．０μｇの血清型３多糖を含む。上記範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
【0456】
ある実施形態では、各用量は、約０．５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約０．５５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約０．７５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約１．０μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約１．１μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約１．５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約２．０μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約２．２μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約２．５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約３．０μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約３．５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約４．０μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約４．４μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約５．０μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約５．５μｇの血清型３多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、約６．０μｇの血清型３多糖を含む。
【0457】
一般に、各用量は、所与の血清型について、０．１μｇ～１００μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、所与の血清型について、０．１μｇ～１００μｇの多糖を含む。好ましい実施形態では、各用量は、０．５μｇ～２０μｇを含む。好ましい実施形態では、各用量は、１．０μｇ～１０μｇを含む。さらに好ましい実施形態では、各用量は、所与の血清型について、２．０μｇ～５．０μｇの多糖を含む。上記範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
【0458】
ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約０．５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約０．５５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約０．７５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約１．０μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約１．１μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約１．５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約２．０μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約２．２μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約２．５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約３．０μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約３．５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約４．０μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約４．４μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約５．０μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約５．５μｇの多糖を含む。ある実施形態では、各用量は、それぞれの特定のグリココンジュゲートについて、約６．０μｇの多糖を含む。
【0459】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび／または３３Ｆに由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0460】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび／または３３Ｆに由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0461】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて、約１．０μｇ、約１．１μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇまたは約６．０μｇの多糖を含む。
【0462】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
【0463】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
【0464】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
【0465】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．２μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。
【0466】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
【0467】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約３μｇ～約６μｇの多糖を含む。
【0468】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
【0469】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇの多糖を含む。
【0470】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．２μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。
【0471】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
【0472】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
【0473】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
【0474】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．２μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。
【0475】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
【0476】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
【0477】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
【0478】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．２μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。
【0479】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂに由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0480】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂに由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0481】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて、約１．０μｇ、約１．１μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇまたは約６．０μｇの多糖を含む。
【0482】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来する各グリココンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
【0483】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
【0484】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来する各グリココンジュゲートについて約２．２μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。
【0485】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
【0486】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
【0487】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
【0488】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する各グリココンジュゲートについて約２．２μｇの多糖、およびＳ．ニューモニエ血清型６Ｂに由来するグリココンジュゲートについて約４．４μｇの多糖を含む。
【0489】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８に由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0490】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８に由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0491】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび／または３８に由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0492】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0493】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0494】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートについて、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
【0495】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含む。
【0496】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。
【0497】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。
【0498】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．０μｇの多糖を含む。
【0499】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．２μｇの多糖を含む。
【0500】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含む。
【0501】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。
【0502】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。
【0503】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．０μｇの多糖を含む。
【0504】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．２μｇの多糖を含む。
【0505】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含む。
【0506】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。
【0507】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。
【0508】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．０μｇの多糖を含む。
【0509】
ある実施形態では、各用量は、Ｓ．ニューモニエ血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来する各グリココンジュゲートについて、約２．２μｇの多糖を含む。
【0510】
２．３ 担体の量
一般に、各用量は、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質、特に１５μｇ～１００μｇの担体タンパク質、より詳細には２５μｇ～７５μｇの担体タンパク質、さらにより詳細には４０μｇ～６０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＳＣＰである。
一般に、各用量は、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質、特に１５μｇ～１００μｇの担体タンパク質、より詳細には２５μｇ～７５μｇの担体タンパク質、さらにより詳細には４０μｇ～６０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＳＣＰである。
【0511】
ある実施形態では、各用量は、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、約６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇまたは約７５μｇの担体タンパク質を含む。
【0512】
ある実施形態では、各用量は、約３０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約３１μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約３２μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約３３μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約３４μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４５μｇの担体タンパク質を含む。
【0513】
ある実施形態では、各用量は、約４０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４１μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４２μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４３μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４４μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４５μｇの担体タンパク質を含む。
【0514】
ある実施形態では、各用量は、約４８μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約４９μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約５０μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約５１μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約５２μｇの担体タンパク質を含む。ある実施形態では、各用量は、約５３μｇの担体タンパク質を含む。
【0515】
ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＳＣＰである。
２．４ さらなる抗原
本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化Ｓ．ニューモニエ糖抗原（グリココンジュゲート）を含む。それらはまた、他の病原体、特に、細菌および／またはウイルスに由来する抗原をさらに含んでもよい。好ましいさらなる抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、典型的には無細胞性（Ｐａ）である、百日咳抗原（Ｐ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲート化ヘモフィルス・インフルエンザｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される。
ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＳＣＰである。
２．４ さらなる抗原
本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化Ｓ．ニューモニエ糖抗原（グリココンジュゲート）を含む。それらはまた、他の病原体、特に、細菌および／またはウイルスに由来する抗原をさらに含んでもよい。好ましいさらなる抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、典型的には無細胞性（Ｐａ）である、百日咳抗原（Ｐ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲート化ヘモフィルス・インフルエンザｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される。
【0516】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－Ｈｉｂ、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－Ｈｉｂを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶ－Ｈｉｂを含む。
【0517】
百日咳抗原：ボルデテラ・ペルツシス（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、百日咳を引き起こす。ワクチン中の百日咳抗原は、細胞性（全細胞、不活性化Ｂ．ペルツシス（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）細胞の形態）または無細胞性のいずれかである。細胞性百日咳抗原の調製は、十分に文書化されている（例えば、それはＢ．ペルツシスのフェーズＩ培養物の熱不活性化により得られ得る）。しかし、好ましくは、本発明は無細胞性抗原を使用する。無細胞性抗原が使用される場合、以下の抗原のうちの１、２または（好ましくは）３個を使用することが好ましい：（１）解毒された百日咳毒素（百日咳トキソイド、またはＰＴ）、（２）線維状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、（３）ペルタクチン（６９キロダルトン外膜タンパク質としても知られる）。ＦＨＡおよびペルタクチンは、本発明による使用の前にホルムアルデヒドで処理されてもよい。ＰＴは、好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドを用いる処理により解毒される。無細胞性百日咳抗原は、好ましくは、１つまたは複数のアルミニウム塩アジュバント上に吸着される。代替手段として、それらは、非吸着状態で添加されてもよい。ペルタクチンが添加される場合、それは水酸化アルミニウムアジュバント上に既に吸着されていることが好ましい。ＰＴおよびＦＨＡは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウム上に吸着されてもよい。ＰＴ、ＦＨＡおよびペルタクチンのすべての水酸化アルミニウムへの吸着が最も好ましい。
