特表 2024-521870 脂質化合物及び核酸送達におけるその応用

(19)【発行国】日本国特許庁(JP)

(12)【公報種別】公表特許公報(A)

(11)【公表番号】

(43)【公表日】2024-06-04

(54)【発明の名称】脂質化合物及び核酸送達におけるその応用

(51)【国際特許分類】

   C07C 215/24 20060101AFI20240528BHJP

   A61K 9/127 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 9/51 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 9/14 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 47/18 20170101ALI20240528BHJP

   C07C 213/04 20060101ALI20240528BHJP

   A61K 31/7088 20060101ALN20240528BHJP

   A61K 48/00 20060101ALN20240528BHJP

【ＦＩ】

C07C215/24 CSP

A61K9/127

A61K9/51

A61K9/14

A61K47/18

C07C213/04

A61K31/7088

A61K48/00

【審査請求】有

【予備審査請求】未請求

(21)【出願番号】P 2023573569

(86)(22)【出願日】2022-05-23

(85)【翻訳文提出日】2023-11-28

(86)【国際出願番号】 CN2022094532

(87)【国際公開番号】W WO2022247801

(87)【国際公開日】2022-12-01

(31)【優先権主張番号】202110592439.8

(32)【優先日】2021-05-28

(33)【優先権主張国・地域又は機関】CN

(81)【指定国・地域】

【公序良俗違反の表示】

（特許庁注：以下のものは登録商標）

１．ＴＷＥＥＮ

(71)【出願人】

【識別番号】523448853

【氏名又は名称】北京啓辰生生物科技有限公司

(74)【代理人】

【識別番号】110000338

【氏名又は名称】弁理士法人 ＨＡＲＡＫＥＮＺＯ ＷＯＲＬＤ ＰＡＴＥＮＴ ＆ ＴＲＡＤＥＭＡＲＫ

(72)【発明者】

【氏名】林耀新

(72)【発明者】

【氏名】高成強

(72)【発明者】

【氏名】栗世▲ヨウ▼

(72)【発明者】

【氏名】王浩

(72)【発明者】

【氏名】烏磊

(72)【発明者】

【氏名】辛▲クィ▼

【テーマコード（参考）】

4C076

4C084

4C086

4H006

【Ｆターム（参考）】

4C076AA19

4C076AA31

4C076AA65

4C076AA95

4C076DD50

4C076FF70

4C084AA13

4C084MA24

4C084MA38

4C084MA43

4C084NA13

4C086AA01

4C086AA10

4C086EA16

4C086MA01

4C086MA04

4C086MA24

4C086MA38

4C086MA43

4C086NA13

4H006AA01

4H006AA02

4H006AA03

4H006AB20

4H006BN10

4H006BU32

(57)【要約】

隣接するシス二重結合構造を有するイオン化可能な脂質化合物とその調製方法、及び活性治療剤（例えば核酸）送達におけるその応用である。イオン化可能な脂質化合物は比較的に高い活性物質カプセル化率、及び比較的に良い細胞トランスフェクション率又はインビボトランスフェクション率を提供することができ、特に中実構造のナノ粒子の調製に好適である。

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉで表される構造を有する化合物。

【化1】

（ここで、Ｑは置換又は無置換の直鎖Ｃ２～２０アルキレン基であり、前記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、
或いは、Ｑは置換又は無置換の飽和又は不飽和の４～６員環であり、前記４～６員環の環原子は、任意に独立してＯ、Ｓ、Ｎから選ばれる１つ又は１つ以上のヘテロ原子を含み、前記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～２０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～２０アルコキシ基、直鎖又は分岐鎖のＣ２～２０アルケニル基、直鎖又は分岐鎖のＣ２～２０アルキニル基、－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５、

【化2】

から選ばれ、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４は同一または異なって、それぞれ独立して水素、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ１～３０アルキル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルケニル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルキニル基又は－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５から選ばれ、前記アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、前記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基から選ばれ、
その条件としては、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４のうちの少なくとも１つが

【化3】

であり、
Ｒ_５は水素、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ１～３０アルキル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルケニル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルキニル基から選ばれ、前記アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、前記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基から選ばれ、
Ｒ_６は水素、Ｃ１～３アルキル基、Ｃ１～３アルコキシ基、－ＯＨから選ばれ、
ｎは１～８の整数から選ばれ、ｍは０～８の整数から選ばれ、ｎとｍは互いに独立して同一または異なって、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４のうちの少なくとも２つが

【化4】

である場合、前記基における各ｎと各ｍは互いに独立しており、同一でも異なってもよい。）

【請求項2】

Ｑは

【化5】

であり、
ここで、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して置換又は無置換の直鎖Ｃ１～１０アルキレン基から選ばれ、前記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、Ｒ_７は、水素、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１～２０アルキル基、直鎖又は分岐鎖Ｃ２～２０アルケニル基、直鎖又は分岐鎖Ｃ２～２０アルキニル基、又は－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５、又は

【化6】

であり、前記置換に用いられる置換基は、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基である、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｑは

【化7】

であり、
ここで、ｘとｙは、同一または異なって、１～８の整数から独立的に選ばれ、
好ましくは、ｘとｙが同一または異なって、１～３の整数から選ばれ、
好ましくは、Ｒ_７が直鎖又は分岐鎖Ｃ１～４アルキル基である、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_６は、－ＯＨであることを特徴とする請求項１～３の何れか一項に記載の化合物。

【請求項5】

ｎは、４～８の整数から選ばれ、ｍは、４～８の整数から選ばれることを特徴とする請求項１～４の何れか一項に記載の化合物。

【請求項6】

下記の式Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤから選ばれる：

【化8】

ここで、各ｎ_１は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_１は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_１は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_１は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_１が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_１が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_１が互いに同じであり、各ｍ_１が互いに同じであり、

【化9】

ここで、各ｎ_２は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_２は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_２は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_２は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_２が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_２が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_２が互いに同じであり、各ｍ_２が互いに同じであり、

【化10】

ここで、各ｎ_３は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_３は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_３は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_３は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_３が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_３が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_３が互いに同じであり、各ｍ_３が互いに同じであり、

【化11】

ここで、各ｎ_４は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_４は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_４は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_４は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_４が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_４が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_４が互いに同じであり、各ｍ_４が互いに同じであり、好ましくは、

【化12】

である、
請求項１～５の何れか一項に記載の化合物。

【請求項7】

生物活性物質送達システムの調製における請求項１～６の何れかに記載の化合物の応用であって、好ましくは、前記送達システムが微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルである、応用。

【請求項8】

請求項１～６の何れかに記載の化合物を含む生物活性物質送達システムであって、好ましくは、前記送達システムが微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルであることを特徴とする生物活性物質送達システム。

【請求項9】

請求項８に記載の生物活性物質送達システムを含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項10】

請求項１～６の何れかに記載の化合物の調製方法であって、

【化13】

であり、
ここで、１）還元において、還元剤の存在下で化合物Ａ１のカルボキシ基をヒドロキシ基に還元して化合物Ａ２を得る、２）酸化において、酸化剤の存在下で化合物Ａ２のヒドロキシ基をアルデヒド基に酸化して化合物Ａ３を得る、３）ハロゲン化－還元において、まず酸性条件で化合物Ａ３のアルデヒドα－水素とハロゲン化試薬とをハロゲン化反応させて中間体であるα－ハロゲン化アルデヒドを得た後、還元剤の存在下でα－ハロゲン化アルデヒドのアルデヒド基をヒドロキシ基に還元して化合物Ａ４を得る、４）エポキシ化において、化合物Ａ４を塩基の存在下で分子内の求核置換反応を行ってエポキシ化合物Ａ５を得る、５）開環反応において、化合物Ａ５をアミンと開環反応させて最終化合物を得ることを特徴とする調製方法。