【0518】
不活性化ポリオウイルスワクチン：ポリオウイルスは灰白髄炎を引き起こす。経口ポリオウイルスワクチンを使用するよりもむしろ、本発明の好ましい実施形態はＩＰＶを使用する。患者に投与する前に、ポリオウイルスは、不活性化されなければならず、これは、ホルムアルデヒドを用いる処理により達成され得る。灰白髄炎は、３つのタイプのポリオウイルスのうちの１つにより引き起こされ得る。３つのタイプは類似しており、同一の症状を引き起こすが、それらは抗原的に異なり、１つのタイプによる感染は他のタイプによる感染に対して防御しない。したがって、本発明において３種のポリオウイルス抗原を使用することが好ましい：ポリオウイルス１型（例えば、Ｍａｈｏｎｅｙ株）、ポリオウイルス２型（例えば、ＭＥＦ－１株）、およびポリオウイルス３型（例えば、Ｓａｕｋｅｔｔ株）。ウイルスは、好ましくは個別に増殖させ、精製し、不活性化し、次いで組み合わせて、本発明と共に使用するためのバルク三価混合物を得る。
【0519】
ジフテリアトキソイド：コリネバクテリウム・ジフテリアは、ジフテリアを引き起こす。ジフテリア毒素は、（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒドを用いて）処理して、注射後に特異的な抗毒素抗体を誘導する能力を保持しながら毒性を除去することができる。これらのジフテリアトキソイドは、ジフテリアワクチン中で使用される。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理により調製されるものである。ジフテリアトキソイドは、増殖培地中でＣ．ジフテリア（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）を増殖させた後、ホルムアルデヒド処理、限外濾過および沈降により得られ得る。次いで、トキソイド化された材料は、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスにより処理されてもよい。ジフテリアトキソイドは、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着される。
【0520】
破傷風トキソイド：クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）は、破傷風を引き起こす。破傷風毒素は、処理して、防御的トキソイドを得ることができる。このトキソイドは、破傷風ワクチン中で使用される。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理により調製されるものである。破傷風トキソイドは、増殖培地中でＣ．テタニ（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）を増殖させた後、ホルムアルデヒド処理、限外濾過および沈降により得られ得る。次いで、この材料は、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスにより処理されてもよい。
【0521】
Ａ型肝炎ウイルス抗原：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす公知の因子の１つである。好ましいＨＡＶ成分は、不活性化ウイルスに基づくものであり、不活性化は、ホルマリン処理により達成され得る。
【0522】
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす公知の因子の１つである。キャプシドの主成分は、ＨＢＶ表面抗原として知られるタンパク質であり、またはより一般的には、典型的には約２４ｋＤａの分子量を有する２２６アミノ酸のポリペプチドであるＨＢｓＡｇである。すべての存在するＢ型肝炎ワクチンは、ＨＢｓＡｇを含有し、この抗原が正常なワクチン被接種者に投与される場合、それはＨＢＶ感染に対して防御する抗ＨＢｓＡｇ抗体の生成を刺激する。
【0523】
ワクチン製造のために、ＨＢｓＡｇは、２つの方法で作製されてきた：慢性Ｂ型肝炎キャリアの血漿からの粒子状形態の抗原の精製、または組換えＤＮＡ法によるタンパク質の発現（例えば、酵母細胞中での組換え発現）。天然のＨＢｓＡｇ（すなわち、血漿精製産物中として）と違って、酵母により発現されるＨＢｓＡｇは、一般的にはグリコシル化されておらず、これは、本発明と共に使用するためのＨＢｓＡｇの最も好ましい形態である。
【0524】
コンジュゲート化ヘモフィルス・インフルエンザｂ型抗原：ヘモフィルス・インフルエンザｂ型（Ｈｉｂ）は、細菌性髄膜炎を引き起こす。Ｈｉｂワクチンは、典型的には、莢膜糖抗原に基づくものであり、その調製は十分に文書化されている。Ｈｉｂ糖は、特に子供におけるその免疫原性を増強するために、担体タンパク質にコンジュゲートされ得る。典型的な担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、Ｈ．インフルエンザプロテインＤ、および血清群Ｂ髄膜炎菌に由来する外膜タンパク質複合体である。コンジュゲートの糖部分は、Ｈｉｂ細菌から調製される完全長ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）および／または完全長ＰＲＰの断片を含んでもよい。Ｈｉｂコンジュゲートは、アルミニウム塩アジュバントに吸着されても、またはされなくてもよい。
【0525】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
【0526】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
【0527】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化Ｎ．メニンギティディス血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
【0528】
２．５ アジュバント
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１種、２種または３種のアジュバントをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１種のアジュバントをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、１種のアジュバントをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、２種のアジュバントをさらに含んでもよい。用語「アジュバント」は、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として、主に免疫モジュレータとして作用するか、またはその両方の強力な特徴を有してもよい。好適なアジュバントとしては、ヒトを含む哺乳動物における使用にとって好適なものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１種、２種または３種のアジュバントをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１種のアジュバントをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、１種のアジュバントをさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、２種のアジュバントをさらに含んでもよい。用語「アジュバント」は、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として、主に免疫モジュレータとして作用するか、またはその両方の強力な特徴を有してもよい。好適なアジュバントとしては、ヒトを含む哺乳動物における使用にとって好適なものが挙げられる。
【0529】
ヒトで使用され得る公知の好適な送達系型アジュバントの例としては、以下に限定されないが、アラム（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油型エマルション、例えばＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．５％ｗ／ｖポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、０．５％ｗ／ｖトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ８５））、油中水型エマルション、例えばモンタニド、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）マイクロ粒子またはナノ粒子が挙げられる。
【0530】
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとして、アルミニウム塩（アラム）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）を含む。好ましい実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとして、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。好ましい実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとして、リン酸アルミニウムを含む。
【0531】
本明細書に開示される免疫原性組成物の有効性を増強するためのさらなる例示的アジュバントとしては、限定されないが、以下が挙げられる：（１）水中油型エマルション製剤（ムラミルペプチド（下記参照）または細菌細胞壁成分などの他の特異的免疫刺激剤を含む、または含まない）、例えば、（ａ）より大きい粒径のエマルションを生成するためにサブミクロンエマルション中にマイクロ流体化された、またはボルテックスされた１０％スクアレン、０．４％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、５％プルロニック（登録商標）ブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、および（ｂ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、および１つまたは複数の細菌細胞壁成分、例えば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコール酸（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））を含有するＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）、（２）サポニンアジュバント、例えば、ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）、ＡＢＩＳＣＯ（登録商標）（Ｉｓｃｏｎｏｖａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、または用いることができるＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、またはさらなる界面活性剤を含まなくてもよいＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などのそれから生成される粒子（例えば、ＷＯ００／０７６２１）、（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（４）サイトカイン、例えば、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（例えば、ＷＯ９９／４４６３６））、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など、（５）任意選択で肺炎球菌糖と共に使用される場合にアラムの実質的な非存在下での（例えば、ＷＯ００／５６３５８を参照されたい）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ－２２２０２２１、ＥＰ０６８９４５４を参照されたい）、（６）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型エマルションとの組合せ（例えば、ＥＰ０８３５３１８、ＥＰ０７３５８９８、ＥＰ０７６１２３１を参照されたい）、（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９を参照されたい）、（８）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１２０７）、またはオクトキシノールなどの少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１１５２）、（９）サポニンおよび免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（例えば、ＷＯ００／６２８００）、（１０）免疫刺激剤および金属塩の粒子（例えば、ＷＯ００／２３１０５を参照されたい）、（１１）サポニンおよび水中油型エマルション（例えば、ＷＯ９９／１１２４１）、（１２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（任意選択で、＋ステロール）（例えば、ＷＯ９８／５７６５９）、（１３）組成物の有効性を増強するための免疫刺激剤として作用する他の物質。ムラミルペプチドとしては、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－トレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル（ｉｓｏｇｌｕｔａｒｎｉｎｙｌ）－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミンＭＴＰ－ＰＥ）などが挙げられる。
【0532】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとして、ＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本明細書で使用されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、免疫刺激性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）を指し、したがって、これらの用語は、別途指摘しない限り互換的に使用される。免疫刺激性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、任意選択である特定の好ましい塩基の文脈内で、非メチル化シトシン－グアニンジヌクレオチドである、１つまたは複数の免疫刺激性ＣｐＧモチーフを含有する。ＣｐＧ免疫刺激性モチーフのメチル化状態は、一般に、ジヌクレオチド中のシトシン残基を指す。少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、３’グアニンにリン酸結合により連結された５’非メチル化シトシンを含有し、かつＴｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ－９）への結合を通じて免疫系を活性化する、オリゴヌクレオチドである。別の実施形態では、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有してもよく、これらはＣｐＧモチーフがメチル化されていない場合ほど強くないが、ＴＬＲ９を通じて免疫系を活性化する。ＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のパリンドロームを含んでもよく、このパリンドロームは、同様に、ＣｐＧジヌクレオチドを包含してもよい。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、いくつかの発行された特許、公開された特許出願、および他の刊行物、例えば、米国特許第６，１９４，３８８号、同第６，２０７，６４６号、同第６，２１４，８０６号、同第６，２１８，３７１号、同第６，２３９，１１６号、および同第６，３３９，０６８号に記載されている。
【0533】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の３頁、２２行目～１２頁、３６行目に記載された任意のＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
【0534】
異なるクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドが同定されている。これらのものは、Ａ、Ｂ、ＣおよびＰクラスと呼ばれ、ＷＯ２０１０／１２５４８０の３頁、２２行目～１２頁、３６行目により詳細に記載されている。本発明の方法は、これらの異なるクラスのＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。
【0535】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＡクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、本発明の「Ａクラス」のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列：５’ＧＧＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧ３’（配列番号１）を有する。Ａクラスのオリゴヌクレオチドのいくつかの非限定例としては、５’Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｇ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ’３’（配列番号２）（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指し、「＿」は、ホスホジエステル結合を指す）が挙げられる。
【0536】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、本発明における使用のためのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも式：
５’Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４３’
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はヌクレオチドである）
により表されるＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、Ｘ２は、アデニン、グアニン、またはチミンである。別の実施形態では、Ｘ３は、シトシン、アデニン、またはチミンである。
５’Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４３’
（式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はヌクレオチドである）
により表されるＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドである。一実施形態では、Ｘ２は、アデニン、グアニン、またはチミンである。別の実施形態では、Ｘ３は、シトシン、アデニン、またはチミンである。
【0537】
本発明のＢクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、上に広く記載されたもの、およびＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１８８１０および米国特許第６，１９４，３８８号、同第６，２０７，６４６号、同第６，２１４，８０６号、同第６，２１８，３７１号、同第６，２３９，１１６号および同第６，３３９，０６８号に開示されたものである。例示的な配列としては、以下に限定されないが、これらの後者の出願および特許に開示されたものが挙げられる。
【0538】
ある実施形態では、本発明の「Ｂクラス」のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列：
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ３’（配列番号３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ３’（配列番号４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’（配列番号５）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’（配列番号６）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ３’（配列番号７）