【発明の詳細な説明】

【発明の詳細な説明】

【0001】

本願は、２０２１年５月２８日に中国国家知識産権局に提出された、特許出願番号が２０２１１０５９２４３９．８であり、発明名称が「化合物及び核酸送達におけるその応用」である先行出願の優先権を主張する。当該先行出願の全文は、引用により本願に組み込まれる。
［技術分野］
本発明は医薬化合物の技術分野に属し、具体的にはイオン化可能な脂質化合物、その調製方法、及び活性治療剤（例えば核酸）の送達におけるその応用に関する。
［背景技術］
核酸は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、リボザイム、プラスミド及び免疫刺激性核酸を含み、様々なメカニズムで機能する。ｍＲＮＡを例にすると、ｍＲＮＡは遺伝情報をＤＮＡから細胞質のリボソームに輸送してタンパク質の翻訳を行うＲＮＡであり、それは細胞核に入る必要がないため、遺伝子変異のリスクをもたらすことがなく、特定の細胞産物の発現を実現するために使用することができる。これらの核酸はタンパク質又は酵素の欠陥に関連する疾患の治療に有用である。しかしながら、治療環境において核酸はいろいろな課題を直面する。例えば、ｍＲＮＡは一本鎖構造で非常に不安定であり、体内に入るとすぐにヌクレアーゼによって分解される。また、ｍＲＮＡは、比較的に大きい分子量を有し、且つ大量に負に帯電しているため、負に帯電した細胞膜を通して標的細胞に入ることが困難である。従って、如何にｍＲＮＡを細胞に効果的に送達するかは、そのインビボでの応用を実現するための技術的なキーポイントである。類似の問題は、様々な治療用核酸にも存在している。

【0002】

遺伝子治療において、イオン化可能な脂質化合物は、様々な疾患を治療する核酸の優れた送達ベクターであることが既に証明された。上記イオン化可能な脂質化合物は、アミン基が適当な酸性条件でプロトン化して正に帯電したヘッド基を形成することができ、そのテールが疎水性炭素鎖からなり、帯電した部分が負に帯電したＲＮＡとの静電的な結合に用いられると共に、疎水性テールが、それが親油性粒子に自己組織化することを可能にする。イオン化可能な脂質化合物がＤＳＰＣ（ジステアロイルホスファチジルコリン）又はＤＯＰＥ（ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン）、コレステロール（ＣＨＯＬ）及びＰＥＧ化脂質［ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００（１，２－ジミリスチル－ｒａｃ－グリセリル－３－メトキシポリエチレングリコール２０００）又はＤＳＰＥ－ＰＥＧ２０００（ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン－ポリエチレングリコール２０００）］のような他の３種類又は４種類の脂質と組み合わせて自己組織化して形成した脂質ナノ粒子（ｌｉｐｉｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ、ＬＮＰ）は、核酸の送達に用いられ、ヌクレアーゼによって分解されないように核酸を保護すると共に、細胞への取り込みを促進することができる。現在、イオン化可能な脂質化合物は、核酸送達において多大な進歩を遂げたが、依然として送達効率が低いという問題が存在しており、これも業界の発展を制約するボトルネック問題の一つである。
［発明の概要］
本発明は、生物活性分子（例えば、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍｉｃＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチドなど）の送達に用いることができる新規なイオン化可能な脂質化合物を提供する。アミン基構造がプロトン化して正に帯電したカチオン基を形成できることに鑑み、本発明に係るイオン化可能な脂質化合物は、特に、ＤＮＡ、ＲＮＡ又は他のヌクレオチド分子のような負に帯電した活性物質の送達に適用される。

【0003】

本発明は、上記イオン化可能な脂質化合物を含む生物活性物質送達システムを更に提供し、上記送達システムは、微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルであってもよい。本発明の一実施形態において、上記送達システムは脂質ナノ粒子である。このような脂質ナノ粒子は、生物活性物質（例えば、ｍＲＮＡ）を細胞、組織又は器官に効率よく送達し、生物活性物質に対する効率的な制御を実現することができる。本発明において、上記イオン化可能な脂質化合物は、標的細胞又は個体に送達する生物活性物質や更に含まれる他の物質（例えば、その他の陰イオン、陽イオン、又はイオン化可能な脂質化合物、合成又は天然のポリマー、界面活性剤、コレステロール、炭水化物、タンパク質、リン脂質など）と組み合わせて微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルを形成する。上記生物活性物質は気体、液体又は固体の形態であってもよく、ポリヌクレオチド、タンパク質、ペプチド又は低分子であってもよい。本発明において、上記送達システムは、さらに任意に医薬賦形剤と組み合わせて医薬組成物を形成することができる。

【0004】

本発明は、これらの新規なイオン化可能な脂質化合物の合成方法を更に提供する。

【0005】

本発明は、生物活性物質送達システムの調製における上記新規なイオン化可能な脂質化合物の応用を更に提供する。上記送達システムは、微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルであってもよい。本発明の一実施形態において、上記送達システムは脂質ナノ粒子である。

【0006】

本発明に係るイオン化可能な脂質化合物は、式Ｉで表される構造

【0007】

【化1】

【0008】

を有する。

【0009】

（ここで、Ｑは置換又は無置換の直鎖Ｃ２～２０アルキレン基であり、上記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、独立して任意にＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、或いは、Ｑは置換又は無置換の、飽和又は不飽和の４～６員環であり、上記４～６員環の環原子は、独立して任意にＯ、Ｓ、Ｎから独立的に選ばれる１つ又は１つ以上のヘテロ原子を含み、上記置換に用いられる置換基は、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～２０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～２０アルコキシ基、直鎖又は分岐鎖のＣ２～２０アルケニル基、直鎖又は分岐鎖のＣ２～２０アルキニル基、－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５、

【0010】

【化2】

【0011】

から選ばれ、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４は同一または異なって、それぞれ独立して水素、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ１～３０アルキル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルケニル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルキニル基、－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５から選ばれ、上記アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、独立して任意にＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、上記置換に用いられる置換基は、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基から選ばれ、
その条件としては、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４のうちの少なくとも１つが

【0012】

【化3】

【0013】

であり、
Ｒ_５は水素、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ１～３０アルキル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルケニル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルキニル基から選ばれ、上記アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、独立して任意にＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、上記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基から選ばれ、
Ｒ_６は水素、Ｃ１～３アルキル基、Ｃ１～３アルコキシ基、－ＯＨから選ばれ、
ｎは１～８の整数から選ばれ、ｍは０～８の整数から選ばれ、ｎとｍは互いに独立して同一または異なって、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４のうちの少なくとも２つが

【0014】

【化4】

【0015】

である場合、上記基における各ｎと各ｍは、互いに独立しており、同一でも異なってもよい。）
本発明の好ましい実施形態において、Ｑは、置換又は無置換の直鎖Ｃ２～２０アルキレン基であり、上記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、独立して任意にＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、
好ましくは、Ｑは

【0016】

【化5】

【0017】

（ここで、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して置換又は無置換の直鎖Ｃ１～１０アルキレン基から選ばれ、上記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、独立して任意にＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、Ｒ_７は、水素、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１～２０アルキル基、直鎖又は分岐鎖Ｃ２～２０アルケニル基、直鎖又は分岐鎖Ｃ２～２０アルキニル基、又は－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５、又は

【0018】

【化6】

【0019】

であり、上記置換に用いられる置換基は、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基である。）であり、
好ましくは、Ｑは

【0020】

【化7】

【0021】

（ここで、ｘとｙは、同一または異なって、独立して１～８の整数から選ばれ、Ｒ_７は、上記と同様に定義され、好ましくは、ｘ又はｙは、同一または異なって、１～３の整数から選ばれ、例えば、１、２又は３であり、好ましくは、Ｒ_７は、直鎖又は分岐鎖のＣ１～４アルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、ｎ－ブチル基などである。）である。

【0022】

本発明のいくつかの実施例において、上記飽和又は不飽和の４～６員環は、ピペラジニル基又はシクロヘキシル基である。

【0023】

本発明の好ましい実施形態において、Ｒ_６は－ＯＨである。

【0024】

本発明の好ましい実施形態において、ｎは４～８の整数から選ばれ、ｍは４～８の整数から選ばれる。

【0025】

本発明の好ましい実施形態において、上記式Ｉの化合物は、下記の式Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤである。

【0026】

【化8】

【0027】

（ここで、各ｎ_１は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_１は１～８の整数から選ばれ、各ｍ_１は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_１は０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_１が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_１が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_１が互いに同じであり、各ｍ_１が互いに同じである。）

【0028】

【化9】

【0029】

（ここで、各ｎ_２は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_２は１～８の整数から選ばれ、各ｍ_２は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_２は０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_２が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_２が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_２が互いに同じであり、各ｍ_２が互いに同じである。）

【0030】

【化10】

【0031】

（ここで、各ｎ_３は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_３は１～８の整数から選ばれ、各ｍ_３は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_３は０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_３が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_３が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_３が互いに同じであり、各ｍ_３が互いに同じである。）

【0032】

【化11】

【0033】

（ここで、各ｎ_４は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_４は１～８の整数から選ばれ、各ｍ_４は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_４は０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_４が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_４が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_４が互いに同じであり、各ｍ_４が互いに同じである。）
本発明のいくつかの具体的な実施形態において、上記式Ｉの化合物は、表１に示す以下の化合物から選ばれる。

【0034】

【表1】

【0035】

本発明に係るイオン化可能な脂質化合物は、本分野で既存の方法で合成することができ、例えば、１当量又は１当量以上のアミンと１当量又は１当量以上のエポキシ基末端化合物とを適切な条件で反応させて形成する。イオン化可能な脂質化合物の合成は、溶媒有り又は無しの場合に行い、且つ上記合成は２５～１００℃の範囲内の比較的に高い温度で行うことができる。任意に、得られたイオン化可能な脂質化合物を精製することができる。例えば、イオン化可能な脂質化合物の混合物を精製して特定のイオン化可能な脂質化合物を得ることができる。或いは、混合物を精製して特定の立体異性体又は位置異性体を得ることができる。上記エポキシドは、市販から入手できるか、又は合成して調製されてもよい。

【0036】

ある実施例において、アミンの全てのアミノ基は、エポキシ末端化合物と完全に反応して第３級アミンを形成する。他の実施例において、アミンのアミノ基は、すべてエポキシ末端化合物と完全に反応するわけではないため、イオン化可能な脂質化合物に第１級アミン又は第２級アミンが生成される。これらの第１級アミン又は第２級アミンをそのままにするか、又は例えば異なるエポキシ末端化合物などの別の求電子試薬と反応させてもよい。過剰のアミンをエポキシ末端化合物と反応させると、様々なテール数を有する複数種の異なるイオン化可能な脂質化合物が生成されることは、当業者に明らかである。例えば、ジアミン又はポリアミンは、分子の各アミノ基にテールとして１つ、２つ、３つ又は４つのエポキシ基から誘導された化合物を含んで第１級アミン、第２級アミン及び第３級アミンを生成することができる。ある実施例において、同じタイプの２種類のエポキシ末端化合物を使用する。他の実施例において、２種類又は２種類以上の異なるエポキシ末端化合物を使用する。

【0037】

本発明のいくつかの実施形態において、本発明のイオン化可能な脂質化合物は、下記のような一般的な調製方法で調製することができる。

【0038】

【化12】

【0039】

ステップ１：還元
還元剤の存在下で化合物Ａ１のカルボキシ基をヒドロキシ基に還元させて化合物Ａ２を得る。還元剤の実例としては、水素化アルミニウムリチウム、水素化ジイソブチルアルミニウムなどを含むが、これらに限定されない。反応に用いられる溶媒の実例としては、エーテル系（例えば、エチルエーテル、テトラヒドロフラン及びジオキサンなど）、ハロゲン化炭化水素（例えば、クロロホルム、ジクロロメタン及びジクロロエタンなど）、炭化水素系（例えば、ｎ－ペンタン、ｎ－ヘキサン、ベンゼン及びトルエンなど）、及びこれらの溶媒の２種又は２種以上からなる混合溶媒を含むが、これらに限定されない。

【0040】

ステップ２：酸化
酸化剤の存在下で化合物Ａ２のヒドロキシ基をアルデヒド基に酸化して化合物Ａ３を得る。酸化剤の実例としては、２－ヨードキシ安息香酸（ＩＢＸ）、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）、ジクロロクロム酸ピリジニウム塩（ＰＤＣ）、デス・マーチン酸化剤、二酸化マンガンなどを含むが、これらに限定されない。反応に用いられる溶媒の実例としては、ハロゲン化炭化水素（例えばクロロホルム、ジクロロメタン及びジクロロエタンなど）、炭化水素系（例えばｎ－ペンタン、ｎ－ヘキサン、ベンゼン及びトルエンなど）、ニトリル系（例えばアセトニトリルなど）、及びこれらの溶媒の２種又は２種以上からなる混合溶媒を含むが、これらに限定されない。

【0041】

ステップ３：ハロゲン化－還元
まず、酸性条件で化合物Ａ３のアルデヒドのα－水素をハロゲン化試薬とハロゲン化反応させて中間体であるα－ハロゲン化アルデヒドを得、次に還元剤の存在下でα－ハロゲン化アルデヒドのアルデヒド基をヒドロキシ基に還元して化合物Ａ４を得る。酸性条件を提供する実例としては、ＤＬ－プロリンを含むが、これらに限定されない。ハロゲン化試薬の実例としては、Ｎ－クロロスクシンイミド（ＮＣＳ）及びＮ－ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）を含むが、これらに限定されない。還元剤の実例としては、水素化ホウ素ナトリウム、シアノ水素化ホウ素ナトリウム及びトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを含むが、これらに限定されない。

【0042】

ステップ４：エポキシ化
化合物Ａ４を塩基の存在下で分子内の求核置換反応を行ってエポキシ化合物Ａ５を得る。塩基の実例としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム及び水素化ナトリウムのようなアルカリ金属の水酸化物又は水素化物を含むが、これらに限定されない。反応に用いられる溶媒の実例としては、ジオキサンと水の混合物を含むが、これに限定されない。

【0043】

ステップ５：開環反応
化合物Ａ５をアミン（例えばＮ，Ｎ－ビス（２－アミノエチル）メチルアミン）と開環反応させて最終化合物を得る。反応に用いられる溶媒の実例としては、エタノール、メタノール、イソプロパノール、テトラヒドロフラン、トリクロロメタン、ヘキサン、トルエン、エチルエーテルなどを含むが、これらに限定されない。

【0044】

上記調製方法における原料Ａ１は、市販から入手されてもよく、汎用の方法で合成されてもよい。

【0045】

本発明に係るイオン化可能な脂質は、分子構造に隣接する２つのシス二重結合が含まれるため、その後送達システムに応用されて活性物質（例えば核酸とｍＲＮＡ）をカプセルする場合、比較的に高いカプセル化率及び比較的に良い細胞トランスフェクション率を備え、また、脂質ナノ粒子を調製する場合、得られた脂質ナノ粒子の粒子径は、より均一になる。本願に係るイオン化可能な脂質化合物は、特に中実構造のナノ粒子の調製に好適である。