を有する。
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ３’（配列番号３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ３’（配列番号４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’（配列番号５）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ３’（配列番号６）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ３’（配列番号７）
を有する。
【0539】
これらの配列のいずれかにおいて、すべての結合は、すべてホスホロチオエート結合であってもよい。別の実施形態では、これらの配列のいずれかにおいて、１つまたは複数の結合は、好ましくはセミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作製するＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間の、ホスホジエステルであってもよい。これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンは、５’Ｔに置き換わってもよい；ハロゲン置換の例としては、以下に限定されないが、ブロモ－ウリジンまたはヨード－ウリジン置換が挙げられる。
【0540】
Ｂクラスのオリゴヌクレオチドのいくつかの非限定例としては、
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号１０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号１１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ３’（配列番号１２）
（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指す）
が挙げられる。
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号１０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ３’（配列番号１１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ３’（配列番号１２）
（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指す）
が挙げられる。
【0541】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＣクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、本発明の「Ｃクラス」のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列：
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１４）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１５）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１６）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１７）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１８）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１９）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２０）、または
５’ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２１）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２２）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ３’（配列番号２３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ３’（配列番号２４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号２５）
を有する。
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１４）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１５）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１６）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１７）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１８）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号１９）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２０）、または
５’ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２１）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号２２）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ３’（配列番号２３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ３’（配列番号２４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ３’（配列番号２５）
を有する。
【0542】
これらの配列のいずれかにおいて、すべての結合は、すべてホスホロチオエート結合であってもよい。別の実施形態では、これらの配列のいずれかにおいて、１つまたは複数の結合は、好ましくはセミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作製するＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間の、ホスホジエステルであってもよい。
【0543】
Ｃクラスのオリゴヌクレオチドのいくつかの非限定例としては、
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３２）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３３）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３４）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３５）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号３８）
（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指し、「＿」は、ホスホジエステル結合を指す）
が挙げられる。
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号２９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３２）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３３）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３４）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３５）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号３７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ３’（配列番号３８）
（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指し、「＿」は、ホスホジエステル結合を指す）
が挙げられる。
【0544】
これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンは、５’Ｔに置き換わってもよい；ハロゲン置換の例としては、以下に限定されないが、ブロモ－ウリジンまたはヨード－ウリジン置換が挙げられる。
【0545】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＰクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。ある実施形態では、本発明における使用のためのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’ＴＬＲ活性化ドメインと、少なくとも２つのパリンドローム領域とを含有するＰクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドであり、一方のパリンドローム領域は、少なくとも６ヌクレオチド長の５’パリンドローム領域であり、直接的に、またはスペーサーを介して少なくとも８ヌクレオチド長の３’パリンドローム領域に接続されており、該オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのＹｐＲジヌクレオチドを含む。ある実施形態では、前記オリゴヌクレオチドは、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ（配列番号２７）ではない。一実施形態では、ＰクラスのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＹｐＲ、ＴＴＹｐＲ、ＴＴＴＹｐＲ、ＵＣＧ、ＵＵＣＧ、ＵＵＵＣＧ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴである。なおまた別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’パリンドローム領域内にある。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’パリンドローム領域のすぐ５’側にある。
【0546】
ある実施形態では、本発明の「Ｐクラス」のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、以下の核酸配列：５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ３’（配列番号３９）を有する。
【0547】
前記配列において、すべての結合は、すべてホスホロチオエート結合であってもよい。別の実施形態では、１つまたは複数の結合は、好ましくはセミソフトＣｐＧオリゴヌクレオチドを作製するＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」との間の、ホスホジエステルであってもよい。これらの配列のいずれかにおいて、エチル－ウリジンまたはハロゲンは、５’Ｔに置き換わってもよい；ハロゲン置換の例としては、以下に限定されないが、ブロモ－ウリジンまたはヨード－ウリジン置換が挙げられる。
【0548】
Ｐクラスのオリゴヌクレオチドの非限定例としては、
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号４０）
（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指し、「＿」は、ホスホジエステル結合を指す）
を含む。
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ３’（配列番号４０）
（式中、「＊」は、ホスホロチオエート結合を指し、「＿」は、ホスホジエステル結合を指す）
を含む。
【0549】
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホジエステル様結合を含む。別の実施形態では、ホスホジエステル様結合は、ホスホジエステル結合である。別の実施形態では、親油性基は、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。一実施形態では、親油性基は、コレステロールである。
【0550】
ある実施形態では、本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間結合は、ホスホジエステル結合である（ＷＯ２００７／０２６１９０に記載された「ソフト」オリゴヌクレオチド）。別の実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、分解に耐性にされる（例えば、安定化される）。「安定化されたオリゴヌクレオチド」は、ｉｎ ｖｉｖｏでの分解（例えば、エキソまたはエンドヌクレアーゼによる）に比較的耐性であるオリゴヌクレオチドを指す。核酸安定化は、骨格改変により達成され得る。ホスホロチオエート結合を有するオリゴヌクレオチドは、最大活性を生じ、細胞内エキソおよびエンドヌクレアーゼによる分解からオリゴヌクレオチドを保護する。
【0551】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル結合とホスホロチオエート結合との組合せを有するキメラ骨格を有してもよい。本発明の目的では、キメラ骨格は、部分的に安定化された骨格であって、少なくとも１つのヌクレオチド間結合がホスホジエステルまたはホスホジエステル様であり、少なくとも１つの他のヌクレオチド間結合が安定化されたヌクレオチド間結合であり、少なくとも１つのホスホジエステルまたはホスホジエステル様結合と、少なくとも１つの安定化された結合とが異なるものである、骨格を指す。ホスホジエステル結合がＣｐＧモチーフ内に優先的に配置される場合、そのような分子は、ＷＯ２００７／０２６１９０に記載されたように「セミソフト」と呼ばれる。
【0552】
他の改変オリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、および／またはｐ－エトキシ結合の組合せを含む。
【0553】
混合骨格改変ＯＤＮは、ＷＯ２００７／０２６１９０に記載のように合成され得る。
ＣｐＧオリゴヌクレオチドのサイズ（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さに沿ったヌクレオチド残基の数）は、オリゴヌクレオチドの刺激活性にも寄与し得る。細胞中への取込みを容易にするために、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、好ましくは、６ヌクレオチドの残基の最小の長さを有する。より大きいオリゴヌクレオチドは細胞内で分解されるため、十分な免疫刺激性モチーフが存在する場合、６ヌクレオチドを超える任意のサイズのオリゴヌクレオチド（多くのｋｂ長であっても）は、免疫応答を誘導することができる。ある特定の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６～１００ヌクレオチド長、優先的には８～３０ヌクレオチド長である。重要な実施形態では、本発明の核酸およびオリゴヌクレオチドは、プラスミドまたは発現ベクターではない。
ＣｐＧオリゴヌクレオチドのサイズ（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さに沿ったヌクレオチド残基の数）は、オリゴヌクレオチドの刺激活性にも寄与し得る。細胞中への取込みを容易にするために、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、好ましくは、６ヌクレオチドの残基の最小の長さを有する。より大きいオリゴヌクレオチドは細胞内で分解されるため、十分な免疫刺激性モチーフが存在する場合、６ヌクレオチドを超える任意のサイズのオリゴヌクレオチド（多くのｋｂ長であっても）は、免疫応答を誘導することができる。ある特定の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６～１００ヌクレオチド長、優先的には８～３０ヌクレオチド長である。重要な実施形態では、本発明の核酸およびオリゴヌクレオチドは、プラスミドまたは発現ベクターではない。
【0554】
ある実施形態では、本明細書に開示されるＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＷＯ２００７／０２６１９０の段落１３４～１４７に記載されたような塩基および／または糖などにおける、置換または修飾を含む。
【0555】
ある実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、化学的に修飾される。化学的修飾の例は、当業者には公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎら（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．９０：５４３；Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ（編）、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＵＳＡ １９９３；Ｃｒｏｏｋｅら（１９９６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３６：１０７～１２９頁；およびＨｕｎｚｉｋｅｒら（１９９５）Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ７：３３１～４１７頁に記載されている。本発明によるオリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の修飾を有してもよく、各修飾は、天然のＤＮＡまたはＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間架橋および／または特定のβ－Ｄ－リボース単位および／または特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。
【0556】
本発明のいくつかの実施形態では、ＣｐＧ含有核酸は、当業者には公知の方法に従って免疫原性担体と単純に混合され得る（例えば、ＷＯ０３／０２４４８０を参照されたい）。
【0557】
本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示される任意の免疫原性組成物は、２μｇ～１００ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本発明の特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、０．１ｍｇ～５０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．２ｍｇ～１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、より好ましくは０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本発明の特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。さらに好ましくは、本発明の免疫原性組成物は、０．５～２ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含んでもよい。最も好ましくは、本発明の免疫原性組成物は、０．７５～１．５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含んでもよい。好ましい実施形態では、本明細書に開示される任意の免疫原性組成物は、約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含んでもよい。
【0558】
３ 製剤
本発明の免疫原性組成物は、液体形態（すなわち、溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で製剤化されてもよい。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、液体形態で製剤化される。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、凍結乾燥形態で製剤化される。液体製剤は、有利には、その包装された形態から直接的に投与されてもよく、したがって、本発明の凍結乾燥組成物について別途必要とされるような水性媒体中での再構成を必要とせず、注射にとって理想的である。