【0046】

本発明に係るイオン化可能な脂質化合物は、薬物送達システムに用いられる場合、ポリヌクレオチド、低分子、タンパク質、ペプチド、金属などを含む薬剤をカプセルすることができる。上記イオン化可能な脂質化合物は、薬物送達システムの調製に適するいくつかの特性、即ち、１）脂質により不安定な薬剤を複合及び「保護」する能力、２）インビボでのｐＨ値を緩衝する能力、３）「プロトンスポンジ」として機能すると共にインビボでの溶解を引き起こす能力、及び４）負に帯電した活性物質における電荷を中和する能力を備える。

【0047】

上記薬物送達システムは粒子形態であってもよい。ある実施例において、粒子直径は１ μｍから１０００ μｍの範囲内である。ある実施例において、粒子直径は１ ｎｍから１０００ ｎｍの範囲内である。例えば、粒子直径は１ μｍから１００ μｍの範囲内であり、又は１ μｍから１０ μｍの範囲内であり、又は１０ μｍから１００ μｍの範囲内であり、又は２０ ｎｍから８００ ｎｍの範囲内であり、又は５０ ｎｍから５００ ｎｍの範囲内であり、又は８０ ｎｍから２００ ｎｍの範囲内であり、又は１ ｎｍから１００ ｎｍの範囲内であり、又は１ ｎｍから１０ ｎｍの範囲内である。粒子の粒子径範囲が１ ｎｍから１０００ ｎｍの範囲内である場合、本分野において一般的に記載されたナノ粒子である。上記粒子は、当該分野で既知の任意の方法で調製することができる。これらの方法は、噴霧乾燥、単一及び二重エマルション溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、ナノ沈殿、マイクロフルイディクス、簡単と複雑な凝集及び当業者によく知られている他の方法を含む（ただし、これらに限定されない）。

【0048】

また、上記薬物送達システムは、マイクロバブル、リポソーム又は脂質ナノ粒子脂質ナノ粒子であってもよく、これらは薬剤の送達に好適である。

【0049】

本発明に係るイオン化可能な脂質化合物により形成された送達システムを介して送達することができる活性物質は、治療剤、診断剤又は予防剤であり得る。活性物質の特性に応じて、低分子化合物、核酸、タンパク質、ペプチド、金属、同位体標識化合物、ワクチンなどに属するものであってもよい。

【0050】

本発明に係るイオン化可能な脂質化合物により形成される送達システムは、標的化分子を修飾して特定の細胞、組織又は器官を標的できる標的化剤にすることもできる。標的化分子は、送達システム全体に含まれてもよく、又はその表面のみに位置してもよい。標的化分子はタンパク質、ペプチド、糖タンパク質、脂質、低分子、核酸などであってもよく、その実例としては、抗体、抗体断片、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、トランスフェリン（ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ）、アシアロ糖タンパク質（ａｓｉａｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）、受容体リガンド、シアル酸、アプタマーなどを含む（ただし、これらに限定されない）。

【0051】

本発明に係るイオン化可能な脂質化合物によって形成される送達システムは、１種又は1種以上の医薬賦形剤と組み合わせて動物（ヒトを含む）への投与に適する医薬組成物を形成することができる。「医薬賦形剤」という用語は、任意の種類の無毒性・不活性の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤などを意味し、乳糖、トレハロース、グルコースとスクロースなどの糖；コーンスターチと馬鈴薯澱粉などの澱粉；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースと酢酸セルロースなどのセルロース及びその誘導体；ゼラチン；タルク；落花生油、綿実油、サフラワー油、オリーブ油、コーン油と大豆油などの油；プロピレングリコールなどのジオール；オレイン酸エチルとラウリン酸エチルなどのエステル類；ツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）などの界面活性剤；リン酸緩衝液、酢酸塩緩衝液とクエン酸塩緩衝液などの緩衝剤；着色剤；甘味剤；調味剤及び芳香剤；防腐剤及び酸化防止剤などを含むが、これらに限定されない。

【0052】

本発明の医薬組成物は、経口、経直腸、静脈内、筋肉注射、膣内、鼻腔内、腹腔内、経頬又は経口若しくは経鼻噴霧などの形態でヒト及び／又は動物に投与することができる。

【0053】

本明細書において使用されるように、「アルキル基」という用語は、１～３０個の炭素原子を含む炭化水素部分から１つの水素原子を除去してなる飽和炭化水素基を意味する。アルキル基の実例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ－ヘキシル基、ｎ－ヘプチル基、ｎ－オクチル基、ｎ－デシル基、ｎ－ウンデシル基及びｎ－ドデシル基を含む（ただし、これらに限定されない）。

【0054】

「アルケニル基」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する炭化水素部分から１つの水素原子を除去してなる１価の基を表す。アルケニル基は例えば、ビニル基、プロペニル基、ブテニル基、１－メチル－２－ブテン－１－イルなどを含む。

【0055】

「アルキニル基」という用語は、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する炭化水素から１つの水素原子を除去してなる１価の基を指す。代表的なアルキニル基は、エチニル基、２－プロピニル（プロパルギル基）、１－プロピニルなどを含む。

【0056】

「アルコキシ基」という用語は、上記に定義されたアルキル基が酸素原子を介して母体分子に結合されたものを指す。アルコキシ基の実例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ネオペンチルオキシ基及びｎ－ヘキシルオキシ基を含む（ただし、これらに限定されない）。

【0057】

「ハロゲン基」及び「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選ばれる原子を指す。

【0058】

「飽和又は不飽和の４～６員環」という用語は、４～６個の環原子を有する環を指し、上記環原子はＣ、Ｎ、Ｓ、Ｏであってもよく、その実例としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などの４～６員飽和のシクロアルキル基、フェニル基などの４～６員アリール基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、ピペラジニル基、モルホリニル基などの４～６員複素環基、トリアゾリル基、アゾリル基、イソアゾリル基、チアゾリル基などの４～６員ヘテロアリール基を含むが、これらに限定されない。本発明の幾つかの実施例において、上記飽和又は不飽和の４～６員環は、ピペラジニル基、シクロヘキシル基が好ましい。

【0059】

「置換」（「任意に」という用語の有無を問わず）及び「置換基」という用語は、全ての原子の価数を維持する条件で１つの官能基を別の官能基に変化する能力を指す。何れかの特定の構造における１つ以上の位置が、指定された群から選択される１つ以上の置換基で置換される場合、上記置換基はそれぞれの位置において同一でも異なってもよい。
［図面の簡単な説明］
［図１］イオン化可能な脂質ＩＩ－３７のｐＫａの曲線である。

【0060】

［図２］イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により形成されたｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率である。

【0061】

［図３］イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により形成されたｐＤＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率である。

【0062】

［図４］イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により形成されたｓｉＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率である。

【0063】

［図５］イオン化可能な脂質ＩＩ－３７及び市販の分子ＭＣ３によりそれぞれ形成されたｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率の比較である。

【0064】

［図６］担持されたｍＲＮＡをＣｙ５で標識し、それぞれイオン化可能な脂質ＩＩ－３７及び市販の分子ＭＣ３により、ｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰを形成し、上記ＬＮＰによりｍＲＮＡを細胞内に送達する効率を蛍光染色で観察したことである。

【0065】

［図７］イオン化可能な脂質ＩＩ－３７及びＣ１４－１１３によりそれぞれ形成されたｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率の比較である。

【0066】

［図８］ＭＴＴ法によるＩＩ－３７－ＬＮＰ及びＣ１４－１１３－ＬＮＰの細胞毒性測定である。
［発明を実施するための形態］
以下、具体的な実施例に合わせて、本発明の技術案を更に詳しく説明する。下記の実施例は、単に本発明を例示的に説明・解釈するものであり、本発明の請求の範囲を限定するものとして解釈されるべきではないことを理解すべきである。本発明の上記内容に基づいて実現される技術は、何れも本発明の請求の範囲内に含まれる。

【0067】

特に説明のない限り、下記の実施例に使用される原料及び試薬は何れも市販品であり、又は既知の方法によって調製することができる。

【0068】

実施例１ イオン化可能な脂質ＩＩ－３７の合成

【0069】

【化13】

【0070】

リノレニルアルコール（ａ２）の合成：０℃でテトラヒドロフラン９５０ ｍＬにＬｉＡｌＨ_４（７．２０ ｇ）、リノール酸（５０ ｇ、ａ１）を加えた後、混合物を２５℃で２ ｈ撹拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により反応完了を示した後、反応液に水（７．２ ｍＬ）、ＮａＯＨ水溶液（７．２ ｍＬ、質量分率１５％）及び水（２１．６ ｍＬ）を順次加えてクエンチし、そして適量のＮａ_２ＳＯ_４を加えて１５分間撹拌してからブフナーロートにより濾過し、且つ酢酸エチルを用いて濾過ケーキを洗浄し、濾液を収集して蒸発濃縮し、目的生成物であるリノレニルアルコール（ａ２）４７．４ ｇを得た。

【0071】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ５．２７－５．４４ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．６３ （ｔ， Ｊ ＝ ６．６３ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．７７ （ｔ， Ｊ ＝ ６．４４ Ｈｚ， ２ Ｈ）， １．９７－２．１２ （ｍ， ４ Ｈ）， １．５７－１．６３ （ｍ， １ Ｈ）， １．２０－１．４６ （ｍ， １８ Ｈ）， ０．８３－０．９５ （ｍ， ３ Ｈ）
（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエナール（ａ３）の合成：室温でアセトニトリル１７０ ｍＬにリノレニルアルコール（２５．０ ｇ、ａ２）及び２－ヨードキシ安息香酸（３９．４ ｇ）を加えた後、混合物を８５℃で４ ｈ撹拌した。反応液をブフナーロートにより濾過し、且つジクロロメタンを用いて濾過ケーキを洗浄し、濾液を収集して蒸発濃縮し、目的生成物である（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエナール（ａ３）２４．０ ｇを得た。

【0072】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ９．７６ （ｔ， Ｊ ＝ １．７６ Ｈｚ， １ Ｈ）， ５．２５－５．４３ （ｍ， ４ Ｈ）， ２．７６ （ｔ， Ｊ ＝ ６．１７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．４１ （ｔｄ， Ｊ ＝ ７．３３， １．８７ Ｈｚ， ２ Ｈ）， ２．０４ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８４ Ｈｚ， ４ Ｈ）， １．５６－１．６８ （ｍ， ２ Ｈ）， １．２２－１．３６ （ｍ， １４ Ｈ）， ０．８８ （ｔ， Ｊ ＝ ６．７３ Ｈｚ， ３ Ｈ）
（９Ｚ，１２Ｚ）－２－クロロ－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－オール（ａ４）の合成：０℃でアセトニトリル２４６ ｍＬに（９Ｚ，１２Ｚ）－オクタデカ－９，１２－ジエナール（４３．０ ｇ、ａ３）、ＤＬ－プロリン（５．６２ ｇ）及びＮ－クロロスクシンイミドを加えた後、０℃で２ ｈ撹拌した。反応完了後、無水エタノール（２４６ ｍＬ）を用いて反応液を希釈し、更に水素化ホウ素ナトリウム（８．８ ｇ）を加えた後、０℃で４ ｈ撹拌した。反応混合物に水（１２０ ｍＬ）を加えてクエンチし、且つメチル－ｔｅｒｔ－ブチルエーテルを用いて抽出し、有機相を合わせてから飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後濾過し、蒸発濃縮し、目的生成物である（９Ｚ，１２Ｚ）－２－クロロ－オクタデカ－９，１２－ジエン－１－オール（ａ４、４６ ｇ）を得、そのまま次のステップに用いた。

【0073】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ５．２５ － ５．５１ （ｍ， ４ Ｈ）， ３．９７－４．０７ （ｍ， １ Ｈ）， ３．７９ （ｄｄ， Ｊ ＝ １２．０１， ３．６３ Ｈｚ， １ Ｈ）， ３．５９－３．７０ （ｍ， １ Ｈ）， ２．６７－２．９０ （ｍ， ２ Ｈ）， １．９６－２．１５ （ｍ， ５ Ｈ）， １．６４－１．８２ （ｍ， １ Ｈ）， １．２０－１．４９ （ｍ， １５ Ｈ）， ０．８９ （ｂｒ ｔ， Ｊ ＝ ６．７５ Ｈｚ， ３ Ｈ）
２－［（７Ｚ，１０Ｚ）－ヘキサデカン－７，１０－ジエン］オキシラン（ａ５）の合成：室温で１，４－ジオキサン４５０ ｍＬに（９Ｚ，１２Ｚ）－２－クロロオクタデカ－９，１２－ジエン－１－オール（４５ ｇ、ａ４）及び水酸化ナトリウム水溶液（水酸化ナトリウム１２０ ｇを水５８５ ｍＬに溶解）を加え、滴下完了後に混合物を３５ ℃で２ ｈ撹拌した。ＴＬＣにより反応完了を示した後、分液ロートにより反応液を分離し、飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した後濾過し、蒸発濃縮した後、高速カラムクロマトグラフィーによって石油エーテル／酢酸エチルで溶出して残留物を精製し、目的生成物である２－［（７Ｚ，１０Ｚ）－ヘキサデカン－７，１０－ジエン］オキシラン（ａ５）２９．１１ ｇを得た。

【0074】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ５．２７－５．４６ （ｍ， ４ Ｈ）， ２．８７－２．９８ （ｍ， １ Ｈ）， ２．７０－２．８５ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．４６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．００， ２．７５ Ｈｚ， １ Ｈ）， １．９４－２．２１ （ｍ， ４ Ｈ）， １．２４ －１．５８ （ｍ， １７ Ｈ）， ０．７８ － １．００ （ｍ， ３ Ｈ）
ＩＩ－３７の合成：室温でエタノール１０ ｍＬに２－［（７Ｚ，１０Ｚ）－ヘキサデカン－７，１０－ジエン］オキシラン（５ ｇ）及びＮ，Ｎ－ビス（２－アミノエチル）メチルアミン（７３９ ｍｇ）を加えた後、混合物を９０℃で３６ ｈ撹拌した。反応液を蒸発濃縮した後、高速カラムクロマトグラフィーによりジクロロメタン／メタノールで溶出して残留物を精製し、粗生成物ＩＩ－３７（４ ｇ）を得た。再び高速カラムクロマトグラフィーによりジクロロメタン／メタノールで目的生成物を精製し、ＩＩ－３７（２．２ ｇ）を得た。