本発明の免疫原性組成物は、液体形態（すなわち、溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で製剤化されてもよい。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、液体形態で製剤化される。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、凍結乾燥形態で製剤化される。液体製剤は、有利には、その包装された形態から直接的に投与されてもよく、したがって、本発明の凍結乾燥組成物について別途必要とされるような水性媒体中での再構成を必要とせず、注射にとって理想的である。
【0559】
本開示の免疫原性組成物の製剤化は、当技術分野で認識される方法を用いて達成され得る。例えば、個々の多糖および／またはコンジュゲートは、生理的に許容されるビヒクルと共に製剤化して、組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例としては、以下に限定されないが、水、緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）およびデキストロース溶液が挙げられる。
【0560】
本開示は、本明細書に開示されるグリココンジュゲートの任意の組合せと、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤とを含む免疫原性組成物を提供する。
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、液体形態、好ましくは、水性液体形態にある。
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、液体形態、好ましくは、水性液体形態にある。
【0561】
本開示の免疫原性組成物は、緩衝剤、塩、二価陽イオン、非イオン性界面活性剤、凍結防止剤、例えば糖、および酸化防止剤、例えばフリーラジカルスカベンジャーまたはキレート剤のうちの１つまたは複数、またはそれらの任意の複数の組合せを含んでもよい。
【0562】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、緩衝剤を含む。ある実施形態では、前記緩衝剤は、約３．５～約７．５のｐＫａを有する。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、リン酸塩、コハク酸塩、ヒスチジンまたはクエン酸塩である。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、コハク酸塩である。いくつかの実施形態では、緩衝剤は、ヒスチジンである。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、最終濃度１ｍＭ～１０ｍＭのコハク酸塩である。特定の一実施形態では、コハク酸塩緩衝剤の最終濃度は、約５ｍＭである。
【0563】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、塩を含む。いくつかの実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびそれらの組合せからなる群から選択される。特定の一実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。特定の一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
【0564】
ある実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、界面活性剤を含む。ある実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｎ－１０１、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、オクトキシノール（ｏｘｔｏｘｙｎｏｌ）４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ１５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、ダイズレシチンおよびポロキサマーからなる群から選択される。特定の一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％ポリソルベート８０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％ポリソルベート８０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％ポリソルベート８０重量／重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０２％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０３％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０４％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０５％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、１％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。
【0565】
特定の一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％ポリソルベート２０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％ポリソルベート２０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％ポリソルベート２０重量／重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％ポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０２％ポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％ポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０３％ポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０４％ポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０５％ポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、１％ポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。
【0566】
特定の一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート４０である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％ポリソルベート４０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％ポリソルベート４０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％ポリソルベート４０重量／重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％ポリソルベート４０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート４０の最終濃度は、１％ポリソルベート４０（ｗ／ｗ）である。
【0567】
特定の一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート６０である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％ポリソルベート６０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％ポリソルベート６０重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％ポリソルベート６０重量／重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％ポリソルベート６０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート６０の最終濃度は、１％ポリソルベート６０（ｗ／ｗ）である。
【0568】
特定の一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート６５である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％ポリソルベート６５重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％ポリソルベート６５重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％ポリソルベート６５重量／重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％ポリソルベート６５（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート６５の最終濃度は、１％ポリソルベート６５（ｗ／ｗ）である。
【0569】
特定の一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８５である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％ポリソルベート８５重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％ポリソルベート８５重量／重量（ｗ／ｗ）である。いくつかの前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％ポリソルベート８５重量／重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％または０．１％ポリソルベート８５（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８５の最終濃度は、１％ポリソルベート８５（ｗ／ｗ）である。
【0570】
ある特定の実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、５．５～７．５のｐＨ、より好ましくは５．６～７．０のｐＨ、さらにより好ましくは５．８～６．０のｐＨを有する。
一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される任意の免疫原性組成物で充填された容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵器、バイオリアクター、バッグ、瓶、アンプル、カートリッジおよび使い捨て型ペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器は、シリコン処理されている。
一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される任意の免疫原性組成物で充填された容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵器、バイオリアクター、バッグ、瓶、アンプル、カートリッジおよび使い捨て型ペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器は、シリコン処理されている。
【0571】
ある実施形態では、本開示の容器は、ガラス、金属（例えば、スチール、ステンレススチール、アルミニウムなど）および／またはポリマー（例えば、熱可塑性物質、エラストマー、熱可塑性エラストマー）から作られている。ある実施形態では、本開示の容器は、ガラスから作られている。
【0572】
一実施形態では、本開示は、本明細書に開示される任意の免疫原性組成物で充填されたシリンジを提供する。ある特定の実施形態では、シリンジは、シリコン処理されている、および／またはガラスから作られている。
【0573】
注射のための本発明の免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬの体積を有する。ある実施形態では、注射のための本発明の免疫原性組成物は、０．２ｍＬ～１ｍＬの体積、さらにより好ましくは約０．５ｍＬの体積を有する。
【0574】
４ 本発明のグリココンジュゲートおよび免疫原性組成物の使用
本明細書に開示されるグリココンジュゲートは、抗原として使用され得る。例えば、それらは、ワクチンの一部であってもよい。
本明細書に開示されるグリココンジュゲートは、抗原として使用され得る。例えば、それらは、ワクチンの一部であってもよい。
【0575】
したがって、ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、医薬として使用するためのものである。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。
【0576】
したがって、ある実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物は、対象における免疫応答の生成に使用するためのものである。一態様では、対象は、哺乳動物、例えばヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌである。一態様では、対象は、ヒトである。
【0577】
本明細書に記載される免疫原性組成物は、対象における細菌性の感染、疾患または状態を予防、治療または改善するための治療的または予防的方法で使用され得る。特に、本明細書に記載される免疫原性組成物は、対象におけるＳ．ニューモニエ血清型３の感染、疾患または状態を予防、治療または改善するために使用され得る。
【0578】
したがって、一態様では、本開示は、免疫学的有効量の本開示の免疫原性組成物を対象に投与するステップを含む、対象におけるＳ．ニューモニエ血清型３に関連する感染、疾患または状態を予防、治療または改善する方法を提供する。
【0579】
いくつかのそのような実施形態では、感染、疾患または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染および脳膿瘍からなる群から選択される。
【0580】
ある実施形態では、本開示は、免疫学的有効量の本発明の免疫原性組成物を対象に投与するステップを含む、対象におけるＳ．ニューモニエ血清型３に対する免疫応答を誘導する方法を提供する。一態様では、対象は、哺乳動物、例えばヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌである。一態様では、対象は、ヒトである。
【0581】
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。そのような実施形態では、本明細書に記載される免疫原性組成物は、対象におけるＳ．ニューモニエ血清型３の感染を予防するために使用され得る。したがって、一態様では、本発明は、免疫学的有効量の本開示の免疫原性組成物を対象に投与するステップを含む、対象におけるＳ．ニューモニエ血清型３による感染を予防する方法を提供する。いくつかのそのような実施形態では、感染は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟組織感染および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、対象は、哺乳動物、例えばヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌである。一態様では、対象は、ヒトである。
【0582】
本開示の免疫原性組成物は、全身経路または粘膜経路を介して免疫原性組成物を投与することにより、Ｓ．ニューモニエ血清型３感染に感受性のあるヒトを予防または治療するために使用され得る。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下経路により投与される。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下注射により投与される。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内または皮下注射により投与される。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内注射により投与される。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、皮下注射により投与される。
【0583】
５ 本発明の免疫原性組成物で治療されるべき対象
本明細書に開示されるように、本明細書に記載される免疫原性組成物は、対象における細菌性の感染、疾患または状態を予防、治療または改善するための様々な治療的または予防的方法で使用され得る。
本明細書に開示されるように、本明細書に記載される免疫原性組成物は、対象における細菌性の感染、疾患または状態を予防、治療または改善するための様々な治療的または予防的方法で使用され得る。
【0584】
好ましい実施形態では、前記対象は、ヒトである。最も好ましい実施形態では、前記対象は、新生児（すなわち、３カ月齢より下）、乳児（すなわち、３カ月齢～１歳）または幼児（すなわち、１歳～４歳）である。
【0585】
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。
そのような実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、１歳未満の年齢であってもよい。例えば、ワクチン接種されるべき対象は、約１カ月齢、約２カ月齢、約３カ月齢、約４カ月齢、約５カ月齢、約６カ月齢、約７カ月齢、約８カ月齢、約９カ月齢、約１０カ月齢、約１１カ月齢または約１２カ月齢であってもよい。ある実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、約２カ月齢、約４カ月齢または約６カ月齢である。別の実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、２歳未満の年齢である。例えば、ワクチン接種されるべき対象は、約１２～約１５カ月齢であってもよい。いくつかの場合、わずか１回用量の本発明による免疫原性組成物が必要とされるが、いくつかの状況下では、第２、第３または第４の用量が与えられてもよい（以下のセクション８を参照されたい）。
そのような実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、１歳未満の年齢であってもよい。例えば、ワクチン接種されるべき対象は、約１カ月齢、約２カ月齢、約３カ月齢、約４カ月齢、約５カ月齢、約６カ月齢、約７カ月齢、約８カ月齢、約９カ月齢、約１０カ月齢、約１１カ月齢または約１２カ月齢であってもよい。ある実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、約２カ月齢、約４カ月齢または約６カ月齢である。別の実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、２歳未満の年齢である。例えば、ワクチン接種されるべき対象は、約１２～約１５カ月齢であってもよい。いくつかの場合、わずか１回用量の本発明による免疫原性組成物が必要とされるが、いくつかの状況下では、第２、第３または第４の用量が与えられてもよい（以下のセクション８を参照されたい）。
【0586】
本発明のある実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、５０歳以上の成人、より好ましくは５５歳以上の成人である。ある実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上または８０歳以上の成人である。
【0587】
ある実施形態では、ワクチン接種されるべき対象は、免疫障害を有する個体、特にヒトである。免疫障害を有する個体は、一般に、感染性因子によるチャレンジに対して正常な液性または細胞性防御を高める能力が減衰または低下した人と定義される。
【0588】
本発明のある実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、免疫系を損なう疾患または状態に罹患し、肺炎球菌疾患に対して防御する、またはそれを処置するのに不十分である抗体応答をもたらす。
【0589】
ある実施形態では、前記疾患は、原発性免疫不全障害である。好ましくは、前記原発性免疫不全障害は、複合ＴおよびＢ細胞免疫不全、抗体欠損、明確に定義された症候群、免疫調節不全疾患、食細胞障害、自然免疫不全、自己炎症障害、および補体欠損からなる群から選択される。ある実施形態では、前記原発性免疫不全障害は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２４頁、１１行目～２５頁、１９行目に開示されたものから選択される。