【0075】

^１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ_３）： δ ５．２７－５．４４ （ｍ， １２ Ｈ）， ３．４８－３．７９ （ｍ， ３ Ｈ）， ２．６３－３．００ （ｍ， １２ Ｈ）， ２．１６－２．６１ （ｍ， １２ Ｈ）， ２．０５ （ｑ， Ｊ ＝ ６．８０ Ｈｚ， １２ Ｈ）， １．１８－１．５７ （ｍ， ５１ Ｈ）， ０．８９ （ｔ， Ｊ ＝ ６．８８ Ｈｚ， ９ Ｈ）
ＥＳＩ－ＭＳ：ｍ／ｚ ９１０．８ ［Ｍ＋Ｈ］^＋， ９１１．８ ［Ｍ＋２Ｈ］^＋， ９１２．８ ［Ｍ＋３Ｈ］^＋
実施例２ イオン化可能な脂質ＩＩ－３７の解離定数（ｐＫａ）
イオン化可能な脂質は、核酸への結合及び細胞内での核酸分子の放出を許可することという２つの主な役割を有する。脂質のｐＫａは重要な要素であり、なぜなら、脂質が核酸に結合するために低いｐＨ値で正に帯電する必要があるが、形成されたＬＮＰに毒性をもたせないのは中性ｐＨ値で電荷を持たないことが要求されているからである。ＴＮＳ染料結合試験で測定したところ、イオン化可能な脂質ＩＩ－３７のｐＫａは６．８１であり、結果を、図１に示した。

【0076】

実施例３ ＩＩ－３７によりｍＲＮＡをカプセルして脂質ナノ粒子を調製した
イオン化可能な脂質ＩＩ－３７、ＤＳＰＣ、ＣＨＯＬ及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を、それぞれモル比３５％：１５％：４８．５％：１．５％で配合して有機相としてエタノール溶液を調製し、水相としてＬｕｃｆｅｒａｓｅ ｍＲＮＡ（ＬｕｃＲＮＡ）をｐＨ＝４の水溶液に溶解した。ナノメディシン製造装置（カナダＰＮＩ社、Ｉｇｎｉｔｅ型番）でマイクロフルイディクス技術により水相と有機相を体積比３：１でナノ粒子の懸濁液に調製した。調製後、限外濾過して濃縮を行って最終的にＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰ脂質ナノ粒子を得、２～８℃で保存して置いた。

【0077】

Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｐｒｏナノ粒子サイズ電位分析装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）でＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰ粒子径及びＺｅｔａ電位を表現した。Ｆ－２８０蛍光分光光度計（天津港東）によりＲｉｂｏｇｒｅｅｎの方法でＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰのカプセル化率を検出した。多機能マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、型番ＳＬＸＦＡＴＳ）によりルシフェラーゼレポーター遺伝子法で調製されたＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰ ＣＨＯ細胞のトランスフェクション率を検出した。ＬｕｃＲＮＡをインビトロで転写する方法としては、ＣＨＯ－Ｋ１細胞を、細胞密度２．５×１０^５個の細胞／ｍＬでプレートに播種し、細胞コンフルエンスが３０％～５０％になるとトランスフェクションした。各ウェルにＬｕｃＲＮＡ ２ μｇをトランスフェクションし、陽性対照としてトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＭｅｓｓａｇｅｒＭＡＸ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてトランスフェクションを行い、トランスフェクション試薬の取扱説明書に従ってトランスフェクション操作を行った。４８ ｈトランスフェクションした後多機能マイクロプレートリーダーを用いてタンパク質発現量を検出した。陰性対照は、ＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰを添加しない細胞培地であった。実施例３の検出結果を、表２に示した。

【0078】

【表2】

【0079】

実施例３の結果から分かるように、新規な脂質化合物を配合して調製した脂質ナノ粒子ＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰは、粒子径が１０８ ｎｍ程度であり、ＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰの粒子径分布が比較的に狭く（ＰＤＩが比較的に小さく）、カプセル化率が９６％にも達した。インビトロでの細胞トランスフェクション率は、１００万にも達した。イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により調製されたＬＮＰによりカプセルされたｍＲＮＡは、非常に良い物理化学的パラメータを有するだけでなく、極めて高い細胞トランスフェクション率を有することが示された。

【0080】

更に、同じＬＮＰを用いて多機能マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、型番ＳＬＸＦＡＴＳ）によりルシフェラーゼレポーター遺伝子の方法で調製されたＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰ ＨＥＫ２９３Ｔ細胞のトランスフェクション率を検出したところ、トランスフェクションされたＬｕｃＲＮＡ量は、それぞれ０．５ μｇ、１．０ μｇ、２．０ μｇであった。ＬｕｃＲＮＡをインビトロで転写する方法としては、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、細胞密度２．５×１０^５個の細胞／ｍＬでプレートに播種し、細胞コンフルエンスが３０％～５０％になるとトランスフェクションした。陽性対照としてトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてＬｕｃＲＮＡ ０．５ μｇをトランスフェクションし、トランスフェクション試薬の取扱説明書に従ってトランスフェクション操作を行った。４８ ｈトランスフェクションした後多機能マイクロプレートリーダーを用いてタンパク質発現量を検出した。陰性対照は、ＬｕｃＲＮＡ－ＬＮＰを添加しない細胞培地であった。当該インビトロ細胞トランスフェクション率は、図２に示す通りであり、イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により調製されたＬＮＰによりカプセルされたｍＲＮＡは、細胞トランスフェクション率が極めに高く、同じｍＲＮＡ量をトランスフェクションする場合、市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００より約１０倍高いことが分かった。

【0081】

実施例４ ＩＩ－３７によりＤＮＡをカプセルして脂質ナノ粒子を調製した
イオン化可能な脂質ＩＩ－３７、ＤＳＰＣ、ＣＨＯＬ及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を、それぞれモル比４５％：１０％：４３．５％：１．５％で配合して有機相としてエタノール溶液を調製し、水相としてＬｕｃｆｅｒａｓｅ ＤＮＡ（ｐＤＮＡ）をｐＨ＝４の水溶液に溶解する。水相と有機相を体積比３：１でナノメディシン製造装置（カナダＰＮＩ社、Ｉｇｎｉｔｅ型番）にてマイクロフルイディクス技術によりナノ粒子の懸濁液に調製した。調製後、限外濾過して濃縮を行い、最終的にｐＤＮＡ－ＬＮＰ脂質ナノ粒子を得、２～８ ℃で保存して置いた。

【0082】

Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｐｒｏナノ粒子サイズ電位分析装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）でｐＤＮＡ－ＬＮＰ粒子径及びＺｅｔａ電位を表現した。実施例４の検出結果として、表３に示すように、新規な脂質化合物を配合して調製した脂質ナノ粒子ｐＤＮＡ－ＬＮＰは、粒子径が１７３ ｎｍ程度であり、ｐＤＮＡ－ＬＮＰの粒子径分布が比較的に狭かった（ＰＤＩが比較的に小さかった）。

【0083】

【表3】

【0084】

多機能マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、型番ＳＬＸＦＡＴＳ）によりルシフェラーゼレポーター遺伝子法で調製されたｐＤＮＡ－ＬＮＰ ２９３Ｔ細胞のトランスフェクション率を検出したところ、トランスフェクションされたｐＤＮＡ量はそれぞれ０．５ μｇ、１．０ μｇ、２．０ μｇであった。インビトロで転写する方法としては、２９３Ｔ細胞を、細胞密度２．０×１０^５個の細胞／ｍＬでプレートに播種し、細胞コンフルエンスが３０％～５０％になるとトランスフェクションした。陽性対照としてトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてｐＤＮＡ ２ μｇ をトランスフェクションし、トランスフェクション試薬の取扱説明書に従ってトランスフェクション操作を行った。４８ ｈトランスフェクションした後、多機能マイクロプレートリーダーを用いてタンパク質発現量を検出した。陰性対照は、ｐＤＮＡ－ＬＮＰを添加しない細胞培地であった。インビトロでの細胞トランスフェクション率は、図３に示す通りであり、イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により調製されたＬＮＰによりカプセルされたＤＮＡは、極めに高い細胞トランスフェクション率を有し、即ち、ＩＩ－３７により調製されたＬＮＰによりｐＤＮＡ １．０ μｇをトランスフェクションしたタンパク質発現量は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００によりｐＤＮＡ ２ μｇ をトランスフェクションした量よりも高く、同じ２ μｇのｐＤＮＡをトランスフェクションする場合、ＩＩ－３７のインビトロ細胞トランスフェクション率は市販のＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００より約３倍高いことが分った。