【0590】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、がん、慢性心臓または肺障害、鬱血性心不全、糖尿病、慢性肝疾患、アルコール依存症、肝硬変、髄液漏、心筋症、慢性気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能障害（例えば鎌状赤血球症）、脾臓機能の欠如（無脾症）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群および喘息からなる群から選択される疾患に罹患している。
【0591】
本発明のある実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、栄養不良に罹患している。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、感染に対する身体の耐性を低下させる薬物または処置を受けている。ある実施形態では、前記薬物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２６頁、３３行目～２６頁、４行目に開示されたものから選択される。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、感染に対する身体の耐性を低下させる薬物または処置を受けている。ある実施形態では、前記薬物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２６頁、３３行目～２６頁、４行目に開示されたものから選択される。
【0592】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、喫煙者である。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、５×１０９細胞／リットル未満、または４×１０９細胞／リットル未満、または３×１０９細胞／リットル未満、または２×１０９細胞／リットル未満、または１×１０９細胞／リットル未満、または０．５×１０９細胞／リットル未満、または０．３×１０９細胞／リットル未満、または０．１×１０９細胞／リットル未満の白血球数（ロイコサイト数）を有する。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、５×１０９細胞／リットル未満、または４×１０９細胞／リットル未満、または３×１０９細胞／リットル未満、または２×１０９細胞／リットル未満、または１×１０９細胞／リットル未満、または０．５×１０９細胞／リットル未満、または０．３×１０９細胞／リットル未満、または０．１×１０９細胞／リットル未満の白血球数（ロイコサイト数）を有する。
【0593】
白血球数（ロイコサイト数）：血液中の白血球（ＷＢＣ）の数。ＷＢＣは、通常、ＣＢＣ（全血球計算）の一部として測定される。白血球は、血液中の感染と戦う細胞であり、赤血球として知られる赤い（酸素運搬）血液細胞とは異なる。好中球（多形核白血球、ＰＭＮ）、桿状球（わずかに未熟な好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球および好塩基球を含む、異なるタイプの白血球が存在する。すべてのタイプの白血球が、白血球数に反映される。白血球数の正常な範囲は、通常、血液１立方ミリメートルあたり４，３００個の細胞から１０，８００個の細胞の間である。これはまた、ロイコサイト数と称される場合があり、４．３～１０．８×１０９細胞／リットルの国際単位で表され得る。
【0594】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、好中球減少症に罹患している。本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、２×１０９細胞／リットル未満、または１×１０９細胞／リットル未満、または０．５×１０９細胞／リットル未満、または０．１×１０９細胞／リットル未満、または０．０５×１０９細胞／リットル未満の好中球数を有する。
【0595】
低い白血球数または「好中球減少症」は、循環血液中の異常に低レベルの好中球を特徴とする状態である。好中球は、感染を防止し、それと戦うのを助ける特定の種類の白血球である。がん患者が好中球減少症を経験する最もよくある理由は、化学療法の副作用としてのものである。化学療法により誘導される好中球減少症は、患者の感染リスクを増大させ、がん治療を中断させる。
【0596】
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種されるべき免疫障害を有する対象は、５００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または３００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または２００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、１００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、７５／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または５０／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数を有する。
【0597】
ＣＤ４細胞試験は、通常、１ｍｍ３中の細胞数として報告される。正常なＣＤ４数は、５００から１，６００の間であり、ＣＤ８数は、３７５から１，１００の間である。ＣＤ４数は、ＨＩＶを有する人々においては劇的に低下する。
【0598】
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される任意の免疫障害を有する対象は、ヒト男性またはヒト女性である。
６ レジメン
いくつかの場合、わずか１回用量の本発明による免疫原性組成物が必要とされるが、より高い免疫不全の状態などの、いくつかの状況下では、第２、第３または第４の用量が与えられてもよい。初回ワクチン接種後、対象は、十分に間隔を空けた１回または数回の追加免疫を受けてもよい。
６ レジメン
いくつかの場合、わずか１回用量の本発明による免疫原性組成物が必要とされるが、より高い免疫不全の状態などの、いくつかの状況下では、第２、第３または第４の用量が与えられてもよい。初回ワクチン接種後、対象は、十分に間隔を空けた１回または数回の追加免疫を受けてもよい。
【0599】
ある実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、単回用量である。特定の実施形態では、前記単回用量スケジュールは、少なくとも２歳の年齢である健康な人々のためのものである。
【0600】
ある実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、複数回用量スケジュールである。特定の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる。特定の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１カ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズ、または約２カ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズからなる。
【0601】
別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１カ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、または約２カ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズからなる。
【0602】
別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、それに続く、１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１カ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、それに続く、１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量、または約２カ月の間隔で隔てられた３回用量シリーズ、それに続く、１回目の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。
【0603】
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、１歳までに少なくとも１回の用量（例えば、１、２または３回用量）、それに続く、少なくとも１回の幼児用量からなる。
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約１カ月～約２カ月の間隔（例えば、用量間は２８～５６日）で隔てられた２回もしくは３回用量シリーズ、およびそれに続く、１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約１カ月～約２カ月の間隔（例えば、用量間は２８～５６日）で隔てられた３回用量シリーズ、およびそれに続く、１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約２カ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズ、およびそれに続く、１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約１カ月～約２カ月の間隔（例えば、用量間は２８～５６日）で隔てられた２回もしくは３回用量シリーズ、およびそれに続く、１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約１カ月～約２カ月の間隔（例えば、用量間は２８～５６日）で隔てられた３回用量シリーズ、およびそれに続く、１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、２カ月齢で開始する、約２カ月の間隔で隔てられた２回用量シリーズ、およびそれに続く、１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。
【0604】
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢での４回用量シリーズのワクチンからなる。
ある実施形態では、初回用量は、０日目に与えられ、１回または複数回の追加免疫は、約２～約２４週間の範囲の間隔で、好ましくは４～８週間の投与間隔で与えられる。
ある実施形態では、初回用量は、０日目に与えられ、１回または複数回の追加免疫は、約２～約２４週間の範囲の間隔で、好ましくは４～８週間の投与間隔で与えられる。
【0605】
ある実施形態では、初回用量は、０日目に与えられ、追加免疫は約３カ月後に与えられる。
７．本発明はまた、以下の番号付けされた項１～８９に定義される以下の実施形態を提供する
１．（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）または１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
７．本発明はまた、以下の番号付けされた項１～８９に定義される以下の実施形態を提供する
１．（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、非プロトン性溶媒中で１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）または１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、非プロトン性溶媒中で担体タンパク質と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
【0606】
２．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前にサイジングされる、項１に記載の方法。
３．単離された多糖が、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、項２に記載の方法。
３．単離された多糖が、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、項２に記載の方法。
【0607】
４．単離された多糖を、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）と反応させる、項１から３のいずれか一項に記載の方法。
５．単離された多糖を、１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させる、項１から３のいずれか一項に記載の方法。
５．単離された多糖を、１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）と反応させる、項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【0608】
６．ステップａ）が、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１モル当量から１０モル当量の間の量のＣＤＩまたはＣＤＴと反応させることを含む、項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【0609】
７．活性化反応ａ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される、項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【0610】
８．活性化反応ａ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される、項１から６のいずれか一項に記載の方法。
９．活性化反応ａ）が、０．１％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される、項１から６のいずれか一項に記載の方法。
９．活性化反応ａ）が、０．１％～１％の水を含む非プロトン性溶媒中で実行される、項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【0611】
１０．活性化反応ａ）が、０．１％～１％の水を含むＤＭＳＯ中で実行される、項１から６のいずれか一項に記載の方法。
１１．活性化反応ａ）の後に、水の添加が続く、項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
１１．活性化反応ａ）の後に、水の添加が続く、項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【0612】
１２．水が、混合物中の総水分量を約１％から約１０％（ｖ／ｖ）の間にするために添加される、項１１に記載の方法。
１３．コンジュゲーション反応ｂ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される、項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
１３．コンジュゲーション反応ｂ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で実行される、項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【0613】
１４．コンジュゲーション反応ｂ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される、項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
１５．コンジュゲーション反応ｂ）が、約０．１％～約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される、項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
１５．コンジュゲーション反応ｂ）が、約０．１％～約１０％ｖ／ｖの水を含むＤＭＳＯ中で実行される、項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
【0614】
１６．ステップｂ）における活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）が、４：１から０．１：１の間である、項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
【0615】
１７．弱有機塩基が、活性化反応ａ）の後であるが、コンジュゲーション反応ｂ）の前に、反応混合物に添加される、項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
１８．弱有機塩基が、担体タンパク質が導入される前に反応混合物に添加される、項１７に記載の方法。
１８．弱有機塩基が、担体タンパク質が導入される前に反応混合物に添加される、項１７に記載の方法。
【0616】
１８．弱有機塩基が、担体タンパク質が導入された後に反応混合物に添加される、項１７に記載の方法。
１９．前記弱有機塩基が、アルカンアミン、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ヒスチジンおよびグアニジンから選択される、項１７から１８のいずれか一項に記載の方法。
１９．前記弱有機塩基が、アルカンアミン、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、ヒスチジンおよびグアニジンから選択される、項１７から１８のいずれか一項に記載の方法。
【0617】
２０．前記有機塩基が、活性化されるべき多糖の量の０．１倍から２５倍（重量／重量）の間の量で添加される、項１７から１９のいずれか一項に記載の方法。
２１．コンジュゲーション反応ｂ）の後、活性化された多糖のコンジュゲートされていない反応部位が、加水分解される、項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
２１．コンジュゲーション反応ｂ）の後、活性化された多糖のコンジュゲートされていない反応部位が、加水分解される、項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
【0618】
２２．コンジュゲートされていない反応部位が、水溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される、項２１に記載の方法。
２３．コンジュゲートされていない反応部位が、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される、項２１に記載の方法。
２３．コンジュゲートされていない反応部位が、水性緩衝溶液のコンジュゲーション溶液への添加により加水分解される、項２１に記載の方法。
【0619】
２４．生成された後にグリココンジュゲートを精製するステップをさらに含む、項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
２５．（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
２５．（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
【0620】
２６．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前にサイジングされる、項２５に記載の方法。
２７．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、項２５に記載の方法。
２７．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、項２５に記載の方法。
【0621】
２８．（ａ）単離されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３莢膜多糖を、酸化剤と反応させるステップ、
（ａ’）クエンチング剤の添加により酸化反応をクエンチするステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）または（ａ’）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
（ａ’）クエンチング剤の添加により酸化反応をクエンチするステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）または（ａ’）の活性化された多糖を、担体タンパク質と混合するステップ、および
（ｃ）混合された活性化された多糖および担体タンパク質を、還元剤と反応させて、グリココンジュゲートを形成させるステップ
を含む、ストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを作製する方法。
【0622】
２９．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前にサイジングされる、項２８に記載の方法。
３０．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、項２８に記載の方法。
３０．単離された多糖が、活性化ステップ（ａ）の前に、１００ｋＤａから２００ｋＤａの間の重量平均分子量にサイジングされる、項２８に記載の方法。
【0623】
３１．酸化剤が、過ヨウ素酸塩である、項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
３２．酸化剤が、過ヨウ素酸である、項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
３３．ステップａ）が、多糖を、０．０１～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む、項２５から３１のいずれか一項に記載の方法。
３２．酸化剤が、過ヨウ素酸である、項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
３３．ステップａ）が、多糖を、０．０１～２モル当量の過ヨウ素酸塩と反応させることを含む、項２５から３１のいずれか一項に記載の方法。
【0624】
３４．活性化された血清型３多糖の酸化度が、２から３０の間である、項２５から３３のいずれか一項に記載の方法。
３５．活性化された血清型３多糖の酸化度が、１１から１９の間である、項２５から３３のいずれか一項に記載の方法。
３５．活性化された血清型３多糖の酸化度が、１１から１９の間である、項２５から３３のいずれか一項に記載の方法。
【0625】
３６．活性化された血清型３多糖の酸化度が、約１５である、項２５から３３のいずれか一項に記載の方法。
３７．ステップｂ）における活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）が、４：１から０．１：１の間である、項２５から３６のいずれか一項に記載の方法。
３７．ステップｂ）における活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）が、４：１から０．１：１の間である、項２５から３６のいずれか一項に記載の方法。
【0626】
３８．活性化された血清型３莢膜多糖の担体タンパク質に対する初期投入比（重量／重量）が、１．５：１から０．５：１の間である、項２５から３６のいずれか一項に記載の方法。
【0627】
３９．還元反応（ｃ）が、水性溶媒中で実行される、項２５から３８のいずれか一項に記載の方法。
４０．還元反応（ｃ）が、非プロトン性溶媒中で実行される、項２５から３８のいずれか一項に記載の方法。
４０．還元反応（ｃ）が、非プロトン性溶媒中で実行される、項２５から３８のいずれか一項に記載の方法。
【0628】
４１．還元反応（ｃ）が、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で実行される、項２５から３８のいずれか一項に記載の方法。
４２．還元剤が、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下のシアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素亜鉛、アミンボラン、例えば、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）である、項２５から４１のいずれか一項に記載の方法。
４２．還元剤が、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下のシアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウムまたは水素化ホウ素亜鉛、アミンボラン、例えば、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）である、項２５から４１のいずれか一項に記載の方法。
【0629】
４３．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである、項２５から４１のいずれか一項に記載の方法。
４４．０．２モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される、項２５から４３のいずれか一項に記載の方法。
４４．０．２モル当量から２０モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される、項２５から４３のいずれか一項に記載の方法。
【0630】
４５．０．５モル当量から３モル当量の間の還元剤が、ステップｃ）で使用される、項２５から４３のいずれか一項に記載の方法。
４６．ステップｃ）の生成物を、１～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと１５分間～１５時間反応させる、項２５から４５のいずれか一項に記載の方法。
４６．ステップｃ）の生成物を、１～２０モル当量の水素化ホウ素ナトリウムと１５分間～１５時間反応させる、項２５から４５のいずれか一項に記載の方法。
【0631】
４７．生成された後にグリココンジュゲートを精製するステップをさらに含む、項２５から４６のいずれか一項に記載の方法。
４８．項１から４７の方法のいずれか１つに従って生成されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲート。
４８．項１から４７の方法のいずれか１つに従って生成されたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲート。
【0632】
４９．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が２５ｋＤａから２００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５０．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａから１７５ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５０．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａから１７５ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
【0633】
５１．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００ｋＤａから２００ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５２．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５２．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２０ｋＤａから１８０ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
【0634】
５３．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１３０ｋＤａから１７０ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５４．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１４０ｋＤａから１６０ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５４．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１４０ｋＤａから１６０ｋＤａの間である、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
【0635】
５５．コンジュゲーション前の多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約１５０ｋＤａである、血清型３莢膜多糖を含む、項４８に記載のグリココンジュゲート。
５６．２５０ｋＤａから１５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、項４８から５５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
５６．２５０ｋＤａから１５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、項４８から５５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0636】
５７．１，０００ｋＤａから５，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、項４８から５５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
５８．１，０００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、項４８から５５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
５８．１，０００ｋＤａから４，０００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、項４８から５５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0637】
５９．２，２５０ｋＤａから３，５００ｋＤａの間の重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、項４８から５５のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６０．前記グリココンジュゲートのコンジュゲーション度が、２から１５の間である、項４８から５９のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６０．前記グリココンジュゲートのコンジュゲーション度が、２から１５の間である、項４８から５９のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0638】
６１．糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が、０．５から１．５の間である、項４８から６０のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６１．糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が、０．９から１．１の間である、項４８から６０のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６１．糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が、０．９から１．１の間である、項４８から６０のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0639】
６２．前記担体タンパク質が、ＣＲＭ１９７である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６３．前記担体タンパク質が、ＳＣＰである、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６３．前記担体タンパク質が、ＳＣＰである、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0640】
６４．前記担体タンパク質が、酵素的に不活性なＳＣＰである、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６５．前記担体タンパク質が、ＧＢＳに由来する酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６５．前記担体タンパク質が、ＧＢＳに由来する酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0641】
６６．前記担体タンパク質が、ＳＣＰＢの断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６７．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
６７．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0642】
６８．前記担体タンパク質が、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。ある実施形態では、ＳＣＰの前記酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない。
【0643】
６９．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化が、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置換することにより達成され、前記置換が、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａからなる群から選択され、数字が、ＷＯ００／３４４８７の配列番号１の番号付けに従うペプチダーゼ中のアミノ酸残基位置を示す、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0644】
７０．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）および３個のフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、搬出シグナルプレ配列、プロ配列および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化が、野生型配列の少なくとも２個のアミノ酸を置換することにより達成され、前記少なくとも２個のアミノ酸置換が、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａであり、数字が、ＷＯ００／３４４８７の配列番号１の番号付けに従うペプチダーゼ中のアミノ酸残基位置を示す、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0645】
７１．前記担体タンパク質が、配列番号４１と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0646】
７２．前記担体タンパク質が、配列番号４２と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0647】
７３．前記担体タンパク質が、配列番号４１からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
７４．前記担体タンパク質が、配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
７４．前記担体タンパク質が、配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、項４８から６１のいずれか一項に記載のグリココンジュゲート。
【0648】
７５．項４８から７４のいずれか一項に記載のストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３グリココンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７６．Ｓ．ニューモニエの異なる血清型に由来する１～２５種のグリココンジュゲートを含む、項７５に記載の免疫原性組成物。
７６．Ｓ．ニューモニエの異なる血清型に由来する１～２５種のグリココンジュゲートを含む、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0649】
７７．Ｓ．ニューモニエの７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４または２５種の異なる血清型に由来するグリココンジュゲートを含む、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0650】
７８．１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
７９．２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
７９．２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0651】
８０．Ｓ．ニューモニエ血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項７５から７９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
【0652】
８１．Ｓ．ニューモニエ血清型１、５および７Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項８０に記載の免疫原性組成物。
８２．Ｓ．ニューモニエ血清型６Ａおよび１９Ａに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項８１に記載の免疫原性組成物。
８２．Ｓ．ニューモニエ血清型６Ａおよび１９Ａに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項８１に記載の免疫原性組成物。
【0653】
８３．Ｓ．ニューモニエ血清型２２Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項８２に記載の免疫原性組成物。
８４．Ｓ．ニューモニエ血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆおよび１５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項８３に記載の免疫原性組成物。
８４．Ｓ．ニューモニエ血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆおよび１５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含む、項８３に記載の免疫原性組成物。
【0654】
８５．Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含み、１３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0655】
８６．Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含み、１５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0656】
８７．Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来するグリココンジュゲートをさらに含み、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0657】
８８．Ｓ．ニューモニエ血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来するグリココンジュゲートをさらに含み、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0658】
８９．Ｓ．ニューモニエ血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆおよび３８に由来するグリココンジュゲートをさらに含み、２５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である、項７５に記載の免疫原性組成物。
【0659】
本明細書で使用される場合、用語「約」は、記述される濃度範囲、時間枠、分子量、温度またはｐＨなどの、ある値の統計的に意味のある範囲内を意味する。そのような範囲は、所与の値または範囲の１桁分以内、典型的には、２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内または１％以内にあってもよい。時には、そのような範囲は、所与の値または範囲の測定および／または決定のために使用される標準的な方法に典型的な実験誤差の範囲内にあってもよい。用語「約」により包含される許容し得る変動は、試験下の特定のシステムに依存し、当業者により容易に理解され得る。範囲が本出願内で記載される場合はいつでも、範囲内のすべての数も本開示の実施形態として企図される。
【0660】