【0085】

実施例５ ＩＩ－３７によりｓｉＲＮＡをカプセルして脂質ナノ粒子を調製した
イオン化可能な脂質ＩＩ－３７、ＤＳＰＣ、ＣＨＯＬ及びＤＭＧ－ＰＥＧ２０００を、それぞれモル比４５％：１５％：３８．５％：１．５％で配合して有機相としてエタノール溶液を調製し、水相としてＬｕｃｆｅｒａｓｅ ｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をｐＨ＝４の水溶液に溶解した。水相と有機相を体積比３：１で配合してナノメディシン製造装置（カナダＰＮＩ社、Ｉｇｎｉｔｅ型番）でマイクロフルイディクス技術によりナノ粒子の懸濁液を調製した。調製後、限外濾過して濃縮を行って最終的にｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ脂質ナノ粒子を得、２～８ ℃で保存して置いた。

【0086】

Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｐｒｏナノ粒子サイズ電位分析装置（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ）でｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ粒子径及びＺｅｔａ電位を表現した。実施例５の検出結果は表４に示した。新規な脂質化合物を配合して調製された脂質ナノ粒子ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰの粒子径は２９４ ｎｍ程度であった。

【0087】

【表4】

【0088】

多機能マイクロプレートリーダー（ＢｉｏＴｅｋ、型番ＳＬＸＦＡＴＳ）によりルシフェラーゼレポーター遺伝子法で調製されたｓｉＲＮＡ－ＬＮＰ ２９３Ｔ細胞のトランスフェクション率を検出したところ、トランスフェクションされたｓｉＲＮＡ量はそれぞれ０．５ μｇ、１．０ μｇ、２．０ μｇであった。インビトロで転写する方法としては、Ｌｕｃｆｅｒａｓｅレポーターを安定的に形質転換した２９３Ｔ細胞を、細胞密度２．０×１０^５個の細胞／ｍＬでプレートに播種し、細胞コンフルエンスが３０％～５０％になるとトランスフェクションした。陽性対照としてトランスフェクション試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いてｓｉＲＮＡ １．０ μｇをトランスフェクションし、トランスフェクション試薬の取扱説明書に従ってトランスフェクション操作を行った。２４ ｈトランスフェクションした後、多機能マイクロプレートリーダーを用いてタンパク質発現量を検出した。陰性対照は、ｓｉＲＮＡ－ＬＮＰを添加しない細胞培地であった。インビトロ細胞トランスフェクション率は、図４に示す通りであり、イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により調製されたＬＮＰによりカプセルされたｓｉＲＮＡは、極めに高いタンパク質ノックダウン率を有することが分かった。

【0089】

実施例６ ＩＩ－３７と市販のイオン化可能な陽イオン脂質分子ＭＣ３との効果比較
ＭＣ３の分子式は、４－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）ブタン酸（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イルエステルであった。

【0090】

実施例３に記載の方法でそれぞれＩＩ－３７及びＭＣ３を用いて脂質ナノ粒子を調製し、具体的なモル比はＩＩ－３７：ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ：ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝４５：１５：３８．５：１．５、ＭＣ３：ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ：ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝４５：１５：３８．５：１．５であり、Ｎ／Ｐ比は５：１であった。

【0091】

調製して得られた脂質ナノ粒子の物理化学的品質管理データを以下の表に示した。

【0092】

【表5】

【0093】

上記の表から分かるように、ＩＩ－３７により調製された脂質ナノ粒子のカプセル化率は９０．５％にも達し、ＭＣ３の脂質ナノ粒子よりはるかに高く、且つ粒子径がより小さくてより均一であり、電位がより高かった。

【0094】

実施例３と同じトランスフェクション方式で調製された脂質ナノ粒子を細胞ＣＨＯ－Ｋ１にトランスフェクションし、タンパク質の発現状況を調べたところ、結果は、図５に示すように、トランスフェクションされたｍＲＮＡ量が同じである場合、ＩＩ－３７（図中にＣ２で示す）により調製された脂質ナノ粒子はｍＲＮＡを担持して細胞をトランスフェクションした後、細胞におけるタンパク質発現量がＭＣ３よりはるかに高いため、ＩＩ－３７により調製された脂質ナノ粒子の細胞トランスフェクション率が非常に高いことを示した。

【0095】

また、担持されたｍＲＮＡをＣｙ５で標識してＣｙ５－ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ＩＩ－３７）及びＣｙ５－ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ＭＣ３）を得た。２９３Ｔ細胞と２ ｈ及び６ ｈコンインキュベートした後、ＬｙｓｏＳｅｎｓｏｒＴＭ Ｇｒｅｅｎで細胞のリソソームに対して染色を行い、Ｃｙ５－ｍＲＮＡのエンドサイトーシス効果を観察した。図６から分かるように、Ｃｙ５－ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ＩＩ－３７）は細胞と６ ｈインキュベートした後、Ｃｙ５－ｍＲＮＡのほとんどがリソソームに到達し、共局在係数が０．６２６に達したが、Ｃｙ５－ｍＲＮＡ－ＬＮＰ（ＭＣ３）は、細胞と６ ｈインキュベートした後、Ｃｙ５－ｍＲＮＡのエンドサイトーシスが比較的に少なく、この比較から、ＩＩ－３７分子の核酸送達効率がＭＣ３分子より優れていることが分かった。

【0096】

実施例６の結果から分かるように、新規な脂質化合物を配合して調製された脂質ナノ粒子は、核酸送達効率及びインビトロ細胞トランスフェクション率がいずれもＭＣ３分子より優れていた。

【0097】

実施例７ ＩＩ－３７とその構造類似体分子Ｃ１４－１１３との比較
Ｃ１４－１１３の構造式は以下の通りであった。

【0098】

【化14】

【0099】

実施例３に記載の方法でそれぞれＩＩ－３７及びＣ１４－１１３を使用して脂質ナノ粒子を調製し、具体的なモル比は、ＩＩ－３７：ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ：ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝４５：１５：３８．５：１．５；Ｃ１４－１１３：ＤＳＰＣ：ＣＨＯＬ：ＤＭＧ－ＰＥＧ２０００＝４５：１５：３８．５：１．５であり、Ｎ／Ｐ比は１０：１であった。

【0100】

調製して得られた脂質ナノ粒子の物理化学的品質管理データを以下の表に示した。

【0101】

【表6】

【0102】

実施例３と同じトランスフェクション方式で調製した脂質ナノ粒子を細胞２９３Ｔにトランスフェクションし、タンパク質の発現状況を調べたところ、結果は、図７に示すように、トランスフェクションされたｍＲＮＡ量が同じである場合、ＩＩ－３７（図中にＩＩ－３７－ＬＮＰで示す）により調製された脂質ナノ粒子はｍＲＮＡを担持して細胞をトランスフェクションした後、細胞におけるタンパク質の発現量がＣ１４－１１３よりはるかに高いため、ＩＩ－３７により調製された脂質ナノ粒子の細胞トランスフェクション率が非常に高いことを示した。

【0103】

また、ＭＴＴ法でＩＩ－３７－ＬＮＰ及びＣ１４－１１３－ＬＮＰの細胞毒性を測定し、ベクターの用量、作用時間などの要素による正常細胞（２９３Ｔ）の細胞増殖への影響を考察した。結果は、図８に示すように、ＩＩ－３７（図中にＩＩ－３７－ＬＮＰで示す）により調製された脂質ナノ粒子はｍＲＮＡを担持して細胞を４８時間トランスフェクションした後、比較的に高い用量（２ μｇ／ｍＬ）でも比較的良い細胞活性を維持しているため、ＩＩ－３７により調製された脂質ナノ粒子の細胞毒性が非常に低いことを示した。