本明細書における用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、それぞれ、例ごとに、用語「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」と置換可能であってもよいと本発明者らによって意図される。
【0661】
「免疫原性量」、「免疫学的有効量」、「治療有効量」、「予防有効量」または「用量」は、それぞれが本明細書で互換的に使用され、一般に、当業者に公知の標準アッセイで測定した場合に、細胞性（Ｔ細胞）もしくは液性（Ｂ細胞または抗体）応答のいずれか、または両方の免疫応答を誘発するのに十分な抗原または免疫原性組成物の量を指す。
【0662】
本文書の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本特許明細書内で引用されるすべての参考文献または特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
本特許明細書内で引用されるすべての参考文献または特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
【0663】
本発明は、添付の実施例に例示される。以下の実施例は、別途詳細に記載される場合を除いて、当業者には周知であり、日常的である標準的な技術を用いて実行される。実施例は例示的なものであるが、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【0664】
実施例１．水性緩衝液中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／Ａｑ．）を用いた血清型３グリココンジュゲートの調製
１．加水分解
活性化前に分子量を低下させるために、天然の多糖を加水分解した。２．０±０．２ｇ／Ｌの最終多糖濃度および０．２Ｍの最終酢酸濃度を達成するように算出した体積の２Ｍ酢酸を、多糖溶液に添加した。希釈された多糖溶液を、８５±５℃に加熱した。加水分解反応を、標的多糖Ｍｗに応じてある特定の時間維持した。反応の終わりに、混合物を２３±２℃に冷却した。
１．加水分解
活性化前に分子量を低下させるために、天然の多糖を加水分解した。２．０±０．２ｇ／Ｌの最終多糖濃度および０．２Ｍの最終酢酸濃度を達成するように算出した体積の２Ｍ酢酸を、多糖溶液に添加した。希釈された多糖溶液を、８５±５℃に加熱した。加水分解反応を、標的多糖Ｍｗに応じてある特定の時間維持した。反応の終わりに、混合物を２３±２℃に冷却した。
【0665】
２．酸化
酸化反応のために、１Ｍ塩化マグネシウムを、最終濃度０．１０Ｍまで反応溶液に添加した。次いで、過ヨウ素酸を多糖溶液に添加して（ＷＦＩ中の５０ｍｇ／ｍＬ溶液として添加）、酸化反応を開始した。過ヨウ素酸の必要とされるモル当量を、標的酸化度（ＤＯ）に基づいて選択した。ＤＯについての標的範囲は、５．０±３．０であった。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間であった。
酸化反応のために、１Ｍ塩化マグネシウムを、最終濃度０．１０Ｍまで反応溶液に添加した。次いで、過ヨウ素酸を多糖溶液に添加して（ＷＦＩ中の５０ｍｇ／ｍＬ溶液として添加）、酸化反応を開始した。過ヨウ素酸の必要とされるモル当量を、標的酸化度（ＤＯ）に基づいて選択した。ＤＯについての標的範囲は、５．０±３．０であった。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間であった。
【0666】
３．活性化された多糖の精製
活性化された多糖を、ＷＦＩに対するタンジェンシャルフロー濾過により精製した。透析濾過を、１００ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フラットシートメンブレンを用いて実施した。透析濾過が完了したら、活性化された多糖を、（ｉ）比色アッセイによる糖濃度、（ｉｉ）比色アッセイによるアルデヒド濃度、（ｉｉｉ）酸化度、および（ｉｖ）ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによる分子量によって特徴付けた。精製された糖のｐＨを、６．３±０．３に調整した。次いで、タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）を、事前に決定した比で添加した。次いで、混合物をシェル凍結し、凍結乾燥した。
活性化された多糖を、ＷＦＩに対するタンジェンシャルフロー濾過により精製した。透析濾過を、１００ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フラットシートメンブレンを用いて実施した。透析濾過が完了したら、活性化された多糖を、（ｉ）比色アッセイによる糖濃度、（ｉｉ）比色アッセイによるアルデヒド濃度、（ｉｉｉ）酸化度、および（ｉｖ）ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによる分子量によって特徴付けた。精製された糖のｐＨを、６．３±０．３に調整した。次いで、タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）を、事前に決定した比で添加した。次いで、混合物をシェル凍結し、凍結乾燥した。
【0667】
４．コンジュゲーション反応
凍結乾燥された活性化された多糖およびタンパク質を、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液中で再構成した。再構成が完了した後、１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウムを用いて、ｐＨを６．５±０．２の最終ｐＨに調整した。コンジュゲーション反応を開始するために、事前に決定したモル当量のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを、反応混合物に添加した。コンジュゲーションは、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、３０±２℃で、４０±４時間の期間、進行した。
凍結乾燥された活性化された多糖およびタンパク質を、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液中で再構成した。再構成が完了した後、１Ｎ塩酸または１Ｎ水酸化ナトリウムを用いて、ｐＨを６．５±０．２の最終ｐＨに調整した。コンジュゲーション反応を開始するために、事前に決定したモル当量のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを、反応混合物に添加した。コンジュゲーションは、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、３０±２℃で、４０±４時間の期間、進行した。
【0668】
５．希釈およびキャッピング反応
コンジュゲーション反応時間が完了した後、反応溶液を２３±２℃に冷却し、反応体積の０．５～１．０倍に０．９％ＮａＣｌ緩衝液で希釈し、次いで、１モル当量の水素化ホウ素ナトリウムを混合物に添加した。キャッピング反応は、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、２３±２℃で、３～６時間の期間、進行した。
コンジュゲーション反応時間が完了した後、反応溶液を２３±２℃に冷却し、反応体積の０．５～１．０倍に０．９％ＮａＣｌ緩衝液で希釈し、次いで、１モル当量の水素化ホウ素ナトリウムを混合物に添加した。キャッピング反応は、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、２３±２℃で、３～６時間の期間、進行した。
【0669】
６．コンジュゲートの精製
希釈されたコンジュゲート溶液を、５μｍフィルターを通過させ、透析濾過を、媒体として５ｍＭコハク酸塩／０．９％食塩水（ｐＨ６．０）を用いて実施した。透析濾過が完了した後、コンジュゲート保持液を、０．４５μｍ／０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
希釈されたコンジュゲート溶液を、５μｍフィルターを通過させ、透析濾過を、媒体として５ｍＭコハク酸塩／０．９％食塩水（ｐＨ６．０）を用いて実施した。透析濾過が完了した後、コンジュゲート保持液を、０．４５μｍ／０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
【0670】
実施例２．ジメチルスルホキシド中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を用いた血清型３グリココンジュゲートの調製
１．加水分解および酸化
多糖の加水分解、活性化および透析濾過を、上記の水性ベースのコンジュゲーションについて記載したのと同じ様式で実施した。過ヨウ素酸ナトリウムの必要とされるモル当量を、標的ＤＯに基づいて選択した。ＤＯについての標的範囲は、１５．０±４．０である。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間である。
１．加水分解および酸化
多糖の加水分解、活性化および透析濾過を、上記の水性ベースのコンジュゲーションについて記載したのと同じ様式で実施した。過ヨウ素酸ナトリウムの必要とされるモル当量を、標的ＤＯに基づいて選択した。ＤＯについての標的範囲は、１５．０±４．０である。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間である。
【0671】
２．混合および凍結乾燥
活性化された多糖を、スクロースと、活性化された多糖１グラムあたり２５～１００グラムのスクロースの比まで、好ましくは活性化された多糖１グラムあたり４０～６０グラムのスクロースの比で混合した。次いで、混合された混合物を凍結乾燥した。算出された量の担体タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）をシェル凍結し、別々に凍結乾燥した。
活性化された多糖を、スクロースと、活性化された多糖１グラムあたり２５～１００グラムのスクロースの比まで、好ましくは活性化された多糖１グラムあたり４０～６０グラムのスクロースの比で混合した。次いで、混合された混合物を凍結乾燥した。算出された量の担体タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）をシェル凍結し、別々に凍結乾燥した。
【0672】
３．コンジュゲート化およびキャッピング
凍結乾燥された活性化された多糖を、無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で再構成し、等量の無水ＤＭＳＯを使用して、担体タンパク質を再構成した。
凍結乾燥された活性化された多糖を、無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で再構成し、等量の無水ＤＭＳＯを使用して、担体タンパク質を再構成した。
【0673】
再構成された活性化された多糖を、反応容器中で再構成された担体タンパク質と組み合わせ、続いて、透明な溶液を得るために徹底的に混合し、その後、シアノ水素化ホウ素ナトリウムによるコンジュゲーションを開始した。反応溶液中の最終多糖濃度は、およそ１ｇ／Ｌであった。反応混合物に０．５～２．０ＭＥｑのシアノ水素化ホウ素ナトリウムを添加し、２３±２℃で２０～４８時間インキュベートすることにより、コンジュゲーションを開始した。２ＭＥｑの水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を添加することによりコンジュゲーション反応を終了させ、未反応アルデヒドをキャッピングした。このキャッピング反応は、２３±２℃で３±１時間継続した。
【0674】
４．精製
１００～３００Ｋ ＭＷＣＯメンブレンを用いたタンジェンシャルフロー濾過による精製に備えて、コンジュゲート溶液を、冷やした５ｍＭコハク酸塩－０．９％食塩水（ｐＨ６．０）で１：１０希釈した。次いで、透析濾過を、媒体として５ｍＭコハク酸塩／０．９％食塩水（ｐＨ６．０）を用いて実施した。透析濾過が完了した後、コンジュゲート保持液を、０．２２μｍフィルターを通して移動させた。コンジュゲートを、およそ０．５ｍｇ／ｍＬの標的糖濃度へと、５ｍＭコハク酸塩／０．９％食塩水（ｐＨ６）を用いてさらに希釈した。あるいは、コンジュゲートを、１００～３００Ｋ ＭＷＣＯメンブレンを用いたタンジェンシャルフロー濾過により２０ｍＭヒスチジン－０．９％食塩水（ｐＨ６．５）を用いて精製した。最終的０．２２μｍ濾過ステップを完了させて、免疫原性コンジュゲートを得た。
１００～３００Ｋ ＭＷＣＯメンブレンを用いたタンジェンシャルフロー濾過による精製に備えて、コンジュゲート溶液を、冷やした５ｍＭコハク酸塩－０．９％食塩水（ｐＨ６．０）で１：１０希釈した。次いで、透析濾過を、媒体として５ｍＭコハク酸塩／０．９％食塩水（ｐＨ６．０）を用いて実施した。透析濾過が完了した後、コンジュゲート保持液を、０．２２μｍフィルターを通して移動させた。コンジュゲートを、およそ０．５ｍｇ／ｍＬの標的糖濃度へと、５ｍＭコハク酸塩／０．９％食塩水（ｐＨ６）を用いてさらに希釈した。あるいは、コンジュゲートを、１００～３００Ｋ ＭＷＣＯメンブレンを用いたタンジェンシャルフロー濾過により２０ｍＭヒスチジン－０．９％食塩水（ｐＨ６．５）を用いて精製した。最終的０．２２μｍ濾過ステップを完了させて、免疫原性コンジュゲートを得た。
【0675】
【表1】
【0676】
実施例３．血清型３グリココンジュゲートについての多糖のサイズの影響
異なるサイズの多糖を含む、マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
異なるサイズの多糖を含む、マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
【0677】
ＣＲＭ１９７へのＲＡＣ／水性（実施例１を参照されたい）またはＲＡＣ／ＤＭＳＯ（実施例２を参照されたい）コンジュゲーションのいずれかを用いてＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、サイジングされた血清型３多糖（約２５、１５０、または２５０ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表２における試験したコンジュゲートの属性を参照されたい）。
【0678】
【表2】
【0679】
２５匹の６～８週齢の雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスの群を、０週目に皮下経路を介して０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートで免疫化した（２５０μＬ）。３週目に同じ用量のコンジュゲートでマウスを追加免疫し、次いで、５週目に放血させた。各ワクチン接種を、アジュバントとして１００μｇ／用量のＡｌＰＯ４を用いて製剤化した。すべての前臨床免疫原性研究を推進して、１群あたり２５匹のマウスを用いてＯＰＡ力価における４～５倍の差を検出した。２回目のワクチン接種から２週間後（５週目、ＰＤ２）にマウスから全血を収集し、血清を分析に使用した。血清型特異的ＯＰＡを、５週目の血清試料に対して実施した。
【0680】
オプソニン食作用活性（ＯＰＡ）アッセイを使用して、Ｓ．ニューモニエ血清型３に特異的なマウス血清中の機能的抗体を測定する。細菌をオプソニン化し、補体沈着を誘発し、それにより食作用を促進し、食細胞により細菌を死滅させる、莢膜多糖特異的免疫グロブリンの能力を測定するアッセイ反応において、試験血清をセットする。ＯＰＡ力価は、試験血清のない対照ウェルに対して細菌数の５０％低下をもたらす希釈率の逆数として定義される。ＯＰＡ力価は、この５０％死滅カットオフを包含する２つの希釈率から内挿される。
【0681】
ＯＰＡ手順は、以下の改変を有するＨｕら（２００５）Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２（２）：２８７～２９５頁に記載された方法に基づいていた。試験血清を、２．５倍連続希釈し、マイクロタイターアッセイプレートに添加した。生きている血清型３標的細菌株をウェルに添加し、プレートを２５℃で３０分間振とうした。分化したＨＬ－６０細胞（食細胞）および仔ウサギ血清（３～４週齢、ＰＥＬ－ＦＲＥＥＺ（登録商標）、１２％最終濃度）をウェルに添加し、プレートを３７℃で４５分間振とうした。反応を終了させるため、８０μＬの０．９％ＮａＣｌをすべてのウェルに添加し、混合し、１０μＬのアリコートを、２００μＬの水を含有するＭＵＬＴＩＳＣＲＥＥＮ（登録商標）ＨＴＳ ＨＶフィルタープレート（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ（登録商標））のウェルに移した。液体を、真空下でプレートを通して濾過し、１５０μＬのＨＹＳＯＹ（登録商標）培地を、各ウェルに添加し、濾過した。次いで、フィルタープレートを３７℃、５％ＣＯ２にて一晩インキュベートし、次いで、Ｄｅｓｔａｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）で固定した。次いで、プレートを、Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ Ｂｌｕｅで染色し、一度脱染色した。コロニーを画像化し、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ（ＣＴＬ）（Ｓｈａｋｅｒ Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＯＨ）ＩＭＭＵＮＯＳＰＯＴ（登録商標）Ａｎａｌｙｚｅｒで計数した。生のコロニー数を使用して、死滅曲線をプロットし、ＯＰＡ力価を算出した。
【0682】
異なる用量での５週間におけるＯＰＡ力価（９５％信頼区間（ＣＩ）を用いた幾何平均力価（ＧＭＴ））を表３に示す。結果を図３に提示する。
【0683】
【表3】
【0684】
表３および図３のデータは、血清型３コンジュゲートが、マウス免疫原性モデルにおいて用量依存的ＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表３に示すように、ＲＡＣ／水性化学を用いた血清型３コンジュゲートは、多糖サイズが減少するにつれて、すべての用量においてより高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導した。ＲＡＣ／ＤＭＳＯ化学では、小さい多糖サイズで０．０１μｇ用量にて非応答個体がより少なかった。
【0685】
実施例４．血清型３グリココンジュゲートについての多糖の酸化度（ＤＯ）／活性化度（ＤｏＡ）の影響
異なる酸化度を用いて生成した、マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
異なる酸化度を用いて生成した、マウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
【0686】
ＣＲＭ１９７へのＲＡＣ／水性（実施例１を参照されたい）またはＲＡＣ／ＤＭＳＯ（実施例２を参照されたい）コンジュゲーションのいずれかを用いてＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、サイジングされた血清型３多糖（約１２０～１７０ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表４における試験したコンジュゲートの属性を参照されたい）。
【0687】
【表4】
【0688】
２５匹の６～８週齢の雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスの群を、０週目に皮下経路を介して０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートで免疫化した（２５０μＬ）。３週目に同じ用量のコンジュゲートでマウスを追加免疫し、次いで、５週目に放血させた。血清型特異的ＯＰＡを、５週目の血清試料に対して実施した。
【0689】
実施例３に記載されるように、ＯＰＡを実行した。結果を表５および図４に提示する。
【0690】
【表5】
【0691】
表５および図４のデータは、血清型３コンジュゲートが、マウス免疫原性モデルにおいて用量依存的ＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表５に示すように、ＲＡＣ／水性またはＲＡＣ／ＤＭＳＯ化学を用いた血清型３コンジュゲートは、より高いＤＯで、すべての用量においてより高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導した。
【0692】
実施例５．血清型３グリココンジュゲートについての免疫原性に対する担体タンパク質の影響
マウスにおけるＣＲＭ１９７、ＳＣＰ、または破傷風トキソイドへの血清型３コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した（実施例２を参照されたい）。
マウスにおけるＣＲＭ１９７、ＳＣＰ、または破傷風トキソイドへの血清型３コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した（実施例２を参照されたい）。
【0693】