【0104】

実施例７の結果から分かるように、新規な脂質化合物を配合して調製された脂質ナノ粒子は、細胞毒性が低く、且つｍＲＮＡのトランスフェクション率が構造類似体分子Ｃ１４－１１３より優れていた。

【0105】

以上、本発明の実施形態について説明した。しかし、本発明は上記の実施形態に限定されない。本発明の精神及び原則を逸脱しない範囲で行われた何れの修正、均等置換、改良なども、本発明の請求の範囲内に含まれる。

【図面の簡単な説明】

【0106】

【図1】イオン化可能な脂質ＩＩ－３７のｐＫａの曲線である。

【図2】イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により形成されたｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率である。

【図3】イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により形成されたｐＤＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率である。

【図4】イオン化可能な脂質ＩＩ－３７により形成されたｓｉＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率である。

【図5】イオン化可能な脂質ＩＩ－３７及び市販の分子ＭＣ３によりそれぞれ形成されたｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率の比較である。

【図6】担持されたｍＲＮＡをＣｙ５で標識し、それぞれイオン化可能な脂質ＩＩ－３７及び市販の分子ＭＣ３により、ｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰを形成し、上記ＬＮＰによりｍＲＮＡを細胞内に送達する効率を蛍光染色で観察したことである。

【図7】イオン化可能な脂質ＩＩ－３７及びＣ１４－１１３によりそれぞれ形成されたｍＲＮＡをカプセルするＬＮＰの細胞トランスフェクション率の比較である。

【図8】ＭＴＴ法によるＩＩ－３７－ＬＮＰ及びＣ１４－１１３－ＬＮＰの細胞毒性測定である。

【図1】

【図2】

【図3】

【図4】

【図5】

【図6】

【図7】

【図8】

【手続補正書】

【提出日】2023-11-28

【手続補正1】

【補正対象書類名】特許請求の範囲

【補正対象項目名】全文

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【請求項1】

式Ｉで表される構造を有する化合物。

【化1】

（ここで、Ｑは置換又は無置換の直鎖Ｃ２～２０アルキレン基であり、前記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、
或いは、Ｑは置換又は無置換の飽和又は不飽和の４～６員環であり、前記４～６員環の環原子は、任意に独立してＯ、Ｓ、Ｎから選ばれる１つ又は１つ以上のヘテロ原子を含み、前記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～２０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～２０アルコキシ基、直鎖又は分岐鎖のＣ２～２０アルケニル基、直鎖又は分岐鎖のＣ２～２０アルキニル基、－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５、

【化2】

から選ばれ、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４は同一または異なって、それぞれ独立して水素、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ１～３０アルキル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルケニル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルキニル基又は－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５から選ばれ、前記アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、前記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基から選ばれ、
その条件としては、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４のうちの少なくとも１つが

【化3】

であり、
Ｒ_５は水素、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ１～３０アルキル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルケニル基、置換又は無置換の直鎖又は分岐鎖Ｃ２～３０アルキニル基から選ばれ、前記アルキル基、アルケニル基又はアルキニル基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、前記置換に用いられる置換基はハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基から選ばれ、
Ｒ_６は水素、Ｃ１～３アルキル基、Ｃ１～３アルコキシ基、－ＯＨから選ばれ、
ｎは１～８の整数から選ばれ、ｍは０～８の整数から選ばれ、ｎとｍは互いに独立して同一または異なって、
Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４のうちの少なくとも２つが

【化4】

である場合、前記基における各ｎと各ｍは互いに独立しており、同一でも異なってもよい。）

【請求項2】

Ｑは

【化5】

であり、
ここで、Ｒ_８、Ｒ_９は、互いに独立して置換又は無置換の直鎖Ｃ１～１０アルキレン基から選ばれ、前記アルキレン基の１つ又は１つ以上のＣ原子は、任意に独立してＯ、Ｓ及びＮから選ばれるヘテロ原子で置換され、Ｒ_７は、水素、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖Ｃ１～２０アルキル基、直鎖又は分岐鎖Ｃ２～２０アルケニル基、直鎖又は分岐鎖Ｃ２～２０アルキニル基、又は－ＣＨ_２ＣＨ（ＯＨ）Ｒ_５、又は

【化6】

であり、前記置換に用いられる置換基は、ハロゲン、－ＯＨ、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルキル基、直鎖又は分岐鎖のＣ１～１０アルコキシ基である、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項3】

Ｑは

【化7】

であり、
ここで、ｘとｙは、同一または異なって、１～８の整数から独立的に選ばれ、
好ましくは、ｘとｙが同一または異なって、１～３の整数から選ばれ、
好ましくは、Ｒ_７が直鎖又は分岐鎖Ｃ１～４アルキル基である、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項4】

Ｒ_６は、－ＯＨであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項5】

ｎは、４～８の整数から選ばれ、ｍは、４～８の整数から選ばれることを特徴とする請求項１に記載の化合物。

【請求項6】

下記の式Ａ、Ｂ、Ｃ又はＤから選ばれる：

【化8】

ここで、各ｎ_１は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_１は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_１は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_１は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_１が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_１が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_１が互いに同じであり、各ｍ_１が互いに同じであり、

【化9】

ここで、各ｎ_２は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_２は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_２は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_２は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_２が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_２が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_２が互いに同じであり、各ｍ_２が互いに同じであり、

【化10】

ここで、各ｎ_３は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_３は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_３は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_３は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_３が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_３が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_３が互いに同じであり、各ｍ_３が互いに同じであり、

【化11】

ここで、各ｎ_４は互いに独立して同一または異なって、各ｎ_４は、１～８の整数から選ばれ、各ｍ_４は互いに独立して同一または異なって、各ｍ_４は、０～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_４が４～８の整数から選ばれ、各ｍ_４が４～８の整数から選ばれ、好ましくは、各ｎ_４が互いに同じであり、各ｍ_４が互いに同じであり、好ましくは、

【化12】

である、
請求項１に記載の化合物。

【請求項7】

生物活性物質送達システムの調製における請求項１～６の何れかに記載の化合物の応用であって、好ましくは、前記送達システムが微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルである、応用。

【請求項8】

請求項１～６の何れかに記載の化合物を含む生物活性物質送達システムであって、好ましくは、前記送達システムが微粒子、ナノ粒子、リポソーム、脂質ナノ粒子又はマイクロバブルであることを特徴とする生物活性物質送達システム。

【請求項9】

請求項８に記載の生物活性物質送達システムを含むことを特徴とする医薬組成物。

【請求項10】

請求項１～６の何れかに記載の化合物の調製方法であって、

【化13】

であり、
ここで、１）還元において、還元剤の存在下で化合物Ａ１のカルボキシ基をヒドロキシ基に還元して化合物Ａ２を得る、２）酸化において、酸化剤の存在下で化合物Ａ２のヒドロキシ基をアルデヒド基に酸化して化合物Ａ３を得る、３）ハロゲン化－還元において、まず酸性条件で化合物Ａ３のアルデヒドα－水素とハロゲン化試薬とをハロゲン化反応させて中間体であるα－ハロゲン化アルデヒドを得た後、還元剤の存在下でα－ハロゲン化アルデヒドのアルデヒド基をヒドロキシ基に還元して化合物Ａ４を得る、４）エポキシ化において、化合物Ａ４を塩基の存在下で分子内の求核置換反応を行ってエポキシ化合物Ａ５を得る、５）開環反応において、化合物Ａ５をアミンと開環反応させて最終化合物を得ることを特徴とする調製方法。

【国際調査報告】