異なる担体タンパク質にコンジュゲートされた、サイジングされた血清型３多糖（約１６０～２５０ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表６における試験したコンジュゲートの属性を参照されたい）。
【0694】
【表6】
【0695】
２５匹の６～８週齢の雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスの群を、０週目に皮下経路を介して０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートで免疫化した（２５０μＬ）。３週目に同じ用量のコンジュゲートでマウスを追加免疫し、次いで、５週目に放血させた。血清型特異的ＯＰＡを、５週目の血清試料に対して実施した。
【0696】
結果を表７および図５に提示する。
【0697】
【表7】
【0698】
表７および図５のデータは、血清型３コンジュゲートが、マウス免疫原性モデルにおいて用量依存的ＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表７に示すように、ＳＣＰにコンジュゲートされた血清型３は、より高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導し、すべてのマウスは、低用量においてさえ、測定可能なＯＰＡ力価で応答した（０％非応答個体）。
【0699】
本明細書に示すように、ＳＣＰのみが、０．０１μｇ／ｍｌ用量で、ワクチン接種に応答するマウスのパーセンテージを真に増強した。ＴＴは、全般的にＣＲＭ１９７より低い応答を誘発した。
【0700】
実施例６：ＣＤＩ化学を用いて調製した血清型３莢膜多糖のコンジュゲーション
１．加水分解、混合および凍結乾燥
約４０ＫＤａまたは約２００ＫＤａのＭｗを標的とする多糖の加水分解を、上記の水性ベースの還元的アミノ化コンジュゲーション（実施例１）について記載したのと同じ様式で実施した。サイジングされた多糖を、水を用いてＰＥＳ（ポリエーテルスルホン）ベースのメンブレンを通して精製した。次いで、精製された多糖を、１～５０×（重量による）のイミダゾールと混合した。任意選択で、生じた混合物のｐＨを、３．０から６．０の間に調整した。次いで、混合物を凍結乾燥した。算出した量の担体タンパク質（ＣＲＭ１９７）を、５ｍＭイミダゾールベースの緩衝液系に緩衝液交換し、シェル凍結し、別々に凍結乾燥した。
１．加水分解、混合および凍結乾燥
約４０ＫＤａまたは約２００ＫＤａのＭｗを標的とする多糖の加水分解を、上記の水性ベースの還元的アミノ化コンジュゲーション（実施例１）について記載したのと同じ様式で実施した。サイジングされた多糖を、水を用いてＰＥＳ（ポリエーテルスルホン）ベースのメンブレンを通して精製した。次いで、精製された多糖を、１～５０×（重量による）のイミダゾールと混合した。任意選択で、生じた混合物のｐＨを、３．０から６．０の間に調整した。次いで、混合物を凍結乾燥した。算出した量の担体タンパク質（ＣＲＭ１９７）を、５ｍＭイミダゾールベースの緩衝液系に緩衝液交換し、シェル凍結し、別々に凍結乾燥した。
【0701】
２．多糖再構成およびＣＤＩ活性化
多糖を、無水ＤＭＳＯ中で再構成し、水分レベルを、水を添加することにより０．１～１％内に調整した。活性化を、２３℃から５０℃の間の温度で、新たに調製したＣＤＩ（ＤＭＳＯ中の１００ｍｇ／ｍＬ）溶液を添加することにより開始した。反応を３時間継続した。ＣＤＩ活性化の完了時に、混合物中の総水分量を約２％（ｖ／ｖ）にするように水を添加し、混合物をさらに０．５～１時間撹拌した。次いで、ＤＭＳＯ中のイミダゾール溶液を混合物に添加した。
多糖を、無水ＤＭＳＯ中で再構成し、水分レベルを、水を添加することにより０．１～１％内に調整した。活性化を、２３℃から５０℃の間の温度で、新たに調製したＣＤＩ（ＤＭＳＯ中の１００ｍｇ／ｍＬ）溶液を添加することにより開始した。反応を３時間継続した。ＣＤＩ活性化の完了時に、混合物中の総水分量を約２％（ｖ／ｖ）にするように水を添加し、混合物をさらに０．５～１時間撹拌した。次いで、ＤＭＳＯ中のイミダゾール溶液を混合物に添加した。
【0702】
３．コンジュゲーション
凍結乾燥されたＣＲＭ１９７をＤＭＳＯ中で再構成し、次いで、活性化された多糖／ＤＭＳＯ溶液に移した。穏やかに混合しながら、反応物を２３℃で１９±３時間インキュベートした。
凍結乾燥されたＣＲＭ１９７をＤＭＳＯ中で再構成し、次いで、活性化された多糖／ＤＭＳＯ溶液に移した。穏やかに混合しながら、反応物を２３℃で１９±３時間インキュベートした。
【0703】
４．加水分解
次いで、コンジュゲーション溶液を０．２Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ３．６中に希釈した。必要な場合、ＮａＯＨまたはＨＣｌを用いて４．０±０．２のｐＨにｐＨを調整した。加水分解反応は、２３℃で４±１時間進行した。このステップで、コンジュゲートされていない反応部位を加水分解した。加水分解ステップの終わりに、コンジュゲート反応混合物を、１Ｍリン酸塩二塩基性溶液でｐＨ６．０±０．２に中和した。次いで、中和されたコンジュゲート溶液を、５μｍプレフィルターを通過させた。
次いで、コンジュゲーション溶液を０．２Ｍ酢酸ナトリウムｐＨ３．６中に希釈した。必要な場合、ＮａＯＨまたはＨＣｌを用いて４．０±０．２のｐＨにｐＨを調整した。加水分解反応は、２３℃で４±１時間進行した。このステップで、コンジュゲートされていない反応部位を加水分解した。加水分解ステップの終わりに、コンジュゲート反応混合物を、１Ｍリン酸塩二塩基性溶液でｐＨ６．０±０．２に中和した。次いで、中和されたコンジュゲート溶液を、５μｍプレフィルターを通過させた。
【0704】
５．コンジュゲーションの精製
１００Ｋ ＭＷＣＯ再生セルロースメンブレンを用いて、濃縮および透析濾過を実行した。透析濾過を、５ｍＭコハク酸塩－０．９％食塩水、ｐＨ６．０の３０倍のダイアボリューム（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）に対して実施した。次いで、コンジュゲートを０．４５μｍ／０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
１００Ｋ ＭＷＣＯ再生セルロースメンブレンを用いて、濃縮および透析濾過を実行した。透析濾過を、５ｍＭコハク酸塩－０．９％食塩水、ｐＨ６．０の３０倍のダイアボリューム（ｄｉａｖｏｌｕｍｅ）に対して実施した。次いで、コンジュゲートを０．４５μｍ／０．２２μｍフィルターを通して濾過した。
【0705】
【表8】
【0706】
実施例７．血清型３グリココンジュゲートについての免疫原性に対する化学の影響
マウスにおけるＣＲＭ１９７への血清型３コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。異なる化学（水性中の還元的アミノ化（ＲＡＣ／Ａｑ．）、実施例１を参照されたい、ＤＭＳＯ中の還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）、実施例２を参照されたい、ｅＴＥＣ連結グリココンジュゲート（ｅＴＥＣ）、ＷＯ２０１４／０２７３０２を参照されたい、またはＣＤＩ化学（ＣＤＩ）、実施例６を参照されたい）を使用して、マウスにおけるＯＰＡ応答の変化を評価した。
マウスにおけるＣＲＭ１９７への血清型３コンジュゲートについてのオプソニン食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。異なる化学（水性中の還元的アミノ化（ＲＡＣ／Ａｑ．）、実施例１を参照されたい、ＤＭＳＯ中の還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）、実施例２を参照されたい、ｅＴＥＣ連結グリココンジュゲート（ｅＴＥＣ）、ＷＯ２０１４／０２７３０２を参照されたい、またはＣＤＩ化学（ＣＤＩ）、実施例６を参照されたい）を使用して、マウスにおけるＯＰＡ応答の変化を評価した。
【0707】
異なる化学を用いてＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた、サイジングされた血清型３多糖（約１６０～１１００ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表９における試験したコンジュゲートの属性を参照されたい）。
【0708】
【表9】
【0709】
２５匹の６～８週齢の雌性Ｓｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウスの群を、０週目に皮下経路を介して０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートで免疫化した（２５０μＬ）。３週目に同じ用量のコンジュゲートでマウスを追加免疫し、次いで、５週目に放血させた。血清型特異的ＯＰＡを、５週目の血清試料に対して実施した。
【0710】
結果を表１０および図６に提示する。
【0711】
【表10】
【0712】
表１０および図６のデータは、すべての血清型３コンジュゲートが、マウス免疫原性モデルにおいて用量依存的ＯＰＡ力価を誘発したことを示す。
実施例８：異なる化学および異なる担体を用いたＳ．ニューモニエ血清型３（ＳＴ３またはＰｎ３）グリココンジュゲートの免疫原性の評価
３つの異なる担体タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）を用いて水性中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／Ａｑ．）またはＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）化学を用いてコンジュゲートされたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３（２つの多糖サイズ；２５０ｋＤａまたは１４０ｋＤａ）を、乳児アカゲザルにワクチン接種した。
実施例８：異なる化学および異なる担体を用いたＳ．ニューモニエ血清型３（ＳＴ３またはＰｎ３）グリココンジュゲートの免疫原性の評価
３つの異なる担体タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴまたはＳＣＰ）を用いて水性中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／Ａｑ．）またはＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）化学を用いてコンジュゲートされたストレプトコッカス・ニューモニエ血清型３（２つの多糖サイズ；２５０ｋＤａまたは１４０ｋＤａ）を、乳児アカゲザルにワクチン接種した。
【0713】
１．乳児アカゲザル研究
合計４０匹の月齢および性別を適合させた乳児アカゲザル（３～６カ月齢）を、５つの群に無作為に分けた（表１１の研究設計を参照されたい）。１０匹の乳児の３つの群に、担体タンパク質－ＣＲＭ１９７、ＳＣＰまたはＴＴのうちの１つを含有するＲＡＣ－ＤＭＳＯを用いて調製したＳ．ニューモニエ血清型３コンジュゲートを、２．２μｇ／動物（すべて約１３０ｋＤａの多糖サイズ）で、鎮静下で筋肉内（右四頭筋）にワクチン接種した。２つの対照群は、担体としてＣＲＭ１９７を用いて、かつ約２５０ｋＤａ（ｎ＝６）または約１４０ｋＤａ（ｎ＝４）のいずれかの多糖サイズを用いて、ＲＡＣ－水性を用いて調製したＳ．ニューモニエ血清型３コンジュゲート（２．２μｇ／動物）を受けた。すべての動物は、１２５μｇ／用量のＡｌＰＯ４を用いて製剤化したそれぞれのワクチンを受けた。ベースラインＳＴ３特異的血清力価を評価するためのプレブリードを、初回ワクチン接種（Ｄ０）の１週間前（ｗｋ＝－１）に収集した。２回の反復ワクチン接種を、初回ワクチン接種後８週目および１６週目に片方ずつの脚に交互に投与した。血清のための全血を、用量１後（ＰＤ１）に４および８週間で、ＰＤ２後に１、４および８週間で、ならびにＰＤ３後に１、４および１６週間で収集した。
合計４０匹の月齢および性別を適合させた乳児アカゲザル（３～６カ月齢）を、５つの群に無作為に分けた（表１１の研究設計を参照されたい）。１０匹の乳児の３つの群に、担体タンパク質－ＣＲＭ１９７、ＳＣＰまたはＴＴのうちの１つを含有するＲＡＣ－ＤＭＳＯを用いて調製したＳ．ニューモニエ血清型３コンジュゲートを、２．２μｇ／動物（すべて約１３０ｋＤａの多糖サイズ）で、鎮静下で筋肉内（右四頭筋）にワクチン接種した。２つの対照群は、担体としてＣＲＭ１９７を用いて、かつ約２５０ｋＤａ（ｎ＝６）または約１４０ｋＤａ（ｎ＝４）のいずれかの多糖サイズを用いて、ＲＡＣ－水性を用いて調製したＳ．ニューモニエ血清型３コンジュゲート（２．２μｇ／動物）を受けた。すべての動物は、１２５μｇ／用量のＡｌＰＯ４を用いて製剤化したそれぞれのワクチンを受けた。ベースラインＳＴ３特異的血清力価を評価するためのプレブリードを、初回ワクチン接種（Ｄ０）の１週間前（ｗｋ＝－１）に収集した。２回の反復ワクチン接種を、初回ワクチン接種後８週目および１６週目に片方ずつの脚に交互に投与した。血清のための全血を、用量１後（ＰＤ１）に４および８週間で、ＰＤ２後に１、４および８週間で、ならびにＰＤ３後に１、４および１６週間で収集した。
【0714】
凍結した血清を解凍し、熱不活性化し、以下に記載されるように処理して、ＳＴ３特異的ＩｇＧおよびＯＰＡ力価を決定した。
２．血清ＩｇＧの定量のための直接的Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイ
Ｓ．ニューモニエ直接的Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイ（ｄＬＩＡ）を使用して、以下の肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏ）多糖：１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆに対する血清中のＩｇＧ抗体濃度を定量した。Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｍａｇｐｌｅｘ技術（例えば、Ｐａｖｌｉａｋｏｖａ，Ｄａｎｋａら ”Ｍｓｐｈｅｒｅ ３．４（２０１８）：ｅ００１２８－１８を参照されたい）を用いて、これを行った。
２．血清ＩｇＧの定量のための直接的Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイ
Ｓ．ニューモニエ直接的Ｌｕｍｉｎｅｘイムノアッセイ（ｄＬＩＡ）を使用して、以下の肺炎球菌（ｐｎｅｕｍｏ）多糖：１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆに対する血清中のＩｇＧ抗体濃度を定量した。Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｍａｇｐｌｅｘ技術（例えば、Ｐａｖｌｉａｋｏｖａ，Ｄａｎｋａら ”Ｍｓｐｈｅｒｅ ３．４（２０１８）：ｅ００１２８－１８を参照されたい）を用いて、これを行った。
【0715】
３．オプソニン食作用アッセイ
マイクロコロニーオプソニン食作用アッセイ（ｍｃＯＰＡ）を実施した。
Ｐｎ３ ｍｃＯＰＡのために、標的細菌細胞および熱不活性化試験血清で構成される反応混合物を、環境シェーカー（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓｈａｋｅｒ）中で２５℃にて３０分間インキュベートする。次いで、分化したＨＬ－６０組織培養細胞（エフェクター細胞）および仔ウサギ補体を反応混合物に添加し、環境シェーカー中で３７℃にて４５分間インキュベートする。機能的抗Ｓ．ニューモニエ抗体力価を、試験血清を含有するｍｃＯＰＡ反応物中の細菌生存を測定することにより決定する。アッセイ混合物を、プレーティングし、一晩増殖させる。
マイクロコロニーオプソニン食作用アッセイ（ｍｃＯＰＡ）を実施した。
Ｐｎ３ ｍｃＯＰＡのために、標的細菌細胞および熱不活性化試験血清で構成される反応混合物を、環境シェーカー（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓｈａｋｅｒ）中で２５℃にて３０分間インキュベートする。次いで、分化したＨＬ－６０組織培養細胞（エフェクター細胞）および仔ウサギ補体を反応混合物に添加し、環境シェーカー中で３７℃にて４５分間インキュベートする。機能的抗Ｓ．ニューモニエ抗体力価を、試験血清を含有するｍｃＯＰＡ反応物中の細菌生存を測定することにより決定する。アッセイ混合物を、プレーティングし、一晩増殖させる。
【0716】
２日目に、食作用を受けなかった生存細菌の数を決定する。ｍｃＯＰＡ抗体力価は、血清を含有しない細菌－エフェクター細胞－補体対照ウェルと比較した場合の、細菌コロニー数の５０％低下をもたらす血清希釈率の逆数である。
【0717】
【表11】
【0718】
４．結果
４．１．ＳＣＰは、ＲＡＣ／ＤＭＳＯを用いて作製したＰｎ３コンジュゲートの中で、より高いＯＰＡおよびＩｇＧ幾何平均力価を誘導した：
乳児アカゲザルに、ＣＲＭ１９７、ＴＴ、またはＳＣＰにコンジュゲートされたＰｎ３（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）をワクチン接種した後、ＯＰＡ（図７Ａ、表１２）およびＩｇＧ（図７Ｂ、表１３）力価の両方における増加があった。興味深いことに、ＳＣＰにコンジュゲートされたＰｎ３は、ＰＤ１からＰＤ２へ、ＩｇＧ力価における２倍の増加を示した（図７Ｂ、表１３）。さらに、ＯＰＡ力価は、２回目および３回目の両方の追加免疫後、４週目において、ＳＣＰ担体およびＴＴ担体で、著しく増加した（図７Ａ、表１２）。ＳＣＰは、ワクチン接種後の時点のそれぞれにおいて、より高い平均的幾何平均力価を誘導した（図７Ａ～Ｂ、表１２～１３）。ＴＴまたはＳＣＰの両方の担体タンパク質を用いてワクチン接種した乳児アカゲザルにおいて、用量１後と用量２後との間の著しいブースト効果、および用量１後と用量３後との間の著しいブースト効果が、ＯＰＡ力価で観察された（図７Ａ、表１２）。しかし、ＳＣＰは、狭い信頼区間でＯＰＡ力価を誘導し、このことは、ＴＴによって誘導されたＯＰＡ力価と比較して均一な免疫応答が生成されたことを示した（図７Ａ、表１２）。ＣＲＭ担体は、用量３により著しいＯＰＡブースター応答を誘導した（図７Ａ、表１２）。用量２では、ＴＴ担体とＳＣＰ担体との間のＩｇＧ応答における著しい増加があった（図７Ｂ、表１３）。
４．１．ＳＣＰは、ＲＡＣ／ＤＭＳＯを用いて作製したＰｎ３コンジュゲートの中で、より高いＯＰＡおよびＩｇＧ幾何平均力価を誘導した：
乳児アカゲザルに、ＣＲＭ１９７、ＴＴ、またはＳＣＰにコンジュゲートされたＰｎ３（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）をワクチン接種した後、ＯＰＡ（図７Ａ、表１２）およびＩｇＧ（図７Ｂ、表１３）力価の両方における増加があった。興味深いことに、ＳＣＰにコンジュゲートされたＰｎ３は、ＰＤ１からＰＤ２へ、ＩｇＧ力価における２倍の増加を示した（図７Ｂ、表１３）。さらに、ＯＰＡ力価は、２回目および３回目の両方の追加免疫後、４週目において、ＳＣＰ担体およびＴＴ担体で、著しく増加した（図７Ａ、表１２）。ＳＣＰは、ワクチン接種後の時点のそれぞれにおいて、より高い平均的幾何平均力価を誘導した（図７Ａ～Ｂ、表１２～１３）。ＴＴまたはＳＣＰの両方の担体タンパク質を用いてワクチン接種した乳児アカゲザルにおいて、用量１後と用量２後との間の著しいブースト効果、および用量１後と用量３後との間の著しいブースト効果が、ＯＰＡ力価で観察された（図７Ａ、表１２）。しかし、ＳＣＰは、狭い信頼区間でＯＰＡ力価を誘導し、このことは、ＴＴによって誘導されたＯＰＡ力価と比較して均一な免疫応答が生成されたことを示した（図７Ａ、表１２）。ＣＲＭ担体は、用量３により著しいＯＰＡブースター応答を誘導した（図７Ａ、表１２）。用量２では、ＴＴ担体とＳＣＰ担体との間のＩｇＧ応答における著しい増加があった（図７Ｂ、表１３）。
【0719】
【表12】
【0720】
【表13】
【0721】
４．２．ＲＡＣ／Ａｑ．を用いた高い（２５０ｋＤａ）および低い（１４０ｋＤａ）多糖サイズを有する担体によるＯＰＡおよびＩｇＧ力価
結果を、図８Ａ～８Ｂおよび表１４～１５に示す。Ｒａｃ／Ａｑ １４０ｋＤａ群において、用量１と用量３との間に、ＯＰＡおよびＩｇＧ力価で、著しいブースト効果が観察された（図８Ａ～Ｂ）。Ｒａｃ／Ａｑ １４０ｋＤＡの用量２でも、ＩｇＧ力価が著しく改善された（図８Ｂ）。
結果を、図８Ａ～８Ｂおよび表１４～１５に示す。Ｒａｃ／Ａｑ １４０ｋＤａ群において、用量１と用量３との間に、ＯＰＡおよびＩｇＧ力価で、著しいブースト効果が観察された（図８Ａ～Ｂ）。Ｒａｃ／Ａｑ １４０ｋＤＡの用量２でも、ＩｇＧ力価が著しく改善された（図８Ｂ）。
【0722】
【表14】
【0723】
本明細書で言及されたすべての刊行物および特許出願は、本発明が属する技術分野における当業者のレベルを示すものである。すべての刊行物および特許出願は、あたかもそれぞれ個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個別に参照により組み込まれると示されたのと同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
【0724】
前記発明は、理解の明確性のために例示および実施例によりいくらか詳細に説明されてきたが、ある特定の変更および改変は、添付の特許請求の範囲内で実行され得る。
【図1】
【図2】
【図3】
【図4】
【図5】
【図6】
【図7A】
【図7B】
【図8A】
【図8B】
【配列表】
【国際調査報告】